[go: up one dir, main page]

CN105943577B - 植物药的微生物发酵 - Google Patents

植物药的微生物发酵 Download PDF

Info

Publication number
CN105943577B
CN105943577B CN201610281887.5A CN201610281887A CN105943577B CN 105943577 B CN105943577 B CN 105943577B CN 201610281887 A CN201610281887 A CN 201610281887A CN 105943577 B CN105943577 B CN 105943577B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus
fermentation
fungi
autonomic drug
probiotics
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610281887.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105943577A (zh
Inventor
刘东波
王蕾
康信聪
张思
赖锡湖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changsha omics Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201610281887.5A priority Critical patent/CN105943577B/zh
Publication of CN105943577A publication Critical patent/CN105943577A/zh
Priority to JP2019507981A priority patent/JP2019514424A/ja
Priority to EP17788796.5A priority patent/EP3444353B1/en
Priority to KR1020187031678A priority patent/KR102541968B1/ko
Priority to PCT/CN2017/082207 priority patent/WO2017186144A1/zh
Priority to US16/096,059 priority patent/US11414682B2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN105943577B publication Critical patent/CN105943577B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A61K36/066—Clavicipitaceae
    • A61K36/068—Cordyceps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/074—Ganoderma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A61K36/258—Panax (ginseng)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/488—Pueraria (kudzu)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P39/00—Processes involving microorganisms of different genera in the same process, simultaneously

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明涉及利用微生物定向发酵植物药、促进植物药有效成分释放的方法，其有利于更好地发挥植物药的药效。

Description

植物药的微生物发酵
技术领域
本发明涉及植物药发酵领域，更具体地说，是涉及利用微生物定向发酵植物药，促进植物药有效成分释放和/或增加植物药药效的方法。
背景技术
天然植物药，尤其是中药，在保健和治疗领域的很多方面有化学方法制备的药物不具备的优势，应用越来越广泛，但其有效成分的利用率一直存在问题。不仅传统的煎煮服用方式受制于植物药有效成分难以突破坚硬的植物细胞壁而释放的障碍，而且现有的中药种植技术也面临植物药有效成分含量普遍较低、重金属污染、和农药残留等问题，其药效与野生植物药也相差甚远。因此，植物药领域亟需安全、高效的促进植物药有效成分释放的工艺。
发明内容
本申请提供了安全、高效的促进植物药有效成分释放的方法。该方法先通过破壁真菌对植物药进行发酵，后通过益生菌对植物药进行一次或多次发酵。本申请的方法能有效破坏植物药细胞壁，促进植物药有效成分的释放，提高植物药利用率的目的。
本文中“植物药”主要是指植物的茎、叶、根、和/或果等部位、作为中医的药材的材料。优选地，本文的植物药是列入中国药典或其它国家药典的植物药。在更具体的实施方案中，本文的植物药是人参或葛根。已知人参属于双子叶植物纲，伞形目，五加科，人参属；葛根属于木兰纲，蔷薇目，豆科，葛属。可见，人参和葛根是非常不相同的两个物种。本申请的方法在人参和葛根上的适用，说明本申请的方法的适用范围较广，可以适用于多种不同的植物药。
本文中“破壁真菌”是指，能对植物细胞壁或昆虫体壁等坚硬的表面结构产生破壁效果的食用真菌。这里提到的破壁效果，并不要求使壁完全破裂，只要使壁上出现漏洞，内含物更容易向外释放即可。所述破壁真菌的范畴内包括药用真菌，例如各国药典中所列的多细胞真菌。在具体实施方案中，所述破壁真菌是能生成肉眼可见的子实体的大型真菌。
已知植物细胞壁的主要成分有纤维素、半纤维素和果胶。相应地，能产生纤维素酶、半纤维素酶、和/或果胶酶的食用真菌，都是能对植物细胞壁造成本文所述破壁效果的，因此都属于本文所述的破壁真菌。
事实上，有不少食用真菌能在木质如树木上生长，它们能突破坚硬的木质表面，固着于其中，说明它们都具有本文所述的破壁效果，因此，这些能在木质上生长的多细胞真菌(简称“木生真菌”)属于本文所述的破壁真菌，具体例子有：灵芝(Ganoderma)、茯苓(Poriacocos)、猪苓(Grifola umbellata)，等等。
除了树木等植物细胞有坚硬表面以外，昆虫及其幼虫在体壁中也有坚硬的纤维素、几丁质成分。有些真菌能感染昆虫(如鳞翅目)的幼虫或蛹，使得本来要经历幼虫→蛹→成虫生长阶段的昆虫终止于幼虫或蛹的阶段，该类真菌则利用昆虫幼虫或蛹的身体为营养进行生长。虫草菌就是这样的真菌。在本文中，“虫草菌”是指广义上的虫草属(Cordyceps)真菌，它们寄生于昆虫，把虫体变成充满菌丝的僵虫，从僵虫前端生出柄头状或棍棒状的子座。虫草属真菌目前已报道的超过500多种，最广为人知的包括冬虫夏草(Cordycepssinensis)、蛹虫草(Cordyceps militaris)等。虫草菌能突破昆虫体壁，说明能产生相应的破壁物质，例如纤维素酶、几丁质酶等等，因此也属于本文所述的破壁真菌。
相应地，在具体实施方案中，本文所述破壁真菌包括木生真菌和虫草菌。在更优选的实施方案中，本文所述破壁真菌选自灵芝、茯苓、猪苓、冬虫夏草、和/或蛹虫草。
本文中“发酵(fermentation)”是指在植物或其果实、茎叶等材料中接种微生物进行培养的过程。由于微生物的生命活动，可以将碳水化合物转化为醇和有机酸等物质，也可以使植物所含的成分(例如营养成分)发生变化，例如更容易释放，活性更强，或成为更有利于被人体吸收的形式。
本文中“酵素(ferment nutrients)”是指植物经益生菌发酵而得到的多种生物活性物质的混合体，其包括：发酵参与菌、用于发酵的食材、发酵参与菌或食材的活性成分，例如多种酶(enzyme)，还包括因发酵而被改良的成分，例如活性更强或更有利于吸收的成分，等等。
本文中“益生菌(probiotics)”是指在人体内对健康有益的微生物。益生菌常用于制作酸奶、酵素等食用物。常用的益生菌有，酵母菌(yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、明串珠菌(Leuconostoc)、链球菌(Streptococcus)、乳球菌(Lactococcus)，醋酸杆菌(Acetobacterium)等等。所述酵母菌例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和椭圆酵母(Saccharomyes eerevisiae)等糖酵母属(Saccharomyces)的酵母、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、奥默毕赤酵母(Pichiaohmeri)、膜璞毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)等毕赤酵母属(Pichia)的酵母、异常汉逊酵母(Hansenula anomala)等汉逊酵母属(Hansenula)的酵母。所述乳酸杆菌例如，布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、面包乳杆菌(Lactobacillus panis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermenti)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、淡绿色乳杆菌(Lactobacillus veridescens)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii bulgaricus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)、纤维二糖乳杆菌(Lactobacillus cellobiosus)、干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp casei)、瑞士乳杆菌约古特亚种(Lactobacillushelveticus subsp.jugurti)、詹森乳杆菌(Lacticum Jansen)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)，等等。所述双歧杆菌例如，青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescents)、分叉双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)，等等。所述醋酸杆菌例如巴氏醋酸杆菌(Acetobacter pasteuranus)、恶臭醋酸杆菌(Acetobacter rancens)等。其他益生菌还有：肠膜明串珠球菌(Leuconostoc mesenteroides aureus)、唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius subsp.thermophilus)、乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.Cremoris)，等等。
本申请人发现，不同的植物药经过破壁真菌发酵和益生菌发酵，相比于传统煎服的汤药，可以大大提高药液中的植物药有效成分的含量，由此可以改进传统中药服用方式和现有中药种植方式所面临的药效低下问题。经过本申请的方法制得的植物药发酵制品，包含植物药有效成分以及来自破壁真菌和益生菌的各种活性酶类或活性物质，是营养丰富的制剂。这样的制剂，可用于调理人体健康。
相应地，本申请还涉及一种发酵方法，其是将破壁真菌的发酵和益生菌的发酵组合。所述发酵方法可以是植物药的发酵方法。在更具体的实施方案中，本申请涉及先进行破壁真菌的发酵，再进行益生菌的发酵。在更具体的实施方案中，本申请的益生菌发酵用酵母菌、乳酸杆菌和醋酸杆菌进行。在更具体的实施方案中，本申请的益生菌发酵是分步骤进行，例如先进行酵母菌和乳酸杆菌的混合发酵，再进行醋酸杆菌的发酵。无论是破壁真菌的发酵，还是益生菌的发酵，都采用各自菌种的适用温度和pH等培养条件进行培养，具体条件是本领域技术人员根据常规可以确认的。
破壁真菌如灵芝、虫草等的培养基也是本领域常见的，作为举例，其中一种培养基的组成如下(按质量比)：葡萄糖1～6％，酵母膏0.1％～0.4％，蛋白胨0.1％～0.8％，磷酸二氢钾0.05％～0.3％，硫酸镁0.05％～0.3％，以水补足。作为碳源的葡萄糖可以用马铃薯汁替换，其它成分也可以调整，这些调整是本领域技术人员容易做到的。在本申请的实施例中，为了统一实验体系，采用了以下的组成(按质量比)：葡萄糖2.4％，酵母膏0.2％，蛋白胨0.4％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，蒸馏水96.8％。
在优选实施方案中，能共享相同或相似培养条件的破壁真菌还可以一起在同一培养基中培养，可选地，再进一步进行益生菌发酵，使得最终的产品中包含不止一种破壁真菌和/或其活性成分。
破壁真菌的发酵可以是：50～250rpm，7～30℃，搅拌发酵3～45天。这些条件是本领域技术人员基于破壁真菌具体物种的生长需求很容易确定的。
益生菌的发酵可以是：密封，10～40℃静置发酵48h以上。在具体实施方案中，本申请的益生菌每一种都选用百万级活菌数的菌液、并按总原料质量分数为1～3‰的量接种。这些条件也是本领域技术人员基于益生菌具体物种的生长需求很容易确定的。
优选地，本申请的发酵方法不涉及提取破壁真菌活性成分的步骤，即，所述方法无需在破壁真菌发酵之前或之后提取大型真菌活性成分，而是破壁真菌的发酵和益生菌的发酵可以在同一个培养系统或发酵装置中依次进行。
在一个具体举例的实施方案中，本申请的方法包括如下步骤：
1、选用符合规定的植物药鲜药材及植物药饮片，粉碎至10～30目，倒入发酵罐中，加入5～20倍量(质量)的培养液，搅拌混合均匀；
2、用食用醋或者食用氢氧化钠溶液调整pH值至5.0～8.0，后通入蒸汽灭菌30～60min；
3、冷却至室温后，接入药用菌菌种，控制发酵罐搅拌速度为50～250rpm，控制温度为7～30℃，发酵3～45天，完成初次发酵；
4、完成初次发酵后，接入益生菌菌种，密封，于10～40℃环境下静置培养48h以上，完成第二次发酵；
5、滤去药渣，收集发酵液。
本发明的优点在于，通过破壁真菌对植物药进行初步发酵，后接入益生菌菌种对植物药进行再次(甚至更多次)发酵，可以有效的破坏植物药的细胞壁，促进植物药有效成分的释放，提高植物药的利用率。另外，由于使用了破壁真菌发酵，植物药药液中还包含有破壁真菌的有效成分，从而起到了增加植物药药效的目的。
更具体举例地，本申请涉及
1.一种植物药的微生物发酵方法，包括先进行破壁真菌的发酵，再进行益生菌发酵。
2.项1的方法，其中所述破壁真菌是木生真菌和/或虫草菌。
3.项1～2之一的方法，其中所述破壁真菌选自灵芝、猪苓、茯苓、冬虫夏草、和/或蛹虫草。
4.项1～3之一的方法，其中所述益生菌选自以下的一或多种：糖酵母、毕赤酵母、汉逊酵母、乳酸杆菌、双歧杆菌、明串珠菌、链球菌、乳球菌，醋酸杆菌。
5.项4的方法，其中的益生菌选自以下的一或多种：酿酒酵母、椭圆酵母、巴斯德毕赤酵母、奥默毕赤酵母、膜璞毕赤酵母、异常汉逊酵母、布氏乳杆菌、面包乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、唾液乳杆菌、短乳杆菌、淡绿色乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、鼠李糖乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、瑞士乳杆菌约古特亚种、詹森乳杆菌、戊糖乳杆菌)、巴氏醋酸杆菌、恶臭醋酸杆菌、青春双歧杆菌、分叉双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、肠膜明串珠球菌、唾液链球菌嗜热亚种、和乳球菌乳脂亚种。
6.项5的方法，其中所述益生菌是酵母菌、乳酸杆菌和醋酸杆菌。
7.向6的方法，其中先进行酵母菌和乳酸杆菌的混合发酵，再进行醋酸杆菌的发酵。
8.项1～7之一的方法，其中所述植物药是人参。
9.项1～7之一的方法，其中所述植物药是葛根。
10.项1～10之一的发酵方法得到的产物。
具体实施例
下面的实施例是对本申请的具体描述，这些实施例旨在对本申请进行进一步说明，不能理解为对发明的保护范围有任何限制，本领域的技术人员基于本申请作出的改进和调整也属于受保护的范围。
实施例1
称取人参10Kg，粉碎至30目，倒入发酵罐中，加入80Kg的培养液(按质量比：葡萄糖2.4％，酵母膏0.2％，蛋白胨0.4％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，蒸馏水96.8％)，充分搅拌混合，用氢氧化钠溶液调整pH值为6.8，通入蒸汽灭菌30min。冷却至室温后，接入灵芝菌(湘赤芝1号，湖南省非主要农作物品种登记证书编号XPD010-2013，获自国家中医药管理局亚健康干预技术实验室)，控制发酵罐搅拌速度为120rpm，控制温度为20℃，发酵15天；后加入1‰(总原料质量分数)酵母菌(奥默毕赤酵母，CGMCC编号2.1803，百万级活菌数)和1‰(总原料质量分数)乳酸菌(植物乳杆菌，CGMCC编号1.6971，百万级活菌数)，于28℃环境下静置发酵7天；后加入1‰(总原料质量分数)醋酸杆菌(恶臭醋酸杆菌AS.1.41，购自上海酿造一厂，百万级活菌数)，30℃静置培养7天，过滤，收集药液。
经测定，应用本发明处理的人参药液，其中总人参皂苷含量达到了1.06mg/mL(测定方法参见，人参总皂苷的含量测定，高丽萍等，浙江工程学院学报,2012,31(3):382-388)，较传统汤剂(人参:水为1:8重量比)提高了7.01倍；还在该药液中检测到灵芝三萜含量为0.75mg/mL(测定方法参见，中华人民共和国药典2015版)。所有数据都是一式三份试样的平均结果。
实施例2
称取人参10Kg，粉碎至30目，倒入发酵罐中，加入80Kg的实施例1所述培养液，充分搅拌混合，用氢氧化钠溶液调整pH值为6.8，通入蒸汽灭菌30min。冷却至室温后，接入灵芝菌(紫光灵芝，CGMCC 5.772，属于紫芝)，控制发酵罐搅拌速度为100rpm，控制温度为23℃，发酵15天；后加入1‰(总原料质量分数)酵母菌(酿酒酵母，CGMCC编号2.3888，百万级活菌数)和1‰(总原料质量分数)乳酸菌(面包乳杆菌，CGMCC编号1.3925，百万级活菌数)，于28℃静置发酵7天；后加入1‰(总原料质量分数)醋酸杆菌(恶臭醋酸杆菌AS.1.41，百万级活菌数)，30℃静置培养7天，过滤，收集药液。
经测定，应用本发明处理的人参药液，其中总人参皂苷含量达到了1.03mg/mL(测定方法同实施例1)，较传统汤剂(人参:水为1:8重量比)提高了6.81倍；还在该药液中检测到灵芝三萜含量为0.64mg/mL(测定方法同实施例1)。所有数据都是一式三份试样的平均结果。
实施例3
称取葛根10Kg，粉碎至20目，倒入发酵罐中，加入100Kg的实施例1所述培养液，充分搅拌混合，用氢氧化钠溶液调整pH值为6.5，121℃高温灭菌30min。冷却至室温后，接入虫草菌(湘北虫草1号，湖南省非主要农作物品种登记证书编号XPD009-2013，得自国家中医药管理局亚健康干预技术实验室)，控制发酵罐搅拌速度为150rpm，控制温度为25℃，发酵10天；后加入3‰(总原料质量分数)酵母菌(酿酒酵母，CGMCC编号2.3973，百万级活菌数)和1‰(总原料质量分数)乳酸菌(布氏乳杆菌，CGMCC编号1.3114，百万级活菌数)，于28℃静置发酵8天；后加入1‰(总原料质量分数)醋酸杆菌(巴氏醋酸杆菌亚种1.01，百万级活菌数)，30℃静置培养7天，过滤，收集药液。
经测定，应用本发明处理的葛根药液，其中葛根素含量达到了0.119mg/mL(测定方法参见中国国家标准GB/T 22251-2008保健食品中葛根素的测定)，较传统汤剂(葛根:水为1:10重量比)提高了1.25倍。还在该药液中检测到虫草素含量为11.3μg/mL(测定法参见，虫草素高产菌株的筛选及不同添加物对虫草素产量的影响研究，王蕾等，菌物学报,2012,31(3):382-388)。所有数据都是一式三份试样的平均结果。
实施例4
称取葛根10Kg，粉碎至20目，倒入发酵罐中，加入100Kg的实施例1所述培养液，充分搅拌混合，用氢氧化钠溶液调整pH值为6.5，121℃高温灭菌30min。冷却至室温后，接入虫草菌(蛹虫草，CGMCC 5.856)，控制发酵罐搅拌速度为130rpm，控制温度为28℃，发酵10天；后加入3‰(总原料质量分数)酵母菌(膜醭毕赤酵母，CGMCC 2.661，百万级活菌数)和1‰(总原料质量分数)乳酸菌(面包乳杆菌，CGMCC 1.3925，百万级活菌数)，28℃静置发酵8天；后加入1‰(总原料质量分数)醋酸杆菌(醋酸杆菌沪酿1.01，百万级活菌数)，30℃静置培养7天，过滤，收集药液。
经测定，应用本发明处理的葛根药液，其中葛根素含量达到了0.113mg/mL，较传统汤剂(葛根:水为1:10重量比)提高了1.19倍(测定方法同实施例3)。还在该药液中检测到虫草素含量为13.7μg/mL(测定方法同实施例3)。所有数据都是一式三份试样的平均结果。

Claims (12)

1.一种植物药的微生物发酵方法，包括先进行破壁真菌的发酵，再进行益生菌发酵，所述破壁真菌的发酵，对植物药的植物细胞壁产生破壁效果，所述破壁效果不要求使壁完全破裂，只要使壁上出现漏洞，内含物更容易向外释放即可。
2.权利要求1的方法，其中，所述方法不涉及提取破壁真菌活性成分的步骤。
3.权利要求1的方法，其中，破壁真菌的发酵和益生菌发酵在同一个培养系统或发酵装置中依次进行。
4.权利要求1的方法，其中所述破壁真菌是木生真菌和/或虫草菌。
5.权利要求1的方法，其中所述破壁真菌选自灵芝、猪苓、茯苓、冬虫夏草、和/或蛹虫草。
6.权利要求1的方法，其中所述益生菌选自以下的一或多种：糖酵母、毕赤酵母、汉逊酵母、乳酸杆菌、双歧杆菌、明串珠菌、链球菌、乳球菌、 醋酸杆菌。
7.权利要求6的方法，其中的益生菌选自以下的一或多种：酿酒酵母、椭圆酵母、巴斯德毕赤酵母、奥默毕赤酵母、膜璞毕赤酵母、异常汉逊酵母、布氏乳杆菌、面包乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、唾液乳杆菌、短乳杆菌、淡绿色乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、鼠李糖乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、瑞士乳杆菌约古特亚种、詹森乳杆菌、戊糖乳杆菌、巴氏醋酸杆菌、恶臭醋酸杆菌、青春双歧杆菌、分叉双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、肠膜明串珠球菌、唾液链球菌嗜热亚种、和乳球菌乳脂亚种。
8.权利要求7的方法，其中所述益生菌是酵母菌、乳酸杆菌和醋酸杆菌。
9.权利要求8的方法，其中先进行酵母菌和乳酸杆菌的混合发酵，再进行醋酸杆菌的发酵。
10.权利要求1的方法，其中所述植物药是人参。
11.权利要求1的方法，其中所述植物药是葛根。
12.权利要求1～11之一的发酵方法得到的产物。
CN201610281887.5A 2016-04-29 2016-04-29 植物药的微生物发酵 Active CN105943577B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610281887.5A CN105943577B (zh) 2016-04-29 2016-04-29 植物药的微生物发酵
JP2019507981A JP2019514424A (ja) 2016-04-29 2017-04-27 植物薬品の微生物発酵
EP17788796.5A EP3444353B1 (en) 2016-04-29 2017-04-27 Microbial fermentation of botanicals
KR1020187031678A KR102541968B1 (ko) 2016-04-29 2017-04-27 약용식물의 미생물 발효
PCT/CN2017/082207 WO2017186144A1 (zh) 2016-04-29 2017-04-27 植物药的微生物发酵
US16/096,059 US11414682B2 (en) 2016-04-29 2017-04-27 Microbial fermentation of botanicals

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610281887.5A CN105943577B (zh) 2016-04-29 2016-04-29 植物药的微生物发酵

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105943577A CN105943577A (zh) 2016-09-21
CN105943577B true CN105943577B (zh) 2018-02-13

Family

ID=56913025

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610281887.5A Active CN105943577B (zh) 2016-04-29 2016-04-29 植物药的微生物发酵

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11414682B2 (zh)
EP (1) EP3444353B1 (zh)
JP (1) JP2019514424A (zh)
KR (1) KR102541968B1 (zh)
CN (1) CN105943577B (zh)
WO (1) WO2017186144A1 (zh)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105943577B (zh) * 2016-04-29 2018-02-13 刘东波 植物药的微生物发酵
CN107929329B (zh) * 2017-07-07 2023-06-06 西北民族大学 一种消栓降脂益生复合菌中药颗粒及其制备方法
CN109207389B (zh) * 2017-07-07 2023-06-06 西北民族大学 一种消栓降脂益生复合菌中药口服液及其制备方法
CN108514628B (zh) * 2018-05-29 2021-05-18 浙江爱诺生物药业股份有限公司 一种富集补中益气口服液的生产工艺
CN109248264A (zh) * 2018-12-07 2019-01-22 李炳华 一种用于提高种猪精液品质的中药组合物及其制备方法
AU2019100035A4 (en) * 2019-01-11 2019-03-07 Hu, Haiyan An antimicrobial strain composition and its preparation method
TWI737086B (zh) * 2019-05-20 2021-08-21 大江生醫股份有限公司 用於提升植物中效性成分含量的發酵方法
JPWO2021059986A1 (zh) * 2019-09-25 2021-04-01
CN110551118B (zh) * 2019-10-10 2020-08-25 福建傲农生物科技集团股份有限公司 一种黄柏中小檗碱的提取方法
CN111110773A (zh) * 2020-01-19 2020-05-08 韩褆 微生物发酵的提高免疫力中药颗粒散剂及制备方法
CN111657490A (zh) * 2020-06-17 2020-09-15 北华大学 蒲公英根糖化液、蒲公英根发酵产物及其制备方法和包括其的产品
CN111808901A (zh) * 2020-07-07 2020-10-23 华熙生物科技股份有限公司 一种蛹虫草发酵提取液的制备方法及所得产品和应用
TWI804749B (zh) * 2020-07-20 2023-06-11 健茂生物科技股份有限公司 提升植化素多酚含量的枸杞飲品製造方法
CN111925970B (zh) * 2020-09-07 2022-07-05 吉林农业大学 一种酸菜复合发酵剂及其制备方法与应用
TWI784357B (zh) * 2020-11-30 2022-11-21 大江生醫股份有限公司 植物發酵液改善睡眠品質及/或抗老化的用途
TWI784621B (zh) * 2021-07-16 2022-11-21 大江生醫股份有限公司 中藥發酵液及其提神、改善疲勞、護肝、提升免疫力、降血脂之用途
CN113897304B (zh) * 2021-09-07 2024-03-29 康美药业股份有限公司 一种可提高人参皂苷转化度的复合菌株组合物及其应用
CN114177121B (zh) * 2021-11-01 2023-07-18 齐鲁工业大学 松花粉益生菌发酵型化妆品原料的制作方法及应用
CN118064335B (zh) * 2024-04-22 2024-08-02 晏龙国科(山东)微生物科技有限公司 具有缓解非酒精性脂肪肝功能的益生菌、组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102100710A (zh) * 2009-12-22 2011-06-22 包海鹰 人参的发酵加工炮制方法及其相关产品的研发
CN104257990A (zh) * 2014-09-28 2015-01-07 神农架神林生物科技有限公司 一种鹿药口含片及其制备方法
CN104872647A (zh) * 2015-04-24 2015-09-02 西藏月王生物技术有限公司 一种含药食同源植物的酵素及其制备方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001000157A (ja) 1999-06-18 2001-01-09 Braustern:Kk 発酵過程による飲料の製造方法
CN1142283C (zh) * 2001-01-03 2004-03-17 傅继杰 用生物技术制取活性多糖的方法
KR101374026B1 (ko) * 2007-05-23 2014-03-12 롯데칠성음료주식회사 곰팡이와 유산균으로 동시 발효하여 생물전환 사포닌이증가된 삼 발효물
KR100910040B1 (ko) * 2007-07-02 2009-07-30 주식회사 엘지생활건강 항산화 활성을 갖는 화장료 조성물
KR100889605B1 (ko) * 2007-07-02 2009-03-20 주식회사 엘지생활건강 주름개선용 화장료 조성물
EP2316278B1 (en) * 2008-08-29 2013-04-10 Pharvis R&D Korea Co., Ltd. Method for producing fermented edible plants or edible animal/plants, fermented edible plants or edible animal/plants produced by same, and foods containing same
JP5249817B2 (ja) * 2009-02-27 2013-07-31 富士産業株式会社 フルクタン含有食品からの免疫賦活発酵食品
KR100956278B1 (ko) * 2009-08-03 2010-05-10 대한약품공업 주식회사 복합생약 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물
US20110206721A1 (en) * 2010-02-19 2011-08-25 Vijaya Nair Fermented soy nutritional supplements including mushroom components
US8968729B2 (en) * 2011-10-28 2015-03-03 United Arab Emirates University Date pit composition for the treatment of animals
KR101422078B1 (ko) * 2012-12-17 2014-07-28 주식회사 메디오젠 동충하초와 유산균을 이용한 혈행개선용 발효맥문동의 제조방법
KR101590492B1 (ko) * 2014-05-30 2016-02-01 선 바이오(주) 발효된 천연물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물 및 이의 제조방법
MA41020A (fr) * 2014-11-25 2017-10-03 Evelo Biosciences Inc Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome
CN104473285A (zh) * 2015-01-09 2015-04-01 杜斌 中药酵素的制作方法
CN104856923B (zh) * 2015-04-24 2017-09-29 西藏月王生物技术有限公司 一种虫草酵素浴组合物及其发酵制备和应用
CN105943577B (zh) * 2016-04-29 2018-02-13 刘东波 植物药的微生物发酵

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102100710A (zh) * 2009-12-22 2011-06-22 包海鹰 人参的发酵加工炮制方法及其相关产品的研发
CN104257990A (zh) * 2014-09-28 2015-01-07 神农架神林生物科技有限公司 一种鹿药口含片及其制备方法
CN104872647A (zh) * 2015-04-24 2015-09-02 西藏月王生物技术有限公司 一种含药食同源植物的酵素及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
酶工程技术在中药活性成分获得中的研究进展;许明淑等;《中国实验方剂学杂志》;20100831;第16卷(第10期);第195-198页 *

Also Published As

Publication number Publication date
US11414682B2 (en) 2022-08-16
EP3444353A4 (en) 2019-05-01
US20190127763A1 (en) 2019-05-02
WO2017186144A1 (zh) 2017-11-02
KR20190002502A (ko) 2019-01-08
EP3444353A1 (en) 2019-02-20
KR102541968B1 (ko) 2023-06-12
EP3444353B1 (en) 2021-05-19
CN105943577A (zh) 2016-09-21
JP2019514424A (ja) 2019-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105943577B (zh) 植物药的微生物发酵
CN109439557A (zh) 高产酸、低产杂醇油酿酒酵母菌及其组合物和应用
CN104643086A (zh) 玫瑰酵素的制备方法
CN103988712A (zh) 一种高产多糖蛹虫草的培养方法
CN105925616A (zh) 药食用真菌的果蔬培养及益生菌发酵
CN104893992B (zh) 一种灵芝菌的深层发酵方法
CN106754619A (zh) 一种在谷物培养基中添加中药组分促进益生菌生长的方法
KR100748846B1 (ko) 프로폴리스 발효물의 제조방법
CN105062677A (zh) 一种植物乳杆菌处理甜菜汁制备发酵型甜菜浸膏的方法
CN107699506B (zh) 一种红茶菌中的酿酒酵母及其应用
TWI460272B (zh) 發酵蟲草屬真菌米基而製備γ－胺基丁酸的方法及其應用
CN106071524A (zh) 一种具有营养保健作用的芦笋发酵饮品制备方法
CN107488616A (zh) 菌种、益生菌面膜、养生菌菌茶以及食用菌菌茶的制备方法
CN106901336A (zh) 一种高原酵素发酵工艺
CN109429893A (zh) 一种血灵芝的培育方法
CN102246969A (zh) 一种发酵剂及其制备方法和应用
CN105505718B (zh) 一种富含dnj的虫草桑汁保健琥珀稠酒
CN111607621A (zh) 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用
KR102011133B1 (ko) 알파-람노시다제 효소 활성이 우수하고, 진세노사이드 Re 및 Rb1을 진세노사이드 Rg1 및 Rg5로 생물전환하는 활성을 갖는 락토바실러스 플란타룸 MBE/L2990 균주 및 이의 용도
CN106434399A (zh) 一种糯米酒的混合酒曲及混合酒曲的制备方法
KR101110220B1 (ko) 한방재료를 포함하는 찜질매질 및 이의 제조 방법
CN104974849B (zh) 一种发酵型烟用甜菜浸膏的制备方法
CN106562295A (zh) 利用真空减压发酵系统制备益生菌果干及固体益生菌饮料的方法
CN101886043B (zh) 一种复合酸奶发酵剂及其应用
CN101491277A (zh) 一种生产酒味酸奶的复合发酵剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1227733

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1227733

Country of ref document: HK

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230609

Address after: Room 1102, Building A2, Lugu Linyu Community, No. 408, Tongzipo West Road, High tech Development Zone, Changsha City, 410000, Hunan Province

Patentee after: Changsha omics Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 410128 Floor 2, Life Science Building, Hunan Agricultural University, Furong District, Changsha City, Hunan Province

Patentee before: Liu Dongbo

TR01 Transfer of patent right