TWI359667B - Formulation for oral administration having a healt - Google Patents

Description

1359667 九、發明說明： 【發明所屬之技術分野】 本發明係關於一種口服用調配物，爲以小包供應之錠 劑，膠囊及粉末形式以隨時使用，由於該調配物組合例如良 好血脂肪及抗氧化劑作用以及血管內皮之保護功效，以及直 接或間接關聯於此等活性之其他功效，其在心血管系統上可 發揮健康促進功效。 【先前技術】 現今心血管疾病在高度已開發國家中爲殘疾及死亡之 主要原因，其中有許多具有動脈硬化性質，亦即因膽固醇及 存在於血管中之其他脂肪性物質，鈣及血纖維蛋白（fibrin) 沉澱在血管壁上，造成動脈內腔變窄（動脈硬化症）。 心血管疾病涉及許多因子，並經確認爲“心血管危險因 子（CVRF)” 。 心血管危險因子中最重要之一爲血膽固醇，由於經大規 模的流行病學硏究顯示動脈硬化症與總血膽固醇（TC)濃度 之間有直接關聯性，特別是結合低密度脂蛋白之膽固醇 (LDL-C)濃度。 另一心血管危險因子爲半胱胺酸的血中濃度提高。半胱 胺酸爲正常存在於血液之胺基酸，但其在血中濃度達135 mg/dl以上時與冠狀動脈，大腦及周邊血管疾病以及靜脈血 栓有關聯性。 心血管危險性因所謂之自由基（亦即分子或基團之原子 含有未配對電子）的侵略行爲也頗有增加。此特色使此類物 1359667 質對其他分子具有極度侵略性，他們移除一電子以恢復他們 原始的穩定構形，而造成嚴重的生物體傷害，例如早熟及全 身性老化，神經系統的退化性疾病，腫瘤及心血管危險的增 加。 有許多因子造成血液組成物前述變化，且此重要原因來 自遺傳，不均衡營養及隨之發生的必須營養素的不足或缺 乏，不適宜的生活形態及因抽煙之慢性中毒，以及其他食物 污染物與環境污染物。 許多危險因子可經由營養矯正，戒煙，在開放空氣中規 律的運動及健康的生以活降低或消除。 然而對於生活形態及營養徹底改變並非易事。另一·方 面，對於輕微或中等高膽固醇血症，不建議開始以目前可得 之強有力的降膽固醇藥治療，因爲這些藥有相當大的副作 用。 但組合正常飲食與天然物質可能有益於降低心血管危 險性，並提供身體流失自正常營養物之物質，而該物質具有 健康促進功效》 【發明內容】 本發明係根據天然活性成分之新穎組合的硏究及確 認，其應發揮良好血脂肪及抗氧化劑功效，抵消同半胱胺酸 血症’血管內皮之保護功效及其他功效，支持及補足前述者； 由於協同作用使得即使在相當低之劑量亦能得到前述健康 促進功效，仍保持於補充食品項目內。 申請專利範圍定義根據本發明之協同性組合物，及其用 1359667 . 於製備具有上述健康促進功效之醫藥產物及/或補充食品之 組合物。 甘鹿原素類（Poliensanols、 化學 .甘蔗原素類”是對飽和長鏈（C22-C36)—級脂族醇類 •混合物之命名總稱，其爲固體、蠟狀黏稠形式，少溶於水。 其中組成之醇類爲天然存在於義大利蜂生 產之蠟中’於甘蔗（Sacc/jflrwwj 之蠟基質中，於 ^ 米糠中以及於各種其他植物中。 相較於一般使用慣例濕法（不保證他們的純度且完全 移除萃取過程中所用之有機溶劑）所得之甘蔗原素，用於本 發明之甘蔗原素較佳是使用二氧化碳於液相中在超臨界狀 " 態之非常低溫度下萃取。 此方法保證他們的純度、原始化學結構、有機溶劑潛在 污染的遺跡完全不存在，以及保留天然存在於開始產物之醇 類的原始部分。 良好血脂肪功效 許多臨床及實驗硏究已證明甘蔗原素類之良好血脂肪 功效，特別明顯於高膽固醇血症受試者。此功效大部分呈現 在結合低密度脂蛋白之膽固醇（LDL-C)，經由抑制膽固醇本 身之合成以及增加其消除[Menendez et al. 1 994⑴， Menendez et al. 1 9 9 6 (2)，M e n e n d e z et a 1. 200 1 (3)]。 甘蔗原素類作用機制之硏究，提供證明贊同在界於利用 乙酸以及製造甲羥戊酸（mevalonate)之階段之膽固醇生物合 1359667 , .成的抑制：但排除直接作用於3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶a 還原酶（HMGCoA-r)[Menendez et al. 1 996(2)，Menendez et —al. 200 1(3)]，其他已熟知的降膽固醇藥，例如司達丁類 (statins)會影響該還原酶。 再者’對於LDLs之結合及肝攝取，甘蔗原素類引起顯 •著的劑量依賴性增加而正向加速分解代謝[Menendez等人 1 994(1>]。最後，已假設甘蔗原素類具有作用在有關食物脂 肪之吸收及細胞內代謝的腸黏膜上[Goumi-Berthold等人， Φ 2002 ⑷]。 LDLs過氧化作用之抑制 活體外及活體內的各種硏究已證明甘蔗原素類發揮抗 氧化劑作用，結果抑制LDLs及VLDLs(極低密度脂蛋白） 之過氧化作用[Menendez等人，1999(5)]。阻止LDLs的過氧 化作用（亦已經人體臨床試驗證實HMenendez等人，2000(6)] 導致重要的抗致動脈硬化效果，係因LDLs只在被氧化狀態 中行使致動脈硬化作用。此事實爲需要構造條件使LDLs能 漏過動脈內皮而被巨噬細胞清掃用受體（receptor)捕捉。 然後後者在進入動脈硬化斑（atheromatous plaques)形 成過程之前被轉形爲"泡沫細胞（foam cells)” 。 內皮的保護作甲' 甘蔗原素類之另一功能爲保護血管內皮免於機械及化 學試劑引起之傷害[Benitez等人，1997(22)]。內皮傷害包括 喪失膜彈性及增加滲透性，其在其他情況中促進LDLs從血 液通過到動脈內膜，而致形成動脈硬化斑。 1359667 , 促精力旺盛作用 自1950年代實施之臨床硏究已顯示：攝取甘蔗原素類 ί ' 在抗壓力及疲勞上具有有益效果。此作用有關於肌肉中肝糖 的生體利用率（bioa vail ability)，神經反應次數，對組織缺氧 ，壓力之抗性，氧的供應以及血膽固醇等等[Cureton 1 972(8)]。 • 因此，身強力壯的人及運動員通常使用甘蔗原素類以促 精力旺盛之效果，此能以他們作爲必需脂肪酸及細胞其他能 量來源之"細胞內載劑”的角色來闡明之。 •劑量學 用於本發明之每日劑量較佳爲 5-40 mg(通常爲 10-20)，較佳與晚餐一起攝取以達脂肪醇類的最佳吸收。爲 使治療有效，治療必須延續超過至少6週。 紅酵母菌 化學 紅酵母菌或紅麴（red yeast rice)是米經酵母菌紅麴菌 (Afowflicws /jwrpwrew·?)醱酵的產物，該紅麵菌製造各種物質 ^ 包括紅色素（此爲'’紅酵母菌”名字之由來）、制菌劑 (bacteriostatic agents)以及可改變血脂隻程度的物質》 其中後者因其健康促進功效而成爲最引人關注之成 分。他們已被稱爲“莫那可林（monacolins)” 。爲達良好血 脂肪目的之最有效莫那可林爲莫那可林 K(m〇nac〇lin K)[Endo 1 9 88(9)]，其於紅酵母菌之含量視所用紅麴菌 (MowfliCi/i pwrpwrewj)菌株及醱酵條件而異。 用於本發明調配物之紅酵母菌較佳爲在標準醱酵條 ⑧ 1359667 件，特別選擇紅麴菌pwrpurewi)之菌株’以得到 最佳產量之莫那可林K(monacolin K)以及維持於所界定限 i _制內之該活性成分內容物。 •良好血脂肪功效 血膽固醇爲食物吸收總和之結果，且由肝臟內生性生物 •合成引起。此合成以乙醯輔酶A開始，從其中形成3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A(HMG-CoA)，然後透過HMG-CoA還原酶 (HMG-CoA-r)作用爲甲羥戊酸。甲羥戊酸爲一連串膽固醇生 •物合成連續階段之關鍵中間物，且表現爲內生性製造以及膽 固醇本身與LDLs之血中相對濃度的關鍵性及限制性步驟。 莫那可林K與HMG-CoA(甲羥戊酸的前身）在結構上競 爭HMG-CoA-r濃度，且對該酵素具有比天然受質大2000倍 之活性，因此活化"競爭性酵素抑制”之機制而阻礙膽固醇 的生物合成[Man等人，2002(1())p 劑量學 | 用於本發明之紅酵母菌的每日劑量較佳等效於莫那可 林1及6 mg間之量，且較佳爲在本發明之組合物中劑量不 超過等效的3 mg莫那可林以使用作爲補充食品。 葉酸（FA、 化學 FA含有三種分子之組合：麩胺酸，對胺基苯甲酸以及 蝶啶衍生物。 人體無法合成FA’因此人類需仰賴富含FA的食物來 源’例如葉狀蔬菜、肝臟、蛋及豆類。FA之成人的建議每 ⑧ -10- 1359667 ，日必需量爲0.2 mg以及懷孕時增加到0.4 mg，哺乳期間增 力口到 0 · 3 m g。 ' 高同半胱胺酸血症之矯正功效 FA在許多生物功能中扮演不可缺的角色，例如核酸 - DN A及RN A的合成，紅血球細胞的製造及發育，懷孕之胚 •胎的適當發育，營養性及皮膚健康狀態的改善，乳汁分泌的 刺激，鐵代謝的調節等等。 再者，FA矯正高同半胱胺酸血症，該症爲一心血管危 ♦ 險因子，其重要性僅些微次於高膽固醇血症對冠狀動脈、大 腦及周邊血管疾病以及靜脈血栓之重要性[Longo 200 1(u Μ。FA之作用與其作爲甲基供者之特性有關聯，其轉 換同半胱胺酸爲L-甲硫胺酸及S-腺苷基甲硫胺酸而消除血 中過多的同半胱胺酸。 劑量學 用於本發明之劑型較佳設計爲葉酸的每日投與劑量從 0.1至0.6 mg，以及更隹爲0.15至0.4 mg» • 暇青素（ΑΧ) 化學 ΑΧ爲一淡紅橘色之色素，存在於許多活物中，特別是 水生動物。化學上其爲一葉黃素，屬於類胡蘿蔔素家族，具 有式：3,3'-二羥基-β，β·-胡蘿蔔素·4,4·-二酮以及具有兩個對 掌中心於兩個鍵結於羥基之環碳上（3及3’）。 羥基很重要係因他們作用爲附著其他分子（例如血漿蛋 白及脂蛋白）之點，以及因爲他們賦予ΑΧ雙極性特性，以致 ⑧ -11- 1359667 其能與形成細胞膜之磷脂質雙層內部及外部的極性位置形 成氫鍵，且因此能橫向排列於該膜。 ·. ' 如此AX能捕捉及去活化自由基（從細胞外面攻擊以及 有些從內部攻擊），有效保護組織免於自由基的傷害以及一 般性對抗具有氧化作用的試劑。 由於這些構造特性，AX所展現之抗氧化劑活性比葉黃 素大四倍，比β-胡蘿蔔素大十倍，且甚至比維生素E大 100-500 倍 ° • 用於本發明調配物之 ΑΧ較佳爲獲自藻類：綠藻 (//aemWococrcMi 之萃取物，經由特殊方法使用能 維持天然AX化學構造之超臨界二氧化碳，並濃縮至2.5%， 穩定ί匕於複合之脂肪基質中。 ' 抗氣化劑功效 由於其強有力的抗氧化劑活性，ΑΧ能發揮明顯的保護 作用對抗氧化壓力，此爲老化、神經系統的退化性疾病以及 腫瘤的已知起因。其亦有益用於反擊因太陽及離子化放射觸 ^ 發之自由基的刺激過程。 ΑΧ也用於保護視網膜構造，特別用於斑點退化的治 療。其他與自由基去活性化有關聯可應用領域，爲關於抽煙 的去毒性化作用，因過多脂肪而不平衡之節食，環境污染等 等。 心血管危險性因子的降低 心血管病變之主要作用爲動脈硬化現象及血栓情形。動 脈硬化斑的形成與血脂肪的種類及含量極有關聯，特別是 -1 2 - ⑧ 1359667 LDL-膽固醇（LDL-C)。 r LDL-C本身並不危險，但經自由基過氧化作用後變得危 ' 險。過氧化作用增加其對動脈壁的親和力，隨後滲透到血管 內膜並經巨噬細胞捕捉，然後退化爲“泡沬細胞”，此爲動 脈硬化斑及動脈硬化形成過程之第一情形，故爲首要的心血 管危險因子（CVR)[Steinberg 1997(7)]。 可由此機制中之事實得知，亦即由於AX的強力抗氧化 劑活性，妨礙LDL-C及其轉形爲動脈硬化劑之過氧化作用 鲁[Iwamoto 等人，2000(2 "]。 使用之安全忤 AX劑量之NOAEL(未觀察到有害副作用程度）每曰反覆 於動物爲1 3 40 mg/kg，對應到人超過80 g。人類之NOAEL 爲 6 mg。 劑量舉 根據本發明之劑型，較佳含有蝦青素每日劑量爲〇. 1 -5 mg，且較佳爲0.4至2 mg，較佳爲與一餐一起攝取以促進 腸道吸收。 輔醃 oio(c〇oi(n

CoQ 1 0爲具有類似醌結構之脂質特性物質，由於其於自 然中廣泛分布，包括人體，因此稱爲泛醌（ubiquinone)。CoQ 10 的主要功能是在涉及ATP合成之連續氧化還原反應之電子 傳遞鏈中作爲輔因。 由於所有細胞功能需仰賴ATP的適當取得，因此CoQ 10 爲人體全部組織及器官所必須。正常情況爲活體內合成，但 ⑧ -13- 1359667 , 可能有些情形發展成內生性製造顯得不足。於此CoQlO不足 之情形，全部細胞皆受影響，特別是代謝最活躍之細胞，例 '如心臟細胞、神經系統之細胞以及免疫系統的細胞。 因此CoQlO不足直接關係於整個系列的功能障礙，例 如心血管疾病，動脈性高血壓及AIDS » 徵兆 已證實CoQlO可用於心血管疾病，因爲可改善心肌及 血管肌肉組織的能量輸出。CoQlO亦已用於癌症[Lockwood _等人，1 994(丨2); Lockwood等人，1 995(丨3)]以及肌肉營養失 調之治療上有出色的成果。 最近亦已將CoQlO導入運動練習用以改善能量輸出以 及運動員的體能指標。並非不重要者爲其抗氧化劑作用，隨 之對抗自由基以保護細胞構造，CoQlO與維生素E協同發揮 保護作用對抗氧化壓力之傷害。 交互作用 HMG-CoA-r爲CoQl 0之生物合成所必須《因此，抑制 此酵素之物質（例如司達丁類）可以非常高劑量造成CoQlO •不足。如此，從大鼠及人類之硏究提出，具有低基本程度 CoQlO及次佳心功能之受試者於攝取HMG-CoA-r抑制劑之 後發展爲過度的CoQlO耗盡[Willis RA等人，1 990(14); Folkers K 等人，1 990(15)] » 因此推論補充CoQlO可永久用於正以HMG-CoA-r抑制 劑治療之受試者，特別是用於具CVR之受試者，因爲Coq10 可改善心肌及血管肌肉組織的能量輸出。 ⑧ -14- 1359667 .. 劑量璺 用於本發明之CoQlO每日劑量較佳爲1-20 mg，以及較 ' 佳爲2至4 mg。 協同功效之優點 根據本發明隨附思量之申請專利範圍中，於活性成分組 合物之調配物在下列活性上產生有利的協同功效。 良好血脂肪活件 提供此活性之活性成分爲甘蔗原素類以及紅酵母菌，此 • 二者皆涉及膽固醇的生物合成，但卻有所不同。前者降低從 乙酸合成膽固醇，其係作用在3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶A 還原酶（HMG-CoA-r)的上游干擾其表現；而後者發揮競爭性 拮抗作用，與HMG-CoA-r本身競爭，抑制依序的乙酸-甲羥 戊酸-膽固醇合成。 組合此二活性成分可產生協同作用於HMG-CoA-r上游 及下游，阻礙膽固醇合成，而有利於互相強化良好血脂肪作 用。 ^ 保護內皮之活件 血管內皮是一脆弱的生物膜，容許易於擴散的物質通 過，例如呼吸的氣體、簡單的碳水化合物以及胺基酸·，但不 容許高分子物質通過，例如蛋白質、複合的脂質以及聚合碳 水化合物。 因機械壓力或侵略性化學作用所致之內皮損傷，危及內 皮半滲透性之特徵以致高分量之分子也能通過。這些分子包 括脂蛋白，尤其是LDLs通過內皮過濾後被動脈內膜的巨噬 ⑧ 1359667 ，細胞捕捉，而轉形爲動脈硬化斑最初核心之泡沫細胞》 根據本發明含有甘蔗原素類，葉酸及蝦青素之組合物，

I 可經由各種機制保護內皮對抗機械壓力及自由基，使內皮能 維持半滲透性之功能，並防止動脈硬化斑的形成及其續後進 展爲動脈硬化性損害。 高同半胱胺酸血症之矯正 本發明包括葉酸於組合物且較佳每日劑量如上所述之 具體例，證明其有利於限制CVR因子連結已存在或潛在之 ®高同半胱胺酸血症。 抗氧化劑活件 根據本發明特別可用於預防與各種類氧化及/或過氧化 現象有聯繫之心血管危險之組合物，除含有甘蔗原素類如上 提及之良好血脂肪作用之外，也發揮有效的抗氧化劑功效， 另蝦青素及輔酶Q1 〇也能發揮抗氧化劑及保護活性於細胞 構造，對抗自由基攻擊所致之潛在傷害。 • c 〇 Q 1 0之協同作用：

CoQ 1 0爲細胞功能之能量效能所必須，且特別是降低或 危害之心功能受試者以及使用HMG_CoA-r抑制劑之受試者 能感覺到其不足。CoQ 1 0添加到調配物之量’較佳以能確保 組織完全安全，以及使心臟及血管肌肉組織的能量輸出最佳 化之量。 【實施方式】 實驗部分 本專利申請案之發明目的可根據下列實驗計畫，在動脈 ⑧ -16- 1359667 之實驗模式中評價及比較上述若干更重要活性成分之 個別及組合效果來證明之。 材料及方法 友法之原理 早先列舉、硏究之物質的功效評價，是根據Prasad等 人[ 1 993 (16)]經由投與添加膽固醇之飲食到兔子製作高膽固 醇血症》 動物管験 治療實驗部分所述兔子所誘發之高膽固醇血症，所使用 之甘蔗原素類、紅酵母菌及蝦青素劑量，比根據本發明調配 物之實施例部分所用及所述之劑量約大4倍。 劑量學在動物及人類間之差異在藥理學上完牵正常，因 爲已熟知在動物中實驗誘發之病狀通常很戲劇性且不自 然’比人類自發者更嚴重。 •動」勿：_ 6-8週且體重2至3kg之紐西蘭白兔。 •餵食： •正常飲食 '、根據Sherman以小九用於天竺鼠及兔子之標 準飮食（Laboratorio dottori Piccioni S.n.c.)。 •致動脈硬化飲食 根據Sherman以7 g/kg之膽固醇混合 於小九中用於天竺鼠及兔子之標準飲食。 以每天餵食1 5 0 g之速率供應該飮食。水爲任意供應。 •物質：.以胃管投與受試物質一天一次，受試物質以2 ml/kg 懸浮於羧甲基纖維素0.2%(CMC)。 •甘蔗原素類「以：甘蔗原素類是對長鏈飽和之一級脂族 ⑧ -17- 1359667 醇類混合物之命名總稱。 •紅酵母菌（E):W m含有1.5%莫那可林K之標準化萃取 物。 •锻淳素Μ):俥用含有2.5%蝦青素之綠藻（Z/ae/wfl/ococcwi /^«v/fl/kHEHP)培養濃縮物。 •處理及組別：全部動物在動物飼養部門於25±2°C及 60%-7 0%之溼度適應環境。一週後抽取血液樣本作爲基線 數據。下一步將動物隨機分配於如下處理組別，每組1 0 隻兔子。 1. (C)正常飲食之對照絹：經由胃管每日投與2 ml/kg之 CMC » 2. (AT)餵食動脈硬化飲食之動物：經由胃管每日投與2 ml/kg 之 CMC。 3 . (P)含甘蔗原素類之致動脈硬化飲食：經由胃管每日投 與0.6 mg/kg甘蔗原素類，懸浮於2 ml/kg之CMC。 4 . (E)含紅酵母菌之致動脈硬化飲食：經由胃管每曰投與 12 mg/kg紅酵母菌（0.18 mg/kg之莫那可林等價物），懸浮 於 2 ml/kg 之 CMC。 5. (P + E)含甘蔗原素類及紅酵母蔺之致動脈硬化飲食：經 由胃管每日投與0.6 mg/kg甘蔗原素類+ 12 mg/kg紅酵母 菌，懸浮於2 ml/kg之CMC。 6. (P + E + A)含甘蔗原素輯，紅酵杻茼及蝦青素之致動脈硬 化飲食：經由胃管每日投逛0.6 mg/kg甘蔗原素類+ 12 mg/kg 紅酵母菌 + 1.2 mg/kg 之 EHP(0.〇3 mg/kg 锻青 ⑧ -18- 1359667 素），懸浮於2 ml/kg之CMC。 該處理持續3個月。於第一個、二個及三個月後採取分 析用之血液樣本。第三個月結束時將動物犧牲用於形態學觀 察。 • 血液分析： •血清中之總膽固醇（TC) •結合HDLS之膽固醇（HDL-C) •結合LDLs之膽固醇（LDL-C) •三酸甘油脂 這些分析是經由平常實驗室方法進行。 •血液丙二醛（MDA) MDA爲脂質過氧化作用程度的指標，且增加於呈現動 脈硬化及高膽固醇血症之血液中[Prasad等人1989(17)]〇MDA 是根據 Prasad等人以”泰歐巴必奇酸反應性物質 (tiobarbituric acid-reactive substance)"分析之[1990(18)]。 •主動脈之形態檢查：從主動脈的起點到腸骨分叉將主動脈 移除，縱開並準備用於根據Holman等人所述以蘇丹 IV(SUdan IV)染色來檢查脂質沉積於血管內膜 [1 95 8 (19)]。使用以主動脈總面積百分比表示之親蘇丹性 (動脈硬化性）面積作爲評價參數。 •統計分析：爲檢査之可變因素，計算平均値及平均値的標 準誤差。使用Student測驗評價比較値之意義。 結果 體重 -19- 1359667 在3個月的硏究期間，全部組別皆出現體重顯著的增 加。對照組增加5 1 %，給與致動脈硬化飲食之動物增加7 6 %， ' 給與致動脈硬化飲食及投與甘蔗原素類之動物增加54%，給 與致動脈硬化飮食及投與紅酵母菌之動物增加44%，給與致 動脈硬化飮食及投與甘蔗原素類及紅酵母菌之動物增加 5 2%，以及給與致動脈硬化飲食及投與甘蔗原素類、紅酵母 菌及蝦青素之動物增加63%。 相對於對照組之該生長差異，在任何組別皆未達到統計 籲上意義値。 對血膽固醇之功效 動脈硬化、高膽固醇飲食（第2組）在TC造成非常大量 .的增加，全部於LDL-C增加以致HDL/TC X 1 00比例從基線 '値 63 減少至 14(Pt < O.OOip 處以甘蔗原素類（第3組：0.6 mg/kg/d甘蔗原素類）使 TC的增加降低5 mm〇l/l，但此無統計上意義。然而LDL-C 減少 9 mmol/1有統計上意義（Pt < 〇.〇5)。並也改進 ® HDL/TCxlOO比例，在第2組觀察到從値14增加到21。然 而此差異未達到統計上意義程度。 處以紅酵母菌（第4組：0.1 8 me/kg/d莫那可林等僭物） 使TC的增加降低8 mmol/1，但此無統計上意義。然而LDL-C 減少13 mmol/1有統計上意義（pt < 0.05)且大於處以甘蔗原 素類所觀察到者。也改進HDL/TCx 100比例，在第2組觀察 到從値1 4增加到25。然而此差異未達到統計上意義程度。 處以甘蔗原素類與紅酵母菌夕細合（第5細）使TC的增 -20 - 1359667 加顯著降低21 mm〇l/l(Pt < 0.001)。LDL膽固醇降低28 mmol/1，大於處以甘蔗原素類以及處以紅酵母菌者之總和， 證明分別攝取成分之可能功效。並也相當改進HDL/TCx 100 比例，在第2組觀察到從値14以具統計意義（Pt < 0.001)增 加到3 4。 含蝦青素之組合物（第6細：含0.03 mg/kg/d蝦青素並 添加甘蔗原素類及紅酵母茼）其至更有功效。此處理使TC的 增加顯著降低 21 mmol/dl(Pt < 0.001)。LDL-C 減少 30 • mmol/1，稍微大於第5組所觀察到者，再次顯示甘蔗原素類 及紅酵母菌之可能功效。 該組別之此減少也非常顯著（Pt < 0.001)。特別在 HDL/TCx 100比例的改進，從第2組觀察到之値1以具統計 意義（Pt < 0.001)提高到39。 對三酸甘油脂之功效 相對於對照組，致動脈硬化飮食造成三酸甘油脂1.58 mmol/1 (136%)的增力□。此爲相當大的增力卩，·但因此參數在血 中之高變化性而變無統計意義。甘蔗原素類及其他投與之物 質並未顯著減少致動脈硬化飲食所增加之三酸甘油脂的產 生。 血液丙二醛（MDA)之功效 相對於對照組，致動脈硬化飲食遵致血液MDA增加 2.01 mmol/1 (87%)。此增加是顯著的（P < 0.001)，顯示致動 脈硬化飮食對血脂質具有氧化影響》 甘蔗原素類使MD A的增加降低0.3 5 mmol/l( 1 1 %) »但 -21 - 1359667 此減少無統計上意義。 r 紅酵母菌使由致動脈硬化飲食所誘發之MDA的增加降 ' 低0.7 1 mmol/l(23%)，此減少具有統計意義（p < o.oi)。 甘蔗原素類與紅酵母菌之組合使由致動脈硬化飲食所 誘發之MDA的增加降低0.95 mmol/l(31%)。此減少具有統 計意義（P < 0.001)且相當於甘蔗原素類及紅酵母菌所產生 之抗氧化劑功效的總和。 添加蝦青素至前述組合物使由致動脈硬化飲食所誘發 • 之MDA的增加降低1 .51 mmol/l(49%)。此減少非常具有統 計意義（P< 〇.〇〇1)，代表甘蔗原素類及紅酵母菌之氧化劑功 效可能性。 主動脈中親蘇丹性浸潤之效果 '含膽固醇之致動脈硬化飲食浩成親蘇丹性浸潤，影響 74±8百分比（平均値±SE)之主動脈壁。相較之下，尤其是對 照組並無浸潤情形。 甘蔗原素類使致動脈硬化飲食之親蘇丹性浸潤降低 0 1 1 %，而此減少沒有統計意義。 紅酵母菌使致動脈硬化飲食之親蘇丹性浸潤降低· 2 0%，但同樣地此減少沒有統計意義。 甘蔗原素類和紅酵母菌之組合使致動脈硬化飲食之親 蘇丹性浸潤降低3 3 %，顯示兩活性成分之功效總和。此功效 在此例中具有統計意義（P < 〇.〇5)。 添加蝦青素到甘蔗原素類-紅酵母菌組合物誘發更顯著 的抗動脈硬化功效可能性（p < 0.0 01)，顯示從致動脈硬化飮 ⑧ -22 - 1359667 食減少92%的親蘇丹性浸潤。 這些結果誠示甘蔗原素類及紅酵母菌之良好血脂肪作 用，降低致動脈硬化飮食之親蘇丹性浸潤，且其效果可經由 蝦青素之強力抗氧化劑特性大大地被強化。 討論 對總瞻固醇rrcn，LDL瞻因醇（LDL-C)及 HDL膽固醇 (HDL-C)之處理效里 本硏究使用之動脈硬化模式中，基於投與富含膽固醇飼 ♦ 料3個月，血液TC從1.5升高至69.8 mmol/1’ LDL-C從0.6 升高至60mmol/l以及HDL-C從1.0升高至9.8mmol/l。但 後者所增加遠少於TC的增加，故以HDL/TC X 100比例代表 抗動脈硬化保護之指標從67落至1 4。 ^ 經由致動脈硬化飲食所增加之TC，可經由每日0.6 mg/kg劑量之甘蔗原素降低7%，以及含有每日劑量0.18 m g/k g莫那可林之紅酵母菌降低11 %。經由致動脈硬化飮食 增加之TC，可由甘蔗原素類-紅酵母菌組合物降低30%，顯 示分別攝取之兩活性成分產生另人驚訝的降膽固醇可能效 果。 此可能性可被事後解釋，若我們考慮作用的各別機 制：事實上，甘蔗原素類會妨礙3-羥基-3-甲基戊二醯輔酶 A 還原酶（HMG-CoA-r)的表現及降解[Menendez 等人 2〇〇1(3)] ’而莫那可林對HMG-CoA-r展現拮抗作用[Herber 等人 1 99 9(2G”。 已很清楚此二機制彼此獨立，且各有潛能（已熟知之 ⑧ -23 - 1359667 , HMG-C〇A-r爲合成膽固醇的前身：甲羥戊酸之必要酵素）。 類似考量應用於LDL-C，亦可如TC經由甘蔗原素類、經由 ' 紅酵母菌以及經由甘蔗原素類-紅酵母菌組合物降低之》 相對於致動脈硬化飲食後觀察到的値，透過甘蔗原素類 及紅酵母菌作用分別於HDL-C無統計意義地增加41%及 5 6%，及分別增加52%及76%代表抗動脈硬化保護之指標： HDL/TC X 1 00 比例。 甘蔗原素類與紅酵母菌之組合物於HDL-C產生70%增 • 加，以及於HDL/TC X 100比例產生144%增加；如此則相對 於個別活性成分，在抗動脈硬化保護上顯示顯著的改善。添 加每日劑量〇.〇3 mg/kg蝦青素於上述該組合物，可造成 HDL-C顯著增力口 9 1 %以及HDL/TC X 100比例增力卩174% » '如此紅酵母菌與甘蔗原素類之組合物，在控制血膽固醇 關聯性之各種致動脈硬化參數上顯得非常有效，且添加蝦青 素在他們抗致動脈硬化效力上產生進一步的改善。 對三酸甘油脂之處理效果 ^ 以富含膽固醇飼料餵食兔子3個月，造成三酸甘油脂從 0.9增加到2.2 mmol/1。但因此參數之高變化性而使此增加 無統計意義。此模式似乎不適合用於三酸甘油脂之可能效果 的硏究。各種處理可使致動脈硬化飲食所致之三酸甘油脂的 增加降低。但因此實驗模式不適用而使此減少無統計意義。 對血液丙二醛（MDA)之處理效果 MD A爲血脂質過氧化作用之產物，因此爲LDLs經由自 由基過氧化作用、使LDLs致動脈硬化性之化學反應的重要 ⑧ -24 - 1359667 指示物[Prasad 等人 1 989(17)]» 以富含膽固醇飼料餵食兔子3個月，造成MD A從0.99 ' 增加到3.1 1 mmol/1，也確認有關此參數之該飲食的致動脈 硬化能力性。 致動脈硬化飼料作用下增加之M D A，可經由甘蔗原素 類降低1 1 %，以及經由紅酵母菌降低2 3 %。此二活性成分的 組合物使MDA降低3 1 %，如此顯示功效的總和。致動脈硬 化飼料所增加之MDA，可經由添加蝦青素至上述該組合物 ® 而降低49%，如此顯示卓越能力於預防血脂質過氧化作用以 及富含膽固醇飮食之致動脈硬化可能性。 對主動脈內膜中親蘇丹件脂質浸濶（SLI)之處理效果 以富含膽固醇飼料餵食兔子3個月，造成SLI增加到 ' 74%主動脈面積受影響。 受富含膽固醇飼料作用增加之S LI，可分別經由甘蔗 原素類以及紅酵母菌降低12%及20%。此二活性成分的組合 $ 物使S LI有統計意義地（P < 〇. 〇 5 )減少3 3 %，顯示分別攝取 兩活性成分之效果的總和。添加蝦青素至組合物的效力十分 明確，造成受富含膽固醇飼料作用而增加之SLI減少92%。 SLI也許是與富含膽固醇飼料作用，以及與各種處理之 抗致動脈硬化效果具有最高關聯性之參數。重要的是指出甘 蔗原素類及紅酵母菌的抗致動脈硬化效果，以及組合投與時 前效果之總和。但添加蝦青素之可能效果尤其重要，係因所 得組合物幾乎可完全預防由評價用實驗模式於兔子所誘發 之致動脈硬化性。

-25 - 1359667 結論 此硏究採用之動脈硬化實驗模式，包括以富含7 g/kg ' 膽固醇之飼料餵食6-8週齡兔子3個月。此飼料造成顯著且 有意義的總血膽固醇（TC)、LDL膽固醇（LDL-C)以及較少範 圍的HDL膽固醇（HDL-C)增加。此導致以HDL/TC X 100比 例表示之抗致動脈硬化保護作用的減少，. 甘蔗原素類及紅酵母菌使TC及LDL-C的增加降低，並 改進HDL/TC X 100比例。此二活性成分的組合物使這些功 • 效成爲可能，提供該組合效力之實驗性確認。 致動脈硬化飮食也增加血液丙二醛（MDA)，MDA產生 自血液脂質的氧化作用，因此爲使LDLs致動脈硬化性之化 學反應的重要指示物。甘蔗原素類及紅酵母菌使MDA的增 '加降低，及其組合物導致這些效果的總和。 添加蝦青素到前述該組合物，可進一步造成MDA的顯 著減少，展現以甘蔗原素類、紅酵母菌及嘏青素爲基礎之組 合物於抑制血脂質過氧化作用及其致動脈硬化能力爲目的 之效力。 致動脈硬化歆食造成主動脈內膜中親蘇丹性脂質浸潤 (S LI)之能力需特別注意，因爲從各種觀點言之，此現象爲 典型的人類動脈硬化斑形成。甘蔗原素類及紅酵母菌減少 SLI，其組合可產生此功效的總和，且添加蝦青素到前述該 組合物，可造成SLI顯著減少，而使主動脈恢復到實際的正 常情況。 因此可作如下結論：以甘蔗原素類、紅酵母菌及蝦青素 ⑧ -26- 1359667 爲代表之天然活性成分之組合，由於各別降膽固醇作用及抑 制血脂質過氧化作用之總合及能力，因此發揮非常明確的抗 ' 致動脈硬化功效於所運用之動脈硬化實驗模式。 毫無疑問地，這些結果亦可應用於人類動脈硬化之情 形，係因重現發病開始機制之實驗模式以及與體重有關聯之 各種活性成分的劑量，可經調整爲適用於人類利用時之劑 量；故請記得在動物中實驗性誘導之發病通常比人類自然發 病者更爲嚴重。 ‘ 籲實施例 以下所述調配物舉例說明本發明之應用可行性，且此例 不應在任何方面被視爲本發明之限制。 將注意力特別引到所考量之各種形式賦形劑，視調配技 '術之要求，該賦形劑可用於作爲本發明已明確提及之選擇 物，此外其能選自經熟習醫藥技藝者所熟知廣泛可得商品產 物，因此不要求進步性。 實施例1 : 口服用之錠劑 下面所示調配物係關於活性成分及賦形劑（含對應之技 術功能說明），其可用於製備根據本發明之口服用錠劑。 活性成分之每日劑量是倂入單一錠劑，其製備只需熟習 該項技藝者所熟知的一般操作，亦即： •秤重調配物之各個成分 •在適當混合器中製備壓縮混合物以乾燥均質化 •在適當自動壓榨機中壓縮所得混合物，最終得到適當形狀 及大小的的錠劑。

-27- 1359667 活性成分 量/旋劑 紅酵母菌η 200 mg (對應於莫那可林幻 (3 mg) 微綠藻之萃取物ο*) ·· 20 mg ，對應於蝦青素J (0.5 mg) 甘蔗原素類 10 mg 輔酶Q10 2 mg 葉酸 0.2 mg (*)經含有1.5%莫那可林K之紅麴菌(Monoscwi 酸酵的米 1(")含有2.5%蝦青素 賦形劑 量/旋劑 功能 鄰酸二鈣 305.8 mg 滑動劑/稀釋劑 微晶纖維素 242.0 mg 稀釋劑/崩散劑 硬脂酸鎂 8.0 mg 潤滑劑 脂肪酸之單-及二甘油酯 8.0 mg 塑化劑 二氧化砂 4.0 mg 吸附劑/抗附著劑 實施例2: 口服用之膠囊 下面所示調配物係關於活性成分及賦形劑（含對應之技 術功能說明），其可用於製備根據本發明之口服用膠囊。 活性成分之每日劑量是併入單一膠囊，其製備只需熟習 該項技藝者所熟知的一般操作，亦即： •秤重調配物之各個成分 •在適當混合器中製備塡入膠囊之混合物以乾燥均質化 •最終在自動膠囊塡入機中，塡入到適當大小及所欲顏色的 硬明膠膠囊中。 -28 - 1359667 活性成分 量/旋劑 紅酵母菌η • 2 0 0 mg (對應於莫那可林幻 ； mg) 微綠藻之萃取物(〃） ； 2 0 mg (//flewfliococcwpwrpwrewi，對應於蝦青素J ； (0-5 mg) 甘蔗原素類 ： 10 mg 輔酶Q10 ： 2 mg 葉酸 ： 0.2 mg • (*)經含有1.5%莫那可林K之紅麴菌醱酵的米 (μ)含有2.5%蝦青素 賦形劑 量/錠劑 功能 澱粉 6 0.0 mg 稀釋劑/崩散劑 乳糖 2 9.0 mg 稀釋劑 硬脂酸鎂 5.0 mg 潤滑劑 滑石 2.6 mg 滑動劑 φ 實施例3:隨時性懸浮液用之含粉末熱密封小袋 下面所示調配物係關於活性成分及賦形劑（含對應之技 術功能說明），可用於粉末調配物，用以製備口服路徑攝取 之隨時性懸浮液。每日劑量是倂入包含於熱密封小袋之粉末 的單一部分，並含有紙外層、鋁界面及聚乙烯內層。 所討論醫藥形式之製備操作，可爲工業上本學科任何技 術人員所熟知及應用，必要者如下： •秤重調配物之各個成分 •在適當混合器中製備壓縮混合物以乾燥均質化

-29- 1359667 •在適當自動線上熱形成小袋 •在上述同一自動線上塡充及密封小袋，最終得到具有所欲 形狀及大小的小袋，並含有隨時使用之粉末單劑。 活性成分 錠劑 紅酵母菌η ： 2 0 0 mg (對應於莫那可林幻 ； P mg) 微綠藻之萃取物(μ) ； 2 0 mg (f/aematococcus purpureas，對應於锻青素) - (0.5 mg) 甘蔗原素類 10 mg 輔酶Q10 二 2 mg 葉酸 0.2 mg (*)經含有1.5%莫那可林K之紅麵菌(从酸酵的米 (**)含有2.5%蝦青素 賦形劑 量/錠劑 功能 山梨糖醇 8 1 5 . 〇 m g 稀釋劑/增甜劑 檸檬酸 10.0 mg 味覺強化 聚乙二醇4000 4.0 mg 潤滑劑/塑化劑 其他（” _ q-s.f. 增甜劑/香料 (* )可視喜好自由添加香料及增甜劑。 【圖式簡單說明】無 ⑧ -30- 1359667 參考文獻 [1] Menendez R, Fernandez SI, Del Rio A et al.: Policosanol inhibits cholesterol biosynthesis and enhances low density lipoprotein processing in cultured human fibroblasts. Biol Res 1994; 27:199-203 [2] Menendez Rs Amor MR, Gonzales RM et al.: Effects of Policosanol on the hepatic cholesterol biosynthesis of normocholesterolemic rats. Biol

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-33 -

Claims (1)

1. I3S9667 第 94134749 號

   g7~T0~0e2 ^ fl π 具有在心血管系統上的健康促進功效之口 服投與調配物」專利案 (2008年10月修正） 十、申請專利範圍： 1. 一種在心血管系統上具有健康促進功效之口服投與用之 組合物’其含有作爲活性成分之甘鹿原素（P〇lic〇san()l)或 甘蔗原素類之混合物，紅酵母菌以及選自蝦青素及葉酸之 劑。

   2.如申請專利範圍第1項之組合物，其更含有輔酶q10。 3 ·如申請專利範圍第1項之組合物，其含有作爲蝦青素來源 之微綠藻（包括綠藻pwrjowrew·?))萃取物。 4.如申請專利範圍第1至3項中任一項之組合物，適用於投 與之劑量單位形式之甘蔗原素類的每日劑量爲5至40 mg» 5 ·如申請專利範圍第4項之組合物，其中投與之甘蔗原素類 的每曰劑量爲10至20 mg。

   6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之組合物，適用於投 與之劑量單位形式之紅酵母菌的每日劑量相當於1至6 mg 莫那可林（monacolin)。 7. 如申請專利範圍第6項之組合物，其中投與之紅酵母菌的 每曰劑量不大於3 mg莫那可林等價物。 8 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之組合物，適用於投 與之劑量單位形式之蝦青素的每日劑量爲0.1至5 mg。 9.如申請專利範圍第8項之組合物，其中投與之蝦青素的每 曰劑量爲0.4至2 mg。 1 〇 Λ •如申請專利範圍第1至3項中任一項之組合物，適用於投 與之劑量單位形式之葉酸的每日劑量爲〇.〗至〇.6mg。 1 \ Λ _ •如申請專利範圍第10項之組合物，其中投與之葉酸的每日 劑量爲0.15至0.4 mg。 1 2 ·如申請專利範圍第2項之組合物，其中該劑量單位形式含 有輔酶Q10，以及適用於投與之輔酶Ql〇每曰劑量爲1至 2 〇 m g。

   13.如申請專利範圍第12項之組合物，其中投與之輔酶qi〇 每曰劑量爲2至4 mg。 1 4_如申請專利範圍第丨項之組合物，其係於錠劑、膠囊或隨 時性懸浮液用粉末之形式。 1 5 .—種如申請專利範圍第1至1 4項中任—項之組合物之用 途’其係用於製備具有良好血脂肪功效，同半胱胺酸血症 之矯正’抗氧化劑作用以及血管內皮之保護功效之醫藥或 補充食品。