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Precipitacion

Este documento describe dos prácticas de laboratorio para observar reacciones de precipitación entre antígenos y anticuerpos. La primera involucra precipitación capilar usando diluciones seriadas de un antígeno oválbumina de huevo. La segunda usa dos métodos de inmunodifusión, Ouchterlony y Mancini, en medio semisólido para observar halos de precipitación. Los resultados son usados para cuantificar inmunoglobulinas y otros componentes en suero.

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Precipitacion

Este documento describe dos prácticas de laboratorio para observar reacciones de precipitación entre antígenos y anticuerpos. La primera involucra precipitación capilar usando diluciones seriadas de un antígeno oválbumina de huevo. La segunda usa dos métodos de inmunodifusión, Ouchterlony y Mancini, en medio semisólido para observar halos de precipitación. Los resultados son usados para cuantificar inmunoglobulinas y otros componentes en suero.

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS


BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA

PRÁCTICA No. 8
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN 1

Jiménez Torres Aylin Guadalupe


6QV2 Equipo 3
OBJETIVOS

 Identificar las distintas maneras de poner en evidencia la


reacción de precipitación que ocurre cuando un antígeno
soluble interacciona con su anticuerpo homologo.
 Observar la precipitación en medio líquido y medio
semisólido.
Ag OVA
REACCIONES DE PRECIPITACION EN MEDIO LIQUIDO Ac ἇOVA
Precipitación capilar

Dividir los capilares entres partes


Realizar diluciones 1:2 iguales.

Incubar a
temperatura
ambiente durante
24 a 48 hrs.

Medir el precipitado
Llenar los capilares con Ag y Ac
hasta cubrir marcas.
Tabla 1. Concentraciones y medidas del precipitado obtenidos en
las diluciones.
CAPILAR No. Dilución del Concentració Precipitación
antígeno n del (mm)
antígeno
(mg/mL)
1 1:2 15 3
2 1:4 7.5 1
3 1:8 3.5 2
4 1:16 1.875 4
5 1:32 0.9365 4
6 1:64 0.4688 6
7 1:128 0.2344 5
8 1:256 0.1172 4
9 1:512 0.0586 2
10 1:1024 0.0293 1
7

5
precipitado (mm)

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16

mg/mL

Figura 1. Curva de precipitación obtenida durante la precipitación en


capilar.
7 Zona de
equivalencia

precipitado (mm)
6

4
Zona de
exceso de Ac
3

Zona de
2 exceso de Ag

0
0 2 4 6 8 10 12

No de tubo.

Figura 2. Zona de exceso de anticuerpo, zona de equivalencia y zona de


exceso de antígeno obtenidos durante el experimento.
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN EN MEDIO SEMISÓLIDO
A) Inmunodifusión doble (Método de Oüchterlony)

Llenar cada uno de los Incubar en cámara húmeda a


Perforar el agar
pozos. temperatura ambiente durante
24-48 hrs.
STH ASH STH ASH

Ac

Ac

Gamma ASH
globulina Gamma globulina

Figura 3. Bandas de identidad, identidad parcial y no identidad.


B) Inmunodifusión radial (Método de Mancini)

Incubar en cámara húmeda a


Realizar cinco pozos al temperatura ambiente durante
Llenar los pozos con ASH
portaobjetos, 24-48 hrs.
a diferentes
previamente cubierto concentraciones y
con agarosa y Ac ἇASH colocar el problema.

Medir el diámetro de los


halos de precipitación.
Tabla 2. Diámetros obtenidos en los
halos de precipitación.
Concentraci Diámetro en D2
ón del mm
antígeno

2 13 169

1 10 100

Figura 4. Halos de precipitación formados a diferentes


0.5 8 64
concentraciones y el problema.

0.25 5 25

problema 9 81
180

f(x) = 78.26 x + 16.13


160

140

120
Diametro mm

100

 
80

60

40

20
Concentración del
0 problema:
0 0.5 1 1.5 2 2.5
0.8288 mg/mL
mg/mL

Figura 5. Curva tipo obtenida de los halos de


precipitación.
APLICACIONES:

 Cuantificar inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM


 Fracciones de complemento C3 y CC4
 Factores de coagulación
 Proteínas en suero
BIBLIOGRAFIA:

 Parham Meter, Inmunología 2º Edición Editorial Médica Panamericana,( 2006)

 Roitt Ivan, Brostoff J. Male D. “Inmunología. Fundamentos”9 Ed.


Panamericana(2004)
 Ivan PalomoG, Arturo Ferreira V, Cecilia Sepúlveda, ¨Fundamentos de Inmunología
Básica y Clínica¨. Editorial Universidad de Talca. Chile. 2009

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