CN103298818A - 螺-吲哚酮mdm2拮抗剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供药物化学领域中的化合物、组合物和方法。本发明所提供的化合物和组合物涉及用作p53和MDM2之间相互作用的拮抗剂的螺-吲哚酮，以及其作为治疗癌症和其它疾病的治疗剂的用途。

Description

螺-吲哚酮MDM2拮抗剂

发明背景

攻击性癌细胞表型是多种遗传和外遗传改变(epigenetic alteration)致使细胞内信号传导通路失调的结果(Ponder，Nature411:336(2001))。癌细胞通常不能执行细胞凋亡程序，且认为由于正常细胞凋亡机制的缺陷引起的缺乏适当细胞凋亡是癌症的标志(Lowe等人，Carcinogenesis21:485(2000))。由于正常细胞凋亡机制的缺陷引起的癌细胞不能执行细胞凋亡程序，通常与对化疗、放射或免疫治疗诱导的细胞凋亡的抗性增加相关。不同来源的人癌症由于细胞凋亡缺陷引起的对于目前治疗方案的原发性或获得性抗性，是目前癌症治疗的主要问题(Lowe等人，Carcinogenesis21:485(2000)；Nicholson，Nature407:810(2000))。因此，目前和未来对设计和研发靶点-特异性新分子抗癌治疗以改善癌症患者的存活率和生活质量的努力，必须包括对细胞凋亡特异性靶点癌细胞抗性的策略。

p53肿瘤抑制基因对于控制细胞周期进程、衰老和细胞凋亡起着核心作用(Vogelstein等人，Nature408:307(2000)；Goberdhan，Cancer Cell7:505(2005))。MDM2和p53是自身调节反馈回路的部分(Wu等人，Genes Dev.7:1126(1993))。MDM2在转录中被p53和MDM2激活，其又通过至少三种机理抑制p53活性(Wu等人，Genes Dev.7:1126(1993))。第一，MDM2蛋白直接结合p53反式激活区，从而抑制p53介导的反式激活。第二，MDM2蛋白含有核输出信号序列，并在结合至p53后诱导p53的核输出，阻止p53结合至靶DNA。第三，MDM2蛋白为E3泛素连接酶，且在结合至p53后能够促进p53的降解。

尽管之前已经成功地设计了基于肽的MDM2的高亲和性抑制剂(Garcia-Echeverria等人，Med.Chem.43:3205(2000))，然而这些抑制剂并非合适的治疗性分子，因为它们的细胞穿透性和体内生物利用度较差。尽管制药工业付出大量的努力，但高通量筛选策略在鉴定有效的非肽小分子抑制剂方面收效甚微。因此，需要p53-MDM2相互作用的非肽药物样小分子抑制剂。

p53和MDM2相互作用的结构基础已由X射线结晶学确定(Kussie等人，Science274:948(1996))。

p53-MDM2相互作用的基于螺-吲哚酮(spiro-oxindole)的拮抗剂公开于美国专利No.7,759,383B2和7,737,174B2中。

皮肤癌或黑色素瘤为一种常见的癌症类型。虽然黑色素瘤仅代表癌症案例总数的一小部分，但其导致了许多癌症死亡。根据美国癌症协会的统计，与许多其它类型的癌症相比，在美国新的黑色瘤病例数仍在增加中。

如同所有的癌症，黑色素瘤需早期诊断。大约70%的黑色素瘤为“浅表扩散性”，是指其在垂直生长和侵袭组织下方的更严重的症状前，先经历一段浅表、辐射生长期。不幸地，约有20%的皮肤黑色素瘤开始立即为垂直生长期，这说明为何这些肿瘤会如此危险。第1期黑色瘤的5年存活率非常好。然而，当癌症得以进展和侵入时(首先是局部地及然后更深远)，则存活率快速下降。疾病第2期的存活率仅40-80%，第3期为10-70%，而第4期因无法治疗的远处转移至(特别是)肺和脑，在5年内几乎一定致命(<5-10%存活超过5年)。

黑色素瘤为起源于黑色素细胞(制造色素的皮肤细胞)的恶性转化，经由非典型和异常的癌前病变中间期至局部侵袭性和最后转移性黑色素瘤。有大量的基因参与这些过程。众所周知转移性黑色素瘤(常见的死因)对于常规的治疗具耐药性。

发明概述

本发明涉及将人和动物暴露于治疗有效量的药物(例如小分子)抑制p53表达细胞的生长，该药物增加p53和p53相关蛋白(例如p63，p73)的功能。在一些实施方案中，本发明提供的化合物抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白(例如MDMX)之间的相互作用。抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白之间的相互作用抑制细胞的生长。例如，抑制p53或p53-相关蛋白与MDM2或MDM2-相关蛋白间的相互作用可抑制癌细胞或支持细胞和/或使这些细胞对诱导细胞死亡活性的癌症治疗药物或放射治疗更敏感。在一些实施方案中，本发明提供的抑制剂通过干扰p53-MDM2相互作用延长p53的半衰期，所述p53-MDM2相互作用通常会促进p53降解。本发明提供的化合物满足了治疗多种癌症类型的尚未满足的需要，无论是作为单一治疗给药以诱导癌细胞的衰老、细胞生长抑制、细胞凋亡和/或细胞周期终止，还是以暂时方式给药其它药物，例如其它诱导细胞死亡或细胞周期干扰性癌症治疗剂或放射治疗(组合治疗)，以使得相比于仅用癌症治疗性药物或放射治疗进行治疗的动物中的相应细胞比例，有更大比例的癌细胞或支持性细胞对执行细胞凋亡程序敏感。

在一些实施方案中，相比于仅用所述化合物或抗癌药物/放射单独治疗动物(包括人)，用治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物和抗癌剂治疗动物产生更大的抗肿瘤活性和临床益处。另外，由于本发明提供的化合物能降低表达p53或p53相关蛋白的细胞的细胞凋亡阈值，因此当与一种或多种本发明提供的化合物组合使用时，成功地执行细胞凋亡程序(作为对抗癌药物/放射的细胞凋亡诱导活性的响应)的细胞比例将会增加。或者，本发明提供的化合物可用于给药更低剂量的、且因此毒性更低和更易耐受的抗癌药物和/或放射，以产生与单用常规剂量的抗癌药物/放射相同的肿瘤响应/临床益处。由于经批准的抗癌药物和放射治疗的剂量是已知的，因此本发明提供的化合物、组合物和方法能与一种或多种经批准的抗癌药物和/或放射治疗一起使用。另外，由于本发明提供的化合物可至少部分地通过刺激p53和p53相关蛋白的促细胞凋亡和/或细胞周期抑制活性而起作用，将癌细胞和支持性细胞暴露于治疗有效量的所述化合物可暂时地连接为响应于抗癌药物或放射治疗的细胞执行细胞凋亡程序的尝试。因此，在一些实施方案中，与其它已知的抗癌药物组合给药本发明提供的化合物或组合物，特别提供了有效的治疗实践。

在其它实施方案中，本发明提供的p53或p53相关蛋白与MDM2和MDM2相关蛋白之间的相互作用的抑制剂可保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭某些化疗剂和放射的毒性作用，这可能是通过所述抑制剂诱导正常细胞的细胞周期终止的能力实现的。例如，本发明提供的抑制剂可引起包含野生型或功能性p53(和/或野生型或功能性p53相关蛋白)的细胞的细胞周期终止，同时对包含突变、缺失或者非功能性或低功能性p53(和/或突变、缺失或者非功能性或低功能性p53相关蛋白)的癌细胞无作用或作用较低。当与本发明提供的抑制剂组合给予时，通过允许使用更高剂量或具有更长期治疗的化疗剂或疗法而不增加所述治疗的毒性副作用，这种有差别的保护性作用可允许更有效地治疗癌症。

申请人已经发现，本发明提供的具体螺-吲哚酮呈现了药物样性质的出乎意料的组合。所述出乎意料的组合包括例如体外功效，体内功效，体外肝微粒体稳定性，想要的吸收、分布、代谢和排泄(ADME)性质之中的两种或多种。例如，相比于已知的p53-MDM2相互作用拮抗剂，本发明提供的具体螺-吲哚酮更耐受代谢降解(例如通过体外肝微粒体稳定性和/或体内药代动力学所测量)和/或显示体内功效增加。

申请人还发现，可代谢裂解的基团可用于增加母体分子的水溶性。因此，在一些实施方案中，本发明提供的螺-吲哚酮是相比于母体分子水溶性增加的有用的前药。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物为具有式I-XXXV的螺-吲哚酮(参见下文“化合物”)，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。在一些实施方案中，本发明提供的化合物抑制了p53或p53-相关蛋白与MDM2或MDM2-相关蛋白间的相互作用。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物含有可代谢裂解的基团。具体而言，在一些实施方案中，本发明提供的化合物含有羟基环烷基侧链的羟基，其可用于连接可代谢裂解的基团。合适的可代谢裂解的基团包括但不限于氨基酸酯或磷酸酯。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物可用于在包含功能性p53或p53相关蛋白的细胞中诱导衰老、细胞周期终止和/或细胞凋亡。本发明还提供了使用本发明提供的化合物使细胞对其它药物敏感的方法，所述其它药物例如衰老、细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂。本发明提供的化合物还能通过在治疗前用化疗剂诱导细胞周期终止而用于为正常细胞提供化学保护。在一个实施方案中，使正常细胞耐受化疗剂或疗法的所述方法包括将所述细胞与一种或多种本发明提供的化合物接触。在一个实施方案中，在具有过度增殖性疾病的动物中保护正常细胞免遭化疗剂或疗法的毒性副作用的方法包括向该动物给药本发明提供的化合物。本发明提供治疗、改善或预防由对正常细胞给药化疗剂引起的疾病、副作用或病症的方法，该方法包括向经历化疗的动物给药本发明提供的化合物。化疗引起的障碍和病症的实例包括但不限于粘膜炎、口腔炎、口干症、胃肠道病症和脱发。

本发明提供的化合物可用于治疗、改善或预防障碍，例如响应于诱导细胞凋亡细胞死亡的障碍，例如表征为细胞凋亡失调的障碍，包括过度增殖性疾病，例如癌症。在一些实施方案中，所述化合物可用于治疗、改善或预防表征为耐受癌症治疗的癌症(例如化学耐受、放射耐受、激素耐受等的那些癌细胞)。在其它实施方案中，所述化合物可用于治疗表征为功能性p53或p53相关蛋白的表达的过度增殖性疾病。在其它实施方案中，本发明提供的化合物通过诱导所述细胞的细胞周期终止可用于保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭化疗剂和疗法的毒性副作用。

在一个实施方案中，提供药物组合物。所述药物组合物可包含一种或多种本发明提供的化合物和药学上可接受的载剂。

在一个实施方案中，提供试剂盒(kit)。所述试剂盒可包含一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐和用于给予动物所述化合物的说明书。所述试剂盒可任选地含有其它治疗剂，例如抗癌剂或细胞凋亡调节剂。

在一个实施方案中，提供在患者中治疗、预防或改善过度增殖性疾病(例如癌症)的方法，其包括脉冲式给予该患者治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一个实施方案中，提供在患者中治疗、预防或改善过度增殖性疾病(例如癌症)的方法，其包括脉冲式给予该患者治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药与一种或多种其它治疗剂(例如抗癌剂)的组合。

在一个实施方案中，提供试剂盒，其包含一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药及以脉冲式将化合物给予患有过度增殖性疾病的患者的说明书。试剂盒可任选含有一种或多种其它治疗剂，例如抗癌剂。

附图说明

图1为用硅胶柱色谱分离后，MI-519-64的反相HPLC色谱图。

图2为用乙腈/水处理12小时后，MI-519-64的反相HPLC色谱图。有三种异构体存在。MI-519-64和MI-519-6401分别对于30.578分钟和31.787分钟时的RP-HPLC锋。在29.162分钟时洗脱的异构体为MI-519-6402。

图3为用乙腈/水处理3天后，MI-519-64的反相HPLC色谱图。

图4为显示使用荧光偏振结合分析所测定的MI-519-64、MI-519-6401和MI-519-6402对人MDM2蛋白结合亲和力的曲线图。用于此实验的各异构体纯度(用RP-HPLC测定)如下：MI-519-6402：90%(含10%的MI-519-64)；MI-519-64：93%(含3%的MI-519-64和及4%的MI-519-6401)；以及MI-519-6401：>99%。MI-519-6402、MI-519-64和MI-519-6401的IC₅₀对数值分别为2.030nM、1.598nM和0.8354nM。

图5为显示使用荧光偏振结合分析所测定的MI-773(TFA盐)、MI-77301(TFA盐)、MI-77301(游离胺)和MI-77302(TFA盐)对人MDM2蛋白结合亲和力的曲线图。

图6为显示在不同时间点在水/甲醇=1:1(含0.1%的TFA，pH2.1)中，MI-773(TFA盐)稳定性的曲线图。对应于峰1的化合物为MI-77302。对应于峰3的化合物为MI-773。对应于峰4的化合物为MI-77301。

图7为显示在不同时间点在水/甲醇=1:1(含0.1%的TFA，pH2.1)中，MI-77301(TFA盐)稳定性的曲线图。对应于峰1的化合物为MI-77302。对应于峰3的化合物为MI-773。对应于峰4的化合物为MI-77301。

图8为显示在SJSA-1(骨肉瘤)细胞系中，由MI-773和MI-77301诱导的p53活化和细胞凋亡的蛋白印迹分析(western blot analysis)。

图9为显示在SJSA-1细胞系中，由MI-519-64和MI-519-6401诱导的p53活化和细胞凋亡的蛋白印迹分析。

图10为显示在SJSA-1细胞系中，由MI-773和MI-77301诱导的细胞凋亡的柱状图。

图11为显示在SJSA-1细胞系中，由MI-519-64和MI-519-6401诱导的细胞死亡的柱状图。

图12为显示在RS4;11(人急性淋巴母细胞白血病(ALL))细胞系中，由MI-519-64和MI-519-6401诱导的细胞死亡的柱状图。

图13为显示在小鼠的SJSA-1肿瘤中，由MI-519-64和MI-519-6401诱导的体内p53活化和PARP裂解的蛋白印迹分析。

图14为显示在小鼠的RS4;11肿瘤中，由MI-519-64和MI-519-6401诱导的体内p53活化和PARP裂解的蛋白印迹分析。

图15为显示在小鼠的SJSA-1肿瘤中，由MI-773和MI-77301诱导的体内p53活化和PARP裂解的蛋白印迹分析。

图16为显示在RS4;11细胞系中，由MI-773和MI-77301诱导的p53活化和细胞凋亡的三个蛋白印迹分析。

图17为显示在小鼠的SJSA-1骨肉瘤异种移植模型中，MI-519-64、MI-519-6401、MI-773和MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图18为显示小鼠中给予MI-519-64、MI-519-6401、MI-773和MI-77301后，动物重量的曲线图。

图19为显示在小鼠的22Rv1人前列腺异种移植模型中，MI-519-6401和MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图20为显示在小鼠的SJSA-1骨肉瘤异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图(Cpd-B=MI-77301；治疗方案=QD11)。

图21为显示在小鼠中给予MI-77301后，动物重量的曲线图(Cpd-B=MI-77301)。

图22为显示在小鼠的SJSA-1骨肉瘤异种移植模型中，体内抗肿瘤活性的曲线图(Cpd-B=MI-77301)。

图23为显示在小鼠的SJSA-1骨肉瘤异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图(Cpd-B=MI-77301)。

图24为显示在黑色素瘤细胞系中，MI-77301的细胞生长抑制活性的曲线图。

图25为显示在SK-Mel-103(人黑色素瘤)细胞中，由MI-77301诱导的p53活化的蛋白印迹分析。

图26为显示在UACC-62(p53wt黑色素瘤)和SK-Mel-19(人黑色素瘤)细胞中，由MI-77301诱导的体内p53活化的蛋白印迹分析。

图27为显示在UACC-62细胞系中，由MI-77301诱导的细胞凋亡的柱状图。

图28为显示在小鼠的SK-Mel-103黑色素瘤异种移植中，由MI-77301诱导的体内p53活化的蛋白印迹分析。

图29为显示在小鼠的SK-Mel-103黑色素瘤异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图30为基本上纯的CB061-异构体B的反相HPLC色谱图。

图31为显示在小鼠的HCT-116人结肠直肠肿瘤异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图32为显示在小鼠的LNCAP人前列腺肿瘤异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图33为显示在小鼠的RS4;11人急性淋巴母细胞白血病异种移植模型中，MI-77301的体内抗肿瘤活性的曲线图。

图34为显示MI-77301(上)、MI-773(中)及MI-77302(下)的三个¹³CCPMAS NMR波谱图系列。

图35为基本上纯的MI-773的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的MeOH/水)。

图36为基本上纯的MI-77301的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的MeOH/水)。

图37为显示在不同时间点在水/甲醇=1:1(含0.1%的TFA，pH10.8)中，MI-773(TFA盐)稳定性的曲线图。对应于峰3的化合物为MI-773。对应于峰4的化合物为MI77301。

图38为显示在不同时间点在水/甲醇=1:1(含0.1%的TFA，pH3.9)中，MI-773(TFA盐)稳定性的曲线图。对应于峰3的化合物为MI-773。对应于峰4的化合物为MI-77301。

图39为基本上纯的C027的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的乙腈/H₂O)。

图40为基本上纯的C02701的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的乙腈/H₂O)。

图41为基本上无其它立体异构体的C029的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的乙腈/H₂O)。

图42为基本上纯的C02901的反相HPLC色谱图(洗脱剂：含0.1%TFA的乙腈/H₂O)。

发明详述

本发明提供了抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白之间的相互作用的化合物。通过抑制MDM2或MDM2相关蛋白对p53或p53相关蛋白的负面作用(negative effect)，这些化合物使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂敏感。在一些实施方案中，本发明提供的化合物诱导细胞凋亡和/或细胞周期终止。因此，本发明还提供了使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期终止的诱导剂敏感的方法和诱导细胞中细胞凋亡和/或细胞周期终止的方法。在一些实施方案中，所述方法包含将所述细胞与单独的一种或多种本发明提供的化合物或其与其它药物的组合接触，所述其它药物例如细胞凋亡诱导剂或细胞周期干扰剂。

本发明还提供了治疗、改善或预防患者病症(例如过度增殖性疾病(例如癌症))的方法，该方法包括向所述患者给药一种或多种本发明提供的化合物和其它药物，例如细胞凋亡诱导剂。所述病症包括表征为细胞凋亡失调和表征为表达功能性p53或p53相关蛋白的细胞增殖的病症。在其它实施方案中，提供了在动物中保护正常细胞(例如非过度增殖性细胞)免遭化疗剂和疗法的毒性副作用的方法。所述方法包含给予所述动物一种或多种本发明提供的化合物。本发明还提供在患者中治疗、预防或改善过度增殖性疾病(例如癌症)的方法，其包括根据脉冲剂量式给药方案，给予该患者治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

本发明还提供在患者中治疗、预防或改善过度增殖性疾病(例如癌症)的方法，其包括根据脉冲剂量式给药方案，给予该患者治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药与一种或多种其它治疗剂(例如抗癌剂)的组合。

本发明还提供试剂盒，其包括一种或多种本发明提供的化合物，以及以脉冲剂量式将化合物给予患有过度增殖性疾病的患者的说明书。试剂盒可任选含有一种或多种其它治疗剂，例如抗癌剂。

定义

本文所用的术语“脉冲式给药”、“脉冲剂量式给药”或“脉冲剂量式给予”是指间歇性(即非连续)给予患者一种或多种本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。可用于本发明公开的脉冲剂量式给药方案包括在有此需要的患者中提供治疗有效量的本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的任何非连续的给药方案。脉冲式给药方案可使用与连续给药法中所用的剂量相等、较低或较高剂量的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药可以以脉冲剂量式给药方案以单剂给药或与一种或多种另外的抗癌剂组合给药(其中另外的抗癌剂以连续或脉冲剂量式给药)。在化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药预定给予患者的当天，给药可以以单一或分开的剂量来进行，例如一天一次、一天两次、一天三次、一天四次或更多次。在一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药在预定给药的当天给予一次(QD)或两次(BID)。在一个实施方案中，所提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药根据脉冲剂量式给药方案以口服给予患者。在一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药根据脉冲剂量式给药方案经静脉给予患者。

给药的治疗用途可被患者所经历的不良反应的次数和严重性抵销。相较于每日连续给药，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的脉冲剂量式给药可降低临床不良反应的次数和/或严重性并维持或增进临床有效性。脉冲剂量式给予本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的临床益处在与其它治疗剂组合给予患者时更加显著。

在一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药以每两天中的一天(例如，给药在第1天、第3天、第5天、第7天、第9天等进行)，每三天中的一天(例如，给药在第1天、第4天、第7天、第10天等进行)，每四天中的一天，每五天中的一天，每六天中的一天，每七天中的一天，每八天中的一天，每九天中的一天，每十天中的一天，每两周中的一天，每三周中的一天，每四周中的一天，每五周中的一天，或更长的频率给予患者。脉冲给药方案可持续一、二、三或四周，一、二、三或四个月，一、二、三或四年，或更长。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药每周给予患者一天，例如式I-XXXV化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药在第一天给予患者，接着连续六天不给予该化合物。在另一个实施方案中，式I-XXXV化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药每两周给予患者一天。在另一个实施方案中，式I-XXXV化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药每三周给予患者一天。在另一个实施方案中，式I-XXXV化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药每四周给药患者一天。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药至少连续两天，例如至少连续三天、四天、五天、六天或七天给予患者，接着至少连续一天、至少连续两天、至少连续三天、至少连续四天、至少连续五天、至少连续六天、至少连续七天、至少连续八天、至少连续九天、至少连续十天、至少连续十一天、至少连续十两天、至少连续十三天、至少连续两周、至少连续三周、至少连续四周或更长不给予文中所公开的化合物。

在一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药与一种或多种抗癌剂在抗癌治疗周期的第1天给予患者。典型地，治疗周期的长度根据此一种或多种抗癌剂与式I-XXXV化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药组合给予患者的获批给药方案而定。在一个实施方案中，治疗周期为约14天、约21天或约28天。在具体的实施方案中，治疗周期为21天。在一个实施方案中，治疗周期重复一或多次，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多次。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药在治疗周期的第1天，第1和2天，或第1、2和3天给予患者，以及按照抗癌剂建议的给药计划将一种或多种抗癌剂于治疗周期开始的1天给予患者。在一个实施方案中，抗癌剂为化疗剂。在另一个实施方案中，抗癌剂为放射治疗。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药经由依次使用两或多个脉冲式给药计划的组合来给药。此组合可包括相同的脉冲式给药计划或不同的脉冲式给药计划。依次使用两或多个脉冲给药方案的组合可重复许多次以达到或维持治疗响应所需，例如一至约五十次，例如一至约二十次，例如约一至约十次。每次重复时，任何其它治疗剂可与前次重复所用的治疗剂相同或不同。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药根据脉冲式给药计划和/或两或多个脉冲式给药计划的依次组合然后一段等候期来给药。本文所用的术语“等候期”是指当文中所公开的化合物不给予患者时，介于给药计划间的时期。等候期可为一、二、三、四、五或六天；一、二或三周；一、二、三或四个月；一、二、三或四年或更长。在一些实施方案中，等候期可为一至三十天，例如七、十四、二十一或三十天，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天。在等候期过后，可恢复文中所公开的化合物的相同或不同的脉冲式给药计划和/或一个或多个脉冲式给药计划的依次组合。脉冲给药/等候期疗法可重复许多次以达到或维持治疗响应所需，例如一至约五十次，例如一至约二十次，例如约一至约十次。每次重复时，任何其它治疗剂可与前次重复所用的治疗剂相同或不同。

本文所用的术语“抗癌剂”是指在过度增殖性疾病例如癌症(例如在哺乳动物中，例如人)的治疗中所用的任何治疗剂(例如化疗化合物和/或分子治疗性化合物)、反义治疗、放射治疗或外科手术介入。

本文所用的术语“前药”是指母体“药物”分子的药理学上不活泼的衍生物，其需要在靶生理系统中发生生物转化(例如自发转化或酶促转化)，以释放或将前药转化(例如酶促、生理、机械、电磁转化)为活性药物。前药设计为克服与以下方面相关的问题：稳定性、水溶性、毒性、缺乏特异性、或有限的生物利用度。示例性前药包含活性药物分子本身以及化学掩蔽基团(例如可逆性抑制所述药物活性的基团)。一些前药是具有在代谢条件下可裂解基团的化合物的变型或衍生物。前药能够容易地使用本领域已知的方法由母体化合物制备，所述方法例如公开于以下文献中：A Textbook of Drug Designand Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard(eds.),Gordon&Breach,1991,特别是第5章:"Design and Applications of Prodrugs"；Design ofProdrugs,H.Bundgaard(ed.),Elsevier,1985；Prodrugs:Topical and Ocular DrugDelivery,K.B.Sloan(ed.),Marcel Dekker,1998；Methods in Enzymology,K.Widder等人(eds.),Vol.42,Academic Press,1985,特别是pp.309-396；Burger'sMedicinal Chemistry and Drug Discovery,5th Ed.,M.Wolff(ed.),John Wiley &Sons,1995,特别是Vol.1和pp.172-178和pp.949-982；Pro-Drugs as NovelDelivery System,T.Higuchi和V.Stella(eds.),Am.Chem.Soc.,1975；以及Bioreversible Carriers in Drug Design,E.B.Roche(ed.),Elsevier,1987。

在经历生理条件下的溶剂分解或经历酶促降解或其它生物化学转化(例如磷酸化，氢化，去氢化，糖基化)时，示例性前药在体内或体外具有药学活性。在哺乳动物机体中，前药常常具有水溶性、组织相容性或延迟释放的优势(参见例如Bundgaard,Design of Prodrugs,pp.7-9,21-24,Elsevier,Amsterdam(1985)；和Silverman,The Organic Chemistry of Drug Design andDrug Action,pp.352-401,Academic Press,San Diego,CA(1992))。常见前药包括：酸衍生物，例如将母体酸与合适的醇(例如低级烷醇)反应得到的酯，或通过将母体醇与合适的羧酸(例如氨基酸)反应得到的酯，通过将母体酸化合物与胺、反应形成酰化的碱性衍生物(例如低级烷基酰胺)的碱性基团反应得到的酰胺；或含磷衍生物，例如磷酸酯(phosphate)、膦酸酯(phosphonate)和氨基磷酸酯(phosphoramidate ester)，包括环状磷酸酯、膦酸酯和氨基磷酸酯，参见例如US2007/0249564A1。

本文所用的术语"可代谢裂解的基团"是指能够从母体分子通过代谢过程裂解和被氢取代的基团。某些包含可代谢裂解的基团的化合物可为前药，即其在药理学上不活泼。某些其它包含可代谢裂解的基团的化合物可为p53与MDM2之间相互作用的拮抗剂。在该情况下，这些化合物与母体分子相比可具有更高、更低或相当的活性。可代谢裂解的基团的实例包括源自氨基酸(参见例如US2006/0241017A1；US2006/0287244A1；和WO2005/046575A2)或含磷化合物(参见例如U.S.2007/0249564A1)的基团，如反应方程式1所示。

反应方程式1

本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指本发明提供的化合物在目标动物(例如哺乳动物)或人中生理上耐受的任何盐(例如通过与酸或碱反应所得)。本发明提供的化合物的盐可来自无机或有机酸和碱。酸的实例包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其它酸，例如草酸，尽管其本身并非药学上可接受，但可用于制备盐，所述盐用作获得本发明提供的化合物和它们的药学上可接受的酸加成盐的中间体。

碱的实例包括但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物，碱土金属(例如镁)氢氧化物，氨和式NW₄ ⁺化合物(其中W为C_1-4烷基)等。

盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(flucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其它实例包括使本发明提供的化合物的阴离子与合适的阳离子(例如Na⁺，NH₄ ⁺和NW₄ ⁺(其中W为C_1-4烷基)等)形成的盐。出于治疗性用途，本发明提供的化合物的盐应为药学上可接受的。然而，酸和碱的非药学上可接受的盐也可用于例如制备或纯化药学上可接受的化合物。

本文所用的术语“溶剂合物”是指本发明提供的化合物与一种或多种有机或无机溶剂分子的物理结合。该物理结合通常包括氢键结合。在一些实例中，例如当一种或多种溶剂合物分子掺入晶状固体的晶格中时，所述溶剂合物能够分离。“溶剂合物”涵盖溶液相溶剂合物和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。

本文所用的术语“药学上可接受的一价阳离子”是指无机阳离子，例如但不限于碱金属离子，例如Na⁺和K⁺，以及有机阳离子，例如但不限于铵和取代的铵离子，例如NH₄ ⁺、NHMe₃ ⁺、NH₂Me₂ ⁺、NHMe₃ ⁺和NMe₄ ⁺。

本文所用的术语“药学上可接受的二价阳离子”是指无机阳离子，例如但不限于碱土金属离子，例如Ca²⁺和Mg²⁺。

药学上可接受的一价和二价阳离子的实例例如公开于Berge等人，J.Pharm.Sci.，66:1-19(1997)。

本文所用的术语“治疗有效量”是指足以改善一种或多种疾病症状、或防止疾病进展、或使疾病退化的治疗剂(包括本发明提供的化合物、药物组合物和物质的组合物)的量。例如，对于癌症的治疗，在一个实施方案中，治疗有效量可指达到以下效果的治疗剂的量：降低肿瘤生长速率，减小肿瘤质量、减小转移数量、延长肿瘤进展时间、增加肿瘤细胞的细胞凋亡、或增加存活时间至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少100%。

本文所用的术语“使…敏感”和“致敏”是指通过给药第一治疗剂(例如本发明提供的化合物)使动物或动物细胞对在第二治疗剂生物效应更敏感或响应性更强，所述生物效应(例如细胞功能的促进或延迟，包括但不限于细胞分裂、细胞生长、增殖、侵袭、血管生成、坏死或细胞凋亡)。在伴随或不伴随给药第一药物的情况下给药第二药物后，在想要的生物学效应(例如细胞功能的促进或延迟，包括但不限于细胞生长、增殖、侵袭、血管生成或细胞凋亡)方面，测得第一药物对靶细胞的致敏作用可能不同。相比于无第一药物的响应，致敏细胞的响应可提高至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约100%、至少约150%、至少约200%、至少约250%、至少300%、至少约350%、至少约400%、至少约450%或至少约500%。

本文所用的术语“细胞凋亡失调”是指细胞通过细胞凋亡而死亡的能力的任何缺失(例如遗传缺陷)。细胞凋亡失调与多种病症有关或由多种病症诱导，所述病症的非限制性实例包括：自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或干燥综合征)、慢性炎症(例如牛皮癣、哮喘或节段性回肠炎)、过度增殖性疾病(例如肿瘤、B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤)、病毒感染(例如疱疹、乳头状瘤或HIV)及其它病症，例如骨关节炎和动脉粥样硬化。应注意，当通过病毒感染诱导所述失调或所述失调与病毒感染有关时，该病毒感染在失调发生或观察时可能被检测到，也可能检测不到。即病毒诱导的失调在病毒感染症状消失后也能够发生。

本文所用的术语“功能性p53”是指在正常水平、低水平或高水平表达的野生型p53，且p53的突变体或等位基因突变体保持至少约5%野生型p53的活性，例如保持至少约10%、约20%、约30%、约40%、约50%或更多的野生型活性。

本文所用的术语“p53相关蛋白”是指与p53具有至少25%的序列同源性、具有肿瘤抑制基因活性、且通过与MDM2或MDM2相关蛋白相互作用而被抑制的蛋白。p53相关蛋白的实例包括但不限于p63和p73。

本文所用的术语“MDM2相关蛋白”是指与MDM2具有至少25%的序列同源性、且与p53或p53相关蛋白相互作用并使其受到抑制的蛋白。MDM2相关蛋白的实例包括但不限于MDMX和MDM4。

本文所用的术语“衰老”是指非癌性二倍体细胞失去分裂活性的现象，且其特征部分地在于末端着丝粒(telomeric)功能障碍或缩短。

本文所用的术语“过度增殖性疾病”是指在动物的局部增殖细胞的群体不受正常生长限制的病症。过度增殖性疾病的实例包括肿瘤、新生物、淋巴瘤、白血病等。若不经历侵袭或转移则新生物为良性；反之则为恶性。“转移性”细胞是指细胞能够侵入邻近身体结构。增生是细胞增殖的形式，其涉及组织或器官中细胞数量的增长，而在结构或功能上无显著变化。组织转化则是受控制的细胞生长的形式，其中一类完全分化的细胞取代另一类分化的细胞。

活化的淋巴样细胞的病理性生长常常导致自身免疫障碍或慢性炎性病症。本文所用的术语“自身免疫障碍”是指其中机体产生识别机体自身的分子、细胞或组织的抗体或免疫细胞的任何病症。自身免疫障碍的非限制性实例包括自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、伯格氏病(Berge’s disease)或IgA肾病、乳糜泻(celiac sprue)、慢性疲劳综合征、节段性回肠炎、皮肌炎、纤维肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫氏病(Grave’s disease)、桥本氏甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、扁平苔藓、多发性硬化、重症肌无力、牛皮癣、风湿热、风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、I型糖尿病、溃疡性结肠炎、白癜风等。

本文所用的术语“肿瘤性疾病”是指细胞的任何异常生长，或为良性(非癌性)或为恶性(癌性)。

本文所用的术语“黑色素瘤”是指始于黑色素细胞的任何癌症形式。黑色素瘤包括但不限于下列亚型：恶性雀斑样痣、雀斑样恶性黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、肢端小痣状黑色素瘤、粘膜黑色素瘤、结节性黑色素瘤、息肉状黑色素瘤、结缔组织增殖性黑素瘤、无黑素性黑素瘤、软组织黑色素瘤及转移性黑色素瘤。本文所用的黑色素瘤还包括转移性黑色素瘤。

本文所用的术语“正常细胞”是指不经历异常生长或分裂的细胞。正常细胞是非癌性的，不是过度增殖性疾病或病症的部分。

本文所用的术语“抗肿瘤剂”是指延缓靶(例如恶性)肿瘤增殖、生长或扩散的任何化合物。

本文所用的术语“防止”或“预防”是指在动物中降低病理性细胞(例如过度增殖性或肿瘤细胞)出现的可能性。所述预防可以是完全的，例如在受试者中完全无病理性细胞。所述预防也可以是部分的，使得在受试者中病理性细胞出现的可能性低于未经一种或多种本发明提供的化合物治疗的受试者中出现的可能性。

术语“一”(“a”和“an”)是指一个或多个。

本文所用的术语“细胞凋亡调节剂”是指参与调节(例如抑制、减少、增加、促进)细胞凋亡的物质。细胞凋亡调节剂的实例包括蛋白，其包含例如但不限于以下的死亡结构域：Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。细胞凋亡调节剂的其它实例包括但不限于TNFα、Fas配体、Fas/CD95抗体和其它TNF家族受体、TRAIL(也已知为Apo2配体或Apo2L/TRAIL)、TRAIL-R1抗体或TRAIL-R2抗体、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。广义的调节剂包括TNF家族受体和TNF家族配体的激动剂和拮抗剂。细胞凋亡调节剂可为可溶性或膜结合性(例如配体或受体)。细胞凋亡调节剂包括细胞凋亡诱导剂，例如TNF或TNF相关配体，特别是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。

术语“药学上可接受的载剂”或“药学上可接受的载体”涵盖任何标准的药用载剂、溶剂、表面活性剂或载体。合适的药学上可接受的载体包括水性载体和非水性载体。标准药用载剂和它们的制剂公开于Remington'sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版，1995中。

以其本身或作为另一基团的部分，本文所用的术语“烷基”是指直链或支链饱和脂肪烃，其具有1至18个碳或指定数目的碳(例如C₁-C₁₈指1至18个碳)。在一个实施方案中，所述烷基为C₁-C₁₀烷基。在一个实施方案中，所述烷基为C₄-C₈烷基。在另一个实施方案中，所述烷基为C₁-C₆烷基。在另一个实施方案中，所述烷基为C₁-C₄烷基。示例性烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基、异己基、正庚基、4,4-二甲基戊基、正辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基等。

以其本身或作为另一基团的部分，本文所用的术语“任选被取代的烷基”是指或未被取代或被一个、两个、三个取代基取代的如上所述的烷基，所述取代基独立地选自：羟基(即-OH)、硝基(即-NO₂)、氰基(即-CN)、任选被取代的环烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，所述任选被取代的烷基被一个取代基取代。在另一个实施方案中，所述取代基选自羟基(即羟基烷基)、任选被取代的环烷基(即(环烷基)烷基)或氨基(即氨基烷基)。示例性任选被取代的烷基包括-CH₂OCH₃、-CH₂CH₂NH₂、-CH₂CH₂NH(CH₃)、-CH₂CH₂CN、-CH₂SO₂CH₃、羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“亚烷基”是指包含一个、两个、三个、四个或更多连接在一起的亚甲基的二价烷基。示例性亚烷基包括-(CH₂)-、-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的亚烷基”是指或未被取代或被一个、两个、三个或四个取代基取代的如上所述的亚烷基，所述取代基独立地选自任选被取代的C₁-C₆烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基。在一个实施方案中，所述任选被取代的C₁-C₆烷基为甲基。在一个实施方案中，所述任选被取代的芳基为任选被一个或两个卤基取代的苯基。示例性的任选被取代的亚烷基包括-CH(CH₃)-，-C(CH₃)₂-、-CH₂CH(CH₃)-、-CH₂CH(CH₃)CH₂-、-CH₂CH(Ph)CH₂-、-CH(CH₃)CH(CH₃)-等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“卤代烷基”是指具有1至6个卤素取代基的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述卤代烷基具有一个、两个或三个卤素取代基。示例性卤代烷基包括三氟甲基、-CH₂CH₂F等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“羟基烷基”是指具有一个羟基取代基的如上定义的烷基。示例性羟基烷基包括羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“二羟基烷基”是指具有两个羟基取代基的如上定义的烷基。示例性二羟基烷基包括-CH₂CH₂CCH₃(OH)CH₂OH、-CH₂CH₂CH(OH)CH(CH₃)OH、-CH₂CH(CH₂OH)₂、-CH₂CH₂CH(OH)C(CH₃)₂OH、-CH₂CH₂CCH₃(OH)CH(CH₃)OH等，包括其立体异构体。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“羟基环烷基”是指具有至少一个，例如一个或两个羟基取代基的如下定义的任选被取代的环烷基。示例性羟基环烷基包括：

等，

包括其立体异构体。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的(环烷基)烷基”是指具有任选被取代的环烷基(如下定义)取代基的如上定义的任选被取代的烷基。示例性任选被取代的(环烷基)烷基包括：

等，

包括其立体异构体。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“芳烷基”是指具有一个、两个或三个任选被取代的芳基取代基的如上定义的任选被取代的烷基。在一个实施方案中，所述芳烷基具有两个任选被取代的芳基取代基。在另一个实施方案中，所述芳烷基具有一个任选被取代的芳基取代基。在另一个实施方案中，所述芳烷基为芳基(C₁-C₄烷基)。在另一个实施方案中，所述芳基(C₁-C₄烷基)具有两个任选被取代的芳基取代基。在另一个实施方案中，所述芳基(C₁-C₄烷基)具有一个任选被取代的芳基取代基。示例性芳烷基包括例如，苄基、苯基乙基、(4-氟苯基)乙基、苯基丙基、二苯基甲基(即Ph₂CH-)、二苯基乙基(Ph₂CHCH₂-)等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“环烷基”是指饱和和部分不饱和(包含一个或两个双键)的环状烃基，其包含一至三个环，具有3至12个碳原子(即C₃-C₁₂环烷基)或所指定的碳数。在一个实施方案中，所述环烷基具有一个环。在另一个实施方案中，所述环烷基为C₃-C₆环烷基。示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、十氢萘、金刚烷基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的环烷基”是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的环烷基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、氨基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。术语“任选被取代的环烷基”也指如上定义的环烷基可稠合至任选被取代的芳基。示例性任选被取代的环烷基包括：

等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“烯基”是指包含一个、两个或三个碳碳双键的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述烯基具有一个碳碳双键。示例性烯基包括-CH=CH₂、-CH₂CH=CH₂、-CH₂CH₂CH=CH₂、-CH₂CH₂CH=CHCH₃等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的烯基”是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的烯基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。示例性任选被取代的烯基包括-CH=CHPh、-CH₂CH=CHPh等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“环烯基”是指包含一个、两个或三个碳碳双键的如上定义的环烷基。在一个实施方案中，所述环烯基具有一个碳碳双键。示例性环烯基包括环戊烯、环己烯等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的环烯基”是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的环烯基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“炔基”是指包含一至三个碳碳叁键的如上定义的烷基。在一个实施方案中，所述炔基具有一个碳碳叁键。示例性炔基包括-C≡CH、-C≡CCH₃、-CH₂C≡CH、-CH₂CH₂C≡CH和-CH₂CH₂C≡CCH₃。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的炔基”是指或未被取代或被一个、两个或三个取代基取代的如上定义的炔基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。示例性任选被取代的烯基包括-C≡CPh、-CH₂C≡CPh等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“芳基”是指单环和双环状芳香环系统，其具有6至14个碳原子(即C₆-C₁₄芳基)，例如苯基(缩写为Ph)、1-萘基和2-萘基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的芳基”是指或未被取代或被一至五个取代基取代的如上定义的芳基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的芳基为任选被取代的苯基。在一个实施方案中，所述任选被取代的苯基具有四个取代基。在另一个实施方案中，所述任选被取代的苯基具有三个取代基。在另一个实施方案中，所述任选被取代的苯基具有两个取代基。在另一个实施方案中，所述任选被取代的苯基具有一个取代基。示例性被取代的芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、2,6-二-氟苯基、2,6-二-氯苯基、2-甲基-3-甲氧基苯基、2-乙基-3-甲氧基苯基、3,4-二-甲氧基苯基、3,5-二-氟苯基、3,5-二-甲基苯基和3,5-二甲氧基-4-甲基苯基、2-氟-3-氯苯基、3-氯-4-氟苯基等。术语任选被取代的芳基意在包括已稠合至任选被取代的环烷基和稠合至任选被取代的杂环的基团。实例包括

等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“杂芳基”是指具有5至14个碳原子（即C₅-C₁₄杂芳基）和一、二、三或四个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的单环和双环状芳香环系统。在一个实施方案中，所述杂芳基具有三个杂原子。在一个实施方案中，所述杂芳基具有两个杂原子。在一个实施方案中，所述杂芳基具有一个杂原子。示例性杂芳基包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-

唑基、4-

唑基、5-

唑基、3-异

唑基、4-异

唑基、5-异

唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、4-苯并咪唑基、5-苯并咪唑基、2-苯并噻唑基、4-苯并噻唑基、5-苯并噻唑基、5-吲哚基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、2-喹啉基、3-喹啉基、6-喹啉基等。术语杂芳基意在包括可能的N-氧化物。示例性N-氧化物包括吡啶基N-氧化物等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的杂芳基”是指或未被取代或被一至四个取代基、通常被一个或两个取代基取代的如上定义的杂芳基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基或磺酰胺基。在一个实施方案中，所述任选被取代的杂芳基具有一个取代基。在另一个实施方案中，所述取代基为任选被取代的芳基、芳烷基或任选被取代的烷基。在另一个实施方案中，所述取代基为任选被取代的苯基。任何可用的碳或氮原子均可被取代。示例性任选被取代的杂芳基包括：

等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“杂环”是指饱和和部分不饱和(包含一个或两个双键)的环状基团，其包含一至三个环，具有2至12个碳原子(即C₂-C₁₂杂环)和一个或两个氧、硫或氮原子。所述杂环能够任选地通过碳或氮原子连接至分子的其它部分。示例性杂环基包括

等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“任选被取代的杂环”是指或未被取代或被一至四个取代基取代的，如上定义的杂环所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、任选被取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环、烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷硫基、羧酰胺基、磺酰胺基、-COR^c、-SO₂R^d、-N(R^e)COR^f、-N(R^e)SO₂R^g或-N(R^e)C=N(R^h)-氨基，其中：R^c为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；R^d为任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；R^e为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；R^f为氢、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；R^g为任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；和R^h为氢、-CN、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基。可在任何可用的碳或氮原子上发生取代。示例性被取代的杂环基包括

等。

任选被取代的杂环可稠合至芳基，以提供如上所述任选被取代的芳基。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“烷氧基”是指连接至末端氧的卤代烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基或任选被取代的炔基。示例性烷氧基包括甲氧基、叔丁氧基、-OCH₂CH=CH₂等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“芳基氧基”是指连接至末端氧原子的任选被取代的芳基。示例性芳基氧基包括苯氧基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“芳烷基氧基”是指连接至末端氧原子的芳烷基。示例性芳烷基氧基包括苄基氧基等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“烷硫基”是指连接至末端硫原子的卤代烷基、芳烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基或任选被取代的炔基。示例性烷基包括-SCH₃等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。在一个实施方案中，所述卤素为氟或氯。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“氨基”是指式-NR^aR^b的基团，其中R^a和R^b独立地为氢、卤代烷基、芳烷基、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的杂环、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；或R^a和R^b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的四至七元杂环。示例性氨基包括-NH₂、-N(H)CH₃、-N(CH₃)₂、N(H)CH₂CH₃、N(CH₂CH₃)、-N(H)CH₂Ph等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“羧酰胺基”是指式-CO-氨基的基团。示例性羧酰胺基包括-CONH₂、-CON(H)CH₃、-CON(H)Ph、-CON(H)CH₂CH₂Ph、-CON(CH₃)₂、CON(H)CHPh₂等。

以其本身或作为另一基团的部分，术语“磺酰胺基”是指式-SO₂-氨基的基团。示例性磺酰胺基包括-SO₂NH₂、-SO₂N(H)CH₃、-SO₂N(H)Ph等。

本文所用的术语“约”，包括所述数值的±10%的范围。因此，“约10”指9至11。

本发明公开的具体化合物可以以立体异构体存在，即仅原子的空间排列不同的异构体，其包括光学异构体和构象异构体(conformer)。本发明公开包括所有的立体异构体，纯的个别立体异构体的制品以及富含个别异构体的制品，和这些立体异构体的外消旋混合物以及可根据本领域技术人员熟知的方法加以分离的个别非对映异构体和对映异构体。

本文所用的术语“基本上不含”是指化合物包含低于约25%的其它立体异构体，例如非对映异构体和/或对映异构体(如使用本领域技术人员常规的分析方法确定)。在一些实施方案中，其它立体异构体的量低于约24%、低于约23%、低于约22%、低于约21%、低于约20%、低于约19%、低于约18%、低于约17%、低于约16%、低于约15%、低于约14%、低于约13%、低于约12%、低于约11%、低于约10%、低于约9%、低于约8%、低于约7%、低于约6%、低于约5%、低于约4%、低于约3%、低于约2%、低于约1%或低于约0.5%。

含有约95%或更多，例如约96%或更多、约97%或更多、约98%或更多或约99%或更多所需立体异构体的富含立体异构体的化合物在文中称为“基本上纯的”或“基本上纯的立体异构体”。

含有约99%或更多所需立体异构体的富含立体异构体的化合物在文中称为“纯的”或“纯的立体异构体”。任何富含立体异构体的化合物的纯度可使用常规的的分析方法加以测定，例如正相HPLC、反相HPLC、手性HPLC及¹H和¹³C NMR。

化合物

在一些实施方案中，提供式I化合物：

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷氧基、芳基氧基、任选被取代的烷基、卤代烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、羧酰胺基和磺酰胺基；

R²选自任选被取代的芳基、芳烷基和任选被取代的杂芳基；

R³选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的环烯基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R⁴选自氢和任选被取代的烷基；

R⁵选自：

其中：

各R^6a和R^6b独立地选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁷选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R^8a和R^8b各独立地选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；或

R^8a和R^8b与它们所连接的碳一起形成任选被取代的3-至8-元环烷基；

W¹选自-OR^9a和-NR^9bR^9c；

R^9a为氢；

R^9b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^9d和-CONR^9eR^9f；

R^9c选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^9b和R^9c与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^9d选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^9e和R^9f各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^9e和R^9f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

W²选自-OR¹⁰和-NR^11aR^11b；

条件是当W¹为-OR^9a和W²为-OR¹⁰时，R⁷、R^8a和R^8b的至少一个不为氢；

R¹⁰为氢；或

R^9a和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R^11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^11c和-CONR^11dR^11e；

R^11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^11a和R^11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^11d和R^11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^11d和R^11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

n为1、2、3、4或5；

各R^12a、R^12b、R^12c和R^12d独立地选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R¹³选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R¹⁴选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

Z选自-OR¹⁵和-NR^16aR^16b；或

Z和R¹⁴一起形成羰基，即C=O基团；

R¹⁵选自氢和可代谢裂解的基团；

R^16a选自-SO₂R^16c和-CONR^16dR^16e；

R^16b选自氢和任选被取代的烷基；

R^16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R^16d和R^16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^16d和R^16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；

o为1、2或3；

p为0、1、2或3；

各R^17a、R^17b、R^17c和R^17d独立地选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R¹⁸选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R¹⁹选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R²⁰选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R^21a和R^21b各为氢；或

R^21a和R^21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

q为0、1、2或3；

r为1、2或3；

各R^22a、R^22b、R^22c和R^22d独立地选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R²³选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R²⁴选自-SO₂R^24a和-CONR^24bR^24c；

R^24a选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R^24b和R^24c各独立地选自氢、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^24b和R^24c与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；

s和t各独立地为1、2或3；

X选自O、S和NR'；

Y选自O、S和NR"；

R'选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基和任选被取代的环烷基；

R"选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基、任选被取代的环烷基和-COR³¹；

R³¹选自氢和任选被取代烷基；且

代表单键或双键，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，对于所述式I化合物，

代表单键。

在一些实施方案中，所述式I化合物为立体异构体的混合物，例如非对映异构体和/或对映异构体的混合物，例如外消旋混合物。在另一所述实施方案中，所述化合物为非对映异构体的混合物。在另一所述实施方案中，所述化合物为对映异构体的混合物。在具体的实施方案中，所述化合物为单一对映异构体。

在一些实施方案中，R⁵选自R5-1和R5-2。在具体的实施方案中，R⁵为R5-2和Z为-OH。在具体的实施方案中，R⁵为R5-2A而Z为OH。

在一些实施方案中，提供式Ia化合物：

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式Ib化合物：

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其互变异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式II-XVII化合物：

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有如上面式I所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式II化合物，其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有上述与式I相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式II化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式III-XVII化合物。在一些实施方案中，式II化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式II化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，式XIII化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。在一些实施方案中，式XIII化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XIII化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，式XIV化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。在一些实施方案中，式XIV化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XIV化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式VI化合物，其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X及Y具有如上有关式I所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式VI化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式II-V和VII-XVII化合物。在一些实施方案中，式VI化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式VI化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式X化合物，其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X及Y具有如上有关式I所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式X化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式II-IX和XI-XVII化合物。在一些实施方案中，式X化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式X化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式XII化合物，其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³、R⁴、R⁵、X及Y具有如上有关式I所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式XII化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式II-XI和XIII-XVII化合物。在一些实施方案中，式XII化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XII化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，式XII化合物令人意外地比式II-XI和XIII-XVII化合物更强效。例如，如文中所示，式XII化合物对MDM2具有比式II-XI和式XIII-XVII化合物更低的IC₅₀值。在一些实施方案中，式XII化合物在荧光偏振MDM2结合分析中比式II化合物更强效约2-倍或更高，例如约3-倍、约4-倍、约5-倍、约6-倍、约7-倍、约8-倍、约9-倍、约10-倍、约15-倍、约20-倍、约25-倍、约30-倍、约35-倍、约40-倍、约45-倍、约50-倍或更高。在一些实施方案中，式XII化合物令人意外地在小鼠的肿瘤异种移植模型中和/或其它体内效力模型中比式II-XI和XIII-XVII化合物更有效。

在一些实施方案中，提供式I-XVII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中：

a)R^1a、R^1b、R^1c和R^1d独立地选自氢，氟和氯；

b)R^1a和R^1d为氢；R^1b选自氢和氟；和R^1c选自氟和氯；

c)R²为任选被取代的苯基；

d)R³选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基和任选被取代的环烷基；

e)R⁴为氢；

f)X为NH；

g)X为O；

h)X为S；

i)Y为O；

j)Y为S；

k)Y为NH；或

l)X和Y为NH；

或其任意组合。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-1；R^6a和R^6b为氢；R⁷为C₁-C₄烷基；R^8a和R^8b为氢；W为-OR¹⁰，R⁹和R¹⁰为氢；和n为2。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-1；R^6a和R^6b为氢；R⁷为C₁-C₄烷基；R^8a和R^8b为氢；W为-NR^11aR^11b，R⁹为氢；和n为2。

在一些实施方案中，所述提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-1；R^6a和R^6b为氢；R⁷为C₁-C₄烷基；R^8a和R^8b为氢；W为-OR¹⁰，R⁹和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；和n为2。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-2；R^12a、R^12b、R^12c和R^12d各为氢；R¹³为氢；Z为-OR¹⁵和R¹⁵为氢；o为1或2；和p为1或2。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-2；R^12a、R^12b、R^12c和R^12d各为氢；R¹³为氢；Z为-NR^16aR^16b；o为1或2；和p为1或2。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-2；R^12a、R^12b、R^12c和R^12d各为氢；R¹³为氢；Z为-OR¹⁵且R¹⁵为可代谢裂解的基团；o为1或2；和p为1或2。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-3；R^17a、R^17b、R^17c和R^17d各为氢；R¹⁸、R¹⁹和R²⁰为氢；R^21a和R^21b为氢；和q和r为1。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-3；R^17a、R^17b、R^17c和R^17d各为氢；R¹⁸、R¹⁹和R²⁰为氢；R^21a和R^21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；和q和r为1。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为R5-2A。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R²选自芳烷基和具有式R2-1的任选被取代芳基：

且R^25a、R^25b、R^25c、R^25d和R^25e各独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、烷氧基、任选被取代的烷基、卤代烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基。在具体的实施方案中，R^25a选自氢和氟；R^25b为氯；R^25c选自氢和氟；和R^25d和R^25e为氢。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受

的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

包括其立体导构体，例如其对映异构体，其中：

R⁷为任选被取代的C₁-C₄烷基；

R^9a和R¹⁰各为氢；或

R^9a和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R^9b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^9d和-CONR^9eR^9f；

R^9c选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^9b和R^9c与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^9d选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^9e和R^9f各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^9e和R^9f与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^11c和-CONR^11dR^11e；

R^11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^11a和R^11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^11d和R^11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^11d和R^11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R¹⁴选自氢、C₁-C₄烷基或C₃-C₆环烷基；

R¹⁵为氢或可代谢裂解的基团；

R^16a选自-SO₂R^16c和-CONR^16dR^16e；

R^16b选自氢和任选被取代的烷基；

R^16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R^16d和R^16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^16d和R^16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；

R¹⁹选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R²⁰选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R^21a和R^21b各为氢；或

R^21a和R^21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R²⁴选自-SO₂R^24a和-CONR^24bR^24c；

R^24a选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；和

R^24b和R^24c各独立地选自氢、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基，或

R^24b和R^24c与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环。

在一些实施方案中，R⁵选自R5-5、R5-6、R5-10、R5-11、R5-12、R5-13和R5-14。

在一些实施方案中，R⁵选自R5-10和R5-12，且R¹⁴为氢或甲基，且R¹⁵为氢。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R⁷选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基;和

R^8a和R^8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R⁷选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；

R^8a和R^8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；

R^9d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和

R^11c选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R⁷选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；

R^8a和R^8b各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；

R^9e选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和

R^11d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和

R¹⁹和R²⁰各独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和

R^16c选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基；和

R^16d选自甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基和环丙基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X和XII化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中R⁵为：

在另一个实施方案中，提供式XVIIIa化合物：

其中：

R^1b和R^1c独立地选自氢、氟和氯；

R³选自任选被取代的烷基、任选被取代的(环烷基)烷基、任选被取代芳基和任选被取代的环烷基；

R^26a、R^26b和R^26c独立地选自氢、氟和氯；和

R²⁷选自：

其中：

R⁷为任选被取代的C₁-C₄烷基；

W²选自-OR¹⁰和-NR^11aR^11b；

R^9a和R¹⁰各为氢；或

R^9a和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R^11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^11c和-CONR^11dR^11e；

R^11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^11a和R^11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^11d和R^11e各独立地选自氢，任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^11d和R^11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R¹⁴选自氢、任选被取代的C₁-C₄烷基和任选被取代的环烷基；

Z选自-OR¹⁵和-NR^16aR^16b；

R¹⁵选自氢和可代谢裂解的基团；

R^16a选自-SO₂R^16c和-CONR^16dR^16e；

R^16b选自氢和任选被取代的烷基；

R^16c选自任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R^16d和R^16e各独立地选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^16d和R^16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环；

R¹⁹选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R²⁰选自氢、任选被取代的C₁-C₆烷基和任选被取代的环烷基；

R^21a和R^21b各为氢；或

R^21a和R^21b中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在另一个实施方案中，提供式XVIIIb化合物：

其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有如式XVIIIa所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在另一个实施方案中，提供式XVIIIc化合物：

其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有如式XVIIIa所述的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，R²⁷选自R27-2、R27-3、R27-5、R27-6、R27-8、R27-9、R27-11、R27-12、R27-14、R27-15、R27-16、R27-17、R27-19、R27-20、R27-21、R27-22、R27-24、R27-25、R27-27、R27-29、R27-30、R27-31和R27-32。在一些实施方案中，R²⁷选自R27-2、R27-3、R27-5和R27-6、R27-8、R27-9、R27-14、R27-15、R27-16和R27-17。在一些实施方案中，R²⁷为羟基环烷基。

在一些实施方案中，R^9a为氢；W²为OH；Z为OH；R⁷为C₁-C₄烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基，或环丙基；R¹⁴、R¹⁹和R²⁰各独立地为氢、C₁-C₄烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；和R^21a和R^21b各为氢。

在一些实施方案中，R^9a为氢，R⁷为氢、C₁-C₄烷基、或环丙基；W²为-NHR^11a；R^11a为C₁-C₄烷基，例如甲基、三氟甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；R¹⁴为氢、C₁-C₄烷基，例如甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基；Z为-NHSO₂R^16c或-NHCONHR^16d；和R^16c和R^16d各独立地为任选被取代的C₁-C₄烷基，例如甲基、三氟甲基、乙基、丙基或异丙基或环丙基。

在一些实施方案中，提供式XIX-XXXIV化合物：

其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有上述与式XVIIIa相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式XIX化合物，其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有上述与式XVIIIa相关的含义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式XIX化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式XX-XXXIV化合物。在一些实施方案中，式XIX化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XIX化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式XXIII化合物，其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有如上有关式XVIIIa所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式XXIII化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式XIX-XXII化合物和XXIV-XXXIV化合物。在一些实施方案中，式XXIII化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XXIII化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式XXVII化合物，其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有如上有关式XVIIIa所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式XXVII化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式XIX-XXVI和XXVIII-XXXIV化合物。在一些实施方案中，式XXVII化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XXVII化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式XXIX化合物，其中R^1b、R^1c、R³、R^26a、R^26b、R^26c和R²⁷具有如上有关式XVIIIa所述的意义，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，式XXIX化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，即式XIX-XXVIII和XXX-XXIV化合物。在一些实施方案中，式XXIX化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，式XXIX化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R²⁷选自：

其中：

R⁷为C₁-C₄烷基；

R^9a和R¹⁰为氢；或

R^9a和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R^11a和R^11b各独立地选自氢、任选被取代的C₁-C₄烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^11a和R^11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R¹⁴选自氢和C₁-C₄烷基；

R¹⁵为氢或可代谢裂解的基团；和

R^16a选自-SO₂R^16c和-CONR^16dR^16e；

R^16c选自任选被取代的C₁-C₄烷基或环丙基；

R^16d和R^16e各独立地选自氢、任选被取代的C_1-C₄烷基或环丙基；或

R^16d和R^16e与它们所连接的氮原子一起形成4-至8-元杂环,

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R²⁷选自：

其中：

R⁷为任选被取代的C₁-C₄烷基；

W²选自-OR¹⁰和-NR^11aR^11b；

R^9a和R¹⁰各为氢；或

R^9a和R¹⁰中的一个为氢且另一个为可代谢裂解的基团；

R^11a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、-SO₂R^11c和-CONR^11dR^11e；

R^11b选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；或

R^11a和R^11b与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

R^11c选自任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；

R^11d和R^11e各独立地选自氢、任选被取代的烷基和任选被取代的环烷基；或

R^11d和R^11e与它们所连接的氮原子一起形成任选被取代的4-至8-元杂环；

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R²⁷选自：

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R²⁷选自：

其中R^11a和R^11b与它们所连接的氮一起形成任选被取代的5-或6-元杂环。

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R²⁷选自：

其中：

R¹⁴选自氢和C₁-C₄烷基；和

R¹⁵为可代谢裂解的基团。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X、XII、XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R¹⁵为可代谢裂解的基团，其选自：

其中：

各R^28a和R^28b独立地选自氢、任选被取代的烷基和芳烷基；

R^29a和R^29b各选自氢和任选被取代的烷基；

v为1、2、3或4；和

R^30a和R^30b各选自氢、任选被取代的烷基、芳烷基、任选被取代的芳基和药学上可接受的一价阳离子；或

与R^30a和R^30b一起代表药学上可接受的二价阳离子或任选被取代的亚烷基。

在一些实施方案中，R¹⁵为天然或非天然氨基酸的残基。在其它实施方案中，R¹⁵为以下氨基酸的残基：甘氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸和组氨酸。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X、XII、XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R³为C₁-C₁₀烷基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X、XII、XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R³选自：-CH₂C(CH₃)₃、-CH₂C(CH₃)₂-CH₂-CH₃、-CH₂C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃、-CH₂C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₂CH₃、-CH₂C(CH₂CH₃)₂CH₃及-CH₂C(CH₃)₂CH₂CH(CH₃)₂。在一些实施方案中，R³为-CH₂C(CH₃)₃。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X、XII、XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R³为任选被取代芳基。

在一些实施方案中，提供式II、VI、X、XII、XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R³为任选被取代苯基。

在一些实施方案中，提供式XIX、XXIII、XXVII和XXIX化合物，其中R^1b、R^1c、R^26a、R^26b和R^26c各自独立地选自氢及卤素，例如氯或氟，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有式VI、X和XII化合物，其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²选自芳烷基和：

其中：

R^25a、R^25b、R^25c、R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³选自任选被取代的C₁-C₈烷基和任选被取代芳基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR'；

Y选自O、S及NR"；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢、任选被取代的C₁-C₄烷基及-COCH₃，

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，R⁴为氢。在一些实施方案中，X为NH。在一些实施方案中，Y为NH。在一些实施方案中，R³为-CH₂C(CH₃)₃。在一些实施方案中，R⁵选自：

在一些实施方案中，提供具有式XII的化合物，其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²选自苄基和：

其中：

R^25a、R^25b、R^25c、R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³选自任选被取代的C₁-C₈烷基及苯基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢、任选被取代的C₁-C₄烷基及-COCH₃，

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，R⁴为氢。在一些实施方案中，X为NH。在一些实施方案中，Y为NH。在一些实施方案中，R³为-CH₂C(CH₃)₃。在一些实施方案中，R⁵选自：

在一些实施方案中，提供具有式XII的化合物，其中：

R^1a为氢；

R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^25a、R^25b、R^25c、R^25d、和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为C₄-C₈烷基；

R⁴为氢；

R⁵选自：

且

X和Y为NH,

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，R⁵选自：

在一些实施方案中，提供具有式XXXV的化合物：

其中：

R^1b和R^1c独立地选自氢、氟和氯；

R³为C₄-C₈烷基；且

R^25a、R^25b和R^25c各自独立地选自氢、氟和氯，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，具有式XXXV的化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。在一些实施方案中，具有式XXXV的化合物为基本上纯的立体异构体。在一些实施方案中，具有式XXXV的化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中该化合物为基本上纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其中该化合物为纯的立体异构体。

在一些实施方案中，提供制备具有式XXXVII的化合物的方法：

其中：

R³²选自-OR³³及-NR^34aR^34b；

R³³选自氢、烷基和芳烷基；

R^34a选自氢、任选被取代烷基、任选被取代环烷基、芳烷基、任选被取代芳基和任选被取代杂芳基；

R^34b选自氢和烷基；

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²选自芳烷基和：

R^25a、R^25b、R^25c、R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；且

R³选自任选被取代的C₁-C₈烷基和任选被取代芳基。

在一个实施方案中，制备具有式XXXVII化合物的方法包括将具有式XXXVI的化合物：

异构化为具有式XXXVII的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³和R³²具有如上有关式XXXVII所述的意义。

在一个实施方案中，制备具有式XXXVII化合物的方法包括将具有式XXXVI的化合物：

溶解于溶剂或溶剂混合物中，

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³和R³²具有如上有关式XXXVII所述的意义。

在一个实施方案中，制备具有式XXXVII化合物的方法包括：

a)将具有式XXXVI的化合物：

溶解于溶剂或溶剂混合物中；以及

b)将具有式XXXVI的化合物异构化为具有式XXXVII的化合物，

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³和R³²具有如上有关式XXXVII所述的意义。

在一个实施方案中，制备具有式XXXVII化合物的方法：

包括：

a)将具有式XXXVI的化合物：

异构化为具有式XXXVII的化合物；以及

b)将基本上不含式XXXVI化合物及一种或多种其它立体异构体的具有式XXXVII的化合物分离出，

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³和R³²具有如上有关式XXXVII所述的意义。

在一个实施方案中，制备具有式XXXVII化合物的方法：

包括：

a)将具有式XXXVI的化合物：

溶解于溶剂或溶剂混合物中；

b)将具有式XXXVI的化合物异构化为具有式XXXVII的化合物；以及

c)将基本上不含式XXXVI化合物及一种或多种其它立体异构体的具有式XXXVII的化合物分离出，

其中R^1a、R^1b、R^1c、R^1d、R²、R³和R³²具有如上有关式XXXVII所述的意义。

在一个实施方案中，该溶剂选自乙腈、甲醇、乙酸乙酯和水，或其混合物。

在一个实施方案中，异构化作用在pH小于7，例如于pH约6、约5、约4、约3、约2或约1下进行。在一个实施方案中，异构化作用在pH约7下进行。在一个实施方案中，异构化作用在pH大于7，例如于pH约8、约9、约10、约11、约12或约13下进行。

在一个实施方案中，异构化作用在酸，例如三氟乙酸或乙酸的存在下进行。

在一个实施方案中，异构化作用在碱，例如NaHCO₃的存在下进行。

在一个实施方案中，异构化作用在约20°C至约100°C的温度，例如于约25°C至约70°C，例如于约45°C至约65°C的温度进行。在一个实施方案中，异构化作用在室温，例如约25°C进行。在一个实施方案中，异构化作用在高于室温，例如在约30°C、约35°C、约40°C、约45°C、约50°C、约55°C、约60°C、约65°C、约70°C、约75°C、约80°C、约85°C、约90°C、约95°C或约100°C进行。

在一个实施方案中，异构化作用进行一段约0.5小时至约2周，例如约1小时、约3小时、约6小时、约12小时、约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约1周的时间。进行异构化作用所需的时间可根据各种因素而定，包括式XXXVI的化学结构、溶剂、温度和/或pH。

在一个实施方案中，R³²为-OR³³。

在一个实施方案中，R³²为-NR^34aR^34b。

在一个实施方案中，R^34b为氢，而R^34a选自烷基、羟基烷基、羟基环烷基、任选被取代芳基和任选被取代杂芳基。

在一个实施方案中，R^34b为氢，而R^34a选自：

在一个实施方案中，具有式XXXVII的化合物经分离为基本上纯的立体异构体。在一个实施方案中，具有式XXXVII的化合物经分离为纯的立体异构体。

在一个实施方案中，

R³²为-NR^34aR^34b；

R^34a为：

R^34b为氢；

R²为：

且

R³为C₁-C₈烷基。

在一个实施方案中，所提供的制备MI-77301的方法包括将MI-773异构化为MI-77301。

在一个实施方案中，所提供的制备MI-77301的方法包括：

a)将MI-773异构化为MI-77301；以及

b)将基本上不含一种或多种其它立体异构体的MI-77301分离出。

在一个实施方案中，所提供的制备MI-77301的方法包括：

a)将MI-773溶解于溶剂或溶剂混合物中；

b)将MI-773异构化为MI-77301；以及

c)将基本上不含一种或多种其它立体异构体的MI-77301分离出。

本发明提供的化合物和方法，结合以下的合成反应方程式将得到更好的理解，这些反应方程式例示了可制备本发明提供的化合物的方法。起始原料可从市售来源获得，或可通过本领域技术人员已知的文献中的公知方法制备。本领域技术人员将理解，上述化合物可通过替换下表所示合成中适当的试剂和物质而制备。

其中Y为NH的式Ia化合物能够如公开于反应方程式2和3中的方法合成。

反应方程式2

反应方程式3

式Ia化合物可通过本领域公知的手性拆分方法制备，例如手性柱色谱，以得到式II-XVII化合物。用于手性拆分的合适的手性柱包括例如，Daicel

OD-H，Daicel

AD-H和Regis TechnologiesULMO手性柱。其它手性拆分方法也是可能的。式II-XVII化合物还可通过不对称合成的方法合成。例如，其中Y为NH的式II化合物可通过使用不对称1,3-偶极环化加成作为关键步骤合成，如先前的文献所公开(参见美国专利No.7,759,383B2和7,737,174B2和Ding等人，J.Am.Chem.Soc.127:10130-10131(2005))(反应方程式4)。

反应方程式4

试剂和条件：a)CH₂Cl₂-CH₃CN,KF-Al₂O₃,微波，或甲醇、哌啶回流；

分子筛，甲苯，70℃；c)HNR⁴R⁵，室温；d)Pb(OAc)₄,CH₂Cl₂-MeOH(1:1),0℃，或硝酸铈(IV)铵(CAN),CH₃CN,K₂CO₃,室温。

简言之，化合物A与醛B反应得到C。化合物C与醛E和化合物D反应得到F(其中R"为芳烷基的式I化合物)。用Pb(OAc)₄或CAN处理F，得到其中Y为NH的式II化合物。

式XII化合物可经由将式II化合物异构化加以制备。不受限于理论，具有式II的化合物异构化为具有式XII的化合物(及其它异构体，包括具有式VI的化合物)如反应方程式5所示可包括形成亚胺中间体。式XII化合物较不可能异构化，即其在化学上比式II化合物可能更稳定。

反应方程式5

方法

在一些实施方案中，本发明提供的化合物诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡，并有单独作用或响应于其它细胞凋亡诱导信号诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡的潜力。因此，认为这些化合物使细胞对诱导细胞周期终止和/或细胞凋亡敏感，所述细胞包括耐受所述诱导刺激物的细胞。通过抑制p53或p53相关蛋白与MDM2或MDM2相关蛋白的相互作用，本发明提供的化合物可用于在任何通过诱导细胞凋亡而治疗、改善或预防的病症中诱导细胞凋亡。在一个实施方案中，所述抑制剂可用于诱导包含功能性p53或p53相关蛋白的细胞的细胞凋亡。

在另一个实施方案中，本发明涉及用本发明提供的化合物与一种或多种其它细胞凋亡调节剂组合来调节细胞凋亡。细胞凋亡调节剂的实例包括但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFα、Fas配体、TRAIL、针对TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白。还包括参与细胞凋亡的起始、决定(decision)和降解期的其它物质。细胞凋亡调节剂的实例包括其活性、存在或浓度的改变能够在受试者中调节细胞凋亡的物质。细胞凋亡调节剂包括细胞凋亡诱导剂，例如TNF或TNF相关配体，特别是TRAMP配体、Fas/CD95配体、TNFR-1配体或TRAIL。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物、组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)在动物(例如哺乳动物患者，包括但不限于人和牲畜)中用于治疗患病的细胞、组织、器官或病理症状和/或疾病状态。在这方面，多种疾病和病理适于使用本发明的方法和组合物治疗或预防。这些疾病和病症的非限制性示例性清单包括但不限于：乳腺癌(breast cancer)、前列腺癌(prostatecancer)、淋巴癌、皮肤癌、胰腺癌(pancreatic cancer)、结肠癌、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌(ovarian cancer)、脑癌、原发性脑肿瘤、头颈癌(head-neck cancer)、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肝癌、膀胱癌(bladder cancer)、非小细胞肺癌、头颈癌(head or neck carcinoma)、乳腺癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小细胞肺癌、维尔姆斯氏肿瘤(Wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌(bladder carcinoma)、胰腺癌(pancreaticcarcinoma)、胃癌、结肠癌、前列腺癌(prostatic carcinoma)、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食管癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛瘤、恶性类癌瘤、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高血钙症、颈椎增生、白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL、包括B-CLL)、急性髓性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、毛细胞性白血病、神经母细胞瘤、肉瘤例如脂肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤、卡波西氏肉瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、软组织肉瘤例如脂肪瘤和恶性神经鞘瘤、骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症和视网膜母细胞瘤等、T和B细胞介导的自身免疫疾病、炎性疾病、感染、过度增殖性疾病；艾滋病；退行性疾病、血管疾病等。在一些实施方案中，所治疗的癌细胞是转移性的。在其它实施方案中，所治疗的癌细胞耐受其它抗癌剂。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物、组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)在患者中用于治疗、改善或预防以下癌症：黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物、组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)在患者中用于治疗、改善或预防黑色素瘤。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物、组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)在患者中用于治疗、改善或预防脂肪肉瘤。

在一些实施方案中，本发明提供的组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)用于治疗表达功能性或野生型p53或p53相关蛋白的癌症。在一些实施方案中，本发明提供的化合物、组合物和方法用于治疗表达MDM2或MDM2相关蛋白水平升高的癌症。

在一些实施方案中，本发明提供的方法、化合物和组合物(包括含脉冲剂量式给药的方法)可用于治疗肉瘤患者，所述肉瘤包括例如，脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，本发明提供的方法、化合物和组合物(包括含脉冲剂量式给药的方法)可用于治疗治疗软组织肿瘤患者，所述软组织肿瘤包括例如，尤因氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪瘤、恶性神经鞘瘤。在一些实施方案中，本发明提供的方法、化合物和组合物(包括含脉冲剂量式给药的方法)可用于治疗肺癌、乳腺癌、肝癌或结肠癌患者。在一些实施方案中，本发明提供的方法、化合物和组合物(包括含脉冲剂量式给药的方法)可用于治疗B细胞慢性淋巴细胞性白血病和急性髓性白血病患者。

在一些实施方案中，适于用本发明提供的化合物、组合物和方法治疗的感染包括但不限于由病毒、细菌、真菌、支原体、朊病毒等引起的感染。

在一些实施例中，提供给药有效量的本发明提供的化合物或组合物和至少一种其它治疗剂的方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)(所述其它治疗剂包括但不限于化疗抗肿瘤物质、细胞凋亡调节剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂和抗炎药物)和/或治疗技术(例如外科手术和/或放射治疗)。在一个具体实施方案中，所述其它治疗剂为抗癌剂。

很多合适的治疗剂或抗癌剂适用于本发明提供的方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)中。事实上，本发明提供的方法包括但不限于给予多种治疗剂，例如：细胞凋亡诱导剂；多核苷酸(例如反义、核酶、siRNA)；多肽(例如酶和抗体)；生物模拟物(例如棉酚或BH3模拟物)；与Bcl-2家族蛋白例如Bax结合(例如与之寡聚或络合)的物质；生物碱类；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢剂；激素；铂化合物；单克隆或多克隆抗体(例如与抗癌物质、毒素、防御素结合的抗体)，毒素；放射性核素；生物反应调节剂(如干扰素(例如IFN-α)和白细胞介素(如IL-2))；过继免疫治疗剂；造血生长因子、诱导肿瘤细胞分化的物质(例如，全反式维甲酸)；基因治疗试剂(例如，反义治疗剂和核苷酸)；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂、蛋白酶抑制剂：NF-кB调节剂；抗CDK化合物；HDAC抑制剂等。治疗剂的很多其它的实例(例如化疗化合物)和抗癌治疗，适于与本领域技术人员已知的公开化合物共同给予。

在一些实施方案中，抗癌剂包括诱导或刺激细胞凋亡的物质。诱导或刺激细胞凋亡的物质包括例如与DNA相互作用或修饰DNA的物质，其例如通过嵌入、交联、烷化，或者破坏或在化学上修饰DNA。诱导细胞凋亡的物质包括但不限于放射(例如X射线、γ射线、UV)；肿瘤坏死因子(TNF)相关因子(例如TNF家族受体蛋白、TNF家族配体、TRAIL、针对TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体)；激酶抑制剂(如表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂。其它抗癌药物包括：血管内皮生长因子受体(VGFR)激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂、血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂、Bcr-Abl激酶抑制剂(如格列卫(GLEEVEC)))；反义分子；抗体(例如，HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素药物(如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素药物(如氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑、皮质类固醇);环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(如塞来昔布、美洛昔康、NS-398和非甾体抗炎药(NSAID))；抗炎药物(例如布他唑立丁、地卡特隆、去氢可的松、地塞米松(dexamethasone、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL)、羟氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羟布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、泼尼松龙、泼尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌症化疗药物(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟达拉滨(FLUDARA)、达卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、多柔比星、吉西他滨、硼替佐米、吉非替尼、贝伐单抗、泰索帝或紫杉醇)；细胞信号分子，神经酰胺和细胞因子；十字孢碱等。

在其它实施方案中，本发明提供的组合物和方法(包括含脉冲剂量式给药的方法)包括一种或多种本发明提供的化合物和至少一种抗过度增殖性或抗肿瘤物质，其选自烷化剂，抗代谢剂，以及天然产物(例如草药和其它植物和/或动物衍生的化合物)。

适用于本发明的组合物和方法的烷化剂包括但不限于：1)氮芥类(例如氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、马法兰(左旋沙可来新)和苯丁酸氮芥)；2)乙烯亚胺和甲基蜜胺(如六甲蜜胺和塞替派)；3)烷基磺酸盐(如白消安)；4)亚硝基脲(例如，卡莫司汀(卡氮芥)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)；链佐星(链唑霉素))；和5)三氮烯类(例如达卡巴嗪(DTIC；二甲基三氮烯咪唑甲酰胺(dimethyltriazenoimid-azolecarboxamide)))。

在一些实施方案中，适用于本发明的组合物和方法的抗代谢剂包括但不限于：1)叶酸类似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶类似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)，氟尿嘧啶脱氧核苷(去氧氟尿嘧啶；FudR)和阿糖胞苷(cytarabine，cytosine arabinoside))；和3)嘌呤类似物(例如巯嘌呤(6-巯嘌呤；6-MP)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤；TG)和喷司他丁(2’-脱氧柯福霉素))。

在其它实施方案中，适用于本发明组合物和方法的化疗剂包括但不限于：1)长春花生物碱(例如长春碱(VLB)、长春新碱)；2)鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(道诺霉素；正定霉素)、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素(丝裂霉素C))；4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物反应调节剂(例如干扰素α)；6)铂配位复合物(例如顺铂(顺式DDP)和卡铂)；7)蒽二酮类(例如米托蒽醌)；8)被取代的脲(例如羟基脲)；9)甲基肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-甲基肼；MIH))；10)肾上腺皮质抑制剂(例如米托坦(o,p’-DDD)和氨鲁米特)；11)肾上腺皮质类固醇类(例如泼尼松)；12)黄体酮(例如羟基己酸黄体酮、醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)他莫昔芬(例如己烯雌酚和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素药物(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睾酮和氟甲睾酮)；16)抗雄激素药物(例如氟他米特)；和17)黄体生成素释放激素类似物(例如亮丙瑞林)。

常规用于癌症治疗中的任一何溶瘤细胞剂可用于本发明组合物和方法中。例如，美国食品和药物管理局(U.S.F.D.A)保有经批准在美国使用的溶瘤细胞剂的处方。U.S.F.D.A.的国际同等机构保有相似的处方。表1显示了经批准在美国使用的示例性抗肿瘤剂的名册。本领域技术人员理解，所有在美国经批准的化疗剂的“产品标签”均公开了所述示例性药物经批准的适应症、剂量信息、毒性数据等。

表1

抗癌剂还包括已证实具有抗癌活性的化合物。实例包括但不限于3-AP、12-O-十四烷酰法波醇-13-乙酸酯、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、ADI-PEG20、AE-941、AG-013736、AGRO100、阿拉诺新、AMG706、抗体G250、抗癌肽类、AP23573、阿替莫德、APC8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦、阿扎胞苷、BB-10901、BCX-1777、贝伐单抗、BG00001、比卡鲁胺、BMS247550、硼替佐米、苔藓抑素1、布舍瑞林、骨化三醇、CCI-779、CDB-2914、头孢克肟、西妥昔单抗、CG0070、西仑吉肽、氯苯吩嗪、磷酸考布他汀A4、CP-675,206、CP-724,714、CpG7909、姜黄素、地西他滨、DENSPM、度骨化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙法昔罗、依氟鸟氨酸、EKB-569、enzastaurin、厄洛替尼、依昔舒林、芬维A胺、黄酮吡醇、氟达拉滨、氟他米特、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔单抗、吉非替尼、染料木素、葡磷酰胺、GTI-2040、组氨瑞林、HKI-272、高三尖杉酯碱、HSPPC-96、hu14.18-白介素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫特、英夫利昔单抗、白介素-12、IPI-504、伊罗夫文、伊沙匹隆、拉帕替尼、来那度胺、来他替尼、醋酸亮丙瑞林、LMB-9免疫毒素、洛那法尼、鲁昔单抗、马磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、单克隆抗体3F8、单克隆抗体J591、莫特沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼鲁米特、硝基喜树碱、二盐酸诺拉曲塞、诺瓦得士、NS-9、O6-苄基鸟嘌呤、奥利默森钠、ONYX-015、奥戈伏单抗、OSI-774、帕尼单抗、铂尔定、PD-0325901、培美曲塞、PHY906、吡格列酮、吡非尼酮、匹杉琼、PS-341、PSC833、PXD101、吡唑并吖啶、R115777、RAD001、豹蛙酶、蝴蝶霉素类似物、rhu血管他丁蛋白、rhuMab2C4、罗格列酮、卢比替康、S-1、S-8184、沙铂、SB-15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR31747A、ST1571、SU011248、辛二酰苯胺异羟肟酸、苏拉明、talabostat、他仑帕奈、他立喹达、temsirolimus、TGFa-PE38免疫毒素、沙立度胺、胸腺法新、替吡法尼、替拉扎明、TLK286、他比特啶、葡萄糖醛酸三甲曲沙、TroVax、UCN-1、丙戊酸、长春氟宁、VNP40101M、伏洛昔单抗、伏立诺他、VX-680、ZD1839、ZD6474、齐留通和唑喹达三盐酸。

对于抗癌剂和其它治疗剂更详细的阐述，本领域技术人员可参考任何指导性手册，包括但不限于：Physician's Desk Reference，以及Goodman和Gilman的"Pharmaceutical Basis of Therapeutics"，第10版，Hardman等人编辑，2002。

在一些实施方案中，本发明提供的方法(包括脉冲剂量式给药法)包括伴随放射治疗给药一种或多种本发明提供的化合物。本发明提供的方法不限于用于向动物递送治疗剂量的放射的类型、量或递送和给药系统。例如，所述动物可接受光子放射治疗，粒子束放射治疗，其它类型的放射治疗及其组合。在一些实施方案中，使用线性加速器对动物进行放射。在其它实施方案中，使用伽马刀进行所述放射。

放射源可在动物体外或体内。外部放射治疗最为常见，且其涉及通过皮肤将高能放射导向肿瘤位点，其使用，例如，线性加速器。尽管放射束定位于肿瘤位点，仍几乎不可能避免正常、健康的组织暴露于其中。然而，外部放射通常可很好地被动物耐受。内部放射治疗涉及在体内肿瘤部位或其附近植入放射-发射源，例如珠、线、丸、胶囊、颗粒等，并且包括特异于靶癌细胞的递送系统的使用(例如使用连接至癌细胞结合配体的颗粒)。所述植入可在治疗后移除，或无活性地留在体内。内部放射治疗的类型包括但不限于近距离放射疗法，间质照射，腔内照射，放射免疫治疗等。

动物可任选地接受放射增敏剂(例如甲硝唑、米索硝唑、动脉内溴尿嘧啶脱氧核苷(Budr)、静脉内碘代脱氧尿嘧啶(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑、2H-异吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-亲和性缺氧选择性细胞毒素、卤代DNA配体、1,2,4-苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基唑衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶-插入剂、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1,2,4-三唑、4,5-二硝基咪唑衍生物、羟基化德克萨斯卟啉(texaphrin)、顺铂、丝裂霉素、替拉扎明、亚硝基脲、巯嘌呤、甲氨喋呤、氟尿嘧啶、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(过热)等)、辐射防护药物(例如巯乙胺、氨基烷基二氢磷硫酰、氨磷汀(WR2721)、IL-1、IL-6等)。放射增敏剂增强了肿瘤细胞的杀灭。辐射防护药物保护健康组织免遭放射的有害作用。

可将任何类型的放射给予动物，只要放射的剂量被动物所耐受，且无难以接受的不良副作用。放射治疗合适的类型包括例如，离子化(电磁)放射治疗(例如X射线或γ射线)或粒子束放射治疗(例如高线能量放射)。离子化放射定义为以下的放射：包含具有足以产生离子化作用(即得到或失去电子)的能量的颗粒或光子(如以下文献公开：例如，U.S.5,770,581，在此整体引入作为参考)。放射的作用可至少部分地通过临床医生来控制。在一个实施方案中，对放射的剂量进行分割，以达到最大靶细胞暴露和毒性降低。

在一个实施方案中，所述给予动物的放射总剂量为约.01戈瑞(Gy)至约100Gy。在另一个实施方案中，在整个治疗过程中给予约10Gy至约65Gy(例如约15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy)。尽管在一些实施方案中在一天的时间里可给予完整剂量的放射，更理想的是将总剂量分割并在数日内给予。有利地，放射治疗经至少约3天的时间给予，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约1-8周)。因此，每天放射剂量将包含大约1-5Gy(例如约1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)或1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每天放射剂量应足以诱导靶细胞的破坏。若将该周期延长，在一个实施方案中，放射不会每天给予，从而使得动物得以休息，并实现所述治疗作用。例如，对于每周的治疗，放射有利地给予连续5天和不给予2天，从而每周休息2天。然而，根据动物的应答性和任何潜在的副作用，放射可给予1天/周、2天/周、3天/周、4天/周、5天/周、6天/周或给予全部7天/周。放射治疗可在治疗周期中的任何时间开始。在一个实施方案中，放射在第1周或第2周开始和在治疗周期中余下的时间内给予。例如，在治疗为期6周的治疗周期中，在第1-6周或第2-6周给予放射，以治疗例如实体瘤。或者，在治疗为期5周的治疗周期中，在第1-5周或第2-5周给予放射。然而，这些示例性放射治疗给予时间表并非意在限制本发明提供的方法。

抗微生物治疗剂可用作与本发明提供的化合物组合的治疗剂。任何能够杀灭、抑制或减弱微生物机体的物质，以及被认为具有所述活性的任何物质均是可用的。抗微生物剂包括但不限于天然和合成的抗生素、抗体、抑制蛋白(例如防御素)、反义核苷酸、膜破坏剂等，或单独使用或组合使用。事实上，任何类型的抗生素均是可用的，包括但不限于抗菌剂量、抗病毒剂、抗真菌剂等。

在本发明提供的方法的一些实施方案中，在一种或多种以下条件下将一种或多种本发明提供的化合物和一种或多种治疗剂或抗癌剂给予动物：以不同周期、经不同时间、以不同浓度、通过不同给予途径等等。在一些实施方案中，在治疗剂或抗癌剂之前给予所述化合物，例如在给予治疗剂或抗癌剂之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周给予所述化合物。在一些实施方案中，在治疗剂或抗癌剂之后给予所述化合物，例如在给予所述抗癌剂之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4周给予所述化合物。在一些实施方案中，根据不同时间表并行给予所述化合物与所述治疗剂或抗癌剂，例如每天给予所述化合物，同时每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次给予治疗剂或抗癌剂。在其它实施方案中，给予所述化合物每周一次，同时每天、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次给予治疗剂或抗癌剂。

在一些实施方案中，本发明提供的组合物包含有效量的一种或多种本发明提供的化合物，以达到其预定目的。尽管个体需要变化，各成分有效量最佳范围的确定属于本领域技术。通常，相对于接受所述响应于细胞凋亡所诱导病症的治疗的动物的体重，所述化合物每天可以以0.0025至50mg/kg的口服剂量给予哺乳动物，例如人，或给予等量的其药学上可接受的盐，在一个实施方案中，口服给予约0.01至约25mg/kg以治疗、改善或预防所述病症。对于肌内注射，剂量通常约为口服剂量的一半。例如，合适的肌内剂量应为约0.0025至约25mg/kg，或约0.01至约5mg/kg。

单位口服剂量可包含约0.01至约1000mg，例如约0.1至约100mg的所述化合物。所述单位剂量可每天给予一次或多次，以一个或多个各包含约0.1至约10mg的片剂或胶囊，方便地约0.25至50mg的所述化合物或其溶剂合物。

在局部制剂中，所述化合物可以以每克载剂约0.01至100mg的浓度存在。在一个实施方案中，所述化合物以约0.07-1.0mg/ml，例如约0.1-0.5mg/ml的浓度存在，且在一个实施方案中，以约0.4mg/ml的浓度存在。

除了给予粗化学品形式的所述化合物，本发明提供的化合物可作为药用制剂或组合物的一部分给予。在一些实施方案中，所述药用制剂或组合物能包括一种或多种药学上可接受的载剂、赋形剂和/或辅剂。在一些实施方案中，所述一种或多种载剂、赋形剂和辅剂促进了将所述化合物制成可药用制剂或组合物的过程。所述制剂，特别是给予可口服或局部给予、用于一种给予方式(例如片剂、糖衣剂、缓释锭剂和胶囊、口腔清洗剂和口腔洗剂、凝胶剂、液体混悬剂、洗发剂、发胶、洗发香波以及能够直肠给予的制剂(例如栓剂)，以及适合通过静脉内输注、注射、局部或口服给予的溶液)的制剂，含有约0.01至99%的活性化合物，在一个实施方案中含有约0.25至75%的活性化合物，以及一种或多种载剂、赋形剂和/或辅剂。

本发明提供的药物组合物可给予可能经历本发明提供的化合物的有益作用的任何患者。所述患者首先是哺乳动物，例如人，尽管本发明提供的方法和组合物并非意在受此限制。其它患者包括牲畜(牛、羊、猪、马、狗、猫等)。

所述化合物及其药物组合物可通过达到其预定目的的任何手段给予。例如，可通过肠胃外、皮下、静脉内、肌内、腹腔内、经皮、口含、鞘内、颅内、鼻内或局部途径给予。或者，可通过口服途径并行给予。所给予剂量将依赖于受者的年龄、健康和体重，并行治疗(若存在)的类型，治疗频率和所需效果的性质。

本发明提供的药用制剂通过常规的混合，制粒，制糖衣，溶解或冻干操作的手段制备。因此，用于口服的药用制剂可通过以下操作获得：将活性化合物与固体赋形剂混合，在加入合适的辅剂后，若需要或必要，任选地研磨所得混合物和处理所述混合物颗粒，以得到片剂或糖衣剂核芯。

合适的赋形剂具体为：填充剂(例如糖类，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，例如磷酸三钙、磷酸氢钙)，以及粘合剂(如淀粉糊，其使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉，明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)。若需要，可加入崩解剂，例如上述淀粉以及羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅剂可为合适的流动调节剂和润滑剂。合适的辅剂包括例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，例如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇。糖衣剂核芯提供有适当的包衣，若需要，则该包衣耐受胃液。出于该目的，可使用浓糖溶液，其可任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制成耐受胃液的包衣，使用合适的纤维素制剂溶液，例如邻苯二甲酸醋酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基-纤维素。染料或色素可加入所述片剂或糖衣剂包衣中，例如用于鉴别或为了表征活性化合物剂量的组合。

其它可口服使用的药用制剂包括明胶制成的推入适配胶囊(push-fitcapsule)，以及明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的密封软胶囊。所述推入适配胶囊可含有颗粒形式的所述活性化合物，其可与填充剂例如乳糖，粘合剂例如淀粉和/或润滑剂例如滑石或硬脂酸镁以和任选地稳定剂混合。在软胶囊中，所述活性化合物在一个实施方案中溶解或混悬于合适的液体，例如脂肪油或液状石蜡中。此外可加入稳定剂。

可以用于直肠给药的药用制剂包括例如由一种或多种所述活性化合物与栓剂基质组成的栓剂。合适的栓剂基质为例如天然或合成的甘油三酯或石蜡烃。此外，也可能使用由所述活性化合物与基质的组合组成的明胶直肠胶囊。可能的基质材料包括例如，液体甘油三酯、聚乙二醇或石蜡烃。

适合肠胃外给药的制剂包括水溶形式的所述活性化合物的水溶液，例如，水溶性盐和碱溶液。此外，可给药所述活性化合物的混悬液作为适当的油性注射混悬液。合适的亲脂溶剂或载体包括脂肪油，例如，芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如，油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400。水性注射混悬液可含有增加混悬液的粘度的物质，包括例如，羧甲基纤维素钠，山梨糖醇和/或葡聚糖。任选地，所述混悬液也可含有稳定剂。

本发明提供的局部组合物在一个实施方案中通过选择适当的载剂而制成油、霜剂、洗剂、软膏剂等。合适的载剂包括植物油或矿物油、白凡士林(白软石蜡)、支链脂肪或油、支链脂肪和高分子量醇(大于C₁₂)。所述载剂可为所述活性成分可溶于其中的载剂。也可包括乳化剂、稳定剂、湿润剂和抗氧化剂，以及需要时也可包括赋予颜色或气味的物质。另外，经皮穿透促进剂可用于这些局部制剂中。所述促进剂的实例见于美国专利No.3,989,816和4,444,762中。

软膏剂可通过将所述活性成分在植物油(例如杏仁油)中的溶液与热的软石蜡混合并使所述混合物冷却而制成。所述软膏剂的一个典型实例是包括约30重量%的杏仁油和约70重量%的白软石蜡的软膏剂。洗剂可方便地通过将所述活性成分溶解于合适的高分子量醇(例如丙二醇或聚乙二醇)中而制成。

在一个实施方案中，本发明公开涉及治疗患有过度增殖性疾病(例如癌症)的患者的方法，该方法包括脉冲剂量式给予患者一种或多种文中所供的化合物或组合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

以下本发明提供的化合物、组合物和方法实例是示例性的，但并非限制性。为适应临床治疗中经常遇到的条件和参数而进行的其它合适的改变和变化，对本领域技术人员而言是显而易见的，并且也在本发明提供的方法、化合物和组合物的精神和范围内。

在一些方案，提供下列实施方案：

实施方案I：治疗、预防或改善患者的癌症的方法，其中该方法包括脉冲式给予患者治疗有效量的具有式XII的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^6a、R^6b、R^6c、R^6d、和R^6e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为任选被取代的C₁-C₈烷基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R⁷选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基，

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体。

实施方案II：实施方案I的方法，其中R⁴为氢，或其药学上可接受的盐。

实施方案III：实施方案I的方法，其中X为NH，或其药学上可接受的盐。

实施方案IV：实施方案I的方法，其中Y为NH，或其药学上可接受的盐。

实施方案V：实施方案I的方法，其中R³为-CH₂C(CH₃)₃，或其药学上可接受的盐。

实施方案VI：实施方案I的方法，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐。

实施方案VII：实施方案I的方法，其中：

R^1a为氢；

R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为C₄-C₈烷基；

R⁴为氢；

R⁵选自：

X和Y为NH；

或其药学上可接受的盐。

实施方案VIII：实施方案VI或VII的方法，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐。

实施方案IX：实施方案I的方法，其中式XII化合物选自：

或其药学上可接受的盐。

实施方案X：实施方案I的方法，其中式XII化合物为：

或其药学上可接受的盐。

实施方案XI：实施方案I的方法，其中式XII化合物为：

或其药学上可接受的盐。

实施方案XII：实施方案IX-XI中任一项的方法，其中此化合物基本上不含其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

实施方案XIII：实施方案XII的方法，其中此化合物为基本上纯的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

实施方案XIV：实施方案I-XIII中任一项的方法，其中此化合物每周一天、两周一天、三周一天或四周一天给予患者。

实施方案XV：实施方案I-XIV中任一项的方法，其中此增殖性疾病的细胞表达功能性p53。

实施方案XVI：实施方案I-XV中任一项的方法，其中该增殖性疾病为癌症。

实施方案XVII。实施方案XVI的方法，进一步包括给予患者一种或多种抗癌剂。

实施方案XVIII。实施方案XVII的方法，其中此抗癌剂为化疗剂。

实施方案XIX：实施方案XVIII的方法，其中此抗癌剂为放射治疗。

实施方案XX：包含具有式XII化合物的试剂盒：

或其药学上可接受的盐，

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^6a、R^6b、R^6c、R^6d和R^6e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为任选被取代的C₁-C₈烷基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R⁷选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基，

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

及将此化合物脉冲式给予患有增殖性疾病的患者的说明。

实施方案XXI：实施方案XX的试剂盒，其中该增殖性疾病为癌症。

实施方案XXII：实施方案XXI的试剂盒，进一步包括一种或多种抗癌剂。

实施方案XXIII：实施方案XXII的试剂盒，其中该说明涉及化合物与一种或多种其它的抗癌剂共同给予。

在一些方案，本发明提供下列具体的实施方案：

实施方案XXIV：一种治疗、改善或预防患者的黑色素瘤的方法，其包括给予患者治疗有效量的具有式XII的化合物：

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^6a、R^6b、R^6c、R^6d、和R^6e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为任选被取代的C₁-C₈烷基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R⁷选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基，

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐。

实施方案XXV：实施方案XXIV的方法，进一步包括给予患者一种或多种另外的抗癌剂。

实施方案XXVI：实施方案XXV的方法，其中该抗癌剂为化疗剂。

实施方案XXVII：实施方案XXVI的方法，其中该抗癌剂为放射治疗。

实施方案XXVIII：实施方案XXIV-XXVII中任一项的方法，其中黑色素瘤的特征为对常规的的癌症治疗具抗性。

实施方案XXIX：实施方案XXIV-XXVIII中任一项的方法，其中此黑色素瘤表达野生型p53蛋白。

实施方案XXX：实施方案XXIV-XXIX中任一项的方法，其中式XII化合物为：

或其药学上可接受的盐。

实施方案XXXI：包括具有式XII化合物的试剂盒：

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^6a、R^6b、R^6c、R^6d和R^6e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为任选被取代的C₁-C₈烷基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R⁷选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基,

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐，

及将化合物给予患有黑色素瘤的患者的说明。

实施方案XXXII：实施方案XXXI的试剂盒，进一步包括一种或多种另外的抗癌剂。

实施方案XXXIII：实施方案XXXI的试剂盒，其中该说明涉及化合物与一种或多种另外的抗癌剂共同给予。

在一些方案，本发明提供下列具体的实施方案：

实施方案XXXIV：具有式XII的化合物：

其中：

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²为：

其中：

R^25a、R^25b、R^25c、R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为任选被取代的C₁-C₈烷基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R¹⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；

X选自O、S及NR′；

Y选自O、S及NR″；

R′选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R″选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基，

其中此化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XXXV：实施方案XXXIV的化合物，其中R⁴为氢，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XXXVI：实施方案XXXIV的化合物，其中X为NH，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XXXVII：实施方案XXXIV的化合物，其中Y为NH，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XXXVIII：实施方案XXXIV的化合物，其中R³为-CH₂C(CH₃)₃，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XXXIX：实施方案XXXIV的化合物，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XL：实施方案XXXVIII的化合物，其中：

R^1a为氢；

R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为C₄-C₈烷基；

R⁴为氢；

R⁵选自：

X和Y为NH；

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药

实施方案XLI：实施方案XXXIX或XL的化合物，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐、溶剂化合物或前药。

实施方案XLII：实施方案XXXIV的化合物，其选自：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XLIII：具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药

实施方案XLIV：具有下列结构的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XLV：实施方案XLII-XLIV任一项中化合物，其中此化合物基本上不含其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XLVI：XLV的化合物，其中此化合物为基本上纯的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。

实施方案XLVII：包括实施方案XXXIV-XLVI任一的化合物，以及药学上可接受的载体的药物组合物。

实施方案XLVIII：一种治疗患者的方法，其包括给予患者治疗有效量的实施方案XXXIV-XLVI中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该患者患有过度增殖性疾病。

实施方案XLIX：一种治疗患者的方法，其包括给予患者治疗有效量的实施方案XLVII的药物组合物，其中该患者患有过度增殖性疾病。

实施方案L：实施方案XLVIII或XLIX的方法，其中该增殖性疾病为癌症。

实施方案LI：实施方案XLVIII或XLIX的方法，其中该过度增殖性疾病的细胞表达功能性p53。

实施方案LII：实施方案L的方法，进一步包括给予该患者一种或多种抗癌剂。

实施方案LIII：实施方案LII的方法，其中该抗癌剂为化疗剂。

实施方案LIV：实施方案LII的方法，其中该抗癌剂为放射治疗。

实施方案LV：一种治疗患者的方法，其中该患者患有过度增殖性病症并用抗癌剂治疗，包括给予该患者实施方案XXXIV-XLVI中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

实施方案LVI：实施方案LV的方法，其中该患者经历下列抗癌剂治疗的副作用：粘膜炎、口腔炎、口干症、脱发及胃肠道病症。

实施方案LVII：实施方案LVI的方法，其中该过度增殖性病症的细胞表达功能性p53。

实施方案LVIII：一种试剂盒，其包括实施方案XXXIV-XLVI中任一项的化合物及将化合物给予患有过度增殖性疾病的患者的说明。

实施方案LIX：实施方案LVIII的试剂盒，其中该过度增殖性疾病为癌症。

实施方案LX：实施方案LIX的试剂盒，进一步包括一种或多种抗癌剂。

实施方案LXI：实施方案LX的试剂盒，其中该说明涉及化合物与一种或多种抗癌剂一起共同给予。

实施例1

化合物的分析数据

一般信息

NMR波谱记录于BRUKER AVANCE250、BRUKER AVANCE300，BRUKER AVANCE DRX-400或BRUKER AVANCE DPX-500或类似仪器上。除非另有指出，否则所有文中所提及的NMR化学位移以delta(δ)尺度来表示。

液相色谱-质谱(以"LC-MS"表示)分析使用方法A、方法B或方法C来进行：

方法A：WATERS UPLC-SQD装置；离子化：正电模式和/或负电模式的电喷雾(ES+/-)；色谱条件：柱：ACQUITY BEH C181.7μm-2.1x50mm；溶剂：A：H₂O(0.1%甲酸)B：CH₃CN(0.1%甲酸)；柱温：50°C；流速：1ml/分钟；梯度(2分钟)：从5至50%的B于0.8分钟内；1.2分钟：100%的B；1.85分钟：100%的B；1.95分钟：5%的B；保留时间=t_R(分钟)。

方法B：WATERS ZQ装置；离子化：正电模式和/或负电模式的电喷雾(ES+/-)；色谱条件：柱：XBridge C182.5μm-3x50mm；溶剂：A：H₂O(0.1%甲酸)B：CH₃CN(0.1%甲酸)；柱温：70°C；流速：0.9ml/分钟；梯度(7分钟)：从5至100%的B于5.3分钟内；5.5分钟：100%的B；6.3分钟：5%的B；保留时间=t_R(分钟)。

方法C：WATERS UPLC-SQD装置；离子化：正电模式和/或负电模式的电喷雾(ES+/-)；色谱条件：柱：ACQUITY BEH C181.7μm-2.1x50mm；溶剂：A：H₂O(0.1%甲酸)B：CH₃CN(0.1%甲酸)；柱温：50°C；流速：0.8ml/分钟；梯度(2.5分钟)：从5至100%的B于1.8分钟内；2.4分钟：100%的B；2.45分钟：100%的B；从100至5%的B于0.05分钟内；保留时间=t_R(分钟)。

纯度分析使用反相HPLC，使用SunFire^TM C185μm4.6x150mm柱，以1mL/分钟的流速于下列条件下进行：条件I：梯度从90%的溶剂A(0.1%的TFA的水溶液)及10%的溶剂B(0.1%的TFA的甲醇溶液)至5%的溶剂A及95%的溶剂B于85分钟内；以及条件II：梯度从80%的溶剂A(0.1%的TFA的水溶液)及20%的溶剂B(0.1%的TFA的乙腈溶液)至50%的溶剂A和50%的溶剂B于30分钟内。

低分辨率ESI质谱分析在Thermo-Scientific LCQ Fleet质谱仪或类似的仪器上进行。

此实施例中所提供的化学名称以ADCLABS version12.0.确定。

C027-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.50-7.36(m,1H),7.24-7.10(m,2H),6.88-6.76(m,3H),5.12(d,J=10.17Hz,1H),4.49(d,J=10.17Hz,1H),4.23(dd,J=6.83,2.09Hz,1H),3.98-3.83(m,1H),2.49-2.36(m,1H),2.36-2.22(m,1H),2.10-1.96(m,2H),1.94-1.82(m,1H),1.35-1.28(m,1H),1.29(s,3H),0.80(s,9H)；¹³CNMR(75MHz,MeOH-d₄)：108.1,166.0,145.4,136.9,127.9,126.1(t,J_C-F=5.6Hz),125.4,123.4118.8(d,J_C-F=17.3Hz),112.0,67.4,64.5,63.7,61.6,49.5,45.6,45.5,42.4,38.5,30.9,29.5,27.6；C₂₈H₃₃ ³⁵ClF₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：532.2179，实测值：532.42。

C029-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.84(d,J=6.80Hz,1H),7.58(t,J=6.80Hz,1H),7.39(t,J=7.11Hz,1H),7.22(t,J=7.80Hz,1H),6.88(dd,J=9.81,7.80Hz,1H),6.78(d,J=10.13,6.63Hz,1H),5.11(d,J=10.37Hz,1H),4.48(d,J=10.37Hz,1H),4.21(d,J=10.37Hz,1H),4.21(dd,J=7.32,2.66Hz,1H),3.95-3.75(m,1H),2.46-2.22(m,2H),2.12-1.96(m,2H),1.94-1.80(m,1H),1.34-1.28(m,1),1.29(s,3H),0.81(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：180.2,169.2,132.2,128.7(d,J_C-F=2.2Hz),126.5(d,J_C-F=4.6Hz),124.7(dd,J_C-F=33.5,19.2Hz),122.6(d,J_C-F=18.1Hz),101.5(d,J_C-F=23.0Hz),67.4,64.4,63.5,61.9,49.8,45.6,45.5,42.4,38.6,30.9,29.5,27.6；C₂₈H₃₂ ³⁵ClF₃N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：550.2084，实测值：550.33。

C031-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.68-7.54(m,1H),7.38-7.26(m,1H),7.22-7.12(m,1H),6.90-6.76(m,1H),6.70-6.60(m,1H),6.56-6.42(m,1H),5.30-5.20(m,1H),4.49(d,J=10.03Hz,1H),4.25(dd,J=71.9,2.39Hz,1H),4.00-3.82(m,1H),2.50-2.21(m,2H),2.18-2.00(m,2H),1.98-1.82(m,1H),1.40-1.30(m,1H),1.28(s,3H),0.79(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：180.6,165.1(d,J_C-F=246.7Hz),166.1,157.7(d,J_C-F=247.9Hz),145.6(d,J_C-F=12.0Hz),132.0,128.6,128.2(d,J_C-F=10.2Hz),126.3(d,J_C-F=4.5Hz),125.0(d,J_C-F=14.0Hz),122.4(d,J_C-F=18.4Hz),122.3,109.8(d,J_C-F=23.2Hz),99.9(d,J_C-F=27.8Hz),67.4,64.5,63.5,61.5,49.2,45.6,45.5,42.3,38.4,30.9,29.5,27.5；C₂₈H₃₃ ³⁵ClF₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：532.2179，实测值：532.42。

C034-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.28-7.10(m,5H),6.92-6.84(m,1H),6.80-6.76(m,1H),5.40-5.20(m,1H),5.08(d,J=10.96Hz,1H),4.40-4.20(m,1H),3.90-3.60(m,1H),2.50-2.30(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.15-2.00(m,2H),1.90-1.75(m,1H),1.57(dd,J=15.3,3.71Hz,1H),1.25(s,3H),0.79(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d4)：180.0,165.9,144.7,136.7,136.6,135.8,131.3,130.1,129.8,128.1,128.1,126.8,123.5,112.0,67.4,64.3,64.0,62.2,57.2,45.7,45.6,42.7,38.3,31.0,29.6,27.5；C₂₈H₃₄ ³⁵Cl₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：530.1977，实测值：530.50。

C035-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.40-7.00(m,5H),6.80-6.40(m,1H),5.60-5.00(m,2H),4.60-4.20(m,1H),4.00-3.80(m,1H),2.60-2.40(m,1H),2.40-2.20(m,1H),2.20-2.00(m,2H),2.00-1.80(m,1H),1.70-1.50(m,1H),1.28(s,3H),0.83(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：180.0,165.8,160.0-145.0(m,2×C_sp2-F),136.5,135.9,131.4,130.0,129.9,128.0,124.1(d,J_C-F=6.3Hz),119.1,116.7(d,J_C-F=20.4Hz),101.4(d,J_C-F=23.0Hz),67.4,64.2,63.8,62.5,57.4,45.6,45.5,42.7,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₃ ³⁵ClF₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：532.2179，实测值：532.42。

MI-519-73-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.50-7.30(m,2H),7.20-7.10(m,1H),6.90-6.70(m,3H),5.00-4.70(m,1H),4.36(d,J=9.76Hz,1H),4.05-3.96(m,1H),3.70-3.50(m,1H),1.94(dd,J=14.98,7.30Hz,1H),1.80-1.00(m,8H),1.16(s,3H),0.90-0.70(m,1H),0.80(s,9H)；C₃₀H₃₇ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：576.2196，实测值：576.58。

MI-519-74-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.50-7.30(m,2H),7.25-7.10(m,1H),6.85-6.70(m,3H),5.00-4.70(m,1H),4.32(d,J=9.69Hz,1H),4.10-3.95(m,1H),3.85-3.70(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.75-1.20(m,7H),1.13(s,3H),0.95-0.75(m,1H),0.81(s,9H)；C₃₀H₃₇ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：576.2196，实测值：576.58。

MI-7102-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.36-7.25(m,1H),7.24-7.11(m,2H),6.86(d,J=1.8Hz,1H),6.80(dd,J=1.8,8.1Hz,1H),6.72(d,J=8.1Hz,1H),4.82(d,J=9.6Hz,1H),4.36(d,J=9.6Hz,1H),4.04(dd,J=2.4,7.4Hz,1H),3.74-3.56(m,1H),3.56-3.40(m,1H),2.05-1.78(m,5H),1.75-1.59(m,1H),1.43-1.04(m,5H),0.81(s,9H)；C₂₉H₃₅ClF₂N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值546.23，实测值546.58；HPLC(条件I)t_R=50.45分钟(纯度95.4%)。

MI-7103-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.38(d,J=7.7Hz,1H),7.54(t,J=6.7Hz,1H),7.40(d,J=7.1Hz,1H),7.20(t,J=7.9Hz,1H),6.93(d,J=6.1Hz,1H),6.86(d,J=8.7Hz,1H),4.45(d,J=10.3Hz,1H),4.13(dd,J=2.8,7.5Hz,1H),3.77-3.55(m,1H),3.55-3.42(m,1H),2.09-1.71(m,4H),1.70-1.56(m,1H),1.45-1.02(m,5H),0.82(s,9H)；C₂₉H₃₄Cl₂F₂N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值580.19，实测值580.67；HPLC(条件I)t_R=55.01分钟(纯度88.1%)。

MI-7104-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.49(t,J=7.2Hz,1H),7.45-7.38(m,1H),7.22(t,J=8.0Hz,1H),6.85-6.68(m,2H),4.80(d,J=9.8Hz,1H),4.36(d,J=9.9Hz,1H),4.01(dd,J=2.4,7.6Hz,1H),3.74-3.57(m,1H),3.55-3.39(m,1H),2.04-1.77(m,4H),1.74-1.59(m,1H),1.44-1.04(m,5H),0.90(d,J=4.5Hz,1H),0.82(s,9H)；C₂₉H₃₄ClF₃N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值564.22，实测值564.58；HPLC(条件I)t_R=51.76分钟(纯度86.9%)。

MI-7105-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.49(t,J=7.2Hz,1H),7.45-7.38(m,1H),7.22(t,J=8.0Hz,1H),6.85-6.68(m,2H),4.80(d,J=9.8Hz,1H),4.36(d,J=9.9Hz,1H),4.01(dd,J=2.4,7.6Hz,1H),3.74-3.57(m,1H),3.55-3.39(m,1H),2.04-1.77(m,4H),1.74-1.59(m,1H),1.44-1.04(m,5H),0.90(d,J=4.5Hz,1H),0.82(s,9H)；C₂₉H₃₅ClF₂N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值546.23，实测值546.58；HPLC(条件I)t_R=49.20分钟(纯度99.4%)。

MI-7106-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.36(d,J=7.0Hz,1H),7.59(d,J=8.1Hz,1H),7.41-7.11(m,4H),7.04(d,J=7.6Hz,1H),6.78(d,J=1.8Hz,1H),5.19(d,J=11.3Hz,1H),4.44(J=8.1Hz,1H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.74-3.53(m,1H),3.53-3.37(m,1H),2.08-1.83(m,3H),1.83-1.69(m,1H),1.61-1.44(m,1H),1.44-1.08(m,4H),1.07-0.72(m,1H),0.88(s,9H)；C₂₉H₃₆Cl₂N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值544.21，实测值544.67；HPLC(条件I)tR=51.41分钟(纯度93.0%)。

MI-7108-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄/DMSO-d₆)：10.15(s,1H),7.76(d,J=8.2Hz,1H),7.22(s,1H),7.17-7.00(m,3H),6.94(d,J=7.1Hz,1H),6.81(d,J=6.0Hz,1H),4.42(d,J=8.3Hz,1H),4.09(d,J=3.0Hz,1H),3.79(d,J=8.3Hz,1H),3.73-3.49(m,2H),3.35(d,J=9.5Hz,1H),2.10-1.84(m,4H),1.52-1.11(m,5H),0.87(s,9H)；13C NMR(75MHz,MeOH-d₄/DMSO-d₆)：177.1,172.4,153.6(d,J_C-F=242.7Hz),138.7,138.5(d,J_C-F=2.4Hz),133.2,129.0,127.544,127.541(d,J_C-F=6.7Hz),126.8,126.5,119.7(d,J_C-F=19.2Hz),111.3,110.4(d,J_C-F=24.1Hz),68.4,66.6,65.7,64.0,58.6,46.8,42.2,33.26,33.20,30.4,30.2,29.7,29.5；C₂₉H₃₅Cl₂FN₃O₃(M+H)+的ESI-MS计算值562.20，实测值562.67；HPLC(条件I)t_R=55.08分钟(纯度96.1%)；HPLC(条件II)t_R=21.44分钟(纯度92.7%)。

MI-7109-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.47(t,J=6.7Hz,1H),7.42-7.33(m,1H),7.18(t,J=7.7Hz,1H),6.87(d,J=1.8Hz,1H),6.78(dd,J=1.8,8.1Hz,1H),6.70(d,J=8.1Hz,1H),4.40(d,J=9.7Hz,1H),4.11(dd,J=2.5,7.6Hz,1H),2.77-2.65(m,1H),1.99(dd,J=7.6,15.3Hz,1H),1.24(dd,J=2.5,15.3Hz,1H),0.92-0.62(m,2H),0.81(s,9H),0.56-0.30(m,2H)；C₂₆H₂₉Cl₂FN₃O₂(M+H)⁺的ESI-MS计算值504.16，实测值504.58；HPLC(条件I)t_R=53.99分钟(纯度94.4%)。

B059-TFA盐

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.45-7.34(m,1H),7.26-7.12(m,1H),7.04-6.93(m,1H),6.90(d,J=1.80Hz,1H),6.65(dd,J=8.08,1.80Hz,1H),4.41(d,J=9.25Hz,1H),3.96(五重峰,J=8.13Hz,1H),2.51-2.07(m,2H),2.40-2.20(m,2H),1.88(dd,J=14.20,9.91Hz,1H),1.32(s,3H),1.20-0.80(m,1H),0.88(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,CD₃OD)：181.3,172.9(d,J_C-F=266.9Hz),168.6,162.7,145.3,135.8,131.7,130.7(d,J_C-F=38.6Hz),126.2(d,J_C-F=4.5Hz),126.1,123.6,122.9,122.7,111.4,78.4,67.7,63.4,46.0,45.8,44.3,38.0,31.4,30.2,27.6；C₂₈H₃₁ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：546.1727，实测值：546.50。

MI-519-77-TFA盐

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.50-7.40(m,1H),7.40(m,1H),7.20-7.10(m,1H),6.85(d,J=1.40Hz,1H),6.84-6.72(m,2H),5.00-4.80(m,1H),4.45(d,J=10.10Hz,1H),4.02(t,J=6.61Hz,1H),3.90(五重峰,J=8.07Hz,1H),2.50-2.25(m,2H),2.10-1.82(m,3H),1.81-1.31(m,8H),1.30(s,3H),1.10-0.91(m,1H),0.91-0.81(m1H)；C₂₉H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：560.1883，实测值：560.50。

MI-519-78-TFA盐

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.45-7.31(m,2H),7.20-7.11(m,1H),6.86-6.82(m,1H),6.81-6.78(m,2H),4.90-4.80(m,1H),4.45(d,J=10.33Hz,1H),4.10-3.95(m,1H),3.70-3.60(m,1H),3.50-3.40(m,1H),2.10-1.05(m,17H),1.05-0.95(m,1H),0.95-0.80(m,1H)；C₃₀H₃₅ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：574.2040，实测值：574.58。

MI-519-80-TFA盐

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.80-7.72(m,1H),7.50-7.38(m,2H),6.87(d,J=1.81Hz,1H),6.71(dd,J=8.16,1.81Hz,1H),6.52-6.40(m,1H),4.96-4.80(m,1H),4.62(d,J=8.69Hz,1H),4.10-3.95(m,1H),3.70-3.55(m,1H),3.50-3.45(m,1H),2.00-1.80(m,3H),1.80-1.60(m,1H),1.40-1.00(m,5H),0.95-0.85(m,1H),0.80(s,9H)；C₂₉H₃₅ ³⁵Cl₃N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：578.1744，实测值：578.75。

C02701-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-6-氯-4'-(2,3-二氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.82(d,J=6.83Hz,1H),7.65-7.55(m,1H),7.45-7.30(m,1H),7.20-7.05(m,3H),6.80-6.75(m,1H),5.40-5.10(m,1H),4.61(d,J=11.39Hz,1H),4.50(d,J=7.66Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.45-2.30(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.05-1.80(m,2H),1.80-1.60(m,1H),1.27(s,3H),1.20-1.08(m,1H),0.86(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.8,167.0,160.0-148.0(m,2×C_sp2-F),145.2,137.2,126.8,126.5-126.0(m),125.0,124.1,123.5,122.1(d,J_C-F=9.74Hz),119.1(d,J_C-F=17.1Hz),112.1,67.3,64.5,64.2,62.6,48.5,45.6,45.5,43.3,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₃ ³⁵ClF₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：532.2179，实测值：532.50。

LC-MS：t_R(分钟)=0.86；[M+H]⁺：m/z532；[M-H]^-：m/z530(方法A)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆+TFA)：0.80(s,9H)；1.01(d宽峰,J=15.2Hz,1H)；1.20(s,3H)；1.60(m,1H)；1.85至1.98(m,2H)；2.08(m,1H)；2.25(m,1H)；3.72(m,1H)；4.49(m,2H)；5.30(d,J=12.1Hz,1H)；6.78(d,J=2.0Hz,1H)；7.16(dd,J=2.0及8.3Hz,1H)；7.23(m,1H)；7.42(m,1H)；7.48(m,1H)；7.74(d,J=8.3Hz,1H)。

C02901-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5,6-二氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.80-7.65(m,1H),7.60-7.50(m,1H),7.40-7.30(m,1H),7.20-7.10(m,1H),6.80-6.65(m,1H),5.50-5.10(m,1H),4.60(d,J=11.39Hz,1H),4.50(d,J=6.96Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.50-2.30(m,1H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.80(m,2H),1.80-1.65(m,1H),1.27(s,3H),1.20-1.05(m,1H),0.87(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.8,167.0,160.0-145.0(m,3×C_sp2-F),132.6,128.6,126.6,122.5(d,J_C-F=18.9Hz),121.3(d,J_C-F=13.0Hz),118.8,115.4(d,J_C-F=21.7Hz),115.1,101.8(d,J_C-F=23.3Hz),67.3,64.6,64.3,62.5,48.7,45.6,45.5,43.4,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₂ ³⁵ClF₃N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：550.2084，实测值：550.33。

LC-MS：t_R(分钟)=0.87；[M+H]⁺：m/z550；[M-H]^-：m/z548(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆+TFA)：0.80(s,9H)；1.01(d,J=15.2Hz,1H)；1.20(s,3H)；1.62(m,1H)；1.85至1.98(m,2H)；2.08(m,1H)；2.26(m,1H)；3.73(m,1H)；4.52(m,2H)；5.28(d,J=12.1Hz,1H)；6.79(dd,J=6.7及10.1Hz,1H)；7.25(t,J=7.8Hz,1H)；7.50(m,1H)；7.60(m,1H)；8.08(m,1H)。

C03001-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.70(d,J=7.30Hz,1H),7.60-7.50(m,1H),7.45-7.35(m,1H),7.25-7.15(m,1H),6.88(d,J=6.00Hz,1H),5.21(d,J=11.35Hz,1H),4.61(d,J=11.37Hz,1H),4.53(d,J=8.19Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.35-2.15(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.80-1.60(m,1H),1.29(s,3H),1.25-1.05(m,1H),0.89(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.3,166.7,157.6(d,J_C-F=249.5Hz),155.7(d,J_C-F=243.5Hz),140.4(d,J_C-F=2.8Hz),132.5,128.4,126.4(d,J_C-F=4.9Hz),125.0(d,J_C-F=7.4Hz),123.4(d,J_C-F=19.5Hz),122.3(d,J_C-F=18.9Hz),121.0(d,J_C-F=13.0Hz),114.5(d,J_C-F=25.1Hz),104.8,67.1,64.6,64.2,62.4,47.3,45.4,45.3,43.2,38.2,30.8,29.2,27.3；C₂₈H₃₂ ³⁵Cl₂F₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：566.1789，实测值：566.50。

LC-MS：t_R(分钟)=0.93；[M+H]⁺：m/z566(方法A)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆+TFA)：0.81(s,9H)；1.02(d宽峰,J=15.2Hz,1H)；1.20(s,3H)；1.62(m,1H)；1.87至1.99(m,2H)；2.09(m,1H)；2.27(m,1H)；3.75(m,1H)；4.55(m,2H)；5.30(d,J=12.1Hz,1H)；6.89(d,J=6.3Hz,1H)；7.25(t,J=7.8Hz,1H)；7.50(m,1H)；7.61(m,1H)；8.04(d,J=8.9Hz,1H)。

C031-TFA盐

LC-MS：t_R(分钟)=0.84；[M+H]⁺：m/z532；[M-H]^-：m/z530(方法A)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆+TFA)：0.83(s,9H)；1.11(d宽峰,J=15.2Hz,1H)；1.22(s,3H)；1.83(m,1H)；2.00至2.36(m,4H)；3.82(m,1H)；4.20(dd,J=2.9及7.7Hz,1H)；4.36(d,J=10.5Hz,1H)；5.00(d,J=10.5Hz,1H)；6.53至6.74(m,2H)；6.94(dd,J=5.6及8.8Hz,1H)；7.21(t,J=8.0Hz,1H)；7.41(t,J=8.0Hz,1H)；7.71(t,J=8.0Hz,1H)。

C03401-TFA盐

(2'S,3'R,4'R,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.58(d,J=8.07Hz,1H),7.30-7.10(m,4H),7.02(d,J=7.67Hz,1H),6.77(d,J=1.54Hz,1H),5.40-5.20(m,1H),4.44(d,J=7.09Hz,1H),4.10(d,J=11.25Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.45-2.30(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.05-1.85(m,2H),1.80-1.70(m,1H),1.27(s,3H),1.20-1.10(m,1H),0.86(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.8,167.3,145.3,137.1,135.8,134.4,131.4,130.4,129.5,128.3,126.3,124.2,124.1,112.2,67.3,64.9,64.2,62.8,57.2,45.7,45.6,43.4,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₄ ³⁵Cl₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：530.1977，实测值：530.58。

LC-MS：t_R(分钟)=0.84；[M+H]⁺：m/z530；[M-H]^-：m/z528(方法A)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆+TFA)：0.80(s,9H)；1.02(d宽峰,J=15.5Hz,1H)；1.20(s,3H)；1.68(m,1H)；1.82至2.00(m,2H)；2.09(m,1H)；2.27(m,1H)；3.73(m,1H)；4.07(d,J=11.9Hz,1H)；4.32(dd,J=2.2及8.4Hz,1H)；5.29(d,J=11.9Hz,1H)；6.74(d,J=2.0Hz,1H)；6.98(d,J=7.8Hz,1H)；7.15至7.35(m,4H)；7.78(t,J=8.3Hz,1H)。

C03701-TFA盐

(2'S,3'R,4'R,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：9.00-8.80(m,1H),7.73(d,J=8.42Hz,1H),7.40-7.20(m,3H),7.15-7.05(m,1H),6.89(d,J=6.00Hz,1H),5.32(d,J=11.34Hz,1H),4.52(d,J=7.91Hz,1H),4.20(d,J=11.28Hz,1H),4.00-3.80(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.35-2.20(m,1H),2.20-1.90(m,2H),1.90-1.80(m,1H),1.31(s,3H),1.30-1.15(m,1H),0.91(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：178.8,168.2,157.3(d,J_C-F=255.8Hz),142.1(d,J_C-F=2.6Hz),137.1,135.5,132.8,131.7,130.7,129.6,127.2(d,J_C-F=7.2Hz),124.7(d,J_C-F=19.3Hz),115.5(d,J_C-F=24.9Hz),114.8,68.6,66.6,65.3,64.0,58.2,47.0,46.8,44.7,39.5,32.2,30.8,28.8；C₂₈H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：548.1883，实测值：548.42。

LC-MS：t_R(分钟)=0.87；[M+H]⁺：m/z548；[M-H]^-：m/z546(方法A)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：0.70至2.23(m,18H)；3.68至5.10(m,4H)；6.78至8.03(m,6H)。

C04801-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-6-氯-4'-(2,3-二氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(3-羟基-3-甲基-环丁基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：9.00-8.80(m,1H),7.70(d,J=8.35Hz,1H),7.50-7.35(m,1H),7.30-7.10(m,2H),6.88(d,J=6.88Hz,1H),5.30(d,J=11.32Hz,1H),4.66(d,J=11.33Hz,1H),4.56(d,J=7.43Hz,1H),4.00-3.80(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.35-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,2H),1.80-1.70(m,1H),1.30(s,3H),1.16(d,J=15.34Hz,1H),0.90(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d⁴)：177.5,166.9,160-145(m,2×C_sp2-F),155.9(d,J_C-F=243.4Hz),140.7(d,J_C-F=2.69Hz,1H),126.5-126.1(m),125.6(d,J_C-F=7.6Hz),125.0(d,J_C-F=3.4Hz),123.6(d,J_C-F=19.5Hz),122.0(d,J_C-F=9.8Hz),119.1(d,J_C-F=17.1Hz),114.7(d,J_C-F=25.0Hz),113.4,67.3,64.7,64.3,62.5,48.2,45.6,45.6,43.4,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₂ ³⁵ClF₃N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：550.2084，实测值：550.42。

LC-MS：t_R(分钟)=0.89；[M+H]⁺：m/z550；[M-H]^-：m/z548(方法A)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆+TFA)：0.81(s,9H)；1.02(d宽峰,J=15.5Hz,1H)；1.20(s,3H)；1.62(m,1H)；1.87至1.98(m,2H)；2.09(m,1H)；2.26(m,1H)；3.73(m,1H)；4.56(m,2H)；5.29(d,J=12.4Hz,1H)；6.89(d,J=6.2Hz,1H)；7.20至7.49(m,3H)；8.06(d,J=9.3Hz,1H)。

MI-710201-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-6-氯-4'-(2,3-二氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.57(d,J=8.0Hz,1H),7.50-7.36(m,1H),7.27-7.07(m,3H),6.79(s,1H),5.11(d,J=11.1Hz,1H),4.55(d,J=11.0Hz,1H),4.39(d,J=7.7Hz,1H),3.71-3.52(m,1H),3.52-3.37(m,1H),3.21(dd,J=7.4,14.5Hz,1H),1.92(d,J=9.6Hz,1H),1.86-1.70(m,2H),1.58(d,J=11.8Hz,1H),1.43-1.18(m,4H),1.12(d,J=15.5Hz,1H),0.99(d,J=13.0Hz,1H),0.88(s,9H)；C₂₉H₃₅ClF₂N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值546.23，实测值546.58；HPLC(条件I)t_R=52.15分钟(纯度98.8%)。

LC-MS：t_R(分钟)=0.84；[M+H]⁺：m/z546；[M-H]^-：m/z544(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)：异构体的混合物：0.80(s,9H)；0.84至1.30(m,5H)；1.41至1.87(m,5H)；3.43至3.54(m,2H)；4.03(m宽峰,1H)；4.36(d宽峰,J=10.3Hz,2H)；4.83(m宽峰,1H)；6.72(d,J=2.0Hz,1H)；7.10(dd,J=2.0及8.3Hz,1H)；7.14(m,1H)；7.24(m,1H)；7.40(m,1H)；7.58(d,J=8.3Hz,1H)；7.97(m宽峰,1H)；10.56(m宽峰,1H)。

MI-710401-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5,6-二氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.67(t,J=8.6Hz,1H),7.57(t,J=6.8Hz,1H),7.38(t,J=6.8Hz,1H),7.15(t,J=7.8Hz,1H),6.71(dd,J=6.6,10.1Hz,1H),5.01(d,J=10.8Hz,1H),4.52(d,J=10.8Hz,1H),4.40-4.21(m,1H),3.74-3.56(m,1H),3.56-3.40(m,1H),2.08-1.87(m,2H),1.87-1.68(m,2H),1.68-1.53(m,1H),1.45-1.18(m,3H),1.17-0.97(m,2H),0.89(s,9H)；C₂₉H₃₄ClF₃N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值564.22，实测值564.58；HPLC(条件I)t_R=52.15分钟(纯度98.8%)。

LC-MS：t_R(分钟)=0.84；[M+H]⁺：m/z564；[M-H]^-：m/z562(方法A)

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆+TFA)：0.81(s,9H)；0.81至1.98(m,10H)；3.35(m,1H)；3.52(m,1H)；4.53(d,J=12.2Hz,1H)；4.59(dd,J=2.3及8.7Hz,1H)；5.33(d,J=12.2Hz,1H)；6.78(dd,J=6.8及10.3Hz,1H)；7.21(t,J=9.0Hz,1H)；7.48(m,1H)；7.66(m,1H)；8.00(m,1H)。

MI-710501-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.66-7.53(m,1H),7.44-7.33(m,1H),7.22-7.09(m,1H),6.93-6.79(m,1H),6.59-6.51(m,1H),5.40-5.31(m,1H),4.63-4.48(m,1H),4.41-4.30(m,1H),2.41-2.20(m,2H),2.15-1.97(m,2H),1.95-1.85(m,1H),1.85-1.71(m,1H),1.71-1.47(m,3H),1.19-1.07(m,1H),0.88(s,9H)；C₂₉H₃₄ClF₃N₃O₃(M+H)⁺的ESI-MS计算值546.23，实测值546.58；HPLC(条件I)t_R=52.05分钟(纯度98.8%)；HPLC(条件II)t_R=19.26分钟(纯度100%)。

LC-MS：t_R(分钟)=0.80；[M+H]⁺：m/z546；[M-H]^-：m/z544(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆+TFA)：0.81(s,9H)；0.81至1.99(m,10H)；3.35(m,1H)；3.52(m,1H)；4.47(d,J=12.0Hz,1H)；4.53(d宽峰,J=8.3Hz,1H)；5.37(d,J=12.0Hz,1H)；6.58(dd,J=2.6及9.1Hz,1H)；6.91(m,1H)；7.21(t,J=9.0Hz,1H)；7.45(m,1H)；7.62至7.72(m,2H)。

MI-710601-TFA盐

(2'S,3'R,4'R,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺,三氟乙酸盐

LC-MS：t_R(分钟)=0.82；[M+H]⁺：m/z544；[M-H]^-：m/z542(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆+TFA)：0.80(s,9H)；0.83至1.96(m,10H)；3.34(m,1H)；3.50(m,1H)；4.02(d,J=12.1Hz,1H)；4.48(d宽峰,J=8.5Hz,1H)；5.32(d,J=12.1Hz,1H)；6.75(dd,J=1.9及8.3Hz,1H)；6.98(d,J=7.8Hz,1H)；7.18至7.32(m,4H)；7.74(d,J=8.3Hz,1H)。

MI-710801

(2'S,3'R,4'R,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺

LC-MS：t_R(分钟)=0.85；[M+H]⁺：m/z562；[M-H]^-：m/z560(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆)：0.78(m,1H)；0.81(s,9H)；1.08至1.33(m,5H)；1.70至1.90(m,4H)；3.25(m,1H)；3.35至3.58(m,3H)；3.92(d,J=9.2Hz,1H)；4.43(t,J=9.2Hz,1H)；4.49(d,J=4.8Hz,1H)；6.79(d,J=6.4Hz,1H)；6.92(d,J=7.8Hz,1H)；7.09至7.21(m,3H)；7.75(d,J=8.5Hz,1H)；7.83(d,J=9.3Hz,1H)；10.38(s宽峰,1H)。

MI-710901-TFA盐

(2'S,3'R,4'S,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸环丙基酰胺,三氟乙酸盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.61(d,J=8.1Hz,1H),7.53(t,J=6.7Hz,1H),7.40(t,J=7.0Hz,1H),7.21-7.08(m,2H),6.79(d,J=1.6Hz,1H),5.14(d,J=11.3Hz,1H),4.60(d,J=11.3Hz,1H),4.48(d,J=7.0Hz,1H),2.78-2.58(m,1H),1.86(dd,J=8.4,15.4Hz,1H),1.13(d,J=15.4Hz,1H),0.88(s,9H),0.78-0.60(m,2H),0.47-0.16(m,2H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.9,169.5,157.8(d,J_C-F=249.4Hz),145.2,137.2,132.6,128.7,126.8(d,J_C-F=1.6Hz),126.6(d,J_C-F=4.9Hz),124.2,123.6,122.5(d,J_C-F=18.8Hz),121.8(d,J_C-F=13.1Hz),64.7,64.4,62.9,43.5,31.0,29.6,23.9,6.7,6.5；C₂₆H₂₉Cl₂FN₃O₂(M+H)⁺的ESI-MS计算值504.16，实测值504.58；HPLC(条件I)t_R=58.22分钟(纯度99.6%)。

LC-MS：t_R(分钟)=0.98；[M+H]⁺：m/z504；[M-H]^-：m/z502(方法A)。

¹H NMR(400MHz；DMSO-d₆+TFA)：0.15(m,1H)；0.35(m,1H)；0.54至0.70(m,2H)；0.81(s,9H)；1.01(d,J=15.2Hz,1H)；1.91(dd,J=8.4及15.2Hz,1H)；2.66(m,1H)；4.52(m,2H)；5.27(d,J=12.0Hz,1H)；6.79(d,J=2.0Hz,1H)；7.18(dd,J=2.0及8.3Hz,1H)；7.23(d,J=8.1Hz,1H)；7.48(m,1H)；7.59(m,1H)；7.74(d,J=8.3Hz,1H)。

C08301-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.64-7.54(m,1H),7.20-7.46(m,1H),7.46-7.38(m,1H),7.28-7.14(m,2H),5.26(d,J=11.34Hz,1H),4.65(d,J=11.43Hz,1H),4.55(dd,J=8.28,1.59Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.46-2.33(m,1H),2.30-2.20(m,1H),2.40-1.84(m,2H),1.76-1.64(m,1H),1.29(s,3H),1.17(dd,J=15.40,1.5Hz,1H),0.88(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.4,166.9,157.8(d,J_C-F=249.9Hz),144.3(d,J_C-F=248.0Hz),132.8,132.5(d,J_C-F=12.3Hz),128.6,126.7(d,J_C-F=4.87Hz),126.3(d,J_C-F=3.32Hz),125.6,123.9(d,J_C-F=14.3Hz),122.6(d,J_C-F=18.9Hz),122.1,121.3(d,J_C-F=13.1Hz),67.2,64.7,64.5,62.6,48.9,45.6,45.5,43.4,38.3,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₂ ³⁵Cl₂F₂N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：566.18，实测值：566.50。

C08601-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.83(d,J=6.98Hz,1H),7.54-7.38(m,2H),7.30-7.14(m,3H),5.26(d,J=11.37Hz,1H),4.64(d,J=11.37Hz,1H),4.56(dd,J=8.35,1.27Hz,1H),3.95-3.80(m,1H),2.48-2.34(m,1H),2.32-2.20(m,1H),2.08-1.86(m,2H),1.80-1.64(m,1H),1.30(s,3H),1.18(d,J=14.37Hz,1H),0.90(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.4,166.9,133.9,132.4,130.1,126.35(dd,J_C-F=9.43,2.72Hz),125.5,125.0(d,J_C-F=3.72Hz),124.0(d,J_C-F=14.4Hz),122.1(d,J_C-F=3.13Hz),121.9(d,J_C-F=9.77Hz),119.3(d,J_C-F=17.1Hz),119.9,115.1,67.3,64.8,64.7,64.5,62.6,45.6,45.5,43.4,38.4,31.0,29.5,27.5；C₂₈H₃₂ ³⁵ClF₃N₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：550.20，实测值：550.35。

C09101-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.43(d,J=7.73Hz,1H),7.66-7.54(m,2H),7.39(t,J=7.31Hz,1H),7.24-7.10(m,2H),6.82(d,J=1.43Hz,1H),5.26(d,J=12.22Hz,1H),4.61(d,J=11.38Hz,1H),4.53(d,J=7.73Hz,1H),3.57-3.54(m,1H),1.93(dd,J=15.41,8.26Hz,1H),1.80-1.10(m,9H),1.16(s,3H),0.89(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.6,166.6,157.7(d,J_C-F=249.6Hz),144.9,137.0,132.4,128.6,126.5,126.4(d,J_C-F=4.9Hz),124.0,123.3,122.3(d,J_C-F=19.2Hz),121.3(d,J_C-F=13.0Hz),118.7,114.9,112.0,68.7,64.4,64.0,62.8,50.2,48.9,43.2,37.9,37.8,30.9,30.8,29.4,28.5,28.3；

C₃₀H₃₇ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：576.21，实测值：576.58。

C09601-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.84(d,J=6.87Hz,1H),7.62(d,J=8.10Hz,1H),7.19(dd,J=8.10,1.79Hz,1H),7.15(dt,J=8.42,1.87Hz,1H),7.01(s,1H),6.94(d,J=9.62,1.30Hz,1H),6.83(d,J=1.69Hz,1H),5.21(d,J=11.25Hz,1H),4.45(dd,J=8.21,1.56Hz,1H),4.15(d,J=11.25Hz,1H),4.00-3.82(m,1H),2.50-2.36(m,1H),2.36-2.22(m,1H),2.10-1.98(m,1H)1.91(dd,J=15.44,8.30Hz,1H),1.84-1.72(m,1H),1.31(s,3H),1.16(dd,J=15.44,1.47Hz,1H),0.90(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.7,167.0,164.0(d,J_C-F=249.6Hz),145.3,137.3,136.6(d,J_C-F=20.6H),136.6,126.4,126.1(d,J_C-F=2.91Hz),124.3,123.8,117.9(d,J_C-F=25.0Hz),115.4(d,J=23.0Hz),112.3,67.3,64.8,64.3,62.7,56.7,45.7,45.6,43.3,38.4,31.0,29.6,27.6；C₂₈H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：548.18，实测值：548.67。

C09701-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.21(d,J=6.81Hz,1H),7.68-7.54(m,2H),7.39(td,J=7.60,1.36Hz,1H),7.18(t,J=8.09Hz,1H),7.13(dd,J=7.97,1.92Hz,1H),6.79(d,J=1.66Hz,1H),5.30(d,J=11.51Hz,1H),4.56(d,J=11.84Hz,1H),4.52(d,J=8.26Hz,1H),3.86-3.70(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.65-1.05(m,8H),1.04(s,3H),0.87(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.8,167.2,145.1,137.2,132.7,128.8,126.7(d,J_C-F=3.6Hz),126.6,124.2,123.4,122.6(d,J_C-F=18.7Hz),121.7(d,J_C-F=12.5Hz),112.1,69.7,64.6,64.2,62.9,49.2,43.4,36.8,36.4,31.0,29.5,28.3,28.3；C₃₀H₃₇ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：576.21，实测值：576.67。

C11701-TFA盐

¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.83(d,J=6.61Hz,1H),7.64(dd,J=6.06,2.50Hz,1H),7.59(d,J=8.11Hz,1H),7.36-7.22(m,1H),7.11(dd,J=8.09,1.76Hz,1H),7.00-6.82(m,1H),1.72(d,J=1.72Hz,1H),5.13(d,J=11.21Hz,1H),4.58(d,J=11.21Hz,1H),4.51(dd,J=8.23,1.66Hz,1H),3.98-3.80(m,1H),2.44-2.32(m,1H),2.32-2.20(m,1H),2.10-1.94(m,1H),1.88(dd,J=15.38,8.24Hz,1H),1.80-1.68(m,1H),1.29(s,3H),1.14(dd,J=15.38,1.45Hz,1H),0.89(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.9,167.1,161.1(d,J_C-F=243.6Hz),145.2,137.3,136.9,132.1(d,J_C-F=9.0Hz),131.2(d,J_C-F=3.60Hz),130.0(d,J_C-F=2.22Hz),127.0,123.8(d,J_C-F=57.7Hz),121.6(d,J_C-F=14.8Hz),118.5(d,J_C-F=25.4Hz),112.1,67.4,64.5,64.4,62.7,48.4,45.7,45.5,43.3,38.4,31.0,29.6,27.6；C₂₈H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：548.19，实测值：548.67。

C29701-TFA盐

¹H NMR(MeOH-d₄)：7.66(d,J=8.47Hz,1H),7.56(t,J=6.87Hz,1H),7.43(td,J=7.60,1.47Hz,1H),7.22(d,J=7.79Hz,1H),7.16(dd,J=8.17,1.89Hz,1H),6.81(d,J=1.80Hz,1H),5.17(d,J=11.92Hz,1H),4.68-4.58(m,2H),3.91-3.78(m,1H),3.78-3.66(m,2H),2.44-2.32(m,1H),2.26-2.10(m,2H),1.98-1.88(m,1H),1.64-1.52(m,1H),1.43(t,J=7.15Hz,1H),1.33-1.25(m,1H),1.29(s,3H),0.81(s,3H)；C₃₀H₃₇Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值=576.22，实测值：576.92。

C30201-TFA盐

¹H NMR(MeOH-d₄)：7.68(dd,J=8.16,1.47Hz,1H),7.48(t,J=7.09Hz,1H),7.39(td,J=7.30,1.29Hz,1H),7.20-7.08(m,2H),6.79(d,J=1.79Hz,1H),5.19(d,J=11.56Hz,1H),4.83(d,J=11.56Hz,1H),4.51(t,J=3.96Hz,1H),3.94-3.78(m,1H),3.12(s,3H),2.50-2.36(m,1H),2.32-2.20(m,1H),2.10-1.92(m,2H),1.73(dd,J=10.67,9.23Hz,1H),1.40-1.25(m,1H),1.29(s,3H),0.75(s,9H)；C₂₉H₃₅Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值=562.20，实测值：562.58。

实施例2

荧光偏振MDM2结合分析

使用优化、灵敏和基于定量荧光偏振(基于FP)的结合分析确定MDM2抑制剂的结合亲和性，该分析使用重组人His标记的MDM2蛋白(残基1-118)和荧光标记的基于p53的肽。

荧光探针的设计是基于先前报导的高亲和性的基于p53的肽模拟物化合物(5-FAM-βAla-βAla-Phe-Met-Aib-pTyr-(6-Cl-LTrp)-Glu-Ac3c-Leu-Asn-NH2(SEQ ID NO：1)，García-Echeverría等人，J.Med.Chem.43：3205-3208(2000))。该标记的肽称为PMDM6-F。通过饱和曲线确定PMDM6-F对重组MDM2蛋白的Kd值。在Dynex96孔黑色圆底板中连续双倍稀释MDM2蛋白，且以1nM的浓度添加PMDM6-F肽。该分析在缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛血清丙种球蛋白；0.02%叠氮化钠，0.01%Triton X-100)中进行，且在3小时的培养后使用ULTRA READER(Tecan U.S.Inc.，ResearchTriangle Park，NC)测量偏振值。通过将S形剂量-响应曲线(可变斜率)中的mP值以非线性回归拟合获得IC50值，且该值确定为1.40nM±0.25。使用如下等式计算K_d值：K_d值=IC₅₀-L0/2。L0为荧光配体的总浓度；L0/2为荧光配体总浓度除以2。由于使用终浓度为1nM的PMDM6-F，故L0/2为0.5nM。

用所测试化合物在DMSO中的系列稀释液进行剂量依赖的竞争性结合实验。将5μL所测试化合物的样品，以及预培养的MDM2蛋白(10nM)与PMDM6-F肽(1nM)在分析缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛血清丙种球蛋白；0.02%叠氮化钠，0.01%Triton X-100)中的溶液加入Dynex96孔黑色圆底板中，形成终体积为125μL。对于各分析，对照包括了MDM2蛋白和PMDM6-F(相当于0%抑制)，单独PMDM6-F肽(相当于100%抑制)。在3小时的培养后测量偏振值。使用非线性最小二乘法分析曲线来确定IC₅₀值，即50%的结合肽被置换的抑制剂浓度。使用GRAPHPAD PRISM软件(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)进行曲线拟合。

或者，使用Infinite M-1000盘式读数仪(Tecan U.S.,Research TrianglePark,NC)于Microfluor296-孔黑色圆底盘(Thermo Scientific)中测量荧光偏振值。在饱和实验中，将1nM的PMDM6-F和浓度递增的蛋白加到各孔中的缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛γ球蛋白；0.02%叠氮化钠(Invitrogen)，含0.01%Triton X-100及4%DMSO)中，得到125μl的最终体积。将分析盘混合并于室温培养30分钟，缓慢震荡以确保平衡。以毫偏振单位(mP)表示的偏振值在485nm的激发波长和530nm的发射波长下测量。然后使用Graphpad Prism5.0软件(Graphpad Software，San Diego，CA)，通过拟合S型剂量依赖FP增加量作为蛋白浓度的函数，计算平衡解离常数(K_d)。

以剂量依赖竞争性结合实验，测定试验化合物的K_i值。将5μl的试验化合物的不同浓度的DMSO溶液和120μl的预培养蛋白/荧光探针复合物的固定浓度的分析缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛γ球蛋白；0.02%叠氮化钠，含0.01%Triton X-100)溶液的混合物，加到分析盘中并于室温缓和震荡下培养30分钟。竞争分析中蛋白和荧光探针的最终浓度分别为10nM和1nM，最终的DMSO浓度为4%。在各分析盘中包括：仅含蛋白/荧光探针复合物(等同0%抑制)的阴性对照，以及仅含游离荧光探针的阳性对照(等同100%抑制)。FP值如上述测量。使用Graphpad Prism5.0软件(GraphpadSoftware，San Diego，CA)，以S型剂量依赖FP降低量作为总化合物浓度函数的非线性回归拟合，测定IC₅₀值。使用竞争分析中所测量的IC₅₀值、荧光探针对蛋白的K_d值及蛋白和荧光探针的浓度，计算试验化合物对MDM2蛋白的K_i值(Nikolovska-Coleska等人,Anal.Biochem.332：261-73(2004))。

表2A所示的游离碱化合物以游离碱或CF₃CO₂H(TFA)或HCl盐来测试。一般而言，预期化合物的游离碱和盐形式的分析反应相当(参见，例如MI-77301(游离碱)和MI-77301(TFA盐))。

不同异构体于结合媒剂中的结合动力学

将等份的新鲜制备的化合物的DMSO储存溶液稀释于FP结合分析缓冲液中，以制备于其中进行化合物异构化作用的水性化合物培养溶液。培养溶液中的最终化合物浓度为25μM，且5%的DMSO用于增进溶解度。在整个实验的时间范围内，将这些溶液储存于室温。于不同的时间点将80μL等份的化合物溶液与20μL新鲜制备的MDM2/PMDM6-F混合物混合于分析盘中。蛋白、荧光探针和DMSO的最终浓度与上述竞争分析中的浓度相同。各分析盘同样包括阴性和阳性对照。在室温缓慢震荡下培养15分钟后，如上述测量mP值及测定IC₅₀值(表2B)。由于在测量前分析盘制备和培养需要时间，所以应注意所有的下示的IC₅₀值实际上在标示的培养时间后20分钟取得。

实施例3

荧光偏振MDM2结合分析

MDM2抑制剂的结合亲和力任选使用基于荧光偏振(基于FP)的结合分析，使用如下的重组的人MDM2蛋白(残基5-109)和PMDM6-F测定：

MDM2蛋白以1.8的步骤于Costar96-孔黑色非结合表面序号3686盘中连续稀释，并加入浓度5nM的PMDM6-F肽。此分析在缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛γ球蛋白，0.01%Triton X-100)中进行，以及使用Fusion读数仪(Packard)于平衡时测量各向异性。使用下列方程式计算配体结合的比例：F_SB=(Aobs-AF)/[(Ab-Aobs)Q+Aobs-AF](ref)，其中Aobs=所观察的各向异性，Ab=当所有的p53接结合时的各向异性，AF=当p53游离时的各向异性，Q=结合的荧光强度/游离的荧光强度的比率(Biochemistry43：16056-16066(2004))。使用荧光偏振的Langmuir方程式测定KD，为1.8nM。

剂量依赖、竞争性结合实验用试验化合物的DMSO连续稀释液来进行。将5μL的试验化合物样本和PMDM6-F肽(5nM)及MDM2蛋白(6或8nM)于分析缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5；100μg/mL牛γ球蛋白，0.01%TritonX-100)中的溶液加至Costar96-孔黑色无结合表面序号3686盘，得到125μL的最终体积。对于各分析，对照组包括MDM2蛋白及PMDM6-F(等同0%抑制)、单独PMDM6-F肽(等同100%抑制)。于平衡时测量偏振值。使用4-参数逻辑模型(Ratkowsky及Reedy,Biometrics42(3)：575-82(1986)由图测定IC₅₀值，即显现50%的结合肽被置换时的抑制剂浓度。由非线性回归使用Xlfit软件的Marquardt运算法调整(表3)。

表3

化合物	IC50(biot MDM2)	IC50(无标记)
			MI-710201	308.32nM	272.83nM
MI-710501	309.08nM	260.40nM
			MI-710601	157.86nM	137.94nM
MI-710801	289.62nM	256.02nM
			MI-710901	224.96nM	184.74nM
C02701	149.49nM	111.52nM
			C02901	159.97nM	121.90nM
C03001	120.23nM	89.59nM
			C031	3339.44nM	2742.86nM
C03401	107.66nM	85.61nM
			C03701	270.09nM	220.41nM
C04801	473.01nM	388.72nM

实施例4

细胞生长分析

等基因的HCT-116结肠癌细胞系由Bert Vogelstein教授(Johns Hopkins,Baltimore,MD)所赠并将其保存在含10%FBS的McCoy's5A培养基中。所有其它的细胞系得自ATCC(Manassas,VA)并保存在含10%FBS的RPMI-1640培养基中。

将细胞以2-3×10³细胞/孔的密度与化合物接种在96-孔平底的细胞培养盘中并培养4天。用浓度渐增的试验化合物处理后，由WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四锉单钠盐(DojindoMolecular Technologies Inc.,Gaithersburg,Maryland)测定细胞生长抑制率。将WST-8以10%最终浓度加到各孔中，然后于37°C培养2-3小时。于450nm使用TECAN ULTRA读数仪测量样本的吸光度。通过将未处理的细胞与经化合物处理的细胞使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software,La Jolla,CA92037,USA)进行比较，计算抑制细胞生长50%的化合物浓度(IC₅₀)。此分析的结果如表2A和2C所示。在此分析所使用的条件下，具有式II的化合物可能异构化为具有式XII的化合物或其它化合物(例如MI-773异构化为MI-77301；MI-519-64异构化为MI-519-6401)。在各种黑色素瘤细胞系中(Fernandez,Y.,等人.,Cancer Res.65：6294-6304及文中所引述的参考文献)，MI-77301的此分析结果如图24所示。

实施例5

细胞死亡分析

细胞死亡分析使用台盼蓝(trypan blue)染色来进行。在存在或不存在所述化合物时处理细胞。用台盼蓝将游浮和粘附的细胞染色。将染成蓝色或形态上不健康的细胞记为死亡细胞。在显微镜下各三个独立的区域中计数至少100细胞。如图11和12所示，本发明提供的MDM2抑制剂诱导带有野生型p53的SJSA-1和RS4;11癌细胞的细胞死亡。

表2B

表2C

¹四天的治疗

实施例6

蛋白印迹分析

对于蛋白印迹分析，将细胞溶于冰冷却的RIPA缓冲液中：20mMTris-HCl(pH7.5)、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1%去氧胆酸钠、2.5mM焦磷酸钠、1mM b-磷酸甘油、1mM原钒酸钠和1μg/ml亮肽酶素。通过蛋白印迹分析检测全细胞裂解产物中的蛋白，其中使用于下抗体：抗-p53(克隆DO-1)、抗-MDM2(克隆SMP-14)、抗-p21(克隆SX118)、抗-β-肌动蛋白(克隆AC-40)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH；HRP结合)。如图8、9和13-16所示，本发明提供的MDM2抑制剂在该分析中是有活性的。

使用PARP裂解作为细胞凋亡的生化标记。在细胞凋亡期间，半胱天冬酶(caspase)裂解了聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)。本实验中使用兔抗-PARP(Cell Signaling目录号9542)检测全长的(116kD)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)及较大的(89kD)PARP裂解片段。在存在或不存在MI-77301时，处理总计2×10⁶的粘附细胞并于37°C培养19小时。使用0.05%胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)采集细胞，于PBS中清洗并在冰上使用添加蛋白酶抑制剂混合液(Roche)的RIPA缓冲液(Sigma)裂解15分钟。将洗脱的细胞以13000×g于4°C离心15分钟，得到澄清的细胞裂解液。使用市售的Bio-Rad蛋白分析染料估算细胞解离液中的蛋白。总计25μg的蛋白载入4-20%SDS-PAGE凝胶中，进行电泳，以及转移至PVDF膜在40V进行3小时。将膜置于室温以含5%奶粉(Bio-Rad)的TBST(20mM Tris,0.5M NaCl,0.1%Tween-20，pH7.5)封闭1小时。将经含5%奶粉的TBST稀释的一抗(primary antibody)涂覆于膜上，在4°C的冷室中于回转式震荡器上放置过夜。用TBST清洗膜，用以1:2000稀释的TBST中的抗兔二抗(Immunopure山羊抗兔抗体，Thermo Scientific)或抗鼠抗体(Pierce山羊抗鼠抗体,Thermo Scientific)，于室温培养1小时。将膜用TBST清洗并使用SuperSignal West Pico试剂(Thermo Scientific)显影。使用缀合HRP的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(Santa Cruz)作为对于蛋白的上样对照组。MI-77301的蛋白印迹分析示于图25、26和28中。

实施例7

使用SJSA-1和22Rv1异种移植模型的体内有效性研究

用胰蛋白酶(0.05%)-EDTA(0.53mM)(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)采集SJSA-1(骨肉瘤)肿瘤细胞，加入生长培养基并将细胞置于冰上。将细胞样本以1:1与台盼蓝(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)混合并于血细胞计数器上计数，测定活的/死亡细胞。将细胞用1X PBS(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)清洗一次并再悬浮于PBS中。对于Matrigel注射，在用PBS清洗后，将细胞再悬浮于冰冷的1:1的PBS和Matrigel(BD Biosciences,Invitrogen Corp.)的混合物中，使最后的Matrigel蛋白浓度为5mg/ml。将SJSA-1肿瘤用0.1ml Matrigel中5x10⁶细胞接种至C.B-17SCID小鼠。将细胞使用27号针头以皮下(s.c.)注射至各小鼠的侧腹区。

使用测径器测量生长在小鼠内的肿瘤的二维大小。肿瘤体积(mm³)=(AxB²)/2，其中A和B分别为肿瘤长度和宽度(以mm表示)。在治疗期间，一周测量三次肿瘤体积和体重。停止治疗后，至少一周测量一次肿瘤体积(图17、20、22和23)和体重(图18和21)。将小鼠再豢养60天以进一步观察肿瘤生长和毒性。如图22所示，单一200mg/kg剂量的MI-77301(QD1治疗)显示与持续的给药方案(QD7治疗)相当的有效性。

在治疗开始前，让肿瘤生长至60-140mm³的体积，在此时供应肿瘤的血管应已建立。将带有可接受大小范围的肿瘤的小鼠随机编入8只小鼠的实验化合物治疗组及10只小鼠的对照组中。以口服给予实验化合物，每天一次持续2-3周。对照组仅接受媒剂(10%PEG400:3%Cremophor:87%PBS)。其它适于体内给药本发明提供的化合物的媒剂包括但不限于98%PEG200:2%聚山梨醇酯80；98%PEG200:2%TPGS；以及0.5%聚山梨醇酯80:0.6%甲基纤维素:98.9%水。

使用类似的方法，于小鼠的22Rv1前列腺癌模型中评估MI-519-6401和MI-77301的抗癌活性(图19)，以及于HCT-116人结肠直肠肿瘤模型(图31)、LNCAP人前列腺肿瘤模型(图32)和RS4;11人ALL模型(图33)中评估MI-77301的抗肿瘤活性。

实施例8

MI-519-64和MI-519-65的合成

步骤1：3-氧代环丁烷甲酸苄酯(2)

参照反应方程式6A，将BnBr加入化合物1和K₂CO₃在150mL乙腈中的混合物中。将所述混合物在室温搅拌24小时并滤出固体。除去溶剂，且通过柱色谱纯化残余物，得到化合物2。

步骤2：3-羟基-3-甲基环丁烷甲酸苄酯(3和4)

在-78°C将MeMgCl的THF溶液滴加至化合物2的乙醚溶液中，并将所述混合物在相同的温度搅拌半小时。TLC监测显示起始原料消失后，通过加入NH₄Cl水溶液终止反应。水相用乙酸乙酯萃取三次，且合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na₂SO₄)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物3和4(基于TLC分析比例为5:1)。

步骤3：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁烷甲酸苄酯(5和6)

向化合物3和4在DMF(10mL)中的混合物中加入咪唑和TBSCl，且所得混合物在80°C搅拌30小时。冷却至室温后，加入水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na₂SO₄)。滤出固体和除去溶剂。通过柱色谱纯化残余物，得到化合物5和6。

步骤4：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁烷甲酸(7和8)

向化合物5和6在异丙醇中的混合物中加入Pd/C。所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。TLC显示起始原料消失，并滤出固体。除去溶剂，得到化合物7和8。

步骤5：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁基氨基甲酸苄酯(9和10)

向在0°C搅拌的化合物7和8以及Et₃N在丙酮中的溶液中滴加ClCOOEt。所得混合物在0°C搅拌30分钟。加入NaN₃的水溶液，且所得混合物在0°C再搅拌20分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相用盐水洗涤并干燥(Na₂SO₄)。除去溶剂，且残余物溶解于甲苯中。加入苄醇和NaHCO₃。所得混合物在80°C搅拌2小时。除去全部溶剂，且通过柱色谱纯化残余物，获得两种异构体9和10，其比例为5:1。

步骤6：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁胺(11)

向主要异构体9和NaHCO₃在异丙醇中的混合物中加入Pd/C，且所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。滤出固体和除去溶剂，得到化合物11。

步骤7：3-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基环丁胺(12)

向次要异构体10和NaHCO₃在异丙醇中的混合物中加入Pd/C，且所得混合物在1大气压的氢气下搅拌1小时。滤出固体和除去溶剂，得到化合物12。

步骤8：MI-519-64

参照反应方程式6B，向化合物11的THF溶液中加入化合物13，且所得溶液搅拌过夜。除去溶剂，并将由此获得的残余物溶解于CH₃CN/H₂O(1:1)中。加入CAN并搅拌该反应混合物30分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。干燥合并的有机层(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到化合物14。将化合物14溶解于甲醇，加入12M HCl水溶液，且该反应混合物在室温搅拌1小时。除去溶剂，且残余物通过HPLC纯化，得到MI-519-64，其为TFA盐。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)：δ7.54-7.52(m，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.23-7.18(m，1H)，6.88-6.75(m，3H)，5.04(d，J=9.9Hz，1H)，4.45(d，J=9.9Hz，1H)，4.19-4.16(m，1H)，3.92-3.89(m，1H)，2.42-2.11(m，2H)，2.10-1.87(m，3H)，1.32-1.24(m，4H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]⁺。

步骤9：MI-519-65

向化合物12在THF的溶液中加入化合物13，所得溶液搅拌过夜。除去溶剂，且将残余物溶解于CH₃CN/H₂O(1:1)中。加入CAN，并将该反应混合物搅拌30分钟。加水，且水相用乙酸乙酯萃取三次。干燥合并的有机层(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到化合物15。将化合物15溶解于甲醇中，加入12M HCl水溶液，且将该反应混合物在室温搅拌1小时。除去溶剂，且残余物通过HPLC纯化，得到MI-519-65，其为TFA盐。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)：δ7.50(m，1H)，7.44-7.38(m，1H)，7.24-7.20(m，1H)，6.89-6.88(m，1H)，6.80(m，1H)，6.71(m，1H)，4.91-4.88(m，1H)，4.40-4.36(m，2H)，4.10-4.06(m，1H)，2.41-2.33(m，2H)，2.07-1.87(m，3H)，1.25-1.21(m，4H)，0.82(s，9H)；MS(ESI)m/z548[M+H]⁺。

实施例9

MI-519-6401的合成

反应方程式7

将经硅胶快速色谱纯化的MI-519-64(100mg)装入装配有磁性搅拌棒的50mL圆底烧瓶中。加入乙腈(20mL)使化合物完全溶解并加入去离子水(7至10mL)。然后加入NaHCO₃饱和水溶液(约0.5mL)调整pH值至7和8之间。将此溶液于室温搅拌至少12小时。将TFA(0.1mL)和另外10mL的去离子水加到溶液中并立即使用乙腈和水作为洗脱剂以半制备型RP-HPLC纯化此溶液，得到MI-519-6401为TFA盐。¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.62-7.53(m,2H),7.45-7.35(m,1H),7.20-7.10(m,2H),6.80-6.85(m,1H),5.11(d,J=11.07Hz,1H),4.57(d,J=11.11Hz,1H),4.40(d,J=7.39Hz,1H),4.00-3.80(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.35-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,1H),1.90-1.60(m,2H),1.30(s,3H),1.20-1.05(m,1H),0.88(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.8,168.0,157.6(d,J_C-F=249Hz),144.9,136.8,132.2,128.5,126.5,126.3(d,J_C-F=4.76),123.9,123.7,122.3(d,J_C-F=18.97Hz),122.0(d,J_C-F=13.1Hz),111.8,67.1,64.6,64.5,62.9,49.0,45.5,45.4,43.3,38.0,30.8,29.5,27.3；C₂₈H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的ESI-MS计算值：548.1883，实测值：548.25。

分析型RP-HPLC谱图如图1-3所示。参照图3，MI-519-6401对应于31.787分钟的RP-HPLC色谱峰。

在另一操作中，将经硅胶快速色谱纯化的MI-519-64(100mg)装入装配有磁性搅拌棒的50mL圆底烧瓶中。加入甲醇(20mL)使化合物完全溶解并加入去离子水(10至20mL)。然后加入NaHCO₃饱和水溶液(约0.5mL)调整pH值至7和8之间。将此溶液于室温搅拌至少12小时。将TFA(0.1mL)和另外10mL的去离子水加到溶液中并立即使用乙腈和水作为洗脱剂以半制备型RP-HPLC纯化此溶液，得到MI-519-6401为TFA盐。

实施例1的C02701、C02901、C03001、C03401、C03701、C03801、C04801、C08301、C08601和C11701使用类似制备MI-519-6401所用的操作来制备。

实施例10

MI-773的合成

反应方程式8

步骤1

向搅拌的吲哚酮1(4.19g，25mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入醛2(3.96g，25mmol)和哌啶(2.45mL，25mmol)。在室温搅拌该反应混合物3小时，并收集黄色沉淀物，依次用甲醇、己烷和乙醚洗涤并干燥，得到化合物3(6.25g，产率81%)。

步骤2

向化合物3(6.25g，21mmol)的甲苯(75ml)溶液中加入化合物4(5.43g，21mmol)、化合物5(2.15g，21mmol)和

分子筛(4g)。将该反应混合物加热回流过夜并过滤。将滤液蒸发，并通过硅胶快速柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=9:1至5:1)纯化残余物，得到化合物6(8.78g，产率65%)。

步骤3

在室温搅拌化合物6(965mg，1.5mmol)和胺7(346mg，3mmol)在5ml的THF中的溶液2天，并减压除去溶剂。通过硅胶快速柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=1:1至1:4)纯化残余物，得到化合物8(819mg，产率72%)。

步骤4

向冰浴冷却的化合物8(800mg，1.05mmol)在CH₃CN(8ml)、H₂O(4ml)和丙酮(4ml)中的溶液中加入CAN(硝酸铈铵)(1.15g，2.1mmol)。该反应的进行通过TLC监测。当所有起始原料消失时(约5分钟)，加入100mg的NaHCO₃粉末，并用50ml的乙酸乙酯稀释该反应混合物。有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷/甲醇/三乙胺=200:1:1至200:10:1)纯化该残余物，得到(2'R,3S,4'S,5'R)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(MI-773)(402mg,68%产率,纯度(HPLC)：>95%(图35))。用X-射线分析测定MI-773的绝对立体化学构形。

将MI-773溶于DCM，加入TFA并蒸发移除溶剂。将残余物进一步以C18反相半制备型HPLC柱上以溶剂A(0.1%TFA的水溶液)和溶剂B(0.1%TFA的甲醇溶液)作为洗脱剂(梯度：45%的溶剂A和55%的溶剂B至30%的溶剂A和70%的溶剂B于30分钟内)色谱纯化，得到MI-773为TFA盐。MI-773(TFA盐)的NMR：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ7.47(t,J=7.0Hz,1H),7.34(t,J=7.4Hz,1H),7.14(t,J=7.9Hz,1H),6.83(s,1H),6.80(s,2H),4.39(d,J=10.0Hz,1H),4.15-4.05(m,1H),3.72-3.53(m,1H),3.53-3.85(m,2H),2.10-1.75(m,4H),1.62(d,J=12.2Hz,1H),1.45-1.05(m,5H),0.78(s,9H)。

MI-773(TFA盐)的稳定性：将MI-773(TFA盐)溶在水/甲醇混合物：1)水/甲醇=1:1，含0.1%的TFA，pH2.1；2)水/甲醇=1:1，含0.1%的TEA，pH10.8；或3)水/甲醇=1:1，pH3.9。将溶液放置于室温。使用C18反相分析型HPLC柱于0、12小时、24小时、48小时和72小时的时间点测试纯度。结果显示MI-773(相当色谱峰3)转化为MI-77302(相当色谱峰1)、MI-77301(相当色谱峰4)和另外的化合物(相当色谱峰2)，其具有相同的分子量(图6、37和38)。还于0和36小时测试储存于4°C的相同的样本溶液的纯度。结果显示MI-773在4°C转化相当缓慢。

实施例11

MI-77301的合成

反应方程式9

将MI-773(为TFA盐)溶于MeOH/H₂O(1:1体积/体积比)并放置于室温1-4天。将溶液以C18反相半制备型HPLC柱上以溶剂A(0.1%的水溶液)和溶剂B(0.1%TFA的甲醇溶液)作为洗脱剂(梯度：45%的溶剂A和55%的溶剂B至30%的溶剂A和70%的溶剂B于30分钟内)色谱纯化。分离出MI-77301为TFA盐。¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：8.35(d,J=7.8Hz,1H),7.54-7.62(m,2H),7.37-7.43(m,1H),7.12-7.20(m,2H),6.80(d,J=1.5Hz,1H),5.20(d,J=11.4Hz,1H),4.58(d,J=11.4Hz,1H),4.51(d,J=7.2Hz,1H),3.50-3.75(m,1H),3.30-3.50(m,1H),1.82-2.00(m,3H),1.76(d,J=10.5Hz,1H),1.52(d,J=12.3Hz,1H),1.05-1.42(m,4H),0.88-1.00(m,1H),0.88(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,MeOH-d₄)：177.7,166.9,157.6(d,JC-F=248.0Hz),145.0,137.0,132.4,128.6,126.6,126.4(d,JC-F=4.9),124.0,123.4,122.3(d,JC-F=18.8Hz),121.5(d,JC-F=12.8Hz),111.9,69.9,64.4,64.0,62.8,49.7,34.3,34.2,30.9,30.82,30.77,29.4；C₂₉H₃₅Cl₂FN₃O₃(M+H)+的ESI-MS计算值562.20，实测值562.33；[α]_D ²⁵=-27.2°(c=0.005g/mL于MeOH中)；纯度(HPLC)：>95%(参见图36)。

在另一操作中，将MI-773(77mg)溶于15mL的MeOH/H₂O(体积/体积=1:1)。3天后，收集已形成的针状结晶，用冷的MeOH/H₂O(体积/体积=1:1)清洗并真空干燥，得到MI-77301为游离胺(20mg；以HPLC测定，纯度>95%)。¹H NMR(300MHz,MeOH-d₄)：7.49-7.55(m,1H),7.25-7.31(m,1H),7.10-7.16(m,1H),6.82(d,J=1.8Hz,1H),6.50-6.71(m,1H),6.49(d,J=8.4Hz,1H),4.32(d,J=9.0Hz,1H),4.09(d,J=8.7Hz,1H),3.57-3.69(m,1H),3.49(d,J=9.2Hz,1H),3.46-3.57(m,1H),1.83-2.07(m,3H),1.68-1.80(m,1H),1.54(dd,J=9.0,14.3Hz,1H),1.12-1.45(m,5H),0.80(s,9H)。用X-射线分析测定MI-77301的绝对立体化学构形。

MI-77301(TFA盐)的稳定性：将MI-77301(TFA盐)溶在水/甲醇混合物(水/甲醇=1:1，含0.1%的TFA)。将溶液放置于室温。使用C18反相分析型HPLC柱于0、12小时、24小时、48小时和72小时的时间点测试纯度。结果显示MI-77301(相当色谱峰4)缓慢转化为MI-77302(相当色谱峰1)及两种其它化合物(相当色谱峰2和3)，其具有相同的分子量(图7)。用X-射线分析测定MI-77302的绝对立体化学构形。

实施例1的MI-710201、MI-710401、MI-710501、MI-710601、MI-710801和MI-710901使用类似制备MI-77301所用的操作来制备。

MI-77301(上方)、MI-773(中间)和MI-77302(下方)的¹³C CPMAS NMR波谱(400MHz)如图34所示。在羰基区域观察到化学位移差异(170-185ppm)。

在另外的操作中，MI-77301如反应方程式9A所述来制备。

反应方程式9A

实施例12

合成：

(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺；以及

(2'R,3S,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺

(5S,6R)-5,6-二苯基吗啉-2-酮根据J.Org.Chem.2005,70,6653所制备。mp：139°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=0.96；[M+H]⁺：m/z254(方法C)。

(3R,3'R,4'S,6'S,8'R,8a'S)-6-氯-8'-(3-氯-2-氟苯基)-6'-新戊基-3',4'-二苯基3',4',8',8a'-四氢螺[二氢吲哚-3,7'-吡咯并[2,1-c][1,4]

嗪]-1',2(6'H)-二酮

在氩气下，于496mg(1.61mmol)的(E)-6-氯-3-(3-氯-2-氟苯亚甲基)二氢吲哚-2-酮的甲苯悬浮液中加入408mg(1.61mmol)的(5S,6R)-5,6-二苯基吗啉-2-酮和213μL(1.61mmol)的3,3-二甲基-丁醛。将反应混合物于回流温度加热6小时，接着冷却至室温并于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于70g的硅胶柱上纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：环己烷/乙酸乙酯90/10体积/体积；流速：50mL/分钟)。得到0.58g的(3R,3'R,4'S,6'S,8'R,8a'S)-6-氯-8'-(3-氯-2-氟苯基)-6'-新戊基-3',4'-二苯基3',4',8',8a'-四氢螺[二氢吲哚-3,7'-吡咯并[2,1-c][1,4]

嗪]-1',2(6'H)-二酮为无定形黄色固体。LC-MS：t_R(分钟)=1.81；[M+H]⁺：m/z643；[M-H]^-：m/z641(WATERS UPLC-SQD装置；离子化：正电模式和/或负电模式的电喷雾(ES+/-)；色谱条件：柱：ACQUITY BEH C181.7μm-2.1x50mm；溶剂：A：H₂O(0.1%甲酸)B：CH₃CN(0.1%甲酸)；柱温：50°C；流速：0.8ml/分钟；梯度(2.5分钟)：从5至100%的B于1.8分钟内；2.4分钟：100%的B；2.45分钟：100%的B；从100至5%的B于0.05分钟内；保留时间=t_R(分钟)；参照本文的"方法C")；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：0.39(s,9H)；1.30(dd,J=4.0及15.2Hz,1H)；1.93(dd,J=6.3及15.2Hz,1H)；3.49(dd,J=4.0及6.3Hz,1H)；4.47(d,J=11.2Hz,1H)；5.04(d,J=4.2Hz,1H)；5.08(d,J=11.2Hz,1H)；6.53(d,J=8.1Hz,1H)；6.66至6.76(m,3H)；6.96(m,2H)；7.10至7.26(m,9H)；7.34(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.62(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；10.71(s宽峰,1H)。

(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-1'-((1S,2R)-2-羟基-1,2-二苯基乙基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'吡咯烷]-5'-甲酰胺

于氩气下，于112mg(0.97mmol)的反式-4-氨基环己醇的2mL的四氢呋喃的混合物中加入0.57g(0.89mmol)的(3R,3'R,4'S,6'S,8'R,8a'S)-6-氯-8'-(3-氯-2-氟苯基)-6'-新戊基-3',4'-二苯基3',4',8',8a'-四氢螺[二氢吲哚-3,7'-吡咯并[2,1-c][1,4]

嗪]-1',2(6'H)-二酮的8mL的四氢呋喃溶液。将生成的混合物于60°C加热17小时，接着加入136μL(0.97mmol)的三乙胺，并再持续加热。

24小时后，加入3.6mg(0.12mmol)的反式-4-氨基环己醇和2.5mL的四氢呋喃。41小时后，让反应混合物冷却至室温并于减压下浓缩至干。将残余物用20mL的乙酸乙酯和6mL的水的混合物稀释并轻轻倒出。用6mL的乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用硫酸镁干燥并于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于70g的硅胶柱上纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：环己烷/乙酸乙酯50/50体积/体积接着40/60体积/体积；流速：50mL/分钟)。得到0.55g的(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-1'-((1S,2R)-2-羟基-1,2-二苯基乙基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'吡咯烷]-5'-甲酰胺为白色霜状物。mp：190°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=1.56；[M+H]⁺：m/z758；[M-H]^-：m/z756(方法C)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：0.51(s,9H)；0.62(d,J=15.2Hz,1H)；0.81(m,1H)；1.02至1.35(m,4H)；1.60(m,1H)；1.79(m,2H)；2.36(dd,J=9.3及15.2Hz,1H)；3.24至3.34(m部分隐藏,2H)；3.48(m,1H)；3.69(d,J=10.9Hz,1H)；3.94(d,J=7.9Hz,1H)；4.13(d,J=10.9Hz,1H)；4.45(d,J=4.4Hz,1H)；5.05(dd,J=4.4及7.9Hz,1H)；5.14(d,J=4.4Hz,1H)；6.18(d,J=8.2Hz,1H)；6.50(d,J=2.0Hz,1H)；6.59(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；6.67(dd,J=2.0及8.2Hz,1H)；6,73(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.20(t,J=7.8Hz,1H)；7.24(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.28(t,J=7.8Hz,2H)；7.35(m,2H)；7.39至7.45(m,3H)；7.49(d,J=8.2Hz,1H)；7.57(d,J=7.8Hz,2H)；10.32(s宽峰,1H)。

(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基-环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺

将542mg(0.71mmol)的(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-1'-((1S,2R)-2-羟基-1,2-二苯基乙基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺的10mL的乙醇混合物冷却至0°C，并经由刮勺于15分钟内缓慢地加入989mg(1.79mmol)的硝酸铈铵。将反应混合物于0°C搅拌1小时，接着用4mL的甲苯、2mL的乙醇、5mL的饱和食盐水及3mL的乙酸乙酯处理并轻轻倒出。将有机层分离并用2x5mL的乙酸乙酯萃取水层。将有机层合并并用3mL的5%碳酸钠清洗。轻轻倒出后用水稀释水层并再次用10mL的乙酸乙酯萃取。将有机层合并并连续用2mL的11%亚硫酸氢钠和2mL的饱和食盐水清洗。然后将其用硫酸镁干燥并于减压下浓缩至干。将222mg的残余物以快速色谱于40g的硅胶柱上纯化(15μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷/丙酮75/25体积/体积，接着65/35体积/体积；流速：30mL/分钟)。得到0.183g灰白色霜状物，将其用异丙醚处理两次并于25°C减压干燥。得到157mg的(2'S,3R,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基-环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺为白色无定形固体。mp：176°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=1.13(91%)及1.03(9%)；[M+H]⁺：m/z562；[M-H]^-：m/z560(方法C)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：0.76(s,9H)；0.85(dd,J=1.8及14.3Hz,1H)；0.97至1.28(m,4H)；1.38至1.50(m,2H)；1.67(m,1H)；1.80(m,2H)；2.56(t,J=12.1Hz,1H)；3.23至3.38(m部分隐藏,2H)；3.45(m,1H)；3.93(d,J=9.6Hz,1H)；4.22(dd,J=9.6及12.1Hz,1H)；4.46(d,J=4.4Hz,1H)；6.62(d,J=8.1Hz,1H)；6.70至6.75(m,2H)；7.13(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.31(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.64(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.92(d,J=7.7Hz,1H)；10.51(s宽峰,1H)。

(2'R,3S,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基-环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺

将其余的粗化合物(206mg)于10mL的乙酸乙酯中溶解并搅拌，用41μL(0.07mmol)的冰乙酸处理，并将反应混合物于60°C搅拌3小时，接着将其冷却至室温并搅拌16小时。然后用5mL饱和碳酸氢钠和3mL的水清洗。

将有机层用硫酸镁干燥并于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于30g的硅胶柱上纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷/丙酮75/25体积/体积；流速：20mL/分钟)。将分离的产物用异丙醚处理两次。过滤固体并于25°C减压干燥。得到106mg的(2'R,3S,4'R,5'S)-6-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2'-新戊基-2-氧代螺[二氢吲哚-3,3'吡咯烷]-5'-甲酰胺为略带粉红色的无定形固体。mp：193°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=1.03；[M+H]⁺：m/z562；[M-H]^-：m/z560(方法C)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：0.72(dd,J=1.5及14.2Hz,1H)；0.80(s,9H)；1.08至1.30(m,5H)；1.68至1.91(m,4H)；3.28至3.49(m,3H)；3.58(m,1H)；4.29(d,J=9.0Hz,1H)；4.39(t,J=9.0Hz,1H)；4.50(d,J=4.4Hz,1H)；6.68(d,J=2.0Hz,1H)；7.05(dd,J=2.0及8.1Hz,1H)；7.12(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.34(t宽峰,J=7.9Hz,1H)；7.48至7.57(m,2H)；7.72(d,J=8.1Hz,1H)；10.40(s宽峰,1H)；α_D=+18.4°+/-0.9(c=1.525mg/0.5mL的MeOH)。

实施例13

(2'S,3'R,4'S,5'R)-1'-乙酰基-6-氯-4'-(3-氯-2-氟-苯基)-2'-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺的合成

乙酸4-{[2′S，3′R，4′S，5′R）-1，1′-二乙酰基-6-氯-4′-（3-氯-2-氟-苯基）-2′-（2，2-二甲基-丙基）-2-氧代-1，2-二氢-螺[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羰基]-氨基}-环己基酯

于氩气下，于281mg(0.50mmol)的(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺的5.0mL的吡啶溶液中加入178μL(2.50mmol)的乙酰氯。将生成的混合物于室温搅拌4天，接着将其倒入水和乙酸乙酯的混合物中，将有机层分离并用乙酸乙酯萃取水层两次。将合并的有机萃取液用盐水清洗，用硫酸镁干燥及然后于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于50g硅胶柱上(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷/甲醇98/2体积/体积；流速：40mL/分钟)纯化，接着用快速色谱于30g硅胶柱上(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷/甲醇98/2体积/体积；流速：20mL/分钟)进行第二次纯化。得到123mg的乙酸4-{[(2′S,3′R,4′S,5′R)-1,1′-二乙酰基-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-羰基]-氨基}-环己基酯为白色粉末。LC-MS：t_R(分钟)=1.19；[M+H]⁺：m/z688；[M-H]^-：m/z686(方法A)。

(2′S,3′R,4′S,5′R)-1′-乙酰基-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺

于氩气下，于117mg(0.17mmol)的乙酸4-{[(2′S,3′R,4′S,5′R)-1,1′-二乙酰基-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-羰基]-氨基}-环己基酯的10.0mL甲醇啶溶液中加入10mL(81mmol)的饱和碳酸钾溶液。将生成的混合物于室温搅拌1小时，接着于减压下蒸发甲醇。用20mL的二氯甲烷萃取剩余的水层3次。将合并的有机萃取液用20mL的盐水清洗，用硫酸镁干燥及然后于减压下浓缩至干。得到92mg的(2′S,3′R,4′S,5′R)-1′-乙酰基-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺为白色粉末。mp：220°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=0.97；[M+H]⁺：m/z604；[M-H]^-：m/z602(方法A)；¹H NMR(60°C,氯仿-d,400MHz)：0.68(s,9H)；0.75至2.62(m部分隐藏,14H)；3.51(m,1H)；3.65(m,1H)；4.28(m宽峰,1H)；4.48(dd,J=3.4及5.9Hz,1H)；4.98(d,J=10.3Hz,1H)；6.65(d,J=1.5Hz,1H)；6.99(t,J=7.8Hz,1H)；7.05至7.48(m,5H)。

实施例14

(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺的合成

(2′R,3′S,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-1′-((1R,2S)-2-羟基-1,2-二苯基-乙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺

于0.28g(1.71mmol)的4-氨基甲基-环己醇盐酸盐的12.0mL的四氢呋喃溶液，加入0.46mL(3.26mmol)的三乙胺。将生成的混合物于室温搅拌30分钟并经由刮片逐渐加入1g(1.55mmol)的：

接着加入2mL的四氢呋喃。将反应混合物加热回流7小时，然后于室温搅拌2.5天，接着将其用10mL的水和15mL的乙酸乙酯稀释。将有机层分离并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机萃取液用硫酸镁干燥并于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于70g硅胶柱上纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷，然后二氯甲烷/甲醇98/2体积/体积；流速：50mL/分钟)。得到0.40g的(2′R,3′S,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-1′-((1R,2S)-2-羟基-1,2-二苯基-乙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺为白色固体。LC-MS：t_R(分钟)=1.16；[M+H]⁺：m/z772；[M-H]^-：m/z770(方法A)；¹H NMR(氯仿-d,400MHz)：0.74(s大峰,9H)；0.83(m,2H)；1.13(m,2H)；1.20(m,1H)；1.25(d,J=15.6Hz,1H)；1.35(d,J=4.9Hz,1H)；1.42(m,1H)；1.55(m部分隐藏,1H)；1.84至2.00(m,2H)；2.29(d,J=2.9Hz,1H)；2.67(dd,J=9.3及15.6Hz,1H)；2.86(m,1H)；3.38(m,1H)；3.48(m,2H)；4.11(m,2H)；4.36(d,J=8.3Hz,1H)；5.20(dd,J=2.9及8.3Hz,1H)；5.64(d,J=8.1Hz,1H)；6.28(m,1H)；6.44(t,J=7.8Hz,1H)；6.53(d,J=2.2Hz,1H)；6.62(dd,J=2.2及8.1Hz,1H)；6.67(t,J=7.8Hz,1H)；7.09(t,J=7.8Hz,1H)；7.25(s,1H)；7.30至7.45(m,5H)；7.54至7.67(m,5H)。

(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺

于50mL的三颈烧瓶中连续装入0.70g(0.91mmol)的(2′R,3′S,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-1′-((1R,2S)-2-羟基-1,2-二苯基-乙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺、7.0mL的乙腈、3.5mL的蒸馏水和3.5mL的丙酮。将生成的混合物搅拌并冷却至0°C，并小量加入0.99g(1.81mmol)的硝酸铈铵。将反应混合物于0°C搅拌20分钟，接着加入89mg(1.06mmol)的碳酸氢钠并持续搅拌5分钟。将混合物用60mL的乙酸乙酯稀释并轻轻倒出。将有机层分离并用10mL的乙酸乙酯萃取水层两次。将合并的有机萃取液以20mL的水清洗，用硫酸镁干燥及然后于减压下浓缩至干。将残余物以快速色谱于30g硅胶柱上纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷；流速：30mL/分钟)，接着用快速色谱于15g硅胶柱上进行第二次纯化(15-40μm硅胶；洗脱溶剂：二氯甲烷/甲醇/28%氨体积/体积/体积；流速：30mL/分钟)。得到87mg的(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基甲基)-酰胺为白色固体。mp：192°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=0.84；[M+H]⁺：m/z576；[M-H]^-：m/z574(方法A)；¹H NMR(氯仿-d,400MHz)：异构体的混合物：0.90(s,9H)；0.99至2.09(m部分隐藏,11H)；3.05至3.27(m,2H)；3.59(m,2H)；4.39(d,J=8.8Hz,1H)；4.59(m,1H)；6.76(s大峰,1H)；6.99(t,J=7.8Hz,1H)；7.06至7.56(m,6H)；7.82(t宽峰,J=6.1Hz,1H)。

实施例15

(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-1′-甲基-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺的合成

于氩气下，于0.50g(0.89mmol)的(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(反式-4-羟基-环己基)-酰胺的18.0mL的乙腈溶液中加入0.89mL(0.97mmol)的36.5%甲醛水溶液，接着加入65mg(0.98mmol)的氰基硼氢化钠。将生成的溶液于室温搅拌2小时，接着将其倒入50mL的乙酸乙酯中。将水层分离并用饱和的碳酸氢钠溶液清洗有机层。用乙酸乙酯再次萃取有机层。将合并的有机萃取液用盐水清洗，用硫酸镁干燥及然后于减压下浓缩至干。将残余物(0.52g)以手性HPLC色谱于Kromasil C18柱上纯化(1100g，批次4680,10μm,7.65x35cm)，洗脱溶剂：乙腈/水40/60体积/体积+0.1%三氟乙酸；流速：250mL/分钟。将收集的溶液用碳酸氢钠处理至pH8，然后用200mL的乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机萃取液用100mL的水清洗两次，用硫酸镁干燥及然后于减压下浓缩至干。然后将残余物于干燥器内在减压下干燥16小时。得到0.17g的(2′S,3′R,4′S,5′R)-6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2,2-二甲基-丙基)-1′-甲基-2-氧代-1,2-二氢-螺[吲哚-3,3′-吡咯烷]-5′-甲酸(4-羟基-环己基)-酰胺为白色固体。mp：188°C(Kofler)；LC-MS：t_R(分钟)=0.85-0.97(异构体的混合物)；[M+H]⁺：m/z576；[M-H]^-：m/z574(方法A)；¹H NMR(400MHz,氯仿-d)：0.73(d,J=15.6Hz,1H)；0.79(s,9H)；1.15至1.48(m,4H)；1.85至2.12(m,5H)；2.75(s,3H)；3.60至3.77(m,3H)；4.17(d,J=9.8Hz,1H)；4.33(d宽峰,J=9.8Hz,1H)；6.69(d,J=1.5Hz,1H)；6.99(t,J=7.8Hz,1H)；7.05(dd,J=1.5及8.3Hz,1H)；7.10至7.25(m,3H)；7.37(m宽峰,1H)；7.56(t,J=7.8Hz,1H)。

使用类似的方法制备C29701和C30201。

实施例16

异构化研究

一般信息

涉及湿度和/或空气敏感成分的实验在烘箱干燥的玻璃容器中于氮气氛下进行。市售溶剂和试剂使用时不必进一步纯化，但下列除外：THF从钠条新鲜蒸馏出。

快速色谱使用TM化学公司的硅胶(H型)来进行。柱典型地以浆液装填并在使用前用己烷平衡。分析型薄层色谱(TLC)使用预制硅胶片(0.2mm厚)的Merck60F254来进行。进行洗脱时，使用UV照射使硅胶片显影。通过用高锰酸钾的碱性溶液或磷钼酸的酸性溶液染色，接着用加热枪加热，可进一步显影。

化合物以HPLC，使用Waters Sunfire C18反相半制备型HPLC柱(19mm×150mm)，使用溶剂A(水,0.1%的TFA)及溶剂B(CH₃CN,0.1%的TFA或MeOH,0.1%的TFA)作为洗脱剂，以10mL/分钟的流速于Waters Delta600仪器上纯化。分析型反相HPLC使用Waters2795分离模块来进行。

质子核磁共振(¹H NMR)及碳核磁共振(¹³C NMR)波谱在Bruker Advance300NMR波谱仪上进行。¹H NMR波谱的化学位移记录为自SiMe⁴(δ0.0)向低场的δ，单位百万分之一(ppm)，或相对于氯仿-d(δ=7.26,单峰)、甲醇-d₄(δ=3.31,五重峰)及DMSO-d₆(δ=2.50,五重峰)的信号。多重性如下：s(单峰)；d(双重峰)；t(三重峰)；q(四重峰)；dd(两组双重峰)；ddd(两组dd峰)；dt(两组三重峰)；m(多重峰)。得到共振的质子数以nH表示。偶合常数以Hz的J值记录。碳核磁共振光谱(¹³C NMR)记录为自SiMe₄(δ0.0)向低场的δ，单位的百万分之一(ppm)，或相对于氯仿-d(δ=77.23,三重峰)、MeOH-d₄(δ=49.20,七重峰)及DMSO-d₆(δ=39.52,七重峰)的信号。

低分辨率ESI质谱分析在Thermo-Scientific LCQ Fleet质谱仪上进行。

化合物1-10根据反应方程式10及使用前述方法的表4制备(参见，例如,Ding,K.等人,J.Am.Chem.Soc.127：10130-10131(2005)；Ding,K.等人,J.Med.Chem.49：3432-3435(2006)；Yu,S.等人,J.Med.Chem.52：7970-7973(2009)；Shangary,S.,Proc.Natl.Acad.Sci.105：3933-3938(2008)；US7,759,383)为异构体的混合物。在大多数的情况下，在CAN氧化后，异构体A为主要鉴定的异构体。申请人已发现，将从CAN氧化得到的异构体混合物溶解于溶剂或溶剂混合物中，并让反应混合物于各种条件下熟化一段时间，得到具有主要异构体为异构体B的异构体混合物。在一些情况下，异构体C和D以纯形式或基本上纯形式分离出。同样，化合物11和12根据反应方程式11和表5制备。

用于本研究的异构化操作如下：将从CAN氧化得到的大约30mg产物(以快速柱色谱预纯化)置于装配有磁性搅拌棒的圆底烧瓶中。加入乙腈(2.4mL)溶解产物。于乙腈溶液中加入水(2.0mL)和0.5mLNaHCO₃(饱和)溶液，得到约8的pH。将反应混合物于室温搅拌约3天。使用分析型HPLC测定异构体的百分比。于半制备型或制备型反相HPLC上使用MeOH(0.1%TFA)和水(0.1%TFA)作为流动相进行进一步的纯化。

异构体A异构化为异构体B还可在酸性条件下进行，例如MeCN-H₂O、CF₃CO₂H(pH<1)、室温、3天；乙酸乙酯、60°C、3小时，或中性条件例如MeOH或MeOH-H₂O。

反应方程式10

表4

^a氧化后的产率；^bHPLC分析所测定的比例；^cHPLC分离后的产率；^d让氧化产物放置于MeOH中二小时后，HPLC所测定的比例；^e化合物10异构体A和化合物10异构体B分别是指表2A中MI-219和MI-21901。

反应方程式11

表5

^a氧化后的产率；^bHPLC分析所测定的比例；^c水解产率；^d以纯的化合物12-异构体A为起始物。

分析数据

化合物1-异构体A(TFA盐)：ESI：C₂₅H₃₀ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=474.17，实测值474.50。

化合物1-异构体B(TFA盐)：ESI：C₂₅H₃₀ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=474.17，实测值：474.68。

化合物1-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.72(d,J=8.08Hz,1H),7.28-7.22(m,1H),7.20-7.12(m,2H),7.12-7.08(m,1H),7.04(d,J=7.65Hz,1H),6.81(d,J=1.79Hz,1H),5.54(d,J=10.87Hz,1H),4.37(dd,J=6.54,4.52Hz,1H),4.15(d,J=10.85Hz,1H),2.98(s,3H),2.81(s,3H),1.70(dd,J=15.24,6.67Hz,1H),1.20(dd,J=15.26,4.43Hz,1H),0.91(s,9H)；ESI：C₂₅H₃₀ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=474.17，实测值：474.50。

化合物2-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.28-7.16(m,3H),7.16-7.06(m,1H),6.92-6.82(m,2H),6.80-6.76(m,1H),4.92(d,J=10.23,4.20-4.10(m,2H),2.73(s,3H),1.99(s,J=15.32,6.75Hz,1H),1.47(dd,J=15.54,3.49Hz,1H),0.80(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₈ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=460.16，实测值：460.52。

化合物2-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.63(d,J=8.06Hz,1H),7.30-7.14(m,4H),7.12-7.00(m,1H),6.82-6.76(m,1H),5.29(d,J=11.24Hz,1H),4.47(d,J=6.68Hz,1H),4.16(d,J=11.22Hz,1H),2.73(s,3H),1.92(dd,J=15.40,8.39Hz,1H),1.17(d,J=16.85Hz,1H),0.90(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.78,168.54,145.38,137.07,135.77,134.60,131.40,130.29,129.48,128.29,126.32,124.24,124.16,112.18,65.11,64.18,62.85,56.95,43.42,30.97,29.66,26.98；ESI：C₂₄H₂₈ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=460.16，实测值：460.48。

化合物2-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.57(d,J=8.12Hz,1H),7.24-7.08(m,3H),7.04-6.98(m,1H),6.92(d,J=7.62Hz,1H),6.76(d,J=1.78Hz,1H),5.02(d,J=12.47Hz,1H),4.42(dd,J=7.06,4.40Hz,1H),4.13(d,J=12.47Hz,1H),2.70(s,3H),1.74(dd,J=15.35,7.14Hz,1H),1.17(dd,J=15.37,4.38Hz,1H),0.88(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：176.72,167.32,144.88,137.13,135.62,133.98,131.17,130.24,129.73,128.41,127.88,123.91,123.53,112.57,65.42,64.33,62.97,59.03,44.86,31.01,29.57,27.03；ESI：C₂₄H₂₈ ³⁵Cl₂N₃O₂[M+H]⁺的计算值=460.16，实测值460.50。

化合物3-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.80-7.70(m,1H),7.50-7.40(m,1H),7.32-7.22(m,1H),6.92-6.88(m,1H),6.74(dd,J=8.15,1.75Hz,1H),6.48(d,J=8.11Hz,1H),5.58(d,J=7.94Hz,1H),4.38(d,J=7.94Hz,1H),4.26(d,J=7.55Hz,1H),2.99(s,3H),2.84(s,3H),2.06(dd,J=15.42,7.72Hz,1H),1.13(d,J=15.37Hz,1H),0.89(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：180.07,166.93,157.51(d,J_C-F=243.98Hz),145.59,137.11,132.54,128.77,127.66,126.74(d,J_C-F=4.55Hz),125.89(d,J_C-F=13.40Hz),123.68,122.85(d,J_C-F=10.19Hz),123.10(d,J_C-F=18.37Hz),112.07,63.03,62.05,61.76,42.09,37.70,36.89,30.77,29.34；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：492.44。

化合物3-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.68-7.57(m,2H),7.45-7.35(m,1H),7.22-7.10(m,2H),6.84-6.77(m1H),5.68(d,J=10.24Hz,1H),4.64(d,J=10.24Hz,1H),4.48(dd,J=8.20,1.70Hz,1H),2.98(s,3H),2.80(s,3H),1.89(dd,J=15.48,8.26Hz,1H),1.14(dd,J=15.48,1.67Hz,1H),0.89(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.96,168.37,152.99(d,J_C-F=253.32Hz),145.26,137.39,132.82,128.82,126.95,126.70(d,J_C-F=4.79Hz),124.28,122.09(d,J_C-F=13.13Hz),118.90,115.11,112.24,64.69,59.97,42.64,37.96,37.03,31.03,29.62；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：492.46。

化合物3-异构体C(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)(TFA盐)：7.63(d,J=8.13Hz,1H),7.52-7.38(m,2H),7.24-7.12(m,2H),6.83(d,J=1.80Hz,1H),5.47(d,J=11.16Hz,1H),4.42(d,J=11.31Hz,1H),4.35(t,J=5.66Hz,1H),2.95(s,3H),2.93(s,3H),1.91(dd,J=15.39,5.80Hz,1H),1.71(dd,J=15.24,5.43Hz,1H),0.84(s,9H)；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：494.20。

化合物3-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)(TFA盐)：7.60(d,J=8.07Hz,1H),7.40-7.30(m,1H),7.22-7.12(m,1H),7.07(dd,J=8.16,1.87Hz,1H),7.04-6.95(m,1H),6.80(d,J=1.87Hz,1H),5.58(d,J=9.80Hz,1H),4.51(d,J=9.84Hz,1H),4.43(dd,J=6.69,4.15Hz,1H),2.99(s,3H),2.80(s,3H),1.68(dd,J=15.41,6.81Hz,1H),1.42(dd,J=15.41,4.26Hz,1H),0.90(s,9H)；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：492.28。

化合物4-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.66-7.54(m,1H),7.38-7.28(m,1H),7.22-7.10(m,1H),6.87(s,1H),6.82-6.72(m,2H),5.21(d,J=10.00Hz,1H),4.50(d,J=9.93Hz,1H),4.30-4.24(m,1H),2.75(s,3H),2.07(dd,J=15.35,7.35Hz,1H),1.8(d,J=14.57Hz,1H),0.80(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：180.31,167.24,157.81(d,J_C-F=247.78Hz),145.44,136.94,132.11,128.66,127.94,126.47(d,J_C-F=4.45Hz),125.29,125.01(d,J_C-F=13.96Hz),123.37,122.64(d,J_C-F=18.03Hz),122.04,64.35,63.69,61.74,49.51,42.34,30.92,29.55,27.10；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.92。

化合物4-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.65-7.55(m,2H),7.40-7.34(m,1H),7.20-7.10(m,2H),6.84-6.80(m,1H),5.26(d,J=11.15Hz,1H),4.64(d,J=11.19Hz,1H),4.45(d,J=7.86Hz,1H),2.74(s,3H),1.87(dd,J=15.19,8.58Hz,1H),1.11(d,J=15.21Hz,1H),0.90(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.75,168.20,159.53(d,J_C-F=248.25Hz),145.22,137.24,132.59,128.58,126.63(d,J_C-F=5.25Hz),124.16,123.43,126.66,122.59(d,J_C-F=4.05Hz),121.54(d,J_C-F=12.75Hz),112.13,64.49,64.40,62.73,55.34,43.33,31.01,29.58,27.06；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.25。

化合物4-异构体C(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.62(d,J=8.17Hz,1H),7.46-7.36(m,2H),7.22(dd,J=8.13,1.89Hz,1H),7.15(t,J=8.08Hz,1H),6.80(d,J=1.85Hz,1H),4.84(d,J=12.32,1H),4.35(d,J=12.32Hz,1H),4.24(t,J=5.62Hz,1H),2.67(s,3H),1.87(dd,J=5.44,2.53Hz,2H),0.77(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.52。

化合物4-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.53(d,J=8.11Hz,1H),7.36-7.26(m,1H),7.11(dd,J=8.08,1.88Hz,1H),6.98-6.90(m,2H),6.77(d,J=1.85Hz,1H),5.03(d,J=11.95Hz,1H),4.51(d,J=11.87Hz,1H),4.50-4.42(m,1H),2.72(s,3H),1.72(d,J=15.36,7.30Hz,1H),1.16(dd,J=15.37,4.09Hz,1H),0.89(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.38。

化合物5-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.63-7.53(m,1H),7.40-7.30(m,1H),7.23-7.13(m,1H),6.87(d,J=1.36Hz,1H),6.86-6.74(m,2H),5.19(d,J=10.22Hz,1H),4.49(d,J=10.22Hz,1H),4.25(dd,J=7.35,2.71Hz,1H),3.56-3.43(m,1H),3.42-3.30(m,4H),2.07(dd,J=15.43,7.44Hz,1H),1.72-1.58(m,1H),1.56-1.40(m,1H),1.30(dd,J=15.43,2.62Hz,1H),0.80(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：180.26,166.78,157.81(d,J_C-F=247.93Hz),145.43,136.90,132.16,128.82,127.96,126.48(d,J_C-F=4.49Hz),125.43,124.94(d,J_C-F=14.00Hz),123.37,122.63(d,J_C-F=18.23Hz),112.00,71.01,67.25,64.38,63.80,61.69,50.06,42.36,38.30,33.80,30.94,29.55；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.92。

化合物5-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.60(d,J=8.15Hz,1H),7.55(t,J=7.12Hz,1H),7.38(t,J=7.57Hz,1H),7.20-7.10(m,2H),6.78(d,J=1.70Hz,1H),5.27(d,J=11.40Hz,1H),4.62(d,J=11.40Hz,1H),4.52(dd,J=8.33,1.29Hz,1H),3.45-3.25(m,5H),1.90(dd,J=15.46,8.38Hz,1H),1.64-1.48(m,1H),1.46-1.32(m,1H),1.14(dd,J=15.46,1.34Hz,1H),0.87(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.77,167.67,157.90(d,J_C-F=251.2Hz),145.21,137.26,132.67,128.64,126.89(d,J_C-F=1.88Hz),126.65(d,J_C-F=4.89Hz),124.17,123.43,122.60(d,J_C-F=19.0Hz),121.52(d,J_C-F=13.0Hz),112.14,79.99,67.25,64.45,62.873,48.8,43.39,38.26,33.78,31.02,29.57；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.42。

化合物5-异构体C(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：8.37(s,宽峰,NH),7.62(d,J=8.11Hz,1H),7.50-7.34(m,2H),7.36-7.10(m,2H),6.83(d,J=1.83Hz,1H),4.32(d,J=12.09Hz,1H),4.24-4.14(m,1H),3.50-3.10(m,5H),1.86-1.72(m,2H),1.58-1.44(m,1H),1.44-1.26(m,1H),0.80(s,9H)；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.42。

化合物5-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.49(d,J=8.02Hz,1H),7.36-7.24(m,1H),7.11(dd,J=8.09,1.89Hz,1H),7.06-6.96(m,1H),6.96-6.88(m,1H),6.80(d,J=1.88Hz,1H),4.89(d,J=11.57Hz,1H),4.46(d,J=11.57Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.56-3.40(m,1H),3.40-3.20(m,4H),1.70-1.40(m,3H),1.10(dd,J=14.59,3.06Hz,1H),0.91(s,9H)；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.40。

化合物6-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.59(t,J=6.93Hz,1H),7.41(td,J=7.55,0.97Hz,1H),7.22(t,J=7.90Hz,1H),6.90(d,J=1.79Hz,1H),6.77(dd,J=8.14,1.79Hz,1H),6.48(d,J=8.15Hz,1H),5.21(d,J=8.22Hz,1H),4.50(d,J=8.19Hz,1H),4.17(dd,J=7.63,2.23Hz,1H),4.10-3.80(m,4H),3.75-3.45(m,4H),3.40-3.00(m,4H),2.08-1.96(m,1H),1.19(dd,J=15.32,2.23Hz,1H),0.81(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：180.28,168.91,157.75(d,J_C-F=248.38Hz),145.50,137.13,132.29,128.63,127.67,126.63(d,J_C-F=4.50Hz),125.74(d,JC-F=13.69Hz),124.72,123.44,122.83(d,J_C-F=18.25Hz),112.20,65.16,64.25,63.84,62.22,58.01,53.84,50.05,42.39,35.72,30.95,29.52；ESI：C₂₉H₃₆ ³⁵Cl₂FN₄O₃[M+H]⁺的计算值=577.21，实测值：577.48。

化合物6-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.66-7.48(m,2H),7.42-7.32(m,1H),7.20-7.10(m,2H),6.78(d,J=1.68Hz,1H),5.38(d,J=11.48Hz,1H),4.65(d,J=11.48Hz,1H),4.52(d,J=7.59Hz,1H),4.00-3.70(m,4H),3.70-3.60(m,2H),3.50-3.40(m,2H),3.40-3.10(m,4H),1.97(dd,J=15.40,8.62Hz,1H),1.12(d,J=15.40Hz,1H),0.88(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.73,169.20,145.19,137.15,132.54,128.69,126.84,126.64(d,J_C-F=4.80Hz),124.11,123.72,122.57(d,J_C-F=13.19Hz),121.77(d,J_C-F=13.19Hz),112.06,65.08,64.59,64.32,62.69,57.41,53.70,48.47,43.55,35.61,31.06,29.56；ESI：C₂₉H₃₆ ³⁵Cl₂FN₄O₃[M+H]⁺的计算值=577.21，实测值：577.48。

化合物7-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.54-7.44(m,2H),7.36-7.26(m,1H),7.14-7.00(m,2H),6.70(d,J=1.76Hz,1H),5.22(d,J=11.36Hz,1H),4.50(d,J=11.36Hz,1H),4.41(d,J=8.23,1.85Hz,1H),1.81(dd,J=15.46,8.31Hz,1H),1.06(dd,J=15.46,1.90Hz,1H),0.78(s,9H)；ESI：C₂₃H₂₅ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=464.13，实测值：464.60。

化合物7-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.64(d,J=8.01Hz,1H),7.54-7.40(m,2H),7.28-7.12(m,2H),6.83(d,J=1.68Hz,1H),4.96(d,J=12.33Hz,1H),4.36(d,J=12.33Hz,1H),4.28(t,J=5.60Hz,1H),1.93-1.86(m,2H),0.80(s,9H)；ESI：C₂₃H₂₅ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=464.13，实测值：464.42。

化合物8-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.66(d,J=8.49HZ,1H),7.35-7.12(m,4H),6.86(d,J=6.02Hz,1H),5.67(d,J=10.03Hz,1H),4.41(dd,J=8.20,1.79Hz,1H),4.13(d,J=10.03Hz,1H),2.97(s,3H),2.74(s,3H),1.91(dd,J=15.46,8.20Hz,1H)1.17(dd,J=15.46,1.82Hz,1H),0.91(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.80,168.54,156.04(d,J_C-F=243.74Hz),141.04,136.12,135.16,131.81,130.66,129.73,128.52,125.50(d,J_C-F=7.37Hz),123.70(d,J_C-F=19.58Hz),114.43(d,J_C-F=25.50Hz),113.62,65.81,64.45,60.58,57.31,42.59,38.04,37.00,31.04,29.63；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：492.50。

化合物8-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.73(d,J=8.75Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.18-7.12(m,1H),7.12-7.06(m,1H),6.89(d,J=6.12Hz,1H),5.52(d,J=10.56Hz,1H),4.37(dd,J=6.56,4.48Hz,1H),4.18(d,J=10.62Hz,1H),2.99(s,3H),2.80(s,3H),1.69(dd,J=15.35,6.58Hz,1H),1.21(dd,J=15.35,4.37Hz,1H),0.93(s,9H)；ESI：C₂₅H₂₉ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=492.16，实测值：492.62。

化合物9-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.25-7.20(m,3H),7.10-7.00(m,1H),6.85(d,J=6.00Hz,1H),5.13(d,J=11.10Hz,1H),4.30-4.10(m,2H),2.72(s,3H),2.02(dd,J=15.30,7.20Hz,1H),1.52(dd,J=15.30,3.90Hz,1H),0.79(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.46。

化合物9-异构体B(TFA盐)：

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.68(d,J=8.47Hz,1H),7.32-7.16(m,3H),7.04(d,J=7.63Hz,1H),6.85(d,J=6.01Hz,1H),5.23(d,J=11.21Hz,1H),4.46(dd,J=8.23,1.76Hz,1H),4.13(d,J=11.21Hz,1H),2.71(S,3H),1.90(dd,J=15.46,8.23Hz,1H),1.17(dd,J=15.48,1.75Hz,1H),0.89(s,9H)

¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.57,168.31,159.98(d,J_C-F=244.73Hz),140.90,135.98,134.31,131.59,130.56,129.45,128.47,125.84(d,J_C-F=7.48Hz),123.61(d,J_C-F=19.45Hz),114.33(d,J_C-F=25.29Hz),113.57,65.62,64.15,62.93,57.04,63.42,31.01,29.60,27.02；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.46。

化合物9-异构体C(TFA盐)：

¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.66(d,J=8.70Hz,1H),7.32(d,J=8.20Hz,1H),7.23(t,J=7.89Hz,1H),7.09(t,J=1.70Hz,1H),6.93(d,J=7.66Hz,1H),6.89(,J=6.13Hz,1H),4.22(t,J=5.73Hz,1H),3.91(d,J=12.36Hz,1H),2.70(s,3H),1.90-1.84(m,2H),0.83(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.58。

化合物9-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.51(d,J=8.79Hz,1H),7.24-7.12(m,2H),7.08(s,1H),7.25(d,J=7.13Hz,1H),6.85(d,J=6.13Hz,1H),4.80(d,J=11.25Hz,1H),4.25-4.15(m,1H),4.09(d,J=11.25Hz,1H),2.76(s,3H),1.44(dd,J=15.26,7.62Hz,1H),1.08(dd,J=15.26,3.19Hz,1H),0.92(s,9H)；ESI：C₂₄H₂₇ ³⁵Cl₂FN₃O₂[M+H]⁺的计算值=478.15，实测值：478.56。

化合物10-异构体A(TFA盐)(MI-219-TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.32-7.22(m,3H),7.18-7.10(m,1H),7.06(d,J=8.74Hz,1H),6.88(d,J=6.08Hz,1H),4.97(d,J=10.79Hz,1H),4.22(d,J=10.79Hz,1H),4.26-4.18(m,1H),3.50-3.20(m,5H),2.03(dd,J=15.35,6.56Hz,1H),1.68-1.52(m,2H),1.50-1.40(m,1H),0.84(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：179.64,166.47,140.40(d,J_P-C=2.94Hz),136.54,136.06,131.64,130.16,130.02,128.14,127.27(d,J_P-C=40.14Hz),123.05(d,J_P-C=19.44Hz),115.94(d,J_P-C=25.54Hz),113.09,70.91,67.24,64.19,64.10,62.73,57.52,42.66,38.14,33.85,30.99,29.57；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.75；HPLC纯度=82%。

化合物10-异构体B,(TFA盐)(MI-21901-TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.68(d,J=8.47Hz,1H),7.32-7.17(m,3H),7.12-7.02(m,1H),6.85(d,J=6.00Hz,1H),5.23(d,J=11.28Hz,1H),4.46(dd,J=8.41,1.91Hz,1H),4.10(d,J=11.28Hz,1H),3.50-3.20(m,5H),1.90(dd,J=15.18,8.62Hz,1H),1.65-1.47(m,1H),1.47-1.33(m,1H),1.18(d,J=15.18Hz,1H),0.89(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.56,167.81,155.99(d,J_P-C=243.27Hz),140.87,135.98,134.28,131.63,130.60,129.51,128.60,125.82(d,J_P-C=7.39Hz),123.58(d,J_P-C=19.68Hz),114.30(d,J_P-C=25.32Hz),113.55,70.86,67.23,65.53,64.16,63.07,57.35,43.43,38.15,33.78,31.01,29.57；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.38；HPLC纯度=95%。

化合物10-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.60-7.53(m,1H),7.30-7.10(m,2H),7.08-7.02(m,1H),7.00-6.92(m,1H),6.84(d,J=6.13Hz,1H),4.96(d,J=12.25Hz,1H),4.39(dd,J=7.22,4.31Hz,1H),4.10(d,J=12.27Hz,1H),3.50-3.20(m,5H),1.68(dd,J=15.29,7.23Hz,1H),1.62-1.48(m,1H),1.48-1.32(m,1H),1.17(dd,J=15.29,4.16Hz,1H),0.90(s,9H)；ESI：C₂₇H₃₃ ³⁵Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=552.18，实测值：552.40。

化合物11-异构体A(TFA盐)：₁H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.50-7.40(m,2H),7.28-7.18(m,1H),6.91(d,J=1.81Hz,1H),6.78(dd,J=8.13,1.87Hz,1H),6.46(d,J=8.14Hz,1H),5.30(d,J=8.52Hz,1H),4.43(d,J=8.52Hz,1H),4.40-4.20(m,2H),4.08(dd,J=7.47,2.43Hz,1H),2.00(dd,J=15.32,7.53Hz,1H),1.22(t,J=7.12Hz,3H),1.19(dd,J=15.32,2.55Hz,1H),0.81(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃Cl，注意游离胺)：181.33,171.91,156.54(d,J_C-F=248.02Hz),142.85,134.15,129.91,128.37(d,J_C-F=14.61Hz),127.19(d,J_C-F=3.19Hz),125.94,124.94,124.63(d,J_C-F=4.50Hz),122.10,121.69(d,J_C-F=18.50Hz),110.72,67.16,65.70,63.19,61.74,51.17,43.45,30.33,29.97,14.32；ESI：C₂₅H₂₈ ³⁵Cl₂FN₂O₃[M+H]⁺的计算值=493.15，实测值：493.44。

化合物11-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.59(d,J=7.41Hz,1H),7.50-7.42(m,1H),7.40-7.32(m,1H),7.17-7.07(m,2H),6.78(d,J=1.65Hz,1H),5.61(d,J=12.25Hz,1H),4.56(d,J=12.25Hz,1H),4.47(dd,J=8.50,1.50Hz,1H),4.25(dq,J=10.77,7.12Hz,1H),4.13(dq,J=10.77,7.12Hz,1H),1.93(dd,J=15.39,8.67Hz,1H),1.34(dd,J=15.39,1.57Hz,1H),1.10(t,J=7.12Hz,3H),0.87(s,9H)；ESI：C₂₅H₂₈ ³⁵Cl₂FN₂O₃[M+H]⁺的计算值=493.15，实测值：493.44。

化合物12-异构体A(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.56-7.46(m,1H),7.46-7.36(m,1H),7.26-7.18(m,1H),6.91(d,J=1.61Hz,1H),6.76(dd,J=8.10,1.50Hz,1H),6.47(d,J=8.14Hz,1H),5.29(d,J=8.67Hz,1H),4.43(d,J=8.67Hz,1H),4.11(d,J=7.47,2.13Hz,1H),2.02(dd,J=15.36,7.50Hz,1H),1.16(dd,J=15.36,2.24Hz,1H),0.81(s,9H)；ESI：C₂₃H₂₄ ³⁵Cl₂FN₂O₃[M+H]⁺的计算值=465.11，实测值：465.42。

化合物12-异构体B(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.58-7.42(m,2H),7.36-7.26(m,1H),7.14-7.02(m,1H),6.75(s,1H),5.43(d,J=12.00Hz,1H),4.58(d,J=11.97Hz,1H),4.35(d,J=8.53Hz,1H),1.87(dd,J=15.08,9.31Hz,1H),1.09(d,J=15.31Hz,1H),0.85(s,9H)；ESI：C₂₃H₂₄ ³⁵Cl₂FN₂O₃[M+H]⁺的计算值=465.11，实测值：465.38。

化合物12-异构体D(TFA盐)：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.49(d,J=8.10Hz,1H),7.36-7.26(m,1H),7.13(dd,J=8.10,1.85Hz,1H),7.08-7.00(m,1H),6.96-6.86(m,1H),6.78(d,J=1.80Hz,1H),5.32(d,J=12.69Hz,1H),4.56(d,J=12.69Hz,1H),4.42(dd,J=7.27,3.88Hz,1H),1.69(dd,J=15.44,7.64Hz,1H),1.13(dd,J=15.44,3.76Hz,1H),0.90(s,9H)；ESI：C₂₃H₂₄ ³⁵Cl₂FN₂O₃[M+H]⁺的计算值=465.11，实测值：465.54。

实施例17

CB061-异构体B(TFA盐)的合成

反应方程式12

CB061根据反应方程式12使用实施例16所述的方法进行制备，氧化后得到15:67:18的A:B:(C+D)异构体比例，异构化后得到2:74:24的A:B:(C+D)异构体比例及色谱后基本上纯的CB061-异构体B(为TFA盐)(图30)。

CB061-异构体B(TFA盐)的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.66(d,J=8.45Hz,1H),7.30-7.16(m,3H),7.10-7.03(m,1H),6.85(d,J=5.98Hz,1H),5.22(d,J=11.37Hz,1H),4.46(dd,J=8.31,1.68Hz,1H),4.09(d,J=11.37Hz,1H),3.70-3.50(m,1H),3.50-3.39(m,1H),2.00-1.84(m,3H),1.82-1.70(m,1H),1.58-1.46(m,1H),1.40-1.12(m,4H),1.08-0.90(m,1H),0.88(s,9H)；¹³C NMR(75MHz,CD₃OD)：177.42,166.80,155.82(d,J_C-F=243.61Hz),140.67(d,J_C-F=2.77Hz),135.73,134.18,131.36,130.33,129.44,128.37,125.77(d,J_C-F=7.38Hz),123.38(d,J_C-F=19.54Hz),114.06(d,J_C-F=25.18Hz),113.39,69.97,65.12,64.06,62.94,57.41,49.88,43.37,34.38,34.29,30.98,30.82,29.39；ESI：C₂₉H₃₅Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的计算值=562.20，实测值：562.36。CB061-异构体B的绝对立体化学用单晶X-射线晶体学确定。

实施例18

CB087-异构体B(TFA盐)的合成

反应方程式13

CB087根据反应方程式13使用实施例16所述的方法进行制备，氧化后得到65:35的(A+C+D):B异构体比例，异构化后得到18:82的(A+C+D):B异构体比例(在TFA的存在下，于乙腈-水中)及色谱后基本上纯的CB087-异构体B(为TFA盐)。在此研究中，中间体A经分离为85:15的异构体的混合物(基于¹H NMR分析)。该混合物用于氧化步骤。用¹H NMR和ESI表征主要异构体。而且，在MeOH或在MeOH-水中，于pH8、室温3天后，观察到少许的异构化作用。

化合物A主要异构体的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：7.40(s,6H),7.10(s,9H),7.20(t,J=7.12Hz,1H),6.74(t,J=7.86Hz,1H),6.48(s,1H),6.44(d,J=8.20Hz,1H),6.08(t,J=7.02Hz,1H),5.51(d,J=8.22Hz,1H),5.35(d,J=4.67Hz,1H),4.55(d,J=4.45Hz,1H),4.18(s,1H),4.15-3.90(m,3H),3.70-3.55(m,1H),2.30-2.00(m,4H),1.60-1.30(m,4H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：179.68,175.39,155.86(d,J_C-P=247.63Hz),142.81,134.49,134.21,132.34,132.09,129.46,129.28(d,J_C-P=12.91Hz),128.45,128.09,127.78,127.16,126.90,126.67,125.20,124.90,124.08(d,J_C-P=3.27Hz),121.32(d,J_C-P=8.18Hz),121.17,110.01,76.10,75.35,69.39,67.82,66.89,61.60,49.60,48.14,33.60,33.48,30.12,29.82；ESI：C₄₄H₄₁Cl₂FN₃O₄[M+H]⁺的计算值=764.25，实测值：764.26。

CB087-异构体B(TFA盐)的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：8.34(d,J=7.70Hz,1H),7.70(d,J=8.11Hz,1H),7.70(t,J=7.02Hz,1H),7.42(t,J=7.61Hz,1H),7.40-7.30(m,5H),7.22(d,J=7.90Hz,1H),7.16(dd,J=8.17,1.85Hz,1H),6.61(d,J=1.74Hz,1H),5.58(s,1H),5.34(d,J=10.97Hz,1H),4.83(d,J=11.04Hz,1H),3.78-3.60(m,1H),3.50-3.40(m,1H),2.00-1.86(m,2H),1.86-1.78(m,1H),1.70-1.60(m,1H),1.42-1.20(m,3H),1.02(qd,J=12.68,3.30Hz,1H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：177.29,167.33,154.20(d,J_C-F=284.04Hz),144.70,136.97,132.50,131.26,130.24,130.03,128.83,128.70,126.61,126.54,123.98,122.91,122.35(d,J_C-F=18.95Hz),121.70(d,J_C-F=12.66Hz),111.78,70.44,69.95,64.89,62.47,49.98,49.87,34.33,34.28,30.91,30.80；ESI：C₃₀H₂₉Cl₂FN₃O₃[M+H]⁺的计算值=568.16，实测值：568.54。

实施例19

CB083-异构体B(TFA盐)的合成

反应方程式14

CB083根据反应方程式14使用实施例16所述的方法进行制备，氧化后得到41:59的(A+C+D):B异构体比例，异构化后得到10:90的(A+C+D):B异构体比例(在TFA的存在下，于乙腈-水中)及色谱后基本上纯的CB083-异构体B(为TFA盐)。在此研究中，中间体A经分离为84：16的异构体的混合物，且主要异构体用于氧化步骤。而且，在MeOH或在MeOH-水中，于pH8、室温3天后，观察到少许的异构化作用。

化合物A主要异构体的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：8.42(d,J=7.49Hz,NH,1H),7.40-7.25(m,5H),7.25-7.10(m,9H),7.20-6.98(m,3H),6.94(dd,J=8.06,1.88Hz,1H),6.82(d,J=8.07Hz,1H),6.63-6.55(m,2H),6.53(d,J=1.84Hz,1H),5.18(d,J=5.70Hz,1H),4.32(s,1H),3.97(d,J=5.70Hz,1H),3.70(d,J=7.57Hz,1H),3.70-3.55(m,2H),3.25-3.10(m,1H),2.64(dd,J=14.03,6.91Hz,1H),2.45(dd,J=13.97,9.24Hz,1H),2.15-1.90(m,4H),1.55-1.30(m,4H)；¹³C(75MHz,CD₃OD)：181.03,176.38,144.79,144.55,139.09,138.54,135.17,134.94,133.16,130.13,130.07,129.77,129.26,129.11,129.03,128.95,128.80,128.18,127.66,127.35,122.68,111.27,79.40,76.05,72.19,70.6,70.56,62.05,53.09,49.63,37.84,34.88,34.77,31.34,31.07；ESI：C₄₅H₄₅ClN₃O₄[M+H]⁺的计算值=726.31，实测值：726.44。

CB083-异构体B(TFA盐)的分析数据：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：10.28(s,NH,1H),8.51(d,J=6.67Hz,NH,1H),7.59(d,J=8.03Hz,1H),7.25-7.00(m,9H),6.60-6.50(m,3H),4.82(s,1H),4.42(d,J=9.65Hz,1H),3.64-3.50(m,1H),3.46-3.32(m,1H),3.30-3.16(m,1H),2.85(dd,J=13.83,4.77Hz,1H),2.28(dd,J=13.83,10.20Hz,1H),1.90-1.66(m,4H),1.38-1.10(m,4H)；¹³C(75MHz,DMSO-d6)：178.36,166.47,143.95,136.55,133.32,131.90,128.69,128.46,128.09,127.88,127.18,126.83,126.52,123.21,120.72,109.97,70.38,67.78,63.18,62.17,52.83,47.76,34.54,33.57,29.82,29.78；ESI：C₃₁H₃₃ClN₃O₃[M+H]⁺的计算值=530.22，实测值：530.40。

实施例20

CB084-异构体B(TFA盐)的合成

CB084根据反应方程式15使用实施例16所述的方法进行制备，氧化后得到97:1:2的A:B:(C+D)异构体比例，在TFA的存在下于乙腈-水中异构化3天后得到46:52:2的A:B:(C+D)异构体比例，于pH8的乙腈-水中异构化3天后得到9:49:42的A:B:(C+D)异构体比例及色谱后基本上纯的CB084-异构体B(为TFA盐)。

CB084-异构体A(游离胺)的分析数据：¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)：10.02(s,NH,1H),7.86(d,J=7.60Hz,NH,1H),7.31(d,J=7.91Hz,1H),7.05(d,J=7.91Hz,1H),6.97(s,3H),6.54(s,1H),6.46(d,J=3.65Hz,2H),4.50(d,J=4.08Hz,NH,1H),3.60-3.40(m,2H),3.40-3.30(m,1H),3.25-3.10(m,1H),2.80-2.70(m,2H),2.60-2.40(m,1H),1.90-1.60(m,4H),1.34(dd,J=13.86,10.33Hz,1H),1.30-1.05(m,4H),0.90-0.70(m,1H),0.71(s,9H)；¹³C(75MHz,DMSO-d6)：180.50,169.86,143.83,138.61,131.88,129.53,127.91,127.64,125.83,125.55,120.61,108.90,68.15,68.08,68.03,61.27,55.94,47.20,43.56,34.36,33.83,33.77,30.30,30.02,29.80,29.67；ESI：C₃₀H₃₉ ³⁵ClN₃O₃[M+H]⁺的计算值=524.27，实测值：524.55。

反应方程式15

CB084-异构体B(TFA盐)的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃OD)：8.54(d,J=7.42Hz,NH,1H),7.48(d,J=8.06Hz,1H),7.23(d,J=8.06Hz,1H),7.20-7.08(m,3H),6.90(s,1H),6.67(d,J=6.94Hz,1H),4.49(d,J=11.08Hz,1H),4.17(dd,J=7.91,1.68Hz,1H),3.75-3.60(m,1H),3.60-3.45(m,1H),3.40-3.30(m,1H),2.79(dd,J=14.10,6.05Hz,1H),2.36(dd,J=14.10,10.21Hz,1H),2.10-1.80(m,4H),1.49(dd,J=15.58,8.30Hz,1H),1.45-1.20(m,4H),1.00-0.80(m,1H),0.87(s,9H)；¹³C(75MHz,DMSO-d6)：175.40,144.42,136.34,133.82,128.42,127.93,127.02,126.60,123.34,121.24,110.53,67.72,63.74,63.35,61.30,51.75,47.89,42.56,33.47,33.44,32.92,29.78,29.66,29.52,28.85；ESI：C₃₀H₃₉ ³⁵ClN₃O₃[M+H]⁺的计算值=524.27，实测值：524.44。

实施例21

C144的合成

反应方程式16

C144使用上述方法进行制备。C144的绝对立体化学用单晶X-射线晶体学确定。

C144的分析数据：¹H NMR(300MHz,CD₃Cl)：7.70-7.40(m,5H),7.50-7.00(m,9H),7.00-6.80(m,5H),6.80-6.60(m,2H),6.43(d,J=7.68Hz,1H),6.11(t,J=5.79Hz,1H),5.99(d,J=7.56Hz,1H),5.27(d,J=6.91Hz,1H),4.48(dd,J=14.79,6.31Hz,1H),4.34(d,J=6.91Hz,1H),4.21(dd,J=14.79,5.41Hz,1H),4.13(d,J=11.24Hz,1H),3.80(d,J=11.24Hz,1H),3.51(d,J=9.46Hz,1H),2.83(dd,J=15.40,9.46Hz,1H),1.32(d,J=15.40Hz,1H),0.76(s,9H)；¹³C(75MHz,CD₃Cl)：178.42,173.63,142.12,139.27,137.97,134.54,133.23,132.49,131.78,129.21,128.88,128.74,128.48,128.21,127.92,127.86,127.77,127.52,127.29,124.63,122.27,109.35,75.06,72.14,70.40,66.08,60.65,60.51,43.62,43.56,30.11,29.91；ESI：C₄₄H₄₆N₃O₃[M+H]⁺的计算值=664.35，实测值：664.36。

实施例22

MI-77301的细胞活性

MI-77301于各种肿瘤细胞中的活性如表6所示。细胞毒性浓度为其中观察到细胞死亡对应的细胞毒性指数的第一浓度。通过台盼蓝排除法于96小时定量细胞毒性，但CCF-STTG1为192小时(20-50%细胞死亡为中等，而>50%细胞死亡为高)。通过ATP分析测定抗增殖IC₅₀。

表6

实施例23

对22Rv1细胞系的细胞生长抑制及毒性效应

以前列腺癌细胞系22Rv1(来自DSMZ-Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH,序号DSMZ ACC438)评估MI-519-6401和MI-77301对其细胞生长抑制和细胞毒性效应。对于生长抑制分析，将细胞在MI-519-6401或MI-77301的存在下以96孔形式培养96小时。细胞接种条件调整至适合在此分析模式下得到显著的细胞生长。生长抑制分析使用Celltiter-Glo发光试剂盒(Promega)来进行。计算IC₅₀值(生长抑制百分比等于试验化合物的最大抑制作用一半时的浓度)，而两种化合物在此前列腺癌细胞系中的IC₅₀值范围值介于100nM至500nM之间。

对于毒性分析，将细胞与MI-519-6401或MI-77301于6-孔模式培养96小时。细胞接种条件调整至适合此分析模式下得到显著的细胞生长。使用台盼蓝染色测量细胞毒性效应。用台盼蓝将游浮的和粘附的两种细胞染色。用细胞活力分析仪(Beckmann-Coulter)测定细胞浓度和活细胞百分率，进行定量。在22Rv1细胞中，对于浓度接近IC₉₀(生长抑制百分比等于试验化合物的最大抑制作用百分之90时的浓度)的两种化合物，相较于未经处理的细胞，其活细胞的百分比显著下降，且最佳介于50至70%之间。

实施例24

细胞凋亡分析

使用膜联蛋白V-FLUOS/碘化丙锭染色试剂盒(Roche Applied Science)按照制造商的说明书测定细胞凋亡。早期的凋亡细胞显现磷脂酰丝氨酸从内部移位到胞膜外表面，其可由膜联蛋白V荧光染色来检测。碘化丙锭(PI)染色测定晚期的凋亡细胞或坏死细胞。将总计0.25×10⁶个细胞装入6-孔组织培养放置过夜。第二天，在存在或不存在I-77301时处理粘附的细胞，并于37°C培养2.5天。使用0.05%胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)以共同收集游浮的和粘附细胞群来采集细胞，并用PBS清洗。接着，将细胞于培养缓冲液中，于室温黑暗中用膜联蛋白V-FLUOS和PI染色10分钟。可使用各0.5μl的膜联蛋白V-FLUOS和PI(取代使用说明书中所提的各2μl)染色来进行改进。在本分析中，这些改进可减少背景噪声，特别是荧光。取得细胞并用流式细胞仪分析。膜联蛋白V+/PI-细胞记载为早期凋亡细胞，而膜联蛋白V+/PI+细胞则为晚期凋亡细胞。分析的结果如图27所示。

实施例25

小鼠的SK-Mel-103异种移植模型中的体内有效性

药物制备

将MI-77301以所需的浓度溶于10%PEG400(聚乙二醇，摩尔重量400,Sigma#P3265)、3%Cremophor EL(Sigma#C5135)及87%1X PBS(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)(每天新鲜制备并于1小时内口服给药)。使用前检查药物溶液的pH，PO(管饲)给药需介于pH3.0至9.0之间而IV(静脉)给药为pH4.5至9.0之间。当需要时，用0.5N NaOH调整溶液的pH。

细胞培养

将人黑色素瘤细胞SK-MEL-103在37°C、95%空气、5%二氧化碳下培养于添加10%FBS和青霉素/链霉素的培养基(含2.05mML-谷氨酰胺,0.1μM无菌过滤的

中，并每周传代培养两次。

异种移植肿瘤细胞注射

用胰蛋白酶(0.05%)-EDTA(0.53mM)(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)采集供异种移植的肿瘤细胞，加入生长培养基并将细胞置于冰上。将细胞样本与台盼蓝(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)以1:1混合并于血细胞计数器上计数，以测定活的/死的细胞数。将细胞以1X PBS(GIBCO^TM,Invitrogen Corp.)清洗一次并再悬浮于PBS中。将0.1mL的细胞以27号针头经皮下(s.c.)注射至各小鼠的侧腹。对于Matrigel注射，在PBS中清洗后，将细胞再悬浮于冰冷的1:1PBS和Matrigel(BD Biosciences,Invitrogen Corp.)的混合物中，最终的Matrigel蛋白浓度为5mg/mL。将SK-MEL-103肿瘤以0.1mL的Matrigel5x10⁶个细胞接种至SCID小鼠(UM培育品种：236C.B-17SCID,Charles River)。在肿瘤注射后4-5天开始治疗。

异种移植肿瘤生长和重量监测

使用测径器测量生长在小鼠内的肿瘤的二维大小。肿瘤体积(mm³)=(AxB²)/2，其中A和B分别为肿瘤长度和宽度(以mm表示)。在治疗期间，一周测量三次肿瘤体积和体重。停止治疗后，至少一周测量一次肿瘤体积和体重，并将小鼠再豢养60天以进一步观察肿瘤生长和毒性。

毒性和终点的评估

肿瘤不能超过动物体重的10%。若动物具有两个或多个肿瘤，则所有肿瘤的总重不能超过动物体重的10%。在实验结束时，或当肿瘤的大小接近动物体重的10%时，将动物施以安乐死。将完全患病或重量减少超过体重20%的动物施以安乐死。

在本分析中，100mg/kg PO的MI-77301的有效性如图29所示。

现已完整地公开了本发明提供的方法、化合物和组合物，本领域技术人员将理解，在不影响本文提供的方法、化合物和组合物或其任何实施方案的范围的情况下，能够在较宽和同等范围的条件、制剂和其他参数之下实施本发明。本文引用的所有专利、专利申请和出版物均整体引入并作参考。

Claims (67)

1.具有式XII的化合物，

其中：

R^１a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯;

R²选自芳烷基和：

其中：

R^25a,R^25b,R^25c,R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯;

R³选自任选被取代的C₁-C₈烷基和任选被取代的芳基；

R⁴选自氢和任选被取代的C₁-C₆烷基；

R⁵选自：

其中：

R^１４选自氢和任选被取代的C_１-C₄烷基;

X选自O、S及NR'；

Y选自O、S及NR"；

R'选自氢和任选被取代的C₁-C₄烷基；且

R"选自氢、任选被取代的C₁-C₄烷基及-COCH₃，

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1的化合物，其中：

R²为：

R^３为任选被取代的C_１-C₈烷基;

R⁵选自：

且

R"选自氢和任选被取代的C_１-C₄烷基，

或其药学上可接受的盐。

3.如权利要求2的化合物，其中R⁴为氢，或其药学上可接受的盐。

4.如权利要求2的化合物，其中X为NH，或其药学上可接受的盐。

5.如权利要求2的化合物，其中Y为NH，或其药学上可接受的盐。

6.如权利要求2的化合物，其中R³为-CH₂C(CH₃)₃，或其药学上可接受的盐。

7.如权利要求2的化合物，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐。

8.如权利要求2的化合物，其中：

R^1a为氢；

R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R³为C₄-C₈烷基；

R⁴为氢；

R⁵选自：

且

X和Y为NH;

或其药学上可接受的盐。

9.如权利要求7或8的化合物，其中R⁵选自：

或其药学上可接受的盐。

10.具有式XXXV的化合物，

其中：

R^1b和R^1c独立地选自氢、氟和氯;

R³为C₄-C₈烷基；且

R^25a、R^25b和R^25c各自独立地选自氢、氟和氯，

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，

或其药学上可接受的盐。

11.如权利要求2的化合物，其选自：

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

12.如权利要求1的化合物，其选自：

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

13.化合物，其选自：

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

14.具有下列结构的化合物，

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

15.具有下列结构的化合物，

其中该化合物基本上不含一种或多种其它的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

16.如权利要求1-15中任一项的化合物，其中该化合物为基本上纯的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

17.如权利要求16的化合物，其中该化合物为纯的立体异构体，或其药学上可接受的盐。

18.药物组合物，其包含如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

19.药物组合物，其包含如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗过度增殖性疾病。

20.一种治疗患者的方法，其包括给予所述患者治疗有效量的如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该患者患有过度增殖性疾病。

21.一种治疗患者的方法，其包括给予患者治疗有效量的如权利要求18的组合物，其中该患者患有过度增殖性疾病。

22.如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗过度增殖性疾病。

23.如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗过度增殖性疾病的药物中的用途。

24.如权利要求19的药物组合物，其中该过度增殖性疾病为癌症。

25.如权利要求20或21的方法，其中该过度增殖性疾病为癌症。

26.如权利要求22的化合物或其药学上可接受的盐，其中该过度增殖性疾病为癌症。

27.如权利要求23的方法，其中该过度增殖性疾病为癌症。

28.如权利要求24的药物组合物，其中该癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

29.如权利要求25的方法，其中该癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

30.如权利要求26的化合物，其中该癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

31.如权利要求27的用途，其中该癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

32.如权利要求28的药物组合物，其中该癌症选自脂肪肉瘤和黑色素瘤。

33.如权利要求29的方法，其中该癌症选自脂肪肉瘤和黑色素瘤。

34.如权利要求30的化合物，其中该癌症选自脂肪肉瘤和黑色素瘤。

35.如权利要求31的用途，其中该癌症选自脂肪肉瘤和黑色素瘤。

36.如权利要求25的方法，其中该癌症的细胞表达功能性p53。

37.如权利要求25的方法，进一步包括给予患者一种或多种抗癌剂。

38.如权利要求37的方法，其中该抗癌剂为化疗剂。

39.如权利要求37的方法，其中该抗癌剂为放射治疗。

40.如权利要求25的方法，其中该方法包括脉冲剂量式给予患者该化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物。

41.如权利要求40的方法，其中该化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物每周一天、每两周一天、每三周一天或每四周一天给予患者。

42.一种治疗患者的方法，其中该患者患有癌症并用抗癌剂治疗，该方法包括给予该患者如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

43.一种治疗患者的方法，该患者患有癌症并用抗癌剂治疗，该方法包括给予该患者如权利要求18的药物组合物。

44.如权利要求42或43的方法，其中该患者经历选自粘膜炎、口腔炎、口干症、脱发及胃肠道病症的抗癌剂治疗的副作用。

45.如权利要求42或43的方法，其中该癌症的细胞表达功能性p53。

46.试剂盒，其包括如权利要求1-17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及用于将化合物或其药学上可接受的盐给予患有癌症的患者的说明书。

47.试剂盒，其包括如权利要求18的药物组合物，以及用于将该药物组合物给予患有癌症的患者的说明书。

48.如权利要求46或47的试剂盒，其中该癌症选自黑色素瘤、肺癌、肉瘤、结肠癌、前列腺癌、绒毛膜癌、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、胃癌、急性髓性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

49.如权利要求46或47的试剂盒，进一步包括一种或多种抗癌剂。

50.如权利要求46或47的试剂盒，其中该说明书指示化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物与一种或多种抗癌剂共同给予。

51.如权利要求46或47的试剂盒，其中该说明书涉及脉冲剂量式给予患者化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物。

52.一种制备具有式XXXVII化合物的方法，

该方法包括将具有式XXXVI的化合物：

异构化为具有式XXXVII的化合物，

其中：

R³²选自-OR³³及-NR^34aR^34b；

R³³选自氢、烷基和芳烷基；

R^34a选自氢、任选被取代的烷基、任选被取代的环烷基、芳烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基；

R^34b选自氢和烷基；

R^1a、R^1b、R^1c和R^1d各自独立地选自氢、氟和氯；

R²选自芳烷基和：

R^25a,R^25b,R^25c,R^25d和R^25e各自独立地选自氢、氟和氯；且

R³选自任选被取代的C₁-C₈烷基和任选被取代的芳基。

53.如权利要求52的方法，其中该溶剂选自乙腈、甲醇、乙酸乙酯和水，或其混合物。

54.如权利要求52或53的方法，其中该异构化作用在低于pH7进行。

55.如权利要求52或53的方法，其中该异构化作用在pH7进行。

56.如权利要求52或53的方法，其中该异构化作用在高于pH7进行。

57.如权利要求52-54中任一项的方法，其中该异构化作用在选自三氟乙酸和乙酸的酸的存在下进行。

58.如权利要求52、53或56中任一项的方法，其中该异构化作用在NaHCO₃存在下进行。

59.如权利要求52-58中任一项的方法，其中该异构化作用在约20°C至约100°C的温度进行。

60.如权利要求52-59中任一项的方法，其中R³²为-OR³³。

61.如权利要求52-59中任一项的方法，其中R³²为-NR^34aR^34b。

62.如权利要求61的方法，其中R^34b为氢且R^34a选自烷基、羟基烷基、羟基环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂芳基。

63.如权利要求62的方法，其中R^34a选自：

64.如权利要求52-63中任一项的方法，其中分离出的式XXXVII化合物为基本上纯的立体异构体。

65.如权利要求64的方法，其中分离出的具有式XXXVII的化合物为纯的立体异构体。

66.如权利要求52-65中任一项的方法，其中：

R³²为-NR^34aR^34b；

R^34a为：

R^33b为氢；

R²为：

且

R³为C₁-C₈烷基。

67.如权利要求52的方法，进一步包括分离出具有式XXXVII的化合物，其基本上不具有式XXXVI化合物。

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