CN114605542B

CN114605542B - 抗fshr抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

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Publication number: CN114605542B
Application number: CN202111367355.0A
Authority: CN
Inventors: 余宁辉; 江旭亮
Original assignee: Conway Guangzhou Biotechnology Co ltd
Current assignee: Conway Guangzhou Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-12-04
Filing date: 2021-11-18
Publication date: 2024-03-01
Anticipated expiration: 2041-11-18
Also published as: KR20230117390A; CN114605542A; AU2021390722A1; US20240043548A1; JP2023552664A; WO2022116853A1; EP4257606A1; AU2021390722A2; CA3201124A1

Abstract

本发明公开了抗FSHR抗体及其抗体‑药物偶联物的制备和应用。本发明公开一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含可变区，其特异性结合人卵泡刺激素受体FSHR，包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自具有以下所示的氨基酸序列的CDR：SEQ ID NO:6、7、8、10、11和12。本发明提供的抗FSHR抗体及其抗体‑药物偶联物在癌症的检测、筛查、预防和治疗中具有广阔的应用前景。

Description

抗FSHR抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗FSHR抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用。

背景技术

人卵泡刺激素受体(FSHR)是80kD G蛋白偶联的膜受体。FSHR胞外域包含一个9-富亮氨酸重复序列(LRR)域，一个胞外铰链环，一个7-螺旋跨膜域和胞质域。LRR域负责FSH的高亲和力结合，铰链环负责受体激活，跨膜域和胞质域负责受体信号传导^[1-4]。

人FSHR主要在卵巢颗粒细胞和睾丸支持细胞中表达^[5]。FSHR的天然蛋白配体重组卵泡刺激素(FSH)已在临床上用于治疗男性和女性不育症。还发现了几种FSHR小分子变构调节剂^[6-9]。

最近已经检测到FSHR在一些性腺外正常组织和肿瘤组织中表达。FSHR在人类女性生殖道和胎盘^[10]、破骨细胞^[11]、脂肪细胞^[12]、软骨细胞^[13]、良性前列腺增生和前列腺癌^[13]以及卵巢癌^[14]中转录。FSH受体也通过内皮细胞在患有多种肿瘤的患者的组织样本中表达^[15]，该肿瘤位于前列腺、乳腺、结肠、胰腺、膀胱、肾、肺、肝、胃、睾丸和卵巢。

由于肿瘤周围血管、前列腺癌和卵巢癌中共同的FSHR标记，抗FSHR人源化抗体原则上应适用于多种肿瘤类型。当前，市场上没有批准的针对FSHR的抗体药物用于癌症治疗。显然需要发明可以有效治疗各种癌症的新型抗FSHR抗体。因此亟需研发新型的抗FSHR单克隆抗体及其抗体-药物偶联物(ADC)，用于癌症的检测、筛查和治疗，使其具有更低的毒副作用，更佳的临床药效，这将给患者提供更多的药物选择。

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发明内容

在一个方面，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含可变区，其特异性结合人卵泡刺激素受体FSHR，包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自具有以下所示的氨基酸序列的CDR：SEQ ID NO:6、7、8、10、11和12。

在一些实施方案中，上述抗体或其抗原结合片段中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和/或重链可变区，所述抗体或其抗原结合片段包含一个、两个或三个选自具有以下所示的氨基酸序列的轻链CDR：SEQ ID NO:6、7和8；和/或，

所述抗体或其抗原结合片段包含一个、两个或三个选自具有以下所示的氨基酸序列的重链CDR：SEQ ID NO:10、11和12。

在一些实施方案中，上述任一所述的抗体或其抗原结合片段中，所述抗体或其抗原结合片段包含具有以下所示的氨基酸序列的轻链CDR：SEQ ID NO:6、7和8以及具有以下所示的氨基酸序列的重链CDR：SEQ ID NO:10、11和12。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段为分离的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段为鼠源抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，上述任一所述的抗体或其抗原结合片段中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或，

所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是小鼠IgG同种型，其选自IgG1亚型、IgG2A亚型、IgG2B亚型、IgG2C亚型或者IgG3亚型，可以通过常规方法进行人源化。

在一些实施方案中，上述任一所述的抗体或其抗原结合片段中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述轻链包含具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或，

所述重链包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

在另一个方面，本发明还提供上述任一所述的抗体或其抗原结合片段的变体，其包含不超过10个氨基酸取代、缺失和/或添加，例如一个、两个或三个保守氨基酸取代、缺失和/或添加，例如在FR区的氨基酸取代、缺失和/或添加，或者至少一个取代、缺失和/或添加是在CDR区。

在一些实施方案中，所述氨基酸的取代、缺失和/或添加通过核苷酸突变实现，通过选自以下方法进行：寡核苷酸介导的定点突变、盒式突变、简并寡核苷酸引物PCR、易错PCR、DNA改组和使用细菌增变株。

在另一个方面，本发明还提供与上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体相关的生物材料，为如下B1)或B2)：

B1)编码上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞或重组微生物。

在一些实施方案中，上述生物材料中，B1)所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明的核苷酸序列有一定同一性的核苷酸，只要编码所述抗体或其抗原结合片段或变体并且具有所述抗体或其抗原结合片段或变体的功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与核酸序列的序列相似性。“同一性”可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

在一些实施方案中，上述生物材料中，B2)所述的含有B1)所述核酸分子的表达盒是指能够在宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段或变体的DNA，该DNA不但可包括启动编码所述抗体或其抗原结合片段或变体的基因转录的启动子，还可包括终止编码所述抗体或其抗原结合片段或变体的基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列；

可用现有的表达载体构建含有编码所述抗体或其抗原结合片段或变体的核酸分子的重组载体，现有的表达载体如pcDNA3.1载体，轻链表达载体可以为pcDNA3.1_CAN001LC，重链表达载体可以为pcDNA3.1_CAN001 HC；

所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体；

所述重组微生物具体可为细菌、藻和真菌，其中，细菌可为大肠杆菌；

所述重组细胞为非繁殖材料。

在一些实施方案中，上述生物材料中，所述核酸分子包含如下1)或2)或3)所示的核酸片段：

1)如下DNA分子：

SEQ ID NO:1中第130位至第168位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第214位至第234位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第331位至第357位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第154位至第168位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第211位至第261位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第358位至第378位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第64位至第405位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第64位至第441位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1所示的核酸片段；或

SEQ ID NO:2所示的核酸片段；

2)与1)限定的核酸片段杂交且编码上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体的核酸片段；

3)与1)或2)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体的核酸片段。

在另一个方面，本发明还提供制备上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体的方法，所述方法包括：

在能使上述B1)所述的核酸分子表达的条件下于培养基中培养含有所述核酸分子的重组细胞，以制备所述抗体或其抗原结合片段或变体。

在一些实施方案中，将轻链表达载体pcDNA3.1_CAN001 LC和重链表达载体pcDNA3.1_CAN001 HC一起转染进HEK293T细胞，培养转染后的HEK293T细胞，收集上清得到所述抗体或其抗原结合片段或变体，优选地，编码CAN001重链和轻链的载体pcDNA3.1_CAN001 HC和pcDNA3.1_CAN001 LC(质量比1:2)与25kD线性PEI聚合物(polyscience)按照载体:聚合物的质量比为1:3的比例复合转染HEK293T细胞。

在一些实施方案中，收集上清后可以进一步纯化得到所述抗体或其抗原结合片段或变体，纯化可以采用protein-A亲和层析(Genescript)。

在另一个方面，本发明还提供一种抗体-药物偶联物，由上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体通过连接子与细胞毒类药物偶联得到。所述抗体-药物偶联物使得所述抗体或其抗原结合片段或变体靶向结合到靶细胞表面的人卵泡刺激素受体FSHR，并使得所述抗体或其抗原结合片段或变体和药物一起被内吞到靶细胞内部。

如本文所用，术语“药物”或“D”是指细胞毒类药物，实例包括化学治疗剂和毒素。特别地，“药物”可以独立地选自：(a)喜树碱衍生物和代谢产物(例如，SN-38)。其他包括白喉毒素、肉毒毒素、破伤风毒素、痢疾毒素、霍乱毒素、鹅膏蕈碱、O-鹅膏蕈碱、鹅膏蕈碱衍生物、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓衍生物、河豚毒素、短裸甲藻毒素、雪卡毒素、蓖麻毒素、AM毒素、tubulysin、格尔德霉素、美登醇、卡奇霉素、道诺霉素、阿霉素、甲氨蝶呤、长春地辛、SG2285、尾海兔素、尾海兔素类似物、澳瑞他汀(例如单甲基澳瑞他汀E和单甲基澳瑞他汀F)、念珠藻素、喜树碱、根瘤菌素、根瘤菌素衍生物、CC-1065、CC-1065类似物或衍生物、倍癌霉素、烯二炔抗生素、拉霉素、埃博霉素、阿咗那非得(azonafide)、阿普立定(aplidine)、类毒素或前述任意组合；(b)厄洛替尼、硼替佐米、氟维司群、索坦、来曲唑、甲磺酸伊马替尼、PTK787/ZK 222584、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、雷帕霉素、拉帕替尼、洛那法尼(lonafarnib)、索拉非尼、吉非替尼、AG1478、AG1571、噻替派、环磷酰胺、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、苯多巴(benzodopa)、卡波醌、米得哌(meturedopa)、乌得哌(uredopa)、乙烯亚胺、六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、riethiylenethiophosphoramide、三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉它辛、布拉它辛酮、amptothecin、拓扑替康、苔藓抑素、卡利他汀(callystatin)、CC-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻素1、念珠藻素8、尾海兔素、倍癌霉素、KW-2189、CB1-TM1、五加素、水鬼蕉碱(pancratistatin)、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海绵抑制素、苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲洛磷胺、乌拉莫司汀、卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司丁、尼莫司汀、雷莫司汀、卡奇霉素、卡奇霉素γ1、卡奇霉素ω1、dynemicin、dynemicin A、氯膦酸盐、拉霉素、新制癌菌素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、抗霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素(carninomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素、放线菌素D、道诺霉素、地托比星(detorubucin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯并阿霉素、脂质体阿霉素、脱氧阿霉素、表柔比星、依索比星、麻西罗霉素、丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、波非罗霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、streptomigrin、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星、5-氟尿嘧啶、二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、曲美沙特、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯、氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、阿莫司汀(bestrabucil)、比生群、edatraxate、地磷酰胺(defofamine)、秋水仙胺、亚丝醌、elfornithine、依利醋铵、乙环氧啶、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、洛尼达宁(lonidainine)、美登素、安丝菌素、米托胍腙、米托蒽醌、莫哌达醇(mopidanmol)、nitraerine、喷司他丁、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星、洛索蒽醌、2-乙基酰肼、甲基苄肼、多糖k、雷佐生、根霉菌素、西佐喃、锗螺胺、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亚胺醌、2,2’,2”-三氯三乙胺、T-2毒素、verracurin A、漆斑菌素A、蛇形菌素、尿烷、长春地辛、达卡巴嗪、甘露醇氮芥、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、胍血生、gacytosine、阿拉伯糖苷、环磷酰胺、噻替派、紫杉醇、紫杉醇的白蛋白工程纳米制剂、多西他赛、瘤可宁、吉西他滨、6-硫代鸟嘌呤、巯嘌呤、顺铂、卡铂、长春花碱、铂、依托泊苷、异环磷酰胺、米托蒽醌、长春新碱、长春瑞滨、米托蒽醌、替尼泊苷、依达曲沙(edatrexate)、道诺霉素、氨喋呤、希罗达、伊班膦酸盐、CPT-11、拓扑异构酶抑制剂RFS 2000、二氟甲基鸟氨酸、视黄酸、卡培他滨或前述任意药学上可接受的盐、溶剂化物或酸；(c)亲和配体，其中该亲和配体是底物、抑制剂、刺激剂、神经递质、放射性同位素或前述的任意组合；(d)放射性标记“P”、“S”、荧光染料、电子致密试剂、酶、生物素、链霉亲和素、地高辛、半抗原、免疫原性蛋白质、具有与靶标互补序列的核酸分子，或前述的任意组合；(e)免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂和抗寄生虫剂或前述的任意组合；(f)他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮或托瑞米芬；(g)4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮、依西美坦、来曲唑或阿曲唑(astrozole)；(h)氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林或曲沙他滨；(i)芳香酶抑制剂；(j)蛋白激酶抑制剂；(k)脂质激酶抑制剂；(l)反义寡核苷酸；(m)核酶；(n)疫苗；(o)抗血管生成剂。在一些实施方案中，所述毒素优选为澳瑞他汀，更优选为单甲基澳瑞他汀F(MMAF)。

在一些实施方案中，上述任一所述的抗体-药物偶联物中，所述接头选自马来酰亚胺基己酰(mc)或其类似物。

在一些实施方案中，上述任一所述的抗体-药物偶联物中，所述抗体-药物偶联物具有1-30范围内的平均药物抗体比DAR，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30以及任意两个上述数值之间的平均药物抗体比DAR，例如5-6的平均药物抗体比DAR。

在另一个方面，本发明还提供制备上述任一所述的抗体-药物偶联物的方法，包括：将所述接头连接至所述药物，使所述接头-药物部分偶联至所述抗体，纯化所述抗体-药物缀合物。

用于制备抗体-药物偶联物的其他方法己描述于各种出版物中。例如，可在抗体中经由通过还原链间二硫键活化的半胱氨酸巯基进行化学修饰用于发生缀合反应。

在一些实施方案中，上述抗体-药物偶联物中，所述细胞毒类药物为MC-MMAF(Maleimidocaproyl monomethylauristatin F，马来酰亚胺基己酰-单甲基澳瑞他汀F)，其连接到上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体的半胱氨酸的S原子上而得到抗体-药物偶联物。优选地，将上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体在TCEP(三(2-羧乙基)膦)的作用下还原，暴露半胱氨酸的S原子，再将药物连接子MC-MMAF连接在该硫原子上从而实现偶联，样品通过illustra NAP-10柱(购自GE Healthcare)纯化。

在另一个方面，本发明还提供一种药物组合物，其包含上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体或上述任一所述的抗体-药物偶联物以及药学上可接受的载体。

在另一个方面，本发明还提供上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或上述变体或上述任一所述的抗体-药物偶联物在制备如下任一所示的产品中的应用：

(1)检测人卵泡刺激素受体表达的产品；

(2)检测、筛查、预防和/或治疗癌症的产品。

在一些实施方案中，上述应用中，所述癌症是前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、睾丸癌和卵巢癌。

在另一个方面，本发明还提供一种试剂盒，其包含上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或变体或上述任一所述的抗体-药物偶联物。

在另一个方面，本发明还提供一种抑制癌细胞生长的方法，包括将所述细胞与上述任一项所述的抗体-药物偶联物接触。

在一些实施方案中，所述癌细胞为前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、胃癌细胞、睾丸癌细胞和卵巢癌细胞。

在另一个方面，本发明还提供一种治疗癌症患者的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的上述任一所述的抗体-药物偶联物。

在一些实施方案中，上述方法中，所述癌症是前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、睾丸癌和卵巢癌。

在一些实施方案中，上述任一所述的方法进一步包括向所述患者施用另外的治疗剂。合适的治疗剂包括现有的用于特定应用(如癌症)的药物和/或手术疗法。例如，所述抗体-药物偶联物与一种或多种其它化疗或抗肿瘤试剂联用。或者，其它治疗剂是放射疗法。

在一些实施方案中，所述治疗剂为细胞毒性剂。

在另一个方面，本发明还提供一种诊断怀疑患有癌症的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用连接可检测标记的上述任一所述的抗体或其抗原结合片段或变体，并检测标记的抗体或其抗原结合片段或变体在所述对象中的分布。

本领域技术人员应理解本发明的抗体或其抗原结合片段或变体或抗体-药物偶联物有多种用途，例如，本发明的抗体-药物偶联物可用作治疗剂、本发明的抗体或其抗原结合片段或变体用作诊断试剂盒中的试剂或用作诊断工具。

本发明提供的抗FSHR抗体CAN001可以与FSHR特异性结合，在其基础上得到的CAN001抗体-药物偶联物CAN001-MC-MMAF对癌细胞具有显著的杀伤作用。本发明提供的抗FSHR抗体及其抗体-药物偶联物在癌症的检测、筛查和治疗中具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为pMSGβ3_FSHR质粒图谱。

图2为含有CAN001抗体的上清液特异性染色FSHR表达细胞，但不染色GFP表达细胞。

图3为筛选最佳CAN001上清液。

图4为CAN001对人胎盘进行IHC染色。

图5为CAN001对卵巢癌组织和邻近组织进行IHC染色。

图6为CAN001-MC-MMAF的疏水作用色谱(HIC)。

图7为CAN001-MC-MMAF的尺寸排除色谱(SEC)。

具体实施方式

以下通过特定的具体实施方式说明本发明，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容容易地了解本发明的优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方式；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方式，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING:ALABORATORY MANUAL,第二版,冷泉港实验室出版社,1989和第三版,2001；Ausubel等,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John Wiley&Sons,纽约,1987和periodic updates:the series METHODS IN ENZYMOLOGY,学术出版社,圣地亚哥；Wolffe,CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION,第三版,学术出版社,圣地亚哥,1998；METHODS IN ENZYMOLOGY,第304卷,Chromatin(P.M.Wassarman和A.P.Wolffe,eds.),学术出版社,圣地亚哥,1999和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,第119卷，ChromatinProtocols(P.B.Becker,ed.)，胡玛纳出版社,托托瓦，1999等。

本文所用术语“抗体”指免疫球蛋白(Ig)分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即包含特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“发生免疫反应”或“针对”是指抗体与目标抗原的一个或多个抗原决定簇反应且不与其它多肽反应，或者以很低亲和力(Kd>10^-6g/ml)与其它多肽结合。抗体包括但不限于单克隆抗体、嵌合抗体、dAb(结构域抗体)、单链抗体、Fab、Fab’和F(ab’)2片段、Fv和Fab表达库。

已知基本的抗体结构单元包括一个四聚体。每个四聚体(或称为“全抗”)由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链和一条“重”链。每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每条链的羧基端部分限定了一个恒定区，主要负责效应子功能。一般来讲，从人类获得的抗体分子涉及IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任意种类，这些由于分子中存在的重链的性质而彼此不同。某些种类还具有亚类，诸如IgG1、IgG2、以及其它。此外，在人类中，轻链可为κ链或λ链。

如本文所用，术语“单克隆抗体”(mAb)是指一群这样的抗体分子：其只含有由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成的抗体分子中的一种分子种类。具体地，单克隆抗体的互补决定区(CDR)在该群体的所有分子中是相同的。mAb含有能够与抗原的特定表位发生免疫反应的抗原结合位点。

如本文所用，术语“特异性结合”是指在免疫球蛋白分子与免疫球蛋白特异的抗原之间发生的非共价相互作用类型。免疫学结合相互作用的强度或亲和力可以以相互作用的解离常数(Kd)表示，其中较小的Kd代表较大的亲和力。所选多肽的免疫结合特性可使用本领域熟知方法进行定量。

如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”预期是指在抗体的HC和LC多肽的可变区内发现的不连续抗原结合位点。其他人已经描述了这些特定区域，包括Kabat等人，Ann.NYAcad.Sci.190:382-93(1971)；Kabat等人，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH Publication No.91-3242(1991)；Chothia等人，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；MacCallum等人，J.Mol.Biol.,262:732-745(1996)；和North等人，J.Mol.Biol.,406,228-256(2011)，其中定义包括彼此比较时氨基酸残基的重叠或亚组。

CDR散布于更保守的区域，称为框架区(“FR”)。每个LCVR和HCVR由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。轻链的三个CDR被称为“LCDR1、LCDR2和LCDR3”，并且重链的三个CDR被称为“HCDR1、HCDR2和HCDR3”。CDR包含与抗原形成特异性的相互作用的大多数残基。本发明中的LCVR和HCVR区域内CDR氨基酸残基的编号和定位符合Kabat规则。

“分离的”抗体是从其天然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是将妨碍抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素、以及其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，将所述抗体纯化到以下程度：(1)所述抗体按重量百分比计大于95％，如大于99％，如由Lowry方法所测；(2)通过使用转杯式测序仪可以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基；或者(3)通过还原或非还原条件下的SDS-PAGE，使用考马斯蓝或银染色测出具有同质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。通常，分离的抗体将通过至少一个或多个纯化步骤制备。在一些实施方案中，分离的抗体的纯度至少为约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约99％，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括终点)或其中任何值。

术语“序列同一性”指的是：在比较窗口中两个多核苷酸或氨基酸序列是相同的(即基于核苷酸对核苷酸或残基对残基是相同的)。术语“序列同一性百分比”通过如下方式计算：在比较窗口中比较两个最佳比对的序列，确定在两个序列中出现相同核酸碱基(例如A、T、C、G或U)或氨基酸残基的位置的数目以得到匹配的位置的数目，将匹配的位置的数目除以比较窗口中位置的总数目(即窗口尺寸)，然后将结果乘以100以得到序列同一性百分比。

抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的微小变化都涵盖在本公开之内，条件是氨基酸序列的同一性保持至少75％、如至少80％、90％、95％并又如99％。在一些实施方案中，变化为保守氨基酸取代。保守氨基酸取代是在其侧链中相关的氨基酸家族内发生的取代。基因编码的氨基酸大致分以下类：(1)酸性氨基酸为天冬氨酸盐、谷氨酸盐；(2)碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；以及(4)无电荷的极性氨基酸为甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。其它家族的氨基酸包括(i)脂肪族-羟基家族的丝氨酸和苏氨酸；(ii)含酰胺家族的天冬酰胺和谷氨酰胺；(iii)脂肪族家族的丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；以及(iv)芳族家族的苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，保守氨基酸取代组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸、以及天冬酰胺-谷氨酰胺。例如，可以合理地预测用异亮氨酸或缬氨酸单独的置换亮氨酸，用谷氨酸盐置换天冬氨酸盐，用丝氨酸置换苏氨酸，或用一个结构相关的氨基酸类似的置换一个氨基酸，且对所得分子的结合或特性不会有重要影响，特别是该置换不涉及结合位点内的氨基酸。氨基酸改变是否产生功能性肽可以容易地通过测定多肽衍生物的比活性来确定。所述测定在本文进行了详细描述。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可由本领域普通技术人员容易地制备。

术语“药学上可接受”是指适合人和/或动物使用而没有与合理的益处/风险比相称的过度不良副作用(例如毒性，刺激和过敏反应)的组分。

术语“载体”是指与活性成分一起使用的用于治疗的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在一些实施方案中，当药物组合物静脉内给药时，载体可以是水。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物载体的实例在E.W.Martin的Remington's Pharmaceutical Sciences中有描述，在此通过引用并入本发明。此类组合物将含有临床有效剂量的抗体或抗体片段，连同合适的载体，以提供适合于患者的给药形式。该制剂应该适用于给药模式。制剂可以封装在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。

术语“基因”用于指功能性蛋白质，多肽或肽的编码单元。如本领域技术人员所理解的，该功能性术语包括基因组序列，cDNA序列或其片段或组合，以及基因产物，包括可能已被人工改变的基因产物。纯化的基因，核酸，蛋白质及类似物，在从通常与其相关的至少一种污染核酸或蛋白质中识别和分离时，用于指鉴这些实体。

如本文所用的术语“序列”用于指核苷酸或氨基酸，无论是天然的还是人工的，例如修饰过的核酸或氨基酸。

在一些实施方案中，氨基酸取代具有如下效果：(1)降低对蛋白水解作用的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变用于形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(5)赋予或改进此类类似物的其它物理化学或功能特性。类似物可包括序列不同于天然存在的肽序列的各种突变蛋白。例如，可在天然存在的序列(优选在形成分子间接触的结构域之外的多肽部分中)中进行单个或多个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代不应当显著改变亲本序列的结构特性(例如，置换的氨基酸不应当趋于破坏亲本序列中存在的螺旋结构，或破坏表征亲本序列的其它类型二级结构)。人工识别的多肽的二级和三级结构的示例描述于Proteins,Structures and Molecular Principles(Creighton编辑，W.H.Freeman and Company,New York(1984))；Introduction toProtein Structure(C.Branden和J.Tooze编辑，Garland Publishing,New York,N.Y.(1991))；和Thornton等人Nature 354:105(1991)。

抗体可通过公知的技术纯化，例如利用蛋白A或蛋白G进行亲和层析，其主要提供了免疫血清中的IgG级分。另外，可将免疫球蛋白所靶向的特异抗原或其表位固定于柱上，以通过免疫亲和色谱来纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化可参考D.Wilkinson的文章(The Scientist，由The Scientist,Inc.,Philadelphia Pa.出版，第14卷，第8期(2000年4月17日)，第25-28页)。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物给药相容的任何和所有溶剂、稳定剂、缓冲剂、分散介质、包衣、抑菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。合适载体描述于最新版的Remington's Pharmaceutical Sciences中。此类载体或稀释剂可选择包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％的人血清白蛋白。

当用“给予”和“治疗”提及动物、人、实验对象、细胞、组织、器官或生物液时，是指将外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受治疗者、细胞、组织、器官或生物液接触。“给予”和“治疗”可指例如治疗方法、药动学方法、诊断方法、研究方法和实验方法。治疗细胞包括让试剂与细胞接触以及让试剂与流液接触，其中所述流液与细胞接触。“给予”和“治疗”还意味着例如通过试剂、诊断剂、结合组合物或通过其他细胞对细胞进行体外和离体治疗。

本文所用“抑制”或“治疗”包括延缓与疾病有关的症状的发展和/或减轻所述疾病将要或预期发展的这些症状的严重程度。所述术语还包括减缓已有症状、防止另外的症状和减缓或防止这些症状的潜在原因。因此，所述术语表示业已将有益结果赋予患有疾病的脊椎动物对象，比如人。

本文所用术语“治疗有效量”或“有效量”是指当将抗体-药物偶联物单独给予或与另外的治疗剂联合给予细胞、组织或受治疗者时，其有效防止或减缓待治疗的疾病或病症的量。治疗有效剂量进一步指所述抗体-药物偶联物足以导致症状减缓的量，所述减缓症状例如为治疗、治愈、防止或减缓相关医学状态，或提高对所述病征的治疗率、治愈率、防止率或减缓率。对具体受治疗者的有效量可视多种因素而变化，例如待治疗的疾病、患者的整体健康状况、给药的方法途径和剂量及副作用的严重性。有效量可为避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。当施用给个体单独给予的活性成分时，治疗有效量是指该单独的成分。当施用组合时，治疗有效量是指产生治疗效果的活性成分的联合的量，而不论其是联合给予、连续给予还是同时给予。治疗有效量将减轻症状通常至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％和最优选至少50％。

单克隆抗体

可根据本领域知识和技能来制备针对FSHR的单克隆抗体。

用常规方法便可容易地合成单克隆抗体的DNA(如轻链DNA和重链DNA)，所述DNA可被置于表达载体中(例如构建得到轻链表达载体和重链表达载体)，然后将这些载体转染到宿主细胞中以在重组宿主细胞中实现单克隆抗体的合成，所述宿主细胞例如有HEK293T细胞、CHO细胞、NS0细胞或不会另外产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞。抗体的重组制备将在下文更详细地阐述。

抗体-药物偶联物

FSHR的单克隆抗体可以与药物连接子(例如MC-MMAF)偶联，通常连接在抗体的半胱氨酸的S原子上。

本发明的抗体及其抗体-药物偶联物的治疗应用

与FSHR特异性结合的本发明抗体或抗原结合片段或抗体-药物偶联物可用于特异性识别表达FSHR的细胞、组织等。

在一些实施方案中，本发明还提供一种治疗疾病的方法。所述方法包括向有需要的患者施用本发明所述的治疗有效量的抗体-药物偶联物。在一些实施方案中，所述疾病为癌症。

癌症

本发明的抗体-药物偶联物可用于治疗癌症(即抑制肿瘤细胞的生长或存活)。在一些实施方案中，可用本发明的抗体-药物偶联物抑制其生长的癌症包括通常包括前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、睾丸癌和卵巢癌。

本发明的抗体及其抗体-药物偶联物的非治疗性应用

本发明的抗体及其抗体-药物偶联物可用于诊断测定，例如用于检测FSHR在特定的细胞、组织或血清中的表达。为了诊断应用，通常用可检测的部分(直接或间接)标记抗体。可利用众多标记物，其通常分为以下类别：生物素、荧光染料、放射性核苷酸、酶、碘和生物合成标记物。

本发明抗体还可用于体内诊断测定。通常用放射性核素(例如¹¹¹In、⁹⁹Tc、⁴C、¹²⁵I、³H、³²P、³⁵S或¹⁸F)标记抗体，以使可用免疫显像(immunoscintigraphy)或正电子成像术定位抗原或表达抗体的细胞。

药物组合物

本发明还提供了药物组合物。这样的组合物包含有效剂量的抗体-药物偶联物以及药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，术语“药学上可接受的载体”是指由政府的监管机构批准的或其他公认的药典中列出的用于动物(特别是用于人类)的物质。此外，“药学上可接受的载体”通常将是任何类型的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或制剂助剂。

实施例1：小鼠抗人FSHR单克隆抗体CAN001

1、由Genescript合成编码抗人FSHR单克隆抗体的轻链和重链的密码子优化的DNA片段(分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示)，并测序验证合成的DNA片段的核苷酸序列。

SEQ ID NO:1：轻链DNA序列

ATGGCCCTCCCTGTCACCGCCCTGCTGCTTCCGCTGGCTCTTCTGCTCCACGCCGCT

CGGCCCCAGATAGTACTTACGCAATCACCCGTCATAATGAGCGCATCCCCTGGTGAA

AAGGTTACTCTGACATGCTCTGCGTCTTCCAGCGTGAGTAGTTCTTATCTCTATTGGT

ATCAGCAAAAACCCGGATCTTCTAGTAAATTGTGGATATATTCTACGTCTAATCTTGC

GTCAGGAGTGCCTGCTCGGTTTTCTGGGTCCGGGTCCGGGACCAGCTATAGTTTGA

CTATAAGTAGTATGGAGGCGGAGGACGCAGCTAGCTACTTTTGCCATCAATGGAGCT

CCTATCCTCCTACCTTTGGGGGCGGAACCAAATTGGAAATCAAAAGAGCCGACGCG

GCACCCACTGTATCTATCTTCCCACCCTCATCAGAACAGCTCACTTCAGGCGGCGCC

AGTGTGGTGTGTTTCCTCAACAACTTCTATCCTAAAGACATAAATGTAAAATGGAAA

ATAGACGGTAGCGAGCGGCAAAACGGGGTGCTGAACTCATGGACGGACCAAGATT

CCAAGGATTCTACCTATTCAATGAGTTCTACATTGACACTTACGAAAGACGAATACG

AGCGCCACAATTCCTATACGTGCGAAGCAACGCACAAAACCTCCACTTCCCCGATT

GTGAAGTCCTTCAATAGGAATGAATGTTGATAA

轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO:1的第64位至第405位，轻链CDR1的DNA序列为第130位至第168位，轻链CDR2的DNA序列为第214位至第234位，轻链CDR3的DNA序列为第331位至第357位。

SEQ ID NO:2：重链DNA序列

ATGGAGTTTGGGCTCAGTTGGGTCTTTCTCGTGGCACTGTTTCGCGGGGTACAGTG

CGCTAGCCAAGTACAACTGCAACAACCAGGCGCGGAGCTCGTTAAACCGGGGGCG

AGCGTCAACCTTAGCTGCAAAGCCTCCGGTTATACCTTTACAAGTTACTGGATGCAC

TGGGTGAAGCAGCGACCAGGGCAAGGACGCGAATGGATCGGGGAAATAAATCCAA

GGAACGGCAGAACGAATTACAACGAGAAGTTCAAATCCAAGGCGACGTTGACGGT

GGACAAATCCTCTTCAACTGCTTATATGCAGCTCAGTTCTCTGACAAGCGAGGATAG

TGCCGTGTACTGTTGCGCCAGGTTGTCTGTGGGGTTCGCCTACTGGGGGCAGGGCA

CGCTCGTTACAGTCTCTGCGGCCAAGACGACTGCGCCTTCAGTATATCCACTGGCTC

CGGTGTGCGGAGATACGACAGGTAGTTCTGTAACTTTGGGATGCCTCGTTAAGGGT

TATTTCCCGGAGCCGGTCACCTTGACGTGGAACTCCGGATCACTCTCCTCAGGGGT

ACATACATTTCCAGCGGTTTTGCAGAGCGACCTCTACACACTCAGTAGCAGTGTAA

CCGTTACCTCATCCACATGGCCTAGCCAGAGTATCACGTGCAATGTTGCACACCCGG

CAAGTTCTACCAAGGTGGACAAAAAAcTCGAGCCTAGAGGACCGACGATAAAGCC

CTGTCCGCCTTGCAAATGTCCGGCACCTAACGCTGCTGGTGGCCCCTCTGTTTTTAT

ATTTCCGCCAAAAATTAAGGACGTCCTCATGATCAGTCTGAGCCCTATAGTCACGTG

TGTGGTGGTAGATGTCTCTGAAGACGATCCCGACGTACAGATTTCATGGTTCGTGA

ACAATGTGGAGGTTCACACAGCCCAAACACAGACACACCGCGAAGATTACAATAG

TACACTGCGGGTAGTCTCTGCCCTCCCAATACAACACCAGGACTGGATGAGCGGGA

AAGAGTTCAAGTGCAAAGTCAATAACAAAGACCTGGGAGCGCCGATAGAAAGAAC

TATAAGTAAACCAAAGGGGAGCGTAAGAGCGCCCCAAGTGTATGTCCTCCCTCCTC

CCGAAGAGGAAATGACCAAGAAACAAGTTACTCTCACATGCATGGTAACCGATTTC

ATGCCTGAAGACATATACGTAGAGTGGACCAACAACGGGAAGACAGAATTGAACT

ACAAGAATACAGAGCCCGTTCTCGATTCTGATGGCTCCTACTTTATGTATAGCAAAC

TCCGGGTGGAAAAAAAGAATTGGGTCGAAAGAAACAGTTATTCATGTTCTGTTGTT

CACGAGGGTTTGCATAACCATCATACGACGAAATCTTTTTCCAGAACCCCAGGAAA

ATGA

重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO:2的第64位至第441位，重链CDR1的DNA序列为第154位至第168位，重链CDR2的DNA序列为第211位至第261位，重链CDR3的DNA序列为第358位至第378位。

2、通过In-Fusion克隆方法将轻链DNA序列克隆到pcDNA3.1(购自Thermo Fisher)的Hind III位点和EcoR I位点间，构建得到轻链表达载体pcDNA3.1_CAN001 LC。

3、通过In-Fusion克隆方法将重链DNA序列克隆到pcDNA3.1的Hind III位点和EcoR I位点间，构建得到重链表达载体pcDNA3.1_CAN001 HC。

SEQ ID NO:3：轻链氨基酸序列

MALPVTALLLPLALLLHAARPQIVLTQSPVIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQK

PGSSSKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPPTFGG

GTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLN

SWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

基于Kabat编号系统编号，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:3的第22位至第135位(SEQ ID NO:5)，轻链CDR1的氨基酸序列为第44位至第56位(CSASSSVSSSYLY(SEQ IDNO:6))，轻链CDR2的氨基酸序列为第72位至第78位(STSNLAS(SEQ ID NO:7))，轻链CDR3的氨基酸序列为第111位至第119位(HQWSSYPPT(SEQ ID NO:8))。

SEQ ID NO:4：重链氨基酸序列

MEFGLSWVFLVALFRGVQCASQVQLQQPGAELVKPGASVNLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGREWIGEINPRNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYCCARLSVGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKLEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLGAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTE PVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK

基于Kabat编号系统编号，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4的第22位至第147位(SEQ ID NO:9)，重链CDR1的氨基酸序列为第52位至第56位(SYWMH(SEQ ID NO:10))，重链CDR2的氨基酸序列为第71位至第87位(EINPRNGRTNYNEKFKS(SEQ ID NO:11))，重链CDR3的氨基酸序列为第120位至第126位(LSVGFAY(SEQ ID NO:12))。

实施例2：人FSHR基因的克隆及表达载体的构建

提取OVCAR3细胞系(购自ATCC公司，产品目录号为htb-161)的RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板以FSHR-F和FSHR-R为引物进行PCR扩增得到含有FSHR基因的片段。

FSHR-F：5’-gtttCCACAACCatggccctgctcctgg-3’(SEQ ID NO:13)；

FSHR-R：5’-ggttgattaactcgagttagttttgggctaaatgacttagagggacaag-3’(SEQ IDNO:14)。

将含有FSHR基因的片段克隆到克隆载体pJET2.1(购自Thermo Fisher，产品目录号为SO501)，构建得到pJET2.1-FSHR质粒。测序验证后，将插入片段亚克隆到pMSGβ3的NcoI和Xho I位点间，构建得到pMSGβ3_FSHR质粒，pMSGβ3_FSHR质粒图谱如图1所示。

实施例3：在HEK293T细胞中产生抗体CAN001

为了制备CAN001抗体，将HEK293T细胞在无血清培养基中培养，并用编码CAN001重链和轻链的载体pcDNA3.1_CAN001 HC和pcDNA3.1_CAN001 LC(质量比1:2)与25kD线性PEI聚合物(polyscience)按照载体:聚合物的质量比为1:3的比例复合转染HEK293T细胞。转染后将HEK293T细胞培养72小时，并收集培养上清液，即为含有CAN001抗体的上清液。

实施例4：CAN001抗体的流式细胞仪分析

用pMSGβ3_FSHR质粒转染HEK293T细胞,得到表达FSHR的HEK293T细胞，作为实验组。用pmaxGFP(Lonza)转染HEK293T细胞，得到表达GFP蛋白的HEK293T细胞，作为阴性对照组。将实验组和阴性对照组的细胞分别与实施例3获得的含有CAN001抗体的上清液一起孵育后，将CAN001抗体包被的细胞洗涤，并与APC偶联的山羊抗小鼠IgG二抗孵育。流式细胞仪使用BD calibur进行，并使用Cellquest软件进行分析。结果如图2所示，结果表明用含有CAN001抗体的上清液特异性染色表达FSHR的细胞，而不染色表达GFP的细胞。

为了进一步筛选最好的CAN001上清液，用不同比例的质粒pcDNA3.1_CAN001 HC和pcDNA3.1_CAN001 LC的混合物(图3中从左到右pcDNA3.1_CAN001 HC和pcDNA3.1_CAN001LC的质量比分别为1:2、1:1和1:3)与25kD线性PEI聚合物按照载体:聚合物的质量比为1:3的比例复合转染HEK293T细胞。转染后72小时，收集上清液并用于染色表达FSHR的HEK293T细胞，表达GFP蛋白的HEK293T细胞用作阴性对照，步骤如上所述。流式细胞仪分析结果如图3所示，结果表明当pcDNA3.1_CAN001 HC与pcDNA3.1_CAN001LC的质量比为1:2时，HEK293T细胞被染色的阳性率最高(38.3％)，而pcDNA3.1_CAN001HC与pcDNA3.1_CAN001 LC的质量比为1:1和1:3时，HEK293T细胞被染色的阳性率分别为30.02％和34.75％。选择pcDNA3.1_CAN001 HC与pcDNA3.1_CAN001 LC的质量比为1:2制备含有CAN001抗体的上清液。

实施例5：CAN001抗体对人胎盘和肿瘤组织进行IHC染色

实验试剂：

PBS缓冲液(pH＝7.4)：1000ml蒸馏水，8.0g NaCl，0.2g KCl，1.149g Na₂HPO₄，0.2gNaH₂PO₄。

0.01M枸橼酸缓冲液(pH6.0)：

A液：29.41g枸橼酸三钠-2H₂O+1000ml蒸馏水

B液：21g枸橼酸+1000ml蒸馏水

抗原修复工作液的配制：82ml A液+18ml B液+900ml蒸馏水

苏木素显色液(避光保存，见光被氧化)：配比根据苏木素试剂盒(购自福州迈新生物技术开发有限公司，产品目录号为CTS1097)上的说明书配比，也可以根据预实验时所得试验结果调整比例，以达到最佳染色。通常配比如下：1ml苏木素原液+4ml蒸馏水。

GTVisionⅢ抗鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒购自基因科技(上海)股份有限公司，产品目录号为GK500705，A液(二抗工作液)：HRP标记聚合物(抗鼠、兔)；B液：DAB缓冲稀释液；C液：DAB原液。DAB显色液配制：1ml B液+20μl C液。显色结果：棕色。该试剂盒不含亲和素、链亲和素，不受内源生物素干扰。

实验步骤：

1)脱蜡和水化

将人胎盘或卵巢癌组织石蜡包埋切片于70℃恒温箱中烘烤约40分钟。然后将切片置于二甲苯中浸泡15分钟，随后在无水乙醇、95％乙醇、75％乙醇中各浸泡5分钟进行梯度水化。

2)去除内源性过氧化物酶

3％过氧化氢中浸泡切片约15分钟，去除组织内源性过氧化氢酶，接着用PBS缓冲液洗片子3次，每次5分钟。

3)抗原修复

在沸水中加入抗原修复工作液(pH 6.0)。将切片放入修复溶液内，在最高压力下，加热约10分钟后打开盖子，待其自然冷却至室温。

4)封闭、抗体孵育

当玻片冷却到室温后，PBS缓冲液洗3次，每次5分钟，滴加10％山羊血清/PBS封闭液在标本上，湿盒内室温静置封闭1小时。后滴加目标蛋白抗体CAN001(1:200-800)在标本上，每片约50μL，置于湿盒中4℃过夜后PBS缓冲液洗3次，每次洗5分钟；滴加羊抗鼠二抗50μL(1:200)，置于湿盒中室温静置1小时，PBS缓冲液洗3次，每次洗5分钟。

5)DAB显色

每块切片组织上滴加1-2滴DAB显色液，并同时在显微镜下观察染色程度，程度适中时用PBS缓冲液终止反应，随后苏木素染细胞核复染30秒，PBS缓冲液终止反应。

6)封片

用封片剂滴在组织旁边，再用方形盖玻片盖上，为避免气泡产生，应先放平一侧，然后再放平另一侧，最后在盖玻片上轻压数次，封好片子晾干24小时。

CAN001抗体对人胎盘进行的IHC染色如图4所示。

CAN001抗体对卵巢癌组织和邻近组织进行的IHC染色如图5所示。

实施例6：CAN001抗体-药物偶联物的制备

用PBS缓冲液(660.0μL,pH＝7)稀释抗体溶液CAN001(1039.2μL,7.66mg/mL)，得到1699.2μL浓度为4.68mg/mL的CAN001抗体溶液。在上述CAN001抗体溶液中加入含有TCEP(三(2-羧乙基)膦)的PBS溶液(14.7μL，2.5mM，pH＝7)，将得到的溶液轻轻涡旋均匀后在37℃下孵育2小时。加入136.5μL含有3.5mM药物连接子MC-MMAF(Maleimidocaproylmonomethylauristatin F，马来酰亚胺基己酰-单甲基澳瑞他汀F)的DMSO溶液，将溶液轻轻涡旋并在25℃下保持1小时，反应得到粗样品。粗样品通过illustra NAP-10柱(购自GEHealthcare)纯化，并通过0.25μm微滤器过滤，得到最终的抗体-药物偶联物CAN001-MC-MMAF，3.1mL，2.56mg/mL，DAR(药物抗体比)＝5.95，UmAb％(未偶联抗体百分率)＝1.3％，Agg％(聚合抗体百分率)＝1.6％。

CAN001-MC-MMAF的结构式如式1所示。

CAN001-MC-MMAF的疏水作用色谱(HIC)如图6所示。

CAN001-MC-MMAF的尺寸排除色谱(SEC)如图7所示。

实施例7：CAN001抗体-药物偶联物的细胞杀伤实验

本实施例使用96孔板通过CellTiter-Glo细胞活力测定法测试CAN001抗体-药物偶联物对抗癌细胞系的作用。

人卵巢癌细胞系：OVCAR-3，A2780，3AO，均购自ATCC。

将细胞接种于96孔细胞培养板中，每个孔1000个细胞，每孔培养基总量控制为200μL。待细胞贴壁后，给予相应的药物处理细胞，于不同时间点(0、24h、48h、72h、96h)撤药，并且加入MTS检测溶液(MTS试剂10μL+190μL完全培养基)(MTS细胞增殖试剂盒(比色法)为艾美捷产品)，然后将96孔细胞培养板放在CO₂细胞恒温培养箱内避光孵育大约2小时，然后取出细胞培养板，放置于酶标仪上，测定不同分组的细胞在492nm处的吸光度。

每种化合物的％抑制率和IC50将通过XLFit曲线拟合软件进行计算。结果如表1所示。

表1

表1表明，与MMAF相比，CAN001抗体-药物偶联物CAN001-MC-MMAF对卵巢癌细胞具有显著提高的杀伤作用。

序列表

<110> 康威（广州）生物科技有限公司

<120> 抗FSHR抗体及其抗体-药物偶联物的制备和应用

<130> DSP1F213818JW

<150> CN 202011417088.9

<151> 2020-12-04

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 714

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60

ccccagatag tacttacgca atcacccgtc ataatgagcg catcccctgg tgaaaaggtt 120

actctgacat gctctgcgtc ttccagcgtg agtagttctt atctctattg gtatcagcaa 180

aaacccggat cttctagtaa attgtggata tattctacgt ctaatcttgc gtcaggagtg 240

cctgctcggt tttctgggtc cgggtccggg accagctata gtttgactat aagtagtatg 300

gaggcggagg acgcagctag ctacttttgc catcaatgga gctcctatcc tcctaccttt 360

gggggcggaa ccaaattgga aatcaaaaga gccgacgcgg cacccactgt atctatcttc 420

ccaccctcat cagaacagct cacttcaggc ggcgccagtg tggtgtgttt cctcaacaac 480

ttctatccta aagacataaa tgtaaaatgg aaaatagacg gtagcgagcg gcaaaacggg 540

gtgctgaact catggacgga ccaagattcc aaggattcta cctattcaat gagttctaca 600

ttgacactta cgaaagacga atacgagcgc cacaattcct atacgtgcga agcaacgcac 660

aaaacctcca cttccccgat tgtgaagtcc ttcaatagga atgaatgttg ataa 714

<210> 2

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggagtttg ggctcagttg ggtctttctc gtggcactgt ttcgcggggt acagtgcgct 60

agccaagtac aactgcaaca accaggcgcg gagctcgtta aaccgggggc gagcgtcaac 120

cttagctgca aagcctccgg ttataccttt acaagttact ggatgcactg ggtgaagcag 180

cgaccagggc aaggacgcga atggatcggg gaaataaatc caaggaacgg cagaacgaat 240

tacaacgaga agttcaaatc caaggcgacg ttgacggtgg acaaatcctc ttcaactgct 300

tatatgcagc tcagttctct gacaagcgag gatagtgccg tgtactgttg cgccaggttg 360

tctgtggggt tcgcctactg ggggcagggc acgctcgtta cagtctctgc ggccaagacg 420

actgcgcctt cagtatatcc actggctccg gtgtgcggag atacgacagg tagttctgta 480

actttgggat gcctcgttaa gggttatttc ccggagccgg tcaccttgac gtggaactcc 540

ggatcactct cctcaggggt acatacattt ccagcggttt tgcagagcga cctctacaca 600

ctcagtagca gtgtaaccgt tacctcatcc acatggccta gccagagtat cacgtgcaat 660

gttgcacacc cggcaagttc taccaaggtg gacaaaaaac tcgagcctag aggaccgacg 720

ataaagccct gtccgccttg caaatgtccg gcacctaacg ctgctggtgg cccctctgtt 780

tttatatttc cgccaaaaat taaggacgtc ctcatgatca gtctgagccc tatagtcacg 840

tgtgtggtgg tagatgtctc tgaagacgat cccgacgtac agatttcatg gttcgtgaac 900

aatgtggagg ttcacacagc ccaaacacag acacaccgcg aagattacaa tagtacactg 960

cgggtagtct ctgccctccc aatacaacac caggactgga tgagcgggaa agagttcaag 1020

tgcaaagtca ataacaaaga cctgggagcg ccgatagaaa gaactataag taaaccaaag 1080

gggagcgtaa gagcgcccca agtgtatgtc ctccctcctc ccgaagagga aatgaccaag 1140

aaacaagtta ctctcacatg catggtaacc gatttcatgc ctgaagacat atacgtagag 1200

tggaccaaca acgggaagac agaattgaac tacaagaata cagagcccgt tctcgattct 1260

gatggctcct actttatgta tagcaaactc cgggtggaaa aaaagaattg ggtcgaaaga 1320

aacagttatt catgttctgt tgttcacgag ggtttgcata accatcatac gacgaaatct 1380

ttttccagaa ccccaggaaa atga 1404

<210> 3

<211> 236

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met

20 25 30

Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser

35 40 45

Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val

65 70 75 80

Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr

85 90 95

Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln

100 105 110

Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

115 120 125

Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser

130 135 140

Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn

145 150 155 160

Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu

165 170 175

Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp

180 185 190

Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr

195 200 205

Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr

210 215 220

Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

225 230 235

<210> 4

<211> 467

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Phe Arg Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Ala Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu

20 25 30

Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Arg Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn

65 70 75 80

Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser

85 90 95

Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser

100 105 110

Ala Val Tyr Cys Cys Ala Arg Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser

130 135 140

Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val

145 150 155 160

Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu

165 170 175

Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

180 185 190

Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr

195 200 205

Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro

210 215 220

Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Arg Gly Pro Thr

225 230 235 240

Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly

245 250 255

Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met

260 265 270

Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu

275 280 285

Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val

290 295 300

His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu

305 310 315 320

Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly

325 330 335

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Gly Ala Pro Ile

340 345 350

Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val

355 360 365

Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr

370 375 380

Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu

385 390 395 400

Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro

405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val

420 425 430

Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val

435 440 445

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr

450 455 460

Pro Gly Lys

465

<210> 5

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Ser Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala

100 105 110

Ala Pro

<210> 6

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 9

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Arg Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Cys Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro

115 120 125

<210> 10

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Glu Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Leu Ser Val Gly Phe Ala Tyr

1 5

<210> 13

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

gtttccacaa ccatggccct gctcctgg 28

<210> 14

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ggttgattaa ctcgagttag ttttgggcta aatgacttag agggacaag 49

Claims

1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含可变区，其特异性结合人卵泡刺激素受体FSHR，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3以及重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，并且其中：

所述轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，

所述轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，

所述轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，

所述重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，

所述重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示，

所述重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

5.根据权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

7.根据权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区；

其中，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述轻链包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

9.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述轻链包含与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

10.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述轻链包含与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

11.根据权利要求1和8-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述重链包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

12.根据权利要求1和8-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述重链包含与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

13.根据权利要求1和8-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含轻链和重链；

其中，所述重链包含与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

14.与权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段相关的生物材料，为如下B1)或B2)：

B1)编码权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组细胞。

15.根据权利要求14所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子包含

SEQ ID NO:1中第130位至第168位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第214位至第234位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第331位至第357位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第154位至第168位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第211位至第261位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第358位至第378位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1中第64位至第405位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:2中第64位至第441位所示的核酸片段；

SEQ ID NO:1所示的核酸片段；或

SEQ ID NO:2所示的核酸片段。

16.制备权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：

在能使权利要求14中B1)所述的核酸分子表达的条件下于培养基中培养含有所述核酸分子的重组细胞，以制备所述抗体或其抗原结合片段。

17.一种抗体-药物偶联物，由权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段通过接头与细胞毒类药物偶联得到。

18.根据权利要求17所述的抗体-药物偶联物，其特征在于：所述细胞毒类药物为化学治疗剂或毒素。

19.根据权利要求18所述的抗体-药物偶联物，其特征在于：所述毒素为澳瑞他汀。

20.根据权利要求19所述的抗体-药物偶联物，其特征在于：所述澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀F。

21.根据权利要求17所述的抗体-药物偶联物，其特征在于：所述接头选自马来酰亚胺基己酰或其类似物。

22.根据权利要求17-21任一项所述的抗体-药物偶联物，其特征在于：所述抗体-药物偶联物具有1-30范围内的平均药物抗体比DAR。

23.制备权利要求17-22任一项所述的抗体-药物偶联物的方法，包括：

将所述接头连接至所述药物，使所述接头-药物部分偶联至所述抗体，纯化所述抗体-药物缀合物。

24.一种药物组合物，其包含权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求17-22任一项所述的抗体-药物偶联物以及药学上可接受的载体。

25.权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备检测人卵泡刺激素受体表达的产品中的应用。

26.权利要求1-13任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备检测、筛查表达人卵泡刺激素受体的癌症的产品中的应用。

27.权利要求17-22任一项所述的抗体-药物偶联物在制备检测人卵泡刺激素受体表达的产品中的应用。

28.权利要求17-22任一项所述的抗体-药物偶联物在制备检测、筛查、预防和/或治疗表达人卵泡刺激素受体的癌症的产品中的应用。

29.根据权利要求26或28所述的应用，其特征在于：所述癌症是前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、睾丸癌和卵巢癌。