[go: up one dir, main page]

CN107108739B - 抗CD79b抗体和使用方法 - Google Patents

抗CD79b抗体和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107108739B
CN107108739B CN201580061858.1A CN201580061858A CN107108739B CN 107108739 B CN107108739 B CN 107108739B CN 201580061858 A CN201580061858 A CN 201580061858A CN 107108739 B CN107108739 B CN 107108739B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
antibody
hvr
sequence
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201580061858.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107108739A (zh
Inventor
孙丽萍
Y·M-Y·陈
M·S·丹尼斯
小艾伦·J·埃本斯
A·波尔森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55022708&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN107108739(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN107108739A publication Critical patent/CN107108739A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107108739B publication Critical patent/CN107108739B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本公开文本提供抗CD79b抗体及其使用方法。

Description

抗CD79b抗体和使用方法
对相关申请的交叉引用
本申请要求2014年12月5日提交的美国临时申请No.62/088,487的优先权，通过援引将其完整收入本文。
序列表
本申请含有序列表，已经以ASCII格式电子提交且据此通过援引完整收录。2015年12月2日创建的所述ASCII拷贝命名为P32464WO_PCTSequenceListing.txt，而且大小为43,470个字节。
发明领域
本发明涉及抗CD79b抗体，包括包含CD3结合域的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体)及其使用方法。
发明背景
细胞增殖性病症(诸如癌症)的特征在于细胞亚群的生长不受控制。它们是发达世界的首位死亡原因和发展中国家的第二位死亡原因，每年诊断超过1200万例新癌症病例且发生700万例癌症死亡。(美国)国家癌症学会估计2013年超过50万美国人会死于癌症，占全国死亡人数的接近四分之一。由于老龄人口增加，因此癌症的发病率伴随升高了，因为发生癌症的概率在70岁后要高超过两倍。如此，癌症护理构成一项重大的且不断变大的社会负担。
CD79b是B细胞受体的信号成分且作为含有CD79a(即Igα或mb-1)和CD79b(即Igβ或B29)的共价异二聚体起作用。CD79b含有一个胞外免疫球蛋白(Ig)域，一个跨膜域，和一个胞内信号域(一种免疫受体基于酪氨酸的激活基序(ITAM)域)。通过使用流式细胞术，已经在几乎所有非何杰金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)患者中检测到CD79b的表面表达。Dornan et al.,Blood 114(13):2721-9(2009)。在它信号功能以外，当B细胞受体交联时，它被靶向至II类主要组织相容性复合物隔室(一种溶酶体样隔室)，作为B细胞进行的II类抗原呈递的一部分。
CD79b生物学的这种特征使得它成为对于ADC的使用特别有吸引力的靶物，因为针对CD79b的抗体内在化并递送至这些溶酶体隔室，已知它们含有能释放细胞毒性药物的蛋白酶。因此，已经生成了抗体-药物缀合物(ADC)(诸如人源化抗CD79b抗体(人源化SN8)通过蛋白酶可切割接头缀合至单甲基奥瑞司他汀E(MMAE))，它已经显示出对于NHL治疗是临床上有效的。参见例如美国专利No.8,088,378和Morschhauser et al.,“4457 UpdatedResults of a Phase II Randomized Study(ROMULUS)of Polatuzumab Vedotin orPinatuzumab Vedotin Plus Rituximab in Patients with Relapsed/Refractory Non-Hodgkin Lymphoma”56th ASH Annual Meeting and Exposition:December 6-9,2014。尽管使用抗CD79b ADC治疗剂的NHL和CLL治疗有进步，然而对于用于NHL和CLL患者(特别是那些对抗CD79b ADC疗法有抗性的)的改良疗法仍然残存未满足的需求。
最近，已经开发了基于双特异性抗体的免疫疗法，它们能够同时结合细胞毒性细胞和肿瘤细胞上的细胞表面抗原，意图在于所结合的细胞毒性细胞会摧毁所结合的肿瘤细胞。与抗体-药物缀合物相比，此类双特异性抗体可具有优势，例如功效和/或安全性。如此，本领域对于开发有效的双特异性抗体用于癌症治疗有未满足的需求。
发明概述
本发明提供抗CD79b抗体及其使用方法。特别地，本文中提供的是包含CD79b结合域和CD3结合域的抗CD79b抗体。
一方面，本文中提供的是一种分离的抗CD79b抗体，该抗体包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，该CD79b结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含(a)与SEQ ID NO:17，21，23，25，27或29的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:18，22，24，26，28或30的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该抗CD79b包含SEQ ID NO:17，21，23，25，27或29的VH序列。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:18，22，24，26，28或30的VL序列。
在一些实施方案中，该CD79b结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含(a)与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:19的VH序列。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:20的VL序列。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD79b结合域结合SEQ ID NO:63。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)作为双臂，二价IgG抗体以小于约25nM，例如小于约10nM或5nM任一的Kd结合人CD79b。在一些实施方案中，Kd是通过BIACORE测定的。在一些实施方案中，Kd是通过以低密度固定化的CD79b测定的。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)作为双臂，二价IgG抗体以小于约150ng/mL，例如小于约100ng/mL，75ng/mL，或50ng/mL任一的EC50结合B细胞(例如BJAB细胞)。在一些实施方案中，对B细胞的结合是通过FACS测定的。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该结合人CD79b的抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)以单价型式(例如包含CD79b和CD3结合域的抗CD79b双特异性抗体)以小于约1.5ug/mL，例如小于约1ug/mL，0.75ug/mL，0.5ug/mL或0.25ug/mL的EC50结合B细胞(例如BJAB细胞)。在一些实施方案中，对B细胞的结合是通过FACS测定的。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体为单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗体为IgG抗体。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗体为结合CD79b的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和/或(Fab’)2片段。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗体为全长抗体。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含无糖基化位点突变。在一些实施方案中，该无糖基化位点突变为替代突变。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含降低的效应器功能。在一些实施方案中，该抗体包含在依照EU编号方式的氨基酸残基N297，L234，L235，和/或D265处的替代突变。在一些实施方案中，该替代突变选自由依照EU编号方式的N297G，N297A，L234A，L235A，和D265A组成的组。在一些实施方案中，该抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基297处包含N297G替代突变。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体为单特异性抗体(例如二价，双臂抗体)。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体为多特异性抗体。
在该多特异性抗体任一的一些实施方案中，该多特异性抗体包含CD3结合域。在一些实施方案中，该CD3结合域结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。
在该多特异性抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域以250nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以100nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以15nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以10nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以5nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-L3。在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含(a)与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:59的VH序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:60的VL序列。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L3。在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含(a)与SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:57的VH序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:58的VL序列。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L3。在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD3结合域包含(a)与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:61的VH序列。在一些实施方案中，该CD3结合域包含SEQ ID NO:62的VL序列。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约100ng/mL，例如小于约50，25，20，或15ng/mL任一的B细胞杀伤EC50。在一些实施方案中，该B细胞杀伤为内源B细胞杀伤。在一些实施方案中，该B细胞杀伤为细胞系B细胞杀伤，例如BJAB细胞系，WSU-DLCL2细胞系，OCI-Ly-19细胞系。在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约50ng/mL，例如小于约25ng/mL或20ng/mL任一的细胞毒性T细胞激活EC50。在一些实施方案中，细胞毒性T细胞激活是通过CD8+ T细胞中的CD69+CD25+ T细胞的％测量的。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该多特异性抗体为双特异性抗体。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，(a)该CD3结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366S，L368A，Y407V，和N297G替代突变，且(b)该CD79b结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366W和N297G替代突变。在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，(a)该CD79b结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366S，L368A，Y407V，和N297G替代突变，且(b)该CD3结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366W和N297G替代突变。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH1(CH11)域，第一CH2(CH21)域，第一CH3(CH31)域，第二CH1(CH12)域，第二CH2(CH22)域，和第二CH3(CH32)域。在一些实施方案中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些实施方案中，该CH31和CH32域各自包含隆起或空腔，且其中该CH31域中的隆起或空腔分别可位于该CH32域中的空腔或隆起中。在一些实施方案中，该CH31和CH32域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些实施方案中，该CH21和CH22域各自包含隆起或空腔，且其中该CH21域中的隆起或空腔分别可位于该CH22域中的空腔或隆起中。在一些实施方案中，该CH21和CH22域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。
本文中还提供的是分离的核酸，其编码本文中描述的抗CD79b抗体。本文中进一步提供的是载体，其包含一种分离的核酸，该分离的核酸编码本文中描述的抗CD79b抗体。本文中提供的是宿主细胞，其包含一种载体，该载体包含一种分离的核酸，该分离的核酸编码本文中描述的抗CD79b抗体。在一些实施方案中，该宿主细胞为真核宿主细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞为哺乳动物宿主细胞(例如CHO)。在一些实施方案中，该宿主细胞为原核宿主细胞。在一些实施方案中，该原核宿主细胞为大肠杆菌宿主细胞。本文中进一步提供的是生成本文中描述的抗CD79b抗体的方法，其中该方法包括在培养基中培养本文中描述的宿主细胞。
本文中进一步提供的是免疫缀合物，其包含本文中描述的抗CD79b抗体和细胞毒剂。
本文中提供的是药物组合物，其包含本文中描述的抗CD79b抗体。
本文中提供的是如本文中描述的抗CD79b抗体，其用作药物。本文中提供的是如本文中描述的抗CD79b抗体，其用于在有所需要的受试者中治疗B细胞增殖性病症或自身免疫性病症或延迟B细胞增殖性病症或自身免疫性病症进展。本文中提供的是如本文中描述的抗CD79b抗体，其用于在具有B细胞增殖性病症或自身免疫性病症的受试者中增强免疫功能。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为癌症。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和/或套细胞淋巴瘤。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b抗体药物缀合物(例如抗CD79b-MMAE抗体药物缀合物)治疗有抗性。在一些实施方案中，该自身免疫性病症选自由类风湿性关节炎，幼发型类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮(SLE)，韦格纳(Wegener)氏病，炎性肠病，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)，自身免疫性血小板减少，多发性硬化，银屑病，IgA肾病，IgM多神经病，重症肌无力，血管炎，糖尿病，雷诺(Reynaud)氏综合征，斯耶格伦(Sjorgen)氏综合征，肾小球肾炎，视神经脊髓炎(NMO)和IgG神经病组成的组。
本文中提供的是本文中描述的抗CD79b抗体任一在制造用于治疗细胞增殖性病症或自身免疫性病症或延迟细胞增殖性病症或自身免疫性病症进展的药物中的用途。本文中提供的是本文中描述的抗CD79b抗体任一在制造用于在具有细胞增殖性病症或自身免疫性病症的受试者中增强免疫功能的药物中的用途。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为癌症。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和/或套细胞淋巴瘤。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b抗体药物缀合物(例如抗CD79b-MMAE抗体药物缀合物)治疗有抗性。在一些实施方案中，该自身免疫性病症选自由类风湿性关节炎，幼发型类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮(SLE)，韦格纳(Wegener)氏病，炎性肠病，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)，自身免疫性血小板减少，多发性硬化，银屑病，IgA肾病，IgM多神经病，重症肌无力，血管炎，糖尿病，雷诺(Reynaud)氏综合征，斯耶格伦(Sjorgen)氏综合征，肾小球肾炎，视神经脊髓炎(NMO)和IgG神经病组成的组。
本文中提供的是在有所需要的受试者中治疗细胞增殖性病症或自身免疫性病症或延迟细胞增殖性病症或自身免疫性病症进展的方法，该方法包括对该受试者施用本文中描述的抗CD79b抗体。本文中提供的是在具有细胞增殖性病症或自身免疫性病症的受试者中增强免疫功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗CD79b抗体。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为癌症。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症为淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和/或套细胞淋巴瘤。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b抗体药物缀合物(例如抗CD79b-MMAE抗体药物缀合物)治疗有抗性。在一些实施方案中，该自身免疫性病症选自由类风湿性关节炎，幼发型类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮(SLE)，韦格纳(Wegener)氏病，炎性肠病，特发性血小板减少性紫癜(ITP)，血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)，自身免疫性血小板减少，多发性硬化，银屑病，IgA肾病，IgM多神经病，重症肌无力，血管炎，糖尿病，雷诺(Reynaud)氏综合征，斯耶格伦(Sjorgen)氏综合征，肾小球肾炎，视神经脊髓炎(NMO)和IgG神经病组成的组。
在该方法任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体结合(a)位于免疫效应器细胞上的CD3分子和(b)位于B细胞上的CD79b分子。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体在结合至(a)和(b)后激活该免疫效应器细胞。在该方法任一的一些实施方案中，该激活的免疫效应器细胞能够对靶细胞发挥细胞毒性效应和/或凋亡效应。
在该方法任一的一些实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂为PD-L2结合拮抗剂。
在该方法任一的一些实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用糖皮质激素。在一些实施方案中，该糖皮质激素为地塞米松。
在该方法任一的一些实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用利妥昔单抗。
附图简述
图1A-C显示以K&H型式或作为bisfab(多种抗CD79b克隆与抗CD3克隆UCHT1v9配对)生成的抗CD79b/CD3 TDB(T细胞依赖性双特异性)抗体的内源B细胞杀伤。在有或无抗CD79b TDB的情况下将200,000个PBMC温育24小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100。
图2A-D显示bisfab抗CD79b/CD3(CD79b.A7/UCHT1v9)的B细胞杀伤和T细胞激活活性。A和B：在有或无抗CD79b TDB的情况下将200,000个PBMC温育24小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤(A)：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100；通过对CD8+ T细胞群体中的CD69+/CD25+细胞设门来测量T细胞激活(B)。C和D：在有或无抗CD79b TDB的情况下将20,000个BJAB细胞和100,000个CD8+T细胞温育24小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤(C)：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100；通过对CD8+ T细胞群体中的CD69+/CD25+细胞设门来测量T细胞激活(D)。
图3A-C显示通过FACS测量的抗CD79b的多种克隆的单价或二价结合亲和力。将BJAB细胞与标示的抗CD79b抗体(二价，双臂抗体)或抗CD79b/CD3 TDB抗体一起在冰上温育30分钟。在温育结束时，用冰冷的FACS缓冲液(1x PBS，2％BSA，2mM EDTA)清洗细胞，接着与PE标记的小鼠抗人IgG抗体(BD bioscience#555787)一起温育。在BD LSR分析仪上进行流式细胞术分析。抗体结合表述为PE荧光团的均值荧光强度(MFI)。A：抗CD79b克隆2F2的二价结合亲和力，与抗CD79b克隆2F2，SN8v28，和SN8new(作为K&H TDB)的单价结合亲和力比较；B：抗CD79b克隆CD79b.F6和CD79b.A7的二价结合亲和力，与抗CD79b克隆CD79b.F6，CD79b.A7，和SN8v28(作为bisfab或K&H TDB)的单价结合比较；C：抗CD79b克隆CD79b.A7.v14的二价结合亲和力，与抗CD79b克隆CD79b.A7.v14(作为K&H TDB)的单价结合比较。
图4A-B显示CD79b抗体变体的(A)重链可变区(依出现次序分别为SEQ ID NO 13，15，17，19，21，23，25，27和29)和(B)轻链可变区(依出现次序分别为SEQ ID NO 14，16，18，20，22，24，26，28和30)的比对。
图5A-B显示抗CD79b/CD3 TDB(CD79b.A7.v14与抗CD3克隆40G5c或38E4v1任一配对)的B细胞杀伤和T细胞激活活性。在有或无抗CD79b TDB的情况下将200,000个PBMC温育48小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤(A)：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100；通过对CD8+ T细胞群体中的CD69+/CD25+细胞设门来测量T细胞激活(B)。
图6A-B显示抗CD79b/CD3 TDB(CD79b.A7v14/38E4v1)的B细胞杀伤和T细胞激活活性。在有或无抗CD79b TDB的情况下将20,000个BJAB或WSU-DLCL2细胞和100,000个CD8+T细胞温育48小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤(A)：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100；通过对CD8+ T细胞群体中的CD69+/CD25+细胞设门来测量T细胞激活(B)。
图7A-C显示抗CD79b/CD3 TDB抗体(A7.v14b/38E4v1)的B细胞杀伤活性。在有或无抗CD79b TDB的情况下将20,000个B淋巴瘤细胞(如标示的)和100,000个CD8+T细胞温育48小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100。A.显示BJAB，WSU-DLCL2，和OCI-LY-19细胞的B细胞杀伤的剂量-响应曲线，HT细胞作为CD79b阴性对照；B-C.显示5000ng/ml抗CD79TDB的B细胞杀伤(一式两份，平均值±STD)。
图8A-B显示抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1)的体外和体内B细胞杀伤活性。在抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE处理小鼠中自非响应性BJAB异种移植物肿瘤衍生BJAB细胞变体(BJAB-CD79b ADC-R T1.1和BJAB-SN8v28vcE CD79b ADC-R T1.2)。A.显示体外BJAB细胞杀伤的剂量-响应曲线：在有或无抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1)的情况下将20,000个BJAB或BJAB变体细胞(如标示的)和100,000个CD8+T细胞温育48小时。在温育结束时，通过对CD19+/PI-群体设门来对活B细胞的数目计数。如下计算百分比B细胞杀伤：(无TDB的情况下活B细胞数目–有TDB的情况下活B细胞数目)/(无TDB的情况下活B细胞数目)*100；B.抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1)在体内阻止BJAB肿瘤生长：混合来自健康供体的BJAB细胞和PBMC并皮下接种，然后如标示的处理小鼠。贯穿研究直至42天测量肿瘤体积。
发明详述
I.定义
如本文中所使用的，术语“CD79b”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人、食蟹猴和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然CD79b，除非另有说明。人CD79b在本文中还称作“Igβ”，“B29”，“DNA225786”或“PRO36249”。包括信号序列的一种例示性CD79b序列显示于SEQ ID NO:1。没有信号序列的一种例示性CD79b序列显示于SEQ IDNO:2。术语“CD79b”涵盖“全长”、未加工的CD79b以及自细胞中加工得到的任何形式的CD79b。该术语还涵盖天然存在的CD79b变体，例如剪接变体、等位变体和同等型(isoform)。本文所述CD79b多肽可以从多种来源分离，诸如人组织类型或其它来源，或者通过重组或合成方法制备。“天然序列CD79b多肽”包括与自自然界衍生的相应CD79b多肽具有相同氨基酸序列的多肽。此类天然序列CD79b多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成方法制备。术语“天然序列CD79b多肽”明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的特定CD79b多肽(例如胞外结构域序列)、该多肽的天然存在变异形式(例如可变剪接形式)和天然存在等位变体。
如本文中所使用的，术语“分化簇3”或“CD3”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然CD3，除非另有说明，包括例如CD3ε，CD3γ，CD3α，和CD3β链。该术语涵盖“全长”、未加工的CD3(例如未加工的或未修饰的CD3ε或CD3γ)以及自细胞中加工得到的任何形式的CD3。该术语还涵盖天然存在的CD3变体，包括例如剪接变体或等位变体。CD3包括例如长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000064)。
术语“抗CD79b抗体”和“结合CD79b的抗体”指能够以足够亲和力结合CD79b，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向CD79b的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗CD79b抗体结合无关的，非CD79b的蛋白质的程度小于该抗体对CD79b的结合的约10％。在某些实施方案中，结合CD79b的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗CD79b抗体结合在来自不同物种的CD79b中保守的CD79b表位。
术语“抗CD3抗体”和“结合CD3的抗体”指能够以足够亲和力结合CD3，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向CD3的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗CD3抗体结合无关的，非CD3的蛋白质的程度小于该抗体对CD3的结合的约10％。在某些实施方案中，结合CD3的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗CD3抗体结合在来自不同物种的CD3中保守的CD3表位。
本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。
“抗体片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的例子包括但不限于Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。抗体有5大类：IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM，并且这些中的几种可以进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1，和IgA2。与不同类免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α，δ，ε，γ，和μ。
“分离的”抗体指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE，等电聚焦(IEF)，毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如Flatman等,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
术语“全长抗体”，“完整抗体”，和“全抗体”在本文中可互换使用，指与天然抗体结构具有基本上类似的结构或者具有含有如本文中所限定的Fc区的重链的抗体。
如本文中使用的，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的生成期间发生的可能的变体抗体外，此类变体一般以极小量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法，重组DNA方法，噬菌体展示方法，和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。
“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其中所有或基本上所有HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。
术语“嵌合”抗体指其中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。
“人抗体”指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“裸抗体”指未与异源模块(例如细胞毒性模块)或放射性标记物缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物配制剂中。
“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1，CH2，和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个恒定轻(CL)域。根据其恒定域氨基酸序列，抗体轻链可归入两种类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链可变域(分别为VH和VL)一般具有类似的结构，其中每个域包含4个保守的框架区(FR)和3个高变区(HVR)。(见例如Kindt等,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman andCo.,第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，Portolano等,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等,Nature 352:624-628(1991)。
“框架”或“FR”指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。一般地，可变域的FR由4个FR域组成：FR1，FR2，FR3，和FR4。因而，HVR和FR序列在VH(或VL)中一般以如下的顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
如本文中使用的，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变的(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的每个区。一般地，抗体包含6个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，且三个在VL中(L1，L2，L3)。本文中的例示性HVR包括：
(a)高变环，存在于氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)，和96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)CDR，存在于氨基酸残基24-34(L1)，50-56(L2)，89-97(L3)，31-35b(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)(Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；
(c)抗原接触，存在于氨基酸残基27c-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35b(H1)，47-58(H2)，和93-101(H3)(MacCallum et al.J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和
(d)(a)，(b)，和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)，47-56(L2)，48-56(L2)，49-56(L2)，26-35(H1)，26-35b(H1)，49-65(H2)，93-102(H3)，和94-102(H3)。
除非另有说明，HVR残基及可变域中的其它残基(例如FR残基)在本文中是依照Kabat等，见上文编号的。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链中至少含有恒定区一部分的C端区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区自Cys226，或自Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号方式依照EU编号系统，又称作EU索引，如记载于Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991。
“变异Fc区”包含由于至少一处氨基酸修饰(优选一处或多处氨基酸替代)而与天然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fc区与天然序列Fc区相比或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具有约1处至约10处氨基酸替代，优选约1处至约5处氨基酸替代。变异Fc区在本文中优选与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区拥有至少约80％的同源性，最优选与它们具有至少约90％的同源性，更优选与它们具有至少约95％的同源性。
“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如Kabat等，Sequences of Proteins of mmunological Interest,第五版,NIH Publication91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组III。
出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。
“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。
“结合域”表示特异性结合靶表位，抗原，配体，或受体的化合物或分子的一部分。结合域包括但不限于抗体(例如单克隆，多克隆，重组，人源化，和嵌合抗体)，抗体片段或其部分(例如Fab片段，Fab’2，scFv抗体，SMIP，域抗体，双抗体，微型抗体(minibody)，scFv-Fc，亲和体(affibody)，纳米抗体(nanobody)，和抗体的VH和/或VL域)，受体，配体，适体，和具有已鉴定的结合配偶的其它分子。
“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
“免疫缀合物”指与一种或多种异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。
如本文中使用的，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于：放射性同位素(例如At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)，阿霉素(adriamicin)，长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)，长春碱(vinblastine)，依托泊苷(etoposide))，多柔比星(doxorubicin)，美法仑(melphalan)，丝裂霉素(mitomycin)C，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或者细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
“分离的”核酸指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。
“编码抗CD79b抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
“编码抗CD3抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
如本文中使用的，术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
术语“宿主细胞”，“宿主细胞系”，和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中包括具有与在初始转化细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。
关于参照多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST，BLAST-2，ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office,Washington D.C.,20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech,Inc.,South San Francisco,California可获得ALIGN-2程序，或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)，与(with)，或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于，与，或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
术语“药物配制剂”指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。
“药学可接受载剂”指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学可接受载剂包括但不限于缓冲剂，赋形剂，稳定剂，或防腐剂。
药剂(例如药物配制剂)的“有效量”指在必需的剂量和时段上有效实现期望的治疗或预防结果的量。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现或者实现期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。
如本文中使用的，“治疗”(及其语法变化形式，诸如“处理”或“处置”)指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，缓解症状，削弱疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减缓疾病进展的速率，改善或减轻疾病状态，及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生/发展，或用于减缓疾病的进展。
如本文中使用的，“延迟病症或疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病或病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的个体，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为个体不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。
“降低”或“抑制”表示引起例如20％或更多，50％或更多，或75％，85％，90％，95％，或更多总体降低的能力。在某些实施方案中，降低或抑制可以指抗体的由抗体Fc区介导的效应器功能，此类效应器功能具体包括补体依赖性细胞毒性(CDC)，抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，和抗体依赖性细胞的吞噬(ADCP)。
“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)
Figure GDA0002721334960000201
磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，
Figure GDA0002721334960000202
)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan)
Figure GDA0002721334960000211
CPT-11(伊立替康(irinotecan)，
Figure GDA0002721334960000212
)、乙酰喜树碱、东莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Nicolaou et al.,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；CDP323，一种口服α-4整联蛋白抑制剂；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括
Figure GDA0002721334960000213
吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂
Figure GDA0002721334960000214
脂质体多柔比星TLC D-99
Figure GDA0002721334960000215
PEG化脂质体多柔比星
Figure GDA0002721334960000216
和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤、吉西他滨(gemcitabine)
Figure GDA0002721334960000221
替加氟(tegafur)
Figure GDA0002721334960000222
卡培他滨(capecitabine)
Figure GDA0002721334960000223
埃坡霉素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure GDA0002721334960000224
多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)
Figure GDA0002721334960000231
达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoid)，例如帕利他塞(paclitaxel)
Figure GDA0002721334960000232
清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANETM)和多西他塞(docetaxel)
Figure GDA0002721334960000233
苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂剂，诸如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)(例如
Figure GDA0002721334960000234
)和卡铂(carboplatin)；长春药类(vincas)，其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括长春碱(vinblastine)
Figure GDA0002721334960000235
长春新碱(vincristine)
Figure GDA0002721334960000236
长春地辛(vindesine)
Figure GDA0002721334960000237
和长春瑞滨(vinorelbine)
Figure GDA0002721334960000238
依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；亚叶酸(leucovorin)；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)，包括贝沙罗汀(bexarotene)
Figure GDA0002721334960000239
二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如
Figure GDA00027213349600002310
或
Figure GDA00027213349600002311
)、依替膦酸钠(etidronate)
Figure GDA00027213349600002312
NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)
Figure GDA00027213349600002313
阿伦膦酸盐(alendronate)
Figure GDA00027213349600002314
帕米膦酸盐(pamidronate)
Figure GDA00027213349600002315
替鲁膦酸盐(tiludronate)
Figure GDA00027213349600002316
或利塞膦酸盐(risedronate)
Figure GDA00027213349600002317
以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如
Figure GDA00027213349600002318
疫苗和基因疗法疫苗，例如
Figure GDA00027213349600002319
疫苗、
Figure GDA00027213349600002320
疫苗和
Figure GDA00027213349600002321
疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如
Figure GDA00027213349600002322
)；rmRH(例如
Figure GDA00027213349600002323
)；BAY439006(sorafenib；Bayer)；SU-11248(sunitinib，
Figure GDA00027213349600002324
Pfizer)；哌立福辛(perifosine)，COX-2抑制剂(如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如PS341)；bortezomib
Figure GDA0002721334960000241
CCI-779；tipifarnib(R11577)；orafenib，ABT510；Bcl-2抑制剂，诸如oblimersen sodium
Figure GDA0002721334960000242
pixantrone；EGFR抑制剂(见下文定义)；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，诸如雷帕霉素(rapamycin)(sirolimus，
Figure GDA0002721334960000243
)；法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafarnib(SCH 6636，SARASARTM)；及任何上述各项的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。
如本文中定义的化疗剂包括起调节、降低、阻断或抑制可促进癌生长的激素效果作用的“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”类。它们自身可以是激素，包括但不限于：具有混合的激动剂/拮抗剂特性的抗雌激素类，包括他莫昔芬(tamoxifen)
Figure GDA0002721334960000244
4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene)
Figure GDA0002721334960000245
艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene)
Figure GDA0002721334960000246
曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)，和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，诸如SERM3；没有激动剂特性的纯的抗雌激素类，诸如氟维司群(fulvestrant)
Figure GDA0002721334960000247
和EM800(此类药剂可阻断雌激素受体(ER)二聚化、抑制DNA结合、提高ER周转、和/或遏制ER水平)；芳香酶抑制剂类，包括类固醇芳香酶抑制剂类，诸如福美坦(formestane)和依西美坦(exemestane)
Figure GDA0002721334960000248
和非类固醇芳香酶抑制剂类，诸如阿那曲唑(anastrazole)
Figure GDA0002721334960000249
来曲唑(letrozole)
Figure GDA00027213349600002410
和氨鲁米特(aminoglutethimide)，和其它芳香酶抑制剂类，包括伏氯唑(vorozole)
Figure GDA00027213349600002411
醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)
Figure GDA00027213349600002412
法倔唑(fadrozole)和4(5)-咪唑；促黄体生成激素释放激素激动剂类，包括亮丙瑞林(leuprolide)(
Figure GDA00027213349600002413
和
Figure GDA00027213349600002414
)、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)和曲普瑞林(tripterelin)；性类固醇类(sex steroids)，包括妊娠素类(progestine)，诸如醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)和醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)，雌激素类，诸如二乙基己烯雌酚(diethylstilbestrol)和普雷马林(premarin)，和雄激素类/类视黄酸类，诸如氟甲睾酮(fluoxymesterone)、所有反式视黄酸(transretionic acid)和芬维A胺(fenretinide)；奥那司酮(onapristone)；抗孕酮类；雌激素受体下调剂类(ERD)；抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。
术语“免疫抑制剂”在本文中用于辅助疗法时指起抑制或掩盖本文中所治疗哺乳动物的免疫系统作用的物质。这将包括抑制细胞因子生成、下调或抑制自身抗原表达、或掩盖MHC抗原的物质。此类药剂的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶类(见美国专利No.4,665,077)；非类固醇抗炎药类(NSAID)；更昔洛韦(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus)、糖皮质激素类诸如皮质醇(cortisol)或醛甾酮(aldosterone)、抗炎剂类诸如环加氧酶抑制剂、5-脂加氧酶抑制剂或白三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂类，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)或霉酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil,MMF)；烷化剂类，诸如环磷酰胺(cyclophosphamide)、溴隐亭(bromocryptine)、达那唑(danazol)、氨苯砜(dapsone)、戊二醛(它掩盖MHC抗原，如美国专利No.4,120,649中所记载的)；MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢霉素A；类固醇类，诸如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物，例如泼尼松(prednisone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)包括SOLU-
Figure GDA0002721334960000251
甲泼尼龙琥珀酸钠、和地塞米松(dexamethasone)；二氢叶酸还原酶抑制剂类，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)(口服或皮下)；抗疟剂类，诸如氯喹(chloroquine)和羟氯喹(hydroxycloroquine)；柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；来氟米特(leflunomide)；细胞因子或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-α、-β或-γ抗体，抗肿瘤坏死因子(TNF)-α抗体(英夫利昔单抗(infliximab)
Figure GDA0002721334960000252
或阿达木单抗(adalimumab))，抗TNF-α免疫粘附素(依那西普(etanercept))，抗TNF-β抗体，抗白介素-2(IL-2)抗体和抗IL-2受体抗体，和抗白介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂(诸如ACTEMRATM(tocilizumab))；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3 T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；泛(pan)T抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；包含LFA-3结合域的可溶性肽(WO 90/08187,发布于90年7月26日)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链道酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；脱氧精胍菌素(deoxyspergualin)；雷帕霉素(rapamycin)；T细胞受体(Cohen et al.,美国专利No.5,114,721)；T细胞受体片段(Offner et al.,Science 251:430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341:482(1989)；WO 91/01133)；BAFF拮抗剂，诸如BAFF抗体和BR3抗体和zTNF4拮抗剂(综述参见Mackay and Mackay,TrendsImmunol.23:113-5(2002)及还见下文定义)；干扰T辅助细胞信号的生物制剂，诸如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括CD40-CD40配体的阻断性抗体(例如Durie et al.,Science,261:1328-30(1993)；Mohan et al.,J.Immunol.,154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck et al.,Science,265:1225-7(1994))；及T细胞受体抗体(EP340,109)，诸如T10B9。本文中的一些优选免疫抑制剂包括环磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、MMF、或甲氨蝶呤。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”指如下的分子，其抑制PD-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍–一项结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-L1，PD-L2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和/或PD-L2。例如，PD-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个特定方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述MDX-1106(nivolumab)。在另一个特定方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述MK-3475(lambrolizumab)。在另一个特定方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述CT-011(pidilizumab)。在另一个特定方面，PD-1结合拮抗剂是本文所述AMP-224。
术语“PD-L1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述YW243.55.S70。在另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MDX-1105。在仍有另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MPDL3280A。在仍有另一个具体方面，抗PD-L1抗体是本文所述MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2结合PD-1。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L2介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
术语“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。
术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。
术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长/增殖不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤(例如何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤)，母细胞瘤，肉瘤和白血病。
术语“B细胞增殖性病症”指与一定程度的异常B细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，该B细胞增殖性病症为癌症。
“B细胞增殖性病症”包括何杰金氏病(包括以淋巴细胞为主型的何杰金氏病(LPHD))；非何杰金氏淋巴瘤(NHL)；滤泡中心细胞(FCC)淋巴瘤；急性淋巴细胞性白血病(ALL)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；和毛细胞性白血病。非何杰金氏淋巴瘤包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞NHL、大块病(bulkydisease)NHL、类浆细胞性淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)。本发明还涵盖这些癌症的复发的治疗。LPHD是尽管有放疗或化疗仍趋于频繁复发的一类何杰金氏病。CLL是四类主要的白血病之一。称作淋巴细胞的成熟B细胞的一种癌症，CLL表现为细胞在血液、骨髓和淋巴组织中的逐渐积累。无痛性淋巴瘤是一种缓慢生长的、不能治愈的疾病，其中患者在多次消退和复发后平均存活在6-10年之间。
术语“非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤”或“NHL”在用于本文时指何杰金氏淋巴瘤以外的淋巴系统癌症。通常可通过何杰金氏淋巴瘤中存在里-施(Reed-Sternberg)细胞而非何杰金氏淋巴瘤中不存在所述细胞将何杰金氏淋巴瘤与非何杰金氏淋巴瘤区分开来。非何杰金氏淋巴瘤在该术语用于本文时所涵盖的例子包括本领域技术人员(例如肿瘤学家或病理学家)依照本领域已知的分类表将鉴定为此类的任何淋巴瘤，诸如Color Atlas ofClinical Hematology,第3版,Victor A.Hoffbrand和John E.Pettit编,HarcourtPublishers Limited,2000中记载的Revised European-American Lymphoma(REAL)scheme(欧美淋巴瘤修正表)。具体参见图11.57、11.58和/或11.59中的表。更具体例子包括但不限于复发性或顽固性NHL、前线(front line)低级NHL、阶段III/IV NHL、化疗耐受性NHL、前体B成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病和/或前淋巴细胞性白血病和/或小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性淋巴瘤、免疫细胞瘤和/或淋巴浆细胞性(lymphoplasmacytic)淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、节外边缘区(extranodal marginal zone)-MALT淋巴瘤、节边缘区(nodal marginalzone)淋巴瘤、毛细胞性白血病、浆细胞瘤和/或浆细胞骨髓瘤、低级/滤泡淋巴瘤、中级/滤泡NHL、套细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤(滤泡的)、中级弥漫性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤、攻击性(agressive)NHL(包括攻击性前线NHL和攻击性复发性NHL)、自体干细胞移植后复发性或顽固性NHL、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、高级成免疫细胞NHL、高级成淋巴细胞NHL、高级小无核裂细胞NHL、大块病(bulky disease)NHL、伯基特氏(Burkitt)淋巴瘤、前体(外周)T细胞成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤、成年T细胞淋巴瘤和/或白血病、T细胞慢性淋巴细胞性白血病和/或前淋巴细胞性白血病、大粒状淋巴细胞白血病、蕈样肉芽肿病和/或塞扎里综合征(Sezary syndrome)、结外天然杀伤/T细胞(鼻型)淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、皮肤(表皮)淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、外周T细胞(其它方面没有规定的)淋巴瘤和血管成免疫细胞T细胞淋巴瘤。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如，牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类(例如，人和非人灵长类诸如猴)，家兔，和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症，用法，剂量，施用，联合疗法，禁忌症和/或警告的信息。
如本文及所附权利要求书中使用的，单数形式“一个”，“一种”，和“该/所述”包括复数提及物，除非上下文明确另有规定。
本文中提及“约”某个数值或参数包括(并描述)涉及该数值或参数本身的变化。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
应当理解，本文中描述的本发明的方面和变型包括“由……组成”和/或“基本上由……组成”的方面和变型。
II.组合物和方法
一方面，本发明部分基于抗CD79b抗体。在某些实施方案中，提供了包含CD79b结合域和CD3结合域的抗CD79b抗体。在某些实施方案中，该抗CD79b抗体为抗CD79b T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体。本发明的抗体对于例如B细胞增殖性疾病的诊断或治疗是有用的。
A.例示性抗CD79b抗体
一方面，本发明提供分离的结合CD79b的抗体。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该CD79b结合域结合SEQ ID NO:63。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)作为双臂，二价IgG抗体以小于约25nM的Kd结合人CD79b。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)以小于约10nM的Kd结合人CD79b。在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)以小于约5nM的Kd结合人CD79b。在一些实施方案中，该Kd是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，Kd是通过BIACORE测定的。在一些实施方案中，Kd是通过以低密度固定化的CD79b测定的。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)作为双臂，二价IgG抗体以小于约150ng/mL的EC50结合B细胞(例如BJAB细胞)。在一些实施方案中，该EC50小于约100ng/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约75ng/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约50ng/mL。在一些实施方案中，该EC50是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，该EC50为约5或10次实验任一的平均值。在一些实施方案中，对B细胞的结合是通过FACS测定的。
在该抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体(例如CD79b结合域)以单价型式(例如包含CD79b和CD3结合域的抗CD79b双特异性抗体)以小于约1.5ug/mL的EC50结合人CD79b结合B细胞(例如BJAB细胞)。在一些实施方案中，该EC50小于约1ug/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约0.75ug/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约0.5ug/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约0.25ug/mL。在一些实施方案中，该EC50是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，该EC50为约5或10次实验任一的平均值。在一些实施方案中，对B细胞的结合是通过FACS测定的。
抗体CD79.A7及其变体
一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3，和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在又一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，本发明的抗CD79b抗体包含CD79b结合域，其包含：(a)VH域，该VH域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，该VL域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VLHVR序列：(i)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ IDNO:12的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述实施方案任一中，抗CD79b抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗CD79b抗体包含上述实施方案任一中的HVR，且进一步包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
另一方面，抗CD79b抗体包含与SEQ ID NO:15，17，19，21，23，25，27，和/或29的氨基酸序列具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代)，插入，或删除，但是包含该序列的抗CD79b抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:15，17，19，21，23，25，27，和/或29中替代，插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，该替代，插入，或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:15，17，19，21，23，25，27，和/或29中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，该VH包含一种，两种或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，提供了一种抗CD79b抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:16，18，20，22，24，26，28，和/或30的氨基酸序列具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代)，插入，或删除，但是包含该序列的抗CD79B抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:16，18，20，22，24，26，28，和/或30中替代，插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，该替代，插入，或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:16，18，20，22，24，26，28，和/或30中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，该VL包含一种，两种或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，提供了一种抗CD79b抗体，其中该抗体包含上文提供的实施方案任一中的VH和上文提供的实施方案任一中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ IDNO:15和SEQ ID NO:16中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在中SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:27和SEQ IDNO:28中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
又一方面，本发明提供与本文中提供的抗CD79b抗体结合相同表位的抗体。例如，在某些实施方案中，提供了与包含SEQ ID NO:19的VH序列和SEQ ID NO:20的VL序列的抗CD79b抗体结合相同表位的抗体。在某些实施方案中，提供了结合由SEQ ID NO:63的氨基酸组成的CD79b片段内的表位的抗体。
在本发明的又一方面，依照上述实施方案任一的抗CD79b抗体为单克隆抗体，包括嵌合，人源化或人抗体。在一个实施方案中，抗CD79b抗体为抗体片段，例如Fv，Fab，Fab’，scFv，双抗体，或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体为全长抗体，例如完整IgG1抗体或本文中定义的其它抗体类或同种型。
抗体SN8.new及其变体
一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3。在一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该抗体包含包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列的HVR-H3，包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3，和包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，本发明的抗CD79b抗体包含CD79b结合域，其包含：(a)VH域，该VH域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，该VL域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(i)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，本发明提供一种抗CD79b抗体，其包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述实施方案任一中，抗CD79b抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗CD79b抗体包含上述实施方案任一中的HVR，且进一步包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
另一方面，抗CD79b抗体包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代)，插入，或删除，但是包含该序列的抗CD79b抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:37中替代，插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，该替代，插入，或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:37中的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，该VH包含一种，两种或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，提供了一种抗CD79b抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，具有至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代)，插入，或删除，但是包含该序列的抗CD79B抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ IDNO:38中替代，插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中，该替代，插入，或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，该抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:38中的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，该VL包含一种，两种或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，提供了一种抗CD79b抗体，其中该抗体包含上文提供的实施方案任一中的VH和上文提供的实施方案任一中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别在SEQ IDNO:37和SEQ ID NO:38中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。
在本发明的又一方面，依照上述实施方案任一的抗CD79b抗体为单克隆抗体，包括嵌合，人源化或人抗体。在一个实施方案中，抗CD79b抗体为抗体片段，例如Fv，Fab，Fab’，scFv，双抗体，或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体为全长抗体，例如完整IgG1抗体或本文中定义的其它抗体类或同种型。
又一方面，依照任何上述实施方案的抗CD79b抗体可单一地或组合地并入下文1-7节中描述的任何特征：
1.抗体亲和力
在某些实施方案中，本文中提供的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM的解离常数(Kd)(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)。
在一个实施方案中，Kd是通过放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的。在一个实施方案中，用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施RIA。例如，通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将
Figure GDA0002721334960000371
多孔板(Thermo Scientific)用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的感兴趣Fab(例如与Presta等,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1％聚山梨酯20
Figure GDA0002721334960000372
洗板8次。平板干燥后，加入150μl/孔闪烁液(MICROSCINT-20TM；Packard)，然后在TOPCOUNTTM伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。
依照另一个实施方案，Kd是使用
Figure GDA0002721334960000381
表面等离振子共振测定法测量的。例如，于25℃使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)使用
Figure GDA0002721334960000382
-2000或
Figure GDA0002721334960000383
-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)实施测定法。在一个实施方案中，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM乙酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(
Figure GDA0002721334960000384
Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。以比率koff/kon计算平衡解离常数(Kd)。见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1 S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBSpH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。
2.抗体片段
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2，Fv，和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthün,于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)；还可见WO 93/16185；及美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利No.5,869,046。
双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)；及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也记载于Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。
单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；见例如美国专利No.6,248,516)。
可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利No.4,816,567；及Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠，大鼠，仓鼠，家兔，或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分)自非人抗体衍生，而FR(或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)，并且进一步记载于例如Riechmann等,Nature 332:323-329(1988)；Queen等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337,7,527,791,6,982,321和7,087,409；Kashmiri等,Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)嫁接)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“重修表面”)；Dall’Acqua等,Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；及Osbourn等,Methods 36:61-68(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了FR改组的“引导选择”方法)。
可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等,J.Immunol.151:2296(1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(见例如Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；及Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还可见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，其描述了XENOMOUSETM技术；美国专利No.5,770,429，其描述了
Figure GDA0002721334960000401
技术；美国专利No.7,041,870，其描述了K-M
Figure GDA0002721334960000402
技术，和美国专利申请公开文本No.US 2007/0061900，其描述了
Figure GDA0002721334960000403
技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。
也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等,J.Immunol.,147:86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利No.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于Vollmers和Brandlein,Histologyand Histopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers和Brandlein,Methods andFindings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。
5.文库衍生的抗体
可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等,于Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,2001)，并且进一步记载于例如McCafferty等,Nature 348:552-554；Clackson等,Nature 352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,于Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；及Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)的。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等,EMBO J,12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利No.5,750,373，和美国专利公开文本No.2005/0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764,2007/0292936和2009/0002360。
认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对CD79b，而另一种针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合CD79b的两个不同表位。也可以使用双特异性抗体来将细胞毒剂定位于表达CD79b的细胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。
一方面，本发明提供分离的抗CD79b抗体，其结合CD79b和CD3(即包含CD79b结合域和CD3结合域)。在某些实施方案中，结合特异性之一是针对CD3(例如CD3ε或CD3γ)且另一是针对CD79b。在一些实施方案中，该CD3结合域结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。在某些实施方案中，提供了一种抗CD79b抗体，其包含结合由人CD3ε的氨基酸1-26或1-27组成的CD3(例如人CD3ε)片段内的表位的CD3结合域。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体为双特异性抗体。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体为双特异性IgG抗体。
在一些实施方案中，CD3结合域以250nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以100nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以15nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，CD3结合域以10nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，CD3结合域以5nM或更低的Kd结合该人CD3ε多肽。
在该多特异性抗体任一的一些实施方案中，例如结合CD79b和CD3的双特异性抗体，包含CD3结合域，其中该CD3结合域包含下述高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该CD3结合域包含：(a)VH域，其包含：(i)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，其包含：(i)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQID NO:43的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该CD3结合域可具有重链可变(VH)域，其包含与SEQ ID NO:57的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:57的序列，和/或轻链可变(VL)域，其包含与SEQ ID NO:58的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:58的序列。在一些情况中，该CD3结合域可具有包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的VL域。在一种特定的情况中，该CD3结合域可以是40G5c，或其衍生物或克隆亲属。
例如，在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL域；和(ii)CD3结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的VL域。
在该多特异性抗体任一的一些实施方案中，例如结合CD79b和CD3的双特异性抗体，该CD3结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该CD3结合域包含：(a)VH域，其包含(i)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，其包含(i)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该CD3结合域可具有包含与SEQ ID NO:59的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:59的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:60的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:60的序列的VL域。在一些情况中，该CD3结合域可具有包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VH域和包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的VL域。在一种特定的情况中，该CD3结合域可以是38E4v1，或其衍生物或克隆亲属。
例如，在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL域；和(ii)CD3结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VL域。
在该多特异性抗体任一的一些实施方案中，例如结合CD79b和CD3的双特异性抗体，该CD3结合域包含：(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该CD3结合域包含：(a)VH域，其包含：(i)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，其包含：(i)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗CD3抗体可具有包含与SEQ ID NO:61的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:61的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:62的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:62的序列的VL域。在一些情况中，该CD3结合域可具有包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的VH域和包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列的VL域。在一种特定的情况中，该抗CD3抗体可以是UCHT1.v9，或其衍生物或克隆亲属。
例如，在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，其包含下述HVR：(a)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含的SEQ ID NO:52氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体包含：(i)CD79b结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL域；和(ii)CD3结合域，其包含(a)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的VL域。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约100ng/mL的B细胞杀伤EC50。在一些实施方案中，该EC50小于约50ng/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约25ng/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约20ng/mL。在一些实施方案中，该EC50小于约15ng/mL。在一些实施方案中，该B细胞杀伤为内源B细胞杀伤。在一些实施方案中，该B细胞杀伤为细胞系B细胞杀伤，例如BJAB细胞系，WSU-DLCL2细胞系，OCI-Ly-19细胞系。在一些实施方案中，该EC50是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，该EC50为约5或10次实验任一的平均值。在一些实施方案中，该EC50为约5或10名供体任一的平均值。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体以5000ng/mL杀伤至少约60％的B细胞。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体以5000ng/mL杀伤至少约80％的B细胞。该抗CD79b抗体以5000ng/mL杀伤至少约90％的B细胞。例如，在一些实施方案中，该B细胞为B细胞系SU-CHL-6，CoHH2，BJAB，WSU-DLCL2，Sc-1，SU-CHL-8，GRANTA-519，Nalm-6，Ramos，和/或OCI-Ly-19中的一种或多种。在一些实施方案中，该EC50是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，该EC50为约5或10次实验任一的平均值。在一些实施方案中，该EC50为约5或10名供体任一的平均值。
在该多特异性抗CD79b抗体任一的一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约50ng/mL任一的细胞毒性T细胞激活EC50。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约25ng/mL的细胞毒性T细胞激活EC50。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体具有小于约小于20ng/mL的细胞毒性T细胞激活EC50。在一些实施方案中，细胞毒性T细胞激活是通过CD8+ T细胞中的CD69+CD25+ T细胞的％测量的。在一些实施方案中，该EC50是通过本文，特别是实施例中描述的任何方法测定的。在一些实施方案中，该EC50为约5或10次实验任一的平均值。在一些实施方案中，该EC50为约5或10名供体任一的平均值。
用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))，WO 93/08829，和Traunecker等,EMBO J.10:3655(1991))，和“节-入-穴”工程化(见例如美国专利No.5,731,168)。也可以通过用于生成抗体Fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利No.4,676,980,及Brennan等,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；及使用单链Fv(sFv)二聚体(见例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994))；及如例如Tutt等,J.Immunol.147:60(1991)中所描述的，制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。
本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US 2006/0025576A1)。
本文中的抗体或片段还包括包含结合CD79b及另一种不同抗原的抗原结合位点的“双重作用FAb”或“DAF”(见例如US 2008/0069820)。
7.抗体变体
在某些实施方案中，涵盖本文中提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除，和/或插入和/或替代。可以进行删除，插入，和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。
a)替代，插入，和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表1中在“优选的替代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表1
初始残基 例示性替代 优选的替代
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp,Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸 Leu
Leu(L) 正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸 Leu
依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile；
(2)中性，亲水性的：Cys,Ser,Thr,Asn,Gln；
(3)酸性的：Asp,Glu；
(4)碱性的：His,Lys,Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly,Pro；
(6)芳香族的：Trp,Tyr,Phe。
非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。
一类替代变体牵涉替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
可以对HVR做出变化(例如，替代)，例如以改善抗体亲和力。可以对HVR“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和/或接触抗原的残基做出此类变化，其中对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记载于例如Hoogenboom等,于Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR，链改组，或寡核苷酸指导的诱变)将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉HVR指导的方法，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的HVR残基。特别地，经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，可以在一个或多个HVR内发生替代，插入，或删除，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对HVR做出保守变化(例如，保守替代，如本文中提供的)，其不实质性降低结合亲和力。例如，此类变化可以在HVR中的抗原接触残基以外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未改变的，或者含有不超过1，2或3处氨基酸替代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述的。在此方法中，将残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg，asp，his，lys，和glu)鉴定，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。作为替代的候选，可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如对于ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。
b)糖基化变体
在某些实施方案中，改变本文中提供的抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或多个糖基化位点来方便地实现对抗体的糖基化位点的添加或删除。
在抗体包含Fc区的情况中，可以改变其附着的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2域的Asn297。见例如Wright等,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了抗体变体，其具有缺乏附着(直接或间接)于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。通过相对于附着于Asn297的所有糖结构(例如，复合的，杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过MALDI-TOF质谱术测量的，例如如记载于WO 2008/077546的。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的Eu编号方式)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka等,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请No US 2003/0157108 A1,Presta,L；及WO 2004/056312A1,Adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(见例如Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；及WO2003/085107)。
进一步提供了具有两分型寡糖的抗体变体，例如其中附着于抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的例子记载于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利No.6,602,684(Umana等)；及US 2005/0123546(Umana等)。还提供了在附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体记载于例如WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)。
c)Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本文中提供的抗体的Fc区中，由此生成Fc区变体。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如，人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4 Fc区)。
在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应器功能的抗体变体，所述效应器功能使其成为如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应器功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消减。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法以确保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的FcR表达。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利No.5,500,362(见例如Hellstrom,I.等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(见Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；和CytoTox
Figure GDA0002721334960000521
非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如披露于Clynes等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)的。也可以实施C1q结合测定法以确认抗体不能结合C1q，并且因此缺乏CDC活性。见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以实施CDC测定法(见例如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等,Blood 101:1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(见例如Petkova,S.B.等,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应器功能的抗体包括那些具有Fc区残基238,265,269,270,297,327和329中的一个或多个的替代的(美国专利No.6,737,056)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265，269，270，297和327中的两处或更多处具有替代的Fc突变体，包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581)。
在一些方面，该抗CD79b抗体(例如抗CD79b TDB抗体)包含包含N297G突变的Fc区。
在一些实施方案中，该包含N297G突变的抗CD79b抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH1(CH11)域，第一CH2(CH21)域，第一CH3(CH31)域，第二CH1(CH12)域，第二CH2(CH22)域，和第二CH3(CH32)域。在一些情况中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些情况中，该CH31和CH32域各自包含隆起或空腔，且其中该CH31域中的隆起或空腔分别可位于该CH32域中的空腔或隆起中。在一些情况中，该CH31和CH32域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该CH21和CH22域各自包含隆起或空腔，且其中该CH21域中的隆起或空腔分别可位于该CH22域中的空腔或隆起中。在其它情况中，该CH21和CH22域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该抗CD3抗体为IgG1抗体。
描述了具有改善的或降低的对FcR的结合的某些抗体变体(见例如美国专利No.6,737,056；WO 2004/056312，及Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一处或多处氨基酸替代，例如Fc区的位置298，333，和/或334(残基的EU编号方式)的替代的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区做出改变，其导致改变的(即，改善的或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如记载于美国专利No.6,194,551，WO 99/51642，及Idusogie等,J.Immunol.164:4178-4184(2000)的。
具有延长的半衰期和改善的对新生儿Fc受体(FcRn)的结合的抗体记载于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生儿Fc受体(FcRn)负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗体包含其中具有改善Fc区对FcRn结合的一处或多处替代的Fc区。此类Fc变体包括那些在Fc区残基238,256,265,272,286,303,305,307,311,312,317,340,356,360,362,376,378,380,382,413,424或434中的一处或多处具有替代，例如，Fc区残基434的替代的(美国专利No.7,371,826)。还可见Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利No.5,648,260；美国专利No.5,624,821；及WO 94/29351，其关注Fc区变体的其它例子。
d)经半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些实施方案中，可以期望创建经半胱氨酸工程化改造的抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在具体的实施方案中，替代的残基存在于抗体的可接近位点。通过用半胱氨酸替代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可接近位点，并且可以用于将抗体与其它模块，诸如药物模块或接头-药物模块缀合，以创建免疫缀合物，如本文中进一步描述的。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸替代下列残基之任一个或多个：轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541所述生成经半胱氨酸工程化改造的抗体。
e)抗体衍生物
在某些实施方案中，可以进一步修饰本文中提供的抗体以含有本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。适合于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)，乙二醇/丙二醇共聚物，羧甲基纤维素，右旋糖苷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1,3-二氧戊环，聚-1,3,6-三口恶烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能，抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质性质模块的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kam等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，并且包括但不限于对普通细胞没有损害，但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附近的细胞被杀死的温度的波长。
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来生成抗体，例如，如记载于美国专利No.4,816,567的。在一个实施方案中，提供了编码本文中所描述的抗CD79b抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含抗体VL的氨基酸序列和/或包含抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻和/或重链)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用下列载体转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，所述第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0，NS0，Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了生成抗CD79b抗体的方法，其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文提供的，并且任选地，自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。
对于抗CD79b抗体的重组生成，将编码抗体的核酸(例如如上文所描述的)分离，并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规规程将此类核酸容易地分离并测序(例如，通过使用寡核苷酸探针来进行，所述寡核苷酸探针能够特异性结合编码抗体的重和轻链的基因)。
适合于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中生成抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，见例如美国专利No.5,648,237,5,789,199和5,840,523(还可见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后，可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离，并可以进一步纯化。
在原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致生成具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004),及Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如美国专利No.5,959,177,6,040,498,6,420,548,7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如记载于例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)的)；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞，如记载于例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如记载于例如Mather等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0，NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
C.测定法
可以通过本领域中已知的多种测定法对本文中提供的抗CD79b抗体鉴定，筛选，或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
1.结合测定法和其它测定法
一方面，对本发明的抗体测试其抗原结合活性，例如通过已知的方法诸如ELISA，Western印迹，等来进行。
另一方面，可使用竞争测定法来鉴定与本文中描述的抗CD79b抗体竞争对CD79b的结合的抗体。在某些实施方案中，此类竞争性抗体结合与本文中描述的抗CD79b抗体所结合表位相同的表位(例如线性或构象表位)。用于定位抗体所结合表位的详细例示性方法见Morris(1996)“EpitopeMapping Protocols”,Methods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。
在一种例示性竞争测定法中，在包含第一经标记抗体(其结合CD79b，例如本文中描述的抗CD79b抗体)和第二未标记抗体(其要测试与第一抗体竞争对CD79b的结合的能力)的溶液中温育固定化CD79b。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一经标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定化CD79b。在允许第一抗体结合CD79b的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定化CD79b联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化CD79b联合的标记物的量与对照样品相比实质性降低，那么这指示第二抗体与第一抗体竞争对CD79b的结合。参见Harlow and Lane(1988)Antibodies:ALaboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性测定法
一方面，提供用于鉴定具有生物学活性的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)的测定法。生物学活性可以包括例如抑制细胞生长或增殖的能力(例如“细胞杀伤”活性)、诱导细胞死亡(包括程序性细胞死亡(凋亡))的能力、或抗原结合活性。还提供在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。
在一些实施方案中，该活性包含支持B细胞杀伤和/或细胞毒性T细胞激活的能力。在某些实施方案中，通过本文，特别是实施例中描述的任何方法对本发明的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)测试此类B细胞杀伤和/或T细胞细胞毒性效应激活生物学活性。在这些活性测定法任一的一些实施方案中，可以通过Ficoll分离自健康供体的全血分离PBMC。特别是，可以在肝素化注射器中收集人血液，并使用Leucosep和Ficoll PaquePlus分离PBMC。在需要时可以依照制造商的说明书用Miltenyi试剂盒分离CD4+T和CD8+T细胞。
进一步地，可以在含有10％FBS，补充有GlutaMax，青霉素和链霉素的RPMI培养基中清洗细胞，并将约0.2x106个悬浮细胞添加至96孔U底板。在增湿标准细胞培养温箱中在补充有10％FBS的RPMI1640中于37℃培养细胞。对于BJAB细胞杀伤测定法，可以以遵照测定法的指定比率将20,000个BJAB细胞与效应细胞(huPBMC或经过纯化的T细胞任一)一起在多种浓度的TDB抗体存在下温育24小时。对于内源B细胞杀伤测定法，可以将200,000个huPBMC与多种浓度的TDB抗体一起温育24小时。
培养后，可以用FACS缓冲液(0.5％BSA，0.05％叠氮化钠，PBS中)清洗细胞。然后可以在FACS缓冲液中对细胞染色，用FACS缓冲液清洗，并在100ul含有1ug/ml碘化丙啶的FACS缓冲液中悬浮。可以在FACSCalibur流式细胞仪上收集数据，并使用FlowJo分析。可以通过FACS作为PI-CD19+或PI-CD20+B细胞设门来选出活的B细胞，并可以用添加至反应混合物的FITC珠获得绝对细胞计数，作为内部计数对照。可以基于非TDB处理对照计算％细胞杀伤。可以使用抗CD69-FITC和抗CD25-PE通过CD69和CD25表面表达检测激活的T细胞。
D.免疫缀合物
本发明还提供了包含与一种或多种细胞毒剂，诸如化疗剂或药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素缀合的本文中的抗CD79b抗体的免疫缀合物。
在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，包括但不限于美登木素生物碱(见美国专利No.5,208,020，5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF(MMAE和MMAF)(见美国专利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；加利车霉素(calicheamicin)或其衍生物(见美国专利No.5,712,374,5,714,586,5,739,116,5,767,285,5,770,701,5,770,710,5,773,001和5,877,296；Hinman等,Cancer Res.53:3336-3342(1993)；及Lode等,Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类抗生素诸如道诺霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(见Kratz等,Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等,Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等,Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；及美国专利No.6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)诸如多西他赛(docetaxel)，帕利他赛，larotaxel，tesetaxel，和ortataxel；单端孢霉素(trichothecene)；和CC1065。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的如本文中所描述的抗体，所述酶活性毒素包括但不限于白喉A链，白喉毒素的非结合活性片段，外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))，蓖麻毒蛋白(ricin)A链，相思豆毒蛋白(abrin)A链，蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链，α-帚曲霉素(sarcin)，油桐(Aleuritesfordii)毒蛋白，香石竹(dianthin)毒蛋白，美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI，PAPII和PAP-S)，苦瓜(Momordica charantia)抑制物，麻疯树毒蛋白(curcin)，巴豆毒蛋白(crotin)，肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂，白树毒蛋白(gelonin)，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素(phenomycin)，依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的如本文中所描述的抗体。多种放射性同位素可用于生成放射性缀合物。例子包括At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行检测时，它可以包含供闪烁法研究用的放射性原子，例如tc99m或I123，或供核磁共振(NMR)成像(又称为磁共振成像，mri)用的自旋标记物，诸如再一次的碘-123，碘-131，铟-111，氟-19，碳-13，氮-15，氧-17，钆，锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白质偶联剂来生成抗体和细胞毒剂的缀合物，诸如N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亚氨基硫烷(IT)，亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)，活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)，醛类(诸如戊二醛)，双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)，双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异硫氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)，和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可以如Vitetta等,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头，肽酶敏感性接头，光不稳定接头，二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Res 52:127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
本文中的免疫缀合物或ADC明确涵盖，但不限于用交联试剂制备的此类缀合物，所述交联试剂包括但不限于BMPS，EMCS，GMBS，HBVS，LC-SMCC，MBS，MPBH，SBAP，SIA，SIAB，SMCC，SMPB，SMPH，sulfo-EMCS，sulfo-GMBS，sulfo-KMUS，sulfo-MBS，sulfo-SIAB，sulfo-SMCC，和sulfo-SMPB，及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它们是商品化的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
E.用于诊断和检测的方法和组合物
一方面，本发明的抗CD79b抗体可用于检测生物学样品中CD79b的存在。如本文中使用的，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包括细胞或组织。在某些实施方案中，此类组织包括以相对于其它组织的更高水平表达CD79b的正常和/或癌性组织，例如B细胞和/或B细胞相关组织。
在一个实施方案中，提供了在诊断或检测方法中使用的抗CD79b抗体。在又一方面，提供了检测生物学样品中CD79b的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在容许抗CD79b抗体结合CD79b的条件下使生物学样品与抗CD79b抗体接触，如本文中所描述的，并检测是否在抗CD79b抗体与CD79b间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中，使用抗CD79b抗体来选择适合用抗CD79b抗体治疗的受试者，例如其中CD79b是一种用于选择患者的生物标志。
可以使用本发明抗体诊断的例示性细胞增殖性病症包括B细胞病症和/或B细胞增殖性病症，包括但不限于淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和套细胞淋巴瘤。
可使用某些其它方法来检测抗CD79b抗体对CD79b的结合。此类方法包括但不限于本领域公知的抗原结合测定法，诸如Western印迹，放射免疫测定法，ELISA(酶联免疫吸附测定法)，“三明治”免疫测定法，免疫沉淀测定法，荧光免疫测定法，蛋白A免疫测定法，和免疫组织化学(IHC)。
在某些实施方案中，提供了经标记的抗CD79b抗体。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光，发色，电子致密，化学发光，和放射性标记物)，及例如经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块，诸如酶或配体。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P，14C，125I，3H，和131I，荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明(rhodamine)及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶，例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2,3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化染料前体的酶诸如HRP偶联)，乳过氧化物酶，或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定的自由基，等等。
F.药物配制剂
通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或多种任选的药学可接受载剂(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))以冻干配制剂或水性溶液形式制备如本文中所描述的抗CD79b抗体的药物配制剂。一般地，药学可接受载剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure GDA0002721334960000611
Baxter International,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
例示性的冻干抗体配制剂记载于美国专利No.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些记载于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一种配制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性化合物，优选活性互补且彼此没有不利影响的。例如，除了抗CD79b抗体之外，可能还期望在一种配制剂中含有另一种抗体，例如结合CD79b多肽上不同表位的第二抗CD79b抗体，或针对一些其它靶物诸如影响特定癌生长的生长因子的抗体。或者/另外，所述组合物还可包含化疗剂、细胞毒剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂和/或心脏保护剂。合适的是，此类分子以对于预定目的有效的量组合存在。
活性成分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980)。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。
用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。
G.治疗方法和组合物
可以在治疗方法中使用本文中提供的任何抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)。
一方面，提供了抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)，其用于作为药物使用。在又一些方面，提供了抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3TDB抗体)，其用于在治疗细胞增殖性病症(例如癌症和/或B细胞增殖性疾病)或延迟细胞增殖性病症(例如癌症和/或B细胞增殖性疾病)进展中使用。在某些实施方案中，提供了抗CD79b抗体(例如抗CD79b/抗CD3双特异性抗体)，其用于在治疗方法中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)，其用于在治疗具有细胞增殖性病症的个体的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。在又一个实施方案中，本发明提供抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)，其用于在在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)，其用于在在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+ T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶B细胞)。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体))在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症和/或B细胞增殖性病症)。在又一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症的方法，包括对具有细胞增殖性病症的个体施用有效量的该药物。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。在又一个实施方案中，该药物用于在该个体中激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+ T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶B细胞)。在又一个实施方案中，该药物用于在具有细胞增殖性病症或自身免疫性病症的个体中增强免疫功能的方法，包括对该个体施用有效量的该药物以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+ T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶B细胞)。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供一种用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症和/或B细胞增殖性病症)的方法。在一个实施方案中，该方法包括对具有此类细胞增殖性病症的个体施用有效量的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供一种用于在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法。在一个实施方案中，该方法包括对该个体施用有效量的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+ T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶B细胞)。在一个实施方案中，“个体”为人。
可以在例如体外，离体，和体内治疗方法中使用本发明的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)。一方面，本发明提供在体内或在体外用于抑制细胞生长或增殖的方法，该方法包括在允许结合至CD79b的条件下将细胞暴露于抗CD79b抗体。“抑制细胞生长或增殖”表示将细胞的生长或增殖降低至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，或100％，而且包括诱导细胞死亡。在某些实施方案中，该细胞为肿瘤细胞。在某些实施方案中，该细胞为B细胞。在某些实施方案中，该细胞为异种移植物，例如如本文中例示的。
一方面，使用本发明的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)来治疗或预防B细胞增殖性病症。在某些实施方案中，该细胞增殖性病症与升高的CD79b表达和/或活性有关。例如，在某些实施方案中，该B细胞增殖性病症与B细胞表面上升高的CD79b表达有关。在某些实施方案中，该B细胞增殖性病症为肿瘤或癌症。要通过本发明的抗体来治疗的B细胞增殖性病症的例子包括但不限于淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和套细胞淋巴瘤。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b免疫缀合物(例如抗CD79b-MMAE免疫缀合物)治疗有抗性。
又一方面，本发明提供药物配制剂，其包含本文中提供的任何抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)，例如用于任何上述治疗方法。在一个实施方案中，药物配制剂包含本文中提供的任何抗CD79b抗体和药学可接受载剂。在另一个实施方案中，药物配制剂包含本文中提供的任何抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)和至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。
在一个实施方案中，B细胞增殖性病症包括但不限于淋巴瘤(例如B细胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL))和淋巴细胞性白血病。此类淋巴瘤和淋巴细胞性白血病包括例如a)滤泡性淋巴瘤，b)小无核裂细胞淋巴瘤(Small Non-Cleaved Cell Lymphoma)/伯基特(Burkitt)氏淋巴瘤(包括地方性伯基特氏淋巴瘤，散发性伯基特氏淋巴瘤和非伯基特氏淋巴瘤)，c)边缘区淋巴瘤(包括结外边缘区B细胞淋巴瘤(粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，MALT)，结边缘区B细胞淋巴瘤和脾边缘区淋巴瘤)，d)套细胞淋巴瘤(MCL)，e)大细胞淋巴瘤(包括B细胞弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)，弥漫性混合细胞淋巴瘤，免疫母细胞性淋巴瘤，原发性纵隔B细胞淋巴瘤，血管中心性淋巴瘤-肺B细胞淋巴瘤)，f)毛细胞白血病，g)淋巴细胞性淋巴瘤，瓦尔登斯特伦(waldenstrom)氏巨球蛋白血症，h)急性淋巴细胞性白血病(ALL)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)，B细胞幼淋巴细胞白血病，i)浆细胞赘生物，浆细胞骨髓瘤，多发性骨髓瘤，浆细胞瘤，和/或j)霍奇金氏病。
在任何方法的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症是癌症。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症是淋巴瘤，非霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，或套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症是NHL，诸如无痛性NHL和/或攻击性NHL。在一些实施方案中，该B细胞增殖性病症是无痛性滤泡性淋巴瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b免疫缀合物(例如抗CD79b-MMAE免疫缀合物)治疗有抗性。
可以在疗法中单独或与其它药剂组合使用本发明的抗体。例如，可以与至少一种另外的治疗剂和/或佐剂共施用本发明的抗体。在某些实施方案中，另外的治疗剂为细胞毒剂，化疗剂，或生长抑制剂。在一个此类实施方案中，化疗剂是一种药剂或药剂组合，诸如例如环磷酰胺，羟基柔红霉素，阿霉素，多柔比星，长春新碱(ONCOVINTM)，泼尼松龙，CHOP，CHP，CVP，或COP，或免疫治疗剂诸如抗CD20(例如
Figure GDA0002721334960000651
)或抗VEGF(例如
Figure GDA0002721334960000652
)，其中该组合疗法在治疗癌症和/或B细胞病症诸如B细胞增殖性病症，包括淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，攻击性NHL，复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，顽固性NHL，顽固性无痛性NHL，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，小淋巴细胞性淋巴瘤，白血病，毛细胞白血病(HCL)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)，和套细胞淋巴瘤中是有用的。在其它实施方案中，例如，本发明的抗体可以与至少一种另外的治疗剂共施用。在某些实施方案中，另外的治疗剂为化疗剂，生长抑制剂，细胞毒剂，放射疗法中使用的药剂，抗血管发生剂，凋亡剂，抗微管蛋白剂，或其它药剂，诸如表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)，HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(TarcevaTM)，血小板衍生生长因子抑制剂(例如GleevecTM(ImatinibMesylate))，COX-2抑制剂(例如塞来考昔)，干扰素，细胞因子，除本发明的抗CD3抗体以外的抗体，诸如结合ErbB2，ErbB3，ErbB4，PDGFR-β，BlyS，APRIL，BCMA VEGF，或VEGF受体中的一种或多种靶物的抗体，TRAIL/Apo2，或其它生物活性和有机化学剂。
在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括另外的疗法。所述另外的疗法可以为放射疗法、手术、化学疗法、基因疗法，DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法(nanotherapy)，单克隆抗体疗法，或前述疗法的组合。所述另外的疗法可以为辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用副作用限制剂(例如意图减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法。在一些实施方案中，所述另外的疗法为手术。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，所述另外的疗法为γ照射。在一些实施方案中，所述另外的疗法可以为分开施用一种或多种上文所述治疗剂。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的治疗剂为糖皮质激素。在一些实施方案中，该糖皮质激素选自由地塞米松，氢化可的松，可的松，泼尼松龙，泼尼松，甲泼尼松，曲安西龙，帕拉米松，倍他米松，氟氢可的松，及其药学可接受酯，盐，和复合物组成的组。在一些实施方案中，该糖皮质激素为地塞米松。在一些实施方案中，该糖皮质激素为地塞米松的药学可接受酯，盐，或复合物。在一些实施方案中，该糖皮质激素为地塞米松。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含抗CD20抗体。在一些实施方案中，该抗CD20抗体为利妥昔单抗。在一些实施方案中，该抗CD20抗体为人源化B-Ly1抗体。在一些实施方案中，该人源化B-Ly1抗体为奥滨尤妥珠单抗(obinituzumab)。在一些实施方案中，该抗CD20抗体为ofatumumab，ublituximab，和/或ibritumomab tiuxetan。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含烷化剂。在一些实施方案中，该烷化剂为4-[5-[二(2-氯乙基)氨基]-1-甲基苯并咪唑-2-基]丁酸及其盐。在一些实施方案中，该烷化剂为苯达莫司汀。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含BCL-2抑制剂。在一些实施方案中，该BCL-2抑制剂为4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基环己-1-烯-1-基]甲基}哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺及其盐。在一些实施方案中，该BCL-2抑制剂为venetoclax(CAS#：1257044-40-8)。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，该PI3K抑制剂抑制δ同等型的PI3K(即P110δ)。在一些实施方案中，该PI3K抑制剂为5-氟-3-苯基-2-[(1S)-1-(7H-嘌呤-6-基氨基)丙基]-4(3H)-喹唑啉酮及其盐。在一些实施方案中，该PI3K抑制剂为idelalisib(CAS#：870281-82-6)。在一些实施方案中，该PI3K抑制剂抑制α和δ同等型的PI3K。在一些实施方案中，该PI3K抑制剂为2-{3-[2-(1-异丙基-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮杂环庚-9-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺及其盐。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含Bruton氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂。在一些实施方案中，该BTK抑制剂为1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮及其盐。在一些实施方案中，该BTK抑制剂为依鲁替尼(ibrutinib)(CAS#：936563-96-1)。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含沙利度胺或其衍生物。在一些实施方案中，该沙利度胺或其衍生物为(RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮及其盐。在一些实施方案中，该沙利度胺或其衍生物为来那度胺(lendalidomide,lenalidomide)(CAS#：191732-72-6)。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，或泼尼松龙(CHOP)中的一种或多种。在一些实施方案中，该另外的疗法进一步包括如上文描述的抗CD20抗体(例如GA-101和/或Rituxan)。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含环磷酰胺，多柔比星，或泼尼松龙(CHP)中的一种或多种。在一些实施方案中，该另外的疗法进一步包括如上文描述的抗CD20抗体(例如GA-101和/或Rituxan)。在一些实施方案中，该另外的疗法进一步包括抗CD79b抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体-药物缀合物为抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体-药物缀合物如U.S.8,088,378和/或US2014/0030280中任一描述的，据此通过援引将它们完整收录。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体-药物缀合物为polatuzumab vedotin。在该B细胞增殖性病症任一的一些实施方案中，该B细胞增殖性病症对抗CD79b抗体-药物缀合物(例如抗CD79b MMAE抗体-药物缀合物)治疗有抗性。在一些实施方案中，该抗CD79b抗体-药物缀合物为polatuzumab vedotin。
在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含PD-1轴结合拮抗剂。在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含PD-1结合拮抗剂。在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含PD-L1结合拮抗剂。在该方法任一的一些实施方案中，该另外的疗法包含PD-L2结合拮抗剂。
在任何方法的一些实施方案中，可以通过任何合适的手段(包括胃肠外，肺内，和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，损伤内施用)来施用本发明抗体(和任何别的治疗剂)。胃肠外输注包括肌肉内，静脉内，动脉内，腹膜内，或皮下施用。部分根据施用是短暂的还是长期的，剂量给药可以通过任何合适的路径(例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射)来进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用，推注施用，和脉冲输注。在一些实施方案中，施用是皮下的。
本发明抗体会以一种符合优秀的医学实践的方式配制，定剂量和施用。在此背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症，所治疗的特定哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂投递部位，施用方法，施用日程表及医学从业人员知道的其它因素。抗体无需但任选与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论病症的药剂一起配制。此类其它药物的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量，病症或治疗的类型，及上文所述其它因素。这些通常以本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以约1-99％的本文所述剂量使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本发明抗体(当单独或与一种或多种其它别的治疗剂组合使用时)的适宜剂量会取决于要治疗的疾病的类型，抗体的类型，疾病的严重性和病程，施用抗体是预防还是治疗目的，之前的疗法，患者的临床史和对抗体的响应，及主治医师的斟酌。抗体适合于在一次或一系列的治疗中施用于患者。
作为一般建议，施用于人的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)的治疗有效量会在约0.01至约100mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，所使用的抗体为例如每天施用约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg。在一个实施方案中，在21天周期的第1天以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg或约1400mg的剂量将本文中描述的抗CD79b抗体(例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)施用于人。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。对于几天或更长时间上的重复施用，根据状况，治疗通常会持续直至疾病症状发生期望的阻抑。抗体的一种例示性剂量会在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围中。如此，可以将一剂或多剂约0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg，或10mg/kg(或其任意组合)施用于患者。此类剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20剂，或例如约6剂抗CD79b抗体，例如抗CD79b/CD3 TDB抗体)。可以施用较高的初始加载剂，接着是较低的一或多剂。此疗法的进展易于通过常规技术和测定法来监测。
H.制品
在本发明的另一个方面，提供了一种制品，其含有可用于治疗，预防和/或诊断上文描述的病症的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断状况的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外，制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器，其中组合物包含本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页，其指示可以使用组合物来治疗特定的状况。或者/另外，制品或试剂盒可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学可接受缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。
应当理解，任何上述制品可包括本发明的免疫缀合物来代替或补充抗CD79b抗体。
III.实施例
下面是本发明的方法和组合物的实施例。理解的是，鉴于上文提供的一般性描述，可以实施各种其它实施方案。
实施例1
材料和方法
A.单克隆抗体生成
通过将表达带Fc标签的或带His标签的人CD79b胞外域(ECD)的载体瞬时转染入CHO细胞来生成用于免疫接种小鼠的蛋白质。在蛋白A柱上自经转染细胞上清液纯化蛋白质，并通过N端测序确认蛋白质的身份。用重组的带Fc标签的或带His标签的人CD79b ECD超免疫接种10只Balb/c小鼠(Charles River Laboratories，Hollister，Calif.)。如先前描述的(Hongo,J.S.et al.,Hybridoma,14:253-260(1995)；Kohler,G.et al.,Nature,256:495-497(1975)；Freund,Y.R.et al.,J.Immunol.,129:2826-2830(1982))将来自通过直接ELISA展现针对人CD79b免疫原且特异性结合Ramos细胞的高抗体滴度的小鼠的B细胞与小鼠骨髓瘤细胞(X63.Ag8.653；美国典型培养物保藏中心，Rockville，Md.)融合。10至12天后，收获上清液并如上文指出的通过直接ELISA和FACS筛选抗体生成和结合。扩充并培养第二轮通过有限稀释进行的亚克隆后显示最高免疫结合的阳性克隆，用于进一步表征，包括人CD79b特异性和交叉反应性。如先前描述的(Hongo,J.S.et al.,Hybridoma,14:253-260(1995)；Kohler,G.et al.,Nature,256:495-497(1975)；Freund,Y.R.et al.,J.Immunol.,129:2826-2830(1982))通过亲和层析(Pharmacia快速蛋白质液体层析(FPLC)；Pharmacia，Uppsala，Sweden)纯化自每个杂交瘤谱系收获的上清液。然后将经过纯化的抗体制备物无菌过滤(0.2-Φm孔径；Nalgene，Rochester N.Y.)，并在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中保存于4℃。
B.TDB的生成
如先前描述的(Atwell et al.J.Mol.Biol.270:26-35,1997)，作为人IgG1以节-入-穴形式作为全长抗体生成TDB抗体。在大肠杆菌或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞任一中表达半抗体，通过蛋白A亲和层析纯化，并如先前描述的(Spiess et al.Nat.Biotechnol.2013)在体外将正确的半抗体对退火。如果在CHO细胞中进行TDB抗体生成的话，抗体可包括无糖基化突变，例如在残基N297处(例如N297G)，使得TDB抗体为效应器降低性变体且不能启动抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
退火后，通过疏水相互作用层析(HIC)纯化抗CD79b/CD3 TDB抗体，并通过分析性凝胶过滤，质谱术，和聚丙烯酰胺凝胶电泳表征。经过纯化的抗体在凝胶过滤中作为单峰(>99％的信号)运行，聚集体少于0.2％。通过质谱术没有检测到同二聚体。
C.结合亲和力
通过Biacore或FACS分析测试每种CD3/CD79b TDB的结合亲和力。简言之，对于Biacore结合测定法，使用来自Biacore的胺偶联试剂盒在Biacore S系列CM5传感器芯片上固定化人CD3γε，而抗CD79b/CD3 TDB抗体或其Fab变体在流穿液中。对于FACS结合测定法，将BJAB细胞(用于B细胞抗原)或规定的其它细胞系与多种浓度的TDB抗体一起于4℃温育30分钟，然后清洗细胞，并与二抗(抗huIgG-PE；BD Bioscience)一起温育另15分钟，之后再次清洗细胞，准备好FACS分析。
D.体外B细胞杀伤和T细胞激活测定法
对所生成的抗CD79b/CD3 TDB抗体测试它们支持B细胞杀伤和激活细胞毒性T细胞的能力。在这些测定法中，通过Ficoll分离自健康供体的全血分离PBMC。简言之，在肝素化注射器中收集人血液，并如制造商推荐的使用Leucosep(Greiner Bio-one，产品目录号227290P)和Ficoll Paque Plus(GE Healthcare Biosciences，产品目录号95038-168)分离PBMC。在需要时依照制造商的说明书使用Miltenyi试剂盒分离CD4+T和CD8+T细胞。
在含有10％FBS，补充有GlutaMax(Gibco，产品目录号35050-061)，青霉素和链霉素(Gibco，产品目录号15140-122)的RPMI培养基中清洗细胞，并将约0.2x106个悬浮细胞添加至96孔U底板。在增湿标准细胞培养温箱中在补充有10％FBS(Sigma-Aldrich)的RPMI1640中于37℃培养细胞。对于BJAB细胞杀伤测定法，以遵照测定法的指定比率将20,000个BJAB细胞与效应细胞(huPBMC或经过纯化的T细胞任一)一起在多种浓度的TDB抗体存在下温育24小时，除非另有规定。对于内源B细胞杀伤测定法，将200,000个huPBMC与多种浓度的抗CD79b/CD3 TDB抗体一起温育24小时，除非另有规定。
培养后，用FACS缓冲液(0.5％BSA，0.05％叠氮化钠，PBS中)清洗细胞。然后在FACS缓冲液中对细胞染色，用FACS缓冲液清洗，并在100ul含有1ug/ml碘化丙啶的FACS缓冲液中悬浮。在FACSCalibur流式细胞仪上收集数据，并使用FlowJo分析。通过FACS作为PI-CD19+或PI-CD20+B细胞设门选出活的B细胞，并用添加至反应混合物的FITC珠获得绝对细胞计数，作为内部计数对照。基于非TDB处理对照计算％细胞杀伤。使用抗CD69-FITC(BD，产品目录号555530)和抗CD25-PE(BD，产品目录号555432)通过CD69和CD25表面表达检测激活的T细胞。
D.体内功效
对50只SCID.bg小鼠在单侧右胸中皮下接种每只小鼠0.2mL体积(不超过200ul)中HBSS中5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1细胞或0.2ml体积(不超过200ul)中HBSS中5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1细胞和10x106个PBMC的混合物。这是一项预防性研究，所以在第0天施用接种和处理。
有五个研究组：1)5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1，媒介，qwx2，IV；2)5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1，0.5mg/kg抗CD79TDB，qwx2，IV；3)5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1+10x106个PBMC(预混合的)，媒介，qwx2，IV；4)5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1+10x106个PBMC(预混合的)，0.5mg/kg抗CD79TDB(CD79b.A7.v14b/38E4v1)，qwx2，IV；和5)5x106个BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性模型T1.1X1，8mg/kg BJAB-luc抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE，一次，IV。PBMC来自供体血沉棕黄层，在非激活条件中培养过夜，作为与BJAB细胞的混合物接种。对尾静脉静脉内施用所有处理，体积＝0.1ml(不超过200ul)。每周1-2次测量肿瘤。每周1-2次测量体重，直至最后一次处理后14天。
1.CD79b TDB-抗CD79b抗原臂的选择
已经生成了抗体-药物缀合物(ADC)(诸如人源化抗CD79b抗体(人源化SN8)通过蛋白酶可切割接头缀合至单甲基奥瑞司他汀E(MMAE))，它已经显示出对于NHL治疗是临床上有效的。参见美国专利No.8,088,378和Morschhauser et al.,“4457 Updated Results ofa Phase II Randomized Study(ROMULUS)of Polatuzumab Vedotin or PinatuzumabVedotin Plus Rituximab in Patients with Relapsed/Refractory Non-HodgkinLymphoma”56th ASH Annual Meeting and Exposition:December 6-9,2014。
基于抗CD79b ADC的临床成功，人源化SN8抗体处于T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体型式以利用T细胞在根除肿瘤细胞中的高细胞毒性潜力。参见美国专利No.8,088,378，据此通过援引将其完整收录。如上文描述的生成了抗CD3(例如UCHT1.v9；参见例如Zhu etal.Int.J.Cancer 62:319-324(1995))/抗CD79b(例如SN8.v28)双特异性节和穴(K&H)。然而，在如上文描述的使用两名不同供体的内源B细胞杀伤测定法中，对UCHT1.v9/SN8.v28双特异性K&H观察到较差的B细胞杀伤活性：EC50为357ng/mL和120ng/mL，细胞杀伤测定法。
使用2F2作为抗CD79b抗体臂生成了第二种抗CD3(例如UCHT1.v9)/抗CD79b TDB。2F2已经在体外显示作为抗CD79b ADC的希望。参见例如US20090068202，通过援引完整收录。另外，修饰CD79b臂抗体SN8.v28以试图改善细胞杀伤(SN8.new(VH SEQ ID NO:37和VLSEQ ID NO:38))。如图1A(内源B细胞杀伤测定法)和图1B(BJAB细胞杀伤测定法)中显示的，SN8.v28/UCHT1.v9双特异性K&H抗体，SN8.new/UCHT1.v9双特异性K&H抗体，以及2F2/UCHT1.v9双特异性K&H抗体导致较差的B细胞杀伤活性。
如上文描述的生成单克隆抗CD79b抗体。还作为双特异性bisfab型式抗CD79b/CD3抗体测试这些抗CD79b抗体中的两种(CD79b.F6和CD79b.A7)。如图1C中显示的，在内源B细胞杀伤测定法中，CD79b.F6/UCHT1.v9双特异性bisfab展示与SN8.v28/UCHT1.v9双特异性K&H相比改良的B细胞杀伤(EC50为33ng/mL，与189ng/mL比较)。进一步地，如图1C中显示的，在内源B细胞杀伤测定法中，双特异性bisfab CD79b.A7/UHT1.v9与双特异性bisfabCD79b.F6/UCHT1.v9或SN8.v28/UCHT1.v9双特异性K&H任一相比显著改善B细胞杀伤(EC50为12ng/mL，与33ng/mL和189ng/mL比较)。使用另外的供体，对双特异性bisfab CD79b.A7/UHT1.v9进一步测试内源B细胞杀伤和CD8+ T细胞激活。如图2A和C中显示的，在如上文描述的内源B细胞杀伤测定法中，双特异性bisfab CD79b.A7/UHT1.v9使用两名不同供体导致有效的B细胞杀伤，EC50分别为7.0ng/mL和18ng/mL。同时，如图2B和D中显示的，在如上文描述的CD8+ T细胞激活测定法中，双特异性bisfab CD79b.A7/UHT1.v9导致有效的T细胞激活，表现为CD8+ T细胞中CD69+CD25+ T细胞的％，EC50分别为17ng/mL和17ng/mL。
为了更好地了解抗CD79b/CD3 TDB抗体中不同抗CD79b抗原臂的B细胞杀伤和T细胞激活中的差异，分析不同抗CD79b抗原臂的特性。FACS测定法中CD79b.A7对BJAB细胞的结合受到对应于huCD79b NH2端的21个氨基酸的肽ARSEDRYRNPKGSACSRIWQS(SEQ ID NO:63)竞争，但是对应于cynoCD79b NH2端的21个氨基酸的肽AKSEDLYPNPKGSACSRIWQS(SEQ IDNO:64)不然(数据未显示)。这与Zheng et al.Mol.Cancer Ther.8(10):2937-2947(2009)中描述的2F2和SN8的结果相似。因此，CD79b上的表位看来不说明SN8.v28/UCHT1.v9，2F2/UCHT1.v9，和CD79.A7之间B细胞杀伤和T细胞激活中的差异。
还评估单价和二价抗CD79b抗体结合亲和力以更好地了解对B细胞杀伤活性的贡献，如果有的话。还使用BJAB细胞分析双臂，二价抗CD79b抗体和双特异性抗CD79b/CD3抗体的结合亲和力。初始实验指示双臂，二价抗CD79b抗体SN8.v28对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计为0.04μg/mL，而抗CD79b/CD3双特异性K&H(SN8.v28/UCHT1.v9)对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计为只有3.7μg/mL。类似地，如图3A中显示的，双臂，二价抗CD79b抗体2F2对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计显著高于抗CD79b/CD3双特异性K&H(SN8.v28/UCHT1.v9，SN8new/UCHT1.v9，和2F2/UCHT.v9)。以双臂，二价抗CD79b抗体型式以及bisfab和K&H双特异性抗CD79b/CD3抗体测试另外的抗CD79抗体(CD79b.F6和CD79b.A7)的结合亲和力。如图3B中显示的，双臂，二价抗CD79b抗体CD79.A7对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计为0.31μg/mL。双特异性bisfab抗CD79b/CD3(CD79b.A7/UCHT1.v9)对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计低于双臂，二价抗CD79b抗体CD79.A7，但是仍然相对较高，为1.4μg/mL。双臂，二价抗CD79b抗体CD79b.F6和K&H和bisfab双特异性抗CD79b/CD3抗体(分别为SN8.v28/UCHT1.v9和CD79b.F6/CHT1.v9)对BJAB细胞的结合亲和力以EC50计显著更低。基于这些数据，将单价结合亲和力与内源B细胞消减程度和％B细胞杀伤关联。
2.抗CD79b抗原臂的人源化
如上文描述的人源化单克隆抗体CD79b.A7。残基编号依照Kabat et al.,Sequences of proteins of immunological interest,5th Ed.,Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)。
以IgG的形式评估CD79b.A7人源化期间构建的变体。比对来自鼠CD79b.A7的VL和VH域与人VL卡帕II(VLK2)和人VH亚组I(VHI)共有序列。将来自鼠抗体的高变区工程化改造入VLK2和VHI受体框架。具体而言，将来自muCD79b.A7域的位置24-34(L1)，50-56(L2)和89-97(L3)嫁接入VLK2并将来自muCD79b.A7VH域的位置26-35(H1)，50-65(H2)和93-102(H3)嫁接入VHI。
通过BIAcoreTM T100测定这一节中的抗体的结合亲和力。简言之，依照供应商的说明书用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)试剂活化BIAcoreTM科研级CM5芯片。将C端融合有Fc域的人CD79a偶联至芯片。为了实现更多单价结合事件，在每个流动室中固定化约12个响应单位(RU)的低密度。为了测量抗体的表观亲和力，固定化约370RU抗原。用1M乙醇胺封闭未反应的偶联基团。为了动力学测量，于25℃以流速30μl/min注入在PBS-T缓冲液(含0.05％表面活性剂P20的PBS)中三倍连续稀释的抗体。以30ul/min流速使用10mM甘氨酸，pH 1.7作为再生缓冲液达1分钟。使用一对一Langmuir结合模型(BIAcoreTM T100Evaluation Software version 2.0)计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。以比率koff/kon计算平衡解离常数(Kd)。
CD79b.A7(CD79b.A7.v1)的人源化CDR嫁接物不结合CD79b。如此，生成另外的人源化变体以评估小鼠框架游标位置对结合的贡献。构建并组合另外六种轻链(VL1：CDR嫁接物+(Y36L)，VL2：CDR嫁接物+(Y36L+L46C)，VL3：CDR嫁接物+(I2V+Y36L+L46C)，VL4：CDR嫁接物+(Y36L+L46S)，VL5：CDR嫁接物+(I2V+Y36L+L46S)，VL6：CDR嫁接物+(L46S))和另外七种重链(VH1a：CDR嫁接物+(A93S)，VH1b：CDR嫁接物+(R71V+A93S)，VH1c：CDR嫁接物+(V67A+I69L+R71V+A93S)，VH1d:CDR嫁接物+(V67A+I69L+R71V+T73K+A93S)，VH1e：CDR嫁接物+(V67A+R71V+A93S)，VH1f：CDR嫁接物+(I69L+R71V+A93S)，和VH1g：CDR嫁接物+(V67A+I69L))以生成表2中的变体。基于这些变体的亲和力，轻链中的Y36L和L46C看来是关键小鼠游标残基。令人惊讶的是，当位置46变成丝氨酸以避免使用游离半胱氨酸时，具有这种变化的变体的亲和力显著改善。在重链中，V67A，I69L，R71V和A93S也对CD79b结合有贡献；然而，基于这项突变分析，R71V看来是关键小鼠游标残基。表2中的亲和力均为表观亲和力，基于二价IgG对以低密度固定化以近似单价结合的CD79b的结合。见下文表2。
表2
Figure GDA0002721334960000761
Figure GDA0002721334960000771
通过FACS分析进一步测试结合亲和力，将BJAB细胞与各种抗CD79b抗体一起在冰上温育30分钟。在温育结束时，用冰冷的FACS缓冲液(1x PBS，2％BSA，2mM EDTA)清洗细胞，接着与PE标记的小鼠抗人IgG抗体(BD bioscience#555787)一起温育。在BD LSR分析仪上进行流式细胞术分析。二价结合表述为PE荧光团的均值荧光强度(MFI)。chCD79b.A7，huCD79b.A7.v12和huCD79b.A7.v14对BJAB-萤光素酶细胞的结合的EC50分别为124ng/mL，400ng/mL，和68ng/mL。
如上文描述的测试单价和二价人源化CD79.A7.v14的结合亲和力。如图3C中显示的，单价CD79.A7.v14(K&H TDB型式CD79.A7.v14/40G5c)具有220ng/ml的EC50，而二价，双臂CD79A7.v14具有46.8ng/ml的EC50。
在热应力(40℃，pH 5.5，2周)和盐酸2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)(AAPH)分析下测试人源化抗体CD79.A7.v14。对样品施加热应力以模拟产品保存期(shelf life)后的稳定性。将样品交换缓冲液入20mM组氨酸-乙酸，240mM蔗糖，pH 5.5，并稀释至1mg/mL的浓度。对1mL样品施加应力，40℃，2周，并将第二份保存于-70℃作为对照。然后使用胰蛋白酶消化这两份样品以创建能使用液相层析(LC)–质谱术(MS)分析来分析的肽。对于样品中的每种肽，自LC获取保留时间，以及在MS中获取高分辨率精确质量和肽离子片段化信息(氨基酸序列信息)。以+-10ppm的窗口自数据集为感兴趣肽(天然和经修饰肽离子)取得提取离子层析图(XIC)，并对峰积分以确定面积。通过将(经修饰肽的面积)除以(经修饰肽的面积加上天然肽的面积)乘以100，为每份样品计算修饰的相对百分比。
CD79b.A7.v14的CDR-H1中的W33和CDR-H2中的M62显示出对氧化易感(W33氧化提高73.7％，而M62氧化提高64.8％)。测试CD79b.A7.v14抗体的变体以测定是否能在不影响对huCD79b的结合情况下降低潜在氧化。通过改变这些区域以匹配人VH1共有(W33Y，M62K，K64Q和D65G)，变体CD79b.A7.v14b消除了这些潜在氧化问题。这些变化不改变CD79b结合的亲和力。数据未显示。
3.CD79b TDB-抗CD3抗原臂的选择
分析CD3结合域配对抗CD79b TDB抗体B细胞杀伤效率的影响。与不同抗CD3抗体结合域(包括40G5c和38E4v1)组合测试抗CD79b.A7.v14抗体。将200,000PBMC在有或无抗CD79b/CD3 TDB抗体的情况下温育48小时。图5A中的B细胞杀伤百分比是如下计算的：(无TDB的情况下活的B细胞数目–有TDB的情况下活的B细胞)/(无TDB的情况下活的B细胞数目)*100。如图5B中显示的T细胞激活是通过对CD8+ T细胞群体中的CD69+/CD25+细胞设门来测量的。如图5A和B中显示的，K&H CD79b.A7.v14/40G5c显示较差的CD8+ T激活和较低的内源B细胞杀伤百分比。在另外的实验中(数据未显示)，抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14/40G5c K&H)显示CD8+ T激活的EC50为1.1和2.3ng/mL，而内源B细胞杀伤的EC50为2658和288ng/mL，使用两名不同供体。与之对比，如图5A和B中显示的，抗CD79b/CD3TDB抗体(CD79b.A7.v14/38E4v1 K&H)显示与CD79b.A7.v14/40G5c K&H相比实质性改善的CD8+ T细胞激活和内源B细胞杀伤百分比-内源B细胞杀伤的EC50为15ng/mL。在另外的实验中(数据未显示)，抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14/40G5c K&H)显示内源B细胞杀伤的EC50为401，14，1.5，10，12，和16ng/mL，使用六名不同供体。
还如上文和图6图例中描述的在BJAB和WSU-DLCL2细胞系中测试抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14/40G5c K&H)的B细胞杀伤和T细胞激活活性。如图6A和B中显示的，抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14/40G5c K&H)显示显著的CD8+ T激活和B细胞杀伤百分比-BJAB B细胞杀伤的EC50为85ng/mL，而WSU-DLCL2 B细胞杀伤的EC50为82ng/mL。BJAB和WSU-DLCL2 B细胞的CD8+ T细胞激活的EC50分别为18和39ng/mL。
如图7A-B中描述的在多种细胞系中测试抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/40G5c K&H)的B细胞杀伤活性。HT细胞系是一种非CD79b表达性细胞。B细胞杀伤百分比是如下计算的：(无TDB的情况下活的B细胞数目–有TDB的情况下活的B细胞数目)/(无TDB的情况下活的B细胞数目)*100。如图7A中显示的，在BJAB，WSU-DLCL2，和OCI-LY-19细胞的B细胞杀伤的剂量-响应曲线中，OCI-Ly-19，BJAB，和WSU-DLCL2 B细胞杀伤的EC50分别为8.87，2.63，和17.41ng/mL。图7B显示5000ng/ml抗CD79/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1 K&H)在多种细胞系间显著的B细胞杀伤(一式两份，平均值±STD)。
所生成的具有针对CD3和CD79b的双特异性的TDB抗体的不同功效强调两种抗体臂在生成拥有高功效的例示性TDB中至关重要且无法预测的贡献。
4.在抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性B细胞中的体外和体内功效
还在抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性B细胞中测试抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1)的体外和体内B细胞杀伤活性。在抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性B细胞处理小鼠中自非响应性BJAB异种移植物肿瘤衍生BJAB细胞变体(BJAB-CD79b ADC-RT1.1和BJAB-SN8v28vcE CD79b ADC-R T1.2)。如图8A中显示的，抗CD79b/CD3 TDB(CD79b.A7.v14b/38E4v1)在BJAB以及体外抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性BJAB细胞细胞杀伤中非常有效。进一步地，如图8B中显示的，抗CD79b/CD3 TDB抗体(CD79b.A7.v14b/38E4v1)在体内阻止抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE抗性BJAB肿瘤生长。
尽管为了清楚理解的目的已经通过举例说明的方式较为详细地描述了上述发明，说明书和实施例不应解释为限制发明范围。通过述及明确收录本文中引用的所有专利和科学文献的完整公开内容。
Figure GDA0002721334960000791
Figure GDA0002721334960000801
Figure GDA0002721334960000811
Figure GDA0002721334960000821
序列表
<110> 基因泰克公司（GENENTECH, INC.）等
<120> 抗CD79b抗体和使用方法
<130> P32464-WO
<140>
<141>
<150> 62/088,487
<151> 2014-12-05
<160> 64
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 179
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr Val Lys Met His Cys Tyr
1 5 10 15
Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser Trp Leu Trp Lys Gln Glu Met
20 25 30
Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys Leu Glu Lys Gly Arg Met Glu Glu
35 40 45
Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala Thr Leu Thr Ile Gln Gly Ile Arg Phe
50 55 60
Glu Asp Asn Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Lys Cys Asn Asn Thr Ser
65 70 75 80
Glu Val Tyr Gln Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser
85 90 95
Thr Leu Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile
100 105 110
Met Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe
115 120 125
Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu Asp His
130 135 140
Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu Asp Ile
145 150 155 160
Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly Glu His Pro
165 170 175
Gly Gln Glu
<210> 2
<211> 201
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 2
Ala Arg Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser
1 5 10 15
Arg Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr
20 25 30
Val Lys Met His Cys Tyr Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser Trp
35 40 45
Leu Trp Lys Gln Glu Met Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys Leu Glu
50 55 60
Lys Gly Arg Met Glu Glu Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Gln Gly Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
Lys Cys Asn Asn Thr Ser Glu Val Tyr Gln Gly Cys Gly Thr Glu Leu
100 105 110
Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr
115 120 125
Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe
130 135 140
Ile Ile Val Pro Ile Phe Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala
145 150 155 160
Gly Met Glu Glu Asp His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr
165 170 175
Ala Thr Tyr Glu Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp
180 185 190
Ser Val Gly Glu His Pro Gly Gln Glu
195 200
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 3
Thr Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 4
Thr Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<220>
<221> 变异
<222> (3)..(3)
<223> /替换="Tyr"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(5)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中变异位置的残基而言没有偏爱"
<400> 5
Thr Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 6
Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 7
Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<220>
<221> 变异
<222> (14)..(14)
<223> /替换="Lys"
<220>
<221> 变异
<222> (16)..(16)
<223> /替换="Gln"
<220>
<221> 变异
<222> (17)..(17)
<223> /替换="Gly"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(17)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中变异位置的残基而言没有偏爱"
<400> 8
Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 9
Ser Leu Ala Phe
1
<210> 10
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 10
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 11
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 12
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gln Thr
1 5
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala
85 90 95
Ile Gln Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Val Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ala
<210> 16
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 16
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Cys Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 18
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 19
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 20
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 21
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 22
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 22
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 23
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 24
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 24
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 25
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 26
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 26
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 27
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 28
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 28
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Met Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Ser Leu Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Ser Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 31
Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 32
Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 33
Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
1 5
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 34
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn
1 5 10 15
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 35
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Arg
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 36
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 37
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Arg Lys Leu Gly Arg Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 39
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 39
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 40
Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 41
Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 42
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 43
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 44
Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 45
Ser Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 46
Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 47
Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 48
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 49
Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser
1 5
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 50
Lys Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 51
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 52
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 53
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 53
Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 55
Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 56
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 57
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 59
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 61
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的多肽"
<400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 63
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 63
Ala Arg Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser
1 5 10 15
Arg Ile Trp Gln Ser
20
<210> 64
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的说明: 合成的肽"
<400> 64
Ala Lys Ser Glu Asp Leu Tyr Pro Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser
1 5 10 15
Arg Ile Trp Gln Ser
20

Claims (70)

1.一种分离的抗CD79b抗体，其中该抗体包含CD79b结合域，该CD79b结合域包含下述六种高变区(HVR)：
(i)
(a)如SEQ ID NO:3所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:6所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:9所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:10所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:11所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:12所列的HVR-L3，或
(ii)
(a)如SEQ ID NO:4所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:7所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:9所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:10所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:11所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:12所列的HVR-L3。
2.权利要求1的抗CD79b抗体，其中该CD79b结合域包含下述六种HVR：
(a)如SEQ ID NO:3所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:6所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:9所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:10所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:11所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:12所列的HVR-L3。
3.权利要求1的抗CD79b抗体，其中该CD79b结合域包含下述六种HVR：
(a)如SEQ ID NO:4所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:7所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:9所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:10所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:11所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:12所列的HVR-L3。
4.权利要求2的抗CD79b抗体，其包含(a) 与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(b) 与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(c) 与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(d) 与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ IDNO:26的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(e) 与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；或(f) 与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列。
5.权利要求2的抗CD79b抗体，其包含(a) SEQ ID NO:17的VH序列和SEQ ID NO:18的VL序列；(b) SEQ ID NO:21的VH序列和SEQ ID NO:22的VL序列；(c) SEQ ID NO:23的VH序列和SEQ ID NO:24的VL序列；(d) SEQ ID NO:25的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列；(e) SEQID NO:27的VH序列和SEQ ID NO:28的VL序列；或(f) SEQ ID NO:29的VH序列和SEQ ID NO:30的VL序列。
6.权利要求3的抗CD79b抗体，其包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列。
7.权利要求3的抗CD79b抗体，其包含SEQ ID NO:19的VH序列和SEQ ID NO:20的VL序列。
8.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该CD79b结合域结合SEQ ID NO:63。
9.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。
10.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为IgG抗体。
11.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为结合CD79b的抗体片段。
12.权利要求11的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体片段为Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和/或(Fab’)2片段。
13.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为全长抗体。
14.权利要求13的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体包含无糖基化位点突变。
15.权利要求14的抗CD79b抗体，其中该无糖基化位点突变为替代突变。
16.权利要求15的抗CD79b抗体，其中该替代突变在依照EU编号方式的氨基酸残基N297处。
17.权利要求16的抗CD79b抗体，其中该替代突变选自由依照EU编号方式的N297G和N297A组成的组。
18.权利要求17的抗CD79b抗体，其中该替代突变是依照EU编号方式的N297G。
19.权利要求13的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体包含降低的效应器功能。
20.权利要求14的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体包含降低的效应器功能。
21.权利要求19或20的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基L234，L235，和/或D265处包含替代突变。
22.权利要求21的抗CD79b抗体，其中该替代突变选自由依照EU编号方式的L234A，L235A，和D265A组成的组。
23.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为单特异性抗体。
24.权利要求23的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为二价，双臂抗体。
25.权利要求1-7任一项的抗CD79b抗体，其中该抗CD79b抗体为多特异性抗体。
26.权利要求25的抗CD79b抗体，其中该多特异性抗体包含CD3结合域。
27.权利要求26的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。
28.权利要求27的抗CD79b抗体，其中该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。
29.权利要求27的抗CD79b抗体，其中该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。
30.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含下述六种HVR：
(a)如SEQ ID NO:45所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:46所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:47所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:48所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:49所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:50所列的HVR-L3。
31.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列。
32.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含SEQ ID NO:59的VH序列和SEQ ID NO:60的VL序列。
33.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含下述六种HVR：
(a)如SEQ ID NO:39所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:40所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:41所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:42所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:43所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:44所列的HVR-L3。
34.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列。
35.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含SEQ ID NO:57的VH序列和SEQ ID NO:58的VL序列。
36.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含下述六种HVR：
(a)如SEQ ID NO:51所列的HVR-H1；
(b)如SEQ ID NO:52所列的HVR-H2；
(c)如SEQ ID NO:53所列的HVR-H3；
(d)如SEQ ID NO:54所列的HVR-L1；
(e)如SEQ ID NO:55所列的HVR-L2；和
(f)如SEQ ID NO:56所列的HVR-L3。
37.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列和与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列。
38.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中该CD3结合域包含SEQ ID NO:61的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
39.权利要求25的抗CD79b抗体，其中该多特异性抗体为双特异性抗体。
40.权利要求26-29任一项的抗CD79b抗体，其中(a) 该CD3结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366S，L368A，Y407V，和N297G替代突变，且(b) 该CD79b结合域包含Fc域，其中该Fc域包含依照EU编号方式的T366W和N297G替代突变。
41.一种分离的核酸，其编码权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体。
42.一种载体，其包含权利要求41的分离的核酸。
43.一种宿主细胞，其包含权利要求42的载体。
44.一种生成权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体的方法，该方法包括在培养基中培养权利要求43的宿主细胞。
45.一种免疫缀合物，其包含权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体和细胞毒剂。
46.一种药物组合物，其包含权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体。
47.权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体在制造用于治疗细胞增殖性病症或自身免疫性病症或延迟细胞增殖性病症或自身免疫性病症进展的药物中的用途。
48.权利要求1-40任一项的抗CD79b抗体在制造用于在具有细胞增殖性病症或自身免疫性病症的受试者中增强免疫功能的药物中的用途。
49.权利要求47的用途，其中该细胞增殖性病症为癌症。
50.权利要求48的用途，其中该细胞增殖性病症为癌症。
51.权利要求47的用途，其中该细胞增殖性病症为淋巴瘤。
52.权利要求51的用途，其中该细胞增殖性病症为小淋巴细胞性淋巴瘤。
53.权利要求51的用途，其中该细胞增殖性病症为套细胞淋巴瘤。
54.权利要求51的用途，其中该细胞增殖性病症为NHL。
55.权利要求54的用途，其中该细胞增殖性病症为攻击性NHL或顽固性NHL。
56.权利要求54的用途，其中该细胞增殖性病症为复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，或顽固性无痛性NHL。
57.权利要求47的用途，其中该细胞增殖性病症为白血病。
58.权利要求57的用途，其中该细胞增殖性病症为CLL，HCL，或ALL。
59.权利要求48的用途，其中该细胞增殖性病症为淋巴瘤。
60.权利要求59的用途，其中该细胞增殖性病症为小淋巴细胞性淋巴瘤。
61.权利要求59的用途，其中该细胞增殖性病症为套细胞淋巴瘤。
62.权利要求59的用途，其中该细胞增殖性病症为NHL。
63.权利要求62的用途，其中该细胞增殖性病症为攻击性NHL或顽固性NHL。
64.权利要求62的用途，其中该细胞增殖性病症为复发性攻击性NHL，复发性无痛性NHL，或顽固性无痛性NHL。
65.权利要求48的用途，其中该细胞增殖性病症为白血病。
66.权利要求65的用途，其中该细胞增殖性病症为CLL，HCL，或ALL。
67.权利要求47-66任一项的用途，其中该药物进一步包含PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。
68.权利要求47-66任一项的用途，其中该药物进一步包含糖皮质激素。
69.权利要求68的用途，其中该糖皮质激素为地塞米松(dexamethasone)。
70.权利要求47-66任一项的用途，其中该药物进一步包含利妥昔单抗(rituximab)。
CN201580061858.1A 2014-12-05 2015-12-04 抗CD79b抗体和使用方法 Expired - Fee Related CN107108739B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462088487P 2014-12-05 2014-12-05
US62/088,487 2014-12-05
PCT/US2015/063902 WO2016090210A1 (en) 2014-12-05 2015-12-04 ANTI-CD79b ANTIBODIES AND METHODS OF USE

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107108739A CN107108739A (zh) 2017-08-29
CN107108739B true CN107108739B (zh) 2022-01-04

Family

ID=55022708

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580061858.1A Expired - Fee Related CN107108739B (zh) 2014-12-05 2015-12-04 抗CD79b抗体和使用方法

Country Status (34)

Country Link
US (2) US9975949B2 (zh)
EP (1) EP3227336B1 (zh)
JP (2) JP6802158B2 (zh)
KR (1) KR20170086549A (zh)
CN (1) CN107108739B (zh)
AR (1) AR102918A1 (zh)
AU (2) AU2015358325A1 (zh)
BR (1) BR112017011326A2 (zh)
CA (1) CA2966362A1 (zh)
CL (1) CL2017001408A1 (zh)
CO (1) CO2017006740A2 (zh)
CR (1) CR20170230A (zh)
DK (1) DK3227336T3 (zh)
EA (1) EA201790984A1 (zh)
ES (1) ES2744540T3 (zh)
HK (1) HK1243102A1 (zh)
HR (1) HRP20191584T1 (zh)
HU (1) HUE045216T2 (zh)
IL (1) IL251970B (zh)
LT (1) LT3227336T (zh)
MA (1) MA40938A (zh)
MX (1) MX386587B (zh)
MY (1) MY188799A (zh)
PE (1) PE20170953A1 (zh)
PH (1) PH12017500877B1 (zh)
PL (1) PL3227336T3 (zh)
PT (1) PT3227336T (zh)
RS (1) RS59203B1 (zh)
SG (1) SG11201704449VA (zh)
SI (1) SI3227336T1 (zh)
TW (1) TWI713480B (zh)
UA (1) UA120102C2 (zh)
WO (1) WO2016090210A1 (zh)
ZA (1) ZA201703167B (zh)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009012256A1 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Genentech, Inc. Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
AR067544A1 (es) 2007-07-16 2009-10-14 Genentech Inc Anticuerpos anti- cd79b e inmunoconjugados y metodos de uso de los mismos
CN104650230A (zh) 2008-01-31 2015-05-27 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
WO2015095392A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
AR101846A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
PT3262071T (pt) * 2014-09-23 2020-06-16 H Hoffnabb La Roche Ag Métodos de utilização de imunoconjugados anti-cd79b
EP3227336B1 (en) * 2014-12-05 2019-07-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd79b antibodies and methods of use
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
CA2986928A1 (en) 2015-06-16 2016-12-22 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
CN109923128A (zh) 2016-11-15 2019-06-21 基因泰克公司 用于用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
MA51793A (fr) 2018-02-08 2020-12-16 Hoffmann La Roche Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène et procédés d'utilisation
AU2019355115A1 (en) * 2018-10-03 2021-03-04 Nepenthe Bioscience LLC Anti-CD79 antibodies and their uses
EP3873939A4 (en) * 2018-10-30 2022-12-07 Board of Regents, The University of Texas System ANTI-CD79B ANTIBODIES AND CHEMERA ANTIGEN RECEPTORS AND METHODS OF USE THEREOF
CN111116745B (zh) * 2018-11-01 2022-10-14 上海新理念生物医药科技有限公司 抗CD79b抗体、其药物偶联物及其应用
BR112021014420A2 (pt) 2019-01-28 2021-09-21 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anticorpo anti-cd79b, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e uso farmacêutico do mesmo
AU2020275415A1 (en) * 2019-05-14 2021-11-25 Genentech, Inc. Methods of using anti-CD79B immunoconjugates to treat follicular lymphoma
AU2021210079A1 (en) * 2020-01-22 2022-08-25 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Drug conjugate of Eribulin derivative, preparation method therefor and application thereof in medicine
MX2023001163A (es) * 2020-07-27 2023-02-22 Tuojie Biotech Shanghai Co Ltd Conjugado de farmaco anticuerpo anti-cd79b, metodo de preparacion y uso farmaceutico del mismo.
EP4263600A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
TW202302648A (zh) * 2021-03-12 2023-01-16 美商健生生物科技公司 Cd79b抗體於自體免疫治療應用之用途
JP2024511115A (ja) * 2021-03-24 2024-03-12 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２０、及びＣＤ３を標的とする三重特異性抗体
IL306111A (en) 2021-04-30 2023-11-01 Hoffmann La Roche Dosage for combined treatment with BISPIFIC ANTI-CD20/ANTI-CD3 antibody and anti-CD79B antibody for antiretroviral drugs
EP4382538A1 (en) * 2021-08-02 2024-06-12 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-cd79b×cd3 bispecific antibody and use thereof
US20240360233A1 (en) 2021-08-27 2024-10-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-tslpr (crlf2) antibodies
CN114891123B (zh) * 2022-06-09 2024-02-09 北京美康基免生物科技有限公司 一种基于CD79b人源化抗体的嵌合抗原受体及其应用
IL318860A (en) * 2022-08-08 2025-04-01 Atb Therapeutics Humanized antibodies against CD79B
WO2024081806A2 (en) * 2022-10-12 2024-04-18 Health Research, Inc. Heterogeneity of human cd79 and synergistic enhancement of antitumor activity by co-targeting of cd79b and cd79a in the therapy of b cell tumors
CN118271439A (zh) * 2022-12-29 2024-07-02 深圳泽安生物医药有限公司 抗CD79b抗体及其用途
WO2024145219A2 (en) * 2022-12-29 2024-07-04 Ltz Therapeutics Inc. Anti-cd79b antibodies and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009099728A1 (en) * 2008-01-31 2009-08-13 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
CN101802012A (zh) * 2007-07-16 2010-08-11 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法

Family Cites Families (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226L (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DK0463101T3 (da) 1989-03-21 1994-03-14 Immune Response Corp Inc Vaccination og fremgangsmåde mod sygdomme, som skyldes patogene reaktioner og specifikke T-cellepopulationer
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
AU652540B2 (en) 1989-07-19 1994-09-01 Xoma Corporation T cell receptor peptides as therapeutics for autoimmune and malignant disease
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
WO1998058964A1 (en) 1997-06-24 1998-12-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
CA2312208C (en) 1997-12-05 2011-01-25 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
WO1999051642A1 (en) 1998-04-02 1999-10-14 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE458007T1 (de) 1998-04-20 2010-03-15 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2015-08-31 Genentech Inc Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2275541B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2385347C (en) 1999-10-04 2009-12-15 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU767394C (en) 1999-12-29 2005-04-21 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
PL357939A1 (en) 2000-04-11 2004-08-09 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2785941C (en) 2000-10-06 2017-01-10 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
DE60131456T2 (de) 2000-11-30 2008-07-10 Medarex, Inc., Milpitas Transchromosomale transgen-nagetiere zur herstellung von humanen antikörpern
NZ581474A (en) 2001-08-03 2011-04-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
DK1443961T3 (da) 2001-10-25 2009-08-24 Genentech Inc Glycoprotein-sammensætninger
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003084570A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia
AU2003236015A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition
AU2003236017B2 (en) 2002-04-09 2009-03-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
CA2481656A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells in which activity of the protein involved in transportation of gdp-fucose is reduced or lost
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
AU2003239966B9 (en) 2002-06-03 2010-08-26 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DK1572744T3 (da) 2002-12-16 2010-09-20 Genentech Inc Immunoglobulinvarianter og deres anvendelser
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US7635472B2 (en) * 2003-05-31 2009-12-22 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
CA2542046A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Fused protein composition
CA2542125A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of .alpha.1,6-fucosyltransferase
EP2380910B1 (en) 2003-11-05 2015-09-30 Roche Glycart AG Antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
AU2004316290C1 (en) 2003-11-06 2012-02-02 Seagen Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
BRPI0508761A (pt) 2004-03-31 2007-08-14 Genentech Inc anticorpo humanizado, composição que compreende um anticorpo humanizado, ácido nucléico isolado, vetor, célula hospedeira, processo de produção de anticorpo humanizado, método de tratamento de disfunção tgf-beta, método de detecção de tgf-beta, artigo industrializado e método de tratamento de cáncer
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
ES2403055T3 (es) 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
JP5234734B2 (ja) 2004-06-01 2013-07-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体−薬物結合体および方法
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
TR201808537T4 (tr) 2004-09-23 2018-07-23 Genentech Inc Sistein değiştirilmiş antikorlar ve konjugatlar.
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP1874821B1 (de) 2005-04-26 2013-04-17 Trion Pharma Gmbh Kombination von antikörpern mit glukokortikoiden zur behandlung von krebs
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2007249408A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CA2662340C (en) 2006-09-08 2016-08-02 Medimmune, Llc Humanized anti-cd19 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN101675077B (zh) 2007-04-03 2013-09-04 安进研发（慕尼黑）股份有限公司 跨种特异性的双特异性结合剂
CA2683370C (en) 2007-04-03 2022-12-13 Micromet Ag Cross-species-specific binding domain
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
WO2009012256A1 (en) * 2007-07-16 2009-01-22 Genentech, Inc. Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
US9308257B2 (en) 2007-11-28 2016-04-12 Medimmune, Llc Protein formulation
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
CN101939847B (zh) 2008-02-08 2012-04-25 三洋电机株式会社 太阳能电池模块和太阳能电池
CA2797981C (en) 2010-05-14 2019-04-23 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
ES2667100T3 (es) 2010-08-02 2018-05-09 Macrogenics, Inc. Diacuerpos covalentes y sus usos
MY173177A (en) 2010-11-10 2020-01-02 Amgen Res Munich Gmbh Prevention of adverse effects caused by cd3 specific binding domains
PL2714733T4 (pl) 2011-05-21 2019-08-30 Macrogenics, Inc. Cząsteczki wiążące CD3 zdolne do wiązania z ludzkim i nieludzkim CD3
AR087608A1 (es) 2011-08-23 2014-04-03 Roche Glycart Ag Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
US20140030280A1 (en) 2012-07-09 2014-01-30 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates
TR201802376T4 (tr) 2012-07-09 2018-03-21 Genentech Inc Anti-CD79b antikorları içeren immünokonjugatlar.
EP3586874A1 (en) 2012-08-14 2020-01-01 IBC Pharmaceuticals, Inc. T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
UA119320C2 (uk) * 2013-02-26 2019-06-10 Рош Глікарт Аг Активуюча т-клітини біспецифічна антигензв'язувальна молекула
PT2968552T (pt) 2013-03-14 2020-05-18 Scripps Research Inst Anticorpo dos agentes alvo, combinações e uso para os mesmos
US11634502B2 (en) * 2013-03-15 2023-04-25 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
SG11201509361TA (en) 2013-05-28 2015-12-30 Numab Ag Novel antibodies
EP3083692B1 (en) 2013-12-17 2020-02-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating her2-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-her2 antibodies
WO2015095392A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
TWI589591B (zh) 2014-08-04 2017-07-01 赫孚孟拉羅股份公司 雙特異性ｔ細胞活化抗原結合分子
EP3227336B1 (en) * 2014-12-05 2019-07-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd79b antibodies and methods of use
CA2986928A1 (en) 2015-06-16 2016-12-22 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101802012A (zh) * 2007-07-16 2010-08-11 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
WO2009099728A1 (en) * 2008-01-31 2009-08-13 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CD22和CD79b在慢性淋巴细胞白血病中的表达特点;朱萍等;《临床血液学杂志》;20131231;第26卷(第10期);667-669 *
Cloning of a hamster anti-mouse CD79B antibody sequences and identification of a new hamster immunoglobulin lambda constant IGLC gene region;Ryan Haggart等;《Immunogenetics》;20130405;第65卷;473-478 *

Also Published As

Publication number Publication date
UA120102C2 (uk) 2019-10-10
DK3227336T3 (da) 2019-09-16
HK1243102A1 (zh) 2018-07-06
ES2744540T3 (es) 2020-02-25
CL2017001408A1 (es) 2018-01-05
IL251970A0 (en) 2017-06-29
US10941199B2 (en) 2021-03-09
SI3227336T1 (sl) 2019-10-30
EP3227336B1 (en) 2019-07-03
ZA201703167B (en) 2021-03-31
PT3227336T (pt) 2019-09-09
CA2966362A1 (en) 2016-06-09
BR112017011326A2 (pt) 2018-07-31
RS59203B1 (sr) 2019-10-31
PH12017500877A1 (en) 2017-11-06
US20180327492A1 (en) 2018-11-15
AR102918A1 (es) 2017-04-05
US9975949B2 (en) 2018-05-22
LT3227336T (lt) 2019-09-25
MA40938A (fr) 2017-10-11
TW201636366A (zh) 2016-10-16
PH12017500877B1 (en) 2017-11-06
SG11201704449VA (en) 2017-06-29
CR20170230A (es) 2017-11-07
IL251970B (en) 2021-12-01
KR20170086549A (ko) 2017-07-26
CO2017006740A2 (es) 2018-01-05
AU2021232717A1 (en) 2021-10-14
MX386587B (es) 2025-03-19
US20160159906A1 (en) 2016-06-09
CN107108739A (zh) 2017-08-29
HUE045216T2 (hu) 2019-12-30
PE20170953A1 (es) 2017-07-13
AU2015358325A1 (en) 2017-05-25
JP2020168006A (ja) 2020-10-15
PL3227336T3 (pl) 2019-11-29
HRP20191584T1 (hr) 2019-11-29
JP6802158B2 (ja) 2020-12-16
WO2016090210A1 (en) 2016-06-09
EA201790984A1 (ru) 2018-05-31
JP2018505849A (ja) 2018-03-01
EP3227336A1 (en) 2017-10-11
TWI713480B (zh) 2020-12-21
MX2017007049A (es) 2018-05-02
MY188799A (en) 2022-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107108739B (zh) 抗CD79b抗体和使用方法
JP7472056B2 (ja) ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
AU2020200101B2 (en) Anti-CD3 antibodies and methods of use
CN107847568B (zh) 抗cll-1抗体和使用方法
CN107787331B (zh) 抗her2抗体和使用方法
CN105744954B (zh) 抗rspo2和/或抗rspo3抗体及其用途
CN102906117A (zh) 抗lrp6抗体
TW202144410A (zh) 抗介白素－３３抗體及其用途
IL308633A (en) Use of anti-ctla-4 antibody
NZ758555B2 (en) Beta-lactamase inhibitors and uses thereof
NZ758555A (en) Atropine pharmaceutical compositions
NZ753232B2 (en) Anti-cd3 antibodies and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1243102

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20220104

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee