JPH05331188A - トリペプチド、その製造方法及びエンドセリン拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ＥＴ−１により引き起こされる血管の収縮作
用を抑制し、高血圧症、気管支喘息の治療剤として有用
である新規なトリペプチド、及びその製造方法、並びに
それを含有するエンドセリン拮抗剤を提供する。 【構成】 代表例として、ロイシル−トリプトフィル−
窒素含有アミノ酸で構成されるトリペプチドのロイシン
側にシクロアルキルカルボニル基が結合してなる、エン
ドセリン拮抗作用を有するトリペプチドを含むトリペプ
チド。ペプチド合成によるその製造方法。このトリペプ
チドを有効成分として含有するエンドセリン拮抗剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、エンドセリン受容体の
拮抗剤として有用な新規なトリペプチド、このトリペプ
チドの製造方法、及びこのトリペプチドを有効成分とし
て含有するエンドセリン拮抗剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】１９８０年の内皮依存性血管拡張反応の
発見以来、血管緊張の調節機構に於ける血管内皮の役割
が重要視されており、１９８２年頃からは種々の刺激に
対する内皮依存性収縮反応或は収縮増強も報告されてい
る。最近、ブタ大動脈内皮細胞の培養上清中に遊離され
る強力なペプチド性血管収縮因子の単離、精製並びに構
造決定がなされ、これは２１個のアミノ酸からなるペプ
チドでありエンドセリン（ＥＴ）と呼ばれている［M.Ya
nagisawa et al.,Nature,332,411-415(1988)] 。その
後、ヒトのエンドセリンも同じアミノ酸配列であること
がわかっている［Y.Itoh et al.,FEBS lett.,231,440-4
44(1988)］。

【０００３】エンドセリンとしては、ＥＴ−１、ＥＴ−
２及びＥＴ−３の三種が見出されており、その受容体も
各ＥＴに対する結合親和性の違いから、ＥＴ−１に選択
的なＥＴ_A 受容体、ＥＴ−１及びＥＴ−３に非選択的な
ＥＴ_B 受容体の二種が見出されている。血管平滑筋細胞
上に偏在するＥＴ_A 受容体にエンドセリンが作用すると
血管を強力に収縮させる。

【０００４】ＥＴ−１により引き起こされる血管の収縮
反応を抑制する物質として、幾つかの化合物が知られて
いる。例えば、本特許出願人はＮ−ペンタノイルトリプ
トファンについて特許出願しており（特開平３−２５１
５６２号公報参照）、また、New Current ３（９）１９
９２年４月１０日号４〜５頁には、（Ｒ）２−［（Ｒ）
−２−［（Ｓ）−２−［［１−（ヘキサヒドロ−１Ｈ−
アゼピニル）］カルボニル］アミノ−４−メチルペンタ
ノイル］アミノ−３−［３−（１−メチル−１Ｈ−イン
ドリル）］プロピオニル］アミノ−３−（２−ピリジ
ル）プロピオン酸がＥＴ_A 受容体の拮抗剤であることが
記載されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ＥＴ
−１により引き起こされる血管の収縮反応を抑制し、高
血圧症、気管支喘息、腎不全、くも膜下出血後の脳卒中
発作等の治療剤として有用である新規なトリペプチド、
及びその製造方法、並びにそれを含有するエンドセリン
拮抗剤を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、一般式
（Ｉ）：

【０００７】

【化７】

【０００８】［式中、Ａは５〜８員環のシクロアルキル
基を表し、Ｂは、−ＣＯ−、−ＣＳ−又は−ＳＯ₂ −で
示される基を表し、Ｄは、−ＮＲ¹ −（但し、Ｒ¹ は水
素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す）で示され
る基を表し、Ｅは−ＣＨＲ² −（但し、Ｒ² は、アリー
ル基又は芳香族複素環基で置換されていてもよい炭素数
１〜７のアルキル基、又は硫黄原子含有複素環基を表
す）で示される基を表し、Ｆは、下記式：

【０００９】

【化８】

【００１０】（式中、Ｒ³ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭
素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基
を有するフェニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁴
（式中、Ｒ⁴ は炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す）で表される基である）で示される基を表し、Ｇは、
下記式：

【００１１】

【化９】

【００１２】（式中、Ｒ⁵ は窒素原子含有芳香族複素環
基を表す）で示される基を表し、Ｑは水素原子、アルカ
リ金属原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１
〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す］で表されるトリペプチドである。

【００１３】他の本発明は、上記一般式（Ｉ）で表され
るトリペプチドを製造する方法であって、それぞれ保護
基を有していてもよいフラグメントであるＡ−Ｂ−Ｚ
（但し、Ｚはヒドロキシル基又はハロゲン原子であ
る）、Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−Ｇ
−ＯＱ（これらのフラグメントはその反応性誘導体であ
ってもよい）を、一般式（Ｉ）で表されるトリペプチド
になるように任意の順序で縮合させるか、或は上記の四
種のフラグメントの二種又は三種を任意の組み合わせで
予め縮合して得た化合物と、残りのフラグメントの二種
（予め縮合しておいてもよい）又は一種とを縮合させ、
所望により保護基を脱離させることからなる製造方法で
ある。

【００１４】更に他の本発明は、上記一般式（Ｉ）で表
されるトリペプチドを有効成分として含有することを特
徴とするエンドセリン拮抗剤である。

【００１５】本発明の好適な態様は下記の通りである。 （１）一般式（Ｉ）に於いて、Ｂが−ＣＯ−で示される
基を表し、Ｄが−ＮＨ−で示される基を表し、Ｅが−Ｃ
ＨＲ³ −（但し、Ｒ³ は、炭素数１〜５の直鎖若しくは
分岐のアルキル基を表す）で示される基を表し、Ｇが下
記式：

【００１６】

【化１０】

【００１７】（式中、Ｒ⁶ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭
素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基
を有するフェニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁸
（式中、Ｒ⁸ は炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す）で表される基であり、Ｒ⁷ は水素原子、炭素数１〜
６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有し且
つ１〜３個のフェニル基を有するアラルキル基、炭素数
２〜６のアルコキシアルキル基又は式−（ＣＨ₂ ）_q Ｏ
−Ｒ⁹ （式中、ｑは１〜３の整数であり、Ｒ⁹ は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基であ
る）で表される基であることを特徴とする、上記の一般
式（Ｉ）で表されるトリペプチド。

【００１８】本発明の前記一般式（Ｉ）で表される化合
物は、一般式（Ｉ）から明らかなようにＤ−Ｅ−ＣＯで
示されるα−アミノ酸単位、Ｆで示されるα−アミノ酸
単位及びＧで示されるα−アミノ酸単位からなるトリペ
プチドであり、一般式（Ｉ）に於けるＡ−Ｂで示される
単位の構造が、前記New Current ３（９）１９９２年４
月１０日号４〜５頁に記載されている化合物とは全く異
なるトリペプチドである。

【００１９】一般式（Ｉ）に於いて、Ａは、シクロペン
チル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチ
ルなどの基であることが好ましい。また、Ｂは−ＣＯ−
で示される基であることが好ましく、Ｄは−ＮＨ−で示
される基であることが好ましい。

【００２０】一般式（Ｉ）に於いて、Ｅは下記式

【００２１】

【化１１】

【００２２】で示される基であることが好ましく、特
に、下記式

【００２３】

【化１２】

【００２４】で示される基であることが好ましい。

【００２５】一般式（Ｉ）に於いて、Ｆで示される基の
うち、Ｒ³ が水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜４のア
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル
等）、ベンジル基等の基である前記（ｆ−１）又は（ｆ
−２）で示される基が好ましい。

【００２６】一般式（Ｉ）に於いて、Ｇが下記式：

【００２７】

【化１３】

【００２８】（式中、Ｒ⁶ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭
素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基
を有するフェニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁸
（式中、Ｒ⁸ は炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す）で表される基であり、Ｒ⁷ は水素原子、炭素数１〜
６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有し且
つ１〜３個のフェニル基を有するアラルキル基、炭素数
２〜６のアルコキシアルキル基又は式−（ＣＨ₂ ）_q Ｏ
−Ｒ⁹ （式中、ｑは１〜３の整数であり、Ｒ⁹ は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基であ
る）で表される基であることが好ましい。

【００２９】上記の（ｇ−１）で示される基のうち、Ｒ
⁶ が水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜４のアルキル基
（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、ベ
ンジル基等の基を示す基であることが好ましく、上記の
（ｇ−２）で示される基のうち、Ｒ⁷ が水素原子、ベン
ジルオキシメチル基、ベンジル基、ベンズヒドリル基、
トリチル基等の基を示す基であることが好ましい。上記
（ｇ−３）で示されるピリジル基は、２−ピリジル基で
あることが好ましい。

【００３０】本発明のトリペプチドは、一般式（Ｉ）に
於いてＤ−Ｅ−ＣＯで示されるα−アミノ酸単位がＬ型
であり、Ｆで示されるアミノ酸単位及びＧで示されるア
ミノ酸単位が共にＤ型であるトリペプチドであることが
好ましい。

【００３１】本明細書に於いて、アミノ酸、ペプチド、
保護基、溶媒等は当該技術分野で慣用されている略号、
或いは、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの命名委員会で採用された
略号を使用している。例えば下記の略号が使用される。
また、アミノ酸の表記に於いて特記しない場合アミノ酸
はＬ型を意味するものとする。

【００３２】EDTA：エチレンジアミンテトラ酢酸 EGTA：エチレングリコールビス（２−アミノエチルエー
テル）テトラ酢酸 PMSF：フェニルメチルスルホニルフルオリド Leu ：Ｌ−ロイシン Trp ：Ｌ−トリプトファン D-Trp ：Ｄ−トリプトファン His ：Ｌ−ヒスチジン D-His ：Ｄ−ヒスチジン Bzl ：ベンジル DMAP：４−ジメチルアミノピリジン WSC・HCl ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩 HOBt：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール TsOH：パラトルエンスルホン酸 Pd-C：パラジウム−炭素 THF ：テトラヒドロフラン

【００３３】本発明のトリペプチドは、他の本発明の製
造方法により製造することができる。本発明の製造方法
に於いて、原料として使用するＡ−Ｂ−Ｚ（但し、Ｚは
ヒドロキシル基又はハロゲン原子、好ましくは、塩素で
ある）、Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−
Ｇ−ＯＱの各フラグメントは、そのままでもよく、必要
に応じて反応に関与しないカルボキシル基、アミノ基等
に保護基を有するものであってもよい。この保護基とし
ては下記の基を例示することができる。

【００３４】カルボキシル基の保護基としては、例え
ば、メチル、エチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、
ｔ−ブチル、シクロヘキシル等のエステルを挙げること
ができる。

【００３５】アミノ基の保護基としては、例えば、ベン
ジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、
イソボルニルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル基等を挙げることができる。

【００３６】インドール基の保護基としては、例えば、
ホルミル基、ベンジルオキシカルボニル基、２，４−ジ
クロロベンジルオキシカルボニル基、２，２，２−トリ
クロロエトキシカルボニル基、４−メトキシ−２，３，
６−トリメチルベンゼンスルホニル基、２，４，６−ト
リメトキシベンゼンスルホニル基、メシチレン−２−ス
ルホニル基等を挙げることができる。

【００３７】イミダゾール基の保護基としては、ベンジ
ル基、２−ニトロベンジル基、フェナシル基、ベンジル
オキシメチル基、ベンズヒドリル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル
基、２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブトキシカル
ボニルアミノエチル基、２，４−ジニトロフェニル基、
２，４，６−トリニトロフェニル基、トリチル基、（４
−ピリジル）ジフェニルメチル基、ピペリジノカルボニ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカル
ボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、４−トル
エンスルホニル基、４−メトキシベンゼンスルホニル
基、９−フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔ−ブト
キシメチル基等を挙げることができる。

【００３８】本発明の製造方法に於いて、ペプチド結合
を形成するための縮合方法として、アジド法、酸クロラ
イド法、酸無水物法、混合酸無水物法、Ｎ，Ｎ′−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド法、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド−アディティブ法、活性エステル
法、カルボニルジイミダゾール法、酸化還元法、ウッド
ワード試薬Ｋを用いる方法等が挙げられる。

【００３９】また、縮合反応を行なう前に、それ自体公
知の手段により、反応に関与するカルボキシル基、アミ
ノ基等をその反応性誘導体とし活性化してもよい。

【００４０】カルボキシル基の反応性誘導体としては、
例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル［ア
ルコール（例、ペンタクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、ｐ−ニトロ
フェノール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，
３−ジカルボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール）とのエステル］等が挙げられる。アミ
ノ基の反応性誘導体としては、例えば、対応する燐酸ア
ミドが挙げられる。

【００４１】反応は、液相法によっても固相法によって
も行うことができるが、通常溶媒中で液相で行うことが
好ましく、例えば、クロロホルム、ジクロルメタン、酢
酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、ピリジン、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ン、水、メタノール等の溶媒、又は、これらの混合物中
で行なうことができる。

【００４２】反応温度は、一般に使用される約−３０℃
〜約５０℃の範囲で行なうことができる。

【００４３】本発明の製造方法に於いて保護基を脱離さ
せる場合には、使用する保護基の種類によって異なる
が、ペプチド結合に影響を与えず、保護基が除かれるよ
うにすることが必要である。

【００４４】保護基の脱離方法としては、例えば、ギ
酸、塩化水素、臭化水素、無水フッ化水素、メタンスル
ホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ
酢酸、又は、これらの混合物等による酸処理が挙げられ
るが、この他に、液体アンモニア中ナトリウム、パラジ
ウム炭素による還元等も挙げられる。上記酸処理による
脱保護基反応に於いては、アニソール、フェノール、チ
オアニソールの如きカチオン捕捉剤の添加が有効であ
る。

【００４５】このようにして製造された本発明のトリペ
プチドは、反応終了後、それ自体公知のペプチドの分離
手段、例えば、抽出、分配、再沈殿、再結晶、カラムク
ロマトグラフィー等によって収得することができる。

【００４６】また、本発明のトリペプチドは、それ自体
公知の方法により、カルボン酸エステル又は、それらの
薬理学的に許容され得る塩にすることができる。

【００４７】本発明の製造方法に於いて、原料として使
用する各フラグメントは、市販品として入手することが
できるか、又はそれ自体公知の合成方法により若しくは
公知の合成方法を参考にして当業者が容易に合成するこ
とができる。また二種又は三種のフラグメントの縮合物
も前記のようにして容易に製造することができる。

【００４８】例えば、前記のＡ−Ｂ−Ｚのフラグメント
とＨ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨのフラグメントとの縮合物の一
つである、下記式（Ｘ−１）：

【００４９】

【化１４】

【００５０】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる化合物は、反応に関与しない溶媒の存在下で、下記
式：

【００５１】

【化１５】

【００５２】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる環状カルボン酸を、反応に関与しない溶媒中で、カ
ルボキシル基を保護したロイシンとを、それ自体公知の
アミド結合を形成する方法により反応させてアミド体を
得た後、カルボキシル基の保護基を脱離させることによ
り合成することができる。また、上記の式（Ｘ−１）で
表される化合物は、上記の環状カルボン酸の酸クロライ
ドとロイシンとを用いて、公知のショッテン−バウマン
反応により合成することもできる。

【００５３】また、前記のＡ−Ｂ−Ｚのフラグメントと
Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨのフラグメントとの縮合物の一つ
である、下記式（Ｘ−２）：

【００５４】

【化１６】

【００５５】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる化合物は、反応に関与しない溶媒の存在下で、下記
式：

【００５６】

【化１７】

【００５７】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れるスルホクロリドを、カルボキシル基を保護したロイ
シンと反応させた後、カルボキシル基の保護基を脱離さ
せることにより合成することができる。

【００５８】本発明のトリペプチドは、下記の試験結果
から明らかなように、エンドセリン受容体へのエンドセ
リンの結合に対して優れた阻害作用を有しており、ま
た、エンドセリンの血管収縮反応を抑制する作用が大き
いことから、優れたエンドセリン受容体拮抗剤である。

【００５９】［エンドセリン受容体へのエンドセリン結
合阻害試験］新鮮なブタ大動脈から以下の方法により膜
画分を調製した。脂肪組織を除去し細切した血管組織
を、液体窒素中で凍結しワーリングブレンダーを用いて
粉末化した。ついで緩衝液［２５ｍＭヘペス、ｐＨ７．
４、０．２５Ｍ蔗糖、５ｍＭＥＤＴＡ・Ｎａ₂ 、１ｍＭ
ＥＧＴＡ、０．４ｍＭフェニルメチルスルホニルフル
オリド（ＰＭＳＦ）］中で、ホモジナイザー（YAMATO U
ltra-Dispercer）を用いて均一化した。ホモジネート
は、１，４７５×ｇおよび２，７００×ｇで各々１０分
間遠心分離し、その上清をさらに１０，５００×ｇで６
０分間遠心分離した。得られたペレットを緩衝液（２５
ｍＭヘペス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ・Ｎａ₂ 、０．４ｍＭ ＰＭＳＦ、５μｇ
／ｍｌアプロチニン）にて１回洗浄し、０．２５ｍｇ／
ｍｌバシトラシンを加えた同緩衝液に再懸濁して−８０
℃で保存した。

【００６０】膜標品（４０μｇ蛋白／assay ）は、［
¹²⁵Ｉ］エンドセリン（１×１０^-11Ｍ）（Amersham、比
活性７４ＴＢｑ／ミリモル）及び１×１０^-7Ｍの被験物
質と共に、最終用量２５０μｌの緩衝液（５０ｍＭヘペ
ス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ₂ 、０．５ｍｇ／ｍｌバシトラシン、１ｍｇ／ｍｌウ
シ血清アルブミン）中で２５℃で９０分間インキュベー
トした。反応後、セルハーベスタ（Brandel M-48R ）を
用いて０．３％ポリエチレンイミンで処理したWhatmann
ＧＦ／Ｂフィルターにて吸引濾過した。フィルターは
３ｍｌの洗浄用緩衝液（２５ｍＭトリス・塩酸、ｐＨ
７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂ ）で
３回洗浄し、フィルター上に捕捉した放射活性をガンマ
カウンター（アロカ ＡＲＣ−３０１Ｂ）にて測定し
た。

【００６１】被験物質の阻害率（Ａ）を次式により算出
した。 Ａ（％）＝１００−（Ｂ−Ｃ）／（Ｄ−Ｃ）×１００ 但し、Ｂ：被験物質１×１０^-7Ｍ存在下の放射活性 Ｃ：１×１０^-7Ｍのエンドセリン存在下の放射活性 Ｄ：１×１０^-11 Ｍの［ ¹²⁵Ｉ］エンドセリン単独によ
る放射活性

【００６２】被験物質として下記の実施例で得られた化
合物を使用したときの阻害率を表１に示す。

【００６３】

【表１】 表１ 阻害率 ────────────────────────────── 化合物 １×１０^-7Ｍ（％） ────────────────────────────── 実施例１ ７２ 実施例２ ７２ ──────────────────────────────

【００６４】本発明のトリペプチドは優れたエンドセリ
ン拮抗作用を有しているので、例えば、高血圧症、狭心
症、心筋症、動脈硬化、心筋梗塞、レイノー病、脳動脈
痙攣、脳虚血、くも膜下出血後の晩期脳痙攣などの脳卒
中発作、気管支収縮などの喘息、急性腎不全などの腎不
全などの治療剤として使用できる。

【００６５】本発明のトリペプチドは、公知の固体又は
液体賦形剤と混合して、非経口投与、経口投与及び外部
投与に適した医薬配合の形態で使用できる。投与形態と
しては、注射剤、吸入剤、シロップ剤、乳剤、散剤、カ
プセル剤、顆粒剤、錠剤、軟膏、坐剤などいずれの形態
であってもよい。この医薬配合には、使用形態に応じた
薬剤を調製するのに通常使用される、佐剤、安定剤、湿
潤剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、増量剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤等が含まれていてもよい。添加剤と
して、注射剤用の蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、グ
ルコース、糖シロップ、ゼラチン、植物油、カカオバタ
ー、エチレングリコール、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ラクトース、蔗糖、コーンスターチ、ステアリン酸
マグネシウム、タルク等を使用できる。

【００６６】本発明のトリペプチドのエンドセリン拮抗
剤としての投与量は、投与方法、患者の症状の程度、患
者の年令、体重等によって異なるが、通常は、本発明の
トリペプチドの大人に対し経口投与する場合の１日投与
量は約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、非経口投
与する場合の１日投与量は約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ
体重である。

【００６７】

【実施例】次に、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。

【００６８】［実施例１］ Ｎ−（Ｎ−シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−ロイシル）
−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプト
ファンの合成

【００６９】（１） Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ
−トリプトファン ベンジルエステルの合成 Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−トリプトファン３．
０４ｇ（１０．０ミリモル）を乾燥塩化メチレン４０ｍ
ｌに溶解し、これに４−ジメチルアミノピリジン（以
下、ＤＭＡＰと略記する）１２２ｍｇ（１．０ミリモ
ル）及びベンジルアルコール１．１９ｇ（１１．０ミリ
モル）を加えた。この溶液に、氷冷下、１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩（以下、ＷＳＣ・ＨＣｌと略記する）２．１０ｇ（１
１．０ミリモル）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液
を水洗後濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液
を１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食塩水の
順に洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し
た後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーで精製（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）するこ
とにより、標題化合物を白色結晶性粉末として定量的に
得た。

【００７０】（２） Ｄ−トリプトファン ベンジルエ
ステル塩酸塩の合成 上記（１）で得られたＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ
−トリプトファン ベンジルエステル（理論量:1０ミリ
モル）を９０％ギ酸６０ｍｌに溶解し、氷浴から室温に
戻しながら６時間撹拌した。ギ酸を減圧下留去し、残渣
に１Ｎ−塩酸／ジオキサン１０ｍｌを加え、室温で１５
分間撹拌した後、エーテルを加えて結晶化した。結晶を
濾取し、エーテルで洗浄し減圧乾燥することにより、標
題化合物を白色結晶性粉末として２．６８ｇ（収率：８
１．２％）得た。

【００７１】（３） Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ
ⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファ
ン ベンジルエステルの合成 上記（２）で得られたＤ−トリプトファン ベンジルエ
ステル塩酸塩１９８ｍｇ（０．６ミリモル）を乾燥塩化
メチレン５ｍｌに溶解し、これにＮ−ｔ−ブトキシカル
ボニル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトファン１９９ｍ
ｇ（０．６ミリモル）、トリエチルアミン０．０８ｍｌ
（０．６ミリモル）、および１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（以下、ＨＯＢｔと略記する）一水和物９２ｍ
ｇ（０．７ミリモル）を加え、氷浴上で撹拌した。更
に、ＷＳＣ・ＨＣｌ １２６ｍｇ（０．７ミリモル）を
加え、室温で一晩撹拌した。反応液を上記（１）の場合
と同様に処理することにより、標題化合物３６０ｍｇを
定量的に得た。

【００７２】（４） Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合成 上記（３）で得られたＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ
ⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファ
ン ベンジルエステル（理論量：０．３ミリモル）を９
０％ギ酸６ｍｌに溶解し、室温で３時間撹拌した。反応
液を減圧下濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和重
曹水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た後濃縮し、得られた残渣をそのまま次の反応に用い
た。

【００７３】（５） Ｎ−シクロヘキシルカルボニル−
Ｌ−ロイシン ベンジルエステルの合成 Ｌ−ロイシン ベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホ
ン酸５．９ｇ（１５．０ミリモル）を乾燥塩化メチレン
４０ｍｌに溶解し、氷冷撹拌下、これにトリエチルアミ
ン４．２ｍｌ（３０．０ミリモル）及びシクロヘキシル
カルボニルクロライド２．２ｇ（１５．０ミリモル）を
加え、２時間撹拌した。反応溶液を水、１規定ＨＣｌ、
水、飽和重曹水、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題
化合物を白色結晶として５．０ｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.9-1.0(6H,m), 1.2-
2.0(13H,m), 2.1-2.2(1H,m), 4.6-4.7(1H,m),5.1-5.2(2
H,m), 5.90(1H,d,J=8Hz), 7.3-7.4(5H,m)

【００７４】（６） Ｎ−シクロヘキシルカルボニル−
Ｌ−ロイシンの合成 上記（５）で得られたＮ−シクロヘキシルカルボニル−
Ｌ−ロイシン ベンジルエステル４．９ｇ（１４．８ミ
リモル）をメタノール１００ｍｌに溶解し、これに１０
％Ｐｄ−Ｃ１．４ｇを加え、水素雰囲気下、室温で一晩
撹拌した。反応液を濾過し、メタノールで洗浄した。濾
液と洗浄液を合わせて減圧濃縮し、標題化合物を白色結
晶として３．２２ｇ（収率：９０．２％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.9-1.0(6H,m), 1.2-1.
9(13H,m), 2.1-2.2(1H,m), 4.5-4.6(1H,m),6.2-6.3(1H,
m), 10.63(1H,br s)

【００７５】（７） Ｎ−（Ｎ−シクロヘキシルカルボ
ニル−Ｌ−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合成 前記の（４）で得られたＮⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル１９５
ｍｇ（０．３８ミリモル）を乾燥塩化メチレン２０ｍｌ
に溶解し、これに上記（６）で得られたＮ−シクロヘキ
シルカルボニル−Ｌ−ロイシン９２ｍｇ（０．３８ミリ
モル）、及びＨＯＢｔ一水和物２３３ｍｇ（０．４２ミ
リモル）を加え、氷浴上で１５分間撹拌した。さらに、
ＷＳＣ・ＨＣｌ３１９ｍｇ（０．４２ミリモル）を加
え、室温で一晩撹拌した。析出した白色固体を濾取し、
１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水で順次洗浄した
後、減圧下乾燥することにより、標題化合物を白色固体
として２４１ｍｇ（収率：８５．８％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.6-0.7(6H,m), 1.1-
1.6(13H,m), 2.1-2.2(1H,m), 2.8-3.3(4H,m),4.1-5.0(5
H,m), 7.0-10.8(19H,m)

【００７６】（８） Ｎ−（Ｎ−シクロヘキシルカルボ
ニル−Ｌ−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル−Ｄ−トリプトファンの合成 上記（７）で得られたＮ−（Ｎ−シクロヘキシルカルボ
ニル−Ｌ−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル５０ｍ
ｇ（０．０７ミリモル）をテトラヒドロフラン５０ｍｌ
に溶解し、これに１０％Ｐｄ−Ｃ２０ｍｇを加え、水素
雰囲気下室温で５時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液
を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（クロロホルム／メタノール／酢酸＝２００／１
０／１）で精製することにより、標題化合物を白色結晶
性粉末として１８ｍｇ（収率：４１．１％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.6-0.7(6H,m), 1.1-
1.6(13H,m), 2.0-2.1(1H,m), 2.8-3.4(4H,m),4.2-4.6(3
H,m), 6.9-10.7(16H,m), FAB MS(m/z);642(M+1)

【００７７】［実施例２］ Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−シクロヘプチルカルボニル−Ｌ−ロイ
シル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−
トリプトファンの合成

【００７８】（１） Ｎ−シクロヘプチルカルボニル−
Ｌ−ロイシン ベンジルエステルの合成 Ｌ−ロイシン ベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホ
ン酸３．９４ｇ（１０．０ミリモル）を塩化メチレン１
００ｍｌに溶解し、氷冷撹拌下、これにトリエチルアミ
ン１．３９ｍｌ、シクロヘプタンカルボン酸１．４２ｇ
（１０．０ミリモル）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ２．１１ｇ
（１１．０ミリモル）を加え、室温で４日間撹拌した。
反応溶液を水、１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、
飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウム で乾燥し
た。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（クロロホルム／メタノール＝２００／１）で
精製することにより、標題化合物を２．７５ｇ（収率：
７９．７％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.8-1.0(6H,m), 1.4-2.
0(15H,m), 2.2-2.3(1H,m), 4.6-4.8(1H,m),5.13(1H,d,J
=12Hz), 5.17(1H,d,J=12Hz), 5.73(1H,d,J=9Hz),7.3-7.
4(5H,m)

【００７９】（２） Ｎ−シクロヘプチルカルボニル−
Ｌ−ロイシンの合成 上記（１）で得られたＮ−シクロヘプチルカルボニル−
Ｌ−ロイシン ベンジルエステル２．４１ｇ（７．０ミ
リモル）をテトラヒドロフラン６０ｍｌに溶解し、これ
に１０％Ｐｄ−Ｃ２４０ｍｇを加え、水素雰囲気下室温
で一晩撹拌した。触媒を濾過し、テトラヒドロフランで
洗浄した。濾液と洗液を合わせて留去し、得られた残渣
を酢酸エチル−ヘキサンより再結晶し、標題化合物を８
４５ｍｇ（収率：４７．５％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.9-1.0(6H,m), 1.4-
2.0(15H,m), 2.2-2.3(1H,m), 4.5-4.7(1H,m),5.8-6.0(1
H,m), 7.8(1H,br s) FAB MS(m/z);256(M+1)

【００８０】（３） Ｎ−シクロヘプチルカルボニル−
Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−
Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合成 前記実施例１の（４）で得られたＮⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−
トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステ
ル１５３ｍｇ（０．３ミリモル）を乾燥塩化メチレン１
０ｍｌに溶解し、これに上記（２）で得られたＮ−シク
ロヘプチルカルボニル−Ｌ−ロイシン７７ｍｇ（０．３
ミリモル）を氷冷撹拌下加え、さらにＷＳＣ・ＨＣｌ６
３ｍｇ（０．３３ミリモル）を加え、室温で７日間撹拌
した。析出物を濾過し、水、１０％クエン酸、水、飽和
重曹水、水で順次洗浄した後、乾燥し、白色結晶を得
た。これをジメチルホルムアミド−エーテルから再結晶
し、標題化合物３７ｍｇ（収率：１６．５％）を得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.5-0.8(6H,m), 1.0-
2.4(16H,m), 2.8-3.5(4H,m), 4.0-5.1(5H,m),6.9-9.8(1
9H,m), 10.86(1H,s) FAB MS(m/z);746(M+1)

【００８１】（４） Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−シクロヘプチル
カルボニル−Ｌ−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−ト
リプトフィル］−Ｄ−トリプトファンの合成 上記（３）で得られたＮ−シクロヘプチルカルボニル−
Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−
Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル２８ｍｇ（０．
０３８ミリモル）をテトラヒドロフラン７ｍｌに溶解
し、これに１０％Ｐｄ−Ｃ５ｍｇを加え、水素雰囲気下
室温で一晩撹拌した。触媒を濾過し、テトラヒドロフラ
ンで洗浄した。濾液と洗液を合わせて溶媒を留去し、標
題化合物を白色結晶として２５ｍｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６）δ；0.5-0.8(6H,m),
1.0-2.4(16H,m), 2.8-3.5(4H,m), 4.0-4.8(3H,m),6.6-
9.7(14H,m), 10.79(1H,s), 12.5(1H,br s) FAB MS(m/z);656(M+1)

【００８２】

【発明の効果】本発明のトリペプチドは、新規なトリペ
プチドであって優れたエンドセリン拮抗作用を有する物
質である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ａは５〜８員環のシクロアルキル基を表し、Ｂ
   は、−ＣＯ−、−ＣＳ−又は−ＳＯ₂ −で示される基を
   表し、Ｄは、−ＮＲ¹ −（但し、Ｒ¹ は水素原子又は炭
   素数１〜６のアルキル基を表す）で示される基を表し、
   Ｅは−ＣＨＲ² −（但し、Ｒ² は、アリール基又は芳香
   族複素環基で置換されていてもよい炭素数１〜７のアル
   キル基、又は硫黄原子含有複素環基を表す）で示される
   基を表し、Ｆは、下記式： 【化２】 （式中、Ｒ³ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁴ （式中、Ｒ⁴ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基である）で示される基を表し、Ｇは、下記式： 【化３】 （式中、Ｒ⁵ は窒素原子含有芳香族複素環基を表す）で
   示される基を表し、Ｑは水素原子、アルカリ金属原子、
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す］で表される
   トリペプチド。
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ）： 【化４】 ［式中、Ａは５〜８員環のシクロアルキル基を表し、Ｂ
   は、−ＣＯ−、−ＣＳ−又は−ＳＯ₂ −で示される基を
   表し、Ｄは、−ＮＲ¹ −（但し、Ｒ¹ は水素原子又は炭
   素数１〜６のアルキル基を表す）で示される基を表し、
   Ｅは−ＣＨＲ² −（但し、Ｒ² は、アリール基又は芳香
   族複素環基で置換されていてもよい炭素数１〜７のアル
   キル基、又は硫黄原子含有複素環基を表す）で示される
   基を表し、Ｆは、下記式： 【化５】 （式中、Ｒ³ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁴ （式中、Ｒ⁴ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基である）で示される基を表し、Ｇは、下記式： 【化６】 （式中、Ｒ⁵ は窒素原子含有芳香族複素環基を表す）で
   示される基を表し、Ｑは水素原子、アルカリ金属原子、
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す］で表される
   トリペプチドを製造する方法であって、それぞれ保護基
   を有していてもよいフラグメントであるＡ−Ｂ−Ｚ（但
   し、Ｚはヒドロキシル基又はハロゲン原子である）、Ｈ
   −Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−Ｇ−ＯＱ
   （これらのフラグメントはその反応性誘導体であっても
   よい）を、一般式（Ｉ）で表されるトリペプチドになる
   ように任意の順序で縮合させるか、或は上記の四種のフ
   ラグメントの二種又は三種を任意の組み合わせで予め縮
   合して得た化合物と、残りのフラグメントの二種（予め
   縮合しておいてもよい）又は一種とを縮合させ、所望に
   より保護基を脱離させることからなる製造方法。
3. 【請求項３】 請求項１に記載のトリペプチドを有効成
   分として含有することを特徴とするエンドセリン拮抗
   剤。