CN104402852B

CN104402852B - 一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法

Info

Publication number: CN104402852B
Application number: CN201410675605.0A
Authority: CN
Inventors: 王晓季; 黄飞飞; 黄双平; 刘东旺; 王高鹏; 王李平; 覃双林
Original assignee: Jiangxi Science and Technology Normal University
Current assignee: Jiangxi Science and Technology Normal University
Priority date: 2014-11-21
Filing date: 2014-11-21
Publication date: 2017-05-24
Anticipated expiration: 2034-11-21
Also published as: CN104402852A

Abstract

本发明提供了一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法，以三羟基丁酸甲酯为原料，经过PMB酯保护，LiAlH4还原，Swern氧化，Mukaiyama Aldol反应，酯水解，Yanaguchi关环，去保护，缩合得到天然产物Tarchonanthuslactone的异构体。本发明的合成路线设计新颖合理，原料价廉易得，操作工艺简便，反应条件温和，速率快，副反应相对少，操作简便，原料廉价易得，可大大降低合成成本。

Description

一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法

技术领域

本发明属于化工领域，尤其涉及一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法。

背景技术

Tarchonanthuslactone，如下式(1)所示，是一种多聚酮的天然产物，于1979年被Bohlmann从一种叫Tarchonanthus trilobus的树的叶子中首次提取出来，它最终的外形结构是被Nakata等人通过不对称合成的方法确定的。从Tarchonanthuslactone的结构看，它有一个α，β不饱和的δ内酯，还有两个手性中心。Tarchonanthuslactone具有生物活性，研究发现它可以降低患糖尿病小鼠的血糖含量，因此对Tarchonanthuslactone及其类似物、异构体的合成以用于构效关系研究具有重要意义，从而引起了众多合成化学家、生物学家及药理学家的极大兴趣。

目前，已报导的合成Tarchonanthuslactone异构体(如式12所示)的方法只有两例，即Hee-Yoon Lee等人于2008年在Synlett，2009(2)，pp0249-0252上发表的题为Afacile total synthesis of all stereoisomers oftarchonanthuslactone andeuscapholide from chiral epichlorohydrin和Vinod K.Singh等人于2005年在TetrahedronLetters，2005,46，pp7527-7529上发表的题为Asymmetric synthesis of allthe stereoisomers oftarchonanthuslactone的学术论文，而国内尚未有相关报道。仔细分析Hee-Yoon Lee，Vinod K.Singh等人的报道，他们的合成路线比较长，采用的试剂昂贵(如三甲基硅炔基锂，Grubbs催化剂等)并且具有剧毒(如路线中使用的硫酸汞)，有些反应多少存在速率慢、副反应多、后处理复杂等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多聚酮天然产物Tarchonanthuslactone异构体的制备方法，旨在解决现有国内无Tarchonanthuslactone异构体合成路线研究，国外已有的两例报道路线较长，试剂昂贵且有剧毒，并且有些反应多少存在速率慢、收率低、副反应多等问题。

本发明克服现有技术的不足，提供了一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法，包括以下步骤：

(1)在氮气保护下，将840mg(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)溶于0.5mL DCM，在0℃下慢慢滴加0.9ml(2，4，6)-三氯苯甲酰氯和6.5ml吡啶，回温到室温反应2h；反应结束后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、浓缩以及柱色谱分离，得到(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)；

(2)将195mg(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)溶于13mlDCM，加1.4ml H₂O，置于0℃下，将300.8mg 2，3-二氯-5，6-二氰对苯醌加入到反应体系中；反应结束后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、浓缩以及柱色谱分离，得到(R)-6-((R)-2-羟基丙基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮)；

(3)将55mg(R)-6-((R)-2-羟基丙基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮)溶解到7ml DCM中，然后加入溶于3ml DCM的159mg 3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸)，再加入80mg DCC，最后加入21.5mg DMAP，在室温下反应15h；反应完全后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、过滤、浓缩以及柱色谱分离，得到(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸酯)；

(4)将272mg(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸酯)溶解到25ml THF溶液中，加入180mg苯甲酸和5mmolTBAF(四丁基氟化铵)，在室温下搅拌1h；反应完全后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、过滤、浓缩以及柱色谱分离，得到Tarchonanthuslactone的异构体(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯)。

优选地，所述停止反应为加入饱和NaHCO₃溶液停止反应；所述萃取为用乙酸乙酯萃取；所述洗涤为用饱和NaCl溶液洗涤；所述干燥为用无水硫酸钠干燥。

优选地，在步骤(2)中，所述柱色谱分离中洗脱剂及其比例为乙酸乙酯：石油醚＝1：1；

在步骤(3)中，所述柱色谱分离中洗脱剂及其比例为乙酸乙酯：石油醚＝1:5；

在步骤(4)中，所述柱色谱分离中洗脱剂及其比例为乙酸乙酯：石油醚＝1:1。

优选地，在步骤(1)中，所述(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)的制备包括以下步骤：

A、将(Z)-((1-甲氧-1,3-二亚乙烯基)氧代)三甲基硅烷)和(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醛)经过MukaiyamaAldol反应得到(5R,7R,E)-甲基-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸酯)；

B、将950mg(5R,7R,E)-甲基-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸酯)溶解到38.5ml THF中，然后加入20ml甲醇；将1.5g氢氧化锂溶于20ml水中，用滴管加到反应瓶中，在室温下反应2h；反应完全后，加1M HCl将pH值调至6，然后用80ml乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)。

优选地，在步骤A中，所述(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醛)的制备包括以下步骤：

a、在氮气保护下先将2.6ml三羟基丁酸甲酯溶于56ml二氯甲烷，再将PMB酯溶于56ml DCM中；在氮气保护下把稀释的PMB酯溶液逐滴加入到(R)-甲基-3-羟基丁酸酯，然后加入535mg樟脑磺酸，在室温下搅拌15h；反应结束后，终止反应、萃取、合并有机相、干燥、过滤、浓缩以及柱色谱分离，得到(R)-甲基-3-((4-甲氧苄基)氧代)丁酸酯)；

b、在氮气保护下，将2.618g LiAlH4溶于57.5ml乙醚中并置于0℃下搅拌；将5.47g式2化合物溶于57.5ml乙醚，在搅拌下逐滴加入到LiAlH₄溶液中，在0℃下反应1h；反应结束后，终止反应、抽滤、滤液萃取、合并有机相、洗涤、干燥、过滤、柱色谱分离，得到(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醇；

c、将(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醇通过Swern Oxidation反应得到(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醛)。

优选地，在步骤a中，所述终止反应为用10ml饱和NaHCO₃溶液终止反应，所述萃取为用115mlDCM萃取3次，所述洗涤为用饱和NaCl溶液洗涤，所述干燥为用无水硫酸钠干燥，所述柱色谱分离中洗脱剂比例为乙酸乙酯：石油醚＝1:15。

优选地，在步骤b中，所述终止反应为用1M 68ml的KOH溶液终止反应，所述抽滤为用硅藻土抽滤，所述萃取为将滤液用120mlDCM萃取3次，所述洗涤为用饱和NaCl溶液洗涤，所述干燥为用无水硫酸钠干燥，所述柱色谱分离中洗脱剂比例为乙酸乙酯：石油醚＝1:5。

优选地，所述PMB酯的制备具体为：在氮气保护下，将5.565g对甲氧基苄醇溶于13ml乙醚，在0℃加入403mg质量浓度为60％的NaH，在室温下搅拌30min，然后冷却到0℃，逐滴加入4.04ml三氯乙腈，自然回温到室温并在室温下搅拌2h；反应结束后，浓缩，再加100ml正己烷并润洗沉淀物，然后用硅藻土过滤，将滤液浓缩得到PMB酯。

优选地，所述(Z)-((1-甲氧-1,3-二亚乙烯基)氧代)三甲基硅烷)的制备包括以下步骤：

在冰水条件以及氮气的保护下，向1.71ml二异丙基氨和13ml四氢呋喃构成的混合溶液中缓慢加入3.76ml、2.5M的丁基锂，得到的混合体系在同一温度下，经过30min的搅拌后冷却至-78℃，然后缓慢加入1.36ml DMPU，并在-78℃下，搅拌30min，然后逐滴加入1ml巴豆酸甲酯，并在-78℃下再次搅拌30min后，缓慢地加入由1.27ml三甲基氯硅烷和5ml四氢呋喃构成的混合溶液，滴加完后将反应体系移至室温并继续搅拌2个小时；

反应完后，加入大量的正己烷，并用冷水洗涤数次，将得到的有机相经过硅藻土过滤后，用无水硫酸钠干燥，并在40℃的水浴下，减压浓缩得到(Z)-((1-甲氧-1,3-二亚乙烯基)氧代)三甲基硅烷)。

本发明提供了一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法，以三羟基丁酸甲酯为原料，经PMB酯保护，四氢铝锂还原，Swern氧化得式4化合物；式4化合物和烯醇硅醚经Mukaiyama Aldol反应得式6化合物；式6化合物经氢氧化锂将酯水解成酸，在2，4，6-三氯苯甲酰氯和吡啶催化下发生Yanaguchi关环反应，脱PMB保护得式9化合物；式9化合物和TBS保护的苯丙酸作用，然后脱TBS得到目标分子12即天然产物Tarchonanthuslactone的一个异构体。

总结以上讨论的一般反应步骤如下：以三羟基丁酸甲酯为原料，经过PMB酯保护，LiAlH₄还原，Swern氧化，Mukaiyama Aldol反应，酯水解，Yanaguchi关环，去保护，缩合得到目标分子式12即天然产物Tarchonanthuslactone的一个异构体。目标分子的全合成路线如图1所示。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明的合成路线设计新颖合理，原料价廉易得，操作工艺简便，反应条件温和，速率快，副反应相对少，操作简便，原料廉价易得，可大大降低合成成本。

附图说明

图1是本发明Tarchonanthuslactone的异构体(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯)的全合成线路图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例结合图1进行描述，图1中，式1化合物：(R)-甲基-3-羟基丁酸酯)；式2化合物：(R)-甲基-3-((4-甲氧苄基)氧代)丁酸酯)；式3化合物：(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醇)；式4化合物：(R)-3-((4-甲氧苄基)氧代)-1-丁醛)；式5化合物:(Z)-((1-甲氧-1,3-二亚乙烯基)氧代)三甲基硅烷)；式6化合物：(5R,7R,E)-甲基-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸酯)；式7化合物：(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)；式8化合物：(5R,7R,E)-5-羟基-7-((4-甲氧苄基)氧代)-2-辛烯酸)；式9化合物：(R)-6-((R)-2-羟基丙基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮)；式10化合物：3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸)；式11化合物：(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸酯)；式12化合物：(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯)。

实施例1PMB酯的合成

在氮气保护下，将对甲氧基苄醇(5.565g)溶于乙醚(13ml)，在0℃加入(403mg，60％)NaH，在室温下搅拌30min，然后冷却到0℃，逐滴加入三氯乙腈(4.04ml)，自然回温到室温并在室温下搅拌2h。反应结束后，先用旋转蒸发仪浓缩，再加正己烷(100ml)并润洗沉淀物，然后用少量硅藻土过滤，将滤液浓缩得到橙色油状物，即PMB酯(8g，70.2％)。

实施例2式2化合物的合成

在氮气保护下先将三羟基丁酸甲酯(2.6ml)溶于二氯甲烷(DCM，56ml)，再将PMB酯溶于56ml DCM中。在氮气保护下把稀释的PMB酯溶液逐滴加入到1溶液，然后加入535mg樟脑磺酸(CSA)，在室温下搅拌15h。加10ml饱和NaHCO₃溶液停止反应，用DCM(115ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物，洗脱剂比例为(乙酸乙酯：石油醚＝1:15)，最后将洗脱液浓缩得橙黄色油状式2化合物(5.15g，93.7％)。

实施例3式3化合物的合成

在氮气保护下将LiAlH₄(2.618g)溶于57.5ml乙醚中并置于0℃下搅拌。将式2化合物(5.47g)溶于57.5ml乙醚，在搅拌下逐滴加入到LiAlH₄溶液中，在0℃下反应1h。反应结束后，用1M的KOH溶液(68ml)终止反应，然后用硅藻土抽滤，滤液用DCM(120ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)，将洗脱液浓缩得黄色油状式3化合物(3.85g，80％)。

实施例4式4化合物的合成(Swern氧化)

在保证整个反应过程中无水无氧，并用氮气保护的条件下，将1.75ml草酰氯(COCl)₂溶于34ml的DCM，放入-60℃下搅拌，逐滴加入二甲基亚砜(DMSO，2.9ml)。此混合物在低温下搅拌15min后，将式3化合物(2.85g)溶于DCM(34ml)，再慢慢地加入到反应瓶中。反应1h后，逐滴地加入三乙胺(Et₃N，13.22ml)，加完料后将反应混合物从低温中取出放入冰水浴中，接着反应2h。待反应结束后，加饱和NaCl溶液(90ml)，用DCM(86ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后经柱色谱分离(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)，将洗脱液浓缩得浅黄色油状式4化合物(2.5g，90％)。

实施例5式6化合物的合成

在0℃(冰水混合物)条件以及氮气的保护下，向二异丙基氨(1.71ml)的四氢呋喃(13ml)溶液中缓慢加入2.5M的丁基锂(3.76ml)，得到的混合体系在同一温度下，经过30min的搅拌后冷却至-78℃，然后缓慢加入DMPU(1.36ml)，并在-78℃下，搅拌30min，然后逐滴加入巴豆酸甲酯(1ml)，并在同一温度下再次搅拌30min后，缓慢地加入三甲基氯硅烷(1.27ml)的四氢呋喃(5ml)溶液，滴加完后将反应体系移至室温并继续搅拌2个小时。反应完后，加入大量的正己烷，并用冷水洗涤数次，将得到的有机相经过硅藻土过滤后，用无水硫酸钠干燥有机相，并在40℃的水浴下，减压移除有机溶剂得到较纯的淡黄色油状液体式5化合物(Z)-((1-甲氧-1,3-二亚乙烯基)氧代)三甲基硅烷)(烯醇硅醚)(1.21g,75％)。

在氮气保护下，先将Ti(OⁱPr)₂Cl₂(10ml)溶于甲苯(30ml)，放在冰水浴中，然后逐滴加入四氯化钛(TiCl₄，3.367ml)，在室温下搅拌1h反应结束后制得乳白色悬浮状的浓度为1M的Ti(OⁱPr)₂Cl₂(二氯二异丙基钛)溶液。

在氮气保护下，将1M的Ti(OⁱPr)₂Cl₂(14.3ml)溶于70ml甲苯，放入-78℃的低温中，然后将已溶于25ml甲苯的式4(2.7g)化合物溶液逐滴加入，在-78℃下搅拌30min，将4.02g式5化合物溶于35ml甲苯，再逐滴加入到反应体系中，滴加完毕后在-78℃下搅拌30min。反应结束加20ml饱和NaHCO₃溶液停止反应，用DCM(80ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:2)，最后将洗脱液浓缩得黄色油状式6化合物(3.28，82％)。

实施例6式7化合物的合成

式6化合物(950mg)溶解到38.5ml THF中，然后加入20ml甲醇；将1.5g氢氧化锂溶于20ml水中，用滴管加到反应瓶中，在室温下反应2h。TLC检测显示反应完全后，加1M HCl将pH值调至6，然后用乙酸乙酯(80ml×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得黄色油状式7化合物(907mg，100％)。

实施例7式8化合物的合成

在氮气保护下，式7化合物(840mg)溶于DCM(0.5mL)，在0℃下慢慢滴加0.9ml(2，4，6)-三氯苯甲酰氯和6.5ml吡啶，回温到室温反应2h。反应结束加饱和NaHCO₃溶液停止反应，用DCM(7.5ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)，最后将洗脱液浓缩得黄色油状式8化合物(685mg，87％)。

实施例8式9化合物的合成

式8化合物(195mg)溶于13ml DCM，加1.4ml H₂O，置于0℃下，将300.8mg DDQ(2，3-二氯-5，6-二氰对苯醌)加入到反应体系中，4h后用饱和NaHCO₃溶液停止反应，DCM(15ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)，最后将洗脱液浓缩得黄色油状式9化合物(81.2mg，79％)。

实施例9式10化合物的合成

3,4-二羟基苯基丙酸(900mg)溶于10ml DMF，加入1.34g咪唑，置于0℃下，慢慢加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.49g)后将反应在室温下反应2天，待反应结束加入40ml乙醚和10ml水停止反应，分液后用乙醚(40ml×4)萃取水相，分液，合并有机相，有机相分别用饱和氯化铵溶液和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)，最后将洗脱液浓缩得黄色油状式10化合物(840mg，94％)。

实施例10式11化合物的合成

式9化合物(55mg)溶解到7ml DCM中，然后加入溶于3ml DCM的式10化合物(159mg)，再加入80mg DCC，最后加入21.5mg DMAP，在室温下反应15h。在TLC检测显示反应完全后，加35ml饱和NH₄Cl溶液停止反应，用DCM(35ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)，最后将洗脱液浓缩得黄色油状式11化合物(155mg，81％)。

实施例11式12化合物的合成

式11化合物(272mg)溶解到25ml THF溶液中，加入180mg苯甲酸和5mmolTBAF(四丁基氟化铵)，在室温下搅拌1h。在TLC检测显示反应完全后，加30ml饱和NaHCO₃溶液，用乙酸乙酯(35ml×3)萃取，合并有机相，用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用柱色谱分离提纯产物(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)，最后将洗脱液浓缩得黄色油式12状化合物(134mg，84％)。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在氮气保护下，将840mg式7化合物溶于0.5mL DCM，在0℃下慢慢滴加0.9ml(2，4，6)-三氯苯甲酰氯和6.5ml吡啶，回温到室温反应2h；反应结束后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、浓缩以及柱色谱分离，得到式8化合物

(2)将195mg式8化合物溶于13ml DCM，加1.4mlH₂O，置于0℃下，将300.8mg2，3-二氯-5，6-二氰对苯醌加入到反应体系中；反应结束后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、浓缩以及柱色谱分离，得到(R)-6-((R)-2-羟基丙基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮；

(3)将55mg(R)-6-((R)-2-羟基丙基)-5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮溶解到7ml DCM中，然后加入溶于3ml DCM的159mg 3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸，再加入80mgDCC，最后加入21.5mgDMAP，在室温下反应15h；反应完全后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、过滤、浓缩以及柱色谱分离，得到(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸酯；

(4)将272mg(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-双((叔丁基二甲基硅)氧代)苯基)丙酸酯溶解到25ml THF溶液中，加入180mg苯甲酸和5mmol TBAF(四丁基氟化铵)，在室温下搅拌1h；反应完全后，停止反应、萃取、合并有机相、洗涤、干燥、过滤、浓缩以及柱色谱分离，得到Tarchonanthuslactone的异构体(R)-1-((R)-6-氧-3,6-二氢-2H-2-吡喃基)异丙基-3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯。

2.如权利要求1所述的合成天然产物Tarchonanthuslactone异构体的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述柱色谱分离中洗脱剂及其比例为乙酸乙酯：石油醚＝1：1；