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La présente invention a pour objet un procédé de préparation de nouveaux composés de la série des tétracy- olines.
Les composés en question comprennent les 6-désoxy tétracyclines répondant à la formule :
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dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyle, ainsi que les épimères 4a de ces 6-désoxytétra- cyclines. L'invention concerne également la préparation des sels thérapeutiquement actifs, acides et basiques ainsi que des complexes dérivés de ces 6-désoxytétracyclines et de' leurs épimères 4, par exemple les sels d'acides minéraux, les sels alcalins et les sels alcalino-terreux, ainsi que ' divers complexes tels que ceux formés avec des sels d'alu- minium, de magnésium et de calcium.
Les composés mentionnés sont apparentés à la tétra- cycline et à l'oxytétracycline, antibiotiques à large spec tre bien connus et largement utilisés. Les 6-désoxytétra- cyclines en question diffèrent essentiellement des antibio- tiques précédents par le fait que le groupe hydroxyle en position 6 du noyau naphtacène est remplacé par un atome d'hydrogène. Cette modifioation produit une différence frappante dans Inactivité des composés obtenus, qui appa raissent plus effioaoes vis-à-vis de certaines souohea de bactéries résistantes à la tétraoyoline.
Il est très surpre nant que les 6-désoxytétraoyolines, particulièrement la
6-désoxytétraoyoline proprement dite, gardent l'activité antibaotérienne à large spectre qui caractérise les tétra-
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oyolines, surtout lorsqu'on sait que 1'anhydrutétraoyoline, qui est aussi dépourvue de groupe hydroxyle en position 6 du noyau naphtaoène, ne présente qu'une activité antibactérienne très inférieure à celle du composé dont elle dérive.
Suivant la nomenclature internationale, le nom chi mique correct de cet analogue de la tétracycline est 4-di- '
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méthylamino-1,44a,5,5a,6,11,12a-oetahydro-3,10,12,12atétrahydroxy-6-métiy1-1,1.1-dioxo-naphtacéne-2-carboxamide.
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L'analogue de l'oxytétracycline présente un groupe hydroxyle en position 5 du noyau et on le désigne de façon similaire.
Il est commode d'attribuer à ces composés les désignations' courantes respectives de 6-désoxytétracycline et de 6-désoxy-oxytétracycline, ainsi qu'on le fera ici.
L'un des avantages les plus importants que possèdent ces nouveaux composés par rapport aux tétracyclines décrites antérieurement est leur stabilité accrue en présence d'acides et d'alcalis. L'instabilité de la tétracycline en milieu acide et l'instabilité de la chlorotétracycline en milieu alcalin sont bien connues. La chlorotétracycline en solution aqueuse avec un tampon au carbonate de sodium à pH 9,.85 perd 50% de son activité en 29,2 minutes à 23 C. Par contre, la 6-désoxytétracycline ne perd pas plus de 1% de son activité en 24 heures dans les mêmes conditions.
La tétracycline a une demi-vie inférieure à 1 minute dans l'acide chlorhydrique 3N à 100 0., La 6-désoxytétracycline par contre a une demi-vie de 27 heures dans les mêmes conditions.La 6-désoxy-oxytétracycline dans les mêmes conditions a une demi-vie de 45 heures. La tétracycline a une demi-vie d'environ 6 minutes dans une solution de soude 0,1N à 100 C.- Par contre, la 6-désoxytétracycline a une demi-vie de 9 1/2 heures dans les mêmes conditions,. et la 6-désoxy-oxytétra-cyoline a une demi-vie de 10 1/2 heures dans ces mêmes conditions.
Ces propriétés inattendues sont très précieuses étant donné que l'instabilité de la tétracycline en milieuacide et l'instabilité de la chlorotétracvcline en milieu alcalin limitent ou excluent entièrement l'usage de ces antibiotiques dans de nombreuses anplications. Grâce à la stabilité bien meilleure des 6-désoxytétracyclines, il est
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possible de préparer de nombreux produite pharmaceutiques qui ne pourraient pas être préparés de façon satisfaisante avec les tétracyclines antérieurement connues. D'autre part, la stabilité accrue permet d'améliorer les'méthodes de récupération et de purification, car on peut utiliser des condi= tions de pH et de température plus sévères sans détruire les composés nouveaux.
Comme on l'a indiqué plus haut, l'activité antibactérienne des 6-désoxytétracyclines est tout à fait similaire à de nombreux égards à celle des tétracyclines antérieurement connu et ainsi le médecin peut administrer les composés nouveaux de la même façon et approximativement aux mêmes doses que les tétracyclines actuellement utilisées.
De plus, étant donné que les nouvelles 6-désoxytétracyclines présentent 1'.activité antibiotique à spectre large qui caraotérise les tétracyclines antérieurement connues, elles peuvent servir à traiter diverses infeotions produites par des baotéries "Gram +" aussi bien que "Gram 1à ou. le traitement de ces infections par la tétraoyoline ou l'oxytétraoyoline est indiqué.
Le spectre antibaotérien des nouveaux composes, représentant la quantité nécessaire pour inhiber la croissanoe de diverses baotéries typiques, est déterminé de façon usuelle par la méthode' des bandes à dilution d'agaragar qui 'sert communément à essayer les nouveaux antibio tiques. Les concentrations minima d'inhibition de la 6-désoxytétraoyoline et de la 6-désoxy-oxytétracycline exprimées en gammas par cm3 vis-à-vis de divers organismes essayés, sont indiquées dans le tableau ci-dessous.
A titre de com paraison, on indique aussi l'activité antibactérienne de la tétracycline vis-à-vis des mêmes organismes.
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TABLEAU 1
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<tb>
<tb> 6-désoxy- <SEP> 6-désoxy- <SEP> Chlorhydrate
<tb> Organisme <SEP> oxytétra- <SEP> tétracycline <SEP> de <SEP> tétracycycline <SEP> ¯¯¯ <SEP> cline
<tb> Mycobacterium <SEP> 0,2 <SEP> 0,2 <SEP> 0,4
<tb> ranae
<tb> Mycobacterium <SEP> 0,2 <SEP> 0,2 <SEP> . <SEP> 0,4
<tb> smegmatis <SEP> ATCC <SEP> 607
<tb> Staphylococcus <SEP> 0,2 <SEP> 0,8 <SEP> 0,4
<tb> aureus <SEP> ATCC <SEP> 6538P <SEP>
<tb>
EMI6.2
(Micrococcus pyoge1)!ef?;
aureuo,1'
EMI6.3
<tb>
<tb> Sarcin <SEP> lutea
<tb> ATCC <SEP> 9341 <SEP> 0,2 <SEP> 0,4 <SEP> 0,4
<tb> Bacillus <SEP> snbtilis
<tb> ATCC <SEP> 6633 <SEP> 0,2 <SEP> 0,1 <SEP> 0,4
<tb>
EMI6.4
Streptccoccus A . 0,8 0 2 6
EMI6.5
<tb>
<tb> hemolyticus
<tb> hémolytique
<tb> Streptococcus <SEP> > <SEP> 50 <SEP> 6 <SEP> 25
<tb> hemolyticus
<tb> hémolytique
<tb>
EMI6.6
Staphylococcus----, 50 6 25 albus Strertococcus '50 6 25t
EMI6.7
<tb>
<tb> hemolytious
<tb> Groupe <SEP> D
<tb> Staphylococcus <SEP> 1,5, <SEP> 1,5 <SEP> 1,5
<tb> aureus
<tb> Bacillus <SEP> cereus <SEP> 1,5 <SEP> 1,5 <SEP> 0,8
<tb> ATCC <SEP> 10702
<tb> Proteus <SEP> vulgaris <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> Esoherichia <SEP> coli <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> ATCC <SEP> 9637
<tb> Salmonella <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> gallinarum
<tb>
D'âpres ce qui précède,
on remarquera qu'à bien des points de vue, le spectre antibactérien des nouveaux composés est étroitement parallèle à celui de la tétra-
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cycline, mais qu'en outre-, la 6-désoxytétracycline est efficace vis-à-vis de certaines souches de bactéries résistantes' à la tétracycline, tplles que le Streptococcus hemolyticus gamma hémolytique, le Staphylococcus albus et le Streptococcus hemolyticus groupe D. En outre., ces deux composés nouveaux sont beaucoup plus efficaces vis-à-vis du Strptococous hemolyticus bêta hémolytique que la tétracycline.
Suivant la présente invention, on prépare les 6-désoxy térracyclines par une réduction catalytique assez remarquable de la tétracycline correspondante, en solution dans un solvant, en présence d'une substance qui est capable de former . , un noyau chélaté avec un hydronaphtalène pérdioxygéné autres ment dit, on prépare la 6-désoxytétracycline en rédùisant catalytiquement la tétracycline, la chlorotétracycline ou la, bromotétracycline, et on prépare la 6-désoxy-oxytétraoycline en réduisant catalytiquement.l'oxytétracycline.
On peut conduire le procédé de réduction en mettant en contact avec de l'hydrogène une solution de.la tétracycline correspondante dans un solvant, en présence d'un catalyseur approprié, tel que le palladium métallique finement divisé ou un autre.métal de la famille du platine, sur du charbon de bois, ou bien l'hydroxyde de palladium sur du charbon de bois.
En outre, suivant l'invention, on fournit un procédé. pour éliminer le groupe hydroxyle de la. position 6 d'un composé de la série des tétracyclines., qui consiste à réduire catalytiqueemnt ce composé en solution dans un solvant, en présence d'une substance capable de former un noyau chélaté avec un hydronatphatakène péri-dioxygéné'. Des composés appropriés qui possèdent la propriété de former un noyau chélaté et qui peuvent servir avec succès dans le présent procédé de
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réduction sont l'acide borique, les trihalogénures de bore tels que -le trifluorure de bore, les sels d'aluminium et de magnésium tels que le chlorure d'aluminium, l'acétate de magnésium, etc.
L'acide borique ou les trihalogénures de bore semblent être les composés les plus utiles au point de vue du rendement en produit désiré. Habituellement, l'acide borique ou le trihalogénure de bore est utilisé en quantité au moins équimolaire. On peut conduire la réduction à des températures variant de 0 à 100 c et de préférence entre la température ambiante et 50 c environ, et sous des pressinns d'hydrogène de 0,5 à 100 atmosphères environ.
Les solvants inertes appropriés qui peuvent 'servir dans la réaction sont les solvants polaires divers tels que l'eau, le dioxane, l'acide acétique glacial, Le 2-éthcxy- éthanol, et l'acétate d'éthyle. On a trouvé qu'un rapport de 1:1 entre l'eau et la diméthylformamide donnait 'on mélange solvant particulièrement bon pour cette réaction.
On ajoute habituellement, une petite quantité d'acide per- chlorique à la solution -Une concentratjon de catalyseur d'au moins 5% en poids de la tétracycline correspondante est nécessaire, et on peut en utiliser jusqu'à 100% environ.
On conduit habituellement l'hydrogénolyse jusqu'à ce qu'une mole d'hydrogène soit absorbée,- lorsque la matière première est la tétracycline, et à ce moment le taux d'absorption tend à diminuer. Quand on utilise la chlorotétracycline, il- faut évidemment 2 moles d'hydrogène. Il faut veiller à ne pas prolonger l'hydrogénation pendant un temps excessif, car il pourrait se dérouler des réductions plus poussées et indésirables avec formation de produits moins intéressants.
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Les substances capables de former un noyau chélaté comme indiqué ci-dessus et qui sont utilisées dans le processus de réduction décrit, sont des réactifs très importants car ils jouent apparemment le rôle de formateurs de complexes et ont pour effet d'empêcher la réduction des fonctions oxygénées en position 11 'et 12 du noyau naphtacène Ces réactifs sont très importants dans la réduction, car en l'absence de ces agents, la réduction se fait en position 12 de préférence à la position 6, et le composé résultant ne possède aucune activité biologique. Mais dans le processus de réduction décrit, la chélation a pour effet de bloquer ces fonctions oxygénées et d'empêcher leur réduction, de sorte que l'activité antibactérienne du composé se conserve.
Une fois l'hydrogénation achevée, on récupère la 6-désoxytétracycline ou la 6-désoxy-oxytétracycline par tous moyens désirés, par exemple en éliminant le catalyseur et en concentrant la solution. On évapore le produit jusqu'à sicci té, on purifie par précipitation fractionnée dans le méthanol et on peut encore purifier en recristallisant dans l'alcool de façon usuelle. On peut convertir le produit neutre ainsi formé en un sel d'acide minéral, par exemple en chlorhydrate, en le traitant par des acides pels que l'acide chlorhydrique, à un pH' inférieur à 4 environ. On peut former de façon simi laire d'autres sels d'acides, tels que le sulfate, le phosphate, le trichloracétate etc.
De préférence, on peut mettre les 6-désoxytétracyclines en suspension dans un solvant approprié pendant l'acidification. On peut former simplement les sels alcalins et alcalino-terreux en traitant le composé amphotère par un équivalent environ de la base choisie, par exemple la soude, la potasse, la chaux, la baryte,
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etc. On peut préparer les sels métalliques en solution aqueuse ou dans un solvant approprié. De préférence, on prépare les sels basiques à un pH de 6 ou supérieur. On peut obtenir la base libre à un pH de 4 à 6 environ. On peut former les comnlexes, par exemple le comnlexe de 6-désoxytétracycline et de gluconate d'aluminium, en mélangeant simplement le chlorhydrate du composé nouveau et le gluconate d'aluminium en solution aqueuse.
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Pour former les épimères 4a des 6lésoxytétracyclines, c'est-à-dire ceux qui ont une forme épimère sur l'atome de carbone en position 4, ainsi qu'on l'a décrit à propos des autres composés de la série tétracycline, on peut ajuster simplement le pH d'une solution concentrée de l'antibiotique entre 3,0 et 5,0 et laisser reposer la solution jusqu'à ce que l'isomérisation soit parvenue à l'équilibre.
Le plus commode est de conduire l'isomérisation à la température ambiante,'bien que l'on obtienne un taux de conversion plus élevé aux températures supérieures. Le pH doit être compris entre 3,0 et 5,0 environ, de préférence entre 3,5 et 4,5. Il se produit une certaine épimérisation . aux pH qui sortent de ces intervalles, et même dans l'eau distillée ; mais la vitesse d'épimérisation est très faible.
La concentration de l'antibiotique dans la solution aqueuse doit être.aussi forte que possible, afin de donner les plus grandes vitesses d'épimérisation. L'équilibre complet peut nécessiter un laps de temps d'environ 24 heures à 25 c mais un équilibre satisfaisant peut être obtenu en un temps beaucoup plus court dans des conditions particulières. Toutefois, en général, on obtient les meilleurs résultats en laissant reposer les solutions pendant une durée d'une
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semaine ou plus. Il semble que l'équilibre soit atteint dans la plupart des cas à 50% environ ; autrement dit, la moitié environ de l'antibiotique se convertit en épimère à l'équilibre.
Etant donné que la concentration est un facteur important pour obtenir des rendements élevés pendant de courts laps de temps, il faut choisir un système solvant qui donne la plus forte concentration en antibiotique. Il faut tamponner ces systèmes de manière à obtenir un pH situé dans l'intervalle préférentiel. Comme solvants, on citera le méthanol, l'éthanol, le butanol, l'acétone, le 2-éthoxyéthano, le 2-méthoxypropanol, l'acide acétique glacial, le tétrahydrofurane, la diméthylformamide, et les mélanges de ces solvants. On peut utiliser encore d'autres solvants. Un tampon préférentiel est le phosphate monosodique, mais on peut utiliser d'autres tampons et couples de tampons qui maintiennent le pH dans l'intervalle désiré.
On décrira l'invention plus en détail à propos des exemples précis qui suivent.
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EXEMPLE 1
On met en suspension 12 g de chlorhydrate de tétracycline dans 10 volumes d'un mélange à 1:1 d'eau et de diméthylformamide. Au mélange, on ajoute 1,48 g d'acide borique, 12 g de palladium non réduit à 5% sur charbon, et 0,5 cm3 d'acide perchlorique. On conduit l'hydrogénation par réaction sur l'hydrogène à environ 2,8 kg/cm2 sur une\se- coueuse Parr, pendant 2 1/2 heures environ. On arrête l'hydre-' génation dès que 1 mole d'hydrogène environ a été absorbée.
On filtre la solution et on lave le catalyseur avec 10 cm3 de diméthylfomaminde puis on lave une deuxième fois avec 10 cm3 d'eau.
EXEMPLE 2
On ajuste à pH 3,0 le filtrat obtenu par le procédé décrit à l'exemple 1, à l'aide d'ammoniaque concentrée, et on évapore sous vide jusqu'à siccité. On ajoute 50 cm3 de butanol saturé d'eau, on agite le mélange et on filtre. On concentre l'activité dans l'eau et on ajuste le pH à 3,0, puis on filtre. On ajuste le filtrat à pH 1,5 et on extrait en re- tour avec 100 cm3 de butanol. On concentre l'extrait jusqu'à environ 5-10 cm3 sous atmosphère d'azote. On ensemence la so lution et on la laisse reposer pendant 18 heures à la tempé rature ambiante. On filtre les cristaux, on les lave à l'acé- tone puis à l'éther et on sèche sous vide à 40 c pendant 20 heures pour obtenir 179 mg de 6-désoxytétracycline.
EXEMPLE 3
On délaie 2/3 de gramme de 6-désoxytétracy- cline dans 13,5 cm3 d'alcool éthylique. On ajouta 0,5 cm3 d'acide chlorhydrique concentré pour ajuster le pH à 0,8-1,0 On laisse reposer la solution pendant 3 1/2 heures. Il se
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forme des cristaux de chlorhydrate de 6-désoxytétracycline que l'on sèche sous vide pendant 20 heures à 100 C.
Analyse : calculée pour C222H25N2CO7 C 56,7; H 5,38 N 6,02; CL 7,69; 0 24,1; effective : C 56,52; H 5,46; N 5,94; CL 7,71; o 23,89
Le produit a une rotation optique Ó de -292 dans H2SO4 0.1N
On détermine le spectre d'absorption d'ultra- violet sur un échantillon du composé dans H2SO4 0,1N à une con- centration de 30,65 gammas par cm3.
On détermine le spectre d'absorption d'infra- rouge sur un échantillon du composé mélangé à des cristaux de KBr et comprimé en un disque.
EXEMPLE 4
On répète l'opération de l'exemple 1, à cette seule exception près que l'on'utilise 12 g d'oxygétracycline comme matière première au lieu du chlorhydrate de tétracycline utilisé dans ledit exemple.
EXEMPLE 5
A la solution de réduction obtenue dans l'exem- ple 4 on ajoute 5 g de terre d'infusoires et on filtre le mé- lange. On lave le gâteau filtre avec 50 cm3 d'un'mélange à 50/50 de diméthylformamide et d'eau. On réunit le filtrat et les liqueurs de lavage pour obtenir un volume de 168 cm3. On ajuste le pH des liqueurs de lavage et du filtrat réunis à 3,0 à l'aide d'ammoniaque concentrée et on évapore la solu- tion sous vide jusqu'à siccité à 40-60-0.,On extrait les so- lides avec 75 cm3 d'eau pendant une heure avec agitation. On filtre la bouillie. On ajuste le pH de la,solution à 1,0 avec de l'acide chlorhydrique. On extrait à deux reprises l'activité
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dans du butanol. On réunit les extraits et on les évapore jusqu'à siccité.
On ajoute 7 cm3 d'acétone à l'extrait sec, et on ajoute de l'acide chlorhydrique pour ajuster le pH à 1,0.
On élimine les solides par centrifugation. On ensemence le li- quide qui surnage et on laisse reposer 6 heures les cristaux' formés, on filtre et on lave à l'acétone, puis à l'éther. On , sèche les cristaux sous vide à 40 c pendant 12 heures. Rende-. ment : 84,7 mg de 6-désoxy-oxytétracycline.
A Analyse calculée pour C22H25N2CLO8 C 54,90; H 5,20; N 5,83 Cl 7,38 0 26,70 ; analyseeffective ; C 54,48 H 4,81 N 5,50 Cl 7,74 0 26,55.
25 Le produit a une rotation optique Ó D de -251 dans H2SO4 0,1N
On détermine le spectre d'absorption d'ultra- violet sur un échantillon du composé dans H2SO4 0.1N à une concentration de 40,76 gammas par cm3.
On détermine le spectre d'absorption d'infra- rouge sur un échantillon du composé mélangé à des cristaux de KBr et comprimé en un disque.
EXEMPLE 6
A 1,0 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un mélange à 1 :1 dediméthylformamide et d'eau.
On ajoute 3 cm3 (10 équivalents molaires) de trifluorure de bore à 45% dans l'éther, et on ajuste le pH à 1,3 avec 2cm3 de triéthylamine, On ajoute 1,0 g de palladium à 5% sur carbone,. et on place le mélange sur une secoueuse Parr et on laisse réagir sur l'hydrogène pendant 100 minutes (absorption dthydro- gène 1 mole). On filtre le mélange et on rince les insolubles avec 10 cm3 d'eau. On obtient de la 6-désoxytétracycline.
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EXEMPLE 7
2 2,5 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un -Mélange à 1:5 de diméthylformamide et d'eau. On ajoute 1,1 g d'acétate de magnésium, Mg(C2H3O2)2 4H2O On ajuste le pH à 1,8 avec de l'acide chlorhydrique.
On ajoute 2,5 g de palladium à 5% sur charbon et 2 gouttes d'acide perchlorique, et on place le mélange sur-une secoueuse Parr et on le fait réagir sur l'hydrogène pendant 71 mi- nutes (absorption d'hydrogène : 1 mole). On filtre la solution réduite et on rince les insolubles avec de l'acide chlorhydrique 0,1N On obtient de la 6-désoxytétracycline.
-EXEMPLE 8
A 2,5 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 dtun mélange à 1 : 1 de diméthylformamide et d'eau. On ajuste le pH à 1,8 avec de l'acide chlorhydrique.
On ajoute 0,55 g de chlorure de calcium, 2 gouttes d'acide perchlorique et 2,5 g de palladium sur charbon. On place le mélange sur une secoueuse Parr et on laisse réggir sur l'hydrogène pendant 97 minutes (absorption :1 mole de H2). On filtre le mélange et on le rince avec 5 cm3 d'acide chlorhydrique 0.1N On obtient de la 6-désoxytétracycline.
EXEMPLE 9
A 1 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 25 cm3 d'un mélange à 1 : 1 de diméthylformamide et d'eau contenant 0,27 g de chlorure d'aluminium. On ajuste le pH à 1,5 avec de l'acide perchlorique. On ajoute 1,0 g de palladium à 5% sur charbon et on place le mélange sur une se- coueuse Parr pendant 150 minutes, ( absorption 1 mole de H2 On filtre le mélange. On obtient de la 6-désoxytétracycline.
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EXEMPLE 10
A 5mg de 6-désoxytétracycline, on ajoute 1 cm3 d'acide acétique glacial. On agite le mélange 'et on le laisse s'équilibrer à la température ambiante pendant 18 heures, puis on filtre. La chromatographie sur papier montre la
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présence de la 6-désoxy-4-épitétracycline.
EXEMPLE 11
A 5mg de 6-désoxytétracycline, on ajoute 1cm3 d'acide acétique glacial. On agite le mélange et on le laisse' s'équilibrer à la température ambiante pendant 18 heures puis on filtre. La chromatographie sur bande de papier montre la
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présence de 6-désoxy-l+=épioxytétracycline.
EXEMPLE 12
A 1,0 g de chlorhydrate de tétracycline, on ajoute 0,1 g d'acide borique dissous dans 28cm3 d'un mélange à 1 :1 dediméthylformamide et d'eau. On ajuste le pH à 2,1 avec de l'acide chlorhydrique. A 13 cm3 de cette solution, on ajoute 0,75 g de palladium à 5% sur charbon. On place le mélange dans un autoclave en acier inoxydable et on le laisse réagir sur l'hydrogène à une pression de 133 kg/cm2 pendant 80 minutes.
On filtre le mélange et on lave les insolubles avec de l'eau.
Des titrages spectrophotométriques du filtrat de réduction indiquent la présence de 6-désoxytétracycline.
EXEI,IPLE 13
On suit la méthode de l'exemple 1, sauf que l'on utilise comme matière première le chlorhydrate de chlorotétracycline au lieu du chlorhydrate de tétracycline. On ajoute le chlorhydrate de chlorotétracycline à 15 cm3 d'un mélange à 50:50 de diméthylformamide et d'eau: et on conduit l'hydrogénation comme dans l'exemple 1 jusqu'à ce que deux moles d'hydro
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gène aient été absorbées. L'examen chromatographique du produit révèle la présence de la 6-désoxytétracycline.
EXEMPLE 14
A 4cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25c-n3 de diméthylformamide, 25cm3 d'eau, 32,5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5,67 mg de 4-épi-oxytétracycline neutre ( J. A. C . S . 79, 2849 1957). On ajoute 7mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à ne pression de 2,1 kg/cm2 pendant 6 heures.. L'analyse chromatographique sur papier et l'analyse spectrophotométrique indiquent la présence
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de 6-.désflxy-l-épi-oxytétracycline.
EXEMPLE 15
A 4cm3 d'une solution que l'on prépare en mé langeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32,5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5,0 mg de sel d'ammonium de 4-épi-bromotétracycline (J.A.C.S 79, 2849(1957). On ajoute 7mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2,1 kg/cm2 pendant 6 heures. L'analyse chromatographique sur papier et l'analyse spectrophotométrique indi-
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quent la présence de 6-désoxy-4-épitétracycline.
EXEMPLE 16
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mélangeant 25 cm3 de diméthylformamdide 25 cm3 d'eau, 32,5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5,0 mg de chlorhydrate de 4-épichlorotétracycline (J.A.C.S.
79, 2849 1957). On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2,1 kg/cm2 pendant 7 heures. L'analyse chromato-
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graphique sur papier et l'analyse spectrophotonétrique indiquent la présence de 6-dsoxy-l-épitétracycline.
EXEMPLE 17 A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mé-
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langeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32,5 mg d'acide borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 6,0 mg de bromotétracycline. On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met, le mélange en contact avec de l'hydregène à une pression de 2,1 kg/cm2, pendant 6 heures. L'analyse chromatographique sur papier et l'analyse spectrophotométrique montrent la présence de 6-désoxytétracycline.
EXEMPLE 18
A 4 cm3 d'une solution que l'on prépare en mé- langeant 25 cm3 de diméthylformamide, 25 cm3 d'eau, 32,5 mg. d'acide -borique et une goutte d'acide perchlorique, on ajoute 5,0 mg de 4-épitétracycline (J.A.C.S. 79, 2849, 1957). On ajoute 7 mg de palladium à 5% sur charbon et on met le mélange en contact avec de l'hydrogène à une pression de 2,1 kg/cm2 pen dant 4 heures. L'analyse chromatographique sur papier et l'anal
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lyse spectrophoto-nétrique indiquent la présence de 6-désoxy-4'' épitétracycline.
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The subject of the present invention is a process for preparing novel compounds of the tetracyoline series.
The compounds in question include 6-deoxy tetracyclines corresponding to the formula:
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wherein R1 is a hydrogen atom or a hydroxyl group, as well as the epimers 4a of these 6-deoxytetracyclins. The invention also relates to the preparation of therapeutically active, acidic and basic salts as well as complexes derived from these 6-deoxytetracyclines and their epimers 4, for example salts of mineral acids, alkali salts and alkaline earth salts. , as well as various complexes such as those formed with aluminum, magnesium and calcium salts.
The compounds mentioned are related to tetracycline and oxytetracycline, well known and widely used broad-spectrum antibiotics. The 6-deoxytetra-cyclins in question differ essentially from the previous antibiotics in that the hydroxyl group at position 6 of the naphtacene ring is replaced by a hydrogen atom. This change produces a striking difference in the inactivity of the compounds obtained, which appear to be more effective against certain bacteria strains resistant to tetraoyolin.
It is very surprising that 6-deoxytetraoyolins, particularly
6-deoxytetraoyoline proper, retain the broad spectrum antibaoteric activity that characterizes tetra-
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oyolins, especially when we know that anhydrutetraoyoline, which also lacks a hydroxyl group at the 6-position of the naphthaene ring, exhibits only much less antibacterial activity than the compound from which it is derived.
According to international nomenclature, the correct chemical name for this tetracycline analogue is 4-di- '
EMI3.2
methylamino-1,44a, 5,5a, 6,11,12a-oetahydro-3,10,12,12atétrahydroxy-6-métiy1-1,1.1-dioxo-naphtacene-2-carboxamide.
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The oxytetracycline analog has a hydroxyl group at the 5-position of the ring and is similarly designated.
It is convenient to give these compounds the respective common designations 6-deoxytetracycline and 6-deoxy-oxytetracycline, as will be done herein.
One of the most important advantages of these new compounds over the tetracyclines described previously is their increased stability in the presence of acids and alkalis. The instability of tetracycline in an acidic medium and the instability of chlorotetracycline in an alkaline medium are well known. Chlorotetracycline in aqueous solution with sodium carbonate buffer at pH 9.85 loses 50% of its activity in 29.2 minutes at 23 C. On the other hand, 6-deoxytetracycline does not lose more than 1% of its activity. in 24 hours under the same conditions.
Tetracycline has a half-life of less than 1 minute in 3N hydrochloric acid at 100 0. 6-deoxytetracycline on the other hand has a half-life of 27 hours under the same conditions. 6-deoxy-oxytetracycline in the same conditions has a half-life of 45 hours. Tetracycline has a half-life of about 6 minutes in a 0.1N sodium hydroxide solution at 100 C. On the other hand, 6-deoxytetracycline has a half-life of 9 1/2 hours under the same conditions. and 6-deoxy-oxytetra-cyoline has a half-life of 10 1/2 hours under these same conditions.
These unexpected properties are very valuable since the instability of tetracycline in an acidic medium and the instability of chlorotetracin in an alkaline medium limit or entirely exclude the use of these antibiotics in many anplications. Thanks to the much better stability of 6-deoxytetracyclines, it is
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possible to prepare many pharmaceutical products which could not be satisfactorily prepared with the previously known tetracyclines. On the other hand, the increased stability makes it possible to improve the recovery and purification methods, since more severe pH and temperature conditions can be used without destroying the new compounds.
As indicated above, the antibacterial activity of 6-deoxytetracyclines is quite similar in many respects to that of previously known tetracyclines and thus the physician can administer the new compounds in the same way and in approximately the same doses. than the tetracyclines currently in use.
In addition, since the new 6-deoxytetracyclines exhibit the broad spectrum antibiotic activity which caroterizes previously known tetracyclines, they can be used to treat a variety of infections produced by "Gram +" as well as "Gram +" baoteria. treatment of these infections with tetraoyolin or oxytetraoyolin is indicated.
The antibaoteric spectrum of the new compounds, representing the amount necessary to inhibit the growth of various typical baoteria, is determined in the usual way by the "agaragar dilution band method" which is commonly used in testing new antibiotics. The minimum inhibitory concentrations of 6-deoxytetraoyoline and 6-deoxy-oxytetracycline, expressed in gamma per cm3 with respect to various organisms tested, are indicated in the table below.
By way of comparison, the antibacterial activity of tetracycline towards the same organisms is also indicated.
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TABLE 1
EMI6.1
<tb>
<tb> 6-deoxy- <SEP> 6-deoxy- <SEP> Hydrochloride
<tb> Organism <SEP> oxytetra- <SEP> tetracycline <SEP> of <SEP> tetracycycline <SEP> ¯¯¯ <SEP> cline
<tb> Mycobacterium <SEP> 0.2 <SEP> 0.2 <SEP> 0.4
<tb> ranae
<tb> Mycobacterium <SEP> 0.2 <SEP> 0.2 <SEP>. <SEP> 0.4
<tb> smegmatis <SEP> ATCC <SEP> 607
<tb> Staphylococcus <SEP> 0.2 <SEP> 0.8 <SEP> 0.4
<tb> aureus <SEP> ATCC <SEP> 6538P <SEP>
<tb>
EMI6.2
(Micrococcus pyoge1)! Ef ?;
aureuo, 1 '
EMI6.3
<tb>
<tb> Sarcin <SEP> lutea
<tb> ATCC <SEP> 9341 <SEP> 0.2 <SEP> 0.4 <SEP> 0.4
<tb> Bacillus <SEP> snbtilis
<tb> ATCC <SEP> 6633 <SEP> 0.2 <SEP> 0.1 <SEP> 0.4
<tb>
EMI6.4
Streptccoccus A. 0.8 0 2 6
EMI6.5
<tb>
<tb> hemolyticus
<tb> hemolytic
<tb> Streptococcus <SEP>> <SEP> 50 <SEP> 6 <SEP> 25
<tb> hemolyticus
<tb> hemolytic
<tb>
EMI6.6
Staphylococcus ----, 50 6 25 albus Strertococcus '50 6 25t
EMI6.7
<tb>
<tb> hemolytious
<tb> Group <SEP> D
<tb> Staphylococcus <SEP> 1.5, <SEP> 1.5 <SEP> 1.5
<tb> aureus
<tb> Bacillus <SEP> cereus <SEP> 1.5 <SEP> 1.5 <SEP> 0.8
<tb> ATCC <SEP> 10702
<tb> Proteus <SEP> vulgaris <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> Esoherichia <SEP> coli <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> ATCC <SEP> 9637
<tb> Salmonella <SEP> 12 <SEP> 12 <SEP> 6
<tb> gallinarum
<tb>
From the above,
it will be noted that in many ways the antibacterial spectrum of the new compounds closely parallels that of tetra-
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cycline, but that, in addition, 6-deoxytetracycline is effective against certain strains of bacteria resistant to tetracycline, such as Streptococcus hemolyticus gamma hemolytic, Staphylococcus albus and Streptococcus hemolyticus group D. In addition, these two new compounds are much more effective against Strptococous hemolyticus beta hemolytic than tetracycline.
According to the present invention, the 6-deoxy terracyclines are prepared by a rather remarkable catalytic reduction of the corresponding tetracycline, in solution in a solvent, in the presence of a substance which is capable of forming. 6-deoxytetracycline is prepared by catalytically reducing tetracycline, chlorotetracycline or 1α, bromotetracycline, and 6-deoxy-oxytetraoycline is prepared by catalytically reducing oxytetetracycline.
The reduction process can be carried out by contacting with hydrogen a solution of the corresponding tetracycline in a solvent, in the presence of a suitable catalyst, such as finely divided metallic palladium or another metal of the family. platinum, on charcoal, or palladium hydroxide on charcoal.
Further, according to the invention, a method is provided. to remove the hydroxyl group from the. position 6 of a compound of the tetracycline series, which consists in catalytically reducing this compound in solution in a solvent, in the presence of a substance capable of forming a chelated ring with a perioxygenated hydronatphatakene '. Suitable compounds which possess the property of forming a chelated nucleus and which can be used successfully in the present method of
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reduction are boric acid, boron trihalides such as boron trifluoride, aluminum and magnesium salts such as aluminum chloride, magnesium acetate, etc.
Boric acid or boron trihalides appear to be the most useful compounds from the point of view of desired product yield. Usually, boric acid or boron trihalide is used in at least equimolar amount. The reduction can be carried out at temperatures varying from 0 to 100 ° C. and preferably between room temperature and approximately 50 ° C., and under hydrogen pressures of from 0.5 to 100 atmospheres approximately.
Suitable inert solvents which can be used in the reaction are the various polar solvents such as water, dioxane, glacial acetic acid, 2-ethoxyethanol, and ethyl acetate. It has been found that a 1: 1 ratio of water to dimethylformamide gives the solvent mixture particularly good for this reaction.
Usually, a small amount of perchloric acid is added to the solution. A catalyst concentrate of at least 5% by weight of the corresponding tetracycline is required, and up to about 100% can be used.
The hydrogenolysis is usually carried out until one mole of hydrogen is absorbed, - when the raw material is tetracycline, and at this time the absorption rate tends to decrease. When using chlorotetracycline, obviously 2 moles of hydrogen are required. Care must be taken not to prolong the hydrogenation for an excessive time, as further and undesirable reductions could take place with the formation of less interesting products.
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Substances capable of forming a chelated nucleus as indicated above and which are used in the described reduction process, are very important reagents because they apparently play the role of complex formers and have the effect of preventing the reduction of functions. oxygenated in position 11 'and 12 of the naphtacene ring These reagents are very important in the reduction, because in the absence of these agents, the reduction takes place in position 12 preferably at position 6, and the resulting compound has no activity biological. But in the reduction process described, chelation has the effect of blocking these oxygen functions and preventing their reduction, so that the antibacterial activity of the compound is retained.
Once the hydrogenation is complete, the 6-deoxytetracycline or 6-deoxy-oxytetracycline is recovered by any desired means, for example by removing the catalyst and concentrating the solution. The product is evaporated to dryness, it is purified by fractional precipitation in methanol and it is possible to further purify by recrystallizing from alcohol in the usual way. The neutral product thus formed can be converted into a mineral acid salt, for example the hydrochloride, by treating it with acids such as hydrochloric acid, at a pH of less than about 4. Other acid salts, such as sulfate, phosphate, trichloroacetate, etc. can be formed in a similar fashion.
Preferably, the 6-deoxytetracyclines can be suspended in a suitable solvent during the acidification. The alkali and alkaline earth salts can be formed simply by treating the amphoteric compound with approximately one equivalent of the base chosen, for example soda, potash, lime, barite,
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etc. The metal salts can be prepared in aqueous solution or in a suitable solvent. Preferably, the basic salts are prepared at a pH of 6 or higher. The free base can be obtained at a pH of about 4 to 6. The complexes, for example the 6-deoxytetracycline and aluminum gluconate complex, can be formed by simply mixing the hydrochloride of the novel compound and the aluminum gluconate in aqueous solution.
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In order to form the epimers 4a of the 6lesoxytetracyclines, that is to say those which have an epimeric form on the carbon atom in position 4, as has been described in connection with the other compounds of the tetracycline series, we can simply adjust the pH of a concentrated solution of the antibiotic to between 3.0 and 5.0 and let the solution stand until isomerization has come to equilibrium.
The most convenient is to carry out the isomerization at room temperature, although a higher conversion rate is obtained at higher temperatures. The pH should be between about 3.0 and 5.0, preferably between 3.5 and 4.5. There is some epimerization. at pHs outside these ranges, and even in distilled water; but the epimerization rate is very low.
The concentration of the antibiotic in the aqueous solution should be as high as possible, in order to give the highest rates of epimerization. Complete equilibrium may take about 24 hours at 25 ° C, but satisfactory equilibrium can be achieved in a much shorter time under particular conditions. However, in general, the best results are obtained by allowing the solutions to stand for a period of
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week or more. It seems that equilibrium is reached in most cases at around 50%; that is, about half of the antibiotic converts to an epimer at equilibrium.
Since concentration is an important factor in obtaining high yields for short periods of time, a solvent system should be chosen which gives the highest concentration of antibiotic. These systems should be buffered so as to obtain a pH within the preferential range. As solvents, mention will be made of methanol, ethanol, butanol, acetone, 2-ethoxyethano, 2-methoxypropanol, glacial acetic acid, tetrahydrofuran, dimethylformamide, and mixtures of these solvents. Still other solvents can be used. A preferred buffer is monosodium phosphate, but other buffers and pairs of buffers can be used which maintain the pH in the desired range.
The invention will be described in more detail with regard to the specific examples which follow.
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EXAMPLE 1
12 g of tetracycline hydrochloride are suspended in 10 volumes of a 1: 1 mixture of water and dimethylformamide. To the mixture are added 1.48 g of boric acid, 12 g of unreduced 5% palladium on charcoal, and 0.5 cm3 of perchloric acid. The hydrogenation by reaction with hydrogen is carried out at about 2.8 kg / cm2 on a Parr sewer for about 21/2 hours. Hydrogenation is stopped as soon as about 1 mole of hydrogen has been absorbed.
The solution is filtered and the catalyst is washed with 10 cm3 of dimethylfomamind then washed a second time with 10 cm3 of water.
EXAMPLE 2
The filtrate obtained by the process described in Example 1 is adjusted to pH 3.0 using concentrated ammonia and evaporated in vacuo to dryness. 50 cm3 of water-saturated butanol are added, the mixture is stirred and filtered. Concentrate the activity in water and adjust the pH to 3.0, then filter. The filtrate is adjusted to pH 1.5 and back-extracted with 100 cm3 of butanol. The extract is concentrated to about 5-10 cm3 under a nitrogen atmosphere. The solution is seeded and allowed to stand for 18 hours at room temperature. The crystals were filtered, washed with acetone and then with ether and dried under vacuum at 40 ° C. for 20 hours to give 179 mg of 6-deoxytetracycline.
EXAMPLE 3
2/3 gram of 6-deoxytetracycline is stirred in 13.5 cm3 of ethyl alcohol. 0.5 cc of concentrated hydrochloric acid was added to adjust the pH to 0.8-1.0 The solution was allowed to stand for 3 1/2 hours. It is
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forms crystals of 6-deoxytetracycline hydrochloride which are dried under vacuum for 20 hours at 100 ° C.
Analysis: calculated for C222H25N2CO7 C 56.7; H 5.38 N 6.02; CL 7.69; 0 24.1; effective: C 56.52; H 5.46; N 5.94; CL 7.71; o 23.89
The product has an optical rotation Ó of -292 in 0.1N H2SO4
The ultraviolet absorption spectrum is determined on a sample of the compound in 0.1N H 2 SO 4 at a concentration of 30.65 gammas per cm 3.
The infrared absorption spectrum is determined on a sample of the compound mixed with KBr crystals and compressed into a disc.
EXAMPLE 4
The operation of Example 1 is repeated, with the sole exception that 12 g of oxygenetracycline are used as starting material instead of the tetracycline hydrochloride used in said example.
EXAMPLE 5
To the reduction solution obtained in Example 4 is added 5 g of diatomaceous earth and the mixture is filtered. The filter cake is washed with 50 cm3 of a 50/50 mixture of dimethylformamide and water. The filtrate and the washings are combined to obtain a volume of 168 cm3. The combined wash liquors and filtrate were adjusted to pH 3.0 with concentrated ammonia and the solution evaporated in vacuo to dryness at 40-60-0. The solids were extracted. lides with 75 cm3 of water for one hour with stirring. The porridge is filtered. The pH of the solution is adjusted to 1.0 with hydrochloric acid. We extract the activity twice
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in butanol. The extracts are combined and evaporated to dryness.
7 cm3 of acetone is added to the dry extract, and hydrochloric acid is added to adjust the pH to 1.0.
The solids are removed by centrifugation. The supernatant liquid is seeded and the crystals formed are left to stand for 6 hours, filtered and washed with acetone, then with ether. The crystals are dried under vacuum at 40 ° C. for 12 hours. Rende-. ment: 84.7 mg of 6-deoxy-oxytetracycline.
A Analysis calculated for C22H25N2CLO8 C 54.90; H 5.20; N 5.83 Cl 7.38 0 26.70; effective analysis; C 54.48 H 4.81 N 5.50 Cl 7.74 0 26.55.
25 The product has an optical rotation Ó D of -251 in 0.1N H2SO4
The ultraviolet absorption spectrum is determined on a sample of the compound in 0.1N H2SO4 at a concentration of 40.76 gammas per cm3.
The infrared absorption spectrum is determined on a sample of the compound mixed with KBr crystals and compressed into a disc.
EXAMPLE 6
To 1.0 g of tetracycline hydrochloride is added 25 cm3 of a 1: 1 mixture of dimethylformamide and water.
3 cm3 (10 molar equivalents) of 45% boron trifluoride in ether are added, and the pH is adjusted to 1.3 with 2 cm3 of triethylamine. 1.0 g of 5% palladium on carbon are added. and the mixture is placed on a Parr shaker and allowed to react with hydrogen for 100 minutes (absorption of hydrogen 1 mol). The mixture is filtered and the insolubles are rinsed with 10 cm3 of water. 6-deoxytetracycline is obtained.
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EXAMPLE 7
2 2.5 g of tetracycline hydrochloride, 25 cm3 of a 1: 5 mixture of dimethylformamide and water are added. 1.1 g of magnesium acetate, Mg (C2H3O2) 2 4H2O are added. The pH is adjusted to 1.8 with hydrochloric acid.
2.5 g of 5% palladium on charcoal and 2 drops of perchloric acid are added, and the mixture is placed on a Parr shaker and reacted with hydrogen for 71 minutes (absorption of hydrogen. : 1 mole). The reduced solution is filtered and the insolubles are rinsed with 0.1N hydrochloric acid. 6-deoxytetracycline is obtained.
-EXAMPLE 8
To 2.5 g of tetracycline hydrochloride is added 25 cm3 of a 1: 1 mixture of dimethylformamide and water. The pH is adjusted to 1.8 with hydrochloric acid.
0.55 g of calcium chloride, 2 drops of perchloric acid and 2.5 g of palladium on charcoal are added. The mixture is placed on a Parr shaker and the mixture is left to regulate on hydrogen for 97 minutes (absorption: 1 mole of H2). The mixture is filtered and rinsed with 5 cm3 of 0.1N hydrochloric acid. 6-deoxytetracycline is obtained.
EXAMPLE 9
To 1 g of tetracycline hydrochloride, 25 cm3 of a 1: 1 mixture of dimethylformamide and water containing 0.27 g of aluminum chloride are added. The pH is adjusted to 1.5 with perchloric acid. 1.0 g of 5% palladium on charcoal was added and the mixture was placed on a Parr shaker for 150 minutes (absorption 1 mole of H2 The mixture was filtered. 6-deoxytetracycline was obtained.
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EXAMPLE 10
To 5 mg of 6-deoxytetracycline, 1 cm3 of glacial acetic acid is added. The mixture is stirred and allowed to equilibrate at room temperature for 18 hours, then filtered. Chromatography on paper shows the
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presence of 6-deoxy-4-epitetracycline.
EXAMPLE 11
To 5 mg of 6-deoxytetracycline, 1 cm3 of glacial acetic acid is added. The mixture is stirred and allowed to equilibrate at room temperature for 18 hours then filtered. The paper strip chromatography shows the
EMI16.2
presence of 6-deoxy-1 + = epioxytetracycline.
EXAMPLE 12
To 1.0 g of tetracycline hydrochloride, 0.1 g of boric acid dissolved in 28 cm3 of a 1: 1 mixture of dimethylformamide and water is added. The pH is adjusted to 2.1 with hydrochloric acid. 0.75 g of 5% palladium on charcoal is added to 13 cm3 of this solution. The mixture is placed in a stainless steel autoclave and allowed to react with hydrogen at a pressure of 133 kg / cm2 for 80 minutes.
The mixture is filtered and the insolubles washed with water.
Spectrophotometric titrations of the reduction filtrate indicate the presence of 6-deoxytetracycline.
EXEI, IPLE 13
The method of Example 1 is followed, except that chlorotetracycline hydrochloride is used as raw material instead of tetracycline hydrochloride. Chlorotetracycline hydrochloride is added to 15 cm3 of a 50:50 mixture of dimethylformamide and water: and the hydrogenation is carried out as in Example 1 until two moles of hydro
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gene have been absorbed. Chromatographic examination of the product reveals the presence of 6-deoxytetracycline.
EXAMPLE 14
To 4cm3 of a solution which is prepared by mixing 25c-n3 of dimethylformamide, 25cm3 of water, 32.5 mg of boric acid and a drop of perchloric acid, 5.67 mg of 4-ear are added. neutral oxytetracycline (JA C. S. 79, 2849 1957). 7 mg of 5% palladium on carbon are added and the mixture is brought into contact with hydrogen at a pressure of 2.1 kg / cm2 for 6 hours. Chromatographic analysis on paper and spectrophotometric analysis indicate the presence
EMI17.1
of 6-.deflxy-1-epi-oxytetracycline.
EXAMPLE 15
To 4cm3 of a solution which is prepared by mixing 25 cm3 of dimethylformamide, 25 cm3 of water, 32.5 mg of boric acid and a drop of perchloric acid, 5.0 mg of salt is added. ammonium of 4-epi-bromotetracycline (JACS 79, 2849 (1957). 7 mg of 5% palladium on charcoal are added and the mixture is contacted with hydrogen at a pressure of 2.1 kg / cm2 for 6 hours Chromatographic analysis on paper and spectrophotometric analysis indicate
EMI17.2
quent the presence of 6-deoxy-4-epitetracycline.
EXAMPLE 16
To 4 cm3 of a solution which is prepared by mixing 25 cm3 of dimethylformamdide 25 cm3 of water, 32.5 mg of boric acid and a drop of perchloric acid, 5.0 mg of 4 hydrochloride is added. -epichlorotetracycline (JACS
79, 2849 1957). 7 mg of 5% palladium on charcoal are added and the mixture is contacted with hydrogen at a pressure of 2.1 kg / cm 2 for 7 hours. Chromato-analysis
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Paper graph and spectrophotonetric analysis indicate the presence of 6-dsoxy-l-epitetracycline.
EXAMPLE 17 At 4 cm3 of a solution which is prepared in
EMI18.2
changing 25 cm3 of dimethylformamide, 25 cm3 of water, 32.5 mg of boric acid and a drop of perchloric acid, 6.0 mg of bromotetracycline are added. 7 mg of 5% palladium on charcoal are added and the mixture is contacted with hydregene at a pressure of 2.1 kg / cm 2 for 6 hours. Chromatographic analysis on paper and spectrophotometric analysis show the presence of 6-deoxytetracycline.
EXAMPLE 18
To 4 cm3 of a solution which is prepared by mixing 25 cm3 of dimethylformamide, 25 cm3 of water, 32.5 mg. -boric acid and a drop of perchloric acid, 5.0 mg of 4-epitetracycline (J.A.C.S. 79, 2849, 1957) are added. 7 mg of 5% palladium on charcoal are added and the mixture is contacted with hydrogen at a pressure of 2.1 kg / cm2 for 4 hours. Chromatographic analysis on paper and anal
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Spectrophoto-netric lysis indicate the presence of 6-deoxy-4 '' epitetracycline.