CN107279816A - 一种海参复方软胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体的说是一种微波辅助酶解海参复方软胶囊的制备方法。其制备方法如下：将鲜海参去除内脏后匀浆，在微波辅助下用复合蛋白酶进行酶解，依次经过灭活、浓缩、冷冻干燥、研磨、过筛得到微波辅助酶解海参产物干粉，然后复配壳寡糖、牛磺酸、蜂蜡和橄榄油，精囊灌装而成。本发明中微波辅助酶解海参复方软胶囊具有很好抗氧化、防衰老、缓解疲劳和增强免疫力等作用，具有很强的营养和保健功效。

Description

一种海参复方软胶囊的制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种海参复方软胶囊的制备方法。

背景技术

海参属于棘皮动物门海参纲，是我国传统的名贵海洋珍品，营养价值极高，且含有多种有益于人类身体健康的生物活性物质，是一种高蛋白的营养物质，素有“海中人参”之称，并被列为“八珍”之一，具有延缓衰老、防治肿瘤等多种功效，还具有很好的食用与医疗方面的作用。明代的《食物本草》指出，海参有很多种养生功效；主要滋补元气、滋益五脏六腑和祛虚损等。清代的《本草纲目拾遗》将海参列为补益药物。近年来先后有中医提出了以海参单用或者组方分别治疗肿瘤、再生障碍贫血和糖尿病等，取得了良好的效果，同时在辅佐如高血压、痔疮、神经衰弱，癫痫、慢性肾炎、脱肛、胃及十二指肠溃疡、肺结核、便秘、静脉血栓和慢性乙型肝炎等常见病治疗中得到了广泛的应用。

但是常见的海参的加工方法破坏了海参的营养成分以及生物活性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供了一种海参复方软胶囊的制备方法，解决现有技术中加工海参，造成海参中生物活性降低以及营养流失的问题。

本发明是这样实现的，

一种海参复方软胶囊的制备方法，该方法包括：将新鲜海参去除内脏后匀浆，利用复合蛋白酶，在微波辅助条件下进行酶解，酶解产物依次经过灭活、浓缩、冷冻干燥、研磨、过筛制得微波辅助酶解海参产物干粉。

进一步地，所选用的微波功率为100W-300W进行辅助酶解，其中复合蛋白酶用量为3000U-4000U/g海参匀浆液，在底物浓度为15-20％，pH 6.0-6.5,酶解温度为55-65℃下酶解3-4h。

进一步地，所述复合蛋白酶选择枯草杆菌蛋白酶复合体。

进一步地，酶解产物于95-100℃下灭活5-10min，40-50℃旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，制成固体微波辅助酶解海参产物。

进一步地，研磨、过筛过程包括：经灭活之后的海参产物研磨成粉，采用150-200目分样筛进行筛分，制得微波辅助酶解海参产物干粉。

进一步地，微波辅助酶解海参产物干粉与壳寡糖和牛磺酸按照质量比为7-9：1-3：1-2进行混合。

进一步地，混合后的混合物按照质量比1:20-30的比例加入到蒸馏水中，搅拌混合均匀进行喷雾干燥，制得均一化微波辅助酶解海参复方物。

进一步地，获得的微波辅助酶解海参复方物加入混合油中，并在真空状态下加热至55-65℃，搅拌20-30min,冷却至25-30℃后精制灌装而成。

进一步地，所述混合油为蜂蜡和橄榄油，质量比例为1：1-2。

进一步地，所述的微波辅助酶解海参复方物与混合油质量比为1：6-9。

本发明与现有技术相比，有益效果在于：

微波辅助降解是利用微波辅助反应进行的一项新技术，具有操作简便、无污染、可控性好、高效节能等特点。微波是频率大约在300MHz至300GHz，波长在100m至1mm范围以内的电磁波。传统的加热方式是通过热源的热传导、热辐射、热对流的方式由外至内加热，通常造成加热慢、受热不均匀等。而微波加热方式则是通过分子吸收微波而振动引起内外同步加热，且微波可以穿透容器以及物料，它不需要传导过程，加热效果更好；此外，微波加热比较均匀，由于微波加热是对物料的整体同时进行加热，所以它加热均匀、无滞后；另外，微波加热时可选择性加热，因为不同物料对微波吸收程度不一样，物料分子极性越强，加热速度越快；并且，微波加热节能高效，在微波场中只有那些能吸收微波的物质才会被加热，而空气与相应的容器不会发热，所以热效率极高。

微波辅助酶解加速反应进程的原理主要有以下几方面。(1)致热效应，它是指微波能增加分子的振动频率，从而使反应体系中迅速产生大量热量，活化反应底物，加快反应速度；(2)非热效应，是微波通过使极性分子极性增加，非极性分子产生极性，从而使分子的结构发生变化；(3)微波电磁场还能通过改变反应体系的电导率，使电子向特定方向移动；(4)微波还可引起分子的振动或转动，造成化学键的断裂，从而提高了反应体系的反应速率。所以，微波辅助酶解海参具有反应速率快、效率高、无污染、可控性好、高效节能、酶解产物活性强等优点。

软胶囊是一种能将油或油状物质与粉状功能性物质混悬液定量压注并包封与胶膜内的密封胶囊，具有以下优点：(1)软胶囊具有良好的隔离功能，可将光、氧敏感的功能性物质与空气和光线隔离，从而有效避免物质的氧化，是其更加稳定，保障生物活性物质功效的发挥；(2)软胶定量准确，吸收快。软胶囊在体内崩解后，内容物以液态形式很快被身体吸收；(3)软胶囊表面光滑，口感好，易吞服，携带和食用方便等特点。

因此，本发明通过创新的酶解提取工艺制备海参酶解产物，获得更多更高效的生物活性物质，然后通过科学复配，进一步强化其功能活性；再通过先进的软胶囊包装方式，更有效的保存和释放活性成分，实现了海参资源的高值化利用，促进人类健康事业的发展。

附图说明

图1为本发明实施例3提供的微波辅助酶解海参的响应面实验结果图示；

图2为本发明实施例3提供微波辅助酶解海参产物的清除超氧阴离子活性实验结果图示；

图3为本发明实施例3提供微波辅助酶解海参产物的总还原力活性实验结果图示；

图4为本发明实施例3提供的微波辅助酶解海参复方物的小鼠抗疲劳动物实验结果图示。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

将新鲜海参去除内脏后匀浆，取100g匀浆液，加入pH 6.0，50mM乙酸缓冲液使其底物浓度达到15％，然后加入300000U复合蛋白酶，本实施例中，复合蛋白酶选择枯草杆菌蛋白酶复合体，产品规格：BR，200U/mg，活力：≥120units/mg。在微波辅助条件为100W，反应温度为55℃下酶解3h。海参酶解液经95℃灭活5min，然后40℃下旋转蒸发浓缩并冷冻干燥后研磨成粉末，用150目分样筛进行筛分，制得微波辅助酶解海参产物干粉。然后，按照质量比为微波辅助酶解海参产物干粉：壳寡糖：牛磺酸＝7：1：1进行混合，然后将其加入到蒸馏水使其比例为1:20，然后搅拌混匀进行喷雾干燥，制备均一化的微波辅助酶解海参复方物；最后将微波辅助酶解复方物按1:6的质量比加入蜂胶和橄榄油混合物(1:1)中，并在真空状态下加热至55℃，搅拌20min,冷却至25℃后灌装软胶囊。

实施例2：

将新鲜海参去除内脏后匀浆，取100g匀浆液，加入pH 6.5 50mM乙酸缓冲液使其底物浓度达到18％，然后加入350000U复合蛋白酶，在微波辅助条件为200W，反应温度为60℃下酶解3.5h。海参酶解液经98℃灭活8min，然后45℃旋转蒸发浓缩并冷冻干燥后研磨成粉末，用180目分样筛进行筛分，制得微波辅助酶解海参产物干粉。按照质量比为微波辅助酶解海参产物干粉：壳寡糖：牛磺酸＝8：2：1进行混合，然后将其加入到蒸馏水中使其比例为1:25，然后搅拌混匀进行喷雾干燥，制得均一化的微波辅助酶解海参复方物；最后将微波辅助酶解海参复方物按1:7的比例加入蜂胶和橄榄油混合物(1:1.5)中，并在真空状态下加热至60℃，搅拌25min,冷却至28℃后灌装软胶囊。

实施例3：

将新鲜海参去除内脏后匀浆，取100g匀浆液，加入pH 6.5 50mM乙酸缓冲液使其底物浓度达到20％，然后加入400000U复合蛋白酶，在微波辅助条件为300W，反应温度为65℃下酶解4h。海参酶解液经100℃灭活10min，然后50℃旋转蒸发浓缩并冷冻干燥后研磨成粉末，用200目分样筛进行筛分，制得微波辅助酶解海参产物干粉。按照质量比为微波辅助酶解海参产物干粉：壳寡糖：牛磺酸＝9：3：2进行混合，然后将其加入蒸馏水使其比例为1:30，然后搅拌混匀进行喷雾干燥，制得均一化的微波辅助酶解海参复方物；最后将微波辅助酶解海参复方物按1:9的比例加入蜂胶和橄榄油混合物(1:2)中，并在真空状态下加热至65℃，搅拌30min,冷却至30℃后灌装软胶囊。

1响应面实验

响应面优化法，即响应曲面法(Response Surface Methodology,RSM)，是一种实验条件寻优的方法，通过在各因素水平的响应值基础上，可以找出预测的响应最优值以及相应的实验条件。RSM与正交实验相比，其优势是：在实验条件寻优过程中，可以连续的对实验的各个水平进行分析，而正交实验只能对一个个孤立的实验点进行分析。通过响应面实验可以直观显现出酶解反应的效率以及寻找出最佳实验条件。

以可溶性蛋白含量为响应值，在单因素试验结果基础上，选取微波功率、酶用量和酶解时间进行响应面试验设计，具体条件如下：

实验结果显示(参加图1)，在微波功率为辅助复合蛋白酶酶解海参效果显著。其中，经响应面优化最佳酶解条件为微波辅助功率300W，60℃、pH6.5，底物浓度：15％、酶用量：4000U/g、酶解时间：4h。

对实施例的产品进行体外抗氧化活性实验，

3微波辅助酶解海参产物的清除超氧阴离子自由基活性，

清除超氧阴离子活性实验：超氧阴离子自由基(O^2-·)是生物体内重要的自由基之一，也是所有活性氧自由基的前体，可以转化为其它的活性氧自由基；人体新陈代谢过程中会产生大量自由基，自由基在体内长期积累会造成众多炎症和衰老等现象。清除超氧阴离子活性实验是一种有效检测体外抗氧化能力的方法，其清除能力的强弱代表生物活性物质的体外抗氧化能力强弱。

采用PMS-NADH-NBT体系来测定微波辅助酶解海参产物对超氧阴离子自由基的清除作用。向试管中依次加入0.5mL 78μM NADH，0.5ml 50μM NBT，0.5ml 10μMPMS及不同剂量的微波辅助酶解海参产物，最后用16mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液将体系总体积稀释至为3.0ml，使其终浓度为：1、5、10、15、20、30、40、50mg/ml。混匀后，采用分光光度法在560nm波长下测定反应液的吸光度。空白组用相同体积的16mM,pH8.0Tris-HCl缓冲液替代供试样品和NADH，对照组用相同体积16mM,pH8.0Tris-HCl缓冲液替代供试样品，每个浓度重复3次，实验结果用清除率E来表示:实验结果显示(参见图2)，微波辅助酶解海参产物的清除超氧阴离子自由基的半清除率(IC₅₀)仅为0.0675mg/ml，说明该微波辅助酶解海参产物具有很强的清除超氧阴离子自由基能力，展现出很强的体外抗氧化活性。

4微波辅助酶解海参产物的总还原能力

机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在这密切联系，而总还原能力是评价生物活性物质抗氧化能力的重要指标之一，总还原能力的大小则直接反映出其抗氧化能力的强弱。

向试管中依次加入1.0mL不同浓度的微波辅助酶解海参产物使其终浓度分别为：1、5、10、15、20、30、40、50mg/mL，1mL 1％的铁氰化钾，50℃水浴20min，然后加入2mL 10％的三氯乙酸终止反应，5min后，加入1.25mL0.1％的三氯化铁，混合均匀，静置30min，于700nm比色。空白组用0.2mol/L pH 6.6PBS来代替样品。实验结果显示(参见图3)，微波辅助酶解海参产物具有很好的还原能力，并且其总还原能力与底物浓度之间具有良好的线性关系，是一个非常好的抗氧化剂。

5微波辅助酶解海参复方物的小鼠体内抗疲劳实验：

小鼠抗疲劳动物实验：运动性疲劳是指运动本身引起的机体工作能力暂时降低，经适当时间休息和调整可以恢复的生理现象。疲劳既标志着机体原有工作能力的暂时下降,又可能是机体发展到伤病状态的一个先兆。抗疲劳就是延缓疲劳的产生，加速疲劳的消除；运动耐力实验如小鼠负重游泳实验是衡量抗疲劳能力的最有利的宏观表现，通过小鼠抗疲劳实验则可检验生物活性物质的体内抗疲劳能力。

实验分为5组，每组10只雌雄各半昆明种SPF小鼠：(1)空白对照组；(2)阳性对照组(西洋参0.3mg/g.d)；(3)低剂量组(0.05mg/g.d)；(4)中剂量组(0.15mg/g.d)；(5)高剂量组(0.5mg/g.d)。空白对照组灌胃蒸馏水，给药频率为1次/日，给药时间为4周。通过观察5组小鼠在末次灌胃30min后，小鼠尾根部负荷5％体重铅皮，置于游泳箱中(水温25±1℃，水深不少于30cm)游泳，至小鼠沉入水底后10s不再浮起作为力竭死亡标准，记录自游泳开始至死亡时间，作为小鼠力竭游泳时间。力竭游泳实验被广泛应用于动物模型中评价新型活性物质抗疲劳特性，小鼠力竭游泳时间越长，说明其缓解疲劳作用越明显。实验结果显示(参见图4)，微波辅助酶解海参复方物具有非常强的体内抗疲劳能力，其抗疲劳能力比阳性对照西洋参更强，是非常有效的抗疲劳活性物质。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，该方法包括：

将新鲜海参去除内脏后匀浆，利用复合蛋白酶，在微波辅助条件下进行酶解，酶解产物依次经过灭活、浓缩、冷冻干燥、研磨、过筛制得微波辅助酶解海参产物干粉。

2.按照权利要求1的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，所选用的微波功率为100W-300W进行辅助酶解，其中复合蛋白酶用量为3000U-4000U/g海参匀浆液，在底物浓度为15-20％，pH 6.0-6.5,酶解温度为55-65℃下酶解3-4h。

3.按照权利要求2的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，所述复合蛋白酶选择枯草杆菌蛋白酶复合体。

4.按照权利要求1的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，酶解产物于95-100℃下灭活5-10min，40-50℃旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，制成固体微波辅助酶解海参产物。

5.按照权利要求1的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，研磨、过筛过程包括：经灭活之后的海参产物研磨成粉，采用150-200目分样筛进行筛分，制得微波辅助酶解海参产物干粉。

6.按照权利要求1的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，微波辅助酶解海参产物干粉与壳寡糖和牛磺酸按照质量比为7-9：1-3：1-2进行混合。

7.按照权利要求6的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，混合后的混合物按照质量比1:20-30的比例加入到蒸馏水中，搅拌混合均匀进行喷雾干燥，制得均一化微波辅助酶解海参复方物。

8.按照权利要求7的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，获得的微波辅助酶解海参复方物加入混合油中，并在真空状态下加热至55-65℃，搅拌20-30min,冷却至25-30℃后精制灌装而成。

9.按照权利要求8的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，所述混合油为蜂蜡和橄榄油，质量比例为1：1-2。

10.按照权利要求8的海参复方软胶囊的制备方法，其特征在于，所述的微波辅助酶解海参复方物与混合油质量比为1：6-9。