CN101023074B - Mdm2及p53间相互作用的抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供式(I)化合物，其作为p53-MDM2相互作用的抑制剂的用途以及包含该式(I)化合物的药物组合物，其中n，m，p，s，t，R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶，R⁷，X，Y，Q及Z具有所定义的意义。

Description

MDM2及P53间相互作用的抑制剂

技术领域

本发明涉及用作MDM2和p53间相互作用抑制剂的化合物及包含该化合物的组合物。另外，本发明提供制备所公开的抑制剂的方法、包含其组合物及使用其方法，例如作为药物。

p53为肿瘤抑制蛋白质，其在调节介于细胞增殖和细胞生长停止/凋亡之间的平衡方面扮演重要的角色。在正常情况下，p53的半衰期很短，因此在细胞中p53的浓度很低。然而，在响应细胞DNA伤害或细胞应力(例如致癌基因活化、染色体端粒侵蚀、缺氧)时，p53的浓度增加。此种p53浓度增加导致许多基因的转录活化，此驱动细胞生长停止或进入凋亡过程。因此，p53的一个重要功能是避免受损细胞未受控制的增殖，并因此保护有机体免于癌症的发展。

MDM2是一种p53功能的关键负向调节剂。其通过结合至p53的氨基终端转活化区而形成一种负向自动调节回路，并且因此MDM2同时抑制p53得到活化转录能力并以p53为目标进行蛋白质降解。在一般情况下，此调节回路负责维持p53的低浓度。然而，在具有野生型p53的肿瘤中，活性p53的平衡浓度可通过拮抗MDM2和p53间的相互作用而增加。此将导致在这种肿瘤细胞中p53-媒介的前凋亡和抗增殖效果的恢复。

MDM2为一种细胞原癌基因。MDM2的过量表达已在癌症区中被观察到。MDM2在各种肿瘤中被过量表达是因为基因扩增或增加的转录或转译所致。MDM2扩增促进肿瘤发生的机制至少部分与其和p53的相互作用有关。在过量表达MDM2的细胞中，p53的保护功能受阻，因此细胞无法通过增加p53浓度而响应DNA伤害或细胞应力，导致细胞生长停止和/或凋亡。因此，在DNA伤害和/或细胞应力之后，过量表达MDM2的细胞自由地持续增殖并采取肿瘤发生显型。在这些情况下，p53和MDM2的相互作用的瓦解将释放p53并因此使生长停止和/或凋亡的正常信号发生作用。

MDM2除了抑制p53的外，也可有不同功能，例如，现已证实，MDM2直接与pRb-调节的转录因子E2F1/DP1相互作用。此相互作用对MDM2的非p53依赖性致癌基因的活性很重要。E2F1区显示对MDM2-结合的p53区有显著的类似性。因为MDM2与p53和E2F1的相互作用均位于MDM2的相同结合部位，可预期MDM2/p53拮抗剂将不仅活化细胞的p53，而且也调整E2F1的活性，其在肿瘤细胞中通常是不受调节的。

同样近来所使用的DNA伤害剂(化学疗法及放射性疗法)的治疗效力可能经由MDM2对p53的负向调节而受到限制。因此，如果p53的MDM2回馈抑制受阻，则功能性p53浓度的增加将通过恢复导致凋亡的野生型p53的功能和/或逆转与p53相关的药物抗性来增加此种药剂的治疗效力。经证实组合MDM2抑制和体内DNA-伤害治疗可导致协同的抗肿瘤效果(Vousden K.H.，Cell，第103卷，691-694，2000)。

因此，MDM2和p53的相互作用的瓦解提供一种以野生型p53治疗性干预肿瘤的方法，甚至在缺乏功能性p53的肿瘤细胞中显示抗增殖效果，且另外可使发生肿瘤的细胞对化学治疗及放射性治疗敏感。发明背景

JP11130750，公开于1999年5月18日，特别描述了取代的苯基氨基羰基吲哚基衍生物作为5-HT受体拮抗剂。

EP1129074，公开于2000年5月18日，描述了邻氨基苯甲酸酰胺类作为血管内皮生长因子受体(VEGFR)的抑制剂，且可用于治疗血管生成障碍。

EP1317443，公开于2002年3月21日，公开了三环的叔胺衍生物，可用作趋化因子受体CXCR⁴或CCR⁵调节剂，用于治疗人类免疫缺陷病毒及猫免疫缺陷病毒。

EP1379329，公开于2002年10月10日，公开了N-(2-芳基乙基)苄胺作为5-HT₆受体的拮抗剂。更具体地公开了以下物质：

6-氯-N-[[3-(4-吡啶基氨基)苯基]甲基]-1H-吲哚-3-乙胺，

N-[[3(4-吡啶基氨基)苯基]甲基]-1H-吲哚-3-乙胺，及

5-甲氧基-N-[[3(4-吡啶基氨基)苯基]甲基]-1H-吲哚-3-乙胺。

WO 00/15357，公开于2000年3月23日，提供了哌嗪-4-苯基衍生物作为MDM2和p53间相互作用的抑制剂。EP 1137418，公开于2000年6月8日，提供了三环化合物，用于恢复p53家族蛋白质的构形稳定性。

WO 03/041715，公开于2003年5月22日，描述了取代的1，4-苯并二氮杂

及其作为MDM2-p53相互作用抑制剂的用途。

WO 03/51359，公开于2003年6月26日，提供了顺式-2，4，5-三苯基-咪唑酮，其抑制MDM2蛋白质与类p53肽的相互作用且具有抗增殖活性。

WO 04/05278，公开于2004年1月15日，公开了双芳基磺酰胺化合物，其结合MDM2且可用于治疗癌症。

仍持续需要抑制MDM2和p53间相互作用的有效且强力的小分子。

本发明的化合物在结构、其药理活性和/或药理效力上不同于现有技术。

发明描述

本发明提供抑制MDM2和p53间相互作用的化合物、组合物及方法，用以治疗癌症。另外，本发明的化合物及组合物可用于提高化学疗法及放射性疗法的效果。

本发明涉及式(I)的化合物。

一种式(I)的化合物，

其N-氧化物形式、加成盐或立体化学异构体形式，其中：

m为0、1或2，且当m为0时，意指直接键；

n为0、1、2或3，且当n为0时，意指直接键；

p为0或1，且当p为0时，意指直接键；

s为0或1，且当s为0时，意指直接键；

t为0或1，且当t为0时，意指直接键；

X为C(＝O)或CHR⁸；其中

R⁸为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、-C(＝O)-NR¹⁷R¹⁸、羟基羰基、芳基C_1-6烷氧基羰基、杂芳基、杂芳基羰基、杂芳基C_1-6烷氧基羰基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、哌啶基羰基、C_1-6烷氧基羰基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；被羟基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基取代的哌嗪羰基；被羟基C_1-6烷基取代的吡咯烷基；或被一个或两个选自羟基、C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基(二羟基)C_1-6烷基或C_1-6烷氧基(羟基)C_{1 -6}烷基的取代基所取代的哌啶基羰基；

R¹⁷及R¹⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、二(C_1-6烷基)氨基C_1-6烷基、芳基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基(C_1-6烷基)或羟基C_1-6烷基(芳基C_1-6烷基)；

为-CR⁹＝C＜且虚线为一个键，-C(＝O)-CH＜，-C(＝O)-N＜，-CHR⁹-CH＜或-CHR⁹-N＜；其中

每个R⁹独立地为氢或C_1-6烷基；

R¹为氢、芳基、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-12烷基或被一个或两个独立选自羟基、芳基、杂芳基、氨基、C_1-6烷氧基、单-或二(C_{1 -6}烷基)氨基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、C_1-6烷基哌嗪基、芳基C_1-6烷基哌嗪基、杂芳基C_1-6烷基哌嗪基、C_3-7环烷基哌嗪基及C_3-7环烷基C_1-6烷基哌嗪基的取代基所取代的C_1-12烷基；

R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基、杂芳基C_1-6烷氧基、苯硫基、羟基C_1-6烷基羰基、被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R³为氢、C_1-6烷基、杂芳基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基、氨基或C_1-6烷氧基；或

R⁴及R⁵一起可任选地形成一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团；

R⁶为氢、C_1-6烷氧基羰基或C_1-6烷基；

当p为1时，则R⁷为氢、芳基C_1-6烷基、羟基或杂芳基C_1-6烷基；

Z为选自下列的基团：

其中

每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、杂芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、杂芳基羰基、C_1-6烷基羰基、芳基C_1-6烷基羰基、杂芳基C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基、C_3-7环烷基羰基、C_3-7环烷基(羟基)C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_2-6链烯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷基羰基氧基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CHR¹⁹)_u-NR¹³R¹⁴；其中

v为0、1、2、3、4、5或6，且当v为0时，意指直接键；

r为0或1，且当r为0时，意指直接键；

u为0、1、2、3、4、5或6，且当u为0时，意指直接键；

R¹⁹为氢或C_1-6烷基；

R¹²为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、C_1-6烷氧基及芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-12烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基磺酰基、芳基C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基、C_3-7环烷基羰基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、羟基羰基、氰基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷氧基、芳基或杂芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；或被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、氨基、芳基C_1-6烷基、杂芳基或杂芳基C_1-6烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；或

R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基、芳基C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基羰基、杂芳基C_1-6烷基、C_3-7环烷基及C_3-7环烷基C_1-6烷基的取代基所取代的哌嗪基；其中

k为0、1、2、3、4、5或6，且当k为0时，意指直接键；

R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基羰基、C_3-7环烷基、被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；及被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基及杂芳基C_1-6烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；或

R¹⁵及R¹⁶与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌嗪基或被选自C_1-6烷氧基羰基所取代的哌嗪基；

芳基为苯基或萘基；

每个苯基或萘基可任选地被一个、两个或三个取代基所取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、C_1-6烷基、氨基、多卤C_1-6烷基及C_1-6烷氧基；及

每个苯基或萘基可任选地被一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团所取代；

杂芳基为吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氢呋喃基；

每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被一、二或三个取代基所取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、C_1-6烷基、氨基、多卤C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；及

每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团所取代；

条件是：

当m为1；在苯环上除R²外的取代基在间位；s为0；及t为0时，则

Z为选自(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)或(a-9)的基团。

式(I)的化合物也以其互变异构体形式存在。这种形式虽然未明示于上述式中，但意欲被含括于本发明的范围中。

许多用于上述定义及后文的术语解释于下文中。这些术语有时以原词或以复合术语使用。

当用于上述定义及后文时，卤素泛指氟、氯、溴及碘；C_1-6烷基定义具有由1至6个碳原子的直链及支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、2-甲基-丁基、2-甲基戊基等；C_1-6烷二基定义具有由1至6个碳原子的二价直链及支链饱和烃基，例如亚甲基、1，2-乙二基、1，3-丙二基、1，4-丁二基、1，5-戊二基、1，6-己二基及其支链异构体，例如2-甲基戊二基、3-甲基戊二基、2，2-二甲基丁二基、2，3-二甲基丁二基等；C_{1- 12}烷基包括C_1-6烷基及其具有7至12个碳原子的高级同系物，例如庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基及十二烷基；羟基C_1-6烷基定义在具有1至6个碳原子的直链及支链饱和烃基上的羟基取代基；三卤甲基定义包含三个相同或不同的卤素取代基的甲基，例如三氟甲基；C_{2 -6}链烯基定义包含一个双键且具有2至6个碳原子的直链及支链烃基，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-甲基-2-丁烯基等；C_3-7炔基定义包含一个三键且具有3至6个碳原子的直链及支链烃基，例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、3-己炔基等；C_3-7环烷基包括具有3至10个碳的环状烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基等。

术语“加成盐”包含式(I)化合物能与有机或无机碱，例如胺、碱金属碱及碱土金属碱或季铵碱，或与有机或无机酸，例如无机酸、磺酸、羧酸或含磷的酸形成的盐类。

术语“加成盐”进一步包含式(I)化合物能形成的药学上可接受的盐、金属络合物以及其溶剂化物和盐类。

术语“药学上可接受的盐”意指药学上可接受的酸或碱加成盐。如前文所提及的药学上可接受的酸或碱加成盐意指包含式(I)化合物能形成的治疗活性的非毒性酸和非毒性碱加成盐形式。具有碱性特性的式(I)化合物可通过以一种适当的酸处理该碱形式而转变成其药学上可接受的酸加成盐。适当的酸包含例如无机酸，如氢卤酸，例如氢氯酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸及类似的酸；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、对-氨基水杨酸、双羟基萘酸及类似的酸。

具有酸性特性的式(I)化合物可通过以一种适当的有机或无机碱处理该酸形式而转变成其药学上可接受的碱加成盐。适当的碱盐形式包含例如铵盐、碱金属及碱土金属盐，例如锂、钠、钾、镁、钙盐等，具有有机碱的盐，例如苄星(benzathine)、N-甲基-D-葡萄糖胺、海德巴胺(hydrabamine)盐、及具有氨基酸，例如精氨酸、赖氨酸等的盐。

术语酸或碱加成盐也包含式(I)化合物能形成的水合物及溶剂加成形式。此种形式的实例为例如水合物、醇合物等。

术语“金属络合物”意指在式(I)化合物和一种或多种有机或无机金属盐之间所形成的络合物。该有机或无机盐的实例包含卤化物、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、磺酸盐(例如甲基磺酸盐、4-甲基苯基磺酸盐)、水杨酸盐、苯甲酸盐及周期表第二主族金属(例如镁或钙盐)、第三或四主族(例如铝、锡、铅)及周期表第一至第八过渡族(例如铬、锰、铁、钴、镍、铜、锌等)的盐。

如前文所用，术语“式(I)化合物的立体化学异构体形式”定义为式(I)化合物可具有的由通过相同顺序的键键合的相同原子构成但具有不同三维结构(其不可相互转变)的所有可能的化合物。除非另外提及或指明，化合物的化学命名包含该化合物可能具有的所有可能的立体化学异构体形式的混合物。该混合物可包含该化合物基本分子结构的所有非对映立体异构体和/或旋光异构体。纯形式或为彼此混合物形式的式(I)化合物的所有立体化学异构体形式拟包含于本发明的范围中。

式(I)化合物的N-氧化物形式意指包含那些式(I)的化合物，其中一个或数个氮原子被氧化成所谓的N-氧化物，特别是那些其中一个或多个哌啶-、哌嗪-或哒嗪基-氮被N-氧化的N-氧化物。

当在下文使用时，术语“式(I)化合物”意指也包括N-氧化物形式、药学上可接受的酸或碱加成盐及所有的立体异构体形式。

第一组令人感兴趣的化合物由其中适用一种或多种下列限制的式(I)的那些化合物组成：

a)X为C(＝O)或CHR⁸；其中

R⁸为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、氨基羰基、单-或二(C_1-6烷基)氨基羰基、羟基羰基、芳基C_1-6烷氧基羰基、杂芳基C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷氧基羰基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基或被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_{3 -7}环烷基；

b)R¹为氢、芳基、杂芳基、C_1-12烷基或被一个或两个独立选自羟基、芳基、杂芳基、氨基、C_1-6烷氧基、单-或二(C_1-6烷基)氨基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、C_1-6烷基哌嗪基、芳基C_1-6烷基哌嗪基、杂芳基C_1-6烷基哌嗪基、C_3-7环烷基哌嗪基及C_3-7环烷基C_{1 -6}烷基哌嗪基的取代基所取代的C_1-12烷基；

c)R³为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

d)R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、多卤C_1-6烷基、羟基、氨基或C_1-6烷氧基；

e)R⁴及R⁵一起可任选地形成选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团；

f)R⁶为氢或C_1-6烷基；

g)当p为1时，则R⁷为氢、芳基C_1-6烷基或杂芳基C_1-6烷基；

h)Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)及(a-6)的基团；

i)每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、杂芳基(羟基)C_{1 -6}烷基、芳基羰基、杂芳基羰基、芳基C_1-6烷基羰基、杂芳基C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷基羰基氧基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CH₂)_u-NR¹³R¹⁴；

j)R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-12烷基、C_3-7环烷基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基及杂芳基的取代基所取代C_1-12烷基；或被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基及杂芳基C_1-6烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

k)R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基、芳基C_1-6烷基、杂芳基C_1-6烷基、C_3-7环烷基及C_3-7环烷基C_1-6烷基的取代基所取代的哌嗪基；

l)R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；及被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基及杂芳基C_1-6烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

m)杂芳基为吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氢呋喃基；并且每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被一个、两个或三个取代基所取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、C_{1 -6}烷基、氨基、多卤C_1-6烷基及C_1-6烷氧基；及

n)每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团所取代；

第二组令人感兴趣的化合物由其中适用一种或多种下列限制的式(I)的那些化合物组成：

a)n为0、1或2；

b)p为0；

c)R⁸为氢、氨基羰基、芳基C_1-6烷氧基羰基或被羟基取代的C_1-6烷基；

d)

为-CR⁹＝C＜或-CHR⁹-CH＜；

e)R¹为氢、C_1-12烷基或被杂芳基取代的C_1-12烷基；

f)R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基或苯硫基；

g)R³为氢或C_1-6烷基；

h)R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素或C_1-6烷氧基；

i)Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)或(a-6)的基团；

j)每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、芳基、芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CH₂)_u-NR¹³R¹⁴；

k)v为0或1；

l)r为0或1；

m)u为0；

n)R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-6烷基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶及被羟基取代的C_1-12烷基；

o)R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可形成吡咯烷基；

p)k为2；

q)R¹⁵及R¹⁶各自独立地为C_1-6烷基；

r)芳基为苯基或被卤素取代的苯基；及

s)杂芳基为吡啶基或吲哚基。

第三组令人感兴趣的化合物由其中适用一种或多种下列限制的式(I)的那些化合物组成：

a)m为0或2；

b)n为0、2或3；

c)p为1；

d)s为1；

e)t为1；

f)X为C(＝O)；

g)

为-C(＝O)-CH＜，-C(＝O)-N＜，-CHR⁹-CH＜或-CHR⁹-N＜；

h)R¹为芳基、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-12烷基或被一个或两个独立选自羟基、芳基、杂芳基、氨基、C_1-6烷氧基、单-或二(C_1-6烷基)氨基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、C_1-6烷基哌嗪基、芳基C_1-6烷基哌嗪基、杂芳基C_1-6烷基哌嗪基、C_3-7环烷基哌嗪基及C_3-7环烷基C_1-6烷基哌嗪基的取代基所取代的C_1-12烷基；

i)R²为卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基、杂芳基C_1-6烷氧基、苯硫基、羟基C_1-6烷基羰基、被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

j)R³为C_1-6烷基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

k)R⁴及R⁵各自独立地为C_1-6烷基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基或氨基；

l)R⁴及R⁵一起可任选地形成选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团；

m)R⁶为C_1-6烷氧基羰基或C_1-6烷基；

n)R⁷为氢、芳基C_1-6烷基、羟基或杂芳基C_1-6烷基；及

o)Z为选自(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)或(a-9)的基团。

第四组令人感兴趣的化合物由其中适用一种或多种下列限制的式(I)的那些化合物组成：

a)R⁸为氢、-C(＝O)-NR¹⁷R¹⁸、芳基C_1-6烷氧基羰基、被羟基取代的C_1-6烷基、被羟基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基取代的哌嗪羰基、被羟基C_1-6烷基取代的吡咯烷基或被一个或两个选自羟基、C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基(二羟基)C_1-6烷基或C_1-6烷氧基(羟基)C_1-6烷基的取代基所取代的哌啶基羰基；

b)R¹⁷及R¹⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、二(C_1-6烷基)氨基C_{1 -6}烷基、芳基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基或羟基C_1-6烷基；

c)为-CR⁹＝C＜且虚线为一个键、-CHR⁹-CH＜或-CHR⁹-N＜；

d)R¹为氢、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-12烷基或被杂芳基取代的C_1-12烷基；

e)R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基或苯硫基；

f)R³为氢、C_1-6烷基或杂芳基；

g)R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基或C_1-6烷氧基；

h)当p为1时，则R⁷为芳基C_1-6烷基或羟基；

i)Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-8)、(a-9)、(a-10)及(a-11)的基团；

j)每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、C_3-7环烷基(羟基)C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基C_{1 -6}烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_2-6链烯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CHR¹⁹)_u-NR¹³R¹⁴；

k)v为0或1；

l)u为0或1

m)R¹²为氢或C_1-6烷基；

n)R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-12烷基、C_1-6烷基羰基、C_{1- 6}烷基磺酰基、芳基C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、羟基羰基、氰基、C_1-6烷氧基羰基或芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；

o)R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基的取代基所取代的哌嗪基；

p)k为2；

q)R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基；

r)R¹⁵及R¹⁶与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌嗪基或被C_1-6烷氧基羰基取代的哌嗪基；

s)芳基为苯基或被卤素取代的苯基；

t)杂芳基为吡啶基、吲哚基、噁二唑基或四唑基；及

u)每个吡啶基、吲哚基、噁二唑基或四唑基可任选地被一个选自C_1-6烷基、芳基或芳基C_1-6烷基的取代基所取代。

第五组令人感兴趣的化合物由其中适用一种或多种下列限制的式(I)的那些化合物组成：

a)m为0；

b)n为1；

c)p为0；

d)s为0；

e)t为0；

f)X为CHR⁸；

g)R⁸为氢；

h)

为-CR⁹＝C＜；

i)每个R⁹为氢；

j)R¹为氢；

k)R²为氢或C_1-6烷氧基；

l)R³为氢；

m)R⁴及R⁵各自独立地为氢、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；

n)R⁶为氢；

o)Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)或(a-4)的基团；

p)R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、羟基或羟基C_1-6烷基。

一组优选化合物由式(I)的那些化合物或其任何亚组所组成，其中

R⁸为氢、-C(＝O)-NR¹⁷R¹⁸、芳基C_1-6烷氧基羰基、被羟基取代的C_1-6烷基、被羟基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基取代的哌嗪羰基、被羟基C_1-6烷基取代的吡咯烷基或被一个或两个选自羟基、C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基(二羟基)C_1-6烷基或C_1-6烷氧基(羟基)C_1-6烷基的取代基所取代的哌啶基羰基；R¹⁷及R¹⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、二(C_1-6烷基)氨基C_{1 -6}烷基、芳基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基或羟基C_1-6烷基；

为-CR⁹＝C＜且虚线为一个键、-CHR⁹-CH＜或-CHR⁹-N＜；R¹为氢、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-12烷基或被杂芳基取代的C_1-12烷基；R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基或苯硫基；R³为氢、C_1-6烷基或杂芳基；R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基或C_1-6烷氧基；当p为1时，则R⁷为芳基C_1-6烷基或羟基；Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-8)、(a-9)、(a-10)及(a-11)的基团；每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、C_3-7环烷基(羟基)C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_2-6链烯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CHR¹⁹)_u-NR¹³R¹⁴；v为0或1；u为0或1；R¹²为氢或C_1-6烷基；R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_{1- 12}烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基磺酰基、芳基C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、羟基羰基、氰基、C_{1 -6}烷氧基羰基或芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基的取代基所取代的哌嗪基；k为2；R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基；k为2；R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基；R¹⁵及R¹⁶与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基或哌嗪基或被C_1-6烷氧基羰基取代的哌嗪基；芳基为苯基或被卤素取代的苯基；杂芳基为吡啶基、吲哚基、噁二唑基或四唑基；并且每个吡啶基、吲哚基、噁二唑基或四唑基可任选地被一个选自C_1-6烷基、芳基或芳基C_1-6烷基的取代基所取代。

一组更优选的化合物由式(I)的那些化合物或其任何亚组所组成，其中m为0；n为1；p为0；s为0；t为0；X为CHR⁸；R⁸为氢；

为-CR⁹＝C＜；每个R⁹为氢；R¹为氢；R²为氢或C_1-6烷氧基；R²为氢或C_1-6烷氧基；R³为氢；R⁴及R⁵各自独立地为氢、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；R⁶为氢；Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)或(a-4)的基团；及R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、羟基或羟基C_1-6烷基。

最优选的化合物为1号化合物、21号化合物、4号化合物、5号化合物、36号化合物、69号化合物、110号化合物、111号化合物、112号化合物、229号化合物及37号化合物。

式(I)化合物、其药学上可接受的盐及N-氧化物及其立体化学异构体形式可以传统方法制备。原料及一些中间体为已知化合物且可商购或可根据本领域公知的传统反应程序制备。

许多这种制备方法将更详细地描述于下文中。获得最终式(I)化合物的其它方法在实施例中描述。

式(I)化合物可通过使式(II)的中间体与式(III)的中间体反应而制备，其中W为适当离去基团，例如卤素，例如氟、氯、溴或碘；或磺酰氧基，例如甲基磺酰氧基、4-甲基苯基磺酰氧基等。反应可在反应惰性溶剂中进行，该溶剂例如为醇，例如甲醇、乙醇、2-甲氧基-乙醇、丙醇、丁醇等；醚，例如4，4-二噁烷、1，1′-氧双丙烷等；酮，例如4-甲基-2-戊酮；或N，N-二甲基甲酰胺、硝基苯、乙腈、乙酸等。添加适当的碱，例如碱金属或碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐，例如三乙胺或碳酸钠，可用来吸收在反应过程中所释放的酸。可添加小量的适当的金属碘化物，例如碘化钠或钾以促进反应。搅拌可提高反应速率。反应可方便地在室温至反应混合物的回流温度范围间的温度进行，且视需要反应可在增压下进行。

其中X为CH₂的式(I)化合物(本文中指的是式(I-a)化合物)可通过转变其中X为C(＝O)的式(I)化合物(本文中指的是式(I-b)化合物)，通过使式(I-b)化合物与氢化铝锂在适当的溶剂如四氢呋喃中反应制备。

式(I-a)化合物也可通过在适当试剂，例如硼氢化钠，如四氢硼酸钠或聚合物负载的氰基三氢硼酸盐的存在下，在适当的溶剂，例如醇，如甲醇中，使适当的式(IV)的甲醛化合物与式(V)的中间体反应制备。

以相同的方式，其中t为1的式(I)化合物(本文中指的是式(I-c)化合物)可通过使式(II)的中间体与适当的式(VI)的甲醛化合物反应制备。

其中s为1的式(I)化合物(本文中指的是式(I-d)化合物)可通过使式(VII)的中间体与氢化铝锂在适当的溶剂如四氢呋喃中反应制备。

式(I)化合物与式(III)的中间体也可通过本领域已知的反应或官能基转换互相转变。许多这种转换已描述于前文。其它实例为羧酸酯水解成对应的羧酸或醇；酰胺水解成对应的羧酸或胺；腈水解成对应的酰胺；在咪唑或苯基上的氨基可通过本领域已知的重氮化反应及随后以氢置换重氮基而被氢取代；醇可被转变成酯和醚；伯胺可被转变成仲胺或叔胺；双键可被氢化成对应的单键；在苯基上的碘基可通过在适当的钯催化剂的存在下插入一氧化碳而转变成酯基。

其中X为CH₂，m为0，s为0且R³为氢的式(II)中间体(本文中指的是式(II-a)的中间体)可在金属催化剂如阮内镍及适当还原剂如氢的存在下，在适当的溶剂如甲醇或乙醇中，通过以式(VIII)的中间体起始由硝基还原成胺的反应制备。

其中X为C(＝O)，s为0且R³为氢的式(II)中间体(本文中指的是式(II-b)的中间体)可在适当试剂如N′-(乙基羰亚胺酰基(ethylcarbonimidoyl))-N，N-二甲基-1，3-丙二胺，一氢氯化物(EDC)及1-羟基-1H-苯并三唑(HOBT)的存在下，通过使式(IX)的中间体与式(X)的中间体反应制备。此反应可在碱如三乙胺的存在下，在适当的溶剂如二氯甲烷与四氢呋喃的混合物中进行。

式(IV)的中间体可通过在适当的溶剂如四氢呋喃中使式(XI)的中间体与氢化铝锂反应制备。

式(VII)的中间体可通过在2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓及三乙胺的存在下，在适当的溶剂如乙腈中，使式(XII)的中间体与式(XIII)的中间体反应制备。

式(VIII)的中间体可在二异丙基乙基胺中，通过使式(XIV)的中间体与式(XV)的中间体(其中A为适当的离去基团，例如卤素，如氟、氯、溴或碘；或C_1-6烷氧基，如甲氧基)反应制备。

式(XII)的中间体可通过在氢氧化钠和水的存在下，在适当的溶剂如乙醇中，转变式(XVI)的中间体制备。

式(XVI)的中间体可在适当的溶剂如二异丙基乙基胺中，通过使式(XVIII)的中间体(其中A如上述所定义)与式(XIV)的中间体反应制备。

式(I)化合物及一些中间体可在其结构中具有至少一个立体生成中心。这种立体生成中心可存在于R或S构形中。

如上述方法制备的式(I)化合物通常为对映异构体的外消旋混合物，其可按照本领域公知得的拆分方法相互分离。式(I)的外消旋化合物可通过与适当的手性酸反应而被转变成对应的非对映异构体盐形式。该非对映异构体盐形式随后被分离，例如通过选择性或分级结晶，而对映异构体则通过碱由其释放。分离式(I)化合物的对映异构体形式的另一种方法涉及利用手性固定相的液相色谱。该纯的立体化学异构体形式也可衍生自适当原料的对应纯的立体化学异构体形式，条件是反应立体定向地发生。优选地，若期望有特定的立体异构体，则该化合物将通过立体专一性的制备方法合成。这种方法将有利地使用对映异构纯的原料。

式(I)化合物，其药学上可接受的酸加成盐及立体异构体形式在抑制p53和MDM2间相互作用上具有价值的药理性质。

术语“MDM2”用于本文时意指因MDM2基因的表达结果所获得的蛋白质。在此术语的意义中，MDM2包含所有被MDM2编码的蛋白质、其变异物、其选择性的切断蛋白质，及其磷酸化蛋白质。另外，当用于本文时，术语“MDM2”包括MDM2类似物，例如MDMX(也称为MDM4)及MDM2同系物及其它动物的类似物，例如人类同系物HDm²或人类类似物HDMX。

术语“抑制相互作用”或“相互作用的抑制剂”用于本文时意指避免或降低一种或多种分子、肽、蛋白质、酶或受体的直接或间接结合；或避免或降低一种或多种分子、肽、蛋白质、酶或受体的正常活性。

术语“p53与MDM2的相互作用的抑制剂”或“p53-MDM2抑制剂”用于本文时为描述在如C.1中所述的分析中增加p53表达的药剂。此种增加可由(但不限于)一种或多种下列作用机制所引起：

-抑制p53与MDM2间的相互作用，

-与MDM2或p53蛋白质的任一者直接结合，

-与上游或下游靶，例如激酶，或涉及泛蛋白化或SUMO修饰的酶活性的相互作用，

-MDM2与p53在不同细胞区间的隔离或传输，

-与MDM2结合的蛋白质的调节，例如(但不限于)p73、E2F-1、Rb、p21waf1或cip1，

-向下调节或干扰MDM2表达和/或MDM2活性，例如通过(但不限于)影响其细胞局部化、后转译修饰、核输出或泛蛋白连接酶活性，

-p53蛋白质的直接或间接稳定化，例如通过保持其为其结构形式或通过避免错折叠，

-促进p53表达或p53家族成员(例如p63及p73)的表达，

-增加p53活性，例如通过(但不限于)增强其转录活性和/或

-增加p53-信号传输路径的基因及蛋白质的表达，例如(但不限于)p21waf1、cip1、MIC-1(GDF-15)、PIG-3及ATF-3。

因此，本发明公开式(I)化合物作为药物的用途。

另外，本发明也涉及用于制造治疗经由p53-MDM2相互作用所介导的障碍的药物的化合物的用途，其中所述化合物为式(I)化合物。

术语“治疗”用于本文时涵盖对动物，特别是人的疾病和/或症状的治疗，且包括：(i)防止疾病和/或症状发生于可能易感染疾病和/或症状但尚未被诊断为患有它的个体；(ii)抑制疾病和/或症状，即遏止其发展；(iii)舒缓疾病和/或症状，即引起疾病和/或症状逆转。

术语“经由p53-MDM2相互作用所介导的障碍”意指任何不希望或有害的症状，其导致或来自MDM2蛋白质与p53或诱导凋亡、诱导细胞死亡或调节细胞循环的其它细胞蛋白质间的相互作用的抑制。

本发明也提供一种通过给药有效量的本发明的化合物至需要此种治疗的个体，例如哺乳动物(且尤其是人)而治疗经由p53-MDM2相互作用所介导的障碍的方法。

本发明的化合物可具有在肿瘤细胞中的抗增殖作用，即使这种细胞没有功能性p53。更特别地，本发明的化合物可在具野生型p53的肿瘤中和/或于过量表达MDM2的肿瘤中具有抗增殖作用。

因此，本发明也提供一种通过给药有效量的本发明的化合物至需要此种治疗的个体，例如哺乳动物(且尤其是人)而抑制肿瘤生长的方法。

可被抑制的肿瘤的实例为(但不限于)肺癌(例如腺癌且包括非小细胞肺癌)、胰脏癌(例如胰脏癌，例如外分泌胰脏癌)、结肠癌(例如结肠直肠癌，例如结肠腺癌及结肠腺肿)、食道癌、口腔鳞状癌、舌癌、胃癌、鼻咽癌、淋巴系的造血肿瘤(例如急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤)、骨髓白血病(例如急性源生骨髓白血病(AML))、甲状腺囊癌、骨髓衰竭异常综合症(MDS)、间叶源的肿瘤(例如肌纤维恶性肿瘤及横纹肌肉瘤)、黑色素瘤、畸形瘤、神经母细胞瘤、脑肿瘤、神经胶质瘤、皮肤的良性肿瘤(例如大角化棘皮瘤)、乳房癌(例如晚期乳房癌)、肾脏癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、膀胱癌、前列腺癌(包括末期疾病)、睾丸癌、骨肉瘤、头和颈癌及表皮癌。

本发明的化合物也可用于发炎症状的治疗及预防。

因此，本发明也提供一种通过给药有效量的本发明的化合物至需要此种治疗的个体，例如哺乳动物(且尤其是人)而治疗及预防发炎症状的方法。

本发明的化合物也可用于治疗自身免疫疾病及症状。术语“自身免疫疾病”意指其中动物的免疫系统对自身抗原有不利反应的疾病。术语“自身抗原”意指在动物体内正常发现的任何抗原。代表性的自身免疫疾病包括但不限于：桥本氏甲状腺炎、格雷夫斯病、多发性硬化、致命贫血、阿迪生氏病、胰岛素依赖型糖尿病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE或狼疮)、皮肤肌炎、克隆氏症、万格内(Wegener)氏肉芽肿、肾丝球基底膜病、抗磷脂综合症、25泡疹样皮肤炎、变应性脑脊髓炎、肾丝球肾炎、膜状肾丝球肾炎、古巴斯德氏综合症、肌无力样综合症(Lambert-Eaton)、肌无力综合症、重症肌无力、类天疱疮、多内分泌腺病、赖特耳氏病及史蒂夫曼(Stiff-Man)综合症。

因此，本发明也提供一种通过给药有效量的本发明的化合物至需要此种治疗的个体，例如哺乳动物(且尤其是人)而治疗自身免疫疾病和症状及治疗与构形上不稳定或错折叠蛋白质有关的疾病的方法。

本发明的化合物也可用于治疗与构形上不稳定或错折叠蛋白质有关的疾病的方法。与构形上不稳定或错折叠蛋白质有关的疾病的实例包括但不限于：囊肿纤维症(CFTR)、马凡氏综合症(Marfansyndrome)(肌原纤维蛋白)、肌萎缩侧索硬化症(超氧化歧化酶)、坏血病(胶原蛋白)、枫糖尿症(α-酮酸去氢酶复合体)、成骨不全症(前-α型胶原蛋白元)、克-雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)(朊病毒)、阿兹海默症(β-类淀粉蛋白纤维)、家族性淀粉样变性病(溶菌酶)、白内障(晶状体蛋白)、家族性高胆固醇血症(LDL受体)、α-I-抗胰蛋白酶缺乏、泰-萨氏病(Tay-Sachs disease)(β-己糖胺酶)、色素性视网膜炎(视紫质)及矮妖精貌综合症(胰岛素受体)。

因此，本发明也提供一种通过给药有效量的本发明的化合物至需要此种治疗的个体，例如哺乳动物(且尤其是人)而治疗与构形上不稳定或错折叠蛋白质有关的疾病的方法。

鉴于其有用的药理特性，主题化合物可被配制成各种供给药目的的药物形式。

为制备本发明的药物组合物，有效量的作为活性成分的特殊化合物以碱或酸加成盐形式与药学上可接受的载体混合成均质混合物，该载体可采取广泛的形式，依赖于给药所需的制剂形式。这种药物组合物理想地为优选适合供经口、经肠、经皮或非经肠注射给药的单一剂型。例如，在制备口服剂型的组合物时，可使用任何通常的药物介质，例如在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆、酏剂及溶液)的情况下，为水、二醇类、油类、醇类等；或在粉末、丸剂、胶囊及片剂的情况下，为固体载体，如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。

因为其易于给药，片剂及胶囊代表最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下显然使用固体药物载体。对于非经肠组合物，载体通常包含无菌水(至少大部分)以例如帮助溶解，虽然可含括其它的成分。可注射溶液例如可被制备，其中载体包含盐水溶液、葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。可注射悬浮液也可被制备，在这种情况下，可使用适当的液体载体、悬浮剂等。在适合供经皮给药的组合物中，载体任选地包含渗透促进剂和/或适当的湿润剂，任选地与小比例的任何性质的合适添加剂组合，该添加剂不会对皮肤造成显著有害的影响。该添加剂可促进对皮肤的给药和/或可帮助制备所需的组合物。这种组合物可以各种方式给药，例如作为透皮贴剂、作为滴剂、作为乳膏。尤其有利地是以剂量单位形式配制上述药物组合物以易于给药与剂量的均一性。本说明书及权利要求中所用的剂量单位形式指的是物理上不连续单位，适合作为单一剂量，每个单位包含预定量的活性成分，其经计算以结合所需要的药物载体产生期望的治疗效果。这种剂量单位形式的实例为片剂(包括刻痕或涂覆的片剂)、胶囊、丸剂、粉末袋、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙量、汤匙量等及其分隔的复合包等。

尤其有利地是以剂量单位形式配制上述药物组合物以易于给药与剂量的均一性。本说明书及权利要求中所用的剂量单位形式指的是物理上不连续单位，适合作为单一剂量，每个单位包含预定量的活性成分，其经计算以结合所需要的药物载体产生期望的治疗效果。这种剂量单位形式的实例为片剂(包括刻痕或涂覆的片剂)、胶囊、丸剂、粉末袋、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙量、汤匙量等及其分隔的复合包等。

本发明的化合物以足以抑制MDM2和p53或其它诱导细胞凋亡、诱导细胞死亡或调节细胞循环的细胞蛋白质间的相互作用的量给药。

MDM2的致癌基因的潜能不仅通过其抑制p53的能力，也可通过其调节其它肿瘤抑制蛋白质，例如视网膜神经胶质瘤蛋白质pRb及密切关连的E2F1转录因子的能力测量。

因此，本发明的化合物以足以调控MDM2和E2F转录因子间的相互作用的量给药。

本领域技术人员可容易地由后文所呈现的实验结果测定有效量。通常认为治疗有效量为0.005mg/kg至100mg/kg体重，特别为0.005mg/kg至10mg/kg体重。可能适当的是在一天中，在适当之间隔下，以一次、两次、三次、四次或更多次亚剂量给予所需要的剂量。该亚剂量可配制成单位剂量形式，例如包含0.5至500mg，特别是每单位剂量形式含10mg至500mg的活性成分。

作为本发明的另一方面，设想p53-MDM2抑制剂与另一种抗癌剂的组合，特别是用作药物，更特别地用于癌症或相关疾病的治疗。

为治疗上述疾病，本发明的化合物可有利地与一种或多种其它药剂，更特别地与其它抗癌剂组合使用。抗癌剂的实例为：

-铂配位化合物，例如顺铂、卡铂或奥瑟里铂帝(oxalyplatin)；

-紫杉醇化合物，例如太平洋紫杉醇或欧洲紫杉醇；

-拓朴异构酶I抑制剂，例如喜树碱化合物，例如伊立替康或托泊替康；

-拓朴异构酶II抑制剂，例如抗肿瘤鬼臼毒素衍生物，例如依托泊苷或替尼泊苷；

-抗肿瘤长春花生物碱，例如长春碱、长春新碱或长春瑞滨；

-抗肿瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶、吉西他滨或卡培他滨；

-烷基化试剂，例如氮芥子气或亚硝基脲，例如环磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀或洛莫司汀；

-抗肿瘤蒽环类衍生物，例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星或米托蒽醌；

-HER2抗体，例如曲妥单抗；

-雌激素受体拮抗剂或选择性雌激素受体调节剂，例如他莫昔芬、托瑞米芬、屈洛昔芬、费司罗迪司(faslodex)或雷洛昔芬；

-芳香酶抑制剂，例如依西美坦、阿那曲唑、雷特唑(letrazole)及伏氯唑；

-分化试剂，例如类视色素、维生素D及视黄酸代谢阻断剂(RAMBA)，例如阿克特恩(accutane)；

-DNA甲基转移酶抑制剂，例如氮胞苷；

-激酶抑制剂，例如黄酮吡立(flavoperidol)、甲磺酸伊马替尼或吉夫提尼伯(gefitinib)；

-金合欢醇(farnesyl)转移酶抑制剂；

-HDAC抑制剂；

-其它泛蛋白-蛋白酶体路径的抑制剂，例如Velcade；或

-Yondelis。

术语“铂配位化合物”用于本文代表任何肿瘤细胞生长抑制铂配位化合物，其提供离子形式的铂。

术语“紫杉醇化合物”表示一类具有紫杉醇环系的化合物，且涉及或衍生自某些紫杉(水松)物种的萃取物；

术语“拓朴异构酶抑制剂”用来表示能改变真核细胞中DNA拓朴的酶。其对重要的细胞功能及细胞增殖是关键的。在真核细胞中有两类拓朴异构酶，即I型及II型。拓朴异构酶I为约100,000分子量的单体酶。该酶结合至DNA并产生短暂的单股断裂，松开双螺旋(或使其松开)，并随后在与DNA股分离前再密合该断裂。拓朴异构酶II具有类似的作用机制，其涉及引起DNA股的断裂或自由基的形成。

术语“喜树碱化合物”用来表示有关或衍生自母系喜树碱化合物的化合物，其是衍生自中国的喜树及印度的青脆枝的水不溶性生物碱。

术语“鬼臼毒素化合物”用来表示有关或衍生自母系鬼臼毒素的化合物，其萃取自曼陀罗草植物。

术语“抗肿瘤长春花生物碱”用来表示有关或衍生自长春花植物(日日春)的萃取物。

术语“烷基化试剂”包含多组具有共同特性的化学品，其具有在生理条件下贡献烷基给生物上维持生命所必需的大分子如DNA的能力。对于大部分较重要的试剂，例如氮芥子气及亚硝基脲，活性烷基化部分在络合物降解反应后在体内产生，其部分为酶性的。烷基化试剂最重要的药理作用为那些扰乱与细胞增殖(特别是DNA合成及细胞分裂)有关的基本机制者。在快速增殖组织中，烷基化试剂干扰DNA功能及完整性的能力提供其在治疗应用及许多其毒性特性的基础。

术语“抗肿瘤蒽环类衍生物”包含由霉菌Strep.Peuticus var.caesius所获得的抗生素及其衍生物，其特征在于具有四环素环结构，带有被糖苷键所连的不常见的糖，六碳氨糖。

人体表皮生长因子受体2蛋白质(HER 2)在初期乳房癌中的扩大业经证明与某些病患的不良临床预后有关。曲妥单抗为高度纯化的重组DNA-衍生的人源化单株IgG1κ抗体，其高亲和性及专一性地结合至HER 2受体的细胞外区域。

许多乳房癌具有雌激素受体且这种肿瘤的生长可受雌激素的刺激。术语“雌激素受体拮抗剂”及“选择性雌激素受体调节剂”用来表示结合至雌激素受体(ER)的雌二醇的竞争性抑制剂。选择性雌激素受体调节剂，当被结合至ER时，引起受体三维形状的变化，调节其在DNA上对雌激素响应性元素(ERE)的结合。

在更年期妇女中，循环的雌激素的主要来源通过在周边组织中的芳香酶将肾上腺及卵巢男性荷尔蒙(雄甾烯二酮及睾酮)转变成雌激素(雌酮及雌二醇)而来。经由芳香酶抑制或灭活的雌激素损失对某些患有荷尔蒙依赖性乳房癌的更年期患者而言为有效及可选择的治疗。

术语“抗雌激素剂”用来包括不仅是雌激素受体拮抗剂及选择性雌激素受体调节剂，也包括如上述的芳香酶抑制剂。

术语“分化试剂”包含以各种方式可抑制细胞增殖及引起分化的化合物。维生素D及类视色素已知在调节各种正常及恶性细胞类型的生长及分化扮演主要角色。视黄酸代谢阻断剂(RAMBA′s)通过抑制视黄酸的细胞色素P450-介导的分解代谢来增加内生性视黄酸的浓度。

DNA甲基化变化为人体瘤形成中最普遍的异常。在所选择基因的启动子内的高甲基化通常与有关基因的失活有关。术语“DNA甲基转移酶抑制剂”用来表示经由DNA甲基转移酶的药理性抑制及肿瘤抑制剂基因表达的再生而作用的化合物。

术语“激酶抑制剂”包含与细胞周期发展及程序性细胞死亡(凋亡)有关的激酶的有效抑制剂。

术语“金合欢醇转移酶抑制剂”用来表示设计以防止Ras及其它细胞内蛋白质的金合欢醇化的化合物。其业经证实对恶性细胞增殖及存活具有影响。

术语“组蛋白去酰基酶抑制剂”或“组蛋白去酰基酶的抑制剂”用来识别能够与组蛋白去酰基酶相互作用并抑制其活性，尤其是其酶活性的化合物。抑制组蛋白去酰基酶酶活性意指降低组蛋白去酰基酶由组蛋白去除酰基的能力。

术语“其它泛蛋白-蛋白酶体路径的抑制剂”用来识别抑制蛋白质体中细胞蛋白质(包括细胞周期调节蛋白质)的定向破坏的化合物。

如上所述，本发明的化合物在敏化用于化学治疗及放射性治疗的肿瘤细胞方面也具有治疗性应用。

因此，本发明的化合物可用作“放射敏感剂”和/或“化学敏感剂”或可与另一种“放射敏感剂”和/或“化学敏感剂”组合使用。

本文所用术语“放射敏感剂”被定义为一种分子，优选为低分子量分子，以治疗有效量给药于动物以增加细胞对离子辐射的敏感性和/或促进可用离子辐射治疗的疾病的治疗。

本文所用术语“化学敏感剂”被定义为一种分子，优选为低分子量分子，以治疗有效量给药于动物以增加细胞对化学治疗的敏感性和/或促进可用化学治疗法治疗的疾病的治疗。

放射敏感剂的作用模式的几种机制已于文献中公开，包括：缺氧细胞放射敏感剂(例如2-硝基咪唑化合物及苯并三嗪二氧化物化合物)模拟氧或者在缺氧下以另一种方式作用类似生物还原剂；非缺氧细胞放射敏感剂(例如卤化嘧啶)可为DNA碱的类似物，且优选引入到癌细胞的DNA中，由此促进辐射诱导的DNA分子的断裂和/或防止正常DNA修复机制；及各种在疾病的治疗中已被假设为放射敏感剂的作用的其它可能机制。

目前许多癌症治疗方案使用放射敏感剂结合x-射线的辐射。x-射线活化的放射敏感剂的实例包括但不限于以下化合物：甲硝唑、米索硝唑、去甲米索硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FudR)、羟基脲、顺铂及其治疗有效的类似物及衍生物。

癌症的光动力疗法(PDT)采用可见光作为敏感剂的辐射活化剂。光动力放射敏感剂的实例包括但不限于下列化合物：血卟啉衍生物、光伏灵(Photofrin)、苯并卟啉衍生物、锡卟啉、褐伯拜-a(pheoborbide-a)、细菌叶绿素-a、萘菁、酞菁、锌酞菁及其治疗有效的类似物及衍生物。

放射敏感剂可与治疗有效量的一种或多种其它化合物结合给药，所述其它化合物包括但不限于：促进放射敏感剂结合入目标细胞的化合物；控制治疗物、营养剂和/或氧流动至目标细胞的化合物；在有或无额外的辐射下作用于肿瘤上的化学治疗剂；或其它供治疗癌症或其它疾病的治疗有效化合物。

化学敏感剂可与治疗有效量的一种或多种其它化合物结合给药，所述其它化合物包括但不限于：促进化学敏感剂结合入目标细胞的化合物；控制治疗物、营养剂和/或氧流动至目标细胞的化合物；作用于肿瘤上或其它供治疗癌症或其它疾病的治疗有效化合物的化学治疗剂。

鉴于其有用的药理特性，根据本发明的组合的组分，即其它药剂及p53-MDM抑制剂可被配制成各种供给药目的的药物形式。所述组分可在各药物组合物中分别配制或在包含两种组分的单一药物组合物中配制。

因此本发明也涉及一种药物组合物，其包含其它药及p53-MDM抑制剂以及一种或多种药物载体。

本发明进一步涉及根据本发明的组合在制造用于抑制肿瘤细胞生长的药物组合物中的用途。

本发明进一步涉及一种包含根据本发明的p53-MDM2抑制剂作为第一活性成分及一种抗癌剂作为第二活性成分的产品，作为用于同时、分开或依序用于治疗患有癌症病患的组合制剂。

其它药剂及p53-MDM2抑制剂可同时(例如在分开或在单一组合物中)或以任何顺序依序给药。在后者情况中，两种化合物将在一期间内以足以确保达成有利或协同作用的用量及方式给药。应理解对组合中各组分的给药的优选方法和顺序及各自的剂量和疗法将依赖于被给予的特殊的其它药剂及p53-MDM2抑制剂、其其给药途径、待治疗的特殊肿瘤及待治疗的特殊宿主而定。给药的最适方法和顺序及剂量和疗法可容易地由本领域技术人员利用传统方法及参考本文所列出的信息决定。

铂配位化合物有利的给药剂量为每平方米体表面积1至500mg(mg/m²)，例如50至400mg/m²，特别是对顺铂而言每疗程剂量为约75mg/m²，而对卡铂而言每疗程剂量为约300mg/m²。

紫杉醇化合物有利的给药剂量为每平方米体表面积50至400mg(mg/m²)，例如75至250mg/m²，特别是对太平洋紫杉醇而言每疗程剂量为约175至250mg/m²，而对欧洲紫杉醇而言每疗程剂量为约75至150mg/m²。

喜树碱化合物有利的给药剂量为每平方米体表面积0.1至400mg(mg/m²)，例如1至300mg/m²，特别是对伊立替康而言每疗程剂量为约100至350mg/m²，而对托泊替康而言每疗程剂量为约1至2mg/m²。

抗肿瘤鬼臼毒素衍生物有利的给药剂量为每平方米体表面积30至300mg(mg/m²)，例如50至250mg/m²，特别是对依托泊苷而言每疗程剂量为约35至100mg/m²，而对替尼泊苷而言每疗程剂量为约50至250mg/m²。

抗肿瘤长春花生物碱有利的给药剂量为每平方米体表面积2至30mg(mg/m²)，特别是对长春碱而言每疗程剂量为约3至12mg/m²，对长春新碱而言每疗程剂量为约1至2mg/m²，而对长春瑞滨而言每疗程剂量为约10至30mg/m²。

抗肿瘤核苷衍生物有利的给药剂量为每平方米体表面积200至2500mg(mg/m²)，例如700至1500mg/m²，特别是对5-FU而言每疗程剂量为约200至500mg/m²，对吉西他滨而言每疗程剂量为约800至1200mg/m²及对卡培他滨而言每疗程剂量为约1000至2500mg/m²。

烷基化试剂如氮芥子气或亚硝基尿脲有利的给药剂量为每平方米体表面积100至500mg(mg/m²)，例如120至200mg/m²，特别是对环磷酰胺而言每疗程剂量为约100至500mg/m²，对苯丁酸氮芥而言每疗程剂量为约0.1至0.2mg/kg，对卡莫司汀而言每疗程剂量为约150至200mg/m²，及对洛莫司汀而言每疗程剂量为约100至150mg/m²。

抗肿瘤蒽环类衍生物有利的给药剂量为每平方米体表面积10至75mg(mg/m²)，例如15至60mg/m²，特别是对多柔比星而言每疗程剂量为约40至75mg/m²，对柔红霉素而言每疗程剂量为约25至45mg/m²，及对伊达比星而言每疗程剂量为约10至15mg/m²。

曲妥单抗有利的给药剂量为每平方米体表面积1至5mg(mg/m²)，特别是每疗程2至4mg/m²。

抗雌激素剂有利的给药剂量为每日约1至100mg，依赖于特殊的药剂及欲治疗的症状而定。他莫昔芬有利地以5至50mg，优选10至20mg的剂量一天两次地经口给药，持续治疗足够的时间以达到并维持治疗效果。托瑞米芬有利地以约60mg的剂量一天一次地经口给药。阿那曲唑有利地以约1mg的剂量一天一次地经口给药。屈洛昔芬有利地以约20-100mg的剂量一天一次地经口给药。雷洛昔芬有利地以约60mg的剂量一天一次地经口给药。依西美坦有利地以约25mg的剂量一天一次地经口给药。

这些剂量可以每疗程给药例如一次、二次或多次，其例如可每隔7、14、21或28天重复。

式(I)化合物、其药学上可接受的酸加成盐及立体异构体形式可具有有价值的诊断特性，因为其可用来检测或识别生物样品中的p53-MDM2相互作用，包含检测或测量标记化合物和/或p53和/或MDM2和/或其它分子、肽、蛋白质、酶或受体间的络合物的形成。

检测或识别方法可使用用标记剂如放射性同位素、酶、萤光物质、发光物质等标记的化合物。放射性同位素的实例包括¹²⁵I、¹³¹I、³H及¹⁴C。酶通常通过结合适当的基质(其反过来催化可检测的反应)而使成为可检测的。其实例包括例如β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、碱性磷酸酶、过氧化酶及苹果酸盐去氢酶，优选为辣根过氧化酶。发光物质包括例如鲁米诺、鲁米诺衍生物、萤光素、水母素及萤光素酶。生物样品可被限定为体组织或体液。体液的实例为脑脊髓液、血液、血浆、血清、尿液、痰、唾液等。

下列实施例举例说明本发明。

实验部分

下文中，“DMF”被定义为N，N-二甲基甲酰胺，“DCM”被定义为二氯甲烷，“DIPE”被定义为二异丙醚，“EtOAc”被定义为乙酸乙酯，“EtOH”被定义为乙醇，“EDC”被定义为N′-(乙基羰亚胺酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺，一氢氯化物，“MeOH”被定义为甲醇，“THF”被定义为四氢呋喃，“HOBT”被定义为1-羟基苯并三唑。

A.中间体化合物的制备

实施例A1

a)中间体1的制备

在210℃搅拌1-氟-4-硝基-苯(0.0142mol)、1H-吲哚-3-乙胺(0.0129mol)及N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.032mol)的混合物18小时，然后使其回到室温并倾析。残余物被吸收在乙腈/水中。过滤沉淀物，以乙醚清洗并干燥，产生2.3g(64％)的中间体1。

b)中间体2的制备

在室温将中间体1(0.0078mol)和阮内镍(2.2g)在EtOH(50ml)中的混合物在3巴的压力下氢化3小时，然后通过硅藻土(Celite)过滤。以DCM/MeOH清洗硅藻土。蒸发滤液。残余物被吸收在DCM中，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.88g(95％)的中间体2。

实施例A2

a)中间体3的制备

在210℃搅拌2-乙氧基-1-甲氧基-1-硝基-苯(0.009mol)、1H-吲哚-3-乙胺(0.009mol)及N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.0228mol)的混合物24小时，然后使其回到室温，在DCM/MeOH中吸收并干燥。残余物被吸收在DCM(少量)中并通过经硅胶(35-70微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/DCM 30/70)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.6g(20％)的中间体3。

b)中间体4的制备

在室温将中间体3(0.002mol)和H₂/阮内镍(0.6g)在MeOH(100ml)中的混合物在3巴的压力下氢化1小时30分钟，然后通过硅藻土过滤。以DCM/MeOH清洗硅藻土。蒸发滤液。残余物被吸收在DCM/MeOH(少量)中，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生0.45g(83％)的中间体4。

实施例A3

a)中间体5的制备

在回流下搅拌N-3-吡啶基-乙酰胺(0.038mol)、1-氟-4-硝基-苯(0.05mol)、氯化铜(I)(0.0038mol)及碳酸钾(0.076mol)在二甲苯中的混合物18小时，然后使其回到室温。加入水。使混合物通过硅藻土过滤。以DCM清洗硅藻土。蒸发滤液。残余物通过经硅胶(35-70微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 97/3/0.1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生6.4g(65％)的中间体5。

b)中间体6的制备

添加氢氧化钠(浓缩的)(10ml)至中间体5(0.025mol)在EtOH(80ml)中的混合物中。搅拌混合物并回流2小时，然后使其回到室温。加入水。搅拌混合物15分钟，然后过滤。残余物通过经硅胶(70-200微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 100/0至95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生1.5g(28％)的中间体6。

c)中间体7的制备

在室温将中间体6(0.007mol)和阮内镍(1.5g)在MeOH(30ml)和THF(10ml)中的混合物在3巴的压力下氢化1小时，然后通过硅藻土过滤。以DCM/MeOH清洗硅藻土。蒸发滤液。残余物被吸收在DCM中。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.2g(92％)的中间体7。

实施例A4

中间体8的制备

于氮气流下，将1H-吲哚-3-丙酸(0.0264mol)，然后是1-羟基苯并三唑(0.0344mol)，然后是N′-(乙基羰亚胺酰基)-N，N-二甲基-1，3-丙二胺，一氢氯化物(＝EDCI)(0.0344mol)添加至1，4-苯二胺(0.137mol)在THF(200ml)和DCM(200ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物24小时，倒入水中并以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(20-45微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 97/3/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生1.75g(24％)的中间体8。

实施例A5

a)中间体9的制备

在200℃搅拌1-氟-4-硝基-苯(0.0025mol)、1-甲基-1H-吲哚-3-乙胺(0.0023mol)及N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.0057mol)的混合物2小时，然后使其回到室温。添加水及DCM。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(0.8g)通过经硅胶(35-70微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM 100)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。残余物(0.45g)被吸收在DIPE中。过滤沉淀物并干燥，产生0.33g(66％)的中间体9。

b)中间体10的制备

在室温将中间体9(0.0011mol)和阮内镍(0.4g)在MeOH(20ml)中的混合物在3巴的压力下氢化1小时，然后通过硅藻土过滤。以DCM/MeOH清洗硅藻土。蒸发滤液。残余物被吸收在DCM中。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生0.305g(97％)的中间体10。

实施例A6

a)中间体11的制备

在210℃搅拌4-氟-苯腈(0.071mol)、1H-吲哚-3-乙胺(0.071mol)及N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.1775mol)的混合物16小时，然后使其回到室温并吸收在DCM/MeOH中。以3N的HCl清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。收集残余物于乙醚/乙腈中。过滤沉淀物并干燥，产生8.07g(43％)的中间体11，熔点144℃。

b)中间体12的制备

搅拌中间体11(0.0115mol)和氢氧化钠(0.17mol)在EtOH(50ml)和水(50ml)中的混合物并回流18小时，然后使其回到室温。将溶剂蒸发。残余物被吸收在3N氢氧化钠中。以DCM清洗水层并酸化直到获得pH 5为止。过滤沉淀物并干燥，产生1.06g(35％)的中间体12，熔点225℃。

c)中间体13的制备

搅拌中间体12(0.0037mol)、4-吡啶胺(0.0037mol)、2-氯-1-甲基-吡啶鎓碘化物(0.0113mol)及三乙胺(0.015mol)在乙腈(100ml)中的混合物并回流90分钟，然后使其回到室温。蒸发溶剂。残余物被吸收在DCM/MeOH中。以碳酸钾10％清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂直到干燥为止。残余物通过经硅胶(35-70微米)的闪蒸柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.1)。收集两个级分并将溶剂蒸发，产生0.06g F1和0.08g F2。F1由乙醚/乙腈结晶。过滤沉淀物并干燥，产生第一批0.032g(24％)的中间体13。将F2及母液层合并，并由乙醚/乙腈结晶。过滤沉淀物并干燥，产生第二批0.105g(10％)的中间体13，熔点200℃。

实施例A7

中间体14的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(227mg，0.0015mol)起始并添加三乙胺(0.22ml)。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生256mg(52％)的中间体14，为淡黄色油。

实施例A8

中间体15的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由1-哌嗪甲酸苄基酯(1.3ml，0.0069mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(500mg，0.0034mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生840mg(70％)的中间体15，为橙色油。

实施例A9

中间体16的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由4-氨基-丁-1-醇(310mg，0.0021mol)和4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生55mg(17％)的中间体16，为黄色油。

实施例A10

中间体17的制备

按照与方法5(见实施例A22/34)类似的程序，由4-(2-氨基-乙基)-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(579mg，0.0025mol)和4-氯-2-吡啶甲醛(325mg，0.0023mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生425mg(53％)的中间体17，为黄色油。

实施例A11

中间体18的制备

按照与方法5(见实施例A22/34)类似的程序，由3-氨基-丙酸甲酯氢氯化物(351mg，0.0025mol)和4-氯-2-吡啶甲醛(325mg，0.0023mol)起始并添加三乙胺(0.35ml，0.0025mol)。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生160mg(30％)的中间体18，为黄色油。

实施例A12

中间体19的制备

按照与方法3(见实施例A22/20)类似的程序，由溴-乙酸甲酯(0.26ml，0.0021mol)和4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：AcOEt/环己烷60/40)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生170mg(38％)的中间体19，为黄色油。

实施例A13

中间体20的制备

方法6

在室温下将4-氨基-1-丁醇(0.13ml，0.0014mol)添加至1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(200mg，0.0013mol)、对-甲苯磺酸(123mg，0.00065mol)及3

分子筛在MeOH(4ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物6小时，冷却至0℃，并缓慢添加硼氢化钠(98mg，0.0026mol)。在室温下搅拌混合物18小时。过滤掉分子筛，将混合物倒入水中并蒸发溶剂。以碳酸氢钠的饱和溶液碱化水层，并以DCM萃取3次。分离有机层，以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生269mg(91％)的中间体20，为黄色油。

实施例A14

中间体21的制备

于氩气下，在室温中将α-(苯基甲基)-1H-吲哚-3-乙酸(94mg，0.00035mol)和1，1-羰基二咪唑(59mg，0.00036mol，逐份添加)在DCM(1ml)中的混合物搅拌3小时。添加N，O-二甲基羟基胺氢氯化物(36mg，0.00037mol)，并在室温下再搅拌混合物3个小时，冷却至0℃，并倒入水中。以氢氧化钠的4N溶液调整pH至10，并以EtOAc萃取水层。分离有机层、以3N盐酸溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生52mg(47％)的中间体21。

实施例A15

a)中间体22的制备

将4-二甲基氨基吡啶(261mg，0.0021mol)和二碳酸二叔丁基酯(di-tert-butyldicarbonate)(14.0g，0.064mol)添加至中间体1(3.0g，0.011mol)在DCM(130ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物5小时。通过添加水使反应结束，并以DCM萃取2次。连续以碳酸氢钠的饱和溶液及以盐水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷10/90至20/80)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生4.65g(90％)的中间体22，为黄色油。

b)中间体23的制备

将阮内镍(3g)添加至中间体22(4.7g，0.0097mol)在乙醇(15ml)和THF(15ml)中的溶液中。在1个大气压的氢中搅拌反应混合物16小时。为完成反应，添加阮内镍(1g)并在1个大气压的氢中再搅拌混合物4个小时。使混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷10/90至20/80)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生4.0g(92％)的中间体23，为黄色泡沫。

实施例A16

a)中间体24的制备

将溴(0.0104mol)，然后是亚硝酸钠(0.0362mol)在水(3ml)中的溶液在-10℃滴加至6，7-二氢-5H-1-吡啶-4-胺(0.0112mol)在含水溴化氢(48％)(5ml)中的混合物中。使混合物回到20℃。添加冰。以浓氢氧化钠碱化混合物并以EtOAc萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生2g(90％)的中间体24。

b)中间体25的制备

将间氯过苯甲酸(0.012mol)添加至中间体24(0.01mol)在DCM(15ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物12小时。添加3N氢氧化钠和水。以DCM萃取混合物3次。以水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.85g(86％)的中间体25。

c)中间体26的制备

在100℃搅拌中间体25(0.0086mol)在乙酸酐(18ml)中的混合物30分钟，然后冷却至室温并蒸发。残余物被吸收在NaHCO₃及EtOAc中并通过硅藻土过滤。以EtOAc清洗硅藻土。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.63g(73％)的中间体26。

d)中间体27的制备

在室温下搅拌中间体26(0.0074mol)在MeOH(10ml)和3N氢氧化钠(80ml)中的混合物30分钟，然后在80℃搅拌10分钟，然后使回到室温。蒸发MeOH。以DCM萃取混合物2次，然后以饱和NaCl清洗。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.02g(64％)的中间体27。

实施例A17

a)中间体28的制备

将溴(1.3ml)，然后是亚硝酸钠(3.3g)在水(4ml)中的溶液在-10℃滴加至5，6，7，8-四氢-4-喹啉胺(0.0135mol)在含水溴化氢(48％)(6.7ml)中的溶液中。使混合物回到20℃。倒出于冰上，以浓氢氧化钠碱化并以EtOAc萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生2.2g(77％)的中间体28。

b)中间体29的制备

将间氯过苯甲酸(0.0125mol)添加至中间体28(0.0104mol)在DCM(20ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物12小时。添加3N氢氧化钠和冰。以DCM萃取混合物2次。将有机层干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生3g(100％)的中间体29。

c)中间体30的制备

在100℃搅拌中间体29(0.0086mol)在乙酸酐(22ml)中的混合物30分钟，然后冷却至室温并蒸发。残余物被吸收在饱和NaHCO₃及EtOAc中。搅拌混合物30分钟。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生3.4g(100％)的中间体30。

d)中间体31的制备

在室温下搅拌中间体30(0.0104mol)在MeOH(18ml)和3N氢氧化钠(150ml)中的混合物30分钟，然后在80℃搅拌10分钟。蒸发MeOH。以DCM萃取混合物2次。以饱和NaCl清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生1.84g(77％)的中间体31。

实施例A18

a)中间体32的制备

在210℃搅拌2-乙氧基-4-硝基茴香醚(0.0107mol)、6-甲氧基色胺(0.0107mol)及二异丙基乙胺(0.0268mol)的混合物5小时，然后倒出于冰上并以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM100％)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.85g(22％)的中间体32。

b)中间体33的制备

在室温将中间体32(0.0023mol)和阮内镍(0.85g)在MeOH(42ml)和THF(42ml)中的混合物在3巴压力下氢化2小时，然后通过硅藻土过滤。蒸发滤液，产生0.74g(95％)的中间体33。

实施例A19

a)中间体34的制备

在0℃将草酰氯(0.012mol)滴加至5-氰基吲哚(0.007mol)在乙醚(21ml)中的溶液中。将混合物于0℃搅拌5小时，然后在室温下搅拌过夜。过滤沉淀物、以乙醚清洗并干燥，产生1.454g(73％)的中间体34。

b)中间体35的制备

在5℃将中间体34(0.0027mol)在DCM(12ml)中的溶液滴加至N-吡啶-4-基-苯-1，4-二胺(0.022mol)和N，N-二异丙基乙胺(0.0034mol)在DCM(4ml)中的溶液中。搅拌混合物并回流一个周末，然后冷却至室温。过滤沉淀物并干燥。由iPrOH结晶残余物。过滤沉淀物并干燥，产生0.756g的粗产物。此级分通过经kromasil(5微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 97/3/0.3至87/13/1.3)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。残余物通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/0.1至87/13/0.1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.098g(20％)的中间体35，熔点＞264℃。

实施例A20

a)中间体36的制备

在210℃搅拌1H-苯并咪唑-1-乙胺(0.011mol)、1-氟-4-硝基-苯(0.011mol)及二异丙基乙胺(0.034mol)的混合物30分钟。蒸发二异丙基乙胺。将沉淀物溶解在DCM/MeOH中。以10％碳酸钾清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(3.2g)通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 98/2/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由乙腈结晶残余物(2.1g，77％)。过滤沉淀物并干燥，产生1.3g(47％)的中间体36，熔点144℃。

b)中间体37的制备

在室温将中间体36(0.006mol)和阮内镍(2g)在MeOH(20ml)中的混合物在3巴的压力下氢化，然后通过硅藻土过滤。以DCM/MeOH清洗硅藻土。蒸发滤液，产生1.7g(100％)的中间体37。

实施例A21

a)中间体38的制备

在210℃搅拌DL-色胺酸甲酯(0.0078mol)、1-氟-4-硝基-苯(0.0078mol)及二异丙基乙胺(0.0353mol)的混合物4小时，然后吸收在DCM/MeOH中并添加3N HCl。搅拌混合物15分钟。以饱和NaHCO₃清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(35-70微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM 100％，然后是DCM/MeOH99/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.75g(28％)的中间体38。

b)中间体39的制备

在室温将中间体38(0.0022mol)和阮内镍(0.75g)在MeOH(100ml)中的混合物在3巴的压力下氢化1小时，然后通过硅藻土过滤。蒸发滤液，产生0.65g(96％)的中间体39。

c)中间体40的制备

在120℃搅拌中间体39(0.139mol)和4-溴吡啶氢氯化物(0.139mol)在乙酸(450ml)中的混合物3小时，倒出于冰上，以浓氢氧化钠碱化并以DCM/MeOH(少量)萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(62.7g)通过经kromasil(20-45微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 93/7/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生22g(41％)的中间体40。

d)中间体41的制备

在氮气流下，将氢氧化锂单水合物(0.112mol)于0℃逐份添加至中间体40(0.056mol)在MeOH(86ml)和水(34.4ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物过夜，然后蒸发直到干燥，产生：22g(定量产率)的中间体41。

实施例A22

1)中间体42的制备

在-78℃于氩气下，将丁基锂在己烷(3.4ml，0.0081mol)中的2.5N溶液添加至二异丙基胺(0.85ml，0.0088mol)在THF(6ml)中的溶液中。在-78℃搅拌混合物30分钟。逐份地添加4-氯-3-甲基吡啶氢氯化物(630mg，0.0038mol)并将混合物在-78℃搅拌1小时。滴加碳酸二乙酯(1.0ml，0.0096mol)并将混合物在-78℃再搅拌1小时，然后升温至室温并搅拌2.5小时。通过缓慢添加水使反应结束，并以EtOAc萃取2次。分离有机层，以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/MeOH 100/0，然后90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生74mg(9％)的中间体42。

2)中间体43的制备

在室温于氩气下，将磷基乙酸三乙酯(0.075ml，0.00038mol)滴加至氢化钠(10.6mg，0.00044mol)在THF(5ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物20分钟，然后滴加4-氯-3-吡啶甲醛(50mg，0.00035mol)在THF(3ml)中的溶液。将混合物在室温下搅拌16小时，然后倒入在水中，以EtOAc萃取2次。分离有机层，以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生77mg(88％)的中间体43。

3)中间体44的制备

在-78℃于氩气下，将丁基锂在己烷(0.80ml，0.0020mol)中的2.5N溶液添加至二异丙基胺(0.28ml，0.0020mol)在THF(2ml)中的溶液中。在-78℃搅拌混合物10分钟，然后滴加4-氯吡啶(219mg，0.0019mol)在THF(1ml)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌1.25小时，然后滴加丙醛(0.14ml，0.0019mol)。将混合物在-78℃搅拌30分钟，最后在室温下搅拌4小时，倒入水中，并以EtOAc萃取。分离有机层，以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生147mg(44％)的中间体44。

4)中间体45的制备

方法2

在-30℃于氩气下，将3M的乙基溴化镁在乙醚中的溶液(1.1ml，0.0032mol)添加至在THF(4ml)中的4-氯-2-吡啶甲酸甲酯溶液(200mg，0.0012mol)中。在75℃搅拌混合物2小时30分钟，冷却至0℃并以水淬火。以碳酸氢钠的饱和溶液使所得混合物成为碱性并以EtOAc萃取2次。以盐水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷10/90)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生54mg(23％)的中间体45，为褐色油。

5)中间体46的制备

在0℃于氩气下，将甲烷磺酰氯(98μl，0.0013mol)滴加至4-氯-2-吡啶甲胺(150mg，0.0011mol)和三乙胺(177μl，0.0013mol)在DCM(4ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物30分钟。以碳酸氢钠的饱和溶液结束反应并以DCM萃取2次。将有机相干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生82mg(35％)的中间体46，为橙色油。

6)中间体47的制备

方法7

在0℃于氩气下，将环丙烷甲酰氯(115μl，0.0013mol)滴加至4-氯-2-吡啶甲胺(150mg，0.0011mol)和三乙胺(177μl，0.0013mol)在DCM(4ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物15分钟。以碳酸氢钠的饱和溶液结束反应并以DCM萃取2次。有机相经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生85mg(38％)的中间体47，为白色固体。

7)中间体48的制备

按照与方法7(见实施例A22/6)类似的程序，由4-氯-2-吡啶甲胺(150mg，0.0011mol)和氢肉桂酰氯(187μl，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生191mg(66％)的中间体48，为黄色固体。

8)中间体49的制备

按照与方法7(见实施例A22/6)类似的程序，由4-氯-2-吡啶甲胺(200mg，0.0014mol)和丙酰氯(146μl，0.0017mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生126mg(45％)的中间体49，为无色油。

9)中间体50的制备

按照与方法7(见实施例A22/6)类似的程序，由4-氯-2-吡啶甲胺(150mg，0.0011mol)和苯基乙酰氯(168μl，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生124mg(45％)的中间体50，为白色固体。

10)中间体51及52的制备

和

中间体51   中间体52

方法1

在0℃于氩气下，将1.4M的环丙基溴化镁在甲苯/THF(75/25)中的溶液滴加至4-氯-2-吡啶甲醛(377mg，0.0027mol)在THF(4ml)中的溶液中。在0℃搅拌反应混合物1小时，去除干冰浴并在室温下搅拌混合物1小时。通过添加水使反应混合物淬火并以EtOAc萃取2次。将有机层以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/EtOAc 80/20)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生193mg(39％)的中间体51及29mg的中间体52。

11)中间体53的制备

按照与方法1(见实施例A22/10)类似的程序，由4-氯-2-吡啶甲醛(300mg，0.0021mol)和2.0M的异丙基氯化镁在THF中的溶液(2.12ml，0.0042mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/EtOAc 80/20)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生165mg(42％)的中间体53，为褐色油。

12)中间体54的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶)-乙酮(298mg，0.0019mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/EtOAc 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生293mg(62％)的中间体54，为黄色油。

13)中间体55的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶)-乙酮(100mg，0.00064mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生50mg(45％)的中间体55，为黄色油。

14)中间体56的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶)-乙酮(100mg，0.00064mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生30mg(25％)的中间体56，为黄色油。

15)中间体57的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶)-乙酮(157mg，0.0010mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生134mg(49％)的中间体57，为黄色油。

16)中间体58的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(200mg，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生281mg(66％)的中间体58，为黄色油。

17)中间体59的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(200mg，0.0013mol)起始并添加三乙胺(0.2ml)。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生80mg(25％)的中间体59，为黄色油。

18)中间体60的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(200mg，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生176mg(68％)的中间体60，为淡黄色油。

19)中间体61的制备

按照与方法6(见实施例A13)类似的程序，由1-(4-氯-2-吡啶基)-乙酮(200mg，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生274mg(77％)的中间体61，为黄色油。

20)中间体62的制备

方法3

在0℃于氩气下，将在THF(3ml)中的4-氯-α-甲基-2-吡啶甲醇(200mg，0.0013mol)滴加至氢化钠(60重量％于矿物油中)(56mg，0.0014mol)在THF(1ml)中的混合物中。将混合物加热至70℃并搅拌3小时，然后冷却至0℃，并滴加碘乙烷(0.102ml，0.0013mol)。将混合物加热至70℃达2小时，冷却至0℃，倒出于冰水上，以DCM萃取2次及以EtOAc萃取1次。将有机层分离，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/EtOAc 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生106mg(45％)的中间体62，为褐色油。

21)中间体63的制备

按照与方法3(见实施例A22/20)类似的程序，由4-氯-α-甲基-2-吡啶甲醇(200mg，0.0013mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：环己烷/EtOAc 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生85mg(39％)的中间体63，为淡黄色油。

22)中间体64的制备

方法4

将4-氯-2-吡啶甲醇(400mg，0.0028mol)溶解于氯仿(24ml)中。添加硫酰氯(0.40ml，0.0056mol)和DMF(2滴)。在80℃搅拌混合物4小时。蒸发去除溶剂。将残余物吸收回到MeOH(18ml)中并添加乙醇胺(1.38ml，0.014mol)。在80℃搅拌混合物4小时。蒸发去除溶剂。将残余物倒入水中并以EtOAc萃取。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生310mg(60％)的中间体64，为橙色油。

23)中间体65的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由2-吗啉-4-基-乙胺(0.45ml，0.0034mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(200mg，0.0014mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生39mg(23％)的中间体65，为黄色油。

24)中间体66的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由33％的在EtOH(10ml)中的甲胺溶液和4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/NH₄OH 85/15/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生130mg(40％)的中间体66，为橙色油。

25)中间体67的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由2.0M的乙胺在THF中的溶液(3.5ml，0.0069mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(200mg，0.014mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生45mg(19％)的中间体67，为橙色油。

26)中间体68的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由3-氨基-丙酸乙酯(2.45g，0.020mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(600mg，0.0042mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生730mg(71％)的中间体68，为橙色液体。

27)中间体69的制备

将中间体68(350mg，0.0015mol)溶解在MeOH(5ml)中并冷却至0℃。缓慢添加硼氢化钠(300mg，0.0078mol)。在80℃搅拌混合物9小时。以水结束反应并蒸发溶剂。将残余物以EtOAc萃取。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生70mg(23％)的中间体69，为无色油。

28)中间体70的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由氨基-乙腈(1.2g，0.013mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(500mg，0.0034mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生160mg(25％)的中间体70，为橙色液体。

29)中间体71的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由N-甲基哌嗪(1.16ml，0.010mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生325mg(69％)的中间体71，为黄色油。

30)中间体72的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由二乙胺(1.45ml，0.014mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生300mg(43％)的中间体72，为黄色液体。

31)中间体73的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由3-氨基丙腈(1.02ml，0.014mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(500mg，0.0034mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生180mg(27％)的中间体73，为黄色油。

32)中间体74的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由苯乙胺(0.52ml，0.0042mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生110mg(22％)的中间体74，为无色油。

33)中间体75的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由3-苯基-丙胺(470mg，0.0035mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生90mg(17％)的中间体75，为橙色油。

34)中间体76的制备

方法5

将4-氯-2-吡啶甲醛(200mg，0.0014mol)、N-(3-氨基丙基)吗啉(224mg，0.0015mol)、对甲苯磺酸(134mg，0.00070mol)及

分子筛在室温于氩气下搅拌7小时。过滤掉分子筛，冷却反应混合物至0℃，并缓慢添加硼氢化钠(107mg，0.0028mol)。在室温下搅拌混合物17小时，倒入水中并以DCM萃取。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₃85/15/3)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生230mg(60％)的中间体76，为黄色油。

35)中间体77的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由苄基胺(0.46ml，0.0042mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(300mg，0.0021mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生240mg(50％)的中间体77，为无色油。

36)中间体78的制备

按照与方法3(见实施例A22/20)类似的程序，由溴乙基甲基醚(0.13ml，0.0014mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(200mg，0.0014mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：AcOEt/环己烷30/70)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生67mg(24％)的中间体78，为黄色油。

37)中间体79的制备

按照与方法4(见实施例A22/22)类似的程序，由4-苯基-丁胺(0.55ml，0.0035mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(250mg，0.0017mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生260mg(55％)的中间体79，为黄色油。

38)中间体80的制备

按照与方法3(见实施例A22/20)类似的程序，由(3-溴-丙基)-苯(0.27ml，0.0018mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(200mg，0.0014mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：AcOEt/环己烷10/90)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生57mg(16％)的中间体80，为无色油。

39)中间体81的制备

按照与方法3(cA22/20)类似的程序，由1-溴-2-乙氧基-乙烷(589mg，0.0052mol)及4-氯-2-吡啶甲醇(500mg，0.0034mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷10/90)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生270mg(36％)的中间体81，为无色油。

40)中间体82的制备

按照与方法1(见实施例A22/10)类似的程序，由4-氯-2-吡啶甲醛(500mg，0.0035mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生136mg(22％)的中间体82，为黄色油。

实施例A23

a)中间体83的制备

将37％盐酸溶液(14.3ml)添加至2-乙氧基-4-硝基-苯胺(10.5g，0.0577mol)在乙酸(210ml)的溶液中，并于室温下搅拌混合物30分钟。然后滴加亚硝酸钠(4.4g，0.0635mol)在水(15ml)中的溶液，并在0℃搅拌混合物30分钟。在0℃滴加碘化钾(19.2g，0.1157mol)及碘(7.3g，0.0288mol)在水(70ml)中的冷溶液。在0℃搅拌混合物30分钟及在室温下搅拌16小时。过滤掉形成的沉淀物，以水清洗，然后溶解在DCM中。以碳酸氢钠的饱和溶液清洗有机溶液，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生13.7g(81％)的中间体83，为黄色固体。

b)中间体84的制备

将中间体83(700mg，0.0024mol)、6-甲氧基色胺(505mg，0.0026mol)、二氯[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(78mg，0.00011mol)、1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(177mg，0.00032mol)及叔丁醇钠(255mg，0.0026mol)在THF(95ml)中的混合物在100℃加热3小时及在120℃1.5小时。在经硅藻土垫过滤后，蒸发溶剂及将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生464mg(55％)的中间体84，为黄色固体。

c)中间体85的制备

在室温将中间体84(见实施例A23/b)(773mg，0.0022mol)和阮内镍(50％水中料浆)在乙醇(8.5ml)和THF(6.8ml)中的混合物在1个大气压的氢中搅拌24小时。在经硅藻土垫过滤后，蒸发溶剂，产生697mg(98％)的中间体85，为紫色泡沫。

实施例A24

中间体86及87的制备

中间体86

和

中间体87

在80℃将3，4，5-三氯-哒嗪(200mg，0.0011mol)、中间体2(见实施例A1/b)(273mg，0.0011mol)及二异丙胺(0.38ml，0.0011mol)的混合物在2-丙醇(4.0ml)中搅拌1小时。蒸发溶剂，并将粗混合物吸收回到EtOAc。以碳酸氢钠的饱和溶液及盐水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生179mg(41％)的中间体86及中间体87，为两种哒嗪化合物的1/1混合物。

实施例A25

a)中间体88的制备

搅拌4-环氧乙烷基-1-(苯基甲基)-哌啶(0.069mol)在MeOH(300ml)及NaOCH₃(0.069mol)中的混合物并回流6小时。蒸发溶剂，然后将残余物吸收在水中并以DCM萃取。分离有机层，经干燥、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH98/2、90/10、85/15)。收集产物级分并将溶剂蒸发，产生5.0g(29％)的中间体88。

b)中间体89的制备

将中间体88(见实施例A25/a)(0.02mol)在MeOH(100ml)中的混合物以Pd/C 10％(1g)作为催化剂氢化。在吸收H₂(1当量)之后，过滤掉催化剂并蒸发滤液，产生3.18g(100％)的中间体89。

实施例A26

a)中间体90的制备

按照与方法5(见实施例A22/34)类似的程序，由N-(2-氨基乙基)氨基甲酸苄基酯氢氯化物(475ml，0.0020mol)及4-氯-2-吡啶甲醛(265mg，0.0019mol)起始并添加三乙胺(0.29ml，0.0021mol)。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生150mg(25％)的中间体90，为无色油。

B.最终化合物的制备

实施例B1

化合物1的制备

搅拌4-氯-喹啉(0.0009mol)及中间体2(0.001mol)在2-丙醇(5ml)中的混合物并回流6小时，然后使其回到室温。蒸发溶剂。以10％碳酸钾碱化残余物，并以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(0.38g)通过经硅胶(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 97/3/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。添加2-丙醇及HCl/2-丙醇。搅拌混合物30分钟，并使其回到室温。过滤沉淀物并以乙醚干燥，产生0.09g(23％)的化合物1，熔点170℃。

实施例B2

化合物2的制备

在110℃，搅拌4-溴-吡啶氢氯化物(0.0044mol)及中间体4(0.0044mol)在乙酸(13ml)中的混合物45分钟，然后冷却至室温，倒入于冰水上，以碳酸钾碱化并以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(1.4g)通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 93/7/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.38g)溶解于2-丙醇/乙醚并转变成盐酸盐。过滤沉淀物并干燥，产生0.385g(20％)的化合物2，熔点150℃。

实施例B3

化合物3的制备

在130℃搅拌4-氯-2(1H)-喹啉酮(0.0011mol)及中间体2(0.0016mol)的混合物5小时，然后在160℃搅拌过夜并使其回到室温。残余物通过经硅胶(35-70微米)(的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.12g)吸收在乙腈中。过滤沉淀物并干燥，产生0.045g(10％)的化合物3，熔点238℃。

实施例B4

化合物4的制备

在100℃搅拌4-氯-6，7-二氢-5H-环戊烷[b]吡啶(0.0006mol)及中间体2(0.0006mol)在乙酸(2ml)中的混合物30分钟，然后使其回到室温。添加水，然后是氢氧化钠(3N)并以DCM萃取形成的混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。所获得的残余物(0.233g)通过经硅胶(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH97/3/0.3)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.025g(11％)的化合物4。

实施例B5

化合物5的制备

在100℃搅拌4-氯-5，6，7，8-四氢-喹啉(0.0009mol)及中间体2(0.0009mol)在DMF(3ml)中的混合物3小时，然后使其回到室温。将混合物倒入冰水及氢氧化钠(3N)中，然后以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。所获得的残余物(0.49g)通过经硅胶(5微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 99/1/0.05至80/20/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.054g(16％)的化合物5。

实施例B6

化合物6的制备

在0℃于N2气流下，将氢化铝锂(0.0032mol)逐份添加至N-甲氧基-N-甲基-1H-吲哚-3-乙酰胺(0.0032mol)在THF(5ml)中的混合物中。搅拌混合物1小时。添加硫酸氢钾(5％)。以乙醚萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。此混合物必须立即使用。将在MeOH(5ml)中的中间体7(0.0016mol)、在聚合物载体(Amberlite IRA-300BH₃CN形式-容量BH₃CN-＝2.5/4.5mmol/g树脂)上的氰基硼氢化物(0.0022mol)及乙酸(数滴)添加至所获得的混合物中。搅拌混合物12小时。过滤沉淀物并干燥。残余物通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 97/3/0.3)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.14g)吸收在HCl/2-丙醇中。过滤沉淀物并干燥，产生0.125g(29％)的化合物6，熔点160℃。

实施例B7

化合物7的制备

搅拌N-4-吡啶基-1，4-苯二胺(0.0016mol)和6-甲氧基-1H-吲哚-3-甲醛(0.0016mol)在MeOH(20ml)中的混合物中并回流过夜。添加四氢硼酸钠(0.0016mol)。在室温下搅拌混合物4小时，倒入于冰上并以DCM萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经kromasil(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 92/8/0.5，然后是甲苯/2-丙醇/NH₄OH 85/15/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由乙腈结晶残余物。过滤沉淀物并干燥，产生0.131g(23％)的化合物7，熔点145℃。

实施例B8

化合物8的制备

在120℃搅拌4-溴-吡啶氢氯化物(0.0069mol)及中间体8(0.008mol)在乙酸(7ml)中的混合物1小时，然后使其回到室温。添加水。以碳酸钾碱化混合物并以DCM/MeOH(95/5)萃取2次。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(35-70微米)的闪速柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 92/8/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生1.6g(65％)的化合物8，熔点208℃。

实施例B9

化合物9的制备

将4-吡啶甲醛(0.0005mol)，然后是在聚合物载体(Amberlite IRA-300BH₃CN形式-容量BH₃CN-＝2.5/4.5mmol/g树脂)上的氰基硼氢化物(0.0004mol)，然后是乙酸(3滴)添加至中间体2(0.0004mol)在MeOH(10ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物3小时。过滤沉淀物并以MeOH清洗。蒸发滤液。将残余物(0.17g)溶解在MeOH(20ml)中，该残余物为目标化合物9和相应的未被还原的中间体亚胺的混合物。逐份地添加四氢硼酸钠(0.02g)。搅拌混合物30分钟。添加水。部分蒸发MeOH。以EtOAc萃取混合物。以水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(0.05g)通过经硅胶(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 98/2/0.4)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.034g)溶解于2-丙酮中并转变成乙二酸盐。过滤沉淀物并干燥，产生0.036g(16％)的化合物9，熔点132℃。

实施例B10

化合物10的制备

在120℃搅拌4-溴-吡啶氢氯化物(0.001mol)及中间体10(0.0005mol)在乙酸(2ml)中的混合物1小时，然后使其回到室温。添加冰，然后是3N氢氧化钠。以DCM萃取混合物2次。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 96/4/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.064g，29％)溶解于2-丙醇/乙醚中并转变成盐酸盐。过滤沉淀物并干燥，产生0.082g(29％)的化合物10，熔点＞250℃。

实施例B11

化合物11的制备

将氢化铝锂(0.0145mol)添加至中间体13(0.0036mol)在THF(100ml)中的混合物中。搅拌混合物并回流3小时，然后使其回到室温。添加EtOAc。添加最小量的水。将混合物通过硅藻土过滤。以EtOAc清洗硅藻土。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(1.1g)通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 93/7/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由乙腈/乙醚中结晶残余物(0.25g)。过滤沉淀物并干燥，产生0.11g(12％)的化合物11，熔点122℃。

实施例B12

化合物86的制备

在100℃于氩气下，搅拌4-氯-2-吡啶腈(154mg，0.0011mol)、中间体2(280mg，0.0011mol)和5N在2-丙醇中的盐酸溶液(0.19ml，0.0011mol)在DMF(2ml)中的混合物24小时，然后冷却至室温并倒入水中。以饱和碳酸氢钠使形成的混合物成为碱性，并以EtOAc萃取2次。连续以碳酸氢钠的饱和溶液及以盐水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生130mg(33％)的化合物86，为米色泡沫。

实施例B13

化合物87的制备

在105℃搅拌化合物86(110mg，0.00031mol)、叠氮化钠(22mg，0.00034mol)和溴化锌(70mg，0.00031mol)在水(1ml)和2-丙醇(0.25ml)中的混合物22小时，然后冷却至室温。添加0.25N的氢氧化钠溶液(3ml)并在室温下搅拌混合物1小时。过滤沉淀物，以MeOH、THF及1-丁醇清洗。蒸发有机层，并将形成的固体以MeOH清洗及干燥，产生26mg(21％)的化合物87，为米色固体，熔点210℃。

实施例B14

化合物88的制备

按照与化合物86(方法B12)类似的程序，由中间体14(254mg，0.00076mol)及中间体2(191mg，0.00076mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.2)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生139mg(30％)的化合物88，为灰色泡沫。

实施例B15

化合物89的制备

在室温1个大气压氢下，搅拌化合物88(112mg，0.00020mol)和碳上钯(10重量％)(43mg，0.000040mol)在MeOH(1ml)和EtOH(4ml)中的混合物26小时。在经硅藻土过滤后，蒸发溶剂，将残余物通过SCX柱色谱纯化。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生27mg(33％)的化合物89，为灰色泡沫。

实施例B16

化合物90的制备

按照与化合物86(方法B12)类似的程序，由中间体15(850mg，0.0024mol)及中间体2(561mg，0.0022mol)起始，在Biotage Initiator微波装置中在120℃加热混合物2小时。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生680mg(56％)的化合物90，为褐色泡沫。

实施例B17

化合物91的制备

将化合物90(200mg，0.00036mol)溶解在EtOH(10ml)及MeOH(10ml)中。添加碳上钯(10重量％)(100mg)。在室温下于氢中搅拌混合物24小时。在硅藻土上过滤混合物并以MeOH清洗。将溶剂蒸发，产生140mg(92％)的化合物91，为绿色油。

实施例B18

化合物92的制备

按照与化合物86类似的程序，由中间体90(150mg，0.00047mol)及中间体2(107mg，0.00042mol)起始，在Biotage Initiator微波装置中在120℃加热混合物80分钟。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生30mg(14％)的中间体90，为绿色油。

实施例B19

化合物93的制备

将化合物92(23mg，0.000043mol)溶解在EtOH(1ml)及MeOH(1ml)中。添加碳上钯(10重量％)(10mg)。在室温下于氢中搅拌混合物20小时。在硅藻土上过滤混合物并以MeOH清洗。将溶剂蒸发。将残余物通过SCX柱色谱纯化，产生18mg(100％)的化合物93，为绿色油。

实施例B20

化合物94的制备

按照与化合物86类似的程序，由中间体17(200mg，0.00056mol)及中间体2(142mg，0.00056mol)起始，在Biotage Initiator微波装置中在120℃加热混合物50分钟。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 85/15/1)的柱色谱纯化。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生35mg(11％)的化合物94，为红色油。

实施例B21

化合物95的制备

将化合物94(50mg，0.000088mol)溶解在MeOH(3ml)中。添加在2-丙醇(5ml)中的5N盐酸溶液。在室温下搅拌混合物17小时。蒸发溶剂。将残余物倒在水上，并以EtOAc萃取。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生15mg(36％)的化合物95，为黄色油。

实施例B22

化合物96的制备

按照与化合物86类似的程序，由中间体18(160mg，0.00070mol)及中间体2(160mg，0.00064mol)起始，在Biotage Initiator微波装置中在120℃加热混合物1小时。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 85/15/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生100mg(35％)的化合物96，为绿色油。

实施例B23

化合物97的制备

将化合物96(50mg，0.00011mol)溶解在THF(3ml)中。添加氢氧化锂(33mg，0.00079mol)及水(1滴)。在室温下搅拌混合物24小时。将残余物倒在水上，并以EtOAc萃取。分离有机层，以4N氢氧化钠溶液清洗。分离有机层，以3N盐酸溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过SCX柱色谱纯化，产生20mg(41％)的化合物97，为绿色油。

实施例B24

化合物98的制备

按照与化合物86类似的程序，由中间体19(170mg，0.00079mol)及中间体2(180mg，0.00071mol)起始，在Biotage Initiator微波装置中在120℃加热混合物80分钟。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生224mg(73％)的化合物98，为褐色油。

实施例B25

化合物99的制备

将化合物98(100mg，0.00023mol)溶解在MeOH(5ml)中并在0℃冷却。缓慢添加硼氢化钠(27mg，0.00069mol)。在80℃搅拌混合物4小时。以水结束反应并蒸发溶剂。以EtOAc萃取残余物。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH85/15)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生40mg(43％)的化合物99，为无色油。

实施例B26

化合物100的制备

在120℃于氩气下搅拌中间体20(107mg，0.00047mol)、中间体2(118mg，0.00047mol)及在2-丙醇中的5N盐酸溶液(0.12ml，0.00072mol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(2.3ml)中的混合物2小时，然后冷却至室温并倒入水中。以饱和碳酸氢钠溶液碱化形成的混合物并以EtOAc萃取3次。分离有机层，以水及盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生61mg(26％)的化合物100，为米色泡沫。

实施例B27

化合物101的制备

在0℃于氩气下，将氢化铝锂(6.5mg，0.00017mol)添加至中间体21(53mg，0.00017mol)在THF(1ml)中的混合物中。在0℃搅拌混合物1小时，以5％硫酸氢钾溶液淬火，并以EtOAc萃取。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物溶解在MeOH(1ml)中并滴加至N-4-吡啶-1，4-苯二胺(32mg，0.00017mol)、氰基硼氢化钠(16mg，0.0025mol)和乙酸(1滴)在MeOH(0.5ml)中的混合物中。在室温下搅拌混合物20小时，倒入在水中并以EtOAc萃取2次。分离有机层，以碳酸氢钠的饱和溶液及以盐水清洗，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/MeOH/NH₄OH 90/10/0.3)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生25mg(34％)的化合物101，为米色泡沫。

实施例B28

化合物102的制备

将中间体23(500mg，0.0011mol)、2-氯-4-溴吡啶(213mg，0.0011mol)、4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨(83mg，0.00014mol)、叔丁醇钠(264mg，0.0028mol)在甲苯(7.5ml)中的混合物在氩气下脱气15分钟。添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物(46mg，0.000044mol)。在Biotage Initiator微波装置中在100℃加热混合物90秒。冷却混合物至室温，然后倒入水中，并以EtOAc萃取2次。以水清洗有机层2次，以盐水清洗1次，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷30/70)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生254mg(41％)的化合物102，为米色泡沫。

实施例B29

化合物103的制备

将化合物102(70mg，0.00012mol)溶解于在2-丙醇(1.5ml)中的5N盐酸溶液中。添加水(2滴)。在室温下搅拌反应混合物5小时。结束反应并以饱和碳酸氢钠溶液碱化及以EtOAc萃取3次。有机层经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生33mg(76％)的化合物103，为白色泡沫。

实施例B30

化合物104的制备

在120℃于氩气下搅拌4-氯-α-甲基-2-吡啶甲醇(170mg，0.0011mol)和中间体2(271mg，0.0011mol)在乙酸(2ml)中的混合物1小时，然后使冷却至室温并倒入水上。以4N氢氧化钠溶液碱化形成的混合物并以EtOAc萃取2次。连续以饱和碳酸氢钠溶液及盐水清洗有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/MeOH 80/20)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生190mg(47％)的化合物104，为米色泡沫。

实施例B31

化合物105的制备

在室温下搅拌化合物104(106mg，0.00029mol)和活性氧化锰(148mg，0.0017mol)在氯仿(4ml)中的混合物6小时。在经硅藻土垫过滤后，蒸发溶剂并将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生4mg(3％)的化合物105，为橙色固体。

实施例B32

化合物106的制备

在室温下于氩气下添加乙酰胺肟(11mg，0.00016mol)至活化的分子筛和氢化钠(3.72mg，0.00016mol)在THF(0.6ml)中的混合物中。在70℃搅拌反应混合物1.5小时，然后冷却至室温。添加化合物200(50mg，0.00013mol)在THF(0.6ml)中的溶液。在70℃搅拌反应混合物1小时。通过添加水使反应结束，并以EtOAc萃取2次。将有机层干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷70/30)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生16mg(30％)的化合物106，为黄色油。

实施例B33

化合物107的制备

按照与化合物106类似的程序，由苄胺肟(38mg，0.00028mol)及化合物200(90mg，0.00023mol)起始，在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/EtOAc 90/10)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生13mg(12％)的化合物107，为黄色油，熔点170℃-174℃。

实施例B34

化合物108的制备

按照与化合物106类似的程序，由N′-羟基-2-苯基乙酰亚胺酰胺(42mg，0.00028mol)及化合物200(90mg，0.00023mol)起始。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷50/50)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生50mg(45％)的化合物108，为黄色固体，熔点159℃-161℃。

实施例B35

化合物109的制备

按照与化合物86类似的程序，由4-氯-2，6-吡啶二甲酸二甲酯(228mg，0.00099mol)及中间体2(250mg，0.00099mol)起始，在BiotageInitiator微波装置中在120℃加热混合物2小时。在后处理后，将残余物通过经硅胶(40-63微米)的柱色谱纯化(洗脱液：丙酮/环己烷30/70至60/40)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生30mg(7％)的化合物109，为黄色泡沫。

实施例B36

化合物110的制备

于120℃在CEM Discover微波烘箱(P＝300W)中，搅拌中间体27(0.0016mol)及中间体2(0.0018mol)在乙酸(35ml)中的混合物5分钟，然后使其回到室温。添加冰及氢氧化钠。使混合物通过硅藻土过滤。以DCM/MeOH(95/5)清洗硅藻土。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(1g)通过经kromasil(15-40微米)柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由CH₃CN/MeOH结晶残余物(0.3g)。过滤沉淀物并干燥，产生0.182g(29％)的化合物110，熔点136℃。

实施例B37

化合物111的制备

于120℃在CEM Discover微波烘箱(P＝300W)中，搅拌中间体31(0.0016mol)及中间体2(0.0018mol)在乙酸(3.5ml)中的混合物5分钟，然后使其回到室温。添加冰及浓NaOH。以DCM萃取混合物2次。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(0.9g)通过经kromasil(10微米)柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH93/7/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由CH₃CN/MeOH/丙酮结晶残余物(0.2g)。过滤沉淀物并干燥，产生0.137g(21％)的化合物111，熔点104℃。

实施例B38

化合物112的制备

于118℃在CEM Discover微波烘箱(P＝300W)中，搅拌中间体33(0.0025mol)及中间体27(0.0025mol)在乙酸(2.7ml)中的混合物10分钟，然后使其回到室温。添加水及3N氢氧化钠。以DCM萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(1.42g)通过经硅胶(10微米)柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.56g)吸收在2-丙酮/CH₃CN中。过滤沉淀物并干燥，产生0.506g(35％)的化合物112，熔点194℃。

实施例B39

化合物113的制备

在0℃于氮气流中，将硼氢化锂(0.0026mol)，然后是MeOH(1ml)逐份添加至中间体35(0.0002mol)在THF(15ml)中的溶液中。在0℃搅拌混合物4小时，添加硼氢化锂(15当量)。在室温下搅拌混合物过夜。添加硼氢化锂(10当量)。在室温下搅拌混合物4小时又30分钟。添加硼氢化锂(15当量)。在室温下搅拌混合物24小时并倒入水中。蒸发MeOH及THF。添加DCM。过滤混合物，产生0.01g的第一批粗产物。以DCM萃取滤液。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂，产生0.035g的第二批粗产物。两个级分通过经kromasil(5微米)柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 95/5/0.5至85/15/1.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.056g(28％)的化合物113，熔点154℃。

实施例B41

化合物36的制备

在110℃搅拌4-溴-吡啶氢氯化物(0.034mol)及中间体2(0.0374mol)在乙酸(13ml)中的混合物40分钟，然后使冷却至室温，倒入冰水中并以碳酸钾碱化。添加DCM。搅拌混合物30分钟，然后通过硅藻土过滤。倾析滤液。硅藻土被吸收在DCM/MeOH(95/5)中。搅拌混合物30分钟，然后过滤。合并两滤液，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。残余物(16.8g)通过经硅胶(20-45微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 92/8/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(4.2g)吸收在2-丙酮中。过滤沉淀物并干燥，产生3.6g(32％)的化合物36，熔点236℃。

实施例B42

化合物115的制备

将N-(2-羟基乙基)哌嗪(0.0019mol)、EDC(0.0019mol)、HOBT(0.0019mol)及三乙胺(0.0019mol)添加至中间体41(0.0013mol)在DCM/DMF 75/25(20ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物过夜。添加10％碳酸钾。以DCM萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(0.32g)通过经kromasil(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.027g(4％)的化合物115。

实施例B43

化合物116的制备

将1-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]哌嗪(0.0019mol)、EDCI(0.0019mol)、HOBT(0.0019mol)及三乙胺(0.0019mol)添加至中间体41(0.0013mol)在DCM/DMF 75/25(20ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物过夜。添加10％碳酸钾。以DCM萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(0.38g)通过经kromasil(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.108g(16％)的化合物116。

实施例B44

化合物117的制备

在140℃于CEM Discover微波烘箱中，搅拌中间体2(0.002mol)及4-氯-1H-吡咯[2，3-d]嘧啶(0.002mol)在乙酸(5ml)中的混合物15分钟。蒸发乙酸。将粗产物溶解在DCM中。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(1g)通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 93/7/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。由乙腈结晶残余物(0.27g)。过滤沉淀物并干燥，产生0.233g(31％)的化合物117，熔点211℃。

实施例B45

化合物118的制备

将5-氨基-1-戊醇(0.0019mol)、EDC(0.0019mol)、HOBT(0.0019mol)及三乙胺(0.0019mol)添加至中间体41(0.0013mol)在DCM/DMF 75/25(10ml)中的溶液中。在室温下搅拌混合物过夜。添加10％碳酸钾。以DCM萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物(0.38g)通过经kromasil(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/1至80/20/2)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.128g的化合物118。

实施例B46

化合物119的制备

在室温下于1个大气压氢下，搅拌中间体86和87(179mg，0.00045mol)和10％碳上钯(20mg)在EtOH中的混合物16小时。在经硅藻土垫过滤后，蒸发溶剂，将残余物通过经硅胶(40-63微米)柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH 9/1)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生70mg(47％)的化合物119，为黄色泡沫。

实施例B47

化合物120的制备

搅拌中间体2(0.050mg，0.000199mol)、4-喹啉甲醛(31mg，0.000199mol)在MeOH中的混合物并回流过夜，然后使其冷却至室温。逐份地添加硼氢化钠，将混合物在室温下搅拌1小时，以水水解，以DCM萃取，通过MgSO₄干燥并浓缩。将残余物通过经kromasil(10微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH 90/10/1至80/20/2)。收集纯的级分并将溶剂蒸发，产生0.045g(45％)的化合物120。

实施例B48

化合物121的制备

搅拌3-吡啶甲醛(0.0028mol)及中间体2(0.0028mol)在MeOH(20ml)中的混合物并回流过夜，然后使其回到室温。逐份地添加硼氢化钠(0.0028mol)。在室温下搅拌混合物5小时，添加冰和水。以DCM萃取混合物。分离有机层，经干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发溶剂。将残余物通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH₄OH97/3/0.2)。收集纯的级分及蒸发溶剂。将残余物(0.4g)吸收在HCl/异丙醇/乙醚中。过滤沉淀物并干燥。添加冰和水。以3N氢氧化钠碱化混合物。以DCM萃取混合物。将残余物(0.3g)通过经硅胶(15-40微米)的柱色谱纯化(洗脱液：甲苯/异丙醇/NH₄OH 90/10/0.5)。收集纯的级分并将溶剂蒸发。将残余物(0.24g)吸收在异丙醇/HCl/异丙醇/乙醚中。过滤沉淀物并干燥，产生0.23g(20％)的化合物121，其分离为盐酸盐，熔点130℃。

表F-1列出根据上述实施例之一所制备的化合物。下列缩写用于表中：.C₂HF₃O₂代表三氟乙酸盐，int.代表中间体，comp.代表化合物，.HCl代表盐酸盐，mp.代表熔点，ms.代表质谱。

表F-1

C.药理实施例：

U87MG细胞为带有野生型p53的人类成胶质细胞瘤细胞。在此细胞系中，MDM2密切地控制p53表达。

化合物保存p53于U87MG细胞中的能力由p53酶连接的免疫吸附分析法测定。p53分析法是一种使用两种多株抗体的“三明治”酶免疫分析法。对p53蛋白质具有专一性的多株抗体被固定于塑料孔的表面。任何存在于待分析样品中的p53将键合至捕捉抗体上。生物素化的检测剂多株抗体也识别p53蛋白质，并将结合至任何p53，其通过捕捉抗体被保持。反过来，检测剂抗体被辣根过氧化酶结合的卵白素所键合。辣根过氧化酶催化发色基质邻苯二胺的转变，其强度与被结合至板上的p53蛋白质的量成正比。利用分光光度计定量有色的反应产物。定量通过利用已知浓度的纯化的重组HIS示踪的p53蛋白质构建标准曲线进行(见实施例C.1.)。

式(I)化合物的细胞活性在U87MG肿瘤细胞上利用比色分析法对细胞毒性或存活率测定(见实施例C.2)。

C.1.p53 ELISA

于37℃，在润湿的含有5％CO₂的培养器中，在由10％胎牛血清(FCS)、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、1.5g/l碳酸氢钠及庆大霉素补充的Dulbecco最低基本培养介质(DMEM)中培养U87MG细胞(ATCC)。

在96孔平皿中以每孔30.000个细胞接种U87MG细胞，培养24小时，并在37℃于润湿的培养器中以化合物处理16小时。在培养后，以磷酸盐缓冲的盐水清洗细胞1次，且每孔添加30μl低盐RIPA缓冲液(20mM tris，pH 7.0，0.5mM EDTA，1％Nonidet P40，0.5％DOC，0.05％SDS，1mM PMSF，1μg/ml抑肽酶及0.5μ/ml的亮肽素)。将平皿放在冰上30分钟以完成溶胞。通过使用下述的三明治ELISA检测在溶胞液中的p53蛋白质。

以在涂覆缓冲液(0.1M NaHCO₃，pH8.2)中浓度为2μg/ml的捕捉抗体pAb122(Roche 1413147)涂覆高结合性聚苯乙烯EIA/RIA 96孔平皿(Costar 9018)，每孔50μl。使抗体在4℃粘附过夜。以磷酸盐缓冲的盐水(PBS)/0.05％Tween 20清洗涂覆平皿1次，并添加300μl的封闭缓冲液(PBS，1％小牛血清白蛋白(BSA))，在室温培养2小时。在封闭缓冲液中制备纯化的重组HIS示踪的p53蛋白质的稀释液(范围为3-200ng/ml)并用作标准品。

以PBS/0.05％Tween 20清洗平皿2次，并添加封闭缓冲液或标准品，每孔80μl。添加20μl的溶胞缓冲液至标准品中。添加样品至其它孔中，每孔20μl溶胞液。在4℃过夜培养之后，以PBS/0.05％Tween20清洗平皿2次。将等分的100μl二次多株抗体p53(FL-393)(Tebubio，sc-6243)以在封闭缓冲液中为1μg/ml的浓度添加至各孔中，并允许在室温粘附2小时。以PBS/0.05％Tween 20清洗平皿3次。添加0.04μg/ml于PBS/1％BSA中的检测抗体抗兔子HRP(sc-2004，Tebubio)并在室温培养1小时。以PBS/0.05％Tween 20清洗平皿3次，并添加100μl的基质缓冲液(基质缓冲液在使用前不久通过添加1片10mg来自Sigma的邻苯二胺(OPD)及125μl的3％的H₂O₂至25ml OPD缓冲液：35mM柠檬酸、132mM Na₂HPO₄，pH 5.6中制备)。于5至10分钟后，通过每孔添加50μl的终止缓冲液(1M H₂SO₄)终止颜色反应。利用Biorad微量盘读数器测量在双波长450/655nm的吸光度，然后分析结果。

对于每个实验，平行进行对照组(不含药物)及空白培养(不含细胞或药物)。从所有的对照组及样品值减去空白值。对于每个样品，p53的值(吸光度单位)被表示为存在于对照组中的p53值的百分比。高于130％的百分比保留被定义为显著的。此处，试验化合物的效果被表示为提供至少130％存在于对照组中的p53值的最低剂量(LAD)(见表F-2)。

C.2.增殖分析

将所有试验的化合物溶解于DMSO中，并在培养介质中制备另外的稀释液。在细胞增殖分析中最终DMSO浓度绝不超过0.1％(v/v)。对照组包含U87MG细胞及DMSO，但无化合物，而空白组包含DMSO但无细胞。

将U87MG细胞以3000细胞/孔/100μl接种于96-孔细胞培养皿中。24小时后，替换介质并添加化合物和/或溶剂至200μl的终体积。在4天培养之后，以200μl的新鲜介质替换介质，并利用以MTT为基础的分析法评估细胞生长。因此，添加25μl的MTT溶液(于磷酸盐-缓冲的盐水中的0.5％MTT，研究等级，来自Serva)至各孔并在37℃进一步培养细胞2小时。然后小心吸出介质，并通过添加至各孔25μl 0.1M甘胺酸及100μl DMSO溶解蓝色MTT-甲

产物。在通过微量盘读数器于540nm读取吸光度前，将平皿在微量盘振荡器上再振荡10分钟。

在实验中，每个实验条件的结果为3个重复孔的平均。对于初始筛选目的，以单一固定浓度10^-5M试验化合物。对于活性化合物，重复实验以建立整个浓度-响应曲线。对每个实验，平行进行对照组(不含药物)及空白培养(不含细胞或药物)。从所有的对照组及样品值减去空白值。对于每个样品，细胞生长的平均值(吸光度单位)被表示为对照组的细胞生长的平均值的百分比。当适当时，利用分级数据的概率单位分析(probit analysis)计算IC₅₀-值(降低细胞生长至对照组的50％所需的药物浓度)(Finney，D.J.，Probit Analyses，第2版，第10章，GradedResponses，Cambridge University Press，Cambridge 1962)。在此试验化合物的效果被表示为pIC₅₀(IC₅₀-值的负对数值)(见表F-2)。

表F-2：表F-2列出根据实施例C.1及C.2所试验的化合物的结果

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			1	3.0E-08	＞8.0
2	3.0E-07	7.2
			3	＞1.0E-05	5.3
4	3.0E-08	8.0
			5	3.0E-08
6	＞1.0E-05	5.5
			7	1.0E-05	5.7
8	＞1.0E-05	5.3
			9	＞1.0E-05
10	＞1.0E-05	5.9
			11	＞1.0E-05	5.3
12	3.0E-07	7.9
			13	1.0E-07	7.6

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			14	3.0E-07	7.4
15	＞1.0E-05	7.3
			16	＞1.0E-05	7.4
17	＞1.0E-05	6.2
			18	1.0E-07	6.3
19	3.0E-07	6.7
			20	3.0E-07	7.0
21	3.0E-08	8.0
			22	1.0E-07	7.7
23	1.0E-06	6.4
			24	1.0E-07	＞8.0
25	＞1.0E-05	7.4
			26	3.0E-06	7.0
27	3.0E-06	7.1
			28	＞1.0E-05	6.7
29	3.0E-06	6.6
			30	＞1.0E-05	6.5
31	＞1.0E-05	5.9
			32	3.0E-06	6.8
33	＞1.0E-05	7.2
			34	＞1.0E-05	7.3
35	1.0E-06	7.4
			36	1.0E-06	6.7
37	3.0E-07	6.8
			38	＞1.0E-05
39	1.0E-05	6.2
			40	＞1.0E-05
41	＞1.0E-05
			42	＞1.0E-05
43	＞1.0E-05
			44	＞1.0E-05
45	＞1.0E-05	6.0
			46	1.0E-06	6.6
47	1.0E-05	6.8
			48	1.0E-05	6.8
49	＞1.0E-05	＜5.0
			50	3.0E-06	7.0
51	＞1.0E-05	6.5
			52	＞1.0E-05	6.3
53	＞1.0E-05	6.2
			54	1.0E-06	6.9
55	3.0E-07	6.3
			56	＞1.0E-05	5.6
57	＞1.0E-05	6.1

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			58	＞1.0E-05	＜5.0
59	1.0E-06	6.4
			60	＞1.0E-05	7.0
61	＞1.0E-05	6.5
			62	＞1.0E-05	5.6
63	＞1.0E-05	5.8
			64	1.0E-06	6.4
65	＞1.0E-05	＜5.0
			66	3.0E-07	7.2
67	＞1.0E-05	5.9
			68	＞1.0E-05	5.6
69	1.0E-07	7.0
			70	＞1.0E-05	6.6
71	＞1.0E-05	6.1
			72	＞1.0E-05	5.7
73	＞1.0E-05	6.3
			74	＞1.0E-05	5.8
75	＞1.0E-05	5.5
			76	＞1.0E-05	＜5.0
77	＞1.0E-05	5.5
			78	＞1.0E-05	5.0
79	＞1.0E-05	5.6
			82	＞1.0E-05	＜5.0
83	＞1.0E-05	5.5
			84	＞1.0E-05	5.8
85	＞1.0E-05	6.8
			86	＞1.00E-05	＜5.0
87	＞1.00E-05	＜5.0
			88	＞1.00E-05	5.5
89	3.00E-06	5.4
			90	＞1.00E-05	5.6
91	＞1.00E-05	5.6
			92	＞1.00E-05	5.5
93	＞1.00E-05	＜5.0
			95	＞1.00E-05	5.1
96	＞1.00E-05	＜5.0
			97	1.00E-06	＜5.0
98	＞1.00E-05	5.4
			99	1.00E-05	5.6
100	＞1.00E-05	5.4
			101	＞1.00E-05	5.6
102	＞1.00E-05	＜5.0
			103	1.00E-05	5.4
104	3.00E-06	5.5

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			105	＞1.00E-05	5.1
106	＞1.00E-05	5.8
			107	＞1.00E-05
108	＞1.00E-05
			109	1.00E-06	＜5.0
110	1.00E-07	8.0
			111	1.00E-07	7.1
112	1.00E-07	7.5
			113	＞1.00E-05	＜5.0
114	＞1.00E-05	＜5.0
			114	＞1.00E-05	＜5.0
115	＞1.00E-05	＜5.0
			116	＞1.00E-05	＜5.0
117	＞1.00E-05	＜5.0
			118	＞1.00E-05	＜5.0
119	＞1.00E-05	＜5.0
			120	＞1.00E-05	5.3
121	＞1.00E-05	＜5.0
			123		5.3
124		5.3
			125	＞1.00E-05	5.4
126	＞1.00E-05	＜5.0
			127	＞1.00E-05	5.1
128	＞1.00E-05	5.5
			129	3.00E-06	5.7
130	＞1.00E-05	5.8
			131	＞1.00E-05	5.6
132	＞1.00E-05	＜5.0
			134	＞1.00E-05	5.9
135	1.00E-06	6.0
			136	＞1.00E-05	5.7
137	＞1.00E-05	5.5
			138	＞1.00E-05	5.8
139	＞1.00E-05	5.7
			140	＞1.00E-05	5.6
141	1.00E-05	5.4
			142	3.00E-06	5.5
143	＞1.00E-05	5.5
			144		5.5
145		5.6
			146	＞1.00E-05	5.1
147	＞1.00E-05	5.3
			148	3.00E-07	5.5
149	＞1.00E-05	5.7

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			150	1.00E-06	5.5
151	1.00E-06	＜5.0
			152	＞1.00E-05	5.0
153	＞1.00E-05	5.6
			154	＞1.00E-05	5.5
155	＞1.00E-05	5.7
			156	＞3.00E-06	5.5
157	＞1.00E-05	5.8
			158	＞1.00E-05	＜5.0
159	＞1.00E-05	5.5
			160	＞1.00E-05	6.4
161	＞1.00E-05	6.0
			162	＞1.00E-05	5.5
163	＞1.00E-05	5.5
			164	＞1.00E-05	5.6
165	3.00E-06	5.3
			166	＞1.00E-05	＜5.0
167	＞1.00E-05	5.4
			168	＞1.00E-05	5.7
169	＞1.00E-05	6.4
			170	3.00E-07	5.5
171	＞1.00E-05	＜5.0
			172	＞1.00E-05	＜5.0
173	＞1.00E-05	＜5.0
			174	＞1.00E-05
175	＞1.00E-05
			176	3.00E-06
177	3.00E-07	7.3
			178	＞1.00E-05	5.8
179	3.00E-06	6.6
			180	＞1.00E-05	6.2
181	3.00E-07	6.6
			182	＞1.00E-05	5.8
183	1.00E-05	6.3
			184	＞1.00E-05	6.0
185	3.00E-06	5.7
			186	1.00E-06	6.0
187	1.00E-06	6.4
			188	1.00E-06	6.1
189	＞1.00E-05	5.5
			190	＞1.00E-05	5.4
191	＞1.00E-05	5.5
			192	1.00E-06	＜5.0
193	3.00E-06	6.0

Co No	p53-elisaLAD	细胞增殖pIC50
			194	＞1.00E-05	5.2
195	1.00E-06	7.1
			196	＞1.00E-05	6.7
197	1.00E-07	6.6
			198	1.00E-06	5.9
199	＞1.00E-05	5.7
			201	＞1.00E-05	5.5
202	＞1.00E-05	5.5
			203	＞1.00E-05	5.5
204	＞1.00E-05	5.1
			205	3.00E-06	6.1
206	＞1.00E-05	5.5
			207	＞1.00E-05	6.1
208	3.00E-06	＜5.0
			209	＞1.00E-05	＜5.0
210	＞1.00E-05	＜5.0
			211	3.00E-07	7.2
212	＞1.00E-05	5.8
			213	3.00E-06	＜5.0
214	1.00E-06	＜5.0
			215	＞1.00E-05	5.5
216	1.00E-06	5.6
			217	＞1.00E-05	5.4
218	＞1.00E-05	＜5.0
			219	＞1.00E-05	5.4
220	3.00E-06	5.2
			221	＞1.00E-05	5.4
222	＞1.00E-05	5.4
			223	＞1.00E-05	6.1
224	＞1.00E-05	5.4
			225	＞1.00E-05	6.8
226	3.00E-06	5.5
			227	＞1.00E-05	5.1
228	1.00E-06	5.1
			229	1.00E-07	7.0

D.组合物实施例：薄膜衣片剂

片核的制备

将100g式(I)的化合物、570g乳糖及200g淀粉的混合物充分混合，之后以5g十二烷基硫酸钠及10g聚乙烯基吡咯烷酮在约200ml水中的溶液润湿。将湿润粉末过筛、干燥并再过筛。之后添加100g微晶纤维素及15g氢化植物油。将整体充分混合并压成片剂，获得10.000个片剂，每个包含10mg式(I)的化合物。

包衣

将5g乙基纤维素于150ml二氯甲烷中的溶液添加至10g甲基纤维素于75ml变性乙醇中的溶液中。然后添加75ml二氯甲烷及2.5ml的1，2，3-丙三醇，熔化10g聚乙二醇并将其溶解于75ml二氯甲烷中。将后者溶液添加至前者中，然后添加2.5g十八酸镁、5g聚乙烯基吡咯烷酮及30ml浓缩的有色悬浮液，并全部均质。采用如此获得的混合物在包衣装置中包覆片核。

Claims (21)

1.一种式(I)的化合物，

其加成盐或立体化学异构体形式，其中：

m为0、1或2，且当m为0时，意指直接键；

n为0、1、2或3，且当n为0时，意指直接键；

p为0或1，且当p为0时，意指直接键；

s为0或1，且当s为0时，意指直接键；

t为0或1，且当t为0时，意指直接键；

X为C(＝O)或CHR⁸；其中

R⁸为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、-C(＝O)-NR¹⁷R¹⁸、羟基羰基、芳基C_1-6烷氧基羰基、杂芳基、杂芳基羰基、杂芳基C_1-6烷氧基羰基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、哌啶基羰基、C_1-6烷氧基羰基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；被羟基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基取代的哌嗪羰基；被羟基C_1-6烷基取代的吡咯烷基；或被一个或两个选自羟基、C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、C_{1 -6}烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基(二羟基)C_1-6烷基或C_1-6烷氧基(羟基)C_{1 -6}烷基的取代基所取代的哌啶基羰基；

R¹⁷及R¹⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、二(C_1-6烷基)氨基C_1-6烷基、芳基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基(C_1-6烷基)或羟基C_1-6烷基(芳基C_1-6烷基)；

为-CR⁹＝C＜且虚线为一个键或-CHR⁹-CH＜；其中

每个R⁹独立地为氢或C_1-6烷基；

R¹为氢、芳基、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-12烷基或被一个或两个独立选自羟基、芳基、杂芳基、氨基、C_1-6烷氧基、单-或二(C_{1 -6}烷基)氨基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、C_1-6烷基哌嗪基、芳基C_1-6烷基哌嗪基、杂芳基C_1-6烷基哌嗪基、C_3-7环烷基哌嗪基及C_3-7环烷基C_1-6烷基哌嗪基的取代基所取代的C_1-12烷基；

R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基、杂芳基C_1-6烷氧基、苯硫基、羟基C_1-6烷基羰基、被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R³为氢、C_1-6烷基、杂芳基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基、氨基或C_1-6烷氧基；或

R⁴及R⁵一起可任选地形成一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团；

R⁶为氢、C_1-6烷氧基羰基或C_1-6烷基；

当p为1时，则R⁷为氢、芳基C_1-6烷基、羟基或杂芳基C_1-6烷基；

Z为选自下列的基团：

其中

每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、杂芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、杂芳基羰基、C_1-6烷基羰基、芳基C_1-6烷基羰基、杂芳基C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基、C_3-7环烷基羰基、C_3-7环烷基(羟基)C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基C_2-6链烯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷基羰基氧基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CHR¹⁹)_u-NR¹³R¹⁴；其中

v为0、1、2、3、4、5或6，且当v为0时，意指直接键；

r为0或1，且当r为0时，意指直接键；

u为0、1、2、3、4、5或6，且当u为0时，意指直接键；

R¹⁹为氢或C_1-6烷基；

R¹²为氢、C_1-6烷基、C_3-7环烷基、被选自羟基、氨基、C_1-6烷氧基及芳基的取代基所取代的C_1-6烷基；或被选自羟基、氨基、芳基及C_1-6烷氧基的取代基所取代的C_3-7环烷基；

R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-12烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基磺酰基、芳基C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基、C_3-7环烷基羰基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、羟基羰基、氰基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-6烷氧基、芳基或杂芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；或被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、氨基、芳基C_1-6烷基、杂芳基或杂芳基C_{1- 6}烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；或

R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基、芳基C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基羰基、杂芳基C_1-6烷基、C_3-7环烷基及C_3-7环烷基C_1-6烷基的取代基所取代的哌嗪基；其中

k为0、1、2、3、4、5或6，且当k为0时，意指直接键；

R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基羰基、C_3-7环烷基、被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基及杂芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；及被选自羟基、C_1-6烷氧基、芳基、芳基C_1-6烷基、杂芳基及杂芳基C_1-6烷基的取代基所取代的C_3-7环烷基；或

R¹⁵及R¹⁶与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、哌嗪基或被C_{1 -6}烷氧基羰基所取代的哌嗪基；

芳基为苯基或萘基；

每个苯基或萘基可任选地被一个、两个或三个取代基所取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、C_1-6烷基、氨基、多卤C_1-6烷基及C_1-6烷氧基；及

每个苯基或萘基可任选地被一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团所取代；

杂芳基为吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、

二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氢呋喃基；

每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、

二唑基、四唑基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被一、二或三个取代基所取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、C_1-6烷基、氨基、多卤C_1-6烷基、芳基、芳基C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；及

每个吡啶基、吲哚基、喹啉基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基或四氢呋喃基可任选地被一种选自亚甲基二氧或亚乙基二氧的二价基团所取代；

条件是：

当m为1；在苯环上除R²外的取代基在间位；s为0；及t为0时，则

Z为选自(a-1)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-7)、(a-8)或(a-9)的基团。

2.根据权利要求1的化合物，其中：

R⁸为氢、-C(＝O)-NR¹⁷R¹⁸、芳基C_1-6烷氧基羰基、被羟基取代的C_1-6烷基、被羟基、羟基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_1-6烷基取代的哌嗪羰基、被羟基C_1-6烷基取代的吡咯烷基或被一个或两个选自羟基、C_1-6烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基(二羟基)C_1-6烷基或C_1-6烷氧基(羟基)C_1-6烷基的取代基所取代的哌啶基羰基；R¹⁷及R¹⁸各自独立地选自氢、C_1-6烷基、二(C_1-6烷基)氨基C_{1 -6}烷基、芳基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基或羟基C_1-6烷基；R¹为氢、杂芳基、C_1-6烷氧基羰基、C_1-23烷基或被杂芳基取代的C_1-12烷基；R²为氢、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基C_1-6烷氧基或苯硫基；R³为氢、C_1-6烷基或杂芳基；R⁴及R⁵各自独立地为氢、卤素、C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、羟基或C_1-6烷氧基；当p为1时，则R⁷为芳基C_1-6烷基或羟基；Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)、(a-4)、(a-5)、(a-6)、(a-8)、(a-9)、(a-10)及(a-11)的基团；每个R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、C_1-6烷基、硝基、多卤C_1-6烷基、氰基、氰基C_1-6烷基、四唑C_1-6烷基、芳基、杂芳基、杂芳基C_1-6烷基、芳基(羟基)C_1-6烷基、芳基羰基、C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、C_3-7环烷基(羟基)C_1-6烷基、芳基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷基羰基氧基C_{1 -6}烷基、C_1-6烷氧基羰基C_1-6烷氧基C_1-6烷基、羟基C_1-6烷氧基C_{1 -6}烷基、C_1-6烷氧基羰基C_2-6链烯基、C_1-6烷氧基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基羰基、氨基羰基、羟基C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、羟基羰基、羟基羰基C_1-6烷基及-(CH₂)_v-(C(＝O)_r)-(CHR¹⁹)_u-NR¹³R¹⁴；v为0或1；u为0或1；R¹²为氢或C_1-6烷基；R¹³及R¹⁴各自独立地选自氢、C_1-12烷基、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷基磺酰基、芳基C_1-6烷基羰基、C_3-7环烷基羰基、-(CH₂)_k-NR¹⁵R¹⁶、被选自羟基、羟基羰基、氰基、C_1-6烷氧基羰基或芳基的取代基所取代的C_1-12烷基；R¹³及R¹⁴与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基或被选自C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基的取代基所取代的哌嗪基；k为2；R¹⁵及R¹⁶各自独立地选自氢、C_1-6烷基或芳基C_1-6烷氧基羰基；R¹⁵及R¹⁶与其所连的氮一起可任选地形成吗啉基或哌嗪基或被C_1-6烷氧基羰基取代的哌嗪基；芳基为苯基或被卤素取代的苯基；杂芳基为吡啶基、吲哚基、

二唑基或四唑基；并且每个吡啶基、吲哚基、

二唑基或四唑基可任选地被一个选自C_1-6烷基、芳基或芳基C_1-6烷基的取代基所取代。

3.根据权利要求1或2的化合物，其中

m为0；n为1；p为0；s为0；t为0；X为CHR⁸；R⁸为氢；

为-CR⁹＝C＜，且虚线为一个键；每个R⁹为氢；R¹为氢；R²为氢或C_1-6烷氧基；R³为氢；R⁴及R⁵各自独立地为氢、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；R⁶为氢；Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)或(a-4)的基团；及R¹⁰或R¹¹各自独立地选自氢、羟基或羟基C_1-6烷基。

4.根据权利要求1、2或3的化合物，其中该化合物为1号化合物、21号化合物、4号化合物、5号化合物、36号化合物、69号化合物、110号化合物、111号化合物、112号化合物、229号化合物或37号化合物：

5.根据权利要求4的化合物，其中所述化合物是

6.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中m为0；n为1；p为0；s为0；t为0。

7.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中X为CHR⁸，其中R⁸为氢。

8.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中

为-CR⁹＝C＜，其中R⁹为氢。

9.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R¹为氢；R³为氢；R⁶为氢。

10.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R⁴和R⁵各自独立地为氢、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

11.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中Z为选自(a-1)、(a-2)、(a-3)或(a-4)的基团。

12.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R¹⁰和R¹¹各自独立地选自氢、羟基或羟基C_1-6烷基。

13.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R²为氢或C_1-6烷氧基。

14.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中所述化合物是

其加成盐形式。

15.根据权利要求14的化合物，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

16.根据权利要求1、2、3、4、5或15的化合物，用作药物。

17.一种药物组合物，包含药学上可接受的载体及作为活性成分的治疗有效量的权利要求1至16任一项的化合物。

18.一种制备权利要求17的药物组合物的方法，其中将药学上可接受的载体与权利要求1至16任一项的化合物紧密混合。

19.根据权利要求1至16任一项的化合物用于制备治疗由p53-MDM2相互作用所介导的病症的药物的用途。

20.一种制备权利要求1的化合物的方法，其特征在于

a)使式(II)的中间体与式(III)的中间体反应，其中W为适当的离去基团，

其中，变量为如在权利要求1中所限定的；

b)在氢化铝锂的存在下，在适当的溶剂中，将其中X为C(＝O)的式(I)化合物，即式(I-b)化合物转变为其中X为CH₂的式(I)化合物，即式(I-a)化合物，

其中，变量为如在权利要求1中所限定的；

c)在适当试剂的存在下，在适当的溶剂中，使式(IV)的适当甲醛化合物与式(V)的中间体反应，

其中，变量为如在权利要求1中所限定的；

d)使式(II)的中间体与式(VI)的适当甲醛化合物反应，形成其中t为1的式(I)化合物，即式(I-c)化合物，或

其中，变量为如在权利要求1中所限定的；

e)在适当的溶剂中，使式(VII)的中间体与氢化铝锂反应，形成其中s为1的式(I)化合物，即式(I-d)化合物

其中，变量为如在权利要求1中所限定的。

21.一种权利要求20的方法，其中W为卤素。