CN101528037A

CN101528037A - 使用saha和硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的方法

Info

Publication number: CN101528037A
Application number: CNA200780040133XA
Authority: CN
Inventors: A·Z·巴罗斯
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: University of Maryland Baltimore
Priority date: 2006-11-03
Filing date: 2007-11-02
Publication date: 2009-09-09
Also published as: JP2010509221A; US20100113392A1; WO2008057456A2; WO2008057456A3; CA2667348A1; AU2007317921A1; EP2086323A2; EP2086323A4

Abstract

本发明涉及治疗患者癌症的方法，该方法给予需要其的患者第一个数量的组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)或其可药用盐或水合物，和第二个数量的一或多种抗癌药剂，包括硼替佐米。可以给予治疗有效量的HDAC抑制剂和抗癌剂。在各个方面，HDAC抑制剂和抗癌剂的效果可以是相加或协同的。

Description

使用SAHA和硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请序列号60/856,462(2006年11月3日申请)的权益。

本文中引用的每个申请和专利，以及在每个申请和专利(包括在每个颁发的专利审查期间；“申请引用的文献”)中引用的每个文献或参考文献，和相当于和/或主张其优先权的任何这些申请和专利的每个美国和外国申请，和在每个申请引用的文献中的每个引用的文献或参考文献，在此明确地引入本文作为参考。一般地说，在本文中在权利要求书之前的引用表中或者在本文本身中引用了文献或参考文献；且这些文献或参考文献的每一个(“本文-引用的参考文献”)，以及每个在每个本文引用的参考文献中引用的文献或参考文献(包括任何制造商的说明书，指导书，等等)，在此明确地引入本文作为参考。作为参考引入到本文中的文献可以在本发明的实践中使用。

发明领域

本发明涉及治疗多发性骨髓瘤的方法，该方法包括：与一或多种抗癌剂组合给予组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)，抗癌剂包括硼替佐米(Bortezomib)。合并数量合起来可以包括治疗有效量。

发明背景

多发性骨髓瘤(浆细胞的B细胞恶性肿瘤)代表第二种最普通的血液恶性肿瘤。在美国，年发病率是每100,000人中大约有4个人。每年确诊大约13,600个多发性骨髓瘤的病例。由于该疾病，每年大约11,200人死亡，占所有癌症死亡者中的大约2％。

多发性骨髓瘤的特点在于：浆细胞的单一克隆的肿瘤增殖参与单克隆免疫球蛋白的产生。虽然多发性骨髓瘤细胞起初对放射治疗和化学治疗敏感，但持久的完全响应是稀少的，并且最初响应的几乎所有患者最终会旧病复发。由于疾病的发展，对感染的抗性降低、显著的骨胳毁坏(骨骼疼痛、病理性骨折和高钙血症)、贫血、肾衰竭和粘滞性过高引起发病和最终的死亡。迄今为止，常规治疗方法不会导致长期的无病存活率，这就突出了开发新药来治疗该不治之症的重要性。

人们经常尝试通过诱导肿瘤细胞的终末分化来治疗癌症(M.B.，Roberts，A.B.，和Driscoll，J.S.(1985)，Cancer：Principles and Practice ofOncology，eds.Hellman，S.，Rosenberg，S.A.，和DeVita，V.T.，Jr，Ed.2，(J.B.Lippincott，Philadelphia)，P.49)。在细胞培养模型中，已经报道的是，使细胞与各种刺激物接触可以产生分化，刺激物包括：环化AMP和视黄酸(Breitman，T.R.，Selonick，S.E.，和Collins，S.J.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：2936-2940；Olsson，I.L.和Breitman，T.R.(1982)Cancer Res.42：3924-3927)，阿柔比星及其它蒽环类抗生素(Schwartz，E.L.和Sartorelli，A.C.(1982)Cancer Res.42：2651-2655)。有大量的证据表明，致瘤性转化不一定破坏癌细胞分化的潜力(Sporn等人；Marks，P.A.，Sheffery，M.，和Rifkind，R.A.(1987)Cancer Res.47：659；Sachs，L.(1978)Nature(Lond.)274：535)。

有许多肿瘤细胞的例子，它们不对正常的增殖调节剂作出反应，似乎在其分化程序的表达方面受到了阻滞，但仍然可能诱导其分化和停止复制。各种药剂可以引起各种转化的细胞系和原发性人肿瘤外植体，以表达更多的分化特征。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)属于这种类别的药剂，其具有诱导肿瘤细胞生长抑制、分化和/或细胞程序死亡的能力(Richon，V.M.，Webb，Y.，Merger，R.等人，(1996)PNAS 93：5705-8)。这些化合物针对肿瘤细胞变成恶性细胞的固有能力的机理作为靶向，因为以抑制动物肿瘤生长的有效剂量来使用它们似乎不具有毒性(Cohen，L.A.，Amin，S.，Marks，P.A.，Rifkind，R.A.，Desai，D.，和Richon，V.M.(1999)Anticancer Research 19：4999-5006)。

在核小体组蛋白的翻译后的乙酰化期间，HDACs施加它们的靶向作用，其影响染色质结构，由此调节基因表达。围绕凝聚、非乙酰化组蛋白所环绕的DNA是转录非活性的，而N-末端组蛋白赖氨酸残基的乙酰化作用使DNA与可促进转录活性的重要转录因子接触(Workman andKingston，1998；Arts等人，2003)。通过组蛋白乙酰基转移酶(HATS)和HDACs来调节组蛋白乙酰化作用和脱乙酰作用之间的动态平衡。HDACs对核小体组蛋白的作用导致染色质的紧密螺旋、和各种基因的表达停止，包括涉及细胞存活、增殖、分化和细胞程序死亡的调节的那些表达(Jones和Baylin，2002)。HDACs的效果不局限于组蛋白脱乙酰作用。HDACs还充当蛋白质络合物的成员，以便对基因的启动子区补充转录因子，包括那些肿瘤抑制剂，并且它们影响特异性(specific)细胞周期调节蛋白的乙酰化状态(Arts等人，2003)。

大量证据证明了HDAC抑制剂与一些其它药剂体外组合的效果。例如，SAHA和DNA去甲基化药剂(5-氮胞苷或地西他滨)的联用可以协同起作用，在各种癌细胞系中引起细胞程序死亡、分化和/或细胞生长抑制(Tabe等人，2002；Zhu和Otterson，2003)。进一步的，当SAHA与抗代谢物5-氟尿嘧啶结合时，在自然型和突变株-p53结肠直肠癌细胞中，可以观察到超相加至相加的抗增殖效果(Di Gennaro等人，2003)。通过增加Bcr-Abl表达，SAHA与

一起对抵御的慢性粒性白血病(CML)细胞是有效的(Nimmanapalli等人，2003；Yu等人，2003)。这些研究提出，SAHA与某些抗癌症药剂组合可以有效地组合实现所需要的治疗效能。

除增加治疗效能的目标以外，组合治疗的另一个目的是在得到的组合中潜在降低单一组分的剂量，以便降低由高剂量单一组分所引起的有害或不良的副作用。由此，急需发现合适的治疗癌症例如多发性骨髓瘤的方法，包括可导致副作用降低和可有效治疗和控制恶性肿瘤的组合治疗。

本发明概述

本发明基于下列发现：组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)可以与硼替佐米(Bortezomib)组合使用，提供相加或协同治疗效果。硼替佐米(Bortezomib)以名称

销售。

本发明涉及治疗多发性骨髓瘤的方法，包括给予需要其的患者适量的HDAC抑制剂例如SAHA、和适量的另一种抗癌症药剂例如硼替佐米(Bortezomib)。在本发明的具体方面中，对于21天周期的第4-11天的至少一个治疗周期，每天口服给予200mg至800mg SAHA或其可药用盐或水合物，对于21天周期的第1、4、8和11天的至少一个治疗周期，每天静脉内给予0.7-1.3mg/m²硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。在具体实施方案中，多发性骨髓瘤是复发性和难治疗的多发性骨髓瘤。

本发明进一步涉及可用于治疗多发性骨髓瘤的药物组合，其包含适量的HDAC抑制剂例如SAHA和适量的抗癌症药剂例如硼替佐米(Bortezomib)。

在进一步实施方案中，以任何连续顺序、以任何交替顺序、同时或其任一组合来进行治疗过程。尤其是，HDAC抑制剂例如SAHA的给予和抗癌症药剂例如硼替佐米(Bortezomib)的给予可以同时进行、连续进行或例如交替的同时进行和顺序给予。

本发明进一步涉及选择性的引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的方法，由此抑制患者中的这种细胞的增殖，该方法给予患者适量的HDAC抑制剂例如SAHA、适量的抗癌症药剂例如硼替佐米(Bortezomib)，其中以有效引起细胞的终末分化、细胞生长抑制或细胞程序死亡的数量给予HDAC抑制剂和硼替佐米(Bortezomib)。

在一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以100mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以200mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以300mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以400mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以400mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以500mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以600mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至多八个治疗周期，重复给予SAHA或其可药用盐或水合物。

在本发明的另一个方面，在21天当中的第1、4、8和11天，以1mg/m²的剂量每日给予一次硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在本发明的又一个方面，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，或以1.0mg/m²的总日剂量给予其可药用盐或水合物。

在本发明的又一个方面，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，或以1.3mg/m²的总日剂量给予其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以200mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，以300mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和或以1.3mg/m²的总日剂量给予其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以400mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以400mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以500mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，以600mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，用SAHA和硼替佐米(Bortezomib)治疗多发性骨髓瘤的方法进一步包括：口服给予地塞米松或其可药用盐或水合物，其中对于21天当中的5天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每日给予一次地塞米松或其可药用盐或水合物。

在进一步实施方案中，治疗多发性骨髓瘤的方法包括：对于21天当中的第4-8天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每日口服给予一次地塞米松。

在又一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的治疗周期，用SAHA口服每天一次给予400mg至少一个治疗周期，和对于21天周期的第1、4、8和11天，每天静脉内给予1.3mg/m²硼替佐米至少一个治疗周期。

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学名词具有与本发明所涉及的本领域普通技术人员通常所理解的含义的相同含义。虽然可以在本发明实践中使用与本文所描述那些相似的方法和物质或等效物，但合适方法和物质描述如下。本文中提及的所有的出版物、专利申请、专利及其它参考文献以其整体明确地引入作为参考。在出现矛盾的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，本文中描述的物质、方法和实施例仅仅是说明性的，不是用来限制的。

由下列详细说明和权利要求，本发明的其它特征和优势是显而易见的，并且由下列详细说明和权利要求所包括。

本发明的详细说明

出乎意料地发现，包括给予本文所描述的HDAC抑制剂SAHA和本文所描述的硼替佐米(Bortezomib)的组合治疗方法可以提供协同治疗效果。每个治疗(给予HDAC抑制剂和给予硼替佐米(Bortezomib))用于提供治疗有效的治疗。

本发明进一步涉及治疗患者多发性骨髓瘤的方法，在一种治疗程序中，给予需要其的患者适量的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)或其可药用盐或水合物，在另一种治疗程序中，给予适量的抗代谢药剂例如硼替佐米(Bortezomib)，其中数量可以包括治疗有效量。SAHA和硼替佐米(Bortezomib)的癌症治疗效果可以是相加或协同的。

在一方面，在第一个治疗程序中，该方法包括给予需要其的患者第一个数量的SAHA或其可药用盐或水合物和另一数量的硼替佐米(Bortezomib)。本发明进一步涉及可用于治疗癌症或其它疾病的药物组合物。在一方面，药物组合物包含第一个数量的HDAC抑制剂例如SAHA或其可药用盐或水合物，和另一数量的抗癌症药剂例如硼替佐米(Bortezomib)或其可药用盐或水合物。第一和第二数量可以包括治疗有效量。

本发明进一步涉及选择性的引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的方法，由此抑制患者中的这种细胞的增殖，该方法给予患者适量的HDAC抑制剂例如SAHA、适量的抗癌症药剂例如硼替佐米，其中以有效引起细胞的终末分化、细胞生长抑制或细胞程序死亡的数量给予HDAC抑制剂和硼替佐米。

本发明进一步涉及选择性的引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的体外方法，由此抑制这种细胞的增殖，该方法使细胞与适量的HDAC抑制剂例如SAHA、适量的抗癌症药剂例如硼替佐米接触，其中HDAC抑制剂和第二个(任选第三个和/或第四个)抗癌症药剂是以有效引起细胞的终末分化、细胞生长抑制或细胞程序死亡的数量给予的。

鉴于与两种治疗方式相关的差分毒性，本发明的组合治疗提供了治疗优越性。例如，用HDAC抑制剂进行治疗可以导致用抗癌症药剂治疗所不能看到的具体毒性，反之亦然。因此，这种差分毒性可每个治疗以容许以不存在所述毒性或所述毒性最小的剂量给药，因此组合治疗可提供治疗剂量，同时避免了组合物药剂的每个组成部分的毒性。此外，当由于组合治疗而达到的治疗效果具有增强或协同效果时，例如，显著地超过相加治疗效果，可以进一步降低每个药剂的剂量，由此更大程度地降低相关毒性。

定义

就本发明而论，在各种语法形式中，术语“治疗”是指预防(即化学预防)、治愈、逆转、减少、减轻、减到最小、抑制或中止疾病状态的有害影响、疾病进展、疾病病原体(例如细菌或病毒)或其它异常状态。例如，治疗可以包括减轻疾病的症状(即非必需的所有症状)或减少疾病的进展。因为一些本发明方法包括物理除去病原体，技术人员可以认识到，它们在给予本发明化合物的情况下是一样有效的，本发明化合物可以在接触病原体之前、与其同时(预防性治疗)和在接触病原体之后(甚至接触很久以后)给予本发明化合物的情况下进行给予。

本文使用的癌症的治疗是指在哺乳动物例如人中部分或完全抑制、迟滞或防止癌症(包括癌症转移)的进展；抑制、迟滞或防止癌症(包括癌症转移)的反复；或预防癌症的发病或形成(化学预防)。此外，本发明的方法用于患有癌症的人类患者的化学预防的治疗。然而，该方法也可以在其它哺乳动物中有效治疗癌症。

本发明的“抗癌药剂”包括本文所描述的那些，包括这种药剂的任何可药用盐或水合物，或任何游离酸，游离碱，或这种药剂的其它游离态，例如下列非限制性实例：A)极性化合物(Marks等人，(1987)；Friend，C.，Scher，W.，Holland，J.W.，和Sato，T.(1971)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)68：378-382；Tanaka，M.，Levy，J.，Terada，M.，Breslow，R.，Rifkind，R.A.，和Marks，P.A.(1975)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)72：1003-1006；Reuben，R.C.，Wife，R.L.，Breslow，R.，Rifkind，R.A.，和Marks，P.A.(1976)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)73：862-866)；B)维生素D和视黄酸的衍生物(Abe，E.，Miyaura，C.，Sakagami，H.，Takeda，M.，Konno，K.，Yamazaki，T.，Yoshika，S.，和Suda，T.(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)78：4990-4994；Schwartz，E.L.，Snoddy，J.R.，Kreutter，D.，Rasmussen，H.，和Sartorelli，A.C.(1983)Proc.Am.Assoc.Cancer Res.24：18；Tanenaga，K.，Hozumi，M.，和Sakagami，Y.(1980)Cancer Res.40：914-919)；C)甾体激素(Lotem，J.和Sachs，L.(1975)Int.J.Cancer 15：731-740)；D)生长因子(Sachs，L.(1978)Nature(Lond.)274：535，Metcalf，D.(1985)Science，229：16-22)；E)蛋白酶类(Scher，W.，Scher，B.M.，和Waxman，S.(1983)Exp.Hematol.11：490-498；Scher，W.，Scher，B.M.，和Waxman，S.(1982)Biochem.&Biophys.Res.Comm.109：348-354)；F)肿瘤促进剂(Huberman，E.和Callaham，M.F.(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)76：1293-1297；Lottem，J.和Sachs，L.(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)76：5158-5162)；和G)DNA或RNA合成的抑制剂(Schwartz，E.L.和Sartorelli，A.C.(1982)Cancer Res.42：2651-2655，Terada，M.，Epner，E.，Nudel，U.，Salmon，J.，Fibach，E.，Rifkind，R.A.，和Marks，P.A.(1978)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)75：2795-2799；Morin，M.J.和Sartorelli，A.C.(1984)Cancer Res.44：2807-2812；Schwartz，E.L.，Brown，B.J.，Nierenberg，M.，Marsh，J.C.，和Sartorelli，A.C.(1983)Cancer Res.43：2725-2730；Sugano，H.，Furusawa，M.，Kawaguchi，T.，和Ikawa，Y.(1973)Bibl.Hematol.39：943-954；Ebert，P.S.，Wars，I.，和Buell，D.N.(1976)Cancer Res.36：1809-1813；Hayashi，M.，Okabe，J.，和Hozumi，M.(1979)Gann 70：235-238)。

本文使用的术语“治疗有效量”用来限制组合治疗中的组合治疗数量。组合数量可以实现所需要的生物反应。在本发明中，所需要的生物反应是在哺乳动物例如人中部分或全部抑制、迟滞或防止癌症(包括癌症转移)的进展；抑制、迟滞或防止癌症(包括癌症转移)的反复；或防止癌症的发病或形成(化学预防)。

本文使用的术语“组合治疗”、“联合治疗”、“综合治疗”或“组合疗法”可互换使用，指的是用至少两种不同治疗剂进行个体的治疗。按照本发明的一个方面，用本文所描述的第一个治疗剂例如SAHA或另一个HDAC抑制剂来治疗个体。第二个治疗剂可以是另一个HDAC抑制剂，或可以是临床确定的抗癌症药剂(例如硼替佐米)，如本文所定义。组合治疗可以包括第三个或更进一步的治疗剂(例如地塞米松，如本文所定义)。组合治疗可以连续或同时进行。

本文列举的“HDAC抑制剂”(例如SAHA)包括任何合成、重组或天然存在的抑制剂，包括这种抑制剂的任何药物盐或水合物，和这种抑制剂的任何游离酸、游离碱或其它游离态。本文使用的“异羟肟酸衍生物”是指组蛋白脱乙酰基酶抑制剂类别，其是异羟肟酸衍生物。本文提供了抑制剂的具体例子。

本文使用的“类视黄醇”或“类视黄醇药剂”(例如3-甲基TTNEB)包括与一或多种类视黄醇受体结合的任何合成、重组或天然存在的化合物，包括这种药剂的任何可药用盐或水合物，和这种药剂的任何游离酸、游离碱或其它游离态。

“辅助药剂”是指用于增强抗癌症药剂效果的任何化合物，或用于预防或治疗与抗癌症药剂有关的病症例如血液指数低、中性白细胞减少、贫血、血小板减少、高钙血症、粘膜炎、淤青、流血、中毒、疲劳、疼痛、恶心和呕吐的化合物。

本文使用的术语“患者”或“个体”指的是治疗的接受者。包括温血动物和非温血动物患者。在具体实施方案中，患者是哺乳动物，例如人、犬、鼠、猫、牛、羊、猪或山羊。在具体实施方案中，患者是人。

本文使用的术语“周期性的”或“间歇性的”是指以正常或非正常间隔终止和开始。

术语“水合物”包括但不局限于半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等等。

组蛋白脱乙酰基酶和组蛋白脱乙酰基酶抑制剂

组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)包括：可以从核小体核组蛋白的氨基末端尾部的赖氨酸残基上催化除去乙酰基的酶。因此，HDACs可以与组蛋白乙酰基转移酶(HATs)一起调节组蛋白的乙酰化状态。组蛋白乙酰化可以影响基因表达，并且HDACs的抑制剂例如基于异羟肟酸的杂化极性化合物辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)可以体外引起转化细胞的生长抑制、分化和/或细胞程序死亡，和体内抑制肿瘤生长。

基于结构同源性，HDAC可以被分成三类。I类HDAC(HDAC1、2、3和8)与酵母菌RPD3蛋白相似，位于晶核中，并且可在与转录共抑制子有关的复合物中发现。II类HDAC(HDAC 4、5、6、7和9)与酵母菌HDA1蛋白相似，并且具有母核和胞质的亚细胞定位。I类和II类HDAC两者都可由基于异羟肟酸的HDAC抑制剂例如SAHA来抑制。III类HDAC形成NAD依赖性酶的结构上有距离的类别，其与酵母菌SIR2蛋白有关，并且不能由基于异羟肟酸的HDAC抑制剂来抑制。

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂或HDAC抑制剂是能够体内、体外或两者来抑制组蛋白的脱乙酰化的化合物。因此，HDAC抑制剂可以抑制至少一种组蛋白脱乙酰基酶的活性。由于抑制至少一种组蛋白的脱乙酰化，乙酰化组蛋白出现增加，并且乙酰化组蛋白的积聚是评价HDAC抑制剂活性的合适的生物标志物。因此，可以检验乙酰化组蛋白的积聚的方法，可用于测定重要化合物的HDAC抑制活性。当然，可以抑制组蛋白脱乙酰基酶活性的化合物还可以与其它基质结合，并因此可以抑制其它生物学活性分子例如酶。还应该理解，本发明的化合物能够抑制上面列出的任何组蛋白脱乙酰基酶或任何其它组蛋白脱乙酰基酶。

例如，在接受HDAC抑制剂的患者中，在用HDAC抑制剂治疗的外周单核细胞以及组织中，可以相对于合适对照物来测定乙酰化组蛋白的累积。

使用例如酶催试验(其显示可抑制至少一种组蛋白脱乙酰基酶)，可以体外测定具体化合物的HDAC抑制活性。进一步的，在用具体组合物治疗的细胞中，乙酰化组蛋白的积聚的测定，可能是化合物的HDAC抑制活性的决定因素。

乙酰化组蛋白的积聚的试验在文献中是众所周知的。参见例如，Marks，P.A.等人，J.Natl.Cancer Inst.，92：1210-1215，2000，Butler，L.M.等人，Cancer Res.60：5165-5170(2000)，Richon，V.M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，95：3003-3007，1998，和Yoshida，M.等人，J.Biol.Chem.，265：17174-17179，1990。

例如，测定HDAC抑制剂化合物的活性的酶催试验可以如下进行。简要地说，通过在没有基质的情况下、用表明数量的抑制剂化合物在冰上培养酶制剂大约20分钟，可以试验HDAC抑制剂化合物对纯化人类表位标记的(Flag)HDAC1的亲合效果。可以加入基质(源于[³H]乙酰基-标记的鼠红白血病细胞的组蛋白)，在37℃培养样品20分钟，总体积30μL。然后终止反应，可以提取释放的乙酸盐，通过闪烁计数测定放射性的释放量。可用于测定HDAC抑制剂化合物活性的另一个试验是“HDAC荧光活性试验；Drug Discovery Kit-AK-500”(得自于

ResearchLaboratories，Inc.，Plymouth Meeting，PA)。

体内试验可以进行如下。可以腹膜内给动物例如小鼠注入HDAC抑制剂化合物。所选择的组织例如脑、脾、肝等等，可以在给药后的预定时间分离。可以从组织中分离组蛋白，基本上如Yoshida等人，J.Biol.Chem.265：17174-17179，1990所描述。可以将相等数量的组蛋白(大约1μg)在15％ SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，并且可以转入Hybond-P过滤器(得自于Amersham)中。可以用3％乳液阻滞过滤器，并且可以用兔纯化的多克隆抗乙酰化组蛋白H4抗体(αAc-H4)和抗乙酰化组蛋白H3抗体(αAc-H3)(Upstate Biotechnology，Inc.)做为探针。可以使用辣根过氧化酶共轭的山羊抗兔抗体(1∶5000)和SuperSignal化学发光基质(Pierce)来显现乙酰化组蛋白的水平。当对组蛋白蛋白加载对照物时，可以运行平行凝胶剂，并且用考马斯蓝(CB)染色。

此外，已经显示，基于异羟肟酸的HDAC抑制剂可以上调p21_WAF1基因的表达。在各种转化细胞中，使用标准方法，用HDAC抑制剂培养2小时之内可以诱导p21_WAF1蛋白。p21_WAF1基因的诱导与该基因的染色质区域中的乙酰化组蛋白的积聚有关。因此，可以认为，在转化细胞中，p21_WAF1的诱导涉及由HDAC抑制剂所引起的G1细胞周期停滞。

授予一些本发明人的美国专利U.S.5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990公开了可用于选择性诱导肿瘤细胞的终末分化的化合物，该化合物具有两个极性端基团，两个极性端基团由亚甲基的挠性链或刚性的苯基来分开，其中极性端基团的一个或两个是大的疏水基。在分子的相同端，一些化合物具有额外的大疏水基作为第一个疏水基，其在酶催试验中可进一步提高分化活性大约100倍，在细胞分化试验中提高大约50倍。在上述专利中，用于本发明方法和药物组合物的化合物的合成方法得到了充分描述，本文将其全部内容引入作为参考。

由此，本发明包括宽范围的组合物，组合物包含HDAC抑制剂，其是1)异羟肟酸衍生物；2)短链脂肪酸(SCFAs)；3)环状四肽；4)苯甲酰胺；5)亲电子的酮；和/或能够抑制组蛋白脱乙酰基酶的任何其它类别的化合物，用于在肿瘤细胞中抑制组蛋白脱乙酰基酶、诱导终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡，和/或在肿瘤中诱导肿瘤细胞的分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡。

这种HDAC抑制剂的非限制性例子列在下面。当然，本发明包括本文所描述的HDAC抑制剂的任何盐、晶体结构、非晶形结构、水合物、衍生物、代谢物、立体异构体、结构异构体和前体药物。

A.异羟肟酸衍生物：例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)(Richon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，3003-3007(1998))；间羧基肉桂酸双羟酰胺(CBHA)(Richon等人，supra)；Pyroxamide；曲古抑菌素(Trichostatin)类似物例如曲古抑菌素A(TSA)曲古抑菌素C(Koghe等人1998.Biochem.Pharmacol.56：1359-1364)；水杨基二异羟肟酸(Andrews等人，International J.Parasitology 30，761-768(2000))；辛二酰二异羟肟酸(SBHA)(U.S.专利No.5,608,108)；壬二酸二异羟肟酸(ABHA)(Andrews等人，supra)；壬二酸-1-异羟肟酸-9-苯胺(AAHA)(Qiu等人，Mol.Biol.Cell 11，2069-2083(2000))；6-(3-氯苯基脲基)己氧肟酸(carpoic hydroxamic acid)(3Cl-UCHA)；Oxamflatin[(2E)-5-[3-[(苯基磺酰基)氨基苯基]-戊-2-烯-4-炔基氧肟酸](Kim等人，Oncogene，18：2461 2470(1999))；A-161906，Scriptaid(Su等人，2000Cancer Research，60：3137-3142)；PXD-101(Prolifix)；LAQ-824；CHAP；MW2796(Andrews等人，上文)；MW2996(Andrews等人，上文)；或在美国专利U.S.5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990中公开的异羟肟酸。

B.环状四肽：例如Trapoxin A(TPX)-环状四肽(环(L-苯丙氨酰L-苯丙氨酰D-(2-甲基哌啶基)-L-2-氨基-8-氧代-9，10-环氧癸酰基))(Kijima等人，J.Biol.Chem..268，22429-22435(1993))；FR901228(FK 228，depsipeptide)(Nakajima等人，Ex.Cell Res.241，126-133(1998))；FR225497环状四肽(H.Mori等人，PCT Application WO 00/08048(2000年2月17日))；Apicidin环状四肽[环(N-O-甲基-L-色氨酰-L-异亮氨酸基-D-(2-甲基哌啶基)-L-2-氨基-8-氧代癸酰基)](Darkin-Rattray等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，13143-13147(1996))；Apicidin Ia，ApicidinIb，Apicidin Ic，Apicidin IIa，和Apicidin IIb(P.Dulski等人，PCT申请WO 97/11366)；CHAP，HC-toxin环状四肽(Bosch等人，Plant Cell 7，1941-1950(1995))；WF27082环状四肽(PCT申请WO 98/48825)；和Chlamydocin(Bosch等人，上文)。

C.短链脂肪酸(SCFA)衍生物：例如：丁酸钠(Cousens等人，J.Biol.Chem.254，1716-1723(1979))；异戊酸盐(McBain等人，Biochem.Pharm.53：1357-1368(1997))；戊酸盐(McBain等人，上文)4-苯基丁酸盐(4-PBA)(Lea和Tulsyan，Anticancer Research，15，879-873(1995))；苯基丁酸盐(PB)(Wang等人，Cancer Research，59，2766-2799(1999))；丙酸盐(McBain等人，上文)；丁酰胺(Lea和Tulsyan，上文)；异丁酰胺(Lea和Tulsyan，上文)；苯乙酸盐(Lea和Tulsyan，上文)；3-溴丙酸盐(Lea和Tulsyan，上文)；三丁精(Tributyrin)(Guan等人，CancerResearch，60，749-755(2000))；丙戊酸，丙戊酸盐，和Pivanex^TM。

D.苯甲酰胺衍生物：例如CI-994；MS-275[N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧羰基)氨甲基]苯甲酰胺](Saito等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，4592-4597(1999))；和MS-275的3′-氨基衍生物(Saito等人，上文)。

E.亲电子的酮衍生物：例如三氟甲基酮(Frey等人Bioorganic &Med.Chem.Lett.(2002)，12，3443-3447；U.S.6,511,990)和α-酮酰胺例如N-甲基-α-酮酰胺。

F.其它HDAC抑制剂：例如天然产物，psammaplins和Depudecin(Kwon等人1998..PNAS 95：3356-3361)。

基于异羟肟酸的HDAC抑制剂包括辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、间羧基肉桂酸二异羟肟酸盐(CBHA)和pyroxamide。已经显示，SAHA可以在组蛋白脱乙酰基酶的催化凹穴直接结合。SAHA可以诱导培养中的转化细胞的细胞周期停滞、分化和/或细胞程序死亡，并且可以在啮齿类中抑制肿瘤生长。SAHA在实质固态瘤和血液癌症中可有效引起这些效果。已经表明，SAHA可在动物中有效抑制肿瘤生长，同时对动物没有毒性。SAHA引起的肿瘤生长的抑制，与肿瘤中的乙酰化组蛋白的积聚有关。在大鼠中，SAHA可有效抑制致癌物质引起的(N-甲基亚硝基脲)乳腺肿瘤的形成和继续生长。在大鼠的饮食中，在130天的研究期间，给予大鼠SAHA。由此，SAHA是非毒性的、口服活性抗癌剂，其作用机理包括抑制组蛋白脱乙酰基酶活性。

HDAC抑制剂包括：授予本发明人的U.S.专利5,369,108、5,932,616、5,700,811、6,087,367和6,511,990中公开的化合物，本文将其全部内容引入作为参考，其非限制性的例子列在下面：

具体HDAC抑制剂包括辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA；N-羟基-N′-苯基辛烷二酰胺)，其由下列结构式代表：

这种化合物及其它HDAC抑制剂的其它例子可以在下列中得到：美国专利U.S.5,369,108，1994年11月29日颁发，美国专利U.S.5,700,811，1997年12月23日颁发，美国专利U.S.5,773,474，1998年6月30日颁发，美国专利U.S.5,932,616，1999年8月3日颁发，和美国专利U.S.6,511,990，2003年1月28日颁发，都颁发给Breslow等人；美国专利U.S.5,055,608，1991年10月8日颁发，美国专利U.S.5,175,191，1992年12月29日颁发，和美国专利U.S.5,608,108，1997年3月4日颁发，都颁发给Marks等人；以及Yoshida，M.，等人，Bioassays 17，423-430(1995)；Saito，A.，等人，PNAS USA 96，4592-4597，(1999)；Furamai R.等人，PNAS USA 98(1)，87-92(2001)；Komatsu，Y.，等人，Cancer Res.61(11)，4459-4466(2001)；Su，G.H.，等人，Cancer Res.60，3137-3142(2000)；Lee，B.I.等人，Cancer Res.61(3)，931-934；Suzuki，T.，等人，J.Med.Chem.42(15)，3001-3003(1999)；公开的PCT申请WO 01/18171，2001年3月15日公开，Sloan-Kettering Institute for Cancer Research和The Trustees ofColumbia University；公开的PCT申请WO 02/246144，Hoffmann-LaRoche；公开的PCT申请WO 02/22577，Novartis；公开的PCT申请WO 02/30879，Prolifix；公开的PCT申请WO 01/38322(2001年5月31日公开)、WO 01/70675(2001年9月27日公开)和WO 00/71703(2000年11月30日公开)，所有的都属于Methylgene，Inc.；公开的PCT申请WO 00/21979，1999年10月8日公开，Fujisawa Pharmaceutical Co.，Ltd.；公开的PCT申请WO 98/40080，1998年3月11日公开，BeaconLaboratories，L.L.C.；和Curtin M.(Current patent status of HDACinhibitors Expert Opin.Ther.Patents(2002)12(9)：1375-1384，和在其中引用的参考文献)。

SAHA或任何其它HDACs可以按照实验细节部分列出的方法来合成，或按照美国专利U.S.5,369,108、5,700,811、5,932,616和6,511,990列出的方法来合成，引入其整体内容作为参考，或按照本领域技术人员已知的任何其它方法来合成。

HDAC抑制剂的具体非限制性例子提供于下表中。应注意，本发明包括结构上与下面所表示的化合物相似的、和能够抑制组蛋白脱乙酰基酶的任何化合物。

立体化学

许多有机化合物存在具有能够转动平面偏光的平面的光学活性形式。在描述旋光性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示围绕分子手性中心的分子的绝对构型。使用前缀d和1或(+)和(-)，以标明平面偏光被化合物旋转的方向，(-)或是指化合物是左旋性的。带有(+)或d前缀的化合物是右旋的。对于给定化学结构，这些化合物(称为立体异构体)是相同的，只不过它们是彼此不能重叠的镜像。特殊的立体异构体还可以称为对映体，这种异构体的混合物常常称为对映体的混合物。对映体的50∶50混合物称为外消旋混合物。

本文描述的许多化合物可以具有一个或多个手性中心，因此可以存在不同的对映体形式。如果需要的话，手性碳可以用星号(^*)标明。在本发明的式中，当将与手性碳的键描写成直线时，应该理解其是手性碳的两个(R)和(S)构型，因此两个对映体和其混合物包括在该式之内。正如本领域使用的那样，当希望说明手性碳的绝对构型时，手性碳的一个键可以被描绘成楔形(与平面上面原子成的键)，把另一个描写成一系列短平行线或楔形的短平行线(与平面下面原子成的键)。Cahn-Inglod-Prelog系统可用于指定手性碳的(R)或(S)构型。

当本发明的HDAC抑制剂含有一个手性中心时，该化合物存在两种对映体形式，本发明包括两种对映体和对映体的混合物，例如称为外消旋混合物的具体50∶50混合物。可以用本领域技术人员已知的方法拆分对映体，例如形成可以分离的非对映异构体盐，例如，利用结晶(参见，CRC Handbook of Optical Resolutions via Diastereomeric Salt Formationby David Kozma(CRC Press，2001))；形成可以分离的非对映异构体的衍生物或复合物，例如，利用结晶、气液或液相色谱；一个对映体与对映体特定试剂进行选择性反应，例如酶催的酯化；或在手性环境下的气-液或液相色谱，例如在手性载体例如硅胶上(其带有结合的手性配体)，或在手性溶剂的存在下。应理解，如果通过如上所述分离方法之一将所需要的对映体转变为另一种化学个体，要求其它步骤，以释放出所需要的对映体形式。或者，可以使用光学活性的试剂、基质、催化剂或溶剂，通过不对称合成来合成特定对映体，或利用非对称转化将一个对映体转化为另一个对映体。

应理解，在本发明化合物的手性碳处的具体绝对构型的符号是指标明对映体形式的化合物是对映体过量(ee)的，换句话说，基本上没有另一个对映体。例如，化合物的“S”形式基本上没有化合物的“R”形式，并由此是“S ”形式的对映体过量。相反，化合物的“R”形式基本上不含化合物的“S”形式，并由此是“R”形式的对映体过量。本文使用的对映体过量是存在的具体对映体大于50％。例如，对映体过量可以是大约60％或更多，例如大约70％或更多，例如大约80％或更多，例如大约90％或更多。在具体实施方案中，当标明具体绝对构型时，所描述化合物的对映体过量至少是大约90％。在更具体实施方案中，化合物的对映体过量至少是大约95％，例如至少大约97.5％，例如至少99％对映体过量。

当本发明化合物具有两个或多个手性碳时，它可以具有两个以上旋光异构体，并且可以存在非对映异构体的形式。例如，当有两个手性碳时，化合物可以具有至多4个旋光异构体和2对对映体((S，S)/(R，R)和(R，S)/(S，R))。一对对映体(例如(S，S)/(R，R))是彼此镜象的立体异构体。不是镜像的立体异构体(例如(S，S)和(R，S))是非对映体。可以利用本领域技术人员已知的方法例如色谱或结晶来分离非对映异构体对，并且在每个对内的单一对映体可以按照如上所述进行分离。本发明包括这种化合物的每个非对映异构体和其混合物。

本文中使用的“一种”、“一个”和“该”包括单数和复数形式，除非上下文另外清楚地规定。由此，例如，“一种活性剂”或“一种药理学活性剂”包括单一活性剂以及两种或多种不同的活性剂组合，“一种载体”包括两种或多种载体的混合物以及单一载体，等等。

本发明还包括本文公开的HDAC抑制剂的前体药物。可以使用众所周知的药理学技术来制备任何化合物的前体药物。

除了上述列出的化合物之外，本发明还包括这种化合物的同系物和类似物的用途。在这里，同系物是与上述化合物具有实质结构相似性的分子，类似物是具有实质生物学相似性的分子(不考虑结构相似性)。

烷基化剂

烷基化剂的例子包括但不局限于：二氯乙胺(氮芥，例如，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，异环磷酰胺，二氯甲二乙胺，苯丙氨酸氮芥，尿嘧啶氮芥)，氮丙啶(例如，硫替派)，烷基酮磺酸酯(例如，白消安)，亚硝基脲(例如，卡莫司汀，环己亚硝脲，链脲霉素)，非典型烷基化剂(六甲蜜胺，达卡巴嗪，和普鲁苄肼)，铂化合物(卡铂和顺铂)。这些化合物与磷酸根、氨基、羟基、sulfihydryl、羧基和咪唑基反应。

顺铂(例如

Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ)是含有铂中心原子的重金属复合物，铂中心原子由两个氯原子和两个氨分子以顺位形式所围绕。顺铂的抗癌机理不是很清楚，但是普遍接受的观点是它通过形成DNA加合物来起作用。认为顺铂与核DNA结合，并且妨碍正常转录和/或DNA复制机制。如果顺铂-DNA加合物不能有效地由细胞机制所加工，将导致细胞死亡。细胞可以通过细胞程序死亡或坏疽而死亡，两种机制可以在肿瘤细胞种群内起作用。顺铂的化学名称是顺式-二氨二氯铂(例如顺式-二氨二氯铂(II))，由下列结构代表：

环磷酰胺(例如，

Baxter Healthcare Corp.，Deerfield，IL)与氮芥化学上相关。通过混合功能的微粒体氧化酶系统，环磷酰胺转化为活性烷基化代谢物。这些代谢物可以妨碍快速增殖的恶性细胞的生长。认为作用机理包括肿瘤细胞DNA的交联。以

形式可得到的环磷酰胺一水合物的化学名称是2-[二(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1，3，2-噁嗪磷2-氧化物一水合物，由下列结构代表：

奥沙利铂(例如，Eloxatin^TM，Sanofi-Synthelabo，Inc.，New York，NY)是有机铂复合物，其中铂原子与1，2-二氨基环己烷(DACH)复合，并且带有草酸酯配体作为离去基团。在生理溶液中，奥沙利铂进行无酶催化的转化，转化为活性衍生物，其形成中间和链内的铂-DNA交联。在两个相邻的鸟嘌呤(GG)、相邻的腺嘌呤-鸟嘌呤(AG)和由间隔核苷酸所分开的鸟嘌呤(GNG)的N7位置之间形成交联。这些交联可以在癌和非癌细胞中抑制DNA复制和转录。奥沙利铂的化学名称是顺式-[(1R，2R)-1，2-环己烷二胺-N，N′][草酸根合(2-)-O，O′]铂，由下列结构代表：

在生理条件下，这些药物离子化并产生阳离子，阳离子附着于敏感核酸和蛋白，导致细胞周期停滞和/或细胞死亡。烷基化剂是细胞周期阶段非特异性的试剂，因为它们可独立地施加它们在细胞周期的特定阶段的活性。在Gl或M期，氮芥和烷基酮磺酸酯针对细胞是最有效的。亚硝基脲、氮芥和氮丙啶可削弱从Gl和S期至M期的进展。Chabner和Collins编，(1990)“Cancer Chemotherapy：Principles and Practice”，Philadelphia：JB Lippincott。

烷基化剂针对多种肿瘤疾病具有活性，在白血病和淋巴瘤以及实质固态瘤的治疗中具有显著的活性。临床上，在治疗下列疾病的过程中常规使用这类药物：急性和慢性白血病；淋巴肉芽肿病；非淋巴肉芽肿病淋巴瘤；多重骨髓癌；初期脑肿瘤；乳房癌，卵巢癌，睾丸癌，肺癌，膀胱癌，宫颈癌，头和颈癌，和恶性黑色素瘤。

抗生素药剂

抗生素(例如细胞毒素抗生素)是通过直接抑制DNA或RNA合成来起作用的，并且在整个细胞周期都是有效的。抗生素药剂的例子包括蒽环类抗生素(例如，多柔比星，柔红霉素，表柔比星，伊达比星和蒽二酮)，丝裂霉素C，博来霉素，放线菌素，Plicatomycin。这些抗生素通过靶向不同的细胞组分来妨碍细胞生长。例如，通常认为蒽环类抗生素可妨碍DNA拓扑异构酶II在转录活性DNA的区域中的作用，导致DNA链断裂。

伊达比星(例如，IdamycinPharmacia & Upjohn Co.，Kalamazoo，MI)是柔红霉素的DNA-插入类似物，其对核酸合成具有抑制效果，并且与酶局部异构酶II相互作用。伊达比星盐酸盐的化学名称是5，12-并四苯二酮，9-乙酰基-7-[(3-氨基-2，3，6-三脱氧-α-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-7，8，9，10-四氢-6，9，11-三羟基盐酸盐，(7S-顺式)，由下列结构代表：

多柔比星(例如，

Ben Venue Laboratories，Inc.，Bedford，OH)是一种从Streptomyces peucetius var..caesius的培养物中分离出的细胞毒素蒽环类抗生素抗生素。多柔比星据推测通过指定的插入具有DNA双螺旋的平面蒽环类抗生素核心与核酸结合。多柔比星由通过糖苷键在环原子7与氨基糖连接的萘醌母核构成，道诺胺(daunosamine)。多柔比星盐酸盐的化学名称是(8S，10S)-10-[(3-氨基-2，3，6-三脱氧-a-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰-7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基-1-甲氧基-5，12-并四苯二酮盐酸盐，由下列结构代表：

通常认为，博来霉素与铁螯合，形成活化络合物，然后其与DNA的碱基结合，导致链断裂和细胞死亡。

抗生素已经作为一系列肿瘤疾病的疗法，包括乳房癌，肺癌，胃癌和甲状腺癌，淋巴瘤，粒细胞性白血病，骨髓瘤和肉瘤。

抗代谢药剂

抗代谢剂(即代谢拮抗剂)是一组妨碍代谢过程的药物，而代谢过程对癌细胞的生理机能和增殖是不可缺少的。增殖活跃的癌细胞需要连续合成大量核酸、蛋白、脂质及其它重要的细胞组成部分。

许多代谢拮抗剂抑制嘌呤或嘧啶核苷的合成，或抑制DNA复制的酶。一些代谢拮抗剂还妨碍核糖核苷和RNA的合成，同时妨碍氨基酸代谢和蛋白质合成。通过干扰重要细胞组成部分的合成，代谢拮抗剂可以延迟或抑制癌细胞的生长。抗有丝分裂剂被归入此组。抗代谢剂的例子包括但不局限于：氟尿嘧啶(5-FU)，氮尿苷(5-FUdR)，氨甲喋呤，亚叶酸，羟基脲，硫鸟嘌呤(6-TG)，巯基嘌呤(6-MP)，阿糖胞苷，喷司他丁，氟达拉滨磷酸盐，克拉屈滨(2-CDA)，门冬酰胺酶和吉西他滨。

吉西他滨(例如，

HCl，Eli Lilly and Co.，Indianapolis，IN)是一种显示抗癌活性的核苷类似物。吉西他滨显示细胞分裂时相特异性，主要地杀灭进行DNA合成(S-阶段)的细胞，以及阻滞细胞通过G1/S-相界的进展。吉西他滨由核苷激酶细胞内代谢成活性磷酸氢盐(dFdCDP)和三磷酸盐(dFdCTP)核苷。吉西他滨的细胞毒素效果是由于磷酸氢盐和三磷酸盐核苷的两种作用的组合，其导致DNA合成的抑制。吉西他滨引起核小体之间DNA断裂，这是细胞程序死亡的一个特征。吉西他滨盐酸盐的化学名称是2′-脱氧-2′，2′-二氟胞嘧啶核苷一盐酸盐(β-异构体)，由下列结构代表：

硼替佐米(例如，

Millennium Pharmaceuticals，公司，Cambridge，MA)是修饰的二肽基硼酸。硼替佐米是哺乳动物细胞中的26S蛋白酶体的可逆性抑制剂。抑制26S蛋白酶体可预防靶向解朊作用，其可以影响细胞内的多重信号级联反应。正常稳态机制的这种破环可以导致细胞死亡。实验证明，硼替佐米是体外细胞毒素，并且导致体内细胞生长的迟滞。硼替佐米、单体硼酸的化学名称是[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸，由下列结构代表：

培美曲唑(Pemetrexed)(例如，

Eli Lilly and Co.，Indianapolis，IN)是抗叶酸药剂，其通过中断细胞复制不可缺少的叶酸依赖性代谢过程来起作用。体外试验表明，培美曲唑可抑制胸苷酸合酶(TS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶(GARFT)，它们都是叶酸依赖性化学酶，参与胸腺嘧啶核苷和嘌呤核苷酸的脱氮生物合成。培美曲唑二钠七水混合物具有化学名称L-谷氨酸，N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]-，二钠盐，七水混合物，由下列结构代表：

阿扎胞苷(例如，Vidaza，Pharmion Corp.，Boulder，CO)是胞嘧啶核苷的嘧啶核苷类似物，其导致DNA的过甲基化和对骨髓中异常造血细胞的直接细胞毒性。过甲基化可以恢复参与分化和增殖的基因的正常功能，并且不会导致DNA合成的主要抑制。阿扎胞苷的细胞毒素效果可促使快速分裂细胞的死亡，包括对正常生长控制机理非长期敏感的细胞。阿扎胞苷的化学名称是4-氨基-1β-D-呋喃核糖基-s-三嗪-2(1H)-酮，由下列结构代表：

夫拉平度(Flavopiridol)(例如，L86-8275；Alvocidib；AventisPharmaceuticals，Inc.，Bridgewater，NJ)是合成黄酮，其以细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的抑制剂的形式起作用。在细胞周期的不同阶段(包括G1至S和G2至M)之间的细胞运输需要CDKs的活化。已经显示，夫拉平度可以在G1-S和G2-M步骤阻滞细胞周期进展，引起体外细胞程序死亡。在Alvocidib中得到的夫拉平度的化学式是(-)-2-(2-氯苯基)-5，7-二羟基-8-[(3R，4S)-3-羟基-1-甲基-4-哌啶基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮盐酸盐，由下列结构代表：

氟尿嘧啶(例如，氟尿嘧啶针剂，Gensia Sicor Pharmaceuticals，Inc.，Irvine，CA；

SP Pharmaceuticals Albuquerque，NM)是氟代嘧啶。在合成代谢途径中，氟尿嘧啶的代谢可以阻滞脱氧尿苷酸至胸腺嘧啶脱氧核苷酸的甲基化反应。用这样的方式，氟尿嘧啶可以妨碍DNA的合成，并且较小程度的抑制核糖核酸(RNA)的形成。由于DNA和RNA对细胞分裂和生长是必不可少的，氟尿嘧啶的效果可以造成胸腺嘧啶缺乏，这可引起细胞的不平衡生长和死亡。对于生长更快速的、和以更快速度接纳氟尿嘧啶的那些细胞，DNA和RNA抑制的效果是最明显的。氟尿嘧啶的化学式是5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，由下列结构代表：

抗代谢剂已经广泛地用于治疗一些普通形式的癌症，包括结肠癌，直肠癌，乳房癌，肝癌，胃癌和胰腺癌，恶性黑色素瘤，急性和慢性白血病和毛细胞白血病。

激素药剂

激素药剂是调节其目标器官的生长发育的药物。大部分激素药剂是性甾体和它们的衍生物和其类似物，例如雌激素，孕激素，抗雌激素，雄激素，抗雄激素和孕酮。这些激素药剂可以充当性甾体的受体的拮抗剂，下调受体表达和重要基因的转录。这种激素药剂的例子是合成雌激素(例如，己烯雌酚)，抗雌激素药(例如，它莫西芬，枸橼酸托瑞米芬，氟甲睾酮(Fluoxymesterol)和雷诺昔酚)，抗雄激素(比卡鲁胺，尼鲁米特，氟他胺)，芳香酶抑制剂(例如，氨鲁米特，阿那曲唑和四唑)，促黄体生成激素释放激素(LHRH)类似物，酮康唑，醋酸性瑞林，亮丙瑞林，甲地孕酮和美服培酮。

脱氢可的松(例如，

Pharmacia & Upjohn Co.，Kalamazoo，MI)是皮质激素和合成糖皮质激素，其容易在胃肠道中吸收。糖皮质激素改进身体对不同刺激的免疫应答。合成糖皮质激素主要用于其抗炎症效果和控制白血病和淋巴瘤及其它血液学病症，例如血小板减少、红细胞增生减低症和贫血。脱氢可的松的化学名称是孕-1，4二烯-3，11，20三酮，17，21-二羟基-(还是1，4-孕二烯-17α，21-二醇-3，11，20三酮；1-可的松；17α，21-二羟基-1，4-孕二烯-3，11，20三酮；和去氢可的松)，由下列结构代表：

激素药剂用于治疗乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤和脑膜瘤。因为激素的主要作用是通过甾体受体介导的，60％受体阳性的乳腺癌对一线激素治疗作出反应；少于10％的受体阴性肿瘤产生应答。与激素药剂有关的主要副作用是潮红。频繁的现象是急剧增加的骨疼痛、红斑造成的皮肤损害和引起高钙血症。

具体地说，孕激素用于治疗子宫内膜癌，这是由于这些癌发生在与高水平雌激素接触的女性中(无孕激素防护)。

抗雄激素基本上用于治疗前列腺癌，前列腺癌是激素依赖性的。它们用于降低睾酮的水平，由此抑制肿瘤的生长。

激素治疗乳腺癌包括降低雌激素的水平-依赖肿瘤乳房细胞中的雌激素受体的活化。抗雌激素通过与雌激素受体结合来起作用，并且妨碍共活化剂的补充，由此抑制雌激素信号。

LHRH类似物用于治疗前列腺癌症，其可降低睾酮的水平，并因此降低肿瘤的生长。

芳香酶抑制剂通过抑制激素合成所需要的化学酶来起作用。在绝经后女性中，雌激素的主要来源是通过雄烯二酮的转化(利用芳香酶)。

衍生自植物的药剂

植物起源的药剂是来源于植物的药物，或基于该药剂的分子结构进行改进的药物。通过阻止细胞分裂所必需的细胞组分的组装，它们抑制细胞复制。

植物起源的药剂的例子包括长春花生物碱(例如，长春花新碱，长春花碱，去乙酰长春酰胺，长春利定和长春瑞宾)，鬼臼霉素(例如，依托泊苷(VP-16)和表鬼臼毒噻吩糖苷(VM-26))，紫杉烷(taxane)(例如，太平洋紫杉醇和多西他赛)。这些植物衍生的药剂通常充当与微管蛋白结合并抑制有丝分裂的抗有丝分裂剂。认为通过与局部异构酶II相互作用，导致DNA链断裂，鬼臼霉素例如依托泊苷可以妨碍DNA合成。

长春花新碱(例如，硫酸醛基长春碱，Gensia Sicor Pharmaceuticals，Irvine，CA)是从普通开花草药玉黍螺植物(长春花)中获得的。最初将长春花新碱确定为长春新碱，并且还称为LCR和VCR。长春花新碱的作用机理与抑制有丝分裂纺锤体中的微管形成相关，这导致分裂细胞在中期阶段得到抑制。硫酸醛基长春碱是长春花碱，22-氧代-，硫酸盐(1∶1)(盐)，由下列结构代表：

依托泊苷(例如，

Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ，还通常被称为VP-16))是鬼臼霉素的半合成的衍生物。已经显示，依托泊苷可以在哺乳动物细胞中促使中期停顿和G2抑制。在高浓度下，依托泊苷可以引起进入有丝分裂的细胞溶解。在低浓度下，依托泊苷可以抑制细胞进入细胞分裂前期。通过与DNA拓扑异构酶II相互作用或形成自由基，依托泊苷的主要高分子效果似乎可以诱导DNA链断裂。依托泊苷磷酸酯(例如，Bristol-Myers Squibb Co.，Princeton，NJ))是依托泊苷的水溶性酯。依托泊苷磷酸酯的化学名称是4′-脱甲基表鬼臼脂素9-[4，6-O-(R)-亚乙基-b-D-吡喃葡萄糖苷]，4′-(二氢磷酸酯)，由下列结构代表：

依托泊苷的化学名称是4′-脱甲基表鬼臼脂素9-[4，6-0-(R)-亚乙基-b-D-吡喃葡萄糖苷]，由下列结构代表：

植物衍生的药剂用于治疗许多形式的癌。例如，长春花新碱用于治疗白血病，Hodgkin和非Hodgkin淋巴瘤，和儿童期肿瘤神经母细胞瘤，横纹肌肉瘤和维耳姆斯瘤。长春花碱用于治疗淋巴瘤，阴囊癌，肾细胞癌，蕈样真菌病和皮肤多发性出血性肉瘤。多西他赛(doxetaxel)针对晚期乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌具有活性。

依托泊苷针对许多瘤具有活性，其中小细胞肺癌、阴囊癌和NSCLC最具响应性。

生物药剂

生物药剂是当单独使用或与化学治疗和/或放射治疗组合使用时可引起癌/肿瘤衰退的生物分子。生物药剂的例子包括免疫调节蛋白例如细胞因子、针对肿瘤抗原的单克隆抗体、抑癌基因和癌疫苗。

细胞因子具有极大的免疫调节活性。一些细胞因子例如白细胞介素-2(IL-2，阿地白介素)和干扰素-α(IFN-α)表明了抗癌活性，并且已经允许用于治疗患有转移性肾细胞癌和转移性恶性黑色素瘤的患者。IL-2是T细胞生长因子，其是T细胞介导的免疫应答的核心。人们认为，IL-2的对于一些患者的选择性抗癌效果，是在自身和非自身之间区分的细胞介导的免疫反应的结果。

干扰素-α包括23个以上具有重叠活性的相关亚型。已经表明，IFN-α针对许多实体和血液恶性肿瘤具有活性，后者似乎尤其敏感。

干扰素的例子包括干扰素-α、干扰素-β(纤维母细胞干扰素)和干扰素-γ(纤维母细胞干扰素)。其它细胞素的例子包括红细胞生成素(Epoietin-α)、粒细胞-CSF(Filgrastin)和粒细胞、巨噬细胞-CSF(沙格司亭)。除细胞因子以外的其它免疫调节药剂包括卡介苗、左旋四咪唑和奥曲肽(模拟天然存在的激素抑生长素的效果的长效八肽)。

此外，抗癌治疗可以包括：利用抗体的免疫治疗和用肿瘤接种方法中使用的试剂进行治疗。在这种治疗中，初期药物是单独或携带例如毒素的抗体，或对癌细胞进行化学治疗/细胞毒素类。针对肿瘤抗原的单克隆抗体是针对被肿瘤表达的抗原所引起的抗体，尤其是肿瘤特异性抗原。例如，单克隆抗体

(曲妥珠单抗)是针对人类表皮生长因子受体2(HER2)(其在一些乳房肿瘤包括转移性乳腺癌中过度表达)产生的。HER2蛋白的超表达与更具侵害性的疾病有关，并且临床很难诊断。

用作单一药剂，用于治疗患有转移性乳腺癌的患者(其肿瘤过度表达HER2蛋白)。

针对肿瘤抗原的单克隆抗体的另一个例子是

(美罗华)，其是针对淋巴瘤细胞上的CD20产生的，并且其选择性的消耗正常和恶性的CD20+成熟前B细胞和成熟B细胞。

RITUXAN用作单一药剂，用于治疗患有复发性或难治疗的轻度或滤泡性的CD20+、B细胞非Hodgkin′s淋巴瘤的患者。

(吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin))和

(阿仑单抗(Alemtuzumab))是可以使用的、针对肿瘤抗原的单克隆抗体的进一步例子。

血管内皮抑素是用于靶向血管生成的血纤维蛋白溶酶原的分裂产物。

抑癌基因是具有抑制细胞生长和分裂周期功能的基因，由此妨碍肿瘤形成的进展。抑癌基因的突变可导致细胞忽略抑制信号网络的一或多个组成部分，克服细胞周期关卡，并导致受控细胞的高速生长，形成癌。抑癌基因的例子包括Duc-4、NF-1、NF-2、RB、p53、WT1、BRCA1和BRCA2。

DPC4与胰腺癌有关，并且参与抑制细胞分裂的胞质路径。NF-1编码抑制Ras的蛋白，其是一种胞质抑制蛋白。NF-1与神经系统的纤维神经瘤和嗜铬细胞瘤以及骨髓性白血病有关。NF-2编码核内蛋白，其涉及神经系统的脑膜瘤、神经鞘瘤和室管膜瘤。RB编码pRB蛋白，其是主要抑制细胞周期的核内蛋白。RB与成视网膜细胞瘤以及骨骼、膀胱、小细胞肺和乳腺癌有关。P53编码p53蛋白，其调节细胞分裂，并且可以引起细胞程序死亡。可在很宽的癌症范围内发现p53的突变和/或钝化。WTI与肾的Wilms′肿瘤有关。BRCA1与乳房和卵巢癌有关，BRCA2与乳腺癌有关。肿瘤抑制基因可以转移到肿瘤细胞中，在其中，它施加其肿瘤抑制功能。

癌疫苗是引起身体对肿瘤产生特异性免疫应答的一组药剂。在研究与开发和临床试验状态下的大部分癌疫苗是肿瘤相关的抗原(TAAs)。TAAs是存在于肿瘤细胞上的结构(即蛋白、化学酶或碳水化合物)，并且在正常细胞上相对不存在或减少。由于其针对肿瘤细胞的相当独特性，TAAs为免疫系统提供靶向，从而辨别并促使其毁坏。TAAs的例子包括神经节苷脂(GM2)、前列腺特异抗原(PSA)、α-胎儿球蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)(由结肠癌及其它腺癌产生，例如乳房、肺、胃和胰腺癌)、黑素瘤相关的抗原(MART-1，gap100，MAGE 1，3酪氨酸酶)、乳头状瘤病毒E6和E7片段、全部的细胞或部分/自体同源肿瘤细胞和异源肿瘤细胞的溶胞产物。

本发明使用的类视黄醇或类视黄醇药剂包括维生素A的所有天然、重组和合成衍生物或类似物，例如棕榈酸视黄酯，视黄酰-β-葡糖苷酸(维生素A1β-葡糖苷酸)，视黄基磷酸酯(维生素A1磷酸酯)，视黄酯，4-氧代视黄醇，4-氧代视黄醛，3-脱氢视黄醇(维生素A2)，11-顺式-视黄醛(11-顺式-视黄醛，11-顺式或新b维生素A1醛)，5，6-环氧视黄醇(5，6-环氧维生素A1醇)，脱水视黄醇(脱水维生素A1)和4-酮视黄醇(4-酮维生素A1醇)，所有的-反式视黄酸(ATRA；维甲酸；维生素A酸；3，7-二甲基-9-(2，6，6，-三甲基-1-cyclohenen-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸酸[CASNo.302-79-4])，所有反式视黄酸的脂质制剂(例如ATRA-IV)，9-顺式视黄酸(9-cis-RA；Alitretinoin；

LGD1057)，(e)-4-[2-(5，6，7，8-四氢-2-萘基)-1-丙烯基]-苯甲酸，3-甲基-(E)-4-[2-(5，6，7，8-四氢-2-萘基)-1-丙烯基]-苯甲酸，芬维A胺(N-(4-羟基苯基)维甲胺；4-HPR)，阿维A酯(2，4，6，8-壬四烯酸酸)，阿维A(Ro10-1670)，维生素A酸(Tazarotene)(乙基6-[2-(4，4-二甲基二氢苯并噻喃-6-基)-乙炔基]烟酸酯)，维A生育醇酯(9-顺式-维甲酸生育酚)，阿达帕林(6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘酸)，莫维A胺(三甲基甲氧基苯基-N-乙基维甲胺)，和视黄醛。

还包括的类视黄醇形式是类视黄醇相关的分子，例如CD437(还称为6-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-2-萘甲酸和AHPN)，CD2325，ST1926([E-3-(4′-羟基-3′-金刚烷基联苯-4-基)丙烯酸)，ST1878(2-[3-[2-[3-(2-甲氧基-1，1-二甲基-2-氧代乙氧基)苯氧基]乙氧基]苯氧基]异丁酸甲酯)，ST2307，ST1898，ST2306，ST2474，MM11453，MM002(3-Cl-AHPC)，MX2870-1，MX3350-1，MX84和MX90-1(Garattini等人，2004，Curr.Pharmaceut.Design 10：433-448；Garattini和Terao，2004，J.Chemother.16：70-73)。所包括的本发明使用的是与一个或多个RXR结合的类视黄醇药剂。还包括的是与一或多种RXR结合和不与一或多种RAR结合的类视黄醇药剂(即选择性地与RXR结合；rexinoids)，例如二十二碳六烯酸(DHA)，植烷酸，烯虫酯酸，LG100268(LG268)，LG100324，LGD1057，SR11203，SR11217，SR11234，SR11236，SR11246，AGN194204(参见例如，Simeone和Tari，2004，Cell Mol.Life Sci.61：1475-1484；Rigas和Dragnev，2005，The Oncologist 10：22-33；Ahuja等人，2001，Mol.Pharmacol.59：765-773；Gorgun和Foss，2002，Blood100：1399-1403；Bischoff等人，1999，J.Natl.Cancer Inst.91：2118-2123；Sun等人，1999，Clin.Cancer Res.5：431-437；Crow和Chandraratna，2004，Breast Cancer Res.6：R546-R555)。更进一步包括的是9-顺式-RA的衍生物。尤其包括的是3-甲基TTNEB和相关药剂，例如

Bexarotene；LGD1069；4-[1-(5，6，7，8-四氢-3，5，5，8，8-五甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸，或其可药用盐或水合物。

与HDAC抑制剂例如SAHA组合使用所有这些方法在本发明的范围之内。

其它药剂

其它药剂也可以有效用于本发明，例如，用于辅助治疗。这种辅助药剂可用于增强抗癌剂的效果或预防或治疗与抗癌剂相关的病症，例如血液指数降低、过敏性反应、中性白细胞减少、贫血、血小板减少、高钙血症、粘膜炎、淤青、流血、毒性(例如亚叶酸)、疲劳、疼痛、恶心和呕吐。止吐药(例如5-HT受体阻断剂或苯并二氮杂

)、消炎药(例如肾上腺皮质类固醇类或抗组胺剂)、营养增补剂(例如叶酸)、维生素(例如维生素E、维生素C、维生素B₆、维生素B₁₂)和酸降低剂(例如H2受体阻断剂)可有效用于增加患者对于癌治疗的耐受性。H₂受体阻断剂的例子包括甲胺呋硫、法莫替丁和西眯替丁。抗组胺剂的例子包括苯海拉明、氯马斯汀、扑尔敏、氯苯那敏、二甲茚定马来酸盐和普鲁米近。甾体的例子包括地塞米松、氢化可的松和脱氢可的松。其它药剂包括生长因子例如阿法依伯汀(epoetin)α(例如

)，用于促进红细胞产生，G-CSF(粒细胞菌落-刺激因子；非格司亭，例如)，用于促进嗜中性白细胞产生，GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞菌落-促进因子)，用于促进一些白血球(包括巨噬细胞)的产生，和IL-11(白细胞间介素-11，例如)，用于促进血小板的产生。

亚叶酸(例如亚叶酸钙，Roxane Laboratories，Inc.，Columbus，OH；也称为亚叶酸、亚叶酸钙、链球菌因子)可以用作叶酸对抗剂的解毒剂，并且还可以强化某些药物例如氟尿嘧啶的活性。亚叶酸钙是N-[4-[[(2-氨基-5-甲酰基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代-6-喋啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸的钙盐。

地塞米松(例如，

Merck & Co.，Inc.，Whitehouse Station，NJ)是合成皮质激素，可以用作控制过敏性反应的消炎剂，例如药物过敏性反应。进一步的，地塞米松可以使细胞对抗癌药剂的细胞毒素活性敏感。口服的地塞米松片剂包含9-氟-11-β，17，21-三羟基16-α-甲基孕-1，4二烯-3，20-二酮，由下列结构代表：

静脉内给予的地塞米松磷酸盐包含9-氟-11β，17-二羟基-16α-甲基-21-(膦酰氧基)孕-1，4二烯-3，20-二酮二钠盐，由下列结构代表：

苯海拉明(例如Parkedale Pharmaceuticals，Inc.，Rochester，MI)是用于改善过敏性反应的抗组胺剂。盐酸苯海拉明(例如，苯海拉明HCl针剂)是2-(二苯基甲氧基)-N，N-二甲基盐酸乙胺，由下列结构代表：

甲胺呋硫(例如，GlaxoSmithKline，Research TrianglePark，NC)是组胺H₂-受体上的组胺的竞争性抑制剂，可用于降低胃酸。甲胺呋硫盐酸盐(例如，片剂或针剂)是N[2-[[[5-[(二甲基氨基)甲基]-2-呋喃基]甲基]硫基]乙基]-N′-甲基-2-硝基-1，1-乙烯二胺，HCl，由下列结构代表：

西咪替丁(例如，

GlaxoSmithKline，Research TrianglePark，NC)也是组胺H2-受体上的组胺的竞争性抑制剂，可用于降低胃酸。西咪替丁是N″-氰基-N-甲基-N′-[2-[[(5-甲基-1H-咪唑-4-基)甲基]硫基]-乙基]-胍，由下列结构代表：

阿瑞匹坦(例如，

Merck & Co.，Inc.)是物质P/神经激肽1(NK1)受体拮抗剂和止吐药。阿瑞匹坦是5-[[(2R，3S)-2-[(1R)-1-[3，5-二(三氟甲基)苯基]乙氧基]-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]甲基]-1，2-二氢-3H-1，2，4-三唑-3-酮，由下列结构代表：

昂丹司琼(例如，GlaxoSmithKline，Research TrianglePark，NC)是5-HT3血清素受体的选择性阻断剂和止吐药。昂丹司琼盐酸盐(例如针剂)是(±)1，2，3，9-四氢-9-甲基-3-[(2-甲基-1H-咪唑-1-基)甲基]-4H-咔唑-4-酮，一盐酸盐，二水合物，由下列结构代表：

氯羟安定(例如，氯羟安定针剂；Baxter Healthcare Corp.，Deerfield，IL)是苯并二氮杂

具有抗惊厥的效果。氯羟安定是7-氯-5(2-氯苯基)-1，3-二氢-3-羟基-2H-1，4-苯并二氮杂

-2-酮，由下列结构代表：

本发明还预计向SAHA和硼替佐米的组合中加入地塞米松，以提高响应速率，和使细胞对抗骨髓瘤药剂的细胞毒素活性敏感。在多发性骨髓瘤的治疗中，地塞米松是重要的药物。加入地塞米松可以至少提高20％的响应速率。在本发明的一方面，完成了2个周期SAHA/硼替佐米和经历了小于部分症状缓解和非器官损伤(定义为恶化贫血、恶化肾衰竭、高粘血症综合症的征象)的患者，可以每日口服20mg地塞米松来治疗，治疗5天(第4-8天)。

HDAC抑制剂的给予

给药途径

HDAC抑制剂(例如SAHA)可以通过本领域技术人员已知的给药方法来给予。给药途径的例子包括但不局限于：口服、肠胃外、腹腔内、静脉内、动脉注射、透皮、局部、舌下、肌注、直肠、口腔粘膜、鼻内、脂质体、吸入、阴道、眼内、通过导管或支架局部输送、皮下、椎间盘内、关节内、鞘内或以缓慢释放的剂型给药。可以根据任何剂量和给药计划，与有效的抗癌剂一起给予SAHA或任一HDAC抑制剂，实现治疗疾病的剂量效果。

当然，SAHA或任一其它HDAC抑制剂的给药途径与抗癌剂的给药途径无关。SAHA的具体给药途径是口服。由此，根据该实施方案，口服给予SAHA，第二个药剂(抗癌剂)可以口服、胃肠外、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌肉内、直肠、口腔粘膜、鼻内、脂质体、吸入、阴道、眼内、通过导管或支架局部输送、皮下、椎间盘内、关节内、鞘内或以缓慢释放剂型的形式给予。

作为实例，本发明的HDAC抑制剂可以以片剂、胶囊(每个胶囊包括持续释放或延时释放制剂)、丸剂、粉末、颗粒、酏剂、酊剂、悬浮液、糖浆和乳化液形式口服给予。同样，HDAC抑制剂可以静脉内给予(例如丸剂或输液)、腹腔内给予、皮下给予、肌注给予或使用药物领域普通技术人员熟知形式的其它途径给予。HDAC抑制剂的具体给药途径是口服。

HDAC抑制剂还可以以长效针剂或植入片制品的形式给予，可以将其用这样的方式进行配制，以便活性组分的持续释放。可以将活性组分压缩成小丸或小的圆柱体，并且皮下或肌肉内植入，作为长效针剂或植入片。植入片可以使用惰性物质，例如可生物降解的聚合物，或合成硅氧烷，例如硅橡胶、硅酮橡胶或Dow-Corning Corporation制备的其它聚合物。

HDAC抑制剂还可以以脂质体递送系统例如小单层脂质体、大单层脂质体和多层气泡的形式给予。脂质体可以由各种磷脂例如胆固醇、十八烷胺硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。还可以在本发明方法中使用酪氨酸激酶抑制剂的脂质体制品。酪氨酸激酶抑制剂的脂质体型式可以用于提高对抑制剂的耐受性。

HDAC抑制剂也可以利用化合物分子结合的单一载体形式的单克隆抗体来递送。

HDAC抑制剂也可以与作为目标药物载体的可溶性聚合物一起制备。这种聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，多羟基-丙基-甲基丙烯酰胺-酚，聚羟乙基-天冬酰胺-酚，或棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯-聚赖氨酸。此外，HDAC抑制剂可以与可生物降解制备用聚合物一起制备，用于实现药物的控制释放，例如聚乳酸、聚乙二醇酸、聚乳酸和聚乙二醇酸的共聚物、聚环氧聚酰胺纤维己内酯、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚乙缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性的嵌段共聚物。

在具体实施方案中，HDAC抑制剂例如SAHA是以胶囊形式口服给予的，其可以包含赋形剂例如微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠和硬脂酸镁。

剂量和给药计划

使用HDAC抑制剂的给药方案可以根据各种因素选择，包括类型、物种、年龄、重量、性别和所治疗疾病的类型；所治疗疾病的严重程度(即阶段)；给药途径；患者的肾和肝脏功能；和所使用的具体化合物或其盐。可以使用例如剂量系统，以预防、抑制(充分或部分)或延滞疾病的发展。

按照本发明，HDAC抑制剂(例如SAHA或其可药用盐或水合物)可以通过连续或周期性的剂量给予。例如，HDAC抑制剂的周期性给予可以每周给予1至6天，或可以是指周期给予(例如对于2至8个连续周，每日给予，然后至多1周的休息期，不用给药)，或可以隔天给予。组合物可以周期给予，在周期之间具有休息期(例如治疗2至8周，在治疗之间的休息期最多一周)。

例如，SAHA或任一HDAC抑制剂可以以至多800mg的总日剂量给药。HDAC抑制剂可以每日给予一次(QD)，或分为许多的日剂量，例如每日两次(BID)，每日三次(TID)。HDAC抑制剂可以以至多800mg的总日剂量给予，例如200mg、300mg、400mg、600mg或800mg，其可以以一个日剂量的形式给予，或可以分成许多的日剂量，如上所述。在具体方面，口服给药。

可以根据任何剂量和给药计划，与有效的抗癌剂一起给予SAHA或任一HDAC抑制剂，实现治疗疾病的剂量效果。可以以总日剂量形式给予HDAC抑制剂，总日剂量可以根据患者的不同而改变，并且可以用变化的剂量计划给药。例如，可以以25-4000mg/m²之间的总日剂量给予患者SAHA或任何HDAC抑制剂。尤其是，可以以至多800mg的总日剂量给予SAHA或任一HDAC抑制剂，特别是口服，每天一次、两次或三次，连续(每天)或间歇地(例如一周3-5天)给予。此外，可以连续给药，即每天给药，或间歇给药。

本发明的优选方面涉及治疗多发性骨髓瘤的方法，包括给予需要其的患者适量的HDAC抑制剂例如SAHA、和适量的另一种抗癌症药剂例如硼替佐米。在本发明的具体方面中，对于21天周期的4-11天的至少一个治疗周期，每天口服给予200mg至800mg SAHA或其可药用盐或水合物，和对于21天周期的第1、4、8和11天的至少一个治疗周期，每天静脉内给予0.7-1.3mg/m²硼替佐米或其可药用盐或水合物。在具体实施方案中，多发性骨髓瘤是复发性和难治疗的多发性骨髓瘤。

在另一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以300mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以400mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以500mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在另一个优选实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每日以600mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

在又一个优选实施方案中，对于21天当中的第4-11天的至多八个治疗周期，重复给予SAHA或其可药用盐或水合物。

在本发明的另一个方面，在21天当中的第1、4、8和11天，以1mg/m²的剂量每日给予一次硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以200mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以400mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以400mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，以500mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，以600mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，用SAHA和硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的方法进一步包括：口服给予地塞米松或其可药用盐或水合物，其中对于21天当中的5天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每日给予一次地塞米松或其可药用盐或水合物。

在又一个实施方案中，对于21天周期当中的第4-11天的至少一个治疗周期，以400mg的剂量每日口服给予一次SAHA，和对于21天周期当中的第1、4、8和11天的至少一个治疗周期，以1.3mg/m²的日剂量静脉给予硼替佐米。

此外，可以按照任何上述计划给予HDAC抑制剂，连续给予几周，而后是休息期。例如，可以按照如上所述的任何计划给予HDAC抑制剂，从2至8周，而后休息一周，或以300mg的剂量每天给药两次，一周给予3至5天。在另一个具体实施方案中，每天给予3次HDAC抑制剂，连续给予2周，而后休息一周。

患者静脉或皮下接受HDAC抑制剂的数量，应该在每天大约3-1500mg/m²之间，例如每天大约3、30、60、90、180、300、600、900、1200或1500mg/m²。可以用许多合适方法给予这种数量，例如在持续时间内一天给予一次或若干次大体积的低浓度HDAC抑制剂。每周(7天周期)一个或多个连续日、间歇性或其组合，可以给予该数量。或者，在短时期内，给予低体积的高浓度HDAC抑制剂，例如对于每周(7天周期)的一或多天(连续地、间歇地或其组合)，一天一次。例如，可以每天给予300mg/m²的剂量，连续5日，每个治疗的总剂量是1500mg/m²。在另一个给药方案中，连续日的数目还可以是5天，治疗持续2或3个连续周，整个治疗总共需要3000mg/m²和4500mg/m²。

典型地，可以制备静脉内制剂，其含有HDAC抑制剂的浓度在大约1.0mg/mL至大约10mg/mL之间，例如2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL、5.0mg/mL、6.0mg/mL、7.0mg/mL、8.0mg/mL、9.0mg/mL和10mg/mL，给予的数量应达到如上所述剂量。在一个实例中，一天可以给予患者足够体积的静脉内制剂，以使当天的总剂量在大约300和大约1500mg/m²之间。

可以按照本领域众所周知的方法制备皮下用的制剂，pH值介于大约5和大约12中间，其中包含合适的缓冲液和等渗性试剂，如下所述。可以将它们进行配制，以递送HDAC抑制剂的日剂量，每天皮下给药一或多次，每天一、二或三次。

还可以通过局部使用合适的鼻内赋形剂，以鼻内形式给予HDAC抑制剂，或通过透皮途径，使用本领域普通技术人员熟知的透皮皮肤贴剂的那些形式。为了以透皮递送系统形式进行给药，在整个给药方式中，剂量给药将是连续的，而不是间歇性的。

本领域技术人员很清楚，HDAC抑制剂的任何一或多种具体剂量计划还适用于组合治疗中所使用的任何一或多种抗癌剂。此外，可以进一步改变抗癌剂的具体剂量和剂量计划，并且基于所使用的具体抗癌剂，可以确定最适量、给药计划和给药途径。进一步的，本文描述的各种给药模式、剂量和给药计划仅仅列出了具体实施方案，不应该将其理解为对本发明的宽范围的限制。剂量和给药计划的任何排列、变化和组合包括在本发明范围内。

抗癌剂的给予

HDAC抑制剂的任何一或多种具体剂量计划还适用于组合治疗中所使用的任何一或多种抗癌剂。

此外，可以进一步改变抗癌剂的具体剂量和剂量计划，并且基于所使用的具体抗癌剂，可以确定最适量、给药计划和给药途径。

当然，SAHA或任一其它HDAC抑制剂的给药途径与抗癌剂的给药途径无关。SAHA的具体给药途径是口服。由此，根据该实施方案，口服给予SAHA，其它药剂(抗癌剂)可以口服、胃肠外、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌肉内、直肠、口腔粘膜、鼻内、脂质体、吸入、阴道、眼内、通过导管或支架局部输送、皮下、椎间盘内、关节内、鞘内或以缓慢释放剂型的形式给予。

此外，HDAC抑制剂和抗癌剂可以通过相同给予模式来给予，即两种药剂都可以口服、IV等等模式给药。然而，利用一种给药模式例如口服来给予HDAC抑制剂和利用另一种给药模式例如IV或上文描述的任何其它给药模式来给予抗癌剂，也在本发明范围内。

通常使用的抗癌剂和通常给予的日剂量包括但不局限于：

代谢拮抗剂：氨甲喋呤：20-40mg/m²i.v.

氨甲喋呤： 4-6mg/m²p.o.

氨甲喋呤： 12000mg/m²高剂量治疗

6-巯基嘌呤： 100mg/m²

6-硫鸟嘌呤： 1-2×80mg/m²p.o.

喷司他丁 4mg/m²i.v.

磷酸氟达拉滨： 25mg/m²i.v.

克拉屈滨： 0.14mg/kg BW i.v.

5-氟尿嘧啶 500-2600mg/m²i.v.

卡培他滨： 1250mg/m²p.o.

胞嘧啶阿拉伯糖苷： 200mg/m²i.v.

胞嘧啶阿拉伯糖苷： 3000mg/m²i.v.高剂量治疗

吉西他滨： 800-1250mg/m²i.v.

羟基脲： 800-4000mg/m²p.o.

培美曲唑 250-500mg/m²i.v.

(Pemetrexed)

抗有丝分裂剂长春花新碱 1.5-2mg/m²i.v.

和衍生自植物

的药剂：

长春花碱 4-8mg/m²i.v.

去乙酰长春酰胺 2-3mg/m²i.v.

依托泊苷(VP16) 100-200mg/m²i.v.

依托泊苷(VP16) 100mg p.o.

表鬼臼毒噻吩糖苷 20-30mg/m²i.v.

(VM26)

太平洋紫杉醇(Taxol) 175-250mg/m²i.v.

多西他赛(Taxotere) 100-150mg/m²i.v.

抗生素：放线菌素D 0.6mg/m2i.v.

柔红霉素 45-6.0mg/m²i.v.

多柔比星 45-60mg/m²i.v.

表柔比星 60-80mg/m²i.v.

伊达比星 10-12mg/m²i.v.

伊达比星 35-50mg/m²p.o.

米托蒽醌 10-12mg/m²i.v.

(Mitoxantron)

博来霉素 10-15mg/m²i.v.，i.m.，s.c.

丝裂霉素C 10-20mg/²i.v.

依立替康(CPT-11) 350mg/m²i.v.

托泊替康 1.5mg/m²i.v.

烷基化剂：盐酸氮芥 6mg/m²i.v.

磷酸雌二醇氮芥 150-200mg/m²i.v.

磷酸雌二醇氮芥 480-550mg/m²p.o.

苯丙氨酸氮芥 8-10mg/m²i.v.

苯丙氨酸氮芥 15mg/m²i.v.

苯丁酸氮芥 3-6mg/m²i.v.

松龙苯芥 40-100mg/m²p.o.

环磷酰胺 750-1200mg/m²i.v.

环磷酰胺 50-100mg/m²p.o.

异环磷酰胺 1500-2000mg/m²i..v.

氯乙环磷酰胺 25-200mg/m²p.o.

白消安 2-6mg/m²p.o.

曲奥舒凡 5000-8000mg/m²i.v.

曲奥舒凡 750-1500mg/m²p.o.

硫替派 12-16mg/m²i.v.

卡莫司汀 100mg/m²i.v.

(Carmustin)(BCNU)

洛莫司汀 100-130mg/m²p.o.

(Lomustin)(CCNU)

尼莫司汀 90-100mg/m²i.v.

(Nimustin)(ACNU)

达卡巴嗪(OTIC) 100-375mg/m²i.v.

普鲁苄肼 100mg/m²p.o.

顺铂 20-120mg/m²i.v.

卡铂 300-400mg/m²i.v.

激素、细胞素和干扰素-a 2-10×10⁶IU/m²

维生素：

脱氢可的松 40-100mg/m²p.o.

地塞米松 8-24mg p.o.

G-CSF 5-20μg/kg BW s.c.

所有反式视黄酸 45mg/m²

白细胞间介素-2 18×10⁶IU/m²

GM-CSF 250mg/m²

红细胞生成素 150IU/kg tiw

使用本文所描述抗癌剂(或这种药剂的任何可药用盐或水合物、或这种药剂的任何游离酸、游离碱或其它游离态)的给药方案可以按照本文示范性的剂量，包括为HDAC抑制剂所提供的那些剂量。可以根据各种因素选择剂量，包括类型、物种、年龄、重量、性别和所治疗疾病的类型；所治疗疾病的严重程度(即阶段)；给药途径；患者的肾和肝脏功能；和所使用的具体化合物或其盐。可以使用例如剂量系统，以治疗例如预防、抑制(充分或部分)或延滞疾病的发展。

在另一个实施方案中，在21天当中的第1、4、8和11天，以0.7-1.3mg/m²的剂量每日静脉注射给予一次硼替佐米或其可药用盐或水合物。在其它实施方案中，在21天当中的第1、4、8和11天，以1.0mg/m²的剂量每日给予一次硼替佐米或其可药用盐或水合物。在又一个实施方案中，在21天当中的第1、4、8和11天，以1.3mg/m²的剂量每日给予一次硼替佐米或其可药用盐或水合物。

组合给药

按照本发明，在多发性骨髓瘤(包括但不局限于复发和难治疗的多发性骨髓瘤)的治疗中，可以使用HDAC抑制剂和抗癌剂。

多发性骨髓瘤的特点在于：浆细胞的单一克隆的肿瘤增殖参与单克隆免疫球蛋白的产生(Kyle，Multiple Myeloma and Other Plasma CellDisorders in Hematology：Basic Principles and Practice.Second edition.1995)。虽然多发性骨髓瘤细胞起初对放射治疗和化学治疗敏感，但持久的完全响应是稀少的，并且最初响应的几乎所有患者最终会旧病复发并死于该疾病。迄今为止，常规治疗方法不会导致长期的无病存活率，这就突出了开发新药来治疗该不治之症的重要性(NCCN Proceedings.Oncology.November 1998)。

在本发明的各个方面，以任何顺序、同时或其组合来连续地执行治疗程序。例如，第一个治疗程序，例如给予HDAC抑制剂，可以在第二个治疗例如给予抗癌剂之前、用抗癌剂的第二个治疗之后、与利用抗癌剂的第二个治疗同时或其组合形式进行。

在本发明的一方面，可以决定HDAC抑制剂的总治疗周期。抗癌剂可以在用HDAC抑制剂起始治疗之前、或用HDAC抑制剂治疗之后给予。此外，可以在给予HDAC抑制剂期间给予抗癌剂，但不需要在全部HDAC抑制剂治疗周期出现。同样，可以在用抗癌剂开始治疗之前或在用抗癌剂治疗之后给予HDAC抑制剂。此外，可以在给予抗癌剂期间给予HDAC抑制剂，但不需要在全部抗癌剂治疗周期出现。或者，对于治疗周期期间，治疗方案包括用一种药剂(HDAC抑制剂或抗癌剂)预先治疗，而后加入其它药剂。

在具体实施方案中，HDAC抑制剂和抗癌剂的联用是相加的，即组合治疗方案产生单独给予每个组成部分时的每个组成部分的加合效应的结果。按照该实施方案，HDAC抑制剂的量和抗癌剂的量一起构成治疗癌的有效量。

在另一个实施方案中，认为当组合治疗方案产生比每个组成部分(以治疗剂量单独给予)的叠加效应显著好的抗癌结果(例如细胞生长抑制、细胞程序死亡、诱导分化、细胞死亡)时，HDAC抑制剂和抗癌剂的联用是治疗协同的。可以使用标准统计分析，以确定何时产生显著好的结果。例如，可以使用Mann-Whitney试验或一些其它通用的统计分析。

组合治疗可以通过诱导癌细胞分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡来起作用。与用药剂的单疗法相比，由于在组合治疗中的每个药剂的剂量可以降低，同时还可以达到总体抗肿瘤效果，所以组合治疗是尤其有利的。

在本发明的一个实施方案中，HDAC抑制剂可以与抗代谢药剂组合给予。具体地说，在一个实施方案中，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.0mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个实施方案中，以100mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，以300mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，以400mg的剂量每日给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，以400mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，以500mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

在另一个具体实施方案中，以600mg的剂量每日给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予硼替佐米或其可药用盐或水合物。

药物组合物

如上所述，可以将包含HDAC抑制剂和/或抗癌剂的组合物配制为任何适合于下列给予形式的剂型：口服，肠胃外，腹腔内，静脉内，动脉注射，透皮，舌下，肌注，直肠，口腔粘膜，鼻内，脂质体，吸入，阴道，或眼内给予，通过导管或支架，局部递送给予，或皮下，椎间盘内，关节内，鞘内给予，或以缓慢释放的剂型给予。

HDAC抑制剂和抗癌剂可以配制在相同制剂中，用于同时给予，或可以将它们分为两个分开剂型，可以同时给予或顺序给予，如上所述。

本发明也包括药物组合物，其包含HDAC抑制剂的可药用盐和/或抗癌剂。

本文所描述和适合用于本发明方法的化合物的合适可药用盐是常规无毒盐，可以包括与碱成的盐或酸加成盐，例如与无机碱成的盐，例如，碱金属盐(例如，锂盐，钠盐，钾盐，等等)，碱土金属盐(例如，钙盐，镁盐，等等)，铵盐；与有机碱成的盐，例如，有机胺盐(例如，三乙胺盐，吡啶盐，甲基吡啶盐，乙醇胺盐，三乙醇胺盐，二环己基胺盐，N，N′-二苄基乙二胺盐，等等)等等；无机酸加成盐(例如，盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，等等)；有机羧酸或磺酸加成盐(例如，甲酸盐，乙酸盐，三氟乙酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，甲磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐，等等)；与碱性或酸性氨基酸成的盐(例如，精氨酸，门冬氨酸，谷氨酸，等等)，等等。

本发明也包括药物组合物，其包含HDAC抑制剂的水合物和/或抗癌剂。

此外，本发明也包括药物组合物，其包含SAHA或任何其它HDAC抑制剂的任何固体或液体物理形式。例如，HDAC抑制剂可以是结晶形式、非晶形式，并且可以具有任何粒径。可以将HDAC抑制剂颗粒微粉化，或可以是聚集物、颗粒、粉末、油、油性悬浮液或任何其它固体形式或液体物理形式。

对于口服，药物组合物可以是液体或固体。适宜的固体口服制剂包括片剂、胶囊、丸剂、颗粒、小丸等等。合适的液体口服制剂包括溶液、悬浮液、分散体、乳化液、油等等。

通常用作载体或稀释剂的任何惰性赋形剂可以在本发明的制剂中使用，例如胶质、淀粉、糖、纤维素材料、丙烯酸酯或其混合物。组合物可以进一步包含崩解剂和润滑剂，此外可以包含一或多种添加剂，添加剂选自结合剂、缓冲液、蛋白酶抑制剂、表面活质、增溶剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、增粘剂、甜味剂、成膜剂或其任何组合。此外，本发明的组合物可以是控制释放或立即释放的制剂形式。

考虑到给药方式，HDAC抑制剂可以作为活性组分在与适当选择的合适药物稀释剂、赋形剂或载体(本文一起指的是“载体”物质或“可药用载体”)的混合物中给予。本文使用的术语“可药用载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、涂层、抗菌和抗真菌剂、等渗的和延迟吸收剂，等等，其与药学给药相适合。合适的载体描述在Remington′s PharmaceuticalSciences的最近版本中，其是本领域的标准参考文献，本文将其引入作为参考。

对于液体制剂，可药用载体可以是非水溶液、悬浮液、乳化液或油类。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇和注射有机酯，例如油酸乙酯。水溶液载体包括水、醇/水溶液、乳化液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。油类的例子是石油、动物、植物或合成来源，例如，花生油，大豆油，矿物油，橄榄油，向日葵油和鱼肝油。溶液或悬浮液还可以包括下列组分：无菌稀释剂，例如注射用水，盐溶液，不挥发油，聚乙二醇，丙三醇，丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗环血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；，缓冲液，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调节pH值。

还可以使用脂质体和非水赋形剂例如不挥发油。药学活性物质的这种介质和试剂的用途在本领域是众所周知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则其都可用在组合物中。还可以在组合物中结合进辅助的活性化合物。

固体载体/稀释剂包括但不局限于：胶质，淀粉(例如，玉米淀粉，预胶凝淀粉)，糖(例如，乳糖，甘露糖醇，蔗糖，葡萄糖)，纤维素材料(例如，微晶纤维素)，丙烯酸酯(例如，聚甲基丙烯酸甲酯)，碳酸钙，氧化镁，滑石粉，或其混合物。

此外，组合物可以进一步包含：粘合剂(例如，阿拉伯胶，玉米淀粉，凝胶，卡波姆，乙基纤维素，胍尔豆胶，羟丙基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮)，崩解剂(例如，玉米淀粉，马铃薯淀粉，海藻酸，二氧化硅，交联羧甲纤维素钠，聚乙烯聚吡咯烷酮，胍尔豆胶，羧甲淀粉钠，Primogel)，各种pH值和离子强度的缓冲液(例如，tris-HCI，乙酸盐，磷酸盐)，预防表面吸收的添加剂例如白蛋白或凝胶，洗涤剂(例如，Tween 20，Tween 80，Pluronic F68，胆汁酸盐)，蛋白酶抑制剂，表面活质(例如，十二烷基硫酸钠)，渗透增强剂，增溶剂(例如，丙三醇，聚乙烯丙三醇)，助流剂(例如，胶体二氧化硅)，抗氧化剂(例如，抗环血酸，焦亚硫酸钠，丁羟茴醚)，稳定剂(例如，羟丙基纤维素，羟基丙基甲基纤维素)，增粘剂(例如，卡波姆，胶体二氧化硅，乙基纤维素，胍尔豆胶)，甜味剂(例如，蔗糖，阿斯巴甜，枸橼酸)，调味剂(例如，薄荷，水杨酸甲酯，或橙调味剂)，防腐剂(例如，硫汞撒，苯甲醇，对羟基苯甲酸酯)，润滑剂(例如，硬脂酸，硬脂酸镁，聚乙二醇，十二烷基硫酸钠)，流动助剂(例如，胶体二氧化硅)，增塑剂(例如，邻苯二甲酸二乙酯，柠檬酸三乙酯)，乳化剂(例如，卡波姆，羟丙基纤维素，十二烷基硫酸钠)，聚合物涂层(例如，泊洛沙姆或其乙二胺衍生物(poloxamines)，涂层和成膜剂(例如，乙基纤维素，丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯)和/或佐剂。

在一个实施方案中，与载体一起制备活性化合物，载体可使化合物避免从身体中快速排出，例如控释制剂，包括植入片和微囊密封的递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯共聚物，聚酐，聚乙二醇酸，胶原，聚原酸酯和聚乳酸。制备这种制剂的方法对本领域技术人员是显而易见的。该物质还可以商业上从AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals，Inc获得。脂质体悬浮液(包括脂质体，其靶向被病毒抗原的单克隆抗体感染的细胞)也可以用作可药用载体。这些可以按照本领域技术人员已知的方法制备，例如U.S.专利No.4,522,811中描述的方法。

特别有利的是，将口服组合物配制为剂量单位形式，以便于给药和剂量的均匀性。本文使用的剂量单位形式是指适合作为所治疗患者的单元剂量的物理离散单位；每个单位包含预定数量的、适于产生所需要的治疗效果的活性化合物与所需药学载体。通过并直接根据活性化合物的独特特征和所达到的具体治疗效果、和混配这种用于治疗个体的活性化合物领域所固有的限制，确定本发明的剂量单位形式的说明。

可以将药物组合物与给药说明书一起包含在容器、包装或分配器中。

包含活性组分的药物组合物的制备在本领域是众所周知的，例如利用混合、造粒或制片工艺。活性治疗组分常常与可药用并且与活性组分不矛盾的赋形剂混合。对于口服，将活性剂与通常用于这种目的的添加剂混合，例如赋形剂、稳定剂或惰性稀释剂，利用常规方法将其转化为适宜的给药形式，例如片剂、糖衣片剂、硬或软胶囊、水溶液、醇或油溶液等等，如上面所详述。

给予患者的化合物的量应该少于可在患者中导致毒性的数量。在某些实施方案中，给予患者的化合物的量少于可在患者血浆中导致化合物浓度等于或超过化合物毒性水平的数量。在具体实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约10nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约25nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约50nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约100nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约500nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约1,000nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约2,500nM。在另一个实施方案中，患者血浆中的化合物的浓度保持在大约5,000nM。在本发明的实践中，应该给予患者的化合物的最佳数量取决于所使用的具体化合物和所治疗的癌症类型。

在制剂中，活性组分和各种赋形剂的百分比可以变化。例如，组合物可以包含在20和90％之间、特别在50-70％重量之间的活性剂。

对于IV给药，在静脉内给药可接受的pH值范围内，具有合理缓冲能力的葡糖醛酸、L-乳酸、乙酸、枸橼酸或任何可药用酸/共轭碱可以用作缓冲液。还可以使用氯化钠水溶液，其中pH值已经用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调节至所需要的范围。典型地，静脉内制剂的pH值范围可以在大约5至大约12范围之内。包含HDAC抑制剂(其中HDAC抑制剂具有异羟肟酸部分)的静脉内制剂的具体pH值范围可以是大约9至大约12。

可以按照本领域众所周知的方法制备皮下用的制剂，pH值介于大约5和大约12中间，其包含合适缓冲液和等渗性试剂。可以将它们进行配制，以递送活性剂的日剂量，每天皮下给药一或多次。根据所给予HDAC抑制剂的溶解度，本领域普通技术人员可以容易地选择制剂的合适缓冲液和pH值。还可以在皮下用的制剂中使用氯化钠水溶液，其中pH值已经用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠调节至所需要的范围。典型地，皮下用的制剂的pH值范围可以在大约5至大约12范围之内。HDAC抑制剂(异羟肟酸部分)的皮下用的制剂的具体pH值范围可以是大约9至大约12。

还可以通过局部使用合适的鼻内赋形剂，以鼻内形式给予本发明的组合物，或通过透皮途径，使用本领域普通技术人员熟知的透皮皮肤贴剂的那些形式。为了以透皮递送系统形式进行给药，在整个给药方式中，剂量给药将是连续的，而不是间歇性的。

本发明还提供了选择性的引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的体外方法，由此抑制这种细胞的增殖，该方法使细胞与第一个数量的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)或其可药用盐或水合物、和第二个数量的抗癌剂接触，其中第一和第二个数量一起包括可有效引起细胞的终末分化、细胞生长抑制和细胞程序死亡的数量。

虽然可以体外实践本发明方法，但预计选择性引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的方法的具体实施方案包括体内接触细胞，即将化合物给予需要治疗的、具有新生细胞或肿瘤细胞的患者。

因此，本发明还提供了选择性的引起肿瘤细胞的终末分化、细胞生长抑制和/或细胞程序死亡的方法，由此在患者中抑制这种细胞的增殖，该方法在第一个治疗过程中给予患者第一个数量的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)或其可药用盐或水合物、和在第二个治疗过程中给予患者第二个数量的抗癌剂，其中第一和第二个数量一起包括可有效引起细胞的终末分化、细胞生长抑制和细胞程序死亡的数量。

用下述实施例举例说明本发明。列出该部分是为了帮助理解本发明，不是用来并且不应该解释为以任何方式限制本发明，本发明由后面列出的权利要求来限制。

实施例

提供实施例，以便更充分地说明本发明的各种实施方案。不应该将这些实施例理解为对在附加权利要求中所列举的本发明范围的限制。

实施例1：在患有复发和难治疗的多发性骨髓瘤的患者中，口服SAHA 与硼替佐米的组合的一期临床试验

该研究的目标是在患有晚期多发性骨髓瘤的患者中测定口服Vorinostat加上硼替佐米组合的极限耐受量(MTD)、药物动力学和药效特性。进一步的，在下列患者中，将地塞米松加入到Vorinostat和硼替佐米的组合中：

a)小于部分症状缓解的患者

b)患有稳定疾病的患者

c)疾病逐渐发展的患者，要求没有显著的最终器官损伤，将器官损伤定义为：恶化贫血、恶化肾衰竭、高粘稠滞度综合症的征象。

此外，该研究用于评价vorinostat和硼替佐米的组合方案的安全性和耐受性，以估计当组合使用时对于vorinostat和硼替佐米的响应速率、响应时间，和响应持续时间和进展时间。

该研究是在适于硼替佐米治疗的患者中的多中心、开放标记、逐步升高剂量的vorinostat与静脉内硼替佐米针剂组合的一期研究。在非随机化的试验中，对于21天治疗周期的第4-11天，用vorinostat治疗患者，至多8个周期。在第1、4、8和11天，给予患者剂量水平1-5的静脉内(IV)推注形式的硼替佐米。完成至少2个周期治疗(用vorinostat与硼替佐米的组合)并且而后经历病情逐渐发展的患者，在每个周期的第4-8天，可以按照计划用地塞米松(每天p.o.20mg)与vorinostat和硼替佐米一起治疗。

在研究开始时，按照下列表1和表2中列出的各种剂量水平，对5组三人同龄组进行评估：

表1.

表2.

患者年龄中间值是55岁(范围38-79岁)。从多发性骨髓瘤诊断至研究的时间中间值是5.3年(范围：1.5-15年)。多发性骨髓瘤同型包括IgG(n＝10)、IgA(n＝5)、L链(n＝4)和非分泌器官(n＝2)。

在没有出现由于不利情况而造成治疗延迟的情况下，治疗可以继续8个周期，或直到适用于下列标准之一为止：

a)疾病逐渐发展

b)妨碍进一步给药治疗的并发疾病

c)无法接受的不利情况

d)患者决定退出该研究

e)根据研究者的判断，患者病症出现常规或特异变化，使患者无法接受进一步的治疗。

f)如果患者获得完全症状缓解，他们继续研究总共8个周期。

进一步的研究登记了多达40个患有多发性骨髓瘤、复发或难治疗疾病的成年患者。一个治疗周期是3周或21天。在每个周期中，在第4-11天，口服(p.o.)给予Vorinostat胶囊(b.i.d.)，静脉内(IV)推注给予硼替佐米针剂，每周两次，给予两周。在同时给予Vorinostat和硼替佐米的那天，在硼替佐米给药之前给予Vorinostat剂量。虽然当前FDA批准的对于复发骨髓瘤患者的硼替佐米剂量是1.0mg/m²，但如果出现毒性，硼替佐米的后续剂量将要减少到0.7mg/m²。如果发现组合治疗是安全的，那么可以进行剂量递增。所试验的其它硼替佐米剂量是1.3mg/m²。

在研究开始时，12名患者具有复合染色体组型；19名患者在最后的前期治疗中有疾病进展(PD)，在最后治疗和研究开始之间具有20天(15-39)的中值。仅仅2个患者在反应停(thalidomide)的维持下第一次复发。在2名患者中对于周期1，每天用Vorinostat 500mg，以4级延长的QT期间和4级疲劳限定最大耐受剂量(MTD)。2个周期之后，观察到一些3-4级毒性，包括骨髓抑制和血小板减少，需要输液支持和生长因子。同样，观察到非血液学2级毒性和较高程度的疲劳(n＝5)、腹泻(n＝3)、心房纤颤(n＝1)、带状疱疹(n＝1)和肺炎(n＝2，细菌和RSV)。在十五个评价响应的患者中，有1个nCR和5个PR(总响应40％)。进一步的，6名患者具有稳定的疾病，3名患者具有PD。在该研究中，给予患者地塞米松没有增加响应。

单一口服剂量之后，Vorinostat的药物动力学从100-500mg是直线型的，具有平均AUC(0.7±0.45-4.4±0.07)、Cmax(0.3±0.14-1.2±0.06)和Tmax(1.3±0.4-2.3±2.5)。在该研究中，十个患者在进入研究前(中间值1.8×10⁶，范围：0.2-42.6)和在第一个周期的第11天[中间值0.9×10⁶，范围：0.4-5.4]从骨髓中分离了CD-138+骨髓瘤细胞；提供了药效数据。如下面表3中所概括，Vorinostat加上硼替佐米的MTD是每天400mg(x8天)加上1.3mg/m²(第1、4、8和11天)。研究发现，给予硼替佐米之后给予Vorinostat不影响药物动力学。考虑到满意效果，计划在二期试验中评价该方案。

表3

组	硼替佐米(mg/m²)	Vorinostat(mg)	No of pts	周期编号	最好的响应5
组	硼替佐米(mg/m²)	Vorinostat(mg)	No of pts	周期编号	最好的响应5	1	1	100bid	3	5，7，5	SD，SD，SD
2	1.3	100bid	3	5，6，3	SD，PR，PD	1	1	100bid	3	5，7，5	SD，SD，SD
2	1.3	100bid	3	5，6，3	SD，PR，PD	3	1.3	200bid	3	8，3，8	nCR，SD，PR
4	1.3	400每天	3	5，3，3	SD，PD，PR	3	1.3	200bid	3	8，3，8	nCR，SD，PR
4	1.3	400每天	3	5，3，3	SD，PD，PR	5	1.3	500每天	3	7，1，1	PR，NE，NE“第一个周期的MTD”
MTD	1.3	400每天	6^*	4，3，“2，2，1，1”	PD，PR，“响应评价前期”	5	1.3	500每天	3	7，1，1	PR，NE，NE“第一个周期的MTD”

在21天周期的第1、4、8和11天给予硼替佐米，在第4-11天，加上Vorinostat。患者接受至多8个周期。对于无反应者，在第2周期加入地塞米松。^*为了更好地限定毒性和响应，在MTD条件下治疗6名患者。

尽管参考本发明的具体实施方案详细说明和描述了本发明，但本领域技术人员应该理解，可以在不背离所描述的本发明的意思的条件下，进行形式和细节上的各种变化。本发明的范围包括下述权利要求。

Claims

1.在需要的患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，该方法包括给予患者：i)SAHA(辛二酰苯胺异羟肟酸)，由下列结构代表：

或其可药用盐或水合物；和ii)(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸(硼替佐米)，或其可药用盐或水合物，其中对于21天周期的第4-11天的至少一个治疗周期，每天口服给予200mg至800mg SAHA或其可药用盐或水合物，和对于21天周期的第1、4、8和11天的至少一个治疗周期，每天静脉内给予0.7-1.3mg/m²硼替佐米或其可药用盐或水合物。

2.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以100mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

3.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以200mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

4.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以300mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

5.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以400mg的剂量给予两次SAHA或其可药用盐或水合物。

6.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以400mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

7.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以500mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

8.权利要求1的方法，其中对于21天当中的第4-11天的至少一个治疗周期，每天以600mg的剂量给予一次SAHA或其可药用盐或水合物。

9.权利要求1的方法，其中在对于21天当中的第4-11天的至多八个治疗周期中，重复给予SAHA或其可药用盐或水合物。

10.权利要求1的方法，其中以100mg的剂量每天给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.0mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

11.权利要求1的方法，其中以100mg的剂量每天给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

12.权利要求1的方法，其中以200mg的剂量每天给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

13.权利要求1的方法，其中以300mg的剂量每天给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

14.权利要求1的方法，其中以400mg的剂量每天给予两次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

15.权利要求1的方法，其中以400mg的剂量每天给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

16.权利要求1的方法，其中以500mg的剂量每天给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

17.权利要求1的方法，其中以600mg的剂量每天给予一次SAHA或其可药用盐或水合物，和以1.3mg/m²的总日剂量给予[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸或其可药用盐或水合物。

18.权利要求1的方法，进一步包括：口服给予地塞米松或其可药用盐或水合物，其中对于21天当中的5天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每天一次给予地塞米松或其可药用盐或水合物。

19.权利要求1的方法，进一步包括：对于21天当中的第4-8天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每日口服一次给予地塞米松。

20.在需要的患者中治疗多发性骨髓瘤的方法，该方法包括给予患者：

i)SAHA(辛二酰苯胺异羟肟酸)，由下列结构代表：

和

ii)(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸(硼替佐米)，其中对于21天周期的第4-11天的至少一个治疗周期，每天口服给予一次400mg SAHA，和对于21天周期的第1、4、8和11天的至少一个治疗周期，每天静脉内给予1.3mg/m²硼替佐米。

21.权利要求20的方法，进一步包括：对于21天当中的第4-8天的至少一个治疗周期，以20mg的剂量每日口服给予一次地塞米松。