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BR112013031819B1 - Suporte polimérico, composição farmacêutica, composto, e, uso do suporte - Google Patents

Suporte polimérico, composição farmacêutica, composto, e, uso do suporte Download PDF

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BR112013031819B1
BR112013031819B1 BR112013031819-8A BR112013031819A BR112013031819B1 BR 112013031819 B1 BR112013031819 B1 BR 112013031819B1 BR 112013031819 A BR112013031819 A BR 112013031819A BR 112013031819 B1 BR112013031819 B1 BR 112013031819B1
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BR
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phf
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BR112013031819-8A
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BR112013031819A2 (pt
Inventor
Aleksandr YURKOVETSKIY
Mao YIN
Timothy B. Lowinger
Joshua D. Thomas
Charles E. Hammond
Cheri A. Stevenson
Natalya D. Bodyak
Patrick R. Conlon
Dmitry R. Gumerov
Original Assignee
Mersana Therapeutics, Inc
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Publication date
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Abstract

SUPORTE POLIMÉRICO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, COMPOSTO, MÉTODO PARA PREPARAR O REFERIDO SUPORTE. Um conjugado de droga é aqui apresentado. O conjuga do compreende uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM) e um carreador polimérico substituído com um ou mais ?LD-D, a molécula de reconhecimento à base de proteína sendo conectada ao carreador polimérico por L P. Cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular (Menor igual) 5 kDa. LD e LP são ligantes conectando o agente terapêutico e PBRM ao carreador polimérico respectivamente. Também são descritos suportes poliméricos utilizáveis para conjugar uma PBRM para formar um conjugado polímero-droga-PBRM descrito aqui, composições compreendendo os conjugados, métodos de sua preparação, e métodos de tratar vários distúrbios com os conjugados ou suas composições.

Description

PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido incorpora como referência e reivindica o benefício de e prioridade sob 35 USC § 119(e) para o Pedido de Patente US 61/495.771, depositado em 10 de junho de 2011; 61/501.000, depositado em 24 de junho de 2011; 61/513.234, depositado em 29 de junho de 2011; 61/566.935, depositado em 5 de dezembro de 2011; 61/605.618, depositado em 1 de março de 2012; e 61/618.499, depositado em 30 de março 2012. Os conteúdos destes pedidos são incorporados aqui como referência em suas totalidades. FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] Tradicionalmente, os produtos farmacêuticos consistiam primariamente de moléculas que são dispensadas oralmente (como pílulas sólidas e líquidos) ou como injetáveis. Ao longo das últimas três décadas, formulações (isto é, composições que controlam a via e/ou a taxa de distribuição de droga e permitem a distribuição do agente terapêutico no local onde ele é necessário) se tornaram cada vez mais comuns e complexas. No entanto, muitas questões e desafios com relação ao desenvolvimento de novos tratamentos assim como os mecanismos com os quais administrar os mesmos necessitam ser alcançados. Por exemplo, muitas drogas exibem potências e efeitos terapêuticos limitados ou de outra forma reduzidos porque eles são geralmente ou submetidos à degradação parcial antes de alcançarem o alvo desejado no corpo, ou se acumularem em tecidos diferentes do alvo, ou ambos.
[003] Um objetivo no campo dos sistemas de distribuição de droga, assim, é distribuir medicações intactas para especificamente áreas marcadas no alvo do corpo através de um sistema que possa estabilizar a droga e controlar a transferência in vivo do agente terapêutico utilizando ou mecanismos psicológicos ou químicos, ou ambos.
[004] Conjugados anticorpos-drogas têm sido desenvolvidos como agentes terapêuticos específicos no alvo. Anticorpos contra vários antígenos de superfície da célula de câncer têm sido conjugados com agentes citotóxicos que inibem vários alvos celulares essenciais como micro túbulos (maitansinóides, auristatinas, taxanos: Patentes U.S. 5.208.020; 5.416.064; 6.333.410; 6.441.163; 6.340.701; 6.372.738; 6.436.931; 6.596.757; e 7.276.497); DNA (caliqueamicina, doxorubicina, análogos CC-1065; Patentes U.S. 5.475.092; 5.585.499; 5.846.545; 6.534.660; 6.756.397; e 6.630,579). Conjugados de anticorpos com algumas destas drogas citotóxicas estão sendo ativamente investigados nas clínicas para terapia de câncer (Ricart, A. D., e Tolcher, A. W., 2007, Nature Clinical Practice, 4, 245-255; Krop et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28, 2698-2704). No entanto, os conjugados anticorpos-drogas têm exibido algumas limitações. Uma limitação principal é sua incapacidade para distribuir uma concentração suficiente da droga para o sítio do alvo devido ao número limitado de antígenos alvo e a citotoxidade relativamente moderada das drogas contra câncer como metotrexato, daunorubicina, maitansinóides, taxanos, e vincristina. Uma abordagem para alcançar uma citotoxidade significante é pela ligação de um grande número de moléculas ou diretamente ou indiretamente ao anticorpo. No entanto, tais anticorpos fortemente modificados frequentemente exibem uma ligação prejudicada com o alvo e rápida depuração in vivo na corrente sanguínea. Desse modo, existe uma necessidade para melhorar a capacidade para distribuir uma concentração suficiente de uma droga para o alvo de modo que uma citotoxidade máxima para a droga seja alcançada.
SUMÁRIO DA INVEN ÇÃO
[005] A presente invenção refere-se a um conjugado proteína- polímero-droga que é biodegradável, biocompatível e exibe uma elevada carga de droga assim como forte ligação ao antígeno alvo. A presente invenção também se refere a um suporte polimérico utilizável para conjugar com uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM) de modo a obter o conjugado proteína-polímero-droga.
[006] Em um aspecto, a invenção apresenta um suporte polimérico utilizável para conjugar com a PBRM. O suporte compreende um carreador polimérico, um ou mais-LD-D conectados ao carreador polimérico, e um ou mais LP conectados ao carreador polimérico que é apropriado para conectar uma PBRM ao carreador polimérico, em que: cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; carreador polimérico é um poliacetal ou policetal, LD é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0001
com RL1 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LD1 conectado a D, e
Figure img0002
denota união direta ou indireta de D para LD1, e LD contém uma ligação biodegradável de modo que quando a ligação é rompida, D seja liberado do carreador polimérico em uma forma ativa para seu efeito terapêutico esperado; LD1 é uma porção contendo carbonila; LP é um ligante diferente de LD e tendo a estrutura:-RL2- C(=O)-LP1 com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LP1 apropriado para conexão diretamente ou indiretamente a uma PBRM ; cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, heteroalquila, cicloalquila, ou heterocicloalquila; e LP1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM. O suporte polimérico pode incluir um ou mais dos seguintes aspectos.
[007] LP é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0003
[008] em que LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM,
Figure img0004
e denota união direta ou indireta de LP2 para LD1.
[009] O grupo funcional de LP1 ou LP2 é selecionado dentre-SRp,-S- S-LG, maleimido, e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo de proteção de enxofre.
[0010] LD1 compreende-X-(CH2)v-C(=O)- com X diretamente conectado ao grupo carbonila de RL1-C(=O), em que X é CH2, O, ou NH, e v é um inteiro de 1 a 6.
[0011] LP1 ou LP2 contém uma ligação biodegradável.
[0012] Cada de RL1 e RL2 está ausente.
[0013] O carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 300 kDa.
[0014] Para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 40 kDa ou maior (por exemplo, 80 kDa ou maior), o carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (por exemplo, cerca de 6-20 kDa ou cerca de 8-15 kDa).
[0015] Para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 200 kDa ou menor (por exemplo, 80 kDa ou menor ), o carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 20 kDa a cerca de 300 kDa (por exemplo, cerca de 40-150 kDa ou cerca de 50-100 kDa).
[0016] O suporte é de Fórmula (Ia):
Figure img0005
(Ia), em que: m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m2 é um inteiro de 1 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e a soma de m, m1, m2 e m3 está na faixa de cerca de 15 a cerca de 2200 .
[0017] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 15 a cerca de 300), m2 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 18, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 140 (por exemplo, m1 sendo cerca de 1-90).
[0018] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 20, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-45).
[0019] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 15, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-30).
[0020] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de 20 kDa a 300 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200), m2 é um inteiro de 3 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660 (por exemplo, m1 sendo cerca de 10-250).
[0021] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m2 é um inteiro de 4 a cerca de 150, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 15-100).
[0022] Quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m2 é um inteiro de 5 a cerca de 100, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 15-80).
[0023] O suporte ainda compreende uma PBRM conectada ao carreador polimérico via LP.
[0024] Uma ou mais PBRMs são conectadas a um carreador polimérico carregando uma droga.
[0025] O suporte (por exemplo, um conjugado PBRM-polímero- droga) é de Fórmula (Ib):
Figure img0006
em que:
Figure img0007
entre LP2 e PBRM denota união direta ou indireta de PBRM para LP2, cada ocorrência de PBRM independentemente tem um peso molecular menor do que 200 kDa, m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m2 é um inteiro de 3 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 0 a cerca de 110, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 60; e a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200 .
[0026] Em Fórmula (Ib), m1 é um inteiro de cerca de 10 a cerca de 660 (por exemplo, cerca de 10-250).
[0027] Quando o PHF em Fórmula (Ib) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m2 é um inteiro de 4 a cerca de 150, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 30, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 10-330 ou cerca de 15-100).
[0028] Quando o PHF em Fórmula (Ib) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m2 é um inteiro de 5 a cerca de 100, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 20, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 1580).
[0029] Alternativamente ou adicionalmente, um ou mais carreadores poliméricos carregando uma droga são conectados a uma PBRM. O suporte (por exemplo, um conjugado PBRM-polímero-droga) compreende uma PBRM com um peso molecular maior do que 40 kDa e um ou mais carreadores poliméricos carregando D conectado a PBRM, em que cada um dos carreadores poliméricos carregando D independentemente é de Fórmula (Ic):
Figure img0008
(Ic), em que: terminal
Figure img0009
unido a LP2 denota união direta ou indireta de LP2 para PBRM de modo que o carreador polimérico carregando D seja conectado a PBRM, m é um inteiro de 1 a 300, m1 é um inteiro de 1 a 140, m2 é um inteiro de 1 a 40, m3 é um inteiro de 0 a 18, m4 é um inteiro de 1 a 10; e a soma de m, m1, m2, m3, e m4 está na faixa de 15 a 300; desde que o número total de LP2 unido a PBRM é 10 ou menor .
[0030] Em Fórmula (Ic), m1 é um inteiro de 1 a cerca de 120 (por exemplo, cerca de 1-90) e/ou m3 é um inteiro de 1 a cerca de 10 (por exemplo, cerca de 1-8).
[0031] Quando o PHF em Fórmula (Ic) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 20, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-45).
[0032] Quando o PHF em Fórmula (Ic) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 15, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-30).
[0033] Cada ocorrência de D independentemente é selecionada dentre alcalóides vinca, auristatinas, tubulisinas, duocarmicinas, inibidores de quinase, inibidores de MEK, inibidores de KSP, e análogos dos mesmos.
[0034] LD é -RL1-C(=O)-XD-MD1-YD-MD2-ZD-MD3-QD-MD4- com MD4 diretamente conectado a D, em que XD é -O-,-S-,-N(R1)-, ou ausente, em que R1 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila,- C(=O)R1B,-C(=O)OR1B, ou-SO2R1B, ou-N(R1)- é uma porção heterocicloalquila, em que R1B é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; cada de YD, ZD, e QD, independentemente, está ausente ou uma porção de ligante biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de -S-S-,-C(—O)O-,-C(—O)NR2-,-OC(—O)-,-NR2C(—O)-,-OC(—O)O-, 22 2 3 2 2 - OC(—O)NR -,-NR C(—O)O-,-NR C(—O)NR -,-C(OR )O-,-C(OR )S-, 2 3 2 2 2 3 23 - C(OR )NR -,-C(SR )O-,-C(SR )S-,-C(SR )NR -,-C(NR R )O-, -C(NR2R3)S-,-C(NR2R3)NR4-,-C(—O)S-,-SC(—O)-,-SC(—O)S-, -OC(—O)S-,-SC(—O)O-,-C(—S)S-,-SC(—S)-,-OC(—S)-,-C(—S)O-, -SC(—S)O-,-OC(—S)S-,-OC(—S)O-,-SC(—S)S-,-C(—NR2)O-,-C(—NR2)S-,- 23 2 2 3 2 2 C(—NR )NR -,-OC(—NR )-,-SC(—NR )-,-NR C(—NR )-,-NR SO2-, 23 23 23 23 - NR NR -,-C(—O)NR NR -,-NR NR C(—O)-,-OC(—O)NR NR -, 23 23 23 4 23 -NR NR C(—O)O-,-C(—S)NR NR -,-NR NR C(—S)-,-C(—NR )NR NR -, 23 4 3 3 2 3 -NR NR C(—NR )-,-O(N—CR )-,-(CR —N)O-,-C(—O)NR -(N—CR )-, -(CR3—N)-NR2C(—O)-,-SO3-,-NR2SO2NR3-,-SO2NR2-, e poliamida, em que cada ocorrência de R2, R3, e R4 independentemente é hidrogênio ou uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocíclica, ou cada ocorrência de-NR2- ou-NR2NR3- é uma porção heterocicloalquila ; e cada de MD1, MD2, MD3, e MD4 independentemente, está ausente ou uma porção de ligante não biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, uma porção carbocíclica, uma porção heterocíclica, e uma combinação das mesmas, e cada de MD1, MD2, e MD3 opcionalmente contém um ou mais-(C=O)- mas não contém qualquer referida porção de ligante biodegradável; desde que para cada LD1, pelo menos um de XD, YD, ZD, e QD não está ausente.
[0035] Cada
Figure img0010
[0036] quando não conectado a PBRM, independentemente compreende um grupo terminal WP, em que cada WP independentemente é: (3)
Figure img0011
Figure img0012
em que R1K é um grupo de saída (por exemplo, haleto ou RC(O)O- em que R é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila), R1A é um grupo de proteção de enxofre, e anel A é cicloalquila ou heterocicloalquila, e R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[0037] Cada R1A independentemente é
Figure img0013
em que r é 1 ou 2 e cada de Rs1, Rs2, e Rs3 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[0038] Cada
Figure img0014
[0039] quando conectado a PBRM, independentemente é - XP-MP1-YP-MP2--ZP-MP3-QP-MP4-, com XP diretamente conectado ao grupo carbonila de RL1-C(=O) e MP4 diretamente conectado a PBRM, em que XP é -O-,-S-,-N(R1)-, ou ausente, em que R1 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila,- C(=O)R1B,-C(=O)OR1B, ou-SO2R1B, ou-N(R1)- é uma porção heterocicloalquila, em que R1B é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; cada de YP, ZP, e QP, independentemente, está ausente ou uma porção de ligante biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de -S-S-,-C(—O)O-,-C(—O)NR2-, -OC(—O)-,-NR2C(—O)-,-OC(—O)O-,-OC(—O)NR2-,-NR2C(—O)O-, 2 3 2 2 23 2 - NR C(—O)NR -,-C(OR )O-,-C(OR )S-,-C(OR )NR -,-C(SR )O-, 2 2 3 23 23 23 4 - C(SR )S-,-C(SR )NR -,-C(NR R )O-,-C(NR R )S-,-C(NR R )NR -, -C(—O)S-,-SC(—O)-,-SC(—O)S-,-OC(—O)S-,-SC(—O)O-,-C(—S)S-, -SC(—S)-,-OC(—S)-,-C(—S)O-,-SC(—S)O-,-OC(—S)S-,-OC(—S)O-, -SC(—S)S-,-C(—NR2)O-,-C(—NR2)S-,-C(—NR2)NR3-,-OC(—NR2)-, 2 3 2 2 23 23 - SC(—NR )-,-NR C(—NR )-,-NR SO2-,-NR NR -,-C(—O)NR NR -, 23 23 23 23 - NR NR C(—O)-,-OC(—O)NR NR -,-NR NR C(—O)O-,-C(—S)NR NR -, 23 4 23 23 4 3 - NR NR C(—S)-,-C(—NR )NR NR -,-NR NR C(—NR )-,-O(N—CR )-, -(CR3—N)O-,-C(—O)NR2-(N—CR3)-,-(CR3—N)-NR2C(—O)-,-SO3-, -NR2SO2NR3-,-SO2NR2-, e poliamida, em que cada ocorrência de R2, R3, e R4 independentemente é hidrogênio ou uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocíclica, ou cada ocorrência de-NR2- ou-NR2NR3- é uma porção heterocicloalquila ; e cada de MP1, MP2, MP3, e MP4 independentemente, está ausente ou uma porção de ligante não biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, uma porção carbocíclica, uma porção heterocíclica, e uma combinação das mesmas, e cada de MP1, MP2, e MP3 opcionalmente contém um ou mais-(C=O)- mas não contém qualquer referida porção de ligante biodegradável; desde que para cada
Figure img0015
conectado a PBRM, pelo menos um de XP, YP, ZP, e QP não está ausente.
[040]Cada de MD1 e MP1 independentemente é C1-6 alquila ou C1-6 D2 D3 D4 P2 P3 P4
[041]Cada de M , M , M , M , M , e M , independentemente C1-6 alquila, cicloalquila, heteroalquila, heterocicloalquila, ou uma combinação das mesmas.
[0042] Em cada
Figure img0016
no máximo um de MP2 e MP3 tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0017
Figure img0018
em que q é um inteiro de 0 to12 e cada de p e t independentemente é um inteiro de 0 a 3.
[0043] Também dentro do escopo da invenção é um método de preparar um suporte descrito acima. O método compreende fornecer um carreador polimérico que é substituído com um ou mais-LD-D e um ou mais- RL1-C(=O)-LD1, e reagir o carreador polimérico com um composto contendo uma porção LP2 para produzir o suporte de acordo com a reivindicação 2 compreendendo um carreador polimérico substituído ambos com um ou mais- LD-D e com um ou mais
Figure img0019
[0044] Alternativamente, o método compreende fornecer um carreador polimérico que é substituído com um ou mais
Figure img0020
e um ou mais-RL1-C(=O)-LD1, e reagir o carreador polimérico com D contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com-RL1-C(=O)-LD1 para produzir o suporte de acordo com a reivindicação 2 compreendendo um carreador polimérico substituído ambos com um ou mais-LD-D e com um ou mais
Figure img0021
.
[0045] A invenção também apresenta um composto de Fórmula (XII) ou (XIIa):
Figure img0022
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R40 é selecionado dentre o grupo consistindo de
Figure img0023
Figure img0024
a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3. R40 pode ser
Figure img0025
Em outro aspecto, a invenção apresenta um suporte polimérico utilizável para conjugar com ambos uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM) e um agente terapêutico (D). O suporte (isto é, o que é livre de qualquer D) compreende um carreador polimérico, um ou mais LP conectados ao carreador polimérico que é apropriado para conectar uma PBRM ao carreador polimérico, e um ou mais-RL1-C(=O)-LD1 conectados ao carreador polimérico via RL1,em que: carreador polimérico é um poliacetal ou policetal, RL1 é conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico, LD1 é um ligante apropriado para conexão da molécula D ao carreador polimérico, em que cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; LP é um ligante diferente de-RL1-C(=O)-LD1, e tendo a estrutura:-RL2-C(=O)-LP1 com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LP1 apropriado para conexão a uma PBRM ; cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, heteroalquila, cicloalquila, ou heterocicloalquila; LD1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional of D, e LP1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM.
[0046] O suporte livre de D ainda utilizável para conjugar com a PBRM e a D pode ter um ou mais dos seguintes aspectos.
[0047] LP é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0026
[0048] em que LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM, e denota
Figure img0027
união direta ou indireta de LP2 para LD1.
[0049] O grupo funcional de LP1 ou LP2 é selecionado dentre-SRp,-S- S-LG, maleimido, e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo de proteção de enxofre.
[0050] LD1 compreende-X-(CH2)v-C(=O)- com X diretamente conectado ao grupo carbonila de RL1-C(=O), em que X é CH2, O, ou NH, e v é um inteiro de 1 a 6.
[0051] LP1 ou LP2 contém uma ligação biodegradável.
[0052] Cada de RL1 e RL2 está ausente.
[0053] O carreador polimérico do suporte livre de D ainda é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 300 kDa.
[0054] Para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 40 kDa ou maior (por exemplo, 80 kDa ou maior), o carreador polimérico do suporte livre de D ainda é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (por exemplo, cerca de 6-20 kDa ou cerca de 8-15 kDa).
[0055] Para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 200 kDa ou menor (por exemplo, 80 kDa ou menor ), o carreador polimérico do suporte livre de D ainda da invenção é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 20 kDa a cerca de 300 kDa (por exemplo, cerca de 40-150 kDa ou cerca de 50-100 kDa).
[0056] O suporte livre de D ainda é de Fórmula (Id):
Figure img0028
(Id), em que: m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e a soma de m, m1, e m3 está na faixa de cerca de 15 a cerca de 2200 .
[0057] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 15 a cerca de 300), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 18, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 140 (por exemplo, m1 sendo cerca de 2-120).
[0058] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 6-60).
[0059] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 6-45).
[0060] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de 20 kDa a 300 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660 (por exemplo, m1 sendo cerca de 13-550).
[0061] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-250).
[0062] Quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-180).
[0063] O suporte livre de D ainda compreende uma PBRM conectada ao carreador polimérico via LP.
[0064] Um ou mais PBRMs são conectados a um carreador polimérico livre de D.
[0065] O suporte livre de D ainda é de Fórmula (Ie):
Figure img0029
(Ie), em que:
Figure img0030
entre LP2 e PBRM denota união direta ou indireta de PBRM para LP2, PBRM tem um peso molecular menor do que 200 kDa, m é um inteiro de 1 a 2200, m1 é um inteiro de 1 a 660, m3 é um inteiro de 0 a 110, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 60; e a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200 .
[0066] Em Fórmula (Ie), m1 é um inteiro de cerca de 10 a cerca de 660 (por exemplo, cerca de 14-550).
[0067] Quando o PHF em Fórmula (Ie) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 30, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-250).
[0068] Quando o PHF em Fórmula (Ie) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 20, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-180).
[0069] Alternativamente ou adicionalmente, um ou mais carreadores poliméricos livres de D são conectados a uma PBRM. O suporte compreende uma PBRM com um peso molecular maior do que 40 kDa e um ou mais carreadores poliméricos conectado a PBRM, em que cada do carreador polimérico independentemente é de Fórmula (Ih):
Figure img0031
(Ih), em que: terminal
Figure img0032
unido a LP2 denota união direta ou indireta de LP2 para PBRM de modo que o carreador polimérico carregando D seja conectado a PBRM, m é um inteiro de 1 a 300, m1 é um inteiro de 1 a 140, m3 é um inteiro de 0 a 18, m4 é um inteiro de 1 a 10; e a soma de m, m1, m3, e m4 está na faixa de 15 a 300; desde que o número total de LP2 unido a PBRM é 10 ou menor .
[0070] Em Fórmula (Ih), m1 é um inteiro de 2 a cerca de 130 (por exemplo, cerca de 3-120) e/ou m3 é um inteiro de 1 a cerca de 10 (por exemplo, cerca de 1-8).
[0071] Quando o PHF em Fórmula (Ih) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 6 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 7-60).
[0072] Quando o PHF em Fórmula (Ih) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 6 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 7-45).
[0073] Como usado aqui, os termos “suporte polimérico” ou simplesmente “suporte” e “conjugado” são usados de modo interpermutável quando o suporte compreende um ou mais PBRM e uma ou mais moléculas D.
[0074] Em ainda outro aspecto, a invenção engloba um conjugado compreendendo um carreador polimérico, um ou mais-LD-D conectados ao carreador polimérico, e uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM) conectada ao carreador polimérico via LP, em que: cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico (por exemplo, uma droga) tendo um peso molecular < 5 kDa; carreador polimérico é um poliacetal ou policetal, LD é um ligante tendo a estrutura:-RL1-C(=O)-XD-MD1-YD- MD2-ZD-MD3-QD-MD4-, com RL1 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e MD4 conectado a D; LP é um ligante tendo a estrutura:-RL2-C(=O)-XP-MP1-YP-MP2- ZP-MP3-QP-MP4-, com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e MP4 conectado a molécula de reconhecimento à base de proteína; cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, cicloalquila, heteroalquila, ou heterocicloalquila; cada de XD e XP, independentemente é -O-,-S-,-N(R1)-, ou ausente, em que R1 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila,-C(=O)R1B, -C(=O)OR1B,-SO2R1B ou-N(R1)- é uma porção heterocicloalquila, em que R1B é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; cada de YD, YP, ZD, ZP, QD, e QP, independentemente, está ausente ou uma porção de ligante biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de -S-S-,-C(=O)O-,-C(=O)NR2-, -OC(=O)-,-NR2C(=O)-,-OC(=O)O-,-OC(=O)NR2-,-NR2C(=O)O-, 2 3 2 2 23 2 - NR C(—O)NR -,-C(OR )O-,-C(OR )S-,-C(OR )NR -,-C(SR )O-, 2 2 3 23 23 23 4 - C(SR )S-,-C(SR )NR -,-C(NR R )O-,-C(NR R )S-,-C(NR R )NR -, - C(—O)S-,-SC(—O)-,-SC(—O)S-,-OC(—O)S-,-SC(—O)O-,-C(—S)S-, - SC(—S)-,-OC(—S)-,-C(—S)O-,-SC(—S)O-,-OC(—S)S-,-OC(—S)O-, -SC(—S)S-,-C(—NR2)O-,-C(—NR2)S-,-C(—NR2)NR3-,-OC(—NR2)-, 2 3 2 2 23 23 - SC(—NR )-,-NR C(—NR )-,-NR SO2-,-NR NR -,-C(—O)NR NR -, 23 23 23 23 - NR NR C(—O)-,-OC(—O)NR NR -,-NR NR C(—O)O-,-C(—S)NR NR -, 23 4 23 23 4 3 - NR NR C(—S)-,-C(—NR )NR NR -,-NR NR C(—NR )-,-O(N—CR )-, - (CR3—N)O-,-C(—O)NR2-(N—CR3)-,-(CR3—N)-NR2C(—O)-,-SO3-, - NR2SO2NR3-,-SO2NR2-, e poliamida, em que cada ocorrência de R2, R3, e R4 independentemente é hidrogênio ou uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocíclica, ou cada ocorrência de-NR2- ou-NR2NR3- é uma porção heterocicloalquila ; e d d MD1 MD2 MD3 MD4 MP1 MP2 MP3 MP4 cada de M , M , M , M , M , M , M e M , independentemente, está ausente ou uma porção de ligante não biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de alquila, alquenila, alquinila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, uma porção carbocíclica, uma porção heterocíclica, e uma combinação das mesmas, e cada de MD1, MD2, MD3, MP1, MP2, e MP3 opcionalmente contém um ou mais-(C=O)- mas não contém qualquer referida porção de ligante biodegradável; desde que para cada LD, pelo menos um de XD, YD, ZD, e QD não está ausente, e para cada LP, pelo menos um de XP, YP, ZP, e QP não está ausente.
[0075] O conjugado pode incluir um ou mais dos seguintes aspectos.
[0076] O carreador polimérico pode ser a poliacetal, por exemplo, PHF.
[0077] Para cada LD, MD1 não está ausente quando XD está ausente.
[0078] Para cada LP, MP1 não está ausente quando XP está ausente.
[0079] O carreador polimérico pode ser ainda substituído com um ou mais-RL1-C(=O)-XD-MD1-YD-MD2-WD, em que cada WD independentemente é:
Figure img0033
Figure img0034
em que R1A é um grupo de proteção de enxofre, cada de anel A e B, independentemente, é cicloalquila ou heterocicloalquila, RW é uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica ou heterocicloalquila; anel D é heterocicloalquila; R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; e R1K é um grupo de saída (por exemplo, haleto ou RC(O)O- em que R é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila).
[0080] O carreador polimérico pode ser ainda substituído com um ou mais-RL2-C(=O)-XP-MP1-YP-MP2-WP, em que cada WP independentemente é:
Figure img0035
Figure img0036
em que R1K é um grupo de saída (por exemplo, haleto ou RC(O)O- em que R é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila), R1A é um grupo de proteção de enxofre, e anel A é cicloalquila ou heterocicloalquila, e R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila. Por exemplo, R1A é
Figure img0037
em que r é 1 ou 2 e cada de Rs1, Rs2, e Rs3 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[0081] Anel A pode ser C3-8 cicloalquila ou heterocicloalquila de 5 a 19 membros.
[0082] Anel A pode ser
Figure img0038
.
[0083] Anel B pode ser C3-8 cicloalquila ou heterocicloalquila de 3 a 12 membros.
[0084] Anel D pode ser piperazinila ou piperidinila.
[0085] Cada de Rs1, Rs2, e Rs3 pode ser hidrogênio ou C1-6 alquila.
[0086] Cada PBRM independentemente pode ser um peptídeo, um mimético de peptídeo, um anticorpo, ou um fragmento de anticorpo.
[0087] Cada de MD1 e MP1 independentemente pode ser C1-6 alquila ou C1-6 heteroalquila. D2 D3 D4 P2 P3 P4
[0088] Cada de M , M , M , M , M , e M , independentemente pode estar ausente, C1-6 alquila, cicloalquila, heteroalquila, heterocicloalquila, ou uma combinação das mesmas.
[0089] Para cada LD, no máximo dois de MD2, MD3, e MD4 podem estar ausentes.
[0090] Para cada LP, no máximo dois de MP2, MP3, e MP4 podem estar ausentes.
[0091] Para cada LD, no máximo um de MD2 e MD3 pode ter uma das seguintes estruturas:
Figure img0039
em que q é um inteiro de 0 a 12 e cada de p e t independentemente é um inteiro de 0 a 3.
[0092] Para cada LP, no máximo um de MP2 e MP3 pode ter uma das seguintes estruturas:
Figure img0040
Figure img0041
independentemente é um inteiro de 0 a 3.
[0093] Para cada LD, cada de-MD2-ZD-,-ZD-MD3-,-ZD-MD2-, e -MD3- ZD-, independentemente pode ter uma das seguintes estruturas:
Figure img0042
Figure img0043
em que anel A ou B independentemente é cicloalquila ou heterocicloalquila; RW é uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; e anel D é heterocicloalquila.
[0094] Para cada LP, cada de-MP2-ZP-,-ZP-MP3-,-ZP-MP2-, e -MP3-ZP-, independentemente, pode ter uma das seguintes estruturas:
Figure img0044
em que anel A é cicloalquila ou heterocicloalquila e R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[0095] Cada de XD e XP, independentemente pode estar ausente.
[0096] Cada de XD e XP, independentemente pode ser O ou NH.
[0097] Cada de XD e XP, independentemente pode ser
Figure img0045
[0098] Cada de YD e YP independentemente pode ser -S-S-,-OCO-,- COO-,-CONH-, ou -NHCO-.
[0099] Cada de QD e QP independentemente pode estar ausente, -S-S-,-OCO-,-COO-,-CONH-,-NHCO-,-OCONHNH- ou -NHNHCOO-.
[00100] Em particular, esta invenção apresenta um conjugado de
Figure img0046
(I), em que cada de n, n1, n2, n3, e n4, é a fração molar da unidade de polímero correspondente na faixa entre 0 e 1; n + n1 + n2 + n3 + n4 = 1; desde que nenhum de n, n2, e n4 é 0.
[00101] Em Fórmula (I) acima, a desconexão ou lacuna entre as unidades poliacetal indica que as unidades podem ser conectadas uma na outra em qualquer ordem. Em outras palavras, os grupos apensos, que contém D, PBRM, WD, e WP, podem ser aleatoriamente distribuídos ao longo da estrutura dorsal do polímero.
[00102] No conjugado proteína-polímero-droga de Fórmula (I), cada D pode ser a mesma ou diferente porção e cada PBRM pode ser a mesma ou diferente porção.
[00103] A razão entre n2 e n4 pode ser maior do que 1:1, e até a 200:1 (por exemplo, até 100:1), por exemplo, entre 2:1 e 40:1; entre 5:1 e 20:1; entre 10:1 e 50:1, entre 25:1 e 50:1, ou entre 30:1 e 50:1.
[00104] A razão entre n2 e n4 pode ser cerca de 50:1, 40:1, 25:1, 20:1, 10:1, 5:1 ou 2:1.
[00105] Em outro aspecto, a invenção provê composições compreendendo os conjugados, métodos para sua preparação, e métodos de uso das mesmas no tratamento de vários distúrbios, incluindo, mas não limitados a câncer.
[00106] A invenção também apresenta um conjugado droga-polímero (por exemplo, conjugado agente terapêutico-polímero) que é similar ao conjugado proteína-polímero-droga descrito acima exceto que conjugado droga-polímero não contém uma PBRM. Nesta forma de realização o conjugado polímero-droga pode compreender uma pluralidade de porções de droga em que cada D pode ser igual ou diferente. Nesta forma de realização, n4 é 0 no conjugado de Fórmula (I). Os métodos de produzir os conjugados droga-polímero e métodos de tratar vários distúrbios (por exemplo, câncer ) são também contemplados e descritos aqui.
[00107] A invenção também apresenta um conjugado proteína- polímero (por exemplo, conjugado PBRM-polímero) que é similar ao conjugado proteína-polímero-droga descrito acima exceto que conjugado proteína-polímero não contém uma droga. Nesta forma de realização o conjugado proteína-polímero pode compreender uma pluralidade de porções de proteína em que cada PBRM pode ser igual ou diferente. Nesta forma de realização, n2 é 0 no conjugado de Fórmula (I). Os métodos de produzir os conjugados droga-polímero ou suportes poliméricos e métodos de tratar vários distúrbios (por exemplo, câncer ) são também contemplados e descritos aqui. O câncer alvo pode ser câncer anal, astrocitoma, leucemia, linfoma, cabeça e pescoço, fígado, testicular, cervical, sarcoma, hemangioma, esofageano, olho, laringeal, boca, mesotelioma, pele, mieloma, oral, rectal, garganta, bexiga, mama, útero, ovário, próstata, pulmão, cólon, pâncreas, renal, ou gástrico.
[00108] A invenção ainda refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um suporte polimérico ou conjugado descrito aqui e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[00109] Em ainda outro aspecto, a invenção refere-se a um método de diagnóstico de um distúrbio em um indivíduo que se suspeita tenha o distúrbio O método compreende administrar uma quantidade eficaz do conjugado descrito aqui ao indivíduo que se suspeita tenha o distúrbio ou realizar um teste para detectar um antígeno alvo/receptor em uma amostra extraída do indivíduo de modo a determinar se o indivíduo expressa o antígeno alvo ou receptor.
[00110] Salvo de outra forma definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui tem o mesmo significado como comumente entendido pelo versado na técnica à qual a invenção pertence. No relatório, as formas no singular também incluem o plural, salvo se o contexto claramente indicar o contrário. Apesar de métodos e materiais similares ou equivalentes ao descritos aqui poderem ser usados na prática ou teste da presente invenção, os métodos e materiais apropriados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências aqui mencionados são incorporados por referência. As referências citadas aqui não são admitidas como sendo técnica anterior à invenção reivindicada. No caso de conflito, o presente relatório, incluindo definições, será o controle. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são ilustrativos apenas e não se destinam a ser limitativos.
[00111] Uma das vantagens da presente invenção é que os conjugados proteína-polímero-droga ou os suportes poliméricos descritos aqui melhoram muito a biodisponibilidade das drogas a serem distribuídos e/ou melhoram a biodisponibilidade da proteína unida ao carreador polimérico. Outros aspectos e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[00112] A Figura 1 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com células NCI-N87 (n=10 para cada grupo) após a administração IV do carreador, conjugado PBRM-droga- polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12), (Exemplo 8, HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15,6 mg/kg, 5,2 mg/kg, 1,6 mg/kg e 0,5 mg/kg respectivamente e conjugado droga-polímero PHF-GA- (HPV-Alanina)-SH (Exemplo 6) (dosado com uma dose Vinca que era equivalente à presente no Exemplo 8 com 15,6 mg/kg) dosado uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente.
[00113] A Figura 2 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=12 para cada grupo) após a administração IV do carreador; PBRM (trastuzumab) com 15 mg/kg; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)- (trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 7,5 mg/kg e PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Rituximab-MCC) (Exemplo 54, HPV: Rituximab cerca de 12:1 a 15:1) com 20 mg/kg; conjugado droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH (Exemplo 6) (dosado com uma dose Vinca que era equivalente aquela presente no Exemplo 7 com 15 mg/kg) em combinação com trastuzumab com 15 mg/kg dosado uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente.
[00114] A Figura 3 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=12 para cada grupo) após a administração IV do carreador; PBRM (trastuzumab) com 15 mg/kg; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(Auristatina F- hidroxipropilamida-L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 52, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 20:1 a 22:1) com 7,5 mg/kg; conjugado droga-polímero PHF-GA-SH-(Auristatina F-propilamida-L-Alanina) (Exemplo 51) (dosado com uma dose de auristatina que era equivalente aquela presente no Exemplo 52 com 15 mg/kg) em combinação com trastuzumab com 15 mg/kg dosado uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente.
[00115] A Figura 4 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após a administração IV do carreador; conjugados PBRM-droga- polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 3,5 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 10 mg/kg dosados como uma dose única no dia 1; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 10 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 17, dia 24 e dia 31 respectivamente.
[00116] A Figura 5 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após a administração IV do carreador ou 30 kDa PHF-GA-(HPV- Alanina)-(Trastuzumab-Fab) (Exemplo 60, HPV:trastuzumab-Fab cerca de 10:1 a 14:1) com 7 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente.
[00117] A Figura 6 é um gráfico mostrando o PK do plasma para o conjugado HPV e trastuzumab após a administração de bolo IV do conjugado PBRM-droga PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) como no Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15 mg/kg (com base no trastuzumab).
[00118] A Figura 7 é um gráfico mostrando a acumulação de HPV em vários órgãos dos camundongos após a administração IV do bolo do conjugado PBRM-droga PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) como no Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15 mg/kg (com base no trastuzumab).
[00119] A Figura 8 é um gráfico mostrando a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após a administração IV do carreador; conjugados PBRM-droga- polímero PHF-GA-(Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina)- (Trastuzumab-MCC) (Exemplo 52, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 24:1 a 28:1) e conjugado droga-polímero PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina)-(S-S-Trastuzumab) (Exemplo 70, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 9:1 a 13:1) com 2 mg/kg e 4 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente.
DESCRIÇÃO DETALHADA DE CERTAS FORMAS DE REALIZAÇÃO PREFERIDAS DA INVENÇÃO
[00120] A presente invenção provê novos conjugados proteína- polímero-droga, suportes poliméricos para produzir os conjugados, métodos sintéticos para produzir os conjugados ou suportes poliméricos, composições farmacêuticas contendo os mesmos e vários usos dos conjugados.
[00121] A presente invenção também provê novos conjugados polímero-droga, métodos sintéticos para produzir os conjugados, composições farmacêuticas contendo os mesmos e vários usos dos conjugados.
[00122] A presente invenção provê ainda novos derivados de drogas, métodos sintéticos para produzir os derivados, composições farmacêuticas contendo os mesmos e vários usos dos derivados de droga.
Definição/Terminologia
[00123] Certos compostos da presente invenção, e definições de grupos funcionais específicos são também descritos em maiores detalhes aqui. Para os propósitos desta invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry e Physics, 75a Ed., capa interna, e os grupos funcionais específicos são geralmente definidos como descrito ali. Adicionalmente, os princípios gerais da química orgânica, assim como porções funcionais específicas e reatividade, são descritos em “Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, os conteúdos dos quais são incorporados aqui como referência. Além disso, será apreciado pelos versados na técnica que os métodos sintéticos, como descritos aqui, utilizam uma variedade de grupos protetores.
[00124] O uso dos artigos “um”, “uma”, e “a, o” em ambas, na descrição seguinte e reivindicações deve ser interpretado para cobrir tanto o singular como o plural, salvo indicado em contrário aqui ou claramente em contrário pelo contexto. Os termos “compreendendo”, “tendo”, “incluindo”, e “contendo” devem ser interpretados como termos abrangentes (isto é, significando “incluindo, mas não limitado a”) salvo indicado em contrário. Adicionalmente quando “compreendendo” ou outro termo abrangente é usado em uma forma de realização, deve ser entendido que a mesma forma de realização pode ser mais minuciosamente reivindicada usando o termo intermediário “consistindo essencialmente de” ou o termo mais próximo “consistindo de.”
[00125] A recitação de faixas de valores é meramente planejada para servir como um método de taquigrafia para se referir individualmente a cada valor separado caindo dentro da faixa, salvo indicado em contrário aqui, e cada valor separado é incorporado dentro da especificação como se ele fosse individualmente recitado aqui. Uma faixa como usado aqui, a menos que especificado em contrário, inclui os dois limites da faixa. Por exemplo, as expressões “x sendo um número inteiro entre 1 e 6” e “x sendo um número inteiro de 1 a 6” significam ambas “x sendo 1, 2, 3, 4, 5, ou 6”.
[00126] “Grupo protetor”: como usado aqui, o termo grupo protetor significa que uma porção funcional particular, por exemplo, O, S, ou N, é temporariamente bloqueada de modo que a reação possa ser realizada seletivamente em outro sítio reativo em um composto multifuncional. Em formas de realização preferidas, um grupo protetor reage seletivamente com bom rendimento para dar um substrato protegido que é estável para as reações projetadas; o grupo protetor deve ser removido seletivamente com bom rendimento, preferivelmente pelos reagentes não tóxicos prontamente disponíveis que não atacam os outros grupos funcionais; o grupo protetor forma um derivado facilmente separável (mais preferivelmente sem a geração de novos centros estereogênicos); e o grupo protetor tem um mínimo de funcionalidade adicional para evitar outros sítios de reação. Como detalhado aqui, grupos protetores de oxigênio, enxofre, nitrogênio e carbono podem ser utilizados. Por exemplo, em certas formas de realização, determinados grupos protetores de oxigênio exemplares podem ser utilizados. Estes grupos protetores de oxigênio incluem, mas não estão limitados a metil éteres, metil éteres substituídos (por exemplo, MOM (metóxi metil éter), MTM (metiltio metil éter), BOM (benzilóxi metil éter), e PMBM (p-metóxi benzilóxi metil éter)), etil éteres substituídos, benzil éteres substituídos, silil éteres (por exemplo, TMS (trimetilsilil éter), TES (trietilsilil éter), TIPS (triisopropilsilil éter), TBDMS (t-butildimetilsilil éter), tribenzil silil éter, e TBDPS (t- butildifenil silil éter), ésteres (por exemplo, formato, acetato, benzoato (Bz), trifluoroacetato, e dicloroacetato), carbonatos, acetais e cetais cíclicos. Em outras determinadas formas de realização exemplares, grupos protetores de nitrogênio são utilizados. Grupos protetores de nitrogênio, assim como métodos de proteção e desproteção são conhecidos na técnica. Grupos protetores de nitrogênio incluem, mas não estão limitados a, carbamatos (incluindo carbamatos de metila, etila e etila substituída (por exemplo, Troc), amidas, derivados de imida cíclicos, N-Alquil e N-Aril aminas, derivados de imina, e derivados de enamina. Em ainda outras formas de realização, determinados grupos protetores de enxofre exemplares podem ser utilizados. Os grupos protetores de enxofre incluem, mas não estão limitados aqueles grupos protetores de oxigênio descritos acima assim como ácido carboxílico alifático (por exemplo, ácido acrílico), maleimida, vinil sulfonila, e opcionalmente ácido maleico substituído. Outros determinados grupos protetores exemplares são detalhados aqui, no entanto, será apreciado que a presente invenção não é planejada para ser limitada a estes grupos protetores; em vez disso, uma variedade de grupos protetores equivalentes adicionais pode ser rapidamente identificada usando o critério acima e utilizado na presente invenção. Adicionalmente, uma variedade de grupos protetores é descrita em “Protective Groups in Organic Synthesis” Terceira Edição Greene, T.W. e Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, Nova Iorque: 1999, os conteúdos totais do qual são incorporados aqui como referência.
[00127] “Grupos de saída” se refere a um fragmento molecular que se desvia com um par de elétrons na clivagem da ligação heterolítica. Os grupos de saída podem ser ânions moléculas neutras. Grupos de saída incluem, mas não estão limitados a halogenetos como Cl-, Br-, e I-, ésteres sulfonato, como para-toluenossulfonato (“tosilato”, TsO-), e RC(O)O- em que R é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocicloalquila.
[00128] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem apropriada salvo indicado em contrário aqui ou de outra forma claramente em contrário pelo contexto. O uso de qualquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, “como”) provida aqui, é planejado meramente para ilustrar melhor a invenção e não deve ser interpretado como uma limitação do escopo das reivindicações a menos que explicitamente reivindicado em contrário. Nenhuma linguagem no relatório deve ser interpretada como indicando que qualquer elemento não reivindicado é essencial para o que é reivindicado.
[00129] “Anticorpo” se refere a uma molécula de imunoglobulina da classe IgG incluindo, mas não limitado as subclasses de IgG (IgG1, 2, 3 e 4) e classe IgM que é capaz de se ligar especificamente a um epítopo específico em um antígeno. Anticorpos podem ser imunoglobulinas intactas derivadas de fontes naturais ou de fontes recombinantes e podem ser porções imunoreativas de imunoglobulinas intactas. Os anticorpos podem existir em uma variedade de formas incluindo, por exemplo, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos de domínio único camelizados, anticorpos intracelulares (“intracorpos”), anticorpos recombinantes, anticorpos idiotípicos, anticorpos do domínio, anticorpos lineares, anticorpos multiespecificos, fragmentos de anticorpos, como, Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, anticorpos de fragmento variável de cadeia única (scFv), Fc, pFc’, scFvFc, dissulfeto de Fv (dsfv), anticorpos biespecíficos (bc-scFv) como anticorpos BiTE; anticorpos de camelídeo, anticorpos re-colocados na superfície, anticorpos humanizados, anticorpos completamente humanos, anticorpos de domínio único (sdAb, também conhecidos como NANOBODY®), anticorpos quiméricos, anticorpos quiméricos compreendendo pelo menos uma região constante humana, anticorpos de dupla afinidade como, proteínas redirecionadas de dupla afinidade (DART™), fragmentos variáveis de cadeia única divalentes (ou bivalentes) (di-scFvs, bi-scFvs) incluindo, mas não limitado a minicorpos, diacorpos, triacorpos ou tricorpos, tetracorpos, e similares, e anticorpos multivalentes. “Fragmento de anticorpo” se refere à pelo menos uma porção da região variável da molécula da imunoglobulina que se liga ao seu alvo, isto é, a região de ligação de antígeno. Como usado aqui, o termo “anticorpo” se refere tanto ao anticorpo com comprimento total como fragmentos de anticorpos a menos que especificado em contrário.
[00130] “Molécula de reconhecimento com base em proteína” ou “PBRM” se refere a uma molécula que reconhece e se liga a um marcador ou receptor na superfície da célula como, uma proteína da transmembrana, proteína imobilizada na superfície, ou protoglicano. Exemplos de PBRMs incluem, mas não estão limitados a, anticorpos (por exemplo, Trastuzumab, Cetuximab, Rituximab, Bevacizumab, Epratuzumab, Veltuzumab, Labetuzumab) ou peptídeos (peptídeos marcando no alvo o receptor LHRH, peptídeo EC-1), lipocalinas, como, por exemplo, anticalinas, proteínas como, por exemplo, interferonas, linfocinas, fatores de crescimento, fatores de estimulação da colônia, e similares, peptídeos ou mímicos de peptídeo, e similares. A molécula de reconhecimento com base em proteína, além de marcar no alvo o conjugado de polímero modificado para uma célula, tecido ou local específico, pode ter também determinados efeitos terapêuticos como atividade antiproliferativa (citostática e/ou citotóxica) contra uma célula alvo ou via. A molécula de reconhecimento com base em proteína compreende ou pode ser engenheirada para compreender pelo menos um grupo quimicamente reativo como,-COOH, amina primária, amina secundária-NHR,-SH, ou uma porção de aminoácido quimicamente reativa ou cadeias laterais como, por exemplo, tirosina, histidina, cisteína, ou lisina.
[00131] “Biocompatível” como usado aqui se destina a descrever compostos que exercem efeitos destrutivos mínimos ou de resposta ao hospedeiro enquanto em contato com fluidos do corpo ou células ou tecidos vivos. Assim, um grupo biocompatível, como usado aqui, se refere a uma porção alifática, cicloalquila, heteroalifática, heterocicloalquila, arila, ou heteroarila, que cai dentro da definição do termo biocompatível, como definido acima e aqui. O termo “Biocompatibilidade” como usado aqui, é usado também para significar que os compostos exibem interações mínimas com proteínas de reconhecimento, por exemplo, anticorpos ocorrendo naturalmente, proteínas de células, células e outros componentes dos sistemas biológicos, a menos que tais interações sejam especificamente desejadas. Assim, substâncias e grupos funcionais planejados especificamente para causar as interações mínimas acima, por exemplo, drogas e pró-drogas, são considerados como sendo biocompatíveis. Preferivelmente (com exceção dos compostos planejados para serem citotóxicos, como, por exemplo, agentes antineoplásticos), os compostos são “biocompatíveis” se a sua adição a células normais in vitro, em concentrações similares as concentrações in vivo sistêmicas planejadas, resulta em menos do que ou igual a 1% de morte da célula durante o tempo equivalente ao da meia vida do composto in vivo (por exemplo, o período de tempo exigido para 50% do composto administrado in vivo ser eliminado/depurado), e sua administração in vivo induz inflamação mínima e medicamente aceitável, reação de corpo estranho, imunotoxidade, toxidade química e/ou outros tais efeitos adversos. Na sentença acima, o termo “células normais” se refere a células que não são planejadas para serem destruídas ou de outra forma significantemente afetadas pelo composto sendo testado.
[00132] “Biodegradável”: Como usado aqui, polímeros “biodegradáveis” são polímeros que são suscetíveis ao processamento biológico in vivo. Como usado aqui, compostos ou porções “biodegradáveis” são aquelas que, quando capturadas pelas células, podem ser rompidas pelo lisossoma ou outro maquinário químico ou por hidrólise em componentes que as células podem ou reusar ou dispor de sem efeito tóxico significante nas células. O termo “bioclivável” como usado aqui tem o mesmo significado de “biodegradável”. Os fragmentos da degradação preferivelmente induzem pouca ou nenhuma sobrecarga no órgão ou célula ou processos patológicos causados por tal sobrecarga ou outros efeitos adversos in vivo. Exemplos de processos de biodegradação incluem hidrólise enzimática e não enzimática, oxidação e redução. Condições apropriadas para hidrólise não enzimática dos conjugados proteína-polímero-droga biodegradáveis (ou seus componentes, por exemplo, o carreador polimérico biodegradável e os ligantes entre o carreador e o anticorpo ou a molécula da droga) descritas aqui, por exemplo, incluem exposição dos conjugados biodegradáveis a água a uma temperatura e um pH do compartimento intracelular do lisossoma. A biodegradação de alguns conjugados proteína-polímero-droga biodegradáveis (ou seus componentes, por exemplo, o carreador polimérico biodegradável e os ligantes entre o carreador e o anticorpo ou a molécula da droga), pode ser também melhorada extracelularmente, por exemplo, em regiões de baixo pH do corpo do animal, por exemplo, uma área inflamada, na cercania próxima dos macrófagos ativados ou outras células liberando fatores que facilitam a degradação. Em certas formas de realização preferidas, o tamanho efetivo do carreador de polímero a um pH~7,5 não muda de modo detectável ao longo de 1 a 7 dias, e permanece nos 50% do tamanho original do polímero durante pelo menos várias semanas. A um pH~5, por outro lado, o carreador de polímero preferivelmente se degrada de modo detectável ao longo de 1 a 5 dias, e está completamente transformado em fragmentos de baixo peso molecular dentro de uma estrutura de tempo de duas semanas a vários meses. A integridade do polímero em tais testes pode ser medida, por exemplo, por HPLC de exclusão de tamanho. Embora a degradação mais rápida possa ser em alguns casos preferível, em geral pode ser mais desejável que o polímero se degrade nas células com a taxa que não excede a taxa da metabolização ou excreção dos fragmentos de polímero pelas células. Em formas de realização preferidas, os polímeros e subprodutos da biodegradação dos polímeros são biocompatíveis.
[00133] “Biodisponibilidade”: O termo “biodisponibilidade” se refere à disponibilidade sistêmica (isto é, níveis de sangue/plasma) de uma dada quantidade de droga ou composto administrada a um indivíduo. Biodisponibilidade é um termo absoluto que indica medição tanto do tempo (taxa) como quantidade total (extensão) da droga ou composto que alcança a circulação geral a partir de uma forma de dosagem administrada.
[00134] “Hidrofílico”: O termo “hidrofílico” à medida que ele se refere aos substituintes nas unidades monoméricas do polímero não difere essencialmente do significado comum deste termo na técnica, e denota porções químicas que contém átomos ionizáveis, polares, ou polarizáveis, ou que diferentemente podem ser solvatados pelas moléculas de água. Assim um grupo hidrofílico, como usado aqui, se refere a uma porção alifática, cicloalquila, heteroalifática, heterocicloalquila, arila ou heteroarila, que cai dentro da definição do termo hidrofílico, como definido acima. Exemplos de porções orgânicas hidrofílicas particulares que são apropriadas incluem, sem limitação, grupos alifáticos ou heteroalifáticos compreendendo uma cadeia de átomos em uma faixa de entre cerca de um a doze átomos de carbono, hidroxila, hidróxialquila, amina, carboxila, amida, éster carboxílico, tioéster, aldeído, nitrila, isonitrila, nitroso, hidroxilamina, mercaptoalquila, heterociclo, carbamatos, ácidos carboxílicos e seus sais, ácidos sulfônicos e seus sais, ésteres de ácido sulfônico, ácidos fosfóricos e seus sais, ésteres de fosfato, éteres de poliglicol, poliaminas, policarboxilatos, poliésteres e politioésteres. Em formas de realização preferidas da presente invenção, pelo menos uma das unidades monoméricas do polímero inclui um grupo carboxila (COOH), um grupo aldeído (CHO), um metilol (CH2OH) ou um glicol (por exemplo, CHOH-CH2OH o CH-(CH2OH)2).
[00135] O termo “hidrofílico” à medida que ele se refere aos polímeros da invenção geralmente não difere do uso deste termo na técnica, e denota polímeros compreendendo grupos funcionais hidrofílicos como definidos acima. Em uma forma de realização preferida, o polímero hidrofílico é um polímero solúvel em água. A hidrofilicidade do polímero pode ser medida diretamente através da determinação da energia de hidratação, ou determinada através da investigação entre duas fases líquidas, ou por cromatografia das fases sólidas com hidrofobicidade conhecida, como, por exemplo, C4 ou C18.
[00136] “Carreador Polimérico”: O termo carreador polimérico, como usado aqui, se refere a um polímero ou polímero modificado, que é apropriado para se unir covalentemente a ou pode ser unido covalentemente a uma ou mais moléculas da droga com um ligante designado e/ou uma ou mais PBRMs com um ligante designado.
[00137] “Condições fisiológicas”: A expressão “condições fisiológicas”, como usada aqui, se refere à faixa de condições químicas (por exemplo, pH, resistência iônica) e bioquímicas (por exemplo, concentrações de enzima) provavelmente encontradas nos fluidos extracelulares dos tecidos vivos. Para os tecidos mais normais, as faixas de pH fisiológico de cerca de 7,0 a 7,4. Plasma do sangue circulante e líquido intersticial normal representam exemplos típicos de condições fisiológicas normais.
[00138] “Polissacarídeo”, “carboidrato” ou “oligossacarídeo”: Os termos “polissacarídeo”, “carboidrato”, ou “oligossacarídeo” são conhecidos na técnica e referem-se, geralmente, às substâncias tendo a fórmula química (CH2O)n, onde geralmente n>2, e seus derivados. Carboidratos são poli- hidroxialdeídos ou poli-hidroxicetonas, ou mudam para tais substâncias em transformações químicas simples, como hidrólise, oxidação ou redução. Tipicamente, carboidratos estão presentes na forma de acetais cíclicos ou cetais (como, glicose ou frutose). As unidades cíclicas (monossacarídeos) podem ser conectadas a cada outra para formar moléculas com poucas unidades (oligossacarídeos) ou várias unidades de monossacarídeos (polissacarídeos). Frequentemente, carboidratos com números, tipos e posicionamento bem definidos de unidades de monossacarídeos são chamados oligossacarídeos, enquanto carboidratos consistindo de misturas de moléculas de números variáveis e/ou posicionamento de unidades de monossacarídeos são chamados polissacarídeos. Os termos “polissacarídeo”, “carboidrato”, e “oligossacarídeo”, são usados aqui de modo interpermutável. Um polissacarídeo pode incluir açúcares naturais (por exemplo, glicose, frutose, galactose, manose, arabinose, ribose, e xilose) e/ou derivados de açúcares de ocorrência natural (por exemplo, 2'-fluororibosc, 2'-deoxiribose, e hexose).
[00139] “Molécula pequena”: Como usado aqui, o termo “molécula pequena” refere-se às moléculas, seja de ocorrência natural ou criadas artificialmente (por exemplo, via síntese química) que tem um peso molecular relativamente baixo. As moléculas pequenas preferidas são biologicamente ativas em que elas produzem um local ou efeito sistêmico em animais, preferivelmente mamíferos, mais preferivelmente humanos. Em determinadas formas de realização preferidas, a molécula pequena é uma droga e a molécula pequena é referida como “molécula de droga” ou “droga” ou “agente terapêutico”. Em determinadas formas de realização, uma molécula de droga tem MW menos do que ou igual a cerca de 5 kDa. Em outras formas de realização, uma molécula de droga tem MW menor do que ou igual a cerca de 1,5 kDa. Em formas de realização, uma molécula de droga é selecionada dentre alcalóides vinca, auristatinas, tubulisinas, duocarmicinas, inibidores de quinase, inibidores de MEK, inibidores de KSP, e análogos dos mesmos. Preferivelmente, apesar de não necessariamente, a droga é uma que já foi considerada segura e eficaz para usar por uma agência governamental apropriada ou corpo, por exemplo, o FDA. Por exemplo, drogas para uso humano listados pela FDA sob 21 C.F.R. §§ 330,5, 331 através de até 361, e 440 através de até 460; drogas para uso veterinário listados pela FDA sob 21 C.F.R. §§ 500 através de até 589, incorporados aqui por referência, são todos considerados apropriados para uso com os polímeros hidrofílicos presentes.
[00140] Classes de moléculas de droga que podem ser usadas na prática da presente invenção incluem, mas não são limitadas para, substâncias anti-câncer, radionuclídeos, vitaminas, substâncias anti-AIDS, antibióticos, imunossupressores, substâncias antivirais, inibidores da enzima, neurotoxinas, opióides, hipnóticos, anti-histaminas, lubrificantes, tranquilizantes, anti- convulsivos, relaxantes musculares e substâncias anti-Parkinson, anti- espasmódicos e agentes de contração muscular incluindo bloqueadores do canal, mióticos e anti-colinérgicos, compostos anti-glaucoma, compostos anti- parasitas e/ou anti-protozoários, moduladores de interações célula- matriz extracelular incluindo inibidores do crescimento de células e moléculas anti- adesão, agentes vasodilatadores, inibidores de DNA, RNA ou síntese de proteína, anti-hipertensivos, analgésico, anti-piréticos, agentes anti- inflamatórios esteroidal e não esteroidal, fatores anti-angiogênicos, fatores anti-secretor, anticoagulantes e/ou agentes antitrombóticos, anestésicos locais, oftálmicos, prostaglandinas, anti-depressivos, substâncias anti-psicóticas, anti-eméticos, agentes de imagem. Muitas moléculas grandes também são drogas.
[00141] Uma listagem mais completa, apesar de não exaustiva, de classes e drogas específicos apropriados para uso na presente invenção pode ser encontrada em “Pharmaceutical Substances: Syntheses, Patents, Applications” por Axel Kleemann e Jurgen Engel, Thieme Medical Publishing, 1999 e “Merck Index: An Enciclopedia of Chemicals, Drugs, e Biologicals”, editado por Susan Budavari et al., CRC Press, 1996, ambos sendo incorporados aqui por referência. Nas formas de realização preferidas, a droga usada nesta invenção é um agente terapêutico que tem atividade antiproliferativa (citostática e/ou citotóxica) contra uma célula alvo ou via. A droga pode ter um grupo quimicamente reativo como, por exemplo,-COOH, amina primária, amina secundária-NHR,-OH,-SH,-C(O)H,-C(O)R,- C(O)NHR2b, C(S)OH,-S(O)2OR2b,-P(O)2OR2b,-CN,-NC ou-ONO, em que R é uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica ou heterocicloalquila e R2b é um hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocíclica.
[00142] “Derivado de droga” ou “droga modificada” ou similares, como usado aqui, refere-se a um composto que compreende a molécula de droga destinada a ser distribuída pelo conjugado da invenção e um grupo funcional capaz de unir a molécula de droga ao carreador polimérico.
[00143] “Forma ativa” como usada aqui se refere à forma de um composto que exibe eficácia farmacêutica destinada in vivo ou in vitro. Em particular, quando uma molécula de droga destinada a ser distribuída pelo conjugado da invenção é liberada do conjugado, a forma ativa pode ser a própria droga ou seus derivados, que exibem as propriedades terapêuticas destinadas. A liberação da droga a partir do conjugado pode ser obtida por clivagem de uma ligação biodegradável do ligante que une a droga ao carreador polimérico. Os derivados de drogas ativas consequentemente podem compreender uma porção do ligante.
[00144] “Rótulo de diagnóstico”: Como usado aqui, o termo rótulo de diagnóstico refere-se a um átomo, grupo de átomos, porção ou grupo funcional, um nanocristal, ou outro elemento discreto de uma composição de matéria, que podem ser detectados in vivo ou ex vivo usando métodos analíticos conhecidos na técnica. Quando associado com um conjugado da presente invenção, tal rótulo de diagnóstico permite o monitoramento do conjugado in vivo. Alternativamente ou adicionalmente, construtos e composições que incluem rótulos de diagnósticos podem ser usados para monitorar funções biológicas ou estruturas. Exemplos de rótulos de diagnósticos incluem, sem limitação, rótulos que podem ser usados em procedimentos de diagnóstico médico, como, isótopos radioativos (radionuclídeos) para gama cintilografia e tomografia por emissão de pósitrons (PET), agentes de contraste para imagem por ressonância magnética (MRI) (por exemplo, átomos paramagnéticos e nanocristais superparamagnéticos), agentes de contraste para tomografia computadorizada e outros métodos de imagem de raios-X, agentes para métodos de diagnóstico com base em ultrassom (sonografia), agentes para ativação com nêutrons (por exemplo, boro, gadolínio), fluoróforos para vários procedimentos ópticos, e, em geral porções que podem emitir, refletir, absorver, dispersar ou de outra forma afetar campos eletromagnéticos ou ondas (por exemplo, raios gama, raios X, ondas de rádio, micro-ondas, luz), partículas (por exemplo, partículas alfa, elétrons, pósitrons, nêutrons, prótons) ou outras formas de radiação, por exemplo, ultrassom.
[00145] “Alifático”: Em geral, o termo alifático, como usado aqui, inclui ambos cadeia reta saturada e insaturada (isto é, não ramificada) ou hidrocarbonetos alifáticos ramificados, que são opcionalmente substituídos com um ou mais grupos funcionais. Como será apreciado por um versado na técnica, “alifático” é destinado aqui para incluir, mas não é limitado para, porções alquila, alquenila, alquinila. Assim, como usado aqui, o termo “alquila” inclui grupos alquila de cadeira reta e ramificada. Uma convenção análoga aplica-se aos outros termos genéricos como “alquenila”, “alquinila” e outros. Além disso, como usado aqui, os termos “alquila”, “alquenila”, “alquinila” e outros engloba amos grupos substituídos e não substituídos. Em determinadas formas de realização, como usado aqui, “alquila inferior” é usada para indicar os grupos alquila (substituídos, não substituídos, ramificados ou não ramificados) tendo cerca de 1-6 átomos de carbono.
[00146] “Alquenila”: o termo alquenila denota um grupo monovalente derivado de uma porção hidrocarboneto tendo pelo menos uma ligação carbono-carbono duplo pela remoção de um átomo de hidrogênio único. Os grupos “alquenila substituídos” são substituídos com um ou mais grupos funcionais. Os substituintes incluem, mas não são limitadas para, qualquer um dos substituintes mencionados abaixo, isto é, os substituintes recitados abaixo resultando na formação de um composto estável. Grupos alquenila incluem, por exemplo, etenila, propenila, butenila, 1-metil-2-buten-1-ila, e outros.
[00147] “Alquinila”: o termo alquinila como usado aqui se refere a um grupo monovalente derivado de um hidrocarboneto tendo pelo menos uma ligação carbono-carbono tripla pela remoção de um átomo de hidrogênio único. Grupos “alquenila substituídos” são substituídos com um ou mais grupos funcionais. Os substituintes incluem, mas não são limitadas para, qualquer um dos substituintes mencionados abaixo, isto é, os substituintes recitados abaixo resultando na formação de um composto estável. Grupos alquinila representativos incluem etinila, 2-propinila (propargil), 1-propinila, e outros.
[00148] Em determinadas formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-20 átomos de carbono alifáticos. Em outras determinadas formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-10 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-8 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-6 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-4 átomos de carbono. Os grupos alifáticos ilustrativos assim incluem, mas não são limitadas para, por exemplo, porções metila, etila, n-propila, isopropila, alila, n-butila, sec-butila, isobutila, terc-butila, n-pentila, sec-pentila, isopentila, terc-pentila, n-hexila, sec-hexila e outros, que novamente, podem conter um ou mais substituintes. Grupos alquenila incluem, mas não são limitados para, por exemplo, etenila, propenila, butenila, 1-metil-2-buten-1- ila, e outros. Grupos alquinila representativos incluem, mas não são limitadas para, etinila, 2-propinila (propargil), 1-propinila e outros.
[00149] “Alquileno” como usado aqui, o termo alquileno sozinho ou como parte de outro termo refere-se à cadeia reta ou ramificada, saturada tendo dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogênio a partir do mesmo ou de dois diferentes átomos de carbono de um alcano parental. Os radicais alquileno incluem, mas não são limitados para, metileno, 1,2, etileno, 1,3-propila, e outros. Os alquilenos apropriados incluem, mas não são limitados para, metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno, hexileno, heptileno, ocitileno, nonileno, decaleno, e outros. O termo “cicloalquileno” similarmente refere-se a cicloalquila bivalente. Os radicais cicloalquileno incluem, mas não são limitadas para, 1,1- ciclopentileno, 1,2-ciclopentileno, 1,1-ciclobutileno, 1,3-ciclobutileno, etc.
[00150] “Heteroalifático”: como usado aqui, o termo heteroalifático refere-se às porções alifáticas em que um ou mais átomos de carbono na cadeia principal foram substituídos com um heteroátomo. Assim, um grupo heteroalifático refere-se a uma cadeia alifática que contém um ou mais átomos de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo ou silício, por exemplo, no lugar de átomos de carbono. As porções heteroalifáticas podem ser ramificadas ou não ramificadas lineares. Em determinadas formas de realização, porções heteroalifáticas são substituídas (“heteroalifático substituído”) por substituição independente de um ou mais dos átomos de hidrogênio no mesmo com uma ou mais porções incluindo, mas não limitadas a alifático; heteroalifático; cicloalquila; heterocicloalquila; arila; heteroarila; alquilarila; alquilheteroarila; alcóxi; arilóxi; heteroalcóxi; heteroarilóxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; C1; Br; I;-NO2;-CN;-CF3;- CH2CF3;-CHC12;-CH2OH;-CH2CH2OH;-CH2NH2;-CH2SO2CH3;- ou-GRG1 em que G é -O-,-S-,-NRG2-,-C(=O)-,-S(=O)-,-SO2-,-C(=O)O-,-C(=O)NRG2-,- OC(=O)-,-NRG2C(=O)-,-OC(=O)O-,-OC(=O)NRG2-,-NRG2C(=O)O-,- NRG2C(=O)NRG2-,-C(=S)-,-C(=S)S-,-SC(=S)-,-SC(=S)S-,-C(=NRG2)-,- C(=NRG2)O-,-C(=NRG2)NRG3-,-OC(=NRG2)-,-NRG2C(=NRG3)-,- NRG2SO2-,-NRG2SO2NRG3-, ou-SO2NRG2-, em que cada ocorrência de RG1, RG2 e RG3 independentemente incluem, mas não é limitado para, hidrogênio, halogênio, ou uma porção alifática, heteroalifática, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, alquilarila, ou alquilheteroarila opcionalmente substituída. Exemplos adicionais de substituintes geralmente aplicáveis são ilustrados pelas formas de realização específicas mostrado nos exemplos que são descritos aqui.
[00151] “Cicloalquila”: como usado aqui, o termo cicloalquila refere- se a um sistema de mono- ou múltiplos anéis de hidrocarboneto saturado ou insaturado não aromático tendo de 3 a 30 átomos de carbono (por exemplo, C3-C10). Cicloalquilas apropriadas incluem, mas não são limitadas a ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, ciclooctila, ciclopentenila, ciclohexenila, cicloheptenila, cicloheptinila, adamantila, e outros.
[00152] “Heterocicloalquila” como usado aqui se refere a um sistema de anel monocíclico de 3-8 membros, bicíclico de 8-12 membros, ou tricíclico de 11-19 membros, saturados ou insaturados não aromáticos tendo um ou mais heteroátomos (como O, N, S, ou Se), salvo indicado em contrário. Em determinadas formas de realização, o termo “heterocicloalquila” refere-se a um anel de 5, 6, 7 ou 8 membros não aromático ou um grupo policíclico, incluindo, mas não limitado a um grupo bi- ou tri-cíclico compreendendo anéis de seis membros fundido tendo entre um e três heteroátomos independentemente selecionados dentre oxigênio, enxofre e nitrogênio, em que (i) cada anel de 5 membros tem de 0 a 2 ligações duplas e cada anel de 6 membros tem de 0 a 2 ligações duplas, (ii) os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados, (iii) o heteroátomo de nitrogênio pode opcionalmente ser quaternizado, e (iv) qualquer um dos anéis heterocicloalquila acima; podem ser fundidos para um anel arila ou heteroarila. Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem, mas não são limitadas para, piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, dioxanila, tetraidrofuranoila, tetrahidrotienila, isoindolinila, indolinila, imidazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, triazolidinila, tetrahirofuranila, oxiranila, azetidinila, oxetanila, tietanila, 1,2,3,6-tetrahidropiridinila, tetrahidro-2H-piranila, 3,6-dihidro-2H-piranila, morfolinila, e outros.
[00153] “Arila”: como usado aqui, refere-se a grupos com aromaticidade, incluindo “conjugado,” ou sistemas multicíclicos com pelo menos um anel aromático e não contendo qualquer heteroátomo na estrutura de anel. Exemplos incluem fenila, benzila, 1,2,3,4-tetrahidronaftalenila, etc.
[00154] “Heteroarila”: como usado aqui, refere-se a grupos arila, como definido acima, exceto tendo de um a quatro heteroátomos na estrutura de anel, e também pode ser referida como “heterociclos arila” ou “heteroaromáticos.” Como usado aqui, o termo “heteroarila” é destinado para incluir um anel monocíclico de 5, 6, ou 7 membros ou bicíclico de 7, 8, 9, 10, 11 ou heterocíclico de 12 membros aromático estável que consiste de átomos de carbono e um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1 ou 1-2 ou 1-3 ou 1-4 ou 1-5 ou 1-6 heteroátomos, ou, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 heteroátomos, independentemente selecionados dentre o grupo consistindo de nitrogênio, oxigênio e enxofre. O átomo de nitrogênio pode ser substituído ou não substituído (isto é, N ou NR em que R é H ou outros substituintes, como definido). Os heteroátomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente ser oxidados (isto é, N^O) e S(O)p, onde p = 1 ou 2). Deve ser notado que o número total de átomos de S e O no heterociclo aromático não é mais do que 1. Exemplos de heteroarila incluem piridila, pirazinila, pirimidinila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, tiazolila, isotiazolila, tetrazolila, oxazolila, isooxazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, tiofenila, furanila, quinolinila, isoquinolinila, tetrazolila, piridazinila, quinazolinila, dihidroquinazolila, e tetrahidroquinazolila e outros.
[00155] Além disso, os termos “arila” e “heteroarila” incluem grupos arila e heteroarila multicíclicos, por exemplo, tricíclico, bicíclico, por exemplo, naftaleno, benzoxazol, benzodioxazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofeno, metilenodioxifenila, quinolina, isoquinolina, naftidina, indol, benzofurano, purina, benzofurano, deazapurina, indolizina.
[00156] No caso de anéis aromáticos multicíclicos, apenas um dos anéis necessita ser aromático (por exemplo, 2,3-dihidroindol), apesar de todos os anéis podem ser aromáticos (por exemplo, quinolina). O segundo anel também pode ser fundido ou ligado.
[00157] “Carbociclo” ou “porção carbocíclica” como usado aqui é destinada para incluir qualquer anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico estável tendo o número especificado de carbonos, qualquer um dos quais podem ser saturados, insaturados, ou aromáticos. Carbociclo inclui cicloalquila e arila. Por exemplo, um C3-C14 carbociclo é destinado para incluir um anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Exemplos de carbociclos incluem, mas não são limitados para, ciclopropila, ciclobutila, ciclobutenila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclohexila, cicloheptenila, cicloheptila, cicloheptenila, ciclooctila, ciclooctenila, ciclooctadienila, fluorenila, fenila, naftila, indanila, adamantila e tetrahidronaftila. Os anéis ligados em ponte também são incluídos na definição de carbociclo, incluindo, por exemplo, [3.3.0]biciclooctano, [4.3.0]biciclononano, [4.4.0]biciclodecano e [2.2.2]biciclooctano. Um anel ligado em ponte ocorre quando um ou mais átomos de carbono liga dois átomos de carbono não adjacentes. Em uma forma de realização, os anéis ligados em ponte são um ou dois átomos de carbono. Não é necessário uma ponte sempre converter um anel monocíclico em um anel tricíclico. Quando um anel é ligado em ponte, os substituintes recitados para o anel também pode estar presente na ponte. Os anéis espiros fundidos (por exemplo, naftila, tetrahidronaftila) também são incluídos.
[00158] “Heterociclo” ou “porção heterocíclica” como usado aqui incluem qualquer estrutura de anel (saturado, insaturado, ou aromático) que contém pelo menos um heteroátomo no anel (por exemplo, N, O ou S). Heterociclo inclui heterocicloalquila e heteroarila. Exemplos de heterociclos incluem, mas não são limitados para, morfolina, pirrolidina, tetrahidrotiofeno, piperidina, piperazina e tetraidrofurano.
[00159] Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não são limitados para, acridinila, azocinila, benzimidazolila, benzofuranoíla, benzotiofuranila, benzotiofenila, benzoxazolila, benzoxazolinila, benztiazolila, benztriazolila, benztetrazolila, benzisoxazolila, benzisotiazolila, benzimidazolinila, carbazolila, 4aH-carbazolila, carbolinila, cromanila, cromenila, cinolinila, decahidroquinolinila, 2H,6H-1,5,2-ditiazinila, dihidrofuro[2,3-b]tetraidrofurano, furanila, furazanila, imidazolidinila, imidazolinila, imidazolila, 1H-indazolila, indolnila, indolinila, indolizinila, indolila, 3H-indolila, isatinoíla, isobenzofuranoíla, isocromanila, isoindazolila, isoindolinila, isoindolila, isoquinolinila, isotiazolila, isoxazolila, metilenodioxifenila, morfolinila, naftiridinila, octahidroisoquinolinila, oxadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4- oxadiazolila, 1,2,4-oxadiazol5(4H)-ona, oxazolidinila, oxazolila, oxindolila, pirimidinila, fenantridinila, fenantrolinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxatinila, fenoxazinila, ftalazinila, piperazinila, piperidinila, piperidonila, 4-piperidonila, piperonila, pteridinila, purinila, piranila, pirazinila, pirazolidinila, pirazolinila, pirazolila, piridazinila, piridooxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinila, piridila, pirimidinila, pirrolidinila, pirrolinila, 2H-pirrolila, pirrolila, quinazolinila, quinolinila, 4H-quinolizinila, quinoxalinila, quinuclidinila, tetraidrofuranoila, tetrahidroisoquinolinila, tetrahidroquinolinila, tetrazolila, 6H-1,2,5-tiadiazinila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, tiantrenila, tiazolila, tienila, tienotiazolila, tienooxazolila, tienoimidazolila, tiofenila, triazinila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4-triazolila, 1,2,5-triazolila, 1,3,4-triazolila e xantenila. Anel heterociclo múltiplo pode incluir fundido, ligado em ponte ou anéis espiro.
[00160] O anel cicloalquila, heterocicloalquila, arila, ou heteroarila (ou o grupo carbocíclico ou heterocíclico) pode ser substituído a uma ou mais posições de anel (por exemplo, o carbono formador de anel ou heteroátomo como N) com tais substituintes como descrito acima, por exemplo, alifático; heteroalifático; cicloalquila; heterocicloalquila; arila; heteroarila; alquilarila; alquilheteroarila; alcóxi; arilóxi; heteroalcóxi; heteroarilóxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; C1; Br; I;-NO2;-CN;-CF3;-CH2CF3;-CHC12;- CH2OH;-CH2CH2OH;-CH2NH2;-CH2SO2CH3;- ou-GRG1 em que G é -O-,-S-,- NRG2-,-C(=O)-,-S(=O)-,-SO2-,-C(=O)O-,-C(=O)NRG2-,-OC(=O)-,- NRG2C(=O)-,-OC(=O)O-,-OC(=O)NRG2-,-NRG2C(=O)O-,-NRG2C(=O)NRG2- ,-C(=S)-,-C(=S)S-,-SC(=S)-,-SC(=S)S-,-C(=NRG2)-,-C(=NRG2)O-,- C(=NRG2)NRG3-,-OC(=NRG2)-,-NRG2C(=NRG3)-,-NRG2SO2-,-NRG2SO2NRG3-, ou-SO2NRG2-, em que cada ocorrência de RG1, RG2 e RG3 independentemente inclui, mas não é limitado para, hidrogênio, halogênio, ou um alifático opcionalmente substituído, heteroalifático, cicloalquila, heterocicloalquila; arila, heteroarila, alquilarila, ou porção alquilheteroarila. Grupos arila e heteroarila também podem ser fundidos ou ligados com anéis cicloalquila ou heterocíclico, que não são aromáticos de modo a formar um sistema multicíclico (por exemplo, tetralina, metilenodioxifenil).
[00161] “Alcóxi” (ou “alquilóxi”): como usado aqui, o termo alcóxi (ou alquilóxi) refere-se a um grupo alquila, como previamente definido, unido na porção molecular parental através de um átomo de oxigênio (“alcóxi”). Em determinadas formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-20 átomos de carbono alifáticos. Em outras determinadas formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-10 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-8 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-6 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-4 átomos de carbono alifáticos. Exemplos de grupos alcóxi, incluem, mas não são limitados para, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, n-butóxi, terc-butóxi, neopentóxi e n-hexóxi.
[00162] “Arilóxi”: como usado aqui, o termo arilóxi refere-se a um grupo arila, como definido aqui, unido na porção molecular parental através de um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos arilóxi incluem, mas não são limitadas para fenóxi e naftilóxi.
[00163] “Heteroarilóxi”: como usado aqui, o termo heteroarilóxi refere-se a um grupo heteroarila, como definido aqui, unido na porção molecular parental através de um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos heteroarilóxi incluem, mas não são limitados para, quinolilóxi e isoquinolizinilóxi.
[00164] “Amina”: o termo amina refere-se a um grupo tendo a estrutura-N(R)2 em que cada ocorrência de R é independentemente hidrogênio, ou um alifático ou porção heteroalifático, ou os grupos R, tomados juntos, podem formar uma porção heterocíclica. Em determinados casos, um grupo amina pode ser carregado (protonizado) ou quaternizado, por exemplo,-HN+(R)2 ou-N+(R)3
[00165] “Alquilamino”: como usado aqui, o termo alquilamino refere- se a um grupo tendo a estrutura-NHR’ em que R’ é alquila, como definido aqui. O termo “aminoalquila” refere-se a um grupo tendo a estrutura NH2R’-, em que R’ é alquila, como definido aqui. Em determinadas formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-20 átomos de carbono alifáticos. Em outras determinadas formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-10 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, os grupos alquila, alquenila e alquinila empregados na invenção contêm cerca de 1-8 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-6 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras formas de realização, o grupo alquila contém cerca de 1-4 átomos de carbono alifáticos. Exemplos de alquilamino incluem, mas não são limitados para, metilamino, etilamino, iso-propilamino e outros.
[00166] “Alquiltio” (ou “tioalquila”) significa um grupo alquila como definido aqui com o número indicado de átomos de carbono unido através de um átomo de enxofre. C1-6 alquiltio, é destinado a incluir grupos C1, C2, C3, C4, C5, e C6 alquiltio. C1-8 alquiltio, é destinado a incluir grupos C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, e C8 alquiltio. Os grupos tioalquila podem ser substituídos com grupos como alquila, alquenila, alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, carbóxi ácido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoíla e ureido), amidino, imino, sulfhidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoíla, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclil alquilarila, ou uma arila ou porções heteroarila.
[00167] “Tiocarbonila” ou “tiocarbóxi” incluem compostos e porções que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de enxofre.
[00168] “Tioéter” inclui porções que contêm um átomo de enxofre ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Exemplos de tioéteres incluem, mas não são limitados a alqtioalquilas, alqtioalquenilas e alqtioalquinilas. O termo “alqtioalquilas” inclui porções com um grupo alquila, alquenila ou alquinila ligado a um átomo de enxofre que é ligado a um grupo alquila. Similarmente, o termo “alqtioalquenilas” refere-se às porções em que um grupo alquila, alquenila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um grupo alquenila; e alqtioalquinilas” refere-se às porções em que um grupo alquila, alquenila ou alquinila é ligado a um átomo de enxofre que é covalentemente ligado a um grupo alquinila.
[00169] “Ariltio” (ou “tioarila”) significa um grupo arila como definido aqui com o número indicado de átomos de carbono unido através de um átomo de enxofre.
[00170] “Ácido carboxílico” como usado aqui se refere a um composto compreendendo um grupo de fórmula-CO2H.
[00171] “Ácido dicarboxílico” refere-se a um composto compreendendo dois grupos de fórmula-CO2H.
[00172] “Halo, haleto e halogênio”: Os termos halo, haleto e halogênio como usado aqui referem-se a um átomo selecionado dentre flúor, cloro, bromo, e iodo.
[00173] “Metilol”: O termo metilol como usado aqui se refere a um grupo de álcool da estrutura-CH2OH.
[00174] “Hidroxialquila”: Como usado aqui, o termo hidroxialquila refere-se a um grupo alquila, como definido acima, contendo pelo menos um grupo OH.
[00175] “Mercaptoalquila”: O termo mercaptoalquila como usado aqui se refere a um grupo alquila, como definido acima, contendo pelo menos um grupo SH.
[00176] “Acila” inclui porções que contém o radical acila (-C(O)-) ou um grupo carbonoíla. “Acila substituída” inclui grupos acila onde um ou mais dos átomos de hidrogênio são substituídos por, por exemplo, grupos alquila, grupos alquinila, halogênio, hidroxila, alquilcarbonilóxi, arilcarbonilóxi, alcoxicarbonilóxi, ariloxicarbonilóxi, carboxilato, alquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, aminocarbonila, alquilaminocarbonila, dialquilaminocarbonila, alquiltiocarbonila, alcoxila, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoíla e ureido), amidino, imino, sulfhidrila, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinila, sulfonato, sulfamoíla, sulfonamido, nitro, trifluorometila, ciano, azido, heterociclila, alquilarila, ou uma porção arila ou heteroarila.
[00177] “Hidrocarboneto”: O termo hidrocarboneto, como usado aqui, refere-se a qualquer grupo químico compreendendo hidrogênio e carbono. O hidrocarboneto pode ser substituído ou não substituído. O hidrocarboneto pode ser insaturado, saturado, ramificado, não ramificado, cíclico, policíclico, ou heterocíclico. Os hidrocarbonetos ilustrativos incluem, por exemplo, metila, etila, n-propila, iso-propila, ciclopropila, alila, vinila, n-butila, terc- butila, etinila, ciclohexila, metóxi, dietilamino, heterocicloalquila, arila, heteroarila, tioalquila, e outros. Tal como seria conhecido por um versado nesta técnica, todas as valências devem ser atendidas ao fazer quaisquer substituições.
[00178] “Alquilarila” como usado aqui se refere a um grupo arila substituído com um ou mais grupos alquila (por exemplo, metilfenil).
[00179] “Alquilarilamino” como usado aqui se refere a-N RG4RG5, em que RG4 é alquila, como definido aqui, e RG5 éuma arila, como definido aqui, ou pelo menos um de RG4 e RG5 é uma alquilarila como definido aqui.
[00180] “Substituído”: Os termos substituído, se precedido pelo termo “opcionalmente” ou não, e substituinte, como usado aqui, referem-se a substituição de radicais de hidrogênio em uma dada estrutura com o radical de um substituinte especificado. Quando mais do que uma posição em qualquer dada estrutura pode ser substituída com mais do que um substituinte selecionado dentre um grupo especificado, o substituinte pode ser ou igual ou diferente em cada posição. Como usado aqui, o termo “substituído” é contemplado para incluir todos os substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Em um aspecto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes acíclico e cíclico, ramificado e não ramificado, carbocíclico e heterocíclico, aromático e não aromático de compostos orgânicos. Heteroátomos como nitrogênio podem ter substituintes de hidrogênio e/ou quaisquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos descritos aqui que satisfazem às valências dos heteroátomos. Exemplos de substituintes incluem, mas não são limitados a alifático; heteroalifático; cicloalquila; heterocicloalquila; arila; heteroarila; alquilarila; alquilheteroarila; alcóxi; arilóxi; heteroalcóxi; heteroarilóxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; C1; Br; I;-NO2;-CN;-CF3;-CH2CF3;-CHC12;-CH2OH;- CH2CH2OH;-CH2NH2;-CH2SO2CH3;- ou-GRG1 em que G é -O-,-S-,-NRG2-,- C(=O)-,-S(=O)-,-SO2-,-C(=O)O-,-C(=O)NRG2-,-OC(=O)-,-NRG2C(=O)-,- OC(=O)O-,-OC(=O)NRG2-,-NRG2C(=O)O-,-NRG2C(=O)NRG2-,-C(=S)-,- C(=S)S-,-SC(=S)-,-SC(=S)S-,-C(=NRG2)-,-C(=NRG2)O-,-C(=NRG2)NRG3-,- OC(=NRG2)-,-NRG2C(=NRG3)-,-NRG2SO2-,-NRG2SO2NRG3-, ou-SO2NRG2-, em que cada ocorrência de RG1, RG2 e RG3 independentemente inclui, mas não é limitada para, hidrogênio, halogênio, ou uma porção cicloalquila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, alquilarila, ou alquilheteroarila alifática, heteroalifática, opcionalmente substituída. Exemplos adicionais de substituintes geralmente aplicáveis são ilustrados pelas formas de realização específicas mostrado nos exemplos que são descritos aqui.
[00181] Os seguintes são mais termos gerais usados em todo o presente pedido: “Animal”: O termo animal, como usado aqui, refere-se a humanos, assim como, animais não humanos, em qualquer estágio de desenvolvimento, incluindo, por exemplo, mamíferos, aves, répteis, anfíbios, peixes, vermes e células únicas. As culturas de célula e as amostras de tecidos vivos são consideradas como sendo pluralidades de animais. Preferivelmente, o animal não humano é um mamífero (por exemplo, um roedor, um camundongo, um rato, um coelho, um macaco, um cão, um gato, um primata, ou um porco). Um animal pode ser um animal transgênico ou um clone humano. O termo “indivíduo” engloba animais.
[00182] “Quantidade eficiente”: Em geral, com referência a um agente ativo ou dispositivo de distribuição de droga, o termo “quantidade eficiente” refere-se à quantidade necessária para eliciar a resposta biológica desejada. Como será apreciada pelo versado nesta técnica, a quantidade eficiente de um agente ou dispositivo pode variar dependendo em tais fatores como o ponto final biológico desejado, o agente a ser distribuído, a composição da matriz de encapsulação, o tecido alvo, etc. Por exemplo, a quantidade eficiente de micropartículas contendo um antígeno a ser distribuído para imunizar um indivíduo é a quantidade que resulta em uma resposta imune suficiente para evitar infecção com um organismo tendo o antígeno administrado.
[00183] “Aminoácido natural” como usado aqui se refere a qualquer um dos L-aminoácidos comuns, de ocorrência natural encontrados nas proteínas de ocorrência natural: glicina (Gly), alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (Ile), lisina (Lys), arginina (Arg), histidina (His), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), fenilalanina (Phe), tirosina (Tyr), triptofano (Trp), ácido aspártico (Asp), ácido glutâmico (Glu), asparagina (Asn), glutamina (Gln), cisteína (Cys) e metionina (Met).
[00184] “Aminoácido não natural” como usado aqui se refere a qualquer aminoácido que não é um aminoácido natural. Isto inclui, por exemplo, aminoácidos que compreendem resíduos de a-, β-, w-, D-, L- aminoacila. Mais geralmente, o aminoácido não natural compreende um resíduo da fórmula geral
Figure img0047
em que a cadeia lateral R é diferente das cadeias laterais de aminoácido ocorrendo na natureza. Os aminoácidos exemplares não naturais incluem, mas não são limitados para, sarcosina (N-metilglicina), citrulina (cit), homocitrulina, β-ureidoalanina, tiocitrulina, hidroxiprolina, alotreonina, ácido pipecólico (homoprolina), ácido a-aminoisobutírico, terc-butilglicina, terc-butilalanina, alo-isoleucina, norleucina, α-metilleucina, ciclohexilglicina, β-ciclohexilalanina, β-ciclopentilalanina, α-metilprolina, fenilglicina, α- metilfenilalanina e homofenilalanina.
[00185] “Amino acila”: Mais geralmente, o termo amino acila, como usado aqui, engloba aminoácido natural e aminoácidos não naturais.
[00186] “Poliamida”: refere-se aos homo ou hetero- polímeros de aminoácidos naturais e aminoácidos não naturais. Os homo-polímeros ilustrativos incluem, mas não são limitados para, poli-lisina, poli-arginina, ácido poli-Y-glutárico, e outros. Os hetero- polímeros ilustrativos incluem, mas não são limitados para, polímeros compreendendo fragmentos de peptídeos selecionados dentre peptidases, lisozimas, metaloproteinases, e outros.
[00187] “PHF” refere-se a poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil- formal).
[00188] Como usado aqui, os termos “unidade de polímero”, “unidade monomérica”, “monômero”, “unidade de monômero”, “unidade” todos referem-se à uma unidade estrutural repetitiva em um polímero.
[00189] A presente invenção é destinada a incluir todos os isótopos de átomos ocorrendo nos compostos presentes. Isótopos incluem os átomos tendo o mesmo número atômico, mas números de massa diferentes. A título de exemplo geral e sem limitação, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério. Isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.
[00190] A presente invenção é destinada a incluir todos os isômeros do composto, que se refere-se e inclui, isômeros ópticos, e isômeros tautoméricos, onde isômeros ópticos incluem enantiômeros e diastereômeros, isômeros quirais e isômeros não quirais, e os isômeros ópticos incluem isômeros ópticos isolados, assim como, misturas de isômeros ópticos incluindo misturas racêmica e não racêmicas; onde um isômero pode ser na forma isolada ou em uma mistura com um ou mais outros isômeros.
Carreadores poliméricos
[00191] Em determinadas formas de realização exemplares, os conjugados da invenção encontram uso em aplicações biomédicas, como distribuição de drogas e engenharia de tecidos, e o carreador é biocompatível e biodegradável. Em determinadas formas de realização, o carreador é um polímero solúvel, nanopartícula, gel, lipossoma, micela, sutura, implante, etc. Em determinadas formas de realização, o termo “polímero solúvel” engloba polímero biodegradável biocompatível como um polial (por exemplo, poliacetal ou policetal hidrofílico). Em outras determinadas formas de realização, o carreador é um polímero completamente sintético, semi-sintético ou de ocorrência natural. Em outras determinadas formas de realização, o carreador é hidrofílico.
[00192] Em determinadas formas de realização exemplares, os carreadores usados na presente invenção são poliais biodegradáveis biocompatíveis compreendendo pelo menos uma ligação hidrolisável em cada unidade de monômero posicionada dentro da cadeia principal. Isto assegura que o processo de degradação (via hidrólise/clivagem das unidades de monômero) irá resultar em fragmentação do conjugado polímero para os componentes monoméricos (isto é, degradação), e confere aos conjugados do polímero da invençã suas propriedades biodegradáveis. As propriedades (por exemplo, solubilidade, bioadesividade e hidrofilicidade) dos conjugados de polímero biodegradáveis e biocompatíveis podem ser modificadas por subsequente substituição de adicionais grupos hidrofílicos ou hidrofóbico. Exemplos de polímeros biocompatíveis biodegradáveis apropriados para a prática da invenção podem ser encontrados inter alia nas Patentes US 5.811.510; 5.863.990; 5.958.398; 7.838.619 e 7.790.150; e Publicação U.S. No. 2006/0058512; cada um dos documentos acima listado é incorporado aqui por referência em sua totalidade. As diretrizes para a significância, preparação, e aplicações deste tipo de polímeros podem ser encontradas nos documentos acima citados. Em determinadas formas de realização, antecipa- se que a presente invenção será particularmente utilizável em combinação com os documentos de patente acima referidos, assim como Patentes US 5.582.172 e 6.822.086, cada um dos documentos de patente acima listados é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
[00193] Os conjugados desta invenção são hidrofílicos, hidrolisáveis e compreendem moléculas de drogas (por exemplo, alcalóides vinca ou derivados, compostos camptotecina não natural ou derivados, auristatinas, tubulisinas, duocarmicinas, PI3 quinases, inibidores de MEK, inibidores de KSP, e análogos dos mesmos) e anticorpos (por exemplo, Trastuzumab, Cetuximab, Rituximab, Bevacizumab, Epratuzumab, Veltuzumab, Labetuzumab) ou peptídeos (peptídeos de alvo marcação do receptor LHRH, peptídeo EC-1) covalentemente unido ao carreador de polímero via ligações que contém uma ou mais ligações biodegradáveis. Assim, em determinadas formas de realização exemplares, os carreadores apropriados para a prática da presente invenção são poliais tendo pelo menos átomo de oxigênio acetal/cetal em cada unidade de monômero posicionada dentro da cadeia principal. Como discutido acima, isto assegura que o processo de degradação (via hidrólise/clivagem dos grupos acetal/cetal do polímero) irá resultar em fragmentação do conjugado polial para componentes de baixo peso molecular (isto é, degradação).
[00194] Em determinadas formas de realização, os carreadores de polímero biodegradável biocompatível, usados para a preparação de conjugados de polímero da invenção, são polissacarídeos de ocorrência natural, glicopolissacarídeos, e polímeros sintético de poliglicosídeos, poliacetal, poliamida, origem de poliéter e poliéster e produtos de sua oxidação, fuincionalização, modificação, reticulação e conjugação.
[00195] Em outras determinadas formas de realização, o carreador é a polímero biodegradável hidrofílico selecionado dentre o grupo consistindo de carboidratos, glicopolissacarídeos, glicolipídeos, glicoconjugados, poliacetais, policetais, e derivados dos mesmos.
[00196] Em determinadas exemplares formas de realização, o carreador é um homopolissacarídeo biodegradável biocompatível linear e/ou ramificado de ocorrência natural selecionado dentre o grupo consistindo de celulose, amilose, dextrano, levano, fucoidano, carraginano, inulina, pectina, amilopectina, glicogênio e lixenano.
[00197] Em outras determinadas exemplares formas de realização, o carreador é um heteropolissacarídeo biodegradável biocompatível linear e ramificado de ocorrência natural selecionado dentre o grupo consistindo de agarose, hiluronano, condroitinsulfato, dermatansulfato, queeratansulfato, ácido algínico e heparina.
[00198] Em ainda outras formas de realização exemplares, o carreador polimérico compreende um copolímero de um poliacetal/policetal e um polímero hidrofílico selecionado dentre o grupo consistindo de poliacrilatos, polímeros de polivinila, poliésteres, poliortoésteres, poliamida, polipeptídeos, e derivados dos mesmos.
[00199] Em ainda outra forma de realização, o carreador polimérico é dextrina que é produzida pela hidrólise de um amido obtido de vários produtos naturais como, por exemplo, trigo, arroz, milho e tapioca. Dependendo da estrutura do material de partida de amido, cada dextrina compreende uma distribuição singular de α-1,4 ligações e α-1,6 ligações. Porque a taxa de biodegradabilidade de α-1,6 ligações é tipicamente menor do que para as α-1,4 ligações, preferivelmente a porcentagem α-1,6 ligações é menor do que 10% e mais preferivelmente menor do que 5%. Em uma forma de realização o peso molecular da dextrina está na faixa de cerca de 1 kDa a cerca de 200 kDa, mais preferivelmente de cerca de 2 kDa a cerca de 55 kDa.
[00200] Em determinadas formas de realização, o carreador compreende polissacarídeos ativados por oxidação seletiva de dióis cíclicos vicinais de 1,2-, 1,4-, 1,6-, e 2,6-piranosídeos, e 1,2-, 1,5-, 1,6-furanosídeos, ou por oxidação de polissacarídeos laterais contendo 6-hidróxi e 5,6-diol antes da conjugação com moléculas de drogas ou PBRMs.
[00201] Em ainda outras formas de realização, o carreador polimérico compreende um poliacetal biodegradável biocompatível em que pelo menos um subconjunto das unidades estruturais de repetição de poliacetal tem a seguinte estrutura química:
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em que para cada ocorrência da estrutura n entre colchetes, um de R1 e R2 é hidrogênio, e o outro é um grupo biocompatível e inclui um átomo de carbono covalentemente unido a C1; Rx é um átomo de carbono covalentemente unido a C2; n” é um inteiro; cada ocorrência de R3, R4, R5 e R6 é um grupo biocompatível e é independentemente hidrogênio ou uma porção orgânica; e para cada ocorrência da estrutura n entre colchetes, pelo menos um de R1, R2, R3, R4, R5 e R6 compreende um grupo funcional apropriado a copulação. Em determinadas formas de realização, o grupo funcional é uma porção hidroxila.
[00202] Em uma forma de realização, o carreador polimérico compreende polímeros hidrofílicos biodegradáveis biocompatíveis ativados, compreendendo de 0,1% a 100% porções de poliacetal cuja estrutura dorsal é representada pela seguinte estrutura química: (-CH2-CHR7-O-CHR8-O-)o onde: R7 e R8 são independentemente hidrogênio, hidroxila, hidróxi alquila (por exemplo,-CH2OH,-CH(OH)-CH2OH),-CHO,-CH(OH)-CHO ou- carbonila; e o é um inteiro de 20 a 2000.
[00203] Em ainda outras formas de realização, o carreador polimérico compreende um policetal biodegradável biocompatível em que pelo menos um subconjunto das unidades estruturas de repetição de policetal tem a seguinte estrutura química:
Figure img0049
em que cada ocorrência de R1 e R2 é um grupo biocompatível e Rx, R3, R4, R5, R6 e são como definidos aqui Em determinadas formas de realização, as unidades cetal são monômeros de Fórmula (IIa) ou (IIb):
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(IIa) (IIb) Os polímeros de policetal biodegradáveis, biocompatíveis e seus métodos de fabricação foram descritos em Patentes US 5.811.510, 7.790.150 e 7.838.619, aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
[00204] Em uma forma de realização, o carreador polimérico pode ser obtido a partir de dextrano parcialmente oxidado (β1 ^6)-D-glicose) seguido por redução. Nesta forma de realização, o polímero compreende uma mistura aleatória do dextrano não modificado (A), parcialmente unidades acetal de dextrano oxidado (B) e exaustivamente unidades acetal de dextrano (C) das
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a. (A) (B) (B) (C)
[00205] Em outra forma de realização, o carreador polimérico compreende unidades de acetal não modificadas, isto é, segmentos poliacetal. Em algumas formas de realização, os poliacetais podem ser derivados de dextrana exaustivamente oxidado seguido por redução. Estes polímeros foram descritos em Patente US 5.811.510, que é aqui incorporada por referência para sua descrição de poliacetame na coluna 2, linha 65 até coluna 8, linha 55 e sua síntese na coluna 10, linha 45 até coluna 11, linha 14. Em uma forma de realização, o polímero poliacetal não modificado é um polímero poli(hidroximetiletileno hidroximetil formal) (PHF).
[00206] Além dos polímeros poli(hidroximetiletileno hidroximetil formal), a estrutura dorsal do carreador polimérico também pode compreender copolímeros de blocos de poli (hidroximetiletileno hidroximetil formal) e outros monômeros acetal ou não acetal ou polímeros. Por exemplo, polímeros polietileno glicol são utilizáveis como agente de bainha na estrutura dorsal do polímero porque eles podem diminuir as interações entre as cadeias laterais do polímero dos grupos funcionais apensos. Estes grupos também podem ser utilizáveis na limitação das interações como entre fatores de soro e o polímero modificado. Outros monômeros de agentes de bainha para inclusão na estrutura dorsal do polímero incluem, por exemplo, etileno imina, ácido metacrílico, acrilamida, ácido glutâmico, e combinações dos mesmos.
[00207] As unidades acetal ou cetal estão presentes no polímero modificado em uma quantidade eficaz para promover a biocompatibilidade. A unidade de acetal ou cetal não modificada pode ser descrita como um “agente de bainha” que proporciona biocompatibilidade e solubilidade para os polímeros modificados. Além disso, conjugação a um polímero poliacetal ou policetal pode modificar a suscetibilidade para metabolismo e degradação das porções unidas ao mesmo, e influenciar a biodistribuição, depuração e degradação.
[00208] As unidades acetal não modificadas são monômeros de Fórmula (III):
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(III)
[00209] A fração molar, n, de unidades poliacetal não modificadas é a fração molar disponível para promover a biocompatibilidade, solubilidade e aumento da meia-vida, com base no número total de unidades de polímero no polímero modificado. A fração molar n pode ser a fração mínima de unidades de acetal monômero não modificadas necessárias para proporcionar biocompatibilidade, solubilidade, estabilidade, ou uma meia-vida particular, ou pode ser alguma fração maior O grau mais desejável de citotoxicidade é substancialmente nenhum, isto é, o polímero modificado é substancialmente inerte para o indivíduo. No entanto, como é entendido pelos versados na técnica, algum grau de citotoxicidade pode ser tolerado dependendo da severidade da doença ou sintoma sendo tratado, a eficácia do tratamento, o tipo e o grau de resposta imune, e considerações similares. .
[00210] Em uma forma de realização, a estrutura dorsal do polímero modificado compreende unidades de Fórmula (IV):
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(IV), em que X’ indica o substituinte para o grupo hidroxila da estrutura dorsal do polímero . Como mostrado em Fórmula (IV) e outras fórmulas descritas aqui, cada unidade de poliacetal tem um único grupo hidroxila unido à porção glicerol da unidade e um grupo X’ (ou outro substituinte como-LD-D) unido à porção glicolaldeído da unidade. Isto é para conveniência apenas e deve ser considerado que o polímero tendo unidades de Fórmula (IV) e outras fórmulas descritas aqui pode conter uma distribuição aleatória de unidades tendo um grupo X’ (ou outro substituinte como-LD-D) unido à porção glicolaldeído das unidades e os tendo um único grupo X’ (ou outro substituinte como-LD-D) unido à porção glicerol das unidades assim como unidades tendo dois grupos X’ (ou outros substituintes como-LD-D) com um unido à porção glicolaldeído e o outro unido à porção glicerol das unidades.
[00211] Em uma forma de realização, poliais biodegradáveis biocompatíveis apropriados para a prática da presente invenção têm um peso molecular de entre cerca de 0,5 e cerca de 300 kDa. Em uma forma de realização preferida da presente invenção, os poliais biodegradáveis biocompatíveis têm um peso molecular de entre cerca de 1 e cerca de 300 kDa (por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 200 kDa, entre cerca de 2 e cerca de 300 kDa, entre cerca de 2 e cerca de 200 kDa, entre cerca de 5 e cerca de 100 kDa, entre cerca de 10 e cerca de 70 kDa, entre cerca de 20 e cerca de 50 kDa, entre cerca de 20 e cerca de 300 kDa, entre cerca de 40 e cerca de 150 kDa, entre cerca de 50 e cerca de 100 kDa, entre cerca de 2 e cerca de 40 kDa, entre cerca de 6 e cerca de 20 kDa, ou entre cerca de 8 e cerca de 15 kDa).
[00212] Em uma forma de realização, os poliais biodegradáveis biocompatíveis apropriados para a prática da presente invenção são modificados antes da conjugação com uma droga ou uma PBRM. Por exemplo, os poliais podem conter subunidades de ligantes LD ou LP, como- C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)- com X sendo CH2, O, ou NH, e v sendo um inteiro de 1 a 6. Tabela A abaixo apresenta alguns exemplos dos poliais modificados apropriados para a conjugação com uma droga ou PBRM ou derivados dos mesmos. Salvo especificado ao contrário, números de referência em Tabelas A até E abaixo correspondem aos números de Exemplos descritos aqui; o termo “ND” significa não determinado; e X é CH2, O, ou NH. Tabela A
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Agentes terapêuticos
[00214] Em determinadas formas de realização, o agente terapêutico é uma molécula pequena tendo um peso molecular preferivelmente < cerca de 5 kDa, mais preferivelmente < cerca de 4 kDa, mais preferivelmente < cerca de 3 kDa, o mais preferivelmente < cerca de 1,5kDa ou < cerca de 1 kDa.
[00215] Em determinadas formas de realização, cerca de 0,1 a cerca de 25 % monômeros compreendem um agente terapêutico, mais preferivelmente cerca de 0,5 a cerca de 20%, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 15%, e ainda mais preferivelmente cerca de 2 a cerca de 10%.
[00216] Os agentes terapêuticos de molécula pequena usados nesta invenção (por exemplo, agentes antiproliferativos (citotóxicos e citostáticos) capazes de serem ligados a um carreador de polímero) incluem compostos citotóxicos (por exemplo, de espectro amplo, inibidores de angiogênese, inibidores da progressão do ciclo celular, inibidores da via PI3K/m- TOR/AKT, inibidores da via de sinalização MAPK, inibidores de quinase, inibidores chaperonas de proteína, inibidores de HDAC, inibidores de PARP, inibidores da sinalização de Wnt/Hedgehog a e inibidores da RNA polimerase.
[00217] As citotoxinas de amplo espectro incluem, mas não são limitadas a, drogas alquilantes ou de ligação de DNA, agentes estabilizantes e desestabilizantes de microtúbulos, compostos de platina e inibidores de topoisomerase I.
[00218] Exemplares drogas alquilantes ou de ligação de DNA incluem, CC-1065 e seus análogos, antraciclinas (doxorubicina, epirubicina, idarubicina, daunorubicina) e seus análogos, agentes alquilantes, como calicheamicinas, dactinomicinas, mitromicinas, pirrolobenzodiazepinas, e similares.
[00219] Exemplares análogos de CC-1065 incluem duocarmicina SA, duocarmicina C1, duocarmicina C2, duocarmicina B2, DU-86, KW-2189, bizelesina, seco-adozelesina, e os descritos em Patentes US 5.475.092; 5.595.499; 5.846.545; 6.534.660; 6.586.618; 6.756.397 e 7.049.316. Doxorubicina e seus análogos incluem os descritos em Patente US 6.630.579. Calicheamicins incluem as descritas em Patentes US 5.714.586 e 5.739.116. Duocarmicinas incluem as descritas em Patentes U.S. Nos.5.070.092; 5.101.038; 5.187.186; 6.548.530; 6.660.742; e 7.553.816 B2; e Li et al., Tet Letts., 50:2932- 2935 (2009). Pirrolobenzodiazepinas incluem as descritas em Denny, Exp. Opin. Ther. Patents., 10(4):459-474 (2000).
[00220] Exemplares agentes estabilizantes e desestabilizantes de microtúbulos incluem compostos taxano, como paclitaxel, docetaxel; maitansinóides, auristatinas e análogos dos mesmos, derivados de tubulisina A e B, derivados de alcalóide vinca, epotilonas e criptoficinas.
[00221] Exemplares maitansinóides ou análogos de maitansinóide incluem maitansinol e maitansinol analogs, maitansina ou DM-1 e DM-4 são os descritos em Patentes US 5.208.020; 5.416.064; 6.333.410; 6.441.163; 6.716.821; RE39.151 e 7.276.497. Em determinadas formas de realização, o agente citotóxico é uma maitansinóide, outro grupo de agentes anti-tubulin (ImmunoGen, Inc.; ver também Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131), maitansinóides ou análogos de maitansinóide. Exemplos de maitansinóides apropriados incluem maitansinol e análogos de maitansinol. Apropriados maitansinóides são descritos em patentes US . 4.424.219; 4.256.746; 4.294.757; 4.307.016; 4.313.946; 4.315.929; 4.331.598; 4.361.650; 4.362.663; 4.364.866; 4.450.254; 4.322.348; 4.371.533; 6.333.410; 5.475.092; 5.585.499; e 5.846.545.
[00222] Exemplares auristatinas incluem auristatina E (também conhecida como um derivado de dolastatina-10), auristatina EB (AEB), auristatina EFP (AEFP), monometil auristatina E (MMAE), monometil auristatina F (MMAF), auristatina F e dolastatina. Apropriadas auristatinas são também descritas em Publicação U.S. Nos. 2003/0083263, 2011/0020343, e 2011/0070248; Publicação de pedido PCT Nos. WO 09/117531, WO 2005/081711, WO 04/010957; WO 02/088172 e WO01/24763, e Patentes US 7.498.298; 6.884.869; 6.323.315; 6.239.104; 6.124.431; 6.034.065; 5.780.588; 5.767.237; 5.665.860; 5.663.149; 5.635.483; 5.599.902; 5.554.725; 5.530.097; 5.521.284; 5.504.191; 5.410.024; 5.138.036; 5.076.973; 4.986.988; 4.978.744; 4.879.278; 4.816.444; e 4.486.414, cujas descrições são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.
[00223] Exemplares compostos de tubulisina incluem compostos descritos em Patentes US 7.816.377; 7.776.814; 7.754.885; Publicação U.S. Nos. 2011/0021568; 2010/004784; 2010/0048490; 2010/00240701; 2008/0176958; e pedido PCT Nos. WO 98/13375; WO 2004/005269; WO 2008/138561; WO 2009/002993; WO 2009/055562; WO 2009/012958; WO 2009/026177; WO 2009/134279; WO 2010/033733; WO 2010/034724; WO 2011/017249; WO 2011/057805; cujas descrições são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.
[00224] Exemplares alcalóides vinca incluem vincristina, vinblastina, vindesina, e navelbina (vinorelbina). Apropriados alcalóides Vinca que podem ser usados na presente invenção são também descritos em Publicação U.S. Nos. 2002/0103136 e 2010/0305149, e Patente US 7.303.749 B1, cujas descrições são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.
[00225] Exemplares epotilona compostos incluem epotilona A, B, C, D, E e F, e derivados dos mesmos. Apropriado compostos epotilona e derivados dos mesmos são descritos, por exemplo, em Patentes US 6.956.036; 6.989.450; 6.121.029; 6.117.659; 6.096.757; 6.043.372; 5.969.145; e 5.886.026; e WO 97/19086; WO 98/08849; WO 98/22461; WO 98/25929; WO 98/38192; WO 99/01124; WO 99/02514; WO 99/03848; WO 99/07692; WO 99/27890; e WO 99/28324; cujas descrições são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.
[00226] Exemplares compostos criptoficina são descritos em Patentes US 6.680.311 e 6.747.021.
[00227] Exemplares compostos de placina incluem cisplatina (PLATINOL®), carboplatina (PARAPLATIN®), oxaliplatina (ELOXATINE®), iproplatina, ormaplatina, e tetraplatin.
[00228] Exemplares inibidores de topoisomerase I incluem camptotecina, camptotecina, derivados, análogos de camptotecina e camptotecina não naturais, como, por exemplo, CPT-11 (irinotecan), SN-38, topotecan, 9-aminocamptotecina, rubitecan, gimatecan, karenitecina, silatecan, lurtotecan, exatecan, diflomotecan, belotecan, lurtotecan e S39625. Outros compostos camptotecina que podem ser usados na presente invenção incluem os descritos em, por exemplo, J. Med. Chem., 29:2358-2363 (1986); J. Med. Chem., 23:554 (1980); J. Med. Chem., 30:1774 (1987).
[00229] Os inibidores da angiogênese incluem, mas não são limitados a, inibidores de MetAP2. Exemplares inibidores de MetAP2 incluem análogos de fumagillol, significando qualquer composto que inclui a estrutura de núcleo de fumagilina, incluindo fumagilamina, que inibe a capacidade de MetAP-2 para remover metionineas NH2-terminais a partir das proteínas como descrito em Rodeschini et al., J. Org. Chem., 69, 357-373, 2004 e Liu, et al., Science 282, 1324-1327, 1998. Exemplos não limitativos de “análogos de fumagilol” são descritos em J. Org. Chem., 69, 357, 2004; J.Org. Chem., 70, 6870, 2005; Pedido de patente europeia 0 354 787; J. Med. Chem., 49, 5645, 2006; Bioorg. Med. Chem., 11, 5051, 2003; Bioorg. Med. Chem., 14, 91, 2004; Tet. Lett. 40, 4797, 1999; WO99/61432; Patentes US 6.603.812; 5.789.405; 5.767.293; 6.566.541; e 6.207.704.
[00230] Exemplares inibidores progressão do ciclo celular incluem inibidores de CDK como, por exemplo, BMS-387032 e PD0332991; inibidores de Rho- quinase como, por exemplo GSK429286; inibidores de ponto de verificação de quinase como, por exemplo, AZD7762; inibidores de quinase aurora como, por exemplo, AZD1152, MLN8054 e MLN8237; inibidores de PLK como, por exemplo, BI 2536, BI6727 (Volasertib), GSK461364, ON-01910 (Estybon); e inibidores de KSP como, por exemplo, SB 743921, SB 715992 (ispinesib), MK-0731, AZD8477, AZ3146 e ARRY-520.
[00231] Exemplares inibidores da via de sinalização de PI3K/m- TOR/AKT incluem inibidores de fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K), inibidores de GSK-3, inibidores de ATM, inibidores de DNA-PK e inibidores de PDK-1.
[00232] Exemplares PI3 quinases são descritas em Patente US 6.608.053, e incluem BEZ235, BGT226, BKM120, CAL101, CAL263, demetoxiviridina, GDC-0941, GSK615, IC87114, LY294002, Palomid 529, perifosine, PF-04691502, PX-866, SAR245408, SAR245409, SF1126, Wortmannin, XL147 e XL765.
[00233] Exemplares inibidores de AKT incluem, mas não são limitados a AT7867.
[00234] Exemplares inibidores da via de sinalização de MAPK incluem inibidores de MEK, Ras, JNK, B-Raf e p38 MAPK.
[00235] Exemplares inibidores de MEK são descritos em Patente US 7.517.994 e incluem GDC-0973, GSK1120212, MSC1936369B, AS703026, RO5126766 e RO4987655, PD0325901, AZD6244, AZD 8330 e GDC-0973.
[00236] Exemplares inibidores de B-raf incluem CDC-0879, PLX- 4032, e SB590885.
[00237] Exemplares inibidores de B p38 MAPK incluem BIRB 796, LY2228820 e SB 202190
[00238] Os receptores de tirosina quinases (RTK) são receptores da superfície celular que são com frequência associados com as vias de sinalização estimulando a proliferação descontrolada de células de câncer e neoangiogênese. Muitos RTKs, que super-expressam ou tem mutações levando à ativação constitutiva do receptor, foram identificados, incluindo, mas não limitados a, e receptores de família de receptores VEGFR, EGFR, FGFR, PDGFR, EphR RET. Exemplares alvos específicos de RTK incluem ErbB2, FLT-3, c-Kit, c-Met, HIF.
[00239] Exemplares inibidores de receptor ErbB2 (família EGFR) incluem mas não limitados a AEE788 (NVP-AEE 788), BIBW2992, (Afatinib), Lapatinib, Erlotinib (Tarceva), e Gefitinib (Iressa).
[00240] Exemplares inibidores de alvo-marcação de RTK como uma via de sinalização (inibidores de quinase marcados com múltiplos alvos) incluem AP24534 (Ponatinib) que alvo-marca receptores de FGFR, FLT-3, VEGFR-PDGFR e Bcr-Abl; ABT-869 (Linifanib) que alvo-marca receptores FLT-3 e VEGFR-PDGFR; AZD2171 que alvo-marca receptores de VEGFR- PDGFR, Flt-1 e VEGF; CHR-258 (Dovitinib) que alvo-marca os receptores de VEGFR-PDGFR, FGFR, Flt-3, e c-Kit.
[00241] Exemplares inibidores chaperon de proteína incluem inibidores de HSP90. Exemplares inibidores de HSP90 incluem 17AAG derivados, BIIB021, BIIB028, SNX-5422, NVP-AUY-922 e KW-2478.
[00242] Exemplares inibidores de HDAC incluem Belinostat (PXD101), CUDC-101, Droxinostat, ITF2357 (Givinostat, Gavinostat), JNJ- 26481585, LAQ824 (NVP-LAQ824, Dacinostat), LBH-589 (Panobinostat), MC1568, MGCD0103 (Mocetinostat), MS-275 (Entinostat), PCI-24781, Piroxamida (NSC 696085), SB939, Trichostatina A e Vorinostat (SAHA).
[00243] Exemplares inibidores de PARP incluem iniparib (BSI 201), olaparib (AZD-2281), ABT-888 (Veliparib), AG014699, CEP 9722, MK 4827, KU-0059436 (AZD2281), LT-673, 3-aminobenzamida, A-966492, e AZD2461
[00244] Exemplares inibidores da via de sinalização de Wnt/Hedgehog incluem vismodegib (RG3616/GDC-0449), ciclopamina (11-deoxojervina) (inibidores da via de Hedgehog) e XAV-939 (inibidor da via de Wnt)
[00245] Exemplares inibidores de RNA polimerase incluem amatoxins. Exemplares amatoxinas incluem α-amanitinas, β-amanitinas, Y—amanitinas, ε- amanitinas, amanulina, ácido amanúlico, amaninamida, amanina, e proamanulina.
[00246] Em uma forma de realização a droga da invenção é um composto de camptotecina não natural, alcalóide vinca, inibidor de quinase (por exemplo, inibidor dePI3 quinase (GDC-0941 e PI-103)), inibidor de MEK, inibidor de KSP, inibidor de RNA polimerase, inibidor de PARP, docetaxel, paclitaxel, doxorubicin, duocarmicina, tubulisina, auristatina ou um composto de platina. Em formas de realização específicas, a droga é um derivado de SN-38, vindesina, vinblastina, PI-103, AZD 8330, auristatina E, auristatina F, um composto duocarmicina, composto tubulisina, ou ARRY- 520.
[00247] Em outra forma de realização, a droga usada na invenção é uma combinação de duas ou mais drogas, como, por exemplo, PI3 quinases e inibidores de MEK ; compostos citotóxicos e compostos de platina de espectro amplo, inibidores de PARP e compostos de platina; compostos citotóxicos de espectro amplo e inibidores de PARP.
[00248] Em uma forma de realização, o alcalóide Vinca é um composto de Fórmula (V),:
Figure img0059
(V) em que: R14 é hidrogênio,-C(O)-C1-3 alquila ou-C(O)-cloro substituído C1-3 alquila; R15 é hidrogênio,-CH3 ou -CHO; quando R17 e R18 são tomados independentemente, R18 é hidrogênio, e um de R16 ou R17 é etila e o outro é hidroxila; quando R17 e R18 são tomados juntos com o carbono ao qual eles são unidos para formar um anel oxirano, R16 é etil; R19 é hidrogênio, OH, grupo amino, alquil amino ou- [C(R20R21)]a-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, hidroxilada C6-10 arila, poli-hidroxilada C6-10 arila, 5 a 13 membros heterociclo, C3-8 cicloalquila, hidroxilada C3-8 cicloalquila, poli- hidroxilada C3-8 cicloalquila ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é hidrogênio ou X2 e NR77 foram umaporção heterocíclica contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12. Outros exemplos of alcalóides Vinca são descrito em US 2010/0305149 e US 2002/0103136.
[00249] Em uma forma de realização o alcalóide Vinca de Fórmula (V) é um composto de Fórmula (VI):
Figure img0060
(VI) em que: R40 é hidrogênio,-OH,-NH2, ou qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0061
Figure img0062
em que: a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3.
[00250] Em uma forma de realização, R40 é
Figure img0063
[00251] Em outra forma de realização, camptotecina não natural é um composto de Fórmula (VII):
Figure img0064
em que: R24 é -H,-Cl,-F,-OH ou alquila; ou R24 e R25, podem ser tomados juntos para formar um anel de cinco ou seis membros; R25 é -H,-F,-OH,-CH3,-CH=N-O-t-Butila,-CH2CH2Si(CH3)3,- Si((CH3)2)-t-butila,-O-C(O)-R29; R29 é -NH2,-R28-C1-6 alquil-R22, heterocicloalquila5 a 13 membros, R28-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R22 ou-R28-C1-6 alquil-C6-12 aril-C1-6 alquil-R22; R26 é -H,-CH2-N(CH3)2, NH2, ou NO2; R27 é etila, N-metila piperidina, cicloalquila,- CH2CH2NHCH(CH3)2, ou-N-4-metilciclohexilamina; R79 é -H ou-C(O)-R28-[C(R20R21)]a-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, poli-hidroxilada C6-10 arila, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, hidroxilada C3-8 cicloalquila, poli-hidroxilada C3-8 cicloalquila ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23), ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é um hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; ou R26 e R27 quando tomados juntos com os dois átomos de carbono aos quais eles se unem e o terceiro átomo de carbono conectando os dois átomos de carbono formam um anel de seis membros opcionalmente substituído; R28 está ausente, NH ou oxigênio; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; f é um inteiro de 1 a 12; u é um inteiro 0 ou 1; w é um inteiro 0 ou 1; e com a condição que o composto de Fórmula (VII) deve conter pelo menos um de R29 e R79 Em uma forma de realização o composto camptotecina não natural de Fórmula (VII) é um composto de Fórmula (VIII) ou Formula (XXV):
Figure img0065
(XXV) em que R30 é -NH2,-R28-C1-6 alquil-R22, heterocicloalquila de 5 a 13 membros, R28-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R22 ou-R28-C1-6 alquil- C6-12 aril-C1-6 alquil-R22; R28 está ausente, NH ou oxigênio; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12.
[00252] Em algumas formas de realização R30 é qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0066
em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e g é um inteiro de 2 a 6.
[00253] Em outra forma de realização a PI3 quinase é um composto de Fórmula (IX):
Figure img0067
em que R47 é um grupo amino,-R9-[C(R20R21)]a-R10,-R9-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R10 ou heterocicloalquila de 5 a 13 membros; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, hidroxilada C6-10 arila, C6-10 arila poli-hidroxilada, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R10 é -OH,-NHR83,-N-(R83)R11,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c- C(H)(R23)-N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23),-R82-(C(O)- CH(X2)-NH)d-R77 ou-R82-C(O)-[C(R20R21)]a-R82-R83; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; R9 está ausente, N-(R83) ou oxigênio; R83 é hidrogênio ou CH3; R11 é:
Figure img0068
cada R12 independentemente é hidrogênio, cloreto,-CH3 ou- OCH3; R13 é hidrogênio ou-C(O)-(CH2)d-(O-CH2-CH2)f-NH2; X4 é a cadeia lateral de lisina, arginina, citrulina, alanina ou glicina; X5 é a cadeia lateral de fenilalanina, valina, leucina, isoleucina ou triptofano; cada de X6 e X7 é independentemente a cadeia lateral de glicina, alanina, serina, valina ou prolina; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; f é um inteiro de 1 a 12; e cada u independentemente é um inteiro 0 ou 1. Em algumas formas de realização
Figure img0069
É citrulina-valina; lisina-fenilalanina; citrulina-fenilalanina; citrulina-leucina; citrulina-valina-glicina-glicina; glicina-fenilalanina-glicina- glicina; valina; prolina; leucina ou isoleucina.
[00254] Em outra forma de realização, R11 é qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0070
Figure img0071
Em algumas formas de realização R47 é qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0072
Figure img0073
em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e g é um inteiro de 2 a 6.
[00255] Em outra forma de realização a auristatina é um composto de Fórmula (X):
Figure img0074
(X) em que: cada de R31 e R32 independentemente é hidrogênio ou C1-8 alquila e no máximo um de R31 e R32 é hidrogênio; R33 é hidrogênio, C1-8 alquila, C3-8 carbociclo, C6-10 arila, C1-8 alquil-C6-10 arila, X1-(C3-8 carbociclo), C3-8 heterociclo ou X1-(C3-8 heterociclo); R34 é hidrogênio, C1-8 alquila, C3-8 carbociclo, C6-10 arila, X1- C6-10 arila, X1-(C3-8 carbociclo), C3-8 heterociclo ou X1-(C3-8 heterociclo); R35 é hidrogênio ou metila; ou R34 e R35, juntos com o átomo de carbono aos quais eles se unem formam um carbocíclico anel tendo a fórmula-(CR55R41)b- em que cada de R55 e R41 independentemente é hidrogênio ou C1-8 alquila e b é um inteiro de 3 a 7; R36 é hidrogênio ou C1-8 alquila; R37 é hidrogênio, C1-8 alquila, C3-8 carbociclo, C6-10 arila,-X1- C6-10 arila,-X1-(C3-8 carbociclo), C3-8 heterociclo ou-X1-(C3-8 heterociclo); cada R38 independentemente é hidrogênio, OH, C1-8 alquila, C3-8 carbociclo ou O-(C1-8 alquila); R53 é:
Figure img0075
R39 ou R54 R39 é H, C1-8 alquila, C6-10 arila,-X1-C6-10 arila, C3-8 carbociclo, C3-8 heterociclo,-X1-C3-8 heterociclo,-C1-8 alquileno-NH2, ou (CH2)2SCH3 cada X1 independentemente é C1-10 alquileno ou C3-10 cicloalquileno; R44 é hidrogênio ou C1-8 alquila; R45 é X3-R42 ou NH-R19; X3 é O ou S; R19 é hidrogênio, OH, grupo alquil amino ou-[C(R20R21)]a-R22; R42 é um grupo amino, C1-6 alquil amino ou-[C(R20R21)]a-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, C6-10 arila poli-hidroxilada, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NHR23,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; R54 é -C(R56)2--C(R56)2-C6-10 arila,-C(R56)2--C(R56)2-C3-8 heterociclo ou-C(R56)2--C(R56)2-C3-8 carbociclo; R56 é independentemente selecionado from H, OH, C1-8 alquila, C3-8 carbociclo,-O-C1-8 alquila,-O-C(O)-R29 e -O-R23-O-C1-6 alquil- NH2; R29 é um grupo amino, 5 a 13 membros heterocicloalquila,-R28- C1-6 alquil-R22, R28-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R22,-[C(R20R21)]a-R22, ou-R28-C1-6 alquil-C6-12 aril-C1-6 alquil-R22; R28 está ausente, NH ou oxigênio; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12.
[00256]Em algumas formas de realização, no composto auristatina de Fórmula (X): R39 é benzila ou
Figure img0076
R44 é hidrogênio; Em uma forma de realização a auristatina de Fórmula (X) é um composto de Fórmula (XI), Formula (XII) ou Formula (XIII): em que o composto de Fórmula (XI) é:
Figure img0077
(XI) em que R42 é -CH3 ou qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0078
em que: a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3; em que o composto de Fórmula (XII) é: (XII)
Figure img0079
em que R40 é hidrogênio,-OH,-NH2, ou qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0080
Figure img0081
em que: a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3. em que o composto de Fórmula (XIII) é:
Figure img0082
em que R29 é um grupo amino, heterocicloalquila de 5 a 13 membros,-R28-C1-6 alquil-R22, R28-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R22,-R28- [C(R20R21)]a-R22, ou-R28-C1-6 alquil-C6-12 aril-C1-6 alquil-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, C6-10 arila poli-hidroxilada, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NHR23,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; R28 está ausente, NH ou oxigênio; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12.
[00257] Em uma forma de realização, em Fórmula (XII), R40 é O
Figure img0083
Em uma forma de realização in o composto de Fórmula (XIII), R29 é -NH2, heterocicloalquila de 5 membros,-R28-C1-6 alquil-R22, R28-C5-12 heterocicloalquil-C1-6 alquil-R22 ou-R28-C1-6 alquil-C6-12 aril-C1-6 alquil-R22;; R28 está ausente, NH ou oxigênio; R22 é -OH,-NHR23,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é um hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12. Em ainda outra forma de realização, R29 é qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0084
(XIV)em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e g é um inteiro de 2 a 6.
[00258] Em uma forma de realização, o inibidor de MEK é um composto de Fórmula (XIV):
Figure img0085
em que R43 é H ou-R46-R47; cada de R20 e R21 independentemente é alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, C6-10 arila heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23) ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; R46 é -C(O)-;-C(O)-O-,-C(O)-NH-, ou ausente; R47 é como definido aqui; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12. Outros exemplos do inibidor de MEK são descritos em US 7,517,994 B2.
[00259] Em algumas formas de realização R43 é -C(O)-(CH2)a-NH2, ou- C(O)-C(H)(CH3)-(CH2)c-NH2; em que a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3.
[00260] Em outra forma de realização, o composto duocarmicina é um composto de Fórmula (XV):
Figure img0086
em que: R47 é como definido aqui; R48 é hidrogênio,-COOC1-6 alquila,-COOH,-NH2 ou-CH3; R49 é Cl, Br ou -OH; R50 é hidrogênio,-OCH3,
Figure img0087
cada de R51 e R52 independentemente é hidrogênio ou-OCH3; e anel AA é ou um anel fenila ou pirrolila. Outros exemplos de compostos duocarmicina são descritos em US 7,553,816.
[00261] Em uma forma de realização o composto duocarmicina de Fórmula (XV) é um composto de Fórmula (XVI), (XVII), (XVIII) ou (XIX):
Figure img0088
Figure img0089
(XIX); em que: R49 é Cl, Br ou -OH; e R47 é como definido aqui.
[00262] Em outra forma de realização, o composto duocarmicina é um composto duocarmicina SA de Fórmula (XX): US 5101038; ou (XXI):
Figure img0090
em que: R42 é C1-6 alquil amino ou-[C(R20R21)]a-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, C6-10 arila poli-hidroxilada, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23), ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; e f é um inteiro de 1 a 12. f é um inteiro de 1 a 12.
[00263] Em algumas formas de realização, R42 é qualquer uma das seguintes estruturas:
Figure img0091
Figure img0092
em que: a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3.
[00264] Em outra forma de realização a tubulisina é um composto de em que:
Figure img0093
R57 é C1-4alquila ou-C(O)R58; R58 é C1-6alquila, CF3 ou C6-10 arila; R59 é C1-6 alquila; R60 é hidrogênio, C1-6 alquila, C2-7 alquenila,-CH2-fenila, CH2OR65 ouCH2OCOR66; R65 é hidrogênio, C1-6 alquila, C2-7 alquenila, C6-10 arila ou C(O)R67; R67 é C1-6 alquila, C2-6 alquenila, C6-10 arila ou heteroarila; R66 é C1-6alquila,-C6H5 ou-CH2-fenila; R61 é C1-6 alquila; R62 é hidrogênio, OH, O-C1-4 alquila ou O-C(O)-C1-4 alquila; R63 é hidrogênio, OH, O-C1-4 alquila, O-C(O)-C1-4 alquila, halogênio ou C1-6 alquila; e é um inteiro entre 1 e 3 inclusive; R64 é
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em que: R68 é hidrogênio ou C1-C6 alquila; R69 é CO2R70, C(O)-R78, CONHNH2, OH, NH2, SH ou grupo alquila, cicloalquila, heteroalquila ou heterocicloalquila opcionalmente substituído; R70 é um grupo alquila (isto é, C1-6 alquil amina), heteroalquila ou heterocicloalquila opcionalmente substituído; cada de R71 e R73 independentemente é hidrogênio, halo,-NO2,- CN,-NHR74, C1-6 alquila, haloalquila, alcóxi, e haloalcóxi; R72 é hidrogênio, OR43, alcóxi, halogênio,-NHR74,-O-C(O)- R47, NO2,-CN, C6-10 arila, C1-6 alquila, amino ou dialquilamino; R74 é hidrogênio,-CHO,-C(O)-C1-4 alquila, OH, grupo amino, alquil amino ou-[C(R20R21)]a-R22; R43 é H ou-R46-R47; R46 é -C(O)-;-C(O)-O-,-C(O)-NH-, ou ausente; R47 é como definido aqui; R78 é X3-R75 ou NH-R19; X3 é O ou S; R19 é hidrogênio, OH, grupo amino, alquil amino ou- [C(R20R21)]a-R22; R75 é um hidrogênio, um grupo amino, C1-6 alquil amino ou- [C(R20R21)]a-R22; cada de R20 e R21 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C6-10 arila hidroxilada, C6-10 arila poli-hidroxilada, heterociclo de 5 a 13 membros, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquila hidroxilada, C3-8 cicloalquila poli-hidroxilada ou uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R22 é -OH,-NH2,-COOH,-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)- N(H)(R23),-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23), ou-R82-(C(O)-CH(X2)- NH)d-R77 ; cada R23 independentemente é hidrogênio, C1-6 alquila, C6-10 arila, C3-8 cicloalquila,-COOH, ou -COO-C1-6 alquila; X2 é uma cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural; R77 é a hidrogênio ou X2 e NR77 formam um composto cíclico contendo nitrogênio; R82 é -NH ou oxigênio; R47 é como definido aqui; a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; d é um inteiro de 1 a 3; f é um inteiro de 1 a 12; e com a condição que quando R69 é C(O)-X3-R75 ou C(O)-NH- R19, um ou ambos de R71 e R73 são-NHR74, e R72 é OR43,-NHR74 ou -O-C(O)- R47, pelo menos um de R19, R43, R74 e R75 não pode ser hidrogênio.
[00265] Em algumas formas de realização no composto de Fórmula (XXII): R57 é -CH3; R59 é sec-butila; R60 é hidrogênio, metila, etila, propila, iso-propila ou iso- butila; R61 é iso-propila, R62 é hidrogênio; R63éhidrogênio, OH,-O-C3H7, O-C(O)-CH3; R68 é hidrogênio ou-CH3; R69 é CO2H, CO2R70 ou C(O)-R78; R70 é C1-6 alquil amina; cada de R71 e R73 independentemente é hidrogênio; R72 é hidrogênio,-OR43, OH, F,-CH3 ou-OCH3; R78 é OH,-OR75 ou-NHR40; e é o inteiro 2; R40 é hidrogênio,-OH,-NH2, ou qualquer uma das seguintes estruturas:
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Figure img0096
em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; R75 é qualquer uma das seguintes estruturas: (
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em que: a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3; R43 é hidrogênio,-C(O)-(CH2)a-NH2, ou-C(O)-C(H)(CH3)- (CH2)c-NH2; em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e R47 é qualquer uma das seguintes estruturas:
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(18) N N O O NH HN O O HN O NH2 NH O O NH 2 3 ; em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e g é um inteiro de 2 a 6; com a condição que se R72 é -OH, então R75 não pode ser hidrogênio; se R69 é COOH então R72 deve ser-OR43 ou -O-C(O)-R47.
[00266] Em algumas formas de realização, a tubulisina de Fórmula (XXII) é um composto de Fórmula (XXIII) ou (XXIV):
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(XXIV) em que: R76 é hidrogênio, OH, OCH3, F,-OR43 ou -O-C(O)-R47; em que R78, R75, R19, R47 e R43 são como definidos aqui; e com a condição que se R76 é -OH, OCH3 ou F, então R75 e R19 não podem ser hidrogênio.
[00267] Em uma forma de realização, R47 é
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Em outra forma de realização, o composto inibidor de KSP é um composto de Fórmula (XXVI):
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(XXVI) em que R30 é como definido aqui. Em algumas formas de realização R30 é:
Figure img0104
em que: a é um inteiro de 1 a 6; c é um inteiro de 0 a 3; e g é um inteiro de 2 a 6. Em outra forma de realização o composto inibidor de KSP é um composto de Fórmula (XXVII), (XXVIII) ou (XXIX):
Figure img0105
em que: R11 é como definido aqui. Um versado na técnica de agentes terapêuticos irá prontamente entender que cada um dos agentes terapêuticos descrito aqui pode ser modificado de tal modo que o composto resultante irá reter a especificidade e/ou atividade do composto original. O versado também irá entender que muitos destes compostos podem ser usados em vez dos agentes terapêuticos descritos aqui. Assim os agentes terapêuticos da presente invenção incluem análogos e derivados dos compostos descritos aqui.
[00268] Tabela B abaixo fornece mais exemplos de agentes terapêuticos e derivados dos mesmos apropriados para conjugação para formar os conjugados polímero-droga-proteína ou suportes de droga-polímero da invenção. Dados espectrais de alguns compostos são também dados (ND na tabela significa “não determinado”). Estes exemplos também podem ser a forma ativa da droga quando ela é liberada dos conjugados in vitro ou in vivo. Tabela B
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Molécula de reconhecimento com base em proteína (PBRMs)
[00269] A molécula de reconhecimento com base em proteína dirige os conjugados droga-carreador de polímero para tecidos, células ou locais específicos em uma célula. A molécula de reconhecimento com base em proteína pode dirigir o polímero modificado em cultura ou em um organismo completo, ou ambos. Em cada caso, a molécula de reconhecimento com base em proteína tem um ligando que está presente sobre a superfície da célula(s) marcada(s) no alvo às quais ele liga como uma especificidade, afinidade e avidez específicas. Em algumas formas de realização, a molécula de reconhecimento com base em proteína alvo-marca o polímero modificado para tecidos diferentes do fígado. Em outras formas de realização a molécula de reconhecimento com base em proteína alvo-marca o polímero modificado a um tecido específico como o fígado, rim, pulmão ou pâncreas. A molécula de reconhecimento com base em proteína pode marcar no alvo o polímero modificado para a célula alvo como uma célula de câncer, como um receptor expressado em uma célula como uma célula de câncer, tecido de matriz ou proteína associada com câncer, como antígeno de tumor. Alternativamente, as células compreendendo a vasculatura do tumor podem ser marcadas no alvo. Molécula de reconhecimento com base em proteína pode dirigir o polímero para tipos específicos de células como marcando no alvo de modo específico hepatócitos no fígado como oposto a células Kupffer. Em outros casos, molécula de reconhecimento com base em proteína pode dirigir o polímero para as células do sistema endotelial ou linfático reticular, ou para células fagocíticas professionis, como macrófagos ou eosinófilos. (Em tais casos, o próprio polímero pode também ser um sistema de distribuição eficaz, sem a necessidade de uma marcação específica).
[00270] Em ainda outras formas de realização, a molécula de reconhecimento com base em proteína pode marcar no alvo o polímero modificado para um local dentro da célula, como o núcleo, o citoplasma, ou o endossoma, por exemplo. Em formas de realização específicas, a molécula de reconhecimento com base em proteína pode melhorar a ligação celular para receptores, ou transporte citoplásmico para o núcleo e entrada do núcleo ou liberação de endossomas ou outras vesículas intracelulares.
[00271] Em formas de realização específicas as moléculas de reconhecimento com base em proteínas incluem anticorpos, proteínas e peptídeos ou miméticos de peptídeo.
[00272] Exemplares anticorpos ou anticorpos derivados de Fab, Fab2, scFv ou fragmentos de cadeia pesada de anticorpo de camelos específicos para os marcadores de superfície de células, incluem, mas não são limitados a, 5T4, AOC3, C242, CA-125, CCL11, CCR 5, CD2, CD3, CD4, CD5, CD15, CD18, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD28, CD30, CD31, CD33, CD37, CD38, CD40, CD41, CD44, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD74, CD80, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD 154, CD326, CEA, fator de agrupamento, CTLA-4, EGFR, ErbB2, ErbB3, EpCAM, receptor de folato, FAP, GD2, GD3, GPNMB, HGF, HER2, ICAM, receptor IGF-1, VEGFR1, EphA2, TRPV1, CFTR, gpNMB, CA9, Cripto, ACE, APP, receptor-beta2 adrenérgico, Claudine 3, Mesotelina, receptor IL-2, receptor IL-4, receptor IL-13, integrinas (incluindo α4, αvβ3, α vβ5, αvβ6, αiβ4, α4βi, α4β7, α5βi, α6β4, απbβ3 integrinas), IFN-α, IFN-y, IgE, IgE, receptor IGF-1, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, receptor de interferon, ITGB2 (CD18), LFA-1 (CD11a), L-selectina (CD62L), mucina, MUC1, miostatina, NCA-90, NGF, PDGFRα, fosfatidilserina, célula de carcinoma da próstata, Pseudomonas aeruginosa, raiva, RANKL, vírus sincicial respiratório, fator, SLAMF7, esfingosina-1- fosfato, TAG-72, receptor de célula T, tenascina C, TGF-1, TGF-β2, TGF-β, TNF-α, TRAIL- R1, TRAIL-R2, antígeno de tumor CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR2, vimentina, e similares.
[00273] Em uma forma de realização os anticorpos ou derivados de anticorpo de Fab, Fab2, scFv ou fragmentos de cadeia pesada de anticorpo de camelos específicos para os marcadores de superfície de célula incluem CA- 125, C242, CD3, CD19, CD22, CD25, CD30, CD31, CD33, CD37, CD40, CD44, CD51, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD138, CD141, CD326, CEA, CTLA-4, EGFR, ErbB2, ErbB3, FAP, receptor de folato, receptor IGF-1, GD3, GPNMB, HGF, HER2, VEGF-A, VEGFR2, VEGFR1, EphA2, EpCAM, 5T4, TAG-72, tenascina C, TRPV1, CFTR, gpNMB, CA9, Cripto, ACE, APP, PDGFR α, fosfatidil serina, células de carcinoma da próstata, receptor-beta2 adrenérgico, Claudine 3, mucina, MUC1, Mesotelina, receptor IL-2, receptor IL-4, receptor IL-13 e integrinas (incluindo αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α5β1, α6β4 integrinas), tenascina C, TRAIL-R2 e vimentina.
[00274] Exemplares anticorpos incluem 3F8, abagovomab, abciximab (REOPRO), adalimumab (HUMIRA), adecatumumab, afelimomab, afutuzumab, alacizumab, ALD518, alemtuzumab (CAMPATH), altumomab, amatuximab, anatumomab, anrukinzumab, apolizumab, arcitumomab (CEA- SCAN), aselizumab, atlizumab (tocilizumab, Actemra, RoActemra), atorolimumab, bapineuzumab, basiliximab (Simulect), bavituximab, bectumomab (LYMPHOSCAN), belimumab (BENLYSTA), benralizumab, bertilimumab, besilesomab (SCINITIMUN), bevacizumab (AVASTIN), biciromab (FIBRISCINT), bivatuzumab, blinatumomab, brentuximab, briakinumab, canakinumab (ILARIS), cantuzumab, capromab, catumaxomab (REMOVAB), CC49, cedelizumab, certolizumab, cetuximab (ERBITUX), citatuzumab , cixutumumab, clenoliximab, clivatuzumab, conatumumab, CR6261, dacetuzumab, daclizumab (ZENAPAX), daratumumab, denosumab (PROLIA), detumomab, dorlimomab , dorlixizumab, ecromeximab, eculizumab (SOLIRIS), edobacomab, edrecolomab (PANOREX), efalizumab (RAPTIVA), efungumab (MYCOGRAB), elotuzumab, elsilimomab, enlimomab, epitumomab , epratuzumab, erlizumab, ertumaxomab (REXOMUN), etaracizumab (ABEGRIN), exbivirumab, fanolesomab (NEUTROSPEC), faralimomab, farletuzumab, felvizumab, fezakinumab, figitumumab, fontolizumab (HuZAF), foravirumab, fresolimumab, galiximab, gantenerumab, gavilimomab, gemtuzumab girentuximab, glembatumumab, golimumab (SIMPONI), gomiliximab, ibalizumab, ibritumomab, igovomab (INDIMACIS-125), imciromab (MYOSCINT), infliximab (REMICADE), intetumumab, inolimomab, inotuzumab, ipilimumab, iratumumab, keliximab, labetuzumab (CEA-CIDE), lebrikizumab, lemalesomab, lerdelimumab, lexatumumab, libivirumab, lintuzumab, lucatumumab, lumiliximab, mapatumumab, maslimomab, matuzumab, mepolizumab (BOSATRIA), metelimumab, milatuzumab, minretumomab, mitumomab, morolimumab, motavizumab (NUMAX), muromonab-CD3 (ORTHOCLONE OKT3), nacolomab, naptumomab, natalizumab (TYSABRI), nebacumab, necitumumab, nerelimomab, nimotuzumab (THERACIM), nofetumomab, ocrelizumab, odulimomab, ofatumumab (ARZERRA), olaratumab, omalizumab (XOLAIR), ontecizumab, oportuzumab, oregovomab (OVAREX), otelixizumab, pagibaximab, palivizumab (SYNAGIS), panitumumab (VECTIBIX), panobacumab, pascolizumab, pemtumomab (THERAGYN), pertuzumab (OMNITARG), pexelizumab, pintumomab, priliximab, pritumumab, PRO 140, rafivirumab, ramucirumab, ranibizumab (LUCENTIS), raxibacumab, regavirumab, reslizumab, rilotumumab, rituximab (RITUXAN), robatumumab, rontalizumab, rovelizumab (LEUKARREST), ruplizumab (ANTOVA), satumomab pendetide, sevirumab, sibrotuzumab, sifalimumab, siltuximab, siplizumab, solanezumab, sonepcizumab, sontuzumab, stamulumab, sulesomab (LEUKOSCAN), tacatuzumab (AFP-CIDE), tetraxetan, tadocizumab, talizumab, tanezumab, taplitumomab paptox, tefibazumab (AUREXIS), telimomab, tenatumomab, teneliximab, teplizumab, TGN1412, ticilimumab (tremelimumab), tigatuzumab, TNX-650, tocilizumab (atlizumab, ACTEMRA), toralizumab, tositumomab (BEXXAR), trastuzumab (HERCEPTIN), tremelimumab, tucotuzumab, tuvirumab, urtoxazumab, ustekinumab (STELERA), vapaliximab, vedolizumab, veltuzumab, vepalimomab, visilizumab (NUVION), volociximab (HUMASPECT), votumumab, zalutumumab (HuMEX-EGFr), zanolimumab (HuMAX-CD4), ziralimumab e zolimomab.
[00275] Em algumas formas de realização os anticorpos são dirigidos para os marcadores de superfície celular para 5T4, CA-125, CEA, CD3, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD40, CD44, CD51, CTLA-4, EpCAM, HER2, EGFR, FAP, receptor de folato, HGF, integrina αvβ3, integrina α5β1, IGF-1 receptor, GD3, GPNMB, mucina, MUC1, fosfatidilserina, células de carcinoma da próstata, PDGFR α, TAG-72, tenascina C, TRAIL-R2, VEGF- A e VEGFR2. Nesta forma de realização os anticorpos são abagovomab, adecatumumab, alacizumab, altumomab, anatumomab, arcitumomab, bavituximab, bevacizumab (AVASTIN), bivatuzumab, blinatumomab, brentuximab, cantuzumab, catumaxomab, capromab , cetuximab, citatuzumab, clivatuzumab, conatumumab, dacetuzumab, edrecolomab, epratuzumab, ertumaxomab, etaracizumab, farletuzumab, figitumumab, gemtuzumab, glembatumumab, ibritumomab, igovomab, intetumumab, inotuzumab, labetuzumab, lexatumumab, lintuzumab, lucatumumab, matuzumab, mitumomab, naptumomab estafenatox, necitumumab, oportuzumab, oregovomab, panitumumab, pemtumomab, pertuzumab, pritumumab, rituximab (RITUXAN), rilotumumab, robatumumab, satumomab, sibrotuzumab, taplitumomab , tenatumomab, tenatumomab, ticilimumab (tremelimumab), tigatuzumab, trastuzumab (HERCEPTIN), tositumomab, tremelimumab, tucotuzumab celmoleukin, volociximab e zalutumumab.
[00276] Em formas de realização específicas os anticorpos dirigidos para os marcadores de superfície celular para HER2 são pertuzumab ou trastuzumab e para EGFR o anticorpo é cetuximab e para CD20 o anticorpo é rituximab e para VEGF-A é bevacizumab e para CD-22 o anticorpo é epratuzumab ou veltuzumab e para CEA o anticorpo é labetuzumab.
[00277] Exemplares peptídeos ou miméticos de peptídeo incluem peptídeos marcando no alvo integrina (peptídeos RGD), peptídeos marcando no alvo receptor de LHRH, peptídeos marcando no alvo receptor de ErbB2 (HER2), peptídeos marcando no alvo antígeno ligado a membrana específico da próstata (PSMA), lipoproteína marcando no alvo receptor de LRP1, peptídeos derivados de proteína ApoE, peptídeos de proteína ApoA, peptídeos marcando no alvo receptor de somatostatina, peptídeos derivados de clorotoxina, e bombesina.
[00278] Em formas de realização específicas os peptídeos ou miméticos de peptídeo são peptídeos marcando no alvo receptor de LHRH e peptídeos marcando no alvo receptor de ErbB2 (HER2)
[00279] Exemplares proteínas compreendem insulina, transferrina, fragment gama-fibrinogênio, trombospondina, claudina, apolipoproteína E, moléculas Affibody como, por exemplo, ABY-025, proteínas de repetição de Ankyrina, proteínas de repetição de tipo ankyrina e peptídeos sintéticos.
[00280] Em algumas formas de realização da invenção os conjugados proteína-droga-polímero compreendem citotoxinas de largo espectro em combinação com marcadores da superfície celular para HER2 como pertuzumab ou trastuzumab; para EGFR como cetuximab; para CEA como labetuzumab; para CD20 como rituximab; para VEGF-A como bevacizumab; ou para CD-22 como epratuzumab ou veltuzumab.
[00281] Em outras formas de realização da invenção os conjugados proteína-droga-polímero ou conjugados proteína-polímero usados na invenção compreendem combinações de duas ou mais moléculas de reconhecimento com base em proteínas, como, por exemplo, combinação de anticorpos biespecíficos dirigidos para o receptor EGF (EGFR) em células de tumor e para CD3 e CD28 em células T; combinação de anticorpos ou derivados de anticorpo a partir de Fab, Fab2, scFv ou fragmentos de cadeia pesada de anticorpo de camelo e peptídeos ou miméticos de peptídeo; combinação de anticorpos ou derivados de anticorpo de Fab, Fab2, scFv ou fragmentos de cadeia pesada de anticorpo de camelo e proteínas; combinação de dois anticorpos biespecíficos como CD3 x CD19 plus anticorpos bi-específicos CD28 x CD22.
[00282] Tabela C abaixo apresenta mais exemplos das PBRMs descritas aqui, que são apropriadas para conjugação para formar os conjugados polímero-droga-proteína ou suportes de proteína- PBRM da invenção. Tabela C
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Figure img0113
[00283] Como descrito acima, a droga ou PBRM é conectada ao carreador polimérico via um ligante LD ou LP. Em algumas formas de realização, o ligante é bioclivável/biodegradável sob condições intracelulares, de modo que a clivagem do ligante libere a droga ou PBRM da unidade do polímero no ambiente intracelular.
[00284] O ligante é qualquer porção química que é capaz de ligar uma droga ou a PBRM a uma estrutura dorsal do polímero através de ligações químicas de modo que a droga ou PBRM e o polímero sejam quimicamente acoplados (por exemplo, covalentemente ligados )a cada outro. Em algumas formas de realização, o ligante compreende uma porção de ligante biodegradável (por exemplo, uma ligação biodegradável como uma ligação amida ou éster). Em outras formas de realização, o ligante LD ou LP é biodegradável sob condições suaves, isto é, condições dentro de uma célula sobre a qual a atividade da droga não é afetada. Exemplos de porção de ligante biodegradável apropriada incluem ligantes dissulfeto, ligantes lábeis em ácido, ligantes fotolábeis, ligantes lábeis em peptidase, e ligantes lábeis em esterase.
[00285] Em algumas formas de realização, o ligante LD ou LP é bioclivável sob condições de redução (por exemplo, um ligante dissulfeto). Nesta forma de realização a droga ou porção de PBRM é ligado ao polímero através de uma ligação dissulfeto. O ligante molécula compreende um grupo químico reativo que pode reagir com a droga. Os grupos químicos reativos preferidos para a reação com a droga ou porção de PBRM são N-sucinimidil ésteres e N-sulfossucinimidil ésteres. Além disso, a molécula de ligante compreende um grupo químico reativo, preferivelmente um grupo ditiopiridila que pode reagir com a droga para formar a ligação dissulfeto. Em algumas formas de realização as moléculas de ligante incluem, por exemplo, N-sucinimidila 3-(2-piridilditio)propionato (SPDP), N-sucinimidila 4-(2- piridilditio)butanoato (SPDB), N-sucinimidila 4-(2-piridilditio)pentanoato (SPP), N-sucinimidila-S-acetiltioacetato (SATA) e N-sucinimidila- oxicarbonil-alfa-metil-alfa-(2-piridil-ditio)tolueno ou 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-(1-(piridin-2-ildisulfanil)etil)benzoato (SMPT).
[00286] Em outras formas de realização, o ligante bioclivável LD ou LP é sensível ao pH-, isto é, sensível à hidrólise em alguns valores de pH. Tipicamente, o ligante sensível a pH é hidrolisável sob condições ácidas. Por exemplo, um rótulo em ácido ligante que é hidrolisável no lisossoma ou endossoma (por exemplo, uma hidrazona, semicarbazona, tiosemicarbazona, cis-aconitic amida, ortoéster, acetal, cetal, ou similares) pode ser usado. Estes ligantes são relativamente estáveis sob condições de pH neutro, como os no sangue, mas são instáveis abaixo pH 5,5 ou 5,0, o pH aproximado do lisosoma. Em determinadas formas de realização, o ligante hidrolisável é ligante de tioéter (como, por exemplo, um tioéter unido ao agente terapêutico via uma ligação acil hidrazona.
[00287] Em outras formas de realização o ligante LD ou LP é foto-lábil e é utilizável na superfície do corpo e em muitas cavidades do corpo que são acessíveis à luz. Além disso, LD ou LP é bioclivável por luz infravermelho que pode penetrar no tecido. Assim, LD ou LP é utilizável para ambas as aplicações na superfície do corpo e no tecido.
[00288] Em algumas formas de realização, o ligante LD ou LP é bioclivável por um agente de clivável que está presente no ambiente intracelular (por exemplo, dentro de um lisosoma ou endossoma ou caveolea). O ligante pode ser, por exemplo, um ligante de peptidila que é clivado por uma enzima peptidase ou protease intracelular, incluindo, mas não limitada, a protease lisossomal ou endossomal.
[00289] Em algumas formas de realização o ligante LD ou LP é clivado por esterases. Somente alguns ésteres podem clivados por esterases presentes dentro ou fora das células. Os ésteres são formados pela condensação de um ácido carboxílico e um álcool. Os ésteres simples são ésteres produzidos com alcoóis simples, como alcoóis alifáticos e alcoóis cíclicos pequenos e aromáticos pequenos.
[00290] Em ainda outras formas de realização, o ligante LD ou LP não é bioclivável e a droga é liberada por degradação do anticorpo. Ver, por exemplo, Patente US 7.498.298, que é incorporada aqui por referência em sua totalidade e para todos os fins.
[00291] Tipicamente, o ligante LD ou LP não é substancialmente sensível ao ambiente extracelular. Como usado aqui, “não é substancialmente sensível ao ambiente extracelular,” no contexto de um ligante, significa que não mais do que cerca de 20%, tipicamente não mais do que cerca de 15%, mais tipicamente não mais do que cerca de 10%, e ainda mais tipicamente não mais do que cerca de 5%, não mais do que cerca de 3%, ou não mais do que cerca de 1% dos ligantes em uma amostra do conjugado polímero-droga, são clivados quando os conjugados polímero-droga presentes em um ambiente extracelular (por exemplo, em plasma) durante 24 Horas. Se um ligante não é substancialmente sensível ao ambiente extracelular pode ser determinado, por exemplo, incubando o conjugado polímero-droga com plasma durante um período de tempo predeterminado (por exemplo, 2, 4, 8, 16, ou 24 horas) e então quantificando a quantidade de droga livre presente no plasma.
[00292] Em formas de realização, o ligante LD tem uma estrutura: -RL1-C(=O)-XD-MD1-YD-MD2-ZD-MD3-QD-MD4-, com RL1 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e MD4 conectado à molécula da droga a ser distribuída.
[00293] Em formas de realização, o ligante LP tem a estrutura: LP é um ligante tendo a estrutura:-RL2-C(=O)-XP-MP1-YP-MP2- ZP-MP3-QP-MP4-, com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e MP4 conectado a PBRM.
[00294] Por exemplo, cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, heterocicloalquila, arila, ou heteroarila.
[00295] Por exemplo, cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, cicloalquila, heteroalquila, ou heterocicloalquila.
[00296] Por exemplo, RL1 está ausente.
[00297] Por exemplo, RL2 está ausente.
[00298] Por exemplo, cada de XD e XP, independentemente é -O-,-S-,- N(R1)-, ou ausente, em que R1 é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila,-C(=O)R1B,-C(=O)OR1B,- SO2R1B ou-N(R1)- é uma porção heterocicloalquila, em que R1B é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[00299] Por exemplo, cada de YD, YP, ZD, ZP, QD, e QP, independentemente, está ausente ou uma porção de ligante biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de-S-S-,-C(=O)O-, - C(=O)NR2-,-OC(=O)-,-NR2C(=O)-,-OC(=O)O-,-OC(=O)NR2-, 2 2 3 2 2 23 - NR C(=O)O-,-NR C(=O)NR -,-C(OR )O-,-C(OR )S-,-C(OR )NR -, 2 2 2 3 23 23 - C(SR )O-,-C(SR )S-,-C(SR )NR -,-C(NR R )O-,-C(NR R )S-, -C(NR2R3)NR4-,-C(=O)S-,-SC(=O)-,-SC(=O)S-,-OC(=O)S-,-SC(=O)O-,- C(=S)S-,-SC(=S)-,-OC(=S)-,-C(=S)O-,-SC(=S)O-,-OC(=S)S-, -OC(=S)O-,-SC(=S)S-,-C(=NR2)O-,-C(=NR2)S-,-C(=NR2)NR3-, 2 2 3 2 2 23 - OC(=NR )-,-SC(=NR )-,-NR C(=NR )-,-NR SO2-,-NR NR -, 23 23 23 23 - C(=O)NR NR -,-NR NR C(=O)-,-OC(=O)NR NR -,-NR NR C(=O)O-, 23 23 4 23 23 4 - C(=S)NR NR -,-NR NR C(=S)-,-C(=NR )NR NR -,-NR NR C(=NR )-, -O(N=CR3)-,-(CR3=N)O-,-C(=O)NR2-(N=CR3)-,-(CR3=N)-NR2C(=O)-, -SO3-,-NR2SO2NR3-,-SO2NR2-, e poliamida, em que cada ocorrência de R2, R3, e R4 independentemente é hidrogênio ou uma porção alifática, heteroalifática, carbocíclica, ou heterocíclica, ou cada ocorrência de-NR2- ou- NR2NR3- é uma porção heterocicloalquila . D1 D2 D3 D4 P1 P2 P3
[00300] Por exemplo, cada de M , M , M , M , M , M , M e MP4, independentemente, está ausente ou uma porção de ligante não biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo de alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, heterocicloalquila, arila, heteroarila, e uma combinação das mesmas e cada de MD1, MD2, MD3, MP1, MP2, e MP3 opcionalmente contém um ou mais-(C=O)- mas não contém qualquer uma das porções do ligante biodegradável acima mencionadas. D1 D2 D3 D4 P1 P2 P3
[00301] Por exemplo, cada de M , M , M , M , M , M , M e MP4, independentemente é C1-6 alquila, C1-6 alquil-C(O)-C0-6 alquila, C1-6 alquil-NH-C0-6 alquila, C1-6 alquil-O-C0-6 alquila, C1-6 alquil-S-C0-6 alquila, C16 alquil-C(O)-C1-6 alquil-NH, C1-6 alquil-C(O)-C1-6 alquil-O, C1-6 alquil-C(O)- C1-6 alquil-S, C3-10 cicloalquil-C(O)-C0-6 alquila, heterocicloalquil-C(O)-C0-6 alquila de 3-19 membros, aril-C(O)-C0-6 alquila, (CH2CH2O)1-12, e similares.
[00302] Por exemplo, para cada LD, MD1 não está ausente quando XD está ausente.
[00303] Por exemplo, para cada LP, MP1 não está ausente quando XP está ausente.
[00304] Por exemplo, para cada LD, pelo menos um de XD, YD, ZD, e QD não está ausente.
[00305] Por exemplo, para cada LP, pelo menos um de XP, YP, ZP, e QP não está ausente.
[00306] Por exemplo, cada de MD1 e MP1 independentemente é C1-6 alquila ou C1-6 heteroalquila. D2 D3 D4 P2 P3 P4
[00307] Por exemplo, cada de M , M , M , M , M , e M , independentemente está ausente, C1-6 alquila, cicloalquila, heteroalquila, heterocicloalquila, ou uma combinação das mesmas.
[00308] Por exemplo, para cada LD, no máximo dois de MD2, MD3, e MD4 está ausente.
[00309] Por exemplo, para cada LP, no máximo dois de MP2, MP3, e MP4 está ausente.
[00310] Por exemplo, para cada LD, um de MD2 e MD3 tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0114
Figure img0115
em que q é um inteiro de 0 a 12 e cada de p e t independentemente é um inteiro de 0 a 3, e o outro de MD2 ou MD3 ou está ausente ou uma porção diferente da acima, como C1-6 alquila.
[00311] Por exemplo, para cada LP, um de MP2 e MP3 tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0116
Figure img0117
em que q é um inteiro de 0 to12 e cada de p e t independentemente é um inteiro de 0 a 3, e o outro de MP2 ou MP3 está ou ausente ou uma porção diferente da acima, como C1-6 alquila.
[00312] Por exemplo, p é 2.
[00313] Por exemplo, q é 0 ou 12.
[00314] Por exemplo, t é 0 ou 1.
[00315] Por exemplo, cada de-MD2-ZD-,-ZD-MD3-,-ZD-MD2-, ou-MD3- ZD-, independentemente tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0118
Figure img0119
[00316] =em que anel A ou B independentemente é cicloalquila ou heterocicloalquila; RW é uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila; e anel D é heterocicloalquila.
[00317] Por exemplo, cada de-MP2-ZP-,-ZP-MP3-,-ZP-MP2-, e -MP3-ZP- independentemente, tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0120
em que anel A é cicloalquila ou heterocicloalquila e R1J é hidrogênio, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila.
[00318] Por exemplo, anel A é heterocicloalquila5 a 19 membros, por exemplo,
Figure img0121
Por exemplo, anel A é C3-8 cicloalquila. Por exemplo, anel D é piperazinila ou piperidinila. Por exemplo, RW é C1-6 alquila. Por exemplo, R1J é hidrogênio ou C1-6 alquila. Por exemplo, ZD é
Figure img0122
Por exemplo, ZP é
Figure img0123
[00319] Por exemplo, XD está ausente, O ou NH.
[00320] Por exemplo, XP está ausente, O ou NH.
[00321] Por exemplo, cada de XD e XP, independentemente é
Figure img0124
[00322] Por exemplo, cada de YD e YP independentemente é -S-S-, -OCO-,-COO-,-CONH- Ou -NHCO-.
[00323] POr exemplO, cada de QD e QP independentemente está ausente,-S-S-,-OCO-,-COO-,-CONH-,-NHCO-,-OCONHNH-, Ou -NHNHCOO-.
[00324] POr exemplO,-LD-D pOde ter uma das seguintes estruturas abaixO, em que a ligaçãO Ondulada indica que D (istO é, DrOga) é Ou cOnectada aO ligante funciOnal diretamente Ou via Outra pOrçãO:
Figure img0125
Figure img0126
Figure img0127
Figure img0128
em que R80 é CH2,-NH, ou oxigênio; e R82 é -NH ou oxigênio.
[00325] Por exemplo, carreador polimérico-LP-PBRM pode ter uma das seguintes estruturas abaixo:
Figure img0129
Figure img0130
Figure img0131
em que: R80 é CH2, NH ou oxigênio;R81 é
Figure img0132
Embora ligantes biocliváveis preferivelmente são usados na invenção, um ligante não bioclivável também pode ser usado para gerar o acima-descrito conjugado. Um ligante não bioclivável é qualquer porção química que é capaz de ligar uma droga ou PBRM, a um polímero em um modo estável covalente. Assim, ligantes não biocliváveis são substancialmente resistentes clivagem induzida por ácido, clivagem induzida por luz,-clivagem induzida por peptidase,-clivagem induzida por esterase, e/ou clivagem de ligação dissulfeto, em condições sob as quais a droga ou polímero permanece ativa(o).
[00326] Em uma forma de realização, uma quantidade substancial da porção de droga não é clivada a partir do conjugado até o conjugado proteína- polímero-droga entrar em uma célula com um receptor de superfície celular específico para a PBRM do conjugado proteína-polímero-droga, e a porção de droga é clivada do conjugado proteína-polímero-droga quando o conjugado proteína-polímero-droga não entra na célula.
[00327] Em outra forma de realização, a biodisponibilidade do conjugado proteína-polímero-droga ou um metabólito intracelular do conjugado proteína-polímero-droga em um indivíduo é melhorada quando comparada a um composto de droga ou conjugado compreendendo a porção de droga do conjugado proteína-polímero-droga, ou quando comparado a um análogo do composto não tendo a porção de droga.
[00328] Em outra forma de realização, a porção de droga é intracelularmente clivada em um indivíduo a partir do conjugado proteína- polímero-droga, ou um metabólito intracelular do conjugado proteína- polímero-droga. Conjugados ou suportes poliméricos
[00329] Conjugados da invenção compreendem uma ou mais ocorrências de D, onde D é um agente terapêutico, por exemplo, uma droga, em que a uma ou mais ocorrências de D podem ser iguais ou diferentes.
[00330] Em outras determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de PBRM são unidas ao carreador polimérico, em que a uma ou mais ocorrências de PBRM podem ser iguais ou diferentes. Em outras determinadas formas de realização, um ou mais carreadores de polímero que contém uma ou mais ocorrências de D são conectados a uma PBRM (por exemplo, um anticorpo).
[00331] Como discutido mais geralmente acima, em determinadas formas de realização, cada carreador polimérico independentemente, tem cerca de 0,1 a cerca de 25 % monômeros compreendendo um D, mais preferivelmente cerca de 0,5 a cerca de 20%, mais preferivelmente cerca de 1 a cerca de 15%, e ainda mais preferivelmente cerca de 2 a cerca de 10%.
[00332] Em determinadas formas de realização, o conjugado desta
Figure img0133
(I), em que: cada de n, n1, n2, n3, e n4, é a fração molar da unidade de polímero correspondente na faixa entre 0 e 1; n + n1 + n2 + n3 + n4 = 1; desde que nenhum de n, n2, e n4 é 0.
[00333] Por exemplo, a razão entre n2 e n4 é maior do que 1:1 e <200:1.
[00334] Por exemplo, a razão entre n2 e n4 é entre 10:1 e 50:1.
[00335] Por exemplo, a razão entre n2 e n4 é entre 30:1 e 50:1.
[00336] Por exemplo, a razão entre n2 e n4 é cerca de 50:1, 25: 1, 10:1, 5:1 ou 2:1.
[00337] Em determinadas formas de realização, os conjugados são formados em várias etapas. Estas e etapas incluem (1) modificar um polímero de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da droga ou seu derivado; (2) reagir o polímero modificado com a droga ou seu derivado de modo que a droga seja ligada ao polímero; (3) modificar o conjugado polímero-droga de modo que o polímero contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado; e (4) reagir o conjugado polímero-droga modificado com a PBRM ou seu derivado para formar o conjugado desta invenção. A etapa (3) pode ser omitida se o polímero modificado produzido por etapa (1) contém um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado.
[00338] Em outra forma de realização os conjugados são formados em várias etapas: (1) modificar um polímero de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional de uma primeira droga ou seu derivado; (2) reagir o modificado polímero com a primeira droga ou seu derivado de modo que a primeira droga seja ligada ao polímero; (3) modificar o conjugado polímero-droga de modo que ele contenha um grupo funcional diferente que pode reagir com um grupo funcional de uma segunda droga ou seu derivado (4) reagir o conjugado polímero-droga modificado com a segunda droga ou seu derivado de modo que a segunda droga é ligada ao conjugado polímero-droga; (5) modificar o conjugado polímero-droga contendo 2 drogas diferentes de modo que o polímero contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado; e (6) reagir o conjugado polímero-droga modificado da etapa (5) com a PBRM ou seu derivado para formar o conjugado desta invenção. As etapas (5) e (6) podem ser repetidas se 2 diferentes PBRM ou seus derivados devem ser conjugados para formar um conjugado polímero-droga compreendendo duas drogas diferentes e duas diferentes PBRMs.
[00339] Em ainda outra forma de realização, os conjugados são formados em várias etapas. Estas etapas incluem (1) modificar um polímero de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da droga ou seu derivado; (2) ainda modificar o polímero de modo que ele também contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado; (3) reagir o polímero modificado com a droga ou seu derivado de modo que a droga seja ligada ao polímero; e (4) reagir o conjugado polímero-droga modificado com a PBRM ou seu derivado para formar o conjugado desta invenção. A sequência de etapas (1) e (2) ou das etapas (3) e (4) pode ser revertida. Ainda mais ou a etapa (1) ou (2) pode ser omitida se o polímero modificado contém um grupo funcional que pode reagir com ambos um grupo funcional da droga ou seus derivados e um grupo funcional da PBRM ou seu derivado.
[00340] Em outra forma de realização os conjugados são formados em várias etapas: (1) modificar um polímero de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional de uma primeira droga ou seu derivado; (2) ainda modificar um polímero de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado; (3) reagir o polímero modificado com a primeira droga ou seu derivado de modo que a primeira droga seja ligada ao polímero; (4) modificar o conjugado polímero-droga de modo que ele contenha um grupo funcional diferente que pode reagir com um grupo funcional de uma segunda droga ou seu derivado (5) reagir o modificado conjugado polímero-droga com o segunda droga ou seu derivado de modo que a segunda droga seja ligada ao conjugado polímero-droga; (6) reagir o conjugado polímero-droga modificado contendo 2 drogas diferentes de modo que o polímero com a PBRM ou seu derivado forme o conjugado desta invenção. A etapa (6) pode ser repetida se 2 PBRM diferentes ou seu derivados devem ser conjugados para formar um conjugado polímero-droga compreendendo duas drogas diferentes e duas PBRMs diferentes. Etapa (4) pode realizada após a etapa (1) de modo que o polímero modificado contenha dois grupos funcionais diferentes que pode reagir com duas drogas diferentes ou seus derivados. Nesta forma de realização, o polímero modificado contendo dois diferentes grupos funcionais que podem reagir com duas drogas diferentes ou seus derivados pode ser ainda modificado de modo que ele contenha um grupo funcional que pode reagir com um grupo funcional da PBRM ou seu derivado; antes da reação do polímero modificado com um dos duas drogas diferentes (etapa (3) e etapa (5) ou PBRM (etapa (6).
[00341] Os conjugados biodegradáveis biocompatíveis da invenção podem ser preparados para atender às exigências de biodegradabilidade e hidrofilicidade. Por exemplo, sob condições fisiológicas, um equilíbrio entre biodegradabilidade e estabilidade pode ser alcançado. Por exemplo, sabe-se que as moléculas com pesos moleculares além de um certo limiar (geralmente, acima 40-100 kDa, dependendo do formato físico da molécula) não são excretadas através dos rins, como o são as moléculas pequenas, e podem ser depuradas do corpo somente através de absorção pelas células degradação em compartimentos intracelulares, o mais notavelmente os lisossomas. Esta observação exemplificada como os materiais funcionalmente estáveis e ainda biodegradáveis podem ser projetados por modulação de sua estabilidade sob condições fisiológicas gerais (pH=7,5±0,5) e em pH lisossomal (pH próximo de 5). Por exemplo, a hidrólise de grupos acetal e cetal é conhecida como sendo catalisada por ácidos, assim os poliais serão em geral menos estáveis em ambiente lisossomal do que, por exemplo, em plasma sanguíneo. Pode-se projetar um teste para comparar o perfil de degradação do polímero em, por exemplo, pH=5 e pH=7,5 a 37oC em meio aquoso e, assim, determinar o equilíbrio esperado da estabilidade do polímero em um ambiente fisiológico normal e no compartimento lisossomal “digestivo” após a absorção pelas células. A integridade do polímero em tais testes pode ser medida, por exemplo, por HPLC de exclusão de tamanho. Um versado na técnica pode selecionar outros métodos apropriados para estudar os vários fragmentos dos conjugados degradados desta invenção.
[00342] Em muitos casos, será preferível que a pH=7,5 o tamanho efetivo do polímero não irá mudar de modo detectável 1 a 7 dias, e permanecerá nos 50% do original durante pelo menos várias semanas. A pH=5, por outro lado, o polímero deve preferivelmente degradar de modo detectável sobre 1 a 5 dias, e ser completamente transformado em fragmentos de baixo peso molecular dentro de um quatro de tempo de duas semanas a vários meses. Apesar de uma degradação mais rápida poder, em alguns casos, ser preferível, em geral, pode ser mais desejável que o polímero degrade em células com uma taxa que não excede a taxa de metabolização ou excreção dos fragmentos do polímero pelas células. Assim, em determinadas formas de realização, os conjugados da presente invenção são esperados como sendo biodegradáveis, in particular mediante absorção pelas células, e relativamente “inertes” em relação a sistemas biológicos. Os produtos da degradação do carreador são preferivelmente não carregados e não mudam de modo significante o pH do ambiente. É proposto que a abundância de grupos de álcool pode fornecer uma taxa baixa de reconhecimento do polímero por receptores celulares, particularmente de fagócitos. As estruturas dorsais do polímero da presente invenção geralmente contém alguns, se quaisquer, determinantes antigênicos (característicos, por exemplo, para alguns polissacarídeos e polipeptídeos) e geralmente não compreendem estruturas rígidas capazes de se encaixar em interações do tipo “chave-e-fechadura” in vivo salvo se as últimas forem desejáveis. Assim, os conjugados solúveis, reticulados e sólidos da invenção são previstos como tendo baixas toxicidade e bioadesividade, o que os tornam apropriados para várias aplicações biomédicas.
[00343] Em determinadas formas de realização da presente invenção, os conjugados biodegradáveis biocompatíveis podem formar estruturas lineares ou ramificadas. Por exemplo, os conjugados de polial biodegradáveis biocompatíveis da presente invenção podem ser quirais (opticamente ativos). Opcionalmente os conjugados de polial biodegradáveis biocompatíveis da presente invenção podem ser escalêmicos.
[00344] Em determinadas formas de realização, os conjugados da invenção são solúveis em água. Em determinadas formas de realização, os conjugados da invenção são insolúveis em água. Em determinadas formas de realização, o conjugado da invenção está em forma sólida. Em determinadas formas de realização, os conjugados da invenção são colóides. Em determinadas formas de realização, os conjugados da invenção estão em forma de partícula. Em determinadas formas de realização, os conjugados da invenção estão em forma de gel.
[00345] Esta invenção também apresenta um suporte polimérico utilizável para conjugar com uma PBRM para formar um conjugado polímero-droga-PBRM descrito aqui. O suporte compreende um carreador polimérico, um ou mais-LD-D conectados ao carreador polimérico, e um ou mais LP conectados ao carreador polimérico que é apropriado para conectar uma PBRM ao carreador polimérico, em que: cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; carreador polimérico é um poliacetal ou policetal, LD é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0134
com RL1 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LD1 conectado a D, e
Figure img0135
denota união direta ou indireta de D para LD1, e LD contém uma ligação biodegradável de modo que quando a ligação é rompida, D seja liberado do carreador polimérico em uma forma ativa para seu efeito terapêutico esperado; LD1 é uma porção contendo carbonila; LP é um ligante diferente de LD e tendo a estrutura:-RL2- C(=O)-LP1 com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LP1 apropriado para conexão diretamente ou indiretamente a uma PBRM ; cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, heteroalquila, cicloalquila, ou heterocicloalquila; e LP1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM.
[00346] Por exemplo, LP é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0136
em que LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM,
Figure img0137
e denota união direta ou indireta de LP2 para LD1.
[00347] Por exemplo, o grupo funcional de LP1 ou LP2 é selecionado dentre-SRp,-S-S-LG, maleimido, e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo de proteção de enxofre.
[00348] Por exemplo, LD1 compreende-X-(CH2)v-C(=O)- com X diretamente conectado ao grupo carbonila de RL1-C(=O), em que X é CH2, O, ou NH, e v é um inteiro de 1 a 6.
[00349] Por exemplo, LP1 ou LP2 contém uma ligação biodegradável.
[00350] Por exemplo, cada de RL1 e RL2 está ausente.
[00351] Por exemplo, o carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 300 kDa. A seleção de um carreador polimérico com uma faixa de MW específica pode depender do tamanho da PBRM a ser conjugada com.
[00352] Por exemplo, para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 40 kDa ou maior (por exemplo, 80 kDa ou maior), o carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (por exemplo, cerca de 6-20 kDa ou cerca de 8-15 kDa).
[00353] Por exemplo, para conjugar uma PBRM tendo um peso molecular de 200 kDa ou menor (por exemplo, 80 kDa ou menor ), o carreador polimérico do suporte da invenção é um poliacetal, por exemplo, um PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 20 kDa a cerca de 300 kDa (por exemplo, cerca de 40-150 kDa ou cerca de 50-100 kDa).
[00354] Por exemplo, o suporte é de Fórmula (Ia):
Figure img0138
em que: m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m2 é um inteiro de 1 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e a soma de m, m1, m2 e m3 está na faixa de cerca de 15 a cerca de 2200 .
[00355] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 15 a cerca de 300), m2 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 18, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 140 (por exemplo, m1 sendo cerca de 1-90).
[00356] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 20, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-45).
[00357] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 15, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-30).
[00358] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de 20 kDa a 300 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200), m2 é um inteiro de 3 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660 (por exemplo, m1 sendo cerca de 10-250).
[00359] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m2 é um inteiro de 4 a cerca de 150, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 15-100).
[00360] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ia) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, e m3 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m2 é um inteiro de 5 a cerca de 100, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 15-80).
[00361] Por exemplo, o suporte ainda compreende uma PBRM conectada ao carreador polimérico via LP.
[00362] Por exemplo, uma ou mais PBRMs são conectadas a um carreador polimérico carregando uma droga.
[00363] Por exemplo, o suporte (por exemplo, um conjugado PBRM- polímero-droga) é de Fórmula (Ib):
Figure img0139
em que:
Figure img0140
entre LP2 e PBRM denota união direta ou indireta de PBRM para LP2, cada ocorrência de PBRM independentemente tem um peso molecular menor do que 200 kDa, m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m2 é um inteiro de 3 a cerca de 300, m3 é um inteiro de 0 a cerca de 110, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 60; e a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200 .
[00364] Por exemplo, em Fórmula (Ib), m1 é um inteiro de cerca de 10 a cerca de 660 (por exemplo, cerca de 10-250).
[00365] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ib) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m2 é um inteiro de 4 a cerca de 150, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 30, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 10330 ou cerca de 15-100).
[00366] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ib) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m2 é um inteiro de 5 a cerca de 100, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 20, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 15-80).
[00367] Alternativamente ou adicionalmente, um ou mais carreadores poliméricos carregando uma droga são conectados a uma PBRM. Por exemplo, o suporte (por exemplo, um conjugado PBRM-polímero-droga) compreende uma PBRM com um peso molecular maior do que 40 kDa e um ou mais carreadores poliméricos carregando D conectado a PBRM, em que cada um dos carreadores poliméricos carregando D independentemente é de Fórmula (Ic): (Ic),
Figure img0141
em que: terminal
Figure img0142
unido a LP2 denota união direta ou indireta de LP2 para PBRM de modo que o carreador polimérico carregando D seja conectado a PBRM, m é um inteiro de 1 a 300, m1 é um inteiro de 1 a 140, m2 é um inteiro de 1 a 40, m3 é um inteiro de 0 a 18, m4 é um inteiro de 1 a 10; e a soma de m, m1, m2, m3, e m4 está na faixa de 15 a 300; desde que o número total de LP2 unido a PBRM é 10 ou menor .
[00368] Por exemplo, em Fórmula (Ic), m1 é um inteiro de 1 a cerca de 120 (por exemplo, cerca de 1-90) e/ou m3 é um inteiro de 1 a cerca de 10 (por exemplo, cerca de 1-8).
[00369] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ic) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 20, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-45).
[00370] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ic) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m2, m3, e m4 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m2 é um inteiro de 2 a cerca de 15, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 4-30).
[00371] Em outro aspecto, a invenção apresenta um suporte polimérico utilizável para conjugar com ambos uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM) e um agente terapêutico (D). O suporte livre de D ainda compreende um carreador polimérico, um ou mais LP conectados ao carreador polimérico que é apropriado para conectar uma PBRM ao carreador polimérico, e um ou mais-RL1-C(=O)-LD1 conectados ao carreador polimérico via RL1, em que: carreador polimérico é um poliacetal ou policetal, RL1 é conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico, LD1 é um ligante apropriado para conexão da molécula D ao carreador polimérico, em que cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; LP é um ligante diferente de-RL1-C(=O)-LD1, e tendo a estrutura:-RL2-C(=O)-LP1 com RL2 conectado a um átomo de oxigênio do carreador polimérico e LP1 apropriado para conexão a uma PBRM ; cada de RL1 e RL2 independentemente está ausente, alquila, heteroalquila, cicloalquila, ou heterocicloalquila; LD1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional of D, e LP1 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM. Por exemplo, o suporte livre de D ainda utilizável para conjugar com a PBRM e a D pode ter um ou mais dos seguintes aspectos.
[00372] Por exemplo, LP é um ligante tendo a estrutura:
Figure img0143
em que LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional de uma PBRM,
Figure img0144
e denota união direta ou indireta de LP2 para LD1.
[00373] Por exemplo, o grupo funcional de LP1 ou LP2 é selecionado dentre-SRp,-S-S-LG, maleimido, e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo de proteção de enxofre.
[00374] Por exemplo, LD1 compreende-X-(CH2)v-C(=O)- com X diretamente conectado ao grupo carbonila de RL1-C(=O), em que X é CH2, O, ou NH, e v é um inteiro de 1 a 6.
[00375] Por exemplo, LP1 ou LP2 contém uma ligação biodegradável.
[00376] Por exemplo, cada de RL1 e RL2 está ausente.
[00377] Por exemplo, o carreador polimérico do suporte livre de D ainda é um poliacetal, por exemplo, a PHF tendo um peso molecular (isto é, MW do PHF não modificado) na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 300 kDa.
[00378] O suporte livre de D ainda é de Fórmula (Id):
Figure img0145
(Id), em que: m é um inteiro de 1 a cerca de 2200, m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660, m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e a soma de m, m1, e m3 está na faixa de cerca de 15 a cerca de 2200 .
[00379] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 2 kDa a cerca de 40 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 15 a cerca de 300), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 18, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 140 (por exemplo, m1 sendo cerca de 2-120).
[00380] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 6-60).
[00381] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 6-45).
[00382] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de 20 kDa a 300 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 110, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 660 (por exemplo, m1 sendo cerca de 13550).
[00383] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20250).
[00384] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Id) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, e m3 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-180).
[00385] Por exemplo, o suporte livre de D ainda compreende uma PBRM conectada ao carreador polimérico via LP.
[00386] Por exemplo, um ou mais PBRMs são conectados a um carreador polimérico livre de D.
[00387] Por exemplo, o suporte livre de D ainda é de Fórmula (Ie):
Figure img0146
PBRM (Ie),
Figure img0147
em que: entre LP2 e PBRM denota união direta ou indireta de PBRM para LP2, PBRM tem um peso molecular menor do que 200 kDa, m é um inteiro de 1 a 2200, m1 é um inteiro de 1 a 660, m3 é um inteiro de 0 a 110, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 60; e a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de cerca de 150 a cerca de 2200 .
[00388] Por exemplo, em Fórmula (Ie), m1 é um inteiro de cerca de 10 a cerca de 660 (por exemplo, cerca de 14-550).
[00389] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ie) tem um peso molecular na faixa de 40 kDa a 150 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 300 a cerca de 1100), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 75, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 30, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 330 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-250).
[00390] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ie) tem um peso molecular na faixa de cerca de 50 kDa a cerca de 100 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 370 a cerca de 740), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 40, m4 é um inteiro de 1 a cerca de 20, e/ou m1 é um inteiro de 1 a cerca de 220 (por exemplo, m1 sendo cerca de 20-180).
[00391] Alternativamente ou adicionalmente, um ou mais carreadores poliméricos livres de D são conectados a uma PBRM. Por exemplo, o suporte compreende uma PBRM com um peso molecular maior do que 40 kDa e um ou mais carreadores poliméricos conectado a PBRM, em que cada do carreador polimérico independentemente é de Fórmula (Ih):
Figure img0148
(Ih), em que: terminal
Figure img0149
unido a LP2 denota união direta ou indireta de LP2 para PBRM de modo que o carreador polimérico carregando D seja conectado a PBRM, m é um inteiro de 1 a 300, m1 é um inteiro de 1 a 140, m3 é um inteiro de 0 a 18, m4 é um inteiro de 1 a 10; e a soma de m, m1, m3, e m4 está na faixa de 15 a 300; desde que o número total de LP2 unido a PBRM é 10 ou menor .
[00392] Por exemplo, em Fórmula (Ih), m1 é um inteiro de 2 a cerca de 130 (por exemplo, cerca de 3-120) e/ou m3 é um inteiro de 1 a cerca de 10 (por exemplo, cerca de 1-8).
[00393] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ih) tem um peso molecular na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 45 a cerca de 150), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 9, e/ou m1 é um inteiro de 6 a cerca de 75 (por exemplo, m1 sendo cerca de 7-60).
[00394] Por exemplo, quando o PHF em Fórmula (Ih) tem um peso molecular na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa (isto é, a soma de m, m1, m3, e m4 na faixa de cerca de 60 a cerca de 110), m3 é um inteiro de 1 a cerca de 7, e/ou m1 é um inteiro de 6 a cerca de 55 (por exemplo, m1 sendo cerca de 7-45).
[00395] Os conjugados PBRM-droga-polímero, suportes poliméricos carregando drogas, ou suportes residual poliméricos carregando PBRM podem ser purificados (isto é, remoção de droga não reagido, PBRM, ou materiais de partida poliméricos) por diafiltração extensiva. Se necessário, purificação adicional por cromatografia de exclusão de tamanho pode ser conduzida para remover quaisquer conjugados agregados PBRM-droga- polímero. Em geral, os conjugados PBRM-droga-polímero como purificados tipicamente contém < 5% conjugados agregados PBRM-droga-polímero como determinado por SEC ou SDS-PAGE; <1% conjugado polímero-droga como determinado por SEC e <2% PBRM não conjugado como determinado por RP HPLC.
[00396] Tabelas D e E abaixo fornecem exemplos dos suportes poliméricos carregando drogas e dos conjugados polímero-droga-proteína da invenção respectivamente TABELA D
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Métodos sintéticos
[00397] De acordo com a presente invenção, quaisquer técnicas disponíveis podem ser usadas para fazer os conjugados inventivos ou composições incluindo os mesmos, e intermediários e componentes (por exemplo, carreadores e modificadores) utilizáveis para fabricar os mesmos. Por exemplo, métodos semi-sintéticos e completamente sintéticos como discutidos em detalhes abaixo podem ser usados. Carreadores
[00398] Métodos para preparar carreadores de polímero (por exemplo, carreadores de polímero biocompatíveis, biodegradáveis) apropriados para conjugação a modificadores são conhecidos na técnica. Por exemplo, um guia dos sintéticos pode ser encontrado em Patentes US 5.811.510; 5.863.990; 5.958.398; 7.838.619; e 7.790.150; e Publicação U.S. No. 2006/0058512. O prático especialista irá saber como adaptar estes métodos para fazer os carreadores de polímero para uso na prática da invenção.
[00399] Por exemplo, poliais semi-sintéticos podem ser preparados a partir de polialdoses e policetoses via clivagem lateral completa de anéis de carboidrato com periodato em soluções aquosas, com subsequente conversão em porções hidrofílicas (por exemplo via redução de boroidretos) para conjugação de grupos hidroxila com uma ou mais moléculas de drogas ou PBRMs, via um ligante de ácido dicarboxílico (por exemplo, ligante de ácido glutárico). Em uma forma de realização exemplar, os anéis de carboidrato de um polissacarídeo apropriado podem ser oxidados por reagentes específicos de glicol, resultando em clivagem das ligações carbono- carbono entre os átomos de carbono que são cada conectados a um grupo hidroxila. Um exemplo de aplicação desta metodologia para dextrano B-512 é ilustrada abaixo:
Figure img0176
[00400] Uma abordagem similar pode ser usada com Levano:
Figure img0177
[00401] Nos esquemas acima, a ligação ondulada indica que WD ou WP são conectados diretamente como mostrado ou via outra porção como MD2 ou MP2 respectivamente
[00402] Nos esquemas acima, q’ é um inteiro de 0 a 4; e cada ocorrência de R2’ é independentemente hidrogênio, halogênio,-CN, NO2, uma porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila, ou-GRG1 em que G é -O-,-S-,-NRG2-,-C(=O)-,-S(=O)-,-SO2-,-C(=O)O-,-C(=O)NRG2-,- OC(=O)-,-NRG2C(=O)-,-OC(=O)O-,-OC(=O)NRG2-,-NRG2C(=O)O-,- NRG2C(=O)NRG2-,-C(=S)-,-C(=S)S-,-SC(=S)-,-SC(=S)S-,-C(=NRG2)-,- C(=NRG2)O-,-C(=NRG2)NRG3-,-OC(=NRG2)-,-NRG2C(=NRG3)-,-NRG2SO2-,- NRG2SO2NRG3-, ou-SO2NRG2-, em que cada ocorrência de RG1, RG2 e RG3 é independentemente hidrogênio, halogênio, ou porção alifática, heteroalifática, carbocícica, ou heterocicloalquila opcionalmente substituída.
[00403] Em determinadas formas de realização, cada ocorrência de R2’ é independentemente hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, heterocicloalquila, arila, heteroarila,-C(=O)R2A ou-ZR2A, em que Z é O, S, NR2B, em que cada ocorrência de R2A e R2B é independentemente hidrogênio, ou uma porção alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, heteroalquila, heteroalquenila, heteroalquinila, heterocicloalquila, arila ou heteroarila. Em determinadas formas de realização, cada ocorrência de R2 é hidrogênio. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é uma porção C1-10 alquila. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é alquila inferior. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é um grupo hidrofóbico. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é um grupo hidrofílico. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2 é um grupo aniônico. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é um grupo catiônico. Em determinadas formas de realização, uma ou mais ocorrências de R2’ é um ligando receptor.
[00404] Em uma forma de realização, um método para formar os conjugados de polial biodegradáveis, biocompatíveis da presente invenção compreende um processo pelo qual um polissacarídeo apropriado é combinado com uma quantidade eficaz de um agente oxidante específico de glicol para formar um intermediário aldeído. O intermediário aldeído, que é um próprio polial, pode então ser reduzido no correspondente poliol, succinulado, e acoplado com um ou mais modificadores apropriados para formar um conjugado de polial biodegradável biocompatível compreendendo ligações contendo succinamida.
[00405] Em outra forma de realização preferida, poliais biodegradáveis biocompatíveis completamente sintéticos para uso na presente invenção podem ser preparados reagindo um iniciador apropriado com um composto precursor apropriado.
[00406] Por exemplo, poliais completamente sintéticos podem ser preparados por condensação de vinil éteres com dióis substituídos protegidos. Outros métodos, como polimerização de abertura de ciclo, podem ser usados, em que a eficácia do método pode depender do grau de substituição e volume ocupado dos grupos protetores.
Figure img0178
[00407] Um versado na técnica irá notar que os sistemas de solvente, catalisadores e outros fatores podem ser otimizados para obter produtos de peso molecular elevado.
[00408] Em determinadas formas de realização, o carreador é PHF.
[00409] Drogas e derivados de drogas
[00410] Em determinadas formas de realização, a droga podem ser modificada antes da conjugação ao carreador polimérico. Esquemas 1 e 2 são métodos ilustrativos para modificar um alcalóide Vinca. Esquema 3 mostra a método para modificar um derivado de camptotecina não natural. Esquema 4 mostra a método para modificar auristatina F. Outros métodos de modificação métodos são descritos em US 2010/0305149, que é aqui incorporada por referência. Esquema 1
Figure img0179
[00411] Reação do éster C23 de um alcalóide Vinca com hidrazina seguido por tratamento com NaNO2 resulta em um éster de azido ativo. Reação do éster de azido com um composto amino como propanolamina ou 1- aminopropan-2-ol resulta em um derivado de alcalóide Vinca com uma hidroxila funcionalizada que pode ser ainda derivada com compostos contendo amino, como, por exemplo, derivados de alanina ou metil alanina, para conjugação com polímeros (ver Esquema 1). Esquema 2
Figure img0180
[00412] Tratamento do derivado de hidroxila do alcalóide Vinca com um éter contendo amino protegido como aminoácido t-butóxi esterificado seguido por hidrólise TFA do éster dá o sal triflato do alcalóide vinca. (Esquema 2) Conjugação do alcalóide vinca para polímeros funcionalizados resulta em conjugados droga-polímero que podem ser ainda conjugados com a PBRM ou seu derivado para resultar em conjugados proteína-droga-polímero. Esquema 3
Figure img0181
[00413] O grupo 10-hidróxi de derivado camptotecina não natural, por exemplo, SN38, é seletivamente protegido reagindo o derivado com cloreto de terc-butildifenilsilila (TBDPSiCl) na presença de trietilamina. O grupo 20- hidróxi pode ser reagido com t-butilcarbonil-alanina para formar o derivado de alanina usando o procedimento descrito em Sapra, P. et al., Clin. Cancer Res., 14: 1888-1896 (2008). Alternativamente, outros aminoácidos podem ser empregados, por exemplo glicina. A amina primária é não mascarada por remoção do grupo de proteção Boc por tratamento com ácido trifluoroacetico, seguido por remoção do grupo de proteção TBDPS com fluoreto de tetrabutilamônio (ver Esquema 3). O composto SN38 derivado de amino resultante pode ser conjugado com um polímero funcionalizado para formar um conjugado droga-polímero. Esquema 4
Figure img0182
[00414] Tratamento de auristatina F com um éter contendo amino protegido como t-butóxi 2-hidroxipropila amina esterificado seguido por hidrólise HCl do éster dá o derivado 2-hidroxilpropila amino de auristatina F (ver Esquema 4). Conjugação do derivado de auristatina F para polímeros funcionalizados resulta em conjugados droga-polímero que podem ser ainda conjugados com a PBRM ou seu derivado para resultar em conjugados proteína-polímero-droga. Conjugados ou suportes poliméricos
[00415] Os métodos gerais de produzir os conjugados ou suportes poliméricos desta invenção foram descritos acima. Esquemas 5-10 abaixo exemplificam como os conjugados ou suportes poliméricos são sintetizados. As variáveis (por exemplo, XD, XP, LD1, e LP2 etc) nestes esquemas tem as mesmas definições como descrito aqui salvo especificado ao contrário. Cada WD1 é uma porção de função que é capaz de reagir com WD para formar ZD- MD3 e cada WP1 é uma porção de função que é capaz de reagir com WP para formar ZP-MP3.-XD-MD1-YD-MD2-WD e -XP-MP1-YP-MP2-WP podem ser diferentes (como em Esquemas 5 e 5A) ou iguais (como em Esquema 6). Em algumas formas de realização -XP-MP1-YP-MP2-WP é formado por outra modificação de -XD-MD1-YD-MD2-WD. Esquema 5
Figure img0183
Esquema 5A
Figure img0184
Esquema 6
Figure img0185
PBRM
[00416] A PBRM pode ser ligada ao conjugado droga-polímero para formar o conjugado proteína-droga-polímero usando métodos sintéticos padrões para a conjugação de proteína, incluindo, mas não limitado a, reações com base em aminação redutiva, ligação Staudinger, formação de oxima, formação de tiazolidina e os métodos e reações descritos aqui.
[00417] Esquema 7 abaixo mostra a síntese de um conjugado PBRM- droga-polímero em que a PBRM é ligada ao conjugado droga-polímero usando química click. Esquema 7
Figure img0186
[00418] Esquema 8 abaixo mostra a síntese de um conjugado PBRM- droga-polímero em que a PBRM é ligada ao conjugado droga-polímero por uma reação de Mannich. Esquema 8
Figure img0187
[00419] Esquema 9 abaixo mostra a síntese de um conjugado PBRM- droga-polímero em que a PBRM é ligada ao conjugado droga-polímero por copulação cruzada catalisada por paládio. Esquema 9
Figure img0188
[00420] Nos Esquemas 7-9 acima, a ligação ondulada indica que PBRM é ou conectada ao modificador funcional diretamente ou via outra porção como alquila, cicloalquila, arila, etc.
[00421] Esquemas 10 abaixo mostra um esquema sintético geral para fazer os suportes poliméricos da invenção. A ligação ondulada indica conexão direta ou indireta entre LD1 e D ou LP2. Esquema 10
Figure img0189
[00422] O PBRM pode ser ligado ao conjugado droga-polímero para formar o conjugado proteína-droga-polímero usando métodos sintéticos padrões para a conjugação de proteína, incluindo, mas não limitado a, reações com base em aminação redutiva, ligação de Staudinger, formação de oxima, formação de tiazolidina e os métodos e reações descritos aqui.
Composições Farmacêuticas
[00423] Também estão incluídas composições farmacêuticas compreendendo um ou mais conjugados proteína-polímero-droga como descritos aqui em um carreador aceitável, como um estabilizador, tampão, e similares. Os conjugados podem ser administrados e introduzidos em um indivíduo por um meio padrão, com ou sem estabilizadores, tampões, e similares, para formar uma composição farmacêutica. A administração pode ser tópica (incluindo oftálmica e para membranas mucosas incluindo vaginal e distribuição retal), pulmonar, por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, incluindo por nebulizador; administração intratraqueal, intranasal, epidermal e transdermal, oral ou parenteral incluindo injeção intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular ou infusão ou intracraniana, por exemplo, administração intratecal ou intraventricular. Os conjugados podem ser formulados e usados como soluções e/ou suspensões estéreis para administração injetável; pós lipofilizados para reconstituição antes da injeção /infusão; composições tópicas; como comprimidos, cápsulas, ou elixires para administração oral; ou supositórios para administração retal, e as outras composições conhecidas na técnica.
[00424] Uma composição ou formulação farmacológica se refere a uma composição ou formulação em uma forma apropriada para administração, por exemplo, administração sistêmica, em uma célula ou indivíduo, incluindo, por exemplo, um humano. As formas apropriadas, em parte, dependem do uso ou da via de entrada, por exemplo, oral, inalada, transdermal, ou por injeção/infusão. Tais formas não devem evitar que a composição ou formulação alcance uma célula alvo (isto é, uma célula para a qual a droga é desejável para a distribuição). Por exemplo, composições farmacológicas injetadas dentro da corrente sanguínea devem ser solúveis. Outros fatores são conhecidos na técnica, e incluem considerações como toxidade e formas que evitem que a composição ou formulação exerça seu efeito.
[00425] Por “administração sistêmica” significa-se absorção ou acumulação sistêmica in vivo do polímero modificado na corrente sanguínea seguido pela distribuição através de todo o corpo. As vias de administração que levam a absorção sistêmica incluem, sem limitação: intravenosa, subcutânea, intraperitoneal, inalação, oral, intrapulmonar, e intramuscular. Cada destas vias de administração expõe os polímeros modificados a um tecido doente acessível. A taxa de entrada de um agente ativo na circulação mostrou ser uma função do peso molecular ou tamanho. O uso de um conjugado desta invenção pode localizar a distribuição de droga em certas células, como células de câncer via a especificidade das PBRMs.
[00426] Uma “formulação farmaceuticamente aceitável” significa uma composição ou formulação que permite a distribuição efetiva dos conjugados no local físico mais apropriado para sua atividade desejada. Em uma forma de realização, a distribuição efetiva ocorre antes da depuração pelo sistema do reticuloendotelial ou a produção da ligação fora do alvo que pode resultar em eficácia reduzida ou toxidade. Exemplos não limitativos dos agentes apropriados para a formulação com os conjugados incluem: inibidores da P- glicoproteína (como Pluronic P85), que podem aumentar a entrada dos agentes ativos nos CNS; polímeros degradáveis, como microesferas de poli (DL-lactídeo-coglicolídeo) para distribuição de liberação sustentada após implantação intracerebral; e nanopartículas carregadas, tal como aquelas feitas de acrilato de polibutilciano, que podem distribuir agentes ativos através da barreira sanguínea do cérebro e podem alterar os mecanismos de remoção neuronal.
[00427] Também incluídas aqui estão composições farmacêuticas preparadas para armazenamento ou administração, que incluem uma quantidade farmaceuticamente efetiva dos conjugados desejados em um carreador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Carreadores, diluentes, e/ou excipientes apropriados para uso terapêutico são bem conhecidos na técnica farmacêutica. Por exemplo, tampões, conservantes, agentes formadores de volume, dispersantes, estabilizadores, corantes, podem ser providos. Além disso, agentes antioxidantes e de colocação em suspensão podem ser usados. Exemplos de carreador, diluentes e/ou excipientes apropriados incluem, mas não estão limitados a: (1) solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco, pH cerca de 6,5, que pode conter cerca de 1 mg/ml a 25 mg/ml de albumina do soro humano, (2) solução salina a 0,9% (NaCl a 0,9% peso/volume), e (3) dextrose a 5% (peso/volume).
[00428] O termo “quantidade farmaceuticamente efetiva”, como usado aqui, se refere a uma quantidade de um agente terapêutico para tratar, melhorar, ou evitar uma doença ou condição identificada, ou para exibir um efeito terapêutico detectável ou inibitório. O efeito pode ser detectado por qualquer método de teste conhecido na técnica. A quantidade efetiva precisa para um indivíduo dependerá do peso corporal, tamanho, e saúde do indivíduo; da natureza e extensão da condição; e o terapêutico ou combinação de terapêuticos selecionados para a administração. As quantidades farmaceuticamente efetivas para uma dada situação podem ser determinadas por experimentação de rotina, que está dentro das qualificações e julgamento do clínico. Em um aspecto preferido, a doença ou condição pode ser tratada via silenciamento do gene.
[00429] Para qualquer conjugado, a quantidade farmaceuticamente efetiva pode ser estimada inicialmente ou nos testes de cultura da célula, por exemplo, de células neoplásticas, ou em modelos animais, usualmente ratos, camundongos, coelhos, cães, ou porcos. O modelo animal pode ser usado também para determinar a faixa de concentração apropriada e via de administração. Tal informação pode ser então usada para determinar doses e vias utilizáveis para a administração em humanos. A eficácia terapêutica /profilática e toxidade podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou animais para experiência, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente efetiva em 50% da população) e LD50 (a dose letal para 50% da população). A razão da dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico, e ele pode ser expresso como razão, LD50/ED50. Composições farmacêuticas que exibem grandes índices terapêuticos são preferidas. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada, sensibilidade do paciente, e via de administração.
[00430] Em uma forma de realização, os conjugados são formulados para administração parenteral por injeção incluindo o uso de técnicas de cateterização ou infusão convencionais. As formulações para injeção podem ser apresentadas em uma forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes de múltiplas doses, com um conservante adicionado. Os conjugados podem ser administrados parenteralmente em um meio estéril. O conjugado, dependendo do carreador e concentração usada, pode ser ou colocado em suspensão ou dissolvido em um carreador. Vantajosamente, adjuvantes como anestésicos locais, conservante, e agentes de volume podem ser dissolvidos no carreador. O termo “parenteral” como usado aqui inclui injeção percutânea, subcutânea, intravascular (por exemplo, intravenosa), intramuscular, ou intratecal ou técnicas de infusão e similares. Além disso, é provida uma formulação farmacêutica compreendendo conjugados e um carreador farmaceuticamente aceitável. Um ou mais dos conjugados podem estar presentes em associação com um ou mais carreadores não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis e/ou diluentes e/ou adjuvantes, e se desejado outros ingredientes ativos.
[00431] A preparação injetável estéril pode ser também uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico, parentalmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os carreadores e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer, e solução de cloreto de sódio isotônico. Além disso, óleos estéreis, unidos são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito, um óleo suave ligador pode ser empregado incluindo mono ou di-glicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como ácido oleico encontram uso na preparação dos injetáveis.
[00432] Os conjugados e composições descritas aqui podem ser administrados na forma apropriada, preferivelmente parenteralmente, mais preferivelmente intravenosamente. Para administração parenteral, os conjugados ou composições podem ser soluções, suspensões ou emulsões estéreis aquosas ou não aquosas. Propileno glicol, óleos vegetais e ésteres orgânicos injetáveis, como oleato de etila, podem ser usados como o solvente ou carreador. As composições podem conter também adjuvantes, emulsificantes ou dispersantes.
[00433] Níveis de dosagem da ordem de entre cerca de 0,01 mg e cerca de 140 mg por quilograma de peso corporal por dia são utilizáveis no tratamento das condições indicadas acima (entre cerca de 0,05 mg e cerca de 7 g por indivíduo por dia). Em algumas formas de realização, a dosagem administrada para um paciente é entre cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg do peso corporal do indivíduo. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada a um paciente é entre cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 15 mg/kg do peso corporal do indivíduo. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada a um paciente é entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 15 mg/kg do peso corporal do paciente. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada a um paciente é entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 20 mg/kg do peso corporal do paciente. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada é entre cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 5 mg/kg ou cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg do peso corporal do paciente. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada é entre cerca de 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg do peso corporal do paciente. Em algumas formas de realização, a dosagem administrada é entre cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg do peso corporal do paciente. A quantidade de conjugado que pode ser combinada com os materiais do carreador para uma forma de dosagem única varia dependendo do hospedeiro tratado e do modo particular de administração. Formas unitárias únicas podem geralmente conter de entre cerca de 0,01 mg e cerca de 100 mg; entre cerca de 0,01 mg e cerca de 75 mg; ou entre cerca de 0,01 mg e cerca de 50 mg; ou entre cerca de 0,01 mg e cerca de 25 mg; de um conjugado.
[00434] Para administração intravenosa, os níveis de dosagem podem compreender de cerca de 0,01 a cerca de 200 mg de um conjugado por kg do peso corporal do animal. Em um aspecto, a composição pode incluir de cerca de 1 a cerca de 100 mg de um conjugado por kg do peso corporal do animal. Em outro aspecto, a quantidade administrada estará na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 25 mg/kg do peso corporal de um composto.
[00435] Em algumas formas de realização, os conjugados podem ser administrados como se segue. Os conjugados podem ser dados diariamente durante cerca de 5 dias ou como um bolo i.v., cada dia durante cerca de 5 dias, ou como uma infusão contínua durante cerca de 5 dias.
[00436] Alternativamente, os conjugados podem ser administrados uma vez por semana durante seis semanas ou mais. Como outra alternativa, os conjugados podem ser administrados uma vez a cada duas ou três semanas. As doses do bolo são dadas em cerca de 50 a cerca de 400 ml de salina normal para o qual cerca de 5 a cerca de 10 ml de albumina de soro humano pode ser adicionada. As infusões contínuas são dadas em cerca de 250 a cerca de 500 ml de salina normal, para o qual cerca de 25 a cerca de 50 ml de albumina de soro humano podem ser adicionados, por um período de 24 horas.
[00437] Em algumas formas de realização cerca de uma a cerca de quatro semanas após o tratamento, o paciente pode receber um segundo curso do tratamento. Os protocolos clínicos específicos com relação à via de administração, excipientes, diluentes, dosagens, e tempos podem ser determinados pelos versados na técnica como as autorizações da situação clínica.
[00438] Deve ser entendido que o nível específico da dose para um indivíduo particular depende de uma variedade de fatores incluindo a atividade do conjugado específico, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, e taxa de excreção, combinação com outros agentes ativos, e a severidade da doença particular passando por terapia.
[00439] Para a administração em animais não humanos, os conjugados podem ser adicionados também na alimentação ou água de beber do animal. Pode ser conveniente formular a alimentação e água de beber do animal de modo que o animal ingira a quantidade terapeuticamente apropriada dos conjugados junto com a sua dieta. Pode ser conveniente também apresentar os conjugados como uma pré-mistura para adição na alimentação ou água de beber.
[00440] Os conjugados podem ser administrados também em um indivíduo em combinação com outros compostos terapêuticos para aumentar o efeito terapêutico total. O uso de múltiplos compostos para tratar uma indicação pode aumentar os efeitos benéficos enquanto reduzindo a presença de efeitos colaterais. Em algumas formas de realização os conjugados são usados em combinação com agentes quimioterapêuticos, como aqueles descritos na Patente U.S. No. 7.303.749. Em outras formas de realização os agentes quimioterapêuticos, incluem, mas não estão limitados a letrozol, oxaliplatina, docetaxel, 5-FU, lapatiniba, capecitabina, leucovorina, erlotinib, pertuzumab, bevacizumab, e gemcitabina.
[00441] A presente invenção provê também kits farmacêuticos compreendendo um ou mais recipientes cheios com um ou mais dos conjugados e/ou composições da presente invenção, incluindo, um ou mais agentes quimioterapêuticos. Tais kits podem incluir também, por exemplo, outros compostos e/ou composições, um(s) dispositivo(s) para administrar os compostos e/ou composições, e instruções escritas em uma forma prescrita por uma agência governamental regulando a fabricação, uso ou venda dos produtos farmacêuticos ou biológicos.
Métodos de Uso Métodos de Tratamento
[00442] Em algumas formas de realização preferidas da invenção, os conjugados proteína-polímero-droga da invenção são usados em métodos de tratamento de animais (preferivelmente mamíferos, mais preferivelmente humanos e incluem machos, fêmeas, bebês, crianças e adultos). Em uma forma de realização, os conjugados da presente invenção podem ser usados em um método de tratamento de animais que compreende administrar ao animal um conjugado biocompatível biodegradável da invenção. Por exemplo, os conjugados de acordo com a invenção podem ser administrados na forma de polímeros lineares solúveis, copolímeros, conjugados, colóides, partículas, géis, itens sólidos, fibras, filmes, etc. Os conjugados biocompatíveis biodegradáveis desta invenção podem ser usados como carreadores de drogas e componentes do carreador de drogas, em sistemas de liberação controlada de droga, preparações para procedimentos cirúrgicos de baixa invasão, etc. As formulações farmacêuticas podem ser injetáveis, implantáveis, etc.
[00443] Em ainda outro aspecto, a invenção provê um método de tratar uma doença ou distúrbio em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficiente de pelo menos um conjugado da invenção; em que referido conjugado libera um ou mais agentes terapêuticos quando da biodegradação.
[00444] Em outra forma de realização os conjugados podem ser administrados in vitro, in vivo e/ou ex vivo para tratar pacientes e/ou para modular o crescimento das populações das células selecionadas incluindo, por exemplo, câncer. Em algumas formas de realização, os tipos particulares de cânceres que podem ser tratados com os conjugados incluem, mas não estão limitados a: (1) tumores sólidos, incluindo, mas não limitado a fibrossarcoma, mixosarcoma, lipossarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogênico, cordoma, angiosarcoma, endotéliosarcoma, linfângiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing's, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, câncer de cólon, câncer coloretal, câncer dos rins, câncer pancreático, câncer nos ossos, câncer de mama, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer esofogeal, câncer de estômago, câncer oral, câncer nasal, câncer na garganta, carcinoma de células escamosas, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma da glândula sudorífera, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinomabroncogênito, carcinoma da célula renal, carcinoma do canal biliar do hepatoma, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrional, tumor de Wilms, câncer cervical, câncer uterino, câncer testicular, carcinoma de pulmão da célula pequena, carcinoma da bexiga, câncer de pulmão, carcinoma epitelial, glioma, glioblastoma, astrocitoma multiforme, meduloblastoma, crâniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, câncer de pele, melanoma, neuroblastoma, e retinoblastoma; (2) cânceres com base nos ossos, incluindo, mas não limitado a leucemia linfoblástica aguda “ALL”, leucemia da célula B linfoblástica aguda, leucemia da célula T linfoblástica aguda, leucemia mieloblástica aguda “AML”, leucemia promielocítica aguda “APL”, leucemia monoblástica aguda, leucemia eritroleuquémica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia não linfocítica aguda, leucemia indiferenciada aguda, leucemia mielocítica crônica “CML”, leucemia linfocítica crônica”CLL”, leucemia de células pilosas, mieloma múltiplo, leucemias crônicas e agudas, por exemplo, leucemiaa mielogenosa linfoblástica e mielocítica linfocítica; e (3) linfomas como doença de Hodgkin, Linfoma não de Hodgkin, mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença da cadeia pesada, e Policitemia vera.
[00445] Em outra forma de realização os conjugados podem ser administrados in vitro, in vivo e/ou ex vivo para tratar doenças autoimunes, como lúpus sistêmico, artrite reumatóide, psoríase, e esclerose múltipla; rejeições a enxertos, como rejeição a transplante renal, rejeição a transplante de fígado, rejeição a transplante de pulmão, rejeição a transplante cardíaco, e rejeição a transplante da medula óssea; enxerto versus doença do hospedeiro; infecções virais, como infecção por CMV, infecção por HIV, e AIDS; e infecções por parasitas, como giardíase, amebíase, esquistossomose, e similares.
[00446] Em determinadas formas de realização os conjugados podem ser usados também para a fabricação de um medicamento utilizável para o tratamento ou diminuição da severidade de distúrbios, como os, caracterizados pelo crescimento anormal das células (por exemplo, câncer).
[00447] Em determinadas formas de realização, o agente terapêutico é distribuído localmente para uma célula alvo, tecido ou órgão específico.
[00448] Em determinadas formas de realização, na prática do método da invenção, o conjugado compreende ainda ou está associado com uma etiqueta de diagnóstico. Em determinadas formas de realização exemplares, a etiqueta de diagnóstico é selecionada dentre o grupo consistindo de: isótopos radio farmacêuticos ou radioativos para cintigrafia gama e PET, agente de contraste para formação de imagem de ressonância magnética (MRI), agente de contraste para tomografia computadorizada, agente de contraste para método de formação de imagem por raios X, agente para método de diagnóstico por ultrassom, agente para ativação de nêutron, porção que pode refletir, espalhar ou afetar raios X, ultrassom, ondas radiofônicas e microondas e fluoróforos. Em determinadas formas de realização exemplar, o conjugado é monitorado ainda in vivo.
[00449] Exemplos de etiquetas de diagnóstico incluem, mas não estão limitados a, isótopos para diagnóstico radio farmacêutico ou radioativo para cintigrafia gama e PET, agente de contraste para formação de imagem de ressonância magnética (MRI) (por exemplo, átomos paramagnéticos e nano cristais superparamagnéticos), agente de contraste para tomografia computadorizada, agente de contraste método de formação de imagem de raios X, agente para método de diagnóstico por ultrassom, agente para ativação de nêutron, e porção que pode refletir, espalhar ou afetar raios X, ultrassom, ondas radiofônicas e micro-ondas e fluoróforos em vários procedimentos ópticos, etc. Radiodrogas para diagnóstico incluem radionucleotídeos emitindo y, por exemplo, índio-111, tecnécio-99m e iodo- 131, etc. Agentes de contraste para MRI (formação de imagem de ressonância magnética) incluem compostos magnéticos, por exemplo, íons paramagnéticos, ferro, manganês, gadolínio, lantanídeos, porções paramagnéticas orgânicas e superparamagnéticas, compostos ferromagnéticos e antiferromagnéticos, por exemplo, colóides de óxido de ferro, colóides de ferrita, etc. Agentes de contraste para tomografia computadorizada e métodos de formação de imagem com base em raios X incluem compostos absorvedores de raios X, por exemplo, iodo, bário, etc. Agentes de contraste para métodos com base em ultrassom incluem compostos que podem absorver, refletir e espalhar as ondas de ultrassom, por exemplo, emulsões, cristais, bolhas de gás, etc. Ainda outros exemplos incluem substâncias utilizáveis para a ativação de nêutron, como boro e gadolínio. Além disso, as etiquetas que podem ser empregadas podem refletir, refratar, espalhar, ou afetar de outra forma raios X, ultrassom, ondas radiofônicas, micro-ondas e outros raios utilizáveis em procedimentos de diagnóstico. Etiquetas fluorescentes podem ser usadas para formação de imagem por fotos. Em determinadas formas de realização um modificador compreende um íon ou grupo paramagnético.
[00450] Em outro aspecto, a invenção provê um método de tratar uma doença ou distúrbio em um indivíduo, compreendendo preparar uma solução aquosa de pelo menos um conjugado da invenção e injetar parenteralmente referida formulação no indivíduo.
[00451] Em outro aspecto, a invenção provê um método de tratar uma doença ou distúrbio em um indivíduo, compreendendo preparar um implante compreendendo pelo menos um conjugado da invenção, e implantar referido implante no indivíduo. Em determinadas formas de realização exemplares, o implante é uma matriz de gel biodegradável.
[00452] Em outro aspecto, a invenção provê um método para o tratamento de um animal em necessidade do mesmo, compreendendo administrar um conjugado de acordo com os métodos descritos acima.
[00453] Em outro aspecto, a invenção provê um método para fazer surgir uma resposta imune em um animal, compreendendo administrar um conjugado como nos métodos descritos acima.
[00454] Em outro aspecto, a invenção provê um método de diagnosticar uma doença em um animal, compreendendo as etapas de: administrar um conjugado como nos métodos descritos acima, em que referido conjugado compreende uma molécula detectável; e detectar a molécula detectável.
[00455] Em determinadas formas de realização exemplares, a etapa de detectar a molécula detectável é realizada de modo não invasivo. Em determinadas formas de realização exemplares, a etapa de detectar a molécula detectável é realizada usando equipamento de formação de imagem apropriado.
[00456] Em uma forma de realização, um método para tratar um animal compreende administrar ao animal um conjugado biodegradável biocompatível da invenção como um pacote para um ferimento cirúrgico do qual um tumor ou crescimento tenha sido removido. O pacote do conjugado biodegradável biocompatível substituirá o local do tumor durante a recuperação e se degrada e dissipa à medida que o ferimento cicatriza.
[00457] Em determinadas formas de realização, o conjugado está associado com uma etiqueta de diagnóstico para monitoramento in vivo.
[00458] Os conjugados descritos acima podem ser usados para tratamento (diagnóstico) terapêutico, preventivo, e analítico de animais. Os conjugados são planejados, geralmente, para administração parenteral, mas em alguns casos podem ser administrados por outras vias.
[00459] Em uma forma de realização, conjugados solúveis ou coloidais são administrados intravenosamente. Em outra forma de realização, conjugados solúveis ou coloidais são administrados via injeção local (por exemplo, subcutânea, intramuscular). Em outra forma de realização, conjugados sólidos (por exemplo, partículas, implantes, sistemas de distribuição de droga) são administrados via implantação ou injeção.
[00460] Em outra forma de realização, conjugados compreendendo uma etiqueta detectável são administrados para estudar os padrões e dinâmicas da distribuição da etiqueta no corpo do animal.
[00461] Em determinadas formas de realização, qualquer um ou mais dos conjugados descritos aqui podem ser usados na prática de qualquer dos métodos descritos acima. Em determinadas formas de realização exemplares, o conjugado é um conjugado Trastuzumab-PHF-, Rituximab-PHF- ou LHRH- PHF-droga.
[00462] Em toda a descrição, onde as composições são descritas como tendo, incluindo, ou compreendendo componentes específicos, é contemplado que as composições também consistem essencialmente de, ou consistem de, componentes relacionados. Similarmente, onde os métodos ou processos são descritos como tendo, incluindo, ou compreendendo etapas específicas do processo, os processos também consistem essencialmente das, ou consistem das, etapas de processamento recitadas. Além disso, deve ser entendido que a ordem das etapas ou ordem para realizar determinadas ações é imaterial contanto que a invenção permanece operável. Ademais, duas ou mais etapas ou ações podem ser conduzidas simultaneamente.
[00463] Os processos sintéticos da invenção podem tolerar uma ampla variedade de grupos funcionais; desse modo vários materiais de partida substituídos podem ser usados. Os processos provêem geralmente o composto final desejado no ou perto do final do processo total, embora possa ser desejável em certas ocasiões ainda converter o composto para um sal farmaceuticamente aceitável, éster ou pró-droga do mesmo.
[00464] Os compostos de droga usados para os conjugados da presente invenção podem ser preparados em uma variedade de formas usando materiais de partida comercialmente disponíveis, compostos conhecidos na literatura, ou a partir de intermediários rapidamente preparados, empregando métodos sintéticos padrão e ou procedimento conhecido pelos versados na técnica, ou que serão aparentes para os versados na técnica levando em consideração os ensinamentos aqui. Métodos sintéticos padrão e procedimentos para a preparação de moléculas orgânicas e transformações e manipulações de grupos funcionais a partir da literatura relevante específica ou a partir de livros didáticos padrão no campo. Embora não limitados a qualquer uma ou várias fontes, testos clássicos como Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, e Structure, 5a. edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 2001; e Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a. edição, John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1999, incorporadas como referência aqui, são utilizáveis e livros didáticos reconhecidos da síntese orgânica conhecido pelos versados na técnica. As descrições seguintes dos métodos sintéticos são projetadas para ilustrar, mas não para limitar, os procedimentos gerais para a preparação dos compostos da presente invenção.
[00465] Os conjugados da presente invenção e os compostos de drogas incluídos aqui podem ser convenientemente preparados por uma variedade de métodos familiar para os versados na técnica. Os conjugados ou compostos desta invenção com cada das fórmulas descritas aqui podem ser preparados de acordo com os procedimentos seguintes a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis ou materiais de partida que podem ser preparados usando procedimentos da literatura. Estes procedimentos mostram a preparação dos conjugados representativos desta invenção.
[00466] Os conjugados projetados, selecionados e/ou otimizados pelos métodos descritos acima, uma vez produzidos, podem ser caracterizados usando uma variedade de testes conhecida pelos versados na técnica para determinar se os conjugados têm atividade biológica. Por exemplo, os conjugados podem ser caracterizados por testes convencionais, incluindo, mas não limitado aos testes descritos acima, para determinar se eles têm uma atividade prevista, atividade de ligação e/ou especificidade de ligação.
[00467] Além disso, uma triagem de alta produção pode ser usada para aumentar a velocidade da análise usando tais testes. Como um resultado, pode ser possível rapidamente fazer uma triagem das moléculas do conjugado descrito aqui para atividade, usando técnicas conhecidas na técnica. Metodologias gerais para a triagem de alta produção são descritas, por exemplo, em Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; e Patente US 5.763.263. Os testes de alta produção podem usar uma ou mais técnicas de teste diferentes incluindo, mas não limitado, as descritas acima.
[00468] Todas as publicações e documentos de patente citados aqui são incorporados aqui como referência como se cada publicação ou documento fosse especificamente e individualmente indicado. A citação de publicações e documentos de patente não é planejada como uma admissão que qualquer destes é pertinente a técnica antecedente, nem constitui qualquer admissão como para os conteúdos ou dados dos mesmos. A invenção foi descrita até agora como forma de descrição escrita, os versados na técnica reconhecerão que a invenção pode ser praticada em uma variedade de formas de realização e que a descrição precedente e exemplos abaixo são com propósitos de ilustração e não limitação das reivindicações que seguem.
EXEMPLOS
[00469] Os conjugados descritos aqui podem ser preparados pelos esquemas geralmente descritos aqui e pelos métodos descritos nos Exemplos abaixo. O termo “teor” como usado em certos exemplos abaixo, a menos que especificado em contrário, significa a fração molar das unidades de polímero que são substituídas com a porção desejada, como o ligante, a molécula da droga, ou PBRM.
ABREVIATURAS
[00470] As abreviações seguintes são usadas nos esquemas de reação e exemplos sintéticos, que seguem. Esta lista não é definida como sendo uma lista inclusiva de todas as abreviações usadas neste pedido como abreviações padrão adicionais, que é rapidamente entendida pelos versados na técnica da síntese orgânica, pode ser usada também nos esquemas sintéticos e exemplos. Adoa ácido 8-amino-3,6-dioxa-octanóico AZD 8330 2-[(2-fluoro-4-iodofenil)amino]-1,6-dihidro- N-(2-hidroxietoxi)-1,5-dimetil-6-oxo-3-piridinacarboxamida BOC terc-Butiloxicarbonila DIC N,N'-Diisopropilcarbodiimida DIEA N,N-Diisopropiletilamina DCM Diclorometano DMA Dimetilacetamida DMF Dimetilformamida DMSO Sulfóxido de dimetila DTT (2S,3S)-1,4-dimercaptobutano-2,3-diol EDC cloridrato de 1-Etil-3-[3- dimetilaminopropil]carbodiimida GA Ácido glutárico HATU hexafluorfosfato de 2-(1H-7-Azabenzotriazol-1-il)- 1,1,3,3-tetrametiluronoio HOBt Hidroxibenzotriazol HPLC Cromatografia líquida de alta pressão HPSEC Cromatografia de exclusão de tamanho de alto desempenho HPV Hidroxipropilvindesina 2HPV 2- Hidroxipropilvindesina MCC carbamato de (N-maleimidometil) 1,4-ciclohexila M-(PEG)12 N-maleimido-PEG12-propionamida MWCO Corte de Peso Molecular NHS 1-Hidroxipirrolidina-2,5-diona NMP N-metil-2-pirrolidona PBS Solução salina tamponada com fosfato, NaCl a 0,9 % PHF poli(1-hidroximetiletileno hidroxilmetilformal), ou FLEXIMER® PI-103 3-[4-(4-morfolinil)pirido[3',2':4,5]furo[3,2- d]pirimidin-2-il]-fenol RP-HPLC cromatografia líquida de alto desempenho da fase reversa SATA acetato de N-Sucinimidil-S-acetiltio SEC Cromatografia de exclusão de tamanho SMCC Sucinimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1- carboxilato SM(PEG)12 Sucinimidil éster-([N- maleimidopropionamida]-PEG12) -SS- Indica um grupo dissulfeto covalentemente ligado SSPy 2-(piridina-2-ildisulfanil) TCEP Tris[2-carboxietil] fosfina TEA Trietilamina TFA Ácido Trifluoro acético INFORMAÇÃO GERAL
[00471] Peptídeos EC-1-Adoa-NH2 e LTVSPNY-Adoa-NH2 foram comprados na CreoSalus, Louisville, Kentucky.
[00472] Ligantes M-(PEG)12-NHS e éster de S-Acetil-(PEG)12-NHS foram comprados na Quanta Biodesign, Powell, Ohio.
[00473] Purificação HPLC foi realizada em uma coluna Phenomenex Gemini de semi-preparação com 5 μm 110 Â, 250 x 10 mm, 5 microns, usando o sistema de solvente seguinte: Solvente A: água (0.1% de TFA); Solvente B: CH3CN (0,1 % de TFA).
[00474] O teor de HPV dos conjugados foi determinado por LC/MS/MS ou HPLC.
[00475] O teor de proteína dos conjugados foi determinado espectrofotometricamente a 280 nm.
[00476] O teor de dissulfeto nos conjugados-SSPy foi determinado espectrofotometricamente a 340 nm após a liberação de piridinationa (10 mM DTT, 10 min., temperatura ambiente).
[00477] O teor de SN38 dos conjugados foi determinado espectrofotometricamente a 370 nm.
[00478] Os pesos moleculares dos conjugados foram determinados por SEC ou com polissacarídeos ou proteínas como padrões de peso molecular.
[00479] Os conjugados PBRM-droga-polímero foram isolados dos conjugados droga-polímero não reagidos residuais por diafiltração extensiva. Se necessário, a purificação adicional por cromatografia de exclusão de tamanho foi conduzida para remover quaisquer conjugados PBRM-droga- polímero agregados. Em geral os conjugados PBRM-droga-polímero continham tipicamente < 5% de conjugados PBRM-droga-polímero agregados como determinado por SEC ou SDS-PAGE; <1% de conjugado polímero-droga como determinado por SEC e <2% de PBRM não conjugada como determinado por RP HPLC.
[00480] Anticorpos reduzidos ou parcialmente reduzidos foram preparados usando os procedimentos descritos na literatura, ver, por exemplo, Francisco et al., Blood 102 (4): 1458-1465 (2003). Exemplo 1. Síntese de 30 kDa PHF-β-Alanina:
Figure img0190
[00481] PHF (30 kDa, 4,54 g, 33,6 mmol de monômero PHF) foi dissolvido em 150 mL de DMF anidro, seguido pela adição de carbonato de bis (nitrofenol) (3,07 g, 10,1 mmol). A solução foi agitada a 40 °C durante 4 h. β-Alanina (1,50 g, 16,8 mmol) dissolvida em água (10 mL) foi adicionado na mistura de PHF. O pH foi ajustado a 7,5-8 com TEA e a mistura de reação agitada a 23°C durante 18 h, diluída a 400 mL com água e o pH ajustado a 11 com 5N de NaOH. A mistura resultante foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente, o pH foi ajustado a 6,5 e então a mistura foi diluída a 10% de orgânicos com água. O produto (30 kDa PHF-β-Alanina) foi purificado usando cartucho de ultrafiltração equipado com 5K de filtro de membrana Biomax. O produto purificado foi liofilizado para dar o composto titular como um sólido branco (2,07 g, 36% de rendimento). A fração molar de unidades de monômero PHF substituído com β-alanina foi de 13%, como determinado por 1H RMN. Exemplo 2. Síntese de 30 kDa PHF-GA
Figure img0191
[00482] N,N-Dimetilpiridin-4-amina (0,268 g, 2,91 mmol) e anidrido glutárico (1,375 g, 12,06 mmol) foram adicionados a uma solução de PHF (30 kDa, 1,48 g, 10,96 mmol de monômero de PHF) em DMA (300 mL) e piridina anidra (33,3 mL). A mistura de reação foi agitada a 60°C durante 18 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o óleo espesso resultante foi tomado em água (100 mL). O pH foi ajustado a pH 6,0-6,5 com 5N de NaOH. A solução clara resultante foi diluída a 200 mL com água, filtrada através de um filtro de 0,2 mícron, e purificada por filtração usando um filtro de membrana, corte de peso molecular de 5000. A água foi removida por liofilização para dar 30 kDa PHF-GA como um sólido branco (1,28 g, 48% de rendimento). A fração das unidades de monômero de PHF total substituídas com ácido glutárico como determinado por 1H RMN foi de 96%. Exemplo 3. Síntese de derivado de trastuzumab-MCC
Figure img0192
[00483] Trastuzumab (10 mg) foi dissolvido em tampão PBS (1 ml, pH 7,0), então uma solução de SMCC em DMSO (5 μL, 30 mg/ml) foi adicionado. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h. O trastuzumab-MCC foi purificado por filtração em gel usando uma coluna PD-10 equilibrada com PBS (90% de rendimento). A análise mostrou que em média 5 a 6 grupos MCC foram ligados a um trastuzumab.
[00484] O procedimento descrito acima pode ser usado para sintetizar outros derivados de PBRM. Exemplo 4. Síntese de derivado de trastuzumab-M-(PEG)12
Figure img0193
[00485] Trastuzumab (10 mg) foi dissolvido em tampão PBS (1 ml, pH 7,0), então uma solução de SM-(PEG)12 em DMSO (4 μL, 100 mg/ml) foi adicionado. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h. Trastuzumab-M-(PEG)12 foi purificado por filtração em gel usando uma coluna PD-10 equilibrada com PBS (~90% de rendimento). A análise mostrou que em média 5 a 6 grupos polietileno foram ligados a um trastuzumab.
[00486] O procedimento descrito pode ser usado para sintetizar outros derivados de PBRM. Exemplo 5. Síntese de 10 kDa PHF-GA-SSpy
Figure img0194
[00487] 10 kDa PHF-GA (1,63 g 11,12 mmol, preparado usando o procedimento descrito no exemplo 2 com PHF 10.000 Da, 25% GA) foi dissolvido em água (10 mL) e NHS (0,154 g, 1,33 mmol) foi adicionado. A mistura foi resfriada a 0°C e então uma solução aquosa de EDC (0,256 g, 1,33 mmol) foi adicionado seguido por cloridrato de 2-(piridina-2-ildisulfanil) etanoamina (0,297 g, 1,33 mmol). O pH da mistura resultante foi ajustado a 5,5-6,0 então agitado a 23°C durante 18 h, seguido por purificação por diálise através de uma membrana de celulose regenerada, e a liofilização deu o composto titular (1,66 g, 86%) como um sólido branco. O teor de SSPy foi de 3%. Exemplo 6. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH
Figure img0195
[00488] 10 kDa PHF-GA-SSpy (289,0 mg, 0,023 mmol, preparado como descrito no exemplo 5) foi tomado em uma mistura de água (8 mL) e acetonitrila (4 mL) e resfriado a 0°C. NHS (26,4 mg, 0,230 mmol) foi adicionado seguido por uma solução aquosa de EDC (44,0 mg, 0,230 mmol) e HPV-Alanina (131,45 mg, 0,138 mmol, preparado como descrito na publicação US número 2010/0305149, exemplo 1). O pH da mistura resultante foi ajustado a 6, e então a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O pH foi ajustado a 7,5 com 1M de NaHCO3 e DTT (37,8 mg, 0,245 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 23°C durante 30 min, diluída a 15 mL com água e purificada por diálise usando uma membrana de celulose regenerada (corte MW de 3 K). Rendimento 57% (com base em HPV); 7,3% em peso de HPV, como determinado por HPLC.
[00489] Substituindo HPV-Alanina com outras porções de droga ou derivados de droga no procedimento descrito acima é possível sintetizar outros conjugados droga-polímero. Exemplo 7. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0196
[00490] Para trastuzumab-MCC (20 mg, preparado como descrito no exemplo 3) em PBS (2 mL, pH 7,0) foi adicionado 10 kDa PHF-GA-(HPV- Alanina)-SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 6) em água (0,5 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h a pH 7.0. O conjugado resultante foi purificado por filtração em gel usando uma coluna Superpose-6 com PBS como o eluente (75% de rendimento). O peso molecular do PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) como determinado por SEC foi de cerca de 170 kDa. O teor de HPV como determinado por HPLC mostrou um razão molar média de HPV para trastuzumab de cerca de 14:1 a 17:1. Para o 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-MCC) usado nas figuras 2 e 4 a razão HPV trastuzumab foi de cerca de 19:1 a 22:1.
[00491] Substituindo trastuzumab-MCC com outros derivados de PBRM no procedimento descrito acima é possível sintetizar outros conjugados proteína-droga. Também conjugados PBRM-droga-polímero com razões variadas de droga para PBRM podem ser obtidos por variar a quantidade de PBRM e droga-polímero usados nos exemplos acima. Exemplo 8. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M- (PEG)12)
Figure img0197
[00492] 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) foi preparado como descrito no exemplo 7 exceto Trastuzumab-MCC foi substituído por Trastuzumab-M-(PEG)12 (preparado como descrito no exemplo 4). O peso molecular do conjugado PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-M-(PEG)12) como determinado por SEC foi de cerca de 200 kDa. O teor de HPV como determinado por HPLC mostrou uma razão molar de HPV para trastuzumab de cerca de 16:1 a 18:1. Exemplo 9. Síntese de 70 kDa PHF-GA-SN-38-Alanina-SSpy
Figure img0198
[00493] 70 kDa PHF-GA-Alanina-SN38 (37,4 mg, 0,254 mmol, preparado como descrito em US 2010/0305149, usando PHF 70.000 Da, GA 20%) foi colocado em um frasco e cloridrato de 2-(piridina-2-ildisulfanil) etanoamina (2,83 mg, 0,013 mmol) e NHS (2,93 mg, 0,025 mmol) foram adicionados seguido por EDC (7,32 mg, 0,038 mmol). Alíquotas adicionais de EDC (7,32 mg, 0,038 mmol) foram adicionados a 30 min, 2 h, 4 h, e 6 h, e a mistura de reação foi agitada durante mais 12 h. O produto foi purificado por diálise através de um filtro de membrana de (SSPy 2%; SN38 4,8% (em peso)). Exemplo 10. Síntese de LHRH-PEG12-SH
Figure img0199
[00494] LHRH (10 mg) foi dissolvido em uma mistura de acetonitrila: água (1:1, 500 μL) e foi adicionado uma solução de carga de PEG12-SATA (9,2 μL, 0,0025 mmol, 1,9 mg). A mistura resultante foi agitada durante 3 h em temperatura ambiente. O produto foi purificado por RP-HPLC seguido por liofilização (60% de rendimento).
[00495] LHRH-PEG12-SH purificado (2 mg) foi dissolvido em água (400 μL), o pH foi ajustado a 11,8 com TEA, e a mistura foi agitada durante 40 min sob argônio e usada na próxima etapa. Exemplo 11. Síntese de 70 kDa PHF-GA-SN-38-Alanina-(SS-PEG12-LHRH)
Figure img0200
[00496] 70 kDa PHF-GA-SN-38-Alanina-SSpy (2 mg, preparado como descrito no exemplo 9) foi dissolvido em PBS (0,5 mL, 50 mM, pH = 7,5). Então, LHRH-PEG12-SH (0,8 mg, preparado como descrito no exemplo 10) foi adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h a pH 7.0. O conjugado foi purificado por diálise contra PBS (pH 7,0) usando um filtro de membrana de celulose regenerada de corte de 10 kDa. O teor de LHRH estimado por HPSEC foi de 65% com retenção quantitativa de SN38. Exemplo 12. Síntese de 30 kDa PHF-GA-Maleimida
Figure img0201
[00497] 30 kDa PHF-GA (7,98 g, 50,2 mmol, preparado como descrito no exemplo 2, GA 15%) foi tomado em água (502 mL) e resfriado a 0°C. NHS (0,087 g, 0,752 mmol) foi adicionado seguido por uma solução aquosa de EDC (0,144 g, 0,752 mmol). O pH foi ajustado a pH 7 a 8 com 1N de NaOH e a mistura de reação agitada durante 1 h em temperatura ambiente. N- aminoetil-maleimida (0,080 g, 0,451 mmol) foi adicionado a 0°C e a mistura de reação foi aquecida em temperatura ambiente e então deixado agitando durante a noite. A mistura foi filtrada através um filtro de 2 mícron, concentrada a 200 mL, purificada por diálise através de um cartucho de Biomax (poliétersulfona) (5K) por lavagem com 1 litro de água, seguido por liofilização para dar o composto titular (2,19 g, 28% de rendimento) como um sólido branco. Teor de maleimida como determinado por análise elementar de CHN foi de 2,6 %: (média CHN): C: 44,81, H: 6,91, N: 0,49. Exemplo 13. Síntese de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-Maleimida
Figure img0202
[00498] 30 kDa PHF-GA-Maleimida (271 mg, 7,86 μmol, preparado como descrito no exemplo 12) foi tomado em uma mistura de água (8 mL) e CH3CN (4 mL) e resfriado a 0°C. NHS (9,04 mg, 0,079 mmol) foi adicionado seguido por uma solução aquosa de EDC (15,1 mg, 0,079 mmol) e HPV- Alanina (104 mg, 0,109 mmol, preparados como descrito na publicação US número 2010/0305149, exemplo 1) em água (2 mL). O pH da mistura resultante foi ajustado a 6,0, e então agitado em temperatura ambiente durante a noite. O progresso da reação foi monitorado por análise HPLC, 245 nm de detecção, e alíquotas adicionais de EDC (15,1 mg, 0,079 mmol) em água foram adicionados a 19 e 22 h. A mistura de reação foi diluída a 15 mL com água e a mistura resultante purificada por diálise através de uma membrana de celulose regenerada (5K) eluindo com 5 % de NaCl/10 %CH3CN (3 x 10 mL) e água (2 x 10 mL). A amostra foi diluída a 10 mL e congelada para dar 245 mg do composto titular, 93% de rendimento. A razão molar de HPV para polímero foi em média de cerca de 24:1 a 28:1. Exemplo 14. Síntese de EC-1-Adoa-M-(PEG)12
Figure img0203
[00499] Para uma mistura de EC-1-Adoa-NH2 (10 mg, 4 15 μmol) em CH3CN/H2O/DMSO (750 μL, 7:7:1) foi adicionada uma solução de carga (0,064 mg/mL) de M-(PEG)12-NHS (63 μL, 4,1 mg, 4,7 μmol) em CH3CN. O pH foi ajustado a 7,4 e então DMSO (50 μL) e NMP (50 μL) foram adicionados para tornar a mistura mais homogênea. A mistura foi agitada sob argônio durante a noite, protegida da luz. Uma alíquota adicional (13 μL, 1 mg) de carga (0,077 mg/mL) de M-(PEG)12-NHS recentemente preparada foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante 30 min. O produto bruto foi purificado por HPLC (gradiente: 10% de solvente B a 90% solvente B durante 25 min). O composto titular eluído a 16 min e foi concentrado para dar 2 mg de um sólido incolor. ESI-MS calculado para C146H209N27O50S2 801,1 (M + 4H+), encontrado 802,1. Exemplo 15. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(EC-1-Adoa-M- (PEG)12)
Figure img0204
[00500] Para uma solução de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH (2 mg, 0,12 μmol, preparada como descrito no exemplo 6, 10 kDa PHF, GA 26%, HPV 7,4%, SH 3%) em 400 μL de água foi adicionada uma solução do peptídeo EC-1-Adoa-M-(PEG)12 (1 mg, 0,31 μmol, preparado como descrito no exemplo 14) em NMP (50 μL). O pH foi ajustado a 7,4 e a mistura de reação foi agitada sob argônio até não ser mais observada a incorporação de peptídeo por HPSEC (2 h, 37% de peptídeo). A mistura de reação foi diluída com NaCl (1%, 10 mL) e então concentrada a 2 mL por filtração centrífuga (corte de membrana de 3000 Da). A solução foi diluída com PBS (25 mM, 8 mL) e concentrada a 1,5 mL para dar o composto titular contendo 0,373 mM de HPV.
[00501] Exemplo 16. Síntese de LTVSPNY-Adoa- PEG12-Tioéster
Figure img0205
[00502] Para uma solução de LTVSPNY-Adoa-NH2 (10 mg, 10,7 μmol) em uma mistura de CH3CN/H2O (500 μL, 1:1) foi adicionado (46 μL, 20,8 μmol, 16,1 mg) de uma solução de carga recentemente preparada de S- Acetil-PEG12-NHS (350 mg/mL) em DMSO. O pH foi ajustado a 6,5-7,0 e a mistura de reação agitada durante a noite. O pH foi então ajustado a 7,5-8,0 e a mistura de reação foi agitada durante ~2 h. O produto bruto foi purificado por HPLC (gradiente: 10% de solvente B a 70% de solvente B durante 25 min) para dar, após concentração, 9 mg do composto titular como um sólido incolor (51 % de rendimento). ESI-MS calculado para C78H126N9NaO28S 845,9, encontrado 845,9 (M + H+ + Na+). Exemplo 17. Síntese de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(LTVSPNY-Adoa- PEG12)
Figure img0206
[00503] LTVSPNY-Adoa-PEG12-Tioéster (0,57 mg, 0,34 μmol, preparado como descrito no exemplo 16) foi dissolvido em água (500 μL) e o pH ajustado a 11,8. A solução foi agitada sob argônio durante 30 min e o pH diminuído a 5-5,5. A isto foi adicionada uma solução de 30 kDa PHF-GA- (HPV-Alanina)-Maleimida (2,5 mg, 0,057 mmol, preparado como descrito no exemplo 13, GA 15%, maleimida 2,6%, HPV 5%) em água (62,5 μL). O pH foi ajustado a 7,6 e então a mistura de reação foi agitada sob argônio até não ser mais observada a incorporação de peptídeo por HPSEC (3 h, 15% incorporação de peptídeo). A mistura de reação foi então diluída com 1% de NaCl e filtrada através de um filtro de seringa a 0,2 μM. O material bruto foi purificado por agitação da filtração de células através de membrana de corte MW de 5 kDa para dar uma solução do composto titular. Exemplo 18. Síntese de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH
Figure img0207
[00504] 30 kDa PHF-GA-SSpy (26,2 mg, 0,72 μmol, preparado como descrito no exemplo 5 usando 30 kDa PHF, GA 10%, SSPy 4,8%) foi tomado em uma mistura de água (3 mL) e acetonitrila (3 mL) e resfriado a 0°C. NHS (0,83 mg, 7,16 μmol) foi adicionado seguido por uma solução aquosa de EDC (1,37 mg, 7,16 μmol) e HPV-Alanina (10,2 mg, 10,7 μmol, preparados como descrito na publicação US número 2010/0305149, exemplo 1). O pH da mistura resultante foi ajustado a 6,0, e então a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O pH foi ajustado a 7,5 com 1M de NaHCO3 e DTT (11,7 mg, 0,076 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 23°C durante 30 min, diluída a 15 mL com água e purificada por diálise usando uma membrana de celulose regenerada (corte MW 30 kDa). Rendimento 82% (com base em HPV); 20,6 % em peso de HPV, como determinado por HPLC. Exemplo 19. Síntese de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC)
Figure img0208
[00505] Para Trastuzumab-MCC (20 mg, preparado como descrito no exemplo 3) em PBS (2 mL, pH 7,0) foi adicionado 30 kDa PHF-GA-(HPV- Alanina)-SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 18) em água (0,5 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h a pH 7.0. O conjugado resultante foi purificado por filtração em gel usando uma coluna Superpose-6 com PBS como o eluente. O teor de HPV como determinado por HPLC foi em uma razão molar média de HPV para anticorpo de cerca de 10:1 a 12:1. Exemplo 20. Síntese de 70 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH
Figure img0209
[00506] 70 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH foi preparado como descrito no exemplo 18 exceto 70 kDa PHF-GA-SSpy (GA 10%, SSPy 4,8%, 58,2 mg, 0,727 μmol, preparado como descrito no exemplo 5), NHS (0,843 mg, 7,27 μmol), EDC (1,39 mg, 7,27 μmol) e HPV-Alanina (10,4 mg, 10,9 μmol) foram usados. Rendimento 82% (com base em polímero); 10,9 % em peso de HPV. Exemplo 21. Síntese de 70 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC)
Figure img0210
[00507] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 19 exceto trastuzumab-MCC (20 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 70 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 20) foram usados. O teor de HPV como determinado por HPLC mostrou uma razão molar média de HPV para anticorpo de cerca de 47:1 a 50:1. Exemplo 22. Síntese de (S)-2HPV
Figure img0211
[00508] Vinblastina desacetil hidrazida (400 mg, 0,520 mmol, preparada como descrito em J. Med. Chem., 21, 88-96, 1978) em MeOH (5 mL) foi combinada com 1N de HCl (15 mL) a 0°C, então nitrito de sódio (93 mg, 1,353 mmol) foi adicionado em uma porção. A mistura de reação foi agitada durante 12 min seguido por ajuste do pH a 7,6 a 0oC com NaHCO3 saturado. A mistura de reação foi extraída com DCM (3 X 50 ml). As frações DCM combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgSO4 e filtradas através de um chumaço de MgSO4. O volume foi reduzido a 10 ml e 5 ml foi usado para copulação com (S)-1-aminopropan-2-ol.
[00509] (S)-1-aminopropan-2-ol (205 μl, 2,6 mmol) em DCM anidro (2 mL) foi adicionado em gotas a uma solução fria agitada de vinblastina desacetil diazida (preparado como descrito acima) sob argônio. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante várias horas e então levado em temperatura ambiente. LC/MS mostrou a conversão do composto titular. A mistura de reação bruta foi aplicada diretamente para uma coluna CombiFlash (40 g coluna) para purificação.
[00510] A coluna CombiFlash foi condicionada com acetato de etila (1% de TEA). Após a injeção da amostra as condições iniciais foram continuadas durante 2 min seguida por um gradiente de 10% de MeOH (1% de TEA) para acetato de etila (1% de TEA) durante 10 minutos e então mantido. O composto titular eluído a ~ 12 minutos. O eluente foi concentrado para obter 96 mg (46% de rendimento). m/z(+) 812,4. Exemplo 23. Síntese de (R)-2HPV
Figure img0212
[00511] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 21 exceto (R)-1-aminopropan-2-ol (205 μl, 2,6 mmol) foi usado em vez de (S)-1- aminopropan-2-ol para dar 97 mg (46% de rendimento). Exemplo 24. Síntese de cloridrato de (PI-103)-4-(2-aminoetil) piperazina-1- carboxilato
Figure img0213
[00512] Para uma mistura de PI-103 (50 mg, 0,144 mmol) e TEA (60 μL, 0,431 mmol) em DMF seco (2,5 mL) foi adicionado cloroformato de 4- nitrofenila (35 mg, 0,172 mmol) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente. Após 45 min t-butil éster de ácido 2-piperazin-1-il-etil- carbâmico (56 mg, 0,244 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi então agitada durante a noite em temperatura ambiente seguido pela remoção do solvente sob vácuo elevado. O resíduo foi dissolvido em DCM (50 mL) e então lavado sucessivamente com água (15 mL) e salmoura (15 mL). A fase orgânica foi secada sobre Na2SO4 e concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado sobre gel de sílica (4 g de coluna CombiFlash, MeOH: DCM (0% de MeOH 1-2 min seguido por um gradiente a 7 % de MeOH durante 15 min) para dar o carbamato BOC-protegido como uma película incolor. ESIMS calculado para C31H38N7O6 604,3 (M + H+), encontrado 604,3.
[00513] Para o carbamato BOC-protegido purificado foi adicionado DCM (5 mL) e 4 M de HCl em dioxano (5 mL). A mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente e então concentrada sob vácuo. O produto PI- 103 desprotegido foi dissolvido em água e então liofilizado para dar o composto titular como um sólido amarelo pálido (69 mg, 83 % de rendimento global). ESI-MS calculado para C26H30N7O4 504,2 (M + H+), encontrado 504,2. Exemplo 25. Síntese de cloridrato de (PI-103)-4-aminobutilcarbamato
Figure img0214
[00514] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 24 exceto a síntese foi conduzida sobre uma escala menor com PI-103 (25 mg) e BOC-1,4-diaminobutano (23 mg, 0,122 mmol) foi usado em vez de t-butil éster de ácido 2-piperazin-1-il-etil-carbâmico para dar o composto titular (13 mg, 36% de rendimento global). ESI-MS calculado para C24H27N6O4 463,2 (M + H+), encontrado 463,2. Exemplo 26. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-aminobutilcarbamato- SH
Figure img0215
[00515] Para uma solução de 10 kDa PHF-GA-SSpy (GA 25%, SSPy 3,8%, 30 mg, 2,38 μmol, preparado como descrito no exemplo 5) em 1:1 CH3CN/H2O (400 μL) foi adicionado NHS (18 μL de 96 mg/mL de carga em CH3CN, 1,7 mg), EDC (78 μL de carga recentemente preparada em água, 37,3 mg/mL, 2,9 mg), seguido por uma solução de cloridrato de (PI-103)-4- aminobutilcarbamato (5,35 mg, 10,7 μmol, preparado como descrito no exemplo 25) em 1:1 CH3CN/H2O (200 μL). CH3CN adicional (100 μL) foi adicionado para melhorar a solubilidade. O pH foi ajustado a 5,7-5,8 e a mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente. CH3CN adicional (100 μL) foi adicionado e a agitação foi continuada durante a noite. A análise de HPLC da mistura de reação bruta indicada a 92% de incorporação de carbamato de (PI-103)-4-aminobutila. O pH foi ajustado a 6,0 e então a mistura bruta foi diluída com 1% de NaCl aquoso (10 mL) e filtrada através de um filtro de seringa a 0,2 μm. O produto bruto foi purificado por agitação da filtração da célula sobre uma membrana de celulose 3 kDa MWCO regenerada seguido por liofilização para dar um sólido incolor (26 mg, 1,82 μmol, 76% de rendimento). O produto (26 mg, 1,82 μmol) foi dissolvido em PBS (25 mM, pH 7,1 mL) e então tratado com DTT (10,4 mg, 0,067 mmol). A mistura foi agitada durante aproximadamente 1 h em temperatura ambiente e então purificada por agitação da filtração da célula através de membrana de celulose regenerada 3 kDa MWCO para dar uma solução aquosa do composto titular. Exemplo 27. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-aminobutilcarbamato- (Trastuzumab-MCC)
Figure img0216
[00516] O conjugado titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (10 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-aminobutilcarbamato- SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 26) foram usados. Exemplo 28. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-(2-aminoetil) piperazina- 1-carbamato-SH
Figure img0217
[00517] O composto titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 26 exceto que 10 kDa PHF-GA-SSpy (GA 25%, SSPy 3,8 %, 30 mg, 3,38 μmol, preparado como descrito no exemplo 5), NHS (1,7 mg, 15 μmol), EDC (2,88 mg, 15 μmol) e di-cloridrato de (PI-103)-4-(2- aminoetil) piperazina-1-carboxilato (5,49 mg, 9,52 μmol, preparado como descrito no exemplo 24) foram usados. Rendimento 80%. Exemplo 29. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-(2-aminoetil) piperazina- 1-carbamato-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0218
[00518] O conjugado titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (10 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-(2-aminoetil) piperazina-1-carbamato-SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 28) foram usados. Exemplo 30. Síntese de cloridrato de (PI-103)-4-aminobutilcarbonato
Figure img0219
[00519] Para uma solução resfriada com gelo de trifosgênio (13,6 mg, 0,046 mmol) em THF seco (0,5 mL) foi adicionado uma solução de 4- hidroxibutilcarbamato de t-butila (24,2 mg, 0,128 mmol) e TEA (18,1 μL, 0,13 mmol) em THF seco (1 mL) sob argônio. Após agitação durante 1 h a 0°C, o cloroformato bruto foi lentamente adicionado a uma solução de PI-103 (25 mg, 0,072 mmol) e TEA (15,1 μL, 0,108 mmol) em NMP (0,5 mL). Após vários minutos THF foi removido sob vácuo e NMP (0,5 mL) foi adicionado para tornar a mistura mais homogênea. A mistura resultante foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Cloroformato adicional (de 45 mg BOC-álcool, preparado como descrito acima) e TEA (15 μL) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada durante 40 min em cujo ponto LC/MS indicou 95% de conversão para o produto desejado. A mistura de reação foi diluída com DCM (150 mL) e então lavada com água (2 x 50 mL) e salmoura (50 mL). A fase orgânica foi secada sobre Na2SO4 e concentrada sob vácuo. O produto bruto foi purificado sobre gel de sílica (4 g de coluna CombiFlash, EtOAc:Hex, 0% de EtOAc 1 min, então gradiente a 80% EtOAc durante 16 min) para dar 26 mg de uma película incolor. Rendimento 64%. ESI-MS calculado para C29H34N5O7 564,3 (M + H+), encontrado 564,1.
[00520] O carbonato BOC-protegido foi dissolvido em DCM (2 mL) e então tratado com 4 M de HCl em dioxano (4 mL). A mistura resultante foi agitada durante 3,5 h e então concentrada sob vácuo. O carbonato desprotegido foi liofilizado de água:CH3CN para dar o composto titular como um sólido amarelo pálido (21,9 mg, 96% de rendimento). ESI-MS calculado para C24H26N5O5 464,2 (M + H+), encontrado 464,1. Exemplo 31. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-aminobutilcarbonato-SH
Figure img0220
[00521] O composto titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 26 exceto que 10 kDa PHF-GA-SSpy (GA 25%, SSPy 3,8%, 30 mg, 3,38 μmol, preparado como descrito no exemplo 5), NHS (1,7 mg, 15 μmol), EDC (2,88 mg, 15 μmol) e cloridrato de (PI-103)-4- aminobutilcarbonato (5,35 mg, 10,7 μmol, preparado como descrito no exemplo 30) foram usados. Rendimento 76%. Exemplo 32. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-4-aminobutilcarbonato- (Trastuzumab-MCC)
Figure img0221
[00522] O conjugado titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (10 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-(4-aminobutilcarbonato)- SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 31) foram usados. Rendimento 30 %. Exemplo 33. Síntese de cloridrato de (PI-103)-(S)-2-amino-3-metilbutanoato
Figure img0222
[00523] Para uma solução de PI-103 (25 mg, 0,072 mmol) em NMP (~750 μL) foi adicionado uma mistura de HATU (32,7 mg, 0,086 mmol), DIEA (30,2 μL, 0,173 mmol), e BOC-Val-OH (0,086 mmol, 18,7 mmol) em NMP. A mistura resultante foi agitada, protegida da luz, durante 3 dias em temperatura ambiente. Uma solução de BOC-Val-OH (15,6 mg, 0,072 mmol), HATU (27,4 mg, 0,072 mmol), e DIEA (25,1 μL, 0,144 mmol) em NMP (200 μL) foi então adicionado. A mistura de reação foi agitada durante ~18 h a 50°C e então DMAP (0,072 mmol, 8,8 mg) foi adicionado. A mistura foi agitada durante mais 1,5 h a 50°C seguido por resfriamento brusco a reação com ácido diluído. A mistura de reação foi diluída com DCM e então lavada com água (2 x 50 mL) e salmoura (50 mL). O éster de valina BOC-protegido foi purificado sobre gel de sílica (4 g de coluna Combiflash, EtOAc:Hex, 0% de EtOAc mantido durante 1 min então um gradiente a 50% de EtOAc durante 16 min).
[00524] O éster de valina BOC-protegido foi dissolvido em DCM (5 mL) e então tratado com 4 M de HCl em dioxano (5 mL). A mistura foi agitada durante 6 h em temperatura ambiente e então concentrada para secura sob vácuo. O éster de valina desprotegido foi liofilizado em água:CH3CN para dar o composto titular como um sólido amarelo pálido (13,6 mg, de rendimento global 39%). ESI-MS calculado para C24H26N5O4 448,2 (M + H+), encontrado 448,2. Exemplo 34. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-(S)-2-amino-3- metilbutanoato-SH
Figure img0223
[00525] O composto titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 26 exceto que 10 kDa PHF-GA-SSpy (GA 25%, SSPy 3,8%, 41,4 mg, 3,38 μmol, preparado como descrito no exemplo 5), NHS (2,81 mg, 25 μmol), EDC (4,85 mg, 25 μmol), e cloridrato de (PI-103)-(S)-2- amino-3-metilbutanoato (6,38 mg, 13 μmol, preparado como descrito no exemplo 33) foram usados. Exemplo 35. Síntese de 10 kDa PHF-GA-((PI-103)-(S)-2-amino-3- metilbutanoato-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0224
[00526] O conjugado titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (10 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa PHF-GA-(PI-103)-(S)-2-amino-3- metilbutanoato-SH (11,2 mg, preparado como descrito no exemplo 34) foram usados. Exemplo 36. Síntese de cloridrato de (AZD 8330)-(S)-2-aminopropanoato
Figure img0225
[00527] Para uma solução de BOC-Ala-OH (61,5 mg, 0,325 mmol) em THF seco (1,5 mL) foi adicionado DIC (20,5 mg, 0,163 mmol). A mistura resultante foi resfriada a 0oC sob argônio e agitada durante 10-15 min. Uma mistura de AZD 8330 (50 mg, 0,108 mmol) e DMAP (1,3 mg, 0,0108 mmol) em THF seco (1,5 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 1,5 h em temperatura ambiente protegido da luz. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e então lavada com NH4Cl saturado seguido por salmoura. A fase orgânica foi secada sobre Na2SO4 então concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado sobre gel de sílica (coluna Combiflash, acetona: DCM, 0% de acetona mantido durante 1-2 min então gradiente a 20% de acetona) para dar 37 mg de um sólido incolor. O sólido foi dissolvido em DCM (5 mL) e então tratado com 4 M de HCl em dioxano (10 mL). A mistura foi agitada, protegida da luz, em temperatura ambiente durante aproximadamente 5 h. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi liofilizado para dar o composto titular como um sólido laranja pálido (22,4 mg, 39% de rendimento global). Exemplo 37. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(AZD 8330)-(S)-2- aminopropanoato-SH
Figure img0226
[00528] O composto titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 26 exceto que 10 kDa PHF-GA-SSpy (GA 25%, SSPy 3,8%, 30 mg, 3,38 μmol, preparado como descrito no exemplo 5), NHS (1,7 mg, 15 μmol), EDC (2,88 mg, 15 μmol), e cloridrato de (AZD 8330)-(S)-2- aminopropanoato (6,44 mg, 9,9 μmol, preparado como descrito no exemplo 36) foram usados. Exemplo 38. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(AZD 8330)-(S)-2- aminopropanoato-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0227
[00529] O composto titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (10 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa cloridrato de PHF-GA-(AZD 8330)-(S)-2- aminopropanoato-SH (15,2 mg, preparado como descrito no exemplo 37) foram usados. A razão molar de AZD 8330 para anticorpo foi em média cerca de 2:1 a 6:1 Exemplo 39. Síntese de trifluoroacetato de 1-aminopropan-2-il-Auristatina F
Figure img0228
[00530] Para auristatina F (150,0 mg, 0,201 mmol) e HOBt (32,6 mg, 0,241 mmol) em 5 mL de diclorometano foi adicionada diisopropilcarbodiimida (68,5 μL, 0,442 mmol). A mistura foi agitada a 0°C durante 10 minutos em cujo ponto um precipitado foi observado. Carbamato de terc-butil-2-hidroxipropila (881,0 mg, 5,03 mmol) em 2 mL de diclorometano foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 45°C em um frasco vedado e o progresso da reação monitorada via LCMS. HOBt adicional (30,0 mg, 0,222 mmol) foi adicionado a 2,5 e 6 h e a mistura agitada durante 18 h. HOBt adicional (54,3 mg, 0,402 mmol) e diisopropilcarbodiimida (43,1 mg, 0,342 mmol) foram adicionados e a mistura agitada a 45°C durante mais 9 h quando então a análise de LCMS mostrou desaparecimento completo do material de partida. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em 3 mL de DMF. A amostra foi purificada via HPLC preparatório; (10-90 solvente B gradiente durante 10 minutos, eluindo com 0,1% de TFA/água, 0,1%TFA/CH3CN). A água foi removida via liofilização para dar o composto titular como um sólido branco.
[00531] 1-(Terc-butoxicarbonilamino) propan-2-il-auristatina F (150 mg, 0,166 mmol) foi tomado em diclorometano (5 mL) e ácido 2,2,2- trifluoroacético (0,256 mL, 3,32 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 23°C durante 30 minutos quando então LC/MS indicou uma conversão completo. O solvente foi reduzido a 1 mL sob pressão reduzida. Adição em gotas da solução com agitação de dietil éter deu o composto titular (27,5 mg, 0,027 mmol. 16%) como um sólido branco que foi coletado via filtração. Exemplo 40. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(1-aminopropan-2-il-Auristatina F)-
Figure img0229
[00532] 10K PHF-GA(28%)-SSPir (10%) (76,0 mg, 5,93 μmol), preparado como descrito no exemplo 5, foi tomado em água (5 mL) e acetonitrila (3 mL) e resfriado a 0°C. NHS (6,82 mg, 0,059 mmol em 500 μL de água) foi adicionado seguido por trifluoroacetato de 1-aminopropan-2-il- auristatina F (27,5 mg, 0,027 mmol, preparado como descrito no exemplo 39) e EDC (11,4 mmol, 0,059 mmol em 500 μL água). O pH foi ajustado a 6 com 0,1N de NaOH e a mistura de reação aquecida em temperatura ambiente e agitada durante a noite. O pH foi ajustado a 7,5 com 1M de NaHCO3 e (2S,3S)-1,4-dimercaptobutano-2,3-diol (100 mg, 0,648 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 23°C durante 30 minutos, diluída a 15 mL com água e purificada via diálise através de uma membrana de celulose 3K regenerada eluindo com 1% NaCl/água (3 x 10 mL) e água (3 x 10 mL). A amostra (76 mg) foi diluída a 5 mL e armazenada a 2-8°C. Exemplo 41. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(1-aminopropan-2-il-Auristatina F)- (Trastuzumab-MCC)
Figure img0230
[00533] O conjugado titular foi preparado em um modo similar ao descrito no exemplo 7 exceto que trastuzumab-MCC (5 mg, preparado como descrito no exemplo 3) e 10 kDa PHF-GA-(1-aminopropan-2-il-Auristatina F)-SH (4,44 mg, preparado como descrito no exemplo 40, GA 19%, SH 4,8% ) foram usados. Exemplo 42. Síntese de RD-S1-BOC-amina
Figure img0231
[00534] RD-S1 (48,5 mg, 0,055 mmol, preparado de acordo com os procedimentos descritos em WO 2008/138561) foi tomado em CH2Cl2 (1 mL) e a solução resfriada a 0°C. EDC (0,127 mL, 0,82 mmol) e N,N- dimetilpiridin-4-amina (33,4 mg, 0,273 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 20 min e então 2-hidroxipropilcarbamato de t-butila (0,094 mL, 0,546 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada aquecer em temperatura ambiente e agitada durante 24 h. A amostra foi purificada por HPLC preparativo, eluindo com 0,1% de TFA/CH3CN e 0,1% de TFA/água, seguido por liofilização para dar o composto titular (20,3 mg, 40% de rendimento) como um sólido bege. Exemplo 43. Síntese de RD-S1-amina
Figure img0232
[00535] RD-S1-BOC-Amina (20,3 mg, 0,022 mmol, preparado como descrito no exemplo 42) foi tomado em CH2Cl2 (0,500 mL) e resfriado a 0 0C. Ácido 2,2,2-trifluoroacético (200 μL, 2,61 mmol) foi adicionado em gotas, então agitado em temperatura ambiente durante 30 min. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O óleo resultante foi tomado em CH2Cl2 seguido pela adição de éter para dar o composto titular como um sólido bege (18,1 mg, 100% de rendimento). Exemplo 44. Síntese de PHF-GA-RD-S1-Amina-SH
Figure img0233
[00536] PHF-GA-SSpy (40,2 mg, 3,19 μmol, PHF-GA-SSpy preparado como descrito no exemplo 5) foi tomado em uma mistura de água (2 mL) e CH3CN (2 mL) e resfriado a 0°C. NHS (3,67 mg, 0,032 mmol) foi adicionado seguido por uma solução aquosa de EDC (6,12 mg, 0,032 mmol) e RD-S1-amina (18,1 mg, 0,019 mmol, preparado como descrito no exemplo 43) em água (1 mL). O pH da mistura resultante foi ajustado a 6,0 a 6,5, e então agitado em temperatura ambiente durante a noite. O pH foi ajustado a 7,5 com 1M de NaHCO3 e DTT (10 mg, 0,065 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, diluída a 15 mL com água, filtrada através de um filtro de 2 mícron e purificada por diálise usando uma membrana de celulose regenerada (corte MW 3K) por lavagem com 1% de NaCl/água (3 x 10 mL) seguido por água (2 x 10 mL). O produto titular foi obtido em 61% de rendimento (com base em tubulisina), 3,8 % de teor de SH.
[00537] Substituindo RD-S1-amina com outras porções de droga ou derivados de droga nos procedimentos descritos acima é possível sintetizar outros conjugados droga-polímero. Exemplo 45. Síntese de XMT-A2
Figure img0234
[00538] Para uma solução de XMT-A1 (5,03 mg, 6,74 μmol) em DMF (33 μL) a 0°C sob argônio foi adicionado TEA (1,88 μL, 0,013 mmol). A mistura foi agitada durante 5 min e então hidrazinacarboxilato de (2-(piridina- 2-ildisulfanil) etila (2,48 mg, 10,1 μmol) em DMF (20 μL) e HATU (3,85 mg, 10,1 μmol) foram adicionados. A mistura de reação foi deixada aquecer em temperatura ambiente, agitada durante 2,5 h, diluída com uma mistura de água (750 μL) e CH3CN (1 mL) e então purificada por HPLC preparativo eluindo com 0,1% de TFA/CH3CN e 0,1% de TFA/água, seguido por liofilização para dar o composto titular (8,64 mg, 65,2% de rendimento) como um sólido branco. Exemplo 46. Síntese de XMT-A3
Figure img0235
XMT-A3
[00539] XMT-A2 (11,9 mg, 0,012 mmol, preparado como descrito no exemplo 45) foi dissolvido em DMF (0,3 mL) e cloridrato de 11- aminoundecano-1-tiol (29,5 mg, 0,123 mmol) em DMF (0,3 mL) foi adicionado a 0°C. A mistura de reação foi deixada aquecer em temperatura ambiente e agitada durante 2 dias, diluída com água (2 mL) e purificada por HPLC preparativo, seguido por liofilização para dar o composto titular (6,02 mg, 46% de rendimento) como um sólido branco. Exemplo 47. Síntese de 70 kDa PHF-GA-(XMT-A3)
Figure img0236
[00540] 70 KDa PHF-GA (57,4 mg, 0,217 mmol, preparado usando o procedimento descrito no exemplo 2 com 70 KDa PHF, 9% de GA) foi dissolvido em uma mistura de água (2,17 mL) e DMF (0,05 mL). XMT-A3 (12,8 mg, 10,9 μmol, preparado como descrito no exemplo 46) em DMF (0,05 mL) foi adicionado e o pH ajustado a 5 a 6. A solução resultante foi resfriada a 0°C e EDC (4,16 mg, 0,022 mmol) foi adicionado em gotas durante 4 h. A mistura de reação foi agitada durante 6 h a pH 5,0 a 6,0. Purificação por cromatografia de exclusão de tamanho eluindo com água deu o composto titular (40 mg, 5% (em peso) de tubulisina). Exemplo 48. Síntese de Auristatina F-hidroxipropilamida
Figure img0237
[00541] Auristatina F (150 mg, 0,201 mmol), HATU (153,0 mg, 0,402 mmol), e diisopropiletilamina (108 μL, 0,603 mmol) foram tomados em DMF (5 mL) e 3-aminopropan-1-ol (45,9 μL, 0,603 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 23°C durante 45 minutos quando então a análise de LCMS mostrou desaparecimento completo do material de partida. A redução do volume a 1,4 mL sob vácuo elevado seguido por purificação via HPLC preparativo (10-90 solvente B gradiente durante 20 minutos eluindo com 0,1% de TFA/água, 0,1%TFA/CH3CN) deu o composto titular como sólido branco (109 mg, 68% de rendimento). Exemplo 49. Síntese de Auristatina F-hidroxipropilamida Boc-L-Alanina
Figure img0238
[00542] BOC-L-alanina (117,0 mg, 0,618 mmol) e DMAP (94,0 mg, 0,772 mmol) foram tomados em diclorometano e então diisopropilcarbodiimida (52,6 μL, 0,340 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi resfriada a 0°C e agitada durante 10 minutos após a qual auristatina F-hidroxipropilamida (124 mg, 0,154 mmol, preparado como descrito no exemplo 48) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida a 23°C e agitada durante 18 h. Purificação via HPLC preparativo seguido por remoção da água via liofilização deu o composto titular como sólido bege (112 mg, 75 % de rendimento). Exemplo 50. Síntese de Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina
Figure img0239
[00543] Auristatina F-hidroxipropilamida Boc-L-Alanina (112 mg, 0,115 mmol, preparada como descrito no exemplo 49) foi tomada em diclorometano (3 mL) e excesso de ácido trifluoroacético foi adicionado. A mistura foi agitada a 23°C durante 1 h e o solvente removido sob vácuo elevado. O óleo resultante foi tomado em diclorometano (1,5 mL) e precipitação de éter dietílico (30 mL para dar o composto titular como sólido branco (96,2 mg, 85%). Exemplo 51. Síntese de 10K PHF-GA-SH-(Auristatina F-hidroxipropilamida- L-Alanina)
Figure img0240
[00544] 10K PHF-GA(28%)-SSPir (10%) (135,0 mg, 10,49 μL, preparado como descrito no exemplo 5) foi tomado em água (8 mL) e acetonitrila (4 mL) e resfriado a 0°C. 1-NHS (12,07 mg, 0,105 mmol) foi adicionado seguido por EDC (20,11 mg, 0,105 mmol) e auristatina F- hidroxipropilamida-L-alanina (52,02 mg, 0,047 mmol, preparado como descrito no exemplo 50). O pH foi ajustado a 6 com 0,1N de NaOH e a mistura agitada a 23°C durante 18 h. O pH foi ajustado a 7,5 com 1M de NaHCO3 e (2S,3S)-1,4-dimercaptobutano-2,3-diol (90 mg, 0,583 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 23°C durante 30 minutos então diluída a 15 mL com água. O material foi purificado via diálise através de uma membrana de celulose regenerada 3K eluindo com 1% de NaCl/água (3 x 10 mL) e água (3 x 10 mL). A amostra foi diluída a 5 mL e armazenada a 2- 8°C. (145,0 mg, Auristatina F 14,06 mg/mL). Exemplo 52. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(Auristatina F-hidroxipropilamida- L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0241
[00545] Para trastuzumab-MCC (400 mg, preparado como descrito no exemplo 3) em PBS (20 mL, pH 7,0) foi adicionado 10 kDa PHF-GA-SH- (Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina) (106 mg, preparada como descrito no exemplo 51) em água (10 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h a pH 7.0. O produto resultante foi purificado por filtração em gel usando uma coluna Superpose-6 com PBS como o eluente (50% de rendimento). O peso molecular do PHF-GA- (Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) como determinado por SEC foi de cerca de 170 kDa. O teor F auristatina como determinado por LC-MS mostrou uma razão molar média de auristatina F para anticorpo de cerca de 20:1 a 22:1. Para a 10 kDa PHF-GA-(Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) usada na figura 3 a razão de auristatina F para trastuzumab foi de cerca de 20:1 a 22:1 e para a usada na figura 8 a razão de auristatina F para trastuzumab foi de cerca de 24:1 a 28:1. Exemplo 53. Síntese de derivado de rituximab-MCC
Figure img0242
[00546] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 3 Rituximab foi usado em vez de trastuzumab. A análise mostrou que em média 5 a 6 grupos MCC foram ligados a um Rituximab. Exemplo 54. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Rituximab-MCC)
Figure img0243
[00547] O composto titular foi preparado usando o procedimento descrito no exemplo 7, exceto Rituximab-MCC (preparado como descrito no exemplo 53) foi usado em vez de Trastuzumab-MCC. O teor de HPV como determinado por HPLC mostrou uma razão molar média de HPV para de Rituximab de cerca de 12:1 a 15:1. Exemplo 55. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC) (5:1)
Figure img0244
[00548] O composto titular foi preparado usando o procedimento descrito no exemplo 7 exceto o teor de HPV como determinado por HPLC mostrou um razão molar média de HPV para anticorpo de cerca de 5:1. Exemplo 56. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC) (10:1)
Figure img0245
[00549] O composto titular foi preparado usando o procedimento descrito no exemplo 7 exceto teor de HPV como determinado por HPLC mostrou um razão molar média de HPV para anticorpo de cerca de 10:1. Exemplo 57. Síntese de 10 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC) (20:1)
Figure img0246
[00550] O composto titular foi preparado usando o procedimento descrito no exemplo 7 exceto teor de HPV como determinado por HPLC mostrou um razão molar média de HPV para anticorpo de cerca de 20:1. Exemplo 58. Síntese de Trastuzumab-F(ab)2
[00551] Trastuzumab-F(ab)2 foi preparado a partir de pepsina imobilizada (15 mL de gel assentado) e trastuzumab (440 mg, 2,4 μmol) de acordo com as instruções do fabricante (Pierce) para dar o composto titular (265,2 mg, 100 % de rendimento). Exemplo 59. Síntese de 30 kDa PHF-GA- SSPir-(HPV-Alanina)
Figure img0247
[00552] Para uma solução de 30 kDa PHF-GA (54 mg, 1,49 μmol, preparada como descrito no exemplo 2) em 2 mL de CH3CN:H2O (1:1)) foi adicionado 69 μL (37 μmol)de solução de carga NHS recentemente preparada (62,4 mg/mL em CH3CN) seguido por solução de carga de EDC (150 μL (37 μmol) de 47,3 mg/mL em água). Uma solução de cloridrato de HPV-alanina (21,3 mg, 22 μmol, preparada como descrito na publicação US número 2010/0305149, exemplo 1) em 500 μL de CH3CN:água (1:1) foi adicionado e então o pH da mistura de reação foi ajustado a 5.8. A reação foi monitorada por SEC HPLC (270 nm de detecção), e EDC adicional foi adicionado a 18 h (7 mg, 0,037 mmol) e 19 h (4,5 mg, 0,023 mmol). A mistura de reação foi diluída com 30 mL 1% de NaCl para levar CH3CN diminuindo até 4% de volume de reação total. A mistura bruta foi filtrada através uma membrana de 0,2 μm por seringa e então purificada por agitação da filtração da célula sobre uma membrana de 5000 MWCO (celulose regenerada) lavagem com 1% de NaCl até não serem observadas moléculas pequenas por SEC HPLC. O material purificado foi finalmente concentrado a 2,5 mL e armazenado como uma solução de NaCl a 1% a-20°C. Rendimento 86% (com base em HPV). A razão molar de HPV para polímero foi em média cerca de 11:1 a 15:1 Exemplo 60. Síntese de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-Fab)
Figure img0248
[00553] Para trastuzumab-F(ab)2 (3,44 mL, 0,325 μmol de 10,4 mg/mL de carga, preparado como descrito no exemplo 58) em PBS, pH 7.4 foi adicionada uma alíquota (138 μL, 0,467 mg) de carga TCEP recentemente preparada (3,38 mg/mL em tampão Et3NHOAc). A mistura foi incubada 1 h a 37°C. A mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente e então purificada sobre uma coluna PD10 que foi pré-equilibrada com tampão Et3NHOAc. Uma solução de 30 kDa PHF-GA-(HPV-Alanina)-SSPir (600 μL de 6,2 mg de equivalentes HPV /mL de carga, 3,72 mg de equivalentes HPV) em 1% de NaCl foi adicionado e a solução foi misturada em temperatura ambiente várias h. O conjugado resultante foi primeiro purificado por centrifugação sobre uma membrana 10 kDa MWCO e opcionalmente purificado por filtração em gel. O peso molecular do conjugado PHF-GA- (HPV-Alanina)-(Trastuzumab-Fab) como determinado por SEC foi de cerca de 108 kDa com polissacarídeos como os padrões de peso molecular. O teor de HPV como determinado por HPLC mostrou uma razão molar média de HPV para trastuzumab-Fab de cerca de 5:1 a 8:1. Para o 30 kDa PHF-GA- (HPV-Alanina)-(Trastuzumab-Fab) usado na figura 5 a razão de HPV para trastuzumab-Fab foi de cerca de 10:1 a 14:1. Exemplo 61. Síntese de (S) 2-Hidroxipropilamida-Auristatin F
Figure img0249
[00554] Para uma solução resfriada com gelo de auristatina F (50 mg, 0,067 mmol) em DMF (4 ml) foi adicionado HATU (51,0 mg, 0,134 mmol) e a mistura resultante foi agitada resfriada durante 20 min. Para isto foi adicionado (S)-1-aminopropan-2-ol (10,07 mg, 0,134 mmol) seguido por DIEA (0,035 ml, 0,201 mmol) e a mistura foi agitada resfriada durante 1 h e então durante a noite em temperatura ambiente. Purificação via HPLC preparativo seguido por liofilização deu o composto titular como um sólido amorfo branco como o sal de TFA (47 mg, 76% de rendimento) M/z = 803,4. Exemplo 62. Síntese de (R) 2-Hidroxipropilamida-Auristatina F
Figure img0250
[00555] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 61 exceto (R)-1-aminopropan-2-ol (10,07 mg, 0,134 mmol) foi usado em vez de (S)-1-aminopropan-2-ol. (49 mg, 80% de rendimento) M/z = 803,4. Exemplo 63. Síntese de XMT-A4 prolina éster
Figure img0251
[00556] Para uma solução resfriada com gelo de ácido (S)-1-(terc- butoxicarbonil) pirrolidina-2-carboxílico (2,79 mg, 0,013 mmol) em DMF (250 μL) foi adicionado DIC (2,018 μL, 0,013 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 15 min e então adicionada a uma solução de XMT-A4 (5 mg, 6,48 μmol) e DMAP (2,374 mg, 0,019 mmol) em DMF (250 μL). A mistura de reação foi agitada resfriada e então em temperatura ambiente. Após 4 h outra alíquota de ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil) pirrolidina-2- carboxílico (2,79 mg, 0,013 mmol), DIC (2,018 μL, 0,013 mmol) em 100 μL de DMF foi adicionado e a agitação foi continuada durante a noite em temperatura ambiente. O produto bruto foi purificado por HPLC seguido por liofilizado para dar o XMT-A4 Boc-protegido como um sólido amorfo branco (4,4 mg, 63% de rendimento). M/z = 969,4.
[00557] Para uma solução resfriada com gelo do composto XMT-A4 Boc-protegido com ácido 2,2,2-trifluoroacético (1:1) (4,4 mg, 4,06 μmol) em DCM (300 μL) foi adicionado TFA (31,3 μL, 0,406 mmol) e a mistura resultante foi agitada resfriada durante 1 h seguido por agitação em temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada, dissolvida em acetonitrila e liofilizada para dar o composto titular como um sólido branco (2,3 mg, 58% de rendimento). M/z = 869,4. Exemplo 64. Síntese de Auristatina F hidroxipropil amida
Figure img0252
[00558] Para uma solução de auristatina F (100 mg, 0,134 mmol) em DCM (5 ml) resfriada em um banho de gelo/sal foi adicionado DIC (0,052 ml, 0,335 mmol), 3-hidroxipropilcarbamato de terc-butila (117 mg, 0,670 mmol) e DMAP (82 mg, 0,670 mmol) e a mistura resultante foi agitada resfriada durante 2 h e então durante a noite em temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada por HPLC seguido por liofilização para dar o composto titular carbamato de terc-butila protegido como um sólido amorfo branco (121 mg, 89% de rendimento) M/z = 903,5.
[00559] Para uma solução resfriada com gelo do composto titular carbamato de terc-butila protegido, 2,2,2-trifluoroacetato (121 mg, 0,119 mmol) em DCM (4 ml) foi adicionado TFA (500 μl, 6,49 mmol) e a mistura resultante foi agitada resfriada durante 1 h e então em temperatura ambiente durante 1 h. Após remoção do TFA em excesso, o composto titular foi isolado por precipitação em etil éter como um sólido amorfo branco (109 mg, 93% de rendimento); MZ = 803,4. Exemplo 65 Síntese de 10K PHF-GA-SH-(Auristatina F hidroxipropil amida)
Figure img0253
[00560] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 51 exceto auristatina F hidroxipropil amida (exemplo 64) foi usado em vez de auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina (exemplo 50). Exemplo 66 Síntese de 10K PHF-GA-SH-(Auristatina F hidroxipropil amida)-(Trastuzumab-MCC)
Figure img0254
TRASTUZUMAB
[00561] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 52 exceto 10K PHF-GA-SH-(Auristatina F hidroxipropil amida) (exemplo 66) foi usado. O teor de auristatina F como determinado por LC-MS mostrou uma razão molar média de auristatina F para anticorpo de cerca de 21:1 a 25:1 Exemplo 67. Síntese de N-3(aminopropil)4-metil-4-((5-nitropiridin-2-il) disulfanil) pentanamida
Figure img0255
[00562] Para 3-aminopropilcarbamato de terc-butila (0,437 mL, 2,50 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,437 mL, 2,50 mmol) e 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-ol (846 mg, 6,26 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 10 minutos a 25°C e 2,5- dioxopirrolidin-1-il-4-metil-4-((5-nitropiridin-2-il) disulfanil) pentanoato (500 mg, 1,25 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 18 h. Purificação por HPLC deu o composto titular como seu carbamato de terc-butila (476,7 mg, 1,04 mmol, 83%) como um sólido bege: m/z 459 [M + H ]+.
[00563] Para o composto titular como seu carbamato de terc-butila (699,7 mg, 1,53 mmol) em DMF (5,00 mL) foi adicionado ácido 2,2,2- trifluoroacético (2,35 mL, 30,5 mmol). A mistura foi agitado a 25°C durante 1 h. Após remoção do solvente o composto titular resultante foi usado sem outra purificação: m/z 359 [M + H ]+. Exemplo 68 10K PHF-GA (25%)-SS-Dimetil-NO2 (5%):
Figure img0256
[00564] 10 kDa PHF-GA (2,37 g, 14,5 mmol, preparado usando o procedimento descrito no exemplo 2 com PHF 10.000 Da, 25% GA) foi diluído a 100 mL com água e NHS (0,133 g, 1,16 mmol) foi adicionado. A mistura foi resfriada a 0°C, pH ajustado a 5,5-6,0 e então N-3(aminopropil)-4- metil-4-((5-nitropiridin-2-il) disulfanil) pentanamida (547,0 mg, 1,16 mmol, exemplo 67) em CH3CN (4 mL) e DMF (0,5 mL) foram adicionados seguido por EDC (0,222 g, 1,16 mmol). O pH da mistura de reação foi novamente ajustado a 5,5-6,0 e agitado em temperatura ambiente durante 18 h. O EDC adicional (0,150 mg, 0,782 mmol) foi adicionado e a mistura agitada durante mais 1,5 h. A amostra foi purificada via diálise através de uma membrana de celulose regenerada para dar o composto titular (2,05 g). Exemplo 69. 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F- hidroxipropilamida-L-Alanina
Figure img0257
[00565] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 51 exceto 10K PHF-GA(25%)-SS-Dimetil-NO2 (5%) (exemplo 68) foi usado em vez de 10K PHF-GA-SS-Pir (exemplo 5) e (2S,3S)-1,4-dimercaptobutano- 2,3-diol (90 mg, 0,583 mmol) não foi adicionado. Exemplo 70. 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F- hidroxipropilamida-L-Alanina)-(S-S-Trastuzumab)
Figure img0258
[00566] O composto titular foi preparado de 10K PHF-GA-SS-Dimetil- NO2-(Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina) (exemplo 69) usando o procedimento descrito no exemplo 60 exceto Trastuzumab reduzido foi usado em vez de Trastuzumab-Fab. O teor de auristatina F como determinado por LC-MS mostrou uma razão molar média de auristatina F para anticorpo de cerca de 9:1 a 13:1 Exemplo 71 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina hidroxipropilamida)
Figure img0259
[00567] O composto titular foi preparado como descrito no exemplo 69 exceto 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2 (exemplo 68) e Auristatina F- hidroxipropilamida foram usados. Exemplo 72 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F- hidroxipropilamida)-(S-S-Trastuzumab)
Figure img0260
[00568] O composto titular foi preparado usando o procedimento descrito no exemplo 70 exceto 10K PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F- hidroxipropilamida) (exemplo 71) foi usado. O teor de auristatina F como determinado por LC-MS mostrou uma razão molar média de auristatina F para anticorpo de cerca de 11:1 a 15:1 Exemplo 73. Teste de viabilidade de célula para os conjugados PBRM-droga- polímero
[00569] Os conjugados PBRM-droga-polímero foram avaliados para sua viabilidade de tumor usando Cell Titer-Glo (Promega Corp). As células foram colocadas em placas de 96 cavidades de paredes pretas e deixadas aderir durante a noite a 37oC em uma atmosfera úmida de 5% de CO2. HER2 expressando células SKBR3, BT474, NCI-N87 e células expressando níveis baixos de HER2-MCF7 foram colocadas nas placas a uma densidade de 5.000 células por cavidade. No próximo dia o meio foi substituído com 50 μL de meio fresco e cargas de 50 μL 2x de conjugado PBRM-droga-polímero, conjugado droga-polímero ou droga foram adicionados nas cavidades apropriadas, misturados e incubados durante 72 h. Reagente Cell Titer-Glo foi adicionado nas cavidades em temperatura ambiente e o sinal luminescente foi medido após 10 min usando uma leitora de placa SpectraMax M5 (dispositivo molecular). As curvas de resposta de dose foram geradas usando software SoftMax Pro. Os valores IC50 foram determinados a partir de configuração de curva de quatro parâmetros.
[00570] Linhagens de células Raji e Ramos expressando CD20 foram colocadas em placas e analisados usando o mesmo procedimento descrito acima para células expressando HER2.
[00571] Tabelas I a VII são resultados ilustrativos para as propriedades de anti-proliferação do conjugado PBRM-droga-polímero em ou células expressando HER2 (tabelas I to IV, VI e VII) ou células expressando CD20 (tabela V).
[00572] Tabela I lista os resultados para o conjugado PBRM-droga- polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC), exemplo 7, (HPV:trastuzumab cerca de 14:1 a 17:1) e PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-M-(PEG)12), exemplo 8, (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1), conjugado droga-polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH, exemplo 6, e droga sozinha (HPV). Tabela I
Figure img0261
[00573] Os resultados da tabela I mostram que, para as linhagens de célula expressando HER2 SKBR3 e BT474, os conjugados PBRM-droga- polímero (exemplos 7 e 8) exibiram atividade antiproliferativa melhorada relativo ao conjugado droga-polímero (exemplo 6) e droga sozinha (HPV). Nestas linhagens de célula o conjugado droga-polímero (exemplo 6) é menos potente do que a droga sozinha (HPV).
[00574] Tabela II lista os resultados para (S)-2HPV (exemplo 22) e (R)-2HPV (exemplo 23). Tabela II
Figure img0262
[00575] Os resultados da tabela II mostram que, para as linhagens de célula SKBR3 e BT474 expressando HER2, os derivados de Vinca (exemplos 22 e 23) exibiram atividade antiproliferativa similar.
[00576] Tabela III relaciona os resultados para conjugado PBRM- droga-polímero (PHF-GA-SSPir-(HPV-Alanina)), exemplo 59) e conjugado droga-polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-Fab)), exemplo 60, HPV:trastuzumab-Fab cerca de 6:1 a 8:1). Tabela III
Figure img0263
[00577] Os resultados da tabela III mostram que, para as linhagens de células expressando HER2 SKBR3, BT474 e N87 o conjugado PBRM-droga- polímero (exemplo 60) exibiu maior atividade antiproliferativa comparativamente ao conjugado droga-polímero (exemplo 59).
[00578] Tabela IV lista os resultados para conjugado PBRM-droga- polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC)), exemplo 7 (HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) e PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-M-(PEG)12), exemplo 8, HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) e conjugado droga-polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH, exemplo 6). Tabela IV
Figure img0264
[00579] Os resultados da tabela IV mostram que, para as linhagens de células expressando HER2 SKBR3, BT474 e N87 ambos conjugados PBRM- droga-polímero (exemplo 7 e Exemplo 8) exibiram maior atividade antiproliferativa comparativamente ao conjugado droga-polímero (exemplo 6).
[00580] Tabela V relaciona os resultados para o conjugado PBRM- droga-polímero (PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Rituximab-MCC), (exemplo 54, HPV:Rituximab cerca de 12 a 15:1) e conjugado droga-polímero (PHF-GA- (HPV-Alanina)-SH, exemplo 6) para as linhagens de célula Raji e Ramos expressando CD20. Tabela V
Figure img0265
[00581] Os resultados da tabela V mostram que, para as linhagens de célula Raji e Ramos expressando CD20 o conjugado PBRM-droga-polímero (exemplo 54) exibiu maior atividade antiproliferativa comparativamente aos conjugados droga-polímero (exemplo 6).
[00582] Tabela VI relaciona os resultados para conjugados PBRM- droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (cerca de 5:1) (exemplo 55); PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (cerca de 10:1) (exemplo 56); e PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (cerca de 20:1) (exemplo 57); Tabela VI
Figure img0266
[00583] Os resultados da tabela VI mostram que, para as linhagens de células SKBR3 e BT474 expressando HER2 o efeito anti-proliferação é dependente sobre a carga de droga. Os conjugados PBRM-droga-polímero com maior carga de droga (exemplo 57) exibiram maior atividade antiproliferativa comparativamente aos conjugados com menor carga de droga (exemplo 56 e Exemplo 55).
[00584] Tabela VII relaciona os resultados para os conjugados PBRM- droga-polímero conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(Auristatina F- hidroxipropilamida-L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (exemplo 52, Auristatina F:trastuzumab cerca de 20:1 a 22:1); conjugado droga-polímero PHF-GA-SH-(Auristatina F-propilamida-L-Alanina) (exemplo 51) e Auristatina F-hidroxipropilamida (exemplo 48) Tabela VII
Figure img0267
[00585] Os resultados da tabela VII mostram que para as linhagens de células SKBR3, BT474 e N87 expressando HER2 os conjugados PBRM- droga-polímero (exemplo 52) e droga sozinha (exemplo 48) exibiram maior atividade antiproliferativa comparado ao conjugado droga-polímero (exemplo 51). O conjugado de PBRM-droga-polímero retém a potência da droga sozinha. Exemplo 74. Teste de viabilidade de teste para compostos de droga
[00586] Os compostos de droga foram avaliados para sua viabilidade de tumor usando Cell Titer-Glo (Promega Corp) como descrito no exemplo 73. Tabela VIII são os resultados ilustrativos para as propriedades de antiproliferação dos compostos de droga nas células expressando HER2 (“ND” = não determinado). Tabela VIII
Figure img0268
Figure img0269
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Exemplo 75. Estudos de eficácia in vivo, farmocinética e biodistribuição
[00587] A fim de avaliar a eficácia e farmocinética do conjugado proteína-droga, modelos de xenoenxertos subcutâneos e ortotópicos de camundongo e rato são usados.
[00588] Os artigos do testes, junto com os controles apropriados são administrados intravenosamente (IV) via injeção cauda-veia ou intraperitonealmente. Para verificar os níveis de circulação do artigo do teste a amostra de sangue é coletada em tempos designados via punção cardíaca terminal. As amostras foram mantidas em temperatura ambiente durante 30 min. para coagular, então centrifugadas durante 10 min. a 1.000x g a 4 °C e imediatamente congeladas a-80 °C. As concentrações totais de PBRM nas amostras de soro foram medidas usando ELISA. A concentração de droga circulando (conjugado e livre) é determinada por métodos de LC/MS /MS.
[00589] Para verificar a eficácia do conjugado PBRM-droga-polímero o tamanho do tumor é medido usando calibradores digitais. O volume o tumor é calculado e usado para determinar o atraso no crescimento do tumor.
[00590] Para determinação da biodistribuição da droga, tumor, e órgãos principais como, por exemplo, fígado, rim, baço, pulmão, coração, músculos, e cérebro são coletados, imediatamente congelados em nitrogênio líquido, armazenados a-80 °C. Os níveis de PBRM e/ou droga são determinados em tecidos homogeneizados por métodos padrão, como, por exemplo, os métodos ELISA ou LC/MS /MS respectivamente. Exemplo 76. Resposta do crescimento do tumor à administração dos conjugados PBRM-droga-polímero
[00591] Camundongos fêmeas CB-17 SCID foram inoculadas subcutaneamente com células NCI-N87 (n=10 para cada grupo) ou tumores BT474 (n=12 ou n=10 para cada grupo). Os compostos ou carreadores do teste foram dosados IV como uma dose única no dia 1; uma vez cada semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente; ou uma vez cada semana durante 3 semanas no dia 17, dia 24 e dia respectivamente. A dose do conjugado droga-polímero foi determinada de tal modo que ela distribui a mesma quantidade de droga como a presente na dose mais alta do conjugado PBRM-droga-polímero administrado O tamanho o tumor foi medido nos tempos indicados nas Figuras 1, 2, 3, 4 e 5 usando calibradores digitais. O volume do tumor foi calculado e foi usado pra determinar o atraso no crescimento do tumor. Os camundongos foram sacrificados quando os tumores alcançaram um tamanho de 1000 mm3, 800 mm3, ou 700 mm3. Os volumes do volume do tumor são relatados como o meio ± SEM para cada grupo.
[00592] A Figura 1 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com células NCI-N87 (n=10 para cada grupo) após IV administração do carreador, conjugado PBRM- droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12), (Exemplo 8, HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) a 15,6 mg/kg, 5,2 mg/kg, 1,6 mg/kg e 0.5 mg/kg respectivamente e conjugado droga-polímero PHF- GA-(HPV-Alanina)-SH (Exemplo 6) (dosado a uma dose Vinca que foi equivalente aquela presente no Exemplo 8 com 15,6 mg/kg) dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente. Os resultados mostram uma resposta da dose para o conjugado PBRM-droga- polímero (Exemplo 8) com a dose mais alta de 15,6 mg/kg mostrando redução do volume do tumor com 80% de respostas parciais (8/10); 20% de respostas completas (2/10) e 0% de sobrevivência livre de tumor (0/10). O carreador, conjugado droga-polímero (Exemplo 6) e conjugado PBRM-droga-polímero (Exemplo 8) com doses de 5,2 mg/kg, 1,6 mg/kg e 0,5 mg /kg mostraram todos um aumento no volume do tumor.
[00593] A Figura 2 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=12 para cada grupo) após IV administração do carreador; PBRM (trastuzumab) com 15 mg/kg; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 7,5 mg/kg e PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Rituximab-MCC) (Exemplo 54, HPV:Rituximab cerca de 12:1 a 15:1) com 20 mg/kg; conjugado droga- polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-SH (Exemplo 6) (dosado com uma dose Vinca que foi equivalente a presente no Exemplo 7 com 15 mg/kg) em combinação com trastuzumab com 15 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente. Os resultados mostram redução no volume do tumor para o Exemplo 7 com 100% de respostas completas e 100% de sobrevivência livre de tumor. O carreador, trastuzumab sozinho, combinação do Exemplo 6 e trastuzumab; e Exemplo 54 mostraram todos um aumento no volume no tumor. A conjugação de uma PBRM específica para células HER2 (trastuzumab) em um conjugado droga- polímero foi necessária para a redução do volume do tumor como nem um conjugado droga-polímero em combinação com uma PBRM (Exemplo 6 em combinação com trastuzumab) nem conjugação de uma PBRM não específica para célula HER2 (Rituximab, Exemplo 54) mostraram redução no volume do tumor).
[00594] A Figura 3 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=12 para cada grupo) após IV administração do carreador; PBRM (trastuzumab) com 15 mg/kg; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(Auristatina F- hidroxipropilamida-L-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 52, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 20:1 a 22:1) com 7,5 mg/kg; conjugado droga-polímero PHF-GA-SH-(Auristatina F-propilamidea-L-Alanina) (Exemplo 51) (dosado com uma dose de auristatina que foi equivalente aquela presente no Exemplo 52 com 15 mg/kg) em combinação com trastuzumab com 15 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente. Os resultados mostram redução do volume do tumor para o Exemplo 52 com 100% de respostas completas (11/11) e 100% e sobrevivência livre de tumor (11/11). O carreador, trastuzumab sozinho, combinação do Exemplo 51 e trastuzumab mostram todos um aumento do volume do tumor. A conjugação da PBRM em conjugado droga-polímero foi necessária para a redução do volume do tumor tanto como um conjugado de droga-polímero em combinação com uma PBRM (Exemplo 51 em combinação com trastuzumab) como PBRM (trastuzumab) sozinha mostrou redução no volume do tumor.
[00595] A Figura 4 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após IV administração do carreador; conjugados PBRM- droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 3,5 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab- MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 10 mg/kg dosados como uma dose única no dia 1; conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 10 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 17, dia 24 e dia 31 respectivamente. Os resultados mostram redução do volume do tumor para o Exemplo 7 para todos os regimes de dosagem e todas as concentrações de dosagens testadas com 100% de respostas completas (10/10) e 100% de sobrevivência livre de tumor (10/10) dosados com 3,5 mg/kg uma vez por semana durante 3 semanas; com 90% de respostas parciais (9/10); 10% de respostas completas (1/10) e 10% de sobrevivência livre de tumor (1/10) dosados com 10 mg/kg uma vez por semana durante 3 semanas em camundongos com tumores grandes; e 100%e respostas completas (10/10) e 100%e sobrevivência livre de tumor (10/10) dosados com 10 mg/kg como uma dose única. O carreador mostrou um aumento no volume do tumor.
[00596] A Figura 5 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após IV administração do carreador ou 30 kDa PHF-GA- (HPV-Alanina)-(Trastuzumab-Fab) (Exemplo 60, HPV:trastuzumab-Fab cerca de 10:1 a 14:1) com 7 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente. Os resultados mostram uma redução do volume do tumor para o Exemplo 60 com 100% de respostas completas (10/10) e 100% de sobrevivência livre de tumor (10/10) comparado a um aumento do volume do tumor para o carreador.
[00597] A Figura 8 apresenta os resultados para a resposta do tumor em camundongos inoculados subcutaneamente com tumores BT474 (n=10 para cada grupo) após IV administração do carreador; conjugados PBRM- droga-polímero PHF-GA-(Auristatina F-hidroxiproplamida-L-Alanina)- (Trastuzumab-MCC) (Exemplo 52, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 24:1 a 28:1) e conjugado droga-polímero PHF-GA-SS-Dimetil-NO2-(Auristatina F-hidroxipropilamida-L-Alanina)-(S-S-Trastuzumab) (Exemplo 70, Auristatina F:Trastuzumab cerca de 9:1 a 13:1) com 2 mg/kg e 4 mg/kg dosados uma vez toda semana durante 3 semanas no dia 1, dia 8 e dia 15 respectivamente. Os resultados mostram a redução completa do volume do tumor para o Exemplo 70 com doses de 2 mg/kg e 4 mg/kg e para o Exemplo 52 com 4 mg/kg.
[00598] Em todos os experimentos in vitro ou in vivo descritos aqui, salvo se especificado em contrário, as doses usadas foram todas com base na PBRM (por exemplo, anticorpos de fragmentos de anticorpo) dos conjugados PBRM-droga-polímero. Exemplo 77. Estabilidade in vitro dos conjugados PBRM-droga-polímero
[00599] A estabilidade in vitro dos conjugados PBRM-droga-polímero foi avaliada pela incubação do conjugado PBRM-droga-polímero em salina fisiológica ou plasma animal a 37oC, pH 7,4. A taxa de degradação do conjugado PBRM-droga-polímero foi determinada monitorando a quantidade de droga liberada dentro da matriz por análise LC/MS/MS após o isolamento da droga liberada do conjugado PBRM-droga-polímero por extração de líquido-líquido.
[00600] A Tabela IX relaciona a meia vida do (T1/2) do conjugado PBRM-droga-polímero, PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) do Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) em plasma de camundongo, plasma de rato e plasma de cachorro. Tabela IX
Figure img0272
[00601] Os resultados mostram que o conjugado PBRM-droga- polímero do Exemplo 8 estava estável no plasma animal e liberou a droga como planejado. Exemplo 78. Estudos de ligação de ligando por ressonância de plasma de superfície BIAcore (SPR)
[00602] A ligação cinética do conjugado PBRM-droga-polímero em um receptor imobilizado foi determinada por BIAcore SPR. As constantes de ligação para a PBRM no conjugado PBRM-droga PHF-GA-(HPV-Alanina)- (Trastuzumab-M-(PEG)12) Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) e PBRM (isto é, trastuzumab) sozinho foram determinadas usando procedimentos padrão BIAcore.
[00603] Usando química de copulação de amina padrão, hErbB2 foi imobilizado em três canais de fluxo para a superfície do chip do sensor de ressonância de plasma em três densidades similares. Trastuzumab se ligou rapidamente ao hErbB2 imobilizado demonstrando assim que ambos os parceiros de ligação estavam ativos. A Tabela X provê os parâmetros de ligação ka (constante de associação ou afinidade) e KD (constante de dissociação) medidos a 25°C para o conjugado do Exemplo 8 e trastuzumab usando um biossensor óptico BioRad ProteOn XPR36 equipado com um chip de sensor GLC e equilibrado com tampão de ciclo. Tabela X
Figure img0273
[00604] Os resultados mostram que a PBRM no conjugado PBRM- droga foi reconhecida pelo receptor da PBRM. Exemplo 79. PK do plasma de camundongo e distribuição de tecido após a administração dos conjugados PBRM-droga-polímero
[00605] A estabilidade PK no plasma e a distribuição de tecido do conjugado PBRM-droga foi determinada após a administração do conjugado PBRM-droga em camundongos fêmea CB-17 SCID com tumores NCI-N87 (n=3). As concentrações do HPV conjugado foram determinadas por análise LC/MS/MS. A concentração do conjugado HPV-trastuzumab foi estimada a partir dos dados do conjugado HPVA. Concentração total de trastuzumab foi determinada por ELISA
[00606] Os camundongos receberam um bolo IV de conjugado PBRM- droga PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) como no Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15 mg/kg (com base no trastuzumab).
[00607] A Figura 6 mostra o PK do plasma para o HPV conjugado e trastuzumab após a administração IV do bolo de conjugado PBRM-droga PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) como no Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15 mg/kg (com base no trastuzumab).
[00608] A Figura 7 mostra a quantidade de HPV que se acumulou em vários órgãos dos camundongos após IV administração do bolo de conjugado PBRM-droga PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M-(PEG)12) como no Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 to 18:1) com 15 mg/kg (com base no trastuzumab).
[00609] Os resultados mostram que o conjugado PBRM-droga estava estável no plasma e que a droga alcançou o tumor. O pico de acumulação de tumor do HPV foi observado entre 24 e 72 horas. Exemplo 80. PK do plasma dos camundongos após administração dos conjugados PBRM-droga-polímero
[00610] A estabilidade PK do plasma do conjugado PBRM-droga foi determinada após a administração do conjugado PBRM-droga em camundongos fêmea CB-17 SCID com tumores N87 (n=3) ou tumores BT474 (n=3). A concentração do HPV conjugado foi determinada por análise LC/MS/MS. A concentração total de trastuzumab foi determinada por ELISA.
[00611] A Tabela XI provê a meia vida (T1/2) e área sob a curva (AUC) do conjugado PBRM-droga, PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-M- (PEG)12) Exemplo 8 (HPV:trastuzumab cerca de 16:1 a 18:1) com 15,6 mg/kg com base no trastuzumab em um modelo xenoenxerto N87 e conjugados PBRM-droga-polímero PHF-GA-(HPV-Alanina)-(Trastuzumab-MCC) (Exemplo 7, HPV:trastuzumab cerca de 19:1 a 22:1) com 15.0 mg/kg com base no trastuzumab no modelo xenoenxerto BT474. Tabela XI
Figure img0274
[00612] Os resultados mostram que o conjugado PBRM-droga- polímero dos Exemplos 7 e 8 estavam estáveis no plasma.
INCORPORAÇÃO COMO REFERÊNCIA
[00613] A descrição completa de cada um dos documentos de patente e artigos científicos referidos aqui é incorporada como referência para todos os propósitos.
EQUIVALENTES
[00614] A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem se desviar do espírito ou características essenciais da mesma. As formas de realização precedentes devem ser consideradas assim em todas as referências ilustrativas em vez de limitar a invenção descrita aqui. O escopo da invenção é indicado assim pelas reivindicações anexas em vez de pela descrição precedente, e todas as mudanças que estejam dentro do significado e faixa de equivalência das reivindicações são planejadas como sendo aqui englobadas.

Claims (22)

1. Suporte polimérico de Fórmula (Ia) útil para conjugar com uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM), caracterizado em que
Figure img0275
o suporte compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil- formal) (PHF), tendo um peso molecular variando de 2 kDa a 40 kDa; cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; LD1 é uma porção contendo carbonila; em que
Figure img0276
contém uma ligação biodegradável de modo que quando a ligação é quebrada, D é liberado em uma forma ativa para seu efeito terapêutico pretendido; e o
Figure img0277
em
Figure img0278
entre LD1 e D denota ligação direta ou indireta de D a LD1;em que
Figure img0279
é é diferente de
Figure img0280
em
Figure img0281
e LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz formar uma ligação covalente com um grupo funcional do PBRM, e o
Figure img0282
entre LD1 e LP2 denota união direta ou indireta de LP2 a LD1; m é um inteiro de 1 a 300, m1 é um inteiro de 1 a 140, m2 é um inteiro de 1 a 40, m3 é um inteiro de 1 a 18, e a soma de m, m1, m2e m3 está na faixa de 15 a 300.
2. Suporte de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que PHF tem um peso molecular na faixa de 6 kDa a 20 kDa, preferencialmente, m2 é um inteiro de 2 a 20, m3 é um inteiro de 1 a 9, e m1 é um inteiro de 1 a 75, e a soma de m, m1, m2e m3 está na faixa de 45 a 150.
3. Suporte de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que PHF tem um peso molecular na faixa de 8 kDa a 15 kDa, preferencialmente, m2 é um inteiro de 2 a 15, m3 é um inteiro de 1 a 7, e m1 é um inteiro de 1 a 55, e a soma de m, m1, m2e m3 está na faixa de 60 a 110.
4. Suporte, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o grupo funcional LP2 é selecionado de -SRp, -S-S-LG, maleimido e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo protetor de enxofre.
5. Suporte, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que LD1 compreende -X-(CH2)v-C(=O)- com X C(=O)-LD1-è— diretamente conectado ao grupo carbonil de
Figure img0283
, em que X é CH2, O ou NH, e v é um número inteiro de 1 a 6.
6. Suporte, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que LP2 contém uma ligação biodegradável.
7. Suporte polimérico compreendendo um PBRM e um ou mais carreadores poliméricos carregando D conectados ao PBRM, caracterizado pelo fato de que cada carreador polimérico é de Fórmula (Ic):
Figure img0284
em que: o PBRM tem um peso molecular de 40 kDa ou mais e, de preferência, o PBRM é um peptídeo, um anticorpo ou um fragmento de anticorpo; o suporte compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil- formal) (PHF) com um peso molecular variando de 2 kDa a 40 kDa; cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico com um peso molecular < 5 kDa; LD1 é uma porção contendo carbonil; em que
Figure img0285
contém uma ligação biodegradável, de modo que quando a ligação é quebrada, D é liberado em uma forma ativa para seu efeito terapêutico pretendido; e o
Figure img0286
em
Figure img0287
entre LD1 e D denota ligação direta ou indireta de D a em que
Figure img0288
c é diferente de
Figure img0289
em
Figure img0290
( e D e LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional do PBRM, e o
Figure img0291
entre LD1 e LP2 denota ligação direta ou indireta de LP2 a LD1;o terminal
Figure img0292
ligado a LP2 denota a ligação direta ou indireta de LP2 ao PBRM, de modo que o carreador polimérico carregando D está conectado ao PBRM; m é um número inteiro de 1 a 300, m1 é um número inteiro de 1 a 140, m2 é um número inteiro de 1 a 40, m3 é um número inteiro de 0 a 18, m4 é um número inteiro de 1 a 10, e a soma de m, m1, m2 e m3 varia de 15 a 300; desde que o número total de LP2 conectados ao PBRM seja 10 ou menos.
8. Suporte polimérico de Fórmula (Ia) útil para conjugar com uma molécula de reconhecimento à base de proteína (PBRM), caracterizado
Figure img0293
em que o suporte compreende poli(1-hidroximetiletileno hidroximetil-formal) (PHF), tendo um peso molecular variando de 20 kDa a 150 kDa; cada ocorrência de D é independentemente um agente terapêutico tendo um peso molecular < 5 kDa; LD1 é uma porção contendo carbonila; em que
Figure img0294
em contém uma ligação biodegradável de modo que, quando a ligação é quebrada, D é liberado em uma forma ativa para seu efeito terapêutico pretendido; e o
Figure img0295
, em
Figure img0296
entre LD1 e D denota união direta ou indireta de D a LD1; em que
Figure img0297
é diferente de
Figure img0298
em
Figure img0299
( e D e LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz formar uma ligação covalente com um grupo funcional de PBRM, e o
Figure img0300
entre LD1 e LP2 denota união direta ou indireta de LP2 a LD1; m é um inteiro de 1 a 1100, m1 é um inteiro de 1 a 330, m2 é um inteiro de 3 a 150, m3 é um inteiro de 1 a 55, e a soma de m, m1, m2e m3 está na faixa de 150 a 1100.
9. Suporte, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o PHF tem um peso molecular de 40 kDa a 150 kDa, m2 é um número inteiro de 4 a 150, a soma de m, m1, m2 e m3 variando de cerca de 300 a cerca de 1100.
10. Suporte de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que PHF tem um peso molecular de 50 kDa a 100 kDa, m2 é um inteiro de 5 a 100, m3 é um inteiro de 1 a 40, e m1 é um inteiro de 1 a 220, e a soma de m, m1, m2e m3 está na faixa de cerca de 370 a cerca de 740.
11. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 10, caracterizado pelo fato de que o grupo funcional LP2 é selecionado dentre -SRp, -S-S-LG, maleimido, e halo, em que LG é um grupo de saída e Rp é H ou um grupo de proteção de enxofre.
12. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 11, caracterizado pelo fato de que LD1 compreende-X-(CH2)v-C(=O)- com X C(=O)-LD1_à— diretamente conectado ao grupo carbonila de
Figure img0301
, em que X é CH2, O, ou NH, e v é um inteiro de 1 a 6.
13. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 12, caracterizado pelo fato de que LP2 contém uma ligação biodegradável.
14. Suporte polimérico compreendendo um PBRM e um carreador polimérico carregando D conectado ao PBRM, caracterizado pelo em que:
Figure img0302
cada PBMR, independentemente, tem um peso molecular de 80 kDa ou menos, e preferencialmente o PBRM é um peptídeo, um anticorpo ou um fragmento de anticorpo; o suporte compreende poli (1-hidroximetiletileno hidroximetil- formal) (PHF) tendo um peso molecular na faixa de cerca de 20 kDa a cerca de 150 KDa; cada ocorrência de D é independentemente um terapêutico com um peso molecular < 5 kDa; LD1 é uma porção contendo carbonil; em que
Figure img0303
contém uma ligação biodegradável de modo que quando a ligação é quebrada, D é liberado em uma forma ativa para seu efeito terapêutico pretendido; e o < C(=O)-LD14-D , TDI em
Figure img0304
entre L e D denota ligação direta ou indireta de D ao LD1; em que
Figure img0305
é diferente de
Figure img0306
em
Figure img0307
D e LP2 é uma porção contendo um grupo funcional que é capaz de formar uma ligação covalente com um grupo funcional do PBRM, e o
Figure img0308
entre LD1 e LP2 denota ligação direta ou indireta de LP2 a LD1; em que
Figure img0309
c em
Figure img0310
PBRM é diferente de
Figure img0311
em
Figure img0312
em que o terminal
Figure img0313
ligado a LP2 denota a ligação direta ou indireta de LP2 ao PBRM após a formação de uma ligação covalente entre um grupo funcional de LP2 e um grupo funcional de PBRM; m é um inteiro de 1 a 1100, m1 é um inteiro de 1 a 330, m2 é um inteiro de 3 a 300, m3 é um inteiro de 0 a 150, m4 é um inteiro de 1 a 30; e a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de 150 a 1100.
15. Suporte de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de 45 a 150, preferencialmente, m1 é um inteiro de 1 a 75, m2 é um inteiro de 2 a 20, e m3 é um inteiro de 1 a 9, e PHF tem um peso molecular variando na faixa de cerca de 6 kDa a cerca de 20 kDa.
16. Suporte de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a soma de m, m1, m2, m3 e m4 está na faixa de 60 a 110, preferencialmente, m1 é um inteiro de 1 a 55, m2 é um inteiro de 2 a 15, e m3 é um inteiro de 1 a 7, e PHF tem um peso molecular variando na faixa de cerca de 8 kDa a cerca de 15 kDa.
17. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que cada ocorrência de D é, independentemente, selecionada dentre alcalóides vinca, auristatinas, tubulisinas, duocarmicinas, inibidores de cinase, inibidores de MEK, inibidores de KSP, pirrolobenzodiazepinas, campotecinas não naturais, maitansinoides, fármacos que se ligam ao DNA, e análogos dos mesmos.
18. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações
Figure img0314
a 6, 8 a 13 ou 17, caracterizado pelo fato de que quando não ligado a PBRM, compreende um grupo terminal WP, no qual cada Wp é, independentemente:
Figure img0315
Figure img0316
em que R1K é um grupo de saída, R1A é um grupo de proteção de enxofre, e o anel A é C3-C30 cicloalquila ou heterocicloalquila de 3 a 19 membros, e R1J é hidrogênio, uma porção alifática C1-C20, heteroalifática C1-C20, carbocíclica C3-C30, ou heterocicloalquila de 3 a 19 membros; preferencialmente, R1A é
Figure img0317
em que r é 1 ou 2 e cada de Rs1, Rs2, e Rs3 é hidrogênio, uma porção alifática C1-C20, heteroalifática C1-C20, carbocíclica C3-C30, ou heterocicloalquila de 3 a 19 membros.
19. Suporte de acordo com qualquer uma das reivindicações ou 14 a 17, caracterizado pelo fato de que
Figure img0318
quando ligado a PBRM, é -XP-MP1-YP-MP2"-ZP-MP3-QP-MP4—, com XP diretamente conectado ao grupo carbonila de
Figure img0319
e MP4 diretamente conectado a PBRM, em que XP é -O-, -S-, -N(R1)-, ou ausente, em que R1 é hidrogênio, uma porção alifática C1-C20, heteroalifática C1-C20, carbocícica C3-C30, ou heterocicloalquila de 3 a 19 membros, -C(=O)R1B, -C(=O)OR1B, ou -SO2R1B, ou -N(R1)- é uma porção heterocicloalquila de 3 a 19 membros, em que R1B é hidrogênio, uma porção alifática C1-C20, heteroalifática C1-C20, carbocíclica C3-C30, ou heterocicloalquila de 3 a 19 membros; cada de YP, ZP, e QP, independentemente, está ausente, ou é uma porção de ligante biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo em —S-S—, —C(—O)O—, —C(—O)NR2—, —OC(—O)—, —NR2C(—O)—, —OC(—O)O—, —OC(—O)NR2—, —NR2C(—O)O—, —NR2C(—O)NR3—, 2 2 23 2 2 —C(OR )O—, —C(OR )S—, —C(OR )NR —,—C(SR )O—, —C(SR )S—, 2 3 23 23 23 4 —C(SR )NR —, —C(NR R )O—, —C(NR R )S—,—C(NR R )NR —, —C(—O)S—, —SC(—O)—, —SC(=O)S—, —OC(=O)S—, —SC(—O)O—, —C(—S)S—, —SC(—S)—, —OC(—S)—, —C(—S)O—, —SC(=S)O—, —OC(=S)S—, —OC(=S)O—, —SC(=S)S—, —C(—NR2)O—, —C(—NR2)S—, —C(—NR2)NR3—, —OC(=NR2)—, —SC(=NR2)—, 3 2 2 23 23 —NR C(—NR )—, —NR SO2—, —NR NR —, —C(—O)NR NR —, 23 23 23 —NR NR C(—O)—, —OC(—O)NR NR —, —NR NR C(—O)O—, 23 23 4 23 —C(—S)NR NR —, —NR NR C(—S)—, —C(—NR )NR NR —, —NR2NR3C(—NR4)—, —O(N—CR3)—, —(CR3—N)O—, —C(—O)NR2-(N—CR3)—, —(CR3—N)-NR2C(—O)—, —SO3—, —NR2SO2NR3—, —SO2NR2—, e poliamida , em que cada ocorrência de R2, R3, e R4 é, independentemente, hidrogênio ou uma porção alifática C1-C20, heteroalifática C1-C20, carbocíclica C3-C30, ou heterocíclica de 3 a 19 membros, ou cada ocorrência de -NR2- ou-NR2NR3- é uma porção heterocicloalquila de 3 a 19 membros; e cada de MP1, MP2, MP3, e MP4 independentemente, está ausente, ou é uma porção de ligante não biodegradável selecionada dentre o grupo consistindo em C1-C20 alquila, C1-C20 alquenila, C1-C20 alquinila, C1-C20 heteroalquila, C1-C20 heteroalquenila, C1-C20 heteroalquinila, uma porção carbocíclica C3-C30, uma porção heterocíclica de 3 a 19 membros, e uma combinação das mesmas, e cada de MP1, MP2, e MP3, opcionalmente, contém um ou mais -(C=O)-, mas não contém qualquer referida porção de ligante biodegradável; desde que para cada
Figure img0320
conectado a PBRM, pelo menos um de XP, YP, ZP, e QP não está ausente; preferencialmente, cada de MD1 e MP1 é, independentemente, C1-6 alquila ou C1-6 heteroalquila, e cada um de MD2, MD3, MD4, MP2, MP3, e MP4, independentemente está ausente, é C1-6 alquila, C3-C30 cicloalquila, C1-C20 heteroalquila, heterocicloalquila de 3 a 19 membros, ou uma combinação das mesmas; e mais preferivelmente, para cada
Figure img0321
, no máximo um de MP2 e MP3 tem uma das seguintes estruturas:
Figure img0322
Figure img0323
em que q é um inteiro de 0 a 12 e cada de p e t, independentemente, é um inteiro de 0 a 3.
20. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato compreendendo um suporte como definido em qualquer uma das reivindicações 7 ou 14 a 17 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
21. Composto, caracterizado pelo fato de ser de Fórmula (XIIb):
Figure img0324
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R42’ é -NH-R40 ou -O-R42; cada um de R40 ou R42 independente é selecionado dentre o grupo consistindo em
Figure img0325
Figure img0326
a é um inteiro de 1 a 6; e c é um inteiro de 0 a 3, e preferencialmente, R40
Figure img0327
Figure img0328
mais preferivelmente, o composto é selecionado de
Figure img0329
Figure img0330
sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
22. Uso de um suporte como definido em qualquer uma das reivindicações 7 ou 13 a 18, caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para tratar câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, preferencialmente, D é liberado localmente em uma célula alvo a qual o PBMR é cpaz de se ligar, e em que o câncer é selecionado dentre o grupo consistindo em câncer anal, astrocitoma, leucemia, linfoma, cabeça e pescoço, fígado, testicular, cervical, sarcoma, hemangioma, esofageano, olho, laringeal, boca, mesotelioma, pele, mieloma, oral, retal, garganta, bexiga, mama, útero, ovário, próstata, pulmão, cólon, pâncreas, renal, e gástrico.
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