CN101033249A - 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 - Google Patents
固相多肽合成比筏芦定的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101033249A CN101033249A CNA2006100246115A CN200610024611A CN101033249A CN 101033249 A CN101033249 A CN 101033249A CN A2006100246115 A CNA2006100246115 A CN A2006100246115A CN 200610024611 A CN200610024611 A CN 200610024611A CN 101033249 A CN101033249 A CN 101033249A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- otbu
- glu
- gly
- resin
- fmoc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 128
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 title claims abstract description 10
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 46
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 46
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 297
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 297
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 306
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 143
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 132
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 71
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 67
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 60
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 59
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 47
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 claims description 21
- ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N (2s)-1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 16
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 14
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 13
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 10
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 9
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 9
- DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N 0.000 claims description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N 0.000 claims description 6
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 claims description 6
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 6
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 6
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 5
- -1 and filter Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 4
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 abstract description 3
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract 1
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- VUTZFAOGDXUYEJ-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methylbenzene Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VUTZFAOGDXUYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 2
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123900 Direct thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940003354 angiomax Drugs 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 231100000004 severe toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种固相多肽合成比筏芦定的制备方法。本发明的方法包括如下步骤：以三苯氯甲基树脂或4－甲基－三苯氯甲基树脂或4－甲氧基－三苯氯甲基树脂或2－氯－三苯氯甲基树脂或Wang树脂其中的任何一种为起始原料，按固相合成的方法依次连接保护氨基酸，获得保护的二十肽树脂，其间依次脱去Fmoc－保护基，脱侧链保护基团、切肽，获得比筏芦定粗品，再经C18(或C8)高压柱分离纯化，制得比伐诺定精品。本发明的方法，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，收率高，质量稳定，生产成本低，接肽收率高，避免使用氟化氢等剧毒试剂，三废污染少，每步接肽收率均在99％以上；总收率为：14％。
Description
技术领域
本发明涉及比伐诺定(包括醋酸盐、三氟醋酸盐及游离肽)的制备方法，尤其涉及固相多肽合成比伐诺定的制备方法。
背景技术
比伐诺定，中文名：比筏芦定、比伐诺定、比伐卢定，
商品名：Angiomax_。英文名：Bivalirudin。
结构式：
D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH
分子式及分子量：C98H138N24O33，2178.99。
Medicines公司2004年11月10日宣布在欧洲首次进行凝血酶特异性抑制剂“比伐诺定”或“比伐卢定”(Bivalirudin)的商业销售，其在美国的商品名为Angiomax_。目前已经被欧洲和美国，以及其他地区，如加拿大，以色列，新西兰和阿跟廷等国家批准，允许其上市。Angiomax是一种直接凝血酶抑制剂，在临床研究中，“比伐诺定”能够同时降低肝素临时抗凝时带来的出血和缺血并发症几率。这一优势在高危患者中也得到了保持。
美国专利5196404报导了制备本品的方法，系采用Boc路线，每步脱Boc均需用三氟醋酸，切肽采用强刺激、剧毒的无水氟化氢；因此该方法限制了比伐诺定的大规模生产和使用。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成比伐诺定的制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的方法包括如下步骤：
以三苯氯甲基树脂作树脂(Trityl Chloride Resin)、4-甲基三苯氯甲基树脂(4-Methyltrityl Chloride Resin)、4-甲氧基三苯氯甲基树脂(4-Methoxytrityl Chloride Resin)、2-氯-三苯氯甲基树脂作树脂(2-Cl TritylChloride Resin)或王树脂(Wang Resin)其中的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的二十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt或TBTU/HOAt或HBTU/HOAt或BOP/HOAt其中的任何一种为缩合剂进行接肽反应，得保护的二十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得比伐诺定粗品，并经C18(或C8)高压柱进行分离纯化，获得所说的比伐诺定，然后可再经冷冻干燥，获得比伐诺定醋酸盐或三氟醋酸盐或游离肽产品。
按照本发明，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护二十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的方法包括如下步骤：
(1)制备Fmoc-Leu-树脂：
将三苯氯甲基树脂作树脂、4-甲基三苯氯甲基树脂、4-甲氧基三苯氯甲基树脂、2-氯-三苯氯甲基树脂作树脂或王树脂(100-400目)用DMF或DCM任何一种浸泡10～60分钟，使树脂充分溶胀，混合物中，树脂的重量体积浓度为5～20ml/g，所说的树脂取代量为：0.3-1.5mmol/g；
然后在上述的树脂中，加入DIPEA或DMAP、Fmoc-Leu-OH，10-50℃反应0.5-5小时，再加甲醇，获得甲醇溶液，10-50℃反应0.5-5小时，氮气抽干，树脂用DMF洗涤，氮气抽干，获得Fmoc-Leu-树脂；
DIPEA或DMAP的摩尔数为树脂的2～20倍；
Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
甲醇溶液中，树脂的浓度为0.1～5ml/g；
(2)制备Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(1)的Fmoc-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
所说的脱帽试剂的组分和体积比为：PIP∶DMF＝1∶2～5，下同；
所说的接肽试剂的组分和体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15，下同；
Fmoc-Tyr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；下同；
Fmoc-Leu-树脂的重量与脱帽试剂的加入量的比例为5～20ml/g，下同；
TBTU或HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2～5倍，下同；
HOBT或HOAT摩尔数为树脂的2～5倍，下同；
(3)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Thr(tBu)-OH摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(4)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(3)的Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Phe-OH摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(5)制备Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(4)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(6)制备Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(5)的Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍。
其余操作以及工艺条件同上；
(7)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(6)的Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(8)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(7)的Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，1～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍。
其余操作以及工艺条件同上；
(9)制备Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(8)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Phe-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(10)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asp(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(11)制备Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(10)的Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(12)制备Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(11)的Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HBTU/BOP和HOBt/HOAT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(13)制备Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂脂：
在步骤(12)的Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(14)制备Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(15)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(14)的Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBtT的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得
Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(16)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(15)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(17)制备Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(16)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(18)制备Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(17)的Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(19)制备Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(18)的Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(20)制备Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(19)的Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃脱帽反应5～60分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Boc-D-Phe-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，20～30℃接肽反应0.5～5小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Boc-D-Phe-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(21)制备Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OH：
在步骤(20)的Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-He-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入预冷至-10℃～30℃的切肽试剂(TFA/EDT/H2O/TIS＝90-95/2-5/2-5/1-5，体积比)，10℃～50℃切肽反应1～5小时，减压蒸除溶剂，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗涤，在室温，置干燥器中，P2O5存在下减压干燥10～14小时，获得比伐诺定粗品；
切肽试剂中，树脂的浓度为：5～50ml/g；
按照本发明，粗品经C18(或C8)柱分离纯化分离纯化的方法包括如下步骤：
将比筏芦定粗品溶于乙酸水溶液中，过滤，滤液经C18或C8柱纯化，流动相：0.01-0.5M醋酸盐、磷酸盐或三氟乙酸盐∶乙腈(10-90∶90-10，体积比)；流速为50-1500ml/min；检测波长为：250-285nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，冻干，获得成品(MW：2179)，总收率为14％(以树脂的mmol计)。
乙酸的重量浓度为0.5～10％，乙酸中比筏芦定粗品的重量浓度为1～50％。
本发明的比筏芦定工艺路线有下列特点，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，生产成本低，三废少，收率高，质量稳定，生产成本低，极具市场竞争力，接肽收率高(每步接肽收率为≥98％)，降低了成本，采用切肽试剂(TFA/EDT/H2O/TIS)进行切肽，加入乙醚沉淀粗品的方法，避免使用氟化氢等剧毒试剂，三废污染少，且提高收率，采用C18(或C8)柱进行分离纯化，总收率约为14％。
本工艺则采用温和的Fmoc路线，每步脱Fmoc仅需用25％六氢吡啶，切肽采用少量三氟醋酸，避免使用氟化氢；大大减少了三废；极大地有利于工业化生产，也符合“资源节约型和环境友好型”的持续发展战略。
具体实施方式
实施例1
实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：
| No | 原料及试制品名 | 来源 |
| 1 | 三苯氯甲基类树脂(Trityl Chloride Resin) | 天津和成科技有限公司 |
| 2 | 4-甲基三苯氯甲基树脂(4-Methyltrityl Chloride Resin) | 天津和成科技有限公司 |
| 3 | 4-甲氧基三苯氯甲基树脂(4-Methoxytrityl ChlorideResin) | 天津和成科技有限公司 |
| 4 | 2-氯-三苯氯甲基树脂作树脂(2-Cl Trityl ChlorideResin) | 天津和成科技有限公司 |
| 5 | Wang树脂(Wang Resin) | 天津和成科技有限公司 |
| 6 | Fmoc-Asp(OtBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 7 | Fmoc-Glu(OtBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 8 | Fmoc-Pro-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 9 | Fmoc-Gly-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 10 | Fmoc-Ile | 四川三高生化股份有限公司 |
| 11 | Fmoc-Leu | 四川三高生化股份有限公司 |
| 12 | Fmoc-Tyr(tBu)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 13 | Fmoc-Phe-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 14 | Fmoc-Arg(Pbf)-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 15 | Boc-D-Phe-OH | 四川三高生化股份有限公司 |
| 16 | HOBt(N-Hydroxybenzotriazole) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 17 | HOAt | 四川三高生化股份有限公司 |
| 18 | HBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 19 | TBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium tetrafluoroborate) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 20 | BOP(Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluroniumtetrafluoroborate) | 四川三高生化股份有限公司 |
| 21 | 三氟乙酸(TFA) | 美国Fluka公司 |
| 22 | N-甲基吗啡啉(NMM) | 美国Fluka公司 |
| 23 | 乙二硫醇(EDT) | 美国Fluka公司 |
| 24 | 三异丙基硅烷(TIS) | 美国Fluka公司 |
| 25 | 乙腈 | 美国Merck公司 |
| 26 | 二甲基甲酰胺(DMF) | 美国Merck公司 |
| 27 | 甲醇 | 上海振兴化工一厂 |
| 28 | 六氢吡啶(PIP) | 上海化学试剂公司 |
| 29 | DIPEA(N，N’Diisopropyl ethylamine) | 美国Fluka公司 |
| 30 | DMAP(4-Dimethylaminopyridine) | 美国Fluka公司 |
实施例中：
所说的接肽试剂为：NMM∶DMF＝1∶10，体积比；
所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF＝1∶3.5，体积比；
(1)制备Fmoc-Leu-树脂：
称取2-氯三苯氯甲基树脂50克(100-400目，1.0mmol/g)，用500mlDMF浸泡30分钟，加DIPEA 44ml，Fmoc-Leu-OH(FW：353.4)17.7g，25℃反应1小时。再加甲醇20ml，25℃反应1小时，抽干，树脂用DMF洗六次，抽干。
(2)制备Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(1)的Fmoc-Leu-树脂中，加入脱帽试剂500ml，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Tyr(tBu)-OH(459.6)68.9g、TBTU(FW：321.1)48.1g和HOBt(FW：135.1)20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(3)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂500ml，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH(FW：425.5)63.8g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍。
其余操作以及工艺条件同上；
(4)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(3)的Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH(425.5)63.8g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OBut)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
其余操作以及工艺条件同上；
(5)制备Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(4)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH(FW：337.4)50.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
其余操作以及工艺条件同上；
(6)制备Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(5)的Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Ile-OH(FW：353.4)53.1g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(7)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂树脂：
在步骤(6)的Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH 63.8g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(8)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(7)的FmocGlu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH 63.4g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(9)制备Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(8)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Phe-OH(FW：387.4)58.1g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
(10)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-He-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Asp(OtBu)-OH(FW：411.5)61.7g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
(11)制备Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(10)的Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH(FW：297.3)44.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
(12)制备Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(11)的Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH(FW：596.7)89.5g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
(13)制备Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(12)的Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH 44.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
(14)制备Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH 44.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(15)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(14)的Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH 44.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(16)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(15)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH 44.6g、TBTU 48.1g和HOBT 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(17)制备Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(16)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH(FW：337.4)50.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-PheGlu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(18)制备Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(17)的Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(Pbf)-OH(FW：648.8)97.3g、TBTU48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(19)制备Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-He-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(18)的Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH 50.6g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(20)制备Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(19)的Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入500ml脱帽试剂，25℃反应30分钟，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用400ml接肽试剂溶解的Boc-D-Phe-OH(FW：265.3)39.8g、TBTU 48.1g和HOBt 20.2g的混合物，25℃反应2小时，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；约得保护的二十肽树脂130g。
(21)制备D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH
在步骤(20)的Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入预冷至0℃的切肽试剂(TFA/EDT/H2O/TIS＝1260ml/56ml/35ml/14ml)，25℃反应3小时，减压除溶剂后，加入1500ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，在室温，置干燥器中，P2O5存在下减压干燥12小时，获得切肽后的比筏芦定粗品，约60g。
将比筏芦定粗品溶于重量浓度为5％乙酸中，过滤，滤液经C18柱纯化，流动相：0.2M醋酸盐缓冲液∶乙腈(7.5∶2.5，体积比)；流速为350ml/min；检测波长为：280nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，冻干，获得产品15.2g(MW：2178.99)，总收率为14％。
实施例2
采用与实施例1相同的方法和工艺条件，其中：
以Wang树脂作起始原料，DMF溶胀后，加入Fmoc-Leu-OH、TBTU、HOBt、NMM和DMF后，25℃反应2小时，DMF、无水乙醇分别洗涤三次。
加入脱帽试剂，25℃反应0.5小时，充分洗涤后，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-氨基酸、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，25℃反应2小时，同例实施1操作，直至接完二十肽。再经切肽等反应，得到14.6g白色疏松块状物产品。
Claims (7)
1.一种固相多肽合成比筏芦定的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
以三苯氯甲基树脂作树脂、4-甲基-三苯氯甲基树脂、4-甲氧基-三苯氯甲基树脂、2-氯-三苯氯甲基树脂作树脂或王树脂其中的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的二十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt及或TBTU/HOAt或HBTU/HOAt或BOP/HOAt其中的任何一种为缩合剂进行接肽反应，得保护的二十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得比伐诺定粗品，并经C18或C8柱进行分离纯化，获得所说的比伐诺定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护二十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的方法包括如下步骤：
(1)制备Fmoc-Leu-树脂：
将三苯氯甲基树脂作树脂、4-甲基三苯氯甲基树脂、4-甲氧基三苯氯甲基树脂、2-氯-三苯氯甲基树脂作树脂或王树脂用DMF或DCM浸泡10～60分钟，混合物中，树脂的重量体积浓度为5～20ml/g；
然后在上述的树脂中，加入DIPEA或DMAP、Fmoc-Leu-OH，10-50℃反应0.5-5小时，再加甲醇，获得甲醇溶液，10-50℃反应0.5-5小时，氮气抽干，树脂用DMF洗涤，氮气抽干，获得Fmoc-Leu-树脂；
DIPEA或DMAP的摩尔数为树脂的2～20倍；
Fmoc-Leu-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
甲醇溶液中，树脂的浓度为0.1～5ml/g；
(2)制备Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(1)的Fmoc-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
所说的脱帽试剂的组分和体积比为：PIP∶DMF＝1∶2～5，下同；
所说的接肽试剂的组分和体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15，下同；
Fmoc-Tyr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
Fmoc-Leu-树脂的重量与脱帽试剂的加入量的比例为5～20ml/g；
TBTU/HBTU/BOP的摩尔数为树脂的2～5倍；
HOBT/HOAT摩尔数为树脂的2～5倍；
(3)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂
在步骤(2)的Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Thr(tBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Thr(tBu)-OH摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(4)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(3)的Fmoc-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Phe-OH摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(5)制备Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(4)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干。加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(6)制备Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(5)的Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍。
其余操作以及工艺条件同上；
(7)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(6)的Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(8)制备Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(7)的Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Glu(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍。
其余操作以及工艺条件同上；
(9)制备Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(8)的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Phe-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Phe-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(10)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(9)的Fmoc-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asp(OtBu)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(11)制备Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(10)的Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(12)制备Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(11)的Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOPHOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(13)制备Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(12)的Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上；
(14)制备Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(13)的Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(15)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(14)的Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBt或HBTU/HOBt或BOP/HOBt的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(16)制备Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(15)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Gly-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(17)制备Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(16)的Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(18)制备Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(17)的Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Arg(Pbf)-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(19)制备Fmoc-Pro-Arg(Pbf)Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(18)的Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Pro-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
Fmoc-Pro-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
(20)制备Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂：
在步骤(19)的Fmoc-Pro-Arg(Pbf)Pro-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入脱帽试剂，脱帽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，加入用接肽试剂溶解的Boc-D-Phe-OH、TBTU/HOBT或HBTU/HOBT或BOP/HOBT的混合物，接肽反应，抽干，分别用DMF和乙醇洗涤，抽干，获得Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
Boc-D-Phe-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；
其余操作以及工艺条件同上。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，切肽包括如下步骤：在步骤(20)的Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly--Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂中，加入预冷至-10℃～30℃的切肽试剂(TFA/EDT/H2O/TIS＝90-95/2-5/2-5/1-5，体积比)，10℃～50℃反应1～5小时，减压蒸除溶剂，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗涤，在室温，置干燥器中，P2O5存在下减压干燥10～14小时，获得比伐诺定粗品；
切肽试剂中，树脂的浓度为：5～50ml/g。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗品经C18或C8柱分离纯化分离纯化的方法包括如下步骤：
将比筏芦定粗品溶于乙酸水溶液中，过滤，滤液经C18或C8柱纯化，流动相：0.01-0.5M醋酸盐或磷酸盐或三氟乙酸盐∶重量浓度为10～40％的乙腈(10-60∶90-40，体积比)；流速为50-1500ml/min；检测波长为：250-285nm；用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后去盐，冻干，获得成品；
乙酸的重量浓度为0.5～10％，乙酸中比筏芦定粗品的重量浓度为1～50％。
4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，脱帽反应温度为10～50℃，时间为5～60分钟。
5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，接肽反应温度为20～30℃，时间为0.5～5小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的树脂取代量为：0.3-1.5mmol/g。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2006100246115A CN101033249B (zh) | 2006-03-10 | 2006-03-10 | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 |
| US11/716,124 US20080051558A1 (en) | 2006-03-10 | 2007-03-09 | Method of preparing bivalirudin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2006100246115A CN101033249B (zh) | 2006-03-10 | 2006-03-10 | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101033249A true CN101033249A (zh) | 2007-09-12 |
| CN101033249B CN101033249B (zh) | 2011-05-11 |
Family
ID=38730009
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2006100246115A Active CN101033249B (zh) | 2006-03-10 | 2006-03-10 | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20080051558A1 (zh) |
| CN (1) | CN101033249B (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101284863B (zh) * | 2008-06-06 | 2010-11-03 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种固相合成西曲瑞克的制备方法 |
| CN101906150A (zh) * | 2010-06-28 | 2010-12-08 | 上海昂博生物技术有限公司 | 一种比法卢定的制备方法 |
| CN101475631B (zh) * | 2009-01-08 | 2011-08-17 | 苏州中科天马肽工程中心有限公司 | 比伐卢定的液相合成方法 |
| CN102229645A (zh) * | 2011-06-03 | 2011-11-02 | 程云 | 免疫七肽的制备方法 |
| CN102229649A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-11-02 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种机体保护多肽(bpc 157肽)的制备方法 |
| CN102264757A (zh) * | 2008-12-29 | 2011-11-30 | 隆萨布莱纳公司 | 制备比伐卢定的方法 |
| CN102286076A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-12-21 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 比伐卢定的制备方法 |
| CN103012556A (zh) * | 2011-09-21 | 2013-04-03 | 上海苏豪逸明制药有限公司 | 固相多肽合成生长激素促分泌素五肽的方法 |
| CN101555274B (zh) * | 2009-05-15 | 2013-08-21 | 海南双成药业股份有限公司 | 一种多肽固相合成比法卢定粗品的制备方法 |
| CN103833833A (zh) * | 2012-11-20 | 2014-06-04 | 天津药物研究院 | 自组装多肽及其制备方法和应用 |
| CN103880945A (zh) * | 2013-12-28 | 2014-06-25 | 郑州大明药物科技有限公司 | 制备高纯度胸腺法新的方法 |
| CN104530224A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-22 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种固相合成比伐芦定的方法 |
| CN108383905A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-08-10 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| WO2019241903A1 (en) * | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Shanghai Space Peptides Pharmaceutical Co., Ltd. | Synthetic method of bivalirundin |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101094867B (zh) | 2004-10-19 | 2011-08-24 | 隆萨股份公司 | 用于固相肽合成的方法 |
| US7582727B1 (en) | 2008-07-27 | 2009-09-01 | The Medicinces Company | Pharmaceutical formulations of bivalirudin and processes of making the same |
| US7598343B1 (en) | 2008-07-27 | 2009-10-06 | The Medicines Company | Pharmaceutical formulations of bivalirudin and processes of making the same |
| KR20110056536A (ko) | 2008-09-03 | 2011-05-30 | 시노팜 타이완 리미티드 | 프람린티드의 제조 방법 |
| WO2011071799A2 (en) * | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd. | Purification of bivalirudin |
| WO2017019174A1 (en) * | 2015-07-30 | 2017-02-02 | Ambiopharm, Inc. | Method of producing bivalirudin |
| CN105388239B (zh) * | 2015-12-18 | 2018-01-05 | 兆科药业（合肥）有限公司 | 一种多肽固相合成的监测方法 |
| US11560402B2 (en) * | 2018-04-10 | 2023-01-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Method for cleavage of solid phase-bound peptides from the solid phase |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5196404B1 (en) * | 1989-08-18 | 1996-09-10 | Biogen Inc | Inhibitors of thrombin |
| DE4103649A1 (de) * | 1991-02-07 | 1992-08-13 | Basf Ag | Neue antikoagulatorisch wirksame peptide |
| CN100338090C (zh) * | 2002-12-17 | 2007-09-19 | 常州市第四制药厂有限公司 | 生长抑素全合成新方法 |
| CN1552728B (zh) * | 2003-05-29 | 2012-04-18 | 上海苏豪逸明制药有限公司 | 一种生长抑素的合成方法 |
| JP2008543884A (ja) * | 2005-09-14 | 2008-12-04 | ノベタイド，リミティド | ビバリルジンの生成方法 |
-
2006
- 2006-03-10 CN CN2006100246115A patent/CN101033249B/zh active Active
-
2007
- 2007-03-09 US US11/716,124 patent/US20080051558A1/en not_active Abandoned
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101284863B (zh) * | 2008-06-06 | 2010-11-03 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种固相合成西曲瑞克的制备方法 |
| CN102264757A (zh) * | 2008-12-29 | 2011-11-30 | 隆萨布莱纳公司 | 制备比伐卢定的方法 |
| CN101475631B (zh) * | 2009-01-08 | 2011-08-17 | 苏州中科天马肽工程中心有限公司 | 比伐卢定的液相合成方法 |
| CN101555274B (zh) * | 2009-05-15 | 2013-08-21 | 海南双成药业股份有限公司 | 一种多肽固相合成比法卢定粗品的制备方法 |
| CN101906150A (zh) * | 2010-06-28 | 2010-12-08 | 上海昂博生物技术有限公司 | 一种比法卢定的制备方法 |
| CN101906150B (zh) * | 2010-06-28 | 2013-01-09 | 上海昂博生物技术有限公司 | 一种比法卢定的制备方法 |
| CN102229649A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-11-02 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种机体保护多肽(bpc 157肽)的制备方法 |
| CN102229645A (zh) * | 2011-06-03 | 2011-11-02 | 程云 | 免疫七肽的制备方法 |
| CN102229645B (zh) * | 2011-06-03 | 2013-08-14 | 程云 | 免疫七肽的制备方法 |
| CN102286076A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-12-21 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 比伐卢定的制备方法 |
| CN103012556A (zh) * | 2011-09-21 | 2013-04-03 | 上海苏豪逸明制药有限公司 | 固相多肽合成生长激素促分泌素五肽的方法 |
| CN103833833A (zh) * | 2012-11-20 | 2014-06-04 | 天津药物研究院 | 自组装多肽及其制备方法和应用 |
| CN103880945A (zh) * | 2013-12-28 | 2014-06-25 | 郑州大明药物科技有限公司 | 制备高纯度胸腺法新的方法 |
| CN104530224A (zh) * | 2015-01-07 | 2015-04-22 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种固相合成比伐芦定的方法 |
| CN108383905A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-08-10 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| WO2019241903A1 (en) * | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Shanghai Space Peptides Pharmaceutical Co., Ltd. | Synthetic method of bivalirundin |
| CN112424216A (zh) * | 2018-06-19 | 2021-02-26 | 上海胜泽泰医药科技有限公司 | 比伐卢定的合成方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101033249B (zh) | 2011-05-11 |
| US20080051558A1 (en) | 2008-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101033249A (zh) | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 | |
| CN1022412C (zh) | 尿烷保护的氨基酸-n-羧酸酐类的制备方法 | |
| CN1450906A (zh) | 用于肽合成的方法和组合物 | |
| KR101653950B1 (ko) | 비발리루딘의 제조 방법 | |
| CN101357936B (zh) | 固相多肽合成曲普瑞林的制备方法 | |
| RU2013118446A (ru) | Способ производства дегареликса и его промежуточных соединений | |
| CN108779150A (zh) | 地加瑞克的制备方法及其中间体 | |
| KR20190059321A (ko) | 친유성으로 변형된 라이신 측쇄를 포함하는 펩티드의 제조 방법 | |
| CN110204611B (zh) | 一种固相片段法合成比伐卢定 | |
| CN1254484C (zh) | 醋酸奥曲肽的固相合成方法 | |
| CN1865280A (zh) | 固相多肽合成亮丙瑞林的制备方法 | |
| CN1552728A (zh) | 一种生长抑素的合成方法 | |
| CN1923851A (zh) | 固相多肽合成生长抑素的制备方法 | |
| CN1923849A (zh) | 固相多肽合成奥曲肽的制备方法 | |
| CN1858060A (zh) | 固相多肽合成依非巴特的制备方法 | |
| US20220177521A1 (en) | Process for the preparation of degarelix | |
| CN100338090C (zh) | 生长抑素全合成新方法 | |
| CN101033248A (zh) | 一种制备小牛胸腺alpha 1的新工艺 | |
| CN1990501A (zh) | 固相多肽合成缩宫素的制备方法 | |
| CN1865279B (zh) | 固相多肽合成胸腺五肽的制备方法 | |
| CN1865282A (zh) | 固相多肽合成特利加压素的制备方法 | |
| CN1240712C (zh) | 制备酪－丝－亮三肽的方法 | |
| CN115746099A (zh) | 一种通过二次环化固相合成普卡那肽的方法 | |
| KR101454892B1 (ko) | 엑세나타이드의 제조방법 | |
| CN113321723A (zh) | 一种胸腺法新的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHANGHAI SOHO-YIMING PHARMACEUTICALS CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: SHANGHAI ZINENG PHARMACEUTICAL CO., LTD. |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20110803 Address after: 200333 Qianyang Road, Shanghai, No. 57, No. Co-patentee after: Shanghai Soho-yiming Pharmaceuticals Co., Ltd. Patentee after: Zhou Yiming Address before: 200333 Qianyang Road, Shanghai, No. 57, No. Co-patentee before: Shanghai Zineng Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee before: Zhou Yiming |
|
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHANGHAI SOHO-YIMING PHARMACEUTICALS CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: ZHOU YIMING Effective date: 20150105 Free format text: FORMER OWNER: SHANGHAI SOHO-YIMING PHARMACEUTICALS CO., LTD. Effective date: 20150105 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20150105 Address after: 200333 Qianyang Road, Shanghai, No. 57, No. Patentee after: Shanghai Soho-yiming Pharmaceuticals Co., Ltd. Address before: 200333 Qianyang Road, Shanghai, No. 57, No. Patentee before: Zhou Yiming Patentee before: Shanghai Soho-yiming Pharmaceuticals Co., Ltd. |