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CN109982560A - 同时基因编辑和单倍体诱导 - Google Patents

同时基因编辑和单倍体诱导 Download PDF

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CN109982560A
CN109982560A CN201780072152.4A CN201780072152A CN109982560A CN 109982560 A CN109982560 A CN 109982560A CN 201780072152 A CN201780072152 A CN 201780072152A CN 109982560 A CN109982560 A CN 109982560A
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CN
China
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plant
haploid
editing
gene
sequence
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CN201780072152.4A
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T·凯利海尔
阙求登
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Syngenta Crop Protection AG Switzerland
Original Assignee
Syngenta Participations AG
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Publication date
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Abstract

本发明披露的主题涉及使用单倍体诱导品系(无论现有的还是创造的)和转化所述单倍体品系，使得所述品系编码能够编辑基因的细胞机器。所转化的单倍体诱导品系被用作两种植物之间杂交中的亲本。在授粉期间，亲本配子融合以形成胚；并且所述基因编辑机器此时也被递送至所述胚。在胚发育期间，一组亲本染色体消失并且所述基因编辑机器对剩余组的染色体起作用。因此，从所述杂交中产生了具有经编辑的基因的至少一种单倍体子代。

Description

同时基因编辑和单倍体诱导
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域，尤其是农业生物技术和基因编辑以及植物育种。本披露主题涉及使用单倍体诱导品系(无论是现存的还是创造的)并且转化该单倍体诱导品系使得其含有编码能够编辑基因的细胞机器的DNA。
序列表
本申请附有一个序列表，所述序列表定名为81189_ST25.txt，创建于2017年12月4日，大小为约334千字节。本序列表通过引用以其全文并入本文。本序列表随同此申请经由EFS-Web提交，并且符合37C.F.R.§1.824(a)(2)-(6)和(b)。
背景技术
定向诱变(也称为“基因编辑”)是作物育种中十分重要的技术。现在有许多方法编辑具体的基因靶，包括CRISPR、TALEN、兆核酸酶、和锌指。向植物中引入编辑机器的一个方法是使用农杆菌或基因枪转化植物组织。在转化中，将编辑该编辑机器(例如，CAS9和指导RNA)的DNA引入植物愈伤组织、种子或胚组织。然后回收到稳定转化的植物(“事件”)，这是任选地在选择性标记的帮助下。但是因为组织培养是基因型依赖性的，这一途径将不会对所有作物都有用，或者甚至不会对它起作用的作物的所有品种都有用。这些被称为转化顽固性作物或品种。这些作物或品种可能因为它们的性能而受到重视，但是它们不能被转化并且因此不能通过转化而直接编辑，这对于生物技术来说是一个挑战。对于顽固性品种，可以使用两种替代性方法中的一种来引入所希望的突变。第一，可通过性状基因渗入来引入编辑。这一途径是昂贵、费力且费时的。它还意味着由遗传连锁导致的最终产物的不纯——即，在渗入的编辑周围将会有连接块，其含有来自可转化供体品系的基因和等位基因。如果那些基因或等位基因中的任一者影响到所述转化顽固性品系(也可被称为“优良品系”)的性能，这一连接可以是组织。第二，可以在无组织培养的情况下，将编辑机器过渡性地引入生长的植物中，例如用于拟南芥转化的花浸渍。所述挑战是确保编辑最终出现在有助于种系的细胞中，因此它们被传递至子代种子中。在作物中，为了这样做，有少数几种已确立或例行的方法。
下面我们示出在单倍体诱导期间过渡性地引入编辑机器的新方法。单倍体诱导(“HI”)是一类植物现象，其特征在于在受精期间或之后的某一时间(常常在早期胚发育期间)从胚中缺失了一个亲本的染色体组(单倍体诱导物亲本的染色体)。如果诱导物品系被用作杂交中的雄性，单倍体诱导也被称为单雌生殖，或如果诱导物品系被用作杂交中的雌性，单倍体诱导也被称为单雄生殖。已经在多个植物物种中研究了单倍体诱导，例如高梁、大麦、小麦、玉米、拟南芥、和许多其他物种。
普遍地是，在单倍体诱导期间，在诱导杂交中使用的两个亲本品系均是二倍体，因此它们的配子(卵细胞和精细胞)是单倍体。单倍体诱导通常是降低诱导物品系的外显性状的媒介，因此所产生的子代，依赖于物种或情形，可以是二倍体(如果没有发生基因组缺失)或单倍体(如果事实上发生了基因组缺失)。如果与单倍体诱导物杂交的亲本品系不是二倍体，而是四倍体、六倍体或更高倍性的其他植物，术语单倍体诱导有些用词不当，因为产生的“单倍体”子代将具有配子染色体数，并且因此不是真正的单倍体，而是二倍体(如果亲本是四倍体)或三倍体(如果亲本是六倍体)以及等等。因此，如本文所使用的，“单倍体”具有亲本一半的染色体数量；因此二倍体生物(例如，玉米)的单倍体示出单倍性；四倍体生物(例如，黑麦草)的单倍体示出二倍性；六倍体生物(例如，小麦)的单倍体示出三倍性。
单倍体诱导可以在自花授粉或同一物种的两个品系的互交期间发生，或它可以在远缘杂交期间发生，在这种情况下它可以被看做是杂交屏障，阻止了种间杂交种的形成。在玉米中，最常使用的诱导单倍体的方法是通过使用种内单倍体诱导物雄性品系，其主要由1号染色体的区域内的重排、突变、和/或重组、插入或缺失引发，尤其是MATRILINEAL(MATL)基因，也称为NOT LIKE DAD1(NLD1)和磷脂酶A1(PLA1)(最显著的例外是ig型单倍体诱导，其是3号染色体上的INDETERMINATE GAMETOPHYTE1基因中的突变的结果)。在小麦中，最常见的诱导单倍体的方法是通过与玉米花粉的远缘杂交-无论亲本基因型或谱系如何，这在几乎所有与几乎所有玉米花粉杂交的小麦中有用。
HI玉米品系在1号染色体上含有数量性状基因座(“QTL”)，其负责至少66％的单倍体诱导变异。当它渗入不同背景时，QTL以不同的比率导致单倍体诱导。种子工业中使用的所有玉米单倍体诱导物品系都是建立的HI品系(称为Stock6)的衍生物，并且全部都具有单倍体诱导物1号染色体QTL突变。
在玉米中，单倍体种子或胚是通过在单倍体诱导物雄性(即“单倍体诱导物花粉”)与实际上人们选择的任何穗之间进行杂交而特异性产生的-所述穗可以是任何近交种、杂交种或其他种质。当单倍体诱导物花粉DNA未通过胚的第一次细胞分裂完全传递和/或维持时产生单倍体。所产生的表型不完全外显，其中一些胚珠含有单倍体胚，并且其他含有二倍体胚、非整倍体胚、嵌合胚或败育胚。单倍体籽粒具有仅含有母本DNA的胚加正常三倍体胚乳。在单倍体诱导后，使用表型或遗传标记筛选典型地将单倍体胚或种子从二倍体和非整倍体同胞中分离出来，并使其生长或培养成单倍体植物。然后将这些植物自然地或经由化学操作(例如，使用抗微管剂例如秋水仙碱)转化成双单倍体(DH)植物，所述植物然后产生近交种子。
通过使用双单倍体(DH)植物协助植物育种。DH植物的产生使得植物育种者能够获得近交品系而无需多代近交，从而减少了产生纯合植物所需的时间。DH植物为植物育种者提供了宝贵的工具，特别是用于产生近交品系、QTL定位、细胞质转换、性状基因渗入以及用于高通量性状改良的F2筛选。由于一代基本上产生了纯合品系，因此节约了大量的时间，否定了对多代单一种子血统(传统近交)的需要。具体地，因为DH植物是完全纯合的，它们非常适合于数量遗传学研究。单倍体种子的产生对于双单倍体育种过程至关重要。当用来自雌核发育诱导物(如Stock 6和Stock 6衍生的品系)的花粉受精时，在母本种质上产生单倍体种子。
在这里，我们描述了一个新方法，在所述方法中体内单倍体诱导过程可以被共同选择以通过将其包括在单倍体诱导物亲本中(无论作为转基因稳定整合、或过渡性地表达)将编辑机器过渡性地引入任何种质。在几乎任何作物中通过远缘杂交或从头单倍体诱导例如通过CENH3突变(即，CENH3-修饰的单倍体诱导物；参见，例如，WO 2017/004375，通过引用以其全文并入本文)或通过脂质喷雾(参见P.C.T.专利申请号PCT/US2016/62548，通过引用以其全文并入本文)可以完成同时编辑加上单倍体诱导。我们示出了在玉米(大田玉米和甜玉米)中的HI的实例，使用了单倍体诱导物雄性作为编辑供体品系。此外，我们示出了拟南芥中的HI的实例，使用了CENH3-修饰的单倍体诱导物品系。
我们还示出了小麦中HI的实例，使用了玉米花粉作为远缘杂交中的编辑供体品系。在小麦、稻、大麦、芸苔属和其他作物中，单倍体诱导的途径会是使用通过远缘杂交诱导单倍体的花粉供体。例如，可以在小麦上使用玉米花粉，在小麦上使用粟花粉，在其他大麦物种上使用大麦花粉，或任何其他的远缘杂交方法。在雌核发育单倍体诱导的那些情况下，优选地是雄性品系含有编辑机器，因为父本(花粉衍生的)DNA在单倍体诱导过程中被消除。在促成雄性性状的单倍体诱导的情况下，例如在玉米的ig1系统中或通过在任何玉米中改变的CENH3(其可通过雄性或雌性起作用)，所述编辑机器最佳地会是出现在母本中，因为雌性染色体在单倍体诱导过程中被消除。
在同时编辑加上单倍体诱导中，目标是在无组织培养的情况下，快速和成本效益高地编辑作物和优良品系(“编辑目的品系”)。接受编辑的品系可以是优良种质，并且编辑机器本身会是在单倍体诱导过程中被消除的。同时，产生了经编辑的双单倍体品系。
发明内容
组织培养顽拗性对作物间的快速优良品系编辑是一个主要的挑战。使用单倍体诱导品系将定向诱变机器递送至优良品系并且同时诱导单倍体表示对这一主要障碍的克服。下一代育种计划可能会依赖于这一过程。
通过诱导物品系递送编辑机器。编辑机器最常是DNA结合蛋白，其在某些情况下与RNA结合，并且在某些情况下也与DNA结合。组成编辑机器的DNA、RNA和蛋白质由诱导物品系编码并且出现在诱导物品系中，因为它们已经被稳定地插入到诱导物中，例如，通过基因枪或农杆菌介导的转化。在其他实例中，编辑机器在受精之前被过渡性地引入配子体中(通过外源性应用)或过渡性地在配子体中表达。受精之后，在消除诱导物染色体之前或过程中，在非诱导物靶基因中通过编辑机器制备编辑。结果是单倍体胚或植物或种子，其含有仅来自非诱导物亲本的染色体组，其中该染色体组含有已编辑的DNA序列。可以鉴定、培养这些经编辑的单倍体，并且它们的染色体优选地通过秋水仙碱或其他的有丝分裂抑制剂加倍。然后这一品系可直接用于下游育种计划。
在一个实施例中，本发明提供了编辑植物的基因组DNA的方法。该方法通过以下完成：取第一植物—其是单倍体诱导植物并且其还编码进其DNA中(完成编辑必须的机器)(例如，Cas9酶和指导RNA)—和使用该第一植物的花粉对第二植物授粉。第二植物是待编辑的植物。从该授粉事件中，产生了子代(例如，胚或种子)；至少其中一个将是单倍体种子。这一单倍体种子将仅含有第二植物的染色体；第一植物的染色体已经消失(已被消除、消失或降解)，但是在这样做之前，第一植物的染色体允许基因-编辑机器被表达。可替代地，并且不希望受理论束缚，第一植物在通过花粉管授粉时递送已表达的编辑机器。或者，在单倍体诱导物品系是杂交中的雌性时的情况下，在使用“野生型”或非单倍体诱导花粉粒受精时单倍体诱导植物的卵细胞含有存在并且或许已被表达的编辑机器。通过这些途径中的任一种，通过杂交获得的单倍体子代将还具有经编辑的基因组。
在一方面，编辑机器是任意DNA修饰酶，但优选地是定点核酸酶。定点核酸酶优选地是基于CRISPR的，但是还可是兆核酸酶、转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)、或锌指核酸酶。在本发明中使用的核酸酶可以是Cas9、Cfp1、dCas9-FokI、嵌合FEN1-FokI。在一方面，DNA修饰酶是定点碱基编辑酶例如Cas9-胞嘧啶脱氨酶或Cas9-腺嘌呤脱氨酶，其中Cas9可具有其灭活的核酸酶活性的一个或两个，即，与胞嘧啶脱氨酶或腺嘌呤脱氨酶融合的嵌合Cas9切口酶(nCas9)或失活的Cas9(dCas9)。任选的指导RNA在旨在被编辑的特定位点靶向基因组。在一方面，任选的指导RNA包含18-21个核苷酸的序列，其与SEQ ID NO:2、4、8、21、23、25、29、32和33中的任一个具有同源性。
一旦获得了经编辑的单倍体子代，它可任选地通过染色体加倍剂(例如秋水仙碱、拿草特、滴停平(dithipyr)、氟乐灵或另一种已知的抗微管剂)使其染色体加倍。
在一个实施例中，第一植物是单子叶植物或双子叶植物。第一植物的方面包括玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。在一个实施例中，第二植物是单子叶植物或双子叶植物。第二植物的方面包括玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。在一个实施例中，第一植物是与第二植物不同物种的单子叶植物或双子叶植物。例如，在一方面，第一植物是玉米并且第二植物是小麦。在第二方面，第一植物是小麦并且第二植物是玉米。在另一个实施例中，第一植物是玉米植物，其选自和/或衍生自品系Stock 6、RWK、RWS、UH400、AX5707RS、NP2222-matl或若干其他已知的HI品系中的任一种。在又一个实施例中，第一植物包含CENH3基因、ig1基因中的突变、或赋予亲本-单倍体诱导系统的另一突变。在另一个实施例中，第一植物是稻植物，其MATL基因被修饰或敲除，使它成为单倍体诱导物品系。
在另一个实施例中，第一植物不必须地是单倍体诱导物，然而第一植物包含编辑基因编辑机器所必须的基因。在该实施例中，通过在授粉期间、在紧接授粉之前或紧随授粉之后，通过基于化合物产生了单倍体诱导。在一方面，组合物包含脂质或磷脂酶抑制剂。在第二方面，组合物包含甲基α-亚油酰基氟膦酸酯(MALFP)、亚油酸乙酯(LLAEE)、亚油酸(LLA)、玉米油、二硬脂酰-磷脂酰胆碱(DSPC)、甲基花生酰基氟膦酸酯(MAFP)、棕榈基三氟甲基酮(PACOCF3)、花生酰基三氟甲基酮(AACOCF3)、海绵类脂、亚麻酸乙酯(LNAEE)、亚麻酸乙酯(LNAEE)、油酸甲酯(OAME)、油酸乙酯(OAEE)、棕榈酸乙酯(PAEE)、棕榈油酸乙酯(PLAEE)、亚麻籽油、玉米油、α-亚麻酸(aLNA)、γ-亚麻酸(gLNA)、油酸、花生四烯酸、硬脂酸、9(Z)-11(E)-共轭亚油酸、或2-油酰-1-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺。
序列表中序列的简要说明
SEQ ID NO:1是载体23396的核苷酸序列。
SEQ ID NO:2是编码用于在玉米中编辑VLHP1的gRNA序列的核苷酸序列。
SEQ ID NO:3是载体23399的核苷酸序列。
SEQ ID NO:4是用于在玉米中编辑GW2-2的gRNA序列。
SEQ ID NO:5是载体22808的核苷酸序列，其包含TALEN构建体。
SEQ ID NO:6是22808的TALEN的靶序列。
SEQ ID NO:7是载体23123的核苷酸序列，其包含Cas9构建体。
SEQ ID NO:8是用于在玉米中编辑MATL的gRNA。
SEQ ID NO:9是NP2222中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:10是Stock6中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:11是USR01350333-3等位基因1中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:12是USR01350333-3等位基因2中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:13是USR01350344-2等位基因1中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:14是USR01350344-2等位基因2中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:15是USR01350343-1等位基因1中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:16是USR01350328-1等位基因1中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:17是USR01350337-2等位基因1中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:18是USR01350337-2等位基因2中MATL的相关部分的核苷酸序列。
SEQ ID NO:19是cDNA野生型MATL的核苷酸序列。
SEQ ID NO:20是载体23397的核苷酸序列。
SEQ ID NO:21是用于在玉米中编辑VLHP2的gRNA序列。
SEQ ID NO:22是载体23398的核苷酸序列。
SEQ ID NO:23是用于在玉米中编辑GW2-1的gRNA序列。
SEQ ID NO:24是载体23763的核苷酸序列。
SEQ ID NO:25是在小麦中的VLHP1的gRNA序列。
SEQ ID NO:26是TaVLHP2的小麦VLHP靶序列。
SEQ ID NO:27是TaVLHP3的小麦VLHP靶序列。
SEQ ID NO:28是用于编辑的在ZmVLHP2-03中的靶序列。
SEQ ID NO:29是在ZmVLHP2-03中的经编辑的序列。
SEQ ID NO:30是用于在ZmPYL-D中产生E149L突变的修复供体模板序列。
SEQ ID NO:31是载体23136的核苷酸序列。
SEQ ID NO:32是载体23136的gRNA。
SEQ ID NO:33是稻PLA基因Os03g27610的核苷酸序列。
SEQ ID NO:34是载体24038的核苷酸序列。
SEQ ID NO:35是载体24039的核苷酸序列。
SEQ ID NO:36是载体24079的核苷酸序列。
SEQ ID NO:37是载体24091的核苷酸序列。
SEQ ID NO:38是载体24094的核苷酸序列。
SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:97是在鉴定的PCR Taqman测定中使用的引物和探针。
SEQ ID NO:98是载体24075的核苷酸序列。
附图说明
图1示出USR01350334-3:二倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在200处为主峰，在400处为第二波峰)。
图2示出USR01350333-3:单倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在100处为主峰，在200处为第二波峰)。
图3示出USR01350333-10:二倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在200处为主峰，在400处为第二波峰)。
图4示出USR01350344-2:单倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在100处为主峰，在200处为第二波峰)。
图5示出USR01350343-1:单倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在100处为主峰，在200处为第二波峰)。
图6示出USR01350341-1:二倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在200处为主峰，在400处为第二波峰)。
图7示出USR01350328-1:单倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在100处为主峰，在200处为第二波峰)。
图8示出USR01350321-3:二倍体的倍性分析(流式细胞术)数据(在200处为主峰，在400处为第二波峰)。
图9是载体23396(SEQ ID NO:1)的示意图，载体23396用于将玉米未成熟的胚经农杆菌-介导的转化以在ZmVLHP1基因中产生靶向突变。xZmVLHP-01：指导RNA(gRNA)序列(5’-GCAGGAGGCGTCGAGCAGCG-3’，SEQ ID NO:2)；rsgRNAZmVLHP-01：单指导RNA(sgRNA)，其包含gRNA、tracRNA和PolIII终止序列。cPMI：PMI选择性标记基因；cCas9：Cas9核酸酶基因；RB：T-DNA右边界；LB：T-DNA左边界；tNOS：胭脂碱合成酶终止子。cSpec：大观霉素抗性基因。
图10是载体23399(SEQ ID NO:3)的示意图，载体23399用于将玉米未成熟的胚经农杆菌-介导的转化以在ZmGW2基因中产生靶向突变。xZmGW2-02：指导RNA(gRNA)序列(5’-AAGCTCGCGCCCTGCTACCC-3’，SEQ ID NO:4)；rsgRNAZmGW2-02：单指导RNA(sgRNA)，其包含gRNA、tracrRNA和PolIII终止序列。cPMI-09：PMI选择性标记基因；cCas9-01：Cas9核酸酶基因；RB：T-DNA右边界；LB：T-DNA左边界；tNOS：胭脂碱合成酶终止子。cSpec：大观霉素抗性基因。
图11示出经编辑的单倍体甜玉米品系JSER82A056的倍性测定并且图12示出经编辑的单倍体甜玉米品系JSER82A063的倍性测定。通过与携带CRISPR-Cas9表达载体23399的转基因基因座的RWKS单倍体诱导品系杂交，获得了这些品系。
图13示出在单倍体甜玉米品系JSER82A063中的GW2-02靶位点编辑的测序确认。将与预测的Cas9切割位点相邻的单碱基C删除。
图14示出野生型对照的倍性分析，并且图15示出经编辑的单倍体小麦品系JSWER30A22的倍性分析。
图16示出在单倍体小麦品系JSWER30A22中的TaVLHP1-4B靶位点编辑的测序确认。底部的图示出紧接着预测的Cas9切割位点的下游的TaVLHP1-4B序列的97bp被删除。97bp-缺失的序列用2个箭头做了标记。
图17示出如从携带载体24038、24039、24079、24091和24094的T-DNA的转基因玉米T0植物中收集的花粉所测量的花粉表达，其用于给去雄的春季小麦品系AC-Nanda授粉。在花粉中该表达高，与在许多玉米和小麦实例中使用的甘蔗泛素启动子相比，在携带T-DNA载体24038、24039和24079的植物中平均更高约100倍。当与携带MATRILINEAL启动子构建体(24094和24091)的花粉相比时，该表达在来自含有载体24038、24039和24079的植物的花粉中也更高。
图18示出二倍体对照(亲本USR01424135)的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“2”位置上。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图19示出二倍体对照(亲本USR01431603)的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“2”位置上。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图20示出二倍体对照(亲本USR01431609)的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“2”位置上。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图21示出来自板1033、孔C3(USR01424135X Ler-427)的经编辑的单倍体的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“1”位置，其说明它是单倍体。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图22示出来自板1033、孔E4(USR01424135X Ler-437)的经编辑的单倍体的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“1”位置，其说明它是单倍体。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图23示出来自板1046、孔H12(USR01431609X Ler-123)的经编辑的单倍体的倍性分析直方图。第一个峰位于对数X-轴的“1”位置，其说明它是单倍体。因为这是来自拟南芥的叶组织，我们看到多个峰，其说明核内复制的正常水平。
图24示出亲本#USR01424135和来自通过拟南芥兰茨贝格(Landsberg erecta)花粉异型杂交的所有测序的经编辑的单倍体中的GL1靶位点序列突变。显然，制造的精确的编辑在不同的单倍体中是不同的。
定义
虽然认为以下术语可以很好地为本领域的普通技术人员所理解，提出以下定义是为了便于解释本申请披露的主题。
除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语旨在具有与本领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本文采用的技术的参考文献旨在参考本领域中通常理解的技术，包括对本领域的普通技术人员而言很清楚的那些技术的变化和/或等效技术的替换。虽然认为以下术语可以很好地为本领域的普通技术人员所理解，提出以下定义是为了便于解释本申请披露的主题。
根据长期存在的专利法公约，在本申请(包括权利要求书)中使用的术语“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”是指“一个/种或多个/种”。例如，短语“一个细胞”是指一个或多个细胞，并且在一些实施例中可以是指组织和/或器官。类似地，短语“至少一个”当在本文中用于指代实体时，是指例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100个或更多个该实体，包括但不限于1与100之间的所有整数值以及大于100的整数。
除非另外指明，本说明书和权利要求书中使用的表示成分的量、反应条件等的所有数字应被理解为在所有情况下用术语“约”来修饰。如本文所使用的术语“约”，当指代可测量的值例如质量、重量、时间、体积、浓度或百分比的量时，意味着涵盖在一些实施例中与规定量相比±20％的变化、在一些实施例中与规定量相比±10％的变化、在一些实施例中与规定量相比±5％的变化、在一些实施例中与规定量相比±1％的变化、在一些实施例中与规定量相比±0.5％的变化、以及在一些实施例中与规定量相比±0.1％的变化，因为此类变化适合于执行所披露的方法和/或使用所披露的组合物、核酸、多肽等。因此，除非相反地指出，在本说明书和所附权利要求书中所列出的数值参数是可以取决于试图通过本申请披露的主题获得的期望特性而变化的近似值。
如本文所使用的，术语“等位基因”是指遗传基因座处的变体或替代序列形式。在二倍体中，在每一个基因座处，单个等位基因分别从每一个亲本遗传给子代个体。存在于二倍体生物体中的给定基因座的两个等位基因占据一对同源染色体上相对应的位置，虽然本领域的普通技术人员理解在任何特定个体中的等位基因不必代表存在于所述物种中的所有等位基因。
如本文所使用的，术语“和/或”当在实体列表的背景下使用时，是指实体单独存在或以组合存在。因此，例如，短语“A、B、C和/或D”包括单独地A、B、C和D，但也包括A、B、C和D的任何和所有组合和子组合(例如，AB、AC、AD、BC、BD、CD、ABC、ABD和BCD)。在一些实施例中，“和/或”所指的一个或多个元素也可以单独存在于组合和/或子组合中的单次或多次出现中。
如本文所使用的，短语“与……相关”是指两个实体之间的可识别和/或可测定的关系。例如，短语“与HI相关”是指性状、基因座、基因、等位基因、标记、表型等或其表达，它们的存在或不存在可以影响植物或其子代表现HI的范围和/或程度。因此，当标记与性状连锁并且当标记的存在指示了期望的性状或性状形式是否会和/或会以什么程度发生在包含标记的植物/种质中时，则所述标记与所述性状“相关”。类似地，当标记与等位基因连锁并且当标记的存在指示了等位基因是否存在于包含标记的植物/种质中时，则所述标记与所述等位基因“相关”。例如，“与HI相关的标记”是指其存在或不存在可以用于预测植物是否会和/或会以什么程度展现单倍体诱导的标记。
术语“包含”(comprising)与“包括”(including)、“含有”(containing)和“特征在于”(characterized by)是同义的，是包含性的或开放式的，并且不排除另外的未列举的元素和/或方法步骤。“包含”是意指所指定的元素和/或步骤存在，但是其他元素和/或步骤可以添加进来并且仍然落入相关主题的范围内的术语。
如本文所使用的，短语“由……组成”排除未具体列举的任何元素、步骤或成分。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中，而不是直接地接在序言后面时，它只限制该子句中所阐述的元素；其他元件并不排除在整个权利要求之外。
如本文所使用的，短语“基本上由……组成”限制相关的披露或权利要求的范围至规定的材料或步骤，加上并不实质上影响所披露的和/或所要求保护的主题的基本和新颖特征的那些。
关于术语“包含”、“基本上由……组成”和“由……组成”，在本文中使用这三个术语之一的情况下，本申请披露和要求保护的主题可以在一些实施例中包括使用其他两个术语中的任一个。例如，如果主题在一些实施例中涉及编码包含与SEQ ID NO:9或19具有至少95％一致性的氨基酸序列的多肽的核酸。应当理解的是，所披露的主题因此还涵盖编码在一些实施例中基本上由与SEQ ID NO:9或19具有至少95％一致性的氨基酸序列组成的多肽的核酸、以及编码在一些实施例中由与SEQ ID NO:9或19具有至少95％一致性的氨基酸序列组成的多肽的核酸。类似地，还应当理解的是，在一些实施例中，用于所披露的主题的方法包括本文所披露的步骤，在一些实施例中，用于本申请披露的主题的方法基本上由披露的步骤组成，并且在一些实施例中，用于本申请披露的主题的方法由本文中披露的步骤组成。
如本文所使用的，术语“从头单倍体诱导”是指通过引入自发单倍体诱导剂来触发单倍体诱导。这样的引入可以通过局部喷雾、手动授粉、诱变或转基因方法来实现。贯穿本说明书，术语“从头单倍体诱导”、“从头HI”和“单倍体诱导从头”可互换使用。
如本文所使用的，术语“基因”是指包括DNA序列的遗传单位，所述遗传单位占据染色体上的特定位置并且含有生物体中的具体特征或性状的遗传指令。
“遗传图谱”是对给定物种内的一个或多个染色体上的基因座之间的遗传连锁关系的描述，通常以图表或表格形式描绘。
如本文所使用的，称为“单倍体”的植物在单倍体植物中具有减少数量的染色体(n)，并且它的染色体组等于配子的染色体组。在单倍体生物中，仅存在染色体正常数量的一半。因此，二倍体生物(例如，玉米)单倍体示出单倍性；四倍体生物(例如，黑麦草)的单倍体示出二倍性；六倍体生物(例如，小麦)的单倍体示出三倍性；等。如本文所使用的，被称为“双单倍体”的植物通过使单倍体染色体组加倍而开发。从自交到任何数量的世代的双单倍体植物获得的植物或种子仍然可以被鉴定为双单倍体植物。双单倍体植物被认为是纯合植物。如果植物是可育的，即使所述植物的整个营养部分不包含具有双组染色体的细胞，所述植物也被认为是双单倍体；也就是说，如果植物含有存活的配子，即使它在营养组织中是嵌合的，也将被认为是双单倍体。
如本文所使用的，术语“人类诱导的突变”是指由于直接或间接人类作用而发生的任何突变。此术语包括但不限于通过任何定向诱变方法获得的突变。
如本文所使用的，“引入的”是指递送的、表达的、施用的、运输的、转移的、渗透的或其他相似的术语以说明所希望的物体的核酸或蛋白质或其组合向一个物体的递送。例如，编码定点核酸酶的核酸和任选地至少一种指导RNA可通过单倍体诱导引入单倍体胚中。同样地，现存编辑机器(包含定点核酸酶蛋白质和任选地至少一种指导RNA)可通过施用适宜的细胞穿透肽引入到单倍体胚中。
如本文所使用的，术语“标记探针”和“探针”是指可以用于检测较大序列内序列的存在或不存在的核苷酸序列或核酸分子(例如，通过核酸杂交与标记或标记基因座的全部或部分互补的核酸探针)。包含约8、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个连续核苷酸的标记探针可以用于核酸杂交。
如本文所使用的，当鉴定HI相关的基因座的存在/不存在时，术语“分子标记”可以用于指如上文所定义的遗传标记，或其用作参比点的编码产物(例如，蛋白质)。分子标记能够源自基因组核苷酸序列或表达的核苷酸序列(例如，来自RNA、cDNA等)。该术语也指与标志序列互补或与其侧接的核苷酸序列，如用作能够扩增该标志序列的探针和/或引物的核苷酸序列。当核苷酸序列在溶液中特异性杂交时，所述核苷酸序列是“互补的”(例如，根据沃森-克里克碱基配对原则)。此术语也指通过与标记序列互补或与其侧接的核苷酸序列(例如用作探针和/或能够扩增标记序列的引物的核苷酸序列)的不存在指示性状的遗传标记。
如本文所使用的，术语“核苷酸序列”、“多核苷酸”、“核酸序列”、“核酸分子”和“核酸片段”是指单链或双链的RNA或DNA的聚合物，任选地含有合成的、非天然的、和/或改变的核苷酸碱基。“核苷酸”是从其构建DNA或RNA聚合物并且由嘌呤或嘧啶碱基、戊糖、和磷酸基团组成的单体单元。核苷酸(通常以其5'-单磷酸酯形式发现)以其单字母名称表示如下：“A”表示腺苷酸或脱氧腺苷酸(分别用于RNA或DNA)，“C”表示胞苷酸或脱氧胞苷酸，“G”表示鸟苷酸或脱氧鸟苷酸，“U”表示尿苷酸，“T”表示脱氧胸苷酸，“R”表示嘌呤(A或G)，“Y”表示嘧啶(C或T)，“K”表示G或T，“H”表示A或C或T，“I”表示肌苷，并且“N”表示任何核苷酸。
如本文所使用的，术语“核苷酸序列一致性”是指在两个多核苷酸的对应位置处存在一致的核苷酸。当进行比对以获得最大对应时(例如，在比较窗口中)，如果在两个多核苷酸中的核苷酸序列是相同的，则多核苷酸具有“一致的”序列。通常通过在比较窗口上比较这两个序列的部分来进行两个或多个多核苷酸之间的序列比较，以鉴定并比较序列相似性的局部区域。比较窗口通常是从约20至200个连续核苷酸。多核苷酸的“序列一致性百分比”，如约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％序列一致性，可以在比较窗口上通过比较两个最佳比对的序列来确定，其中为了两个序列的最佳比对，与参比序列相比，在比较窗口中的多核苷酸序列的部分可以包括添加或缺失(即，空位)。在一些实施例中，通过以下方式计算百分比：(a)确定在两个序列中出现一致的核酸碱基的位置的数量；(b)将匹配位置的数量除以比较窗口中位置的总数；并且(c)将结果乘以100。还可以通过已知算法的计算机化实施方式或者通过目视检查进行用于比较的序列的最佳比对。易于获得的序列比较和多重序列比对算法分别是可在因特网(例如，EMBL-EBI的网站)上获得的基本局部比对搜索工具(BLAST)和ClustalW/ClustalW2/Clustal Omega程序。其他合适的程序包括但不限于，GAP、BestFit、Plot Similarity和FASTA，它们是可从Accelrys公司(美国，加利福尼亚州，圣地亚哥)获得的Accelrys GCG软件包的一部分。还参见Smith和Waterman,1981；Needleman和Wunsch,1970；Pearson和Lipman,1988；Ausubel等人,1988；以及Sambrook和Russell,2001。
适于确定百分比序列一致性和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，它描述于Altschul等人,1990中。在一些实施例中，序列一致性百分比是指进行比较的SEQ IDNo:1的最大ORF中的gDNA、cDNA或预测的蛋白质序列之一的全长上的序列一致性。在一些实施例中，确定核酸序列一致性百分比的计算在计算中并不包括所比较的核酸之一包括“N”(即，其中在该位置可以存在任何核苷酸)的任何核苷酸位置。
术语“开放阅读框”(ORF)是指编码多肽的核酸序列。在一些实施例中，ORF包含翻译起始密码子(即，起始密码子)、翻译终止(termination)(即，终止(stop)密码子)、以及其间的编码多肽中存在的氨基酸的核酸序列。术语“起始密码子”和“终止密码子”是指在编码序列中三个相邻的核苷酸(即，密码子)的单位，它对应地指明蛋白质合成(mRNA翻译)的起始和链终止。
马铃薯糖蛋白样磷脂酶A2α也可以称为PLA、pPLA、pPLAIIA pPLAIIα、PLA2α、或PLA2、或其他类似的变体。马铃薯糖蛋白样磷脂酶AIIα也被称为MATRILINEAL(MATL)。这些术语自始至终可互换使用。包含四个碱基对移码突变的MATRILINEAL基因称为matrilineal(matl)。
如本文所使用的，术语“表型”、“表型性状”或“性状”是指植物或植物细胞的一个或多个性状。表型对于裸眼或通过本领域已知的任何其他评价手段(例如，显微术、生物化学分析、或电子机械测定)是可观察的。在一些情况下，表型直接由单一基因或遗传基因座控制(即，对应于“单基因性状”)。在单倍体诱导的情况下，使用颜色标记(例如R Navajo)和其他标记(包括通过种子内颜色的存在或不存在来可视化的转基因)证明种子是否是诱导的单倍体种子。使用R Navajo作为颜色标记和使用转基因作为检测雌株上单倍体种子诱导的手段在本领域是熟知的。在其他情况下，表型是几个基因之间相互作用的结果，在一些实施例中，其也由植物和/或植物细胞与其环境相互作用引起。
如本文所使用的，术语“植物”可以是指全株植物、其任何部分、或从植物衍生的细胞或组织培养物。因此，术语“植物”可以是指全株植物、植物组分或器官(例如，叶、茎、根等)、植物组织、种子和/或植物细胞中的任何一种。
植物细胞是从植物取得的植物细胞，或者是通过培养从取自植物的细胞衍生的植物细胞。因此，术语“植物细胞”包括但不限于种子、悬浮培养物、胚、分生区、愈伤组织、叶、嫩枝、配子体、孢子体、花粉和小孢子内的细胞。短语“植物部分”是指植物的一部分，包括单细胞和细胞组织(例如植物中完整的植物细胞)、细胞团块和可以再生植物的组织培养物。植物部分的实例包括但不限于来自以下各项的单细胞和组织：花粉、胚珠、叶、胚、根、根尖、花药、花、果实、茎、嫩枝和种子；以及接穗、根茎、原生质体、愈伤组织等。
如本文所使用的，术语“引物”是指如下寡核苷酸，当置于诱导引物延伸产物合成的条件下(例如，在核苷酸和用于聚合的试剂(如DNA聚合酶)的存在下以及在合适的温度和pH下)时，其能够与核酸靶退火(在一些实施例中，特异性地与核酸靶退火)，允许DNA聚合酶和/或逆转录酶与其附接，从而用作DNA合成的起始点。在一些实施例中，采用一个或多个引物来扩增核酸(例如，使用聚合酶链式反应；PCR)。
如本文所使用的，术语“探针”是指可以与靶核酸序列中的互补序列形成氢键合的双链体的核酸(例如，单链核酸或双链或更高级核酸的链、或其子序列)。典型地，探针具有足够的长度以便与其补体形成稳定且序列特异的双链体分子，并且这样可以在一些实施例中用于检测在多个核酸中存在的感兴趣的序列。
如本文所使用的，术语“子代”和“子代植物”是指从一个或多个亲本植物通过无性或有性繁殖产生的植物。在单雌生殖-介导的单倍体诱导中，母本上的单倍体胚包含雌性染色体排除雄性染色体—因此它不是雄性单倍体-诱导品系的子代。单倍体玉米种子典型地仍然具有含有雄性染色体组的正常的三倍体胚乳。经编辑的单倍体子代和随后的经编辑的双单倍体植物和随后的种子不是唯一的所希望的子代。还有常常携带Cas9转基因的来自单倍体诱导物品系本身的种子、和后续植物以及单倍体诱导植物的种子子代。单倍体种子和单倍体诱导物(自花授粉诱导的)种子可以是子代。子代植物可以通过克隆单一亲本植物或使单一亲本植物自交、或者通过使两个或更多个亲本植物杂交来获得。例如，子代植物可以通过克隆单一亲本植物或使单一亲本植物自交、或者通过使两个亲本植物杂交来获得，并且包括自交体以及F1或F2或甚至更远的世代。F1是产生自亲本的第一代子代(这些亲本中的至少一个第一次被用作性状的供体)，而第二代(F2)或后续代(F3、F4等)的子代是从F1、F2等的自交、互交、回交和/或其他杂交产生的标本。因此，F1可以是(并且在一些实施例中是)从两个纯育亲本(即，对于感兴趣的性状或其等位基因而言纯育的亲本中的每一个都是纯合的)之间的杂交产生的杂交种，而F2可以是(并且在一些实施例中是)从F1杂交种自花授粉产生的子代。
如本文所使用的，短语“重组”是指在相似或相同核苷酸序列的区域中，在配对染色体的两个DNA分子或染色单体之间的DNA片段的交换(“互换”)。“重组事件”在本文中被理解为在一些实施例中是指减数分裂互换。
如本文所使用的，术语“参比序列”是指用作核苷酸序列比较的基础的确定的核苷酸序列。在一些实施例中，SEQ ID NO:2、4、8、21、23、25、29、32、和33中的任何一个可以用作参比序列，用于与从植物获得的其他序列进行比较。
如本文所使用的，术语“再生”及其语法变体是指从组织培养物中产生植物。
如本文所使用的，短语“严格杂交条件”是指多核苷酸通常在复杂的核酸混合物中与其靶子序列杂交(但基本上不与其他序列杂交)的条件。严格条件是序列依赖性的并且在不同的环境下可以是不同的。
典型地，较长的序列在较高的温度下特异性杂交。核酸杂交的延伸指南发现于Sambrook和Russell,2001中。通常，严格条件被选择为在确定的离子强度、pH下低于特定序列的热力学熔点(Tm)约5℃-10℃。Tm是50％的与靶互补的探针杂交靶序列处于平衡状态时(在靶序列过量存在时，在Tm时，50％的探针被占据处于平衡状态)的温度(在确定的离子强度、pH、和核酸浓度下)。示例性的严紧条件是这些：其中盐浓度小于约1.0M钠离子、典型地在pH 7.0至8.3下大约0.01至1.0M钠离子浓度(或其他盐)，并且对于短探针(例如，10至50个核苷酸)温度为至少大约30℃而对于长探针(例如，大于50个核苷酸)至少大约60℃。
还可以通过添加去稳定剂(如甲酰胺)来达到严格条件。另外的示例性严格杂交条件包括50％甲酰胺、5x SSC和1％SDS，在42℃下孵育；或SSC、1％SDS，在65℃下孵育；在65℃下在0.2x SSC和0.1％SDS中洗涤一次或多次。对于PCR，约36℃的温度典型地用于低严格扩增，但是取决于引物长度，退火温度可以在约32℃与48℃(或更高)之间变化。在许多的参考文献中提供了用于确定杂交参数的另外的指南(参见例如，Ausubel等人,1999)。
如本文所使用的，术语“性状”是指感兴趣的表型、促成感兴趣的表型的基因、以及与促成感兴趣的表型的基因相关的核酸序列。例如，“HI性状”是指单倍体诱导表型、以及促成单倍体诱导的基因(例如，玉米中的matl或稻中的Os03g27610)和与单倍体诱导表型的存在或不存在相关的核酸序列(例如，HI相关的基因产物)。
如本文所使用的，术语“转基因”是指通过某些形式的人工转移技术引入生物体或一个或多个其祖先中的核酸分子。因此，人工转移技术产生“转基因生物体”或“转基因细胞”。应当理解的是，人工转移技术可以在祖先生物体(或其中的细胞和/或可以发育成祖先生物体的细胞)中发生，并且即使一种或多种自然和/或辅助育种导致了人工转移的核酸分子存在于子代个体中，具有人工转移的核酸分子或其片段的任何子代个体仍然被认为是转基因的。
如本文所使用的，术语“定向诱变”或“诱变策略”是指导致所选择的基因的有意诱变的任何诱变方法。定向诱变包括方法CRISPR、TILLING、TALEN和其他尚未发现但可以用于实现相同结果的其他方法。
如本文所使用的，单倍体诱导率(“HIR”)意指在用单倍体诱导物花粉对穗进行授粉后存活的单倍体籽粒的数量除以籽粒的总数。
特定的问题困扰着单倍体诱导：提高的胚败育率和提高的受精失败率(降低的结籽率)。出于这些原因，存在对成功确定HI的原因，并利用该知识来确定稳定或越来越多地产生单倍体植物同时减少受精失败和胚败育的方法的需求。
特别考虑到人们可以诱变启动子以潜在地改进元件用于在植物中表达转基因的效用。这些元件的诱变可以随机进行，并且在试错程序(trial-by-error procedure)中筛选诱变的启动子序列的活性。可替代地，可以鉴定为启动子提供希望的表达特征或为启动子提供表达增强活性的特定序列，并且可以经由突变将这些或类似序列引入启动子中。进一步考虑到人们可以诱变这些序列以便增强其转基因在特定物种中的表达。用于诱变编码本发明的启动子序列的DNA区段的手段是本领域技术人员熟知的。如所指示的，可以通过随机或位点特异性诱变程序对启动子或其他调节元件进行修饰。启动子和其他调节元件可以通过从编码相应的未修饰序列的序列中添加或缺失一个或多个核苷酸改变它们的结构来进行修饰。
可以根据本领域已知的任何技术进行诱变，例如但不限于合成在特定调节序列的序列内具有一个或多个突变的寡核苷酸。具体地，位点特异性诱变是通过对基础DNA的特异性诱变可用于制备启动子突变体的技术。也可以使用RNA指导的内切核酸酶(“RGEN”，例如CRISPR/Cas9)。例如，结合一个或多个前述考虑，通过将一个或多个核苷酸序列改变引入DNA中，所述技术进一步提供制备和测试序列变体的现成能力。位点特异性诱变允许通过使用编码所希望的突变的DNA序列的特定寡核苷酸序列以及足够数量的相邻核苷酸来提供足够大小和序列复杂性的引物序列以在正在详细研究的缺失连接片段的两侧形成稳定的双链体而产生突变体。典型地，长度为约17个至约75个核苷酸或更多个核苷酸的引物是优选的，其中序列连接片段的两侧上约10个至约25个或更多个残基被改变。
在根据本发明分离出包含启动子的克隆的情况下，人们可能希望界定克隆内的基本启动子区域。用于制备诱变的启动子的一种有效的靶向手段依赖于在启动子序列内鉴定推定的调节元件。这可以通过与已知以相似的组织特异性或发育独特模式表达的启动子序列进行比较来启动。在具有相似的表达模式的启动子之间共享的序列可能是转录因子结合的候选物，并且因此可能是赋予表达模式的元件。这些推定的调节元件的确认可以通过对每个推定的调节序列进行缺失分析，接着通过测定与每个构建体功能性附接的报告基因对每个缺失构建体进行功能分析来实现。因此，一旦提供了起始启动子序列，就可以容易地制备起始启动子的许多不同的缺失突变体中的任何一个。
本文中披露的发明提供了包含可以用于构建新颖嵌合调节元件的调节元件片段的多核苷酸分子。包含这些多核苷酸分子的片段和至少一个其他调节元件或片段的新颖组合可以在植物中构建和测试并且被认为是在本发明的范围内。因此，嵌合调节元件的设计、构建和使用是本发明的一个实施例。本发明的启动子包括显示与本发明的启动子序列具有同源性的、已知影响基因调节的顺式元件的同系物。
本文所述的转录调节核酸之一的功能等价片段包含至少50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000个碱基对的转录调节核酸。然后，通过缺失编码mRNA的5'非翻译区的区域获得的转录调节核酸的等价片段将仅提供(未转录的)启动子区域。5'非翻译区可以通过本领域已知的方法(例如5'-RACE分析)容易地确定。因此，本文所述的一些转录调节核酸是其他序列的等价片段。
如上文所指示的，也可以随机制备本发明的启动子的缺失突变体并且然后对其进行测定。按照此策略，制备一系列构建体，每个构建体含有启动子的不同部分(亚克隆)，并且然后筛选这些构建体的活性。用于筛选活性的合适手段是将含有缺失区段的缺失启动子或内含子构建体附接至可选择的或可筛选的标记，并且仅分离表达标记基因的那些细胞。以这种方式，鉴定了许多不同的、缺失的启动子构建体，其仍然保留了希望的甚至增强的活性。由此通过比较所选择的构建体来鉴定活性所需的最小区段。然后，此区段可以用于构建用于表达外源基因的载体。
如本文所述的表达盒可以包含另外的调节元件。在此背景下的术语应被广义地理解为包含可以影响表达盒的构建或功能的所有序列。例如，调节元件可以修饰原核生物体或真核生物体中的转录和/或翻译。本文所述的表达盒可以在待表达的核酸序列的下游(在3'方向)并且任选地含有另外的调节元件，例如转录或翻译增强子。每个另外的调节元件都可以可操作地连接至待表达的核酸序列(或转录调节核苷酸序列)。另外的调节元件可以包含可以修饰或增强表达调节性质的另外的启动子、最小启动子、启动子元件或转座子元件。表达盒还可以含有一个或多个内含子、一个或多个外显子和一个或多个终止子。
此外，考虑到启动子组合来自多于一个启动子的元件可能是有用的。例如，美国专利号5,491,288披露了将花椰菜花叶病毒启动子与组蛋白启动子组合。因此，来自本文披露的启动子的元件可以与来自其他启动子的元件组合。可用于植物转基因表达的启动子包括可诱导的、病毒的、合成的、组成的(Odell Nature[自然]313:810-812(1985))、时间调节的、空间调节的、组织特异性的和空间时间调节的那些启动子。使用本文所述的调节元件，可以在转化的植物中表达许多农艺学基因。更具体地，可以将植物基因工程化以表达农艺学感兴趣的各种表型。
具体实施方式
本发明的一个实施例提供了编辑植物基因组DNA的方法，所述方法包括：(i)获得第一植物，其中所述第一植物是植物的单倍体诱导物品系，并且其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地指导核酸；(ii)获得第二植物，其中第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；(iii)用来自第一植物的花粉给第二植物授粉；和(iv)选择由步骤(c)的授粉产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含第二植物的基因组但是不包含第一植物的基因组，并且单倍体子代的基因组通过由第一植物递送的DNA修饰酶和任选的指导核酸修饰。
在该方法的一个方面中，所述DNA修饰酶是定点核酸酶，所述定点核酸酶选自由以下组成的组：兆核酸酶(MN)、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)、Cas9核酸酶、Cfp1核酸酶、dCas9-FokI、dCpf1-FokI、嵌合Cas9-胞嘧啶脱氨酶、嵌合Cas9-腺嘌呤脱氨酶、嵌合FEN1-FokI、和Mega-TAL、切口酶Cas9(nCas9)、嵌合dCas9非FokI核酸酶和dCpf1非FokI核酸酶；并且进一步地所述指导核酸是指导RNA。
在本方法的另一方面中，将经编辑的单倍体子代用染色体加倍剂处理，从而产生经编辑的双单倍体子代。例如，所述染色体加倍剂是秋水仙碱、拿草特、滴停平、氟乐灵、或另一种已知的抗微管剂。
在本方法的另一方面中，所述第一植物是单子叶植物或双子叶植物。例如，所述第一植物是单子叶植物，所述单子叶植物选自由以下组成的组：玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。在第二方面，第二植物是单子叶植物或双子叶植物。例如第二植物是单子叶植物，所述单子叶植物选自由以下组成的组：玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。
在本方法的另一方面中，任选的指导RNA是18-21个核苷酸的序列并且与选自由以下组成的组的序列同源：SEQ ID NO:2、4、8、21、23、25、29、32、和33。在第二方面，所述第一植物表达标记基因。例如，所述标记基因选自由以下组成的组：GUS、PMI、PAT、GFP、RFP、CFP、B1、C1、R-nj、花青素苷色素、和任何其他的标记基因。
在本方法的另一方面中，第一植物是玉米植物，其选自和/或衍生自品系Stock 6、RWK、RWS、UH400、AX5707RS、NP2222-matl或若干其他已知的HI品系中的任一种。
在一个实施例中，所述第一植物和第二植物是不同的物种。在一方面，第一植物是小麦植物并且第二植物是玉米植物。在第二方面，所述第一植物是玉米植物并且第二植物是小麦植物。
本发明的一个目的是通过提供的所述方法产生的经基因编辑的植物。
在另一个实施例中，本发明提供了编辑植物基因组DNA的方法，其包括：(i)获得第一植物，其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地指导核酸；(ii)获得第二植物，其中第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；(iii)用来自第一植物的花粉给第二植物授粉；(iv)就在步骤(iii)的授粉之前、在其期间或之后施用包含脂质或磷脂酶抑制剂的组合物；和(v)选择由步骤(iii)的授粉产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含第二植物的基因组但是不包含第一植物的基因组，并且单倍体子代的基因组通过由第一植物递送的DNA修饰酶和任选的指导核酸修饰。在一方面，组合物包含甲基α-亚油酰基氟膦酸酯(MALFP)、亚油酸乙酯(LLAEE)、亚油酸(LLA)、玉米油、二硬脂酰-磷脂酰胆碱(DSPC)、甲基花生酰基氟膦酸酯(MAFP)、棕榈基三氟甲基酮(PACOCF3)、花生酰基三氟甲基酮(AACOCF3)、海绵类脂、亚麻酸乙酯(LNAEE)、亚麻酸乙酯(LNAEE)、油酸甲酯(OAME)、油酸乙酯(OAEE)、棕榈酸乙酯(PAEE)、棕榈油酸乙酯(PLAEE)、亚麻籽油、玉米油、α-亚麻酸(aLNA)、γ-亚麻酸(gLNA)、油酸、花生四烯酸、硬脂酸、9(Z)-11(E)-共轭亚油酸、或2-油酰-1-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺。
在另一个实施例中，本发明提供了编辑植物基因组DNA的方法，其包括：(i)获得第一植物，其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地指导核酸；(ii)获得第二植物，其中第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；(iii)使第一植物与第二植物杂交；和(iv)选择由步骤(iii)的杂交产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含第二植物的基因组但是不包含第一植物的基因组，并且单倍体子代的基因组通过由第一植物递送的DNA修饰酶和任选的指导核酸修饰。在一方面，第一植物作为步骤(iii)的杂交中的母本。在第二方面，第一植物包含CENH3基因、ig1基因中的突变、或赋予亲本-单倍体诱导系统的另一突变。
实例
I.产生新的包含编辑机器的单倍体诱导物品系。
我们用TALEN构建体转化了称为NP2222的可转化的玉米品系，并且分别地用Cas9和指导RNA构建体转化了该品系。设计TALEN构建体(pBSC22808(SEQ ID NO:5)，在靶序列中具有TALEN靶向切割，5’-
TCCAGGGTCAACGTGGAGACAGGGAGGTACGAACCGGTGACTGGCGAAGGAAGCA-3’，SEQ ID NO:6；TALEN识别序列加下划线)和Cas9构建体(pBSC23123(SEQ ID NO:7)，具有xZmPLAIIA的指导RNA序列，5’-GGGTCAACGTGGAGACAGGG-3’，SEQ ID NO:8)以靶向突变至称为MATRILINEAL的玉米基因(MATL；GRAMENE ID:GRMZM2G471240)的第四外显子。该基因(当通过TALEN或Cas9和指导RNA在靶位点突变时)被敲除，产生了蛋白质产物的功能丧失。我们先前确定了由于MATL中的功能丧失突变而纯合子的品系是单倍体诱导物品系，这意味着当在杂交中使用它们作为花粉供体时，它们诱导在所得穗上单倍体的形成(参见P.C.T.专利申请号PCT/US 2016/62548，于2016年11月17日提交，通过引用以其全文并入本文)。
我们产生了若干事件并且使它们自花授粉以产生T1种子。我们从事件MZET152408A042A中培养了T1个体。我们回收了五个T1子代，其保留了稳定转化的Cas9和指导RNA编辑机器的两个拷贝，并且还是MATL基因的纯合子突变体。参见表1。
表1.包含基因组编辑机器的新HI品系。
使用TaqMan测定检测了MATL突变，其扩增了MATL的野生型拷贝(本文中称为MATL或wt-MATL；这些术语在本文中可互换使用)。当两个MATL拷贝均发生突变，该测定读为阴性(即，“-”)。通过构建体23123(SEQ ID NO:7)，将Cas9和指导RNA编辑机器稳定地插入。通过PCR和亚克隆，我们测序了MATL中的突变。测序了每个PCR产物的四个集落，并且给定个体的所有集落具有相同的序列，这说明这些植物都是MATL等位基因的纯合子突变体(当引用Stock6和其他Stock6-衍生的品系中发现的MATRILINEAL中的4个碱基对插入时本文中也称为matl，或当引用MATRILINEAL中的任何其他人类诱导的突变时称为μMATL)。有两种具有8bp缺失的植物，和三种具有13bp缺失的植物。
II.使用新HI品系作为父本和子代分析。
我们将上述新HI植物作为雄性花粉供体与雌性测试品系杂交，该雌性测试品系含有隐性颜色标记但是MATL基因的野生型。雄性单倍体诱导物品系是相同颜色标记的纯合子野生型。这一雌性品系因此是非单倍体诱导物并且是MATL基因的纯合子野生型但是颜色标记的纯合子突变体。我们从杂交中回收了种子和由此产生的发芽的幼苗。
子代幼苗经历若干次测定。如果子代幼苗不示出颜色标记(因为隐性标记由雄性诱导物DNA补充)，则它们评价为二倍体。如果子代幼苗示出颜色标记，它们评价为假定的单倍体，因为隐性标记未被补充。在种植的2656种子中，我们使用了颜色测定并且鉴定了90个幼苗位假定的单倍体。
我们进一步使用Taqman标记测定分析了90个假定的单倍体中野生型MATL基因的存在。在这些之中，82个对于MATL是阳性的，这意味着它们不是由父本提供的编辑机器编辑的。使用Taqman标记，剩下的8个假定的单倍体幼苗对于野生型MATL阴性的，这说明它们可能是由父本提供的编辑机器编辑的。
我们通过流式细胞术对这些8个假定的、经编辑的单倍体幼苗使用叶组织在倍数性分析仪中进行了倍性分析。参见图1-8。我们发现它们中的四个是真正的单倍体，而其他的实际上是二倍体。如我们在下文中讨论的，我们进行了PCR并且测序了在这四个真正的单倍体中的MATL基因中的突变以及植物USR01350337-2，该植物根据MATL Taqman测定不是由基因组编辑机器编辑的。
在90个假定的单倍体中有四个二倍体的发现不是出乎预料的—所述幼苗测定不是完美的并且偶尔有假阳性出现。我们测试了90个单倍体中Cas9构建体(构建体23123)的存在，并且发现90个中有86个缺失，包括以上的四个真正的单倍体。相反，我们在倍性分析期间发现的这四个经编辑的二倍体都具有存在的Cas9构建体，这确认了它们作为杂合二倍体的身份，这些杂合二倍体由单倍体幼苗测定错误地鉴定为了单倍体。
然后我们使用叶组织来分离基因组DNA并且进行了PCR反应以测序这四个真正的单倍体(假定的经编辑的个体)中的MATL基因，其具体地针对侧翼于指导RNA靶诱变位点的序列。这是为了测定可能或可能不在那里发生的编辑的性质。我们使用可商购的TOPOBlunt IV试剂盒亚克隆了PCR片段，并且测序了每个的至少四个集落(正向和反向测序)。参见以下的表2可见经编辑的等位基因和参照wt-MATL等位基因的对比。
表2.比较经编辑的等位基因和wt-MATL。
个体USR01350333-3产生了经编辑的MATL等位基因，其在cDNA序列的碱基对1143处插入了丙氨酸(表2中加下划线)。这足以在编码序列中引起移码，这将产生提前终止密码子。我们先前想到的是USR01350333-3的经编辑的等位基因#2(GACAAGGGAGGTAC的13个碱基对缺失)实际上是PCR污染的结果。在重新测序之后，我们确认了这一植物仅仅具有一个经编辑的等位基因，并且在6个集落中的6个中均发现如此。
这一等位基因在如下方面是新颖的，它既不在这一个体的父本植物中，也不在这一个体的母本植物中。这一个体的父本ID是USR01283391，并且据发现该植物对于8bp缺失是纯合子。
个体USR01350344-2提供了A的缺失(野生型cDNA序列的碱基对1143的缺失)。这一突变足以引起编码序列的移码，并产生提前终止密码子。在重新测序和发现了PCR污染之后，我们确认了在6个集落中的6个中均发现如此。先前鉴定为USR01350344-2的经编辑的等位基因#2在此鉴定为PCR污染。
个体USR01350343-1提供了cDNA序列在碱基对1143处的A的插入。这足以在编码序列中引起移码，并产生提前终止密码子。在4个集落中的4个中均发现如此。
个体USR01350328-1提供了A的缺失(来自野生型cDNA序列的碱基对1143的缺失)。这一突变足以引起编码序列的移码，并产生提前终止密码子。在4个集落中的4个中均发现如此。
个体USR01350337-2没有改变：它的序列与wt-MATL的100％一致。
总之，我们发现在86个确认的单倍体中的4个中具有MATL基因中的突变。我们确认了这些植物是单倍体并且不含有任何的Cas9 DNA。显然，在胚胎发生期间消除了Cas9转基因以及剩下的雄性衍生的DNA，并且雌性(卵细胞-衍生的)基因组在胚胎发生过程中产生了编辑。
我们知道这些编辑是新颖的并且发生在胚胎发生过程中的雌性基因组中，因为单倍体诱导物品系典型地产生母本单倍体并且我们确认了这些事实上是单倍体。人们可能会试图争辩说有可能这些实际上是父本单倍体，并且我们所看到的编辑实际上是已经存在于父本DNA中的编辑。然而，我们可以证明情况不是这样。首先，突变与父系亲本的那些突变不匹配。这在表3和表4中可以清楚地看到(如下所示)。经编辑的单倍体植物USR01350343-1对于插入的单个核苷酸(“A”)是纯合子，但是父本植物具有13个核苷酸的缺失。相似地，植物USR01350328-1对于A的缺失是纯合子，并且父本具有13个核苷酸的缺失。这些实例结合起来证明了在单倍体诱导过程中，可能发生母本基因组的编辑，导致形成了经编辑的母本单倍体。根据这些并且基于检测MATL存在的测定和通过倍性分析的确认，并且在雄性方面在玉米泛素启动子的控制下使用了Cas9转基因，在单倍体诱导过程中的编辑的比率是约4/86、或4.65％。
此外，当使用不同的单倍体诱导物品系或使用远缘杂交时，在单倍体诱导期间编辑的比率可以是很不相同的。可能的是，在玉米中使用MATL突变体品系的单倍体诱导和在大麦、小麦、或其他作物的远缘杂交都通过相似的机制发挥作用：受精伴随着基因组消除。还可能的是，受精和基因组消除之间的时间段足够的长，使得编辑机器可以编辑诱导物品系杂交的所述品系的基因组中的靶基因(靶种质)。应注意的是，促进稳定转化的编辑蛋白质系统表达的启动子的选择可能对单倍体中的编辑比率有很大影响。我们使用了组成型甘蔗启动子(prSoUbi4)但是促进在胚囊、卵细胞、花粉或精细胞中的高表达或特异性表达的其他的启动子可能更加有效，尤其是在远缘杂交的情况下，其中雄性DNA以比在种内单倍体诱导物系统如玉米单倍体诱导物系统或CENH3型单倍体诱导物系统中更加强健和迅速的方式被消除。换言之，在远缘杂交期间，例如当将玉米花粉与小麦穗杂交时(这样做是为了诱导小麦母本单倍体)，效果最好的可能是使玉米花粉中的编辑机器由具有强花粉或精细胞表达(或许除合子表达之外)的启动子驱动，因此大量编辑机器(RNA和蛋白质)被递送并且出现在合子细胞中和在后续的两个、四个或八分细胞的胚阶段中，即使雄性DNA被消除或很快地消失。
表3.产生的单倍体子代
表4.父本信息及其子代
III.优良玉米近交品系中的同时单倍体诱导和编辑。
转化的单倍体诱导物品系：NP2222-HI、RWK、RWS、或UH400或Stock6或任何其他的单倍体诱导物品系(其全部已具有MATL的突变体版本)用构建体表达基因组修饰系统例如Cas9+指导RNA(Cong,L.等人2013.Multiplex genome engineering using CRISPR/Cassystems[使用CRISPR/Cas系统的多重基因组工程].Science[科学]339,819-823)、dCas9-FokI+指导RNA(Tsai,S.Q.等人2014,Dimeric CRISPR RNA-guided FokI nucleases forhighly specific genome editing.[二聚CRISPR RNA指导的FokI核酸酶用于高度特异性的基因组编辑]Nature Biotechnol.[自然生物技术]32,569-576)、TALEN(Li等人,2012,High-efficiency TALEN-based gene editing produces disease-resistant rice.[基于TALEN的高效基因编辑产生抗病稻]Nature Biotech.[自然生物技术]30,390-392)、工程化兆核酸酶(Gao等人,2010,Heritable targeted mutagenesis in maize using adesigned endonuclease.[使用设计的核酸内切酶在玉米中进行可遗传的定向诱变]PlantJournal.[植物杂志]61:176-187)、锌指核酸酶(Shukla等人2009.Precise genomemodification in the crop species Zea mays using zinc-finger nucleases.[使用锌指核酸酶对作物物种玉米进行精确的基因组修饰]Nature[自然]459,437-441)、dCas9-胞嘧啶脱氨酶(Komor等人2016,Programmable editing of a target base in genomic DNAwithout double-stranded DNA cleavage.[无需双链DNA切割的基因组DNA中的靶碱基的可编程编辑]Nature[自然]doi:10.1038/nature17946)或任何其他的基因组修饰系统稳定地转化。然后使用也表达编辑机器的转基因单倍体诱导物品系作为花粉供体以通过异交在靶品系中产生突变和单倍体。然后回收了单倍体胚或种子，鉴定为单倍体，并且测试了在靶位点(凭借TALEN构建体设计或Cas9指导RNA设计选择了任何靶位点)的编辑。含有所希望的编辑的单倍体使用标准程序使用标准方法例如秋水仙碱、氟乐灵或洽谈的染色体加倍剂进行了染色体加倍。诱导的单倍体的可通过使用颜色标记来碱化，如在玉米双单倍体生产中典型所进行的—这一颜色标记可在所得的胚、种子、幼苗、或成熟植物中呈现。可以通过序列分析(DNA测序)、标记分析或表型来检查在靶位点处的突变的存在。因为在单倍体植物中只有一个DNA拷贝可以突变，所以应该呈现隐性表型，从而这可能是用来鉴定经编辑的单倍体的另一种方式。
A.用在单倍体诱导物品系中直接产生的转基因编辑基因座对优良玉米近交品系中VLHP靶的诱变。
VLHP1和VLHP2是同源域-亮氨酸拉链I-类同源框基因和植物特有的一类蛋白质的成员。HD结构域参与DNA结合，而Zip结构域参与了蛋白质同源和异源二聚化。HD-Zip I蛋白通常参与与非生物胁迫、脱落酸(ABA)、蓝光、去黄化和胚胎发生相关的反应(Elhiti和Stasolla,2009.Structure and function of homodomain-leucine zipper(HD-Zip)proteins.[同源域-亮氨酸拉链(HD-Zip)蛋白的结构和功能]Plant Signal Behav.[植物信息与行为]4:86-88)。VLHP1和VLHP2与Grassy Tillers1(GT1)属于同一基因家族。GT1促进侧芽休眠并抑制玉米侧穗分枝的伸长。
在这一实例中，制备了用于表达Cas9盒单指导RNA(sgRNA)的载体23396(SEQ IDNO:1；还参见图9)以靶向玉米VLHP1(GRMZM2G104204)和其同系物VLHP2(GRMZM2G062244)基因。载体23396表达sgRNA，其具有20个核苷酸的靶向序列xZmVLHP-01(5’-GCAGGAGGCGTCGAGCAGCG-3’，SEQ ID NO:2)。xZmVLHP-01在第二外显子处靶向VLHP1和VLHP2基因。使用农杆菌-介导的转化和甘露糖选择将载体23396引入至转化的单倍体诱导物品系NP2222-HI中。NP2222-HI衍生自可转化的玉米近交品系NP2222和Stock 6衍生的品系RWKS的杂交以渗入单倍体诱导(HI)基因座。NP2222-HI具有约9.2％的平均单倍体诱导比率。
测定来自载体23396的NP2222-HI转化体的基因组VLHP靶序列(5’-GCAGGAGGCGTCGAGCA/GCG-3’；SEQ ID NO:2)修饰。斜线(“/”)表示Cas9切割位置。使用如前所述的定量PCR Taqman方法(WO 2016106121，通过引用并入本文中)测定了靶基因座编辑活性。选择具有高靶位点修饰活性的转基因品系-即，VLHP1和VLHP2基因都被修饰，并且优选地含有单拷贝转基因-用于进一步研究并用于杂交或子代的产生。
来自23396的T0转化体的花粉直接用于给优良近交品系ID5829或其他的玉米品系包括甜玉米品系的穗授粉以诱导单倍体胚的产生。可替代地，在NP2222-HI背景中的23396的T0转化体自交以产生携带纯合子转基因的子代品系并且来自子代植物的花粉被用于给玉米品系授粉以诱导单倍体胚形成。诱导的单倍体胚从籽粒中提取并置于胚拯救培养基上以直接发芽或允许其成熟以形成种子。测定来自诱导的单倍体胚和所得植物的组织以确定编辑是否在VLHP靶序列中产生。如果诱导的单倍体胚或植物含有所希望的突变施用染色体加倍处理以从它们中产生双单倍体品系。例如，使用胚拯救方法，在授粉后18-22天从用携带23396编辑基因座的转基因单倍体诱导物品系授粉的优良品系ID5829穗中提取(“DAP”，在10-25DAP之间提取在理论上是可能的)胚。从发芽的单倍体幼苗中分离DNA并用于测定。施用秋水仙碱处理幼苗用于染色体加倍。可替代地，在发芽期间可以将染色体加倍剂施用至分离的胚上。从发芽的幼苗中提取DNA并用于确定在xZmVLHP-01靶序列处发生了突变。
可以使用替代性的方法。可以允许种子成熟，并且稍后通过另一种表型选择单倍体。可以让种子干燥，并在稍后的时间让种子发芽以确定没有标记的单倍体(例如，使用植物大小而不是赋予颜色标记的基因)，此时将测试编辑并在适当情况下应用染色体加倍剂。该方法的优点在于避免了胚筛选和/或拯救。
B.用在单倍体诱导物品系中直接引入的转基因编辑基因座对优良玉米近交品系中GW2靶的诱变。
稻中E3-泛素连接酶基因DA2的突变导致更大的种子(Song等人，2007)。稻DA2具有2个玉米同系物：GW2-1(GRMZM2G170088)和GW2-2(GRMZM2G007288)。玉米基因在蛋白质水平上是94％一致的并且在DNA水平上是90％一致的。与GRMZM2G007288相比，GRMZM2G170088具有大的177bp插入(59aa)。
在这一实例中，制备了载体23399(SEQ ID NO:3，还参见图10)以表达Cas9和sgRNA来靶向玉米GW2-1(GRMZM2G170088)和其同系物GW2-2(GRMZM2G007288)基因。GW2-1和GW2-2基因在外显子1中含有靶序列xZmGW2-02(5’-AAGCTCGCGCCCTGCTACCC-3’，SEQ ID NO:4)并且使用这一序列来设计从载体23399表达的sgRNA。二元载体23399表达具有20个核苷酸的靶向序列xZmGW2-02的单指导RNA(sgRNA)，其融合至包含crRNA和tracrRNA的单指导RNA支架上。使用农杆菌-介导的转化和甘露糖选择将载体23399引入至转化的单倍体诱导物品系NP2222-HI中。NP2222-HI衍生自可转化的玉米近交品系NP2222和Stock 6衍生的品系RWKS的杂交以渗入单倍体诱导(HI)基因座。
测定了载体23399的NP2222-HI转化体的基因组GW2-2靶序列(5’-AAGCTCGCGCCCTGCTA/CCC-3’，SEQ ID NO:4；斜线(“/”)说明Cas9切割位置)修饰。使用如前所述的定量PCR Taqman方法(WO 2016106121)测定了靶序列编辑活性。选择具有高靶位点修饰活性的转基因品系-即，GW2-1和GW2-2基因都被修饰，并且优选地含有单拷贝转基因-用于进一步研究并用于杂交或子代的产生。
来自23399的T0转化体的花粉直接用于给优良近交品系ID5829或其他的玉米品系包括甜玉米品系的穗授粉以诱导单倍体胚的产生。可替代地，在NP2222-HI背景中的23399的T0转化体自交以产生携带纯合子转基因的子代品系并且来自子代植物的花粉被用于给玉米品系授粉以诱导单倍体胚形成。诱导的单倍体胚从籽粒中提取并置于胚拯救培养基上以直接发芽或允许其成熟以形成种子。测定来自诱导的单倍体胚和所得植物的组织以确定编辑是否在玉米GW2靶序列中产生。如果诱导的单倍体胚或植物含有所希望的突变施用染色体加倍处理以从它们中产生双单倍体品系。例如，使用胚拯救方法，在授粉后18-22天从用携带23396编辑基因座的转基因单倍体诱导物品系授粉的优良品系ID5829穗中提取胚。从发芽的单倍体幼苗中分离DNA并用于测定。施用秋水仙碱处理幼苗用于染色体加倍。可替代地，在发芽期间可以将染色体加倍剂施用至分离的胚上。从发芽的幼苗中提取DNA并用于确定在xZmGW2-02靶序列处是否发生了突变。可替代地，可以允许种子成熟，并且稍后通过另一种表型选择单倍体。甚至可以让种子干燥，并在稍后的时间让种子发芽以确定没有标记的单倍体(例如，使用植物大小而不是赋予颜色标记的基因)，此时将测试编辑并在适当情况下应用染色体加倍剂。该方法的优点在于避免了胚筛选和/或拯救。
IV.在玉米、稻、向日葵或任何其他作物中通过基于化学的单倍体诱导的同时单倍体诱导和编辑
玉米、稻、小麦、番茄、向日葵、大麦或任何其他作物的任何品系可用编辑构建体(Cas9加上设计用来突变具体的靶位点的指导RNA)转化并且然后任选地制备杂合子或纯合子编辑构建体(通过转化事件的自花授粉)，并且然后在异交期间使用脂质或油施用(给靶品系授粉)从而从头诱导单倍体并且同时编辑靶基因组中的靶位点。当施用至任何植物的花粉、穗丝、花、或雄花穗时—无论父本如何，这些脂质施用能够诱导单倍体。特别地，父本不必须在MATL基因中具有任何突变(即，它可以是MATRILINEAL基因的纯合子野生型)。这些脂质施用从头诱导单倍体，对任一亲本没有任何遗传要求。参见P.C.T.专利申请号PCT/US2016/62548，通过引用以其全文并入本文。通过脂质喷雾的从头单倍体诱导似乎以与matl突变体(基因单倍体诱导物)品系相同的方式发挥作用：通过受精后染色体消除。分离单倍体子代并检查诱导的突变(通过编辑过程引起)，并且然后加倍以制备经编辑的双单倍体植物。
V.用渗入单倍体诱导物品系中的转基因编辑基因座诱变优良大田玉米和甜玉米近交品系的靶序列。
还可在不具有单倍体诱导活性例如A188、Hi-II或NP2222的常规可转化玉米品系中产生转基因基因座表达基因组编辑机器并且所述转基因基因座表达基因组编辑机器然后侵入单倍体诱导物品系例如NP2222-HI、RWK、RWKS、RWS或UH400或Stock6或任何其他的单倍体诱导物品系中。
在这一实例中，玉米近交品系NP2222用VLHP Cas9-sgRNA载体(23396和23397)和GW2Cas9-sgRNA载体(23398和23399)转化。在先前的实例(实例IIIA和实例IIIB)中描述了载体23396和23399。载体23397(SEQ ID NO:20)与23396一致，除了gRNA-编码序列xZmVLHP-01(5’-GCAGGAGGCGTCGAGCAGCG-3’，SEQ ID NO:2)以xZmVLHP-02(5’-GCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:21)取代。载体23398(SEQ ID NO:23)与23399一致，除了23399中的gRNA-编码序列xZmGW2-02(5’-AAGCTCGCGCCCTGCTACCC-3’，SEQ ID NO:4)以xZmGW2-01(5’-GAGCGGTTCACGCGGCCGCA-3’，SEQ ID NO:23)取代。将这些载体引入农杆菌菌株LBA4404(pVGW7)中。所得的含有载体23396、23397、23398或23399的农杆菌菌株用于转化可转化的优良近交品系NP2222的未成熟的胚。从感染的未成熟胚中诱导愈伤组织并在甘露糖培养基上选择以回收转基因愈伤组织。将转基因愈伤组织置于再生和生根培养基上以回收表达CRISPR-Cas9编辑机器的转基因植物。测定转基因植物的转基因拷贝数量并将转基因植物移至温室用于种子生产。
鉴定了载体23396(MZET154902A004A，MZET154902B006A)、23397(MZET154903B009A，MZET154903B012A)、23398(MZET154904B005A，MZET154904B014A)和23399(MZET154905A002A，MZET154905A010A)的单一拷贝转化体并且将其与非转基因NP2222回交。将含有上述每种载体的T-DNA插入物的转基因子代植物的穗用单倍体诱导物品系RWKS的花粉授粉以产生F1子代。通过基因分型测定鉴定了含有转基因基因座和单倍体诱导基因座的F1子代，并自花授粉以产生F2子代种子。种植了F2子代种子并且用qPCRTaqman测定来测定了幼苗植物以鉴定植物针对转基因Cas9-sgRNA基因座(测定#2540)和单倍体诱导基因座(测定#2827)是纯合子。
针对单倍体诱导基因座和优选地转基因23396、23397、23398和23399Cas9-sgRNA编辑基因座是纯合子的品系用于给靶优良大田玉米品系ID5829和甜玉米品系(SWC726或SWC412F)的穗授粉以进行单倍体诱导。从授粉的ID5829、SWC412F、SWC726穗中分离了诱导的单倍体胚并在胚拯救培养基上进行发芽。可替代地，允许授粉的穗成熟并使具有单倍体胚的籽粒发芽。收集了叶样品并且对其用Taqman测定分析以鉴定在VLHP和GW2基因中含有突变但缺失诱导品系遗传组分例如转基因Cas9-sgRNA或其他的非转基因标记基因序列的植物。将具有靶GW2或VLHP基因突变的鉴定的单倍体植物用秋水仙碱处理以进行染色体加倍以回收双单倍体植物用于种子生产。可替代地，提取的单倍体胚可以用染色体加倍剂例如秋水仙碱处理并且分析所得植物的倍性水平和在GW2或VLHP基因中靶向突变的存在。具有靶向GW2和VLHP基因突变的植物生长至成熟用于种子生产和进一步的子代评估。
例如，从用含有23399Cas9-sgRNA转基因的单倍体诱导物授粉的甜玉米品系SWC412F穗的杂交中鉴定了经编辑的单倍体品系(JSER82A056和JSER82A063)。品系JSER82A056具有突变的GW2-01和GW2-02靶基因，而品系JSER82A063仅具有突变的GW2-02基因(参见表5)。由于从单倍体中消除了雄性基因组，这些品系都不含有Cas9转基因(Cas9的测定#2540或PMI选择性标记基因的#1750)或单倍体诱导物基因(测定#2827)。倍性水平分析确认了两个品系都是单倍体(图11和12)。注意的是，单倍体中的野生型(“WT”)基因的拷贝数为“2”，并且突变体将为“0”，因为拷贝得分记数是相对于内源性ADH基因拷贝数。因此，携带WT未经编辑的GW2-01或GW2-02基因的单倍体品系将具有为“2”的拷贝得分记数。WT单倍体诱导物基因座对于测定#2826将具有“2”的拷贝得分记数，并且对于测定#2827(单倍体诱导物变体)具有“0”的拷贝得分记数。如果玉米植物品系是甜玉米和转基因诱导物的二倍体，则它对于单倍体诱导物基因是杂合子，并且因此对于测定#2826和测定#2827都具有为“1”的拷贝得分记数。
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表5.杂交的子代接合性分析。Taqman分析结果示出所述品系不含有花粉供体的转基因或单倍体诱导物基因座，但是在GW2-01和/或GW2-02靶中具有编辑。
为了进一步确认这些单倍体品系中的靶特异性编辑，通过PCR从JSER82A063扩增了GW2-02靶区域并对PCR产物进行测序。与精确地在Cas9切割位点的WT序列相比，JSER82A063中缺失了单个碱基C(图13)。这些结果清楚地表明，从雄性配子体带入卵细胞中的编辑机器可以在双受精后消除雄性基因组之前编辑雌性基因组以形成单倍体胚。通过在0.5％DMSO中的0.125％秋水仙素的注射或在0.06％秋水仙碱溶液中幼苗的浸泡，处理没有转基因的候选经编辑单倍体品系(Eder和Chalyk,2002,In vivo haploid induction inmaize.[玉米中的体内单倍体诱导]Theor.Appl.Genetics[理论与应用遗传学]104:703-708)。将处理过的品系种植在土壤中并在温室中生长以产生子代种子。
VI.通过远缘杂交在小麦和其他的单子叶植物中同时单倍体诱导和编辑。
使用种间或属间远缘杂交也可以实现单倍体诱导(Kasha and Kao,1970,Highfrequency haploid production in barley(Hordeum vulgare L.).[大麦(Hordeumvulgare L.)中的高频单倍体产生]Nature[自然]225:874-886)。例如，小麦单倍体可以通过与玉米(Suenaga和Nakajima 1989)、珍珠粟(Inagaki和Mujeeb-Kazi 1995)、类蜀黍(Ushiyama等人1991)、球茎大麦(H.bulbosum)(Barclay 1975)和高梁(Ohkawa等人1992)的不同属间杂交的授粉获得。大麦单倍体是通过用球茎大麦花粉授粉获得的。烟草单倍体可以通过与非洲烟草(N.africana)花粉杂交获得。其他作物中也存在许多其他实例。
类似于上述将转基因编辑基因座引入Stock6诱导品系的实例，可以将转基因编辑基因座引入用于远缘杂交的这些品系中以诱导单倍体诱导和靶向序列突变。表达编辑机器的转基因品系可以通过直接转化或异交的玉米、小麦、大麦、黑麦、珍珠粟、稻、芸苔属、莴苣、番茄、或任何其他作物中的任何品系中产生。优选地，使转基因基因座成为纯合的，并且然后将所述品系用作与其他相容的受体作物的远缘杂交的花粉供体，以诱导单倍体产生所需的编辑。在远缘杂交中受精后基因组消除的过程基本上与玉米MATL突变体系统中的过程相同，尽管在某些情况下，外源花粉衍生的DNA和编辑机器可能在胚发育中稍早的时候被消除，这就是为什么这一方法优选地使用驱动花粉、精细胞和/或合子细胞中编辑机器的表达的启动子来实施，使得编辑RNA和蛋白质存在并且能够编辑靶基因组，即使雄性DNA在受精后很快就被消除了。
为了证明通过远缘杂交同时进行单倍体诱导和编辑的可行性，产生了表达Cas9和靶向小麦VLHP基因序列的sgRNA的玉米转基因品系。载体23763(SEQ ID NO:24)含有Cas9和sgRNA的表达盒(其含有前间区序列xTaVLHP1(5’-GACGAGCAGGCGCAGTTCC-3’，SEQ ID NO:25))用于指导在小麦中TaVLHP1靶位点的Cas9介导的切割。小麦基因组总共具有三个xTaVLHP1靶(TaVLHP1-4A、TaVLHP1-4B和TaVLHP1-4D)，其中每个靶在其三个亚基因组中。23397(SEQ ID NO:20)中的指导序列xZmVLHP(5’-GCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:21)将还指导小麦VLHP靶序列xTaVLHP2-1A(5’-GCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:26)或xTaVLHP2-1B(5’-TCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:27)的切割。在中国春小麦基因组中有三个含有xTaVLHP2-1A的VLHP2A基因和3个含xTaVLHP2-1B序列的VLHP2B基因。使用农杆菌介导的转化将载体23397和23763转化到玉米近交品系NP2222中以产生表达Cas9和sgRNA的转基因品系。转基因玉米品系在温室中生长并自交以产生T1植物。
从携带载体23397或23763的T-DNA的转基因玉米T0或子代T1植物收集的花粉用于给去雄的春小麦品系AC-Nanda授粉。在开花前一至两天，小麦小花被去雄，并且两天后用携带编辑机器的新鲜玉米花粉授粉。为方便起见，来自先正达优良细胞质雄性不育(“CMS”)小麦品系(16A300292)的小穗也直接用作雌性供体，以用表达23397或23763 Cas9-sgRNA的转基因玉米花粉诱导单倍体胚形成。在授粉后14-20天从授粉的小花中提取胚用于胚拯救以从小麦x玉米单倍体诱导系统中回收单倍体小植株。将切除的胚在全强度MS(Murashige和Skoog 1962)或含有不同修改的有机补充物的1/2MS或B5基础培养基上培养，并在20℃-25℃和16小时日长下体外培养3-5周。
例如，来自含有载体23763的转基因玉米品系MZET164902A044A的T1子代的花粉用于给CMS品系16A300292的穗状花序授粉以诱导小麦单倍体。拯救单倍体胚并取样所得的小麦单倍体幼苗用于qPCR分析以确定VLHP靶序列的拷贝数(参见表6)。据发现一个单倍体品系(JSWER30A22)在TaVLHP1-4B基因中含有突变，但在A和D亚基因组中的其直向同源物TaVLHP1-4A和TaVLHP1-4D中没有。倍性水平分析确认了JSWER30A22是真正的单倍体(参见图14和15)。通过测序进一步表征TaVLHP1-4B靶区域内的突变，并且发现含有从预测的Cas9切割位点开始97bp缺失(图16)。我们还鉴定出了在TaVLHP1-4A基因中具有“0”个拷贝的另一品系JSW16A07(测定#3252)，这说明了靶序列中的靶向编辑。然而，由于我们无法回收用于测序的PCR产物，缺失一个或多个引物结合位点时这一靶基因的缺失可能非常大。在体外培养3-5周后，将具有经编辑的靶位点的单倍体幼苗移植到土壤中。在相同的环境条件下，将移植的幼苗在生长室中硬化一周。在芽形成后添加秋水仙碱。然而，染色体加倍处理可以在胚拯救体外培养阶段之前或移植后进行。当对全麦幼苗进行加倍处理时，修剪单倍体幼苗的根，留下2-3cm的区域，并且然后在20℃浸没在含有2％二甲基亚砜(DMSO)和约0.05％吐温-20的0.1％秋水仙碱溶液中5小时。在该处理之后，洗涤根以除去残留的秋水仙碱并将其在泥炭土中盆栽。可以从单倍体幼苗中除去植物组织样品用于突变检测，以鉴定含有TaVLHP靶基因序列突变但包括编码转基因编辑机器的序列玉米染色体完全消除的植物。由于JSWER30A22来自CMS品系，因此所述植物用恢复系授粉以产生子代种子。
表6.来自远缘杂交的小麦子代的Taqman分析。编辑了品系JSW30A22。
为了进一步证明通过远缘杂交同时进行单倍体诱导和编辑的可行性，产生了表达来自在花粉中具有高和/或特异性表达的五个启动子的Cas9，以及靶向小麦VLHP基因序列的sgRNA的玉米转基因品系。这五个载体是24038(SEQ ID NO:34)、24039(SEQ ID NO:35)、24079(SEQ ID NO:36)、24091(SEQ ID NO:37)、和24094(SEQ ID NO:38)。所有这五种载体均使用含有前间区序列xTaVLHP2(5’-GCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:21)的相同sgRNA，用于指导小麦中TaVLHP2靶位点的Cas9介导的切割。小麦基因组总共具有三个xTaVLHP2靶(TaVLHP2-2A、TaVLHP2-2B和TaVLHP2-2D)，其中每个靶在其三个亚基因组中。在这五个构建体中的指导序列还指导小麦VLHP靶序列，xTaVLHP2(5’-GCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:26)或xTaVLHP3(5’-TCTGGAGCTGAGCTTCCGGG-3’，SEQ ID NO:27)的切割。在中国春小麦基因组中有三个含有xTaVLHP2的TaVLHP2基因和3个含xTaVLHP2-1B序列的TaVLHP3基因。
载体24038(SEQ ID NO:34)含有在来自玉米prf3(profilin同系物3)基因的花粉-优选高表达启动子prZmGRMZM5G876285和终止子tZmGRMZM5G876285控制下的Cas9的表达盒，该基因在花粉中在RNA和蛋白质水平具有极高的天然表达，并且具有高精细胞表达的证据。
载体24039(SEQ ID NO:35)含有在来自玉米EXPB2(BETA EXPANSIN2)基因的花粉-优选高表达启动子prZmGRMZM2G020852和终止子tZmGRMZM2G020852控制下的Cas9的表达盒，该基因在花粉中在RNA和蛋白质水平具有极高的天然表达，并且具有精细胞表达的证据。
载体24079(SEQ ID NO:36)含有在来自玉米EXPB1(BETA EXPANSIN1)基因的花粉-优选高表达启动子prZmGRMZM2G146551和终止子tZmGRMZM2G146551控制下的Cas9的表达盒，该基因在花粉中在RNA和蛋白质水平具有极高的天然表达，并且具有精细胞表达的证据。
载体24091(SEQ ID NO:37)含有在来自玉米MATL(MATRILINEAL)基因的花粉-优选启动子prZmGRMZM2G471240和终止子tZmGMRMZM2G471240控制下的Cas9的表达盒，该基因示出在RNA和蛋白质水平上花粉和可能的精细胞表达的证据。
载体24094(SEQ ID NO:38)含有在来自玉米MATL(MATRILINEAL)基因的花粉-优选启动子prZmGRMZM2G471240和终止子tZmGMRMZM2G471240控制下的Cas9的表达盒，该基因示出在RNA和蛋白质水平上花粉和可能的精细胞表达的证据。这一构建体另外地在Cas9分子上具有AmCyan荧光蛋白的N-末端融合，用于成像和可视化花粉中Cas9的位置。
使用农杆菌介导的转化将这五种载体(24038、24039、24079、24091和24094)转化到玉米近交品系NP2222中以产生表达Cas9和sgRNA的转基因品系。
转基因玉米品系在温室中生长，并且单拷贝和双拷贝转基因植物与春小麦和CMS小麦品系异交。从携带载体24038、24039、24079、24091、和24094之一的T-DNA的转基因玉米T0植物收集的花粉用于给去雄的春小麦品系AC-Nanda授粉。当Cas9由如上所述许多玉米和小麦实例中使用的甘蔗泛素启动子驱动时，花粉也用于qRT实验，其中Cas9的表达在RNA水平测量并与叶样品中的Cas9表达进行比较。如图17所示，花粉中的表达高，与泛素启动子相比，携带T-DNA载体24038、24039和24079的植物平均高约100倍。当与携带MATRILINEAL启动子构建体(24094和24091)的花粉相比时，该表达在来自含有载体24038、24039和24079的植物的花粉中也更高，前者已知具有更低的天然基因表达。所有这五种启动子都具有受限于花粉的表达模式。作为启动子正常工作的指示，我们未观察到愈伤组织幼苗叶片中Cas9的T0表达，并且在T0玉米叶中没有编辑VLHP靶位点(不希望受理论束缚，当Cas9第一次表达时，编辑可能发生在玉米靶位点，十分很可能是在成熟花粉阶段)。
在开花前一至两天，从CMS品系和AC Nanda品系中将小麦小花去雄。两天后，小花用携带来自构建体24038、24039、24091或24094的编辑机器Cas9-sgRNA的新鲜玉米花粉授粉(用构建体24079转化的T0植物延迟，并且不以这种方式与小麦杂交)。在授粉后14-20天从授粉的小花中提取小麦胚用于胚拯救以从小麦x玉米单倍体诱导系统中回收单倍体小植株。将切除的胚在全强度MS(Murashige和Skoog 1962)或含有不同修改的有机补充物的1/2MS或B5基础培养基上培养，并在20℃-25℃和16小时日长下体外培养1-5周。例如，来自含有载体24039的转基因玉米品系MZKE172601A100A的T0子代的花粉用于给CMS品系16A300292的穗状花序授粉以诱导小麦单倍体。拯救单倍体胚并取样所得的小麦单倍体幼苗用于qPCR分析以确定VLHP靶序列的拷贝数(表7)。在该分析中，我们使用测定#2540测试了Cas9转基因。被拯救和测试的所有小麦胚都缺乏这一转基因并且给出Cas9分数为“0”，因为它们在发育中的胚中没有任何玉米DNA，并且因此不具有转基因。在单倍体诱导过程中，玉米DNA首先被完全消除，踢除或不能完全递送，这在受精期间和/或受精后发生。除了Cas9之外，我们测试了测定#3332和#3333，其给出了VLHP2-2A和VLHP2-2D等位基因的非特异性扩增。这些测定通常在单倍体小麦中读数为“2”或“>2”，并且我们使用转基因玉米花粉产生的大多数单倍体在这些测定中得分为2或>2。通过寻找0或1的分数，我们使用这些测定来寻找推定的经编辑的单倍体。得分记数“1”可能说明编辑了两个等位基因中的一个，即VLHP2-2A或VLHP2-2D。最后，我们在AC Nanda单倍体中测试了测定3255，其特异性地检测VLHP2-2B。CMS品系不会扩增这一测定，即使它是野生型，因此我们没有将其用于CMS单倍体。未经编辑的单倍体给出“2”的分数，而发现了假定的经编辑的单倍体因为它们具有“0”的分数。分数“1”可能说明读数错误或嵌入的部分经编辑的样本。
例如，发现AC Nanda单倍体植物之一440-A5含有在TaVLHP2-2B基因中的突变，但是在A和D亚基因组中的其直向同源物TaVLHP2-2A和TaVLHP2-2D中不含有突变(表7)。Taqman数据还显示它缺乏Cas9转基因。通过测序进一步表征TaVLHP2-2B靶区域内的突变，但是尽管我们能够扩增A和D等位基因，但我们不能再扩增B等位基因，这表明存在更大的编辑，可能是大的缺失，导致PCR产物不再扩增。
作为另一个实例，根据测定3332和3333的分数“1”发现CMS单倍体植物之一450-D11在TaVLHP2-2D或TaVLHP2-2A同系物中含有突变。(表7)。taqman数据示出它缺乏Cas9转基因。通过测序进一步表征了TaVLHP2-2A、2B和2D靶区域，但是尽管我们能够扩增A和B等位基因，但我们不能再扩增D等位基因，这表明存在更大的编辑，导致PCR失败。
考虑了从携带以下五种优选花粉表达构建体(24038、24039、24091和24094)之一的玉米花粉杂交产生的2295个小麦单倍体，我们发现15个单倍体给出的Taqman测定数据表明在VLHP2-2A、VLHP2-2D或VLHP2-2B靶位点处的可能编辑。测序后，发现这些单倍体中的七个在靶位点具有野生型序列，并且由于Taqman误差而被称为假阳性。认为这些错误或者是由于测定#3332和#3333给出了VLHP-2A和VLHP-2D等位基因的非特异性扩增，导致一些错过的得分记数，或者是由于低DNA量。
在剩余的8个推定的经编辑的单倍体中，六个是AC Nanda(440-B3、440-D3、440-A5、447-G8、456-G9、459-A2)，其中编辑转基因来自构建体24038。这些中的四个(440-B3、440-D3、440-A5、和456-G9)包含在VLHP2-2B中的编辑。发现这些是因为它们对于测定3255具有的Taqman分数为“0”。这些植物缺乏Cas9(分数为“0”)，但对于VLHP2-2A或VLHP2-2D(测定#3332和#3333)具有野生型“2”的分数，这表明它们是未经编辑的那些位点。通过倍性分析确认了这六种植物是单倍体。我们尝试对经编辑的等位基因进行测序，但是虽然PCR和测序反应对2A和2D效果很好，但我们无法获得2B的PCR产物。我们使用一系列反应条件重复PCR几次，但不能从这些单倍体植物中扩增2B同系物。这可能表明编辑引起这些植物中2B基因的大的变化，这可能导致缺失引物退火位点。我们预期许多CMS植物也会在VLHP2-2B靶位点具有编辑，但我们没有进行测定检测来自CMS品系的VLHP2-2B等位基因。
仅考虑AC Nanda，我们计算所有构建体的等位基因整体编辑率为0.7％，但构建体24038的编辑率特别高，为1.4％。
除了这四个经编辑的单倍体(其中3255的分数为“0”)，其他若干种植物给出3255的“0或1”或“1”分数，这表明可能的嵌合性(在胚或小植株的某些细胞谱系中的部分编辑)，但我们没有跟进那些植物。对于AC Nanda同系物VLHP2-2A，植物447-G8含有编辑，由于PCR反应失败，我们也无法对其测序，即使2B和2D确实扩增了并含有野生型序列。我们使用一系列反应条件重复了PCR几次，但不能扩增2A同系物。相似地，对于VLHP2-2D，植物459-A2含有编辑，由于PCR反应失败，我们无法测序该编辑。我们使用一系列反应条件重复了PCR几次，但不能扩增2D同系物。我们还在447-H12和440-G6中发现了假定的编辑，但在测序后我们发现这些都是假阳性。
对于CMS单倍体，植物450-D11在测定#3332和3333(表7)给出了分数“1”。在测序后，我们发现2A同系物具有野生型序列，但我们无法PCR扩增2D同系物，这表明发生了较大的编辑。我们使用一系列反应条件重复了PCR几次，但不能扩增2D同系物。对于植物452-B11，#3332(VLHP2-2A)的Taqman分数为“0”，并且即使2D和2B PCR产物和序列正常，我们也无法扩增该等位基因用于测序。我们使用一系列反应条件重复了PCR几次，但不能扩增2A同系物。我们还根据测试3332和3333的Taqman数据发现了五种具有推定编辑的植物，但PCR测序示出了这些是假阳性的；所述序列是野生型的(未经编辑的)。
总共，我们发现了两个经编辑的CMS单倍体和六个经编辑的AC Nanda单倍体。可能有更多经编辑的单倍体我们无法检测，因为我们没有针对CMS植物的2B基因的测定，也没有针对这五种构建体中的指导RNA的VLHP3基因靶位点的测定。
来自这些经编辑的单倍体的测序数据与指导RNA靶位点周围的大的缺失、易位或重排的概念一致，并且延伸得足够远以可能包括除去一个引物结合位点。这一类型的大变化在Cas9编辑过程中并不少见，特别是在通过非同源末端连接的DNA修复较慢或被抑制的组织中-在刚受精的合子或早期单倍体小麦胚可能是这样的情况。
表7.经编辑的小麦单倍体的测序数据。
总体而言，我们发现构建体24038的编辑频率(所鉴定的经编辑的单倍体的数量除以单倍体的总数)为0.79％；对于构建体24039，它是0％；对于构建体24091，它是0％，并且对于构建体24094，它是0.75％。然而，这种编辑率肯定是低估的，因为我们没有进行测定来检测许多指导RNA靶位点上的编辑。另外，因为我们使用了1或2拷贝的T0花粉，我们知道使用1拷贝花粉，只有50％的受精花粉粒将含有Cas9，并且因此只有一半的胚有机会成为经编辑的；相似地，对于2拷贝亲本，假设在雄性减数分裂中随机分离转基因，我们预计约75％的花粉含有Cas9，因此25％的胚不能被编辑。可以合理地得出结论，当人们试图将这一同时编辑加单倍体诱导技术与花粉携带的编辑机器一起使用时，在某些情况下使用在花粉和精细胞中特异性或高表达的启动子可能更为理想，从而Cas9可以以更高的水平表达。在基因靶可能影响单倍体诱导物植物发育的情况下，具有不在叶中表达的花粉或精子优选启动子可能是有用的，因为它将避免在发育过程中编辑单倍体诱导物植物中的靶基因-或许在花粉中对其进行第一次编辑。
由于精细胞使卵子受精，它们有可能递送Cas9RNA和蛋白质(以及转基因DNA本身，整合到将被消除的雄性染色体之一中)。正如我们在这一实例中的远缘杂交工作中所证明的那样，将Cas9和/或指导RNA置于花粉中(并且特别是在精细胞中，当使用单倍体诱导物作为雄性来编辑优良品系时)特异性或高表达的启动子的控制下，可能效果很好。我们不确切地知道MATRILINEAL、EXPB1、EXPB2、和PRF3是否在营养核、精细胞或两者中表达，以及在合子细胞类型中是否有任何表达，但选择这些是因为它们被认为是在花粉中高和/或特异性表达的。PRF3启动子在启动子中具有DUO1结合基序，这可能说明它在精细胞中表达。这与具有较高编辑频率的启动子一致。我们在远缘杂交后发现了许多经编辑的小麦单倍体这一事实说明，当花粉中Cas9高表达时，使用这些或任何其他启动子，该表达可导致在远缘杂交后在小麦胚中的编辑。这些启动子以及驱动花粉中或特别是精细胞中表达的其他启动子很可能在玉米单倍体诱导或稻单倍体诱导期间增加编辑过程的效率。
相似地，在下面的下一个实例中，我们使用CENH3修饰的单倍体诱导物品系在双子叶植物中示出单倍体编辑，并且我们使用组成型启动子来驱动Cas9。但是为了提高单倍体编辑的效率，我们可以选择使用在卵细胞中驱动高表达和/或特异性表达的启动子，例如卵器1(EGG APPARATUS1)基因的启动子(“prEA1”)(参见，例如，Gray-Mitsumune,M.和Matton,D.P.，The Egg apparatus 1gene from maize is a member of a large gene familyfound in both monocots and dicots[来自玉米的卵器1基因是在单子叶植物和双子叶植物中发现的大基因家族的成员],Planta[植物]223(3):618-625(2006年2月))或卵细胞1(EGG CELL1，EC1)(参见，例如，Sprunck S等人,Egg cell-secreted EC1triggers spermcell activation during double fertilization.[卵细胞分泌的EC1在双受精期间触发精细胞活化]Science[科学]2012；338:1093-97；PMID:23180860；http://dx.doi.org/10.1126/science.1223944)。
作为这种启动子的实例，人们可以使用精细胞表达的启动子，如拟南芥精子特异性DUO1启动子(参见，例如，Engel等人,Green Sperm.Identification of Male GametePromoters in Arabidopsis[绿色精子.拟南芥雄配子启动子的鉴定],Plant Physiology[植物生理学]2005年8月,138(4)2124-2133；DOI:10.1104/pp.104.054213)或来自其他物种的DUO1的同系物(例如，玉米基因GRMZM2G105137和GRMZM2G046443都是DUO1同系物，其具有相似的花粉特异性表达模式)。如果使用其中任何一种来驱动在单倍体诱导物品系如RWK、NP2222-HI或matl突变体的精细胞中的Cas9表达，它可能会成为一种高效的单倍体编辑品系，用于分别通过种内或远缘杂交编辑不同的优良玉米或小麦种质。
用于在精细胞中促进高Cas9表达的概念的其他合适的精子表达的启动子将包括小麦、稻、大麦、番茄、向日葵或其他单子叶植物或双子叶植物中的DUO1同系物。用于该概念的其他合适的启动子示出在下表8中。这些启动子、或它们在作物物种中的同系物-可能对这一概念非常有用。工作原理是编辑机器的配子细胞表达可以增加本发明的比率或效率，因为这意味着在受精过程中将有丰富的编辑蛋白质或RNA存在或递送到胚中，使得编辑可以快速发生。
表8.启动子列表：启动子可用于在转基因中驱动编辑机器的高精细胞表达，以提高同时编辑和双单倍体诱导(“SEDHI”)的效率。
VII.通过远缘杂交或通过与CENH3改变的品系或其他单倍体诱导品系的杂交，在双子叶植物中的同时单倍体诱导和编辑。
体内单倍体诱导也可以使用双子叶植物物种的种间或属间远缘杂交来实现，例如在棉花中(Turcotte等人1969,Semigametic production of haploids in pima cotton.[比马棉中单倍体的半配子生产]Crop Sci.[作物科学]9:653-655)和烟草中(Burke等人,1979,Maternal haploids of Nicotiana tabacum L.[烟草(Nicotiana tabacum L.)的母本单倍体]Science[科学]206:585；Wernsman等人1989,Androgenetic vs.gynogeneticdoubled haploids of tobacco.[烟草单雄生殖与雌核发育的双单倍体]Crop Sci.[作物科学]29:1151-1155)。通过与来自突变体CENH3植物的花粉杂交，或通过将所述植物作为雌性与野生型花粉杂交，可以获得单倍体拟南芥植物(Ravi和Chan,2010,Haploid plantsproduced by centromere-mediated genome elimination.[通过着丝粒介导的基因组消除产生的单倍体植物]Nature[自然]464:615-618)。可以被修饰以产生单倍体诱导物和SEDHI编辑品系的其他候选基因包括KNL2和CENPC(两者都可以通过着丝粒介导的单亲基因组消除来操作)以及MSI2和向日葵PLA2。在这种情况下，单倍体诱导基因组(无论是杂交种的雄性还是雌性)也包含编辑机器，因此可以在单倍体诱导过程中实现了编辑，其结果是没有改变的CENH3或编辑转基因的经编辑的母本或父本单倍体子代植物。参见，例如，WO2017/004375，通过引用以其全文并入本文中。表达编辑机器的转基因基因座可以引入任何双子叶植物作物或其芸苔属、番茄、胡椒、莴苣、茄子、大豆、向日葵、甜菜、棉花、苜蓿、烟草等的野生近缘种。然后将表达编辑机器的转基因品系用作花粉供体，或者在CENH3的情况下，用作花粉供体或受体，在种间或属间远缘杂交中用于单倍体诱导和同时基因组编辑。例如，通过农杆菌介导的转化产生表达靶向烟草赤霉素20-氧化酶的sgRNA的非洲烟草转基因CRISPR-Cas9品系，并用于给去雄的烟草花授粉以诱导单倍体植物，这些植物的基因组在赤霉素20-氧化酶基因座处被编辑。优选地，使用具有大量花粉的易于转化的品系作为用于单倍体诱导的花粉供体并且瞬时提供编辑机器。用于单倍体生产的受体植物具有易于去雄或雄性不育的花。更优选地，颜色或其他视觉标记存在于诱导品系中或包含在编辑基因座中以容易地将单倍体胚或植物与从正常合子发育产生的二倍体区分开。
我们通过利用Columbia生态型中的拟南芥单倍体诱导物品系，并用编码Cas9和靶向GLABROUS1基因(GL1)的单指导RNA(当敲除时，其给出无毛状体的表型)表达的构建体将其转化来例证这一点。我们通过拟南芥兰茨贝格(Landsberg erecta)(Ler)生态型花粉将T0作为雌性杂交，并回收了gl1经编辑的单倍体子代。
单倍体诱导物材料获得自加利福尼亚大学戴维斯分校(UC Davis)的Comai实验室(Comai lab)。这些材料通常用作父本单倍体诱导物品系(当作为雌性与野生型雄性杂交时，引起单雄生殖)，但也可以作为母本单倍体诱导物(当作为雄性与野生型雌性杂交时，引起单雌生殖)。通过用玉米CENH3转基因替换天然CENH3基因，已将这些品系改变为单倍体诱导物，如(Maheshwari,等人,2017,Centromere location in Arabidopsis is unalteredby extreme divergence in CENH3protein sequence.[拟南芥中的着丝粒位置不受CENH3蛋白质序列极端分化的影响]Genome Research[基因组研究]27(3))所报道。
特别地，天然AtCENH3基因的两个拷贝被敲除并用稳定插入的ZmCENH3转基因补充，其不影响正常植物发育，并且在自花授粉时不产生单倍体，但在异交后确实产生约10％的单倍体。这是对(Ravi和Chan,2010,Haploid plants produced by centromere-mediated genome elimination.[通过着丝粒介导的基因组消除产生的单倍体植物]Nature[自然]464:615-618)和许多后续出版物中详细描述的CENH3-tailswap的最初概念的修改。
在我们从加利福尼亚大学戴维斯分校获得CENH3*品系后，我们将它们培养，确认了它们具有ZmCENH3转基因并且对于天然AtCENH3基因是纯合子“无效”的。我们通过以下进行这一点：设计ZmCENH3的taqman qPCR测定(测定#2298)并使用PCR和凝胶电泳，通过使用Xbal正向和反向引物(SEQ NO TKX和TKY)和Reddy混合剂(Reddy mix)在60℃退火温度下，并在37℃用XbaI限制酶切割过夜进行PCR来测试183个幼苗的AtCENH3基因型的接合性。野生型等位基因将被该酶切割并产生两个条带(189bp，25bp)，而突变体将保持在215bp。这些测试表明，加利福尼亚大学戴维斯分校寄送的所有种子都是突变型等位基因Atcenh3-1的纯合子，并且存在多个拷贝的ZmCENH3转基因。
确信这些获得的种子确实是单倍体诱导物后，我们保留了100株植物，并在两个靶位点处用含有靶向拟南芥(GL1)基因(AT3G27920)的sgRNA盒的二元载体24075(SEQ ID NO:98)开始花浸转化。靶序列是5'-GGAAAAGTTGTAGACTGAGA-3'和5'-GCAGTGATGAACAATGACGG-3'(互补链)。GL1基因的破坏产生部分或完全无毛植物的可见表型(无毛植物缺乏毛状体)。这一载体中的Cas9基因(cCas9-05)由拟南芥延伸因子启动子驱动。载体还含有两个选择标记盒，赋予其分别由CMP-02启动子和Glycine max UBI-01启动子驱动的Kan抗性和AmCyan荧光。将载体移入农杆菌菌株EHA101中，并且然后将其花浸转化到单倍体诱导物拟南芥植物中。
转化方案如下：早上我们将从板获得的24075EHA101RecA农杆菌涂布到YPSpec100Kan50板上。我们将这些在28℃黑暗中培养24小时。我们准备了渗透培养基(4L)：1/2XMS盐(8.66g)、1XGamborg B5维生素(4ml)、5％(W/V)蔗糖(200g)、0.044μM BAP(12.5mg---12.5ml DMSO)40μL，随后进行过滤灭菌。然后我们将250μl 40mg/ml AS(20mg/L)和25μl SIlwet L-77(50μl/L)添加到500ml渗透培养基中。使用环收集农杆菌并将约10ml放入50ml管中，过滤灭菌，我们将农杆菌悬浮直至产生1L，其光密度600为0.54。我们将花序枝条浸入悬浮培养基中20-30秒，并且用盖子盖住托盘。我们第二次重复这一过程，另一悬浮的OD600为0.552。
转化后约4周，收获大约100,000个自花授粉的种子，并在4℃孵育2天进行春化作用，并且然后通过在70％乙醇中浸泡1分钟并且然后在50％(V/V)漂白剂和0.05％(v/v)Triton X-100中浸泡另外10分钟，然后在四次更换的无菌水中洗涤种子将种子灭菌。然后将种子置于卡那霉素(50μg/ml)板上，用于在植物组织培养室中进行发芽筛选/选择(23℃白天，24℃夜晚，16小时照明)。鉴定出38个阳性转化体，因为它们对卡那霉素选择具有抗性，并且它们在转移到土壤中之前长成了幼苗并被取样来测试了Cas9T-DNA的存在(测定#3049)以及两个指导RNA切割位点的状态(测定#3321和测定#3322)。鉴定了具有GL1突变的等位基因和具有无毛状表型的10个单拷贝和15个2拷贝事件。优先考虑了这些植物，因为它们已示出Cas9活性的证据(由于突变的GL1和无毛表型)，它们具有Cas9转基因并且通过qPCR测定它们具有ZmCENH3转基因。通过将这些植物保持在以下生长条件下诱导这些植物长时间开花：16小时光照，23℃白天20℃夜间温度，相对湿度不>60％。
在鉴定用Cas9构建体转化的这些单倍体诱导物植物的同时，我们播种并培养了从俄亥俄州立大学的拟南芥生物资源中心获得的拟南芥兰茨贝格(Ler)种子群(品系#CS20)。这些是野生型种子，并且CS20中GL1指导RNA靶位点的序列与我们构建体中的指导RNA的序列匹配。我们允许两个群落开花并进行了约2000个对照杂交，使用了野生型Ler植物作为雄性花粉供体，与具有Cas9构建体的大约25个单倍体诱导物(其用作雌性)杂交。我们为每只雌性做了100次杂交，用黑色标记对杂交的花朵进行标记，并且除去了我们没有杂交的花朵，以限制收获自花授粉长角果的可能性。在大多数情况下，我们在授粉前通过用镊子除去花药来给雌花去雄，再次避免自花授粉的种子的污染，但在某些情况下这不是必需的，因为花药是幼小或发育不良的。
大约15天，我们收获了呈现浅棕色的长角果。然后我们打开了长角果并在土壤中种下种子。然后将它们放入6℃(白天和光照)，8小时日长，200umal/m2s照明，60％相对湿度生长室4天。然后我们将它们转移到16小时光照，23℃白天，20℃夜间温度，湿度不>60％生长室中7-10天。我们在几乎所有的长角果中观察到了高频率的败育的种子，平均占种子总数的约40％-50％。在已发表的报道中，该数量的败育胚与该单倍体诱导物材料的性能非常一致。不希望受到该理论的限制，据推测，败育种子最可能是由胚乳中部分或完全基因组消除导致胚乳失衡和失败引起的。这是在异交期间CENH3型单倍体诱导品系中的自然现象，并且可能与Cas9转基因的存在无关。这些败育胚不会发芽。由于在每个异交的长角果中胚败育的稳定和可靠率，我们最终使用该表型的缺乏来筛选出意外自花授粉的长角果。就这样，我们让异交的长角果发芽了。
总共我们回收了大约2000个发芽子代，其中大部分是异交的。我们通过qPCR标记测定和/或表型筛选的组合鉴定了经编辑的单倍体。我们用来检测经编辑的单倍体的标记如下。
首先，我们寻找在ZmCENH3测定中的分数“0”。这表明植物是单倍体，因为母本基因组已经丢失，并且因此存在于母本单倍体诱导物植物的多个拷贝中的ZmCENH3转基因也已经丢失。相反，二倍体将是母本和父本基因组之间的杂交种，并且对于该测定将具有“1”或“2”或更高的Taqman分数，这取决于母株的拷贝数。关键是所有二倍体都会示出这种转基因的证据，但仅具有Ler基因组的父本单倍体将不会并且将因此而成为“0”。
其次，我们寻找在Cas9测定中的“0”分数，这表明它是非转基因的。通过使用荧光并寻找CFP荧光标记物，也可以在视觉上看到这一点。
第三，我们寻找GL1靶位点测定之一的分数“0”，这表明该植物已被编辑。对于那些测定，二倍体植物可能示出“0”、“1”或“2”，但单倍体示出“2”或“0”。两个GL1指导RNA中的第一个显然具有比第二个更高的编辑效率，因为测定3321在单倍体诱导物T0中具有“0”和“1”的高优势，但是3322大多数为“2”。
使用这些测定，我们能够鉴定未经编辑的单倍体(对于ZmCENH3和Cas9其为“0”，但对于两个GL1靶位点其都具有“2”的分数)和经编辑的单倍体(对于ZmCENH3、Cas9和GL1(3321)测定其具有“0”)。我们还能够鉴定具有Cas9的二倍体杂交种(并且通常在GL1位点被编辑)和不具有Cas9的二倍体杂交种(并且通常具有经编辑的GL1的一个拷贝(来自母本)而不是另一个，并且因此，具有GL1测定分数为“1”。我们还能够鉴定若干个假定的经编辑的单倍体，因为它们具有对于靶位点测定(3321)、ZmCENH3(2298)和Cas9(3049)的分数为“0”。参见下表9的来自亲本USR01424136的子代Taqman数据的实例，其含有三个假定的经编辑的单倍体(孔F2中的植物254、孔D3中的植物260和孔E3中的植物261)。
表9.亲本USR01424136的子代分析。
只需通过种子发芽和qPCR Taqman分析取样，我们就能够识别出8个推定的经编辑的单倍体。还通过表型目视筛选鉴定了经编辑的单倍体，并且然后通过Taqman测定稍后进行确认。我们通过寻找无毛状体或无毛(这表明它们没有GL1基因的任何野生型等位基因)的植物和通过寻找胚或幼苗根中缺乏青色荧光蛋白(“CFP”)的表达来筛选经编辑的单倍体。这表明它们缺乏Cas9T-DNA。我们观察了若干种这些植物，并将它们提交用于Taqman分析。对于我们在表型上鉴定的三种此类的植物，我们能够通过Taqman测定确认它们是真正的经编辑的单倍体。我们意识到缺乏CFP的这些无毛植物中的一些可能是假阳性，这是因为CFP是沉默的，或者是因为完全编辑的母株的自花授粉和无效分离体、完全编辑(因此无毛)子代的产生。Taqman测定能够检测并筛选出这些假阳性，因为它们不仅直接测试了Cas9转基因的存在，还测试了ZmCENH3等位基因的存在，ZmCENH3等位基因肯定存在于任何自花授粉的污染种子中。我们发现了一些自花授粉种子的例子，这些种子都来自一株母株。该母本的授粉记录表明，花粉十分丰富，可能导致一些自花授粉。我们从总分析中排除了这些子代。
对通过Taqman测定鉴定的所有推定的经编辑的单倍体进行测序。我们使用PCR扩增经编辑的等位基因，并且然后对每个假定的经编辑的等位基因进行了亚克隆和测序了至少8个集落。参见表10关于我们在第一指导RNA(测定#3321)靶位点的经编辑的单倍体中发现的序列变化，以及来自T0亲本的Taqman数据。总之，我们发现了19个假定的经编辑的单倍体，并且我们确认3321个靶位点在我们试图测序的12个经编辑的单倍体中的11个中具有突变。其他7个是否也具有突变将在测序时得到确认。参见图24中这些编辑的序列比对。
表10. 19个经编辑的单倍体的Taqman和序列数据。
我们通过倍性分析以及三个二倍体对照(从母本植物取样的组织)进一步运行来自三个经编辑的单倍体植物的叶样品，其示出它们是真正的单倍体(图18-23)。这有助于重新确认它们作为经编辑的单倍体的身份。
在我们确信没有自花授粉污染的三个亲本品系中，我们没有进行任何表型预筛选，而是对所有发芽子代进行取样以进行Taqman测定(表11)。这些子代的三个母本是USR01431603、USR01431609和USR01431604。我们发现了通过将缺乏ZmCENH3和Cas9转基因的子代数(59)除以取样子代的总数(605)计算出的单倍体诱导率为约为9.7％。在59个单倍体中，我们发现10个是被编辑的。这意味着在消除母本基因组之前，平均有16.9％的单倍体被母本Cas9编辑。不希望受这个最终数量的限制，这意味着，使用该系统，作为总子代的百分比，9.7％*16.9％＝所有发芽子代的1.64％是经编辑的单倍体。
表11.来自三组子代的单倍体诱导率和编辑率数据，其中每个来自用拟南芥兰茨贝格花粉杂交的不同的SEDHI诱导物母本。
通过使用在受精前驱动卵细胞中Cas9和/或指导RNA表达到更高水平的启动子和/或在受精期间或受精后驱动合子细胞中Cas9和/或指导RNA表达到更高水平的启动子，可以增加CENH3*型单倍体编辑或其他父本单倍体编辑(使用母本单倍体诱导物品系)的比率。此类启动子的一个实例是EA1(卵器1(EGG APPARATUS1))(GRMZM2G456746)的启动子，尽管还有许多其他的实例。人们还可以在卵器-特异性增强子(EASE)的背景下表达Cas9，其是一个77bp的序列，可刺激卵细胞或早期受合子中相邻基因的表达(参见，例如，Yang,等人An EggApparatus-Specific Enhancer of Arabidopsis,Identified by Enhancer Detection[通过增强子检测鉴定的拟南芥卵器-特异性增强子],PLANT PHYSIOLOGY[植物生理学]2005年11月,139(3)1421-1432；DOI:https://doi.org/10.1104/pp.105.068262)。
VIII.通过直接修饰基因组DNA序列中的靶碱基的同时进行的单倍体诱导和编辑。
DNA序列的定向诱变也可以通过将一个DNA碱基直接转化为另一个DNA碱基而不需要双链断裂(DSB)来实现。例如，胞嘧啶脱氨酶APOBEC1、腺嘌呤脱氨酶和其他增强组分如尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)可与Cas9(A840H)切口酶或核酸酶灭活的死亡Cas9(dCa9)融合以直接编辑DNA序列而不引入双链DNA断裂(Komor等人2016.Programmable editing of atarget base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage.[无需双链DNA切割的可编程编辑基因组DNA中的靶碱基]Nature[自然]doi:10.1038/nature17946；Gaudelli等人2017.Programmable base editing of A:T to G:C in genomic DNAwithout DNA cleavage.[无DNA切割的基因组DNA中A：T至G：C的可编程碱基编辑]Nature[自然]doi:10.1038/nature24644；Komor等人2017.Improved base excision repairinhibition and bacteriophage Mu Gam protein yields C:G-to-T:A base editorswith higher efficiency and product purity.[改进的碱基切除修复抑制和噬菌体MuGam蛋白产生更高效率和产品纯度的C：G-至-T：A碱基编辑器]Science Advances[科学进展],第3卷,第8期,eaao4774,DOI:10.1126/sciadv.aao4774)。这种基础编辑机器也可以通过单倍体诱导品系递送，以直接在其他品种中诱导靶序列的碱基编辑。例如，设计了指导RNA序列xZmVLHP-03(5’-AGGCGTCGAGCAGCGAGGTG-3’，SEQ ID NO:28)以胞嘧啶脱氨酶碱基编辑系统以将ZmVLHP基因外显子2基因组序列5’-AGGCGTCGAGCAGCGAGGTG-3’(SEQ ID NO:28)转化为5’-AGGCGTTGAGCAGCGAGGTG-3’(SEQ ID NO:29)，从而将精氨酸密码子CGA改变为编码序列中的终止密码子(TGA)并导致蛋白质序列的过早终止和功能基因的敲除。C到T突变有下划线。相似地，嵌合nCas9-或dCas9-腺嘌呤脱氨酶碱基编辑系统可用于突变ZmVLHP或其他基因的编码区、剪接接头或启动子序列以产生具有改变的基因活性的变体。胞嘧啶脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶特别适用于改变转录物剪接位点，因为典型的剪接接头具有5’-…..AG/GT…3’序列(或在相反链中的5’-……AC/CT……3’)。
IX.通过DNA模板取代等位基因的同时进行的单倍体诱导和编辑
体内单倍体诱导系统不仅可以用来引入蛋白质、RNA或DNA用于切割或转化靶序列，它还可以用于递送DNA模板用于以转基因DNA形式在靶区域中对精确的序列取代的同源依赖性修复。可以将模板DNA插入携带基因组编辑机器(例如CRISPR-Cas9系统)的诱导物品系基因组中，插入在相同的转基因座位或不同的基因座中。当Cas9-sgRNA和模板DNA都存在于诱导的单倍体胚中时，靶序列的切割将导致用同源转基因DNA序列作为模板修复染色体断裂。例如，为了在ZmPYL-D基因(GRMZM2G048733_P02)(参见WO 16033230，通过引用以其全文并入本文中)中产生E149L突变，含有供体序列(5’-CCTTGGTGTTGCCGTCGGGGACGTCGACGACGAATGACAGGATGACGAGCGTCCCTGGCCGGCCGTCGATGACCT-3’，SEQ ID NO:30)的DNA片段用作修复供体。应该注意的是，可以添加另外的同源序列以侧接该核心修复供体序列。将这一修复供体序列的一个或多个拷贝插入Cas9-sgRNA表达载体23136(SEQ ID NO:31)中，其表达指导RNA 5’-GTCGGGGACGTCGACGACGA-3’(SEQ ID NO:32)以形成等位基因修饰载体pBSC23136-AMD。应注意的是，已从供体DNA序列中除去潜在的PAM位点，使得整合的供体序列不会被pBSC23136-AMD表达的Cas9-sgRNA复合物切割。将pBSC23136-AMD转化为单倍体诱导物品系NP2222-HI以产生转基因编辑品系。转基因编辑-单倍体诱导品系自交以产生子代品系纯合子编辑基因座。这些纯合子品系用于给靶优良玉米近交品系授粉以诱导单倍体形成，并且还在花粉供体染色体被消除之前通过表达的Cas9-sgRNA使用瞬时存在的供体DNA引入修饰的等位基因。
X.在稻中诱导单倍体和同时基因编辑
获得了HI-稻品系。例如，稻MATL直向同源物，Os03g27610(SEQ ID NO:33)被突变以产生新的稻HI品系。用包含用于编辑稻基因组的定点诱变系统例如CRISPR/Cas9系统的载体转化所述品系。
将稻HI品系与不同的稻品系杂交，优选地为优良品系，以产生至少一个子代单倍体胚。在杂交产生至少一个子代单倍体胚期间，HI亲本稻植物也使基因组编辑机器(例如Cas9加上指导RNA)被递送至胚。此时，编辑机器操作以编辑单倍体胚的基因组，并且从而获得经编辑的单倍体子代植物。
XI.Taqman测定和条件。
通过数量或目标名称提及了若干种测定。下面提供了上述测定表和相关引物和探针的序列。PCR的条件是所有测定的标准，并且是如下：在98℃变性持续2分钟；随后进行35个循环：(i)在98℃变性30秒，(ii)在60℃退火30秒，(iii)在72℃延伸1分钟；随后在72℃最终延伸10分钟，在4℃保持直至准备好。除非下文另有说明，否则在这些条件下进行测定。
表11.测试引物和探针。
序列表
<110> Syngenta Participations AG
Que, Qiudeng
Kelliher, Timothy
<120> 同时基因编辑和单倍体诱导
<130> 81189-WO-REG-ORG-P-1
<150> US 62/429260
<151> 2016-12-02
<160> 98
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23396
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmVLHP
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7032)
<223> rsgRNAZmVLHP-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10251)..(10503)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<400> 1
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagcag gaggcgtcga gcagcggttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca cacacacaca 7980
accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc cgctcgtcct 8040
cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt 8220
ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
cagcagccgc gtgcagaacg ccgccggcga catcgtgagc ctgcgcgacg tgatcgagag 9240
cgacaagagc accctgctgg gcgaggccgt ggccaagcgc ttcggcgagc tgcccttcct 9300
gttcaaggtg ctgtgcgccg cccagcccct gagcatccag gtgcacccca acaagcacaa 9360
cagcgagatc ggcttcgcca aggagaacgc cgccggcatc cccatggacg ccgccgagcg 9420
caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
ccaccccgcc atcgcccact tcctgcagca gcccgacgcc gagcgcctga gcgagctgtt 9600
cgccagcctg ctgaacatgc agggcgagga gaagagccgc gccctggcca tcctgaagag 9660
cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
ccccgaggac agcggcctgt tcagccccct gctgctgaac gtggtgaagc tgaaccccgg 9780
cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
ggtgatggcc aacagcgaca acgtgctgcg cgccggcctg acccccaagt acatcgacat 9900
ccccgagctg gtggccaacg tgaagttcga ggccaagccc gccaaccagc tgctgaccca 9960
gcccgtgaag cagggcgccg agctggactt ccccatcccc gtggacgact tcgccttcag 10020
cctgcacgac ctgagcgaca aggagaccac catcagccag cagagcgccg ccatcctgtt 10080
ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca 10320
tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat 10380
ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa 10440
acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
ccattgttgt gcacgacgac atcattccgt ggcgttatcc agctaagcgc gaactgcaat 11280
ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
cgtacccggg gatctggctc gcggcggacg cacgacgccg gggcgagacc ataggcgatc 11820
tcctaaatca atagtagctg taacctcgaa gcgtttcact tgtaacaacg attgagaatt 11880
tttgtcataa aattgaaata cttggttcgc atttttgtca tccgcggtca gccgcaattc 11940
tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
cgctgtgaac aagggttcag attttagatt gaaaggtgag ccgttgaaac acgttcttct 12060
tgtcgatgac gacgtcgcta tgcggcatct tattattgaa taccttacga tccacgcctt 12120
caaagtgacc gcggtagccg acagcaccca gttcacaaga gtactctctt ccgcgacggt 12180
cgatgtcgtg gttgttgatc tagatttagg tcgtgaagat gggctcgagc taggagcaag 12240
tgattttatc gctaagccgt tcagtatcag agagtttcta gcacgcattc gggttgcctt 12300
gcgcgtgcgc cccaacgttg tccgctccaa agaccgacgg tctttttgtt ttactgactg 12360
gacacttaat ctcaggcaac gtcgcttgat gtccgaagct ggcggtgagg tgaaacttac 12420
ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
tgttctcatt ttgaggctgc gccgcaaact tgaggcagat ccgtcaagcc ctcaactgat 12600
aaaaacagca agaggtgccg gttatttctt tgacgcggac gtgcaggttt cgcacggggg 12660
gacgatggca gcctgagcca attcccagat ccccgaggaa tcggcgtgag cggtcgcaaa 12720
ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga gaagttgaag 12780
gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg tgaatcgtgg 12840
caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca cgtagaggtt 13080
tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact gatggcggtt 13140
tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa gcccggccgc 13200
gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga tggcggaaag 13260
cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt tgccatgcag 13320
cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga agccttgatt 13380
agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct gacggttcac 13500
cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg cagtggcagc 13620
gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc aaatgacctg 13680
ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt catgcgctac 13740
cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa cccaaagccg 13920
tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg gtcgctgcgc 14100
tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc aaaaatggct 14160
ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc actcgaccgc 14220
cggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc ctgaatcgcc 14280
ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt gtaggtggac 14340
cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc gggaagatgc 14400
gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg ccgtcccgtc 14460
aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat tagaaaaact 14520
catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt 14580
gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa 14640
gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc 14700
cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
agaatggcaa aagctctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt 14820
attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg 14880
cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac 14940
gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 15000
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 15060
agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 15120
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 15180
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 15240
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 15300
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 15360
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 15420
aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg 15480
aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 15540
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 15660
gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gatccggaat 15720
ta 15722
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于编辑VLHP1的gRNA序列
<400> 2
gcaggaggcg tcgagcagcg 20
<210> 3
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23399
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmGW2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7031)
<223> rsgRNAZmGW2-02
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10251)..(10503)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13822)..(14226)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14904)..(15710)
<223> oCOLE-06
<400> 3
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcaaagc tcgcgccctg ctacccgttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca cacacacaca 7980
accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc cgctcgtcct 8040
cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt 8220
ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
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caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
ccaccccgcc atcgcccact tcctgcagca gcccgacgcc gagcgcctga gcgagctgtt 9600
cgccagcctg ctgaacatgc agggcgagga gaagagccgc gccctggcca tcctgaagag 9660
cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
ccccgaggac agcggcctgt tcagccccct gctgctgaac gtggtgaagc tgaaccccgg 9780
cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
ggtgatggcc aacagcgaca acgtgctgcg cgccggcctg acccccaagt acatcgacat 9900
ccccgagctg gtggccaacg tgaagttcga ggccaagccc gccaaccagc tgctgaccca 9960
gcccgtgaag cagggcgccg agctggactt ccccatcccc gtggacgact tcgccttcag 10020
cctgcacgac ctgagcgaca aggagaccac catcagccag cagagcgccg ccatcctgtt 10080
ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca 10320
tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat 10380
ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa 10440
acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
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ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
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tttgtcataa aattgaaata cttggttcgc atttttgtca tccgcggtca gccgcaattc 11940
tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
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gacacttaat ctcaggcaac gtcgcttgat gtccgaagct ggcggtgagg tgaaacttac 12420
ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
tgttctcatt ttgaggctgc gccgcaaact tgaggcagat ccgtcaagcc ctcaactgat 12600
aaaaacagca agaggtgccg gttatttctt tgacgcggac gtgcaggttt cgcacggggg 12660
gacgatggca gcctgagcca attcccagat ccccgaggaa tcggcgtgag cggtcgcaaa 12720
ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga gaagttgaag 12780
gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg tgaatcgtgg 12840
caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
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tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact gatggcggtt 13140
tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa gcccggccgc 13200
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cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt tgccatgcag 13320
cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga agccttgatt 13380
agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct gacggttcac 13500
cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg cagtggcagc 13620
gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc aaatgacctg 13680
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cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa cccaaagccg 13920
tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
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cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
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gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 15300
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 15360
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 15420
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aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 15540
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 15660
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ta 15722
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<212> DNA
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<221> 启动子
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<221> 终止子
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<221> 启动子
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<223> prUbi1-10
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<221> 基因
<222> (7492)..(10566)
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<221> 终止子
<222> (10573)..(10825)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
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<223> prUbi1-04
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<221> 基因
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<221> 终止子
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14349)..(14478)
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<221> 基因
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<221> 尚未归类的特征
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<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> oCOLE-06
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attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gcgccaccat gggaaaacct attcctaatc ctctgctggg cctggattct 2160
accggaggca tggcccctaa gaaaaagcgg aaggtggacg gcggagtgga cctgagaaca 2220
ctgggatatt ctcagcagca gcaggagaag atcaagccca aggtgagatc tacagtggcc 2280
cagcaccacg aagccctggt gggacacgga tttacacacg cccacattgt ggccctgtct 2340
cagcaccctg ccgccctggg aacagtggcc gtgaaatatc aggatatgat tgccgccctg 2400
cctgaggcca cacacgaagc cattgtggga gtgggaaaac agtggtctgg agccagagcc 2460
ctggaagccc tgctgacagt ggccggagaa ctgagaggac ctcctctgca gctggataca 2520
ggacagctgc tgaagattgc caaaaggggc ggagtgaccg cggtggaagc cgtgcacgcc 2580
tggagaaatg ccctgacagg agcccctctg aacctgaccc ccgaacaggt ggtggccatt 2640
gccagccacg acggcggcaa gcaggccctg gaaaccgtgc agagactgct gcccgtgctg 2700
tgccaggccc atggcctgac acctgaacag gtggtggcta tcgcctctca cgacggagga 2760
aaacaggctc tggaaacagt gcagcggctg ctgcctgtgc tgtgtcaggc tcacggcttg 2820
actccagaac aggtggtggc tattgcttcc aatattgggg ggaaacaggc cctggaaact 2880
gtgcagcgcc tgctgccagt gctgtgccag gctcacggac tgacccccga acaggtggtg 2940
gccattgcca gcaacaacgg cggcaagcag gccctggaaa ccgtgcagag actgctgccc 3000
gtgctgtgcc aggcccatgg cctgacacct gaacaggtgg tggctatcgc ctctaacaac 3060
ggaggaaaac aggctctgga aacagtgcag cggctgctgc ctgtgctgtg tcaggctcac 3120
ggcttgactc cagaacaggt ggtggctatt gcttccaaca acggggggaa acaggccctg 3180
gaaactgtgc agcgcctgct gccagtgctg tgccaggctc acgggctgac ccccgaacag 3240
gtggtggcca ttgccagcaa cggcggcggc aagcaggccc tggaaaccgt gcagagactg 3300
ctgcccgtgc tgtgccaggc ccatggcctg acacctgaac aggtggtggc tatcgcctct 3360
cacgacggag gaaaacaggc tctggaaaca gtgcagcggc tgctgcctgt gctgtgtcag 3420
gctcacggct tgactccaga acaggtggtg gctattgctt ccaatattgg ggggaaacag 3480
gccctggaaa ctgtgcagcg cctgctgcca gtgctgtgcc aggctcacgg cctcactccc 3540
gaacaggtgg tggccattgc cagcaacatc ggcggcaagc aggccctgga aaccgtgcag 3600
agactgctgc ccgtgctgtg ccaggcccat ggcctgacac ctgaacaggt ggtggctatc 3660
gcctctcacg acggaggaaa acaggctctg gaaacagtgc agcggctgct gcctgtgctg 3720
tgtcaggctc acggcttgac tccagaacag gtggtggcta ttgcttccaa caacgggggg 3780
aaacaggccc tggaaactgt gcagcgcctg ctgccagtgc tgtgccaggc tcacggactg 3840
acccccgaac aggtggtggc cattgccagc aacggcggcg gcaagcaggc cctggaaacc 3900
gtgcagagac tgctgcccgt gctgtgccag gcccatggcc tgacacctga acaggtggtg 3960
gctatcgcct ctaacaacgg aggaaaacaa gcactcgaga cagtgcagcg gctgctgcct 4020
gtgctgtgtc aggctcacgg cttgactcca gaacaggtgg tggctattgc ttccaacaac 4080
ggggggaaac aggccctgga aactgtgcag cgcctgctgc cagtgctgtg ccaggctcac 4140
gggctgaccc ccgaacaggt ggtggccatt gccagcaaca tcggcggcaa gcaggccctg 4200
gaaaccgtgc agagactgct gcccgtgctg tgccaggccc atggcctgac acctgaacag 4260
gtggtggcta tcgcctctaa caacggagga aaacaggctc tggaaacagt gcagcggctg 4320
ctgcctgtgc tgtgtcaggc tcacggcttg actccacagc aggtcgtggc aattgctagc 4380
aatatcggcg gacggcccgc cctggagagc attgtggccc agctgtctag acctgatcct 4440
gccctggccg ccctgacaaa tgatcacctg gtggccctgg cctgtctggg aggcagacct 4500
gccctggatg ccgtgaaaaa aggactgcct cacgcccctg ccctgattaa aagaacaaat 4560
agaagaatcc ccgagcggac ctctcacaga gtggccggat cccagctggt gaaatctgag 4620
ctggaggaga agaagtctga gctgagacac aagctgaagt acgtgcctca cgagtacatc 4680
gagctgatcg agatcgccag aaatagcacc caggatagaa tcctggagat gaaggtgatg 4740
gagttcttca tgaaagtgta cggctacaga ggaaagcatc tgggaggaag cagaaaacct 4800
gacggagcca tttatacagt gggcagccct atcgattatg gcgtgatcgt ggatacaaag 4860
gcctacagcg gaggctacaa tctgcctatt ggacaggccg atgagatgca gagatacgtg 4920
gaggagaacc aaaccaggaa caagcatatc aaccctaacg agtggtggaa ggtgtaccct 4980
tctagcgtga ccgagttcaa gttcctgttt gtgagcggcc acttcaaggg caattataag 5040
gcccagctga ccaggctgaa ccacatcaca aattgtaatg gcgccgtgct gtctgtggag 5100
gaactgctga ttggaggaga gatgattaag gccggaacac tgacactgga ggaggtgaga 5160
agaaagttca acaacggcga gatcaacttc tgaaagcttg atcgttcaaa catttggcaa 5220
taaagtttct taagattgaa tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg 5280
ttgaattacg ttaagcatgt aataattaac atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg 5340
gtttttatga ttagagtccc gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag 5400
cgcgcaaact aggataaatt atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga tcttcgaacc 5460
ctagtcgaag acaaccggtg catgcctgca gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct 5520
agagataatg agcattgcat gtctaagtta taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac 5580
acttgtttga agtgcagttt atctatcttt atacatatat ttaaacttta ctctacgaat 5640
aatataatct atagtactac aataatatca gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt 5700
tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt ttgacaacag gactctacag ttttatcttt 5760
ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg caaatagctt cacctatata atacttcatc 5820
cattttatta gtacatccat ttagggttta gggttaatgg tttttataga ctaatttttt 5880
tagtacatct attttattct attttagcct ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta 5940
gtttttttat ttaataattt agatataaaa tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa 6000
caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata 6060
atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc 6120
gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct 6180
ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg 6240
cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag gcggcctcct cctcctctca cggcaccggc 6300
agctacgggg gattcctttc ccaccgctcc ttcgctttcc cttcctcgcc cgccgtaata 6360
aatagacacc ccctccacac cctctttccc caacctcgtg ttgttcggag cgcacacaca 6420
cacaaccaga tctcccccaa atccacccgt cggcacctcc gcttcaaggt acgccgctcg 6480
tcctcccccc ccccccctct ctaccttctc tagatcggcg ttccggtcca tggttagggc 6540
ccggtagttc tacttctgtt catgtttgtg ttagatccgt gtttgtgtta gatccgtgct 6600
gctagcgttc gtacacggat gcgacctgta cgtcagacac gttctgattg ctaacttgcc 6660
agtgtttctc tttggggaat cctgggatgg ctctagccgt tccgcagacg ggatcgattt 6720
catgattttt tttgtttcgt tgcatagggt ttggtttgcc cttttccttt atttcaatat 6780
atgccgtgca cttgtttgtc gggtcatctt ttcatgcttt tttttgtctt ggttgtgatg 6840
atgtggtctg gttgggcggt cgttctagat cggagtagaa ttctgtttca aactacctgg 6900
tggatttatt aattttggat ctgtatgtgt gtgccataca tattcatagt tacgaattga 6960
agatgatgga tggaaatatc gatctaggat aggtatacat gttgatgcgg gttttactga 7020
tgcatataca gagatgcttt ttgttcgctt ggttgtgatg atgtggtgtg gttgggcggt 7080
cgttcattcg ttctagatcg gagtagaata ctgtttcaaa ctacctggtg tatttattaa 7140
ttttggaact gtatgtgtgt gtcatacatc ttcatagtta cgagtttaag atggatggaa 7200
atatcgatct aggataggta tacatgttga tgtgggtttt actgatgcat atacatgatg 7260
gcatatgcag catctattca tatgctctaa ccttgagtac ctatctatta taataaacaa 7320
gtatgtttta taattatttt gatcttgata tacttggatg atggcatatg cagcagctat 7380
atgtggattt ttttagccct gccttcatac gctatttatt tgcttggtac tgtttctttt 7440
gtcgatgctc accctgttgt ttggtgttac ttctgcagcg gccgcgccac catgggaaaa 7500
cctattccta atcctctgct gggcctggat tctaccggag gcatggcccc taagaaaaag 7560
cggaaggtgg acggcggagt ggacctgaga acactgggat attctcagca gcagcaggag 7620
aagatcaagc ccaaggtgag atctacagtg gcccagcacc acgaagccct ggtgggacac 7680
ggatttacac acgcccacat tgtggccctg tctcagcacc ctgccgccct gggaacagtg 7740
gccgtgaaat atcaggatat gattgccgcc ctgcctgagg ccacacacga agccattgtg 7800
ggagtgggaa aacagtggtc tggagccaga gccctggaag ccctgctgac agtggccgga 7860
gaactgagag gacctcctct gcagctggat acaggacagc tgctgaagat tgccaaaagg 7920
ggcggagtga ccgcggtgga agccgtgcac gcctggagaa atgccctgac aggagcccct 7980
ctgaacctga cccccgaaca ggtggtggcc attgccagca acaacggcgg caagcaggcc 8040
ctggaaaccg tgcagagact gctgcccgtg ctgtgccagg cccatggcct gacacctgaa 8100
caggtggtgg ctatcgcctc tcacgacgga ggaaaacagg ctctggaaac agtgcagcgg 8160
ctgctgcctg tgctgtgtca ggctcacggc ttgactccag aacaggtggt ggctattgct 8220
tccaacggcg gggggaaaca ggccctggaa actgtgcagc gcctgctgcc agtgctgtgc 8280
caggctcacg gactgacccc cgaacaggtg gtggccattg ccagcaacgg cggcggcaag 8340
caggccctgg aaaccgtgca gagactgctg cccgtgctgt gccaggccca tggcctgaca 8400
cctgaacagg tggtggctat cgcctctcac gacggaggaa aacaggctct ggaaacagtg 8460
cagcggctgc tgcctgtgct gtgtcaggct cacggcttga ctccagaaca ggtggtggct 8520
attgcttccc acgacggggg gaaacaggcc ctggaaactg tgcagcgcct gctgccagtg 8580
ctgtgccagg ctcacgggct gacccccgaa caggtggtgg ccattgccag caacggcggc 8640
ggcaagcagg ccctggaaac cgtgcagaga ctgctgcccg tgctgtgcca ggcccatggc 8700
ctgacacctg aacaggtggt ggctatcgcc tctaacggcg gaggaaaaca ggctctggaa 8760
acagtgcagc ggctgctgcc tgtgctgtgt caggctcacg gcttgactcc agaacaggtg 8820
gtggctattg cttcccacga cggggggaaa caggccctgg aaactgtgca gcgcctgctg 8880
ccagtgctgt gccaggctca cggcctcact cccgaacagg tggtggccat tgccagcaac 8940
aacggcggca agcaggccct ggaaaccgtg cagagactgc tgcccgtgct gtgccaggcc 9000
catggcctga cacctgaaca ggtggtggct atcgcctctc acgacggagg aaaacaggct 9060
ctggaaacag tgcagcggct gctgcctgtg ctgtgtcagg ctcacggctt gactccagaa 9120
caggtggtgg ctattgcttc ccacgacggg gggaaacagg ccctggaaac tgtgcagcgc 9180
ctgctgccag tgctgtgcca ggctcacgga ctgacccccg aacaggtggt ggccattgcc 9240
agcaacatcg gcggcaagca ggccctggaa accgtgcaga gactgctgcc cgtgctgtgc 9300
caggcccatg gcctgacacc tgaacaggtg gtggctatcg cctctaacaa cggaggaaaa 9360
caagcactcg agacagtgca gcggctgctg cctgtgctgt gtcaggctca cggcttgact 9420
ccagaacagg tggtggctat tgcttccaac ggcgggggga aacaggccct ggaaactgtg 9480
cagcgcctgc tgccagtgct gtgccaggct cacgggctga cccccgaaca ggtggtggcc 9540
attgccagcc acgacggcgg caagcaggcc ctggaaaccg tgcagagact gctgcccgtg 9600
ctgtgccagg cccatggcct gacacctgaa caggtggtgg ctatcgcctc taatatcgga 9660
ggaaaacagg ctctggaaac agtgcagcgg ctgctgcctg tgctgtgtca ggctcacggc 9720
ttgactccac agcaggtcgt ggcaattgct agccacgacg gcggacggcc cgccctggag 9780
agcattgtgg cccagctgtc tagacctgat cctgccctgg ccgccctgac aaatgatcac 9840
ctggtggccc tggcctgtct gggaggcaga cctgccctgg atgccgtgaa aaaaggactg 9900
cctcacgccc ctgccctgat taaaagaaca aatagaagaa tccccgagcg gacctctcac 9960
agagtggccg gatcccagct ggtgaaatct gagctggagg agaagaagtc tgagctgaga 10020
cacaagctga agtacgtgcc tcacgagtac atcgagctga tcgagatcgc cagaaatagc 10080
acccaggata gaatcctgga gatgaaggtg atggagttct tcatgaaagt gtacggctac 10140
agaggaaagc atctgggagg aagcagaaaa cctgacggag ccatttatac agtgggcagc 10200
cctatcgatt atggcgtgat cgtggataca aaggcctaca gcggaggcta caatctgcct 10260
attggacagg ccgatgagat gcagagatac gtggaggaga accaaaccag gaacaagcat 10320
atcaacccta acgagtggtg gaaggtgtac ccttctagcg tgaccgagtt caagttcctg 10380
tttgtgagcg gccacttcaa gggcaattat aaggcccagc tgaccaggct gaaccacatc 10440
acaaattgta atggcgccgt gctgtctgtg gaggaactgc tgattggagg agagatgatt 10500
aaggccggaa cactgacact ggaggaggtg agaagaaagt tcaacaacgg cgagatcaac 10560
ttctgaaagc ttgatcgttc aaacatttgg caataaagtt tcttaagatt gaatcctgtt 10620
gccggtcttg cgatgattat catataattt ctgttgaatt acgttaagca tgtaataatt 10680
aacatgtaat gcatgacgtt atttatgaga tgggttttta tgattagagt cccgcaatta 10740
tacatttaat acgcgataga aaacaaaata tagcgcgcaa actaggataa attatcgcgc 10800
gcggtgtcat ctatgttact agatcttcga agacggaccg cgcctgcagt gcagcgtgac 10860
ccggtcgtgc ccctctctag agataatgag cattgcatgt ctaagttata aaaaattacc 10920
acatattttt tttgtcacac ttgtttgaag tgcagtttat ctatctttat acatatattt 10980
aaactttact ctacgaataa tataatctat agtactacaa taatatcagt gttttagaga 11040
atcatataaa tgaacagtta gacatggtct aaaggacaat tgagtatttt gacaacagga 11100
ctctacagtt ttatcttttt agtgtgcatg tgttctcctt tttttttgca aatagcttca 11160
cctatataat acttcatcca ttttattagt acatccattt agggtttagg gttaatggtt 11220
tttatagact aattttttta gtacatctat tttattctat tttagcctct aaattaagaa 11280
aactaaaact ctattttagt ttttttattt aataatttag atataaaata gaataaaata 11340
aagtgactaa aaattaaaca aatacccttt aagaaattaa aaaaactaag gaaacatttt 11400
tcttgtttcg agtagataat gccagcctgt taaacgccgt cgacgagtct aacggacacc 11460
aaccagcgaa ccagcagcgt cgcgtcgggc caagcgaagc agacggcacg gcatctctgt 11520
cgctgcctct ggacccctct cgagagttcc gctccaccgt tggacttgct ccgctgtcgg 11580
catccagaaa ttgcgtggcg gagcggcaga cgtgagccgg cacggcaggc ggcctcctcc 11640
tcctctcacg gcaccggcag ctacggggga ttcctttccc accgctcctt cgctttccct 11700
tcctcgcccg ccgtaataaa tagacacccc ctccacaccc tctttcccca acctcgtgtt 11760
gttcggagcg cacacacaca caaccagatc tcccccaaat ccacccgtcg gcacctccgc 11820
ttcaaggtac gccgctcgtc ctcccccccc cccctctcta ccttctctag atcggcgttc 11880
cggtccatgg ttagggcccg gtagttctac ttctgttcat gtttgtgtta gatccgtgtt 11940
tgtgttagat ccgtgctgct agcgttcgta cacggatgcg acctgtacgt cagacacgtt 12000
ctgattgcta acttgccagt gtttctcttt ggggaatcct gggatggctc tagccgttcc 12060
gcagacggga tcgatttcat gatttttttt gtttcgttgc atagggtttg gtttgccctt 12120
ttcctttatt tcaatatatg ccgtgcactt gtttgtcggg tcatcttttc atgctttttt 12180
ttgtcttggt tgtgatgatg tggtctggtt gggcggtcgt tctagatcgg agtagaattc 12240
tgtttcaaac tacctggtgg atttattaat tttggatctg tatgtgtgtg ccatacatat 12300
tcatagttac gaattgaaga tgatggatgg aaatatcgat ctaggatagg tatacatgtt 12360
gatgcgggtt ttactgatgc atatacagag atgctttttg ttcgcttggt tgtgatgatg 12420
tggtgtggtt gggcggtcgt tcattcgttc tagatcggag tagaatactg tttcaaacta 12480
cctggtgtat ttattaattt tggaactgta tgtgtgtgtc atacatcttc atagttacga 12540
gtttaagatg gatggaaata tcgatctagg ataggtatac atgttgatgt gggttttact 12600
gatgcatata catgatggca tatgcagcat ctattcatat gctctaacct tgagtaccta 12660
tctattataa taaacaagta tgttttataa ttattttgat cttgatatac ttggatgatg 12720
gcatatgcag cagctatatg tggatttttt tagccctgcc ttcatacgct atttatttgc 12780
ttggtactgt ttcttttgtc gatgctcacc ctgttgtttg gtgttacttc tgcagggatc 12840
cggcagcagc catgcagaag ctgatcaaca gcgtgcagaa ctacgcctgg ggcagcaaga 12900
ccgccctgac cgagctgtac ggcatggaga accccagcag ccagcccatg gccgagctgt 12960
ggatgggcgc ccaccccaag agcagcagcc gcgtgcagaa cgccgccggc gacatcgtga 13020
gcctgcgcga cgtgatcgag agcgacaaga gcaccctgct gggcgaggcc gtggccaagc 13080
gcttcggcga gctgcccttc ctgttcaagg tgctgtgcgc cgcccagccc ctgagcatcc 13140
aggtgcaccc caacaagcac aacagcgaga tcggcttcgc caaggagaac gccgccggca 13200
tccccatgga cgccgccgag cgcaactaca aggaccccaa ccacaagccc gagctggtgt 13260
tcgccctgac ccccttcctg gccatgaacg ccttccgcga gttcagcgag atcgtgagcc 13320
tgctgcagcc cgtggccggc gcccaccccg ccatcgccca cttcctgcag cagcccgacg 13380
ccgagcgcct gagcgagctg ttcgccagcc tgctgaacat gcagggcgag gagaagagcc 13440
gcgccctggc catcctgaag agcgccctgg acagccagca gggcgagccc tggcagacca 13500
tccgcctgat cagcgagttc taccccgagg acagcggcct gttcagcccc ctgctgctga 13560
acgtggtgaa gctgaacccc ggcgaggcca tgttcctgtt cgccgagacc ccccacgcct 13620
acctgcaggg cgtggccctg gaggtgatgg ccaacagcga caacgtgctg cgcgccggcc 13680
tgacccccaa gtacatcgac atccccgagc tggtggccaa cgtgaagttc gaggccaagc 13740
ccgccaacca gctgctgacc cagcccgtga agcagggcgc cgagctggac ttccccatcc 13800
ccgtggacga cttcgccttc agcctgcacg acctgagcga caaggagacc accatcagcc 13860
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agcagctgca gctgaagccc ggcgagagcg ccttcatcgc cgccaacgag agccccgtga 13980
ccgtgaaggg ccacggccgc ctggcccgcg tgtacaacaa gctgtgatag gagctcgatc 14040
cgtcgacctg cagatcgttc aaacatttgg caataaagtt tcttaagatt gaatcctgtt 14100
gccggtcttg cgatgattat catataattt ctgttgaatt acgttaagca tgtaataatt 14160
aacatgtaat gcatgacgtt atttatgaga tgggttttta tgattagagt cccgcaatta 14220
tacatttaat acgcgataga aaacaaaata tagcgcgcaa actaggataa attatcgcgc 14280
gcggtgtcat ctatgttact agatcggcgc gccgcaattg aagtttgggc ggccagcatg 14340
gccgtatccg caatgtgtta ttaagttgtc taagcgtcaa tttgtttaca ccacaatata 14400
tcctgccacc agccagccaa cagctccccg accggcagct cggcacaaaa tcaccactcg 14460
atacaggcag cccatcagaa ttaattctca tgtttgacag cttatcatcg actgcacggt 14520
gcaccaatgc ttctggcgtc aggcagccat cggaagctgt ggtatggctg tgcaggtcgt 14580
aaatcactgc ataattcgtg tcgctcaagg cgcactcccg ttctggataa tgttttttgc 14640
gccgacatca taacggttct ggcaaatatt ctgaaatgag ctgttgacaa ttaatcatcc 14700
ggctcgtata atgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagaccatg 14760
agggaagcgt tgatcgccga agtatcgact caactatcag aggtagttgg cgtcatcgag 14820
cgccatctcg aaccgacgtt gctggccgta catttgtacg gctccgcagt ggatggcggc 14880
ctgaagccac acagtgatat tgatttgctg gttacggtga ccgtaaggct tgatgaaaca 14940
acgcggcgag ctttgatcaa cgaccttttg gaaacttcgg cttcccctgg agagagcgag 15000
attctccgcg ctgtagaagt caccattgtt gtgcacgacg acatcattcc gtggcgttat 15060
ccagctaagc gcgaactgca atttggagaa tggcagcgca atgacattct tgcaggtatc 15120
ttcgagccag ccacgatcga cattgatctg gctatcttgc tgacaaaagc aagagaacat 15180
agcgttgcct tggtaggtcc agcggcggag gaactctttg atccggttcc tgaacaggat 15240
ctatttgagg cgctaaatga aaccttaacg ctatggaact cgccgcccga ctgggctggc 15300
gatgagcgaa atgtagtgct tacgttgtcc cgcatttggt acagcgcagt aaccggcaaa 15360
atcgcgccga aggatgtcgc tgccgactgg gcaatggagc gcctgccggc ccagtatcag 15420
cccgtcatac ttgaagctag gcaggcttat cttggacaag aagatcgctt ggcctcgcgc 15480
gcagatcagt tggaagaatt tgttcactac gtgaaaggcg agatcaccaa agtagtcggc 15540
aaataaagct ctagtggatc tccgtacccg gggatctggc tcgcggcgga cgcacgacgc 15600
cggggcgaga ccataggcga tctcctaaat caatagtagc tgtaacctcg aagcgtttca 15660
cttgtaacaa cgattgagaa tttttgtcat aaaattgaaa tacttggttc gcatttttgt 15720
catccgcggt cagccgcaat tctgacgaac tgcccattta gctggagatg attgtacatc 15780
cttcacgtga aaatttctca agcgctgtga acaagggttc agattttaga ttgaaaggtg 15840
agccgttgaa acacgttctt cttgtcgatg acgacgtcgc tatgcggcat cttattattg 15900
aataccttac gatccacgcc ttcaaagtga ccgcggtagc cgacagcacc cagttcacaa 15960
gagtactctc ttccgcgacg gtcgatgtcg tggttgttga tctagattta ggtcgtgaag 16020
atgggctcga gatcgttcgt aatctggcgg caaagtctga tattccaatc ataattatca 16080
gtggcgaccg ccttgaggag acggataaag ttgttgcact cgagctagga gcaagtgatt 16140
ttatcgctaa gccgttcagt atcagagagt ttctagcacg cattcgggtt gccttgcgcg 16200
tgcgccccaa cgttgtccgc tccaaagacc gacggtcttt ttgttttact gactggacac 16260
ttaatctcag gcaacgtcgc ttgatgtccg aagctggcgg tgaggtgaaa cttacggcag 16320
gtgagttcaa tcttctcctc gcgtttttag agaaaccccg cgacgttcta tcgcgcgagc 16380
aacttctcat tgccagtcga gtacgcgacg aggaggttta tgacaggagt atagatgttc 16440
tcattttgag gctgcgccgc aaacttgagg cagatccgtc aagccctcaa ctgataaaaa 16500
cagcaagagg tgccggttat ttctttgacg cggacgtgca ggtttcgcac ggggggacga 16560
tggcagcctg agccaattcc cagatccccg aggaatcggc gtgagcggtc gcaaaccatc 16620
cggcccggta caaatcggcg cggcgctggg tgatgacctg gtggagaagt tgaaggccgc 16680
gcaggccgcc cagcggcaac gcatcgaggc agaagcacgc cccggtgaat cgtggcaagc 16740
ggccgctgat cgaatccgca aagaatcccg gcaaccgccg gcagccggtg cgccgtcgat 16800
taggaagccg cccaagggcg acgagcaacc agattttttc gttccgatgc tctatgacgt 16860
gggcacccgc gatagtcgca gcatcatgga cgtggccgtt ttccgtctgt cgaagcgtga 16920
ccgacgagct ggcgaggtga tccgctacga gcttccagac gggcacgtag aggtttccgc 16980
agggccggcc ggcatggcca gtgtgtggga ttacgacctg gtactgatgg cggtttccca 17040
tctaaccgaa tccatgaacc gataccggga agggaaggga gacaagcccg gccgcgtgtt 17100
ccgtccacac gttgcggacg tactcaagtt ctgccggcga gccgatggcg gaaagcagaa 17160
agacgacctg gtagaaacct gcattcggtt aaacaccacg cacgttgcca tgcagcgtac 17220
gaagaaggcc aagaacggcc gcctggtgac ggtatccgag ggtgaagcct tgattagccg 17280
ctacaagatc gtaaagagcg aaaccgggcg gccggagtac atcgagatcg agctagctga 17340
ttggatgtac cgcgagatca cagaaggcaa gaacccggac gtgctgacgg ttcaccccga 17400
ttactttttg atcgatcccg gcatcggccg ttttctctac cgcctggcac gccgcgccgc 17460
aggcaaggca gaagccagat ggttgttcaa gacgatctac gaacgcagtg gcagcgccgg 17520
agagttcaag aagttctgtt tcaccgtgcg caagctgatc gggtcaaatg acctgccgga 17580
gtacgatttg aaggaggagg cggggcaggc tggcccgatc ctagtcatgc gctaccgcaa 17640
cctgatcgag ggcgaagcat ccgccggttc ctaatgtacg gagcagatgc tagggcaaat 17700
tgccctagca ggggaaaaag gtcgaaaagg tctctttcct gtggatagca cgtacattgg 17760
gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggaa cccgtacatt gggaacccaa agccgtacat 17820
tgggaaccgg tcacacatgt aagtgactga tataaaagag aaaaaaggcg atttttccgc 17880
ctaaaactct ttaaaactta ttaaaactct taaaacccgc ctggcctgtg cataactgtc 17940
tggccagcgc acagccgaag agctgcaaaa agcgcctacc cttcggtcgc tgcgctccct 18000
acgccccgcc gcttcgcgtc ggcctatcgc ggccgctggc cgctcaaaaa tggctggcct 18060
acggccaggc aatctaccag ggcgcggaca agccgcgccg tcgccactcg accgccggcg 18120
ctgaggtctg cctcgtgaag aaggtgttgc tgactcatac caggcctgaa tcgccccatc 18180
atccagccag aaagtgaggg agccacggtt gatgagagct ttgttgtagg tggaccagtt 18240
ggtgattttg aacttttgct ttgccacgga acggtctgcg ttgtcgggaa gatgcgtgat 18300
ctgatccttc aactcagcaa aagttcgatt tattcaacaa agccgccgtc ccgtcaagtc 18360
agcgtaatgc tctgccagtg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg 18420
agcatcaaat gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa 18480
agccgtttct gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc 18540
tggtatcggt ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg 18600
tcaaaaataa ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat 18660
ggcaaaagct ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg 18720
gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc 18780
ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg 18840
aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct 18900
ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca 18960
gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct 19020
cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc 19080
gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt 19140
tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc 19200
cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc 19260
cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg 19320
gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 19380
agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 19440
cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga 19500
tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat 19560
tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttgatcc ggaatta 19617
<210> 6
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 22808的TALEN的靶序列
<400> 6
tccagggtca acgtggagac agggaggtac gaaccggtga ctggcgaagg aagca 55
<210> 7
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23123
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmPLAIIA
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7031)
<223> rsgRNAZmPLAIIA02
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10251)..(10503)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13822)..(14226)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14904)..(15710)
<223> oCOLE-06
<400> 7
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
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caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
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gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagggt caacgtggag acaggggttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca cacacacaca 7980
accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc cgctcgtcct 8040
cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt 8220
ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
cagcagccgc gtgcagaacg ccgccggcga catcgtgagc ctgcgcgacg tgatcgagag 9240
cgacaagagc accctgctgg gcgaggccgt ggccaagcgc ttcggcgagc tgcccttcct 9300
gttcaaggtg ctgtgcgccg cccagcccct gagcatccag gtgcacccca acaagcacaa 9360
cagcgagatc ggcttcgcca aggagaacgc cgccggcatc cccatggacg ccgccgagcg 9420
caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
ccaccccgcc atcgcccact tcctgcagca gcccgacgcc gagcgcctga gcgagctgtt 9600
cgccagcctg ctgaacatgc agggcgagga gaagagccgc gccctggcca tcctgaagag 9660
cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
ccccgaggac agcggcctgt tcagccccct gctgctgaac gtggtgaagc tgaaccccgg 9780
cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
ggtgatggcc aacagcgaca acgtgctgcg cgccggcctg acccccaagt acatcgacat 9900
ccccgagctg gtggccaacg tgaagttcga ggccaagccc gccaaccagc tgctgaccca 9960
gcccgtgaag cagggcgccg agctggactt ccccatcccc gtggacgact tcgccttcag 10020
cctgcacgac ctgagcgaca aggagaccac catcagccag cagagcgccg ccatcctgtt 10080
ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca 10320
tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat 10380
ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa 10440
acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
ccattgttgt gcacgacgac atcattccgt ggcgttatcc agctaagcgc gaactgcaat 11280
ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
cgtacccggg gatctggctc gcggcggacg cacgacgccg gggcgagacc ataggcgatc 11820
tcctaaatca atagtagctg taacctcgaa gcgtttcact tgtaacaacg attgagaatt 11880
tttgtcataa aattgaaata cttggttcgc atttttgtca tccgcggtca gccgcaattc 11940
tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
cgctgtgaac aagggttcag attttagatt gaaaggtgag ccgttgaaac acgttcttct 12060
tgtcgatgac gacgtcgcta tgcggcatct tattattgaa taccttacga tccacgcctt 12120
caaagtgacc gcggtagccg acagcaccca gttcacaaga gtactctctt ccgcgacggt 12180
cgatgtcgtg gttgttgatc tagatttagg tcgtgaagat gggctcgagc taggagcaag 12240
tgattttatc gctaagccgt tcagtatcag agagtttcta gcacgcattc gggttgcctt 12300
gcgcgtgcgc cccaacgttg tccgctccaa agaccgacgg tctttttgtt ttactgactg 12360
gacacttaat ctcaggcaac gtcgcttgat gtccgaagct ggcggtgagg tgaaacttac 12420
ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
tgttctcatt ttgaggctgc gccgcaaact tgaggcagat ccgtcaagcc ctcaactgat 12600
aaaaacagca agaggtgccg gttatttctt tgacgcggac gtgcaggttt cgcacggggg 12660
gacgatggca gcctgagcca attcccagat ccccgaggaa tcggcgtgag cggtcgcaaa 12720
ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga gaagttgaag 12780
gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg tgaatcgtgg 12840
caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca cgtagaggtt 13080
tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact gatggcggtt 13140
tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa gcccggccgc 13200
gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga tggcggaaag 13260
cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt tgccatgcag 13320
cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga agccttgatt 13380
agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct gacggttcac 13500
cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg cagtggcagc 13620
gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc aaatgacctg 13680
ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt catgcgctac 13740
cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa cccaaagccg 13920
tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg gtcgctgcgc 14100
tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc aaaaatggct 14160
ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc actcgaccgc 14220
cggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc ctgaatcgcc 14280
ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt gtaggtggac 14340
cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc gggaagatgc 14400
gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg ccgtcccgtc 14460
aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat tagaaaaact 14520
catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt 14580
gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa 14640
gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc 14700
cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
agaatggcaa aagctctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt 14820
attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg 14880
cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac 14940
gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 15000
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 15060
agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 15120
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 15180
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 15240
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 15300
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 15360
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 15420
aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg 15480
aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 15540
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 15660
gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gatccggaat 15720
ta 15722
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于编辑MTL
<400> 8
gggtcaacgt ggagacaggg 20
<210> 9
<211> 41
<212> DNA
<213> 玉米
<400> 9
agggtcaacg tggagacagg gaggtacgaa ccggtgactg g 41
<210> 10
<211> 45
<212> DNA
<213> 玉米
<400> 10
agggtcaacg tggagacagg cgaggaggta cgaaccggtg actgg 45
<210> 11
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL
<400> 11
agggtcaacg tggagacaag ggaggtacga accggtgact gg 42
<210> 12
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 12
agggtcaacg tggagaaccg gtgactgg 28
<210> 13
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 13
agggtcaacg tggagacggg aggtacgaac cggtgactgg 40
<210> 14
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 14
agggtcaacg tggagaaccg gtgactgg 28
<210> 15
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 15
agggtcaacg tggagacaag ggaggtacga accggtgact gg 42
<210> 16
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 16
agggtcaacg tggagacggg aggtacgaac cggtgactgg 40
<210> 17
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 未突变的MTL部分
<400> 17
agggtcaacg tggagacagg gaggtacgaa ccggtgactg g 41
<210> 18
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 突变的MTL部分
<400> 18
agggtcaacg tggagaaccg gtgactgg 28
<210> 19
<211> 1371
<212> DNA
<213> 玉米
<400> 19
agttcatcac taatcacact tattgttccc tcgacgagta tctagctagc tcattaatcg 60
atcaatcggg gtgtgcggtc gaaggcggca atggcgagct actcgtcgcg gcgtccatgc 120
aatacctgta gcacgaaggc gatggccggg agcgtggtcg gcgagcccgt cgtgctgggg 180
cagagggtga cggtgctgac ggtggacggc ggcggcgtcc ggggtctcat cccgggaacc 240
atcctcgcct tcctcgaggc caggctgcag gagctggacg gaccggaggc gaggctggcg 300
gactacttcg actacatcgc cggaaccagc accggcggtc tcatcaccgc catgctcacc 360
gcgcccggca aggacaagcg gcctctctac gctgccaagg acatcaacca cttttacatg 420
gagaactgcc cgcgcatctt ccctcagaag agcaggcttg cggccgccat gtccgcgctg 480
aggaagccaa agtacaacgg caagtgcatg cgcagcctga ttaggagcat cctcggcgag 540
acgagggcca agagcacgcc tctgaagaac gctctgctct cggacgtgtg cattggcacg 600
tccgccgcgc cgacctacct cccggcgcac tacttccaga ctgaagacgc caacggcaag 660
gagcgcgaat acaacctcat cgacggcggt gtggcggcca acaacccgac gatggttgcg 720
atgacgcaga tcaccaaaaa gatgcttgcc agcaaggaca aggccgagga gctgtaccca 780
gtgaagccgt cgaactgccg caggttcctg gtgctgtcca tcgggacggg gtcgacgtcc 840
gagcagggcc tctacacggc gcggcagtgc tcccggtggg gtatctgccg gtggctccgc 900
aacaacggca tggcccccat catcgacatc ttcatggcgg ccagctcgga cctggtggac 960
atccacgtcg ccgcgatgtt ccagtcgctc cacagcgacg gcgactacct gcgcatccag 1020
gacaactcgc tccgtggcgc cgcggccacc gtggacgcgg cgacgccgga gaacatgcgg 1080
acgctcgtcg ggatcgggga gcggatgctg gcacagaggg tgtccagggt caacgtggag 1140
acagggaggt acgaaccggt gactggcgaa ggaagcaatg ccgatgccct cggtgggctc 1200
gctaggcagc tctccgagga gaggagaaca aggctcgcgc gccgcgtgtc tgccatcaac 1260
ccaagaggct ctagatgtgc gtcgtacgat atctaagaca agtggcttta ctgtcagtca 1320
catgcttgta aataagtaga ctttatttta ataaaacata aaaatatata t 1371
<210> 20
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23397
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmVLHP
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7031)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10251)..(10503)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13822)..(14226)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14904)..(15710)
<223> oCOLE-06
<400> 20
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagctg gagctgagct tccggggttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca cacacacaca 7980
accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc cgctcgtcct 8040
cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt 8220
ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
cagcagccgc gtgcagaacg ccgccggcga catcgtgagc ctgcgcgacg tgatcgagag 9240
cgacaagagc accctgctgg gcgaggccgt ggccaagcgc ttcggcgagc tgcccttcct 9300
gttcaaggtg ctgtgcgccg cccagcccct gagcatccag gtgcacccca acaagcacaa 9360
cagcgagatc ggcttcgcca aggagaacgc cgccggcatc cccatggacg ccgccgagcg 9420
caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
ccaccccgcc atcgcccact tcctgcagca gcccgacgcc gagcgcctga gcgagctgtt 9600
cgccagcctg ctgaacatgc agggcgagga gaagagccgc gccctggcca tcctgaagag 9660
cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
ccccgaggac agcggcctgt tcagccccct gctgctgaac gtggtgaagc tgaaccccgg 9780
cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
ggtgatggcc aacagcgaca acgtgctgcg cgccggcctg acccccaagt acatcgacat 9900
ccccgagctg gtggccaacg tgaagttcga ggccaagccc gccaaccagc tgctgaccca 9960
gcccgtgaag cagggcgccg agctggactt ccccatcccc gtggacgact tcgccttcag 10020
cctgcacgac ctgagcgaca aggagaccac catcagccag cagagcgccg ccatcctgtt 10080
ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca 10320
tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat 10380
ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa 10440
acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
ccattgttgt gcacgacgac atcattccgt ggcgttatcc agctaagcgc gaactgcaat 11280
ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
cgtacccggg gatctggctc gcggcggacg cacgacgccg gggcgagacc ataggcgatc 11820
tcctaaatca atagtagctg taacctcgaa gcgtttcact tgtaacaacg attgagaatt 11880
tttgtcataa aattgaaata cttggttcgc atttttgtca tccgcggtca gccgcaattc 11940
tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
cgctgtgaac aagggttcag attttagatt gaaaggtgag ccgttgaaac acgttcttct 12060
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caaagtgacc gcggtagccg acagcaccca gttcacaaga gtactctctt ccgcgacggt 12180
cgatgtcgtg gttgttgatc tagatttagg tcgtgaagat gggctcgagc taggagcaag 12240
tgattttatc gctaagccgt tcagtatcag agagtttcta gcacgcattc gggttgcctt 12300
gcgcgtgcgc cccaacgttg tccgctccaa agaccgacgg tctttttgtt ttactgactg 12360
gacacttaat ctcaggcaac gtcgcttgat gtccgaagct ggcggtgagg tgaaacttac 12420
ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
tgttctcatt ttgaggctgc gccgcaaact tgaggcagat ccgtcaagcc ctcaactgat 12600
aaaaacagca agaggtgccg gttatttctt tgacgcggac gtgcaggttt cgcacggggg 12660
gacgatggca gcctgagcca attcccagat ccccgaggaa tcggcgtgag cggtcgcaaa 12720
ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga gaagttgaag 12780
gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg tgaatcgtgg 12840
caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca cgtagaggtt 13080
tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact gatggcggtt 13140
tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa gcccggccgc 13200
gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga tggcggaaag 13260
cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt tgccatgcag 13320
cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga agccttgatt 13380
agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct gacggttcac 13500
cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg cagtggcagc 13620
gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc aaatgacctg 13680
ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt catgcgctac 13740
cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
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tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg gtcgctgcgc 14100
tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc aaaaatggct 14160
ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc actcgaccgc 14220
cggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc ctgaatcgcc 14280
ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt gtaggtggac 14340
cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc gggaagatgc 14400
gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg ccgtcccgtc 14460
aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat tagaaaaact 14520
catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt 14580
gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa 14640
gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc 14700
cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
agaatggcaa aagctctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt 14820
attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg 14880
cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac 14940
gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 15000
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 15060
agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 15120
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 15180
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 15240
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 15300
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 15360
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 15420
aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg 15480
aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 15540
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 15660
gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gatccggaat 15720
ta 15722
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于编辑VLHP2
<400> 21
gctggagctg agcttccggg 20
<210> 22
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23398
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmGW2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7031)
<223> rsgRNAZmGW2-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
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<221> 终止子
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<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
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<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13822)..(14226)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14904)..(15710)
<223> oCOLE-06
<400> 22
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagagc ggttcacgcg gccgcagttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
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cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
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ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
cagcagccgc gtgcagaacg ccgccggcga catcgtgagc ctgcgcgacg tgatcgagag 9240
cgacaagagc accctgctgg gcgaggccgt ggccaagcgc ttcggcgagc tgcccttcct 9300
gttcaaggtg ctgtgcgccg cccagcccct gagcatccag gtgcacccca acaagcacaa 9360
cagcgagatc ggcttcgcca aggagaacgc cgccggcatc cccatggacg ccgccgagcg 9420
caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
ccaccccgcc atcgcccact tcctgcagca gcccgacgcc gagcgcctga gcgagctgtt 9600
cgccagcctg ctgaacatgc agggcgagga gaagagccgc gccctggcca tcctgaagag 9660
cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
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cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
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ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
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acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
ccattgttgt gcacgacgac atcattccgt ggcgttatcc agctaagcgc gaactgcaat 11280
ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
cgtacccggg gatctggctc gcggcggacg cacgacgccg gggcgagacc ataggcgatc 11820
tcctaaatca atagtagctg taacctcgaa gcgtttcact tgtaacaacg attgagaatt 11880
tttgtcataa aattgaaata cttggttcgc atttttgtca tccgcggtca gccgcaattc 11940
tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
cgctgtgaac aagggttcag attttagatt gaaaggtgag ccgttgaaac acgttcttct 12060
tgtcgatgac gacgtcgcta tgcggcatct tattattgaa taccttacga tccacgcctt 12120
caaagtgacc gcggtagccg acagcaccca gttcacaaga gtactctctt ccgcgacggt 12180
cgatgtcgtg gttgttgatc tagatttagg tcgtgaagat gggctcgagc taggagcaag 12240
tgattttatc gctaagccgt tcagtatcag agagtttcta gcacgcattc gggttgcctt 12300
gcgcgtgcgc cccaacgttg tccgctccaa agaccgacgg tctttttgtt ttactgactg 12360
gacacttaat ctcaggcaac gtcgcttgat gtccgaagct ggcggtgagg tgaaacttac 12420
ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
tgttctcatt ttgaggctgc gccgcaaact tgaggcagat ccgtcaagcc ctcaactgat 12600
aaaaacagca agaggtgccg gttatttctt tgacgcggac gtgcaggttt cgcacggggg 12660
gacgatggca gcctgagcca attcccagat ccccgaggaa tcggcgtgag cggtcgcaaa 12720
ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga gaagttgaag 12780
gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg tgaatcgtgg 12840
caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca cgtagaggtt 13080
tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact gatggcggtt 13140
tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa gcccggccgc 13200
gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga tggcggaaag 13260
cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt tgccatgcag 13320
cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga agccttgatt 13380
agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct gacggttcac 13500
cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg cagtggcagc 13620
gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc aaatgacctg 13680
ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt catgcgctac 13740
cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa cccaaagccg 13920
tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg gtcgctgcgc 14100
tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc aaaaatggct 14160
ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc actcgaccgc 14220
cggcgctgag gtctgcctcg tgaagaaggt gttgctgact cataccaggc ctgaatcgcc 14280
ccatcatcca gccagaaagt gagggagcca cggttgatga gagctttgtt gtaggtggac 14340
cagttggtga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc gggaagatgc 14400
gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cgatttattc aacaaagccg ccgtcccgtc 14460
aagtcagcgt aatgctctgc cagtgttaca accaattaac caattctgat tagaaaaact 14520
catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt 14580
gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa 14640
gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc 14700
cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
agaatggcaa aagctctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt 14820
attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg 14880
cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac 14940
gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 15000
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 15060
agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 15120
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 15180
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 15240
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 15300
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 15360
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 15420
aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg 15480
aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 15540
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 15660
gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gatccggaat 15720
ta 15722
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于编辑GW2-1
<400> 23
gagcggttca cgcggccgca 20
<210> 24
<211> 15721
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23763
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6221)..(6283)
<223> xSV40NLS-03
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6945)
<223> xTaVLHP1
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7030)
<223> rsgRNA TaVLHP1-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7041)..(9032)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9049)..(10227)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10250)..(10502)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10546)..(10675)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10955)..(11743)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11838)..(11968)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12705)..(13778)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13821)..(14225)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14903)..(15709)
<223> oCOLE-06
<400> 24
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgccagcgcc cagagcttca tcgagaggat 3600
gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
cgagtacttc accgtgtaca acgagctgac caaggtgaag tacgtgaccg agggcatgag 3720
gaagccggcc ttcctgagcg gcgagcagaa gaaggccatc gtggacctgc tgttcaagac 3780
caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
cgacagcgtg gagatcagcg gcgtggagga caggttcaac gccagcctgg gcacctacca 3900
cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagacg agcaggcgca gttccgtttt agagctagaa 6960
atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg 7020
cttttttttt cggaccgcgc ctgcagtgca gcgtgacccg gtcgtgcccc tctctagaga 7080
taatgagcat tgcatgtcta agttataaaa aattaccaca tatttttttt gtcacacttg 7140
tttgaagtgc agtttatcta tctttataca tatatttaaa ctttactcta cgaataatat 7200
aatctatagt actacaataa tatcagtgtt ttagagaatc atataaatga acagttagac 7260
atggtctaaa ggacaattga gtattttgac aacaggactc tacagtttta tctttttagt 7320
gtgcatgtgt tctccttttt ttttgcaaat agcttcacct atataatact tcatccattt 7380
tattagtaca tccatttagg gtttagggtt aatggttttt atagactaat ttttttagta 7440
catctatttt attctatttt agcctctaaa ttaagaaaac taaaactcta ttttagtttt 7500
tttatttaat aatttagata taaaatagaa taaaataaag tgactaaaaa ttaaacaaat 7560
accctttaag aaattaaaaa aactaaggaa acatttttct tgtttcgagt agataatgcc 7620
agcctgttaa acgccgtcga cgagtctaac ggacaccaac cagcgaacca gcagcgtcgc 7680
gtcgggccaa gcgaagcaga cggcacggca tctctgtcgc tgcctctgga cccctctcga 7740
gagttccgct ccaccgttgg acttgctccg ctgtcggcat ccagaaattg cgtggcggag 7800
cggcagacgt gagccggcac ggcaggcggc ctcctcctcc tctcacggca ccggcagcta 7860
cgggggattc ctttcccacc gctccttcgc tttcccttcc tcgcccgccg taataaatag 7920
acaccccctc cacaccctct ttccccaacc tcgtgttgtt cggagcgcac acacacacaa 7980
ccagatctcc cccaaatcca cccgtcggca cctccgcttc aaggtacgcc gctcgtcctc 8040
cccccccccc ctctctacct tctctagatc ggcgttccgg tccatggtta gggcccggta 8100
gttctacttc tgttcatgtt tgtgttagat ccgtgtttgt gttagatccg tgctgctagc 8160
gttcgtacac ggatgcgacc tgtacgtcag acacgttctg attgctaact tgccagtgtt 8220
tctctttggg gaatcctggg atggctctag ccgttccgca gacgggatcg atttcatgat 8280
tttttttgtt tcgttgcata gggtttggtt tgcccttttc ctttatttca atatatgccg 8340
tgcacttgtt tgtcgggtca tcttttcatg cttttttttg tcttggttgt gatgatgtgg 8400
tctggttggg cggtcgttct agatcggagt agaattctgt ttcaaactac ctggtggatt 8460
tattaatttt ggatctgtat gtgtgtgcca tacatattca tagttacgaa ttgaagatga 8520
tggatggaaa tatcgatcta ggataggtat acatgttgat gcgggtttta ctgatgcata 8580
tacagagatg ctttttgttc gcttggttgt gatgatgtgg tgtggttggg cggtcgttca 8640
ttcgttctag atcggagtag aatactgttt caaactacct ggtgtattta ttaattttgg 8700
aactgtatgt gtgtgtcata catcttcata gttacgagtt taagatggat ggaaatatcg 8760
atctaggata ggtatacatg ttgatgtggg ttttactgat gcatatacat gatggcatat 8820
gcagcatcta ttcatatgct ctaaccttga gtacctatct attataataa acaagtatgt 8880
tttataatta ttttgatctt gatatacttg gatgatggca tatgcagcag ctatatgtgg 8940
atttttttag ccctgccttc atacgctatt tatttgcttg gtactgtttc ttttgtcgat 9000
gctcaccctg ttgtttggtg ttacttctgc agggatccgg cagcagccat gcagaagctg 9060
atcaacagcg tgcagaacta cgcctggggc agcaagaccg ccctgaccga gctgtacggc 9120
atggagaacc ccagcagcca gcccatggcc gagctgtgga tgggcgccca ccccaagagc 9180
agcagccgcg tgcagaacgc cgccggcgac atcgtgagcc tgcgcgacgt gatcgagagc 9240
gacaagagca ccctgctggg cgaggccgtg gccaagcgct tcggcgagct gcccttcctg 9300
ttcaaggtgc tgtgcgccgc ccagcccctg agcatccagg tgcaccccaa caagcacaac 9360
agcgagatcg gcttcgccaa ggagaacgcc gccggcatcc ccatggacgc cgccgagcgc 9420
aactacaagg accccaacca caagcccgag ctggtgttcg ccctgacccc cttcctggcc 9480
atgaacgcct tccgcgagtt cagcgagatc gtgagcctgc tgcagcccgt ggccggcgcc 9540
caccccgcca tcgcccactt cctgcagcag cccgacgccg agcgcctgag cgagctgttc 9600
gccagcctgc tgaacatgca gggcgaggag aagagccgcg ccctggccat cctgaagagc 9660
gccctggaca gccagcaggg cgagccctgg cagaccatcc gcctgatcag cgagttctac 9720
cccgaggaca gcggcctgtt cagccccctg ctgctgaacg tggtgaagct gaaccccggc 9780
gaggccatgt tcctgttcgc cgagaccccc cacgcctacc tgcagggcgt ggccctggag 9840
gtgatggcca acagcgacaa cgtgctgcgc gccggcctga cccccaagta catcgacatc 9900
cccgagctgg tggccaacgt gaagttcgag gccaagcccg ccaaccagct gctgacccag 9960
cccgtgaagc agggcgccga gctggacttc cccatccccg tggacgactt cgccttcagc 10020
ctgcacgacc tgagcgacaa ggagaccacc atcagccagc agagcgccgc catcctgttc 10080
tgcgtggagg gcgacgccac cctgtggaag ggcagccagc agctgcagct gaagcccggc 10140
gagagcgcct tcatcgccgc caacgagagc cccgtgaccg tgaagggcca cggccgcctg 10200
gcccgcgtgt acaacaagct gtgataggag ctcgatccgt cgacctgcag atcgttcaaa 10260
catttggcaa taaagtttct taagattgaa tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat 10320
ataatttctg ttgaattacg ttaagcatgt aataattaac atgtaatgca tgacgttatt 10380
tatgagatgg gtttttatga ttagagtccc gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa 10440
caaaatatag cgcgcaaact aggataaatt atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga 10500
tcggcgcgcc gcaattgaag tttgggcggc cagcatggcc gtatccgcaa tgtgttatta 10560
agttgtctaa gcgtcaattt gtttacacca caatatatcc tgccaccagc cagccaacag 10620
ctccccgacc ggcagctcgg cacaaaatca ccactcgata caggcagccc atcagaatta 10680
attctcatgt ttgacagctt atcatcgact gcacggtgca ccaatgcttc tggcgtcagg 10740
cagccatcgg aagctgtggt atggctgtgc aggtcgtaaa tcactgcata attcgtgtcg 10800
ctcaaggcgc actcccgttc tggataatgt tttttgcgcc gacatcataa cggttctggc 10860
aaatattctg aaatgagctg ttgacaatta atcatccggc tcgtataatg tgtggaattg 10920
tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gaccatgagg gaagcgttga tcgccgaagt 10980
atcgactcaa ctatcagagg tagttggcgt catcgagcgc catctcgaac cgacgttgct 11040
ggccgtacat ttgtacggct ccgcagtgga tggcggcctg aagccacaca gtgatattga 11100
tttgctggtt acggtgaccg taaggcttga tgaaacaacg cggcgagctt tgatcaacga 11160
ccttttggaa acttcggctt cccctggaga gagcgagatt ctccgcgctg tagaagtcac 11220
cattgttgtg cacgacgaca tcattccgtg gcgttatcca gctaagcgcg aactgcaatt 11280
tggagaatgg cagcgcaatg acattcttgc aggtatcttc gagccagcca cgatcgacat 11340
tgatctggct atcttgctga caaaagcaag agaacatagc gttgccttgg taggtccagc 11400
ggcggaggaa ctctttgatc cggttcctga acaggatcta tttgaggcgc taaatgaaac 11460
cttaacgcta tggaactcgc cgcccgactg ggctggcgat gagcgaaatg tagtgcttac 11520
gttgtcccgc atttggtaca gcgcagtaac cggcaaaatc gcgccgaagg atgtcgctgc 11580
cgactgggca atggagcgcc tgccggccca gtatcagccc gtcatacttg aagctaggca 11640
ggcttatctt ggacaagaag atcgcttggc ctcgcgcgca gatcagttgg aagaatttgt 11700
tcactacgtg aaaggcgaga tcaccaaagt agtcggcaaa taaagctcta gtggatctcc 11760
gtacccgggg atctggctcg cggcggacgc acgacgccgg ggcgagacca taggcgatct 11820
cctaaatcaa tagtagctgt aacctcgaag cgtttcactt gtaacaacga ttgagaattt 11880
ttgtcataaa attgaaatac ttggttcgca tttttgtcat ccgcggtcag ccgcaattct 11940
gacgaactgc ccatttagct ggagatgatt gtacatcctt cacgtgaaaa tttctcaagc 12000
gctgtgaaca agggttcaga ttttagattg aaaggtgagc cgttgaaaca cgttcttctt 12060
gtcgatgacg acgtcgctat gcggcatctt attattgaat accttacgat ccacgccttc 12120
aaagtgaccg cggtagccga cagcacccag ttcacaagag tactctcttc cgcgacggtc 12180
gatgtcgtgg ttgttgatct agatttaggt cgtgaagatg ggctcgagct aggagcaagt 12240
gattttatcg ctaagccgtt cagtatcaga gagtttctag cacgcattcg ggttgccttg 12300
cgcgtgcgcc ccaacgttgt ccgctccaaa gaccgacggt ctttttgttt tactgactgg 12360
acacttaatc tcaggcaacg tcgcttgatg tccgaagctg gcggtgaggt gaaacttacg 12420
gcaggtgagt tcaatcttct cctcgcgttt ttagagaaac cccgcgacgt tctatcgcgc 12480
gagcaacttc tcattgccag tcgagtacgc gacgaggagg tttatgacag gagtatagat 12540
gttctcattt tgaggctgcg ccgcaaactt gaggcagatc cgtcaagccc tcaactgata 12600
aaaacagcaa gaggtgccgg ttatttcttt gacgcggacg tgcaggtttc gcacgggggg 12660
acgatggcag cctgagccaa ttcccagatc cccgaggaat cggcgtgagc ggtcgcaaac 12720
catccggccc ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag aagttgaagg 12780
ccgcgcaggc cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt gaatcgtggc 12840
aagcggccgc tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc ggtgcgccgt 12900
cgattaggaa gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg atgctctatg 12960
acgtgggcac ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt ctgtcgaagc 13020
gtgaccgacg agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac gtagaggttt 13080
ccgcagggcc ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga cctggtactg atggcggttt 13140
cccatctaac cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag cccggccgcg 13200
tgttccgtcc acacgttgcg gacgtactca agttctgccg gcgagccgat ggcggaaagc 13260
agaaagacga cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt gccatgcagc 13320
gtacgaagaa ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa gccttgatta 13380
gccgctacaa gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag atcgagctag 13440
ctgattggat gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg acggttcacc 13500
ccgattactt tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg gcacgccgcg 13560
ccgcaggcaa ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc agtggcagcg 13620
ccggagagtt caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca aatgacctgc 13680
cggagtacga tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc atgcgctacc 13740
gcaacctgat cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag atgctagggc 13800
aaattgccct agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt tcctgtggat agcacgtaca 13860
ttgggaaccc aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta cattgggaac ccaaagccgt 13920
acattgggaa ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa ggcgattttt 13980
ccgcctaaaa ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc tgtgcataac 14040
tgtctggcca gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc tacccttcgg tcgctgcgct 14100
ccctacgccc cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc tggccgctca aaaatggctg 14160
gcctacggcc aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc gccgtcgcca ctcgaccgcc 14220
ggcgctgagg tctgcctcgt gaagaaggtg ttgctgactc ataccaggcc tgaatcgccc 14280
catcatccag ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc 14340
agttggtgat tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcg 14400
tgatctgatc cttcaactca gcaaaagttc gatttattca acaaagccgc cgtcccgtca 14460
agtcagcgta atgctctgcc agtgttacaa ccaattaacc aattctgatt agaaaaactc 14520
atcgagcatc aaatgaaact gcaatttatt catatcagga ttatcaatac catatttttg 14580
aaaaagccgt ttctgtaatg aaggagaaaa ctcaccgagg cagttccata ggatggcaag 14640
atcctggtat cggtctgcga ttccgactcg tccaacatca atacaaccta ttaatttccc 14700
ctcgtcaaaa ataaggttat caagtgagaa atcaccatga gtgacgactg aatccggtga 14760
gaatggcaaa agctctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta 14820
ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc 14880
gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg 14940
caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt 15000
tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa 15060
gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct 15120
ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc 15180
cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg 15240
tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct 15300
tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag 15360
cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga 15420
agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga 15480
agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg 15540
gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag 15600
aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag 15660
ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatccttttg atccggaatt 15720
a 15721
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于在小麦中编辑VLHP1
<400> 25
gacgagcagg cgcagttcc 19
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 小麦
<400> 26
gctggagctg agcttccggg 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 小麦
<400> 27
tctggagctg agcttccggg 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 玉米
<400> 28
aggcgtcgag cagcgaggtg 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编辑的ZmVLHP-03部分
<400> 29
aggcgttgag cagcgaggtg 20
<210> 30
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于在ZmPYL-D中产生E149L突变的修复供体模板
<400> 30
ccttggtgtt gccgtcgggg acgtcgacga cgaatgacag gatgacgagc gtccctggcc 60
ggccgtcgat gacct 75
<210> 31
<211> 15722
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23136
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (304)..(2100)
<223> prSoUbi4-04
<220>
<221> 基因
<222> (2117)..(6286)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5606)..(5608)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5651)..(5653)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6292)..(6544)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6551)..(6925)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(6946)
<223> xZmPYL-D
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6927)..(7031)
<223> rsgRBAZmPYLd-02
<220>
<221> 启动子
<222> (7042)..(9033)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (9050)..(10228)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (10251)..(10503)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10547)..(10676)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (10956)..(11744)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (11839)..(11969)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (12706)..(13779)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13822)..(14226)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14904)..(15710)
<223> oCOLE-06
<400> 31
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccattatg tggtctaggt aggttctata tataagaaaa cttgaaatgt tctaaaaaaa 360
aattcaagcc catgcatgat tgaagcaaac ggtatagcaa cggtgttaac ctgatctagt 420
gatctcttgc aatccttaac ggccacctac cgcaggtagc aaacggcgtc cccctcctcg 480
atatctccgc ggcgacctct ggctttttcc gcggaattgc gcggtgggga cggattccac 540
gagaccgcga cgcaaccgcc tctcgccgct gggccccaca ccgctcggtg ccgtagcctc 600
acgggactct ttctccctcc tcccccgtta taaattggct tcatcccctc cttgcctcat 660
ccatccaaat cccagtcccc aatcccatcc cttcgtagga gaaattcatc gaagctaagc 720
gaatcctcgc gatcctctca aggtactgcg agttttcgat ccccctctcg acccctcgta 780
tgtttgtgtt tgtcgtagcg tttgattagg tatgctttcc ctgtttgtgt tcgtcgtagc 840
gtttgattag gtatgctttc cctgttcgtg ttcatcgtag tgtttgatta ggtcgtgtga 900
ggcgatggcc tgctcgcgtc cttcgatctg tagtcgattt gcgggtcgtg gtgtagatct 960
gcgggctgtg atgaagttat ttggtgtgat ctgctcgcct gattctgcgg gttggctcga 1020
gtagatatga tggttggacc ggttggttcg tttaccgcgc tagggttggg ctgggatgat 1080
gttgcatgcg ccgttgcgcg tgatcccgca gcaggacttg cgtttgattg ccagatctcg 1140
ttacgattat gtgatttggt ttggactttt tagatctgta gcttctgctt atgtgccaga 1200
tgcgcctact gctcatatgc ctgatgataa tcataaatgg ctgtggaact aactagttga 1260
ttgcggagtc atgtatcagc tacaggtgta gggactagct acaggtgtag ggacttgcgt 1320
ctaattgttt ggtcctttac tcatgttgca attatgcaat ttagtttaga ttgtttgttc 1380
cactcatcta ggctgtaaaa gggacactgc ttagattgct gtttaatctt tttagtagat 1440
tatattatat tggtaactta ttacccctat tacatgccat acgtgacttc tgctcatgcc 1500
tgatgataat catagatcac tgtggaatta attagttgat tgttgaatca tgtttcatgt 1560
acataccacg gcacaattgc ttagttcctt aacaaatgca aattttactg atccatgtat 1620
gatttgcgtg gttctctaat gtgaaatact atagctactt gttagtaaga atcaggttcg 1680
tatgcttaat gctgtatgtg ccttctgctc atgcctgatg ataatcatat atcactggaa 1740
ttaattagtt gatcgtttaa tcatatatca agtacatacc atgccacaat ttttagtcac 1800
ttaacccatg cagattgaac tggtccctgc atgttttgct aaattgttct attctgatta 1860
gaccatatat catgtatttt tttttggtaa tggttctctt attttaaatg ctatatagtt 1920
ctggtacttg ttagaaagat ctgcttcata gtttagttgc ctatccctcg aattaggatg 1980
ctgagcagct gatcctatag ctttgtttca tgtatcaatt cttttgtgtt caacagtcag 2040
tttttgttag attcattgta acttatggtc gcttactctt ctggtcctca atgcttgcag 2100
gatcgcggcc gctcatatgg acaagaagta cagcatcggc ctggacatcg gcaccaacag 2160
cgtgggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccg agcaagaagt tcaaggtgct 2220
gggcaacacc gacaggcaca gcatcaagaa gaacctgatc ggcgccctgc tgttcgacag 2280
cggcgagacc gccgaggcca ccaggctgaa gaggaccgcc aggaggaggt acaccaggag 2340
gaagaacagg atctgctacc tgcaggagat cttcagcaac gagatggcca aggtggacga 2400
cagcttcttc cacaggctgg aggagagctt cctggtggag gaggacaaga agcacgagag 2460
gcacccgatc ttcggcaaca tcgtggacga ggtggcctac cacgagaagt acccgaccat 2520
ctaccacctg aggaagaagc tggtggacag caccgacaag gccgacctga ggctgatcta 2580
cctggccctg gcccacatga tcaagttcag gggccacttc ctgatcgagg gcgacctgaa 2640
cccggacaac agcgacgtgg acaagctgtt catccagctg gtgcagacct acaaccagct 2700
gttcgaggag aacccgatca acgccagcgg cgtggacgcc aaggccatcc tgagcgccag 2760
gctgagcaag agcaggaggc tggagaacct gatcgcccag ctgccgggcg agaagaagaa 2820
cggcctgttc ggcaacctga tcgccctgag cctgggcctg accccgaact tcaagagcaa 2880
cttcgacctg gccgaggacg ccaagctgca gctgagcaag gacacctacg acgacgacct 2940
ggacaacctg ctggcccaga tcggcgacca gtacgccgac ctgttcctgg ccgccaagaa 3000
cctgagcgac gccatcctgc tgagcgacat cctgagggtg aacaccgaga tcaccaaggc 3060
cccgctgagc gccagcatga tcaagaggta cgacgagcac caccaggacc tgaccctgct 3120
gaaggccctg gtgaggcagc agctgccgga gaagtacaag gagatcttct tcgaccagag 3180
caagaacggc tacgccggct acatcgacgg cggcgccagc caggaggagt tctacaagtt 3240
catcaagccg atcctggaga agatggacgg caccgaggag ctgctggtga agctgaacag 3300
ggaggacctg ctgaggaagc agaggacctt cgacaacggc agcatcccgc accagatcca 3360
cctgggcgag ctgcacgcca tcctgaggag gcaggaggac ttctacccgt tcctgaagga 3420
caacagggag aagatcgaga agatcctgac cttccgcatc ccgtactacg tgggcccgct 3480
ggccaggggc aacagcaggt tcgcctggat gaccaggaag agcgaggaga ccatcacccc 3540
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gaccaacttc gacaagaacc tgccgaacga gaaggtgctg ccgaagcaca gcctgctgta 3660
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caacaggaag gtgaccgtga agcagctgaa ggaggactac ttcaagaaga tcgagtgctt 3840
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cgacctgctg aagatcatca aggacaagga cttcctggac aacgaggaga acgaggacat 3960
cctggaggac atcgtgctga ccctgaccct gttcgaggac agggagatga tcgaggagag 4020
gctgaagacc tacgcccacc tgttcgacga caaggtgatg aagcagctga agaggaggag 4080
gtacaccggc tggggcaggc tgagcaggaa gctgatcaac ggcatcaggg acaagcagag 4140
cggcaagacc atcctggact tcctgaagag cgacggcttc gccaacagga acttcatgca 4200
gctgatccac gacgacagcc tgaccttcaa ggaggacatc cagaaggccc aggtgagcgg 4260
ccagggcgac agcctgcacg agcacatcgc caacctggcc ggcagcccgg ccatcaagaa 4320
gggcatcctg cagaccgtga aggtggtgga cgagctggtg aaggtgatgg gcaggcacaa 4380
gccggagaac atcgtgatcg agatggccag ggagaaccag accacccaga agggccagaa 4440
gaacagcagg gagaggatga agaggatcga ggagggcatc aaggagctgg gcagccagat 4500
cctgaaggag cacccggtgg agaacaccca gctgcagaac gagaagctgt acctgtacta 4560
cctgcagaac ggcagggaca tgtacgtgga ccaggagctg gacatcaaca ggctgagcga 4620
ctacgacgtg gaccacatcg tgccgcagag cttcctgaag gacgacagca tcgacaacaa 4680
ggtgctgacc aggagcgaca agaacagggg caagagcgac aacgtgccga gcgaggaggt 4740
ggtgaagaag atgaaaaact actggaggca gctgctgaac gccaagctga tcacccagag 4800
gaagttcgac aacctgacca aggccgagag gggcggcctg agcgagctgg acaaggccgg 4860
cttcattaaa aggcagctgg tggagaccag gcagatcacc aagcacgtgg cccagatcct 4920
ggacagcagg atgaacacca agtacgacga gaacgacaag ctgatcaggg aggtgaaggt 4980
gatcaccctg aagagcaagc tggtgagcga cttcaggaag gacttccagt tctacaaggt 5040
gagggagatc aataattacc accacgccca cgacgcctac ctgaacgccg tggtgggcac 5100
cgccctgatt aaaaagtacc cgaagctgga gagcgagttc gtgtacggcg actacaaggt 5160
gtacgacgtg aggaagatga tcgccaagag cgagcaggag atcggcaagg ccaccgccaa 5220
gtacttcttc tacagcaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcaccc tggccaacgg 5280
cgagatcagg aagaggccgc tgatcgagac caacggcgag accggcgaga tcgtgtggga 5340
caagggcagg gacttcgcca ccgtgaggaa ggtgctgtcc atgccgcagg tgaacatcgt 5400
gaagaagacc gaggtgcaga ccggcggctt cagcaaggag agcatcctgc cgaagaggaa 5460
cagcgacaag ctgatcgcca ggaagaagga ctgggacccg aagaagtacg gcggcttcga 5520
cagcccgacc gtggcctaca gcgtgctggt ggtggccaag gtggagaagg gcaagagcaa 5580
gaagctgaag agcgtgaagg agctggtggg catcaccatc atggagagga gcagcttcga 5640
gaagaaccca gtggacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga aggacctgat 5700
cattaaactg ccgaagtaca gcctgttcga gctggagaac ggcaggaaga ggatgctggc 5760
cagcgccggc gagctgcaga agggcaacga gctggccctg ccgagcaagt acgtgaactt 5820
cctgtacctg gccagccact acgagaagct gaagggcagc ccggaggaca acgagcagaa 5880
gcagctgttc gtggagcagc acaagcacta cctggacgag atcatcgagc agatcagcga 5940
gttcagcaag agggtgatcc tggccgacgc caacctggac aaggtgctga gcgcctacaa 6000
caagcacagg gacaagccga tcagggagca ggccgagaac atcatccacc tgttcaccct 6060
gaccaacctg ggcgccccgg ccgccttcaa gtacttcgac accaccatcg acaggaagag 6120
gtacaccagc accaaggagg tgctggacgc caccctgatc caccagagca tcaccggcct 6180
gtacgagacc aggatcgacc tgagccagct gggcggcgac agcagcccgc cgaagaagaa 6240
gaggaaggtg agctggaagg acgccagcgg ctggagcagg atgtgaagct tgatcgttca 6300
aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc 6360
atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta 6420
tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa 6480
aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta 6540
gatcttcgaa gggatcttta aacatacgaa cagatcactt aaagttcttc tgaagcaact 6600
taaagttatc aggcatgcat ggatcttgga ggaatcagat gtgcagtcag ggaccatagc 6660
acaggacagg cgtcttctac tggtgctacc agcaaatgct ggaagccggg aacactgggt 6720
acgttggaaa ccacgtgatg tggagtaaga taaactgtag gagaaaagca tttcgtagtg 6780
ggccatgaag cctttcagga catgtattgc agtatgggcc ggcccattac gcaattggac 6840
gacaacaaag actagtatta gtaccacctc ggctatccac atagatcaaa gctggtttaa 6900
aagagttgtg cagatgatcc gtggcagtcg gggacgtcga cgacgagttt tagagctaga 6960
aatagcaagt taaaataagg ctagtccgtt atcaacttga aaaagtggca ccgagtcggt 7020
gctttttttt tcggaccgcg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc ctctctagag 7080
ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt tgtcacactt 7140
gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct acgaataata 7200
taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg aacagttaga 7260
catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt atctttttag 7320
tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac ttcatccatt 7380
ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa tttttttagt 7440
acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct attttagttt 7500
ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa attaaacaaa 7560
taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag tagataatgc 7620
cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc agcagcgtcg 7680
cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg acccctctcg 7740
agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt gcgtggcgga 7800
gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc accggcagct 7860
acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc gtaataaata 7920
gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca cacacacaca 7980
accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc cgctcgtcct 8040
cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt agggcccggt 8100
agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc gtgctgctag 8160
cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt 8220
ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga 8280
ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc aatatatgcc 8340
gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg tgatgatgtg 8400
gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat 8460
ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg 8520
atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat 8580
atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc 8640
attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg 8700
gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc 8760
gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata 8820
tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg 8880
ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg 8940
gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga 9000
tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagggatccg gcagcagcca tgcagaagct 9060
gatcaacagc gtgcagaact acgcctgggg cagcaagacc gccctgaccg agctgtacgg 9120
catggagaac cccagcagcc agcccatggc cgagctgtgg atgggcgccc accccaagag 9180
cagcagccgc gtgcagaacg ccgccggcga catcgtgagc ctgcgcgacg tgatcgagag 9240
cgacaagagc accctgctgg gcgaggccgt ggccaagcgc ttcggcgagc tgcccttcct 9300
gttcaaggtg ctgtgcgccg cccagcccct gagcatccag gtgcacccca acaagcacaa 9360
cagcgagatc ggcttcgcca aggagaacgc cgccggcatc cccatggacg ccgccgagcg 9420
caactacaag gaccccaacc acaagcccga gctggtgttc gccctgaccc ccttcctggc 9480
catgaacgcc ttccgcgagt tcagcgagat cgtgagcctg ctgcagcccg tggccggcgc 9540
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cgccctggac agccagcagg gcgagccctg gcagaccatc cgcctgatca gcgagttcta 9720
ccccgaggac agcggcctgt tcagccccct gctgctgaac gtggtgaagc tgaaccccgg 9780
cgaggccatg ttcctgttcg ccgagacccc ccacgcctac ctgcagggcg tggccctgga 9840
ggtgatggcc aacagcgaca acgtgctgcg cgccggcctg acccccaagt acatcgacat 9900
ccccgagctg gtggccaacg tgaagttcga ggccaagccc gccaaccagc tgctgaccca 9960
gcccgtgaag cagggcgccg agctggactt ccccatcccc gtggacgact tcgccttcag 10020
cctgcacgac ctgagcgaca aggagaccac catcagccag cagagcgccg ccatcctgtt 10080
ctgcgtggag ggcgacgcca ccctgtggaa gggcagccag cagctgcagc tgaagcccgg 10140
cgagagcgcc ttcatcgccg ccaacgagag ccccgtgacc gtgaagggcc acggccgcct 10200
ggcccgcgtg tacaacaagc tgtgatagga gctcgatccg tcgacctgca gatcgttcaa 10260
acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca 10320
tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat 10380
ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa 10440
acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag 10500
atcggcgcgc cgcaattgaa gtttgggcgg ccagcatggc cgtatccgca atgtgttatt 10560
aagttgtcta agcgtcaatt tgtttacacc acaatatatc ctgccaccag ccagccaaca 10620
gctccccgac cggcagctcg gcacaaaatc accactcgat acaggcagcc catcagaatt 10680
aattctcatg tttgacagct tatcatcgac tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag 10740
gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc 10800
gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg 10860
caaatattct gaaatgagct gttgacaatt aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt 10920
gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agaccatgag ggaagcgttg atcgccgaag 10980
tatcgactca actatcagag gtagttggcg tcatcgagcg ccatctcgaa ccgacgttgc 11040
tggccgtaca tttgtacggc tccgcagtgg atggcggcct gaagccacac agtgatattg 11100
atttgctggt tacggtgacc gtaaggcttg atgaaacaac gcggcgagct ttgatcaacg 11160
accttttgga aacttcggct tcccctggag agagcgagat tctccgcgct gtagaagtca 11220
ccattgttgt gcacgacgac atcattccgt ggcgttatcc agctaagcgc gaactgcaat 11280
ttggagaatg gcagcgcaat gacattcttg caggtatctt cgagccagcc acgatcgaca 11340
ttgatctggc tatcttgctg acaaaagcaa gagaacatag cgttgccttg gtaggtccag 11400
cggcggagga actctttgat ccggttcctg aacaggatct atttgaggcg ctaaatgaaa 11460
ccttaacgct atggaactcg ccgcccgact gggctggcga tgagcgaaat gtagtgctta 11520
cgttgtcccg catttggtac agcgcagtaa ccggcaaaat cgcgccgaag gatgtcgctg 11580
ccgactgggc aatggagcgc ctgccggccc agtatcagcc cgtcatactt gaagctaggc 11640
aggcttatct tggacaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg gaagaatttg 11700
ttcactacgt gaaaggcgag atcaccaaag tagtcggcaa ataaagctct agtggatctc 11760
cgtacccggg gatctggctc gcggcggacg cacgacgccg gggcgagacc ataggcgatc 11820
tcctaaatca atagtagctg taacctcgaa gcgtttcact tgtaacaacg attgagaatt 11880
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tgacgaactg cccatttagc tggagatgat tgtacatcct tcacgtgaaa atttctcaag 12000
cgctgtgaac aagggttcag attttagatt gaaaggtgag ccgttgaaac acgttcttct 12060
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ggcaggtgag ttcaatcttc tcctcgcgtt tttagagaaa ccccgcgacg ttctatcgcg 12480
cgagcaactt ctcattgcca gtcgagtacg cgacgaggag gtttatgaca ggagtataga 12540
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caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc cggtgcgccg 12900
tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc gatgctctat 12960
gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg tctgtcgaag 13020
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agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga gatcgagcta 13440
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cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct ggcacgccgc 13560
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ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt catgcgctac 13740
cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca gatgctaggg 13800
caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga tagcacgtac 13860
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tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa aggcgatttt 13980
tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc ctgtgcataa 14040
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catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt 14580
gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa 14640
gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc 14700
cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg 14760
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attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg 14880
cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac 14940
gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 15000
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 15060
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tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 15180
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ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 15600
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gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt gatccggaat 15720
ta 15722
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体23136的编码gRNA
<400> 32
gtcggggacg tcgacgacga 20
<210> 33
<211> 1823
<212> DNA
<213> 水稻
<400> 33
acagtgacta gtgacaaacg atcgatcgat ccctccatcc acaaaccctc ctcgatctca 60
tcttccttcg tctcgtcaat ggcggcgagc tactcgtgcc ggcggacatg cgaggcgtgc 120
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gtgacgttgc tggcgatcga cggcggcggc atcaggggcc tcatcccggg caccatcctc 240
gccttcctcg aggccaggct gcaggagctg gatggccccg acgcgcgcct cgccgattac 300
ttcgactgca tcgccgggac cagcaccggc ggcctcatca ccgccatgct cgccgcgccc 360
ggcgaccacg gccgcccgct cttcgccgcc agcgacatca accgcttcta cctcgacaac 420
ggcccactca tcttcccaca aaagtaactg atcacctcga attcgatctc ctctcttcga 480
tctctgcatt atttgatttg attggggatt gtgggcggcg tggcgtggcg tccaggaggt 540
gcggcatggc ggcggccatg gcggcgctga cgaggccgag gtacaacggc aagtacctgc 600
aggggaagat caggaagatg ctgggcgaga cgagggtgcg cgacacgctg acgaacgtcg 660
tcatccccac gttcgacgtc aggctgctcc agccaaccat cttctccaca tacgacgtgc 720
gtgcgttgat tccatccgca ttggcgttgg aatcagctga ttgtttgatt gatcgaacaa 780
ttgatcggtt aaaattttgc aggcgaagag catgccgctc aagaacgcgc tcctctccga 840
catctgcatc agcacatccg cggcgccgac ctacctcccc gcgcactgct tccagaccac 900
cgacgacgcc accggcaagg tccgcgagtt cgacctcatc gacggcggcg tcgccgccaa 960
caacccggta actaatcaat caagcaatcc atcaaacgaa gatccacatg tgcattcctg 1020
tggtacaaat gctgatcgat cgatggatgg atcgattttc gcgagaacgt acagacgatg 1080
gtggccatga cgcagatcac caagaagata atggtgaagg acaaggagga gctgtacccg 1140
gtaaagccgt cggactgcgg taagttcctg gtgctgtccg tgggcaccgg gtcgacgtcg 1200
gaccagggga tgtacacggc gaggcagtgc tcgcggtggg ggatcgtccg gtggctgcgc 1260
aacaagggga tggcgcccat catcgacatc ttcatggcgg ccagctccga cctcgtcgac 1320
atccacgccg ccgtcatgtt ccagtcgctg cacagcgacg gcgactacct ccgcatccag 1380
gacaacacgc tccacggcga cgccgccacg gtggacgccg ccaccaggga caacatgcgg 1440
gcgctcgtcg ggatcggcga gcggatgctg gcgcagcggg tgtcgagggt caacgtcgag 1500
accggcaggt acgtcgaggt gcccggcgcc ggcagcaacg ccgacgcgct gaggggcttc 1560
gccaggcagc tctccgagga gaggagggcg aggctaggtc ggcgaaacgc ctgcggcggc 1620
ggcggcgaag gagagcccag cggcgtggcg tgcaagcgtt agtaactgta cacgcatcat 1680
gctgacgcga tcttttttat ttttcttttt ttttttttac ctttctagcg gacatgggga 1740
ataacaagac gtgacagtag tgcaatcggt ttgtaacgtg cgtataccaa cattgatcca 1800
tttcttcatc acagtttcag ttc 1823
<210> 34
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<212> DNA
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<223> 载体24038
<220>
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<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
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<221> 启动子
<222> (313)..(1149)
<223> prZmGRMZM5G876285-01
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<221> 基因
<222> (1152)..(5412)
<223> cCas9-12
<220>
<221> 终止子
<222> (5419)..(6736)
<223> tZmGRMZM5G876285-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6750)..(7124)
<223> prOsU3-01
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<221> 尚未归类的特征
<222> (7126)..(7145)
<223> xZmVLHP2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7126)..(7230)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7146)..(7157)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> rsgRNA碱基-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
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<223> prUbi-04
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<221> 基因
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<223> tNOS-05-01
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<223> bNLB-03
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<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
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<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
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<223> cVirG-09
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<221> 基因
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<223> cRepA-01
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<221> 尚未归类的特征
<222> (14021)..(14425)
<223> oVA1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15103)..(15909)
<223> oCOLE-06
<400> 34
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccgggacc ctaagtaatc ttgtgctaca aatttatttt tcagacagaa aaatctattt 360
agctaactaa ttaatacaaa ttaataccaa gcaacgatag atgaacatct agttgtctaa 420
ttagctaact aattaataca aattaagtag aatccttacc gtggggagat ggggcgcgac 480
gaagtgctcg agcttggggc gcggcgaccg gcgacgtgaa gcttgggggc gcgggggccg 540
gacggcgctg cgggcggcat ggcgggcggc tgcgggcggc ggcgcgggcg caggaaacaa 600
acgacgggag tgggaggaag gagaaagcgg cgcgccggtt tagtcctagc tcggcgccaa 660
gatctgtggc gccgagctag gtgccacgat ggccgccgcg tcagcaaagc tcggcgccaa 720
ggcatgttgc gccgagccgt gttagctcgg cgtcatagct catggtgccg agttttgggt 780
ctaaaattgc gtttaagtat tctagggatc taaacgcaaa tatttttcga aaatagggcc 840
gaaaaacaaa aaaaaatcgg tcgtttcgtc gagcacatcg tccagcctat cttgcatgtc 900
catcctctct atggttcgcg agccgcgcgc atggcgctcc aaaggagggg cgaggttgaa 960
tatagacaga tggaatgggt ggttctctat ttatagcgca tgcagtcgtc ccctggcaca 1020
cctatttata tgtgagcgtt cctggcacta gagagatcga tcgatcgagc ttaattgcgc 1080
cactgctcgt tatcctcctc ttgcattgca ttgcaggtcg tagttgagca gcagcaacca 1140
ctgcacaggc catggacaag aagtacagca tcggcctgga catcggcacc aacagcgtgg 1200
gctgggccgt gatcaccgac gagtacaagg tgataccaat ttgcatgatc cttgttcgtt 1260
ctagctcttg catgccgatc agttgaatca cgcggtttcc ttctgcgcat ttgcatccag 1320
gtgccgagca agaagttcaa ggtgctgggc aacaccgaca ggcacagcat caagaagaac 1380
ctgatcggcg ccctgctgtt cgacagcggc gagaccgccg aggccaccag gctgaagagg 1440
accgccagga ggaggtacac caggaggaag aacaggatct gctacctgca ggagatcttc 1500
agcaacgaga tggccaaggt ggacgacagc ttcttccaca ggctggagga gagcttcctg 1560
gtggaggagg acaagaagca cgagaggcac ccgatcttcg gcaacatcgt ggacgaggtg 1620
gcctaccacg agaagtaccc gaccatctac cacctgagga agaagctggt ggacagcacc 1680
gacaaggccg acctgaggct gatctacctg gccctggccc acatgatcaa gttcaggggc 1740
cacttcctga tcgagggcga cctgaacccg gacaacagcg acgtggacaa gctgttcatc 1800
cagctggtgc agacctacaa ccagctgttc gaggagaacc cgatcaacgc cagcggcgtg 1860
gacgccaagg ccatcctgag cgccaggctg agcaagagca ggaggctgga gaacctgatc 1920
gcccagctgc cgggcgagaa gaagaacggc ctgttcggca acctgatcgc cctgagcctg 1980
ggcctgaccc cgaacttcaa gagcaacttc gacctggccg aggacgccaa gctgcagctg 2040
agcaaggaca cctacgacga cgacctggac aacctgctgg cccagatcgg cgaccagtac 2100
gccgacctgt tcctggccgc caagaacctg agcgacgcca tcctgctgag cgacatcctg 2160
agggtgaaca ccgagatcac caaggccccg ctgagcgcca gcatgatcaa gaggtacgac 2220
gagcaccacc aggacctgac cctgctgaag gccctggtga ggcagcagct gccggagaag 2280
tacaaggaga tcttcttcga ccagagcaag aacggctacg ccggctacat cgacggcggc 2340
gccagccagg aggagttcta caagttcatc aagccgatcc tggagaagat ggacggcacc 2400
gaggagctgc tggtgaagct gaacagggag gacctgctga ggaagcagag gaccttcgac 2460
aacggcagca tcccgcacca gatccacctg ggcgagctgc acgccatcct gaggaggcag 2520
gaggacttct acccgttcct gaaggacaac agggagaaga tcgagaagat cctgaccttc 2580
cgcatcccgt actacgtggg cccgctggcc aggggcaaca gcaggttcgc ctggatgacc 2640
aggaagagcg aggagaccat caccccgtgg aacttcgagg aggtggtgga caagggcgcc 2700
agcgcccaga gcttcatcga gaggatgacc aacttcgaca agaacctgcc gaacgagaag 2760
gtgctgccga agcacagcct gctgtacgag tacttcaccg tgtacaacga gctgaccaag 2820
gtgaagtacg tgaccgaggg catgaggaag ccggccttcc tgagcggcga gcagaagaag 2880
gccatcgtgg acctgctgtt caagaccaac aggaaggtga ccgtgaagca gctgaaggag 2940
gactacttca agaagatcga gtgcttcgac agcgtggaga tcagcggcgt ggaggacagg 3000
ttcaacgcca gcctgggcac ctaccacgac ctgctgaaga tcatcaagga caaggacttc 3060
ctggacaacg aggagaacga ggacatcctg gaggacatcg tgctgaccct gaccctgttc 3120
gaggacaggg agatgatcga ggagaggctg aagacctacg cccacctgtt cgacgacaag 3180
gtgatgaagc agctgaagag gaggaggtac accggctggg gcaggctgag caggaagctg 3240
atcaacggca tcagggacaa gcagagcggc aagaccatcc tggacttcct gaagagcgac 3300
ggcttcgcca acaggaactt catgcagctg atccacgacg acagcctgac cttcaaggag 3360
gacatccaga aggcccaggt gagcggccag ggcgacagcc tgcacgagca catcgccaac 3420
ctggccggca gcccggccat caagaagggc atcctgcaga ccgtgaaggt ggtggacgag 3480
ctggtgaagg tgatgggcag gcacaagccg gagaacatcg tgatcgagat ggccagggag 3540
aaccagacca cccagaaggg ccagaagaac agcagggaga ggatgaagag gatcgaggag 3600
ggcatcaagg agctgggcag ccagatcctg aaggagcacc cggtggagaa cacccagctg 3660
cagaacgaga agctgtacct gtactacctg cagaacggca gggacatgta cgtggaccag 3720
gagctggaca tcaacaggct gagcgactac gacgtggacc acatcgtgcc gcagagcttc 3780
ctgaaggacg acagcatcga caacaaggtg ctgaccagga gcgacaagaa caggggcaag 3840
agcgacaacg tgccgagcga ggaggtggtg aagaagatga aaaactactg gaggcagctg 3900
ctgaacgcca agctgatcac ccagaggaag ttcgacaacc tgaccaaggc cgagaggggc 3960
ggcctgagcg agctggacaa ggccggcttc attaaaaggc agctggtgga gaccaggcag 4020
atcaccaagc acgtggccca gatcctggac agcaggatga acaccaagta cgacgagaac 4080
gacaagctga tcagggaggt gaaggtgatc accctgaaga gcaagctggt gagcgacttc 4140
aggaaggact tccagttcta caaggtgagg gagatcaata attaccacca cgcccacgac 4200
gcctacctga acgccgtggt gggcaccgcc ctgattaaaa agtacccgaa gctggagagc 4260
gagttcgtgt acggcgacta caaggtgtac gacgtgagga agatgatcgc caagagcgag 4320
caggagatcg gcaaggccac cgccaagtac ttcttctaca gcaacatcat gaacttcttc 4380
aagaccgaga tcaccctggc caacggcgag atcaggaaga ggccgctgat cgagaccaac 4440
ggcgagaccg gcgagatcgt gtgggacaag ggcagggact tcgccaccgt gaggaaggtg 4500
ctgtccatgc cgcaggtgaa catcgtgaag aagaccgagg tgcagaccgg cggcttcagc 4560
aaggagagca tcctgccgaa gaggaacagc gacaagctga tcgccaggaa gaaggactgg 4620
gacccgaaga agtacggcgg cttcgacagc ccgaccgtgg cctacagcgt gctggtggtg 4680
gccaaggtgg agaagggcaa gagcaagaag ctgaagagcg tgaaggagct ggtgggcatc 4740
accatcatgg agaggagcag cttcgagaag aacccagtgg acttcctgga ggccaagggc 4800
tacaaggagg tgaagaagga cctgatcatt aaactgccga agtacagcct gttcgagctg 4860
gagaacggca ggaagaggat gctggccagc gccggcgagc tgcagaaggg caacgagctg 4920
gccctgccga gcaagtacgt gaacttcctg tacctggcca gccactacga gaagctgaag 4980
ggcagcccgg aggacaacga gcagaagcag ctgttcgtgg agcagcacaa gcactacctg 5040
gacgagatca tcgagcagat cagcgagttc agcaagaggg tgatcctggc cgacgccaac 5100
ctggacaagg tgctgagcgc ctacaacaag cacagggaca agccgatcag ggagcaggcc 5160
gagaacatca tccacctgtt caccctgacc aacctgggcg ccccggccgc cttcaagtac 5220
ttcgacacca ccatcgacag gaagaggtac accagcacca aggaggtgct ggacgccacc 5280
ctgatccacc agagcatcac cggcctgtac gagaccagga tcgacctgag ccagctgggc 5340
ggcgacagca gcccgccgaa gaagaagagg aaggtgagct ggaaggacgc cagcggctgg 5400
agcaggatgt gagctctaat gcatccaaac aacgacacca acgccaacat taattaatta 5460
gtagtctcca tgccctggga ttgtgcgtgg ccgctccgtt gaacaccacc catccttcgt 5520
tcggcatttt ttcccccctt gtttatataa ttttattgta tcgttttggc aaataatttt 5580
gtgattcgac cccaaagcaa gtttggttgt cttacgattt gtaaacctgg aacaatatat 5640
aatgtgattg aactgctttg tctattcttt ttgtagtacg ataatatgta tatgtattcc 5700
atgcgatctc ttctagggcg acgactaatg tgcaagtgtg tgtttgcatg cgctgagcac 5760
ggagtttgta ttcaggggtc aatatctttc gattccttta tctaaaaagg tgttgcatat 5820
atctaaaaaa aagaaaaaaa aggcttacaa ctgttgaaaa aataagcatt tttagtttta 5880
atttaattca gaaaatcata gtgatatatg tgacgatatg catgtgcata tgtatcacta 5940
ctcacataaa cagtaaacaa cagtaaaata tgtataaata caaaaataac aaagtgtacc 6000
ctgcggaggg accgatgttc aaggcatctg tggctccatt cacacgagac atctcgtgtg 6060
tatgttcgat gtagtcatac gcagtcgagg cagtcagatg tacgcagtgc agtccctcga 6120
tcggcgccgg cgacgaggaa cttgatcagt gctggtcgag cggacgaagc gagcagtcgc 6180
gagtacgctc ccgaaaaaca tgatcgctcg cacacccatg caagtgtcgc tctgcggacg 6240
acgatttcgg aagcctacgc gtatgagaat gtttgtatgt gtgttctctc gtaaccagaa 6300
gcctcatctc ctccgtatat atacacgcgc agagggaggc caacagatag taacggtgga 6360
aggaatactc ggaccaaggt ccgatctacc atggccacgg cccggcctgg ccagcggcgc 6420
gtgcgtgtgg cagtccttca tccttttatc agcttatcaa tagatgcacc aaagatccac 6480
ctatttaagt tgattgaatt gtctcttgta cttccggtat gttactaaag taataataca 6540
ccgtagcatt aaattgggcc tttagcattg gctattattg aatattaatt tgagccagac 6600
ccaccaccag atgctaagtc acaccaaaat gctctcatca tctcaaacat ttcatatact 6660
ggtgtttcga tggagactat taagttgaac atccacctag aatctagatt acacttgacc 6720
acaactacat aatggacgga ccgttcgaag ggatctttaa acatacgaac agatcactta 6780
aagttcttct gaagcaactt aaagttatca ggcatgcatg gatcttggag gaatcagatg 6840
tgcagtcagg gaccatagca caggacaggc gtcttctact ggtgctacca gcaaatgctg 6900
gaagccggga acactgggta cgttggaaac cacgtgatgt ggagtaagat aaactgtagg 6960
agaaaagcat ttcgtagtgg gccatgaagc ctttcaggac atgtattgca gtatgggccg 7020
gcccattacg caattggacg acaacaaaga ctagtattag taccacctcg gctatccaca 7080
tagatcaaag ctggtttaaa agagttgtgc agatgatccg tggcagctgg agctgagctt 7140
ccggggtttt agagctagaa atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta tcaacttgaa 7200
aaagtggcac cgagtcggtg cttttttttt cggaccgcgc ctgcagtgca gcgtgacccg 7260
gtcgtgcccc tctctagaga taatgagcat tgcatgtcta agttataaaa aattaccaca 7320
tatttttttt gtcacacttg tttgaagtgc agtttatcta tctttataca tatatttaaa 7380
ctttactcta cgaataatat aatctatagt actacaataa tatcagtgtt ttagagaatc 7440
atataaatga acagttagac atggtctaaa ggacaattga gtattttgac aacaggactc 7500
tacagtttta tctttttagt gtgcatgtgt tctccttttt ttttgcaaat agcttcacct 7560
atataatact tcatccattt tattagtaca tccatttagg gtttagggtt aatggttttt 7620
atagactaat ttttttagta catctatttt attctatttt agcctctaaa ttaagaaaac 7680
taaaactcta ttttagtttt tttatttaat aatttagata taaaatagaa taaaataaag 7740
tgactaaaaa ttaaacaaat accctttaag aaattaaaaa aactaaggaa acatttttct 7800
tgtttcgagt agataatgcc agcctgttaa acgccgtcga cgagtctaac ggacaccaac 7860
cagcgaacca gcagcgtcgc gtcgggccaa gcgaagcaga cggcacggca tctctgtcgc 7920
tgcctctgga cccctctcga gagttccgct ccaccgttgg acttgctccg ctgtcggcat 7980
ccagaaattg cgtggcggag cggcagacgt gagccggcac ggcaggcggc ctcctcctcc 8040
tctcacggca ccggcagcta cgggggattc ctttcccacc gctccttcgc tttcccttcc 8100
tcgcccgccg taataaatag acaccccctc cacaccctct ttccccaacc tcgtgttgtt 8160
cggagcgcac acacacacaa ccagatctcc cccaaatcca cccgtcggca cctccgcttc 8220
aaggtacgcc gctcgtcctc cccccccccc ctctctacct tctctagatc ggcgttccgg 8280
tccatggtta gggcccggta gttctacttc tgttcatgtt tgtgttagat ccgtgtttgt 8340
gttagatccg tgctgctagc gttcgtacac ggatgcgacc tgtacgtcag acacgttctg 8400
attgctaact tgccagtgtt tctctttggg gaatcctggg atggctctag ccgttccgca 8460
gacgggatcg atttcatgat tttttttgtt tcgttgcata gggtttggtt tgcccttttc 8520
ctttatttca atatatgccg tgcacttgtt tgtcgggtca tcttttcatg cttttttttg 8580
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tagttacgaa ttgaagatga tggatggaaa tatcgatcta ggataggtat acatgttgat 8760
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ggtgtattta ttaattttgg aactgtatgt gtgtgtcata catcttcata gttacgagtt 8940
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gcatatacat gatggcatat gcagcatcta ttcatatgct ctaaccttga gtacctatct 9060
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tatgcagcag ctatatgtgg atttttttag ccctgccttc atacgctatt tatttgcttg 9180
gtactgtttc ttttgtcgat gctcaccctg ttgtttggtg ttacttctgc agggatccgg 9240
cagcagccat gcagaagctg atcaacagcg tgcagaacta cgcctggggc agcaagaccg 9300
ccctgaccga gctgtacggc atggagaacc ccagcagcca gcccatggcc gagctgtgga 9360
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tgcgcgacgt gatcgagagc gacaagagca ccctgctggg cgaggccgtg gccaagcgct 9480
tcggcgagct gcccttcctg ttcaaggtgc tgtgcgccgc ccagcccctg agcatccagg 9540
tgcaccccaa caagcacaac agcgagatcg gcttcgccaa ggagaacgcc gccggcatcc 9600
ccatggacgc cgccgagcgc aactacaagg accccaacca caagcccgag ctggtgttcg 9660
ccctgacccc cttcctggcc atgaacgcct tccgcgagtt cagcgagatc gtgagcctgc 9720
tgcagcccgt ggccggcgcc caccccgcca tcgcccactt cctgcagcag cccgacgccg 9780
agcgcctgag cgagctgttc gccagcctgc tgaacatgca gggcgaggag aagagccgcg 9840
ccctggccat cctgaagagc gccctggaca gccagcaggg cgagccctgg cagaccatcc 9900
gcctgatcag cgagttctac cccgaggaca gcggcctgtt cagccccctg ctgctgaacg 9960
tggtgaagct gaaccccggc gaggccatgt tcctgttcgc cgagaccccc cacgcctacc 10020
tgcagggcgt ggccctggag gtgatggcca acagcgacaa cgtgctgcgc gccggcctga 10080
cccccaagta catcgacatc cccgagctgg tggccaacgt gaagttcgag gccaagcccg 10140
ccaaccagct gctgacccag cccgtgaagc agggcgccga gctggacttc cccatccccg 10200
tggacgactt cgccttcagc ctgcacgacc tgagcgacaa ggagaccacc atcagccagc 10260
agagcgccgc catcctgttc tgcgtggagg gcgacgccac cctgtggaag ggcagccagc 10320
agctgcagct gaagcccggc gagagcgcct tcatcgccgc caacgagagc cccgtgaccg 10380
tgaagggcca cggccgcctg gcccgcgtgt acaacaagct gtgataggag ctcgatccgt 10440
cgacctgcag atcgttcaaa catttggcaa taaagtttct taagattgaa tcctgttgcc 10500
ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg ttgaattacg ttaagcatgt aataattaac 10560
atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg gtttttatga ttagagtccc gcaattatac 10620
atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag cgcgcaaact aggataaatt atcgcgcgcg 10680
gtgtcatcta tgttactaga tcggcgcgcc gcaattgaag tttgggcggc cagcatggcc 10740
gtatccgcaa tgtgttatta agttgtctaa gcgtcaattt gtttacacca caatatatcc 10800
tgccaccagc cagccaacag ctccccgacc ggcagctcgg cacaaaatca ccactcgata 10860
caggcagccc atcagaatta attctcatgt ttgacagctt atcatcgact gcacggtgca 10920
ccaatgcttc tggcgtcagg cagccatcgg aagctgtggt atggctgtgc aggtcgtaaa 10980
tcactgcata attcgtgtcg ctcaaggcgc actcccgttc tggataatgt tttttgcgcc 11040
gacatcataa cggttctggc aaatattctg aaatgagctg ttgacaatta atcatccggc 11100
tcgtataatg tgtggaattg tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gaccatgagg 11160
gaagcgttga tcgccgaagt atcgactcaa ctatcagagg tagttggcgt catcgagcgc 11220
catctcgaac cgacgttgct ggccgtacat ttgtacggct ccgcagtgga tggcggcctg 11280
aagccacaca gtgatattga tttgctggtt acggtgaccg taaggcttga tgaaacaacg 11340
cggcgagctt tgatcaacga ccttttggaa acttcggctt cccctggaga gagcgagatt 11400
ctccgcgctg tagaagtcac cattgttgtg cacgacgaca tcattccgtg gcgttatcca 11460
gctaagcgcg aactgcaatt tggagaatgg cagcgcaatg acattcttgc aggtatcttc 11520
gagccagcca cgatcgacat tgatctggct atcttgctga caaaagcaag agaacatagc 11580
gttgccttgg taggtccagc ggcggaggaa ctctttgatc cggttcctga acaggatcta 11640
tttgaggcgc taaatgaaac cttaacgcta tggaactcgc cgcccgactg ggctggcgat 11700
gagcgaaatg tagtgcttac gttgtcccgc atttggtaca gcgcagtaac cggcaaaatc 11760
gcgccgaagg atgtcgctgc cgactgggca atggagcgcc tgccggccca gtatcagccc 11820
gtcatacttg aagctaggca ggcttatctt ggacaagaag atcgcttggc ctcgcgcgca 11880
gatcagttgg aagaatttgt tcactacgtg aaaggcgaga tcaccaaagt agtcggcaaa 11940
taaagctcta gtggatctcc gtacccgggg atctggctcg cggcggacgc acgacgccgg 12000
ggcgagacca taggcgatct cctaaatcaa tagtagctgt aacctcgaag cgtttcactt 12060
gtaacaacga ttgagaattt ttgtcataaa attgaaatac ttggttcgca tttttgtcat 12120
ccgcggtcag ccgcaattct gacgaactgc ccatttagct ggagatgatt gtacatcctt 12180
cacgtgaaaa tttctcaagc gctgtgaaca agggttcaga ttttagattg aaaggtgagc 12240
cgttgaaaca cgttcttctt gtcgatgacg acgtcgctat gcggcatctt attattgaat 12300
accttacgat ccacgccttc aaagtgaccg cggtagccga cagcacccag ttcacaagag 12360
tactctcttc cgcgacggtc gatgtcgtgg ttgttgatct agatttaggt cgtgaagatg 12420
ggctcgagct aggagcaagt gattttatcg ctaagccgtt cagtatcaga gagtttctag 12480
cacgcattcg ggttgccttg cgcgtgcgcc ccaacgttgt ccgctccaaa gaccgacggt 12540
ctttttgttt tactgactgg acacttaatc tcaggcaacg tcgcttgatg tccgaagctg 12600
gcggtgaggt gaaacttacg gcaggtgagt tcaatcttct cctcgcgttt ttagagaaac 12660
cccgcgacgt tctatcgcgc gagcaacttc tcattgccag tcgagtacgc gacgaggagg 12720
tttatgacag gagtatagat gttctcattt tgaggctgcg ccgcaaactt gaggcagatc 12780
cgtcaagccc tcaactgata aaaacagcaa gaggtgccgg ttatttcttt gacgcggacg 12840
tgcaggtttc gcacgggggg acgatggcag cctgagccaa ttcccagatc cccgaggaat 12900
cggcgtgagc ggtcgcaaac catccggccc ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga 12960
cctggtggag aagttgaagg ccgcgcaggc cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc 13020
acgccccggt gaatcgtggc aagcggccgc tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc 13080
gccggcagcc ggtgcgccgt cgattaggaa gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt 13140
tttcgttccg atgctctatg acgtgggcac ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc 13200
cgttttccgt ctgtcgaagc gtgaccgacg agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc 13260
agacgggcac gtagaggttt ccgcagggcc ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga 13320
cctggtactg atggcggttt cccatctaac cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa 13380
gggagacaag cccggccgcg tgttccgtcc acacgttgcg gacgtactca agttctgccg 13440
gcgagccgat ggcggaaagc agaaagacga cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac 13500
cacgcacgtt gccatgcagc gtacgaagaa ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc 13560
cgagggtgaa gccttgatta gccgctacaa gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga 13620
gtacatcgag atcgagctag ctgattggat gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc 13680
ggacgtgctg acggttcacc ccgattactt tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct 13740
ctaccgcctg gcacgccgcg ccgcaggcaa ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat 13800
ctacgaacgc agtggcagcg ccggagagtt caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct 13860
gatcgggtca aatgacctgc cggagtacga tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc 13920
gatcctagtc atgcgctacc gcaacctgat cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg 13980
tacggagcag atgctagggc aaattgccct agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt 14040
tcctgtggat agcacgtaca ttgggaaccc aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta 14100
cattgggaac ccaaagccgt acattgggaa ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa 14160
agagaaaaaa ggcgattttt ccgcctaaaa ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac 14220
ccgcctggcc tgtgcataac tgtctggcca gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc 14280
tacccttcgg tcgctgcgct ccctacgccc cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc 14340
tggccgctca aaaatggctg gcctacggcc aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc 14400
gccgtcgcca ctcgaccgcc ggcgctgagg tctgcctcgt gaagaaggtg ttgctgactc 14460
ataccaggcc tgaatcgccc catcatccag ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag 14520
agctttgttg taggtggacc agttggtgat tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc 14580
tgcgttgtcg ggaagatgcg tgatctgatc cttcaactca gcaaaagttc gatttattca 14640
acaaagccgc cgtcccgtca agtcagcgta atgctctgcc agtgttacaa ccaattaacc 14700
aattctgatt agaaaaactc atcgagcatc aaatgaaact gcaatttatt catatcagga 14760
ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt ttctgtaatg aaggagaaaa ctcaccgagg 14820
cagttccata ggatggcaag atcctggtat cggtctgcga ttccgactcg tccaacatca 14880
atacaaccta ttaatttccc ctcgtcaaaa ataaggttat caagtgagaa atcaccatga 14940
gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa agctctgcat taatgaatcg gccaacgcgc 15000
ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg 15060
ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc 15120
cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag 15180
gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca 15240
tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca 15300
ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg 15360
atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag 15420
gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt 15480
tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca 15540
cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg 15600
cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt 15660
tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc 15720
cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg 15780
cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg 15840
gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta 15900
gatccttttg atccggaatt a 15921
<210> 35
<211> 17954
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体24039
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (315)..(1729)
<223> prZmGRMZM2G020852-01
<220>
<221> 基因
<222> (1731)..(5979)
<223> cCas9-13
<220>
<221> 终止子
<222> (5989)..(8769)
<223> tZmGRMZM2G020852-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8783)..(9157)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9159)..(9178)
<223> xZmVLHP2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9159)..(9263)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9179)..(9190)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9195)..(9263)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (9274)..(11265)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (11282)..(12460)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (12483)..(12735)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12779)..(12908)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (13188)..(13976)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (14071)..(14201)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (14276)..(14908)
<223> cVirG-09
<220>
<221> 基因
<222> (14938)..(16011)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16054)..(16458)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17136)..(17942)
<223> oCOLE-o6
<400> 35
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccggaccg ttataacagt gaatacaaaa atgacattcg tgttatttag cacaagttac 360
gatctatttc aggaacatgc cggaattttc gaacaccatt ctcacaaaac atgaccttga 420
acttgcgatc cagttgtttt aaaattatat aaaacaaaaa caaagtcaga aaatcatgaa 480
acttgtcgac atgtcatgat atcatatgta gagactctaa taaaaagttg agattgtttc 540
atgaaagttg tcacacacta tgtgtagaaa cttagcccgt ctacattgaa gttctatgat 600
ttcatgtgaa ggacacctag gcatcgatgt ttatgataat atcttatgtt tgtttggaca 660
aaatattaaa aacaaataaa aggggtccct gatcactttg acgagcattg cattcagcaa 720
agggtgcctt tgttgagtgc aatggtcata gaactcggta gaaaagacat acataaacat 780
cgggaaactt gctttaccgc acgctatggc caagacactc ggcaaactag gctcctttgt 840
tgagtgccat ctcaagcact cgacattgga actacgacta ggcctcacgg aagctttctt 900
tgccgagtgc cactaagcga ggaactcgga cactcagcaa cagctctgtc atcgtcacga 960
tgtcttttct ttgtcgtgta ccagttggca ctcggttaag actttactga gtgcccgata 1020
gaaagtactc ggcaaagaga ccgttgccga cgtttggttc actgagggct ctttgctgcc 1080
ttttggactt gacaaagaag tcatctccag tactgtctcc taggacgcag gatttatgtt 1140
ttttcccgga gctcgatctg tgggacatca cagatggtcc aatctggtga tctaaaatgg 1200
acggtttgcc aagcccacag agaagtcttt aagatcttcc acgatgcacg catgctttaa 1260
ggttagatag tgtttggtcc aaaaaagcgt caacaatcag gaaattagaa ctaaaattat 1320
taaaggacag atcaaaaggc atgcatgttc ttcttctata gtgtgtgttg agcctgagtt 1380
ttgattttag gctttattag gggactcgca gtctagctaa ggagttgtat tgatgttctg 1440
acaaatatta tgttcgatcg tcacagtggt cttgtgcgga tcgattaggc ccgatcatgg 1500
tgaaataaac taaccaccgg taagcccggg cagccctaga gcatgcagcg gcctacgtga 1560
agcccgcgtg tcgcatcgtc gtccgtcaga cgctaacggc aggccgctgc atgcgttgcc 1620
ggcgaactct ctcctgagcc actcgtcatc catataagta gacatcccat cactgtcgtc 1680
tatcaacaac acacagagcg acatttcgaa taacacagtt gagcgcgacc atggacaaga 1740
agtacagcat cggcctggac atcggcacca acagcgtggg ctgggccgtg atcaccgacg 1800
agtacaaggt acgagcggga tacatgttta tactcctcct gtaggtcgct ccttcatgta 1860
atgtgttgcg attaaaacgg tgcgcaggtg ccgagcaaga agttcaaggt gctgggcaac 1920
accgacaggc acagcatcaa gaagaacctg atcggcgccc tgctgttcga cagcggcgag 1980
accgccgagg ccaccaggct gaagaggacc gccaggagga ggtacaccag gaggaagaac 2040
aggatctgct acctgcagga gatcttcagc aacgagatgg ccaaggtgga cgacagcttc 2100
ttccacaggc tggaggagag cttcctggtg gaggaggaca agaagcacga gaggcacccg 2160
atcttcggca acatcgtgga cgaggtggcc taccacgaga agtacccgac catctaccac 2220
ctgaggaaga agctggtgga cagcaccgac aaggccgacc tgaggctgat ctacctggcc 2280
ctggcccaca tgatcaagtt caggggccac ttcctgatcg agggcgacct gaacccggac 2340
aacagcgacg tggacaagct gttcatccag ctggtgcaga cctacaacca gctgttcgag 2400
gagaacccga tcaacgccag cggcgtggac gccaaggcca tcctgagcgc caggctgagc 2460
aagagcagga ggctggagaa cctgatcgcc cagctgccgg gcgagaagaa gaacggcctg 2520
ttcggcaacc tgatcgccct gagcctgggc ctgaccccga acttcaagag caacttcgac 2580
ctggccgagg acgccaagct gcagctgagc aaggacacct acgacgacga cctggacaac 2640
ctgctggccc agatcggcga ccagtacgcc gacctgttcc tggccgccaa gaacctgagc 2700
gacgccatcc tgctgagcga catcctgagg gtgaacaccg agatcaccaa ggccccgctg 2760
agcgccagca tgatcaagag gtacgacgag caccaccagg acctgaccct gctgaaggcc 2820
ctggtgaggc agcagctgcc ggagaagtac aaggagatct tcttcgacca gagcaagaac 2880
ggctacgccg gctacatcga cggcggcgcc agccaggagg agttctacaa gttcatcaag 2940
ccgatcctgg agaagatgga cggcaccgag gagctgctgg tgaagctgaa cagggaggac 3000
ctgctgagga agcagaggac cttcgacaac ggcagcatcc cgcaccagat ccacctgggc 3060
gagctgcacg ccatcctgag gaggcaggag gacttctacc cgttcctgaa ggacaacagg 3120
gagaagatcg agaagatcct gaccttccgc atcccgtact acgtgggccc gctggccagg 3180
ggcaacagca ggttcgcctg gatgaccagg aagagcgagg agaccatcac cccgtggaac 3240
ttcgaggagg tggtggacaa gggcgccagc gcccagagct tcatcgagag gatgaccaac 3300
ttcgacaaga acctgccgaa cgagaaggtg ctgccgaagc acagcctgct gtacgagtac 3360
ttcaccgtgt acaacgagct gaccaaggtg aagtacgtga ccgagggcat gaggaagccg 3420
gccttcctga gcggcgagca gaagaaggcc atcgtggacc tgctgttcaa gaccaacagg 3480
aaggtgaccg tgaagcagct gaaggaggac tacttcaaga agatcgagtg cttcgacagc 3540
gtggagatca gcggcgtgga ggacaggttc aacgccagcc tgggcaccta ccacgacctg 3600
ctgaagatca tcaaggacaa ggacttcctg gacaacgagg agaacgagga catcctggag 3660
gacatcgtgc tgaccctgac cctgttcgag gacagggaga tgatcgagga gaggctgaag 3720
acctacgccc acctgttcga cgacaaggtg atgaagcagc tgaagaggag gaggtacacc 3780
ggctggggca ggctgagcag gaagctgatc aacggcatca gggacaagca gagcggcaag 3840
accatcctgg acttcctgaa gagcgacggc ttcgccaaca ggaacttcat gcagctgatc 3900
cacgacgaca gcctgacctt caaggaggac atccagaagg cccaggtgag cggccagggc 3960
gacagcctgc acgagcacat cgccaacctg gccggcagcc cggccatcaa gaagggcatc 4020
ctgcagaccg tgaaggtggt ggacgagctg gtgaaggtga tgggcaggca caagccggag 4080
aacatcgtga tcgagatggc cagggagaac cagaccaccc agaagggcca gaagaacagc 4140
agggagagga tgaagaggat cgaggagggc atcaaggagc tgggcagcca gatcctgaag 4200
gagcacccgg tggagaacac ccagctgcag aacgagaagc tgtacctgta ctacctgcag 4260
aacggcaggg acatgtacgt ggaccaggag ctggacatca acaggctgag cgactacgac 4320
gtggaccaca tcgtgccgca gagcttcctg aaggacgaca gcatcgacaa caaggtgctg 4380
accaggagcg acaagaacag gggcaagagc gacaacgtgc cgagcgagga ggtggtgaag 4440
aagatgaaaa actactggag gcagctgctg aacgccaagc tgatcaccca gaggaagttc 4500
gacaacctga ccaaggccga gaggggcggc ctgagcgagc tggacaaggc cggcttcatt 4560
aaaaggcagc tggtggagac caggcagatc accaagcacg tggcccagat cctggacagc 4620
aggatgaaca ccaagtacga cgagaacgac aagctgatca gggaggtgaa ggtgatcacc 4680
ctgaagagca agctggtgag cgacttcagg aaggacttcc agttctacaa ggtgagggag 4740
atcaataatt accaccacgc ccacgacgcc tacctgaacg ccgtggtggg caccgccctg 4800
attaaaaagt acccgaagct ggagagcgag ttcgtgtacg gcgactacaa ggtgtacgac 4860
gtgaggaaga tgatcgccaa gagcgagcag gagatcggca aggccaccgc caagtacttc 4920
ttctacagca acatcatgaa cttcttcaag accgagatca ccctggccaa cggcgagatc 4980
aggaagaggc cgctgatcga gaccaacggc gagaccggcg agatcgtgtg ggacaagggc 5040
agggacttcg ccaccgtgag gaaggtgctg tccatgccgc aggtgaacat cgtgaagaag 5100
accgaggtgc agaccggcgg cttcagcaag gagagcatcc tgccgaagag gaacagcgac 5160
aagctgatcg ccaggaagaa ggactgggac ccgaagaagt acggcggctt cgacagcccg 5220
accgtggcct acagcgtgct ggtggtggcc aaggtggaga agggcaagag caagaagctg 5280
aagagcgtga aggagctggt gggcatcacc atcatggaga ggagcagctt cgagaagaac 5340
ccagtggact tcctggaggc caagggctac aaggaggtga agaaggacct gatcattaaa 5400
ctgccgaagt acagcctgtt cgagctggag aacggcagga agaggatgct ggccagcgcc 5460
ggcgagctgc agaagggcaa cgagctggcc ctgccgagca agtacgtgaa cttcctgtac 5520
ctggccagcc actacgagaa gctgaagggc agcccggagg acaacgagca gaagcagctg 5580
ttcgtggagc agcacaagca ctacctggac gagatcatcg agcagatcag cgagttcagc 5640
aagagggtga tcctggccga cgccaacctg gacaaggtgc tgagcgccta caacaagcac 5700
agggacaagc cgatcaggga gcaggccgag aacatcatcc acctgttcac cctgaccaac 5760
ctgggcgccc cggccgcctt caagtacttc gacaccacca tcgacaggaa gaggtacacc 5820
agcaccaagg aggtgctgga cgccaccctg atccaccaga gcatcaccgg cctgtacgag 5880
accaggatcg acctgagcca gctgggcggc gacagcagcc cgccgaagaa gaagaggaag 5940
gtgagctgga aggacgccag cggctggagc aggatgtgag ctcaattaac tttgaattcc 6000
cttcgattca tccggcgcgg tgggctatgg acctgcagca gcaagctaat taagtttata 6060
tatattgcat gagagagcat gcaccgctaa ccatatatac tactgagact tctgaattct 6120
agtatatgta atccttttgt ttgggtttag gaggcaattc taatcatgta tgccgaattc 6180
caaagagtgg aaaacaagca aaatgttaaa tatacatgcc attttcggag gcaatttttt 6240
tcatgagggc atgttgctat aattccgggg accttggact tcttggagca ccttcctgtg 6300
acttaggcat acatgattag attataatcc aattagttaa gtcatagaaa attacctcat 6360
tctcatctcc atctccattt ctctatttct tctcaatcaa ggaccaaaat agcacttttg 6420
ctaaaaaaca agttagattg caaaccaaag tgcacaatac atagtaaaag gtatatgcaa 6480
catatttgaa tactcaaacc tctcatactt acattttcca tcattttgtt ccatttagcc 6540
tgtttgagct cggggttgga ctccaaaacc tcatgtcaac ataacttgat ccttttagca 6600
aactatgagc tctaacacca tacaatggtc aacaagaact attccaaaca taggaatgac 6660
ccaaactaca agtcaaagta tacttagctc tttgggcact tacaggttct aactttgata 6720
attctgtact tcttgtgacc atgactctgc tcgagctagg atcttgagcc ttatgactta 6780
aacaattaaa ccacaaacat tacctcaatg gttgtaagcc acgtccatat atcacagact 6840
tcaatgcatt cagactattc acagcttgac caaccttgac ctcttgcaag aacctcttct 6900
tctttgtgac cttaggtact ttagtcttct tgaccttctc ccttgctctt cataccttga 6960
agtccttctt gccttcacct tagttcaatc agctatctcc aagtcatgca cattgagttc 7020
cacttagtca atgtccatcc ttcaacttga cttgtgatgt ccacaattca tagtcatctc 7080
agtctatggg tccatcatgc ttgactccat gtgatgaacc ttgtaaggtt ttcactaagt 7140
acatgctcag acctttaatt gtgttgccat ccaaaaaaac caaaacctag attggaccat 7200
tcattatatt catcaatcat tgtacttgca agagtgatca aggtcatatt atttctctca 7260
actactccat tttgttgagg ggtgtcagtt gtggagactt cttgtttgat cccaacctca 7320
tcacaatact catgaatata gttgttgtca aattcatttc cattgtcact tcttattttt 7380
cttgattttg caatcaaact cattttgtac tttcatggta aatttattca atgttgatgc 7440
aacttttgac ttttcttgaa gaaagaacac tcaattacat ctagagaaat catcaacaac 7500
gaccaaacaa tacaggtttc ccccaacact agcatattat gtaggaccaa ataaatccat 7560
gtgaagtaac tctagtggtc ttggtgttga cataaaagcg tttgtaggat gtgtattggc 7620
aacttgtttt ccagcttgac atgcactata aaagattttc ctttttcaaa cacaacatct 7680
ttcaaatctc taaccatttc tttctttgga agcttcttgt tggggaaatg atccccggac 7740
cctaggaccc accggtcaga gagcgcgagg aagagccccc ggtcgctggg acccgttggt 7800
ccgctggaaa atgtggttac gtcaaccctg aaagaacccg cccctggttg agccccgtgg 7860
caccgagcct agggtcgagc gcggtggaat ctgacaggag gggccagaca tgttggaggg 7920
gaaccactca agtggatccc gcgcctggcc ccagaatgac ccgtcattaa tacccaacca 7980
cattaaccat gcctggcacc gagccatagc acggacgtcg gtccacttcc cactcatgac 8040
ctacgaacca gttgggctgc atagcactca tgaccgatag gttgaaggct tggcttcgca 8100
gagtgaaagg cgctgcatac atgtgaaggc tcgacttctt tttcttttcc tttcttttct 8160
tttctatttt taggtttcca atttaaattc caattttttt gtggagttca tatttggatc 8220
aaatagacaa attcacctat cagtatgaat agatgcattt attttgttta tatctatttt 8280
cttcatattt atatagtatt tcccttattc tttatatcat tttcaatttg taattggtaa 8340
gtttggtctt aaattcccca tttgggcact aatatatttt tattaatatt attattatta 8400
ttattattat tatttataga tgcacaaaca cataaactcc gacatgatgc atagattatt 8460
ttagatgtca ctagttaatg gttcacttta aatatggtta ttcccatgtt ctaatgagta 8520
gagggcaaag catatattga ggtcaactct ttccttatta tttacaaatt ggggaaattc 8580
tattcataac tcttcttctc tctcccaagt agcttaatct tcaccatggt gatttcattg 8640
cactttgcac attttgatca ctttattcct tgtaacccga gtcaaagtgt caatgatctt 8700
gataggatac tccgtgcagg ttagatcacc ttgcacactg agttcttcca ttggtaactg 8760
ttcctctggc ggaccgttcg aagggatctt taaacatacg aacagatcac ttaaagttct 8820
tctgaagcaa cttaaagtta tcaggcatgc atggatcttg gaggaatcag atgtgcagtc 8880
agggaccata gcacaggaca ggcgtcttct actggtgcta ccagcaaatg ctggaagccg 8940
ggaacactgg gtacgttgga aaccacgtga tgtggagtaa gataaactgt aggagaaaag 9000
catttcgtag tgggccatga agcctttcag gacatgtatt gcagtatggg ccggcccatt 9060
acgcaattgg acgacaacaa agactagtat tagtaccacc tcggctatcc acatagatca 9120
aagctggttt aaaagagttg tgcagatgat ccgtggcagc tggagctgag cttccggggt 9180
tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa ggctagtccg ttatcaactt gaaaaagtgg 9240
caccgagtcg gtgctttttt tttcggaccg cgcctgcagt gcagcgtgac ccggtcgtgc 9300
ccctctctag agataatgag cattgcatgt ctaagttata aaaaattacc acatattttt 9360
tttgtcacac ttgtttgaag tgcagtttat ctatctttat acatatattt aaactttact 9420
ctacgaataa tataatctat agtactacaa taatatcagt gttttagaga atcatataaa 9480
tgaacagtta gacatggtct aaaggacaat tgagtatttt gacaacagga ctctacagtt 9540
ttatcttttt agtgtgcatg tgttctcctt tttttttgca aatagcttca cctatataat 9600
acttcatcca ttttattagt acatccattt agggtttagg gttaatggtt tttatagact 9660
aattttttta gtacatctat tttattctat tttagcctct aaattaagaa aactaaaact 9720
ctattttagt ttttttattt aataatttag atataaaata gaataaaata aagtgactaa 9780
aaattaaaca aatacccttt aagaaattaa aaaaactaag gaaacatttt tcttgtttcg 9840
agtagataat gccagcctgt taaacgccgt cgacgagtct aacggacacc aaccagcgaa 9900
ccagcagcgt cgcgtcgggc caagcgaagc agacggcacg gcatctctgt cgctgcctct 9960
ggacccctct cgagagttcc gctccaccgt tggacttgct ccgctgtcgg catccagaaa 10020
ttgcgtggcg gagcggcaga cgtgagccgg cacggcaggc ggcctcctcc tcctctcacg 10080
gcaccggcag ctacggggga ttcctttccc accgctcctt cgctttccct tcctcgcccg 10140
ccgtaataaa tagacacccc ctccacaccc tctttcccca acctcgtgtt gttcggagcg 10200
cacacacaca caaccagatc tcccccaaat ccacccgtcg gcacctccgc ttcaaggtac 10260
gccgctcgtc ctcccccccc cccctctcta ccttctctag atcggcgttc cggtccatgg 10320
ttagggcccg gtagttctac ttctgttcat gtttgtgtta gatccgtgtt tgtgttagat 10380
ccgtgctgct agcgttcgta cacggatgcg acctgtacgt cagacacgtt ctgattgcta 10440
acttgccagt gtttctcttt ggggaatcct gggatggctc tagccgttcc gcagacggga 10500
tcgatttcat gatttttttt gtttcgttgc atagggtttg gtttgccctt ttcctttatt 10560
tcaatatatg ccgtgcactt gtttgtcggg tcatcttttc atgctttttt ttgtcttggt 10620
tgtgatgatg tggtctggtt gggcggtcgt tctagatcgg agtagaattc tgtttcaaac 10680
tacctggtgg atttattaat tttggatctg tatgtgtgtg ccatacatat tcatagttac 10740
gaattgaaga tgatggatgg aaatatcgat ctaggatagg tatacatgtt gatgcgggtt 10800
ttactgatgc atatacagag atgctttttg ttcgcttggt tgtgatgatg tggtgtggtt 10860
gggcggtcgt tcattcgttc tagatcggag tagaatactg tttcaaacta cctggtgtat 10920
ttattaattt tggaactgta tgtgtgtgtc atacatcttc atagttacga gtttaagatg 10980
gatggaaata tcgatctagg ataggtatac atgttgatgt gggttttact gatgcatata 11040
catgatggca tatgcagcat ctattcatat gctctaacct tgagtaccta tctattataa 11100
taaacaagta tgttttataa ttattttgat cttgatatac ttggatgatg gcatatgcag 11160
cagctatatg tggatttttt tagccctgcc ttcatacgct atttatttgc ttggtactgt 11220
ttcttttgtc gatgctcacc ctgttgtttg gtgttacttc tgcagggatc cggcagcagc 11280
catgcagaag ctgatcaaca gcgtgcagaa ctacgcctgg ggcagcaaga ccgccctgac 11340
cgagctgtac ggcatggaga accccagcag ccagcccatg gccgagctgt ggatgggcgc 11400
ccaccccaag agcagcagcc gcgtgcagaa cgccgccggc gacatcgtga gcctgcgcga 11460
cgtgatcgag agcgacaaga gcaccctgct gggcgaggcc gtggccaagc gcttcggcga 11520
gctgcccttc ctgttcaagg tgctgtgcgc cgcccagccc ctgagcatcc aggtgcaccc 11580
caacaagcac aacagcgaga tcggcttcgc caaggagaac gccgccggca tccccatgga 11640
cgccgccgag cgcaactaca aggaccccaa ccacaagccc gagctggtgt tcgccctgac 11700
ccccttcctg gccatgaacg ccttccgcga gttcagcgag atcgtgagcc tgctgcagcc 11760
cgtggccggc gcccaccccg ccatcgccca cttcctgcag cagcccgacg ccgagcgcct 11820
gagcgagctg ttcgccagcc tgctgaacat gcagggcgag gagaagagcc gcgccctggc 11880
catcctgaag agcgccctgg acagccagca gggcgagccc tggcagacca tccgcctgat 11940
cagcgagttc taccccgagg acagcggcct gttcagcccc ctgctgctga acgtggtgaa 12000
gctgaacccc ggcgaggcca tgttcctgtt cgccgagacc ccccacgcct acctgcaggg 12060
cgtggccctg gaggtgatgg ccaacagcga caacgtgctg cgcgccggcc tgacccccaa 12120
gtacatcgac atccccgagc tggtggccaa cgtgaagttc gaggccaagc ccgccaacca 12180
gctgctgacc cagcccgtga agcagggcgc cgagctggac ttccccatcc ccgtggacga 12240
cttcgccttc agcctgcacg acctgagcga caaggagacc accatcagcc agcagagcgc 12300
cgccatcctg ttctgcgtgg agggcgacgc caccctgtgg aagggcagcc agcagctgca 12360
gctgaagccc ggcgagagcg ccttcatcgc cgccaacgag agccccgtga ccgtgaaggg 12420
ccacggccgc ctggcccgcg tgtacaacaa gctgtgatag gagctcgatc cgtcgacctg 12480
cagatcgttc aaacatttgg caataaagtt tcttaagatt gaatcctgtt gccggtcttg 12540
cgatgattat catataattt ctgttgaatt acgttaagca tgtaataatt aacatgtaat 12600
gcatgacgtt atttatgaga tgggttttta tgattagagt cccgcaatta tacatttaat 12660
acgcgataga aaacaaaata tagcgcgcaa actaggataa attatcgcgc gcggtgtcat 12720
ctatgttact agatcggcgc gccgcaattg aagtttgggc ggccagcatg gccgtatccg 12780
caatgtgtta ttaagttgtc taagcgtcaa tttgtttaca ccacaatata tcctgccacc 12840
agccagccaa cagctccccg accggcagct cggcacaaaa tcaccactcg atacaggcag 12900
cccatcagaa ttaattctca tgtttgacag cttatcatcg actgcacggt gcaccaatgc 12960
ttctggcgtc aggcagccat cggaagctgt ggtatggctg tgcaggtcgt aaatcactgc 13020
ataattcgtg tcgctcaagg cgcactcccg ttctggataa tgttttttgc gccgacatca 13080
taacggttct ggcaaatatt ctgaaatgag ctgttgacaa ttaatcatcc ggctcgtata 13140
atgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagaccatg agggaagcgt 13200
tgatcgccga agtatcgact caactatcag aggtagttgg cgtcatcgag cgccatctcg 13260
aaccgacgtt gctggccgta catttgtacg gctccgcagt ggatggcggc ctgaagccac 13320
acagtgatat tgatttgctg gttacggtga ccgtaaggct tgatgaaaca acgcggcgag 13380
ctttgatcaa cgaccttttg gaaacttcgg cttcccctgg agagagcgag attctccgcg 13440
ctgtagaagt caccattgtt gtgcacgacg acatcattcc gtggcgttat ccagctaagc 13500
gcgaactgca atttggagaa tggcagcgca atgacattct tgcaggtatc ttcgagccag 13560
ccacgatcga cattgatctg gctatcttgc tgacaaaagc aagagaacat agcgttgcct 13620
tggtaggtcc agcggcggag gaactctttg atccggttcc tgaacaggat ctatttgagg 13680
cgctaaatga aaccttaacg ctatggaact cgccgcccga ctgggctggc gatgagcgaa 13740
atgtagtgct tacgttgtcc cgcatttggt acagcgcagt aaccggcaaa atcgcgccga 13800
aggatgtcgc tgccgactgg gcaatggagc gcctgccggc ccagtatcag cccgtcatac 13860
ttgaagctag gcaggcttat cttggacaag aagatcgctt ggcctcgcgc gcagatcagt 13920
tggaagaatt tgttcactac gtgaaaggcg agatcaccaa agtagtcggc aaataaagct 13980
ctagtggatc tccgtacccg gggatctggc tcgcggcgga cgcacgacgc cggggcgaga 14040
ccataggcga tctcctaaat caatagtagc tgtaacctcg aagcgtttca cttgtaacaa 14100
cgattgagaa tttttgtcat aaaattgaaa tacttggttc gcatttttgt catccgcggt 14160
cagccgcaat tctgacgaac tgcccattta gctggagatg attgtacatc cttcacgtga 14220
aaatttctca agcgctgtga acaagggttc agattttaga ttgaaaggtg agccgttgaa 14280
acacgttctt cttgtcgatg acgacgtcgc tatgcggcat cttattattg aataccttac 14340
gatccacgcc ttcaaagtga ccgcggtagc cgacagcacc cagttcacaa gagtactctc 14400
ttccgcgacg gtcgatgtcg tggttgttga tctagattta ggtcgtgaag atgggctcga 14460
gctaggagca agtgatttta tcgctaagcc gttcagtatc agagagtttc tagcacgcat 14520
tcgggttgcc ttgcgcgtgc gccccaacgt tgtccgctcc aaagaccgac ggtctttttg 14580
ttttactgac tggacactta atctcaggca acgtcgcttg atgtccgaag ctggcggtga 14640
ggtgaaactt acggcaggtg agttcaatct tctcctcgcg tttttagaga aaccccgcga 14700
cgttctatcg cgcgagcaac ttctcattgc cagtcgagta cgcgacgagg aggtttatga 14760
caggagtata gatgttctca ttttgaggct gcgccgcaaa cttgaggcag atccgtcaag 14820
ccctcaactg ataaaaacag caagaggtgc cggttatttc tttgacgcgg acgtgcaggt 14880
ttcgcacggg gggacgatgg cagcctgagc caattcccag atccccgagg aatcggcgtg 14940
agcggtcgca aaccatccgg cccggtacaa atcggcgcgg cgctgggtga tgacctggtg 15000
gagaagttga aggccgcgca ggccgcccag cggcaacgca tcgaggcaga agcacgcccc 15060
ggtgaatcgt ggcaagcggc cgctgatcga atccgcaaag aatcccggca accgccggca 15120
gccggtgcgc cgtcgattag gaagccgccc aagggcgacg agcaaccaga ttttttcgtt 15180
ccgatgctct atgacgtggg cacccgcgat agtcgcagca tcatggacgt ggccgttttc 15240
cgtctgtcga agcgtgaccg acgagctggc gaggtgatcc gctacgagct tccagacggg 15300
cacgtagagg tttccgcagg gccggccggc atggccagtg tgtgggatta cgacctggta 15360
ctgatggcgg tttcccatct aaccgaatcc atgaaccgat accgggaagg gaagggagac 15420
aagcccggcc gcgtgttccg tccacacgtt gcggacgtac tcaagttctg ccggcgagcc 15480
gatggcggaa agcagaaaga cgacctggta gaaacctgca ttcggttaaa caccacgcac 15540
gttgccatgc agcgtacgaa gaaggccaag aacggccgcc tggtgacggt atccgagggt 15600
gaagccttga ttagccgcta caagatcgta aagagcgaaa ccgggcggcc ggagtacatc 15660
gagatcgagc tagctgattg gatgtaccgc gagatcacag aaggcaagaa cccggacgtg 15720
ctgacggttc accccgatta ctttttgatc gatcccggca tcggccgttt tctctaccgc 15780
ctggcacgcc gcgccgcagg caaggcagaa gccagatggt tgttcaagac gatctacgaa 15840
cgcagtggca gcgccggaga gttcaagaag ttctgtttca ccgtgcgcaa gctgatcggg 15900
tcaaatgacc tgccggagta cgatttgaag gaggaggcgg ggcaggctgg cccgatccta 15960
gtcatgcgct accgcaacct gatcgagggc gaagcatccg ccggttccta atgtacggag 16020
cagatgctag ggcaaattgc cctagcaggg gaaaaaggtc gaaaaggtct ctttcctgtg 16080
gatagcacgt acattgggaa cccaaagccg tacattggga accggaaccc gtacattggg 16140
aacccaaagc cgtacattgg gaaccggtca cacatgtaag tgactgatat aaaagagaaa 16200
aaaggcgatt tttccgccta aaactcttta aaacttatta aaactcttaa aacccgcctg 16260
gcctgtgcat aactgtctgg ccagcgcaca gccgaagagc tgcaaaaagc gcctaccctt 16320
cggtcgctgc gctccctacg ccccgccgct tcgcgtcggc ctatcgcggc cgctggccgc 16380
tcaaaaatgg ctggcctacg gccaggcaat ctaccagggc gcggacaagc cgcgccgtcg 16440
ccactcgacc gccggcgctg aggtctgcct cgtgaagaag gtgttgctga ctcataccag 16500
gcctgaatcg ccccatcatc cagccagaaa gtgagggagc cacggttgat gagagctttg 16560
ttgtaggtgg accagttggt gattttgaac ttttgctttg ccacggaacg gtctgcgttg 16620
tcgggaagat gcgtgatctg atccttcaac tcagcaaaag ttcgatttat tcaacaaagc 16680
cgccgtcccg tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg 16740
attagaaaaa ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa 16800
taccatattt ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc 16860
ataggatggc aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac 16920
ctattaattt cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga 16980
ctgaatccgg tgagaatggc aaaagctctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga 17040
ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc 17100
gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa 17160
tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt 17220
aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa 17280
aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt 17340
ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg 17400
tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc 17460
agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc 17520
gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta 17580
tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct 17640
acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc 17700
tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa 17760
caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa 17820
aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa 17880
aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt 17940
ttgatccgga atta 17954
<210> 36
<211> 17045
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体24079
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<220>
<221> 启动子
<222> (312)..(2356)
<223> prGRMZM2G146551-01
<220>
<221> 基因
<222> (2358)..(6527)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5847)..(5849)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5892)..(5894)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6542)..(7860)
<223> tGRMZM2G146551-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7874)..(8248)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8249)..(8354)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8250)..(8269)
<223> ZmVLHP2靶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8270)..(8281)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8286)..(8354)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8365)..(10356)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (10373)..(11551)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (11574)..(11826)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11870)..(11999)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (12279)..(13067)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (13162)..(13292)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (13367)..(13999)
<223> cVirG-09
<220>
<221> 基因
<222> (14029)..(15102)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15145)..(15549)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16227)..(17033)
<223> oCOLE-06
<400> 36
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
taccgggacc catgtagtat cacatgagtg agtcaaggac taagtattat gcattttgtt 360
tctcactcac ggattagctc gcaatcatca tagtgaaatc tagctactgg cactatcgaa 420
atctagctct ttgccgagtg cactttatcg agcactcgac aaagcattct ttatcgagtg 480
ccagtcttgg cgaaataaga ctctcgacaa agaccttgtt taccgaggga gaaacactcg 540
gcgtaaaaag acactcggca aagaagactt tgctgagtgt caaaccctca gcgaaatgcg 600
accctcggca aaggaccgtc agcagccatc tatagttgat ggctattaac ttcgcgagtg 660
tcaggcgttg acacacgaca aaatatcttt tttgtcgagt gtcactgggc aaacacttgg 720
taaacctatg ttttgccgag tgtctttcct tgacactcga caaagtatat ttgttttttc 780
tttttcccca aactttttgt ggtgtgtttc tacaatatat agacctattt gttcaatttt 840
ggcacaatta taaaagtgtt tgctataact atcagattta gtttgcttaa ttggatttct 900
ttggataatt cagatttgaa ctacaagcca cttgaaaaat ggaaaacagt gaatacaaaa 960
atgacattca tgttatttag cacaagttat gatctatttc aggaacatgc gagaattttc 1020
gaacaccatt ctcacaaaac atgattgcgg acttgtgatc aagttgtttt aaaattgtat 1080
aaaacaaaaa caaagtcaga aaatcatgaa acttgttgac atgtcatgat atcatatgta 1140
gagactctaa taaaaatttg agattgtttc atgaaagttg tcacgcgcta tgtgtagaaa 1200
cctagcccgt ctacattgag gttctatgat ttcatgtgaa ggacatctag gcatcaatgt 1260
ttatgataat atcttatgtt tgtttggacg aaatattaaa aacaaataaa aaggggtcct 1320
tgatcacttt gacgagcatt gcactcagca aagggtgcct ttgctgagtg caatggtcat 1380
agaactcggt agaaaaacat acatagacat agggaaactt gctttaccgc gtgctatggc 1440
caagacactc ggcaaactag gctcctttgt cgagttccat cccaagcact cgacattgga 1500
actgcgactg ggcctcacag aagctttctt tgccgagtgc cactaagcga ggaactcgga 1560
tgctcagcaa aggctctgtc atcgtcacga tgtcttttgt ttgtcgtgta ccagttggca 1620
ctcggtaaag actttactga gtgcccgata gaaagtactc gacaaagaga ccgttgccaa 1680
cgtttggttc actgagggct ctttgctgcc ttttggactt gacaaagaag ccgtctccag 1740
tagtgtctcc tgggaggcgg gatttatgtt ttttcccgga gctctgtggg acatcatgga 1800
cggtccagtc tggtgatcta aaatagacgg tttgccaagc tcacagagaa gtctttaaga 1860
tcttccacga tgcacgcatg ctttaaggtt agttagtgtt tggtctgaaa aagcgtcaac 1920
aattaggaaa caagaactaa aattattaaa ggacagatca ggaagcatgc atgttcttct 1980
tctatagtgt gtgttgagcc tgagtttggc cttttaggct ttattagggg gctcacagtc 2040
taactaagga gttgtattga tgtgctgaca aatattatgt tcgatcgtca cagtgttctt 2100
atgcggatcg attaggcccg atcatggtga aataaactaa ccaccggtaa gcccgggcag 2160
ccctagagca tgcagcggcc tacgtgaagc ccgcacatcg catcgtcgtc cgtcaggcgc 2220
taacggccgg ccgctgcatg cgtcgccggc gaactctctg ctgagccacc cgtcctccct 2280
ataagtagct atcccagcac cgtcgtctat caaccacaca cagagcggca tttcgaataa 2340
cacaggtgag cgcgaccatg gacaagaagt acagcatcgg cctggacatc ggcaccaaca 2400
gcgtgggctg ggccgtgatc accgacgagt acaaggtgcc gagcaagaag ttcaaggtgc 2460
tgggcaacac cgacaggcac agcatcaaga agaacctgat cggcgccctg ctgttcgaca 2520
gcggcgagac cgccgaggcc accaggctga agaggaccgc caggaggagg tacaccagga 2580
ggaagaacag gatctgctac ctgcaggaga tcttcagcaa cgagatggcc aaggtggacg 2640
acagcttctt ccacaggctg gaggagagct tcctggtgga ggaggacaag aagcacgaga 2700
ggcacccgat cttcggcaac atcgtggacg aggtggccta ccacgagaag tacccgacca 2760
tctaccacct gaggaagaag ctggtggaca gcaccgacaa ggccgacctg aggctgatct 2820
acctggccct ggcccacatg atcaagttca ggggccactt cctgatcgag ggcgacctga 2880
acccggacaa cagcgacgtg gacaagctgt tcatccagct ggtgcagacc tacaaccagc 2940
tgttcgagga gaacccgatc aacgccagcg gcgtggacgc caaggccatc ctgagcgcca 3000
ggctgagcaa gagcaggagg ctggagaacc tgatcgccca gctgccgggc gagaagaaga 3060
acggcctgtt cggcaacctg atcgccctga gcctgggcct gaccccgaac ttcaagagca 3120
acttcgacct ggccgaggac gccaagctgc agctgagcaa ggacacctac gacgacgacc 3180
tggacaacct gctggcccag atcggcgacc agtacgccga cctgttcctg gccgccaaga 3240
acctgagcga cgccatcctg ctgagcgaca tcctgagggt gaacaccgag atcaccaagg 3300
ccccgctgag cgccagcatg atcaagaggt acgacgagca ccaccaggac ctgaccctgc 3360
tgaaggccct ggtgaggcag cagctgccgg agaagtacaa ggagatcttc ttcgaccaga 3420
gcaagaacgg ctacgccggc tacatcgacg gcggcgccag ccaggaggag ttctacaagt 3480
tcatcaagcc gatcctggag aagatggacg gcaccgagga gctgctggtg aagctgaaca 3540
gggaggacct gctgaggaag cagaggacct tcgacaacgg cagcatcccg caccagatcc 3600
acctgggcga gctgcacgcc atcctgagga ggcaggagga cttctacccg ttcctgaagg 3660
acaacaggga gaagatcgag aagatcctga ccttccgcat cccgtactac gtgggcccgc 3720
tggccagggg caacagcagg ttcgcctgga tgaccaggaa gagcgaggag accatcaccc 3780
cgtggaactt cgaggaggtg gtggacaagg gcgccagcgc ccagagcttc atcgagagga 3840
tgaccaactt cgacaagaac ctgccgaacg agaaggtgct gccgaagcac agcctgctgt 3900
acgagtactt caccgtgtac aacgagctga ccaaggtgaa gtacgtgacc gagggcatga 3960
ggaagccggc cttcctgagc ggcgagcaga agaaggccat cgtggacctg ctgttcaaga 4020
ccaacaggaa ggtgaccgtg aagcagctga aggaggacta cttcaagaag atcgagtgct 4080
tcgacagcgt ggagatcagc ggcgtggagg acaggttcaa cgccagcctg ggcacctacc 4140
acgacctgct gaagatcatc aaggacaagg acttcctgga caacgaggag aacgaggaca 4200
tcctggagga catcgtgctg accctgaccc tgttcgagga cagggagatg atcgaggaga 4260
ggctgaagac ctacgcccac ctgttcgacg acaaggtgat gaagcagctg aagaggagga 4320
ggtacaccgg ctggggcagg ctgagcagga agctgatcaa cggcatcagg gacaagcaga 4380
gcggcaagac catcctggac ttcctgaaga gcgacggctt cgccaacagg aacttcatgc 4440
agctgatcca cgacgacagc ctgaccttca aggaggacat ccagaaggcc caggtgagcg 4500
gccagggcga cagcctgcac gagcacatcg ccaacctggc cggcagcccg gccatcaaga 4560
agggcatcct gcagaccgtg aaggtggtgg acgagctggt gaaggtgatg ggcaggcaca 4620
agccggagaa catcgtgatc gagatggcca gggagaacca gaccacccag aagggccaga 4680
agaacagcag ggagaggatg aagaggatcg aggagggcat caaggagctg ggcagccaga 4740
tcctgaagga gcacccggtg gagaacaccc agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact 4800
acctgcagaa cggcagggac atgtacgtgg accaggagct ggacatcaac aggctgagcg 4860
actacgacgt ggaccacatc gtgccgcaga gcttcctgaa ggacgacagc atcgacaaca 4920
aggtgctgac caggagcgac aagaacaggg gcaagagcga caacgtgccg agcgaggagg 4980
tggtgaagaa gatgaaaaac tactggaggc agctgctgaa cgccaagctg atcacccaga 5040
ggaagttcga caacctgacc aaggccgaga ggggcggcct gagcgagctg gacaaggccg 5100
gcttcattaa aaggcagctg gtggagacca ggcagatcac caagcacgtg gcccagatcc 5160
tggacagcag gatgaacacc aagtacgacg agaacgacaa gctgatcagg gaggtgaagg 5220
tgatcaccct gaagagcaag ctggtgagcg acttcaggaa ggacttccag ttctacaagg 5280
tgagggagat caataattac caccacgccc acgacgccta cctgaacgcc gtggtgggca 5340
ccgccctgat taaaaagtac ccgaagctgg agagcgagtt cgtgtacggc gactacaagg 5400
tgtacgacgt gaggaagatg atcgccaaga gcgagcagga gatcggcaag gccaccgcca 5460
agtacttctt ctacagcaac atcatgaact tcttcaagac cgagatcacc ctggccaacg 5520
gcgagatcag gaagaggccg ctgatcgaga ccaacggcga gaccggcgag atcgtgtggg 5580
acaagggcag ggacttcgcc accgtgagga aggtgctgtc catgccgcag gtgaacatcg 5640
tgaagaagac cgaggtgcag accggcggct tcagcaagga gagcatcctg ccgaagagga 5700
acagcgacaa gctgatcgcc aggaagaagg actgggaccc gaagaagtac ggcggcttcg 5760
acagcccgac cgtggcctac agcgtgctgg tggtggccaa ggtggagaag ggcaagagca 5820
agaagctgaa gagcgtgaag gagctggtgg gcatcaccat catggagagg agcagcttcg 5880
agaagaaccc agtggacttc ctggaggcca agggctacaa ggaggtgaag aaggacctga 5940
tcattaaact gccgaagtac agcctgttcg agctggagaa cggcaggaag aggatgctgg 6000
ccagcgccgg cgagctgcag aagggcaacg agctggccct gccgagcaag tacgtgaact 6060
tcctgtacct ggccagccac tacgagaagc tgaagggcag cccggaggac aacgagcaga 6120
agcagctgtt cgtggagcag cacaagcact acctggacga gatcatcgag cagatcagcg 6180
agttcagcaa gagggtgatc ctggccgacg ccaacctgga caaggtgctg agcgcctaca 6240
acaagcacag ggacaagccg atcagggagc aggccgagaa catcatccac ctgttcaccc 6300
tgaccaacct gggcgccccg gccgccttca agtacttcga caccaccatc gacaggaaga 6360
ggtacaccag caccaaggag gtgctggacg ccaccctgat ccaccagagc atcaccggcc 6420
tgtacgagac caggatcgac ctgagccagc tgggcggcga cagcagcccg ccgaagaaga 6480
agaggaaggt gagctggaag gacgccagcg gctggagcag gatgtgacca tggagctcta 6540
aactttgaat tcccttcgat tcatccggca cagcgggcta tggaccttca gcagcaagct 6600
aattaagttg gcagcatgca ccgctaacct tatatactac tgagacttcc aaattctagt 6660
atatgtaatc cttttgttcg ggttcatgat cgaattccaa agagtggaaa acaagcaaaa 6720
ggttaaatat acatgccatt tttggaggca tttttttcat gagggcatgt ttcgatatat 6780
ggaccactaa atatacatat catttacttt cctacaaatt tgctacatcc ttggaaatgc 6840
atagtctgtc tccaagaaaa agatactctg attacatcac tagtacacac agcctctata 6900
gtggcggttc tagagacatt ttcactggcg cttttcagtg ccgccagtgt taggggccag 6960
tggaaatcgc catttccatt caataaccgc cagtggaaaa agcatttcca ctggcggttt 7020
tcttaagcaa ccgccagtgg aaatgtttcc cgtctttttt taaattttcg tactgaaatt 7080
tatatattta cacacacaaa catatatata tatatattga tattgataaa catgtagtat 7140
tgatactaaa agcaacatga aattaaattc tatcatacat ttatatacat caaagtcttg 7200
tttacaacca tgtatgcatc acacattata tacatcaaag ttttcactta agctctaata 7260
actatctcgg ctaagagata gtctactaat ttctgttagt attctaaact ctggcaaagc 7320
taatgttccg gaagcatcgt gatatttccc ttctgcggga atgacctctt tcaatatgaa 7380
tgtgcacagg tcctcaacta tgccatacaa tgcaccttca gtcaagttct ccgggcttcc 7440
tttttgaaat tgctgtaaag gaagtttata aacatcatct atttatactc aataataaca 7500
catttgcatc tttaatgaca taaatacata cgtgactatt actaataata ccttgccagg 7560
gttcgtgatg tatcgtccat tcattctcat aaactcgcac acgtagaacc cacataggac 7620
cgatccgggt ggttgcttgt ggcactacat aacgggagat tggttattta gttgcaacat 7680
tgtcctatgt acgtacatgt atgatatgta ttcataaatt cacatactta ctggccagtt 7740
ataatggatg tctagtggca cacctttttt ggacgtgtcg tactttccac catgtagctt 7800
ataaaaccta aatgccctgt gatctcaaat agaatcacca tgttattcta caattctcat 7860
gggacccttc gaagggatct ttaaacatac gaacagatca cttaaagttc ttctgaagca 7920
acttaaagtt atcaggcatg catggatctt ggaggaatca gatgtgcagt cagggaccat 7980
agcacaggac aggcgtcttc tactggtgct accagcaaat gctggaagcc gggaacactg 8040
ggtacgttgg aaaccacgtg atgtggagta agataaactg taggagaaaa gcatttcgta 8100
gtgggccatg aagcctttca ggacatgtat tgcagtatgg gccggcccat tacgcaattg 8160
gacgacaaca aagactagta ttagtaccac ctcggctatc cacatagatc aaagctggtt 8220
taaaagagtt gtgcagatga tccgtggcag ctggagctga gcttccgggg ttttagagct 8280
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ggtgcttttt ttttcggacc gcgcctgcag tgcagcgtga cccggtcgtg cccctctcta 8400
gagataatga gcattgcatg tctaagttat aaaaaattac cacatatttt ttttgtcaca 8460
cttgtttgaa gtgcagttta tctatcttta tacatatatt taaactttac tctacgaata 8520
atataatcta tagtactaca ataatatcag tgttttagag aatcatataa atgaacagtt 8580
agacatggtc taaaggacaa ttgagtattt tgacaacagg actctacagt tttatctttt 8640
tagtgtgcat gtgttctcct ttttttttgc aaatagcttc acctatataa tacttcatcc 8700
attttattag tacatccatt tagggtttag ggttaatggt ttttatagac taattttttt 8760
agtacatcta ttttattcta ttttagcctc taaattaaga aaactaaaac tctattttag 8820
tttttttatt taataattta gatataaaat agaataaaat aaagtgacta aaaattaaac 8880
aaataccctt taagaaatta aaaaaactaa ggaaacattt ttcttgtttc gagtagataa 8940
tgccagcctg ttaaacgccg tcgacgagtc taacggacac caaccagcga accagcagcg 9000
tcgcgtcggg ccaagcgaag cagacggcac ggcatctctg tcgctgcctc tggacccctc 9060
tcgagagttc cgctccaccg ttggacttgc tccgctgtcg gcatccagaa attgcgtggc 9120
ggagcggcag acgtgagccg gcacggcagg cggcctcctc ctcctctcac ggcaccggca 9180
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acaaccagat ctcccccaaa tccacccgtc ggcacctccg cttcaaggta cgccgctcgt 9360
cctccccccc ccccctctct accttctcta gatcggcgtt ccggtccatg gttagggccc 9420
ggtagttcta cttctgttca tgtttgtgtt agatccgtgt ttgtgttaga tccgtgctgc 9480
tagcgttcgt acacggatgc gacctgtacg tcagacacgt tctgattgct aacttgccag 9540
tgtttctctt tggggaatcc tgggatggct ctagccgttc cgcagacggg atcgatttca 9600
tgattttttt tgtttcgttg catagggttt ggtttgccct tttcctttat ttcaatatat 9660
gccgtgcact tgtttgtcgg gtcatctttt catgcttttt tttgtcttgg ttgtgatgat 9720
gtggtctggt tgggcggtcg ttctagatcg gagtagaatt ctgtttcaaa ctacctggtg 9780
gatttattaa ttttggatct gtatgtgtgt gccatacata ttcatagtta cgaattgaag 9840
atgatggatg gaaatatcga tctaggatag gtatacatgt tgatgcgggt tttactgatg 9900
catatacaga gatgcttttt gttcgcttgg ttgtgatgat gtggtgtggt tgggcggtcg 9960
ttcattcgtt ctagatcgga gtagaatact gtttcaaact acctggtgta tttattaatt 10020
ttggaactgt atgtgtgtgt catacatctt catagttacg agtttaagat ggatggaaat 10080
atcgatctag gataggtata catgttgatg tgggttttac tgatgcatat acatgatggc 10140
atatgcagca tctattcata tgctctaacc ttgagtacct atctattata ataaacaagt 10200
atgttttata attattttga tcttgatata cttggatgat ggcatatgca gcagctatat 10260
gtggattttt ttagccctgc cttcatacgc tatttatttg cttggtactg tttcttttgt 10320
cgatgctcac cctgttgttt ggtgttactt ctgcagggat ccggcagcag ccatgcagaa 10380
gctgatcaac agcgtgcaga actacgcctg gggcagcaag accgccctga ccgagctgta 10440
cggcatggag aaccccagca gccagcccat ggccgagctg tggatgggcg cccaccccaa 10500
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cctgttcaag gtgctgtgcg ccgcccagcc cctgagcatc caggtgcacc ccaacaagca 10680
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gcgcaactac aaggacccca accacaagcc cgagctggtg ttcgccctga cccccttcct 10800
ggccatgaac gccttccgcg agttcagcga gatcgtgagc ctgctgcagc ccgtggccgg 10860
cgcccacccc gccatcgccc acttcctgca gcagcccgac gccgagcgcc tgagcgagct 10920
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ctaccccgag gacagcggcc tgttcagccc cctgctgctg aacgtggtga agctgaaccc 11100
cggcgaggcc atgttcctgt tcgccgagac cccccacgcc tacctgcagg gcgtggccct 11160
ggaggtgatg gccaacagcg acaacgtgct gcgcgccggc ctgaccccca agtacatcga 11220
catccccgag ctggtggcca acgtgaagtt cgaggccaag cccgccaacc agctgctgac 11280
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cggcgagagc gccttcatcg ccgccaacga gagccccgtg accgtgaagg gccacggccg 11520
cctggcccgc gtgtacaaca agctgtgata ggagctcgat ccgtcgacct gcagatcgtt 11580
caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta 11640
tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt 11700
tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag 11760
aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac 11820
tagatcggcg cgccgcaatt gaagtttggg cggccagcat ggccgtatcc gcaatgtgtt 11880
attaagttgt ctaagcgtca atttgtttac accacaatat atcctgccac cagccagcca 11940
acagctcccc gaccggcagc tcggcacaaa atcaccactc gatacaggca gcccatcaga 12000
attaattctc atgtttgaca gcttatcatc gactgcacgg tgcaccaatg cttctggcgt 12060
caggcagcca tcggaagctg tggtatggct gtgcaggtcg taaatcactg cataattcgt 12120
gtcgctcaag gcgcactccc gttctggata atgttttttg cgccgacatc ataacggttc 12180
tggcaaatat tctgaaatga gctgttgaca attaatcatc cggctcgtat aatgtgtgga 12240
attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagaccat gagggaagcg ttgatcgccg 12300
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acattgatct ggctatcttg ctgacaaaag caagagaaca tagcgttgcc ttggtaggtc 12720
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ggcaggctta tcttggacaa gaagatcgct tggcctcgcg cgcagatcag ttggaagaat 13020
ttgttcacta cgtgaaaggc gagatcacca aagtagtcgg caaataaagc tctagtggat 13080
ctccgtaccc ggggatctgg ctcgcggcgg acgcacgacg ccggggcgag accataggcg 13140
atctcctaaa tcaatagtag ctgtaacctc gaagcgtttc acttgtaaca acgattgaga 13200
atttttgtca taaaattgaa atacttggtt cgcatttttg tcatccgcgg tcagccgcaa 13260
ttctgacgaa ctgcccattt agctggagat gattgtacat ccttcacgtg aaaatttctc 13320
aagcgctgtg aacaagggtt cagattttag attgaaaggt gagccgttga aacacgttct 13380
tcttgtcgat gacgacgtcg ctatgcggca tcttattatt gaatacctta cgatccacgc 13440
cttcaaagtg accgcggtag ccgacagcac ccagttcaca agagtactct cttccgcgac 13500
ggtcgatgtc gtggttgttg atctagattt aggtcgtgaa gatgggctcg agctaggagc 13560
aagtgatttt atcgctaagc cgttcagtat cagagagttt ctagcacgca ttcgggttgc 13620
cttgcgcgtg cgccccaacg ttgtccgctc caaagaccga cggtcttttt gttttactga 13680
ctggacactt aatctcaggc aacgtcgctt gatgtccgaa gctggcggtg aggtgaaact 13740
tacggcaggt gagttcaatc ttctcctcgc gtttttagag aaaccccgcg acgttctatc 13800
gcgcgagcaa cttctcattg ccagtcgagt acgcgacgag gaggtttatg acaggagtat 13860
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ggggacgatg gcagcctgag ccaattccca gatccccgag gaatcggcgt gagcggtcgc 14040
aaaccatccg gcccggtaca aatcggcgcg gcgctgggtg atgacctggt ggagaagttg 14100
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tggcaagcgg ccgctgatcg aatccgcaaa gaatcccggc aaccgccggc agccggtgcg 14220
ccgtcgatta ggaagccgcc caagggcgac gagcaaccag attttttcgt tccgatgctc 14280
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attagccgct acaagatcgt aaagagcgaa accgggcggc cggagtacat cgagatcgag 14760
ctagctgatt ggatgtaccg cgagatcaca gaaggcaaga acccggacgt gctgacggtt 14820
caccccgatt actttttgat cgatcccggc atcggccgtt ttctctaccg cctggcacgc 14880
cgcgccgcag gcaaggcaga agccagatgg ttgttcaaga cgatctacga acgcagtggc 14940
agcgccggag agttcaagaa gttctgtttc accgtgcgca agctgatcgg gtcaaatgac 15000
ctgccggagt acgatttgaa ggaggaggcg gggcaggctg gcccgatcct agtcatgcgc 15060
taccgcaacc tgatcgaggg cgaagcatcc gccggttcct aatgtacgga gcagatgcta 15120
gggcaaattg ccctagcagg ggaaaaaggt cgaaaaggtc tctttcctgt ggatagcacg 15180
tacattggga acccaaagcc gtacattggg aaccggaacc cgtacattgg gaacccaaag 15240
ccgtacattg ggaaccggtc acacatgtaa gtgactgata taaaagagaa aaaaggcgat 15300
ttttccgcct aaaactcttt aaaacttatt aaaactctta aaacccgcct ggcctgtgca 15360
taactgtctg gccagcgcac agccgaagag ctgcaaaaag cgcctaccct tcggtcgctg 15420
cgctccctac gccccgccgc ttcgcgtcgg cctatcgcgg ccgctggccg ctcaaaaatg 15480
gctggcctac ggccaggcaa tctaccaggg cgcggacaag ccgcgccgtc gccactcgac 15540
cgccggcgct gaggtctgcc tcgtgaagaa ggtgttgctg actcatacca ggcctgaatc 15600
gccccatcat ccagccagaa agtgagggag ccacggttga tgagagcttt gttgtaggtg 15660
gaccagttgg tgattttgaa cttttgcttt gccacggaac ggtctgcgtt gtcgggaaga 15720
tgcgtgatct gatccttcaa ctcagcaaaa gttcgattta ttcaacaaag ccgccgtccc 15780
gtcaagtcag cgtaatgctc tgccagtgtt acaaccaatt aaccaattct gattagaaaa 15840
actcatcgag catcaaatga aactgcaatt tattcatatc aggattatca ataccatatt 15900
tttgaaaaag ccgtttctgt aatgaaggag aaaactcacc gaggcagttc cataggatgg 15960
caagatcctg gtatcggtct gcgattccga ctcgtccaac atcaatacaa cctattaatt 16020
tcccctcgtc aaaaataagg ttatcaagtg agaaatcacc atgagtgacg actgaatccg 16080
gtgagaatgg caaaagctct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg 16140
cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg 16200
cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat 16260
aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc 16320
gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc 16380
tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga 16440
agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt 16500
ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg 16560
taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc 16620
gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg 16680
gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc 16740
ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg 16800
ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc 16860
gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct 16920
caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt 16980
taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttgatccgg 17040
aatta 17045
<210> 37
<211> 16776
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体24091
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (330)..(2417)
<223> prZmGRMZM2G471240-01
<220>
<221> 基因
<222> (2420)..(6589)
<223> cCas9-01
<220>
<221> 突变
<222> (5909)..(5911)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5954)..(5956)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (6596)..(7591)
<223> tZmGRMZM2G471240-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7605)..(7979)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7981)..(8085)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7981)..(8000)
<223> xZmVLHP2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8001)..(8012)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8017)..(8085)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8096)..(10087)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (10104)..(11282)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
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<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11601)..(11730)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (12010)..(12798)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (12893)..(13023)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (13098)..(13730)
<223> cVirG-09
<220>
<221> 基因
<222> (13760)..(14833)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14876)..(15280)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15958)..(16764)
<223> oCOLE-06
<400> 37
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
tacctcgcga atgcatctag atgggaccct atttgtactc attccatgtc tcataaactt 360
tgggcaccat ccatccaaca catccaatct aaacacacca aacgatgggg aatggaaaga 420
gcagtattcg attcaacaat ggcaaacaaa tatcactgaa ttagaccaag aataaaccta 480
attagacaac gacctcccaa ccatcattcg tcaggctgta aagaagataa agctgccttg 540
gggcatggat caagcagaac accagagatg aatccaaaca cacagaaaat cacgcgcgct 600
gtctacaatg acaacaagcc ccacatttca ttgcagtaca ctgggctaca aaggcacgta 660
caacaaagag ctagggaaac attgcggagg gcacgagaga gcagctaact tgacaatata 720
gcagactgag cttgcactgt tagcaggcga ggaagggaat catggggacg gagaatgggg 780
tccatgcccg cgaaggagaa ggcggacgcc gccacggtgg caccggcgca cgcgcacaca 840
gggaacccgc acaggcagcc aaggatgctg cctcgccatt gcgccggtcg tctctgccac 900
gctcctctct ctctcccgct gcatcgccgt ggatggggca agcagagagc agggactgcg 960
acgatctggg cggaggactc gccttggaga gcgcggacgc agacgggatt ctagggagag 1020
agcgaagacg gggcgcgcgc ggcgctcgcg cggcgtggtg gcggcgagat tagcgggggt 1080
ggggggaggg cggagccgtg gtgagggtgt ggacgccctc cttaccctct taagtagtag 1140
tagagatata atccgttcca aaatatccat ccgttcaatt tatatttcgt ttgatctttt 1200
taccctaaat ttgattgact catcttatta aaaaagttca taactattat taatctttat 1260
tgagatatca tttagcatat aatatacttt aagtgtggtt ttagattttt tttaaaaaaa 1320
aaaattcgca aaaattaaat gaaacgaccc aatcaaactt gaaaagtaaa actaattata 1380
aatttgaacg gaaggagtaa gaggatgttt gaatgtacta gagctaatag ttggttgctt 1440
taaaatttgc tagtagaatt agctagctaa taaatatcta gataactatt agctaatttg 1500
ctaaaacagc taatagttga actattagct agattgtttg gatgtattcg gctaatttta 1560
atggctaact attagctata gtacaatatt caaacacctc ctaattaaaa tggacaaata 1620
tctcttcttt tggtcccttg cgttagattt ttcatatctc cttatttagt ataaaagaat 1680
catcaaaaag tggacaaccc ctagtggaac accattttag tagtggttgc atgaaacctt 1740
tcgcgcacca gtttctatgt gtcactctaa aaatgggaca gcatgtacgt agtgcctata 1800
tatatacaag tcatctatcg ttgcctcctc agttcatcac taatcacact tattgtgccc 1860
tcgacgagta tctatagcta gctcattaat cgattcgggg gtgtgttgtc gaaggcggca 1920
ttggcgagct actcgtcgcg gcgtccaagc aatacctgta gcacgaaggc gatcgccggg 1980
agcgtggtcg gcgagcccgt cgtgctgggg cagagggtga cggtgctgac ggtggacggc 2040
ggcggcgtcc ggggtctcat cccgggaacc atcctcgcct tcctggaggc caggctgcag 2100
gagctggacg caccggaggc gaggctggcg gactacttcg actacatcgc cggaaccagc 2160
accggcggtc tcatcaccgc cttgctgacc gcgcccggca aggacaagcg gcctctctag 2220
gctgccaagg acatcaacca cttttacatc cataactgcc cgcgcatctt tcctcagaag 2280
tgagtccgat gctgccgcca ttgttcttgc atccatccag catcgtacgt acgtcctcta 2340
tacatctgcg gatcatcatg tgcgcatgtt tgtggcatgc atgcatgcat gtgagcagga 2400
gcaggcttgc gaaaacccca tggacaagaa gtacagcatc ggcctggaca tcggcaccaa 2460
cagcgtgggc tgggccgtga tcaccgacga gtacaaggtg ccgagcaaga agttcaaggt 2520
gctgggcaac accgacaggc acagcatcaa gaagaacctg atcggcgccc tgctgttcga 2580
cagcggcgag accgccgagg ccaccaggct gaagaggacc gccaggagga ggtacaccag 2640
gaggaagaac aggatctgct acctgcagga gatcttcagc aacgagatgg ccaaggtgga 2700
cgacagcttc ttccacaggc tggaggagag cttcctggtg gaggaggaca agaagcacga 2760
gaggcacccg atcttcggca acatcgtgga cgaggtggcc taccacgaga agtacccgac 2820
catctaccac ctgaggaaga agctggtgga cagcaccgac aaggccgacc tgaggctgat 2880
ctacctggcc ctggcccaca tgatcaagtt caggggccac ttcctgatcg agggcgacct 2940
gaacccggac aacagcgacg tggacaagct gttcatccag ctggtgcaga cctacaacca 3000
gctgttcgag gagaacccga tcaacgccag cggcgtggac gccaaggcca tcctgagcgc 3060
caggctgagc aagagcagga ggctggagaa cctgatcgcc cagctgccgg gcgagaagaa 3120
gaacggcctg ttcggcaacc tgatcgccct gagcctgggc ctgaccccga acttcaagag 3180
caacttcgac ctggccgagg acgccaagct gcagctgagc aaggacacct acgacgacga 3240
cctggacaac ctgctggccc agatcggcga ccagtacgcc gacctgttcc tggccgccaa 3300
gaacctgagc gacgccatcc tgctgagcga catcctgagg gtgaacaccg agatcaccaa 3360
ggccccgctg agcgccagca tgatcaagag gtacgacgag caccaccagg acctgaccct 3420
gctgaaggcc ctggtgaggc agcagctgcc ggagaagtac aaggagatct tcttcgacca 3480
gagcaagaac ggctacgccg gctacatcga cggcggcgcc agccaggagg agttctacaa 3540
gttcatcaag ccgatcctgg agaagatgga cggcaccgag gagctgctgg tgaagctgaa 3600
cagggaggac ctgctgagga agcagaggac cttcgacaac ggcagcatcc cgcaccagat 3660
ccacctgggc gagctgcacg ccatcctgag gaggcaggag gacttctacc cgttcctgaa 3720
ggacaacagg gagaagatcg agaagatcct gaccttccgc atcccgtact acgtgggccc 3780
gctggccagg ggcaacagca ggttcgcctg gatgaccagg aagagcgagg agaccatcac 3840
cccgtggaac ttcgaggagg tggtggacaa gggcgccagc gcccagagct tcatcgagag 3900
gatgaccaac ttcgacaaga acctgccgaa cgagaaggtg ctgccgaagc acagcctgct 3960
gtacgagtac ttcaccgtgt acaacgagct gaccaaggtg aagtacgtga ccgagggcat 4020
gaggaagccg gccttcctga gcggcgagca gaagaaggcc atcgtggacc tgctgttcaa 4080
gaccaacagg aaggtgaccg tgaagcagct gaaggaggac tacttcaaga agatcgagtg 4140
cttcgacagc gtggagatca gcggcgtgga ggacaggttc aacgccagcc tgggcaccta 4200
ccacgacctg ctgaagatca tcaaggacaa ggacttcctg gacaacgagg agaacgagga 4260
catcctggag gacatcgtgc tgaccctgac cctgttcgag gacagggaga tgatcgagga 4320
gaggctgaag acctacgccc acctgttcga cgacaaggtg atgaagcagc tgaagaggag 4380
gaggtacacc ggctggggca ggctgagcag gaagctgatc aacggcatca gggacaagca 4440
gagcggcaag accatcctgg acttcctgaa gagcgacggc ttcgccaaca ggaacttcat 4500
gcagctgatc cacgacgaca gcctgacctt caaggaggac atccagaagg cccaggtgag 4560
cggccagggc gacagcctgc acgagcacat cgccaacctg gccggcagcc cggccatcaa 4620
gaagggcatc ctgcagaccg tgaaggtggt ggacgagctg gtgaaggtga tgggcaggca 4680
caagccggag aacatcgtga tcgagatggc cagggagaac cagaccaccc agaagggcca 4740
gaagaacagc agggagagga tgaagaggat cgaggagggc atcaaggagc tgggcagcca 4800
gatcctgaag gagcacccgg tggagaacac ccagctgcag aacgagaagc tgtacctgta 4860
ctacctgcag aacggcaggg acatgtacgt ggaccaggag ctggacatca acaggctgag 4920
cgactacgac gtggaccaca tcgtgccgca gagcttcctg aaggacgaca gcatcgacaa 4980
caaggtgctg accaggagcg acaagaacag gggcaagagc gacaacgtgc cgagcgagga 5040
ggtggtgaag aagatgaaaa actactggag gcagctgctg aacgccaagc tgatcaccca 5100
gaggaagttc gacaacctga ccaaggccga gaggggcggc ctgagcgagc tggacaaggc 5160
cggcttcatt aaaaggcagc tggtggagac caggcagatc accaagcacg tggcccagat 5220
cctggacagc aggatgaaca ccaagtacga cgagaacgac aagctgatca gggaggtgaa 5280
ggtgatcacc ctgaagagca agctggtgag cgacttcagg aaggacttcc agttctacaa 5340
ggtgagggag atcaataatt accaccacgc ccacgacgcc tacctgaacg ccgtggtggg 5400
caccgccctg attaaaaagt acccgaagct ggagagcgag ttcgtgtacg gcgactacaa 5460
ggtgtacgac gtgaggaaga tgatcgccaa gagcgagcag gagatcggca aggccaccgc 5520
caagtacttc ttctacagca acatcatgaa cttcttcaag accgagatca ccctggccaa 5580
cggcgagatc aggaagaggc cgctgatcga gaccaacggc gagaccggcg agatcgtgtg 5640
ggacaagggc agggacttcg ccaccgtgag gaaggtgctg tccatgccgc aggtgaacat 5700
cgtgaagaag accgaggtgc agaccggcgg cttcagcaag gagagcatcc tgccgaagag 5760
gaacagcgac aagctgatcg ccaggaagaa ggactgggac ccgaagaagt acggcggctt 5820
cgacagcccg accgtggcct acagcgtgct ggtggtggcc aaggtggaga agggcaagag 5880
caagaagctg aagagcgtga aggagctggt gggcatcacc atcatggaga ggagcagctt 5940
cgagaagaac ccagtggact tcctggaggc caagggctac aaggaggtga agaaggacct 6000
gatcattaaa ctgccgaagt acagcctgtt cgagctggag aacggcagga agaggatgct 6060
ggccagcgcc ggcgagctgc agaagggcaa cgagctggcc ctgccgagca agtacgtgaa 6120
cttcctgtac ctggccagcc actacgagaa gctgaagggc agcccggagg acaacgagca 6180
gaagcagctg ttcgtggagc agcacaagca ctacctggac gagatcatcg agcagatcag 6240
cgagttcagc aagagggtga tcctggccga cgccaacctg gacaaggtgc tgagcgccta 6300
caacaagcac agggacaagc cgatcaggga gcaggccgag aacatcatcc acctgttcac 6360
cctgaccaac ctgggcgccc cggccgcctt caagtacttc gacaccacca tcgacaggaa 6420
gaggtacacc agcaccaagg aggtgctgga cgccaccctg atccaccaga gcatcaccgg 6480
cctgtacgag accaggatcg acctgagcca gctgggcggc gacagcagcc cgccgaagaa 6540
gaagaggaag gtgagctgga aggacgccag cggctggagc aggatgtgac catgggacaa 6600
gtggctttac tgtcagtcac atgcttgtaa ataagtagac tttattttaa taaaacataa 6660
aaatatatat atgttcttga atataaaatt gataaccaaa ttaaaattcg aaccatcact 6720
tatacataat tttactttat tttttataaa acgtgaacgg gaaggactac cgtgaatgac 6780
tatagaacca atcatactag tataaaatat atgatgacac tacgggagag acaaactttg 6840
tctggcgcta aatattttgc cgagtgtgaa ttcacgggca ctaggcaaag atcttctttg 6900
ccgagtgtta cgctgggcaa agtaagacac taggtaaatc agtcatttgc cgagtgtccg 6960
ccactaggca aagcaaaaca ctggcaaatc aaaagtttac ctagtgccag acactaggca 7020
aaaaaaaaac gctcggcaaa tcggaagttt ccctagtgcc agacactaga caaagaaaaa 7080
cacttgataa actagcgtcg tcagctaaca ccatccacca accgttaacg ttgccgagta 7140
tctgacttcg acactcggca aagaaggtct ctttgcctag tgtcggtctg gaacactagg 7200
caaagaggca ctttacctag tgtcgtattt tgacactcag taaaataatt ttttttcttt 7260
ctgcttccaa actttttatg atgtgttcct atagcaccta gaactacatg tcaagttttg 7320
gtaaaatttt tgaagttttt gctatattta cttaatttat tttatttaat tgaatttctt 7380
ttgataattc aaatttgaac tcggcaaggt aagaagcgag ggtagcctgg aaacacactt 7440
tgcctagtgt tacactcggt acaggagcct cccctgccta gtgctgcact cgacaaaaga 7500
ttcgcctttg cctagcgctg cactcggcac aggagtcgcc tttgcctagt gctgcactag 7560
gcaaagcctc cgttaccgtg ccttccatcg tcggaccctt cgaagggatc tttaaacata 7620
cgaacagatc acttaaagtt cttctgaagc aacttaaagt tatcaggcat gcatggatct 7680
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taccagcaaa tgctggaagc cgggaacact gggtacgttg gaaaccacgt gatgtggagt 7800
aagataaact gtaggagaaa agcatttcgt agtgggccat gaagcctttc aggacatgta 7860
ttgcagtatg ggccggccca ttacgcaatt ggacgacaac aaagactagt attagtacca 7920
cctcggctat ccacatagat caaagctggt ttaaaagagt tgtgcagatg atccgtggca 7980
gctggagctg agcttccggg gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc 8040
cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt tttttcggac cgcgcctgca 8100
gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat gtctaagtta 8160
taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt atctatcttt 8220
atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac aataatatca 8280
gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt 8340
ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg 8400
caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat ttagggttta 8460
gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct attttagcct 8520
ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt agatataaaa 8580
tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta 8640
aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt 8700
ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca 8760
cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg 8820
ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag 8880
gcggcctcct cctcctctca cggcaccggc agctacgggg gattcctttc ccaccgctcc 8940
ttcgctttcc cttcctcgcc cgccgtaata aatagacacc ccctccacac cctctttccc 9000
caacctcgtg ttgttcggag cgcacacaca cacaaccaga tctcccccaa atccacccgt 9060
cggcacctcc gcttcaaggt acgccgctcg tcctcccccc cccccctctc taccttctct 9120
agatcggcgt tccggtccat ggttagggcc cggtagttct acttctgttc atgtttgtgt 9180
tagatccgtg tttgtgttag atccgtgctg ctagcgttcg tacacggatg cgacctgtac 9240
gtcagacacg ttctgattgc taacttgcca gtgtttctct ttggggaatc ctgggatggc 9300
tctagccgtt ccgcagacgg gatcgatttc atgatttttt ttgtttcgtt gcatagggtt 9360
tggtttgccc ttttccttta tttcaatata tgccgtgcac ttgtttgtcg ggtcatcttt 9420
tcatgctttt ttttgtcttg gttgtgatga tgtggtctgg ttgggcggtc gttctagatc 9480
ggagtagaat tctgtttcaa actacctggt ggatttatta attttggatc tgtatgtgtg 9540
tgccatacat attcatagtt acgaattgaa gatgatggat ggaaatatcg atctaggata 9600
ggtatacatg ttgatgcggg ttttactgat gcatatacag agatgctttt tgttcgcttg 9660
gttgtgatga tgtggtgtgg ttgggcggtc gttcattcgt tctagatcgg agtagaatac 9720
tgtttcaaac tacctggtgt atttattaat tttggaactg tatgtgtgtg tcatacatct 9780
tcatagttac gagtttaaga tggatggaaa tatcgatcta ggataggtat acatgttgat 9840
gtgggtttta ctgatgcata tacatgatgg catatgcagc atctattcat atgctctaac 9900
cttgagtacc tatctattat aataaacaag tatgttttat aattattttg atcttgatat 9960
acttggatga tggcatatgc agcagctata tgtggatttt tttagccctg ccttcatacg 10020
ctatttattt gcttggtact gtttcttttg tcgatgctca ccctgttgtt tggtgttact 10080
tctgcaggga tccggcagca gccatgcaga agctgatcaa cagcgtgcag aactacgcct 10140
ggggcagcaa gaccgccctg accgagctgt acggcatgga gaaccccagc agccagccca 10200
tggccgagct gtggatgggc gcccacccca agagcagcag ccgcgtgcag aacgccgccg 10260
gcgacatcgt gagcctgcgc gacgtgatcg agagcgacaa gagcaccctg ctgggcgagg 10320
ccgtggccaa gcgcttcggc gagctgccct tcctgttcaa ggtgctgtgc gccgcccagc 10380
ccctgagcat ccaggtgcac cccaacaagc acaacagcga gatcggcttc gccaaggaga 10440
acgccgccgg catccccatg gacgccgccg agcgcaacta caaggacccc aaccacaagc 10500
ccgagctggt gttcgccctg acccccttcc tggccatgaa cgccttccgc gagttcagcg 10560
agatcgtgag cctgctgcag cccgtggccg gcgcccaccc cgccatcgcc cacttcctgc 10620
agcagcccga cgccgagcgc ctgagcgagc tgttcgccag cctgctgaac atgcagggcg 10680
aggagaagag ccgcgccctg gccatcctga agagcgccct ggacagccag cagggcgagc 10740
cctggcagac catccgcctg atcagcgagt tctaccccga ggacagcggc ctgttcagcc 10800
ccctgctgct gaacgtggtg aagctgaacc ccggcgaggc catgttcctg ttcgccgaga 10860
ccccccacgc ctacctgcag ggcgtggccc tggaggtgat ggccaacagc gacaacgtgc 10920
tgcgcgccgg cctgaccccc aagtacatcg acatccccga gctggtggcc aacgtgaagt 10980
tcgaggccaa gcccgccaac cagctgctga cccagcccgt gaagcagggc gccgagctgg 11040
acttccccat ccccgtggac gacttcgcct tcagcctgca cgacctgagc gacaaggaga 11100
ccaccatcag ccagcagagc gccgccatcc tgttctgcgt ggagggcgac gccaccctgt 11160
ggaagggcag ccagcagctg cagctgaagc ccggcgagag cgccttcatc gccgccaacg 11220
agagccccgt gaccgtgaag ggccacggcc gcctggcccg cgtgtacaac aagctgtgat 11280
aggagctcga tccgtcgacc tgcagatcgt tcaaacattt ggcaataaag tttcttaaga 11340
ttgaatcctg ttgccggtct tgcgatgatt atcatataat ttctgttgaa ttacgttaag 11400
catgtaataa ttaacatgta atgcatgacg ttatttatga gatgggtttt tatgattaga 11460
gtcccgcaat tatacattta atacgcgata gaaaacaaaa tatagcgcgc aaactaggat 11520
aaattatcgc gcgcggtgtc atctatgtta ctagatcggc gcgccgcaat tgaagtttgg 11580
gcggccagca tggccgtatc cgcaatgtgt tattaagttg tctaagcgtc aatttgttta 11640
caccacaata tatcctgcca ccagccagcc aacagctccc cgaccggcag ctcggcacaa 11700
aatcaccact cgatacaggc agcccatcag aattaattct catgtttgac agcttatcat 11760
cgactgcacg gtgcaccaat gcttctggcg tcaggcagcc atcggaagct gtggtatggc 11820
tgtgcaggtc gtaaatcact gcataattcg tgtcgctcaa ggcgcactcc cgttctggat 11880
aatgtttttt gcgccgacat cataacggtt ctggcaaata ttctgaaatg agctgttgac 11940
aattaatcat ccggctcgta taatgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg 12000
aaacagacca tgagggaagc gttgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt 12060
ggcgtcatcg agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca 12120
gtggatggcg gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg 12180
cttgatgaaa caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct 12240
ggagagagcg agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt 12300
ccgtggcgtt atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt 12360
cttgcaggta tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa 12420
gcaagagaac atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt 12480
cctgaacagg atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc 12540
gactgggctg gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca 12600
gtaaccggca aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg 12660
gcccagtatc agcccgtcat acttgaagct aggcaggctt atcttggaca agaagatcgc 12720
ttggcctcgc gcgcagatca gttggaagaa tttgttcact acgtgaaagg cgagatcacc 12780
aaagtagtcg gcaaataaag ctctagtgga tctccgtacc cggggatctg gctcgcggcg 12840
gacgcacgac gccggggcga gaccataggc gatctcctaa atcaatagta gctgtaacct 12900
cgaagcgttt cacttgtaac aacgattgag aatttttgtc ataaaattga aatacttggt 12960
tcgcattttt gtcatccgcg gtcagccgca attctgacga actgcccatt tagctggaga 13020
tgattgtaca tccttcacgt gaaaatttct caagcgctgt gaacaagggt tcagatttta 13080
gattgaaagg tgagccgttg aaacacgttc ttcttgtcga tgacgacgtc gctatgcggc 13140
atcttattat tgaatacctt acgatccacg ccttcaaagt gaccgcggta gccgacagca 13200
cccagttcac aagagtactc tcttccgcga cggtcgatgt cgtggttgtt gatctagatt 13260
taggtcgtga agatgggctc gagctaggag caagtgattt tatcgctaag ccgttcagta 13320
tcagagagtt tctagcacgc attcgggttg ccttgcgcgt gcgccccaac gttgtccgct 13380
ccaaagaccg acggtctttt tgttttactg actggacact taatctcagg caacgtcgct 13440
tgatgtccga agctggcggt gaggtgaaac ttacggcagg tgagttcaat cttctcctcg 13500
cgtttttaga gaaaccccgc gacgttctat cgcgcgagca acttctcatt gccagtcgag 13560
tacgcgacga ggaggtttat gacaggagta tagatgttct cattttgagg ctgcgccgca 13620
aacttgaggc agatccgtca agccctcaac tgataaaaac agcaagaggt gccggttatt 13680
tctttgacgc ggacgtgcag gtttcgcacg gggggacgat ggcagcctga gccaattccc 13740
agatccccga ggaatcggcg tgagcggtcg caaaccatcc ggcccggtac aaatcggcgc 13800
ggcgctgggt gatgacctgg tggagaagtt gaaggccgcg caggccgccc agcggcaacg 13860
catcgaggca gaagcacgcc ccggtgaatc gtggcaagcg gccgctgatc gaatccgcaa 13920
agaatcccgg caaccgccgg cagccggtgc gccgtcgatt aggaagccgc ccaagggcga 13980
cgagcaacca gattttttcg ttccgatgct ctatgacgtg ggcacccgcg atagtcgcag 14040
catcatggac gtggccgttt tccgtctgtc gaagcgtgac cgacgagctg gcgaggtgat 14100
ccgctacgag cttccagacg ggcacgtaga ggtttccgca gggccggccg gcatggccag 14160
tgtgtgggat tacgacctgg tactgatggc ggtttcccat ctaaccgaat ccatgaaccg 14220
ataccgggaa gggaagggag acaagcccgg ccgcgtgttc cgtccacacg ttgcggacgt 14280
actcaagttc tgccggcgag ccgatggcgg aaagcagaaa gacgacctgg tagaaacctg 14340
cattcggtta aacaccacgc acgttgccat gcagcgtacg aagaaggcca agaacggccg 14400
cctggtgacg gtatccgagg gtgaagcctt gattagccgc tacaagatcg taaagagcga 14460
aaccgggcgg ccggagtaca tcgagatcga gctagctgat tggatgtacc gcgagatcac 14520
agaaggcaag aacccggacg tgctgacggt tcaccccgat tactttttga tcgatcccgg 14580
catcggccgt tttctctacc gcctggcacg ccgcgccgca ggcaaggcag aagccagatg 14640
gttgttcaag acgatctacg aacgcagtgg cagcgccgga gagttcaaga agttctgttt 14700
caccgtgcgc aagctgatcg ggtcaaatga cctgccggag tacgatttga aggaggaggc 14760
ggggcaggct ggcccgatcc tagtcatgcg ctaccgcaac ctgatcgagg gcgaagcatc 14820
cgccggttcc taatgtacgg agcagatgct agggcaaatt gccctagcag gggaaaaagg 14880
tcgaaaaggt ctctttcctg tggatagcac gtacattggg aacccaaagc cgtacattgg 14940
gaaccggaac ccgtacattg ggaacccaaa gccgtacatt gggaaccggt cacacatgta 15000
agtgactgat ataaaagaga aaaaaggcga tttttccgcc taaaactctt taaaacttat 15060
taaaactctt aaaacccgcc tggcctgtgc ataactgtct ggccagcgca cagccgaaga 15120
gctgcaaaaa gcgcctaccc ttcggtcgct gcgctcccta cgccccgccg cttcgcgtcg 15180
gcctatcgcg gccgctggcc gctcaaaaat ggctggccta cggccaggca atctaccagg 15240
gcgcggacaa gccgcgccgt cgccactcga ccgccggcgc tgaggtctgc ctcgtgaaga 15300
aggtgttgct gactcatacc aggcctgaat cgccccatca tccagccaga aagtgaggga 15360
gccacggttg atgagagctt tgttgtaggt ggaccagttg gtgattttga acttttgctt 15420
tgccacggaa cggtctgcgt tgtcgggaag atgcgtgatc tgatccttca actcagcaaa 15480
agttcgattt attcaacaaa gccgccgtcc cgtcaagtca gcgtaatgct ctgccagtgt 15540
tacaaccaat taaccaattc tgattagaaa aactcatcga gcatcaaatg aaactgcaat 15600
ttattcatat caggattatc aataccatat ttttgaaaaa gccgtttctg taatgaagga 15660
gaaaactcac cgaggcagtt ccataggatg gcaagatcct ggtatcggtc tgcgattccg 15720
actcgtccaa catcaataca acctattaat ttcccctcgt caaaaataag gttatcaagt 15780
gagaaatcac catgagtgac gactgaatcc ggtgagaatg gcaaaagctc tgcattaatg 15840
aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct 15900
cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc 15960
ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg 16020
ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 16080
cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 16140
actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 16200
cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 16260
tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 16320
gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 16380
caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 16440
agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 16500
tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 16560
tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 16620
gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 16680
gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 16740
aaggatcttc acctagatcc ttttgatccg gaatta 16776
<210> 38
<211> 17475
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体24094
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(259)
<223> bNRB-05
<220>
<221> 启动子
<222> (330)..(2417)
<223> prZmGRMZM2G471240-01
<220>
<221> 基因
<222> (2420)..(7288)
<223> cAmCyanCas9-01
<220>
<221> 终止子
<222> (7295)..(8290)
<223> tZmGRMZM2G471240-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8304)..(8678)
<223> prOsU3-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8679)..(8784)
<223> rsgRNAZmVLHP-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8680)..(8699)
<223> ZmVLHP2靶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8700)..(8711)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8716)..(8784)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8795)..(10786)
<223> prUbi1-04
<220>
<221> 基因
<222> (10803)..(11981)
<223> cPMI-09
<220>
<221> 终止子
<222> (12004)..(12256)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12300)..(12429)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (12709)..(13497)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 启动子
<222> (13592)..(13722)
<223> prVirG-01
<220>
<221> 基因
<222> (13797)..(14429)
<223> cVirG-09
<220>
<221> 基因
<222> (14459)..(15532)
<223> cRepA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15575)..(15979)
<223> oVS1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16657)..(17463)
<223> oCOLE-06
<400> 38
attcctgtgg ttggcatgca catacaaatg gacgaacgga taaacctttt cacgcccttt 60
taaatatccg attattctaa taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc 120
tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga 180
attaagggag tcacgttatg acccccgccg atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg 240
aactgacaga accgcaacgc tgcaggaatt ggccgcagcg gccatttaaa caaagcttgg 300
tacctcgcga atgcatctag atgggaccct atttgtactc attccatgtc tcataaactt 360
tgggcaccat ccatccaaca catccaatct aaacacacca aacgatgggg aatggaaaga 420
gcagtattcg attcaacaat ggcaaacaaa tatcactgaa ttagaccaag aataaaccta 480
attagacaac gacctcccaa ccatcattcg tcaggctgta aagaagataa agctgccttg 540
gggcatggat caagcagaac accagagatg aatccaaaca cacagaaaat cacgcgcgct 600
gtctacaatg acaacaagcc ccacatttca ttgcagtaca ctgggctaca aaggcacgta 660
caacaaagag ctagggaaac attgcggagg gcacgagaga gcagctaact tgacaatata 720
gcagactgag cttgcactgt tagcaggcga ggaagggaat catggggacg gagaatgggg 780
tccatgcccg cgaaggagaa ggcggacgcc gccacggtgg caccggcgca cgcgcacaca 840
gggaacccgc acaggcagcc aaggatgctg cctcgccatt gcgccggtcg tctctgccac 900
gctcctctct ctctcccgct gcatcgccgt ggatggggca agcagagagc agggactgcg 960
acgatctggg cggaggactc gccttggaga gcgcggacgc agacgggatt ctagggagag 1020
agcgaagacg gggcgcgcgc ggcgctcgcg cggcgtggtg gcggcgagat tagcgggggt 1080
ggggggaggg cggagccgtg gtgagggtgt ggacgccctc cttaccctct taagtagtag 1140
tagagatata atccgttcca aaatatccat ccgttcaatt tatatttcgt ttgatctttt 1200
taccctaaat ttgattgact catcttatta aaaaagttca taactattat taatctttat 1260
tgagatatca tttagcatat aatatacttt aagtgtggtt ttagattttt tttaaaaaaa 1320
aaaattcgca aaaattaaat gaaacgaccc aatcaaactt gaaaagtaaa actaattata 1380
aatttgaacg gaaggagtaa gaggatgttt gaatgtacta gagctaatag ttggttgctt 1440
taaaatttgc tagtagaatt agctagctaa taaatatcta gataactatt agctaatttg 1500
ctaaaacagc taatagttga actattagct agattgtttg gatgtattcg gctaatttta 1560
atggctaact attagctata gtacaatatt caaacacctc ctaattaaaa tggacaaata 1620
tctcttcttt tggtcccttg cgttagattt ttcatatctc cttatttagt ataaaagaat 1680
catcaaaaag tggacaaccc ctagtggaac accattttag tagtggttgc atgaaacctt 1740
tcgcgcacca gtttctatgt gtcactctaa aaatgggaca gcatgtacgt agtgcctata 1800
tatatacaag tcatctatcg ttgcctcctc agttcatcac taatcacact tattgtgccc 1860
tcgacgagta tctatagcta gctcattaat cgattcgggg gtgtgttgtc gaaggcggca 1920
ttggcgagct actcgtcgcg gcgtccaagc aatacctgta gcacgaaggc gatcgccggg 1980
agcgtggtcg gcgagcccgt cgtgctgggg cagagggtga cggtgctgac ggtggacggc 2040
ggcggcgtcc ggggtctcat cccgggaacc atcctcgcct tcctggaggc caggctgcag 2100
gagctggacg caccggaggc gaggctggcg gactacttcg actacatcgc cggaaccagc 2160
accggcggtc tcatcaccgc cttgctgacc gcgcccggca aggacaagcg gcctctctag 2220
gctgccaagg acatcaacca cttttacatc cataactgcc cgcgcatctt tcctcagaag 2280
tgagtccgat gctgccgcca ttgttcttgc atccatccag catcgtacgt acgtcctcta 2340
tacatctgcg gatcatcatg tgcgcatgtt tgtggcatgc atgcatgcat gtgagcagga 2400
gcaggcttgc gaaaacccca tggccctgtc caacaagttc atcggcgacg acatgaagat 2460
gacctaccac atggacggct gcgtgaacgg ccactacttc accgtgaagg gcgagggcag 2520
cggcaagccc tacgagggca cccagacctc caccttcaag gtgaccatgg ccaacggcgg 2580
ccccctggcc ttctccttcg acatcctgtc caccgtgttc atgtacggca accgctgctt 2640
caccgcctac cccaccagca tgcccgacta cttcaagcag gccttccccg acggcatgtc 2700
ctacgagaga accttcacct acgaggacgg cggcgtggcc accgccagct gggagatcag 2760
cctgaagggc aactgcttcg agcacaagtc caccttccac ggcgtgaact tccccgccga 2820
cggccccgtg atggccaaga agaccaccgg ctgggacccc tccttcgaga agatgaccgt 2880
gtgcgacggc atcttgaagg gcgacgtgac cgccttcctg atgctgcagg gcggcggcaa 2940
ctacagatgc cagttccaca cctcctacaa gaccaagaag cccgtgacca tgccccccaa 3000
ccacgtggtg gagcaccgca tcgccagaac cgacctggac aagggcggca acagcgtgca 3060
gctgaccgag cacgccgtgg cccacatcac ctccgtggtg cccttcggcg gcggcggatc 3120
cgacaagaag tacagcatcg gcctggacat cggcaccaac agcgtgggct gggccgtgat 3180
caccgacgag tacaaggtgc cgagcaagaa gttcaaggtg ctgggcaaca ccgacaggca 3240
cagcatcaag aagaacctga tcggcgccct gctgttcgac agcggcgaga ccgccgaggc 3300
caccaggctg aagaggaccg ccaggaggag gtacaccagg aggaagaaca ggatctgcta 3360
cctgcaggag atcttcagca acgagatggc caaggtggac gacagcttct tccacaggct 3420
ggaggagagc ttcctggtgg aggaggacaa gaagcacgag aggcacccga tcttcggcaa 3480
catcgtggac gaggtggcct accacgagaa gtacccgacc atctaccacc tgaggaagaa 3540
gctggtggac agcaccgaca aggccgacct gaggctgatc tacctggccc tggcccacat 3600
gatcaagttc aggggccact tcctgatcga gggcgacctg aacccggaca acagcgacgt 3660
ggacaagctg ttcatccagc tggtgcagac ctacaaccag ctgttcgagg agaacccgat 3720
caacgccagc ggcgtggacg ccaaggccat cctgagcgcc aggctgagca agagcaggag 3780
gctggagaac ctgatcgccc agctgccggg cgagaagaag aacggcctgt tcggcaacct 3840
gatcgccctg agcctgggcc tgaccccgaa cttcaagagc aacttcgacc tggccgagga 3900
cgccaagctg cagctgagca aggacaccta cgacgacgac ctggacaacc tgctggccca 3960
gatcggcgac cagtacgccg acctgttcct ggccgccaag aacctgagcg acgccatcct 4020
gctgagcgac atcctgaggg tgaacaccga gatcaccaag gccccgctga gcgccagcat 4080
gatcaagagg tacgacgagc accaccagga cctgaccctg ctgaaggccc tggtgaggca 4140
gcagctgccg gagaagtaca aggagatctt cttcgaccag agcaagaacg gctacgccgg 4200
ctacatcgac ggcggcgcca gccaggagga gttctacaag ttcatcaagc cgatcctgga 4260
gaagatggac ggcaccgagg agctgctggt gaagctgaac agggaggacc tgctgaggaa 4320
gcagaggacc ttcgacaacg gcagcatccc gcaccagatc cacctgggcg agctgcacgc 4380
catcctgagg aggcaggagg acttctaccc gttcctgaag gacaacaggg agaagatcga 4440
gaagatcctg accttccgca tcccgtacta cgtgggcccg ctggccaggg gcaacagcag 4500
gttcgcctgg atgaccagga agagcgagga gaccatcacc ccgtggaact tcgaggaggt 4560
ggtggacaag ggcgccagcg cccagagctt catcgagagg atgaccaact tcgacaagaa 4620
cctgccgaac gagaaggtgc tgccgaagca cagcctgctg tacgagtact tcaccgtgta 4680
caacgagctg accaaggtga agtacgtgac cgagggcatg aggaagccgg ccttcctgag 4740
cggcgagcag aagaaggcca tcgtggacct gctgttcaag accaacagga aggtgaccgt 4800
gaagcagctg aaggaggact acttcaagaa gatcgagtgc ttcgacagcg tggagatcag 4860
cggcgtggag gacaggttca acgccagcct gggcacctac cacgacctgc tgaagatcat 4920
caaggacaag gacttcctgg acaacgagga gaacgaggac atcctggagg acatcgtgct 4980
gaccctgacc ctgttcgagg acagggagat gatcgaggag aggctgaaga cctacgccca 5040
cctgttcgac gacaaggtga tgaagcagct gaagaggagg aggtacaccg gctggggcag 5100
gctgagcagg aagctgatca acggcatcag ggacaagcag agcggcaaga ccatcctgga 5160
cttcctgaag agcgacggct tcgccaacag gaacttcatg cagctgatcc acgacgacag 5220
cctgaccttc aaggaggaca tccagaaggc ccaggtgagc ggccagggcg acagcctgca 5280
cgagcacatc gccaacctgg ccggcagccc ggccatcaag aagggcatcc tgcagaccgt 5340
gaaggtggtg gacgagctgg tgaaggtgat gggcaggcac aagccggaga acatcgtgat 5400
cgagatggcc agggagaacc agaccaccca gaagggccag aagaacagca gggagaggat 5460
gaagaggatc gaggagggca tcaaggagct gggcagccag atcctgaagg agcacccggt 5520
ggagaacacc cagctgcaga acgagaagct gtacctgtac tacctgcaga acggcaggga 5580
catgtacgtg gaccaggagc tggacatcaa caggctgagc gactacgacg tggaccacat 5640
cgtgccgcag agcttcctga aggacgacag catcgacaac aaggtgctga ccaggagcga 5700
caagaacagg ggcaagagcg acaacgtgcc gagcgaggag gtggtgaaga agatgaaaaa 5760
ctactggagg cagctgctga acgccaagct gatcacccag aggaagttcg acaacctgac 5820
caaggccgag aggggcggcc tgagcgagct ggacaaggcc ggcttcatta aaaggcagct 5880
ggtggagacc aggcagatca ccaagcacgt ggcccagatc ctggacagca ggatgaacac 5940
caagtacgac gagaacgaca agctgatcag ggaggtgaag gtgatcaccc tgaagagcaa 6000
gctggtgagc gacttcagga aggacttcca gttctacaag gtgagggaga tcaataatta 6060
ccaccacgcc cacgacgcct acctgaacgc cgtggtgggc accgccctga ttaaaaagta 6120
cccgaagctg gagagcgagt tcgtgtacgg cgactacaag gtgtacgacg tgaggaagat 6180
gatcgccaag agcgagcagg agatcggcaa ggccaccgcc aagtacttct tctacagcaa 6240
catcatgaac ttcttcaaga ccgagatcac cctggccaac ggcgagatca ggaagaggcc 6300
gctgatcgag accaacggcg agaccggcga gatcgtgtgg gacaagggca gggacttcgc 6360
caccgtgagg aaggtgctgt ccatgccgca ggtgaacatc gtgaagaaga ccgaggtgca 6420
gaccggcggc ttcagcaagg agagcatcct gccgaagagg aacagcgaca agctgatcgc 6480
caggaagaag gactgggacc cgaagaagta cggcggcttc gacagcccga ccgtggccta 6540
cagcgtgctg gtggtggcca aggtggagaa gggcaagagc aagaagctga agagcgtgaa 6600
ggagctggtg ggcatcacca tcatggagag gagcagcttc gagaagaacc cagtggactt 6660
cctggaggcc aagggctaca aggaggtgaa gaaggacctg atcattaaac tgccgaagta 6720
cagcctgttc gagctggaga acggcaggaa gaggatgctg gccagcgccg gcgagctgca 6780
gaagggcaac gagctggccc tgccgagcaa gtacgtgaac ttcctgtacc tggccagcca 6840
ctacgagaag ctgaagggca gcccggagga caacgagcag aagcagctgt tcgtggagca 6900
gcacaagcac tacctggacg agatcatcga gcagatcagc gagttcagca agagggtgat 6960
cctggccgac gccaacctgg acaaggtgct gagcgcctac aacaagcaca gggacaagcc 7020
gatcagggag caggccgaga acatcatcca cctgttcacc ctgaccaacc tgggcgcccc 7080
ggccgccttc aagtacttcg acaccaccat cgacaggaag aggtacacca gcaccaagga 7140
ggtgctggac gccaccctga tccaccagag catcaccggc ctgtacgaga ccaggatcga 7200
cctgagccag ctgggcggcg acagcagccc gccgaagaag aagaggaagg tgagctggaa 7260
ggacgccagc ggctggagca ggatgtgacc atgggacaag tggctttact gtcagtcaca 7320
tgcttgtaaa taagtagact ttattttaat aaaacataaa aatatatata tgttcttgaa 7380
tataaaattg ataaccaaat taaaattcga accatcactt atacataatt ttactttatt 7440
ttttataaaa cgtgaacggg aaggactacc gtgaatgact atagaaccaa tcatactagt 7500
ataaaatata tgatgacact acgggagaga caaactttgt ctggcgctaa atattttgcc 7560
gagtgtgaat tcacgggcac taggcaaaga tcttctttgc cgagtgttac gctgggcaaa 7620
gtaagacact aggtaaatca gtcatttgcc gagtgtccgc cactaggcaa agcaaaacac 7680
tggcaaatca aaagtttacc tagtgccaga cactaggcaa aaaaaaaacg ctcggcaaat 7740
cggaagtttc cctagtgcca gacactagac aaagaaaaac acttgataaa ctagcgtcgt 7800
cagctaacac catccaccaa ccgttaacgt tgccgagtat ctgacttcga cactcggcaa 7860
agaaggtctc tttgcctagt gtcggtctgg aacactaggc aaagaggcac tttacctagt 7920
gtcgtatttt gacactcagt aaaataattt tttttctttc tgcttccaaa ctttttatga 7980
tgtgttccta tagcacctag aactacatgt caagttttgg taaaattttt gaagtttttg 8040
ctatatttac ttaatttatt ttatttaatt gaatttcttt tgataattca aatttgaact 8100
cggcaaggta agaagcgagg gtagcctgga aacacacttt gcctagtgtt acactcggta 8160
caggagcctc ccctgcctag tgctgcactc gacaaaagat tcgcctttgc ctagcgctgc 8220
actcggcaca ggagtcgcct ttgcctagtg ctgcactagg caaagcctcc gttaccgtgc 8280
cttccatcgt cggacccttc gaagggatct ttaaacatac gaacagatca cttaaagttc 8340
ttctgaagca acttaaagtt atcaggcatg catggatctt ggaggaatca gatgtgcagt 8400
cagggaccat agcacaggac aggcgtcttc tactggtgct accagcaaat gctggaagcc 8460
gggaacactg ggtacgttgg aaaccacgtg atgtggagta agataaactg taggagaaaa 8520
gcatttcgta gtgggccatg aagcctttca ggacatgtat tgcagtatgg gccggcccat 8580
tacgcaattg gacgacaaca aagactagta ttagtaccac ctcggctatc cacatagatc 8640
aaagctggtt taaaagagtt gtgcagatga tccgtggcag ctggagctga gcttccgggg 8700
ttttagagct agaaatagca agttaaaata aggctagtcc gttatcaact tgaaaaagtg 8760
gcaccgagtc ggtgcttttt ttttcggacc gcgcctgcag tgcagcgtga cccggtcgtg 8820
cccctctcta gagataatga gcattgcatg tctaagttat aaaaaattac cacatatttt 8880
ttttgtcaca cttgtttgaa gtgcagttta tctatcttta tacatatatt taaactttac 8940
tctacgaata atataatcta tagtactaca ataatatcag tgttttagag aatcatataa 9000
atgaacagtt agacatggtc taaaggacaa ttgagtattt tgacaacagg actctacagt 9060
tttatctttt tagtgtgcat gtgttctcct ttttttttgc aaatagcttc acctatataa 9120
tacttcatcc attttattag tacatccatt tagggtttag ggttaatggt ttttatagac 9180
taattttttt agtacatcta ttttattcta ttttagcctc taaattaaga aaactaaaac 9240
tctattttag tttttttatt taataattta gatataaaat agaataaaat aaagtgacta 9300
aaaattaaac aaataccctt taagaaatta aaaaaactaa ggaaacattt ttcttgtttc 9360
gagtagataa tgccagcctg ttaaacgccg tcgacgagtc taacggacac caaccagcga 9420
accagcagcg tcgcgtcggg ccaagcgaag cagacggcac ggcatctctg tcgctgcctc 9480
tggacccctc tcgagagttc cgctccaccg ttggacttgc tccgctgtcg gcatccagaa 9540
attgcgtggc ggagcggcag acgtgagccg gcacggcagg cggcctcctc ctcctctcac 9600
ggcaccggca gctacggggg attcctttcc caccgctcct tcgctttccc ttcctcgccc 9660
gccgtaataa atagacaccc cctccacacc ctctttcccc aacctcgtgt tgttcggagc 9720
gcacacacac acaaccagat ctcccccaaa tccacccgtc ggcacctccg cttcaaggta 9780
cgccgctcgt cctccccccc ccccctctct accttctcta gatcggcgtt ccggtccatg 9840
gttagggccc ggtagttcta cttctgttca tgtttgtgtt agatccgtgt ttgtgttaga 9900
tccgtgctgc tagcgttcgt acacggatgc gacctgtacg tcagacacgt tctgattgct 9960
aacttgccag tgtttctctt tggggaatcc tgggatggct ctagccgttc cgcagacggg 10020
atcgatttca tgattttttt tgtttcgttg catagggttt ggtttgccct tttcctttat 10080
ttcaatatat gccgtgcact tgtttgtcgg gtcatctttt catgcttttt tttgtcttgg 10140
ttgtgatgat gtggtctggt tgggcggtcg ttctagatcg gagtagaatt ctgtttcaaa 10200
ctacctggtg gatttattaa ttttggatct gtatgtgtgt gccatacata ttcatagtta 10260
cgaattgaag atgatggatg gaaatatcga tctaggatag gtatacatgt tgatgcgggt 10320
tttactgatg catatacaga gatgcttttt gttcgcttgg ttgtgatgat gtggtgtggt 10380
tgggcggtcg ttcattcgtt ctagatcgga gtagaatact gtttcaaact acctggtgta 10440
tttattaatt ttggaactgt atgtgtgtgt catacatctt catagttacg agtttaagat 10500
ggatggaaat atcgatctag gataggtata catgttgatg tgggttttac tgatgcatat 10560
acatgatggc atatgcagca tctattcata tgctctaacc ttgagtacct atctattata 10620
ataaacaagt atgttttata attattttga tcttgatata cttggatgat ggcatatgca 10680
gcagctatat gtggattttt ttagccctgc cttcatacgc tatttatttg cttggtactg 10740
tttcttttgt cgatgctcac cctgttgttt ggtgttactt ctgcagggat ccggcagcag 10800
ccatgcagaa gctgatcaac agcgtgcaga actacgcctg gggcagcaag accgccctga 10860
ccgagctgta cggcatggag aaccccagca gccagcccat ggccgagctg tggatgggcg 10920
cccaccccaa gagcagcagc cgcgtgcaga acgccgccgg cgacatcgtg agcctgcgcg 10980
acgtgatcga gagcgacaag agcaccctgc tgggcgaggc cgtggccaag cgcttcggcg 11040
agctgccctt cctgttcaag gtgctgtgcg ccgcccagcc cctgagcatc caggtgcacc 11100
ccaacaagca caacagcgag atcggcttcg ccaaggagaa cgccgccggc atccccatgg 11160
acgccgccga gcgcaactac aaggacccca accacaagcc cgagctggtg ttcgccctga 11220
cccccttcct ggccatgaac gccttccgcg agttcagcga gatcgtgagc ctgctgcagc 11280
ccgtggccgg cgcccacccc gccatcgccc acttcctgca gcagcccgac gccgagcgcc 11340
tgagcgagct gttcgccagc ctgctgaaca tgcagggcga ggagaagagc cgcgccctgg 11400
ccatcctgaa gagcgccctg gacagccagc agggcgagcc ctggcagacc atccgcctga 11460
tcagcgagtt ctaccccgag gacagcggcc tgttcagccc cctgctgctg aacgtggtga 11520
agctgaaccc cggcgaggcc atgttcctgt tcgccgagac cccccacgcc tacctgcagg 11580
gcgtggccct ggaggtgatg gccaacagcg acaacgtgct gcgcgccggc ctgaccccca 11640
agtacatcga catccccgag ctggtggcca acgtgaagtt cgaggccaag cccgccaacc 11700
agctgctgac ccagcccgtg aagcagggcg ccgagctgga cttccccatc cccgtggacg 11760
acttcgcctt cagcctgcac gacctgagcg acaaggagac caccatcagc cagcagagcg 11820
ccgccatcct gttctgcgtg gagggcgacg ccaccctgtg gaagggcagc cagcagctgc 11880
agctgaagcc cggcgagagc gccttcatcg ccgccaacga gagccccgtg accgtgaagg 11940
gccacggccg cctggcccgc gtgtacaaca agctgtgata ggagctcgat ccgtcgacct 12000
gcagatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt 12060
gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa 12120
tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa 12180
tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca 12240
tctatgttac tagatcggcg cgccgcaatt gaagtttggg cggccagcat ggccgtatcc 12300
gcaatgtgtt attaagttgt ctaagcgtca atttgtttac accacaatat atcctgccac 12360
cagccagcca acagctcccc gaccggcagc tcggcacaaa atcaccactc gatacaggca 12420
gcccatcaga attaattctc atgtttgaca gcttatcatc gactgcacgg tgcaccaatg 12480
cttctggcgt caggcagcca tcggaagctg tggtatggct gtgcaggtcg taaatcactg 12540
cataattcgt gtcgctcaag gcgcactccc gttctggata atgttttttg cgccgacatc 12600
ataacggttc tggcaaatat tctgaaatga gctgttgaca attaatcatc cggctcgtat 12660
aatgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagaccat gagggaagcg 12720
ttgatcgccg aagtatcgac tcaactatca gaggtagttg gcgtcatcga gcgccatctc 12780
gaaccgacgt tgctggccgt acatttgtac ggctccgcag tggatggcgg cctgaagcca 12840
cacagtgata ttgatttgct ggttacggtg accgtaaggc ttgatgaaac aacgcggcga 12900
gctttgatca acgacctttt ggaaacttcg gcttcccctg gagagagcga gattctccgc 12960
gctgtagaag tcaccattgt tgtgcacgac gacatcattc cgtggcgtta tccagctaag 13020
cgcgaactgc aatttggaga atggcagcgc aatgacattc ttgcaggtat cttcgagcca 13080
gccacgatcg acattgatct ggctatcttg ctgacaaaag caagagaaca tagcgttgcc 13140
ttggtaggtc cagcggcgga ggaactcttt gatccggttc ctgaacagga tctatttgag 13200
gcgctaaatg aaaccttaac gctatggaac tcgccgcccg actgggctgg cgatgagcga 13260
aatgtagtgc ttacgttgtc ccgcatttgg tacagcgcag taaccggcaa aatcgcgccg 13320
aaggatgtcg ctgccgactg ggcaatggag cgcctgccgg cccagtatca gcccgtcata 13380
cttgaagcta ggcaggctta tcttggacaa gaagatcgct tggcctcgcg cgcagatcag 13440
ttggaagaat ttgttcacta cgtgaaaggc gagatcacca aagtagtcgg caaataaagc 13500
tctagtggat ctccgtaccc ggggatctgg ctcgcggcgg acgcacgacg ccggggcgag 13560
accataggcg atctcctaaa tcaatagtag ctgtaacctc gaagcgtttc acttgtaaca 13620
acgattgaga atttttgtca taaaattgaa atacttggtt cgcatttttg tcatccgcgg 13680
tcagccgcaa ttctgacgaa ctgcccattt agctggagat gattgtacat ccttcacgtg 13740
aaaatttctc aagcgctgtg aacaagggtt cagattttag attgaaaggt gagccgttga 13800
aacacgttct tcttgtcgat gacgacgtcg ctatgcggca tcttattatt gaatacctta 13860
cgatccacgc cttcaaagtg accgcggtag ccgacagcac ccagttcaca agagtactct 13920
cttccgcgac ggtcgatgtc gtggttgttg atctagattt aggtcgtgaa gatgggctcg 13980
agctaggagc aagtgatttt atcgctaagc cgttcagtat cagagagttt ctagcacgca 14040
ttcgggttgc cttgcgcgtg cgccccaacg ttgtccgctc caaagaccga cggtcttttt 14100
gttttactga ctggacactt aatctcaggc aacgtcgctt gatgtccgaa gctggcggtg 14160
aggtgaaact tacggcaggt gagttcaatc ttctcctcgc gtttttagag aaaccccgcg 14220
acgttctatc gcgcgagcaa cttctcattg ccagtcgagt acgcgacgag gaggtttatg 14280
acaggagtat agatgttctc attttgaggc tgcgccgcaa acttgaggca gatccgtcaa 14340
gccctcaact gataaaaaca gcaagaggtg ccggttattt ctttgacgcg gacgtgcagg 14400
tttcgcacgg ggggacgatg gcagcctgag ccaattccca gatccccgag gaatcggcgt 14460
gagcggtcgc aaaccatccg gcccggtaca aatcggcgcg gcgctgggtg atgacctggt 14520
ggagaagttg aaggccgcgc aggccgccca gcggcaacgc atcgaggcag aagcacgccc 14580
cggtgaatcg tggcaagcgg ccgctgatcg aatccgcaaa gaatcccggc aaccgccggc 14640
agccggtgcg ccgtcgatta ggaagccgcc caagggcgac gagcaaccag attttttcgt 14700
tccgatgctc tatgacgtgg gcacccgcga tagtcgcagc atcatggacg tggccgtttt 14760
ccgtctgtcg aagcgtgacc gacgagctgg cgaggtgatc cgctacgagc ttccagacgg 14820
gcacgtagag gtttccgcag ggccggccgg catggccagt gtgtgggatt acgacctggt 14880
actgatggcg gtttcccatc taaccgaatc catgaaccga taccgggaag ggaagggaga 14940
caagcccggc cgcgtgttcc gtccacacgt tgcggacgta ctcaagttct gccggcgagc 15000
cgatggcgga aagcagaaag acgacctggt agaaacctgc attcggttaa acaccacgca 15060
cgttgccatg cagcgtacga agaaggccaa gaacggccgc ctggtgacgg tatccgaggg 15120
tgaagccttg attagccgct acaagatcgt aaagagcgaa accgggcggc cggagtacat 15180
cgagatcgag ctagctgatt ggatgtaccg cgagatcaca gaaggcaaga acccggacgt 15240
gctgacggtt caccccgatt actttttgat cgatcccggc atcggccgtt ttctctaccg 15300
cctggcacgc cgcgccgcag gcaaggcaga agccagatgg ttgttcaaga cgatctacga 15360
acgcagtggc agcgccggag agttcaagaa gttctgtttc accgtgcgca agctgatcgg 15420
gtcaaatgac ctgccggagt acgatttgaa ggaggaggcg gggcaggctg gcccgatcct 15480
agtcatgcgc taccgcaacc tgatcgaggg cgaagcatcc gccggttcct aatgtacgga 15540
gcagatgcta gggcaaattg ccctagcagg ggaaaaaggt cgaaaaggtc tctttcctgt 15600
ggatagcacg tacattggga acccaaagcc gtacattggg aaccggaacc cgtacattgg 15660
gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggtc acacatgtaa gtgactgata taaaagagaa 15720
aaaaggcgat ttttccgcct aaaactcttt aaaacttatt aaaactctta aaacccgcct 15780
ggcctgtgca taactgtctg gccagcgcac agccgaagag ctgcaaaaag cgcctaccct 15840
tcggtcgctg cgctccctac gccccgccgc ttcgcgtcgg cctatcgcgg ccgctggccg 15900
ctcaaaaatg gctggcctac ggccaggcaa tctaccaggg cgcggacaag ccgcgccgtc 15960
gccactcgac cgccggcgct gaggtctgcc tcgtgaagaa ggtgttgctg actcatacca 16020
ggcctgaatc gccccatcat ccagccagaa agtgagggag ccacggttga tgagagcttt 16080
gttgtaggtg gaccagttgg tgattttgaa cttttgcttt gccacggaac ggtctgcgtt 16140
gtcgggaaga tgcgtgatct gatccttcaa ctcagcaaaa gttcgattta ttcaacaaag 16200
ccgccgtccc gtcaagtcag cgtaatgctc tgccagtgtt acaaccaatt aaccaattct 16260
gattagaaaa actcatcgag catcaaatga aactgcaatt tattcatatc aggattatca 16320
ataccatatt tttgaaaaag ccgtttctgt aatgaaggag aaaactcacc gaggcagttc 16380
cataggatgg caagatcctg gtatcggtct gcgattccga ctcgtccaac atcaatacaa 16440
cctattaatt tcccctcgtc aaaaataagg ttatcaagtg agaaatcacc atgagtgacg 16500
actgaatccg gtgagaatgg caaaagctct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag 16560
aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt 16620
cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga 16680
atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg 16740
taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa 16800
aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt 16860
tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct 16920
gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct 16980
cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc 17040
cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt 17100
atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc 17160
tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat 17220
ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa 17280
acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa 17340
aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 17400
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 17460
tttgatccgg aatta 17475
<210> 39
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 39
ttgtgctgct ccacgaaca 19
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 40
gccagccact acgagaagct 20
<210> 41
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 41
ctgcttctgc tcgttgtcct ccgg 24
<210> 42
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子
<400> 42
gcggatgctg gcacagc 17
<210> 43
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 43
ggcattgctt ccttctccg 19
<210> 44
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 44
cagggagcga ggtac 15
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 45
ctggtggcca acgtgaagtt 20
<210> 46
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 46
gcttcacggg ctgggtc 17
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 47
aggccaagcc cgccaaccag 20
<210> 48
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 48
gcggatgctg gcacaga 17
<210> 49
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 49
gcattgcttc cttcgcca 18
<210> 50
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 50
cagggaggta cgaacc 16
<210> 51
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 51
gcggcgaaga agcgaa 16
<210> 52
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 52
gcggcgtctc cagcttc 17
<210> 53
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 53
ccaggaactg cg 12
<210> 54
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 54
aagaaacgcc ggctgagt 18
<210> 55
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 55
accttgcggg gcgtt 15
<210> 56
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 56
ccaggaactg cg 12
<210> 57
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 57
aagaaacgcc ggctgagt 18
<210> 58
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 58
ccttgcgcgg cgtc 14
<210> 59
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 59
ccaggaactg cg 12
<210> 60
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 60
tgatcctcga ggccaagct 19
<210> 61
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 61
aggtcgaggt cccctcca 18
<210> 62
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 62
cctgctaccc gggc 14
<210> 63
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 63
cgcgccctgc taccc 15
<210> 64
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 64
gcgcgtgctt accagga 17
<210> 65
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 65
tcgaggagtg ccc 13
<210> 66
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 66
caccgatgag caggcg 16
<210> 67
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 67
agatacacct tccggccg 18
<210> 68
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 68
ttcctcccgg aagc 14
<210> 69
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 69
caccgatgag caggcg 16
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 70
agatacacct tccggccagt 20
<210> 71
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 71
ctcctcccgg aagc 14
<210> 72
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 72
caagtttctg gacaaggaga ttctc 25
<210> 73
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 73
aagaattccc ttcttaatag ctggaga 27
<210> 74
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 74
cacgagcaca ttgctaacct tgctgg 26
<210> 75
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 75
tcaccgatga gcaggca 17
<210> 76
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 76
atacaccttc cggccagc 18
<210> 77
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 77
ttcctcccgg aagc 14
<210> 78
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 78
gatagggcta aagagatgtg ggaa 24
<210> 79
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 79
ctttgttcac attagggctc aaataa 26
<210> 80
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 80
tagactgaga tggatg 16
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 81
aaaaccaccg gagaagacga 20
<210> 82
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 82
aggtgtggcg gcagtga 17
<210> 83
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 83
caccgtcatt gttc 14
<210> 84
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 84
caagtttctg gacaaggaga ttctc 25
<210> 85
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 85
aagaattccc ttcttaatag ctggaga 27
<210> 86
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 86
cacgagcaca ttgctaacct tgctgg 26
<210> 87
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 87
gcgacgccgg aaagg 15
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 88
tggcgtggtt tcgtcttctt a 21
<210> 89
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 探针
<400> 89
aagagcggcg tctggaggtg actca 25
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 90
aaccgcatcg tcagaaaaac 20
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 91
tcaacttaac cggccaaatc 20
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 92
catcccttct cttccctcct g 21
<210> 93
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 93
gccagtgtga gtgtgtatga gca 23
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 94
catcgttttc tcccctcctc a 21
<210> 95
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 95
actgatatgc acggcgcca 19
<210> 96
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 96
tgcagtagct tcattttcac cg 22
<210> 97
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 97
aggaattgat atgtacgccc gt 22
<210> 98
<211> 16279
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体24075
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(517)
<223> bNRB-07
<220>
<221> 启动子
<222> (538)..(1697)
<223> prAtEFaA1-02
<220>
<221> 基因
<222> (1716)..(5885)
<223> cCas9-05
<220>
<221> 突变
<222> (5205)..(5207)
<223> L至V突变
<220>
<221> 突变
<222> (5250)..(5252)
<223> I至V突变
<220>
<221> 终止子
<222> (5894)..(6146)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6173)..(6620)
<223> prAtU6-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6621)..(6640)
<223> AtGL1靶1
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6621)..(6725)
<223> rsgRNA AtGL1-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6641)..(6652)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6657)..(6725)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (6726)..(7173)
<223> prAtU6-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7174)..(7193)
<223> AtGl1靶2
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7174)..(7278)
<223> rsgRNA AtGL1-02
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7194)..(7205)
<223> rCrRNA-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7210)..(7278)
<223> rTracrRNA-01
<220>
<221> 启动子
<222> (7295)..(7640)
<223> prCMP-02
<220>
<221> 基因
<222> (7653)..(8447)
<223> cNpt2-10
<220>
<221> 终止子
<222> (8476)..(8728)
<223> tNOS-05-01
<220>
<221> 启动子
<222> (8755)..(10752)
<223> prGmUBI-01
<220>
<221> 基因
<222> (10765)..(11454)
<223> cAmCyan-06
<220>
<221> 终止子
<222> (11477)..(12119)
<223> tPsE9-01
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12193)..(12311)
<223> bNLB-03
<220>
<221> 基因
<222> (12928)..(13716)
<223> cSpec-03
<220>
<221> 基因
<222> (13751)..(14824)
<223> cRepA-08
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14867)..(15271)
<223> oVC1-04
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15441)..(16247)
<223> oCOLE-06
<400> 98
gccaggacgt cggccgaaag agcgacaagc agatcacgct tttcgacagc gtcggatttg 60
cgatcgagga tttttcggcg ctgcgctacg tccgcgaccg cgttgaggga tcaagccaca 120
gcagcccact cgaccttcta gccgacccag acgagccaag ggatcttttt ggaatgctgc 180
tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga agtcattatc gcacggaatg 240
ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca tacaaatgga cgaacggata 300
aaccttttca cgccctttta aatatccgat tattctaata aacgctcttt tctcttaggt 360
ttacccgcca atatatcctg tcaaacactg atagtttaaa ctgaaggcgg gaaacgacaa 420
tctgatcatg agcggagaat taagggagtc acgttatgac ccccgccgat gacgcgggac 480
aagccgtttt acgtttggaa ctgacagaac cgcaacgttg aaggcgcgcc actcagcaag 540
cttgatatcg gaagtttctc tcttgaggga ggttgctcgt ggaatgggac acatatggtt 600
gttataataa accatttcca ttgtcatgag attttgaggt taatatatac tttacttgtt 660
cattatttta tttggtgttt gaataaatga tataaatggc tcttgataat ctgcattcat 720
tgagatatca aatatttact ctagagaaga gtgtcatata gattgatggt ccacaatcaa 780
tgaaattttt gggagacgaa catgtataac catttgcttg aataacctta attaaaaggt 840
gtgattaaat gatgtttgta acatgtagta ctaaacattc ataaaacaca accaacccaa 900
gaggtattga gtattcacgg ctaaacaggg gcataatggt aatttaaaga atgatattat 960
tttatgttaa accctaacat tggtttcgga ttcaacgcta taaataaaac cactctcgtt 1020
gctgattcca tttatcgttc ttattgaccc tagccgctac acacttttct gcgatatctc 1080
tgaggtaagc gttaacgtac ccttagatcg ttctttttct ttttcgtctg ctgatcgttg 1140
ctcatattat ttcgatgatt gttggattcg atgctctttg ttgattgatc gttctgaaaa 1200
ttctgatctg ttgtttagat tttatcgatt gttaatatca acgtttcact gcttctaaac 1260
gataatttat tcatgaaact attttcccat tctgatcgat cttgttttga gattttaatt 1320
tgttcgattg attgttggtt ggtggatcta tatacgagtg aacttgttga tttgcgtatt 1380
taagatgtat gtcgatttga attgtgattg ggtaattctg gagtagcata acaaatccag 1440
tgttcccttt ttctaagggt aattctcgga ttgtttgctt tatatctctt gaaattgccg 1500
atttgattga atttagctcg cttagctcag atgatagagc accacaattt ttgtggtaga 1560
aatcggtttg actccgatag cggcttttta ctatgattgt tttgtgttaa agatgatttt 1620
cataatggtt atatatgtct actgttttta ttgattcaat atttgattgt tctttttttt 1680
gcagatttgt tgaccaggga tccgcggccg ctaaaatgga taagaagtat tctattggac 1740
ttgatattgg aaccaactct gtgggatggg ctgttattac tgacgagtat aaggttccat 1800
ctaagaagtt caaggttctt ggaaacactg atagacactc tattaagaag aaccttattg 1860
gtgctcttct tttcgattct ggagagactg ctgaggctac tagacttaag agaactgcta 1920
gaagaagata tactagaaga aagaacagaa tttgctatct tcaagagatt ttctctaacg 1980
agatggctaa ggttgacgat tctttcttcc acagacttga ggagtctttc cttgttgagg 2040
aggataagaa gcacgagaga cacccaattt tcggaaacat tgttgacgag gttgcttatc 2100
acgagaagta tccaactatt tatcacctta gaaagaagct cgttgattct actgataagg 2160
ctgatcttag acttatttat cttgctcttg ctcacatgat taagttcaga ggacacttcc 2220
ttattgaggg agatcttaac ccagataact ctgacgttga taagctcttc attcaacttg 2280
ttcaaactta taaccaactt ttcgaggaga acccaattaa cgcttctgga gttgacgcta 2340
aggctattct ttctgctaga ctttctaagt ctagaaggct tgagaacctt attgctcaac 2400
ttccaggaga gaagaagaac ggacttttcg gaaaccttat tgctctttct cttggactta 2460
ctccaaactt caagtctaac ttcgatcttg ctgaggacgc taagctccaa ctttctaagg 2520
atacttacga cgatgatctt gataaccttc ttgctcaaat tggagatcaa tacgctgatc 2580
ttttccttgc tgctaagaac ctttctgacg ctattcttct ttctgatatt cttagagtta 2640
acactgagat tactaaggct ccactttctg cttctatgat taagagatac gacgagcacc 2700
accaagatct tactcttctt aaggctcttg ttagacaaca acttccagag aagtataagg 2760
agattttctt cgatcaatct aagaacggat acgctggata tattgacgga ggagcttctc 2820
aagaggagtt ctataagttc attaagccaa ttcttgagaa gatggacgga actgaggagc 2880
ttcttgttaa gctcaacaga gaggatcttc ttagaaagca aagaactttc gataacggat 2940
ctattccaca ccaaattcac cttggagagc ttcacgctat tcttagaagg caagaggatt 3000
tctatccatt ccttaaggat aacagagaga agattgagaa gattcttact ttccgtattc 3060
catattacgt tggaccactt gctagaggaa actctagatt cgcttggatg actagaaagt 3120
ctgaggagac tattactcct tggaacttcg aggaggttgt tgataaggga gcttctgctc 3180
aatctttcat tgagagaatg actaacttcg ataagaacct tccaaacgag aaggttcttc 3240
caaagcactc tcttctttac gagtatttca ctgtttataa cgagcttact aaggttaagt 3300
acgttactga gggaatgaga aagccagctt tcctttctgg agagcaaaag aaggctattg 3360
ttgatcttct tttcaagact aacagaaagg ttactgttaa gcaacttaag gaggattatt 3420
tcaagaagat tgagtgcttc gattctgttg agatttctgg agttgaggat agattcaacg 3480
cttctcttgg aacttatcac gatcttctta agattattaa ggataaggat ttccttgata 3540
acgaggagaa cgaggatatt cttgaggata ttgttcttac tcttactctt ttcgaggata 3600
gagagatgat tgaggagaga cttaagactt acgctcacct tttcgacgat aaggttatga 3660
agcaacttaa gagaagaaga tatactggat ggggtagact ttctagaaag ctcattaacg 3720
gaattagaga taagcaatct ggaaagacta ttcttgattt ccttaagtct gacggattcg 3780
ctaacagaaa cttcatgcaa cttattcacg acgattctct tactttcaag gaggatattc 3840
aaaaggctca agtttctgga caaggagatt ctcttcacga gcacattgct aaccttgctg 3900
gatctccagc tattaagaag ggaattcttc aaactgttaa ggttgttgac gagcttgtta 3960
aggttatggg tagacacaag ccagagaaca ttgttattga gatggctaga gagaaccaaa 4020
ctactcaaaa gggacaaaag aactctagag agagaatgaa gagaattgag gagggaatta 4080
aggagcttgg atctcaaatt cttaaggagc acccagttga gaacactcaa cttcaaaacg 4140
agaagctcta tctttattat cttcaaaacg gaagagatat gtacgttgat caagagcttg 4200
atattaacag actttctgat tacgacgttg atcacattgt tccacaatct ttccttaagg 4260
acgattctat tgataacaag gttcttacta gatctgataa gaacagagga aagtctgata 4320
acgttccatc tgaggaggtt gttaagaaga tgaagaacta ttggagacaa cttcttaacg 4380
ctaagctcat tactcaaaga aagttcgata accttactaa ggctgagaga ggaggacttt 4440
ctgagcttga taaggctgga ttcattaaga gacaacttgt tgagactaga caaattacta 4500
agcacgttgc tcaaattctt gattctagaa tgaacactaa gtacgacgag aacgataagc 4560
tcattagaga ggttaaggtt attactctta agtctaagct cgtttctgat ttcagaaagg 4620
atttccaatt ctataaggtt agagagatta acaactatca ccacgctcac gacgcttatc 4680
ttaacgctgt tgttggaact gctcttatta agaagtatcc aaaacttgag tctgagttcg 4740
tttacggaga ttataaggtt tacgacgtta gaaagatgat tgctaagtct gagcaagaga 4800
ttggaaaggc tactgctaag tatttcttct attctaacat tatgaacttc ttcaagactg 4860
agattactct tgctaacgga gagattagaa agaggccact tattgagact aacggagaga 4920
ctggagagat tgtttgggat aagggaagag atttcgctac tgttagaaag gttctttcta 4980
tgccacaagt taacattgtt aagaaaactg aggttcaaac tggaggattc tctaaggagt 5040
ctattcttcc aaagagaaac tctgataagc tcattgctag aaagaaggat tgggacccaa 5100
agaagtacgg aggattcgat tctccaactg ttgcttattc tgttcttgtt gttgctaagg 5160
ttgagaaggg aaagtctaag aagctcaagt ctgttaagga gcttgttgga attactatta 5220
tggagagatc ttctttcgag aagaacccag ttgatttcct tgaggctaag ggatataagg 5280
aggttaagaa ggatcttatt attaagctcc caaagtattc tcttttcgag cttgagaacg 5340
gaagaaagag aatgcttgct tctgctggag agcttcaaaa gggaaacgag cttgctcttc 5400
catctaagta cgttaacttc ctttatcttg cttctcacta cgagaagctc aagggatctc 5460
cagaggataa cgagcaaaag caacttttcg ttgagcaaca caagcactat cttgacgaga 5520
ttattgagca aatttctgag ttctctaaga gagttattct tgctgacgct aaccttgata 5580
aggttctttc tgcttataac aagcacagag ataagccaat tagagagcaa gctgagaaca 5640
ttattcacct tttcactctt actaaccttg gtgctccagc tgctttcaag tatttcgata 5700
ctactattga tagaaagaga tatacttcta ctaaggaggt tcttgacgct actcttattc 5760
accaatctat tactggactt tacgagacta gaattgatct ttctcaactt ggaggagatt 5820
cttctccacc aaagaagaag agaaaggttt cttggaagga cgcttctgga tggtctagaa 5880
tgtgacgtcg cgtgatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 5940
tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 6000
taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 6060
atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 6120
cgcggtgtca tctatgttac tagatctgca gatcggaccc ctaattagct aaaagcttcg 6180
ttgaacaacg gaaactcgac ttgccttccg cacaatacat catttcttct tagctttttt 6240
tcttcttctt cgttcataca gttttttttt gtttatcagc ttacattttc ttgaaccgta 6300
gctttcgttt tcttcttttt aactttccat tcggagtttt tgtatcttgt ttcatagttt 6360
gtcccaggat tagaatgatt aggcatcgaa ccttcaagaa tttgattgaa taaaacatct 6420
tcattcttaa gatatgaaga taatcttcaa aaggcccctg ggaatctgaa agaagagaag 6480
caggcccatt tatatgggaa agaacaatag tatttcttat ataggcccat ttaagttgaa 6540
aacaatcttc aaaagtccca catcgcttag ataagaaaac gaagctgagt ttatatacag 6600
ctagagtcga agtagtgatt ggaaaagttg tagactgaga gttttagagc tagaaatagc 6660
aagttaaaat aaggctagtc cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt 6720
tttttaagct tcgttgaaca acggaaactc gacttgcctt ccgcacaata catcatttct 6780
tcttagcttt ttttcttctt cttcgttcat acagtttttt tttgtttatc agcttacatt 6840
ttcttgaacc gtagctttcg ttttcttctt tttaactttc cattcggagt ttttgtatct 6900
tgtttcatag tttgtcccag gattagaatg attaggcatc gaaccttcaa gaatttgatt 6960
gaataaaaca tcttcattct taagatatga agataatctt caaaaggccc ctgggaatct 7020
gaaagaagag aagcaggccc atttatatgg gaaagaacaa tagtatttct tatataggcc 7080
catttaagtt gaaaacaatc ttcaaaagtc ccacatcgct tagataagaa aacgaagctg 7140
agtttatata cagctagagt cgaagtagtg attgcagtga tgaacaatga cgggttttag 7200
agctagaaat agcaagttaa aataaggcta gtccgttatc aacttgaaaa agtggcaccg 7260
agtcggtgct ttttttttgg cgcgcctaaa gcttctggca gacaaagtgg cagacatact 7320
gtcccacaaa tgaagatgga atctgtaaaa gaaaacgcgt gaaataatgc gtctgacaaa 7380
ggttaggtcg gctgccttta atcaatacca aagtggtccc taccacgatg gaaaaactgt 7440
gcagtcggtt tggctttttc tgacgaacaa ataagattcg tggccgacag gtgggggtcc 7500
accatgtgaa ggcatcttca gactccaata atggagcaat gacgtaaggg cttacgaaat 7560
aagtaagggt agtttgggaa atgtccactc acccgtcagt ctataaatac ttagcccctc 7620
cctcattgtt aagggagcaa ggatcctaaa ccatgattga acaagatgga ttgcacgcag 7680
gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa cagacaatcg 7740
gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt ctttttgtca 7800
agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaggacga ggcagcgcgg ctatcgtggc 7860
tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa gcgggaaggg 7920
actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac cttgctcctg 7980
ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt gatccggcta 8040
cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact cggatggaag 8100
ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg ccagccgaac 8160
tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg acccatggcg 8220
atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc atcgactgtg 8280
gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt gatattgctg 8340
aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc gccgctcccg 8400
attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgatga gagctctaga 8460
tccccgaatt tccccgatcg ttcaaacatt tggcaataaa gtttcttaag attgaatcct 8520
gttgccggtc ttgcgatgat tatcatataa tttctgttga attacgttaa gcatgtaata 8580
attaacatgt aatgcatgac gttatttatg agatgggttt ttatgattag agtcccgcaa 8640
ttatacattt aatacgcgat agaaaacaaa atatagcgcg caaactagga taaattatcg 8700
cgcgcggtgt catctatgtt actagatcgg gaattgggta ccctaattag ctaaattcca 8760
aaattttcag ttagtcctta ctaattatta aattatagta ttaatccaat gtgattgcgg 8820
ttacatcatg tacggaaaaa taattctaat ccttgattta aatttgatct tgactattta 8880
tttattcttt atttcatttt gtaaatcatt ttatgtatct cctggcaagc aattttatcc 8940
accttgcacc aacaccttcg ggttccataa tcaaaccacc ttaacttcac accatgctgt 9000
aactcacacc gcccagcatc tccaatgtga aagaagctaa aatttaataa acaatcatac 9060
gaagcagtga caaaatacca gatggtatta atgctttgat aaaattaatt ggaaagtata 9120
aaatggtaga aaataataaa ttataattaa tttaaataag ataaaaaata attaaaaact 9180
aaaatgttaa aattttaaaa aaattatttt aaataatatt taaaaacatt aaaaatcatt 9240
ttaaaaaatt tatttataga acaattaaat aaatatttca gctaataaaa aacaaaagct 9300
tacctagcct tagaagacaa cttgtccaac aattagatga tacccattgc ccttacgttt 9360
tctttaacat caattattgt ttttgtcaac aagctatctt ttagttttat tttattggta 9420
aaaaatatgt cgccttcaag ttgcatcatt taacacatct cgtcattaga aaaataaaac 9480
tcttccctaa acgattagta gaaaaaatca ttcgataata aataagaaag aaaaattaga 9540
aaaaaataac ttcattttaa aaaaatcatt aaggctatat tttttaaatg actaatttta 9600
tatagactgt aactaaaagt atacaattta ttatgctatg tatcttaaag aattacttat 9660
aaaaatctac ggaagaatat cttacaaagt gaaaaacaaa tgagaaagaa tttagtggga 9720
tgattatgat tttatttgaa aattgaaaaa ataattatta aagactttag tggagtaaga 9780
aagctttcct attagtcttt tcttatccat aaaaaaaaaa aaaaatctag cgtgacagct 9840
tttccataga ttttaataat gtaaaatact ggtagcagcc gaccgttcag gtaatggaca 9900
ctgtggtcct aacttgcaac gggtgcgggc ccaatttaat aacgccgtgg taacggataa 9960
agccaagcgt gaagcggtga aggtacatct ctgactccgt caagattacg aaaccgtcaa 10020
ctacgaagga ctccccgaaa tatcatctgt gtcataaaca ccaagtcaca ccatacatgg 10080
gcacgcgtca caatatgatt ggagaacggt tccaccgcat atgctataaa atgcccccac 10140
acccctcgac cctaatcgca cttcaattgc aatcaaatta gttcattctc tttgcgcagt 10200
tccctacctc tcctttcaag gttcgtagat ttcttctgtt tttttttctt cttctttatt 10260
gtttgttcta catcagcatg atgttgattt gattgtgttt tctatcgttt catcgattat 10320
aaattttcat aatcagaaga ttcagctttt attaatgcaa gaacgtcctt aattgatgat 10380
tttataaccg taaattaggt ctaattagag tttttttcat aaagattttc agatccgttt 10440
acaacaagcc ttaattgttg attctgtagt cgtagattaa ggtttttttc atgaactact 10500
tcagatccgt taaacaacag ccttatttgt tgatacttca gtcgtttttc aagaaattgt 10560
tcagatccgt tgataaaagc cttattcgtt gattctgtat ggtatttcaa gagatattgc 10620
tcaggtcctt tagcaactac cttatttgtt gattctgtgg ccatagatta ggattttttt 10680
tcacgaaatt gcttcttgaa attacgtgat ggattttgat tctgatttat cttgtgattg 10740
ttgactctac agagatctaa aaaaatggcc ctgtccaaca agttcatcgg cgacgacatg 10800
aagatgacct accacatgga cggctgcgtg aacggccact acttcaccgt gaagggcgag 10860
ggcagcggca agccctacga gggcacccag acctccacct tcaaggtgac gatggccaac 10920
ggcggccccc tggccttctc cttcgacatc ctgtccaccg tgttcatgta cggcaaccgc 10980
tgcttcaccg cctaccccac cagcatgccc gactacttca agcaggcctt ccccgacggc 11040
atgtcctacg agagaacctt cacctacgag gacggcggcg tggccaccgc cagctgggag 11100
atcagcctga agggcaactg cttcgagcac aagtccacct tccacggcgt gaacttcccc 11160
gccgacggcc ccgtgatggc caagaagacc accggctggg atccctcctt cgagaagatg 11220
accgtgtgcg acggcatctt gaagggcgac gtgaccgcct tcctgatgct gcagggcggc 11280
ggcaactaca gatgccagtt ccacacctcc tacaagacca agaagcccgt gaccatgccc 11340
cccaaccacg tggtggagca ccgcatcgcc agaaccgacc tggacaaggg cggcaacagc 11400
gtgcagctga ccgagcacgc cgtggcccac atcacctccg tggtgccctt ctgatgaact 11460
agtgaattcg agctcaagct ttcgttcgta tcatcggttt cgacaacgtt cgtcaagttc 11520
aatgcatcag tttcattgcg cacacaccag aatcctactg agtttgagta ttatggcatt 11580
gggaaaactg tttttcttgt accatttgtt gtgcttgtaa tttactgtgt tttttattcg 11640
gttttcgcta tcgaactgtg aaatggaaat ggatggagaa gagttaatga atgatatggt 11700
ccttttgttc attctcaaat taatattatt tgttttttct cttatttgtt gtgtgttgaa 11760
tttgaaatta taagagatat gcaaacattt tgttttgagt aaaaatgtgt caaatcgtgg 11820
cctctaatga ccgaagttaa tatgaggagt aaaacacttg tagttgtacc attatgctta 11880
ttcactaggc aacaaatata ttttcagacc tagaaaagct gcaaatgtta ctgaatacaa 11940
gtatgtcctc ttgtgtttta gacatttatg aactttcctt tatgtaattt tccagaatcc 12000
ttgtcagatt ctaatcattg ctttataatt atagttatac tcatggattt gtagttgagt 12060
atgaaaatat tttttaatgc attttatgac ttgccaattg attgacaaca tgcatcaatc 12120
ggaccgttaa ctagctagac ggccaggatc gccgcgtgag cctttagcaa ctagctagat 12180
taattaaacg tccgcaatgt gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa 12240
tatatcctgc caccagccag ccaacagctc cccgaccggc agctcggcac aaaatcacca 12300
ctcgatacag gcagcccatc agtccgggac ggcgtcagcg ggagagccgt tgtaaggcgg 12360
cagactttgc tcatgttacc gatgctattc ggaagaacgg caactaagct gccgggtttg 12420
aaacacggat gatctcgcgg agggtagcat gttgattgta acgatgacag agcgttgctg 12480
cctgtgatca aatatcatct ccctcgcaga gatccgaatt atcagccttc ttattcattt 12540
ctcgcttaac cgtgacaggc tgtcgatctt gagaactatg ccgacataat aggaaatcgc 12600
tggataaagc cgctgaggaa gctgagtggc gctatttctt tagaagtgaa cgtcgactca 12660
tgtttgacag cttatcatcg actgcacggt gcaccaatgc ttctggcgtc aggcagccat 12720
cggaagctgt ggtatggctg tgcaggtcgt aaatcactgc ataattcgtg tcgctcaagg 12780
cgcactcccg ttctggataa tgttttttgc gccgacatca taacggttct ggcaaatatt 12840
ctgaaatgag ctgttgacaa ttaatcatcc ggctcgtata atgtgtggaa ttgtgagcgg 12900
ataacaattt cacacaggaa acagaccatg agggaagcgt tgatcgccga agtatcgact 12960
caactatcag aggtagttgg cgtcatcgag cgccatctcg aaccgacgtt gctggccgta 13020
catttgtacg gctccgcagt ggatggcggc ctgaagccac acagtgatat tgatttgctg 13080
gttacggtga ccgtaaggct tgatgaaaca acgcggcgag ctttgatcaa cgaccttttg 13140
gaaacttcgg cttcccctgg agagagcgag attctccgcg ctgtagaagt caccattgtt 13200
gtgcacgacg acatcattcc gtggcgttat ccagctaagc gcgaactgca atttggagaa 13260
tggcagcgca atgacattct tgcaggtatc ttcgagccag ccacgatcga cattgatctg 13320
gctatcttgc tgacaaaagc aagagaacat agcgttgcct tggtaggtcc agcggcggag 13380
gaactctttg atccggttcc tgaacaggat ctatttgagg cgctaaatga aaccttaacg 13440
ctatggaact cgccgcccga ctgggctggc gatgagcgaa atgtagtgct tacgttgtcc 13500
cgcatttggt acagcgcagt aaccggcaaa atcgcgccga aggatgtcgc tgccgactgg 13560
gcaatggagc gcctgccggc ccagtatcag cccgtcatac ttgaagctag gcaggcttat 13620
cttggacaag aagatcgctt ggcctcgcgc gcagatcagt tggaagaatt tgttcactac 13680
gtgaaaggcg agatcaccaa agtagtcggc aaataaagct ctagtggatc tccgtacccg 13740
aggaatcggc gtgagcggtc gcaaaccatc cggcccggta caaatcggcg cggcgctggg 13800
tgatgacctg gtggagaagt tgaaggccgc gcaggccgcc cagcggcaac gcatcgaggc 13860
agaagcacgc cccggtgaat cgtggcaagc ggccgctgat cgaatccgca aagaatcccg 13920
gcaaccgccg gcagccggtg cgccgtcgat taggaagccg cccaagggcg acgagcaacc 13980
agattttttc gttccgatgc tctatgacgt gggcacccgc gatagtcgca gcatcatgga 14040
cgtggccgtt ttccgtctgt cgaagcgtga ccgacgagct ggcgaggtga tccgctacga 14100
gcttccagac gggcacgtag aggtttccgc agggccggcc ggcatggcca gtgtgtggga 14160
ttacgacctg gtactgatgg cggtttccca tctaaccgaa tccatgaacc gataccggga 14220
agggaaggga gacaagcccg gccgcgtgtt ccgtccacac gttgcggacg tactcaagtt 14280
ctgccggcga gccgatggcg gaaagcagaa agacgacctg gtagaaacct gcattcggtt 14340
aaacaccacg cacgttgcca tgcagcgtac caagaaggcc aagaacggcc gcctggtgac 14400
ggtatccgag ggtgaagcct tgattagccg ctacaagatc gtaaagagcg aaaccgggcg 14460
gccggagtac atcgagatcg agctggctga ttggatgtac cgcgagatca cagaaggcaa 14520
gaacccggac gtgctgacgg ttcaccccga ttactttttg atcgatcccg gcatcggccg 14580
ttttctctac cgcctggcac gccgcgccgc aggcaaggca gaagccagat ggttgttcaa 14640
gacgatctac gaacgcagtg gcagcgccgg agagttcaag aagttctgtt tcaccgtgcg 14700
caagctgatc gggtcaaatg acctgccgga gtacgatttg aaggaggagg cggggcaggc 14760
tggcccgatc ctagtcatgc gctaccgcaa cctgatcgag ggcgaagcat ccgccggttc 14820
ctaatgtacg gagcagatgc tagggcaaat tgccctagca ggggaaaaag gtcgaaaagg 14880
actctttcct gtggatagca cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggaa 14940
cccgtacatt gggaacccaa agccgtacat tgggaaccgg acacacatgt aagtgactga 15000
tataaaagag aaaaaaggcg atttttccgc ctaaaactct ttaaaactta ttaaaactct 15060
taaaacccgc ctggcctgtg cataactgtc tggccagcgc acagccgaag agctgcaaaa 15120
agcgcctacc cttcggtcgc tgcgctccct acgccccgcc gcttcgcgtc ggcctatcgc 15180
ggccgctggc cgctcaaaaa tggctggcct acggccaggc aatctaccag ggcgcggaca 15240
agccgcgccg tcgccactcg accgccggcg ctgaggtctg cctcgtgaag aaggtgttgc 15300
tgactcatac caggccatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt 15360
gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga 15420
gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca 15480
ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg 15540
ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt 15600
cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc 15660
ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct 15720
tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc 15780
gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta 15840
tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca 15900
gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag 15960
tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag 16020
ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt 16080
agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa 16140
gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg 16200
attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttgat ccggacaaac 16260
aaacaaatac agtaattta 16279

Claims (22)

1.一种编辑植物基因组DNA的方法，所述方法包括：
a)获得第一植物，其中所述第一植物是植物的单倍体诱导物品系，并且其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地至少一种指导核酸；
b)获得第二植物，其中所述第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；
c)用来自所述第一植物的花粉给所述第二植物授粉；以及
d)选择由步骤(c)的授粉产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含所述第二植物的基因组但是不包含所述第一植物的基因组，并且所述单倍体子代的基因组已经通过由所述第一植物递送的所述DNA修饰酶和任选的至少一种指导核酸修饰。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述DNA修饰酶是定点核酸酶，所述定点核酸酶选自由以下组成的组：兆核酸酶(MN)、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应子核酸酶(TALEN)、Cas9核酸酶、Cfp1核酸酶、dCas9-FokI、dCpf1-FokI、嵌合Cas9-胞嘧啶脱氨酶、嵌合Cas9-腺嘌呤脱氨酶、嵌合FEN1-FokI、和Mega-TAL、切口酶Cas9(nCas9)、嵌合dCas9非FokI核酸酶和dCpf1非FokI核酸酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种指导核酸是指导RNA。
4.根据权利要求1所述的方法，其中将经编辑的单倍体子代用染色体加倍剂处理，从而产生经编辑的双单倍体子代。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述染色体加倍剂是秋水仙碱、拿草特、滴停平、氟乐灵、或另一种已知的抗微管剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一植物是单子叶植物或双子叶植物。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述第一植物是单子叶植物，所述单子叶植物选自由以下组成的组：玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二植物是单子叶植物或双子叶植物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中第二植物是单子叶植物，所述单子叶植物选自由以下组成的组：玉米、小麦、稻、大麦、燕麦、小黑麦、高梁、珍珠粟、类蜀黍、竹、甘蔗、芦笋、洋葱、和大蒜。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述任选的指导RNA是18-21个核苷酸的序列并且与选自由以下组成的组的序列同源：SEQ ID NO:2、4、8、21、23、25、29、32、和33。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一植物表达标记基因。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述标记基因选自由以下组成的组：GUS、PMI、PAT、GFP、RFP、CFP、B1、C1、R-nj、花青素苷色素、和任何其他的标记基因。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一植物是玉米植物，所述玉米植物选自和/或衍生自品系Stock6、RWK、RWS、UH400、AX5707RS、NP2222-matl或若干其他已知的HI品系中的任一种。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一植物和所述第二植物是不同的物种。
15.根据权利要求14所述的方法，所述第一植物是小麦植物，并且所述第二植物是玉米植物。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述第一植物是玉米植物，并且所述第二植物是小麦植物。
17.一种基因编辑的植物，所述基因编辑的植物由根据权利要求1所述的方法产生。
18.一种编辑植物基因组DNA的方法，所述方法包括：
a)获得第一植物，其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地指导核酸；
b)获得第二植物，其中所述第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；
c)用来自所述第一植物的花粉给所述第二植物授粉；
d)就在步骤(c)的授粉之前、在其期间或之后施用包含脂质或磷脂酶抑制剂的组合物；以及
e)选择由步骤(c)的授粉产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含所述第二植物的基因组但是不包含所述第一植物的基因组，并且所述单倍体子代的基因组已经通过由所述第一植物递送的所述DNA修饰酶和任选的指导核酸修饰。
19.根据权利要求18所述的方法，其中步骤(d)的所述组合物包含甲基α-亚油酰基氟膦酸酯(MALFP)、亚油酸乙酯(LLAEE)、亚油酸(LLA)、玉米油、二硬脂酰-磷脂酰胆碱(DSPC)、甲基花生酰基氟膦酸酯(MAFP)、棕榈基三氟甲基酮(PACOCF3)、花生酰基三氟甲基酮(AACOCF3)、海绵类脂、亚麻酸乙酯(LNAEE)、亚麻酸乙酯(LNAEE)、油酸甲酯(OAME)、油酸乙酯(OAEE)、棕榈酸乙酯(PAEE)、棕榈油酸乙酯(PLAEE)、亚麻籽油、玉米油、α-亚麻酸(aLNA)、γ-亚麻酸(gLNA)、油酸、花生四烯酸、硬脂酸、9(Z)-11(E)-共轭亚油酸、或2-油酰-1-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺。
20.一种编辑植物基因组DNA的方法，所述方法包括：
a)获得第一植物，其中所述第一植物能够表达DNA修饰酶和任选地指导核酸；
b)获得第二植物，其中所述第二植物包含待编辑的植物基因组DNA；
c)使所述第一植物与所述第二植物杂交；以及
d)选择由步骤(c)的杂交产生的至少一种单倍体子代，其中所述单倍体子代包含所述第二植物的基因组但是不包含所述第一植物的基因组，并且所述单倍体子代的基因组已经通过由所述第一植物递送的所述DNA修饰酶和任选的指导核酸修饰。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述第一植物作为步骤(c)的杂交中的母本。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述第一植物包含CENH3基因、ig1基因中的突变、或赋予亲本-单倍体诱导系统的另一突变。
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