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TWI736523B - 新穎聚醣結合物及其使用方法 - Google Patents

新穎聚醣結合物及其使用方法 Download PDF

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TWI736523B
TWI736523B TW104127439A TW104127439A TWI736523B TW I736523 B TWI736523 B TW I736523B TW 104127439 A TW104127439 A TW 104127439A TW 104127439 A TW104127439 A TW 104127439A TW I736523 B TWI736523 B TW I736523B
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翁啟惠
吳宗益
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中央研究院
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Abstract

本發明係關於靶向SSEA3/SSEA4/GloboH相關抗原決定基(天然及經修飾)之疫苗、抗體及/或免疫原性結合物組合物，其誘發抗體及/或結合片段產生用於調節球系列鞘醣脂合成。本發明係關於可調節球系列鞘醣脂合成之方法及組合物。特定言之，本發明係關於可調節生物合成路徑中之球系列鞘醣脂SSEA3/SSEA4/GloboH合成之醣酶抑制劑化合物及其組合物及使用方法；特定言之，醣酶抑制劑靶向球系列合成路徑中之α-1,4-半乳醣基轉移酶；β-1,4-N-乙醯半乳醣基轉移酶-I；或β-1,3-半乳醣基轉移酶-V。此外，本發明亦關於使用本文所述之組合物治療或偵測過度增生性疾病及/或病狀之方法。

Description

新穎聚醣結合物及其使用方法
本發明係關於可調節球系列鞘醣脂合成之方法及組合物。特定言之，本發明係關於可調節生物合成路徑中之球系列鞘醣脂合成之醣酶抑制劑化合物及其組合物及使用方法；特定言之，醣酶抑制劑靶向球系列合成路徑中之α-1,4-半乳醣基轉移酶；β-1,4-N-乙醯半乳醣基轉移酶-I；或β-1,3-半乳醣基轉移酶-V。另外，本發明亦關於靶向SSEA3/SSEA4/GloboH相關抗原決定基(天然及經修飾)之疫苗、抗體及/或免疫原性結合物組合物，其誘發抗體及/或結合片段產生用於調節球系列鞘醣脂合成。此外，本發明亦關於使用本文所述之組合物治療或偵測過度增生性疾病及/或病狀之方法。
碳水化合物抗原GloboH、階段特異性胚抗原-3(SSEA3)及階段特異性胚抗原-4(SSEA4)在結構或功能上彼此密切相關。GloboH、SSEA3及SSEA4為球系列鞘醣脂，其中SSEA3為GloboH之非海藻糖基化五醣前驅物結構，SSEA4為唾液酸α2-3連接至SSEA3半乳糖之非還原端的唾液酸化SSEA3。
首先鑑別階段特異性胚抗原-3(SSEA3)且根據經4至8個細胞期小鼠胚免疫的大鼠中所產生的IgM單株抗體之反應性來定義。此單株抗體與所有小鼠之植入前胚(自卵母細胞直至早期囊胚期)均反應，其中 其在植入之後的原始內胚層中之表現受到更多限制。SSEA3抗原性決定子經測定為存在於醣脂及醣蛋白上之碳水化合物；在人類畸胎癌細胞及人類紅血球上亦發現SSEA3抗原性決定子。在一組自2102Ep人類畸胎癌細胞株中分離之結構中，SSEA3抗體對於Galβ(1-3)GalNAcβ(1-3)Galα(1-4)Galβ(1-4)Glcβ(1)Cer具有最高親和力。此結構亦稱為Gb5(半乳糖基-紅血球糖苷脂或球狀細胞五糖神經醯胺)。
當β-1,3-半乳糖苷基轉移酶V(β3-GalT-V)使半乳糖轉移至紅血球糖苷脂之N-乙醯半乳糖胺上而形成Gb5或半乳糖基-紅血球糖苷脂時，SSEA3之合成發生。已確定造血幹細胞或間質幹細胞不表現SSEA3。基於原發肺癌患者的不朽化淋巴結淋巴細胞，產生融合瘤且選擇抗體分泌純系；接著由此等純系中之兩者(J309及D579)產生識別SSEA3抗原性決定子的單株抗體。抗體識別若干腫瘤細胞株(包括肺癌及乳癌細胞株，以及畸胎癌細胞株)上的SSEA3；在免疫黏附性分析中，與J309及D579抗體相同，嚙齒動物單株SSEA3抗體(亦稱為MC631)針對該等細胞株發生反應。亦已在睪丸生殖細胞腫瘤以及乳癌及BCSC(乳癌幹細胞)上發現SSEA3。
Chang等人使用組織微陣列來檢視SSEA3在正常組織上的表現，原因在於其在癌症外的位置及發展基本上未知(Proc Natl Acad Sci U S A.2008 Aug 19；105(33)：11667-72,Expression of GloboH and SSEA3 in breast cancer stem cells and the involvement of fucosyl transferases 1 and 2 in GloboH synthesis)。該研究組發現SSEA3表現於結腸、食道、小腸、腎臟、前列腺、直腸、皮膚、睪丸、胸腺及子宮頸的正常上皮上。表現僅位於上皮細胞之頂表面上或位於細胞質中，此等位置被認為是免疫系統受限制或不可接近之位點。在對小鼠使用KLH與GloboH結合之單價疫苗的實驗中，僅針對GloboH抗原發生抗體反應。當α-GalCer作為佐劑添加時，總體抗體產生量增加且小鼠產生針 對GloboH、SSEA3與SSEA4抗原結構的多株抗體，在缺乏佐劑的情況下不能產生接種疫苗。此結果顯示，SSEA3、GloboH及SSEA4可有望成為癌症疫苗的標靶且可同時成為標靶。
然而，大部分的腫瘤相關碳水化合物抗原具有不良的免疫原性且已經開發出多種方法來增強基於碳水化合物之疫苗的免疫反應，包括與載劑蛋白質結合、聯合利用非天然糖苷鍵聯的免疫佐劑投與、叢集抗原、單分子多價疫苗或雜聚醣多價疫苗。使用此等策略，設計出可誘發針對標靶聚醣結構之顯著免疫反應的幾種基於碳水化合物之疫苗用於癌症療法且進入臨床試驗。其中，在患病時間之間及總體存活率之間，Theratope及GMK聯合佐劑QS-21的臨床試驗未能產生統計顯著性差異。這兩種疫苗很可能不會在患者中誘發穩定的T細胞依賴性免疫反應。具體而言，Theratope及GMK在患者中誘導高含量的IgM，但不會誘導較強的IgG免疫反應，此為基於碳水化合物之疫苗開發中的主要問題。
先前研究顯示，對碳水化合物抗原結構(MCAS)的修飾可有效地誘發高水準的免疫反應。舉例而言，在B群腦膜炎球菌之莢膜多醣之修飾研究中，α-(2,8)連接型聚唾液酸(PSA)之N-乙醯基經N-丙醯基置換且此修飾誘發的高抗體反應不僅識別N-丙醯基聚唾液酸，而且識別天然N-乙醯基聚唾液酸。為了產生針對修飾形式及天然形式的高抗體效價，對STn及GM3抗原應用類似方法。結果表明，聚醣抗原上的N-苯乙基、N-氟乙醯基或N-二氟乙醯基修飾可改良免疫原性。此外，舒爾茨(Schultz)研究組報導，將p-硝基苯丙胺酸併入腫瘤壞死因子-α(TNF-α)中會破壞免疫耐受性且針對TNF-α誘導更多的抗體反應。使用聚醣作為抗原雖然已達成一些進展，但大部分情況為二醣(STn)、三醣(GM3)及聚唾液酸(PSA)之氮基修飾；而一些情況係基於氟化MUC1醣肽抗原。
本發明係基於以下發現：具有本文所揭示之某些基團的階段特異性胚抗原(SSEA3及SSEA4)之修飾誘發可分別特異性地識別SSEA3及SSEA4的穩定IgG抗體反應。包含此類非天然聚醣部分之免疫原性組合物所誘導的抗體能夠介導針對腫瘤細胞的補體依賴性細胞之細胞毒性。
因此，本發明展示用於治療癌症之針對SSEA3及/或SSEA4之抗體的設計。本發明亦展示由經修飾之碳水化合物抗原(SSEA3及SSEA4)組成的新穎化合物、包含此類化合物之聚醣結合物，及其免疫原性組合物及疫苗。
本發明亦提供使用本文所述之合成聚醣結合物治療或減輕過度增生性疾病(諸如癌症)的方法。
另外，本發明亦關於靶向SSEA3/SSEA4/GloboH相關抗原決定基(天然及經修飾)的疫苗及/或免疫原性結合物組合物，其可誘發抗體及/或結合片段產生用於調節球系列鞘醣脂合成。此外，本發明亦關於使用本文所述之組合物治療或偵測過度增生性疾病及/或病狀的方法。
因此，本發明展示用於治療癌症之針對SSEA3之抗體的設計。本發明亦展示由經修飾之碳水化合物抗原(SSEA3、SSEA4)組成的新穎化合物、包含此類化合物之聚醣結合物，及其免疫原性組合物及疫苗。
在一個態樣中，本發明提供式(I)化合物：
Figure 104127439-A0202-12-0004-3
 或其鹽，其中X1、R1、R2、R3、R4、R5、R6及L如本文所述。在某些實施例中，式(I)化合物適用於製備供治療癌症用的免疫原性組合物。
在另一態樣中，本發明提供式(II)化合物：
Figure 104127439-A0202-12-0005-4
 或其鹽，其中X1、R1、R2、R3、R8、R9、R10、R11及RN如本文所述。在某些實施例中，式(II)化合物適用於製備供治療癌症用的免疫原性組合物。
在另一態樣中，本發明提供一種免疫原性組合物，包含(a)包括載劑及一或多種聚醣的聚醣結合物，及視情況存在之(b)佐劑，其中：一或多種聚醣中之每一者經由連接子與載劑結合，其具有式(III)或(IV)：
Figure 104127439-A0202-12-0005-5
Figure 104127439-A0202-12-0005-6
其中X1、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、L及RN如本文所述。
在某些態樣中，預期含有三種聚醣(SSEA3、SSEA4及GloboH)及其類似物之任一者或多者之任何比率之組合的任何疫苗構築體可連接至載劑。
Figure 104127439-A0202-12-0006-7
其中n可為整數1至10；其中聚醣可選自由式I、II、III及IV組成之群；其中若n為2或大於2，則各聚醣可與天冬胺醯基肽上的另一聚醣或天冬胺醯基肽上的相異聚醣相同。
在一些實施例中，聚醣可選自由SSEA3、SSEA4及GloboH組成之群。
在一些實施例中，例示性多價構築體可為：
Figure 104127439-A0202-12-0007-8
Figure 104127439-A0202-12-0008-9
Figure 104127439-A0202-12-0009-10
其中各聚醣部分上的R1、R2、R3、R4、R5、R6及L可為相同或不同的。
在某些實施例中，本發明的免疫原性組合物包含佐劑。適用於本發明的例示性佐劑如本文所述。
在某些實施例中，免疫原性組合物能夠在個體中誘發針對癌細胞的免疫反應。在某些實施例中，癌細胞選自由以下組成之群：腦癌細胞、肺癌細胞、乳癌細胞、口腔癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、肝癌細胞、膽管癌細胞、胰臟癌細胞、結腸癌細胞、腎臟癌細胞、骨 癌細胞、皮膚癌細胞、子宮頸癌細胞、卵巢癌細胞及前列腺癌細胞。在某些實施例中，免疫反應包括特異性結合至一或多種選自由GloboH、SSEA3及SSEA4組成之群之抗原的抗體的產生。在某些實施例中，開發出靶向癌細胞或癌症幹細胞表面上所表現之GloboH、SSEA3及SSEA4中之一或多者且引發補體依賴性細胞毒性及/或抗體依賴細胞介導細胞毒性殺死此等細胞的抗體。在某些實施例中，抗體主要包括IgG抗體。在某些實施例中，本文所提供之免疫原性組合物主要誘導IgG1、IgG2b、IgG2c及IgG3。
另外，本發明展示針對本文所述之免疫原性組合物所產生的單株抗體及結合片段。
在一個實施例中，抗體為人類抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體。
在一個實施例中，抗體特異性靶向SSEA4、SSEA3或GloboH中之一或多者。
在一個實施例中，抗體特異性靶向SSEA3。
在一個實施例中，抗體特異性靶向SSEA4。
在一個實施例中，抗體為具有雙觸角聚醣的均質抗體，該雙觸角聚醣經兩個唾液酸以α-2,6-鍵聯方式封端。
在一個態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含有效量之特異性靶向SSEA4、SSEA3或GloboH中之一或多者的抗體或抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。
在一個實施例中，醫藥組合物包含各自獨立地靶向SSEA4、SSEA3及/或GloboH聚醣中之一或多者的抗體及/或其結合片段之組合。
在一個實施例中，醫藥組合物適用於治療癌症、感染性疾病及/或發炎性疾病。
在一個實施例中，醫藥組合物包含具有通用雙觸角N-聚醣的抗體或其結合片段，該通用雙觸角N-聚醣經唾液酸以α-2,6-鍵聯方式封端。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所述之免疫原性組合物及醫藥學上可接受之賦形劑的癌症疫苗。
在另一態樣中，本發明提供治療個體之癌症及/或降低個體之癌症風險的方法，包含向需要其之個體投與治療有效量之如本文所述的免疫原性組合物或癌症疫苗。
治療可減小腫瘤尺寸、消除惡性細胞、預防癌轉移、預防復發、減少或殺死播散性癌症、延長存活期及/或延長腫瘤癌症進展之時間。
在一些實施例中，治療進一步包含在投與本文所述之免疫原性組合物或癌症疫苗之前、期間或之後向該個體投與另一種療法。在一些實施例中，另一種療法為用化學治療劑治療。在一些實施例中，另一種療法為輻射療法。
本發明之另一態樣展示一種用針對癌症的疫苗接種哺乳動物的方法，包含向哺乳動物投與藥理學上有效量之如本文所述的免疫原性組合物或癌症疫苗。
在一些實施例中，哺乳動物為人類。在一些實施例中，皮下投與本文所述之免疫原性組合物或癌症疫苗。
癌症之實例包括(但不限於)腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎臟癌、子宮頸癌、卵巢癌及前列腺癌。在一些實施例中，癌症為腦癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌或胰臟癌。
在另一態樣中，本發明提供合成如本文所述之本發明化合物的方法。
在又一態樣中，本發明展示製備如本文所述之免疫原性組合物或癌症疫苗的方法。
本發明之某些實施例的細節闡述於本文中。本發明的其他特徵、目標及優點根據實施方式、圖式、實例及申請專利範圍將顯而易見。
圖1：球系列鞘醣脂之生物合成路徑。
圖2：自不同抗原決定基比率之SSEA4-CRM197或SSEA4-Gc-CRM197免疫接種的小鼠中所收集的經誘導GloboH-IgG抗體。
圖3A：原生SSEA4以及所有八種SSEA4類似物當與Gal-C34組合使用時可誘發針對SSEA4的IgG抗體。
圖3B：原生SSEA4以及所有八種SSEA4類似物當與Gal-C34組合使用時可誘發針對SSEA4的IgM抗體。
圖4A：原生SSEA4以及所有八種SSEA4類似物當與Glc-C34組合使用時可誘發針對SSEA4的IgG抗體。
圖4B：原生SSEA4以及所有八種SSEA4類似物當與Glc-C34組合使用時可誘發針對SSEA4的IgM抗體。
圖5：聚醣-蛋白質結合方法影響免疫反應。
本發明係基於如下驚人發現：階段特異性胚抗原(SSEA3及SSEA4)經某些基團修飾可誘發分別特異性識別SSEA3及SSEA4的穩定IgG抗體反應。
在一些實例中，SSEA3的修飾包含SSEA3之葡萄糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA3的修飾包含非還 原端半乳糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA4的修飾包含SSEA4之葡萄糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA4的修飾包含唾液酸殘基之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。
本文描述還原端及/或非還原端具有修飾的SSEA3類似物及SSEA4類似物。相較於原生SSEA3及SSEA4，此類SSEA3及SSEA4類似物可誘發更強的免疫反應(例如誘導針對SSEA3及/或SSEA4的IgG抗體)。包含此類非天然聚醣部分之免疫原性組合物所誘導的抗體能夠介導針對腫瘤細胞的補體依賴性細胞之細胞毒性。
化學定義
下文更詳細地描述特定官能基及化學術語之定義。化學元素係根據Handbook of Chemistry and Physics第75版內封面之元素週期表(CAS版)來鑑別，且特定官能基大體上如其中所述來定義。另外，有機化學之一般原理以及特定官能性部分及反應性描述於Thomas Sorrell,Organic Chemistry,University Science Books,Sausalito,1999；Smith及March,March's Advanced Organic Chemistry，第5版，John Wiley & Sons,Inc.,New York,2001；Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers,Inc.,New York,1989：及Carruthers,Some Modern Methods of Organic Synthesis，第3版，Cambridge University Press,Cambridge,1987。此外，例示性聚醣及抗體方法描述於Wong等人的US20100136042、US20090317837及US20140051127中，其每一者之揭示內容以引用的方式併入本文中。
本文所述之化合物可包含一或多個不對稱中心，且因此可以各種異構體形式(例如對映異構體及/或非對映異構體)存在。舉例而言，本文所述之化合物可呈個別對映異構體、非對映異構體或幾何異構體形式，或可呈立體異構體之混合物形式，包括外消旋混合物及其中一 或多種立體異構體增濃之混合物。異構體可利用熟習此項技術者已知之方法(包括對掌性高壓液相層析(HPLC)及對掌性鹽的形成及結晶)而自混合物中分離；或可藉由不對稱合成來製備較佳異構體。參見例如Jacques等人，Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen等人，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel,Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；及Wilen,Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions第268頁(E.L.Eliel編，Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN 1972)。本發明另外涵蓋呈實質上不含其他異構體之個別異構體形式及替代地呈各種異構體之混合物形式的本文所述化合物。
當列舉值範圍時，希望涵蓋此範圍內的每個值及子範圍。舉例而言，「C1-6」意欲涵蓋C1、C2、C3、C4、C5、C6、C1-6、C1-5、C1-4、C1-3、C1-2、C2-6、C2-5、C2-4、C2-3、C3-6、C3-5、C3-4、C4-6、C4-5及C5-6。
「烷基」係指具有1至20個碳原子的直鏈或分支鏈飽和烴基(「C1-20烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至10個碳原子(「C1-10烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至9個碳原子(「C1-9烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至8個碳原子(「C1-8烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至7個碳原子(「C1-7烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至6個碳原子(「C1-6烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至5個碳原子(「C1-5烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至4個碳原子(「C1-4烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至3個碳原子(「C1-3烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1至2個碳原子(「C1-2烷基」)。在一些實施例中，烷基具有1個碳原子(「C1烷基」)。在一些實施例中，烷基具有2至6個碳原子(「C2-6烷基」)。C1-6烷基之實例包括甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、異丙基 (C3)、正丁基(C4)、第三丁基(C4)、第二丁基(C4)、異丁基(C4)、正戊基(C5)、3-戊基(C5)、戊基(C5)、新戊基(C5)、3-甲基-2-丁基(C5)、第三戊基(C5)及正己基(C6)。烷基之其他實例包括正庚基(C7)、正辛基(C8)及其類似基團。除非另外說明，否則烷基之各實例獨立地視情況經取代，亦即未經取代(「未經取代之烷基」)或經一或多個取代基取代(「經取代之烷基」)。在某些實施例中，烷基為未經取代之C1-10烷基(例如-CH3)。在某些實施例中，烷基為經取代之C1-10烷基。
「烯基」係指具有2至20個碳原子、一或多個碳-碳雙鍵且無參鍵的直鏈或分支鏈烴基(「C2-20烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至10個碳原子(「C2-10烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至9個碳原子(「C2-9烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至8個碳原子(「C2-8烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至7個碳原子(「C2-7烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至6個碳原子(「C2-6烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至5個碳原子(「C2-5烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至4個碳原子(「C2-4烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2至3個碳原子(「C2-3烯基」)。在一些實施例中，烯基具有2個碳原子(「C2烯基」)。一或多個碳-碳雙鍵可位於內部(諸如2-丁烯基)或末端(諸如1-丁烯基)。C2-4烯基之實例包括乙烯基(C2)、l-丙烯基(C3)、2-丙烯基(C3)、1-丁烯基(C4)、2-丁烯基(C4)、丁二烯基(C4)及其類似基團。C2-6烯基之實例包括前述C2-4烯基以及戊烯基(C5)、戊二烯基(C5)、己烯基(C6)及其類似基團。烯基之其他實例包括庚烯基(C7)、辛烯基(C8)、辛三烯基(C8)及其類似基團。除非另外說明，否則烯基之各實例獨立地視情況經取代，亦即，未經取代(「未經取代之烯基」)或經一或多個取代基取代(「經取代之烯基」)。在某些實施例中，烯基為未經取代之C2-10烯基。在某些實施例中，烯基為經 取代之C2-10烯基。
「炔基」係指具有2至20個碳原子、一或多個碳-碳參鍵及視情況存在之一或多個雙鍵的直鏈或分支鏈烴基(「C2-20炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至10個碳原子(「C2-10炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至9個碳原子(「C2-9炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至8個碳原子(「C2-8炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至7個碳原子(「C2-7炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至6個碳原子(「C2-6炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至5個碳原子(「C2-5炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至4個碳原子(「C2-4炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2至3個碳原子(「C2-3炔基」)。在一些實施例中，炔基具有2個碳原子(「C2炔基」)。一或多個碳-碳參鍵可位於內部(諸如2-丁炔基)或末端(諸如1-丁炔基)。C2-4炔基之實例包括(但不限於)乙炔基(C2)、1-丙炔基(C3)、2-丙炔基(C3)、1-丁炔基(C4)、2-丁炔基(C4)及其類似基團。C2-6烯基之實例包括前述C2-4炔基以及戊炔基(C5)、己炔基(C6)及其類似基團。炔基之其他實例包括庚炔基(C7)、辛炔基(C8)及其類似基團。除非另外說明，否則炔基之各實例獨立地視情況經取代，亦即未經取代(「未經取代之炔基」)或經一或多個取代基取代(「經取代之炔基」)。在某些實施例中，炔基為未經取代之C2-10炔基。在某些實施例中，炔基為經取代之C2-10炔基。
「雜環基」或「雜環」係指具有環碳原子及1至4個環雜原子的3員至10員非芳環系統之基團，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、硫、硼、磷及矽(「3至10員雜環基」)。在某些實施例中，雜原子獨立地選自氮、硫及氧。在含有一或多個氮原子之雜環基中，價數允許時，連接點可為碳或氮原子。雜環基可為單環(「單環雜環基」)或稠合、橋連或螺環系統，諸如雙環系統(「雙環雜環基」)，且可為飽和或部分不飽和。雜環基雙環系統可在一個或兩個環中包括一或多個雜原 子。「雜環基」亦包括其中如上文所定義之雜環與一或多個碳環基稠合之環系統，其中連接點位於碳環基或雜環上；或其中如上文所定義之雜環與一或多個芳基或雜芳基稠合之環系統，其中連接點位於雜環上，且在此等情況下，環成員數繼續表示雜環系統中之環成員數。除非另外說明，否則雜環基之各實例獨立地視情況經取代，亦即，未經取代(「未經取代之雜環基」)或經一或多個取代基取代(「經取代之雜環基」)。在某些實施例中，雜環基為未經取代之3至10員雜環基。在某些實施例中，雜環基為經取代之3至10員雜環基。
「芳基」係指單環或多環(例如雙環或三環)4n+2芳族環系統(例如環狀陣列中共用6、10或14個π電子)之基團，該芳族環系統中具有6至14個環碳原子及零個雜原子(「C6-14芳基」)。在一些實施例中，芳基具有6個環碳原子(「C6芳基」；例如苯基)。在一些實施例中，芳基具有10個環碳原子(「C10芳基」；例如萘基，諸如1-萘基及2-萘基)。在一些實施例中，芳基具有14個環碳原子(「C14芳基」；例如蒽基)。「芳基」亦包括其中如上文所定義之芳基環與一或多個碳環基或雜環基稠合之環系統，其中連接基團或連接點位於芳基環上，且在此等情況下，碳原子數繼續指示芳基環系統中之碳原子數。除非另外說明，否則芳基之各實例獨立地視情況經取代，亦即未經取代(「未經取代之芳基」)或經一或多個取代基取代(「經取代之芳基」)。在某些實施例中，芳基為未經取代之C6-14芳基。在某些實施例中，芳基為經取代之C6-14芳基。
如本文所定義之作為二價橋接基團的烷基、烯基、炔基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基另外使用後綴-伸基提及，例如伸烷基、伸烯基、伸炔基、伸碳環基、伸雜環基、伸芳基及伸雜芳基。
術語「烷氧基」或「烷基氧基」係指-O-烷基，其中烷基視情況經如本文所定義之烷基取代。烷氧基之實例包括(但不限於)甲氧基、 乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基。
術語「芳氧基」係指-O-芳基，其中芳基視情況經如本文所定義之芳基取代。
如本文所使用，術語「視情況經取代」係指經取代或未經取代之部分。
如本文所定義之烷基、烯基、炔基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基視情況經取代(例如「經取代」或「未經取代」之烷基、「經取代」或「未經取代」之烯基、「經取代」或「未經取代」之炔基、「經取代」或「未經取代」之碳環基、「經取代」或「未經取代」之雜環基、「經取代」或「未經取代」之芳基或「經取代」或「未經取代」之雜芳基)。一般而言，術語「取代」，不論是否位於術語「視情況」之前，均意謂存在於基團上的至少一個氫(例如碳或氮原子)經可允許取代基(例如取代時產生穩定化合物(例如不能自發地經歷轉化(諸如重排、環化、消除或其他反應)的化合物)的取代基)置換。除非另外指明，否則「經取代」之基團在該基團之一或多個可取代位置具有取代基，且當任何既定結構中之一個以上位置經取代時，取代基在各位置相同或不同。術語「經取代」預期包括經有機化合物之所有容許取代基、引起穩定化合物形成之本文所述任何取代基取代。本發明涵蓋任何及所有此類組合以便獲得穩定化合物。出於本發明之目的，雜原子(諸如氮)可具有氫取代基及/或滿足雜原子價數且引起穩定部分形成之如本文所描述之任何適合取代基。
「鹵基」或「鹵素」係指氟(氟基、-F)、氯(氯基、-Cl)、溴(溴基、-Br)或碘(碘基、-I)。
如本文所用，「醯基」係指選自由以下組成之群的部分：-C(=O)Raa、-CHO、-CO2Raa、-C(=O)N(Rbb)2、-C(=NRbb)Raa、- C(=NRbb)ORaa、-C(=NRbb)N(Rbb)2、-C(=O)NRbbSO2Raa、-C(=S)N(Rbb)2、-C(=O)SRaa及-C(=S)SRaa，其中Raa及Rbb如本文所定義。
價數允許時，氮原子可經取代或未經取代，且包括一級、二級、三級及四級氮原子。例示性氮原子取代基包括(但不限於)氫、-OH、-ORaa、-N(Rcc)2、-CN、-C(=O)Raa、-C(=O)N(Rcc)2、-CO2Raa、-SO2Raa、-C(=NRbb)Raa、-C(=NRcc)ORaa、-C(=NRcc)N(Rcc)2、-SO2N(Rcc)2、-SO2Rcc、-SO2ORcc、-SORaa、-C(=S)N(Rcc)2、-C(=O)SRcc、-C(=S)SRcc、-P(=O)2Raa、-P(=O)(Raa)2、-P(=O)2N(Rcc)2、-P(=O)(NRcc)2、C1-10烷基、C1-10全鹵烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、C3-10碳環基、3-14員雜環基、C6-14芳基及5-14員雜芳基，或連接至氮原子的兩個Rcc基團連接而形成3-14員雜環基或5-14員雜芳基環，其中各烷基、烯基、炔基、碳環基、雜環基、芳基及雜芳基獨立地經0、1、2、3、4或5個Rdd基團取代且其中Raa、Rbb、Rcc及Rdd如上文所定義。
在某些實施例中，存在於氧原子上之取代基為氧保護基(在本文中亦稱為「羥基保護基」)。氧保護基包括(但不限於)-Raa、-N(Rbb)2、-C(=O)SRaa、-C(=O)Raa、-CO2Raa、-C(=O)N(Rbb)2、-C(=NRbb)Raa、-C(=NRbb)ORaa、-C(=NRbb)N(Rbb)2、-S(=O)Raa、-SO2Raa、-Si(Raa)3、-P(Rcc)2、-P(Rcc)3、-P(=O)2Raa、-P(=O)(Raa)2、-P(=O)(ORcc)2、-P(=O)2N(Rbb)2及-P(=O)(NRbb)2，其中Raa、Rbb及Rcc如本文所定義。氧保護基在此項技術中已熟知且包括Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene及P.G.M.Wuts,第3版，John Wiley & Sons,1999中所述的氧保護基團，所述文獻以引用的方式併入本文中。
例示性氧保護基團包括(但不限於)甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲 硫基甲基(MTM)、第三丁基硫甲基、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、對甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、鄰甲氧基苯酚甲基(GUM)、第三丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、矽烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、雙(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氫哌喃基(THP)、3-溴四氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、1-甲氧基環己基、4-甲氧基四氫哌喃基(MTHP)、4-甲氧基四氫硫代哌喃基、4-甲氧基四氫硫代哌喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氫呋喃基、四氫硫代呋喃基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫-7,8,8-三甲基-4,7-甲醇苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基矽烷基乙基、2-(苯基氧硒基)乙基、第三丁基、烯丙基、對氯苯基、對甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基(Bn)、對甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、鄰硝基苯甲基、對硝基苯甲基、對鹵基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、對氰基苯甲基、對苯基苯甲基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧離子基、二苯甲基、對,對'-二硝基二苯甲基、5-二苯并環庚基、三苯甲基、α-萘基二苯基甲基、對甲氧基苯基二苯基甲基、二(對甲氧基苯基)苯基甲基、三(對甲氧基苯基)甲基、4-(4'-溴苯甲醯甲基氧基苯基)二苯甲基、4,4',4"-參(4,5-二氯鄰苯二甲醯亞胺基苯基)甲基、4,4',4"-參(菊芋糖基氧基苯基)甲基、4,4',4"-參(苯甲醯氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)雙(4',4"-二甲氧基苯基)甲基、1,1-雙(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)二苯并哌喃基、9-(9-苯基-10-側氧基)蒽基、1,3-苯并二硫雜環戊烷-2-基、苯并異噻唑基S,S-二氧離子基、三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、三異丙基矽烷基 (TIPS)、二甲基異丙基矽烷基(IPDMS)、二乙基異丙基矽烷基(DEIPS)、二甲基第三己基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、三苯甲基矽烷基、三-對二甲苯基矽烷基、三苯基矽烷基、二苯基甲基矽烷基(DPMS)、第三丁基甲氧苯基矽烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲醯基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-側氧基戊酸酯(乙醯丙酸酯)、4,4-(伸乙基二硫基)戊酸酯(乙醯丙醯基二硫縮醛)、新戊酸酯、金剛酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(均三甲基苯甲酸酯)、碳酸甲酯、碳酸9-茀基甲酯(Fmoc)、碳酸乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、2-(三甲基矽烷基)碳酸乙酯(TMSEC)、碳酸2-(苯基磺醯基)乙酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)碳酸乙酯(Peoc)、碳酸異丁酯、碳酸乙烯酯、碳酸烯丙酯、碳酸第三丁酯(BOC)、碳酸對硝基苯酯、碳酸苯甲酯、碳酸對甲氧基苯甲酯、碳酸3,4-二甲氧基苯甲酯、碳酸鄰硝基苯甲酯、碳酸對硝基苯甲酯、硫代碳酸S-苯甲酯、碳酸4-乙氧基-1-萘基酯、二硫代碳酸甲酯、2-碘苯甲酸酯、4-疊氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、鄰(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲醯基苯磺酸酯、2-(甲基硫代甲氧基)乙基、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-雙(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、異丁酸酯、單丁二酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、鄰(甲氧基醯基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、N,N,N',N'-四甲基二胺基磷酸烷基酯、N-苯基胺基甲酸烷基酯、硼酸酯、二甲基膦基亞硫醯基、2,4-二硝基苯基亞磺酸烷酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苯甲基磺酸酯及甲苯磺酸酯(Ts)。
亦必須注意，除非上下文另有明確規定，否則如在本文中及在隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數個提及物。同樣，術語「一(a)」(或「一(an)」)、「一或多個」及「至少一個」在本文中可互換使用。亦應注意，術語「包含」、「包括」及「具有」可互換使用。
除非另外指明，否則將使用屬於此項技術之技能範圍內的分子生物學、微生物學、重組DNA及免疫學習知技術實施本發明。該等技術在文獻中充分解釋。參見例如Molecular Cloning A Laboratory Manual，第2版，Sambrook,Fritsch及Maniatis編(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)；DNA Cloning，第I及II卷(D.N.Glover編，1985)；Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney,Alan R.Liss,Inc.,1987)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press,1986)；B.Perbal,A Practical Guide To Molecular Cloning(1984)；論文Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller及M.P.Calos編，1987,Cold Spring Harbor Laboratory)；Methods In Enzymology，第154卷及第155卷(Wu等人編)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer及Walker編，Academic Press,London,1987)；Antibodies：A Laboratory Manual,Harlow and Lane s(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988)；及Handbook Of Experimental Immunology，第I-IV卷(D.M.Weir及C.C.Blackwell編，1986)。
如本文所使用，術語「聚醣」係指多醣，或寡醣。聚醣在本文中亦用於指醣結合物之碳水化合物部分，諸如醣蛋白、醣脂、醣肽、醣蛋白質組、肽聚醣、脂多醣或蛋白聚醣。聚醣通常僅由單醣之間的O-糖苷鍵聯組成。舉例而言，纖維素為由β-1,4-連接型D-葡萄糖組成的聚醣(或更特定而言，葡聚糖)，且甲殼素為由β-1,4-連接型N-乙醯 基-D-葡糖胺組成的聚醣。聚醣可為單醣殘基之均聚物或雜聚物，且可為線性的或分枝的。可發現聚醣連接至蛋白質，如醣蛋白及蛋白聚醣。其通常發現於細胞外表面上。O連接型及N連接型聚醣在真核生物中很常見，而且可發現於原核生物中(然而不常見)。發現N連接型聚醣連接至序列子中之天冬醯胺之R族氮(N)。序列子為Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列，其中X為除堅果糖之外的任何胺基酸。
如本文所使用，術語「抗原」定義為能夠誘發免疫反應的任何物質。
如本文所使用，術語「免疫原性」係指免疫原、抗原或疫苗刺激免疫反應的能力。
如本文所使用，術語「CD1d」係指各種人類抗原呈遞細胞表面上所表現之醣蛋白之CD1(分化叢集1)家族的一員。CD1d呈遞的脂質抗原活化天然殺手T細胞。CD1d具有供糖脂抗原結合於其中的較深抗原結合凹槽。樹突狀細胞上所表現的CD1d分子可結合及呈遞醣脂，包括α-GalCer類似物，諸如C34。
如本文所使用，術語「抗原決定基」定義為抗原分子之一部分，此部分接觸抗體或T細胞受體之抗原結合位點。
如本文所使用，術語「疫苗」係指含有抗原的製劑，其由完整致病生物體(殺死或減毒)或該等生物體之組分(諸如蛋白質、肽或多醣)組成，用於賦予針對該等生物體所致之疾病的免疫力。疫苗製劑可為天然的、合成的或藉由重組DNA技術獲得。
如本文所使用，術語「抗原特異性」係指細胞群之一種特性，其使得特定抗原或抗原片段之供應引起特異性細胞增殖。
如本文所用，術語「特異性結合」係指結合對(例如抗體與抗原)之間的相互作用。在各種情形下，特異性結合可體現為約10-6莫耳/公升、約10-7莫耳/公升或約10-8莫耳/公升或小於10-8莫耳/公升之親和力 常數。
如本文所用，術語醣酶至少部分地指球系列生物合成路徑中的酶；例示性醣酶包括α-1,4-半乳醣基轉移酶；β-1,4-N-乙醯半乳醣基轉移酶-I；或β-1,3-半乳醣基轉移酶-V。
如本文所使用，術語「球系列路徑」包括圖1中所述之生物合成及酶促路徑。
「分離」抗體為已鑑別且自其天然環境之組分分離且/或回收的抗體。其天然環境之污染物組分為會干擾抗體之研究、診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在一個實施例中，抗體將純化(1)至大於95wt%，如藉由例如洛瑞方法(Lowry method)所測定，且在一些實施例中超過99wt%；(2)至足以藉由使用例如旋杯式測序儀獲得N末端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度；或(3)至均質，此係藉由使用例如庫馬斯藍(Coomassie blue)或銀染劑、在還原或非還原條件下進行SDS-PAGE所達成。經分離抗體包括原位存在於重組細胞內之抗體，因為抗體之天然環境中的至少一種組分將不存在。然而，通常，經分離抗體將藉由至少一個純化步驟來製備。
「結合親和力」一般係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用力的總和。除非另外指明，否則如本文所使用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1：1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(Kd)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述之方法)量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中任一者可用於本發明之目的。特定說明性實施例描述於下文中。
「抗體片段」僅包含完整抗體之一部分，其中該部分保留與彼部分當其存在於完整抗體中時正常相關之功能中之至少一功能，及大部分或全部功能。在一個實施例中，抗體片段包含完整抗體之抗原結合位點且因此保留結合抗原之能力。在另一實施例中，抗體片段(例如包含Fc區域者)保留當存在於完整抗體中時通常與Fc區域相關的至少一個生物學功能，諸如FcRn結合、抗體半衰期調節、抗體依賴細胞介導的細胞毒殺功能及補體結合。在一個實施例中，抗體片段為具有實質上類似於完整抗體的活體內半衰期之單價抗體。舉例而言，該抗體片段可包含連接至Fc序列的抗原結合臂，其能夠對該片段賦予活體內穩定性。
本文之單株抗體特定包括「嵌合」抗體，其中一部分重鏈及/或輕鏈與得自特定物種或屬於特定抗體種類或亞類之抗體中的相應序列相同或同源，而該(該等)鏈之其餘部分與得自另一物種或屬於另一抗體種類或亞類之抗體中的相應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要其展現出所需生物學活性即可(美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855(1984))。
「人類化」形式之非人類(例如鼠科)抗體為含有自非人類免疫球蛋白獲得之最小序列的嵌合抗體。在一個實施例中，人類化抗體為人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中將獲自接受者之高變區的殘基置換為獲自具有所要特異性、親和力及/或容量之非人類種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之高變區的殘基。在一些情況下，人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經相應之非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含受體抗體或供者抗體中未見之殘基。進行此等修飾以進一步改善抗體效能。一般而言，人類化抗體將包含實質上所有至少一個且通常兩個可變域，其中所有或實質上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環，且所有或實質上所有FR為人類免疫球 蛋白序列之FR。人化抗體視情況亦將包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常為人類免疫球蛋白之恆定區。欲知詳情，參見Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。亦參見以下評述論文及其中所引用的參考文獻：Vaswani及Hamilton,Ann.Allergy,Asthma & Immunol.1：105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23：1035-1038(1995)；Hurle及Gross,Curr.Op.Biotech.5：428-433(1994)。
「阻斷」抗體或「拮抗劑」抗體為抑制或降低所結合之抗原之生物活性的抗體。某些阻斷抗體或拮抗劑抗體大體上或完全地抑制抗原之生物活性。
如本文中所使用之「促效劑抗體」為一種模擬所研究之多肽之至少一種功能活性的抗體。
「病症」為經本發明之抗體治療可好轉的任何病狀。此包括慢性及急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所述病症之彼等病理病況。本文所治療病症之非限制性實例包括癌症。
術語「細胞增生性病症」及「增生性病症」係指與某種程度之異常細胞增殖相關之病症。在一個實施例中，細胞增殖病症為癌症。
如本文所使用之「腫瘤」係指所有贅生性細胞(惡性或良性)之生長及增殖，及所有癌前及癌細胞及組織。如本文中所引述，術語「癌症」「癌變」、「細胞增殖性病症」、「增殖性病症」及「腫瘤」並非互相排斥的。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物體內通常以不受調控之細胞生長/增殖為特徵之生理病況。癌症之實例包括但不限於癌瘤、淋巴瘤(例如霍奇金氏淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤)、胚細胞瘤、肉瘤及白血病。該等癌症之更具體實例包括鱗狀細胞癌、小細胞 肺癌、非小細胞肺癌、肺之腺癌、肺之鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、成膠質細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、白血病及其他淋巴組織增生性病症，以及各種類型之頭頸癌。
術語「球系列相關病症」係指或描述特徵典型地為或導致路徑功能發揮或呈遞發生異常的病症。此類病症之實例包括(但不限於)過度增生性疾病，包括癌症。
免疫缺乏症候群之實例包括但不限於共濟失調毛細血管擴張、白細胞黏著缺乏症候群、淋巴細胞減少症、異常γ球蛋白血症、人類免疫缺陷病毒或δ逆轉錄病毒感染、常見變異性免疫缺乏、嚴重聯合免疫缺陷、巨噬細胞殺菌功能異常、無γ球蛋白血症、狄喬治症候群(DiGeorge syndrome)及韋斯科特-阿德里奇症候群(Wiskott-Aldrich syndrome)。過敏症之實例包括但不限於變態反應、哮喘、皮膚炎、麻疹、過敏症、韋斯勒氏症候群(Wissler's syndrome)及血小板減少性紫癜。
如本文所使用之「治療」係指試圖改變所治療之個體或細胞之自然過程的臨床干預，且可出於預防之目的或臨床病理學過程中進行。理想的治療效果包括防止疾病發作或復發、減輕症狀、減少疾病之任何直接或間接病理性後果、防止或減緩炎症及/或組織/器官傷害、降低疾病行進速度、改善或減緩疾病狀態及症狀緩解或預後改良。在一些實施例中，使用本發明之抗體推遲疾病或病症之發展。
「個體(individual)」或「個體(subject)」為脊椎動物。在某些實施例中，脊椎動物為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於農畜(諸如牛)、運動型動物、寵物(諸如貓、狗及馬)、靈長類動物、小鼠及大鼠。在某些實施例中，脊椎動物為人類。
用於治療目的之「哺乳動物」係指歸類為哺乳動物的任何動物，包括人類、馴養動物及農耕動物，以及動物園、運動或寵物動物，諸如狗、馬、貓、母牛等。在某些實施例中，哺乳動物為人類。
「有效量」係指有效達成所需治療或預防結果所必需之劑量及時間量。
本發明之物質/分子之「治療有效量」可根據諸如以下因素而變：個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及該物質/分子在個體中誘發所要反應的能力。治療有效量亦為一種治療有益效應超過該物質/分子之任何毒性或有害效應的量。「預防有效量」係指有效達成所需預防結果所必需之劑量及時間量。由於預防劑量係在患病之前或在患病早期之個體中使用，因此預防有效量通常(但不一定)小於治療有效量。
本文所用之術語「細胞毒性劑」係指一種抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞破壞之物質。該術語意欲包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32及Lu之放射性同位素)；化學治療劑，例如甲胺蝶呤、阿黴素(adriamicin)、長春生物鹼類(vinca alkaloids)(長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide)、阿黴素(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他插入劑、酶及其片段(諸如核酸分解酶、抗生素及毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶促活性毒素，包括其片段及/或變體)，以及下文所揭示之各種抗瘤劑或抗癌劑。其他細胞毒性劑在下文中描述。殺腫瘤劑可使腫瘤細胞毀壞。
「化學治療劑」為可用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括：烷化劑，諸如硫替派(thiotepa)及CYTOXAN®環磷醯胺；烷 基磺酸鹽類，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙基亞胺類及甲基密胺類，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基密胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethiylenethiophosphoramide)及三甲密胺(trimethylolomelamine)；多聚乙醯類(acetogenins)(尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；△-9-四氫大麻酚(delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol,MARINOL®))；β-拉帕酮(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼(colchicine)；樺木酸(betulinic acid)；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓朴替康(topotecan)(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊諾替康(irinotecan；CAMPTOSAR®)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、斯考普萊叮(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚蟲素(bryostatin)；卡利斯塔叮(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新合成類似物)；足葉草毒素(podophyllotoxin)；足葉草酸(podophyllinic acid)；替尼泊甙(teniposide)；念珠藻環肽(cryptophycin)(尤其念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡米辛(duocarmycin)(包括合成類似物，KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；盤克斯塔叮(pancratistatin)；沙考的汀(sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥類，諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、環磷醯胺、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺、二氯甲二乙胺、鹽酸二氯甲二乙胺氧化物(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖、新氮芥(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲，諸如亞硝脲氮 芥(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、環己亞硝脲(lomustine)、嘧啶亞硝脲(nimustine)及拉甯司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如刺孢黴素(calicheamicin)，尤其刺孢黴素γ1及刺孢黴素ω1(參見例如Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；達米辛(dynemicin)，包括達米辛A；艾斯帕米辛(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、克拉斯米辛(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、奧斯拉米辛(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、克羅米辛(chromomycinis)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧-L-正白胺酸、ADRIAMYCIN®阿黴素(包括嗎啉并-阿黴素(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉并-阿黴素(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯并-阿黴素及脫氧阿黴素(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；葉酸類似物，諸如傣諾特呤(denopterin)、甲胺蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤 (6-mercaptopurine)、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)；雄性激素，諸如二甲睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone)；抗腎上腺劑，諸如胺基苯乙哌啶酮(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡內酯(aceglatone)；醛磷醯胺葡糖甙(aldophosphamide glycoside)；胺基果糖酸(aminolevulinic acid)；伊利盧拉(eniluracil)；胺苯吖啶(amsacrine)；倍思塔布(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；埃達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗利散(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；乙環氧啶(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇糖(lentinan)；羅尼達寧(lonidainine)；美登素類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)及胺沙托辛(ansamitocins)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫比達摩(mopidanmol)；硝拉維林(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；凡那明(phenamet)；比柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；普魯苄肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；丙亞胺(razoxane)；根黴菌素(rhizoxin)；西佐糖(sizofiran)；螺鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2.2'-2"-三氯三乙基胺；單端孢黴烯族毒素(trichothecenes)(尤其T-2毒素、弗納庫林A(verracurin A)、桿孢菌素 A(roridin A)及胺癸叮(anguidine))；烏拉坦(urethan)；去乙醯長春醯胺(vindesine)(ELDISINE®,FILDESIN®)；氮烯唑胺(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；雙溴丙基哌嗪(pipobroman)；甲托辛(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(「Ara-C」)；硫替派(thiotepa)；紫杉醇(taxoids)，例如TAXOL®太平洋紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)；ABRAXANETM無Cremophor-太平洋紫杉醇之白蛋白設計奈米微粒調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)及TAXOTERE®多西他賽(doxetaxel)(Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France)；克羅南布(chloranbucil)；吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲胺蝶呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)(VELBAN®)；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN®)；奧沙利鉑(oxaliplatin)；盧考弗文(leucovovin)；長春瑞賓(vinorelbine)(NAVELBINE®)；諾凡特龍(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素；胺基蝶呤；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylornithine)(DMFO)；類視色素類，諸如視黃酸(retinoic acid)；卡培他濱(capecitabine)(XELODA®)；以上任一種治療劑之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及以上兩種或兩種以上治療劑之組合，諸如CHOP(環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼與潑尼松龍(prednisolone)之混合治療之縮寫)及FOLFOX(奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATINTM)與5-FU及盧考弗文組合治療方案之縮寫)。
除非另外界定，否則本文中所使用之所有技術及科學術語具有 與一般熟習本發明所屬之技術者通常所理解的意義相同的意義。雖然類似或等效於本文中所描述之彼等方法及材料之任何方法及材料可用於實踐或測試本發明中，但現在描述較佳方法及材料。本文特別提及的所有公開案及專利以引用的方式併入本文中用於所有目的，包括描述及揭示公開案中所報導、可聯合本發明使用的化學品、細胞株、載體、動物、儀器、統計學分析及方法。本說明書中所引用的所有參考文獻視為此項技術中之技能水準之指示。本文不應解釋為承認本發明無權先於先前發明之此類揭示內容。
在一個態樣中，本發明係基於如下驚人發現：階段特異性胚抗原(SSEA3及SSEA4)經某些基團修飾可誘發分別特異性地識別SSEA3及SSEA4的穩定IgG抗體反應。
在一些實例中，SSEA3的修飾包含SSEA3之葡萄糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA3的修飾包含非還原端半乳糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA4的修飾包含SSEA4之葡萄糖之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。在一些實例中，SSEA4的修飾包含唾液酸殘基之一或多個位置上的氟、疊氮基或O-苯基。
在某些態樣中，本發明提供在還原端及/或非還原端具有修飾的SSEA3及SSEA4類似物。相較於原生SSEA3及SSEA4，此類SSEA3及SSEA4類似物可誘發更強的免疫反應(例如誘導針對SSEA3及/或SSEA4的IgG抗體)。包含此類非天然聚醣部分之免疫原性組合物所誘導的抗體能夠介導針對腫瘤細胞的補體依賴性細胞之細胞毒性。
化合物
因此，本發明亦展示由經修飾之碳水化合物抗原(SSEA3及SSEA4)組成的新穎化合物、包含此類化合物之聚醣結合物，及其免疫原性組合物及疫苗。
在一個態樣中，本發明提供式(I)化合物：
Figure 104127439-A0202-12-0034-11
或其鹽，其中：X1為-OR或-SR，其中R為氫、氧或硫保護基、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之醯基或視情況經取代之醯亞胺基；R1、R2、R3、R4、R5、R6及L之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基及視情況經取代之芳基；RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基及視情況經取代之芳基；及其限制條件為化合物不具有下式：
Figure 104127439-A0202-12-0034-12
在某些實施例中，X1呈α組態。在某些實施例中，X1呈β組態。
在一些實施例中，X1為-ORA。在一些實施例中，X1為-OH。在一些實施例中，X1為-O-(保護基)。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為未經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為未經取代之芳基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為經取代之芳基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為未經取代之醯基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為經取代之醯基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為未經取代之醯亞胺基。在一些實施例中，X1為-ORA，其中RA為經取代之醯亞胺基。
在一些實施例中，X1為-SRA。在一些實施例中，X1為-SH。在一些實施例中，X1為-S-(保護基)。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為未經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為經取代之C1-10烷基。在某些實施例中，X1為-SCH3。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為未經取代之芳基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為經取代之芳基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為未經取代之醯基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為經取代之醯基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為未經取代之醯亞胺基。在一些實施例中，X1為-SRA，其中RA為經取代之醯亞胺基。
在一些實施例中，X1為C1-10烷氧基。在一些實施例中，X1為C1-3烷氧基。
在一些實施例中，X1選自由以下組成之群：α-硫基甲基、β-硫基甲基、α-硫基甲苯基、β-硫基甲苯基、α-第三丁基二苯基矽烷基氧基、β-第三丁基二苯基矽烷基氧基及α-甲氧基。
在一些實施例中，R1為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R1為-N3。在某些實施例中，R1為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R1為- NH2。在某些實施例中，R1為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R1為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R1選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R1為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R1為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R1為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R1為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R1為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R2為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R2為-N3。在某些實施例中，R2為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R2為-NH2。在某些實施例中，R2為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R2為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R2選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R2為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R2為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R2為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R2為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R2為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R3為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R3為-N3。在某些實施例中，R3為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R3為-NH2。在某些實施例中，R3為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R3為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R3選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R3為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R3為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R3為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R3為-NHC(O)CH3。在某些實施 例中，R3為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R4為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R4為-N3。在某些實施例中，R4為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R4為-NH2。在某些實施例中，R4為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R4為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R4選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R4為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R4為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R4為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R4為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R4為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R5為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R5為-N3。在某些實施例中，R5為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R5為-NH2。在某些實施例中，R5為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R5為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R5選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R5為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R5為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R5為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R5為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R5為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R6為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R6為-N3。在某些實施例中，R6為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R6為-NH2。在某些實施例中，R6為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R6為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中， R6選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R6為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R6為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R6為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R6為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R6為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R1、R2及R3相同。在一些實施例中，R1、R2及R3為-OH。在一些實施例中，R4、R5及R6相同。在一些實施例中，R4、R5及R6為-OH。
在某些實施例中，L為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R1為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R1為-N3，且R2、R3、R4、R5及R6之各實例為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R2為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R2為-N3且R1、R3、R4、R5及R6之各實例為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R3為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R3為-N3，且R1、R2、R4、R5及R6之各實例為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R4為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R4為-N3，且R1、R2、R3、R5及R6之各實例為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R5為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R5為-N3，且R1、R2、R3、R4及R6之各實例為-OH。
在某些實施例中，L為-OH且R6為-N3。在某些實施例中，L為-OH，R6為-N3，且R1、R2、R3、R4及R5之各實例為-OH。
在某些實施例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6及L之各實例為-F。在某些實施例中，R1為-F。在某些實施例中，R2為-F。在某些實施例中，R3為-F。在某些實施例中，R4為-F。在某些實施例中，R5為-F。在某些實施例中，R6為-F。在某些實施例中，L為-F。
在某些實施例中，L具有以下結構：
Figure 104127439-A0202-12-0039-13
其中：R8、R9、R10及R11之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；RN選自-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基及視情況經取代之芳基；及RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之雜環基及視情況經取代之芳基。
在一些實施例中，化合物具有式(II)
Figure 104127439-A0202-12-0039-14
 其中：R1、R2、R3、R8、R9、R10、R11及RN及X1如本文所述，及其限制條件為化合物不具有下式：
Figure 104127439-A0202-12-0040-15
在一些實施例中，R8為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R8為-N3。在某些實施例中，R8為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R8為-NH2。在某些實施例中，R8為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R8為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R8選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R8為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R8為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R8為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R8為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R8為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R9為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R9為-N3。在某些實施例中，R9為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R9為-NH2。在某些實施例中，R9為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R9為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R9選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R9為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R9為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R9為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R9為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R9為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R10為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R10為-N3。在某些實施例中，R10為- N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R10為-NH2。在某些實施例中，R10為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R10為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R10選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R10為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R10為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R10為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R10為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R10為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R11為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R11為-N3。在某些實施例中，R11為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R11為-NH2。在某些實施例中，R11為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R11為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R11選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R11為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R11為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，R11為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R11為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R11為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，R12為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R12為-N3。在某些實施例中，R12為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，R12為-NH2。在某些實施例中，R12為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，R12為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，R12選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，R12為-NH(Cbz)。在某些實施例中，R12為-NH(Fmoc)。在某 些實施例中，R12為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，R12為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，R12為-N(C(O)CH3)2。
在一些實施例中，RN為-N3或-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，RN為-N3。在某些實施例中，RN為-N(RW)2，其中各RW獨立地為氫或氮保護基。在某些實施例中，RN為-NH2。在某些實施例中，RN為-NHRW，其中RW為氮保護基。在某些實施例中，RN為-N(RW)2，其中各RW為氮保護基。在某些實施例中，RN選自由以下組成之群：-N3、-NH(Cbz)、-NH(Boc)、-NH(Fmoc)、-NHC(O)CCl3、-NHC(O)CH3及-N(C(O)CH3)2。在某些實施例中，RN為-NH(Cbz)。在某些實施例中，RN為-NH(Fmoc)。在某些實施例中，RN為-NHC(O)CCl3。在某些實施例中，RN為-NHC(O)CH3。在某些實施例中，RN為-N(C(O)CH3)2。
免疫原性組合物
在另一態樣中，本發明提供一種免疫原性組合物，包含(a)包括載劑及一或多種聚醣的聚醣結合物，及視情況存在之(b)佐劑，其中：一或多種聚醣中之每一者經由連接子與載劑結合，其具有式(III)或(IV)：
Figure 104127439-A0202-12-0042-16
Figure 104127439-A0202-12-0042-17
其中X1、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、L及RN 如本文所述。
在某些實施例中，連接子為雜雙官能連接子或均雙官能連接子。
在某些實施例中，連接子為均雙官能對硝基苯基連接子。
在某些實施例中，連接子包括至少一個硫原子、羧酸酯基團、醯胺基團、胺基甲酸酯基團、碳酸酯基團、硫代胺基甲酸酯基團、硫代碳酸酯基團、硫醚基團、順丁烯二醯亞胺基團、N-羥基順丁烯二醯亞胺基團，或其任何組合。
在某些實施例中，連接子為-L1-L2-，其中L1為一鍵、-O-、-S-、-NRL1a-、-C(=O)-、-NRL1aC(=O)-、-NRL1aC(=O)O-、-C(=O)NRL1a-、-OC(=O)NRL1a-、-SC(=O)-、-C(=O)S-、-OC(=O)-、-C(=O)O-、-NRL1aC(=S)-、-C(=S)NRL1a-、反-CRL1b=CRL1b-、順-CRL1b=CRL1b-、-C≡C-、-OC(RL1b)2-、-C(RL1b)2O-、-NRL1aC(RL1b)2-、-C(RL1b)2NRL1a-、-SC(RL1b)2-、-C(RL1b)2S-、-S(=O)2O-、-OS(=O)2-、-S(=O)2NRL1a-、-NRL1aS(=O)2-；或視情況經取代之C1-20烴鏈，視情況其中該烴鏈之一或多個碳單元經以下置換：-O-、-S-、-NRL1a-、-C(=O)-、NRL1aC(=O)-、-NRL1aC(=O)O-、-C(=O)NRL1a-、-OC(=O)NRL1a-、-SC(=O)-、-C(=O)S-、-OC(=O)-、-C(=O)O-、-NRL1aC(=S)-、-C(=S)NRL1a-、反-CRL1b=CRL1b-、順-CRL1b=CRL1b-、-C≡C-、-S(=O)2O-、-OS(=O)2-、-S(=O)2NRL1a-或-NRL1aS(=O)2-，其中RL1a為氫、視情況經取代之C1-6烷基或氮保護基，或RL1a與相鄰碳原子連接而形成視情況經取代之雜環，且其中每次出現之RL1b獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之烯基、視情況經取代之炔基、視情況經取代之碳環基、視情況經取代之雜環基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基，或RL1b與相鄰碳或氮或氧原子連接而形 成視情況經取代之碳環或雜環，或兩個RL1b基團連接而形成視情況經取代之碳環或視情況經取代之雜環；且L2為能夠使載劑與L1交聯之交聯試劑所衍生的部分。
載劑可為蛋白質、脂質、脂質化蛋白質、病毒、肽，或醣肽之樹枝狀聚合物。在某些實施例中，載劑為包含T細胞抗原決定基的肽。
可用於本發明中的載劑蛋白質實例為破傷風類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)、白喉毒素交叉反應物質197(CRM197)、TT之片段C、匙孔螺血氰蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、蛋白質D、外膜蛋白質(OMP)及肺炎鏈球菌溶血素、白喉毒素交叉反應物質197(CRM197)或其他DT點突變體，諸如CRM176、CRM228、CRM45(Uchida等人，J.Biol.Chem.218；3838-3844,1973)；CRM9、CRM45、CRM102、CRM103及CRM107，以及此項技術中描述之其他突變。
在某些實施例中，聚醣結合物具有式(IV-a)或(IV-b)：
Figure 104127439-A0202-12-0044-18
Figure 104127439-A0202-12-0044-19
其中m為整數1至40(包括端點)。
在某些實施例中，m為整數1至30(包括端點)。如本文一般性定義，m為整數1至20(包括端點)。在某些實施例中，m為1。在某些實施例中，m為2。在某些實施例中，m為4。在某些實施例中，m為6。在某些實施例中，m為8。在某些實施例中，m為10。在某些實施例中，m為15。在某些實施例中，m為20。在某些實施例中，m為30。在某些實施例中，m為40。
在另一態樣中，本發明提供包含如本文所述之聚醣結合物中之至少兩者的聚醣結合物混合物。在某些實施例中，聚醣混合物中之w平均值為約1.0至約40.0。在某些實施例中，聚醣混合物中之w平均值為約1.0至10.0。在某些實施例中，聚醣混合物中之w平均值為約5.7、4.9、2.9、2.8或3.1。在某些實施例中，聚醣混合物中之w平均值為約4.9、2.9、2.8或3.1。
在某些實施例中，本文所述之免疫原性組合物包括免疫學上有效量之本發明聚醣結合物。在某些實施例中，免疫原性組合物包括醫藥學上有效量之本發明聚醣結合物。
本發明化合物可使用本文所述之程序合成且亦參見US20140051127。
本發明之免疫原性結合物可包括相同或不同SSEA3及/或SSEA4類似物及/或相關衍生物之一或多種分子(例如1-40、1-20、1-25、1-30種)。用於產生聚醣結合物的其他描述及相關程序描述如下。亦參見美國專利第8,268,969號。其內容以引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，本發明之免疫原性組合物可包括一或多種佐劑。適合佐劑可包括例如C34、7DW8-5、C17、C23、C-30、α-半乳糖神經醯胺、Glc-C34、鋁鹽、角鯊烯、MF59及OS-21)。
如本文所使用，術語「鋁佐劑」係指具有免疫佐劑活性的鋁 鹽。此藥劑吸附溶液中的蛋白質抗原且使其沈澱；所得沈澱物藉由促進接種位點處所形成之疫苗儲槽中的抗原緩慢釋放來改良疫苗免疫原性。
如本文所使用，術語「免疫佐劑」係指結合免疫原使用的增強或調節針對免疫原之免疫反應的物質。本發明之α-GalCer類似物係用作調節或增強疫苗作用的免疫佐劑，其藉由刺激疫苗所投與之患者之免疫系統以對疫苗產生更強烈的反應。在例示性實施例中，使用類似物C34作為佐劑。C34及其他α-半乳糖神經醯胺類似物之結構及其用作佐劑的用途揭示於美國專利第7,928,077號中。
如本文所使用，術語「醣脂」係指碳水化合物連接的脂質，其充當細胞識別的標記。
醣脂C34、Glc-C34、C23及7DW8-5具有以下結構：
Figure 104127439-A0202-12-0046-20
Figure 104127439-A0202-12-0047-21
Figure 104127439-A0202-12-0047-22
免疫原性組合物可進一步包括醫藥學上可接受之賦形劑。在某些實施例中，本文所述之免疫原性組合物包括醫藥學上有效量之本發明聚醣結合物。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所述之免疫原性組合物及醫藥學上可接受之賦形劑的癌症疫苗。
本發明之癌症疫苗可包括單次劑量或多次劑量的本發明聚醣結合物、其聚醣結合物混合物，或其免疫原性組合物。所提供之癌症疫苗可適用於治療癌症或降低癌症風險。癌症疫苗亦可包括包裝資訊，其描述用途或處方資訊供個體或健康照護專業人士用。監管機構，諸如美國食品及藥物管理局(U.S.Food and Drug Administration；FDA)，可能需要此類資訊。癌症疫苗亦可視情況包括投與化合物或組合物之器件，例如非經腸投藥用的注射器。
醫藥調配物
免疫組合物係以與劑型相容的方式且以治療上具有有效性、保護性及免疫原性的量投與。投藥量視所治療之個體而定，包括例如個體免疫系統合成抗體及必要時產生細胞介導免疫反應的能力。投藥所需之活性成分的準確量視從業者判斷而定。然而，熟習此項技術者容易確定適合的劑量範圍。初始投藥及加打劑量的適合方案亦為可變 的，但可包括初始投藥、隨後再投藥。疫苗劑量亦可視投藥途徑而定且根據宿主體型而變。
本發明之免疫組合物亦可用於在用於產生抗體的動物中產生可用於癌症治療與診斷的抗體。用動物(例如小鼠、兔、山羊、綿羊或馬)產生單株及多株抗體及其片段的方法在此項技術中已熟知。參見例如Harlow及Lane,(1988)Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York。術語「抗體」包括完整免疫球蛋白分子以及其片段，諸如Fab、F(ab')2、Fv、scFv(單鏈抗體)及dAb(域抗體；Ward等人，(1989)Nature,341,544)。
本文所揭示之組合物可與熟習此項技術者經閱讀本發明而可鑑別的其他活性劑、載劑、媒劑、賦形劑或助劑一起包括於醫藥組合物中。
醫藥組合物較佳包含至少一種醫藥學上可接受之載劑。在此類醫藥組合物中，本文所揭示之組合物形成「活性化合物」，亦稱為「活性劑」。如本文所用，語言「醫藥學上可接受之載劑」包括與投藥相容的溶劑、分散介質、包衣劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。亦可將補充活性化合物併入組合物中。醫藥組合物經調配可與其預期的投藥途徑相容。投藥途徑之實例包括非經腸，例如靜脈內、皮內、皮下、經口(例如吸入)、經皮(局部)、經黏膜及直腸投藥。用於非經腸、皮內或皮下施用的溶液或懸浮液可包括以下組分：無菌稀釋劑，例如注射用水、生理食鹽水溶液、不揮發性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細菌劑，例如苯甲醇或對烴基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩衝劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及張力調節劑，例如氯化鈉或右旋糖。可用酸或鹼(諸如鹽酸或氫氧化鈉)調節pH。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成的安瓿、 拋棄式注射器或多劑量小瓶中。
臨床應用
本發明提供適用於治療個體之增生性疾病的聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗，增生性疾病諸如癌症(例如肺癌、大腸癌、胰臟癌、膽道癌或子宮內膜癌)、良性贅瘤或血管生成。
本文所述之免疫原性組合物或疫苗亦可用於在用於產生抗體的人類或動物中產生可用於癌症治療與診斷的抗體。在一些實施例中，本文所述之免疫原性組合物或疫苗亦可用於引起GloboH、SSEA3及/或SSEA4抗體產生。用動物(例如小鼠、兔、山羊、綿羊或馬)產生單株及多株抗體及其片段的方法在此項技術中已熟知。參見例如Harlow及Lane,(1988)Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York。術語「抗體」包括完整免疫球蛋白分子以及其片段，諸如Fab、F(ab)2、Fv、scFv(單鏈抗體)及dAb(域抗體；Ward等人，(1989)Nature,341,544)。
提供包含至少一種抗SSEA3/SSEA4/GloboH抗體或至少一種含有編碼抗SSEA3/SSEA4/GloboH抗體之序列之聚核苷酸的組合物。在某些實施例中，組合物可為醫藥組合物。如本文所使用，組合物包含一或多種結合至一或多種SSEA3/SSEA4/GloboH的抗體及/或一或多種含有編碼一或多種結合至一或多種SSEA3/SSEA4/GloboH之抗體之序列的聚核苷酸。此等組合物可另外包含此項技術中熟知之適當載劑，諸如醫藥學上可接受之賦形劑(包括緩衝液)。
亦提供經分離之抗體及聚核苷酸。在某些實施例中，經分離之抗體及聚核苷酸為實質上純的。
在一個實施例中，抗SSEA3/SSEA4/GloboH抗體為單株抗體。在另一個實施例中，提供抗SSEA3/SSEA4/GloboH抗體之片段(例如Fab、Fab'-SH及F(ab')2片段)。此等抗體片段可藉由諸如酶促消化之傳 統方式產生，或可藉由重組技術產生。此等抗體片段可為嵌合抗體、人化抗體或人類抗體。此等片段可用於達成下文所述之診斷及治療目的。
醫藥調配物
包含本發明醫藥劑的治療性調配物藉由將具有所要純度之抗體與視情況存在之生理學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980))混合、以水溶液、凍乾型或其他乾燥型調配物之形式製備。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所使用之劑量及濃度下對接受者無毒性，且包括緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、組胺酸及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨、氯化六羥季銨、氯化苯甲烴銨、苄索氯銨、苯酚、丁醇或苯甲醇、對羥基苯甲酸烷酯(諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他醣，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如鋅-蛋白錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
本文中之調配物亦可含有超過一種為治療特定適應症所需的活性化合物，包括(但不限於)具有彼此無不利影響之補充活性的彼等物。該等分子適合以可有效地達成預期目的之量組合存在。
舉例而言，活性成分亦可捕集於微膠囊中，例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微膠囊，例如分別為羥基甲基纖維素或明膠 微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；膠狀藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或巨乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。
欲用於活體內投藥之調配物必須無菌。其可容易藉由無菌過濾膜過濾來實現。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適當實例包括含有本發明免疫球蛋白之固體疏水性聚合物的半滲透性基質，該等基質為成形物品之形式，例如薄膜或微膠囊。持續釋放型基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與γ乙基-L-麩胺酸酯之共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、可降解性乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物與亮丙瑞林乙酸鹽組成之可注射微球體))及聚D-(-)-3-羥基丁酸。雖然聚合物(諸如乙烯-乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸)使分子能夠釋放100天，但某些水凝膠釋放蛋白質的時期較短。當囊封抗體長時間保留於體內時，其可能因暴露於37℃之水分而變性或聚集，導致生物活性喪失且可能使免疫原性發生變化。視所涉及之機制而定，可設計合理策略以達成穩定化。舉例而言，若發現聚集機制為經由硫醇-二硫化物互換形成分子間S-S鍵，則可藉由修飾硫氫基殘基、自酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適當添加劑及開發特定聚合物基質組合物來達成穩定。
本發明之醫藥組合物可用於治療、抑制、延遲進展、預防/延遲復發、改善或預防與SSEA3/SSEA4/GloboH及SSEA3/SSEA4/GloboH相關蛋白質之異常表現及/或活性有關的疾病、病症或病狀，包括(但不限於)癌症、肌肉病症、泛素路徑相關遺傳病症、免疫/發炎病症、神經病症，及其他泛素路徑相關病症。
在一個態樣中，本發明之阻斷性抗體對SSEA3/SSEA4/GloboH具有特異性。
本發明的醫藥組合物在治療中可單獨或與其他組合物組合使用。舉例而言，本發明之抗體可與其他抗體及/或佐劑/治療劑(例如類固醇)共投藥。舉例而言，本發明抗體在治療方案中可與消炎劑及/或防腐劑組合，例如治療本文所述之任何疾病，包括癌症、肌肉病症、泛素路徑相關遺傳病症、免疫/發炎病症、神經病症及其他泛素路徑相關病症。以上所說明之該等組合療法包括組合投與(其中兩種或兩種以上藥劑包括於同一或分開之調配物中)，及分開投與，在此情況下，本發明抗體之投與可在佐劑療法投與之前及/或之後進行。
本發明之醫藥組合物(及輔助治療劑)可藉由任一適當方式(包括非經腸、皮下、腹膜內、肺內及鼻內)投藥，且若需要局部治療，則為病灶內投藥。非經腸輸液包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。另外，醫藥組合物宜藉由脈動輸注投與，尤其是在抗體劑量下降的情況下。可藉由任何適當途徑(例如注射，諸如靜脈內或皮下注射)給藥，此部分地視投藥之短期或長期性而定。
在抗體製備及投藥時可考慮本發明抗體之結合標靶之位置。當結合標靶為細胞內分子時，本發明之某些實施例提供可引入結合標靶所位於之細胞中的抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，本發明之抗體可作為胞內抗體表現於細胞內。如本文所使用之術語「胞內抗體」係指細胞內表現且能夠選擇性結合至靶分子的抗體或其抗原結合部分，如以下文獻中所述：Marasco,Gene Therapy 4：11-15(1997)；Kontermann,Methods 34：163-170(2004)；美國專利第6,004,940號及第6,329,173號；美國專利申請公開案第2003/0104402號及PCT公開案第WO2003/077945號。胞內抗體之細胞內表現係藉由將編碼所需抗體或其抗原結合部分的核酸(缺乏野生型前導序列及通常與編碼抗體或 抗原結合片段之基因有關的分泌信號)引入靶細胞中來實現。可使用任一種將核酸引入細胞內的標準方法，包括(但不限於)微量注射、彈道注射、電穿孔、磷酸鈣沈澱、脂質體及用攜有所關注核酸的逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒及牛痘載體轉染。
本發明之醫藥組合物以符合良好醫學實務的方式調配、給藥且投與。在此背景下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之起因、藥劑之遞送位點、投藥方法、投藥時程及從醫者已知之其他因素。抗體無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視存在於調配物中之本發明抗體的量、病症或治療之類型及上文所討論之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量且利用本文中所述之投藥途徑使用，或以本文中所述劑量之約1%至99%使用，或以任意劑量且憑經驗/臨床上確定為適當的任何途徑使用。
預防或治療疾病時，本發明醫藥組合物(單獨使用或與諸如化學治療劑之其他藥劑組合使用時)之適當劑量視待治療之疾病類型、抗體類型、疾病嚴重程度及病程、抗體投藥是否為預防性或治療性目的、先前療法、患者臨床史及對抗體之反應及主診醫師之判斷而定。抗體適於一次性或經一系列治療投與患者。視疾病類型及嚴重程度而定，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)抗體可為投與患者的初始候選劑量，無論例如藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注。一種典型之日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或超過100mg/kg之範圍內，此視上文所提及之因素而定。對於數天或更長時間的重複投藥而言，視病狀而定通常可持續治療，直至疾病症狀出現所要抑制。抗體之一種例示性劑量在約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內。因此，可將約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg之一或多種劑量(或其任何組合)投與患者。該等劑量可間歇地投與，例如每週或每三週 (例如使得患者接受約二至約二十次或例如約六次劑量的抗體)。最初可投與較高負荷劑量，隨後可投與一或多次較低劑量。例示性給藥方案包含投與約4mg/kg初始負荷劑量之抗體，隨後投與約2mg/kg之每週維持劑量之抗體。然而，可使用其他給藥方案。此療法之進程易於藉由習知技術及分析監測。
製品
在本發明之另一態樣中，提供一種含有可用於治療、預防及/或診斷上述病症之物質的製品。該製品包含容器及附於或系於該容器之標籤或藥品說明書。合適之容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可由諸如玻璃或塑料之各種材料形成。該容器容納單獨組合物或與另一種有效治療、預防及/或診斷病狀之組合物組合之組合物，且該容器可具有無菌進入口(例如該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針穿孔之塞子之小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本發明之抗體。標籤或藥品說明書指示該組合物用於治療所選病狀。此外，該製品可包含(a)內含組合物的第一容器，其中該組合物包含本發明之抗體；及(b)內含組合物的第二容器，其中該組合物包含另一種細胞毒性劑或治療劑。本發明之實施例中的製品可另外包含藥品說明書，該藥品說明書指示組合物可用於治療特定病狀。或者或另外，該製品可進一步包含一包含醫藥學上可接受之緩衝液(諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格爾氏溶液(Ringer's solution)及葡萄糖溶液)的第二(或第三)容器。其可另外包括就商業及使用者觀點而言所需之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解，考慮到上文提供之一般說明，可實施各種其他實施例。
在一些實施例中，所提供的聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗適用於治療或診斷癌症，包括(但不限於)聽覺神經瘤、腺癌、腎上 腺癌、肛門癌、血管肉瘤(angiosarcoma)(例如淋巴管肉瘤、淋巴內皮肉瘤、血管肉瘤(hemangiosarcoma))、附件癌、良性單株球蛋白症、膽道癌(例如膽管癌)、膀胱癌、乳癌(例如乳房腺癌、乳房乳頭狀癌瘤、乳腺癌、乳房髓質癌)、腦癌(例如腦膜瘤；神經膠質瘤，例如星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤；神經管胚細胞瘤)、支氣管癌、類癌瘤、子宮頸癌(例如子宮頸腺癌)、絨膜癌、脊索瘤、顱咽管瘤、結腸直腸癌(例如結腸癌、直腸癌、結腸直腸腺癌)、上皮癌、室管膜瘤、內皮肉瘤(例如卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、多發性特發性出血性肉瘤)、子宮內膜癌(例如子宮癌、子宮肉瘤)、食道癌(例如食道腺癌、巴雷特氏腺癌(Barrett's adenocarinoma))、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌(例如眼內黑色素瘤、視網膜母細胞瘤)、家族性嗜伊紅血球增多症、膽囊癌、胃癌(例如胃腺癌)、胃腸基質腫瘤(GIST)、頭頸癌(例如頭頸鱗狀細胞癌)、口腔癌(例如口腔鱗狀細胞癌(OSCC)、咽喉癌(例如喉癌、咽癌、鼻咽癌症、口咽癌))、造血癌症(例如白血病，諸如急性淋巴細胞性白血病(ALL)(例如B細胞ALL、T細胞ALL)、急性骨髓細胞性白血病(AML)(例如B細胞AML、T細胞AML)、慢性骨髓細胞性白血病(CML)(例如B細胞CML、T細胞CML)及慢性淋巴細胞性白血病(CLL)(例如B細胞CLL、T細胞CLL)；淋巴瘤，諸如霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma；HL)(例如B細胞HL、T細胞HL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如B細胞NHL，諸如彌漫性大細胞淋巴瘤(DLCL)(例如彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL))、濾泡性淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病/小淋巴細胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(例如黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區B細胞淋巴瘤)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、淋巴漿細胞淋巴瘤(亦即「瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenström's macroglobulinemia)「)、毛細胞白血病(HCL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅B淋巴母細胞性淋巴瘤及原發性中樞神經系統(CNS)淋巴瘤；及T細胞NHL，諸如前驅T淋巴母細胞性淋巴瘤/白血病、周邊T細胞淋巴瘤(PTCL)(例如皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)(例如蕈樣真菌病、塞紮萊症候群(Sezary syndrome))、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、結外天然殺手T細胞淋巴瘤、腸病型T細胞淋巴瘤、皮下脂層炎樣T細胞淋巴瘤、多形性大細胞淋巴瘤)；一或多種上述白血病/淋巴瘤之混合；及多發性骨髓瘤(MM))、重鏈疾病(例如α鏈疾病、γ鏈疾病、μ鏈疾病)、血管母細胞瘤、發炎性肌纖維母細胞性腫瘤、免疫細胞性澱粉樣變性、腎臟癌症(例如腎母細胞瘤，亦稱為威爾姆斯氏腫瘤(Wilms' tumor)、腎細胞癌)、肝癌(例如肝細胞癌症(HCC)、惡性肝癌)、肺癌(例如支氣管癌、小細胞肺癌(SCLC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)、平滑肌肉瘤(LMS)、肥大細胞增多症(例如全身性肥大細胞增多症)、骨髓發育不良症候群(MDS)、間皮瘤、骨髓增生性病症(MPD)(例如真性紅血球增多症(PV)、原發性血小板增多症(ET)、原因不明性骨髓細胞化生(AMM)(亦稱為骨髓纖維化(MF)、慢性特發性骨髓纖維化、慢性骨髓細胞性白血病(CML)、慢性嗜中性白血病(CNL)、嗜伊紅白血球增多症候群(HES))、神經母細胞瘤、神經纖維瘤(例如1型或2型神經纖維瘤(NF)、許旺氏瘤病(schwannomatosis))、神經內分泌癌症(例如胃腸胰神經內分泌腫瘤(GEP-NET)、類癌瘤)、骨肉瘤、卵巢癌(例如囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)、乳頭狀腺癌、胰臟癌(例如胰腺癌、管內乳頭狀黏液性贅瘤(IPMN)、胰島細胞瘤)、陰莖癌(例如陽莖及陰囊之佩吉特氏病疾病(Paget's disease)、松果體瘤、原始神經外胚層瘤(PNT)、前列腺癌(例如前列腺腺癌)、直腸癌、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、皮膚癌(例如鱗狀細胞癌(SCC)、角化棘皮瘤(KA)、黑色素瘤、基底細胞癌(BCC))、小腸癌(例如附件癌)、 軟組織肉瘤(例如惡性纖維組織細胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、惡性周邊神經鞘腫瘤(MPNST)、軟骨肉瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤)、皮脂腺癌瘤、汗腺癌、滑膜瘤、睪丸癌(例如精原細胞瘤、睪丸胚胎癌)、甲狀腺癌(例如甲狀腺之乳頭狀癌、乳頭狀甲狀腺癌(PTC)、髓質甲狀腺癌)、尿道癌、陰道癌及外陰癌(例如外陰之佩吉特氏病)。在某些實施例中，所提供的聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗適用於治療腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎臟癌、骨癌、皮膚癌、子宮頸癌、卵巢癌及前列腺癌。
為了執行本文所述之治療方法，可經由如上文所述的適合途徑將有效量之本文所述任一種聚醣結合物或免疫原性組合物或疫苗投與需要治療之個體。個體，諸如人類個體，可為患有癌症、懷疑患有癌症或易患癌症的患者。投與個體之聚醣結合物或免疫原性組合物的量可有效誘發特異性針對結合物或組合物中之聚醣部分的免疫反應。在一些實施例中，聚醣結合物或免疫原性組合物的量足以誘發抑制癌症生長及/或減小腫瘤塊的免疫反應。在其他實施例中，聚醣結合物或免疫原性組合物的量可有效延遲目標癌症之發作或降低出現癌症的風險。為達成有效量必需之所提供聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗的確切量將因個體而異，此視例如以下而定：個體之物種、年齡及一般狀況、副作用或病症之嚴重程度、特定化合物之身分、投藥模式及類似因素。所要劑量的遞送可為一天三次、一天兩次、一天一次、每隔一天、每隔兩天、每週、每兩週、每三週或每四週。在某些實施例中，所要劑量可使用多次投藥遞送(例如兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或超過十四次投藥)。
在某些實施例中，所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗向70kg成年人投與一或多次的有效量可包含每個單位劑型約0.0001 mg至約3000mg、約0.0001mg至約2000mg、約0.0001mg至約1000mg、約0.001mg至約1000mg、約0.01mg至約1000mg、約0.1mg至約1000mg、約1mg至約1000mg、約1mg至約100mg、約10mg至約1000mg，或約100mg至約1000mg化合物。
在某些實施例中，所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗可經口或非經腸，以足以遞送約每天每公斤個體體重0.001mg至約100mg、約0.01mg至約50mg、較佳約0.1mg至約40mg、較佳約0.5mg至約30mg、約0.01mg至約10mg、約0.1mg至約10mg及更佳約lmg至約25mg的劑量水準，一天投與一或多次，以獲得所要治療作用。
應瞭解如本文所述的劑量範圍提供關於向成人投與所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗的指導。投與例如兒童或青少年的量可由從醫者或熟習此項技術者確定且可低於投與成人的量或與投與成人的量相同。
亦應瞭解，所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗可與一或多種其他治療活性劑組合投與。所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗可與改良其生物可用性、減少及/或修改其代謝、抑制其排泄及/或修改其在體內之分佈的其他治療活性劑組合投與。亦應瞭解，所用療法可針對相同病症達成所要作用，且/或其可達成不同作用。
所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗可與一或多種其他治療活性劑同時、在其之後或之後投與。一般而言，各藥劑將依根據該藥劑所確定的劑量及/或時程來投與。另外應瞭解，此組合中所用之其他治療活性劑可在單一組合物中一起投與或在不同組合物中分開投與。療法中使用的特定組合將考慮本發明化合物與其他治療活性劑的相容性及/或欲達成的所要治療作用。一般而言，預期組合中所 用之其他治療活性劑的用量不超過其個別使用時的量。在一些實施例中，組合用量將低於個別使用量。
在某些實施例中，所提供之聚醣結合物、免疫原性組合物或疫苗與一或多種本文所述其他醫藥劑組合投與。在某些實施例中，其他醫藥劑為抗癌劑。抗癌劑涵蓋生物治療抗癌劑以及化學治療劑。
例示性生物治療抗癌劑包括(但不限於)干擾素、細胞激素(例如腫瘤壞死因子、干擾素α、干擾素γ)、疫苗、造血生長因子、單株血清療法、免疫刺激劑及/或免疫調節劑(例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-6或IL-12)、免疫細胞生長因子(例如GM-CSF)及抗體(例如赫賽汀(Herceptin)(曲妥珠單抗(trastuzumab))、T-DM1、阿瓦斯汀(AVASTIN)(貝伐單抗(bevacizumab))、艾必妥(ERBITUX)(西妥昔單抗(cetuximab))、維克替比(Vectibix)(帕尼單抗(panitumumab))、美羅華(Rituxan)(rituximab)、百克沙(Bexxar)(托西莫單抗(tositumomab)))。
例示性化學治療劑包括(但不限於)抗雌激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷諾昔酚(raloxifene)及甲地孕酮(megestrol))、LHRH促效劑(例如膏斯克林(goscrclin)及亮丙立德(leuprolide))、抗雄激素(例如氟他胺(flutamide)及比卡魯胺(bicalutamide))、光動力療法(例如弗妥珀芬(vertoporfin)(BPD-MA)、酞花青(phthalocyanine)、感光劑Pc4及去甲氧基-竹紅菌素A(demethoxy-hypocrellin A)(2BA-2-DMHA))、氮芥(nitrogen mustards)(例如環磷醯胺(cyclophosphamide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、曲磷胺(trofosfamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、雌氮芥(estramustine)及美法侖(melphalan))、亞硝基脲(nitrosoureas)(例如卡莫司汀(carmustine)(BCNU)及洛莫司汀(lomustine)(CCNU))、烷基磺酸酯(例如白消安(busulfan)及曲奧舒凡(treosulfan))、三氮烯(例如達卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide))、含鉑化合物(例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin))、長春花生物 鹼(例如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春地辛(vindesine)及長春瑞賓(vinorelbine))、類紫杉醇(例如太平洋紫杉醇或太平洋紫杉醇等效物，諸如奈米粒子白蛋白結合太平洋紫杉醇(阿布拉生(Abraxane))、二十二碳六烯酸結合太平洋紫杉醇(DHA-太平洋紫杉醇，他克普辛(Taxoprexin))、聚麩胺酸鹽結合太平洋紫杉醇(PG-太平洋紫杉醇，太平洋紫杉醇聚麩胺酸，CT-2103，XYOTAX)、腫瘤活化前藥(TAP)ANG1005(Angiopep-2結合至三個太平洋紫杉醇分子)、太平洋紫杉醇-EC-1(太平洋紫杉醇結合至識別erbB2的肽EC-1)，及葡萄糖結合的太平洋紫杉醇，例如2'-太平洋紫杉醇2-葡萄哌喃糖基丁二酸甲酯；多西他賽(docetaxel)，紫杉醇(taxol))、表鬼臼脂(epipodophyllins)(例如依託泊苷(etoposide)、磷酸依託泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊甙(teniposide)、拓朴替康(topotecan)、9-胺基喜樹鹼、開普替康(camptoirinotecan)、伊立替康(irinotecan)、克立那托(crisnatol)、絲裂黴素C(mytomycin C))、抗代謝物、DHFR抑制劑(例如甲胺喋呤(methotrexate)、二氯喋醯麩胺酸(dichloromethotrexate)、曲美沙特(trimetrexate)、依達曲沙(edatrexate))、IMP去氫酶抑制劑(例如黴酚酸(mycophenolic acid)、噻唑呋林(tiazofurin)、病毒唑(ribavirin)及EICAR)、核糖核苷酸還原酶抑制劑(例如羥脲(hydroxyurea)及去鐵胺(deferoxamine))、尿嘧啶類似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(floxuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、雷替曲賽(ratitrexed)、喃氟啶-尿嘧啶(tegafur-uracil)、卡培他濱(capecitabine))、胞嘧啶類似物(例如阿糖胞苷(cytarabine)(ara C)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)及氟達拉賓(fludarabine))、嘌呤類似物(例如巰基嘌呤(mercaptopurine)及硫鳥嘌呤(Thioguanine))、維生素D3類似物(例如EB 1089、CB 1093及KH 1060)、異戊烯化抑制劑(例如洛伐他汀(lovastatin))、多巴胺激導性神經毒素(例如1-甲基-4-苯 基吡錠離子)、細胞週期抑制劑(例如星形孢菌素(staurosporine))、放線菌素(actinomycin)(例如放線菌素D、放線菌素d)、博萊黴素(bleomycin)(例如博萊黴素A2、博萊黴素B2、培洛黴素(peplomycin))、蒽環黴素(anthracycline)(例如道諾黴素(daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)、聚乙二醇化脂質體阿黴素、艾達黴素(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、吡柔比星(pirarubicin)、左柔比星(zorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone))、MDR抑制劑(例如維拉帕米(verapamil))、Ca2+ ATP酶抑制劑(例如毒胡蘿蔔素(thapsigargin))、伊馬替尼(imatinib)、沙立度胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)、酪胺酸激酶抑制劑(例如阿西替尼(axitinib)(AG013736)、伯舒替尼(bosutinib)(SKI-606)、西地尼布(cediranib)(RECENTINTM，AZD2171)、達沙替尼(dasatinib)(SPRYCEL®，BMS-354825)、埃羅替尼(erlotinib)(TARCEVA®)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®)、伊馬替尼(imatinib)(Gleevec®，CGP57148B，STI-571)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®，TYVERB®)、來他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、來那替尼(neratinib)(HKI-272)、尼羅替尼(nilotinib)(TASIGNA®)、司馬沙尼(semaxanib)(司馬西尼(semaxinib)，SU5416)、舒尼替尼(sunitinib)(SUTENT®，SU11248)、妥賽蘭尼(toceranib)(PALLADIA®)、凡德他尼(vandetanib)(ZACTIMA®，ZD6474)、凡塔藍尼(vatalanib)(PTK787，PTK/ZK)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®)、貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®)、西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®)、帕尼單抗(panitumumab)(VECTIBIX®)、蘭尼單抗(ranibizumab)(Lucentis®)、尼羅替尼(nilotinib)(TASIGNA®)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®)、依維莫司 (everolimus)(AFINITOR®)、阿侖單抗(alemtuzumab)(CAMPATH®)、吉妥單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG®)、坦羅莫司(temsirolimus)(TORISEL®)、ENMD-2076、PCI-32765、AC220、乳酸多韋替尼(dovitinib lactate)(TKI258，CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF 1120(VARGATEF®)、AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、替沃紮尼(tivozanib)(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647及/或XL228)、蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(bortezomib)(萬珂(Velcade)))、mTOR抑制劑(例如雷帕黴素(rapamycin)、坦羅莫司(temsirolimus)(CCI-779)、依維莫司(everolimus)(RAD-001)、地磷莫司(ridaforolimus)、AP23573(Ariad)、AZD8055(AstraZeneca)、BEZ235(Novartis)、BGT226(Norvartis)、XL765(Sanofi Aventis)、PF-4691502(Pfizer)、GDC0980(Genetech)、SF1126(Semafoe)及OSI-027(OSI))、奧利默森(oblimersen)、吉西他濱(gemcitabine)、洋紅黴素(carminomycin)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、培美曲塞(pemetrexed)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、達卡巴嗪(dacarbazine)、丙卡巴肼(procarbizine)、潑尼龍(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、卡普熱新(campathecin)、普卡黴素(plicamycin)、天冬醯胺酶(asparaginase)、胺基喋呤(aminopterin)、甲胺喋呤(methopterin)、泊非羅黴素(porfiromycin)、美法侖(melphalan)、異長春鹼(leurosidine)、環氧長春鹼(leurosine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、曲貝替定(trabectedin)、丙卡巴肼(procarbazine)、迪斯德莫來(discodermolide)、洋紅黴素(carminomycin)、胺基喋呤及六甲基三聚氰胺(hexamethyl melamine)。
在某些實施例中，所治療之個體為哺乳動物。在某些實施例中，個體為人類。在某些實施例中，個體為馴養動物，諸如狗、貓、牛、豬、馬、綿羊或山羊。在某些實施例中，個體為伴侶動物，例如狗或貓。在某些實施例中，個體為家畜動物，諸如牛、豬、馬、綿羊或山羊。在某些實施例中，個體為動物園動物。在另一個實施例中，個體為研究動物，諸如嚙齒動物、狗或非人類靈長類動物。在某些實施例中，個體為非人類轉殖基因動物，諸如轉殖基因小鼠或轉殖基因豬。
實例
包括以下實例以展示本發明之較佳實施例。熟習此項技術者應瞭解，以下實例中所揭示之技術代表本發明人發現在本發明實施中起良好作用之技術，且因此可視為構成其較佳實施方式。然而，根據本發明，熟習此項技術者應瞭解，在不背離本發明之精神及範疇的情況下可對所揭示之特定實施例作出許多改變且仍獲得相同或類似結果。
實例1：SSEA3類似物之例示性合成
A：SSEA3類似物-氨基之化學酶促合成
Figure 104127439-A0202-12-0063-23
合併化合物Gb4類似物、ATP、UTP、半乳糖類似物、磷酸烯醇丙酮酸酯、氯化鎂與酶半乳糖激酶(GalK)、UDP糖焦磷酸化酶(AtUSP)、β-1,3-半乳糖基轉移酶(LgtD)、丙酮酸激酶(PK)及無機焦磷酸酶(PPA)於溶液中，在室溫下開始反應，並控制pH值為7.0，且藉由薄膜層析板監視反應直至不再觀察到產物。反應完成後，藉由加熱30分鐘來移除反應混合物中的蛋白質，隨後離心且用0.22μM過濾器過濾。接著藉由C-18凝膠層析純化濾液。收集溶離份且藉由薄膜層析板監測。
實例2：SSEA4類似物之例示性合成
A：SSEA4-Gc-氨基之化學合成
Figure 104127439-A0202-12-0064-24
Figure 104127439-A0202-12-0065-25
將粉末狀分子篩(4A，0.5g)添加至受體3(93mg，0.045mmol)及醯亞胺酯6(76mg，0.068mmol)於6mL二氯甲烷(CH2Cl2)中之溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。接著冷卻至-10℃之後，添加TMSOTf(5μL，0.03mmol)，且混合物在5℃(冷室)攪拌一夜。反應混合物藉由添加三乙胺(0.5mL)淬滅，用CH2Cl2稀釋且經由矽藻土墊過濾。濾液用飽和碳酸氫鈉(NaHCO3)水溶液洗滌，經硫酸鈉(Na2SO4)除水，過濾且濃縮。藉由二氧化矽凝膠層析(沖提液為50-100%乙酸乙酯/正己烷)純化殘餘物，得到六醣7，其混雜有來自二醣醯亞胺酯6之雜質。藉由NMR測定產量(90mg，68%)。
將鋅粉(1g)添加至六醣7(90mg，0.03mmol)於冰乙酸(5.0mL)中之溶液中且攪拌混合物1至2小時，根據薄膜層析板分析直至化合物7耗盡。反應混合物用二氯甲烷稀釋，經由矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於吡啶/乙酸酐(1：1，2.0mL)中，攪拌1小時且濃縮。藉由二氧化矽凝膠層析來純化殘餘物。將醯基化物質溶解於無水二氯甲烷及甲醇(2：8，10mL)中且用甲醇鈉(45mg)處理。在室溫下攪拌4小時之後，添加水(0.2mL)，且攪拌所得混合物16小時。反應混合物用陽離子交換樹脂amberlyst IR-120中和，過濾且濃縮。藉由逆相層析法(RP-18)純化殘餘物。
將氫氧化鈀(20%，於木炭中，50mg)與純化物添加至甲醇/水/乙酸(10：10：0.5，6mL)混合液中，並在室溫一大氣壓的氫氣下攪拌16小時。混合物經由矽藻土墊過濾且濃縮。藉由逆相層析法純化殘餘物，得到化合物8(17mg，43%)。
B：SSEA4類似物-氨基之化學酶促合成
Figure 104127439-A0202-12-0066-26
SSEA4類似物-氨基係經由如流程3中所述的酶促再生策略合成。在此系統中，使N-乙醯-D-甘露糖胺衍生物與丙酮酸酯反應且藉由醛縮酶催化而轉化成乙醯神經氨酸類似物，隨後與Gb5-氨基在再生系統中合併(J.Am.Chem.Soc.2013,135,14831-14839)，獲得範例的SSEA4類似物-氨基。
反應條件詳細描述如下：Gb5-氨基(18μmol)、CTP(5μmol)、N-乙醯-D-甘露糖胺衍生物(27μmol)、丙酮酸鈉(81μmol)、PEP(55μmol)及ATP(5μmol)溶解於50mM Tris-HCl緩衝液(pH 8.0)中。將α-(2,3)-唾液酸轉移酶(20個單位)、唾液酸醛縮酶(20個單位)、CMK酶 (10個單位)、Pykf酶(10個單位)、PPA酶(10個單位)及Pmcss酶(10個單位)添加至溶液中，且在37℃反應8小時且藉由薄膜層析板監視。在反應結束時，藉由在100℃加熱5分鐘來使酶變性。所要的SSEA4類似物-氨基藉由G25、DEAE及SP管柱純化，產率約80%。
SSEA4類似物-氨基之1H NMR
B-1. SSEA4-戊胺(RN=NHAc，R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.94(d,J=3.8Hz,1H),4.72(d,J=8.5Hz,1H),4.54-4.50(m,3H),4.40(t,J=6.4Hz,1H),4.27(d,J=2.0Hz,1H),4.20(d,J=2.8Hz,1H),4.10-3.54(m,37 H),3.34-3.31(m,1H),3.02(t,J=7.6Hz,2H),2.78(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.05(m,6H),1.80(t,12.2Hz,1H),1.74-1.67(m,4H),1.51-1.45(m,2H)
B-2. Neu5Gc_SSEA4-戊胺(RN=NHGc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.89(d,J=3.6Hz,1H),4.66(d,J=8.2Hz,1H),4.52-4.45(m,3H),4.37(t,J=6.8Hz,1H),4.23(d,J=3.2Hz,1H),4.15(d,J=2.8Hz,1H),4.10-3.48(m,35 H),3.27(m,1H),2.98(t,J=7.6Hz,2H),2.73(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.00(s,3H),1.77(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.61(m,4H),1.48-1.39(m,2 H)。
B-3. Ac-炔基_SSEA4-戊胺(RN=NHCOC2H4C≡CH,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.89(d,J=4.0Hz,1H),4.67(d,J=8.4Hz,1H),4.52-4.45(m,3H),4.37(t,J=6.4Hz,1H),4.23(d,J=2.4Hz,1H),4.08-3.54(m,38 H),3.28(m,1H),2.99(t,J=7.6Hz,2H),2.53-2.4(m,4H),2.37(s,1H),2.01(s,3H),1.77(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.62(m,4H),1.49-1.41(m,2 H)。
B-4. Ac-氟化物_SSEA4-戊胺(RN=NHCOCH2F,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.90(d,J=46.4Hz,2H),4.90(d,J=4.0Hz,1 H),4.67(d,J=8.8Hz,1H),4.53-4.46(m,3H),4.37(t,J=6.8 Hz,1 H),4.24(d,J=2.8Hz,2H),4.16(d,J=3.2Hz,1 H),4.09-3.51(m,34H),3.28(m,1H),2.99(t,J=7.2Hz,1H),2.75(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.01(s,3H),1.79(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.62(m,4H),1.48-1.40(m,2 H)。
B-5. Ac-苯基_SSEA4-戊胺(RN=NHCOCH2Ph,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.39-7.30(m,5H),4.90(d,J=4.0Hz,1H),4.66(d,J=8.4Hz,1H),4.52-4.46(m,3H),4.37(t,J=6.8Hz,1H),4.23(d,J=2.8Hz,1H),4.15(d,J=3.2Hz,1H),4.08-3.47(m,38H),3.36(dd,J=1.6,9.2Hz,1H),3.28(m,1H),2.99(t,J=7.6Hz,2H),2.73(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.00(s,3H),1.76(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.61(m,4H),1.51-1.40(m,2 H)。
B-6. Ac-疊氮基_SSEA4-戊胺(RN=NHCOCH2N3,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.88(d,J=3.6Hz,1H),4.66(d,J=8.4Hz,1H),4.52-4.44(m,3H),4.36(t,J=6.4Hz,1H),4.23(d,J=2.4Hz,1H),4.08-3.54(m,35 H),3.27(m,1H),2.98(t,J=7.2Hz,2H),2.73(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.00(s,3H),1.77(t,J=12.4Hz,1H),1.72-1.60(m,4H),1.48-1.39(m,2 H)。
B-7. 5'-疊氮基_SSEA4-戊胺(RN=N3,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)：δ 4.90(d,J=3.6Hz,1H),4.67(d,J=8.4Hz,1H),4.51-4.47(m,3H),4.37(t,J=6.4Hz,1H),4.23(d,J=2.8Hz,1H),4.15(d,J=3.2Hz,1H),4.08-3.44(m,35H),3.31-3.27(m,1H),2.99(t,J=7.2Hz,1H),2.73(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.01(s,3H),1.76(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.63(3,4H),1.48-1.41(m,2H)；HRMS(ESI-TOF,M-H-)C46H78N5O33計算值1228.4579，實驗值1228.4621。
B-8. 9'-疊氮基_SSEA4-戊胺(RN=NHAc,R10=N3)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.85(d,J=3.8Hz,1H),4.67(d,J=8.4Hz,1H),4.51-4.44(m,3H),4.37(t,J=6.4Hz,1H),4.23(d,J=2.8Hz,1H),4.10-3.40(m,33 H),3.27(m,1H),2.98(t,J=7.6Hz,2H),2.72(dd,J=4.8,12.8Hz,1H),2.00(s,3H),2.00(s,3H),1.75(t,J=12.4Hz,1H),1.72-1.60(m,4H),1.58-1.38(m,2 H)。
B-9. NHBz_SSEA4-戊胺(RN=NHBz,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.80-7.73(m,2H),7.63(m,1H),7.56-7.51(m,2H),4.92(d,J=4.0Hz,1H),4.70(d,J=8.4Hz,1H),4.58-4.47(m,3H),4.40(t,J=6.4Hz,1H),4.26(d,J=2.8Hz,1H),4.19(d,J=3.2Hz,1H),4.15-3.53(m,36H),3.31(m,1H),3.01(t,J=7.6Hz,2H),2.82(dd,J=4.4,12.4Hz,1H),2.00(s,3H),1.87(t,J=12.0Hz,1H),1.72-1.60(m,4H),1.48-1.39(m,2 H)。
C：SSEA4類似物-硫醇之交聯反應
Figure 104127439-A0202-12-0069-27
在某些實施例中，將DTSSP(2.0eq)及SSEA4類似物-氨基(1.0 eq)混合於0.1M磷酸鹽緩衝液pH 7.4(約3mg/mL)中。在室溫下攪拌溶液一夜。接著將反應混合物升溫至40℃且添加DTT(9.0eq)。在40℃攪拌1.5小時之後，真空濃縮反應混合物，且藉由LH-20管柱純化殘餘物，得到白色固體SSEA4類似物-硫醇。(流程4)
SSEA4類似物-硫醇之1H NMR
C-1：SSEA4-硫醇(RN=NHAc,R10=OH)
1H NMR(400Hz,D2O)δ 4.88(d,J=4.0Hz,1H),4.65(d,J=8.5Hz,1H),4.50-4.44(m,3H),4.36(t,J=6.5Hz,1H),4.22(d,J=2.9Hz,1H),4.14(d,J=3.1Hz,1H),4.04-3.55(m,35H),3.26(t,J=8.5Hz,1H),3.18(t,J=6.8Hz,2H),2.74-2.70(m,3H),2.49(t,J=6.8Hz,2H),1.994(s,3H),1.992(s,3H),1.75(t,J=12.2Hz,1H),1.61(tt,J=6.7,6.7HZ,2H),1.52(tt,J=7.1,7.1Hz,2H),1.40-1.36(m,2H)；
C-2：Neu5Gc_SSEA4-硫醇(RN=NHGc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.89(d,J=3.9Hz,1H),4.66(d,J=8.5Hz,1H),4.53-4.43(m,3H),4.36(t,J=6.5Hz,1H),4.22(d,J=3.0Hz,1H),4.15(d,J=3.1Hz,1H),4.11-3.48(m,38H),3.27(t,J=8.4Hz,1H),3.19(t,J=6.7Hz,2H),2.78-2.71(m,3H),2.51(t,J=6.7Hz,2H),2.00(s,3H),1.78(t,J=12.1Hz,1H),1.61(q,J=7.1Hz,2H),1.52(q,J=7.1Hz,2H),1.39(q,J=8.0Hz,2H)。
C-3：Ac-炔基_SSEA4-硫醇(RN=NHCOC2H4C≡CH,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.94(d,J=3.9Hz,1H),4.72(d,J=8.4Hz,1H),4.58-4.48(m,3H),4.41(t,J=6.5Hz,1H),4.30-4.26(m,1H),4.21(d,J=3.1Hz,1H),4.14-3.54(m,37H),3.32(t,J=8.6Hz,1H),3.24(t,J=6.8Hz,2H),2.83-2.74(m,3H),2.59-2.49(m,5H),2.43(s,1H),2.06(s,3H),1.82(t,J=12.1Hz,1H),1.67(p,J=6.9Hz,2H),1.58(p,J=6.9Hz,2H),1.48-1.38(m,2H)。
C-4：Ac-氟化物_SSEA4-硫醇(RN=NHCOCH2F，R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.90(d,J=46.4Hz,2H),4.95(d,J=4.0Hz,1H),4.72(d,J=8.5Hz,1H),4.59-4.48(m,3H),4.41(t,J=6.6Hz,1H),4.31-4.26(m,1H),4.23-4.18(m,1H),4.14-3.54(m,36H),3.36-3.29(m,1H),3.25(t,J=6.8Hz,2H),2.80(m,3H),2.57(t,J=6.7Hz,2H),2.06(s,3H),1.84(t,J=12.2Hz,1H),1.67(p,J=6.9Hz,2H),1.58(p,J=7.0Hz,2H),1.43(q,J=8.3Hz,2H)。
C-5：Ac-苯基_SSEA4-硫醇(RN=NHCOCH2Ph，R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.48-7.32(m,5H),4.94(d,J=3.6Hz,1H),4.73-4.68(d,J=8.4Hz,1H),4.52(m,3H),4.41(t,J=6.4Hz,1H),4.29-4.26(m,1H),4.20(d,J=3.0Hz,1H),4.13-3.51(m,37H),3.39(dd,J=9.0,1.8Hz,1H),3.32(t,J=8.6Hz,1H),3.25(t,J=6.7Hz,2H),2.83-2.74(m,3H),2.56(t,J=6.7Hz,2H),2.04(s,3H),1.80(t,J=12.1Hz,1H),1.67(q,J=7.2Hz,2H),1.57(q,J=7.1Hz,2H),1.48-1.38(m,2H)。
C-6：Ac-疊氮基_SSEA4-硫醇(RN=NHCOCH2N3，R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.88(d,J=3.9Hz,1H),4.66(d,J=8.5Hz,1H),4.52-4.43(m,3H),4.36(t,J=6.5Hz,1H),4.22(d,J=3.1Hz,1H),4.14(d,J=3.1Hz,1H),4.08-3.47(m,38H),3.26(t,J=8.4Hz,1H),3.19(t,J=6.8Hz,2H),2.74(m,3H),2.51(t,J=6.7Hz,2H),2.00(s,3H),1.76(t,J=12.1Hz,1H),1.61(q,J=7.1Hz,2H),1.53(p,J=7.0Hz,2H),1.38(q,J=8.3Hz,2H)。
C-7：5'-疊氮基_SSEA4-硫醇(RN=N3，R10=OH)
1H NMR(400Hz,D2O)δ 4.90(d,J=4.0Hz,1H),4.67(d,J=8.4Hz,1H),4.51-4.46(m,3H),4.37(t,J=6.4Hz,1H),4.24(d,J=2.8Hz,1H),4.15(d,J=2.8Hz,1H),4.01-3.44(m,35H),3.28(t,J=8.4Hz, 1H),3.21(t,J=6.8Hz,2H),2.78-2.72(m,3H),2.52(t,J=7.2Hz,2H),2.02(s,3H),1.77(t,J=12.0Hz,1H),1.67-1.60(m,2H),1.58-1.50(m,2H),1.43-1.37(m,2H)
C-8：9'-疊氮基_SSEA4-硫醇(RN=NHAc，R10=N3)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 4.90(d,J=3.9Hz,1H),4.68(d,J=8.5Hz,1H),4.48(dd,J=13.2,7.9Hz,3H),4.37(t,J=6.5Hz,1H),4.26-4.22(m,1H),4.16(d,J=3.3Hz,1H),4.09-3.44(m,36H),3.31-3.24(m,1H),3.20(t,J=6.8Hz,2H),2.79-2.70(m,3H),2.52(t,J=6.7Hz,2H),2.02(d,J=2.0Hz,6H),1.76(t,J=12.1Hz,1H),1.63(p,J=6.9Hz,2H),1.54(p,J=6.9Hz,2H),1.39(q,J=8.3Hz,,2H)。
C-9：NHBz_SSEA4-硫醇(RN=NHBz,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.80-7.73(m,2H),7.66-7.58(m,1H),7.52(dd,J=8.4,7.0Hz,2H),4.91(d,J=3.9Hz,1H),4.69(d,J=8.5Hz,1H),4.57-4.44(m,3H),4.38(t,J=6.5Hz,1H),4.27-4.22(m,1H),4.18(d,J=3.1Hz,1H),4.16-3.52(m,36H),3.29(t,J=8.5Hz,1H),3.20(t,J=6.8Hz,2H),2.84-2.72(m,3H),2.52(t,J=6.7Hz,2H),2.03(s,3H),1.89(t,J=12.2Hz,1H),1.63(p,J=6.8Hz,2H),1.53(q,J=7.1Hz,2H),1.40(q,J=8.2Hz,2H)。
D：SSEA4類似物-烯丙基之化學酶促合成
流程5. 藉由再生系統產生SSEA4類似物-烯丙基之合成路徑
Figure 104127439-A0202-12-0073-28
經由如流程5中所述的酶促再生策略來合成SSEA4類似物-烯丙基。在此系統中，使N-乙醯-D-氨基甘露糖衍生物與丙酮酸酯反應且藉由醛縮酶催化而轉化成乙醯神經氨酸類似物，隨後與Gb5-烯丙基在再生系統中合併(J.Am.Chem.Soc.2013,135,14831-14839)，獲得範例的SSEA4類似物-烯丙基。(流程5)
反應條件詳細描述如下：將Gb5-烯丙基(18μmol)、CTP(5μmol)、N-乙醯-D-氨基甘露糖衍生物(27μmol)、丙酮酸鈉(81μmol)、PEP(55μmol)及ATP(5μmol)溶解於50mM Tris-HCl緩衝液(pH 8.0)中。將α-(2,3)-唾液酸轉移酶(20個單位)、唾液酸醛縮酶(20個單位)、CMK酶(10個單位)、Pykf酶(10個單位)、PPA酶(10個單位)及Pmcss酶(10個單位)添加至溶液中，且在37℃反應8小時且藉由薄膜層析板監視。在反應結束時，藉由在100℃加熱5分鐘來使酶變性。所要SSEA4類似物-烯丙基藉由G25、DEAE及SP管柱純化，產率約80%。
SSEA4類似物-烯丙基之1H NMR
D-1. SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHAc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 6.00(m,1H),5.40-5.37(d,J=17.3 Hz,1H),5.30-5.28(d,J=10.4Hz,1H),4.92(d,J=3.9Hz,1H),4.70(d,J=8.5Hz,1H),4.54-4.51(m,3H),4.40-4.38(m,2H),4.25-4.18(m,3H),4.10-3.52(m,34 H),3.35-3.32(t,J=8.6Hz,1H),2.77(dd,J=12.5,4.6Hz,1H),2.03(s,6H),1.80(t,J=12.1Hz,1H)
D-2. Neu5Gc_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHGc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.99(m,1H),5.38(dd,J=1.2,17.2Hz,1H),5.29(dd,J=1.2,10.0Hz,1H),4.93(d,J=4.0Hz,1H),4.69(d,J=8.4Hz,1H),4.58-4.51(m,3H),4.43-4.37(m,2H),4.28-4.17(m,3H),4.14-3.52(m,34 H),3.33(t,J=8.8Hz,1H),2.77(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.03(s,3H),1.81(t,J=12.0Hz,1H)。
D-3. Ac-氟化物_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHCOCH2F,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.96(m,1H),5.36(dd,J=1.6,17.2Hz,1H),5.25(dd,J=1.6,10.4Hz,1H),4.89(d,J=46.4Hz,2H),4.88(d,J=3.6Hz,1 H),4.65(d,J=8.4Hz,1H),4.53-4.45(m,3H),4.39-4.32(m,2H),4.22-3.51(m,37H),3.30(t,J=8.4Hz,1H),2.73(dd,J=4.4,12.4Hz,1H),2.00(s,3H),1.85(t,J=12.4Hz,1H)。
D-4. Ac-苯基_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHCOCH2Ph,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.45-7.34(m,5H),6.02(m,1H),5.42(dd,J=1.2,17.2Hz,1H),5.32(dd,J=1.2,10.4Hz,1H),4.94(d,J=4.0Hz,1H),4.72(d,J=8.4Hz,1H),4.59-4.52(m,3H),4.46-4.38(m,2H),4.30-3.50(m,38 H),3.42-3.32(m,4H),2.77(dd,J=4.4,12.8Hz,1H),2.05(s,3H),1.90(t,J=12.0Hz,1H)。
D-5. Ac-疊氮基_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHCOCH2N3,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.95(m,1H),5.35(dd,J=1.6,17.2Hz,1H),5.25(dd,J=1.2,10.4Hz,1H),4.88(d,J=3.6Hz,1H),4.65(d,J=8.4Hz,1H),4.52-4.46(m,3H),4.40-4.32(m,2H),4.23-4.18(m,3H),4.12-3.50(m,36 H),3.30(t,J=5.6Hz,1H),2.72(dd,J=4.8,12.8Hz,1H),2.00(s,3H),1.84(t,J=12.4Hz,1H)。
D-6. 5'-疊氮基_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=N3,R10=OH)
1HNMR(400MHz,D2O)：δ 5.99(m,1H),4.40(dd,J=1.6,17.2Hz,1H),5.29(d,J=10.4Hz,1H),4.92(d,J=3.6Hz,1H),4.70(d,J=8.4Hz,1H),4.56-4.51(m,3H),4.43-4.38(m,2H),4.26(d,J=3.6Hz,2H),4.22(d,J=6.4Hz,1H),4.10-3.46(m,35H),3.36-3.32(m,1H),2.74(dd,J=4.8,12.4Hz,1H),2.04(s,3H),1.79(t,J=12.4Hz)；HRMS(ESI-TOF,M-H-)C44H71N4O33計算值1183.4001，實驗值1183.4056。
D-7. 9'-疊氮基_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHAc,R10=N3)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.96(m,1H),5.36(dd,J=1.6,17.3Hz,1H),5.26(dd,J=1.6,10.4Hz,1H),4.90(d,J=3.6Hz,1H),4.68(d,J=8.4Hz,1H),4.55-4.47(m,3H),4.41-4.35(m,2H),4.25-4.14(m,3H),4.10-3.41(m,34 H),3.31(t,J=6.8Hz,1H),2.72(dd,J=4.8,12.8Hz,1H),2.02(s,3H),1.79(t,J=12.0Hz,1H)。
D-8. NHBz_SSEA4-烯丙基(R1=OH,RN=NHBz,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.76-7.73(m,2H),7.59(m,1H),7.51-7.46(m,2H),5.90(m,1H),5.30(dd,J=1.6,17.2Hz,1H),5.25(dd,J=1.6,10.8Hz,1H),4.89(d,J=3.6Hz,1H),4.67(d,J=8.8Hz,1H),4.55-4.45(m,3H),4.39-4.38(m,2H),4.24-3.50(m,34H),3.30(t,J=8.0Hz,1H),2.77(dd,J=4.4,12.4Hz,1H),2.01(s,3H),1.90(t,J=12.4Hz,1H)。
E：SSEA4類似物-醛之氧化反應
Figure 104127439-A0202-12-0076-29
在某些例示性實施例中，使SSEA4類似物-烯丙基於甲醇及水中之經攪拌溶液在臭氧氣體氛圍下、在-70℃進行臭氧分解15分鐘。藉由甲硫醚(Me2S)淬滅反應混合物，接著真空蒸發溶液。所要SSEA4類似物-醛接著藉由G15管柱純化。(流程6)
SSEA4類似物-醛之1H NMR
E-1：SSEA4-醛(RN=NHAc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.19(t,J=4.9Hz,1H),4.89(d,J=3.9Hz,1H),4.66(d,J=8.4Hz,1H),4.54-4.45(m,3H),4.36(t,J=6.5Hz,1H),4.25-4.20(m,1H),4.15(d,J=3.1Hz,1H),4.08-3.47(m,32H),3.37-3.30(m,1H),2.73(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.00(d,J=0.9Hz,6H),1.76(t,J=12.1Hz,1H)。
E-2：Neu5Gc_SSEA4-醛(RN=NHGc,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.20(t,J=4.9Hz,1H),4.91(d,J=3.9Hz,1H),4.68(d,J=8.5Hz,1H),4.52(dt,J=8.5,4.5Hz,3H),4.38(t,J=6.5Hz,1H),4.27-4.22(m,1H),4.17(d,J=3.1Hz,1H),4.13-3.51(m,34H),3.38-3.32(m,1H),2.76(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.02 (s,3H),1.80(t,J=12.1Hz,1H)。
E-3：Ac-氟化物_SSEA4-醛(RN=NHCOCH2F,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.21(t,J=4.9Hz,1H),4.90(d,J=46.4Hz,2H),4.69(d,J=8.5Hz,1H),4.52(t,J=8.0Hz,3H),4.38(t,J=6.4Hz,1H),4.24(d,J=3.1Hz,1H),4.17(d,J=3.2Hz,1H),4.10-3.45(m,33H),3.40-3.32(m,1H),2.78(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.03(s,3H),1.81(t,J=12.2Hz,1H)。
E-4：Ac-苯基_SSEA4-醛(RN=NHCOCH2Ph,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.48-7.27(m,5H),5.22(t,J=4.9Hz,1H),4.92(d,J=4.0Hz,1H),4.69(d,J=8.4Hz,1H),4.56-4.49(m,3H),4.39(t,J=6.5Hz,1H),4.26(m,1H),4.18(m,1H),4.10-3.45(m,34H),3.43-3.34(m,1H),2.76(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.03(s,3H),1.78(t,J=12.3Hz,1H)。
E-5：Ac-疊氮基_SSEA4-醛(RN=NHCOCH2N3,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.20(t,J=4.9Hz,1H),4.90(d,J=3.9Hz,1H),4.68(d,J=8.5Hz,1H),4.54-4.48(m,3H),4.38(t,J=6.4Hz,1H),4.24(d,J=3.1Hz,1H),4.17(d,J=3.1Hz,1H),4.13-3.51(m,34H),3.39-3.32(m,1H),2.75(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.02(s,3H),1.79(t,J=12.2Hz,1H)。
E-6：9'-疊氮基_SSEA4-醛(RN=NHAc,R10=N3)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.20(t,J=4.9Hz,1H),4.91(d,J=3.9Hz,1H),4.69(d,J=8.5Hz,1H),4.52(t,J=8.0Hz,3H),4.38(t,J=6.4Hz,1H),4.24(d,J=3.1Hz,1H),4.17(d,J=3.2Hz,1H),4.10-3.45(m,32H),3.39-3.32(m,1H),2.74(dd,J=12.5,4.6Hz,1H),2.03(d,J=2.1Hz,6H),1.77(t,J=12.1Hz,1H)。
E-7：NHBz_SSEA4-醛(RN=NHBz,R10=OH)
1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.83-7.76(m,2H),7.63(t,J=7.3Hz,1H),7.53(t,J=7.7Hz,2H),5.21(t,J=4.9Hz,1H),4.92(d,J=3.8Hz,1H),4.70(d,J=8.5Hz,1H),4.57-4.49(m,3H),4.39(t,J=6.5Hz,1H),4.26(d,J=3.1Hz,1H),4.19(d,J=3.3Hz,1H),4.16-3.52(m,32H),3.40-3.34(m,1H),2.82(dd,J=12.4,4.6Hz,1H),2.04(d,J=4.7Hz,3H),1.87(t,J=12.1Hz,1H)。
實例3：經由磺基-EMCS交聯來合成SSEA3/SSEA4類似物-CRM197結合物
Figure 104127439-A0202-12-0078-30
一般方法：
步驟A. 將SSEA3類似物-氨基或SSEA4類似物-氨基修飾成SSEA3類似物-硫醇或SSEA4類似物-硫醇
為了合成SSEA3/4類似物CRM197結合物，使胺封端的SSEA3/4類似物與DTSSP連接子在PBS緩衝液(pH 7.4)中在室溫下反應。藉由pH紙監測溶液pH值；當溶液變成偏酸性時，添加一些氫氧化鈉溶液至反應溶液中。在室溫下攪拌反應物12小時之後，在室溫下向溶液中添加DTT。溶液在40℃保持攪拌，接著藉由減壓濃縮移除溶劑。最後藉由LH-20管柱層析純化殘餘物，得到SSEA3/4類似物-硫醇。
步驟B：將CRM197修飾為CRM197-順丁烯二醯亞胺。
經由反覆地加水及透析(Amicon Ultra-0.5，10kDa)移除市售CRM197(1.0mg)的鹽之後，將殘餘物溶解於PBS緩衝液(pH 6.5，1.0mL)中且轉移至樣品小瓶中。向溶液中添加磺基-EMCS(1.0mg，8.22×10-6mol)，接著反應物在室溫下保持攪拌2小時。藉由Amicon Ultra-0.5(10kDa)純化混合物。使用MALDI-TOF檢查分子量且用BCA分析計算蛋白質含量之後，將CRM197-順丁烯二醯亞胺儲存於PBS緩衝液(pH 7.2，1.0mg/mL)中以用於下一步驟。根據MALDI-TOF資料，可計算順丁烯二醯亞胺官能基之量。舉例而言，當CRM197-順丁烯二醯亞胺之分子量為61841時，CRM197-順丁烯二醯亞胺上之順丁烯二醯亞胺官能基數目為(61841-58326)/193=18.2。
步驟C：合成SSEA3/4類似物-CRM197結合物
將CRM197-順丁烯二醯亞胺溶解於PBS緩衝液(pH 7.2，濃度為1.0mg/mL)中，接著向溶液中添加不同量的SSEA3/4類似物-硫醇(5.0mg/mL，於PBS緩衝液中，pH 7.2)。在室溫下攪拌混合物2小時。使用Amicon Ultra-0.5(10kDa)純化SSEA3/4類似物-CRM197結合物，以經由透析來移除未反應的SSEA3/4類似物-硫醇及磷酸鈉鹽。所得SSEA3/4類似物-CRM197結合物可藉由MALDI-TOF分析加以表徵以測定碳水化合物合併率。與DTT反應且藉由LH-20管柱層析純化之後，可回收未反應的SSEA3/4類似物-硫醇。
Figure 104127439-A0202-12-0079-31
Figure 104127439-A0202-12-0080-32
實例4：經由磺基-EMCS交聯來合成SSEA4-Gc-CRM197結合物
Figure 104127439-A0202-12-0080-33
步驟A：將SSEA4-Gc-氨基修飾為SSEA4-Gc-硫醇
在室溫下，將DTSSP(5.0mg，8.22×10-6mol)添加至含有SSEA4-Gc-氨基(5.0mg，4.01×10-6mol)於PBS緩衝液(pH 7.4，1.0mL)中的燒瓶中。藉由pH紙監測溶液pH值，當溶液變成偏酸性時，向溶液中添加氫氧化鈉溶液(1莫耳濃度/水)至反應溶液中。在室溫下攪拌反應物12小時之後，在室溫下向溶液中添加DTT(5.0mg，32.41×10-6mol)。溶液在40℃保持攪拌1小時，接著藉由減壓濃縮移除溶劑。最後藉由LH-20管柱層析來純化殘餘物，得到SSEA4-Gc-硫醇(5.0mg，93%)。
步驟B：將CRM197修飾為CRM197-順丁烯二醯亞胺。
經由反覆地加水且透析(Amicon Ultra-0.5，10kDa)來移除市售CRM197(1.0mg)中的鹽之後，將殘餘物溶解於PBS緩衝液(pH 6.5，1.0mL)中且轉移至樣品小瓶中。向溶液中添加磺基-EMCS(1.0mg， 8.22×10-6mol)，接著反應物在室溫下保持攪拌2小時。藉由Amicon Ultra-0.5(10kDa)純化混合物。使用MALDI-TOF檢查分子量且用BCA分析計算蛋白質量之後，CRM197-順丁烯二醯亞胺於PBS緩衝液(pH 7.2，1.0mg/mL)中儲存用於下一步驟。根據MALDI-TOF資料，可計算順丁烯二醯亞胺官能基之量。舉例而言，當CRM197-順丁烯二醯亞胺之分子量為61841時，CRM197-順丁烯二醯亞胺上之順丁烯二醯亞胺官能基數目為(61841-58326)/193=18.2。
將CRM197-順丁烯二醯亞胺溶解於PBS緩衝液(pH 7.2，濃度為1.0mg/mL)中，接著向溶液中添加不同量的SSEA4Gc-硫醇(5.0mg/mL，於PBS緩衝液中，pH 7.2)。在室溫下攪拌混合物2小時。使用Amicon Ultra-0.5(10kDa)純化SSEA4-Gc-CRM197結合物，以經由透析來移除未反應的SSEA4-Gc-硫醇及磷酸鈉鹽。所得SSEA4-Gc-CRM197結合物可藉由MALDI-TOF分析來表徵以測定碳水化合物合併率，如表2中所示。與DTT反應且藉由LH-20管柱層析純化之後，可回收未反應的SSEA4-Gc-硫醇。
步驟C：捕捉CRM197-順丁烯二醯亞胺中的未反應順丁烯二醯亞胺
將SSEA4-Gc-CRM197結合物溶解於PBS緩衝液(pH 7.2，濃度為1.0mg/mL)中且向溶液中添加10.0當量的2-巰基乙醇(5mg/mL，PBS緩衝液，pH 7.2)。在室溫下攪拌混合物2小時。使用Amicon Ultra-0.5(10kDa)純化SSEA4-Gc-CRM197結合物，以經由透析移除未反應的2-巰基乙醇及磷酸鈉鹽，接著凍乾為白色粉末。
表2
Figure 104127439-A0202-12-0082-34
實例5：經由SBAP交聯產生的SSEA4類似物-CRM197結合物
Figure 104127439-A0202-12-0082-35
將CRM197溶解於0.1M磷酸鹽緩衝液pH 7.4(約1mg/mL)中，且向溶液中添加SBAP(1.0mg)。在室溫下輕緩地攪拌溶液2小時。混合物接著用PBS緩衝液稀釋且藉由Amicon Ultra-0.5(10kDa，2X)離心濃縮，接著加入0.1M磷酸鹽緩衝液至濃縮液中並離心，重覆5次。所得經修飾之CRM-197可藉由MALDI-TOF(陽離子模式，基質為芥子酸，水)分析加以表徵以測定SBAP合併率。
將經修飾之CRM197溶解於0.1M磷酸鹽緩衝液pH 8.0(約1mg/mL)中，且向溶液中添加SSEA4-硫醇類似物。混合物在室溫下攪拌1天。混合物接著用PBS緩衝液稀釋且藉由Amicon Ultra-0.5(10 kDa)離心濃縮，接著加入0.1M磷酸鹽緩衝液至濃縮液中並離心，重覆5次。所得聚醣-蛋白質結合物可藉由MALDI-TOF(陽離子模式，基質為芥子酸，水)分析加以表徵以測定碳水化合物合併率。(流程9)
Figure 104127439-A0202-12-0083-36
實例6：經由還原胺化交聯產生的SSEA4類似物-CRM197結合物
Figure 104127439-A0202-12-0083-37
在某些實施例中，將CRM197溶解於0.1M磷酸鹽緩衝液(pH 6-9，約1mg/mL)中，且向溶液中添加足量的SSEA4-醛類似物及氰基硼氫化鈉。在室溫下輕緩地攪拌溶液3天。混合物接著用去離子水稀釋且藉由Amicon Ultra-0.5(10kDa離心濃縮，接著加入0.1M磷酸鹽緩衝液至濃縮液中並離心，重覆5次。所得聚醣-蛋白質結合物藉由MALDI-TOF(陽離子模式，基質為芥子酸與水)分析加以表徵以測定碳水化合物接合數。(流程10)
表4：經由還原胺化產生的SSFA4類似物與CRM197結合物中的碳水化合物接合數
Figure 104127439-A0202-12-0084-38
實例7：SSEA4類似物-CRM197結合物之免疫測定
例示性方法
為了證明SSEA4類似物-CRM197結合物(S1至S10)的功效/免疫原性，雌性C57BL/6小鼠(各組n=5)肌內接種0.5μg SSEA4類似物CRM197結合物(與2.0μg醣脂佐劑組合使用)。對照小鼠僅給予磷酸鹽緩衝生理鹽水與2.0μg醣脂佐劑。疫苗接種2個月，隔兩週一次且每次接種疫苗之後一週收集免疫小鼠的抗血清。使用SSEA4所固著的96孔滴定盤檢查針對SSEA4的抗體效價。使用SSEA4所固著的96孔滴定盤進行酵素連結免疫吸附法(ELISA)。簡言之，將稀釋的抗血清與所固著的SSEA4一起在室溫下培育2小時。洗滌循環之後，接著使用HPR結合的抗IgG或IgM特異性抗體偵測所捕獲的抗SSEA4抗體。
為了確定聚醣-蛋白質結合方法是否會干擾免疫反應，使原生SSEA4與CRM197經由EMCS連接子(M1)、SBAP連接子(S1)或還原胺化法(R1)結合且用於如上文所述的免疫原性研究。
代表性結果
四次免疫接種之後，原生SSEA4以及所有八種SSEA4類似物當與Gal-C34佐劑組合使用時可積極地誘發針對SSEA4的IgG(圖3A)與IgM(圖3B)抗體。在不同類似物群組中，抗SSEA4 IgG及IgM抗體之效價無顯著差異。另外，Glc-C34當與原生SSEA4及其它類似物共投與時，亦可用作誘導針對SSEA4之IgG(圖4A)與IgM(圖4B)的疫苗佐劑。
此外，圖5中所示的結果表明聚醣-蛋白質結合方法可影響免疫反應。與Gal-C34組合使用時，SSEA4-EMCS-CRM197(M1)誘發的抗SSEA4 IgG抗體效價高於SSEA4-SBAP-CRM197(S1)及SSEA4-CRM197(經由還原胺化法結合，R1)。
實例8：SSEA4類似物CRM197結合物之免疫原性研究
為了證明SSEA4類似物CRM197結合物的免疫原性，五隻雌性BALB/c小鼠肌內免疫接種2μg SSEA4類似物-CRM197結合物及2μg醣脂佐劑C34三次，隔兩週一次。在先前研究中，在無任何佐劑之單獨SSEA4類似物-蛋白質結合物的情況下，抗GloboH抗體效價較低。第三次免疫接種之後十天，獲得來自各免疫原的抗血清且針對含有94種化學合成聚醣的聚醣微陣列加以測試，包括球系列聚醣及其他腫瘤相關碳水化合物抗原。由於對聚醣進行一些化學修飾，因此為了檢查交叉反應性而在聚醣陣列中包括一些官能性連接子。
SSEA4-Gc-CRM197結合物所誘導的抗體被SSEA4-Gc、原生SSEA4或SSEA4四醣片段特異性識別，但不被其他TACA及官能性連接子特異性識別。獲自醣結合物的血清誘導高IgG抗體效價，表明T細胞依賴性免疫反應。有趣的是，對於SSEA4-Gc或原生SSEA4而言，未觀察到顯著IgM產生。關於針對GloboH的IgG含量，SSEA4-Gc CRM197所誘導的抗體效價比天然形式原生SSEA4-CRM197結合物高得多。其中，6.9個SSEA4-Gc分子與1個CRM197分子的結合物可誘導最高的抗體效價。
小鼠劑量及免疫接種時程
為了比較SSEA4類似物CRM197的免疫原性，十組五隻小鼠(8週齡雌性BALB/c小鼠，BioLASCO，臺灣)肌內免疫接種醣脂C34。免疫接種三次，隔2週一次。各疫苗含有2μg SSEA4類似物及2μg C34。對照小鼠注射磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)。小鼠首次免疫接種之前(免 疫前)及第三次免疫接種之後10天放血。藉由4,000×g離心10分鐘來獲得所有血清。藉由聚醣微陣列來分析血清反應。
使用聚醣陣列的血清學分析
用1% BSA/PBST緩衝液(PBST緩衝液：PBS及0.05% Tween-20，pH 7.4)稀釋小鼠血清。聚醣微陣列在4℃用Superblock阻斷緩衝液(Pierce)阻斷1小時且在使用之前用PBST緩衝液洗滌三次。接著將血清稀釋液引入聚醣微陣列中且在4℃培育1小時。洗去過量血清抗體且微陣列個別地與Alexa Fluor 647結合的山羊抗小鼠IgG抗體或DyLight 649結合的山羊抗小鼠IgM抗體作為二次抗體，一起在4℃在暗處培育1小時。載片接著用PBST洗滌三次且用微陣列螢光晶片讀取器(GenePix 4300A；Molecular Devices Corporation)在635nm波長下掃描且經掃描之影像用GenePix Pro-6.0分析軟體(Axon Instruments,Union City,CA,USA)加以分析。
其他實施例
本說明書中揭示之所有特徵可以任何組合形式組合。本說明書中揭示之各特徵可經用於相同、等效或類似目的之替代性特徵置換。因此，除非另外明確說明，否則所揭示之各特徵僅為一系列等效或類似通用特徵之一個實例。根據以上描述，熟習此項技術者可容易確定所述實施例之基本特徵，且在不背離其精神及範疇之情況下可對實施例作出各種變化及修改以使其適應各種用途及條件。因此，其他實施例亦屬於申請專利範圍內。
Figure 104127439-A0202-11-0002-2

Claims (38)

  1. 一種免疫原性組合物，其包含：包括載劑及一或多種聚醣之聚醣結合物；其中該組合物可包含或不包含佐劑；其中該一或多種聚醣中之每一者經由連接子與該載劑結合，該結合物具有式(III)：
    Figure 104127439-A0305-02-0089-2
     其中：X1為-OR或-SR，其中R為氧或硫保護基、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C6-14芳基、視情況經取代之醯基或視情況經取代之醯亞胺基；其中，該氧或硫保護基選自由以下組成之群：甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、第三丁基硫甲基、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、對甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、鄰甲氧基苯酚甲基(GUM)、第三丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、矽烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、雙(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氫哌喃基(THP)、3-溴四氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、1-甲氧基環己基、4-甲氧基四氫哌喃基(MTHP)、4-甲氧基四氫硫代哌喃基、4-甲氧基四氫硫代哌喃基S,S-二氧化 物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氫呋喃基、四氫硫代呋喃基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫-7,8,8-三甲基-4,7-甲醇苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基矽烷基乙基、2-(苯基氧硒基)乙基、第三丁基、烯丙基、對氯苯基、對甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基(Bn)、對甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、鄰硝基苯甲基、對硝基苯甲基、對鹵基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、對氰基苯甲基、對苯基苯甲基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧離子基、二苯甲基、對，對'-二硝基二苯甲基、5-二苯并環庚基、三苯甲基、α-萘基二苯基甲基、對甲氧基苯基二苯基甲基、二(對甲氧基苯基)苯基甲基、三(對甲氧基苯基)甲基、4-(4'-溴苯甲醯甲基氧基苯基)二苯甲基、4,4',4"-參(4,5-二氯鄰苯二甲醯亞胺基苯基)甲基、4,4',4"-參(菊芋糖基氧基苯基)甲基、4,4',4"-參(苯甲醯氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)雙(4',4"-二甲氧基苯基)甲基、1,1-雙(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)二苯并哌喃基、9-(9-苯基-10-側氧基)蒽基、1,3-苯并二硫雜環戊烷-2-基、苯并異噻唑基S,S-二氧離子基、三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、三異丙基矽烷基(TIPS)、二甲基異丙基矽烷基(IPDMS)、二乙基異丙基矽烷基(DEIPS)、二甲基第三己基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、三苯甲基矽烷基、三-對二甲苯基矽烷基、三苯基矽烷基、二苯基甲基矽烷基(DPMS)、第三丁基甲氧苯基矽烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲醯基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸 酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-側氧基戊酸酯(乙醯丙酸酯)、4,4-(伸乙基二硫基)戊酸酯(乙醯丙醯基二硫縮醛)、新戊酸酯、金剛酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(均三甲基苯甲酸酯)、碳酸甲酯、碳酸9-茀基甲酯(Fmoc)、碳酸乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、2-(三甲基矽烷基)碳酸乙酯(TMSEC)、碳酸2-(苯基磺醯基)乙酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)碳酸乙酯(Peoc)、碳酸異丁酯、碳酸乙烯酯、碳酸烯丙酯、碳酸第三丁酯(BOC)、碳酸對硝基苯酯、碳酸苯甲酯、碳酸對甲氧基苯甲酯、碳酸3,4-二甲氧基苯甲酯、碳酸鄰硝基苯甲酯、碳酸對硝基苯甲酯、硫代碳酸S-苯甲酯、碳酸4-乙氧基-1-萘基酯、二硫代碳酸甲酯、2-碘苯甲酸酯、4-疊氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、鄰(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲醯基苯磺酸酯、2-(甲基硫代甲氧基)乙基、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-雙(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、異丁酸酯、單丁二酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、鄰(甲氧基醯基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、N,N,N',N'-四甲基二胺基磷酸烷基酯、N-苯基胺基甲酸烷基酯、硼酸酯、二甲基膦基亞硫醯基、2,4-二硝基苯基亞磺酸烷酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)及苯甲基磺酸酯及甲苯磺酸酯(Ts)；R1、R2、R3、R4、R5及L之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫 及氧之環雜原子的3至10員雜環基、視情況經取代之C6-14芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；其中：RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；且RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；R6係ORA，其中RA係氫；且其限制條件為該聚醣結合物不具有式(III-a)及(III-b)：
    Figure 104127439-A0305-02-0092-3
     ；或
    Figure 104127439-A0305-02-0092-4
     III-b。
  2. 如請求項1之免疫原性組合物，其中L為-OH。
  3. 如請求項2之免疫原性組合物，其中R1、R2、R3、R4及R5之至少一個實例為-N3。
  4. 如請求項2之免疫原性組合物，其中R1、R2、R3、R4及R5之至少一個實例為-F。
  5. 如請求項1之免疫原性組合物，其中L具有下式：
    Figure 104127439-A0305-02-0093-5
     其中：R8、R9、R10及R11之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基、視情況經取代之C6-14芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；其中R12為H、OH或鹵素；RN係選自-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情 況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基。
  6. 如請求項5之免疫原性組合物，其中該聚醣結合物具有式(IV)：
    Figure 104127439-A0305-02-0094-6
  7. 如請求項6之免疫原性組合物，其中R1、R2、R3、R8、R9、R10、R11及RN之至少一個實例為-N3。
  8. 如請求項6之免疫原性組合物，其中R1、R2、R3、R8、R9、R10、R11及RN之至少一個實例為-F。
  9. 如請求項1至8中任一項之免疫原性組合物，其中該載劑為蛋白質、脂質、脂質化蛋白質、病毒、肽或醣肽之樹枝狀聚合物。
  10. 如請求項9之免疫原性組合物，其中該載劑為選自由以下組成之群的蛋白質：破傷風類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)、白喉毒素交叉反應物質197(CRM197)、TT之片段C、匙孔螺血氰蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、蛋白質D、外膜蛋白質(OMP)及肺炎鏈球菌溶血素。
  11. 如請求項10之免疫原性組合物，其中該載劑蛋白質選自由TT、DT及CRM197組成之群。
  12. 如請求項11之免疫原性組合物，其中該聚醣結合物具有式(IV-a)或(IV-b)：
    Figure 104127439-A0305-02-0095-7
    Figure 104127439-A0305-02-0095-8
     其中m為整數1至40，包括端點。
  13. 如請求項1至8中任一項之免疫原性組合物，其中該連接子為雜雙官能連接子或均雙官能連接子。
  14. 如請求項1至8中任一項之免疫原性組合物，其中該佐劑為能夠結合樹突狀細胞上之CD1d分子的醣脂。
  15. 如請求項1至8中任一項之免疫原性組合物，其中該佐劑為C34、7DW8-5、C17、C23、Glc-C34、鋁鹽、角鯊烯、MF59或QS-21。
  16. 如請求項1至8中任一項之免疫原性組合物，其中該免疫原性組合物能夠誘發針對癌細胞之免疫反應。
  17. 如請求項16之免疫原性組合物，其中該癌細胞選自由以下組成之群：腦癌細胞、肺癌細胞、乳癌細胞、口腔癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、肝癌細胞、膽管癌細胞、胰臟癌細胞、結腸 癌細胞、腎臟癌細胞、骨癌細胞、皮膚癌細胞、子宮頸癌細胞、卵巢癌細胞及前列腺癌細胞。
  18. 如請求項16之免疫原性組合物，其中該免疫反應包括特異性結合至一或多種選自由SSEA3及SSEA4組成之群之抗原的抗體的產生。
  19. 如請求項18之免疫原性組合物，其中該等抗體中和癌細胞或癌症幹細胞表面上所表現之SSEA3及SSEA4抗原中的一或多者。
  20. 如請求項18之免疫原性組合物，其中該等抗體主要包括IgG抗體。
  21. 一種癌症疫苗，其包含治療有效量之如請求項1至15中任一項之免疫原性組合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  22. 如請求項21之癌症疫苗，其中該癌症疫苗能夠誘導個體之抗癌免疫反應。
  23. 一種如請求項1至15中任一項之免疫原性組合物或如請求項21或22之癌症疫苗之用途，其係用於製造用於治療有需要之個體之癌症的藥劑。
  24. 如請求項23之用途，其中該疫苗與另一種治療劑組合共投與。
  25. 如請求項23之用途，其中該癌症選自由以下組成之群：腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎臟癌、骨癌、皮膚癌、子宮頸癌、卵巢癌及前列腺癌。
  26. 如請求項25之用途，其中該癌細胞在細胞表面上表現SSEA3及/或SSEA4抗原。
  27. 如請求項26之用途，其中該個體為人類。
  28. 如請求項23之用途，其中該免疫原性組合物或該癌症疫苗係皮下投與。
  29. 一種用於製備如請求項1之免疫原性組合物的方法，其中該方法包含：提供載劑；藉由結合反應使一或多種聚醣與該載劑結合。
  30. 一種免疫原性組合物，其包含靶向SSEA4及SSEA3及其類似物中之一或多者的多價構築體，其中該等聚醣連接至如下所示之結構；及載劑，
    Figure 104127439-A0305-02-0097-9
     其中n可為整數1至10；其中聚醣的結構如請求項1中之式III所示；其中若n為2或大於2，則各聚醣可與天冬胺醯基肽上之另一聚醣或天冬胺醯基肽上的相異聚醣相同。
  31. 如請求項30之組合物，其中該多價構築體具有以下結構：
    Figure 104127439-A0305-02-0098-10
    Figure 104127439-A0305-02-0099-11
    Figure 104127439-A0305-02-0100-12
     其中各聚醣部分上之R1、R2、R3、R4、R5、R6及L可為相同或不同的，前述R1、R2、R3、R4、R5、R6及L如請求項1中所定義。
  32. 一種化合物，其具有式(I)：
    Figure 104127439-A0305-02-0100-13
     (I)或其鹽，其中：X1為-OR或-SR，其中R為氫、氧或硫保護基、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C6-14芳基、視情況經取代之醯基或視情況經取代之醯亞胺基；其中，該氫、氧或硫保護基選自由以下組成之群：甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、第三丁基硫甲基、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、對甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、鄰甲氧基苯酚甲基(GUM)、第三丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、矽烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、雙(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氫哌喃基(THP)、3-溴四氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、1-甲氧基環己基、4-甲氧基四氫哌喃基(MTHP)、4-甲氧基四氫硫代哌喃基、4-甲氧基四氫硫代哌喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氫呋喃基、四氫硫代呋喃基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫-7,8,8-三甲基-4,7-甲醇苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基矽烷基乙基、2-(苯基氧硒基)乙基、第三丁基、烯丙基、對氯苯基、對甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基(Bn)、對甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、鄰硝基苯甲基、對硝基苯甲基、對鹵基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、對氰基苯甲基、對苯基苯甲基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧 離子基、二苯甲基、對，對'-二硝基二苯甲基、5-二苯并環庚基、三苯甲基、α-萘基二苯基甲基、對甲氧基苯基二苯基甲基、二(對甲氧基苯基)苯基甲基、三(對甲氧基苯基)甲基、4-(4'-溴苯甲醯甲基氧基苯基)二苯甲基、4,4',4"-參(4,5-二氯鄰苯二甲醯亞胺基苯基)甲基、4,4',4"-參(菊芋糖基氧基苯基)甲基、4,4',4"-參(苯甲醯氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)雙(4',4"-二甲氧基苯基)甲基、1,1-雙(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)二苯并哌喃基、9-(9-苯基-10-側氧基)蒽基、1,3-苯并二硫雜環戊烷-2-基、苯并異噻唑基S,S-二氧離子基、三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、三異丙基矽烷基(TIPS)、二甲基異丙基矽烷基(IPDMS)、二乙基異丙基矽烷基(DEIPS)、二甲基第三己基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、三苯甲基矽烷基、三-對二甲苯基矽烷基、三苯基矽烷基、二苯基甲基矽烷基(DPMS)、第三丁基甲氧苯基矽烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲醯基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-側氧基戊酸酯(乙醯丙酸酯)、4,4-(伸乙基二硫基)戊酸酯(乙醯丙醯基二硫縮醛)、新戊酸酯、金剛酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(均三甲基苯甲酸酯)、碳酸甲酯、碳酸9-茀基甲酯(Fmoc)、碳酸乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、2-(三甲基矽烷基)碳酸乙酯(TMSEC)、碳酸2-(苯基磺醯基)乙酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)碳酸乙酯(Peoc)、碳酸異丁酯、碳酸乙烯酯、碳酸烯丙酯、碳酸第三丁酯(BOC)、碳酸對硝基苯酯、碳酸苯甲酯、碳酸對甲 氧基苯甲酯、碳酸3,4-二甲氧基苯甲酯、碳酸鄰硝基苯甲酯、碳酸對硝基苯甲酯、硫代碳酸S-苯甲酯、碳酸4-乙氧基-1-萘基酯、二硫代碳酸甲酯、2-碘苯甲酸酯、4-疊氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、鄰(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲醯基苯磺酸酯、2-(甲基硫代甲氧基)乙基、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-雙(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、異丁酸酯、單丁二酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、鄰(甲氧基醯基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、N,N,N',N'-四甲基二胺基磷酸烷基酯、N-苯基胺基甲酸烷基酯、硼酸酯、二甲基膦基亞硫醯基、2,4-二硝基苯基亞磺酸烷酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)及苯甲基磺酸酯及甲苯磺酸酯(Ts)；R1、R2、R3、R4、R5及L之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基、視情況經取代之C6-14芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；其中：RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；且RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情 況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；R6係ORA，其中RA係氫；其限制條件為該化合物不具有式(I-a)或(I-b)：
    Figure 104127439-A0305-02-0104-14
    Figure 104127439-A0305-02-0104-15
  33. 如請求項32之化合物，其中L為-OH。
  34. 如請求項32之化合物，其中L具有下式：
    Figure 104127439-A0305-02-0104-16
     其中：R8、R9、R19及R11之各實例獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基、視情況經取代之C6-14芳基、-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、 -SO2N(RB)2及-NHSO2RB；其中R12為H、OH或鹵素；RN係選自-N3、-NO2、-N(RB)2、-N(RA)C(O)RA、-ORA、-OC(O)RA、-SRA、-C(O)N(RB)2、-CN、-C(O)RA、-C(O)ORA、-S(O)RA、-SO2RA、-SO2N(RB)2及-NHSO2RB；RA之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基；及RB之各實例獨立地選自氫、視情況經取代之C1-10烷基、視情況經取代之C2-10烯基、視情況經取代之C2-10炔基、視情況經取代之具有1至4個獨立選自氮、硫及氧之環雜原子的3至10員雜環基及視情況經取代之C6-14芳基。
  35. 如請求項34之化合物，其中該化合物具有式(II)：
    Figure 104127439-A0305-02-0105-17
  36. 如請求項35之化合物，其中R1、R2、R3、R8、R9、R10及R11之至少一個實例為-F。
  37. 如請求項35之化合物，其中R1、R2、R3、R8、R9、R10及R11之至少一個實例為-N3。
  38. 一種如請求項32或35之化合物之用途，其係用於製造用於治療過度增生性疾病或病狀之藥劑。
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