TWI843799B - 抗pd-1抗體、其抗原結合片段及醫藥用途 - Google Patents
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Abstract
本公開涉及抗PD-1抗體、其抗原結合片段及醫藥用途。具體地，本公開涉及包含特定CDR區的人源化的抗PD-1抗體及其抗原結合片段，以及包含抗PD-1抗體及其抗原結合片段的醫藥組成物，及其作為藥物的用途。特別地，本公開涉及一種人源化的抗PD-1抗體在製備用於治療PD-1相關的疾病或病症的藥物中的用途。
Description
本公開屬於生物技術領域，更具體地，本公開涉及抗PD-1抗體及其應用。
這裡的陳述僅是提供與本發明有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。
腫瘤免疫治療是充分利用、調動腫瘤患者體內的殺傷性T細胞，對腫瘤進行殺傷作用的治療方法。與此同時，腫瘤細胞逃逸是腫瘤免疫治療面臨的一個巨大障礙，腫瘤細胞利用其自身對免疫系統的抑制作用促進了腫瘤的快速生長。腫瘤的免疫逃逸機制與機體對腫瘤的免疫應答之間存在著極為複雜的關係。在腫瘤免疫治療早期腫瘤特異性的殺傷性T細胞是有其生物活性的，但隨著腫瘤生長在後期失去了殺傷的功能。
人體內T細胞的活化採取了兩條信號通路系統，除了需要藉由抗原呈遞細胞遞呈MHC-抗原肽給T細胞提供第一信號外，還需要一系列協同刺激分子提供第二信號，進而才能使T細胞產生正常的免疫應答。這個雙信號通路系統對體內免疫系統的平衡起著至關重要的作用，它嚴格
調控機體對自身和非自身抗原產生不同的免疫應答。如果缺少協同刺激分子提供的第二信號，將會導致T細胞的無應答或持續特異性免疫應答，從而產生耐受。因此，第二信號通路在機體免疫應答的整個過程中起著非常關鍵的調節作用。
程序性死亡分子1(programmed death-1，PD-1)是1992年發現的表達在T細胞表面的一個蛋白受體，參與到細胞的凋亡過程之中。PD-1屬CD28家族，與細胞毒性T淋巴細胞抗原4(cytotoxic T Iymphocyte antigen 4，CTLA-4)具有23%的胺基酸同源性，但其表達卻與CTLA不同，主要表達在活化的T細胞、B細胞和髓系細胞上。PD-1有兩個配體，分別為PD-L1和PD-L2。PD-L1主要表達於T細胞、B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞(dendritic cell，DC)上，在活化後細胞上的表達能夠進行上調。而PD-L2的表達相對較局限，主要表達在抗原呈遞細胞上，如活化的巨噬細胞和樹突狀細胞。
PD-L1藉由和PD-1及B7-1的結合抑制免疫系統，很多腫瘤細胞及腫瘤組織微環境的免疫細胞表達PD-L1。新的研究發現乳腺癌、肺癌(例如，非小細胞肺癌)、胃癌、腸癌、腎癌、黑色素瘤、結腸癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌及肝癌等人類腫瘤組織中檢測到高PD-L1蛋白的表達，且PD-L1的表達水平和患者的臨床及預後緊密相關。
抗PD-1單株抗體，它可藉由阻斷PD-L1/PD-1之間結合，最大限度的提高患者自身對腫瘤的免疫系統反應，從而達到對腫瘤細胞進行殺傷的目的。目前，抗PD-1抗體Pembrolizumab(也稱Merck keytruda、keytruda、Merck-Pemb、Merck-keytruda、Merck-PD-1、派姆單抗)和Novilumab(也稱BMS Opdivo、Opdivo、BMS-Nivolumab、納武單抗)
已經獲FDA批准用於治療黑色素瘤、霍奇金淋巴瘤患者、非小細胞肺癌等腫瘤。另外專利文獻WO200139722、WO2006121168、WO2010036959、WO2010089411、WO2011110604、WO2013173223、WO2013181634、US2014335093、US6803192B1、US8617546B2、WO2015085847等也公開了多種抗PD-1單株抗體。
本公開提供了一種新的抗PD-1抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途。
在一些可選的實施方案中，本公開提供一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其為選自如下i)至iii)任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段：
i)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：8所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR1，序列如SEQ ID NO：9所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR2，和序列如SEQ ID NO：10所示或與其具有至多8個、3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR3；輕鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：11所示或與其具有至多4個、3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR1，序列如SEQ ID NO：12所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR2，和序列如SEQ ID NO：13所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR3；
ii)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：14所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的
HCDR1，序列如SEQ ID NO：15所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR2，和序列如SEQ ID NO：16所示或與其具有至多8個、3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR3；輕鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：17所示或與其具有至多4個、3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR1，序列如SEQ ID NO：12所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR2，和序列如SEQ ID NO：18所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR3；和
iii)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：21所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR1，序列如SEQ ID NO：22所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR2，和序列如SEQ ID NO：23所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的HCDR3；輕鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：24所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR1，序列如SEQ ID NO：25所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR2，和序列如SEQ ID NO：26所示或與其具有至多3個、2個或1個胺基酸突變的LCDR3。
在一些實施方式中，本公開的前述抗PD-1抗體或其抗原結合片段以等於或小於10-7M解離平衡常數與人PD-1結合，在一些實施方式中，以等於或小於10-8M、10-9M、10-10M或10-11M解離平衡常數與人PD-1結合。
在一些可選的實施方案中，本公開提供一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含：序列如SEQ ID NO：65所示的HCDR1，序列如SEQ ID NO：66所示的HCDR2，和序列如SEQ ID NO：67所示的HCDR3；輕鏈可變區包含：序列如SEQ ID NO：68所示的
LCDR1，序列如SEQ ID NO：12所示的LCDR2，和序列如SEQ ID NO：69所示的LCDR3區；序列見下表1：
表1
在一些可選的實施方案中，前述抗PD-1抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：8所示的HCDR1，序列如SEQ ID NO：9所示的HCDR2，和序列如SEQ ID NO：10所示的HCDR3；
該輕鏈可變區包含序列如SEQ ID NO：12所示的LCDR2，序列如SEQ ID NO：13所示的LCDR3，和序列如通式RSSQSX13VHSX14X15X16TYLE(SEQ ID NO：68)所示的LCDR1，其中X13選自L，X14選自N、Q、L、T或D，X15選自G、A或V，X16選自N。
在一些可選的實施方案中，該抗PD-1抗體或其抗原結合片段是選自如下(a)至(e)任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段：
(a)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和序列分別如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR2和LCDR3，和序列如SEQ ID NO：11、47、48、49、50、51或52所示的LCDR1；
(b)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其包含序列分別如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和序列分別如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
(c)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其包含序列分別如SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和序列分別如SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
(d)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其包含序列分別如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和序列分別如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR2和LCDR3，以及序列如SEQ ID NO：11、47、48、49、50、51或52所示的LCDR1；和
(e)該重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和該輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中，該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和該輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中，該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和該輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些可選的實施方案中，本公開提供一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其為選自如下iv)至vi)任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段：
iv)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：4序列所示的重鏈可變區具有相同序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：5序列所示的輕鏈可變區具有相同序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
v)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：6序列所示的重鏈可變區具有相同序列的HCDR1、HCDR2和
HCDR3，且輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：7序列所示的輕鏈可變區具有相同序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3；和
vi)一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其重鏈可變區包含與如SEQ ID NO：19序列所示的重鏈可變區具有相同序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且輕鏈可變區包含與如SEQ ID NO：20序列所示的輕鏈可變區具有相同序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段是鼠源抗體或其抗原結合片段、嵌合抗體或其抗原結合片段、全人抗體或其抗原結合片段，或人源化抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體或抗原結合片段為人源化抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，該人源化抗體包含來源自人抗體的框架區或其框架區變體。
在一些實施方案中，該框架區變體為在人抗體的輕鏈框架區和/或重鏈框架區基礎上分別具有至多11個胺基酸的回復突變。
在一些實施方案中，該框架區變體包含選自以下(f)至(h)任一該的突變：
(f)輕鏈可變區中包含2G胺基酸回復突變，和/或重鏈可變區中包含選自27Y、48I、67T、69L、82F和93T中的一個或更多個胺基酸回復突變；
(g)輕鏈可變區中包含2V胺基酸回復突變，和/或重鏈可變區中包含選自26D、27F、30T、38K、43H、48I、66K、67A、69L、82F和93T中的一個或更多個胺基酸回復突變；和
(h)輕鏈可變區中包含選自42G、44V和71Y中的一個或更多個胺基酸回復突變，和/或重鏈可變區中包含1K和/或94S胺基酸回復突變。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含選自如下該的抗體可變區：
(a2)重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且重鏈框架區包含27Y、48I、67T、69L、82F和93T中的一個或更多個胺基酸回復突變，和
輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR2和LCDR3，和序列如SEQ ID NO：11、47、48、49、50、51或52所示的LCDR1，且輕鏈框架區包含2G胺基酸回復突變；
(b2)重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且重鏈框架區包含選自26D、27F、30T、38K、43H、48I、66K、67A、69L、82F和93T中的一個或更多個胺基酸回復突變；和
輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：18所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，且輕鏈框架區包含2V胺基酸回復突變；
(c2)重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：23所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且重鏈框架區包含1K和/或94S胺基酸回復突變，和
輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，且輕鏈框架區包含選自42G、44V和71Y中的一個或更多個胺基酸回復突變。在一些實施方案中，前述
的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含選自如下(i)至(o)任一所述的抗體可變區；
(i)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：4所示或與SEQ ID NO：4具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：5或與SEQ ID NO：5具有至少90%序列同一性；
(j)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：6或與SEQ ID NO：6具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：7或與SEQ ID NO：7具有至少90%序列同一性；
(k)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：19所示或與SEQ ID NO：19具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：20所示或與SEQ ID NO：20具有至少90%序列同一性；
(l)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：27、30、31或32或分別與SEQ ID NO：27、30、31或32具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：28、29、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63或64或分別與SEQ ID NO：28、29、34、35、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63或64具有至少90%序列同一性；
(m)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：33、36、37、38、39或40所示或分別與SEQ ID NO：33、36、37、38、39或40具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：34、35、28、29、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63或64或分別與SEQ ID NO：34、35、28、29、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63或64具有至少90%序列同一性；
(n)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：41、45或46所示或分別與SEQ ID NO：41、45或46具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：42、43或44或分別與SEQ ID NO：42、43或44具有至少90%序列同一性；
(o)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：70所示或與SEQ ID NO：70具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如71所示或與SEQ ID NO：71具有至少90%序列同一性；和
(p)重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：27、30、31或32或分別與SEQ ID NO：27、30、31或32具有至少90%序列同一性，和/或
輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：34或35所示或分別與SEQ ID NO：34或35具有至少90%序列同一性；
其中，序列SEQ ID NO：70和SEQ ID NO：71為通式序列見表2：
表2
在一些實施方案中，該抗PD-1抗體的重鏈可變區如SEQ ID NO：27所示或與SEQ ID NO：27具有至少90%的同一性，且該抗PD-1抗體的輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：55所示或與SEQ ID NO：55具有至少90%的序列同一性。
在一些實施方案中，該抗PD-1抗體的重鏈可變區如SEQ ID NO：46所示或與SEQ ID NO：46具有至少90%的同一性，且該抗PD-1抗體的輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示或與SEQ ID NO：43具有至少90%的序列同一性。
前述的“至少90%同一性”包含具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。
在另外一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體進一步包含抗體恆定區；在另外一些實施方案中，該抗體恆定區的重鏈恆定區選自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恆定區及其常規
變體，該抗體恆定區的輕鏈恆定區選自人抗體κ和λ鏈恆定區及其常規變體；在另外一些實施方案中，該抗體恆定區包含引入S228P、F234A和L235A中的一個或更多個突變的IgG4重鏈恆定區，例如含S228P、F234A和L235A三個胺基酸突變；在另外一些實施方案中，該抗體包含序列如SEQ ID NO：72或如SEQ ID NO：79所示的重鏈恆定區和序列如SEQ ID NO：73所示的輕鏈恆定區。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體包含如SEQ ID NO：78所示的輕鏈和如SEQ ID NO：77或82所示的重鏈；或
包含如SEQ ID NO：75所示的輕鏈和如SEQ ID NO：74、76、80或81所示的重鏈。
在一些實施方案中，該抗PD-1抗體包含：
序列如SEQ ID：74所示的重鏈和序列如SEQ ID：75所示的輕鏈；或
序列如SEQ ID：77所示的重鏈和序列如SEQ ID：78所示的輕鏈。
在一些實施方案中，還提供一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，該抗體與前述的任一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段競爭性結合人PD-1或結合相同的人PD-1表位。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體是雙特異性抗體或多特異抗體。
在一些實施方案中，前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段選自Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈抗體(scFv)、二聚化的V區(雙抗體)和二硫鍵穩定化的V區(dsFv)。
在一些實施方案中，還公開一種分離的單株抗體或其抗原結合片段，該抗體與前述任一項所述抗PD-1抗體或其抗原結合片段競爭性結合人PD-1。
在一些實施方案中，本公開還提供一種醫藥組成物，其含有治療有效量的前述任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，或治療有效量的前述分離的單株抗體或其抗原結合片段，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑。在一些實施方案中，該治療有效量為單位劑量的組合物中含有0.1-3000mg的如前所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，本公開還提供一種核酸分子，其編碼前述任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，或編碼前述分離的單株抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，本公開還提供一種宿主細胞，其包含前述的核酸分子。
在一些實施方案中，本公開還提供一種用於免疫檢測或測定PD-1的方法，該方法包括使用前述任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段的步驟，或使用前述分離的單株抗體或其抗原結合片段的步驟。
在一些實施方案中，本公開還提供一種試劑盒，其包含前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段或前述分離的單株抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方案中，還提供前述抗PD-1抗體或其抗原結合片段或前述分離的單株抗體或其抗原結合片段在製備與PD-1相關的疾病的診斷劑中的應用。
在一些實施方案中，本公開還提供一種治療疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的前面任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，或前述分離的單株抗體或其抗原結合片段，或前述的醫藥組成物，或前述的核酸分子。
在一些實施方案中，該疾病為腫瘤。
在另一些實施方案中，該疾病選自：頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝細胞癌、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌；在其中一些實施方案中，該淋巴瘤選自：何傑金淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤、彌漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤，該肺癌選自：非小細胞肺癌和小細胞肺癌，該白血病選自：慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病；在另一些實施方案中，該疾病選自：PD-L1陽性的黑色素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、腸癌和結腸癌。
在一些實施方案中，本公開還提供前述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，或前述分離的單株抗體或其抗原結合片段，或前述的醫藥組成物，或前述的核酸分子在製備治療或預防與疾病的藥物中的用途。
在一些實施方案中，該疾病為腫瘤。
在另一些實施方案中，該疾病選自：頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝細胞癌、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌；在其中一些實施方案中，該淋巴瘤選自：何傑金淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤、彌漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤，該肺癌選自：非小細胞肺癌和小細胞肺癌，該白血病選自：慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病；在另一些實施方案中，該疾病選自：PD-L1陽性的黑色素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、腸癌和結腸癌。
在一些實施方案中，本公開還提供用作藥物的前面任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段、或前述分離的單株抗體或其抗原結合片段，或前述的核酸分子、或前述的醫藥組成物。
在一些實施方案中，該藥物用於治療或預防與PD-1相關的疾病。
在一些實施方案中，該疾病為腫瘤。
在另一些實施方案中，該疾病選自：頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝細胞癌、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌；在其中一些實施方案中，該淋巴瘤選自：何傑金淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤、彌漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤，該肺癌選自：非小細胞肺癌和小細胞肺癌，該白血病選自：慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病；在另一些實施方案中，該疾病選自：PD-L1陽性的黑色素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、腸癌和結腸癌。
第1圖為抗PD-1抗體阻斷PD-1與其配體的結合測試結果；
第2圖為抗PD-1抗體對PBMC細胞分泌IFNγ的影響；
第3圖為抗PD-1抗體對小鼠結腸癌MC38嫁接瘤的療效；
第4圖為抗PD-1抗體對小鼠結腸癌MC38腫瘤體積的影響。
為了更容易理解本公開，以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義，本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本公開所屬領域的一般技術人員通常理解的含義。
術語“程序性死亡1”、“細胞程序性死亡1”、“蛋白PD-1”、“PD-1”、“PDCD1”和“hPD-1”可互換使用，且包括人PD-1的變體、同種型、物種同源物、以及與PD-1具有至少一個共同表位的類似物。完整的PD-1序列可以GenBank登錄號U64863找到。
術語“程序性死亡配體-1(PD-L1)”是PD-1的兩種細胞表面糖蛋白配體之一(另一種為PD-L2)，它在與PD-1結合時下調T細胞活化和細胞因子分泌。如本文中使用的術語“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)，hPD-L1的變體、同種型、和種間同源物，以及5種與hPD-L1具有至少一個共同表位的類似物。完整的hPD-L1序列可以用GenBank登錄號Q9NZQ7查到。
術語“細胞因子”是由一個細胞群體釋放的、作為細胞間介質作用於其它細胞的蛋白質的一般術語。這樣的細胞因子的例子包括淋巴因
子、單核因子、趨化因子和傳統的多肽激素。示例性的細胞因子包括：人IL-2、IFN-γ、IL-6、TNFα、IL-17和IL-5。
本公開所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem，243，p3558(1968)中該。
本公開所述的“抗體”指一般是免疫球蛋白，一個天然完整抗體是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈恆定區的胺基酸組成和排列順序不同，故其抗原性也不同。據此，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈、和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的亞類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由恆定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。本公開所稱抗體包括抗體或其抗原結合片段，包括在免疫球蛋白基礎上經過改造，同時保留結合抗原的能力的抗體或其抗原結合片段；包括單特異性抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體；還包括一價抗體、二價抗體或多價抗體。抗體的抗原結合片段，例如可以是包含至少一個VH-CH1和至少一個VL-CL結構，其中VH和VL結構能夠基於鏈間相互作用而靠近，並保留結合抗原的能力的抗原結合片段，在一些實施方案中，該抗體的抗原結合片段為一價Fab片段(Fab1片段)、二價Fab片段(F(ab)2)、三價Fab片段(F(ab)3)、多價(兩個或以上)Fab片段，也可以是其它包含至少一個Fab片段的單特異性、雙特異性或多特異性抗原結合片段。
“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段，如單鏈抗體)。現有技術已公開了各種結構的雙特異性抗體，根據IgG分子的完整
性分可為IgG樣雙特異性抗體和抗體片段型雙特異性抗體，根據抗原結合區域的數量構型可分為二價、三價、四價或更多價的雙特異性抗體，根據結構左右是否對稱性可分為對稱結構雙特異性抗體和不對稱結構雙特異性抗體。其中，基於抗體片段的雙特異性抗體，例如缺乏Fc片段的Fab片段，其藉由將2個或多個Fab片段結合在一個分子中形成雙特異性抗體，其具有較低的免疫原性，且分子量小，具有較高的腫瘤組織滲透性，該類型的典型的抗體結構如F(ab)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab等雙特異性抗體；IgG樣雙特異性抗體(例如具有Fc片段)，這類抗體相對分子量較大，Fc片段有助於抗體後期的純化，並提高其溶解性、穩定性，Fc部分還可能會與受體FcRn結合，增加抗體血清半衰期，典型的雙特異性抗體結構模型如KiH、CrossMAb、Triomab quadroma、Fc△Adp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2：1 TCBs、1Fab-IgG TDB、FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等等雙特異性抗體(參見Aran F.Labrijn等，Nature Reviews Drug Discovery volume 18，pages585-608(2019)；Chen S1等，J Immunol Res.2019 Feb 11；2019：4516041)。
術語“一價”、“二價”、“三價”或“多價”是指抗體或多肽複合物中存在指定數量的抗原結合位點。例如“一價抗體”表示抗體中存在一個抗原結合位點，“一價多肽複合物”表示多肽複合物中存在一個抗原結合位點；“二價抗體”表示抗體中存在兩個抗原結合位點，“二價多肽複合物”表示多肽複合物中存在兩個抗原結合位點；“三價抗體”表示抗體中存在三個抗原結合位點，“三價多肽複合物”表示多肽複合物中存在三個抗原結合位
點；“多價抗體”表示抗體中存在多個(三個或以上)抗原結合位點，“多價多肽複合物”表示多肽複合物中存在多個(兩個或以上)抗原結合位點。
術語“抗體融合蛋白”是指將目的蛋白質(多肽)與免疫球蛋白連接形成的具有生物活性的融合蛋白，該融合蛋白具有所連接的蛋白質的生物學活性以及免疫球蛋白活性。
抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大，為可變區(Fv區)；靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定，為恆定區。可變區包括3個高變區(HVR)和4個序列相對保守的骨架區(FR)。3個高變區決定抗體的特異性，又稱為互補性決定區(CDR)。每條輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)由3個CDR區4個FR區組成，從胺基端到羧基端依次排列的順序為：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。輕鏈的3個CDR區指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重鏈的3個CDR區指HCDR1、HCDR2和HCDR3。
本公開的抗體包括鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體和全人抗體，較佳人源化抗體。
術語“鼠源抗體”在本公開中為根據本領域知識和技能製備的針對人PD-1的單株抗體。製備時用PD-1抗原注射試驗對象，然後分離表達具有所需序列或功能特性的抗體的融合瘤。在本公開一個較佳的實施方案中，該的鼠源抗PD-1抗體或其抗原結合片段，可進一步包含鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，或進一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG或其變體的重鏈恆定區。
術語“嵌合抗體(chimeric antibody)”，是將鼠源性抗體的可變區與人抗體的恆定區融合而成的抗體，可以減輕鼠源性抗體誘發的免疫應答反應。建立嵌合抗體，要先建立分泌鼠源性特異性單抗的融合瘤，
然後從鼠融合瘤細胞中選殖可變區基因，再根據需要選殖人抗體的恆定區基因，將鼠可變區基因與人恆定區基因連接成嵌合基因後插入表達載體中，最後在真核系統或原核系統中表達嵌合抗體分子。在本公開一個較佳的實施方案中，該PD-L1嵌合抗體的抗體輕鏈進一步包含人源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區。該PD-1嵌合抗體的抗體重鏈進一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恆定區，較佳包含人源IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區，或者使用胺基酸突變(例如L234A和/或L235A突變，和/或S228P突變)的IgG1、IgG2或IgG4變體。
術語“人源化抗體(humanized antibody)”，也稱為CDR嫁接抗體(CDR-grafted antibody)，是指將鼠的CDR序列嫁接到人的抗體可變區框架，即不同類型的人種系抗體框架序列中產生的抗體。可以克服嵌合抗體由於攜帶大量鼠蛋白成分，從而誘導的異源性反應。此類構架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA數據庫或公開的參考文獻獲得。如人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列數據庫(在因特網www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可獲得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。為避免免疫原性下降的同時，引起的活性下降，可對該人抗體可變區框架序列進行最少反向突變或回復突變，以保持活性。本公開的人源化抗體也包括進一步由酵母菌展示對CDR進行親和力成熟突變後的人源化抗體。
由於抗原的接觸殘基，CDR的嫁接可由於與抗原接觸的構架殘基而導致產生的抗體或其抗原結合片段對抗原的親和力減弱。此類相互作用可以可能是體細胞高度突變的結果。因此，可能仍然需要將此類供體構架胺基酸嫁接至人源化抗體的構架。來自非人抗體或其抗原結合片段
的參與抗原結合的胺基酸殘基可藉由檢查動物單株抗體可變區序列和結構來鑒定。CDR供體構架中與種系不同的各殘基可被認為是相關的。如果不能確定最接近的種系，那麼可將序列與亞類共有序列或具有高相似性百分數的動物抗體序列的共有序列相比較。稀有構架殘基被認為可能是體細胞高度突變的結果，從而在結合中起著重要作用。
在本公開一個的實施方案中，該抗體或其抗原結合片段，可進一步包含人源或鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，或進一步包含人源或鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恆定區；較佳包含人源IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區，或者使用胺基酸突變(例如L234A和/或L235A突變、和/或S228P突變)的IgG1、IgG2或IgG4變體。
本公開中所述人抗體重鏈恆定區和人抗體輕鏈恆定區的“常規變體”是指現有技術已公開的來源於人的不改變抗體可變區結構和功能的重鏈恆定區或輕鏈恆定區的變體，示例性變體包括對重鏈恆定區進行定點改造和胺基酸替換的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重鏈恆定區變體，具體替換如現有技術已知的YTE突變，L234A和/或L235A突變，S228P突變，和/或獲得knob-into-hole結構的突變(使得抗體重鏈具有knob-Fc和hole-Fc組合)，這些突變已被證實使得抗體具有新的性能，但不改變抗體可變區的功能。
“人抗體”(HuMAb)、“人源抗體”、“全人抗體”、“完全人抗體”可以互換使用，可以是源於人的抗體或者是從一種轉基因生物體中獲得的抗體，該轉基因生物體經“改造”以響應於抗原刺激而產生特異性人抗體並且可以藉由本領域已知的任何方法產生。在某些技術中，將人重鏈和輕鏈基因座的元素元件引入到源於胚胎幹細胞系的生物體的細胞株中，這些細胞系中的內源性重鏈和輕鏈基因座被靶向破壞這些細胞系中包含靶向的
內源性重鏈和輕鏈基因座破壞。轉基因生物可以合成對人抗原特異的人抗體，並且該生物可以用於產生人抗體-分泌融合瘤。人抗體還可以是一種抗體，其中重鏈和輕鏈是由源於一個或更多個人DNA來源的核苷酸序列編碼的。完全人抗體還可以藉由基因或染色體轉染方法以及噬菌體展示技術來構建，或者由體外活化的B細胞構建，所有的這些都是本領域已知的。
術語“全長抗體”、“完整抗體”、“完全抗體”和“全抗體”在本文中可互換使用，指基本上完整形式的抗體，與下文定義的抗原結合片段相區分。該術語特別指重鏈包含Fc區的抗體。
術語抗體的“抗原結合片段”或“功能片段”是指抗體的保持特異性結合抗原(例如，PD-1)的能力的一個或更多個片段。已顯示可利用全長抗體的片段來進行抗體的抗原結合功能。術語抗體的“抗原結合片段”中包含的結合片段的實例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，包含藉由鉸鏈區上的二硫橋連接的兩個Fab片段的二價片段，(iii)由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VH和VL結構域組成的Fv片段；(v)單結構域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)，其由VH結構域組成；和(vi)分離的互補決定區(CDR)或(vii)可任選地藉由合成的接頭連接的兩個或更多個分離的CDR的組合。此外，雖然Fv片段的兩個結構域VL和VH由分開的基因編碼，但可使用重組方法，藉由合成的接頭連接它們，從而使得其能夠產生為其中VL和VH區配對形成單價分子的單個蛋白質鏈(稱為單鏈Fv(scFv)；參見，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85：5879-5883)。此類單鏈抗體也意欲包括在術語抗體的“抗原結合片段”中。使用本領域技術人員已知的常規技術獲得此類抗體片段，並且以與對於完整抗體的方式相同的方
式就功用性篩選片段。可藉由重組DNA技術或藉由酶促或化學斷裂完整免疫球蛋白來產生抗原結合部分。抗體可以是不同同種型的抗體，例如，IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亞型)、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗體。
本公開的抗原結合片段包括Fab、F(ab')2、Fab'、單鏈抗體(scFv)、二聚化的V區(雙抗體)、二硫鍵穩定化的V區(dsFv)、包含CDR的肽等。
Fab是藉由用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H鏈的224位的胺基酸殘基)處理IgG抗體分子所獲得的片段中的具有約50，000的分子量並具有抗原結合活性的抗體片段，其中H鏈N端側的約一半和整個L鏈藉由二硫鍵結合在一起。
本公開的Fab可以藉由用木瓜蛋白酶處理本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體來生產。此外，可以藉由將編碼該抗體的Fab的DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中並將載體導入到原核生物或真核生物中以表達Fab來生產該Fab。
F(ab')2是藉由用酶胃蛋白酶消化IgG鉸鏈區中兩個二硫鍵的下方部分而獲得的分子量為約100，000並具有抗原結合活性並包含在鉸鏈位置相連的兩個Fab區的抗體片段。
本公開的F(ab')2可以藉由用胃蛋白酶處理本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體來生產。此外，可以藉由用硫醚鍵或二硫鍵連接下面描述的Fab'來生產該F(ab')2。
Fab'是藉由切割上述F(ab')2的鉸鏈區的二硫鍵而獲得的分子量為約50，000並具有抗原結合活性的抗體片段。本公開的Fab'可以藉由用還原劑例如二硫蘇糖醇處理本公開的特異性識別PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的F(ab')2來生產。
此外，可以藉由將編碼抗體的Fab'片段的DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中並將載體導入到原核生物或真核生物中以表達Fab'來生產該Fab'。
術語“單鏈抗體”、“單鏈Fv”或“scFv”意指包含藉由接頭連接的抗體重鏈可變結構域(或區域；VH)和抗體輕鏈可變結構域(或區域；VL)的分子。此類scFv分子可具有一般結構：NH2-VL-接頭-VH-COOH或NH2-VH-接頭-VL-COOH。合適的現有技術接頭由重複的GGGGS胺基酸序列或其變體組成，例如使用1-4個重複的變體(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用於本公開的其他接頭由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8：725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immuno l.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
本公開的scFv可以藉由以下步驟來生產：獲得本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體的VH和VL的編碼cDNA，構建編碼scFv的DNA，將該DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中，然後將該表達載體導入到原核生物或真核生物中以表達scFv。
雙抗體是其中scFv被二聚體化的抗體片段，是具有二價抗原結合活性的抗體片段。在二價抗原結合活性中，兩個抗原可以是相同或不同的。
本公開的雙抗體可以藉由以下步驟來生產：獲得本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體的VH和VL的編碼cDNA，構建編碼scFv的DNA以使肽接頭的胺基酸序列長度為8個殘基或更少，將該DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中，然後將該表達載體導入到原核生物或真核生物中以表達雙抗體。
dsFv是藉由將其中每個VH和VL中的一個胺基酸殘基被半胱胺酸殘基取代的多肽經由半胱胺酸殘基之間的二硫鍵相連而獲得的。可以按照已知方法(Protein Engineering，7，697(1994))基於抗體的三維結構預測來選擇被半胱胺酸殘基取代的胺基酸殘基。
本公開的dsFv可以藉由以下步驟來生產：獲得本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體的VH和VL的編碼cDNA，構建編碼dsFv的DNA，將該DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中，然後將該表達載體導入到原核生物或真核生物中以表達dsFv。
包含CDR的肽是藉由包含VH或VL的CDR中的一個或更多個區域而構成的。包含多個CDR的肽可以被直接相連或經由適合的肽接頭相連。
本公開的包含CDR的肽可以藉由以下步驟來生產：構建本公開的特異性識別人PD-1並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的單株抗體的VH和VL的CDR的編碼DNA，將該DNA插入到原核生物表
達載體或真核生物表達載體中，然後將該表達載體導入到原核生物或真核生物中以表達該肽。也可以藉由化學合成方法例如Fmoc方法或tBoc方法來生產該包含CDR的肽。
術語“胺基酸差異”或“胺基酸突變”是指相較於原蛋白質或多肽，變體蛋白質或多肽存在胺基酸的改變或突變，包括在原蛋白質或多肽的基礎上發生1個、2個、3個或更多個胺基酸的插入、缺失或替換。
術語“抗體框架”或“FR區”，是指可變結構域VL或VH的一部分，其用作該可變結構域的抗原結合環(CDR)的支架。從本質上講，其是不具有CDR的可變結構域。
術語“互補決定區”、“CDR”或“高變區”是指抗體的可變結構域內主要促成抗原結合的6個高變區之一。通常，每個重鏈可變區中存在三個CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，每個輕鏈可變區中存在三個CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各種公知方案中的任何一種來確定CDR的胺基酸序列邊界，包括“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”編號規則(參見Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273：927-948)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)等。例如，對於經典格式，遵循Kabat規則，該重鏈可變域(VH)中的CDR胺基酸殘基編號為31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；輕鏈可變域(VL)中的CDR胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia規則，VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；並且VL中
的胺基酸殘基編號為26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。藉由組合Kabat和Chothia兩者的CDR定義，CDR由人VH中的胺基酸殘基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的胺基酸殘基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)構成。遵循IMGT規則，VH中的CDR胺基酸殘基編號大致為26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，VL中的CDR胺基酸殘基編號大致為27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT規則，抗體的CDR區可以使用程序IMGT/DomainGap Align確定。
術語“表位”或“抗原決定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗體特異性結合的部位(例如，PD-L1分子上的特定部位)。表位通常以獨特的空間構象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15個連續或非連續的胺基酸。參見，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。
術語“特異性結合”、“選擇性結合”、“選擇性地結合”和“特異性地結合”是指抗體對預先確定的抗原上的表位的結合。通常，抗體以大約小於10-8M，例如大約小於10-9M、10-10M、10-11M或更小的親和力(KD)結合。
術語“KD”或“Kd”是指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數。通常，本公開的抗體以小於大約10-7M，例如小於大約10-8M或10-9M的解離平衡常數(KD)結合PD-1，例如，如使用表面等離子體共振(SPR)技術在BIACORE儀中測定的。
當術語“競爭”用於競爭相同表位的抗原結合蛋白(例如中和抗原結合蛋白或中和抗體)的情況中時，意指在抗原結合蛋白之間競爭，其藉由以下測定法來測定：在該測定法中，待檢測的抗原結合蛋白(例如抗
體或其免疫學功能片段)防止或抑制(例如降低)參考抗原結合蛋白(例如配體或參考抗體)與共同抗原(例如PD-1抗原或其片段)的特異性結合。眾多類型的競爭性結合測定可用於確定一種抗原結合蛋白是否與另一種競爭，這些測定例如：固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定(參見例如Stahli等，1983，Methodsin Enzymology 9：242-253)；固相直接生物素-親和素EIA(參見例如Kirkland等，1986，J.Immunol.137：3614-3619)、固相直接標記測定、固相直接標記夾心測定(參見例如Harlow和Lane，1988，Antibodies，A Laboratory Manual(抗體，實驗室手冊)，Cold Spring Harbor Press)；用I-125標記物的固相直接標記RIA(參見例如Morel等，1988，Molec.Immunol.25：7-15)；固相直接生物素-親和素EIA(參見例如Cheung，等，1990，Virology176：546-552)；和直接標記的RIA(Moldenhauer等，1990，Scand.J.Immunol.32：77-82)。通常該測定法涉及使用結合荷有未標記的檢測抗原結合蛋白及標記的參考抗原結合蛋白任一種的固態表面或細胞的純化的抗原。藉由測量在所測抗原結合蛋白存在下結合固態表面或細胞的標記的量來測量競爭性抑制。通常所測抗原結合蛋白過量存在。由競爭性測定(競爭抗原結合蛋白)鑒定的抗原結合蛋白包括：結合與參考抗原結合蛋白同一表位的抗原結合蛋白；和結合充分接近參考抗原結合蛋白的結合表位的鄰近表位的抗原結合蛋白，該兩個表位在空間上互相妨礙發生結合。在本文實施例中提供關於用於測定競爭性結合的方法的其它詳細資料。通常當競爭的抗原結合蛋白過量存在時，其將抑制(例如降低)至少40-45%、45-50%、50-55%、55-60%、60-65%、65-70%、70-75%或75%或更多參考抗原結合蛋白與共同抗原的特異性結合。在某些情況下，結合被抑制至少80-85%、85-90%、90-95%、95-97%或97%或更多。
本文中使用的術語“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，較佳是雙鏈DNA或單鏈mRNA或修飾的mRNA。當將核酸與另一個核酸序列置於功能關係中時，核酸是“有效連接的”。例如，如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，那麼啟動子或增強子有效地連接至該編碼序列。
術語“載體”是指能夠運輸已與其連接的另一個核酸的核酸分子。在一個實施方案中，載體是“質粒”，其是指可將另外的DNA區段連接至其中的環狀雙鏈DNA環。在另一個實施方案中，載體是病毒載體，其中可將另外的DNA區段連接至病毒基因組中。本文中公開的載體能夠在已引入它們的宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌的複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)或可在引入宿主細胞後整合入宿主細胞的基因組，從而隨宿主基因組一起複製(例如，非附加型哺乳動物載體)。
現有技術中熟知生產和純化抗體和抗原結合片段的方法，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用人PD-1或其片段免疫，所得到的抗體能被覆性、純化，並且可以用常規的方法進行胺基酸測序。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。發明所述的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或更多個人源FR區。人FR種系序列可以藉由比對IMGT人類抗體可變區種系基因數據庫和MOE軟體，從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http：//imgt.cines.fr得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。
術語“宿主細胞”是指已向其中引入了表達載體的細胞。宿主細胞可包括細菌、微生物、植物或動物細胞。易於轉化的細菌包括腸桿菌科(enterobacteriaceae)的成員，例如大腸桿菌(Escherichia coli)或沙門氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢桿菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢桿菌
(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；鏈球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。適當的微生物包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和畢赤酵母(Pichia pastoris)。適當的動物宿主細胞系包括CHO(中國倉鼠卵巢細胞系)和NS0細胞。
本公開工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在Fc區的高度保守N端位點。藉由表達與人PD-1特異性結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如，用含調整過的緩衝液的A或G Sepharose FF管柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用pH梯度法沖提結合的抗體，用SDS-PAGE檢測抗體片段，收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。
“施用”、“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組合物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，例如包含本公開的任一種結合化合物的組合物，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床右測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本公開的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
“保守修飾”或“保守置換或取代”是指具有類似特徵(例如電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構象和剛性等)的其它胺基酸置換蛋白中的胺基酸，使得可頻繁進行改變而不改變蛋白的生物學活性。本領域技術人員知曉，一般而言，多肽的非必需區域中的單個胺基酸置換基本上不改變生物學活性(參見例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224頁，(第4版))。另外，結構或功能類似的胺基酸的置換不大可能破環生物學活性。示例性保守取代於下表“示例性胺基酸保守取代”中陳述。
表3.示例性胺基酸保守取代
“有效量”或“有效劑量”指指獲得任一種或多種有益的或所需的治療結果所必需的藥物、化合物或醫藥組成物的量。對於預防用途，有益的或所需的結果包括消除或降低風險、減輕嚴重性或延遲病症的發作，包括病症、其併發症和在病症的發展過程中呈現的中間病理表型的生物化學、組織學和/或行為症狀。對於治療應用，有益的或所需的結果包括臨床結果，諸如減少各種本公開靶抗原相關病症的發病率或改善該病症的一個或更多個症狀，減少治療病症所需的其它藥劑的劑量，增強另一種藥劑的療效，和/或延緩患者的本公開靶抗原相關病症的進展。
“外源性”指根據情況在生物、細胞或人體外產生的物質。“內源性”指根據情況在細胞、生物或人體內產生的物質。
“同源性”是指兩個多核苷酸序列之間或兩個多肽之間的序列相似性。當兩個比較序列中的位置均被相同堿基或胺基酸單體亞基佔據時，例如如果兩個DNA分子的每一個位置都被腺嘌呤佔據時，那麼該分子在該位置是同源的。兩個序列之間的同源性百分率是兩個序列共有的匹配或同源位置數除以比較的位置數×100的函數。例如，在序列最佳比對時，如果兩個序列中的10個位置有6個匹配或同源，那麼兩個序列為60%同源；如果兩個序列中的100個位置有95個匹配或同源，那麼兩個序列為95%同源。通常，當比對兩個序列時進行比較以給出最大百分比同源性。例如，可以藉由BLAST算法執行比較，其中選擇算法的參數以在各個參考序列的整個長度上給出各個序列之間的最大匹配。以下參考文獻涉及經常用於序列分析的BLAST算法：BLAST算法(BLAST ALGORITHMS)：Altschul，S.F.等人，(1990)J.Mol.Biol.215：403-410；Gish，W.等人，(1993)Nature Genet.3：266-272；Madden，T.L.等人，(1996)Meth.Enzymol.266：131-141；Altschul，S.F.等人，(1997)Nucleic Acids Res.
25：3389-3402；Zhang，J.等人，(1997)Genome Res.7：649-656。其他如NCBI BLAST提供的常規BLAST算法也為本領域技術人員所熟知。
本文使用的表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”可互換使用，並且所有這類名稱都包括後代。因此，單詞“轉化體”和“轉化細胞”包括原代受試細胞和由其衍生的培養物，而不考慮轉移數目。還應當理解的是，由於故意或非有意的突變，所有後代在DNA含量方面不可能精確相同。包括具有與最初轉化細胞中篩選的相同的功能或生物學活性的突變後代。在意指不同名稱的情況下，其由上下文清楚可見。
本文使用的“聚合酶鏈式反應”或“PCR”是指其中微量的特定部分的核酸、RNA和/或DNA如在例如美國專利號4，683，195中該擴增的程序或技術。一般來說，需要獲得來自目標區域末端或之外的序列信息，使得可以設計寡核苷酸引子；這些引子在序列方面與待擴增模板的對應鏈相同或相似。2個引子的5’末端核苷酸可以與待擴增材料的末端一致。PCR可用於擴增特定的RNA序列、來自總基因組DNA的特定DNA序列和由總細胞RNA轉錄的cDNA、噬菌體或質粒序列等。一般參見Mullis等(1987)Cold Spring Harbor Symp.Ouant.Biol.51：263；Erlich編輯，(1989)PCR TECHNOLOGY(Stockton Press，N.Y.)。本文使用的PCR被視為用於擴增核酸測試樣品的核酸聚合酶反應法的一個實例，但不是唯一的實例，該方法包括使用作為引子的已知核酸和核酸聚合酶，以擴增或產生核酸的特定部分。
“分離的”指純化狀態，並且在這種情況下意味著在指定的分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白質、脂質、碳水化合物或其他材料，例如細胞碎片和生長培養基。通常，術語“分離的”並不意圖指完
全不存在這些材料或不存在水、緩衝液或鹽，除非它們以顯著干擾如本文所述的化合物的實驗或治療用途的量存在。
“任選”或“任選地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“任選包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
術語“藥學上可接受的載體”指適合用於製劑中用於遞送抗體或抗原結合片段的任何無活性物質。載體可以是抗黏附劑、黏合劑、包衣、崩解劑、充填劑或稀釋劑、防腐劑(如抗氧化劑、抗菌劑或抗真菌劑)、增甜劑、吸收延遲劑、潤濕劑、乳化劑、緩衝劑等。合適的藥學上可接受的載體的示例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)右旋糖、植物油(例如橄欖油)、鹽水、緩衝液、緩衝的鹽水和等滲劑例如糖、多元醇、山梨糖醇和氯化鈉。
此外，本公開包括用於治療與目標抗原(例如PD-1)陽性細胞相關的疾病的藥劑，該藥劑包含本公開的抗PD-1抗體或其抗原結合片段作為活性成分。
本公開中與PD-1相關的疾病沒有限制，只要它是與PD-1相關的疾病即可，例如利用本公開的分子誘導的治療反應可藉由結合人類PD-1，然後阻遏PD-1與其配體PD-L1、PD-L2的結合，或殺傷過表達PD-1的腫瘤細胞。因此，當處於適於治療應用的製備物和製劑中時，本公開的
分子對這樣一些人是非常有用的，他們患有腫瘤或癌症，較佳黑色素瘤、結腸癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、腸癌、腎癌、非小細胞肺癌、膀胱癌等。
此外，本公開涉及用於免疫檢測或測定目標抗原(例如PD-1)的方法、用於免疫檢測或測定目標抗原(例如PD-1)的試劑、用於免疫檢測或測定表達目標抗原(例如PD-1)的細胞的方法和用於診斷與目標抗原(例如PD-1)陽性細胞相關的疾病的診斷劑，其包含本公開的特異性識別目標抗原(例如人PD-1)並與胞外區的胺基酸序列或其三維結構結合的抗體或抗體片段作為活性成分。
在本公開中，用於檢測或測定目標抗原(例如PD-1)的量的方法可以是任何已知方法。例如，它包括免疫檢測或測定方法。
免疫檢測或測定方法是使用標記的抗原或抗體檢測或測定抗體量或抗原量的方法。免疫檢測或測定方法的實例包括放射性物質標記的免疫抗體方法(RIA)、酶免疫測定法(EIA或ELISA)、螢光免疫測定法(FIA)、發光免疫測定法、蛋白質免疫印跡法、物理化學方法等。
上述與PD-1陽性細胞相關的疾病可以藉由用本公開的抗體或抗體片段檢測或測定表達PD-1的細胞來診斷。
為了檢測表達多肽的細胞，可以使用已知的免疫檢測方法，並較佳使用免疫沉澱法、螢光細胞染色法、免疫組織染色法等。此外，可以使用利用FMAT8100HTS系統(Applied Biosystem)的螢光抗體染色法等。
在本公開中，對用於檢測或測定目標抗原(例如PD-1)的活體樣品沒有特別限制，只要它具有包含表達目標抗原(例如PD-1)的細胞的可能性即可，例如組織細胞、血液、血漿、血清、胰液、尿液、糞便、組織液或培養液。
根據所需的診斷方法，含有本公開的單株抗體或其抗體片段的診斷劑還可以含有用於執行抗原-抗體反應的試劑或用於檢測反應的試劑。用於執行抗原-抗體反應的試劑包括緩衝劑、鹽等。用於檢測的試劑包括通常用於免疫檢測或測定方法的試劑，例如識別該單株抗體、其抗體片段或其結合物的標記的第二抗體和與該標記對應的受質等。
抗原的製備
1.抗原構建：
設計併合成人PD-1-IgG1Fc融合蛋白，N端為人PD-1胞外區150個胺基酸，C端為人IgG1的Fc段(hIgG1Fc)。經Protein A的親和管柱純化，可獲得高純度的重組PD-1-Fc蛋白，用於檢測抗PD-1抗體與抗原的結合。
人PD-1-IgG1Fc(SEQ ID NO：1)：
註釋：下劃線部分為信號肽，正體部分為人PD-1胞外區，斜體部分為hIgG1Fc(信號肽+胞外區+hIgG1Fc)。
人PD-1-his(SEQ ID NO：2)：
轉染細胞核酸編碼的PD-1抗原(SEQ ID NO：3)：
抗體的製備
抗人PD-1抗體可藉由免疫小鼠產生，也可藉由抗人PD-1噬菌體小鼠免疫文庫獲得。
藉由免疫小鼠製備抗人PD-1抗體的方法如下：
1.免疫：實驗用SJL白小鼠，雌性，6-8週齡和Balb/c白小鼠，雌性，6-8週齡。飼養環境：SPF級。小鼠購進後，實驗室環境飼養1週，12/12小時光/暗週期調節，溫度20-25℃；濕度40-60%。將已適應環境的小鼠按不同方案免疫，每組6-10隻。免疫抗原可以是純化的重組蛋白PD-1-IgG1Fc(見SEQ ID NO：1)、PD-1-his(見SEQ ID NO：2)、或PD-1作為抗原(見SEQ ID NO：3)轉染的Jurkat/CHO-PD-1細胞，可以使用單獨一種抗原配合不同的免疫佐劑或者不同類型免疫原交叉免疫。免疫部
位可以是腹腔或者背部皮下，或者兩種位置交替免疫。免疫佐劑TiterMax® Gold Adjuvant(以下簡稱Titermax，購自Sigma貨號T2684)與Imject Alum Adjuvant(以下簡稱Alum，購自Pierce貨號77161)交叉免疫。抗原與佐劑(Titermax)比例為1：1，抗原與佐劑(Alum)比例為3：1，25-50μg/隻(首免)，50μg/隻(加強免疫)，或是1×107個Jurkat/CHO-PD-1細胞/隻。第0天腹膜內注射25-50μg/隻的乳化後抗原，首免後每週一次或是每兩週一次，Titermax和Alum交替使用，共5-8次。
2.細胞融合：選擇血清中抗體滴度高的小鼠進行脾細胞融合，將衝刺免疫72小時後的小鼠眼球放血，拉頸處死，放入75%乙醇中消毒。採用優化的PEG介導的融合步驟將脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0細胞(中國科學院)進行融合得到融合瘤細胞。融合好的融合瘤細胞用HAT完全培養基(含20% FBS、1×HAT和1×OPI的RPMI-1640培養基)重新懸浮，分裝於96孔細胞培養板中(1×105/150μl/孔)，37℃，5%CO2孵育，種板10-30塊左右。融合後的第5天加入HAT完全培養基，50μl/孔，37℃，5%CO2孵育。融合後第7天至8天，根據細胞生長密度，全換液，200μl/孔，37℃，5%CO2孵育。
3.融合瘤細胞篩選：融合後第7-9天，根據細胞生長密度，進行抗體與PD-1結合的ELISA方法檢測，並將檢測的陽性孔細胞進行PD-1/PDL1結合的阻斷ELISA檢測，陽性孔換液，並根據細胞密度及時擴大至24孔板中。移入24孔板的細胞株經過複測後進行保種和第一次亞選殖。第一次亞選殖篩選為陽性的進行保種，並進行第二次或第三次亞選殖，直至獲得單細胞純株。多次融合獲得有阻斷PD-1與PDL1結合效果的融合瘤細胞。
藉由抗人PD-1噬菌體小鼠免疫文庫獲得抗人PD-1抗體的方法如下：
1.構建抗人PD-1噬菌體小鼠免疫文庫：選擇血清中抗體滴度高的小鼠的脾臟，用Trizol(Invitrogen Cat No.15596-018)提取組織總RNA。使用PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒(Takara Cat No.6210A)進行反轉錄獲得cDNA。根據IMGT數據庫設計並合成構建文庫的引子。藉由三輪PCR反應，獲得單鏈抗體片段。將單鏈抗體片段和經過改造的建庫載體pCantab5E(Amersham Biosciences/GE Cat No.27-9400-01)用Sfi1(NEB Cat No.#R0123L)進行酶切，電泳後用E.Z.N.A.® Gel Extraction Kit(Omega Cat No.D2500-02)進行純化回收。然後用T4 DNA連接酶(NEB Cat No.#M0202L)16℃連接16-18小時，再用上述試劑盒進行純化回收，最後用去離子水沖提。取1μg連接產物與1支電轉化感受態TG1(Lucigen Cat No.60502-2)混合，電轉化儀(Bio Rad Micropulser)參數設至2.5kV，200Ω，25uF，進行電轉化。重複轉化10次，塗平板，37℃倒置培養16-18小時。將所有菌落刮洗下來混和在一起，加入終濃度為15%的甘油，-80℃保存備用。
2.抗人PD-1噬菌體小鼠免疫文庫的篩選：將包裝好的抗人PD-1噬菌體免疫文庫(1×1012-1×1013)與100μl鏈菌素微珠(Milenvi Biotec，Auburn，CA)加入1m1含2%脫脂牛奶-磷酸鹽緩衝液(縮寫MPBS)中於室溫下孵育1小時，放置在磁力架上，取上清。上清加入10μg/ml生物素化的人PD-1-ECD-his蛋白(購自Sino Biological)中於室溫下孵育1小時，再加入100μl鏈黴親和素包被的磁珠(1ml MPBS預孵育)於室溫下孵育1小時。並使其負載於磁力架系統上用於分選，吸去上清。加入1ml PBST(含0.1% Tween-20的磷酸鹽緩衝液)，翻轉多次，吸盡後再加入新鮮洗液，重複11次，以去除未結合的抗體片段，加入0.5ml沖提液(50μl 10mg/ml trypsin stock solution(存儲液)加入450μl PBS中)。室溫下搖
晃15min。放置在磁力架上，吸出上清至一新EP管中。TG1接入2YT培養基中擴增至培養細菌密度OD600=0.4時。每管加入1.75ml TG1(OD600=0.4)，並加入250μl沖提後phage(噬菌體)，37℃水浴中靜置孵育30min，梯度稀釋塗板，用於測試滴度。其餘TG1溶液離心，塗板，37℃過夜孵育。
噬菌體小鼠免疫文庫利用生物素化的人PD-1-ECD-his抗原，經過2-3輪MACS篩選(鏈黴素磁珠，Invitrogen)，最終獲得具有結合PD-1和阻斷PD-1與PD-L1結合的單株，測序驗證，得到抗體的可變區序列。
重組抗原蛋白/抗體的純化
1.融合瘤上清分離純化/ProteinG親和層析：
對於小鼠融合瘤上清純化首選ProteinG進行親和層析，將培養所得融合瘤離心取上清，根據上清體積加入10-15%體積的1M Tris-HCl(pH8.0-8.5)調節上清pH。ProteinG管柱利用6M鹽酸胍洗3-5倍管柱體積，然後利用純水清洗3-5倍管柱體積；利用如1×PBS(pH7.4)緩衝體系作為平衡緩衝液對層析管柱平衡3-5倍管柱體積；細胞上清利用低流速上樣結合，控制流速使保留時間約1min或更長時間；利用1×PBS(pH7.4)洗滌層析管柱3-5倍管柱體積至紫外吸收回落至基線；利用0.1M醋酸/醋酸鈉(pH3.0)緩衝液進行樣品沖提，根據紫外檢測收集沖提峰，沖提產物利用1M Tris-HCl(pH8.0)快速調節pH至5-6暫存。對於沖提產物可以利用本領域技術人員熟知的方法進行溶液置換，如利用超濾管進行超濾濃縮及溶液置換至所需的緩衝體系，或者利用分子排阻如G-25脫鹽替換成所需的緩衝體系，或者利用如Superdex 200等高分辨率分子排阻管柱去除沖提產物中的聚體成分以提高樣品純度。
2.Protein A親和層析純化蛋白或抗體：
首先將表達抗原蛋白或者抗體的細胞培養上清進行高速離心收取上清。ProteinA親和管柱利用6M鹽酸胍洗3-5倍管柱體積，然後利用純水清洗3-5倍管柱體積。利用如1×PBS(pH7.4)緩衝體系作為平衡緩衝液對層析管柱平衡3-5倍管柱體積。細胞上清利用低流速上樣結合，控制流速使保留時間約1min或更長時間，結合完畢後利用1×PBS(pH7.4)洗滌層析管柱3-5倍管柱體積至紫外吸收回落至基線。利用0.1M醋酸/醋酸鈉(pH3.0-3.5)緩衝液進行樣品沖提，根據紫外檢測收集沖提峰，沖提產物利用1M Tris-HCl(pH8.0)快速調節pH至5-6暫存。對於沖提產物可以利用本領域技術人員熟知的方法進行溶液置換，如利用超濾管進行超濾濃縮及溶液置換至所需的緩衝體系，或者利用分子排阻如G-25脫鹽替換成所需的緩衝體系，或者利用如Superdex 200等高分辨率分子排阻管柱去除沖提產物中的聚體成分以提高樣品純度。
實施例
以下結合實施例進一步描述本公開，但這些實施例並非限制著本公開的範圍。本公開實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如冷泉港的抗體技術實驗手冊，分子選殖手冊；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未注明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
實施例1.抗人PD-1鼠源抗體獲得
將經前述方法獲得的抗人PD-1鼠源抗體進行抗原結合實驗，篩選得到多株活性良好的抗體：其中包括M23、M32和M33，將單細胞純株擴培養，提取RNA，利用mouse-Ig的簡並引子進行反轉錄擴增(RT-PCR)，得到抗體的可變區序列。將該鼠抗體可變區序列與人抗體恆定區
序列連接，選殖並重組表達出該鼠單株抗體的嵌合抗體，進行體外活性實驗，確認所得到的單株抗體可變區序列正確。
測得鼠源抗體M23、M32和M33的可變區序列如下：
鼠源抗體M23的重鏈可變區(SEQ ID NO：4)：
鼠源抗體M23的輕鏈可變區(SEQ ID NO：5)：
鼠源抗體M32的重鏈可變區(SEQ ID NO：6)：
鼠源抗體M32的輕鏈可變區(SEQ ID NO：7)：
鼠源抗體M33的重鏈可變區：(SEQ ID NO：19)
鼠源抗體M33的輕鏈可變區：(SEQ ID NO：20)
備註：上述抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區序列中，下劃線為Kabat編號系統確定的CDR序列，依次為FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
表4.鼠源抗體M23、M32和M33重鏈及輕鏈CDR區序列
實施例2.抗人PD-1單株抗體的人源化
藉由比對IMGT人類抗體重輕鏈可變區種系基因數據庫和MOE軟體分析，分別挑選與M23，M32，M33的輕重鏈序列同一性高的人種系重輕鏈可變區種系基因作為模板，將這3個鼠源抗體的CDR分別嫁接到相應的人源抗體模板中，分別構建其對應的人源化抗體。
1.鼠源抗體M23人源化
1.1 鼠源抗體M23人源化構架選擇
鼠源抗體M23的人源化輕鏈模板為IGKV2-40*01和IGKJ4*01，人源化重鏈模板為IGHV1-69*02和IGHJ6*01，人源化改造後可變區序列如下(下劃線為CDR序列)：
Hu23VH-CDR嫁接：(SEQ ID NO：27)
Hu23VL-CDR嫁接：(SEQ ID NO：28)
1.2 鼠源抗體M23的人源化模板選擇和回復突變設計
表5.鼠源抗體M23人源化抗體的回復突變
M23的人源化抗體輕/重鏈可變區序列如下：
>Hu23VL1(同Hu23VL-CDR grafted)：(SEQ ID NO：28)
>Hu23VL2(SEQ ID NO：29)
>Hu23VH1(同Hu23VH-CDR grafted)：(SEQ ID NO：27)
>Hu23VH2(SEQ ID NO：30)
>Hu23VH3(SEQ ID NO：31)
>Hu23VH4(SEQ ID NO：32)
1.3 鼠源抗體M23的人源化序列組合
鼠源抗體M23的人源化後獲得的抗體及其可變區組合見下表。
表6.人源化Hu23抗體可變區組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu23-1)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu23-1)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu23-1.IgG4AA”表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu23-1.IgG4P”表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
2.鼠源抗體M32人源化
2.1 鼠源抗體M32人源化構架選擇
鼠源抗體M32的人源化輕鏈模板為IGKV2-40*01和IGKJ4*01，人源化重鏈模板為IGHV1-69*02和IGHJ6*01，人源化可變區序列如下(下劃線為CDR序列)：
Hu32VH-CDR嫁接：(SEO ID NO：33)IGHV1-69*02和IGHJ6*01
Hu32VL-CDR嫁接：(SEQ ID NO：34)
2.2 鼠源抗體M32的人源化模板選擇和回復突變設計
表7.鼠源抗體M32的人源化抗體的回復突變
鼠源抗體M32的人源化抗體輕重鏈可變區序列如下：
>Hu32VL1(同Hu32VL-CDR嫁接)：(SEQ ID NO：34)
>Hu32VL2(SEQ ID NO：35)
>Hu32VH1(同Hu32VH-CDR grafted)：(SEQ ID NO：33)
>Hu32VH2(SEQ ID NO：36)
>Hu32VH3(SEQ ID NO：37)
>Hu32VH4(SEQ ID NO：38)
>Hu32VH5(SEQ ID NO：39)
>Hu32VH6(SEQ ID NO：40)
2.3 鼠源抗體M32的人源化序列組合
鼠源抗體M32的人源化後獲得的抗體及其可變區組合。
表8.人源化抗體Hu32輕/重鏈可變區組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu32-1)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu32-1)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu32-1.IgG4AA”表示由Hu32VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu32VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu32-1.IgG4P”表示由Hu32VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-
P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu32VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
3.鼠源抗體M33人源化
3.1 鼠源抗體M33人源化構架選擇
鼠源抗體M33的人源化輕鏈模板為IGKV1-39*01和IGKJ4*01，人源化重鏈模板為IGHV3-7和IGHJ6*01，人源化可變區序列如下：
Hu33VH-CDR嫁接(SEQ ID NO：41)：
Hu33VL-CDR嫁接(SEQ ID NO：42)：
3.2 鼠源抗體M33的人源化模板選擇和回復突變設計
表9.鼠源抗體M33人源化抗體的回復突變
註：嫁接(Grafted)代表鼠抗體CDR植入人種系FR區序列。胺基酸殘基由Kabat編號系統確定並註釋，如F71Y表示依照Kabat編號系統，將Kabat編號的第71位F突變回Y。
鼠源抗體M33的人源化抗體輕鏈可變區和重鏈可變區序列如下：
>Hu33VL1(同Hu33VL-CDR grafted)：(SEQ ID NO：42)
>Hu33VL2(SEQ ID NO：43)
>Hu33VL3(SEQ ID NO：44)
>Hu33VH1(同Hu33VH-CDR grafted)：(SEQ ID NO：41)
>Hu33VH2(SEQ ID NO：45)
>Hu33VH3(SEQ ID NO：46)
3.3 鼠源抗體M33的人源化序列組合
表10.人源化抗體輕重鏈可變區組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu33-6)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu33-6)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴
“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu33-6.IgG4AA”，表示由Hu33VH3重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu33VL2輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu33-6.IgG4P”，表示由Hu33VH3重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu33VL2輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
4.人源化抗體的突變體
4.1 Hu23人源化抗體的突變抗體
藉由計算機模擬，對Hu23人源化抗體的輕鏈LCDR1(SEQ ID NO：11)
的特定位點胺基酸進行定點突變，具體突變見表11：
表11.Hu23輕鏈LCDR1的突變序列：
LCDR1突變後的Hu23人源化抗體輕鏈可變區序列如下：
>Hu23VL1(N28Q)序列為：
(SEQ ID NO：53)
>Hu23VL1(N28L)序列為：
(SEQ ID NO：54)
>Hu23VL1(N28T)序列為：
(SEQ ID NO：55)
>Hu23VL1(N28D)序列為：
(SEQ ID NO：56)
>Hu23VL1(G29A)序列為：
(SEQ ID NO：57)
>Hu23VL1(G29V)序列為：
(SEQ ID NO：58)
>Hu23VL2(N28Q)序列為：
(SEQ ID NO：59)
>Hu23VL2(N28L)序列為：
(SEQ ID NO：60)
>Hu23VL2(N28T)序列為：
(SEQ ID NO：61)
>Hu23VL2(N28D)序列為：
(SEQ ID NO：62)
>Hu23VL2(G29A)序列為：
(SEQ ID NO：63)
>Hu23VL2(G29V)序列為：
(SEQ ID NO：64)
表12.Hu23人源化抗體輕/重鏈可變區組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu23-11)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu23-11)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu23-11.IgG4AA”，表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1(N28T)輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu23-11.IgG4P”，表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1(N28T)輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
實驗結果顯示，Hu23LCDR1(N28Q)、Hu23LCDR1(N28L)、Hu23LCDR1(N28T)、Hu23LCDR1(N28D)、Hu23LCDR1
(G29A)、Hu23LCDR1(G29V)位點突變後的人源化抗體均保持與PD-1的結合能力(表16)。
4.2 Hu32人源化抗體的突變抗體
經序列分析，M23來源的系列人源化抗體Hu23和M32來源的系列人源化抗體Hu32的序列同一性較高，將Hu23輕鏈可變區和Hu32的重鏈可變區組合成新的輕重鏈可變區組合。實驗結果顯示，包含新組合輕重鏈可變區的人源化抗體均保持與PD-1抗原的結合能力(表16)。
表13.Hu32和Hu23抗體可變區共有序列通式
表14.Hu32重鏈可變區與Hu23輕鏈可變區的組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu32a-85)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu32a-85)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu32a-85.IgG4AA”，表示由Hu32VH6重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1(N28T)輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu32a-85.IgG4P”，表示由Hu32VH6重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu23VL1(N28T)輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
表15.Hu23重鏈可變區與Hu32輕鏈可變區的組合
上表中所指代的抗體輕/重鏈可變區組合(例如Hu23a-57)可以分別與抗體輕/重鏈恆定區連接形成全長抗體；在本公開中如無明確說明時，形成全長抗體時輕鏈可變區與SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接形成抗體輕鏈，重鏈可變區與SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區或SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接形成抗體重鏈，並以表中指代抗體輕/重鏈可變區組合的名稱(例如Hu32a-85)加後綴“.IgG4AA”表示與IgG4-AA重鏈恆定區連接形成的全長抗體，加後綴“.IgG4P”表示與IgG4-P重鏈恆定區連接形成的全長抗體，例如，“Hu23a-57.IgG4AA”，表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：72所示的IgG4-AA重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu32VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。“Hu23a-57.IgG4P”，表示由Hu23VH1重鏈可變區和如SEQ ID NO：79所示的IgG4-P重鏈恆定區連接而成的重鏈，與由Hu32VL1輕鏈可變區和如SEQ ID NO：73所示的Kappa鏈恆定區連接而成的輕鏈形成的全長抗體。
5.人源化抗體的篩選
藉由Biacore進行不同人源化抗體的親和力檢測(方法參見測試例3)，結果見表16，結果顯示不同的人源化抗體保持了對於PD-1的結合能力，部分人源化抗體的親和力甚至和其鼠源抗體基本接近。
表16.Hu23人源化抗體與人PD-1的親和力
實施例3.構建和表達PD-1人源化抗體
設計引子PCR搭建各人源化抗體VH/VK基因片段，再與表達載體pHr(帶信號肽及恆定區基因(CH1-Fc/CL)片段)進行同源重組，構建抗體全長表達載體VH-CH1-Fc-pHr/VK-CL-pHr。IgG4-P代表S228P(對應於序列SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：79的第108位)突變，IgG4-AA代表F234A(對應於序列SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：79的第114位)、L235A(對應於序列SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：79的第115位)和S228P(對應於序列SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：79的第108位)突變，IgG4-AA和IgG4-P抗體形式可以藉由IgG4抗體形式簡單點突變獲得。
IgG4-AA重鏈恆定區序列如下(SEQ ID NO：72)：
抗體的輕鏈(Kappa鏈)恆定區序列如下(SEQ ID NO：73)：
構建的IgG4AA形式全長抗體序列示例性列舉如下：
Hu23-11.IgG4AA抗體重鏈(SEQ ID NO：74)：
Hu23-11.IgG4AA輕鏈(SEQ ID NO：75)：
Hu32a-85.IgG4AA重鏈(SEQ ID NO：76)：
Hu32a-85.IgG4AA的輕鏈(同Hu23-11.IgG4AA的輕鏈，SEQ ID NO：75)：
Hu33-6.IgG4AA重鏈(SEQ ID NO：77)：
Hu33-6.IgG4AA輕鏈(SEQ ID NO：78)：
IgG4-P的重鏈恆定區序列如下(SEQ ID NO：79)：
構建的IgG4-P形式全長抗體序列示例性列舉如下：
Hu23-11.IgG4P抗體重鏈(SEQ ID NO：80)：
Hu23-11.IgG4P輕鏈(同Hu23-11.IgG4AA的輕鏈，SEQ ID NO：75)：
Hu32a-85.IgG4P重鏈(SEQ ID NO：81)：
Hu32a-85.IgG4P的輕鏈(同Hu23-11.IgG4AA的輕鏈，SEQ ID NO：75)：
Hu33-6.IgG4P重鏈(SEQ ID NO：82)：
Hu33-6.IgG4P輕鏈(同Hu33-6.IgG4AA輕鏈，SEQ ID NO：78)：
測試例
測試例1.抗PD-1抗體體外PD-1配體結合和結合阻斷ELISA實驗
腫瘤細胞表面的PD-L1藉由和T細胞表面的PD-1的結合，從而對T細胞的增殖起到抑制的效果。PD-1的抗體能藉由和PD-1的結合，而阻斷PD-L1/PD-1的信號通路，進而刺激T細胞的增殖。PD-1/PD-L1的結合阻斷實驗用於檢測抗PD-1抗體對於信號通路的阻斷活性。
本實驗中，將PD-1-His蛋白(Cat.# 10377H08H，Sino Biological)包被96孔板後，分別加入待測的抗PD-1抗體(包括抗體：Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA，陽性對照抗體：H005-1(參見WO2015085847中H005-1抗體)，進行孵育反應；稍後再HRP標記的goat anti-human IgG(H+L)抗體(Cat.# 109-035-003，Jackson ImmunoResearch)，孵育反應。洗板後，檢測HRP標記的goat anti-human IgG(H+L)結合量，計算得到抗PD-1抗體對配體PD-1結合的EC50值。
本實驗中，將胞外區與Fc融合的PD-1蛋白(PD-1-Fc，序列見SEQ ID NO：1)包被96孔板後，分別加入待測的抗PD-1抗體(包括抗體：Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA，陽性對照抗體：H005-1(參見WO2015085847中H005-1抗體)，進行孵育反應；稍後再加入生物素標記的PD-L1/PD-L2，孵育反應。洗板後，檢測生
物素標記的PD-L1/PD-L2結合量，計算得到抗PD-1抗體對配體PD-L1/PD-L2結合阻斷的IC50值。
用pH 9.6 CB緩衝液(1.59g Na2CO3和2.93g NaHCO3溶於1L蒸餾水)將PD-1-Fc稀釋至1μg/ml，以100μl/孔的體積加於96孔板中，於4℃放置16h-20h。將96孔板中PBS緩衝液吸掉，用PBST(pH7.4 PBS含0.05% tween20)緩衝液洗板1次後，加入120μl/孔PBST/1% milk，室溫孵育1h進行封閉。移去封閉液，用PBST緩衝液洗板1次後，加入90μl用樣品稀釋液(pH7.4 PBS含5%BSA，0.05% Tween20)稀釋至合適濃度的待測抗PD-1抗體，置4℃預孵育1h。以10μl/孔的體積加入10×濃度的生物素標記PD-L1/PD-L2(北京義翹神州生物技術有限公司)(10μg/ml)，在振盪器上振盪、混勻後，置37℃孵育1h。移去反應體系，用PBST洗板6次後，加入100μl/孔用PBST緩衝液1：400稀釋的Streptavidin-Peroxidase Polymer(鏈黴親和素-過氧化物酶聚合物)，室溫振盪孵育50分鐘。用PBST洗板6次後，加入100μl/孔TMB，於室溫孵育5-10min。加入100μl/孔1M H2SO4終止反應。用酶標儀在450nm處讀取吸收值，計算抗PD-1抗體對配體PD-L1/PD-L2結合阻斷的IC50值。數據詳見下表17。
表17.本公開的抗PD-1抗體和PD-1結合及對配體PD-L1/PD-L2結合阻斷ELISA
本公開示例性抗PD-1抗體Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA都能夠有效阻斷PD-1與PD-L1/PD-L2的結合，其阻斷活性與陽性對照抗體相似。
測試例2.示例性抗體的配體阻斷試驗
研究抗體對PD-1與PD-L1結合的阻斷作用。實驗過程簡單描述如下：
消化CHOK1/PD-L1細胞(Promega)，按照100μL/孔加入到96孔板中，放置於37℃，5%CO2培養箱培養24小時。使用PBS稀釋對照品和樣品至所需濃度。計數Jurkat/PD-1細胞(穩轉PD-1的Jurkat細胞)，按一定比例種CHOK1/PD-L1細胞的細胞培養板中(90μL/孔)同時加入10μL/孔加入稀釋後的抗體(抗體：Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA，陽性對照抗體：H005-1)，陰性對照IgG4蛋白，抗體梯度稀釋濃度為0.3mg/ml、3mg/ml、30mg/ml)，置於37℃，5%CO2培養箱培養5小時。取出細胞培養板，置於室溫放置5分鐘，然後每孔加入50μl Bio-GloTM Reagent，室溫孵育5分鐘，讀板。實驗結果見第1圖。
結果表明，本公開中示例性的抗PD-1抗體Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA能夠有效阻斷PD-1與PD-L1的結合。
測試例3.示例性抗體的BIAcore抗體親和力實驗
用Protein A生物傳感芯片(Cat.# 29127556，GE)親和捕獲IgG，human PD-1抗原(Cat.# 10377H08H，Sino Biological)、Cyno PD-1抗原(購自Sino Biological)流過芯片表面，Biacore T200儀器實時檢測PD-1抗體和抗原PD-1反應信號獲得結合和解離曲線。在每個實驗循環解離完成後，用10mM Glycine-HCl pH1.5的緩衝液將生物傳感芯片洗淨再生。實驗緩衝體系為1×HBS-EP緩衝溶液(Cat# BR-1001-88，GE)。實驗結束後用GE Biacore T200 Evaluation version 3.0軟體以(1：1)Langmuir模型擬合數據，得出親和力數值，結果見表18。
表18.抗PD-1抗體與人PD-1和猴PD-1的親和力
結果顯示，本公開示例性的抗PD-1抗體Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA均能夠與人PD-1和猴PD-1結合。
測試例4.抗體在PBMC-T淋巴細胞激活實驗中對細胞IFNγ的分泌作用
為了研究抗PD-1抗體對人原代T淋巴細胞功能的影響，收集和純化人外周血單核細胞(PBMC)，採用結核菌素(TB)體外刺激5天後，檢測細胞因子IFNγ分泌水平。實驗過程簡單描述如下：
新鮮血液利用Ficoll-Hypaque(17-5442-02，GE)，密度梯度離心(Stem Cell Technologies)得到PBMC，於RPMI 1640(SH30809.01，GE)培養基中培養，該培養基中添加10%(v/v)FBS(10099-141，Gibco)，37℃，5% CO2條件下培養。
新鮮分離純化的PBMC以RPMI 1640培養基調整密度為2×106個/ml，20mL細胞懸液中加入40μl結核菌素(97-8800，Synbiotics)，37℃，5% CO2培養箱培養5天。第5天，收集上述培養的細胞離心，重新懸浮至新鮮的RPMI 1640培養基中，調整密度為1.1×106個/ml，接種至96孔細胞培養板，每孔90μl。同時加入梯度稀釋的抗體樣品(包括本公開的抗體：Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA，陽性對照抗體H005-1，和陰性對照IgG4蛋白，抗體梯度稀釋濃度為0.3mg/ml、3mg/ml、30mg/ml)，用PBS(B320，上海源培生物科技股份有限公司)稀釋，每孔10μl。細胞培養板置於37℃，5% CO2培養箱孵育3天。取出細胞培養板，離心(4000rpm，10min)收集細胞培養上清，採用ELISA的方法(人IFN-γ檢測試劑盒(EHC102g.96，欣博盛)，檢測IFN-γ的水平。具體操作參考試劑說明書。
試驗結果見第2圖，結果表明本公開的抗PD-1抗體Hu23-11.IgG4AA、Hu32a-85.IgG4AA、和Hu33-6.IgG4AA均能有效激活IFN-γ的分泌。
測試例5.抗PD-1抗體在轉基因PD-1小鼠結腸癌模型MC38中的作用
將MC38細胞5×10*5細胞/小鼠/100μl接種於90隻hPD-1 TG小鼠(百奧賽圖)右肋部皮下，10天後去除腫瘤體積過大過小的動物，按平均腫瘤體積約120mm^3將小鼠隨機分為：空白對照Vehicle(PBS)、陽性對照H005-1 3mpk、Hu32a-85.IgG4AA 1mpk、Hu32a-85.IgG4AA 3mpk、Hu23-11.IgG4AA 1mpk、Hu23-11.IgG4AA 3mpk、Hu33-6.IgG4AA 3mpk共7組，每組8隻。Day0(第0天)起每週三次腹腔注射各組抗體，第一週給藥結束後發現腫瘤被明顯抑制，第二、三週調整給藥頻率為每週一次，共給藥5次。每週2次監測腫瘤體積、動物重量並記錄數據。當腫瘤體積超過2000mm3或多數腫瘤出現破潰或體重下降20%時，將荷瘤動物進行安樂死作為實驗終點。
腫瘤體積(TV)=1/2×L長×L短 2
腫瘤增殖率(T/C%)=(T-T0)/(C-C0)×100%
抑瘤率(TGI%)=1-T/C %
其中，T、T0分別表示抗體給藥組試驗結束和試驗開始時的腫瘤體積，C、C0分別表示空白對照組試驗結束和試驗開始時的腫瘤體積。
試驗結果見表19和第3圖，試驗結果表明，與空白對照相比，本公開的抗體均能顯著抑制小鼠結腸癌MC38嫁接瘤的生長，其中抑瘤率最高的是Hu32a-85.IgG4AA-3mpk組，末次測量時抑瘤率為77.64%。當給藥頻率為一週三次給藥3次，在第七天檢測時，結果顯示本公開的抗體的抑瘤率均明顯優於陽性對照抗體H005-1；其後給藥頻率降為一週一次，給藥2次後(Day21)，本公開的抗體間藥效逐漸拉開差距，且表現出劑量依賴性，其中Hu32a-85.IgG4AA明顯優於同等劑量的H005-1(p<
0.05)。而且荷瘤小鼠對抗PD-1抗體均能很好耐受，在整個給藥過程中體重平穩上升，無明顯藥物致體重減輕等症狀發生。
表19.抗PD-1抗體對小鼠結腸癌MC38的抑瘤率影響(mm3)
測試例6.抗PD-1抗體在轉基因PD-1小鼠結腸癌模型MC38中的作用
轉基因PD-1小鼠來源於購買的轉基因PD-1小鼠(ISIS INNOVATION LIMITED，University Offices，Wellington Square，Oxford OX1 2JD，England)在Cephrim Biosciences，Inc.培育的第五代小鼠。將MC38細胞以5x105個/100μl/隻接種到hPD-1轉基因小鼠(雌雄各半)右肋後部皮下，待小鼠平均腫瘤體積達到80-100mm3之間時，去除體重、腫瘤過大和過小的動物，按照腫瘤體積大小將荷瘤小鼠隨機分為5組(每組8隻)：陰性對照hIgG control 30mpk、H005-1 10mpk、H005-1 30mpk、Hu33-6.IgG4AA 10mpk、Hu33-6.IgG4AA 30mpk。分組給藥日期設定為Day 0。分組後腹腔給予各藥物，給藥週期22天，每兩天給藥一次，共11次。每週測2次瘤體積，稱體重，記錄數據。各組動物體重、腫瘤體積均用平均值±標準差(Mean±SEM)表示，並用Graphpad Prism 5和Excel軟體作圖，使用student t test統計分析。
腫瘤體積(TV)=0.5236×L長×L短 2
腫瘤增殖率T/C%=(T-T0)/(C-C0)×100%
抑瘤率%TGI=1-T/C %
其中，T、T0分別表示抗體給藥組試驗結束和試驗開始時的腫瘤體積，C、C0分別表示空白對照組試驗結束和試驗開始時的腫瘤體積。
試驗結果見表20和第4圖所示，試驗結果表明，與對照組相比，本公開的抗體能顯著抑制小鼠結腸癌MC38嫁接瘤的生長，其中抑瘤率最高的是Hu33-6.IgG4AA 30mpk組，第20天測量時抑瘤率為80.4%。在低劑量組(10mpk)，Hu33-6.IgG4AA-10mpk的藥效好於陽性對照H005-1-10mpk。
表20.抗PD-1抗體對小鼠結腸癌MC38腫瘤體積影響
測試例7.抗PD-1抗體食蟹猴的藥物代謝動力學試驗
實驗用食蟹獼猴，雄性，6隻，2-5歲，2-5公斤。購於於廣東前沿生物科技有限公司，許可證號：SCXK(粵)2015-0037，動物合格證號：44613900000219。
飼養環境：室溫控制在18℃~26℃，相對濕度在40%~70%，光照12小時明暗交替。除了需要禁食的情況外，無限量獲取飼料和水。
動物給藥前稱重，體重介於2.81~3.52kg之間。使用注射泵於前肢或後肢皮下靜脈輸注給藥，各組給藥劑量均為1mg/kg(1mpk)，單次靜脈注射給藥，給藥速度0.1mL/kg/min，給藥時間約30min。動物於給藥前，靜脈輸注開始後5min、0.25h、0.5h(給藥結束即刻)，1h、2h、4h、8h，1d、2d、3d、4d、5d、7d、10d、13d、14d、21d和28d，於後肢靜脈採集全血，分離血清。其中給藥前，靜脈輸注開始後14d，21d，28d採集全血約2mL，其餘採血點採集全血約1mL。用ELISA檢測血清中的血藥濃度，進行PK分析，結果見表21。
表21.人源化抗PD1抗體食蟹獼猴藥物代謝動力學
結果顯示，Hu23-11.IgG4AA和Hu33-6.IgG4AA的藥物代謝動力學活性良好。
雖然為了清楚的理解，已經借助於圖式和實例詳細描述了上述發明，但是描述和實例不應當解釋為限制本公開的範圍。本文中引用的所有專利和科學文獻的公開內容藉由引用完整地清楚結合。
<110> 江蘇恆瑞醫藥股份有限公司上海恆瑞醫藥有限公司
<120> 抗PD-1抗體、其抗原結合片段及醫藥用途
<130> 2019
<150> CN 201910108743.3 CN 202010052351.2
<151> 2019-02-03 2020-01-17
<160> 82
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<212> PRT
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<221> 結構域
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<221> 結構域
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<221> 結構域
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<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> Hu23VL2(N33D)序列
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> Hu23VL2(G34A)序列
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<220>
<221> 結構域
<223> Hu23VL2(G34V)序列
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
<222> (4)..(4)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> Hu32和Hu23抗體的HCDR2通式序列
<220>
<221> 結構域
<222> (2)..(2)
<223> Xaa選自Phe或Ile
<220>
<221> 結構域
<222> (9)..(9)
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<220>
<221> 結構域
<222> (17)..(17)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
<222> (2)..(2)
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<220>
<221> 結構域
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<223> Xaa選自Phe或空缺
<220>
<221> 結構域
<222> (4)..(4)
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<220>
<221> 結構域
<222> (5)..(5)
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<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
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<223> Xaa選自Ser或空缺
<220>
<221> 結構域
<222> (9)..(9)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> Hu32和Hu23抗體的LCDR1通式序列
<220>
<221> 結構域
<222> (6)..(6)
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<221> 結構域
<222> (10)..(10)
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<221> 結構域
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<211> 9
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
<223> Hu32和Hu23抗體的LCDR3通式序列
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
<222> (26)..(26)
<223> Xaa選自Gly或Asp
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<221> 結構域
<222> (27)..(27)
<223> Xaa選自Gly、Phe或Tyr
<220>
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<220>
<221> 結構域
<222> (34)..(34)
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<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
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<220>
<221> 結構域
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<221> 結構域
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<221> 結構域
<222> (97)..(97)
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<220>
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Claims (24)
- 一種抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，該重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且該輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR2和LCDR3，和序列如SEQ ID NO：11、47、48、49、50、51或52所示的LCDR1。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中，該重鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，且該輕鏈可變區包含序列分別如SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
- 如申請專利範圍第1項中所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段是鼠源抗體或其抗原結合片段、嵌合抗體或其抗原結合片段、全人抗體或其抗原結合片段，或人源化抗體或其抗原結合片段。
- 如申請專利範圍第3項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體為人源化抗體，該人源化抗體包含源自人抗體的框架區或其框架區變體，其中：該框架區變體包含輕鏈可變區中包含2G胺基酸回復突變，和/或重鏈可變區中胺基酸回復突變包含：重鏈可變區中包含27Y和69L的胺基酸回復突變；或 重鏈可變區中包含27Y、48I、67T、69L和82F的胺基酸回復突變；或重鏈可變區中包含27Y、48I、67T、69L、82F和93T的胺基酸回復突變；其中所述的胺基酸位點依照kabat規則編號確定。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈可變區和輕鏈可變區組合選自：重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：4所示，和輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：5所示；或重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：27、30、31或32所示，和輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：28、29、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63或64所示。
- 如申請專利範圍第5項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體重鏈可變區和輕鏈可變區組合選自：重鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：27所示，和輕鏈可變區，其序列如SEQ ID NO：55所示。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含抗體恆定區。
- 如申請專利範圍第7項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體恆定區的重鏈恆定區選自人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恆定區及其常規變體，該抗體恆定區的輕鏈恆定區選自人抗體κ和λ鏈恆定區及其常規變體。
- 如申請專利範圍第8項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含序列如SEQ ID NO：72或79所示的重鏈恆定區和序列如SEQ ID NO：73所示的輕鏈恆定區。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體包含：如SEQ ID NO：75所示的輕鏈和如SEQ ID NO：74或80所示的重鏈。
- 如申請專利範圍第10項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗PD-1抗體包含：序列如SEQ ID：74所示的重鏈和序列如SEQ ID：75所示的輕鏈。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段選自Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈抗體(scFv)、二聚化的V區(雙抗體)和二硫鍵穩定化的V區(dsFv)。
- 如申請專利範圍第1項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，其中該抗體是雙特異性抗體、多特異抗體或抗體融合蛋白。
- 一種醫藥組成物，其含有：治療有效量的申請專利範圍第1至13項中任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑。
- 一種核酸分子，其編碼申請專利範圍第1至13項中任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段。
- 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第15項所述的核酸分子。
- 一種用於免疫檢測或測定PD-1的方法，所述方法包括使用申請專利範圍第1至13項中任一項的抗PD-1抗體或其抗原結合片段的步驟。
- 一種試劑盒，其包含如申請專利範圍第1至13項中任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段。
- 一種如申請專利範圍第1至13項中任一項所述的抗PD-1抗體或其抗原結合片段，或申請專利範圍第14項所述的醫藥組成物，或申請專利範圍第15項所述的核酸分子的用途，其用於製備治療與PD-1相關的疾病的藥物。
- 如申請專利範圍第19項所述的用途，其中該疾病為腫瘤。
- 如申請專利範圍第19項所述的用途，其中該疾病選自：頭和頸鱗狀細胞癌、頭和頸癌、腦癌、神經膠質瘤、多形性成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、中樞神經系統癌、神經內分泌腫瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲狀腺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝細胞瘤、肝細胞癌、肝膽癌、胰腺癌、胃癌、胃腸道癌、腸癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎癌、透明細胞腎細胞癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮膚癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、軟骨肉瘤、骨髓瘤、多發性骨髓瘤、骨髓異常增生綜合症、骨髓增生性腫瘤、鱗狀細胞癌、尤因氏肉瘤、全身性輕鏈澱粉樣變性和梅克爾細胞癌。
- 如申請專利範圍第21項所述的用途，其中該淋巴瘤選自：何傑金淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤、彌漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、原發性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤和淋巴漿細胞性淋巴瘤。
- 如申請專利範圍第21項所述的用途，其中該肺癌選自：非小細胞肺癌和小細胞肺癌，所述白血病選自：慢性髓細胞樣白血病、急性髓細胞樣白血病、淋巴細胞白血病、成淋巴細胞性白血病、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病和髓樣細胞白血病。
- 如申請專利範圍第21項所述的用途，其中該疾病選自：PD-L1陽性的黑色素瘤、肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、膀胱癌和腸癌和結腸癌。
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| WO2024058289A1 (ko) * | 2022-09-15 | 2024-03-21 | 주식회사 와이바이오로직스 | Pd-1에 특이적으로 결합하는 항체를 유효성분으로 포함하는 신경내분비 신생물의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104250302A (zh) * | 2013-06-26 | 2014-12-31 | 上海君实生物医药科技有限公司 | 抗pd-1抗体及其应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CA2392477A1 (en) | 1999-11-30 | 2001-06-07 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | B7-h1, a novel immunoregulatory molecule |
| US6803192B1 (en) | 1999-11-30 | 2004-10-12 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | B7-H1, a novel immunoregulatory molecule |
| US8008449B2 (en) | 2005-05-09 | 2011-08-30 | Medarex, Inc. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
| AU2011203119C1 (en) * | 2005-05-09 | 2018-06-14 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
| CA2738252C (en) | 2008-09-26 | 2018-05-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Human anti-pd-1, pd-l1, and pd-l2 antibodies and uses therefor |
| KR101050829B1 (ko) | 2008-10-02 | 2011-07-20 | 서울대학교산학협력단 | 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제 |
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