CN112703038A

CN112703038A - 靶向CD38和TGF-β的抗癌组合疗法

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Publication number: CN112703038A
Application number: CN201980057720.2A
Authority: CN
Inventors: F·阿德里安; R·C·格雷戈里; G·夏皮罗; H·范德维尔德
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 2018-07-10
Filing date: 2019-07-10
Publication date: 2021-04-23
Also published as: JP2021530461A; BR112021000065A2; SG11202012991QA; KR20210030411A; CO2021000015A2; IL279935A; MX2021000304A; CA3105333A1; TW202019962A; AU2019301283B2; WO2020012383A1; JP7636177B2; US20210155708A1; AU2019301283A1; AU2025201957A1; EP3820575A1

Abstract

本公开文本涉及靶向CD38和TGF‑β的组合癌症疗法，所述组合癌症疗法使用对这些靶标具有特异性的抗体。还提供了可用于所述疗法中的组合物。

Description

靶向CD38和TGF-β的抗癌组合疗法

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年7月10日提交的美国临时专利申请 62/696,198的优先权。将该申请的公开内容通过引用以其整体并入本文。

序列表

本申请含有已经以ASCII格式电子提交并且特此通过引用以其整体并入的序列表。在2019年7月9日创建的序列表的电子副本名称为 022548_WO025_SL.txt并且大小为52,428字节。

背景技术

转化生长因子β(TGF-β)是一种调节多种生物学过程的细胞因子，所述多种生物学过程如细胞外基质形成、伤口愈合、胚胎发育、骨骼发育、造血作用、免疫和炎性反应以及恶性转化。TGF-β的失调导致病理学病症，例如先天缺陷、癌症、慢性炎症以及自身免疫和纤维化疾病。

TGF-β具有三种已知的同种型：TGF-β1、2和3。这三种同种型在其功能上是多效性的，并且在细胞和组织类型之间以不同的模式表达。它们具有相似的体外活性，但特定细胞类型中的单独敲除表明尽管它们共同具有与相同受体结合的能力，但在体内具有不同的作用(Akhurst等人,Nat Rev Drug Discov 11(10):790-811(2012))。

在TGF-β与TGFβRII结合后，受体的组成性激酶活性磷酸化并激活TGFβRI，从而使SMAD2/3磷酸化，这允许SMAD2/3与SMAD4缔合，然后定位至细胞核并起始TGF-β反应基因的转录。同上。除了此经典信号传导级联外，非经典途径还通过其他因子(包括p38 MAPK、PI3K、AKT、JUN、 JNK和NF-κB)传输信号。TGF-β信号传导也受其他途径调节，所述其他途径包括WNT、刺猬、Notch、INF、TNF和RAS。因此，TGF-β信号传导的最终结果是所有这些信号传导途径的串扰，所述串扰整合了细胞的状态和环境。同上。

CD38是一种45kD II型跨膜糖蛋白，其具有长C末端细胞外结构域和短N末端胞质结构域。CD38蛋白是一种双功能胞外酶，其催化将NAD⁺转化为环状ADP-核糖(cADPR)以及将cADPR水解为ADP-核糖。在个体发生过程中，CD38出现在CD34阳性定向干细胞以及淋巴细胞、红系细胞和髓样细胞的谱系定向祖细胞上。CD38表达主要在淋巴谱系中持续存在，并且在T细胞和B细胞发育的不同阶段具有不同的表达水平。

CD38在许多造血系统恶性肿瘤中和源自各种造血系统恶性肿瘤的细胞系中上调，所述造血系统恶性肿瘤包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特淋巴瘤(BL)、多发性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴细胞性白血病 (B-CLL)、B和T急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性髓性白血病(AML)、毛细胞白血病(HCL)、霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性髓性白血病(CML)。另一方面，造血系统的最原始多能干细胞是CD38 阴性的。造血系统恶性肿瘤中的CD38表达及其与疾病进展的相关性使CD38 成为抗体疗法的有吸引力靶标。

发明内容

本文提供了靶向CD38和TGF-β的组合疗法。本发明人已经发现抗TGF-β抗体可以阻断TGF-β减弱抗CD38抗体的抗肿瘤作用的能力(例如， TGF-β可以抑制抗CD38抗体的由NK细胞介导的ADCC)。与目前可用的癌症治疗(包括抗体治疗)相比，本文提供的组合疗法可提供优异的临床功效。

因此，本文提供了一种用与TGF-β特异性结合的药剂来增强与 CD38特异性结合的药剂的功效的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种通过以下方式在患者(例如人类患者)中治疗癌症的方法：向所述患者施用与人CD38特异性结合的药剂和与人TGF-β特异性结合的药剂。在一些实施方案中，所述与人CD38特异性结合的药剂是抗CD38抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗CD38抗体能够通过细胞凋亡、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)来杀伤CD38 阳性细胞，其中通过细胞凋亡杀伤所述CD38阳性细胞可以在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下发生。在一些实施方案中，所述与人TGF-β特异性结合的药剂是泛特异性抗TGF-β抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，本文提供了一种在有需要的人类患者中治疗癌症的方法，所述方法向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体或其抗原片段。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体：

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的重链可变结构域和轻链可变结构域；或者

c)具有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:12 的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，所述抗TGF-β抗体：

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的重链可变结构域和轻链可变结构域；或者

c)具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:2 的氨基酸序列的轻链。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体具有分别包含SEQ ID NO: 15-20的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链CDR1 (LCDR1)、LCDR2和LCDR3，并且所述抗TGF-β抗体或其抗原结合片段具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、 LCDR1、LCDR2和LCDR3。在某些实施方案中，所述抗CD38抗体包含分别含有SEQ IDNO:13和14的氨基酸序列的重链可变结构域(V_H)和轻链可变结构域(V_L)；并且所述抗TGF-β抗体包含分别含有SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L。在特定实施方案中，所述抗CD38抗体具有分别包含SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的重链(HC)和轻链(LC)；并且所述抗TGF-β抗体具有分别包含SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列的重链和轻链。

在本文提供的任何实施方案中，所述抗CD38抗体可以包含人 IgG₁ Fc区，并且所述抗TGF-β抗体可以包含人IgG₄ Fc区。

本文还提供了一种在有需要的人类患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体，所述抗 CD38抗体包含SEQ ID NO:13的重链可变结构域氨基酸序列和SEQ ID NO: 14的轻链可变结构域氨基酸序列，所述抗TGF-β抗体包含SEQ ID NO:3的重链可变结构域氨基酸序列和SEQ ID NO:4的轻链可变结构域氨基酸序列。

本文还提供了一种在有需要的人类患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体，所述抗 CD38抗体包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列，所述抗TGF-β抗体包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列。

在本文提供的任何实施方案中，可以将所述抗CD38抗体和所述抗TGF-β抗体或片段顺序地施用至所述患者。

本文还提供了一种与抗TGF-β抗体组合用于在有需要的人类患者中治疗癌症的抗CD38抗体，以及抗CD38抗体与抗TGF-β抗体组合用于制造在有需要的人类患者中治疗癌症的药物的用途。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

本文还提供了一种与抗CD38抗体组合用于在有需要的人类患者中治疗癌症的抗TGF-β抗体，以及抗TGF-β抗体与抗CD38抗体组合用于制造在有需要的人类患者中治疗癌症的药物的用途。在一些实施方案中，所述抗TGF-β抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

在本文所述的方法、用于所述用途的抗体和抗体的用途的一些实施方案中，所述癌症是CD38阳性的。

在本文所述的方法、用于所述用途的抗体和抗体的用途的一些实施方案中，所述癌症选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓性白血病、急性髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、黑色素瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、皮肤鳞状细胞癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、头颈癌、肝细胞癌、尿路上皮癌和肾细胞癌。

在本文所述的方法、用于所述用途的抗体和抗体的用途的一些实施方案中，所述癌症是血液恶性肿瘤。

在本文所述的方法、用于所述用途的抗体和抗体的用途的一些实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，在多发性骨髓瘤患者中，本文所述的治疗导致与用单独抗CD38抗体的治疗相比更少的骨破坏，和/或增强骨形成，从而导致骨重塑和/或骨愈合。

因此，在一些实施方案中，本文提供了一种用于在人多发性骨髓瘤患者中减少骨破坏的方法，所述方法包括向所述患者施用如本文所述的与人CD38特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体)和如本文所述的与人 TGF-β特异性结合的药剂(例如，抗TGF-β抗体)。本文还提供了一种与抗 CD38抗体组合用于在人多发性骨髓瘤患者中减少骨破坏的如本文所述的抗 TGF-β抗体，以及抗TGF-β抗体与抗CD38抗体组合用于制造在人多发性骨髓瘤患者中减少骨破坏的药物的用途。

本文还提供了一种用于在多发性骨髓瘤患者中增强骨形成从而导致骨重塑和/或骨愈合的方法，所述方法包括向所述患者施用如本文所述的与人CD38特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体)和如本文所述的与人 TGF-β特异性结合的药剂(例如，抗TGF-β抗体)。本文还提供了一种与抗 CD38抗体组合用于在人多发性骨髓瘤患者中增强骨形成的如本文所述的抗 TGF-β抗体，以及抗TGF-β抗体与抗CD38抗体组合用于制造在人多发性骨髓瘤患者中增强骨形成的药物的用途。

在本文所述的方法、用于所述用途的抗体和抗体的用途的一些实施方案中，所述癌症对于用Ab2的治疗或用达雷木单抗(daratumumab)的治疗是难治性的，或对于两种治疗均是难治性的。在一些实施方案中，所述患者患有复发或难治性多发性骨髓瘤，并且已接受过至少一种先前疗法或至少两种先前疗法。

本文还提供了包含抗CD38抗体和抗TGF-β抗体的制品，其中所述制品适用于例如在本文所述的治疗方法中治疗患者中的癌症。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

c)具有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:12 的氨基酸序列的轻链；并且

所述抗TGF-β抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3；

附图说明

图1是示出了如通过ELISA定量的在1、2或3天时通过多发性骨髓瘤细胞系释放TGF-β的图。

图2是示出了来自MOLP8靶细胞的钙黄绿素荧光水平(裂解％) 的图，所述MOLP8靶细胞与浓度为0、0.001、0.1或1μg/mL的Ab2一起孵育并通过与10ng/mL TGF-β一起孵育过夜、24小时、48小时或72小时的人NK 细胞裂解1小时。

图3是示出了来自MOLP8靶细胞的钙黄绿素荧光水平(裂解％) 的图，所述MOLP8靶细胞与浓度为0、0.001、0.01、0.1或1μg/mL的Ab2或IgG₁对照一起孵育并通过与10ng/mLTGF-β和50μg/mL Ab1一起孵育90小时的人 NK细胞裂解1小时。

图4是示出了0.1、1和10ng/mL TGF-β对NCI-H929细胞的由Ab2 介导的ADCC的影响的图。

图5是示出了用100μg/mL IgG₄、100μg/mL Ab1、10ng/mL TGF-β、TGF-β+IgG₄或TGF-β+Ab1处理的NCI-H929细胞的由Ab2介导的 ADCC的图。*＝p<0.05，相比于NT；**＝p<0.005，相比于NT。

图6是示出了用200μg/mL IgG₄、200μg/mL Ab1、10ng/mL TGF-β、TGF-β+IgG₄或TGF-β+Ab1处理的NCI-H929细胞的由Ab2介导的 ADCC的图。*＝p<0.05，相比于NT；**＝p<0.005，相比于NT。

图7是示出了来自K562靶细胞的钙黄绿素荧光水平(裂解％) 的图，所述K562靶细胞是通过与内源性TGF-β释放JJN3细胞和100μg/mL Ab1或亚型对照一起孵育90小时的人NK细胞的细胞裂解活性裂解的。

图8是示出了RPMI8226靶细胞的由Ab2介导的ADCC的图，所述RPMI8226靶细胞与浓度为0、0.01或0.1μg/mL的Ab2或与浓度为0.1μg/mL 的对照Ab2突变体一起孵育并通过与内源性TGF-β释放JJN3细胞和100 μg/mL Ab1或亚型对照一起孵育90小时的人NK细胞裂解1小时。

具体实施方式

本公开文本提供了靶向人TGF-β和人CD38的新组合疗法，例如通过使用结合这些靶标的抗体。所述组合疗法可用于治疗病症，如癌症。除非另有说明，否则“TGF-β”在本文中是指人TGF-β。人TGF-β的三种同种型 (TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3)的多肽序列可分别在SwissProt登录号P01137、 P08112和P10600下获得，在此处示出为SEQ ID NO:21-23。除非另有说明，否则“CD38”在本文中是指人CD38。人CD38多肽序列可在Genbank登录号 NP_001766下获得，在此处示出为SEQ ID NO:24。

如本文所用，术语“抗体”(Ab)或“免疫球蛋白”(Ig)是指包含通过二硫键相互连接的两条重(H)链(约50-70kDa)和两条轻(L) 链(约25kDa)的四聚体蛋白。每条重链由重链可变结构域(V_H)和重链恒定区(C_H)构成。每条轻链由轻链可变结构域(V_L)和轻链恒定区(C_L)构成。V_H和V_L结构域可以进一步细分为具有高变性的区域，称为“互补决定区”(CDR)，其中散布有更保守的区域，称为“框架区”(FR)。每个 V_H或V_L由三个CDR和四个FR构成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸在每个区域中的分配可以根据

定义(Lefranc等人,Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003))；或以下定义：Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest (NationalInstitutes of Health,贝塞斯达,马里兰州(1987年和1991年))；或 Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；或Chothia等人,Nature 342:878-883(1989)。

术语“亲和力”是指抗原与抗体之间的吸引力的量度。抗体对抗原的固有吸引力通常表示为特定抗体-抗原相互作用的结合亲和力平衡常数(K_D)。如通过例如表面等离振子共振或生物层干涉法测定的，当K_D小于 10^-7M(如小于10^-8M(例如1-9nM))时，抗体被称为与抗原特异性结合。

术语“k_off”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数。k_off解离速率常数可以例如通过生物层干涉法来测量。

如本文所用，术语“表位”是指抗原中与抗体特异性结合的部分(决定簇)。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团(如氨基酸或碳水化合物或糖侧链)组成并且通常具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。表位可以是“线性的”或“构象的”。在线性表位中，蛋白质(例如，抗原)与相互作用分子(如，抗体)之间的所有相互作用点均沿蛋白质的一级氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用点跨越蛋白质上的氨基酸残基存在，所述氨基酸残基在所述一级氨基酸序列中是彼此隔开的。一旦确定了抗原上期望的表位，就可以使用本领域熟知的技术产生针对该表位的抗体。例如，可以例如通过用具有线性表位的氨基酸残基的肽免疫动物来产生针对线性表位的抗体。可以例如通过用含有构象表位的相关氨基酸残基的微型结构域免疫动物来产生针对构象表位的抗体。也可以例如通过用目的靶分子或其相关部分免疫动物，然后针对与表位的结合进行筛选来产生针对特定表位的抗体。

可以通过使用本领域已知的方法(包括但不限于竞争测定、表位分组(binning)和丙氨酸扫描)来确定抗体是与如本文所述的抗体结合相同的表位还是与如本文所述的抗体竞争结合。在一些实施方案中，所述测试抗体和如本文所述的抗体与所述靶蛋白(即，TGF-β或CD38)上的至少一个共同残基(例如，至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个残基)结合。在进一步的实施方案中，所述靶蛋白上的接触残基在测试抗体与如本文所述的抗体之间是完全相同的。在一个实施方案中，使如本文所述的抗体在饱和条件下与所述靶蛋白结合，并随后测量所述测试抗体与所述靶蛋白结合的能力。如果所述测试抗体能够与所述参考抗体同时结合所述靶蛋白，则所述测试抗体与所述参考抗体结合不同的表位。然而，如果所述测试抗体不能同时与所述靶蛋白结合，则所述测试抗体与相同的表位、重叠的表位或非常接近于由如本文所述的抗体结合的表位的表位结合。可以使用例如ELISA、RIA、BIACORE^TM、SPR、生物层干涉法或流式细胞术进行该实验。为了测试一种抗体是否与另一种抗体交叉竞争，可以在两个方向上使用上述竞争方法，即确定已知抗体是否阻断了测试抗体，反之亦然。

术语“人源化”是指这样的事实，其中抗体全部或部分地是非人起源的(例如，通过用目的抗原免疫小鼠而获得的鼠抗体，或基于这种鼠抗体的嵌合抗体)，可以替换特别是在重链和轻链的框架区和恒定区中的某些氨基酸，以避免或最小化在人中的免疫应答。尽管不可能精确地预测特定抗体的免疫原性以及由此的人抗抗体反应，但非人抗体在人中的免疫原性往往高于人抗体。嵌合抗体(其中外来(例如，啮齿动物)恒定区已被人起源的序列替换)已显示出通常比完全外来起源的抗体具有更低的免疫原性，并且治疗性抗体趋向于人源化或完全人抗体。嵌合抗体或非人起源的其他抗体因此可以被人源化以降低人抗抗体反应的风险。

对于嵌合抗体，人源化通常涉及对可变结构域序列的框架区的修饰。作为互补决定区(CDR)的一部分的氨基酸残基通常不会关于人源化进行改变，但是在某些情况下可能期望改变单独CDR氨基酸残基，例如以去除糖基化位点、脱酰胺位点、天冬氨酸异构化位点或不需要的半胱氨酸或甲硫氨酸残基。N-连接的糖基化通过将寡糖链附接至三肽序列Asn-X-Ser或 Asn-X-Thr中的天冬酰胺残基而发生，其中X可以是Pro以外的任何氨基酸。 N-糖基化位点的去除可以通过以下方式来实现：将Asn或Ser/Thr残基突变为不同的残基，优选地通过保守取代的方式。天冬酰胺和谷氨酰胺残基的脱酰胺可以根据诸如pH和表面暴露的因素而发生。天冬酰胺残基特别易发生脱酰胺，主要是当存在于Asn-Gly序列中时发生，而在其他二肽序列如Asn-Ala中在较小程度上发生。当在CDR序列中存在这种脱酰胺位点、特别是Asn-Gly 时，因此可能希望去除所述位点，通常通过保守取代以去除所涉及残基中的一个。

人源化抗体序列的许多方法在本领域中是已知的；参见例如， Almagro和Fransson,Front Biosci.13:1619-1633(2008)的综述。一种常用的方法是CDR植入，对于例如鼠来源的嵌合抗体，所述CDR植入涉及鉴定鼠可变结构域基因的人种系基因对应物以及将鼠CDR序列植入该框架中。抗体与靶抗原相互作用的特异性主要在于位于重链和轻链的六个CDR中的氨基酸残基中。因此，CDR内的氨基酸序列在单独抗体之间的可变性比CDR外部的序列大得多。因为CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，所以可以表达模拟天然存在的特异性抗体的特性的重组抗体，或更通常表达具有给定氨基酸序列的任何特异性抗体，例如通过构建表达植入来自不同抗体的框架序列中的来自特异性抗体的CDR序列的表达载体。因此，可以“人源化”非人抗体，并且仍然基本上保持原始抗体的结合特异性和亲和力。CDR植入可以基于 Kabat CDR定义，但是最近的出版物(Magdelaine-Beuzelin等人,CritRev.Oncol Hematol.64:210-225(2007))已经提出了

定义(the internationalImMunoGeneTics information

www.imgt.org)可以改善人源化的结果(参见Lefranc等人.,Dev.Comp Immunol.27:55-77(2003))。

在一些情况下，与从中获得CDR的亲本抗体相比，CDR植入可能降低CDR植入的非人抗体的结合特异性和亲和力，且因此降低其生物活性。可以在CDR植入的抗体中的选择的位置处(通常在框架区中)引入回复突变(有时称为“框架修复”)，以重建亲本抗体的结合特异性和亲和力。可以使用文献和抗体数据库中可用的信息来鉴定可能的回复突变的位置。作为回复突变的候选者的氨基酸残基通常是位于抗体分子表面的那些残基，而被掩埋或具有低程度的表面暴露的残基通常不会被改变。

CDR植入和回复突变的替代性人源化技术是表面重塑，其中保留了非人起源的非表面暴露残基，而表面残基则改变为人残基。

在某些情况下，可能希望改变一个或多个CDR氨基酸残基，以改善与靶表位的结合亲和力。这被称为“亲和力成熟化”。各种亲和力成熟化方法是本领域已知的，例如，由Burks等人,Proc Natl Acad Sci USA, 94:412–417(1997)描述的体外扫描饱和诱变方法，以及Wu等人,Proc Natl Acad Sci USA 95:6037–6042(1998)的逐步体外亲和力成熟化方法。

术语“人抗体”是指其中可变结构域和恒定区序列源自人序列的抗体。所述术语涵盖具有源自人基因的序列的抗体，但是那些序列已经被修饰，例如以降低免疫原性、增加亲和力和增加稳定性。所述术语涵盖在非人细胞中重组产生的抗体，其可以赋予人细胞不典型的糖基化。所述术语还涵盖在具有人抗体基因的转基因非人生物体中产生的抗体。

术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”是指抗体的保留与抗原特异性结合的能力的部分或片段。在一些实施方案中，本公开文本的抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv或scFv片段。在某些实施方案中，本公开文本的抗原结合片段是F(ab')₂片段，其是包含通过二硫桥在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段(Fab是由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域组成的单价抗体片段)。在一些实施方案中，本公开文本的抗原结合片段也可以包含C_H2或C_H3结构域。抗体片段可以使用常规技术例如从完整抗体(如完整抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化)来制备。此外，可以使用例如如本文所述的标准重组DNA技术获得抗体、抗体片段和免疫粘附分子。

可以分离本文所述的抗体和抗原结合片段。术语“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”是指这样的蛋白质、多肽或抗体，根据其起源或衍生来源，所述蛋白质、多肽或抗体(1)与其天然状态下伴随它的天然缔合组分未缔合；(2)基本上不含来自相同物种的其他蛋白质；(3) 由来自不同物种的细胞表达；或者(4)不存在于自然界中。因此，化学合成或在与其天然起源的细胞不同的细胞系统中合成的多肽将与其天然缔合组分“分离”。通过使用本领域熟知的蛋白质纯化技术分离，也可以使蛋白质基本上不含天然缔合组分。

本文所述的抗体的种类(亚型)和亚类可以通过本领域已知的任何方法来确定。通常，可以使用对抗体的特定种类和亚类具有特异性的抗体来确定抗体的种类和亚类。此类抗体是可商购的。所述种类和亚类可以通过ELISA和蛋白质印迹以及其他技术来确定。可替代地，可以通过以下方式来确定抗体的种类和亚类：对抗体的重链和/或轻链的全部或部分恒定区进行测序，将其氨基酸序列与免疫球蛋白的各种种类和亚类的已知氨基酸序列进行比较，并确定抗体的种类和亚类。本公开文本的优选亚型是IgG亚型。

抑制TGF-β的药剂

在一些实施方案中，在本文所述的组合疗法中使用的与TGF-β特异性结合的药剂是抗TGF-β抗体或其抗原结合片段(例如，Ab1、非苏木单抗(Fresolimumab)、XOMA 089/NIS793(Gramont等人,Oncoimmunology 6(1):e1257453(2017))、SRK-181(Scholar Rock)、ABBV-151(AbbVie)、乐地单抗(lerdelimumab)或美替木单抗(metelimumab)或TGF-β陷阱分子(例如，M7824(Knudson等人,Oncoimmunology 7(5):e1426519(2018))或AVID200(Thwaites等人,Blood 130:2532(2017)))。在某些实施方案中，所述抗TGF-β抗体是人单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗TGF-β抗体是泛TGF-β特异性单克隆抗体，其与先前已知的抗体如非苏木单抗相比较不易形成半抗体。在一些实施方案中，与非苏木单抗相比，所述抗TGF-β抗体具有优异的药代动力学特征(profile)，如在体内更高的暴露。

在一些实施方案中，所述抗TGF-β抗体是PCT专利公开WO 2018/134681、PCT专利公开WO 2006/086469、PCT专利公开WO 2014/153435、美国专利8,569,462或美国专利7,527,791中所述的抗体，将所述文献通过引用以其整体并入本文。在某些实施方案中，所述抗TGF-β抗体是抗体Ab1或其变体，其中所述变体可以例如含有相对于Ab1的某些最小氨基酸变化(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸变化，所述氨基酸变化可能例如在框架区中)而不丧失抗体的抗原结合特异性。

抗体Ab1在未糖基化时具有144kD的估计分子量。其重链和轻链氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和2。这两个序列在下文示出。可变结构域用斜体表示。CDR以框示出。所述重链的恒定结构域中的糖基化位点以粗体和小写体(N297)表示。Ab1具有人IgG₄恒定区，其中铰链区中的残基228 (EU编号)已从丝氨酸突变为脯氨酸。P228在下文所示的SEQ ID NO:1的序列中以框加粗体显示。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段与Ab1竞争结合TGF-β或与Ab1结合TGF-β上相同的表位。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体具有重链，所述重链包含：

a)分别含有SEQ ID NO:5-7的氨基酸序列的重链CDR1-3(HCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的重链可变结构域(V_H)；

c)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的V_H；或

d)SEQ ID NO:1的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体具有轻链，所述轻链包含：

a)分别含有SEQ ID NO:8-10的氨基酸序列的轻链CDR1-3 (LCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的轻链可变结构域(V_L)；

c)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的V_L；或

d)SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体包含任何上述重链与任何上述轻链的组合。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体包含：

a)分别含有SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H和在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_L；

c)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的V_H和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的V_L；以及

d)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的HC和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的LC。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体(例如，具有Ab1 的六个CDR或V_H和V_L的抗TGF-β抗体)具有人IgG₄恒定区。在某些实施方案中，所述IgG₄恒定区的铰链区中的残基228(EU编号)已从丝氨酸突变为脯氨酸。本文所述的抗TGF-β抗体的恒定结构域还可以例如在Kabat残基L248 处(例如，通过引入突变L248E)被修饰，以降低分子的任何不期望的效应子功能。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体具有人免疫球蛋白κ轻链区。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段与人TGF-β1、-β2和-β3特异性地结合。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段以1x10^-8M或更低(例如9x10^-9M、8x10^-9M、7x10^-9M、6x10^-9M、5x 10^-9M、4x10^-9M、3x10^-9M、2x10^-9M或1x10^-9M)的K_D结合TGF-β1、-β2 和/或-β3(例如，TGF-β1、-β2和-β3)。在某些实施方案中，所述抗TGF-β抗体或抗原结合片段以3x10^-9M或更低的K_D结合TGF-β1、-β2和-β3。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段具有以下特性中的一种或多种：

a)抑制TGF-β信号转导；

b)当在水貂肺上皮细胞测定中进行测定时中和TGF-β；

c)具有如在A549细胞IL-11诱导测定中测定的约0.05至1μg/ml的 EC50；

d)抑制CD4阳性T细胞分化为诱导型调节T细胞(iTreg)；

e)减轻免疫抑制肿瘤微环境；

f)增加患者中(例如，患者的肿瘤组织中)的MIP2水平；

g)增加患者中(例如，患者的肿瘤组织中)的KC/GRO水平；

h)促进CD8阳性T细胞(如INF-γ阳性CD8阳性T细胞)的激活或对肿瘤组织的浸润；

i)增加患者中(例如，患者的肿瘤组织中)自然杀伤(NK)细胞的聚集；以及

j)在与人重组TGF-β一起孵育后恢复NK-92细胞的细胞溶解活性。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段具有所述特性中的1、2、3、4、5、6、7、8、9种或全部。

在一些实施方案中，与非苏木单抗相比，本文所述的抗TGF-β抗体或抗原结合片段具有增加的半衰期、增加的暴露或两者。例如，所述增加是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或更多增加。药物(如本文所述的抗体或片段)的暴露是体内药物的浓度关于时间的函数。体内药物的浓度通常通过血液、血浆或血清中的药物水平来指示。可以通过熟知的方法(例如，如PCT专利公开WO 2018/134681中所述)测量药物的半衰期和暴露(生物暴露)。

抑制CD38的药剂

在一些实施方案中，在本文所述的组合疗法中使用的与CD38 特异性结合的药剂是抗CD38抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗CD38抗体是人源化单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体是美国专利8,153,765中描述的抗体，将所述文献通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体是由在保藏号PTA-7670下保藏在美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection)的杂交瘤细胞系产生。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体是Ab2、Ab3、Ab4、达雷木单抗、 MOR202(Raab等人,Blood 128:1152(2016))、TAK-079(Roepcke等人, Pharmacol Res Perspect 6(3):e00402(2018))、TAK-573(Takeda)、TAK-169 (Takeda)、

(Genmab/Janssen)、抗CD38SIFbody(Momenta) 或TSK011010(CASI)。

在特定实施方案中，所述抗CD38抗体是抗体Ab2或其变体，其中所述变体可以例如含有相对于Ab2的某些最小氨基酸变化(例如，1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10个氨基酸变化，所述氨基酸变化可能例如在框架区中) 而不丧失所述抗体的抗原结合特异性。

Ab2的重链和轻链氨基酸序列分别为SEQ ID NO:11和12。这两个序列在下文示出。可变结构域用斜体表示。CDR以框示出。Ab2具有人IgG₁恒定区。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与Ab2 竞争结合CD38或与Ab2结合CD38上相同的表位。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体具有重链，所述重链包含：

a)分别含有SEQ ID NO:15-17的氨基酸序列的重链CDR1-3 (HCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的重链可变结构域(V_H)；

c)含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的V_H；或

d)SEQ ID NO:11的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体具有轻链，所述轻链包含：

a)分别含有SEQ ID NO:18-20的氨基酸序列的轻链CDR1-3 (LCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的轻链可变结构域(V_L)；

c)含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的V_L；或

d)SEQ ID NO:12的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体包含任何上述重链与任何上述轻链的组合。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体包含：

a)分别含有SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H和在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_L；

c)含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的V_H和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的V_L；以及

d)含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HC和含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的LC。

在某些实施方案中，所述抗CD38抗体是抗体Ab3或其变体，其中所述变体可以例如含有相对于Ab3的某些最小氨基酸变化(例如，1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10个氨基酸变化，所述氨基酸变化可能例如在框架区中) 而不丧失所述抗体的抗原结合特异性。

Ab3的重链和轻链氨基酸序列分别为SEQ ID NO:25和26。这两个序列在下文示出。可变结构域用斜体表示。CDR以框示出。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与Ab3 竞争结合CD38或与Ab3结合CD38上相同的表位。

a)分别含有SEQ ID NO:29-31的氨基酸序列的重链CDR1-3 (HCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的重链可变结构域(V_H)；

c)含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的V_H；或

d)SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

a)分别含有SEQ ID NO:32-34的氨基酸序列的轻链CDR1-3 (LCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的轻链可变结构域(V_L)；

c)含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的V_L；或

d)SEQ ID NO:26的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体包含：

a)分别含有SEQ ID NO:29-34的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)在序列上与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H和在序列上与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_L；

c)含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的V_H和含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的V_L；以及

d)含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的HC和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的LC。

在某些实施方案中，所述抗CD38抗体是抗体Ab4或其变体，其中所述变体可以例如含有相对于Ab4的某些最小氨基酸变化(例如，1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10个氨基酸变化，所述氨基酸变化可能例如在框架区中) 而不丧失所述抗体的抗原结合特异性。

Ab4的重链和轻链氨基酸序列分别为SEQ ID NO:35和36。这两个序列在下文示出。可变结构域用斜体表示。CDR以框示出。

在一些实施方案中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与Ab4 竞争结合CD38或与Ab4结合CD38上相同的表位。

a)分别含有SEQ ID NO:39-41的氨基酸序列的重链CDR1-3 (HCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的重链可变结构域(V_H)；

c)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的V_H；或

d)SEQ ID NO:35的氨基酸序列。

a)分别含有SEQ ID NO:42-44的氨基酸序列的轻链CDR1-3 (LCDR1-3)；

b)在序列上与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的轻链可变结构域(V_L)；

c)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的V_L；或

d)SEQ ID NO:36的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体包含：

a)分别含有SEQ ID NO:39-44的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)在序列上与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H和在序列上与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_L；

c)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的V_H和含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的V_L；以及

d)含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HC和含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的LC。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体具有人IgG₁恒定区。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体具有人免疫球蛋白κ轻链区。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段以1x10^-8M或更低(例如9x10^-9M、8x10^-9M、7x10^-9M、6x10^-9M、5x 10^-9M、4x10^-9M、3x10^-9M、2x10^-9M或1x10^-9M)的K_D结合CD38。在某些实施方案中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段以3x10^-9M或更低的K_D结合CD38。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段通过细胞凋亡、ADCC和CDC来杀伤CD38阳性细胞；在某些实施方案中，通过细胞凋亡杀伤所述CD38阳性细胞可以在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下发生。在一些实施方案中，所述CD38阳性细胞是恶性细胞。在一些实施方案中，所述CD38阳性细胞是B细胞。在某些实施方案中，所述 CD38阳性细胞是源自造血系统恶性肿瘤的肿瘤细胞。在更优选的实施方案中，所述CD38阳性细胞是淋巴瘤细胞、白血病细胞或多发性骨髓瘤细胞。在另一个优选的实施方案中，所述CD38阳性细胞是NHL、BL、MM、B-CLL、 ALL、TCL、AML、HCL、HL或CML细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 10％、15％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、 30％、35％或40％(例如，至少24％)的Daudi淋巴瘤细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％(例如，至少7％)的Ramos淋巴瘤细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、 18％、19％或20％(例如，至少11％)的MOLP-8多发性骨髓瘤细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 25％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、 45％或50％(例如，至少36％)的SU-DHL-8淋巴瘤细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 20％、25％、26％、27％、28％、29％、30％或35％(例如，至少27％)的NU-DUL-1 淋巴瘤细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 50％、55％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、70％或75％(例如，至少62％)的DND-41白血病细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％或13％(例如，至少9％)的JVM-13 白血病细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段能够在体外在不存在基质细胞或基质来源的细胞因子的情况下杀伤至少 1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％或8％(例如，至少4％)的HC-1白血病细胞。

在一些实施方案中，所述与CD38特异性结合的药剂是包含与细胞毒性剂连接的本文所述的抗CD38抗体或抗原结合片段的缀合物。所述细胞毒性剂可以选自例如美登木素生物碱、小药物、托马霉素(tomaymycin) 衍生物、莱普霉素(leptomycin)衍生物、前药、紫杉烷、CC-1065和CC-1065 类似物、或美国专利8,153,765(将所述文献通过引用以其整体并入本文)中所述的任何细胞毒性剂。

本文所述的抗TGF-β或抗CD38抗体的种类可以改变或转变成另一种类或亚类。在一方面，使用本领域熟知的方法分离编码V_L或V_H的核酸分子，使得其不包含编码CL或CH的核酸序列。然后将编码V_L或V_H的核酸分子分别与来自不同种类的免疫球蛋白分子的编码CL或CH的核酸序列可操作地连接。如上所述，这可以使用包含CL或CH链的载体或核酸分子来实现。例如，最初为IgM的抗体在种类上可以转变成IgG。此外，所述种类转变可用于将一个IgG亚类转换为另一个亚类，例如从IgG1转变为IgG2。κ轻链恒定区例如可以改变为λ轻链恒定区。用于产生具有期望的Ig亚型的如本文所述的抗体的优选方法包括以下步骤：分离编码抗体的重链的核酸分子和编码抗体的轻链的核酸分子，获得所述重链的可变结构域，将所述重链的可变结构域与期望的亚型的重链的恒定区连接，在细胞中表达所述轻链和连接的重链，以及收集具有期望的亚型的抗体。

本文所述的抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子，但通常属于IgG亚型，例如属于IgG亚类IgG₁、IgG_2a或IgG_2b、IgG₃或IgG₄。

在一个实施方案中，所述抗体可以在Fc区中包含至少一个突变。已知许多不同的Fc突变，其中这些突变提供了改变的效应子功能。例如，在许多情况下，将希望降低或消除效应子功能，例如在不期望配体/受体相互作用的情况下或在抗体-药物缀合物的情况下。

在一些实施方案中，本文所述的抗体(如抗TGF-β和抗CD38 抗体)在重链中不具有C末端赖氨酸。可以在制造过程中或通过重组技术去除C末端赖氨酸(即，重链的编码序列不包含C末端赖氨酸的密码子)。因此，在本公开文本内还设想了包含不具有C末端赖氨酸的重链氨基酸序列SEQ ID NO:1或11的抗体。

组合疗法

本公开文本提供了一种组合疗法，所述组合疗法包含与人 TGF-β特异性结合的药剂和与人CD38特异性结合的药剂。在一些实施方案中，所述与TGF-β特异性结合的药剂可以是本文所述的任何抗TGF-β抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述与CD38特异性结合的药剂可以是本文所述的任何抗CD38抗体或其抗原结合片段。本公开文本还设想具有一种或多种抑制TGF-β的其他药剂(例如，加尼舍替(galunisertib)、 LY3200882、PF-06952229(Pfizer)、GFH-018(GenFleet)和/或伐托舍替 (vactosertib))和/或一种或多种抑制CD38的其他药剂的组合疗法。本文所述的组合疗法可以采取使用所述药剂或包含所述药剂的药物组合物进行治疗的方法的形式。

本公开文本还设想了一种组合疗法，所述组合疗法包含与人 CD38特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体或其抗原结合片段，如本文所述的一种)和与LAP特异性结合的药剂(例如，抗LAP抗体)。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法使用抗TGF-β抗体 Ab1和抗CD38抗体Ab2。在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法使用与 Ab1竞争结合TGF-β或与Ab1结合TGF-β的相同表位的抗体或其抗原结合片段和与Ab2竞争结合CD38或与Ab2结合CD38的相同表位的抗体。在某些实施方案中，将所述Ab1和Ab2药剂在分开的组合物中使用(例如，顺序地施用)。在某些实施方案中，将所述Ab1和Ab2药剂在单一组合物中使用。

在某些实施方案中，本公开文本的组合疗法使用：

-包含分别具有SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和 LCDR1-3的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段；和包含分别具有SEQ ID NO: 15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3的抗CD38抗体；

-包含以下的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段：在序列上与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H，和在序列上与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％或99％相同的V_L；和包含以下的抗CD38抗体：在序列上与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％或99％相同的V_H，和在序列上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、 97％、98％或99％相同的V_L；

-包含分别具有SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段；和包含分别具有SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的V_H和V_L的抗CD38抗体；或者

-包含分别具有SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列的HC和LC的抗 TGF-β抗体；和包含分别具有SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的HC和LC的抗CD38抗体。

在一些实施方案中，在组合疗法中使用的抗TGF-β抗体和抗 CD38抗体分别具有亚型IgG₄和IgG₁。在某些实施方案中，所述抗TGF-β抗体具有人IgG₄恒定区，其中铰链区中的残基228(EU编号)已从丝氨酸突变为脯氨酸。

在一些实施方案中，本文所述的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段缓解了TGF-β对通过本文所述的抗CD38抗体的由NK细胞介导的ADCC的免疫抑制作用，从而使得本公开文本的组合疗法比用单独抗CD38抗体治疗更有效。

在一些实施方案中，包含与人TGF-β特异性结合的药剂和与人 CD38特异性结合的药剂(例如抗TGF-β抗体和抗CD38抗体，如分别为Ab1 和Ab2)的组合疗法可以进一步包含另外的药剂或疗法。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法可以是例如来那度胺、泊马度胺(pomalidomide)、硼替佐米、甲基泼尼松龙、地塞米松、泼尼松、美法仑、硼替佐米、艾沙佐米 (ixazomib)、卡非佐米(carfilzomib)、沙利度胺、环磷酰胺、派姆单抗、泛组蛋白脱乙酰酶抑制剂(例如、帕比司他(Panobinostat))、视黄酸(例如、全反式视黄酸)、放射免疫疗法、化学疗法等。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是来那度胺和地塞米松的组合。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是硼替佐米、美法仑和泼尼松的组合。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是硼替佐米和地塞米松的组合。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是泊马度胺和地塞米松的组合。在某些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是地塞米松。在一些实施方案中，所述另外的药剂或疗法是针对由本公开文本的组合疗法靶向的病症的治疗。例如，当所述病症是骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)时，所述治疗可以是例如依洛妥珠单抗 (elotuzumab)。

在一些实施方案中，将本公开文本的组合疗法中的药剂在多于一种组合物中施用。在某些实施方案中，将每种药剂在分开的组合物中提供。在存在多于一种组合物的情况下，可以将所述组合物同时、顺序地或分开地施用。在其他实施方案中，将所述药剂在单一组合物中施用。例如，包含抗 TGF-β抗体和抗CD38抗体的组合疗法可以涉及施用包含两种抗体的单一组合物，或针对每种抗体的分开的组合物(其中可以将所述分开的组合物顺序地或并行地施用)。

本公开文本的组合疗法的治疗性用途

在一方面，本公开文本的组合疗法用于治疗依赖于CD38表达的病症。在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗过度增殖性障碍、炎性疾病、自身免疫性疾病或纤维化病症。在某些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗癌症。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法靶向CD38阳性细胞(例如，CD38阳性癌细胞，如恶性B细胞)。可通过用于测定基因或蛋白质表达的任何合适方法，例如通过组织学、流式细胞术、RT-PCR或RNA-Seq，将细胞鉴定为CD38阳性。用于测定的癌细胞可以通过肿瘤活检或通过收集循环肿瘤细胞来获得。不希望受到理论的束缚，可以设想与CD38特异性结合的药剂将与CD38阳性细胞结合并在所述细胞上介导ADCC/CDC，并且与 TGF-β特异性结合的药剂将降低TGF-β的免疫抑制作用，从而增强所述癌症疗法的功效。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗骨髓瘤，如多发性骨髓瘤(例如，复发和/或难治性多发性骨髓瘤、新近诊断的多发性骨髓瘤(任选地不适合移植)、冒烟型多发性骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、免疫球蛋白D骨髓瘤或免疫球蛋白E骨髓瘤)。在某些实施方案中，与仅用与CD38特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体)的疗法相比，本公开文本的组合疗法导致骨髓瘤骨病变中的较少骨破坏。在特定实施方案中，本公开文本的组合疗法可以导致改善的骨髓瘤骨病变愈合。不希望受到理论的束缚，设想与TGF-β特异性结合的药剂(例如，抗TGF-β抗体)将抑制TGF-β对成骨细胞分化和基质矿化的抑制活性，从而增强骨骼形成并导致骨重塑和骨愈合。此外，因为成熟的成骨细胞增强多发性骨髓瘤细胞的细胞凋亡和细胞周期停滞，所以与TGF-β特异性结合的药剂也可以抑制多发性骨髓瘤细胞生长。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗例如淀粉样变性(如复发或难治性原发性淀粉样变性或轻链淀粉样变性)、骨髓增生异常综合征(MDS)、单克隆丙种球蛋白病、孤立性浆细胞瘤、髓外浆细胞瘤或瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(

macroglobulinemia)。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗血液恶性肿瘤，例如白血病或淋巴瘤。例如，所述恶性肿瘤可以是慢性淋巴细胞性白血病、B和T急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病(例如，B细胞急性淋巴细胞性白血病或B细胞或T细胞前体急性淋巴细胞性白血病)、慢性淋巴细胞性急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、前髓细胞性白血病和毛细胞白血病)、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B细胞淋巴瘤(如弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞淋巴瘤)、T细胞淋巴瘤(如外周T细胞淋巴瘤)、自然杀伤/T细胞淋巴瘤(例如，鼻型)、成淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤。在某些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗成淋巴细胞性白血病。

可以通过本公开文本的组合疗法治疗的其他癌症可以是实体瘤，并且可以包括但不限于皮肤癌(例如，黑色素瘤(包括不可切除的或转移性黑色素瘤)、皮肤鳞状细胞癌、着色性干皮病和角化棘皮瘤)、甲状腺癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、原发性腹膜癌、膀胱癌、肾癌或肾脏癌(例如，肾细胞癌)、尿路上皮癌、乳腺癌(例如，Her2阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌)、卵巢癌、输卵管癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、睾丸癌、头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌)、脑癌、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、间皮瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、精原细胞瘤和畸形恶瘤(teratocarinoma)。在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗非小细胞肺癌、前列腺癌(例如，前列腺腺癌)、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、卵巢癌、头颈癌、尿路上皮癌或结直肠癌。

本公开文本的组合疗法还可用于抑制环孢菌素介导的恶性肿瘤或癌症进展(例如，转移)。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法可用于治疗早期、中期、晚期或转移阶段的癌症。在一些实施方案中，所述组合疗法用于治疗已接受过至少一种先前疗法的患者(例如，多发性骨髓瘤患者)。在一些实施方案中，所述组合疗法可用于治疗复发或难治性癌症。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于在如下患者中治疗本文所述的任何病症(例如，本文所述的癌症)，所述患者已经在针对所述病症的标准疗法时或之后进展或对于所述患者没有针对所述病症的有效标准疗法。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于在如下患者中治疗本文所述的任何病症(例如，本文所述的癌症)，所述患者对所述病症的一种或多种标准疗法有抗性。在某些实施方案中，所述患者可能患有对于Ab2、Ab3、Ab4、加尼舍替、LY3200882、XOMA 089、达雷木单抗、MOR202、 TAK-079、TAK-573、TAK-169、

或其任何组合是难治性的病症(例如，癌症如多发性骨髓瘤)。所述病症对于用与CD38特异性结合的药剂的治疗可能是难治性的。在特定实施方案中，所述患者可能患有对于用 Ab2的治疗或用达雷木单抗的治疗是难治性的，或对于两种治疗均是难治性的病症(例如，癌症如多发性骨髓瘤)。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗本文所述的癌症，其中所述癌症显示高水平的TGF-β表达。在某些实施方案中，所述癌症显示出高水平的TGF-β表达并且对用与CD38特异性结合的药剂(例如， Ab2、Ab3、Ab4、达雷木单抗、MOR202、TAK-079、TAK-573、TAK-169、

或其任何组合)的治疗有抗性。在特定实施方案中，所述癌症可能对于用Ab2的治疗或用达雷木单抗的治疗是难治性的，或对于两种治疗均是难治性的。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗患有新近诊断的多发性骨髓瘤的患者，所述患者不能接受使用其自身干细胞的干细胞移植类型(自体干细胞移植)。另外地或可替代地，所述患者已接受过至少一种用于治疗多发性骨髓瘤的先前药物。在特定实施方案中，所述组合疗法进一步包含：

a)来那度胺和/或地塞米松，

b)硼替佐米、来那度胺和/或地塞米松，

c)硼替佐米、美法仑和/或泼尼松，或

d)硼替佐米和/或地塞米松。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗已接受过至少两种用于治疗多发性骨髓瘤的先前药物的患者。在某些实施方案中，所述两种先前药物包括来那度胺和/或蛋白酶体抑制剂。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗已接受过至少三种用于治疗多发性骨髓瘤的先前药物的患者。在某些实施方案中，所述三种先前药物包括蛋白酶体抑制剂和/或免疫调节剂。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于治疗对蛋白酶体抑制剂和/或免疫调节剂无反应的患者。

在一些实施方案中，本公开文本的组合疗法用于与泊马度胺和 /或地塞米松(例如，低剂量地塞米松)组合治疗患有复发/难治性多发性骨髓瘤的患者。在某些实施方案中，所述患者已接受过至少两种用于治疗多发性骨髓瘤的先前药物。在特定实施方案中，所述两种先前药物包括来那度胺和/或蛋白酶体抑制剂。

“治疗(Treat、treating和treatment)”是指减轻或消除生物学障碍和/或其伴随症状中的至少一种的方法。如本文所用，用于“减轻”疾病、障碍或病症意指降低所述疾病、障碍或病症的症状的严重程度和/或发生频率。此外，本文对“治疗”的提及包括对治愈性、姑息性和预防性治疗的提及。当然应理解，在癌症疗法的情境下，“治疗”包括导致癌症生长减缓、癌症进展或复发延迟、或癌症转移减少，以及癌症部分缓解以延长患者的预期寿命的任何医学干预。

如本文所用，术语“共同施用(co-administration、co-administ ered)”和“与……组合”是指但不限于(i)当将治疗剂一起配制成单一剂型时将此类药剂同时施用至需要治疗的患者，(ii)当将此类药剂彼此分开地配制成分开的剂型时，将此类药剂基本上同时施用至需要治疗的患者，以及(i ii)当将此类药剂彼此分开地配制成由所述患者在不同时间服用的分开的剂型时，将此类药剂顺序地施用至需要治疗的患者。

与TGF-β特异性结合的药剂(例如，抗TGF-β抗体)和与CD38 特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体)之间的比率可以是使得所述药剂以等量(即1:1比率)施用的比率，但不一定是这种情况。根据单独药剂的特征，可能希望使用非等量的所述药剂。

应理解，本公开文本的组合疗法可以用于如本文所述的治疗方法中，可以用于如本文所述的治疗中和/或可以用于制造用于如本文所述的治疗的药物中。

给药方案

本公开文本的组合疗法将以用于治疗所讨论的病症的有效量施用，即实现所期望结果所需的剂量和时间段施用。治疗有效量可根据多种因素而变化，所述多种因素如所治疗的特定病症，患者的年龄、性别、健康状况和体重，以及所述药剂是作为独立治疗施用还是与一种或多种另外的抗癌治疗组合施用。

“治疗有效量”是指治疗剂将在某种程度上缓解所治疗障碍的一种或多种症状的施用量。该量可以由医疗保健专业人员使用完善的原则来确定。治疗有效量的抗癌治疗剂可以例如导致肿瘤缩小、生存期增加、癌细胞消除、疾病进展减少、转移逆转或医疗保健专业人员期望的其他临床终点。

在一些实施方案中，当用本公开文本的组合疗法治疗时，监测患者的心脏和肺部副作用。

产生抗体和抗体组合物的宿主细胞和方法

本公开文本的一个方面涉及产生用于本发明组合疗法的抗体的方法。一个实施方案涉及用于产生如本文所述的抗体的方法，所述方法包括提供能够表达所述抗体的重组宿主细胞、在适用于抗体表达的条件下培养所述宿主细胞、以及分离所得的抗体。在此类重组宿主细胞中通过这种表达产生的抗体在本文中称为“重组抗体”。还描述了此类宿主细胞的后代细胞，以及由所述后代细胞产生的抗体。

如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简单地“宿主细胞”) 意指已经将重组表达载体引入其中的细胞。所述宿主细胞可以包含例如本文所述的一种或多种载体。所述宿主细胞可以包含例如编码本文所述的抗 TGF-β和/或抗CD38抗体或其抗原结合片段的重链或所述重链的抗原结合片段的核苷酸序列、编码本文所述的抗TGF-β和/或抗CD38抗体或其抗原结合片段的轻链或所述轻链的抗原结合片段的核苷酸序列、或两者。应理解，“重组宿主细胞”和“宿主细胞”不仅意指特定受试者细胞，而且还意指这种细胞的后代。因为后代中可能由于突变或环境影响而发生某些修饰，所以这种子代可能实际上与亲代细胞不同，但是仍包括在如本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。

在一些实施方案中，本公开文本的宿主细胞包含：

-编码如本文所述的抗TGF-β抗体的重链或其抗原结合片段的核苷酸序列、编码如本文所述的抗TGF-β抗体的轻链或其抗原结合片段的核苷酸序列、或两者，以及

-编码如本文所述的抗CD38抗体的重链或其抗原结合片段的核苷酸序列、编码如本文所述的抗CD38抗体的轻链或其抗原结合片段的核苷酸序列、或两者。

编码抗TGF-β和/或抗CD38抗体的重链和/或轻链氨基酸序列或其抗原结合片段的核酸分子可以包含在表达载体中。其中目的核酸序列与必要的表达控制序列(如转录和翻译控制序列)连接的表达载体包括质粒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、植物病毒(如花椰菜花叶病毒)、烟草花叶病毒、粘粒、YAC、EBV来源的附加体等。可以将抗体轻链编码序列和抗体重链编码序列插入分开的载体中，并且可以与相同或不同的表达控制序列(例如，启动子)可操作地连接。在一个实施方案中，将两种编码序列都插入相同的表达载体中，并且可以与相同的表达控制序列(例如，一个共同的启动子)、分开的相同表达控制序列(例如，多个启动子)或不同的表达控制序列(例如，多个启动子)可操作地连接。通过标准方法将抗体编码序列插入表达载体中(例如，将抗体基因片段和载体上的互补限制性位点连接，或在不存在限制性位点时进行平端连接)。

可以将编码本文所述的抗体和抗原结合片段的表达载体引入宿主细胞中进行表达。在一些实施方案中，将编码抗TGF-β抗体的表达载体和编码抗CD38抗体的表达载体引入分开的宿主细胞中。在其他实施方案中，将表达载体引入相同的宿主细胞中。将宿主细胞在适用于抗体表达的条件下培养，然后将其收获并分离。宿主细胞包括哺乳动物、植物、细菌或酵母宿主细胞。可获得作为用于表达的宿主的哺乳动物细胞系是本领域熟知的，并且包括许多可从美国菌种保藏中心(ATCC)获得的永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0细胞、SP2细胞、HEK-293T细胞、 293Freestyle细胞(Invitrogen)、NIH-3T3细胞、HeLa细胞、幼小仓鼠肾(BHK) 细胞、非洲绿猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、A549 细胞和多种其他细胞系。可以基于表达水平选择细胞系。可以使用的其他细胞系是昆虫细胞系，如Sf9或Sf21细胞。

此外，可以使用多种已知技术来增强抗体的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)是用于在某些条件下增强表达的常用方法。

用于宿主细胞的组织培养基可以包含或不含动物来源的组分 (ADC)，如牛血清白蛋白。在一些实施方案中，不含ADC的培养基对于人安全性是优选的。组织培养可以使用分批补料法、连续灌注法或适合宿主细胞和期望产量的任何其他方法进行。

在一些实施方案中，本公开文本涉及用于产生包含抗TGF-β抗体或其抗原结合片段和抗CD38抗体或其抗原结合片段的抗体组合物的方法，所述方法包括：

-提供第一宿主细胞和第二宿主细胞，其中所述第一宿主细胞能够表达如本文所述的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段，并且所述第二宿主细胞能够表达如本文所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，

-在适用于所述抗TGF-β抗体或其抗原结合片段和所述抗CD38抗体或其抗原结合片段表达的条件下培养所述第一宿主细胞和第二宿主细胞，

-分离所得的抗体或抗原结合片段，以及

-任选地将所述抗体或抗原结合片段组合以产生抗体组合物。

药物组合物

本公开文本的另一方面是药物组合物，所述药物组合物包含与人TGF-β特异性结合的药剂(例如，抗TGF-β抗体或其抗原结合片段)和与人CD38特异性结合的药剂(例如，抗CD38抗体或其抗原结合片段)作为活性成分(例如，作为唯一的活性成分)。可以将与TGF-β特异性结合的药剂和与CD38特异性结合的药剂共同配制，例如混合并提供于单一组合物中。本公开文本还提供了(1)包含与人TGF-β特异性结合的药剂的药物组合物，和 (2)包含与人CD38特异性结合的药剂的药物组合物，其中将所述药物组合物用于同一组合疗法中。

在一些实施方案中，当在本公开文本的组合疗法中施用时，本文所述的药物组合物旨在用于治疗(例如，改进和/或预防)障碍、疾病或病症，所述治疗通过调节TGF-β和CD38的活性或表达来改善或减缓所述障碍、疾病或病症的进展。在某些实施方案中，所述药物组合物旨在用于治疗(例如，改进和/或预防)癌症。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。

在一些实施方案中，本公开文本的药物组合物包含本文所述的抗TGF-β抗体，其具有小于1％的半抗体。半抗体形成可以通过单克隆抗体制剂的纯度分析来测定，所述纯度分析通过以下方式进行：使用例如非还原条件下的SDS-毛细管电泳或非还原SDS-PAGE分析，然后光密度法或RP-HPLC (Angal等人,Mol Immunol 30(1):105-8(1993)；Bloom等人,Protein Science 6:407-415(1997)；Schuurman等人,38(1):1-8(2001)；和Solanos等人,Anal Chem 78:6583-94(2006))。

通常，本文所述的药物组合物适合作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂(例如，如下所述的)结合的配制品施用。

本文使用术语“赋形剂”或“载体”来描述除本公开文本的一种或多种化合物以外的任何成分。赋形剂的选择将在很大程度上取决于多种因素，如特定的施用方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质。“药学上可接受的赋形剂”包括生理上可相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的赋形剂的一些例子是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等，及其组合。在一些情况下，在所述组合物中将包含等渗剂，例如糖、多元醇 (如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。药学上可接受的物质的另外例子是增加所述抗体的保质期或有效性的润湿剂或少量辅助物质(如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液)。在一些实施方案中，本公开文本的药物组合物可以包含透明质酸酶(例如，重组人透明质酸酶)。在某些实施方案中，包含透明质酸酶的药物组合物可以用于皮下施用。

本公开文本的药物组合物可以作为单一单位剂量或作为多个单一单位剂量制备、包装或提供。如本文所用，“单位剂量”是药物组合物的离散量，其包含预定量的一种或多种活性成分。每种活性成分的量通常等于将要施用至受试者的活性成分的剂量或这种剂量的简便分数，例如像这种剂量的一半或三分之一。

本公开文本的药物组合物通常适用于肠胃外施用。如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括特征在于以下的任何施用途径：对受试者的组织物理地制造缺口且通过组织中的缺口施用药物组合物，因此通常导致直接施用至血液中、肌肉中或内部器官中。因此，肠胃外施用包括但不限于通过以下方式来施用药物组合物：注射所述组合物、经手术切口施加所述组合物、经穿透组织的非手术伤口施加所述组合物等。特别地，设想肠胃外施用包括但不限于皮下、腹膜内、肌内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、颅内、肿瘤内和滑膜内注射或输注；和肾脏透析输注技术。也设想了局部灌注。优选的实施方案可以包括静脉内和皮下途径。

适用于肠胃外施用的药物组合物的配制品通常包含与药学上可接受的载体(如无菌水或无菌等渗盐水)组合的一种或多种活性成分。此类配制品可以以适用于推注施用或连续施用的形式制备、包装或提供。可注射配制品可以在单位剂型中如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂量容器中制备、包装或提供。用于肠胃外施用的配制品包括但不限于悬浮液、溶液、在油性或水性媒介物中的乳剂、糊剂等。此类配制品可以进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的配制品的一个实施方案中，将一种或多种活性成分以干燥(即，粉末或颗粒)形式提供，以用合适的媒介物(例如，无菌无热原的水)重构，然后在肠胃外施用所述重构的组合物。肠胃外配制品还包括可以含有赋形剂如盐、碳水化合物和缓冲剂(例如，具有3至9的pH)的水性溶液，但是对于一些应用，它们可以更合适地被配制为无菌非水性溶液或配制为将与合适的媒介物 (如无菌无热原的水)结合使用的干燥(例如，冻干)形式。示例性肠胃外施用形式包括呈无菌水性溶液(例如水性丙二醇或葡萄糖溶液)形式的溶液或悬浮液。如果需要的话，可以适当地缓冲此类剂型。可用的其他肠胃外施用的配制品包括包含呈微晶型或于脂质体制剂中的一种或多种活性成分的那些。用于肠胃外施用的配制品可以被配制成立即释放和/或缓和释放。缓和释放配制品包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控制释放、靶向释放和程序化释放。

制品和试剂盒

本公开文本还提供了制品，所述制品包含与人TGF-β特异性结合的药剂和与人CD38特异性结合的药剂。在一些实施方案中，本公开文本的制品包含本文所述的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段、和本文所述的抗 CD38抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述制品包含Ab1和Ab2。本公开文本进一步提供了用于制造所述制品的方法。

本公开文本还提供了试剂盒，所述试剂盒包含与人TGF-β特异性结合的药剂和与人CD38特异性结合的药剂，以及与所述药剂组合使用的说明书。在一些实施方案中，本公开文本的试剂盒包含本文所述的抗TGF-β抗体或其抗原结合片段、和本文所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述试剂盒包含Ab1和Ab2。

除非在本文中另外定义，否则结合本公开文本使用的科学和技术术语应具有由本领域普通技术人员通常所理解的含义。下文描述了示例性方法和材料，但在本公开文本的实践或测试中也可以使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料。在矛盾的情况下，将以包括定义在内的本说明书为准。

通常，本文所述的结合细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、分析化学、合成有机化学、医学和药物化学以及蛋白质和核酸化学和杂交使用的命名法以及其技术是本领域中熟知且常用的那些。根据制造商的说明书来进行酶反应和纯化技术，如本领域通常所实现的或如本文所述。

此外，除非另外通过上下文要求，否则单数的术语应包括复数并且复数术语应包括单数。在整个本说明书和实施方案中，词语“具有 (have)”和“包含(comprise)”或变型如“具有(has、having)”、“包含(comprises或comprising)”应被理解为暗示包括所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。

本文提及的所有出版物和其他参考文献均通过引用以其整体并入。尽管本文引用了许多文件，但是该引用并不意味着承认这些文件中的任何文件构成本领域的一般常识的一部分。

实施例

为了更好地理解本公开文本，阐述了以下实施例。这些实施例仅用于说明，并且不应以任何方式解释为限制本公开文本的范围。

实施例1：由多发性骨髓瘤和淋巴瘤细胞系释放TGF-β

将JJN3、NCI-H929、RPMI8226、LP1、MOLP8、SUDHL-4、 DAUDI、OCI-LY19和SUDHL8细胞在补充有10％胎牛血清(Invitrogen目录号10082-147)的RPMI 1640(Invitrogen目录号22400-089)中培养。

为了定量由MM和淋巴瘤细胞系释放的TGF-β，将每个细胞系的1x10⁶细胞铺板于一个96孔经组织培养处理的平板中的补充有10％胎牛血清的100μL RPMI的体积中。将细胞在含有5％CO₂的37℃加湿培养箱中在 37℃下孵育1天、2天或3天。以250g离心5分钟后，从每个孔收集40μL上清液，并根据制造商的说明书使用MSD 96孔多阵列人TGF-β1测定试剂盒(Meso Scale Discovery目录号K151IUC-1)测定总人TGF-β的水平。简而言之，将样品通过酸处理激活并随后中和，之后与捕获抗体一起孵育。然后使用基于ELISA的方法检测抗体，并在MSD SECTOR成像器上读取结果。

在所有MM和淋巴瘤细胞系的上清液中检测到总TGF-β含量处于超过500pg/mL的水平下，并且在大多数细胞系中，特别是在JJN3、 RPMI8226和MOLP8细胞中观察到了随时间的积累(图1)。

实施例2：TGF-β降低人NK细胞的细胞溶解活性并减小Ab2介导的ADCC

将对数生长期NK92V细胞(NK92-05 CD16 V/V；Conkwest) 悬浮在生长培养基(补充有100个单位/mL人白介素-2(R&D目录号 202-IL-010/CF)的Middle MyeloCult H5100(Stemcell Technologies目录号 05150))中，并以0.8x10⁵个细胞/mL的密度接种至10cm培养皿中。将所述细胞用终浓度为10ng/mL的重组人TGF-β在37℃下处理过夜、24小时、48小时或72小时。

将MOLP8细胞在补充有20％胎牛血清(Invitrogen目录号 10082-147)的RPMI1640(Invitrogen目录号22400-089)中培养。

将钙黄绿素(AM)(Invitrogen目录号C3100MP)标记的MOLP8 靶细胞和NK92V效应细胞以每孔4x10⁴个靶细胞(MOLP8)和1.2x10⁵个效应细胞(NK92V)的密度接种至96孔板中。将细胞用浓度为0、0.001、0.1 或1μg/mL的Ab2、或用IgG₁对照(数据未示出)在37℃下处理1小时。使用多模式板读取器(Envision)测量从上清液中裂解的靶细胞释放的钙黄绿素荧光(florescence)。荧光信号的强度与裂解的靶细胞数量成正比。

将人NK细胞与TGF-β一起孵育长达72h导致Ab2介导的ADCC 的时间依赖性减少(E:T＝3:1)。虽然与TGF-β一起孵育24h的NK细胞保留了其裂解活性，但孵育48h或72h的NK细胞的裂解却降低约25％-60％(图2)。

实施例3：TGF-β中和恢复了NK细胞溶解活性和Ab2介导的ADCC

将对数生长期NK92V细胞(NK92-05 CD16 V/V；Conkwest) 悬浮在生长培养基(补充有100个单位/mL人白介素-2(R&D目录号 202-IL-010/CF)的Middle MyeloCult H5100(Stemcell Technologies目录号 05150))中，并以0.8x10⁵个细胞/mL的密度接种至10cm培养皿中。将所述细胞用终浓度为10ng/mL的重组人TGF-β、以及用终浓度为50μg/mL的1D11(Ab1的鼠替代物)或抗体亚型对照(13C4；数据未示出)在37℃下处理90 小时。

将钙黄绿素(AM)(Invitrogen目录号C3100MP)标记的MOLP8 靶细胞和NK92V效应细胞以每孔4x10⁴个靶细胞(MOLP8)和1.2x10⁵个效应细胞(NK92V)的密度接种至96孔板中。将细胞用0、0.001、0.01、0.1或 1μg/mL的Ab2、或用1μg/mL的IgG₁对照在37℃下处理1小时。使用多模式板读取器(Envision)测量从上清液中裂解的靶细胞释放的钙黄绿素荧光。荧光信号的强度与裂解的靶细胞数量成正比。

当TGF-β被Ab1中和时，由TGF-β诱导的NK细胞裂解活性和 Ab2介导的ADCC的减小被完全恢复，但在对照抗体的情况下并非如此(图 3)。

实施例4：TGF-β抑制NCI-H929细胞的由Ab2介导的ADCC，并且Ab1阻断该抑制

通过阴性选择从正常人供体(Stem Cell Technologies)分离人 NK细胞。将经富集的NK细胞在加湿培养箱中在37℃下在存在IL-2(在100 IU/mL下)、TGF-β(如所指示的)和/或Ab1或亚型对照的情况下培养3天。此时，将指数增长的NCI-H929细胞用钙黄绿素(AM)标记，并与1μg/mL 的Ab2一起孵育30分钟。然后将NK效应细胞重悬并与标记的靶NCI-H929细胞在加湿培养箱中合并1小时。通过使用分光光度计测量用钙黄绿素(AM) 标记的靶细胞的水平来量化Ab2介导的ADCC。渐增剂量的TGF-β显示为抑制正常人NK细胞杀伤Ab2预处理的NCI-H929细胞的能力，其中0.1ng/mL对NK 细胞介导的细胞裂解几乎没有影响，但1和10ng/mL将ADCC阻断大约50％ (图4)。接下来，在2种不同的Ab1浓度(100和200μg/mL)下评价ADCC。亚型对照Ab(IgG₄)或Ab1当在不存在TGF-β的情况下添加至培养物中时对 ADCC都没有任何影响(图5和图6)。显示Ab1阻断TGF-β抑制ADCC的能力 (图5和图6，p<0.005，相比于未处理)，而IgG₄对照无法在相同程度上阻断 TGF-β的作用。因此，该数据证明Ab1能够缓解TGF-β对NK细胞介导的ADCC 的免疫抑制作用。

实施例5：Ab1对内源性TGF-β的中和恢复了原代NK细胞溶解活性和Ab2介导的ADCC

将JJN3、K562和RPMI8226细胞在补充有10％胎牛血清 (Invitrogen目录号10082-147)的RPMI 1640(Invitrogen目录号22400-089) 中培养。

根据生产商建议的方案(StemCell Technologies目录号 17955RF)，通过阴性选择从正常人PBMC分离人原代NK细胞。在5％CO₂培养箱中，在37℃下，在存在或不存在100mg/ml Ab1或亚型对照的情况下，将分离的NK细胞在6-transwell板中单独培养或在存在JJN3细胞的情况下共培养90小时。

共培养90小时后，将来自transwell的NK细胞与用钙黄绿素 (AM)(Invitrogen目录号C3100MP)标记的K562细胞在37℃下一起孵育2 小时以进行NK细胞的细胞溶解功能检测，或在存在0.001或0.1mg/ml的Ab2 或0.1mg/ml的对照Ab2突变体(Ab*)的情况下与钙黄绿素(AM)标记的 RPMI8226在37℃下一起孵育1小时以进行Ab2介导的ADCC检测。使用多模式板读取器(Envision)测量从上清液中裂解的靶细胞释放的钙黄绿素荧光。荧光信号的强度与裂解的靶细胞数量成正比。

原代NK细胞的细胞溶解活性增加(图7)和Ab2介导的ADCC 增加(图8)证明，在90小时共培养过程中，Ab1的存在中和了JJN3细胞释放的内源性TGFβ。

实施例6：在多发性骨髓瘤患者中用Ab1和Ab2的组合治疗

可以在人类患者中进一步评估用抗体Ab1和Ab2的组合治疗的作用，所述人类患者如对一种或多种靶向CD38的其他治疗(例如艾萨妥昔单抗(isatuximab)或达雷木单抗)有抗性的多发性骨髓瘤患者。所述多发性骨髓瘤患者可能例如对靶向CD38的所述其他治疗无反应或在用靶向CD38 的所述其他治疗期间进展。

预期Ab1和Ab2的组合将比单独Ab2更有效地治疗多发性骨髓瘤。例如，与用单独Ab2的治疗相比，所述组合治疗可导致症状改善、骨破坏减少、骨形成增强，从而导致骨重塑和/或骨愈合、癌症进展或复发延迟或预期寿命更长。

可以使用如下给药时间表(例如，每周、每两周、每三周或每四周)将Ab1和Ab2以如下剂量(例如1-20mg/kg)施用一定的时间段(例如，如由医生决定的)，所述给药时间表、剂量、时间段是实现所期望结果所需的。在一些实施方案中，可以经由静脉内输注施用任一种或两种抗体。在某些实施方案中，在治疗过程中，将Ab2每周、每两周、每三周或每四周或其任何组合以10mg/kg或16mg/kg实际体重来施用。

序列表

SEQ ID NO:1(Ab1重链)

SEQ ID NO:2(Ab1轻链)

SEQ ID NO:3(Ab1重链可变结构域)

SEQ ID NO:4(Ab1轻链可变结构域)

SEQ ID NO:5(Ab1重链CDR1)

SNVIS

SEQ ID NO:6(Ab1重链CDR2)

GVIPIVDIAN Y

SEQ ID NO:7(Ab1重链CDR3)

TLGLVLDAMD Y

SEQ ID NO:8(Ab1轻链CDR1)

RASQSLGSSY LA

SEQ ID NO:9(Ab1轻链CDR2)

GASSRAP

SEQ ID NO:10(Ab1轻链CDR3)

QQYADSPIT

SEQ ID NO:11(Ab2重链)

SEQ ID NO:12(Ab2轻链)

SEQ ID NO:13(Ab2重链可变结构域)

SEQ ID NO:14(Ab2轻链可变结构域)

SEQ ID NO:15(Ab2重链CDR1)

DYWMQ

SEQ ID NO:16(Ab2重链CDR2)

TIYPGDGDTG YAQKFQG

SEQ ID NO:17(Ab2重链CDR3)

GDYYGSNSLD Y

SEQ ID NO:18(Ab2轻链CDR1)

KASQDVSTVV A

SEQ ID NO:19(Ab2轻链CDR2)

SASYRYI

SEQ ID NO:20(Ab2轻链CDR3)

QQHYSPPYT

SEQ ID NO:21(人TGF-β1)：SwissProt P01137

SEQ ID NO:22(人TGF-β2)：SwissProt P08112

SEQ ID NO:23(人TGF-β3)：SwissProt P10600

SEQ ID NO:24(人CD38)：GenBank NP_001766

SEQ ID NO:25(Ab3重链)

SEQ ID NO:26(Ab3轻链)

SEQ ID NO:27(Ab3重链可变结构域)

SEQ ID NO:28(Ab3轻链可变结构域)

SEQ ID NO:29(Ab3重链CDR1)

GYTFTSYA

SEQ ID NO:30(Ab3重链CDR2)

IYPGQGGT

SEQ ID NO:31(Ab3重链CDR3)

ARTGGLRRAY FTY

SEQ ID NO:32(Ab3轻链CDR1)

QSVSSYGQGF

SEQ ID NO:33(Ab3轻链CDR2)

GAS

SEQ ID NO:34(Ab3轻链CDR3)

QQNKEDPWT

SEQ ID NO:35(Ab4重链)

SEQ ID NO:36(Ab4轻链)

SEQ ID NO:37(Ab4重链可变结构域)

SEQ ID NO:38(Ab4轻链可变结构域)

SEQ ID NO:39(Ab4重链CDR1)

GFTFSSYG

SEQ ID NO:40(Ab4重链CDR2)

IWYDGSNK

SEQ ID NO:41(Ab4重链CDR3)

ARMFRGAFDY

SEQ ID NO:42(Ab4轻链CDR1)

QGIRND

SEQ ID NO:43(Ab4轻链CDR2)

AAS

SEQ ID NO:44(Ab4轻链CDR3)

LQDYIYYPT。

序列表

<110> 赛诺菲

<120> 靶向CD38和TGF-β的抗癌组合疗法

<130> 022548.WO025

<140>

<141>

<150> 62/696,198

<151> 2018-07-10

<160> 44

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 2

Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro

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Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

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Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<210> 3

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 3

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe

50 55 60

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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 4

Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

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Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

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<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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肽"

<400> 5

Ser Asn Val Ile Ser

1 5

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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肽"

<400> 6

Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr

1 5 10

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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肽"

<400> 7

Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 8

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 8

Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 9

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 10

Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro Ile Thr

1 5

<210> 11

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

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Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

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Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

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Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

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Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

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Gly Lys

450

<210> 12

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 12

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

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85 90 95

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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

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210

<210> 13

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

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Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

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Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

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Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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多肽"

<400> 14

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

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Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

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<220>

<221> 来源

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肽"

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

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肽"

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Gly

<210> 17

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 17

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 18

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val Val Ala

1 5 10

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 19

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 20

Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr

1 5

<210> 21

<211> 390

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 21

Met Pro Pro Ser Gly Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Trp Leu Leu Val Leu Thr Pro Gly Arg Pro Ala Ala Gly Leu Ser Thr

20 25 30

Cys Lys Thr Ile Asp Met Glu Leu Val Lys Arg Lys Arg Ile Glu Ala

35 40 45

Ile Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Ala Ser Pro Pro Ser

50 55 60

Gln Gly Glu Val Pro Pro Gly Pro Leu Pro Glu Ala Val Leu Ala Leu

65 70 75 80

Tyr Asn Ser Thr Arg Asp Arg Val Ala Gly Glu Ser Ala Glu Pro Glu

85 90 95

Pro Glu Pro Glu Ala Asp Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Thr Arg Val Leu

100 105 110

Met Val Glu Thr His Asn Glu Ile Tyr Asp Lys Phe Lys Gln Ser Thr

115 120 125

His Ser Ile Tyr Met Phe Phe Asn Thr Ser Glu Leu Arg Glu Ala Val

130 135 140

Pro Glu Pro Val Leu Leu Ser Arg Ala Glu Leu Arg Leu Leu Arg Leu

145 150 155 160

Lys Leu Lys Val Glu Gln His Val Glu Leu Tyr Gln Lys Tyr Ser Asn

165 170 175

Asn Ser Trp Arg Tyr Leu Ser Asn Arg Leu Leu Ala Pro Ser Asp Ser

180 185 190

Pro Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Gly Val Val Arg Gln Trp Leu

195 200 205

Ser Arg Gly Gly Glu Ile Glu Gly Phe Arg Leu Ser Ala His Cys Ser

210 215 220

Cys Asp Ser Arg Asp Asn Thr Leu Gln Val Asp Ile Asn Gly Phe Thr

225 230 235 240

Thr Gly Arg Arg Gly Asp Leu Ala Thr Ile His Gly Met Asn Arg Pro

245 250 255

Phe Leu Leu Leu Met Ala Thr Pro Leu Glu Arg Ala Gln His Leu Gln

260 265 270

Ser Ser Arg His Arg Arg Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser

275 280 285

Thr Glu Lys Asn Cys Cys Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys

290 295 300

Asp Leu Gly Trp Lys Trp Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn

305 310 315 320

Phe Cys Leu Gly Pro Cys Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr

325 330 335

Ser Lys Val Leu Ala Leu Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala

340 345 350

Ala Pro Cys Cys Val Pro Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr

355 360 365

Tyr Val Gly Arg Lys Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val

370 375 380

Arg Ser Cys Lys Cys Ser

385 390

<210> 22

<211> 414

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 22

Met His Tyr Cys Val Leu Ser Ala Phe Leu Ile Leu His Leu Val Thr

1 5 10 15

Val Ala Leu Ser Leu Ser Thr Cys Ser Thr Leu Asp Met Asp Gln Phe

20 25 30

Met Arg Lys Arg Ile Glu Ala Ile Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu

35 40 45

Lys Leu Thr Ser Pro Pro Glu Asp Tyr Pro Glu Pro Glu Glu Val Pro

50 55 60

Pro Glu Val Ile Ser Ile Tyr Asn Ser Thr Arg Asp Leu Leu Gln Glu

65 70 75 80

Lys Ala Ser Arg Arg Ala Ala Ala Cys Glu Arg Glu Arg Ser Asp Glu

85 90 95

Glu Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Tyr Lys Ile Asp Met Pro Pro Phe Phe

100 105 110

Pro Ser Glu Asn Ala Ile Pro Pro Thr Phe Tyr Arg Pro Tyr Phe Arg

115 120 125

Ile Val Arg Phe Asp Val Ser Ala Met Glu Lys Asn Ala Ser Asn Leu

130 135 140

Val Lys Ala Glu Phe Arg Val Phe Arg Leu Gln Asn Pro Lys Ala Arg

145 150 155 160

Val Pro Glu Gln Arg Ile Glu Leu Tyr Gln Ile Leu Lys Ser Lys Asp

165 170 175

Leu Thr Ser Pro Thr Gln Arg Tyr Ile Asp Ser Lys Val Val Lys Thr

180 185 190

Arg Ala Glu Gly Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Asp Ala Val His

195 200 205

Glu Trp Leu His His Lys Asp Arg Asn Leu Gly Phe Lys Ile Ser Leu

210 215 220

His Cys Pro Cys Cys Thr Phe Val Pro Ser Asn Asn Tyr Ile Ile Pro

225 230 235 240

Asn Lys Ser Glu Glu Leu Glu Ala Arg Phe Ala Gly Ile Asp Gly Thr

245 250 255

Ser Thr Tyr Thr Ser Gly Asp Gln Lys Thr Ile Lys Ser Thr Arg Lys

260 265 270

Lys Asn Ser Gly Lys Thr Pro His Leu Leu Leu Met Leu Leu Pro Ser

275 280 285

Tyr Arg Leu Glu Ser Gln Gln Thr Asn Arg Arg Lys Lys Arg Ala Leu

290 295 300

Asp Ala Ala Tyr Cys Phe Arg Asn Val Gln Asp Asn Cys Cys Leu Arg

305 310 315 320

Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Arg Asp Leu Gly Trp Lys Trp Ile His

325 330 335

Glu Pro Lys Gly Tyr Asn Ala Asn Phe Cys Ala Gly Ala Cys Pro Tyr

340 345 350

Leu Trp Ser Ser Asp Thr Gln His Ser Arg Val Leu Ser Leu Tyr Asn

355 360 365

Thr Ile Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Ser Gln Asp

370 375 380

Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Ile Gly Lys Thr Pro Lys Ile

385 390 395 400

Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser

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<210> 23

<211> 412

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 23

Met Lys Met His Leu Gln Arg Ala Leu Val Val Leu Ala Leu Leu Asn

1 5 10 15

Phe Ala Thr Val Ser Leu Ser Leu Ser Thr Cys Thr Thr Leu Asp Phe

20 25 30

Gly His Ile Lys Lys Lys Arg Val Glu Ala Ile Arg Gly Gln Ile Leu

35 40 45

Ser Lys Leu Arg Leu Thr Ser Pro Pro Glu Pro Thr Val Met Thr His

50 55 60

Val Pro Tyr Gln Val Leu Ala Leu Tyr Asn Ser Thr Arg Glu Leu Leu

65 70 75 80

Glu Glu Met His Gly Glu Arg Glu Glu Gly Cys Thr Gln Glu Asn Thr

85 90 95

Glu Ser Glu Tyr Tyr Ala Lys Glu Ile His Lys Phe Asp Met Ile Gln

100 105 110

Gly Leu Ala Glu His Asn Glu Leu Ala Val Cys Pro Lys Gly Ile Thr

115 120 125

Ser Lys Val Phe Arg Phe Asn Val Ser Ser Val Glu Lys Asn Arg Thr

130 135 140

Asn Leu Phe Arg Ala Glu Phe Arg Val Leu Arg Val Pro Asn Pro Ser

145 150 155 160

Ser Lys Arg Asn Glu Gln Arg Ile Glu Leu Phe Gln Ile Leu Arg Pro

165 170 175

Asp Glu His Ile Ala Lys Gln Arg Tyr Ile Gly Gly Lys Asn Leu Pro

180 185 190

Thr Arg Gly Thr Ala Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Asp Thr Val

195 200 205

Arg Glu Trp Leu Leu Arg Arg Glu Ser Asn Leu Gly Leu Glu Ile Ser

210 215 220

Ile His Cys Pro Cys His Thr Phe Gln Pro Asn Gly Asp Ile Leu Glu

225 230 235 240

Asn Ile His Glu Val Met Glu Ile Lys Phe Lys Gly Val Asp Asn Glu

245 250 255

Asp Asp His Gly Arg Gly Asp Leu Gly Arg Leu Lys Lys Gln Lys Asp

260 265 270

His His Asn Pro His Leu Ile Leu Met Met Ile Pro Pro His Arg Leu

275 280 285

Asp Asn Pro Gly Gln Gly Gly Gln Arg Lys Lys Arg Ala Leu Asp Thr

290 295 300

Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys Val Arg Pro Leu

305 310 315 320

Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp Val His Glu Pro

325 330 335

Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys Pro Tyr Leu Arg

340 345 350

Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu Tyr Asn Thr Leu

355 360 365

Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Pro Gln Asp Leu Glu

370 375 380

Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro Lys Val Glu Gln

385 390 395 400

Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser

405 410

<210> 24

<211> 300

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 24

Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys

1 5 10 15

Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Leu Cys Leu Gly Val Ser Ile Leu Val

20 25 30

Leu Ile Leu Val Val Val Leu Ala Val Val Val Pro Arg Trp Arg Gln

35 40 45

Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg Phe Pro Glu Thr Val Leu

50 55 60

Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro Glu Met Arg His Val

65 70 75 80

Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser Lys

85 90 95

His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Met Lys Leu

100 105 110

Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile Leu Leu Trp Ser Arg Ile

115 120 125

Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe Thr

130 135 140

Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp Cys

145 150 155 160

Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp Trp

165 170 175

Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr Val

180 185 190

Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp Val Val His Val Met Leu

195 200 205

Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly Ser

210 215 220

Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Thr Leu Glu Ala

225 230 235 240

Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln Asp

245 250 255

Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile Gln

260 265 270

Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys Val

275 280 285

Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser Glu Ile

290 295 300

<210> 25

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 25

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Lys Glu Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Gln Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Gly Leu Arg Arg Ala Tyr Phe Thr Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Ala Gly

225 230 235 240

Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu Pro Glu Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

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Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

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Gly

<210> 26

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 26

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Gln Gly Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Pro Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Lys

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Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 27

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 27

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Lys Glu Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Gln Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Gly Gly Leu Arg Arg Ala Tyr Phe Thr Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 28

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Gln Gly Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Pro Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Lys

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 29

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 29

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala

1 5

<210> 30

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 30

Ile Tyr Pro Gly Gln Gly Gly Thr

1 5

<210> 31

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 31

Ala Arg Thr Gly Gly Leu Arg Arg Ala Tyr Phe Thr Tyr

1 5 10

<210> 32

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 32

Gln Ser Val Ser Ser Tyr Gly Gln Gly Phe

1 5 10

<210> 33

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 33

Gly Ala Ser

1

<210> 34

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 34

Gln Gln Asn Lys Glu Asp Pro Trp Thr

1 5

<210> 35

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Met Phe Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Ala Gly Pro Asp Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu Pro Glu Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 36

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 36

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Ile Tyr Tyr Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 37

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Met Phe Arg Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 38

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

多肽"

<400> 38

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Ile Tyr Tyr Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 39

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 40

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 40

Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 41

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 41

Ala Arg Met Phe Arg Gly Ala Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 42

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 42

Gln Gly Ile Arg Asn Asp

1 5

<210> 43

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 43

Ala Ala Ser

1

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述：合成

肽"

<400> 44

Leu Gln Asp Tyr Ile Tyr Tyr Pro Thr

1 5

Claims

1.一种在有需要的人类患者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体或其抗原结合片段，所述抗CD38抗体具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链CDR1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，所述抗TGF-β抗体或其抗原结合片段具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗CD38抗体包含分别含有SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的重链可变结构域(V_H)和轻链可变结构域(V_L)；并且其中所述抗TGF-β抗体包含分别含有SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗CD38抗体具有分别包含SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的重链(HC)和轻链(LC)；并且其中所述抗TGF-β抗体具有分别包含SEQ IDNO:1和2的氨基酸序列的HC和LC。

4.一种在有需要的人类患者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体或其抗原结合片段。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗CD38抗体：

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的重链可变结构域(V_H)和轻链可变结构域(V_L)；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的重链(HC)和轻链(LC)。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗TGF-β抗体：

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列的HC和LC。

7.根据权利要求1、2和4-6中任一项所述的方法，其中所述抗CD38抗体包含人IgG₁ Fc区，并且所述抗TGF-β抗体包含人IgG₄ Fc区。

8.一种在有需要的人类患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体，所述抗CD38抗体包含SEQ ID NO:13的重链可变结构域(V_H)氨基酸序列和SEQ ID NO:14的轻链可变结构域(V_L)氨基酸序列，所述抗TGF-β抗体包含SEQID NO:3的V_H氨基酸序列和SEQ ID NO:4的V_L氨基酸序列。

9.一种在有需要的人类患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用抗CD38抗体和抗TGF-β抗体，所述抗CD38抗体包含SEQ ID NO:11的重链(HC)氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链(LC)氨基酸序列，所述抗TGF-β抗体包含SEQ ID NO:1的HC氨基酸序列和SEQ ID NO:2的LC氨基酸序列。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述抗CD38抗体和所述抗TGF-β抗体或片段顺序地施用至所述患者。

11.一种抗CD38抗体，所述抗CD38抗体与抗TGF-β抗体组合用于在有需要的人类患者中治疗癌症。

12.抗CD38抗体与抗TGF-β抗体组合用于制造在有需要的人类患者中治疗癌症的药物的用途。

13.根据权利要求11所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求12所述的用途，其中所述抗CD38抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的V_H和V_L；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的HC和LC。

14.一种抗TGF-β抗体，所述抗TGF-β抗体与抗CD38抗体组合用于在有需要的人类患者中治疗癌症。

15.抗TGF-β抗体与抗CD38抗体组合用于制造在有需要的人类患者中治疗癌症的药物的用途。

16.根据权利要求14所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求15所述的用途，其中所述抗TGF-β抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列的HC和LC。

17.根据权利要求1-10中任一项所述的方法、根据权利要求11、13、14和16中任一项所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求12、13、15和16中任一项所述的用途，其中所述癌症是CD38阳性的。

18.根据权利要求1-10中任一项所述的方法、根据权利要求11、13、14和16中任一项所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求12、13、15和16中任一项所述的用途，其中所述癌症选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓性白血病、急性髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、黑色素瘤、胶质母细胞瘤、肺癌、皮肤鳞状细胞癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、头颈癌、肝细胞癌、尿路上皮癌和肾细胞癌。

19.根据权利要求1-10中任一项所述的方法、根据权利要求11、13、14和16中任一项所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求12、13、15和16中任一项所述的用途，其中所述癌症是血液恶性肿瘤。

20.根据权利要求19所述的方法、用于所述用途的抗体或用途，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。

21.根据权利要求20所述的方法、用于所述用途的抗体或用途，其中所述治疗导致与用单独抗CD38抗体的治疗相比更少的骨破坏。

22.根据权利要求20所述的方法、用于所述用途的抗体或用途，其中所述治疗增强骨愈合。

23.根据权利要求20所述的方法、用于所述用途的抗体或用途，其中所述治疗进一步包含地塞米松。

24.根据权利要求1-10中任一项所述的方法、根据权利要求11、13、14和16中任一项所述的用于所述用途的抗体或根据权利要求12、13、15和16中任一项所述的用途，其中所述癌症对于用Ab2或达雷木单抗的治疗是难治性的，或对于用Ab2的治疗和用达雷木单抗的治疗两者均是难治性的。

25.一种包含抗CD38抗体和抗TGF-β抗体的制品，其中所述制品适用于在根据权利要求1-10中任一项所述的方法中治疗有需要的患者中的癌症。

26.根据权利要求25所述的制品，

其中所述抗CD38抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:13和14的氨基酸序列的V_H和V_L；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:11和12的氨基酸序列的HC和LC；并且

其中所述抗TGF-β抗体

a)具有分别包含SEQ ID NO:5-10的氨基酸序列的HCDR1-3和LCDR1-3；

b)具有分别包含SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列的V_H和V_L；或者

c)具有分别包含SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列的HC和LC。