CN101003563A - 含色氨酸残基的肽的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种固相合成含有至少一个色氨酸残基的肽的方法，其中所述方法包含用对碱不稳定的侧链保护基团暂时性保护所述色氨酸残基的吲哚环，其中所述保护基团在所述肽从固相支持物上切割过程中被去除。
Description
本申请为国际申请PCT/IE01/00159于2003年6月20日进入中国国家阶段、申请号为01821038.4、发明名称为“含色氨酸残基的肽的合成方法”的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种用固相法来合成含色氨酸(Trp)残基的肽的方法。
背景技术
促黄体激素释放激素(LHRH)是一种由下脑丘产生的神经传递质，其功能是使垂体稳定分泌促黄体生成激素(LH)和促卵泡激素(FSH)，这些激素反过来会刺激甾类激素的合成，比如来自于性腺的睾丸激素。许多目前出售的促黄体激素释放激素肽的类似物(比如激动剂和拮抗剂)是用来治疗子宫内膜异位、前列腺癌、性早熟以及其他的激素紊乱症状。合成这种LHRH类似物的方法难度大，而且昂贵。
固相肽的合成在1963年引入，目的是克服许多与溶液相合成相关的中间体的纯化问题。Stewart等，固相肽合成(Pierce Chemical Co.，第二版)1984。在固相合成中，氨基酸组装(即偶联)在任意所需的序列肽上，其链的一端固定在一个不溶性支持物上。一旦所需的序列肽已连接在支持物上，肽就被从支持物上剥离(即切割)。
美国专利No.4,010,125(1977)描述了[D-Trp6]-LHRH的合成，其中LHRH激动剂十个残基中有四个残基的侧链被保护(例如L-甲苯磺酰基组氨酰、苄基丝氨酰、(2，6-二-氯-Bzl)酪氨酰和L-甲苯磺酰基精氨酰)。然而，Coy等，Int.J.Peptide Protein Res.14：359(1979)后来报道的合成许多其他LHRH激动剂的方法，其中最小量的侧链保护，比如只有盐保护的精氨酸(即Arg.HCl)，比相应的保护合成的产量要大。本发明涉及下述发现：在固相合成中色氨酸残基的保护的确提高了含色氨酸残基的LHRH类似物(比如[D-Trp6]-LHRH)的产量，尽管在合成LHRH类似物中本领域的趋势不是保护氨基酸的侧链。
发明内容
一方面，本发明提供了一种合成具有通式(I)的肽的方法
A1-A2-A3-Ser-A5-D-Trp-Leu-A8-Pro-A10-R1
(I)
其中
A1是焦谷氨酸(pGlu)或N-Ac-D-β-Nal；
A2是组氨酸、D-p-Cl-Phe或D-p-F-Phe；
A3是色氨酸或D-色氨酸；
A5是酪氨酸、NicLys、cPzACAla或PicLys；
A8是精氨酸、hArg(Et)2、hArg(Bu)、hArg(CH2CF3)2或Lys(iPr)；
A10是甘氨酸、D-丙氨酸或缺失的；和
R1是NH2或NHEt；
其包含以下步骤：
(a)如果A10存在，就将Boc-A10的铯盐，或者如果A10不存在，就将Boc-Pro的铯盐连接在氯甲基化的聚苯乙烯树脂上以分别产生Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂；
(b)通过使Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂与Boc去封闭的有机酸混合分别产生H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂的有机酸盐而将Boc-A10-树脂或Boc-Pro-树脂去封闭；
(c)将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂的有机酸盐与碱中和分别产生H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂；
(d)以从C端到N端的顺序，将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂与Boc-α-胺保护的氨基酸偶联，所述保护的氨基酸对应于通式(I)中所限定的氨基酸，其包括：
(i)将H2N-A10-树脂或H2N-Pro-树脂与Boc-α-胺保护的氨基酸在肽偶合剂的存在下反应产生Boc封闭的偶联产物；
(ii)通过将Boc封闭的偶联产物和Boc去封闭的有机酸混合，从Boc封闭的偶联产物中去封闭Boc基团，生成偶联产物；
(iii)将偶联产物和下一个Boc-α-胺保护的氨基酸在肽偶合剂的存在下反应产生Boc封闭的偶联产物；
(iv)通过将Boc封闭的偶联产物和Boc去封闭的有机酸混合，从Boc封闭的偶联产物中去封闭Boc基团，生成下一个偶联产物；
(v)重复步骤(d)(iii)和(d)(iv)直到通式(I)的肽的N端氨基酸偶联完毕，N端氨基酸Boc基团被去封闭产生完整保护的肽-树脂；
(e)切割及去保护被完整保护的肽树脂以生成通式(I)的肽，其包括：
(i)在乙醇/极性非质子惰性溶剂混合物中制备完整保护的肽树脂溶液；
(ii)将溶液冷却到约0℃-约10℃；
(iii)将氨气或乙胺气体缓慢通入溶液起泡，保持冷却温度直到溶液被氨气充分饱和而产生饱和溶液；
(iv)在无冷却条件下混合饱和溶液大约15-36小时，直到大于95％的游离甲酯，若用氨气，转化为相应的酰胺，或若用乙胺气体，转化为相应的乙酰胺；和
(f)从所述溶液中分离出肽。
上述方法的优选方法是A10是甘氨酸。
紧接着上述方法的优选方法是其中将以下的Boc-α-胺氨基酸从C端到N端连续偶联：N-α-Boc-L-脯氨酸、N-α-Boc-L-精氨酸·盐酸、N-α-Boc-L-亮氨酸、N-α-Boc-D-色氨酸(N’-吲哚-甲酰基)、N-α-Boc-L-酪氨酸、N-α-Boc-L-丝氨酸水合物、N-α-Boc-色氨酸(N’-吲哚-甲酰基)、N-α-Boc-L-组氨酸(甲苯磺酰基)-环己胺盐和焦谷氨酸。
紧接着上述方法的优选方法是其中通过用包含氨、伯胺或仲胺和乙醇的溶液处理去掉色氨酸侧链上甲酰基保护基。
紧接着上述方法的优选方法是其中该溶液包含氨和甲醇。
紧接着上述方法的优选方法是其中从该溶液中分离出该肽的步骤包括：
(i)过滤该溶液得到滤液；和
(ii)浓缩该滤液。
紧接着上述方法的优选方法是其中具有通式(I)的肽是
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
紧接着上述方法的优选方法是其中当偶联N-α-Boc-D-色氨酸(N’-吲哚-甲酰基)、N-α-Boc-L-酪氨酸、N-α-Boc-L-丝氨酸水合物和N-α-Boc-色氨酸(N’-吲哚-甲酰基)时也用到1-羟基苯并三唑(HOBT)。
另一方面，本发明提供了固相合成具有通式(II)的肽的方法，
A1-A2-A3-Ser-A5-A6-Leu-A8-Pro-A10-R1，
(II)
其中
A1是焦谷氨酸或N-Ac-D-β-Nal；
A2是组氨酸D-p-Cl-Phe或D-p-F-Phe；
A3是色氨酸、D-色氨酸、D-β-Nal或D-Pal；
A5是酪氨酸、NicLys、cPzACAla或PicLys；
A6是D-β-Nal、D-hArg(Et)2、D-Lys(iPr)、D-hArg(Bu)、D-hArg(CH2CF3)2、D-His(Bzl)、D-Leu、D-Pal、D-Ser(tBu)、D-Trp、D-Cit、D-Arg、D-NicLys、D-PicLys或D-Qal；
A8是精氨酸、hArg(Et)2、hArg(Bu)、hArg(CH2CF3)2或Lys(iPr)；
A10是甘氨酸、NHNHCO或D-丙氨酸或缺失的；和。
R1是NH2或NHEt。
其中A3或A6中至少一个是色氨酸或D-色氨酸，该方法包含用对碱不稳定的侧链保护基团临时性保护任何色氨酸残基，其中所述保护基团在与碱反应时从固相支持物上切割具有通式(II)的肽时被去掉。
紧接着上述方法的优选方法是其中该色氨酸(Trp)或D-色氨酸(D-Trp)侧链保护基团是酰基。
紧接着上述方法的优选方法是其中该Trp或D-Trp侧链保护基团通过用包含氨、伯胺或仲胺和乙醇的溶液处理来去掉。
紧接着上述方法的另一个优选方法是该侧链保护基团是甲酰基，以及该碱是含有氨的甲醇溶液。
紧接着上述方法的优选方法是其中A3是色氨酸。
紧接着上述方法的优选方法是其中A1是焦谷氨酸，A2是组氨酸，A5是酪氨酸，A6是D-色氨酸，A8是精氨酸，A10是甘氨酸和R1是NH2。
另一方面，本发明涉及一种固相合成具有通式pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2的肽的方法，其包含将下列被保护的氨基酸连续偶联到固相支持物上的步骤：Boc-甘氨酸、Boc-脯氨酸、Boc-精氨酸·盐酸、Boc-亮氨酸、Boc-D-色氨酸(PG-1)、Boc-酪氨酸、Boc-丝氨酸、Boc-色氨酸(PG-1)、Boc-组氨酸(PG-2)和Boc-焦谷氨酸，其中PG-1是对碱不稳定的保护基团，PG-2是组氨酸的保护基团，以及所述方法包括从所述支持物上切割该肽和用含碱的溶液从色氨酸残基上去除该PG-1。
紧接着上述方法的优选方法是其中该PG-1是酰基。
紧接着上述方法的优选方法是其中该溶液包含氨、伯胺或仲胺。
紧接着上述方法的优选方法是其中该PG-2是甲苯磺酰基(tosyl)。
紧接着上述方法的优选方法是其中该PG-1是甲酰基，及该溶液包含氨。
本发明的其他特点和优势可以从本发明的详细描述以及权利要求中一目了然。
缩写词
BOC＝叔丁氧基羰基
Cit＝瓜氨酸
CPzACAla＝顺式-3-(4-吡嗪基羰基氨基环己基)丙氨酸
hArg(Bu)＝N-胍基-(丁基)-高精氨酸
hArg(Et)2＝N，N’-胍基-(二甲基)-高精氨酸
hArg(CH2CF3)2＝N，N’-胍基-双-(2，2，2-三氟乙基)-高精氨酸
HOBT＝1-羟基苯并三唑
Lys(iPr)＝Nε-异丙基赖氨酸
β-Nal＝β-1-萘基丙氨酸或β-2-萘基丙氨酸，除非有其他说明
NicLys＝Nε-烟酰赖氨酸
Pal＝吡啶基丙氨酸
p-Cl-Phe＝3-(4-氯苯)丙氨酸
p-F-Phe＝3-(4-氟苯)丙氨酸
PicLys＝Nε-甲基吡啶酰基赖氨酸(picolinoyl lysine)
Qal＝喹啉基丙氨酸
可以肯定本领域的技术人员在本说明的基础上会最大限度地利用此专利。因此以下的具体实施方案仅仅是说明而不是为本发明限定范围。
除非另有定义，这里所用的所有技术和科学术语与本领域中一个普通技术人员通常所理解的意思相同。这里提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献在此专门引作参考。
具有通式(I)的肽的制备方法是可以在Merrifield树脂上用Boc化学固相肽合成，接着用氨、伯胺或仲胺的乙醇溶液将肽从树脂上切割。
根据本发明，该方法中的第一步是将C端氨基酸的铯盐，Boc-A10，通过酯键连接在Merrifield树脂上。在甲醇和水的混合溶液中将Boc-A10加入碳酸铯中可得到Boc-A10的铯盐。真空干燥Boc-A10的铯盐，然后在无水的极性非质子溶剂，比如二甲基甲酰胺中与聚苯乙烯上的氯甲苄基反应。该反应要进行24到48小时，优选是在45℃到60℃反应36小时，50℃为最佳。然后过滤反应树脂，用水、极性非质子溶剂比如DMF(二甲基甲酰胺)、醇比如甲醇清洗，优选在减压条件下干燥至恒重。干燥的树脂可以被测试以确定Boc-A10的含量，该含量以每克干树脂中所含A10的毫摩尔数来表示。计算值用来为随后的材料用量和理论产量确定该组装反应的规模。
合成通式(I)的肽可以在底部有烧结的玻璃圆盘过滤器的玻璃反应器中的Boc-A10-树脂上进行。反应器用机械搅拌子搅拌，其排液方法是施加惰性气压比如氮气压来强迫液体通过底部的烧结的圆盘，同时保留树脂在反应器中。首先，通过两次将A10-树脂与有机酸的混合物在氯化了的溶剂中混合约两分钟，再继续混合约25分钟使Boc-A10上的Boc基团从A10-树脂中除去(如去封闭)，溶剂优选是25％三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷(DCM)，接着用氮气压排干。A10-树脂用DCM清洗三次，用醇比如异丙醇(IPA)清洗两次，在惰性溶剂中将所得的氨基TFA盐与碱中和两次，优选是在10％三乙胺碱的DCM中，每次中和约五分钟，接着再用DCM清洗三次。在极性非质子溶剂中用肽偶合剂，优选二异丙基碳二亚胺(DIC)，将树脂与2.5摩尔当量的Boc-α-氨保护的对应于通式(I)定义的氨基酸从C端到N端偶联，优选的反应介质是DMF/DCM混合物。每次偶联之后都要用DMF和DCM清洗。对各偶联完成，树脂都可以用Kaiser Ninhydrin测试，除了精氨酸是用靛红检测未被偶联的脯氨酸残基上的仲胺以外。从每个偶联的氨基酸上去除Boc基团，按上述方法进行测试。下列对应于通式(I)的氨基酸的保护的氨基酸在本发明的合成中是最佳的：N-α-Boc-L-脯氨酸、N-α-Boc-L-精氨酸·盐酸、N-α-Boc-L-亮氨酸、N-α-Boc-D-色氨酸(N’-吲哚-甲酰基)、N-α-Boc-L-酪氨酸、N-α-Boc-L-丝氨酸水合物、N-α-Boc-L-组氨酸(甲苯磺酰基)-环己胺盐和焦谷氨酸。
当偶联D-色氨酸、酪氨酸、丝氨酸和色氨酸的被保护衍生物时可采用1-HOBT(3-5当量)。在最终的氨基酸偶联后，在DMF中用HOBT处理两次(每次一小时)可将组氨酸的甲苯磺酰基侧链保护基团去掉。Boc-D-色氨酸和Boc-L-色氨酸的侧链用位于吲哚环的氮上的甲酰基保护。在从树脂上切割肽时用碱将甲酰基去掉。
完整的肽-树脂在配衡的烧结玻璃漏斗中用惰性的氯化了的溶剂比如DCM清洗，用醇比如甲醇清洗两次，然后真空干燥。干燥的肽-树脂转移到一升的三颈圆底烧瓶中。以每克肽-树脂约15毫升的9∶1的甲醇/DMF的混合液加入圆底烧瓶中。如果肽上的C端的酰胺形式是理想的，则将溶液冷却到低于约10℃，在强冷条件下通入氨气起泡直到充分饱和(大约一小时)，其中肽从树脂上以游离甲酯中间体形式被释放。让溶液在无冷却条件下进一步混合15-36小时，此时大约大于95％的游离甲酯转化为相应的酰胺产物。反应进程可被监测，比如用高效液相色谱(HPLC)，达到理想结果时可以终止反应。产物用烧结玻璃漏斗过滤到溶液中，树脂用甲醇和DMF清洗几次。所有清洗液和过滤液均被浓缩至非常浓的油状物。加入乙酸乙酯，溶液研磨得到固化产品，倾析，继续用乙酸乙酯研磨。粗产物溶解在甲醇中，加入等体积的4N醋酸。浓缩溶液去掉所有甲醇。产物用4N醋酸稀释。
通过在前一段中的过程将氨替代为乙胺可以获得肽的C端乙酰胺形式，其中在用乙胺饱和溶液的过程中，其温度保持在约16℃以下，最佳温度是约5℃到约15℃。
粗材料可以通过反复的反相制备色谱运行来纯化，冻干得到最终产品。
对本领域的技术人员而言可以用其他的溶剂体系，包括但是并不是局限于低分子量的醇比如乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔-丁醇以及类似物，其他极性非质子溶剂及其混合物。
实施发明的方式
下面的实施例是为了说明本发明的方法，但本发明并不局限于此。
实施例
合成pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2([D-Trp6]LHRH-NH2)
通过固相肽合成法在merrifield树脂上用Boc化学制备[D-Trp6]LHRH-NH2，然后用甲醇氨从树脂上切割肽以产生标题肽。
该方法的第一步是将C端氨基酸的铯盐，Boc-甘氨酸，通过酯键连接在Merrifield树脂上。在甲醇和水的混合溶液(80ml/40ml)中将Boc-甘氨酸(40.9g)与碳酸铯反应可得到Boc-甘氨酸的铯盐。真空干燥Boc-甘氨酸的铯盐，然后在无水的二甲基甲酰胺(DMF；200ml)中与聚苯乙烯珠(Merrifield树脂；Advanced Chemtech，88.2g)上的氯甲苄基反应。该反应要在约50℃下在BuchiTMModel 110旋转蒸发仪中进行约36小时。然后过滤反应树脂，用水、DMF、甲醇清洗，在低于35℃下真空干燥至恒重。然后干燥的树脂可以被测试以确定Boc-甘氨酸的含量，该含量以每克干树脂中所含甘氨酸的毫摩尔数来表示。计算值为0.872毫摩尔/克，并用来为随后的材料用量和理论产量确定该组装反应的规模。
肽的合成可以在底部和顶端有烧结的玻璃圆盘过滤器的500ml玻璃反应器中的Boc-甘氨酸树脂(12.5克)上进行。反应器从底部装满然后倒置摇晃(在三秒内旋转180度)。首先，通过两次将树脂与175毫升25％的三氟乙酸(TFA)混合在二氯甲烷(DCM)(2分钟和25分钟)中使Boc基团从甘氨酸树脂中除去，接着在氮气压中排干。树脂用125毫升DCM清洗三次，用异丙醇(IPA)清洗两次，再用125毫升DCM清洗三次。所得的氨基TFA盐与125ml的10％三乙胺碱在DCM中中和两次，每次五分钟，然后再用DCM清洗三次。
将树脂与2.5摩尔当量的下列Boc保护的氨基酸和4.2毫升的二异丙基碳二亚酰胺(DIC)的混合物在16毫升DMF和47毫升DCM中偶联和去封闭：5.84g Boc-L-脯氨酸、8.93g Boc-L-精氨酸·盐酸、6.77gBoc-L-亮氨酸、9.0g Boc-D-色氨酸(甲酰基)、7.64g Boc-L-酪氨酸、9.0gBoc-L-色氨酸(甲酰基)、6.06g Boc-L-丝氨酸水合物、16g Boc-L-组氨酸(甲苯磺酰基)-环己胺盐和13.5g焦谷氨酸。在D-Trp、酪氨酸、丝氨酸、色氨酸偶联中也用1-HOBT。在偶联精氨酸时以75ml二甲基乙酰胺(DMA)取代DMF和DCM。树脂用DMF和DCM清洗，用KaiserNinhydrin来检测偶联完成。如上所述Boc基团从每个偶联的氨基酸中去除。组氨酸用甲苯磺酰基进行侧链保护，在最终氨基酸偶联之后以4.16克HOBT的105毫升DMF处理两次，每次1小时，来去掉甲苯磺酰基。Boc-D-色氨酸和Boc-L-色氨酸用甲酰基进行侧链保护，在从树脂上切割肽时去掉甲酰基。
完整的肽-树脂用DCM清洗到配衡的烧结玻璃漏斗中，用甲醇清洗两次，然后真空干燥。干燥的肽-树脂转移到一升的三颈圆底烧瓶中。每克肽-树脂15毫升的9∶1的甲醇/DMF(380ml对应于10.9mM)的混合液加入烧瓶中。溶液冷却到低于约10℃，在强冷条件下缓慢通入氨气起泡直到充分饱和(大约一小时)。让溶液在无冷却条件下继续混合约15-36小时，直到大于95％的游离甲酯转化为由高效液相色谱(HPLC)监测所确定的酰胺产物。产物用烧结玻璃漏斗过滤到溶液中，树脂用甲醇和DMF清洗几次。所有清洗液和过滤液均在温度低于40℃用旋转蒸发仪浓缩至非常浓的油状物。加入乙酸乙酯(0.08升)，溶液研磨得到固化的产品，倾析，继续用0.08升乙酸乙酯研磨。把又硬又粘的产品浸泡在乙酸乙酯中过夜，然后倾析。粗产物溶解在(0.07升)甲醇中，加入等体积的4N醋酸。在温度低于40℃时用旋转蒸发仪浓缩溶液去掉所有甲醇。产物用4N醋酸稀释到浓度为35克/升。
粗材料可以通过反复的反相制备色谱运行来纯化，冻干得到最终产品(8.4克，59％产率)为纯度大于99％的白色固体。
其他实施方案
从以上描述中，本领域的技术人员可以很容易地确认本发明的必要特点，在不偏离本发明范围和实质的情况下，能够作出许多的变化和调整以适应不同的用途和条件。这样，其他的实施方案也在本权利要求范围内。
Claims (11)
1.一种固相合成具有通式(II)的肽的方法，
A1-A2-A3-Ser-A5-A6-Leu-A8-Pro-A10-R1，
(II)
其中
A1是焦谷氨酸或N-Ac-D-β-Nal；
A2是组氨酸、D-p-Cl-Phe或D-p-F-Phe；
A3是色氨酸、D-色氨酸、D-β-Nal或D-Pal；
A5是酪氨酸、NicLys、cPzACAla或PicLys；
A6是D-β-Nal、D-hArg(Et)2、D-Lys(iPr)、D-hArg(Bu)、D-hArg(CH2CF3)2、D-His(Bzl)、D-Leu、D-Pal、D-Ser(tBu)、D-Trp、D-Cit、D-Arg、D-NicLys、D-PicLys或D-Qal；
A8是精氨酸、hArg(Et)2、hArg(Bu)、hArg(CH2CF3)2或Lys(iPr)；
A10是甘氨酸、NHNHCO或D-丙氨酸或缺失的；和
R1是NH2或NHEt；
其中A3或A6中至少一个是色氨酸或D-色氨酸，该方法包含用对碱不稳定的侧链保护基团临时性保护所有色氨酸残基的吲哚-NH，其中所述保护基团通过与碱反应从固相支持物上切割具有通式(II)的肽时被去掉。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述色氨酸或D-色氨酸侧链保护基团是酰基。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述色氨酸或D-色氨酸侧链保护基团用包含氨、伯胺或仲胺和醇的溶液处理来去掉。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述侧链保护基团是甲酰基，以及该碱是包含氨的甲醇溶液。
5.根据权利要求4所述的方法，其中A3是色氨酸。
6.根据权利要求1所述的方法，其中A1是焦谷氨酸，A2是组氨酸，A5是酪氨酸，A6是D-色氨酸，A8是精氨酸，A10是甘氨酸，和R1是NH2。
7.根据权利要求1所述的方法，用于固相合成下式pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2的肽，其包括将以下被保护的氨基酸连续偶联在固相支持物上的步骤：Boc-甘氨酸、Boc-脯氨酸、Boc-精氨酸·盐酸、Boc-亮氨酸、Boc-D-色氨酸(PG-1)、Boc-酪氨酸、Boc-丝氨酸、Boc-色氨酸(PG-1)、Boc-组氨酸(PG-2)和Boc-焦谷氨酸，其中PG-1是对碱不稳定的保护基团和PG-2是组氨酸的保护基团，该方法包含从所述支持物上切割该肽以及用含碱的溶液从所述色氨酸残基上去除PG-1。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述PG-1是酰基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述溶液包含氨、伯胺或仲胺。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述PG-2是甲苯磺酰基。
11.根据权利要求7所述的方法，其中所述PG-1是甲酰基，以及该溶液包含氨。
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