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CN113874075A - 调节γC-细胞因子信号传导对于治疗脱发和脱发相关病症的影响 - Google Patents

调节γC-细胞因子信号传导对于治疗脱发和脱发相关病症的影响 Download PDF

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CN113874075A
CN113874075A CN202080037966.6A CN202080037966A CN113874075A CN 113874075 A CN113874075 A CN 113874075A CN 202080037966 A CN202080037966 A CN 202080037966A CN 113874075 A CN113874075 A CN 113874075A
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cytokine
seq
leu
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田谷丰
纳兹利·阿兹米
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Bioniz LLC
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Abstract

γc‑家族细胞因子，即白介素‑2(IL‑2)、白介素‑4(IL‑4)、白介素‑7(IL‑7)、白介素‑9(IL‑9)、白介素‑15(IL‑15)和白介素‑21(IL‑21)与重要的人类疾病(例如脱发和脱发相关病症)相关。描述了调节至少一个γc‑细胞因子家族成员的信号传导以抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作，或者预防至少一种脱发相关病症的组合物、方法和试剂盒。

Description

调节γC-细胞因子信号传导对于治疗脱发和脱发相关病症的 影响
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年5月3日提交的美国临时专利申请第62/842,846号的优先权。前述申请出于所有目的通过引用完全并入本文。
电子格式的序列表
本申请与作为ASCII文本文件的序列表经由EFS-Web一起递交。序列表提供为于2020年4月29日生成并最后保存的标题为BION012WOSEQLIST.txt的文件，其大小为47,416字节。电子格式的序列表中的信息根据35U.S.C.§1.52(e)通过引用以其整体并入本文中。
背景
领域
本实施方案涉及使用一种或多种治疗性化合物通过调节至少一个c-细胞因子家族成员的信号传导来抑制、改善、降低自身免疫性疾病(例如脱发和脱发相关病症)的严重程度，治疗所述自身免疫性疾病，延迟所述自身免疫性疾病的发作或者预防所述自身免疫性疾病。
相关领域的描述
细胞因子是一组多样化的可溶性因子，其介导各种细胞功能，例如生长、功能分化以及程序性细胞死亡(凋亡细胞死亡)的促进或预防。与激素不同，细胞因子不是由特化的腺体组织产生的，而是可以由多种细胞类型例如上皮细胞、基质细胞或免疫细胞产生。
γc-家族细胞因子是一组哺乳动物细胞因子，其主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生，并控制多样化的淋巴细胞系列的正常和病理性活化。这些细胞因子对于胸腺中T细胞的早期发育以及它们在外周系统中的稳态是严格必需的。
概述
在一些实施方案中，组合物包含治疗性化合物，其量足以调节至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，从而抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作，或者预防至少一种脱发相关病症；以及药学上可接受的载体。
在组合物的一些实施方案中，所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
在组合物的一些实施方案中，所述至少一个γc-细胞因子家族成员选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。
在组合物的一些实施方案中，所述治疗性化合物为γc细胞因子拮抗肽、γc细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合中的至少一种。
在组合物的一些实施方案中，所述γc细胞因子拮抗肽包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的部分序列。
在组合物的一些实施方案中，所述部分序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的至少5个氨基酸的连续嵌段。
在组合物的一些实施方案中，所述部分序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的1-10个氨基酸的连续嵌段。
在组合物的一些实施方案中，至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区选自IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含11至50个氨基酸。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽还包含在在N末端、C末端、侧链残基或其组合处的缀合物。
在组合物的一些实施方案中，所述缀合物包含一个或多个选自以下的另外部分：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽还包含信号肽。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约50％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约90％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约95％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含SEQ ID NO:1的序列(BNZ-γ)。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽和γc拮抗肽衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约50％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。
在组合物的一些实施方案中，药学上可接受的载体被配制用于局部递送、口服递送和/或肠胃外递送。
在组合物的一些实施方案中，药学上可接受的载体被配制用于局部递送。
在组合物的一些实施方案中，药学上可接受的载体被配制用于口服递送。
在组合物的一些实施方案中，药学上可接受的载体被配制用于肠胃外递送。
在一些实施方案中，抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的方法包括向有需要的对象施用本文提供的一种或多种组合物，从而抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症。
在抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的方法的一些实施方案中，所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
在一些实施方案中，设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法包括以下步骤：使用计算机从氨基酸序列数据库中获得至少一个γc-细胞因子家族成员的氨基酸序列，基于所述至少一个γc-细胞因子家族成员的序列组装γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物调节和/或阻断所述至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，所述γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物经配置以调节和/或阻断至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，所述至少一个γc-细胞因子家族成员选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，所述γc-细胞因子拮抗肽包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的部分序列。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，所述序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的至少5个氨基酸的连续嵌段。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，所述序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的1-10个氨基酸的连续嵌段。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区选自IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含11至50个氨基酸。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽还包含在N末端、C末端、侧链残基或其组合处的缀合物。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽还包含信号肽。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约50％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约90％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约95％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽包含SEQ ID NO:1的序列(BNZ-γ)。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约50％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。
在设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法的一些实施方案中，γc细胞因子拮抗肽及其衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
在一些实施方案中，用于抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的试剂盒包含本文提供的一种或多种组合物。
在试剂盒的一些实施方案中，所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
附图简述
图1A显示了人γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的比对。
图1B描绘了在γc-细胞因子的D螺旋区周围产生共有序列的γc-盒(SEQ ID NO:9)和IL-2/IL-15盒(SEQ ID NO:10)基序。
图2描绘了氨基酸的生化特性的图示。
图3A显示了PT-18增殖测定中BNZ-γ对IL-15和IL-9活性的抑制。
图3B显示了在IL-2或IL-15和0、0.1、1或10μM的BNZ-γ存在下生长的CTLL-2细胞的增殖测定。
图4显示了BNZ-γ对STAT5的IL-15介导的酪氨酸-磷酸化的抑制。
图5显示了huPBMC移植到NSG小鼠后人细胞因子IL-2、IL-15和IFNγ的循环水平。
图6A显示了huPBMC移植后4周来自代表性NSG小鼠的人CD8+T细胞完全表达NKG2D(CD314)。
图6B显示了从huPBMC移植后1周到4周NKG2A+人CD8+T细胞(框)在代表性NSG小鼠中的扩增。
图7A显示了在huPBMC移植后4周的代表性NSG小鼠中注射抗CD8抗体后人CD8+T细胞的特异性耗损。在注射抗CD8AB后的图是抗体注射后第8天。
图7B显示了在huPBMC移植后4周抗体处理的三只NSG小鼠中抗CD8抗体介导的人CD8+T细胞耗损后体重的平均恢复(以天数中的克计)。
图7C显示了在抗体注射后14天和huPBMC移植后42天的代表性NSG小鼠中抗CD8抗体介导的人CD8+T细胞耗损后体毛的再生长。
图8显示了在huPBMC移植后4周从代表性NSG小鼠分离的NKG2A+(+)而非NKG2A-(-)CD8+T细胞中的Jak3和STAT5的正磷酸化，表明γC-细胞因子信号传导的组成型活化。
图9A显示了在huPBMC移植后1周至6周的过程中来自三只代表性人源化NSG小鼠的NKG2A+人CD8+T细胞的扩增与炎性细胞因子IFNγ及γc-细胞因子IL-2和IL-15的水平之间的正相关。
图9B显示了在huPBMC移植后3至5周，经由在三只代表性人源化NSG小鼠中每周两次施用抗NKG2A抗体，人NKG2A+CD8+T细胞的有效耗损导致GvHD症状(例如体重减轻)的改善，以及γc-细胞因子IL-2、IL-15和炎性细胞因子IFNγ的显著降低。
图10A显示了在代表性NSG小鼠中BNZ-γ对免疫介导的脱发的逆转。时间点：第-30天是在huPBMC移植之前。第0天是huPBMC移植后4周。第7天是huPBMC移植后5周，并且在两周的治疗持续时间内每周两次BNZ-γ给药方案的1周。第21天是在huPBMC移植后7周并且在两周的治疗持续时间内每周两次BNZ-γ给药方案完成后的一周。第30天是刚超过huPBMC移植后8周并且在两周的治疗持续时间内刚超过每周两次BNZ-γ给药方案完成后2周。
图10B显示了在两周的治疗持续时间内完成和未完成(PBS对照)每周两次BNZ-γ给药方案的情况下，在huPBMC移植后6周的两个代表性NSG小鼠中循环的人炎性细胞因子IL-6和IFNγ的血清浓度的比较。结果是统计学显著的(***)，p<0.001。
图11A显示了在huPBMC移植后35天用PBS对照(未处理的)、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗IL-2和抗IL-15抗体的组合和BNZ-γ开始治疗性处理的人源化NSG小鼠的存活曲线。
图11B显示了在huPBMC移植后35天在NSG小鼠上完成四周处理方案后，来自以下每个处理组的代表性NSG小鼠中毛发再生水平的比较：PBS对照、抗IL-2抗体(AB)、抗IL-15AB、抗IL-2和抗IL-15AB的组合以及BNZ-γ。
图11C显示了在huPBMC移植后35天，在NSG小鼠上完成四周处理方案后，来自以下每个处理组的循环的人炎性细胞因子IL-6和IFNγ的平均血清浓度的比较：PBS对照、抗IL-2抗体(Ab)、抗IL-15Ab、抗IL-2和抗IL-15Ab的组合以及BNZ-γ。
图12显示了来自huPBMC移植后3周(BNZ-γ处理前)和7周(使用或未用BNZ-γ处理)的人源化NSG小鼠的人CD8+T细胞的免疫染色皮肤组织。用黑色箭头突出显示了人CD8+T细胞。
图13A描绘了人CD8α链的核苷酸和肽序列。
图13B描绘了人CD8β链的核苷酸和肽序列。
图14描绘了人IL-2的核苷酸和肽序列。
图15描绘了人IL-15的核苷酸和肽序列。
图16描绘了人NKG2A的核苷酸和肽序列。
图17描绘了人NKG2B的核苷酸和肽序列。
图18描绘了人NKG2C的核苷酸和肽序列。
图19描绘了人NKG2D的核苷酸和肽序列。
图20描绘了人NKG2E的核苷酸和肽序列。
图21描绘了人NKG2F的核苷酸和肽序列。
图22描绘了人NKG2H的核苷酸和肽序列。
详述
本文的实施方案涉及包含一种或多种治疗性化合物的组合物、方法和试剂盒，所述治疗性化合物调节至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，用于抑制、改善、降低自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)的严重程度，治疗自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)，延迟自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)的发作或者预防自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)。γc-家族的细胞因子包括一组哺乳动物细胞因子，其主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生并控制各种各样的淋巴细胞的正常和病理性活化。公开了治疗性化合物的靶标疾病以及施用方法、生产方法和商业化方法的描述。
概述
到目前为止已经鉴定了多于100种细胞因子，并且认为它们是通过基因复制的方式从原始基因库开发而来(参见Bazan,J.F.1990,Immunol.Today 11:350-354)。为了支持这种观点，一组细胞因子在其多亚基受体系统中共有组分是较常见的。T细胞中记载最多的共有细胞因子亚基是常见的γ亚基(γc亚基)。
γc亚基为6种已知的细胞因子(白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素15(IL-15)和白介素21(IL-21)，统称为“γc-细胞因子”或“γc家族细胞因子”)所共有，并且在转导所有这些细胞因子的细胞激活信号中起着不可或缺的作用。另外，对于每种γc-细胞因子，存在一个或两个私有的细胞因子特异性的受体亚基，其在与γc亚基复合时，产生完全功能化的受体(参见Rochman等人,2009,Nat RevImmunol.9:480-90)。
γc家族细胞因子是一组哺乳动物细胞因子，其主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生，并控制各种各样的淋巴细胞的正常和病理性活化。这些细胞因子对于胸腺中T细胞的早期发育以及它们在外周系统中的稳态是严格必需的。例如，在不存在γc亚基的情况下，小鼠中的T、B和NK细胞不发育。(参见Sugamura等人,1996,Annu.Rev.Immunol.14:179-205)。
γc-细胞因子在构成免疫系统的淋巴样细胞，尤其是T、B和NK细胞的发育中起着重要作用。此外，γc-细胞因子涉及多种人类疾病。因此，抑制γc-细胞因子活性的因素将为阐明淋巴细胞亚群的发育机制和治疗免疫病症以及γc-细胞因子介导的疾病提供有用的工具。
已知小鼠中编码γc-亚基的基因的种系耗损或人中γc-亚基的突变通过破坏NK、T和B细胞的正常外表或功能而引起严重联合免疫缺陷(SCID)。在证明了来自这些小鼠和人类患者的淋巴细胞缺乏对γc-细胞因子的反应的研究中，指出了γc-亚基在γc-细胞因子IL-2、-4、-7、-9、-15、-21的信号转导中的重要性(在Sugamura等人,1995Adv.Immunol.59:225 277中有综述)。这表明γc-亚基与γc-细胞因子之间相互作用的破坏将有效地阻断通过γc-细胞因子家族成员的细胞内信号传导事件。因此，预期根据本实施方案的拮抗肽将有效地阻断患有由γc-细胞因子家族成员的错误调节介导的疾病的人类中的病原性变化。
申请人提出了新的组合物、方法和试剂盒，其包含一种或多种调节至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导的治疗性化合物，用于抑制、改善、降低自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)的严重程度，治疗自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)，延迟自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)的发作或者预防自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)。申请人还设计了在本文中被称为“Simul-Block”的新的低分子量治疗性化合物，其阻抑多种γc-细胞因子的活性。这些包括化学物质和肽的低分子量治疗性化合物的免疫原性通常低于抗体，并且可以用作单独的(stand-alone)方法，或者与抗体介导的方法互补，用于在临床干预中调节γc-细胞因子活性。
与γc-细胞因子相关的病理学
最近的研究表明，γc-细胞因子的表达失调和功能障碍可能导致多种人类免疫性和造血性疾病。
IL-2
尽管IL-2在历史上被认为是原型T细胞生长因子，但缺乏IL-2表达的敲除小鼠的产生揭示了IL-2对于体内常规T细胞的生长或发育不是至关重要的。然而，IL-2的过表达导致T细胞亚群-调节性T细胞(T-regs)的优先扩增。(参见Antony等人,2006,J.Immunol.176:5255-66)。T-regs阻抑其它细胞的免疫应答，从而起到维持外周耐受的作用(在Sakaguchi等人,2008,Cell 133:775-87中有综述)。外周耐受的崩溃被认为会引起人体中的自身免疫性疾病。
因此，认为T-regs的免疫抑制功能可以防止自身免疫性疾病的发展(参见Sakaguchi等人,2008,Cell 133:775-87)。T-regs也与癌症有关，其中实体瘤和血液系统恶性肿瘤与T-regs数量增加相关(参见De Rezende等人,2010,Arch.Immunol.Ther.Exp.58:179-190)。
IL-4
IL-4是参与T辅助细胞分化为Th2(T辅助2型)亚群的非冗余的细胞因子，后者促进未成熟的B细胞分化为产IgE的血浆细胞。过敏性哮喘中IgE水平升高。因此，IL-4涉及过敏性哮喘的发展。靶向IL-4的抗体可用于治疗或甚至防止过敏性哮喘的发作。(参见LeBuanec等人,2007,Vaccine 25:7206 16)。
IL-7
IL-7对于B细胞发育和胸腺中T细胞的早期发育是必需的。在小鼠中，IL-7的异常表达引起T细胞相关的白血病。(参见Fisher等人,1993,Leukemia 2:S66-68)。然而，在人中，IL-7的错误调节似乎不会引起T细胞相关的白血病。在人中，IL-7单独或与其它的γc-细胞因子家族成员IL-15的组合的上调与大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病有关。
IL-9
与其它的γc-细胞因子家族成员相比，IL-9的相当多的作用仍然未被定征。耗损IL-9基因的小鼠看起来是正常的，并且在淋巴样和造血区室中不缺乏任何细胞亚群。然而，最近的研究揭示了IL-9在Th17(白介素17诱导的T辅助细胞)细胞生成中的体内作用(参见Littman等人,2010,Cell 140(6):845-58；以及Nowak等人,2009,J.Exp.Med.206:1653-60)。
IL-15
IL-15至关重要地参与NK细胞、NK-T细胞、上皮内淋巴细胞(IEL)的一些亚群、γδ-T细胞和记忆表型CD8 T细胞的发育(参见Waldmann,2007,J.Clin.Immunol.27:1-18；以及Tagaya等人,1996,EMBO J.15:4928-39)。小鼠中IL-15的过表达导致NK-T细胞和CD8细胞类型T细胞白血病的发展(参见Fehniger等人,2001,J.Exp.Med.193:219-31；Sato等人,2011Blood,印刷中)。这些实验诱导的白血病看起来与人中的LGL(大颗粒淋巴细胞)白血病相似，因为在这两种情况下白血病细胞都表达CD8抗原。
还怀疑IL-15介导的自分泌机制可能参与CD4 T淋巴细胞的白血病转化。(参见Azimi等人,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.95:2452-7；Azimi等人,1999,J.Immunol.163:4064-72；Azimi等人,2000,AIDS Res.Hum.Retroviruses 16:1717-22；以及Azimi等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:14559-64)。例如，在人中引起成人T细胞白血病的CD4热带HTLV-I通过产生IL-15和IL-15Rα而诱导病毒转化的T细胞的自分泌生长(Azimi等人,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.95:2452-7)。
除白血病转化外，最近的研究还表明IL-15在乳糜泻(CD)(一种自身免疫性疾病)的病理发展中起作用。已知IL-15通过诱导细胞溶解酶(即颗粒酶和穿孔素)以及干扰素-γ的表达来刺激NK、CD8和肠上皮内淋巴(IEL)细胞分化为淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞。乳糜泻(从本文中表示为CD)是一种免疫介导的肠病，其由表达特定HLA DQ等位基因的个体中食用的含麸质的食物引发。
该疾病的患病率在西方人群中为1％。目前治疗CD的唯一方法是彻底消除患者饮食中的麸质。CD的病理学主要是由肠粘膜的广泛损伤引起的，后者是由已经渗入肠固有层的活化的CD8 T细胞引起。这些CD8 T细胞似乎通过涉及IL-15的机制被激活。最近的一篇出版物在小鼠中证实了肠细胞异位过表达IL-15导致肠病的发展，这与CD患者的病变非常相似。IL-15活性的中和显著减少了病理变化。因此，阻断IL-15激活CD8 T细胞的干预似乎提供了管理CD的常规无麸质饮食的替代策略。
IL-21
IL-21是γc-家族中最近发现的成员。与其它的家族成员不同，IL-21似乎没有强效的生长促进作用。相反，IL-21被认为作为分化引子的功能多于其作为控制细胞增殖的因子的功能(参见Tagaya,2010,J.Leuk.Biol.87:13-15)。
用于治疗γc-细胞因子介导的病症的当前策略
因为γc-细胞因子被认为与许多人类疾病有关，所以提出了通过抑制γc-细胞因子家族活性来治疗涉及γc-细胞因子的疾病的数种方法。这些方法包括使用细胞因子特异性单克隆抗体来中和靶向细胞因子的体内活性；使用靶向私有的细胞因子特异性受体亚基(除共有的γc亚基之外的亚基)的单克隆抗体来选择性地抑制细胞因子活性；以及使用阻断下游细胞内细胞因子信号转导通路的化学抑制剂。
虽然细胞因子特异性抗体通常是设计治疗剂的首选，但共有受体组分的细胞因子显示重叠的功能(参见Paul,W.E.,1989,Cell 57:521-24)，并且多于一种细胞因子可以协作引起疾病(参见本文中所述的实施例)。因此，涉及中和单一细胞因子的抗体方法在涉及细胞因子的人类疾病的治疗中可能不总是最佳的。替代治疗策略可以包括使用多于一种抗体，其中每种抗体靶向疾病发病机理中涉及的特定细胞因子，和/或靶向疾病发病机理中涉及的特定蛋白受体，其活性和/或丰度由γc-细胞因子信号传导直接调节。
还提出了设计经由识别共有的受体组分的抗体而抑制多种细胞因子功能的治疗剂的策略。然而，细胞因子受体系统的多亚基性质以及针对单一细胞因子的功能性受体可以呈现不同的配置这一事实，使得该方法变得困难。
例如，功能性IL-15受体可以是IL-15Rβ/γc或IL-15Rα/β/γc。(参见Dubois等人,2002,Immunity 17:537-47)。针对IL-15Rβ受体(TMβ1)的抗体是IL-15功能的有效抑制剂，但仅当受体复合物中不存在IL-15Rα分子时如此。(参见Tanaka等人,1991,J.Immunol.147:2222–28)。因此，无论是针对共有的还是私有的亚基产生的单克隆抗受体抗体的有效性，都可以依赖于环境，并且在体内是不可预测的。
治疗性化合物的多肽、其片段或其它衍生物、或其类似物、或表达它们的细胞可用作免疫原以产生其抗体。本文所用的术语“免疫原”或“表位”是指在动物，优选哺乳动物中具有抗原性或免疫原性活性的多肽部分。在优选的实施方案中，本发明的治疗性化合物涵盖含有表位的多肽以及编码这种多肽的多核苷酸。本文所用的“免疫原性表位”被定义为如通过本领域已知的任何方法，例如通过下文所述的产生抗体的方法测定的在动物中引起抗体应答的蛋白质的一部分。本文所用的术语“抗原表位”被定义为如通过本领域众所周知的任何方法测定，例如通过免疫测定法测定的抗体能够免疫特异性地结合其抗原的蛋白质的一部分(Cox等人,2004“Immunoassay methods”,in Assay Guidance Manual[internet])。免疫特异性结合排除非特异性结合，但不一定排除与其它抗原的交叉反应性。抗原表位不必是免疫原性的。可以使用本公开内容中的治疗性化合物的全长多肽或抗原性肽片段。
可以通过本领域已知的任何方法，例如通过可免费获得使用的多软件程序，包括但不限于：BepiPred-2.0(Jespersen等人,2017Nucleic Acids Res,45:W24-W29)、SVMTriP(Yao等人,2012PLoS One,7:e45152)以及ABCpred(Saha等人,2006Proteins,65:40-8)测定本公开内容中的治疗性化合物的携带表位的多肽区域。抗体优选从这些区域或从这些区域中的离散片段制备。然而，抗体可以从如本文所述的肽的任何区域制备。还可以针对特定的功能位点，例如配体结合位点或糖基化，磷酸化，肉豆蔻酰化或酰胺化的位点，开发抗体。起表位作用的肽片段可以通过任何常规手段产生，例如使用重组技术的生物产生或者通过手动或自动化肽合成技术化学地产生。
本领域已知的各种程序可用于生产这种抗体和片段。本发明的携带表位的多肽可用于根据本领域众所周知的方法诱导抗体，所述方法包括但不限于体内免疫、体外免疫(Tomimatsu等人,2014Methods Mol Biol,1060:297-307)和噬菌体展示方法(Hammers等人,2014J Invest Dermatol.,134:e17)。如果使用体内免疫，则可以用游离肽免疫动物；然而，抗肽抗体滴度可以通过将肽偶联到大分子载体如钥孔戚血蓝素(KLH)或破伤风类毒素来加强。例如，含有半胱氨酸残基的肽可以使用连接子如马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)偶联到载体上，而其它肽可以使用更通用的连接剂如戊二醛偶联到载体上。通过将多肽直接注射到动物中或通过将多肽施用至动物，优选非人动物，可以获得针对与本发明的每种治疗性化合物对应的多肽产生的抗体。动物如兔、大鼠、小鼠和山羊可以用游离的或载体偶联的肽，或者称为多抗原肽(MAP)的人工分支形式，例如通过腹膜内和/或皮内注射含有约100μg肽或载体蛋白和弗氏佐剂或已知用于刺激免疫应答的任何其它佐剂的乳剂进行免疫。可能需要几次加强注射，例如，间隔约两周，以提供有用的抗肽抗体滴度，其可以例如通过ELISA测定使用吸附到固体表面的游离肽来检测。可以通过选择抗肽抗体，例如通过根据本领域众所周知的方法吸附到固体支持物上的肽上以及洗脱选择的抗体来提高来自免疫动物的血清中抗肽抗体的滴度。
对于单克隆抗体的制备，可以使用提供由连续细胞系培养物产生的抗体的任何技术。实例包括杂交瘤技术(Kohler等人,1975Nature,256:495-7),三源杂交瘤技术，人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人,1983Immunology Today,4:72-9)和EBV-杂交瘤技术产生人单克隆抗体(Kozbor等人,1982Proc Natl Acad Sci,79:6651-55)。用于生产单链抗体片段(scFv)所述的技术(
Figure BDA0003367166100000151
等人,2003Folia Microbiol,48:687-98)可适用于产生针对来源于本发明中治疗性化合物的免疫原性多肽的单链抗体。
人源化抗体是来源于非人物种抗体的抗体分子，其结合具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区的所需抗原。通常，人框架区中的框架残基将被来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变，优选提高抗原结合。通过本领域众所周知的方法鉴定这些框架取代，例如，通过对CDR与框架残基的相互作用进行建模以鉴定对于抗原结合和序列比较重要的框架残基，从而鉴定在特定位置处不常见的框架残基。(Riechmann等人,1988Nature 332:323-7)。抗体可以使用本领域已知的多种技术来人源化，包括例如CDR移植(Williams等人,2010“Humanising Antibodies by CDRGrafting”,in Antibody Engineering)、饰面(veneering)或表面重修(Padlan1991MolImmunol 28:489-98；Studnicka等人,1994Protein Eng 7:805-14；Roguska等人,1994ProcNatl Acad Sci 91:969-73)和链改组(Guo-Qiang等人,2009Methods Mol Biol 562:133-42)。
完全人类抗体对于人类患者的治疗性治疗是特别理想的。人类抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用来源于人类免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示(Frenzel等人,2017Transfus Med Hemother 44:312-18,Vaughan等人,1996Nature 14:309-14)。识别所选表位的人类抗体也可以使用称为“指导选择”的技术产生。在该方法中，选定的非人类单克隆抗体，例如小鼠抗体，用于指导识别相同表位的完全人类抗体的选择。(Jespers等人,1994Biotechnology 12:899-903)。
此外，转基因小鼠可以用于表达针对来源于本发明治疗性化合物的免疫原性多肽的人类抗体(Laffleur等人,2012Methods Mol Biol,901:149-59)。不能表达功能性内源性免疫球蛋白的转基因小鼠可以用于表达人类免疫球蛋白基因。例如，人类重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可以随机引入到或通过同源重组引入到小鼠胚胎干细胞中。或者，除了人类重链和轻链基因之外，还可以将人类可变区、恒定区和多样性区引入到小鼠胚胎干细胞中。小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因可以通过同源重组引入人类免疫球蛋白基因座时分别或同时变得无功能。具体而言，JH区的纯合缺失阻止了内源性抗体的产生。将修饰的胚胎干细胞扩增并显微注射到胚泡中以产生嵌合小鼠。然后繁殖嵌合小鼠以产生表达人类抗体的纯合子代。转基因小鼠以正常方式用选定的抗原免疫，例如与本发明的治疗性化合物对应的全部或部分多肽。可以使用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠中获得针对抗原的单克隆抗体。由转基因小鼠携带的人类免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，随后经历类别转换和体细胞突变。因此，使用这种技术，可以产生治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。对于生产人类抗体的这种技术的概述，参见Lonberg等人,1995Int Rev Immunol.13:65-93。
本发明的抗体包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、多特异性抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、由Fab表达文库产生的片段、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如针对本发明抗体的抗Id抗体)和以上任一种的表位结合片段。本文所用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、Ig|D、IgA和IgY)，类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。在优选的实施方案中，免疫球蛋白是IgG1同种型。在另一个优选的实施方案中，免疫球蛋白是IgG2同种型。在另一个优选的实施方案中，免疫球蛋白是IgG4同种型。免疫球蛋白可以具有重链和轻链。一系列的IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY重链可以与κ或λ形式的轻链配对。
靶向JAK3，其为用于抑制多种γc-细胞因子的现存的替代性实例
γc-亚基与γc-细胞因子之间的相互作用导致称为Janus激酶3(Jak3)的细胞内蛋白酪氨酸激酶的活化。继而，Jak3磷酸化多种信号传导分子，包括STAT5和PI3激酶。γc-亚基与Jak3的相互作用是非常特异性的。事实上，没有其它的受体分子募集Jak3用于信号转导。(参见O’Shea,2004,Ann.Rheum.Dis.63:(suppl.II):ii67-7)。因此，可以通过阻断Jak3激酶的活性来实现通过γc-亚基抑制细胞因子信号传导。因此，靶向Jak3的激酶活性的多种小分子化学抑制剂已被引入市场。(参见Pesu等人,2008,Immunol.Rev.223:132-142)。一个这样的实例是CP690,550。
这些蛋白激酶抑制剂的主要缺点是缺乏对Jak3激酶的特异性。这些药物拦截ATP(腺苷三磷酸)分子与Jak3激酶的结合(其为许多蛋白激酶的常见生化反应)，并因此倾向于阻断与Jak3激酶(其作用对于各种组织中正常细胞的健康是严格必需的)无关的多种细胞内蛋白激酶的作用。因此，需要通过γc-亚基的更特异性的信号传导抑制剂。
因此，非常需要用于治疗涉及γc-细胞因子的疾病的替代性非小分子化学策略。
γc-盒的发现
γc-细胞因子的C端(D螺旋)含有用于与多单元细胞因子受体的常见γc-亚基相互作用的建议的位点(Bernard等人,2004J.Biol.Chem.279:24313-21)。对在小鼠和人中鉴定的所有γc-细胞因子的氨基酸的生化特性的比较揭示出在γc-细胞因子家族的成员的D螺旋中的许多位置处的氨基酸的化学性质，例如疏水性、亲水性、碱性/酸性是保守的(如果并非相同的话)。
相比之下，与γc-细胞因子IL-4相关但不与γc-亚基结合的IL-13的序列，在D螺旋区未表现出与γc-细胞因子的显著同源性，表明D螺旋区中的序列同源性与γc-亚基的结合相关。如图1A所示，人中γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的氨基酸序列的比对揭示了在这些细胞因子中的中等序列同源性的基序，其在本文中称为“γc-盒”。
γc-盒(SEQ ID NO:9)包含19个氨基酸，其中在19个位置中，位置4、5和13是完全保守的，分别为苯丙氨酸、亮氨酸和谷氨酰胺。在γc-盒的位置6、7和11处观察到更少的保守性，其中氨基酸是共有理化特性的两个或三个相关氨基酸中的一个：位置6可被极性氨基酸谷氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺占据；非极性氨基酸丝氨酸或精氨酸可占据位置7；并且位置11可被非极性脂肪族氨基酸亮氨酸或异亮氨酸中的一种占据。位置9和16可被非极性氨基酸异亮氨酸或极性氨基酸赖氨酸占据。参见图1B。在γc-细胞因子的亚家族中，在位置9和16处观察到γc-盒的氨基酸组成中的一些差异。物种间γc-细胞因子的比较表明在IL-2/15亚家族中，在位置9和16处通常存在异亮氨酸，而其它的γc-家族成员在这些位置中通常具有赖氨酸。不希望受到特定理论的束缚，异亮氨酸和赖氨酸是生化不同的，因此可能赋予IL-2/15亚家族和其它的γc-细胞因子之间的特定构象差异。
γc-细胞因子之间的γc-盒基序的保守性得到以下发现的支持：位于D螺旋区的谷氨酰胺(Gln,Q)残基对于γc-细胞因子与γc-亚基的结合是至关重要的(Bernard等人,2004J.Biol.Chem.279:2431321)。
γc-细胞因子活性的调节剂
可以通过破坏γc-细胞因子与γc-亚基之间的相互作用，例如通过引入可以与γc-亚基相互作用而不刺激通过多亚基细胞因子受体的信号传导的竞争性抑制剂来阻断γc-家族细胞因子的活性。不受特定理论的束缚，参与γc-家族细胞因子与γc-亚基的结合的保守的γc-盒基序呈现核心的基础氨基酸序列，其可用于设计γc-细胞因子信号传导的肽调节剂。
核心γc-盒氨基酸序列包含：D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)(其中X表示任何氨基酸)。本文中描述的实施方案涉及核心γc-盒氨基酸序列的定制肽衍生物，其能够调节一种或多种γc-细胞因子的活性。定制肽衍生物包括任何肽，其部分氨基酸序列显示出与核心γc-盒氨基酸序列约50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何肽，其中该肽衍生物的部分氨基酸序列包含与核心γc-盒的氨基酸具有相似理化特性的氨基酸。例如，具有相似理化特性的氨基酸将包括苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸，其为芳香族氨基酸。图2显示了可以取代包含核心γc-盒的氨基酸的具有相似理化特性的氨基酸的图示。核心γc-盒的肽衍生物可以为11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有生物蛋白/肽的N末端、C末端和/或侧链残基。
基于对结合γc-亚基的细胞因子中的保守的γc-盒基序的鉴定，申请人设计了新的19-mer的定制衍生肽，其为组合人IL-2和IL-15γc-盒的氨基酸序列的人工复合肽。19-mer肽，在本文中称为BNZ-γ，由以下氨基酸序列组成：I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，其中通过加粗字符示出的氨基酸在IL-2与IL-15之间是保守的，并且加下划线的氨基酸代表这样的位置，其中氨基酸的理化特性是保守的。
申请人发现19-mer BNZ-γ阻抑IL-15和IL-9诱导的细胞增殖，而非IL-3或IL-4诱导的细胞增殖。参见图3A和实施例2。申请人还证明了BNZ-γ抑制细胞内细胞因子信号转导分子STAT-5的IL-15介导的磷酸化。参见图4和实施例5。这些结果证明了保守的γc-盒基序的定制肽衍生物能够调节多种γc-细胞因子的活性。
几个实施方案涉及一种或多种治疗性化合物，其调节至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导用于抑制、改善、降低自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)的严重程度，治疗自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)，延迟自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)发作或者预防自身免疫性疾病(如脱发和脱发相关病症)。在一些实施方案中，治疗性化合物是γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合中的一种或多种。
在一些实施方案中，γc-细胞因子拮抗肽及其衍生物，在本文中也称为19-merBNZ-γ氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的定制衍生肽或复合肽衍生物，可以抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。19-mer BNZ-γ氨基酸序列的定制肽衍生物包括任何肽，其部分氨基酸序列显示出与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)约50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何肽，其中该肽衍生物的部分氨基酸序列包含具有与序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQID NO:1)的氨基酸相似的理化特性的氨基酸。
在几个实施方案中，定制衍生肽的氨基酸残基保留了与BNZ-γ的氨基酸残基相似的理化特性，但表现出对来自原始的19-mer肽的那些的6个γc-细胞因子家族成员不同的生物抑制特异性。BNZ-γ的肽衍生物可以为19、20、21、22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。
在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有的生物蛋白/肽的N末端、C末端和/或侧链残基。在一些实施方案中，BNZ-γ的肽衍生物可以通过复合肽的N末端、C末端或侧链与其它部分缀合。其它部分可以包括稳定复合肽或其它部分的蛋白或肽，包括但不限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
在一些实施方案中，本文公开的任何定制肽衍生物可包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基和SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。
几个实施方案涉及氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQID NO:1)的定制衍生肽，其可以抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。氨基酸序列的定制肽衍生物包括任何肽，其部分氨基酸序列显示出与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)约50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何肽，其中该肽衍生物的部分氨基酸序列包含具有与序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的氨基酸相似的理化特性的氨基酸。
在几个实施方案中，定制衍生肽的氨基酸残基保留了与SEQ ID NO:1的氨基酸残基相似的理化特性，但表现出对来自原始的19-mer肽的那些的6个γc-细胞因子家族成员不同的生物抑制特异性。SEQ ID NO:1的肽衍生物可以为小于19、20、21、22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。
在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有的生物蛋白/肽的N末端、C末端和/或侧链残基。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1的复合肽可以通过复合肽的N末端、C末端或侧链与其它部分缀合。在一些实施方案中，其它部分可以包括稳定复合肽或其它部分的蛋白或肽，包括但不限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
在一些实施方案中，本文公开的任何定制肽衍生物可包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ IDNO:1上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基和SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。
几个实施方案涉及IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc-盒基序的定制肽衍生物，其描绘在图1A中。其它实施方案涉及定制衍生肽，其为组合人IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7γc-盒基序中的两种或更多种的氨基酸序列的人工复合肽。几个实施方案涉及IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc-盒基序的定制肽衍生物，其具有显示出与IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc-盒基序的氨基酸序列约50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％同一性的部分氨基酸序列。IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc-盒基序的定制肽衍生物还包括任何肽，其中该肽衍生物的部分氨基酸序列包含与IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc-盒基序序列的氨基酸具有相似理化特性的氨基酸。
几个实施方案涉及将抑制γc-细胞因子中的一个、所有或选择性成员的功能的定制肽衍生物。在一些实施方案中，定制肽衍生物选择性地靶向单独的γc-细胞因子家族成员。例如，定制肽衍生物能够选择性地抑制IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其它实施方案中，定制肽衍生物能够抑制2个或更多个γc-细胞因子家族成员。
例如，本实施方案的定制肽衍生物能够选择性地抑制以下物质的功能：IL-2与IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-4与IL-2、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-7与IL-2、IL-4、IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-9与IL-2、IL-4、IL-7、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-15与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-21中的一种或多种的组合；或者IL-21与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15中的一种或多种的组合。在其它实施方案中，定制肽衍生物能够全面地靶向所有γc-细胞因子家族成员。
不希望受特定理论的束缚，定制肽衍生物能够通过减少γc-细胞因子与γc-亚基的结合，例如，作为竞争性抑制剂而抑制γc-细胞因子中的所有或选择的成员的功能。这样的定制肽衍生物可用于不同的应用，包括作为临床药物。
几个实施方案涉及定制的肽衍生物，其将调节(包括增强或降低)γc-细胞因子的一个、两个或更多个选择性成员的功能。在一些实施例中，定制肽衍生物选择性地靶向单独的γc-细胞因子家族成员。例如，定制肽衍生物能够选择性地增强或抑制IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其它实施方案中，定制肽衍生物能够增强或抑制两个或更多个γc-细胞因子家族成员。
在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导的细胞增殖而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导的细胞增殖，以及通过抑制由一种或多种γc-细胞因子介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过一种或多种其它机制而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。
在一些实施方案中，本文公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文公开的细胞因子(例如，IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21)中的一种或多种诱导的一种或多种细胞类型的增殖。在一些实施方案中，本文公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文公开的所有细胞因子诱导的一种或多种细胞类型的增殖。在一些实施方案中，本文公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文公开的一些但非所有细胞因子诱导的一种或多种细胞类型的增殖。在一些实施方案中，SEQ ID NO:1抑制IL-2、IL-9和IL-15诱导的细胞增殖。
在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由本文公开的一种或多种γc-细胞因子(例如，IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21)介导的一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文公开的所有γc-细胞因子介导的一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化。在一些实施方案中，本文公开的保守的γc-盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文公开的一些但非所有γc-细胞因子介导的一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化。
此外，例如，本文公开的肽可用于抑制IL-15介导的细胞内细胞因子信号转导分子STAT-5的磷酸化。
本文提供了调节γc-细胞因子信号传导的复合肽和组合物、方法和试剂盒。术语“复合肽”、“复合肽衍生物”、“定制肽”、“拮抗肽”、“拮抗肽衍生物”、“寡肽”、“多肽”、“肽”和“蛋白质”在涉及根据本实施方案提供的“定制肽衍生物”时可以互换使用，并且可以用于指定一系列任何长度的氨基酸残基。本实施方案的肽可以是线性的或环状的。本实施方案的肽可以包括天然氨基酸、非天然氨基酸、(D)立体化学构型的氨基酸、(L)立体化学构型的氨基酸、(R)立体化学构型的氨基酸，(S)立体化学构型的氨基酸或其组合。
本实施方案的肽还可以包含有或无多种侧链修饰和/或取代中的任何一种的一个或多个稀有氨基酸(如4个羟脯氨酸或羟赖氨酸)、有机酸或酰胺和/或常见氨基酸的衍生物，如具有酯化的(例如，苄酯、甲酯或乙酯)或酰胺化的C末端羧酸盐和/或具有N末端氨基修饰(例如，乙酰化或烷氧羰基氨基)的氨基酸。可以存在于本实施方案的定制肽衍生物中的侧链修饰、取代或它们的组合包括但不限于：α-甲基、α-烯基、烷基化、甲基化、苄化、叔丁化、甲苯磺酰化、烷氧羰基氨基等。
可以存在的除常见氨基酸外的残基包括但不限于：青霉胺、四亚甲基半胱氨酸、五亚甲基半胱氨酸、巯基丙酸、正亮氨酸、五亚甲基-巯基丙酸、2-巯基苯、2-巯基苯胺、2-巯基脯氨酸、鸟氨酸、氨基异丁酸、二氨基丁酸、氨基己二酸、氨基甲基苯甲酸和二氨基丙酸。
可以通过本领域技术人员已知的各种方法生产和获得本实施方案的肽。例如，可以通过基因工程，基于编码本实施方案的肽的核苷酸序列生产肽，或通过肽固相合成等方式化学合成肽，或者以其组合生产和获得肽。固相肽合成领域的技术人员可以容易地掺入(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨基酸。对固相肽合成领域的技术人员还显而易见的是利用(D)、(L)、(R)或(S)立体化学构型或它们的组合中的一种或多种的α-取代的(如α-烯基)天然的或非天然的氨基酸，来生产和获得包含一个或多个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。在一些实施方案中，可以通过催化一个或多个关环复分解反应来产生连接α-取代的氨基酸(例如，α-烯基氨基酸)的肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，可以通过在肽合成期间，在结合有树脂的肽上，使用苯亚甲基双(三环己基-膦)-二氯钌(格拉布催化剂(Grubb’s catalyst)催化关环复分解反应来产生一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，还包括在一个或多个已知的肽合成过程期间的其它闭环合成反应和/或机制。本领域技术人员可以基于保守的γc-盒基序的本公开内容和氨基酸的生化特性的知识(如图2所述)来合成定制的肽衍生物。
本实施方案的肽还可以包含两个或更多个α-烯基取代的氨基酸。在一些实施方案中，所述两个或更多个α-烯基取代的氨基酸经由在α-烯基取代的氨基酸处掺入的一个或多个肽内烃连接子元件连接。在一些实施方案中，α-烯基取代的氨基酸用于在肽合成期间通过关环复分解反应催化肽内烃连接子元件的形成。肽内连接子元件在本公开内容的定制肽衍生物的相同序列上连接单独的氨基酸。在一些实施方案中，本公开内容的肽是线性的或环状的。
在一些实施方案中，在与复合肽的二级结构中的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置处掺入一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的单α-螺旋转角时，与复合肽的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是单α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+4的位置相距4个残基(隔开4个)。
在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成这样的复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个单α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个单α-螺旋转角是非连续的，即多于一个单α-螺旋转角不共有取代的氨基酸。例如，在一些实施方案中，复合肽可以包含式1的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表1)，其跨越复合肽的多于一个非连续的单α-螺旋转角。
不希望束缚于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的任何特定肽，包含连接位置相距4个残基的两个单独的一个氨基酸的肽内烃连接子元件或者一个α-螺旋转角(位置i和位置i+4)的通用的肽实例，可以具有在使用格拉布催化剂催化关环复分解反应之前，肽仍然经树脂结合(resin-bound)在固相支持物上时，于肽的固相合成期间，在每个位置i和i+4处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生位置相距4个残基的包含以下描绘的肽内烃连接子元件(SEQ ID NO:23)的肽序列：
Figure BDA0003367166100000271
在一些实施方案中，在与复合肽的二级结构中的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置处掺入一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的双α-螺旋转角时，与复合肽的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，且i+7是双α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+7的位置相距7个残基(隔开7个)。
不希望束缚于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的任何特定肽，包含连接位置相距7个残基的两个单独的氨基酸的一个肽内烃连接子元件，或两个α-螺旋转角(位置i和位置i+7)的通用的肽实例，可以具有在使用格拉布催化剂催化关环复分解反应之前，肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，于肽的固相合成期间，在位置i处掺入的R-辛烯基丙氨酸(R8Ala)和在位置i+7处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生包含以下描绘的(SEQ ID NO:24)位置相距7个残基的肽内烃连接子元件的肽序列：
Figure BDA0003367166100000281
在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个双α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个双α-螺旋转角是非连续的，即多于一个双α-螺旋转角不共有取代的氨基酸。例如，在一些实施方案中，复合肽可以包含跨越复合肽的多于一个非连续的双α-螺旋转角的式2的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表1)。
固相肽合成领域的技术人员可以通过在使用格拉布催化剂催化关环复分解反应之前，在肽仍然经树脂结合在固相载体上时，于固相肽合成期间在肽的成对的非重叠的氨基酸位置处掺入α-烯基取代的氨基酸容易地合成本实施方案的包含多于一个肽内烃连接子元件的肽，其中成对氨基酸中的每个α-烯基取代的氨基酸的位置与单α-螺旋转角(隔开4个残基)或双α-螺旋转角(隔开7个残基)分开。在一些实施方案中，单个肽可包含跨越单α-螺旋转角(隔开4个残基)的多于一个肽内烃连接子元件，可包含跨越双α-螺旋转角(隔开7个残基)的烃连接子元件，或者可包含单α-螺旋转角(隔开4个残基)和双α-螺旋转角(隔开7个残基)肽内烃连接子元件的组合。
可以通过固相肽合成，利用可商购的Boc或Fmoc保护的α-烯基取代的天然的或非天然的(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的氨基酸，制造包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的肽。可用于合成本实施方案的定制肽衍生物的Fmoc保护的α-烯基取代的氨基酸和在关环复分解反应之后由此产生的烃连接子元件包括但不限于表1：
表1
Figure BDA0003367166100000291
在一些实施方案中，可通过一种或多种化学反应将肽内烃连接子进一步功能化。在一些实施方案中，肽内烃连接子(例如，表1中的式1-式2)中存在的一个或多个碳-碳双键可用于用以添加一个或多个另外的化学官能团的有机化学反应。例如，烯烃反应可用于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物。烯烃反应的非限制性实例包括硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。在一些实施方案中，可在烯烃反应之后获得肽内烃连接子元件的一个或多个另外的化学官能团。非限制性实例包括共价添加一个或多个化学基团取代基，如与环氧和羟基基团的亲核反应等。在一些实施方案中，烯烃反应可用于将生物素、放射性同位素、治疗剂(非限制性实例包括雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇等)、非蛋白荧光化学基团(非限制性实例包括FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺等)，以及蛋白荧光基团(非限制性实例包括GFP、YFP、mCherry等)与本实施方案的一个或多个肽间和/或肽内烃连接子元件连接。
包含一个或多个肽内烃连接子元件的复合肽的非限制性实例提供在表2中。表2中的实例并不限定于本实施方案的定制肽衍生物中的可用于合成本实施方案的单α-螺旋转角(隔开4个)的任何特定的α-烯基取代的氨基酸，和/或双α-螺旋转角(隔开7个)肽内烃连接子元件，和/或任何特定的氨基酸立体化学构型(例如，表2中以“d”表示的(D)立体化学构型)。
表2
Figure BDA0003367166100000311
*下标表示相应对的烃连接的α-烯基取代的氨基酸
在一些实施方案中，治疗性化合物可以是抗体。可以开发抗体以靶向γc-细胞因子，例如IL-2或IL-15，或者靶向其活性和/或丰度直接受细胞因子信号传导调节的特定蛋白受体，如跨膜糖蛋白CD8或NKG2 C-型凝集素受体家族的蛋白，两者都在T-淋巴细胞上表达。
一些实施方案还涉及包含编码本发明的肽和抗体的核苷酸序列的多核苷酸。“核苷酸序列”、“多核苷酸”或“核酸”可互换使用，并且应理解为意指双链DNA、单链DNA或所述DNA的转录产物(例如，RNA分子)。可以将多核苷酸施用至细胞或对象，并由细胞或对象表达，而不是施用肽本身。几个实施方案还涉及包含编码本发明的肽的多核苷酸序列的遗传构建体。遗传构建体还可以含有另外的调控元件，如启动子和增强子，以及任选地可选择标志物。
治疗γc-细胞因子介导的疾病的方法
几个实施方案涉及治疗性化合物如γc-拮抗肽、细胞因子靶向抗体和/或靶向特定蛋白受体的抗体在治疗γc-细胞因子介导的疾病中的用途，所述特定蛋白受体的活性和/或丰度由细胞因子信号传导直接调节。根据本实施方案的治疗性化合物的使用允许设计和组合的灵活性，这实现了使用小分子化学抑制剂或抗细胞因子受体抗体的常规策略无法实现的更全面的结果。
本文描述了调节γc-家族细胞因子的作用的新方法。这种操作可以产生治疗自身免疫性疾病如脱发和脱发相关病症的有效的临床干预方法。
在一些实施方案中，描述了用于抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的组合物、方法和试剂盒。在一些实施方案中，本文所述的治疗性化合物可以用于抑制、改善、降低以下疾病中的一种或多种，治疗以下疾病中的一种或多种，延迟以下疾病中的一种或多种的发作或者预防以下疾病中的一种或多种：斑秃、全秃、亚全秃(alopecia subtotalis)、普秃、弥漫性脱发(alopecia diffusa)、蛇型斑秃(ophiasis-type alopecia areata)和与脱发相关的其它免疫介导的疾病，如扁平苔癣、硬化性苔癣、硬化性萎缩性苔癣、特异反应性、特应性皮炎、银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病(psoriasis capitis)、滴状银屑病(psoriasis guttate)、反向性银屑病(psoriasisinversa)、银屑病关节炎、湿疹、天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮、粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、甲状腺病症、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、地方性甲状腺肿、阿狄森病、局限性硬皮病、荨麻疹、痒疹、酒渣鼻白癜风(rosacea vitiligo)、白癜风和移植物抗宿主病(GvHD)。
几个实施方案涉及将调节γc-细胞因子的所有或选择性成员的信号传导的治疗性化合物。在一些实施方案中，治疗性化合物选择性地调节各个γc-细胞因子家族成员的信号传导。在其它实施方案中，治疗性化合物可以全面地调节所有γc-细胞因子家族成员的信号传导(Simul-Block)。在一些实施方案中，治疗性化合物可以选择性地调节γc-细胞因子的亚群的信号传导。不希望受特定理论束缚，治疗性化合物可以通过减少γc-细胞因子与γc-亚基的结合，例如作为竞争性抑制剂，或者通过调节自身直接受γc-细胞因子信号传导调节的特定蛋白受体的活性和/或丰度来调节γc-细胞因子的所有或选择性成员的功能。
γc-细胞因子家族的几个成员已经被认为参与脱发疾病进展。脱发是一种免疫介导的皮肤病症，其中存在支持最终导致脱发的毛囊自身抗原的T细胞靶向的T细胞过度增殖环境。IL-2和IL-15表达在患者的病灶性头皮活检中升高(Fuentes-Duculan等人,2016 ExpDermatol 4:282-6.,Suarez-Farinas等人,2015J.Allergy Clin.Immunol.136:1277-87.,Waldmann 2013 J Investig Dermatol Symp Proc 16:S28-30)，以及靶向γc-细胞因子IL-2和IL-15的抗体各自在脱发小鼠模型中显示出抑制活性，但没有一种单独的阻断抗体可以逆转所建立的病症Xing等人,2014 Nat Med 9:1043-9)。与健康对照相比，脱发患者的血清中IL-21的表达升高(Atwa等人,2016Int J Dermatol 55:666-72)，以及全基因组关联研究也具有与脱发正相关的IL-2和IL-21(Jagielska等人,2012 J Invest Dermatol 132:2192-7,Petukhova等人,2010 Nature466:113-7)。
白癜风是与表皮中T细胞流入有关的免疫介导的皮肤病症，其导致黑素细胞破坏和身体表面上出现白斑。最近的研究显示，经由抗体治疗阻断IL-15信号传导是患有确定的白癜风的小鼠中的有效治疗策略(Richmond等人,2018Sci Transl Med 10:450)。有趣的是，在研究中使用的抗体靶向CD122，其为IL-15和IL-2常见的私有细胞因子特异性受体亚基。事实上，IL-2的表达在局限性白癜风和全身性白癜风患者的血清中已经显示出升高，并且与疾病严重程度呈正相关(Sushama等人,2018J Cosmet Dermatol 00:1-5)。
类天疱疮和天疱疮是免疫介导的皮肤病症，其特征在于在身体表面上存在大的充以液体的水泡。在早期的研究中，来自人类患者的类天疱疮和天疱疮疱液都显示出升高的IL-2活性(Grando等人,1989,Arch Dermatol.125:925-30)。类天疱疮患者也表现出增加的T细胞活化和升高的IL-2水平(Schaller等人,1990,Arch Dermatol.Res.282:223-6)。单独的研究评估了类天疱疮和天疱疮患者中的IL-15水平，并且发现任一疾病的患者表现出与疾病严重程度正相关的增加的IL-15血清水平(D’Auria等人,1999,ArchDermatol.Res.291:354-6)。
已经显示某些γc-细胞因子与银屑病呈正相关。银屑病是一种免疫介导的皮肤病症，其特征在于额外皮肤细胞的鳞状红色斑块，其通常是干燥的，发痒的，有时是疼痛的。在银屑病患者的皮肤损伤中IL-15的表达升高(Waldmann 2013 J Investig Dermatol SympProc16:S28-30)。IL-15特异性抗体(其有效地干扰IL-15细胞因子-受体信号传导复合物的组装)在人类银屑病异种移植模型中降低了疾病的严重程度(Villadsen等人,2003,J.Clin.Invest.112:1571-80)。另一种γc-细胞因子IL-21在银屑病患者中也显示出升高并且与疾病严重程度呈正相关(Caruso等人,2009Cell Cycle 8:3629-30.,Botti等人,2012Curr Pharm Biotechnol 13:1861-7.,He等人,2012,Br.J.Dermatol.167:191-3)。经由抗IL-21抗体处理阻断细胞因子导致在人类银屑病异种移植小鼠模型中角化细胞增殖和炎症的显著减少(Caruso等人,2009Nat.Med.15:1013-5)。
移植物抗宿主病(GvHD)通常可以在患者的造血细胞移植后产生，因为宿主细胞被供体的T淋巴细胞识别为外来实体。GvHD本身表现为宿主器官组织损伤，因为供体来源的T细胞分化成CD4和CD8效应细胞，产生促炎细胞因子和直接的CD8 T细胞细胞毒性作用。众所周知，γc-细胞因子家族的成员参与CD4和CD8 T细胞的活化，已经报道了许多γc-细胞因子与GvHD发病机理呈正相关。预防性使用两种IL-2受体拮抗抗体在供体-外周血干细胞移植后的恶性血液病患者中显示出对GvHD的有益作用(Fang等人,2012 Biol Blood MarrowTransplant.18:754-62)。在移植后的第一个月内，在GvHD患者中，IL-15的血清水平也显示出急剧升高(Chik等人,2003,J Pediatr Hematol Oncol.25:960-4)，以及供体来源的IL-15在鼠GvHD模型中显示对于急性GvHD是关键的(Blaser等人,2005 Blood 105:894-901)。最后，在GvHD患者的皮肤和结肠样品中观察到IL-21表达，但在无GvHD的对照样品中没有观察到IL-21表达，并且在GvHD鼠模型中，血清IL-21水平升高，并且使用抗人IL-21抗体减少了施用后与GvHD相关的体重减轻和死亡率(Hippen等人,2012 Blood 119:619-28,Bucher等人,2009 Blood 114:5375-84)。
几个实施方案涉及选择性地抑制IL-15活性的治疗性拮抗肽单独地或与其它γc-细胞因子家族成员组合地作为针对脱发和/或脱发相关病症的治疗剂的用途。在一些实施方案中，选择性地抑制IL-2、IL-15、IL-9，IL-2和IL-15的组合，IL-2和IL-9的组合，和/或IL-15和IL-9活性的组合的定制衍生物拮抗肽用作治疗脱发和/或脱发相关疾病的治疗剂。在一些实施方案中，选择性地抑制IL-2和IL-15的组合，IL-2和IL-9的组合和/或IL-15和IL-9的组合的定制衍生物拮抗肽的作用可以是叠加的或协同的。几个实施方案涉及SEQ IDNO:2用于治疗脱发和/或脱发相关病症的用途。几个实施方案涉及BNZ-γ用于治疗脱发和/或脱发相关病症的用途。几个实施方案涉及SEQ ID NO:1用于治疗脱发和/或脱发相关病症的用途。
几个实施方案涉及单独或组合的治疗性化合物作为用于脱发和/或脱发相关病症的治疗剂的用途。在一些实施方案中，治疗性化合物是SEQ ID NO:2。在一些实施方案中，治疗性化合物是BNZ-γ。在一些实施方案中，治疗性化合物是SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，治疗性化合物是抗CD8抗体。在一些实施方案中，治疗性化合物是抗IL-2抗体。在一些实施方案中，治疗性化合物是抗IL-15抗体。在一些实施方案中，治疗性化合物是抗NKG2A抗体。
当组合的效应等于组合中单独的效应的总和(例如，两种或更多种治疗性化合物的组合的效应等于单独的每种治疗性化合物的效应的总和)时，观察到累加效应。当组合的效应大于组合中单独的效应的总和(例如，两种或更多种治疗性化合物的组合的效应大于单独的每种治疗性化合物的效应的总和)时，观察到协同效应。协同效应大于累加效应。在人类患者、非人类患者、非患者人类志愿者、体内模型、离体模型、体外模型等中均可发生累加效应、协同效应或二者。
在一些实施方案中，本文公开的两种或更多种治疗性化合物可以组合使用。在一些实施方案中，本文公开的两种或更多种治疗性化合物在组合使用时产生累加效应。在一些实施方案中，本文公开的两种或更多种治疗性化合物在组合使用时产生协同效应。协同效应范围可以为从约>1倍至约100倍。在一些实施方案中，协同效应为约2倍至约20倍。在一些实施方案中，协同效应为约20倍至约100倍。在一些实施方案中，协同效应为从大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍，或在上述值的任何两个所界定的范围内。
另一实施方案涉及这样的化合物(非肽、非蛋白)的开发，其具有类似19-mer氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的空间结构，并且可以纳入γc-亚基的囊中以在结构上阻碍γc-细胞因子与γc-亚基接近以便结合。一些实施方案涉及结构上相似的化合物作为γc-细胞因子活性的抑制剂的用途。进一步改善结构类似现有的生物肽/蛋白的合成化合物的开发的此类分子模拟策略描述于Orzaez等人,2009Chem.Med.Chem.4:146 160中。另一实施方案涉及施用具有类似19-mer氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的3D结构的化合物(非肽、非蛋白)以抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
几个实施方案涉及氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQID NO:1)的肽的施用，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的衍生肽的施用，用于抑制、改善，降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症，其中衍生肽的氨基酸序列具有与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽相似的理化特性，但具有不同的生物活性。另一个实施方案涉及将与现有生物蛋白/肽的N末端和C末端或侧链残基缀合的氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
几个实施方案涉及氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQID NO:1)的肽的施用，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽衍生物的施用，用于抑制、改善，降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症，其中衍生肽的氨基酸序列具有与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽相似的理化特性，但具有不同的生物活性。另一个实施方案涉及将与现有生物蛋白/肽的N末端和C末端或侧链残基缀合的氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
几个实施方案涉及将针对包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽产生的多克隆抗体和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及针对氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的衍生肽产生的多克隆和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症，其中衍生肽的氨基酸序列具有与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
几个实施方案涉及将针对IL-2产生的多克隆抗体和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及将针对IL-15产生的多克隆抗体和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及将针对跨膜糖蛋白T细胞共受体CD8产生的多克隆抗体和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。另一个实施方案涉及将针对C-型凝集素受体NKG2家族成员(例如NKG2D、NKG2A)产生的多克隆抗体和单克隆抗体作为免疫原施用至患者，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
治疗性化合物的施用
本实施方案还涵盖一种或多种治疗性化合物在制备用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症的药物中的用途，所述治疗性化合物选自γc-细胞因子拮抗肽，γc-细胞因子拮抗肽衍生物，抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体或其组合的。本实施方案还涵盖药物组合物，其包含一种或多种治疗性化合物与药学上可接受的载体组合。药物组合物可以包含药学上可接受的载体和无毒的治疗有效量的治疗性化合物，或本实施方案的其它组合物。
本实施方案提供了使用于合适的稀释剂或载体中的包含有效量的治疗性化合物的药物组合物的方法。可以根据用于制备药学上可用的组合物的已知方法配制本实施方案的治疗性化合物。治疗性化合物可以作为唯一的活性材料或与其它已知的活性材料一起、与药学上合适的稀释剂(例如，磷酸盐、乙酸盐、Tris HCl)、防腐剂(例如，硫柳汞、苄醇、对羟基苯甲酸酯类)、乳化化合物、增溶剂、佐剂和/或载体如牛血清白蛋白一起，在混合物中组合。
在一些实施方案中，考虑了包含一种或多种本文公开的治疗性化合物的一种或多种组合物和试剂盒。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒用于预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
在一些实施方案中，包含一种或多种治疗性化合物的一种或多种组合物和试剂盒经由本文提供的任何施用途径施用至有需要的对象。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含治疗有效量的一种或多种治疗性化合物以调节一种或多种选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的γc-细胞因子的信号传导。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含治疗有效量的一种或多种治疗性化合物以预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，包含一种或多种治疗性化合物的一种或多种组合物和试剂盒另外包含一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。
在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种治疗性化合物被配制成适于施用至对象以预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种治疗性化合物被配制成适于施用至对象以预防和/或治疗脱发和/或脱发相关病症。
在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体和抗NKG2A抗体的一种或多种治疗性化合物被配制成适于施用至对象以预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体和抗NKG2A抗体的一种或多种复合肽被配制成适于施用至对象以抑制、改善或降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体和抗NKG2A抗体的一种或多种复合肽的一种或多种衍生物被配制成适于施用至对象以预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体和抗NKG2A抗体的一种或多种复合肽的一种或多种衍生物被配制成适于施用至对象以抑制、改善或降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症的发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。
术语“疾病”、“病症”和“生物学病况”在提及根据本实施方案提供的“抑制、改善、降低一种或多种疾病的严重程度，治疗一种或多种疾病，延迟一种或多种疾病的发作，或者预防一种或多种疾病”时可以互换使用。
在一些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多种衍生物包含与一种或多种复合肽共有约50％至约99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多种衍生物包含与一种或多种复合肽共有50％、50-60％、60-70％、70-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％同一性，或者在由上述值中的任两个限定的范围内的氨基酸序列。
在一些实施方案中，一种或多种脱发相关病症选自：斑秃、全秃、亚全秃、普秃、弥漫性脱发、蛇型斑秃、扁平苔癣、硬化性苔癣、硬化性萎缩性苔癣、特异反应性、特应性皮炎、银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、银屑病关节炎、湿疹、天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮、粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、甲状腺病症、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、地方性甲状腺肿、阿狄森病、局限性硬皮病、荨麻疹、痒疹、酒渣鼻白癜风、白癜风和移植物抗宿主病(GvHD)。
合适的载体及其配方描述于Remington's Pharmaceutical Sciences,16thed.1980Mack Publishing CO以及抗体药物递送的概述(Awwad等人,2018Pharmaceutics10:83)中。另外，这样的组合物可以含有与聚乙二醇(PEG)、金属离子复合的，或者掺入到聚合化合物如聚乙酸、聚乙醇酸、水凝胶等中，或者掺入到脂质体、微乳液、微胶粒、单层或多层囊泡、红细胞血影或球形体(spheroblasts)中的治疗性化合物。这样的组合物将影响治疗性化合物的物理状态、溶解度、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。治疗性化合物可以与针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体缀合，或者与组织特异性受体的配体偶联。
施用本实施方案的治疗性化合物的方法可以根据诸如疾病类型、对象的病况和/或待靶向的部位的因素来适当选择。治疗性化合物可以局部、口服、肠胃外、直肠或通过吸入施用。治疗性化合物的局部施用可以通过配制成洗剂、擦剂(香膏)、溶液、软膏、乳膏、糊剂、凝胶，或其它合适的局部递送系统(视情况而定)来实现(Gupta等人,2016Indo Amer JPharm Res 6:6353-69)。局部制剂组分可以包括润肤剂和/或硬化剂，例如鲸蜡醇、鲸蜡酯蜡、巴西棕榈蜡、羊毛脂、羊毛脂醇、石蜡、凡士林、聚乙二醇、硬脂酸、硬脂醇、白蜡或黄蜡；乳化剂和/或增溶剂，例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60、泊洛沙姆、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、十二烷基硫酸钠、丙二醇单硬脂酸酯；湿润剂，例如甘油、丙二醇、聚乙二醇；增稠剂/胶凝剂，例如卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、角叉菜胶、胶体二氧化硅、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、聚环氧乙烷、海藻酸、海藻酸钠、气相二氧化硅；防腐剂，例如苯甲酸、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯、咪脲、山梨酸、山梨酸钾、苯扎氯铵、乙酸苯汞、氯丁醇、苯氧乙醇；渗透增强剂，例如丙二醇、乙醇、异丙醇、油酸、聚乙二醇；抗氧化剂，例如丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯；缓冲剂，例如柠檬酸、磷酸、氢氧化钠、磷酸二氢钠；以及媒介物试剂，例如纯净水、丙二醇、己二醇、油醇、碳酸丙烯酯和矿物油(Chang等人,2013AAPS J 15:41-52)。口服制剂组分可以包括脂肪酸和衍生物，例如月桂酸、辛酸、油酸；胆盐，例如胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、甘胆酸钠；螯合剂，例如柠檬酸、水杨酸钠；含有烷基糖苷的聚合物、阳离子聚合物、阴离子聚合物和纳米颗粒；以及表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠、十二烷基麦芽糖苷月桂酸钠、泊洛沙姆、肉豆蔻酸钠、月桂基硫酸钠、quillayasaponin和蔗糖棕榈酸酯(Liu等人,2018Expert Opin Drug Del 15:223-33.,Aguirre等人,2016Adv Drug Deliv Rev 106:223-41)。术语“肠胃外”包括皮下注射、静脉内、肌内、腹膜内、脑池内注射或输注技术。这些组合物通常包括单独的或与有效量的任何其它活性材料组合的有效量的治疗性化合物。几种非限制性施用途径是可能的，包括肠胃外、皮下、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈管内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内(intrapericardiac)、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、大丸剂、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或透皮。
可以以任何剂量，经由任何施用途径和以任何施用频率，如本领域普通技术人员基于各种参数所确定的，施用本文公开的一种或多种治疗性化合物。其非限制性实例包括治疗的病况、病况的严重程度、患者依从性、治疗功效、副作用等。
可以根据诸如疾病类型、对象的病况和/或待靶向的部位的因素适当选择本实施方案的药物组合物中含有的治疗性化合物的量、药物组合物的剂型、施用频率等。组合物中含有的这样的剂量和所需药物浓度可能受许多参数的影响而不同，包括预期用途、患者的体重和年龄，以及施用途径。前期研究将首先使用动物研究进行，并且根据领域接受的实践进行缩放至人类施用。
在一个实施方案中，将已经用编码至少一种治疗性化合物的多核苷酸进行遗传修饰的宿主细胞施用至对象，用于抑制、改善、降低一种或多种脱发和/或脱发相关病症的严重程度，治疗一种或多种脱发和/或脱发相关病症，延迟一种或多种脱发和/或脱发相关病症发作，或者预防一种或多种脱发和/或脱发相关病症。多核苷酸由宿主细胞表达，从而在对象体内产生治疗性化合物。优选地，宿主细胞是对象同种异体的或自体的。
在另一方面，选自γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合的一种或多种治疗性化合物可以与其它疗法(例如抑制癌细胞增殖和生长的疗法)组合使用。短语“组合疗法”包括施用选自γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合的一种或多种治疗性化合物和一种或多种另外的治疗剂，作为旨在提供来自这些治疗剂的共同作用的有益效果的特定治疗方案的一部分。这些治疗剂的组合施用通常在确定的时间段内进行(通常数分钟、数小时、数天或数周，取决于所选择的组合)。
组合疗法旨在包括以顺序方式施用这些治疗剂，即其中在不同的时间施用每种治疗剂，以及以基本上同时的方式施用这些治疗剂或至少两种治疗剂。基本上同时施用可以例如通过向对象施用具有固定比例的每种治疗剂的单一胶囊或者在多次的每种治疗剂的单一胶囊中完成。可以通过适当的途径实现每种治疗剂的顺序或基本上同时的施用，包括但不限于经口途径、静脉内途径、肌内途径和通过粘膜组织直接吸收。可以通过相同的途径或不同的途径施用治疗剂。施用治疗剂的顺序并不是非常关键的。
组合疗法还可以包括施用如上所述的治疗剂与其它的生物活性成分(诸如但不限于第二和不同的治疗剂)和非药物疗法(诸如但不限于手术或放射治疗)的进一步组合。在组合疗法还包括放射治疗的情况下，所述放射治疗可以在任何合适的时间进行，只要实现来自治疗剂和放射治疗的组合的共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的施用中暂时移除放射治疗时，可能在数天或甚至数周仍然可以实现有益效果。
在某些实施方案中，一种或多种治疗性化合物可以与至少一种抗增殖剂组合施用，所述治疗性化合物选自γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合，所述抗增殖剂选自化疗剂、抗代谢物和抗肿瘤发生剂、抗有丝分裂剂和抗病毒剂及抗肿瘤剂、免疫治疗剂和放射治疗剂。
在某些实施方案中，一种或多种治疗性化合物可以与选自类固醇、皮质类固醇和非类固醇抗炎药的至少一种抗炎剂组合施用，所述治疗性化合物选自γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合。
还提供了用于执行上述方法中的任一种的试剂盒。试剂盒可以包含根据本实施方案的一种或多种治疗性化合物，其选自γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合。在一些实施方案中，试剂盒可以包含说明书。说明书可以是书面形式或图画形式，或者可以在记录介质上，包括音频带、音频CD、录像带、DVD、CD-ROM等。试剂盒可以包含包装。
另外的实施方案
在所述方法的一些实施方案中，复合肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约50％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约90％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约95％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽和复合肽衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
在所述方法的一些实施方案中，复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)(BNZ-γ)。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约50％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽和复合肽衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
在所述方法的一些实施方案中，复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ IDNO:1的肽共有至少约50％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽和复合肽衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
在所述方法的一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在所述方法的一些实施方案中，所述一种或多种γc-细胞因子选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。在所述方法的一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物抑制IL-2、IL-15和IL-9的活性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物抑制IL-2和IL-15的活性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物抑制IL-15和IL-9的活性。在所述方法的一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物抑制IL-15和IL-21的活性。
在一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物包含信号肽。在一些实施方案中，复合肽或复合肽衍生物进一步缀合到复合肽或复合肽衍生物的N末端、C末端或侧链残基上的一个或多个另外的部分。在复合肽或复合肽衍生物的一些实施方案中，一个或多个另外的部分选自牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
在一些实施方案中，所述复合肽或复合肽衍生物包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经由至少一个肽内烃连接子元件连接。在复合肽的一些实施方案中，所述至少两个α-烯基取代的氨基酸通过关环复分解反应连接以形成至少一个肽内烃连接子元件，其中所述关环复分解反应由格拉布催化剂催化。
在一些实施方案中，复合肽中的氨基酸选自天然氨基酸、非天然氨基酸、(D)立体化学构型氨基酸、(L)立体化学构型氨基酸、(R)立体化学构型氨基酸和(S)立体化学构型氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸选自S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)和R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)。
在复合肽的一些实施方案中，由至少一种肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸被n-2个氨基酸分开，其中n表示肽键内所涵盖的氨基酸数目。
在复合肽的一些实施方案中，当由至少一种肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸被三个氨基酸分开时，至少一个肽内烃连接子元件跨越复合肽的单α螺旋转角。
在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的单α螺旋转角时，与复合肽的单α螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是单α螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是单α螺旋转角的最后一个氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包括α-烯基取代的氨基酸。在复合肽的一些实施方案中，当在位置i处的α-烯基取代的氨基酸是S5Ala时，在位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸也是S5Ala，通过关环复分解反应形成的烃连接子元件由式1表示。
在复合肽的一些实施方案中，当由至少一种肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸被6个残基分开时，至少一个肽内烃连接子元件跨越复合肽的双α螺旋转角。
在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的双α螺旋转角时，与复合肽的双α螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是双α螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是双α螺旋转角的最后一个氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包括α-烯基取代的氨基酸。在复合肽的一些实施方案中，当在位置i处的α-烯基取代的氨基酸是R8Ala时，在位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是S5Ala，通过关环复分解反应形成的烃连接子元件由式2表示。
在一些实施方案中，复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γ-c-盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ IDNO:1)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经由至少一个肽内烃连接子元件连接。
在一些实施方案中，复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γ-c-盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ IDNO:1)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经由至少一个肽内烃连接子元件连接。
在复合肽的一些实施方案中，存在于肽内烃连接子中的一个或多个碳-碳双键用于一种或多种有机化学反应以添加一个或多个另外的化学官能团。在复合肽的一些实施方案中，一种或多种有机化学反应包括烯烃反应。在复合肽的一些实施方案中，烯烃反应选自硼氢化，羟汞化，水合，氯化，溴化，HF、HBr、HCl或HI的添加，二羟基化，环氧化，氢化和环丙烷化。在复合肽的一些实施方案中，可以在烯烃反应之后添加一个或多个另外的化学官能团，其中一个或多个另外的化学官能团包括一个或多个化学基团取代基的共价加成，其中一个或多个化学基团取代基的共价加成包括与环氧化物和羟基的亲核反应。在复合肽的一些实施方案中，一个或多个另外的化学官能团选自生物素、放射性同位素、治疗剂、雷帕霉素、长春碱、紫杉醇、非蛋白荧光化学基团、FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺、蛋白荧光基团、GFP,YFP和mCherry。
在一些实施方案中，提供了药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸，并且其中其衍生物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在一些实施方案中，提供了药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，并且其中其衍生物包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在一些实施方案中，提供了药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，并且其中所述肽缀合物的衍生物包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在药物组合物的一些实施方案中，肽缀合物或其衍生物抑制选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性。在药物组合物的一些实施方案中，肽缀合物或其衍生物还包含在N末端、C末端或其侧链残基处的另外缀合物。
在药物组合物的一些实施方案中，肽缀合物或其衍生物还包含信号肽。在一些实施方案中，药物组合物还包含稳定肽缀合物或其衍生物的结构并提高其生物活性的蛋白质，其中所述蛋白质选自牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)的Fc区、起支架作用的生物蛋白质、聚乙二醇(PEG)及其衍生物。在药物组合物的一些实施方案中，其衍生物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列共有至少95％同一性的肽序列。在药物组合物的一些实施方案中，其衍生物包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列共有至少95％同一性的肽序列。
在一些实施方案中，提供了治疗脱发相关疾病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的对象施用本文提供的药物组合物，其中所述脱发相关疾病选自：斑秃、全秃、亚全秃、普秃、弥漫性脱发、蛇型斑秃、扁平苔癣、硬化性苔癣、硬化性萎缩性苔癣、特异反应性、特应性皮炎、银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、银屑病关节炎、湿疹、天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮、粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、甲状腺病症、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、地方性甲状腺肿、阿狄森病、局限性硬皮病、荨麻疹、痒疹、酒渣鼻白癜风、白癜风和移植物抗宿主病(GvHD)。
在一些实施方案中，提供了用于治疗患者的脱发相关疾病的试剂盒。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸，并且其中其衍生物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，并且其中其衍生物包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在一些实施方案中，所述试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的肽缀合物或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合，其中所述肽缀合物或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的两种或更多种γc-细胞因子的活性，其中所述肽缀合物包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，并且其中其衍生物包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列共有至少90％同一性的肽序列。
在试剂盒的一些实施方案中，所述病况为以下的一种或多种：斑秃、全秃、亚全秃、普秃、弥漫性脱发、蛇型斑秃、扁平苔癣、硬化性苔癣、硬化性萎缩性苔癣、特异反应性、特应性皮炎、银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、银屑病关节炎、湿疹、天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮、粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、甲状腺病症、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、地方性甲状腺肿、阿狄森病、局限性硬皮病、荨麻疹、痒疹、酒渣鼻白癜风、白癜风或移植物抗宿主病(GvHD)。
定义
如本文所用，术语“患者”或“对象”是指本文公开的复合肽的任何实施方案的接受者，并且包括动物界内的所有有机体。在一些实施方案中，包括任何脊椎动物，包括但不限于人和其它灵长类动物(例如，黑猩猩和其它的猿和猴类物种)、农场动物(例如，牛、绵羊、猪、山羊和马)、家养哺乳动物(例如，狗和猫)、实验室动物(例如，啮齿动物如小鼠、大鼠和豚鼠)，以及鸟类(例如，家养的、野生的和游戏的鸟类，如鸡、火鸡和其它的鹑鸡类、鸭、鹅等)。在优选的实施方案中，动物属于哺乳动物家族，如人、牛科动物、羊、猪、猫科动物、水牛、犬、山羊、马、驴、鹿和灵长类动物。最优选的动物是人。在一些实施方案中，患者是男性或女性。
如本文所用，术语“治疗(treat)”或其任何变体(例如，治疗(treatment)、治疗(treating)等)是指诊断患有生物学病况的患者的任何治疗，所述生物学病况例如斑秃、全秃、亚全秃、普秃、弥漫性脱发、蛇型斑秃、扁平苔癣、硬化性苔癣、硬化性萎缩性苔癣、特异反应性、特应性皮炎、银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、银屑病关节炎、湿疹、天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮、粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、甲状腺病症、桥本甲状腺炎、甲状腺功能减退、地方性甲状腺肿、阿狄森病、局限性硬皮病、荨麻疹、痒疹、酒渣鼻白癜风、白癜风和移植物抗宿主病(GvHD)。
本文所用的术语治疗包括：(i)预防或延迟有待显示与生物学病况相关的症状的处于风险患者中与目标生物学病况相关的症状的呈现；(ii)改善与诊断患有生物学病况的患者中的目标生物学病况相关的症状；(iii)预防、延迟或改善与处于风险的患者或诊断患有生物学病况的患者中的目标生物学病况相关的并发症、病况或疾病相关症状的呈现；(iv)减缓、延迟或中止生物学病况的进展；和/或(v)预防、延缓、减缓、中止或改善炎症的细胞事件；和/或(vi)预防、延迟、减缓、中止或改善组织学异常和/或生物学病况的其它的临床测量。
本文所用的术语“症状”是指患者正患特定病况或疾病的常见迹象或指示。
本文所用的术语“有效量”是指引起所需生物反应所需的量。根据本实施方案，γc-拮抗剂的有效量是提供用于治疗生物学病况的至少一种生物因素的可观察效应所需的量。
“重组DNA技术”或“重组”是指使用用于从已经用克隆的或合成的DNA序列转化或转染以能够进行异源肽的生物合成的微生物(例如，细菌、酵母)、无脊椎动物(昆虫)、哺乳动物细胞或有机体(例如，转基因动物或植物)产生特定多肽的技术和方法。仅能用哺乳动物细胞表达系统实现天然的糖基化模式。原核表达系统缺乏向合成的蛋白添加糖基化的能力。酵母和昆虫细胞提供了可能不同于天然模式的独特的糖基化模式。
“核苷酸序列”是指这样的多核苷酸，其为单独的片段形式，或者作为较大DNA构建体的组分，所述构建体来源于以基本上纯的形式分离至少一次的DNA或RNA，不含污染性内源材料，并且其量或浓度使得能够通过标准分子生物学方法(如Current Protocols inMolecular Biology中概述的)进行鉴定、操作和回收其组分核苷酸序列。
“重组表达载体”是指包含含有以下组装体的转录单元的质粒：(1)具有基因表达调控作用的遗传元件，包括启动子和增强子，(2)编码根据本实施方案的多肽的结构或编码序列，以及(3)适当的转录和翻译起始序列，以及(如果需要的话)终止序列。旨在用于酵母和哺乳动物系统的结构元件优选包括使得能够通过酵母或哺乳动物宿主细胞胞外分泌翻译的多肽的信号序列。
“重组微生物表达系统”是指已经将重组转录单元稳定整合至染色体DNA中或携带重组转录单元作为残留质粒的组分的合适的宿主微生物，例如，细菌如大肠杆菌(E.coli)或酵母菌如啤酒酵母(S.cerevisiae)的基本上同源的单一培养物。通常，构成重组微生物表达系统的宿主细胞是单一祖先转化的细胞的后代。重组微生物表达系统将在诱导与待表达的结构核苷酸序列连接的调控元件后表达异源多肽。
如本文所用，章节标题仅用于组织目的，而不应理解为以任何方式限制所描述的主题。本申请中引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文和因特网网页，均出于任何目的明确地通过引用以其整体并入。当并入的参考文献中术语的定义看起来不同于本教导中提供的定义时，本教导中提供的定义将占据主导地位。应理解，在本教导中论述的温度、浓度、时间等之前存在暗示的“约”，使得轻微且非实质性的偏差属于本文的本教导的范围内。
尽管在某些实施方案和实施例的背景下公开了本发明，但本领域技术人员将理解，本发明超出了具体公开的实施方案，达到本发明的其它替代实施方案和/或应用，以及其明显的修改和等同物。另外，虽然详细示出和描述了本发明的几种变型，但是基于本公开内容，属于本发明范围内的其它修改对于本领域技术人员将容易变得显而易见。
还包括可以进行实施方案的特定特征和方面的各种组合或亚组合，且其仍然落入本发明的范围内。应理解，所公开的实施方案的各种特征和方面可以彼此组合或取代，以形成所公开发明的不同模式或实施方案。因此，旨在本文所公开的本发明的范围不应受上述特别公开的实施方案的限制。
然而，应理解，该详细描述虽然表明了本发明的优选实施方案，但其仅通过说明的方式给出，因为属于本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。
实施例
以下实施例是出于说明的目的而呈现的，不应解释为限制。
实施例1-用于评估γc-拮抗肽的抑制活性的方法
使用哺乳动物细胞测定来测定根据本实施方案制备的任何定制衍生肽抑制一个γc-细胞因子家族成员的作用的能力，从而测量其对γc-细胞因子家族成员的增殖性反应。
对于6种γc-细胞因子中的每一种，用人IL-2Rβ基因转染指示细胞系：NK92(一种可通过美国模式培养物收集中心(American Type Culture Collection,ATCC)获得的人NK细胞系NK92(目录号CRL-2407))、CTLL-2(一种可从ATCC获得的鼠CD8 T细胞系)、以及PT-18(一种鼠肥大细胞系)及其亚克隆PT-18β，以使得细胞响应IL-2和IL-15(Tagaya等人,1996,EMBO J.15:4928-39)，并将其用于定量测定γc-细胞因子的生长促进活性(对于方法参考，参见Current protocols in Immunology from Wiley and Sons)。当通过比色WST-1测定在一系列浓度下测量时，指示细胞显示半线性剂量依赖响应(对于试剂和方法的详细描述，参见Clontech PT3946-1和相关的用户手册，将其通过引用并入本文中)。
一旦确定了来自指示细胞系的产生50％％和95％最大响应的细胞因子的适当剂量，就向包含细胞因子和指示细胞的每个孔中加入各种浓度(范围从1pM到10μM)的纯化的或合成的定制衍生肽。将450nm处吸光度的降低用作抑制细胞因子刺激的细胞增殖的指标。通常，细胞被细胞因子刺激，使得含有指示细胞系和细胞因子的孔的吸光度为2.0至3.0，通过加入抑制性肽将其降低至0.1至0.5的范围。
实施例2-通过BNZ-γ选择性抑制某些γc-细胞因子的生长促进活性
使用如上所述的PT-18β细胞，测定了BNZ-γ肽特异性抑制选择的γc-细胞因子的生长促进活性的能力(图3A)。将IL-3(一种支持PT-18β细胞生长的非γc-细胞因子)用作阴性对照。简言之，在IL-3、IL-9、IL-15或IL-4(培养物中1nM的各种细胞因子)存在下，用通过HEK293T细胞产生的BNZ-γ肽的两种不同的稀释物(用BNZ-γ表达构建体转染的HEK293T细胞的原始上清液的1:20或1:60稀释度)或在无BNZ-γ肽下孵育PT-18β细胞。
使用WST-1测定在BNZ-γ肽和细胞因子引入后2天测定细胞的生长响应。IL-3(一种非γc-细胞因子)的生长促进活性未被BNZ-γ抑制。相比之下，IL-15和IL-9的活性被BNZ-γ肽显著(p<0.01，学生T检验)降低。通过IL-4(另一种γc-细胞因子)刺激的细胞增殖未受BNZ-γ肽加入的影响。IL-3、IL-9、IL-15和IL-4的结果显示在图3A中。
在相似的测定中，使用了鼠细胞系CTTL2。在该测定中，利用在RPMI 10％胎牛血清中的0.5nM重组IL-2培养细胞。为了建立增殖测定，从细胞因子中洗涤细胞3次。以96孔板的每孔1x 10(5)个细胞的密度接种细胞，IL-2或IL-15的终浓度为50pM。向每个孔中加入不同浓度的BNZ-γ肽(0.1、1和10μM)。将细胞培养20小时，并在最后的4小时，向板中加入3H-胸苷。收获细胞并测量放射性以测定细胞增殖水平。数据显示在图3B中。
实施例3-通过测定作为细胞增殖的标志物的3H-胸苷掺入来测量抑制γc-细胞因 子活性的方法
通过3H-胸苷掺入测定来测量通过拮抗剂定制衍生肽抑制指示细胞群的γc-细胞因子诱导的增殖。简言之，在细胞因子存在下，将放射性标记的胸苷(1microCi)给予经历增殖的20-50,000个细胞。通过使用常规的捕获仪器(例如，来自Perkin-Elmer的FiltermateUniversal Harvester)将细胞结合的放射性捕获于玻璃纤维过滤器上来测量细胞掺入的放射性，然后使用b-计数器(例如，1450Trilux微孔板闪烁计数器)来测量放射性。
实施例4-通过测定作为细胞增殖的标志物的细胞追踪染料的掺入以测量抑制γ c-细胞因子活性的方法
在所选择的γc-细胞因子存在下，或者在所选择的γc-细胞因子和所选择的定制衍生肽存在下，孵育指示细胞。然后使用细胞追踪染料，例如来自Invitrogen的CMFDA、C2925体外标记细胞群，并使用流式细胞仪(例如，Beckton-Dickinson FACScalibur)监测每次细胞分裂时的细胞绿色荧光的衰减。通常，响应γc-细胞因子刺激，在绿色荧光通道上将出现对应于细胞已经历的分裂数目的7～10个不同的峰。根据抑制的程度，利用选择的γc-细胞因子和拮抗剂定制衍生肽孵育细胞将峰的数目减少至仅1-3个。
实施例5-通过定制肽衍生物拮抗剂抑制细胞内信号传导
除了刺激细胞增殖外，γc-细胞因子与其受体的结合还引起不同的细胞内事件(Rochman等人,2009 Nat.Rev.Immunol.9:480-90,Pesu等人,2005 Immunol.Rev.203:127-142)。在细胞因子与其受体结合后不久，称为Jak3的酪氨酸激酶(Janus激酶3)在质膜处被募集至受体。该激酶使多种蛋白的酪氨酸残基磷酸化，包括γc-亚基、STAT5(转录5的信号转导剂和活化剂)和PI3(磷脂酰肌醇3)激酶的亚基。在这些中，STAT5的磷酸化在许多研究中表明与γc-细胞因子起始的细胞增殖相关。(Hennighausen和Robinson,2008 GenesDev.22:711-21中有综述)。根据这些发表的数据，检查了BNZ-γ肽是否抑制通过IL-15刺激的PT-18β细胞中STAT5分子的酪氨酸磷酸化(结果显示在图4中)。
在BNZ-γ肽存在或不存在下，通过IL-15刺激PT-18β细胞。根据如Tagaya等人,1996 EMBO J.15:4928-39中所述的常规方法，从细胞中提取细胞质蛋白。使用标准的SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分辨所提取的细胞质蛋白，并通过抗磷酸化-STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9354，Danvers MA)，使用免疫印迹确认磷酸化状态(参见图4，上图面)。为了确认每个泳道代表相似的总蛋白负载，于是将膜剥离，并用抗STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9358)重新探测(参见图4，下图面)。
这些结果证明了STAT5(信号转导的标志物)的酪氨酸磷酸化由PT-18β细胞中的IL-15诱导，且STAT5的酪氨酸磷酸化通过BNZ-γ肽显著降低。
实施例6-γc-拮抗肽衍生物的合理设计
基于核心序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)(其中X表示任何氨基酸)，通过利用具有如图2中指定的相同理化特性的氨基酸取代核心序列的确定的氨基酸而制备衍生肽。
可选地，可以基于不同的γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的序列比对，制备定制肽或其衍生肽。
实施例7-鉴定拮抗性定制衍生肽的抑制特异性的方法
通过测定定制衍生肽抑制细胞因子响应性细胞系对每种γc-细胞因子的增殖响应的能力，来确定拮抗性定制衍生肽的γc-细胞因子抑制特异性。例如，将小鼠细胞系CTLL-2用于确定候选肽是否抑制IL-2和IL-15的功能。将PT-18(β)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-4和IL-9的功能。将PT-18(7α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-7的功能，并将PT-18(21α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-21的功能。PT-18(β)表示通过基因转染外源性表达人IL-2Rβ的PT-18细胞的亚克隆(参见Tagaya等人,1996)，PT-18(7α)表示通过基因转染表达人IL-7Rα的亚克隆，并且PT-18(21Rα)细胞表达人IL-21Rα。
另一替代选择是使用响应一系列细胞因子的其它细胞系。人NK细胞系NK92中的该细胞系的实例可通过ATCC商购获得(目录号CRL-2407)。该细胞系是IL-2依赖性细胞系，其响应其它细胞因子，包括IL-9、IL-7、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21(Gong等人,1994Leukemia8:652-658,,Kingemann等人,1996,Biol Blood Marrow Transplant2:68；75,Hodge DL等人,2002J.Immunol.168:9090-8)。
实施例8-γc-拮抗肽的制备
通过手动或自动化过程化学合成定制衍生γc-拮抗肽。
手动合成：采用经典的液相合成，其包括将一个氨基酸的羧基或C末端与另一个氨基酸的氨基或N末端偶联。可选地，使用固相肽合成(SPPS)。
自动化合成：许多商业公司以一定费用提供自动化肽合成。这些公司使用各种商业肽合成仪，包括由Applied Biosystems(ABI)提供的合成仪。通过自动化肽合成仪合成定制衍生γc-拮抗肽。
实施例9-使用重组技术生物产生定制衍生γc-拮抗肽
以前肽生物合成定制衍生γc-拮抗肽，其由适当的标签肽、信号肽或来源于增强或稳定BNZ-γ肽的结构，并且改良其生物活性的已知的人类蛋白的肽组成。如果需要，应设计肽的N末端之前的适当的酶切割序列，以从最终的蛋白中去除标签或肽的任何部分。
将编码在3’端具有终止密码子的定制衍生肽的核苷酸序列插入商业载体中，所述载体具有来源于大肠杆菌的硫氧还蛋白的标签部分和特殊肽序列，所述特殊肽序列被介于标签部分与编码定制衍生肽和终止密码子的核苷酸序列之间的适当的蛋白水解酶(例如，肠激酶)识别和消化。合适载体的一个实例是可从Invitrogen,CA获得的pThioHis质粒。可以使用其它的表达载体。
实施例10-将定制肽和衍生物与载体蛋白缀合用于免疫目的和产生针对定制肽的 抗体
将BNZ-γ或其衍生物用于免疫动物，以获得多克隆抗体和单克隆抗体。通过常规方法，使用戊二醛或间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯将肽与适当的载体蛋白(例如，牛血清白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)等)的N末端或C末端缀合。然后将与适当的佐剂结合的缀合肽用于免疫动物如兔、啮齿动物或驴。使用常规方法检查所得抗体的特异性。如果所得抗体与免疫原性肽反应，则然后根据实施例1-3中所述的细胞增殖测定测试其抑制单独的γc-细胞因子活性的能力。由于衍生肽的复合性质，可能产生同时识别两种不同的细胞因子的单一抗体，这是因为这些肽的复合性质。
实施例11-定制衍生γc-拮抗肽的大规模生产方法
通过使用如别处所述的无细胞系统大规模生产重组蛋白。(参见Takai等人,2010Curr.Pharm.Biotechnol.11(3):272-8)。简言之，将编码γc-拮抗肽和标签的cDNA亚克隆到适当的载体中(参见Takai等人,2010 Curr.Pharm.Biotechnol.11(3):272-8)，对其进行体外转录，随后立即进行体外翻译以产生标记的肽。然后使用识别标记的表位的固定化抗体纯化前多肽，通过蛋白水解酶处理，并使用常规的18％Tricine-SDS-PAGE(Invitrogen)和常规的考马斯染色测试洗脱物(其主要含有目标定制衍生肽)的纯度。如果不满足所需的肽纯度(>98％)，则对混合物进行常规的HPLC(高效液相色谱)以进一步纯化。
实施例12-人源化NSG小鼠模型用于治疗性研究免疫介导的脱发和脱发相关病症 的用途
人免疫系统的体内研究的主要进展是开发了可以在严重免疫缺陷的小鼠如免疫受损的NOD/Scid/Il2rg-/-(NSG)小鼠中建立功能性人免疫系统(Shultz等人,2012Nat.Rev.Immunol.12:786-98)。NSG小鼠缺乏γc-细胞因子信号传导所需的功能性γc-亚基，淋巴样细胞极度缺乏，并且在腹膜内施用Ficoll梯度纯化的人外周血单核细胞(huPBMC)后允许非常有效的人免疫系统移植。人免疫细胞的随后扩增导致全身性移植物抗宿主病(GvHD)的人源化小鼠模型，因为人T细胞靶向包括皮肤在内的鼠组织(Sonntag等人,2015 J.Autoimmun.62:55-66)。人源化NSG小鼠发展成作为全身性GvHD的一种症状的进行性脱发(hair loss)(脱发(alopecia))，在约3-4周后出现秃斑，其在约45-50天发展为完全脱发。由于GvHD，动物很快就会死亡。
为了进一步理解人源化小鼠模型中脱发的潜在机制，在向5只3周龄的NSG小鼠腹膜内施用2百万个huPBMC后，表征了对于脱发而言三种关键循环人细胞因子(IL-2、IL-15和IFNγ)的表达谱。IL-15的增加最早并且在第14天明显，而IL-2和IFNγ直到第35天才升高，所有三种细胞因子都增加到第49天(结果显示在图5中)，其是由于实验组中的小鼠死亡而可获得的最后一个时间点。这表明IL-15是疾病的关键驱动因素。到第35天，小鼠显示出GvH应答的症状，包括体重减轻和中度至重度脱发。
实施例13-抗人CD8抗体对具有免疫介导的脱发的人源化NSG小鼠的影响
NKG2家族的成员与NK和CD8+T细胞的细胞毒性过程有关，并且由多种细胞因子(包括γc-细胞因子IL-15)调节(Borrego等人,1998 J Exp Med 187:813-18,Brumbaugh等人,1996J Immunol 157:2804-12,Cantoni等人,1998Eur J Immunol 28:327-38,Mingari等人,1998 Proc Natl Acad Sci 95:1172-7)。每个NKG2受体与凝集素蛋白CD94二聚化以形成异二聚体受体复合物(Lazetic等人,1996 J Immunol 157:4741-5)，除了NKG2D作为同二聚体存在(Garrity等人,2005 Proc Natl Acad Sci102:7641-6)。以前的报道表明，脱发患者的脱发是由表达NKG2D受体的细胞毒性CD8+T细胞介导的(Xing等人,2014Nat Med 9:1043-9.,Gilhar等人,2016 Autoimmun.Rev.15:726-35)。为了表征CD8+T细胞在该疾病模型中的重要性，用耗损人CD8+T细胞的抗人CD8抗体(OKT8)(BD Biosciences)处理动物。在移植2百万个huPBMC后的4周内，5只小鼠的群组发展出体重减轻和斑片状至完全脱发。然后选择三只人源化小鼠以使用两次注射(两次/周)50μg/小鼠的抗CD8抗体进行治疗。
在用抗人CD8抗体处理之前，从代表性的人源化NSG小鼠收集的血液样品中分离人CD8+T细胞，并针对NKG2D(CD314)受体和NKG2家族中的受体(NKG2A和NKG2C)的表达进行染色以促进通过流式细胞术的测量。脱发疾病进展中的细胞毒性CD8+T细胞也被表征为对于活化NKG2D受体的表达呈阳性(Xing等人,2014Nat Med 9:1043-9)。流式细胞术显示从人源化NSG小鼠分离的几乎整个人CD8+T细胞群是NKG2D+(参见图6A)。有趣的是，尽管观察到人NKG2C+CD8+T细胞在huPBMC移植后减少，但人NKG2A+CD8+T细胞在huPBMC移植后显示出显著增加，其仅随着GvHD症状恶化和疾病进展而扩增(参见图6B)。
用抗人CD8抗体处理后，所有人CD8+T细胞都显著且特异性地耗损(参见图7A)，其在处理后不再重新出现。在CD8+T细胞耗损后4天内，所有三只人源化小鼠显示出体重增加(参见图7B)，治疗后两周体毛的再生长明显(参见图7C)。
实施例14-在具有免疫介导的脱发的人源化NSG小鼠中人NKG2A+CD8+T细胞的组成 型γc-信号传导
γc-亚基与γc-细胞因子之间的相互作用导致Jak3的活化和磷酸化。考虑到γc-亚基与Jak3的相互作用是非常特异性的，因为没有其它受体分子募集Jak3用于信号转导，接下来测试在从移植2百万个huPBMC后4周的人源化NSG小鼠分离的人NKG2A+CD8+T细胞对于Jak3的磷酸化和STAT5的下游磷酸化是否是阳性的。人NKG2A+和NKG2A-CD8+T细胞是来自三只代表性人源化NSG小鼠的血液和脾脏中经Ficoll纯化的。然后用FITC-抗CD4、PE-抗CD8和PE/Cy7-抗NKG2A的混合物对细胞染色，并将荧光活化细胞分选(FACSAria II,BDBiosciences)成CD4-CD8+NKG2A+和CD4-CD8+NKG2A-亚群。作为对照，未移植的NKG2A+和NKG2A-CD8+T细胞保持未受刺激，或者通过离体加入IL-15进行刺激。根据Tagaya等人,1996EMBO J.15:4928-39所述的常规方法从细胞中提取细胞质蛋白。使用标准SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)解析提取的细胞质蛋白，并且通过抗磷酸化-Jak3抗体(Cell Signaling Technology,目录号5031,Danvers MA)或抗磷酸化-STAT5抗体(CellSignaling Technology,目录号9354,Danvers MA)，使用免疫印迹，确认磷酸化状态(参见图8)。将粘着斑蛋白作为对照进行探索。结果显示人NKG2A+而不是NKG2A-CD8+T细胞在移植2百万个huPBMC后4周的人源化NSG小鼠中的组成型γc-信号传导。
实施例15-在具有免疫介导的脱发的人源化NSG小鼠的CD8+T细胞中人C型凝集素 受体NKG2家族成员的抗体介导的耗损
为了测试CD8+T细胞中人C型凝集素受体NKG2家族成员(NKG2A、B、C、D、E、F和H)在人源化NSG小鼠中的全身性GvHD发病机理中的致病参与，CD8+T细胞中每个人NKG2蛋白成员的抗体介导的耗损是通过在移植2百万个huPBMC后3-5周的三只代表性的人源化NSG小鼠中每周两次注射50μg/小鼠的对研究中的NKG2蛋白成员具有特异性的抗NKG2抗体来进行的。然后CD8+T细胞中特异性NKG2家族成员的成功耗损与主要的全身性GvHD症状(如体重减轻，免疫介导的脱发和细胞因子IL-2、IL-15和IFNγ的循环水平)相关。
实施例16-抗体介导的人NKG2A+CD8+T细胞的耗损对具有免疫介导的脱发的人源 化NSG小鼠的影响
为了进一步检查NKG2A+CD8+T细胞是否与在NSG小鼠中huPBMC移植后观察到的诸如体重减轻和脱发的全身性GvHD症状因果相关，生成了来自2百万个huPBMC移植后1周至6周的三只代表性人源化NSG小鼠的NKG2A+CD8+T细胞扩增的动力学与每周体重以及炎性细胞因子IFNγ和γc细胞因子IL-2、IL-7和IL-15的水平的汇编。在CD8+T细胞区室中NKG2A+细胞的增加与IL-2、IL-15和IFNγ的增加之间观察到明显的相关性(参见图9A)。
为了测试NKG2A+CD8+T细胞在人源化NSG小鼠的全身性GvHD发病机理中的致病参与，抗体介导的人NKG2A+CD8+T细胞的耗损通过在2百万个huPBMC移植后3至5周的三只代表性人源化NSG小鼠中每周两次注射50μg/小鼠的抗NKG2A抗体(R&DSystems,目录号MAB1059,Clone 131411,Minneapolis,MN)来进行。NKG2A+CD8+T细胞的成功耗损(参见图9B，huPBMC移植后4-6周)与减轻主要的全身性GvHD症状呈正相关，在抗NKG2A抗体处理一周后体重减轻和免疫介导的脱发改良。观察到IL-2、IL-15和IFNγ的降低与抗体介导的人NKG2A+CD8+T细胞的耗损直接相关(参见图9B)。
实施例17-BNZ-γ对具有免疫介导的脱发的人源化NSG小鼠的影响
为了测试BNZ-γ的作用，在开始治疗之前(约2百万个huPBMC移植后4周)，允许五只人源化NSG小鼠发展具有普遍脱发的广泛的GvHD。在用PEG化的BNZ-γ(第0天，2mg/kg)开始每周两次静脉内(IV)处理2周时，所有动物看起来非常病态。对照PBS处理的动物在大约1-2周内死亡。在第21天，BNZ-γ处理的动物获得显著的体重，具有看起来更健康的皮肤，以及它们的毛皮可见的再生长。BNZ-γ的作用在完成两周治疗后持续约2周，其中BNZ-γ处理的动物显示其毛皮的显著再生长(结果显示在图10A中)。为了支持临床观察，在两周的治疗持续时间内完成每周两次的BNZ-γ给药方案后，BNZ-γ导致循环炎性细胞因子(IL-6和IFNγ)的水平在统计学上显著降低回到/接近NSG小鼠的正常生理范围(参见图10B)。
实施例18-BNZ-γ、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体以及抗IL-2和抗IL-15抗体的组合处 理对人源化NSG小鼠的存活、免疫介导的脱发和细胞因子水平的比较
在该实验中，在研究的第0天用2百万个huPBMC移植NSG小鼠，在移植后35天开始进行治疗处理。每周两次IV注射PBS对照(n＝5)、2mg/kg的BNZ-γ(n＝5)、5mg/kg的抗IL-2抗体(n＝3)、5mg/kg的抗IL-15抗体(n＝3)或各自为5mg/kg的抗IL-2和抗IL-15抗体的组合(n＝3)处理小鼠，在第35天开始，处理持续时间为4周。PBS对照小鼠在处理开始后不久开始死亡，而单抗体处理的动物在处理停止后开始死亡，这与未处理的对照没有统计学差异(p>0.05)。与单一抗体处理(p＝0.014)相比，抗IL-2和抗IL-15抗体的组合显著更有效，在停止处理后存活益处持续数周，但不如BNZ-γ(p＝0.001)有效(结果显示在图11A中)。
在移植后第35天处理开始时，小鼠具有显著的脱发。在处理完成后约两周(约第63天)，在用抗IL-15抗体处理的动物中毛发的再生长有明显的改良，与抗IL-2抗体相比，抗IL-15抗体看起来更有效。与单独的抗IL-15抗体相比，组合抗体处理对于毛发再生长看起来没有显著不同。然而，在所有4个处理组中，BNZ-γ处理的小鼠看起来具有最大程度的毛发再生长，这表明阻断IL-9对于实现最大治疗反应可能是重要的。(结果显示在11B中)。
在该实验中还测量了IL-6和IFNγ的水平。两种炎性细胞因子在PBS对照NSG小鼠中显示出显著升高。所有4种活性处理均不同程度地降低了每种细胞因子的水平，其中BNZ-γ和组合抗体是最有效的。这些数据与先前的报道一致，即IFNγ是由IL-15调节的下游细胞因子，其中IL-15阻断关闭IFNγ表达(Fehniger等人，2000J.Immunol.164:1643-7)。使用在第50天收集的血清测定细胞因子水平，不同的是抗IL-2抗体处理组中的一只动物(第45天收集)，PBS对照未处理组中的一只小鼠(第45天收集)，以及PBS对照未处理组中的两只小鼠(第40天收集)，以确保在每只动物病入膏肓之前收集血样(结果显示在图11C中)。
实施例19-用BNZ-γ处理的人源化NSG小鼠皮肤组织的免疫组织化学
为了表征皮肤组织和毛囊周围的免疫攻击的性质，在移植2百万个huPBMC后，对人源化NSG小鼠的皮肤组织进行3周(BNZ-γ之前)和7周(使用或未用BNZ-γ处理)的免疫组织化学研究。将组织在4％福尔马林(Sigma)中固定24小时，然后移至70％乙醇中保持至少24小时，然后进行加工。然后将组织包埋在石蜡中，在70％、90％和100％乙醇中脱水洗涤两次，每次两小时，然后在二甲苯中清洗两次，每次两小时，并在60C下用融化的paraplastplus浸润两次，持续两小时。石蜡包埋的组织在室温下保存，然后切片和染色。基于IHC的标准程序，将抗人CD8抗体(BioCare Medical CRM 311C)或同种型对照用于组织染色。
观察到人CD8 T细胞在移植后3周流入人源化NSG小鼠的皮肤组织中。在没有BNZ-γ处理的情况下，在移植后7周，CD8 T细胞保持在相当的水平。然而，在用BNZ-γ处理移植后7周，观察到浸润的CD8细胞的数目显著减少。数据显示在图12中。
实施例20-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的脱发的方法
鉴定患有脱发(斑秃、全秃、亚全秃、普秃、弥漫性脱发、蛇型斑秃)的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
实施例21-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的白癜风的方法
鉴定患有白癜风(白癜风和酒渣鼻白癜风)的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
实施例22-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的银屑病的方法
鉴定患有银屑病(银屑病、寻常型银屑病、头皮型银屑病、滴状银屑病、反向性银屑病、银屑病关节炎)的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
实施例23-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的天疱疮的方法
鉴定患有天疱疮(天疱疮、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、增殖型天疱疮、红斑性天疱疮)的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
实施例24-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的类天疱疮的方法
鉴定患有类天疱疮(粘膜类天疱疮、瘢痕粘膜类天疱疮、大疱性类天疱疮)的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
实施例25-通过施用治疗性化合物治疗人类患者的GvHD的方法
鉴定患有GvHD的人类患者。将由医生确定的有效剂量的治疗性化合物，例如抗CD8抗体，抗IL-2抗体，抗IL-15抗体，抗NKG2A抗体，定制衍生物γc-拮抗肽，例如包含BNZ-γ序列的复合肽或其衍生物，或所述治疗性化合物的组合施用至患者，持续由医生确定的时间段。如果患者的症状改良或疾病的进展已经停止或减缓，则确定治疗是有效的。
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本文公开的以及下文列出的所有参考文献通过引用以其整体并入。
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<222> (12)..(12)
<223> X = 非极性氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> X = 带电氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> X = 任何氨基酸
<400> 10
Xaa Xaa Xaa Phe Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Ile
1 5 10 15
Xaa Thr Ser
<210> 11
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<400> 11
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Val Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ser
20
<210> 12
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第12位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第8位的S-戊烯基丙氨酸连接
<400> 12
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Ala Gln Ser Ile Ile
1 5 10 15
Asn Thr Ser
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第8位的R-辛烯基丙氨酸连接
<400> 13
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Val Gln Ser Ala Ile
1 5 10 15
Asn Thr Ser
<210> 14
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第12位的S-戊烯基丙氨酸连接
<400> 14
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Ala Gln Ser Ile Ala
1 5 10 15
Asn Thr Ser
<210> 15
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第12位的R-辛烯基丙氨酸连接
<400> 15
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Ala Gln Ser Ile Ile
1 5 10 15
Asn Thr Ala
<210> 16
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
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<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
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<400> 16
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Ala Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ser
20
<210> 17
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> R-辛烯基丙氨酸；与第16位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第8位的R-辛烯基丙氨酸连接
<400> 17
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Val Gln Ser Ala
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ser
20
<210> 18
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第17位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第13位的S-戊烯基丙氨酸连接
<400> 18
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Ala Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ala Asn Thr Ser
20
<210> 19
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
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<400> 19
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Ala Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ala
20
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第13位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第9位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> D立体化学构型
<400> 20
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Ala Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ser
20
<210> 21
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第9位的R-辛烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> D立体化学构型
<400> 21
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Ala Ile His Ile Val Gln Ser Ala
1 5 10 15
Ile Asn Thr Ser
20
<210> 22
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第5位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第1位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第13位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> D立体化学构型
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> D立体化学构型
<400> 22
Ala Ile Lys Glu Ala Leu Gln Arg Phe Ile His Ile Ala Gln Ser Ile
1 5 10 15
Ala Asn Thr Ser
20
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
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<220>
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<220>
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<222> (3)..(3)
<223> X = 任何氨基酸
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> S-戊烯基丙氨酸；与第4位的S-戊烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> X = 任何氨基酸
<400> 23
Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> X = 任何氨基酸
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<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> X = 任何氨基酸
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<222> (5)..(5)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> X = 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> X = 任何氨基酸
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<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> S-戊烯基丙氨酸；与第3位的R-辛烯基丙氨酸连接
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> X = 任何氨基酸
<400> 24
Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Xaa
1 5 10
<210> 25
<211> 708
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccgagccagt tccgggtgtc gccgctggat cggacctgga acctgggcga gacagtggag 120
ctgaagtgcc aggtgctgct gtccaacccg acgtcgggct gctcgtggct cttccagccg 180
cgcggcgccg ccgccagtcc caccttcctc ctatacctct cccaaaacaa gcccaaggcg 240
gccgaggggc tggacaccca gcggttctcg ggcaagaggt tgggggacac cttcgtcctc 300
accctgagcg acttccgccg agagaacgag ggctactatt tctgctcggc cctgagcaac 360
tccatcatgt acttcagcca cttcgtgccg gtcttcctgc cagcgaagcc caccacgacg 420
ccagcgccgc gaccaccaac accggcgccc accatcgcgt cgcagcccct gtccctgcgc 480
ccagaggcgt gccggccagc ggcggggggc gcagtgcaca cgagggggct ggacttcgcc 540
tgtgatatct acatctgggc gcccttggcc gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg 600
gttatcaccc tttactgcaa ccacaggaac cgaagacgtg tttgcaaatg tccccggcct 660
gtggtcaaat cgggagacaa gcccagcctt tcggcgagat acgtctaa 708
<210> 26
<211> 235
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 27
<211> 732
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
atgcggccgc ggctgtggct cctcttggcc gcgcagctga cagttctcca tggcaactca 60
gtcctccagc agacccctgc atacataaag gtgcaaacca acaagatggt gatgctgtcc 120
tgcgaggcta aaatctccct cagtaacatg cgcatctact ggctgagaca gcgccaggca 180
ccgagcagtg acagtcacca cgagttcctg gccctctggg attccgcaaa agggactatc 240
cacggtgaag aggtggaaca ggagaagata gctgtgtttc gggatgcaag ccggttcatt 300
ctcaatctca caagcgtgaa gccggaagac agtggcatct acttctgcat gatcgtcggg 360
agccccgagc tgaccttcgg gaagggaact cagctgagtg tggttgattt ccttcccacc 420
actgcccagc ccaccaagaa gtccaccctc aagaagagag tgtgccggtt acccaggcca 480
gagacccaga agggcccact ttgtagcccc atcacccttg gcctgctggt ggctggcgtc 540
ctggttctgc tggtttccct gggagtggcc atccacctgt gctgccggcg gaggagagcc 600
cggcttcgtt tcatgaaaca gcctcaaggg gaaggtatat caggaacctt tgtcccccaa 660
tgcctgcatg gatactacag caatactaca acctcacaga agctgcttaa cccatggatc 720
ctgaaaacat ag 732
<210> 28
<211> 243
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
Met Arg Pro Arg Leu Trp Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Thr Val Leu
1 5 10 15
His Gly Asn Ser Val Leu Gln Gln Thr Pro Ala Tyr Ile Lys Val Gln
20 25 30
Thr Asn Lys Met Val Met Leu Ser Cys Glu Ala Lys Ile Ser Leu Ser
35 40 45
Asn Met Arg Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Arg Gln Ala Pro Ser Ser Asp
50 55 60
Ser His His Glu Phe Leu Ala Leu Trp Asp Ser Ala Lys Gly Thr Ile
65 70 75 80
His Gly Glu Glu Val Glu Gln Glu Lys Ile Ala Val Phe Arg Asp Ala
85 90 95
Ser Arg Phe Ile Leu Asn Leu Thr Ser Val Lys Pro Glu Asp Ser Gly
100 105 110
Ile Tyr Phe Cys Met Ile Val Gly Ser Pro Glu Leu Thr Phe Gly Lys
115 120 125
Gly Thr Gln Leu Ser Val Val Asp Phe Leu Pro Thr Thr Ala Gln Pro
130 135 140
Thr Lys Lys Ser Thr Leu Lys Lys Arg Val Cys Arg Leu Pro Arg Pro
145 150 155 160
Glu Thr Gln Lys Gly Pro Leu Cys Ser Pro Ile Thr Leu Gly Leu Leu
165 170 175
Val Ala Gly Val Leu Val Leu Leu Val Ser Leu Gly Val Ala Ile His
180 185 190
Leu Cys Cys Arg Arg Arg Arg Ala Arg Leu Arg Phe Met Lys Gln Pro
195 200 205
Gln Gly Glu Gly Ile Ser Gly Thr Phe Val Pro Gln Cys Leu His Gly
210 215 220
Tyr Tyr Ser Asn Thr Thr Thr Ser Gln Lys Leu Leu Asn Pro Trp Ile
225 230 235 240
Leu Lys Thr
<210> 29
<211> 462
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
atgtacagga tgcaactcct gtcttgcatt gcactaagtc ttgcacttgt cacaaacagt 60
gcacctactt caagttctac aaagaaaaca cagctacaac tggagcattt actgctggat 120
ttacagatga ttttgaatgg aattaataat tacaagaatc ccaaactcac caggatgctc 180
acatttaagt tttacatgcc caagaaggcc acagaactga aacatcttca gtgtctagaa 240
gaagaactca aacctctgga ggaagtgcta aatttagctc aaagcaaaaa ctttcactta 300
agacccaggg acttaatcag caatatcaac gtaatagttc tggaactaaa gggatctgaa 360
acaacattca tgtgtgaata tgctgatgag acagcaacca ttgtagaatt tctgaacaga 420
tggattacct tttgtcaaag catcatctca acactgactt ga 462
<210> 30
<211> 153
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe
50 55 60
Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
85 90 95
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
100 105 110
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
115 120 125
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
130 135 140
Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 31
<211> 489
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
atgagaattt cgaaaccaca tttgagaagt atttccatcc agtgctactt gtgtttactt 60
ctaaacagtc attttctaac tgaagctggc attcatgtct tcattttggg ctgtttcagt 120
gcagggcttc ctaaaacaga agccaactgg gtgaatgtaa taagtgattt gaaaaaaatt 180
gaagatctta ttcaatctat gcatattgat gctactttat atacggaaag tgatgttcac 240
cccagttgca aagtaacagc aatgaagtgc tttctcttgg agttacaagt tatttcactt 300
gagtccggag atgcaagtat tcatgataca gtagaaaatc tgatcatcct agcaaacaac 360
agtttgtctt ctaatgggaa tgtaacagaa tctggatgca aagaatgtga ggaactggag 420
gaaaaaaata ttaaagaatt tttgcagagt tttgtacata ttgtccaaat gttcatcaac 480
acttcttga 489
<210> 32
<211> 162
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr
1 5 10 15
Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His
20 25 30
Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala
35 40 45
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
50 55 60
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
65 70 75 80
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
85 90 95
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
100 105 110
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
115 120 125
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
130 135 140
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
145 150 155 160
Thr Ser
<210> 33
<211> 702
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
atggataacc aaggagtaat ctactcagac ctgaatctgc ccccaaaccc aaagaggcag 60
caacgaaaac ctaaaggcaa taaaagctcc attttagcaa ctgaacagga aataacctat 120
gcggaattaa accttcaaaa agcttctcag gattttcaag ggaatgacaa aacctatcac 180
tgcaaagatt taccatcagc tccagagaag ctcattgttg ggatcctggg aattatctgt 240
cttatcttaa tggcctctgt ggtaacgata gttgttattc cctctacatt aatacagagg 300
cacaacaatt cttccctgaa tacaagaact cagaaagcac gtcattgtgg ccattgtcct 360
gaggagtgga ttacatattc caacagttgt tactacattg gtaaggaaag aagaacttgg 420
gaagagagtt tgctggcctg tacttcgaag aactccagtc tgctttctat agataatgaa 480
gaagaaatga aatttctgtc catcatttca ccatcctcat ggattggtgt gtttcgtaac 540
agcagtcatc atccatgggt gacaatgaat ggtttggctt tcaaacatga gataaaagac 600
tcagataatg ctgaacttaa ctgtgcagtg ctacaagtaa atcgacttaa atcagcccag 660
tgtggatctt caataatata tcattgtaag cataagcttt ag 702
<210> 34
<211> 233
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
Met Asp Asn Gln Gly Val Ile Tyr Ser Asp Leu Asn Leu Pro Pro Asn
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Leu
20 25 30
Ala Thr Glu Gln Glu Ile Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gln Lys Ala
35 40 45
Ser Gln Asp Phe Gln Gly Asn Asp Lys Thr Tyr His Cys Lys Asp Leu
50 55 60
Pro Ser Ala Pro Glu Lys Leu Ile Val Gly Ile Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Leu Ile Leu Met Ala Ser Val Val Thr Ile Val Val Ile Pro Ser Thr
85 90 95
Leu Ile Gln Arg His Asn Asn Ser Ser Leu Asn Thr Arg Thr Gln Lys
100 105 110
Ala Arg His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn
115 120 125
Ser Cys Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu
130 135 140
Leu Ala Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu
145 150 155 160
Glu Glu Met Lys Phe Leu Ser Ile Ile Ser Pro Ser Ser Trp Ile Gly
165 170 175
Val Phe Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Met Asn Gly Leu
180 185 190
Ala Phe Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys
195 200 205
Ala Val Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser
210 215 220
Ile Ile Tyr His Cys Lys His Lys Leu
225 230
<210> 35
<211> 648
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
atggataacc aaggagtaat ctactcagac ctgaatctgc ccccaaaccc aaagaggcag 60
caacgaaaac ctaaaggcaa taaaagctcc attttagcaa ctgaacagga aataacctat 120
gcggaattaa accttcaaaa agcttctcag gattttcaag ggaatgacaa aacctatcac 180
tgcaaagatt taccatcagc tccagagaag ctcattgttg ggatcctggg aattatctgt 240
cttatcttaa tggcctctgt ggtaacgata gttgttattc cctcacgtca ttgtggccat 300
tgtcctgagg agtggattac atattccaac agttgttact acattggtaa ggaaagaaga 360
acttgggaag agagtttgct ggcctgtact tcgaagaact ccagtctgct ttctatagat 420
aatgaagaag aaatgaaatt tctgtccatc atttcaccat cctcatggat tggtgtgttt 480
cgtaacagca gtcatcatcc atgggtgaca atgaatggtt tggctttcaa acatgagata 540
aaagactcag ataatgctga acttaactgt gcagtgctac aagtaaatcg acttaaatca 600
gcccagtgtg gatcttcaat aatatatcat tgtaagcata agctttag 648
<210> 36
<211> 215
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
Met Asp Asn Gln Gly Val Ile Tyr Ser Asp Leu Asn Leu Pro Pro Asn
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Leu
20 25 30
Ala Thr Glu Gln Glu Ile Thr Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gln Lys Ala
35 40 45
Ser Gln Asp Phe Gln Gly Asn Asp Lys Thr Tyr His Cys Lys Asp Leu
50 55 60
Pro Ser Ala Pro Glu Lys Leu Ile Val Gly Ile Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Leu Ile Leu Met Ala Ser Val Val Thr Ile Val Val Ile Pro Ser Arg
85 90 95
His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn Ser Cys
100 105 110
Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu Leu Ala
115 120 125
Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu Glu Glu
130 135 140
Met Lys Phe Leu Ser Ile Ile Ser Pro Ser Ser Trp Ile Gly Val Phe
145 150 155 160
Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Met Asn Gly Leu Ala Phe
165 170 175
Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys Ala Val
180 185 190
Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser Ile Ile
195 200 205
Tyr His Cys Lys His Lys Leu
210 215
<210> 37
<211> 696
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
atgaataaac aaagaggaac cttctcagaa gtgagtctgg cccaggaccc aaagcggcag 60
caaaggaaac ctaaaggcaa taaaagctcc atttcaggaa ccgaacagga aatattccaa 120
gtagaattaa atcttcaaaa tccttccctg aatcatcaag ggattgataa aatatatgac 180
tgccaaggtt tactgccacc tccagagaag ctcactgccg aggtcctagg aatcatttgc 240
attgtcctga tggccactgt gttaaaaaca atagttctta ttcctttcct ggagcagaac 300
aatttttccc cgaatacaag aacgcagaaa gcacgtcatt gtggccattg tcctgaggag 360
tggattacat attccaacag ttgttattac attggtaagg aaagaagaac ttgggaagag 420
agtttgctgg cctgtacttc gaagaactcc agtctgcttt ctatagataa tgaagaagaa 480
atgaaatttc tggccagcat tttaccttcc tcatggattg gtgtgtttcg taacagcagt 540
catcatccat gggtgacaat aaatggtttg gctttcaaac ataagataaa agactcagat 600
aatgctgaac ttaactgtgc agtgctacaa gtaaatcgac ttaaatcagc ccagtgtgga 660
tcttcaatga tatatcattg taagcataag ctttag 696
<210> 38
<211> 231
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
Met Asn Lys Gln Arg Gly Thr Phe Ser Glu Val Ser Leu Ala Gln Asp
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Ser
20 25 30
Gly Thr Glu Gln Glu Ile Phe Gln Val Glu Leu Asn Leu Gln Asn Pro
35 40 45
Ser Leu Asn His Gln Gly Ile Asp Lys Ile Tyr Asp Cys Gln Gly Leu
50 55 60
Leu Pro Pro Pro Glu Lys Leu Thr Ala Glu Val Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Ile Val Leu Met Ala Thr Val Leu Lys Thr Ile Val Leu Ile Pro Phe
85 90 95
Leu Glu Gln Asn Asn Phe Ser Pro Asn Thr Arg Thr Gln Lys Ala Arg
100 105 110
His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn Ser Cys
115 120 125
Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu Leu Ala
130 135 140
Cys Thr Ser Lys Asn Ser Ser Leu Leu Ser Ile Asp Asn Glu Glu Glu
145 150 155 160
Met Lys Phe Leu Ala Ser Ile Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Val Phe
165 170 175
Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Ile Asn Gly Leu Ala Phe
180 185 190
Lys His Lys Ile Lys Asp Ser Asp Asn Ala Glu Leu Asn Cys Ala Val
195 200 205
Leu Gln Val Asn Arg Leu Lys Ser Ala Gln Cys Gly Ser Ser Met Ile
210 215 220
Tyr His Cys Lys His Lys Leu
225 230
<210> 39
<211> 651
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
atggggtgga ttcgtggtcg gaggtctcga cacagctggg agatgagtga atttcataat 60
tataacttgg atctgaagaa gagtgatttt tcaacacgat ggcaaaagca aagatgtcca 120
gtagtcaaaa gcaaatgtag agaaaatgca tctccatttt ttttctgctg cttcatcgct 180
gtagccatgg gaatccgttt cattattatg gtaacaatat ggagtgctgt attcctaaac 240
tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 300
aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 360
tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 420
gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcatatcatt ggatgggact agtacacatt 480
ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 540
ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 600
gaaaactgtt caactccaaa tacgtacatc tgcatgcaaa ggactgtgta a 651
<210> 40
<211> 216
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
Met Gly Trp Ile Arg Gly Arg Arg Ser Arg His Ser Trp Glu Met Ser
1 5 10 15
Glu Phe His Asn Tyr Asn Leu Asp Leu Lys Lys Ser Asp Phe Ser Thr
20 25 30
Arg Trp Gln Lys Gln Arg Cys Pro Val Val Lys Ser Lys Cys Arg Glu
35 40 45
Asn Ala Ser Pro Phe Phe Phe Cys Cys Phe Ile Ala Val Ala Met Gly
50 55 60
Ile Arg Phe Ile Ile Met Val Thr Ile Trp Ser Ala Val Phe Leu Asn
65 70 75 80
Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys
85 90 95
Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln
100 105 110
Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met
115 120 125
Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp
130 135 140
Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile
145 150 155 160
Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro
165 170 175
Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr
180 185 190
Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val
210 215
<210> 41
<211> 723
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
atgagtaaac aaagaggaac cttctcagaa gtgagtctgg cccaggaccc aaagtggcag 60
caaaggaaac ctaaaggcaa taaaagctcc atttcaggaa ccgaacagga aatattccaa 120
gtagaattaa accttcaaaa tgcttctctg aatcatcaag ggattgataa aatatatgac 180
tgccaaggtt tactgccacc tccagaaaag ctcactgccg aggtcctagg aatcatttgc 240
attgtcctga tggccactgt gttaaaaaca atagttctta ttcctttcct ggagcagaac 300
aattcttccc cgaatgcaag aacccagaaa gcacgtcatt gtggccattg tcctgaggag 360
tggattacat attccaacag ttgttattac attggtaagg aaagaagaac ttgggaagag 420
agtttgcagg cctgtgcttc aaagaactct tctagtctgc tttgtataga taatgaagaa 480
gaaatgaaat ttctggccag cattttacct tcctcatgga ttggtgtgtt tcgtaacagc 540
agtcatcatc catgggtgac aataaatggt ttggctttca aacatgagat aaaagactca 600
gatcatgctg aacgtaactg tgcaatgcta catgtacgtg gacttatatc agaccagtgt 660
ggatcttcaa gaatcattag acggggtttc atcatgttga ccaggctggt cttgaactcc 720
tga 723
<210> 42
<211> 240
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
Met Ser Lys Gln Arg Gly Thr Phe Ser Glu Val Ser Leu Ala Gln Asp
1 5 10 15
Pro Lys Trp Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Ser
20 25 30
Gly Thr Glu Gln Glu Ile Phe Gln Val Glu Leu Asn Leu Gln Asn Ala
35 40 45
Ser Leu Asn His Gln Gly Ile Asp Lys Ile Tyr Asp Cys Gln Gly Leu
50 55 60
Leu Pro Pro Pro Glu Lys Leu Thr Ala Glu Val Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Ile Val Leu Met Ala Thr Val Leu Lys Thr Ile Val Leu Ile Pro Phe
85 90 95
Leu Glu Gln Asn Asn Ser Ser Pro Asn Ala Arg Thr Gln Lys Ala Arg
100 105 110
His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn Ser Cys
115 120 125
Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu Gln Ala
130 135 140
Cys Ala Ser Lys Asn Ser Ser Ser Leu Leu Cys Ile Asp Asn Glu Glu
145 150 155 160
Glu Met Lys Phe Leu Ala Ser Ile Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Val
165 170 175
Phe Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Ile Asn Gly Leu Ala
180 185 190
Phe Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp His Ala Glu Arg Asn Cys Ala
195 200 205
Met Leu His Val Arg Gly Leu Ile Ser Asp Gln Cys Gly Ser Ser Arg
210 215 220
Ile Ile Arg Arg Gly Phe Ile Met Leu Thr Arg Leu Val Leu Asn Ser
225 230 235 240
<210> 43
<211> 477
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
atgaataaac aaagaggaac ctactcagaa gtgagtctgg cccaggaccc aaagaggcag 60
caaaggaaac ttaagggcaa taaaatctcc atttcaggaa ccaaacagga aatattccaa 120
gtagaattaa accttcaaaa tgcttcttcg gatcatcaag ggaatgacaa gacatatcac 180
tgcaaaggtt tactgccacc tccagagaag ctcactgctg aggtcctagg aatcatttgc 240
attgtcctga tggccactgt gttaaaaaca atagttctta ttccttgtat tggagtactg 300
gagcagaaca atttttccct gaatagaaga atgcagaaag cacgtcattg tggccattgt 360
cctgaggagt ggattacata ttccaacagt tgttattaca ttggtaagga aagaagaact 420
tgggaagaaa gagtttgctg gcctgtgctt cgaagaactc tgatctgctt tctatag 477
<210> 44
<211> 158
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
Met Asn Lys Gln Arg Gly Thr Tyr Ser Glu Val Ser Leu Ala Gln Asp
1 5 10 15
Pro Lys Arg Gln Gln Arg Lys Leu Lys Gly Asn Lys Ile Ser Ile Ser
20 25 30
Gly Thr Lys Gln Glu Ile Phe Gln Val Glu Leu Asn Leu Gln Asn Ala
35 40 45
Ser Ser Asp His Gln Gly Asn Asp Lys Thr Tyr His Cys Lys Gly Leu
50 55 60
Leu Pro Pro Pro Glu Lys Leu Thr Ala Glu Val Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Ile Val Leu Met Ala Thr Val Leu Lys Thr Ile Val Leu Ile Pro Cys
85 90 95
Ile Gly Val Leu Glu Gln Asn Asn Phe Ser Leu Asn Arg Arg Met Gln
100 105 110
Lys Ala Arg His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser
115 120 125
Asn Ser Cys Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Arg
130 135 140
Val Cys Trp Pro Val Leu Arg Arg Thr Leu Ile Cys Phe Leu
145 150 155
<210> 45
<211> 774
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
atgagtaaac aaagaggaac cttctcagaa gtgagtctgg cccaggaccc aaagtggcag 60
caaaggaaac ctaaaggcaa taaaagctcc atttcaggaa ccgaacagga aatattccaa 120
gtagaattaa accttcaaaa tgcttctctg aatcatcaag ggattgataa aatatatgac 180
tgccaaggtt tactgccacc tccagaaaag ctcactgccg aggtcctagg aatcatttgc 240
attgtcctga tggccactgt gttaaaaaca atagttctta ttcctttcct ggagcagaac 300
aattcttccc cgaatgcaag aacccagaaa gcacgtcatt gtggccattg tcctgaggag 360
tggattacat attccaacag ttgttattac attggtaagg aaagaagaac ttgggaagag 420
agtttgcagg cctgtgcttc aaagaactct tctagtctgc tttgtataga taatgaagaa 480
gaaatgaaat ttctggccag cattttacct tcctcatgga ttggtgtgtt tcgtaacagc 540
agtcatcatc catgggtgac aataaatggt ttggctttca aacatgagat aaaagactca 600
gatcatgctg aacgtaactg tgcaatgcta catgtacgtg gacttatatc agaccagtgt 660
ggatcttcaa gaatcattgt gagcataagc tttagaatta aagcgcttga gcttgcagtg 720
catcagataa aattttatat ttgttcaaac agaaatgata ttatgattgc ataa 774
<210> 46
<211> 257
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
Met Ser Lys Gln Arg Gly Thr Phe Ser Glu Val Ser Leu Ala Gln Asp
1 5 10 15
Pro Lys Trp Gln Gln Arg Lys Pro Lys Gly Asn Lys Ser Ser Ile Ser
20 25 30
Gly Thr Glu Gln Glu Ile Phe Gln Val Glu Leu Asn Leu Gln Asn Ala
35 40 45
Ser Leu Asn His Gln Gly Ile Asp Lys Ile Tyr Asp Cys Gln Gly Leu
50 55 60
Leu Pro Pro Pro Glu Lys Leu Thr Ala Glu Val Leu Gly Ile Ile Cys
65 70 75 80
Ile Val Leu Met Ala Thr Val Leu Lys Thr Ile Val Leu Ile Pro Phe
85 90 95
Leu Glu Gln Asn Asn Ser Ser Pro Asn Ala Arg Thr Gln Lys Ala Arg
100 105 110
His Cys Gly His Cys Pro Glu Glu Trp Ile Thr Tyr Ser Asn Ser Cys
115 120 125
Tyr Tyr Ile Gly Lys Glu Arg Arg Thr Trp Glu Glu Ser Leu Gln Ala
130 135 140
Cys Ala Ser Lys Asn Ser Ser Ser Leu Leu Cys Ile Asp Asn Glu Glu
145 150 155 160
Glu Met Lys Phe Leu Ala Ser Ile Leu Pro Ser Ser Trp Ile Gly Val
165 170 175
Phe Arg Asn Ser Ser His His Pro Trp Val Thr Ile Asn Gly Leu Ala
180 185 190
Phe Lys His Glu Ile Lys Asp Ser Asp His Ala Glu Arg Asn Cys Ala
195 200 205
Met Leu His Val Arg Gly Leu Ile Ser Asp Gln Cys Gly Ser Ser Arg
210 215 220
Ile Ile Val Ser Ile Ser Phe Arg Ile Lys Ala Leu Glu Leu Ala Val
225 230 235 240
His Gln Ile Lys Phe Tyr Ile Cys Ser Asn Arg Asn Asp Ile Met Ile
245 250 255
Ala

Claims (49)

1.组合物，其包含：
治疗性化合物，其量足以调节至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，从而抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作，或者预防至少一种脱发相关病症；以及
药学上可接受的载体。
2.根据权利要求1所述的组合物、其中所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一个γc-细胞因子家族成员选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述治疗性化合物为γc-细胞因子拮抗肽、γc-细胞因子拮抗肽衍生物、抗CD8抗体、抗IL-2抗体、抗IL-15抗体、抗NKG2A抗体或其组合中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的部分序列。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述部分序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的至少5个氨基酸的连续嵌段。
7.根据权利要求5所述的组合物，其中所述部分序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的1-10个氨基酸的连续嵌段。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的组合物，其中至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区选自IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含11至50个氨基酸。
10.根据权利要求4-9中任一项所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽还包含在N末端、C末端、侧链残基或其组合处的缀合物。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述缀合物包含一个或多个选自以下的另外部分：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
12.根据权利要求4-11中任一项所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽还包含信号肽。
13.根据权利要求4-12中任一项所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸。
14.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约50％的同一性。
15.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约90％的同一性。
16.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约95％的同一性。
17.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含SEQ ID NO:1的序列(BNZ-γ)。
18.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽由SEQ ID NO:1的序列组成。
19.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽和所述γc-拮抗肽衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
20.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约50％的同一性。
21.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。
22.根据权利要求4所述的组合物，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体被配制用于局部递送、口服递送和/或肠胃外递送。
24.根据权利要求1-22中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体被配制用于局部递送。
25.根据权利要求1-22中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体被配制用于口服递送。
26.根据权利要求1-22中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体被配制用于肠胃外递送。
27.抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的方法，所述方法包括：
向有需要的对象施用权利要求1-26中任一项所述的组合物，
从而抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
29.设计γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物的方法，所述γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物经配置以调节和/或阻断至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导，其抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症，所述方法包括以下步骤：
使用计算机从氨基酸序列数据库中获得至少一个γc-细胞因子家族成员的氨基酸序列，
基于所述至少一个γc-细胞因子家族成员的序列组装γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物，
其中所述γc-细胞因子拮抗肽和/或其衍生物调节和/或阻断所述至少一个γc-细胞因子家族成员的信号传导。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述至少一个γc-细胞因子家族成员选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。
31.根据权利要求29所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的部分序列。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的至少5个氨基酸的连续嵌段。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述序列包含至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区的1-10个氨基酸的连续嵌段。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的方法，其中至少两个γc-细胞因子家族成员中每一个的γc-盒D-螺旋区选自IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7。
35.根据权利要求29-34中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含11至50个氨基酸。
36.根据权利要求29-35中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽还包含在N末端、C末端、侧链残基或其组合处的缀合物。
37.根据权利要求29-36中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽还包含信号肽。
38.根据权利要求29-37中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸。
39.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约50％的同一性。
40.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约90％的同一性。
41.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:2的肽共有至少约95％的同一性。
42.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽包含SEQID NO:1的序列(BNZ-γ)。
43.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽由SEQ IDNO:1的序列组成。
44.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约50％的同一性。
45.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约90％的同一性。
46.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽衍生物与SEQ ID NO:1的肽共有至少约95％的同一性。
47.根据权利要求29-46中任一项所述的方法，其中所述γc-细胞因子拮抗肽及其衍生物具有相似的理化特性，但具有不同的生物活性。
48.用于抑制、改善、降低至少一种脱发相关病症的严重程度，治疗至少一种脱发相关病症，延迟至少一种脱发相关病症的发作或者预防至少一种脱发相关病症的试剂盒，其包含：
权利要求1-26中任一项所述的组合物。
49.根据权利要求48所述的试剂盒，其中所述至少一种脱发相关病症选自脱发、天疱疮、类天疱疮、银屑病、白癜风、移植物抗宿主病和免疫介导的脱发。
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