<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention se rapporte à des substances d'origine bactérienne possédant de l'activité contre des moisissures. L'invention se rapporte en outre à des procédés pour isoler ces substances à partir de liqueurs de fermentation et pour les purifier.
On désigne selon la présente invention par Coliformine un produit nettement défini. Il contient les éléments carbone, hydrogène, azote, oxygène, soufre, phosphore et chlore dans les proportions approximatives suivantes: C = 47,6%, H = 7,02 %, N = 8,22%, 0 (par différence) =
EMI1.1
33,15 ., S = 0,23;, P = 0,47 %, 01 3,31 %, cendres = 0,0 %. Dans la partie ultraviolette du spectre, cette substance montre un maximum d'absorptîe3n étendu à 272 mL(..
Dans la partie infrarouge du spectre, une suspension de la substance dans de la parafl3ne liquide montre les 15 maxima d'absorption suivants exprimés en cc-1 : 3970/ 31601 2730/ 2170/ 2040/ 1660/ 1530/ 1410/ 1230/ ,in70/ 833/ z 757/ 683/ 665
Par l'analyse d'un hydrolysat de cette substance, on montre qu'elle contient environ 70 % d' aminoacides, 15% de glucose et 5% de xylo-
EMI1.2
se. Le poids moléculaire le plus bas correspondant aux données analyti- ques indiquées, est de 1062. Par distillation isotherme on obtient les valeurs suivantes: 3600, 3880, 4120 et 4410. Cette substance présente le spectre fongicide reproduit ci-dessous.
On peut modifier la substance ci-dessus par un nouveau traitement, obtenant un produit avec un spectre fongicide beaucoup plus étroit.
Une telle substance contient les éléments carbone, hydrogène, azote et oxy-
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gène dans les proportions approximatives suivantes: C = 47,88% E = 5599%5 N = 12,2%, 0 (par différence) = 33,93%, et avec les maxima d'absorption suivants dans la partie infrarouge du spectre déterminés pour une sus-
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pension dans de la paraffine liquide. On donne les spectres maxima d' a'ksorption en cm -1 = 3300/ 2900/ 1660/ 1550/ 1410/ 1240/ 1060.
On peut suivre la purification de la Coliformine par l'augmentation de l'activité contre -le Pal7..vlaria pullulans ou le Candida alibi- cana. L'activité donnée dans les exemples se rapporte à l'activité de la substance mentionnée plus haut qui montre les 15 maxima d'absorption dans la partie infrarouge du spectre. On décrit cette substance dans l'exemple 7 ci-dessous.
Comme mentionné plus haut, on a constaté que les nouvelles substances antibiotiques, dans des études in vitro, présentent de l'activité contre un grand nombre de moisissures données en exemple ci-dessous.
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1. - Moisissures pathozénes MME 1-*h2m¯me.
EMI1.6
<tb>
<tb>
Candida <SEP> albicans <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 300 <SEP> 000
<tb> Candida <SEP> tropicalis <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 300 <SEP> 000 <SEP>
<tb> Candida <SEP> Krusei <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 2000 <SEP> 000
<tb>
EMI1.7
Torrlopsis (Cryptococcus)neofor#ans Red 1 : 2000 000 Hormodendru111 Pedrosoi Brumpt 1 :300 000 Microsporum felioam Fox et Blaxall 1 :300 000 Mierosporun gypseum Guiart et Grigoraki 1 : 300 000
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<tb>
<tb> Trichlophton <SEP> mentagropbytes <SEP> Blanchard <SEP> 1 <SEP> :300 <SEP> 000
<tb> Trichophyton <SEP> tonsurans <SEP> Malmsten <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 300 <SEP> 000
<tb>
Moisissures pathogènes pour les plantes.
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<tb>
<tb> Fusarium <SEP> nivale <SEP> Ces <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb>
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Botrytis aili Mmm 1 :
1 000 000
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<tb>
<tb> Rhizoctonia <SEP> solani <SEP> Kühn <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Verticillium <SEP> albo-atrum <SEP> R <SEP> et <SEP> Berth <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Cladosporium. <SEP> sp. <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Trichbdorma <SEP> viride <SEP> Pers <SEP> ex <SEP> F <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 250 <SEP> 000
<tb>
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3.
Moisissures attaquant le bois et la pulpe de bois.
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<tb>
<tb> Pullularia <SEP> pullmans <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP>
<tb>
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Cladosporîum elatga Nannf 1 1 000 oye* Oidiodendron grisoum Robak 1 1 000 000 Oidiodendron Bigrum Robak 1 1 000 000 Phialophora Melinii Conant 1 1 000 000 Trichospsmm heterr-èmorohum Nannf 1 1 000 000 Paezilcmyces -variai Bain 1 000 000 Fomes annosus Fr 500000 Gladosporum herbarum Link 1 500 000 Lecyptopoora lignicola Nannf 1 500 000 Oîdîodendron fusccm.
Robak 1 500 000 Mialophora fastigiata Conant 1 500 000 Merulîus Lai3zymans Fr 1 500000
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<tb>
<tb> Rhinocladiella <SEP> atrovirens <SEP> Nannf <SEP> 1 <SEP> 250 <SEP> 000
<tb>
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On peut obtenir la Cbliformine par fermentation d'une souche de bactéries gram-négatives, n.:;D .sporu1.antes et non-motiles, apparaissant en bâtonnets simples ou par paires ou parfais en chaînes avec une di-
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mension d'environ 0,5 - 0,6 à 1,2 - 19 $ microns dans une liqueur de fermentation appropriée contenant une source carbonée comprenant du sucrose, glucose, maltose, xylose et autres carbohydrates hydrnsolubles ou partiel- lement solubles dans l'eau.
Les sources appropriées d'azote pour le procédé de fermentation comprennent une grande variété de substances telles que aminoacides, asparagine, peptone, et autres composés azotés d'origine végétale ou animale. On peut également utiliser comme source d'azote des produits chi-
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miques comme les composés d'ammoniumo On donne ci-dessous un exemple de liqueur de fermentation appropriée pour la fermentation à l'échelle de laboratoire :
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<tb>
<tb> Glucose <SEP> 10 <SEP> g/l
<tb> tartrate <SEP> d'ammonium <SEP> 5
<tb> KH2PO4 <SEP> 1 <SEP> "
<tb>
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MgSO 4' 2FLzO 0,5 "
EMI2.9
<tb>
<tb> CaCl2 <SEP> (0 <SEP> ,1 <SEP> mole/1) <SEP> 5,0 <SEP> ml
<tb>
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FeC13 (2gFe/l) 0,5" ZnSO4 (2g ZD/l) 0,5 " Mgo% (001 Dsle/B 0,5"
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<tb>
<tb> H2O <SEP> 995,0 <SEP> "
<tb>
On met fermenter les bactéries dans des conditions aérobies
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à une température d'environ 25 x 3 et â une valeur de pH d'environ 5, 5. Après environ une semaine, on traite la liqueur,¯de ferment aticn suivant les exemples donnés ci-dessous.
Il y a lieu de noter que dans les exemples 1 à 9 la liqueur de fermentation est mise à bouillir pendant environ une minute, après quoi on enlevé les bactéries, tandis que dans les
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exemples 10 et 11, on n'enlève pas les bactéries après ebullition.
Exemple 1.
On extrait 500 cm3 de liqueur de fermentation à pH = 7 avec trois fois 100 cm3 de n-butanol. On enlève ensuite le solvant sous vide à la température ordinaire ou à une température légèrement supérieure.
<Desc/Clms Page number 3>
Le .résidu consistant en une huile brune montre 500 fois l'activité de la liqueur de fermentation originale, ce qui corres- pond à 5% de l'activité de la substance standard.
Exemple 2
On absorbe 7 litres de liqueur de fermentation sur 10 g de charbon actif pendant 1 heure, après quoi on élue le charbon avec 250 cm3 d'éthanol à 80 %.
La substance de cette solution dans l'éthanol montre une ac- tivité qui est 25 fois celle de la liqueur de fermentation originale.
Exempt 3.
On secoue 3,5 litres de liqueur de fermentation pendant 1 heu- re avec 50 g d'oxyde d'aluminium (Brockman) , après quoi on élue l'oxyde d'aluminium avec des parties égales d'hydroxyde de sodium 0,2 molaire et d'éthanol à 95%. On utilise 4 fois 250 cm3 de ce mélange. On neutralise l'éluat avec de l'acide chlorhydrique.
La substance ainsi obtenue montre une activité qui est 20 fois celle de la liqueur de fermentation.
Exemple
On fait absorber sur du silica gel la substance active dans 500 cm3 de liqueur de fermentation, après quoi on élue le gel avec 150 cm3 d'acide chlorhydrique à pH = 2. On neutralise cette solution avec de l'hydroxyde de sodium.
L'activité de la substance isolée à partir de cette solution est 20 fois celle de la liqueur originale de fermentation.
Exemple 5
On ajoute 1 litre de liqueur de fermentation tout en agitant 25 g d'acide benzoique dans 100 cm3 d'acétone On enlève l'acide benzoique après 2 heures,on le lave puis onle sèche à 40 C pendant 48 heures.
L'acide benzoïque sec, sur lequel la substance active est absorbée, est traité avec 400 cm3 d'éther éthylique sec pour dissoudre l'acide benzoïque. On isole le résidu et on l'extrait pendant 24 heures avec de l'éther éthylique. Le résidu gris obtenu est pratiquement exempt d'acide benzoïque.
Cette substance montre 600 fois l'activité de la liqueur de fermentation originale.
Exemple 6.
On extrait 10 g de la substance obtenue suivant l'exemple 5, avec 300 cm3 d'éthanol pendant 18 heures dans un percolateur. On refroidit l'extrait à + 5 C et on sépare la substance précipitée, on la lave avec de l'éther éthylique refroidi, puis on la sèche sur chlorure de calcium dans un exsiccateur.
Cette substance montre une activité qui est 6000 fois celle de la liqueur de fermentation originale et qui représente 63 % de l'activité de la substance la plus pure. Résultats analytiques : C = 49,81%, H = 7,90 %, N = 8,99 %, S = 0,62%, P = 1, 66 %, cendres = 7,3 %.
Exemple 7
On dissout 310 mg de la substance isolée suivant l'exemple 6, dans 50 cm3 de méthanol bouillant On ajoute 5 cm3 d'éthanol absolu contenant 3% d'acide chlorhydrique gazeux et on continue l'ébullition pendant 2 minutes. On filtre la solution pendant qu'elle est encore chau- de, puis on la refroidit à la température ordinaire, après quoi on ajoute
<Desc/Clms Page number 4>
150 cm3 d'éther éthylique. On lave le précipité deux fois avec de l'éther éthylique et on le sèche dans un exsiocateur.
Cette substance montre une activité qui est 9600 fois celle de la liqueur de fermentation. Ce chlorhydrate a pour analyse :C = 47,6%, H = 7,02 %, N = 8,22 %, 0 (par différence) = 33,85, Cl = 3,31 %, S = 0,23 %, P = 0,47 %, cendres = 0,0 %.
Exemple 8
On met absorber 300 cm3 de la solution méthanolique restante de l'exemple 6 sur de l'oxyde d'aluminium, on traite avec de l'acide chlorhydrique dilué à une valeur de pH = 6. On lave le chlorured'aluminium avec 100 cm3 de méthanol et 100 cm3 d'eau, après quoi la majeure partie des composés colorés non actifs sont enlevés . On effectue l'élution avec 3 litres d'acide chlorhydrique 0,36 molaire, puis on neutralise la solution à une valeur de pH de 6,5, valeur à laquelle l'oxyde d'aluminium précipite. On réduit alors le volume à 290 cm3, à 50-60 C.
On extrait cette solution avec 3 fois 150 cm3 de n-butanol, qui est traité avec 3 fois 50 cm3 d'eau pour enlever le chlorure de sodium dissous, après quoi on sépare la solution butanolique et on enlève sous vide à 50 C le butanol.
Le résidu est une huile épaisse, que l'on secoue avec 50 cm3 d'éthanol absolu et 75 cm3 d'éther éthylique et, suite à ce traitement, une substance précipite Après séchage, cette substance montre une activité qui est 8400 fois celle de la liqueur de fermentation originale et représente 87 % de la substance la plus active.
Exemple 9.
On extrait pendant une minute avec 2 fois 50 cm3 de pyridine bouillante 3 g de la substance isolée dans l'exemple 5, après quoi on refroidit la solution à la température ordinaire et on la soumet à un essorage.
On enlève la pyridine sous vide; l' huile brune résiduelle présente une activité qui est 1800 fois selle de la liqueur de fermentation originale et qui correspond à 19 % de la substance la plus active.
Exemple 10.
On fait absorber sur 5 g de silica gel la substance active dans 1000 cm3 de liqueur de fermentation non filtrée, puis, après essorage, on sèche le gel à 40 C et on l'élue avec 25 g de phénol. Après essorage, on précipite la solution phénolique avec 20 cm3 d'acétone.
Cette substance montre une activité 1200 fois plus grande que celle de la liqueur de fermentation originale.
Exemple 11.
On fait bouillir 1 g de la substance obtenue dans l'exemple 10 avec 3 fois 100 cm3 d'eau distillée, chaque fois pendant 30 minutes.
On lyophilise la solution aqueuse, après quoi on obtient une substance qui montre une activité 6600 fois plus grande que celle de la liqueur de fermentation originale, ou qui représente 69 % de l'activité de la substance la plus pure.
Les résultats analytiques pour cette substance sont : C = 47,88 %, H = 5,99 %, N = 12,2%, 0 (par différence) = 33,93%.
Cette substance eontient 6% de glucose, mais pas de xylose.
Ces modifications se traduisent par un spectre fongicide plus étroit et aussi par une absorption modifiée dans la partie infrarouge du spectre.
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On obtient les 7 maxima d'absorption suivants avec une suspension dans de la paraffine liquide. Maxima d'absorption exprimés en on-1 : 3300/
2900/ 1660/ 1550/ 1410/ 1240/ 1060.
REVENDICATIONS.
1. Substances efficaces pour l'inhibition de la croissance de moisissures, choisies dans le groupe consistant en une substance capa- ble de former des sels avec des acides, qui contient les éléments car- bone, hydrogène, azote, oxygène, soufre, phosphore et chlore, qui montre des maxima d'absorption caractéristiques dans la partie infrarouge du spectre, lorsqu'elle est en suspension dans de la paraffine liquide, aux fréquences suivantes exprimées en car' - 3970/ 3160/ 2730/ 2170/
2040/ 1660/ 1530/ 1410/ 1230/ 1070/ 833/ 789/ 757/ 683/
665, et en la base libre correspondante.
2. Substance efficace pour l'inhibition de la croissance de moisissures, contenant les éléments carbone, hydrogène, azote, oxygène, soufre, phosphore et chlore dans les pourcentages suivants: C = 47,6%,
H = 7,02%, N = 8,22%, 0 (par différence) = 33,15%, S = 0,23, P = 0,47%,
Cl = 3,31 %, cendres = 0,0 %, et base libre correspondante.
3. Substances efficaces pour l'inhibition de la croissance de moisissures, choisies dans le groupe consistant en une substance, con- tenant les éléments carbone, hydrogène, azote, et oxygène, montrant les maxima d'absorption caractéristiques dans la partie infrarouge du spectre, lorsqu'elle est en suspension dans de la paraffine liquide, aux fréquences suivantes exprimées en cm-1: 3300/ 2900/ 1660/ 1550/ 1410/ 1240/ 1060/.
4. Substance efficace pour l'inhibition de la croissance de moisissures,contenant les éléments carbone, hydrogène, azote, et oxygène dans les pourcentages suivants: C = 47,88 %, H = 5,99%, N = 12,2 %, 0 (par différence) = 33,93%.
5. Procédé de préparation de substances efficaces pour l'inhi- bition de la croissance de moisissures, caractérisé en ce qu'on isole ces substances à partir d'une liqueur de fermentation en faisant fermenter une souche de bactéries gram-négatives, non-sporulantes et non-motiles, apparaissant en bâtonnets simples ou par paires ou parfois en chaînes avec une dimension d'environ 0,5 - 0,6 à 1,2 - 1,8 microns, dans une liqueur de fermentation appropriée.
6. Procédé de préparation de substances efficaces pour l'inhibition de la croissance de moisissures, caractérisé en ce qu'on isole, à partir d'une liqueur de fermentation en faisant fermenter une souche de bactéries gram-négatives, non-sporulantes et non-motiles, apparaissant en bâtonnets simples ou par paires ou parfois en chaînes avec une dimen- sion d'environ 0,5 - 0,6 à 1,2 - 1,8 microns dans une liqueur de fermentation appropriée, une substance contenant les éléments carbone, hydrogène, azote, oxygène, soufre, phosphore et chlore, présentant des maxima d'absorption caractéristiques dans la partie infrarouge du spectre, lorsqu'elle est en suspension dans de la paraffine liquide, aux fréquences suivantes exprimées en cm-1 :
3970/ 3160/ 2730/ 2170/ 2040/ 1660/ 1530/ 1410/ 1230/ 1070/ 833/ 789/ 757/ 683/ 665, et la base libre correspondante.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
<Desc / Clms Page number 1>
The present invention relates to substances of bacterial origin having activity against molds. The invention further relates to methods for isolating these substances from fermentation liquors and for purifying them.
According to the present invention, Coliformin denotes a clearly defined product. It contains the elements carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus and chlorine in the following approximate proportions: C = 47.6%, H = 7.02%, N = 8.22%, 0 (by difference) =
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33.15., S = 0.23 ;, P = 0.47%, 01 3.31%, ash = 0.0%. In the ultraviolet part of the spectrum, this substance shows a maximum absorption extended to 272 mL (..
In the infrared part of the spectrum, a suspension of the substance in liquid paraffin shows the following absorption maxima expressed in cc-1: 3970/31601 2730/2170/2040/1660/1530/1410/1230 /, in70 / 833 / z 757/683/665
By analysis of a hydrolyzate of this substance, it is shown that it contains about 70% amino acids, 15% glucose and 5% xylo-
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himself. The lowest molecular weight corresponding to the analytical data indicated is 1062. By isothermal distillation the following values are obtained: 3600, 3880, 4120 and 4410. This substance has the fungicidal spectrum reproduced below.
The above substance can be modified by further processing, obtaining a product with a much narrower fungicidal spectrum.
Such a substance contains the elements carbon, hydrogen, nitrogen and oxy-
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gene in the following approximate proportions: C = 47.88% E = 5599% 5 N = 12.2%, 0 (by difference) = 33.93%, and with the following absorption maxima in the infrared part of the spectrum determined for a sus-
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board in liquid paraffin. The maximum a'ksorption spectra are given in cm -1 = 3300/2900/1660/1550/1410/1240/1060.
The purification of coliformin can be followed by increasing activity against Pal7..vlaria pullulans or Candida alibicana. The activity given in the examples refers to the activity of the substance mentioned above which shows the absorption maxima in the infrared part of the spectrum. This substance is described in Example 7 below.
As mentioned above, it has been found that the new antibiotic substances, in in vitro studies, exhibit activity against a large number of molds exemplified below.
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1. - Pathozenic molds MME 1- * h2m¯me.
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<tb>
<tb>
Candida <SEP> albicans <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 300 <SEP> 000
<tb> Candida <SEP> tropicalis <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 300 <SEP> 000 <SEP>
<tb> Candida <SEP> Krusei <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 2000 <SEP> 000
<tb>
EMI1.7
Torrlopsis (Cryptococcus) neofor # years Red 1: 2,000,000 Hormodendru111 Pedrosoi Brumpt 1: 300,000 Microsporum felioam Fox and Blaxall 1: 300,000 Mierosporun gypseum Guiart and Grigoraki 1: 300,000
EMI1.8
<tb>
<tb> Trichlophton <SEP> mentagropbytes <SEP> Blanchard <SEP> 1 <SEP>: 300 <SEP> 000
<tb> Trichophyton <SEP> tonsurans <SEP> Malmsten <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 300 <SEP> 000
<tb>
Pathogenic molds for plants.
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<tb>
<tb> Fusarium <SEP> nivale <SEP> These <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb>
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Botrytis aili Mmm 1:
1,000,000
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<tb>
<tb> Rhizoctonia <SEP> solani <SEP> Kühn <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Verticillium <SEP> albo-atrum <SEP> R <SEP> and <SEP> Berth <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Cladosporium. <SEP> sp. <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000
<tb> Trichbdorma <SEP> viride <SEP> Pers <SEP> ex <SEP> F <SEP> 1 <SEP>: <SEP> 250 <SEP> 000
<tb>
<Desc / Clms Page number 2>
3.
Molds attacking wood and wood pulp.
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<tb>
<tb> Pullularia <SEP> pullmans <SEP> Berkh <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP>
<tb>
EMI2.2
Cladosporiium elatga Nannf 1 1,000 oye * Oidiodendron grisoum Robak 1 1,000,000 Oidiodendron Bigrum Robak 1 1,000,000 Phialophora Melinii Conant 1 1,000,000 Trichospsmm heterr-èmorohum Nannf 1 1,000,000 Paezilcmyces -variai Bainorus 500,000 Fomes Gladus 500,000 Fomes herbarum Link 1,500,000 Lecyptopoora lignicola Nannf 1,500,000 Oîdîodendron fusccm.
Robak 1,500,000 Mialophora fastigiata Conant 1,500,000 Merulîus Lai3zymans Fr 1,500,000
EMI2.3
<tb>
<tb> Rhinocladiella <SEP> atrovirens <SEP> Nannf <SEP> 1 <SEP> 250 <SEP> 000
<tb>
EMI2.4
Cbliformin can be obtained by fermentation of a strain of gram-negative bacteria, n.:;D. Sporu1.antes and non-motile, appearing in single rods or in pairs or even in chains with a di-
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Approximately 0.5 - 0.6 to 1.2 - 19 micron in a suitable fermentation liquor containing a carbon source comprising sucrose, glucose, maltose, xylose and other water-soluble or partially soluble carbohydrates. water.
Suitable sources of nitrogen for the fermentation process include a wide variety of substances such as amino acids, asparagine, peptone, and other nitrogen compounds of plant or animal origin. Chemical products can also be used as a source of nitrogen.
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mics such as ammonium compounds An example of a fermentation liquor suitable for laboratory scale fermentation is given below:
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<tb>
<tb> Glucose <SEP> 10 <SEP> g / l
<tb> <SEP> ammonium tartrate <SEP> 5
<tb> KH2PO4 <SEP> 1 <SEP> "
<tb>
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MgSO 4 '2FLzO 0.5 "
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<tb>
<tb> CaCl2 <SEP> (0 <SEP>, 1 <SEP> mole / 1) <SEP> 5.0 <SEP> ml
<tb>
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FeC13 (2gFe / l) 0.5 "ZnSO4 (2g ZD / l) 0.5" Mgo% (001 Dsle / B 0.5 "
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<tb>
<tb> H2O <SEP> 995.0 <SEP> "
<tb>
The bacteria are fermented under aerobic conditions
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at a temperature of about 25 x 3 and a pH value of about 5.5. After about a week, the liquor is treated with an atic ferment according to the examples given below.
It should be noted that in Examples 1 to 9 the fermentation liquor is boiled for about a minute, after which the bacteria are removed, while in the
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Examples 10 and 11, bacteria were not removed after boiling.
Example 1.
500 cm3 of fermentation liquor at pH = 7 are extracted with three times 100 cm3 of n-butanol. The solvent is then removed in vacuo at room temperature or at a slightly higher temperature.
<Desc / Clms Page number 3>
The brown oil residue shows 500 times the activity of the original fermentation liquor, corresponding to 5% of the activity of the standard substance.
Example 2
7 liters of fermentation liquor is absorbed on 10 g of activated carbon for 1 hour, after which the carbon is eluted with 250 cm3 of 80% ethanol.
The substance of this solution in ethanol shows activity which is 25 times that of the original fermentation liquor.
Exempt 3.
3.5 liters of fermentation liquor are shaken for 1 hour with 50 g of aluminum oxide (Brockman), after which the aluminum oxide is eluted with equal parts of 0.2 sodium hydroxide. molar and 95% ethanol. 250 cm3 of this mixture are used 4 times. The eluate is neutralized with hydrochloric acid.
The substance thus obtained shows an activity which is 20 times that of the fermentation liquor.
Example
The active substance is absorbed onto silica gel in 500 cm3 of fermentation liquor, after which the gel is eluted with 150 cm3 of hydrochloric acid at pH = 2. This solution is neutralized with sodium hydroxide.
The activity of the substance isolated from this solution is 20 times that of the original fermentation liquor.
Example 5
1 liter of fermentation liquor is added while stirring 25 g of benzoic acid in 100 cm3 of acetone. Benzoic acid is removed after 2 hours, washed and then dried at 40 ° C. for 48 hours.
Dry benzoic acid, on which the active substance is absorbed, is treated with 400 cm3 of dry ethyl ether to dissolve the benzoic acid. The residue is isolated and extracted for 24 hours with ethyl ether. The gray residue obtained is practically free of benzoic acid.
This substance shows 600 times the activity of the original fermentation liquor.
Example 6.
10 g of the substance obtained according to Example 5 are extracted with 300 cm3 of ethanol for 18 hours in a percolator. The extract is cooled to + 5 ° C. and the precipitated substance is separated, washed with cooled ethyl ether, then dried over calcium chloride in an exsiccator.
This substance shows an activity which is 6000 times that of the original fermentation liquor and which accounts for 63% of the activity of the purest substance. Analytical results: C = 49.81%, H = 7.90%, N = 8.99%, S = 0.62%, P = 1.66%, ash = 7.3%.
Example 7
310 mg of the substance isolated according to Example 6 are dissolved in 50 cm3 of boiling methanol. 5 cm3 of absolute ethanol containing 3% of gaseous hydrochloric acid are added and the boiling is continued for 2 minutes. The solution is filtered while it is still hot, then it is cooled to room temperature, after which it is added
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150 cm3 of ethyl ether. The precipitate is washed twice with ethyl ether and dried in an exsiocator.
This substance shows an activity which is 9600 times that of the fermentation liquor. This hydrochloride has for analysis: C = 47.6%, H = 7.02%, N = 8.22%, 0 (by difference) = 33.85, Cl = 3.31%, S = 0.23% , P = 0.47%, ash = 0.0%.
Example 8
300 cm3 of the remaining methanolic solution of Example 6 are absorbed on aluminum oxide, treated with dilute hydrochloric acid to a pH value = 6. The aluminum chloride is washed with 100 cm3. of methanol and 100 cm3 of water, after which most of the non-active colored compounds are removed. The elution is carried out with 3 liters of 0.36 molar hydrochloric acid, then the solution is neutralized to a pH value of 6.5, at which value the aluminum oxide precipitates. The volume is then reduced to 290 cm3, at 50-60 C.
This solution is extracted with 3 times 150 cm3 of n-butanol, which is treated with 3 times 50 cm3 of water to remove the dissolved sodium chloride, after which the butanol solution is separated and the butanol is removed under vacuum at 50 ° C. .
The residue is a thick oil, which is shaken with 50 cm3 of absolute ethanol and 75 cm3 of ethyl ether and, following this treatment, a substance precipitates. After drying, this substance shows an activity which is 8400 times that of the original fermentation liquor and represents 87% of the most active substance.
Example 9.
3 g of the substance isolated in Example 5 are extracted for one minute with 2 times 50 cm 3 of boiling pyridine, after which the solution is cooled to room temperature and subjected to suction.
The pyridine is removed in vacuo; the residual brown oil exhibits an activity which is 1800 times the amount of the original fermentation liquor and which corresponds to 19% of the most active substance.
Example 10.
The active substance is absorbed on 5 g of silica gel in 1000 cm3 of unfiltered fermentation liquor, then, after draining, the gel is dried at 40 ° C. and eluted with 25 g of phenol. After draining, the phenolic solution is precipitated with 20 cm3 of acetone.
This substance shows an activity 1200 times greater than that of the original fermentation liquor.
Example 11.
1 g of the substance obtained in Example 10 is boiled with 3 times 100 cm3 of distilled water, each time for 30 minutes.
The aqueous solution is freeze-dried, after which a substance is obtained which shows an activity 6600 times greater than that of the original fermentation liquor, or which accounts for 69% of the activity of the purest substance.
The analytical results for this substance are: C = 47.88%, H = 5.99%, N = 12.2%, 0 (by difference) = 33.93%.
This substance contains 6% glucose, but no xylose.
These changes result in a narrower fungicidal spectrum and also in altered absorption in the infrared portion of the spectrum.
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The following 7 absorption maxima are obtained with a suspension in liquid paraffin. Maximum absorption expressed in on-1: 3300 /
2900/1660/1550/1410/1240/1060.
CLAIMS.
1. Substances effective for inhibiting the growth of molds, selected from the group consisting of a substance capable of forming salts with acids, which contains the elements carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus and chlorine, which shows characteristic absorption maxima in the infrared part of the spectrum, when suspended in liquid paraffin, at the following frequencies expressed in char '- 3970/3160/2730/2170 /
2040/1660/1530/1410/1230/1070/833/789/757/683 /
665, and in the corresponding free base.
2. Substance effective for inhibiting the growth of molds, containing the elements carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus and chlorine in the following percentages: C = 47.6%,
H = 7.02%, N = 8.22%, 0 (by difference) = 33.15%, S = 0.23, P = 0.47%,
Cl = 3.31%, ash = 0.0%, and corresponding free base.
3. Substances effective for inhibiting mold growth, selected from the group consisting of a substance, containing the elements carbon, hydrogen, nitrogen, and oxygen, showing characteristic absorption maxima in the infrared part of the spectrum. , when suspended in liquid paraffin, at the following frequencies expressed in cm-1: 3300/2900/1660/1550/1410/1240/1060 /.
4. Substance effective for inhibiting the growth of molds, containing the elements carbon, hydrogen, nitrogen and oxygen in the following percentages: C = 47.88%, H = 5.99%, N = 12.2% , 0 (by difference) = 33.93%.
5. Process for the preparation of substances effective for inhibiting the growth of molds, characterized in that these substances are isolated from a fermentation liquor by fermenting a strain of gram-negative bacteria, non-. sporulating and non-motile, appearing in single rods or in pairs or sometimes in chains with a size of about 0.5 - 0.6 to 1.2 - 1.8 microns, in a suitable fermentation liquor.
6. Process for the preparation of substances effective for inhibiting the growth of molds, characterized in that one isolates, from a fermentation liquor by fermenting a strain of gram-negative bacteria, non-sporulating and not - motiles, appearing in single rods or in pairs or sometimes in chains with a dimension of about 0.5 - 0.6 to 1.2 - 1.8 microns in a suitable fermentation liquor, a substance containing the elements carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen, sulfur, phosphorus and chlorine, exhibiting characteristic absorption maxima in the infrared part of the spectrum, when suspended in liquid paraffin, at the following frequencies expressed in cm-1:
3970/3160/2730/2170/2040/1660/1530/1410/1230/1070/833/789/757/683/665, and the corresponding free base.
** ATTENTION ** end of DESC field can contain start of CLMS **.