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CN113056287A - 缀合的化学降解诱导剂及使用方法 - Google Patents

缀合的化学降解诱导剂及使用方法 Download PDF

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CN113056287A
CN113056287A CN201980074698.2A CN201980074698A CN113056287A CN 113056287 A CN113056287 A CN 113056287A CN 201980074698 A CN201980074698 A CN 201980074698A CN 113056287 A CN113056287 A CN 113056287A
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CN
China
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seq
antibody
amino acid
hvr
acid sequence
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Pending
Application number
CN201980074698.2A
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P·德拉格维奇
T·皮罗
R·A·布雷克
I·沃茨
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F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
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Publication date
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Abstract

本文所述的主题涉及抗体‑CIDE缀合物(Ab‑CIDE)、包含它们的药物组合物以及它们在治疗靶向蛋白质降解有益的疾病和症状中的用途。

Description

缀合的化学降解诱导剂及使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年10月24日提交的美国临时专利申请第62/749,812号的优先权和权益，该临时专利申请的全部内容以引用方式并入本文。
对通过EFS-WEB作为TEXT文件提交的序列表的引用
序列表的正式副本通过EFS-Web以ASCII格式的序列表的形式通过电子方式提交，其文件名为515668_SEQLIST.TXT，创建于2018年10月24日，大小为274千字节，与说明书同时提交。该ASCII格式的文档中包含的序列表是说明书的一部分，其全部内容以引用的方式并入本文。
技术领域
本文所述的主题总体上涉及包含抗体-蛋白质水解-靶向嵌合分子的降解剂缀合物，其可用于促进靶蛋白质的细胞内降解。
背景技术
细胞维持和正常功能需要细胞蛋白质的受控降解。例如，调节蛋白质的降解会触发细胞周期中的事件，例如DNA复制，染色体分离等。因此，这种蛋白质降解会影响细胞的增殖、分化和死亡。
尽管蛋白质抑制剂可以阻止或降低细胞中的蛋白质活性，但细胞中蛋白质降解也可以降低活性或完全去除靶蛋白质。因此，利用细胞的蛋白质降解途径可以提供减少或去除蛋白质活性的手段。细胞的主要降解途径中的一者已知是泛素-蛋白酶体系统。在该系统中，通过泛素化蛋白质来标记，蛋白质被蛋白酶体降解。蛋白质的泛素化是通过与蛋白质结合并将泛素分子添加到蛋白质的E3泛素连接酶完成的。E3泛素连接酶是包括E1和E2泛素连接酶的途径的一部分，这使E3泛素连接酶可将泛素添加到蛋白质中。
为了利用该降解途径，分子构建体将E3泛素连接酶与待靶向降解的蛋白质和靶向抗体结合在一起。为了促进蛋白酶体降解蛋白质，分子构建体包括与E3泛素连接酶结合的基团和与待降解的蛋白质靶结合的基团。这些基团通常与连接基连接。该分子构建体可以使E3泛素连接酶与蛋白质接近，从而使其泛素化并标记用于降解。然而，分子构建体的相对大的尺寸对于靶向递送可能是成问题的。
本领域中持续需要将此类分子构建体增强和靶向递送至包含蛋白质靶的细胞。本文描述的主题解决了本领域中的这个和其他缺点。
发明内容
在一方面，本文所述的主题涉及共价连接的Ab-CIDE(PAC)，其中连接Ab-CIDE的组分的共价键的位置：Ab、L1(连接基1)、L2(连接基2)，蛋白质结合基团和E3连接酶结合基团可以根据需要进行定制，以制备具有所需性质的Ab-CIDE，例如体内药代动力学、稳定性和溶解性。
在一方面，本文所述的主题涉及具有下式的缀合的化学降解诱导剂(“CIDE”)：
Ab―(L1―D)p，
其中，
D为具有E3LB―L2―PB结构的CIDE；
E3LB共价结合L2，其中所述E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为vonHippel-Lindau(VHL)；
L2为与E3LB和PB共价结合的连接基；
PB是共价结合L2的蛋白质结合基团，所述PB是结合BRD4或ERα的基团，包括其所有变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体，
Ab为与L1共价结合的抗体；
L1是与Ab和D共价结合的连接基；并且
p的值为约1至约8。
本文描述的主题的另一方面是一种药物组合物，其包含Ab-CIDE和一种或多种药用赋形剂。
本文描述的主题的另一方面是Ab-CIDE在通过向受试者施用包含Ab-CIDE的药物组合物来治疗症状和疾病的方法中的用途。
本文描述的主题的另一方面是一种制备Ab-CIDE的方法。
本文描述的主题的另一方面是一种制品，其包括包含Ab-CIDE的药物组合物、容器和指示该药物组合物可用于治疗疾病或症状的包装说明书或标签页。
附图说明
图1显示了用ERα靶向Ab-CIDE在MCF7 neo/HER2细胞中的ERα降解百分数活性。红色曲线(最下方的曲线)＝7C2-HER2-ms-L1EC10，蓝色曲线(最上方的曲线)＝CD22-ms-L1EC10。
图2显示了用ERα靶向Ab-CIDE在MCF7 neo/HER2细胞中的ERα降解百分数活性。红色曲线(最下方的曲线)＝7C2-HER2-ms-L1EC11，蓝色曲线(最上方的曲线)＝CD22-ms-L1EC11。
图3显示了用ERα靶向Ab-CIDE在MCF7 neo/HER2细胞中的ERα降解百分数活性。红色曲线(最下方的曲线)＝7C2-HER2-ms-L1EC12，蓝色曲线(最上方的曲线)＝CD22-ms-L1EC12。
图4描绘了降解测定中的降解测定对照。红色曲线(最上方的曲线)＝仅Ab缓冲液，运行#1，橙色曲线(最上方的曲线，重叠的红色曲线)＝仅Ab缓冲液，运行#2，蓝色曲线(中间曲线)＝7C2-HER2 mAb(高DAR[LC:K149C HC:L174C HC:Y373C])；运行#1，绿色曲线(最下方的曲线)＝7C2-HER2 mAb(高DAR[LC:K149C HC:L174C HC:Y373C])；运行#2。
图5描绘了以指示的剂量单次IV施用列出的缀合物后，MCF7neo/HER2异种移植物中ERα蛋白质水平的体内降低。时间点＝4天。每个点代表来自单个动物的MCF7 neo/HER2肿瘤的分析。组01＝媒介；组02＝CD22-ms-L1EC10，10mg/kg；组03＝7C2-HER2-ms-L1EC10，5mg/kg；组04＝7C2-HER2-ms-L1EC10，10mg/kg；组05＝7C2-HER2-ms-L1EC10，25mg/kg；组06＝7C2-HER2-mAb，10mg/kg。
图6a和6b描绘了Ab-CIDE和相应的未缀合的CIDE的药代动力学性质。
图7描述了抗CLL1-CIDE缀合物在EOL-1肿瘤模型中的体内剂量依赖性功效。
图8描述了相对于未缀合的CIDE，Ab-CIDE(PAC)的体内功效。
图9描绘了用未缀合的化合物2、6、7或9(下排，时间点＝4h)或缀合物HER2-12、CD22-12或HER2-13(上排，时间点＝72h)处理的MCF7-neo/HER2细胞中ERα水平的体外降低。还描绘了未缀合的HER2-mAb的活性(上排，最左侧)。对于测试的缀合物，描绘的浓度是指实验中存在的相应降解剂的浓度(即400、40、4、0.4nM降解剂浓度分别对应于10、1、0.1和0.01μg/mL DAR6缀合物的浓度)。
具体实施方式
本文公开的是抗体-化学降解诱导剂(“CIDE”)缀合物，其在本文中称为Ab-CIDE或PAC，其可用于靶向蛋白质降解以及相关疾病和病症的治疗。本文所述的主题利用抗体靶向将CIDE引导至靶细胞或组织。如本文所述，已显示将抗体连接至CIDE以形成Ab-CIDE可将CIDE递送至靶细胞或组织。如本文所示，例如在实施例中，表达抗原的细胞可以被抗原特异性的Ab-CIDE靶向，由此Ab-CIDE的CIDE部分被细胞内递送至靶细胞。包含针对未在细胞上发现的抗原的抗体的CIDE不会导致CIDE向细胞的大量细胞内递送。
因此，本文所述的主题涉及导致靶蛋白质泛素化和随后蛋白质降解的Ab-CIDE组合物。该组合物包含与连接基(L1)共价连接的抗体，该抗体在与CIDE的任何可用连接点共价连接，其中CIDE包含E3泛素连接酶结合(E3LB)部分和蛋白质结合部分(PB)，其中所述E3LB部分识别E3泛素连接酶蛋白质(其是VHL或XIAP)，所述蛋白质结合部分识别靶蛋白质(其是Erα或BRD4)。本文所述的主题可用于调节蛋白质活性，以及治疗与蛋白质活性有关的疾病和症状。
现在将在下文中更全面地描述本发明所公开的主题。然而，对于当前公开的主题所涉及的本领域技术人员而言，在受益于上文描述中所提出的教导的情况下，将想到本文阐述的当前公开的主题的许多变型例(modification)和其他实施例。因此，应当理解的是，当前公开的主题不限于所公开的特定实施例，并且变型例和其他实施例旨在包括在所附权利要求的范围内。换言之，本文所描述的主题涵盖所有备选方案、变型方案和等同方案。如果所合并文献、专利和类似材料中的一者或多者与本申请不同或矛盾，包括但不限于定义的术语、术语用法、描述的技术或类似内容，以本申请为准。除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语所具有的含义与本领域普通技术人员通常理解的含义相同。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以其全文合并于本文。
I.定义
术语“CIDE”是指通常具有如下三个组分的蛋白质水解靶向嵌合分子：E3泛素连接酶结合基团(E3LB)、连接基L2和蛋白质结合基团(PB)。
术语“残基”、“部分”或“基团”是指与另一组分共价结合或连接的组分。举例而言，化合物的残基将使该化合物的一个或多个原子(例如氢或羟基)被共价键取代，从而使该残基与CIDE、L1-CIDE或Ab-CIDE的另一组分结合。例如，“CIDE的残基”是指与一个或多个基团例如连接基L2共价连接的CIDE，其本身可以任选地进一步与抗体连接。
术语“共价结合”或“共价连接”是指通过共享一对或多对电子而形成的化学键。
如本文所用，术语“拟肽”或PM是指非肽化学部分。肽是通过肽(酰胺)键连接的氨基酸单体的短链，所述肽键即当一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基反应时形成的共价化学键。最短的肽是二肽(由通过单个肽键连接的2个氨基酸组成)，然后是三肽、四肽等。拟肽化学部分包括非氨基酸化学部分。拟肽化学部分还可包含被一个或多个由非氨基酸化学单元分隔的一个或多个氨基酸。拟肽化学部分在其化学结构的任何部分中不包含两个或更多个通过肽键连接的相邻氨基酸。
本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且特别涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性即可(Miller等人(2003)Jour.of Immunology 170:4854-4861)。抗体可以是鼠、人类、人源化、嵌合或源自其他物种的抗体。抗体是由免疫系统产生的能够识别并结合特定抗原的蛋白质。(Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immuno Biology,第5版，Garland Publishing,New York)。靶抗原通常具有多个结合位点，也称为表位，被多个抗体上的CDR(互补决定区)识别。与不同表位特异性结合的每种抗体具有不同的结构。因此，一种抗原可以具有多于一种的相应抗体。抗体包括全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分(即含有免疫特异性结合目标靶标抗原或其一部分的抗原结合位点的分子)，此类靶标包括但不限于癌细胞或产生与自身免疫疾病相关的自身免疫抗体的细胞。本文公开的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)，类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或免疫球蛋白分子的亚类。免疫球蛋白可以源自任何物种。然而，在一方面，免疫球蛋白是人、鼠或兔来源的。
如本文所用，术语“抗体片段”包括全长抗体的一部分，通常是其抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双体抗体；线性抗体；微型抗体(Olafsen等人(2004)Protein Eng.Design&Sel.17(4):315-323)，由Fab表达文库产生的片段、抗独特型(抗Id)抗体、CDR(互补决定区)和上述中任一项(其免疫特异性地结合癌症细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)的表位结合片段、单链抗体分子；由抗体片段形成的多特异性抗体。
本文所使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，例如，除了可能存在的少量天然存在的突变，该抗体群包含的单个抗体是相同的。单克隆抗体对单个抗原位点具有高特异性。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除特异性以外，单克隆抗体的优势还在于它们可以在不受其他抗体污染的情况下合成。修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本文所述主题使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等人(1975)Nature,256:495描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法制备(参见例如：US 4816567、US5807715)。“单克隆抗体”还可使用例如Clackson等人(1991)Nature,352:624-628；Marks等人(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597所述的技术从噬菌体抗体文库中分离得到。
本文中的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列以及这些抗体的片段相同或同源，只要它们表现出所需的生物学活性即可(US 4816567和Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855)。本文中的目标嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其包含来源于非人灵长类动物(例如，旧大陆猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列以及人恒定区序列。
术语“嵌合”抗体是指这样的抗体，在所述抗体中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同的来源或物种。
抗体的“类别”是指抗体的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1，以及IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。
如本文所用，术语“完整抗体”是包含VL和VH结构域以及轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。完整抗体可具有一种或多种“效应子功能”，其是指可归因于抗体的Fc恒定区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物学活性。抗体效应子功能的例子包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；以及下调细胞表面受体，例如B细胞受体和BCR。
如本文所用，术语“Fc区”意指免疫球蛋白重链的C末端区，该C末端区包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施例，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文另外规定，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，EU编号系统也称为EU索引，如在Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
如本文所用，术语“框架”或“FR”是指除高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由以下四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常在VH(或VL)中以如下序列出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”、“完整抗体”及“全抗体”在本文中可互换地用于指代具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
“人抗体”是这样的抗体，该抗体具有的氨基酸序列对应于由人或人细胞产生的抗体的氨基酸序列，或来源于利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人源的抗体的氨基酸序列。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人源化”抗体是指这样的嵌合抗体，其包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些实施例中，人源化抗体将基本上包含所有的至少一个，通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有HVR(例如CDR)对应于非人抗体的HVR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。“人源化形式”的抗体，例如，非人抗体，是指已经进行过人源化的抗体。
“分离的抗体”为已从其自然环境的组分中分离的抗体。在一些实施例中，通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)测定，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评定抗体纯度的方法的综述，请参见例如Flatman等人J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“分离的核酸”是指已从其天然环境的组分中分开的核酸分子。分离的核酸包括这样的核酸分子，其包含在通常含有所述核酸分子的细胞中，但所述核酸分子存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置处。
“编码抗体的分离的核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或单独的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。
“裸抗体”是指不缀合至异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记的抗体。裸抗体可呈递在药物制剂中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由经二硫键合的两条相同轻链和两条相同重链组成。从N末端到C末端，每条重链具有可变区(VH)(也称为可变重链结构域或重链可变结构域)，后接三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，自N-末端至C-末端，各轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，继之以恒定轻链(CL)结构域。抗体的轻链基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以归属于两种类型中的一种，所述两种类型称为卡帕(κ)和兰姆达(λ)。
相对于参照多肽序列的“氨基酸序列一致性百分比(％)”被定义为在比对候选序列与参考多肽序列并引入空位(如有必要)以实现最大的序列一致性百分比之后，并且在不考虑将任何保守置换作为序列一致性的组成部分的情况下，候选序列中的氨基酸残基与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比。用于确定氨基酸序列一致性百分比的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，为了本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成氨基酸序列一致性％的值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经与用户文档一起提交到U.S.CopyrightOffice,Washington D.C.,20559，在那里以美国版权登记号TXU510087注册。ALIGN-2程序可从Genentech,Inc.,South San Francisco,California公开获得，或者可以从所述源代码编译。ALIGN-2程序应经编译以在UNIX操作系统上使用，所述UNIX操作系统包括数字UNIXV4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置并且不变。
在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与给定氨基酸序列B的氨基酸序列一致性％(其可以可替代地表达为给定氨基酸序列A具有或包含与给定氨基酸序列B的某一氨基酸序列一致性％)计算如下：
100乘以分数X/Y
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序对A和B的比对中评分为相同匹配的氨基酸残基的数目，而其中Y是B中氨基酸残基的总数。应当理解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列一致性％将不等于B与A的氨基酸序列一致性％。除非另外特别指明，否则本文所使用的所有氨基酸序列一致性％的值是如前一段中所述使用ALIGN-2计算机程序获得的。
根据其重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将完整抗体分为不同的“类别”。存在五大类完整免疫球蛋白抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中的若干可以进一步分为“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类别的抗体的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同种类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。Ig形式包括铰链修饰形式或无铰链形式(Roux等人(1998)J.Immunol.161:4083-4090；Lund等人(2000)Eur.J.Biochem.267:7246-7256；US 2005/0048572；US 2004/0229310)。
如本文所用，术语“人共有框架”是指这样的框架，其表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基。一般而言，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自于可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteinsof Immunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242，Bethesda MD(1991)，第1-3卷中所述的亚组。在一个实施例中，对于VL，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组κI。在一个实施例中，对于VH，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组III。
出于本文目的的“受体人框架”是这样的框架，其包含来源于如下所定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与所述人免疫球蛋白框架或人共有框架相同的氨基酸序列，或者其可以包含氨基酸序列变化。在一些实施例中，氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少，或2个或更少。在一些实施例中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
如本文所用，术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见例如Kindt等人，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007)。)单个VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可分别使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域来进行分离，以筛选互补VL或VH结构域的文库。参见，例如，Portolano等人J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用，术语“高变区”或“HVR”是指在序列上高变及/或形成结构上限定的环(“高变环”)的抗体可变结构域区域中的任一个。通常，天然四链抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基具有最高的序列可变性和/或参与抗原识别。示例性高变环发生在氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)处。(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)。)示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)发生在L1的氨基酸残基24-34、L2的氨基酸残基50-56、L3的氨基酸残基89-97、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-65，以及H3的氨基酸残基95-102处。(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991)。)除VH中的CDR1外，CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其是与抗原接触的残基。SDR包含在被称为缩短CDR或a-CDR的CDR区域内。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)发生在L1的氨基酸残基31-34、L2的氨基酸残基50-55、L3的氨基酸残基89-96、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-58，以及H3的氨基酸残基95-102处。(参见Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)。)除非另外指明，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如，FR残基)在本文中根据Kabat等人，出处同上编号。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区、随着抗体同种型的变化而变化的那些生物活性。抗体效应子功能的示例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
术语“表位”是指抗体结合的抗原分子上的特定位点。
“表位4D5”或“4D5表位”或“4D5”是HER2的细胞外结构域中抗体4D5(ATCC CRL10463)和曲妥珠单抗结合的区域。该表位靠近HER2的跨膜结构域，并且在HER2的结构域IV内。为了筛选与4D5表位结合的抗体，需要进行常规的交叉阻断测定诸如Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow和David Lane(1988)所述。可替代地，可以进行表位作图以评估抗体是否结合HER2的4D5表位(例如，HER2的约残基550至约残基610(包括端值)的区域中的任何一个或多个残基(SEQ ID NO:39)。
“表位2C4”或“2C4表位”是HER2的细胞外结构域中抗体2C4结合的区域。为了筛选与2C4表位结合的抗体，需要进行常规的交叉阻断测定诸如Antibodies,A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow和David Lane(1988)所述。可替代地，可以进行表位作图以评估抗体是否与HER2的2C4表位结合。表位2C4包含来自HER2的细胞外结构域中的结构域II的残基。2C4抗体和帕妥珠单抗在结构域I、II和III的交界处结合至HER2的细胞外结构域(Franklin等人Cancer Cell 5:317-328(2004))。
“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量，包括本文所述的那些方法。下文描述用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施例。在某些实施例中，本文所述抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤5nM、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
“亲和力成熟的”的抗体是指在一个或多个高变区(HVR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致了抗体对抗原的亲和力的改善。
如本文所用，术语“载体”是指能够载运与其相链接的另一核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及整合入其已被引入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作链接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
如本文所用，术语“游离半胱氨酸氨基酸”是指已被改造进入亲本抗体，具有硫醇官能团(-SH)并且不配对为分子内或分子间二硫键的半胱氨酸氨基酸残基。如本文所用，术语“氨基酸”是指甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或瓜氨酸。
如本文所用，术语“连接基”，“连接基单元”或“连接子”是指包含原子链的化学部分，该原子链将CIDE部分与抗体共价连接，或将CIDE的一组分与CIDE的另一组分共价连接。在各种实施例中，连接基是二价基团，指定为L1或L2。
“患者”或“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施例中，该患者或个体或受试者为人。在一些实施例中，患者可以是“癌症患者”，即患有一种或多种癌症症状或有患一种或多种癌症症状的风险的患者。
“患者人群”是指一组癌症患者。这样的人群可用于证明统计学上显著的药物功效和/或安全性。
“复发”的患者是指缓解后有癌症体征或症状的患者。任选地，患者在辅助或新辅助治疗后已经复发。
“显示HER表达、扩增或激活”的癌症或生物学样品是在诊断测试中表达(包括过表达)HER受体、扩增HER基因和/或另外证明HER受体激活或磷酸化的样品。
本文中的“新辅助疗法”或“术前疗法”是指在手术之前给予的疗法。新辅助疗法的目标是提供立即的全身治疗，潜在地消除微转移，如果遵循标准的外科手术随后进行全身治疗，这种微小转移可能会扩散。新辅助疗法也可能有助于减小肿瘤的大小，从而完全切除最初无法切除的肿瘤或保留器官及其功能的部分。此外，新辅助疗法允许对药物功效进行体内评估，这可以指导后续治疗的选择。
本文中的“辅助疗法”是指在确定性手术之后进行的疗法，其中无法检测到残留疾病的证据，从而降低了疾病复发的风险。辅助治疗的目的是防止癌症复发，从而减少癌症相关死亡的机会。本文中的辅助疗法特别排除了新辅助疗法。
在医学界内部使用“确定性手术”这一术语。确定性手术包括例如导致肿瘤的去除或切除的程序、手术或其他方法，包括导致全部肉眼可见的肿瘤去除或切除的那些手术。确定性手术包括，例如，肿瘤的完全或根治性切除或完全大体切除。确定性手术包括在一个或多个阶段中发生的程序，并且包括例如多阶段手术程序，其中在切除肿瘤之前执行一个或多个手术或其他程序。确定性手术包括去除或切除肿瘤的程序，包括受累器官、器官和组织的部分、以及周围器官，例如淋巴结、器官的部分、或组织。去除可能不完全，从而即使未检测到肿瘤细胞也可能残留。
“生存期”是指患者还活着，包括无疾病生存期(DFS)、无进展生存期(PFS)和总体生存期(OS)。生存期可以通过Kaplan-Meier方法进行估算，生存期的任何差异都可以通过分层对数秩检验来计算。
“无进展生存期”(PFS)是指从治疗的第一天到记录的疾病进展(包括孤立的CNS进展)或研究中任何原因导致的死亡(以先发生者为准)的时间。
“无疾病生存期(DFS)”是指患者还活着，没有癌症复发的从开始治疗或初步诊断起算定义的时间段，例如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在本文所述主题的一方面，根据意向治疗原则分析DFS，即，根据患者分配的疗法对其进行评估。DFS分析中使用的事件可能包括局部，区域和远处的癌症复发，继发性癌症的发生以及无在先事件(例如，乳腺癌复发或第二原发癌)的患者因任何原因死亡。
“总体生存期”是指患者还活着，从开始治疗或初步诊断起算定义的时间段，例如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。
“延长生存期”是指相对于未治疗的患者或相对于对照治疗方案，增加了经治疗患者的DFS和/或OS。开始治疗或初步诊断后，监测生存期至少约六个月、或至少约1年、或至少约2年、或至少约3年、或至少约4年、或至少约5年、或至少约10年等。
“单一疗法”是指仅在治疗期间用于治疗癌症或肿瘤的仅包含单一治疗剂的治疗方案。
“维持疗法”是指给予治疗方案以减少疾病复发或进展的可能性。可以在任何时间长度内提供维持治疗，包括延长直至受试者寿命的时间段。可以在初始疗法后或与初始或其它疗法结合提供维持治疗。与用于其它类型疗法的剂量相比，用于维持疗法的剂量可以变化，并且可以包括减少的剂量。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和来源于所述原代转化细胞的子代，不考虑传代次数。子代可能不与亲本细胞的核酸内容物完全一致，而是可能含有突变。本文包括如在原始转化细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变子代。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长/增殖不受控制为特征的生理状况。“肿瘤”包含一个或多个癌细胞。癌症的实例在本文其他地方提供。
“HER2阳性”癌症包括癌细胞的HER2水平高于正常水平。HER2阳性癌症的实例包括HER2阳性乳腺癌和HER2阳性胃癌。任选地，HER2阳性癌症的免疫组化(IHC)得分为2+或3+和/或原位杂交(ISH)扩增比率≥2.0。术语“HER2阳性细胞”是指在其表面表达HER2的细胞。
术语“早期乳腺癌(EBC)”或“早期乳腺癌”在本文中用于指尚未扩散到乳房或腋窝淋巴结之外的乳腺癌。这包括原位导管癌和I期、IIA期、IIB期和IIIA期乳腺癌。
使用本领域已知的总体阶段分组或罗马数字分级方法，将肿瘤或癌症称为“0期”、“I期”、“II期”、“III期”或“IV期”，以及此分类中的各个子阶段，来表示肿瘤或癌症的分类。尽管癌症的实际阶段取决于癌症的类型，但总的来说，0期癌症是原位病变，I期癌症是小的局部肿瘤，II期和III期癌症是局部晚期肿瘤，表现为局部淋巴结转移，IV期癌症代表转移性癌症。每种类型的肿瘤的特定阶段是熟练的临床医生已知的。
术语“转移性乳腺癌”是指癌细胞通过血管或淋巴管从原始部位传递到身体其他地方的一个或多个部位，从而在除乳房外的更多器官中形成一种或多种继发性肿瘤的状态。
“晚期”癌症是指由于局部浸润或转移而扩散到原发部位或器官之外的癌症。因此，术语“晚期”癌症包括局部晚期和转移性疾病。“复发性”癌症是指对初始疗法(例如手术)产生应答后，在初始部位或远处部位复发的癌症。“局部复发”癌症是指在治疗后与先前治疗过的癌症在同一位置复发的癌症。“可手术的”或“可切除的”癌症是局限于主要器官且适合手术(切除)的癌症。“非可切除的”或“不可切除的”癌症无法通过手术去除(切除)。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤、阿德里亚霉素(adriamicin)、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、阿霉素、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，例如溶核酶；抗生素；毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；以及以下公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。
如本文所用，术语“化学治疗剂”是指可用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂的实例包括烷基化剂，例如噻替帕和环磷酰胺
Figure BDA0003063017060000168
烷基磺酸盐，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯并多巴、卡巴醌、美多巴(meturedopa)和脲多巴(uredopa)；乙亚胺和甲基蜜胺包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基蜜胺；产乙酸素(特别是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，
Figure BDA0003063017060000161
)；β-拉帕酮；拉帕醇；秋水仙素；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康
Figure BDA0003063017060000162
CPT-11(伊立替康，
Figure BDA0003063017060000163
)、乙酰喜树碱、莨菪亭和9-氨基喜树碱)；bryostatin；callystatin；CC-1065(包括其adozelesin、carzelesin和bizelesin合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；隐藻霉素(尤其是隐藻霉素1和隐藻霉素8)；多拉司汀；杜卡霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；eleutherobin；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥例如苯丁酸氮芥、氯苯那嗪、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸氧二氯甲基二乙胺、美法仑、新霉素、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，例如卡莫司汀、氯唑霉素、福莫司汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔类抗生素(例如加利车霉素，特别是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωIl(参见，例如，Nicolaou等人，Angew.Chem Intl.以英语进行编辑，33:183-186(1994))；CDP323、口服α-4整联蛋白质抑制剂；达尼霉素，包括达尼霉素A；埃斯波霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白质烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、蒽霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(包括
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吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯烷-阿霉素、阿霉素HCl脂质体注射剂
Figure BDA0003063017060000165
脂质体阿霉素TLC D-99
Figure BDA0003063017060000166
聚乙二醇化脂质体阿霉素
Figure BDA0003063017060000167
和脱氧阿霉素)、表柔比星、埃索比星、伊达比星、marcellomycin、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、porfiromycin、嘌呤霉素、quelamycin、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，例如甲氨蝶呤、吉西他滨
Figure BDA0003063017060000171
替加氟
Figure BDA0003063017060000172
卡培他滨
Figure BDA0003063017060000173
埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲蝶呤；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硝咪硫鸟嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫呋、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，例如钙雌酮、丙酸去氧孕甾烷酮、表甾醇、mepitiostane、睾丸内酯；抗肾上腺素，例如氨基谷氨酰胺、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；eniluracil；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；defofamine；地美可辛；地吖醌；elfomithine；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；lentinan；lonidainine；美登木素生物碱，例如美登素和安托霉素；米托胍腙；米托蒽醌；mopidanmol；二胺硝吖啶；喷司他丁；phenamet；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基肼；丙卡巴嗪；
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多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根霉菌素；西索菲兰；盐酸锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三嗪酮；2,2’,2’-三氯三乙胺；单端孢霉毒素(特别是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和胍基啶)；尿烷；长春地辛
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达卡巴嗪；甘露司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖苷(“Ara-C”)；噻替派；紫杉烷类，例如紫杉醇
Figure BDA0003063017060000177
白蛋白改造紫杉醇纳米颗粒制剂(ABRAXANETM)和多西紫杉醇
Figure BDA0003063017060000178
苯丁酸氮芥；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂试剂，例如顺铂、奥沙利铂(例如
Figure BDA0003063017060000179
)和卡铂；防止微管蛋白质聚合形成微管的长春花，包括长春碱
Figure BDA00030630170600001710
长春新碱
Figure BDA00030630170600001711
长春地辛
Figure BDA00030630170600001712
和长春瑞滨
Figure BDA00030630170600001713
依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；亚叶酸；米托蒽醌；依达曲塞；道诺霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸，包括贝沙罗汀
Figure BDA00030630170600001714
双膦酸盐，诸如氯膦酸盐(例如
Figure BDA00030630170600001715
或
Figure BDA00030630170600001716
)、依替膦酸盐
Figure BDA00030630170600001717
NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐
Figure BDA00030630170600001718
阿仑膦酸盐
Figure BDA00030630170600001719
帕米膦酸盐
Figure BDA00030630170600001720
替洛膦酸盐
Figure BDA00030630170600001721
或利塞膦酸盐
Figure BDA00030630170600001722
曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些抑制与异常细胞增殖有关的信号传导途径中的基因表达的寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，例如
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疫苗和基因治疗疫苗，例如
Figure BDA0003063017060000182
疫苗、
Figure BDA0003063017060000183
疫苗和
Figure BDA0003063017060000184
疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如
Figure BDA0003063017060000185
)；rmRH(例如
Figure BDA0003063017060000186
)；BAY439006(索拉非尼；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼，
Figure BDA0003063017060000187
Pfizer)；哌立福新、COX-2抑制剂(例如塞来昔布或依托昔布)、蛋白质体抑制剂(例如PS341)；硼替佐米
Figure BDA0003063017060000188
CCI-779；替吡法尼(R11577)；奥拉非尼、ABT510；Bcl-2抑制剂，例如奥利默森钠(
Figure BDA0003063017060000189
一种反义寡核苷酸)；匹克生琼；EGFR抑制剂(请参阅下面的定义)；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，例如雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA00030630170600001810
)；法呢基转移酶抑制剂，例如lonafarnib(SCH 6636,SARASARTM)；以及以上任何一种的药用盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合，例如CHOP，其是环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙的联合疗法的缩写；FOLFOX，其是奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写。
如本文所定义，化学治疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其作用在于调节、减少、阻断或抑制可促进癌症生长的激素的作用。它们本身可能是激素，包括但不限于：具有混合激动剂/拮抗剂特性的抗雌激素，包括他莫昔芬
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4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬
Figure BDA00030630170600001812
伊多昔芬、屈洛昔芬、雷洛昔芬
Figure BDA00030630170600001813
曲沃昔芬、雷洛昔芬和选择性雌激素受体调节剂(SERM)例如SERM3；没有激动剂特性的纯抗雌激素，例如氟维司群
Figure BDA00030630170600001814
和EM800(此类药物可能会阻断雌激素受体(ER)的二聚作用，抑制DNA结合，增加ER转换和/或抑制ER水平)；芳香酶抑制剂，包括甾体芳香酶抑制剂，例如福尔马汀和依西美坦
Figure BDA00030630170600001815
以及非甾体芳香酶抑制剂，例如阿那曲唑
Figure BDA00030630170600001816
来曲唑
Figure BDA00030630170600001817
和氨基戊二酰亚胺，以及其他芳香酶抑制剂包括伏洛唑
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醋酸甲地孕酮
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法得唑和4(5)-咪唑；促黄体激素释放激素激动剂，包括亮丙瑞林(
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和
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)、戈舍瑞林、布舍瑞林和曲普瑞林；性类固醇，包括孕激素，例如乙酸孕甾酮和乙酸甲羟孕酮；雌激素，例如己烯雌酚和普力马林；以及雄激素/类视黄醇，例如氟甲睾酮；所有的反式视黄酸和芬维A胺；奥那斯酮；抗孕酮；雌激素受体下调剂(ERD)；抗雄激素，如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；以及以上任何一种的药用盐、酸或衍生物；以及以上两种或多种的组合。
如本文所用，用于辅助疗法的术语“免疫抑制剂”是指起到抑制或掩盖本文所治疗的哺乳动物的免疫系统的作用的物质。这将包括抑制细胞因子产生，下调或抑制自身抗原表达或掩盖MHC抗原的物质。这类试剂的实例包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见美国专利号4,665,077)；和非甾体类抗炎药(NSAID)；更昔洛韦、他克莫司、糖皮质激素(如皮质醇或醛固酮)、抗炎药(如环氧合酶抑制剂、5-脂氧合酶抑制剂或白三烯受体拮抗剂)；嘌呤拮抗剂，例如硫唑嘌呤或霉酚酸酯(MMF)；烷基化剂，例如环磷酰胺；甲磺酸溴隐亭；达那唑；氨苯砜；戊二醛(掩盖MHC抗原，如美国专利号4,120,649所述)；MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢菌素A；类固醇，例如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物，例如泼尼松、甲基泼尼松龙，包括
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甲基泼尼松龙琥珀酸钠和地塞米松；二氢叶酸还原酶抑制剂，例如甲氨蝶呤(口服或皮下注射)；抗疟药，例如氯喹和羟氯喹；柳氮磺吡啶；来氟米特；细胞因子或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-α、-β或-γ抗体，抗肿瘤坏死因子(TNF)-α抗体(英夫利昔单抗(
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或阿达木单抗)，抗TNF-α免疫粘附素(依那西普)，抗TNF-β抗体，抗白介素2(Il-2)抗体和抗IL-2受体抗体，以及抗白介素6(IL-6)受体抗体和拮抗剂(例如ACTEMRATM(tocilizumab))；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白质；pan-T抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；含有LFA-3结合结构域的可溶性肽(WO 90/08187公开于7/26/90)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链霉烯酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥；去氧精胍菌素；雷帕霉素；T细胞受体(Cohen等人，美国专利号5,114,721)；T细胞受体片段(Offner等人，Science,251:430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341:482(1989)；和WO 91/01133)；BAFF拮抗剂，例如BAFF抗体和BR3抗体以及zTNF4拮抗剂(综述，参见Mackay和Mackay,Trends Immunol.,23:113-5(2002)，也参见下面的定义)；干扰T细胞辅助信号的生物制剂，例如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括针对CD40-CD40配体的封闭抗体(e.g.,Durie等人，Science,261:1328-30(1993)；Mohan等人，J.Immunol，154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck等人，Science，265:1225-7(1994))；和T细胞受体抗体(EP 340,109)，例如T10B9。本文中一些优选的免疫抑制剂包括环磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、MMF或甲氨蝶呤。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变型，诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指试图改变待治疗个体的自然进程的临床干预，并且可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善预后。在一些实施例中，本文描述主题的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
与一种或多种其他药物“同时”施用的药物是在同一治疗周期内，在与一种或多种其他药物的治疗的同一天，以及任选地与一种或多种其他药物同时施用。例如，对于每3周进行一次的癌症治疗，在3周周期的第1天施用同时施用的每种药物。
药剂(例如药物制剂)的“有效量”是指在必要的剂量和时间段下有效实现所需治疗或预防结果的量。例如，药物的治疗癌症有效量可减少癌细胞数；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)癌细胞浸润周围器官；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解癌症相关的一种或多种症状。在某种程度上，药物可阻止生长和/或杀死既存癌细胞，它可以抑制细胞生长和/或具有细胞毒性。有效量可以延长无进展生存期(例如，根据实体瘤的应答评估标准，RECIST或CA-125改变来衡量)，导致客观应答(包括部分应答，PR或完全应答，CR)，增加总体生存时间，和/或改善一种或多种癌症症状(例如，通过FOSI评估)。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指与未接受该量的相应受试者相比导致治疗疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症的进展率的任何量。该术语在其范围内还包括有效增强正常生理功能的量。为了用于治疗，可以将治疗有效量的Ab-CIDE及其盐作为原料化学品施用。另外，活性成分可以作为药物组合物存在。
如本文所用，除非在权利要求中另有定义，否则术语“任选地”是指随后描述的事件可以发生或可以不发生，并且包括发生的事件和不发生的事件。
如本文所用，除非另有定义，否则短语“任选地取代的”，“取代的”或其变体表示被一个或多个取代基(例如一个、两个或三个取代基)任选地取代，包括多个取代度。该短语不应被解释为与本文描述和描绘的取代重复。
术语“药物制剂”是指处于允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对于将被施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的制剂。
“药用赋形剂”是指药物制剂中除活性成分外的对受试者无毒的成分。药用赋形剂包括但不限于缓冲剂、载体、稳定剂或防腐剂。
如本文所用，短语“药用盐”是指分子的药用有机或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸性柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸酯、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对-甲苯磺酸盐和巴莫酸盐(即1,1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸))盐。药用盐可包括包含另一种分子，例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其他抗衡离子。抗衡离子可以是稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。此外，药用盐在其结构中可以具有一个以上的带电原子。其中多个带电原子是药用盐的一部分的实例可以具有多个抗衡离子。因此，药用盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
其他非药用盐可用于制备本文所述的化合物，并且应将其视为形成本主题的另一方面。这些盐，例如草酸或三氟乙酸盐，虽然本身不是药用，但可用于制备用于获得本文所述化合物及其药用盐的中间体的盐。
如本文所用，术语“多个”是指两个或更多个缀合物。每个缀合物可以与多个中的任何其他缀合物相同或不同。
“小分子”或“小分子化合物”通常是指尺寸小于约5千道尔顿(Kd)的有机分子。在一些实施例中，小分子小于约4Kd、3Kd、约2Kd或约1Kd。在一些实施例中，小分子小于约800道尔顿(D)，约600D、约500D、约400D、约300D、约200D或约100D。在一些实施例中，小分子小于约2000g/mol，小于约1500g/mol，小于约1000g/mol，小于约800g/mol或小于约500g/mol。在一些实施例中，小分子是非聚合的。小分子不是蛋白质、多肽、寡肽、肽、多核苷酸、寡核苷酸、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖等。小分子的衍生物是指与原始小分子具有相同结构核心的分子，但可以由最初的小分子通过一系列化学反应制备而成。
如本文所用，术语“烷基”是指具有一至十二个碳原子的任何长度的饱和直链或支链单价烃基(C1-C12)，其中所述烷基可以任选地独立地被下述一个或多个取代基取代。在另一实施例中，烷基为一至八个碳原子(C1-C8)或一至六个碳原子(C1-C6)。烷基基团的实例包括但不限于甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、1-庚基和1-辛基等等。
如本文所用，术语“亚烷基”是指具有一至十二个碳原子的任何长度的饱和的直链或支链二价烃基(C1-C12)，其中亚烷基可任选地独立地被下述一个或多个取代基取代。在另一实施例中，亚烷基为一至八个碳原子(C1-C8)或一至六个碳原子(C1-C6)。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。
术语“烯基”是指具有两个至八个碳原子的任何长度的直链或支链单价烃基(C2-C8)，具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp2双键，其中烯基可以任选地被本文所述的一个或多个取代基独立地取代，并且包括具有“顺式”和“反式”取向，或可替代地具有“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于乙烯基(ethylenyl或vinyl)(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)等。
术语“亚烯基”是指具有两个至八个碳原子的任何长度的具有至少一个不饱和位点的直链或支链二价烃基(C2-C8)，即碳-碳sp2双键，其中亚烯基可以任选地被本文所述的一个或多个取代基独立地取代，并且包括具有“顺式”和“反式”取向，或可替代地具有“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于亚乙烯基(ethylenylene或vinylene)(-CH＝CH-)、烯丙基(-CH2CH＝CH-)等。
术语“炔基”是指具有两个至八个碳原子的任何长度的直链或支链的单价烃基(C2-C8)，具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp三键，其中炔基可以任选地独立地被本文所述的一个或多个取代基取代。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)等。
术语“亚炔基”是指具有两个至八个碳原子的任何长度的直链或支链二价烃基(C2-C8)，具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp三键，其中亚炔基可以任选地独立地被本文所述的一个或多个取代基取代。实例包括但不限于亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(丙炔亚基，-CH2C≡C-)等。
术语“碳环”、“碳环基”、“碳环”和“环烷基”是指作为单环的具有3至12个碳原子(C3-C12)的或作为双环的7至12个碳原子的单价非芳族、饱和或部分不饱和环。可以将具有7至12个原子的双环碳环布置为例如双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统，以及具有9或10个环原子的双环碳环可布置为双环[5,6]或[6,6]系统，也可布置成桥联系统，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷。螺环部分也包括在该定义的范围内。单环碳环的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基等。碳环基基团可以任选地用一个或多个本文所述取代基独立地取代。
“芳基”是指通过从母体芳族环系统的单个碳原子上除去一个氢原子而衍生出的6-20个碳原子的单价芳族烃基(C6-C20)。一些芳基基团在示例性结构中表示为“Ar”。芳基包括双环基团，该双环基团包含稠合至饱和的、部分不饱和的环或芳族碳环的芳族环。典型的芳基基团包括但不限于衍生自苯(苯基)、取代苯、萘、蒽、联苯、茚基、茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等。芳基基团可以任选地用一个或多个本文所述取代基独立地取代。
“亚芳基”是指通过从母体芳族环系统的两个碳原子中去除两个氢原子而获得的6-20个碳原子的二价芳族烃基(C6-C20)。一些亚芳基在示例性结构中表示为“Ar”。亚芳基包括双环基团，该双环基团包含稠合至饱和的、部分不饱和的环或芳族碳环的芳族环。典型的亚芳基包括但不限于：衍生自苯(亚苯基)、取代苯、萘、蒽、亚联苯、亚茚基、亚茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等。亚芳基基团可以任选地用一个或多个本文所述取代基取代。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环”在本文中可互换使用，并且是指饱和的或部分不饱和的(即，在环内具有一个或多个双和/或三键的)碳环基团，其有3至约20个环原子，其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余的环原子为C，其中一个或多个环原子任选地独立地被下述一个或多个取代基取代。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子和1至4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和选自N、O、P和S的1至6个杂原子)，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环描述于Paquette,Leo A.；“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其是第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistry of HeterocyclicCompounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950to present)，尤其是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括其中杂环基与饱和的、部分不饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于：吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代吗啉-4-基、S-二氧代硫吗啉-4-基、偶氮烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮平-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、哌啶子基、吗啉代、硫代吗啉代、噻吨基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环己烷基、硫杂环己烷基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧杂戊基、吡唑啉基、二噻吩基、二硫杂戊基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑啉基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹啉基和N-吡啶基脲。螺环部分也包括在该定义的范围内。其中2个环原子被氧代(＝O)部分所取代的杂环基的实例是嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。本文的杂环基团可以任选地用一个或多个本文所述取代基独立地取代。
术语“杂芳基”是指5元、6元或7元环的一价芳族基团，并且包括5-20个原子的稠合环系统(其中至少一个是芳族的)，包含独立地选自氮、氧和硫的一个或多个杂原子。杂芳基基团的实例是吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、1-甲基-1H-苯并[d]咪唑、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑啉基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃吡啶基。杂芳基基团可以任选地用一个或多个本文所述取代基独立地取代。
在可能的情况下，杂环或杂芳基基团可以是碳(碳连接的)或氮(氮连接的)键合的。举例但非限制性地来说，碳键合的杂环或杂芳基键合在以下位置：吡啶的2、3、4、5或6位，哒嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氢呋喃、噻呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯环的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2或3位，氮杂环丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
举例但非限制性地来说，氮键合的杂环或杂芳基键合在以下位置：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位；异吲哚或异吲哚啉酮的2位；吗啉的4位；和咔唑或β-咔啉的9位。
术语“手性”是指具有与镜像配偶体不重叠性的分子，而术语“非手性”是指与其镜像配偶体可重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有相同化学组成，但原子或基团在空间的排列不同的化合物。
“非对映异构体”表示具有两个或更多个手性中心并且其分子并非彼此镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。非对映异构体的混合物可以在高分辨率分析程序(诸如电泳和色谱法)下分离。
“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，所述两种立体异构体是彼此不可重叠的镜像。
本文中所用的立体化学定义和约定大致遵循：S.P.Parker编辑，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley&Sons,Inc.,New York。许多有机化合物以旋光活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子围绕其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于表示化合物对平面偏振光的旋转的符号，其中(-)或1表示该化合物是左旋的。带有(+)或d前缀的化合物是右旋的。对于既定化学结构，这些立体异构体除了互为镜像外，是完全相同的。特定的立体异构体也可以被称为对映异构体，并且此类异构体的混合物通常被称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋物，其可能在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性的情况下发生。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种无旋光活性的对映体种类的等摩尔混合物。
本文中的其他术语、定义和缩写包括：野生型("WT")；半胱氨酸改造的突变抗体("thio")；轻链("LC")；重链("HC")；6-马来酰亚胺基己酰基(“MC”)；马来酰亚胺基丙酰基(“MP”)；缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)，丙氨酸-苯丙氨酸苯丙氨酸(“ala-phe”)，对氨基苄基(“PAB”)和对氨基苄氧基羰基(“PABC”)；重链的A118C(EU编号)＝A121C(顺序编号)＝A114C(Kabat编号)轻链的K149C(Kabat编号)。这里还提供了其它的定义和缩写。
II.化学降解诱导剂
可以将化学降解诱导剂(CIDE)分子与抗体缀合，以形成“Ab-CIDE”缀合物。所述抗体经由连接基(L1)缀合至CIDE(“D”)，其中所述CIDE包含泛素E3连接酶结合基团(“E3LB”)、连接基(“L2”)和蛋白质结合基团(“PB”)。Ab-CIDE分子的通式为：
Ab―(L1―D)p，
其中D为具有结构E3LB―L2―PB的CIDE；其中E3LB是与L2共价结合的E3连接酶结合基团。L2是与E3LB和PB共价结合的连接基；PB是与L2共价结合的蛋白质结合基团。Ab是与L1共价结合的抗体；L1是与Ab和D共价结合的连接基；p的值为约1至约50。变量p反映抗体可以连接至一个或多个L1-D基团。在一个实施例中，p为约1至8。在另一实施例中，p为约2。
以下章节描述了组成Ab-CIDE的组分。为了获得具有有效功效和所需治疗指数的Ab-CIDE，提供了以下组分。
1.抗体(Ab)
如本文所述，抗体例如单克隆抗体(mAB)用于将CIDE递送至靶细胞，例如表达该抗体靶向的特定蛋白质的细胞。Ab-CIDE的抗体部分可以靶向表达抗原的细胞，从而通常通过内吞作用将抗原特异性Ab-CIDE细胞内递送至靶细胞。虽然包含针对细胞表面上未发现的抗原的抗体的Ab-CIDE可能导致CIDE部分进入所述细胞的特异性细胞内递送降低，但Ab-CIDE仍可能发生胞饮作用。本文所述的Ab-CIDE及其使用方法有利地利用抗体对细胞表面识别和/或对Ab-CIDE内吞作用，以将CIDE部分递送至细胞内。
a.人抗体
在某些实施例中，本文提供的抗体为人抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体。人抗体通常如van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)所述。
可以通过以下方式来制备人抗体：将免疫原施用于转基因动物，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发而产生具有人可变区的完整人抗体或完整抗体。此类动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，所述全部或部分人免疫球蛋白基因座替代内源性免疫球蛋白基因座，或者在动物的染色体外存在或随机整合至动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被灭活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如描述XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述
Figure BDA0003063017060000271
技术的美国专利号5,770,429；描述
Figure BDA0003063017060000272
技术的美国专利号7,041,870，以及描述
Figure BDA0003063017060000273
技术的美国专利申请公开号US 2007/0061900)。可以进一步修饰来自由此类动物产生的完整抗体的人可变区，例如通过与不同的人恒定区组合。
人抗体也可以通过基于杂交瘤的方法制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系。(参见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991).)经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也描述于Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。另外的方法包括例如在美国专利号7,189,826(描述了从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)中描述的那些方法。人类杂交瘤技术(Trioma技术)也描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and ClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)中。
人抗体也可以通过分离选自人源噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列来产生。然后可以将此类可变结构域序列与所需的人恒定结构域结合。下面描述了从抗体文库中筛选人抗体的技术。
b.文库衍生的抗体
可以通过筛选组合文库中具有一种或多种所需活性的抗体来分离用于Ab-CIDE的抗体。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选此类文库以获得具有所需结合特征的抗体。此类方法综述于，例如在Hoogenboom等人Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等人编辑Human Press,Totowa,NJ,2001)，进一步描述在例如McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks and Bradbury,Methods in MolecularBiology 248:161-175(Lo编辑,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因谱系通过聚合酶链式反应(PCR)单独克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以筛选抗原结合噬菌体，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所描述。噬菌体通常将抗体片段展示为单链Fv(scFv)片段或Fab片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而无需构建杂交瘤。可替代地，可以克隆所有天然谱系(例如，来自人)以向广泛的非自身抗原和自身抗原的提供单一来源的抗体，而无需任何免疫，如Griffiths等人，EMBO J,12:725-734(1993)中所描述。最后，还可通过以下方式来合成初始文库：克隆来自干细胞的未重排的V基因区段；以及使用含有随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区域并完成体外重排，如Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)中所描述。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利号5,750,373和美国专利公开号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
在本文中从人抗体文库分离出的抗体或抗体片段被认为是人抗体或人抗体片段。
c.嵌合和人源化抗体
在某些实施例中，本文所述的抗体为嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于例如美国专利号4,816,567；和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，衍生自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物例如猴子的可变区)和人恒定区。在另一实例中，嵌合抗体是其中类别或亚类已经从亲本抗体的类别或亚类改变的“类别转换”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施例中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR例如CDR(或其部分)衍生自非人抗体，而FR(或其部分)衍生自人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施例中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，HVR残基所来源于的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述，并且进一步描述于例如Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述了SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面再塑”)；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；以及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了用于FR改组的“指导选择”方法)中。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳匹配”方法选择的框架区(参见例如Sims等人，J.Immunol.151:2296(1993))；来源于轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人，J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人类种系框架区(参见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及来源于筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
d.多特异性抗体
在某些实施例中，本文提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含具有多表位特异性的抗原结合结构域的抗体(即，能够结合一个分子上的两个或更多个不同表位，或能够结合两个或更多个不同分子上的表位)。
在一些实施例中，多特异性抗体是对至少两个不同的抗原结合位点具有结合特异性的单克隆抗体(例如双特异性抗体)。在一些实施例中，多特异性抗体的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以结合一个相同分子内的两个表位(分子内结合)。例如，多特异性抗体的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以结合同一蛋白质分子上的两个不同表位。在某些实施例中，多特异性抗体结合的两个不同表位是通常不被一种单特异性抗体(例如常规抗体或一个免疫球蛋白单可变结构域)在同一时间结合的表位。在一些实施例中，多特异性抗体的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以结合位于两个不同分子内的表位(分子间结合)。例如，多特异性抗体的第一抗原结合结构域可以结合一个蛋白质分子上的一个表位，而多特异性抗体的第二抗原结合域可以结合不同蛋白质分子上的另一表位，从而使这两个分子交联。
在一些实施例中，多特异性抗体(诸如双特异性抗体)的抗原结合结构域包含两个VH/VL单元，其中第一VH/VL单元与第一表位结合，第二VH/VL单元与第二表位结合，其中每个VH/VL单元包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)。这样的多特异性抗体包括但不限于全长抗体，具有两个或多个VL和VH结构域的抗体，和抗体片段(诸如Fab、Fv、dsFv、scFv、双体抗体、双特异性双体抗体和三抗体，已共价或非共价连接的抗体片段)。进一步包含重链可变区的至少一部分和/或轻链可变区的至少一部分的VH/VL单元也可以称为“臂(arm)”、“半体(hemimer)”或“半抗体(half antibody)”。在一些实施例中，半体包括重链可变区的足够部分，以实现与第二半体形成分子内二硫键。在一些实施例中，半体包括杵突变(knob mutation)或臼突变(hole mutation)，例如，以实现与包含互补臼突变或杵突变的第二半体或半抗体的异二聚化。杵突变和臼突变将在以下进一步讨论。
在某些实施例中，本文提供的多特异性抗体可以是双特异性抗体。如本文所用，术语“双特异性抗体”是包含抗原结合结构域的多特异性抗体，其能够特异性结合一个生物分子上的两个不同表位或能够特异性结合两个不同生物分子上的表位。双特异性抗体在本文中也可以被称为具有“双重特异性”或为“双重特异性的”。示例性的双特异性抗体可以结合蛋白质和任何其他抗原。在某些实施例中，结合特异性中的一者是针对蛋白质的，而另一个是针对CD3的。参见，例如，美国专利号5,821,337。在某些实施例中，双特异性抗体可以结合相同蛋白质分子的两个不同表位。在某些实施例中，双特异性抗体可以结合两个不同蛋白质分子上的两个不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位于表达蛋白质的细胞。可以将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段。
制备多特异性抗体的技术包括但不限于：具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983),WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.10:3655(1991))，和“杵臼结构”改造(参见例如U.S.PatentNo.5,731,168,WO2009/089004,US2009/0182127,US2011/0287009,Marvin和Zhu,ActaPharmacol.Sin.(2005)26(6):649-658,和Kontermann(2005)Acta Pharmacol.Sin.,26:1-9)。如本文所用，术语“杵臼(knob-into-hole)”或“KnH”技术是指通过在其相互作用的界面将突起(杵)引入一个多肽并将腔(臼)引入其他多肽，从而引导在体内或体外将两个多肽配对在一起的技术。例如，已在抗体的Fc:Fc结合界面、CL:CH1界面或VH/VL界面中引入KnH(参见，例如，US 2011/0287009、US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431、Zhu等人，1997,Protein Science 6:781-788、和WO2012/106587)。在一些实施例中，在多特异性抗体的制造过程中，KnH驱动两个不同的重链配对在一起。例如，在其Fc区中具有KnH的多特异性抗体可以进一步包含与各自Fc区连接的单个可变结构域，或进一步包含与相似或不同的轻链可变结构域配对的不同的重链可变结构域。KnH技术还可以用于将两个不同的受体胞外域或包含不同靶标识别序列的任何其他多肽序列配对在一起(例如，包括亲和体、肽体和其他Fc融合体)。
如本文所用，术语“杵突变”是指在多肽与另一多肽相互作用的界面将突起(杵)引入多肽的突变。在一些实施例中，另一多肽具有臼突变。
如本文所用，术语“臼突变”是指在多肽与另一多肽相互作用的界面将腔(臼)引入多肽的突变。在一些实施例中，另一多肽具有杵突变。
“突起”是指至少一条氨基酸侧链，其从第一多肽的界面突出，因此可定位在相邻界面(即第二多肽的界面)的补偿腔中，以稳定异源多聚体，从而例如相较于同多聚体形成更倾向于异多聚体形成。突起可以存在于原始界面中，或者可以合成引入(例如，通过改变编码界面的核酸)。在一些实施例中，编码第一多肽的界面的核酸被改变以编码突起。为此，用编码至少一个“输入”氨基酸残基的核酸代替在第一多肽的界面中的编码至少一个“原始”氨基酸残基的核酸，所述“输入”氨基酸残基具有比原始氨基酸残基更大的侧链体积。应当理解，可以有一个以上的原始残基和相应的输入残基。各种氨基残基的侧链体积显示在例如US2011/0287009的表1中。引入“突出”的突变可以称为“杵突变”。
在一些实施例中，用于形成突起的输入残基是选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)的天然存在的氨基酸残基。在一些实施例中，输入残基是色氨酸或酪氨酸。在一些实施例中，用于形成突起的原始残基具有小的侧链体积，例如丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
“腔”是指从第二多肽的界面凹入的至少一个氨基酸侧链，因此在第一多肽的相邻界面上容纳相应的突起。腔可以存在于原始界面中，或者可以被合成地引入(例如，通过改变编码界面的核酸)。在一些实施例中，编码第二多肽的界面的核酸被改变以编码腔。为此，用编码至少一个“输入”氨基酸残基的DNA代替在第二多肽的界面中的编码至少一个“原始”氨基酸残基的核酸，所述“输入”氨基酸残基具有比原始氨基酸残基更小的侧链体积。应当理解，可以有一个以上的原始残基和相应的输入残基。在一些实施例中，用于形成腔的输入残基是选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)的天然存在的氨基酸残基。在一些实施例中，输入残基是丝氨酸、丙氨酸或苏氨酸。在一些实施例中，用于形成腔的原始残基具有大的侧链体积，例如酪氨酸、精氨酸、苯丙氨酸或色氨酸。引入“腔”的突变可以称为“臼突变”。
突起“可定位”腔中，这意味着突起和腔分别在第一多肽和第二多肽的界面上的空间位置，以及突起和腔的大小使得突起可以位于腔中不会显著干扰第一多肽和第二多肽在界面上的正常缔合。由于突起(例如Tyr、Phe和Trp)通常不从界面的轴垂直延伸，而是具有优选的构型，因此在某些情况下，突起与相应腔的对准可能取决于基于三维结构(例如通过X射线晶体学或核磁共振(NMR)获得的三维结构)对突起/腔对进行建模。这可以使用本领域广泛接受的技术来实现。
在一些实施例中，IgG1恒定区中的杵突变是T366W(EU编号)。在一些实施例中，IgG1恒定区中的臼突变包含一个或多个选自T366S、L368A和Y407V(EU编号)的突变。在一些实施例中，IgG1恒定区中的臼突变包含T366S、L368A和Y407V(EU编号)。
在一些实施例中，IgG4恒定区中的杵突变是T366W(EU编号)。在一些实施例中，IgG4恒定区中的臼突变包含一个或多个选自T366S、L368A、和Y407V(EU编号)的突变。在一些实施例中，IgG4恒定区中的臼突变包含T366S、L368A和Y407V(EU编号)。
多特异性抗体也可以通过改造静电操纵效应来制备，以制备抗体Fc-异二聚体分子(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(参见，例如，美国专利号4,676,980和Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体(参见，例如，Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用“双体抗体”技术制备双特异性抗体片段(参见，例如，Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；以及使用单链Fv(sFv)二聚体(例如，参见Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994))；并按照例如Tutt等人J.Immunol.147:60(1991)所述来制备三特异性抗体。
本文还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的改造的抗体，包括“章鱼抗体”或“双可变结构域免疫球蛋白”(DVD)(参见，例如，US 2006/0025576A1和Wu等人NatureBiotechnology(2007))。)。本文抗体或片段也包括“双重作用FAb”或“DAF”，其包含与靶蛋白和另一不同抗原的抗原结合位点结合(参见，例如，US 2008/0069820)。
e.抗体片段
在某些实施例中，本文提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，以及以下描述的其他片段。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见例如Pluckthün在Theharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷，Rosenburg and Moore编辑，(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)中所述；还可参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和No.5,587,458。关于对包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论，请参见美国专利号5,869,046。
双体抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；以及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三体抗体和四体抗体也在Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中进行了描述。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施例中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.，Waltham，MA；参见例如美国专利号6,248,516B1)。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白质水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)产生，如本文所述。
f.抗体变体
在某些实施例中，考虑了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内残基的缺失、和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以实现最终构建体，前提条件是最终构建体具有所需特征，例如抗原结合。
g.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如在美国专利号4,816,567中所述。在一个实施例中，提供了编码本文所述抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码构成抗体的VL的氨基酸序列和/或构成抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在另一实施例中，提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如表达载体)。在另一实施例中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施例中，宿主细胞包含以下项(例如已被用以下转化)：(1)载体，其包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸，或(2)第一载体和第二载体，第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施例中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施例中，提供了一种制备抗体的方法，其中所述方法包括在适于表达抗体的条件下培养包含如上提供的编码所述抗体的核酸的宿主细胞，以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收所述抗体。
对于重组生产抗体，将例如如上所述的编码抗体的核酸分离并插入至一个或多个载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序来容易地对此类核酸进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(另请参见Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达。)抗体可在表达后在可溶性级分中从细菌细胞糊中分离，并且可以进一步纯化。
除了原核生物外，诸如丝状真菌或酵母等真核微生物也是用于编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主，所述真核微生物包括这样的真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经“人源化”，从而导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等人，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定出了许多可以与昆虫细胞一起使用的杆状病毒株，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例为由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如例如描述于Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977))、幼仓鼠肾细胞(BHK)、小鼠支持细胞(TM4细胞，如例如描述于Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))、猴肾细胞(CV1)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76)、人宫颈癌细胞(HELA)、犬肾细胞(MDCK)、布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A)、人肺细胞(W138)、人肝细胞(Hep G2)、小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)、TRI细胞，如例如Mather等人，Annals N.Y.中所描述。Acad.Sci.383:44-68(1982)；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，其包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适用于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，请参见例如Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
现在参考抗体亲和力，在实施例中，抗体与一个或多个选自(1)-(53)的肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合：
(1)BMPR1B(IB型骨形态发生蛋白质受体，Genbank登录号NM_001203)ten Dijke,P.等人Science 264(5155):101-104(1994),Oncogene 14(11):1377-1382(1997))；WO2004063362(权利要求2)；WO2003042661(权利要求12)；US2003134790-A1(第38-39页)；WO2002102235(权利要求13；第296页)；WO2003055443(第91-92页)；WO200299122(实例2；第528-530页)；WO2003029421(权利要求6)；WO2003024392(权利要求2；图112)；WO200298358(权利要求1；第183页)；WO200254940(第100-101页)；WO200259377(第349-350页)；WO200230268(权利要求27；第376页)；WO200148204(实例；图4)NP_001194骨形态发生蛋白受体，IB型/pid＝NP_001194.1-交叉引用：MIM：603248；NP_001194.1；AY065994
(2)E16(LAT1、SLC7A5,Genbank登录号NM_003486)
Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2),283-288(1999),Nature 395(6699):288-291(1998),Gaugitsch,H.W.等人(1992)J.Biol.Chem.267(16):11267-11273)；WO2004048938(实例2)；WO2004032842(实例IV)；WO2003042661(权利要求12)；WO2003016475(权利要求1)；WO200278524(实例2)；WO200299074(权利要求19；第127-129页)；WO200286443(权利要求27；第222、393页)；WO2003003906(权利要求10；第293页)；WO200264798(权利要求33；第93-95页)；WO200014228(权利要求5；第133-136页)；US2003224454(图3)；WO2003025138(权利要求12；第150页)；NP_003477溶质载体家族7(阳离子氨基酸转运蛋白，y+系统)，成员5/pid＝NP_003477.3-智人交叉引用：MIM:600182；NP_003477.3；NM_015923；NM_003486_1
(3)STEAP1(前列腺六跨膜上皮抗原，Genbank登录号NM_012449)
Cancer Res.61(15),5857-5860(2001),Hubert,R.S.等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(25):14523-14528)；WO2004065577(权利要求6)；WO2004027049(图1L)；EP1394274(实例11)；WO2004016225(权利要求2)；WO2003042661(权利要求12)；US2003157089(实例5)；US2003185830(实例5)；US2003064397(图2)；WO200289747(实例5；第618-619页)；WO2003022995(实例9；图13A，实例53；第173页，实例2；图2A)；
NP_036581前列腺六跨膜上皮抗原
交叉引用：MIM:604415；NP_036581.1；NM_012449_1
(4)0772P(CA125、MUC16,Genbank登录号AF361486)
J.Biol.Chem.276(29):27371-27375(2001))；WO2004045553(权利要求14)；WO200292836(权利要求6；图12)；WO200283866(权利要求15；第116-121页)；US2003124140(实例16)；US 798959。交叉引用：GI:34501467；AAK74120.3；AF361486_1
(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核细胞增强因子、间皮素，Genbank登录号NM_005823)Yamaguchi,N.等人Biol.Chem.269(2),805-808(1994),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20):11531-11536(1999),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1):136-140(1996),J.Biol.Chem.270(37):21984-21990(1995))；WO2003101283(权利要求14)；(WO2002102235(权利要求13；第287-288页)；WO2002101075(权利要求4；第308-309页)；WO200271928(第320-321页)；WO9410312(第52-57页)；交叉引用：MIM:601051；NP_005814.2；NM_005823_1
(6)Napi2b(Napi3b、NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶质载体家族34(磷酸钠)、成员2、II型钠依赖性磷酸盐转运蛋白3b，Genbank登录号NM_006424)
J.Biol.Chem.277(22):19665-19672(2002),Genomics 62(2):281-284(1999),Feild,J.A.等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3):578-582)；WO2004022778(权利要求2)；EP1394274(实例11)；WO2002102235(权利要求13；第326页)；EP875569(权利要求1；第17-19页)；WO200157188(权利要求20；第329页)；WO2004032842(实例IV)；WO200175177(权利要求24；第139-140页)；
交叉引用：MIM:604217；NP_006415.1；NM_006424_1
(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、Semaphorin 5bHlog、sema结构域、七个血小板反应蛋白重复序列(1型和类1型)、跨膜结构域(TM)和短细胞质结构域(semaphorin)5B，Genbank登录号AB040878)
Nagase T.等人(2000)DNA Res.7(2):143-150)；WO2004000997(权利要求1)；WO2003003984(权利要求1)；WO200206339(权利要求1；第50页)；WO200188133(权利要求1；第41-43页，48-58页)；WO2003054152(权利要求20)；WO2003101400(权利要求11)；
登录：Q9P283；EMBL；AB040878；BAA95969.1.Genew；HGNC:10737；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKENcDNA 2700050C12基因，Genbank登录号AY358628)；Ross等人(2002)Cancer Res.62:2546-2553；US2003129192(权利要求2)；US2004044180(权利要求12)；US2004044179(权利要求11)；US2003096961(权利要求11)；US2003232056(实例5)；WO2003105758(权利要求12)；US2003206918(实例5)；EP1347046(权利要求1)；WO2003025148(权利要求20)；
交叉引用：GI:37182378；AAQ88991.1；AY358628_1
(9)ETBR(内皮素B型受体，Genbank登录号AY275463)；
Nakamuta M.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.177,34-39,1991；Ogawa Y.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991；Arai H.等人Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992；Arai H.等人J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993；Sakamoto A.,Yanagisawa M.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991；Elshourbagy N.A.等人J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993；Haendler B.等人J.Cardiovasc.Pharmacol.20,s1-S4,1992；Tsutsumi M.等人Gene 228,43-49,1999；Strausberg R.L.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；Bourgeois C.等人J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997；Okamoto Y.等人Biol.Chem.272,21589-21596,1997；Verheij J.B.等人Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002；Hofstra R.M.W.等人Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997；Puffenberger E.G.等人Cell 79,1257-1266,1994；Attie T.等人，Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995；Auricchio A.等人Hum.Mol.Genet.5:351-354,1996；Amiel J.等人Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996；Hofstra R.M.W.等人Nat.Genet.12,445-447,1996；Svensson P.J.等人Hum.Genet.103,145-148,1998；FuchsS.等人Mol.Med.7,115-124,2001；Pingault V.等人(2002)Hum.Genet.111,198-206；WO2004045516(权利要求1)；WO2004048938(实例2)；WO2004040000(权利要求151)；WO2003087768(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO200261087(图1)；WO2003016494(图6)；WO2003025138(权利要求12；第144页)；WO200198351(权利要求1；第124-125页)；EP522868(权利要求8；图2)；WO200177172(权利要求1；第297-299页)；US2003109676；US6518404(图3)；US5773223(权利要求1a；第31-34栏)；WO2004001004；
(10)MSG783(RNF124、假定蛋白质FLJ20315，Genbank登录号NM_017763)；
WO2003104275(权利要求1)；WO2004046342(实例2)；WO2003042661(权利要求12)；WO2003083074(权利要求14；第61页)；WO2003018621(权利要求1)；WO2003024392(权利要求2；图93)；WO200166689(实例6)；
交叉引用：基因座编号:54894、NP_060233.2、NM_017763_1
(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相关基因1、前列腺癌相关蛋白质1、前列腺六跨膜上皮抗原2、前列腺六跨膜蛋白质，Genbank登录号AF455138)
Lab.Invest.82(11):1573-1582(2002))；WO2003087306；US2003064397(权利要求1；图1)；WO200272596(权利要求13；第54-55页)；WO200172962(权利要求1；图4B)；WO2003104270(权利要求11)；WO2003104270(权利要求16)；US2004005598(权利要求22)；WO2003042661(权利要求12)；US2003060612(权利要求12；图10)；WO200226822(权利要求23；图2)；WO200216429(权利要求12；图10)；
交叉引用：GI:22655488；AAN04080.1；AF455138_1
(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬时受体电位阳离子通道、亚家族M、成员4，Genbank登录号NM_017636)
Xu,X.Z.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19):10692-10697(2001),Cell109(3):397-407(2002),J.Biol.Chem.278(33):30813-30820(2003))；US2003143557(权利要求4)；WO200040614(权利要求14；第100-103页)；WO200210382(权利要求1；图9A)；WO2003042661(权利要求12)；WO200230268(权利要求27；第391页)；US2003219806(权利要求4)；WO200162794(权利要求14；图1A-D)；
交叉引用：MIM:606936；NP_060106.2；NM_017636_1
(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤来源的生长因子，Genbank登录号NP_003203或NM_003212)
Ciccodicola,A.等人EMBO J.8(7):1987-1991(1989),Am.J.Hum.Genet.49(3):555-565(1991))；US2003224411(权利要求1)；WO2003083041(实例1)；WO2003034984(权利要求12)；WO200288170(权利要求2；第52-53页)；WO2003024392(权利要求2；图58)；WO200216413(权利要求1；94-95页，105)；WO200222808(权利要求2；图1)；US5854399(实例2；第17-18栏)；US5792616(图2)；
交叉引用：MIM:187395；NP_003203.1；NM_003212_1
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/Epstein Barr病毒受体)或Hs.73792Genbank登录号M26004)
Fujisaku等人(1989)J.Biol.Chem.264(4):2118-2125)；Weis J.J.等人J.Exp.Med.167,1047-1066,1988；Moore M.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,9194-9198,1987；Barel M.等人Mol.Immunol.35,1025-1031,1998；Weis J.J.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.83,5639-5643,1986；Sinha S.K.等人(1993)J.Immunol.150,5311-5320；WO2004045520(实例4)；US2004005538(实例1)；WO2003062401(权利要求9)；WO2004045520(实例4)；WO9102536(图9.1-9.9)；WO2004020595(权利要求1)；
登录：P20023、Q13866、Q14212、EMBL、M26004、AAA35786.1。
(15)CD79b(CD79B、CD79、IGb(免疫球蛋白相关β)、B29，Genbank登录号NM_000626或11038674)
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7):4126-4131,Blood(2002)100(9):3068-3076,Muller等人(1992)Eur.J.Immunol.22(6):1621-1625)；WO2004016225(权利要求2，图140)；WO2003087768，US2004101874(权利要求1，第102页)；WO2003062401(权利要求9)；WO200278524(实例2)；US2002150573(权利要求5，第15页)；US5644033；WO2003048202(权利要求1，第306和309页)；WO 99/558658，US6534482(权利要求13，图17A/B)；WO200055351(权利要求11，第1145-1146页)；
交叉引用：MIM:147245；NP_000617.1；NM_000626_1
(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白质1a的SH2结构域)、SPAP1B、SPAP1C，Genbank登录号NM_030764，AY358130)Genome Res.13(10):2265-2270(2003),Immunogenetics 54(2):87-95(2002),Blood 99(8):2662-2669(2002),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17):9772-9777(2001),Xu,M.J.等人(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.280(3):768-775；WO2004016225(权利要求2)；WO2003077836；WO200138490(权利要求5；图18D-1-18D-2)；WO2003097803(权利要求12)；WO2003089624(权利要求25)；
交叉引用：MIM:606509；NP_110391.2；NM_030764_1
(17)HER2(ErbB2，Genbank登录号M11730)
Coussens L.等人Science(1985)230(4730):1132-1139)；Yamamoto T.等人Nature 319,230-234,1986；Semba K.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82,6497-6501,1985；Swiercz J.M.等人J.Cell Biol.165,869-880,2004；Kuhns J.J.等人J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999；Cho H.-S.等人Nature 421,756-760,2003；EhsaniA.等人(1993)Genomics 15,426-429；WO2004048938(实例2)；WO2004027049(图1I)；WO2004009622；WO2003081210；WO2003089904(权利要求9)；WO2003016475(权利要求1)；US2003118592；WO2003008537(权利要求1)；WO2003055439(权利要求29；图1A-B)；WO2003025228(权利要求37；图5C)；和WO200222636(实施例13；第95-107页)；WO200212341(权利要求68；图7)；WO200213847(第71-74页)；WO200214503(第114-117页)；WO200153463(权利要求2；第41-46页)；WO200141787(第15页)；WO200044899(权利要求52；图7)；WO200020579(权利要求3；图2)；US5869445(权利要求3；第31-38栏)；WO9630514(权利要求2；第56-61页)；EP1439393(权利要求7)；WO2004043361(权利要求7)；WO2004022709；WO200100244(实例3；图4)；
登录：P04626；EMBL；M11767；AAA35808.1.EMBL；M11761；AAA35808.1。(18)NCA(CEACAM6，Genbank登录号M18728)；
Barnett T.等人Genomics 3,59-66,1988；Tawaragi Y.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.150,89-96,1988；Strausberg R.L.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:16899-16903,2002；WO2004063709；EP1439393(权利要求7)；WO2004044178(实例4)；WO2004031238；WO2003042661(权利要求12)；WO200278524(实例2)；WO200286443(权利要求27；第427页)；WO200260317(权利要求2)；
登录：P40199；Q14920；EMBL；M29541；AAA59915.1.EMBL；M18728；
(19)MDP(DPEP1，Genbank登录号BC017023)
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26):16899-16903(2002))；WO2003016475(权利要求1)；WO200264798(权利要求33；第85-87页)；JP05003790(图6-8)；WO9946284(图9)；
交叉引用：MIM:179780；AAH17023.1；BC017023_1
(20)IL20R(IL20Ra、ZCYTOR7，Genbank登录号AF184971)；Clark H.F.等人GenomeRes.13,2265-2270,2003；Mungall A.J.等人Nature 425,805-811,2003；Blumberg H.等人Cell 104,9-19,2001；Dumoutier L.等人J.Immunol.167,3545-3549,2001；Parrish-NovakJ.等人J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002；Pletnev S.等人(2003)Biochemistry 42:12617-12624；Sheikh F.等人(2004)J.Immunol.172,2006-2010；EP1394274(实例11)；US2004005320(实例5)；WO2003029262(第74-75页)；WO2003002717(权利要求2；第63页)；WO200222153(第45-47页)；US2002042366(第20-21页)；WO200146261(第57-59页；WO200146232(第63-65页)；WO9837193(权利要求1；第55-59页)；
登录：Q9UHF4、Q6UWA9、Q96SH8、EMBL、AF184971、AAF01320.1。
(21)短蛋白聚糖(BCAN、BEHAB，Genbank登录号AF229053)
Gary S.C.等人Gene 256,139-147,2000；Clark H.F.等人Genome Res.13,2265-2270,2003；Strausberg R.L.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；US2003186372(权利要求11)；US2003186373(权利要求11)；US2003119131(权利要求1；图52)；US2003119122(权利要求1；图52)；US2003119126(权利要求1)；US2003119121(权利要求1；图52)；US2003119129(权利要求1)；US2003119130(权利要求1)；US2003119128(权利要求1；图52)；US2003119125(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO200202634(权利要求1)；
(22)EphB2R(DRT、ERK、Hek5、EPHT3、Tyro5，Genbank登录号NM_004442)
Chan,J.和Watt,V.M.,Oncogene 6(6),1057-1061(1991)Oncogene 10(5):897-905(1995),Annu.Rev.Neurosci.21:309-345(1998),Int.Rev.Cytol.196:177-244(2000))；WO2003042661(权利要求12)；WO200053216(权利要求1；第41页)；WO2004065576(权利要求1)；WO2004020583(权利要求9)；WO2003004529(第128-132页)；WO200053216(权利要求1；第42页)；
交叉引用：MIM:600997；NP_004433.2；NM_004442_1
(23)ASLG659(B7h，Genbank登录号AX092328)
US20040101899(权利要求2)；WO2003104399(权利要求11)；WO2004000221(图3)；US2003165504(权利要求1)；US2003124140(实例2)；US2003065143(图60)；WO2002102235(权利要求13；第299页)；US2003091580(实例2)；WO200210187(权利要求6；图10)；WO200194641(权利要求12；图7b)；WO200202624(权利要求13；图1A-1B)；US2002034749(权利要求54；第45-46页)；WO200206317(实例2；第320-321页；权利要求34；第321-322页)；WO200271928(第468-469页)；WO200202587(实例1；图1)；WO200140269(实例3；第190-192页)；WO200036107(实例2；第205-207页)；WO2004053079(权利要求12)；WO2003004989(权利要求1)；WO200271928(第233-234页，第452-453页)；WO 0116318；
(24)PSCA(前列腺干细胞抗原前体，Genbank登录号AJ297436)
Reiter R.E.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,1735-1740,1998；Gu Z.等人Oncogene 19,1288-1296,2000；Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3):783-788；WO2004022709；EP1394274(实例11)；US2004018553(权利要求17)；WO2003008537(权利要求1)；WO200281646(权利要求1；第164页)；WO2003003906(权利要求10；第288页)；WO200140309(实例1；图17)；US2001055751(实例1；图1b)；WO200032752(权利要求18；图1)；WO9851805(权利要求17；第97页)；WO9851824(权利要求10；第94页)；WO9840403(权利要求2；图1B)；
登录：O43653；EMBL；AF043498；AAC39607.1.
(25)GEDA(Genbank登录号AY260763)；
AAP14954脂肪瘤HMGIC融合伴侣样蛋白质/pid＝AAP14954.1-智人物种:智人(人类)
WO2003054152(权利要求20)；WO2003000842(权利要求1)；WO2003023013(实例3；权利要求20)；US2003194704(权利要求45)；交叉引用：GI:30102449；AAP14954.1；AY260763_1
(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体、BLyS受体3、BR3，Genbank登录号AF116456)；BAFF受体/pid＝NP_443177.1-智人
Thompson,J.S.等人Science 293(5537),2108-2111(2001)；WO2004058309；WO2004011611；WO2003045422(实例；第32-33页)；WO2003014294(权利要求35；图6B)；WO2003035846(权利要求70；第615-616页)；WO200294852(第136-137栏)；WO200238766(权利要求3；第133页)；WO200224909(实例3；图3)；
交叉引用：MIM:606269；NP_443177.1；NM_052945_1；AF132600
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同工型、BL-CAM、Lyb-8、Lyb8、SIGLEC-2、FLJ22814，Genbank登录号AK026467)；
Wilson等人(1991)J.Exp.Med.173:137-146；WO2003072036(权利要求1；图1)；
交叉引用：MIM:107266；NP_001762.1；NM_001771_1
(28)CD79a(CD79A、CD79、免疫球蛋白相关α，即一种B细胞特异性蛋白质，其与Igβ(CD79B)共价相互作用并与Ig M分子在表面形成复合物，转导涉及B细胞分化的信号)，pI：4.84,MW:25028TM：2[P]基因染色体：19q13.2，Genbank登录号NP_001774.10)
WO2003088808、US20030228319；WO2003062401(权利要求9)；US2002150573(权利要求4，第13-14页)；WO9958658(权利要求13，图16)；WO9207574(图1)；US5644033；Ha等人(1992)J.Immunol.148(5):1526-1531；Mueller等人(1992)Eur.J.Biochem.22:1621-1625；Hashimoto等人(1994)Immunogenetics 40(4):287-295；Preud’homme等人(1992)Clin.Exp.Immunol.90(1):141-146；Yu等人(1992)J.Immunol.148(2)633-637；Sakaguchi等人(1988)EMBO J.7(11):3457-3464；
(29)CXCR5(Burkitt淋巴瘤受体1，即一种由CXCL13趋化因子激活的G蛋白质偶联受体，其在淋巴细胞迁移和体液防御中起作用，在HIV-2感染以及也许在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病的发展中起作用)；372aa,pI:8.54MW：41959TM：7[P]基因染色体：11q23.3，Genbank登录号NP_001707.1)
WO2004040000；WO2004015426；US2003105292(实例2)；US6555339(实例2)；WO200261087(图1)；WO200157188(权利要求20，第269页)；WO200172830(第12-13页)；WO200022129(实例1，第152-153页，实例2，第254-256页)；WO9928468(权利要求1，第38页)；US5440021(实例2，第49-52栏)；WO9428931(第56-58页)；WO9217497(权利要求7，图5)；Dobner等人(1992)Eur.J.Immunol.22:2795-2799；Barella等人(1995)Biochem.J.309:773-779；
(30)HLA-DOB(II类MHC分子的β亚基(Ia抗原)，其结合肽并将其呈递给CD4+T淋巴细胞)；273aa,pI:6.56MW:30820TM:1[P]基因染色体：6p21.3，Genbank登录号NP_002111.1)
Tonnelle等人(1985)EMBO J.4(11):2839-2847；Jonsson等人(1989)Immunogenetics 29(6):411-413；Beck等人(1992)J.Mol.Biol.228:433-441；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99:16899-16903；Servenius等人(1987)J.Biol.Chem.262:8759-8766；Beck等人(1996)J.Mol.Biol.255:1-13；Naruse等人(2002)Tissue Antigens 59:512-519；WO9958658(权利要求13，图15)；US6153408(第35-38栏)；US5976551(第168-170栏)；US6011146(第145-146栏)；Kasahara等人(1989)Immunogenetics30(1):66-68；Larhammar等人(1985)J.Biol.Chem.260(26):14111-14119；
(31)P2X5(嘌呤受体P2X配体门控离子通道5，即一种由细胞外ATP门控的离子通道，可能参与突触传递和神经发生，其缺乏可能有助于特发性逼尿肌不稳定的病理生理学)；422aa),pI:7.63,MW:47206TM:1[P]基因染色体：17p13.3，Genbank登录号NP_002552.2)
Le等人(1997)FEBS Lett.418(1-2):195-199；WO2004047749；WO2003072035(权利要求10)；Touchman等人(2000)Genome Res.10:165-173；WO200222660(权利要求20)；WO2003093444(权利要求1)；WO2003087768(权利要求1)；WO2003029277(第82页)；
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72，Lyb-2)PROTEIN SEQUENCE Fullmaeaity...tafrfpd(1..359；359aa),pI:8.66,MW:40225TM：1[P]基因染色体：9p13.3，Genbank登录号NP_001773.1)
WO2004042346(权利要求65)；WO2003026493(第51-52页、第57-58页)；WO200075655(第105-106页)；Von Hoegen等人(1990)J.Immunol.144(12):4870-4877；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99:16899-16903；
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)，即富含亮氨酸重复序列(LRR)家族的I型膜蛋白，其调节B细胞活化和细胞凋亡，其功能丧失与系统性红斑狼疮患者的疾病活性增加相关)；661aa,pI:6.20,MW:74147TM：1[P]基因染色体：5q12,Genbank登录号NP_005573.1)
US2002193567；WO9707198(权利要求11，第39-42页)；Miura等人(1996)Genomics38(3):299-304；Miura等人(1998)Blood 92:2815-2822；WO2003083047；WO9744452(权利要求8，第57-61页)；WO200012130(第24-26页)；
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白质1，即一种包含C2型Ig样和ITAM结构域的免疫球蛋白Fc结构域的假定受体，其可能在B淋巴细胞分化中起作用)；429aa,pI:5.28,MW:46925TM：1[P]基因染色体：1q21-1q22，Genbank登录号NP_443170.1)
WO2003077836；WO200138490(权利要求6，图18E-1-18-E-2)；Davis等人(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA 98(17):9772-9777；WO2003089624(权利要求8)；EP1347046(权利要求1)；WO2003089624(权利要求7)；
(35)FCRH5(IRTA2、免疫球蛋白超家族受体易位相关2，即一种假定免疫受体，其可能在B细胞发育和淋巴瘤的发生中起作用的；在某些B细胞恶性肿瘤中通过易位导致基因失调)；977aa,pI:6.88MW：106468TM:1[P]基因染色体：1q21，Genbank登录号人：AF343662、AF343663、AF343664、AF343665、AF369794、AF397453、AK090423、AK090475、AL834187、AY358085；鼠：AK089756、AY158090、AY506558；NP_112571.1WO2003024392(权利要求2，图97)；Nakayama等人(2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1):124-127；WO2003077836；WO200138490(权利要求3，图18B-1-18B-2)；
(36)TENB2(TMEFF2、tomoregulin、TPEF、HPP1、TR，即一种假定的跨膜蛋白聚糖，其与EGF/heregulin家族生长因子和卵泡抑素有关)；374aa,NCBI登录：AAD55776,AAF91397,AAG49451,NCBI RefSeq:NP_057276；NCBI基因：23671；OMIM:605734；SwissProt Q9UIK5；Genbank登录号AF179274；AY358907、CAF85723、CQ782436
WO2004074320(SEQ ID NO 810)；JP2004113151(SEQ ID NO 2、4、8)；WO2003042661(SEQ ID NO 580)；WO2003009814(SEQ ID NO 411)；EP1295944(第69-70页)；WO200230268(第329页)；WO200190304(SEQ ID NO 2706)；US2004249130；US2004022727；WO2004063355；US2004197325；US2003232350；US2004005563；US2003124579；Horie等人(2000)Genomics 67:146-152；Uchida等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602；Liang等人(2000)Cancer Res.60:4907-12；Glynne-Jones等人(2001)Int JCancer.Oct 15；94(2):178-84；
(37)PMEL17(silver homolog；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；ME20；gp100)BC001414；BT007202；M32295；M77348；NM_006928；McGlinchey,R.P.等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106(33),13731-13736；Kummer,M.P.等人(2009)J.Biol.Chem.284(4),2296-2306；
(38)TMEFF1(具有EGF样和两个卵泡抑素样结构域1的跨膜蛋白；Tomoregulin-1)；H7365；C9orf2；C9ORF2；U19878；X83961；NM_080655；NM_003692；Harms,P.W.(2003)GenesDev.17(21),2624-2629；Gery,S.等人(2003)Oncogene 22(18):2723-2727；
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受体α1、GFRA1、GDNFR、GDNFRA、RETL1、TRNR1、RET1L、GDNFR-α1、GFR-Α-1)；U95847；BC014962；NM_145793NM_005264；Kim,M.H.等人(2009)Mol.Cell.Biol.29(8),2264-2277；Treanor,J.J.等人(1996)Nature 382(6586):80-83；
(40)Ly6E(淋巴细胞抗原6复合物、基因座E、Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)；NP_002337.1；NM_002346.2；de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6),768-774；Zammit,D.J.等人(2002)Mol.Cell.Biol.22(3):946-952；WO 2013/17705；
(41)TMEM46(shisa homolog 2(非洲爪蟾)；SHISA2)；NP_001007539.1；NM_001007538.1；Furushima,K.等人(2007)Dev.Biol.306(2),480-492；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270；
(42)Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合物、基因座G6D、Ly6-D、MEGT1)；NP_067079.2；NM_021246.2；Mallya,M.等人(2002)Genomics 80(1):113-123；Ribas,G.等人(1999)J.Immunol.163(1):278-287；
(43)LGR5(富含亮氨酸重复序列的G蛋白质偶联受体5；GPR49、GPR67)；NP_003658.1；NM_003667.2；Salanti,G.等人(2009)Am.J.Epidemiol.170(5):537-545；Yamamoto,Y.等人(2003)Hepatology 37(3):528-533；
(44)RET(ret原癌基因、MEN2A、HSCR1、MEN2B、MTC1、PTC、CDHF12、Hs.168114、RET51、RET-ELE1)；NP_066124.1；NM_020975.4；Tsukamoto,H.等人(2009)Cancer Sci.100(10):1895-1901；Narita,N.等人(2009)Oncogene 28(34):3058-3068；
(45)LY6K(淋巴细胞抗原6复合物基因座K、LY6K、HSJ001348、FLJ35226)；NP_059997.3；NM_017527.3；Ishikawa,N.等人(2007)Cancer Res.67(24):11601-11611；deNooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6):768-774；
(46)GPR19(G蛋白质偶联受体19；Mm.4787)；NP_006134.1；NM_006143.2；Montpetit,A.和Sinnett,D.(1999)Hum.Genet.105(1-2):162-164；O'Dowd,B.F.等人(1996)FEBS Lett.394(3):325-329；
(47)GPR54(KISS1受体、KISS1R、GPR54、HOT7T175、AXOR12)；NP_115940.2；NM_032551.4；Navenot,J.M.等人(2009)Mol.Pharmacol.75(6):1300-1306；Hata,K.等人(2009)Anticancer Res.29(2):617-623；
(48)ASPHD1(含天冬氨酸β-羟化酶结构域1、LOC253982)；NP_859069.2；NM_181718.3；Gerhard,D.S.等人(2004)Genome Res.14(10B):2121-2127；
(49)酪氨酸酶(TYR、OCAIA、OCA1A、酪氨酸酶、SHEP3)；NP_000363.1；NM_000372.4；Bishop,D.T.等人(2009)Nat.Genet.41(8):920-925；Nan,H.等人(2009)Int.J.Cancer 125(4):909-917；
(50)TMEM118(环指蛋白、跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；NP_001103373.1；NM_001109903.1；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270；Scherer,S.E.等人(2006)Nature 440(7082):346-351
(51)GPR172A(G蛋白质偶联受体172A、GPCR41、FLJ11856、D15Ertd747e)；NP_078807.1；NM_024531.3；Ericsson,T.A.等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100(11):6759-6764；Takeda,S.等人(2002)FEBS Lett.520(1-3):97-101。
(52)CD33，即唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素家族的一种成员，其是一种67kDa的糖基化跨膜蛋白。CD33在除了必定表达的骨髓单核细胞和红系祖细胞外，在大多数髓样和单核细胞白血病细胞上表达。在最早的多能干细胞、成熟的粒细胞、淋巴样细胞或非造血细胞上看不到它(Sabbath等人，(1985)J.Clin.Invest.75:756-56；Andrews等人，(1986)Blood 68:1030-5)。CD33在其胞质尾上包含两个酪氨酸残基，每个残基后面都是疏水残基，类似于在许多抑制受体中看到的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。
(53)CLL-1(CLEC12A、MICL和DCAL2)编码C型凝集素/C型凝集素样结构域(CTL/CTLD)超家族的成员。该家族的成员共享共同的蛋白质折叠，并具有多种功能，例如细胞粘附、细胞信号传导、糖蛋白质周转以及在炎症和免疫应答中的作用。该基因编码的蛋白质是粒细胞和单核细胞功能的负调节剂。已经描述了该基因的几个可替代地剪接的转录变体，但是其中一些变体的全长性质尚未确定。该基因与12p13号染色体上自然杀手基因复合物区域中的其他CTL/CTLD超家族成员紧密相连(Drickamer K(1999)Curr.Opin.Struct.Biol.9(5):585–90；van Rhenen A等人，(2007)Blood 110(7):2659–66；Chen CH等人(2006)Blood 107(4):1459–67；Marshall AS等人(2006)Eur.J.Immunol.36(8):2159–69；Bakker AB等人(2005)Cancer Res.64(22):8443–50；Marshall AS等人(2004)J.Biol.Chem.279(15):14792–802)。已经显示CLL-1是II型跨膜受体，其包含单个C型凝集素样结构域(预计不会结合钙或糖)、茎区域、跨膜结构域和包含ITIM基序的短胞质尾。
在一方面，Ab-CIDE的抗体可以是针对在多种细胞或组织类型上发现的蛋白质的抗体。此类抗体的实例包括gD和EpCAM。上皮细胞粘附分子(EpCAM)是一种跨膜糖蛋白，其介导上皮细胞中不依赖Ca2+的同型细胞间粘附(Litvinov,S.等人(1994)Journal of CellBiology 125(2):437–46)。也称为DIAR5、EGP-2、EGP314、EGP40、ESA、HNPCC8、KS1/4、KSA、M4S1、MIC18、MK-1、TACSTD1、TROP1，EpCAM也参与细胞信号传导(Maetzel,D.等人(2009)Nature Cell Biology 11(2):162–71)、迁移(Osta,WA；等人(2004)Cancer Res.64(16):5818–24)、增殖和分化(Litvinov,S.等人(1996)Am J Pathol.148(3):865–75)。另外，EpCAM通过上调c-myc、e-fabp和细胞周期蛋白A和E的能力而具有致癌能力(Munz,M.等人(2004)Oncogene 23(34):5748–58)。由于EpCAM仅在上皮和上皮来源的赘生物中表达，因此EpCAM可以用作各种癌症的诊断标记。换句话说，Ab-CIDE可以用来将CIDE递送到许多细胞或组织，而不是像使用靶向抗体时那样递送给特定的细胞类型或组织类型。
如本文所述，Ab-CIDE可包含抗体，例如选自以下项的抗体：
抗Ly6E抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE可以包含抗Ly6E抗体。淋巴细胞抗原6复合物基因座E(Ly6E)，也称为视黄酸诱导基因E(RIG-E)和干细胞抗原2(SCA-2)。它是一种GPI连锁，131个氨基酸的长度，约8.4kDa的蛋白质，功能未知，没有已知的结合伴侣。其最初被鉴定为在小鼠的未成熟胸腺细胞，胸腺髓质上皮细胞中表达的转录物(Mao等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:5910-5914)。在一些实施例中，本文描述的主题提供的Ab-CIDE包含在PCT公开号WO 2013/177055中描述的抗Ly6E抗体。
在一些实施例中，本文所述的主题提供了包含抗Ly6E抗体的Ab-CIDE，所述抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的主题提供了包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的主题提供了包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文所述的主题提供了包含抗体的Ab-CIDE，所述抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗Ly6E抗体是人源化的。在一个实施例中，抗Ly6E抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗Ly6E抗体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗Ly6E抗体保留了结合Ly6E的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:8中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:8中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Ly6E抗体包含SEQ ID NO:8的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗Ly6E抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，VL序列与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗Ly6E抗体保留了结合Ly6E的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:7中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:7中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Ly6E抗体包含SEQ ID NO:7的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQID NO:10的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了包含抗Ly6E抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了Ab-CIDE，其中所述抗体包含分别在SEQ ID NO:8和SEQID NO:7中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗Ly6E抗体结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗Ly6E抗体(分别包含SEQ ID NO:8的VH序列和SEQ ID NO:7的VL序列)结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗Ly6E抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗Ly6E抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，该抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。在一些实施例中，Ab-CIDE包含抗Ly6E抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含SEQ ID NO:16和15的氨基酸序列。
抗HER2抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE包含抗HER2抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体包含人源化抗HER2抗体，例如huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7和huMAb4D5-8，如US 5821337的表3中所述。这些抗体包含人框架区和与HER2结合的鼠抗体(4D5)的互补决定区。人源化抗体huMAb4D5-8也称为曲妥珠单抗，可以商品名
Figure BDA0003063017060000531
商购。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体包含人源化抗HER2抗体，例如人源化2C4，如US7862817中所述。示例性的人源化2C4抗体是帕妥珠单抗，可以商品名
Figure BDA0003063017060000532
商购。
在另一实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体包含人源化7C2抗HER2抗体。人源化7C2抗体为抗HER2抗体。
在一些实施例中，本文描述的是包含抗HER2抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:23、27或28的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:24或29的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施例中，本文所述的是包含抗HER2抗体的PAC，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:23、27或28的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:24或29的氨基酸序列的HVR-H3。在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，抗体包含(a)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:23、27、28的氨基酸序列的HVR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:24或29的氨基酸序列的HVR-H3。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列的HVR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2、(c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:23、27或28的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:24或29的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:23、27或28的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:24或29的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体是人源化的。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗HER2抗体包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗HER2抗体保留了结合HER2的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:18中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:18中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗HER2抗体包含SEQ IDNO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗HER2抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，VL序列与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗HER2抗体保留了结合HER2的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:17中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:17中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗HER2抗体包含SEQ ID NO:17的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了包含抗HER2抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了包含抗体的Ab-CIDE，其中该抗体包含分别在SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:17中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在一个实施例中，提供了包含抗体的Ab-CIDE，其中该抗体包含SEQ ID NO:30的人源化7C2.v2.2.LA(hu7C2)K149Cκ轻链序列
在一个实施例中，提供了包含抗体的Ab-CIDE，其中该抗体包含SEQ ID NO:31的Hu7C2 A118C IgG1重链序列
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗HER2抗体结合相同表位的抗体的PAC。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗HER2抗体(分别包含SEQ ID NO:18的VH序列和SEQ ID NO:17的VL序列)结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗HER2抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗HER2抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE包含基本上是全长抗体的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗B7-H4抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE可以包含抗B7-H4抗体。B7-H4是I型跨膜蛋白，是B7蛋白质超家族的成员，该蛋白质与T细胞受体抗原信号结合提供共同信号。B7-H4是T细胞功能的负调节剂，T细胞的连接会抑制T细胞的生长、细胞因子分泌和细胞毒性。消除小鼠中的B7-H4不会影响免疫细胞的稳态，也没有自身免疫的迹象。Zhu等人，Blood,113(8):1759-1767(2009)；Suh等人，Molecular and Cellular Biology,26(17):6403-6411(2006)。B7-H4的受体是未知的和鉴定的。
人B7-H4是282个氨基酸的蛋白质(包括氨基末端信号序列)，其中约227个氨基酸被预测为在切割氨基末端信号序列后位于细胞外空间。B7-H4包含Ig样V结构域、Ig样C结构域、跨膜结构域和短胞质尾。B7-H4是B7家族的成员，可能通过其共同抑制信号以及T细胞受体的抗原依赖性信号传导而下调免疫系统。B7-H4理论上在正常人体组织中表达，但在多种人类癌症中高度表达，其中包括女性生殖系统癌症-乳腺癌、卵巢癌和子宫内膜癌。据报道，在包括原发性乳腺癌(约95％)和转移性乳腺癌(约97％)的侵袭性导管癌和小叶癌中，B7-H4的患病率很高。尽管B7-H4染色增加与PR和Her2阴性状态相关，但表达与肿瘤等级或阶段无关。除了在这些类型的乳腺癌中高比例的B7H4染色细胞外，浸润淋巴细胞的数量也随之减少。最近，在肺转移性乳腺癌的B7-H4基因敲除模型中，作者报告说，与野生型小鼠相比，B7-H4-/-小鼠的肺肿瘤结节更少，并且显示出对肿瘤激发的增强生存和记忆应答。这归因于与B7-H4-Ig融合蛋白结合的肿瘤相关嗜中性粒细胞对CD4和CD8细胞的免疫抑制作用。这也可以解释为什么SCID小鼠中植入的过表达B7-H4的SKOV3细胞比野生型SKOV3细胞更具侵略性。此外，显示出SKBR3细胞中的B7-H4 mRNA和蛋白质的敲降导致半胱天冬酶活性和细胞凋亡的增加。在一些实施例中，本文描述的主题提供的Ab-CIDE包含在PCT公开号WO 2016/040724中描述的抗B7-H4抗体。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，包含：
(a)(i)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(ii)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3、和(iii)包含SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2；或者
(b)(i)包含SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列的HVR-H3、(ii)包含SEQ ID NO:129所示的氨基酸序列的HVR-L3、和(iii)包含SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：
(a)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:128所示的氨基酸序列的HVR-H3；或者
(b)(i)包含SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:213的重链框架FR3序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:202所示的氨基酸序列的HVR-L1，(b)包含SEQ ID NO:203所示的氨基酸序列的HVR-L2，以及(c)包含SEQID NO:129所示的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQID NO:207的轻链框架FR3序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含
(a)与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的VH序列；
(b)与SEQ ID NO:126的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的VL序列；或者
(c)与SEQ ID NO:127的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的VH序列；或者
(d)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列；或者
(e)如(c)中的VH序列和如(b)中的VL序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:198或127的VH序列。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:126的VL序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含(a)SEQ ID NO:198的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列；或(b)SEQ ID NO:127的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列。
在一些实施例中，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含：
(a)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3；或者
(b)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在本文描述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可以是单克隆抗体。在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可以是结合B7-H4的抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，以及以下描述的其他片段。
在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可以是IgG1、IgG2a或IgG2b抗体。在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可包含一个或多个改造的半胱氨酸氨基酸残基。在本文所述的任何实施例中，一个或多个改造的半胱氨酸氨基酸残基可位于重链中。在本文所述的任何实施例中，一个或多个改造的半胱氨酸氨基酸残基可位于轻链中。在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可在重链恒定区中包含至少一个选自A118C和S400C的突变。在本文所述的任何实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体可在轻链恒定区中包含至少一个选自K149C和V205C的突变。
在一些实施例中，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含(a)SEQ ID NO:132的重链序列和SEQ ID NO:134的轻链序列；或(b)SEQ ID NO:133的重链序列和SEQ IDNO:134的轻链序列；或(c)SEQ ID NO:130的重链序列和SEQ ID NO:140的轻链序列；或(d)SEQ ID NO:130的重链序列和SEQ ID NO:141的轻链序列；或(e)SEQ ID NO:131的重链序列和SEQ ID NO:140的轻链序列；或(f)SEQ ID NO:131的重链序列和141的轻链序列；或(g)SEQ ID NO:144的重链序列和SEQ ID NO:142的轻链序列；或(h)SEQ ID NO:144的重链序列和SEQ ID NO:143的轻链序列；或(i)SEQ ID NO:137的重链序列和SEQ ID NO:138的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:130的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；或(d)SEQ ID NO:130的重链序列和SEQ ID NO:146的轻链序列；或(e)SEQ ID NO:131的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；或(f)SEQ ID NO:131的重链序列和146的轻链序列；或(g)SEQ ID NO:144的重链序列和SEQ ID NO:147的轻链序列；或(h)SEQ ID NO:144的重链序列和SEQ ID NO:148的轻链序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是包含第一半抗体和第二半抗体的双表位抗体，其中第一半抗体包含与B7-H4的第一表位结合的第一VH/VL单元，其中第二半抗体包含与B7-H4的第二表位结合的第二VH/VL单元。在一些实施例中，第一表位或第二表位是在在全部或部分的含B7-H4 Ig-V结构域内的表位。在一些实施例中，第一表位或第二表位不在B7-H4 Ig-V结构域内或不完全在含B7-H4 Ig-V的结构域内。在一些实施例中，第一表位在在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内，第二表位不在B7-H4 Ig-V结构域内或不完全在含B7-H4 Ig-V的结构域内；或其中第一表位不在B7-H4 Ig-V结构域内或不完全在含B7-H4 Ig-V的结构域内，第二表位在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内。在一些实施例中，第一表位和第二表位各自独立地选自：
a)在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位；
b)在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位；以及
c)在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位。
在一些实施例中，含B7-H4 Ig-V的结构域具有SEQ ID NO:233的氨基酸29-157的序列。在一些实施例中，含B7-H4 Ig-C的结构域具有SEQ ID NO:233的氨基酸158-250的序列。
在一些实施例中，
a)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位；或者
b)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位；或者
c)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位；或者
d)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位；或者
e)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位；或者
f)第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位。
在一些实施例中，第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位；或其中第一半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V和Ig-C的结构域内的表位，而第二半抗体结合在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位。
在一些实施例中，第一半抗体包括：
(a)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3；
(b)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3；
(c)SEQ ID NO:198的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列；或者
(d)SEQ ID NO:127的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列。
在一些实施例中，第二半抗体包含：
(a)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3；
(b)(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3；
(c)SEQ ID NO:198的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列；或者
(d)SEQ ID NO:127的VH序列和SEQ ID NO:126的VL序列。在一些实施例中，第一半抗体包含
(a)(i)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3；或者
(b)SEQ ID NO:216的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。
在一些实施例中，第二半抗体包含：
(a)(i)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3、(iv)包含SEQ IDNO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(v)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2、和(vi)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3；或者
(b)SEQ ID NO:216的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是双表位抗体，其是IgG1或IgG4抗体。在一些实施例中，第一半抗体包含具有杵突变的第一重链恒定区，而第二重链包含具有臼突变的第二重链恒定区；或其中第一半抗体包含具有臼突变的第一重链恒定区，而第二重链包含具有杵突变的第二重链恒定区。在一些实施例中，双表位抗体是IgG1抗体，并且其中杵突变包括T366W突变。在一些实施例中，双表位抗体是IgG1抗体，并且其中臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V的至少一个、至少两个或三个突变。在一些实施例中，双表位抗体是IgG4抗体，并且其中杵突变包括T366W突变。在一些实施例中，双表位抗体是IgG4抗体，并且其中臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V突变的至少一个、至少两个或三个突变。
在一些实施例中，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体(其为双表位抗体)，其中：
a)第一半抗体包含SEQ ID NO:159或163的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列；
b)第一半抗体包含SEQ ID NO:160或164的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列；
c)第一半抗体包含SEQ ID NO:161或165的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列；
d)第一半抗体包含SEQ ID NO:162或166的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列；
e)第二半抗体包含SEQ ID NO:159或163的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列；
f)第二半抗体包含SEQ ID NO:160或164的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列；
g)第二半抗体包含SEQ ID NO:161或165的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列；或者
h)第二半抗体包含SEQ ID NO:162或166的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列。
在一些实施例中，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体(其为双表位抗体)，其中：
a)第一半抗体包含SEQ ID NO:159或163的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列，而第二半抗体包含SEQ ID NO:162或166的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列；或者
b)第一半抗体包含SEQ ID NO:161或165的重链序列和SEQ ID NO:147或148的轻链序列，而第二半抗体包含SEQ ID NO:160或164的重链序列和SEQ ID NO:145或146的轻链序列。
在一些实施例中，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体(其为双表位抗体)，其包含第一半抗体和第二半抗体，其中第一半抗体包含结合B7-H4的第一表位的第一VH/VL单元，其中第二半抗体包含结合B7-H4的第二表位的第二VH/VL单元，其中第一半抗体包含SEQ ID NO:159或163的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列，第二半抗体包含SEQ ID NO:162或166的重链序列和SEQ ID NO:147的轻链序列。
在本文所述的任何实施例中，B7-H4可以是SEQ ID NO:233的人B7-H4。
在SEQ ID NO:233中提供了示例性的天然人B7-H4前体蛋白质序列，其具有信号序列(氨基酸1-28)，并且在SEQ ID NO:234中示出了相应的成熟B7-H4蛋白质序列(对应于SEQID NO:233的氨基酸29-282)。
在某些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：
(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合，并且
(b)以≤100nM、≤50nM、≤10nM、或≤9nM、或≤8nM、或≤7nM、或≤6nM、或≤5nM、或≤4nM、或≤3nM、或≤2nM、或≤1nM，并且任选地≥0.0001nM、或≥0.001nM、或≥0.01nM的亲和力结合B7-H4。
Ab-CIDE的非限制性示例性抗B7-H4抗体包括hu1D11.v1.9 varC2和hu1D11.v1.9varD，如本文所述。在一些实施例中，B7-H4是人B7-H4。在一些实施例中，B7-H4选自人、食蟹猴、小鼠和大鼠B7-H4。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与在全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与在全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与在全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。在一些此类实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体以≤100nM、≤50nM、≤10nM、或≤9nM、或≤8nM、或≤7nM、或≤6nM、或≤5nM、或≤4nM、或≤3nM、或≤2nM、或≤1nM，并且任选地≥0.0001nM、或≥0.001nM、或≥0.01nM的亲和力结合B7-H4。
抗体1D11v1.9变体和其他实施例
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含选自SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含选自SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是人源化的。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含受体人构架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些实施例中，人受体框架是人VLκI共有(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些实施例中，人受体框架是人VLκI共有(VLKI)框架和/或VH框架VH1，其包含以下任一突变：轻链框架区FR3中的Y49H、V58I、T69R和/或F71Y突变；重链框架区FR3中的V67A、I69L、R71A、T73K和/或T75S突变。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含SEQ ID NO:213的重链框架FR3序列。在一些此类实施例中，重链可变结构域框架是具有SEQ ID NO:213的FR3序列的修饰的人VH1框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:198或127的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:198或127的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:198或127中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:198或127中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。
任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:198的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列的HVR-H3。
任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:127的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:128所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:126的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:126中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:126中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:126的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含如上述任一实施例中提供的VH和如上述任一实施例中提供的VL。
在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:198和SEQ ID NO:126中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:126中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在某些实施例中，提供了根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其与B7-H4结合并且具有以下特征中的至少一个：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。
在另一方面，根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗体1D11和其他实施例
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ IDNO:170的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ IDNO:167的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2和(c)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含选自SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含选自SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是人源化的。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含受体人构架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些实施例中，人受体框架是人VLκI共有(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些实施例中，人受体框架是人VLκI共有(VLKI)框架和/或VH框架VH1，其包含以下任一突变：轻链框架区FR3中的Y49H、V58I、T69R和/或F71Y突变；重链框架区FR3中的V67A、I69L、R71A、T73K和/或T75S突变。
在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含如上述任一实施例中的HVR，并且进一步包含SEQ ID NO:211、212或213的重链框架FR3序列。在一些此类实施例中，重链可变结构域框架是具有SEQ ID NO:211、212或213的FR3序列的修饰的人VH1框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:4中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:4中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:4的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQID NO:6所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:167所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:196、197、198、99、100、101、102或103的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，与SEQ ID NO:196、197、198、99、100、101、102或103的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:196、197、198、99、100、101、102或103中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:196、197、198、99、100、101、102或103中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:196、197、198、99、100、101、102或103的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:199所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQID NO:200所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:201所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:3中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:3中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:3的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:195、253、254、255、256、257或258的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ IDNO:195、253、254、255、256、257或258的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:195、253、254、255、256、257或258中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:195、253、254、255、256、257或258中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:195、253、254、255、256、257或258的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含如上述任一实施例中提供的VH和如上述任一实施例中提供的VL。
在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:253中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:257中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQID NO:102和SEQ ID NO:258中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:258中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:256中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:255中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:254中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:253中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:99和SEQ IDNO:253中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:196和SEQ ID NO:253中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:196和SEQ ID NO:195中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:195中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:198和SEQ ID NO:195中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与本文提供的抗B7-H4抗体结合相同表位。例如，在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ IDNO:4的VH序列和SEQ ID NO:3的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:101的VH序列和SEQ ID NO:253的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:101的VH序列和SEQ ID NO:257的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:102的VH序列和SEQ ID NO:258的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:103的VH序列和SEQID NO:258的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:101的VH序列和SEQ ID NO:256的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:101的VH序列和SEQ ID NO:255的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:101的VH序列和SEQ ID NO:254的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:100的VH序列和SEQ ID NO:253的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ IDNO:99的VH序列和SEQ ID NO:253的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:256的VH序列和SEQ ID NO:253的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:256的VH序列和SEQ ID NO:255的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:257的VH序列和SEQ ID NO:195的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:198的VH序列和SEQID NO:195的VL序列。
在某些实施例中，提供了根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其与B7-H4结合并且具有以下特征中的至少一个：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与在全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与在全部或部分的SEQ IDNO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与在全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ IDNO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。
在另一方面，根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗体22C10和其他实施例
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2(c)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2和(c)包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2和(c)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含选自SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:218的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含选自SEQ ID NO:223的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是人抗体。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:188中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:188中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:188的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:189所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:190所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:191所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:187的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:187的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:187中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:187中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:187的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:215、217、104、105或106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:215、217、104、105或106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:215、217、104、105或106中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:215、217、104、105或106中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:215、217、104、105或106的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ IDNO:223的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含如上述任一实施例中提供的VH和如上述任一实施例中提供的VL。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:104中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ IDNO:112和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:114和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:111和SEQ ID NO:105中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:111和SEQ IDNO:106中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:109和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:107和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQID NO:216和SEQ ID NO:215中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:216和SEQ ID NO:217中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与本文提供的抗B7-H4抗体结合相同表位。例如，在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:188的VH序列和SEQ ID NO:187的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:111的VH序列和SEQ IDNO:104的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:111的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:112的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:113的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:114的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:111的VH序列和SEQ ID NO:105的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:111的VH序列和SEQ ID NO:106的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:110的VH序列和SEQ IDNO:215的VL序列。在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:109的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:108的VH序列和SEQ IDNO:215的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:107的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:216的VH序列和SEQ ID NO:215的VL序列。在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQID NO:216的VH序列和SEQ ID NO:217的VL序列。
在某些实施例中，提供了根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其与B7-H4结合并且具有以下特征中的至少一个：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是基本上全长的抗体，例如IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗体32D6和其他实施例
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2和(c)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:175的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含选自SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是人抗体。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:172中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:172中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:172的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:173所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:175所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:171的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:171的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:171中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:171中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:171的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含如上述任一实施例中提供的VH和如上述任一实施例中提供的VL。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:172和SEQ ID NO:171中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:172和SEQ ID NO:171中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与本文提供的抗B7-H4抗体结合相同表位。例如，在某些实施例中，与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ IDNO:172的VH序列和SEQ ID NO:171的VL序列。
在某些实施例中，提供了根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其与B7-H4结合并且具有以下特征中的至少一个：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与在全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与在全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；与在全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是基本上全长的抗体，例如IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗体9B9和其他实施例
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：包含SEQID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3、包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3以及包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2以及(c)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2(c)包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2和(iii)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2和(c)包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含选自SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是人抗体。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VH序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:180中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:180中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:180的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:181所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:182所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:183所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗B7-H4抗体保留了结合B7-H4的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:179中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:179中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体包含SEQ ID NO:171的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其中该抗体包含如上述任一实施例中提供的VH和如上述任一实施例中提供的VL。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体分别包含SEQ ID NO:180和SEQ ID NO:179中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体与本文提供的抗B7-H4抗体结合相同表位。例如，在某些实施例中，提供了与抗B7-H4抗体结合相同表位的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其包含SEQ ID NO:180的VH序列和SEQ ID NO:179的VL序列。
在某些实施例中，提供了根据上述任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体，其针对B7-H4并且具有以下特征中的至少一个：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与在全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与在全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与在全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合；在一些实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体具有至少一个或多个以下特征，以任何组合：(a)与在全部或部分的含B7-H4 Ig-V的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-157)结合；或与在全部或部分的含B7-H4 Ig-C的结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸158-250)结合；或与全部或部分的B7-H4 Ig-V和Ig-C结构域内的表位(SEQ ID NO:233的氨基酸29-250)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:234内的表位(成熟的人B7-H4)结合；或与全部或部分的SEQ ID NO:233内的表位(前体人B7-H4)结合。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，Ab-CIDE的抗B7-H4抗体是基本上全长的抗体，例如IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗MUC16抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE包含抗MUC16抗体。
在一些实施例中，本文所述的是包含抗MUC16抗体的PAC，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-L2、(c)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，所述抗体包含：(a)包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列的HVR-H1(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQID NO:37的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗MUC16抗体是人源化的。在一个实施例中，抗MUC16抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗MUC16抗体包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗MUC16抗体保留了结合MUC16的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:39中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:39中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗MUC16抗体包含SEQID NO:39的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗MUC16抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，VL序列与SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗MUC16抗体保留了结合MUC16的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:38中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:38中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗MUC16抗体包含SEQ ID NO:38的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了包含抗MUC16抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了Ab-CIDE，其中所述抗体包含分别在SEQ ID NO:39和SEQID NO:38中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗MUC16抗体结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗MUC16抗体(分别包含SEQ ID NO:39的VH序列和SEQ ID NO:38的VL序列)结合相同表位的抗体的PAC。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗MUC16抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗MUC16抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，该抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗STEAP-1抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE包含抗STEAP-1抗体。
在一些实施例中，本文所述的是包含抗STEAP-1抗体的PAC，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L2、(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ IDNO:44的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，所述抗体包含：(a)包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列的HVR-H1(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQID NO:42的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗STEAP-1抗体是人源化的。在一个实施例中，抗STEAP-1抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗STEAP-1抗体包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗STEAP-1抗体保留了结合STEAP-1的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:46中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:46中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗STEAP-1抗体包含SEQ ID NO:46的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗STEAP-1抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，VL序列与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗STEAP-1抗体保留了结合STEAP-1的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:47中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:47中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗STEAP-1抗体包含SEQ ID NO:47的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了包含抗STEAP-1抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了Ab-CIDE，其中所述抗体包含分别在SEQ ID NO:46和SEQID NO:47中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗STEAP-1抗体结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗STEAP-1抗体(分别包含SEQ ID NO:46的VH序列和SEQ ID NO:47的VL序列)结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗STEAP-1抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗STEAP-1抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，该抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗NaPi2b抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE包含抗NaPi2b抗体。
在一些实施例中，本文所述的是包含抗NaPi2b抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3。在另一实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ IDNO:49的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2、(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ IDNO:52的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，所述抗体包含：(a)包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列的HVR-H1(b)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQID NO:50的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗NaPi2b抗体是人源化的。在一个实施例中，抗NaPi2b抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗NaPi2b抗体包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗NaPi2b抗体保留了结合NaPi2b的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:54中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:54中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗NaPi2b抗体包含SEQ ID NO:54的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗NaPi2b抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的VL序列包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗NaPi2b抗体保留了结合抗NaPi2b的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:55中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:55中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗NaPi2b抗体包含SEQ ID NO:55的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，提供了包含抗NaPi2b抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了Ab-CIDE，其中所述抗体包含分别在SEQ ID NO:54和SEQID NO:55中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗NaPi2b抗体结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗NaPi2b抗体(分别包含SEQ ID NO:54的VH序列和SEQ ID NO:55的VL序列)结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗NaPi2b抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗NaPi2b抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，该抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗CD79b抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE包含抗CD79b抗体。
在一些实施例中，本文所述的是包含抗CD79b抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-H3。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L2、(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施例中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，Ab-CIDE包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H1、(ii)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-H2、和(iii)包含选自SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-H3；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1；(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L2、和(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗体的Ab-CIDE，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-H2、(c)包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的HVR-H3、(d)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、(e)包含SEQID NO:62的氨基酸序列的HVR-L2和(f)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述任一实施例中，Ab-CIDE的抗CD79b抗体是人源化的。在一个实施例中，抗CD79b抗体包含上述任一实施例中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一方面，Ab-CIDE的抗CD79b抗体包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施例中，VH序列与SEQ ID NO:56的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗CD79b抗体保留了结合CD79b的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:56中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:56中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗CD79b抗体包含SEQID NO:8的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VH包含一、二或三个选自以下项的HVR：(a)包含SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的HVR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，提供了Ab-CIDE的抗CD79b抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施例中，VL序列与SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，包含相对于参考序列的取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗Ly6E抗体保留了结合CD79b的能力。在某些实施例中，在SEQ ID NO:57中，总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，在SEQ ID NO:57中，总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施例中，该取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:57的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一具体实施例中，VL包含选自以下项的一个、两个或三个HVR：(a)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L1、(b)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L2、以及(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文描述的是包含抗CD79b抗体的Ab-CIDE，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施例中的VH和如以上提供的任何实施例中的VL。
在一个实施例中，提供了Ab-CIDE，其中所述抗体包含分别在SEQ ID NO:56和SEQID NO:57中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在另一方面，本文提供了包含与本文提供的抗CD79b抗体结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。例如，在某些实施例中，提供了包含与抗CD79b抗体(分别包含SEQ ID NO:56的VH序列和SEQ ID NO:57的VL序列)结合相同表位的抗体的Ab-CIDE。
在另一方面，根据以上任一实施例的Ab-CIDE的抗CD79b抗体是单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD79b抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双体抗体或F(ab’)2片段。在另一实施例中，该抗体是基本上全长的抗体，例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本文定义的其他抗体类型或同种型。
抗CD22抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE可包含抗CD22抗体，其包含三个轻链高变区(HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3)和三个重链高变区(HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD22抗体包含三个轻链高变区和三个重链高变区(SEQ ID NO:66-71)，其序列如下所示。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD22抗体包含SEQ ID NO:72的可变轻链序列和SEQ IDNO:73的可变重链序列。在一个实施例中，本发明的Ab-CIDE的抗CD22抗体包含SEQ ID NO:74的轻链序列和SEQ ID NO:75的重链序列：
抗CD33抗体
在某些实施例中，Ab-CIDE可包含抗CD33抗体，其包含三个轻链高变区和三个重链高变区，其序列(SEQ ID NO:76-81)如下所示。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:82的可变轻链序列和SEQ ID NO:83的可变重链序列。
在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:84的轻链序列和SEQ IDNO:85的重链序列。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD33抗体包含三个轻链高变区和三个重链高变区，其序列(Seq ID NO:84-89)如下所示。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:90的可变轻链序列和SEQ ID NO:91的可变重链序列。在一个实施例中，Ab-CIDE的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:92的可变轻链序列和SEQ ID NO:93的可变重链序列。在一个实施例中，本发明的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:94的可变轻链序列和SEQ ID NO:95的可变重链序列。在一个实施例中，本发明的抗CD33抗体包含SEQ ID NO:96的可变轻链序列和SEQ ID NO:97的可变重链序列。
1.抗体亲和力
在某些实施例中，本文提供的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤50nM、≤10nM、≤5nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、≤0.001nM、并且任选地≥10-13M(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一个实施例中，通过如下测定所述的用Fab形式的目标抗体及其抗原进行放射性标记的抗原结合测定(RIA)来测量Kd。Fab对抗原的溶液结合亲和力是通过在一系列未标记抗原滴定的存在下用最小浓度的(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原来测量的(参见，例如Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了确定用于测定的条件，在用含5μg/ml捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)的50mM碳酸钠(pH 9.6)包被
Figure BDA0003063017060001021
多孔板(Thermo Scientific)过夜，并且随后在室温(大约23℃)在含2％(w/v)牛血清白蛋白的PBS阻断二至五小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目标Fab的系列稀释液(例如，遵循在Presta等人，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中的抗VEGF抗体(Fab-12)的评定)混合。接着将目标Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温温育(例如，一小时)。随后移除溶液并且用含0.1％聚山梨酯20
Figure BDA0003063017060001022
的PBS洗涤该板八次。当板已干燥时，添加150μl/孔的闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，并且在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上对板计数十分钟。选择给出小于或等于20％最大结合的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。
根据另一实施例，在25℃，用经固定化的抗原CM5芯片，在10个响应单位(RU)下，使用
Figure BDA0003063017060001031
-2000或
Figure BDA0003063017060001032
-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，通过表面等离子体共振测定来测量Kd。简而言之，根据供应商说明书，用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活羧甲基化的葡聚糖生物感测器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM醋酸钠(pH 4.8)稀释至5μg/ml(约0.2μM)，之后以5μl/分钟的流速进行注射以获得大约10响应单位(RU)的偶联蛋白质。注射抗原之后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。关于动力学测量，在25℃，以大约25μl/min的流速，注射在含有0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中的Fab的两倍系列稀释液(0.78nM至500nM)。使用简单的一对一Langmuir结合模型(
Figure BDA0003063017060001033
EvaluationSoftware 3.2版)，通过同时拟合缔合与解离感测器图来计算缔合速率(kon)与解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)计算为比率koff/kon。参见，例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若通过上述表面等离子体共振测定得出缔合速率超过106M-1s-1，则可通过使用荧光淬灭技术测定缔合速率，即如在分光计诸如配备止流装置的分光光度计(AvivInstruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯所测得的，在浓度渐增的抗原存在下，测量在25℃含20nM抗-抗原抗体(Fab形式)的PBS(pH7.2)中的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的增加或减少。
2.连接基(L1)
如本文所述，“连接基”(L1，连接基1)是双功能或多功能部分，其可用于将一个或多个CIDE部分(D)连接至抗体(Ab)以形成Ab-CIDE。在一些实施例中，可以使用具有反应性官能团的L1来制备Ab-CIDE，所述反应性官能团用于共价连接到CIDE和抗体。例如，在一些实施例中，抗体(Ab)的半胱氨酸硫醇可与连接基的反应性官能团或连接基L1-CIDE基团形成键以制备Ab-CIDE。特别地，连接基的化学结构可对Ab-CIDE的功效和安全性均具有显著影响(Ducry&Stump,Bioconjugate Chem,2010,21,5-13)。选择正确的连接基会影响药物正确递送至靶细胞的预期细胞区室。
连接基通常可分为两类：可裂解的(例如肽、腙(hydrzone)或二硫化物)或不可裂解的(例如硫醚)。如果连接基是不可裂解的连接基，则其在E3LB部分上的位置应使其不干扰VHL结合。具体地，不可裂解的连接基在VHL结合结构域的脯氨酸的羟基位置不被共价连接。可以被溶酶体酶(例如组织蛋白酶B)水解的肽连接基，例如缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)已用于使药物与抗体连接(US 6,214,345)。它们之所以特别有用，部分是由于它们在体循环中的相对稳定性以及在肿瘤中有效释放药物的能力。但是，以天然肽为代表的化学空间是有限的；因此，理想的是具有各种非肽连接基，其作用类似于肽并且可以被溶酶体蛋白酶有效地裂解。非肽结构的更大多样性可以产生肽连接基没有提供的新颖的有益特性。本文提供了用于连接基L1的不同类型的非肽连接基，其可以被溶酶体酶裂解。
a.拟肽连接基
本文提供了溶酶体酶可切割的用于Ab-CIDE的不同类型的非肽、拟肽连接基。例如，将二肽中间的酰胺键(例如Val-Cit)替换为酰胺模拟物；和/或整个氨基酸(例如，Val-Cit二肽中的缬氨酸氨基酸)被非氨基酸部分(例如，环烷基二羰基结构(例如，环大小＝4或5))替换。
当L1是拟肽连接基时，其由下式表示
—Str—(PM)—Sp—，
其中：
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；并且
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001051
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地是C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或R4和R5可以形成C3-C7环烷基环。
注意，L1可以通过E3LB、L2或PB基团中的任何一个连接到CIDE。
在实施例中，Y为杂芳基；R4和R5一起形成环丁基环。
在实施例中，Y是选自由以下项组成的组的部分：
Figure BDA0003063017060001052
在实施例中，Str是由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060001061
其中R6选自由C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、C3-C8环烷基、(C1-C8亚烷基)O-和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基组成的组，其中每个亚烷基可以被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、芳基、芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地是H或C1-C6烷基；Sp是—Ar—Rb—，其中Ar是芳基或杂芳基，Rb是(C1-C10亚烷基)O-。
在实施例中，Str具有下式：
Figure BDA0003063017060001062
其中R7选自C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、(C1-C10亚烷基)O-、N(Rc)-(C2-C6亚烷基)-N(Rc)和N(Rc)-(C2-C6亚烷基)；其中每个Rc独立地是H或C1-C6烷基；Sp为-Ar-Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，Rb为(C1-C10亚烷基)O-或Sp-C1-C6亚烷基-C(O)NH-。
在实施例中，L1是由下式表示的非肽化学部分
Figure BDA0003063017060001063
R1是C1-C6烷基、C1-C6烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地是H或C1-C10烷基。
在实施例中，L1是由下式表示的非肽化学部分
Figure BDA0003063017060001064
R1是C1-C6烷基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5一起形成C3-C7环烷基环。
在实施例中，L1是由下式表示的非肽化学部分
Figure BDA0003063017060001071
R1是C1-C6烷基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2，而W如上述所定义。
在一些实施例中，连接基可以是模拟肽连接基，例如在WO2015/095227、WO2015/095124或WO2015/095223中描述的那些。
在某些实施例中，连接基选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001072
b.非拟肽连接基
在一方面，连接基L1与抗体形成二硫键。在一方面，连接基具有以下结构：
Figure BDA0003063017060001073
Figure BDA0003063017060001081
其中R1和R2独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1和R2形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。可以按如下方式将连接基与抗体和CIDE共价结合：
Figure BDA0003063017060001082
在一方面，连接基L1与抗体形成二硫键，并且该连接基具有以下结构：
Figure BDA0003063017060001083
其中R1、R2、R3和R4独立地选自由H、任选地取代的支链或直链C1-C5烷基和任选地取代的C3-C6环烷基组成的组，或者R1和R2一起或R3和R4一起与它们所结合的碳原子一起形成C3-C6环烷基环。
在一方面，连接基的羰基与CIDE中的胺基连接。还应注意，与Ab连接的硫原子是来自抗体中半胱氨酸的硫基。在另一方面，连接基L1具有能够与抗体上存在的游离半胱氨酸反应以形成共价键的官能团。此类反应性官能团的非限制性实例包括马来酰亚胺、卤代乙酰胺、α-卤代乙酰基、活化的酯(例如琥珀酰亚胺酯)、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。参见例如，Klussman等人(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773的第766页的缀合方法，以及本文的实例。
在一些实施例中，连接基具有能够与抗体上存在的亲电子基团反应的官能团。这种亲电基团的实例包括但不限于醛和酮羰基。在一些实施例中，连接基的反应性官能团的杂原子可与抗体上的亲电基团反应，并形成与抗体单元的共价键。此类反应性官能团的非限制性实例包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、硫代氨基脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。
连接基可包含一个或多个连接基组分。示例性的连接基组分包括6-马来酰亚胺基己酰基(“MC”)、马来酰亚胺基丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄氧基羰基(a“PAB”)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯(“SPP”)和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸酯(“MCC”)。各种连接基组分在本领域中是已知的，其中一些如下文所述。
连接基可以是“可裂解的连接基”，以促进CIDE的释放。非限制性示例性可裂解的连接基包括酸不稳定的连接基(例如，包含腙)、蛋白酶敏感的(例如，肽酶敏感的)连接基、光不稳定的连接基或含二硫化物的连接基(Chari等人，Cancer Research 52:127-131(1992)；US 5208020)。
在某些实施例中，连接基具有下式：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为“拉伸单元”，并且a为0至1的整数；W为“氨基酸单元”，并且w为0至12的整数；Y为“间隔单元”，并且y为0、1或2。在美国专利号7,498,298中描述了此类连接基的示例性实施例。
在一些实施例中，连接基组分包含将抗体与另一连接基组分或CIDE部分连接的“拉伸单元”。非限制性示例性拉伸单元如下所示(其中波浪线表示与抗体、CIDE或其他连接基组分共价连接的位点)：
Figure BDA0003063017060001091
Figure BDA0003063017060001101
在某些实施例中，连接基为:
Figure BDA0003063017060001102
在某些实施例中，连接基具有下式：
—Aa—Yy—
其中A和Y如上定义。在某些实施例中，间隔单元Y可以是磷酸酯，例如单磷酸酯或二磷酸酯。在某些实施例中，拉伸组分A包含：
Figure BDA0003063017060001103
在某些实施例中，连接基为:
Figure BDA0003063017060001104
3.CIDE(“D”)
有用的CIDE具有上述通式。CIDE包括具有以下组分的那些。
a.E3泛素连接酶结合基团(E3LB)
E3泛素连接酶(在人类中已知有600多种)赋予泛素化底物特异性。存在与这些连接酶结合的已知配体。如本文所述，E3泛素连接酶结合基团是可以结合选自由von Hippel-Lindau(VHL)和XIAP组成的组的E3泛素连接酶的肽或小分子。
特定的E3泛素连接酶是von Hippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制因子，它是E3连接酶复合物VCB的底物识别亚基，它也由延伸蛋白B和C、Cul2和Rbxl组成。VHL的主要底物是低氧诱导因子lα(HIF-lα)，这是一种转录因子，其可响应低氧水平上调基因，例如促血管生成生长因子VEGF和红细胞诱导的细胞因子促红细胞生成素。结合VHL的化合物可以是羟基脯氨酸化合物，例如在WO2013/106643、WO2013/106646中公开的那些，以及在US2016/0045607、WO2014187777、US20140356322和US 9,249,153中描述的其他化合物。
在一方面，本文的主题涉及根据以下化学结构的化合物：
Figure BDA0003063017060001111
其中R1’是任选地取代的C1-C6烷基基团、任选地取代的-(CH2)nOH、任选地取代的-(CH2)nSH、任选地取代的(ΟΗ2)n-O-(C1-C6)烷基基团、任选地取代的(CH2)n-WCOCW-(C0-C6)烷基基团(其包含环氧化物部分WCOCW，其中每个W独立地是H或C1-C3烷基基团)、任选地取代的-(CH2)nCOOH、任选地取代的-(CH2)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2)nC(O)-NR1R2、任选地取代的-(CH2)nOC(O)-NR1R2、-(CH2O)nH、任选地取代的-(CH2)nOC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的--(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(OCH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2O)nC(O)-NR1R2、-(CH2CH2O)nH、任选地取代的-(CH2CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2CH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(OCH2CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-NRiR2、任选地取代的-SO2Rs、任选地取代的S(O)Rs、NO2、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选为F或Cl)；
R1和R2各自独立地是H或C1-C6烷基基团，其可任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团(优选氟)取代；
Rs为C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基团或-(CH2)NR1R2基团；
X和X’各自独立地是C＝O、O＝S、-S(O)、S(O)2(优选地X和X’均为C＝O)；
R2’是任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w烷基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)wNR1NR2N基团，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环，
任选地取代的-XR2’-烷基基团，
任选地取代的-XR2’-芳基基团，
任选地取代的-XR2’-杂芳基基团，
任选地取代的-XR2’-杂环基团，
R3’是任选地取代的烷基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-C(O)NR1R2，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂环，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-烷基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂环基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-烷基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂环基团，
任选地取代的-XR3’-烷基基团，
任选地取代的-XR3’-芳基基团，
任选地取代的-XR3’-杂芳基基团，
任选地取代的-XR3’-杂环基团，
任选地取代的
其中R1N和R2N各自独立地是H、C1-C6烷基(其任选地被一个或两个羟基基团和至多三个卤素基团取代)或任选地取代的-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基或-(CH2)n-杂环基团；
RZ和R1各自独立地是H或C1-C3烷基基团；
V为O、S或NR1；
R1与上述相同；
XR2’和XR3’各自独立地是任选地取代的-CH2)n-、-CH2)n-CH(XV)＝CH(XV)-(顺式或反式)、-CH2)n-CH≡CH-、-(CH2CH2O)n-或C3-C6环烷基
其中Xv为H、卤代或任选地取代的C1-C3烷基基团；
每个m独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个m’独立地为0或1；
每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个n’独立地为0或1；
每个u独立地为0或1；
每个v独立地为0或1；
每个w独立地为0或1；或者
其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
在替代方面，本发明涉及根据以下化学结构的化合物：
Figure BDA0003063017060001141
其中R1’、R2’和R3’各自与上述相同，并且X为C＝O、C＝S、-S(O)基或S(O)2基，更优选为C＝O基，或者
其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
在本发明的其他优选方面，根据本发明的化合物
Figure BDA0003063017060001142
其中R1’、R2’和R3’与上述相同，或者
其药用对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
在本发明的其他优选方面，R1’优选为羟基基团或可代谢为羟基基团或羧基(优选为羟基基团)的基团，从而该化合物代表活性化合物的前药形式。示例性的优选R1’基团包括例如-(CH2)nOH、(CH2)n-O-(C1-C6)烷基基团、-(CH2)nCOOH、-(CH2O)nH、任选地取代的-(CH2)nC(O)(C0-C6)烷基、任选地取代的-(CH2)nOC(O)-(C1C6)烷基或任选地取代的-(CH2)nC(O)-O-(C1-C6)烷基，其中n为0或1。最常见的是，R1为羟基。
X和X’，当存在时，优选为C＝O、C＝S、-S(O)基或S(O)2基，更优选为C＝O基。
R 2’优选为任选地取代的–NR1-T-芳基、任选地取代的–NR1-T-杂芳基基团或任选地取代的–NR1-T-杂环，其中R1为C1-C3烷基基团、优选为H或CH3、更优选为H，并且T为任选地取代的-(CH2)n-基团，其中亚烷基链内的每个亚甲基可任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基优选选自卤素、C1-C3烷基基团、或如本文另外描述的氨基酸侧链，优选为一个或两个甲基，其可以任选地被取代；n为0至6，通常为0、1、2或3，优选为0或1。可替代地，T也可以是-(CH2O)n-基团、-(OCH2)n-基团、-(CH2CH2O)n-基团，-(OCH2CH2)n-基团，所有这些基团均任选地被取代。
用于R2’的优选的芳基基团包括：任选地取代的苯基或萘基优选苯基(其中苯基任选地被卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基胺或二烷基胺(优选二甲胺)、F、Cl、OH、SH、COOH、C1-C6烷基(优选CH3)、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基(每个基团均可在苯环的邻位、间位和/或对位取代，优选对位))；任选地取代的苯基(苯基本身优选被F、Cl、OH、SH、COOH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基团中的至少一个取代，可以在苯环的邻位、间位和/或对位被取代，优选地对位)；萘基(其可以是任选地取代的)；任选地取代的杂芳基(优选为任选地取代的异噁唑，包括甲基取代的异噁唑；任选地取代的噁唑，包括甲基取代的噁唑；任选地取代的噻唑，包括甲基取代的噻唑；任选地取代的异噻唑，包括甲基取代的异噻唑；任选地取代的吡咯，包括甲基取代的吡咯；任选地取代的咪唑，包括甲基咪唑；任选地取代的苯并咪唑或甲氧基苄并咪唑；任选地取代的氧咪唑或甲基氧咪唑；任选地取代的二唑基，包括甲基二唑基；任选地取代的三唑基，包括甲基取代的三唑基；任选地取代的吡啶基，包括卤代(优选F)或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧与苯基相连)；任选地取代的呋喃；任选地取代的苯并呋喃；任选地取代的二氢苯并呋喃；任选地取代的吲哚、吲哚嗪或氮杂吲哚嗪(2-氮杂吲哚嗪、3-氮杂吲哚嗪或4-氮杂吲哚嗪)；任选地取代的喹啉)；根据以下化学结构的任选地取代的基团：
Figure BDA0003063017060001161
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选C1或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1C6烷基)，其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)、或任选地取代的苯基、任选地取代的杂芳基、或任选地取代的杂环(优选例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃等)取代；
RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩(thiene)、二氢噻吩(dihydrothiene)、四氢噻吩(tetrahydrothiene)、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；并且
每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，或者
任选地取代的杂环，优选四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪或吗啉(当被取代时，每个基团优选被甲基或卤代(F、Br、Cl)取代。
在某些优选的方面，
Figure BDA0003063017060001171
是
Figure BDA0003063017060001172
基，其中RPRO和n与上述相同。
用于R2’的优选杂芳基基团包括任选地取代的喹啉(其可以连接到药效基团上或在喹啉环内的任何碳原子上取代)、任选地取代的吲哚、任选地取代的吲哚嗪、任选地取代的氮杂吲哚嗪、任选地取代的苯并呋喃(包括任选地取代的苯并呋喃)、任选地取代的异噁唑、任选地取代的噻唑、任选地取代的异噻唑、任选地取代的噻吩、任选地取代的吡啶(2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶)、任选地取代的咪唑、任选地取代的吡咯、任选地取代的二唑、任选地取代的三唑、四唑、任选地取代的氧咪唑、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001181
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，并且
Yc是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)。
用于R2’的优选杂环基团包括四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、噁烷、噻烷(thiane)(其中每个基团可被任选地取代)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001191
优选地，
Figure BDA0003063017060001192
基，其中RPRO为H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基；RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，并且
每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。
用于本发明的优选的R2’取代基还具体包括(但不限于所公开的具体化合物)在本文公开的已鉴定化合物中发现的R2’取代基(包括本说明书中公开的具体化合物，以及所附的图)。这些R2’取代基中的每一个可以与本文也公开的任何数目的R3’取代基结合使用。
R3优选为任选地取代的-T-芳基、任选地取代的-T-杂芳基、任选地取代的-T-杂环、任选地取代的–NR1-T-芳基、任选地取代的–NR1-T-杂芳基或任选地取代的–NR1-T-杂环，其中其中R1为C1-C3烷基基团、优选为H或CH3、更优选为H，T为任选地取代的-(CH2)n-基团，其中每个亚甲基可任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基优选选自卤素、C1-C3烷基基团、或如本文另外描述的氨基酸侧链、优选为甲基，其可以任选地被取代；并且n为0至6，通常为0、1、2或3，优选为0或1。可替代地，T也可以是-(CH2O)n-基团、-(OCH2)n-基团、-(CH2CH2O)n-基团、-(OCH2CH2)n-基团，每个基团任选地被取代。
用于R3’的优选的芳基基团包括任选地取代的苯基或萘基(包括四氢萘基)优选苯基，其中苯基或萘基任选地被以下项取代：卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基胺或二烷基胺(优选二甲胺)、酰胺基(优选-(CH2)m-NR1C(O)R2基，其中m、R1和R2与上述相同)、卤代(通常为F、Cl)、OH、SH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2、CN或S(O)2Rs基团(Rs为C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基团或-(CH2)mNR1R2基)(每个可以在苯环的邻位、间位和/或对位、优选对位被取代)、或芳基(优选苯基)、杂芳基或杂环。优选地，所述取代苯基是任选地取代的苯基(即，取代的苯基本身优选被F、Cl、OH、SH、COOH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基中的至少一个取代，其可以在苯环的邻位、间位和/或对位、优选对位取代)；萘基，其可以任选地被取代；任选地取代的杂芳基(包括：任选地取代的异噁唑，包括甲基取代的异噁唑；任选地取代的噁唑；包括甲基取代的噁唑；任选地取代的噻唑，包括甲基取代的噻唑；任选地取代的吡咯，包括甲基取代的吡咯；任选地取代的咪唑；包括甲基咪唑；任选地取代的苄基咪唑或甲氧基苄基咪唑；任选地取代的氧咪唑或甲基氧咪唑；任选地取代的二唑基，包括甲基二唑基；任选地取代的三唑基，包括甲基取代的三唑基；四唑基；任选地取代的吡啶基，包括卤代(优选F)或甲基取代的吡啶基或任选地取代的氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧连接至苯基))；或任选地取代的杂环(四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、噁烷、噻烷或四氢喹啉)。
用于R3’的优选杂芳基基团包括任选地取代的喹啉(其可以连接至药效基团或在喹啉环内的任何碳原子上取代)、任选地取代的吲哚(包括二氢吲哚)、任选地取代的吲哚嗪、任选地取代的氮杂吲哚嗪(2-氮杂吲哚嗪、3-氮杂吲哚嗪或4-氮杂吲哚嗪)任选地取代的苯并咪唑、苯并二唑、苯并呋喃、任选地取代的咪唑、任选地取代的异噁唑、任选地取代的噁唑(优选甲基取代的)、任选地取代的二唑、任选地取代的三唑、四唑、任选地取代的苯并呋喃、任选地取代的噻吩、任选地取代的噻唑(优选甲基和/或硫醇取代的)、任选地取代的异噻唑、任选地取代的三唑(优选被甲基取代的1,2,3-三唑、三异丙基甲硅烷基基团、任选地取代的-(CH2)m-O-C1-C6烷基基团或任选地取代的-(CH2)m-C(O)-O-C1-C6烷基基团)、任选地取代的吡啶(2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001211
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，和
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)。
用于R3’的优选杂环基团包括四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、噁烷和噻烷(其中每个基团可被任选地取代)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001221
优选地，
Figure BDA0003063017060001222
基，
其中RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，和
每个n是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。
用于本发明的优选的R3’取代基还具体包括(但不限于所公开的具体化合物)在本文公开的已鉴定化合物中发现的R3’取代基(包括本说明书中公开的具体化合物，以及所附的图)。这些R3’取代基中的每一个可以与在本说明书中也公开的任何数目的R2’取代基结合使用，特别是包括在附图中给出的R2’基团。
在某些替代的优选实施例中，R2’是任选地取代的-NR1-XR2’-烷基基团、-NR1-XR2’-芳基基团；任选地取代的-NR1-XR2’-HET、任选地取代的-NR1-XR2’-芳基-HET或任选地取代的-NR1-XR2’-HET-芳基，
其中R1是H或C1-C3烷基基团(优选H)；
X2’是任选地取代的-CH2)n-、-CH2)n-CH(Xv)＝CH(Xv)-(顺式或反式)，-CH2)n-CH≡CH-、-(CH2CH2O)n-或C3-C6环烷基基团；
其中Xv是H、卤代或任选被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团取代的C1-C3烷基基团；
烷基是任选地取代的Cl-C10烷基(优选C1-C6烷基)基团(在某些优选的实施例中，烷基基团被卤代基团通常是Cl或Br封端)；芳基是任选地取代的苯基或萘基(优选苯基)；HET是任选地取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(当被取代时，各自优选被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001241
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，和
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，和
每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。
在本发明的某些替代的优选实施例中，R3’是任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-RS3基团、任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-RS3’基团、任选地取代的-XR3’-烷基基团、任选地取代的-XR3’-芳基基团；任选地取代的-XR3-HET基团、任选地取代的-XR3-芳基-HET基团或任选地取代的-XR3’-HET-芳基基团，
其中RS3’是任选地取代的烷基基团(C1-Q10，优选C1-C6烷基)、任选地取代的芳基基团或HET基团；
R1是H或C1-C3烷基基团(优选H)；
V为O、S或NR1’；
XR3’是-(CH2)n-、-(CH2CH2O)n-、-CH2)n-CH(Xv)＝CH(Xv)-(顺式或反式)、-CH2)n-CH≡CH-、或C3-C6环烷基基团，全部任选地被取代；
其中Xv是H、卤代或任选被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团取代的C1-C3烷基基团；
烷基是任选地取代的C1-C10烷基(优选C1-C6烷基)基团(在某些优选的实施例中，烷基基团被卤代基团通常是Cl或Br封端)；芳基是任选地取代的苯基或萘基(优选苯基)；HET是任选地取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(当被取代时，各自优选被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001261
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的Q-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，并且
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃(dihydirofuran)、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，和
每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)；
每个m’是0或1；并且
每个n’是0或1。
在替代实施例中，R3’是-(CH2)n-芳基、-(CH2CH2O)n-芳基、-(CH2)n-HET或-(CH2CH2O)n-HET；
其中芳基是任选地被一个或两个取代基取代的苯基，其中所述取代基优选地选自：-(CH2)nOH、C1-C6烷基(其本身进一步任选地被CN、卤代(至多三个卤代基团)取代)、OH、-(CH2)nO(C1-C6)烷基、胺、单或二(C1-C6烷基)胺(其中胺上的烷基基团任选地被1或2个羟基基团或至多三个卤代(优选F、Cl)基团取代)；或所述芳基基团被以下所取代：-(CH2)nOH、-(CH2)n-O-(C1-C6)烷基、-(CH2)n-O-(CH2)n-(C1-C6)烷基、-(CH2)n-C(O)(C0-C6)烷基、-(CH2)n-C(O)O(C0-C6)烷基、-(CH2)n-OC(O)(C0-C6)烷基、胺、单或二(C1-C6烷基)胺(其中胺上的烷基基团任选地被1或2个羟基基团或至多三个卤代(优选F、Cl)基团取代)、CN、NO2、任选地取代的-(CH2)n-(V)m’-CH2)n-(V)m-(C1-C6)烷基基团、-(V)m-(CH2CH2O)n-RPEG基团(其中V是O、S或NR1，R1是H或C1-C3烷基基团(优选H)，RPEG是H或任选地取代的C1-C6烷基基团(包括任选地被羧基取代))；或所述芳基基团任选地被选自由以下项组成的组的杂环(包括杂芳基)所取代：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪(当被取代时，各自优选被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001281
其中Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，并且
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；
HET优选是噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001301
其中Sc是CHRSS、NR或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃(tetrahydroftiran)、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，并且
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基；
RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，
每个m’独立地是0或1；并且
每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。
在其他额外的实施例中，优选的化合物包括根据以下化学结构的那些：
Figure BDA0003063017060001311
其中R1’是OH或在患者或受试者体内被代谢成OH的基团；
R2’是-NH-CH2-芳基-HET(优选直接与甲基取代的噻唑连接的苯基)；
R3’是-CHRCR3’-NH-C(O)-R3P1基或-CHRCR3’-R3P2基；
其中RCR3’是C1-C4烷基基团，优选甲基、异丙基或叔丁基；
R3P1是C1-C3烷基(优选甲基)、任选地取代的氧杂环丁烷基(优选甲基取代的、-(CH2)nOCH3基(其中n是1或2(优选2))、或
Figure BDA0003063017060001321
基(乙醚基优选在苯基部分上间位取代)、吗啉代基(在2-或3-位连接至羰基)；
R3P2是
Figure BDA0003063017060001322
其中芳基是苯基；
HET是任选地取代的噻唑或异噻唑；并且
RHET是H或卤代基团(优选H)，
或其药用盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。在本文图17中给出了与本申请的该实施例有关的优选组合物。
在另一方面，根据本发明的化合物基于氨基酸，例如苯嘌呤作为根据下式的分子的一部分(右手)：
Figure BDA0003063017060001323
其中X是卤素、C1-C3烷基或任选地取代的杂环；并且
R1和R2各自独立地是H、任选被一个或两个羟基基团取代的C1-C3烷基、或任选地取代的苯基；并且
n是0、1、2或3(优选0或1)，或其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
优选地，E3LB部分终止于-NHCOOH部分，其可通过酰胺键共价连接至L2部分。
在某些实施例中，E3LB残基公开于美国专利申请公布号2019/0300521，其全部内容通过引用并入本文。E3LB残基包括具有以下结构的那些：
Figure BDA0003063017060001331
其中，
L1选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001332
其中R1L1和R2L1独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1L1和R2L1形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团；或为由下式表示的拟肽连接基：
—Str—(PM)—Sp—，
其中：
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；并且
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001341
其中
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可形成C3-C7环烷基环；
或具有下式的连接基：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为拉伸单元，并且a为0至1的整数；W为氨基酸单元，并且w为0至12的整数；Y为间隔单元，并且y为0、1或2；
或具有下式的连接基：
Figure BDA0003063017060001351
虚线表示对至少一个PB、另一E3LB、或化学连接基部分(其将至少一个PB、抗体或另一E3LB连接到连接基的另一端)的连接；
L1是如本文其他地方所述的连接基；或者，在某些实施例中，当L1基在另一位置(如表1-L1中所示的苯环)共价连接到式I-A、I-B、I-C、I-D、I-E、I-F、I-G、I-H、I-I、I-J、I-K、I-L、I-M-、I-N、I-O、I-P、I-Q、I-R和L-I的化合物(每个都是E3LB残基)时，L1可以是如本文其他地方所述的连接基或氢。
式I-A的X1、X2各自独立地选自由键、O、NRY3、CRY3RY4、C═O、C═S、SO和SO2组成的组；
式I-A的RY3、RY4各自独立地选自由H、直链或支链的C1-6烷基(其任选地被1个或更多个卤代取代)、任选地取代的C1-6烷氧基组成的组；
式I-A的W3选自由以下项组成的组：任选地取代的T、任选地取代的-T-N(R1aR1b)X3、任选地取代的-T-N(R1aR1b)、任选地取代的-T-芳基、任选地取代的-T-杂芳基、任选地取代的T-二杂环芳基、任选地取代的-T-杂环基、任选地取代的-T-二杂环基、任选地取代的—NR1-T-芳基、任选地取代的—NR1-T-杂芳基或任选地取代的—NR1-T-杂环基；
式I-A的X3是C═O、R1、R1a、R1b；
R1、R1a、R1b各自独立地选自由以下项组成的组：H、直链或支链的C1-C6烷基基团(其任选地被1个或多个卤代或-OH基团取代)、RY3C═O、RY3C═S、RY3SO、RY3SO2、N(RY3RY4)C═O、N(RY3RY4)C═S、N(RY3RY4)SO和N(RY3RY4)SO2；
式I-A的T选自任选地取代的烷基、—(CH2)n—基、—(CH2)n—O—C1-C6烷基(其是任选地取代的、直链、支链的)、或任选地取代的—(CH2)n—O-杂环基，其中每个亚甲基任选地被选自以下组的一个或两个取代基取代：卤素、甲基、直链或支链的C1-C6烷基基团(任选地被1个或更多个卤素或-OH基取代)、任选地取代的氨基酸侧链或任选地取代的杂环基；式I-A的W4是任选地取代的—NR1-T-芳基，其中所述芳基基团可以任选地被任选地取代的5-6元杂芳基或任选地取代的芳基、任选地取代的—NR1-T-杂芳基基团取代，其中所述杂芳基任选地被任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基、或任选地取代的—NR1-T-杂环基取代，其中—NR1共价键合至X2，并且R1是H或CH3(优选H)。
在本文描述的任一实施例中，T选自任选地取代的烷基、—(CH2)n—基的组，其中每个亚甲基任选地被选自以下组的一个或两个取代基取代：卤素、甲基、任选地取代的烷氧基、任选地被1个或多个卤素取代的直链或支链C1-C6烷基基团、C(O)NR1R1a或NR1R1a(或者R1和R1a连接形成任选地取代的杂环基)、或-OH基或任选地取代的氨基酸侧链；n是0至6，通常是0、1、2或3(优选0或1)。
在某些实施例中，式I-A的W4是
Figure BDA0003063017060001371
其中R14a、R14b各自独立地选自以下项的组：H、卤代烷基(例如氟烷基)、任选地取代的烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或者R14a、R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3至5元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶。
在任一实施例中，式I-A的W5选自任选地取代的苯基、任选地取代的萘基或任选地取代的5-10元杂芳基的组，
式I-A的R15选自以下项的组：H、卤素、CN、OH、NO2、NR14aR14b、OR14a、CONR14aR14b、NR14aCOR14b、SO2NR14aR14b、NR14a SO2R14b、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的卤代烷氧基、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基；
在额外的实施例中，用于本公开的W4取代基还具体包括(但不限于所公开的具体化合物)在本文公开的鉴定的化合物中发现的W4取代基。这些W4取代基中的每一个都可以与任意数量的本文也公开的W3取代基结合使用。
在某些额外的实施例中，I-A任选地被吡咯烷部分中的0-3RP基取代。每个RP独立地是H、卤代、—OH、C1-3烷基、C═O。
在本文所述的任一实施例中，式I-A的W3、W4可以独立地共价偶联至连接着一个或多个PB基的连接基。
其中虚线表示至少一个PB、另一E3LB或化学连接基部分(其将至少一个PB偶联至E3LB)的连接位点。
在某些实施例中，E3LB由以下结构表示：
Figure BDA0003063017060001381
其中：
式I-B的W3选自任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、或
Figure BDA0003063017060001382
式I-B的R9和R10独立地是氢、任选地取代的烷基、任选地取代的环烷基、任选地取代的羟烷基、任选地取代的杂芳基或卤代烷基，或者R9、R10和它们所连接的碳原子形成任选地取代的环烷基；
式I-B的R11选自任选地取代的杂环基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的芳基的组，
Figure BDA0003063017060001391
式I-B的R12选自H或任选地取代的烷基；
式I-B的R13选自以下项的组：H、任选地取代的烷基、任选地取代的烷基羰基、任选地取代的(环烷基)烷基羰基、任选地取代的芳烷基羰基、任选地取代的芳基羰基、任选地取代的(杂环基)羰基或任选地取代的芳烷基；
其中式I-B的R14a、R14b各自独立地选自以下项的组：H、卤代烷基(例如氟烷基)、任选地取代的烷基、任选地取代的烷氧基、氨基甲基、烷基氨基甲基、烷氧基甲基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、CONR27aR27b、CH2NHCOR26或(CH2)N(CH3)COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或者R14a、R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3元至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
式I-B的W5选自苯基、萘基或5-10元杂芳基的组，
式I-B的R15选自以下项的组：H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27a SO2R27b、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的卤代烷氧基、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基；
式I-B的每个R16独立地选自卤代、CN、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、羟基或任选地取代的卤代烷氧基的组；
式I-B的o是0、1、2、3或4；
式I-B的R18独立地选自H、卤代、任选地取代的烷氧基、氰基、任选地取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或连接基的组；
每个R26独立地选自H、任选地取代的烷基或NR27aR27b；
R27a和R27b各自独立地是H、任选地取代的烷基，或R27a和R27b与它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基；并且
式I-B的p是0、1、2、3或4，并且其中虚线表示至少一个PB、另一E3LB或化学连接基部分(其将至少一个PB偶联至E3LB)的连接位点。
在某些实施例中，式I-B的R15是
Figure BDA0003063017060001401
其中R17是H、卤代、任选地取代的C3-6环烷基、任选地取代的C1-6烷基、任选地取代的C1-6烯基和C1-6卤代烷基；并且Xa是S或O。
在某些实施例中，式I-B的R17选自甲基、乙基、异丙基和环丙基的组。
在某些额外的实施例中，式I-B的R15选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001411
Figure BDA0003063017060001421
在某些实施例中，式I-B的R11选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001422
Figure BDA0003063017060001431
Figure BDA0003063017060001441
在某些实施例中，式I-B的R14a、R14b各自独立地选自以下项的组：H、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26或CH2NCH3COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或R14a、R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3元至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶，所述螺环烷基或螺杂环烷基本身任选地被烷基、卤代烷基或—COR33取代，其中R33是烷基或卤代烷基，
其中R30选自H、烷基、炔基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳烷基或杂芳烷基，其进一步被任选地取代；R26和R27如上所述。
在某些实施例中，式I-B的R15选自以下项的组：H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27aSO2R27b、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基(例如任选地取代的氟烷基)、任选地取代的卤代烷氧基、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的任选地取代包括CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26、CH2NCH3COR26或者
Figure BDA0003063017060001451
其中R26、R27、R30和R14a如上所述。
在某些实施例中，式I-B的R14a、R14b各自独立地选自以下项的组：H、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷基、CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26或CH2NCH3COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或R14a、R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3元至6元螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶，所述螺环烷基或螺杂环烷基本身任选地被烷基、卤代烷基或—COR33取代，其中R33是烷基或卤代烷基，其中R30选自H、烷基、炔基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳烷基或杂芳烷基，其进一步被任选地取代；
式I-B的R15选自以下项的组：H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27a SO2R27b、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的卤代烷氧基、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的任选地取代包括CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26、CH2NCH3COR26或者
Figure BDA0003063017060001461
其中R26、R27、R30和R14a如上所述。
在某些实施例中，E3LB具有选自以下组的化学结构：
Figure BDA0003063017060001462
Figure BDA0003063017060001471
其中：
式I-C、I-D和I-E的R1是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；任选地取代的烷基、任选地取代的环烷基、任选地取代的羟烷基、任选地取代的杂芳基、或卤代烷基；
式I-C、I-D和I-E的R14a是H、卤代烷基、任选地取代的烷基、甲基、氟甲基、羟甲基、乙基、异丙基或环丙基；
式I-C、I-D和I-E的R15选自由以下项组成的组：H、卤素、CN、OH、NO2、任选地取代的杂芳基、任选地取代的芳基；任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的卤代烷氧基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基；
式I-C、I-D和I-E的X是C、CH2或C＝O
式I-C、I-D和I-E的R3不存在或是任选地取代的5元或6元杂芳基；并且
虚线表示至少一个PB、另一E3LB或化学连接基部分(其将至少一个PB或另一E3LB或两者偶联至E3LB)的连接位点。
在某些实施例中，E3LB包括根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001481
其中：
式I-F的R14a是H、卤代烷基、任选地取代的烷基、甲基、氟甲基、羟甲基、乙基、异丙基或环丙基；
式I-F的R9是H；
式I-F的R10是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
式I-F的R11是
Figure BDA0003063017060001482
或任选地取代的杂芳基；
式I-F的p是0、1、2、3或4；
式I-F的每个R18独立地是卤素、任选地取代的烷氧基、氰基、任选地取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或连接基；
式I-F的R12是H、C＝O；
式I-F的R13是H、任选地取代的烷基、任选地取代的烷基羰基、任选地取代的(环烷基)烷基羰基、任选地取代的芳烷基羰基、任选地取代的芳基羰基、任选地取代的(杂环基)羰基或任选地取代的芳烷基，
式I-F的R15选自由H、卤素、Cl、CN、OH、NO2、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的芳基组成的组；
Figure BDA0003063017060001491
Figure BDA0003063017060001501
并且，
其中式I-F的虚线表示至少一个PB、另一E3LB或化学连接基部分(其将至少一个PB或另一E3LB或两者偶联至E3LB)的连接位点。
在某些实施例中，E3LB选自以下结构：
Figure BDA0003063017060001511
Figure BDA0003063017060001521
Figure BDA0003063017060001531
Figure BDA0003063017060001541
其中n是0或1。
在某些实施例中，E3LB选自以下结构：
Figure BDA0003063017060001542
Figure BDA0003063017060001551
Figure BDA0003063017060001561
Figure BDA0003063017060001571
Figure BDA0003063017060001581
Figure BDA0003063017060001591
Figure BDA0003063017060001601
Figure BDA0003063017060001611
Figure BDA0003063017060001621
其中I-A1至I-A15、I-B1至I-B12、I-C1至I-C15和I-D1至I-D9中的苯环任选地被氟、低级烷基和烷氧基取代，其中虚线表示至少一个PB、另一E3LB或化学连接基部分(其将至少一个PB或另一E3LB或两者偶联至I-A)的连接位点。
在一个实施例中，可以将I-A1至I-A15、I-B1至I-B12、I-C1至I-C15和I-D1至I-D9中的苯环官能化为酯，使其成为前药一部分。
在某些实施例中，I-A1至I-A15、I-B1至I-B12、I-C1至I-C15和I-D1至I-D9的吡咯烷环上的羟基基团分别包含酯-连接的前药部分。
在本文所述的任一方面或实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001631
或其药用盐，其中：
I-G的X和X′各自独立地是C═O、C═S、—S(O)、S(O)2(优选地X和X′均是C═O)；
I-G的R2′是任选地取代的—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w烷基基团、任选地取代的—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)wNR1NR2N基、任选地取代的—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-芳基、任选地取代的—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的—(CH2)n—(C═O)vNR″(SO2)w-杂环基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-烷基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR1NR2N、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR″C(O)R1N、任选地取代的—NR″—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-芳基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的—NR″—(CH2)n—(C═O)vNR″(SO2)w-杂环基、任选地取代的—XR2′-烷基基团；任选地取代的—XR2′-芳基基团；任选地取代的—XR2′-杂芳基基团；任选地取代的—XR2′—杂环基基团；
I-G的R3′是任选地取代的烷基、任选地取代的—(CH2)n—(O)u(NR″)v(SO2)w-烷基、任选地取代的—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR1NR2N、任选地取代的—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR″C(O)R1N、任选地取代的—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—C(O)(R″)2、任选地取代的—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-芳基、任选地取代的—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的—(CH2)n—C(O)—(NR″)v(SO2)w-杂环基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-烷基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR1NR2N、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w—NR″C(O)R1N、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-芳基、任选地取代的—NR″—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的—NR1—(CH2)n—C(O)u(NR″)v(SO2)w-杂环基、任选地取代的—O—(CH2)n-(C═O)u(NR″)v(SO2)w-烷基、任选地取代的—O—(CH2)n-(C═O)u(NR″)v(SO2)w—NR1NR2N、任选地取代的—O—(CH2)n-(C═O)u(NR″)v(SO2)w—NR″C(O)R1N、任选地取代的—O—(CH2)n-(C═O)u(NR″)v(SO2)w-芳基、任选地取代的—O—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的—O—(CH2)n—(C═O)u(NR″)v(SO2)w-杂环基；—(CH2)n—(V)n′—(CH2)n—(V)n′-烷基基团、任选地取代的—(CH2)n—(V)n′—(CH2)n—(V)n′-芳基基团、任选地取代的—(CH2)n—(V)n′—(CH2)n—(V)n′-杂芳基基团、任选地取代的—(CH2)n—(V)n′—(CH2)n—(V)n′-杂环基'、任选地取代的—(CH2)n—N(R1′)(C═O)m′—(V)n′-烷基基团、任选地取代基—(CH2)n—N(R1′)(C═O)m′—(V)n′-芳基基团、任选地取代的—(CH2)n—N(R1′)(C═O)m′—(V)n-杂芳基基团、任选地取代的—(CH2)n—N(R1′)(C═O)m′—(V)n′-杂环基、任选地取代的—XR3′-烷基基团；任选地取代的—XR3′-芳基基团；任选地取代的—XR3′—杂芳基基团；任选地取代的—XR3′-杂环基基团；
I-G的R1N和R2N各自独立地是H、C1-C6烷基(其任选地被一个或两个羟基基团和至多三个卤素基团取代)、或任选地取代的—(CH2)n-芳基、—(CH2)n-杂芳基或—(CH2)n-杂环基基团；
I-G的V是O、S或NR1；
I-G的每个R1′独立地是H或C1-C3烷基基团；
I-G的XR2′和XR3′各自独立地是任选地取代的—CH2)n—、—CH2)n—CH(Xv)═CH(Xv)—(顺式或反式)、—CH2)n—CH≡CH—、—(CH2CH2O)n—或C3-C6环烷基基团，其中Xv是H、卤代或任选地取代的C1-C3烷基基团；
I-G的每个R″独立地是H或C1-C6烷基基团(其可任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团(优选氟)取代)；
I-G的RS是C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基基团或—(CH2)mN(R″)2基团；
I-G的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；
I-G的每个m′独立地是0或1；
I-G的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；
I-G的每个n′独立地是0或1；
I-G的每个u独立地是0或1；
I-G的每个v独立地是0或1；
I-G的每个w独立地是0或1；并且
当PB不是E3LB时，I-G的任何一个或多个R2′、R3′、X和X′被任选修饰为通过连接基与PB基共价键合；或者当PB是E3LB时，每个E3LB的任何一个或多个R2′、R3′、X和X′任选地被修饰为直接或通过连接基彼此共价键合，或其药用盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。
在本文所述的任何方面或实施例中，E3LB是：
Figure BDA0003063017060001651
其中：
I-H的R2′和R3′各自与上述相同，并且X是C═O、C═S、—S(O)基或S(O)2基、更优选C═O基，和
当PB不是E3LB时，I-H的任何一个或多个R2′、R3′被任选修饰为结合连接基，所述连接基进一步与PB基共价键合；或者当PB是E3LB时，每个E3LB的任何一个或多个R2′、R3′任选地被修饰为直接或通过连接基彼此共价键合，或者
其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
在本文描述的任何方面或实施例中，E3LB根据以下化学结构：
Figure BDA0003063017060001661
其中：
当PB不是E3LB时，I-I的任何一个或多个R2′、R3′被任选修饰为结合连接基，所述连接基进一步与PB基共价键合；或者当PB是E3LB时，每个E3LB的任何一个或多个R2′、R3′被任选修饰为直接或通过连接基彼此共价键合，或者
其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。
I-G和I-H的X和X'，当存在时，优选是C═O、C═S、—S(O)基或S(O)2基、更优选C═O基；
I-G至I-I的R2′优选是任选地取代的-NH-T-芳基、任选地取代的—N(CH3)-T-芳基、任选地取代的—NH-T-杂芳基基团、任选地取代的—N(CH3)-T-杂芳基、任选地取代的—NH-T-杂环基或任选地取代的—N(CH3)-T-杂环基，优选地H和T是任选地取代的—(CH2)n—基，其中每个亚甲基可以任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基优选地选自卤素、本文另外描述的氨基酸侧链或C1-C3烷基基团(优选一个或两个甲基)，其可以被任选地取代；n是0至6，通常是0、1、2或3，优选0或1。可替代地，T也可以是-(CH2O)n-基团、-(OCH2)n-基团、-(CH2CH2O)n-基团、-(OCH2CH2)n-基团，所有基团任选地被取代。
用于I-G至I-I的R2’的优选的芳基基团包括：任选地取代的苯基或萘基，优选苯基(其中苯基或萘基通过连接基连接至PB(包括E3LB基)，和/或任选地被卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基胺或二烷基胺(优选二甲胺)、F、Cl、OH、COOH、C1-C6烷基(优选CH3)、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基所取代(每个基团均可在苯环的邻位、间位和/或对位取代，优选对位))；任选地取代的苯基(苯基本身任选地通过连接基连接至PB基，包括E3LB)和/或优选被F、Cl、OH、COOH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基中的至少一个取代(在苯环的邻位、间位和/或对位，优选对位)；萘基(其可以是任选地取代的)；任选地取代的杂芳基，优选任选地取代的异噁唑，包括甲基取代的异噁唑；任选地取代的噁唑，包括甲基取代的噁唑；任选地取代的噻唑，包括甲基取代的噻唑；任选地取代的异噻唑，包括甲基取代的异噻唑；任选地取代的吡咯，包括甲基取代的吡咯；任选地取代的咪唑，包括甲基咪唑；任选地取代的苯并咪唑或甲氧基苄并咪唑；任选地取代的氧咪唑或甲基氧咪唑；任选地取代的二唑基，包括甲基二唑基；任选地取代的三唑基，包括甲基取代的三唑基；任选地取代的吡啶基，包括卤代(优选F)或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧与苯基相连)；任选地取代的呋喃；任选地取代的苯并呋喃；任选地取代的二氢苯并呋喃；任选地取代的吲哚、吲哚嗪或氮杂吲哚嗪(2-氮杂吲哚嗪、3-氮杂吲哚嗪或4-氮杂吲哚嗪)；任选地取代的喹啉；根据以下化学结构的任选地取代的基团：
Figure BDA0003063017060001681
其中：
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或—C(O)(C1-C6烷基)，其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)、或任选地取代的苯基、任选地取代的杂芳基、或任选地取代的杂环基(优选例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃等)取代；
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基基团(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；并且
I-G至I-I的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，或任选地取代的杂环基，优选四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪或吗啉(每个基团当被取代时，优选被甲基或卤代(F、Br、Cl)取代，其中每个基团可任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
在某些优选方面，
Figure BDA0003063017060001691
I-G至I-I的是
Figure BDA0003063017060001692
基团，
其中I-G至I-I的RPRO和n与上述相同。
用于I-G至I-I的R2’的优选杂芳基基团包括任选地取代的喹啉(其可以连接到药效基团上或在喹啉环内的任何碳原子上取代)、任选地取代的吲哚、任选地取代的吲哚嗪、任选地取代的氮杂吲哚嗪、任选地取代的苯并呋喃(包括任选地取代的苯并呋喃)、任选地取代的异噁唑、任选地取代的噻唑、任选地取代的异噻唑、任选地取代的噻吩、任选地取代的吡啶(2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶)、任选地取代的咪唑、任选地取代的吡咯、任选地取代的二唑、任选地取代的三唑、四唑、任选地取代的氧咪唑、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001701
其中：
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中I-G至I-I的Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，和
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基-C≡C-Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)，每个基团都可以任选地通过连接基连接到PB基(包括E3LB基)。
I-G至I-I的R2′的优选杂环基杂环基基团包括四氢呋喃、四氢噻吩、四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、噁烷或噻烷，每个基团均可被任选地取代，或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001711
优选地，
Figure BDA0003063017060001712
基团，
其中：
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基基团；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基并且
I-G至I-I的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(通常为0或1)，每个基团都可以任选地通过连接基连接到PB基(包括E3LB基)。
I-G至I-I的优选的R2′取代基还具体包括(但不限于所公开的具体化合物)在本文公开的鉴定的化合物中发现的R2′取代基。这些R2′取代基中的每一个可以与本文也公开的任何数目的R3′取代基结合使用。
I-G至I-I的R3′优选是任选地取代的-NH-T-芳基、任选地取代的—N(C1-C3烷基基团)-T-芳基、任选地取代的—NH-T-杂芳基基团、任选地取代的—N(C1-C3烷基基团)-T-杂芳基、任选地取代的—NH-T-杂环基或任选地取代的—N(C1-C3烷基)-T-杂环基，其中T是任选地取代的—(CH2)n—基，其中每个亚甲基可以任选地被一个或两个取代基取代，所述取代基优选地选自卤素、C1-C3烷基基团或本文另外描述的氨基酸侧链(优选甲基)，其可以被任选地取代；n是0至6，通常是0、1、2或3，优选0或1。可替代地，T也可以是—(CH2O)n—基、—(OCH2)n—基、—(CH2CH2O)n—基、—(OCH2CH2)n—基，每个基团任选地被取代。
用于I-G至I-I的R3’的优选的芳基基团包括任选地取代的苯基或萘基(优选苯基)，其中苯基或萘基任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)和/或任选地被以下项取代：卤素(优选F或Cl)、胺、单烷基胺或二烷基胺(优选二甲胺)、酰胺基(优选-(CH2)m-NR1C(O)R2基，其中m、R1和R2与上述相同)、卤代(通常为F或Cl)、OH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2、CN或S(O)2Rs基(Rs为C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基基团或—(CH2)m(R″)2基团)(每个可以在苯环的邻位、间位和/或对位、优选对位被取代)、或芳基(优选苯基)、杂芳基或杂环基。优选地，所述取代苯基是任选地取代的苯基(即，取代苯基本身优选被F、Cl、OH、SH、COOH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2、CN或连接基(所述连接基连接PB基(包括E3LB基))中的至少一个取代，所述取代发生在苯环的邻位、间位和/或对位、优选对位)；萘基，其可以任选地被取代包括如上所述、任选地取代的杂芳基(优选任选地取代的异噁唑，包括甲基取代的异噁唑；任选地取代的噁唑；包括甲基取代的噁唑；任选地取代的噻唑，包括甲基取代的噻唑；任选地取代的吡咯，包括甲基取代的吡咯；任选地取代的咪唑；包括甲基咪唑；苄基咪唑或甲氧基苄基咪唑；氧咪唑或甲基氧咪唑；任选地取代的二唑基，包括甲基二唑基；任选地取代的三唑基，包括甲基取代的三唑基；吡啶基，包括卤代(优选F)或甲基取代的吡啶基或氧杂吡啶基(其中吡啶基通过氧连接至苯基))；或任选地取代的杂环基(四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、四氢喹啉、噁烷或噻烷)。芳基、杂芳基或杂环基基团中的每一个可任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
用于I-G至I-I的R3’的优选杂芳基基团包括任选地取代的喹啉(其可以连接至药效基团或在喹啉环内的任何碳原子上取代)、任选地取代的吲哚(包括二氢吲哚)、任选地取代的吲哚嗪、任选地取代的氮杂吲哚嗪(2-氮杂吲哚嗪、3-氮杂吲哚嗪或4-氮杂吲哚嗪)任选地取代的苯并咪唑、苯并二唑、苯并呋喃、任选地取代的咪唑、任选地取代的异噁唑、任选地取代的噁唑(优选甲基取代的)、任选地取代的二唑、任选地取代的三唑、四唑、任选地取代的苯并呋喃、任选地取代的噻吩、任选地取代的噻唑(优选甲基和/或硫醇取代的)、任选地取代的异噻唑、任选地取代的三唑(优选被甲基取代的1,2,3-三唑、三异丙基甲硅烷基基团、任选地取代的—(CH2)m—O—C1-C6烷基基团或任选地取代的—(CH2)m—C(O)—O—C1-C6烷基基团)、任选地取代的吡啶(2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001731
其中：
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)，和
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)。每个所述杂芳基基团可任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
用于I-G至I-I的R3’的优选杂环基基团包括四氢喹啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、四氢呋喃、四氢噻吩、噁烷和噻烷(其中每个基团可被任选地取代)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001751
优选地，
Figure BDA0003063017060001752
基团，
其中：
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基基团(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，和
I-G至I-I的每个n是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，其中每个所述杂环基基团都可以任选地通过连接基连接到PB基(包括E3LB基)。
在某些替代的优选实施例中，I-G至I-I的R2′是任选地取代的—NR1—XR2′-烷基基团、—NR1—XR2′-芳基基团；任选地取代的—NR1—XR2′-HET、任选地取代的—NR1—XR2′-芳基-HET或任选地取代的—NR1—XR2′-HET-芳基，
其中：
I-G至I-I的R1是H或C1-C3烷基基团(优选H)；
I-G至I-I的XR2′是任选地取代的—CH2)n—、—CH2)n—CH(Xv)═CH(Xv)—(顺式或反式)、—(CH2)n—CH═CH—、—(CH2CH2O)n—或C3-C6环烷基基团；并且
I-G至I-I的Xv是H、卤代或任选被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团取代的C1-C3烷基基团；
I-G至I-I的烷基是任选地取代的C1-C10烷基(优选C1-C6烷基)(在某些优选的实施例中，该烷基基团被卤代基团(通常为Cl或Br)封端)；
I-G至I-I的芳基是任选地取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且
I-G至I-I的HET优选是任选地取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(当被取代时，各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001771
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)；
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基基团(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基，和
I-G至I-I的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。
每个所述基团可任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
在本公开的某些替代的优选实施例中，I-G至I-I的R3’是任选地取代的—(CH2)n—(V)n′—(CH2)n—(V)n′—RS3′基、任选地取代的-(CH2)n—N(R1′)(C＝O)m′—(V)n′—RS3′基、任选地取代的—XR3′-烷基基团、任选地取代的—XR3′-芳基基团；任选地取代的—XR3′-HET基、任选地取代的—XR3′-芳基-HET基团或任选地取代的—XR3′-HET-芳基基团，
其中：
RS3’是任选地取代的烷基基团(C1-C10，优选C1-C6烷基)、任选地取代的芳基基团或HET基团；
R1′是H或C1-C3烷基基团(优选H)；
V为O、S或NR1′；
XR3’是—(CH2)n—、—(CH2CH2O)n—、—CH2)n—CH(Xv)═CH(Xv)—(顺式或反式)、—CH2)n—CH═CH—、或C3-C6环烷基基团，全部任选地被取代；
Xv是H、卤代或任选被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团取代的C1-C3烷基基团；
烷基是任选地取代的C1-C10烷基(优选C1-C6烷基)基团(在某些优选的实施例中，该烷基基团被卤代基团(通常为Cl或Br)封端)；
芳基是任选地取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且
HET优选是任选地取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、喹啉(当被取代时，各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001791
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)；
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基基团(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；
I-G至I-I的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)；
I-G至I-I的每个m′是0或1；并且
I-G至I-I的每个n′是0或1；
其中每个所述化合物，优选在烷基、芳基或Het基团上，任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
在替代实施例中，I-G至I-I的R3’是—(CH2)n-芳基、—(CH2CH2O)n-芳基、—(CH2)n-HET或—(CH2CH2O)n-HET，
其中：
I-G至I-I的所述芳基是任选地被一个或两个取代基取代的苯基，其中所述取代基优选选自：—(CH2)nOH、C1-C6烷基(其本身进一步任选地被CN、卤代(至多三个卤代基团)、OH取代)、—(CH2)nO(C1-C6)烷基、胺、单或二(C1-C6烷基)胺(其中胺上的烷基基团任选地被1或2个羟基基团或至多三个卤代(优选F、Cl)基团取代)，或者
I-G至I-I的所述芳基基团被以下项取代：—(CH2)nOH、—(CH2)n—O—(C1-C6)烷基、—(CH2)n—O—(CH2)n—(C1-C6)烷基、—(CH2)n—C(O)O(C0-C6)烷基、—(CH2)n—OC(O)(C0-C6)烷基、—(CH2)n—OC(O)(C0-C6)烷基、胺、单或二(C1-C6烷基)胺(其中胺上的烷基基团任选地被1或2个羟基基团或至多三个卤代(优选F、Cl)基团取代)、CN、NO2、任选地取代的—(CH2)n—(V)m′—CH2)n—(V)m′—(C1-C6)烷基基团、—(V)m′—(CH2CH2O)n—RPEG基(其中V是O、S或NR1′，R1′是H或C1-C3烷基基团(优选H)，并且RPEG是H或C1-C6烷基基团(其任选地被取代，包括任选地被羧基取代))，或者
I-G至I-I的所述芳基基团任选地被选自由以下项组成的组的杂环基(包括杂芳基基团)取代：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪(当被取代时，各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001821
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)；
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基(苯基或萘基)、杂芳基或杂环基基团(选自由以下项组成的组：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪)；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；
I-G至I-I的HET优选是噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选地被C1-C3烷基基团(优选甲基)或卤代基团(优选F或Cl)取代)、苯并呋喃、吲哚、吲哚嗪、氮杂吲哚嗪、或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001841
I-G至I-I的Sc是CHRSS、NRURE或O；
I-G至I-I的RHET是H、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RSS是H、CN、NO2、卤代(优选F或Cl)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)、任选地取代的O—(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的—C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)；
I-G至I-I的RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C0-C6烷基)(其中每个基团任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素(优选氟基)取代)、或任选地取代的杂环基(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，它们各自被任选地取代)；
I-G至I-I的YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代(优选Cl或F)、任选地取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团(例如CF3)取代、任选地取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基团取代)或任选地取代的炔基—C≡C—Ra，其中Ra为H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
I-G至I-I的RPRO是H、任选地取代的C1-C6烷基或任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基基团；
I-G至I-I的RPRO1和RPRO2各自独立地是H、任选地取代的C1-C3烷基基团，或一起形成酮基；
I-G至I-I的每个m′独立地是0或1；并且
I-G至I-I的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，
其中每个所述化合物，优选在所述芳基或HET基团上，任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
在其他额外的实施例中，优选的化合物包括根据以下化学结构的那些：
Figure BDA0003063017060001851
其中：
I-I的R2’是—NH—CH2-芳基-HET(优选直接与甲基取代的噻唑连接的苯基)；
I-I的R3’是-CHRCR3’-NH-C(O)-R3P1基或-CHRCR3’-R3P2基；
I-I的RCR3’是C1-C4烷基基团，优选甲基、异丙基或叔丁基；
I-I的R3P1是C1-C3烷基(优选甲基)、任选地取代的氧杂环丁烷基(优选甲基取代的，—(CH2)nOCH3基(其中n是1或2(优选2))，或者
Figure BDA0003063017060001861
基团(乙醚基优选在苯基部分上间位取代)、吗啉代基(在2-位或3-位连接到羰基；
I-I的R3P2是
Figure BDA0003063017060001862
基团；
I-I的芳基是苯基；
I-I的HET是任选地取代的噻唑或异噻唑；并且
I-I的RHET是H或卤代基团(优选H)；
或其药用盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物，其中每个所述化合物任选地通过连接基连接至PB基(包括E3LB基)。
在某些方面，包含泛素E3连接酶结合部分(E3LB)的双功能化合物，其中E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001863
其中：
I-J的每个R5和R6独立地是OH、SH或任选地取代的烷基，或者R5、R6和它们所连接的碳原子形成羰基；
I-J的R7是H或任选地取代的烷基；
I-J的E是键、C＝O或C＝S；
I-J的G是键、任选地取代的烷基、—COOH或C＝J；
I-J的J是O或N—R8；
I-J的R8是H、CN、任选地取代的烷基或任选地取代的烷氧基；
I-J的M是任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的杂环基或
Figure BDA0003063017060001871
R9和R10各自独立地是H；任选地取代的烷基、任选地取代的环烷基、任选地取代的羟烷基、任选地取代的硫代烷基、二硫化物连接的I-J、任选地取代的杂芳基、或卤代烷基，或者R9、R10和它们所连接的碳原子形成任选地取代的环烷基；
I-J的R11是任选地取代的杂环基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的芳基，或者
Figure BDA0003063017060001872
I-J的R12是H或任选地取代的烷基；
I-J的R13是H、任选地取代的烷基、任选地取代的烷基羰基、任选地取代的(环烷基)烷基羰基、任选地取代的芳烷基羰基、任选地取代的芳基羰基、任选地取代的(杂环基)羰基或任选地取代的芳烷基；任选地取代的(氧代烷基)氨基甲酸酯，
I-J的每个R14独立地是H、卤代烷基、任选地取代的环烷基、任选地取代的烷基、氮杂环丁烷、任选地取代的烷氧基或任选地取代的杂环基；
I-J的R15是H、CN、任选地取代的杂芳基、卤代烷基、任选地取代的芳基、任选地取代的烷氧基或任选地取代的杂环基；
I-J的每个R16独立地是卤代、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的CN或任选地取代的卤代烷氧基；
I-J的每个R25独立地是H或任选地取代的烷基；或两个R25基可一起形成氧代或任选地取代的环烷基基团；
I-J的R23是H或OH；
其中R23、R5或R6中的一者是O-L1。
I-J的Z1、Z2、Z3和Z4独立地是C或N；并且
I-J的o是0、1、2、3或4，或其药用盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。
在某些实施例中，其中I-J的G为C＝J，J为O，R7为H，每个R14为H，并且o为0。
在某些实施例中，其中I-J的G为C＝J，J为O，R7为H，每个R14为H，R15为任选地取代的杂芳基，并且o为0。在其他情况下，E为C＝O，M为
Figure BDA0003063017060001881
在某些实施例中，其中I-J的E为C＝O，R11是任选地取代的杂环基或
Figure BDA0003063017060001882
和M是
Figure BDA0003063017060001883
在某些实施例中，其中I-J的E为C＝O，M是
Figure BDA0003063017060001884
和R11是
Figure BDA0003063017060001885
每个R18独立地是H、卤代、任选地取代的烷氧基、氰基、任选地取代的烷基、卤代烷基或卤代烷氧基；并且p是0、1、2、3或4。
在某些实施例中，每个R14独立地被H、羟基、卤代、胺、酰胺、烷氧基、烷基、卤代烷基或杂环中的至少一个取代。
在某些实施例中，I-J的R15是根据以下项的基团：
Figure BDA0003063017060001891
CN、或卤代烷基，并且每个R18独立地是H、卤代、任选地取代的烷氧基、氰基、氨基烷基、酰胺基烷基、任选地取代的烷基、卤代烷基或卤代烷氧基；并且p是0、1、2、3或4。
在某些实施例中，E3LB是以下化学结构：
Figure BDA0003063017060001892
其中：
I-K的G为C＝J，J为O；
I-K的R7为H；
I-K的每个R14独立地是H、酰胺、烷基(例如甲基)，其任选地被一个或多个C1-C6烷基基团或C(O)NR′R″取代；
R′和R″各自独立地是H、任选地取代的烷基、或环烷基；
I-K的o为0；
I-K的R15如上针对I-J所定义；
I-K的R16如上针对I-J所定义；并且
I-K的R17是H、卤代、任选地取代的环烷基、任选地取代的烷基、任选地取代的烯基、和卤代烷基。
在其他情况下，I-K的R17是烷基(例如，甲基)或环烷基(例如，环丙基)。
在其他实施例中，E3LB根据以下化学结构：
Figure BDA0003063017060001901
其中：
I-K的G为C＝J，J为O；
I-K的R7为H；
I-K的每个R14为H；
I-K的o为0；并且
I-K的R15选自由任选地取代的以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001911
其中I-K的R30为H或任选地取代的烷基。
在其他实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060001921
其中：
I-K的E为C＝O；
I-K的M为
Figure BDA0003063017060001922
和
I-K的R11选自由任选地取代的以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001923
Figure BDA0003063017060001931
在其他实施例中，以下化学结构的化合物，
Figure BDA0003063017060001932
其中：
I-K的E为C＝O；
I-K的R11为
Figure BDA0003063017060001933
和
I-K的M为
Figure BDA0003063017060001934
I-K的q为1或2；
I-K的R20为H、任选地取代的烷基、任选地取代的环烷基、任选地取代的芳基、或
Figure BDA0003063017060001941
I-K的R21为H或任选地取代的烷基；并且
I-K的R22为H、任选地取代的烷基、任选地取代的烷氧基、或卤代烷基。
在本文所述的任何实施例中，I-J或I-K的R11选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001942
Figure BDA0003063017060001951
Figure BDA0003063017060001961
Figure BDA0003063017060001971
Figure BDA0003063017060001981
在某些实施例中，I-J或I-K的R11选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060001991
Figure BDA0003063017060002001
Figure BDA0003063017060002011
在某些实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060002021
其中：
I-L的X为O或S；
I-L的Y为H、甲基或乙基；
I-L的R17为H、甲基、乙基、羟甲基或环丙基；
I-L的M为任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基，或
Figure BDA0003063017060002023
I-L的R9为H；
I-L的R10为H、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的芳基、任选地取代的羟烷基、任选地取代的硫代烷基、或环烷基；
I-L的R11为任选地取代的杂芳族基、任选地取代的杂环基、任选地取代的芳基或
Figure BDA0003063017060002024
I-L的R12为H或任选地取代的烷基；并且
I-L的R13是H、任选地取代的烷基、任选地取代的烷基羰基、任选地取代的(环烷基)烷基羰基、任选地取代的芳烷基羰基、任选地取代的芳基羰基、任选地取代的(杂环基)羰基或任选地取代的芳烷基；任选地取代的(氧代烷基)氨基甲酸酯。
在一些实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060002031
其中：
I-M的Y为H、甲氧基或乙基
I-M的R9为H；
R10是异丙基、叔丁基、仲丁基、环戊基或环己基；
I-M的R11是任选地取代的酰胺、任选地取代的异吲哚啉酮、任选地取代的异噁唑、任选地取代的杂环基。
在本公开的其他优选实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060002032
其中：
I-N的R17为甲基、乙基或环丙基；并且
I-N的R9、R10和R11如上所定义。在其他情况，R9为H；并且
I-N的R10为H、烷基或环烷基(优选异丙基、叔丁基、仲丁基、环戊基或环己基)。
在本公开的其他优选实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060002041
或其药用盐，其中：
R1为H、任选地取代的烷基或任选地取代的环烷基；
R3是任选地取代的5-6元杂芳基；
W5为任选地取代的苯基、任选地取代的萘基或任选地取代的吡啶基；
R14a和R14b中的一者是H、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基(例如氟烷基)、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或者R14a、R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3元至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
R15是CN、任选地取代的氟烷基、
Figure BDA0003063017060002051
任选地取代的
Figure BDA0003063017060002052
其中R28a是卤代、任选地取代的烷基或氟烷基，或
Figure BDA0003063017060002061
每个R16独立地选自卤代、CN、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、羟基或卤代烷氧基；
每个R26独立地是H、任选地取代的烷基或NR27aR27b；
R27a和R27b各自独立地是H、任选地取代的烷基、任选地取代的环烷基，或者R27a和R27b与它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基；
每个R28独立地是H、卤素、CN、任选地取代的氨基烷基、任选地取代的酰胺基烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的羟烷基、胺、任选地取代的炔基、或任选地取代的环烷基；
o为0、1或2；并且
p为0、1、2、3或4。
在本文描述的任何方面或实施例中，E3LB为下式：
Figure BDA0003063017060002071
其中：
X4、X5和X6各自选自CH和N，其中N不超过2；
R1为C1-6烷基；
R3与针对I-O和IP所定义的相同
R14a和R14b中的一者是H、任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；R14a和R14b中的另一个是H；或者R14a和R14b与它们所连接的碳原子一起形成任选地取代的3至5元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
R27a和R27b各自独立地是H C1-6烷基或环烷基；
q为1、2、3或4；
R15是任选地取代的
Figure BDA0003063017060002081
或CN；
R28是H、甲基、CH2N(Me)2、CH2OH、CH2O(C1-4烷基)、CH2NHC(O)C1-4烷基、NH2，
Figure BDA0003063017060002082
在本文所述的任何方面或实施例中，R14a和R14b选自：H、C1-4烷基、C1-4环烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟烷基、C1-4烷氧基烷基、C1-4烷基-NR27aR27b和CONR27aR27b。
在本文所述的任何方面或实施例中，R14a和R14b中的至少一个是H(例如，R14a和R14b均为H)。
在本文所述的任何方面或实施例中，R14a和R14b中的至少一个为任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26。可替代地，在本文所述的任何方面或实施例中，R14a和R14b中的一者为任选地取代的烷基、任选地取代的卤代烷基、任选地取代的烷氧基、任选地取代的羟基烷基、任选地取代的烷基胺、任选地取代的杂烷基、任选地取代的烷基-杂环烷基、任选地取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一个为H。
在本文所述的任何方面或实施例中，R14a和R14b与它们所连接的碳原子一起形成
Figure BDA0003063017060002091
其中R23选自氢、C1-4烷基、—C(O)C1-4烷基。
在本公开的其他优选实施例中，E3LB是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003063017060002092
或其药用盐，其中：
X为CH或N；并且
I-Q和I-R的R1、R3、R14a、R14b和R15与针对I-O和I-P所定义的相同。
在本文所述的任何方面或实施例中，本文所述的E3LB可以是其药用盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。另外，在本文所述的任何方面或实施例中，本文所述的E3LB可直接通过键或通过化学连接基与PB偶联。
b.BRD4或ERα蛋白质结合基团(PB)
PB组分是与旨在被降解的靶蛋白质结合的基团。PB基包括，例如，任何与蛋白质特异性结合的部分(与靶蛋白质结合)。因此，CIDE的PB组分是结合选自由以下项组成的组的靶蛋白质的任何肽或小分子：ERα和BRD4，包括列出的这些靶蛋白质的所有变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合。PB选自小分子靶蛋白质结合部分。这样的小分子靶蛋白质结合部分还包括这些组合物的药用盐、对映异构体、溶剂化物和多晶型物，以及可以靶向目标蛋白质的其他小分子。
i.BRD4
1.四环
在实施例中，CIDE包含四环溴结构域抑制剂的残基，例如US2016/0039821中描述的抑制剂。该抑制剂具有以下通式：
Figure BDA0003063017060002101
在式(I)的某些实施例中，Y1是N或CH。
在某些实施例中，Y1为N。
在某些实施例中，Y1为CH。
在式(I)的某些实施例中，R1是CD3、C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基。
在某些实施例中，R1为C1-C3烷基。在一些此类实施例中，R1为甲基。
在式(I)的某些实施例中，R2为H或C1-C3烷基。
在某些实施例中，R2为H或甲基。
在某些实施例中，R2为H。
在某些实施例中，R2为C1-C3烷基。在一些此类实施例中，R2为甲基。
在式(I)的某些实施例中，Y3为N或CR3。
在某些实施例中，Y3为N。
在某些实施例中，Y3为CR3。
在式(I)的某些实施例中，R3是H、-CN、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—S(O)R3d、—S(O)2R3a、—S(O)2NR3bR3c、或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—CN、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—C(O)N(R3b)NR3bR3c、—S(O)R3d、—S(O)2R3a、—S(O)2NR3bR3c、—OR3a、—OC(IO)R3d、—NR3bR3c、N(R3b)C(O)R3d、N(R3a)SO3R3d、N(R3b)C(O)OR3d、N(R3b)C(O)NR3bR3c、N(R3b)SO2NR3bR3c、和N(R3b)C(NR3bR3c)═NR3bR3c。
在某些实施例中，R3是H、—CN、—C(O)R3c、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、或C1-C6烷基，其中C1-C6烷基任选地被选自由以下项组成的组的取代基所取代：G1、—NR3bR3c、N(R3b)C(O)R3d、N(R3b)SO2R3d、N(R3b)C(O)OR3d、N(R3b)C(O)NR3bR3c、和N(R3b)SO2NR3bR3c。在一些此类实施例中，G1基是任选地取代的杂环。在一些此类实施例中，C1-C6烷基被G1基取代，其中G1基是哌啶基、哌嗪基或吗啉基，其各自任选地被1或2个C1-C6烷基取代。在一些此类实施例中，C1-C6烷基被G1基取代，其中G1基是哌嗪基或吗啉基，其各自任选地被1或2个C1-C6烷基取代。
在某些实施例中，R3是H、—C(O)NR3bR3c、—CN或被G1基取代的C1-C6烷基。在一些此类实施例中，C1-C6烷基被G1基取代，其中G1基是任选地取代的C4-C6杂环。在一些此类实施例中，C1-C6烷基被G1基取代，其中G1基是哌啶基、哌嗪基或吗啉基，其各自任选地被1或2个C1-C6烷基取代。
在某些实施例中，R3是H、—C(O)R3a或—C(O)NR3bR3c。在一些此类实施例中，R3a是G1。在一些此类实施例中，R3a是G1，其中G1是任选地取代的杂环。在一些此类实施例中，R3b是G1，其中G1是哌啶基、哌嗪基或吗啉基，其各自任选地被1或2个C1-C6烷基取代。在一些此类实施例中，R3a是G1，其中G1是哌嗪基，其任选地被1或2个C1-C6烷基取代。
在某些实施例中，R3为H或—C(O)NR3bR3c。在一些此类实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基。
在某些实施例中，R3为H。
在某些实施例中，R3为—C(O)NR3bR3c。在一些此类实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C3烷基。
在某些实施例中，R3为G1。在一些此类实施例中，G1是任选地取代的单环杂芳基。在一些此类实施例中，G1是任选地取代的吡唑基。在一些此类实施例中，G1是被1或2个C1-C6烷基取代的吡唑基。
在式(I)的某些实施例中，Y2是C(O)、S(O)2或CR4R5。
在某些实施例中，Y2是C(O)。
在某些实施例中，Y2是S(O)2。
在某些实施例中，Y2是CR4R5。
在式(I)的某些实施例中，R4是H、氘、C1-C6烷基、卤素或C1-C6卤代烷基。
在某些实施例中，R4是H或氘。
在某些实施例中，R4为H。
在式(I)的某些实施例中，R5是H、氘、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—S(O)R5d、—S(O)2R5a、—S(O)2NR5bR5c、或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—CN、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c、N(R5b)SO2NR5bR5c、N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c、N(R5b)SO2NR5bR5c、和N(R5b)C(NR5bR5c)＝NR5bR5c。
在某些实施例中，R5是H、氘、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5b)NR3bR4c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c、N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c、和N(R5b)SO2NR5bR5c。
在某些实施例中，R5是被G1基任选地取代的C2-C6烯基，或者R5是H、氘、C1-C6烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)OR5a或G1；其中C1-C6烷基未被取代被选自由以下项组成的组的取代基所取代：G1、—C(O)R5c、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5b)NR5bR5c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c和N(R5b)C(NR5bR5c)═NR5bR5c。
在某些实施例中，R5是H、氘或任选地被选自由—C(O)OR5a或OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基。在一些此类实施例中，R5a为C1-C6烷基。
在某些实施例中，R5为H。
在式(I)的某些实施例中，R6是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6c、—S(O)2NR6bR6c、或G2；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G2、—CN、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—C(O)N(R6b)NR6bR6c、—S(O)R6d、—S(O)2R6a、—S(O)2NR6bR6c、—OR6a、—OC(O)R6d、—NR6bR6c、N(R6b)C(O)R6d、N(R6b)SO2R6d、N(R6b)C(O)OR6d、N(R6b)C(O)NR6bR6c、N(R6b)SO2NR6bR6c、和N(R6b)C(NR6bR6c)＝NR6bR6c。
在某些实施例中，R6是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、—C(O)R6c、—C(O)OR6c、—C(O)NR6bR6c、—S(O)3R6a或G2；其中C1-C6烷基和C2-C6烯基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G2、—CN、—C(O)OR6a、—NR6bR6c、N(R6b)C(O)R6d、N(R6b)SO2R6d、N(R6b)C(O)OR6d、N(R6c)C(O)NR6bR6c、和N(R6c)SO2NR6bR6c。
在某些实施例中，R6是H、C1-C6烷基、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6a或G2，其中C1-C6烷基未被取代或被选自由G2和—C(O)OR6a组成的组的取代基所取代。
在某些实施例中，R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2、或未被取代的或被G2基取代的C1-C6烷基。在某些实施例中，R6a是G2或未被取代的C1-C6烷基。
在某些实施例中，R6是—C(O)OR6c。在一些实施例中，R6a是C1-C6烷基。
在某些实施例中，R6是G2或未被取代的或被G2基取代的C1-C6烷基。在一些此类实施例中，R6是任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的杂环或任选地取代的环烷基；或者R6是未被取代的或被选自由以下项组成的组的取代基所取代的C1-C6烷基：杂芳基、环烷基和杂环，它们各自被任选地取代。在一些此类实施例中，R6是任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基或任选地取代的环烷基；或者R6是未被取代的或被选自由以下项组成的组的取代基所取代的C1-C6烷基：环烷基和杂环，它们各自被任选地取代。在一些此类实施例中，R6是苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲唑基、环己基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基或氮杂环庚烷基，它们各自任选地被取代，或者R6是未被取代的或被G1取代的C1-C6烷基，其中G1基是环丙基、环己基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、1,3-二氧戊基、或吡唑基，它们各自被任选地取代。在一些此类实施例中，R6是任选地取代的苯基、任选地取代的吡啶基或任选地取代的环己基；或者R6是未被取代的或被选自由以下项组成的组的取代基所取代的C1-C6烷基：环丙基和四氢呋喃基，它们各自被任选地取代。在一些此类实施例中，所述任选的取代基独立地选自由以下项组成的组：卤素、—O(C1-C3烷基)、—O(C1-C3卤代烷基)、—N(H)C(O)O(C1-C6烷基)、C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基。在一些此类实施例中，所述任选的取代基是卤素。在一些此类实施例中，所述卤素是F或Cl。
在式(I)的某些实施例中，A1是C(R7)或N；A2是C(R8)或N；A3是C(R9)或N；并且A4是C(R10)或N；其中零、一、或二或A1、A2、A3和A4是N。
在某些实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A2是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，A1、A2、A3和A4中的一者是N。在一些此类实施例中，A1是N；A2是C(R8)；A3是C(R9)；并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，A1、A2、A3和A4中的两个是N。在一些此类实施例中，A1是N；A2是C(R8)；A3是N；并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N；A2是C(R8)；A3是C(R9)；并且A4是C(R10)；或者A1是N；A2是C(R8)；A3是N；并且A是C(R10)；
在式(I)的某些实施例中，R7、R8和R9各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、—ORγ1、—OC(O)Rγ2、—OC(O)NRγ3Rγ4、—SRγ1、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—C(O)Rγ1、—C(O)ORγ1、—C(O)NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、G3、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—CN或(C1-C6亚烷基)—G3。
在某些实施例中，R7是H、卤素、-CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基。
在某些实施例中，R7是H、卤素、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基。在一些此类实施例中，环丙基任选地被1、2、3、4或5个R4g基取代，其中R4g是C1-C2烷基、卤素或C1-C2卤代烷基。
在某些实施例中，R7是H或卤素。在一些此类实施例中，卤素是F或Cl。在一些此类实施例中，卤素是F。
在某些实施例中，R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)-G3其中G3是任选地取代的杂环。
在某些实施例中，R8为H。
在某些实施例中，R9是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3、Rγ4、—C(O)NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4。
在某些实施例中，R9是H、C1-C6烷基、卤素、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—CN或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。
在某些实施例中，R9是H、C1-C6烷基、卤素、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。在一些实施例中，在每次出现时，Rγ1、Rγ3和Rγ4各自独立地是H或C1-C6烷基，并且Rγ2是C1-C6烷基。在一些实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C3烷基，并且Rγ3和Rγ4是氢。
在某些实施例中，R9是卤素、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。
在某些实施例中，R9是卤素、—NR(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。在一些此类实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基，并且Rγ2是H。在一些此类实施例中，卤素是F。在一些此类实施例中，Rγ1和Rγ2各自独立地是甲基或乙基，并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R9是—(CH2)—S(O)2Rγ1。在一些实施例中，Rγ1是C1-C6烷基。在一些此类实施例中，Rγ1是甲基。
在式(I)的某些实施例中，R10是H、C1-C3烷基卤素、C1-C3卤代烷基或-CN。
在某些实施例中，R10是H、C1-C2烷基或卤素。
在某些实施例中，R10为H。
上面已经讨论了取代基R1、R2、R4、Y1、Y2、Y3、A1、A2、A3和A4的各种实施例。这些取代基的实施例可以组合以形成式(I)的化合物的各种实施例。通过组合以上讨论的取代基实施例形成的式(I)化合物的所有实施例在本主题的范围内，并且在下面提供式(I)化合物的一些说明性实施例。
在某些实施例中，Y1是CH；Y2是CR3；并且Y2是CR4R5。
在某些实施例中，Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且R3是H、-CN、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c或C1-C6烷基，其中C1-C6烷基任选地被选自由以下项组成的组的取代基所取代：G1、—NR3bR3c、N(R3b)C(O)R3d、N(R3b)SO2R3d、N(R3b)C(O)OR3d、N(R3b)C(O)NR3bR3c和N(R3b)SO2NR3bR3c。
在一些其它实施例中，A1是C(Ry)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；R4是H或氘；并且R5是H、氘、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R4b)NR5bR5c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c、N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c和N(R5b)SO2NR5bR5c。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且R6是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6a或G2；其中C1-C6烷基和C2-C6烯基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G2、—CN、—C(O)OR6a、—NR6bR6c、N(R6b)C(O)R6d、N(R6b)SO2R6d、N(R6b)C(O)OR6d、N(R6b)C(O)NR6bR6c、和N(R6b)SO2NR6bR6c。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A2是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且R9是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—C(O)NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(R≡3)S(O)2R6652、—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—N(Rγ3)CX(O)NRγ3R654、—N(Rγ3)S(O)2NRγ3R654、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4或—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是C1-C3烷基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；并且Y2是CR4R5。
在一些其它实施例中，R1是甲基。
在某些实施例中，R1是C1-C3烷基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；R4 is H或氘；R5是被G1基任选地取代的C2-C6烯基，或者R5是H、氘、C1-C6烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a或G1；其中C1-C6烷基未被取代被选自由以下项组成的组的取代基所取代：G1、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5b)NR5bR5c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c和N(R5b)C(NR5bR5c)═NR5bR5c。
在一些其它实施例中，R1是甲基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是C1-C3烷基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且R3是H、—C(O)R3a或—C(O)NR3bR3c。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R1是甲基。
在一些其它实施例中，R1是甲基，并且R3a是G1。
在另外一些其它实施例中，R1是甲基，R3a是G1，其中G1是任选地取代的杂环。
在某些实施例中，R1是C1-C3烷基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且R6是H、C1-C6烷基、—C(O)R6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6a或G2；其中C1-C6烷基未被取代或被选自由G2和—C(O)OR6a组成的组的取代基所取代。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R1是甲基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1为C1-C2烷基；R2是H；Y1是CH:Y3是CR3；Y3是CR4R5；并且R9是H、C1-C6烷基、卤素、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R1是甲基。
在某些实施例中，R1是C1-C3烷基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；并且A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在另外一些其它实施例中，R1是甲基。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10；R4是H或氘；R7是H、卤素、C1-C3烷基、或任选地取代的环丙基；R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ 3R654、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C11-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)—G3其中G3是任选地取代的杂环；并且R10是H、C1-C3烷基、或卤素。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一个实施例中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10；R4是H或氘；R7是H、卤素、C1-C3烷基、或任选地取代的环丙基；R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)—G3其中G3是任选地取代的杂环；R10是H、C1-C3烷基、或卤素；并且R3是H或—C(O)NR3bR3c。
在一些其它实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一个实施例中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A2是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H、卤素、C1-C3烷基、或任选地取代的环丙基；R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)—G3其中G3是任选地取代的杂环；R10是H、C1-C3烷基、或卤素；并且R5是H、氘或任选地被选自—C(O)OR5a和OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在另外一些实施例中，R5a是C1-C6烷基。
在一个实施例中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H、卤素、C1-C3烷基、或任选地取代的环丙基；R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、或—(C1-C6亚烷基)—G3其中G3是任选地取代的杂环；并且R10是H、C1-C3烷基、或卤素；并且R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2、或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，R6a是G2或未取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一个实施例中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H、卤素、C1-C3烷基、或任选地取代的环丙基；R8是H、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、任选地取代的杂环、—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4或—(C1-C6亚烷基)—G3其中G3是任选地取代的杂环；R10是H、C1-C3烷基、或卤素；并且R9是卤素、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；并且R10是H。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；并且R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；并且R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基，并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；并且R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2、或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，R6a是G2或未取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基，并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2、或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基；并且R5是H或氘、或任选地被选自由—C(O)OR5a或OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，R6a是G2或未取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基，并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR4R5；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2R652或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；
R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2、或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基；R5是H、氘、或任选地被选自由—C(O)OR5a和OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基；并且R3是H或—C(O)NR3bR3c。
在一些其它实施例中，R6a是G2或未取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A5是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R6是—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、G2或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基；R5是H、氘、或任选地被选自由—C(O)OR5a和OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基；R3是H或—C(O)NR3bR3c；R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基；R5a是C1-C6烷基；Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在一些其它实施例中，R6a是G2或未取代的C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R4是H或氘；R7是H或卤素；R8是H；R10是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R6是G2或未取代的或被G2基取代的C1-C6烷基；R5是H、氘、或任选地被选自由—C(O)OR5a和OR5a组成的组的取代基取代的C1-C6烷基；R3是H或—C(O)NR3bR3c；R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基；R5a是C1-C6烷基；Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在一些其它实施例中，R6是任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基或任选地取代的环烷基；或者R6是未被取代的或被选自由以下项组成的组的取代基所取代的C1-C6烷基：环烷基和杂环，它们各自被任选地取代。
在一些其它实施例中，R6是任选地取代的苯基、任选地取代的环己基、任选地取代的吡啶基；或未被取代的或被G2基取代的C1-C6烷基，其中G2是环丙基和四氢呋喃基，它们各自被任选地取代。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是H、—C(O)NR3bR3c、—CN或被G1基取代的C1-C6烷基；其中G1是任选地取代的C4-C6杂环；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；并且R10是H。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R3)，A3是C(9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R3b是H或C1-C6烷基；并且R3c是H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、G1或—(C1-C6亚烷基)—G1。
在一些实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是H、—C(O)NR3bR3c、—CN或被G1基取代的C1-C6烷基；其中G1是任选地取代的C4-C6杂环；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8是H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R10是H；并且R8是H。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是H、—C(O)NR3bR3c、—CN或被G1基取代的C1-C6烷基；其中G1是任选地取代的C4-C6杂环；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8 H；R9是卤素、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R10是H；R5是H；并且R6是苯基、吡啶基或环己基；它们各自任选地被取代；或者R6是—C(O)O(C1-C6烷基)；或者R6是—CH2—(任选地取代的四氢吡喃基)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，R3b和R3c各自独立地是H或C1-C6烷基。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是G1；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8是H；R9是—S(O)2Rγ1、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；并且R10是H。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y2是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是G1；其中G1是任选地取代的杂芳基；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8是H；R9是—S(O)2Rγ1、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2或—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1；R10是H；并且R5是H。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1和Rγ2是C1-C6烷基；并且Rγ3是H。
在某些实施例中，R1是甲基；R2是H；Y1是CH；Y3是CR3；Y2是CR4R5；A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)；或者A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)；R3是G1；其中G1是任选地取代的吡唑基；R4是H或氘；R7是H、卤素、—CN、C1-C3烷基或任选地取代的环丙基；R8是H；R9是—S(O)2Rγ1；R10是H；R5是H；并且R6是苯基、吡啶基或环己基；它们各自任选地被取代；或者R6是—C(O)O(C1-C6烷基)；或者R6是—CH2—(任选地取代的四氢吡喃基)。
在一些其它实施例中，A1是C(R7)，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是C(R9)，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，A1是N，A2是C(R8)，A3是N，并且A4是C(R10)。
在一些其它实施例中，Rγ1是C1-C6烷基。
在某些实施例中，Y1是N或CH；R1是CD3、C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基；R2是H或C1-C3烷基；Y3是N或CR3；R3是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—S(O)R3d、—S(O)2R3a、—S(O)2NR3bR3c或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—C(O)N(R3b)NR3bR3c、—S(O)R3d、—S(O)2R3a、—S(O)2NR3bR3c、—OR3a、—OC(O)R3d、—NR3bR3c、N(R3b)C(O)R3d、N(R3b)SO2R3d、N(R3b)、N(R3b)C(O)OR3d、N(R3b)C(O)NR3bR3c、N(R3b)SO2NR3bR3c和N(R3b)C(NR3bR3c)═NR3bR3c；Y2是C(O)2S(O)2或CR4R5；R4是H、氘、C1-C6烷基、卤素或C1-C6卤代烷基；R5是H、氘、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—S(O)R5d、—S(O)2R5a、—S(O)2NR5bR5c或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5bR5c、—S(O)R5d、—S(O)2R5a、—S(O)2NR5bR5c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c、N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c、N(R5b)SO2NR5bR5c和N(R5b)C(NR5bR5c)═NR5bR5c；R3a、R3b、R3c、R5a、R5b和R5c，各自出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1或—(C1-C6亚烷基)—G1；R3d和R5d，各自出现时，各自独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1或—(C1-C6亚烷基)-G1；G1，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基或环烯基；并且每个G1任选地被下述项取代：1、2、3、4或5个R1g基；R6是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6a、—S(O)2NR6bR6c或G2；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G2、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—C(O)N(R6b)NR6bR6c、—S(O)R6d、—S(O)2R6a、—S(O)2NR6bR6c、—OR6a、—OC(O)R6d、—NR6bR6c、N(R6b)C(O)R6d、N(R6b)SO2R6d、N(R6b)C(O)OR6d、N(R6b)C(O)NR6bR6c、N(R6b)SO2NR6bR6c和N(R6b)C(NR6bR6c)═NR6bR6c；R6a、R6b和R6c，各自出现时，各自独立地是H、烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤代烷基、G2、—(C2-C6亚烷基)-G2、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；R6d，各自出现时，独立地是烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤代烷基、G2、—(C1-C6亚烷基)—G2、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；G2，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基或环烯基；并且每个G2任选地被下述项取代：1、2、3、4或5个R2g基；A1是C(R7)或N；A2是C(R8)或N；A3是C(R9)或N；并且A4是C(R10)或N；其中A1、A2、A3和A4中的零个、一个或两个是N；R7、R8和R9各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、—ORγ1、—OC(O)Rγ2、—OC(O)NRγ3Rγ4、—SRγ1、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—C(O)Rγ1、—C(O)ORγ1、—C(O)NRγ3Rγ4、—NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—N(Rγ3)C(O)O(Rγ1)、—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、G3、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—CN或—(C1-C6亚烷基)—G3；Rγ1、Rγ3和Rγ4，各自出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G3、—(C1-C6亚烷基)—G3、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；Rγ2，各自出现时、独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G3、—(C1-C6亚烷基)—G3、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；G3，各自出现时，独立地是芳基、环烷基、环烯基或杂环；并且每个G3基任选地被下述项取代：1、2、3、4、或5个R6g基；R10是H、C1-C3烷基,卤素、C1-C3卤代烷基或—CN；R1g、R2g和R4g，各自出现时，独立地是选自由以下项组成的组：氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基,卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、G3a、—ORa、—OC(O)Rb、—OC(O)NRcRd、—SRa、—S(O)2Ra、—S(O)2NRc Rd、—C(O)Ra、—C(O)ORa、—C(O)NRcRd、—NRcRd、—(RcC(O)Rb、—N(Rc)S(O)2Rb、—N(Rc)C(O)O(Rb)、—N(Rc)C(O)NRcRd、—N(Rc)S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—G2a、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(RcC(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—CN；Ra、Rc、Rd和Rc，各自出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G2a、或—(C1-C6亚烷基)—G2a；Rb，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G3a或—(C1-C6亚烷基)—G2a；G2a，各自出现时，各自独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基或环烯基；并且每个G2a基任选地被下述项取代：1、2、3、4或5个R3g基；R3g，各自出现时，独立地是氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、—ORx1、—OC(O)Rx2、—OC(O)NRx1Rx1、—SRx1、—S(O)2Rx1、—S(O)2NRx3Rx4、—C(O)Rx1、—C(O)ORx1、—C(O)NRx3Rx4、—NRx3Rx4、—N(Rx3)C(O)Rx2、—N(Rx1)S(O)2Rx2、—N(Rx1)C(O)O(Rx2)、—N(Rx1)C(O)NRx3Rx4、—N(Rx3)S(O)2NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—ORx1、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rx2、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rx1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Rx1、—(C1-C4亚烷基)—C(O)ORx1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)C(O)Rx2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)S(O)2Rx2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)C(O)O(Rx2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)C(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)S(O)2NRx3Rx4或—(C1-C6亚烷基)—CN；Rx1、Rx3和Rx4，各自出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6卤代烷基；并且Rx2，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6卤代烷基。
在某些实施例中，Y1是N或CH；R1是CD3、C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基；R2是H或C1-C3烷基；Y3是N或CR3；R3是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—S(O)R3d、—SO)2R3a、—S(O)2NR3bR3c或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—CN、—C(O)R3a、—C(O)OR3a、—C(O)NR3bR3c、—C(O)N(R3b)NR3bR3c、—S(O)R3d、—S(O)2R3a、—S(O)2NR3bR3c、—OR3a、—OC(O)R3d、—NR3bR3c、N(R3b)C(O)R3d、N(R3b)SO2R3d、N(R3b)C(O)OR3d、N(R3b)C(O)NR3bR3c、N(R3b)SO2NR3bR3c和N(R3b)C(NR3bR3c)′NR3bR3c；Y2是C(O)、S(O)2、或CR4R5；R4是H、氘、C1-C6烷基、卤素或C1-C6卤代烷基；R5是H、氘、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—S(O)R5d、—S(O)2R5a、—S(O)2NR5bR5c或G1；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G1、—C(O)R5a、—C(O)OR5a、—C(O)NR5bR5c、—C(O)N(R5b)NR5bR5c、—S(O)R5d、—S(O)2R5a、—S(O)2NR5bR5c、—OR5a、—OC(O)R5d、—NR5bR5c、N(R5b)C(O)R5d、N(R5b)SO2R5d、N(R5b)C(O)OR5d、N(R5b)C(O)NR5bR5c、N(R5b)SO2NR5bR5c和N(R5b)C(NR5bR5c)═NR5bR5c；R3a、R3b、R3c、R5a和R5b，各自出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1、或—(C1-C6亚烷基)—G1；R5c各自出现时，独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1、—(C1-C6亚烷基)—G1、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—ORa、或—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa；R3d，各自出现时独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1、或—(C1-C6亚烷基)—G1；R5d，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G1、—(C1-C6亚烷基)—G1、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)；G1，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基或环烯基；并且每个G1任选地被1、2、3、4、或5个R1g基取代；
R6是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—S(O)2R6a、—S(O)2NR6bR6c或G2；其中C1-C6烷基、C2-C6烯基和C2-C6炔基各自独立地未被取代或被独立地选自由以下项组成的组的1个或2个取代基所取代：G2、—C(O)R6a、—C(O)OR6a、—C(O)NR6bR6c、—C(O)N(R6b)NR6bR6c、—S(O)R6d、—S(O)2R6a、—S(O)2NR6bR6c、—OR6a、—OC(O)R6d、—NR6bR6c、N(R6b)C(O)R6d、N(R6a)SO2R6d、N(R6b)C(O)OR6d、N(R6b)C(O)NR6bR6c、N(R6b)SO2NR6bR6c和N(R6b)C(NR6bR6c)═NR6bR6c；R6a、R6b和R6c，各自出现时，独立地是H、烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤代烷基、G2、—(C1-C6亚烷基)—G2、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(RcS(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd、或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；R6d，各自出现时，独立地是烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤代烷基、G2、—(C1-C6亚烷基)—G2、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)-N(Rc)S(O)2NRcRd；G2，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基、或环烯基；并且每个G2任选地被1、2、3、4或5个R2g基取代；A1是C(R7)或N；A2是C(R8)或N；A3是C(R9)或N；并且A4是C(R10)或N；其中A1、A2、A3和A4中的零个、一个或两个是N；R7、R8和R9独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、—ORγ1、—OC(O)Rγ2、—OC(O)NRγ3Rγ4、—SRγ1、—S(O)2Rγ1、—S(O)2NRγ3Rγ4、—C(O)Rγ1、—C(O)ORγ1、—C(O)NRγ3Rγ4、—NRγRγ4、—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、G3、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Rγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORγ1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2Rγ2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)O(Rγ2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)C(O)NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rγ3)S(O)2NRγ3Rγ4、—(C1-C6亚烷基)—cn、或—(C1-C6亚烷基)—G3；
Rγ1、Rγ3和Rγ4，各自出现时，独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G3、—(C1-C6亚烷基)-G3、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；Rγ2，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G3、—(C1-C6亚烷基)—G3、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd；G3，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环；并且每个G3基任选地被1、2、3、4、或5个R4g基取代；R10是H、C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基或—CN；R1g、R2g和R4g，各自出现时，独立地是选自由以下项组成的组：氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、G2a、—ORa、—OC(O)Rb、—OC(O)NRcRd、—SRa、—S(O)2Ra、—S(O)2NRc Rd、—C(O)Ra、—C(O)ORa、—C(O)NRcRd、—NRcRd、—N(Ra)C(O)Rb、—N(Ra)S(O)2Rb、—N(Ra)C(O)O(Rb)、—N(Rc)C(O)NRcRd、—N(Rc)S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—CN、—(C1-C6亚烷基)—G2a、—(C1-C6亚烷基)—ORa、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Ra、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Ra、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORa、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Ra)C(O)Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2Rb、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)O(Rb)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)C(O)NRcRd、—(C1-C6亚烷基)—N(Rc)S(O)2NRcRd或—(C1-C6亚烷基)—CN；Ra、Rc、Rd和Re，各自出现时，独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G2a或—(C1-C6亚烷基)—G2a；Rb，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、G2a或—(C1-C6亚烷基)—G2a；G2a，各自出现时，独立地是芳基、杂芳基、杂环、环烷基或环烯基；并且每个G2a基独立地被1、2、3、4、或5个R3g基取代；R3g，各自出现时，独立地是氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、—CN、NO2、—ORx1、—OC(O)Rx2、—OC(O)NRx3Rx4、—SRx1、—S(O)2Rx1、—S(O)2NRx3Rx4、—C(O)Rx1、—C(O)ORx1、—C(O)NRx3Rx4、—NRx3Rx4、—N(Rx3)C(O)Rx2、—N(Rx3)S(O)2Rx2、—N(Rx3)C(O)O(Rx2)、—N(Rx3)C(O)NRx3Rx4、—N(Rx3)S(O)2NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—ORx1、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)Rx2、—(C1-C6亚烷基)—OC(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2Rx1、—(C1-C6亚烷基)—S(O)2NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—C(O)Rx1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)ORx1、—(C1-C6亚烷基)—C(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—n(rx3)C(O)Rx2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)S(O)2Rx2、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)C(O)O(Rx2)、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)C(O)NRx3Rx4、—(C1-C6亚烷基)—N(Rx3)S(O)2NRx3Rx4或—(C1-C6亚烷基)—CN；Rx1、Rx3和Rx4，每次出现时，各自独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6卤代烷基；并且Rx2，各自出现时，独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6卤代烷基。
在某些实施例中，BRD4抑制剂具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002381
在实施例中，BRD4结合片段通过酰胺键与L2共价连接。在实施例中，BRD4结合片段通过从L2的胺基和上述结构的–COOH形成的酰胺键与L2共价连接。因此，在某些实施例中，为了将BRD4结合片段连接至L2，A2是C(R8)，其中R8是–C(O)ORγ1，其中Rγ1是氢。
在实施例中，为了将BRD4结合片段连接至L2，A2是C(R8)，其中R8是–C(O)NRγ3Rγ4，其中Rγ3和Rγ4各自独立地选自由氢和C1-C6烷基组成的组，在以下结构中：
Figure BDA0003063017060002391
2.JQ1抑制剂
在实施例中，CIDE含有JQ1溴结构域抑制剂的残基，例如US8,981,083中描述的抑制剂，其通过引用整体并入本文。该抑制剂具有以下通式I：
Figure BDA0003063017060002392
其中
X是N或CR5；
R5是H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；
RB是H、烷基、羟烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基或-COO-R3，它们各自任选地被取代；
环A是芳基或杂芳基；
每个RA独立地是烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其各自任选地被取代；或任何两个RA与各自连接的原子可一起形成稠合的芳基或杂芳基基团；
R为烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；它们各自任选地被取代；
R1为—(CH2)n-L，其中n为0-3且L为H、—COO—R3、—CO—R3、—CO—N(R3R4)、—S(O)2—R3、—S(O)2—N(R3R4)、N(R3R4)、N(R4)C(O)R3、任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基；
R2是H、D(氘)、卤素或任选地取代的烷基；
每个R3独立地选自由以下项组成的组：
(i)H、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；
(ii)杂环烷基或取代的杂环烷基；
(iii)—C1-C8烷基、—C2-C8烯基或—C2-C8炔基，各自包含选自O、S或N的0、1、2或3个杂原子；—C3-C12环烷基、取代的—C3-C12环烷基、—C3-C12环烯基或取代的—C3-C12环烯基，它们各自可以任选地被取代；以及
(iv)NH2、N＝CR4R6；
每个R4独立地是H、烷基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；或者R3和R4与它们所连接的氮原子一起形成4-10元环；
R6是烷基、烯基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；或者R4和R6与它们所连接的碳原子一起形成4-10元环；
m为0、1、2或3；
前提是
(a)如果环A为噻吩基，X为N，R为苯基或取代的苯基，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为1并且L为—CO—N(R3R4)，则R3和R4不与它们所连接的氮原子一起形成吗啉代环；
(b)如果环A为噻吩基，X为N，R为取代的苯基，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为1，L为—CO—N(R3R4)，并且R3和R4中的一者是H，则R3和R4中的另一个不是甲基、羟乙基、烷氧基、苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；并且
(c)如果环A为噻吩基，X为N，R为取代的苯基，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为1，L为—COO—R3，则R3不是甲基或乙基；
或其盐、溶剂化物或水合物。
在某些实施例中，R为芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代。
在某些实施例中，L为H、—COO—R3、—CO—N(R3R4)、—S(O)2—R3、—S(O)2—N(R3R4)、N(R3R4)、N(R4)C(O)R3或任选地取代的芳基。在某些实施例中，每个R3独立地选自由以下项组成的组：H、—C1-C8烷基(其任选地被取代，含有选自O、S或N的0、1、2或3个杂原子)；或NH2、N═CR4R6。
在某些实施例中，R2为H、D、卤素或甲基。
在某些实施例中，RB为烷基、羟烷基、卤代烷基或烷氧基；它们各自任选地被取代。
在某些实施例中，RB为甲基、乙基、羟基甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、COOH、COOMe、COOEt或COOCH2OC(O)CH3。
在某些实施例中，环A为5元或6元芳基或杂芳基。在某些实施例中，环A为硫代呋喃基、苯基、萘基、联苯、四氢萘基、茚满基、吡啶基、呋喃基、吲哚基、嘧啶基、吡地嗪基(pyridizinyl)、吡嗪基、咪唑基、噁唑基、噻吩基、噻唑基、三唑基、异噁唑基、喹啉基、吡咯基、吡唑基或5,6,7,8-四氢异喹啉基。
在某些实施例中，环A为苯基或噻吩基。
在某些实施例中，m为1或2，并且至少一个出现的RA的为甲基。
在某些实施例中，每个RA独立地是H、任选地取代的烷基，或者任何两个RA与各自连接的原子可一起形成芳基。
在一些其它实施例中，JQ1抑制剂是式II的化合物：
Figure BDA0003063017060002411
其中
X是N或CR5；
R5是H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；
RB是H、烷基、羟烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基或-COO-R3，它们各自任选地被取代；
每个RA独立地是烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其各自任选地被取代；或任何两个RA与各自连接的原子可一起形成稠合的芳基或杂芳基基团；
R为烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；
R′1为H、—COO—R3、—CO—R3、任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基；
每个R3独立地选自由以下项组成的组：
(i)H、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基；
(ii)杂环烷基或取代的杂环烷基；
(iii)—C1-C8烷基、—C2-C8烯基或—C2-C8炔基，各自包含选自O、S或N的0、1、2或3个杂原子；—C3-C12环烷基、取代的—C3-C12环烷基；—C3-C12环烯基或取代的—C3-C12环烯基，它们各自可以任选地被取代；
m为0、1、2或3；
前提是，如果R′1是—COO—R3，X是N，R是取代的苯基，RB是甲基，则R3不是甲基或乙基；或其盐、溶剂化物或水合物。
在某些实施例中，R为芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代。在某些实施例中，R为苯基或吡啶基，它们各自任选地被取代。在某些实施例中，R为对-Cl-苯基、邻-Cl-苯基、间-Cl-苯基、对-F-苯基、邻-F-苯基、间-F-苯基或吡啶基。
在某些实施例中，R′1为—COO—R3、任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基；R3为—C1-C8烷基，其包含选自O、S或N的0、1、2或3个杂原子，并且其可以任选地被取代。在某些实施例中，R′1为—COO—R3，并且R3为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基或叔丁基；或R′1为H或任选地取代的苯基。
在某些实施例中，RB为甲基、乙基、羟基甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、COOH、COOMe、COOEt、COOCH2OC(O)CH3。
在某些实施例中，RB为甲基、乙基、羟基甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、COOH、COOMe、COOEt或COOCH2OC(O)CH3。
在某些实施例中，每个RA独立地是任选地取代的烷基，或者任何两个RA与各自连接的原子可一起形成稠合的芳基。
在某些实施例中，每个RA是甲基。
在其它实施例中，JQ1抑制剂是式IV的化合物：
Figure BDA0003063017060002431
其中
X是N或CR5；
R5是H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；
RB是H、烷基、羟烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基或-COO-R3，它们各自任选地被取代；
环A是芳基或杂芳基；
每个RA独立地是烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其各自任选地被取代；或任何两个RA与各自连接的原子可一起形成稠合的芳基或杂芳基基团；
R1为—(CH2)n-L，其中n为0-3且L为H、—COO—R3、—CO—R3、—CO—N(R3R4)、—S(O)2—R3、—S(O)2—N(R3R4)、N(R3R4)、N(R4)C(O)R3、任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基；
R2是H、D、卤素或任选地取代的烷基；
每个R3独立地选自由以下项组成的组：
(i)H、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；
(ii)杂环烷基或取代的杂环烷基；
(iii)—C1-C8烷基、—C2-C8烯基或—C2-C8炔基，各自包含选自O、S或N的0、1、2或3个杂原子；—C3-C12环烷基、取代的—C3-C12环烷基、—C3-C12环烯基或取代的—C3-C12环烯基，它们各自可以任选地被取代；以及
(iv)NH2、N═CR4R6；
每个R4独立地是H、烷基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；
或者R3和R4与它们所连接的氮原子一起形成4-10元环；
R6是烷基、烯基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基或杂芳基，它们各自任选地被取代；或者R4和R6与它们所连接的碳原子一起形成4-10元环；
m为0、1、2或3；
前提是
(a)如果环A为噻吩基，X为N，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为0并且L为—CO—N(R3R4)，则R3和R4不与它们所连接的氮原子一起形成吗啉代环；
(b)如果环A为噻吩基，X为N，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为0并且L为—CO—N(R3R4)，并且R3和R4中的一者是H，则R3和R4中的另一个不是甲基、羟乙基、烷氧基、苯基、取代的苯基、吡啶基或取代的吡啶基；并且
(c)如果环A为噻吩基，X为N，R2为H，RB为甲基，并且R1为—(CH2)n-L，其中n为0并且L为—COO—R3，则R3不是甲基或乙基；或者
其盐、溶剂化物或水合物。
在某些实施例中，JQ1抑制剂是如上所述的化合物，其中R’1是—COO—R3，其中R3是H。在某些实施例中，JQ1抑制剂具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002451
在某些实施例中，JQ1结合片段通过从L2的胺基和上述结构的–COOH形成的酰胺键与L2共价连接。
当L1共价结合到JQ1结合片段时，连接点包括以下结构中标为*的点，而特定实施例标为*’：
Figure BDA0003063017060002452
ii.ERα
在实施例中，CIDE部分包含抗雌激素化合物的残基，例如他莫昔芬代谢物残基、4-羟基他莫昔芬(E和Z异构体的混合物或分离的E或Z异构体)和内西芬(E和Z异构体的混合物或分离的E或Z异构体)，诸如具有下式的化合物：
Figure BDA0003063017060002461
其中Rα是氢或甲基，并且R’是氢、C1-C6烷基、苄基、苯基或-(PO3H2)。
在实施例中，CIDE部分含有内西芬的残基(E和Z异构体的混合物或分离的E或Z异构体)：
Figure BDA0003063017060002462
c.连接基L2
如本文所述的CIDE的E3LB和PB基可以与连接基(L2、连接基L2、连接基-2)连接。在某些实施例中，连接基L2通过从-NH、–NH2、–NHRα、-NHCOOH或能够与连接基L2形成酰胺键的E3LB部分上的其它部分所形成的酰胺键共价结合至E3LB部分。
在某些实施例中，连接基L2是包含A的一个或多个共价连接的结构单元(例如，-A1...Aq-)的基团，其中A1是与E3LB、PB或其组合中的至少一个偶联的基团。在某些实施例中，A1将E3LB、PB或其组合直接连接到另一E3LB、PB或其组合。在其它实施例中，A1通过Aq将EL3B、PB或其组合间接连接到另一E3LB、PB或其组合。
在某些实施例中，A1至Aq各自独立地是键、CRLaRLb、O、S、SO、SO2、NRLc、SO2NRLc、SONRLc、CONRLc、NRLcCONRLd、NRLcSO2NRLd、CO、CRLa═CRLb、C≡C、SiRLaRLb、P(O)RLa、P(O)ORLa、NRLcC(═NCN)NRLd、NRLcC(═NCN)、NRLcC(═CNO2)NRLd、被0-6个RLa和/或RLb基任选地取代的C3-11环烷基、被0-6个RLa和/或RLb基任选地取代的C3-11杂环基、被0-6个RLa和/或RLb基任选地取代的芳基、被0-6个RLa和/或RLb基任选地取代的杂芳基，其中RLa或RLb各自独立地可以与其他A基连接形成环烷基和/或杂环基部分(其可以被0-4个RLe基进一步取代)；其中RLa、RLb、RLc、RLd和RLe各自独立地为H、卤代、C1-8烷基、OC1-8烷基、SC1-8烷基、NHC1-8烷基、N(C1-8烷基)2、C3-11环烷基、芳基、杂芳基、C3-11杂环基、OC1-8环烷基、SC1-8环烷基、NHC1-8环烷基、N(C1-8环烷基)2、N(C1-8环烷基)(C1-8烷基)、OH、NH2、SH、SO2C1-8烷基、P(O)(OC1-8烷基)(C1-8烷基)、P(O)(OC1-8烷基)2、CC—C1-8烷基、CCH、CH═CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)═CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)═C(C1-8烷基)2、Si(OH)3、Si(C1-8烷基)3、Si(OH)(C1-8烷基)2、COC1-8烷基、CO2H、卤素、CN、CF3、CHF2、CH2F、NO2、SF5、SO2NHC1-8烷基、SO2N(C1-8烷基)2、SONHC1-8烷基、SON(C1-8烷基)2、CONHC1-8烷基、CON(C1-8烷基)2、N(C1-8烷基)CONH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)CON(C1-8烷基)2、NHCONH(C1-8烷基)、NHCON(C1-8烷基)2、NHCONH2、N(C1-8烷基)SO2NH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH(C1-8烷基)、NH SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH2。
在某些实施例中，q是大于或等于0的整数。在某些实施例中，q是大于或等于1的整数。
在某些实施例中，例如，当q大于2时，Aq是连接至E3LB部分的基团，并且A1和Aq经由A的结构单元(A的这种结构单元的数目：q-2)连接。
在某些实施例中，例如，当q为2时，Aq是连接至A1和E3LB部分的基团。
在某些实施例中，例如，当q为1时，连接基L2的结构为-A1-，并且A1为连接至E3LB部分和PB部分的基团。
在额外的实施例中，q是1至100、1至90、1至80、1至70、1至60、1至50、1至40、1至30、1至20或1至10的整数。
在某些实施例中，连接基(L2)选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060002471
Figure BDA0003063017060002481
Figure BDA0003063017060002491
Figure BDA0003063017060002501
在额外的实施例中，连接基是任选地取代的(聚)乙二醇，其具有1至约100个乙二醇单元、约1至约50个乙二醇单元、1至约25个乙二醇单元、约1至10个乙二醇单元、1至约8个乙二醇单元和1至6个乙二醇单元、2至4个乙二醇单元，或被任选地取代的O、N、S、P或Si原子相互分散的任选地取代的烷基基团。在某些实施例中，连接基被芳基、苯基、苄基、烷基、亚烷基或杂环基团取代。在某些实施例中，连接基可以是不对称的或对称的。
在本文描述的化合物的任一实施例中，连接基团可以是本文描述的任何合适的部分。在一个实施例中，连接基是取代的或未取代的聚乙二醇基，其大小范围为约1至约12个乙二醇单元、1至约10个乙二醇单元、约2约6个乙二醇单元、约2至5个乙二醇单元、约2至4个乙二醇单元。
尽管E3LB基和PB基可以通过对连接基的化学性质合适和稳定的任何基团共价连接至连接基。连接基优选地通过酰胺、酯、硫酯、酮基、氨基甲酸酯(尿烷)、碳或醚独立地共价键合至E3LB基和PB基，每个基团可以插入在E3LB基和PB基上的任何位置，以提供泛素连接酶上的E3LB基和待降解的靶蛋白质上的PB基的最大结合。在PB基是E3LB基的某些方面，用于降解的靶蛋白质可以是泛素连接酶本身。在某些方面，连接基可以与E3LB和/或PB基上的任选地取代的烷基、亚烷基、烯基或炔基、芳基基团或杂环基连接。注意，可能需要将E3LB基或PB基衍生化以制备与连接基上的化学官能团反应的化学官能团。可替代地，可能需要将连接基衍生化以包括可以与E3LB和/或PB上发现的官能团反应的化学官能团。
L2也可以由下式表示：
Figure BDA0003063017060002511
其中Z是将E3LB连接至X的基团；X是将Z连接到基团PB的基团。
在实施例中，Z不存在(键)，-(CH2)i-O、-(CH2)i-S、-(CH2)i-N-R、(CH2)i-X1Y1基团(其中X1Y1形成酰胺基或氨基甲酸酯基、酯或硫酯基)，或
Figure BDA0003063017060002512
其中每个R是H或C1-C3烷基、烷醇基团或杂环(包括水溶性杂环，优选为促进连接基团水溶性的吗啉代、哌啶或哌嗪基团)；每个Y独立地是键、O、S或N-R；每个i各自是0至100、1至75、1至60、1至55、1至50、1至45、1至40、2至35、3至30、1至15、1至10、1至8、1至6、1、2、3、4或5；
在实施例中，X是
Figure BDA0003063017060002513
其中每个V独立地是键(不存在)，
Figure BDA0003063017060002514
-(CH2)m′-；或
Figure BDA0003063017060002515
j是1至100、1至75、1至60、1至55、1至50、1至45、1至40、2至35、3至30、1至15、1至10、1至8、1至6、1、2、3、4或5；
k是1至100、1至75、1至60、1至55、1至50、1至45、1至40、2至35、3至30、1至15、1至10、1至8、1至6、1、2、3、4或5；优选地，k是1、2、3、4或5；
m’是1至100、1至75、1至60、1至55、1至50、1至45、1至40、2至35、3至30、1至15、1至10、1至8、1至6、1、2、3、4或5；
n是1至100、1至75、1至60、1至55、1至50、1至45、1至40、2至35、3至30、1至15、1至10、l至8、1至6、1、2、3、4或5；
X1为O、S或N-R，优选O；
Y与上述相同；
当存在于连接子基团中时，CON是将Z连接至X的连接基基团(可以是键)。
在实施例中，CON是键(不存在)、杂环，包括水溶性杂环，例如哌嗪基或其他基团或基团，
Figure BDA0003063017060002521
其中X2是O、S、NR4、S(O)、S(O)2、-S(O)2O、-OS(O)2或OS(O)2O；
X3是O、S、CHR4、NR4；并且
R是H或被一个或两个羟基基团任选地取代的C1-C3烷基基团，或其药用盐、对映异构体或立体异构体。
在替代的优选方面，连接基是(聚)乙二醇，其具有1至约100个乙二醇单元、约1至约50个乙二醇单元、1至约25个乙二醇单元、约1至10个乙二醇单元、1至约8个乙二醇单元和1至6个乙二醇单元、2至4个乙二醇单元。
在实施例中，CON是
Figure BDA0003063017060002531
或酰胺基。
尽管E3LB基和PB基可以通过对连接基的化学性质合适和稳定的任何基团与连接基共价连接，在优选的方面，该连接基通过酰胺、酯、硫酯、酮基、氨基甲酸酯(尿烷)或醚独立地与E3LB基和PB基共价键合，每个基团都可以插入E3LB和PB基上的任何位置，以使E3LB基与泛素连接酶结合，而PB基与待降解的靶蛋白质结合。换句话说，如本文所示，可以将连接基设计并连接至E3LB和PB，以最小化、消除或中和其存在可能对E3LB和PB与它们各自的结合伴侣的结合产生的任何影响。在某些方面，用于降解的靶向蛋白质可以是泛素连接酶。
在美国申请公开号2016/0058872、2016/0045607、2014/0356322和2015/0291562，以及WO2014/063061中公开了另外的连接基L2。
现在参考Ab-CIDE，Ab-CIDE可包含单一抗体，其中该单一抗体可具有一个以上的CIDE，每个CIDE通过连接基L1共价连接至抗体。“CIDE载量”是每个抗体的CIDE部分的平均数。每个抗体(Ab)的CIDE载量范围可能是1至8个CIDE(D)。即，在Ab-CIDE式，Ab―(L1―D)p中，p具有从约1至约50、从约1至约8、从约1至约5、从约1至约4或从约1至约3的值。通过连接基L1与抗体共价连接的每个CIDE可以是相同或不同的CIDE，并且可以具有与任何其它共价连接至抗体的L1相同或不同类型的连接基。在一个实施例中，Ab是半胱氨酸改造的抗体，p约为2。
通过缀合反应得到的Ab-CIDE制剂中每个抗体的CIDE的平均数量可通过常规方法诸如质谱、ELISA测定、电泳和HPLC进行表征。也可以测定以p表示的Ab-CIDE的定量分布。通过ELISA，可以确定Ab-CIDE的特定制剂中p的平均值(Hamblett等人(2004)Clin.CancerRes.10:7063-7070；Sanderson等人(2005)Clin.Cancer Res.11:843-852)。然而，通过抗体-抗原结合和ELISA的检测限制不能辨别p值的分布。同样，用于检测Ab-CIDE的ELISA测定不能确定CIDE部分在何处与抗体连接，例如重链或轻链片段或特定的氨基酸残基。在一些情况下，在其中p为由具有其他CIDE载量的Ab-CIDE得到的特定值的均相Ab-CIDE的分离、纯化和表征可通过反相HPLC或电泳等方法实现。
对于一些Ab-CIDE，p可能受抗体上结合位点数量的限制。例如，抗体可仅具有一个或几个半胱氨酸硫醇基，或者可仅具有一个或几个具有足够高的反应性的硫醇基团，通过这些基团可连接连接基。Ab上的连接L1-D的另一个反应性位点是赖氨酸残基的胺官能团。p值包括从约1至约50、从约1至约8、从约1至约5、从约1至约4、从约1至约3的值，其中p等于2。在一些实施例中，本文所述的主题针对任何Ab-CIDE，其中p为约1、2、3、4、5、6、7或8。
通常，在缀合反应过程中，数量少于理论最大值的CIDE部分与抗体缀合。抗体可以包含例如许多不与连接基L1-CIDE基(L1-D)或连接基试剂反应的赖氨酸残基。仅最具反应性的赖氨酸基可与胺反应性连接基剂反应。而且，仅最具反应性的半胱氨酸硫醇基可以与硫醇反应性的连接基剂或连接基L1-CIDE基反应。通常，抗体不包含许多(如果有的话)可与CIDE部分连接的游离和反应性半胱氨酸硫醇基。化合物抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基以二硫键形式存在，必须在部分或完全还原条件下用还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或TCEP)还原。但是，可以通过几种不同的方式来控制CAR的CIDE载量(CIDE/抗体比，“CAR”)，包括：(i)限制连接基L1-CIDE基或连接基剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，以及(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件。
III.L1-CIDE化合物
可将本文所述的CIDE共价连接至连接基L1以制备L1-CIDE基。这些化合物具有以下通式：
(L1―D)，
其中D是具有结构E3LB―L2―PB的CIDE；其中E3LB是与L2共价结合的E3连接酶结合基团。L2是与E3LB和PB共价结合的连接基；PB是与L2共价结合的蛋白质结合基团。并且L1是与D共价结合的连接基。这些组分中每一个的有用基团如上所述。
在特定的实施例中，L1如本文其他地方所述，包括拟肽连接基。在这些实施例中，L1-CIDE具有下式：
Figure BDA0003063017060002551
其中
Str是拉伸单元；
Sp是与D即CIDE部分共价连接的键或间隔单元；
R1是C1-C10烷基、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5各自独立地是C1-C10烷基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可以形成C3-C7环烷基环；
D是CIDE部分。
L1-CIDE化合物可由下式表示：
Figure BDA0003063017060002552
其中R6是C1-C10亚烷基；R4和R5一起形成C3-C7环烷基环，并且D是CIDE部分。
L1-CIDE化合物可由下式表示：
Figure BDA0003063017060002553
其中R1、R4和R5如本文其它地方所述，并且D是CIDE部分。
L1-CIDE化合物可由下式表示：
Figure BDA0003063017060002554
其中
Str是拉伸单元；
Sp是与D即CIDE部分共价连接的任选的间隔单元；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
R1是C1-C10烷基、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地是H、C1-C10烷基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
D是CIDE部分。
L1-CIDE化合物可由下式表示：
Figure BDA0003063017060002561
其中R6是C1-C10亚烷基，并且R1、R2和R3如本文其它地方所述，并且D是CIDE部分
L1-CIDE化合物可由下式表示：
Figure BDA0003063017060002562
其中R1、R2和R3如本文其它地方所述，并且D是CIDE部分。
在上述任一L1-CIDE化合物中，Str可以具有下式：
Figure BDA0003063017060002563
其中R6选自由C1-C10亚烷基、C3-C8环烷基、O-(C1-C8亚烷基)和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基组成的组，其中每个亚烷基可以被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基芳基、芳烷基、杂芳烷基和杂芳基；每个Ra独立地是H或C1-C6烷基；Sp是—Ar—Rb—，其中Ar是芳基或杂芳基，Rb是(C1-C10亚烷基)O-。
在某些L1-CIDE化合物中，R6是C1-C10亚烷基，Sp是—Ar—Rb—，其中Ar是芳基Rb是(C1-C6亚烷基)O-；或者R6是–(CH2)q是1-10；
在上述任一L1-CIDE化合物中，Str可以具有下式：
Figure BDA0003063017060002571
其中
Figure BDA0003063017060002572
表示能够与抗体缀合的部分，R7选自由C1-C10亚烷基、C1-C10亚烷基-O、N(Rc)-(C2-C6亚烷基)-N(Rc)和N(Rc)-(C2-C6亚烷基)组成的组；其中每个Rc独立地为H或C1-C6烷基；
Sp为-Ar-Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，Rb为(C1-C10亚烷基)O-；或者其中R6为C1-C10亚烷基，Sp为—Ar—Rb—，其中Ar为芳基Rb为(C1-C6亚烷基)O-。
L1-CIDE可具有下式，其中在每种情况下，D是CIDE部分：
Figure BDA0003063017060002573
现在参考CIDE的PB基，在特定的实施例中，PB如本文其他地方所述，并且选自雌激素受体α(ERα)和BRD4组成的组。现在参考CIDE的E3LB基，E3LB如本文其他地方所述，并且选自由VHL和XIAP组成的组。Ab-CIDE可以包括PB、E3LB、Ab、L1和L2的任意组合，前提是当EL3B是结合XIAP的连接酶结合基团时，则PB不是靶向ERα的基团。
鉴于本文公开的主题，本领域技术人员将理解，L1和L2的连接点可以变化。此外，部分连接基，例如—Str—(PM)—Sp—可以互换。另外，部分连接基L1可以互换。与CIDE、抗体和与其它可互换的连接基连接的L1连接基的非限制性实例包括但不限于表1-L1中所示的那些。
表1-L1
Figure BDA0003063017060002581
Figure BDA0003063017060002591
Figure BDA0003063017060002601
Figure BDA0003063017060002611
Figure BDA0003063017060002621
在某些实施例中，连接基L1可以在不同的位置T、U和V共价连接至E3LB残基：
Figure BDA0003063017060002622
其中T、U和V中的一者为L1-Ab，其中L1为连接基-1；前提是如果T为L1，则U为氢，并且V和*不存在；或者如果U为L1，则T为氢，并且V和*不存在；或者如果V为L1，则*为
Figure BDA0003063017060002623
并且T和U中的每一者均为氢；L1如本文所述。
连接基L2可以连接至抗体的任何位置，只要连接基L2与抗体之间的共价键为二硫键即可。如本文所公开的，L2可与PB残基、E3LB残基和/或连接基-L1共价连接。非限制性实例包括：L1与缀合物L1BQ3中的PB残基共价连接；与缀合物L1BQ2一样，L1与E3LB的羟基(T位置)共价连接；与缀合物L1BQ7相同，L1与E3LB的苯基(U位置)共价连接；与缀合物L1BC1相同，L1与E3LB的噻唑N(V位置)共价连接；与L1BQ1相同，L1与连接基L2共价连接。
在实施例中，抗体Ab各自经由连接基L1与一至八个化学降解诱导剂(CIDE)D缀合。
Ab―(L1―D)p，其中p为1至8
D包含通过连接基L2与靶蛋白质结合(PB)配体连接的E3连接酶结合(E3LB)配体，如下所示：
E3LB—L2—PB
在实施例中，L1与抗体的改造的Cys残基的硫形成二硫键以将CIDE连接至Ab。
在实施例中，抗体通过L1连接至CIDE的E3LB配体。
在实施例中，L1连接至CIDE的E3LB配体的E3LB配体残基。
在实施例中，E3LB配体残基包括
Figure BDA0003063017060002631
其中L1与-------处的残基连接。
在实施例中，L1通过选自以下项组成的组的连接基与所述E3LB配体残基连接：
Figure BDA0003063017060002632
在实施例中，L1通过选自以下项组成的组的连接基与所述E3LB配体残基连接：
Figure BDA0003063017060002633
在实施例中，L1包括连接至拟肽连接基(PM)的拉伸单元(Str)，该拟肽连接基连接至间隔单元(Sp)，如下：
Str—PM—Sp。
在实施例中，如下所示，Str连接至抗体的经改造Cys残基的硫，而Sp连接至CIDE的E3LB配体，如下：
Ab—Str—PM—Sp—E3LB—L2—PB。
在实施例中，其中Sp连接至CIDE的E3LB配体，Sp连接至E3LB配体残基。在实施例中，E3LB配体残基包括
Figure BDA0003063017060002641
在实施例中，Str是
Figure BDA0003063017060002642
在实施例中，L1的Str-PM-Sp选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060002643
Figure BDA0003063017060002651
在实施例中，E3LB配体残基包括
Figure BDA0003063017060002652
在实施例中，L1通过选自以下项组成的组的连接基与E3LB配体残基连接：
Figure BDA0003063017060002653
Figure BDA0003063017060002661
在实施例中，E3LB配体残基包括
Figure BDA0003063017060002662
在实施例中，L1通过所述选自以下项组成的组的连接基与E3LB配体残基连接：
Figure BDA0003063017060002663
Figure BDA0003063017060002671
在某些实施例中，本文公开的主题涉及缀合物，其具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002672
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L2为与E3LB共价结合的连接基
并且，
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau。
在某些实施例中，本文公开的主题涉及缀合物，其具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002681
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L2为与E3LB共价结合的连接基
并且，
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau。
在某些实施例中，本文公开的主题涉及缀合物，其具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002682
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L1为与E3LB共价结合的连接基；
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau，
并且，Z
L2为与E3LB共价结合的连接基。
本文所述的主题还涉及由L1-CIDE化合物制备Ab-CIDE的方法，该方法包括在一定条件下使抗体、或其变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体与L1-CIDE接触，其中抗体与L1-CIDE上任何可用的连接点共价结合，其中制备了Ab-CIDE。本文所述的主题还涉及由Ab-L1部分(即与L1共价连接的抗体、或其变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体)制备Ab-CIDE的方法，该方法包括在一定条件下使CIDE与Ab-L1接触，其中CIDE与Ab-L1上任何可用的连接点共价结合，其中制备了Ab-CIDE。该方法可以进一步包括Ab-CIDE的常规分离和纯化。
现在参考本文所述的Ab-CIDE和L1-CIDE化合物，它们可以固体或液体形式存在。在固态下，它可以以结晶或非结晶形式或其混合物形式存在。技术人员将理解，可以形成用于结晶或非结晶化合物的药用溶剂化物。在结晶溶剂化物中，在结晶过程中将溶剂分子掺入到晶格中。溶剂化物可以涉及非水溶剂，例如但不限于乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯，或者它们可以涉及水作为掺入到晶格中的溶剂。其中水作为掺入到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量的水的组合物。本文描述的主题包括所有这样的溶剂化物。
本领域技术人员将进一步理解，本文所述的某些以结晶形式存在的化合物和Ab-CIDE，包括其各种溶剂化物，可表现出多态性(即在不同晶体结构中发生的能力)。这些不同的晶体形式通常称为“多晶型物”。本文公开的主题包括所有这样的多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但在堆积、几何排列和结晶固态的其它描述性性质有所不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性质。多晶型物通常表现出不同的熔点，IR光谱和X射线粉末衍射图，可用于鉴定。本领域技术人员将理解，例如可以通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂来产生不同的多晶型物。例如，温度、压力或溶剂的变化可以导致多晶型物。另外，在某些条件下，一种多晶型物可自发转化为另一种多晶型物。
本文所述的化合物和Ab-CIDE或其盐可以以立体异构体形式存在(例如，它含有一个或多个不对称碳原子)。各种立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本文所公开的主题范围内。同样，应当理解，式(I)化合物或盐可以除式中所示的结构以外的互变异构形式存在，并且也包括在本文所公开的主题范围内。应当理解，本文所公开的主题包括本文所述的特定组的所有组合和子集。本文所公开的主题范围包括立体异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映体/非对映体富集的混合物。应当理解，本文所公开的主题包括本文上述定义的特定组的所有组合和子集。
本文所公开的主题还包括本文所述的化合物的同位素标记的形式，但事实上，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子所取代。可掺入本文所述的化合物及其药用盐的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。
包含前述同位素和/或其他原子的其他同位素的本文公开的化合物和Ab-CIDE及其药用盐在本文公开的主题的范围内。本文公开了同位素标记的化合物，例如其中掺入有放射性同位素(例如3H、14C)的那些化合物，可用于药物和/或底物组织分布测定。常用氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素，因为它们易于制备和检测。11C和18F同位素可用于PET(正电子发射断层扫描)，而125I同位素可用于SPECT(单光子发射计算机断层扫描)，所有这些都可用于脑成像。进一步地，用较重的同位素诸如氘(即，2H)取代可以提供由于代谢稳定性更高(例如，体内半衰期增加或剂量减少要求)而带来的某些治疗优势，因此在某些情况下是优选的。式I的同位素标记的化合物通常可以通过执行以下方案和/或实例中公开的程序(通过将非同位素标记的试剂替换为容易获得的同位素标记的试剂)来制备。
本文描述的主题包括以下实施例：
1.一种具有如下化学结构的缀合物
Ab―(L1―D)p，
其中，
D为具有E3LB―L2―PB结构的CIDE；
E3LB共价结合L2，其中所述E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为vonHippel-Lindau(VHL)；
L2为与E3LB和PB共价结合的连接基；
PB是共价结合L2的蛋白质结合基团，所述PB是结合BRD4或ERα的基团，包括其所有变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体，
Ab为与L1共价结合的抗体；
L1是与Ab和D共价结合的连接基；并且
p的值为约1至约8。
2.根据实施例1所述的缀合物，其中所述EL3B是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060002711
其中R1’是任选地取代的C1-C6烷基基团、任选地取代的-(CH2)nOH、任选地取代的-(CH2)nSH、任选地取代的(ΟΗ2)n-O-(C1-C6)烷基基团、任选地取代的(CH2)n-WCOCW-(C0-C6)烷基基团(其包含环氧化物部分WCOCW，其中每个W独立地是H或C1-C3烷基基团)、任选地取代的-(CH2)nCOOH、任选地取代的-(CH2)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2)nC(O)-NR1R2、任选地取代的-(CH2)nOC(O)-NR1R2、-(CH2O)nH、任选地取代的-(CH2)nOC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的
-(CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的--(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(OCH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2O)nC(O)-NR1R2、-(CH2CH2O)nH、任选地取代的
-(CH2CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2CH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的
-(OCH2CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-NRiR2、任选地取代的-SO2Rs、任选地取代的S(O)Rs、NO2、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选为F或Cl)；
R1和R2各自独立地是H或C1-C6烷基基团，其可任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团(优选氟)取代；
Rs为C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基团或-(CH2)NR1R2基团；
X和X’各自独立地是C＝O、O＝S、-S(O)、S(O)2(优选地X和X’均为C＝O)；
R2’是任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w烷基基团、任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)wNR1NR2N基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环、任选地取代的
-XR2’-烷基基团；任选地取代的
-XR2’-芳基基团；任选地取代的
-XR2’-杂芳基基团；任选地取代的
-XR2’-杂环基团；任选地取代的；
R3是任选地取代的烷基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-C(O)NR1R2、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-NRI-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂环；
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-烷基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂环基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-烷基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂环基团、任选地取代的
-XR3’-烷基基团；任选地取代的
-XR3’-芳基基团；任选地取代的
-XR3’-杂芳基基团；任选地取代的
-XR3’-杂环基团；任选地取代的；
其中R1N和R2N各自独立地是H、C1-C6烷基(其任选地被一个或两个羟基基团和至多三个卤素基团取代)或任选地取代的-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基或-(CH2)n-杂环基团；
R1和R1各自独立地是H或C1-C3烷基基团；
V为O、S或NR1；
R1与上述相同；
R1和R1各自独立地是H或C1-C3烷基基团；
XR2’和XR3’各自独立地是任选地取代的-CH2)n-、-CH2)n-CH(XV)＝CH(XV)-(顺式或反式)、-CH2)n-CH≡CH-、-(CH2CH2O)n-或C3-C6环烷基
其中Xv为H、卤代或任选地取代的C1-C3烷基基团；
每个m独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个m’独立地为0或1；
每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个n’独立地为0或1；
每个u独立地为0或1；
每个v独立地是0或1；并且
每个w独立地是0或1。
3.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述E3LB是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060002741
Figure BDA0003063017060002751
其中Rβ是氢、甲基、乙基或丙基。
4.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中E3LB是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060002752
Figure BDA0003063017060002761
其中Rβ是氢、甲基、乙基或丙基。
5.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基。
6.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基，并具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002762
7.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是结合ERα的基团的残基，并且是抗雌激素。
8.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是结合ERα的基团的残基，并且为以下结构的化合物：
Figure BDA0003063017060002771
其中R”是氢、C1-C6烷基、苄基、苯基或-(PO3H2)。
9.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是具有以下结构的化合物的残基：
Figure BDA0003063017060002772
10.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述Ab是半胱氨酸改造的抗体或其变体。
11.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：DLL3、EDAR、CLL1；BMPR1B；E16；STEAP1；0772P；MPF；NaPi2b；Sema 5b；PSCAhlg；ETBR；MSG783；STEAP2；TrpM4；CRIPTO；CD21；CD79b；FcRH2；B7-H4；HER2；NCA；MDP；IL20R；短蛋白聚糖；EphB2R；ASLG659；PSCA；GEDA；BAFF-R；CD22；CD79a；CXCR5；HLA-DOB；P2X5；CD72；LY64；FcRH1；IRTA2；TENB2；PMEL17；TMEFF1；GDNF-Ra1；Ly6E；TMEM46；Ly6G6D；LGR5；RET；LY6K；GPR19；GPR54；ASPHD1；酪氨酸酶；TMEM118；GPR172A；MUC16和CD33。
12.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：CLL1、STEAP1、NaPi2b、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、B7-H4、HER2、CD22、CD79a、CD72、LY64、Ly6E、MUC16和CD33。
13.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中Ab是与选自由HER2、B7-H4和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
14.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述抗体与HER2结合。
15.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述抗体与B7-H4或CD22结合。
16.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1是拟肽连接基。
17.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1是由下式表示的拟肽连接基：
—Str—(PM)—Sp—
其中，
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Ab为抗体；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060002781
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环。
18.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060002791
其中R6选自由以下项组成的组C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、C3-C8环烷基、(C1-C8亚烷基)O-和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可以被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、杂芳烷基、芳基芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
19.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中Str具有下式：
Figure BDA0003063017060002792
其中R7选自C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、(C1-C10亚烷基)O-、N(Rc)-(C2-C6亚烷基)-N(Rc)和N(Rc)-(C2-C6亚烷基)；其中每个Rc独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
20.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure BDA0003063017060002801
R1是C1-C6烷基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5一起形成C3-C7环烷基环。
21.根据上述任何实施例所述的缀合物，其具有下式：
Figure BDA0003063017060002802
其中
Sp为与CIDE部分D共价连接的键或间隔单元；
R4和R5各自独立地是C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环
R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060002803
R6选自由以下项组成的组：C1-C10亚烷基和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、芳基、芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；
p为1、2、3或4。
22.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环，并且R1是C1-C10烷基或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2。
23.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中R4和R5一起形成环丁基。
24.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述连接基的结构选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060002811
25.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060002812
R6为C1-C6亚烷基；
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb—，其中Ar为芳基，Rb为(C1-C3亚烷基)O-。
26.根据上述任何实施例所述的缀合物，其具有下式：
Figure BDA0003063017060002821
其中
p为1、2、3或4；
R1为C1-C6烷基-NH2、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5各自独立地为C1-C6烷基，其中所述烷基未被取代，或者R4和R5可形成C3-C7环烷基环。
27.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1具有选自由以下项组成的组的下式：
Figure BDA0003063017060002822
其中R1和R2独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1和R2形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。
28.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure BDA0003063017060002831
29.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1具有下式：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为“拉伸单元”，并且a为0至1的整数；W为“氨基酸单元”，并且w为0至12的整数；Y为“间隔单元”，并且y为0、1或2。
30.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述拉伸单元A包含下式：
Figure BDA0003063017060002832
31.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述连接基具有下式：
Figure BDA0003063017060002833
32.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1具有下式：
—Aa—Yy—
其中A和Y如上定义。
33.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1是:
Figure BDA0003063017060002834
34.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中p为约1.0至约3。
35.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中p为约2。
36.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中D是与L1共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060002841
37.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1-D是与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060002842
Figure BDA0003063017060002851
Figure BDA0003063017060002861
Figure BDA0003063017060002871
38.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述Ab是与选自由B7-H4、HER2和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
39.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基，并具有以下结构：
Figure BDA0003063017060002872
Figure BDA0003063017060002881
40.根据上述任何实施例所述的缀合物，其中L1-D是与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060002882
Figure BDA0003063017060002891
Figure BDA0003063017060002901
Figure BDA0003063017060002911
Figure BDA0003063017060002921
41.一种药物组合物，其包含上述任何实施例所述的缀合物和一种或多种药用赋形剂。
42.一种治疗有此需要的人的疾病的方法，其包括向所述人施用有效量的上述任何实施例的缀合物或实施例41的组合物。
43.根据实施例42所述的方法，其中所述疾病是癌症。
44.根据实施例43所述的方法，其中所述癌症选自由以下项组成的组：前列腺癌、乳腺癌和急性髓细胞性白血病。
45.根据实施例44所述的方法，其中所述癌症是HER2阳性癌症。
46.根据实施例45所述的方法，其中所述HER2阳性癌症是乳腺癌。
47.一种制备具有如下化学结构的缀合物的方法
Ab―(L1―D)p，
其中，
D为具有E3LB―L2―PB结构的CIDE；
E3LB共价结合L2，其中所述E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为vonHippel-Lindau(VHL)；
L2为与E3LB和PB共价结合的连接基；
PB是共价结合L2的蛋白质结合基团，所述PB是结合BRD4或ERα的基团，包括其所有变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体，
Ab为与L1共价结合的抗体；
L1是与Ab和D共价结合的连接基；并且
p的值为约1至约8；
所述方法包括：
使L2与第一溶剂、第一碱和第一偶联剂接触以制备第一溶液；
使E3LB与所述第一溶液接触以制备E3LB-L2中间体；
使PB与第二溶剂、第二碱和第二偶联剂接触以制备第二溶液；
使所述第二溶液与所述E3LB-L2中间体接触以制备CIDE；
使所述CIDE与L1和第三碱在第三溶剂中接触以制备L1-CIDE；并且
使所述L1-CIDE与硫醇和第四溶剂接触以制备第四溶液；并且
使所述第四溶液与抗体接触以制备所述缀合物。
48.根据实施例47所述的方法，其中所述第一溶剂、第二溶剂、第三溶剂和第四溶剂各自独立地选自由二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二甲基亚砜和碳酸亚丙酯组成的组。
49.根据实施例47所述的方法，其中所述第一溶剂、第二溶剂、第三溶剂和第四溶剂各自为二甲基甲酰胺。
50.根据实施例47所述的方法，其中所述第一和第二偶联剂各自为1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)。
51.根据实施例47所述的方法，其中所述第一、第二和第三碱各自独立地选自由N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三乙胺和2,2,2,6,6-四甲基哌啶组成的组。
52.根据实施例47所述的方法，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060002941
其中R1和R2独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1和R2形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。
53.根据实施例47所述的方法，其中D是与L1共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060002942
Figure BDA0003063017060002951
54.根据实施例47所述的方法，其中L1-D是与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060002952
Figure BDA0003063017060002961
Figure BDA0003063017060002971
55.一种通过实施例47、48、49、50、51、52、53或54的方法制备的抗体缀合物。
56.一种基本上如本文所述的抗体缀合物。
57.一种具有如下化学结构的缀合物
Ab―(L1―D)p，
其中，
D为具有E3LB―L2―PB结构的CIDE；
E3LB共价结合L2，其中所述E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为vonHippel-Lindau(VHL)；
L2为与E3LB和PB共价结合的连接基；
PB是共价结合L2的蛋白质结合基团，所述PB是结合BRD4或ERα的基团，包括其所有变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体，
Ab为与L1共价结合的抗体；
L1是与Ab和D共价结合的连接基；并且
p的值为约1至约8。
58.根据实施例57所述的缀合物，其中所述EL3B是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060002981
其中R1’是任选地取代的C1-C6烷基基团、任选地取代的-(CH2)nOH、任选地取代的-(CH2)nSH、任选地取代的(ΟΗ2)n-O-(C1-C6)烷基基团、任选地取代的(CH2)n-WCOCW-(C0-C6)烷基基团(其包含环氧化物部分WCOCW，其中每个W独立地是H或C1-C3烷基基团)、任选地取代的-(CH2)nCOOH、任选地取代的-(CH2)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2)nC(O)-NR1R2、任选地取代的
-(CH2)nOC(O)-NR1R2、-(CH2O)nH、任选地取代的
-(CH2)nOC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的
-(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的
-(CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的--(CH2)nC(O)-O-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(OCH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2O)nC(O)-NR1R2、-(CH2CH2O)nH、任选地取代的
-(CH2CH2O)nCOOH、任选地取代的-(OCH2CH2)nO-(C1-C6烷基)、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-(C1-C6烷基)、任选地取代的
-(OCH2CH2)nNHC(O)-R1、任选地取代的-(CH2CH2O)nC(O)-NRiR2、任选地取代的-SO2Rs、任选地取代的S(O)Rs、NO2、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选为F或Cl)；
R1和R2各自独立地是H或C1-C6烷基基团，其可任选地被一个或两个羟基基团或至多三个卤素基团(优选氟)取代；
Rs为C1-C6烷基基团、任选地取代的芳基、杂芳基或杂环基团或-(CH2)NR1R2基团；
X和X’各自独立地是C＝O、O＝S、-S(O)、S(O)2(优选地X和X’均为C＝O)；
R2’是任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w烷基基团、任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)wNR1NR2N基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的
-NR1-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环、任选地取代的
-XR2’-烷基基团；任选地取代的
-XR2’-芳基基团；任选地取代的
-XR2’-杂芳基基团；任选地取代的
-XR2’-杂环基团；任选地取代的；
R3是任选地取代的烷基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-C(O)NR1R2、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-NRI-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基、任选地取代的
-NR1-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-烷基、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基、任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基或任选地取代的
-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂环；
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-烷基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂环基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-烷基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂芳基基团、任选地取代的
-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂环基团、任选地取代的
-XR3’-烷基基团；任选地取代的
-XR3’-芳基基团；任选地取代的
-XR3’-杂芳基基团；任选地取代的
-XR3’-杂环基团；任选地取代的；
其中R1N和R2N各自独立地是H、C1-C6烷基(其任选地被一个或两个羟基基团和至多三个卤素基团取代)或任选地取代的-(CH2)n-芳基、-(CH2)n-杂芳基或-(CH2)n-杂环基团；
R1和R1各自独立地是H或C1-C3烷基基团；
V为O、S或NR1；
R1与上述相同；
R1和R1各自独立地是H或C1-C3烷基基团；
XR2’和XR3’各自独立地是任选地取代的-CH2)n-、-CH2)n-CH(XV)＝CH(XV)-(顺式或反式)、-CH2)n-CH≡CH-、-(CH2CH2O)n-或C3-C6环烷基
其中Xv为H、卤代或任选地取代的C1-C3烷基基团；
每个m独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个m’独立地为0或1；
每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个n’独立地为0或1；
每个u独立地为0或1；
每个v独立地是0或1；并且
每个w独立地是0或1。
59.根据实施例58所述的缀合物，其中所述E3LB是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060003011
Figure BDA0003063017060003021
其中Rβ是氢、甲基、乙基或丙基。
60.根据实施例58所述的缀合物，其中E3LB是具有以下结构的基团的残基：
Figure BDA0003063017060003022
Figure BDA0003063017060003031
其中Rβ是氢、甲基、乙基或丙基。
61.根据实施例57所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基。
62.根据实施例61所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基，并具有以下结构：
Figure BDA0003063017060003032
63.根据实施例57所述的缀合物，其中所述PB是结合ERα的基团的残基，并且是抗雌激素。
64.根据实施例63所述的缀合物，其中所述PB是结合ERα的基团的残基，并且为以下结构的化合物：
Figure BDA0003063017060003033
其中R”是氢、C1-C6烷基、苄基、苯基或-(PO3H2)。
65.根据实施例64所述的缀合物，其中所述PB是具有以下结构的化合物的残基：
Figure BDA0003063017060003041
66.根据实施例57所述的缀合物，其中所述Ab是半胱氨酸经改造的抗体或其变体。
67.根据实施例57所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：DLL3、EDAR、CLL1；BMPR1B；E16；STEAP1；0772P；MPF；NaPi2b；Sema 5b；PSCA hlg；ETBR；MSG783；STEAP2；TrpM4；CRIPTO；CD21；CD79b；FcRH2；B7-H4；HER2；NCA；MDP；IL20R；短蛋白聚糖；EphB2R；ASLG659；PSCA；GEDA；BAFF-R；CD22；CD79a；CXCR5；HLA-DOB；P2X5；CD72；LY64；FcRH1；IRTA2；TENB2；PMEL17；TMEFF1；GDNF-Ra1；Ly6E；TMEM46；Ly6G6D；LGR5；RET；LY6K；GPR19；GPR54；ASPHD1；酪氨酸酶；TMEM118；GPR172A；MUC16和CD33。
68.根据实施例66所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：CLL1、STEAP1、NaPi2b、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、B7-H4、HER2、CD22、CD79a、CD72、LY64、Ly6E、MUC16和CD33。
69.根据实施例68所述的缀合物，其中Ab是与选自由HER2、B7-H4和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
70.根据实施例69所述的缀合物，其中所述抗体与HER2结合。
71.根据实施例69所述的缀合物，其中所述抗体与B7-H4或CD22结合。
72.根据实施例1所述的缀合物，其中L1是拟肽连接基。
73.根据实施例72所述的缀合物，其中L1是由下式表示的拟肽连接基：
—Str—(PM)—Sp—
其中，
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Ab为抗体；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060003051
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环。
74.根据实施例73所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060003061
其中R6选自由以下项组成的组C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、C3-C8环烷基、(C1-C8亚烷基)O-和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可以被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、杂芳烷基、芳基芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
75.根据实施例73所述的缀合物，其中Str具有下式：
Figure BDA0003063017060003062
其中R7选自C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、(C1-C10亚烷基)O-、N(Rc)-(C2-C6亚烷基)-N(Rc)和N(Rc)-(C2-C6亚烷基)；其中每个Rc独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb—，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
76.根据实施例73所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure BDA0003063017060003063
R1是C1-C6烷基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5一起形成C3-C7环烷基环。
77.根据实施例57所述的缀合物，其具有下式：
Figure BDA0003063017060003071
其中
Sp为与CIDE部分D共价连接的键或间隔单元；
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环；
R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060003072
R6选自由以下项组成的组：C1-C10亚烷基和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、甲酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、芳基、芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；
p为1、2、3或4。
78.根据实施例77所述的缀合物，其中R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环，并且R1是C1-C10烷基或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2。
79.根据实施例78所述的缀合物，其中R4和R5一起形成环丁基。
80.根据实施例79所述的缀合物，其中所述连接基的结构选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003063017060003081
81.根据实施例77所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure BDA0003063017060003082
R6为C1-C6亚烷基；
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb—，其中Ar为芳基，Rb为(C1-C3亚烷基)O-。
82.根据实施例57所述的缀合物，其具有下式：
Figure BDA0003063017060003083
其中
p为1、2、3或4；
R1为C1-C6烷基-NH2、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5各自独立地为C1-C6烷基，其中所述烷基未被取代，或者R4和R5可形成C3-C7环烷基环。
83.根据实施例57所述的缀合物，其中L1具有选自由以下项组成的组的下式：
Figure BDA0003063017060003091
其中R1和R2独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1和R2形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。
84.根据实施例83所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure BDA0003063017060003092
85.根据实施例57所述的缀合物，其中L1具有下式：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为“拉伸单元”，并且a为0至1的整数；W为“氨基酸单元”，并且w为0至12的整数；Y为“间隔单元”，并且y为0、1或2。
86.根据实施例85所述的缀合物，其中所述拉伸单元A包含下式：
Figure BDA0003063017060003093
87.根据实施例86所述的缀合物，其中所述连接基具有下式：
Figure BDA0003063017060003101
88.根据实施例57所述的缀合物，其中L1具有下式：
—Aa—Yy—
其中A和Y如上定义。
89.根据实施例88所述的缀合物，其中L1是：
Figure BDA0003063017060003102
90.根据实施例57所述的缀合物，其中p为约1.0至约3。
91.根据实施例57所述的缀合物，其中p为约2。
92.根据实施例57所述的缀合物，其中D是与L1共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060003103
93.根据实施例57所述的缀合物，其中L1-D是与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure BDA0003063017060003111
Figure BDA0003063017060003121
Figure BDA0003063017060003131
94.根据实施例93所述的缀合物，其中所述Ab是与选自由B7-H4、HER2和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
95.根据实施例61所述的缀合物，其中所述PB是结合BRD4的基团的残基，并具有以下结构：
Figure BDA0003063017060003141
96.根据实施例95所述的缀合物，其中L1-D是与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下中的一者：L1BQ1、L1BQ2、L1BQ3、L1BQ4、LIBQ5、L1BQ6、L1BQ7、L1BQ8、L1BQ9、LIBQ10、L1BQ11、L1BQ12、L1BQ13、L1BQ14、LIBQ15、L1BQ16、L1BQ17、L1BQ18、L1BQ19、LIBQ20、L1BQ21和L1BQ22。
IV.合成路线
CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE和本文所述的其它化合物可通过以下合成路线合成，该合成路线包括(特别是鉴于本文所包含的描述)与化学领域公知的工艺类似的工艺，以及以下描述的用于其他杂环的那些工艺：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors Katritzky and Rees,Elsevier,1997,例如第3卷；Liebigs Annalen derChemie,(9):1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41:1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung,40(12):1328-31,(1990)。起始材料通常可从商业来源获得，诸如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)，或易于使用本领域技术人员公知的方法制备(例如，通过以下通常所述的方法进行制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents forOrganic Synthesis,v.1-23,Wiley,N.Y。(1967-2006编辑)，或Beilsteins Handbuch derorganischen Chemie,4,Aufl.编辑Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(还通过Beilstein在线数据库获得))。
可用于合成本文所述的CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE和其它化合物的合成化学转化和保护基方法(保护和脱保护)以及必要的试剂和中间体是本领域已知的，包括例如以下文献中所描述的那些：R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版，John Wiley和Sons(1999)；和L.Paquette编辑，Encyclopedia of Reagents forOrganic Synthesis,John Wiley和Sons(1995)及其后续版本。在制备CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE和其它化合物时，可能需要保护中间体的远端官能团(例如，伯胺或仲胺)。此类保护的需求将根据远端官能度的性质以及制备方法的条件而有所不同。合适的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBz或CBZ)和9-芴基亚甲基氧羰基(Fmoc)。对于是否需要这种保护是本领域技术人员容易确定的。有关保护基团及其用途的常规说明，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
一般程序和实例提供了制备本文所述的CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE以及其它化合物的示例性方法。本领域技术人员应当理解，可以使用其他合成路线以合成PAC和化合物。尽管在方案、一般程序、实例中描述和讨论了特定的起始材料和试剂，但是可容易替代为其他起始材料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，根据本公开，可使用本领域的技术人员熟知的常规化学方法进一步修饰通过所述方法制备的许多示例性化合物。
通常，可以根据WO 2013/055987、WO 2015/023355、WO 2010/009124、WO 2015/095227的程序，通过将CIDE与L1连接基剂连接来制备Ab-CIDE，以制备L1-CIDE，并使L1-CIDE与本文所述的任何抗体或其变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体(包括半胱氨酸改造的抗体)缀合。可替代地，可以通过首先将本文所述的抗体或变体、突变、剪接变体、插入/缺失和融合体(包括半胱氨酸改造的抗体)与L1连接基剂连接，并使其与任何CIDE缀合来制备Ab-CIDE。
以下合成路线描述了制备CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE以及其其它化合物和组分的示例性方法。本文其他地方公开了用于制备CIDE、L1-CIDE和Ab-CIDE以及其其它化合物和组分的其它合成路线。
1.连接基L1
关于连接基L1，方案1-4描绘了到示例性连接基L1的合成路线，其用于二硫化物连接至抗体Ab。Ab通过二硫键连接至L1，而CIDE通过CIDE上任何可用的连接点连接至L1。
Figure BDA0003063017060003161
参考方案1，在室温使1,2-二(吡啶-2-基)二硫烷和2-巯基乙醇在吡啶和甲醇中反应，得到2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙醇。在三乙胺和乙腈中用氯甲酸4-硝基苯酯酰化，得到4-硝基苯基2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基碳酸酯9。
Figure BDA0003063017060003162
参考方案2，向含1,2-双(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷10(1.0g，3.22mmol)的无水DMF/MeOH(25mL/25mL)的混合物中加入HOAc(0.1mL)，然后加入2-氨基乙硫醇盐酸盐11(183mg，1.61mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，真空浓缩以除去溶剂，将残余物用DCM(30mL×4)洗涤，得到2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙胺盐酸盐12，为淡黄色固体(300mg,69.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.24(s,4H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),3.15-3.13(m,2H),3.08-3.06(m,2H).
Figure BDA0003063017060003171
参考方案3，将含1,2-双(5-硝基吡啶-2-基)硫烷10(9.6g，30.97mmol)和2-巯基乙醇(1.21g，15.49mmol)的无水DCM/CH3OH(250mL/250mL)溶液在室温下在N2下搅拌24h。在真空下浓缩混合物后，将残余物用DCM(300mL)稀释。加入MnO2(10g)，并将混合物在室温再搅拌0.5h。将混合物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝100/1至100/1)，得到2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙醇13(2.2g，61.1％)，为棕色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(d,J＝2.8Hz,1H),8.38-8.35(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.67(d,J＝9.2Hz,1H),4.10(t,J＝7.2Hz,1H),3.81-3.76(q,2H),3.01(t,J＝5.2Hz,2H).
向含13(500mg，2.15mmol)的无水DMF(10mL)的溶液中添加DIEA(834mg，6.45mmol)，随后加入PNP碳酸酯(双(4-硝基苯基)碳酸酯，1.31g，4.31mmol)。将反应溶液在室温搅拌4h，并将混合物通过制备型HPLC(FA)纯化，得到4-硝基苯基2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙基碳酸酯14(270mg，33.1％)，为浅棕色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(d,J＝2.4Hz,1H),8.43-8.40(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.30-8.28(m,2H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.39-7.37(m,2H),4.56(t,J＝6.4Hz,2H),3.21(t,J＝6.4Hz,2H).
Figure BDA0003063017060003181
参考方案4，将硫酰氯(2.35mL的1.0M在DCM中的溶液，2.35mmol)滴加到含5-硝基吡啶-2-硫醇(334mg，2.14mmol)的干燥DCM(7.5mL)的在0℃(冰/丙酮)和氩气气氛下搅拌的悬浮液中。反应混合物从黄色悬浮液变为黄色溶液，使其温热至室温，然后搅拌2小时，然后通过真空蒸发除去溶剂，得到黄色固体。将固体重新溶于DCM(15mL)中，并在0℃在氩气气氛下用含(R)-2-巯基丙-1-醇(213mg，2.31mmol)的干燥的DCM(7.5mL)的溶液逐滴处理。使反应混合物温热至室温并搅拌20小时，此时通过LC/MS分析显示在保留时间1.41分钟形成大量产物(ES+)m/z247([M+H]+.，约100％相对强度)。过滤除去沉淀物，并将滤液真空蒸发，得到橙色固体，将其用H2O(20mL)处理，并用氢氧化铵溶液碱化。将混合物用DCM(3×25mL)萃取，并将合并的萃取物用H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发，得到粗产物。通过快速色谱法纯化(梯度洗脱，以1％的增量进行：100％DCM至98:2v/v DCM/MeOH)得到(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙-1-醇15为油状(111mg，21％产率)。
在20℃向三光气溶液，即含Cl3COCOOCCl3，Sigma Aldrich,CAS Reg.No.32315-10-9(241mg,0.812mmol)的DCM(10mL)，中滴加含(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙-1-醇15(500mg，2.03mmol)和吡啶(153mg，1.93mmol)的DCM(10mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌30min后，将其浓缩，无需进一步纯化即可直接使用(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙基氯甲酸酯16通过氯甲酸酯基共价连接至CIDE上任何可用的基团。
2.半胱氨酸改造的抗体
对于通过还原和再氧化进行缀合的半胱氨酸改造的抗体，它们通常可以如下制备。轻链氨基酸根据Kabat(Kabat等人，Sequences of proteins of immunologicalinterest,(1991)第5版，US Dept of Health and Human Service,National Institutesof Health,Bethesda,MD)进行编号。重链氨基酸根据EU编号系统(Edelman等人(1969)Proc.Natl.Acad.of Sci.63(1):78-85)进行编号，除非注明为Kabat系统。使用单字母氨基酸缩写。
在CHO细胞中表达的全长半胱氨酸改造的单克隆抗体(THIOMABTM抗体)带有半胱氨酸加合物(胱氨酸)，或由于细胞培养条件而在经改造半胱氨酸上被谷胱甘肽化。如此，从CHO细胞纯化的THIOMABTM抗体不能与Cys反应性连接基L1-CIDE中间体缀合。通过用还原剂例如DTT(Cleland试剂，二硫苏糖醇)或TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐；Getz等人(1999)Anal.Biochem.第273卷：73-80；Soltec Ventures,Beverly,MA)，然后用弱氧化剂如脱氢抗坏血酸重新形成链间二硫键(再氧化)，可使半胱氨酸改造的抗体与本文所述的L1-CIDE中间体缀合反应。将在CHO细胞中表达的全长半胱氨酸改造的单克隆抗体(THIOMABTM抗体)(Gomez等人(2010)Biotechnology and Bioeng.105(4):748-760；Gomez等人(2010)Biotechnol.Prog.26:1438-1445)还原，例如在室温在50mM Tris，pH 8.0和2mM EDTA中，用约50倍过量的DTT还原，这可以除去Cys和谷胱甘肽加合物以及减少抗体的链间二硫键。使用PLRP-S色谱柱通过反相LCMS监测加合物的去除。通过将还原的THIOMABTM抗体添加至至少四体积的10mM琥珀酸钠，pH 5缓冲液进行稀释和酸化。
可替代地，通过将抗体添加至至少四体积的10mM琥珀酸盐，pH 5缓冲液，并用10％的乙酸滴定直至pH约为五，来稀释和酸化抗体。随后将pH值降低的并稀释的THIOMABTM抗体加载到HiTrap S阳离子交换柱上，用数倍柱体积的10mM乙酸钠，pH 5洗涤，并用50mM Tris，pH 8.0，150mM氯化钠洗脱。通过进行再氧化，在亲本Mab中存在的半胱氨酸残基之间重新建立了二硫键。将上述洗脱的还原的THIOMABTM抗体在室温下用15X脱氢抗坏血酸(DHAA)处理约3小时，或者可替代地，用200nM至2mM硫酸铜水溶液(CuSO4)处理过夜。可以使用本领域已知的其它氧化剂(即氧化试剂)和氧化条件。周围空气氧化也可能是有效的。这种温和的部分再氧化步骤可以高保真度有效地形成链内二硫键。使用PLRP-S色谱柱通过反相LCMS监测再氧化。如上所述，将再氧化的THIOMABTM抗体用琥珀酸盐缓冲液稀释至pH约为5，并如上所述在S柱上进行纯化，不同的是进行梯度洗脱：10mM琥珀酸盐，pH 5，300mM氯化钠(缓冲液B)，10mM琥珀酸盐，pH 5的溶液(缓冲液A)。向洗脱的ThiomabTM抗体中，加入EDTA达到终浓度2mM，并在必要时进行浓缩，以使其终浓度超过5mg/mL。将准备缀合的所得THIOMABTM抗体等分保存在-20℃或-80℃。液相色谱/质谱分析是在6200系列TOF或QTOF Agilent LC/MS上进行的。将样品在加热到80℃的
Figure BDA0003063017060003201
1000A微孔色谱柱(50mm×2.1mm,PolymerLaboratories,Shropshire,UK)上进行色谱分离。采用线性梯度30-40％B(溶剂A：含0.05％TFA的水溶液，溶剂B：含0.04％TFA的乙腈)，使用电喷雾源直接离子化洗脱液。使用MassHunter软件(Agilent)对数据进行收集和解卷积。在LC/MS分析之前，将抗体或缀合物(50微克)用PNGase F(2单位/ml；PROzyme,San Leandro,CA)在37℃下处理2小时，以除去N-连接的碳水化合物。
可替代地，将抗体或缀合物在37℃用LysC(0.25μg/50μg(微克)抗体或缀合物)部分消化15分钟，得到Fab和Fc片段，用于通过LCMS分析。去卷积的LCMS光谱中的峰被指定并定量。通过计算对应于CIDE-缀合抗体的一个或多个峰相对于观察到的所有峰的强度比值，计算出CIDE与抗体的比率(CAR)。
3.连接基L1-CIDE基与抗体的缀合
在将连接基L1-CIDE化合物与抗体缀合的一种方法中，经过上述还原和再氧化步骤后，用1M Tris将含半胱氨酸改造的抗体(THIOMABTM抗体)的10mM琥珀酸盐，pH 5，150mMNaCl，2mM EDTA的pH调节至pH 7.5-8.5。将过量(约3摩尔至20当量)的具有硫醇反应性基团的连接基-CIDE中间体(例如，马来酰亚胺或4-硝基吡啶二硫化物)溶于DMF、DMA或丙二醇中，并添加到还原的再氧化的并且pH调节后的抗体中。通过LC-MS分析反应混合物，将反应在室温或37C温育并监测直至完成(1至约24小时)，如通过对反应混合物的LC-MS分析确定的。反应完成后，可通过一种方法或几种方法的任意组合纯化缀合物，目的是去除残留的未反应的L1-CIDE中间体和聚集蛋白质(如果存在的水平很高)。例如，可以用10mM组氨酸乙酸盐(pH 5.5)稀释缀合物，直到最终pH值约为5.5，然后使用连接至Akta纯化系统(GEHealthcare)的HiTrap S柱或S maxi离心柱(Pierce)通过S阳离子交换色谱法纯化。可替代地，可以使用连接至Akta纯化系统的S200柱或Zeba离心柱，通过凝胶过滤色谱法纯化缀合物。可替代地，可以使用透析。使用凝胶过滤或透析将THIOMABTM抗体CIDE缀合物配制到20mMHis/乙酸盐(pH 5)，240mM蔗糖中。通过离心超滤浓缩纯化的缀合物，并在无菌条件下通过0.2μm过滤器过滤，然后冷冻保存。通过BCA测定表征PAC以确定蛋白质浓度，分析SEC(尺寸排阻色谱)进行聚集分析，用赖氨酸C内肽酶(LysC)处理后进行LC-MS以计算CAR。
使用Shodex KW802.5色谱柱，以0.75ml/min流速的具有0.25mM氯化钾和15％IPA的0.2M磷酸钾(pH 6.2)对缀合物进行尺寸排阻色谱分析。通过积分在280nm处洗脱的峰面积吸光度来确定缀合物的聚集状态。
可以使用Agilent QTOF 6520ESI仪器对Ab-CIDE进行LC-MS分析。例如，将CAR用含1:500w/w胞内蛋白酶Lys C(Promega)的Tris(pH 7.5)在37℃处理30min。将所得的裂解片段加载到加热至80℃的
Figure BDA0003063017060003211
(埃),8μm(微米)PLRP-S(高度交联聚苯乙烯)色谱柱上，并在5分钟内用30％B至40％B的梯度洗脱。流动相A为0.05％TFA的H2O溶液，并且流动相B为0.04％的乙腈溶液。流速为0.5ml/min。在电喷雾离子化和MS分析之前，通过在280nm处的UV吸光度检测来监测蛋白质洗脱。通常可以实现未缀合Fc片段、残留的未缀合Fab和药物化Fab的色谱分辨。使用Mass HunterTM软件(Agilent Technologies)对获得的m/z光谱进行解卷积，以计算抗体片段的质量。
V.制剂
如本文所述的治疗性CIDE-抗体-缀合物(PAC)的药物制剂可以制备用于肠胃外施用，例如与药用肠胃外载体一起并且可以单位剂量注射形式推注、静脉内、肿瘤内注射。PAC具有期望纯度的如本文所述的化合物或其药用盐任选地与一种或多种药用赋形剂(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.编辑)，以用于重建的冻干制剂形式或水溶液的形式混合。
PAC可以根据标准药学实践配制为药物组合物。根据这个方面，提供了一种药物组合物，其包含与一种或多种药用赋形剂结合的PAC。
通过将PAC与赋形剂(例如载体和/或稀释剂)混合来制备典型的制剂。合适的载体、稀释剂和其它赋形剂是本领域技术人员众所周知的，并且包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶胀聚合物的材料、亲水或疏水材料、明胶、油、溶剂，水等。所使用的特定载体、稀释剂或赋形剂将取决于PAC被施用的方式和目的。通常基于本领域技术人员公认对哺乳动物施用安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。
通常，安全溶剂是无毒的水性溶剂，例如水和其他可溶于水或与水混溶的无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG 300)等及其混合物。可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受体无毒，包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白质、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，锌蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN、PLURONICS或聚乙二醇(PEG)。
制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、加香剂、调味剂和其他已知的添加剂，以提供美观的PAC展示或有助于药物产品的制备。可使用常规的溶解和混合程序来制备制剂。
可通过在环境温度下以适当的pH值和期望的纯度与生理上可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对受体无毒的载体)混合以进行配制。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但是可在约3至约8的范围内。在pH 5的乙酸盐缓冲液中的制剂是合适的实施例。
PAC制剂可以是无菌的。特别地，待用于体内施用的制剂必须为无菌的。此类灭菌通过无菌过滤膜过滤很容易实现。
PAC通常可作为固体组合物、冻干制剂或作为水溶液储存。
包含PAC的药物组合物可按符合良好医疗实践的方式，即用量、浓度、时间表、疗程、媒介物和施用途径来配制、给药和施用。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾患、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病症、疾患的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。待施用的化合物的“治疗有效量”将受此类考虑因素的约束，并且是预防、改善或治疗凝血因子介导的疾患所需的最小量。该量优选地低于对宿主有毒或使宿主显著地更易出血的量。
将PAC配制成药物剂型，以提供易于控制的药物剂量并使患者能够遵循处方。根据用于施用药物的方法，可以以多种方式包装用于施用的药物组合物(或制剂)。通常，用于分配的物品包括其中以适当形式沉积有药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员熟知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等之类的材料。容器还可以包括干预防护组件，以防止不慎接触包装的内容物。另外，容器上设置有描述容器内容物的标签。标签上还可能包括适当的警告。
药物组合物可为无菌注射制剂的形式，诸如无菌注射水性或油质悬浮液。该悬浮液可根据已知技术使用上面已经提到的那些合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可以是无菌注射液或悬浮液，其处于非毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(诸如1,3-丁二醇)中。无菌可注射制剂还可制备为冻干粉末。可采用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油传统上可用作溶剂或悬浮介质。对于这一目的，可采用任何温和的固定油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸可同样用于制备可注射物。
可与载体材料组合以产生单一剂型的PAC的量将根据所治疗的宿主和特定的施用方式而变化。例如，用于人口服施用的延时释放制剂可含有约1至1000mg与适当和方便量的载体物质复配的活性物质，该载体物质可占总组合物的约5％至约95％(重量：重量)。可以制备药物组合物以提供易于测量的施用量。例如，用于静脉内输注的水溶液可每毫升溶液包含约3μg至500μg活性成分，以便可以约30mL/h的速率输注合适的体积。
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，从而使制剂与预期接受者的血液等渗，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。
制剂可以包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶中，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下储存，仅需要在使用前添加注射用无菌液体载体，例如水。临时注射溶液和悬浮液由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有如本文上文所述的每日剂量或单位每日亚剂量的，或其适当分数的活性成分的那些。
本发明的主题进一步提供了兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及兽用载体。兽用载体是可用于施用组合物的材料，可以为固态、液态或气态材料，这些材料在兽医领域是惰性的或可接受的，并且与活性成分相容。这些兽用组合物可以肠胃外或通过任何其他预期途径施用。
VI.适应症和治疗方法
预期本文公开的CIDE-抗体缀合物(PAC)可用于治疗各种疾病或病症。示例性过度增殖性病症包括良性或恶性实体瘤和血液系统病症，例如白血病和淋巴恶性肿瘤。其它病症包括神经元的、神经胶质的、星形细胞的、下丘脑的、腺体的、巨噬细胞的、上皮的、基质的、囊胚的、炎性的、血管生成的和免疫的，包括自身免疫性病症。
本文还提供了用于治疗的PAC或包含PAC的组合物。在一些实施例中，本文提供了PAC或包含PAC的组合物，其用于治疗或预防本文所公开的疾病和病症，例如需要降解靶蛋白质例如癌症的疾病或病症。本文还提供了PAC或包含PAC的组合物在治疗中的用途。在一些实施例中，本文提供了PAC用于治疗或预防本文所公开的疾病和病症的用途。本文还提供了PAC或包含PAC的组合物在制备用于治疗或预防本文所公开的疾病和病症的药物中的用途。
通常，待治疗的疾病或病症是过度增殖性疾病，例如癌症。本文待治疗的癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更多具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。
可用PAC治疗的自身免疫性疾病包括风湿性病症(例如类风湿性关节炎、干燥综合征、硬皮病、狼疮(例如系统性红斑狼疮(SLE)和狼疮肾炎、多发性肌炎/皮肌炎、冷冻球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征和银屑病关节炎)、骨关节炎、自身免疫性胃肠道和肝脏病症(诸如例如炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和Crohn病)、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和乳糜泻)、脉管炎(例如与ANCA相关的脉管炎，包括Churg-Strauss脉管炎、Wegener肉芽肿和多发性动脉炎)、自身免疫性神经系统病症(诸如例如多发性硬化症、斜视眼阵挛肌阵挛综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎、Parkinson病、Alzheimer病和自身免疫性多发性神经病)、肾脏病症(诸如例如肾小球肾炎、Goodpasture综合征和Berger病)、自身免疫性皮肤病症(诸如例如银屑病、荨麻疹、麻疹、寻常型天疱疮、大疱性天疱疮和皮肤性红斑狼疮)、血液系统病症(诸如例如血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听力疾病(例如内耳疾病和听力下降)、Behcet病、Raynaud综合症、器官移植和自身免疫性内分泌失调(例如与糖尿病相关的自身免疫性疾病，例如胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)、Addison病和自身免疫性甲状腺疾病(例如，Graves病和甲状腺炎))。更优选的此类疾病包括例如类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、ANCA相关血管炎、狼疮、多发性硬化症、干燥综合征、Graves病、IDDM、恶性贫血、甲状腺炎和肾小球肾炎。
在某些实施例中，包含抗NaPi2b抗体的PAC(例如上述那些)用于治疗实体瘤(例如卵巢)的方法中。
在另一个实施例中，将PAC抗CD33抗体，例如本文所述的那些，用于治疗血液恶性肿瘤例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大造血性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病(AML)和髓样细胞白血病(MCL)，包括B细胞相关的癌症和增生性病症。参见：US 8226945；Li等人(2013)Mol.Cancer.Ther.12(7):1255-1265；Polson等人(2010)Leukemia 24:1566-1573；Polson等人(2011)Expert Opin.Investig.Drugs 20(1):75-85.
在另一实施例中，将包含抗MUC16抗体的PAC(例如本文所述的那些)用于治疗卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌的方法。该癌症可能与MUC16/CA125/O772P多肽的表达或活性有关。参见：WO 2007/001851；US 7989595；US 8449883；US 7723485；Chen等人(2007)CancerRes.67(10):4924-4932；Junutula等人，(2008)Nature Biotech.,26(8):925-932.
在某些实施例中，包含抗HER2抗体的PAC(例如上述那些)用于治疗癌症(例如乳腺癌或胃癌，更具体地讲是HER2+乳腺癌或胃癌)的方法，其中该方法包括向需要这种治疗的患者施用这种PAC。在一个这样的实施例中，PAC包含抗HER2抗体曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
PAC可通过适合于待治疗病症的任何途径施用。PAC通常将肠胃外施用，即输注、皮下、肌内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外施用。
PAC可以在治疗中单独使用或与其他药剂组合使用。例如，PAC可与至少一种另外的治疗剂共同施用。上述此类联合疗法涵盖联合施用(其中两种或更多种治疗剂被包含在同一组合物或分开的制剂中)，以及分开施用，在分开施用的情况下，PAC的施用可以在施用附加治疗剂和/或佐剂之前、同时和/或之后发生。PAC也可以与放射疗法结合使用。
PAC(和任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、肺内和鼻内，并且如果需要的话用于局部治疗、病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。投配可以通过任何合适的途径进行，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑了各种投配时间安排，包括但不限于在各个时间点处的单次或多次施用、推注施用，以及脉冲输注。
为了预防或治疗疾病，PAC的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其他药物联合使用时)将取决于待治疗的疾病类型、PAC的类型、疾病的严重程度和病程、施用PAC用于预防还是治疗目的、先前的治疗、患者的病史和对PAC的应答以及主治医师的酌处权。PAC适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg--10mg/kg)的PAC可以是例如通过一次或多次单独施用或通过连续输注而施用于患者的初始候选剂量。取决于上述因素，一种典型的日剂量的范围可以为约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于数天或更长时间的重复施用，取决于病症，治疗通常会持续直至发生所需的疾病症状抑制。PAC的一个示例性剂量应在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。因此，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或它们的任何组合)的一种或多种剂量。此类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周施用(例如，使得患者接受约两次至约二十次，或例如约六次剂量)。可施用初始较高负荷剂量，然后施用一种或多种较低剂量。然而，其他剂量方案可能有用。通过常规技术和测定可以容易地监测该治疗的进展。
本文所述的方法包括降解靶蛋白质的方法。在某些实施例中，所述方法包括向受试者施用PAC，其中所述靶蛋白质被降解。蛋白质的降解水平可以是约1％至约5％；或约1％至约10％；或约1％至约15％；或约1％至约20％；或约1％至约30％；或约1％至约40％；约1％至约50％；或约10％至约20％；或约10％至约30％；或约10％至约40％；或或约10％至约50％；或至少约1％；或至少约10％；或至少约20％；或至少约30％；或至少约40％；或至少约50％；或至少约60％；或至少约70％；或至少约80％；或至少约90％；或至少约95％；或至少约99％。
本文所述的方法包括减少肿瘤组织增殖的方法。在某些实施例中，所述方法包括向受试者施用PAC，其中肿瘤组织的增殖减少。减少的水平可以是约1％至约5％；或约1％至约10％；或约1％至约15％；或约1％至约20％；或约1％至约30％；或约1％至约40％；约1％至约50％；或约10％至约20％；或约10％至约30％；或约10％至约40％；或或约10％至约50％；或至少约1％；或至少约10％；或至少约20％；或至少约30％；或至少约40％；或至少约50％；或至少约60％；或至少约70％；或至少约80％；或至少约90％；或至少约95％；或至少约99％。
VII.制品
在另一方面，本文描述的是一种制品(例如试剂盒)，其含有用于治疗上述疾病和病症的材料。该试剂盒包括包含PAC的容器。该试剂盒可进一步包含在容器上或与容器相关的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于指治疗产品的商业包装中通常包括的说明，其含有涉及此类治疗产品的使用的有关适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。
合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。“小瓶”是适合于容纳液体或冻干制剂的容器。在一个实施例中，小瓶是一次性小瓶，例如带塞子的20cc一次性小瓶。容器可以由多种材料形成诸如玻璃或塑料。容器可以容纳对病症治疗有效的PAC或其制剂，并且可以具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或带有皮下注射针可刺穿的塞子的小瓶)。
组合物中的至少一种活性剂是PAC。标签或包装说明书表明化合物用于治疗所选择的病症，诸如癌症。另外，标签或包装说明书可以指示要治疗的患者是患有诸如过度增殖性病症、动脉粥样硬化、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛或神经外伤性疾病或事件的病症的患者。在一个实施例中，标签或包装说明书指示包含PAC的组合物可用于治疗由异常细胞生长引起的病症。标签或包装说明书也可表明该组合物可用于治疗其他病症。可替代地或另外地，制品可进一步包括第二容器，该第二容器盛有药用缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。制品还可以包括从商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
试剂盒可进一步包含PAC和第二药物制剂(如果存在)的施用指导。例如，如果试剂盒包括包含PAC的第一组合物和第二药物制剂，则试剂盒可以进一步包含用于向有此需要的患者将第一药物组合物和第二药物组合物同时、按顺序或分开施用的说明。
在另一实施例中，试剂盒适用于递送固体口服形式的PAC，诸如片剂或胶囊剂。此类试剂盒优选地包括许多单位剂量。此类试剂盒可包括具有按照其预期用途的次序定向的剂量的卡。此类试剂盒的实例是泡罩包装。泡罩包装在包装工业中是众所周知的，并广泛用于包装药物单位剂型。如果需要，可例如以数字、字母或其他标记的形式或用指定治疗时间表中可以施用剂量的日期的日历插入事件提供记忆辅助。
根据一个实施例，试剂盒可包含(a)其中装有PAC的第一容器；以及任选的(b)其中装有第二药物制剂的第二容器，其中所述第二药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。可替代地或另外地，试剂盒可进一步包括第三容器，该第三容器盛有药用缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。制品还可以包括从商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
在试剂盒包含PAC和第二治疗剂的某些其他实施例中，所述试剂盒可以包含用于容纳单独的组合物的容器(例如分开的瓶子或分开的箔包装)，但是，单独的组合物也可以容纳在单个不分开的容器中。通常，试剂盒包括用于施用单独组分的说明。当单独的组分优选地以不同的剂型(例如，口服和肠胃外)施用时，以不同的剂量间隔施用时，或者当处方医师希望滴定组合的各种组分时，试剂盒形式是特别有利的。
一般合成方法
下面描述制备具有化学结构Ab―(L1―D)p的缀合物的一般方法。
1.1将L2与E3LB偶联以制备E3LB-L2中间体的一般合成方法
在某些实施例中，首先将L2与第一合适溶剂、第一碱和第一偶联剂接触以制备第一溶液。在某些实施例中，在室温(约25℃)，将L2与第一合适溶剂、第一碱和第一偶联剂接触持续约15分钟。然后将E3LB与所述第一溶液接触。在某些实施例中，在室温(约25℃)，将E3LB与第一溶液接触持续约一个小时。然后将溶液浓缩并任选地纯化。
在某些实施例中，L2与第一碱与第一偶联剂的摩尔比为约1:4:1.19。在某些实施例中，L2与第一碱与第一偶联剂的摩尔比为约1:2:0.5、约1:3:1、约1:4:2、约1:5:3或约1:6:4。
在某些实施例中，L2与E3LB的摩尔比为约1:1。在某些实施例中，L2与E3LB的摩尔比为约1:0.5、约1:0.75、约1:2或约0.5:1。
1.2将E3LB-L2中间体与PB偶联以制备CIDE的一般合成方法
在某些实施例中，将E3LB-L2中间体偶联至PB以制备CIDE。在某些实施例中，首先将PB与第二合适溶剂、第二碱和第二偶联剂接触。在某些实施例中，所述接触在室温(约25℃)进行约10分钟。然后使溶液与E3LB-L2中间体接触。在某些实施例中，在室温(约25℃)，将第二溶液与E3LB-L2中间体接触持续约1小时。然后将溶液浓缩并任选地纯化以制备CIDE。
在某些实施例中，PB与第二碱与第二偶联剂的摩尔比为约1:4:1.2。在某些实施例中，PB与第二碱与第二偶联剂的摩尔比为约1:3:0.75、约1:5:1、约1:3:2或约1:5:3。
在某些实施例中，PB与E3LB-L2中间体的摩尔比为约1:1。在某些实施例中，PB与E3LB-L2中间体的摩尔比为约1:0.5、约1:0.75、约1:2或约0.5:1。
1.3将CIDE与L1偶联以制备L1-CIDE的一般合成方法
在某些实施例中，将CIDE与L1和第三碱在第三合适的溶剂中接触以制备溶液。在某些实施例中，所述接触在约(约25℃)进行约2小时。然后可以任选地将溶液纯化以制备L1-CIDE。
在某些实施例中，CIDE与L1的摩尔比为约1:4。在某些实施例中，CIDE与L1的摩尔比为约1:1、1:2、1:3、1:5、1:6、1:7或约1:8。
1.4将L1-CIDE与抗体偶联的一般合成方法
在某些实施例中，将L1-CIDE与硫醇和第四合适溶剂接触以形成第四溶液。然后使该溶液与抗体接触以制备缀合物。在某些实施例中，所述
在某些实施例中，硫醇是马来酰亚胺或4-硝基吡啶二硫化物。在某些实施例中，合适溶剂选自由二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和丙二醇组成的组。
在某些实施例中，L1-CIDE与硫醇反应性基团的摩尔比为约3:1至约20:1。
在某些实施例中，将包含L1-CIDE、硫醇反应性基团和合适溶剂的溶液与抗体接触持续约1至约24小时。在某些实施例中，在约室温(约25℃)至约37℃，使包含L1-CIDE、硫醇反应性基团和合适溶剂的溶液与抗体接触持续。
在上述一般方法的某些实施例中，合适的溶剂是极性非质子溶剂，选自由二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二甲基亚砜和碳酸亚丙酯组成的组。
在上述一般方法的某些实施例中，碱选自由N,N-二异丙基乙胺(DIEA)、三乙胺和2,2,2,6,6-四甲基哌啶组成的组。在某些实施例中，偶联剂选自由以下项组成的组：1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)、(7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷六氟磷酸盐(PyAOP)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HCTU)、O-(N-琥珀酰亚胺基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TSTU)、O-(5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TNTU)、O-(1,2-二氢-2-氧代-1-吡啶基-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)和羰基二咪唑(CDI)。
在一个优选的实施例中，溶剂是二甲基甲酰胺，碱是N,N-二异丙基乙胺，偶联剂是HATU。
在上述一般方法的某些实施例中，所述接触持续约30秒、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、16分钟、17分钟、18分钟、19分钟、20分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、180分钟、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、20小时、40小时、60小时或72小时。
在上述一般方法的某些实施例中，所述接触持续约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或100℃。
以下实例仅以说明而非限制的方式提供。
实例
实例1
CIDE的合成
A.CIDE的一般化学合成：
i.连接基(L2)与E3连接酶结合基团(E3LB)的连接
Figure BDA0003063017060003311
4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯甲酸甲酯
在氮气下，向含N-[(1S)-1-[[(3S,4S)-7-氰基-1-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-4-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基]氨基甲酰基]乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(3.00g，5.25mmol)的1,2-二氯乙烷(50mL)溶液中加入三乙胺(2.6g，25.7mmol)和4-(碳酰氯基)苯甲酸甲酯(3.10g，15.61mmol)。将所得溶液在80℃搅拌5h，然后冷却至室温。加入水(100mL)。用3x100mL二氯甲烷萃取所得溶液，合并有机层，并经无水硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱。这得到3.10g(81％)的4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯甲酸甲酯，为棕色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝734.4。
Figure BDA0003063017060003321
4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯甲酸
在室温，将LiOH水溶液(30mL，1M)添加到含4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯甲酸甲酯(3.10g，4.22mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中。将所得溶液在室温下搅拌5小时。加入乙醚(20mL)。分离相。用1N HCl溶液酸化水相，直到pH约为7。用2x80mL乙酸乙酯萃取所得混合物，合并有机层，并经无水硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩。这得到2.5g的4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯甲酸，为棕色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝720.5。
Figure BDA0003063017060003322
2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯盐酸盐
在室温，向含2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酸盐酸盐(500mg，2.505mmol)的2,2-二甲氧基丙烷(5mL，40.327mmol)溶液中滴加浓HCl(0.2mL)。将反应混合物在25℃搅拌15h，并在真空下浓缩。残余物不经进一步纯化即可直接使用。
Figure BDA0003063017060003331
2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基-羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)乙酸甲酯
于室温在氮气下，向含[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基]羰基]苯甲酸(500mg，0.695mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入粗制2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酸甲酯HCl盐(500mg)、HATU(528mg，1.389mmol)和DIPEA(897mg，6.94)。将所得溶液在25℃搅拌1小时，并用水淬灭。所得溶液用二氯甲烷萃取，合并有机层。将有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱。这得到550mg(90％)的2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)乙酸甲酯，为黄色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝879.5。
Figure BDA0003063017060003332
2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基]羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)乙酸
在室温，向含2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基]羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)乙酸甲酯(500mg，0.569mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液中加入含一水氢氧化锂(95mg,2.26mmol)的水溶液(1mL)溶液。将混合物在25℃搅拌1小时。将混合物用水稀释并用1N柠檬酸酸化至pH约4，用乙酸乙酯萃取(2x)。将有机层合并，用盐水洗涤，用硫酸钠使其干燥，然后减压浓缩。残余物通过C18硅胶反相快速色谱法纯化，流动相：5mM水溶液NH4HCO3和CH3CN(0-95％)以得到370mg(75％)的2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-3-[(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰胺基]-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基[羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)乙酸，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝865.5.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)8.70(d,J＝8.6Hz,1H),8.46(t,J＝5.5Hz,1H),8.21(d,J＝8.7Hz,1H),8.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.89(dd,J＝8.6,1.9Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.50(d,J＝9.2Hz,1H),7.30(m,1H),7.18(d,J＝1.9Hz,1H),7.13(t,J＝7.5Hz,1H),7.00(d,J＝8.1Hz,2H),6.13(d,J＝15.1Hz,1H),5.78(d,J＝8.0Hz,2H),5.51(d,J＝15.0Hz,1H),5.04(brs,1H),4.61-4.52(m,1H),4.22(dd,J＝11.9,8.5Hz,1H),3.99(s,2H),3.96(s,3H),3.68–3.44(m,7H),3.37(s,1H),2.76(s,3H),1.40-1.31(m,12H),1.12(d,J＝6.1Hz,3H).
ii.通过连接基(L2)将PB连接到E3LB
Figure BDA0003063017060003341
4-((2S,3S)-8-氰基-5-((2-甲氧基萘-1-基)甲基)-2-甲基-3-((S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂卓-1-羰基)-N-(2-(2-(2-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺(“化合物P1”)
向含2-[2-[2-[[4-[(3S,4S)-3-[[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]丙酰基]氨基]-7-氰基-1-[(2-甲氧基-1-萘基)甲基]-4-甲基-2-氧代-3,4-二氢-1,5-苯并二氮杂卓-5-羰基]苯甲酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酸(74mg，0.0855mmol)的2-甲基四氢呋喃(0.855mL)溶液中加入HATU(1.1当量，36.5mg，0.0941mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.0当量，0.045mL，0.257mmol)。将混合物在室温搅拌30分钟，然后加入含4-[1-[4-[2-(甲基(甲基氨基)乙氧基]苯基]-2-苯基-丁-1-烯基]苯酚(1.05当量，33.5mg，0.0898mmol)的2-甲基四氢呋喃(60，0.5mL，400mg，5mmol)溶液，然后加入0.2mL DMF。将混合物在室温搅拌22h。添加水，并将溶液用iPrOAc萃取3次。合并有机层，然后用硫酸钠干燥并且在真空下浓缩。
将粗材料溶于二氯甲烷(0.85mL)中，并滴加三氟乙酸(0.26mL)。将反应在室温搅拌直至观察不到气体逸出。1h后，将溶液真空浓缩并通过反相HPLC纯化，得到45mg(2步产率为45％)所需产物。
M+H＝560.9,1120.7；δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39,9.14(重叠s,1H),8.85–8.70(m,1H),8.44–8.36(m,1H),8.20(d,J＝8.8Hz,1H),8.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.97–7.82(m,2H),7.70–7.64(m,1H),7.50–7.44(m,1H),7.34–7.27(m,1H),7.21–7.04(m,9H),7.03–6.87(m,4H),6.78–6.67(m,2H),6.62–6.54(m,2H),6.44–6.33(m,1H),6.12(d,J＝15.1Hz,1H),5.78(d,J＝8.0Hz,2H),5.52(d,J＝15.0Hz,1H),4.99-4.89(m,1H),4.33–4.04(m,4H),4.00–3.88(m,1H),3.94(s,3H),3.68–3.61(m,1H),3.60–3.42(m,5H),3.38–3.32(m,1H),3.03–2.78(m,3H),2.45–2.35(m,2H),2.32(s,3H),1.23(d,J＝6.4Hz,3H),1.11(d,J＝6.1Hz,3H),0.89–0.76(m,4H).
B.L1-CIDE的制备
i.连接基L1与CIDE的连接
Figure BDA0003063017060003351
N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-[4-[(1Z)-1-(4-[2-[2-[2-[2-[(4-[[(2S,3S)-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2-甲基-3-[(2S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基]-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基]羰基]苯基)甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)-N-甲基乙酰胺基]乙氧基]苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基]苯氧基甲基]苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(“化合物LP2”)
在0℃下，向含(2S)-N-[(3S,4S)-7-氰基-5-[(4-[[2-(2-[[(2-[4-[(1Z)-1-4-(羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基]苯氧基]乙基)(甲基)氨基甲酰基]甲氧基]乙氧基)乙基]氨基甲酰基]苯基)羰基]-1-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-4-甲基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基]-2-(甲基氨基)丙酰胺(化合物P1，48mg，0.043mmol)和N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(氯甲基)苯基]氨基甲酰基}丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(90mg，0.152mmol)的DMF(0.9mL)溶液中加入K2CO3(60mg,0.43mmol)。将反应混合物在0℃搅拌4h，并用预冷却的DMF(0.9mL)稀释。滤出固体。利用制备型HPLC纯化滤液，所用条件如下：色谱柱SunFire PrepC18 OBD色谱柱，19*150mm 5um，10nm；流动相，水(0.1％TFA)和CH3CN(10min内从5％CH3CN上升至48％)；检测器，UV 254/220nm以提供22mg(31％)的N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-[4-[(1Z)-1-(4-[2-[2-(2-[2-[(4-[[(2S,3S)-8-氰基-5-[(2-甲氧基萘-1-基)甲基]-2]-甲基-3-[(2S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基]-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-1-基]羰基]苯基]甲酰胺基]乙氧基]乙氧基)-N-甲基乙酰胺基]乙氧基]苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基]苯氧基甲基]苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝1675.1；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ(ppm)10.15(s,1H),9.95-9.72(m,1H),9.52-9.41(m,1H),9.31-9.14(m,1H),8.43(brs,1H),8.20-8.18(m,1H),8.17-8.07(m,2H),7.93(m,2H),7.70(d,J＝8Hz,1H),7.70-7.65(m,3H),7.48-7.42(m,2H),7.41-7.36(m,1H),7.33-7.28(m,1H),7.23(m,1H),7.18-7.07(m,7H),7.02-7.01(m,1H),6.99(s,3H),6.96-6.92(m,2H),6.76-6.67(m,2H),6.60-6.58(m,2H),6.40(d,J＝8.4Hz,1H),6.13-6.08(m,1H),5.99(s,1H),5.80(d,J＝7.6Hz,2H),5.55(d,J＝15.2Hz,1H),5.44(brs,1H),5.02-4.93(m,1H),7.43-4.36(m,3H),4.26-4.02(m,6H),3.95-3.88(m,4H),3.66-3.63(m,3H),3.57-3.53(m,4H),3.39-3.36(m,4H),3.05-2.81(m,5H),2.68(s,2H),2.42-2.39(m,3H),2.22-2.07(m,2H),2.03-1.91(m,1H),1.71(brs,2H),1.62(brs,3H),1.50-1.36(m,6H),1.21-1.17(m,5H),0.87-0.82(m,10H).
示例性ERα靶向CIDE的合成
除非另有说明，否则所有化合物均为烯烃异构体的混合物(约1:1)。括号中列出的13C共振代表特定化合物的主要异构体的烯烃异构体和/或N-Me酰胺键的旋转异构体。
i.EC1可通过以下方案合成示例性CIDE,EC1：
Figure BDA0003063017060003371
步骤1：(9H-芴-9-基)甲基(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)氨基甲酸酯(A)。在0℃下，将含2-氨基-2-苯基乙腈盐酸盐(1.20g，7.10mmol)、(iPr)2NEt(1.37g,10.6mmol)和O-((9H-芴-9-基)甲基)羰酰异硫氰酸酯(2.00g,7.10mmol)的DCM(10mL)溶液搅拌1h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中。用EtOAc对所得混合物进行萃取。将有机层用盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-80％乙酸乙酯的石油醚)得到996mg(33％)的化合物A，为黄色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝414。
步骤2：(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酸甲酯(B)。于0℃在氮气下，将含N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-丙氨酸(2.00g,9.90mmol)，4-甲基吗啉(NMM,1.99g,19.7mmol)和氯甲酸异丁酯(1.60g,11.8mmol)的THF(32mL)溶液搅拌0.5h。然后加入含(S)-2-氨基-2-环己基乙酸甲酯盐酸盐(2.00g，9.70mmol)和4-甲基吗啉(NMM；1.99g,19.7mmol)的THF(16mL)溶液和DCM(16mL)，并将所得溶液在0℃搅拌1h。将反应混合物用EtOAc稀释，并通过添加水淬灭。分离相。将水相用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，无水Na2SO干燥，并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-40％乙酸乙酯的石油醚)得到2.5g(71％)的化合物B，为无色油。MS(ESI)：[M+H]+＝357。
步骤3：(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酸(C)。向含(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-丙酰胺基)-2-环己基乙酸酯(B，2.50g，7.00mmol)的丙酮/水(30mL，1:1)溶液中加入LiOH-H2O(1.20g,28.6mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后通过加入2N HCl溶液酸化直至pH为约4。将混合物减压浓缩至大约一半的体积，然后用EtOAc稀释。分离相。将水溶液用EtOAc(2x)萃取。依次用5％KHSO4水溶液，盐水和水洗涤合并的有机层，然后经无水Na2SO4干燥并减压浓缩以产生2.0g(83％)的化合物C，为无色油。MS(ESI)：[M+H]+＝343。
步骤4：((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)-L-脯氨酸甲酯(D)。在室温，向含(S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酸(C，2.00g，5.80mmol)L-脯氨酸甲酯盐酸盐(0.96g，5.80mmol)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(DMT-MM；3.20g，11.6mmol)的THF(50mL)和DMF(5mL)的混合物中加入4-甲基吗啉(NMM；2.4g，23.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后用EtOAc稀释，然后添加水。分离相。将水相用EtOAc(2x)萃取。依次用饱和NaHCO3水溶液、5％KHSO4水溶液和盐水洗涤合并的有机层，然后用无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-80％乙酸乙酯的石油醚)得到1.6g(60％)的化合物D，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝454。
步骤5：((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)-L-脯氨酸(E)。向含((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)-L-脯氨酸甲酯(D，1.60g，3.50mmol)的丙酮/水(30mL，1:1)溶液中加入LiOH-H2O(588mg,14.0mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1h然后通过加入2N HCl溶液酸化直至pH为约4。将混合物减压浓缩至大约一半的体积，然后用EtOAc稀释。分离相。将水相用EtOAc(2x)萃取。依次用5％KHSO4水溶液，盐水和水洗涤合并的有机层，然后经无水Na2SO4干燥并减压浓缩以产生1.1g(71％)的化合物E，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝440。
步骤6：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(氟羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(F)。在0℃下，向含((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)-L-脯氨酸(E,1.10g,2.50mmol)和吡啶(790mg,10.0mmol)的DCM(10mL)溶液中加入三聚氟氰(507mg，3.80mmol)。将所得溶液在0℃下搅拌1h，然后通过加入冰水淬灭。分离相。将水相用DCM萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩，得到1.10g的粗产物F，为无色油。该材料不经进一步纯化而用于下一步。MS(ESI)：[M+H]+＝442。
步骤7：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(G)。于室温在氮气下，将含(9H-芴-9-基)甲基(5-氨基-4-苯基噻唑-2-基)氨基甲酸酯(A，687mg，1.66mmol)、吡啶(525mg，6.60mmol)和((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-(氟羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)-氨基甲酸叔丁酯(F，1.10g，2.50mmol)的DCM(10mL)混合物搅拌1h。然后加入NaHCO3水溶液，并将所得混合物用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层以无水Na2SO4干燥并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-100％乙酸乙酯的石油醚)得到845mg(41％)的化合物G，为黄色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝835。
步骤8：((S)-1-(((S)-2-((S)-2-((2-氨基-4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(H)。在室温，将含((S)-1-(((S)-2-((S)-2-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(G，845mg，1.0mmol)和哌啶(0.5mL)的DMF(4.5mL)混合物搅拌1h。将反应混合物用EtOAc稀释，并用水洗涤。将有机层以无水Na2SO4干燥并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-100％乙酸乙酯的石油醚)得到540mg(87％)的化合物H，为黄色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝613。
步骤9：3-(2-(3-((5-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)-4-苯基噻唑-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸乙酯(I)。于室温在氮气下，向含3-(2-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(491mg，2.10mmol)的DCM(5mL)溶液中加入草酰氯溶液(1.10mL,2.0M溶液在DCM,2.20mmol中)和催化量的DMF(3.8mg，0.05mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。然后在0℃下，将得到的溶液加入到含((S)-1-(((S)-2-((S)-2-((2-氨基-4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰基)吡咯烷基-1-基)-1-环己基-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(H，320mg，0.520mmol)和吡啶(331mg,4.2mmol)的DCM(3mL)预混合溶液中。将所得混合物在0℃下搅拌1小时，然后使其温热至室温，并在该温度下搅拌过夜。通过添加水淬灭所得溶液，随后用DCM稀释。分离相。将有机层以无水Na2SO4干燥并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法纯化残余物(梯度:含0％-100％乙酸乙酯的石油醚)得到370mg(85％)的化合物I，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝829。
步骤10：3-(2-(3-((5-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)-4-苯基噻唑-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(J)。在室温，向含3-(2-(3-((5-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)-4-苯基噻唑-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸乙酯(I，370mg，0.450mmol)的THF(3mL)和水(3mL)的混合物中加入LiOH-H2O(92.4mg,2.20mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，然后用柠檬酸水溶液(1M)酸化至pH约2，随后用EtOAc稀释。分离相。将有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并且减压浓缩，以产生345mg(97％)的化合物J，为浅黄色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝801。
步骤11：((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-((2-(3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-4-苯基噻唑-5-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(L)。将含3-(2-(3-((5-((S)-1-((S)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-丙酰胺基)-2-环己基乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺基)-4-苯基噻唑-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(J，345mg，0.430mmol)，4-(1-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯酚(K，其制备方法如下：Breast Cancer Research and Treatment2004,85,151；179mg,0.48mmol)、(iPr)2NEt(224mg,1.74mmol)和HATU(179mg,0.470mmol)的DMF(4mL)混合物在室温搅拌1h。将反应混合物直接加载到预先填充的C18色谱柱(40g,C18,20-35μm,
Figure BDA0003063017060003411
Agela Technologies)上，用乙腈/水洗脱(溶剂梯度：含5-100％乙腈的水溶液(0.05％NH4HCO3)，收集适当的级分并减压浓缩。利用硅胶快速色谱法再纯化残余物(梯度:0％-5％MeOH/DCM)得到358mg(72％)的化合物L，为白色固体。MS(ESI)：[M+H]+＝1157。
步骤12：(S)-1-((S)-2-环己基-2-((S)-2-(甲基氨基)丙酰胺基)乙酰基)-N-(2-(3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-4-苯基噻唑-5-基)吡咯烷-2-甲酰胺(1)。在室温，将含((S)-1-(((S)-1-环己基-2-((S)-2-((2-(3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)-乙氧基)丙酰胺基)-4-苯基噻唑-5-基)(氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(L，350mg，0.30mmol)的TFA(1mL)和DCM(2.5mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物减压浓缩，并将残余物通过反相快速色谱法纯化(溶剂梯度：含5-100％乙腈的水溶液(0.05％NH4HCO3))，得到213.2mg(67％)的化合物1(化合物EC1)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.07(s,1H),10.30(s,1H),9.41(9.16)(s,1H),7.91(d,J＝8.9Hz,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,2H),7.48–7.39(m,2H),7.34(t,J＝7.5Hz,1H),7.23–7.05(m,6H),7.02–6.88(m,2H),6.79–6.67(m,2H),6.63–6.54(m,2H),6.43–6.36(m,1H),4.54(dd,J＝8.3,5.1Hz,1H),4.42(t,J＝8.2Hz,1H),4.11(4.04,3.95,3.88)(t,J＝5.5Hz,2H),3.85-3.75(m,1H),3.75–3.68(m,2H),3.68-3.55(m,4H),3.55-3.40(m,5H),3.05(2.96,2.87,2.80)(s,3H),3.02–2.92(m,1H),2.72-2.60(m,3H),2.60-2.55(m,1H),2.45–2.35(m,2H),2.25–1.96(m,6H),1.95-1.80(m,2H),1.80-1.50(m,6H),1.20-0.89(m,8H),0.89–0.79(m,3H).13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ174.8,171.5,171.0(171.0,170.9,170.9),170.4,169.9,157.5(157.3),156.6,156.5,155.7,153.0,142.7,142.7(142.7),140.5(140.3),138.3(138.3),137.4,136.5(136.4,136.3,136.1),134.4(134.4),134.1(134.0),131.9,131.9,130.6,130.6,129.9,128.9,128.3,128.3,128.2,127.9,126.4(126.4),123.9,115.4,114.8,114.5,113.8,70.1,67.5(67.4,67.1,67.1),66.7,66.0(66.0,65.8,65.7),59.8,59.6,54.7,48.8(48.7),47.7,47.0(47.0),36.9(36.8),36.2,34.7,33.8(33.7),33.6(33.5),33.2(33.1),29.6,29.4,29.0(29.0),28.4,26.4,26.1(26.0),25.2,19.6,13.9.HRMS(ESI+):C59H74N7O9S(M+H)+的m/z计算值1056.5269发现值1056.5249.
ii.EC3可通过以下方案合成示例性CIDE,EC3：
Figure BDA0003063017060003421
步骤1：3,3'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸二乙酯(AA)。向含化合物Z(Aldrich，2.0g，11.9mmol)的EtOH(30mL)溶液中滴加H2SO4(5.0mL)。将反应溶液在85℃搅拌16h，然后真空浓缩以除去大部分EtOH。用H2O(30mL)稀释残余物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，并浓缩以得到粗产物。将该材料通过硅胶快速色谱法纯化(含0-30％EtOAc的石油醚溶液)，得到化合物AA(1.40g，45％产率)，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.17–4.11(m,4H),3.74(t,J＝6.4Hz,4H),3.60(s,4H),2.58(t,J＝6.4Hz,4H),1.25(t,J＝6.8Hz,6H).
步骤2：3-(2-(3-乙氧基-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(BB)。向含化合物AA(1.30g，4.96mmol)的EtOH(20mL)/H2O(3.0mL)溶液中加入KOH(278mg，4.96mmol)。将反应溶液在80℃搅拌1h，然后真空浓缩以除去溶剂。将残余物用H2O(20mL)稀释，并用饱和NaHCO3溶液将pH调节至9.0。用EtOAc(20mL×2)洗涤混合物，并用HCl(2.0M)将水相调节至pH 3.0。然后将酸化的水相用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到化合物BB(370mg，32％)，为无色油。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ4.16–4.13(m,2H),3.75–3.71(m,4H),3.60–3.59(m,4H),2.56–2.52(m,4H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤3：3-(2-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)-丙酸乙酯(DD)。向含化合物BB(370mg，1.58mmol)的DMF(15mL)溶液中加入(iPr)2NEt(816mg，6.32mmol)和HATU(720.69mg，1.9mmol)。将溶液在25℃搅拌15min，然后将VHL配体CC(TFA盐，其制备方法描述于：J.Med.Chem.2018,61,599；590mg,1.26mmol)加入进来。将反应溶液在25℃再搅拌1h，然后真空浓缩以除去溶剂。将残余物用EtOAc(40mL)稀释，并将该溶液用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物DD(300mg，23％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.746min,m/z＝669.1[M+Na]+.
步骤4：3-(2-(3-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)-丙酸(EE)。向含化合物DD(300mg,0.460mmol)的THF(6.0mL)/H2O(2.0mL)溶液中加入LiOH-H2O(97mg,2.3mmol)。将反应溶液在25℃搅拌16h，然后真空浓缩以除去大部分THF。将残余物用HCl(2.0M)酸化至pH 7.0，随后通过制备型HPLC(Xtimate C18 150*25mm*5um，乙腈23-53/0.225％FA的水溶液)纯化，得到化合物EE(100mg,34％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.72min,m/z＝641.1[M+Na]+.
步骤5：(2S,4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-16-(4-1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)-14-甲基-4,13-二氧代-7,10-二氧杂-3,14-二氮杂十六-1-酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(3)。向含化合物EE(100mg，0.160mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入HATU(73mg，0.190mmol)和(iPr)2NEt(83mg，0.650mmol)。将混合物在25℃搅拌10min，然后将化合物K(其制备方法描述于：Breast Cancer Research andTreatment 2004,85,151；60mg,0.16mmol)加入进来。将反应溶液在25℃再搅拌1h，然后通过制备型HPLC(Xtimate C18 150*25mm*5um，乙腈60-80.6/0.225％FA的水溶液)纯化，得到化合物3(化合物EC3)(105mg，65％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.93min,m/z＝996.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.90(s,1H),7.46–7.38(m,4H).7.13–7.04(m,7H),6.90–6.87(m,2H),6.63(d,J＝8.4Hz,2H),6.40(d,J＝8.8Hz,2H),4.65–4.48(m,5H),4.38–4.32(m,1H),4.16–4.09(m,2H),3.91–3.88(m,1H),3.80–3.65(m,7H),3.60–3.54(m,4H),3.16(s,1H),2.99–2.97(m,1H),2.78–2.75(m,1H),2.65–2.62(m,1H),2.53–2.51(m,1H),2.47–2.41(m,6H),2.24–2.19(m,1H),2.11–2.06(m,1H),1.02(s,9H),0.88(t,J＝7.6Hz,3H).13C NMR(100MHz,CD3OD)δ174.6,174.3,174.0,173.8,172.2,158.9,158.7,156.5,153.2,148.7,144.3,141.9,140.5,139.7,133.3,133.2,131.8,131.4,131.0,130.6,130.5,129.1,129.0,127.1,116.1,115.3,114.5,71.6,71.5,71.2,68.5,68.4,66.9,60.9,58.1,43.8,39.0,37.5,36.9,34.6,30.0,27.2,15.9,14.2.HRMS(0-95_1_4min,ESI),m/z 974.4676[M+H]+.
iii.EC4可以通过以下方案合成示例性CIDE,EC4：
Figure BDA0003063017060003441
步骤1：4-((4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)氨基甲酰基)苯甲酸(FF)。在25℃，将HATU(144mg，0.38mmol)添加到含对苯二甲酸(70mg，0.42mmol)和(iPr)2NEt(81mg,0.63mmol)的DMF(4mL)溶液中。在该温度下搅拌10min后，加入4-氨基丁酸叔丁酯(54mg，0.34mmol)，并将所得混合物在25℃搅拌1h。LCMS分析{(5-95AB/1.5min):RT＝0.720min,m/z＝[M+Na]+329.9}显示40％的所需产物。将反应真空浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈37-51％/0.225％FA的水溶液)，得到化合物FF(50mg，35％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.18(brs,1H),8.63(t,J＝5.6Hz,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,2H),7.92(d,J＝8.4Hz,2H),3.26–3.21(m,2H),2.23(t,J＝7.2Hz,2H),1.74–1.67(m,2H),1.36(s,9H).LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.72min,m/z＝[M+Na]+329.9.
步骤2：4-(4-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)苯甲酰胺基)-丁酸叔丁酯(GG)。将含化合物CC(TFA盐，其制备方法如下述：J.Med.Chem.2018,61,599；252mg,0.59mmol)、HATU(278mg，0.73mmol)、Et3N(148mg,1.46mmol)和化合物FF(150mg，0.49mmol)的DMF(15mL)混合物在25℃搅拌2h。将混合物减压浓缩，并将残余物通过快速色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM，Rf＝0.5)，得到化合物GG(350mg,90％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.845min,m/z＝[M+H]+720.3.
步骤3：4-(4-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酰基)苯甲酰胺基)-丁酸(HH)。在25℃向含化合物GG(350mg,0.44mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(10.0mL,0.440mmol)。将混合物在25℃搅拌2h，然后真空浓缩，得到粗制化合物HH(290mg,99％)，为黄色油。将该粗材料直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.710min,m/z＝[M+H]+664.3.
步骤4：N1-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-N4-(4-((2-(4-(1-(4-(羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-4-氧代丁基)-对苯二甲酰胺(4)。将含化合物HH(150mg，0.23mmol)、HATU(112mg，0.29mmol)、化合物K(制备方法如下述：Breast CancerResearch and Treatment 2004,85,151；127mg,0.34mmol)和Et3N(69mg,0.68mmol)的DMF(10mL)混合物在25℃搅拌2h。随后通过制备型HPLC(乙腈51–81％/0.225％FA的水溶液)纯化混合物，得到化合物4(化合物EC4)(90mg,39％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.89min,m/z＝[M+H]+1019.5.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.93(s,1H),7.99–7.86(m,4H),7.45–7.39(m,4H),7.12–7.05(m,7H),6.88(d,J＝8.0Hz,2H),6.61(d,J＝8.0Hz,2H),6.38(d,J＝8.0Hz,2H),4.92–4.90(m,1H),4.60–4.52(m,3H),4.35–4.31(m,1H),4.14–4.10(m,2H),3.99–3.93(m,1H),3.87–3.83(m,1H),3.79–3.61(m,2H),3.45–3.38(m,2H),3.15(s,1H),3.05–2.84(m,2H),2.62–2.59(m,1H),2.49–2.39(m,6H),2.26–2.20(m,1H),2.13–2.06(m,1H),2.01–1.86(m,2H),1.30–1.27(m,1H),1.09–1.07(m,9H),0.88–0.84(m,3H).13CNMR(100MHz,CD3OD)δ175.9,175.5,174.5,172.3,169.2,158.9,158.7,157.3,156.4,153.3,148.6,144.1,142.3,140.5,138.3,138.1,133.2,131.8,131.8,131.0,130.5,129.1,129.0,128.9,128.6,116.0,115.3,114.4,71.3,67.2,66.6,66.3,61.7,59.7,43.8,39.0,37.9,37.4,34.4,32.0,30.0,27.3,25.8,15.9,14.1.HRMS(0-95_1_4min,ESI):m/z1019.4650[M+H]+.
示例性ERα靶向L1-CIDE的合成
iv.L1EC8示例性L1-CIDE,L1EC8的合成如下：
Figure BDA0003063017060003461
((2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酰基氨基]-3-甲基-丁酰基]氨基]-5-脲基-戊酰基]氨基]-苯基]甲氧基]苯基]-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺)(8,“L1EC8”)。在一个小瓶中，将MC-VC-PAB-Cl{N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(氯甲基)苯基]氨基甲酰基]-4-脲基-丁基]氨基甲酰基]-2-甲基-丙基]-6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酰胺}(按如下方法制备：Nat.Chem.2016,8,1112；35.5mg，0.06mmol)和化合物3(49.5mg，0.051mmol)加入到DMF(0.1mL)中，并冷却至0℃。向混合物中加入碳酸钾(70mg，0.51mmol)，并将反应在0℃搅拌1h，然后在25℃保持2h。将混合物用冷的DMF稀释并过滤。使用28min方法通过HPLC直接纯化滤液，以40-80％乙腈的梯度洗脱：含0.01％甲酸的水溶液，在Luna 10u C18,250x30mm色谱柱上。分离的化合物8(L1EC8)(10.8mg，14％)。M+H＝1720.35.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.08(d,J＝16.7Hz,1H),8.98(s,1H),8.59(t,J＝6.0Hz,1H),8.17(t,J＝7.4Hz,1H),7.94(dd,J＝9.5,3.1Hz,1H),7.88–7.83(m,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.45–7.34(m,5H),7.29(d,J＝8.5Hz,1H),7.21–7.14(m,2H),7.13–7.04(m,5H),7.00(d,J＝3.5Hz,3H),6.93(d,J＝8.2Hz,1H),6.74–6.68(m,2H),6.68–6.62(m,1H),6.11–5.99(m,1H),5.45(d,J＝4.7Hz,2H),4.85(s,1H),4.56(d,J＝9.4Hz,1H),4.47–4.32(m,4H),4.26–4.16(m,2H),4.13(t,J＝5.4Hz,1H),4.05(t,J＝5.8Hz,1H),3.72(t,J＝5.3Hz,1H),3.70–3.50(m,8H),3.50–3.27(m,18H),3.07(s,1H),3.05–2.90(m,3H),2.88(s,1H),2.62–2.47(m,7H),2.44(s,3H),2.43–2.28(m,3H),2.24–1.84(m,6H),1.75–1.64(m,1H),1.64–1.55(m,1H),1.54–1.31(m,7H),1.23(s,1H),1.22–1.13(m,2H),0.93(s,9H),0.88–0.77(m,10H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ172.7,172.4,171.8,171.5,171.1,171.0,170.4,170.0,159.4,156.8,151.9,148.2,142.5,140.9,140.0,139.2,137.9,134.9,132.1,131.9,131.6,130.7,130.1,129.9,129.3,129.1,129.0,128.4,127.9,126.6,119.5,119.4,114.9,114.6,114.1,113.8,70.1,69.9,69.3,67.4,67.1,59.2,58.0,56.9,56.8,53.6,47.0,42.1,40.5,40.4,40.3,40.2,40.1,40.0,39.8,39.6,39.5,39.4,38.4,37.5,36.9,36.1,35.8,35.4,33.8,33.6,33.2,30.9,29.7,29.0,28.2,27.3,26.8,26.3,25.4,19.7,18.7,16.2,13.9.1H NMR峰分配(s、d、t、m等)和积分由于酰胺旋转异构体和烯烃异构体的存在而变得复杂(所有峰均列于表中)。13C NMR峰分配也同样复杂。
v.L1EC10示例性L1-CIDE,L1EC10可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003471
Figure BDA0003063017060003481
步骤1：2-乙酰基硫烷基-2-甲基-丙酸乙酯(JJ)。向含乙硫醇钾(5.0g,44mmol)的DMF(50mL)溶液中加入2-溴异丁酸乙酯(25.6g,131mmol)。将反应在室温搅拌2h，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(含0-10％EtOAc的石油醚)，得到化合物JJ(7.00g，84％)，为无色液体。
步骤2：2-巯基-2-甲基丙-1-醇(KK)。在0℃，向含氢化铝锂(2.0g，53mmol)的THF(20mL)溶液中滴加含2-乙酰基硫烷基-2-甲基-丙酸乙酯(JJ，2.0g，10.5mmol)的THF(10mL)溶液。将反应在75℃搅拌2h，然后通过在0℃添加EtOAc(20mL)和HCl(2.0M，50mL)将其淬灭。分离混合物，将水层用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，然后过滤。浓缩滤液，得到粗制化合物KK(0.90g)，为黄色油。该材料不经进一步纯化而直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.19–4.09(m,1H),3.43(s,2H),1.63(s,1H),1.35(s,6H).
步骤3：2-甲基-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙-1-醇(LL)。向含2-甲基-2-硫烷基-丙-1-醇(KK，0.90g，8.40mmol)的MeOH(30mL)和DCM(30mL)溶液中添加2,2'-二硫代双(5-硝基吡啶)(2.60g，8.50mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。然后加入MnO2(0.20g)，并将混合物再搅拌0.5h。将反应混合物过滤，并将滤液通过硅胶柱色谱法(含0-50％EtOAc的石油醚)纯化，得到化合物LL(1.10g，50％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.32(d,J＝4.0Hz,1H),8.36–7.34(m,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),4.70(s,1H),3.32(d,J＝8.0Hz,2H),1.37(s,6H).
步骤4：S-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-甲硫代磺酸盐(MM)。在室温，将甲烷亚磺酸钠(2.20g，21mmol)和碘(2.10g，8.40mmol)依次添加到含2-甲基-2-[(5-硝基-2-吡啶基)二硫烷基]丙-1-醇(LL,1.1g,4.2mmol)的DCM(20mL)溶液中。将反应混合物在50℃搅拌24h后，将其过滤，并将滤液通过硅胶柱色谱法(含0-50％EtOAc的石油醚)纯化，得到化合物MM(660mg,85％)，为黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.81(s,2H),3.40(s,3H),1.54(s,6H).
步骤5：3,3’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸(II)。向含3,3'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸乙酯(AA，其制备方法同上述化合物3的合成；2.30g,8.7mmol)的EtOH(40mL)和水(2.0mL)溶液中加入氢氧化钾(492mg，8.7mmol)。将反应在85℃搅拌1h，然后减压浓缩。将残余物用H2O(20mL)稀释，并通过添加饱和NaHCO3溶液(10mL)将pH调节至约9.0。用EtOAc(20mL×2)萃取混合物，并用HCl(2.0M)溶液将水相调节至pH＝3.0，并用iPrOH/CHCl3(1:3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，得到化合物NN(1.30g，75％)，为无色油。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.76–3.70(m,4H),3.62–3.58(m,4H),2.58–2.50(m,4H).
步骤6：3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)-(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(OO)。向含3,3'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二丙酸(NN，828mg，4.0mmol)的DMF(13mL)溶液中添加(iPr)2NEt(865mg,6.69mmol)和HATU(559mg,1.47mmol)。将该溶液在25℃搅拌10min，然后将4-(1-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯酚(K，其制备方法描述于：Breast Cancer Research andTreatment 2004,85,151；500mg,1.3mmol)加入进来。将反应在室温搅拌1h，然后直接通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(MeCN 26-46/0.1％NH4HCO3的水溶液)]纯化，得到化合物OO(290mg,38％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:562.1[M+H]+。
步骤7：S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(QQ)。在室温，将含三光气(0.050mL，0.30mmol)的DCM(2.0mL)溶液滴加含吡啶(0.040mL，0.50mmol)和2-甲基-2-甲基磺酰基硫烷基-丙-1-醇(MM，100mg，0.50mmol)的DCM(2.0mL)溶液中。将所得混合物在室温搅拌30min后，将含((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PP，其制备方法如下：J.Med.Chem.2018,61,599；220mg,0.40mmol)的DCM(10mL)和Et3N(0.11mL,0.80mmol)溶液加入进来。将反应混合物在室温搅拌2h，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化(含0-5％MeOH的DCM)，得到化合物QQ(230mg，76％)，为黄色油。LCMS(ESI)m/z:763.0[M+H]+。
步骤8：S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(RR)。在室温，将三氟乙酸(0.3mL，0.04mmol)滴加到含S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(QQ,30mg,0.04mmol)的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(6mL，0.04mmol)溶液中。将反应混合物在室温搅拌1h，然后减压浓缩。粗产物RR(28mg)无需进一步纯化即可用于后续步骤。LCMS(ESI)m/z:641.1[M+H]+。
步骤9：S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-(叔丁基)-16-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)-14-甲基-4,13-二氧代-7,10-二氧杂-3,14-二氮杂十六-1-酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(10)。在室温，将含3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(OO，28mg，0.050mmol)、(iPr)2NEt(0.03mL,0.16mmol)和HATU(19mg，0.05mmol)的无水DMF(1.0mL)溶液搅拌20min。向所得混合物中添加S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(RR，25mg，0.040mmol)，并将反应在室温搅拌另外2h。然后将混合物过滤，并通过制备型HPLC[Xtimate C18 150*25mm*5um(MeCN 55-85/0.225％甲酸的水溶液)]纯化滤液，得到化合物10(L1EC10)(4.5mg,9.6％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:641.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.42(s,0.3H),9.17(s,0.7H),8.98(s,1H),8.62(t,J＝6.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.42–7.38(m,4H),7.21–7.14(m,2H),7.13–7.04(m,2H),6.95–6.87(m,2H),6.75–6.69(m,1H),6.65–6.57(m,2H),6.41–6.37(m,1H),5.24(s,1H),4.49–4.37(m,3H),4.36–4.34(m,2H),4.33–4.31(m,1H),4.30(s,3H),4.28–4.21(m,2H),4.20–4.01(m,1H),3.78–3.75(m,1H),3.63–3.57(m,4H),3.54–3.35(m,5H),3.06(s,1H),2.98(s,0.5H),2.87(s,1H),2.80(s,0.5H),2.70–2.52(m,3H),2.43–2.25(m,5H),2.24–1.98(m,1H),1.52(s,3H),1.49(s,3H),1.25–1.22(m,2H),0.94(s,9H),0.85–0.81(m,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)171.2,170.5,170.4,169.7,163.1,156.9,156.1,156.0,155.9,155.2,153.5,151.5,147.7,142.1,134.0,139.8,139.2,137.8,137.7,135.9,135.6,133.9,133.6,131.4,131.1,130.1,129.7,129.4,128.7,127.9,127.8,127.4,129.6,114.9,114.3,114.0,113.2,77.3,72.7,69.6,69.4,66.9,66.5,65.5,58.2,57.0,55.7,53.4,53.0,48.2,46.5,41.7,36.4,36.3,35.5,34.7,33.3,33.20,33.1,32.6,28.9,28.5,26.2,25.0,15.9,13.4.HRMS(5-95AB_4MIN_neg,ESI),m/z 1184.4736[M+H]+.
vi.L1EC11示例性L1-CIDE,L1EC11的合成如下：
Figure BDA0003063017060003511
S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-(叔丁基)-14-甲基-4,13-二氧代-16-(4-(2-苯基-1-(4-(膦酰氧基)苯基)丁-1-烯-1-基)苯氧基)-7,10-二氧杂-3,14-二氮杂十六-1-酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(11，“L1EC11”)。在-40℃，将焦磷酰氯(42mg，0.17mmol)滴加到含S-(1-(((((3R,5S)-1-((S)-2-(叔丁基)-16-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)-14-甲基-4,13-二氧代-7,10-二氧杂-3,14-二氮杂十六-1-酰基)-5-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氧基)羰基)氧基)-2-甲基丙-2-基)甲硫代磺酸盐(10,80mg,0.070mmol)的THF(1mL)溶液中。将反应混合物在-40℃搅拌2h，然后用冰水(3mL)淬灭。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(5.0mL)和HCl(1.0M，2.0mL)处理，然后用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×2)洗涤，然后浓缩。将残余物通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150×25 5u(MeCN 25-55/0.01％NH4HCO3的水溶液)]纯化，得到化合物11(L1EC11)(25mg,30％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:632.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.72–8.67(m,1H),8.01–7.92(m,1H),7.49–7.36(m,4H),7.25–7.18(m,5H),7.17–7.09(m,5H),7.08–6.94(m,1H),6.93–6.90(m,1H),6.75–6.67(m,2H),6.65–6.59(m,2H),5.24(s,1H),4.49–4.31(m,6H),4.30–4.21(m,2H),4.20–4.01(m,2H),3.78–3.71(m,1H),3.60–3.57(m,3H),3.56–3.54(m,2H),3.45–3.35(m,6H),3.06(s,1H),2.98(s,0.5H),2.87(s,1H),2.80(s,0.5H),2.70–2.65(m,1H),2.52–2.49(m,1H),2.43(s,3H),2.41–2.28(m,5H),2.22–2.01(m,1H),1.51(s,3H),1.48(s,3H),0.94(s,9H),0.85–0.81(m,3H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.4,170.3,169.7,165.0,160.9,157.7,153.5,153.5,151.5,151.1,147.8,139.3,131.2,129.7,128.7,127.4,113.7,113.4,77.4,72.7,69.4,66.9,65.5,58.2,56.9,55.7,53.0,41.7,40.4,36.2,35.5,34.7,30.3,29.1,29.0,28.8,28.7,28.6,26.6,26.3,25.0,22.1,15.9,13.9.HRMS(50-100AB_4MIN_neg,ESI),m/z 1262.3861[M-H]-.
vii.L1EC12示例性L1-CIDE,L1EC12可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003531
步骤1：((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(SS)。在0℃，将氯甲酸烯丙酯(440mg，3.60mmol)滴加到含(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(CC，TFA盐，其制备方法如下：J.Med.Chem.2018,61,599；1.50g,3.40mmol)和NaHCO3(1.46g,17.4mmol)的水(4.0mL)和THF(4mL)溶液中。将该混合物加热至25℃，并在该温度保持16h。然后将反应用水(10mL)稀释，并将所得混合物用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，然后进行过滤。将滤液减压浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱法(含0-5％MeOH的DCM)纯化，得到化合物SS(1.40g,78％)，为灰色固体。LCMS(ESI)m/z:514.0[M+H]+。
步骤2：((2S)-1-((2S,4R)-4-((羟基氢磷酰基)氧基)-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(TT)。在-78℃，将含三氯化磷(373mg，2.72mmol)的THF(1.0mL)溶液和含Et3N(688mg,6.8mmol)的THF(2.0mL)溶液依次添加到基含((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(SS,700mg,1.36mmol)的THF(12mL)溶液中。将反应混合物在-78℃搅拌20min，然后使其升温至25℃。在该温度搅拌16h后，通过加入水(2.0mL)和NaHCO3水溶液(5.0mL)淬灭反应。将所得混合物在25℃搅拌10min，然后用HCl(1.0M)酸化至pH＝3.0，并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(含12％MeOH的DCM)，得到化合物TT(400mg,51％)，为无色固体。LCMS(ESI)m/z:579.1[M+H]+。
步骤3：((2S)-1-((2S,4R)-4-((羟基(1H-咪唑-1-基)磷酰基)氧基)-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(UU)。在25℃，将N-三甲基甲硅烷基咪唑(727mg，5.2mmol)添加到含((2S)-1-((2S,4R)-4-((羟基氢磷酰基)氧基)-2-((4-(4-甲基噻唑)-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(TT,750mg,1.3mmol)和Et3N(0.72mL,5.2mmol)的四氯化碳(4mL)和MeCN(4.0mL)溶液中。将反应混合物在该温度搅拌50min，然后用MeOH(0.10mL)处理，再搅拌10min。减压除去溶剂，并将残余物用5/1MTBE/EtOAc(3.0mL)洗涤。通过过滤除去所得沉淀物，并用MTBE(3.0mL)洗涤。浓缩滤液并洗涤，得到化合物UU(830mg,95％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:645.3[M+H]+。
步骤4：9H-芴-9-基甲基N-[2-[[[(3R,5S)-1-[(2S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]氧基-羟基-磷酰基]氧基-羟基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(WW)。在室温，将含((2S)-1-((2S,4R)-4-((羟基(1H-咪唑-1-基)磷酰基)氧基)-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙酯(UU,830mg,1.29mmol)和(9H-芴-9-基)甲基(2-(膦酰氧基)乙基)氨基甲酸酯(VV，其制备方法如下：J.Am.Chem.Soc.2016,138,1430；514mg,1.42mmol)的DMF(3.5mL)溶液中加入含氯化锌的甲苯溶液(1.0M,12.8mL,12.8mmol)。将反应在室温搅拌12h，然后直接通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(MeCN 20-40/10mM NH4HCO3的水溶液)]纯化，得到化合物WW(400mg,33％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:940.1[M+H]+。
步骤5：9H-芴-9-基甲基N-[2-[[[(3R,5S)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]氧基-羟基-磷酰基]氧基-羟基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(XX)。在25℃，向含9H-芴-9-基甲基N-[2-[[[(3R,5S)-1-[(2S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]氧基-羟基-磷酰基]-氧基-羟基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(WW,150mg,0.16mmol)和1,3--二甲基巴比妥酸(125mg，0.80mmol)的DCM(6.0mL)和MeOH(0.60mL)溶液中加入四(三苯基膦)钯(37mg，0.030mmol)。将反应混合物在该温度搅拌2h，然后通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(MeCN 15-45/10mMNH4HCO3的水溶液)]直接纯化，得到化合物XX(78mg,57％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:856.1[M+H]+。
步骤6：9H-芴-9-基甲基N-[2-[羟基-[羟基-[(3R,5S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-(4-羟苯基)-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]氧基-磷酰基]氧基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(YY)。将含3-(2-(3-((2-(4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基丁-1-烯-1-基)苯氧基)乙基)(甲基)氨基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸(OO，其制备方法同上述化合物10的合成；210mg,0.37mmol)，(iPr)2NEt(0.12mL,0.75mmol)和HATU(142mg，0.37mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液在25℃搅拌20min。然后加入9H-芴-9-基甲基N-[2-[[[(3R,5S)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]-吡咯烷-3-基]氧基-羟基-磷酰基]氧基-羟基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(XX,80mg,0.09mmol)，将所得混合物在25℃搅拌2h。随后将反应混合物通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(含MeCN 32-62/10mM NH4HCO3的水溶液)]直接纯化，得到化合物TT(60mg,45％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:1400.2[M+H]+。
步骤7：[2-[6-(2,5-二氧代吡咯-1-基)己酰基氨基]乙氧基-羟基-磷酰基][(3R,5S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-(4-羟苯基)-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]磷酸氢盐(12)。A部分。在25℃，将哌啶(14mg，0.16mmol)滴加到含9H-芴-9-基甲基N-[2-[羟基-[羟基-[(3R,5S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-(4-羟基-苯基)-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基-氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]氧基-磷酰基]氧基-磷酰基]氧基乙基]氨基甲酸酯(YY，46mg，0.030mmol)的DMF(0.50mL)溶液中。将反应混合物在该温度下搅拌1h，然后减压浓缩。通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(含MeCN 25-55/10mM NH4HCO3的水溶液)]纯化所得残余物，得到[2-氨基乙氧基(羟基)磷酰基][(3R,5S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-(4-羟苯基)-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]磷酸氢盐(方案中未显示；30mg,78％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:1177.4[M+H]+。
B部分。在25℃，向含(iPr)2NEt(6.6mg,0.05mmol)和[2-氨基乙氧基(羟基)磷酰基][(3R,5S)-1-[(2S)-2-[3-[2-[3-[2-[4-[1-(4-羟苯基)-2-苯基-丁-1-烯基]苯氧基]乙基-甲基-氨基]-3-氧代-丙氧基]乙氧基]丙酰基氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-5-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-3-基]磷酸氢盐(如上面A部分所制备；30mg，0.030mmol)的DMF(1.0mL)溶液中添加6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(MC-OSu，Aldrich；19.6mg，0.06mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌8h，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC[Waters Xbridge 150*25 5u(含MeCN 25-55％/10mM NH4HCO3的水溶液)]纯化，得到化合物12(“L1EC12”)(9.5mg,26％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:641.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.85(s,1H),8.72(s,1H),7.96(t,J＝8.0Hz,1H),7.46–7.36(m,6H),7.18–7.14(m,2H),7.13–7.04(m,5H),6.98(s,2H),6.95–6.92(m,2H),6.76–6.68(m,1H),6.67–6.61(m,1H),6.59–6.55(m,2H),6.42–6.40(m,1H),4.78–4.71(s,1H),4.57–4.52(m,1H),4.51–4.41(m,2H),4.28–4.21(m,1H),4.20–4.01(m,1H),3.78–3.75(m,1H),3.63–3.57(m,5H),3.54–3.49(m,8H),3.48–3.41(m,6H),3.38–3.35(m,2H),3.07(s,1H),2.98(s,1H),2.80(s,1H),2.75(s,1H),2.65–2.62(m,1H),2.44(s,3H),2.05–1.98(m,2H),1.95–1.85(m,1H),1.54–1.43(m,6H),1.26–1.12(m,3H),0.92(s,9H),0.85–0.81(m,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.7,171.1,159.3,158.4,155.3,151.5,147.7,142.2,139.4,134.5,131.4,131.2,130.2,130.1,129.7,129.4,128.7,127.8,127.4,115.0,114.3,113.3,69.6,69.4,67.0,66.6,63.5,62.5,59.9,57.6,57.6,56.4,55.1,41.7,36.5,35.7,35.5,34.9,33.1,32.6,30.9,29.1,28.7,28.6,27.8,26.3,25.9,24.8,15.9,15.9,13.4.HRMS(50-100AB_4MIN_neg,ESI),m/z 1385.4942[M-H+NH3]-.
示例性BRD4靶向CIDE和BRD4靶向L1-CIDE的合成
viii.L1BC1示例性L1-CIDE,L1BC1可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003571
将化合物1(1.000g，1.66mmol)溶于HBr/HOAc(10mL)中，并将混合物在25℃搅拌2h。将反应混合物放入冰水(20mL)中。将沉淀物过滤并用水(10mL x 2)、MTBE(20mL)洗涤，并在真空下干燥24h，以得到粗产物化合物2(1.100g,99.6％)，为灰色固体，将其直接用于下一步中。
Figure BDA0003063017060003581
将含化合物3(500.0mg，0.9400mmol)和化合物2(1.064g，1.6mmol)的无水DMF(8.0mL)溶液在80℃搅拌2h。过滤反应物，并通过制备型HPLC(乙腈34-64/0.225％FA的水溶液)纯化所得残余物，得到化合物4(150mg,14％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.738min,m/z＝1114.6[M]+.
Figure BDA0003063017060003582
在25℃，将化合物4(30.0mg，0.0300mmol)溶于含TFA的HFIP(5％,1.5mL)溶液中，并将混合物在25℃搅拌1h。浓缩混合物，得到粗产物化合物5(30mg，98.8％)，为灰色固体，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003583
在25℃，将含化合物6(9.8mg，0.0300mmol)，DIEA(10.3mg，0.0800mmol)和HATU(12.12mg，0.0300mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液搅拌20min，然后加入化合物5(30.0mg,0.0300mmol)。在25℃，将所得混合物搅拌2h。浓缩反应物，并将所得残余物用EtOAc(2.0mLx 2)洗涤，得到化合物7(34mg，98％)，为灰色固体，将其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.848min,m/z＝1305.3[M]+.
Figure BDA0003063017060003584
在25℃，将化合物7(34.0mg，0.0300mmol)溶于含TFA的HFIP(5％,1.5mL)溶液中，并将混合物在25℃搅拌1h。浓缩混合物，将残余物用EtOAc(1.0mL×2)洗涤，得到粗产物化合物8(34mg,98.9％)，为灰色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003591
在25℃，将含化合物9(15.49mg，0.0300mmol)、HATU(10.79mg，0.0300mmol)和DIEA(13.33mg，0.1000mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌20min，然后加入化合物8(34.0mg,0.0300mmol)。在25℃，将所得混合物搅拌2h。浓缩混合物，将残余物用EtOAc(2.0mL x 2)洗涤，得到化合物10(43mg,98.8％)，为浅黄色固体，将其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.828min,m/z＝843.4[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003592
在25℃，向含化合物10(43.0mg，0.0300mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入哌啶(10.85mg,0.1300mmol)。将混合物在25℃搅拌30min。浓缩混合物，将残余物用EtOAc(1.0mLx 2)洗涤，得到化合物11(37mg,99.1％)，为灰色固体，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003593
在25℃，向含化合物11(“BC1”),(37.0mg,0.0300mmol)的DMF(1.0mL)溶液中添加化合物12(11.68mg,0.0400mmol)。将混合物在25℃搅拌12h。将混合物过滤并通过制备型HPLC(乙腈22-52％/0.225％FA的水溶液)纯化，得到L1BC1(3.95mg,7.5％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.757min,m/z＝828.8[M/2+1]+.
ix.L1BC2示例性L1-CIDE,L1BC2可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003601
在25℃，将含化合物1(200.0mg，0.2600mmol)的TFA(0.30mL)和HFIP(6.0mL)的混合物溶液搅拌1h。将溶液浓缩，并将残余物用DMF(5.0mL)稀释，并再次浓缩，得到化合物2(200mg,98％)，为无色油，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003602
向含BocNH_PEG3-酸(80.0mg,0.2600mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(134.56mg,1.04mmol)和HATU(118.77mg,0.3100mmol)。在25℃，将溶液搅拌15min，然后添加化合物2(200.0mg,0.260mmol)。在25℃，将反应溶液搅拌另外1h。将溶液浓缩，并将残余物通过制备型TLC(含10％MeOH的DCM，Rf＝0.5)纯化，得到化合物3(150mg，59％产率)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.883min,m/z＝975.6[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003611
在25℃，将含化合物3(150.0mg，0.1600mmol)的TFA(0.20mL)和HFIP(4.0mL)的混合物溶液搅拌1h。将溶液浓缩，并将残余物用DMF(5.0mL)稀释，并再次浓缩，得到化合物4(150mg 98.6％)，为无色油，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003612
向含砜BRD4酸(75.0mg，0.1500mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(77.47mg，0.600mmol)和HATU(68.38mg,0.1800mmol)。在25℃，将溶液搅拌10min，然后添加化合物4(144.92mg，0.1500mmol)。在25℃，将所得反应溶液搅拌1h。将溶液浓缩，并将残余物通过制备型TLC(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)纯化，得到化合物5(198mg,97.9％)，为淡黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.847min,m/z＝1358.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003613
向含化合物5(160.0mg，0.1200mmol)的DCM(4.0mL)溶液中加入TMSI(239.72mg，1.2mmol)。在25℃，将反应混合物搅拌1h。加入MeOH(20mL)，并将溶液在25℃搅拌另外10min。将溶液浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈0-40/0.1％HCl的水溶液)，得到BC2(42mg,27％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.773min,m/z＝1201.6[M+1]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(s,1H),8.53(s,1H),7.94(s,1H),7.88(s,1H),7.69(s,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.36(s,1H),7.23-7.21(m,2H),7.05-7.00(m,2H),4.88-4.82(br,2H),4.69(s,1H),4.60-4.49(m,5H),4.38-4.34(m,1H),4.02-3.98(m,2H),3.88-3.79(m,2H),3.71-3.63(m,13H),3.51-3.44(m,4H),3.24-3.20(m,2H),2.99(s,3H),2.46(s,3H),2.13-2.07(m,6H),1.02(s,9H).
Figure BDA0003063017060003621
将DIEA(10.36mg，0.0800mmol)加入含BC2(25.0mg，0.0200mmol)和MC_SQ_Cit_PAB-PNP的DMF(2.0mL)溶液中。在25℃，将反应溶液搅拌2h。通过制备型HPLC(Xtimate C18150*25mm*5um，乙腈35-65/0.225％FA的水溶液)纯化溶液，得到L1BC2(16.89mg,45％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.803min,m/z＝900.4[M/2+H]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(s,1H),7.93(s,1H),7.87(s,1H),7.86(s,1H),7.69-7.68(m,3H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.35(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(s,1H),7.21(s,1H),7.01-6.94(m,1H),6.75(s,2H),5.06(brs,1H),4.89-4.67(m,12H),4.65-4.61(m,1H),4.01(d,J＝4.8Hz,2H),3.71-3.61(m,15H),3.49-3.42(m,5H),3.31-3.22(m,3H),3.25-3.21(m,4H),3.16-3.13(m,2H),2.97(s,3H),2.56-2.51(m,2H),2.45(s,3H),1.94-1.92(m,3H),1.78-1.74(m,2H),1.55-1.51(m,6H),1.28-1.26(m,4H),1.00(s,9H).
x.L1BC3示例性L1-CIDE,L1BC3可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003631
在25℃，向含1(2.00g，7.68mmol)的DCM(20mL)溶液中添加MeSO2Na(3.92g,38.41mmol)和I2(3.90g,15.37mmol)。将反应混合物在50℃搅拌24h后，将其过滤并浓缩滤液。通过柱色谱法纯化(含0-33％EtOAc的石油醚，Rf＝0.3)纯化，得到2(400mg,28.3％)，为黄色油。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.81(s,2H),3.40(s,3H),1.54(s,6H).
Figure BDA0003063017060003632
向含三光气(322.06mg，1.09mmol)的DCM(2.0mL)溶液中添加含吡啶(171.70mg，2.17mmol)和化合物2(400.00mg，2.17mmol)的DCM(2.0mL)溶液。在25℃搅拌反应30min后，将其浓缩并重新溶于DCM(20mL)中。加入Et3N(438.83mg,4.34mmol)和化合物3(1.73g，3.25mmol)的溶液，并将反应在25℃搅拌2h。将混合物真空浓缩，并通过柱色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM，Rf＝0.5)，得到化合物4(100.00mg,6.2％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.962min,m/z＝741.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003641
向含化合物4(100.00mg,0.13mmol)的HFIP(6.00mL)溶液中加入TFA(0.30mL)。在25℃，将反应溶液搅拌1h后，将其真空浓缩，得到化合物5(TFA盐，101.00mg,99.1％)，为无色油，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003642
向含化合物6(44.36mg，0.15mmol)和HATU(67.15mg，0.18mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(86.46mg,0.67mmol)。在25℃，将混合物搅拌10min后，加入化合物5(101.00mg，0.13mmol)。在25℃，将混合物搅拌30min。将混合物真空浓缩，并通过柱色谱法纯化(溶剂梯度：含0-10％MeOH的DCM Rf＝0.6)，然后通过制备型TLC(含10％MeOH的DCM，Rf＝0.6)得到化合物7(100.00mg,74.4％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝1.066min,m/z＝924.5[M+1]+；
Figure BDA0003063017060003643
向含化合物7(44.36mg,0.05mmol)的HFIP(6.00mL)溶液中加入TFA(0.30mL)。在25℃，将反应溶液搅拌1h。将该溶液真空浓缩，得到化合物8(TFA盐，45.00mg,94％)，为无色油。
Figure BDA0003063017060003651
向含化合物9(20.00mg，0.04mmol)和HATU(19.75mg，0.05mmol)的DMF(15mL)溶液中加入DIEA(25.82mg，0.20mmol)。在25℃，将混合物搅拌10min后，加入化合物8(45mg,0.05mmol)。在25℃，将混合物搅拌30min。将混合物通过制备型HPLC纯化(乙腈50-80/0.225％FA的水溶液)，得到L1BC3(35.00mg,67％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.854min,m/z＝654.1[M/2+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(brs,2H),8.98(s,1H),8.61-8.58(m,1H),8.40-8.36(m,1H),8.06(s,1H),7.89-7.86(m,2H),7.75(s,1H),7.63-7.60(m,2H),7.39-7.33(m,4H),7.26-7.23(m,2H),5.24(brs,2H),4.48-4.39(m,3H),4.37-4.29(m,4H),4.28-4.25(m,1H),4.24-4.08(m,4H),3.84-3.81(m,2H),3.62(s,2H),3.53(s,3H),3.14(brs,3H),2.90(s,3H),2.44(s,2H),1.60-1.48(m,10H),1.21(brs,12H),0.95(s,9H).
xi.L1BC4示例性L1-CIDE,L1BC4可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003661
向含三光气(88.57mg，0.3000mmol)的DCM(2.0mL)溶液中添加吡啶溶液(47.22mg，0.600mmol)，然后加入含化合物2(110.0mg，0.600mmol)的DCM(2.0mL)溶液。将反应在25℃搅拌30min。将反应混合物浓缩至干燥，得到粗产物(140mg)，为白色固体。向该粗产物的DCM(8.0mL)溶液中加入Et3N(76.27mg,0.7500mmol)和化合物1(200.0mg,0.380mmol)的DCM(2.0mL)溶液，并在25℃搅拌反应2h。将混合物浓缩，并通过柱色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM Rf＝0.5)，得到化合物3(110mg,36％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.955min,m/z＝741.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003671
向含化合物3(55.0mg,0.0700mmol)的HFIP(6.0mL)溶液中加入TFA(0.30mL)。在25℃，将反应溶液搅拌1h。浓缩溶液，得到化合物4TFA盐(56.0mg)，为黄色油，将其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.697min,m/z＝641.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003672
向含化合物5(29.64mg,0.1000mmol)和HATU(42.31mg，0.1100mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(47.94mg，0.370mmol)。在25℃，将混合物搅拌10min。向上述反应混合物中加入化合物4的TFA盐(56.0mg，0.0700mmol)。在25℃，将混合物搅拌1h。将混合物浓缩，并将所得残余物通过制备型TLC纯化(含5％MeOH的DCM，Rf＝0.5)，得到化合物6(65mg,82％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.850min,m/z＝952.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003673
向含化合物6(65.0mg,0.0600mmol)的HFIP(6.0mL)溶液中加入TFA(0.30mL)。在25℃，将反应溶液搅拌1h。浓缩溶液得到化合物7TFA盐(57mg,99.7％)，为黄色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.720min,m/z＝852.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003681
向含化合物8(20.0mg，0.0400mmol)和HATU(19.75mg，0.0500mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(22.46mg，0.1700mmol)。在25℃，将混合物搅拌10min。向上述混合物中加入化合物7TFA盐(32.8mg，0.030mmol)，并将该混合物在25℃搅拌1h。将混合物浓缩，并将所得残余物通过制备型HPLC纯化(41-71水(0.225％FA)-ACN)，得到所需产物L1BC4(21.79mg,42％产率)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.819min,m/z＝1313.6[M+1]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.91(s,1H),8.97(s,1H),8.65(brs,1H),8.48(brs,1H),8.06(s,1H),7.92(s,1H),7.76(s,1H),7.62-7.57(m,1H),7.45-7.39(m,5H),7.28(brs,2H),5.95(brs,1H),5.26-5.17(m,2H),4.62-4.26(m,7H),4.07-3.86(m,4H),3.62(brs,5H),3.53(brs,10H),2.90(s,3H),2.43-2.33(m,7H),2.15-2.11(m,1H),1.49(d,J＝6.8Hz,6H),1.23(brs,1H),0.91(s,9H).
xii.L1BC5示例性L1-CIDE,L1BC5可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003682
在20℃，将含化合物1(100.0mg，0.1300mmol)的TFA(0.2mL)和HFIP(4.0mL)混合物溶液搅拌1h。浓缩溶液，将残余物用DMF(8mL)稀释。再次真空浓缩，得到化合物2(100mg,98.2％)，为粗制无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.705min,m/z＝663.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003691
向含2-[2-[2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酸(40.71mg,0.1300mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(68.48mg,0.530mmol)和HATU(60.45mg,0.1600mmol)。在25℃将溶液搅拌10min，然后添加化合物2(100.0mg,0.1300mmol)。在25℃将所得反应溶液再搅拌1h。将溶液浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM，Rf＝0.5)，得到化合物3(110mg,77％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.942min,m/z＝952.4[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003692
在25℃，将含化合物3(50.0mg,0.0500mmol)的TFA(0.20mL)和HFIP(4.0mL)混合物溶液搅拌1h。将溶液浓缩，并将残余物用DMF(6.0mL)稀释。再次浓缩以除去剩余的TFA，得到化合物4(50mg,98.5％)，为粗无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.740min,m/z＝830.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003693
向含砜BRD4-酸(20.0mg，0.0400mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入DIEA(20.66mg,0.1600mmol)和HATU(18.23mg,0.0500mmol)。在25℃将溶液搅拌10min，然后加入化合物4(45.27mg,0.0500mmol)。将反应溶液在25℃搅拌另外1h后，将其浓缩并通过制备型HPLC纯化(Xtimate C18 150*25mm*5um，乙腈36-66/0.225％FA的水溶液)纯化，得到L1BC5(15mg,29％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.839min,m/z＝1334.2[M+23]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.87(s,1H),7.94(s,1H),7.88(s,1H),7.69(s,2H),7.62-7.58(m,1H),7.43-7.35(m,3H),7.25-7.22(m,2H),5.29(s,1H),4.62-4.51(m,4H),4.34-4.22(m,4H),4.04-3.92(m,4H),3.71-3.64(m,11H),3.51-3.49(m,2H),3.43-3.38(m,3H),2.98(s,3H),2.47-2.45(m,4H),2.29-2.26(m,2H),1.46-1.43(m,2H),1.38-1.25(m,4H),1.03-1.00(m,9H).
xiii.L1BC6示例性L1-CIDE,L1BC6可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003701
向含化合物1a(5.000g,16.06mmol)的DCM(50mL)和MeOH(10mL)的搅拌溶液中加入EEDQ(7.943g，32.12mmol)。搅拌10min后，在20℃在N2下加入化合物2a(2.967g,24.1mmol)。将混合物在20℃搅拌12h后，将其浓缩，并用甲基叔丁基醚(20mL x 3)和DCM(20mL)洗涤，得到化合物3a(5.000g,75％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.876min,m/z＝439.2[M+23]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),7.85(d,J＝7.6Hz,2H),7.73-7.62(m,3H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.38-7.19(m,6H),5.08(t,J＝5.6Hz,1H),4.39(d,J＝5.6Hz,2H),4.29-4.21(m,2H),4.18-4.15(m,2H),1.28-1.23(m,3H).
Figure BDA0003063017060003711
在25℃，向含哌啶(3.066g，36.02mmol)的DMF(50mL)溶液中添加化合物3a(3.000g,7.2mmol)。将反应混合物在25℃搅拌1h，浓缩，得到粗产物，将其用甲基叔丁基醚(10mL×3)洗涤，得到化合物4a(1.390g,99.3％)，为白色固体，其直接用于下一步骤。
Figure BDA0003063017060003712
在18℃，向搅拌的化合物4b(20.00g,99.89mmol)的EtOH(100mL)溶液中加入KOH(5.6g,99.89mmol)/水(10mL)。将反应混合物在80℃搅拌4h。将混合物浓缩至干燥，并在EtOAc(100mL)和H2O(130mL)之间分配。将水相用HCl(1.0M)酸化至pH＝3.0，并用EtOAc(120mL×2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并浓缩，得到化合物5a(13.5g,78.5％)，为无色油。粗制化合物直接用于下一步骤。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.560min,m/z＝172.8[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003713
向含化合物5a(1.478,8.59mmol)的DMF(20mL)混合物中加入HATU(4.081g，10.73mmol)和DIEA(4.624g，35.78mmol)。将混合物搅拌30min，然后在25℃添加化合物4a(1.390g,7.16mmol)。将混合物搅拌2h。浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM，Rf＝0.6)，得到化合物5(1.900g,70.7％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.766min,m/z＝371.1[M+23]+；
Figure BDA0003063017060003721
在25℃，将化合物5a(30.0mg,0.1000mmol)溶于含4M HCl的二噁烷(2.0mL)中，将混合物在25℃搅拌1h。浓缩混合物，得到粗产物化合物6a(23.66mg,100％)，为灰色固体，将其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003722
在25℃，将含化合物7a(25.0mg，0.0500mmol)、DIEA(19.37mg，0.1500mmol)和HATU(22.79mg，0.0600mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌50min。加入化合物6a(17.82mg，0.0700mmol)，并将反应混合物在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化(含12％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到产物化合物8(34mg,99.5％)，为灰色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.817min,m/z＝684.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003723
将NaH(60％,240.95mg,6.02mmol)悬浮在THF(4.0mL)中，并在25℃滴加含化合物1(310.0mg,0.600mmol)的THF(3.0mL)，并将反应混合物在25℃搅拌2h。然后加入含化合物2(125.55mg,0.900mmol)的THF(3.0mL)。将所得反应混合物在25℃搅拌12h后，将其用水(10mL)淬灭，并用EtOAc(10mL)萃取。分离水层，并用HCl(2.0M)酸化至pH＝3.0，并用含10％MeOH的DCM(10mL×2)溶液萃取。将DCM层干燥并浓缩，以得到粗产物化合物3(320mg,92.8％)，为棕色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003731
向含化合物3(100.0mg，0.1700mmol)和DPPA(96.11mg，0.350mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入Et3N(70.68mg,0.7000mmol)。在25℃将所得混合物搅拌1h。将混合物用水(5.0mL)稀释，用甲苯(3.0mL x 2)萃取。将甲苯层用Na2SO4和4A分子筛干燥、过滤，滤液直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003732
向上述含化合物4(100.0mg,0.1700mmol)的甲苯(6.0mL)和DMF(1.0mL)溶液中加入化合物5(58.29mg,0.1700mmol)和二月桂酸二丁锡(10.57mg，0.0200mmol)，并将混合物在80℃搅拌1h。将反应混合物过滤并将滤液浓缩，并通过制备型TLC纯化(含8％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物6(100mg,65％)，为浅黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.769min,m/z＝918.4[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003733
向含化合物6(80.0mg,0.0900mmol)的DCM(3.0mL)和MeOH(0.30mL)溶液中添加Pd(Ph3P)4(10.07mg,0.0100mmol)和吡咯烷(30.99mg，0.440mmol)，将混合物在25℃在N2下搅拌1h。将反应混合物浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化(含12％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物7(46mg,63％)，为棕色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.671min,m/z＝834.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003734
在25℃，将含化合物8(34.0mg,0.0500mmol)、DIEA(19.28mg，0.150mmol)和HATU(28.36mg，0.0700mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌50min，然后加入化合物7(45.62mg,0.0500mmol)。在25℃将所得混合物搅拌2h。将反应混合物浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到产物化合物9(60mg,81％)，为灰色固体。LCMS(5-95，AB，1.5min):RT＝0.814min，m/z＝750.7[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003741
将化合物9(60.0mg,0.0400mmol)溶于THF(2.0mL)和MeOH(1.0mL)中，并在25℃加入含LiOH H2O(8.39mg,0.200mmol)的水溶液(1.0mL)。将反应混合物在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈27-47/水)，得到化合物10(11mg,19％)，为白色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.700min,m/z＝1097.5[M(片段)+1]+.
Figure BDA0003063017060003742
在25℃，将含化合物10(10.0mg，0.010mmol)、DIEA(2.63mg，0.020mmol)和HATU(3.88mg，0.0100mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌20min，然后加入化合物11(1.86mg,0.0100mmol)。在25℃将所得混合物搅拌2h。过滤反应混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈45-65/水)，得到产物L1BC6(2.5mg,23％)，为白色固体。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.950min,m/z＝818.5[M/2+H]+.
xiv.L1BC8示例性L1-CIDE,L1BC8可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003751
在0℃向含1(25.0g，115.18mmol)的DCM(200mL)溶液中滴加BBr3(21.45mL,230.35mmol)，并将混合物在25℃搅拌16h。用MeOH(50mL)淬灭反应，并真空浓缩，得到2(21.7g,99.7％)，为红色油，其无需进一步纯化即可直接使用。
Figure BDA0003063017060003752
向含2(6.0g,31.74mmol)的DMF(150mL)溶液中加入K2CO3(8.77g,63.49mmol)和BnBr(7.55mL,63.49mmol)。在25℃将混合物搅拌16h。过滤混合物，浓缩有机层，并通过柱色谱法纯化(含0-10％EtOAc的石油醚)，得到3(11.0g,94％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.35(m,10H),6.76(s,4H),6.54(s,1H),5.00(s,4H).
Figure BDA0003063017060003761
向含3(11.0g，29.79mmol)的1,4-二噁烷(100mL)和水(20mL)溶液中添加Pd(dppf)Cl2(2.18g,2.98mmol)、Cs2CO3(19.41g,59.58mmol)、乙烯基硼酸频哪醇酯(6.88g,44.69mmol)，将混合物在100℃在N2下搅拌16h。将溶液过滤并用EtOAc(40mL×3)萃取，并用水(50mL)洗涤。将有机物经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并通过柱色谱法纯化(含0-10％EtOAc的石油醚)，得到4(6.6g,70％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44-7.29(m,10H),6.67(s,2H),6.55-6.54(m,1H),5.70(d,J＝17.2Hz,1H),5.24(d,J＝10.8Hz,1H),5.04(s,4H).
Figure BDA0003063017060003762
于0℃在N2下，向含4(6.60g,20.86mmol)的THF(20mL)溶液中添加BH3/THF(31.29mL,31.29mmol)，然后将混合物在25℃搅拌3h。然后在0℃加入NaOH水溶液(3.0M,10.43mL,31.29mmol)，随后加入H2O2(31.39mL,312.9mmol)。在25℃将所得混合物搅拌1h。用Na2SO3溶液淬灭反应，并用EtOAc(30mL×3)和水(30mL)萃取。将有机物经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并用柱色谱法纯化(含0-50％EtOAc的石油醚)，得到5(4.8g,69％)，为白色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(s,1H),7.43-7.32(m,10H),6.52-6.49(m,1H),6.48(s,2H),5.02(s,4H),3.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.80(d,J＝7.6Hz,2H).
Figure BDA0003063017060003763
向含5(4.800g,14.35mmol)的甲苯(100mL)混合物中添加含NaOH(22.965g，574.15mmol)的水(25mL)溶液、nBu4HSO4(487.35mg，1.44mmol)和化合物6(5.599g，28.71mmol)。在25℃将混合物搅拌16h。分离混合物，将水层用EtOAc(30mL×2)萃取，用水(50mL)和盐水(20mL×2)洗涤。浓缩合并的有机层，并将所得残余物通过柱色谱法纯化(含0-20％EtOAc的石油醚)，得到7(4.00g,62.1％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝1.186min,m/z＝471[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003771
向含7(4.000g,8.92mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入10％碳载钯(104.39mg，0.980mmol)。将混合物在25℃H2(15psi)下搅拌16h。将该溶液过滤，浓缩并通过柱色谱法纯化(含0-50％EtOAc的石油醚)，得到8(2.100g,88％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.855min,m/z＝314k[M+46]+.
Figure BDA0003063017060003772
向含化合物9(2.222mg，8.61mmol)和化合物8(2.100g，7.83mmol)的乙腈(50mL)溶液中添加K2CO3(1.73g,12.52mmol)和KI(129.92mg,0.7800mmol)。将混合物在70℃搅拌12h。将混合物浓缩，用EtOAc(40mL)稀释，用水(20mL x 2)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈20–80％/0.225％FA的水溶液)，得到10(1.100g,32％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.978min,m/z＝468.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003773
向含化合物10(330.0mg,0.740mmol)的DCM(10mL)溶液中加入吡啶(0.30mL,3.7mmol)和Tf2O(0.25mL,1.48mmol)。将混合物在20℃搅拌1h。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，并分配。将有机物用柠檬酸(10mL×3)洗涤，浓缩，得到粗产物化合物11(427mg,99.8％)，为黄色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.985min,m/z＝600.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003774
在25℃，向含化合物11(427.0mg,0.7400mmol)的1,4-二噁烷(20mL)溶液中加入氨基甲酸叔丁酯(129.91mg，1.11mmol)、Cs2CO3(481.8mg,1.48mmol)、XPhos(35.24mg,0.0700mmol)和Pd(OAc)2(8.3mg,0.0400mmol)。将反应混合物在110℃在N2下搅拌16h。浓缩混合物，并通过柱色谱法纯化(含0-40％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物12(220mg,55％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.948min,m/z＝567.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003781
向化合物12(220.0mg,0.400mmol)的DCM(3.0mL)溶液中加入TFA(2.0mL)。将混合物在25℃搅拌1h。浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化(乙腈19-49％/0.225％FA的水溶液)，得到产物化合物13(110mg,54％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.640min,m/z＝389.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003782
向含VHL配体(256.07mg，0.590mmol)、化合物13(110.0mg,0.2800mmol)和HATU(118.45mg，0.3100mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加DIEA(0.23mL，1.42mmol)。将混合物在25℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物15(120mg,53％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.855min,m/z＝823.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003783
在25℃，将TMSI(99.93mg，0.50mmol)添加至含化合物14(80.00mg,0.10mmol)的DCM(5.0mL)溶液中，并将所得混合物在25℃搅拌1h。除去溶剂，所得残余物用EtOAc(10mL x3)洗涤，直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.661min,m/z＝667.5[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003791
向含BRD4酸(50.00mg，0.10mmol)和HATU(41.79mg，0.11mmol)的DMF(8.0mL)溶液中加入DIEA(64.56mg，0.50mmol)。将混合物在25℃搅拌10min。向上述溶液中加入化合物15(90.00mg,0.10mmol)的溶液。将混合物在25℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物16(80mg,70％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.750min,m/z＝575.8[M/2+H]+.
Figure BDA0003063017060003792
向含化合物15(50.00mg,0.040mmol)和MC_SQ_Cit_PAB-PNP(96.03mg，0.13mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HOBt(11.75mg，0.09mmol)和吡啶(34.41mg，0.44mmol)。将混合物在38℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈32-62/0.225％FA的水溶液)，得到L1BC8(15.00mg,19％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.706min,m/z＝873.8[M/2+H]+.
xv.L1BC9示例性L1-CIDE,L1BC9可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003801
在-78℃，向含化合物1(450.0mg,0.870mmol)的THF(5.0mL)溶液中加入含PCl3(500.0mg,3.64mmol)的THF(2.0mL)和含Et3N(0.73mL,5.25mmol)的THF(2.0mL)。将反应混合物在-78℃搅拌20min，然后温热至25℃。将混合物在25℃搅拌12h后，用水(2.0mL)和NaHCO3水溶液(5.0mL)淬灭，然后将混合物在25℃搅拌10min。将其用HCl(1.0M)酸化至pH＝3.0，将所得混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含12％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物2(450mg,89％)，为无色晶体。LCMS(0-60,CD,3.0min):RT＝1.421min,m/z＝579.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003802
在25℃，向含化合物2(450.0mg，0.7800mmol)和Et3N(0.43mL,3.11mmol)的CCl4(4.0mL)和乙腈(4.0mL)溶液中加入N-TMS-咪唑(436.33mg,3.11mmol)。将反应混合物在25℃搅拌40min。将混合物用MeOH(0.1mL)处理，并在25℃搅拌10min。除去溶剂，将残余物用MTBE/EtOAc＝5/1(3mL)洗涤，过滤沉淀物，并用MTBE(3mL)洗涤，得到产物化合物3(450mg,90％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.725min,m/z＝645.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003811
在25℃，向含化合物3(450.0mg，0.700mmol)和化合物4(355.03mg，0.980mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加ZnCl2溶液(1.0mol/L在甲苯中,6.98mL,6.98mmol)。将反应混合物在25℃搅拌12h。反应混合物用HCl(1.0M)淬灭，浓缩，通过制备型HPLC纯化(乙腈22-42/10mM NH4HCO3水溶液)，得到产物化合物5(250mg,38％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝1.751min,m/z＝940.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003812
在25℃，向含化合物5(100.0mg，0.1100mmol)和1,3-二甲基巴比妥酸(83.06mg，0.530mmol)的DCM(1.0mL)和MeOH(0.20mL)溶液中添加Pd(Ph3P)4(24.59mg,0.0200mmol)。将反应混合物在N2下在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈18-48/10mM NH4HCO3的水溶液)，得到化合物6(55mg,60.4％)，为白色固体。LCMS(0-60,CD,3.0min):RT＝1.450min,m/z＝856.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003821
在25℃，将含化合物7(119.84mg，0.1800mmol)、DIEA(7.55mg，0.0600mmol)和HATU(22.21mg，0.0600mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液搅拌20min，然后加入化合物6(50.0mg，0.0600mmol)。将所得混合物在25℃搅拌2h。过滤反应，并将所得残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈27-57/0.05％NH4OH的水溶液)，得到化合物8(40mg,45％)，为白色固体。LCMS(0-60,CD,3.0min):RT＝1.968min,m/z＝761.3[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003822
在25℃，向含化合物8(40.0mg，0.0300mmol)的DMF(1.0mL)溶液中添加哌啶(11.19mg，0.1300mmol)。将反应混合物在25℃搅拌1h。将混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(乙腈23-53％/10mM NH4HCO3的水溶液)，得到化合物9(20mg,59％)，为白色固体。LCMS(0-60,CD,3.0min):RT＝1.729min,m/z＝650.3[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003823
在25℃，向含化合物10(5.93mg,0.0200mmol)和DIEA(1.99mg，0.0200mmol)的DMF(1.0mL)溶液中添加化合物9(10.0mg，0.0100mmol)。将混合物在25℃搅拌6h。过滤混合物，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈25-55％/0.1％TFA的水溶液)，得到L1BC9(2.7mg,24％)，为白色固体。LCMS(0-60,CD,3.0min):RT＝1.635min,m/z＝746.8[M/2+1]+.
xvi.L1BC10示例性L1-CIDE,L1BC10可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003831
将化合物12(1.000g，1.99mmol)添加到含HBr的HOAc(35％，15.0mL)溶液中。将混合物在25℃搅拌2h后，将其倒入冰水(20mL)中。将沉淀物过滤并用MTBE(20mL x 2)洗涤，得到粗产物4(1000mg,89％)，为灰色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.783min,m/z＝566.8[M+1+2]+.
Figure BDA0003063017060003841
向含化合物1(0.300g，0.6700mmol)的THF(15mL)溶液中添加Pd/C(359mg)，并在H2(15psi)下在25℃搅拌2h。过滤固体，并将滤液减压浓缩，得到粗产物2(200mg,95％)，为黄色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003842
在25℃，向含化合物2(200mg,0.64mmol)和Et3N(0.13mL,0.960mmol)的DCM(10mL)溶液中添加Boc2O(140.19mg,0.640mmol)。将反应在25℃搅拌1h后，将其浓缩，并通过制备型TLC纯化残余物(含5％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物3(260mg,87％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT 0.933min,m/z＝434.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003843
在25℃，将含Cs2CO3(285.05mg,0.870mmol)和化合物3(120.0mg,0.290mmol)的无水DMF(5.0mL)混合物搅拌10min，然后加入化合物4(494.7mg,0.870mmol)。将所得混合物在25℃搅拌1h。将混合物用水(15mL)稀释，用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物5(50mg,19％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝1.021min,m/z＝897.4[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003844
向含化合物5(50mg，0.0547mmol)的HFIP(4.0mL)溶液中加入TFA(0.20mL)。将反应溶液在25℃搅拌1h。浓缩溶液得到的化合物6TFA盐(72mg,99.4％)，为黄色油。将该粗产物直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.663min,m/z＝740.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003851
在25℃，将含化合物7(50.0mg,0.1000mmol)，DIEA(0.05mL，0.300mmol)和HATU(41.79mg，0.1100mmol)的无水DMF(5.0mL)溶液搅拌10min，然后加入化合物6的TFA盐(68.24mg,0.0800mmol)。将所得混合物在25℃搅拌1h。浓缩反应物并添加DCM(10mL)，收集沉淀，用DCM(5.0mL)洗涤并真空干燥，得到的化合物8(50mg,41％)，为黄色固体。该产物直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.872min,m/z＝1224.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003852
向含化合物8(50.0mg，0.0400mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入VHL配体(21.14mg，0.0500mmol)、HATU(17.11mg，0.0400mmol)和DIEA(15.86mg，0.1200mmol)。将混合物在25℃搅拌2h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM Rf＝0.3)，得到化合物9(15mg,22％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.753min,m/z＝817.8[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003861
在25℃，将含化合物9(15.0mg,0.0100mmol)和哌啶(0.010mL，0.0200mmol)的DMF(2.0mL)混合物搅拌2h。浓缩混合物，得到粗化合物10(12mg,93％产率)，为白色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.769min,m/z＝707.0[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003862
向含化合物10(12.0mg,0.0100mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入化合物11(3.14mg,0.0100mmol)、HATU(4.85mg,0.0100mmol)和DIEA(3.29mg,0.0300mmol)。将混合物在25℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(37-67水(0.225％FA)-ACN)，得到所需产物L1BC10(4.92mg,33％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.839min,m/z＝852.3[M/2+1]+；HRMS(0-95_1_4min):RT＝2.561-2.643min,m/z＝1702.6758[M+1]+.
xvii.L1BC11示例性L1-CIDE,L1BC11可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003871
向含化合物1(2.4g,3.68mmol)的DMSO(6.74mL，94.87mmol)溶液中加入HOAc(6.74mL,117.83mmol)和Ac2O(4.51mL,47.67mmol)。将混合物在40℃搅拌48h。向混合物中加入水(30mL)，并用饱和NaHCO3水溶液(50mL)处理。将混合物用EtOAc(40mL x 3)萃取，并将有机层浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化(含0％-5％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物2(2.03g,65％)，为浅黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝1.007min,m/z＝713.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003881
将磷酸(481.12mg，4.91mmol)在120℃加热20min，然后冷却至25℃。然后加入分子筛(4A，50mg)和含化合物2(500.0mg，0.700mmol)的THF(10mL)溶液，然后加入NIS(236.68mg，1.05mmol)。将所得混合物在25℃搅拌2h。然后浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈22-52/0.05％NH3H2O的水溶液)，得到化合物3(200mg,37％)，为灰色固体，其直接用于下一步。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.001min,m/z＝763.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003882
向含化合物3(200.0mg,0.2600mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入DBU(119.75mg，0.790mmol)。将混合物在25℃搅拌30min。然后将混合物浓缩，并将残余物用EtOAc(2.0mL x2)洗涤，得到粗产物化合物4(141mg,99.5％)，为灰色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.554min,m/z＝541.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003883
在25℃，将含化合物5(178.35mg,0.260mmol)、DIEA(101.13mg，0.780mmol)和HATU(99.18mg，0.2600mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌20min，然后加入化合物4(141.0mg,0.260mmol)。将所得混合物在25℃搅拌2h。过滤反应混合物，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈20-50/0.05％NH4OH的水溶液)，得到化合物6(130mg,41％)，为白色固体。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.144min,m/z＝1206.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003891
在25℃，向含化合物7(54.21mg，0.1500mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液中添加Et3N(15.1mg，0.150mmol)和CDI(30.92mg，0.1900mmol)。将反应混合物在25℃搅拌20min，然后加入化合物6(100.0mg，0.0800mmol)和ZnCl2溶液(0.83mL，1.0mol/L在甲苯中，0.830mmol)。将所得混合物在25℃搅拌12h。过滤反应混合物，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈25-55/0.05％NH4OH的水溶液)，得到产物化合物8(35mg,27.2％)，为白色固体。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.498min,m/z＝776.3[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003892
向含化合物8(35.0mg,0.020mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入奎宁环(12.54mg，0.110mmol)。将混合物在25℃搅拌4h。混合物溶液直接用于下一步。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.299min,m/z＝665.4[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060003893
在25℃，向含化合物9(29.0mg，0.020mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液中加入化合物10(6.73mg，0.0200mmol)。将反应混合物在25℃搅拌12h后，将其过滤并浓缩滤液。通过制备型HPLC纯化两次(乙腈18-48/在水中，然后乙腈25-48/10mM NH4HCO3的水溶液)，得到L1BC11(2.4mg,7.2％)，为白色固体。LCMS(10-80,CD,3.0min):RT＝1.202min,m/z＝761.8[M/2+1]+.
xviii.L1BC12示例性L1-CIDE,L1BC12可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003901
在20℃下，缓慢向含三光气(240.45mg，0.810mmol)和
Figure BDA0003063017060003902
分子筛(100mg)的无水DCM(20mL)混合物中添加含化合物2(300.0mg，1.63mmol)的吡啶(256.37mg，3.24mmol)无水DCM(6.0mL)溶液。将反应混合物在20℃下搅拌0.5h。然后将混合物真空浓缩，并将残余物用无水DCM(25mL)稀释。加入Et3N(245.98mg，2.43mmol)，然后加入含化合物1(430.0mg,0.810mmol)的无水DCM(8.0mL)溶液。将反应混合物在20℃再搅拌16h。将混合物用DCM(30mL)稀释，用H2O(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(含7％MeOH的DCM，Rf＝0.6)，得到化合物3(480mg,74％)，为淡黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.877min,m/z＝763.3[M+23]+；
Figure BDA0003063017060003911
在20℃，将含化合物3(100.0mg，0.1300mmol)的TFA(0.20mL)/HFIP(4.0mL)混合物溶液搅拌1h。将该溶液真空浓缩，将残余物用DMF(10mL)稀释，并再次真空浓缩，得到化合物4(100mg,98.2％)，为粗制无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.723min,m/z＝641.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003912
向含化合物5(40.0mg，0.1300mmol)的无水DCM(10mL)溶液中加入HATU(60.55mg，0.1600mmol)和N,N-二异丙基乙胺(68.6mg,0.530mmol)。将混合物在20℃搅拌15min，然后添加含化合物4(100.0mg,0.1300mmol)的无水DCM(5mL)溶液。将所得反应混合物在20℃再搅拌1h。将混合物真空浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物6(85mg,61％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.964min,m/z＝946.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003913
在20℃，将含化合物6(85.0mg，0.090mmol)的TFA(0.20mL)/HFIP(4.0mL)的混合物溶液搅拌1h。将该溶液真空浓缩，用DMF(10mL)稀释，并再次真空浓缩以除去残留的TFA，得到化合物7(86mg,99.7％)，为粗制无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.777min,m/z＝824.4[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003921
向含化合物8(20.0mg，0.0400mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入HATU(19.75mg，0.0500mmol)和DIEA(25.82mg,0.200mmol)。将溶液在20℃搅拌10min，加入化合物7(48.74mg,0.0500mmol)。将所得反应溶液在20℃再搅拌1h。通过制备型HPLC纯化溶液(Xtimate C18 150*25mm*5um,乙腈50-80/0.225％FA的水溶液)，得到L1BC12(23mg,43.2％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.892min,m/z＝1329.1[M+23]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.98(s,1H),8.62-8.60(m,1H),8.41-8.39(m,1H),8.06(d,J＝2.4Hz,1H),7.91-7.87(m,2H),7.75(s,1H),7.63-7.57(m,2H),7.43-7.37(m,3H),7.27-7.26(m,2H),5.21(d,J＝12.0Hz,2H),4.98-4.94(m,2H),4.47-4.35(m,4H),4.27-4.09(m,4H),3.84-3.80(m,2H),3.75-3.70(m,2H),3.62(s,3H),3.54(d,J＝2.8Hz,3H),3.13(brs,3H),2.90(s,3H),2.67(brs,1H),2.44(s,3H),2.33-2.09(m,3H),1.45-1.32(m,10H),1.21(s,8H),0.94(s,9H).
xix.L1BQ1示例性L1-CIDE,L1BQ1可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003931
向含化合物1(15.0g,69.11mmol)的DCM(150mL)溶液中加入BBr3(19.25mL,207.32mmol)。将混合物在20℃搅拌10小时。TLC(含10％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.4)表明反应完成。用MeOH(20mL)淬灭反应，然后加入DCM(100mL)。将有机层用水(60m)和盐水(60mL)洗涤。然后分离有机物，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物(9.6g,74％)，为黄色油，无需进一步纯化即可直接使用。1H NMR(400MHz,MeOD):δ6.37(s,2H),6.14(m,J＝2.4Hz,1H).
Figure BDA0003063017060003932
向含化合物2(9.6g，50.79mmol)的DMF(200mL)溶液中加入K2CO3(42.12g，304.75mmol)和BnBr(34.75g,203.16mmol)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩，得到的残余物，通过柱色谱法纯化(含0-10％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.8)，得到化合物3(12.5g,63％)，为白色粉末。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38-7.32(m,10H),6.76(d,J＝2.0Hz,2H),6.52(d,J＝1.6Hz,1H),4.99(s,4H).
Figure BDA0003063017060003941
向含化合物3(9.9g,26.81mmol)和K2CO3(14.82g,107.24mmol)的1,4-二噁烷(200mL)和水(50mL)溶液中加入化合物4(5.78g,37.54mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.57g,2.14mmol)。将混合物在氮气下在100℃搅拌15小时。将混合物用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到残余物，通过柱色谱法纯化(含10％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.8)，得到化合物5(5.6g,66％)，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.44-7.31(m,10H),6.76(d,J＝2.0Hz,2H),6.48-6.32(m,1H),6.55(d,J＝1.6Hz,1H),5.72(d,J＝17.6Hz,1H),5.25(d,J＝13.6Hz,1H),5.05(s,4H).
Figure BDA0003063017060003942
在氮气下在0℃向含化合物5(5.6g，17.7mmol)的THF(100mL)溶液中加入含BH3的THF(23.01mL,23.01mmol)，将混合物在20℃搅拌1小时。然后加入NaOH水溶液(1mL,1mol/L)，接着加入H2O2(26.64mL,265.5mmol)，将所得混合物在20℃搅拌2小时。用Na2SO3溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将得到的残余物用柱色谱法纯化(含25％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.4)，得到化合物6(2.9g,49％)，为无色油。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.29(m,10H),6.50-6.47(m,3H),5.02(s,4H),3.83(t,J＝6.4Hz,2H),2.79(t,J＝6.4Hz,2H).
Figure BDA0003063017060003943
在20℃，向含化合物6(4.1g,12.26mmol)、化合物7(15.81mL,98.08mmol)的甲苯(100mL)溶液中加入含NaOH(39.2g,980.83mmol)的水溶液(40mL)水溶液和nBu4NHSO4(3.35g,9.81mmol)。将混合物在20℃搅拌3小时。TLC(含20％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.5)显示起始原料已消耗。用EtOAc(50mLX3)萃取反应混合物。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，然后通过硅胶快速色谱法纯化(含0-20％EtOAC的石油醚)，得到化合物8(4840mg,64％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝1.064min,m/z＝471.0[M+23]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.42-7.30(m,10H),6.50-6.47(m,3H),5.00(s,4H),3.94(s,2H),3.72(t,J＝7.2Hz,2H),2.88(t,J＝7.2Hz,2H),1.46(s,9H).
Figure BDA0003063017060003951
向含化合物9(2.60g,9.69mmol)和化合物10(2.50g,9.69mmol)的乙腈(80mL)溶液中加入K2CO3(2.14g,15.5mmol)和KI(160.86mg,0.97mmol)。将混合物在70℃搅拌12小时。用EtOAc(250mL)稀释混合物，并用水(50mL*3)洗涤。将有机层浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈25–70％/0.225％FA的水溶液)，得到化合物3(2.13g,49％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.887min,m/z＝468.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003952
向含化合物11(2.13g,4.78mmol)和吡啶(1.93mL，23.91mmol)的DCM(20mL)溶液中加入Tf2O(1.61mL,9.56mmol)。将混合物在20℃搅拌1小时。将混合物用EtOAc(120mL)稀释，并用柠檬酸(30mL*3)洗涤。将有机层浓缩以得到粗产物12，不经纯化而直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝1.066min,m/z＝600.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003953
向含化合物12(2.74g，23.37mmol)的1,4-二噁烷(50mL)溶液中添加Pd(OAc)2(104.95mg,0.47mmol)、Xphos(445.71mg,0.93mmol)和Cs2CO3(4.57g,14.02mmol)。将混合物于100℃在N2下搅拌12h。将混合物浓缩，并通过快速柱纯化(洗脱含0-40％EtOAc的石油醚)，得到化合物13(2.20g,76％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.971min,m/z＝567.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003961
向含化合物13(2.20g,4.04mmol)的THF(80mL)溶液中加入Pd/C(429.87mg)。将混合物于20℃在H2下搅拌2小时。将混合物过滤并浓缩，得到粗产物14，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.773min,m/z＝411.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003962
向含JQ1(2.20g，5.48mmol)、化合物14(1.50g，3.65mmol)和HATU(1.81g，4.75mmol)的DMF(20mL)溶液中加入DIEA(2.55mL，14.62mmol)。将混合物在20℃搅拌1小时。将该混合物通过反相色谱法纯化(乙腈30-90/0.225％FA的水溶液)，得到化合物14(1.13g,39％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.969min,m/z＝815.0[M+23]+.
Figure BDA0003063017060003963
将含化合物15(1.13g，1.42mmol)的HCl/EtOAc(10mL)混合物在20℃搅拌1h。浓缩混合物，得到化合物16(959mg,100％)，为白色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.786min,m/z＝637.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003971
向含化合物16(959mg，1.42mmol)、VHL(1287mg，2.99mmol)和DIEA(919.98mg，7.12mmol)的DMF(15mL)溶液中加入HATU(595.46mg,1.57mmol)。在20℃，将该混合物搅拌1h。将该混合物通过反相色谱法纯化(乙腈10-50/0.225％FA的水溶液)，得到化合物17(1.10g,71.4％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.817min,m/z＝1049.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003972
向含三光气(14.13mg，0.05mmol)和4A分子筛的DCM(2mL)混合物中添加含化合物17(50.00mg,0.05mmol)和Et3N(14.46mg,0.14mmol)的DCM(2mL)溶液。将混合物在20℃搅拌0.5小时。将混合物浓缩并溶解在DCM(5mL)中，并直接用于下一步。
向上述溶液中加入含化合物MC_SQ_Cit_PAB(81.53mg,0.14mmol)和Et3N(14.46mg,0.14mmol)的DMF(2mL)溶液。将混合物在15℃搅拌12小时。将混合物浓缩，并将所得残余物通过反相色谱法纯化(乙腈38-68/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ1(5.0mg,6％)，为白色固体。LCMS(10-80,AB,7.0min):RT(220/254nm)＝3.928min,m/z＝824.5[M/2+1]+.
xx.L1BQ2示例性L1-CIDE,L1BQ2可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060003981
将NaH(226.12mg，5.65mmol)悬浮在THF(4.0mL)中，并在20℃滴加含化合物1(300.0mg,0.5700mmol)的THF(3.0mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌2h。然后加入含化合物2(117.83mg,0.8500mmol)的THF(3.0mL)。将反应混合物在20℃搅拌2h后，将其用水(10mL)淬灭，并用EtOAc(10mL)萃取。分离水层，并用HCl(2.0M)酸化至pH＝3.0，并用含MeOH的DCM(10mL×2)溶液萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，得到粗产物化合物3(190mg,57％)，为棕色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.735min,m/z＝589.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003982
向含化合物3(190.0mg，0.3600mmol)的DCM(5.0mL)溶液中添加含HCl的EtOAc(4.0M,5.0mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌2h后，将其浓缩，得到粗产物化合物4(120mg,64％)，为灰色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060003991
在20℃，将含化合物5(151.72mg，0.2600mmol)、DIEA(66.46mg，0.5100mmol)和HATU(97.76mg，0.2600mmol)的无水DMF(3.0mL)溶液搅拌50min，然后加入化合物4(90.0mg,0.1700mmol)。将所得混合物在20℃搅拌2h，过滤，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈40-60/0.225％FA的水溶液)，得到化合物6(35mg,19.3％)，为灰色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.881min,m/z＝1060.7[M+1]+.
Figure BDA0003063017060003992
向含化合物6(30.0mg，0.0300mmol)和DPPA(11.68mg，0.0400mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入Et3N(8.59mg,0.0800mmol)。将混合物在20℃搅拌1h后，将其用水(5.0mL)稀释，并用甲苯(3mL x 2)萃取。将甲苯层用Na2SO4干燥，并用4A分子筛干燥。向在甲苯(6.0mL)中的溶液中添加含化合物8(15.77mg，0.0300mmol)的DMF(1.0mL)，二月桂酸二丁锡(1.75mg,0.0028mmol)，并将混合物在80℃搅拌1h。将反应混合物过滤，浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到L1BQ2(2.5mg,5.6％)，为灰色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.755min,m/z＝815.1[M/2+1]+.
xxi.L1BQ3示例性L1-CIDE,L1BQ3可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004001
向含化合物1(100.0mg,0.230mmol)的吡啶(10.0mL)溶液中加入TFAA(144.0mg，0.6900mmol)。将反应混合物在50℃搅拌12h。将反应用EtOAc(20mL)稀释，并用水(20mL x2)和盐水(20mL)洗涤。将有机物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含5％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物2(65mg,52％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.752min,m/z＝534.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004002
在25℃，将含化合物2(65.0mg，0.1200mmol)的TFA(5mL)/DCM(5mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物浓缩，得到化合物3(55mg,95％)，为黄色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060004011
在20℃，向含化合物3(55.0mg，0.1200mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加HATU(87.6mg，0.2300mmol)和DIEA(44.66mg,0.3500mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min后，加入化合物4(80.0mg,0.1300mmol)。将反应混合物在20℃搅拌2h。将反应混合物用水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将其通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物5(100mg，73％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.684min,m/z＝1101.6[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004012
向含化合物5(100.0mg，0.0900mmol)的MeOH(4.0mL)、THF(2.0mL)溶液中加入LiOH(19.44mg,0.4600mmol)。在50℃，将反应混合物搅拌12h。将反应浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈20-50％/0.225％EA的ACN)，得到化合物6(40mg,44％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.591min,m/z＝1105.6[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004013
在25℃，将含Fmoc-Cit-OH(18.19mg，0.0500mmol)和EEDQ(15.09mg，0.0600mmol)的DMF(2.0mL)混合物搅拌30min。将混合物加入含化合物6(15.0mg，0.0200mmol)的DMF(2.0mL)溶液中。将反应混合物在25℃搅拌48h。将混合物过滤，并通过制备型HLC纯化滤液(乙腈33-63/0.225％FA的水溶液)，得到化合物7(10mg,48％)，为白色固体。LCMS(10-80,AB,7.0min):RT＝3.695min,m/z＝682.1[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060004021
在25℃，向含化合物7(10.0mg，0.0100mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入哌啶(2.5mg,0.0300mmol)。将反应混合物在25℃搅拌2h。浓缩混合物，用MTBE(2mL x 2)洗涤，得到化合物8(8mg,95.6％)，为灰色固体，其直接使用。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.611min,m/z＝571.1[M/2+1]+.
Figure BDA0003063017060004022
向含DIEA(0.95mg，0.0100mmol)和化合物8(10.0mg，0.0100mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入化合物9(11.9mg,0.0300mmol)。将反应混合物在20℃搅拌12h。将混合物过滤，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈31-51/0.225％FA的水溶液)，得到化合物L1BQ3(2.5mg,23.6％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.663min,m/z＝716.3[M/2+1]+.
xxii.L1BQ4示例性L1-CIDE,L1BQ4可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004031
在20℃，向含Fmoc-Cit-OH(30.08mg，0.0800mmol)的DMF(10.0mL)溶液中加入HATU(47.97mg，0.1300mmol)和DIEA(20.38mg,0.1600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物1(30.0mg,0.0600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌12h后，将其用水(10mL)稀释，并用EtOAc(10mL)萃取。将有机层用水(10mL x 2)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将其通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物2(45mg，78.4％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.885min,m/z＝877.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004041
在20℃向含化合物2(45.0mg,0.0500mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加哌啶(0.02mL,0.1600mmol)。将混合物在20℃搅拌2h，然后浓缩，得到化合物3(33mg,99.1％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.742min,m/z＝655.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004042
在20℃，向含化合物4(19.3mg，0.0600mmol)的DMF(2.0mL)溶液中添加HATU(39.66mg，0.1000mmol)和DIEA(20.22mg,0.1600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物3(33.0mg,0.0500mmol)。将反应混合物在20℃搅拌12h。将反应用水(10mL)淬灭，并用EtOAc(10mL)萃取。将有机层用水(5mL x 2)、盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将其通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.2)，得到化合物5(30mg，58％)，其为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.826min,m/z＝945.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004043
将含化合物5(30.0mg，0.0300mmol)的TFA(3mL)/DCM(3mL)溶液在20℃搅拌2小时。TLC(含50％乙酸乙酯的石油醚，Rf＝0.1)表明反应完成。浓缩反应混合物，得到化合物6(28mg,99.4％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.601min,m/z＝869.5[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004051
在20℃，向含化合物6(28.0mg,0.0300mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入HATU(24.56mg，0.0600mmol)和DIEA(12.52mg,0.1000mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物7(20.0mg,0.0300mmol)。将反应混合物在20℃搅拌12h。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，并用水(5mL x 2)和盐水(5mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含20％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到L1BQ4(20.9mg,42.6％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.788min,m/z＝734.8[M/2+1]+.
xxiii.L1BQ5示例性L1-CIDE,L1BQ5可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004052
Figure BDA0003063017060004061
向含MC-OSu(38.89mg,0.1300mmol)和DIEA(0.06mL，0.3400mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入化合物1(40.0mg,0.0800mmol)。将混合物在20℃搅拌2h后，将其浓缩，并通过制备性TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物2(55mg,94％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.863min,m/z＝691.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004062
在20℃，将含化合物2(55.0mg,0.0800mmol)的TFA(1.0mL)/DCM(3.0mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物浓缩，得到化合物3(49mg,97％)，为无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.796min,m/z＝613.4[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004063
在20℃，向含化合物3(49.0mg,0.0800mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加HATU(60.82mg，0.1600mmol)和DIEA(31.01mg,0.2400mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物4(55.0mg,0.090mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。将反应混合物用水(5.0mL)稀释，用EtOAc(10mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.2)，得到L1BQ5(33.7mg,33％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.04(brs,1H),8.60(s,1H),7.85(brs,1H),7.41-7.36(m,1H),7.30-7.25(m,6H),7.19(s,2H),6.59(s,2H),5.87(brs,1H),4.72(t,J＝7.50Hz,1H),4.61-4.51(m,2H),4.46-4.38(m,2H),4.25-4.15(m,3H),4.09-4.02(m,1H),3.62-3.51(m,12H),3.43(t,J＝7.2Hz,2H),3.38(d,J＝8.8Hz,1H),3.38-3.30(m,2H),3.07-3.01(m,3H),2.54(s,2H),2.43(s,2H),2.31(s,2H),2.14(t,J＝7.6Hz,2H),1.61-1.49(m,5H),1.41-1.37(m,12H),1.32(d,J＝6.8Hz,8H),1.28-1.18(m,4H),0.9(s,9H).LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.823min,m/z＝1214.6[M+1]+.
xxiv.L1BQ6示例性L1-CIDE,L1BQ6可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004071
向含化合物1(1.0g,4.54mmol)的THF(5.0mL)溶液中加入Boc2O(1.25mL,5.45mmol)。然后将混合物在20℃搅拌4h。然后将混合物浓缩，并通过柱色谱法纯化(含30％EtOAc的石油醚，Rf＝0.7)，得到化合物2(1.1g,76％)。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.697min,m/z＝321.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004081
在0℃，缓慢向含化合物2(600.0mg,1.87mmol)、Ph3P(982.33mg,3.75mmol)和化合物3(210.98mg，2.81mmol)的THF(20mL)溶液中加入DIAD(757.32mg,3.75mmol)。将反应混合物在70℃搅拌12h后，将其用DCM(50mL)稀释，用水(40mL x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物4(100mg,14％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.713min,m/z＝378.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004082
向含化合物4(100.0mg，0.2600mmol)的THF(10mL)溶液中添加含Na2CO3(56.15mg,0.530mmol)的水溶液(4.0mL)溶液和Fmoc-Cl(96.44mg,0.4000mmol)。将混合物在20℃搅拌8h。将反应混合物用水(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅快速色谱法纯化(10％-80％EtOAc/石油醚，得到化合物5(130mg,81％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.986min,m/z＝622.0[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004083
在20℃，将含化合物5(130.0mg,0.2200mmol)的TFA(1.0mL)/DCM(4.0mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物浓缩，得到化合物6(105mg,97％)，为白色固体，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060004091
在20℃，向含化合物7(115.0mg，0.330mmol)的DMF(10.0mL)溶液中添加HATU(159.8mg，0.420mmol)和DIEA(81.48mg,0.630mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物6(105.0mg,0.210mmol)。将混合物在20℃搅拌2h。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％甲醇的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物8(170mg,98％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.935min,m/z＝848.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004092
在20℃，将含化合物8(170.0mg,0.210mmol)的TFA(1.0mL)/DCM(4.0mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物浓缩，得到化合物9(149mg,99.7％)，为无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.801min,m/z＝726.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004093
在20℃，向含化合物10(75.7mg，0.250mmol)的DMF(5.0mL)溶液中添加HATU(156.1mg,0.410mmol)和DIEA(79.58mg,0.6200mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物9(149.0mg,0.210mmol)。将反应混合物在20℃搅拌2h。将反应用水(10mL)稀释，并用DCM(10mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物11(208mg,99.8％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.920min,m/z＝1037.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004101
向含化合物11(40.0mg,0.0400mmol)的DCM(1.0mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4.0M,2.0mL,8mmol)，并将混合物在20℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到化合物12(37.11mg,99％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.685min,m/z＝915.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004102
在20℃，向含JQ1(23.45mg,0.0600mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入HATU(29.66mg，0.0800mmol)和DIEA(20.16mg，0.1600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min后，在20℃加入化合物12(37.11mg,0.0400mmol)2h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物13(40mg,66％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.922min,m/z＝1297.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004103
向含化合物13(40.0mg,0.0300mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入哌啶(13.12mg,0.1500mmol)，并将混合物在20℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈33-63/0.225％FA的水溶液)，得到化合物14(8.4mg,25％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.773min,m/z＝1075.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004111
向含MC_SQ_Cit_PAB-PNP(3.08mg，0.0042mmol)和化合物14(3.0mg,0.0028mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入DIEA(1.44mg,0.0100mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈38-68/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ6(2.19mg,46％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.842min,m/z＝858.9[M/2+23]+.HRMS(0-95_1_4min.m):m/z＝1671.66[M+1]+.
xxv.L1BQ7示例性L1-CIDE,L1BQ7可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004112
向含化合物2(1.29mg，0.0028mmol)和化合物1(3.0mg,0.0028mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入DIEA(1.5mg,0.0100mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈38-68/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ7(2.41mg,68％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.850min,m/z＝1291.7[M+23]+.HRMS(0-95_1_4min.m):m/z＝1290.4777[M+23]+.
xxvi.L1BQ8示例性L1-CIDE,L1BQ8可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004121
将含化合物10(5.000g,49.43mmol)、NaHCO3(10.478g,98.86mmol)的THF(50mL)溶液冷却至0℃，然后滴加Cbz-Cl(9.275g,54.37mmol)。将混合物加热至20℃持续12h。将混合物浓缩，用NaHCO3(5％,30mL)水溶液稀释，并用EtOAc(100mL x 2)萃取。将有机层用盐水(100mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将其通过硅胶快速色谱法纯化(含0-60％EtOAc的石油醚溶液)，得到化合物11(11.00g,95％)，为黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37-7.30(m,5H),5.13(s,2H),3.93-3.84(m,3H),3.18-3.11(m,2H),1.87(brs,2H),1.50-1.48(br,2H).
Figure BDA0003063017060004131
在0℃下，将含化合物12(2.260g，10.2mmol)的DCM(10mL)滴加到含化合物11(2.000g,8.5mmol)和TEA(2.150g,21.25mmol)、DMAP(51.93mg，0.4300mmol)的DCM(50mL)溶液中。将反应混合物在20℃搅拌12h。浓缩反应，并通过硅胶快速色谱法纯化(含0-50％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物12(1.300g,36％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.888min,m/z＝442.9[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004132
在50℃，将含Cs2CO3(596.0mg,1.83mmol)，化合物1(500.0mg,0.9100mmol)和化合物2(1.153g,2.74mmol)的DMF(20mL)混合物搅拌13h。将反应溶液用水(10mL)稀释，用EtOAc(50mL)萃取。将无机层浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(含0-90％EtOAc的石油醚溶液)，得到化合物3(370mg,53％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.897min,m/z＝786.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004133
在20℃，将含化合物3(50.0mg,0.0700mmol)的TFA(1.0mL)/DCM(5.0mL)混合物溶液搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到化合物4(50mg,98.2％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.763min,m/z＝664.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004141
在20℃，向含化合物5(23.71mg,0.0800mmol)的DMF(10mL)溶液中添加HATU(48.88mg，0.1300mmol)和DIEA(24.92mg,0.1900mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物4(50.0mg,0.0600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌12h。将反应混合物添加到水(5.0mL)中，然后用EtOAc(30mL)萃取。将有机物用水(10mL x 2)，然后用盐水(10mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物6(60mg,98％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.886min,m/z＝975.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004142
在20℃，将含化合物6(60.0mg,0.0600mmol)的TFA(1.0mL)/DCM(4.0mL)溶液搅拌0.5h。将反应混合物浓缩，得到化合物7(52mg,85％)，为无色油，直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.781min,m/z＝875.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004143
在20℃，向含JQ1(26.46mg,0.0700mmol)的DMF(10mL)溶液中添加HATU(40.89mg，0.1100mmol)和DIEA(20.85mg,0.1600mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物7(52.0mg,0.0500mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。将反应混合物用水(5mL)稀释，并用EtOAc(10mL x 3)萃取。将有机层用水(10mL x 2)和盐水(10mL)洗涤。将其经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.2)，得到化合物8(66mg,97％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.906min,m/z＝1257.9[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004151
在20℃，将TMSI(110.09mg，0.5500mmol)添加至含化合物8(68.0mg，0.0600mmol)的DCM(15mL)溶液中，并将所得混合物在20℃搅拌12h。加入Et3N(2.0mL)，并将混合物在20℃搅拌15min。除去溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物(乙腈21–51％/0.225％FA的水溶液)，得到化合物9(15mg,24％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.792min,m/z＝1101.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004152
向含MC_SQ_Cit_PAB-PNP(8.51mg，0.0100mmol)和化合物9(8.5mg,0.0100mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入DIEA(0.01mL,0.0300mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈12-47/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ8(1.6mg,12％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.852min,m/z＝850.2[M/2+1]+.
xxvii.L1BQ9示例性L1-CIDE,L1BQ9可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004153
向含化合物1(22.0mg，0.0200mmol)和MC-OSu(9.23mg，0.0300mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入DIEA(7.74mg,0.0600mmol)。将混合物在20℃搅拌3h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈38-68/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ9(4.5mg,16.7％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.867min,m/z＝1294.4[M+1]+.
xxviii.L1BQ10示例性L1-CIDE,L1BQ10可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004161
在110℃和N2下，将含化合物1(300.0mg,0.660mmol)、二苯甲酮亚胺(178.46mg,0.980mmol)、Pd2(dba)3(60.11mg,0.0700mmol)、S-Phos(26.95mg,0.0700mmol)、Cs2CO3(641.7mg,1.97mmol)的甲苯(20mL)混合物溶液搅拌16h。除去溶剂以得到粗产物，将其通过快速柱纯化(含0-50％EtOAc的石油)，得到化合物2(350mg,60％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝1.050min,m/z＝602.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004171
在20℃，将含化合物2(350.0mg，0.580mmol)的THF(20mL)和HCl(1.0M，5.0mL)混合物搅拌3h。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，并分离有机层。将有机层浓缩，并通过制备型TLC纯化(含5％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物3(250mg，94.5％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.739min,m/z＝460.0[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004172
在20℃和N2下，向含三光气(27.13mg，0.0900mmol)的THF(5.0mL)溶液中添加含化合物3(40.0mg，0.0900mmol)的THF(5.0mL)溶液。将反应混合物在40℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到粗产物(40mg)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.849min,m/z＝496.1[M+1]+(用MeOH淬灭).在20℃，向含上述产物(40.0mg，0.0900mmol)的DCM(5.0mL)溶液中添加含MC_SQ_Cit_PAB(59.09mg，0.1000mmol)和Et3N(26.2mg,0.260mmol)的DMF(1mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌4h。将该反应浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈44–74％/0.225％FA的水溶液)，得到化合物4(7mg,8％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.856min,m/z＝1056.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004181
在20℃，将含化合物4(10.0mg,0.0100mmol)的TFA(2.0mL)/DCM(2mL)溶液搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到化合物5(9.4mg,100％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.780min,m/z＝978.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004182
在20℃，将含化合物6(45.0mg,0.0600mmol)的TFA(1mL)/DCM(5mL)溶液搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到具有TFA盐的化合物7(38.7mg,85％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.692min,m/z＝620.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004183
在20℃，向含化合物5(9.4mg,0.0100mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入HATU(4.39mg，0.0100mmol)和DIEA(3.73mg，0.0300mmol)。将反应混合物在20℃搅拌10min。然后加入化合物7(8.46mg,0.0100mmol)，将形成的混合物在20℃搅拌12h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈30–60％/0.225％FA的MeCN)，得到L1BQ10(1.8mg,12％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.823min,m/z＝790.6[M/2+1]+.
xxix.L1BQ11示例性L1-CIDE,L1BQ11可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004191
向含化合物1(45.0mg，0.0800mmol)的无水DMF(4.0mL)溶液中加入HATU(37.33mg,0.1000mmol)和DIEA(31.72mg,0.2500mmol)。将溶液在25℃搅拌15min，然后加入VHL配体(42.03mg,0.0900mmol)。将所得反应溶液在25℃再搅拌1h。将混合物通过制备型HPLC纯化(Xtimate C18 150*25mm*5um，乙腈40-70/0.225％FA的水溶液)，得到化合物2(46mg,58％)，为淡黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.835min,m/z＝962.3[M+1]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.78(t,J＝4.2Hz,1H),8.60(t,J＝6.0Hz,1H),7.55(d,J＝9.6Hz,1H),7.49-7.40(m,8H),4.57-4.35(m,6H),4.27-4.21(m,1H),4.11-4.01(m,4H),3.68-3.59(m,3H),3.31-3.19(m,2H),2.59(s,3H),2.52-2.51(m,1H),2.44(m,3H),2.40(s,3H),2.08-2.03(m,1H),1.92-1.86(m,1H),1.61(s,3H),0.93(s,9H).
Figure BDA0003063017060004201
在20℃，将含化合物2(100.0mg，0.1000mmol)和NaH(16.62mg，0.420mmol)的THF(5.0mL)混合物搅拌1h，然后滴加含化合物3(21.65mg,0.1600mmol)的THF(1.0mL)。将混合物在20℃搅拌2h。将反应用饱和NH4Cl(10mL)水溶液淬灭，并用HCl溶液(2.0M)酸化至pH＝4.0。将所得混合物用含MeOH的DCM(10％,20mL×3)溶液萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，然后过滤。浓缩滤液，得到粗制化合物4(100mg,94.3％)，为浅黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.885min,m/z＝1042.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004202
在20℃，向含化合物4(60.0mg,0.0600mmol)和Et3N(7.14mg,0.0700mmol)的丙酮(3.0mL)溶液中加入化合物5(9.64mg,0.0700mmol)，将混合物在20℃搅拌10min，然后滴加含NaN3(7.64mg,0.1200mmol)的水溶液(1.0mL)。将所得混合物在20℃搅拌1h，并添加水(5.0mL)。将混合物用甲苯(2mL x 2)萃取。将合并的甲苯层经Na2SO4干燥，并过滤。将滤液用4A分子筛处理并直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060004203
在20℃，向上述甲苯溶液中加入含化合物7(33.29mg，0.0600mmol)的DMF(1.0mL)和二月桂酸二丁锡(3.68mg,0.0100mmol)。将反应混合物在60℃搅拌1h，浓缩，并通过制备型TLC(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.4)和制备型HPLC(乙腈28-53/10mM NH4HCO3的水溶液)纯化，得到L1BQ11(3mg,3.2％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.783min,m/z＝794.6[M/2+1]+.
xxx.L1BQ12示例性L1-CIDE,L1BQ12可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004211
向含化合物1(45.0mg，0.1100mmol)的CH3CN(4.0mL)混合物中添加Pd-Cy*Phine(6.96mg,0.0100mmol)、Cs2CO3(106.01mg,0.3300mmol)和化合物2(97.08mg,0.2200mmol)。将混合物在100℃在微波下在N2下搅拌1h后，将其过滤、浓缩，并通过硅胶快速色谱法(含0-100％EtOAc的石油醚,Rf＝0.3)，得到化合物3(70mg,74％)，为棕色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝1.017min,m/z＝848.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004221
在0℃向含化合物3(70.0mg,0.0800mmol)的DCM(4.5mL)混合物中加入TFA(1.5mL,0.1700mmol)，并在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到化合物4(56mg,98.7％)，为棕色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.775min,m/z＝692.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004222
向含化合物4(40.0mg，0.0600mmol)的DCM(5.0mL)溶液中加入DIEA(23.15mg,0.1800mmol)和Boc2O(26.07mg,0.1200mmol)。将混合物在25℃搅拌16h。将混合物浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含0-5％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物5(35mg,62％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.908min,m/z＝770.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004223
向含化合物5(35.0mg,0.050mmol)，VHL配体(29.36mg，0.0700mmol)和HATU(20.74mg，0.0500mmol)的DMF(5mL)溶液中添加DIEA(0.04mL,0.230mmol)，将反应溶液在25℃搅拌2h。将反应混合物过滤并浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.4)，得到化合物6(30mg,48％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.933min,m/z＝1205.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004224
在20℃，将含化合物6(30.0mg，0.0300mmol)和LiOH(2.43mg,0.1000mmol)的THF(3.0mL)和水(0.600mL)混合物搅拌2h。将混合物用水(10mL)稀释，并用HCl溶液(2.0M)调节至pH＝5。将混合物过滤，并将固体用水(10mL)洗涤，浓缩，得到化合物7(15mg,51％)，为黄色固体，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.775min,m/z＝[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004231
向含化合物7(15.0mg,0.0100mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入2-氨基乙烷磺酸(3.21mg,0.0300mmol)、DIEA(8.3mg,0.0600mmol)、EDCI(4.92mg,0.0300mmol)和HOBt(3.47mg,0.0300mmol)。将混合物在20℃搅拌18h。通过制备型HPLC纯化反应混合物(乙腈35-65％/0.1％TFA的水溶液)，得到化合物8(8.0mg,47％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.738min,m/z＝1276.4[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004232
在0℃向含化合物8(8.0mg,0.0100mmol)的DCM(5.0mL)混合物中加入TFA(1.0mL)，并在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(乙腈19-49％/0.1％TFA的水溶液)，得到化合物9(6.57mg,80％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.662min,m/z＝1175.5[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004233
向含化合物9(7.0mg，0.0100mmol)的DMF(2.0mL)溶液中加入吡啶(4.71mg,0.0600mmol)、HOBt(1.05mg,0.0100mmol)和MC_SQ_Cit_PAB-PNP(5.7mg,0.0100mmol)。将反应溶液在50℃搅拌24h。将溶液浓缩，通过制备型HPLC纯化(乙腈0-40/0.1％HCl的水溶液)，得到L1BQ12(2.01mg,19％)，为淡黄色固体。LCMS(10-80,AB,7min):RT＝3.717min,m/z＝886.6[M/2+1]+.HRMS:0-95_1_4min.m,m/z＝1771.70[M+1]+.
xxxi.L1BQ13示例性L1-CIDE,L1BQ13可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004241
于25℃和N2下，向含化合物1(5.00g,17.01mmol)的THF(75mL)混合物中加入BH3THF(705.76mg,51.03mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。将反应用MeOH(10mL)淬灭，并浓缩至干燥。用EtOAc(60mL)稀释残余物，并用盐水(20mL×3)洗涤。然后将有机层经Na2SO4干燥，浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含0-30％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物2(4.722g,99％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.53(s,1H),7.39(s,2H),3.72(t,J＝6.8Hz,2H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H).
Figure BDA0003063017060004251
在25℃，向含化合物2(4.00g,14.29mmol)、化合物3(22.294g,114.3mmol)的甲苯(80mL)和水(228mL)溶液中加入TBAI(3.904g,11.43mmol)和NaOH(45.72g,1143mmol)。将混合物在25℃搅拌3h。将反应混合物用MTBE(50mL x 3)萃取。合并有机层，然后用无水硫酸钠干燥，并且浓缩。将粗产物通过快速色谱法纯化(含0-10％EtOAC的石油醚，Rf＝0.6)，得到化合物4(5.550g,98.6％)，为无色油。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.51(d,J＝1.6Hz,1H),7.42(d,J＝2.0Hz,2H),3.93(s,2H),3.70(t,J＝6.4Hz,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),1.44(s,9H).
Figure BDA0003063017060004252
向此含化合物4(4.500g,11.42mmol)的DCM(180mL)溶液中加入TFA(36.0mL)。将混合物在25℃搅拌16h。将混合物浓缩，得到粗产物，将其用EtOAc(60mL)稀释，并用水(20mL×8)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到化合物5(3650mg,95％)，为黄色油，其直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(s,1H),7.32(s,2H),4.24-4.16(m,2H),3.78(t,J＝7.2Hz,2H),2.89(t,J＝6.8Hz,2H).
Figure BDA0003063017060004253
于20℃和N2下，向含化合物5(5.300g,15.68mmol)的THF(70mL)溶液中加入含硼烷的Me2S(10.0M,4.7mL,47.04mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。将反应用MeOH(30mL)淬灭。浓缩混合物，并用NaHCO3(60mL)水溶液稀释，用EtOAc(30mL x 3)萃取，并用盐水(30mL x 3)洗涤。将合并的有机层分离，经Na2SO4干燥，并浓缩，得到化合物6(4.60g,90.5％)，为黄色油，其直接用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(t,J＝1.6Hz,1H),7.32(d,J＝2.0Hz,2H),3.74-3.67(m,4H),3.56(t,J＝4.8Hz,2H),2.85(t,J＝6.4Hz,2H).
Figure BDA0003063017060004261
在20℃，将含化合物6(4.600g,14.2mmol)、TBSCl(3.209g,21.3mmol)和咪唑(2.899g，42.59mmol)的DCM(50mL)混合物搅拌4h。加入水(30mL)，用DCM(30mL×3)萃取，并用盐水(30mL×3)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含0-5％EtOAc的石油醚，Rf＝0.6)，得到化合物7(5.200g,84％)，为黄色油。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.48(t,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,2H),3.70-3.63(m,4H),3.45(t,J＝4.8Hz,2H),2.79(t,J＝6.0Hz,2H),0.84(s,9H),0.00(m,6H).
Figure BDA0003063017060004262
向含化合物7(1.380g,3.15mmol)的DMF(20mL)溶液中加入TBAB(1.015g,3.15mmol)、化合物8(605.36mg,4.72mmol)、NaHCO3(1.058g,12.59mmol)和Pd(OAc)2(70.69mg,0.3100mmol)。将混合物于105℃在N2下搅拌24h。过滤混合物，加入水，用EtOAc(30mL×3)萃取，用盐水(30mL×3)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型HPLC纯化(含0-10％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物9(1.230g,81％)，为浅黄色油。1HNMR(400MHz,MeOD)δ7.52(d,J＝1.6Hz,1H),7.42-7.38(m,3H),6.38(d,J＝16Hz,1H),3.71-3.65(m,4H),3.46(t,J＝4.8Hz,2H),2.83(t,J＝6.4Hz,2H),1.49(s,9H),0.84(s,9H),0.00(s,6H).
Figure BDA0003063017060004263
向含化合物9(1.230g,2.53mmol)和化合物10(445.17mg,3.8mmol)的1,4-二噁烷(20mL)溶液中添加Cs2CO3(1.650g,5.07mmol)、Xphos(120.77mg,0.2500mmol)和Pd(OAc)2(28.44mg,0.1300mmol)。将混合物于100℃在N2下搅拌16h。过滤混合物，并添加水(20mL)。将其用EtOAc(30mL×3)萃取，用盐水(30mL×3)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型HPLC纯化(含0-17％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物11(1180mg,89％)，为黄色油。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.47-7.43(m,2H),7.30(brs,1H),7.05(s,1H),6.33(d,J＝16Hz,1H),3.71-3.65(m,4H),3.47(t,J＝4.8Hz,2H),2.82-2.80(m,2H),1.48(s,18H),0.84(s,9H),0.00(m,6H).
Figure BDA0003063017060004271
在20℃在N2下，向含化合物11(2.000g,3.83mmol)的MeOH(20mL)混合物中加入10％Pd/C(407.93mg)。将混合物在50℃在H2(50psi)下搅拌16h。将混合物过滤并将滤液浓缩，得到化合物12(1.750g)，为无色油，直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.781min,m/z＝432.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004272
于0℃在N2下，向含化合物12(1.560g,3.81mmol)的THF(20mL)溶液中加入tBuONa(439.29mg,4.57mmol)。将混合物在0℃搅拌30分钟，然后滴加炔丙基溴(0.51mL,4.57mmol)。将混合物于25℃在N2下搅拌12h。用水(10mL)淬灭反应，用EtOAc(30mL×2)萃取，用盐水(20mL×3)洗涤，并浓缩。将其通过快速柱色谱法纯化(含0-30％EtOAc的石油醚，Rf＝0.4)，得到化合物13(1.150g,68％)，为浅色油。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.11-7.09(m,2H),6.74(s,1H),4.15(s,2H),3.65-3.59(m,6H),2.82-2.76(m,5H),2.49(t,J＝7.6Hz,2H),1.54(s,9H),1.43(s,9H).LCMS(10-80,AB,7min):RT(220/254nm)＝4.259min,m/z＝470.2[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004273
向含化合物15(0.870g,2.11mmol)、NH4Cl(337.81mg，6.32mmol)和HATU(1.600g，4.21mmol)的DMF(20mL)混合物中加入DIEA(1.74mL,10.53mmol)。将混合物在20℃搅拌2h。将混合物浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含0-5％MeOH的DCM)，得到化合物16(0.84g,98.5％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.771min,m/z＝421.9[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004281
向含化合物16(840.00mg,2.10mmol)的THF(50mL)溶液中加入Lawesson试剂(1.700g,4.20mmol)。将混合物在40℃搅拌2h。将混合物用EtOAc(250mL)稀释，并用H2O(50mL x 3)和盐水(50mL)洗涤。将有机层浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含5-10％MeOH的DCM)，得到化合物4(630.00mg，71.4％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.888min,m/z＝416.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004282
向含化合物17(630.00mg,1.51mmol)和2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(447.71mg，2.27mmol)的乙酸(5mL)溶液中添加TsOH(26.08mg,0.15mmol)。将混合物在90℃搅拌1小时。将混合物浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(洗脱含5-10％MeOH的DCM)，得到化合物18(600mg,87％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.845min,m/z＝461.9[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004283
向含化合物18(30.0mg，0.0700mmol)的乙腈(3mL)混合物中添加Pd-Cy*Phine(4.37mg,0.05mmol)、Cs2CO3(66.65mg,0.2000mmol)和化合物13(61.03mg,0.1400mmol)。将混合物在105℃下在N2下于微波中搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物过滤、浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％甲醇的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物19(26mg,45％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝1.065min,m/z＝851.3[M+1]+
Figure BDA0003063017060004291
在25℃向含19(47.0mg,0.0600mmol)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(0.6mL)。将混合物在25℃搅拌2h。浓缩混合物，得到20(38mg,99％)，为黄色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.801min,m/z＝695.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004292
在20℃，将含20(21.0mg,0.0300mmol)、21(14.31mg,0.0300mmol)、DIEA(11.72mg,0.0900mmol)和HATU(12.64mg,0.0300mmol)的DMF(3.0mL)混合物搅拌1h。将混合物浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化(乙腈25-55/0.05％TFA的水溶液)，并将产物级分用HCl(1.0M,0.10mL)水溶液处理，然后冻干，得到22(3.82mg,11.1％)，为浅黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.835min,m/z＝1107.7[M+1]+.1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.86(s,1H),7.72(d,J＝3.6Hz,1H),7.54(d,J＝3.2Hz,1H),7.46-7.39(m,10H),6.52-6.46(m,3H),4.65-4.60(m,7H),4.56-4.51(m,2H),4.40(s,1H),4.35-4.26(m,1H),4.25-4.15(m,1H),4.14-4.10(m,1H),3.80-3.76(m,1H),3.73-3.72(m,2H),3.71-3.64(m,5H),2.78-2.75(m,4H),2.71(s,3H),2.55-2.51(m,2H),2.46(s,3H),2.43(s,3H),2.40-2.36(m,1H),2.09-2.07(m,1H),1.64(s,2H),0.95(s,9H).
Figure BDA0003063017060004301
向含22(20.0mg，0.0200mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液中加入吡啶(14.29mg,0.1800mmol)、HOBt(3.17mg,0.0200mmol)和MC_SQ_Cit_PAB-PNP(17.27mg,0.0200mmol)。将反应溶液在50℃搅拌16h。将反应混合物过滤，并通过制备型HPLC纯化滤液(乙腈46-56/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ13(8.5mg,27％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.756min,m/z＝852.9[M/2+1]+.
xxxii.L1BQ14示例性L1-CIDE,L1BQ14可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004302
向含化合物1(15.0mg，0.0100mmol)和MC_OSu(6.26mg，0.0200mmol)的DMF(8.0mL)溶液中加入DIEA(5.25mg,0.0400mmol)。将混合物在60℃搅拌48h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈38-68/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ14(1.68mg,9.4％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,7min):RT(220/254nm)＝4.218min,m/z＝1322.0[M+23]+.
xxxiii.L1BQ15示例性L1-CIDE,L1BQ15可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004311
向含化合物1(2.000g,18.84mmol)的无水DCM(40mL)溶液中加入MnO2(2.456g,28.25mmol)。将反应混合物在20℃搅拌1h。将混合物过滤，将滤液真空浓缩，得到化合物2(1.970g,99.4％)，为无色油，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060004312
向含化合物2(1.970g,9.36mmol)的无水DCM(50mL)溶液中加入MeSO2Na(1.912g,18.73mmol)和碘(2.376g,9.36mmol)。将反应混合物在20℃于暗处搅拌24h。将混合物过滤，浓缩滤液，并通过硅胶色谱法纯化(含0-5％MeOH的DCM)，得到化合物3(1.200g,70％)，为淡黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.13-4.11,3.96-3.93(m,1H),3.77-3.70和3.51-3.47(m,1H),3.42和3.39(s,3H),2.04和1.96(s,1H),1.53和1.42(d,J＝7.2Hz,3H),1.33和1.22(d,J＝6.0Hz,3H).
Figure BDA0003063017060004321
在20℃，缓慢地向含三光气(111.84mg，0.3800mmol)和
Figure BDA0003063017060004322
分子筛(100mg)的无水DCM(10mL)混合物中加入化合物3(138.9mg，0.750mmol)的溶液和含吡啶(178.86mg，2.26mmol)的无水DCM(5.0mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌0.5h。然后将混合物浓缩，得到粗产物，其直接用于下一步。向含上述产物在无水DCM(15mL)中加入Et3N(114.41mg,1.13mmol)和化合物4(200.0mg,0.3800mmol)。将反应混合物在20℃再搅拌2h，用DCM(20mL)稀释，用H2O(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(含8％MeOH的DCM,Rf＝0.6)，得到化合物5(100mg，35％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.883min,m/z＝763.0[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004323
向含化合物5(90.0mg,0.1200mmol)的六氟异丙醇(6.0mL)溶液中加入TFA(0.30mL,0.1200mmol)。将反应溶液在20℃搅拌1h。浓缩溶液，得到化合物6(90mg,98.2％)，为粗制无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.744min,m/z＝641.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004324
向含化合物7(54.97mg，0.1800mmol)的DMF(6mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(77.04mg,0.600mmol)和HATU(90.67mg,0.240mmol)。在20℃将溶液搅拌15min，然后添加化合物6(90.0mg,0.1200mmol)。将所得反应溶液在20℃搅拌0.5h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含10％MeOH的DCM,Rf＝0.7)，得到化合物8(100mg,83％)，为白色固体。LCMS(10-80,AB,7min):RT＝4.028min,m/z＝952.3[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004331
向此含化合物8(90.0mg,0.1000mmol)的HFIP(7.0mL)溶液中加入TFA(0.35mL)。将反应溶液在20℃搅拌1h。真空浓缩混合物，去除溶剂，得到化合物9(90mg,99％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.760min,m/z＝830.5[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004332
向含化合物10(57.32mg，0.1400mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入DIEA(61.6mg,0.4800mmol)和HATU(61.62mg,0.1600mmol)。在20℃将溶液搅拌15min，然后添加化合物9(90.0mg,0.1000mmol)。将反应溶液在20℃搅拌1h。将混合物通过制备型HPLC纯化(XtimateC18150*25mm*5um，乙腈56-66/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ15(30mg,25％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99-8.98(m,1H),8.64(brs,1H),8.29(t,J＝5.6Hz,1H),7.45-7.40(m,9H),5.23(brs,1H),4.98-4.95(m,1H),4.53-4.43(m,4H),4.30-4.24(m,1H),4.07(t,J＝12.4Hz,1H),3.96(s,2H),3.86-3.84(m,1H),3.74-3.71(m,1H),3.59-3.53(m,12H),3.31-3.18(m,3H),2.59(s,3H),2.45-2.44(m,3H),2.40(s,3H),2.37-2.33(m,1H),2.17-2.10(m,1H),1.61(s,3H),1.44-1.37(m,3H),1.34-1.25(m,3H),0.95(s,9H).LCMS(10-80,AB,7min):RT＝4.328min,m/z＝607.4[M/2+1]+.
xxxiv.L1BQ17示例性L1-CIDE,L1BQ17可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004341
在室温，向含2-甲基-2-[(5-硝基-2-吡啶基)二硫烷基]丙-1-醇(1.1g，4.2mmol)的DCM(20mL)溶液中加入甲烷亚磺酸钠(2.20g，21.1mmol)和碘(2.10g,8.40mmol)。将反应混合物在50℃搅拌24h后，将其过滤，并将滤液通过硅胶柱色谱法纯化(含0-50％EtOAc的PE)，得到标题化合物(660mg,85％)，为黄色油。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.77(s,2H),3.37(s,3H),1.54(s,6H).
Figure BDA0003063017060004351
向此含三光气(95.01mg,0.3200mmol)的DCM(2.0mL)溶液中加入含吡啶(50.65mg，0.6400mmol)和化合物2(118.0mg,0.6400mmol)的DCM(2.0mL)溶液，
Figure BDA0003063017060004352
将反应在15℃搅拌30min。将反应混合物浓缩至干燥，得到化合物3(156mg,98％)，为白色固体。向含上述产物(90.66mg，0.370mmol)的DCM(8mL)溶液中加入含Et3N(49.58mg,0.490mmol)和化合物1(130.0mg,0.240mmol)的DCM(2.0mL)溶液。将反应混合物在20℃搅拌2h。将混合物浓缩，并通过快速柱纯化(含0-10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物3(107mg,44％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.811min,m/z＝741.1[M+1]+.
向含化合物3(107.0mg,0.1400mmol)的六氟异丙醇(1.9mL)溶液中加入TFA(0.10mL)。将反应溶液在20℃搅拌1h。浓缩混合物，得到具有TFA盐的化合物4(109mg,100％)，为无色油，其直接用于下一步。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.632min,m/z＝641.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004361
在25℃，将含化合物5(60.0mg,0.1000mmol)、DIEA(39.42mg，0.3100mmol)和HATU(57.99mg,0.1500mmol)的无水DMF(10mL)溶液搅拌10min，然后加入化合物4(99.78mg,0.1300mmol)。将所得混合物在25℃搅拌2h。通过制备型HPLC纯化混合物(乙腈39-69％/0.1％TFA的水溶液)，得到L1BQ17(43.09mg,32.5％)，为白色固体。LCMS(10-80,AB,7min):RT＝4.305min,m/z＝1212.6[M+1]+.
xxxv.L1BQ18示例性L1-CIDE,L1BQ18可以通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004362
向含MC_OSu(6.43mg，0.020mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液中加入1(15.0mg,0.0100mmol)和DIEA(8.99mg,0.0700mmol)。将混合物在20℃搅拌12h。将溶液浓缩，通过制备型HPLC纯化(45-75水(0.225％FA)-ACN)，得到L1BQ18(4.02mg,23％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.847min,m/z＝1234.4[M+1]+.
xxxvi.L1BQ19示例性L1-CIDE,L1BQ19可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004371
在0℃，向含化合物A(5.0g,25.61mmol)和DIEA(6.35mL，38.42mmol)的DCM(50mL)溶液中加入TsCl(7.32g,38.42mmol)。将混合物加热至25℃并搅拌16h。用水(20mL)淬灭混合物，用EtOAc(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化(含0-50％EtOAc的石油醚)，得到所需产物B(5.20g,58％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.879min,m/z＝371.9[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004372
在40℃，向含NaH(480.82mg，12.02mmol)的THF(40mL)悬浮液中加入含化合物B(3.500g,10.02mmol)的THF(5.0mL)，并将反应混合物在40℃搅拌4.5h，并用水淬灭。加入EtOAc(10mL)，分离有机层，并用水(10mL×2)和盐水(10mL)洗涤。将有机物经MgSO4干燥，浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含0-20％EtOAc的石油醚，Rf＝0.4)，得到化合物C(1.200g,68％)，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.32(m,5H),5.15(s,2H),2.24(s,4H).
Figure BDA0003063017060004381
向含化合物1(6.000g,30.74mmol)的乙酸(50mL)溶液中加入PtO2(698.1mg,3.07mmol)，并将所得悬浮液在45℃在H2(50psi)下搅拌12h。通过硅藻土过滤除去催化剂后，将滤液浓缩，得到化合物2(6.000g,97％)，为无色油。粗产物不经进一步纯化而直接使用。
Figure BDA0003063017060004382
向含化合物2(6.00g，29.82mmol)的THF(20mL)和水(5.00mL)溶液中加入NaHCO3(10.020g,119.27mmol)和Boc2O(10.28mL,44.73mmol)。将混合物在18℃搅拌2h。将混合物用水(15mL)稀释，并用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层干燥，浓缩，并通过柱色谱法纯化(含5％-30％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物3(7.200g,75％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.873min,m/z＝201.9[M+1-100]+.
Figure BDA0003063017060004383
在-78℃在N2下，向含化合物3(7.200g,23.89mmol)的THF(40.0mL)溶液中加入DIBAL-H(95.57mL,95.57mmol)(1.0M在甲苯中)，将混合物在-78℃搅拌2h。在-25℃，将反应用MeOH(5.0mL)淬灭，并搅拌5min。加入Rochelle盐溶液(60mL 20％w/w)，并在25℃搅拌1h。将残余物用EtOAc(15mL×2)萃取。将合并的有机层用水(30mL x 2)、盐水(30mL x 2)洗涤，并用硫酸钠干燥。将粗产物通过快速柱色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM,Rf＝0.5)，得到化合物4(2.70g，38％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.840min,m/z＝268.0[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004391
在0℃在N2下，向含Rh(OAc)2(0.45g,2.04mmol)和化合物4(2.50g,10.19mmol)的DCM(40mL)溶液中加入重氮乙酸乙酯(1.07mL,10.19mmol)。然后将混合物加热至15℃并搅拌12h。用水(10mL)淬灭混合物，用DCM(10mL×3)萃取。将有机层用水(10mL x 3)、盐水(10mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过柱色谱法纯化(含0-1％MeOH的DCM，Rf＝0.3)，得到化合物5(1.00g,30％)，为无色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.805min,m/z＝354.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004392
在-78℃在N2下，搅拌含化合物5(1000.0mg,3.02mmol)和Sc(OTf)3(148.51mg,0.3000mmol)的DCM(10mL)混合物，然后滴加含氮丙啶-1-羧酸苄酯(802.05mg,4.53mmol)的DCM(3.0mL)溶液。将混合物在-78℃搅拌4h，并加热到15℃持续12h。浓缩混合物，并通过硅胶快速色谱法(含0-5％MeOH的DCM,Rf＝0.4)和制备型HPLC(50％-80％水(10mM NH4HCO3)-ACN)纯化，得到化合物6(200mg,13％)，为棕色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.896min,m/z＝409.0[M+1-100]+.
Figure BDA0003063017060004393
向含Pd/C(35.57mg)的THF(10mL)溶液中添加化合物6(170.0mg,0.3300mmol)。将混合物在15℃在H2(15psi)下搅拌1h。过滤混合物，用MeOH(10mL x 3)洗涤，浓缩滤液，得到化合物7(125mg,99.9％)，为黄色油，无需进一步纯化即可用于下一步。
Figure BDA0003063017060004401
在0℃，向含JQ1(160.58mg,0.4000mmol)、HATU(190.38mg，0.5000mmol)和DIEA(0.17mL，1mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入化合物7(125.0mg,0.3300mmol)。将反应混合物在15℃搅拌1h。将混合物浓缩，并通过制备型TLC纯化(含5％MeOH的DCM,Rf＝0.3)，得到化合物8(240mg,92％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.920min,m/z＝757.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004402
向含化合物8(180.0mg,0.2400mmol)的THF(5.0mL)、MeOH(1.0mL)和水(1mL)溶液中加入LiOH H2O(49.86mg,1.19mmol)。将混合物在15℃搅拌1h。将混合物用水(10mL)淬灭，用EtOAc(10mL x 3)洗涤。将水层用柠檬酸酸化至pH＝4，用EtOAc(10mL×2)萃取。将有机层干燥，浓缩，并通过制备型HPLC纯化(25％-55％水(10mM NH4HCO3)-ACN)，得到化合物9(100mg,58％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT(220/254nm)＝0.843min,m/z＝751.1[M+23]+.
Figure BDA0003063017060004403
在50℃，将含化合物9(30.0mg,0.0300mmol)、VHL(26.58mg,0.0600mmol)、DIEA(5.31mg,0.0300mmol)和HATU(15.63mg，0.0300mmol)的DMF(4.0mL)溶液搅拌6h。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(45％-75％水(10mM和NH4HCO3)-ACN,25ml/min)，得到化合物10(25mg,72％)，为黄色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.894min,m/z＝1142.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004411
在15℃，将含化合物10(25.0mg,0.0200mmol)的HCl的EtOAc(4.0M，9.83mL)混合物溶液搅拌1h。将混合物浓缩，并将所得残余物用EtOAc(10mL x 2)和DCM(10mL x 2)洗涤，得到GNT_C439_45-1HCl盐，为黄色固体(20mg,85％)。1H NMR(400MHz,D2O)δ9.56(s,1H),7.43-7.41(m,4H),7.38-7.33(m,4H),4.53-4.46(m,3H),4.38-4.37(m,2H),4.05-3.96(m,2H),3.90-3.87(m,1H),3.77-3.75(m,1H),3.59-3.57(m,3H),3.49-3.32(m,9H),2.69-2.65(m,4H),2.46(s,3H),2.33-1.88(m,10H),1.67-1.63(m,1H),1.52(s,3H),1.19-1.09(m,1H),0.88(s,9H).LCMS(10-80,AB,7min):RT＝3.233min,m/z＝1041.5[M+1]+.手性HPLC(CD-PH_10-80_B_08ML_30min)：RT＝16.05min,16.44min，显示68％和32％的所需产物。
Figure BDA0003063017060004412
向含MC_SQ_Cit_PAB-PNP(9.11mg，0.0100mmol)的无水DMF(2.0mL)溶液中加入11(8.9mg,0.0100mmol)和DIEA(5.33mg,0.0400mmol)。将反应溶液在20℃搅拌12h。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化(38-58水(10mM NH4HCO3)-ACN)，得到产物(15mg，纯度为89％)，将其通过制备型HPLC进一步纯化(39-59水(0.225％FA)-ACN)，得到两种L1BQ19产物：(4.11mg,43％)和(4.62mg,47％)均为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.841min,m/z＝820.0[M\2+1]+；and LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.844min,m/z＝820.1[M/2+1]+.
xxxvii.L1BQ20示例性L1-CIDE,L1BQ20可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004421
在0℃在N2下，向含NaH(59.94mg,1.5mmol)的THF(10mL)悬浮液中加入化合物1(0.070mL,1mmol)。将混合物搅拌0.5h。然后将含溴乙酸叔丁酯(0.11mL，0.950mmol)的THF(5.0mL)缓慢加入上述混合物中。用水(10mL)淬灭反应，用EtOAc(20mL×2)萃取，用盐水(10mL×2)洗涤。将有机层浓缩，并通过快速柱色谱法纯化(含20％EtOAc的石油醚，Rf＝0.5)，得到化合物2(90mg,40.2％)，为浅黄色油。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ4.34(s,2H),4.24(s,2H),4.03(s,2H),1.48(s,9H).
Figure BDA0003063017060004422
在20℃，向含化合物2(512.0mg,2.28mmol)、PhthNH2(369.51mg,2.51mmol)和Ph3P(718.62mg,2.74mmol)的THF(10mL)的搅拌溶液中加入DIAD(554.0mg,2.74mmol)。将混合物在室温搅拌12h。除去反应溶剂，并将残余物通过硅胶快速色谱法纯化(含0-30％EtOAc的石油醚)，得到化合物3(1.1g,>100％)，为黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89-7.86(m,2H),7.75-7.73(m,2H),4.52(s,2H),4.32(s,2H),4.01(s,2H),1.45(s,9H).
Figure BDA0003063017060004431
向含化合物3(200.0mg,0.570mmol)的EtOH(5.0mL)的搅拌溶液中加入水合肼(0.010mL,0.680mmol)，并将混合物在80℃搅拌1h。将混合物浓缩，用DCM/MeOH(10:1)(20mLx 3)萃取，并用盐水(10mL)洗涤。将有机层浓缩，得到化合物4(120mg,95％)，为棕色油，其直接用于下一步。
Figure BDA0003063017060004432
在25℃，向含JQ1(2.05g,5.11mmol)和化合物4(0.95g,4.25mmol)的DMF(10mL)混合物中添加DIEA(1.099g,8.51mmol)和HATU(2.426g,6.38mmol)。将混合物搅拌2h。浓缩混合物，并通过硅胶色谱法纯化(含0-10％MeOH的DCM Rf＝0.6)，得到化合物5(1.56g,61％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.905min,m/z＝606.0[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004433
在20℃，向含化合物5(1.37g,2.26mmol)的DCM(20mL)的搅拌的溶液中加入TFA(20.0mL)。将混合物在20℃搅拌2h。除去溶剂，得到化合物6(1.2g,82％)，为黄色油。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.804min,m/z＝550.1[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004441
LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.942min,m/z＝727.2[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004442
LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.748min,m/z＝627.3[M+1]+.
Figure BDA0003063017060004443
在25℃，将含化合物6(96.52mg,0.1800mmol)、DIEA(52.34mg，0.400mmol)和HATU(66.72mg,0.1800mmol)的无水DMF(5.0mL)混合物搅拌10min，加入化合物7(100.0mg,0.1300mmol)。将混合物在25℃搅拌2h。通过制备型HPLC纯化粗产物(乙腈32-62％/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ20(18.75mg,12％)，为白色固体。LCMS(10-80,AB,7min):RT＝4.380min,m/z＝1158.2[M+1]+.
xxxviii.L1BQ21示例性L1-CIDE,L1BQ21可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004451
向含化合物1(45.0mg，0.0800mmol)的DMF(4.0mL)溶液中加入HATU(34.22mg,0.0900mmol)和DIEA(31.72mg,0.2500mmol)。在25℃将溶液搅拌15min，然后添加化合物2(91.0mg,0.1200mmol)。将反应溶液在25℃再搅拌1h，通过制备型HPLC纯化(XtimateC18150*25mm*5um，乙腈54-74/0.225％FA的水溶液)，得到L1BQ21(22mg,23％)，为白色固体。LCMS(5-95,AB,1.5min):RT＝0.889min,m/z＝1172.2[M+1]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.78(t,J＝5.2Hz,1H),8.64(brs,1H),7.63(t,J＝8.8Hz,1H),7.49-7.40(m,8H),5.23(brs,1H),4.97-4.94(m,1H),4.52-4.38(m,4H),4.28-4.23(m,1H),4.16-3.98(m,4H),3.86-3.82(m,2H),3.76-3.71(m,2H),3.55(brs,2H),3.29-3.17(m,1H),2.59(s,3H),2.44(s,3H),2.40(s,3H),2.33(brs,1H),2.17-2.11(m,1H),1.61(s,3H),1.44-1.37(m,3H),1.34-1.23(m,3H),0.95(s,9H).
xxxix.L1BQ22示例性L1-CIDE,L1BQ22可通过以下方案合成：
Figure BDA0003063017060004452
向含化合物1(37.71mg，0.0700mmol)和HATU(29.47mg，0.0800mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入DIEA(38.52mg,0.3000mmol)。将混合物在25℃搅拌10min。加入化合物2(45.0mg,0.0600mmol)，并将混合物在25℃搅拌1h。将混合物浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化(51-71水(0.225％FA)-ACN)，得到L1BQ22(20.95mg,30％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.95(s,1H),8.76-8.73(m,1H),8.63-8.60(m,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,1H),7.45-7.36(m,8H),4.47-4.20(m,9H),4.06-3.96(m,5H),3.97-3.82(m,1H),3.51(s,3H),3.27-3.23(m,1H),3.18-3.13(m,1H),2.64-2.63(m,1H),2.56(s,3H),2.40(s,3H),2.37(s,3H),2.32-2.29(m,1H),2.18-2.04(m,1H),1.58(s,3H)1.438-1.45(m,6H),0.92(s,9H).LCMS(5-95_1.5min):RT(220/254nm)＝0.888min,[M+H]+1172.2.
C.Ab-CIDE的制备
i.通过连接基L1将抗体(Ab)连接到CIDE
L1-CIDE与几种抗体的缀合以产生Ab-CIDE，其完成方式如下。
通过改造的LC-K149C，HC-A140，HC-L174C和/或HC-Y373C半胱氨酸残基，抗HER27C2 LC-K149C和B7-H4 LC K149C缀合到化合物6-8，抗HER2 7C2 LC-K149C和抗CD2210F4.v3 LC K149C缀合到化合物10-12。用1M Tris将含半胱氨酸改造的抗体(THIOMABTM)的10mM琥珀酸盐，pH 5，150mM NaCl，2mM EDTA的pH调节至pH 7.5-8.5。将3-16当量的化合物6-8和10-12(均含有硫醇反应性马来酰亚胺基)溶于DMF或DMA(浓度＝10mM)中，并添加到还原的重新氧化的和pH调节的抗体中。将反应在室温或37℃温育，并监测直至反应完成(1至约24小时)，如通过反应混合物的LC-MS分析所确定的。反应完成后，可通过一种方法或几种方法的任意组合纯化Ab-CIDE，目的是去除残留的未反应的连接基药物中间体和聚集的蛋白质(如果存在的水平较高)。在一个实例中，用10mM组氨酸乙酸盐(pH 5.5)稀释Ab-CIDE，直到最终pH值约为5.5，然后使用连接至Akta纯化系统(GE Healthcare)的HiTrap S柱、或Smaxi离心柱(Pierce)通过S阳离子交换色谱法纯化。可替代地，使用连接至Akta纯化系统的S200柱或Zeba离心柱，通过凝胶过滤色谱法纯化Ab-CIDE。透析用于纯化缀合物。
使用凝胶过滤或透析将THIOMABTMAb-CIDE配制到20mM His/乙酸盐(pH 5)，240mM蔗糖中。通过离心超滤浓缩纯化的Ab-CIDE，并在无菌条件下通过0.2μm过滤器过滤，并在-20℃冷冻保存。
实例2
Ab-CIDE的表征
表征Ab-CIDE以确定蛋白质浓度(例如，通过BCA测定)、聚集水平(通过分析性SEC)、CAR(例如，通过LC-MS)。
使用Shodex KW802.5色谱柱，用pH 6.2的0.2M磷酸钾，0.25mM氯化钾和15％IPA中，以0.75mL/min的流速对缀合物进行尺寸排阻色谱分析。通过积分在280nm处洗脱的峰面积吸光度来确定Ab-CIDE的聚集状态。使用Agilent TOF 6530ESI仪器对缀合物进行LC-MS分析。例如，将Ab-CIDE用含1:500w/w胞内蛋白酶Lys C(Promega)的Tris(pH 7.5)在37℃处理30min。将所得的裂解片段加载到加热至80℃的
Figure BDA0003063017060004472
(埃),8μm(微米)PLRP-S(高度交联聚苯乙烯)色谱柱上，并在10分钟内用30％B至40％B的梯度洗脱。流动相A为0.05％TFA的H2O溶液，并且流动相B为0.04％的乙腈溶液。流速为0.5mL/min。在电喷雾离子化和MS分析之前，通过280nm处UV吸收检测来监测蛋白质洗脱。通常可以实现未缀合Fc片段、残留的未缀合Fab和药物化Fab的色谱分辨。使用Mass HunterTM软件(Agilent Technologies)对获得的m/z光谱进行解卷积，以计算抗体片段的质量。下表1中提供了几种Ab-CIDE缀合物的详细表征数据。
表1.几种Ab-CIDE的表征。
Figure BDA0003063017060004471
Figure BDA0003063017060004481
aCys突变位点，用于连接连接基。用于描述mAb连接位点的命名法规则如下描述：E.A.Kabat,T.T.Wu,C.Foeller,H.M.Perry,K.S.Gottesman“Sequences of Proteins ofImmunological Interest”Diane Publishing,1992ISBN 094137565X.bCIDE-抗体比率。c在缀合过程中观察到的聚集物质百分比。在随后的纯化过程中，将这些聚集物与缀合物分离。d纯化的缀合物中存在的未缀合的连接基药物的量。e高聚集度和/或较差的溶解度阻止了纯化缀合物的分离。f使用DMF或PG作为助溶剂，未观察到连接基药物的缀合。
实例3
ERα的体内降解
图1描绘了两种Ab-CIDE的活性。结构如表2所示。
表2.
Figure BDA0003063017060004482
图2描绘了两种Ab-CIDE的活性。结构如表3所示。
表3.
Figure BDA0003063017060004483
图3描绘了两种Ab-CIDE的活性。结构如表4所示。
表4.
Figure BDA0003063017060004491
实例4
CIDE对PC3-Steap 1细胞中BRD4降解的定量
在第1天，将PC3 Steap-1过量表达前列腺癌细胞以每孔9000个细胞的密度接种在CellCarrier-384Ultra微孔板中，在45ul/孔的测定培养基(RPMI,10％FBS,含2mM L-谷氨酰胺)中进行组织培养(Perkin Elmer#6057300)。在第2天，将化合物在二甲基亚砜(DMSO)中连续稀释1/3，以在384孔v型底部聚丙烯微孔板(Greiner#781091)上产生20点稀释液。将来自连续稀释液的每个2ul样品转移至98ul测定介质中作为中间稀释液。将5ul中间稀释液加入到45ul细胞板中。将第1、2、23和24列仅以0.2％w/v终浓度的DMSO处理，以将数据归一化为“中性对照”。化合物处理后，将细胞板在37C的培养箱中保存4小时。4小时后，通过将15ul 16％w/v多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences#15710-S)直接加入到50ul培养基和细胞板中的化合物中，将细胞固定在终浓度为3.7％的多聚甲醛中。将细胞板在RT温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔PBS洗涤3次。将50ul/孔的包含0.5％w/v牛血清蛋白质、0.5％w/v Triton X-100的磷酸缓冲盐溶液(PBS(抗体稀释缓冲液)加入到每个孔中。将样品温育30分钟。将样品温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔的PBS洗涤3次。从孔中抽吸出PBS。BRD4的免疫荧光染色是通过将mAB抗BRD4[EPR5150]抗体(Abcam128874)1:500稀释到抗体稀释缓冲液(PBS,Triton X100 0.5％,BSA 0.5％)中进行的。每孔加入25ul稀释于缓冲液中的BRD4抗体，并在4C温育过夜。
在第3天，将样品用100ul/孔的PBS洗涤3次。将25ul/孔的第二抗体溶液(山羊抗兔IgG，DyLight 488缀合的高度交叉吸附的Thermo Fisher#35553)和以1ug/ml稀释于抗体缓冲液中的Hoechst 33342)分配到每个孔中。仅将Hoechst 33342添加到底部3列以将数据归一化为“抑制剂对照”。将样品在室温温育2小时。将样品用100ul PBS洗涤3次。使用OperaPhenix高内涵筛选系统对BRD4进行荧光定量成像。使用488nm和405nm通道捕获样品的荧光图像。Hoechst通道用于识别核区域。在核区域中定量平均BRD4强度为488。使用GenedataScreener进行数据分析，其中使用DMSO和无第一抗体对照处理的样品来定义BRD4的0％和100％变化。剂量-应答对数(抑制剂)与应答的关系曲线，用于定义曲线的拐点(EC50)和最大效应的平台。
实例5
CIDE对EoL-1细胞中BRD4降解的定量
在第1天，将PC3 Steap-1过量表达前列腺癌细胞以每孔9000个细胞的密度接种在CellCarrier-384微孔板中
在第1天，将EoL-1嗜酸性粒细胞以每孔45,000个细胞的密度接种在CorningPureCoat Amine微孔板(Corning#354719)中，以45ul/孔的测定培养基(RPMI,10％FBS，含L-谷氨酰胺)。细胞附着到细胞板上后，将化合物在二甲基亚砜(DMSO)中连续稀释1/3，以在384孔v型底部聚丙烯微量滴定板(Greiner#781091)上产生20点稀释液。将来自连续稀释液的每个2ul样品转移至98ul测定介质中作为中间稀释液。将每孔5ul的中间稀释液加入到45ul的细胞板中。将第1、2、23和24列仅用0.2％终浓度的DMSO处理，以将数据归一化为“中性对照”。化合物处理后，将细胞板在37℃培养箱中保存4小时。4小时后，通过将15ul 16％w/v多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences#15710-S)直接添加到细胞板中的50ul培养基和化合物中，将细胞固定在3.7％w/v终浓度的多聚甲醛中。将细胞板在RT温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔PBS洗涤3次。向每个孔中加入50ul/孔的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)(pH7.5)，其包含0.5％w/v牛血清蛋白质，0.5％w/v Triton X-100(封闭/通透缓冲液)。将样品温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔的PBS洗涤3次。从孔中抽吸出PBS，并向每个孔中加入每孔50ul的EoL-1封闭缓冲液(含有10％正常山羊血清的PBS(AbCam#ab7481))。将试管在室温温育30分钟。从孔中倒出封闭缓冲液。BRD4的免疫荧光染色是通过将mAB抗BRD4[EPR5150]抗体(Abcam 128874)以1:500的比例稀释到抗体稀释缓冲液(PBS，2％正常山羊血清)中进行的。每孔加入25ul稀释于缓冲液中的BRD4抗体，并在4C温育过夜。
在第2天，将样品用100ul/孔的PBS洗涤3次。将25ul/孔的第二抗体溶液(山羊抗兔IgG，DyLight 488缀合的高度交叉吸附的Thermo Fisher#35553)和以1ug/ml稀释于抗体缓冲液中的Hoechst 33342)分配到每个孔中。仅将Hoechst 33342添加到底部3列以将数据归一化为“抑制剂对照”。将样品在室温温育2小时。将样品用100ul PBS洗涤3次。使用OperaPhenix高内涵筛选系统对BRD4进行荧光定量成像。使用488nm和405nm通道捕获样品的荧光图像。Hoechst通道用于识别核区域。在核区域中定量平均BRD4强度为488。使用GenedataScreener进行数据分析，其中使用DMSO和无第一抗体对照处理的样品来定义BRD4的0％和100％变化。剂量-应答对数(抑制剂)与应答的关系曲线，用于定义曲线的拐点(EC50)和最大效应的平台。
实例6
CIDE抗体缀合物对PC3-Steap 1细胞中BRD4降解的定量
在第1天，将过量表达PC3 Steap-1的前列腺癌细胞以每孔1000个细胞的密度接种在CellCarrier-384Ultra微孔板中，以45ul/孔的测定培养基(RPMI,10％FBS,1％Glutamax，测定当天补充甲硫氨酸和50uM胱氨酸)进行组织培养处理(Perkin Elmer#6057300)。在第2天，将抗体缀合物在抗体缓冲液(20mM组氨酸乙酸盐pH 5.5、240mM蔗糖，0.02％Tween 20)中依次稀释1/3，以在384孔v型底部聚丙烯微量滴定板(Greiner#781091)上产生20点稀释液。将每孔5ul抗体缀合物转移至45ul细胞板。仅使用抗体缓冲液处理第1、2、23和24列，以将数据归一化为“中性对照”。抗体处理后，将细胞板在37C培养箱中保存72小时。4小时后，通过直接向细胞板中的50ul培养基和化合物中添加15ul 16％多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences#15710-S)，将细胞固定在终浓度3.7％的多聚甲醛中。将细胞板在RT温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔PBS洗涤3次。向每个孔中加入50ul/孔的磷酸盐缓冲盐水(PBS)，其包含0.5％w/v的牛血清蛋白质，0.5％v/v的Triton X-100(抗体稀释缓冲液)。将样品温育30分钟。将样品温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔的PBS洗涤3次。从孔中抽吸出PBS。BRD4的免疫荧光染色是通过将mAB抗BRD4[EPR5150]抗体(Abcam 128874)1:500稀释到抗体稀释缓冲液(PBS,Triton X100 0.5％,BSA 0.5％)中进行的。每孔加入25ul稀释于缓冲液中的BRD4抗体，并在4C温育过夜。
在第3天，将样品用100ul/孔的PBS洗涤3次。将25ul/孔的第二抗体溶液(山羊抗兔IgG，DyLight 488缀合的高度交叉吸附的Thermo Fisher#35553)和以1ug/ml稀释于抗体缓冲液中的Hoechst 33342)分配到每个孔中。仅将Hoechst 33342添加到底部3列以将数据归一化为“抑制剂对照”。将样品在室温温育2小时。将样品用100ul PBS洗涤3次。使用OperaPhenix高内涵筛选系统对BRD4进行荧光定量成像。使用488nm和405nm通道捕获样品的荧光图像。Hoechst通道用于识别核区域。在核区域中定量平均BRD4强度为488。使用GenedataScreener进行数据分析，其中使用DMSO和无第一抗体对照处理的样品来定义BRD4的0％和100％变化。剂量-应答对数(抑制剂)与应答的关系曲线，用于定义曲线的拐点(EC50)和最大效应的平台。数据如下表5所示。
表5.BRD4降解结果。
Figure BDA0003063017060004521
Figure BDA0003063017060004531
Figure BDA0003063017060004541
a药物-抗体比率。
bBRD4降解效力(缀合物浓度)。
cBRD4降解效力(缀合的CIDE浓度)。
d观察到最大的BRD4降解。
实例7
CIDE抗体缀合物对EoL-1细胞中BRD4降解的定量
在第1天，将EoL-1嗜酸性粒细胞以每孔45,000个细胞的密度接种在CorningPureCoat Amine微孔板(Corning#354719)中，以45ul/孔的测定培养基(RPMI,10％FBS，含L-谷氨酰胺)。将细胞附着到细胞板上后，将抗体缀合物在抗体缓冲液(20mM组氨酸乙酸盐pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％Tween 20)中依次稀释1/3，以在384孔v型底部聚丙烯微孔板上形成20点稀释液(Greiner#781091)。将每孔5ul抗体缀合物转移至45ul细胞板。仅使用抗体缓冲液处理第1、2、23和24列，以将数据归一化为“中性对照”。抗体处理后，将铺板的细胞在37C培养箱中保存20小时。20小时后，通过直接向细胞板中的50ul培养基和化合物中添加15ul 16％多聚甲醛(Electron Microscopy Sciences#15710-S)，将细胞固定在终浓度3.7％的多聚甲醛中。将细胞板在RT温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔PBS洗涤3次。将50ul/孔的包含0.5％w/v牛血清蛋白质、0.5％w/v Triton X-100的磷酸缓冲盐溶液(PBS)(pH7.5)(封闭/通透缓冲液)加入到每个孔中。将样品温育20分钟。将孔内容物抽吸出来，并用100ul/孔的PBS洗涤3次。从孔中抽吸出PBS，并向每个孔中加入每孔50ul的EoL-1封闭缓冲液(含有10％正常山羊血清的PBS(AbCam#ab7481))。将试管在室温温育30分钟。从孔中倒出封闭缓冲液。BRD4的免疫荧光染色是通过将mAB抗BRD4[EPR5150]抗体(Abcam128874)1:500稀释到抗体稀释缓冲液(PBS,Triton X100 0.5％,BSA 0.1％)中进行的。每孔加入25ul稀释于缓冲液中的BRD4抗体，并在4C温育过夜。
在第2天，将样品用100ul/孔的PBS洗涤3次。将25ul/孔的第二抗体溶液(山羊抗兔IgG，DyLight 488缀合的高度交叉吸附的Thermo Fisher#35553)和以1ug/ml稀释于抗体缓冲液中的Hoechst 33342)分配到每个孔中。仅将Hoechst 33342添加到底部3列以将数据归一化为“抑制剂对照”。将样品在室温温育2小时。将样品用100ul PBS洗涤3次。使用OperaPhenix高内涵筛选系统对BRD4进行荧光定量成像。使用488nm和405nm通道捕获样品的荧光图像。Hoechst通道用于识别核区域。在核区域中定量平均BRD4强度为488。使用GenedataScreener进行数据分析，其中使用DMSO和无第一抗体对照处理的样品来定义BRD4的0％和100％变化。剂量-应答对数(抑制剂)与应答的关系曲线，用于定义曲线的拐点(EC50)和最大效应的平台。
实例8
BRD4靶向CIDE的细胞增殖测定
为了确定BRD4小分子降解剂的抗增殖作用，无论是单独还是作为与抗体缀合的有效负载，均采用标准的细胞生存力评估方案。由于抗体缀合物靶向STEAP-1或CLL-1抗原，因此测定的细胞系包括LNCaP(克隆FGC)、PC-3-STEAP1(稳定表达STEAP-1的PC-3细胞)、EOL-1和HL-60。
用于所有细胞系的培养基是具有降低的半胱氨酸浓度(50uM)外加10％FBS和抗生素的RPM-1640。确定每个细胞系的细胞接种密度，以使得能够用测试化合物或抗体进行6天的处理而没有细胞过度生长。所有温育均在37℃的潮湿CO2培养箱中进行。
在第1天，通过离心悬浮细胞或通过Acutase处理贴壁细胞来收获细胞，然后以以下密度接种在384孔黑色/透明组织培养板中的50uL新鲜培养基中：LNCaP(1250细胞/孔)、PC-3-STEAP-1(400细胞/孔)、EOL-1和HL-60(2500细胞/孔)。第二天，使用回声分配器(Labcyte)，通过添加稀释于DMSO的小分子或含抗体缀合物的稀释缓冲液(20mM组氨酸乙酸盐，240mM蔗糖，0.02％聚山梨酯20，pH 5.5)来开始用各种浓度的测试分子处理。
用测试分子处理6天后，将测定板平衡至室温，并根据制造商的说明和Envision仪器(PerkinElmer)上的发光读数，通过添加40uL CellTiterGlo(Promega)评估活细胞水平。
发光水平与裂解细胞的ATP直接相关，反映了活细胞的数量。与对照孔(DSMO或抗体稀释剂)相比，降低的信号被用作由于BRD4损失而抑制增殖或引起细胞死亡的指示。结果在表6中示出。
表6.抗增殖结果。
Figure BDA0003063017060004571
aCIDE-抗体比率。
b效力(LnCap细胞；缀合物浓度)。
c抗增殖效力(LnCap细胞；缀合的CIDE浓度)。
d抗增殖效力(PC3细胞；缀合物浓度)。
e抗增殖效力(PC3细胞；缀合的CIDE浓度)。
PK和肿瘤模型实例9-11
材料和方法：
体内实验。所有动物研究均按照美国国立卫生研究院关于实验动物的护理和使用的准则进行，并得到了Genentech，Inc.的机构动物护理和使用委员会(IACUC)的批准。
两种人AML细胞系EOL-1(DSMZ；Braunschweig,Germany)和HL-60(ATCC,Manassas,VA)用于建立皮下异种移植模型，以评估降解剂-抗体缀合物的效力。将肿瘤细胞(5百万个细胞悬浮在0.1mL Hanks平衡盐溶液中，添加有Matrigel)接种在雌性CB-17 Fox ChaseSCID小鼠(Charles River Lab,Hollister,CA)的侧面。当平均肿瘤大小达到所需的体积(200-300mm3)时，将动物随机分为n＝5组，每组具有相似的肿瘤体积分布，并且每只动物腹膜内注射过量的小鼠IgG2a抗豚草抗体(30mg/kg；以阻断经常在AML细胞表面表达的Fcγ受体)。四小时后，通过尾静脉单次静脉内(IV)推注向动物施用媒介物或降解剂-抗体缀合物。使用卡尺在两个维度(长度和宽度)上测量肿瘤，并使用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤大小(mm3)＝0.5x(长x宽x宽)。将结果绘制为每组随时间的平均肿瘤体积+/-SEM。治疗组在肿瘤测量期间没有致盲。
为了评估体内释放的降解剂和BRD4降解的水平，在施用单次IV剂量的上述降解剂-抗体缀合物加抗豚草后第4天，收集了来自其他异种移植动物的肿瘤组织(200-300mm3；n＝4-5/组)。为了进行药代动力学和体内稳定性分析，在单次IV剂量的降解剂-抗体缀合物之后的指定时间点，从此前未接受过治疗的动物中收集血浆样品(n＝3/时间点)。将所有样品储存在约-70℃直至分析。
实例9
具有以下结构的CLL1-靶向Ab-CIDE(PAC)的药代动力学：
Figure BDA0003063017060004581
星代表Ab-缀合(DAR)的位点，与具有以下结构的相应未缀合CIDE进行比较：
Figure BDA0003063017060004591
未缀合的CIDE的小鼠PK如图6a所示。CLL1-靶向PAC的小鼠PK如图6b所示。
实例10
抗体缀合在小鼠异种移植模型中表现出强大的、抗原依赖的功效
单次静脉内(IV)施用具有以下结构的CLL1-靶向PAC：
Figure BDA0003063017060004592
其中星代表Ab-缀合(DAR)的位点，给携带HL-60AML异种移植物的小鼠，提供了剂量依赖性的肿瘤生长抑制活性，该活性与媒介物对照完全分开(数据未显示)。在5mg/kg的匹配剂量水平下，CLL1-靶向PAC相对于HER2-靶向对照缀合物(HER2-5，数据未显示)表现出明显更强的HL-60功效结果。该结果与相应的CIDE(未缀合)经由CLL1-靶向PAC向AML肿瘤的抗原依赖性递送一致。当通过单次IV施用对携带EOL-1AML异种移植物的小鼠评估CLL1-靶向PAC和HER2-5时，观察到相似的剂量依赖性抗肿瘤活性，甚至观察到更显著的抗原依赖性递送作用(图7)。在一个单独的实验中，在将CLL1-靶向PAC IV施用给异种移植小鼠四天后，在EOL-1肿瘤中检测到可测量水平的未缀合CIDE(数据未显示)。测得的未缀合的CIDE的肿瘤内量与CLL1-靶向PAC的施用剂量以及缀合物显示的EOL-1肿瘤生长抑制活性密切相关(比较剂量水平1.5、5.0和10mg/kg)。CLL1-靶向PAC的异种移植物功效与肿瘤内降解剂浓度之间的关系与其他先前研究过的携带细胞毒性有效载荷的ADC观察到的相关结果相似。重要的是，在所有这些体内研究中，CLL1-靶向PAC和HER2-5缀合物均具有良好的耐受性，并且检测到相关小鼠体重最小降低幅度(数据未显示)。
实例11
相对于未缀合的CIDE，CIDE的抗体缀合可显著改善体内功效
为了确定实例9中未缀合的CIDE的缀合是否增强了分子提供良好异种移植结果的能力，在EOL-1肿瘤模型中通过单次IV剂量(0.4mg/kg)施用来评估未缀合的化合物。此实验中使用的未缀合的未缀合CIDE的量等于与10mg/kg剂量的相应CLL1-靶向PAC相关的量(请注意，未缀合的CIDE和CLL1-靶向PAC之间存在较大的分子量差异；分别为1096和156,690g/mole)。如图8所示，未缀合的CIDE的施用在EOL-1模型中没有功效。相反，在相同的实验中，匹配剂量的CLL1-靶向PAC(10mg/kg)表现出很强的抗肿瘤活性(图8)。这些结果清楚地证明了抗体缀合的能力，以使嵌合降解剂分子的体内活性成为可能，从而相对于未缀合化合物获得的结果而言，显著增强了其功效。用CLL1-靶向PAC进行的稳定性和药代动力学分析支持CLL1-靶向PAC体内暴露时间延长；并且，该性质可能有助于使用缀合物观察到有利的功效结果。此外，以5和10mg/kg的剂量水平单次IV施用未缀合的CLL1抗体均没有EOL-1的体内功效(图8)。这些结果证实，在EOL-1模型中观察到CLL1-靶向PAC功效不是由缀合物的mAb部分产生的。
实例12
与未缀合的CIDE相比，CIDE的抗体缀合显示出更高的ERα水平降低
将MCF7-neo/HER2细胞以200,000个细胞/孔的密度接种到12孔细胞培养板中(在补充有10％的木炭剥离的胎牛血清的无酚红RPMI中)。16小时后，将细胞分别用系列稀释的缀合物或化合物处理72小时或4小时。用PBS洗涤细胞一次，并裂解于100uL裂解缓冲液(20mM Tris pH7.5,12.5mM NaCl,2.5mM MgCl2,0.1％Triton X-100,6M尿素，蛋白酶抑制剂(Roche))。通过BCA测定法(ThermoFisher)测定总蛋白质浓度。对于每个样品，在4-12％Bis-Tris凝胶上分离10μg总蛋白质，并转移到PVDF膜上。将膜与抗雌激素受体α抗体(CellSignaling；8644S)和GAPDH(Cell Signaling；8884S)温育，并使用化学发光法(PerkinElmer)可视化蛋白质条带。结果数据汇总于图9中。测试化合物的结构为：
Figure BDA0003063017060004611
Figure BDA0003063017060004621
已努力确保所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应考虑到一些实验误差和偏差。
本领域的技术人员将认识到许多与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料，可用于实施本文所述的主题。本发明决不仅限于所述的方法和材料。
除非另外定义，否则本文所用的所有科学技术术语的含义与本主题所属领域普通技术人员通常理解的含义相同，并且与下述文献一致：Singleton等人(1994)Dictionaryof Microbiology and Molecular Biology,第2版，J.Wiley&Sons,New York,NY；andJaneway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immunobiology,第5版，GarlandPublishing,New York.
在本说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则“包括”、“包含”和“含有”这些词是在非排他性意义上使用的。应理解的是，本文描述的实施例包括“由实施例组成”和/或“基本上由实施例组成”。
如本文所用的术语“约”，当指的是数值时，是指包括从指定量起的变化，在一些实施例中为±50％，在一些实施例中为±20％，在一些实施例中为±10％，在一些实施例中为±5％，在一些实施例中为±1％，在一些实施例中为±0.5％，在一些实施例中为±0.1％，因为此类变化适于执行所公开的方法或采用所公开的组合物。
若提供数值的范围，则应理解的是，介于该范围上限与下限之间的每个中间值(到下限的单位的十分之一，除非上下文另外明确规定)以及所指定范围内的任何其他指定值或中间值，均涵盖在本文之内。这些小范围的上限和下限可独立地包括在该较小范围内，并且也涵盖在本文之内，以所指定范围内任何明确排除的限值为准。在规定范围包括一个或两个限制的情况下，还包括排除那些包括的限制中的一个或两个的范围。
对于本主题所涉及的本领域技术人员而言，在受益于上文的描述和相关附图中所提出的教导的情况下，将想到本文阐述的本发明的许多变型例和其他实施例。因此，应当理解的是，本主题不限于所公开的特定实施例，并且变型例和其他实施例旨在包括在所附权利要求的范围内。尽管本文采用了特定的术语，但这些术语仅在通用和描述性的意义上使用，而非出于限制的目的。
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Claims (63)

1.一种具有如下化学结构的缀合物
Ab―(L1―D)p，
其中，
D为具有E3LB―L2―PB结构的CIDE；
E3LB与L2共价结合，其中所述E3LB为结合E3连接酶的配体，其中所述E3连接酶为vonHippel-Lindau(VHL)；
L2为与E3LB和PB共价结合的连接基；
PB与L2共价结合，其中所述PB为蛋白质结合配体，其结合蛋白质以通过蛋白酶体发生降解；
Ab为与L1共价结合的抗体；
L1为与Ab和D共价结合的连接基；并且
p的值为1至8，
其中EL3B包含具有以下结构的残基：
Figure FDA0003063017050000011
其中，
X和X’各自独立地为C＝O、O＝S、-S(O)、S(O)2；
R2’为
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w烷基，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)wNR1NR2N，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-(C＝O)vNR1(SO2)w-杂环；
任选地取代的-XR2’-烷基基团；
任选地取代的-XR2’-芳基基团；
任选地取代的-XR2’-杂芳基基团；或
任选地取代的-XR2’-杂环基团；
R3’为
任选地取代的烷基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-C(O)NR1R2，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-NRZ-(CH2)n-C(O)u(NR1)v(SO2)w-杂环，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-烷基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1NR2N，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-NR1C(O)R1N，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-芳基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂芳基，
任选地取代的-O-(CH2)n-(C＝O)u(NR1)v(SO2)w-杂环；
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-烷基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-(V)n’-(CH2)n-(V)n’-杂环基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-烷基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂芳基基团，
任选地取代的-(CH2)n-N(R1’)(C＝O)m’-(V)n’-杂环基团，
任选地取代的-XR3’-烷基基团；
任选地取代的-XR3’-芳基基团；
任选地取代的-XR3’-杂芳基基团；或
任选地取代的-XR3’-杂环基团；
其中R1N和R2N各自独立地选自由以下项组成的组：H、任选地被一个或两个羟基基团或一个、两个或三个卤素基团取代的C1-C6烷基、任选地取代的-(CH2)n-芳基、任选地取代的-(CH2)n-杂芳基和任选地取代的-(CH2)n-杂环基团；
RZ、R2和R1各自独立地为H或C1-C3烷基基团；
V为O、S或NR1；
R1与上述相同；
XR2’和XR3’各自独立地任选地被选自由以下项组成的组的一个或多个取代基所取代：–(CH2)n-、-(CH2)n-CH(XV)＝CH(XV)-(顺式或反式)、-CH2)n-CH≡CH-、-(CH2CH2O)n-或C3-C6环烷基，其中Xv为H、卤代或任选地取代的C1-C3烷基基团；
每个m独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个m’独立地为0或1；
每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6；
每个n’独立地为0或1；
每个u独立地为0或1；
每个v独立地为0或1；
每个w独立地为0或1；并且
R1’为—O—L1；其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000031
其中R1L1和R2L1独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1L1和R2L1形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团；或为由下式表示的拟肽连接基：
—Str—(PM)—Sp—，
其中：
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；并且
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000041
其中
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可形成C3-C7环烷基环；或具有下式的连接基：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为拉伸单元，并且a为0至1的整数；W为氨基酸单元，并且w为0至12的整数；Y为间隔单元，并且y为0、1或2；
或具有下式的连接基：
Figure FDA0003063017050000051
2.根据权利要求1所述的缀合物，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000052
其中，R1L1和R2L1独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1L1和R2L1形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团；
Figure FDA0003063017050000061
Figure FDA0003063017050000071
其中，-----为与-O的连接点，并且S-----为与Ab的二硫化物连接点。
3.根据权利要求2所述的缀合物，其中
其中所述L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000072
其中，R1L1和R2L1独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1L1和R2L1形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。
4.根据权利要求3所述的缀合物，其中
其中所述L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000073
5.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述与Ab的二硫化物连接点具有结构—S—Cys—，其中Cys为半胱氨酸残基。
6.根据权利要求1所述的缀合物，其中X和X’各自为C＝O，并且所述EL3B为具有以下结构的残基：
Figure FDA0003063017050000074
7.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述EL3B为具有以下结构的基团的残基：
Figure FDA0003063017050000081
其中，
G为
Figure FDA0003063017050000082
Rβ为氢、甲基、乙基或丙基。
8.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述EL3B为具有以下结构的基团的残基：
Figure FDA0003063017050000083
其中，
Rβ为氢、甲基、乙基或丙基。
9.根据权利要求8所述的缀合物，其中所述EL3B为具有以下结构的基团的残基：
Figure FDA0003063017050000091
10.根据权利要求9所述的缀合物，其中Rβ为氢。
11.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述PB为结合BRD4的基团的残基。
12.根据权利要求11所述的缀合物，其中所述PB为结合BRD4的基团的残基并且具有以下结构：
Figure FDA0003063017050000101
其中，*表示与L2的共价连接点。
13.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述PB为结合ERα的基团的残基并且为抗雌激素。
14.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述PB为结合ERα的基团的残基并且为以下结构的化合物：
Figure FDA0003063017050000102
其中，
R”为氢、C1-C6烷基、苄基、苯基或-(PO3H2)，并且
*表示与L2的共价连接点。
15.根据权利要求14所述的缀合物，其中所述PB为以下结构的化合物的残基：
Figure FDA0003063017050000111
其中，
*表示与L2的共价连接点。
16.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述Ab为半胱氨酸工程化的抗体或其变体。
17.根据权利要求1所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：DLL3、EDAR、CLL1；BMPR1B；E16；STEAP1；0772P；MPF；NaPi2b；Sema 5b；PSCA hlg；ETBR；MSG783；STEAP2；TrpM4；CRIPTO；CD21；CD79b；FcRH2；B7-H4；HER2；NCA；MDP；IL20Rα；短蛋白聚糖；EphB2R；ASLG659；PSCA；GEDA；BAFF-R；CD22；CD79a；CXCR5；HLA-DOB；P2X5；CD72；LY64；FcRH1；IRTA2；TENB2；PMEL17；TMEFF1；GDNF-Ra1；Ly6E；TMEM46；Ly6G6D；LGR5；RET；LY6K；GPR19；GPR54；ASPHD1；酪氨酸酶；TMEM118；GPR172A；MUC16和CD33。
18.根据权利要求17所述的缀合物，其中Ab与选自由以下项组成的组的一种或多种多肽结合：CLL1、STEAP1、NaPi2b、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、B7-H4、HER2、CD22、CD79a、CD72、LY64、Ly6E、MUC16和CD33。
19.根据权利要求18所述的缀合物，其中Ab为与选自由HER2、B7-H4和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
20.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述抗体与HER2结合。
21.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述抗体与B7-H4或CD22结合。
22.根据权利要求1所述的缀合物，其具有以下结构：
Figure FDA0003063017050000121
Figure FDA0003063017050000131
Figure FDA0003063017050000141
Figure FDA0003063017050000151
Figure FDA0003063017050000161
23.一种具有以下结构的缀合物：
Figure FDA0003063017050000162
其中，
PB为蛋白质结合基团；
L2为连接基-2；
G为
Figure FDA0003063017050000163
并且，
T、U和V中的一者为L1-Ab，其中L1为连接基-1；前提是
如果T为L1，则U为氢，并且V和*不存在；或者
如果U为L1，则T为氢，并且V和*不存在；或者
如果V为L1，则*为
Figure FDA0003063017050000173
并且T和U中的每一者均为氢。
24.根据权利要求23所述的缀合物，其中T为L1，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000171
其中，R1L1和R2L1独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1L1和R2L1形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团；
Figure FDA0003063017050000172
Figure FDA0003063017050000181
25.根据权利要求23所述的缀合物，其中U为L1，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000191
Figure FDA0003063017050000201
26.根据权利要求23所述的缀合物，其中V为L1，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000202
27.一种具有以下结构的缀合物：
Figure FDA0003063017050000211
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L2为与E3LB共价结合的连接基
并且，
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau。
28.根据权利要求27所述的缀合物，其中L1具有以下结构：
Figure FDA0003063017050000212
29.根据权利要求28所述的缀合物，其中L2具有以下结构：
Figure FDA0003063017050000213
30.一种具有以下结构的缀合物：
Figure FDA0003063017050000221
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L2为与E3LB共价结合的连接基
并且，
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau。
31.根据权利要求30所述的缀合物，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000222
Figure FDA0003063017050000231
Figure FDA0003063017050000241
32.一种具有以下结构的缀合物：
Figure FDA0003063017050000242
其中，
Ab为通过二硫键与L1共价结合的抗体；
L1为与E3LB共价结合的连接基；
E3LB为结合E3连接酶的基团，其中所述E3连接酶为von Hippel-Lindau，
并且，Z
L2为与E3LB共价结合的连接基。
33.根据权利要求32所述的缀合物，其中L1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000251
Figure FDA0003063017050000261
Figure FDA0003063017050000271
34.根据权利要求1、23、27、30和32中任一项所述的缀合物，其中L1为由下式表示的拟肽连接基：
—Str—(PM)—Sp—
其中，
Str为与Ab共价连接的拉伸单元；
Ab为抗体；
Sp为与CIDE部分共价连接的键或间隔单元；
PM为非肽化学部分，其选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000272
W为-NH-杂环烷基-或杂环烷基；
Y为杂芳基、芳基、-C(O)C1-C6亚烷基、C1-C6亚烷基-NH2、C1-C6亚烷基-NH-CH3、C1-C6亚烷基-N-(CH3)2、C1-C6烯基或C1-C6亚烷基；
每个R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
R3和R2各自独立地为H、C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基或杂芳烷基，或者R3和R2可一起形成C3-C7环烷基；并且
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环。
35.根据权利要求34所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure FDA0003063017050000281
其中R6选自由以下项组成的组：C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、C3-C8环烷基、(C1-C8亚烷基)O-和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、羧酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、杂芳烷基、芳基芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb-，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
36.根据权利要求34所述的缀合物，其中Str具有下式：
Figure FDA0003063017050000282
其中R7选自C1-C10亚烷基、C1-C10烯基、(C1-C10亚烷基)O-、N(Rc)-(C2-C6亚烷基)-N(Rc)和N(Rc)-(C2-C6亚烷基)；其中每个Rc独立地为H或C1-C6烷基；并且
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb—，其中Ar为芳基或杂芳基，并且Rb为(C1-C10亚烷基)O-。
37.根据权利要求34所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure FDA0003063017050000291
R1为C1-C6烷基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5一起形成C3-C7环烷基环。
38.根据权利要求35所述的缀合物，其具有下式：
Figure FDA0003063017050000292
其中
Sp为与CIDE部分D共价连接的键或间隔单元；
R4和R5各自独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、芳烷基、杂芳烷基、(C1-C10烷基)OCH2-，或者R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环；
R1独立地为C1-C10烷基、C1-C10烯基、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2、(C1-C6烷基)NHC(O)NH2、(C1-C10烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C10烷基)NHC(O)NH2；
Str为由下式表示的化学部分：
Figure FDA0003063017050000293
R6选自由以下项组成的组：C1-C10亚烷基和C1-C10亚烷基-C(O)N(Ra)-C2-C6亚烷基，其中每个亚烷基可被选自由以下项组成的组的一至五个取代基取代：卤代、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺、亚砜、羟基、烷氧基、酯、羧酸、烷硫基、C3-C8环烷基、C4-C7杂环烷基、芳基、芳烷基、杂芳烷基和杂芳基，每个Ra独立地为H或C1-C6烷基；
p为1、2、3或4。
39.根据权利要求38所述的缀合物，其中R4和R5可一起形成C3-C7环烷基环，并且R1为C1-C10烷基或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2。
40.根据权利要求39所述的缀合物，其中R4和R5一起形成环丁基。
41.根据权利要求40所述的缀合物，其中所述连接基的结构选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003063017050000301
42.根据权利要求38所述的缀合物，其中
Str为由下式表示的化学部分：
Figure FDA0003063017050000302
R6为C1-C6亚烷基；
Sp为-C1-C6亚烷基-C(O)NH-或—Ar—Rb—，其中Ar为芳基，Rb为(C1-C3亚烷基)O-。
43.根据权利要求34所述的缀合物，其具有下式：
Figure FDA0003063017050000311
其中
p为1、2、3或4；
R1为C1-C6烷基-NH2、(C1-C6烷基)NHC(NH)NH2或(C1-C6烷基)NHC(O)NH2；
R4和R5各自独立地为C1-C6烷基，其中所述烷基未被取代，或者R4和R5可形成C3-C7环烷基环。
44.根据权利要求23、27、30和32中任一项所述的缀合物，其中L1具有选自由以下项组成的组的下式：
Figure FDA0003063017050000312
其中，R1和R2独立地选自H和C1-C6烷基，或者R1和R2形成3元、4元、5元或6元环烷基或杂环基基团。
45.根据权利要求44所述的缀合物，其中L1具有下式：
Figure FDA0003063017050000321
46.根据权利要求1、23、27、30和32中任一项所述的缀合物，其中L1具有下式：
-Aa-Ww-Yy-
其中A为“拉伸单元”，并且a为0至1的整数；W为“氨基酸单元”，并且w为0至12的整数；Y为“间隔单元”，并且y为0、1或2。
47.根据权利要求46所述的缀合物，其中所述拉伸单元A包含下式：
Figure FDA0003063017050000322
48.根据权利要求47所述的缀合物，其中所述连接基具有下式：
Figure FDA0003063017050000323
49.根据权利要求46所述的缀合物，其中L1具有下式：
—Aa—Yy—
其中A和Y如上定义。
50.根据权利要求49所述的缀合物，其中L1为：
Figure FDA0003063017050000324
51.根据权利要求1所述的缀合物，其中p为约1.0至约3。
52.根据权利要求1所述的缀合物，其中p为约2。
53.根据权利要求1所述的缀合物，其中D为与L1共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure FDA0003063017050000331
54.根据权利要求1所述的缀合物，其中L1-D为与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure FDA0003063017050000332
Figure FDA0003063017050000341
Figure FDA0003063017050000351
Figure FDA0003063017050000361
Figure FDA0003063017050000371
Figure FDA0003063017050000381
Figure FDA0003063017050000391
55.根据权利要求54所述的缀合物，其中所述Ab为与选自由B7-H4、HER2和CD22组成的组的一种或多种多肽结合的抗体。
56.根据权利要求12所述的缀合物，其中所述PB为结合BRD4的基团的残基并且具有以下结构：
Figure FDA0003063017050000392
57.根据权利要求56所述的缀合物，其中L1-D为与所述Ab共价连接的残基，并且选自以下结构中的一者：
Figure FDA0003063017050000401
Figure FDA0003063017050000411
Figure FDA0003063017050000421
Figure FDA0003063017050000431
Figure FDA0003063017050000441
58.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的缀合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
59.一种治疗有此需要的人的疾病的方法，所述方法包括向所述人施用有效量的权利要求1所述的缀合物或权利要求58所述的组合物。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述疾病为癌症。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述癌症选自由以下项组成的组：前列腺癌、乳腺癌和急性髓细胞性白血病。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述癌症为HER2阳性癌症。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述HER2阳性癌症为乳腺癌。
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