CN110291090A

CN110291090A - 作为新型jak激酶抑制剂的双环胺

Info

Publication number: CN110291090A
Application number: CN201880009654.7A
Authority: CN
Inventors: D·R·格雷夫; T·H·杰普森; M·拉森; A·里岑
Original assignee: Leo Pharma AS
Current assignee: Leo Pharma AS
Priority date: 2017-01-20
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2019-09-27
Also published as: US20190382418A1; RU2019126033A; EP3571198B1; RU2764980C2; JP2020505353A; WO2018134352A1; JP7101685B2; US10851116B2; RU2019126033A3; EP3571198A1

Abstract

本发明涉及根据式(I)的化合物：其中R₁表示烷基；n是1或2；R₂选自由氢、氰基、‑SO₂R_a、‑SO₂NR_bR_c、–C(O)R_b、苯基及5‑元杂芳基和6‑元杂芳基组成的组；或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。本发明还涉及用于疗法中的所述化合物、包含所述化合物的药物组合物、用所述化合物治疗疾病的方法，以及所述化合物在制备药物中的用途。

Description

作为新型JAK激酶抑制剂的双环胺

发明领域

本发明涉及作为蛋白酪氨酸激酶诸如Janus激酶的抑制剂的化合物、用于疗法中的所述化合物、包含所述化合物的药物组合物和用所述化合物治疗疾病的方法。

发明背景

本发明涉及作为蛋白酪氨酸激酶诸如Janus激酶JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的抑制剂的新型化合物。

蛋白酪氨酸激酶是催化三磷酸腺苷末端磷酸转移至蛋白质底物中酪氨酸残基的酶家族。蛋白质底物上酪氨酸残基的磷酸化导致调节多种过程(诸如细胞生长分化和活化、代谢、造血、宿主防御和免疫调节)的细胞内信号的转导。随着许多炎性疾患和其它免疫系统病症(例如自身免疫性疾病)中分子机制的阐明强调了这些细胞内信号通路的关键作用，蛋白酪氨酸激酶活性的调节似乎是管理炎性疾病的有吸引力的途径。已经鉴定了大量蛋白酪氨酸激酶，它们可以是受体蛋白酪氨酸激酶(例如胰岛素受体)或非受体蛋白酪氨酸激酶。

蛋白酪氨酸激酶JAK1、JAK2、JAK3和TYK2选择性地与各种细胞因子受体链的细胞质结构域结合，并且在细胞因子依赖性调节组织稳态，引发先天免疫，形成适应性免疫应答和炎性过程中具有至关重要的作用。它们在响应于刺激细胞因子受体经由酪氨酸磷酸化对它们的激活的信号转导中至关重要。(1)Schindler C.等人JAK-STAT signaling:frominterferons to cytokines.J.Biol.Chem2007；282(28):20059；(2)O’SheaJ.J.Targeting the Jak/STAT pathway for immunosuppression；Ann.Rheum.Dis.2004；63增刊2:ii67；(3)Schindler C.Series introduction.JAK-STAT signaling in humandisease；J.Clin.Invest.2002；109(9):1133；(4)O’Shea等人Cell,第109卷，S121–S131,2002；(5)Schwartz D.M.等人Nat.Rev.Rheumatol.,2016；12(1):25–36；(6)O’Shea等人New.Eng.J.Med.2013；368(2):161-170.

虽然JAK1、JAK2和TYK2普遍表达，但JAK3主要在造血细胞中表达。

JAK1在生物反应调节中起关键作用，且JAK1被广泛表达并与几种主要的细胞因子受体家族相关联。它参与通过IL-2受体γ亚单位家族(IL-2、IL-4、IL-7R、IL-9R、IL-15R和IL-21R)、IL-4受体家族(IL-4R、IL-13R)、gp130受体家族和II类细胞因子受体(包括IL-10受体家族以及I型和II型IFN受体家族两者)的成员的信号传导。

JAK2与通过几种单链受体(包括Epo-R、GHR、PRL-R)、IL-3受体家族、gp130受体家族、IL-12受体家族(IL-12和IL-23)和某一II类受体细胞因子家族的信号传导有关。因此，JAK2在转导Epo、IL-3、GM-CSF、IL-5和IFNγ的信号中起关键作用。JAK2敲除的小鼠表现出胚胎致死表型。

JAK3参与通过使用I型细胞因子受体家族(也称为IL-2受体家族，例如IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21)的共用γ链的受体的信号转导。已经鉴定出XSCID患者群体具有降低水平的JAK3蛋白或具有共用γ链的遗传缺陷，这表明免疫抑制应由阻断通过JAK3途径的信号传导引起。动物研究表明，JAK3不仅在B淋巴细胞和T淋巴细胞成熟过程中起关键作用，而且JAK3在组成上也是维持T细胞功能所必需的。通过这种新型机制调节免疫活性可被证明在治疗诸如免疫系统疾病特别是自身免疫疾病的T细胞增殖性病症中是有用的。

TYK2与I型干扰素、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23信号传导有关。已描述一位具有TYK2缺陷的人类患者，该患者患有原发性免疫缺陷病症，其特征为高IgE样综合征并伴有由病毒、细菌和真菌引起的许多机会性感染。因为已经发现IL-23在许多慢性炎性疾患中起重要作用，所以可以想象TYK2抑制剂在治疗受IL-23影响的疾病方面是非常有效的。

预期Janus激酶的抑制剂在治疗涉及这些激酶的炎性和非感染性自身免疫疾病中具有实用性。最近已推出pan-JAK抑制剂托法替尼和鲁索利替尼，分别用于治疗类风湿性关节炎和骨髓纤维化。

因此，JAK抑制剂此外可用于治疗与Janus激酶活性有关的疾病，包括例如皮肤病，如增殖性和炎性皮肤病症、银屑病、特应性皮炎、硬皮病、酒渣鼻、皮肤癌、皮炎、疱疹样皮炎、皮肌炎、白癜风、斑秃、接触性皮炎、湿疹、干燥症、荨麻疹和慢性特发性瘙痒症；呼吸系统疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、囊性纤维化、鼻炎、毛细支气管炎、绵纤维吸入性肺炎(byssinosis)、尘肺病、支气管扩张症、过敏性肺炎、肺癌、间皮瘤和结节病；胃肠疾病，如炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、腹膜后纤维化、乳糜泻和癌症；眼部疾病，如重症肌无力、综合征、结膜炎、巩膜炎、葡萄膜炎、干眼综合征、角膜炎、虹膜炎；系统性适应症，如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、I型糖尿病和糖尿病并发症、癌症、强直性脊柱炎和银屑病性关节炎；以及其它需要免疫抑制的自身免疫疾病和适应症，例如在器官移植中。

WO 2012/054364公开了作为Janus激酶抑制剂的双环胺。

EP 2460806公开了作为JAK2和JAK3抑制剂的含氮螺环化合物。

WO 2015/083028公开了作为Janus激酶抑制剂的吡咯并[2,3-D]嘧啶基、吡咯并[2,3-B]吡嗪基和吡咯并[2,3-D]吡啶基丙烯酰胺。

发明内容

本发明的目的是提供对Janus激酶受体JAK1、JAK2、JAK3和TYK2中的一种或多种表现出高抑制活性的新型化合物。

本发明化合物可具有有利的性质，诸如改善的代谢稳定性和代谢消除性质、皮肤稳定性和递送性质、局部递送后的全身暴露特性，所有这些都可使它们特别适合用作外用药物制剂中的活性药物成分。

本发明一些化合物的一个特别优点是它们在角质细胞中显示稳定性，同时在人肝微粒体或人肝细胞中显示高清除率，因此表明所述化合物在皮肤中具有稳定性且所述化合物具有高全身清除率，从而表明在保留在皮肤中的功效的同时降低了外用施用后的不良副作用风险。

本发明化合物可具有有利的溶解性质。

本发明化合物此外可具有有利的安全性质，诸如与其它激酶相比的高选择性的JAK抑制活性，和/或有利的细胞毒性、光毒性和基因毒性。

因此，本发明涉及通式I的化合物：

其中

R₁表示甲基或乙基；

n是1或2；

R₂选自由以下组成的组：

氢、氰基、-SO₂R_a、-SO₂NR_bR_c、–C(O)R_b、苯基及5-元杂芳基和6-元杂芳基，其中所述苯基、5-元杂芳基和6-元杂芳基任选地被一个或多个独立地选自R₃的取代基取代，

R₃表示由羟基、氰基、卤素、(C₁-C₄)烷基、羟基(C₁-C₄)烷基、卤代(C₁-C₄)烷基、氰基(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基、卤代(C₁-C₄)烷氧基、-SO₂R_a和-SO₂NR_bR_c组成的组；

R_a选自(C₁-C₄)烷基、(C₃-C₆)环烷基、卤代(C₁-C₄)烷基和氰基(C₁-C₄)烷基；

R_b和R_c各自独立地选自氢、(C₁-C₄)烷基、卤代(C₁-C₄)烷基、氰基(C₁-C₄)烷基、(C₃-C₆)环烷基、卤代(C₃-C₆)环烷基和氰基(C₃-C₆)环烷基；

或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在进一步方面，本发明涉及根据上文通式I的化合物，其用作药物。

在另一方面，本发明涉及根据上文通式I的化合物，其用于防治和/或治疗免疫系统疾病(诸如自身免疫疾病)或与免疫系统失调有关的疾病。

在再一方面，本发明涉及药物组合物，其包含根据上文通式I的化合物以及药学上可接受的媒介物或赋形剂或一种或多种药学上可接受的载体。

附图说明

图1示出了化合物22的绝对晶体结构的ORTEP图。该结构在不对称晶胞中具有两个分子。

具体实施方式

定义

术语“(C_a-C_b)烷基”旨在指示当从支链或直链烃中除去一个氢原子时得到的基团。所述(C_a-C_b)烷基包括1-6个，优选1-4个，诸如1-3个，诸如2-3个或诸如1-2个碳原子。该术语包括亚类正烷基(normal alkyl)(正-烷基)、仲烷基和叔烷基，诸如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、正-戊基、异戊基、新戊基、正-己基和异己基。“(C_a-C_b)烷基”中的碳原子数目由前缀“(C_a-C_b)”表示，其中a是所述烃基团中碳的最小数目，b是所述烃基团中碳的最大数目。因此，例如(C₁-C₄)烷基旨在表示包含1至4个碳原子的烷基基团。

术语“(C_a-C_b)烷基氧基”和“(C_a-C_b)烷氧基”旨在表示式-OR'的基团，其中R'是如本文所指示的(C_a-C_b)烷基，其中(C_a-C_b)烷基通过氧原子与母体分子半族附接，例如甲氧基(-OCH₃)、乙氧基(-OCH₂CH₃)、正丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基等。

术语“芳基”旨在表示包含6-13个碳原子，诸如6-9个碳原子，诸如6个碳原子的芳族碳环的基团，特别是5-元环或6-元环，例如苯基。

术语“氰基”旨在表示通过碳原子与母体分子半族附接的-CN基团。

术语“氰基(C_a-C_b)烷基”旨在表示被一个或多个如本文所定义的氰基原子取代的如本文所定义的(C_a-C_b)烷基，诸如氰基甲基或氰基乙基。

术语“(C_a-C_b)环烷基”旨在表示包含(C_a-C_b)碳原子(诸如3-7个碳原子，优选3-6个碳原子，诸如3-5个碳原子或诸如3-4个碳原子)的饱和环烷烃基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。

术语“卤代(C_a-C_b)烷基”旨在表示被一个或多个如本文所定义的卤素原子(例如氟或氯)取代的如本文所定义的(C_a-C_b)烷基，诸如二氟甲基或三氟甲基。

术语“卤代(C_a-C_b)烷基氧基”和“卤代(C_a-C_b)烷氧基”旨在表示通过氧原子与母体分子半族附接的如本文所定义的卤代(C_a-C_b)烷基，诸如二氟甲氧基或三氟甲氧基。

术语“卤素”旨在表示来自元素周期表第7主族的取代基，诸如氟、氯和溴。

术语“5-元杂芳基”和“6-元杂芳基”旨在表示包含5-元环或6-元环的单环杂芳环的基团，所述5-元或6-元环含有1-5个碳原子和1-4个选自氧、硫和氮的杂原子，诸如5个碳原子和1个杂原子，诸如4个碳原子和2个杂原子，诸如4个碳原子和1个杂原子，诸如3个碳原子和2个杂原子，诸如2个碳原子和3个杂原子。杂芳基可以通过杂芳基内任何位置含有的碳原子或氮原子与母体分子半族连接。5元和6元杂芳基的代表性实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基。

烃基团(例如烷基、环烷基和芳基)中的碳原子数目由前缀“(C_a-C_b)”表示，其中a是烃基团中碳的最小数目，b是烃基团中碳的最大数目。因此，例如(C₁-C₄)烷基旨在表示包含1至4个碳原子的烷基，且(C₃-C₅)环烷基旨在表示包含3至5个碳环原子的环烷基。

术语“羟(hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”旨在表示-OH基团。

术语“羟(C_a-C_b)烷基”或“羟基(C_a-C_b)烷基”旨在表示被一个或多个羟基取代的如上所定义的(C_a-C_b)烷基，例如羟甲基、羟乙基、羟丙基。

术语“氧代”旨在表示经由双键(＝O)与母体分子半族连接的氧原子。

基团C(O)旨在表示羰基基团(C＝O)。

基团S(O)旨在表示亚砜基团(S＝O)。

基团S(O)₂或SO₂旨在表示砜基团(O＝S＝O)。

如果取代基被描述为独立地选自一个基团，则每个取代基均是彼此独立地选择的。因此，每个取代基可以与一个或多个其它取代基相同或不同。

术语“任选取代的”是指“未取代的或取代的”，因此本文所述的通式包括含有指定的一个或多个任选取代基的化合物以及不含一个或多个任选取代基的化合物。

术语“药学上可接受的盐”旨在表示通过使包含碱性半族的式I化合物与合适的无机或有机酸(诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、半乳糖二酸、乳酸、马来酸、L-苹果酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、丙酸、苯甲酸、戊二酸、葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、甲烷磺酸、水杨酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、苯磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、甲苯磺酸、氨基磺酸或富马酸)反应制备的盐。包含酸性半族的式I化合物的药学上可接受的盐也可通过与合适的碱诸如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化银、氨等，或合适的无毒胺诸如低级烷基胺、羟基-低级烷基胺、环烷基胺或苄胺，或L-精氨酸或L-赖氨酸的反应来制备。药学上可接受的盐的进一步的实例列于Berge,S.M.；J.Pharm.Sci.；(1977),66(1),1-19,所述文献通过引用并入本文。

术语“溶剂化物”旨在表示通过化合物(例如式I化合物)与溶剂(例如醇、甘油或水)之间的相互作用形成的物质，其中所述物质为结晶形式。当水是溶剂时，所述物质称为水合物。

如本文所用的术语“治疗”是指为了对抗疾病、病症或疾患而对患者进行的管理和护理。该术语旨在包括延迟疾病、病症或疾患的进展，改善、减轻或缓解症状和并发症，和/或治愈或消除疾病、病症或疾患。该术语还包括疾患的预防，其中预防应被理解为为了对抗疾病、疾患或病症而对患者进行的管理和护理，并且包括施用活性化合物以预防症状或并发症的发作。尽管如此，防治性(prophylactic)(预防性(preventive))和治疗性(治愈性)治疗是两个独立的方面。

本文引用的所有参考文献(包括出版物、专利申请和专利)据此通过引用整体并入本文，其引用程度如同每篇参考文献被单独具体地指示通过引用并入，而不考虑本文其它地方给出的任何单独提供的特定文献合并。

本发明的实施方案

在实施方案中，本发明提供了根据通式I(a)的化合物

其中n、R₁和R₂如上文对通式I所描述。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中n是2。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₁表示甲基且n是2。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₁表示乙基且n是2。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₂选自由氢、氰基、-SO₂R_a、-SO₂NR_bR_c、–C(O)R_b、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻唑基和噻二唑基组成的组，其中所述苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻唑基和噻二唑基任选地被一个或多个独立地选自R₃的取代基取代。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₂选自由氢、氰基、-SO₂R_a和-SO₂NR_bR_c组成的组。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₂选自由氰基和-SO₂NH₂组成的组。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R₃表示由氰基、卤素、甲基、羟甲基和-SO₂CH₃组成的组。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R_a选自甲基和三氟乙基。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或I(a)的化合物，其中R_b和R_c各自独立地选自氢、甲基和氰基甲基。

在实施方案中，本发明提供根据通式I或选自以下的化合物：

(4aR,8aS)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

(4aS,8aR)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

5-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]吡嗪-2-甲腈、

6-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]吡啶-3-甲腈、

6-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]哒嗪-3-甲腈、

2-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]嘧啶-5-甲腈、

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-4-甲基-吡啶-3-甲腈、

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺、

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-2-甲基-吡啶-3-甲腈、

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-5-甲基-吡啶-3-甲腈、

(4aS*,8aR*)-2-(5-溴-4-甲基-2-吡啶基)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘、

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-2-甲基磺酰基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘、

(4aS*,8aR*)-2-(5-溴-6-甲基-2-吡啶基)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘、

1-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]乙酮、

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲醛、

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺、

(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺、

(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺、

2-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-5-溴-1,3,4-噻二唑、

(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈、

8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,5,6,8-八氢-2,7-二氮杂萘、

2-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]噻唑-4-甲腈、

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-甲基磺酰基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、

(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-磺酰胺、

(3aR,7aR)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈、

(3aS,7aS)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈、

(3aS*,7aS*)-N-(氰基甲基)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-磺酰胺、

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基磺酰基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、

3-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-3-氧代-丙腈、

6-[(3aS,7aS)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈、

6-[(3aR,7aR)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈、

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-(5-甲基磺酰基-2-吡啶基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-3-吡啶基]甲醇、

[2-[3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-3-吡啶基]甲醇、

4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2-(4-甲基磺酰基苯基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、

4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2-嘧啶-4-基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、

6-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-4-甲基-吡啶-3-甲腈、

2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]嘧啶-5-甲腈、

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]哒嗪-3-甲腈、

5-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡嗪-2-甲腈、

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-甲基-吡啶-3-甲腈、

6-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-2-甲基-吡啶-3-甲腈、

1-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-羰基]环戊烷甲腈、

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈，

或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其中所述化合物是(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其中所述化合物是(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其水合物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其水合物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其中所述化合物是(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其中所述化合物是(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其水合物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其水合物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自5-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]吡嗪-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自6-[(3aS,7aS)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-(5-甲基磺酰基-2-吡啶基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-3-吡啶基]甲醇或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2-(4-甲基磺酰基苯基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自6-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-4-甲基-吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自5-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡嗪-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在实施方案中，本发明提供根据通式I的化合物，其选自6[((3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在一个或多个实施方案中，本发明提供通式I(b)、I(c)或I(d)的化合物，其中R₁、R₂和n如上文所述。

在一个或多个实施方案中，本发明提供通式I(e)、I(c)或I(d)的化合物，其中R₁和R₂如上文所述。

本文描述的两个或更多个实施方案的任何组合都被认为在本发明的范围内。

本发明包括其中n、R₁、R₂、R₃、R_a、R_b和R_c如本文任何地方所述以任意组合组合的所有实施方案。

式I化合物可以结晶形式直接通过从有机溶剂中浓缩而获得或通过从有机溶剂或所述溶剂与可以是有机或无机的共溶剂(诸如水)的混合物中结晶或重结晶而获得。该晶体可以基本上无溶剂的形式分离或作为溶剂化物(诸如水合物)分离。本发明涵盖所有结晶形式，诸如多晶型物和假多晶型物，以及它们的混合物。

式I化合物包含不对称取代的(手性)碳原子，这些碳原子导致异构形式的存在，例如对映体和非对映体。本发明涉及所有此类异构体，可以是光学纯的形式，也可以是它们的混合物(例如外消旋体和外消旋混合物或部分纯化的光学混合物)。本发明化合物和中间体的纯立体异构形式可通过应用本领域已知的程序获得。各种异构形式可通过物理分离方法诸如选择性结晶和色谱技术，例如使用手性固定相的高压液相色谱分离。对映体可以通过使它们的非对映体盐选择性结晶而相互分离，非对映体盐可以由光学活性胺或光学活性酸形成。光学纯化的化合物随后可从所述纯化的非对映体盐中释放出来。对映体也可通过形成非对映体衍生物来拆分。替代地，对映体可通过使用手性固定相的色谱技术分离。纯立体异构形式也可衍生自适当起始材料的相应纯立体异构形式，条件是反应立体选择性地或立体特异性地发生。优选地，如果需要特定的立体异构体，则所述化合物将通过立体选择性或立体特异性制备方法合成。这些方法将有利地使用手性纯起始材料。此外，当分子中存在双键或完全或部分饱和的环体系时，可形成几何异构体。任何几何异构体，如分离的、纯的或部分纯化的几何异构体或其混合物，都旨在包括在本发明的范围内。在命名本发明的相关化合物时，外消旋混合物的相对立体化学由*表示。因此，例如“(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺”表示“(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺”和“(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺”的外消旋混合物。

在通式I化合物中，原子可以表现出它们的天然同位素丰度，或者一个或多个原子可以被人工地富集具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于自然界中发现的原子质量或质量数的特定同位素。本发明旨在包括通式I化合物的所有合适的同位素变型。例如，氢的不同同位素形式包括¹H、²H和³H，且碳的不同同位素形式包括¹²C、¹³C和¹⁴C，且氮的不同同位素形式包括¹⁴N和¹⁵N。氘(²H)富集可以例如增加体内半衰期或减少剂量方案，或者可以提供可用作生物样品表征标准的化合物。通式I内的同位素富集的化合物可以通过本领域技术人员熟知的常规技术或通过类似于本文一般方法和实施例中描述的那些的工艺，使用适当的同位素富集试剂和/或中间体来制备。

在本发明的一个或多个实施方案中，如上所定义的式I化合物可用于疗法中，特别可用于治疗例如皮肤病，如增殖性和炎性皮肤病症、银屑病、特应性皮炎、硬皮病、酒渣鼻、皮肤癌、皮炎、疱疹样皮炎、皮肌炎、白癜风、斑秃、接触性皮炎、湿疹、干燥症、鱼鳞病、荨麻疹和慢性特发性瘙痒症；呼吸系统疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病、肺纤维化、囊性纤维化、鼻炎、毛细支气管炎、绵纤维吸入性肺炎(byssinosis)、尘肺病、支气管扩张症、过敏性肺炎、肺癌、间皮瘤和结节病；胃肠疾病，如炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、腹膜后纤维化、乳糜泻和癌症；眼部疾病，如重症肌无力、综合征、结膜炎、巩膜炎、葡萄膜炎、干眼综合征、角膜炎、虹膜炎；系统性适应症，如狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、I型糖尿病和糖尿病并发症、癌症、强直性脊柱炎和银屑病性关节炎；以及其它需要免疫抑制的自身免疫疾病和适应症，例如在器官移植中。

在实施方案中，本发明提供了如上所定义的式I化合物,其用于防治和/或治疗银屑病或特应性皮炎。

在实施方案中，本发明提供了一种预防、治疗或改善免疫系统疾病诸如自身免疫性疾病的方法，该方法包括将有效量的一种或多种根据上文通式I的化合物，任选地与药学上可接受的载体或一种或多种赋形剂一起，任选地与其它治疗活性化合物组合施用给罹患至少一种所述疾病的人。

在实施方案中，本发明提供了一种预防、治疗或改善银屑病或特应性皮炎的方法，该方法包括将有效量的一种或多种根据上文通式I的化合物，任选地与药学上可接受的载体或一种或多种赋形剂一起，任选地与其它治疗活性化合物组合施用给罹患至少一种所述疾病的人。

在实施方案中，本发明提供了根据式I的化合物，其用于制造用于防治和/或治疗免疫系统疾病的药物，所述疾病诸如自身免疫疾病，诸如银屑病或特应性皮炎。

在本发明的一个或多个实施方案中，如上所定义的式I化合物可用作抗炎剂，其能够调节蛋白酪氨酸激酶JAK家族的蛋白酪氨酸激酶诸如JAK1、JAK2、JAK3或TYK2蛋白酪氨酸激酶的活性。

除了可用于人类治疗外，本发明化合物还可用于动物的兽医治疗，所述动物包括哺乳动物诸如马、牛、羊、猪、狗和猫。

本发明的药物组合物

为了用于疗法中，本发明化合物通常是药物组合物的形式。因此，本发明涉及药物组合物，其包含任选地与一种或多种其它治疗活性化合物在一起的式I化合物，以及药学上可接受的赋形剂、媒介物或一种或多种载体。赋形剂必须在与组合物的其它成分相容且对其接受者无害的意义上是“可接受的”。

方便地，活性成分占制剂重量的0.0001-99.9％。

以剂量单位的形式，化合物可以每天以适当的间隔施用一次或多次，然而，这总是要视患者的状况，并且根据医师开的处方来决定。方便地，剂量单位制剂含有介于0.001mg至1000mg，优选0.1mg至300mg，诸如50-200mg之间的式I化合物。本发明化合物的合适剂量将尤其取决于患者的年龄和状况、待治疗疾病的严重程度以及执业医师熟知的其它因素。该化合物可以根据不同的给药方案，例如每天、每周或以每月间隔，经口、肠胃外、外用、透皮或皮内或以其它途径施用。一般地，单剂量在0.001至400mg/kg体重的范围内。该化合物可以以团注剂量施用(即，一次性施用整个日剂量)或以一天两次或更多次的分剂量施用。

在外用治疗的上下文中，提及“使用单位”可能更合适，“使用单位”表示能够施用给患者并且可以容易地处理和包装的单剂量，其保持为包含活性物质本身或其与固体、半固体或液体药物稀释剂或载体的混合物的物理和化学稳定的单位剂量。

与外用使用相关的术语“使用单位”是指单一剂量，即单剂量，其能够按每平方厘米治疗区域0.001微克至1mg，优选0.05微克至0.5mg所讨论的有效成分的敷用方式外用施用给患者。

还设想在某些治疗方案中，以较长间隔施用，例如每隔一天、每周、或甚至以更长间隔施用可能是有益的。

如果治疗涉及施用另一种治疗活性化合物，所述化合物的有用剂量建议查阅Goodman&Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，J.G.Hardman和L.E.Limbird(编辑)，McGraw-Hill 1995。

本发明化合物与一种或多种其它活性化合物的施用可以同时进行或依次进行。

制剂包括例如呈适于经口(包括持续或控制释放)、直肠、胃肠外(包括皮下、腹膜内、肌内、关节内和静脉内)、透皮、皮内、眼部、外用、鼻、舌下或颊施用的形式的那些。

制剂可以方便地以剂量单位形式提供，并且可以通过但不限于药学领域熟知的，如在Remington,The Science and Practice of Pharmacy,第21版，2005中描述的任何方法制备。所有方法包括使活性成分与载体结合的步骤，所述载体构成一种或多种辅助成分。一般地，制剂是通过如下方式制备的：使活性成分与液体载体、半固体载体或细碎固体载体或它们的组合均匀紧密地结合，然后，如果需要，使产品成型为所需的制剂。

适于经口和颊施用的本发明制剂可以呈离散单位，如胶囊、小袋、片剂、口香糖或锭剂形式，每种均含有预定量的活性成分；呈粉末、颗粒或团粒的形式；呈在水性或非水性液体诸如乙醇或甘油中的溶液或悬浮液的形式；或者呈凝胶、纳米乳液或微乳液、水包油乳液、油包水乳液或其它分配体系的形式。油可以是食用油，诸如但不限于例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油。适于水性悬浮液的分散剂或悬浮剂包括合成或天然表面活性剂和增粘剂。活性成分也可以以大丸剂、冲服剂(electuary)或糊剂的形式施用。

片剂可以通过将活性成分任选地与一种或多种辅助成分一起压缩、模制或冷冻干燥来制得。压缩片剂可以通过在合适的机器中压制诸如粉末或颗粒的自由流动形式的一种或多种活性成分(任选地与粘合剂和/或填料混合)、润滑剂、崩解剂或分散剂来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分和合适载体的混合物来制得。冷冻干燥的片剂可以由药物物质的溶液在冷冻干燥器中形成。可以包括合适的填料。

用于直肠施用的制剂可以是栓剂形式，其中本发明化合物与低熔点、水溶性或不溶性固体混合，而酏剂可以使用肉豆蔻基棕榈酸酯制备。

适于胃肠外施用的制剂方便地包含优选与接受者的血液等渗的活性成分的无菌油性或水性制品，例如等渗盐水、等渗葡萄糖溶液或缓冲溶液。此外，该制剂可以含有共溶剂、增溶剂和/或络合剂。该制剂可以通过例如通过细菌截留过滤器过滤、向制剂中加入灭菌剂、照射制剂或加热制剂来方便地灭菌。如在例如Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology,第9卷，1994中所公开的脂质体制剂也适于胃肠外施用。

替代地，式I化合物可以作为在使用前很容易立刻溶解在无菌溶剂中的无菌固体制品，例如冷冻干燥的粉末存在。

透皮制剂可以是硬膏剂、贴剂、微针、脂质体或纳米颗粒递送系统或其它适用于皮肤的皮肤制剂的形式。

适于眼部施用的制剂可以是活性成分的无菌水性制品的形式，其可以是微晶形式，例如，水性微晶悬浮液的形式。脂质体制剂或可生物降解的聚合物体系，例如Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第2卷,1989中所公开的，也可用来提供用于眼部施用的活性成分。

适于外用诸如皮肤、皮内或眼部施用的制剂包括液体或半固体制剂，诸如搽剂、洗剂、凝胶、敷用剂(applicant)、喷雾、泡沫、成膜系统、微针、微乳液或纳米乳液、水包油或油包水乳液诸如霜剂、膏剂或糊剂；或溶液或悬浮液诸如滴剂。

对于外用施用，式I化合物按重量计通常可以以组合物的0.001％至20％，诸如0.01％至约10％，诸如0.1-5％的量存在，但是也可以以组合物的高达约100％的量存在。

适于鼻或颊施用的制剂包括粉末、自推进和喷雾制剂，诸如气溶胶和雾化剂(atomiser)。此类制剂更详细地公开于例如Modern Pharmaceutics，第2版，G.S.Banker和C.T.Rhodes(编辑),427-432页,Marcel Dekker，纽约；Modern Pharmaceutics,第3版,G.S.Banker和C.T.Rhodes(编辑),618-619页和718-721页，Marcel Dekker，纽约以及Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,第10卷,J.Swarbrick和J.C.Boylan(编辑),191-221页,Marcel Dekker，纽约。

除了上述成分之外，式I化合物的制剂可包括一种或多种另外的成分，诸如稀释剂、缓冲剂、调味剂、着色剂、表面活性剂、增稠剂、渗透增强剂、溶解度增强剂、防腐剂，例如羟基苯甲酸甲酯(包括抗氧化剂)、乳化剂等。

当活性成分是以含有药学上可接受的无毒酸或碱的盐的形式施用时，优选的盐例如易溶于水或微溶于水，以获得特定和适当的吸收速率。

制备方法

本发明化合物可以用合成领域技术人员熟知的许多方式制备。方案1中式I化合物可以例如使用与合成有机化学领域中已知的方法相结合的下面所概述的反应和技术，或本领域技术人员所理解的其变型来制备。优选的方法包括但不限于下面描述的那些。反应在适合于所用试剂和材料并且适于待进行的转化的溶剂中进行。此外，在下面描述的合成方法中，应当理解，所有提出的反应条件(包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理程序)，都被选择为该反应的标准条件，这应该是有机合成领域的技术人员容易认识到的。并非所有落入给定类别的化合物都与所述某些方法中所需的某些反应条件相容。对与反应条件相容的取代基的这种限制对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以使用替代方法。

起始材料是已知的或可商购的化合物，或者可以通过本领域技术人员熟知的常规合成方法制备。

一般程序、制备和实施例

在300MHz、400MHz或600MHz下记录¹H核磁共振(NMR)光谱。所引用的化学位移值(δ，以ppm为单位)是在指定溶剂中相对于内标物四甲基硅烷(δ＝0.00)或氯仿(δ＝7.26)而获得的。除非引用一个范围，否则给出在近似中点处界定(双峰(d)、双双峰(dd)、三重峰(t)、四重峰(q))的，或未界定(m)的多重峰的值。(br)表示宽峰。使用的有机溶剂通常是无水的。

制备型HPLC(酸性)

设备：Gilson HPLC系统，配有Gilson UV/VIS-155检测器

柱：Waters SunFire^TM Prep C18 5μm OBD 19x250mm

试剂：(A)0.1％甲酸-水溶液；(B)MeCN

泵：

—流速:30mL/min

制备HPLC(碱性)

设备：Gilson HPLC系统，其配有Gilson UV/VIS-155检测器

柱：WatersPrep C18 5μm OBD 19x250mm

试剂：(A)50mM NH₄HCO₃溶液；(B)MeCN

泵：

流速:30mL/min

时间(分钟)	[％]B
		0.0	0
2.0	0
		9.0	60
10.0	100
		13.0	100

分析型UPLC-MS

柱：Waters Aquity UPLC HSS T3 1.8μm，2.1x50mm。

柱温：60℃。

UV：PDA 210-400nm。

进样体积：2μl。

洗脱液：

A：10mM乙酸铵和0.1％甲酸。

B：100％乙腈和0.1％甲酸。

梯度：

MS：正电离和负电离之间的电喷雾转换。

仪器：Waters Aquity UPLC，Waters SQD

分析型UPLC-MS方法5

柱：Acquity UPLC HSST3 1.8μm；2.1x50mm

流速：0.7(mL/min)

柱温：40℃

流动相：

A：10mM乙酸铵+0.1％甲酸

B：100％乙腈+0.1％甲酸

UV:240-400nm

进样体积：2μl

梯度：

UPLC(进样方法)：XE Metode 7CM

MS-方法：PosNeg_50_1000

仪器：Waters Acquity UPLC，Waters LCT Premier XE

柱色谱使用硅胶(100-200目)手动进行，或者在CombiFlash ISCO系统或GraceReveleris系统上使用预装柱自动进行。

除非另有说明，否则所示的溶剂比率指的是v:v。

利用Fieser方法对含有LAH的反应物进行后处理，其由以下组成：每使用x g LAH加入x mL水，然后加入x mL 15％NaOH水溶液和3x mL水并过滤掉沉淀的盐。

以下缩写贯穿全文：

Aq. 水溶液

AcOH 乙酸

BOC 叔丁氧基羰基

BZ 苄基

CBz 羧基苄基

CbzCl 氯甲酸苄酯

DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯

DCM 二氯甲烷

DIPEA 二异丙基乙胺

DMAP N,N-二甲基-4-氨基吡啶

DMF N,N'-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

DSC 差示扫描量热法

EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

Et 乙基

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

h 小时

HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1-H-1,2,3-三唑并

[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

LAH 氢化铝锂

LG 离去基团

Me 甲基

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

NMR 核磁共振

Ms 甲磺酸酯

PG 保护基团

Ph 苯基

Pr 正丙基

rt 室温

SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基

SM 起始材料

S_nAr 亲核芳香取代

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

t_R 保留时间(以分钟为单位)

Ts 甲苯磺酸酯

V 体积

一般制备程序

本发明化合物(I)的通式在方案1中示出

方案1

其中R₁、R₂和n如本文所述的那样定义。

通式I(其中n＝1)化合物可以例如通过方案2中概述的一般方法制备

方案2

PG表示合适的保护基团(参见例如“Greene's Protective Groups in OrganicSynthesis”，第5版，Wuts P.G.M.，John Wiley&Sons Inc.)，诸如但不限于CBz、Bz、BOC、SEM和Ts。

LG表示合适的离去基团，诸如但不限于：氟、氯、溴、碘、甲氧基、-OMs或-OTs。

Q表示-H或如针对PG所述的保护基团，这取决于具体的反应需要。

通式I(其中n＝1)化合物可以根据需要通过使通式化合物I-Q脱保护来制备。如果Q等于-H，则不需要脱保护。

通式I-Q化合物可以通过使通式II化合物与适当活化的试剂或R₂的前体，诸如磺酰氯(实施例31)、活化的卤代杂芳烃(实施例38)和溴化氰(实施例29)反应来制备。

通式II化合物可以从通式III化合物通过PG脱保护获得。在Q是保护基团的情况下，该脱保护选择性地除去PG，同时将Q留在原位，例如在中间体23下所描述。

通式III化合物可以通过如下方式制备：例如使用溶剂如DMF、MeCN或水和碱如DIPEA或K₂CO₃，在诸如室温至200℃的合适温度下，通过常规加热或微波诱导加热，使通式V化合物与吡咯并嘧啶衍生物IV在SnAr条件下偶联。

替代地，IV与V形成III的反应可以在具有合适配体的过渡金属基催化剂和合适的碱的存在下并且在合适的溶剂中，在诸如室温至200℃的合适温度下，通过常规加热或微波诱导加热进行。典型的过渡金属包括Pd和Cu，合适的配体包括P-基配体如2,2'-双(二苯基膦基)1,1'-联萘基和4,5-双-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-9H-呫吨，以及N基配体如N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺，合适的碱包括Cs₂CO₃、叔丁醇钠和K₃PO₄，且合适的溶剂包括二噁烷和甲苯。

通式IV化合物可商购获得，或者由可商购获得的分子根据有机合成领域的化学技术人员已知的标准程序经过合成转化而制得。通式V化合物是合成通式I化合物(其中n＝1)的关键结构单元，并且它们可以例如如方案3中概述的那样制备并且进一步详细描述在中间体部分中。

方案3

通式I化合物(其中n＝2)可以例如通过方案4中概述的一般方法制备

方案4

Q表示-H或如之前针对PG所述的保护基团，这取决于具体的反应需要。

通式I化合物(其中n＝2)可以根据需要通过使通式I-Q化合物(其中n＝2)脱保护来制备，例如在实施例4-8中。如果Q等于-H，则不需要脱保护，例如在实施例15和实施例25中。

通式I-Q化合物(其中n＝2)可以通过使通式VI化合物与适当活化的试剂或R₂的前体，诸如活化的卤代杂芳烃(诸如实施例4-8)和甲磺酰氯(实施例13)反应来制备。

通式VI化合物可以从通式VII化合物通过还原获得，如在中间体6下所描述。

通式VII化合物可以通过如下方式制备：例如使用溶剂如DMF、MeCN或水和碱如DIPEA或K₂CO₃，在诸如室温至200℃的合适温度下，通过常规加热或微波诱导加热，使通式VIII化合物与吡咯并嘧啶衍生物IV在SnAr条件下偶联。

替代地，IV与VIII形成VII的反应可以在具有合适配体的过渡金属基催化剂和合适的碱的存在下并且在合适的溶剂中，在诸如室温至200℃的合适温度下，通过常规加热或微波诱导加热进行。典型的过渡金属包括Pd和Cu，合适的配体包括P-基配体如2,2'-双(二苯基膦基)1,1'-联萘基和4,5-双-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-9H-呫吨，以及N基配体如N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺，合适的碱包括Cs₂CO₃、叔丁醇钠和K₃PO₄，且合适的溶剂包括二噁烷和甲苯。

通式IV化合物可商购获得，或者由可商购获得的分子根据有机合成领域的化学技术人员已知的标准程序经过合成转化而制得。

通式VIII化合物是合成通式I化合物(其中n＝2)的关键结构单元，并且它们可以例如如方案5中概述的那样制备并且进一步详细描述在中间体部分中。

方案5

替代地，式VIII和式IX的关键结构单元可以按照方案6中概述的顺序合成。

方案6

如方案6中所概述，在迈克尔加成条件下，烯烃二酯可与取代的丙二腈偶联，并且可通过氢化、环化和还原进一步操作该反应的产物以提供式IX化合物。在类似于如针对VIII与IV的反应所述的条件下，式IX化合物可与IV反应以产生VI。

如方案6中所概述，式VII化合物可以以4-(氰基甲基)吡啶-3-羧酸甲酯为起始原料来制备，4-(氰基甲基)吡啶-3-羧酸甲酯经过腈的还原、随后的分子内环化和吡啶环的还原可得到式X化合物。通过形成烯醇化物和烷基化进一步衍生化可以得到式VIII化合物，其可用于制备式VII化合物或被进一步操作至IX。

立体化学

在用于中间体2、7和13的合成程序中，所述烷基化提供外消旋产物。因此，使用这些中间体的后续中间体和实施例被合成为外消旋混合物。

除非另有说明，否则在本发明中间体和实施例结构中使用楔形和短划线键的构型指示应理解为意指外消旋混合物的相对立体化学。

在命名相关化合物时，外消旋混合物的相对立体化学由*表示。

在中间体4和9的分子内环化程序中，顺式和反式两种双环体系都有可能形成，参见方案7。

方案7

基于对外消旋实施例23的NOESY NMR研究，显示这种纯化的物质由纯顺式非对映体组成，表明在分子内环化步骤中顺式非对映体的形成相对于反式来说是占优势的，但是未评估顺式与反式的具体比率(即，非对映体比率)。

对于中间体15，文献(Kim等人，Tetrahedron Letters 48(2007)5023-5026)已经描述，从中间体14到中间体15的氢化步骤是在存在高度立体控制的情况下进行的，导致非对映体比率为～9:1。

纯对映体的分离是通过手性色谱法对执行分离的如所述的所选实施例进行的。

中间体

中间体1

4-氧代哌啶-1,3-二羧酸O1-苄酯O3-甲酯

在0℃下，将4-氧代哌啶-3-羧酸甲酯盐酸盐(25g，129.11mmol)悬浮于DCM(250mL)中，缓慢加入DIPEA(38.4g，297mmol，50.8mL)，得到澄清溶液。然后将CbzCl(24.2g，142mmol，20.3mL)逐滴加入到该溶液中，并在0℃下搅拌30min，然后在室温下再搅拌15h,以完全转化起始胺。将反应混合物用10％柠檬酸水溶液(2×100mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到呈粗黄色油状物的中间体1(39.8g，123mmol，95％收率)，其纯度足以用于进一步操作。

UPLC-MS:t_R＝0.78(M+H⁺)＝293.3

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ11.97(s,1H),7.46–7.27(m,5H),5.16(s,2H),4.14(t,J＝1.7Hz,2H),3.78(s,3H),3.65(t,J＝6.0Hz,2H),2.39(br s,2H).

中间体2

外消旋3-甲基-4-氧代-哌啶-1,3-二羧酸O1-苄酯O3-甲酯

将中间体1(15.0g，51.5mmol)、碳酸钾(2.0当量，102mmol，14.2g)和碘甲烷(3.0当量，154mmol，21.9g，9.64mL)溶解在DMF(50mL)中，并在室温下搅拌3h，以使得基于NMR起始酮酯完全转化。含水后处理(盐水/乙醚)，然后将醚相干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到外消旋中间体2(16.7g，50.8mmol，98％收率)，其纯度足以用于进一步操作。

UPLC-MS:t_R＝0.73(M+Na⁺)＝329.2

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.36(m,5H),5.17(s,2H),4.60(dd,J＝13.7,2.2Hz,1H),4.24(m,1H),3.64(br s,3H),3.41(m,1H),3.13(d,J＝13.7Hz,1H),2.77(ddd,J＝15.1,10.2,6.5Hz,1H),2.50(dt,J＝15.5,4.0Hz,1H),1.31(s,3H).

中间体3

外消旋(4E)-4-(氰基亚甲基)-3-甲基-哌啶-1,3-二羧酸O1-苄酯O3-甲酯

用注射泵将(三丁基亚正膦基)乙腈(1.05当量，59.3mmol，14.3g，16mL)历经10h(0.68mL/h)加入到中间体2(17.2g，56.5mmol)在干燥THF(170mL)的溶液中。将混合物在室温下搅拌15h以实现高度转化。

将反应混合物直接蒸发到硅藻土上，并通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：庚烷—>EtOAc)纯化，得到呈无色油状物的中间体3，为纯E异构体(16.8g，51.2mmol，91％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.73(M+H⁺)＝329.3

1H NMR(600MHz,氯仿-d)δ7.47–7.30(m,5H),5.16(d,J＝3.8Hz,2H),4.52(d,J＝13.4Hz,1H),4.34–4.04(m,1H),3.64(m,3H),3.18–2.86(m,2H),2.83(d,J＝13.4Hz,1H),2.58(br s,1H),1.42–1.23(br s,3H).

中间体4(VIII，R1＝Me)

8a-甲基-2,3,4,4a,5,6,7,8-八氢-2,7-二氮杂萘-1-酮

将负载于碳上的Pd(0.05当量，2.54mmol，2.71g，10质量％)加入到中间体3(16.7g，50.9mmol)的AcOH(150mL)溶液中，并在Parr装置(4巴)上氢化15h以完全转换SM。

将混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩，然后与甲苯共蒸发以除去痕量的乙酸。中间体4以粗品的形式接着用于下一反应中。

中间体5(VII，R1＝Me)

8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-2H-2,7-二氮杂萘-1-酮

将中间体4(8.50g，40.4mmol)、4-氯吡咯并嘧啶(1.0当量，6.21g，40.4mmol)和DIPEA(3.0当量，15.7g，121mmol，21mL)溶解在MeCN(120mL)中并回流(90℃)15h。

将粗制的反应混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩。将残余物装载到硅藻土上，并通过自动柱色谱法(ISCO，DCM→含10％MeOH的DCM)纯化，得到呈白色泡沫的中间体5(5.98g，21.0mmol，52％收率，5.98g)。

UPLC-MS:t_R＝0.34(M+H⁺)＝286.1

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.23(br s,1H),8.26(s,1H),7.05(d,J＝3.6Hz,1H),6.97(d,J＝3.7Hz,1H),5.95(br s,1H),4.89(d,J＝13.5Hz,1H),4.52(d,J＝13.2Hz,1H),3.66(m,2H),3.46–3.25(m,2H),2.28–2.12(m,1H),2.05–1.70(m,4H).

中间体6(Boc-VI，R1＝Me)

8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-羧酸叔丁酯

将LAH(5.0当量，105mmol，3.98g)分批加入到中间体5(1.78g，5.95mmol，1.78g)在干燥THF中的溶液(3mL/mmol，17.8mL)中并回流(80℃)15h以将内酰胺完全转化为所需的胺。将反应混合物冷却(0℃)并用乙酸乙酯(40mL)和MeOH(10mL)逐滴淬灭直至不再产生氢气。在室温下再搅拌1h。

然后加入Boc-酸酐(2.0当量，41.9mmol，9.15g)，并在室温下搅拌2h以进行完全转化。

将混合物过滤，用EtOAc洗涤残余物数次，将滤液真空浓缩，含水后处理(盐水/EtOAc)，干燥(硫酸镁)，过滤并蒸发至干。该粗的经后处理的物质主要由单保护和二保护的物质组成，并通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：庚烷→EtOAc)纯化，得到呈白色泡沫的中间体6(2.06g，5.55mmol)。

UPLC-MS:t_R＝0.67(M+H⁺)＝372.4

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.64(s,1H),8.32(s,1H),7.07(d,J＝3.6Hz,1H),6.52(d,J＝3.6Hz,1H),4.11(br s,1H),4.00(d,J＝13.6Hz,1H),3.79(m,1H),3.57–3.30(m,4H),3.15(d,J＝14.0Hz,1H),1.85–1.65(m,5H),1.46(s,9H),1.04(s,3H).

中间体7

外消旋3-乙基-4-氧代-哌啶-1,3-二羧酸O1-苄酯O3-甲酯

将中间体1(20g，68.7mmol)、碳酸钾(2.0当量，137mmol，18.9g)和碘乙烷(3.0当量，206mmol，32.1g，16.6mL)溶解在DMF(70mL)中，并在50℃下搅拌2h，以将起始物完全转化为所需产物。含水后处理(盐水/乙醚)，干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，得到乙基化产物中间体7(21.8g，68.3mmol，99％收率)，其纯度足以用于进一步操作。通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：庚烷→EtOAc)纯化少量样品用于鉴定。

UPLC-MS:t_R＝0.74(M+H⁺)＝320.3

1H NMR(旋转异构体,300MHz,氯仿-d)δ7.45–7.30(m,5H),5.17(d,J＝6.5Hz,2H),4.52–3.92(m,2H),3.75–3.59(m,4H),3.55–3.29(m,1H),2.68-2.37(m,2H),1.91-1.67(m,1H),1.40–1.23(m,3H).

中间体8

外消旋(4E)-4-(氰基亚甲基)-3-乙基-哌啶-1,3-二羧酸O1-苄酯O3-甲酯

用注射泵将(三丁基亚正膦基)乙腈(1.20当量，20.3mmol，4.90g，5.3mL)历经10h(0.68mL/h)加入到中间体7(5.40g，16.9mmol)在干燥THF(50mL)中的溶液中。在室温下搅拌15h，以高度转化成所需产物。

如果内鎓盐以高浓度存在(可能是内鎓盐分解)，则使反应停止。

将反应混合物直接蒸发到硅藻土上，并通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：庚烷→EtOAc)纯化，得到中间体8的单一反式异构体(5.16g，15.1mmol，89％收率)，为无色油状物。

UPLC-MS:t_R＝0.78(M+H⁺)＝343.3

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.43–7.30(m,5H),5.35(s,1H),5.16(s,2H),4.22–4.03(m,1H),3.68(m,4H),3.44(ddd,J＝12.9,8.3,4.5Hz,1H),3.30(m,1H),2.77(m,1H),2.60(dddd,J＝14.4,8.3,5.0,0.9Hz,1H),1.76(m,2H),0.93–0.84(m,3H).

中间体9(VII，R1＝Et)

8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-2H-2,7-二氮杂萘-1-酮

将负载于碳上的Pd(0.10当量，1.61mmol，1.71g，10质量％)加入到中间体8(5.50g，16.1mmol)的AcOH(50mL)溶液中，并在Parr装置(5巴)上氢化20h，以将SM完全转化为所需的内酰胺。

将混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩，并与甲苯共蒸发以除去痕量的乙酸。粗产物接着用于下一反应中，无需进一步纯化。

将该粗的物质溶于MeCN(50mL)中并加入IV(2.47g，16.1mmol)和DIPEA(8.4mL，48.3mmol)。将反应混合物回流(95℃)15h，以使起始氯化物部分转化为所需的S_NAr产物以及一些次要的副产物。

将粗混合物直接蒸发到硅藻土上，并通过自动柱色谱法(ISCO，首先庚烷→DCM，然后梯度：DCM→含10％MeOH的DCM)纯化，得到呈白色泡沫的中间体9(2.77g，9.24mmol，57％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.38(M+H⁺)＝300.2

1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ8.21(br s,1H),8.14(s,1H),7.15(d,J＝3.7Hz,1H),6.80(d,J＝3.6Hz,1H),4.44(d,J＝13.3Hz,1H),4.09(ddd,J＝13.3,7.0,4.0Hz,1H),3.72(ddd,J＝12.8,8.5,3.8Hz,1H),3.66(d,J＝13.3Hz,1H),3.37(ddd,J＝13.2,7.6,5.7Hz,1H),3.31–3.26(m,1H),2.17(tt,J＝8.3,4.3Hz,1H),2.05(dddd,J＝13.7,7.8,5.8,3.8Hz,1H),1.99–1.86(m,2H),1.82–1.69(m,3H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H).

中间体10(VI，R1＝Et)

8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,2,3,4,4a,5,6,8-八氢-2,7-二氮杂萘

将LAH(3.0当量，17.8mmol，0.677g)分批加入到中间体9(1.78g，5.95mmol)在干燥THF(20mL)中的溶液中并回流(80℃)15h以将内酰胺完全转化为所需的胺。

在冰上冷却，用乙醚(20mL)稀释，通过Fieser方法淬灭，干燥(硫酸镁)，过滤，得到呈白色泡沫的粗中间体10(750mg，2.63mmol，44％收率)。其纯度足以用于进一步操作。

UPLC-MS:t_R＝0.33(M+H⁺)＝286.3

1H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.63(s,1H),8.09(s,1H),7.14(d,J＝3.5Hz,1H),6.55(d,J＝3.5Hz,1H),4.01–3.60(m,4H),2.86(br s,1H),2.63(m,2H),2.45(d,J＝12.7Hz,1H),1.81–1.37(m,7H),0.78(t,J＝7.5Hz,3H).

中间体11

2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸乙酯

在0℃下，向2-氨基乙酸乙酯(100g，716.33mmol)在THF(1L)中的溶液中缓慢加入TEA(144.6g，1432.6mmol)和(Boc)₂O(156.3g，716.33mmol),并在50℃下搅拌16h。在反应完成后，在减压下蒸发挥发物，并将所得残余物用1N NaOH(300mL)洗涤，并用EtOAc(1LX2)萃取。将合并的有机层用盐水(1L)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗中间体11(128g，88％收率，白色固体)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.04(br s,1H),4.25–4.16(m,2H),3.93-3.82(m,2H),1.39(m,9H),1.31-1.24(m,3H).

中间体12

4-氧代吡咯烷-1,3-二羧酸O1-叔丁酯O3-乙酯

在0℃下，向氢化钠(60％，18.4g，768.47mmol)在甲苯(350mL)中的悬浮液中分批加入中间体11(120g，591.13mmol)。在该温度下搅拌5h后，向混合物中逐滴加入丙烯酸乙酯(76.8g，768.47mmol)。在室温下再搅拌2h后，小心地用水(200mL)将反应淬灭，并用EtOAc(600mL×2)萃取。将合并的萃取物经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗中间体12(50g，33％收率，浅棕色液体)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.28-3.97(m,6H),3.94-3.81(m,1H),1.50-1.39(s,9H),1.36-1.20(m,3H).

中间体13

3-甲基-4-氧代-吡咯烷-1,3-二羧酸O1-叔丁酯O3-乙酯

向中间体12(50g，194.5mmol)在丙酮(500mL)中的溶液中缓慢加入K₂CO₃(53.6g，389.1mmol)和碘甲烷(55.2g，389.1mmol)，并在26℃下搅拌16h。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液浓缩，并通过硅胶(100-200目)柱色谱法(含0-10％EtOAc的石油醚作为洗脱液)纯化，得到中间体13(32g，60％收率，浅黄色液体)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.27(br d,J＝11.7Hz,1H),4.19(dq,J＝1.7,7.1Hz,2H),4.14-3.96(m,1H),3.81(d,J＝19.6Hz,1H),3.46(br d,J＝11.7Hz,1H),1.49(s,9H),1.41(s,3H),1.29-1.22(m,3H).

中间体14

(4Z)-4-(氰基亚甲基)-3-甲基-吡咯烷-1,3-二羧酸O1-叔丁酯O3-乙酯

在0℃下，向氢化钠(60％，3.45g，143.9mmol)在THF(500mL)中的溶液中逐滴加入氰基甲基膦酸二乙酯(25.47g，143.9mmol)。在室温下搅拌1h后，将中间体13(30g，110.7mmol)在THF(50mL)中的溶液逐滴加入到混合物中，并再搅拌2h。完成后，将反应混合物用饱和NH₄Cl猝灭并用EtOAc(2×500mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(含0-10％EtOAc的石油醚作为洗脱液)纯化，得到中间体14。(19g，58％收率，黄色液体)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ6.82-6.60(m,1H),4.34(br d J＝11.4Hz,1H),4.26-4.16(m,2H),3.57(br d,J＝12.1,1H),3.36-3.13(m,2H),1.55-1.48(m,9H),1.45(s,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H).

中间体15

(3R*,4S*)-4-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-1,3-二羧酸O1-叔丁酯O3-乙酯

在0℃下，向中间体14(9g，30.61mmol)在MeOH(180mL)中的溶液中加入(Boc)₂O(13.34g，61.22mmol)和湿的10％Pd/C(2.7g)，并在Parr-Apparatus下以90psi氢化36h。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液浓缩，并通过硅胶(100-200目)柱色谱法(含0-10％EtOAc的石油醚作为洗脱液)纯化，得到中间体15(11.7g，95％收率，淡黄色液体)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ4.65-4.45(m,1H),4.20-4.08(m,2H),3.88-3.75(m,1H),3.73-3.51(m,2H),3.24-2.94(m,4H),2.05-1.96(m,1H),1.75-1.55(m,2H),1.51-1.39(m,18H),1.33-1.22(m,6H).

中间体16

(3R*,4S*)-4-(2-氨基乙基)-3-甲基-吡咯烷-3-羧酸乙酯

在0℃下，向中间体15(12.8g，32mmol)在DCM(250mL)中的溶液中加入三氟乙酸(11g，96mmol)，并在26℃下搅拌16h。完成后，将反应物料用饱和NaHCO3(600mL)洗涤，并用EtOAc(500mL×3)萃取，将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗中间体16(6.4g，99％收率，浅棕色胶状固体)，其无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。

中间体17

(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2,3,5,6,7,7a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-4-酮

向粗中间体16(6.4g，32mmol)在EtOH(300mL)中的溶液中加入t-BuOK(17.9g，160mmol)，并在26℃下搅拌16h。完成后，将三氟乙酸加入到反应物料中直至pH为～3，然后在真空下蒸发挥发物，得到粗中间体17(4.93g，浅棕色胶状物)，其无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。

中间体18

(3aR*,7aS*)-2-苯甲酰基-3a-甲基-1,3,5,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-4-酮

在0℃下，向中间体17(4.93g，32mmol)在乙腈(60mL)中的溶液中缓慢加入K₂CO₃(17.6g，128mmol)和苯甲酰氯(5.3g，38.4mmol)，并在26℃下搅拌16h。完成后，将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液浓缩，并通过二氧化硅(100-200目)柱色谱(含0-5％MeOH的DCM作为洗脱液)纯化，得到中间体18(7.0g，84％收率，浅棕色胶状物)。

¹H NMR(400MHz,DMSO):δ7.53-7.37(m,5H),7.22(br s,1H),3.82-3.66(m,2H),3.53-3.11(m,4H),2.28(br s,1H),1.85(br s,1H),1.65(br s,1H),1.21-1.14(m,3H).

中间体19

(3aS*,7aS*)-2-苄基-3a-甲基-3,4,5,6,7,7a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶

在0℃下，向中间体18(5.5g，21.31mmol)在THF(200mL)中的溶液中分批加入LAH(2.43g，63.95mmol)，并在80℃下搅拌3h。完成后，将反应物料用冰冷水(30mL)和15％NaOH(30mL)淬灭，然后在室温下搅拌30min。然后将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液在减压下浓缩，得到粗中间体19(4.9g，99％收率，浅黄色胶状液体)。

中间体20

(3aR*,7aS*)-2-苄基-3a-甲基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯

在0℃下，向中间体19(4.9g，21.31mmol)在DCM(1L)中的溶液中缓慢加入TEA(6.45g，63.93mmol)和(Boc)₂O(9.3g，42.62mmol)，并在26℃下搅拌16h。反应完成后，在真空下蒸发挥发物，并通过二氧化硅(100-200目)柱色谱法(含0-5％MeOH的DCM作为洗脱液)纯化，得到中间体20(4.8g，68％收率，浅黄色液体)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.34-7.19(m,5H),3.59(s,2H),3.40-3.13(m,4H),2.76-2.68(m,1H),2.48-2.26(m,3H),1.86-1.66(m,2H),1.63-1.52(m,1H),1.49-1.37(m,9H),1.04(s,3H).

中间体21

2-[[4-[(3aR*,7aS*)-2-苄基-3a-甲基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲氧基]乙基-三甲基-硅烷

向中间体19(745mg，3.24mmol)和DIPEA(1.3g，10mmol)在二噁烷(30mL)中的溶液中加入2-[(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲氧基]乙基-三甲基-硅烷(850mg，2.99mmol)。将混合物在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物蒸发以除去挥发物，将残余物溶于DCM中，并通过硅胶色谱法(DCM:MeOH 25:1)纯化，得到呈无色油状物的中间体21。

中间体22

N-[[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]磺酰基]氨基甲酸叔丁酯

在氩气下，向中间体23(50mg，0.13mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入三乙胺(54μL，0.39mmol)。将混合物在冰上冷却，加入N-氯磺酰基氨基甲酸叔丁酯(31mg，0.14mmol)，并使混合物升温至室温，并搅拌2h。将混合物蒸发至干，并使用制备型HPLC(酸性)将残余物纯化，得到呈白色固体的中间体22(33mg，45％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.92(M+H⁺)＝567.4

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.33(s,1H),7.37(br s,1H),7.10(d,J＝3.7Hz,1H),6.49(d,J＝3.8Hz,1H),5.58(s,2H),4.17–4.12(m,1H),4.11(d,J＝13.8Hz,1H),3.85(dd,J＝9.6,6.9Hz,1H),3.71–3.65(m,1H),3.60(d,J＝13.8Hz,1H),3.57–3.51(m,3H),3.43(d,J＝9.6Hz,1H),3.26(d,J＝9.6Hz,1H),2.17–2.10(m,1H),1.96–1.90(m,1H),1.74–1.66(m,1H),1.43(s,9H),1.17(s,3H),0.94–0.89(m,2H),-0.05(s,9H).

中间体23

2-[[4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2,3,4,6,7,7a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲氧基]乙基-三甲基-硅烷

在4mL螺旋盖小瓶中,向中间体21(63mg，0.13mmol)在THF(1.5mL)和甲醇(1mL)中的溶液中加入甲酸铵(50mg，0.79mmol)，将小瓶用氩气冲洗，并加入10％Pd/C(约5mg)。将混合物在60℃下振荡过夜，通过硅藻土过滤并用甲醇洗涤。将滤液蒸发至干，得到中间体23(41mg，80％收率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。

UPLC-MS:t_R＝0.65(M+H⁺)＝388.4

¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.31(s,1H),7.05(d,J＝3.7Hz,1H),6.56(d,J＝3.7Hz,1H),5.56(s,2H),4.07–3.63(m,4H),3.58–3.47(m,2H),3.29(dd,J＝11.0,6.8Hz,1H),2.97–2.68(m,3H),2.06–1.84(m,2H),1.82–1.62(m,1H),1.12(s,3H),0.96–0.86(m,2H),-0.05(s,9H).

中间体24和25

6-[(3aS,7aS)-3-a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈(24)

和

6-[(3aR,7aR)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈(25)

向外消旋中间体23(226mg，0.583mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入6-氯吡啶-3-甲腈(88.9mg，0.641mmol)，然后加入DBU(192μL，1.28mmol)。将溶液在50℃搅拌1.5h，蒸发挥发物，并使用CombiFlash系统(12g硅胶柱，EtOAc:庚烷0:100→30:70)通过色谱法纯化残余物，得到呈白色泡沫的外消旋产物(240mg，84％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.96(M+H⁺)＝490.5

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.41(br d,1H),8.19(s,1H),7.79(br s,1H),7.37(d,J＝3.7Hz,1H),6.75(d,J＝3.7Hz,1H),6.50(br d,1H),5.52(d,J＝10.8Hz,1H),5.50(d,J＝10.9Hz,1H),4.10–3.90(m,2H),3.89–3.69(m,2H),3.67–3.55(m,1H),3.51–3.46(m,2H),3.46–3.12(m,3H),2.33–2.16(m,1H),1.92–1.84(m,1H),1.55–1.46(m,1H),1.10(s,3H),0.83–0.77(m,2H),-0.11(s,9H).

通过手性HPLC分离获得纯对映体。将外消旋物质在乙腈中溶解至24mg/mL，然后通过HPLC纯化。每次进样0.75mL(18mg)。使用的柱是Lux A2(20mm×250mm，5μm)。洗脱液为MeCN/异丙醇，比例为90/10。在280nm的波长下流速为21mL/min。然后使用旋转蒸发器将湿级分蒸发至干，并在40℃、5毫巴的真空烘箱中干燥，得到恒重。使用Lux A2(4.6mm×250mm，5μm)通过HPLC进行最终分析。洗脱液为MeCN/异丙醇，比例为90/10。流速为1mL/min。由此得到中间体24(114mg，99.1％ee，分析型HPLC t_R＝5.6min)和中间体25(108mg，98.4％ee，分析型HPLC t_R＝4.5min)。

中间体26

2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-吡啶-3-羧酸甲酯

向中间体23(200mg，0.433mmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入5-溴-2-氯-吡啶-3-羧酸甲酯(119mg，0.475mmol)，然后加入DBU(0.14mL，0.95mmol)。将混合物在50℃加热4h，然后使其冷却至室温过夜。将挥发物蒸发，并使用Grace系统(12g硅胶柱，EtOAc:庚烷0:100→40:60)通过色谱法纯化残余物，得到呈无色油状物的中间体26(261mg，定量)。

UPLC-MS:t_R＝1.07(M+H⁺)＝601.5

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.33(s,1H),8.22(d,J＝2.5Hz,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.09(d,J＝3.7Hz,1H),6.51(d,J＝3.8Hz,1H),5.58(s,2H),4.09–4.01(m,1H),3.92(d,J＝13.7Hz,1H),3.87–3.79(m,1H),3.77(s,3H),3.72–3.64(m,2H),3.57–3.50(m,2H),3.42(dd,J＝11.3,5.6Hz,1H),3.34(d,J＝11.1Hz,1H),3.15(d,J＝11.1Hz,1H),2.20–2.14(m,1H),1.99–1.91(m,1H),1.70–1.61(m,1H),1.16(s,3H),0.94–0.89(m,2H),-0.05(s,9H).

中间体27

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-3-吡啶基]甲醇

向中间体26(246mg，0.409mmol)在THF(3mL)和甲醇(3mL)中的溶液中加入NaBH₄(92.8mg，2.45mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入另一部分NaBH₄(92.8mg，2.45mmol)，并继续搅拌3h。将这再重复两次，然后将混合物蒸发至干。将残余物在冰上冷却，加入水(20mL)，并用EtOAc(4×25mL)萃取混合物。将合并的EtOAc相用盐水(30mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。使用Grace系统(12g硅胶柱，EtOAc:庚烷0:100→50:50)通过色谱法纯化残余物，得到中间体27(36mg，15％收率)和回收的起始材料(110mg)。

UPLC-MS:t_R＝0.98(M+H⁺)＝573.5

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.31(s,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(d,J＝2.4Hz,1H),7.08(d,J＝3.7Hz,1H),6.53(d,J＝3.8Hz,1H),5.56(s,2H),4.62(d,J＝13.2Hz,1H),4.58(d,J＝13.1Hz,1H),4.02–3.96(m,1H),3.90(d,J＝13.6Hz,1H),3.88–3.84(m,1H),3.81(dd,J＝10.4,7.3Hz,1H),3.77(d,J＝13.6Hz,1H),3.61(dd,J＝10.4,5.8Hz,1H),3.57(d,J＝10.3Hz,1H),3.55–3.50(m,2H),3.35(d,J＝10.3Hz,1H),2.61(br s,1H),2.18–2.12(m,1H),2.00–1.93(m,1H),1.75–1.67(m,1H),1.17(s,3H),0.94–0.88(m,2H),-0.05(s,9H).

中间体28

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-3-吡啶基]甲醇

在氩气和0℃下，向中间体26(55mg，0.091mmol)在干燥THF(1mL)的溶液中加入LiAlH₄(1.0M在THF中，0.18mL，0.18mmol)，并将混合物搅拌20min。通过依次加入水(7μL)、15％NaOH水溶液(7μL)和水(21μL)淬灭反应，并将混合物在室温下搅拌1h。滤出沉淀的锂盐，蒸发滤液并通过制备型HPLC(酸性方法)纯化残余物，得到中间体27(12mg，23％收率)和中间体28(5mg，11％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.71(M+H⁺)＝495.6

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.34(s,1H),8.12(dd,J＝4.9,1.9Hz,1H),7.48(dd,J＝7.3,1.9Hz,1H),7.08(d,J＝3.7Hz,1H),6.66(dd,J＝7.3,4.9Hz,1H),6.55(d,J＝3.7Hz,1H),5.58(s,2H),4.68(d,J＝12.8Hz,1H),4.64(d,J＝12.8Hz,1H),4.02–3.95(m,1H),3.95–3.83(m,4H),3.69(dd,J＝10.3,6.0Hz,1H),3.61(d,J＝10.3Hz,1H),3.56–3.51(m,2H),3.43(d,J＝10.2Hz,1H),2.21–2.15(m,1H),2.04–1.97(m,1H),1.80–1.73(m,1H),1.20(s,3H),0.94–0.89(m,2H),-0.05(s,9H).

中间体29和30

(3aS,7aS)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈(29)和(3aR,7aR)-3a-甲基-5-[7-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈(30)

向中间体23(686mg，1.52mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入三乙胺(0.42mL，3.0mmol)，然后加入溴化氰(180mg，1.7mmol)，并将溶液在室温、氩气下搅拌1h(根据LCMS，反应完全)。将反应混合物蒸发到硅胶上，使用CombiFlash系统(40g硅胶柱，梯度洗脱，EtOAc:庚烷0:100→80:20)通过色谱法纯化产物，得到呈浅黄色油状物的外消旋产物(589mg，81％收率)，其保留14％的EtOAc，如通过¹H NMR所测定。

UPLC-MS:t_R＝0.83(M+H⁺)＝413.4

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.18(s,1H),7.36(d,J＝3.7Hz,1H),6.73(d,J＝3.7Hz,1H),5.51(s,2H),3.95–3.89(m,1H),3.86(d,J＝13.9Hz,1H),3.85–3.80(m,1H),3.79(d,J＝13.8Hz,1H),3.63(dd,J＝9.4,7.3Hz,1H),3.52–3.47(m,2H),3.38(dd,J＝9.4,5.8Hz,1H),3.26(d,J＝9.3Hz,1H),3.13(d,J＝9.3Hz,1H),2.14–2.08(m,1H),1.86–1.80(m,1H),1.55–1.48(m,1H),1.04(s,3H),0.83–0.78(m,2H),-0.10(s,9H).

通过手性SFC分离获得纯对映体。将外消旋物质在甲醇中溶解至50mg/mL，然后通过SFC纯化。每次进样0.25mL(12.5mg)。使用的柱是Lux C1(20mm×250mm，5μm)。洗脱液为MeOH/CO₂ 25％。在216nm的波长下流速为50mL/min。然后使用旋转蒸发器将湿级分蒸发至接近干燥，用DCM将其转移到最终容器中，在40℃下在氮气流下除去DCM，然后在40℃、5毫巴的真空烘箱中储存6小时，得到黄色胶状物。使用Lux C1(4.6mm×250mm，5μm)通过SFC进行最终分析。洗脱液为MeOH/CO₂ 30％。流速为4mL/min。

由此得到中间体29(237mg，99.8％ee，分析型SFC t_R＝1.87min)和中间体30(243mg，96.6％ee，分析型SFC t_R＝2.01min)。

中间体31

2-[[4-(8a-甲基-1,3,4,4a,5,6,7,8-八氢-2,7-二氮杂萘-2-基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲氧基]乙基-三甲基-硅烷

将中间体4(380mg，1.86mmol)、2-[(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲氧基]乙基-三甲基-硅烷(579mg，2.05mmol)和DIPEA(2mL)在二噁烷(120mL)中混合，并在100℃下搅拌18h。

将反应混合物真空浓缩，并通过二氧化硅柱色谱法(庚烷:EA 2:1至DCM:MeOH 40:1)纯化，得到SEM保护的内酰胺中间体(350mg，45％收率)，为黄色胶状物。

将其溶于THF(10mL)中,并在冰浴上冷却，然后加入LAH(200mg，5.26mmol),并在室温下搅拌过夜。将反应混合物在冰浴上冷却并淬灭，然后通过二氧化硅柱色谱法(DCM:MeOH15:1)纯化，得到呈灰白色泡沫的中间体31(174mg，51％收率)，其按原样使用。

实施例

实施例2

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物2)

将TFA(15mL)加入到中间体6(2.06g，5.55mmol)在DCM(50mL)中的溶液中，并在室温下搅拌3h，以进行完全脱保护。然后蒸发至干，并与甲苯共蒸发。将粗产物再溶于MeOH(30mL)中并加入碳酸氢钠(5.0当量，27.8mmol，2.33g)，并在冰上冷却10min。然后将溴化氰(1.1当量，6.11mmol，647mg)分批加入混合物中，并在氩气、室温下搅拌1h以完全转化为所需的氨腈。将粗混合物过滤并直接蒸发到硅藻土上，并通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：DCM→含10％MeOH的DCM)纯化，得到呈白色固体的所需实施例2(692mg，2.34mmol，42％收率)，为外消旋的单一非对映体。

UPLC-MS:t_R＝0.45(M+H⁺)＝297.3

1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.81(s,1H),8.31(d,J＝1.1Hz,1H),7.08(d,J＝3.6Hz,1H),6.49(d,J＝3.6Hz,1H),4.29(m,2H),3.59(s,1H),3.39–3.11(m,4H),2.86(d,J＝13.0Hz,1H),2.00(dd,J＝9.2,4.8Hz,1H),1.89–1.64(m,4H),1.18(d,J＝1.1Hz,3H)

通过手性SFC分离获得纯对映体。将外消旋物质在甲醇中溶解至32mg/mL，然后通过SFC纯化。每次进样1.5mL(48mg)。使用的柱是Amy-C(20mm×250mm，5μm)。洗脱液为MeOH/CO₂ 25％。在220nm的波长下流速为21mL/min。然后使用旋转蒸发器将湿级分蒸发至接近干燥，用DCM将其转移到最终容器中，在40℃下在氮气流下除去DCM，然后在40℃、5毫巴的真空烘箱中储存6h，得到灰白色固体。使用Lux A2(4.6mm×250mm，5μm)通过SFC进行最终分析。流速为1mL/min，波长为254nm。

由此获得实施例1和实施例3。

实施例1

(4aR,8aS)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物1)

138mg，99.9％ee，分析型SFC t_R＝8.78min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.76(M+H⁺)＝297.17

实施例3

(4aS,8aR)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物3)

143mg，99.9％ee，分析型SFC t_R＝10.01min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.76(M+H⁺)＝297.17

实施例4-8和10-12和14

这些实施例是根据下面的亲核芳族取代和SEM去保护的一般程序制备的：

根据以下方法制备实施例4-8、10-12和14的化合物：在4mL螺旋盖小瓶中将中间体31(100mg，0.25mmol)和碱(1.2当量)(DBU或Dipea)在DMF、二噁烷或NMP(3mL)中的溶液加入到相应杂芳基卤化物(1.2当量)中，并在下面指出的温度和时间下振荡混合物。通过制备型HPLC(碱性)纯化反应混合物，得到SEM保护的中间体，将其溶于DCM(3mL)和TFA(2mL)中。在室温下静置1h后，蒸发挥发物，并将残余物溶于甲醇(5mL)和NH₃(3mL)水溶液中。在室温下静置6h后，通过制备型HPLC(碱性)纯化反应混合物，得到纯产物。

实施例4

5-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]吡嗪-2-甲腈(化合物4)

使用作为杂芳基卤化物的5-氯吡嗪-2-甲腈、DBU和DMF，在室温下搅拌2h。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.98(M+H⁺)＝375.44

实施例5

6-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]吡啶-3-甲腈(化合物5)

使用6-溴吡啶-3-甲腈、Dipea和二噁烷，在100℃下搅拌10h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.06(M+H⁺)＝374.45

实施例6

6-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]哒嗪-3-甲腈(化合物6)

使用6-氯哒嗪-3-甲腈、DBU和DMF，在室温下搅拌2h。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.90(M+H⁺)＝375.44

实施例7

2-[(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]嘧啶-5-甲腈(化合物7)

使用2-氯嘧啶-5-甲腈、DBU和DMF，在50℃下搅拌3h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.08(M+H⁺)＝375.44

实施例8

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-4-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物8)

使用6-溴-4-甲基-吡啶-3-甲腈、Dipea和二噁烷，在100℃下搅拌10h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.12(M+H⁺)＝388.48

实施例10

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-2-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物10)

使用6-氯-2-甲基-吡啶-3-甲腈、Dipea和二噁烷，在100℃下搅拌过夜。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.17(M+H⁺)＝388.48

实施例11

6-[(4aS*,8aR*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-5-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物11)

使用6-氟-5-甲基-吡啶-3-甲腈、Dipea和二噁烷，在100℃下搅拌10h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.12(M+H⁺)＝388.48

实施例12

(4aS*,8aR*)-2-(5-溴-4-甲基-2-吡啶基)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘(化合物12)

使用5-溴-2-氯-4-甲基-吡啶、Dipiea和DMF，在100℃下搅拌3h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.32(M+H⁺)＝442.37

实施例14

(4aS*,8aR*)-2-(5-溴-6-甲基-2-吡啶基)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘(化合物14)

使用3-溴-6-氯-2-甲基-吡啶、Dipea和NMP，在100℃下搅拌3h。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.45(M+H⁺)＝442.37

实施例9

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺(化合物9)

将中间体31(50mg，0.125mmol)溶于二噁烷(10mL)中，加入磺酰胺(50mg，0.52mmol)，并将混合物加热回流20h。冷却至室温后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(碱性)纯化。将SEM保护的中间产物溶于DCM(3mL)和TFA(3mL)中，并在室温下搅拌1.5h。将反应混合物减压浓缩，再溶于MeOH(3mL)中，然后加入NH₃(3mL)水溶液。将混合物搅拌过夜，并通过HPLC(碱性)纯化。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.67(M+H⁺)＝351.44

实施例13

(4aR*,8aS*)-8a-甲基-2-甲基磺酰基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘(化合物13)

将中间体31(50mg，0.125mmol)溶于二噁烷(5mL)中，加入TEA(63mg，0.5mmol)，将混合物冷却至0℃，然后加入CH₃SO₂Cl(22mg，0.187mmol)。在室温下搅拌1.5h后，对反应混合物进行含水后处理(3×10mL DCM)，减压浓缩并通过制备型HPLC(碱性)纯化。将SEM保护的中间产物溶于DCM(2mL)和TFA(2mL)中，并在室温下搅拌1.5h。将反应混合物减压浓缩，再溶于MeOH(2mL)中，然后加入NH₃(2mL)水溶液。将混合物搅拌过夜，并通过HPLC(碱性)纯化。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.75(M+H⁺)＝350.45

实施例15

1-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]乙酮(化合物15)

将中间体10(5mg，0.01752mmol)悬浮于MeCN(0.5mL)和DIPEA(3.0当量，0.0526mmol，6.8mg，0.00915mL)中，在冰上冷却并加入乙酰氯(1当量，0.0175mmol，1.4mg，0.00132mL)。将反应混合物在冰浴上搅拌30min，然后将混合物直接在制备型HPLC(碱性)上纯化，得到实施例15，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.75(M+H⁺)＝328.21

实施例16

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲醛(化合物16)

在微波反应器小瓶中，将中间体10(5mg，0.0175mmol)溶于DMF(0.8mL)中，并加入甲酸(1.1当量，0.887mg，0.0193mmol)、DMAP(1当量，0.0175mmol，2.14mg)和EDCI(1.2当量，0.021mmol，4.0mg)。将小瓶密封并在室温下搅拌2h。将混合物直接在制备型HPLC(碱性)上纯化，得到实施例16，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.73(M+H⁺)＝314.19

实施例17

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺(化合物17)

将Boc-氨磺酰氯(1.1当量，0.0771mmol，16.6mg)加入到中间体10(20mg，0.0701mmol)和TEA(5当量，0.350mmol，35.5mg，0.0488mL)在干燥乙腈(0.50mL)的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌15h，然后将TFA(20当量，1.40mmol，160mg，0.107mL)加入到混合物中，并在室温下搅拌3h，然后在60℃下再加热1h，以完全转化为所需产物。

将反应混合物蒸发至干，并通过制备型HPLC纯化，得到实施例17(13.1mg，0.0359mmol，51％收率)，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS:t_R＝0.45(M+H⁺)＝365.1

1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),8.11(s,1H),7.16(dd,J＝3.6,2.4Hz,1H),6.65(s,2H),6.54(dd,J＝3.6,1.8Hz,1H),4.19–4.00(m,2H),3.62(brs,1H),3.51(d,J＝13.5Hz,1H),3.01(m,1H),2.96–2.82(m,2H),2.76(d,J＝12.0Hz,1H),1.83(td,J＝8.7,4.2Hz,1H),1.78–1.56(m,5H),1.44(dq,J＝14.8,7.5Hz,1H),0.83(t,J＝7.5Hz,3H).

通过手性SFC分离获得纯对映体。将外消旋物质在乙醇中溶解至77mg/mL，然后通过SFC纯化。每次进样0.2mL(15mg)。使用的柱是Lux A1(21.2mm×250mm，5μm)。洗脱液为MeOH/CO₂ 25％。在220nm的波长下流速为21mL/min。然后使用旋转蒸发器将湿级分蒸发至接近干燥，用DCM将其转移到最终容器中，在40℃下在氮气流下除去DCM，然后在40℃、5毫巴的真空烘箱中储存6h，得到灰白色固体。使用Lux A2(4.6mm×250mm，5μm)通过SFC进行最终分析。流速为1mL/min，波长为254nm。

由此获得实施例18和实施例19。

实施例18

(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺(化合物18)

85mg，99.9％ee，分析型SFC t_R＝7.38min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.78(M+H⁺)＝365.17

根据m.p.(DSC起始温度)207.9±2℃表征为结晶形式

实施例19

(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺(化合物19)

95mg，97.7％ee，分析型SFC t_R＝9.34min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.77(M+H⁺)＝365.17

实施例20

2-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]-5-溴-1,3,4-噻二唑(化合物20)

在微波反应器小瓶中，将中间体10(5mg，0.01752mmol)悬浮于MeCN(0.5mL)中，并加入DIPEA(3.0当量，0.0526mmol，6.8mg，0.00915mL)和2,5-二溴-1,3,4-噻二唑(1当量，0.0175mmol，4.27mg)。将小瓶密封，并在加热块中加热至60℃并保持2.5h。通过制备型HPLC(碱性)纯化反应混合物。将纯级分蒸发至干，得到所需化合物，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS：t_R＝0.64(M+H⁺)＝448/450

实施例23

(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物23)

将溴化氰(1.1当量，2.66mmol，282mg)分批加入到中间体10(690mg，2.42mmol，1.0当量)和碳酸氢钠(2.0当量，4.84mmol，将406mg)在MeOH(12)中的冷溶液(0℃)中，并将溶液在氩气、室温下搅拌1h，以使起始胺完全转化为所需产物。直接蒸发到硅藻土上并通过自动柱色谱法(ISCO，梯度：DCM→10％MeOH)纯化，得到实施例23(652mg，2.10mmol，87％收率)，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS:t_R＝0.51(M+H⁺)＝311.3

1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),8.11(s,1H),7.17(dd,J＝3.6,2.2Hz,1H),6.60(dd,J＝3.6,1.7Hz,1H),4.17–3.98(m,2H),3.72–3.47(m,2H),3.31–3.25(m,1H),3.16(d,J＝12.9Hz,1H),3.06(ddd,J＝12.5,6.3,4.4Hz,1H),2.90(d,J＝13.0Hz,1H),1.85–1.44(m,7H),0.83(t,J＝7.6Hz,3H).

通过手性SFC分离获得纯对映体。将外消旋物质在甲醇中溶解至40mg/mL，然后通过SFC纯化。每次进样0.22mL(8mg)。使用的柱是Amy-C(20mm×250mm，5μm)。洗脱液为MeOH/CO₂ 25％。在220nm的波长下流速为21mL/min。然后使用旋转蒸发器将湿级分蒸发至接近干燥，用DCM将其转移到最终容器中，在40℃下在氮气流下除去DCM，然后在40℃、5毫巴的真空烘箱中储存6h，得到灰白色固体。使用Amy-C(4.6mm×250mm，5μm)通过SFC进行最终分析。流速为1mL/min，波长为254nm。

由此获得实施例21和实施例22。

实施例21

(4aS,8aR)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物21)

160mg，98.8％ee，分析型SFC t_R＝10.63min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.85(M+H⁺)＝311.19

实施例22

(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈(化合物22)

124mg，98.7％ee，分析型SFC t_R＝8.93min

UPLC-MS方法5：t_R＝1.85(M+H⁺)＝311.19

化合物22的单X射线晶体学

通过缓慢蒸发使化合物22在EtOAc:庚烷(2:1)溶液中结晶，得到代表性晶体。

该晶体的特征在于具有与表A中提供的那些基本相同的单晶参数。化合物22具有通过单晶X射线晶体学(XRC)获得的结构，如图1所示。

表A.来自单晶结构测定的晶体参数

上面的晶形是根据m.p.(DSC起始温度)178.4±2℃表征的。

实施例25

2-[(4aR*,8aS*)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-基]噻唑-4-甲腈(化合物25)

在微波反应器小瓶中，将中间体10(50mg，0.175mmol)、2-溴噻唑-4-甲腈(33mg，0.175mmol)和DIPEA(68mg，0.0915mL，0.526mmol)溶于MeCN(1mL)中，并在60℃下加热15h，以完全转化为所需产物。然后通过制备型HPLC直接纯化混合物，得到实施例25(36mg，0.0915mmol，52％收率)，为白色固体(外消旋的单一非对映体)。

UPLC-MS方法5：t_R＝2.15(M+H⁺)＝394.17

实施例26

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-甲基磺酰基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物26)

步骤1：

向中间体23(64mg，0.165mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入三乙胺(140mg)和CH₃SO₂Cl(58mg，0.51mmol)，并将混合物在室温下搅拌30min。含水后处理(H₂O，DCM)后，将有机层干燥(MgSO₄)并浓缩。通过色谱法纯化残余物，得到81mg固体，将其直接使用。

步骤2：

将步骤1的产物(81mg)溶于DCM(2mL)和TFA(2mL)中，并将溶液搅拌3h。将混合物蒸发至干，将残余物溶于MeOH(2mL)和NH₃.H₂O(2mL)中，并搅拌过夜。将所得混合物蒸发至干，溶于乙酸乙酯中，并通过柱色谱法纯化，然后从水中重结晶，得到实施例26(9.3mg，白色固体，16％收率)。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.68(M+H⁺)＝336.14

¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.01(s,1H),7.02(d,J＝3.6Hz,1H),6.55(d,J＝3.6Hz,1H),4.07-3.91(m,2H),3.73–3.62(m,2H),3.64(m,1H),3.17–3.06(m,4H),2.93(m,1H),2.05(m,1H),1.86(m,1H),1.65(m,1H).

实施例27

(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-磺酰胺(化合物27)

步骤1：

向中间体23(90mg，0.23mmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中加入磺酰胺(30mg，0.31mmol)，将混合物加热至110℃并保持2h，然后蒸发溶剂。通过色谱法(DCM:MeOH 10:1)纯化残余物，得到60mg油状物，将其直接使用。

步骤2：

将步骤1的产物(60mg)溶于DCM(3mL)和TFA(3mL)中，并将溶液搅拌3h。将混合物蒸发至干，将残余物溶于MeOH(3mL)和NH₃.H₂O(3mL)中，并搅拌过夜。将得到的混合物蒸发至干，溶于乙酸乙酯中，并通过柱色谱法(EA:MeOH 20:1)纯化，得到实施例27(8mg，白色固体，23％收率)。

UPLC-MS方法5：t_R＝1.6(M+H⁺)＝337.14

实施例28

(3aR,7aR)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈(化合物28)

将中间体30(240mg，0.582mmol)在1.0M TBAF的THF溶液(5.0mL，5.0mmol)中的溶液蒸发以除去THF，并将残余物在60℃、真空(30-40毫巴)下搅拌35min。使用Grace系统(40g硅胶柱，梯度洗脱，EtOAc:MeOH 100:0→90:10)通过色谱法纯化反应混合物，以除去大部分TBAF。通过制备型HPLC(碱性)进行最后纯化，得到实施例28(28mg，17％收率)，为白色固体。

UPLC-MS:t_R＝0.42(M+H⁺)＝283.2

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.61(br s,1H),8.12(s,1H),7.18(d,J＝3.6Hz,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,1H),4.00–3.70(m,4H),3.63(dd,J＝9.4,7.2Hz,1H),3.36(dd,J＝9.4,5.7Hz,1H),3.27(d,J＝9.3Hz,1H),3.13(d,J＝9.3Hz,1H),2.15–2.03(m,1H),1.90–1.76(m,1H),1.60–1.44(m,1H),1.05(s,3H).

实施例29

(3aS,7aS)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲腈(化合物29)

如实施例28所述的那样制备，但以中间体29(220mg，0.533mmol)为起始物。收率：17.6mg，12％。

UPLC-MS:t_R＝0.42(M+H⁺)＝283.2

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.12(s,1H),7.17(dd,J＝3.6,2.1Hz,1H),6.61(dd,J＝3.6,1.5Hz,1H),4.00–3.70(m,4H),3.63(dd,J＝9.4,7.2Hz,1H),3.36(dd,J＝9.4,5.7Hz,1H),3.27(d,J＝9.3Hz,1H),3.13(d,J＝9.3Hz,1H),2.15–2.03(m,1H),1.90–1.76(m,1H),1.60–1.44(m,1H),1.05(s,3H).

实施例30

(3aS*,7aS*)-N-(氰基甲基)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-磺酰胺(化合物30)

步骤1：

向中间体22(16mg，0.028mmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入三乙胺(12μL，0.085mmol)，然后加入溴化氰(5.1mg，0.042mmol)。将混合物在室温下振荡2h，然后加入另外的三乙胺(24μL，0.17mmol)和溴化氰(10mg，0.085mmol)。将混合物在室温下振荡过夜，并通过制备型HPLC(酸性)获得中间产物(5mg，29％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.97(M+H⁺)＝606.4

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.33(s,1H),7.10(d,J＝3.7Hz,1H),6.49(d,J＝3.7Hz,1H),5.58(s,2H),4.56(s,2H),4.17–4.13(m,1H),4.12(d,J＝13.8Hz,1H),3.84(dd,J＝9.7,6.9Hz,1H),3.71–3.65(m,1H),3.60(d,J＝13.9Hz,1H),3.56–3.52(m,2H),3.52–3.48(m,2H),3.30(d,J＝9.6Hz,1H),2.18–2.12(m,1H),1.98–1.91(m,1H),1.72–1.64(m,1H),1.49(s,9H),1.17(s,3H),0.94–0.88(m,2H),-0.05(s,9H).

步骤2：

将步骤1的产物(5mg，0.008mmol)溶于DCM(0.6mL)和TFA(0.2mL)中，并将溶液在室温下振荡过夜。将混合物蒸发至干，并将残余物溶于MeCN(0.5mL)和乙二胺(0.1mL)中。将所得混合物在室温下振荡3.5h，蒸发挥发物，并使用制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例30(2.6mg，84％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.42(M+H⁺)＝376.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.68(br s,1H),8.16(s,1H),8.11(s,1H),7.17(d,J＝3.5Hz,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,1H),4.08(s,2H),4.03–3.97(m,1H),3.96(d,J＝13.7Hz,1H),3.75–3.68(m,2H),3.50(dd,J＝9.8,7.2Hz,1H),3.19(dd,J＝9.8,5.2Hz,1H),3.15(d,J＝9.5Hz,1H),2.99(d,J＝9.5Hz,1H),2.15–2.09(m,1H),1.86–1.79(m,1H),1.61–1.53(m,1H),1.08(s,3H).

实施例31

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-(2,2,2-三氟乙基磺酰基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物31)

步骤1：

向中间体23(20mg，0.052mmol)在DCM(0.6mL)中的溶液中加入三乙胺(22μL，0.15mmol)，然后加入2,2,2-三氟乙烷磺酰氯(14mg，0.077mmol)，并将混合物在室温下振荡45min。蒸发挥发物，并使用制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到中间产物(10mg，36％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.91(M+H⁺)＝534.3

¹H NMR(600MHz,氯仿-d)δ8.34(s,1H),7.11(d,J＝3.8Hz,1H),6.50(d,J＝3.8Hz,1H),5.58(s,2H),4.15–4.11(m,1H),4.10(d,J＝13.9Hz,1H),3.77–3.68(m,4H),3.64(d,J＝13.8Hz,1H),3.56–3.52(m,2H),3.44–3.40(m,2H),3.20(d,J＝9.6Hz,1H),2.19–2.13(m,1H),1.99–1.92(m,1H),1.72–1.63(m,1H),1.19(s,3H),0.94–0.88(m,2H),-0.05(s,9H).

步骤2：

将步骤1的产物(10mg，0.019mmol)溶于DCM(0.6mL)和TFA(0.2mL)中，并将溶液在室温下振荡过夜。将混合物蒸发至干，并将残余物溶于MeCN(0.5mL)和乙二胺(0.1mL)中。将所得混合物在室温下振荡5h，蒸发挥发物，并使用制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例31(2.2mg，29％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.33(M+H⁺)＝404.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.67(br s,1H),8.10(s,1H),7.16(d,J＝3.5Hz,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,1H),4.01–3.90(m,2H),3.81–3.67(m,2H),3.55–3.40(m,3H),3.30–3.12(m,2H),3.06–2.97(m,1H),2.15–2.05(m,1H),1.84–1.77(m,1H),1.63–1.54(m,1H),1.06(s,3H).

实施例32

3-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-3-氧代-丙腈(化合物32)

如实施例46所述的那样制备，但以氰基乙酸(6.6mg，0.077mmol)为起始物。收率：1.2mg,7％。¹H NMR谱显示出对应于两个酰胺键旋转异构体的比率约为1:1的两组峰。

UPLC-MS:t_R＝0.38(M+H⁺)＝325.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.69(br s,1H),8.11(s,1H),7.17(dd,J＝3.7,1.1Hz,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,0.5H),6.58(d,J＝3.6Hz,0.5H),4.04–3.97(m,1H),3.96–3.84(m,3H),3.76–3.67(m,1H),3.66–3.61(m,1.5H),3.55(dd,J＝12.0,7.2Hz,0.5H),3.41–3.30(m,1.5H),3.22(d,J＝11.8Hz,0.5H),3.16(d,J＝10.0Hz,0.5H),3.05(d,J＝11.9Hz,0.5H),2.18–2.11(m,0.5H),2.08–2.02(m,0.5H),1.85–1.76(m,1H),1.52–1.43(m,1H),1.06(s,1.5H),1.04(s,1.5H).

实施例33

6-[(3aS,7aS)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈(化合物33)

向中间体24(111mg，0.227mmol)在DCM(4mL)中的溶液中加入TFA(0.3mL)，并将混合物在室温下振荡过夜。蒸发挥发物，将残余物溶于MeCN(2mL)中，并加入乙二胺(0.15mL，2.3mmol)。将混合物在室温下振荡3.5h，蒸发挥发物，并使用制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例33(38mg，47％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.56(M+H⁺)＝360.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.68(br s,1H),8.42(br s,1H),8.12(s,1H),7.78(brd,J＝8.8Hz,1H),7.17(dd,J＝3.6,2.3Hz,1H),6.62(d,J＝3.4Hz,1H),6.51(br s,1H),4.14–3.89(m,2H),3.85–3.57(m,3H),3.51–3.12(m,3H),2.33–2.15(m,1H),1.92–1.84(m,1H),1.55–1.46(m,1H),1.11(s,3H).

实施例34

6-[(3aR,7aR)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈(化合物34)

如实施例33所述的那样制备，但以中间体25(111mg，0.227mmol)为起始物。收率：36mg，44％。

UPLC-MS:t_R＝0.57(M+H⁺)＝360.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.68(br s,1H),8.42(br s,1H),8.12(s,1H),7.78(brd,J＝8.9Hz,1H),7.17(dd,J＝3.6,2.2Hz,1H),6.62(dd,J＝3.7,1.6Hz,1H),6.51(br s,1H),4.13–3.88(m,2H),3.85–3.58(m,3H),3.51–3.11(m,3H),2.31–2.15(m,1H),1.92–1.83(m,1H),1.54–1.46(m,1H),1.11(s,3H).

实施例35

4-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-2-(5-甲基磺酰基-2-吡啶基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物35)

向中间体23(50mg，0.13mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入2-氯-5-甲基磺酰基-吡啶(30mg，0.16mmol)和DBU(23μL，0.16mmol)。将混合物在50℃下加热3.5h，蒸发挥发物，并使用CombiFlash系统(4g硅胶柱，EtOAc:庚烷0:100→100:0)通过色谱法纯化残余物，得到SEM保护的中间体(70mg，定量)。将该物质溶于CH₂Cl₂(3mL)和TFA(0.3mL)中，在室温下搅拌过夜，并蒸发挥发物。将残余物溶于甲醇(2mL)和乙二胺(0.3mL)中。在室温下静置1h后，蒸发挥发物，并用水洗涤残余物。使粗产物悬浮于回流的EtOAc中，过滤并真空干燥，得到实施例35(1.7mg，3％收率)，为白色固体。

UPLC-MS:t_R＝0.51(M+H⁺)＝413.4

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.68(br s,1H),8.45(br s,1H),8.12(s,1H),7.83(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),6.63(dd,J＝3.7,1.5Hz,1H),6.54(br s,1H),4.12–3.94(m,2H),3.84–3.65(m,4H),3.52–3.35(m,2H),3.11(s,3H),2.24(br s,1H),1.92–1.85(m,1H),1.55–1.47(m,1H),1.12(s,3H).

实施例36

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-3-吡啶基]甲醇(化合物36)

向中间体28(5mg，0.016mmol)在DCM(0.6mL)中的溶液中加入TFA(0.2mL)，并将混合物在室温下振荡过夜。蒸发挥发物，并将残余物溶于甲醇(0.5mL)和乙二胺(0.15mL)中。在室温下振荡1h后，将混合物蒸发至干，并通过制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例36(0.7mg，18％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.36(M+H⁺)＝365.5

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.11(s,1H),7.94(dd,J＝4.9,1.9Hz,1H),7.50(dd,J＝7.2,1.9Hz,1H),7.16(d,J＝3.5Hz,1H),6.64–6.60(m,2H),4.49(d,J＝13.3Hz,1H),4.45(d,J＝13.3Hz,1H),4.03–3.97(m,1H),3.92(d,J＝13.7Hz,1H),3.83–3.77(m,2H),3.74(d,J＝13.6Hz,1H),3.57(dd,J＝10.4,5.5Hz,1H),3.50(d,J＝10.6Hz,1H),3.25(d,J＝10.6Hz,1H),2.12–2.06(m,1H),1.89–1.81(m,1H),1.58–1.49(m,1H),1.09(s,3H).

实施例37

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-3-吡啶基]甲醇(化合物37)

向中间体27(9mg，0.016mmol)在DCM(0.6mL)中的溶液中加入TFA(0.2mL)，并将混合物在室温下振荡2.5h。蒸发挥发物，并将残余物溶于甲醇(0.5mL)和乙二胺(0.15mL)中。在室温下振荡1.5h后，将混合物蒸发至干，并通过制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例37(3.8mg，55％收率)。

UPLC-MS:t_R＝0.61(M+H⁺)＝443.4

1H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.67(br s,1H),8.11(s,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.64(d,J＝2.5Hz,1H),7.16(d,J＝3.6Hz,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,1H),4.50(d,J＝13.7Hz,1H),4.47(d,J＝13.6Hz,1H),4.02–3.96(m,1H),3.91(d,J＝13.6Hz,1H),3.83–3.76(m,2H),3.73(d,J＝13.6Hz,1H),3.56(dd,J＝10.5,5.5Hz,1H),3.49(d,J＝10.6Hz,1H),3.24(d,J＝10.6Hz,1H),2.13–2.07(m,1H),1.88–1.80(m,1H),1.55–1.46(m,1H),1.09(s,3H).

实施例38-45和47

这些实施例是根据下面的亲核芳族取代和SEM去保护的一般程序制备的。

根据以下方法制备实施例38-45和47的化合物：在4mL螺旋盖小瓶中将中间体23(20mg，0.052mmol)和DBU(16μL，0.11mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液加入到相应杂芳基卤化物(1.2当量)中，并在下面指出的温度和时间下振荡混合物。通过制备型HPLC(碱性)纯化反应混合物，得到SEM保护的中间体，将其溶于CH₂Cl₂(0.5mL)和TFA(0.5mL)中。在室温下静置1h后，蒸发挥发物，并将残余物溶于甲醇(0.5mL)和乙二胺(0.1mL)中。在室温下静置6h后，有沉淀物形成。通过过滤将其收集，用一滴甲醇洗涤并真空干燥，得到呈白色或黄色固体的纯产物。替代地，在那些没有沉淀物形成的情况下，通过制备型HPLC(碱性)纯化反应混合物，得到纯产物。

实施例38

4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2-(4-甲基磺酰基苯基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物38)

由中间体23和1-氟-4-甲基磺酰基-苯(11mg，0.063mmol)在80℃加热2h，然后在100℃下加热过夜来制备。通过制备型HPLC(碱性)纯化标题化合物。收率：9.7mg，46％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.13(s,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),6.59(d,J＝8.9Hz,2H),4.04–3.96(m,1H),3.92(d,J＝13.8Hz,1H),3.88–3.80(m,1H),3.76(d,J＝13.7Hz,1H),3.58(dd,J＝10.2,7.2Hz,1H),3.39–3.25(m,2H),3.09(d,J＝10.0Hz,1H),3.03(s,3H),2.30–2.19(m,1H),1.96–1.83(m,1H),1.59–1.46(m,1H),1.12(s,3H).

实施例39

4-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-2-嘧啶-4-基-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-5-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物39)

由中间体23和4-氯嘧啶(7.1mg，0.062mmol)在30℃下加热1h 45min，然后在50℃下加热2h制备。通过制备型HPLC(碱性)纯化标题化合物。收率：13.5mg，78％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.62(br s,1H),8.41(br s,1H),8.12(s,1H),8.10(d,J＝6.2Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),6.43(br s,1H),4.13–3.87(m,2H),3.83–3.53(m,4H),3.48–2.98(m,2H),2.29–2.14(m,1H),1.94–1.81(m,1H),1.56–1.42(m,1H),1.10(s,3H).

实施例40

6-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-4-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物40)

由中间体23和6-氯-4-甲基-吡啶-3-甲腈(9.4mg，0.062mmol)在30℃下加热1h45min，然后在50℃下加热2h来制备。收率：11.5mg，60％。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.72(br s,1H),8.32(br d,1H),8.12(s,1H),7.18(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),6.43(br d,1H),4.11–4.02(m,1H),3.99(d,J＝13.8Hz,1H),3.80–3.73(m,2H),3.70(d,J＝13.8Hz,1H),3.66–3.53(m,1H),3.47–3.39(m,1H),3.30–3.21(m,1H),2.38–2.12(m,4H),1.92–1.82(m,1H),1.54–1.43(m,1H),1.10(s,3H).

实施例41

2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]嘧啶-5-甲腈(化合物41)

由中间体23和2-氯嘧啶-5-甲腈(8.6mg，0.062mmol)在30℃下加热1h 15min来制备。收率：13.8mg，74％。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.72(br s,1H),8.74(d,J＝2.9Hz,1H),8.68(d,J＝2.9Hz,1H),8.12(s,1H),7.18(d,J＝3.6Hz,1H),6.63(d,J＝3.6Hz,1H),4.13–4.06(m,1H),4.05(d,J＝13.8Hz,1H),3.78(dd,J＝12.1,7.0Hz,1H),3.75–3.71(m,1H),3.69(d,J＝13.9Hz,1H),3.57(dd,J＝12.1,5.0Hz,1H),3.46(d,J＝12.0Hz,1H),3.31(d,J＝12.0Hz,1H),2.26–2.19(m,1H),1.90–1.82(m,1H),1.52–1.44(m,1H),1.12(s,3H).

实施例42

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]哒嗪-3-甲腈(化合物42)

由中间体23和6-氟哒嗪-3-甲腈(7.6mg，0.062mmol)在30℃下加热1h来制备。收率：8.4mg，45％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.13(s,1H),7.79(d,J＝9.5Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.91(br d,J＝9.5Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),4.12–3.91(m,2H),3.89–3.13(m,6H),2.35–2.20(m,1H),1.99–1.82(m,1H),1.63–1.47(m,1H),1.14(s,3H).

实施例43

5-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡嗪-2-甲腈(化合物43)

由中间体23和5-氯吡嗪-2-甲腈(8.6mg，0.062mmol)在30℃下加热2h 20min，然后在50℃下加热1h来制备。收率：10.6mg，57％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.65(br s,1H),8.50(br s,1H),8.12(s,1H),8.03(brs,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),4.18–3.88(m,2H),3.87–3.64(m,2H),3.64–3.41(m,2H),3.38–3.22(m,2H),2.39–2.13(m,1H),1.97–1.82(m,1H),1.64–1.45(m,1H),1.12(s,3H).

实施例44

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物44)

由中间体23和6-氯-5-甲基-吡啶-3-甲腈(9.4mg，0.062mmol)在30℃下加热1h来制备。收率：9.2mg，48％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.27(d,J＝2.3Hz,1H),8.12(s,1H),7.58(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),4.09–3.88(m,3H),3.87–3.68(m,3H),3.64(d,J＝11.2Hz,1H),3.38(d,J＝11.2Hz,1H),2.36(s,3H),2.19–2.06(m,1H),1.93–1.77(m,1H),1.59–1.42(m,1H),1.10(s,3H).

实施例45

6-[(3aR*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-2-甲基-吡啶-3-甲腈(化合物45)

由中间体23和6-氯-2-甲基-吡啶-3-甲腈(9.4mg，0.062mmol)在30℃下加热2h20min，然后在50℃下加热1h来制备。收率：8.1mg，42％。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ11.66(br s,1H),8.12(s,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),6.34(br s,1H),4.15–3.87(m,2H),3.86–3.54(m,2H),3.47–3.07(m,4H),2.43(s,3H),2.30–2.11(m,1H),1.95–1.80(m,1H),1.58–1.43(m,1H),1.10(s,3H).

实施例47

6-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]吡啶-3-甲腈(化合物47)

由中间体23和6-氯吡啶-3-甲腈(7.9mg，0.057mmol)在30℃下加热1h制备。将粗固体用MeCN研磨，得到标题化合物。收率：2.4mg，13％。

UPLC-MS:t_R＝0.59(M+H⁺)＝360.3

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.68(br s,1H),8.42(br s,1H),8.12(s,1H),7.78(brd,J＝7.8Hz,1H),7.17(d,J＝3.5Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),6.51(brs,1H),4.15–3.89(m,2H),3.85–3.53(m,3H),3.50–3.12(m,3H),2.30–2.16(m,1H),1.91–1.84(m,1H),1.55–1.45(m,1H),1.11(s,3H).

实施例46

1-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-羰基]环戊烷甲腈(化合物46)

向中间体23(20mg，0.052mmol)在DMF(0.6mL)中的溶液中加入1-氰基环戊烷羧酸(10.8mg，0.0774mmol)、DIPEA(27μL，0.15mmol)和HATU(29mg，0.077mmol)。将混合物在30℃下振荡1h，蒸发挥发物，并将残余物溶于DCM(0.5mL)和TFA(0.1mL)中。将混合物在室温下振荡过夜，蒸发挥发物，并将残余物从甲醇中共蒸发以除去过量的TFA。然后将残余物溶于甲醇(0.5mL)中，加入乙二胺(0.1mL)，并将混合物在室温下振荡1h。蒸发挥发物，并通过制备型HPLC(酸性)纯化残余物，得到实施例46(1.3mg，6％收率)。¹H NMR谱显示出对应于两个酰胺键旋转异构体的比率约为1:1的两组峰。

UPLC-MS:t_R＝0.58(M+H⁺)＝379.4

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.69(br s,0.5H),11.67(br s,0.5H),8.12(s,0.5H),8.11(s,0.5H),7.17(dd,J＝3.7,1.8Hz,1H),6.66(d,J＝3.6Hz,0.5H),6.61(d,J＝3.6Hz,0.5H),4.21–4.13(m,1H),4.10(d,J＝13.8Hz,0.5H),3.98–3.87(m,1.5H),3.81–3.73(m,0.5H),3.72–3.67(m,1H),3.67–3.57(m,1.5H),3.54(d,J＝13.8Hz,0.5H),3.47–3.39(m,1H),3.29(d,J＝12.2Hz,0.5H),3.14(d,J＝12.2Hz,0.5H),2.35–2.26(m,1H),2.25–2.05(m,4H),1.91–1.80(m,1H),1.76–1.58(m,4H),1.57–1.49(m,0.5H),1.48–1.40(m,0.5H),1.09(s,1.5H),1.08(s,1.5H).

JAK激酶测定：

人杆状病毒表达的JAK1、2、3和TYK2购自Carna Biosciences，Inc。所有四种纯化的酶都仅含有催化结构域。JAK1(aa 850-1154)和TYK2(aa 871-1187)用N-末端融合的GST-标签表达，JAK2和JAK3用N-末端融合的His-标签表达。

使用来自Cisbio HTRFKinEASE TK试剂盒的TK底物-生物素，在基于HTRF的测定中测量合成肽的磷酸化受到的抑制。首先，将2μl TK溶液(含有TK底物-生物素的激酶缓冲液[来自HTRFKinEASE TK试剂盒的1x酶促缓冲液，1mMDTT])加入到含有1μl预先稀释的化合物(最终测定浓度DMSO:0.75％)的板中。然后，将5μl激酶-ATP混合物(在激酶缓冲液中配制)加入到孔中，并将板在室温下孵育20-30min。对于所有四种激酶，使用对应于ATP的Km的ATP浓度。缓冲液、底物、激酶和ATP的最终浓度为：JAK1：50mM Hepes缓冲液pH 7.0，0.01％BSA，10mM MgCl₂，1mM DTT，7μM ATP，50nM SEB，1μM TK底物-生物素和5ng JAK1；JAK2：50mMHepes缓冲液pH 7.0，0.01％BSA，5mMMgCl₂，1mM DTT，4μM ATP，1μM TK底物-生物素和0.1ngJAK2；JAK3：50mM Hepes缓冲液pH 7.0，0.01％BSA，5mM MgCl₂，1mM DTT，2μM ATP，1μM TK底物-生物素和0.3ng JAK3；TYK2：50mM Hepes缓冲液pH 7.0，0.01％BSA，5mM MgCl₂，1mMDTT，13μM ATP，50nM SEB，1μM TK底物-生物素和0.8ng TYK2。此后，通过加入4μl检测混合物(终浓度：50mM Hepes缓冲液pH7.0，0.01％BSA，0.8M KF，20mM EDTA，42nM链霉亲和素-XL665和1:400STKAb Cryptate)终止激酶反应，并将板在黑暗中孵育过夜。使用Envision读板器读取HTRF信号。

在表1中列出了选择的JAK激酶抑制活性。

表1.JAK激酶抑制数据

为了评估体外代谢稳定性，使用液体处理机器人(Hamilton Microlab Star)将化合物(0.5μM)一式两份地与在磷酸盐缓冲液中的人肝微粒体(0.5mg/mL)和NADPH一起在96孔板中孵育40min(37℃)。在0min、5min、10min、20min和40min取等分试样，并将其分配到冷乙腈中，以便停止反应。将板离心30分钟，然后使用与飞行时间质谱仪(AB Sciex API5600)联接的液相色谱分析样品。利用化合物随时间的耗尽估计消除速率常数，由此计算表观内在清除率Clapp，并且值列于表2中。

表2.人肝微粒体Cl_app数据

Claims

1.根据通式I的化合物

其中

R₁表示甲基或乙基；

n是1或2；

R₂选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

2.根据权利要求1所述的化合物，其具有通式I(a)，

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R₁表示乙基且n是2。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中R₂选自由氢、氰基、-SO₂R_a、-SO₂NR_bR_c、–C(O)R_b、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻唑基和噻二唑基组成的组，其中所述苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻唑基和噻二唑基任选地被一个或多个独立地选自R₃的取代基取代。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R₂选自由氰基和-SO₂NH₂组成的组。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R₃表示由氰基、卤素、甲基、羟甲基和-SO₂CH₃组成的组。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R_a选自甲基和三氟乙基。

8.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R_b和R_c各自独立地选自氢、甲基和氰基甲基。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其选自

[2-[(3aS*,7aS*)-3a-甲基-5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1,3,4,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基]-5-溴-3-吡啶基]甲醇、

或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-磺酰胺或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其选自(4aR,8aS)-8a-乙基-7-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3,4,4a,5,6,8-六氢-1H-2,7-二氮杂萘-2-甲腈或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其用作药物。

13.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其用于防治和/或治疗免疫系统疾病，诸如自身免疫疾病，或与免疫系统失调有关的疾病。

14.根据权利要求13使用的化合物，其用于防治和/或治疗选自银屑病和特应性皮炎的疾病。

15.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其用于治疗疾病，所述疾病对蛋白酪氨酸激酶的JAK家族的蛋白酪氨酸激酶，诸如JAK1、JAK2、JAK3或TYK2蛋白酪氨酸激酶的抑制有反应。

16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物以及药学上可接受的媒介物或赋形剂或一种或多种药学上可接受的载体。

17.根据权利要求16所述的药物组合物，其与一种或多种其它治疗活性化合物在一起。

18.一种预防、治疗或改善免疫系统疾病，诸如自身免疫疾病，或与免疫系统失调有关的疾病的方法，所述方法包括将有效量的一种或多种根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，任选地与药学上可接受的载体或一种或多种赋形剂一起，任选地与其它治疗活性化合物组合施用给罹患至少一种所述疾病的人。