CN1135265C - 含酶颗粒及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
一种含酶颗粒,它包括(a)酶和(b)本身能吸收至少5%w/w(基于芯的重量)水的芯。生产这类颗粒的方法,该方法包括(a)将能吸收至少5%w/w(基于芯的重量)水的吸收性芯与液体介质如含水介质接触,该介质含呈溶解形式和/或分散形式的酶,应用的液体介质量应使所得产物基本上不伴随发生附聚作用;以及(b)从所得产物中至少部分地除去该液体介质的挥发性组分。
Description
本发明涉及形成粉尘倾向极低的含酶粒化物(由含酶颗粒构成的),涉及生产这类粒化物的方法,并涉及所述粒化物在一些工业应用场合中的应用。
酶、特别是微生物源的酶的工业应用已日益普遍。酶可用于很多工业方面,例如包括淀粉加工工业和洗涤剂工业。人们熟知,酶、特别是蛋白酶在洗涤剂工业中的应用已引起洗涤剂工厂工人的工业卫生问题,特别是由于同可能发生的任何含酶粉尘的形成相关的健康危险性(包括过敏反应发作的危险性)。
随着酶被引入洗涤剂工业,人们作出了很大努力致力于改善酶的粒化作用和涂敷酶以便减少酶粉尘的形成。
生产含酶颗粒的一种方法包括用酶涂敷芯的表面,接着进行外层涂敷。US5,324,649描述了用酶涂敷non-pareil芯表面,接着进行外层涂敷。US4,689,297和EP0 532 777描述了这样一种方法,它包括通过在流化床中将酶喷到芯上而将酶涂到基于盐晶体的芯或non-pareil芯表面,接着进行外层涂敷。
然而另一种方法则基本上包括:
(i)将酶与适当成粒组分(优选以干物质)在成粒机(例如混合器)中混合,其中的成粒组分如填料、粘合剂、纤维状物质和成粒剂(例如水);以及
(ii)在成粒装置中加工该混合物直至颗粒具有所需的颗粒分布和圆度(球形度)。
很多文献描述了用这种方法制作含酶颗粒的方法。这些文献包括US4,242,219,US4,740,469,WO94/04665,US4,940,665,EP564476,EP168526,US4,661,452,US4,876,198,WO94/16064和US4,106,991。
此外,US5,494,600和US5,318,903描述了这种方法,它包括将酶吸收入多孔性疏水芯(例如多孔性疏水二氧化硅芯)内,接着进行涂敷。
尽管已改善了成粒技术,以便顾及日益严重的环境问题并提高了工业卫生领域中的认识,但仍需要比现有产品表现出甚至更少的粉尘形成的含酶粒状组合物。
本发明的一个目的是提供这种含酶粒状组合物,以及生产这类组合物的改善了的方法。
意外地发现,当颗粒基于适当选择的芯(颗料)时、更具体地说尤其是满足吸液性能方面的要求的芯时,可实现含酶颗粒极低的粉尘形成倾向。
因此,本发明的第一个方面涉及含酶颗粒,它包括:
(a)酶,以及
(b)本身能吸收至少5wt%(w/w)水(相对于芯的重量)的芯。
为保持与本发明的该第一个方面一致,本发明的另一方面涉及从吸收性芯生产含酶颗粒的方法,该方法包括:
(a)将能吸收至少5%w/w(基于芯的重量)水的吸收性芯与含有呈溶解形式和/或分散形式的酶的液体介质接触,应用的液体介质的量应使所得产物基本上不发生附聚作用;以及
(b)从所得产物中至少部分地除去该液体介质的挥发性组分。
芯
构成本发明的含酶颗粒的基础(以及在本发明制备这类颗粒的方法中)的芯是这样的芯,即除了芯本身外不存在减小疏水性的物质或减小表面张力的物质(如表面活性剂)以及含酶颗粒组分(特别是所述酶或多种酶)时,与水(即基本上是纯的液态水)接触后本身(即固有的、天生的或“自然的”)具有吸收至少5%w/w水的能力。
本发明含义中的芯优选能吸收至少10%w/w(基于芯重量)的水,更优选至少15%w/w且甚至更优选至少20%w/w。特别优选的芯是能吸收至少30%w/w水的芯,例如能吸收至少33%w/w水的芯。一些优选种类的芯甚至有更大的吸水能力(例如约40%w/w或更多的水)。
具体类型的芯的吸水能力例如可这样适当地测定,即在混合器中混合下将定量的水喷到定量的芯上〔例如本文实施例1中所述那样(见下文)〕并在喷的过程中观察芯的外观和表现;环境条件(室温、常压等)通常是合适的。一般地,只要所述量的芯能吸收水,基本上就没有湿芯的附聚(即附聚而形成块状等)且有可能移动所得单个的颗粒并将它们干燥而不会显著改变总体颗粒大小分布。
在本发明的含义中,引用的给定类型的芯能吸收的水重量百分数是应用较大量(因此是大数量)给定类型的芯(颗粒)测定的这种“宏观的”综合值,例如多千克量(如约为5、10、15或更多千克的给定类型的芯量)。
不过合适的话,可应用更少量的芯来测定吸水能力,但需(i)应用的样品中单个芯颗粒的数量多到足以适当地代表整体芯,以及(ii)应用的样品大到足以允许令人满意地逐渐加水(优选通过喷射加水),适当混合,同时观察芯的表面润湿和附聚倾向方面的外观/表现。
对于吸收性差或不吸收的芯材料来说,只引入少量水时通常就会发生颗粒的附聚,因此一般将不能维持初始的总体颗粒大小分布。
吸收性差的芯材料一个实例是称为nonpareil种类的常规糖/淀粉基颗粒。在本文的工作实施例中(见下文)尤其证实典型的nonpareil芯产品能吸收小于4wt%的水(相对于芯来说)。
本发明含酶颗粒的优选实施方案是这种颗粒,即其中存在于颗粒中的酶总量至少部分被吸收入芯中;这类颗粒通常会是这样的颗粒,即其中存在于颗粒中的酶总量至少部分已通过芯外表面与含所述酶的液体介质接触而被吸收入芯。
与已知类型的含酶颗粒相比,就实现本发明的含酶颗粒一些特征或性能的改善而言,这类实施方案〔参照本文的工作实施例(见下文)〕看来是有益的;这些特征或性能包括:
颗粒形成粉尘(特别是含酶粉尘)的倾向;
颗粒的酶活性收率(即一批产物颗粒中,用于制备该批产物的酶制剂总的初始酶活性的保持度);
在各种条件下颗粒的贮存期间酶活性的保持度;以及
在破坏性处理如暴露于高温和/或高湿中后酶活性的保持度。
此外,不受任何理论的束缚,认为〔下面还提及(见本文的实施例11)〕在芯中存在吸收的酶增强了对沉积在本发明含义中类型的吸收性芯外表面的酶的粘附,导致这种产品形成粉尘倾向的相应降低。
至于其中总酶含量的一部分被吸收入芯中的本发明的含酶颗粒实施方案,有价值的实施方案包括那些,即其中至少10%w/w、例如至少25%w/w如至少40%w/w的总酶含量(作为活性酶蛋白质计算的)是作为吸收入芯的酶存在的。
特别有价值的实施方案包括那些,即其中该颗粒的至少90%w/w总酶含量是作为吸收入芯的酶存在的,还有可能(例如应用本发明的方法)获得本发明的这种含酶颗粒,即其中该颗粒的基本上所有(即基本上100%w/w)酶含量是作为吸收入芯的酶存在的。
在这方面值得一提的是,对于本发明的颗粒酶含量在(i)芯吸收的酶和(ii)存在于芯表面或一层或多层涂层中/上的酶之间的一定分布,作为吸收入芯的酶存在的酶蛋白质的绝对量,当然将取决于存在于颗粒中酶的总量。
构成本发明的含酶颗粒的基础的芯,以及应用于本发明方法中的芯,优选被加工成形使得其最大直径与最小直径的比小于3;本发明的颗粒-不管是未涂敷的或涂敷的(见下文)-同样优选被加工成形使得其最大直径与最小直径的比小于3。对于芯和含酶颗粒二者来说,后者的比优选小于2,更优选≤1.5(即在1和1.5之间),特别优选的是所述该比最多为1.2。
应注意在本发明的含义中,本文列举的芯或颗粒的最大直径和最小直径之间的上述比值通常是作为有代表性的一些颗粒所述比率的平均值测定的,这些颗粒是从所述芯或颗粒样品中随机抽取的。对于本发明含义中主要的优选类型/形状的芯或颗粒来说,对随机从芯或颗粒的样品中抽取的各20个或更多个颗粒分别测定(例如通过显微术)所述比值,为计算令人满意的再现性平均值提供可靠的基础。
对于多数用途来说,构成本发明的含酶颗粒的基础的芯,本发明方法中应用的芯,以及本发明的含酶颗粒本身,基本上都是球形的,即致使所述比值约为1(因为对严格的球形颗粒来说,所述比值当然是1.0)。
芯或颗粒的最大直径和最小直径之间的比通常可看成该芯或该颗粒各自的最大尺寸和最小尺寸(线尺寸)之间的比,这种尺寸在基本上通过该颗粒中心的方向上。
至于术语“该颗粒中心”,显然基本上是轴对称的颗粒(芯或颗粒),例如基本上呈球形或椭球形的颗粒,具有几何上清晰的中心。这些情况下“该颗粒中心”这一术语可以几何方式解释。
然而,更不规则形状的颗粒一般不具有几何上可确定的中心,于是这些情况下“该颗粒中心”〔因为对多数用途来说不规则形状的颗粒(芯、颗粒)通常在本发明的含义中不是优选的种类〕可被理解成所述颗粒的重力中心。
进一步优选的是,构成本发明的含酶颗粒的基础的芯,本发明方法中应用的芯,以及本发明的含酶颗粒本身〔不管这些颗粒是未涂敷的或涂敷的(见下文)〕具有基本上光滑的表面,即基本没有突出、尖头、次级颗粒、不规则性、凹处、环形口、缺口、纹孔等的表面。
本发明含义中芯或颗粒的“光滑”度通常将基于对大量芯或颗粒各自的代表性样品表面特征的总体估测。特别在基本上呈球形的颗粒(芯或颗粒)情况下,“光滑”这个术语可进一步认为是指,对于有代表性数量(例如≥20)的颗粒,在通过该颗粒中心的方向上、在颗粒外表面的任意给定部分球缺上测定的这些颗粒最大线尺寸和最小线尺寸的比率的平均值小于1.15,优选小于1.10,更优选小于1.05。
本发明含义中芯的优选类型包括由淀粉和/或改性淀粉构成的芯,特别是含总计至少25%w/w(基于芯的总重量)例如至少50%w/w的淀粉和/或改性淀粉的芯。
基于这种芯的含酶颗粒通常看来具有特别有益的性能(例如上文所述的性能如低的粉尘形成倾向,增强了的酶活性保持力等),其中这种芯包括总计至少75%w/w的淀粉和/或改性淀粉,例如总计至少80%w/w,如总计至少85%w/w(基于芯的总重量)的淀粉和/或改性淀粉。
高度优选的这类芯是这种芯,即含有总计至少90%w/w、特别是至少95%w/w(基于芯的总重量)的淀粉和/或改性淀粉的芯,尤其是基本上全部(即含总计基本上100%w/w的)由淀粉和/或改性淀粉构成的芯。
显然,上述淀粉和/或改性淀粉的总重量百分数(%w/w)被表示为芯本身〔即呈“天然的”或固有状态的芯,不包括在制备本发明的含酶颗粒过程中进入或粘附在芯上的酶或任何其它成分〕的重量百分数。
得自各种各样植物源的淀粉(天然生成的淀粉)看来适合于本发明的含义(或者作为淀粉本身,或者作为改性淀粉的起始点),有关淀粉包括得自下列的淀粉:木薯〔尤其是得自苦木薯(Manihot esculenta)或甜木薯(Manihot dulcis)〕;西谷椰子属(Metroxylon spp.,例如西谷椰子(M.sagu));马铃薯(Solanum tuberosum);稻(Oryza spp.);玉米(maize,ZeaMays);小麦(Triticum spp.);大麦(Hordeum spp.,例如H.vulgare);甘薯(Ipomoea batatas);高粱(Sorghum spp.);以及薯蓣(Dioscorea spp.)。
在本发明的这方面可能有价值的其它淀粉类型包括得自下列的淀粉:黑麦(Secal cereale);燕麦(Avena spp.,例如A.sativa);粟(例如得自如下属,即马唐属(Digitaria)、黍属(Panicum)、雀稗属(Paspalum)、狼尾草属(Pennisetum)或狗尾草属(Setaria));荞麦(Fagopyrum spp.,例如F.esculentum);糯性玉米;其它谷物;竹芋(例如Maranta arundinacea);芋(Colocasia spp.,例如野芋(C.antiquorum)或芋头(C.esculenta));箭叶黄体芋(Xanthosoma sagittifolium);苋属(Amaranthus spp.);以及藜属(Chenopodium spp.)。
木薯淀粉属于本发明含义中优选的淀粉;在这方面可提及的是木薯和木薯淀粉已知有不同的同义词,包括木薯(tapioca)、树薯(manioc)、木薯(mandioca)和木薯(manihot)。
人们熟知,淀粉通常基本上包括由α-D-吡喃型葡萄糖单元构成的大分子聚合物。其中这些单元通过α-D-(1→4)键连接构成的线型或大体上线型聚合形式被称为“直链淀粉”。含有通过α-D-(1→4)和α-D-(1→6)键连接的α-D-吡喃型葡萄糖单元的分支的聚合形式被称为“支链淀粉”,α-D-(1→6)键一般占其中配糖键的约5~6%。
在这方面,得自不同植物源的淀粉含不同比例的直链淀粉和支链淀粉。因此,例如得自马铃薯的淀粉一般含约20%w/w直链淀粉和约80%w/w支链淀粉,而所谓的“糯性玉米淀粉”一般含≤2%w/w直链淀粉和≥98%w/w支链淀粉。
至此该提及的是,人们作了很大努力试图获得产淀粉植物株(例如基因操作的株),它们生产的淀粉相对于天然植物生产的淀粉来说具有改变了的直链淀粉/支链淀粉平衡(比率)。
本发明含义中认为各自具有大不相同的直链淀粉和支链淀粉比例的淀粉都有效用。因此,高直链淀粉含量的淀粉、高支链淀粉含量的淀粉以及具有中间比例直链淀粉/支链淀粉的淀粉-包括得自基因修饰的植物源的淀粉-都与本发明的这方面相关,它们可作为本来的淀粉或作为改性淀粉源。
本发明含义中应用的术语“改性淀粉”表示已经过某种至少部分的化学改性、酶促改性和/或物理改性或物理化学改性的淀粉(天然淀粉),所以它们通常表现出相对于“亲代”淀粉来说改变了的性能。
有关的化学改性包括但不限于:羟基的酯化(例如通过乙酰化作用实现的);羟基的醚化作用;氧化(例如通过与氯或次氯酸盐反应而实现的);以及交联(例如通过与甲醛或表氯醇反应而实现的)。
醚化淀粉(例如羧甲基淀粉或羟烷基淀粉)和/或酯化淀粉尤其可作为本发明范围中相关芯的粘合剂(见下文)。
相关的酶促改性例如包括用淀粉降解酶或淀粉改性酶处理,例如用淀粉酶如α-淀粉酶或葡糖淀粉酶。在这方面,特别有意义的可能性是现有含淀粉的芯吸收性能(且可能有其它性能)的改性,其中的芯包括主要或基本上全部由淀粉和/或部分糊化的淀粉构成的芯(见下文),通过用淀粉降解酶对其控制的处理以致改性(一般是提高)芯的多孔性/吸收能力〔例如通过形成新的孔,和/或通过增大其中现有孔的尺寸和/或数量和/或程度(“深度”)〕。
相关的物理改性或物理化学改性尤其包括所谓的糊化。淀粉方面的术语“糊化的”是根据本领域中的用法(例如参见A.Xu和P.A.Seib,
谷物 化学(
Cereal Chem.)
70(1993),pp.463-70)而用于本文的。
当包括淀粉粒的多孔性聚集体的芯被部分糊化(例如通过在水蒸汽压下加热)时,认为处于或靠近芯外表面的淀粉粒经历这种过程,即其中所述淀粉粒中的直链淀粉和/或支链淀粉形成内部网络/结构,它导致该芯外部更大的弹性和物理强度。
糊化度可适当地应用A.Xu和P.A.Seib(在上述引文中)描述的差示扫描量热法(DSC)测定(参见本文的实施例21的进一步详述)。
在本发明的进一步方面中,包括淀粉和/或改性淀粉的这类(上面讨论的)很有用的芯是包括部分糊化淀粉的芯;优选的这种芯包括基本上全部由部分糊化淀粉构成的芯。
在这类芯中,通常希望淀粉的糊化度(见下文)大于0.5%,例如至少2%,但最多95%。对于很多类型的淀粉,在这方面优选的糊化度范围是从10%至60%糊化。
具有低淀粉糊化度的含淀粉的芯显得比具有高淀粉糊化度的相应的芯的物理强度更低。另一方面,具有高淀粉糊化度的含淀粉的芯吸水能力显得比具有低淀粉糊化度的芯更低。
尤其但不是全部地对于主要或基本上单独由部分糊化淀粉构成的芯来说,在30~60%范围内例如30~50%范围内的淀粉糊化度特别显得与下列性能的组合相关,即很令人满意的吸收能力、高球形度和表面光滑性,以及令人满意的高物理强度(耐压榨)。从本文的工作实施例(见下文)可看出,这类基于淀粉的芯可由现有的供应商提供,并已发现它们在本发明范围内的很多方面意义中表现出很理想的性能组合。
就特别是淀粉作为本发明含义中芯材的应用来说,希望对用作基本上均匀的、基于淀粉的芯颗粒替代物来说,将可能应用这种芯颗粒,即它包括一层沉积在内部载体材料(例如不溶性硅酸盐、碳酸盐等)上的吸收性淀粉(例如木薯淀粉或大米淀粉),这种载体材料本身可能或不可能具有属于本发明含义中的芯的其它特征的吸水性能。
在这方面,显得适合本发明含义的其它类吸收性芯包括这样的芯,即它们包括作为吸收性材料的非疏水性硅酸盐或硅质材料。可以粒状形式制备或获得的这类材料实例有:皂土、漂白土(二者都主要由绿土矿蒙脱土构成),硅藻土(infusorial earths,例如kieselguhr、tripolite、tripoli或diatomite)以及其它绿土矿(例如贝得石、囊脱石、滑石粉、锌蒙脱石或水辉石)。
构成本发明的含酶颗粒的基础的芯,或者应用于本发明方法中的芯,如果合适的话并且相关的话,可包括一种或多种例如下列物质(添加剂或助剂):粘合剂、填料、增塑剂、纤维状物质和/或所谓的“超吸收剂”。
粘合剂:当掺入本发明含义的芯中时,适当存在的粘合剂量占高达该芯总重量的约20%。合适的粘合剂通常是这类粘合剂,即常用于成粒领域且具有高熔点或者不熔,并属于非蜡性的。这种粘合剂可能是低或高分子量粘合剂,包括水溶性粘合剂和水基乳液粘合剂。这方面包括碳水化合物类粘合剂,范围从单糖类物质到多糖类物质及其衍生物。寡糖类粘合剂,例如某些糊精,通常很合适。
多糖衍生物类粘合剂的实例包括:淀粉衍生物(它们的一些类型已在前述改性淀粉方面提到过),例如淀粉酯(如乙酸淀粉),淀粉醚(例如羧甲基淀粉或羟烷基淀粉,如羟甲基淀粉、羟乙基淀粉或羟丙基淀粉)以及纤维素衍生物,例如甲基羟丙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素(CMC)和CMC钠盐。
相关粘合剂的其它实例包括聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、丙烯酸/马来酸共聚物和含乙烯基的化合物如聚乙烯醇、水解的聚乙酸乙烯酯和聚乙烯基吡咯烷酮。
填料:适合掺入本发明含义上芯内的填料包括惰性材料,它们被用于增大体积和降低成本,或用于调节成品颗粒中的酶活性。这类填料的实例包括但不限于:水溶性物质如脲,各种盐(例如氯化钠、硫酸铵或硫酸钠)和糖类,以及水分散剂如陶土、滑石、硅酸盐或淀粉。
增塑剂:在本发明含义上相关的某些类型的芯中,增塑剂可适当地以占该芯总重量高达约10%的量存在。增塑剂一般起减小脆性和/或增大可变形性的作用,它们通常应是低挥发性的低分子量有机化合物〔例如:多元醇(如二元醇例如乙二醇)、脲以及邻苯二甲酸酯(如邻苯二甲酸二丁酯或二甲酯)〕。水可在某些情况下用作增塑剂。
纤维状物质:当掺入本发明含义上的芯内时,纤维状物质可适当地以占该芯总重量高达约30%的量存在,优选在5~15%之间。合适的纤维状物质包括这类物质,即具有高拉伸强度且呈直径为1~50μm、长度至少是直径的4倍的细丝形式。典型的纤维状物质包括但不限于:纤维素纤维、玻璃纤维、金属丝、橡胶纤维、再生蛋白质纤维(从玉米、花生和奶的天然蛋白质制备的)和合成聚合物纤维(例如下列纤维,即RayonTM、NylonTM、聚酯、聚烯烃、SaranTM、SpandexTM和VinalTM的纤维)。纤维素纤维在这方面是很合适的纤维,它们通常适当地具有150~300μm范围内的平均纤维长度和约20~40μm范围内的直径。
超吸收剂:尤其是某些类型的大分子物质具有吸收多倍于它们自身重量的水或某些含水介质的能力。这类物质〔它们包括各种合成聚合物以及得自天然源聚合物的物质,已发现它们的应用,例如作为体液吸收剂(如用于创伤敷料、婴儿尿布、卫生巾等用品中)〕有时被称为“超吸收剂”,所以这类物质可作为构成本发明含酶颗粒基础的芯的组分存在。
一组描述于WO96/03440中的有趣超吸收剂包括易生物降解的物质,它们通过酶法得自某些天然存在的酚式多糖如酚式果胶,所以这类物质很适合作本发明含义中相关的芯的吸水性组分。
在这一点上该适时提及很适合作本发明的含酶颗粒基础的另一类吸收性芯,即“空白对照剂”(无酶的)芯,是按US4,106,991的一般方法制备的,但未包括酶。US4,106,991描述了所谓的“T粒化物”的生产,除了酶外,这种粒化物还包括2~40%w/w纤维状纤维素,以及粘合剂(例如前述有关芯的或与本发明含义相关的那些粘合剂之一),填料(一般是盐例如硫酸钠或氯化钠,任选含有少量增白剂如二氧化钛或高岭土)以及液相成粒剂(水和/或蜡质物例如聚乙二醇、脂肪族醇、乙氧基化的脂肪族醇等)。通过按US4,106,991制备颗粒(它应用了酶、纤维状纤维素、粘合剂、填料和液相成粒剂混合物的转鼓式成粒作用),但未掺入酶,可制备吸收性芯,它们很适合作本发明含义上的芯。可被恰如其分地称为“空白对照剂T”芯的这类芯,还可应用除盐之外的“填料”物质(例如粉状淀粉,如粉状大米淀粉)制备。
正如前面已在一定程度上指出的那样,优选地,构成本发明的含酶颗粒基础的芯颗粒具有较高的物理强度。在本发明含义中,基本上球形芯颗粒的该强度可适当地以这种比值来确定,即在下文规定的试验条件(见下文)下开始压碎该颗粒所需的力与该芯直径(即将该颗粒视为基本上呈球形)的平方之间的比值。
优选地,从大批量的芯随机抽取的有代表性数量的芯(适当地≥20个芯)测定的该比值平均值大于400g/mm2,更优选大于600g/mm2,例如大于800g/mm2。特别希望该比值大于1000g/mm2,更优选大于1200g/mm2,特别是大于1400g/mm2,最优选大于1600g/mm2。
适合于测定本发明含义中的芯颗粒(或成品含酶颗粒)强度的压碎试验的原理阐释于本文的图1(见下文)。该试验是这样进行的:
1)将芯材料颗粒置于图1中所示的铝板和PlexiglasTM〔透明的聚(甲基丙烯酸甲酯)型聚合物〕板(各板量度218mm×40mm,厚3.2mm)之间;该PlexiglasTM板用两个铝U形框加强,这两个U形框连接在该板的边缘〔如图1的底部“正视图”(端视图)中所示〕并沿该板的全长延伸;
2)如图1所示,将增加的负荷(环形/圆柱形重物)逐个置于最靠近该芯的PlexiglasTM板的一端,使该重物的重心位于该板宽度的中央,离它的端部20mm;同时,应用显微镜透过该透明板观察颗粒;
3)测定该颗粒开始破碎(目视估测)时的荷重(以克表示),将它除以该芯颗粒直径的平方(以mm2表示)而得该芯颗粒的强度。
芯材料颗粒(或本发明的颗粒)的物理强度也可按Heubach法或NovoNordisk磨耗法测定,这二者都给出颗粒的粉尘形成倾向的量度;后两种方法(分别为EAL-SM-0289.01/01和AF225/2-GB)的方案可从NovoNordisk A/S,Bagsvaerd,Denmark索取。在后两种方法中,使颗粒床受钢滚球的作用,同时通过该床抽气以收集该操作中产生的粉尘和碎片。
对于本发明的含酶颗粒很多应用来说,该颗粒(以及相应地在很多情况下其中的芯颗粒)的平均粒径应适当地在50~4000μm范围内,例如200~2000μm(如在200~1000μm范围内)。最佳平均芯粒径通常应取决于最终含酶颗粒的具体应用。
本发明的含酶粒化物的实施方案例如很适合用于洗涤剂、动物饲料组合物、烘焙和织物的处理。作为洗涤剂应用的实例,优选的平均颗粒粒径(以及很多情况下相应的平均芯粒径)通常在250~2000μm范围内(例如300~2000μm),而对于烘焙应用来说,优选的平均芯粒径通常在50~200μm范围内。尺寸大于4000μm的颗粒(以及通常相应的芯),例如尺寸为10000μm数量级的颗粒,可适合于某些应用(例如织物的处理中)。
总的粒径分布优选较窄,例如使得给定样品中至少90%、更优选95%的颗粒,它们的最大粒径和最小粒径的比率小于4∶1,优选小于3∶1,更优选小于2∶1,且最优选小于1.5∶1。
适合作本发明的含酶颗粒基础的粒状芯颗粒例如可通过常规的造粒法制备,如将起始原料例如包括淀粉或硅酸盐/硅质材料的起始原料进行滚转、转动、制粒、挤出/球化处理、和/或机械搅拌。可用转鼓造粒(按US4,106,991中所述方法)制备的合适的吸收性芯(“空白对照剂T”芯)实例在前面已描述过(也可参见本文的实施例8和13)。
涂层
本发明的颗粒可包括一层、二层或多层涂层。这种涂层例如可以是一层或多层居间的涂层,或者是一层或多层外表涂层,或者是它们的组合。
涂层在颗粒组合物中可起许多功能中任一种,这取决于该酶颗粒的具体应用。于是,例如涂层可实现下列效用中的一种或多种:
(i)进一步降低本发明的未涂敷颗粒形成粉尘的倾向;
(ii)保护颗粒中的酶以抗漂白物质/体系(例如过硼酸盐、过碳酸盐、有机过酸等)氧化;
(iii)当该颗粒被引入液体介质(例如含水介质)时以所需的速度溶解;
(iv)提供一道抗环境湿气的屏障以增强该酶的贮存稳定性并减小该颗粒内微生物生长的可能性。
在本发明的颗粒合适的实施方案中,该涂层可按US4,106,991中所述方法构成〔例如用蜡质材料如聚乙二醇(PEG),任选接着用增白剂如二氧化钛制成粉〕。
给定的涂层可占成品颗粒重量的0.5%到多达50%。
本发明颗粒中/上的涂层可进一步包括一种或多种下列物质:抗氧剂、氯清除剂、增塑剂、颜料、润滑剂(例如表面活性剂或抗静电剂)和其它酶。
适用于本发明含义中涂层中的增塑剂例如包括:多元醇如糖、糖醇、或分子量小于1000的聚乙二醇(PEGs);脲,邻苯二甲酸酯如邻苯二甲酸二丁酯或二甲酯;以及水。
合适的颜料包括但不限于:细分散的增白剂,如二氧化钛或高岭土,彩色颜料,水溶性着色剂,以及一种或多种颜料和水溶性着色剂的组合。
本文中应用的术语“润滑剂”表示能减小表面摩擦、润滑该颗粒的表面、降低静电的聚集倾向、和/或减小该颗粒的脆性的任意试剂。润滑剂还可通过减小涂层中粘合剂的粘合性而起改善涂敷过程的相关作用。因此,润滑剂可作为抗附聚剂和湿润剂。
合适的润滑剂实例有聚乙二醇(PEGs)和乙氧基化脂肪族醇。
前面已提到过,本发明还涉及从吸收性芯生产含酶颗粒的方法,该方法包括:
(a)将能吸收至少5%w/w(基于芯的重量)水的吸收性芯与含呈溶解形式和/或分散形式的酶的液体介质接触,应用的液体介质量应使所得产物基本上不发生附聚作用;以及
(b)从所得产物中至少部分地除去该液体介质的挥发性组分。
适用于本发明方法中的芯的优选特征是前面已讨论过的与本发明的含酶颗粒相关的那些。
在本发明的方法中,吸收性芯与包括溶解的和/或分散的酶的液体介质(例如含水介质)的接触例如是通过下列方法适当地进行的:通过在混合条件下用该溶液/分散液喷淋芯,或者通过将该酶溶液/分散液施加(例如通过喷射)在(例如在流化床装置中)流化过的芯上,或者结合应用这两种技术。
芯与酶通过混合技术的接触通常很适合于本发明的含义,因为它有利于在适当时于本发明方法的步骤(a)中以一定的量以及在一段时间内给芯加入含酶溶液或分散液,它足以全部地(或部分地)利用该芯的吸收能力,但它不会在形成的单个颗粒上或颗粒之间留下任何显著量的游离液相(即含酶溶液或分散液),也就是使得没有足够的游离(未吸收的)液相来引起颗粒附聚。如果存在过剩的(未吸收的)液相,就有发生附聚的危险,随之在大批颗粒中形成不希望有的块。
常规的混合设备可令人满意地用于混合该芯和含酶液体介质。该混合设备可以是分批混合器或连续混合器,例如对流式混合器〔例如参见Harnby等,加工工业中的混合(Mixing in the Process Industries),pp.39-53(ISBN 0-408-11574-2)〕。也可应用非对流式混合设备,例如转鼓式混合器或所谓的盘式造粒机。
正如已指出的那样,在将芯与含酶液体介质接触时也可应用流化(例如在流化床装置或其它形式流化设备中,如Hüttlin型流化器)该芯的条件。至于合适的流化床设备的描述,例如参见,Harnby等,加工工业中的混合,pp.54-77(ISBN 0-408-11574-2)。
通常,较有利的是,应用于本发明方法中的含酶液体介质包含溶解的酶。当用含水介质加工时一般应是这种情况。还希望本方法在这种条件下实施,即在本方法步骤(a)中芯对该液体介质的液相(它通常会含有溶解的酶)的吸收进行到一定程度,通常优选进行到这样的程度,即致使在采取任何措施从所得产物除去液体介质的挥发性组分之前发生了芯对液相的基本上全部吸收。
在这方面,本发明的方法就可例如在这种条件下实施,即在接触阶段中基本上不发生脱除、或至少很少量的脱除挥发性组分。当在接触步骤中应用混合器装置时,这通常可通过简单地保证混合器中的温度不太高(例如使得该温度为室温或更低)而实现;当在接触步骤中应用流化条件时,该条件通常可通过应用足够低温度(例如低于30℃的温度,如室温或更低)的流化空气来满足。
随后挥发性组分例如可在混合器中下列条件下除去,即在混合条件(例如通过加热和/或减压)下或者在流化条件下,例如在流化床装置中(例如通过适当地应用热流化空气)。当然,应用的该温度应使得产物颗粒中不发生酶活性的明显降低。
备择地,可在实施该接触步骤的同时使之发生一定程度的蒸发挥发性组分。于是例如,当在接触步骤中应用混合器装置时,可将该混合器加热到适当高的温度以便在接触阶段中引起挥发物的一定蒸发;当在接触步骤中应用流化条件时,流化空气本身可被加热到适当高的温度。如前所述,应用的温度当然应使得产物颗粒不发生酶活性的明显降低。
当干燥产物颗粒时,可将颗粒保持在加工装置中达一段时间以致足以将湿含量(在应用水性含酶介质制备的产物的情况下)降至低于10%w/w游离水分的含量,优选低于5%w/w游离水分。
如同已讨论过的那样(见上文),应用于本发明含义中的芯本身能吸收适当量的水(从而吸收适当量的含水介质),因此不需在含酶液体介质中包括表面活性剂来使芯能吸收足量例如酶的亲水性多肽。
这对用于例如烘焙工业或动物饲料工业的工业中的含酶颗粒的生产特别有益,这类应用中一般不希望表面活性剂存在于颗粒中。
然而,在某些情况下,例如当需要比通常具有更高酶活性的产物时(如用于洗涤剂工业中),至少对于某些类型的吸收性芯来说,为增强和/或加快芯对酶的吸收,在含酶液体介质中包括适量的表面活性剂是有利的。适合该应用的表面活性剂包括多种阳离子型、阴离子型、非离子型或两性离子型表面活性剂,它们合适的实例在下文的洗涤剂组合物的讨论方面将会提及(见下文)。
为了促进在芯与含酶液相接触之后形成稠密、紧凑(光滑/规整)的颗粒表面,优选在混合器中存在一个快速旋转的造粒装置(“切碎机”)。可参考US4,106,991更详细的说明。
为促进在该芯与液体介质接触后形成稠密、紧凑(光滑/规整)的颗粒表面的另一个方法是在MarumerizerTM中处理该湿粒化物。可参考US4,106,991更详细的说明。
当将含酶水溶液/水分散液应用于本发明时,该溶液(即含水介质的液相)通常优选具有含量为2%w/w~50%w/w的干物质〔干物质包括酶蛋白质,可能还有其它有机物和无机物〕。当存在分散的酶时,该溶液/分散液将适当地具有10%w/w~70%w/w的干物质含量〔包括得自溶解的和分散的(未溶解的)原料的干物质〕。
在这方面应用的术语“分散液”表示含固体颗粒的体系,至少某些固体颗粒包括酶或由酶构成,颗粒大小在胶态尺寸范围和更大,且固体颗粒悬浮于、成浆状或分布于液相(例如含水相)中。于是本发明含义中的术语“分散液”特别包括悬浮液和浆状物。
在本发明方法的一个优选方面,应用于步骤(a)的液体介质中存在的分散态酶包括呈结晶形式的酶。
在本发明的方法中,优选地该含酶液体介质(溶液或溶液/-分散液)以至少0.05∶1的重量比(液体介质:芯)被加入颗粒芯,更优选至少0.1∶1,例如至少0.15∶1,如至少0.2∶1,通常至少0.5∶1。应用的该比率一般将取决于芯的吸收能力,并取决于成品含酶颗粒的所需强度。
可应用常规的方法例如通过盘式涂布、混合器涂布和/或流化床涂布将一层、两层或多层涂层涂到干燥的或部分干燥的含酶颗粒上。合适的涂料/涂料组分包括已在前文本发明的含酶颗粒方面讨论过的那些。
酶
任意酶或不同酶的组合都可用于本发明的含义中。因此,当提及“酶”时,通常应将它理解为包括一种或多种酶的组合。
应用于本说明书和权利要求书中的酶分类遵照国际生物化学和分子生物学联合会的命名委员会的建议(1992)(Recommendations(1992)ofthe Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistryand Molecular Biology),Academic Press,Inc.,1992。
应懂得,在术语“酶”的意义中包括酶变体(例如通过重组技术生产的)。这类酶变体的实例例如公开于EP251,446(Genencor)、WO91/00345(Novo Nordisk A/S)、EP525,610(Solvay)和WO94/02618(Gist-Brocades NV)中。
可适当地掺入本发明颗粒中的酶种类包括:
水解酶〔EC3;例如脂肪酶(EC3.1.1.3)和其它羧酸酯水解酶(EC3.1.1);肌醇六磷酸酶,例如3-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.8)和6-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.26);α-淀粉酶(EC3.2.1.1)和其它糖苷酶(EC3.2,它属于本文表示为“糖酶”的组中);肽酶(EC3.4,也称为蛋白酶);以及其它羰基水解酶〕;氧化还原酶〔EC1;例如过氧化物酶(EC1.11.1),漆酶(EC1.10.3.2)和葡糖氧化酶(EC1.1.3.4)〕;转移酶(EC2);异构酶(EC5);以及连接酶(EC6)。
可商购的蛋白酶(肽酶)实例包括:EsperaseTM,AlcalaseTM,NeutraseTM,Du razymTM,SavinaseTM,PyraseTM,Pancreatic TrypsinNOVO(PTN),Bio-FeedTM Pro和Clear-LensTM Pro(都得自NovoNordisk A/S,Bagsvaerd,Denmark)。
其它可商购的蛋白酶包括MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM和PurafectTM(可得自GenencorInternational Inc.或Gist-Brocades)。
可商购的脂肪酶实例包括LipolaseTM,LipolaseTM Ultra,LipozymeTM,PalataseTM,NovozymTM 435和LecitaseTM(都可得自NovoNordisk A/S)。
其它可商购的脂肪酶包括LumafastTM〔得自Genencor InternationalInc.的门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)脂肪酶〕;LipomaxTM〔得自Gist-Brocades/Genencor Int.Inc.的类产碱假单胞菌(Ps.pseudoalcaligenes)脂肪酶;以及得自Solvay enzymes的芽孢杆菌属(Bacillus sp.)脂肪酶〕。其它脂肪酶可得自其它供应商。
在本文中,术语“糖酶”不但表示能分解尤其具有五元和六元环结构的糖链(例如淀粉)的酶(即糖苷酶,EC3.2),还表示能使糖异构化的酶,其中的糖例如具有六元环结构如D-葡萄糖到五元环结构如D-果糖。
相关的糖酶包括下列酶(括号内为EC号):
α淀粉酶(3.2.1.1),β淀粉酶(3.2.1.2),葡聚糖-1,4-α-葡糖苷酶(3.2.1.3),纤维素酶(3.2.1.4),内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶(3.2.1.6),内切-1,4-β-木聚糖酶(3.2.1.8),葡聚糖酶(3.2.1.11),壳多糖酶(3.2.1.14),聚半乳糖醛酸酶(3.2.1.15),溶菌酶(3.2.1.17),β-葡糖苷酶(3.2.1.21),α-半乳糖苷酶(3.2.1.22),β-半乳糖苷酶(3.2.1.23),淀粉-1,6-葡糖苷酶(3.2.1.33),木聚糖1,4-木糖苷酶(3.2.1.37),葡聚糖内切-1,3-β-D-葡糖苷酶(3.2.1.39),α-糊精内切-1,6-α-葡糖苷酶(3.2.1.41),蔗糖α-葡糖苷酶(3.2.1.48),葡聚糖内切-1,3-α-葡糖苷酶(3.2.1.59),葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶(3.2.1.74),葡聚糖内切-1,6-β-葡糖苷酶(3.2.1.75),arabinan内切-1,5-α-L-阿拉伯糖苷酶(3.2.1.99),乳糖酶(3.2.1.108),脱乙酰壳多糖酶(3.2.1.132)和木糖异构酶(5.3.1.5)。
可商购的糖酶实例包括:
A1pha-GalTM,Bio-FeedTM Alpha,Bio-FeedTM Beta,Bio-FeedTMPlus,Bio-FeedTM Plus,NovozymeTM 188,CelluclastTM,CellusoftTM,CeremylTM,CitrozymTM,DenimaxTM,DezymeTM,DextrozymeTM,FinizymTM,FungamylTM,GamanaseTM,GlucanexTM,LactozymTM,MaltogenaseTM,PentopanTM,PectinexTM,PromozymeTM,PulpzymeTM,NovamylTM,TermamylTM,AMGTM (Amyloglucosidase Novo),MaltogenaseTM,SweetzymeTM和AquazymTM(都可得自Novo NordiskA/S)。其它糖酶可得自其它供应商。
可商购的氧化还原酶(EC1)实例包括GluzymeTM(可得自NovoNordiskA/S的酶)。其它氧化还原酶可得自其它供应商。
本发明含义中合适的转移酶(EC2)有下列任意亚类中的转移酶:
转移一碳基的转移酶(EC2.1);转移醛残基或酮残基的转移酶(EC2.2);酰基转移酶(EC2.3);糖基转移酶(EC2.4);转移非甲基的烷基或芳基的转移酶(EC2.5);以及转移含氮基的转移酶(EC2.6)。
本发明含义中转移酶的优选种类是转谷氨酰胺酶(蛋白质-谷氨酰胺γ-谷氨酰基转移酶;EC2.3.2.13)。
转谷氨酰胺酶的实例被描述于WO96/06931中(Novo Nordisk A/S)。
掺入本发明颗粒中酶的量将取决于该粒化物的预期用途。对于很多应用来说,酶含量应尽可能高或者切实可行。
本发明颗粒中的酶含量(基于纯酶蛋白质计算的)一般在含酶颗粒重量的约0.5%~20%范围内。
例如当将蛋白酶(肽酶)掺入本发明的颗粒中时,成品颗粒的酶活性(蛋白酶解活性)通常应在1~20KNPU/g的范围内。同样,例如就α淀粉酶来说,活性通常为10~500KNU/g,而对于脂肪酶,50~400KLU/g范围内的活性一般将是合适的。
其它添加剂组分
适当时,可将各种添加剂与该酶一起掺入本发明的颗粒中。相关的添加剂可包括:金属化合物(例如过渡金属的盐和/或配合物),增溶剂,激活剂,抗氧剂,染料,抑制剂,粘合剂,香料,酶保护剂/清除剂,例如硫酸铵,柠檬酸铵,脲,盐酸胍,碳酸胍,磺酸胍,硫脲二氧化物,一乙醇胺,二乙醇胺,三乙醇胺,氨基酸如甘氨酸、谷氨酸钠等,蛋白质如牛血清白蛋白、酪蛋白,表面活性剂,包括阴离子型表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂和长链脂肪酸盐,增效助剂,碱或无机电解质,漂白剂,变蓝剂和荧光染料,以及结块抑制剂。可参照WO92/00384关于合适的表面活性剂的描述。
掺有这类助剂的颗粒可通过酶粒化领域中技术人员熟知的方法制备,这类方法包括:流化床喷涂,盘式涂布以及用于通过在起始芯材料表面依次涂布涂层而构造颗粒的其它技术。
除了上述按本发明生产含酶颗粒的该方法外,本发明还涉及通过该方法的实施方案获得的或可获得的含酶颗粒。
本发明的含酶颗粒的应用
本发明的颗粒(含酶颗粒)可用于很多工业应用。特别有意义的应用包括它们在下列方面的应用,即在洗涤剂、动物饲料组合物、供烘焙工业用的制品以及织物处理制品中的应用,下面列出了在这些应用各个领域中最有意义的酶类型:
洗涤剂:蛋白酶,淀粉酶(例如α-淀粉酶),纤维素酶,脂肪酶,氧化还原酶;
烘焙制品:淀粉葡糖苷酶(葡糖淀粉酶、葡聚糖1,4-α-葡糖苷酶),细菌α-淀粉酶,真菌α-淀粉酶,生麦淀粉酶,葡糖氧化酶,蛋白酶,戊聚糖酶;
动物饲料组合物:细菌α淀粉酶,蛋白酶,木聚糖酶,肌醇六磷酸酶;
织物处理制品:纤维素酶,α淀粉酶。
在进一步的方面中,本发明涉及洗涤剂组合物(特别是洗衣的和洗碟的洗涤剂组合物),该组合物包括本发明的含酶颗粒或按本发明生产的含酶颗粒。
在另一方面,本发明涉及动物饲料组合物,它们包括本发明的含酶颗粒或按本发明生产的含酶颗粒。
本发明的又一方面涉及烘焙用组合物,它们包括本发明的含酶颗粒或按本发明生产的含酶颗粒。
此外,本发明还涉及本发明的含酶颗粒或按本发明生产的含酶颗粒作为含酶组分在如下方面中的应用:
洗涤剂组合物,例如供洗衣或洗碟用的;
动物饲料组合物;
供烘焙用的组合物;或者
供织物处理的组合物(例如供脱色或染色)。
洗涤剂组合物
按本发明,本发明的含酶颗粒可典型地成为洗涤剂组合物的组分,例如洗衣的洗涤剂组合物或洗碟的洗涤剂组合物。这样,它们可呈未涂敷的颗粒或按本领域已知方法涂敷的已涂敷颗粒形式包括于洗涤剂组合物中。蜡质的涂敷材料的实例有:平均分子量为1000~20000的聚环氧乙烷产品(聚乙二醇,PEG);具有16~50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚;乙氧基化脂肪族醇,其中该醇含12~20个碳原子并且其中有15~80个环氧乙烷单元;脂肪族醇;脂肪酸;以及脂肪酸的单、二和三甘油酯。适合于通过流化床技术涂布的成膜涂料实例给出于专利GB1483591中。
本发明的洗涤剂组合物可呈任何合适的形式,例如作为粉末、颗粒或浆状物。
该洗涤剂组合物包括一种或多种表面活性剂,其中每种可以是阴离子型、非离子型、阳离子型或两性离子型。该洗涤剂通常含0~50%阴离子型表面活性剂例如线型烷基苯磺酸盐(LAS)、α烯烃磺酸盐(AOS)、烷基硫酸盐(脂肪族醇硫酸盐)(AS)、醇乙氧基硫酸盐(AEOS或AES)、仲链烷磺酸盐(SAS)、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基丁二酸或者皂。它还可含0~40%非离子型表面活性剂例如醇乙氧基化物(AEO或AE)、醇丙氧基化物、羧化醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基聚糖苷、烷基二甲基氧化胺、乙氧基化脂肪酸一乙醇氨化物、脂肪酸一乙醇氨化物、或多羟基烷基脂肪酸氨化物(例如WO92/06154中所述的)。
除了含于本发明的含酶颗粒中的酶外,该洗涤剂组合物还可包括一种或多种其它酶,例如支链淀粉酶、酯酶、脂肪酶、角质酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、过氧化物酶或氧化酶(例如漆酶)。
通常该洗涤剂含1~65%助洗剂,但某些洗碟用洗涤剂可含甚至高达90%助洗剂或配位剂例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基或烯基丁二酸、可溶性硅酸盐或层叠式硅酸盐(例如得自Hoechst的SKS-6)。
助洗剂可再分成含磷型和不含磷型的。含磷无机碱助洗剂的实例包括水溶性盐,尤其是碱金属焦磷酸盐、正磷酸盐、多磷酸盐和膦酸盐。不含磷的无机助洗剂实例包括水溶性碱金属碳酸盐、硼酸盐和硅酸盐以及层叠式二硅酸盐和各种水不溶性晶状或无定形硅铝酸盐,其中沸石是已知最有代表性的。
合适的有机助洗剂实例包括下列的碱金属盐、铵盐或取代铵盐:丁二酸盐、丙二酸盐、脂肪酸丙二酸盐、脂肪酸磺酸盐、羧基甲氧基丁二酸盐、聚乙酸盐、羧酸盐、聚羧酸盐、氨基聚羧酸盐和聚乙酰基羧酸盐。
该洗涤剂也可以是未复配的,即基本上不含助洗剂。
该洗涤剂可包括一种或多种聚合物。实例有羧甲基纤维素(CMC),聚乙烯基吡咯烷酮(PVP),聚乙二醇(PEG),聚乙烯醇(PVA),聚羧酸盐如聚丙烯酸盐,聚马来酸盐,马来酸/丙烯酸共聚物以及甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。
该洗涤剂组合物可含有氯/溴型或氧型漂白剂。该漂白剂可以是涂敷的或胶囊化的。无机氯/溴型漂白剂的实例有锂、钠或钙的次氯酸盐或次溴酸盐以及氯化磷酸三钠。该漂白体系也可包括H2O2源例如过硼酸盐或过碳酸盐,它们可与形成过酸的漂白活化剂如四乙酰基乙二胺(TAED)或壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)组合。
有机氯/溴型漂白剂的实例有杂环的N-溴或N-氯酰亚胺例如三氯异氰脲酸、三溴异氰脲酸、二溴异氰脲酸和二氯异氰脲酸,及其与水溶性阳离子如钾和钠的盐。海因化合物也合适。该漂白体系还可包括例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。
在洗碟洗涤剂中,氧漂白剂是优选的,例如呈无机过酸盐的形式,优选含有漂白前体或作为过氧酸化合物。合适的过氧漂白化合物的典型实例有碱金属过硼酸盐四水合物和一水合物,碱金属过碳酸盐,过硅酸盐和过磷酸盐。优选的活化剂物质有TAED或NOBS。
本发明的洗涤剂组合物中的酶可应用常规的稳定剂稳定化,该稳定剂例如多元醇如丙二醇或甘油,糖或糖醇,乳酸,硼酸,或硼酸衍生物如芳香硼酸酯,而且该组合物例如可按WO92/19709和WO92/19708中所述方法调制。本发明的酶还可通过加入可逆的酶抑制剂如EP0544777 B1中所述的蛋白质型酶抑制剂而被稳定化。
该洗涤剂还可含有其它常规的洗涤剂组分例如织物调节剂,它们包括陶土、抗絮凝剂物质、泡沫促进剂/抑泡剂(在洗碟的洗涤剂中为抑泡剂)、抑泡剂、防腐剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉淀剂、染料、脱水剂、杀菌剂、荧光增白剂或香料。
pH(在应用浓度下的水溶液中测定的)通常应是中性或碱性,例如在7~11范围内。
本发明范围内的洗衣用洗涤剂组合物的具体形式包括:
(1)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 7-2% |
醇乙氧基硫酸盐(例如C12-18醇,1-2EO)或烷基硫酸盐(如C16-18) | 1-4% |
醇乙氧基化物(如C14-15醇,7EO) | 5-9% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 14-20% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 2-6% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 15-22% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 0-6% |
柠檬酸钠/柠檬酸(作为C6H5Na3O7/C6H8O7) | 0-15% |
过硼酸钠(作为NaBO3·H2O) | 11-18% |
TAED | 2-6% |
羧甲基纤维素 | 0-2% |
聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG) | 0-3% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如抑泡剂、香料、荧光增白剂、光漂白剂) | 0-5% |
2)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 6-11% |
醇乙氧基硫酸盐(例如C12-18醇,1-2EO)或烷基硫酸盐(如C16-18) | 1-3% |
醇乙氧基化物(如C14-15醇,7EO) | 5-9% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 15-21% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 1-4% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 24-34% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 4-10% |
柠檬酸钠/柠檬酸(作为C6H5Na3O7/C6H8O7) | 0-15% |
羧甲基纤维素 | 0-2% |
聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG) | 1-6% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如抑泡剂、香料) | 0-5% |
3)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 5-9% |
醇乙氧基化物(如C12-15醇,7EO) | 7-14% |
作为脂肪酸的皂(例如C16-22脂肪酸) | 1-3% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 10-17% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 3-9% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 23-33% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 0-4% |
过硼酸钠(作为NaBO3·H2O) | 8-16% |
TAED | 2-8% |
膦酸盐(如EDTMPA) | 0-1% |
羧甲基纤维素 | 0-2% |
聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG) | 0-3% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如抑泡剂、香料、荧光增白剂) | 0-5% |
4)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 8-12% |
醇乙氧基化物(如C12-15醇,7EO) | 10-25% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 14-22% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 1-5% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 25-35% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 0-10% |
羧甲基纤维素 | 0-2% |
聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物、PVP、PEG) | 1-3% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如抑泡剂、香料) | 0-5% |
5)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
6)作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
脂肪族醇硫酸盐 | 5-10% |
乙氧基化脂肪酸一乙醇氨化物 | 3-9% |
作为脂肪酸的皂 | 0-3% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 5-10% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 1-4% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 20-40% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 2-8% |
过硼酸钠(作为NaBO3·H2O) | 12-18% |
TAED | 2-7% |
聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物、PEG) | 1-5% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如荧光增白剂、抑泡剂、香料) | 0-5% |
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 8-14% |
乙氧基化脂肪酸一乙醇氨化物 | 5-11% |
作为脂肪酸的皂 | 0-3% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 4-10% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 1-4% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 30-50% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 3-11% |
柠檬酸钠(作为C6H5Na3O7) | 5-12% |
聚合物(例如PVP、马来酸/丙烯酸共聚物、PEG) | 1-5% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(例如抑泡剂、香料) | 0-5% |
7)作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
线型烷基苯磺酸盐(作为酸计算的) | 6-12% |
非离子型表面活性剂 | 1-4% |
作为脂肪酸的皂 | 2-6% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 14-22% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 18-32% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 5-20% |
柠檬酸钠(作为C6H5Na3O7) | 3-8% |
过硼酸钠(作为NaBO3·H2O) | 4-9% |
漂白活化剂(如NOBS或TAED) | 1-5% |
羧甲基纤维素 | 0-2% |
聚合物(如聚羧酸盐或PEG) | 1-5% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(如荧光增白剂、香料) | 0-5% |
8)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
阴离子型表面活性剂(线型烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐、α烯烃磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、链烷磺酸盐、皂) | 25-40% |
非离子型表面活性剂(如醇乙氧基化物) | 1-10% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 8-25% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 5-15% |
硫酸钠(作为Na2SO4) | 0-5% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 15-28% |
过硼酸钠(作为NaBO3·4H2O) | 0-20% |
漂白活化剂(TAED或NOBS) | 0-5% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(如香料、荧光增白剂) | 0-3% |
9)1)~8)中所述的洗涤组合物,其中全部或部分线型烷基苯磺酸盐被(C12~C18)烷基硫酸盐代替。
10)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
(C12-C18)烷基硫酸盐 | 9-15% |
醇乙氧基化物 | 3-6% |
多羟基烷基脂肪酸氨化物 | 1-5% |
沸石(作为NaAlSiO4) | 10-20% |
层叠式二硅酸盐(如得自Hoechst的SK56) | 10-20% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 3-12% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 0-6% |
柠檬酸钠 | 4-8% |
过碳酸钠 | 13-22% |
TAED | 3-8% |
聚合物(如聚羧酸盐和PVP) | 0-5% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(如荧光增白剂、光漂白剂、香料、抑泡剂) | 0-5% |
11)堆积密度至少为600g/l、作为粒化物调制的洗涤剂组合物,它包括:
(C12-C18)烷基硫酸盐 | 4-8% |
醇乙氧基化物 | 11-15% |
皂 | 1-4% |
沸石MAP或沸石A | 35-45% |
碳酸钠(作为Na2CO3) | 2-8% |
可溶性硅酸盐(作为Na2O,2SiO2) | 0-4% |
过碳酸钠 | 13-22% |
TAED | 1-8% |
羧甲基纤维素 | 0-3% |
聚合物(如聚羧酸盐和PVP) | 0-3% |
酶(作为纯酶蛋白质计算的) | 0.0001-0.1% |
少量组分(如荧光增白剂、膦酸盐、香料) | 0-3% |
12)1)~11)中所述的洗涤剂组合物,它们含有稳定化或胶囊包封的过酸,或者作为添加的组分或者作为已指定漂白体系的替代物。
13)1)、3)、5)、7)和8)中所述的洗涤剂组合物,其中过硼酸盐被过碳酸盐代替。
14)1)、3)、5)、7)、8)、10)和11)中所述的洗涤剂组合物,它们另外含有锰催化剂。该锰催化剂例如可以是“低温漂白用的有效锰催化剂”,自然[英](
Nature)
369,1994,pp.637~639中描述的化合物之一。本发明范围内的洗碟用洗涤剂组合物具体形式包括:
1)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂 | 0.4-2.5% |
硅酸钠 | 0-20% |
二硅酸钠 | 3-20% |
三磷酸钠 | 20-40% |
碳酸钠 | 0-20% |
过硼酸钠 | 2-9% |
四乙酰基乙二胺(TAED) | 1-4% |
硫酸钠 | 5-33% |
酶 | 0.0001-0.1% |
2)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂(如醇乙氧基化物) | 1-2% |
二硅酸钠 | 2-30% |
碳酸钠 | 10-50% |
膦酸钠 | 0-5% |
柠檬酸三钠二水合物 | 9-30% |
次氮基三乙酸钠(NTA) | 0-20% |
过硼酸钠一水合物 | 5-10% |
四乙酰基乙二胺(TAED) | 1-2% |
聚丙烯酸聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物) | 6-25% |
酶 | 0.0001-0.1% |
香料 | 0.1-0.5% |
水 | 5-10% |
3)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂 | 0.5-2.0% |
二硅酸钠 | 25-40% |
柠檬酸钠 | 30-55% |
碳酸钠 | 0-29% |
碳酸氢钠 | 0-20% |
过硼酸钠一水合物 | 0-15% |
四乙酰基乙二胺(TAED) | 0-6% |
马来酸/丙烯酸共聚物 | 0-5% |
陶土 | 1-3% |
聚氨基酸 | 0-20% |
聚丙烯酸钠 | 0-8% |
酶 | 0.0001-0.1% |
4)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂 | 1-2% |
沸石MAP | 15-42% |
二硅酸钠 | 30-34% |
柠檬酸钠 | 0-12% |
碳酸钠 | 0-20% |
过硼酸钠一水合物 | 7-15% |
四乙酰基乙二胺(TAED) | 0-3% |
聚合物 | 0-4% |
马来酸/丙烯酸共聚物 | 0-5% |
有机膦酸化物 | 0-4% |
陶土 | 1-2% |
酶 | 0.0001-0.1% |
硫酸钠 | 平衡 |
5)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂 | 1-7% |
二硅酸钠 | 18-30% |
柠檬酸三钠 | 10-24% |
碳酸钠 | 12-20% |
单过硫酸盐(2KHSO5·KHSO4·K2SO4) | 15-21% |
漂白稳定剂 | 0.1-2% |
马来酸/丙烯酸共聚物 | 0-6% |
二亚乙基三胺五乙酸五钠盐 | 0-2.5% |
酶 | 0.0001-0.1% |
硫酸钠,水 | 平衡 |
6)1)、2)、3)和4)中所述的自动洗碟组合物,其中用过碳酸盐代替过硼酸盐。
7)1)~4)中所述的自动洗碟组合物,它们还含有锰催化剂。该锰催化剂例如可以是“低温漂白用的有效锰催化剂”,
自然〔英〕,
369,1994,pp.637~639中描述的化合物之一。
当然,所有上面列举的洗衣用和洗碟用洗涤剂组合物的具体形式另外还包括少量粒化物组分(芯材料、涂料组分等)。
本发明的含酶颗粒可以相应于通常应用于洗涤剂中的酶浓度的浓度掺入。本文预计,在本发明的洗涤剂组合物中,该酶可以相应于每升洗衣/洗碟液中0.00001~1mg(作为纯酶蛋白质计算的)酶的量加入。
参照WO97/07202(PCT/DK96/00341)有关同本发明含义相关的其它类洗涤剂组合物的详细情况。
本发明通过下述工作实施例而进一步阐释,这些实施例是作为代表而不是想以任何方式限定本发明的范围。本领域技术人员能根据本文的启示选择其它酶、芯、涂敷剂/助剂或方法。
原料和方法
酶活性分析
蛋白分解活性(KNU):在本说明书中,蛋白分解活性以Kilo NovoProtease Unit(KNPU)表示。该活性是相对于酶标准物测定的,该测定基于标准条件(50℃,pH8.3,9分钟的反应时间,3分钟的测定时间)下由蛋白酶对二甲基酪蛋白(DMC)溶液的消化。提供该分析方法更详细说明的说明书(AF220/1)可从Novo Nordisk A/S,Bagsvaerd,Denmark函索。
淀粉分解活性(KNU)可应用马铃薯淀粉作底物而测定。该方法基于酶对改性马铃薯淀粉的水解,在该反应之后将该淀粉/酶溶液样品与碘溶液混合。开始时,形成蓝黑色,但随着淀粉的分解蓝色变浅且逐渐变成棕红色,将它与有色玻璃标准物比较。一个Kilo Novo αAmylase Unit(淀粉酶单位)(KNU)定义为,在标准条件(37±0.05℃,0.0003M Ca2+,pH5.6)下糊精化5.26g淀粉干物质Merck Amylum solubile所需的酶量。
更详细的描述该分析方法的说明书(AF9/6)可从Novo NordiskA/S,Denmark函索。
脂解活性(LU)可应用三丁精作底物测定。该方法基于酶对三丁精的催化水解,并测定碱的消耗与时间的作用关系。一个Lipase Unit(脂肪酶单位)(LU)定义为,在标准条件(30.0℃,pH7.0;Gum Arabic(阿拉伯树胶)作乳化剂,三丁精作底物)下每分钟释放1mmol可滴定的丁酸所需的酶量。更详细的描述该分析方法的说明书(AF95/5)可从Novo NordiskA/S,Denmark函索。
肌醇六磷酸酶活性(FYT)可应用Novo Nordisk分析方法KAL-SM-0403.01/01(可从Novo Nordisk A/S,Denmark函索)测定。
芯
木薯淀粉芯:如果未另外说明,应用的木薯淀粉芯得自AgroComercial,Brazil。
Nonpareil芯(基于糖-淀粉的):得自Crompton&Knowles,USA(“Sugar Spheres NF Mesh 35-40”)或得自NP Pharma。
酶
SavinaseTM浓缩物(水基蛋白酶浓缩物)得自Novo Nordisk A/S,Denmark。
肌醇六磷酸酶浓缩物得自Novo Nordisk A/S,Denmark。
脂肪酶(脂肪酶变体HL9)是如WO97/07202的实施例3中所述那样获得的。
Heubach法和Novo Nordisk磨耗法
如前所述(见上文),Heubach法和Novo Nordisk磨耗法都是这类方法,即一床颗粒受钢滚球的作用,同时通过该床抽气以收集该操作中产生的粉尘和碎片。更详细地描述这些方法的说明书(分别为EAL-SM-0289.01/01和AF225/2-GB)可从Novo Nordisk A/S,Denmark函索。
实施例1
将一份15kg的粒状木薯淀粉芯(粒径分布:97%的原料直径在0.5mm和1.0mm之间)引入50升Ldige混合器,在应用混合叶片(“犁铧”(“ploughshares”))进行混合下共喷6.0kg纯水(芯的40%w/w),初始时喷3.5kg水未操作“切碎机”(压实刀),然后喷剩余的水量(2.5kg),同时操作该切碎机,直至6.0kg的总量。
在喷涂期间定期检查该湿芯,这些芯没有发粘的迹象或附聚的倾向,否则就会在随后的干燥期间造成困难或引起终产品的质量问题。
将所得产物转至Glatt WSG15流化床装置(Glatt,德国),进气温度为62℃,干燥30分钟或者直至产物温度超过50℃,然后用1.2mm目筛筛分,筛上只余下0.8%w/w残余的、太大的颗粒。
实施例2(应用差吸收性芯的对比实施例)
将一份15kg的糖-淀粉nonpareil芯引入50升Ldige混合器,在应用混合叶片混合下逐步喷涂共0.9kg水,开始时用0.3kg喷涂。
在喷涂期间定期检查该湿芯。当喷涂第一份0.3kg水(芯的2%w/w)后芯显示粘性。当总共喷涂4~5%w/w的水后严重发粘。
共喷涂0.9kg水(芯的6%w/w)后将湿芯转到Glatt WSG15流化床装置在与实施例1相同的条件下干燥。然而,即使试图在流化床装置中手工混合该床湿芯,该材料都太粘而不能令人满意地流化。最后干燥的产物主要包括尺寸高达约10cm的附聚的块或外皮。
该实施例表明,所述nonpareil芯能吸收少于4%w/w的水。
实施例3
步骤1:将一份20kg的粒状木薯淀粉芯(如实施例1中应用的;粒径分布:97%的原料直径在0.5mm和1.0mm之间)引入50升装有多切碎机头的Lige混合器,在应用混合叶片混合下喷涂4.5kg水基超滤液SavinaseTM浓缩物(33KNPU/g)。应用埋没在芯内的压力喷嘴将该SavinaseTM浓缩物直接喷入切碎机。混合叶片和切碎机在喷涂期间连续操作。
在涂了该SavinaseTM浓缩物后,将所得颗粒转至Glatt WSG5流化床装置并按实施例1中所述那样干燥。
步骤2:随后将一份15kg干燥的粒化物在流化床装置中涂上8%w/w硫酸铵,是应用38%w/w硫酸铵溶液并应用常规的表面喷涂技术(topspray coating technique)(进气温度为62℃,产物温度为43℃,喷涂速度100g/min,空气流速为700m3/h)。
步骤3:应用相同的流化床表面喷涂技术将硫酸铵涂布的粒化物进一步涂上18.5%w/w涂料,该涂料组成为27%TiO2、27%高岭土、30%GlascolTM LS27和16%PEG 4000。该涂布液的成分如下:
0.75kg TiO2(KronosTM 2044)
0.75kg高岭土(得自English China Clay的SpeswhiteTM)
1.80kg GlascolTM LS27(得自英国的Allied Colloids Ltd.;46%干物质)
0.45kg聚乙二醇4000(PEG4000)
2.40kg水。
步骤4:最后应用23%w/w PEG4000的水基溶液并应用与前述相同的流化床表面喷涂技术涂上0.75w/w PEG4000的表面涂层。
步骤4之后最终粒化产物的活性是4.1KNPU/g。
按Novo Nordisk磨耗法估测步骤1和步骤2之后粒化物的粉尘形成/物理强度性能,而得自步骤3和步骤4的产物则按Heubach法估测。
各步骤后的粉尘含量:
步骤1:总粉尘0.4mg;活性粉尘2410μg
步骤2:总粉尘0.5mg;活性粉尘74μg
步骤3:总粉尘6.2mg;活性粉尘43μg
步骤4:总粉尘0.0mg;活性粉尘<10μg
活性粉尘的量以活性为4.0KNPU/g的标准物微克数(μg)表示。
实施例4
步骤1:将一份15kg粒状木薯淀粉芯(如实施例1和实施例3中应用的)引入50升Ldige混合器,在应用混合叶片混合下喷涂5.9kg液态SavinaseTM浓缩物(33KNPU/g),再按实施例1中所述那样干燥。
步骤2~4:将一份15kg的步骤1的干粒化物按实施例3的步骤2~4中所述那样处理。
步骤4后的最终粒化产物活性为10.0KNPU/g。
步骤1~4的产物粉尘形成性能(按实施例3中那样测定的)如下:
步骤1:总粉尘5.9mg;活性粉尘7330μg
步骤2:总粉尘0.0mg;活性粉尘78μg
步骤3:总粉尘2.6mg;活性粉尘<10μg
步骤4:总粉尘0.0mg;活性粉尘<10μg
实施例5
将一份15kg粒状木薯淀粉芯(如实施例1中应用的)引入50升Lodige混合器,在应用混合叶片混合下,利用置于该混合器上方通风管内的气动喷嘴喷涂5.9kg液态SavinaseTM浓缩物(18KNPU/g)。在该实施例中切碎机在喷涂期间未操作,但在喷涂后用该切碎机将喷过的粒化物处理3分钟。
所得粒化物(未涂的粒化物)的活性为6.28KNPU/g,该产物的粉尘形成性能(由Novo Nordisk磨耗法测定的)如下:
总粉尘0.5mg;活性粉尘483μg。
实施例6(应用差吸收性芯的对比实施例)
在应用nonpareil芯(糖-淀粉芯)的实验中,应用递增量的液态SavinaseTM浓缩物以与实施例3、4和5中所述相同的方法接连进行喷涂,当涂覆≥4%w/w(相对于该芯)的浓缩物后,观察到芯的外表面存在过剩的浓缩物,伴随发生颗粒的附聚。
这表明,所述nonpareil芯能吸收少于4%w/w的该SavinaseTM浓缩物。
实施例7
该实施例是一个对比实施例,其中用水性含酶介质喷涂差吸收性的nonpareil(糖-淀粉)芯,再在常规的流化床装置中干燥。
步骤1:将一份15kg nonpareil芯(粒径分布:99%的直径在425μm和600μm之间)引入Glatt WSG 5流化床装置,在流化条件下应用常规的表面喷涂技术(进气温度65℃;产物温度42℃;喷速100g/分;空气流量550m3/小时)喷涂由4.0kg液态SavinaseTM浓缩物(33KNPU/g)、225g20%KollidonTM VA64和50g TiO2构成的混合物。
然后如前述那样将产物进行流化床干燥。
步骤2~4:象实施例3的步骤2~4中那样接续处理步骤1的产物。
终产物的活性为6.2KNPU/g。
各种产物的粉尘形成性能(应用Novo Nordisk磨耗法测定步骤1和步骤2的产物,而应用Heubach法测定步骤3和步骤4的产物)如下:
步骤1:总粉尘9.1mg;活性粉尘56900μg
步骤2:总粉尘23.2mg;活性粉尘72400μg
步骤3:总粉尘12.3mg;活性粉尘6660μg
步骤4:总粉尘1.8mg;活性粉尘1570μg
从这些结果明显看出,不管涂布量是多少,基于差吸收性的nonpareil芯的各种产物都表现出不好的粉尘形成性能。
实施例8
将从下列物质制备的18kg粉状组合物:
4.5kg纤维状纤维素(ArbocelTM FTC200),
3.0kg高岭土(SpeswhiteTM,English China Clay)和
20.5kg细磨过的硫酸钠,用9.5kg 21%w/w糖粘合剂(GlucidexTM21D,得自Roquette Freres)的水溶液进行喷涂,再象US4,106,991的实施例1中所述那样造粒并干燥。
将该干粒化物筛分,在0.3~1.0mm间的大小级分被用作下述操作的酶吸收芯:
步骤1:将一份18.5kg的该芯材料转至50升Ldige混合器,在应用混合叶片混合下喷涂4.5kg液态SavinaseTM浓缩物。如实施例3中所述那样干燥该产物。
步骤2~4:将16kg步骤1的粒化物转至Glatt WSG5流化床装置,然后象上述那样干燥并象实施例3的步骤2~4中所述那样进一步处理。
终产物的活性为5.5KNPU/g。
粉尘形成性能(应用Novo Nordisk磨耗法测定步骤1和步骤2的产物,应用Heubach法测定步骤3和步骤4的产物)如下
步骤1:总粉尘11.6mg;活性粉尘29900μg
步骤2:总粉尘0.7mg;活性粉尘741μg
步骤3:总粉尘7.3mg;活性粉尘367μg
步骤4:总粉尘0.6mg;活性粉尘51μg
实施例9
步骤1:将一份15kg粒状木薯淀粉芯(如实施例1中应用的)引入50升装有多切碎机头的Ldige混合器,在应用混合叶片混合下喷涂5.0kg超滤过的SavinaseTM浓缩物(27.4KNPU/g)。将该浓缩物如实施例3中所述那样喷入芯中。
喷涂该SavinaseTM浓缩物之后,将所得粒状物质转至Glatt WSG15流化床装置并如前述那样干燥。
步骤2:干燥后,应用Wurster型流化床装置这样涂敷一薄层涂料(共2%w/w):将15kg步骤1的粒化物转至Glatt GRPC 15流化床装置(底部喷涂(bottom spray)),用溶于1.8升水中的150g甲基羟丙基纤维素(AqualonTM 8MP5C)和150g PEG4000的混合物进行喷涂。进气温度:55℃;产物温度:39.5℃。喷涂后,将该粒化物干燥5分钟然后冷却到30℃。
最终步骤2之后的活性是7.0KNPU/g。
各步骤后的粉尘含量:
步骤1:总粉尘0.2mg;活性粉尘263μg(Novo Nordisk磨耗法)
步骤2:总粉尘0.0mg;活性粉尘26μg(Heubach法)
这些很低的粉尘值清楚地表明了该酶/木薯芯粒化物的物理质量,因为只涂布了一薄层涂料。
实施例10
步骤1:将一份15kg木薯淀粉芯(如实施例1中应用的)引入GlattWSG5流化床装置,如实施例7的步骤1中所述那样,喷涂由下列物质构成的混合物:3.9kg液态SavinaseTM浓缩物(27.4KNPU/g)、200g20%w/w KollidonTMVA64的水溶液以及50g TiO2。
步骤2~4:如实施例3和7的步骤2~4中所述那样处理(涂布)该产物。
终产物的活性为5.9KNPU/g。
步骤1~4的产物的粉尘形成性能(如实施例3中那样测定的)如下:
步骤1:总粉尘0.0mg;活性粉尘474μg
步骤2:总粉尘1.7mg;活性粉尘1550μg
步骤3:总粉尘3.3mg;活性粉尘294μg
步骤4:总粉尘0.0mg;活性粉尘<10μg
该实施例表明,本发明方法中步骤(a)的接触/吸收可在流化床中进行,且仍产生表现出良好性能(例如低粉尘形成)的产物。反之,实施例7中所述类似的方法(见上文)中,应用差吸收性的non-pareil芯给出的产物表现出较高的粉尘含量。
除了吸收性能外,认为一种或多种下列因素的组合,例如所述吸收性芯的高物理强度、高球形度、光滑性和淀粉糊化度可引起这种产品(本发明的产品)中观察到的低粉尘值,该产品即在应用本发明含义中优选类型的芯的本实施例以及本文其它实施例(如实施例3)中例举的所得产品。
实施例11
本实施例中,液体酶被部分地吸收入木薯淀粉芯、部分地层叠在木薯淀粉芯上,整个操作在Hüttlin型流化仪中进行,作底部喷涂。
步骤1:将一份3.5kg木薯淀粉芯(如实施例1中应用的)引入5升Hüttlin Turbojet HKC-5-TJ型流化仪,对该芯喷涂1500g液态SavinaseTM浓缩物(27.4KNPU/g),通过缓慢地将进气温度从35℃升到65℃而保持产物温度在24℃。此时粒化物太湿而不能适当地流化,停止喷涂它并使产物温度升到40℃,该粒化物就变干。干燥后,进一步用1600g该SavinaseTM浓缩物喷涂该产物(进气温度为80℃;产物温度为44℃)。喷涂后,继续通入入口空气(80℃)达2分钟,然后冷却。
步骤2:随后在流化床装置中用38%w/w硫酸铵水溶液喷涂得自步骤1的已干燥的粒化物而涂上8%w/w硫酸铵(进气温度78℃;产物温度38℃)。
步骤3:采用实施例3的步骤3中所述组成将硫酸铵涂敷的粒化物进一步涂上18.5%w/w的涂层,应用的涂敷液组成与实施例3的步骤3中应用的相同。
步骤4:最后如实施例3步骤4中所述那样涂布表面涂层。
步骤4后的最终粒化物活性为18.5KNPU/g。
最终产物的粉尘形成性能(Heubach法):
总粉尘:0.4mg;活性粉尘:28μg
这些结果表明,从该方法(本发明范围内的方法)获得的该产品(本发明的产品,它不但有吸收入芯的酶,还有沉积在其外表面的酶)不仅具有很高的酶含量(因而具有很高活性),而且表现出很低的粉尘形成倾向。
不想受任何理论束缚,认为沉积在本发明含义中相关类型的吸收性芯外表面的酶的粘附力因该芯表面内吸收的酶的存在而增强,于是这种产物粉尘形成的倾向相应地减小了。
实施例12
步骤1:将一份15kg木薯淀粉芯(如实施例1中应用的)引入装有多切碎机头的50升Ldige混合器,在应用混合叶片混合下给芯喷涂总计5.0kg超滤过的、活性为145KLU/g的脂肪酶浓缩物。所述脂肪酶的制备描述于WO97/07202(见实施例3,其中的变体HL9)中。从置于该混合器上方通风管内的双流体喷嘴(空气雾化器喷嘴)喷涂该浓缩物。
当该脂肪酶浓缩物被喷涂后,将所得粒状物质转至Glatt WSG5流化床装置并象前述那样干燥。
步骤2:干燥后,将所得粒化物涂敷4.8%w/w PEG4000和12.5%w/w1∶1的二氧化钛和高岭土混合物,是应用US4,106,991(其中的实施例XX II)中所述方法,不同的是本文用PEG4000代替PEG1500。
步骤2之后的最终粒化产物的活性为32KLU/g。
实施例13
本实施例为了比较(见下述实施例14)描述了已知种类的含酶粒化物(即US4,106,991的粒化物)的制备。
步骤1:具有下列成分的粉状混合物:
2.25kg纤维状纤维素(ArbocelTM BFC200)
1.50kg高岭土(SpeswhiteTM,得自English China Clay)
1.00kg糖粘合剂(GlucidexTM 21D,Roquette Freres)
9.35kg磨细的硫酸钠用其中还溶有0.4kg糖粘合剂(GlucidexTM 21D)的3.0kg脂肪酶浓缩物(如实施例12中应用的)进行喷涂。如US4,106,991(其中的实施例I)中所述那样将该混合物造粒并干燥。
步骤2:将干粒化物筛分而得粒径范围为0.3~1.2mm的产物;随后如实施例12步骤2中所述那样涂敷该产物。
步骤2之后的最终粒化产物的活性为20KLU/g。
实施例14
本实施例比较了(i)本发明的含脂肪酶、基于淀粉的粒化物(上文实施例12),以及(ii)按US4,106,991生产的含脂肪酶粒化物(上文实施例13)在洗涤剂中的贮存稳定性。
A:在含过硼酸盐和TAED的洗涤剂中贮存
将分别按实施例12和实施例13生产的产物混入含有过硼酸钠和四乙酰基乙二胺(TAED)的常规的(非压实的)、沸石复配粉状洗涤剂(至酶含量约为1KLU/g洗涤剂)。在不同条件下贮存所得含酶洗涤剂组合物之后获得的分析结果(残余脂肪酶活性)给出于下表中:
(i)在35℃和55%相对湿度下于开口罐内贮存
粒化物 %残余活性(2次测定)
2周后 4周后实施例12 93-96 101-105实施例13 80-84 78-71
(ii)在37℃和70%相对湿度下于开口罐内贮存粒化物 %残余活性
3天后 7天后 14天后实施例12 100 90 91-87实施例13 84 68 49-43
B:在含过碳酸盐洗涤剂中贮存
将分别按实施例12和实施例13生产的产物混入含有过碳酸钠的、标准压实的欧洲型粉状洗涤剂(至酶含量约为1KLU/g洗涤剂)。在规定条件下贮存所得含酶洗涤剂组合物之后获得的分析结果(残余脂肪酶活性)给出于下表:
(i)在35℃和55%相对湿度下于开口罐内贮存
粒化物 %残余活性
2周后 4周后实施例12 97-100 92-89实施例13 58-52 36-35
实施例15
本实施例描述了与实施例8中生产的种类相似的吸收性芯(无酶)的制备,该吸收性芯含有大米淀粉而不是硫酸钠。
将一份14kg磨细了的、再循环的无酶芯(应用EP 0 304 331 B1的方法生产的,但未掺入酶)与所述粉状成分混合,其中该芯的组成相应于下列量下述粉状成分的混合物,即
3.15kg纤维状纤维素(ArbocelTM BFC200)
2.10kg高岭土(SpeswhiteTM,得自English China Clay)以及
12.75kg大米淀粉(得自Remy Industri)。
用14kg 21.4%w/w糖粘合剂(GlucidexTM 21D)水溶液喷涂该干混合物,再按EP 0 304 331 B1(其中的实施例1)中所述那样造粒并干燥。
将该干粒化物(芯)筛分而得粒径在0.3~1.1mm范围内的芯。
实施例16
步骤1:在Ldige混合器中按实施例3中所述那样用3.3kgSavinaseTM浓缩物(33KNPU/g)喷涂一份15kg得自实施例15的已筛分的芯。然后将湿粒化物在混合器中与300g高岭土(SpeswhiteTM)一起粉化。再将该产物转至MarumerizerTM(得自Fuji Paudal,Osaka,Japan)而进一步团成球状。基本上象实施例1中那样在Glatt WSG5流化床装置中干燥所得粒化物。
步骤2~4:将该干燥的粒化物如实施例3的步骤2~4中所述那样涂敷。
步骤4之后的最终粒化物活性为4.7KNPU/g。
各步骤之后的粉尘含量:
步骤1:总粉尘0.4mg;活性粉尘1000μg
(Novo Nordisk磨耗法)。
步骤2:总粉尘1.0mg;活性粉尘194μg
(Novo Nordisk磨耗法)。
步骤4:总粉尘0.6mg;活性粉尘<10μg
(Heubach法)。
实施例17
步骤1:在50升Ldige混合器中,在应用混合叶片混合下用5.0kgSavinaseTM浓缩物(33KNPU/g)喷涂一份15kg的木薯淀粉芯(实施例1中应用的那种),再象实施例3中所述那样干燥,不同的是喷嘴并不直接喷入切碎机而是从混合器上方的通风管喷射。
步骤2:将一份2.0kg已干燥的粒化物转至5升Ldige混合器,应用US4,106,991(其中的实施例XX II)中所述方法涂敷3%w/wPEG4000以及3%w/w 1∶1的二氧化钛和高岭土混合物。
最终粒化物具有10.8KNPU/g的活性,粉尘含量(按Heubach法)为0.2mg总粉尘和37μg活性粉尘。
实施例18
按上面实施例17中所述那样制备粒化物,不同的是最终涂料包括5%w/w PEG4000以及13%w/w 1∶1的二氧化钛和高岭土混合物。
产品粒化物活性为10.5KNPU/g,粉尘含量(Heubach)为0.4mg总粉尘和<10μg活性粉尘。
作为比较,应提及的是,按US4,106,991生产并具有本实施例中所述种类的涂层的粒化物呈现的粉尘值约为200~300μg活性粉尘。
实施例19
按US4,106,991的连续法生产具有下列组分的无酶芯(吸收性芯):
10.0%w/w纤维状纤维素(ArbocelTM BC200)
10.0%w/w高岭土(SpeswhiteTM)
10.0%w/w糖粘合剂(3∶2 GlucidexTM21D和山梨糖醇的混合物)
平衡:硫酸钠产生的芯不是充分紧实和充分呈球状的。按下列方法压实这些芯并作物理改善:
步骤1:按前面实施例12中所述方法用溶有2%w/w硫代硫酸钠的3.0kgSavinaseTM浓缩物(27.4KNPU/g)喷涂一份18kg的该(无酶)芯。
在混合该产物达2分钟(同时操作混合器叶片和切碎机)后,将该粒化物涂敷600g大米淀粉(Remy Industri),再进一步用500g SavinaseTM浓缩物喷涂。
又施用600g大米淀粉,接着又用500g SavinaseTM浓缩物喷涂。
最后,再将该粒化物先用600g大米淀粉,然后用360g高岭土涂敷。
在最后的两个操作中,启动混合器叶片和切碎机以便压实该粒化物并使颗粒表面变光滑。
接着如实施例1中所述那样干燥该粒化物。
步骤2~3:按实施例3的步骤2~3中所述那样涂敷一份15kg已干燥的粒化物。
步骤3后最终产物的活性为6.4KNPU/g。
粉尘含量(Heubach):总粉尘0.1mg;活性粉尘32μg。
本实施例阐明了,按US4,106,991的方法制备的基于“空白对照剂”芯(无酶芯)的含酶颗粒(本发明的颗粒)粉尘形成倾向可通过淀粉涂布接着施用/吸收酶更进一步降低。
实施例20木薯淀粉芯的球形度
本实施例给出球形度测定(通过显微术)结果,以最大直径(dmax)和最小直径(dmin)间的比表示,从由Agro Comercial,Brazil提供的一批芯(大小分布:97%在0.5mm和1.0mm之间)中随机抽取20颗木薯淀粉芯进行测定。
结果如下:
颗粒号 dmax/dmin
1 1.056
2 1.029
3 1.086
4 1.025
5 1.188
6 1.852
7 1.117
8 1.032
9 1.025
10 1.056
11 1.056
12 1.081
13 1.104
14 1.244
15 1.091
16 1.027
17 1.031
18 1.030
19 1.063
20 1.056
dmax/dmin平均值: 1.112
如果忽略明显偏离其它颗粒的第6号颗粒,则其余19颗颗粒的平均球形度是1.074。
本实施例阐明了,属于本发明含义中优选种类的芯的吸收性芯(即木薯淀粉芯)可以高球形度形式获得。显微术对这些芯的检查也揭示了高表面光滑度。
实施例21.糊化度的测定
糊化度是通过差示扫描量热法(DSC)对糊化焓降低的测定而估测的。
将大约200mg的(a)天然木薯淀粉(淀粉粒)和(b)粉状(破碎的)淀粉芯分别称入各个DSC盘与去离子水调成25%w/w(干物质)浆。将样品密封并在1℃/min下从45℃加热到95℃。将空气作参比。应用得自HartScientific的差示扫描量热仪进行测定。
按A.Xu和P.A.Seib〔
谷物化学(
Cereal Chem.)
70(4)(1993)pp.463-70〕的方法这样计算糊化度:
ΔH芯/ΔH天然淀粉,其中ΔH芯是该(粉状)芯的吸热焓变,而ΔH天 然淀粉则是天然淀粉的吸热焓变。
下表给出不同来源的不同批木薯淀粉芯(基本上是球形芯)的结果,以及估测的各种芯的吸水能力(例如象本文实施例1中那样估测的):-芯供应商 %糊化度 吸水能力(%w/w)-Cia.Lorenz 43 ≥33(Brazil)Agro Comercial(Brazil)(1) 53 ≥33Agro Comercial(Brazil)(2) 42 ≥33Sukhjit(India) 92 <20
实施例22.试验生产规模上制备SavinaseTM/木薯淀粉芯
将327kg木薯淀粉芯(得自Cia.Lorenz,Brazil)装入配有5个切碎机的1200升Ldige混合器;但是,在下列操作中切碎机未启动:
在用混合叶片混合下,以大约10kg/分钟的加料速度,应用置于混合器上部“通风筒”中的2个喷嘴将总计81kg SavinaseTM浓缩物(活性37.15KNPU/g;干物质含量28.4%w/w)喷到芯上。停止喷射后继续混合5分钟。将未显示粘性或附聚倾向的产物转至干燥流化床。应用约1.5m/秒的空气流速和60℃的初始进气温度干燥10分钟后,将进气温度升高到75℃又干燥10分钟,然后升到95℃。总干燥时间为32分钟,当该床/产物温度达80℃时将流化床倒空。
然后在三层筛上筛分该干燥了的产物(粗粒化物),将尺寸约为300~1100μm的级分于600升Ldige混合器中进行如下涂敷:
将318kg粗粒化物引入该混合器。在混合下加入3.8%w/w(相对于粗粒化物)的PEG4000,使该混合器运转1分钟。然后加入12.5%w/w(相对于该粗粒化物)由38.5%w/w二氧化钛和61.5%w/w高岭土构成的粉状混合物。再操作该混合器达30秒后,加入0.5%w/w的PEG4000,又运转该混合器1分钟,接着加入3%w/w(相对于该粗粒化物)上述TiO2/高岭土粉状混合物。然后又将该混合器操作2分钟。
将所得涂敷了的产物转至进气温度范围为15℃~20℃的冷却流化床(空气流速大约1.5m/s.),在其中冷却31分钟。最终产物温度为26℃。
然后在两层筛上筛分已冷却的产物,最后装入袋中。检查产物样品的蛋白酶(SavinaseTM)活性以及粉尘含量,得下列结果:
活性:6.56 KNPU/g
粉尘(Heubach):总粉尘:0.1mg;活性粉尘:43μg。
实施例23:SavinaseTM/木薯淀粉粒化物在织物(洗衣)洗涤中的效能
本实施例中,将涂敷了的本发明SavinaseTM/木薯淀粉粒化物(基本上按实施例3中那样制备并涂敷的(见上文),但含更高含量的SavinaseTM)的洗涤效能与标准的、US4,106,991类型的可商购SavinaseTM粒化物(涂敷的粒化物)(SavinaseTM6.0T,得自Novo Nordisk A/S,Denmark)的效能作了对比。
测试了该SavinaseTM/木薯粒化物(活性为6.81KNPU/g)和SavinaseTM 6.0T粒化物(活性约为6.5KNPU/g)分别与洗涤剂组合物〔得自中国的Red OMOTM(密实粉末)〕结合后在相当于日本洗衣条件(见下文)的条件下从标准试验小布样(EMPA117,得自Center for TestMaterials,Holland;白棉/聚酯,用血、奶和炭黑沾污)除去污迹的效能。
提供的Red OMOTM含有酶,为了进行本文所述试验,应用前可这样将该酶内含物灭活(给出的量是每次洗涤用量):将35g商品Red OMOTM密实粉末溶于/分散于400ml去离子水并在室温下搅拌10分钟。然后在应用于洗涤过程之前将该溶液/分散液在85℃下的微波炉中加热5分钟。
将每小块布样连在黑色T恤(100%棉)上,于是T恤与小布样一起洗涤以检查洗涤后其上是否能检测到任何结实的残余物(特别是木薯淀粉)。每次洗涤时,同时洗涤9件小布样/T恤。为了对比,未在洗涤介质中加入任何酶(含酶粒化物)而进行相应的洗涤。
洗涤条件归纳如下:
洗涤剂: Red OMOTM(应用前灭活酶内含物)
洗涤剂用量: 1.0g/l
pH: 10.2~10.3(未调节)
洗涤时间: 12分钟
洗涤温度: 20℃
水硬度: 6°dH Ca2+/Mg2+(2∶1)
洗液体积: 35升
洗涤介质中的酶浓度: 10nM
洗衣机: Japanese
试验织物: EMPA117小布样+黑色T恤(每次洗涤9件
小布样/T恤)
该准确硬度的水是通过将氯化钙和氯化镁加入去离子水而配制的。
试验小布样的反射/发射比R是应用Elrepho 2000光度计(光栅10mm,无UV)测定的。
结果总结于下表,它给出每次洗涤中9件小布样/T恤的平均R值:受试验的粒化物 平均R值SavinaseTM/木薯淀粉 60.8SavinaseTM 6.0T 62.0无(无酶) 47.5
各情况下在黑色T恤布料上都看不到任何残余物。
该结果表明,本发明的涂敷了的SavinaseTM/木薯淀粉粒化物洗涤效能可与商品SavinaseTM 6.0T粒化物媲美。
实施例24.芯的抗碎强度
本实施例中,应用示于图1(见下文)中的装置按前文描述的方法测定各种/各部分木薯淀粉芯(得自巴西供应商)和non-pareil芯对压榨的抗性。
给出于下表的抗碎强度(以g/mm2表示)是从所述一批该种类/部分芯中随机抽取的20颗颗粒(芯)的平均值。还给出标准偏差(SD)。芯类别 大小范围 强度 SD(供应商) (μm) (g/mm2) (g/mm2)木薯淀粉 500-600 1010 770(Agro Comercial)木薯淀粉 500-600 1495 619(Cia.Lorenz)木薯淀粉 600-710 1038 816(Agro Comercial)木薯淀粉 600-710 1662 754(Cia.Lorenz)木薯淀粉 710-850 1104 657(Agro Comercial)木薯淀粉 710-850 1600 565(Cia.Lorenz)Non-pareil 500-600 93 88(Crompton&Knowles)Non-pareil 500-600 203 96(NP Pharma)实施例25
本实施例描述了分别基于马铃薯淀粉芯和玉米淀粉芯的含SavinaseTM的涂敷粒化物(本发明的粒化物)的制备。
A.从马铃薯淀粉芯制备
步骤1:将具有良好吸收性能、粒径范围为1.8~3.2mm的一份15kg马铃薯淀粉芯(得自TIPIAK,France)引入50升Lodige混合器,在以150rpm混合和未开启切碎机下,应用二流体喷嘴喷涂5.0kg超滤过的SavinaseTM浓缩物(27.4KNPU/g)。
然后将产物转至Glatt WSG5流化床并如前述那样干燥。
步骤2:象实施例12(见上文)中所述那样将该干燥了的粒化物涂敷4.8%w/w PEG4000以及12.5%w/w 1∶1的二氧化钛和高岭土混合物。
涂布后的活性粉尘含量(Heubach法)为35μg。
B:从玉米淀粉芯制备:象上面步骤1关于马铃薯淀粉芯那样,用SavinaseTM浓缩物处理粒径范围为850~2000μm的一份15kg玉米淀粉芯(得自Santos,India),接着干燥。
实施例26
本实施例描述了涂敷的肌醇六磷酸酶/木薯淀粉粒化物的制备。粒化物1。
步骤1:将一份3.5kg的木薯淀粉芯(得自Agro Comercial,Brazil;主要部分的大小范围为300~1000μm)引入20升Lodige混合器。在该装置的最高混合速度下向芯喷涂通过将肌醇六磷酸酶浓缩物(得自NovoNordisk A/S)稀释成10700 FYT/G的浓度而配制的肌醇六磷酸酶溶液。未开启切碎机。
步骤2:将得自步骤1的产物转至流化床并在60℃下干燥。
步骤3:将已干燥的粗粒化物在Lodige混合器中约80℃下用熔化了的氢化棕榈油和Talc 5/0 M-10涂敷;按下列份量涂布成交替相间的涂层(重量百分数相对于粗粒化物):
1)5%w/w氢化棕桐油;
2)12.5%w/w滑石;
3)1.0%w/w氢化棕榈油;
4)5.0%w/w滑石;
5)2.0%w/w氢化棕榈油;
6)5.0w/w滑石。
粒化物2。
步骤1~3:象上面关于粒化物1的那样,只是应用于步骤1中喷涂的肌醇六磷酸酶溶液含有65g溶解的NeosorbTM 70/70。
粒化物3。
步骤1~3:象上面关于粒化物1的那样,只是应用于步骤1中喷涂的肌醇六磷酸酶溶液含有17.5g溶解的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP K30)。
粒化物4。
步骤1和2:象关于粒化物2的那样。
步骤3:省去
因此,粒化物4相应于粒化物2,但缺少涂层。
实施例27
本实施例中,检查如实施例26中制备的涂敷了的肌醇六磷酸酶/木薯淀粉粒化物的肌醇六磷酸酶活性保持力,并与可商购的含肌醇六磷酸酶粒化物(涂敷了的粒化物;Phytase Novo CT,得自Novo NordiskA/S,Denmar的的进行比较。
在Bioteknologisk Institut,Kolding,Denmark,在所谓的造粒试验中按标准方法比较如实施例26中制备的粒化物1~4与Phytase Novo CT粒化物。在该试验中,将各种粒化物与商品化小猪饲料组合物混合,再在热和高湿度条件下将该混合物调制成丸。在95℃下,对三种涂敷的基于木薯的粒化物(粒化物1~3)测定的肌醇六磷酸酶活性保持力很相似(79~84%活性保持力),而商品化(涂敷的)粒化物的活性保持力则是61%。未涂敷的基于木薯的粒化物在相同条件下的活性保持力约为52%。
因此,本实施例阐明了作为基于淀粉基芯的颗粒的酶调和物可导致对其中的酶内含物很强的保护作用以抗苛刻条件下的失活,而且,所述种类的颗粒很适合于生产需要热处理(例如为保证除去致病性有机体)的饲料组合物。
实施例28
还测试了在37.5℃的乙酸盐缓冲液中搅拌下应用于实施例27中的粒化物(四种基于木薯的粒化物和Phytase Novo CT粒化物)“分解”的容易性(伴随释放肌醇六磷酸酶活性),开始时缓冲液的肌醇六磷酸酶活性(作为粒化物)为50FYT/ml。60分钟后,所有四种基于木薯的粒化物表现出高于90%释放肌醇六磷酸酶活性,而商品化粒化物表现出稍高于60%释放肌醇六磷酸酶活性。
因此本实施例阐明了,例如所述种类的基于淀粉的颗粒在相似于动物消化系统中的条件下其酶内含物可利用率方面具有很有益的性能。
Claims (32)
1.生产含酶颗粒的方法,它包括:
a)将能吸收基于芯的重量至少5%w/w水的芯与含有呈溶解形式和/或分散形式的酶的液体介质接触,以便使该芯吸收该液体,而应用的该液体量应使该芯基本上不发生附聚,于是形成该颗粒,以及
b)干燥该含酶颗粒。
2.权利要求1的方法,其中该含酶颗粒包括一层涂层。
3.权利要求1的方法,其中该含酶颗粒包括两层或多层涂层。
4.权利要求2的方法,其中该涂层占成品颗粒的0.5~50wt%。
5.权利要求2~4任一项的方法,其中该涂层包括聚乙二醇;乙氧基化脂肪族醇;脂肪族醇;脂肪酸;脂肪酸的单酸、二酸或三酸甘油酯;多元醇;糖;糖醇;脲;或邻苯二甲酸酯。
6.权利要求1~5任一项的方法,其中该芯包括硅酸盐,它能吸收基于该芯的重量至少5%w/w的水。
7.权利要求5的方法,其中该硅酸盐选自皂土、漂白土和硅藻土。
8.权利要求1~7任一项的方法,其中该芯具有的物理强度可使
i)开始压碎该芯所需的力和
ii)该芯直径的平方之间的比值大于400g/mm2。
9.权利要求1~8任一项的方法,其中该芯包括淀粉和/或改性淀粉。
10.权利要求9的方法,其中该芯包括至少75wt%的淀粉和/或改性淀粉。
11.权利要求9或10的方法,其中该淀粉选自:木薯淀粉、西谷椰子淀粉、马铃薯淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、糯性玉米淀粉、小麦淀粉、高粱淀粉、大麦淀粉、甘薯淀粉和薯蓣淀粉。
12.权利要求9~11任一项的方法,其中该芯包括部分糊化的淀粉。
13.权利要求9~12任一项的方法,其中该淀粉的糊化度大于0.5%。
14.权利要求9~12任一项的方法,其中该淀粉的糊化度在10~60%范围内。
15.权利要求1~14任一项的方法,其中该颗粒的大小范围约为50~4000μm。
16.权利要求1~15任一项的方法,其中该液体介质还含有表面活性剂。
17.权利要求1~16任一项的方法,其中进行该接触以便在开始干燥之前使该芯完全吸收该液体介质。
18.权利要求1~17任一项的方法,其中该接触是通过在混合器中混合而进行的。
19.权利要求1~17任一项的方法,其中该接触是在流化该芯的同时进行的。
20.权利要求19的方法,其中该接触是通过将该液体从一个或多个喷嘴喷到该芯上而进行的。
21.权利要求1~20任一项的方法,其中干燥是在混合器中完成的。
22.权利要求1~20任一项的方法,其中干燥是在流化该芯的同时进行的。
23.权利要求1~22任一项的方法,其中该酶选自蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶和氧化还原酶。
24.通过权利要求1的方法生产的含酶颗粒。
25.动物饲料组合物,它包含权利要求24的含酶颗粒。
26.用于焙烤的组合物,它包含权利要求24的含酶颗粒。
27.用于织物处理的组合物,它包含权利要求24的含酶颗粒。
28.洗涤剂组合物,它包含权利要求24的含酶颗粒。
29.权利要求25的动物饲料组合物,其中该酶选自细菌α淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶和肌醇六磷酸酶。
30.权利要求26的用于焙烤的组合物,其中该酶选自淀粉葡糖苷酶、细菌α淀粉酶、真菌α淀粉酶、生麦淀粉酶、葡糖氧化酶、蛋白酶和戊聚糖酶。
31.权利要求27的用于织物处理的组合物,其中该酶选自纤维素酶和细菌α淀粉酶。
32.权利要求28的洗涤剂组合物,其中该酶选自蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶和氧化还原酶。
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