WO2024204223A1

WO2024204223A1 - マイクロ流体デバイスおよび検査方法

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Publication number: WO2024204223A1
Application number: PCT/JP2024/012000
Authority: WO
Inventors: 周平青山
Original assignee: デンカ株式会社
Priority date: 2023-03-29
Filing date: 2024-03-26
Publication date: 2024-10-03

Abstract

液体試料（９９）を導入する導入部（２２）と、導入された液体試料（９９）を貯留する貯留部（２３）と、導入部（２２）と貯留部（２３）とを結ぶ流路（２１）とを備える検査キット（１）であって、基材（４１）と、蓋材（４２）と、基材（４１）と蓋材（４２）とを接合する粘着テープ（４３）との３層構造（４０）を備え、流路（２１）は、基材（４１）の流路（２１）側の表面と蓋材（４２）の流路（２１）側の表面と粘着テープ（４３）の側面によって形成された閉空間により構成されており、蓋材（４２）の少なくとも流路（２１）側の表面は流体浸透性材料により構成されている検査キット（１）が提供される。

Description

マイクロ流体デバイスおよび検査方法

　本発明は、液体試料中の被検出物質を検出するマイクロ流体デバイス（マイクロデバイスともいう）およびそのようなマイクロ流体デバイスを用いた検査方法に関する。

　近年、抗原抗体反応などを用いることで、感染症への罹患や妊娠を検査したり、血糖値などを測定したりする、ＰＯＣＴ（Point of Care Testing）試薬が注目を集めている。ＰＯＣＴ試薬を用いた検査・測定では、短時間での結果の判別が可能である。また、ＰＯＣＴ試薬の使用方法は簡便であり、ＰＯＣＴ試薬は安価である。ＰＯＣＴ試薬は、これらの特徴を有するため、症状が軽度である段階での診察や定期診察などに多く使用されている。また今後増加することが予想される在宅医療においてもＰＯＣＴ試薬は重要な診察ツールとなる。

　ＰＯＣＴ試薬の一種である検査キット（「マイクロデバイス」ともいう）を用いた検査または診断では、血液などの液体試料を検査キットに導入し、液体試料に含まれる特定の被検出物質を検出する。液体試料から特定の被検出物質を検出する方法として、ラテラルフローイムノアッセイ法がよく用いられている。ラテラルフローイムノアッセイ法では、検査キットが備える膜担体上に液体試料を滴下して、液体試料が膜担体上を移動する過程で、液体試料中の被検出物質が標識物質と結合する。さらに被検出物質が、検査キット中に固定された物質（以下、検出物質という）と特異的・選択的に結合する。その結果検査キットに生じた色や重量の変化などを検出する。検出物質は、試薬（ｒｅａｇeｎｔ）と言い換えてもよい。

　液体試料を移動させるための膜担体としては、ニトロセルロース膜がよく用いられている（下記特許文献１参照。）。ニトロセルロース膜は、直径が数μｍ程度の微細な孔を多数有しており、その孔の中を液体試料が毛細管力によって移動する。

　しかしニトロセルロース膜は天然物由来であり、膜における孔径や孔同士のつながり方が一様ではないため、膜における液体試料の流速が膜によって異なる。流速に差異が生じると、被検出物質の検出にかかる時間も変化してしまう。その結果、被検出物質が標識物質または試薬と結合する前に、被検出物質が検出されない、という誤った判断がなされてしまう可能性がある。

　上記の課題を解決するため、液体試料の微細流路を人工的に作製する手法が考案されている（下記特許文献２、３参照。）。この手法を用いることで、均一な構造を有する膜担体を作製することができる。その結果、被検出物質が標識物質または試薬と結合する前に、被検出物質が検出されない、という誤った判断がなされる可能性を低減することができる。

特開２０１４－０６２８２０号公報特許第４５９７６６４号特表２０１２－５２４８９４号公報

　ところで、ラテラルフローイムノアッセイ法において、被検出物質を検出する手法として、着色ラテックス粒子、蛍光粒子、または金属コロイド粒子などの標識物質と結合した被検出物質が、検知ゾーンに固定された試薬と結合することによって生じる検知ゾーンの発色、蛍光、発光などの変化を、吸光度測定器などの光学測定機器によって検知する方法（光学的検出手法）がよく知られている。また、バイオマーカーの濃度を電気化学的活性な物質濃度に変換して検出する手法（電気化学ラテラルフローイムノアッセイ法）もある。

　光学的検出手法および電気化学ラテラルフローイムノアッセイ法のいずれの場合でも、精度良く疾病（被検出物質）を見つけ出すには、ノイズがないことが好ましい。ノイズを低減することで、検体の少量化につながり、被検者の負担軽減にも貢献する。

　本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、ラテラルフローイムノアッセイ法に用いるマイクロ流体デバイスにおいて、ノイズを低減し検出精度を向上させる技術を提供することを目的とする。

　本発明によれば次の技術が提供される。
１．
　液体試料を導入する導入部と、導入された液体試料を貯留する貯留部と、前記導入部と前記貯留部とを結ぶ流路とを備えるマイクロ流体デバイスであって、
　基材と、蓋材と、前記基材と前記蓋材とを接合する粘着テープとの３層構造を備え、
　前記流路は、前記基材の流路側の表面と前記蓋材の流路側の表面と前記粘着テープによって形成された閉空間により構成されており、
　前記蓋材において、少なくとも前記流路側の表面が流体浸透性材料により構成されているマイクロ流体デバイス。
２．
　前記蓋材の少なくとも前記流路側の表面が親水層で構成されている、１．に記載のマイクロ流体デバイス。
３．
　前記親水層の純水の接触角が０～４０°である、２．に記載のマイクロ流体デバイス。
４．
　前記蓋材は、ポリエステルの表面に前記親水層を形成している、２．または３．に記載のマイクロ流体デバイス。
５．
　前記親水層は、ポリビニルアルコール、アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、ポリエチレンイミンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上の樹脂からなる、２．から４．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
６．
　前記粘着テープは、ポリエステル基材の両面にアクリル系粘着材またはシリコーン系粘着剤が設けられて構成されている、１．から５．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
７．
　前記ポリエステル基材の厚みが２０～５００μｍであり、
　前記アクリル系粘着材またはシリコーン系粘着材の片面の厚みは、それぞれ５～１００μｍである、６．に記載のマイクロ流体デバイス。
８．
　前記基材の表面に検出物質が固定化された固相部が設けられている、１．から７．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
９．
　前記基材の表面に複数の凸部が備わった構造Ａが設けられている、１．から８．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１０．
　前記構造Ａの前記凸部は、錐体、半球、半楕円球、直方体または柱状体を呈する、９．に記載のマイクロ流体デバイス。
１１．
　前記構造Ａは、前記複数の凸部が格子状に平面配置されている構造である、９．または１０．に記載のマイクロ流体デバイス。
１２．
　前記凸部の底面の径が１０μｍ以上１０００μｍ以下である、１０．または１１．に記載のマイクロ流体デバイス。
１３．
　前記凸部の高さが１０μｍ以上５００μｍ以下である、１０．から１２．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１４．
　前記凸部の表面に微細凹凸構造Ｂが形成されており、
　前記微細凹凸構造Ｂが形成された前記凸部の、粗さ曲線の算術平均粗さＲａが０．００５μｍ以上１μｍ以下である、１０．から１３．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１５．
　前記構造Ａは、検出物質を固定する固相部に設けられている、１０．から１４．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１６．
　前記貯留部には多孔性吸収部材または複数の凸部からなる構造Ａの少なくともいずれかが設けられている、１．から１５．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１７．
　前記貯留部に設けられた多孔性吸収部材または複数の凸部からなる構造Ａの直前には、流路が拡大する構造または所定の空間を有する構造の少なくもいずれかが設けられた、１６．に記載のマイクロ流体デバイス。
１８．
　前記蓋材および前記貯留部の一部には、空気が抜ける穴または空気が抜ける開口部が設けられている１．から１７．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
１９．
　前記液体試料の導入部にはメンブレンフィルターが設けられた、１．から１８．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２０．
　前記３層構造には、前記基材、前記蓋材及び前記粘着テープによる接合の位置決めをするアライメント構造が設けられている、１．から１９．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２１．
　前記アライメント構造は、前記基材と前記蓋材の双方に設けられた位置合わせマークである、２０．に記載のマイクロ流体デバイス。
２２．
　前記蓋材の前記流路側の表面は、液体の流れを調整する蓋側調整部を有する、１．から２１．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２３．
　前記粘着テープは、液体の流れを調整する形状を有する、１．から２２．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２４．
　前記基材の前記流路側の表面は、液体の流れを調整する基材側調整部を有する、１．から２３．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２５．
　前記基材および前記粘着テープは、前記導入部の下流側に、液体の流れを調整する調整構造を有し、かつ標識検出物質を固定する標識検出物質固定部を備える、１．から２４．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２６．
　前記導入部は、検体が導入される検体導入部と、反応試薬が導入される反応試薬導入部とを備え、
　前記流路は、
　　断面において流れ方向に対して垂直方向が閉空間により構成されており、
　　前記検体導入部と前記貯留部とを接続する主流路と、
　　前記主流路の上流側において、前記主流路に合流する分岐流路とを有し、
　前記分岐流路の上流側に前記反応試薬導入部が設けられており、下流側の流路からの逆流を防止する逆流防止構造が設けられている、１．から２５．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
２７．
　前記逆流防止構造として、前記分岐流路の上流側を密封した構造を有する、２６．に記載のマイクロ流体デバイス。
２８．
　前記逆流防止構造として、前記分岐流路において液体の流れを調整することで合流先の流路からの逆流を防止する流れ調整部を有する、２６．または２７．に記載のマイクロ流体デバイス。
２９．
　前記流れ調整部は、流路表面に設けられた疎水性層を有しており、前記疎水性層より下流側の領域より疎水性が高くなるように設けられている、２８．に記載のマイクロ流体デバイス。
３０．
　前記分岐流路は、上流側で更に分岐した副分岐流路を備える、２６．から２９．までのいずれか１に記載のマイクロ流体デバイス。
３１．
　前記導入部には、反応試薬が封入されたパウチが設けられており、
　前記パウチが開封されること、前記反応試薬が前記導入部に導入される、２６．から３０．に記載のマイクロ流体デバイス。
３２．
　１．～３１．のいずれか１に記載のマイクロ流体デバイスを用いた検査方法。

　本発明によれば、ラテラルフローイムノアッセイ法に用いるマイクロ流体デバイスにおいて、ノイズを低減し検出精度を向上させる技術を提供することができる。

第１の実施形態の検査キットの平面図である。第１の実施形態の検査キットの斜視図である。第１の実施形態の検査キットの分解斜視図である。第１の実施形態の図１のＸ１－Ｘ１断面図およびＸ２－Ｘ２断面図である。第１の実施形態の閉鎖空間のマイクロ流路における毛細管力を説明する図である。第１の実施形態の構造Ａおよび凸部の斜視図である。第１の実施形態の凸部の斜視図である。第１の実施形態の変形例の基材側調整部または蓋側調整部を説明する図である。第１の実施形態の変形例の粘着テープにおける液体の流れを調整する調整構造を説明する図である。第２の実施形態の検査キットの斜視図である。第２の実施形態の検査キットの分解斜視図である。第２の実施形態の検査キットの平面図である。第２の実施形態のパウチの断面図である。第２の実施形態の第１分岐流路および第２分岐流路に設けられる流れ調整部の例を示す図である。第２の実施形態の副分岐流路を有する検査キットの平面図である。第２の実施形態の簡易構造の検査キットの平面図である。第２の実施形態の簡易構造の検査キットの平面図である。実施例における検査キットのサンプルおよび検査方法概要（プロトコール）を説明する図である。実施例の実験１の結果を示す図である。実施例における３種類の検査キット（方式（１）～（３））の仕様および測定結果例（濃度０（Blank）時）を示した図である。実施例における方式（２）および（３）の検査キットを用いて、抗原濃度を変えて発光信号を測定したときの結果を示した図である。実施例における方式（２）の結果（図左側）と、マイクロプレート利用時の化学発光ELISAの結果（図右側）とを示した図である。実施例における実験２の方式および実験３の方式の試験結果を示した図である。

　以下では、本発明の実施形態を図面を参照して説明する。
＜検査キットの概要＞
　図１は本実施形態に係る検査キット１（マイクロ流体デバイスまたはマイクロデバイスともいう）を示す平面図である。図２は、検査キット１の斜視図である。図３は検査キット１の分解斜視図である。図４は図１のＸ１－Ｘ１断面図（図４（ａ））とＸ２－Ｘ２断面図（図４（ｂ））である。

　検査キット１は、ＰＯＣＴ試薬の一種であって、液体試料９９中の被検出物質を検出する機能を有する。血液などの液体試料９９を検査キット１に導入し、液体試料９９に含まれる特定の被検出物質を検出する。液体試料９９から特定の被検出物質を検出する方法として、ラテラルフローイムノアッセイ法が適用される。なお、ラテラルフローイムノアッセイ法として、光学的検出手法と電気化学ラテラルフローイムノアッセイ法のいずれが用いられてもよい。以下では、光学的検出手法について例示する。

＜検査キット１の詳細＞
　図１～４に示すように、検査キット１は、液体試料９９を導入する導入部２２と、導入された液体試料９９を貯留する貯留部２３と、導入部２２と貯留部２３とを結ぶ流路２１とを備える。すなわち、導入部２２から導入された液体試料９９は、流路２１を通り、貯留部２３に流れる。本実施形態では、導入部２２から貯留部２３へ向く方向を溶液の進行方向ｄ（「流路方向」ともいう）として説明する。

　検査キット１は、基材４１と、蓋材４２と、基材４１と蓋材４２とを接合する粘着テープ４３との３層構造４０を備える。３層構造４０には、基材４１、蓋材４２及び粘着テープ４３による接合の位置決めをするアライメント構造８０が設けられている。アライメント構造８０については後述する。

＜流路２１＞
　流路２１は、例えば図４（ａ）に示すように、基材４１の流路２１側の表面４１ａと蓋材４２の流路２１側の表面４２ａと粘着テープ４３の壁面４３ａによって形成された閉空間４５により構成されている。流路２１と連結している導入部２２と貯留部２３は、流路２１と同様の構造（すなわち閉空間４５）により構成されている。ただし、導入部２２は液体試料９９を導入する必要があることから、蓋材４２には閉空間４５の内外を連通する試料導入開口部２２ｂが設けられている。また、液体試料９９を流路中を流す必要があることから、貯留部２３の一部には空気を抜くための空気穴８５が設けられている。

　導入部２２から流路２１に導入された液体試料９９は、閉鎖空間のマイクロ流路（ここでは流路２１）における毛細管力によって、貯留部２３へ向けて輸送される。図５を参照して、閉鎖空間のマイクロ流路における毛細管力について説明する。図５に示す流路当該毛細管力は、流路２１の４面（基材４１の流路２１側の表面４１ａ、蓋材４２の流路２１側の表面４２ａ、粘着テープ４３の壁面４３ａ）の親水性の高さおよび、流路の高さ、幅により定まる。一般には、流体（ここでは液体試料９９）の表面張力をγ、流路表面の接触角をθ、流路高さをｈ、流路幅をｗとした場合に、毛細管力Ｐは下記の式（１）で表される。

　すなわち、流路表面の親水性が高いほど、流路が狭いほど、毛細管力Ｐ（すなわち輸送力）が高くなる。流路の幅は例えば、０．１～６ｍｍであってよい。

　流路２１の底面、すなわち基材４１の表面４１ａの一部領域（固相部５０）には、図４（ｂ）に示すように、複数の凸部８を備えた構造Ａ７が設けられている。同様に、導入部２２及び貯留部２３における基材４１の表面４１ｂ、４１ｃにも構造Ａ７が設けられてもよい。構造Ａ７の詳細は後述する。

＜固相部５０＞
　流路２１の途中には、試薬（検出物質）が固定された固相部５０が設けられている。ここでは、固相部５０は、上流側（導入部２２側）から第１の固相部５１、第２の固相部５２および第３の固相部５３の３箇所設けられている。固相部５０は、平坦であっても、構造Ａ７が設けられていてもよい。ただし検出物質を高効率で固定化する観点から、固相部５０には複数の凸部を備えた構造Ａ７の形成、またはプラズマ処理、シランカップリング処理などの化学的表面改質処理の少なくともいずれかが施されていることが好ましい。第１の固相部５１、第２の固相部５２および第３の固相部５３には、それぞれ複数の凸部８を備えた構造Ａ７が設けられている。構造Ａ７に試薬（検出物質）が固定されている。

　第１の固相部５１は、酵素等の標識物質が検出物質に固定化された標識検出物質（例えば、検出物質が抗体であるときには標識抗体）が固定化される領域である。第２の固相部５２は、テストラインとも称され、液体試料９９に含まれる被検出物質を検出する検出物質（例えば、検出物質が抗体であるときには非標識抗体）が固相化される領域である。第３の固相部５３は、コントロールラインとも称され、ラテラルフローイムノアッセイ試験が正常に行われたかどうかを判定する領域であって、液体試料９９に含まれるコントロール判定用物質に反応する検出物質（例えば、検出物質が抗体であるときには非標識抗体）が固相化されている。

＜貯留部２３＞
　貯留部２３は、余剰な液体試料９９を吸収する領域である。余剰溶液を吸収する多孔性吸収部材（吸収部材、吸収パッドともいう）または複数の凸部８からなる構造Ａ７が設けられてもよい。さらに、例えば、貯留部２３において、多孔性吸収部材の直前に、流路が急激に拡大する構造や、一定の空間を有する構造を設けることによって、流路側にも液体試料９９が貯留するようにしてもよい。このような構造によって、液体試料９９の輸送速度や所定領域を通過するタイミングを調整することができ、液体試料９９の多段階反応が可能となる。さらに貯留部２３および蓋材４２には、液体試料９９を流路２１中に流す必要があることから、空気を抜くための空気穴８５が設けられてもよい。空気を抜くことができれば、空気穴８５の形状は特に限定されず、例えば貯留部２３の後方部に蓋材４２が存在しない状態、すなわち開口部となっていてもよい。なお、空気穴８５または同等の機能を有する構造は、貯留部２３に限らず流路２１を構成する蓋材４２等に適宜設けられてもよい。

＜構造Ａ７＞
　図６および図７を参照して構造Ａ７を説明する。図６（ａ）は構造Ａ７の上面図であり、図６（ｂ）は構造Ａ７を構成する凸部８の斜視図である。図７は凸部８の斜視図であり、ＳＥＭ画像で示している。

　構造Ａ７は、複数の凸部８の総体である。つまり、基材４１は、液体試料９９の流路２１や導入部２２、貯留部２３の底面に相当する平坦部９と、平坦部９から突出する複数の凸部８と、を備える。

　複数の凸部８は、格子状配置（例えば菱形格子状配置や正格子状配置）のように規則的に、または並進対称的に、基材４１の表面上に規則的に整列して並んで形成される。

　本実施形態では、構造Ａ７は、固相部５０における抗体等の検出物質を固相化するための構造としてのみ設けられている。構造Ａ７（すなわち複数の凸部８の配置）の粗密を制御することによって、単位面積あたりに固定化する検出物質の量を制御できる。具体的には、凸部８間の距離５が狭いほど、より高密度に検出物質を固定化できる。構造Ａ７の例として、図７（a）に、凸部８が円錐であり、底面の径を３０μｍ、高さを３０μｍ、凸部８間の距離５を１５μｍとして、正方格子状に配列した構造Ａ７を示す。また、図７（b）に、凸部８が円錐であり、底面の径を３０μｍ、高さを３０μｍ、凸部８間の距離５を２μｍとして、六角格子状に配列した構造Ａ７を示す。しかしながら、構造Ａ７を流路２１全体に設けると、試薬（検出物質）が固相部５０以外の領域に吸着してしまうことがある。その場合、固相部５０以外に吸着した試薬（検出物質）がノイズとして検出され、ＳＮ比が低下するおそれがある。そこで、固相部５０のみに構造Ａ７を設けることで、検出精度を向上させる。

＜微細凹凸構造Ｂ＞
　被検出物質の測定精度を向上する観点から、少なくとも固相部５０において、凸部８の表面に微細凹凸構造Ｂが形成されていることが好ましい。
　同様の観点から、このとき、微細凹凸構造Ｂが形成された凸部８の、粗さ曲線の算術平均粗さＲａは、好ましくは０．００５μｍ以上１μｍ以下である。
　ここで、粗さ曲線の算術平均粗さＲａは、具体的には、三次元粗さ解析走査電子顕微鏡を用いて、ＪＩＳ　Ｂ　０６０１：２０１３に準じて測定される。

　微細凹凸構造Ｂが形成された凸部８の、粗さ曲線の算術平均粗さＲａは、検出物質をより安定的に固定する観点から、好ましくは０．００５μｍ以上であり、より好ましくは０．０１０μｍ以上、さらに好ましくは０．０５０μｍ以上、さらにより好ましくは０．０８０μｍ以上である。
　微細凹凸構造Ｂの成形性向上の観点から、上記算術平均粗さＲａは、好ましくは１μｍ以下であり、より好ましくは０．５μｍ以下、さらに好ましくは０．３μｍ以下、さらにより好ましくは０．２μｍ以下である。

　以下、図６（ａ）を例に、構造Ａ７における微細凹凸構造Ｂが形成された凸部８の算術平均粗さＲａの測定方法を説明する。
　三次元粗さ解析走査電子顕微鏡を用いて、凸部８の頂点中心部（例えば、突起部の中心１９）を中心点として凸部８の表面に沿って（上面からみたときに直線２０に沿って）凸プロファイルを測定する。直線２０は、頂点中心部（たとえば、凸部８の中心１９）を中心点とし、長さ２０ｄの一本の直線である。長さ２０ｄは、凸部８の底面の径と同じ長さである。直線２０が同一平面上の直線である場合（たとえば両端および中心が同一平面上にある場合）、すなわち凸部８が円柱、多角柱等の形状である場合、凹凸プロファイルよりＪＩＳ　Ｂ　０６０１：２０１３で規定された粗さ曲線の算術平均粗さＲａを算出する。直線２０が同一平面上の直線ではない場合、すなわち凸部８が円錐、多角錐、半球、半楕円体、円錐台、多角錐台等の形状である場合、凹凸プロファイルより傾き補正を施し、平面としてＪＩＳ　Ｂ　０６０１：２０１３で規定された粗さ曲線の算術平均粗さＲａを算出する。

＜基材４１（膜担体）＞
　構造Ａ７（複数の凸部８）を含む基材４１は、例えば熱可塑性プラスチックからなる。すなわち、熱可塑性プラスチックからなる膜状基材を熱インプリントによって加工することにより、構造Ａ７を固相部５０に有する基材４１を作製することができる。

　熱インプリントの方式は、平板プレス式及びロール式のいずれであってもよい。平板プレス式では、平行に対面する上下のステージの間で、モールドを、熱可塑性プラスチックからなる基材と重ねて、これらをステージ間に挟む。そして、ステージを介して、モールド及び基材４１を加熱し、且つ加圧する。このような平板プレス式は、成型の精度が良い点において優れている。ロール式は、加熱したロール式モールドを用い、ロール同士の挟み圧によって成型を行う方式である。ロール式は、生産性に優れている。

　熱インプリントを行う際の成型温度、成型圧力、転写時間等の条件は、微細加工のサイズ、構造Ａ７（すなわち凸部８）の形状、加工範囲の大きさなどに応じて、選択すればよい。例えば、平板プレス式の場合、成型温度は、ガラス転移点Ｔｇよりも２０～５０℃高い温度、または融点Ｔｍよりも２０～５０℃高い温度であってよい。成型圧力は、１～１０ＭＰａであってよい。転写時間（モールド及び基材４１を加圧しながら保持する時間）は、３～１０分であってよい。以上の諸条件下での熱インプリントにより、モールドの構造Ａ７を基材４１の表面へ正確に転写し易くなる。
　基材４１の厚みｔ１は、構造Ａ７（すなわち凸部８）の高さ６を除き、例えば、０．１～１０ｍｍとすることができる。

＜基材４１（膜担体）の材料＞
　基材４１を構成する熱可塑性プラスチックは、例えば、ポリエステル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート系樹脂、フッ素系樹脂、及びアクリル系樹脂からなる群より選ばれる少なくとも一種であってよい。具体的な熱可塑性プラスチックは、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、及びポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）からなる少なくとも一種であってよい。

　上記の熱可塑性プラスチックのガラス転移点Ｔｇまたは融点Ｔｍは、８０～１８０℃であってよい。ガラス転移点Ｔｇより２０℃高い温度での熱可塑性プラスチックの貯蔵弾性率は、１．０Ｐａ以上１．０×１０^７Ｐａ以下であってよい。融点Ｔｍより２０℃高い温度での熱可塑性プラスチックの貯蔵弾性率は、１．０Ｐａ以上１．０×１０^７Ｐａ以下であってよい。

　熱可塑性プラスチックのガラス転移または融解が８０℃未満の温度で起こり、さらにガラス転移点または融点よりも２０℃高い温度での熱可塑性プラスチックの貯蔵弾性率が１．０×１０^７Ｐａ以上である場合、熱可塑性プラスチックを、室温で固体として使用するのは実用上困難であり、熱インプリントによって基材４１を作製し難くなる。

　熱可塑性プラスチックのガラス転移または融解が１８０℃より高い温度で起こる場合、熱インプリント時の成型温度が高くなり、基材４１の生産性が低下する。つまり、熱インプリント時に熱可塑性プラスチックを柔らかくするために要する温度が１８０℃より高い場合、基材４１の生産性が低下する。

　ガラス転移点または融点よりも２０℃高い温度での熱可塑性プラスチックの貯蔵弾性率が１．０×１０^７Ｐａ以下である場合、構造Ａ７を作製する際に必要な成型圧力を小さく抑えることができ、比較的温和な条件で作製できるため生産効率が向上する。

＜凸部８＞
　凸部８は、例えば、錐体を呈し、ここでは、図６（ｂ）や図７に示すように円錐形状である。その他に、角錐、円錐台（円錐体の頭部が切り取られた形状）、角錐台（角錐体の頭部が切り取られた形状）等の錐体や、半球、半楕円球、直方体、柱状体等であってもよい。

　流路２１、導入部２２及び貯留部２３の構造Ａ７は、同一の形状および配置で構成されてもよいし、複数の種類のエリアに異なる形状や配置、構成が採用されてもよい。エリア毎に構造Ａ７を構成する凸部８の形状や大きさ、配置を変えることで、エリア毎に要求される性能に最適化される。

　凸部８は、モールドを用いた熱インプリントによって形成することができる。モールドを用いて錐体を形成する場合、モールドを用いて溝状の流路（ラインａｎｄスペース構造）を形成する場合に比べて、モールドの作製時に金属部材の表面から削り出す金属の体積が大幅に低減され、モールドの加工費が低減する。一方で、ラインａｎｄスペース構造を形成するためのモールドの作製では、多量の金属を金属部材から削り取らなくてはならない。

　また錐体の上部は、錐体の底面に比べて細い。したがって、モールドを用いて錐体を形成する場合、錐体と同じ底面を有する柱体をモールドで形成する場合に比べて、モールドの作製時に金属部材の表面から削り出す金属の体積が大幅に低減され、モールドの加工費が低減する。

　さらに錐体が規則的に整列した構造Ａ７の空隙率は、ラインａｎｄスペース構造の空隙率よりも大きい。また、錐体が規則的に整列した構造Ａ７の空隙率は、錐体と同じ底面を有する複数の柱体が規則的に整列した構造よりも空隙率が大きい。そのため、錐体が規則的に整列した構造Ａ７によれば、液体試料９９の流量を増加させることが可能であり、被検出物質の検出に有利となる。

　凸部８の底面１０の径４は、例えば１０～１０００μｍである。径４の下限は好ましくは１５μｍ以上であり、より好ましくは２０μｍ以上である。上限は好ましくは９００μｍ以下であり、より好ましくは８００μｍ以下である。底面の径とは、凸部８が円錐の場合は、底面の形状である円の直径である。凸部８が円錐以外の場合は、底面の形状に外接する円の直径である。凸部８の底面１０の径４が１０μｍよりも小さい場合、モールドの微細加工費が高くなり、また面積の大きい基材４１の表面に無数の構造Ａ７を均一に作製し難い。したがって、小さ過ぎる構造Ａ７は、実用に向かない。構造Ａ７の底面１０の径４が１０００μｍよりも大きい場合、モールドの作製時に金属部材から削り出す金属の体積が大きくなり、モールド及び基材４１の作製費用が高くなってしまう。また構造Ａ７の底面１０の径４が１０００μｍよりも大きい場合、基材４１における流路２の面積も大きくしなければならず、検査キット１が巨大化して、検査キット１自体の輸送に不利となる。凸部８（構造Ａ７）が円錐である場合、凸部８の底面１０の径４は、円錐の底面１０（円）の直径であってよい。

　凸部８の高さ６は、例えば１０～５００μｍである。高さ６の下限は好ましくは１５μｍ以上であり、より好ましくは２０μｍ以上である。上限は好ましくは４５０μｍ以下であり、より好ましくは４００μｍ以下である。凸部８の高さ６が１０μｍよりも低い場合、液体試料９９を移動させるのに必要な毛細管力が弱まる傾向がある。凸部８の高さ６が５００μｍよりも高い場合、熱インプリントの際に熱可塑性プラスチックを金型の凹部（構造Ａ７の凸部８の形状に対応する窪み）へ完全に充填し難い。

　凸部８のアスペクト比Ｌｖ／Ｌｈは、１／１０以上２／１以下であってよい。アスペクト比Ｌｖ／Ｌｈの下限は、好ましくは１／８以上であり、より好ましくは１／５以上である。上限は、好ましくは３／２以下であり、より好ましくは５／４以下である。アスペクト比Ｌｖ／Ｌｈが１／１０よりも小さい場合、液体試料９９と流路２との接触面積が小さく、固相部５０に吸着する検出物質が少なくなり、検出性能が低下してしまう虞がある。アスペクト比Ｌｖ／Ｌｈが２／１よりも大きい場合、熱インプリントによる基材４１の生産性が低下してしまう。本実施形態のように、凸部８が錐体（より具体的には円錐）である場合、凸部８の水平方向における長さＬｈは、凸部８の底面１０の直径４であってよい。また、凸部８の垂直方向における長さＬｖは、平坦部９からの凸部８の高さ６であってよい。

　凸部８の底面の径４（Ｄ１）と、凸部８同士の最近接中心間距離（Ｄ２）との比Ｄ２／Ｄ１は、１より大きく５以下であってよい。比Ｄ２／Ｄ１は１以下でありえない。比Ｄ２／Ｄ１
の下限については、特に限定はなく凸部８を密に配置する観点から、１に近いことが好ましい。上限は、好ましくは３以下であり、より好ましくは２以下である。比Ｄ２／Ｄ１が５より大きい場合、液体試料９９と流路２との接触面積が減少し、固相部５０に吸着する検出物質が少なくなり、検出性能が低下してしまう虞がある。本実施形態のように凸部８が円錐である場合、凸部８の底面１０の径４（Ｄ１）は、円錐の底面の直径であってよく、最近接中心間距離Ｄ２は、隣り合う一対の凸部８（円錐）の頂点間の距離であってよい。凸部８の底面１０の径４（Ｄ１）は、上述した凸部８の水平方向における長さＬｈと一致してもよい。したがって、アスペクト比Ｌｖ／Ｌｈは、Ｌｖ／Ｄ１と表されてもよい。

＜固相部５０＞
　固相部５０（第１～第３の固相部５１～５３）は、凸部８に試薬（検出物質）や標識物質が固定される領域である。基材４１を構成する熱可塑性プラスチックの種類、及び試薬（検出物質）の種類によっては、試薬（検出物質）を固相部５０に固定し難いことがある。この場合、固相部５０の領域のみに適当な表面処理を施したり、上述したように凸部８の表面に微細凹凸構造Ｂを設けることで、試薬（検出物質）を基材４１の固相部５０に固定し易くなる。

　固相部５０の表面処理手法は、何ら限定されるものではなく、例えば、各種プラズマ処理、ＵＶ処理、ＵＶ／オゾン処理、または、３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌｔｒｉｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ若しくはＧｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅによる表面修飾など種々の手法であってよい。

　固相部５０に固定される試薬（検出物質）は、例えば、抗体であってよい。
　抗体は、被検出物質との抗原抗体反応を起こす物質である。抗体は、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。被検出物質は、何ら限定されるものではなく、各種病原体、各種臨床マーカー等、抗体との抗原抗体反応を起こすことが可能な如何なる物質であってもよい。具体例な被検出物質は、例えば、インフルエンザウイルス、コロナウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ＨＡＶ、ＨＢｓ、ＨＩＶ等のウイルス抗原であってよい。被検出物質は、ＭＲＳＡ、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素であってもよい。被検出物質は、マイコプラズマ、クラミジア・トラコマティス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモンであってもよい。被検出物質は、Ｃ反応性タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、CK－MB、ナトリウム利尿ペプチド、N末端プロB型ナトリウム利尿ペプチド、D－ダイマー各種腫瘍マーカー、農薬、及び環境ホルモン等であってもよい。特に、インフルエンザウイルス、コロナウイルス、ノロウイルス、Ｃ反応性タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、CK－MB、ナトリウム利尿ペプチド、N末端プロB型ナトリウム利尿ペプチド、D－ダイマーのような被検出物質の検出と、これらに起因する病気の治療措置に急を要する場合、本実施形態に係る検査キット１の有用性が特に大きい。なお、被検出物質は、単独で免疫反応を誘起できる抗原であってもよい。被検出物質は、単独では免疫反応を誘起できないが、抗体と抗原抗体反応により抗体に結合することが可能なハプテンであってもよい。

＜蓋材４２＞
　蓋材４２は、少なくとも流路２１側の表面４２ａが流体浸透性材料により構成されている。すなわち、蓋材４２は、例えば透明な基材の表面に親水層を有した構成とされる。基材としては、例えばポリエステルを用いることができる。
　蓋材４２の厚みｔ２は、例えば、０．１～１０ｍｍとすることができる。厚みｔ２の下限は、例えば０．５ｍｍ以上であり、より好ましくは０．８ｍｍ以上である。上限は、好ましくは８ｍｍ以下であり、より好ましくは２ｍｍ以下である。
　厚みｔ２が上記範囲にあることで、検査キット１（マイクロ流体デバイス）の剛性を保ちつつ、微弱な信号を検出することができる。
　親水層（すなわち蓋材４２の表面４２ａ）の純水の接触角が０～４０°である。
　接触角の下限は、例えば好ましくは５°以上であり、より好ましくは１０°以上である。接触角の上限は例えば好ましくは３５°以下であり、より好ましくは３０°以下である。

　親水層は、ポリビニルアルコール、アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、ポリエチレンイミンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上の樹脂からなる。

　蓋材４２をこの様な構成とすることで、蓋材４２で流路２１を覆っても、蓋材４２の流路２１側の表面４２ａが曇ることなく、流路２１の状態を良好に視認できる。また、図５や式（１）で上述したように、閉鎖空間のマイクロ流路における毛細管力Ｐは、流路２１の四面の親水性の高さおよび、流路の高さ、幅によって定まる。親水性が高いほど、流路が狭いほど、毛細管力が高くなる。すなわち、流路２１の表面（上面、下面、側面）の親水性によっても、溶液を輸送する速度は変化する。流路表面の親水性を高くするほど、溶液の輸送速度は大きくなる。蓋材４２における純水の接触角を０～４０°とすることで、流路２１における液体試料９９の輸送速度を所望の範囲に設定することができる。また、蓋材４２（より具体的には親水層）の材料、厚みを適宜選択することで、流路２１における液体試料９９の流速を調整することができる。流速を調整する構成については、変形例で後述する。

＜粘着テープ４３＞
　粘着テープ４３は、基材４３ｂと、基材４３ｂの一方の面に設けられた第１の粘着剤４３ｃと、他方の面に設けられた第２の粘着剤４３ｄとを有する。

　基材４３ｂとして、例えばポリエステルを用いることができる。基材４３ｂとしてポリエステルを用いることで、流路２１の壁面として十分な耐久性を実現できる。
　基材４３ｂの厚みが２０～５００μｍである。基材４３ｂの厚みの下限は、好ましくは３０μｍ以上であり、より好ましくは５０μｍ以上である。上限は、好ましくは４５０μｍ以下であり、より好ましくは４００μｍ以下である。基材４３ｂの厚みを上記範囲とすることで、粘着テープ４３としての厚み、すなわち流路２１の厚みｔ３（高さ）を十分に確保できる。

　第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄとして、アクリル系粘着材またはシリコーン系粘着剤を用いることができる。第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄは、同じ粘着剤であってもよいし、異なる粘着剤であってもよい。
　第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄの厚みは、それぞれ５～１００μｍである。
第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄの厚みの下限は、好ましくは１０μｍ以上であり、より好ましくは２０μｍ以上である。上限は、好ましくは９０μｍ以下であり、より好ましくは８０μｍ以下である。
　第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄの厚みは、同じであってもよいし、異なってもよい。
　第１の粘着剤４３ｃと第２の粘着剤４３ｄの厚みを上記範囲とすることで、所望の粘着力を発揮させることができる。

　粘着テープ４３の厚みを調整することで、流路２１の高さを調整できる。流路２１に投入する液体試料９９の適切な設定量を調整できる。また、流路２１内の液体試料９９の輸送における構造Ａ７及び蓋材４２の親水層の影響を調整し、液体試料９９の輸送速度を調整することができる。また、粘着テープ４３により基材４１と蓋材４２とを固定する際に用いるアライメント構造８０の視認性の観点から、粘着テープ４３は透明又は半透明であることが好ましい。

＜アライメント構造８０＞
　アライメント構造８０は、基材４１、蓋材４２および粘着テープ４３のそれぞれに設けられた位置合わせマーク８１～８３として設けられている。基材４１と蓋材４２とを粘着テープ４３で固定するときに、基材４１に設けられた位置合わせマーク８１と、蓋材４２に設けられた位置合わせマーク８２と、粘着テープ４３に設けられた位置合わせマーク８３と一致させる。位置合わせマーク８１～８３の形状や数、位置については、検出に影響を及ぼさなければ特に限定はしない。本実施形態では、検査キット１を上面視したときの、図示では左下と右上の角部近傍の２箇所にアライメント構造８０が設けられている。位置合わせマーク８１～８３は、例えばインプリント加工や突き加工、レーザー加工、インク等の印刷加工により設けられる。

　アライメント構造８０を設けることで、基材４１と蓋材４２との固定時の位置合わせ精度を向上させることができる。また、位置合わせ作業を効率を向上させることができる。
　なお、例えば、液体試料９９の導入部２２を適正位置になるようにする観点では、基材４１と蓋材４２との位置決め精度が重要であり、粘着テープ４３の位置決め精度はそれほど重要視されない場合も想定される。そのような場合は、基材４１と蓋材４２のみアライメント構造８０（位置合わせ８１、８２）を設け、粘着テープ４３の位置合わせマーク８３を省いてもよい。

＜検査方法＞
　以上の構成の検査キット１を用いたラテラルフローイムノアッセイ法（光学的検出手法）による検査方法について説明する。
　液体試料９９が導入部２２に滴下されると、液体試料９９は閉鎖空間のマイクロ流路（ここでは流路２１）における毛細管力および液体試料に生じる重力により、進行方向ｄに沿って、すなわち貯留部２３に向けて流路２１を流れる。

　液体試料９９が第１の固相部５１に達すると、被検出物質が第１の固相部５１の標識物質を結合し、さらに下流に流れる。標識物質と結合した被検出物質が第２の固相部５２に達すると、第２の固相部５２の抗体に捕捉される。その結果、第２の固相部５２は標識物質により発色または発光する。液体試料９９に被検出物質が含まれない場合、第２の固相部５２は発色または発光しない。液体試料９９は更に下流側に流れ、第３の固相部５３において、液体試料９９に含まれるコントロール判定用物質（抗体）が第３の固相部５３の固相化されている抗体と反応し発色または発光する。これにより検査が適正に行われた旨を示す。余剰の液体試料９９は貯留部２３に貯留される。

＜変形例＞
　上述のように、導入部２２に滴下された液体試料９９が流路２１を通り貯留部２３に向けて流れる過程で、第１～第３の固相部５１～５３のそれぞれ上述の所定の反応が起きる。このとき、適正な反応時間を確保する必要がある。特に第１の固相部５１では、液体試料９９中の被検出物質は、第１の固相部５１を通過中に第１の固相部５１に固相化されている標識物質を結合させる必要がある。そこで、図８および９に示すような、液体試料９９の流れを調整する調整構造を設ける。調整構造としては、液体試料９９の流れの抵抗となる構造または実質的な流路長を長くなる構造を採用することができる。

　図８は流路２１側の表面４１ａに設けられる基材側調整部４１ｄまたは蓋材４２の流路２１側の表面４２ａに設けられる蓋側調整部４２ｄを説明する図である。

　図８（ａ）は基材４１または蓋材４２の表面４１ａ、４２ａを流路２１側から見た図である。基材側調整部４１ｄまたは蓋側調整部４２ｄとして、流路２１の途中に疎水性バンド４１ｅ、４２ｅを設けた例を示す。疎水性バンド４１ｅ、４２ｅは、流路方向ｄに対して垂直に２列に幅方向（図示で上下方向）にわたるように設けられている。疎水性バンド４１ｅは、周囲よりも疎水性が高く、言い換えると親水性が低くなっている。疎水性バンド４１ｅ、４２ｅ以外の領域において流路２１の表面４１ａ、４２ａが親水層として形成されている場合は、親水層を設けない構成としたり、周囲の親水層より親水性を低くした構成とすることができる。また、疎水化処理を施す場合は、例えば、シランカップリング処理やフッ素プラズマ処理等を用いることができる。

　図８（ｂ）は基材４１または蓋材４２の流路方向ｄの断面図である。基材側調整部４１ｄまたは蓋側調整部４２ｄとして、流路２１の途中に断面凸形状の壁部４１ｆ、４２ｆを設けている。壁部４１ｆ、４２ｆは、流路方向ｄに対して垂直に３列に幅方向にわたるように設けられている。壁部４１ｆ、４２ｆの数や大きさ、形状を調整することで流速を調整することができる。

　図８（ｃ）は基材４１または蓋材４２の流路方向ｄの断面図である。基材側調整部４１ｄまたは蓋側調整部４２ｄとして、流路２１の途中に断面凹形状の溝部４１ｇ、４２ｇを設けている。溝部４１ｇ、４２ｇは、流路方向ｄに対して垂直に３列に幅方向にわたるように設けられている。壁部４１ｈ、４２ｈの数や大きさ、形状を調整することで流速を調整することができる。

　なお、基材側調整部４１ｄや蓋側調整部４２ｄは、いずれかが設けてもよいし、両方が設けられてもよい。両方設けられる場合には、異なる形状を設けてもよい。例えば、基材側調整部４１ｄとして図８（ｂ）の壁部４１ｈを設け、蓋側調整部４２ｄとして図８（ａ）の疎水性バンド４２ｅを設けてもよい。

　図９は、粘着テープ４３における液体の流れを調整する調整構造４９を示す。粘着テープ４３における流路２１の形状（すなわち壁面４３ａの配置）を調整することで、液体試料９９の流れを調整する。

　図９（ａ）では、粘着テープ４３における流路２１の形状（すなわち壁面４３ａで囲まれた空間の形状）として、上面視で流路途中において流路２１の一時的に幅が狭くなるくびれ部４６を設けている。くびれ部４６の幅を調整することで、液体試料９９の流れを調整する。

　図９（ｂ）では、粘着テープ４３における流路２１の形状（すなわち壁面４３ａで囲まれた空間の形状）として、上面視で流路途中につづら折り状に形成した屈曲流路４７を設けている。屈曲流路４７の屈曲回数や屈曲部分の長さを調整することで、液体試料９９の流れを調整する。

　図９（ｃ）では、粘着テープ４３における流路２１の形状（すなわち壁面４３ａで囲まれた空間の形状）として、図９（ａ）と図９（ｂ）で示した形状をあわせた形状、すなわち、くびれ部４６および屈曲流路４７を設けている。ここでは、上流側のくびれ部４６で流路が一旦狭くなり、つづいて屈曲流路４７で流路２１がつづら折り状に屈曲し、下流側のくびれ部４６で狭くなっていた流路２１が元の幅に広がる。くびれ部４６においてどの程度狭くするかや屈曲流路４７の屈曲回数や屈曲部分の長さを調整することで、液体試料９９の流れを調整する。

　図９（ｄ）では、粘着テープ４３における流路２１の形状（すなわち壁面４３ａで囲まれた空間の形状）として、渦巻き形状４８としている。渦巻き形状の長さを調整することで、液体試料９９の流れを調整する。

　なお、図８および図９を組み合わせてもよい。例えば、基材側調整部４１ｄとして図８（ｂ）の壁部４１ｈを設け、蓋側調整部４２ｄとして図８（ａ）の疎水性バンド４２ｅを設け、粘着テープ４３として図９（ａ）のくびれ部４６を設けた構成としてもよい。

＜第１の実施形態のまとめ＞
　本実施形態の特徴を纏めると次の通りである。
１．
　液体試料９９を導入する導入部２２と、導入された液体試料９９を貯留する貯留部２３と、導入部２２と貯留部２３とを結ぶ流路２１とを備える検査キット１（マイクロデバイス）であって、
　基材４１と、蓋材４２と、基材４１と蓋材４２とを接合する粘着テープ４３との３層構造４０を備え、
　流路２１は、基材４１の流路２１側の表面４１ａと蓋材４２の流路２１側の表面４２ａと粘着テープ４３によって形成された閉空間４５により構成されており、
　蓋材４２の少なくとも流路２１側の表面４２ａは流体浸透性材料により構成されている検査キット１。
　流路２１を蓋材４２で覆うことで、非特異吸着を抑制し、抗体を固定した固相部５０以外からのノイズ信号を低減できる。また、蓋材４２の流路２１側の表面４２ａを流体浸透性材料としたことで、液体試料９９が導入部２２や流路２１途上で留まってしまうことを防止し、液体試料９９を導入部２２から貯留部２３へ円滑に輸送できる。
２．
　蓋材４２の少なくとも流路２１側の表面４２ａが親水層で構成されている、１．に記載の検査キット１。
　蓋材４２の流路２１側の表面４２ａを親水層とすることで、液体試料９９を導入部２２から貯留部２３へ円滑に輸送できる。
　また、親水層の種類を適宜選択することで、流路２１における液体試料９９の輸送速度を調整できる。
３．
　親水層（蓋材４２の表面４２ａ）の純水の接触角が０～４０°である、２．に記載の検査キット１。
　接触角を上記の範囲とすることで、液体試料９９の輸送が阻害されることを防止できる。また、親水層の材料を適宜選択することで、接触角を調整でき、所望の輸送速度を実現できる。
４．
　蓋材４２は、ポリエステルの表面に親水層を形成している、２．または３．に記載の検査キット１。
　ポリエステルは耐久性が高く多くの化学物質に耐性があることから、ＰＯＣＴ試薬の一種である検査キット１に好適である。
５．
　親水層は、ポリビニルアルコール、アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、ポリエチレンイミンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上の樹脂からなる、２．から４．までのいずれか１に記載の検査キット１。
６．
　粘着テープ４３は、ポリエステル基材の両面にアクリル系粘着材またはシリコーン系粘着材が設けられて構成されている、１．から５．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　アクリル系粘着材は、一般に透明性、耐候性、耐熱性に優れ、検査キット１の外観の観点や品質維持に好適である。シリコーン系粘着剤は、一般に、使用可能温度の範囲が広く、耐薬品性、耐水性に優れ、幅広い試薬に対応できる。
７．
　ポリエステル基材の厚みが２０～５００μｍであり、
　アクリル系粘着材またはシリコーン系粘着材の片面の厚みは、それぞれ５～１００μｍである、６．に記載の検査キット１。
８．
　基材４１の表面に検出物質が固定化された固相部５０が設けられている、１．から７．までのいずれか１に記載の検査キット１。
９．
　基材４１の表面に構造Ａ７が設けられている、１．から８．までのいずれか１に記載の検査キット１。
１０．
　構造Ａ７は複数の錐体、半球、半楕円球、直方体または柱状体を呈する凸部８からなる、９．に記載の検査キット１。
１１．
　複数の凸部８が格子状に平面配置されている構造である、９．または１０．に記載の検査キット１。
１２．
　構造Ａ７は凸部８の底面の径が１０μｍ以上１０００μｍ以下である、９．から１１．までのいずれか１に記載の検査キット１。
１３．
　凸部８の高さが１０μｍ以上５００μｍ以下である、９．から１２．までのいずれか１に記載の検査キット１。
１４．
　凸部８の表面に微細凹凸構造Ｂが形成されており、
　微細凹凸構造Ｂが形成された凸部８の、粗さ曲線の算術平均粗さＲａが０．００５μｍ以上１μｍ以下である、１０．から１３．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　凸部８の表面の微細凹凸構造Ｂを上記のようにすることで、固相部５０（第１～第３の固相部５１～５３における固相化を向上させることができ、その結果、検出精度の向上を実現できる。
１５．
　構造Ａ７は、検出物質を固定する固相部５０（第１～第３の固相部５１～５３）に設けられている、１０．から１４．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　検出ゾーンとなる固相部５０にのみ構造Ａ７を設けることで、固相部５０以外の領域における試薬（検出物質）の余分な吸着を抑制し、ＳＮ比が低下してしまうことを抑制できる。
１６．
　貯留部２３には多孔性吸収部材または複数の凸部からなる構造Ａの少なくともいずれかが設けられている、１．から１５．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　このような構造によって、貯留部２３の液体試料９９への流れを調整し、逆流を確実に防止できる。
１７．
　貯留部２３に設けられた多孔性吸収部材または微細凹凸構造Bの直前には、流路が拡大する構造または所定の空間を有する構造の少なくもいずれかが設けられた、１６．に記載の検査キット１。
　このような構造によって、液体試料９９の輸送速度や所定領域を通過するタイミングを調整することができ、液体試料９９の多段階反応が可能となる。
１８．
　蓋材４２および貯留部２３の一部には、空気が抜ける穴（空気穴８５）または空気が抜ける開口部が設けられている１．から１７．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　このような構造により液体試料９９の流れが円滑になる。
１９．
　液体試料の導入部２２にはメンブレンフィルター１６５が設けられた、１．から１８．までのいずれか１に記載の検査キット１。
２０．
　３層構造４０には、基材４１、蓋材４２及び粘着テープ４３による接合の位置決めをするアライメント構造８０が設けられている、１．から１９．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　アライメント構造８０により、基材４１、蓋材４２及び粘着テープ４３の位置がズレてしまうことを防止できる。
２１．
　アライメント構造８０は、基材４１と蓋材４２の双方に設けられた位置合わせマーク８１、８２である、２０．に記載の検査キット１。
２２．
　蓋材４２の流路２１側の表面４２ａは、液体の流れを調整する蓋側調整部４２ｂを有する、１．から２１．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　これにより、流路２１を通過する液体試料９９の流れを調整できる。
２３．
　粘着テープ４３は、液体の流れを調整する形状を有する、１．から２２．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　これにより、流路２１を通過する液体試料９９の流れを調整できる。
２４．
　基材４１の流路２１側の表面４１ａは、液体の流れを調整する基材側調整部４１ｄを有する、１．から２３．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　これにより、流路２１を通過する液体試料９９の流れを調整できる。
２５．
　基材４１および粘着テープ４３は、導入部２２の下流側に、液体の流れを調整する調整構造を有し、かつ標識検出物質を固定する標識検出物質固定部（例えば第１の固相部５１）を備える、１．から２４．までのいずれか１に記載の検査キット１。
　第１の固相部５１（標識検出物質固定部）が、液体の流れを調整する調整構造を有することで、液体試料９９中の被検出物質が第１の固相部５１を通過中に第１の固相部５１に固相化されている標識検出物質を適切に結合させることができる。
２６．
　１．～２５．までのいずれか１に記載のマイクロデバイスを用いた検査方法。

＜第２の実施形態＞
　図１０～図１７を参照して第２の実施形態を説明する。
　図１０は検査キット１０１の斜視図である。図１１は検査キット１０１の分解斜視図である。図１２は検査キット１０１の平面図である。

　検査キット１０１は、液体試料９９を導入する導入部１２２と、導入された液体試料９９を貯留する貯留部１２３と、導入部１２２と貯留部１２３とを結ぶ流路１２１とを備え、毛細管力および重力沈降により液体試料９９を、導入部１２２から貯留部１２３へ輸送する。

　第１の実施形態と同様に、検査キット１０１は、基材１４１と、蓋材１４２と、基材１４１と蓋材１４２とを接合する粘着テープ１４３との３層構造１４０を備える。３層構造１４０には、基材１４１、蓋材１４２及び粘着テープ１４３による接合の位置決めをするアライメント構造１８０が設けられている。

　流路１２１は、基材１４１の流路２１側の表面１４１ａと蓋材１４２の流路１２１側の表面１４２ａと粘着テープ１４３の壁面１４３ａによって形成された閉空間により構成されている。本実施形態では、第１の実施形態と異なり、導入部１２２と貯留部１２３とを繋ぐ流路１２１が、上流側（すなわち導入部１２２側）において複数に分岐している。貯留部１２３には、多孔性吸収部材（例えばセルロース等の素材）でできた吸収部材１２９が配置され、貯留部１２３に流れてきた液体（液体試料９９等）を吸収する。貯留部１２３には、複数の凸部８からなる構造Ａが設けられてもよく、その場合は、必要に応じて吸収部材１２９が省かれてもよい。なお、第１の実施形態の凸部８による構造Ａは、固相部１５０にのみ設けられる構成として説明する。また貯留部１２３における吸収部材１２９の厚みが、粘着テープ１４３の厚みと蓋材１４２の厚みを合計した厚みよりも、大きくなっている。そのため吸収部材１２９を固定化するために、片面粘着テープ１４４を設置している。さらに貯留部１２３は、検査キット１０１の端（図示では右側の端部）まで形成されており、貯留部１２３の端部の側面は開放系となっている。ここで、貯留部１２３の端部の側面ではなく、上面が開放されていたり、上面と側面の両方が開放されていてもよい。また、後方に空気抜きのための穴が設けられていてもよい。なお本実施形態では、貯留部１２３は検査キット１０１の端まで形成されているが、上述の図１、２、３に示した検査キット１のように、貯留部２３が検査キット１の端まで形成されていない場合でも、空気を抜くための穴や開放部が設けられていればよい。また吸収部材の１２９の厚みが粘着テープ１４３の厚みより薄い場合、蓋材１４２または片面粘着テープ１４４によって固定されていてもよい。
　以下、第１の実施形態と異なる点について主に説明し、同一の構成については適宜説明を省略する。

＜流路１２１＞
　流路１２１は、主流路１２１ａ、第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃを有する。主流路１２１ａの途中の分岐部１２８から上流側に向けて第１分岐流路１２１ｂと第２分岐流路１２１ｃとが延出している。すなわち、分岐部１２８より上流側では、３つの流路（主流路１２１ａ、第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）が備わり、分岐部１２８より下流側では一つの流路（すなわち主流路１２１ａ）に合流する。

＜導入部１２２＞
　主流路１２１ａ、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの各上流側端部には、導入部１２２として、検体導入部１２２ａ、反応試薬導入部１２２ｂおよび洗浄液導入部１２２ｃが設けられている。

　検体導入部１２２ａは、蓋材１４２に開口を有し、主流路１２１ａの上流側端部に接続され、貯留部１２３に接続されている。検体導入部１２２ａには、検体を含む液体試料９９が滴下される。検体導入部１２２ａに滴下された液体試料９９は、主流路１２１ａを通り貯留部１２３に流れ込む。

　反応試薬導入部１２２ｂは、第１分岐流路１２１ｂの上流側に接続されており、第１分岐流路１２１ｂにより主流路１２１ａの分岐部１２８に接続される。反応試薬導入部１２２ｂは、図１３で示すようなパウチ２２５による密閉構造を有し、その内部に液体状の反応試薬が充填されている。反応試薬導入部１２２ｂに対して所定の操作、例えば押し潰す等の操作により、密閉構造が開放され、内部の反応試薬が第１分岐流路１２１ｂに投入される。反応試薬は、第１分岐流路１２１ｂを通り、分岐部１２８で主流路１２１ａに合流し、さらに下流側に流れて貯留部１２３に流れ込む。

　洗浄液導入部１２２ｃは、第２分岐流路１２１ｃの上流側に接続されており、第２分岐流路１２１ｃにより主流路１２１ａの分岐部１２８に接続される。洗浄液導入部１２２ｃは、反応試薬導入部１２２ｂと同様に図１３に示すようなパウチ２２５による密閉構造を有し、その内部に洗浄液が充填されている。洗浄液導入部１２２ｃに対して所定の操作、例えば押し潰す等の操作により、密閉構造が開放され、内部の洗浄液が第２分岐流路１２１ｃに投入される。洗浄液は、第２分岐流路１２１ｃを通り、分岐部１２８で主流路１２１ａに合流し、さらに下流側に流れて貯留部１２３に流れ込む。

＜パウチ２２５＞
　図１３はパウチ２２５の断面図である。ここでは、反応試薬導入部１２２ｂのパウチ２２５を示している。パウチ２２５は、粘着テープ１４３に設けられた上面視で円形の開口２３８を覆うように設けられたドーム状の外装部２３１と、開口２３８と外装部２３１とによって設けられた空間を上側の溶液収容部２３５と下側の中空部２３６に分離する仕切部２３２とを有する。溶液収容部２３５には、反応試薬や洗浄液の所定の溶液が充填されている。中空部２３６は何も充填されておらず中空となっており、第１分岐流路１２１ｂと接続されている。中空部２３６の底面には、凸状の穿刺部２３３が設けられている。

　外装部２３１が押し込む等の操作が成されたときに、穿刺部２３３が仕切部２３２を穿刺し溶液収容部２３５と中空部２３６とを連通させる。その結果、溶液収容部２３５の溶液が第１分岐流路１２１ｂに投入される。

＜固相部１５０＞
　主流路１２１ａの途中には、試薬（検出物質）が固定された固相部１５０が設けられている。ここでは、分岐部１２８より上流側に第１の固相部１５１が設けられている。分岐部１２８より下流側に第２の固相部１５２が、さらに第２の固相部１５２より下流側に第３の固相部１５３が設けられている。

　第１の固相部１５１、第２の固相部１５２および第３の固相部１５３に固定化される物質は、検査の種類に応じて適宜選択され、例えば第１の実施形態に例示した物質と同様とすることができる。また、固相部１５０の設置箇所は、３箇所に限定せず、少なくも１箇所以上に設けられていればよい。

＜逆流防止構造１４９＞
　第１分岐流路１２１ｂや第２分岐流路１２１ｃには、他の流路からの逆流を防止するための逆流防止構造１４９が一つまたは複数設けられている。以下、いくつかの逆流防止構造１４９について例示する。

　逆流防止構造１４９として、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃにおいて、それぞれの上流側流路が密閉構造となっている。上述のように、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの各上流側端部がパウチ２２５に接続された構造となって、密閉されている。この結果、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの上流側には空気が抜ける孔等が無く、分岐部１２８から上流へ液体が流れることが実質的にない。
　また、逆流防止構造１４９は、パウチの有無にかかわらず、各上流側端部が密閉されていればよく、例えばシーリングテープ（粘着テープ）などによって密閉されていてもよい。

　逆流防止構造１４９として、第１の実施形態の図８や図９で示した構造の流れ調整部４９０を有する。図１４（ａ）～図１４（ｄ）に、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃに設けられる流れ調整部４９０を３例示す。

　図１４（ａ）は、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃのそれぞれの分岐部１２８の近傍に疎水性層４９１を、分岐部１２８側が疎水性が高くなるように設けている。疎水性層４９１は、基材１４１に設けられてもよいし、蓋材４２に設けられてもよいし、両方に設けられてもよい。

　ここでは、分岐部１２８側から上流側に向けて、第１疎水性層４９１ａ、第２疎水性層４９１ｂおよび第３疎水性層４９１ｃを設けている。第１疎水性層４９１ａの疎水性が最も高く、第３疎水性層４９１ｃの疎水性が最も低い。

　このような疎水性層４９１は、液体試料９９の流れの抵抗となり、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの上流側への逆流が防止される。また、反応試薬導入部１２２ｂや洗浄液導入部１２２ｃから投入される溶液が主流路１２１ａに流れ込むまでの時間が調整される。

　図１４（ｂ）は、分岐部１２８側から上流側に向けて、第１疎水性層４９２ａ、第２疎水性層４９２ｂおよび第３疎水性層４９２ｃを設けている。第１疎水性層４９２ａの疎水性が最も低く、第３疎水性層４９２ｃの疎水性が最も高い。なお、疎水性層４９２を何層とするかは特に限定は無く、例えば第１疎水性層４９２ａ、第２疎水性層４９２ｂを省いて第３疎水性層４９２ｃの一層のみとしてもよいし、または、追加として第４疎水性層（図示せず）を設けてもよい。

　このような疎水性層４９１、４９２は、液体試料９９の流れの抵抗となり、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの上流側への逆流が防止される。また、反応試薬導入部１２２ｂや洗浄液導入部１２２ｃから投入される溶液が主流路１２１ａに流れ込むまでの時間が調整される。
　なお、流れ調整部４９０として、疎水性層４９１、４９２の他に親水性層（図示せず）を設けてもよい。それによって、流れ調整部４９０における液体試料９９の流れをより細かく調整できる。

　図１４（ｃ）は、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃのそれぞれの分岐部１２８近傍に、図９（ａ）で示した、くびれ部１４６を設けている。くびれ部１４６が液体試料９９の流れの抵抗となり、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの上流側への逆流が防止される。また、反応試薬導入部１２２ｂや洗浄液導入部１２２ｃから投入される溶液が主流路１２１ａに流れ込むまでの時間が調整される。なお、ここでは、くびれ部１４６を直線状に設けているが、これに限らず、全体として屈曲してもよいし、一部が屈曲してもよい。

　図１４（ｄ）は、図１４（ｃ）で示したくびれ部１４６を、つづら折り状に設けている。つづら折り状のくびれ部１４６が液体試料９９の流れの抵抗となり、第１分岐流路１２１ｂおよび第２分岐流路１２１ｃの上流側への逆流が防止される。また、反応試薬導入部１２２ｂや洗浄液導入部１２２ｃから投入される溶液が主流路１２１ａに流れ込むまでの時間が調整される。また、つづら折りの長さを調整することで、主流路１２１ａに流れ込むまでの時間の調整幅が拡がる。

＜検査方法＞
　以上の構成の検査キット１０１を用いた検査方法について説明する。
　液体試料９９が導入部１２２の検体導入部１２２ａに滴下されると、液体試料９９は下流側すなわち貯留部１２３に向けて主流路１２１ａを流れる。

　液体試料９９の検出対象は、第１の固相部１５１に固定されている標識体と結合し、さらに下流に流れ、第２の固相部１５２に固定される。残余の液体試料９９は貯留部１２３に吸収される。

　つづいて、洗浄液導入部１２２ｃのパウチ２２５を押し潰し、洗浄液を第２分岐流路１２１ｃを介して主流路１２１ａに導入し、固相部１５０に固定されず流路に残留している検出対象及び標識体を洗浄する。残った洗浄液は貯留部１２３に吸収される。

　洗浄後、反応試薬導入部１２２ｂのパウチ２２５を押し潰し、反応液を第１分岐流路１２１ｂを介して主流路１２１ａに導入する。反応液は、第２の固相部１５２に固定されている標識体と反応して所定の活性な物質を生成する。その後、反応液は下流側のコントロールラインである第３の固相部１５３に流れ、さらに貯留部１２３に吸収される。

　ここで、第１分岐流路１２１ｂと第２分岐流路１２１ｃの流路長や流れ調整部４９０を適宜調整して設け、反応試薬導入部１２２ｂの反応液や洗浄液導入部１２２ｃの洗浄液の主流路１２１ａへの到達時間を調整することによって、反応試薬導入部１２２ｂや洗浄液導入部１２２ｃに対する溶液投入操作が同時に行われても、反応液や洗浄液を適切なタイミングで主流路１２１ａに到達させることができる。

　図１５に変形例の検査キット１０１の平面図を示す。この検査キット１０１は、分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）の上流側にさらに分岐した副分岐流路１２７を有する。副分岐流路１２７の上流側に反応液等が充填されたパウチ２２６が設けられる。副分岐流路１２７についても、上述のような逆流防止構造１４９や流れ調整部４９０を適用することで、逆流防止や下流側の流路への合流タイミングを調整することができる。

　図１６に別の変形例の検査キット１０１の平面図を示す。この検査キット１０１では、図１に示した検査キット１０１から分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）、およびそれらに接続する反応試薬導入部１２２ｂおよび洗浄液導入部１２２ｃが取り除かれた構成となっている。また、主流路１２１ａに接続する導入部１２２（図１における検体導入部１２２ａに相当するもののみ）を、上面視で円形の開口として一つのみ設けている。さらに、貯留部１２３を平面視で長方形に形成し、その内部に収容される吸収部材１２９を同様に長方形としている。貯留部１２３に収容される吸収部材１２９は、図示で右側にずれるように、すなわち貯留部１２３において主流路１２１ａからの入口と吸収部材１２９との間に僅かな距離を設定し逆流を防止する。また、検体試料の検体導入部１２２ａにはメンブレンフィルター１６５を設置している。さらにメンブレンフィルター１６５と検体試料の検体導入部１２２ａの隙間には、中空形状に加工した粘着テープ１６０を貼ることによって検体導入部１２２ａとメンブレンフィルター１６５との隙間から空気が入り込まないようにしている。このような構成とすることで、検査キット１０１を簡便に作製することができる。

　図１７に別の変形例の検査キット１０１の平面図を示す。この検査キット１０１では、図１に示した検査キット１０１の分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）、を主流路１２１ａに対して垂直横方向にかつ短く設けている。さらに、分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）に接続する反応試薬導入部１２２ｂおよび洗浄液導入部１２２ｃを円形の開口としている。また、貯留部１２３および吸収部材１２９については図１６と同様に矩形形状に構成し、貯留部１２３において主流路１２１ａからの入口と吸収部材１２９との間に僅かな距離を設定している。また、液体試料の検体導入部１２２ａ、１２２ｂ、１２２ｃにはメンブレンフィルター１６５を設置している。さらに、メンブレンフィルター１６５と検体試料の検体導入部１２２ａや反応試薬導入部１２２ｂ、洗浄液導入部１２２ｃの隙間には、中空形状に加工した粘着テープ１６０を貼ることによって検体導入部１２２ａや反応試薬導入部１２２ｂ、洗浄液導入部１２２ｃとメンブレンフィルター１６５との隙間から空気が入り込まないようにしている。このような構成とすることで、分岐流路を有する検査キット１０１を簡便に作製することができる。

＜メンブレンフィルター１６５＞
　メンブレンフィルター１６５としては、試料濾過フィルターや血漿分離フィルターなどを用いることができ、特に限定されない。

＜反応試薬＞
　反応試薬について、標識検出物質と反応して光学的もしくは電気化学的に変化する試薬、または、光学的な変化もしくは電気化学的な変化を促進する試薬であればよく、特に限定されない。例えば、標識検出物質が酵素標識抗体であるとき、反応試薬は酵素と反応する基質であってよい。

＜第２の実施形態のまとめ＞
　第２の実施形態の特徴を纏めると次の通りである。
１．
　液体試料９９を導入する導入部１２２と、導入された液体試料９９を貯留する貯留部１２３と、前記導入部１２２と前記貯留部１２３とを結ぶ流路１２１とを備え、毛細管力および重力沈降により前記液体試料９９を輸送する検査キット１０１であって、
　前記導入部１２２は、検体が導入される検体導入部１２２ａと、反応試薬が導入される反応試薬導入部１２２ｂとを備え、
　前記流路１２１は、
　　断面において流れ方向に対して垂直方向が閉空間により構成されており、
　　前記検体導入部１２２ａと前記貯留部１２３とを接続する主流路１２１ａと、
　　前記主流路１２１ａの途中において、前記主流路１２１ａに合流する分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）とを有し、
　前記分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）の上流側に前記反応試薬導入部１２２ｂが設けられており、下流側の流路からの逆流を防止する逆流防止構造１４９が設けられている、検査キット１０１。
２．
　前記逆流防止構造１４９として、前記分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）の上流側を密封した構造を有する、１．に記載の検査キット１０１。
３．
　前記逆流防止構造１４９として、前記分岐流路（第１分岐流路１２１ｂ、第２分岐流路１２１ｃ）において液体の流れを調整することで合流先の流路（すなわち主流路１２１ａ）からの逆流を防止する流れ調整部４９０を有する、１．または２．に記載の検査キット１０１。
４．
　前記流れ調整部４９０は、流路表面に設けられた疎水性層４９１を有しており、前記疎水性層４９１より下流側の領域より疎水性が高くなるように設けられている、３．に記載の検査キット１０１。
５．
　前記分岐流路２１２は、上流側で更に分岐した副分岐流路２１５を備える、１．から４．までのいずれか１に記載の検査キット１０１。
６．
　前記導入部２２には、反応試薬が封入されたパウチ２２５が設けられており、
　前記パウチ２２５が開封されること、前記反応試薬が前記導入部２２（すなわち反応試薬導入部２２２）に導入される、１．から５．までのいずれか１に記載の検査キット１０１。
７．
　基材１４１と、蓋材１４２と、前記基材１４１と前記蓋材１４２とを接合する粘着テープ１４３との３層構造を備え、
　前記流路１２１は、前記基材１４１の流路側の表面と前記蓋材１４２の流路側の表面と前記粘着テープ１４３によって形成された閉空間により構成されており、
　前記蓋材１４２において、少なくとも前記流路側の表面が流体浸透性材料により構成されている、１．から６．までのいずれか１に記載の検査キット１０１。
８．
　前記蓋材１４２の少なくとも前記流路側の表面が親水層で構成されている、７．に記載の検査キット１０１。
９．
　前記親水層の接触角が０～４０°である、８．に記載の検査キット１０１。
１０．
　前記蓋材は、ポリエステルの表面に前記親水層を形成している、８．または９．に記載の検査キット１０１。
１１．
　前記親水層は、ポリビニルアルコール、アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、ポリエチレンイミンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上の樹脂からなる、８．から１０．までのいずれか１に記載の検査キット１０１。
１２．
　前記粘着テープ１４３は、ポリエステル基材の両面にアクリル系粘着材またはシリコーン系粘着剤が設けられて構成されている、８．から１１．までのいずれか１に記載の検査キット１０１。
１３．
　前記ポリエステル基材の厚みが２０～５００μｍであり、
　前記粘着材（アクリル系粘着材またはシリコーン系粘着剤）の片面の厚みは、それぞれ５～１００μｍである、１２．に記載の検査キット１０１。
１４．
　１．から１３．までのいずれか１に記載の検査キット１０１を用いた検査方法であって、
　前記検体導入部２２１に検体を導入する第１工程と、
　前記第１工程の後に、所定の分岐流路（第１分岐流路１２１ｂや第２分岐流路１２１ｃ）の密封状態を開封し、反応試薬を導入する第２工程と、を有する、検査方法。
［１５］
　前記第２工程の後に、他の分岐流路（第１分岐流路１２１ｂや第２分岐流路１２１ｃ）の密封状態を開封し、第２工程とは別の反応試薬を導入する第３工程を有する、１４．に記載の検査方法。

　以下、本発明を実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例では、流路に分岐流路を有する検査キットの評価実験を行った。
　図１８は、実施例に用いた検査キットのサンプルおよび検査方法概要（プロトコール）を説明する図である。

１．　実験１
　（１）図１６に示した基材、蓋材および粘着テープの３層構造の検査キットを用意した。検出物質の固相部として、第２の固相部（テストライン）を設けた。導入部として、主滴下口を設けた。導入部には、メンブレンフィルターを設置し、メンブレンフィルターの周囲には中空形状の粘着テープを貼ることによって隙間から空気が入り込まないようにした。
　流路として、主流路を設けた。流路の高さ（粘着テープの高さ）は０．１ｍｍとした。
　主流路は、幅２．４ｍｍとした。
　基材として、ポリカーボネートシート（帝人社製品番ＰＣ－２１５１）、厚さ２００μｍに対して熱インプリントにより凹凸加工を施した基材を用いた。具体的には、シートの一部領域（１．９ｍｍ×１．９ｍｍ）に対して構造Ａ（複数の凸部８からなる構造）の凸部８の底面の径（以下、「凸部の径」又は、「径」ということもある。）が３０μｍであり、構造Ａ（凸部８）の高さ（以下、「高さ」ということもある。）が３０μｍの円錐型の凸部８が、凸部８間の距離を２μｍとして六角格子状に配列したシート基材（図7（b））を作製し、基材として用いた。
　ここで、熱インプリントを施す際に、レーザー加工された金型（モールド）を用いることによって、構造Ａ（凸部８）の表面に微細凹凸構造Ｂを形成した。微細凹凸構造Ｂが形成された凸部８の粗さ曲線の算術平均粗さＲａは、０．１１４μｍであった。
　なおシート基材の製造に用いた金型の加工方法は、以下のとおりである。アルミニウム合金平板にレーザー加工装置（東成エレクトロビーム社製極短パルスレーザー加工機Ｒ－２００、レーザー波長：１５５２ｎｍ、定格出力：１０Ｗ、パルス：フェムト秒）からパルス光を複数回照射して、凸部８に対応する円錐形状の凹部を有する金型を得た。
　蓋材として、親水性ポリエステル（スリーエム社製品番９９０１Ｐ）、厚さ１００μｍの材料を用いた。
　粘着テープとして、厚さ２５μｍのアクリル系粘着テープ（スリーエム社製品番９９６９）でＰＥＴシート（厚さ５０μｍ）の両面を挟んだ３層構造で作製した材料を用いた。３層構造のシートをレーザー加工により所望の流路形状を製作した。
　固相部として、主流路の分岐部より下流側に位置する構造Ａ（凸部８）上に、抗ＣＲＰ（C-Reactive protein）抗体溶液を塗布して乾燥した領域（抗体塗布部）を設けた。
　また貯留部には吸収部材（セルロース）を設置し、貯留部における主流路と吸収部材の距離は０．５ｍｍとした。

実験１（プロトコール）：
　主滴下口より、洗浄液（2% Triton X-100/PBS溶液）を滴下後、濃度を調整した抗原溶液（Human C-Reactive protein, CRP）を滴下し５分インキュベーションした。その後、洗浄液（2% Triton X-100/PBS溶液）を投入し、ＦＩＴＣ標識抗ＣＲＰ抗体（蛍光標識抗ＣＲＰ抗体）を滴下し２分インキュベーションした。最後に洗浄液を投入した。抗原溶液は、抗原を2% Triton X-100/PBS溶液中に希釈することによって調製した。抗原溶液の濃度は０（Blank）、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬの３段階とした。
　各滴下の滴下量は２０μＬとした。
　ＦＩＴＣ標識抗体由来の蛍光像を蛍光顕微鏡（キーエンス社製，ＢＺ－Ｘ７００）で撮像し、蛍光強度を評価した。

　図１９は実験１の結果を示している。図１９（ａ）に蛍光像の観察結果を示す。抗原を含むサンプルにおいて、抗体塗布部から蛍光が確認できた。一方で抗原を含まないサンプルからは、抗体塗布部からの蛍光が確認できなかった。また抗体を塗布していない領域からは、蛍光がほとんど確認できなかった。図１９（ｂ）に蛍光強度の評価結果を示す。抗原濃度に依存して蛍光強度が上昇することが確認できた。したがって、作製したマイクロ流体デバイスを用いて蛍光標識抗体を用いた蛍光測定が可能であることが示された。

１．　実験２
（１）図１７に示した基材、蓋材および粘着テープの３層構造の検査キットを用意した。検出物質の固相部として、第２の固相部（テストライン）を設けた。
　検査キットのサンプルの構成は方式（１）～（３）の３種類とし、仕様は次の通りである。
　図２０に、実験に用いた３種類の検査キット（方式（１）～（３））の仕様および測定結果例（濃度０（Blank）時）を示している。

　共通項目：
　導入部として、主滴下口、副滴下口１、副滴下口２を設けた。導入部には、メンブレンフィルターを設置し、メンブレンフィルターの周囲には中空形状の粘着テープを貼ることによって隙間から空気が入り込まないようにした。
　流路として、主流路、第１分岐流路、第２分岐流路を設けた。流路の高さ（粘着テープの高さ）は０．１ｍｍとした。
　主流路は、上流側で主滴下口に、下流側で貯留部に接続する構成であって、幅２．４ｍｍとした。第１分岐流路は、上流側で副滴下口１に接続し、下流側で主流路（分岐部）に接続する構成であって、幅０．８ｍｍとした。第２分岐流路は、上流側で副滴下口２に接続し、下流側で主流路（分岐部）に接続する構成であって、幅０．８ｍｍとした。
　基材として、実験１と同様にして作成した基材を用いた。
　蓋材として、実験１と同様の材料を用いた。
　粘着テープとして、実験１と同様にして作成した粘着テープを用いた。実験１と同様に３層構造のシートをレーザー加工により所望の流路形状を製作した。
　固相部として、抗体溶液を抗ＴｎＩ（Troponin I）抗体溶液に変えたこと以外は、実験１と同様にして作製した固相部を用いた。
　貯留部として実験１と同様の材料を用い、同様の主流路と吸収部材の距離設定とした。

　方式（１）のサンプル：
　　主滴下口、副滴下口１、副滴下口２の開口を同一外径（直径４ｍｍ）とし、主滴下口、副滴下口１および副滴下口２にメンブレンフィルターを設置した。メンブレンフィルターと各滴下口の隙間には中空形状の粘着テープを貼った。

　方式（２）のサンプル：
　　方式（１）のサンプルの構造を採用し、さらに、副滴下口２をテープでシーリングした。

　方式（３）のサンプル：
　　主滴下口の開口を直径４ｍｍとし、副滴下口１、２の開口を１．５ｍｍとした。主滴下口には、メンブレンフィルターを設置した。メンブレンフィルターと主滴下口の隙間には中空形状の粘着テープを貼った。副滴下口１、２には、メンブレンフィルターを配置せず、またシーリングもしなかった。

　実験２（プロトコール（図１８参照））：
（ａ）主滴下口より、洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，ＰＢＳ－Ｔ－ＢＳＡ）を滴下後、濃度を調整した抗原溶液（Troponin I－C－T 複合体, ＴｎＩ－Ｃ－Ｔｃｏｍｐｌｅｘ）を滴下し５分インキュベーションした。その後、洗浄液を投入した。
抗原溶液は、抗原をＰＢＳ－Ｔ－ＢＳＡで希釈することによって調製した。抗原溶液の濃度は０（Blank）、０．４ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、４ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬの６段階とした。
（ｂ）副滴下口１より、ＨＲＰ標識抗体を滴下し、洗浄液を滴下した。
（ｃ）副滴下口２より、洗浄液を滴下後、基質（SuperSignal ELISA Femto Substrate, Thermo Fisher Scientific社）および同基質に付属の反応促進試薬（Enhancer）を混合した溶液を滴下した。なお方式（３）については、シーリングを外してから各溶液を滴下した。
　各滴下の滴下量は２０μＬとした。
　酵素標識抗体と基質反応により生じる化学発光の発光強度を発光測定Imager（ChemiDoc touch, バイオラッド社）で測定した。

　評価１：
　まず、方式（１）～（３）のいずれのサンプルが良好なＳＮ比となるかを確認するために、抗原濃度０（Blank）による実験で評価した。
　図２０に示すように、方式（１）ではノイズが高く、方式（２）および（３）がノイズが低いことが確認できた。

　評価２：
　実験２の結果を踏まえ、方式（２）および方式（３）のサンプルを用いて、抗原濃度毎の発光信号の強度を計測した。図２１は、方式（２）および（３）の検査キットを用いて、抗原濃度４０ｎｇ／ｍL（図左側）および０ｎｇ／ｍL（図右側）について発光信号を測定したときの結果を示しており、各濃度の画像において左側が方式（３）、右側が方式（２）の結果である。各試験はｎ＝３で実施した。
　方式（２）において、よりＳＮ比が高い結果が得られることが確認できた。

　評価３：
　図２２は、方式（２）の結果（図左側）と、マイクロプレート利用時の化学発光ELISAの結果（図右側）とを示した図である。横軸が抗原濃度、縦軸が発光強度を示している。
　方式（２）のサンプルの検査キットによれば、従来用いられていたマイクロプレートを利用した化学発光ELISAと同等の検出感度（最小検出感度, Limit of Detection, LOD）で測定可能であることが確認できた。

　実験３
方式（３）のサンプルを利用して、下記のプロトコールで実験を実施した。
（ａ）主滴下口より、洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，ＰＢＳ－Ｔ－ＢＳＡ）を滴下後、濃度を調整した抗原溶液（Troponin I－C 複合体, ＴｎＩ－Ｃｃｏｍｐｌｅｘ）とＨＲＰ標識抗体を予め混合した試料を滴下し５分インキュベーションした。その後、洗浄液を投入した。抗原溶液は、抗原をＰＢＳ－Ｔ－ＢＳＡで希釈することによって調製した。抗原溶液の濃度は０（Blank）、１ｎｇ／ｍＬ、４ｎｇ／ｍＬとした。
（ｂ）副滴下口１より、洗浄液を滴下した。
（ｃ）副滴下口２より、洗浄液を滴下後、基質（SuperSignal ELISA Femto Substrate, Thermo Fisher Scientific社）および同基質に付属の反応促進試薬（Enhancer）を混合した溶液を滴下した。なお方式（３）については、シーリングを外してから各溶液を滴下した。
　各滴下の滴下量は２０μＬとした。
　酵素標識抗体と基質反応により生じる化学発光の発光強度を測定した。

　実験２の方式での試験結果と、実験３の方式での試験結果を比較した結果を図２３に示す。抗原と標識抗体を別々に滴下する実験２の方式と同様に、抗原と標識抗体を予め混合した試料を用いる実験３の方式においても、抗原濃度に依存して発光信号強度が上昇することが示された。

　この出願は、２０２３年３月２９日に出願された日本出願特願２０２３－０５２９９８号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。

１、１０１　検査キット（マイクロデバイス）
７　構造Ａ
８　凸部
９　平坦部
１０　底面
２１、１２１　流路
２２、１２２　導入部
２３、１２３　貯留部
４０、１４０　３層構造
４１、１４１　基材
４１ａ、１４１ａ　表面
４１ｄ　基材側調整部
４１ｅ　疎水性バンド
４１ｆ　壁部
４１ｇ　溝部
４２、１４２　蓋材
４２ａ、１４２ａ　表面
４２ｄ　蓋側調整部
４２ｅ　疎水性バンド
４２ｆ　壁部
４２ｇ　溝部
４３、１４３　粘着テープ
４３ａ、１４３ａ　側面
４３ｂ　基材
４３ｃ　第１の粘着剤
４３ｄ　第２の粘着剤
４６、１４６　くびれ部
４９　調整構造
５０、１５０　固相部
５１、１５１　第１の固相部
５２、１５２　第２の固相部
５３、１５３　第３の固相部
８０、１８０　アライメント構造
８１～８３、１８１～１８３　位置合わせマーク
９９　液体試料
１２１ａ　主流路
１２１ｂ　第１分岐流路
１２１ｃ　第２分岐流路
１２２ａ　検体導入部
１２２ｂ　反応試薬導入部
１２２ｃ　洗浄液導入部
１２７　副分岐流路
１２８　分岐部
１２９　吸収部材
２２５、２２６　パウチ
２３１　外装部
２３２　仕切部
２３３　穿刺部
２３４　凹部
２３５　溶液収容部
２３６　中空部
４９１、４９２　疎水性層
４９１ａ～４９１ｃ、４９２ａ～４９２ｃ　第１～第３疎水性層

Claims

　液体試料を導入する導入部と、導入された液体試料を貯留する貯留部と、前記導入部と前記貯留部とを結ぶ流路とを備えるマイクロ流体デバイスであって、
　基材と、蓋材と、前記基材と前記蓋材とを接合する粘着テープとの３層構造を備え、
　前記流路は、前記基材の流路側の表面と前記蓋材の流路側の表面と前記粘着テープによって形成された閉空間により構成されており、
　前記蓋材において、少なくとも前記流路側の表面が流体浸透性材料により構成されているマイクロ流体デバイス。
　前記蓋材の少なくとも前記流路側の表面が親水層で構成されている、請求項１に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記親水層の純水の接触角が０～４０°である、請求項２に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記蓋材は、ポリエステルの表面に前記親水層を形成している、請求項２または３に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記親水層は、ポリビニルアルコール、アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、ポリエチレンイミンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上の樹脂からなる、請求項２または３に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記粘着テープは、ポリエステル基材の両面にアクリル系粘着材またはシリコーン系粘着材が設けられて構成されている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記ポリエステル基材の厚みが２０～５００μｍであり、
　前記アクリル系粘着材またはシリコーン系粘着材の片面の厚みは、それぞれ５～１００μｍである、
　請求項６に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記基材の表面に検出物質が固定化された固相部が設けられている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記基材の表面に複数の凸部が備わった構造Ａが設けられている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記構造Ａの前記凸部は、錐体、半球、半楕円球、直方体または柱状体を呈する、請求項９に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記構造Ａは、前記複数の凸部が格子状に平面配置されている構造である、請求項９に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記凸部の底面の径が１０μｍ以上１０００μｍ以下である、請求項１０に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記凸部の高さが１０μｍ以上５００μｍ以下である、請求項１０に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記凸部の表面に微細凹凸構造Ｂが形成されており、
　前記微細凹凸構造Ｂが形成された前記凸部の、粗さ曲線の算術平均粗さＲａが０．００５μｍ以上１μｍ以下である、請求項１０に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記構造Ａは、検出物質を固定する固相部に設けられている、請求項９に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記貯留部には多孔性吸収部材または複数の凸部からなる構造Ａの少なくともいずれかが設けられている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記貯留部に設けられた多孔性吸収部材または複数の凸部からなる構造Ａの直前には、流路が拡大する構造または所定の空間を有する構造の少なくともいずれかが設けられた、請求項１６に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記蓋材および前記貯留部の一部には、空気が抜ける穴または空気が抜ける開口部が設けられている請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記液体試料の導入部にはメンブレンフィルターが設けられた、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記３層構造には、前記基材、前記蓋材及び前記粘着テープによる接合の位置決めをするアライメント構造が設けられている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記アライメント構造は、前記基材と前記蓋材の双方に設けられた位置合わせマークである、請求項２０に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記蓋材の前記流路側の表面は、液体の流れを調整する蓋側調整部を有する、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記粘着テープは、液体の流れを調整する形状を有する、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記基材の前記流路側の表面は、液体の流れを調整する基材側調整部を有する、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記基材および前記粘着テープは、前記導入部の下流側に、液体の流れを調整する調整構造を有し、かつ標識検出物質を固定する標識検出物質固定部を備える、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記導入部は、検体が導入される検体導入部と、反応試薬が導入される反応試薬導入部とを備え、
　前記流路は、
　　断面において流れ方向に対して垂直方向が閉空間により構成されており、
　　前記検体導入部と前記貯留部とを接続する主流路と、
　　前記主流路の上流側において、前記主流路に合流する分岐流路とを有し、
　前記分岐流路の上流側に前記反応試薬導入部が設けられており、下流側の流路からの逆流を防止する逆流防止構造が設けられている、請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記逆流防止構造として、前記分岐流路の上流側を密封した構造を有する、請求項２６に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記逆流防止構造として、前記分岐流路において液体の流れを調整することで合流先の流路からの逆流を防止する流れ調整部を有する、請求項２７に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記流れ調整部は、流路表面に設けられた疎水性層を有しており、前記疎水性層より下流側の領域より疎水性が高くなるように設けられている、請求項２８に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記分岐流路は、上流側で更に分岐した副分岐流路を備える、請求項２６に記載のマイクロ流体デバイス。
　前記導入部には、反応試薬が封入されたパウチが設けられており、
　前記パウチが開封されること、前記反応試薬が前記導入部に導入される、請求項２６に記載のマイクロ流体デバイス。
　請求項１から３までのいずれか１項に記載のマイクロ流体デバイスを用いた検査方法。