CN1103216C - 含有生物活性甾体的药物乳剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新的水包油乳剂，它特别适合于经非胃肠道施用生物活性甾体，否则，该生物活性甾体很难溶于常用溶剂。该乳剂包括一种含有蓖麻油的脂质相。

Description

含有生物活性甾体的药物乳剂

本发明涉及新的水包油乳剂，它特别适合于经非胃肠道施用生物活性甾体，不然生物活性甾体难于溶解。该乳剂包括含有蓖麻油的脂质相，该脂质相可含有附加的脂质，例如至少一种植物油和/或中等长度链的甘油三脂。

人们注意到许多治疗用甾体在常用药物载体或溶剂中的溶解性很差，因而都试图增加其溶解性，例如通过引入溶解性改性基团或改善所施用载体的性质。

英国专利说明书GB1317184和GB1379730公开了释放3α-羟基-5α-孕甾烷-11，20-三酮的麻醉组合物。然而，这些将甾体与一种非离子表面活性的聚氧乙烯化蓖麻油(Cremophor-EL)一起制成的非胃肠道制剂组合物，具有严重的副作用。

欧洲专利EP0233849公开了可经非胃肠道施用的3α-羟基-5β-孕烷-20-酮(孕烷醇酮)的脂质乳剂，其中的活性甾体溶于脂质相，该脂质相选自可可油，琉璃苣油，红花油，棉籽油，豆油和合成甘油酯，该合成甘油酯分子中带有长链和中等链脂肪酸的混合物。

先前认为蓖麻油与有机共溶剂如苄醇和苯甲酸苄酯一起作为经非胃肠道施用的甾体激素的载体，正如CRiffkin等在J.ofPharm.Sci.，Vol.53(8)，1964的第891-5页所公开的那样，或者据美国专利说明书US 4048310，蓖麻油与共溶剂作为一种局部用制剂的载体。然而在今天，将Riffkin等提示的共溶剂作为非胃肠道药物制剂中的组份是很难接受的。

欧洲专利申请EP 0418004公开了作为具有前列腺素E₁活性化合物的载体的脂肪乳剂，它具有含有油的脂质相，该油选自豆油，芝麻油，蓖麻油，棉籽油或橄榄油。然而这些乳剂除含有磷脂乳化剂外，还含有一种乳化辅助剂，它优选游离形式的脂肪酸和一种稳定剂。为避免如The Lancet，April 18 1970，第813到815页(V.A.Kurien等)和EP 0241553中公开的副作用，通常将非胃肠道中的游离脂肪酸量保持在尽可能低的水平。

虽公开了蓖麻油作为难溶药物的溶剂的用途，但在实际中它并不用于非胃肠道乳剂，这是因为它的高粘性常带来实际问题，还因为它与包括蓖麻油衍生物的Cremophor-EL的副作用有关，还可能与极强的毒素：蓖麻毒有关，蓖麻毒天然存在于蓖麻植物中。

这样就需要一种适合于生物活性甾体的乳剂载体，在该载体中该甾体化合物的溶解性(在常用植物油中是有限的)及高灭菌和保存期间的稳定性都得到改善。尤其需要提供这样一种仅含乳化剂、增溶剂和其它附加剂的药物乳剂，这些物质已公知是临床上可接受的并可适量使用的。因此免避用常用的合成增溶剂来改善乳剂的性质是有益的，因为它们常产生人们不希望的副作用。普卢诺尼克(P1uronic)F-68对狗显示有明显的心血管作用，并引起大鼠肺和肾的改变。吐温-80对大鼠和小鼠产生广泛的CNS作用，并引起狗的组胺释放和低血压，还能抑制豚鼠心脏标本的心肌收缩力。另外，当上述的Cremophor E₁用作麻醉药的溶剂时，它对狗是一种强组胺释放剂，因而推测它诱导人的过敏性样反应。

依据本发明，提供了一种适于施用生物活性甾体的水包油乳剂，该乳剂具有包含蓖麻油和一种蛋黄磷脂乳化剂的脂质相，上述生物活性甾体在常用溶剂中具有有限的溶解度。

本发明的目的是提供一种水包油乳剂形式的组合物，它在具有改善的物理和化学稳定性的脂质相中可含有较高量的溶解的甾体，因而减少了施用于患者的总脂质载量和增溶剂或稳定剂的量。

本发明的目的还有就是提供一种含有蓖麻油，且含或不含另一种脂质的乳剂，该乳剂具有极好的稳定性并长期存放后能保持经非胃肠道施用甾体的适宜特性，且它仅包含已公知的生物可接受的常用组份。

本发明的目的旨在克服先前的经蓖麻油而产生的乳化和稳定性问题，提供一种改进的生物活性甾体的脂质乳剂载体，它包括临床上已公知和安全的组份。

本发明涉及一种新的适于施用生物活性甾体的水包油乳剂，该乳剂具有含有蓖麻油和蛋黄磷脂作为乳化剂的脂质相，该生物活性甾体在常用溶剂中具有有限的溶解度。该脂质相还可含有至少一种附加的脂质，该脂质选自植物油和/或合成或精炼的中等长度链甘油三酯。本发明还指示了一种制备上述乳剂的方法及其在制备具有麻醉作用的药剂中的用途。

本发明乳剂的脂质含有具有药学上可接受纯度的蓖麻油，该蓖麻油可与至少一种附加的脂质结合，该附加的脂质选自植物油，例如豆油、红花油(Safflor oil)、芝麻油、棉籽油或橄榄油和合成或精炼的中等长度链的分子中带有6-12个碳原子的脂肪酸残基的甘油三酯，例如衍生于可可油的MCT馏份。上述脂质的混合物也适于作为蓖麻油的附加剂。根据已建立好的方法，该乳化剂选自临床可接受的蛋黄磷脂。

蓖麻油相对于其它脂质的量优选为蓖麻油：附加脂质在90∶10％(w/w)到10∶90％((w/w)范围内。

适宜的脂质组合物仅含有蓖麻油，或是70％(w/w)蓖麻油和30％(w/w)豆油的混合物。加入附加脂质的量应基本保证蓖麻油的溶解能力。脂质的相对量可因加入的脂质组份的极性(链长度)而变化。运用熟悉该类技术的人员的实验技能可发现各种脂质混合物的蓖麻油和附加脂质的适宜相对量，得到一种具有理想增溶特性的稳定乳剂。甾体在蓖麻油中的高溶解度可通过羟基化脂肪酸(蓖麻油酸)的存在得到解释，羟基化的脂肪酸具有高极性的特点，因而增加了溶解能力。

以本发明的乳剂或组合物施用的生物活性甾体在常用亲水和疏水性溶剂中的溶解度有限，并将优先作用于中枢神经系统(CNS)。尤其优选的是那些具有麻醉活性的CNS活性甾体。本发明最优选的甾体选自：5β-孕烷-3α-醇-20-酮(乙他诺隆(e1tano1one)或孕烷醇酮)，5β-孕烷-3β-醇-20-酮(表孕烷醇酮)，5a-孕烷-3α-醇-20-酮(别孕烷-3α-醇-20-酮)，5α-孕烷-3β-醇-20-酮(别孕烷醇酮)，5α-孕烷-3α-醇-11，20-二酮(阿法沙龙)，5β-孕烷-3α，21-二醇-20-酮(四氢脱氧皮质甾酮或THDOC)，5α-孕烷-3α，21-二醇-20-酮(别四氢脱氧皮质甾酮或别THDOC)，5α-雄烷-3α-醇-17-酮(雄甾酮；顺-雄甾酮)，5-孕烯-3β-醇-20-酮-硫酸酯(孕烯醇酮硫酸酯)，11β-11，17，21-三羟基孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮(强的松龙)和11β，17α，21-三羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮(二氢可的松)。在本发明提供的乳剂和组合物中含有该甾体的量为0.1-15mg/ml。

更具体地说，本发明涉及一种水包油乳剂，它适于胃肠外施用在常用溶剂中具有有限溶解度的生物活性甾体，其特征在于每毫升该最终组合含有：

a)0.1-15mg量的甾体；

b)50-200mg量的脂质，包括蓖麻油和选择性地至少一种另外的选自下列成分的脂质：植物油、合成和纯化的中等长度链甘油三酯；

c)5-50mg量的选自纯化蛋黄磷脂的乳化剂；

d)注射用水；

e)加入的以使该最终组合物等渗的等渗调节剂；以及

f)加入的以达到适宜pH的氢氧化钠溶液，

并且其不包括下列添加剂：聚乙二醇、普卢诺尼克F-68，苯甲醇和苯甲酸苯甲酯。

一种本发明的适宜的乳剂包括：

a)一种生物活性甾体，含量为5mg/ml，

b)含有蓖麻油和占总脂质乳剂量10％(w/w)的附加脂质的脂质，

c)一种乳化剂，每100ml最终组合物中的含量为1-5g的蛋黄磷脂，

d)注射用水，

e)等渗调节剂，

f)用于pH调节的氢氧化钠。

该乳剂的脂质优选含有10-90％(w/w)的蓖麻油。

适宜的等渗调节剂是甘油。如果需要，该乳剂也可含有常用的，但是临床上可接受的抗氧剂和防腐剂。

为制备该新的水包油乳剂，第一步将生物活性甾体物质溶于脂质是适宜的。然后将所得溶液通过常用的高压均化器，在水性介质中进行乳化，该水性介质含有注射用水，上述的乳化剂和等渗调节剂，如果需要，还可含有任何指定的附加成份。所得乳剂中的油滴的颗粒小于5μ，其中大部份小于1μ，优选在0.2-0.3μ。

该新的水包油乳剂主要包括一种生物活性甾体在脂质相中的溶液，该脂质相被乳化在一亲水相中。这些乳剂特别适于经非胃肠道给患者施用麻醉活性的甾体。

本发明的乳剂具有极好的减少氧化的化学和物理稳定性，这应归于蓖麻油本身的内在特性，其中小油滴凝集然后分层的趋势减小，以及游离脂肪酸形成水平低。该乳剂也能经受住高压灭菌过程。由于甾体的度溶解性将减少在各种表面上沉淀的问题，这样就使制造商能更灵活地选择适宜的包装。本发明的乳剂与医药应用中使用的常规塑料和橡胶制品也更相容。

该乳剂的高溶解力和改善了的稳定性也使得可以排除几种常用的、但在一定程度上有争议的溶剂，例如Cremophor-EL，聚乙二醇，丙二醇，苄醇，苯甲酸苄酯和乙醇。

该新乳剂的另一个优点是脂质减少，这将使患者在施用期间摄入较低的脂质量。

其它的优点可从下面的实施例中清楚地看到，它们将包括使用本发明的乳剂施用麻醉活性甾体(孕烷醇酮)而心血管作用较小这一重要的特性。

这些实施例并不旨在限制本发明的范围，而是描述了本发明的一些切实可行的乳剂及其在体内施用后的生物学功效。

实施例1显示了依据本发明制备一些乳剂。

实施例2显示了依据本发明的乳剂组合物，它们在实施例3-5中进行了生物学测试。

实施例3显示了孕烷醇酮以本发明的乳剂施用与以描述的现有技术的乳剂施用进行比较的麻醉效果。

实施例4显示了对心血管作用的比较结果。

实施例5显示了急性毒性的观察结果。

实施例1

为测定含有蓖麻油与不同甾体的乳剂的质量，制备下列组合物：

   甾体                 0.10g

   油相                 20.0g

   磷脂                    2.40g

   甘油                    4.50g

   NaOH(1M)                0.70g

   注射用水                172.3g

在50ml玻璃烧杯中称取甾体。将蓖麻油(CO)或蓖麻油和豆油的70∶30的混合物(GO+SBO)加到该烧杯中，加热熔解甾体。将磷脂加到该油相中并继续搅拌5分钟。然后将该混合物加到加热了的含有水和甘油的水相中，搅拌5分钟。之后，在一高压实验室型均化器中在技术允许的最高压力下将该混合物均化成乳剂。将所得乳剂分配并封入加热灭菌的20ml玻璃水瓶中。分析该乳剂的外观、振荡稳定性、pH和容积分布。用Malvern Mastersizer分析该范围(span)。用显微镜观察大于1μ的小液滴的外观、在相关图上的平均面积和沉淀的存在。并研究了在5℃和40℃下的存放稳定性。

                                                           存期

物质            载体     pH    D(4∶3)μm   范围     面积

                                                           5和40℃1.阿法沙龙         CO       8.9       0.38      1.85      -    ＞4个月

               CO+SBO   8.9       0.58      1.61      -    ＞4个月2.表孕烷醇酮       CO       8.8       0.75      1.81      53   ＞4个月

               CO+SBO   9.0       0.75      1.71      34   ＞4个月

               CO       8.8       0.69      1.70      49   ＞3个月3.别孕烷醇酮       CO+SBO   9.0       0.53      1.58      -    ＞3个月

               CO       9.0       0.68      1.80      25   ＞1个月4.四氢脱氧皮质甾酮 CO+SBO   9.0       0.58      1.52      2    ＞1个月

               CO       8.8       0.97      1.76      40   ＞1个月5.孕烯醇酮硫酸酯   CO+SBO   8.8       0.50      1.56      1    ＞1个月6.雄甾酮           CO       8.9       0.83      1.79      9    ＞1个月

               CO+SBO   9.2       0.51      1.50      1    ＞1个月7.强的松龙         CO       8.9       0.81      1.28      11   ＞2个月

               CO+SBO   8.9       0.70      1.26      4    ＞2个月8.氢化可的松       CO       8.7       0.76      1.43      3    -

               CO+SBO   8.8       0.56      1.51      1    -

该结果表明油相中包含蓖麻油的乳剂是许多难溶性甾体的适宜载体。通常，该乳剂在长期存放期间具有良好的稳定性，并具有适于经非胃肠道施用的特点。

实施例2

为进行生物学实验，制备下列组成的水包油乳剂：

                  药剂1  药剂2  药剂3

                  (mg)   (mg)   (mg)孕烷醇酮(INN)          4      4     4蓖麻油                 70     70    -豆油                   30     -     200MCT                           30单甘油二乙酯

                   -      -     70(Diacetyl.Monoglyc.磷脂                   12     12    18甘油                   22.5   22.5  17

用NaOH调pH8.5并在所有的药剂中都加入注射用水至1ml。

药剂1和2是依据本发明的乳剂，而药剂3是依据欧洲专利EP233,849描述的现有技术的乳剂。药剂2中中等链的甘油三酯是从可可油衍生来的，它含有具有6-12个碳原子的脂肪酸残基的甘油三酯馏份。

依据本发明，孕烷醇酮首先与蓖麻油或者蓖麻油和豆油和/或MCT混合物混合。这样使孕烷醇酮基本上溶解。然后将所得的油-孕烷醇酮混合物与其它指定的组份一起制备乳剂。所得乳剂是稳定的且具有平均颗粒大小为约0.2-0.3μ，并且可经过高压灭菌法消毒而不破坏其稳定性。

值得一提的是，依据本发明的药剂1和2中与药剂3相比仅半量的脂质足以使孕烷醇酮基本溶解。例如孕烷醇酮在药剂1中的溶解度要比在药剂3中高约5倍。

之后，在4mg/ml 5β-孕烷-3β-醇-20-酮(表孕烷醇酮)来代替孕烷醇酮制备如药剂1的相同乳剂，在甾体溶解度及乳剂稳定性方面也得到了相似的结果。

实施例3

麻醉效果的测定

比较实施例2的药剂1和3的麻醉效果。在该实验中，使用体重在343-391克范围之内的30只Sprague-Dawley雄性大鼠。将由四折复式不锈钢丝(0.2mm)组成的EEG电极皮下固定在大鼠的每只耳前，将鼠准备好。

经尾静脉注入该乳剂，剂量输注速率为2mg/kg/分钟。连续监视EEG，一旦观察到EEG波(burst)至少一秒钟(一“静止秒”)的抑制，结束输注。然后将该动物平放在其笼中并观察直至其恢复翻正反射。

测试的参数为：

—诱导该静止秒所需的孕烷醇酮的剂量。

—睡眠时间，即从该静止秒出现至恢复翻正反射的时间。

结果(组平均值±SE)：

        诱导该静止秒乳剂

                           睡眠时间(分钟)

       所需剂量(mg/kg)

药剂1    8.75±0.38           43±2

药剂3    8.73±0.55           28±1

该结果表明，在所用的剂量输注速率下，在诱导皮层EEG静止(一静止秒)上两种乳剂间没有区别，但施用药剂1后的睡眠时间长些。

实施例4

心血管作用研究

该研究的目的是比较实施例2的药剂1和3对心血管的作用。在该研究中使用五只长期带有仪器的狗。这种模式没有手术紧迫性和附加药物例如预先用药和基础麻醉剂，便可记录心血管参数。从清醒状态到麻醉再到清醒状态的过渡便可在没有干扰的条件下进行。在不同的时间下用相同的动物测试两种乳剂。按大丸剂(bolus)静脉注射的孕烷醇酮的剂量为5mg/kg。该剂量约是诱导狗麻醉所需正常剂量的2倍。

最显著的结果是：

          自清醒状态的大约量大变化(％)参数                     药剂1          药剂3心率                     +20            +100平均动脉压               +10            -20心搏量                   -20            -65左心室dp/dt max          -10            -50(收缩力)

药剂1诱导的麻醉比药剂3发诱导的麻醉对心血管的影响明显要小。

实施例5

急性毒性的研究

对大鼠静脉高剂量(对大鼠有效麻醉剂量的10-16倍)单次施用药剂1后，测试急性毒性。使用40只体重范围在198-261g之间的Sprague-Dawley雄性大鼠。测量睡眠时间，即翻正反射的丧失与恢复之间的时间。在动物麻醉期间和清醒后，观察其临床症状，例如呼吸类型、心率和皮肤颜色。

在接下来的两周里，观察这些动物的一般状况。在施用药物前片刻称量大鼠的体重，然后于第7和14天再称量之。

在该实验中，全部动物存活下来。下表显示了这些剂量、输注速率和结果。

在麻醉较浅，但平稳期间观察呼吸速率。然而未注射到任何迹象的发绀。虽然心率有些减慢，但仍是节律而有力的搏动。在睡眠期尾注意到某些动物有呼吸啰音，但仅有一只动物需人工呼吸帮助。在所有动物中都观察到暂时性外周心血管收缩。动物清醒后即刻显得相当倦怠，但其它状况一切良好。在接下来的一个时期里，大鼠的行为、其总的健康状况以及其体重的增加都正常。

组    剂量  剂量   输注    动物数    睡眠    体重，g    体重     体重速率      只      时间      0天     增长，g   增长，gmg/kg ml/kg   ml/分              分                0-7天    8-14天
	A    40    10     0，5     10      98±7     222±3    43±3    40±3B    64    16     0,1      10      133±5    229±5    40±2    42±2C    64    16     0,5      10      145±5    224±4    39±2    38±2D    64    16     2,5      10      151±6    229±5    37±1    39±2

所记录睡眠时间和体重是平均值±SE

该剂量、输注速率和大鼠的大小均与先前进行的静脉麻醉急性毒性试验一致。该结果是令人满意的，说明依据本发明的乳剂未显示出毒性作用。

Claims (5)

1.一种水包油乳剂，它适于胃肠外施用在常用溶剂中具有有限溶解度的生物活性甾体，其特征在于每毫升该最终组合含有：

a)0.1-15mg量的甾体；

b)50-200mg量的脂质，包括蓖麻油和选择性地至少一种另外的选自下列成分的脂质：植物油、合成和纯化的中等长度链甘油三酯；

c)5-50mg量的选自纯化蛋黄磷脂的乳化剂；

d)注射用水；

e)加入以使该最终组合物等渗的等渗调节剂；以及

f)加入以达到适宜pH的氢氧化钠溶液，

并且其不包括下列添加剂：聚乙二醇、普卢诺尼克F-68，苯甲醇和苯甲酸苯甲酯。

2.根据权利要求1的乳剂，其特征在于该甾体选自5β-孕烷-3α-醇-20-酮、即乙他诺隆或孕烷醇酮，5β-孕烷-3β-醇-20-酮，5α-孕烷-3α-醇-20-酮，5α-孕烷-3β-醇-20-酮、即别孕烷醇酮，5α-孕烷-3α-醇-11，20-二酮、即阿法沙龙，5β-孕烷-3α，21-二醇-20-酮、即四氢脱氧皮质甾酮或THDOC，5α-孕烷-3α，21-二醇-20-酮、即别四氧脱氧皮质甾酮或别THDOC，5α-雄烷-3α-醇-17-酮、即雄甾酮或顺雄甾酮，5-孕烯-3β-醇-20-酮-硫酸酯、即孕烯醇酮硫酸酯，11β-11，17，21-三羟基孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮、即强的松龙，和11β，17α，21-三羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮、即二氢可的松。

3.根据权利要求1或2的乳剂，其特征在于该脂质含有10-90％重量/重量蓖麻油。

4.根据权利要求1或2的乳剂，其特征在于该脂质含有约70％重量/重量蓖麻油和约30％重量/重量豆油。

5.一种制备根据权利要求1-4的任一种乳剂或组合物的方法，其特征在于将甾体溶于一种含有蓖麻油或与另一种附加脂质混合的蓖麻油的脂质组合物中，然后将所得甾体—脂质组合物与一种水相乳化成一种稳定乳剂，所述附加脂质选自植物油和合成或精炼的中等长度链甘油三酯，所述水相含有水和蛋黄磷脂乳化剂，并且可选择性地含或不含等渗调节剂。