BG108553A

BG108553A - Кристали, включващи сол на ябълчената киселина c n-[2-(диетиламино) етил]-5-[(5-флуоро-2-оксо-3н-индол-3-илиден) метил]-2,4-диметил-1н-пирол-3-карбоксамид, методи за получаването им и техни състави

Info

Publication number: BG108553A
Application number: BG108553A
Authority: BG
Inventors: Michael Hawley; Thomas Fleck; Stephen Prescott; Mark Maloney
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Company
Priority date: 2001-08-15
Filing date: 2004-01-29
Publication date: 2005-04-30
Also published as: CY1121552T1; EP3168218B1; MXPA04001452A; JP2005503386A; SI1419151T1; KR100639281B1; ECSP044975A; KR20040030074A; AP2004002976A0; HU229206B1; IS7147A; UA76483C2; HUP0700036A2; EP2332934A1; EP1419151B1; JP4159988B2; HRP20040112A2; SI3168218T1; IL160097A0; NZ531232A

Abstract

Изобретението се отнася до кристали и техни състави, които включват сол на ябълчена киселина с N-[2-(диетиламино) етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-3 Н-индол-3-илиден) метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид, както и до методи за получаване на кристалите. а

Description

Област на приложение

Настоящото изобретение се отнася до кристали и техни състави, в които кристалите включват сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3 илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид.

Настоящото изобретение се отнася също до методи за получаване на такива кристали.

Предшестващо състояние на техниката

Протеин киназите (РК) са ензими, които катализират фосфорилирането на хидрокси групи на тирозинови, серинови и треонинови остатъци на протеини. Последиците от тази привидно проста активност са изумителни: клетъчен растеж, диференциация и пролиферация, т.е., на практика всички аспекти на клетъчния живот по един или друг начин, зависят от РК активността. Освен това, анормалната РК активност е била свързана с гостоприемник на заболявания, вариращи от относително не застрашаващи живота заболявания като псориазис, до извънредно злокачествени заболявания като глиобластома (карцином на мозъка). РК могат удобно да бъдат разделени на два класа: протеинови тирозин кинази (РТК) и серин-треонинови кинази (STK).

Един от главните аспекти на РТК активността е тяхната замесеност с рецепторите на растежния фактор. Рецепторите на растежния фактор са протеини на повърхността на клетките. Когато са свързани с лиганд на растежен фактор, рецепторите на растежния фактор се привеждат в активна форма, която взаимодейства с протеини на вътрешната повърхност на клетъчна мембрана. Това води до фосфорилиране на тирозиновите остатъци на рецептора и другите протеини и до образуването вътре в клетката на комплекси с множество цитоплазмени сигнализиращи молекули, които от своя страна осъществяват множество клетъчни отговори, такива като клетъчно делене (пролиферация), клетъчна диференциация, клетъчен растеж, експресиране на метаболитни ©ефекти към извънклетъчното микрообкръжение и т.н.

Малки молекули, които действат като РК инхибитори са били идентифицирани и включват например, 3-пирол заместени 2-индолинонови съединения, както е разкрито в РСТ международна публикация № WO 01/60814 (Tang et al.). З-Пирол заместени 2-индолинонови съединения включват например, М-[2-(диетиламино)етил]5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил1Н-пирол-3-карбоксамид, както е разкрито в РСТ Международна публикация № WO 01/60814 (Tang et al.). Обаче, в разкритието не се говори относно получаването на, и естеството на специфични кристални форми на соли на М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2ф оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид.

Съществува необходимост за кристални форми на такива вещества, които имат превъзходни химични и/или физични свойства, които са полезни в приложения за доставяне на лекарства.

Кратко изложение на изобретението

В един аспект, настоящото изобретение осигурява кристал, включващ ябълчно-кисела сол на съединение, имащо структурата:

Съединението с горната структура е известно също като N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид. Солта на ябълчената киселина може да бъде сол на D-ябълчена киселина; D,L-ябълчена киселина; L-ябълчена киселина; или техни комбинации. За предпочитане, солта на ябълчената киселина е сол на L-ябълчена киселина. За предпочитане, кристалът е безводен. За предпочитане, кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета, и по-предпочитано при около 13.2, 19.4, 24.2 и 25.5 градуса две тета, и най-предпочитано както е описано в Таблица 1 за Кристална форма I, в прахова рентгенова дифракционна решетка. За предпочитане, кристалът включва най-много около 2 тегл.% вода, по-предпочитано най-много около 0.5 тегл.% вода, и най-предпочитано най-много около 0.2 тегл.% вода. За предпочитане, кристалът има точка на топене от поне около 190 °C, и попредпочитано поне около 195 °C. Състави, включващи кристалите описани тук, също са предоставени. За предпочитане, съставите включват терапевтично ефективно количество от кристалите. По избор, съставите включват ексципиент, за предпочитане фармацевтично приемлив ексципиент.

В друг аспект, настоящото изобретение осигурява кристал, включващ сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5>

флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Нпирол-3-карбоксамид, при което кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета, по4

предпочитано при около 3.0, 12.1, 14.5 и 27.7 градуса две тета, и найпредпочитано както е описано в Таблица 1 за Кристална форма II, в прахова рентгенова дифракционна решетка. Типично, кристалът абсорбира поне около 5 тегл.% вода при излагане на 80 % относителна влажност и има точка на топене от най-много около 185 °C. Състави, включващи кристалите описани тук, също са предоставени. За предпочитане, съставите включват терапевтично ефективно количество от кристалите. По избор, съставите включват ексципиент, за предпочитане фармацевтично приемлив ексципиент.

В друг аспект, настоящото изобретение осигурява методи за получаване на безводен кристал, включващ сол на ябълчената киселина с №[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид (напр. Кристална форма I). В едно изпълнение, методът включва: обединяване на ябълчена киселина; М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид и разтворител; и причиняване на кристализация на солта при условия за кристализация (напр., Кристализационни условия за Кристална форма I) включващи един или повече фактори, включително: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от наймного около 100 °C; скорост на охлаждане от най-много около 50 °C на час; без кристални зародиши; отношение на пресищане от най-много около 10; без утаяващо средство; и/или техни комбинации. За предпочитане, ябълчената киселина е L-ябълчена киселина. За предпочитане, разтворителят включва един или повече разтворители, включително например, ацетонитрил, метанол, етанол, изопропанол, толуен, н-бутанол, тетрахидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид, ацетон, вода и техни комбинации.

В друго изпълнение, методът за получаване на безводен кристал, включващ сол на ябълчена киселина с №[2-(диетиламино)етил]-5-[(55 флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Нпирол-3-карбоксамид (напр., Кристална форма I) включва: контактуване на кристал, включващ сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етип]-5[(5-ф луоро-1,2-д ихид ро-2-оксо-ЗН-индол-З-илид ен)метил]-2,4-д и метил-1Нпирол-3-карбоксамид с разтворител, в който контактуващият кристал има съществена разтворимост, при което контактуващият кристал (напр., Кристална форма II) има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка. За предпочитане, разтворителят включва един или повече разтворители, включително например, ацетонитрил, етанол, метанол и техни комбинации. За предпочитане, контактуването на кристала с разтворителя води до образуване на суспензия, и суспензията за предпочитане се разбърква и/или нагрява. По избор, безводният кристал може да бъде отстранен от суспензията.

В друг аспект, настоящото изобретение осигурява метод за получаване на кристал, включващ сол на ябълчена киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид (напр., Кристална форма II). Методът включва: обединяване на ябълчена киселина; N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид; и разтворител; и причиняване на кристализация на солта при условия за кристализация (напр., кристализационни условия за Кристална форма II) включващи един или повече фактори, включително: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от поне около 25 °C; скорост на охлаждане от поне около 25 °C на час; внасяне на кристални зародиши; отношение на пресищане от поне около 2; присъствие на утаяващо средство; и/или техни комбинации. За предпочитане, ябълчената киселина е L-ябълчена киселина. За предпочитане, разтворителят включва един или повече разтворители, включително например, метанол, вода, тетрахидрофуран/водни смеси и техни комбинации. За предпочитане, кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.

Безводната Кристална форма I е по-изгодна от Кристална форма II за много приложения, тъй като свойствата, които Кристална форма I предлага за предпочитане включват например, по-голяма термодинамична стабилност, по-висока кристалност и по-ниска хигроскопичност, отколкото съответните свойства на Кристална форма II

Множество фактори влияят на кристализационните условия, и те са добре известни на специалиста в областта. Такива фактори включват например: концентрацията на солта в кристализационния разтвор; разликата, ако има такава, между началните и крайни температури на кристализационния разтвор; скоростта на охлаждане, ако има такова; скоростта на изпаряване на разтворителя, ако има такова; внасяне на кристални зародиши; отношение на пресищане; и присъствие на утаяващо средство. С помощта на разкритието, дадено тук, един специалист в областта без неоправдано много експерименти може да избере и/или регулира един или повече подходящи фактори за постигане на кристализационни условия за получаване на Кристална форма I и/или Кристална форма II.

Дефиниции

Както е използвано тук, “отношение на пресищане” се отнася до отношението на концентрацията на материала в разтвора към концентрацията на материала в наситен разтвор при температура на кристализиране.

Както е използвано тук, “внасяне на кристални зародиши” се отнася до техниката на прибавяне на “зародишен” кристал към кристализационния разтвор, за да се подпомогне образуването на кристали. За предпочитане, съставът на зародишния кристал е същият, както съставът на кристалите, които се образуват.

Както е използвано тук, “утаяващо средство” означава субстанция, която проявява тенденция да предизвика кристализация, когато е прибавена към кристапизационен разтвор. Полезни утаяващи средства включват например, изсолители за солта и разтвори, включващи в излишък противойони. Както е използвано тук, изсолител е разтворител, в който солта за предпочитане има разтворимост от най-много около 1 тегл.%, по-предпочитано най-много около 0.1 тегл.%, и най-предпочитано най-много около 0.01 тегл.%.

Както е използвано тук, “безводен кристал” означава кристал, в който вода не е специфично свързана. Безводните кристали за предпочитане не включват съществени количества вода. Водното съдържание може да бъде определено по методи, известни в областта, включващи например титрувания по Karl Fischer. За предпочитане един безводен кристал включва най-много около 2 тегл.% вода, по-предпочитано най-много около 0.5 тегл.% вода, и най-предпочитано най-много около 0.2 тегл.% вода.

Както е използвано тук, “кристален” означава материал, който има подредена на дълго разстояние молекулярна структура. Степента на кристалност на кристална форма може да бъде определена по много техники, включващи например прахова рентгенова дифракция, сорбция на влага, диференциална сканираща калориметрия, калориметрия в разтвор и характеристики на разтваряне.

Както е използвано тук, “по-кристален” означава, че един материал има по-висока степен на кристалност отколкото материала, с който той е бил сравняван. Материалите с по-висока степен на кристалност обикновено имат високо подредена на дълго разстояние молекулярна структура с по-малко дефекти в кристалната структура, отколкото материали с по-малки степени на кристалност. По-високата степен на кристалност може да бъде оценена спрямо другата форма с техники, включващи например по-точни отражения в праховата рентгенова дифракционна решетка, по-ниска сорбция на влага за частици с подобен размер при специфицирана относителна влажност, по-ниска топлина на разтваряне, по-висока топлина на стапяне, по-бавна скорост на разтваряне и техни комбинации.

Както е използвано тук, “по-малко кристален” означава, че един материал има по-ниска степен на кристалност отколкото материала, с който той е сравняван. Материалите с по-ниска степен на кристалност обикновено имат подреденост с по-малка дължина и повече дефекти в кристалната структура, отколкото материалите с по-високи степени на кристалност. По-ниската степен на кристалност може да бъде оценена спрямо другата форма с техники, включващи например, по-широки и/или по-малки отражения в праховата рентгенова дифракционна решетка, повисока сорбция на влага за частици с подобен размер при специфицирана относителна влажност, по-висока топлина на разтваряне, по-ниска топлина на стапяне, по-бърза скорост на разтваряне и техни комбинации.

Както е споменато в настоящата заявка, “стабилен* в тестове за стабилност на обемни лекарствени средства означава, че поне около 97 тегл.%, за предпочитане поне около 98 тегл.%, и по-предпочитано поне около 99 тегл.% от обемното лекарство остава непроменено след съхраняване при посочените условия за посоченото време.

с

Пояснение на приложените фигури

Фигура 1 е илюстрация на данните от праховата рентгенова дифракция (PXRD) за Кристална форма I на сол на L-ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид. Решетката е различаваща се от другите кристални форми на солта и свободната база, и е по-кристапна от Кристална форма II (напр., Фигура 2).

Фигура 2 е илюстрация на данни от праховата рентгенова дифракция (PXRD) за Кристална форма II на солта на L-ябълчена киселина с N-[29

(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид. Решетката е различаваща се от другите кристални форми на солта и свободната база, и е по-малко кристална от Кристална форма I, както се доказва от пошироките отражения в праховата рентгенова дифракционна решетка (напр., Фигура 1).

Фигура 3 е илюстрация на сорбционната изотерма от динамична сорбционна влажностна гравиметрия (DMSG) за профили на сорбция на влага за Кристална форма I & Кристална форма II на сол на L-ябълчената киселина с И-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид. Покристал ният полиморф, Кристална форма I, е с по-малка хигроскопичност, абсорбирайки по-малко от 0.5 % вода през обхвата 0 - 90 % относителна влажност. По-малко кристалният полиморф, Кристална форма II, е много хигроскопичен, абсорбирайки над 15 % вода в обхвата 0 - 90 % относителна влажност.

Фигура 4 е илюстрация на данни от диференциална сканираща калориметрия (DSC), показвайки DSC профили за Кристална форма I & Кристална форма II от сол на L-ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид. Екзотермичните преходи са посочени в посока нагоре. Кристална форма I се стапя при повисока температура (около 196 °C) с по-висока енталпия на стапяне (около 141 J/g), отколкото Кристална форма II, която се стапя при около 181 °C с енталпия на стапяне около 105 J/g. Това предполага, че двете Кристални форми са монотропни, въпреки, че след като 1фисталите се стопят, настъпва разлагане. Монотропизмът се потвърждава чрез превръщането на Кристална форма II в Кристална форма I в суспензия със стайна температура, както е описано тук.

Подробно описание на предпочитаните изпълнения

1Ч-[2-(Диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид е 3-пирол заместено 2-индолиноново съединение, имащо следната структура:

М-[2-(Диетипамино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид може да бъде получен като свободна база чрез стандартни синтезни процедури, включващи например тези описани в РСТ Международна публикация № WO 01/60814 (Tang et. al.). Въпреки че свободната база може да бъде кристализирана като малки частици, при работа в големи мащаби е желателно например да има кристали с по-голям размер за улесняване на филтруването. За целта, получаването на соли на N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид бе предприето за оценяване на получените свойства, свързани с обработването на солта и получаването на орални фармацевтични състави от нея.

Кристалните форми на М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3карбоксамид включват свободната база и нейни соли (напр., соли на цикламатна киселина, малеинова киселина, бромоводородна киселина, бадемена киселина, винена киселина, фумарова киселина, аскорбинова киселина, фосфорна киселина, солна киселина, р-толуенсулфонова киселина, лимонена киселина и ябълчена киселина) бяха изследвани за свойства, свързани с обработването на солта и получаването на орални фармацевтични състави от нея, включващи например, кристалност (напр., кристална или аморфна, степен на кристалност, безводни или хидратирани кристали), токсичност, хигроскопичност, стабилност и морфология. На базата на горното изследване, сол на ябълчена киселина с И-[2-(д иетиламино)ети л]-5-[(5-флуоро-1,2-д ихид ро-2-оксо-З Н-и нд ол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид бе определено, че осигурява най-добрия баланс на желаните свойства. При допълнително изследване бе намерено, че сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид кристализира в множество кристални форми.

Настоящото изобретение осигурява методи за получаване на кристални форми включващи сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, и идентификацията на тези кристални форми. Получаването на безводни кристали включващи сол на ябълчена киселина е описано тук. Безводната Кристална форма I има превъзходни свойства за много приложения.

КРИСТАЛНА ФОРМА I

В едно изпълнение, сол на ябълчена киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид бе получена като безводни кристали (напр., Кристална форма I). Безводната Кристална форма I е термодинамично по-стабилна отколкото други Кристални форми (напр., Кристална форма II). В един метод Кристална форма I може да бъде получена например чрез предизвикване на кристализация на сол на ябълчена киселина при кристализационни условия за Кристална форма I от пренаситен разтвор.

Както е използвано тук, “кристализационни условия за Кристална форма I” се отнасят до кристализационни условия, които осигуряват термодинамичната кристална форма (напр., Кристална форма I). Такива условия обикновено се наричат “бавни” кристализационни условия. Един специалист в областта може да избере един или повече фактори, включващи например: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор за предпочитане от най-много около 100 °C, по-предпочитано най-много около 50 °C, още по-предпочитано най-много около 25 °C, и най-предпочитано около 0 °C; скорост на охлаждане за предпочитане от, най-много около 50 °C на час, по-предпочитано наймного около 20 °C на час, още по-предпочитано най-много около 2 °C на час, и най-предпочитано около 0 °C на час; без кристални зародиши; отношение на пресищане за предпочитане от най-много около 10, попредпочитано най-много около 5, и най-предпочитано най-много около 1.5; без утаяващо средство; и/или техни комбинации за осигуряване на кристализационни условия за Кристална форма I.

Полезни разтворители за получаване на кристализационния разтвор включват например, ацетонитрил, метанол, етанол, изопропанол, толуен, н-бутанол, тетрахидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид, ацетон, вода и техни комбинации.

В друг метод, Кристална форма I може да бъде получена например чрез осигуряване на суспензия от Кристална форма II в разтворители, в които Кристална форма II има съществена разтворимост. Както е използвано тук, “съществена разтворимост” означава, че един кристал е за предпочитане разтворим в разтворителя в концентрации от поне около 0.1 тегл.%, по-предпочитано поне около 1 тегл.%, и най-предпочитано поне около 10 тегл.%, при около стайна температура (напр., около 15 °C до около 30 °C). По избор, кристалът може да бъде разтворен в разтворителя при посочената концентрация при стайна температура.

Такива разтворители включват например ацетонитрил, етанол, метанол и техни комбинации.

КРИСТАЛНА ФОРМА II

В друго изпълнение, сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид бе получена в друга кристална форма (напр., Кристална форма II). Кристална форма II е полезна например като междинна в получаването на безводната Кристална форма I.

Кристална форма II може да бъде получена например чрез предизвикване на сол на ябълчена киселина да кристализира при кристализационни условия за Кристална форма II, от пренаситен разтвор.

Както е използвано тук, кристализационни условия за Кристална форма ΙΓ се отнася до кристализационни условия, които осигуряват кристална форма, различна от термодинамичната форма. Такива условия обикновено се наричат “бързи” кристализационни условия. Един специалист в областта може да избере един или повече фактори включващи например: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор за предпочитане от поне около 25 °C, попредпочитано поне около 50 °C, и най-предпочитано поне около 100 °C; скорост на охлаждане за предпочитане поне от около 25 °C на час, попредпочитано поне около 100 °C на час, и най-предпочитано поне около 300 °C на час; внасяне на кристални зародиши; отношение на пресищане от за предпочитане поне около 2, по-предпочитано поне около 5, и найпредпочитано поне около 10; присъствие на утаяващо средство; и/или техни комбинации до осигуряване на кристализационни условия за Кристална форма II.

Полезни разтворители за кристализационния разтвор включват например, метанол, вода, тетрахидрофуран/водни смеси, и техни комбинации.

ПРАХОВА РЕНТГЕНОВА ДИФРАКЦИЯ (PXRD)

Кристалните органични съединения се състоят от голям брой атоми, които са подредени в периодична решетка в тримерното пространство. Структурната периодичност обикновено проявява различни физични свойства, такива като ясно изразени, определени спектрални признаци от най-спектроскопичните проби (напр., рентгенова дифракция, инфрачервен и твърдотелен ядрено-магнитен резонанс). Рентгеновата дифракция (XRD) се приема за един от най-чувствителните методи за определяне кристалността на твърдите вещества. Кристалите дават определени дифракционни максимуми, които се появяват при специфични ъгли в съгласие с междуплоскостните разстояния на кристалната решетка, както са предсказани от закона на Браг. Обратно, аморфните материали не притежават подреденост на дълго разстояние. Те често запазват допълнителен обем между молекулите, както в течно състояние. Аморфните твърди вещества обикновено показват неопределена XRD решетка с широки, дифузни ореоли, поради липсата на подреденост на дълго разстояние на повтарящата се кристална решетка.

Праховата рентгенова дифракция според сведенията е била използвана за характеризиране на различни кристални форми на органичните съединения (напр., съединения, полезни във фармацевтичните състави). Виж например, US патенти №№ 5 504 216 (Holohan et al), 5 721 359 (Dunn et al.), 5 910 588 (Wangnick et al.), 6 066 647 (Douglas et al.), 6 225 474 (Matsumoto et al.), 6 239 141 (Alien et al.), 6 251 355 (Murata et al.), 6 288 057 (Harkness), 6 316 672 (Stowell et al.), 6 329 364 (Groleau) и US патентни заявки c номер на публикацията №№ 2001/0003752 (Talley et al.), 2002/0038021 (Barton et al.) и 2002/0045746 (Barton et al.).

Кристалните материали са предпочитани в много фармацевтични приложения. Кристалните форми обикновено са термодинамично постабилни, отколкото аморфните форми на същата субстанция. Тази термодинамична стабилност за предпочитане се отразява в по-ниската разтворимост и подобрена физична стабилност на кристалната форма. Правилната опаковка на молекулите в кристалното вещество, за предпочитане, не допуска включването на химични онечиствания. Оттук, кристалните материали обикновено притежават по-висока химична чистота, отколкото техните аморфни съответствия. Опаковката в кристалното твърдо вещество обикновено ограничава молекулите в добре дефинирани позиции в решетката и намалява подвижността на молекулите, която е предпоставката за химичните реакции. От това следва, че кристалните твърди вещества, с много малко забележителни изключения, са химично по-стабилни, отколкото аморфните твърди вещества със същия молекулен състав. За предпочитане, кристалните форми на солите на ябълчената киселина с 1Ч-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Нпирол-3-карбоксамид, разкрити в настоящата заявка, притежават едно или повече от изгодните химични и/или физични свойства, разкрити тук.

Кристалните форми на солите на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-Н-пирол-3-карбоксамид разкрити в настоящата заявка, за предпочитане имат отличаващи се профили на прахова рентгенова дифракция. Например, безводните кристали включващи сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид могат за предпочитане да бъдат разпознати от другата кристална форма, включваща сол на ябълчената киселина, разкрита тук, посредством присъствието на характеристични дифракционни пикове. Характеристични дифракционни пикове, както е използвано тук, са пикове, избрани от найинтензивните пикове на наблюдаваната дифракционна решетка.

За предпочитане, характеристичните пикове са избрани от около 20 от най-интензивните пикове, по-предпочитано от около 10 от най16 интензивните пикове, и най-предпочитано от около 5 от най-интензивните пикове в дифракционната решетка.

Фигури 1 и 2 показват праховите рентгенови дифракционни решетки за Кристални форми I и II съответно, на сол на L-ябълчена киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид. Таблица 1 съдържа списъка на най-интензивните пикове от всяка PXRD решетка между 2 и 35 градуса две тета. Свободната база, Кристална форма I и Кристална форма II са всички лесно различаващи се по техните уникални PXRD решетки.

За предпочитане безводен кристал, включващ сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид (напр., Кристална форма I) има характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета, по-предпочитано при около 13.2, 19.4, 24.2 и 25.5 градуса две тета, и най-предпочитано има характеристичните дифракционни пикове, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма I.

За предпочитане, Кристална форма II на сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета, по-предпочитано при около 3.0, 12.1, 14.5 и 27.7 градуса две тета, и най-предпочитано има характеристичните дифракционни пикове, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма II.

Таблица 1: Таблица на пикове от прахова рентгенова дифракция за Кристални форми I и II

Кристална форма 1	Кристална форма II
Две тета (градуси)	Относителна интензивност	Две тета (градуси)	Относителна интензивност
11.39	7	3.02	100
11.90	7	5.93	12
13.16	82	7.61	18
15.92	27	9.26	7
16.79	25	12.08	32
17.18	24	14.54	42
19.40	76	17.54	19
20.30	20	19.46	28
21.26	31	23.36	54
21.68	28	24.77	28
22.13	48	27.71	80
22.91	21
24.17	100
25.46	79
26.06	23
26.96	26
27.56	28
32.27	13
32.93	17
34.43	23

Чистота и стабилност в твърдо състояние

Чистотата на Кристална форма I на солта на ябълчената киселина с 1Ч-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид бе оценена с високоефективна течна хроматография (HPLC). Резултатите показаха повече от около 98 % площ на чистота с по-малко от около 2 % площ на определени онечиствания (Таблица 2).

Проведено бе също изследване на стабилността в твърдо състояние на Кристална форма I на солта на L-ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-инд ол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид (Таблица 2). Данни от четири седмици след престояване при 60 °С/относителна влажност на околната среда, 60 °С/75 % относителна влажност и 80 °С/относителна влажност на околната среда, показаха липса на значително разпадане. Праховата рентгенова дифракция на двуседмични проби също показа липса на промяна в кристалната форма.

Таблица 2: Стабилност на Кристална форма I, основаваща се на

HPLC анализ

Условия	Чистота (площ %)	Общи онечиствания (площ %)
Начални	99.7	1.5
2 седмици при 60 °C / RH* на околната среда	98.2	1.1
2 седмици при 60 °C / 75 % RH	99.6	1.2
2 седмици при 80 °C / RH на околната среда	99.5	1.2
4 седмици при 60 °C / RH на околната среда	100.4	1.2
4 седмици при 60 °C / 75 % RH	100.1	2.2
4 седмици при 80 °C / RH на околната среда	98.0	3.1

‘относителна влажност (RH)

Данни за сорбция на влага

Данните за сорбцията на влага при 25 °C за Кристални форми I и II на солта на L-ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Нпирол-3-карбоксамид са показани на Фигура 3. По-кристалният полиморф

Кристална форма I, е с ниска хигроскопичност, абсорбирайки по-малко от

0.5 % вода в обхвата 0 - 90 % относителна влажност. По-малко кристалният полиморф, Кристална форма II, е много хигроскопичен, абсорбирайки над 15 % вода в обхвата 0 - 90 % относителна влажност.

Термични данни

Данните от диференциалната сканираща калориметрия са показани на Фигура 4. Безводната Кристална форма I на солта на L-ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид се стапя при около 196 °C, докато Кристална форма II се стапя при около 181 °C. Процесите, наблюдавани след първоначалното стапяне, навеждат на мисълта, че вероятно има известно разлагане свързано със стапянето. Следователно, точната топлина на стапяне не би могла лесно да бъде измерена.

TGA данните за Кристална форма I (не показани) не сочат значителна загуба на тегло до точката на топене, което означава липса на остатъчен разтворител и/или вода, задържани в кристалите.

Приложение и фармацевтични състави

Кристали от настоящото изобретение могат да бъдат прилагани като такива на пациент човек или могат да бъдат прилагани във фармацевтични състави, в които кристалът от по-горе се смесва с подходящи носители или ексципиент(и). Техниките за формулиране и прилагане на лекарствени средства могат да бъдат намерени в “Remington's Pharmacological Sciences,” Mack Publishing Co., Easton, PA., последното издание.

Както е използвано тук, “предписване” или “приложение” се отнася до доставянето на кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав към организъм за целите на предотвратяването или лечението на заболяване, свързано с РК.

Подходящи начини за приложение могат да включват без ограничение орално, ректално, трансмукозно или интестинално приложение, или интрамускулни, субкутанни, интрамедуларни, интратекални, директни интравентрикуларни, интравенозни, интравитреални, интраперитонеални, интраназални или интраокулярни инжекции. Предпочитаните начини на приложение са орален и парентерален.

Алтернативно, някои могат да приложат кристала от настоящото изобретение или неговият фармацевтичен състав по-скоро по локален, отколкото по систематичен начин, например чрез инжекция на кристала от настоящото изобретение или неговия фармацевтичен състав директно в твърд тумор, често във форма за депо или продължително освобождаване.

Нещо повече, някой може да приложи лекарството в система за целево доставяне на лекарството, например в липозом покрит с туморно специфично антитяло. Липозомите ще бъдат насочени към и поети селективно от тумора.

Фармацевтични състави от настоящото изобретение могат да бъдат произведени чрез процеси, добре известни в областта, напр. посредством обичайно смесване, разтваряне, гранулиране, приготвяне на дражета, стриване на прах, емулгиране, капсулиране, процеси на задържане или лиофилизиране.

Фармацевтични състави за използване в съответствие с настоящото изобретение могат да бъдат формулирани по обичаен начин като се използват един или повече физиологично приемливи носители, включително ексципиенти и помощни вещества, които улесняват обработката на кристали от настоящото изобретение в препарати, които могат да бъдат използвани фармацевтично. Подходящото формулиране е в зависимост от избрания начин на приложение.

За инжекция, кристал от настоящото изобретение или неговия фармацевтичен състав може да бъде формулиран във водни разтвори, за предпочитане във физиологично съвместими буфери, такива като разтвор на Ханкс, Рингеров разтвор или буфер от физиологичен разтвор. За трансмукозно приложение във формулировката се използват средства подпомагащи проникването, подходящи за бариерата, през която трябва да се проникне. Такива средства подпомагащи проникването най-общо са известни в областта.

За орално приложение, кристал от настоящото изобретение или неговия фармацевтичен състав могат да бъдат формулирани чрез обединяване на кристал от настоящото изобретение с фармацевтично приемливи носители, добре известни в областта. Такива носители позволяват кристали от настоящото изобретение да бъдат формулирани като таблетки, хапчета, отлети таблетки за смучене, дражета, капсули, течности, гелове, сиропи, пулп, суспензии и подобни, за орално поемане от пациент. Фармацевтични препарати за орално използване могат да бъдат приготвени като се използва твърд ексципиент, по избор смилане на получената смес и обработване на сместа от гранули след добавяне на други подходящи спомагателни вещества ако се желае, до получаване на таблетки или ядра на дражета. Полезни ексципиенти по-специално са пълнители като захари, включително лактоза, захар, манитол или сорбитол, целулозни препарати като например, царевично нишесте, пшеничено нишесте, оризово нишесте и картофено нишесте и други вещества като желатин, смола трагакант, метилцелулоза, хидроксипропилметилцелулоза, натриева карбоксиметилцелулоза и/или поливинилпиролидон (PVP). Ако се желае, могат да бъдат добавени дезинтегриращи средства, такива като напречно омрежен поливинилпиролидон, агар или алгинова киселина. Също може да бъде използвана сол като натриев алгинат.

Ядрата на дражетата се осигуряват с подходящи покрития. За тази цел могат да бъдат използвани концентрирани захарни разтвори, които могат по избор да съдържат гуми арабика, талк, поливинилпиролидон, карбопол гел, полиетиленгликол и/или титанов диоксид, лакови разтвори и подходящи органични разтворители или разтворителни смеси. Могат да бъдат добавени багрилни вещества или пигменти към таблетките или покритията на дражетата, за идентификация или за характеризиране на различните комбинации от активни дози.

Фармацевтични състави, които могат да бъдат използвани орално включват затваряни чрез натискане капсули, направени от желатин, а така също меки запечатани капсули, направени от желатин и пластификатор, такъв като глицерол или сорбитол. Затваряните чрез натискане капсули могат да съдържат активните ингредиенти в смес с пълнител като лактоза, свързващо вещество като нишесте и/или мазилно вещество като талк или магнезиев стеарат и по избор, стабилизатори. В меките капсули, кристали от настоящото изобретение могат да бъдат разтворени или суспендирани в подходящи течности, такива като тлъсти масла, течен парафин или течни полиетиленгликоли. В тези формулировки също могат да бъдат добавени стабилизатори.

Капсулите могат да бъдат опаковани в кафяви стъклени или пластмасови бутилки за защита на кристалите от настоящото изобретение или техните фармацевтични състави от светлина. Контейнерите, съдържащи активната формулировка в капсули, трябва да бъдат съхранявани при контролирана стайна температура (напр., около 15 °C до около 30 °C).

За приложение чрез инхалация кристал от настоящото изобретение или неговия фармацевтичен състав удобно се доставя във формата на аерозолен спрей, като се използва опаковка под налягане или разпръсквател и подходящ пропелант, напр., без ограничение, дихлородифлуорометан, трихлорофлуорометан, дихлоротетрафлуороетан или въглероден диоксид. В случая на аерозол под налягане, единичната доза може да бъде контролирана чрез осигуряване на клапан за доставяне на премерено количество. Капсули и патрони например от желатин за използване в инхалатор или инсуфлатор, могат да бъдат формулирани така, че да съдържат прахообразна смес от кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав, и подходяща прахова основа, такава като лактоза или нишесте.

Кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав могат да бъдат формулирани също за парентерално приложение, напр., чрез инжекция с ударна доза или непрекъсната инфузия. Формулировките за инжекция могат да бъдат представени в единична дозирана форма напр. в ампули или в контейнери с множество дози, с добавен консервант. Съставите могат да имат такива форми като суспензии, разтвори или емулсии в маслени или водни носители, и могат да съдържат формулиращи материали, такива като суспендиращи, стабилизиращи и/или диспергиращи средства.

Фармацевтичните състави за парентерално приложение включват водни разтвори на водоразтворима форма на кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав. Допълнително, суспензии от кристали от настоящото изобретение или техни фармацевтични състави могат да бъдат получени в липофилен пълнител. Подходящи липофилни пълнители включват тлъсти масла като сусамово масло, синтетични мастно-киселинни естери като етилолеат и триглицериди, или материали като липозоми. Водни инжекционни суспензии могат да съдържат субстанции, които повишават вискозитета на суспензията, такива като натриева карбоксиметилцелулоза, сорбитол или декстран. По избор, суспензията може също да съдържа подходящи стабилизатори и/или средства, които повишават разтворимостта на кристалите от настоящото изобретение или техни фармацевтични състави, така че да позволят получаването на високо концентрирани разтвори.

Алтернативно, активният ингредиент може да бъде във формата на прах за приготвяне с подходящ пълнител, напр., стерилна апирогенна вода, преди употреба.

Кристал от настоящото изобретение или неговият фармацевтичен състав може също да бъде формулиран в ректални състави, такива като супозитории или задържащи клизми, използващи напр. обичайни основи за супозитории, такива като какаово масло или други глицериди.

В допълнение към формулировките, описани преди, кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав могат също да бъдат формулирани като депо препарати. Такива дългодействащи формулировки могат да бъдат прилагани чрез имплантиране (например, субкутанно или интрамускулно) или чрез интрамускулна инжекция. Кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав могат да бъдат формулирани за този начин на приложение с подходящи полимерни или хидрофобни материали (например, в една емулсия с фармакологично приемливо масло), с йонообменни смоли или като умерено разтворимо производно.

Съответно, кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав могат да бъдат доставяни с използване на система със забавено освобождаване, такава като полупропускливи матрици от твърди хидрофобни полимери, съдържащи терапевтичното средство. Различни материали със забавено освобождаване са били установени и са добре известни на специалистите в областта. Капсули със забавено освобождаване могат в зависимост от тяхното химично естество, да освобождават сол или неин фармацевтичен състав за няколко седмици до над 100 дни. В зависимост от химичната природа и биологичната стабилност на терапевтичния реагент, могат да бъдат използвани допълнителни стратегии за протеиново стабилизиране.

Фармацевтичните състави могат също да включват подходящи твърди или в гелна фаза носители или ексципиенти. Примери на такива носители или ексципиенти включват, но не са ограничени до, калциев карбонат, калциев фосфат, различни захари, нишестета, целулозни производни, желатин и полимери като полиетиленгликоли.

Фармацевтичните състави, подходящи за използване в настоящото изобретение включват състави, в които активните ингредиенти се съдържат в достатъчно количество за постигане на планираната цел, напр., модулирането на РК активност или лечението или предотвратяването на свързано с РК заболяване.

По-специфично, терапевтично ефективно количество означава едно количество от кристали от настоящото изобретение или техни фармацевтични състави, ефективно за предотвратяване, облекчаване или подобряване на симптоми, или заболяване, или удължаване на оцеляването на субекта, подложен на лечение.

Определянето на терапевтично ефективното количество е напълно в способностите на тези, които са специалисти в областта, особено в светлината на подробното разкритие, дадено тук.

За някои кристали от настоящото изобретение или техни фармацевтични състави, използвани в методите от изобретението, терапевтично ефективното количество или доза могат да бъдат оценени първоначално от изследвания на клетъчни култури. Тогава дозата може да бъде формулирана за използване в животински модели така, че да се постигне циркулиращ концентрационен обхват, който включва IC50 както е определена в клетъчна култура (т.е., концентрацията на кристалите от настоящото изобретение или техните фармацевтични състави, които постигат полу-максимално инхибиране на РК активността). Такава информация може после да бъде използвана за по-точно определяне на полезните дози при хора.

Токсичността и терапевтичната ефикасност на кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав могат да бъдат определени със стандартни фармацевтични процедури в клетъчни култури или експериментални животни, напр., чрез определяне на IC50 и LD₅₀ (които и двете са обсъдени другаде тук) за обект кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав. Данните, получени от тези клетъчно-културални анализи и изследвания на животни могат да бъдат използвани за формулиране на обхват на дозата за използване от хора. Дозата може да варира в зависимост от използваната форма на дозата и използвания начин на приложение. Точната формулировка, начинът на приложение и дозата могат да бъдат избрани от отделния лекар предвид състоянието на пациента. (Виж напр., Fingl, et al., 1975, в “The Pharmacological Basis of Therapeutics”, Ch. 1 p.1).

Количеството на дозата и интервалът могат да бъдат нагодени индивидуално, за да осигурят плазмени нива на активните видове, които са достатъчни да поддържат киназните модулиращи ефекти. Тези плазмени нива се споменават като минимални ефективни концентрации (МЕС). МЕС ще варира за всеки кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав, но може да бъде оценена от in vitro данни, напр., концентрацията, необходима за постигане 50 - 90 % инхибиране на една киназа може да бъде установена като се използват описаните тук анализи. Дозите, необходими за постигане на МЕС ще зависят от индивидуалните характеристики и начина на приложение. Могат да бъдат използвани HPLC анализи или биоанализи за определяне на плазмените концентрации.

Интервалите на дозите могат също да бъдат определени като се използва МЕС стойността. Кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав би трябвало да се прилага като се използва режим, който поддържа плазмени нива над МЕС за 10 - 90 % от времето, за предпочитане между 30 - 90 %, и най-предпочитано между 50 - 90 %.

В случаите на локално приложение или селективно поемане, ефективната локална концентрация на лекарственото средство не може да бъде свързана с плазмена концентрация и могат да бъдат използвани други процедури, известни в областта, за определяне на правилното количество на дозата и интервала.

Количеството на един прилаган състав ще зависи разбира се, от лекувания субект, тежкия характер на страданието, начина на приложение, преценката на лекуващия лекар и т.н.

Съставите могат, ако се желае, да бъдат представени в опаковка или устройство за разпределяне, такова като одобрен от Агенцията за храни и лекарства набор, който може да съдържа една или повече единични дозирани форми, съдържащи активния ингредиент. Опаковката може например да включва метално или пластмасово фолио, такава като блистерна опаковка. Опаковката или разпределящото устройство могат да бъдат придружени от инструкции за приложение. Опаковката или разпределящото устройство могат също да бъдат придружени от надпис, свързан с контейнера във форма, предписана от държавна агенция регулираща производството, използването или продажбата на фармацевтични средства, който надпис отразява одобрението на агенцията за формата на съставите, или на хуманно или ветеринарно приложение. Такъв надпис например може да бъде от етикетите одобрени от Администрацията за храни и лекарства на САЩ за лекарствата, отпускани с рецепта или от листовка за одобрен продукт. Състави, включително кристал от настоящото изобретение, формулиран в съвместим фармацевтичен носител, също могат да бъдат приготвени, поставени в подходящ контейнер и надписани за лечение на посочено състояние. Подходящи състояния посочени в надписа, могат да включват лечение на тумор, инхибиране на ангиогенеза, лечение на фиброза, диабет и подобни.

Аспект на това изобретение е също, че кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав, могат да бъдат обединени с други хемотерапевтични средства за лечението на заболяванията и смущенията, обсъдени по-горе. Например, кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав, могат да бъдат обединени с алкилиращи средства като флуороурацил (5-FU) самостоятелно или в допълнителна комбинация с леуковорин; или други алкилиращи средства

такива като, без ограничение, други пиримидинови аналози като UFT, капецитабин, гемцитабин и цитарабин, алкил сулфонати напр. бусулфан (използван в лечението на хронична гранулоцитна левкемия), импросулфан и пипосулфан; азиридини, напр. бензодепа, карбоквион, метуредепа и уредепа; етиленимини и метилмеламини, напр., алтретамин, триетиленмеламин, триетиленфосфорамид, триетилентиофосфорамид и триметилолмеламин; и азотни синапи напр., хлорамбуцил (използван в лечението на хронична лимфоцитна левкемия, първична макроглобулинемия и не-Ходжкинова лимфома), циклофосфамид (използван в лечението на болестта на Ходжкин, множествена миелома, невробластома, рак на гърдата, рак на яйчника, рак на белия дроб, тумор на Уилм и рабдомиосаркома), естрамустин, ифостамид, новембрицин, преднимустин и урацилен синап (използван в лечението на първична тромбоцитоза, не-Ходжкинова лимфома, болест на Ходжкин и рак на яйчника); и триазини, напр., дакарбазин (използван в лечението на саркома на мека тъкан).

Кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав, може също да бъде използван в комбинация с други антиметаболитни, хемотерапевтични средства като, без ограничение, аналози на фолиева киселина, напр. метотрексат (използван в лечението на остра лимфоцитна левкемия, хориокарцинома, мукозен фунгиоден рак на гърдата, рак на глава и врат и остеогенна саркома) и птероптерин; и пуриновите аналози като меркаптопурин и тиогуанин, които намират приложение в лечението на остра гранулоцитна, остра лимфоцитна и хронична гранулоцитна левкемии.

Планирано е кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав да могат също да бъдат използвани в комбинация с природен продукт на база хемотерапевтични средства като, без ограничение, винка алкалоидите, напр., винбластин (използван в лечението на рак на гърдата и тестисите), винкристин и виндезин;

епиподофилотоксините, напр., етопозид и тенипозид, които и двата са полезни в лечението на рак на тестисите и саркома на Капоши; антибиотичните хемотерапевтични средства, напр., даунорубицин, доксорубицин, епирубицин, митомицин (използван за лечение на рак на стомаха, цервикса, ободното черво, гърдата, пикочния мехур и панкреаса), дактиномицин, темозоломид, пликамицин, блеомицин (използван в лечението на рак на кожата, хранопровода и генитално-уринарния тракт); и ензимни хемотерапевтични средства такива като L-аспарагиназа.

В допълнение към горното, кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав може също да бъде използван в комбинация с платинови координационни комплекси (цисплатин и т.н.); заместени уреи като хидроксиурея; метилхидразинови производни, напр., прокарбазин; адренокортикални супресанти, напр., митотан, аминоглутетимид и хормон и хормонни антагонисти такива като адренокротикостероидите (напр., преднизон), прогестини (напр., хидроксипрогестерон капроат); естрогени (напр., диетилстилбестерол); антиестрогени като тамоксифен; андрогени, напр., тестостерон пропионат; и ароматазни инхибитори като анастрозол.

Накрая, планирано е също, комбинацията от кристал от настоящото изобретение или негов фармацевтичен състав да бъде ефективна в комбинация с митоксантрон или паклитаксел за лечението на твърди туморни карциноми или левкемии като, без ограничение, остра миелогенна (не-лимфоцитна) левкемия.

Настоящото изобретение е илюстрирано със следващите примери. Ще бъде разбрано също, че отделните примери, материали, количества и процедури трябва да бъдат интерпретирани широко в съответствие с обхвата и духа на изобретението, както е изложено тук.

Примери за изпълнение на изобретението

Рентгеновите дифракционни (XRD) решетки бяха измерени на дифрактометър Scintag Х2 (Thermo ARL, Ecublens, Switzerland), снабден с тета-тета гониометър. Точките на топене бяха определени с използване на ТА Instruments 2920 диференциален сканиращ калориметър (ТА Instruments, New Castle, DE) със стандартни гофрирани блюда и скорост на нагряване от 10 °C/min. Хигроскопичността бе оценена с гравиметрия на динамична сорбция на влага (DMSG), като се използва микровезна с контролирана атмосфера (Pharmacia Corp., Kalamazoo, Ml). Всички използвани химични вещества са налични от Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl, освен ако не е специфицирано друго. N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид бе получен като свободна база с процедура, подобна на тази, описана в Пример 80 на РСТ Международна публикация № WO 01/60814 (Tang et al.).

МЕТОДИ

Прахова рентгенова дифракция (XRD). Праховата рентгенова дифракция бе осъществена с използване на Scintag Х2 Advanced Diffraction System, работеща под Scintag DMS/NT 1.30а и Microsoft Windows NT 4.0 софтуер. Системата използва меден източник на рентгенови лъчи поддържан при 45 kV и 40 МА, за осигуряване на CuKfai) емисия от 1.5406Д и твърдотелен охлаждан детектор на Peltier. Апертурата на лъча бе контролирана с използване на дивергенция на тръбата и процепи против разсейване от 2 и 4 mm, детектор против разсейване и приемащи процепи с 0.5 и 0.2 mm ширина. Данните бяха събирани от 2 до 35° две тета, с използване на стъпка на сканиране от 0.037точка, с време на отчитане от една секунда на стъпка. За експериментите бяха използвани обли пробни чаши Scintag от неръждаема стомана с горно зареждане, с вложки с 12 mm диаметър. Обемистото лекарствено средство бе изследвано както е и бе поставяно в пробната тава без каквато и да е подготовка. Някои специфични проби бяха също смлени на ръка с хаван и чукало преди да бъдат изследвани. Анализът на данните бе извършен с използване на Origin 6.0 (Microcal Software, Northampton MA).

Гравиметрия c динамична сорбция на влага (DMSG). DMSG изотермите бяха събрани на микровезната с контролирана атмосфера и променлива температура. Бяха използвани приблизително 10 mg проби във везната. Пробите бяха пуснати с получаването им. Влажността последователно бе установявана между 0 и 90 % относителна влажност (RH) със стъпка 3 % RH. След това масата бе измервана на всеки две минути. RH бе променяна към следващата стойност, когато масата на пробата бе стабилна в границите на 0.5 микрограма в 480 секунди. Използвана бе програма Visual Basic за контрол на събираните данни и за експорт на информацията към Excel електронна таблица.

Термичен анализ. Данните от диференциалната сканираща калориметрия (DSC) бяха получени чрез нагъване на прахообразната проба в алуминиево DSC блюдо. Пробите бяха пуснати с получаването им, големините бяха около 1 mg. Температурите бяха типично сканирани до 320 °C при скорост на сканиране от 10 °C в минута. DSC бе калориметър ТА Instruments 2920. Използваният софтуер за анализ на данните бе ТА Universal Analysis V1.1 OB.

Получени бяха данни от термогравиметричен анализ (TGA) на ТА Instruments TGA 2950. Пробите бяха уравновесени в TGA при 25 °C, с 20 °C точка на оросяване за 30 min преди началото на температурната програма. Температурният наклон бе при 10 °C/min, но бе сканиран при собствените условия за висока разделителна способност на ТА. Тази техника забавя скоростта на сканиране, когато настъпва преход, подобрявайки способността на устройството да разделя независими събития със загуба на тегло.

ПРИМЕР 1: Получаване на безводната Кристална форма I на сол на L-ябълчена киселина със И-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-3карбоксамид.

Получаване А: М-[2-(Диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид (130 mg, 0.326 mMol) бе прибавен към 20 mL метанол и сместа бе разбъркана. Добавена бе L-ябълчена киселина (47.2 mg, 0.352 mMol), което причини бързо разтваряне на всички твърди вещества. Метанолът бе отстранен при намалено налягане до получаване на незадоволително кристално, оранжево твърдо вещество. Прибавен бе ацетонитрил (5 mL) и суспензията бе разбъркана и нагрята за около 10 min. Разбъркването бе продължено, като суспензията бе оставена да се охлади до стайна температура. Кристалите бяха филтрувани и изсушени, което доведе до 149 mg твърди вещества (86 % добив) от Кристална форма I.

Получаване В: М-[2-(Диетиламино)етил]-5- [(5-флуоро-1,2-дихидро-2оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-д иметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид може да бъде пречистен чрез водно промиване с pH = 11 преди образуването на солта с L-ябълчената киселина. Получен бе разтвор от свободната база в смес от 80 : 20 н-бутанол:вода (о : о), при 80 °C. След охлаждане до 20 °C и разбъркване за 1 час, бе наблюдавана значителна кристализация. Една проба бе анализирана с PXRD и бе намерено, че е Кристална форма I. Филтруване, сушене и съвместно смилане на кристалите даде 99 % добив.

ПРИМЕР 2: Получаване на Кристална форма II на сол на Lябълчена киселина с 1\1-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид.

Кристали от Кристална форма I на сол на L-ябълчена киселина с N(2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид (25 mg) бяха прибавени към тетрахидрофуран (2 mL), последвани от прибавянето на вода (250 pl). Сместа бе нагрята до разтваряне на кристалите. Разтворът бе оставен да се изпарява една нощ, водещо до получаване на кристали от Кристална форма II.

ПРИМЕР 3: Получаване на безводната Кристална форма / на сол на L-ябълчената киселина с №[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-3карбоксамид от Кристална форма II.

Към Кристална форма II (150 mg) бе прибавен ацетонитрил (приблизително 5 mL). Суспензията бе разбъркана и нагрята за около 10 min. Разбъркването бе продължено, като суспензията бе оставена да се охлади до стайна температура. Кристалите бяха филтрувани и изсушени, което доведе до получаването на кристали от Кристална форма I.

ПРИМЕР 4: Разтворимост на Кристална форма I на солта на Lябълчена киселина с 1\1-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид

Разтворимостта на Кристална форма I на солта на L-ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид бе определена, че е 5 mg/mL във вода при 25 °C. Това показва, че разтворимостта не би трябвало да е ограничаващ фактор за биодостъпността на материала.

Пълното разкритие на всички патенти, заявки за патенти и публикации и електронно наличен материал (напр., GenBank замествания на аминокиселини и нуклеотидни последователности; и протеинова банка данни (pdb) замествания), цитирани тук, са включени чрез позоваване. Предходното подробно описание и примери са дадени само за яснота и разбиране. Те не трябва да се разбират като ненужни ограничения. Изобретението не е ограничено до показаните точни подробности, варианти, очевидни за специалиста в областта ще бъдат включени в изобретението дефинирано от претенциите.

Claims

ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ

1. Безводен кристал състоящ се от сол на ябълчена киселина със съединение, имащо структурата:
2. Кристал съгласно претенция 1, в който ябълчената киселина е L-ябълчена киселина.
3. Безводен кристал състоящ се от сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид.
4. Кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, в който кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
5. Кристал съгласно претенция 4, имащ характеристични дифракционни пикове при около 13.2, 19.4, 24.2 и 25.5 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
6. Кристал съгласно претенция 5, имащ характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка както е описано в Таблица 1 за Кристална форма I.
7. Кристал съгласно претенция 4, допълнително включващ наймного около 2 тегл.% вода.
9. Кристал съгласно претенция 8, включващ най-много около 0.2 тегл.% вода.
10. Кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, който кристал има точка на топене от поне около 190 °C.
12. Кристал съгласно претенция 10, допълнително включващ наймного около 2 тегл.% вода.
13. Кристал съгласно претенция 12 включващ най-много около 0.5 тегл.% вода.
14. Кристал съгласно претенция 13, включващ най-много около 0.2 тегл.% вода.
15. Кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид, който кристал има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
16. Кристал съгласно претенция 15, имащ характеристични дифракционни пикове при около 3.0, 12.1, 14.5 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
17. Кристал съгласно претенция 16, имащ характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма II.
18. Кристал съгласно претенция 15, при което кристалът абсорбира поне около 5 тегл.% вода при излагане до 80 % относителна влажност.
19. Кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с N-[2(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-инд ол-3илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид, при което кристалът има точка на топене от най-много около185 °C.
20. Кристал съгласно претенция 19, при което кристалът абсорбира поне около 5 тегл.% вода при излагане до 80 % относителна влажност.
21. Метод за получаване на безводен кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-337 карбоксамид, като методът се състои от:

обединяване на ябълчена киселина; М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Нпирол-3-карбоксамид; и разтворител; и причиняване на кристализация на солта при условия за кристализация, включващи един или повече фактори, състоящи се от: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от най-много около 100 °C; скорост на охлаждане от най-много около 50 °C на час; без кристални зародиши; отношение на пресищане от най-много около 10; без утаяващо средство; и/или техни комбинации.
22. Метод съгласно претенция 21, в който ябълчената киселина е L-ябълчена киселина.
23. Метод съгласно претенция 21, в който единият или повече фактори включват: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от най-много около 50 °C; скорост на охлаждане от най-много около 20 °C на час; отношение на пресищане от най-много около 5; и/или техни комбинации.
24. Метод съгласно претенция 23, в който единият или повече фактори включват: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от най-много около 25 °C; скорост на охлаждане от най-много около 2 °C на час; отношение на пресищане от най-много около 1.5; и/или техни комбинации.
25. Метод съгласно претенция 24, в който началната и крайна температури на кристализационния разтвор са еднакви.
26. Метод съгласно претенция 21, в който разтворителят е избран от групата, състояща се от ацетонитрил, метанол, етанол, изопропанол, толуен, н-бутанол, тетрахидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид, ацетон, вода и техни комбинации.
27. Метод съгласно претенция 21, в който безводният кристал има характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
28. Кристал съгласно претенция 27, имащ характеристични дифракционни пикове при около 13.2, 19.4, 24.2 и 25.5 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
29. Кристал съгласно претенция 28, имащ характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма I.
30. Метод за получаване на безводен кристал състоящ се от сол на ябълчената киселина с №[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-Зкарбоксамид, който метод се състои от контактуване на кристал, състоящ се от сол на ябълчената киселина с №[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3карбоксамид с разтворител, в който контактуващият кристал има съществена разтворимост, при което контактуващият кристал има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
31. Метод съгласно претенция 30, в който контактуващият кристал има характеристични дифракционни пикове при около 3.0,12.1,14.5, и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
32. Метод съгласно претенция 31, в който контактуващият кристал има характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма II.
33. Метод съгласно претенция 30, в който разтворителят е избран от групата, състояща се от ацетонитрил, етанол, метанол и техни комбинации.
34. Метод съгласно претенция 30, в който контактуването на кристала с разтворителя води до образуване на суспензия.

35. Метод съгласно претенция 34, допълнително включващ разбъркване на суспензията. 36. Метод съгласно претенция 34, допълнително включващ нагряване на суспензията. 37. Метод съгласно претенция 34, допълнително включващ

отстраняване на безводния кристал от суспензията.
38. Метод съгласно претенция 30, в който безводният кристал има характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
39. Метод съгласно претенция 38, в който безводният кристал има характеристични дифракционни пикове при около 13.2, 19.4, 24.2 и 25.5 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
40. Метод съгласно претенция 39, в който безводният кристал има характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма

I.
41. Метод за получаване на кристал състоящ се от сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пирол-3-карбоксамид, който метод се състои от:

обединяване на ябълчена киселина; 1Ч-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Нпирол-3-карбоксамид; и разтворител; и причиняване на кристализация на солта при условия за кристализация, включващи един или повече фактори, състоящи се от: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от поне около 25 °C; скорост на охлаждане от поне около 25 °C на час; внасяне на кристални зародиши; отношение на пресищане от поне около 2; присъствие на утаяващо средство; и/или техни комбинации.
42. Метод съгласно претенция 41, в който ябълчената киселина е L-ябълчена киселина.
43. Метод съгласно претенция 41, в който единият или повече фактори включват: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от поне около 50 °C; скорост на охлаждане от поне около 100 °C на час; отношение на пресищане от поне около 5; и/или техни комбинации.
44. Метод съгласно претенция 43, в който единият или повече фактори включват: разлика между началната и крайна температури на кристализационния разтвор от поне около 100 °C; скорост на охлаждане от поне около 300 °C на час; отношение на пресищане от поне около 10;

и/или техни комбинации.
45. Метод съгласно претенция 41, в който разтворителят е избран от групата, състояща се от метанол, вода, тетрахидрофуран/водни смеси, и техни комбинации.
46. Метод съгласно претенция 41, в който кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
47. Метод съгласно претенция 46, в който кристалът има характеристични дифракционни пикове при около 3.0, 12.1, 14.5, и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
48. Метод съгласно претенция 47, в който кристалът има характеристични дифракционни пикове в прахова рентгенова дифракционна решетка, както е описано в Таблица 1 за Кристална форма II.
49. Състав, съдържащ безводни кристали, състоящи се от сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид.
50. Състав съгласно претенция 49, допълнително включващ ексципиент.
51. Състав, съдържащ кристали, състоящи се от сол на ябълчената киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2^дихидро2-оксо-ЗН-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, при което кристалите имат характеристични дифракционни пикове при около 13.2 и 24.2 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
52. Състав, съдържащ кристали, състоящи се от сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, при което кристалите имат точка на топене от поне около 190 °C.
53. Състав, съдържащ кристали състоящи се от сол на ябълчена киселина с 1М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, при което кристалите имат характеристични дифракционни пикове при около 3.0 и 27.7 градуса две тета в прахова рентгенова дифракционна решетка.
54. Състав, съдържащ кристали, състоящи се от сол на ябълчена киселина с М-[2-(диетиламино)етил]-5-[(5-флуоро-1,2-дихидро-2-оксо-ЗНиндол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1 Н-пирол-З-карбоксамид, при което кристалите имат точка на топене от най-много около 185 °C.