[go: up one dir, main page]

CN111592597A - 白介素4受体（il-4r）结合蛋白及其用途 - Google Patents

白介素4受体（il-4r）结合蛋白及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111592597A
CN111592597A CN202010464386.7A CN202010464386A CN111592597A CN 111592597 A CN111592597 A CN 111592597A CN 202010464386 A CN202010464386 A CN 202010464386A CN 111592597 A CN111592597 A CN 111592597A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antigen
seq
ser
binding fragment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010464386.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111592597B (zh
Inventor
宋德勇
董创创
韩静
孙百平
窦昌林
曹发扬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Bioanty Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Shandong Bioanty Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Bioanty Biological Technology Co ltd filed Critical Shandong Bioanty Biological Technology Co ltd
Publication of CN111592597A publication Critical patent/CN111592597A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111592597B publication Critical patent/CN111592597B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及特异性结合IL‑4R抗原的抗体或其抗原结合片段及其制备方法、组合物和应用。本发明的抗体与IL‑4R抗原的相互作用良好，能够用于制备抗IL‑4R蛋白抗体药物，可用于治疗和/或预防炎症或过敏症。还可用于免疫学检测IL‑4R抗原。

Description

白介素4受体（IL-4R）结合蛋白及其用途
技术领域
本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，更具体地涉及人抗IL-4R的抗体，及其编码序列、制备方法、组合物和应用。
背景技术
白细胞介素-4(interleukin-4；IL-4)是由活化的2型T辅助细胞(Th2)产生的具有多种生物学功能的细胞因子，由129个氨基酸残基组成疏水性的球形蛋白质。IL-4有很多靶细胞：T 细胞、B细胞、造血细胞、成纤维细胞和各种肿瘤细胞等都具有IL-4受体。白细胞介素-4受体(IL-4R)有两种类型：Ⅰ型主要由IL-4Rα链和γc链组成,主要在造血细胞表面表达。II 型受体由IL-4Rα链和IL-13Rα1链构成，主要在非造血细胞和肿瘤细胞表面常表达(La Porte SL,Juo ZS,Vaclavikova J,et al.Cell,2008,132(2):259-272)。IL-4Rα是2型炎症通路中I型受体和II型受体的关键组成部分，阻断IL-4Rα可同时阻断两个2型免疫反应的强效调节因子 IL-4和IL-13。在II型炎症通路中，Th2细胞(T helper 2，属于CD4+T细胞)扮演关键角色。 II型免疫是一种包含先天性免疫和适应性免疫并促使在黏膜表面形成免疫屏障清除病原体的特殊免疫反应。在过敏性疾病发生过程中，2型炎症通路起到重要作用。因此，IL-4Rα是针对性治疗过敏性疾病(包括特应性皮炎、哮喘、特发性荨麻疹、慢性鼻息肉性鼻窦炎以及食物过敏等)的关键靶点之一。
目前，已有多个IL-4R相关药物研究项目正在进行中。已报道的IL-4R抗体序列在IL-4R 抑制活性/体内半衰期方面尚有不足，或者毒副作用明显。因此，亟需开发活性更好、毒副作用更低的新型IL-4R抗体药物。
发明内容
本发明提供具有结合IL-4R抗原的抗体及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明提供了结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段。本发明所述抗体或其抗原结合片段是指脱离人体或动物体的抗体或其抗原结合片段，即分离的抗体或其抗原结合片段。
在本发明的一个方面中，所述抗体或其抗原结合片段轻链包含轻链互补决定区LCDR1、 LCDR2和LCDR3，所述互补决定区包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的轻链可变区的 CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，或上述轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3 序列在1或2或3个LCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代。所述抗体或其抗原结合片段重链包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述互补决定区包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的重链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，或在1或2或3个HCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代。优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3所示LCDR1，SEQ ID NO:4 所示LCDR2，SEQ ID NO:5所示LCDR3，SEQ ID NO:6所示HCDR1，SEQ ID NO:7所示 HCDR2，SEQ ID NO:8所示HCDR3；或SEQID NO:11所示LCDR1，SEQ ID NO:12所示 LCDR2，SEQ ID NO:13所示LCDR3，SEQ ID NO:14所示HCDR1，SEQ ID NO:15所示 HCDR2，SEQ ID NO:16所示HCDR3。
在本发明的一个方面中，所述抗体或其抗原结合片段轻链包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的任一氨基酸序列或包括与上述轻链可变区氨基酸序列具有至少80％、85％或90％序列同一性的氨基酸序列；所述抗体或其抗原结合片段重链包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的任一氨基酸序列或包括与上述重链可变区氨基酸序列具有至少80％、85％或90％序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含以下轻、重链可变区序列包含：
1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列轻链可变区和/或包含与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链可变区，或者
2)SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的轻链可变区和/或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的重链可变区。
本发明还提供了编码含有结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
在本发明的一个方面中，所述编码含有结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核酸序列，是编码含有以下氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段的核酸：
包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9所示的轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列，或上述轻链可变区的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列在1或2或3个LCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代；或/和包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:10所示的重链可变区的CDR1序列、CDR2 序列和CDR3序列，或在1或2或3个HCDR区上共包含至少一个且不超过8、5或4、3、 2或1个氨基酸改变，优选氨基酸取代，进一步优选保守取代。优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3所示LCDR1，SEQ ID NO:4所示LCDR2，SEQ ID NO:5所示 LCDR3，SEQ ID NO:6所示HCDR1，SEQID NO:7所示HCDR2，SEQ ID NO:8所示HCDR3；或SEQ ID NO:11所示LCDR1，SEQ ID NO:12所示LCDR2，SEQ ID NO:13所示LCDR3， SEQ ID NO:14所示HCDR1，SEQ ID NO:15所示HCDR2，SEQ ID NO:16所示HCDR3
本发明还提供了含有编码结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列的载体，优选地，所述载体是表达载体。本发明所述表达载体包括但不限于，病毒载体，如腺病毒载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒载体等；非病毒载体，如质粒、转座子载体等。
在本发明的一个方面中，所述有编码结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列的表达载体是质粒载体。优选地，所述有编码结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列的质粒载体是pCDNA3.4(Life Technology)载体。
本发明还提供了用于表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，该宿主细胞含有编码结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的表达载体或编码结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的核酸。
在本发明的一个方面中，表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞包括但不限于哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、真菌细胞、细菌细胞。优选地，本发明提供用于表达结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞是HEK293。
本发明还涉及一种抗体检测试剂盒，所述抗体检测试剂盒包括上文所述任一结合IL-4R 抗原的抗体或其抗体片段。在本发明的一个方面中,所述抗体检测试剂盒还包括用于对CGRP 抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照。
根据本发明的另一方面，还提供一种组合物，其包含上文所述结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段、以及药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体包括以下中的一种或多种：药学上可接受的溶剂、分散剂、附加剂、塑形剂、药物辅料。
根据本发明的另一方面，还提供上文所述的结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段在预防和/或治疗IL-4R相关疾病中的用途以及在制备预防和/或治疗IL-4R相关疾病药物中的用途。其中，所述IL-4R相关病症是炎症或过敏性疾病。优选地，所述炎症或过敏性疾病是哮喘。
本发明还提供了上文所述结合人IL-4R的抗体或其抗原结合片段在制备IL-4R相关病症诊断试剂中的应用。
附图说明
图1示出了转基因小鼠血清滴度。
图2示出了候选抗体阻断IL4/IL4R的蛋白结合活性的比较。
图3示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab与IL4R蛋白结合活性的比较。
图4示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab阻断IL4/IL4R的蛋白结合活性比较。
图5示出了BA167、BA173、BA030、Dupilumab阻断IL13+IL13RA1/IL4R的蛋白结合活性比较。
图6示出了BA167、BA173、BA030和Dupilimab与Human/Rhesus/Mouse IL4R的结合差异。
图7示出了IL4诱导的TF-1细胞增殖抑制实验。
图8示出了IL13诱导的TF-1细胞增殖抑制实验。
图9示出了候选抗体对PBMC细胞的增殖抑制作用。
图10示出了食蟹猴皮下注射2.5mg/kg处方BA167、BA173、Dupilumab后体体内平均浓度-时间曲线。
图11示出了给药后B-hIL4/hIL4Rα双人源化哮喘模型小鼠血清中IgE水平变化。
图12示出了给药后B-hIL4/hIL4RA双人源化哮喘模型小鼠BALF嗜酸细胞水平的变化。
图13示出了对BA173、BA167和Dupilumab抗体免疫原性检测。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，经过大量的筛选，成功获得一类抗IL-4R抗体，实验结果表明，本发明获得的IL-4R抗体能够有效阻断IL-4R与其受体之间的相互作用，令人意外的是，与已上市的IL-4R抗体相比，本发明筛选的抗IL-4R候选抗体具有不同的抗原结合表位，同时，还具有免疫原性低，体内半衰期长等优点。在此基础上完成了本发明。
本发明的抗体被设计为具有工程改造的CDR且具有人类来源的抗体的一些部分(框架、铰链区和恒定区的全部或部分)，所述部分与衍生自人类基因组序列的框架和恒定区相同或基本相同(基本是人类的)。全人类框架、铰链区和恒定区是那些人类种系序列以及具有天然存在的体细胞突变的序列和具有工程改造的突变的那些。本发明的抗体可包含框架、铰链或恒定区，其衍生自其中含有一个或多个氨基酸取代、缺失或添加的全人类框架、铰链或恒定区。此外，本发明的抗体优选为在人类中基本上为非免疫原性的。
本发明的抗体是IgG类型抗体且具有经由链内和链间二硫键交联的“重”链和“轻”链。每一重链包含N-末端HCVR(或VH)和重链恒定区。每一轻链包含LCVR(或VL)和轻链恒定区。HCVR和LCVR区可进一步细分为互补决定区(“CDR”)和更保守的框架区(“FR”)。每个HCVR和LCVR由三个CDR和四个FR组成，其从氨基末端至羧基末端以下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。本文中，重链的三个CDR被称为“HCDR1、HCDR2 和HCDR3”且轻链的三个CDR被称为“LCDR1、LCDR2和LCDR3”。CDR含有大多数与抗原形成相互作用的残基。
术语编码的“核酸”可以是包括编码的核酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的核酸。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的核酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述核酸可杂交的核酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如 0.2×SSC,0.1％SDS,60℃；或(2)杂交时加有变性剂,如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％ Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在90％以上,更好是95％以上时才发生杂交。并且,可杂交的核酸编码的多肽与成熟多肽有相同的生物学功能和活性。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。本发明所涉及的生物分子(核酸、蛋白等)包括以分离的形式存在的生物分子。
目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA 序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS7、293细胞的动物细胞等。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔,脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
本发明还提供了一种组合物。优选地，所述的组合物是药物组合物，它含有上述的抗体或其活性片段或其融合蛋白，以及药学上可接受的载体。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质中。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：瘤内、腹膜内、静脉内、或肌肉注射等局部给药。
本发明的抗体或其抗原结合片段有广泛生物应用价值和临床应用价值，其应用涉及到与 IL-4R相关的疾病的诊断和治疗、基础医学研究、生物学研究等多个领域。一个优选的应用是用于针对IL-4R的临床诊断和靶向治疗。
参照以下实施例可以更好地理解本发明。但是，应理解，以下实施例仅用于举例说明目的，而不应被理解为以任何方式限制本发明的保护范围。
实施例1.抗IL4R抗体的产生
1.1免疫
用IL4R(Sinobiological，目录号10402-H08H)与弗氏佐剂乳化后免疫山东博安全人抗体转基因小鼠BoAn-hMab。首免使用弗氏完全佐剂，二免至三免使用弗氏不完全佐剂，本次共免疫9只小鼠。选取血清滴度较高的小鼠加强免疫，3天后处死小鼠取出脾脏用于后续实验。检测血清滴度主要采用ELISA法。以CBS包被液(pH9.6碳酸溶液)包被浓度为1μg/ml的蛋白IL4R(10402-H08H，义翘神州)，100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉37℃封闭1h；用PBST将血清稀释至200X、1000X、5000X、25000X，每孔加100ul。37度孵育1h；然后加入HRP-山羊抗人H+L(474-1006，KPL)，37℃孵育1h，显色10min后，用2M浓硫酸终止，酶标仪上读取OD450。检测血清滴度如图1所示。
1.2噬菌体库的建立
取免疫小鼠的脾脏细胞，加入Trizol(Thermo Scientific，目录货号15596-026)，待裂解充分后加入1/5体积的氯仿，充分混匀，室温放置20min后4℃12000rpm离心20min，取上层水溶液，并加入等体积的异丙醇，室温放置20min，4℃12000rpm离心20min，弃去上清水溶液，加入75％乙醇洗涤两次，4℃12000rpm离心5min，弃去水溶液，保留沉淀，室温风干后加入DEPC水重悬沉淀获得RNA，获得的RNA使用罗氏反转录试剂盒Transcriptor FirstStrand cDNA Synthesis Kit(Roche Applied Science，目录货号4897030001)按照其说明书将 RNA反转录成cDNA。噬菌体库的建立步骤参照Carlos F.Barbas III，Phage display：A laboratory manual中记载的方法进行，以编号为IL4R Q14的小鼠建立的噬菌体库IL4RQ14，库容9.28x 108；以编号为IL4R Q6的小鼠建立的噬菌体库IL4R Q6，库容2.8x 108；以编号为IL4R Q29 的小鼠建立的噬菌体库IL4R Q29，库容6.4x 108。
1.3筛选
1.平板筛选用IL4R-His蛋白(义翘神州，10402-H08H)以1μg/孔包被平板，4℃放置过夜，第二天通过2％BSA封闭平板1h，加入噬菌体库(2x 1012)孵育2h，洗涤4-10次后用Elution Buffer(pH 2.2)洗脱IL4R结合的噬菌体。
2.磁珠筛选，将IL4R-Fc蛋白(义翘神州，10402-H02H)按照常规步骤进行生物素化(投入的IL4R蛋白与生物素摩尔比1:2)，再与Thermo的磁珠(Invitrogen Dynabeads M-280Streptavidin，00355871)结合后与噬菌体库孵育，洗涤4-10次后用Elution Buffer(pH2.2) 洗脱IL4R特异性结合的噬菌体。
平板筛选获得克隆IL4RQ14-BA030\BA034、IL4RQ6-BA167\BA173、IL4RQ24-BA420、IL4RQ29-BA1301。其中，IL4RQ14代表免疫的第14只野生型小鼠，BA代表磁珠筛选。
将通过噬菌体酶联免疫(Elisa)法检测阳性的库涂布平板，挑取直接进行自主培养基的诱导表达，上清检测结合活性，挑选出的继续利用ELISA检测阻断IL4的表达。将具有IL4 阻断活性的挑选出来，再进行一次ELISA检测，挑选出能阻断IL13/IL13RA1的阳性克隆。将这些阳性克隆进行分子构建与生产。
实施例2.阻断抗体的分子构建与生产
将克隆IL4RQ14-BA030、BA034(本发明中简称BA030、BA034)、IL4RQ6-BA167、BA173(本发明中简称BA167、BA173)、IL4RQ24-BA420(本发明中简称BA1301)、 IL4RQ29-BA1301(本发明中简称BA1301)送Invitrogen生物技术有限公司测序。各克隆氨基酸序列如下表1：
表1具有阻断活性克隆的氨基酸序列
Figure BDA0002512107370000061
Figure BDA0002512107370000071
通过常规的分子生物学技术进行可变区基因扩增(2*EasyPfu PCR SuperMix厂家： Transgen货号：AS211批号：#L11228)、信号肽与可变区重叠延伸，将带有重链和信号肽基因的可变区同源重组(ClonExpressⅡOne Step Cloning Kit厂家：Vazyme货号：C112-01批号：TE222B8)连接入带有抗体重链恒定区(IgG4)序列的载体pCDNA3.4(LifeTechnology)，将带有轻链和信号肽基因的可变区同源重组(ClonExpressⅡOne StepCloning Kit厂家： Vazyme货号：C112-01批号：TE222B8)连接入带有抗体轻链恒定区列的载体pCDNA3.4(Life Technology,序列如下所示。
重链恒定区(IgG4)序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY SLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSLG-
轻链恒定区序列：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC-
然后共转染进入HEK293细胞，在37℃\8％CO2\125rpm摇床中培养，6-7天后的瞬时表达上清通过Protein A亲和层析，纯化获得IL4R抗体，并通过UV280结合消光系数确定抗体浓度。
对照抗体生产：通过IMGT数据及专利US2008160035A1确定再生元IL4R抗体Dupilumab 的氨基酸序列，全基因合成后插入载体pCDNA3.4通过HEK293细胞表达。Dupilumab氨基酸序列如下所示：
Dupilumab轻链氨基酸序列：
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Dupilumab重链氨基酸序列：
EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTV TVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG-
实施例3 BA030、BA167、BA173与Dupilumab的比较
3.1筛选抗体与IL4R蛋白的阻断活性的比较
包被浓度为0.2μg/ml的IL4(11846-HANE，义翘神州)，100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉封闭1h；同时IL4R-Fc-biotin(0.4μg/ml)50ul和不同浓度(16μg/mL、4μg/mL、1μg/mL、 0.25μg/mL、0.0625μg/mL、0.015625μg/mL、0.00390625μg/mL)候选抗体50ul共100ul，加入到封闭过的ELISA板上37℃共孵育1h；PBST洗三次后，加入链霉素/HRP(R&D，目录号：890803)，37℃孵育1h；每孔加入100ul TMB显色液(北京梅科万德，目录号：1001)显色10min后，加入50ul 2M的浓硫酸终止，酶标仪上读取OD450。结果见图2及表2所示。
表2候选抗体阻断IL4/IL4R的蛋白结合活性
Figure BDA0002512107370000081
综合分析抗体序列、阻断数据等，我们选择IL4R-BA167-IgG4(以下或简称为BA167)、 IL4R-BA173-IgG4(以下或简称为BA173)、IL4R-BA030-IgG4(以下或简称为BA030)与 Dupilumab抗体进行比较实验。
3.2 BA167、BA173、BA030、Dupilumab与IL4R蛋白的结合活性的比较
以CBS包被液(pH9.6碳酸溶液)包被不同浓度(0.4μg/ml、0.2μg/ml、0.1μg/ml、0.05μg/ml、 0.025μg/ml、0.0125μg/ml、0.00625μg/ml、0μg/ml)的蛋白IL4R(10402-H08H，义翘神州)， 100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉37℃封闭1h；每孔加入2μg/ml候选抗体各100ul，37度孵育1h；然后加入山羊抗人IgG(H+L)/HRP(KPL，目录号：474-1006)，37℃孵育1h，显色10min后，每孔加入50μL 2M H2SO4终止显色酶标仪上读取OD450。结果见图3及表3所示，3株抗体与对照抗体相比，具有对IL4R蛋白接近的结合灵敏度。
表3.对IL4R蛋白的结合灵敏度
Figure BDA0002512107370000082
3.3候选抗体阻断IL4/IL4R的蛋白结合
包被浓度为0.2μg/ml的IL4(11846-HANE，义翘神州)，100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉封闭1h；同时IL4R-Fc-biotin(0.4μg/ml)和不同浓度(30μg/mL、7.5μg/mL、1.875μg/mL、 0.46875μg/mL、0.1171875μg/mL、0μg/mL)候选抗体37℃共孵育1h，然后加入到封闭过的 ELISA板上，37℃再孵育1h；继而加入链霉素/HRP(R&D，目录号：890803)，37℃孵育 1h；显色10min后，每孔加入50μL 2M H2SO4终止。酶标仪上读取OD450。结果见图4及表 4，与对照相比，3株抗体都能够有效阻断IL4与IL4R的结合，且具有接近的阻断活性。
表4.
Figure BDA0002512107370000083
3.4候选抗体阻断IL13+IL13RA1/IL4R的蛋白结合
包被浓度为0.8μg/ml的IL13RA1(10943-H08H，义翘神州)，100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉封闭1h；同时IL4R-Fc-biotin(0.24μg/ml)、IL13(1μg/ml，10369-HANE，义翘神州) 和不同浓度(30μg/mL、7.5μg/mL、1.875μg/mL、0.46875μg/mL、0.1171875μg/mL、0μg/mL) 候选抗体37℃共孵育1h，然后加入到封闭过的ELISA板上，37℃再孵育1h；PBST清洗三次后，加入链霉素/HRP(R&D，目录号：890803)，37℃孵育1h；PBST清洗四次后，TMB 显色10min，每孔加入50μL 2M H2SO4终止，酶标仪上读取OD450。结果见图5及表5，与对照抗体相比，3株抗体都能够有效阻断IL13+IL13RA1与IL4R的结合，且具有相似的阻断活性。
表5.阻断IL13+IL13RA1/IL4R的蛋白结合活性
Figure BDA0002512107370000091
3.5 BA167、BA173、BA030和Dupilumab在不同种属上的结合
通过Elisa法检测BA167、BA173、BA030和Dupilumab分别与人、小鼠、食蟹猴IL4R的结合。
以CBS包被液(pH9.6碳酸溶液)包被不同浓度(5μg/ml、1.25μg/ml、0.3125μg/ml、0.078125μg/ml)的huamn IL4R(10402-H08H，义翘神州)、Rhesus IL4R(ILR-C52H8,ACRO)、Mouse IL4R(ILR-M52H1,ACRO)100ul/孔4度过夜；用3％脱脂奶粉37℃封闭1h；每孔加入 5μg/ml候选抗体各100ul，37度孵育1h；然后加入山羊抗人IgG/HRP(KPL，目录号：474-1006)，37℃孵育1h。PBST清洗四次后，TMB显色10min，每孔加入50μL 2M H2SO4终止，酶标仪上读取OD450。
结果显示4组抗体与人IL-4R蛋白具有相似的结合，而在食蟹猴IL4R蛋白上具有不一样的结合表现，见图6，该结果抗体预示BA167、BA173、BA030抗体与Dupilumab在IL4R上具有不同的表位。
3.6 BA030、BA167、BA173与Dupilumab抗体在体外细胞功能上的比较
3.6.1 IL4诱导的TF-1细胞增殖抑制实验
TF-1细胞、IL4(Sinobiological，目录号：11846-HNAE)和抗体均用完全培养基(90％RPMI 1640,10％FBS)进行稀释，把TF-1细胞稀释至4x105 cells/mL，接种于白色96孔板中，50μL/ 孔，即20000cells/孔。把IL4稀释至2ng/mL。把抗体稀释至5μg/mL，然后依次4倍稀释，共6个浓度。把稀释的抗体和IL4等体积混合后加入到细胞孔中，50μL/孔。把1ng/mL的IL4 加入细胞孔作为阴性对照。把完全培养基加入细胞孔作为阳性对照。所有样品设置复孔。培养96h后，使用CellTiter-Glo(Promega，目录号：G7572)试剂盒检测细胞量。实验结果见图7和表6所示。
3.6.2 IL13诱导的TF-1细胞增殖抑制实验
TF细胞、IL13(Sinobiological，目录号：10369-HNAC)和抗体均用完全培养基(90％RPMI 1640,10％FBS)进行稀释，把TF-1细胞稀释至4x105 cells/mL，接种于白色96孔板中，50μL/ 孔，即20000cells/孔。把IL13稀释至4ng/mL。把抗体稀释至7.5μg/mL，然后依次8倍稀释，共6个浓度。把稀释的抗体和IL13等体积混合后加入到细胞孔中，50μL/孔。把2ng/mL的 IL13加入细胞孔作为阴性对照。把完全培养基加入细胞孔作为阳性对照。所有样品设置复孔。培养96h后，使用CellTiter-Glo(Promega，目录号：G7572)试剂盒检测细胞量。实验结果见图8和表6所示。
3.6.3对PBMC细胞的增殖抑制作用
IL4可以促进PBMC细胞的增殖，加入抗体后，抗体与IL4的受体结合，抑制了PBMC细胞的增殖。细胞、IL4(Sinobiological，目录号：11846-HNAE)和抗体均用完全培养基(90％ RPMI 1640,10％FBS)进行稀释。复苏PBMC，按1:100比例加入PHA(Thermo，目录号：10576015)，培养4天。把抗体稀释至160μg/mL，在依次10倍稀释，共9个浓度。把IL4稀释至400ng/mL。把抗体和IL4等体积混合后，加入96孔板中，50μL/孔。加入PHA处理的 PBMC，50μL/孔。每孔加入10μL CCK8(Dojindo，目录号：CK08)，显色4h后读取OD450nm。实验结果见图9和表6所示。
表6：细胞活性IC50数据统计
Figure BDA0002512107370000101
TF-1是人血液白血病细胞，IL4、IL13可以通过结合细胞表面受体从而诱导TF-1细胞的生长，加入抗体后，抗体与IL4/IL13的受体结合，从而抑制了TF-1细胞的增殖。从上述3.6.1-3.6.2实验可以发现，在TF-1的细胞增殖抑制实验中，BA173抗体的抑制IL-4诱导的TF-1细胞增殖效果优于其他候选抗体，且BA173具有与Dupilumab相似的阻断活性。在3.6.3实验中，BA173和BA167比Dupilumab的作用效果更好，说明两个抗体能更好的与IL4的受体结合，从而抑制PBMC的增殖。
实施例4 BA167、BA173与Dupilumab在食蟹猴PK上的研究
每个抗体选3只食蟹猴皮下注射给药，剂量为2.5mg/kg，两次给药，第二次给药时间为 14d(d表示天)，给药前0h、给药后1h、4h、10h及1d、2d、3d、4d、5d、7d、10d、14d 及第二次给药后1h、4h、10h及1d、2d、3d、4d、5d、7d、10d、14d、21d和28d采血清检测抗体浓度，检测血清方法为Elisa法，检测具体结果见下图10及表7
表7食蟹猴皮下注射2.5mg/kg处方BA167、BA173、Dupilumab后体内的药代参数
Figure BDA0002512107370000102
食蟹猴皮下第二次给药Dupilumab、BA173、BA167后，出现不同程度的蓄积，其Cmax2/ Cmax1值接近2，AUC2st/AUC1st值≥2。以第二次给药末端消除相求算T1/2值分别为4.2±3.0d、15.7±1.9d、22.2±8.1d。以上数据可以发现，给药后BA167、BA173在食蟹猴血清中更加持久。
实施例5 BA167、BA173与Dupilumab基于B-hIL-4/hIL-4RA双人源化小鼠哮喘模型的药物药效实验
配40μg OVA(卵清蛋白)，腹腔注射致敏，200μL/只。致敏时间为第0、7、14天。在第21-25天，雾化吸入2％OVA激发，每次30min，连续5天。受试品在第20、23天给药，最后一次激发操作结束24小时后采集样本检测分析。末次雾化激发操作结束24小时后，采小鼠外周血，血清进行OVA特异性的IgE抗体检测；采集肺泡灌洗液进行OVA特异性IgE抗体检测。末次雾化激发操作结束24小时后，采集小鼠肺泡灌洗液通过流式细胞术进行嗜酸细胞浸润检测。实验结果如图11和图12所示，其中G1:1X Buffer；G2:Dupilumab；G3:BA173； G4:BA167。
在实验终点，血清中G1对照组平均IgE水平为28.85ng/mL，Dupilumab、BA173组和BA167组IgE水平分别为2.0ng/mL，3.4ng/mL、2.1ng/mL；嗜酸性粒细胞数对照组平均为384.50X 102(个/mL)，Dupilumab、BA173组和BA167组嗜酸性粒细胞数分别为31.1X 102(个/mL)，12.8X 102(个/mL)，14.0X 102(个/mL)。在本实验药效模型上，BA167、BA173 组在25mg/kg剂量下可显著减少哮喘模型鼠血清中IgE水平以及肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞数量。
实施例6 BA167、BA173与Dupilumab在食蟹猴上的免疫原性
以CBS包被液(pH9.6碳酸溶液)包被BA167、BA173与Dupilumab为0.125μg/ml，100ul/ 孔4度过夜；用3％脱脂奶粉37℃封闭1h；每孔加入PBST稀释的100X血清100ul，37度孵育1h；PBST洗两次后加入BA167-biotin、BA173-biotin与Dupilumab-biotin 0.125μg/ml，每孔100ul，37℃孵育1h。PBST洗两次后，加入链霉素/HRP，37℃孵育1h；PBST洗四次后TMB显色10min，每孔加入50μL 2M H2SO4终止，酶标仪上读取OD450。
结果如图13所示(101-303代表猴编号)，Dupilumab实验组有一只猴子在第21天产生了较强的免疫原性，在第28天时OD值接近2。BA173和BA167的OD值均未超过0.3，在食蟹猴上没有产生免疫原性。说明我们的抗体未来在疗效和安全性上会更高。
序列表
<110> 山东博安生物技术有限公司
<120> 白介素4受体（IL-4R）结合蛋白及其用途
<130> 1
<160> 16
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Ser Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 119
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Thr Thr Val Arg Gly Val Leu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Gln Asn Ile Gly Ser Arg
1 5
<210> 4
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Lys Ala Ser
1
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Ala Arg Gly Leu Thr Thr Val Arg Gly Val Leu Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Thr Ser Tyr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 119
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Thr Thr Val Arg Gly Val Leu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Gln Ser Ile Ser Thr Arg
1 5
<210> 12
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Trp Ala Ser
1
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Gln Gln Tyr Thr Ser Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
Ala Arg Gly Leu Thr Thr Val Arg Gly Val Leu Tyr
1 5 10

Claims (10)

1.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ IDNOs:11-13所示的轻链互补决定区CDR1-CDR3和/或SEQ ID NOs:14-16所示的重链互补决定区CDR1-CDR3。
2.权利要求1所述抗体或其抗原结合片段，其结合抗原是IL-4R。
3.权利要求2所述抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的轻链可变区和/或SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的重链可变区。
4.一种分离的核酸，其编码前述权利要求任一项的抗体或其抗原结合片段。
5.一种载体，其包含权利要求4的核酸，优选地所述载体是表达载体。
6.一种宿主细胞，其包含有权利要求4的核酸或权利要求5的载体。
7.权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段在制备预防和/或治疗IL-4R相关疾病药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述IL-4R相关疾病是炎症或过敏性疾病，优选地，所述炎症或过敏性疾病是哮喘。
9.权利要求1-3任一所述抗体或其抗原结合片段在制备IL-4R相关疾病诊断试剂或试剂盒中的应用。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段，及其药学可接受的载体。
CN202010464386.7A 2019-05-29 2020-05-27 白介素4受体(il-4r)结合蛋白及其用途 Active CN111592597B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019104566054 2019-05-29
CN201910456273 2019-05-29
CN201910456273X 2019-05-29
CN201910456605 2019-05-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111592597A true CN111592597A (zh) 2020-08-28
CN111592597B CN111592597B (zh) 2022-04-26

Family

ID=72184132

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010464386.7A Active CN111592597B (zh) 2019-05-29 2020-05-27 白介素4受体(il-4r)结合蛋白及其用途
CN202010464384.8A Active CN112010977B (zh) 2019-05-29 2020-05-27 抗白介素4受体(il-4r)的抗体及其应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010464384.8A Active CN112010977B (zh) 2019-05-29 2020-05-27 抗白介素4受体(il-4r)的抗体及其应用

Country Status (5)

Country Link
US (1) US12338288B2 (zh)
EP (1) EP3978528A4 (zh)
JP (1) JP7236562B2 (zh)
CN (2) CN111592597B (zh)
WO (1) WO2020239134A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2025026332A1 (zh) * 2023-08-01 2025-02-06 先声药业有限公司 抗il4r抗体及其应用

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111592597B (zh) 2019-05-29 2022-04-26 山东博安生物技术股份有限公司 白介素4受体(il-4r)结合蛋白及其用途
CA3227014A1 (en) 2021-08-23 2023-03-02 Ashish Bansal Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
AU2022425608A1 (en) 2021-12-30 2024-08-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist
KR20250004903A (ko) 2022-05-02 2025-01-08 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 리파제 활성을 감소시키기 위한 방법
AU2023263975A1 (en) 2022-05-02 2024-12-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-interleukin-4 receptor (il-4r) antibody formulations
CN119546337A (zh) 2022-07-08 2025-02-28 瑞泽恩制药公司 通过施用il-4r拮抗剂治疗小儿嗜酸性粒细胞性食管炎的方法
AU2023372824A1 (en) 2022-11-01 2025-06-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hand and foot dermatitis by administering an il-4r antagonist
WO2024112935A1 (en) 2022-11-23 2024-05-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for improving bone growth by administering an il-4r antagonist
WO2024206341A1 (en) 2023-03-27 2024-10-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic gastroenteritis by administering an il-4r antagonist
US20250145662A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipase activity using stress

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104755495A (zh) * 2012-08-21 2015-07-01 赛诺菲 通过施用il-4r拮抗剂治疗或预防哮喘的方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6743604B1 (en) * 1996-12-13 2004-06-01 Smithkline Beecham Corporation Substances and their uses
US7608693B2 (en) * 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
MEP11109A (en) 2006-10-02 2011-12-20 High affinity human antibodies to human il-4 receptor
CN104788563A (zh) * 2007-12-21 2015-07-22 米迪缪尼有限公司 白介素-4受体α(IL-4Rα)-173的结合成员
US8092804B2 (en) * 2007-12-21 2012-01-10 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Rα)-173
US20140072583A1 (en) * 2012-09-07 2014-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
WO2016034648A1 (en) * 2014-09-03 2016-03-10 Medimmune Limited Stable anti-il-4r-alpha antibody formulation
CN105753987A (zh) 2016-05-11 2016-07-13 贵阳中医学院 抗il-4r单链抗体的制备方法及其在抗肿瘤上的应用
CN113372446A (zh) * 2016-06-08 2021-09-10 苏州康乃德生物医药有限公司 用于结合白细胞介素4受体的抗体
CN108373505B (zh) * 2018-04-20 2019-08-20 北京智仁美博生物科技有限公司 抗il-4r抗体及其用途
CN111592597B (zh) 2019-05-29 2022-04-26 山东博安生物技术股份有限公司 白介素4受体(il-4r)结合蛋白及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104755495A (zh) * 2012-08-21 2015-07-01 赛诺菲 通过施用il-4r拮抗剂治疗或预防哮喘的方法
RU2015109716A (ru) * 2012-08-21 2016-10-10 Санофи Байотекнолоджи Способы лечения или предотвращения астмы посредством введения антагониста il-4r

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2025026332A1 (zh) * 2023-08-01 2025-02-06 先声药业有限公司 抗il4r抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3978528A1 (en) 2022-04-06
US12338288B2 (en) 2025-06-24
JP7236562B2 (ja) 2023-03-09
JP2022537797A (ja) 2022-08-30
WO2020239134A1 (zh) 2020-12-03
US20220162328A1 (en) 2022-05-26
CN112010977B (zh) 2022-04-26
CN112010977A (zh) 2020-12-01
CN111592597B (zh) 2022-04-26
EP3978528A4 (en) 2023-10-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112010977B (zh) 抗白介素4受体(il-4r)的抗体及其应用
TWI477512B (zh) 抗-ｇｍ-ｃｓｆ抗體及其用途
EP2231707B1 (en) Anti mif antibodies
AU2020286889A1 (en) Antibody capable of binding to thymic stromal lymphopoietin and use thereof
EP4137517A1 (en) Antibody to human interleukin-4 receptor ?, preparation method therefor and use thereof
KR20160113113A (ko) Ｐｄ-1 항체, 이의 항원 결합 단편, 및 이의 의약 용도
CN111615519B (zh) 结合人il-5的单克隆抗体、其制备方法和用途
KR20230116857A (ko) 항 tslp 항체의 약학 조성물 및 이의 용도
JP2014526886A (ja) マクロファージ遊走阻止因子（ｍｉｆ）とｄ−ドーパクロームトートメラーゼ（ｄ−ｄｔ）に交差反応性がある抗体
KR20220064331A (ko) SARS-CoV-2에 대한 단일 도메인 항체 및 이의 용도
KR20230004659A (ko) 항-인간 신경 성장 인자 항체
CN112480252A (zh) 抗白细胞介素-33抗体及其制备方法和应用
CN114127110B (zh) 抗cgrp抗体及其应用
CN112062848B (zh) 抗cd47单克隆抗体及其应用
CN116251181B (zh) 一种抗tslp单克隆抗体的注射制剂
RU2807060C1 (ru) Антитело к альфа-рецептору интерлейкина-4 человека, способ его получения и его применение
CN119504996A (zh) 抗cd40单克隆抗体及其应用
WO2024170485A1 (en) Canine antibodies to canine il-13
WO2024170486A1 (en) Canine antibodies to canine il-4
EP4448572A1 (en) Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha 1
CN115073593A (zh) 新型冠状病毒抗体及其用途
HK1147762B (zh) 抗mif的抗體
HK1181052A (zh) 抗mif的抗體

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 264670 No. 39 Science and Technology Avenue, Yantai High-tech Zone, Shandong Province

Applicant after: Shandong Boan Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 264670 No. 39 Science and Technology Avenue, Yantai High-tech Zone, Shandong Province

Applicant before: SHANDONG BIOANTY BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant