TW202440159A

TW202440159A - 含有治療性抗體的藥物製劑及其用途

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Publication number: TW202440159A
Application number: TW112151403A
Authority: TW
Inventors: 凡張; 胡裕迪; 邵琦; 雪明錢; 李紅俊; 怡顧; 滕菲; 孫迪
Original assignee: 大陸商蘇州創勝醫藥集團有限公司
Priority date: 2022-12-29
Filing date: 2023-12-28
Publication date: 2024-10-16
Also published as: WO2024140939A2; WO2024140939A3

Abstract

本發明提供了包含以高濃度和低濃度存在的特異性結合至人MASP-2的單株抗體的穩定的藥物製劑，以及包含該製劑的試劑盒、醫藥組成物、單位劑型，和使用該製劑和試劑盒、醫藥組成物、單位劑型用於抑制MASP-2依賴性補體活化、治療相關疾病的治療方法，以及製備相應藥劑的用途。本發明還提供了新的特異性結合至人MASP-2的單株抗體。

Description

含有治療性抗體的藥物製劑及其用途

本發明屬於藥物製劑領域，具體涉及治療性抗體製劑的領域。更具體來說，本發明涉及包含特異性結合至人MASP-2的單株抗體的藥物製劑，及其用途。

MASP-2(MBL相關的絲胺酸蛋白酶2)參與補體系統，它與MASP-1和兩個C1q相關的絲胺酸蛋白酶C1r和C1s顯示出顯著的同源性。一旦凝集素識別並與病原體結合，MASP-2的酶原形式就會在CCP2和SP結構域之間裂解(在保守的R444和I445之間裂解)，變成由兩條多肽鏈(重鏈/A鏈和輕鏈/B鏈)組成的活性形式，藉由二硫鍵(C434-C552)連接(A.B.W.Boldt et al.,Human Immunology,72(9)：753-760(2011))。當MBL與病原體結合時，MASP-2被激活，將補體成分C4和C2裂解為C4a、C4b、C2a和C2b，生成C3轉化酶C4bC2b，隨後C3被C4bC2b轉化為C3b，最後在C5被C3b轉化為C5b後形成膜攻擊複合物(MAC)。C3的激活最終導致MAC的形成，然後啟動下游補體系統的一系列級聯激活過程，刺激先天免疫反應。事實上C4b可以激活C4d的生成。C4d的沉積可能是補體激活的一個標誌。有研究表明，C4d陽性染色是IgAN患者發生 ESRD的獨立風險因素(見，Clin J Am Soc Nephrol 9：897-904,2014)，在IgAN患者中，有C4d染色的腎臟比沒有C4d染色的腎臟生存時間明顯短。在狼瘡性腎炎和膜性腎小球腎炎患者的腎臟中也檢測到C4d染色。MASP-2已被確定為治療自身免疫性疾病的一個非常有希望的靶點。

除了在免疫防禦中的重要作用外，補體系統在許多臨床情況下也會造成組織損傷。目前，仍然需要治療上有效的補體抑制劑，如新的MASP-2抗體，特別是那些具有有利的高結合親和力和特異性的抗體，以防止不良反應。

治療性抗體需要配製為適用於向患者給藥的製劑，並且該製劑還能夠維持其在儲存和後續使用期間的穩定性。例如，如果該製劑溶液配置不當，其中的治療性抗體可能更容易發生降解、聚集和/或非所需甚至有害的化學修飾。液體製劑中的抗體的穩定性不僅視製劑中所使用的賦形劑的種類而定，並且還視賦形劑相對於彼此的量和比例而定。此外，當製備液體抗體製劑時，除穩定性之外，還必須考慮其它因素，例如給定製劑可容納的抗體濃度和製劑的視覺質量或外觀，等等。因此，當配製治療性抗體製劑時，必須格外謹慎以獲得保持穩定、含有足夠濃度的抗體且具有使得製劑能夠方便地施用至患者的其它特性的製劑。

對於抗MASP-2抗體，例如，Omeros公司的單抗Narsoplimab(OMS721)進入了III期臨床，其在中國專利申請號CN201780051640.7中揭露了MASP-2抗體製劑，含185mg/mL的蛋白，20mM L-組胺酸，200mM L-精胺酸HCl，0.01%(w/v)的聚山梨酯80，pH5.5-6.5。然而，上述製劑處方不能使本發明抗MASP-2單抗達到符合要求的穩定性，因此對於本發明提供的新型抗MASP- 2單株抗體，仍有開發穩定的針對本發明抗MASP-2抗體的穩定的液體製劑需要。

發明簡述

MASP-2是重要和有利的治療靶標。本發明提供了本發明抗MASP-2抗體製劑處方，可以使得本發明抗MASP-2單抗在較高濃度和低濃度情況下的液體狀態時維持較好的穩定性，滿足生產工藝和臨床給藥的需求，可以支持將本發明抗MASP-2單抗開發為靜脈注射液和皮下注射液。本發明還提供了針對MASP-2的抗體。

一、本發明的抗體製劑

一方面，本發明提供了一種穩定液體藥物製劑，其特徵在於，該藥物是特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段，並且該製劑還包含緩衝液、表面活性劑、和輔料。

在本發明的一些實施方案中，該穩定液體藥物製劑中該緩衝液包含組胺酸和/或醋酸緩衝體系；該表面活性劑包含聚山梨酯；該輔料包含蔗糖、海藻糖和/或脯胺酸；該穩定液體藥物製劑的pH值為4.7-6.1。

因此，在本發明的一些實施方案中，提供了一種穩定液體藥物製劑，其包含：(a)特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段；(b)包含組胺酸和/或醋酸緩衝體系的緩衝液；(c)包含聚山梨酯的表面活性劑；和(d)包含蔗糖、海藻糖和/或脯胺酸的輔料；其中該製劑的pH為4.7-6.1。

在一些實施方案中，抗體濃度為10mg/ml±1mg/ml至200mg/ml±20mg/ml。在一些實施方案中，抗體濃度為20mg/ml±2mg/ml。在一些實施方案中，抗體濃度為60mg/ml±6mg/ml。在一些實施方案中，抗體濃度為100mg/ml±10mg/ml。在一些實施方案中，抗體濃度為150mg/ml±15mg/ml。在一些實施方案中，抗體濃度為約20mg/ml至約100mg/ml。

在一些實施方案中，該緩衝液包含組胺酸，並且其濃度為5mM±1mM至20mM±4mM。在一些情況下，組胺酸緩衝液濃度為10mM±2mM。在一些實施方案中，組胺酸緩衝液包含L-組胺酸和一水合L-組胺酸鹽酸鹽。在一些情況下，該緩衝液包含0.175mg/ml的L-組胺酸和1.86mg/ml的一水合L-組胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，該緩衝液包含醋酸，並且其濃度為5mM±1mM至20mM±4mM。在一些情況下，醋酸緩衝液濃度為10mM±1mM。在一些實施方案中，醋酸緩衝液包含醋酸和三水合醋酸鈉。

在一些實施方案中，聚山梨酯濃度為0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)。在一些情況下，聚山梨酯濃度為0.05%±0.01%(w/v)。在一些實施方案中，聚山梨酯為聚山梨酯20。在一些實施方案中，聚山梨酯為聚山梨酯80。

在一些實施方案中，該輔料是蔗糖。在一些實施方案中，蔗糖濃度為5.5%±0.5%至9%±0.5%(w/v)。在某些實施方案中，蔗糖濃度為5.8%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，蔗糖濃度為5.8%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，蔗糖濃度為6.0%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，蔗糖濃度為6.5%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，蔗糖濃度為7.0%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，蔗糖濃度為8.6%±0.5%(w/v)。

在一些實施方案中，該輔料是海藻糖。在一些實施方案中，海藻糖濃度為5.5%±0.5%至9%±0.5%(w/v)。在某些實施方案中，海藻糖濃度為7.0%±0.5%至9.0%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，海藻糖濃度為7.0%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，海藻糖濃度為8.0%±0.5%(w/v)。在一些實施方案中，海藻糖濃度為9.0%±0.5%(w/v)。

在一些實施方案中，該輔料是脯胺酸。在一些實施方案中，脯胺酸濃度為200mM至300mM。在某些實施方案中，脯胺酸濃度為200mM至250mM。在一些實施方案中，脯胺酸濃度為230mM。

在一些實施方案中，用於本發明的製劑中的緩衝液可以將本發明的製劑的pH控制在大約4.7-6.1的範圍，較佳大約5.0-6.0，更佳約5.0-5.5，最佳為5.3±0.1。在一些具體的實施方案中，本發明的抗體製劑具有約4.7、5.0、5.2、5.3、5.4、5.5、6.0、6.1、6.2、6.5的pH值。

在本發明較佳的實施方案中，本發明的液體製劑中的表面活性劑是聚山梨酯，諸如聚山梨酯-20、聚山梨酯-80、聚山梨酯-60、或聚山梨酯-40；普洛尼克等。在一個較佳實施方案中，本發明的液體製劑中包含聚山梨酯-80作為表面活性劑。在另一個較佳實施方案中，本發明的液體製劑中包含聚山梨酯-20作為表面活性劑。

在一個實施方案中，該液體製劑是胃腸外給藥製劑，較佳為注射劑，更佳為皮下注射劑或靜脈內注射劑。在一個實施方案中，該液體製劑為靜脈輸注劑。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml至200mg/ml±20mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，或200mM至300mM脯胺酸，

pH為4.7至6.0。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

本發明的液體製劑可以長期穩定儲存，例如至少24個月或更長時間。在一個實施方案中，本發明的液體製劑可以在約-80℃至約45℃，例如-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約5℃、約25℃、約35℃、約38℃、約40℃、約42℃或約45℃的條件下，儲存至少10天、至少20天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月，至少36個月，或更長時間，且是穩定的。

在一些實施方案中，本發明的液體製劑具有2-10μm的平均粒徑，如藉由微流成像系統(MFI)所測定的。

在一些實施方案中，本發明的液體製劑具有250~350mOsm/kg H₂O之間的質量滲透壓莫耳濃度。

在一些實施方案中，本發明的液體製劑具有約1.0厘泊-30厘泊的黏度，例如約1.0厘泊-10厘泊的黏度。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0厘泊-20厘泊。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0厘泊-10厘泊。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0或10.0厘泊。在一個實施方案中，該液體製劑在4-40℃的黏度為約5.0厘泊-7.0厘泊。在一個實施方案中，該液體製劑在4-40℃的黏度為約6.8厘泊。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約6.8厘泊。

在一個實施方案中，本發明的液體製劑可以穩定儲存至少24個月。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在-80℃至45℃之間的任何溫度下是穩定的。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在約2℃-8℃保持穩定至少3個月，較佳至少12個月，更佳至少24個月，最佳至少36個月。在一個實施方案中，本發明的液體製劑在室溫或例如約25℃保持穩定至少2個月，較佳至少3個月，更佳至少6個月，最佳至少12個月。在再一實施方案中，本發明的液體製劑在約40℃保持穩定至少2週、較佳至少1個月、更佳至少6週、最佳至少8週。該穩定例如表現為例如溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%。

在一個實施方案中，可以藉由檢測製劑的外觀、可見異物、蛋白含量、單體純度、和/或電荷變異體的變化，來指示儲存後製劑的穩定性。在一個實施方案中，可以在高溫脅迫的強制實驗中，例如在40℃±2℃儲存至少1週、2週或較佳地1個月後，或在加速實驗中，例如在25℃±2℃儲存至少1個月或2個月後，或在長期實驗中，例如在5℃±3℃儲存至少6個月或12個月後，檢測本發明液體製劑的穩定性。該穩定例如表現為溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%。

在一個實施方案中，在儲存後，藉由目視檢查本發明液體製劑的穩定性，其中本發明液體製劑在外觀上保持為澄清至微乳光，為無色至淡黃色液體，且無異物。在一個實施方案中，在澄明度檢測儀下目視檢查，製劑中無可見異物存在。在一個實施方案中，檢測製劑在約405nm或約350nm處的吸光度以測定溶液混濁度。在一個實施方案中，藉由測定蛋白在升溫過程中發生構型變化或聚集而使得粒徑發生變化時的轉變溫度T_onset，檢查本發明液體製劑的穩定性，較佳T_onset高於60℃、63℃、65℃、68℃或70℃。在一個實施方案中，在儲存後，藉由測定蛋白含量變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，相對於儲存第0天的初始值，蛋白含量變化率不超過10%，較佳不超過5%。在一個實施方案中，在儲存後，藉由測定本發明液體製劑中抗體的單體純度變化，檢查本發明液體製劑的穩定性，其中藉由體積排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC)，相對於儲存第0天的初始值，單體純度的變化值不超過10%，例如不超過5%、4%、3%、例如變化值不超過1-2%，較佳不超過1%。在另一個實施方案中，在儲存後，藉由非還原型和/或還原型十二烷基硫酸鈉毛細管電泳(CE-SDS)法，單體純度的變化值下降不超過10%，例如不超過5%、4%、3%。在一個實施方案中，在儲存後，藉由全柱成像毛細管等電聚焦電泳法(icIEF)或陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC)檢測本發明液體製劑的穩定性，其中相對於儲存第0天的初始值，抗體的電荷變異體(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過50%，例如不超過40%、30%、20%、10%、5%。

在一些實施方案中，製劑在儲存後，例如在2-8℃儲存至少24個月後，或在室溫儲存至少3個月後，或在40℃±2℃儲存1個月後，是穩定的，較佳地具有如下特徵之一或多項：

(i)藉由SEC-HPLC法測量，製劑具有大於90%的抗體單體純度，較佳大於95%、96%、97%、98%、99%的純度；

(ii)藉由還原型或非還原型CE-SDS法(例如，非還原型CE-SDS)測量，製劑具有大於90%的抗體單體純度，較佳大於92%、94%、96%、98%的純度；

(iii)藉由iCIEF或CEX法測量，相對於儲存第0天的初始值，製劑中抗體蛋白的各組分(主成分、酸性組分和鹼性組分)的變化值總和不超過50%，例如不超過40%、30%、20%、10%、5%。

在一些實施方案中，製劑在振搖後(例如，振搖14天後)，攪拌後(例如，攪拌6小時後)，光照後(例如，光照3天後)，和/或凍融後(例如，經5輪凍融後)，是穩定的，較佳地具有如下特徵之一或多項：

在本發明的較佳實施方案中，本發明的製劑具有高的抗體濃度，同時其具有適合給藥尤其皮下給藥的低黏度，具有高的物理和化學穩定性，存放時不易產生聚集體和顆粒並且較不易發生電荷異質性變化。這些優點對於生產完全、有效、高一致性的臨床藥品是十分有益的。

在一個方面，本發明提供了一種遞送裝置，其包含本發明的液體抗體製劑。在一個實施方案中，本發明的遞送裝置以包含本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的預填充注射器形式提供，例如用於靜脈內、皮下、皮內或者肌內注射、靜脈內輸注。

在又一方面，本發明提供向受試者，例如哺乳動物，例如人，施用抗體的方法，包括給予該受試者本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑的步驟，該遞送是例如藉由使用預填充注射器的遞送裝置實施的。

在又一方面，本發明提供本發明的液體抗體製劑或固體抗體製劑用於製備在受試者中治療、預防或延緩與......相關的病症的遞送裝置(如，預填充注射器)或藥物的用途，該病症例如......。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，(b)包含10mM±2mM組胺酸的緩衝液，(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，(b)0.175mg/ml L-組胺酸，(c)1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(e)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，(b)包含10mM±2mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，(b)0.175mg/ml L-組胺酸，(c)1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(e)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，(b)包含10mM±1mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，(b)0.175mg/ml L-組胺酸，(c)1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(e)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，(b)包含10mM±1mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，(b)0.175mg/ml L-組胺酸，(c)1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(e)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，pH為5.3±0.1。

在這些實施例中的任一者中，聚山梨酯可為聚山梨酯80或聚山梨酯20，較佳聚山梨酯80。

在一個方面中，本發明提供了一種醫藥組成物，其中該組成物包含如上文或本文所論述的藥物製劑，且該組成物容納於容器中。在一些實施方案中，容器為小瓶。在一些情況下，小瓶為2ml、5ml、10ml或20ml的1型透明玻璃小瓶。在一些實施方案中，容器為注射器。在一些情況下，注射器為低鎢玻璃。在一些實施方案中，容器為預填充注射器。在一些實施方案中，組成物容納於自動注射器中。

在一個方面中，本發明提供了一種試劑盒，其包含(i)含有包含如上文或本文所論述的藥物製劑的組成物的容器，和使用該組成物的說明書。在一些實施方案中，容器為玻璃小瓶。在一些實施方案中，容器為預填充注射器。在一些實施方案中，容器為自動注射器。

在一個方面中，本發明提供了包含如上文或本文所論述的藥物製劑的單位劑型，其中抗體以0.1mg至500mg的量存在。在一些情況下，抗體以200-400mg的量存在。在一些實施方案中，單位劑型為玻璃小瓶，例如西林瓶。在一些實施方案中，單位劑型為預填充注射器。在一些實施方案中，單位劑型為自動注射器。

在上文或本文所論述的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型中的任一者中，含有藥物製劑的容器可包含頂隙，該頂隙包含氣體，其中該氣體包含小於5體積%的氧氣。在一些情況下，氣體包含小於1體積%的氧氣。在一些情況下，氣體包含不超過0.1體積%的氧氣。

在一個方面中，本發明提供含有醫藥組成物的容器，其中該組成物包含如上文或本文中所論述的藥物製劑。在一些情況下，容器為注射器。在一些情況下，容器為預填充注射器。在一些情況下，容器為自動注射器。在一些情況下，容器為玻璃小瓶。

在各種實施例中，上文或本文所論述的實施例的特徵或組分中的任一者可組合，且此類組合涵蓋於本發明案的範圍內。上文或本文所論述的任何具體值可與上文或本文所論述的另一相關值組合以敘述範圍，其中該值表示該範圍的上端和下端，且此類範圍和屬此類範圍內的所有值涵蓋於本發明案的範圍內。上文或本文所論述的值中的每一者可表示為具有1%、5%、10%或20%的變化。舉例來說，10mM濃度可表示為10mM±0.1mM(1%變化)、10mM±0.5mM(5%變化)、10mM±1mM(10%變化)或10mM±2mM(20%變化)。

二、本發明的抗MASP-2抗體

在一個方面中，本發明提供結合MASP-2或其片段(較佳人MASP-2蛋白)的抗MASP-2抗體或抗體片段(較佳抗原結合片段)。

在一些實施方案中，本發明提供了新型單株抗MASP-2抗體及其片段。

在一個方面，本發明提供了特異性結合MASP-2的分離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段表現出以下一個或多個特徵：a)與小鼠或大鼠沒有交叉反應；b)與OMS721相比，在猴體內具有更長的血清半衰期；c)與C1s、C1r、MASP1或MASP3沒有交叉反應；d)能夠選擇性地阻斷MBL途徑的補體激活；e)能夠與人MASP-2特異性結合，其K_D值不超過27.8nM(或不超過25nM、20nM、15nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.09nM、0.08nM、0.07nM、0.06nM、0.05nM、0.04nM、0.03nM、0.02nM、0.01nM、0.009nM、0.008nM、0.007nM、0.006nM、0.005nM、0.004nM、0.003nM、0.002nM，或0.001nM)，如由Bio-Layer Interferometry所測量的；f)能夠阻斷補體C3的激活，在1%的人血清中藉由ELISA測定其IC₅₀不超過0.08μg/mL(或不超過0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL、0.02μg/mL或0.01μg/mL)，或在10%的人血清中藉由ELISA測定其IC₅₀不超過0.20μg/mL(或不超過0.15μg/mL、0.10μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL、0.02μg/mL、或0.01μg/mL)；g)能夠在50%人血清中阻斷補體C3的激活；h)能夠阻斷補體C4的激活，在2%的人血清中藉由ELISA測定其IC₅₀不超過0.11μg/mL(或不超過0.10μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL、0.02μg/mL，或0.01μg/mL)，或在10%的人血清中藉由ELISA測定其IC₅₀不超過0.69μg/mL(或不超過0.65μg/mL、0.6μg/mL、0.55μg/mL、0.5μg/mL、0.45μg/mL、0.4μg/mL、0.35μg/mL、0.3μg/mL、0.25μg/mL、或0.2μg/mL、0.15μg/mL、0.1μg/mL、0.09μg/mL、0.08 μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL、0.02μg/mL、或0.01μg/mL)；i)能夠阻斷MAC的形成，在2%的人血清中藉由ELISA測定其IC₅₀不超過0.27μg/mL(或不超過0.25μg/mL，或0.2μg/mL，0.15μg/mL、0.1μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL、0.02μg/mL、或0.01μg/mL)。

在一個方面，本發明提供了分離的抗體或其抗原結合片段，包含：

包含DYYIN(SEQ ID NO：1)的胺基酸序列的重鏈CDR1，

包含WIFPGSX₁ SX₂ YX₃ X₄ X₅ X₆ FX₇ X₈(SEQ ID NO：2)的胺基酸序列的重鏈CDR2，和

包含GDRSGPFX₉ Y(SEQ ID NO：3)的胺基酸序列的重鏈CDR3；和/或

包含KSSQSLLYSNGKTYLN(SEQ ID NO：4)的胺基酸序列的輕鏈CDR1，

包含LVSKLDS(SEQ ID NO：5)胺基酸序列的輕鏈CDR2，和

包含VQX₁₀ THFPFT(SEQ ID NO：6)的胺基酸序列的輕鏈CDR3。

其中X₁是E、D或G，X₂是A或P，X₃是H或Y，X₄是S或N，X₅是E或Q，X₆是K或N，X₇是K或Q，X₈是A或G，X₉是A或P，和X₁₀是V或G。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，和/或

包含選自SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10的胺基酸序列的重鏈CDR2，和/或

包含選自SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12的胺基酸序列的重鏈CDR3；和/或

含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，和/或

包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR2，和/或

包含選自SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的胺基酸序列的輕鏈CDR3。

在一個方面，本發明提供了分離的抗體或其抗原結合片段，其包含：

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的重鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段進一步包含：

包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，和包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的輕鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的輕鏈CDR3。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3，包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的輕鏈CDR3；或。

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的重鏈CDR3，包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的輕鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3，包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的輕鏈CDR3；或

包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1，包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的重鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的重鏈CDR3，包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1，包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2，以及包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的輕鏈CDR3。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；

包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；

包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；

包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；

包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；

包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區；或

包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列或與其具有至少80%同一性的序列的重鏈可變區。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，或具有至少80%同一性的序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列，或具有至少80%同一性的序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列，或具有至少80%同一性的序列的輕鏈可變區；或

包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列，或具有至少80%同一性的序列的輕鏈可變區。

在某些實施方案中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含與SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26具有至少80%序列同一性的胺基酸序列和/或輕鏈可變區包含與SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：30具有至少80%序列同一性的胺基酸序列。

在某些實施方案中，該抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的重鏈可變區，以及包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的重鏈可變區，以及包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的重鏈可變區，以及包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的輕鏈可變區；

包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的重鏈可變區，以及包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的輕鏈可變區。

在某些實施方案中，抗體或其抗原結合片段進一步包含一個或多個胺基酸殘基突變，但仍保留對MASP-2的特定結合親和力。在某些實施方案中，至少有一個突變是保守取代，或所有的突變都是保守取代。在某些實施方案中，至少一個突變是發生在CDR序列中的一個或多個位置，和/或在重鏈可變區或輕鏈可變區的非CDR序列中的一個或多個位置。

在某些實施方案中，抗體或其抗原結合片段進一步包含免疫球蛋白恆定區，可選地包含IgG的重鏈恆定區，和/或輕鏈恆定區。在某些實施方案中，恆定區包括小鼠恆定區、兔恆定區或人恆定區，視需要地恆定區包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區。在某些實施方案中，重鏈恆定區包含相對於野生型人IgG恆定區在胺基酸殘基252、254或256處的一個或多個胺基酸取代，視需要地，胺基酸殘基252處的胺基酸取代是被酪胺酸取代，胺基酸殘基254處的胺基酸取代是被蘇胺酸取代，胺基酸殘基256處的胺基酸取代是被谷胺酸取代。在某些實施方案中，重鏈恆定區包含與野生型人IgG恆定區胺基酸序列具有至少80%同一性的序列，並且相對於野生型人IgG恆定區具有胺基酸殘基252處被酪胺酸取代，胺基酸殘基254處被蘇胺酸取代，和胺基酸殘基256處被谷胺酸取代。

在某些實施方案中，該抗MASP-2抗體或其抗原結合片段是單株抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、重組抗體、嵌合抗體、人源化抗體、標記抗體、二價抗體、抗獨特型抗體、融合蛋白、二聚或多聚抗體、或修飾的抗體(例如糖基化修飾的抗體)。

在某些實施方案中，該抗MASP-2抗體或其抗原結合片段是雙體抗體(diabody)、Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)₂、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')。二硫鍵穩定的雙體抗體(ds diabody)，單鏈抗體分子(scFv)，scFv二聚體(二價雙體抗體)，多特異性抗體，駱駝單域抗體，奈米抗體，域抗體，或二價域抗體。

在某些實施方案中，抗體或其抗原結合片段特異性地與MASP-2結合，與C1s、C1r、MASP1或MASP3沒有交叉反應。

在本發明的較佳的實施方案中，該抗MASP-2抗體或其抗原結合片段具有如下表所示的序列：

表1 小鼠抗MASP-2抗體和人源化129C10抗體的CDR序列

表2 本發明的抗體序列

在某些實施方案中，本發明提供的抗體及其抗原結合片段是人源化的。人源化抗體或抗原結合片段在降低針對人的免疫原性方面具有優勢。人源化抗體在其可變區是嵌合的，以非人的CDR序列嫁接到人FR序列(或基本上是人的FR序列)。抗體或抗原結合片段的人源化基本上可以藉由在人免疫球蛋白基因中用非人(如鼠)CDR基因替換相應的人CDR基因來實現(例如，參見Jones et al.(1986)Nature 321：522-525；Riechmann et al.(1988)Nature 332：323-327；Verhoeyen et al.(1988)Science 239：1534-1536)。在一些實施方案中，本文提供的人源化抗體或抗原結合片段基本全部由人序列組成，除了CDR序列是非人的。在某些實施方案中，可變區FR和恆定區(如果有)完全或基本上完全來自人免疫球蛋白序列。人FR序列和人恆定區序列可以來自不同的人免疫球蛋白基因，例如，FR序列來自一個人的抗體，恆定區來自另一個人的抗體。在一些實施方案中，人源化抗體或抗原結合片段包括人重/輕鏈FR1-4。

在某些實施方案中，本發明提供的人源化抗體及其抗原結合片段包含人胚系框架序列VH/1-2的一個或多個重鏈FR序列，和/或人胚系框架序列VK/2-30的一個或多個輕鏈FR序列，有或沒有回復突變。可以根據需要在人胚系框架序列中引入回復突變。在某些實施方案中，本發明的人源化抗體129C10可以包含一個或多個選自下組的突變：在重鏈框架序列VH/1-2中的R71V、A93T、V67A和M69L(基於Kabat編號)，和/或重鏈CDR2中的A65G、K64Q、E61Q(基於Kabat編號)。人源化抗體129C10可以包含一個或多個選自下組的回復突變：輕鏈框架序列VK/2-30中的F36L和T69A(基於Kabat編號)。

在某些實施方案中，本文提供的抗體及其抗原結合片段的人源化重鏈和輕鏈在人體內基本上沒有免疫原性，並保持與MASP-2的母體抗體基本相同或甚至更高的親和力。

在一些實施方案中，本文所述的抗MASP-2抗體是人抗體。可使用本領域中已知的各種技術來製備人抗體。人抗體一般描述於van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol 5：368-74(2001)以及Lonberg，Curr.Opin.Immunol 20：450-459(2008)。

在一些實施方案中，本文所述的抗MASP-2抗體是嵌合抗體。

三、本發明抗體或其製劑的治療方法和用途

本發明還提供了治療方法，包括將治療有效量的本發明的抗體或抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型施用於需要的受試者，從而治療或預防MASP-2依賴性補體激活相關疾病或病症。

本發明提供了在需要的受試者中藉由抑制MASP-2而抑制MASP-2依賴性補體激活的方法，或治療或預防與MASP-2依賴性補體激活相關的病症或疾病的方法，這些方法包括向受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型。

在另一個方面，本發明提供了治療受試者中受益於抑制MASP-2依賴性補體激活的病症的方法，包括將治療有效量的本文提供的抗體或抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型施用於需要的受試者。

在另一個方面，本發明進一步提供了降低受試者血清C4水平的方法，包括向受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型，從而降低受試者的血清C4的水平。

在另一個方面，本發明進一步提供了一種治療受試者的病症的方法，其中該病症將受益於受試者血清C4水平的降低，包括向受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型，從而治療該病症。

在另一個方面，本發明進一步提供了治療或預防與血清C4水平異常(例如升高)相關的病症或疾病的方法，包括向受試者施用治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型，從而治療該病症或疾病。

在某些實施方案中，該方法進一步包括施用第二種治療劑。

在某些實施方案中，受試者是人。在某些實施方案中，給藥是藉由口服、鼻飼、靜脈注射、皮下注射、舌下注射或肌肉注射。

在一個方面，本發明進一步提供了本發明提供的抗體或其抗原結合片段，或本發明的抗體藥物製劑，或本發明的醫藥組成物、試劑盒或單位劑型在製造藥劑中的用途，其中該藥劑用於以下中的一者或多者：

(1)用於抑制MASP-2依賴性補體激活；

(2)用於治療或預防MASP-2依賴性補體激活相關疾病或病症；

(3)用於治療受試者中受益於抑制MASP-2依賴性補體激活的病症；

(4)用於降低受試者血清C4水平；

(5)用於治療受試者中受益於受試者血清C4水平的降低的病症；

(6)用於治療或預防與血清C4水平異常(例如升高)相關的病症或疾病。

在一些實施方案中，前述任何疾病或病症包括自身免疫性疾病、血管病症、缺血再灌注損傷、動脈硬化、炎症、肺部病症、體外再灌注過程、肌肉骨骼病症、腎臟病症、皮膚病症、器官或組織移植過程、神經系統疾病或損傷、血液疾病、泌尿生殖系統疾病、非肥胖型糖尿病或與1型或2型糖尿病相關併發症、癌症、內分泌疾病、眼科疾病或COVID-19(新冠肺炎)。

在一些具體的實施方案中，該自身免疫性疾病包括血栓性微血管病(TMA)、非典型溶血性尿毒癥綜合症(aHUS)、造血移植相關的血栓性微血管病(TA-TMA)、狼瘡腎炎、系統性紅斑狼瘡(SLE)和IgA腎病。

在一些具體的實施方案中，該血管病症血管病症包括心血管病症、腦血管病症、外周(如肌肉骨骼)血管病症、腎血管病症、腸系膜/腸道血管病症、移植物和/或再移植物的血管再生、血管炎、亨-舍二氏紫癜性腎炎、系統性紅斑狼瘡相關的血管炎、與類風濕性關節炎相關的血管炎、免疫複合物血管炎、大動脈炎、擴張型心肌病、糖尿病血管病、川崎病(動脈炎)、靜脈氣體栓塞(VGE)，以及支架置入術、旋轉動脈瘤切除術和經皮腔內冠狀動脈成形術(PTCA)後的再狹窄。

在一些具體的實施方案中，該缺血再灌注損傷包括與主動脈瘤修復、心肺轉流、與器官移植和/或肢體/手指再植有關的血管再吻合、中風、心肌梗死和休克和/或外科手術後的血液動力學復蘇有關的缺血再灌注損傷。

在一些具體的實施方案中，該炎症包括炎症性胃腸道疾病，其包括胰腺炎、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、腸易激綜合症和憩室炎。

在一些具體的實施方案中，該肺部病症包括急性呼吸窘迫綜合症、輸血相關性急性肺損傷、缺血/再灌注急性肺損傷、慢性阻塞性肺病、哮喘、韋格納肉芽腫病、抗腎小球基底膜病(Goodpasture病)；胎糞吸入綜合症、閉塞性細支氣管炎綜合症、特發性肺纖維化、繼發於燒傷的急性肺損傷、非心源性肺水腫、輸血相關呼吸困難、肺氣腫、囊性纖維化、SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2(Covid-19)相關疾病。

在一些具體的實施方案中，該體外循環再灌注過程包括血液透析、血漿去除術、白細胞去除術、體外膜氧合(ECMO)、肝素誘導體外膜氧合低密度脂蛋白沉澱(heparin-induced exfracorporeal membrane oxygenation LDL precipitation,HELP)和心肺轉流術(CPB)。

在一些具體的實施方案中，該肌肉骨骼病症包括骨關節炎、類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、痛風、神經性關節病、銀屑病性關節炎、脊椎關節病、結晶性關節病和系統性紅斑狼瘡(SLE)。

在一些具體的實施方案中，該腎臟病症包括系膜增生型腎小球腎炎、膜性腎小球腎炎、膜性增生性腎小球腎炎(系膜毛細血管性腎小球腎炎)、急性感染後腎小球腎炎(鏈球菌感染後腎小球腎炎)、冷球蛋白血症性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎、亨-舍二氏紫癜性腎炎和IgA腎病。

在一些具體的實施方案中，該皮膚病症包括銀屑病、自身免疫性大皰性皮膚病、嗜酸性海綿形成、大皰性類天皰瘡、獲得性大皰性表皮松解、妊娠皰疹、熱燒傷和化學燒傷。

在一些具體的實施方案中，該器官或組織移植過程包括器官異體移植、器官異種移植器官和組織移植。

在一些具體的實施方案中，該神經系統疾病或損傷包括多發性硬化症、重症肌無力、亨廷頓氏病、肌萎縮性脊髓側索硬化、格林巴利綜合症、中風後再灌注(reperfusion following stroke)、退變性椎間盤、腦外傷、帕金森氏病、阿爾茨海默病、Miller-Fisher綜合症、腦外傷和/或出血、脫髓鞘和腦膜炎。

在一些具體的實施方案中，該血液病包括敗血症、嚴重敗血症、敗血症休克、敗血症引起的急性呼吸窘迫綜合症、全身炎症反應綜合症、失血性休克、溶血性貧血、自身免疫性血栓性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合症。

在一些具體的實施方案中，該泌尿生殖系統病症包括疼痛性膀胱病、感覺性膀胱病、慢性非細菌性膀胱炎、間質性膀胱炎、不孕症、胎盤功能障礙和流產和子癇前症。

在一些具體的實施方案中，該內分泌疾病包括橋本氏甲狀腺炎、壓力、焦慮和激素性疾病，涉及垂體的催乳素、生長素或其他胰島素樣生長因子和促腎上腺皮質激素的調節性釋放。

在一些具體的實施方案中，該眼科疾病包括年齡相關性黃斑變性。

本發明的治療方法包含向個體施用包含如本發明的特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段的任何製劑、醫藥組成物或單位劑型。施用藥物製劑的個體可為例如需要此類治療的任何人類或非人類動物。

四、其它

在一方面，本發明提供了編碼以上任何抗MASP-2抗體或其片段的核酸。在一個實施方案中，提供包含該核酸的載體。在一個實施方案中，載體是表達載體。在一個實施方案中，提供包含該載體的宿主細胞。在一個實施方案中，宿主細胞是真核的。在另一個實施方案中，宿主細胞選自酵母細胞、哺乳動物細胞或適用於製備抗體或其抗原結合片段的其它細胞。在另一個實施方案中，宿主細胞是原核的。

在一個實施方案中，本發明提供製備抗MASP-2抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)的方法，其中該方法包含在適於表達編碼該抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)的核酸的條件下培養該宿主細胞，以及視需要地分離該抗體或其片段(較佳地抗原結合片段)。在某個實施方案中，該方法還包括從宿主細胞回收抗MASP-2抗體或其片段(較佳地抗原結合片段)。

在一方面中，本發明涉及檢測樣品中MASP-2蛋白的方法，該方法包括(a)將樣品與本發明所述的任何抗MASP-2抗體製劑或本發明的抗體接觸；和(b)檢測抗MASP-2抗體或其片段和MASP-2蛋白間的複合物的形成。在一個實施方案中，抗MASP-2抗體是被可檢測地標記的。

本發明還涵蓋本文所述的任何實施方案的任意組合。本文所述的任何實施方案或其任何組合適用於本文所述的發明的任何和所有製劑或抗MASP-2抗體或其片段、方法和用途。

發明詳述

定義

除非另外規定，否則本文所使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域具有通常知識者通常所理解相同的含義。如本文所使用，當關於特定敘述數值或值範圍使用時，本文所用的術語“約”將與其聯用的數值浮動±10%。舉例而言，如本文所使用，表述“約100”包括90和110和其間的所有值(例如90.5、95、101、105、109.95......等)。對於比例而言，術語“約”用於限定所給出的比例的每個數字。例如，比例約1：1是指比例為0.9~1.1：0.9~1.1。。

儘管類似或等效於本文所描述的方法和材料的任何方法和材料可以用於本發明的實踐或測試中，但現描述示例性方法和材料。本說明書中所提及的所有專利、申請和非專利出版物均以全文引用的方式併入本文中。

本文所用的術語“患者”是指可受益於本發明的難溶性抗腫瘤活性劑的哺乳動物和非哺乳動物個體。哺乳動物是指哺乳類的任何成員，其包括但不限於：人；非人靈長類動物，如黑猩猩及其它猿類和猴類物種；農場動物，如牛、馬、綿羊、山羊和豬；家畜，如兔、狗和貓；實驗室動物，包括齧齒類動物，如大鼠、小鼠和豚鼠；等等。非哺乳動物的例子包括但不限於鳥等。術語“患者”並不限定特定的年齡或性別。在一些實施方案中，該“患者”是人。

如無特別說明，本文中“施用”和“給藥”可互換使用。

如本文所用，術語“按體積計的重量百分比”或“%w/v”表示單一組分相對於含有該組分的混合物的總體積的百分比重量(以克計)。例如，總體積8ml中的500mg組分為6.25%w/v，總體積5ml中的500mg組分為10%w/v。

本文所用的術語"抗體"包括任何與特定抗原結合的免疫球蛋白、單株抗體、多株抗體、多價抗體、二價抗體、單價抗體、多特異性抗體、或雙特異性抗體。天然的完整抗體包含兩條重鏈(H)和兩條輕鏈(L)。哺乳動物的重鏈分為α、δ、ε、γ和μ，每個重鏈由一個可變區(V_H)和第一、第二和第三恆定區(分別為C_H1,C_H2,C_H3)組成。哺乳動物的輕鏈分為λ和κ，而每條輕鏈由一個可變區(V_L代表λ輕鏈，或V_K代表κ輕鏈)和一個恆定區(C_L代表λ輕鏈或C_K代表κ輕鏈)組成。抗體呈"Y"形，Y的莖部由兩條重鏈的第二和第三恆定區組成，藉由二硫鍵結合在一起。Y的每個臂包括一個重鏈的可變區和第一恆定區與一個輕鏈的可變區和恆定區結合。輕鏈和重鏈的可變區負責抗原結合。兩條鏈的可變區通常包含三個高度可變的環，稱為互補性決定區(CDR)(輕鏈CDR包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，重鏈CDR包括HCDR1、HCDR2、HCDR3)。本文所揭露的抗體和抗原結合片段的CDR邊界可以按照Kabat、IMGT、Chothia或Al-Lazikani的慣例來定義或識別(Al-Lazikani,B.,Chothia,C.,Lesk,A.M.,J.Mol.Biol.,273(4),927(1997)；Chothia,C.et al.,J Mol Biol.Dec 5；186(3)：651-63(1985)；Chothia,C.and Lesk,A.M.,J.Mol.Biol.,196,901(1987)；Chothia,C.et al.,Nature.Dec 21-28；342(6252)：877-83(1989)；Kabat E.A.et al.,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。三個CDR散佈在四個被稱為框架區(FR)的側翼之間，後者比CDR更高度保守，形成一個支架來支持高變異環。重鏈和輕鏈的恆定區域不參與抗原結合，但表現出各種效應子功能。根據其重鏈恆定區的胺基酸序列，抗體分為不同的類別。抗體的五個主要類別或同型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，它們的特點是分別包含α、δ、ε、γ和μ重鏈。幾個主要的抗體類別又分為幾個亞類，如IgG1(γ1重鏈)，IgG2(γ2重鏈)，IgG3(γ3重鏈)，IgG4(γ4重鏈)，IgA1(α1重鏈)，或IgA2(α2重鏈)。

本文所用的術語"二價"是指具有兩個抗原結合位點的抗體或抗原結合片段；術語"單價"是指僅具有一個單一抗原結合位點的抗體或抗原結合片段；而術語"多價"是指具有多個抗原結合位點的抗體或抗原結合片段。在一些實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段是二價的。

在本文中，"雙特異性"抗體指的是一種人工抗體，它有來自兩個不同的單株抗體的片段，能夠與兩個不同的表位結合。這兩個表位可以出現在同一個抗原上，或者它們可以出現在兩個不同的抗原上。

本文所用的術語"抗原結合片段"是指由抗體的包含1、2或3個CDR的一部分形成的抗體片段，或任何其他能夠與抗原結合但不包含完整天然抗體結構的抗體片段。抗原結合片段的例子包括但不限於雙體抗體diabody、Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)₂、雙特異性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫鍵穩定的雙體抗體(ds Diabody)。單鏈抗體分子(scFv)，scFv二聚體(二價雙體抗體)，雙特異性抗體，多特異性抗體，駱駝單域抗體，奈米抗體，域抗體和二價域抗體。抗原結合片段能夠與母體抗體所結合的相同抗原結合。

"Fab"對於抗體而言，是指由一條輕鏈(包括可變區和恆定區)藉由二硫鍵與一條重鏈的可變區和第一恆定區結合而成的抗體部分。

"Fab'"是指包括部分鉸鏈區的Fab片段。

"F(ab')₂"是指Fab'的二聚體。"Fv"對於一個抗體來說指的是抗體的具有完整的抗原結合部位的最小片段。一個Fv片段由單個輕鏈的可變區和單個重鏈的可變區結合組成。

"dsFv"是指一個二硫鍵穩定的Fv片段，其單一輕鏈的可變區和單一重鏈的可變區之間的連接是二硫鍵。在一些實施方案中，"(dsFv)₂"或"(dsFv-dsFv')"包括三個肽鏈：兩個V_H部分藉由肽接頭(例如長的柔性接頭)連接並分別藉由二硫橋與兩個V_L部分結合。在一些實施方案中，dsFv-dsFv'是雙特異性的，其中每個二硫鍵配對的重鏈和輕鏈具有不同的抗原特異性。

"單鏈Fv抗體"或"scFv"是指由一個輕鏈可變區和一個重鏈可變區直接或經由肽接頭序列相互連接的工程抗體(Huston JS等，Proc Natl Acad Sci USA,85：5879(1988))。

"Fc"對於抗體來說是指由第一重鏈的第二和第三恆定區藉由二硫鍵與第二重鏈的第二和第三恆定區結合而成的抗體部分。抗體的Fc部分負責各種效應子功能，如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和補體依賴性細胞毒性(CDC)，但不具有抗原結合功能。

"單鏈Fv-Fc抗體"或"scFv-Fc"是指由連接到抗體Fc區的scFv組成的工程化抗體。

“駱駝單域抗體”、“重鏈抗體”或“HCAb”是指包含兩個V_H結構域而沒有輕鏈的抗體(Riechmann L.and Muyldermans S.,J Immunol Methods.Dec 10；231(1-2)：25-38(1999)；Muyldermans S.,J Biotechnol.Jun；74(4)：277-302(2001)；WO94/04678；WO94/25591；U.S.Patent No.6,005,079)。重鏈抗體最初源自駱駝科(駱駝、單峰駝和美洲駝)。雖然沒有輕鏈，但駱駝化的抗體有可靠的抗原結合區(Hamers-Casterman C.et al.,Nature.Jun 3；363(6428)：446-8(1993)；Nguyen VK.et al.“Heavy-chain antibodies in Camelidae；a case of evolutionary innovation,”Immunogenetics.Apr；54(1)：39-47(2002)；Nguyen VK.et al.Immunology.May；109(1)：93-101(2003))。重鏈抗體的可變結構域(VHH結構域)代表了由適應性免疫反應產生的最小的已知抗原結合單元(Koch-Nolte F.et al.,FASEB J.Nov；21(13)：3490-8.Epub 2007 Jun 15(2007))。

“奈米抗體”是指由一個重鏈抗體的VHH結構域和兩個恆定結構域(CH2和CH3)組成的抗體片段。

“雙體抗體”或"dAb"包括具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，其中該片段包含一個V_H結構域與同一多肽鏈上的V_L結構域相連(V_H-V_L或V_L-V_H)(例如，見Holliger P.et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.Jul 15；90(14)：6444-8(1993)；EP404097；WO93/11161)。藉由使用太短的連接子，使同一鏈上的兩個結構域之間配對，結構域被迫與另一鏈的互補結構域配對，從而產生兩個抗原結合位點。這些抗原結合位點可以針對相同或不同的抗原(或表位)。在某些實施方案中，“雙特異性ds雙體抗體”是針對兩種不同抗原(或表位)的雙體抗體。在某些實施方案中，"scFv二聚體"是一種二價雙體抗體或二價ScFv(BsFv)，其包含V_H-V_L(由肽接頭連接)與另一個V_H-V_L分子二聚化，從而一個部分的V_H與另一個部分的V_L配合並形成兩個結合位點，其可針對相同抗原(或表位)或不同抗原(或表位)。在其他實施方案中，"scFv二聚體"是一種雙特異性雙體抗體，包括與V_L1-V_H2(由肽接頭連接)相締合的V_H1-V_L2(由肽接頭連接)，這樣V_H1和V_L1配合，V_H2和V_L2配合，每個配合配對具有不同抗原特異性。

“域抗體”是指只包含重鏈可變區或輕鏈可變區的抗體片段。在某些情況下，兩個或更多的V_H結構域與肽接頭共價連接，形成一個二價或多價結構域抗體。一個二價域抗體的兩個V_H域可以針對相同或不同的抗原。

本文所用的術語"嵌合"是指一種抗體或抗原結合片段，其重鏈和/或輕鏈的一部分來自一個物種，重鏈和/或輕鏈的其餘部分來自另一個物種。在一個說明性的例子中，一個嵌合抗體可以包含來自人的恆定區，和來自非人動物的可變區，如來自小鼠或大鼠。在一些實施方案中，非人動物是哺乳動物，例如，小鼠、大鼠、兔子、山羊、綿羊、豚鼠或倉鼠。

本文所用的術語"人源化"是指該抗體或抗原結合片段包含來自非人動物的CDR，來自人的FR區域，以及在適用時，來自人的恆定區。

如本文所用，術語"MASP-2"是指與甘露聚糖結合凝集素相關的絲胺酸蛋白酶2，它是補體系統MBL途徑中的一個重要成員。人、小鼠和食蟹猴MASP-2的胺基酸和核酸序列可以在公共數據庫諸如GenBank、UniProt和Swiss-Prot中找到。如本文所用，術語MASP-2包括包含突變的蛋白質，例如，全長野生型MASP-2的點突變、片段、插入、缺失和剪接變體。在某些實施方案中，人MASP-2蛋白包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列。在某些實施方案中，小鼠MASP-2蛋白包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列。在某些實施方案中，食蟹猴MASP-2蛋白包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列。在某些實施方案中，合成了包括小鼠MASP-2 CUB1-EGF-CUB2結構域(殘基20-297)和人MASP-2 CCP1-CCP2-SP結構域(殘基298-686)的嵌合MASP-2蛋白，其胺基酸序列為SEQ ID NO：42。

本文所用的術語"特異性結合"或"特異地結合"是指兩個分子之間的非隨機性結合反應，諸如在抗體和抗原之間。在某些實施方案中，本文提供的抗體或抗原結合片段與人MASP-2特異性地結合，其結合親和力(K_D)為

10^-6M(例如

5x10^-8M,

2x10^-8M,

10^-8M,

5x10^-9M,

2x10^-9M,

10^-9M,

5x10^-10M,

2x10^-10M,

10^-10M,

5x10^-11M,

2x10^-11M,

10^-11M,

5x10^-12M,

4x10^-12M,

3x10^-12M,

2x10^-12M,or

10^-12M。此處使用的K_D是指解離速率與締合速率的比值(k_off/k_on)，可藉由使用本領域已知的任何常規方法確定，包括但不限於表面電漿共振法、微尺度熱泳法、HPLC-MS法、生物層干涉法和流式細胞儀(如FACS)法。在某些實施方案中，K_D值可以藉由使用ForteBio方法適當地確定。

本文所用的"阻斷結合"或"競爭同一表位"的能力是指抗體或抗原結合片段對兩個分子(例如，MASP-2蛋白和抗MASP-2抗體)之間的結合作用的抑制達到任何可檢測的程度。在某些實施方案中，阻斷兩個分子之間結合的抗體或抗原結合片段對兩個分子之間的結合作用的抑制程度為至少50%，至少60%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，或至少90%。在某些實施方案中，這種抑制可以大於60%，大於70%，大於75%，大於80%，大於85%，或大於90%。

本文所用的術語"表位"是指抗體所結合的抗原上的特定原子或胺基酸組。如果兩個抗體表現出對抗原的競爭性結合，則它們可能結合相同或緊密相關的抗原表位。例如，如果一個抗體或抗原結合片段阻止參考抗體與抗原(如人/猴MASP-2)的結合至少50%，至少60%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，或至少90%，那麼該抗體或抗原結合片段可被認為與參考抗體結合相同/緊密相關的表位。

所屬技術領域中具有通常知識者將認識到，無需進行不必要的實驗就可能確定一種人單株抗體是否與本發明的抗體結合同一表位，只要藉由弄清前者是否阻止後者與MASP-2抗原多肽的結合。如果測試抗體與本發明的抗體競爭，如同表現為本發明的抗體與MASP-2抗原多肽的結合減少，那麼這兩種抗體結合到相同或緊密相關的表位。或者，如果測試抗體與MASP-2抗原多肽的結合被本發明的抗體所抑制，那麼這兩種抗體與相同或緊密相關的表位結合。

本文中所用的術語“OMS721”是指Omeros公司的單抗Narsoplimab(OMS721)，其完整結構記載於美國專利US9011860B2中，在中國專利申請號CN201780051640.7中揭露了OMS721抗體製劑，該專利藉由引用以其全文併入本文。OMS721具有人IgG4的恆定區。OMS721的重鏈序列如SEQ ID NO：32所示，輕鏈序列如SEQ ID NO：33所示。

OMS721的重鏈(hIgG4 kappa)(SEQ ID NO：32)：

OMS721的輕鏈(hIgG4 kappa)(SEQ ID NO：33)：

關於胺基酸序列的"保守取代"是指將一個胺基酸殘基用具有類似理化性質的側鏈的不同胺基酸殘基來替代。例如，可以在具有疏水側鏈的胺基酸殘基(如Met、Ala、Val、Leu和Ile)之間，在具有中性親水側鏈的殘基(如Cys、Ser、Thr、Asn和Gln)之間，具有酸性側鏈的殘基(如Asp、Glu)，具有鹼性側鏈的胺基酸(如His、Lys和Arg)，或具有芳香族側鏈的殘基(如Trp、Tyr和Phe)之間進行保守取代。如本領域所知，保守取代通常不會引起蛋白質構象結構的顯著變化，因此可以保留蛋白質的生物活性。

本文所用的術語"同源物"和"同源的"是可以互換的，指的是在最適比對時，與另一序列具有至少80%(例如，至少85%、88%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%)的核酸序列(或它的互補鏈)或胺基酸序列。

關於胺基酸序列(或核酸序列)的"序列同一性百分比(%)"是指在比對序列並在必要時引入空位以達到相同胺基酸(或核酸)的最大數量後，候選序列中與參考序列中的胺基酸(或核酸)殘基相同的胺基酸(或核酸)殘基的百分比。胺基酸殘基的保守取代可以被也可以不被視為相同的殘基。為了確定胺基酸(或核酸)序列同一性的百分比，可以使用公開的工具，例如BLASTN、BLASTp(可在美國國家生物技術信息中心(NCBI)的網站上找到，另見Altschul S.F.et al,J.Mol.Biol.,215：403-410(1990)；Stephen F.et al,Nucleic Acids Res.,25：3389-3402(1997))，ClustalW2(可在歐洲生物信息學研究所的網站上找到，另見Higgins D.G.et al,Methods in Enzymology,266：383-402(1996)；Larkin M.A.et al,Bioinformatics(Oxford,England),23(21)：2947-8(2007))，以及ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體來實現比對。所屬技術領域中具有通常知識者可以使用該工具提供的默認參數，也可以根據比對的情況訂製參數，例如，藉由選擇合適的算法。

本文所用的"治療"或"處理"病症包括預防或緩解一種病症，減緩一種病症的發病或發展速度，減少一種疾病的風險，預防或推遲與一種病症相關的症狀的發展，減少或結束與一種疾病相關的症狀，產生一種病症的完全或部分消退，治癒一種病症，或其一些組合。

一種“分離的”物質已經被人力從其自然狀態中改變了。如果一種“分離的”成分或物質出現在自然界中，那麼它已經被改變或從其原來的環境中移除，或者兩種情況都是。例如，自然存在於活體動物中的多核苷酸或多肽不是“分離的”，但如果同一多核苷酸或多肽已經與自然狀態下的共存物質充分分開，從而以基本純淨的狀態存在，則是“分離的”。分離的“核酸”或“多核苷酸”可互換使用，指的是分離的核酸分子的序列。在某些實施方案中，"分離的抗體或其抗原結合片段"是指抗體或抗原結合片段的純度至少為60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%。92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%，如藉由電泳方法(如SDS-PAGE、等電聚焦、毛細管電泳)或色譜方法(如離子交換色譜或反相HPLC)所確定的。

本文所用的術語"載體"是指一種載體，編碼蛋白質的多核苷酸可以可操作地插入其中，以實現該蛋白質的表達。載體可用於轉化、轉導或轉染宿主細胞，以使其攜帶的遺傳元件在宿主細胞內得到表達。載體的實例包括質粒、噬菌體、黏粒、人工染色體，如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1衍生的人工染色體(PAC)，噬菌體，如λ噬菌體或M13噬菌體，以及動物病毒。用作載體的動物病毒類別包括逆轉錄病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、杆狀病毒、乳頭瘤病毒和乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)。載體可以包含各種控制表達的元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、可選擇元件和報告基因。此外，載體還可以包含一個複製起點。載體還可以包含幫助其進入細胞的材料，包括但不限於病毒顆粒、脂質體或蛋白質包衣。載體可以是表達載體或選殖載體。本發明提供的載體(例如表達載體)含有本文提供的編碼抗體或其抗原結合片段的核酸序列、至少一個與核酸序列可操作連接的啟動子(例如SV40、CMV、EF-1α)以及至少一個選擇標記。載體的實例包括但不限於逆轉錄病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、杆狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)、λ噬菌體和M13噬菌體、質粒pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等等。

本文所用的"宿主細胞"是指引入了外源性多核苷酸和/或載體的細胞。

補體系統與許多急性和慢性疾病或病症的發病機制有關，包括：心肌梗塞、中風、急性呼吸窘迫綜合症(ARDS)、再灌注損傷、敗血症休克、熱燒傷後的毛細血管滲漏、心肺旁路術後炎症、移植排斥、類風濕性關節炎、多發性硬化症、重症肌無力症和阿爾茨海默病。在幾乎所有這些疾病或病症中，補體不是病因，但是是參與發病機制的幾個因素之一。補體激活可能是一個主要的病理機制，代表了許多這些疾病狀態中臨床控制的有效點。MASP-2參與MBL途徑，即三大補體激活途徑之一，也可能參與許多疾病或狀態的發病機制。在一些實施方案中，與MASP-2依賴性補體激活有關的疾病或病症是自身免疫性疾病、血管病症、缺血再灌注損傷、動脈硬化、炎症、肺部病症、體外再灌注手術、肌肉骨骼病症、腎臟病症、皮膚病症、器官或組織移植手術、神經系統疾病或損傷、血液疾病、泌尿生殖系統病症、非肥胖型糖尿病或與1型或2型糖尿病相關的併發症、癌症、內分泌疾病或眼科病症。

本文所用的術語"甘露聚糖結合凝集素"("MBL")等同於甘露聚糖結合蛋白("MBP")。術語"膜攻擊複合物"("MAC"，也被稱為C5b-9)是指由五種終末補體成分(C5-C9)組成的複合物，它插入並破壞細胞膜。

本文所用的術語"自身免疫性疾病"是指一種病理生理狀態，其中免疫反應是針對人體自身組織的，並對其造成損害(自身免疫性)。自身免疫性疾病的實例，包括但不限於血栓性微血管病(TMA)、非典型溶血性尿毒癥(aHUS)、造血移植相關的血栓性微血管病(TA-TMA)、狼瘡腎炎、系統性紅斑狼瘡(SLE)和IgA腎病。

本文所用的術語“腫瘤”是指是指機體在各種致瘤因子作用下，局部組織細胞增生所形成的新生物。

術語"藥學上可接受的"表示指定的載體、稀釋劑、賦形劑和/或鹽通常與構成製劑的其他成分在化學上和/或物理上相容，並與接受者在生理上相容。

藥物製劑

如本文所使用，術語“藥物製劑”意指至少一種活性成分(例如特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段)與至少一種非活性成分的組合，該非活性成分在與活性成分和/或一種或多種額外非活性成分組合時適用於治療性施用至人類或非人類動物。除非另外具體說明，否則如本文所使用的術語“製劑”意指“藥物製劑”。本發明提供包含至少一種治療性抗體的藥物製劑。根據本發明的某些實施方案，治療性抗體為特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段。更具體地，本發明包括藥物製劑，其包含：(i)特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段；(ii)包含組胺酸和/或醋酸緩衝體系的緩衝液；(iii)包含聚山梨酯的表面活性劑；和(iv)包含蔗糖、海藻糖和/或脯胺酸的輔料。如果額外組分不會顯著地干擾製劑的穩定性，則該組分可包括於本發明的製劑中。下文詳細描述本發明內所包括的具體示例性組分和製劑。

在某些實施例中，本發明的藥物製劑為液體製劑。如本文所使用，表述“液體製劑”意指在約2℃至約40℃下主要以液體狀態存在的至少兩種組分的混合物。液體製劑可視其特定成分而具有低黏度、中等黏度或高黏度。

如本文所用，術語“緩衝液”是指弱酸及其共軛鹼或弱鹼及其共軛酸的混合物。例如，如本文所用，“醋酸緩衝液”是指包含醋酸鈉以及其共軛酸醋酸的混合物。由於在弱酸與其共軛鹼之間建立了化學平衡，當向溶液中加入少量酸或鹼時，含有緩衝液的溶液抵抗pH值的突然變化。

如本文所用，術語“質量滲透壓莫耳濃度”是指溶解的溶質顆粒在水溶液中的滲透壓的量度。溶質顆粒包括兩種離子以及非離子化分子。滲透壓表示為溶解在1kg溶劑(即水)中的滲透活性顆粒的濃度(即滲透壓莫耳)。本文以毫滲透壓莫耳/千克水(mOsm/kg)為單位表示質量滲透壓莫耳濃度。

本文中術語“輔料”意指添加至製劑中以提供期望稠度、黏度和/或穩定作用的任何非治療劑，本發明較佳的輔料包括但不限於海藻糖、蔗糖、和脯胺酸。

“粒徑(Diameter)”和“平均粒徑(Mean Diameter)”是指微粒製劑對應的強度體積徑，可以採用動態光散射儀例如激光粒度儀測得。

本發明的抗體

本發明的藥物製劑內所含有的抗體或其抗原結合片段的量可視製劑所期望的具體特性以及意圖使用製劑的特定情況和目的而變化。在某些實施例中，藥物製劑可含有約0.1mg/mL至約500mg/mL的抗體；約0.5mg/mL至約400mg/mL的抗體；約1mg/mL至約200mg/mL的抗體；約2mg/mL至約100mg/mL；約1mg/mL至約5mg/mL的抗體；約10mg/mL至約30mg/mL的抗體；約75mg/mL至約125mg/mL；約5mg/mL至約50mg/mL；或約2mg/mL至約150mg/mL的抗體。舉例來說，本發明的製劑可為液體製劑，其包含約0.5mg/mL；約1mg/mL；約2mg/mL；約3mg/mL；約4mg/mL；約5mg/mL；約6mg/mL；約7mg/mL；約8mg/mL；約9mg/mL；約10mg/mL；約11mg/mL；約12mg/mL；約13mg/mL；約14mg/mL；約15mg/mL；約16mg/mL；約17mg/mL；約18mg/mL；約19mg/mL；約20mg/mL；約21mg/mL；約22mg/mL；約23mg/mL；約24mg/mL；約25mg/mL；約26mg/mL；約27mg/mL；約28mg/mL；約29mg/mL；約30mg/mL；約35mg/mL；約40mg/mL；約45mg/mL；約50mg/mL；約55mg/mL；約60mg/mL；約65mg/mL；約70mg/mL；約75mg/mL；約80mg/mL；約85mg/mL；約90mg/mL；約95mg/mL；約96mg/mL；約97mg/mL；約98mg/mL；約99mg/mL；約100mg/mL；約101mg/mL；約 102mg/mL；約103mg/mL；約104mg/mL；約105mg/mL；約110mg/mL；約115mg/mL；約120mg/mL；約125mg/mL；約130mg/mL；約135mg/mL；約140mg/mL；約145mg/mL；約150mg/mL；約155mg/mL；約160mg/mL；約165mg/mL；約170mg/mL；約175mg/mL；約180mg/mL；約185mg/mL；約190mg/mL；約195mg/mL；或約200mg/mL的特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，藥物製劑為液體製劑，其可含有1±0.1mg/mL至200±20mg/mL的抗體；2±0.2mg/mL至100±10mg/mL的抗體；1±0.5mg/mL至30±5mg/mL的抗體；10±1mg/mL至30±3mg/mL的抗體；1±0.1mg/mL至3±0.3mg/mL的抗體；15±1.5mg/mL至25±2.5mg/mL的抗體；90±5mg/mL至110±5mg/mL的抗體；或150±7.5mg/mL至170±7.5mg/mL的抗體。在一些實施方案中，藥物製劑含有20±2mg/mL的抗體。在一些實施方案中，藥物製劑含有60±6mg/mL的抗體。在一些實施方案中，藥物製劑含有100±10mg/ml的抗體。在一些實施方案中，藥物製劑含有150±15mg/ml的抗體。

生物等效物11

本發明涵蓋具有與本文所揭露的示例性分子的胺基酸序列不同的胺基酸序列但保留人MASP-2特異性結合能力的抗體或其抗原結合片段。當相比於親本序列時，此類變異分子可包含胺基酸的一個或多個添加、缺失或取代，但仍展現與本文所論述的抗體的生物活性基本上等效的生物活性。

本發明包括與本文所闡述的示例性抗體中的任一者生物等效的抗原結合分子。舉例來說，如果兩種抗體為當在類似實驗條件下以相同劑量(單次劑量或多次劑量)施用時，吸收速率和吸收程度未顯示顯著差異的醫藥等效物或醫藥替代物，則將其視為生物等效的。如果一些抗體在其吸收程度方面等效但在其吸收速率方面並不等效，則將其視為等效物或醫藥替代物，且仍可將其視為生物等效的，這是因為此類吸收速率方面的差異為既定的且反映在標簽中，對於在例如長期使用時達到有效體內藥物濃度並非必需的，且對於所研究的特定藥品在醫療上無關緊要。

在一個實施例中，如果兩種抗體的安全性、純度和效力不存在臨床上有意義的差異，則該兩種抗體是生物等效的。

在一個實施例中，如果患者可以在參考產品與生物學產品之間轉換一或多次且相比於不具有該轉換的持續療法，預期副作用風險沒有增加，則兩種抗體為生物等效的，該副作用包括臨床上顯著的免疫原性變化或經減弱的有效性。

生物等效性可藉由體內和體外方法證明。生物等效性測量包括例如(a)人類或其它哺乳動物中的體內測試，其中測量血液、血漿、血清或其它生物流體中的抗體或其代謝物隨時間變化的濃度；(b)與人類體內生物可用性資料相關且合理地預測人類體內生物可用性資料的體外測試；(c)人類或其它哺乳動物中的體內測試，其中測量抗體(或其目標)隨時間變化的適當急性藥理學作用；和(d)建立抗原結合蛋白的安全性、功效或生物可用性或生物等效性的良好受控的臨床試驗。

製劑輔料和pH

本發明的藥物製劑包含一種或多種輔料。如本文所使用，術語“輔料”意指添加至製劑中以提供期望稠度、黏度和/或穩定作用的任何非治療劑。

在某些實施例中，本發明的藥物配藥物製劑具有小於30cP的黏度，這有利於從預填充注射器或自動注射器遞送組成物。在一些實施方案中，本發明的穩定的液體製劑具有約1.0cP-30cP的黏度。在一些情況下，當使用動態光散射儀(DLS)測量時，藥物製劑在25℃下的黏度為小於28cP、小於25cP、小於23cP、小於20cP、小於18cP、小於15cP、小於13cP、小於10cP、小於7cP或小於5cP，例如約1.0cP-10cP。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0cP-20cP。在一些實施方案中，當使用DLS測量時，藥物製劑在25℃下在至多150mg/ml的抗體濃度下的黏度為小於15cP。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0cP-10cP。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0或10.0cP。在一些實施方案中，當使用DLS測量時，藥物製劑在25℃下在至多150mg/ml的抗體濃度下的黏度為小於7cP。在一個實施方案中，該液體製劑在4-40℃的黏度為約5.0cP-7.0cP。在一個實施方案中，該液體製劑在4-40℃的黏度為約6.8cP。在一個實施方案中，該液體製劑在25℃的黏度為約6.8cP。

本發明的藥物製劑內所含有的輔料的量視使用製劑的具體情況和預期目的而變化。在某些實施例中，製劑可含有約0.1%至約20%輔料；約0.5%至約20%輔料；約1%至約20%輔料；約2%至約15%輔料；約5%至約15%輔料；約7.5%至約12.5%輔料；或約9%至約11%輔料。舉例而言，本發明的藥物製劑可包含約0.5%、約1.0%、約1.5%、約2.0%、約2.5%、約3.0%、約3.5%、約4.0%、約4.5%、約5.0%、約5.5%、約6.0%、約6.5%、約7.0%、約7.5%、約8.0%、約8.5%、約9.0%、約9.5%、約10.0%、約10.5%、約11.0%、約11.5%、約12.0%、約12.5%、約13.0%、約13.5%、約14.0%、約14.5%、約15%或約 20%輔料(例如蔗糖)。在一些實施方案中，製劑含有約5.8%±0.5%輔料(例如蔗糖)。在一些實施方案中，製劑含有約6.0%±0.5%輔料(例如蔗糖)。在一些實施方案中，製劑含有約6.5%±0.5%輔料(例如蔗糖)。在一些實施方案中，製劑含有約7.0%±0.5%輔料(例如蔗糖)。在一些實施方案中，製劑含有約8.6%±0.5%輔料(例如蔗糖)。上述百分比中的每一者對應於重量/體積百分比(w/v)。在一些情況下，製劑含有5.5%±0.5%至9%±0.5%(w/v)蔗糖。在一些情況下，製劑含有5.5%±0.5%至9%±0.5%(w/v)海藻糖。在一些情況下，製劑含有200mM至300mM脯胺酸。

製劑中的表面活性劑

本發明的藥物製劑還可包含一種或多種表面活性劑，其類型和量應在如回轉式振盪的粗糙處置或攪動條件下特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段穩定。如本文所使用，術語“表面活性劑”意指降低物質所溶解的流體的表面張力和/或降低油與水之間的界面張力的物質。表面活性劑可以是離子或非離子的。可包括於本發明的製劑中的示例性非離子表面活性劑包括例如烷基聚(環氧乙烷)、烷基多葡糖苷(例如辛基葡糖苷和癸基麥芽糖苷)、如鯨蠟醇和油醇的脂肪醇、椰油醯胺MEA、椰油醯胺DEA和椰油醯胺TEA。可包括於本發明的製劑中的具體非離子表面活性劑包括例如聚山梨酯，如聚山梨酯20、聚山梨酯28、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81和聚山梨酯85；泊洛沙姆(poloxamer)，如泊洛沙姆188(也稱為Pluronic F68)、泊洛沙姆407；聚乙烯-聚丙二醇；或聚乙二醇(PEG)。聚山梨酯20也稱為TWEEN 20、脫水山梨糖醇單月桂酸酯和聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯。在一些實施方案中，表面活性劑為聚山梨酯80或聚山梨酯20，較佳聚山梨酯80。

本發明的藥物製劑內所含有的表面活性劑的量可視製劑所期望的具體特性以及意圖使用製劑的特定情況和目的而變化。在某些實施例中，製劑可含有約0.01%至約1%表面活性劑；約0.01%至約0.5%表面活性劑；約0.05%至約0.15%；約0.08%至約0.12%；或約0.09%至約0.11%表面活性劑。舉例來說，本發明的製劑可包含約0.01%；約0.02%；約0.03%；約0.04%；約0.05%；約0.06%；約0.07%；約0.08%；約0.09%；約0.10%；約0.11%；約0.12%；約0.13%；約0.14%；約0.15%；約0.16%；約0.17%；約0.18%；約0.19%；約0.20%；約0.21%；約0.22%；約0.23%；約0.24%；約0.25%；約0.26%；約0.27%；約0.28%；約0.29%；或約0.30%表面活性劑(例如聚山梨酯80)。在一些實施方案中，製劑含有約0.1%表面活性劑(例如聚山梨酯80)。上述百分比中的每一者對應於重量/體積百分比(w/v)。在一些情況下，製劑含有0.025%±0.01%至0.1%±0.01% w/v聚山梨酯80。在一些情況下，製劑含有0.05%±0.01% w/v聚山梨酯80。

製劑的緩衝體系和pH

本發明的藥物製劑還可包含用於維持穩定pH且用於幫助穩定特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段的緩衝液或緩衝液系統。在一些實施方案中，緩衝液或緩衝液系統包含緩衝範圍完全或部分覆蓋pH 4.7至6.1的範圍的至少一種緩衝液。在某些實施例中，緩衝液包含組胺酸緩衝液和/或醋酸緩衝液。在某些實施例中，緩衝液(例如組胺酸)以約1mM至約40mM、約1mM至約30mM、約1mM至約20mM；約3mM至約18mM、約5mM至約15mM；或約8mM至約12mM的濃度存在。在一些實施方案中，緩衝液(例如組胺酸)以約1mM；約2mM；約3mM；約4mM；約5mM；約6mM；約7 mM；約8mM；約9mM；約10mM；約11mM；約12mM；約13mM；約14mM；約15mM；約16mM；約17mM；約18mM；約19mM；或約20mM的濃度存在。在一些情況下，製劑含有濃度為5mM±1mM至20mM±4mM的組胺酸緩衝液。在一些情況下，製劑含有濃度為10mM±2mM的組胺酸緩衝液。在一些實施方案中，組胺酸緩衝液包含L-組胺酸和一水合L-組胺酸鹽酸鹽。在一些情況下，組胺酸緩衝液包含濃度為0.175mg/mL的L-組胺酸和濃度為1.86mg/mL的一水合L-組胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，製劑含有醋酸緩衝液。在一些實施方案中，緩衝液(例如醋酸)以約1mM至約40mM、約1mM至約30mM、約1mM至約20mM；約3mM至約18mM、約5mM至約15mM；或約8mM至約12mM的濃度存在。在一些實施方案中，緩衝液(例如醋酸)以約1mM；約2mM；約3mM；約4mM；約5mM；約6mM；約7mM；約8mM；約9mM；約10mM；約11mM；約12mM；約13mM；約14mM；約15mM；約16mM；約17mM；約18mM；約19mM；或約20mM的濃度存在。在一些情況下，製劑含有濃度為5mM±1mM至20mM±4mM的醋酸緩衝液。在一些情況下，製劑含有濃度為10mM±2mM的醋酸緩衝液。在一些實施方案中，醋酸緩衝液包含醋酸和三水合醋酸鈉。在一些情況下，組胺酸緩衝液包含濃度為10mM的組胺酸鹽。

在抗體純化過程中，可能期望或有必要將一種緩衝液交換為另一種，以達成合適的賦形劑濃度、抗體濃度、pH等。可以例如藉由使用例如半透切向流過濾膜的超過濾/透濾作用(UF/DF)來完成緩衝液交換。然而，使用此類技術有可能引起吉布斯-唐南效應(Gibbs-Donnan effect)(Bolton等人，2011,《生物技術進展(Biotechnol.Prog.)》27(1)：140-152)。在蛋白質濃縮過程中，膜的產品側上正電荷的積累藉由正離子優先向膜的對側移動而在電學上得到配衡。此現象的潛在後果是，由於在UF/DF步驟期間帶正電荷的透濾緩衝賦形劑對帶正電荷的抗體蛋白的靜電排斥，因此某些組分(例如組胺酸)的最終濃度可能低於這些組分的預期目標濃度。因此，本發明包括以下製劑，其中由於吉布斯-唐南效應，例如組胺酸/醋酸的濃度在本文所敘述的量或範圍內變化。

體積排阻描述了高濃度樣品的特性，其中溶液總體積中的很大一部分被溶質佔據，尤其是大分子(如蛋白質)，使溶劑排除在此空間之外。隨後，此減少了可用於溶解其它溶質的溶劑的總體積，其可能會導致超過濾膜分配不均。因此，本發明包括製劑，其中由於體積排阻效應，例如組胺酸的濃度可在本文所敘述的量或範圍內變化。

在製造本發明製劑期間，製劑的組成可能發生變化。這些變化可包括活性成分的濃度、賦形劑的濃度和/或製劑的pH。本發明包括包含特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段的製劑，該特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段是穩定的且在賦形劑濃度變化高達至少10%的情況下保留效力。舉例來說，本文包括特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段製劑，其中該製劑的穩定性和效力不受抗體、輔料、緩衝液和/或表面活性劑的濃度的±10%或±20%變化影響。

藥物製劑的穩定性

本發明的藥物製劑展現高水準的穩定性。如本文所使用的關於藥物製劑的術語“穩定”意指藥物製劑內的抗體在儲存限定時間量之後保留可接受程度的結構和/或功能和/或生物活性。即使製劑中所含有的抗體在儲存限定時間量之後無法維持100%的其結構和/或功能和/或生物活性，該製劑仍可為穩定的。在某些情況下，約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的抗體在儲存限定時間量之後的結構和/或功能和/或生物活性的維持可視為“穩定的”。

在一些實施方案中，本發明的穩定的液體製劑具有2-10μm的平均粒徑，如藉由微流成像系統(MFI)所測定的。

在一些實施方案中，本發明的穩定的液體製劑具有250~350mOsm/kg H₂O之間的質量滲透壓莫耳濃度。

在一些實施方案中，穩定性可尤其藉由測定在給定溫度下儲存限定時間量之後製劑中抗體的蛋白含量(濃度)來測量。當本文使用“可接受的穩定度”時，該短語意指可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%。在某些實施例中，可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少。測量穩定性之前的限定時間量可為至少3天、至少5天、至少1週、至少10天、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少24個月、至少36個月或更長時間。當評定穩定性時藥物製劑可儲存的溫度可為約-80℃至約45℃的任何溫度，例如儲存在約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃或約45℃下。舉例來說，如果在4℃下儲存3個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑可視為穩定的。如果在4℃下儲存6個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存9個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存12個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存24個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存36個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存2週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存1個月後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存4週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存6週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存2週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存4週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存6週後，在製劑中檢測到抗體的蛋白含量變化不超過10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則藥物製劑也可視為穩定的。

在一些實施方案中，穩定性可尤其藉由測定在給定溫度下儲存限定時間量之後製劑中抗體的單體純度百分比來測量。抗體的單體純度尤其可以藉由尺寸排阻色譜法(例如尺寸排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC))來測定。當本文使用“可接受的穩定度”時，該短語意指可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到抗體的單體純度至少90%。在某些實施例中，可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到抗體的單體純度至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。測量穩定性之前的限定時間量可為至少3天、至少5天、至少1週、至少10天、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少24個月、至少36個月或更長時間。當評定穩定性時藥物製劑可儲存的溫度可為約-80℃至約45℃的任何溫度，例如儲存在約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃或約45℃下。舉例來說，如果在4℃下儲存3個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%或97%，則藥物製劑可視為穩定的。如果在4℃下儲存6個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%或97%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存9個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存12個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、 96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存24個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在4℃下儲存36個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存2週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存1個月後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存4週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存6週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、95%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存2週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存4週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存6週後，藉由SEC-HPLC檢測到抗體的單體純度大於約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%，則藥物製劑也可視為穩定的。

在其他的實施方案中，使用其它方法以評定本發明的製劑的穩定性，如用以測定溶液混濁度的在約405nm或約350nm處的吸光度、用以測定熱穩定性的差示掃描熱量測定(DSC)和用以測定機械穩定性的受控攪動。舉例來說，如果在約4℃至約25℃下儲存6週或更長時間後，本發明的製劑的OD405相對於t=0時製劑的OD405的變化小於約0.05(例如0.04、0.03、0.02、0.01或更小)，則製劑可視為穩定的。

在一些實施方案中，可以藉由檢測製劑的外觀、可見異物，來指示儲存後製劑的穩定性。在一個具體的實施方案中，在儲存後，藉由目視檢查本發明液體製劑的穩定性，其中本發明液體製劑在外觀上保持為澄清至微乳光，為無色至淡黃色液體，且無異物。在一個實施方案中，在澄明度檢測儀下目視檢查，製劑中無可見異物存在。

在其他的實施方案中，藉由測量抗體與其目標的結合親和力評定穩定性。舉例來說，如果在例如-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、40℃或45℃等溫度下儲存限定時間量(例如7天至12個月、24個月或36個月)後，本發明的製劑內所含有的特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段以抗體在該儲存之前的結合親和力的至少80%、85%、90%、95%或更多親和力結合至人MASP-2，則製劑可視為穩定的。結合親和力可藉由如ELISA或電漿共振的任何方法來測定。生物活性可藉由MASP-2活性分析來測定，例如藉由使表達MASP-2的細胞與包含特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段的製劑接觸。抗體與此類細胞的結合可如經由FACS分析來直接測量。

在一些實施方案中，穩定性可以藉由測定在限定條件下儲存限定時間量之後在製劑內形成聚集物(高分子量(HMW))的抗體的百分比來測量，其中穩定性與所形成的聚集物百分比成反比。經聚集的抗體的百分比可尤其藉由尺寸排阻色譜法(例如尺寸排阻高效液相色譜法(SEC-HPLC))來測定。當本文使用“可接受的穩定度”時，該短語意指至多6%的抗體呈在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到的聚集形式。在某些實施例中，可接受的穩定度意指可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中的聚集物中檢測到至多約6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體。測量穩定性之前的限定時間量可為至少3天、至少5天、至少1週、至少10天、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週或更長時間。當評定穩定性時藥物製劑可儲存的溫度可為約-80℃至約45℃的任何溫度，例如儲存在約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃或約45℃下。舉例來說，如果在40℃下儲存6週後，檢測到小於約10%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1.75%、1.5%、1.25%、1%、0.75%、0.5%、0.25%或0.1%呈聚集形式的抗體，則藥物製劑可視為穩定的。如果在25℃度下儲存6週後，檢測到小於約10%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1.75%、1.5%、1.25%、1%、0.75%、0.5%、0.25%或0.1%呈聚集形式的抗體，則藥物製劑也可視為穩定的。

在一些實施方案中，穩定性可尤其藉由測定在離子交換期間在比抗體的主要沖提份(“主要電荷形式”)更具酸性的沖提份(“酸性形式”)中遷移的抗體的百分比來測量，其中穩定性與呈酸性形式的抗體的分數成反比。“酸化”抗體的百分比可藉由離子交換色譜法(例如陽離子交換高效液相色譜法(CEX-HPLC))或全柱成像毛細管等電聚焦電泳法(icIEF)來測定。當本文使用“可接受的穩定度”時，該短語意指至多52%的抗體呈在限定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到的較具酸性形式。在某些實施例中，可接受的穩定度意指可在給定溫度下儲存限定時間量之後在製劑中檢測到至多約52%、50%、45%、40%、35%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%呈酸性形式的抗體。測量穩定性之前的限定時間量可為至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少30個月、至少36個月或更長時間。當評定穩定性時藥物製劑可儲存的溫度可為約-80℃至約45℃的任何溫度，例如儲存在約-80℃、約-30℃、約-20℃、約0℃、約4℃-8℃、約5℃、約25℃、約35℃、約37℃、約40℃或約45℃下。舉例來說，如果在-80℃、-30℃或-20℃下儲存36個月後，小於約29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體呈較具酸性形式，則藥物製劑可視為穩定的。如果在4℃下儲存12個月、24個月甚至36個月後，小於約28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體呈較具酸性形式，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在25℃下儲存4週或6週後，小於約30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體呈較具酸性形式，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在37℃下儲存4週或6週後，小於約37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、 12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的抗體呈較具酸性形式，則藥物製劑也可視為穩定的。如果在40℃下儲存4週或6週後，可檢測到小於約52%、51%、50%、49%、48%、47%、46%、45%、44%、43%、42%、41%、40%、39%、38%、37%、36%、35%、34%、33%、32%、31%、30%、29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%呈較具酸性形式的抗體，則藥物製劑也可視為穩定的。

在一個實施方案中，藉由測定蛋白在升溫過程中發生構型變化或聚集而使得粒徑發生變化時的轉變溫度T_onset，檢查本發明液體製劑的穩定性，例如，本發明的液體製劑具有高於約60℃、高於約63℃、高於約65℃、高於約68℃或高於約70℃的T_onset。

提及“指定時間段之後”藥物製劑的穩定性意指在指定時間段結束時或指定時間段快結束時進行穩定性參數測量，且意指對於其後所測量的參數，藥物製劑不一定維持相同穩定度。舉例來說，提及6週之後的特定穩定性意指在研究開始之後6週時或約6週時進行穩定性測量。用於評定製劑中的抗體的穩定性的額外方法展示於下文所呈現的實例中。

在本發明的一些較佳的實施方案中，製劑在振搖後(例如，振搖14天後)，按照如上文所述的評估方式是穩定的。

在本發明的一些較佳的實施方案中，製劑在攪拌後(例如，攪拌6小時後)，按照如上文所述的評估方式是穩定的。

在本發明的一些較佳的實施方案中，製劑在光照後(例如，光照3天後)，按照如上文所述的評估方式是穩定的。

在本發明的一些較佳的實施方案中，製劑在凍融後(例如，經5輪凍融後)，按照如上文所述的評估方式是穩定的。

示例性製劑

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml至200mg/ml±20mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

pH為4.7至6.0。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一個實施方案中，本發明的液體抗體製劑包含：

(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，藥物製劑包含：(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，(c)0.025% ±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨酯，和(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，pH為5.3±0.5。

在一些實施方案中，該藥物製劑不包含其他緩衝體系/緩衝液。

在一些實施方案中，該藥物製劑不包含其他表面活性劑。

在一些實施方案中，該藥物製劑不包含其他輔料。

本發明的包含抗MASP-2抗體或其抗原結合片段的藥物製劑處方，可以使該抗體在較高濃度(例如，約100mg/mL，約150mg/mL)和低濃度(例如，約20mg/mL，約50mg/mL)情況下的液體狀態時維持較好的穩定性，符合生產工藝的要求和臨床應用的需要，可以支持將該抗體開發為靜脈注射液和皮下注射液。

本發明所涵蓋的藥物製劑的額外非限制性實例在本文其它地方闡述，包括下文所呈現的工作實例。

容器和施用方法

本發明的藥物製劑可含於適用於儲存藥品和其它治療性組成物的任何容器內。舉例來說，藥物製劑可含於如小瓶、西林瓶、安瓿、注射器、藥筒、瓶或IV袋的具有限定體積的經密封且經滅菌的塑料或玻璃容器內。可使用包括例如澄清且不透明(例如琥珀色)玻璃或塑料小瓶的不同類型的小瓶以含有本發明的製劑。同樣，可使用任何類型的注射器以含有和/或施用本發明的藥物製劑。在一些實施方案中，藥物製劑含於預填充注射器中。在一些實施方案中，藥物製劑含於預填充立樁針注射器中。

本發明的藥物製劑可含於“正常鎢”注射器或“低鎢”注射器內。如所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解，製造玻璃注射器的方法一般涉及使用用以刺穿玻璃，由此產生可自其中抽吸液體且自注射器排出的洞的熱鎢棒。此過程導致痕量鎢沉積於注射器的內表面上。後續洗滌和其它處理步驟可用於減少注射器中的鎢的量。如本文所使用，術語“正常鎢”意指注射器含有大於500十億分率(ppb)的鎢。術語“低鎢”意指注射器含有小於500ppb的鎢。舉例來說，根據本發明，低鎢注射器可含有小於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10ppb或更少的鎢。

藥物製劑可以藉由如注射(例如皮下、靜脈內、肌內、腹膜內等)或經皮、經黏膜、經鼻、經肺和/或經口施用的非經腸途徑施用至患者。在一些實施方案中，本發明的藥物製劑利用可重複使用的筆式和/或自動注射器式遞送裝置進行皮下遞送。在一些情況下，藥物製劑含於特別適於與自動注射器一起使用的注射器中。

本文還考慮使用微輸注器來遞送本發明的藥物製劑。如本文所使用，術語“微輸注器”意指皮下遞送裝置，其經設計以在延長的時間段內(例如，約10、15、20、25、30或更長時間)緩慢地施用較大體積(例如，至多約2.5mL、約3.0mL或更多)的治療性製劑。

在某些實施例中，藥物製劑經由I.V.滴注施用，使得製劑在含有生理學可接受的溶液的IV袋中稀釋。在一個實施方案中，醫藥組成物是處於靜脈輸液袋中的複合無菌製劑，使得單劑量的藥品稀釋至100mL、250mL(或其它適合於靜脈內滴注遞送的類似量)的生理緩衝液(例如0.9%的鹽水)。

本發明的藥物製劑還可含於單位劑型中。如本文所使用，術語“單位劑型”是指適用作待治療的患者的單位劑量的物理離散單位，各單位含有經計算以與所需醫藥載劑、稀釋劑或賦形劑結合產生所期望治療效果的預定量的活性化合物。在各種實施例中，單位劑型含於如本文所論述的容器內。本發明的製劑中的活性成分(例如特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段)的實際劑量水準可變化以便獲得可有效達成特定患者、組成物和施用模式所期望的治療反應且對患者不具有副作用的量的活性成分。所選劑量水準將視各種藥物動力學因素而定，該因素包括所採用的本發明的特定組成物的活性、施用途徑、施用時間、所採用的特定化合物的排泄速率、治療持續時間、與所採用的特定組成物組合使用的其它藥物、化合物和/或物種、所治療患者的年齡、性別、體重、病況、一般健康狀況和先前病史；和醫學領域中熟知的類似因素。如本文所使用的術語“稀釋劑”是指適合於改變或達成如本文所描述的示例性或適當濃度或濃度的溶液。

在各種實施例中，單位劑型含有意圖單次使用的量的活性成分(例如特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段)。在各種實施例中，單位劑型中的活性成分的量為約0.1mg至約5000mg、約100mg至約1000mg，和約100mg至約500mg、約100mg至約400mg、約100mg至約200mg、約200mg至約400mg、約250mg至約350mg、約125mg至約175mg、約275mg至約325mg、約1mg至約250mg、約1mg至約100mg、約1mg至約50mg、約1mg至約25mg、約1mg至約10mg、約1mg至約5mg或其範圍或區間。例如約2mg至約100mg或2mg至20mg的上文所敘述量的中間範圍也意圖成為本發明的一部分。舉例來說，意圖包括使用上文所敘述值(或含於上文所敘述範圍內的值)中的任一個的組合作為上限值和/或下限值的值範圍。在特定實施例中，製劑常常以呈單位劑型的液體形式供應。在一些實施方案中，單位劑型含有2至2.5mg或10至11mg、20至25mg、80至90mg、100至125mg、160至180mg、200至225或320至360mg、200至400mg。在一些實施方案中，根據本發明的單位劑型適合於皮下施用至患者(例如，含有濃度為約100mg/ml或約150mg/ml的抗體的單位劑型)。

在一個實施方案中，本發明提供了在穩定製劑中包含約20mg、約80mg、約160mg、約200mg、約320mg或約400mg的抗體的單位劑型，其中該製劑包含200mg或400mg的抗體單位劑型。

本發明還包括製備單位劑型的方法。在示例性實施例中，用於製備醫藥單位劑型的方法包括在合適容器(例如本文所論述的那些容器)中合併前述實施例中的任一個的製劑。

在各種實施例中，藥物製劑含於容器(例如，小瓶或預填充注射器)中，該容器可含有小於5體積%的氧化氣體(例如氧氣)的頂隙氣體。在各個實施例中，容器的頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)的濃度可小於4.5%、小於4%、小於3.5%、小於3%、小於2.5%、小於2%或小於1.5%。在一個實施例中，頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)的濃度小於約1%。在一個實施例中，頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)的濃度不超過約0.5%。在一個實施例中，頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)的濃度不超過約0.1%。在各種實施例中，藥品容器的頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)的濃度小於0.9%、小於0.8%、小於0.7%、小於0.6%、小於0.5%、小於0.4%、小於0.3%、小於0.2%或小於0.1%。在一些情況下，頂隙氣體中的氧氣濃度為約0.01%至約1.5%。在一些情況下，頂隙氣體中的氧氣濃度為約0.75%至約1.25%。在一些情況下，頂隙氣體中的氧氣濃度為約0.05%至約0.15%。在各種實施例中，頂隙中的氧化氣體(例如氧氣)被惰性氣體如氮氣、氬氣、氦氣、氙氣、氖氣、氪氣或氡氣替代或基本上被替代。在一個實施例中，非氧化氣體為氮氣。在一個實施例中，非氧化氣體為氬氣。

藥物製劑的治療性用途

本發明的藥物製劑尤其適用於治療、預防和/或改善與表達人MASP-2的細胞相關的任何疾病或病症。可以藉由施用本發明的藥物製劑來治療的示例性、非限制性疾病和病症包括將受益於抑制MASP-2依賴性補體激活的疾病或病症。

在一些實施方案中，該將受益於抑制MASP-2依賴性補體激活的疾病或病症包括自身免疫性疾病、血管病症、缺血再灌注損傷、動脈硬化、炎症、肺部病症、體外再灌注過程、肌肉骨骼病症、腎臟病症、皮膚病症、器官或組織移植過程、神經系統疾病或損傷、血液疾病、泌尿生殖系統疾病、非肥胖型糖尿病或與1型或2型糖尿病相關併發症、癌症、內分泌疾病、眼科疾病或COVID-19(新冠肺炎)。

在一些具體的實施方案中，該血管病症血管病症包括心血管病症、腦血管病症、外週(如肌肉骨骼)血管病症、腎血管病症、腸系膜/腸道血管病症、移植物和/或再移植物的血管再生、血管炎、亨-舍二氏紫癜性腎炎、系統性紅斑狼瘡相關的血管炎、與類風濕性關節炎相關的血管炎、免疫複合物血管炎、大動脈炎、擴張型心肌病、糖尿病血管病、川崎病(動脈炎)、靜脈氣體栓塞(VGE)，以及支架置入術、旋轉動脈瘤切除術和經皮腔內冠狀動脈成形術(PTCA)後的再狹窄。

在本文提供的方法的一些實施方案中，受試者被確定為具有升高的C4血清水平，或在有關樣品中具有C4d沉積或C4d陽性染色。在一些實施方案中，該條件或疾病是IgA腎病。據報導，C4d陽性染色是IgAN發生ESRD的一個獨立風險因素。C4d可以用本領域已知的任何合適的方法進行檢測，例如，藉由使用ELISA，或免疫熒光顯微鏡。

本文提供的抗體或抗原結合片段的治療有效量將取決於本領域已知的各種因素，例如體重、年齡、過去的病史、目前的藥物、受試者的健康狀況和潛在的交叉反應、過敏、敏感和不良副作用，以及給藥途徑和疾病發展程度。所屬技術領域中具有通常知識者(如醫生或獸醫)可根據這些和其他情況或要求按比例減少或增加劑量。

在某些實施方案中，本文提供的抗MASP-2抗體或抗原結合片段的治療有效劑量為約0.01mg/kg至約100mg/kg(例如。約0.01毫克/千克，約0.5mg/kg、約1mg/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、或約100mg/kg)。在其中某些實施方案中，抗體或抗原結合片段的給藥劑量為約50mg/kg或更少，在其中某些實施方案中，劑量為10mg/kg或更少，5mg/kg或更少，3mg/kg或更少，1mg/kg或更少，或0.1mg/kg或更少。在某些實施方案中，給藥劑量可在治療過程中改變。例如，在某些實施方案中，初始給藥劑量可高於後續給藥劑量。在某些實施方案中，給藥劑量可根據受試者的反應在治療過程中變化。

可以調整劑量方案以提供最佳的預期反應(例如，治療反應)。例如，可以施用單一劑量，或在一段時間內施用幾個分割的劑量。

本文揭露的抗MASP-2抗體和抗原結合片段可藉由本領域已知的任何途徑給藥，例如腸外(如皮下、腹膜內、靜脈內，包括靜脈輸液、肌肉內或皮內注射)或非腸外(如口服、鼻內、眼內、舌下、直腸或局部)途徑。

在一些實施方案中，本文所揭露的抗MASP-2抗體或抗原結合片段可單獨或與一種或多種額外的治療手段或藥劑聯合施用。例如，本文所揭露的抗體或抗原結合片段可與另一種治療劑，如抗自體免疫藥物結合使用。

在某些實施方案中，本文所揭露的與一種或多種附加治療劑聯合施用的抗MASP-2抗體或抗原結合片段可與一種或多種附加治療劑同時施用，在某些實施方案中，抗體或抗原結合片段和附加治療劑可作為同一醫藥組成物的一部分施用。然而，抗MASP-2抗體或抗原結合片段與另一種治療劑"結合"使用，不一定要與該治療劑同時或在同一組成物中使用。在另一藥劑之前或之後施用的抗MASP-2抗體或抗原結合片段被認為是與該藥劑"聯合"施用，因為該短語在此使用，即使該抗體或抗原結合片段和第二藥劑是藉由不同途徑施用。在可能的情況下，與本文揭露的抗體或抗原結合片段聯合施用的額外治療劑是根據額外治療劑的產品信息表中列出的時間表，或根據Physicians' Desk Reference 2003(Physicians' Desk Reference,57th Ed；Medical Economics Company；ISBN：1563634457；57th edition(November 2002))或本領域中眾所周知的方案施用。

本發明的治療方法包含向個體施用包含如本文所揭露的特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段的任何製劑。施用藥物製劑的個體可為例如需要此類治療的任何人類或非人類動物。舉例來說，個體可為診斷患有前述疾病或病症中的任一者或視為處於罹患前述疾病或病症中的任一者的風險下的個體。本發明進一步包括本文所揭露的藥物製劑中的任一種在製造用於治療與表達人MASP-2的細胞相關的任何疾病或病症的藥劑中的用途，該任何疾病或病症包括上文所提及的示例性疾病、病症和病況中的任一者。

在一些實施方案中，本發明提供包含如本文所論述的藥物製劑(例如具有製劑或單位劑型的容器)和包裝或標簽(例如藥品說明書)以及藥物製劑使用說明書的試劑盒以治療如上文所論述的疾病或病症。在一些情況下，說明書提供如本文所論述的單位劑型用於治療疾病或病症的用途。

圖1顯示MASP-2抗體阻斷補體C3的激活。

圖2顯示MASP-2抗體阻斷補體C4的激活。

圖3顯示MASP-2抗體阻斷MAC的形成。

圖4顯示嵌合型和人源化MASP-2抗體阻斷補體C3的激活。

圖5顯示MASP-2抗體129C10-hu和OMS721-analog在2%的人血清中阻斷補體C4的激活。

圖6顯示MASP-2抗體129C10-hu和OMS721-analog在2%的人血清中阻斷MAC的形成。

圖7顯示MASP-2抗體在1%人血清中阻斷C3激活。

圖8顯示MASP-2抗體在10%人血清中阻斷C3激活。

圖9顯示MASP-2抗體在50%的人血清中阻斷C3的激活。

圖10顯示MASP-2抗體在10%的人血清中阻斷C4的激活。

圖11顯示了MASP-2抗體129C10-hu與hMASP-2的親和力動力學。

圖12A至圖12E顯示藉由ELISA檢測MASP-2抗體129C10-Hu與人C1s(12A)、C1r(12B)、MASP1(12C)、MASP3(12D)和MASP2(12E)的結合。

圖13A及圖13B顯示藉由ELISA檢測MASP-2抗體129C10-hu(13A)和OMS721-analog(13B)與人、食蟹猴、大鼠和小鼠MASP2的結合。

圖14顯示MASP-2抗體129C10-hu與食蟹猴MASP-2的交叉反應性。

圖15顯示MASP-2抗體129C10-hu中和三種補體激活途徑的選擇性。

圖16A及圖16B顯示MASP-2抗體129C10-hu-WT(16A)和129C10-hu-YTE(16B)與人FcRn的結合動力學曲線。

圖17顯示了MASP-2抗體129C10-hu-WT和129C10-hu-YTE在食蟹猴血清中的藥代動力學(PK)結果。

圖18A至圖18C顯示了MASP-2抗體129C10-hu-WT和129C10-hu-YTE在食蟹猴血清中的PK和藥效學(PD)結果。

圖19顯示了129C10-hu在第一次用藥後對猴血清C4c的降低作用。

圖20顯示了129C10-hu在第四個劑量後對猴血清C4c的降低作用。

圖21至圖23涉及用於篩選製劑最適pH值的F12-F20處方於高溫40℃條件下放置14天後的相關實驗結果。圖21所示為九個處方藉由SEC檢測HMW%的結果。圖22所示為九個處方藉由NR CE-SDS檢測LMW%的結果。圖23所示為九個處方藉由CEX檢測主峰、酸性峰和鹼性峰的百分比的結果。

圖24至圖29涉及用於篩選最適輔料的F1-F5處方的相關實驗結果。圖24-圖26分別為五個處方於高溫40℃條件下放置14天後的SEC、NR CE-SDS和CEX結果。圖27所示為各處方在振搖14天條件下的CEX結果。圖28及圖29所示分別為各處方在攪拌6小時條件下的CEX、NR CE-SDS結果。

圖30至圖32涉及用於篩選最適表面活性劑的F6-F11處方的相關實驗結果。圖30所示為六個處方於高溫40℃條件下放置14天後的SEC結果。圖31及圖32所示分別為各處方在100rpm攪拌6小時條件下藉由NR CE-SDS和CEX檢測穩定性結果。

圖33至圖44涉及用於篩選最適處方的F31-F37處方的相關實驗結果。圖33至圖35分別為七個處方於高溫40℃條件下放置4-6週後的SEC、NR CE-SDS和CEX結果。圖36至圖38分別為七個處方於25℃條件下放置4-6週後的SEC、NR CE-SDS和CEX結果。圖39至圖41分別為七個處方於光照3天條件下的SEC、NR CE-SDS和CEX結果。圖42至圖44分別為七個處方於200rpm振搖條件下處理10天的SEC、NR CE-SDS和CEX結果。

以下實施例的目的是便於向所屬技術領域中具有通常知識者提供如何製造和使用本發明的方法和組成物的完整揭露內容和描述，且並不意在限制本發明所要求保護的範圍。已努力確保關於所用數字(例如量、溫度等)的準確性，但還應考慮一些實驗誤差和偏差。除非另有指示，否則份數為重量份，分子量為平均分子量，溫度以攝氏度計，且壓力為大氣壓或接近大氣壓。

註：本發明表格中的NT若無特別說明，表示未檢測；ND若無特別說明，表示未檢出。

實施例1：人、小鼠、食蟹猴MASP-2抗原的產生

1.表達用抗原的構建

為了將抗體的表位限制在人MASP-2的補體結合和激活結構域上，我們設計了一種用於動物免疫的嵌合抗原。合成了表達小鼠MASP-2 CUB1-EGF-CUB2結構域(SEQ ID NO：40的殘基20-297)和人MASP-2 CCP1-CCP2-SP結構域(SEQ ID NO：39的殘基298-686)的編碼序列。此外，在N端添加IL-2分泌信號肽序列(SEQ ID NO：41)，在C端加入FLAG標簽序列。上述元件被組合成一個開放閱讀框(ORF)，製成一個嵌合抗原表達構建體(SEQ ID NO：42)。其他表達全長人MASP-2(SEQ ID NO：39)、小鼠MASP-2(SEQ ID NO：40)和食蟹猴MASP-2(SEQ ID NO：43)的構建體，在C端加入HIS標簽，藉由合成製成。另外，藉由PCR方法製作了另一個表達全長的人MASP-2(SEQ ID NO：39)並在C端帶有FLAG標記的構建體。

人MASP-2蛋白(SEQ ID NO：39)

小鼠MASP-2蛋白(SEQ ID NO：40)

IL-2分泌信號肽序列(SEQ ID NO：41)

MYRMQLLSCI ALSLALVTNS

嵌合MASP-2蛋白(SEQ ID NO：4)

食蟹猴MASP-2蛋白(SEQ ID NO：43)

2.MASP-2抗原的表達和純化

用ExpiFectamine CHO轉染試劑盒將上述的MASP-2表達構建體分別轉染到ExpiCHO-s細胞。ExpiCHO-s細胞在無血清的ExpiCHO表達培養基中培養。轉染後14天，收集上清液。離心和過濾後，上清液被加載到抗FLAG或抗HIS管柱上，然後用GE AKTA純化系統進行純化。清洗後，MASP-2蛋白用檸檬酸(pH3.5)沖提，用於動物免疫。

實施例2：MASP-2抗體的產生

1.免疫接種和融合瘤融合

經由Helios基因槍系統(Bio-Rad)用表達上述嵌合MASP-2抗原的DNA對不同品系的小鼠或大鼠進行免疫。每兩週用重組MASP-2蛋白對免疫的動物進行加強。在最後一次加強免疫的4天後，處死動物進行融合瘤融合。分離脾臟細胞並經由電融合方法與SP2-0細胞融合。得到的融合瘤細胞在含有次黃嘌呤-胺蝶呤-胸苷的DMEM培養基中培養。

2.融合瘤篩選

培養10天後，收集融合瘤上清液進行抗原結合篩選。全長的人MASP-2蛋白以0.5μg/ml的濃度包被在ELISA板中，每孔100μl。用含有1%BSA+1%正常山羊血清+0.05%Tween20的PBS封閉後，將融合瘤上清液加入板中1小時。用辣根過氧化物酶(HRP)連接的抗鼠抗體檢測融合瘤抗體與人MASP-2的特異性結合。挑選出ELISA結合的陽性株，進行進一步的活性篩選。

3.活性篩選

ELISA板用10μg/ml甘露聚糖包被，每孔100μl，4℃過夜。用PBS+0.1% Tween20洗滌3次後，用封閉緩衝液(10mM Tris-HCl+0.1%人血清白蛋白+140mM NaCl)封閉平板1小時。將50μl融合瘤上清液與50μl用檢測緩衝液(0.1%人血清白蛋白+20mM Tris-HCl+2mM CaCl₂+140mM NaCl+1mM MgCl₂+0.05% Tween20)稀釋的1%人血清(Quidel，A113)混合，然後在冰上孵育45分鐘。將封閉緩衝液從甘露聚糖包被平板上棄去，並加入上清液-血清混合物。將平板在37℃下孵育1.5小時。用洗滌緩衝液洗滌3次後，藉由測量C4b的沉積來監測C4的激活。沉積的C4b藉由HRP連接的抗C4c抗體(Quidel-A211)檢測。如果MASP-2的活性被抗體所抑制，則沉積在平板底部的C4b就會減少。藉由使用這種方法，選擇具有MASP-2抑制活性的融合瘤抗體。

然後對陽性抗體進行亞選殖，並藉由ELISA結合和C4激活試驗進行重新篩選。

實施例3：抗人MASP-2抗體的抑制活性的表徵。

1.融合瘤抗體的純化

亞選殖後，將具有中和活性的陽性融合瘤株在10cm皿中擴增。離心過濾後，將含抗體的上清液裝入蛋白A管柱，用GE AKTA純化系統進行純化。清洗後，用檸檬酸(pH3.5)沖提抗體。

2.純化抗體的活性評估

MASP-2是凝集素途徑的一個關鍵成分，它可以裂解補體因子C4和C2，生成C3轉化酶C4bC2a。C3的激活最終導致了膜攻擊複合物(MAC)的形成。為了測試抑制MASP-2的抗體是否能減少凝集素途徑的激活，在純化的MASP-2抗體存在的情況下，對C4、C3和MAC的激活進行了評估。

ELISA板用10μg/ml甘露聚糖包被，每孔100μl，4℃過夜。用PBS+0.1% Tween20洗滌3次後，用封閉緩衝液(10mM Tris-HCl+0.1%人血清白蛋白+140mM NaCl)封閉平板1小時。用含有1%人血清(Quidel，A113)的檢測緩衝液(0.1%人血清白蛋白+20mM Tris-HCl+2mM CaCl₂+140mM NaCl+1mM MgCl₂+0.05% Tween20)連續稀釋抗體並在冰上孵育45分鐘。將封閉緩衝液從甘露聚糖包被平板上棄去，加入抗體-血清混合物。將平板在37℃下孵育1.5小時。激活的補體成分應沉積在板的底面，而未激活的成分仍可溶於緩衝液。用洗滌緩衝液洗滌3次後，用HRP連接的補體抗體，包括抗C3c抗體(Quidel-A205)、抗C4c抗體(Quidel-A211)和抗MAC(SC5b-9)抗體(Quidel-A239)監測補體成分的激活。檢測抗體是在內部用HRP連接的。從融合瘤細胞中純化的MASP-2抗體以劑量依賴的方式阻止了補體C3(見圖1)、補體C4(見圖2)和MAC(見圖3)的激活。

實施例4：V型基因的選殖和嵌合抗體的生成

1.融合瘤抗體的V型基因選殖和測序

挑選出具有理想特徵的主導抗體進行V型基因選殖。藉由聚合酶鏈反應(PCR)擴增技術獲得鼠抗人MASP-2輕鏈和重鏈可變區的序列。用MiniBest Universal RNA Extraction Kit(TaKaRa)分離出陽性融合瘤細胞的總RNA，用1st Strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)與Oligo(dT)引子合成cDNA。藉由PCR擴增小鼠IgG基因的可變區域，重鏈可變區域使用不同同型的引子，輕鏈可變區域使用Kappa鏈引子。PCR產物被亞選殖到一個TA選殖載體中。對於每個可變基因構建體，將10個以上的單株用於由Synbio Technologies(中國蘇州)進行DNA測序。VH和Vκ的胺基酸序列由DNA測序結果得出。

2.嵌合抗體的構建

三個不同序列的抗體，包括129C10、160D10和125D5，被選為產生嵌合抗體的先導抗體，其SEQ列於表1和表2。經過測序分析和確認，合成了重鏈和輕鏈可變區的cDNA，並與人IgG4和人kappa的恆定區序列相融合。為了提高抗體的分泌，在重鏈和輕鏈的N端分別加入了信號肽序列。得到的嵌合抗體基因被選殖到表達載體中。藉由使用Qiagen公司的Plasmid Maxi-prep System製備大規模的DNA。

3.嵌合抗體的表達和純化

根據製造商的協議，使用Invitrogen公司的ExpiFectamine^TM CHO試劑進行重鏈和輕鏈的共轉染。使用ExpiFectamine^TM CHO試劑將ExpiCHO-S細胞在ExpiCHO表達培養基中以5-6x10⁶細胞/ml的濃度轉染等量的最終濃度為0.8μg/ml的重鏈載體和輕鏈載體DNA。將質粒DNA或ExpiFectamine^TM CHO試劑用冷的OptiPRO^TM培養基稀釋，然後藉由旋轉試管和/或倒置混合。將ExpiFectamine^TM CHO/質粒DNA混合物在室溫下孵育1-5分鐘，然後慢慢轉移到裝有細胞的搖瓶中。轉染的細胞在37℃，5%CO₂的濕潤氣氛下，在軌道搖床(125rpm的搖動速度)上培養。轉染後18至22小時，加入ExpiCHO^TM Feed，並在第10天收穫條件培養基。將上清液以4,000rpm的速度離心20分鐘，然後藉由0.22μm的過濾囊過濾以去除細胞碎片。過濾後的上清液被裝入預平衡的Protein-A親和管柱。用平衡緩衝液(PBS)清洗Protein-A樹脂，然後用25mM檸檬酸鹽(pH3.5)來沖提抗體。用1M Tris-base(pH9.0)將純化的抗體溶液調節到pH6.0-7.0。內毒素被控制在1EU/mg以下。最後，純化的抗體藉由SDS-PAGE進行鑑定。

實施例5：人源化抗體的產生和特性化

1.人源化抗體的產生、表達和純化

小鼠抗體129C10的可變區結構域的序列被用來確定與各自小鼠框架具有最高同源性的胚系序列。使用計算機建模設計帶有CDR嫁接和回復突變的人源化變體。

129C10

人胚系框架序列VH/1-2用於重鏈，VK/2-30用於輕鏈，分別用於CDR嫁接。

重鏈(HC)變體1、2、3和4是藉由將三個CDR直接嫁接到胚系序列(SEQ ID NO：37)，此外，分別對於HC變體1有R71V、A93T突變(SEQ ID NO：20)，對於HC變體2有R71V，A93T，V67A，M69L突變(SEQ ID NO：22)，對於HC變體3有R71V，A93T，A65G，K64Q，E61Q突變(SEQ ID NO：24)和對於HC變體4有R71V，A93T，V67A，M69L，A65G，K64Q，E61Q突變(SEQ ID NO：26)而得到的。應該注意的是，HC變體3和4有3個突變(A65G，K64Q，E61Q)被引入HC CDR2中，以進一步提高抗體的人源化。

129C10 HC的胚系序列：

VH/1-2(129C10-HC胚系，SEQ ID NO：37)。

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR

VH/1-2變體1(Hu129C10_Ha，SEQ ID NO：20)。

VH/1-2變體2(Hu129C10_Hb，SEQ ID NO：22)。

VH/1-2變體3(Hu129C10_Hc，SEQ ID NO：24)。

VH/1-2變體4(Hu129C10_Hd，SEQ ID NO：26)。

輕鏈(LC)變體1和2是藉由將三個CDR直接嫁接到胚系序列(SEQ ID NO：38)，另外，分別對於LC變體1有F36L回復突變(SEQ ID NO：28)和對於LC變體2有F36L、T69A回復突變(SEQ ID NO：30)而得到的。

129C10 LC的胚系序列

VK/2-30(129C10-LC-胚系，SEQ ID NO：38)

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWP

VK/2-30變體1(Hu129C10_La，SEQ ID NO：28)。

VK/2-30變體2(Hu129C10_Lb，SEQ ID NO：30)。

合成了上述重鏈和輕鏈的可變區的cDNA，然後與人IgG4和人kappa的恆定區的序列相融合。得到的抗體基因序列被選殖到一個表達載體中。使用Qiagen公司的Plasmid Maxiprep系統製備大規模的DNA，並根據製造商的協議使用Invitrogen公司的ExpiFectamine^TM CHO試劑進行細胞轉染。當細胞活力超過60%時收穫上清液，並藉由0.22微米的過濾囊過濾以去除細胞碎片。過濾後的上清液隨後被加載到一個預平衡的Protein-A親和管柱上。用平衡緩衝液(PBS)清洗蛋白A樹脂，然後用25mM檸檬酸鹽(pH3.5)沖提抗體。用1M Tris- base(pH9.0)將純化的抗體溶液調節到pH6.0-7.0。內毒素被控制在1EU/mg以下。最後，純化的抗體藉由SDS-PAGE進行鑑定。

還構建了基準抗體OMS721-analog和129C10-hu-YTE(Hu129C10_HaLa-hIgG4並具有胺基酸取代M252Y/S254T/T256E[YTE]，見表2-3)，表達和純化過程與上述相同。

實施例6：嵌合型和人源化MASP-2抗體的阻斷活性

將純化的抗體從100μg/ml開始連續稀釋，得到一個梯度濃度。補體C3激活試驗用於評估MASP-2抗體的阻斷活性，如實施例3所述。將每孔100μl的10μg/ml甘露聚糖包被在ELISA板上，在4℃下過夜。將抗體與1%人血清(Quidel，A113)在冰上孵育45分鐘。洗滌和封閉板後，加入抗體-血清混合物並在37℃下孵育90分鐘。清洗後，用HRP連接的抗C3c抗體(Quidel-A205)檢測沉積的活化C3。圖4顯示了嵌合抗體和人源化抗體對補體C3激活的阻斷活性。由於人源化的129C10變體129C10HaLa顯示出最好的親和力和C3阻斷活性，129C10HaLa被選為進一步的體外和體內研究的主導抗體，並被命名為129C10-hu。

實施例7：先導抗體129C10-hu與基準抗體OMS721-analog之間阻斷補體C4和MAC的活性比較

1.阻斷補體C4和MAC激活的活性比較

使用實施例3中描述的檢測方法，對先導MASP-2抗體129C10-hu和OMS721-analog在2%人血清中對補體C4和MAC激活的阻斷活性進行了比較。將每孔100μl的10μg/ml甘露聚糖包被在ELISA板上，在4℃下過夜。將抗體與2%人血清(Quidel，A113)在冰上孵育45分鐘。洗滌和封閉板後，加入抗體-血清混合物，在37℃下孵育90分鐘。清洗後，用HRP連接的抗C4c抗體(Quidel- A211)檢測沉積的活化C4。對於MAC的激活，用HRP連接的抗MAC(SC5b-9)抗體(Quidel-A239)檢測。如圖5和圖6所示，結果表明，相比於OMS721-analog，129C10-hu在阻斷補體C4(IC50：0.11μg/mL vs.1.70μg/mL)和MAC(IC50：0.27μg/mL vs.1.97μg/mL)的激活方面更強效約10倍。

2.不同濃度血清中的活性比較

不同濃度(1%、10%和50%)的人血清被用於補體C3激活試驗。對於1%和10%的人血清，檢測方法與實施例3中所述相同。對於50%的人血清，以1μg/ml的濃度包被甘露聚糖，每孔100μl，4℃過夜。用PBS+0.1% Tween20洗滌3次後，用封閉緩衝液(10mM Tris-HCl+0.1%人血清白蛋白+140mM NaCl)封閉平板1小時。用含有50%人血清(Quidel，A113)的測定緩衝液(0.1%人血清白蛋白+20mM Tris-HCl+2mM CaCl₂+140mM NaCl+1mM MgCl₂+0.05% Tween20)連續稀釋抗體，然後在冰上孵育45分鐘。將封閉緩衝液從甘露聚糖包被的平板上移走，加入抗體-血清混合物。平板在37℃下孵育30分鐘。清洗3次後，用HRP連接的抗C3c抗體(Quidel-A205)檢測活化的C3。如圖7所示，129C10-hu和OMS721-analog對1%血清中的C3激活有類似的抑制功效(IC50：0.08μg/mL vs.0.10μg/mL)。有趣的是129C10-hu在10%血清的高濃度下表現出比OMS721-analog高3倍的效力(IC50：0.20μg/mL vs.0.69μg/mL)(見圖8)。更重要的是，在50%的血清濃度下，129C10-hu仍然具有阻斷C3激活的活性，IC50為0.05μg/mL，而OMS721-analog則失去活性(見圖9)。對於阻斷C4的激活，129C10-hu在10%的人血清中也顯示出比OMS721-analog高2倍的效力(IC50：0.69μg/mL vs.1.59μg/mL)(見圖10)。

實施例8：藉由生物層干涉儀(ForteBio)檢測MASP-2抗體與人MASP-2的結合親和力

用ForteBio動力學緩衝液(PBS pH 7.4，0.1% BSA+0.002% Tween-20)將待測抗體稀釋到100nM的濃度。用動力學緩衝液稀釋人MASP-2蛋白，得到100nM、50nM和25nM三個濃度的梯度。0nM被用來作為參考對照。抗體被固定在Protein A生物傳感器上。檢測基線60秒，然後檢測抗體與MASP-2的締合180秒，得到K_on因子數據。隨後在動力學緩衝液中解離180秒，得到K_off因子數據。生物傳感器的再生是在10mM甘胺酸，pH2.0的緩衝液中。所有的動力學數據都是在30℃下收集的。數據是藉由使用ForteBio Octet RED96獲取，並藉由Octet Data Analysis軟體進行分析。如表3所示，所有測試的MASP-2融合瘤抗體與人MASP-2有很高的結合親和力，KD值從10^-10M到10^-8M。人源化後，主導抗體129C10-hu(129C10-HaLa)與hMASP-2保持最高的結合親和力，KD值<10^-12M(達到ForteBio的檢測極限)(表4)，K_on值為3.53E+4，K_off值為<1.0E-7(見圖11)。

表3 MASP-2融合瘤抗體的結合親和力

表4 MASP-2人源化或嵌合抗體的結合親和力

實施例9：藉由ELISA檢測129C10-hu的結合特異性

人C1s/C1r、MASP-1/3均購自R&D、Cusbio等。將重組人補體成分C1s/C1r、MASP-1或MASP-3(1mg/ml)在4℃下包被過夜；用洗滌緩衝液洗滌三次；在4℃下加入封閉緩衝液(200μL/孔)1h；洗滌三次；在RT下加入連續稀釋的Ab 1h；洗滌三次；加入小鼠抗人IgG4 HRP(1：20000)，在RT下1小時；洗滌三次；用四甲基聯苯胺(TMB)在OD450nm下檢測40分鐘。129C10-Hu和OMS721-analog與C1s、C1r、MASP1、MASP2或MASP3結合的EC50分別顯示在圖12A-12E。結果顯示，129C10-Hu只與人MASP2結合，而不與人C1s、C1r、MASP1或MASP3結合。

實施例10：藉由ELISA對129C10-hu進行交叉反應

大鼠/小鼠MASP-2是向Cusbio公司訂購的。人/食蟹猴MASP-2是在內部生成的。ELISA測定按以下程序進行。將不同物種的MASP2(1μg/ml)在4℃下包被過夜；用洗滌緩衝液洗滌三次；在RT下加入封閉緩衝液(200μL/孔)2小時；洗滌三次；在RT下加入連續稀釋的129C10-hu或作為對照的OMS721-analog 1小時；洗滌三次；在RT下加入小鼠抗人IgG4 Fc HRP(1：20000)1小時；洗滌三次；用TMB在OD450nm下檢測2分鐘。129C10-Hu和OMS721-analog與不同物種的MASP-2的結合EC50分別見圖13A和圖13B。

實施例11：129C10-hu與食蟹猴MASP-2的交叉反應性，藉由使用食蟹猴血清中的C4激活測定

除了使用食蟹猴的血清外，測定方法與實施例3中描述的相同。每孔100μl，10μg/ml甘露聚糖包被在ELISA板上，4℃過夜。將抗體與1%食蟹猴的血清在冰上孵育45分鐘。洗滌和封閉板後，加入抗體-血清混合物，然後在37℃下孵育90分鐘。清洗後，用HRP連接的抗C4c抗體(Quidel-A211)檢測沉積的活化C4。如圖14所示，129C10阻斷了食蟹猴的C4激活，其IC₅₀為0.4973μg/ml，表明129C10可以與食蟹猴MASP-2結合，阻斷其活性。

實施例12：129C10在阻斷MB-Lectin補體途徑的激活方面的選擇性

有3條途徑可以啟動補體激活：經典途徑、MB-Lectin(MBL)途徑和替代途徑。這些途徑的啟動依賴於不同的分子，而它們彙聚在一起產生同一套效應分子，如膜攻擊複合物(MAC)。這三種途徑都是先天免疫的重要組成部分，在防禦不同的感染中發揮不同的作用(Noris M,et.Al.2013.JM.)。接下來，測試了129C10-hu阻斷MBL途徑的選擇性。

Wieslab補體系統篩選試劑盒(IBL America,Cat# COMPL 300 RUO)被用來確定主導抗體129C10-hu的選擇性。板上預包被有甘露聚糖作為MBL途徑的啟動劑，IgM作為經典途徑的啟動劑，LPS作為替代途徑的啟動劑。用含有人類血清(Quidel，A113)的測定緩衝液連續稀釋129C10-hu，然後在冰上孵育45分鐘。將抗體-血清混合物加入平板中，在37℃下孵育60分鐘。清洗後，用AP連接的抗C5b-9抗體檢測沉積的MAC。EDTA被用來作為阻斷補體激活的陽性對照。如圖15a-15C所示的結果，129C10-hu只阻斷了從MBL途徑啟動的補體激活，而不是其他兩條補體途徑，這表明129C10-hu抗體選擇性地阻斷了MBL途徑的補體激活。

實施例13：藉由在Fc處引入YTE突變來延長129C10-hu的半衰期。

Dall'Acqua WF等人報告說，在IgG的Fc部分引入三重突變M252Y/S254T/T256E(YTE)可以增強其與FcRn的結合親和力並延長其在體內的半衰期(Dall'Acqua WF,et.al.2006.JBC)。Motavizumab-YTE是人類第一個YTE突變的IgG，在I期臨床試驗中顯示出良好的耐受性和延長的半衰期(Robbie,G.J.,et.al.2013.AAC)。

我們將這種M252Y/S254T/T256E(YTE)突變引入129C10-hu，生成129C10-hu-YTE。用生物層干涉儀(ForteBio)評估了它與FcRn的結合親和力。129C10-hu或129C10-hu-YTE用ForteBio動力學緩衝液(PBS pH 7.4,0.1% BSA+0.002% Tween-20)稀釋到500nM、167nM、56nM、19nM和0nM的系列濃度。帶His標簽的人FcRn(FCGRT&B2M)蛋白用動力學緩衝液稀釋到100nM的濃度梯度。FcRn蛋白被固定在Ni-NTA生物傳感器上。記錄和分析了締合和解離的動力學過程。如圖16A、圖16B和表5所示，YTE突變使129C10-hu與人FcRn的結合親和力增加了3倍。

表5 129C10-hu和129C10-hu-YTE與人FcRn的結合親和力

實施例14：MASP-2抗體129C10-hu和129C10-hu-YTE在食蟹猴中的藥代動力學(PK)/藥效動力學(PD)研究

每組2隻食蟹猴靜脈注射10mg/kg 129C10-hu、129C10-hu-YTE或OMS721-analog。在輸液後0、0.5、2、8、24、48、72、96、168、336、504、672、840小時收集血清樣品。測試了血清中的抗體濃度和凝集素途徑激活的效力。

血清濃度用開發的ELISA方法測定，檢測範圍為0.625-40ng/mL。微孔板上預包被有人IgG特異性抗IgG抗體[R10z8e6]。封閉後，加入標準(STD)、質控(QC)樣品、基質空白樣品和測試樣品。洗滌後，將生物素小鼠抗人IgG4加入微孔板孔中，隨後加入用HRP標記的鏈黴親和素。在微孔板孔中加入TMB。藉由與同時分析的標準曲線進行比較，將質控和測試樣品的OD值轉換為濃度，根據四參數的邏輯模型進行回歸。

對於凝集素途徑的激活效力測試，將10μg/ml甘露聚糖包被在ELISA板上。用C4激活緩衝液將食蟹猴血清樣品稀釋到2%。洗滌和封閉平板後，加入稀釋的血清並在37℃下孵育90分鐘。清洗後，用HRP連接的抗C4c抗體(Quidel-A211)檢測沉積的活化C4。

如圖17和表6所示的PK結果，129C10-hu在食蟹猴中的半衰期164.77小時比OMS721-analog(130.152小時)長。YTE突變使129C10-hu的半衰期增加到274.404小時。如圖18所示的PD結果，抗體給藥0.5小時後，凝集素途徑的激活效力被抑制到基礎水平。抑制效果在OMS721-模擬組持續2週，在129C10-hu組持續3週，在129C10-hu-YTE組持續約4週。

表6 食蟹猴PK試驗的數據匯總

在另一項單獨的研究中，雄性和雌性食蟹猴被分配到五組，每組2雄性和2雌性，藉由皮下注射0(溶媒對照)、15、20和295.8mg/kg 129C10-hu，或藉由靜脈注射15mg/kg 129C10-hu，注射量為3mL/kg，持續4週(多達五次)。溶媒對照文章使用藥物配方緩衝液。

在用藥前並分別在第一劑(見圖19)和第四劑(見圖20)後約0.083、2、6、24、48、96和168小時採集血樣。血清中的補體4c(C4c)用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行分析。簡而言之，甘露聚糖(Sigma)用包被緩衝液稀釋到10μg/ml。在96孔板的每個孔中加入100μl的甘露聚糖工作溶液。將平板在4℃下孵育過夜。洗滌平板三次，然後加入200μl封閉緩衝液，在室溫下孵育1h。用C4激活緩衝液將猴血清稀釋至2%。在96孔板中加入100μl稀釋後的血清，在37℃下孵育70分鐘。用洗滌緩衝液清洗平板三次。加入100μl HRP連接的抗C4c抗體(用封閉緩衝液稀釋為1：5000)，在室溫下孵育1小時。用洗滌緩衝液清洗平板三次。在96孔板的每個孔中加入100μl TMB受質溶液，在室溫下孵育5-10分鐘。向每孔板中加入50μl終止液。在450奈米處讀取平板。在450奈米處的光密度(OD450)值表示為單個值，並計算每個動物每個時間點的平均值。

在第一次和第四次用藥後，血清C4c在

15mg/kg時出現劑量依賴性降低，在皮下用藥的動物中給藥後2小時開始出現，在經由I.V.用藥的動物中給藥後0.083小時開始出現，藉由S.C或I.V.給藥的3個劑量水平在整個用藥期間，效果持續存在，在第一劑量後24-96小時具有最大效果，注意到藉由S.C.給藥的劑量為295.8mg/kg時，與基線值相比，最大平均降幅在雄性動物中高達88.4%，在雌性動物中高達92.8%。總之，在每週一次以劑量為15、60或295.8mg/kg藉由S.C.或I.V.給藥5個劑量後，129C10-hu對猴血清C4c有明顯的劑量依賴性降低作用，表明血清C4c可能是一個潛在的藥效學標誌物。

實施例15：抗體製劑研究的材料與方法

本發明製劑研究中選用的蛋白即抗體分子以129C10-hu-YTE為示例進行考察。

本發明所用的儀器設備參見如下表7，耗材參見如下表8，試劑參見如下表9。

表7 儀器設備

表8 耗材

表9 試劑

本發明中涉及的方法步驟如下：

1.通用緩衝液製備方法：所有緩衝液的製備均使用特定的酸性和鹼性離子對。準確稱取酸性，鹼性離子對的輔料，加入約為目標緩衝液體積的60%的Milli-Q水，混合均勻後，測定溶液的pH。如果pH值偏離目標值，需使用相應的離子對調節pH。然後將溶液用Milli-Q水稀釋至目標重量或目標體積。最後測定溶液的電導率，滲透壓和pH以進行驗證。

2.樣品製備方法：用透析法將DS緩衝液置換到目標製劑處方中，或者直接將高濃度輔料、表面活性劑加入高濃度DS中，然後將DS稀釋至目標濃度。透析方法根據使用的耗材可以分為以下兩種：(1)如果目標製劑的處方與DS中的緩衝液不同，則使用透析方法將DS緩衝液置換為目標製劑處方(表面活性劑不可藉由透析方法加入)。將樣品裝入SnakeSkin^®透析袋，密封後，放入體積大約是樣品量100到200倍的緩衝液中。透析進行3次，持續時間分別為4小時，4小時和過夜，攪拌速度為200rpm。然後移取適量的表面活性劑和其他輔料儲備液加入樣品溶液中，並將樣品溶液稀釋至目標濃度。(2)還可使用Slide-A-Lyzer透析卡進行透析。使用帶針注射器將3-12ml樣品裝入透析卡內，浸入100到200倍的目標緩衝液中，在室溫下，以300轉/分攪拌將透析卡持續透析三次，時間分別為4小時，4小時和過夜。

3.外觀：藉由YB-2澄明度檢測儀檢查黑色和白色背景的外觀。報告澄清度，顏色和可見顆粒。

4.pH：樣品pH藉由安裝有Inlab® Micro-Pro-ISM電極的Seven Compact pH計測量樣品pH。在使用前校準pH計。

5.蛋白濃度：藉由Nano Drop 2000分光光度計在280nm處的吸光度測定蛋白質濃度。在整個研究中使用的消光係數(E1%)為1.422L/g/cm。每個樣品在2.0μL的加載體積下測量兩次，報告平均濃度。

6.動態光散射儀(DLS)：藉由DLS使用以下測量條件測定蛋白質大小分佈：採集時間：5s，每次測量採集：20次，溫度：25℃。

6.1 利用DLS測定k _D值：將樣品用相應的緩衝液稀釋至濃度為1、2、4、8、12、16、20mg/mL，利用DLS對其k _D值進行分析，採集時間：5s，每次測量採集：20次，溫度：25℃。

6.2 利用DLS測定黏度：將待測樣品與直徑為100nm的標準粒子混合，標準粒子的終濃度為1%，利用DLS測得標準粒子的表觀粒徑，採集時間：5s，每次測量採集：20次，溫度：25℃，並採集的數據經DYNAMICS軟體進行分析計算出體系的黏度。

6.3 利用DLS測定T_onset值：T_onset測定的是蛋白在升溫過程中發生構型變化或聚集而使得粒徑發生變化時的轉變溫度。將樣品用相應緩衝液稀釋至4mg/mL，取100μL加入96孔板，3000rpm離心5min，加入10μL矽油覆蓋在樣品上，3000rpm離心5min。儀器在25~80℃範圍內按照1℃/min進行線性升溫，同時單個樣品測定8次，每次採集3s。收集粒徑和溫度數據，繪製曲線，用儀器官方軟體提供的線性相交功能可計算得到樣品的T_onset。

7.體積排阻色譜(SEC)：蛋白聚集情況使用Waters H Class超高效液相色譜儀和Waters BEH Protein SEC管柱(150×4.6mm，1.7μm)藉由SEC方法測定。流動相為50mM磷酸鈉緩衝液，300mM NaCl，pH 6.8±0.1。流速為0.4mL/min。將樣品稀釋至2mg/mL，檢測體積10μL，檢測波長為280nm。

8.陽離子交換色譜(CEX)：蛋白的電荷異質性藉由CEX-HPLC方法進行測定。液相系統為Agilent 1260 Infinity II，色譜管柱為Thermo Propac WCX-10 BioLC column(4×250mm,10μm)。樣品混合均勻後，離心並轉移上清液，然後用流動相A稀釋至2.0mg/mL。色譜條件如下表10所示。

表10 陽離子色譜運行條件

9.非還原毛細管電泳(NR-CE-SDS)：蛋白碎片情況藉由NR-CE-SDS方法進行測定。將標準品或供試樣品用磷酸-檸檬酸緩衝液稀釋至4mg/mL，然後取25μL與75μL SDS樣品緩衝液和5μL NEM(100mM N-乙基馬來醯亞胺)渦旋混合進行變性處理。變性的樣品經離心後，在70±2℃下孵育10±2min，在室溫下冷卻，然後再次離心。使用SDS分離凝膠試劑盒和未塗層的熔融石英毛細管在PA800 plus上進行分離。使用高速分離模式，毛細管的有效分離長度10cm。

10.蛋白溶液濁度測試(OD405)：藉由Envision多功能微孔板檢測儀對樣品濁度進行檢測。以緩衝液為空白對照，測得樣品與空白對照的差值為樣品405nm的OD值。

11.微流成像系統(MFI)：樣品中的亞可見微粒數量是藉由Protein Simple的MFI 5200進行測定。樣品無需稀釋，直接用移液槍取1mL進樣。報告每毫升樣品中粒徑分別在2μm，10μm和25μm範圍內的顆粒數。

12.全柱成像毛細管等電聚焦電泳法(icIEF)：樣品藉由和適當的包含有pl標記物和兩性電解質混合物混勻後藉由自動進樣器進入到iCE3系統的FC-coated毛細管中。經過高電壓分離步驟後，蛋白的不同電荷異構體遷移到各自的等電點位置，然後該分離後確定位置經UV檢測器捕獲(藉由全柱檢測的CCD相機在UV280nm處採集的UV吸收圖譜)。使用iCE系統軟體，藉由樣品出峰和相應的pl標記物的聚焦位置校準樣品出峰的等電點，後續數據分析在Empower軟體中執行。色譜條件如下表11所示。

表11 色譜運行條件

13.結合活性：本方法使用抗MASP-2抗體C4活化抑制測定法，實驗中包被物為甘露聚糖，檢測抗體為Complement C4c Antibody(HRP)，酶反應的受質為TMB。將甘露聚糖包被吸附在ELISA固相載體吸附板上，洗滌封閉後加入供試品和人血清補體混合物與之結合，其中樣品濃度越高其抑制血清中MASP-2裂解C4的效應越強，C4b含量就越低，則剪切得到的C4c越少。待孵育後洗滌，加入檢測抗體，再進行孵育後洗滌除去未結合的檢測抗體，加入受質顯色，最後加入反應終止液，在酶標儀上讀取吸光值，其檢測波長為450nm/650nm。以抗MASP-2抗體蛋白濃度的log值為橫坐標，OD_450nm-650nm值為縱坐標進行四參數擬合，獲得樣品與標準品的IC₅₀值。最終結果以標準品IC₅₀值除以樣品IC₅₀值的相對活性進行彙報。

實施例16：輔料篩選實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格12所示。UFDF樣品藉由透析置換為目標處方的緩衝液中，然後用相應的輔料儲備液稀釋至30mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。

表12 輔料篩選實驗設計方案

2.實驗

2.1.高溫40℃實驗結果

在40℃下放置14天後，5個處方的粒徑、濃度、pH沒有明顯差異；純度方面，所有處方的純度均發生下降，其中F2(NaCl)和F3(Sor)的SEC主峰最多，F3(Sor)的CEX主峰下降最多，具體降解趨勢如圖24，圖25，圖26所示。

2.2.振搖實驗結果

輔料篩選中各處方在振搖條件下的CEX結果如圖27所示，振搖1天，3天，5天後，5個處方的外觀、濃度、OD405和純度都沒有發生明顯變化。

2.3.攪拌實驗結果

5個處方的樣品外觀均由乳光變為渾濁，但F4(Suc)在攪拌2小時後依然保持乳光狀態，而其他處方在攪拌2小時後已變渾濁。除F1(Arg)外，其餘處方的OD405均增加。所有處方的濃度和pH無明顯變化。攪拌2小時，6小時後，5個處方的SEC純度都沒有發生明顯變化。輔料篩選中各處方在攪拌條件下的CEX、NR CE-SDS結果如圖28、圖29所示。

2.4.凍融實驗結果

經5輪凍融後，5個處方的樣品濃度，粒徑，OD405和pH均沒有明顯變化。不溶性微粒方面，F2(NaCl)不溶性微粒濃度呈明顯增加趨勢。輔料篩選中各處方在凍融條件下的MFI結果如表格13所示。

表13 MFI結果_凍融

總結

對於F2(NaCl)和F3(Sor)來說，40℃條件下SEC、CEX主峰下降程度較其他處方更大，明顯劣於其他處方，因此排除上述兩種作為輔料。總體來看，精胺酸、蔗糖和海藻糖之間無明顯差異，均可滿足試驗要求，綜合成本和輔料在生物製劑上應用的廣泛性考慮，因此選擇蔗糖F4(Suc)進入下一步實驗。

實施例17：表面活性劑篩選實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格14所示。UFDF樣品用相應的輔料儲備液稀釋至50mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。分別取1mL樣品至2R西林瓶以進行40℃試驗，取2mL樣品至6R西林瓶中以進行攪拌試驗，2mL樣品至2R西林瓶中進行振搖試驗。

表14 表面活性劑篩選實驗方案設計

2.實驗

2.1.高溫40℃實驗結果

(1)外觀、粒徑、Conc.，pH和OD405

如表格15所示，6個處方在經40℃處理後外觀、粒徑、Conc.，pH和OD405均無變化。

表15 表面活性劑篩選實驗的外觀，粒徑，濃度和OD405_高溫實驗結果

(2)SEC

如表16和圖30所示，經40℃處理後所有樣品的SEC主峰略微下降，但6組處方之間無明顯區別。

表16 表面活性劑篩選實驗SEC結果_高溫實驗

(3)NR CE-SDS

如表格17所示，經40℃處理後所有處方的NR CE-SDS MP%均發生下降，但變化幅度不大，均在可接受範圍。

表17 表面活性劑篩選實驗NR CE-SDS結果_高溫實驗

(4)CEX

如表格18所示，經40℃處理後，所有處方的主峰MP%均發生了中等程度的下降，但均在可接受範圍，各處方的CEX無顯著差異。

表18 CEX結果_高溫實驗

2.2.攪拌實驗結果

表面活性劑篩選中各處方在100rpm攪拌條件下的穩定性結果如表格19、圖31、圖32所示。經100rpm攪拌6小時後，F6(T2)、F7(T5)、F9(W2)和F10(W5)的外觀由乳光變為渾濁，所有處方的OD405均升高，濃度和pH無明顯變化。攪拌2小時，6小時後，6個處方的純度都沒有發生明顯變化。

表19 外觀、濃度、OD405、PH、粒徑結果_攪拌實驗

2.3.振搖實驗結果

(1)外觀、濃度、OD405

如表格20所示，經200rpm振搖5天後，各處方的外觀、濃度和OD405無明顯變化。

表20 外觀、濃度、OD405結果_振搖實驗

(2)NR CE-SDS

如表格21所示，經振搖處理後，所有處方的NR CE-SDS主峰變化無明顯區別。

表21 NR CE-SDS結果_振搖實驗

(3)CEX

如表格22所示，經振搖處理後，所有處方的CEX主峰無明顯變化。

表22 CEX結果_振搖實驗

3.總結

40℃條件下，各個處方的外觀、OD405和DLS等結果均無明顯變化，所有處方的SEC有略微降低，NR CE-SDS和CEX主峰有中等程度定的降低，處方之間的差異較小。

攪拌條件下，各處方的濃度無明顯變化，但F6(T2)、F7(T5)、F8(W2)和F10(W5)的外觀由乳光變為渾濁，F7(T5)、F9(W2)和F10(W5)的OD405上升，所有處方的DLS粒徑和PDI均有增加，純度無明顯變化。

振搖條件下，各個處方的外觀和DLS等結果均無明顯變化，所有處方的純度無明顯變化，處方之間沒有差異。

在表面活性劑篩選中，聚山梨酯80和聚山梨酯20之間無明顯差別，所有處方均對於振搖應力有一定的抗性，均滿足實驗要求。綜合成本考慮，選擇聚山梨酯80作為表面活性劑進行接下來的試驗。

實施例18：pH篩選實驗

1.實驗設計

樣品處方信息和檢測方法如表23所示。UFDF樣品藉由透析置換為目標處方的緩衝液中，然後用相應的輔料儲備液稀釋至30mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。樣品製備完成後對其外觀，濃度，滲透壓，黏度，k_D，T_onset進行測定。

表23 pH篩選實驗設計方案

2.實驗

2.1.凍融實驗

(1)濃度，pH，粒徑和OD405結果

如表格24所示，經5次凍融後，F18(Cit5.5)、F19(Cit6.0)和F20(Cit6.5)的OD405呈增加趨勢，其餘處方的OD405沒有明顯變化。9個處方的樣品濃度和pH均沒有明顯變化。F18(Cit5.5)、F19(Cit6.0)和F20(Cit6.5)的樣品粒徑較大，凍融後樣品粒徑無明顯變化。

表24 外觀，濃度，pH和OD405結果_凍融

(2)MFI結果

如表格25所示，T0時，在25μm的不溶性微粒濃度方面，所有處方均小於10個/mL；在10μm的不溶性微粒方面，所有處方均小於100個/mL。經過凍融後，F19(Cit6.0)中2μm和10μm的不溶性微粒有明顯增加趨勢，其餘處方之間沒有觀察到明顯的差異。

表25 MFI結果_凍融

2.2.振搖實驗

(1)外觀、濃度，pH和OD405結果

如表26所示，T0時，所有樣品均呈有乳光，且均未發現可見異物，蛋白濃度和pH值均符合要求。經200rpm振搖5天後，F18(Cit5.5)外觀變為渾濁，F18(Cit5.5)、F19(Cit6.0)和F20(Cit6.5)的OD405呈增加趨勢，其餘處方的外觀和OD405沒有明顯變化。9個處方的樣品濃度和pH均沒有明顯變化。

表26 外觀，濃度，pH和OD405結果_振搖

(2)NR CE-SDS和CEX結果

如表27和表28所示，所有處方的NR CE-SDS和CEX主峰無變化。

表27 NR CE-SDS結果_振搖

表28 CEX結果_振搖

2.3.高溫40℃實驗

(1)濃度，pH，粒徑和OD405結果

如表格29所示，在40℃下放置14天後，9個處方的濃度、pH和粒徑沒有明顯差異。但F18(Cit5.5)的OD405有一定程度的上升。

表29 濃度，pH和OD405結果_高溫

(2)SEC結果

如表格30和圖21所示，組胺酸處方中蛋白的SEC HMW%含量總體較小，醋酸處方和檸檬酸處方中蛋白的SEC HMW%含量隨著pH增加而增加，F14(Ace5.5)的SEC HMW%增加程度較大。

表30 SEC結果_高溫

(3)NR CE-SDS結果

如表格31和圖22所示，高溫40℃下，所有處方的LMW%隨著時間都有所增加，但所有處方結果均在可接受範圍內。

表31 NR CE-SDS結果_高溫

(4)CEX結果

如表格32和圖23所示，所有處方結果均在可接受範圍內，其中F17(His6.0)主峰變化程度最大，其餘處方的變化無顯著性差異。

表32 CEX結果_高溫

3.總結

pH篩選實驗在T0時，F18(Cit5.5)、F19(Cit6.0)和F20(Cit6.5)的粒徑較大，表明其結構更為鬆散；振搖實驗中F18(Cit5.5)的外觀由乳光變為渾濁，劣於其他處方；凍融實驗中F19(Cit6.0)和F20(Cit6.5)的不溶性微粒數量變化較大；在40℃條件下，F18(Cit5.5)的OD405上升，F14(Ace5.5)的SEC高聚體增加較多，F16(His5.5)和F17(His6.0)的CEX主峰下降較多和NR CE-SDS低聚體增加較多。

總體來看，醋酸和組胺酸體系的穩定性更優，總體而言，在醋酸體系中的pH 4.5和pH 5.0，組胺酸體系中的pH 5.0和pH5.5對蛋白具有較好的穩定性。考慮到醋酸緩衝液體系在pH 5.0，組胺酸體系在pH 5.5時的緩衝能力和穩健性較好，在工藝中pH調節時具有較好的操作空間，對偏離目標值的極端情況具有較好的風險控制。此外對於皮下注射的製劑而言，選用組胺酸的刺激更小，患者的耐受度更高。因此較佳F13(Ace5.0)醋酸緩衝液pH 5.0和F16(His5.5)組胺酸緩衝液pH 5.5為較佳緩衝體系。

實施例19：低濃度處方確認試驗

1.實驗設計

樣品處方信息和檢測方法如表33所示。樣品藉由透析置換為目標處方的緩衝液中，然後用相應的輔料儲備液稀釋至20mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。樣品製備完成後對其外觀，濃度，滲透壓，黏度，kD，Tonset進行測定。

表33 處方設計方案

2.實驗結果

2.1 外觀，濃度，pH，粒徑和OD405結果

如表格34所示，處方F21在經歷攪拌、凍融、光照、振搖以及5℃、25℃、40℃、-20℃、-30℃條件的孵育之後，基本屬性(外觀、濃度、pH、生物學活性)均沒有發生明顯變化。對於粒徑和PD%結果，除40℃外的穩定性條件下均無明顯差異；因為40℃對於蛋白製劑屬較為劇烈的應力條件，因此結果變化較為明顯屬於正常現象，具體應根據SEC、NR-CE、CEX的結果進行判斷。

表34 外觀，濃度，pH和OD405結果

2.2 SEC，CEX，NR CE-SDS結果

如表格35所示，處方F21在經歷攪拌、凍融、光照、振搖以及5℃、25℃、-20℃、-30℃條件的孵育之後，SEC，CEX，NR CE的結果均無明顯變化。40℃ 條件下，SEC、CEX和NR CE主峰均發生了一定程度的下降，但並不影響生物學活性；在40℃下倒置4週的樣品和正置相比，各檢測項無明顯差異，說明包材與蛋白製劑相容性良好。

表15 SEC，CEX，NR CE-SDS結果

3.總結

低濃度處方確認實驗的結果表明，最終處方F21在5℃、25℃、-20℃、-30℃條件下均能保持長時間的穩定，對凍融和振搖的耐受性較好，在光照和攪拌條件下不會發生變化，在40℃條件下會有一定的變化，因此該樣品應該注意防止長時間高溫放置。低濃度製劑開發經過了表面活性劑篩選，輔料篩選，pH篩選和最終處方確認研究，得到最終低濃度製劑處方選定為20mg/mL蛋白，10mM組胺酸鹽，8.6%(w/v)蔗糖，0.05%(w/v)聚山梨酯80，pH為5.3。

實施例20：高濃度實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格36所示。UFDF樣品經超濾濃縮後用相應的輔料儲備液稀釋至150mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。取製備的樣品分別進行k _D，T_onset和黏度測定。

表36 高濃度實驗設計方案

2.實驗結果

表37 kD值，Tonset和滲透壓結果

(1)k _D值結果

pH為4.5，5.0、5.5的醋酸緩衝液和pH為5.0、5.5、6.0的組胺酸緩衝液kD均為正值。在pH為5.0的10mM醋酸緩衝液中，輔料為5.8%蔗糖和230mM脯胺酸的處方的kD為正值，輔料為125mM精胺酸時為負值。kD為正，說明體系中蛋白分子之間的作用力為強淨排斥力，有利於蛋白的長期膠體穩定性，當kD為負值時，說明蛋白分子之間的作用力為淨吸引力，不利於蛋白的長期膠體穩定性。

(2)T_onset結果

T_onset能預測蛋白的熱穩定性。除F29(ARG)精胺酸處方外，各樣品的T_onset值均大於60℃，表示在這些處方中，蛋白有較好的熱穩定性。

(3)滲透壓

根據滲透壓結果可知，125mM精胺酸和5.8%的蔗糖濃度較目標值低，需要在後續實驗中進一步調整。

3.總結

藉由在不同緩衝液和輔料中的一般性質研究，10mM醋酸鹽(pH 4.5，pH 5.0，pH 5.5)和10mM組胺酸(pH5.0，pH5.5和pH6.0)的k_D為正值，T_onset值均大於60℃，均滿足試驗要求。對於3種輔料而言，精胺酸的k_D和T_onset均劣於蔗糖和脯胺酸。對皮下注射劑來說，選用組胺酸的緩衝體系對注射刺激性更小，且pH不宜過低，因此綜合來看，較佳10mM醋酸鹽，pH 5.0，10mM組胺酸，pH 5.0，10mM組胺酸，pH 5.5，搭配蔗糖或者脯胺酸進入下一步研究。

實施例21：6處方研究和工藝比較實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格38所示。Fed-batch的UFDF樣品先行超濾濃縮至合適濃度，然後用相應的輔料儲備液稀釋至150mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。分別取1mL樣品至2R西林瓶以進行25℃、40℃和光照試驗，取2mL樣品至6R西林瓶中以進行攪拌試驗，2mL樣品至2R西林瓶中進行振搖試驗。

表38 最佳6處方實驗設計方案

2.實驗

2.1.高溫40℃實驗

(1)外觀，粒徑，濃度，OD405和pH

如表格39所示，所有處方的滲透壓均在預設目標內(250~350mOsm/kg H2O)，以蔗糖作為輔料的處方(F31，F32，F33，F37)相較於脯胺酸處方(F34，F35，F36)的黏度更高，組胺酸處方與醋酸處方相比黏度更高。F34(Ace50Pro)，F35(His50Pro)和F36(Fed-Batch)的pH比目標值略高，需要在後續實驗中進行調整。7個處方在經40℃處理4週後外觀、粒徑濃度和pH均無變化，但F31(Ace50Suc)， F32(His50Suc)，F33(His55Suc)，F34(Ace50Pro)和F36(His55Pro)的OD405略有上升。

表39 外觀，粒徑，濃度，OD405和pH結果_高溫40℃實驗

(2)SEC

如表格40和圖33所示，經40℃處理4/6週後，所有處方的SEC HMW%均有所上升，MP%下降，F31(Ace50Suc)和F32(His50Suc)主峰下降更多，F33(His55Suc)和F36(His55Pro)下降較少。同樣處方的F31(Ace50Suc)和F37(Fed-Batch)相比，Fed-batch來源的原液要比Perfusion在40℃條件下SEC主峰下降更少。

表40 SEC結果_高溫實驗

(3)NR CE-SDS

如表格38和圖34所示，經40℃處理4/6週後所有處方的NR CE-SDS LMW%均有一定程度增加，MP%下降，其中F34(Ace50Pro)變化最大。同樣處方的F31(Ace50Suc)和F37(Fed-Batch)相比，Fed-batch來源的DS要比Perfusion在40℃條件下NR CE-SDS主峰下降更少。

表41 NR CE-SDS結果_高溫實驗

(4)CEX

如表格42和圖35所示，經40℃處理4週後所有處方的酸性峰均增加，MP%下降。相同處方的F31(Ace50Suc)比F37(Fed-Batch)的CEX主峰下降略多。

表42 CEX結果_高溫實驗

(5)活性

如表格43所示，在40℃放置4週後，各處方的活性沒有顯著差異。

表43 活性結果_高溫實驗

2.2.25℃實驗

經25℃處理4週後所有處方外觀、Conc.、pH和OD405均無變化。所有樣品的純度(SEC，NR CE-SDS，CEX)均發生中等程度的下降，其中F31(Ace50Suc)的SEC變化最多，F34(Ace50Pro)的NR CE-SDS變化最大。總體而言組胺酸緩衝體系優於醋酸緩衝體系，具體降解趨勢如圖36，圖37和圖38所示。

2.3.光照

經光照處理3天後所有處方外觀、DLS、Conc.、pH和OD405均無變化。各組處方的純度均發生下降，具體趨勢如圖39，圖40和圖41所示。F35(His50Pro)的SEC HMW%和NR CE-SDS LMW%增加最少。F33(His55Suc)和F36(His55Pro)的CEX變化最小。

2.4.振搖

經200rpm振搖處理10天後所有處方外觀、DLS、Conc.、pH和OD405均無變化。純度方面CEX無明顯變化，經200rpm振搖10天後，所有處方的SEC和NR CE-SDS均發生變化，其中F32(His50Suc)的LMW%增加最少，其餘處方無明顯差異，具體趨勢如圖42、圖43和圖44所示。經過200rpm振搖10天後，各處方的不溶性微粒數量無明顯差異。

3.總結

25℃ 4週條件下，各個處方的外觀、DLS、OD405等結果均無明顯變化，但F31(Ace50Suc)的SEC較其他處方變化更多，F34(Ace50Pro)的NR CE-SDS較其他處方變化更多。

40℃ 4週條件下，外觀、Conc、pH、DLS均無變化，但F31(Ace50Suc)，F32(His50Suc)，F33(His55Suc)，F34(Ace50Pro)和F36(His55Pro)的OD405略有上升，所有處方的SEC、CEX和NR CE-SDS的主峰有一定程度下降。F31(Ace50Suc)和F32(His50Suc)SEC變化程度大於其餘處方，而F34(Ace50Pro)的NR CE-SDS變化略微大於其餘處方。相同處方的不同工藝的灌流工藝F31(Ace50Suc)與批次補料的F37(Fed-Batch)相比，批次補料工藝的F37(Fed-Batch)在40℃條件下，所有純度變化均小於灌流工藝的F31(Ace50Suc)。

光照3天的條件下，各個處方的濃度、外觀、pH和DLS等結果均無明顯變化。SEC，NR CE-SDS和CEX主峰均有下降，其中F35(His50Pro)的SEC和NR CE-SDS主峰下降程度小於其餘處方，F33(His55Suc)和F36(His55Pro)CEX主峰下降程度小於其餘處方。

振搖條件下，各個處方的濃度、外觀、pH、DLS、OD405、CEX主峰等結果均無明顯變化。SEC和NR CE-SDS主峰略有下降，可能是由於振搖實驗是在25℃條件下進行所導致的。其中F35(His50Pro)的SEC變化最小，F32(His50Suc)的NR CE-SDS變化最小。

本研究中選用了pH 5.0的醋酸緩衝液以及pH 5.0和pH 5.5組胺酸緩衝液，搭配蔗糖和脯胺酸，0.05%的聚山梨酯80進行試驗，考察了光照，振搖，25℃，40℃的壓力條件。此外，還比較了灌流和批次補料培養工藝生產的原液穩定性的差異。結果顯示，在40℃，25℃和光照下，組胺酸緩衝液純度變化小於醋酸緩衝液，且批次補料的工藝較灌流工藝生產的原液在40℃下更穩定，考慮到組胺酸對皮下注射更友好，蔗糖在生物製劑中使用得更為廣泛，因此選擇10mM組胺酸，pH選擇5.0和5.5中間值5.3搭配蔗糖進行最終處方確認實驗。

實施例22：高濃度蛋白中表面活性劑濃度篩選實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格44所示。UFDF樣品用相應的輔料儲備液稀釋至100mg/mL，最後用0.22μm PVDF膜過濾製備得到。分別取2mL樣品至6R西林瓶中以進行攪拌試驗，2mL樣品至2R西林瓶中進行振搖試驗。

表44 第二次表面活性劑濃度篩選實驗設計方案

2.結果

在本試驗中，考察了0.025%、0.05%和0.1%等3個濃度的聚山梨酯80，並對樣品進行了振搖和攪拌等壓力測試，結果顯示各聚山梨酯80濃度下，樣品的外觀、不溶性微粒、粒徑、純度(SEC)等結果無明顯區別，均滿足試驗要求，選擇0.05%的中間濃度進入最終處方確認試驗。

表45 第二次表面活性劑濃度篩選實驗結果

實施例23：處方確認實驗

1.實驗設計

樣品處方信息，穩定性實驗放置條件和檢測方法如表格46所示。將UFDF樣品用母液稀釋至目標濃度的蛋白、蔗糖和聚山梨酯80，然後用0.22μm PVDF膜過濾，分別取2mL樣品至2R西林瓶以進行-40℃、-20℃、5℃、25℃、40℃穩定性、-20℃/-40℃凍融、振搖和光照試驗，取2mL樣品至6R西林瓶中以進行攪拌試驗，2mL樣品至5mL PC瓶中進行-80℃凍融試驗。

表46 製劑處方確認研究方案

2.結果

在處方確認實驗中，對選定的處方進行了不同溫度下的凍融、攪拌、振搖、光照、強制降解(40℃)，加速(25℃)，長期(5/-20/-40℃)等條件的考察，結果顯示凍融、攪拌、振搖、長期條件下，樣品的純度均無明顯變化，25℃和光照條件下，純度有所下降，40℃條件下6週後，樣品的純度發生顯著下降，但不影響結合活性，且處方中的PS80濃度沒有發生下降。

最終處方確認實驗的結果如表格47、48、49和表格50所示。

在5℃，-20℃和-40℃長期穩定性考察實驗中，樣品外觀、DLS、SEC、CEX和NR-CE-SDS等結果均無明顯變化。

25℃條件下，6週時各個處方無明顯變化，3個月和6個月後CEX主峰略有下降。聚山梨酯80的含量無明顯下降。

40℃條件下放置6週，樣品SEC、CEX和NR-CE-SDS主峰均發生顯著下降，但聚山梨酯80的含量並無明顯下降。

光照7天的條件下，樣品的外觀和DLS等結果均無明顯變化。純度有輕微下降，但不影響結合活性。

凍融條件下，樣品的外觀、DLS、SEC、CEX、NR-CE-SDS等結果均無明顯變化。且不溶性微粒的濃度沒有明顯增加。不同溫度的冷凍條件對樣品的凍融穩定性無明顯影響。

在200rpm攪拌2小時後，樣品的外觀由輕微乳光變為渾濁，因此未對不溶性微粒進行檢測，其餘結果無明顯變化。

在25℃下以200rpm轉速振搖兩週後，樣品的外觀、DLS、OD405、MFI、SEC、NR-CE-SDS和CEX主峰等結果均無明顯變化。

在40℃下倒置4週的樣品和正置相比，各檢測項無明顯差異，說明包材與蛋白製劑相容

表47 最終處方確認高溫40℃實驗結果

表48 最終處方確認加速(25℃)穩定性實驗結果

表49 最終處方確認長期(5℃/-20℃/-40℃)穩定性實驗結果

表50 最終處方確認攪拌、凍融、光照、振搖實驗結果

3.總結

高濃度最終處方在-40℃，-20℃，5℃和25℃條件下均能保持長時間的穩定，對凍融和振搖的耐受性較好。在光照和攪拌條件下會發生變化，在40℃條件下變化較大，因此該樣品應該注意防止長時間光照，高溫和劇烈攪拌。

本發明的範圍不受本文所述的具體實施方案限制。實際上，除所描述的那些以外，根據前述描述和附圖，本文提供的多種修改對於所屬技術領域中具有通常知識者來說將變得顯而易見。此類修改意圖屬於所附申請專利範圍的範圍之內。

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Claims

一種穩定液體藥物製劑，其包含：

(a)特異性結合至人MASP-2的單株抗體或其抗原結合片段；

(b)包含組胺酸和/或醋酸緩衝體系的緩衝液；

(c)包含聚山梨酯的表面活性劑；和

(d)包含蔗糖、海藻糖和/或脯胺酸的輔料；

其中該製劑的pH為4.7-6.1，較佳5.0-6.0，更佳5.0-5.5，最佳5.3。
如請求項1所述的藥物製劑，其中該製劑具有以下特性中的一項或多項：

(i)平均粒徑為2-10μm；

(ii)質量滲透壓莫耳濃度為250~350mOsm/kg H₂O之間；

(iii)黏度為約1.0厘泊-30厘泊，例如約1.0厘泊-10厘泊；

(iv)在40℃或25℃下放置6週或振搖14天後，外觀保持或基本保持輕微乳光或澄清狀態，平均粒徑不變或基本不變，且溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%；

(v)在4℃下放置1年-3年後，外觀保持或基本保持輕微乳光或澄清狀態，平均粒徑不變或基本不變，且溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%；

(vi)光照3天後，外觀保持或基本保持輕微乳光或澄清狀態，平均粒徑不變或基本不變，且溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%；

(vii)攪拌6小時後，外觀保持或基本保持輕微乳光或澄清狀態，平均粒徑不變或基本不變，且溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%；和

(viii)經5輪凍融後，外觀保持或基本保持輕微乳光或澄清狀態，平均粒徑不變或基本不變，且溶解狀態下的抗體單體純度超過95%，較佳98%，更佳99%。
如請求項1或2所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為10mg/ml±1mg/ml至200mg/ml±20mg/mL。
如請求項3所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為20mg/ml±2mg/mL。
如請求項3所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為60mg/ml±6mg/ml。
如請求項3所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為100mg/ml±10mg/ml。
如請求項3所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為150mg/ml±15mg/ml。
如請求項3所述的藥物製劑，其中該抗體濃度為約20mg/ml至約100mg/ml。
如請求項1至8中任一項所述的藥物製劑，其中該緩衝液包含組胺酸，並且組胺酸濃度為5mM±1mM至20mM±4mM。
如請求項9所述的藥物製劑，其中該緩衝液濃度為10mM±2mM。
如請求項10所述的藥物製劑，其中該緩衝液包含L-組胺酸和一水合L-組胺酸鹽酸鹽。
如請求項11所述的藥物製劑，其中該緩衝液包含約0.175mg/ml的L-組胺酸和約1.86mg/ml的一水合L-組胺酸鹽酸鹽。
如請求項1至12中任一項所述的藥物製劑，其中該聚山梨醇酯濃度為0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)。
如請求項13所述的藥物製劑，其中該聚山梨醇酯濃度為0.05%±0.01%(w/v)。
如請求項1至14中任一項所述的藥物製劑，其中該聚山梨醇酯為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20，較佳為聚山梨醇酯80。
如請求項1至15中任一項所述的藥物製劑，其中該輔料包含蔗糖。
如請求項16所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為5.5%±0.5%至9%±0.5%(w/v)。
如請求項17所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為5.8%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)。
如請求項18所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為5.8%±0.5%(w/v)。
如請求項18所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為6.0%±0.5%(w/v)。
如請求項18所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為6.5%±0.5%(w/v)。
如請求項18所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為7.0%±0.5%(w/v)。
如請求項18所述的藥物製劑，其中該蔗糖濃度為8.6%±0.5%(w/v)。
如請求項1所述的藥物製劑，其包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯80，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。
如請求項24所述的藥物製劑，其包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，

(b)包含10mM±2mM組胺酸的緩衝液，

(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項25所述的藥物製劑，其包含：

(a)20mg/ml±2mg/ml抗體，

(b)約0.175mg/ml L-組胺酸，

(c)約1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，

(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(e)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項1所述的藥物製劑，其包含：

(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。
如請求項27所述的藥物製劑，其包含：

(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，

(b)包含10mM±2mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，

(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項28所述的藥物製劑，其包含：

(a)60mg/ml±6mg/ml抗體，

(b)約0.175mg/ml L-組胺酸，

(c)約1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，

(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(e)8.6%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項1所述的藥物製劑，其包含：

(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。
如請求項30所述的藥物製劑，其包含：

(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，

(b)包含10mM±1mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，

(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項31所述的藥物製劑，其包含：

(a)100mg/ml±10mg/ml抗體，

(b)約0.175mg/ml L-組胺酸，

(c)約1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，

(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(e)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項1所述的藥物製劑，其包含：

(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，

(b)包含5mM±1mM至20mM±4mM組胺酸或醋酸的緩衝液，

(c)0.025%±0.01%至0.1%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)6.5%±0.5%至8.6%±0.5%(w/v)蔗糖或海藻糖，

pH為5.3±0.5。
如請求項33所述的藥物製劑，其包含：

(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，

(b)包含10mM±1mM組胺酸緩衝體系的緩衝液，

(c)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(d)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項34所述的藥物製劑，其包含：

(a)150mg/ml±15mg/ml抗體，

(b)約0.175mg/ml L-組胺酸，

(c)約1.86mg/ml L-組胺酸一鹽酸鹽一水合物，

(d)0.05%±0.01%(w/v)聚山梨醇酯，和

(e)7.0%±0.5%(w/v)蔗糖，

pH為5.3±0.1。
如請求項21至35中任一項所述的藥物製劑，其中該聚山梨醇酯為聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，較佳聚山梨醇酯80。
如請求項1至36中任一項所述的藥物製劑，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中，HCDR1的胺基酸序列如DYYIN(SEQ ID NO：1)所示，HCDR2的胺基酸序列如WIFPGSX ₁ SX ₂ YX ₃ X ₄ X ₅ X ₆ FX ₇ X ₈(SEQ ID NO：2)所示，並且HCDR3的胺基酸序列如GDRSGPFX ₉ Y(SEQ ID NO：3)所示；

和/或

該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，LCDR1的胺基酸序列如KSSQSLLYSNGKTYLN(SEQ ID NO：4)所示，LCDR2的胺基酸序列如LVSKLDS(SEQ ID NO：5)所示，並且LCDR3的胺基酸序列如VQX ₁₀ THFPFT(SEQ ID NO：6)所示，

其中X₁是E、D或G，X₂是A或P，X₃是H或Y，X₄是S或N，X₅是E或Q，X₆是K或N，X₇是K或Q，X₈是A或G，X₉是A或P，並且X₁₀是V或G。
如請求項37所述的藥物製劑，其中HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示，並且HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12所示；和/或LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示。
如請求項1至36中任一項所述的藥物製劑，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，其中該重鏈可變區包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中，

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：7所示，並且HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：9所示，並且HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：12所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：10所示，並且HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：8所示，並且HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示。
如請求項39所述的藥物製劑，其中該抗體或其抗原結合片段進一步包含輕鏈可變區，其中輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中，

LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示；或

LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：14所示。
如請求項37至40中任一項所述的藥物製劑，其中，

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：7所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示，LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：9所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：12所示，LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：10所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示，LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：14所示；或

HCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：8所示，HCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：11所示，LCDR1的胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示，LCDR2的胺基酸序列如SEQ ID NO：5所示，並且LCDR3的胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示。
如請求項37至41中任一項所述的藥物製劑，其中該重鏈可變區包含選自SEQ ID NO：15、17、18、20、22、24和26中任一者的序列或與其具有至少80%序列同一性的序列。
如請求項42所述的藥物製劑，其中該輕鏈可變區包含選自SEQ ID NO：16、19、28和30中任一者的序列或與其具有至少80%序列同一性的序列。
如請求項37至41中任一項所述的藥物製劑，其中該抗體或其抗原結合片段包含：

包含如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；或

包含如SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的重鏈可變區，和包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的輕鏈可變區。
如請求項37至44中任一項所述的藥物製劑，其中該抗體或其抗原結合片段包含免疫球蛋白恆定區，視需要地包含IgG的重鏈恆定區，和/或輕鏈恆定區。
如請求項45所述的藥物製劑，其中該恆定區包含小鼠恆定區、兔恆定區或人恆定區，視需要地，該恆定區包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區。
如請求項45所述的藥物製劑，其中該重鏈恆定區包含相對於野生型人IgG恆定區在胺基酸殘基252、254或256處的一個或多個胺基酸取代，視需要地，胺基酸殘基252處的胺基酸取代是被酪胺酸取代，胺基酸殘基254處的胺基酸取代是被蘇胺酸取代，胺基酸殘基256處的胺基酸取代是被谷胺酸取代。
如請求項47所述的藥物製劑，其中該重鏈恆定區包含與野生型人IgG恆定區胺基酸序列具有至少80%同一性的序列，並且相對於野生型人IgG恆定區具有胺基酸殘基252處被酪胺酸取代，胺基酸殘基254處被蘇胺酸取代，和胺基酸殘基256處被谷胺酸取代。
一種醫藥組成物，其中該組成物包含如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑，且該組成物容納於容器中。
如請求項49所述的醫藥組成物，其中該容器為小瓶，例如西林瓶。
如請求項49所述的醫藥組成物，其中該容器為注射器。
如請求項49所述的醫藥組成物，其中該容器為預填充注射器。
如請求項49所述的醫藥組成物，其容納於自動注射器中。
如請求項49至53中任一項所述的醫藥組成物，其中該容器包含包括氣體的頂隙，其中該氣體包含小於5體積%的氧氣，較佳包含小於1體積%的氧氣，更佳包含不超過0.1體積%的氧氣。
一種試劑盒，其包含：

(i)含有包含如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑的組成物的容器，和使用該組成物的說明書；或

(ii)含有包含如請求項49至54中任一項所述的醫藥組成物的容器，和使用該組成物的說明書。
一種包含如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑的單位劑型，其中該抗體以0.1mg至500mg的量存在。
如請求項56所述的單位劑型，其中該抗體以200mg的量存在或該抗體以400mg的量存在。
如請求項56或57所述的單位劑型，其為玻璃小瓶，例如西林瓶。
如請求項56或57所述的單位劑型，其為預填充注射器。
如請求項56或57所述的單位劑型，其為自動注射器。
如請求項56或57所述的單位劑型，其中該玻璃小瓶包含包括氣體的頂隙，其中該氣體包含小於5體積%的氧氣，較佳包含小於1體積%的氧氣，更佳包含不超過0.1體積%的氧氣。
一種抑制MASP-2依賴性補體激活的方法，該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑，或如請求項49至54中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項55所述的試劑盒，或如請求項56至61中任一項所述的單位劑型。
一種降低受試者血清C4水平的方法，該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑，或如請求項49至54中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項55所述的試劑盒，或如請求項56至61中任一項所述的單位劑型。
一種治療受試者中疾病或病症的方法，該疾病或病症(1)將受益於受試者血清C4水平的降低；(2)與血清C4水平異常(例如升高)相關；(3)將受益於抑制MASP-2依賴性補體激活；和/或(4)與MASP-2依賴性補體激活相關，

該方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑，或如請求項49至54中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項55所述的試劑盒，或如請求項56至61中任一項所述的單位劑型。
一種如請求項1至48中任一項所述的藥物製劑、或如請求項49至54中任一項所述的醫藥組成物、或如請求項55所述的試劑盒、或如請求項56至61中任一項所述的單位劑型在製備藥劑中的用途，該藥劑用於用於以下中的一者或多者：

(1)用於抑制MASP-2依賴性補體激活；

(2)用於治療或預防MASP-2依賴性補體激活相關疾病或病症；

(3)用於治療受試者中受益於抑制MASP-2依賴性補體激活的病症；

(4)用於降低受試者血清C4水平；

(5)用於治療受試者中受益於受試者血清C4水平的降低的病症；

(6)用於治療或預防與血清C4水平異常(例如升高)相關的病症或疾病。
如請求項65所述的用途，其中該疾病或病症為自身免疫性疾病、血管病症、缺血再灌注損傷、動脈硬化、炎症、肺部病症、體外再灌注過程、肌肉骨骼病症、腎臟病症、皮膚病症、器官或組織移植過程、神經系統疾病或損傷、血液疾病、泌尿生殖系統疾病、非肥胖型糖尿病或與1型或2型糖尿病相關併發症、癌症、內分泌疾病、眼科疾病或COVID-19。
如請求項66所述的用途，其中，

該自身免疫性疾病包括血栓性微血管病(TMA)、非典型溶血性尿毒癥綜合症(aHUS)、造血移植相關的血栓性微血管病(TA-TMA)、狼瘡腎炎、系統性紅斑狼瘡(SLE)和IgA腎病；

該血管病症包括心血管病症、腦血管病症、外周(如肌肉骨骼)血管病症、腎血管病症、腸系膜/腸道血管病症、移植物和/或再移植物的血管再生、血管炎、亨-舍二氏紫癜性腎炎、系統性紅斑狼瘡相關的血管炎、與類風濕性關節炎相關的血管炎、免疫複合物血管炎、大動脈炎、擴張型心肌病、糖尿病血管病、川崎病(動脈炎)、靜脈氣體栓塞(VGE)，以及支架置入術、旋轉動脈瘤切除術和經皮腔內冠狀動脈成形術(PTCA)後的再狹窄，

該缺血再灌注損傷包括與主動脈瘤修復、心肺轉流、與器官移植和/或肢體/手指再植有關的血管再吻合、中風、心肌梗死和休克和/或外科手術後的血液動力學復蘇有關的缺血再灌注損傷；

該炎症包括炎症性胃腸道疾病，其包括胰腺炎、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、腸易激綜合症和憩室炎；

該肺部病症包括急性呼吸窘迫綜合症、輸血相關性急性肺損傷、缺血/再灌注急性肺損傷、慢性阻塞性肺病、哮喘、韋格納肉芽腫病、抗腎小球基底膜病(Goodpasture病)；胎糞吸入綜合症、閉塞性細支氣管炎綜合症、特發性肺纖維化、繼發於燒傷的急性肺損傷、非心源性肺水腫、輸血相關呼吸困難、肺氣腫、囊性纖維化、SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2(Covid-19)相關疾病；

該體外循環再灌注過程包括血液透析、血漿去除術、白細胞去除術、體外膜氧合(ECMO)、肝素誘導體外膜氧合低密度脂蛋白沉澱(heparin-induced exfracorporeal membrane oxygenation LDL precipitation,HELP)和心肺轉流術(CPB)；

該肌肉骨骼病症包括骨關節炎、類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、痛風、神經性關節病、銀屑病性關節炎、脊椎關節病、結晶性關節病和系統性紅斑狼瘡(SLE)；

該腎臟病症包括系膜增生型腎小球腎炎、膜性腎小球腎炎、膜性增生性腎小球腎炎(系膜毛細血管性腎小球腎炎)、急性感染後腎小球腎炎(鏈球菌感染後腎小球腎炎)、冷球蛋白血症性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎、亨-舍二氏紫癜性腎炎和IgA腎病；

該皮膚病症包括銀屑病、自身免疫性大皰性皮膚病、嗜酸性海綿形成、大皰性類天皰瘡、獲得性大皰性表皮松解、妊娠皰疹、熱燒傷和化學燒傷；

該器官或組織移植過程包括器官異體移植、器官異種移植器官和組織移植；

該神經系統疾病或損傷包括多發性硬化症、重症肌無力、亨廷頓氏病、肌萎縮性脊髓側索硬化、格林巴利綜合症、中風後再灌注(reperfusion following stroke)、退變性椎間盤、腦外傷、帕金森氏病、阿爾茨海默病、Miller-Fisher綜合症、腦外傷和/或出血、脫髓鞘和腦膜炎；

該血液病包括敗血症、嚴重敗血症、敗血症休克、敗血症引起的急性呼吸窘迫綜合症、全身炎症反應綜合症、失血性休克、溶血性貧血、自身免疫性血栓性血小板減少性紫癜和溶血性尿毒綜合症；

該泌尿生殖系統病症包括疼痛性膀胱病、感覺性膀胱病、慢性非細菌性膀胱炎、間質性膀胱炎、不孕症、胎盤功能障礙和流產和子癇前症；

該內分泌疾病包括橋本氏甲狀腺炎、壓力、焦慮和激素性疾病，涉及垂體的催乳素、生長素或其他胰島素樣生長因子和促腎上腺皮質激素的調節性釋放；

該眼科疾病包括年齡相關性黃斑變性。
如請求項65所述的用途，其中該藥劑用於皮下給藥、胃腸外給藥和/或靜脈給藥。