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JP2018505849A - 抗ＣＤ７９ｂ抗体及び使用方法 - Google Patents

抗ＣＤ７９ｂ抗体及び使用方法 Download PDF

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JP2018505849A JP2017528910A JP2017528910A JP2018505849A JP 2018505849 A JP2018505849 A JP 2018505849A JP 2017528910 A JP2017528910 A JP 2017528910A JP 2017528910 A JP2017528910 A JP 2017528910A JP 2018505849 A JP2018505849 A JP 2018505849A
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Abstract

本開示は、抗ＣＤ７９ｂ抗体及びその使用方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１２月５日に出願された米国仮出願第６２／０８８４８７号に対する優先権の利益を主張するものであり、その全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる。２０１５年１２月２日に作成された該ＡＳＣＩＩの複写は、Ｐ３２４６４ＷＯ＿ＰＣＴＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、４３，４７０バイトの大きさである。
本発明は、ＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体）を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体、及びその使用方法に関する。
癌等の細胞増殖性障害は、細胞亜集団の制御されていない成長を特徴とする。これらは先進国世界における死因の第１位、及び発展途上国における死因の第２位であり、毎年１千２百万を超える新たな癌症例が診断され、７百万の癌死亡が生じている。米国国立癌研究所は、２０１３年には５０万人を超えるアメリカ人が癌によって死亡すると推定しており、これは、ほぼ米国の死亡４件中１件の割合を占める。癌の発症確率は７０歳を過ぎると２倍以上高くなるため、高齢者人口が成長するにつれて、癌の発生数も同時に上昇している。このため、癌治療は、重大かつ増え続ける社会的負担を意味する。
ＣＤ７９ｂは、Ｂ細胞受容体のシグナル成分であり、ＣＤ７９ａ（すなわち、Ｉｇαまたはｍｂ−１）及びＣＤ７９ｂ（すなわち、ＩｇβまたはＢ２９）を含有する共有結合ヘテロ二量体として作用する。ＣＤ７９ｂは、細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメイン、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインを含有する。フローサイトメトリーを使用することによって、ＣＤ７９ｂの表面発現は、ほぼ全ての非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者において検出される。Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１−９（２００９）。そのシグナル伝達機能に加えて、Ｂ細胞受容体が架橋されると、Ｂ細胞によってクラスＩＩ抗原提示の一部であるリソソーム様コンパートメントである、主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩコンパートメントを標的とする。
ＣＤ７９ｂに対する抗体は、細胞傷害性薬物を放出し得るプロテアーゼを含有することが既知であるこれらのリソソームコンパートメントに内在化及び送達されるため、ＣＤ７９ｂ生物学のこの特徴は、ＣＤ７９ｂをＡＤＣの使用に対して特に魅力的な標的にする。そのため、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が生成され（プロテアーゼ切断可能リンカーによってモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に複合体化されたヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体（ヒト化ＳＮ８）等）、これはＮＨＬの治療に対して臨床効果があることを示している。例えば、米国特許第８，０８８，３７８号及びＭｏｒｓｃｈｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，「４４５７ Ｕｐｄａｔｅｄ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ Ｐｈａｓｅ ＩＩ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｓｔｕｄｙ（ＲＯＭＵＬＵＳ）ｏｆ Ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ ｏｒ Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ Ｐｌｕｓ Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｌａｐｓｅｄ／Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ」５６ｔｈ ＡＳＨ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ：Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ６−９，２０１４を参照されたい。抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ治療薬を使用したＮＨＬ及びＣＬＬ治療における進歩にもかかわらず、ＮＨＬ及びＣＬＬ患者、具体的には、抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ療法に耐性を示す患者に対する改善した療法に対する満たされていない必要性が依然として存在する。
最近では、二重特異性抗体をベースとする免疫療法が開発され、これは結合細胞傷害性細胞が結合腫瘍細胞を破壊することを目的として、細胞傷害性細胞及び腫瘍細胞上で細胞表面抗原を同時に結合することができる。このような二重特異性抗体は、例えば、抗体−薬物複合体と比較した有効性及び／または安全性といった利点を有する場合がある。このため、癌治療において使用するための有効な二重特異性抗体の開発の分野において満たされていない必要性が存在する。
本発明は、抗ＣＤ７９ｂ抗体及びその使用方法を提供する。具体的には、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体が本明細書に提供される。
一態様では、単離された抗ＣＤ７９ｂ抗体が本明細書に提供され、本抗体は、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂ結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）配列番号１７、２１、２３、２５、２７、若しくは２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１８、２２、２４、２６、２８、若しくは３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂは、配列番号１７、２１、２３、２５、２７、または２９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号１８、２２、２４、２６、２８、または３０のＶＬ配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂ結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号１９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号２０のＶＬ配列を含む。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂ結合ドメインは、配列番号６３に結合する。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、二重アームの二価ＩｇＧ抗体として約２５ｎＭ未満、例えば、約１０ｎＭ未満または約５ｎＭ未満のうちのいずれかのＫｄでヒトＣＤ７９ｂと結合する。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥによって決定される。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、低密度で固定化されるＣＤ７９ｂによって決定される。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、二重アームの二価ＩｇＧ抗体として約１５０ｎｇ／ｍＬ未満、例えば、約１００ｎｇ／ｍＬ未満、約７５ｎｇ／ｍＬ未満、または約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかのＥＣ５０でＢ細胞（例えば、ＢＪＡＢ細胞）と結合する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞との結合は、ＦＡＣＳによって決定される。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）はヒトＣＤ７９ｂと結合し、一価形式で約１．５ｕｇ／ｍＬ未満、例えば、約１ｕｇ／ｍＬ未満、０．７５ｕｇ／ｍＬ未満、０．５ｕｇ／ｍＬ未満、または０．２５ｕｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０でＢ細胞（例えば、ＢＪＡＢ細胞）と結合する（例えば、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ二重特異性抗体）。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞との結合は、ＦＡＣＳによって決定される。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ抗体である。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ７９ｂと結合する抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は完全長抗体である。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位突然変異を含む。いくつかの実施形態では、非グリコシル化部位突然変異は、置換突然変異である。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、低減されたエフェクター機能を備える。いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／またはＤ２６５における置換突然変異を含む。いくつかの実施形態では、置換突然変異は、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７におけるＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、単一特異的抗体（例えば、二価二重アーム抗体）である。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、多重特異性抗体である。
多重特異性抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３εポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３γポリペプチドである。
多重特異性抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、２５０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号６０のＶＬ配列を含む。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５８のＶＬ配列を含む。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号６１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号６２のＶＬ配列を含む。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、約１００ｎｇ／ｍＬ未満、例えば、約５０ｎｇ／ｍＬ未満、約２５ｎｇ／ｍＬ未満、約２０ｎｇ／ｍＬ未満、または約１５ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかのＢ細胞死滅ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞死滅は、内因性Ｂ細胞死滅である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞死滅は、細胞株Ｂ細胞死滅、例えば、ＢＪＡＢ細胞株、ＷＳＵ−ＣＬＣＬ２細胞株、ＯＣＩ−Ｌｙ−１９細胞株である。多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれか、例えば、約２５ｎｇ／ｍＬ未満または約２０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかである細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性Ｔ細胞活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の％で測定される。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＤ７９ｂ結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ７９ｂ結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）ＣＤ３結合ドメインはＦｃドメインを含み、該Ｆｃドメインは、ＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、該１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対を作る。いくつかの実施形態では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。
本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする単離された核酸も本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする単離された核酸を含むベクターが、さらに本明細書に提供される。本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする単離された核酸を含むベクターを含む宿主細胞が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物の宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類の宿主細胞（例えば、ＣＨＯ）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核生物の宿主細胞である。いくつかの実施形態では、原核生物の宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞である。本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体の産生方法がさらに本明細書に提供され、該方法は、培養培地で本明細書に記載される宿主細胞を培養することを含む。
本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体及び細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体が、さらに本明細書に提供される。
本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
薬剤として使用するための本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体が本明細書に提供される。Ｂ細胞増殖性障害または自己免疫性障害の治療またはその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体が本明細書に提供される。Ｂ細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において、免疫機能の増強に使用するための本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び／またはマントル細胞リンパ腫である。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性を示す。いくつかの実施形態では、自己免疫性障害は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェグナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、及びＩｇＧニューロパチーからなる群から選択される。
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の進行を治療する、または遅延させるための薬剤の製造における、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかの使用が本明細書に提供される。細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において免疫機能を増強するための薬剤の製造における、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかの使用が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び／またはマントル細胞リンパ腫である。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性を示す。いくつかの実施形態では、自己免疫性障害は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェグナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、及びＩｇＧニューロパチーからなる群から選択される。
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の進行の治療または遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法が本明細書に提供され、該方法は、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体を対象に投与することを含む。細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法が本明細書に提供され、該方法は、有効量の本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び／またはマントル細胞リンパ腫である。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性を示す。いくつかの実施形態では、自己免疫性障害は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェグナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、及びＩｇＧニューロパチーからなる群から選択される。
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）免疫エフェクター細胞上に位置するＣＤ３分子、及び（ｂ）Ｂ細胞上に位置するＣＤ７９ｂ分子に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）及び（ｂ）への結合に続いて免疫エフェクター細胞を活性化する。方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、活性化された免疫エフェクター細胞は、標的細胞への細胞傷害性作用及び／またはアポトーシス作用を及ぼすことができる。
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象にグルココルチコイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンである。
方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、対象にリツキシマブを投与することをさらに含む。
Ｋ＆Ｈ形式で、またはｂｉｓｆａｂ（抗ＣＤ３クローンＵＣＨＴ１ｖ９と対を作る種々の抗ＣＤ７９ｂクローン）としてのいずれかで産生される抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ＴＤＢ（Ｔ細胞依存性二重特異性）抗体による内因性Ｂ細胞死滅を示す。抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに、２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。 Ｋ＆Ｈ形式で、またはｂｉｓｆａｂ（抗ＣＤ３クローンＵＣＨＴ１ｖ９と対を作る種々の抗ＣＤ７９ｂクローン）としてのいずれかで産生される抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ＴＤＢ（Ｔ細胞依存性二重特異性）抗体による内因性Ｂ細胞死滅を示す。抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに、２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。 Ｋ＆Ｈ形式で、またはｂｉｓｆａｂ（抗ＣＤ３クローンＵＣＨＴ１ｖ９と対を作る種々の抗ＣＤ７９ｂクローン）としてのいずれかで産生される抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ＴＤＢ（Ｔ細胞依存性二重特異性）抗体による内因性Ｂ細胞死滅を示す。抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに、２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。 ｂｉｓｆａｂ抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３（ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＣＨＴ１ｖ９）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。Ａ及びＢ：抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによって、Ｔ細胞活性化（Ｂ）を測定した。Ｃ及びＤ：２０，０００個のＢＪＡＢ細胞及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ｃ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｄ）を測定した。 ｂｉｓｆａｂ抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３（ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＣＨＴ１ｖ９）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。Ａ及びＢ：抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによって、Ｔ細胞活性化（Ｂ）を測定した。Ｃ及びＤ：２０，０００個のＢＪＡＢ細胞及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ｃ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｄ）を測定した。 ｂｉｓｆａｂ抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３（ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＣＨＴ１ｖ９）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。Ａ及びＢ：抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによって、Ｔ細胞活性化（Ｂ）を測定した。Ｃ及びＤ：２０，０００個のＢＪＡＢ細胞及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ｃ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｄ）を測定した。 ｂｉｓｆａｂ抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３（ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＣＨＴ１ｖ９）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。Ａ及びＢ：抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによって、Ｔ細胞活性化（Ｂ）を測定した。Ｃ及びＤ：２０，０００個のＢＪＡＢ細胞及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２４時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ｃ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｄ）を測定した。 ＦＡＣＳによって測定される抗ＣＤ７９ｂの種々のクローンの一価または二価結合親和性を示す。ＢＪＡＢ細胞を、示されるように抗ＣＤ７９ｂ抗体（二価二重アーム抗体）または抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を加えて氷上で３０分間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、氷冷されたＦＡＣＳ緩衝液（１ｘＰＢＳ、２％のＢＳＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）で細胞を洗浄し、その後、ＰＥ標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、番号５５５７８７）用いるインキュベーションが続く。ＢＤ ＬＳＲ分析器上でフローサイトメトリー分析を行った。抗体結合は、ＰＥフルオロフォアの平均蛍光強度（ＭＦＩ）として発現された。Ａ：抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の一価結合親和性、ＳＮ８ｖ２８、及びＳＮ８ｎｅｗ（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）と比較する、Ｂ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６及びＣＤ７９ｂ．Ａ７の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６、ＣＤ７９ｂ．Ａ７、及びＳＮ８ｖ２８（ｂｉｓｆａｂまたはＫ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する、Ｃ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する。 ＦＡＣＳによって測定される抗ＣＤ７９ｂの種々のクローンの一価または二価結合親和性を示す。ＢＪＡＢ細胞を、示されるように抗ＣＤ７９ｂ抗体（二価二重アーム抗体）または抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を加えて氷上で３０分間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、氷冷されたＦＡＣＳ緩衝液（１ｘＰＢＳ、２％のＢＳＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）で細胞を洗浄し、その後、ＰＥ標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、番号５５５７８７）用いるインキュベーションが続く。ＢＤ ＬＳＲ分析器上でフローサイトメトリー分析を行った。抗体結合は、ＰＥフルオロフォアの平均蛍光強度（ＭＦＩ）として発現された。Ａ：抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の一価結合親和性、ＳＮ８ｖ２８、及びＳＮ８ｎｅｗ（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）と比較する、Ｂ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６及びＣＤ７９ｂ．Ａ７の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６、ＣＤ７９ｂ．Ａ７、及びＳＮ８ｖ２８（ｂｉｓｆａｂまたはＫ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する、Ｃ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する。 ＦＡＣＳによって測定される抗ＣＤ７９ｂの種々のクローンの一価または二価結合親和性を示す。ＢＪＡＢ細胞を、示されるように抗ＣＤ７９ｂ抗体（二価二重アーム抗体）または抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を加えて氷上で３０分間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、氷冷されたＦＡＣＳ緩衝液（１ｘＰＢＳ、２％のＢＳＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）で細胞を洗浄し、その後、ＰＥ標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、番号５５５７８７）用いるインキュベーションが続く。ＢＤ ＬＳＲ分析器上でフローサイトメトリー分析を行った。抗体結合は、ＰＥフルオロフォアの平均蛍光強度（ＭＦＩ）として発現された。Ａ：抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローン２Ｆ２の一価結合親和性、ＳＮ８ｖ２８、及びＳＮ８ｎｅｗ（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）と比較する、Ｂ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６及びＣＤ７９ｂ．Ａ７の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ｆ６、ＣＤ７９ｂ．Ａ７、及びＳＮ８ｖ２８（ｂｉｓｆａｂまたはＫ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する、Ｃ：抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４の二価結合親和性を、抗ＣＤ７９ｂクローンＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢである）の一価結合と比較する。 ＣＤ７９ｂ抗体変異体の（Ａ）重鎖可変領域（それぞれ、出現順に配列番号１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９）、ならびに（Ｂ）軽鎖可変領域（それぞれ、出現順に配列番号１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０）のアライメントを示す。 ＣＤ７９ｂ抗体変異体の（Ａ）重鎖可変領域（それぞれ、出現順に配列番号１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９）、ならびに（Ｂ）軽鎖可変領域（それぞれ、出現順に配列番号１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０）のアライメントを示す。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ＴＤＢ（抗ＣＤ３クローン４０Ｇ５ｃまたは３８Ｅ４ｖ１のいずれかと対を作るＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｂ）を測定した。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ＴＤＢ（抗ＣＤ３クローン４０Ｇ５ｃまたは３８Ｅ４ｖ１のいずれかと対を作るＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｂ）を測定した。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ（ＣＤ７９ｂ．Ａ７ｖ１４／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。２０，０００個のＢＪＡＢまたはＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｂ）を測定した。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ（ＣＤ７９ｂ．Ａ７ｖ１４／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の活性を示す。２０，０００個のＢＪＡＢまたはＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅（Ａ）の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作製することによってＴ細胞活性化（Ｂ）を測定した。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性を示す。２０，０００個のＢリンパ腫細胞（示されるように）及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。Ａ．ＣＤ７９ｂ陰性対照としてＨＴ細胞を用いる、ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、及びＯＣＩ−ＬＹ−１９細胞に対するＢ細胞死滅の用量反応曲線を示す、Ｂ〜Ｃ．５０００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ７９ ＴＤＢ（２連、平均±ＳＴＤ）によるＢ細胞死滅を示す。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性を示す。２０，０００個のＢリンパ腫細胞（示されるように）及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。Ａ．ＣＤ７９ｂ陰性対照としてＨＴ細胞を用いる、ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、及びＯＣＩ−ＬＹ−１９細胞に対するＢ細胞死滅の用量反応曲線を示す、Ｂ〜Ｃ．５０００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ７９ ＴＤＢ（２連、平均±ＳＴＤ）によるＢ細胞死滅を示す。 抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性を示す。２０，０００個のＢリンパ腫細胞（示されるように）及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。Ａ．ＣＤ７９ｂ陰性対照としてＨＴ細胞を用いる、ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、及びＯＣＩ−ＬＹ−１９細胞に対するＢ細胞死滅の用量反応曲線を示す、Ｂ〜Ｃ．５０００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ７９ ＴＤＢ（２連、平均±ＳＴＤ）によるＢ細胞死滅を示す。 インビトロ及びインビボでの抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性を示す。ＢＪＡＢ細胞変異体（ＢＪＡＢ−ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．１及びＢＪＡＢ−ＳＮ８ｖ２８ｖｃＥ ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．２）は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥで治療されるマウスの非応答性ＢＪＡＢ異種移植腫瘍に由来した。Ａ．インビトロでのＢＪＡＢ細胞死滅の用量反応曲線を示す：２０，０００個のＢＪＡＢまたはＢＪＡＢ変異細胞（示されるように）及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）を加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。Ｂ．抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）は、インビボでのＢＪＡＢ腫瘍成長を防ぐ：健常ドナーからのＢＪＡＢ細胞及びＰＢＭＣを混合して、皮下に接種し、次いでマウスを示されるように治療した。最大４２日間の研究の全体にわたって腫瘍体積を測定した。 インビトロ及びインビボでの抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性を示す。ＢＪＡＢ細胞変異体（ＢＪＡＢ−ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．１及びＢＪＡＢ−ＳＮ８ｖ２８ｖｃＥ ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．２）は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥで治療されるマウスの非応答性ＢＪＡＢ異種移植腫瘍に由来した。Ａ．インビトロでのＢＪＡＢ細胞死滅の用量反応曲線を示す：２０，０００個のＢＪＡＢまたはＢＪＡＢ変異細胞（示されるように）及び１００，０００個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）を加えて、または加えずに４８時間にわたってインキュベートした。インキュベーションが終わった後、ＣＤ１９＋／ＰＩ−集団にゲートを作製することによって生存Ｂ細胞の数を数えた。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。Ｂ．抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）は、インビボでのＢＪＡＢ腫瘍成長を防ぐ：健常ドナーからのＢＪＡＢ細胞及びＰＢＭＣを混合して、皮下に接種し、次いでマウスを示されるように治療した。最大４２日間の研究の全体にわたって腫瘍体積を測定した。
Ｉ．定義
「ＣＤ７９ｂ」という用語は、本明細書で用いる場合、別途指示されない限り、霊長動物（例えば、ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）（ｃｙｎｏ））、及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ７９ｂを指す。ヒトＣＤ７９ｂは、本明細書で「Ｉｇβ」、「Ｂ２９」、「ＤＮＡ２２５７８６」、または「ＰＲＯ３６２４９」とも称される。シグナル配列を含む例示的なＣＤ７９ｂ配列が、配列番号１に示される。シグナル配列を含まない例示的なＣＤ７９ｂ配列が、配列番号２に示される。「ＣＤ７９ｂ」という用語は、「完全長」のプロセシングされていないＣＤ７９ｂ、ならびに細胞内のプロセシングから得られるＣＤ７９ｂの任意の形態を包含する。この用語は、ＣＤ７９ｂの自然発生変異体、例えば、スプライス変異体、対立遺伝子変異体、及びアイソフォームも包含する。本明細書に記載されるＣＤ７９ｂポリペプチドは、ヒト組織型から、若しくは別の源から等、多様な源から単離され得るか、または組み換え法または合成法によって調製され得る。「天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチド」は、自然界に由来する対応ＣＤ７９ｂポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチドは、自然界から単離され得るか、または組み換え手法若しくは合成手法によって産生され得る。「天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチド」という用語は、具体的には、特定のＣＤ７９ｂポリペプチド（例えば、細胞外ドメイン配列）の自然発生切頭型若しくは分泌型、自然発生変異形態（例えば、オルタナティブスプライシング型）、及びポリペプチドの自然発生対立遺伝子変異体を包含する。
「表面抗原分類３」または「ＣＤ３」という用語は、本明細書で用いる場合、別途指示されない限り、霊長動物（例えばヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指し、例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３α、及びＣＤ３β鎖を含む。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＣＤ３（例えば、プロセシングされていない、若しくは修飾されていないＣＤ３εまたはＣＤ３γ）、ならびに細胞内のプロセシングから得られるＣＤ３の任意の形態を包含する。この用語は、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体を含む、ＣＤ３の自然発生変異体も包含する。ＣＤ３は、例えば、２０７のアミノ酸長であるヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号 ＮＰ＿０００７２４）、及び１８２のアミノ酸長であるヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号 ＮＰ＿００００６４）を含む。
「抗ＣＤ７９ｂ抗体」及び「ＣＤ７９ｂに結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ７９ｂの標的化において診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ７９ｂと結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＤ７９ｂタンパク質への抗ＣＤ７９ｂ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＣＤ７９ｂへの結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ７９ｂに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、異なる種に由来するＣＤ７９ｂ間で保存されるＣＤ７９ｂのエピトープに結合する。
「抗ＣＤ３抗体」及び「ＣＤ３に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３の標的化において診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ３と結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＤ３タンパク質への抗ＣＤ３抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体へのＣＤ３への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、異なる種に由来するＣＤ３間で保存されるＣＤ３のエピトープに結合する。
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含む、種々の抗体構造を包含する。
「抗体フラグメント」とは、無傷の抗体が結合する抗原に結合する、無傷の抗体の一部を含む無傷の抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと称される。
「単離された」抗体とは、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される場合、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
「完全長抗体」、「無傷の抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書において定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように、本明細書において交換可能に使用される。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で用いる場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異抗体は例外であり、かかる変異体は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。このため、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法によって抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を経た抗体を指す。
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合体化されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する自然発生免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一軽鎖及び２つの同一重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも称される可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも称される可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と称される２つの型のうちの１つに割り当てられ得る。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは一般的に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。） 単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原を結合する抗体が単離されてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般的に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で用いる場合、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、抗体は、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある、６つのＨＶＲを含む。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
別途指示されない限り、可変ドメイン（例えば、ＦＲ残基）におけるＨＶＲ残基及び他の残基は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒト ＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及び。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途指示がない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付け方式に従う。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親のポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親のポリペプチドのＦｃ領域中に約１個から約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１個〜約５アミノ酸置換を有する。本明細書の変異体Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親のポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、ならびに最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン 配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態では、ＶＬに関して、下位集団は、上記Ｋａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態では、ＶＨに関して、下位集団は、上記Ｋａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
本明細書の目的に関して、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下で定義されるヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、またはアミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークの配列は、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で用いる場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な実例となる例示的実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、改変を保有しない親抗体と比較して１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有する抗体を指し、かかる改変は、抗原に対する抗体の親和性を改善する。
「結合ドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインは、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組み換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体フラグメントまたはその部分（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び特定された結合パートナーを有する他の分子を含むが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプによって異なる抗体のＦｃ領域に起因するそれらの生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）に複合体化される抗体である。
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で用いる場合、細胞機能を阻害する若しくは阻む、及び／または細胞死若しくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学治療剤または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他の挿入剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらのフラグメント；抗生物質；細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素等の毒素（それらのフラグメント及び／または変異体を含む）；ならびに以下に開示される種々の抗腫瘍剤または抗癌剤を含むが、これらに限定されない。
「単離された」核酸とは、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらのフラグメント）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
「抗ＣＤ３抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらのフラグメント）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
「ベクター」という用語は、本明細書で用いる場合、連結されている別の核酸を増殖することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにその中にベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、その中に外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞は、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫の核酸含量は、親細胞と完全に同一ではないことがあるが、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞に対してスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列し、配列同一性最大パーセントを実現するために必要な場合はギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当該技術分野の範囲内の種々の方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、実現することができる。当業者は、配列を整列するために適切なパラメータを決定することができ、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを実現するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む。しかしながら、本明細書の目的において、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって執筆され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権局（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変化しない。
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、次のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されるだろう。別途具体的に記されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与され得る対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を全く含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって非毒性である活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤を含むが、これらに限定されない。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を実現するために必要な投薬量及び一定期間にわたる、有効な量を指す。本明細書の有効量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘起する抗体の能力等の要因に従って変化し得る。有効量は、治療上有益な作用が、その治療の任意の毒性作用または有害作用を上回るものでもある。予防用途では、有益な結果または所望の結果は、疾患の生化学的、組織学的、及び／または行動学的症状、その合併症、ならびに疾患の発達中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患の危険性の排除若しくは低減、その重症度の低下、またはその発症の遅延等の結果を含む。治療用途では、有益な結果または所望の結果は、疾患から生じる１つ以上の症状の減少、疾患を患っている者の生活の質の向上、疾患を治療するために必要とされる他の薬物の用量の減少、疾患を標的化すること、疾患の進行を遅延させること等による別の薬物の作用の増強、及び／または生存期間の延長等の臨床結果を含む。癌または腫瘍の場合、有効量の薬物は、癌細胞の数を低減させること、腫瘍サイズを低減させること、末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害すること（すなわち、ある程度減速させること、または望ましくは停止させること）、腫瘍転移を阻害すること（すなわち、ある程度減速させること、または望ましくは停止させること）、腫瘍成長をある程度阻害すること、及び／または障害に関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和することにおいて、効果を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的において、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的文脈において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて実現される場合もあれば、実現されない場合もある。このため、「有効量」は、１つ以上の治療剤を投与するという文脈で考慮されてもよく、１つ以上の他の薬剤と併せて望ましい結果が実現され得るか、または実現される場合、単一の薬剤が有効量で与えられることと見なされてもよい。
本明細書で用いる場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
本明細書で用いる場合、障害または疾患の「進行を遅延させること」とは、疾患または障害（例えば細胞増殖性障害、例えば癌）の発達を延期する、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定化させる、及び／または延滞させることを意味する。この遅延は、病歴及び／または治療されている個体に応じて様々な長さの時間のものであり得る。当業者には明白であるように、十分な、または著しい遅延は、個体が疾患を発症しないという意味で、実質的に予防を包含し得る。例えば、転移の発症等の末期癌が遅延され得る。
「低減する」または「阻害する」とは、例えば、２０％以上の、５０％以上の、または７５％、８５％、９０％、９５％、若しくはそれ以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。ある特定の実施形態では、減少する、または阻害するとは、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、かかるエフェクター機能は、具体的に補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含む。
「化学治療剤」とは、癌の治療において有用な化学物質を指す。化学治療剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミンならびにメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（具体的にはクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）等のニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマ１Ｉ及びカリチアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）等の抗生物質；ＣＤＰ３２３、口腔アルファ−４インテグリン阻害剤；ダイネミシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、アウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシ（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ（ｐｙｒｒｏｌｉｎｏ）−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグリ化（ｐｅｇｌｙｌａｔｅｄ）リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の抗代謝産物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎物；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）等の葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサマイトシン等のマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド（ｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特にＴ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン等の白金剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合がマイクロチューブルを形成することを防ぐビンカ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイン酸等のレチノイド；クロドロネート等のビスホスホネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；
トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、具体的には、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）等の異常な細胞増殖に関係しているシグナル経路において遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン等のワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ １ 阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））等のＢｃｌ−２阻害剤；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（定義は以下を参照されたい）；チロシンキナーゼ阻害剤；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））等のセリン−スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファルニブ（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上述のもののいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの組み合わせ療法に対する略語である）等の上述のもののうちの２つ以上の組み合わせ；及びＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）を用いる治療レジメンに対する略語である）が挙げられる。
本明細書で定義される化学治療剤は、癌の成長を促進し得るホルモンの効果を制御、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」を含む。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３等の選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化を遮断する、ＤＮＡ結合を阻害する、ＥＲターンオーバーを増加させる、及び／またはＥＲレベルを抑制する場合がある）等のアゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））等のステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミド等の非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、ならびにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロールアセテート（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールを含む、他のアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；メゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテート等のプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリン等のエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全てのトランスレチオン酸（ｔｒａｎｓｒｅｔｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、及びフェンレチニド等のアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミド等の抗アンドロゲン；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせを含むが、これらに限定されない。
「免疫抑制剤」という用語は、補助療法に関して本明細書で用いる場合、本明細書で治療されている哺乳動物の免疫系を抑制またはマスクするように作用する物質を指す。これは、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御するか、若しくは抑制する、またはＭＨＣ抗原をマスクする物質を含むだろう。かかる薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７等を参照されたい）；非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、コルチゾールまたはアルドステロン等のグルココルチコイド、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、またはロイコトリエン受容体アンタゴニスト等の抗炎症剤；アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等のプリンアンタゴニスト；シクロホスファミド等のアルキル化剤；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載されるようにＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣフラグメントに関する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；コルチコステロイドまたはグルココルチコステロイド若しくはグルココルチコイド類似体等のステロイド、例えば、プレドニゾン、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムを含むメチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；メトトレキサート（経口または皮下）等のジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤；クロロキン及びヒドロキシクロロキン等の抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；抗インターフェロン−アルファ、−ベータ、または−ガンマ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−アルファイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−ベータ抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体、及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及びアンタゴニスト（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）（トシリズマブ）等）を含む、サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む、抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種性抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、１９９０年７月２６日公開）；ストレプトキナーゼ；トランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；クロラムブシル；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎらの米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）、ＷＯ９０／１１２９４、Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）、及びＷＯ９１／０１１３３）；ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体等のＢＡＦＦアンタゴニストならびにｚＴＮＦ４アンタゴニスト（概説については、Ｍａｃｋａｙ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）を参照されたく、及び以下の定義も参照されたい）；ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対する遮断抗体を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）等のＴ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物学的薬剤（例えば、Ｄｕｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）、Ｍｏｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））；ならびにＴ１０Ｂ９等のＴ細胞受容体抗体（ＥＰ ３４０，１０９）が挙げられる。本明細書のいくつかの好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが挙げられる。
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を取り除くように、ＰＤ−１軸結合パートナーの、その結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用を阻害し、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺傷）を復元または増強するような結果をもたらす分子を指す。本明細書で用いる場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、その結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介するシグナル伝達を媒介して、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１、Ｂ７−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１、Ｂ７−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介するシグナル伝達を媒介して、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６である。
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少する、遮断する、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介するシグナル伝達を媒介して、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
「腫瘍」という用語は、悪性または良性にかかわらず全ての腫瘍性細胞の成長及び増殖、ならびに全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」は、本明細書で言及される場合、相互排他的ではない。
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は癌である。
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には制御されない細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳動物における生理的状態を指すか、または記述する。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
「Ｂ細胞増殖性障害」という用語は、ある程度異常なＢ細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は癌である。
「Ｂ細胞増殖性障害」は、リンパ球優位型ホジキン病（ＬＰＨＤ）を含むホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞中心細胞（ＦＣＣ）リンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びヘアリー細胞白血病を含む。非ホジキンリンパ腫は、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、形質細胞様リンパ性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む。これらの癌の再発の治療も企図される。ＬＰＨＤは、放射線または化学療法治療にもかかわらず、頻繁に再発する傾向があるホジキン病のタイプである。ＣＬＬは、４つの主要なタイプの白血病のうちの１つである。リンパ球と称される成熟Ｂ細胞の癌であるＣＬＬは、血液、骨髄、及びリンパ組織中の細胞の進行性の蓄積を呈する。低悪性度リンパ腫は、進行の遅い難病であり、多数の緩解期間及び再発期間の後、患者の平均生存期間は６〜１０年である。
「非ホジキンリンパ腫」または「ＮＨＬ」という用語は、本明細書で用いる場合、ホジキンリンパ腫以外のリンパ系の癌を指す。ホジキンリンパ腫は一般に、ホジキンリンパ腫におけるリード−シュテルンベルク細胞の存在、及び非ホジキンリンパ腫における該細胞の不在によって、非ホジキンリンパ腫と区別することができる。本明細書で用いられる用語によって包含される非ホジキンリンパ腫の例には、Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ａ．Ｖｉｃｔｏｒ Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｐｅｔｔｉｔ（ｅｄｓ．） （Ｈａｒｃｏｕｒｔ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ２０００）（特に図１１．５７、１１．５８、及び／または１１．５９を参照されたい）に記載されるＲｅｖｉｓｅｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ（ＲＥＡＬ）体系等の当該技術分野で既知の分類体系に従って、当業者（例えば、腫瘍学者または病理学者）によってそのようなものとして特定され得る任意の非ホジキンリンパ腫が挙げられる。より具体的な例には、再発性または難治性ＮＨＬ、フロントライン低悪性度ＮＨＬ、第ＩＩＩ／ＩＶ病期ＮＨＬ、化学療法耐性ＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球性白血病及び／またはリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病及び／または前リンパ性白血病及び／または小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ性リンパ腫、免疫細胞腫及び／またはリンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、節外性辺縁帯−ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、形質細胞腫及び／または形質細胞骨髄腫、低悪性度／濾胞性リンパ腫、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）、中悪性度びまん性ＮＨＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、侵襲性ＮＨＬ（侵襲性フロントラインＮＨＬ及び侵襲性再発性ＮＨＬを含む）、自家幹細胞移植後に再発する、または自家幹細胞移植に対して難治性のＮＨＬ、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、前駆体（末梢）Ｔ細胞リンパ芽球性白血病及び／またはリンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫及び／または白血病、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病及び／または前リンパ球性白血病、大型顆粒リンパ性白血病、菌状息肉腫及び／またはセザリー症候群、節外性ナチュラルキラー／Ｔ細胞（鼻型）リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、皮膚（皮膚性）リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞（別途指示されない）リンパ腫、ならびに血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長動物（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長動物）、ウサギ、及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
「添付文書」という用語は、効能、効果、投薬量、投与、併用療法、禁忌、及び／またはかかる治療用製品の使用に関する警告に関する情報を含有する、治療用製品の市販パッケージに慣習的に含まれる指示書を指すために使用される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いる場合、「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈が別途明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。
本明細書において「約」の値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とするバラツキを含む（及び記述する）。例えば、「約Ｘ」を言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
本明細書に記載される本発明の態様及び変形は、態様及び変形「からなる」及び／または「から本質的になる」を含むことが理解される。
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、部分的に抗ＣＤ７９ｂ抗体に基づく。ある特定の実施形態では、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、抗ＣＤ７９ｂＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体である。本発明の抗体は、例えば、Ｂ細胞増殖性疾患の診断または治療に有用である。
Ａ．例示的な抗ＣＤ７９ｂ抗体
一態様では、本発明は、ＣＤ７９ｂに結合する単離された抗体を提供する。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ７９ｂ結合ドメインは、配列番号６３に結合する。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、二重アームの二価ＩｇＧ抗体として約２５ｎＭ未満のＫｄでヒトＣＤ７９ｂと結合する。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、約１０ｎＭ未満のＫｄでヒトＣＤ７９ｂと結合する。抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、約５ｎＭ未満のＫｄでヒトＣＤ７９ｂと結合する。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥによって決定される。いくつかの実施形態では、Ｋｄは、低密度で固定化されるＣＤ７９ｂによって決定される。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、二重アームの二価ＩｇＧ抗体として約１５０ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０でＢ細胞（例えば、ＢＪＡＢ細胞）と結合する。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約１００ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約７５ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５０ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０の実験のうちのいずれかの平均である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞との結合は、ＦＡＣＳによって決定される。
抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン）は、ヒトＣＤ７９ｂと結合し、一価形式で約１．５ｕｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０でＢ細胞（例えば、ＢＪＡＢ細胞）と結合する（例えば、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３結合ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ二重特異性抗体。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｕｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約０．７５ｕｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約０．５ｕｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約０．２５ｕｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０の実験のうちのいずれかの平均である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞との結合は、ＦＡＣＳによって決定される。
抗体ＣＤ７９．Ａ７及びその変異体
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインにおいて、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインにおいて成る、ＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。
上述の実施形態のうちのいずれかでは、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようにＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び／または２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び／または２９内で置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び／または２９のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、抗体は、配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び／または３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９Ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び／または３０内で置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び／または３０のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、抗体は、上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１５及び配列番号１６それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１７及び配列番号１８それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号１９及び配列番号２０それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２１及び配列番号２２それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２３及び配列番号２４それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２５及び配列番号２６それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２７及び配列番号２８それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。一実施形態では、抗体は、配列番号２９及び配列番号３０それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態では、配列番号１９のＶＨ配列及び配列番号２０のＶＬ配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、配列番号６３のアミノ酸からなるＣＤ７９ｂのフラグメント内のエピトープに結合する抗体が提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のうちのいずれかによる抗ＣＤ７９ｂ抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。別の実施形態では、抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書において定義される無傷のＩｇＧ１抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
抗体ＳＮ８．ｎｅｗ及びその変異体
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインにおいて、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインにおいて成る、ＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。
上述の実施形態のうちのいずれかでは、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようにＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３７内で置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号３７のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９Ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３８内で置換、挿入、及び／または欠失されている。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号３８のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、抗体は、上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号３７及び配列番号３８それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のうちのいずれかによる抗ＣＤ７９ｂ抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。別の実施形態では、抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書において定義される無傷のＩｇＧ１抗体または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記実施形態のうちのいずれかによる抗ＣＤ７９ｂ抗体は、以下の第１〜７章に記載される特徴のうちのいずれかを単独で、または組み合わせて、組み込んでもよい。
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施形態では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的とする抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂｓの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングされ、その後、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたりＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで遮断される。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的とするＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。次いで、目的とするＦａｂは一晩インキュベートされるが、しかしながら、このインキュベーションは、確実に平衡に達するようにより長い期間（例えば、約６５時間）にわたって継続してもよい。その後、混合物は、室温で（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために捕捉プレートに移される。次いで溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥すると、ウェル当たり１５０μｌのシンチラート（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）が追加され、プレートは、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数される。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度が、競合結合アッセイで使用するために選定される。
別の実施形態に従って、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈した後、カップリングされたタンパク質のおよそ１０の応答単位（ＲＵ）を実現するように５μｌ／分の流速で注射する。抗原の注射後、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応の基を遮断する。動態測定のために、Ｆａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）の２倍段階希釈物が、２５℃及びおよそ２５μｌ／分の流速で、０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注射される。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して計算する。ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として平衡解離定数（Ｋｄ）を計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオンレートが１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オンレートは、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
２．抗体フラグメント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖフラグメント、ならびに以下に記載される他のフラグメントを含むが、これらに限定されない。ある特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖフラグメントの概説については、例えば、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、またＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、上昇したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）には、トリアボディ及びテトラボディも記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部、または軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部を含む、抗体フラグメントである。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
抗体フラグメントは、本明細書に記載される無傷の抗体のタンパク質消化ならびに組み換え宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない種々の技法によって作製することができる。
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長動物に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化している、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、それらの抗原結合フラグメントを含む。
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、そのＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）は、非ヒト抗体に由来し、そのＦＲ（またはそれらの部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）移植を記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングに対する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載する）にさらに記載されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベスト−フィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異された）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、免疫原を、抗原チャレンジに応答して無傷のヒト抗体またはヒト可変領域を含む無傷の抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって調製することができる。かかる動物は典型的に、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般的に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびに ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号）も参照されたい。かかる動物によって生成される無傷の抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載される。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３： ３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体も、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ（Ｔｒｉｏｍａ）技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）、及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
ヒト抗体は、ヒト−由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は、次いで所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２： ６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローン化され、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それは次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２： ４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントとして、またはＦａｂフラグメントとしてのいずれかで、抗体フラグメントを提示する。免疫性を与えられた源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要を伴わずに、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーは、クローン化され（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、幅広い非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリから単離される抗体または抗体フラグメントは、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なされる。
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、ＣＤ７９ｂに対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ７９ｂの２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体を使用して、細胞傷害性薬剤を、ＣＤ７９ｂを発現する細胞に限局することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメントとして調製することができる。
一態様では、本発明は、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３に結合する（すなわち、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを含む）単離された抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εまたはＣＤ３γ）に対するものであり、他方は、ＣＤ７９ｂに対するものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３εポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３γポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ３εのアミノ酸１−２６または１−２７からなるＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３ε）のフラグメント内のエピトープに結合するＣＤ３結合ドメインを含む、抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、二重特異性ＩｇＧ抗体である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、２５０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１００ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫｄでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。
多重特異性抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、例えば、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体は、ＣＤ３結合ドメインを含み、該ＣＤ３結合ドメインは、超可変領域（ＨＶＲ）（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５７若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び／または配列番号５８若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、４０Ｇ５ｃ、またはその誘導体またはクローン類縁体であり得る。
例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
多重特異性抗体、例えば、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５９若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号６０若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、ＣＤ３結合ドメインは、３８Ｅ４ｖ１、またはその誘導体またはクローン類縁体であり得る。
例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
多重特異性抗体、例えば、ＣＤ７９ｂ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、配列番号６１若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号６２若しくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。いくつかの事例では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、抗ＣＤ３抗体は、ＵＣＨＴ１．ｖ９、またはその誘導体またはクローン類縁体であり得る。
例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＨＶＲ（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ｉ）（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＣＤ３結合ドメインを含む。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、約１００ｎｇ／ｍＬ未満のＢ細胞死滅ＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５０ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約２５ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約２０ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約１５ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞死滅は、内因性Ｂ細胞死滅である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞死滅は、細胞株Ｂ細胞死滅、例えば、ＢＪＡＢ細胞株、ＷＳＵ−ＣＬＣＬ２細胞株、ＯＣＩ−Ｌｙ−１９細胞株である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０の実験のうちのいずれかの平均である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０のドナーのうちのいずれかの平均である。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、５０００ｎｇ／ｍＬでＢ細胞の少なくとも約６０％を死滅させる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、５０００ｎｇ／ｍＬでＢ細胞の少なくとも約８０％を死滅させる。抗ＣＤ７９ｂ抗体は、５０００ｎｇ／ｍＬでＢ細胞の少なくとも約９０％を死滅させる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、Ｂ細胞株ＳＵ−ＣＨＬ−６、ＣｏＨＨ２、ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、Ｓｃ−１、ＳＵ−ＣＨＬ−８、ＧＲＡＮＴＡ−５１９、Ｎａｌｍ−６、Ｒａｍｏｓ、及び／またはＯＣＩ−Ｌｙ−１９のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０の実験のうちのいずれかの平均である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０のドナーのうちのいずれかの平均である。
多重特異性抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有し、約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有し、約２５ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有し、約２０ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、細胞傷害性Ｔ細胞活性化は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の％で測定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書、特に実施例に記載される任意の方法で決定される。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０の実験のうちのいずれかの平均である。いくつかの実施形態では、ＥＣ５０は、約５または１０のドナーのうちのいずれかの平均である。
多重特異性抗体を作製するための技法は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、ならびに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電気ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）作用の操作（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体またはフラグメントの架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、二重特異性抗体を産生するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、二重特異性抗体フラグメントを作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体の調製によって作製することもできる。
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能抗原結合部位を有する操作された抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
本明細書の抗体またはフラグメントは、ＣＤ７９ｂならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
７．抗体変異体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。最終構築物に到達ために欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができるが、最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換変異導入のための目的とする部位には、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１において「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において「例示的置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに後述される。アミノ酸置換が目的とする抗体に導入され、その産物が、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの改善に対してスクリーニングされ得る。
Figure 2018505849
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従ってグループ化することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必然的に伴う。
置換変異体の１つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異体（複数可）は、親抗体と比較してある特定の生物学的特性の修飾（例えば、改善）（例えば、上昇した親和性、低減した免疫原性）を有し、及び／または親抗体のある特定の生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１つ以上のＨＶＲ残基は、突然変異され、変異体抗体がファージ上に提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングされる。
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するためにＨＶＲにおいて行われ得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異体ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７に記載されている（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）。）親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指定変異導入）のうちのいずれかによって成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、ライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定するためにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニン系統的変異導入法またはモデリングを使用して特異的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、標的とされることが多い。
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限りは、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上記提供される変異体ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されないか、または１つ以下、２つ以下、若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異導入のために標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、「アラニン系統的変異導入法」と称され、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されている。この方法では、標的残基の残基または基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負に荷電されたアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）と置き換えられ、抗体の抗原との相互作用が影響を受けたかどうかを決定する。さらなる置換が、初期の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的化され得るか、または排除され得る。変異体は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入は、長さが１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端若しくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
ｂ）グリコシル化変異体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって、好都合に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合された炭水化物が、改変され得る。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は典型的に、一般的にＮ−結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチル グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「基部」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の特性が改善された抗体変異体を作製するために行われ得る。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分光分析によって測定されるＡｓｎ２９７に結合する全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造体）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、しかしながら、Ａｓｎ２９７は、抗体におけるわずかな配列変異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位にも位置する場合がある。かかるフコース化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコース化」または「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコース化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコース化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓら）、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体変異体がさらに提供される。かかる抗体変異体では、フコース化が低減され、及び／またはＡＤＣＣ機能が改善され得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も、提供される。かかる抗体変異体は、ＣＤＣ機能も改善され得る。かかる抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではなくいくつかのエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらにある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不必要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体変異体を企図する。インビトロ及び／またはインビボでの細胞毒性アッセイを行い、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、抗体が確実に、ＦｃγＲ結合を欠く（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持するように、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行うことができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁、表３に要約されている。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）で開示されるもの等の動物モデルにおいてインビボで評価されてもよい。また、抗体がＣ１ｑに結合することが不可能であり、それによりＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイが行われてもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施されてもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定もまた、当該技術分野で既知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体は、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
いくつかの態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢ抗体）は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、該１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの事例では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対になる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。他の事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
ＦｃＲｓへの改善または減退した結合を有するある特定の抗体変異体が、記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の改変（すなわち、改善または減退）をもたらす改変が、Ｆｃ領域において行われる。
増加した半減期と、胎児への母体ＩｇＧの移入に関与する新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善した結合（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））と、を有する抗体が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
ｄ）システイン操作された抗体変異体
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の接触可能部位で発生する。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の接触可能部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に抗体を複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、次の残基のうちの任意の１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性により、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐であっても、または非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は可変であり、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／またはタイプは、抗体の改善されるべき特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むが、これらに限定されない考慮に基づいて決定され得る。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞を死滅させる温度まで加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
Ｂ．組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組み換え法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体の作製方法が提供され、該方法は、上に提供されるように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、及び任意に、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む。
抗ＣＤ７９ｂ抗体の組み換え産生のために、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌内で産生され得る。細菌内での抗体フラグメント及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉ内での抗体フラグメントの発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物中で抗体を産生するためのＰＬ抗体（商標）技術を記載する）を参照されたい。
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用である場合がある。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適したある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体は、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、それらの物理／化学特性及び／または生物活性について、特定されるか、スクリーニングされるか、または特徴付けられてもよい。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の既知の方法によってその抗原結合活性について試験される。
別の態様では、競合アッセイを使用して、ＣＤ７９ｂへの結合に対して本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体と競合する抗体を特定することができる。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体によって結合される、同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＣＤ７９ｂは、ＣＤ７９ｂに結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体）、及びＣＤ７９ｂへの結合について第１の抗体と競合するその能力に関して試験されている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＣＤ７９ｂが、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＣＤ７９ｂへの第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化されたＣＤ７９ｂと会合している標識の量が測定される。固定化されたＣＤ７９ｂと会合している標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは第２の抗体が、ＣＤ７９ｂへの結合に関して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
２．活性アッセイ
一態様では、アッセイは、生物活性を有する抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を特定するために提供される。生物活性には、例えば、細胞成長または増殖（例えば、「細胞死滅」活性）を阻害する能力、プログラム細胞死（アポトーシス）を含む細胞死を誘発する能力、または抗原結合活性が挙げられる。インビボ及び／またはインビトロにおいてかかる生物活性を有する抗体も提供される。
いくつかの実施形態では、活性は、Ｂ細胞死滅を支援する能力及び／または細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）は、本明細書、具体的には実施例に記載される方法のうちのいずれかによって、かかるＢ細胞死滅及び／またはＴ細胞生物活性の細胞傷害性作用の活性化について試験される。これらの活性アッセイのうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ分離によって健常ドナーの全血から単離され得る。具体的には、ヒト血液は、ヘパリン処理されたシリンジ中で採取されてもよく、Ｌｅｕｃｏｓｅｐ及びＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓを使用してＰＢＭＣを単離した。必要に応じて、ＣＤ４＋Ｔ及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、製造業者の指示書に従ってＭｉｌｔｅｎｙｉキットを用いて分離されてもよい。
さらに、細胞を、ＧｌｕｔａＭａｘを補充した１０％ＦＢＳ、ペニシリン、及びストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ培地中で洗浄してもよく、約２０万個の浮遊細胞を９６ウェルＵ底プレートに追加した。細胞は、加湿標準細胞培養インキュベータにおいて３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０中で培養され得る。ＢＪＡＢ細胞死滅アッセイでは、２０，０００個のＢＪＡＢ細胞が、種々の濃度のＴＤＢ抗体の存在下で２４時間にわたって、１アッセイ当たりで示される割合でｈｕＰＢＭＣまたは精製Ｔ細胞のいずれかであるエフェクター細胞を加えてインキュベートされ得る。内因性Ｂ細胞死滅アッセイでは、２００，０００個のｈｕＰＢＭＣが、２４時間にわたって種々の濃度のＴＤＢ抗体を加えてインキュベートされ得る。
培養後、細胞は、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳ中０．０５％のアジ化ナトリウム）を用いて洗浄され得る。次いで細胞は、ＦＡＣＳ緩衝液中で染色され、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄され、１ｕｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを含有する１００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液中で懸濁され得る。データは、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター上で収集され、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析され得る。生存Ｂ細胞は、ＦＡＣＳによってＰＩ−ＣＤ１９＋またはＰＩ−ＣＤ２０＋Ｂ細胞としてゲートアウト（ｇａｔｅｄ ｏｕｔ）されてもよく、細胞絶対数は、内部計数対照として反応混合物に追加されるＦＩＴＣビーズを用いて得ることができる。細胞死滅％は、非ＴＤＢ治療対照に基づいて計算することができる。活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ６９−ＦＩＴＣ及び抗ＣＤ２５−ＰＥを使用してＣＤ６９及びＣＤ２５表面発現によって検出され得る。
Ｄ．免疫複合体
本発明は、本明細書において、化学治療剤若しくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらのフラグメント）、または放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合体化される抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む、免疫複合体も提供する。
一実施形態では、免疫複合体は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）であり、抗体は、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ ０ ４２５ ２３５ Ｂ１号を参照されたい）、モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン、カリチアマイシン、またはそれらの誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）、ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン、トリコテシン、ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない、１つ以上の薬物に複合体化される。
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的活性毒素またはそのフラグメントに複合体化される、本明細書に記載される抗体を含む。
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。多様な放射性同位体が、放射性複合体の産生のために利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性複合体が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、または再びヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄等の核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても既知である）のためのスピン標識を含み得る。
抗体及び細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン ２，６−ジイソシアネート等）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）等の多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に複合体化するための例示的キレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびに市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＳＶＳＢ（サクシニミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬を用いて調製されるかかる複合体を明白に企図するが、これに限定されない。
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
一態様では、本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、生体試料中のＣＤ７９ｂの存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で用いる場合、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、細胞または組織を含む。ある特定の実施形態では、かかる組織は、正常組織、ならびに／または他の組織、例えば、Ｂ細胞及び／若しくはＢ細胞関連組織と比べて、高水準でＣＤ７９ｂを発現する癌性組織を含む。
一実施形態では、診断方法または検出方法において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料中のＣＤ７９ｂの存在の検出方法は、提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、ＣＤ７９ｂへの抗ＣＤ７９ｂ抗体の結合を許容する条件下で、生体試料を本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体と接触させることと、複合体が抗ＣＤ７９ｂ抗体とＣＤ７９ｂとの間で形成されるかどうかを検出することと、を含む。かかる方法は、インビトロ法であっても、またはインビボ法であってもよい。一実施形態では、例えば、ＣＤ７９ｂが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＣＤ７９ｂ抗体を使用して、抗ＣＤ７９ｂ抗体を用いる療法にふさわしい対象を選択する。
本発明の抗体を使用して診断され得る例示的な細胞増殖性障害には、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及びマントル細胞リンパ腫を含むが、これらに限定されない、Ｂ細胞障害及び／またはＢ細胞増殖性障害が挙げられる。
ある特定の他の方法を使用して、ＣＤ７９ｂへの抗ＣＤ７９ｂ抗体の結合を検出することができる。かかる方法には、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイ、タンパク質Ａイムノアッセイ、及び免疫組織化学法（ＩＨＣ）等の当該技術分野で周知の抗原結合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、標識された抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに、例えば、酵素反応若しくは分子相互作用によって間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分を含むが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸脱水素酵素、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはミクロペルオキシダーゼ等の色素前駆体を酸化させる過酸化水素を用いる酵素とカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体の薬学的製剤が、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール、メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及びその使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝剤を含む。
本明細書の製剤は、治療されている特定の適応症に対して必要な１つを超える活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有してもよい。例えば、抗ＣＤ７９ｂ抗体に加えて、１つの製剤中に、追加の抗体、例えば、ＣＤ７９ｂポリペプチド上で異なるエピトープに結合する第２の抗ＣＤ７９ｂ抗体、または特定の癌の成長に影響する成長因子等のいくつかの他の標的に対する抗体を含むことが望ましい場合がある。あるいは、または加えて、組成物は、化学治療剤、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、及び／または心臓保護剤をさらに含んでもよい。かかる分子は、意図される目的に対して有効である量で組み合わせて適切に存在する。
活性成分は、例えば、液滴形成技法によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）、若しくはマクロエマルション中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタキレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に封入されてもよい。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
持続放出調製物が調製されてもよい。持続放出調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される製剤は、一般に滅菌されている。無菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成され得る。
Ｇ．治療法及び組成物
本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）のうちのいずれかが、治療法において使用され得る。
一態様では、薬剤として使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）が提供される。さらなる態様では、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＢ細胞増殖性疾患）の治療またはその進行の遅延において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／抗ＣＤ３二重特異性抗体）が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、有効量の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害を有する個体を治療する方法において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を提供する。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能の増強において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的Ｂ細胞）を死滅させるために有効である抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するための抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を提供する。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様では、本発明は、薬剤の製造または調製における抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体））の使用を提供する。一実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＢ細胞増殖性障害）の治療のためのものである。さらなる実施形態では、薬剤は、細胞増殖性障害を有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む、細胞増殖性障害を治療する方法において使用するためのものである。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、薬剤は、個体中の、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的Ｂ細胞）を死滅させるためのものである。さらなる実施形態では、薬剤は、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的Ｂ細胞）を死滅させるために有効な量の薬剤を個体に投与することを含む、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体の免疫機能を増強する方法において使用するためのものである。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、癌及び／またはＢ細胞増殖性障害）を治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、かかる細胞増殖性障害を有する個体に有効量の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害を有する個体において、細胞増殖性障害を有する個体の免疫機能を増強するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、個体に有効量の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を投与して、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えばＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または標的細胞（例えば、標的Ｂ細胞）を死滅させることを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）は、例えば、インビトロ、エクスビトロ、及びインビボ治療法において使用され得る。一態様では、本発明は、インビボまたはインビトロのいずれかで、細胞成長または増殖を阻害するための方法を提供し、本方法は、ＣＤ７９ｂへの結合を許容する条件下で、細胞をその抗ＣＤ７９ｂ抗体に曝露することを含む。「細胞成長または増殖を阻害すること」とは、細胞の成長または増殖を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、若しくは１００％減少させることを意味し、細胞死の誘発を増加させる。ある特定の実施形態では、細胞は、腫瘍細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｂ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、例えば、本明細書に例示されるような異種移植である。
一態様では、本発明の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を使用して、Ｂ細胞増殖性障害を治療または予防する。ある特定の実施形態では、細胞増殖性障害は、ＣＤ７９ｂの発現及び／または活性の増加に関連付けられる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、Ｂ細胞の表面上でのＣＤ７９ｂの発現の増加に関連付けられる。ある特定の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、腫瘍または癌である。本発明の抗体によって治療されるＢ細胞増殖性障害の例には、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及びマントル細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ免疫複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ免疫複合体）を用いる治療に耐性を示す。
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記治療法のうちのいずれかにおいて使用するために、本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）のうちのいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちのいずれか及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）のうちのいずれか、及び、例えば、後述される少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
一実施形態では、Ｂ細胞増殖性疾患は、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を含むが、これらに限定されない。かかるリンパ腫及びリンパ性白血病には、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非切れ込み核細胞性リンパ腫／バーキットリンパ腫（地域性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、及び脾性辺縁帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞型リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞リンパ腫、免疫芽細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリー細胞白血病、ｇ）リンパ性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病、ｉ）形質細胞腫瘍、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ならびに／またはｊ）ホジキン病が挙げられる。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は癌である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、またはマントル細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、低悪性度ＮＨＬ及び／または侵襲性ＮＨＬ等のＮＨＬである。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、低悪性度濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ免疫複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ免疫複合体）を用いる治療に耐性を示す。
本発明の抗体は、療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤及び／またはアジュバントと同時投与されてもよい。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、細胞傷害性薬剤、化学治療剤、または成長阻害剤である。かかる実施形態のうちの１つでは、化学治療剤は、例えば、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、アドリアマイシン、ドキソルビンシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｎｃｉｎ）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））、プレドニゾロン、ＣＨＯＰ、ＣＨＰ、ＣＶＰ、若しくはＣＯＰ等の薬剤または薬剤の組み合わせ、または抗ＣＤ２０（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））若しくは抗ＶＥＧＦ（例えば、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））等の免疫治療薬であり、その併用療法は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及びマントル細胞リンパ腫を含むＢ細胞増殖性障害等の癌及び／またはＢ細胞障害の治療に有用である。他の実施形態では、例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学治療剤、成長阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ ＶＥＧＦ、若しくはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つ以上に結合する抗体等の本発明の抗ＣＤ３抗体以外の抗体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、または別の生物活性若しくは有機化学剤等の他の薬剤である。
いくつかの実施形態では、本方法は、追加の療法をさらに含んでもよい。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述のものの組み合わせであってもよい。追加の療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形態であってもよい。いくつかの実施形態では、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、抗嘔吐剤等の治療の副作用の発生及び／または重症度を低減することを意図する薬剤等）の投与である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、手術である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、放射線療法と手術の組み合わせである。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ガンマ線放射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の治療剤のうちの１つ以上の別個の投与であってもよい。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療剤は、グルココルチコイドである。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、トリアムシノロン、パラメタゾン、ベタメタゾン、フルドロコルチゾン、ならびにそれらの薬学的に許容されるエステル、塩、及び複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンである。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンの薬学的に許容されるエステル、塩、または複合体である。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンである。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、抗ＣＤ２０抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、オビヌツズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブ、ウブリツキシマブ（ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、及び／またはイブリツモマブチウキセタンである。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、アルキル化剤を含む。いくつかの実施形態では、アルキル化剤は、４−［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−１−メチルベンズイミダゾール−２−イル］ブタン酸及びその塩である。いくつかの実施形態では、アルキル化剤は、ベンダムスチンである。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ＢＣＬ−２阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘクス−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド及びその塩である。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤は、ベネトクラックス（ＣＡＳ番号：１２５７０４４−４０−８）である。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、デルタアイソフォームＰＩ３Ｋ（すなわち、Ｐ１１０δ）を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン及びその塩である。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＳ番号：８７０２８１−８２−６）である。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋのアルファ及びデルタアイソフォームを阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、２−｛３−［２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２−４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル｝−２−メチルプロパンアミド及びその塩である。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＢＴＫ阻害剤は、１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロップ−２−エン−１−オン及びその塩である。いくつかの実施形態では、ＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブ（ＣＡＳ番号：９３６５６３−９６−１）である。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、サリドマイドまたはその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、サリドマイドまたはその誘導体は、（ＲＳ）−３−（４−アミノ−１−オキソ１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン及びその塩である。いくつかの実施形態では、サリドマイドまたはその誘導体は、レンダリドミド（ｌｅｎｄａｌｉｄｏｍｉｄｅ）（ＣＡＳ番号：１９１７３２−７２−６）である。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、またはプレドニゾロン（ＣＨＯＰ）のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＧＡ−１０１及び／またはＲｉｔｕｘａｎ）をさらに含む。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、またはプレドニゾロン（ＣＨＰ）のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＧＡ−１０１及び／またはＲｉｔｕｘａｎ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体は、Ｕ．Ｓ．８，０８８，３７８及び／またはＵＳ２０１４／００３０２８０のうちのいずれかに記載されており、これらは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体は、ポラツズマブベドチンである。Ｂ細胞増殖性障害のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ ＭＭＡＥ抗体薬物複合体）を用いる治療に耐性を示す。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体薬物複合体は、ポラツズマブベドチンである。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ＰＤ−１結合アンタゴニストを含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストを含む。本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
本方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに所望に応じて局所治療のための病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。投薬は、任意の好適な経路によるもの、例えば、投与が短時間であるか、または慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内注射または皮下注射等の注射によるものであり得る。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。いくつかの実施形態では、投与は、皮下である。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、及び投与されるだろう。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因を含む。抗体は必然的にではなく任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に左右される。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は好適に、１回で、または一連の治療にわたって患者に投与される。
一般的な提案として、ヒトに投与される抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）の治療有効量は、１回以上の投与によるものかどうかにかかわらず、患者の体重の約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、例えば、毎日投与される、使用される抗体は、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）は、２１日周期の１日目に約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、または約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。用量は、注入物等の、単回用量で、または複数回用量（例えば、２回用量または３回用量）で投与されてもよい。病態に応じて数日間以上にわたって反復投与では、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲だろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週、または３週間毎に投与されてもよい（例えば、患者が、約２回〜約２０回、または例えば、約６回用量の抗ＣＤ７９ｂ抗体（例えば、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体）を受容するようにする。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
Ｈ．製造品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器上の、または容器と関連するラベル若しくは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体によって、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物をその中に収容した第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器を含み得る。本発明のこの実施形態の製造品は、組成物を使用して特定の病態を治療することができることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
上記製造品のうちのいずれかは、抗ＣＤ７９ｂ抗体の代わりに、またはそれに加えて本発明の免疫複合体を含んでもよいことが理解される。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供される概要を仮定して、種々の他の実施形態が実践され得ることが理解される。
実施例１
材料及び方法
Ａ．モノクローナル抗体生成
ヒトＣＤ７９ｂのＦｃ標的化またはＨｉｓ標的化細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を発現するベクターをＣＨＯ細胞内に一過性トランスフェクションすることによって、マウスの免疫化のためのタンパク質を生成した。タンパク質Ａカラム上のトランスフェクトされた細胞上清からタンパク質を精製し、タンパク質の同一性をＮ末端シークエンシングによって確認した。１０個のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，Ｃａｌｉｆ．）を、ヒトＣＤ７９ｂの組み換えＦｃ標的化またはＨｉｓ標的化ＥＣＤで過免疫化した。直接ＥＬＩＳＡによりヒトＣＤ７９ｂ免疫原に対して高い抗体価を示し、Ｒａｍｏｓ細胞に対して特異的に結合するマウス由来のＢ細胞を、以前に記載されているように（Ｈｏｎｇｏ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４：２５３−２６０（１９９５）、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７（１９７５）、Ｆｒｅｕｎｄ，Ｙ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２９：２８２６−２８３０（１９８２））、マウス骨髄腫細胞（Ｘ６３．Ａｇ８．６５３；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）と融合した。１０〜１２日後、上清を収集し、直接ＥＬＩＳＡ、及び上述のＦＡＣＳによって抗体産生及び結合に関してスクリーニングした。限界希釈による第２巡目のサブクローニング後、最も高い免疫結合を示す陽性クローンを、ヒトＣＤ７９ｂ特異性及び交差反応を含むさらなる特性評価のために拡張及び培養した。以前に記載されているように（Ｈｏｎｇｏ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４：２５３−２６０（１９９５）、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７（１９７５）、Ｆｒｅｕｎｄ，Ｙ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２９：２８２６−２８３０（１９８２））、各ハイブリドーマ系統から収集された上清を、親和性クロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって精製した。次いで、精製された抗体調製物を滅菌濾過して（０．２−Φｍ孔径；Ｎａｌｇｅｎｅ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ Ｎ．Ｙ．）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で、４℃で保管した。
Ｂ．ＴＤＢの生成
以前に記載されているように（Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６−３５，１９９７）、ヒトＩｇＧ１である、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）形式の完全長抗体である、ＴＤＢ抗体を産生した。半抗体がタンパク質Ａ−親和性クロマトグラフィーによって精製されたＥ．ｃｏｌｉまたはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で発現され、以前に記載されているように（Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３）、その適切な半抗体対をインビトロでアニーリングした。ＣＨＯ細胞内でＴＤＢ抗体産生を行った場合、ＴＤＢ抗体が、エフェクターのない（ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｌｅｓｓ）変異体であり、抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を始めることが不可能であるように、抗体は、例えば、残基Ｎ２９７（例えば、Ｎ２９７Ｇ）に非グリコシル化突然変異を有し得る。
アニーリング後、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって精製し、分析用ゲル濾過、質量分光分析、及びポリアクリルアミドゲル電気泳動によって特徴付けた。精製された抗体を、単一ピーク（９９％超のシグナル）として、０．２％未満の凝集体を含むゲル濾過内を通した。質量分光分析では、ホモ二量体は検出されなかった。
Ｃ．結合親和性
ＢｉａｃｏｒｅまたはＦＡＣＳ分析によって、ＣＤ３／ＣＤ７９ｂ ＴＤＢの各々に対する結合親和性を試験した。簡潔に述べると、Ｂｉａｃｏｒｅ結合アッセイでは、ヒトＣＤ３γεが、Ｂｉａｃｏｒｅのアミンカップリングキットを使用してＢｉａｃｏｒｅ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサチップ上に固定され、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体またはそのＦａｂ変異体が、通過画分中に存在した。ＦＡＣＳ結合アッセイでは、ＢＪＡＢ細胞（Ｂ細胞抗原に対する）または定められる他の細胞株を、種々の濃度のＴＤＢ抗体を加えて４℃で３０分間インキュベートし、次いで、細胞を洗浄し、細胞を再び洗浄してＦＡＣＳ分析への準備を整える前に、第２の抗体（抗ｈｕＩｇＧ−ＰＥ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を加えてさらに１５分間インキュベートした。
Ｄ．インビトロでのＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化アッセイ
生成された抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を、Ｂ細胞死滅及び細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を支援する、その能力に関して試験した。これらのアッセイでは、Ｆｉｃｏｌｌ分離によって健常ドナーの全血からＰＢＭＣを単離した。簡潔に述べると、ヘパリン処理されたシリンジ中でヒト血液を採取し、製造業によって推薦される、Ｌｅｕｃｏｓｅｐ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−ｏｎｅ、カタログ番号２２７２９０Ｐ）及びＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号９５０３８−１６８）を使用してＰＢＭＣを単離した。必要に応じて、製造業者の指示書に従ってＭｉｌｔｅｎｙｉキットを用いて、ＣＤ４＋Ｔ及びＣＤ８＋Ｔ細胞を分離した。
細胞を、ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号３５０５０−０６１）を補充した１０％ＦＢＳ、ペニシリン、及びストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５１４０−１２２）を含有するＲＰＭＩ培地中で洗浄し、約２０万個の浮遊細胞を９６ウェルＵ底プレートに追加した。細胞を、加湿標準細胞培養インキュベータにおいて３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中で培養した。ＢＪＡＢ細胞死滅アッセイでは、別途指示がない限り、種々の濃度のＴＤＢ抗体の存在下で２４時間にわたって、１アッセイ当たりで示される割合でｈｕＰＢＭＣまたは精製Ｔ細胞のいずれかであるエフェクター細胞を加えて、２０，０００個のＢＪＡＢ細胞をインキュベートした。内因性Ｂ細胞死滅アッセイでは、２００，０００個のｈｕＰＢＭＣを、別途指示がない限り、種々の濃度の抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を加えて２４時間にわたってインキュベートした。
培養後、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳ中０．０５％のアジ化ナトリウム）で細胞を洗浄した。次いで細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で染色し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１ｕｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを含有する１００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液中で懸濁した。データをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター上で収集し、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析した。生存Ｂ細胞は、ＦＡＣＳによってＰＩ−ＣＤ１９＋またはＰＩ−ＣＤ２０＋Ｂ細胞としてゲートアウトされ、内部計数対照として反応混合物に追加されるＦＩＴＣビーズを用いて細胞絶対数を得た。細胞死滅％を、非ＴＤＢ治療対照に基づいて計算した。活性化Ｔ細胞を、抗ＣＤ６９−ＦＩＴＣ（ＢＤ、カタログ番号５５５５３０）及び抗ＣＤ２５−ＰＥ（ＢＤ、カタログ番号５５５４３２）を使用するＣＤ６９及びＣＤ２５表面発現によって検出した。
Ｄ．インビボでの有効性
５０ＳＣＩＤ．ｂｇマウスに、ＨＢＳＳ中、５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１細胞をマウス１匹当たり０．２ｍＬの量で（２００ｕｌを超えない）、または、ＨＢＳＳ中、５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１細胞と１千万個のＰＢＭＣとの混合物を０．２ｍｌの量で（２００ｕｌを超えない）、右片側胸部内の皮下に接種した。これは予防研究であり、接種及び治療は０日目に施された。
５つの研究群が存在した：１）５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１、ビヒクル、週１回ｘ２、ＩＶ、２）５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１、０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７９ ＴＤＢ、週１回ｘ２、ＩＶ、３）５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１＋１０ｘ１０＾６ＰＢＭＣ（事前混合される）、ビヒクル、週１回ｘ２、ＩＶ、４）５百万個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１＋１０ｘ１０＾６ＰＢＭＣ（事前混合される）、０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７９ ＴＤＢ（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）、週１回ｘ２、ＩＶ、及び５）５個のＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性モデルＴ１．１Ｘ１、８ｍｇ／ｋｇのＢＪＡＢ−ｌｕｃ抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、１回、ＩＶ。Ｂｕｆｆｙ Ｃｏａｔ ＤｏｎｏｒからのＰＢＭＣを非活性化条件下で一晩培養し、ＢＪＡＢ細胞との混合物として接種した。全治療は、静脈内（尾静脈）に０．１ｍｌの量（２００ｕｌを超えない）で施された。１週間に１〜２回、腫瘍を測定した。最終治療後、最大１４日間にわたって１〜２回／週、体重を測定した。
１．ＣＤ７９ｂ ＴＤＢ−抗ＣＤ７９ｂ抗原アームの選択
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）が生成されており（プロテアーゼ切断可能リンカーによってモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に複合体化されたヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体（ヒト化ＳＮ８）等）、これは臨床においてＮＨＬの治療に対して効果があることを示している。米国特許第８，０８８，３７８号及びＭｏｒｓｃｈｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，「４４５７ Ｕｐｄａｔｅｄ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ Ｐｈａｓｅ ＩＩ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｓｔｕｄｙ（ＲＯＭＵＬＵＳ）ｏｆ Ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ ｏｒ Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ Ｐｌｕｓ Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｌａｐｓｅｄ／Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ」５６ｔｈ ＡＳＨ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ：Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ６−９，２０１４を参照されたい。
抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣの臨床的成果に基づいて、ヒト化ＳＮ８抗体は、腫瘍細胞の根絶におけるＴ細胞の高い細胞傷害能を利用するためにＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体形式であった。米国特許第８，０８８，３７８号を参照されたく、その全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる。上述のように、抗ＣＤ３（例えば、ＵＣＨＴ１．ｖ９、例えば、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６２：３１９−３２４（１９９５）を参照されたい）／抗ＣＤ７９ｂ（例えば、ＳＮ８．ｖ２８）二重特異性ノブ及びホール（ｋｎｏｂ＆ｈｏｌｅ）（Ｋ＆Ｈ）を生成した。しかしながら、上述の２つの異なるドナーを使用する内因性Ｂ細胞死滅検定では、ＵＣＨＴ１．ｖ９／ＳＮ８．ｖ２８二重特異性Ｋ＆Ｈに対するＢ細胞死滅活性不良を観察した。細胞死滅アッセイにおいて、ＥＣ５０は、３５７ｎｇ／ｍＬ及び１２０ｎｇ／ｍＬであった。
抗ＣＤ７９ｂ抗体アームとして２Ｆ２を使用して、第２の抗ＣＤ３（例えば、ＵＣＨＴ１．ｖ９）／抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢを生成した。２Ｆ２は、抗ＣＤ７９ｂ ＡＤＣとしてインビトロでの見込みを示した。例えば、その全ての内容が参照により組み込まれる、ＵＳ２００９００６８２０２を参照されたい。加えて、ＣＤ７９ｂアーム抗体ＳＮ８．ｖ２８を、細胞死滅を改善することを目的として修飾した（ＳＮ８．ｎｅｗ（ＶＨ配列番号３７及びＶＬ配列番号３８））。図１Ａ（内因性Ｂ細胞死滅アッセイ）及び図１Ｂ（ＢＪＡＢ細胞死滅アッセイ）に示されるように、ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性Ｋ＆Ｈ抗体、ＳＮ８．ｎｅｗ／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性Ｋ＆Ｈ抗体、ならびに２Ｆ２／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性Ｋ＆Ｈ抗体は、Ｂ細胞死滅活性不良をもたらした。
上述のようにモノクローナル抗ＣＤ７９ｂ抗体を生成した。これらの抗ＣＤ７９ｂ抗体のうちの２つ（ＣＤ７９ｂ．Ｆ６及びＣＤ７９ｂ．Ａ７）も、二重特異性ｂｉｓｆａｂ形式の抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３抗体として試験した。図１Ｃに示されるように、内因性Ｂ細胞死滅アッセイにおいて、ＣＤ７９ｂ．Ｆ６／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性ｂｉｓｆａｂは、ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性Ｋ＆Ｈと比べて改善したＢ細胞死滅を示した（１８９ｎｇ／ｍＬと比べて３３ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０）。さらに、図１Ｃに示されるように、内因性Ｂ細胞死滅アッセイにおいて、二重特異性ｂｉｓｆａｂ ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＨＴ１．ｖ９は、二重特異性ｂｉｓｆａｂ ＣＤ７９ｂ．Ｆ６／ＵＣＨＴ１．ｖ９またはＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９二重特異性Ｋ＆Ｈのいずれかと比べてＢ細胞死滅を劇的に改善した（３３ｎｇ／ｍＬ及び１８９ｎｇ／ｍＬと比べて１２ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０）。追加のドナーを使用して内因性Ｂ細胞死滅及びＣＤ８＋Ｔ細胞活性化に関して、二重特異性ｂｉｓｆａｂ ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＨＴ１．ｖ９をさらに試験した。図２Ａ及びＣに示されるように、上述の内因性Ｂ細胞死滅アッセイにおいて、２つの異なるドナーを使用する二重特異性ｂｉｓｆａｂ ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＨＴ１．ｖ９は、それぞれ、７．０ｎｇ／ｍＬ及び１８ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有する効率的なＢ細胞死滅をもたらした。同時に、図２Ｂ及びＤに示されるように、上述のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化アッセイにおいて、二重特異性ｂｉｓｆａｂ ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＨＴ１．ｖ９は、それぞれ、１７ｎｇ／ｍＬ及び１７ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有するＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞％から明らかなように、Ｔ細胞の効率的な活性化をもたらした。
抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体中の異なる抗ＣＤ７９ｂ抗原アームのＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の差をよりよく理解するために、異なる抗ＣＤ７９ｂ抗原アームの特性を分析した。ＢＪＡＢ細胞へのＣＤ７９ｂ．Ａ７の結合は、ＦＡＣＳアッセイにおいて、ｈｕＣＤ７９ｂのＮＨ２末端に対応する２１−アミノ酸ペプチドＡＲＳＥＤＲＹＲＮＰＫＧＳＡＣＳＲＩＷＱＳ（配列番号６３）と競合されたが、ｃｙｎｏＣＤ７９ｂのＮＨ２に対応する２１−アミノ酸ペプチドＡＫＳＥＤＬＹＰＮＰＫＧＳＡＣＳＲＩＷＱＳ（配列番号６４）とは競合されなかった（データは図示されない）。これは、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．８（１０）：２９３７−２９４７（２００９）に記載されるように、２Ｆ２及びＳＮ８の結果と類似している。したがって、ＣＤ７９ｂ上のエピトープは、ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９、２Ｆ２／ＵＣＨＴ１．ｖ９、及びＣＤ７９．Ａ７の間のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化の差の主な原因であるとは思われない。
Ｂ細胞死滅活性への寄与が存在する場合、よりよく理解するために、一価及び二価抗ＣＤ７９ｂ抗体結合親和性も評定した。二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体及び二重特異性抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３抗体の結合親和性も、ＢＪＡＢ細胞を使用して分析した。初期実験は、二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体ＳＮ８．ｖ２８のＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による結合親和性が、０．０４μｇ／ｍＬであった一方、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３二重特異性Ｋ＆Ｈ（ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９）のＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による結合親和性が、たった３．７μｇ／ｍＬであったことを示した。同様に図３Ａに示されるように、二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体２Ｆ２のＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による結合親和性は、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３二重特異性Ｋ＆Ｈ（ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９、ＳＮ８ｎｅｗ／ＵＣＨＴ１．ｖ９、及び２Ｆ２／ＵＣＨＴ．ｖ９）よりも著しく高かった。追加の抗ＣＤ７９抗体、ＣＤ７９ｂ．Ｆ６、及びＣＤ７９ｂ．Ａ７の結合親和性を、二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体形式で、ならびにｂｉｓｆａｂ及びＫ＆Ｈ二重特異性抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３抗体において試験した。図３Ｂに示されるように、ＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体ＣＤ７９．Ａ７の結合親和性は、０．３１μｇ／ｍＬであった。二重特異性ｂｉｓｆａｂ抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３（ＣＤ７９ｂ．Ａ７／ＵＣＨＴ１．ｖ９）のＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による結合親和性は、二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体ＣＤ７９．Ａ７よりも低いが、依然として比較して高い、１．４μｇ／ｍＬであった。二重アームの二価抗ＣＤ７９ｂ抗体ＣＤ７９ｂ．Ｆ６ならびにＫ＆Ｈ及びｂｉｓｆａｂ二重特異性抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３抗体（それぞれ、ＳＮ８．ｖ２８／ＵＣＨＴ１．ｖ９及びＣＤ７９ｂ．Ｆ６／ＣＨＴ１．ｖ９）のＢＪＡＢ細胞におけるＥＣ５０による結合親和性は、著しく低かった。このデータに基づいて、一価結合親和性を、内因性Ｂ細胞枯渇及びＢ細胞死滅％の程度と相関させた。
２．抗ＣＤ７９ｂ抗原アームのヒト化
上述のようにモノクローナル抗体ＣＤ７９ｂ．Ａ７をヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に従う。
ＣＤ７９ｂ．Ａ７のヒト化中に構築された変異体を、ＩｇＧの形態で評価した。マウスＣＤ７９ｂ．Ａ７のＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩＩ（ＶＬＫ２）及びヒトＶＨ下位集団Ｉ（ＶＨＩ）コンセンサス配列と整列させた。マウス抗体の超可変領域を、ＶＬＫ２及びＶＨＩアクセプターフレームワーク内に操作した。具体的には、ｍｕＣＤ７９ｂ．Ａ７ドメインから、２４〜３４位（Ｌ１）、５０〜５６位（Ｌ２）、及び８９〜９７位（Ｌ３）をＶＬＫ２に移植し、ｍｕＣＤ７９ｂ．Ａ７ＶＨドメインから、２６〜３５位（Ｈ１）、５０〜６５位（Ｈ２）、及び９３〜１０２位（Ｈ３）をＶＨＩに移植した。
この区分における抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００によって決定した。簡潔に述べると、供給者の指示書に従って、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬を用いて、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップを活性化した。Ｃ末端でＦｃドメインと融合したヒトＣＤ７９ａを、このチップとカップリングした。より多くの一価結合事象を実現するために、低密度の約１２の応答単位（ＲＵ）を各フローセル内で固定化した。抗体の見かけの親和性を測定するために、抗原の約３７０のＲＵを固定化した。未反応のカップリング基を、１Ｍのエタノールアミンで遮断した。動態測定のために、３０μｌ／分の流速及び２５℃で、ＰＢＳ−Ｔ緩衝剤（ＰＢＳ中０．０５％の界面活性剤Ｐ２０）に抗体の３倍段階希釈物を注射した。１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．７）を、３０ｕｌ／分の流速で１分間にわたり再生緩衝液として使用した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ１００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第２．０版）を使用して計算した。平衡解離定数（Ｋｄ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算した。
ＣＤ７９ｂ．Ａ７（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１）のヒト化ＣＤＲ移植片は、ＣＤ７９ｂに結合しなかった。このため、追加のヒト化変異体を作製し、結合に対するマウスフレームワークバーニア位置の寄与を評定した。６個の追加の軽鎖（ＶＬ１：ＣＤＲ移植片＋（Ｙ３６Ｌ）、ＶＬ２：ＣＤＲ移植片＋（Ｙ３６Ｌ＋Ｌ４６Ｃ）、ＶＬ３：ＣＤＲ移植片＋（Ｉ２Ｖ＋Ｙ３６Ｌ＋Ｌ４６Ｃ）、ＶＬ４：ＣＤＲ移植片＋（Ｙ３６Ｌ＋Ｌ４６Ｓ）、ＶＬ５：ＣＤＲ移植片＋（Ｉ２Ｖ＋Ｙ３６Ｌ＋Ｌ４６Ｓ）、ＶＬ６：ＣＤＲ移植片＋（Ｌ４６Ｓ））、及び７個の追加の重鎖（ＶＨ１ａ：ＣＤＲ移植片＋（Ａ９３Ｓ）、ＶＨ１ｂ：ＣＤＲ移植片＋（Ｒ７１Ｖ＋Ａ９３Ｓ）、ＶＨ１ｃ：ＣＤＲ移植片＋（Ｖ６７Ａ＋Ｉ６９Ｌ＋Ｒ７１Ｖ＋Ａ９３Ｓ）、ＶＨ１ｄ：ＣＤＲ移植片＋（Ｖ６７Ａ＋Ｉ６９Ｌ＋Ｒ７１Ｖ＋Ｔ７３Ｋ＋Ａ９３Ｓ）、ＶＨ１ｅ：ＣＤＲ移植片＋（Ｖ６７Ａ＋Ｒ７１Ｖ＋Ａ９３Ｓ）、ＶＨ１ｆ：ＣＤＲ移植片＋（Ｉ６９Ｌ＋Ｒ７１Ｖ＋Ａ９３Ｓ）、及びＶＨ１ｇ：ＣＤＲ移植片＋（Ｖ６７Ａ＋Ｉ６９Ｌ））を構築し、組み合わせて、表２の変異体を生成した。これらの変異体の親和性に基づき、軽鎖内のＹ３６Ｌ及びＬ４６Ｃは、重要なマウスバーニア残基であるように思われる。驚くことに、遊離システインの使用を避けるために４６位がセリンに変化した場合、この変化を有する変異体の親和性は、劇的に改善した。重鎖内のＶ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ｖ、及びＡ９３ＳもＣＤ７９ｂ結合に寄与したが、しかしながら、この突然変異分析に基づき、Ｒ７１Ｖが、重要なマウスバーニア残基であるように思われた。表２の親和性は、一価結合を概算するための、低密度で固定化されたＣＤ７９ｂへの二価ＩｇＧ結合に基づく、全て見かけの親和性である。以下の表２を参照されたい。
Figure 2018505849
ＦＡＣＳ分析によって結合親和性をさらに試験するため、ＢＪＡＢ細胞を、氷上で３０分間、種々の抗ＣＤ７９ｂ抗体を加えてインキュベートした。インキュベーションが終わった後、氷冷されたＦＡＣＳ緩衝液（１ｘＰＢＳ、２％のＢＳＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）で細胞を洗浄し、その後、ＰＥ標識マウス抗ヒトＩｇＧ抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、番号５５５７８７）用いるインキュベーションが続く。ＢＤ ＬＳＲ分析器上でフローサイトメトリー分析を行った。二価結合は、ＰＥフルオロフォアの平均蛍光強度（ＭＦＩ）として発現された。ＢＪＡＢ−ルシフェラーゼ細胞へのｃｈＣＤ７９ｂ．Ａ７、ｈｕＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１２、及びｈｕＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４の結合は、それぞれ、１２４ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、及び６８ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０であった。
一価及び二価のヒト化ＣＤ７９．Ａ７．ｖ１４の結合親和性を、上述のように試験した。図３Ｃに示されるように、一価ＣＤ７９．Ａ７．ｖ１４（Ｋ＆Ｈ ＴＤＢフォーマットＣＤ７９．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃである）は、２２０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を有した一方、二価の二重アームＣＤ７９Ａ７．ｖ１４は、４６．８ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を有した。
ヒト化抗体ＣＤ７９．Ａ７．ｖ１４を、熱応力下（４０℃、ｐＨ５．５、２週間）、及び２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）塩酸塩（ＡＡＰＨ）分析で試験した。試料に熱応力をかけて、産物の保存期間にわたる安定性を模倣した。試料を、２０ｍＭのＨｉｓ Ａｃｅｔａｔｅ、２４０ｍＭのスクロース、ｐＨ５．５へと緩衝液交換し、１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。１ｍＬの試料に４０Ｃで２週間応力をかけ、２番目を対照として−７０Ｃで保管した。次いで、トリプシンを使用して両方の試料を消化し、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）−質量分光分析（ＭＳ）分析を使用して分析され得るペプチドを作成した。試料中の各ペプチドに関して、ＬＣから保持時間、ならびに高分解能精密質量及びペプチドイオン断片化情報（アミノ酸配列情報）を、ＭＳにおいて取得した。＋−１０ｐｐｍの範囲でデータセットから目的とするペプチド（天然及び修飾ペプチドイオン）に関して抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）を行い、ピークを統合して、面積を決定した。（修飾ペプチドの面積）を（修飾ペプチド＋天然ペプチドの面積）で除し、１００を乗ずることによって、各試料に対する修飾の相対的割合を計算した。
ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４のＣＤＲ−Ｈ１内のＷ３３及びＣＤＲ−Ｈ２内のＭ６２は、酸化の影響を受けやすいことを示した（Ｗ３３酸化の７３．７％上昇及びＭ６２酸化の６４．８％上昇）。ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４抗体の変異体を試験し、ｈｕＣＤ７９ｂへの結合に影響を及ぼすことなく、潜在的な酸化が低減され得るかどうかを決定した。変異体ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂは、ヒトＶＨ１コンセンサス（Ｗ３３Ｙ、Ｍ６２Ｋ、Ｋ６４Ｑ、及びＤ６５Ｇ）と一致するようにこれらの領域を変化することによって、これらの潜在的な酸化問題を排除した。これらの変化は、ＣＤ７９ｂ結合に対する親和性を変更しない。図示されないデータを参照されたい。
３．ＣＤ７９ｂ ＴＤＢ−抗ＣＤ３抗原アームの選択
抗ＣＤ７９ｂ ＴＤＢ抗体Ｂ細胞死滅の効率におけるＣＤ３結合ドメイン対合の作用を分析した。４０Ｇ５ｃ及び３８Ｅ４ｖ１を含む異なる抗ＣＤ３抗体結合ドメインと組み合わせて、抗ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４抗体を試験した。抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体を加えて、または加えずに２００，０００個のＰＢＭＣを４８時間にわたってインキュベートした。図５ＡのＢ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。図５Ｂに示されるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団中のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋細胞にゲートを作成することによって、Ｔ細胞活性化を測定した。図５Ａ及びＢに示されるように、Ｋ＆Ｈ ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃは、ＣＤ８＋Ｔ活性化不良及び低割合の内因性Ｂ細胞死滅を示した。追加の実験（データは図示されない）では、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈ）は、２つの異なるドナーを使用して、ＣＤ８＋Ｔ活性化に対して１．１及び２．３ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０、ならびに内因性Ｂ細胞死滅に対して２６５８及び２８８ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を示した。対照的に、図５Ａ及びＢに示されるように、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／３８Ｅ４ｖ１ Ｋ＆Ｈ）は、ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈと比べて、実質的に改善したＣＤ８＋Ｔ細胞活性化及び内因性Ｂ細胞死滅の割合（内因性Ｂ細胞死滅に対して１５ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０）を示した。追加の実験（データは図示されない）では、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈ）は、６つの異なるドナーを使用して、内因性Ｂ細胞死滅に対して４０１、１４、１．５、１０、１２、及び１６ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を示した。
抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈ）のＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化活性も、上述されるように、及び図６の図の説明文に記載されるように、ＢＪＡＢ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株において試験した。図６Ａ及びＢに示されるように、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈ）は、有意なＣＤ８＋Ｔ活性化及びＢ細胞死滅の割合（ＢＪＡＢ Ｂ細胞死滅に対して８５ｎｇ／ｍＬ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ Ｂ細胞死滅に対して８２ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０）を示した。ＢＪＡＢ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ Ｂ細胞を使用するＣＤ８＋Ｔ細胞活性化に対するＥＣ５０は、それぞれ、１８及び３９ｎｇ／ｍＬであった。
抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／４０Ｇ５ｃ Ｋ＆Ｈ）のＢ細胞死滅活性を、図７Ａ−Ｂに記載されるように種々の細胞株において試験した。ＨＴ細胞株は、非ＣＤ７９ｂ発現細胞である。Ｂ細胞死滅の割合を次のように計算した：（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数−ＴＤＢを有する生存Ｂ細胞数）／（ＴＤＢを有しない生存Ｂ細胞数）＊１００。図７Ａに示されるように、ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、及びＯＣＩ−ＬＹ−１９細胞に対するＢ細胞死滅の用量反応曲線では、ＯＣＩ−Ｌｙ−１９、ＢＪＡＢ、及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ Ｂ細胞死滅に対して、それぞれ、８．８７、２．６３、及び１７．４１ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０。図７Ｂは、複数の細胞株（２連、平均±ＳＴＤ）にわたって、５０００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ７９／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１ Ｋ＆Ｈ）による、有意なＢ細胞死滅を示す。
ＣＤ３及びＣＤ７９ｂに対する二重特異性を有する生成されたＴＤＢ抗体の多様な有効性は、高い有効性を保有する例示的なＴＤＢの生成における、双方の抗体アームの極めて重要であり、予測不能な寄与を明確に示す。
４．抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性Ｂ細胞のインビトロ及びインビボでの有効性
インビトロ及びインビボでの抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）のＢ細胞死滅活性も、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性Ｂ細胞において試験した。ＢＪＡＢ細胞変異体（ＢＪＡＢ−ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．１及びＢＪＡＢ−ＳＮ８ｖ２８ｖｃＥ ＣＤ７９ｂ ＡＤＣ−Ｒ Ｔ１．２）は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性Ｂ細胞で治療されるマウスの非応答性ＢＪＡＢ異種移植腫瘍に由来した。図８Ａに示されるように、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）は、ＢＪＡＢならびに抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性ＢＪＡＢ細胞のインビトロでの細胞死滅において非常に有効であった。さらに、図８Ｂに示されるように、抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３ ＴＤＢ抗体（ＣＤ７９ｂ．Ａ７．ｖ１４ｂ／３８Ｅ４ｖ１）は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ耐性ＢＪＡＢ腫瘍のインビボでの成長を防ぐ。
上述の発明は、明確な理解を目的とする実例及び例として、ある程度詳細に記載されているが、記述及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。
Figure 2018505849
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Claims (69)

  1. 単離された抗ＣＤ７９ｂ抗体であって、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
    （ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＣＤ７９ｂ結合ドメインを含む、前記抗体。
  2. 前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  3. 前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  4. （ａ）配列番号１７、２１、２３、２５、２７、若しくは２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１８、２２、２４、２６、２８、若しくは３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  5. 配列番号１７、２１、２３、２５、２７、または２９のＶＨ配列を含む、請求項３〜４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  6. 配列番号１８、２２、２４、２６、２８、または３０のＶＬ配列を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  7. （ａ）配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、請求項３に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  8. 配列番号１９のＶＨ配列を含む、請求項３または７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  9. 配列番号２０のＶＬ配列を含む、請求項３または７〜８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  10. 前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインが、配列番号６３に結合する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  11. 前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインが、二重アームの二価ＩｇＧ抗体として約２５ｎＭ未満、例えば、約１０ｎＭ未満または約５ｎＭ未満のうちのいずれかのＫｄでヒトＣＤ７９ｂと結合する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  12. 前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインが、ヒトＣＤ７９ｂと結合し、一価形式で約１．５ｕｇ／ｍＬ未満、例えば、約１ｕｇ／ｍＬ未満、０．７５ｕｇ／ｍＬ、０．５ｕｇ／ｍＬ、または０．２５ｕｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０でＢ細胞と結合する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  13. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  14. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  15. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、ＣＤ７９ｂと結合する抗体フラグメントである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  16. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び／または（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項１５に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  17. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、完全長抗体である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  18. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位突然変異を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  19. 前記非グリコシル化部位突然変異が、置換突然変異である、請求項１８に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  20. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、低減したエフェクター機能を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  21. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／またはＤ２６５における置換突然変異を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  22. 前記置換突然変異が、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａからなる群から選択される、請求項２１に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  23. 前記抗体が、ＥＵ番号付けによるアミノ酸残基２９７におけるＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む、請求項２１に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  24. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、単一特異性抗体（例えば、二価二重アーム抗体）である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  25. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、多重特異性抗体である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  26. 前記多重特異性抗体が、ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項２５に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  27. 前記ＣＤ３結合ドメインが、ヒトＣＤ３ポリペプチドまたはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する、請求項２６に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  28. 前記ヒトＣＤ３ポリペプチドまたは前記ｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドが、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３εポリペプチドである、請求項２７に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  29. 前記ヒトＣＤ３ポリペプチドまたは前記ｃｙｎｏＣＤ３ポリペプチドが、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチドまたはｃｙｎｏＣＤ３γポリペプチドである、請求項２７に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  30. 前記ＣＤ３結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  31. 前記ＣＤ３結合ドメインが、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  32. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号５９のＶＨ配列を含む、請求項２６〜３１のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  33. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号６０のＶＬ配列を含む、請求項２６〜３２のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  34. 前記ＣＤ３結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  35. 前記ＣＤ３結合ドメインが、（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、請求項２６〜２９または３４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  36. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号５７のＶＨ配列を含む、請求項２６〜２９または３４〜３５のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  37. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号５８のＶＬ配列を含む、請求項２６〜２９または３４〜３６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  38. 前記ＣＤ３結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  39. 前記ＣＤ３結合ドメインが、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列及び（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、請求項２６〜２９または３８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  40. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号６１のＶＨ配列を含む、請求項２６〜２９または３８〜３９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  41. 前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号６２のＶＬ配列を含む、請求項２６〜２９または３８〜４０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  42. 前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項２５〜４１のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  43. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、約１００ｎｇ／ｍＬ未満のＢ細胞死滅ＥＣ５０を有する、請求項２５〜４２のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  44. 前記Ｂ細胞死滅が、内因性Ｂ細胞死滅または細胞株Ｂ細胞死滅、例えば、ＢＪＡＢ細胞株、ＷＳＵ−ＣＬＣＬ２細胞株、ＯＣＩ−Ｌｙ−１９細胞株である、請求項４３に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  45. 前記抗ＣＤ７９ｂ抗体が、約５０ｎｇ／ｍＬ未満のうちのいずれかである、細胞傷害性Ｔ細胞活性化ＥＣ５０を有する、請求項２５〜４４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  46. （ａ）前記ＣＤ３結合ドメインがＦｃドメインを含み、前記ＦｃドメインがＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）前記ＣＤ７９ｂ結合ドメインがＦｃドメインを含み、前記ＦｃドメインがＥＵ番号付けによるＴ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む、請求項２６〜４５のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  47. 請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体をコードする、単離された核酸。
  48. 請求項４７に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
  49. 請求項４８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  50. 請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体の産生方法であって、前記方法が、請求項４９に記載の前記宿主細胞を培養培地中で培養することを含む、前記方法。
  51. 請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体及び細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体。
  52. 請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む、薬学的組成物。
  53. 薬剤として使用するための、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  54. Ｂ細胞増殖性障害または自己免疫性障害の進行の治療または遅延を必要とする対象において、それに使用するための請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  55. Ｂ細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において、免疫機能の増強に使用するための請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  56. 前記Ｂ細胞増殖性障害が癌である、請求項５４〜５５のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  57. 前記Ｂ細胞増殖性障害が、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び／またはマントル細胞リンパ腫である、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体。
  58. 細胞増殖性障害または自己免疫性障害の進行を治療する、または遅延させるための薬剤の製造における、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体の使用。
  59. 細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象において免疫機能を増強するための薬剤の製造における、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体の使用。
  60. 前記細胞増殖性障害が癌である、請求項５８〜５９のいずれか１項に記載の使用。
  61. 前記Ｂ細胞増殖性障害が、リンパ腫、ＮＨＬ、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、ＣＬＬ、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ＨＣＬ、ＡＬＬ、及び／またはマントル細胞リンパ腫である、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の使用。
  62. 細胞増殖性障害または自己免疫性障害の前記進行の治療または遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法であって、前記対象に請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体を投与することを含む、前記方法。
  63. 細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体を投与することを含む、前記方法。
  64. 前記細胞増殖性障害が癌である、請求項６２〜６３のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記Ｂ細胞増殖性障害が、リンパ腫、ＮＨＬ、侵襲性ＮＨＬ、再発性侵襲性ＮＨＬ、再発性低悪性度ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性低悪性度ＮＨＬ、ＣＬＬ、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ＨＣＬ、ＡＬＬ、及び／またはマントル細胞リンパ腫である、請求項６２〜６４のいずれか１項に記載の方法。
  66. 前記対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項６２〜６５のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記対象にグルココルチコイドを投与することをさらに含む、請求項６２〜６６のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記グルココルチコイドがデキサメタゾンである、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記対象にリツキシマブを投与することをさらに含む、請求項６２〜６８のいずれか１項に記載の方法。
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