[go: up one dir, main page]

TWI234463B - Vaccine composition for treating streptococcus pneumoniae and respiratory syncytial virus infection, and preparation method thereof - Google Patents

Vaccine composition for treating streptococcus pneumoniae and respiratory syncytial virus infection, and preparation method thereof Download PDF

Info

Publication number
TWI234463B
TWI234463B TW089107452A TW89107452A TWI234463B TW I234463 B TWI234463 B TW I234463B TW 089107452 A TW089107452 A TW 089107452A TW 89107452 A TW89107452 A TW 89107452A TW I234463 B TWI234463 B TW I234463B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
vaccine composition
mpl
rsv
vaccine
alum
Prior art date
Application number
TW089107452A
Other languages
English (en)
Inventor
Marguerite Deschamps
Craig Antony Joseph Laferriere
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Application granted granted Critical
Publication of TWI234463B publication Critical patent/TWI234463B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/05—Adjuvants
    • C12N2501/056—Immunostimulating oligonucleotides, e.g. CpG
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

1234463 ⑴ 坎、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡單說明) 本發明係關於新穎疫苗配方、其製備法及其對疾病預防 與治療之用途。特定言之，本發明係關於投給兒童及老人 之組合疫苗。更特定言之，本發明係關於避免肺炎鏈球菌 及呼吸道細胞融合病毒（RSV)感染或致病之組合疫苗。 肺炎鏈球菌為革蘭氏陽性菌，可造成高發病率與死亡 率’對幼兒及老人傷害特重。其於呼吸道及中耳的擴張繁 衍’好發於幼童，是美國醫院求診的單一最常見原因。該 菌可成為具侵襲性，感染下肺部並造成肺炎。美國逾60 歲者而患有肺炎球菌肺炎之比率，估計為每1 〇萬人中有 3至8人。2 0 %的病例產生菌血症，其他症狀如腦膜炎， 即使以抗生素治療，也有近3 0 %的死亡率。圍繞肺炎鏈球 菌的莢膜多醣結構可決定其90種已知的血清型，而這也 是它的主要致病原因。 已知一種1 7價肺炎球菌疫苗（Moniarix)，是由侵襲性疾 病中最常見的肺炎球菌血清型之多醣類純化物為其基 礎。這些多醣類的純化法揭載於歐洲專利72513 B 1。較低 價疫苗之疫苗效力試驗，證明了對於呈現在該組合之血清 型，具有70至90%之效力。在美國對逾55歲者施用14 價疫苗之個案控制研究證明-*~70%的效力（Mills，O.F.，and Rhoads，G.G·，J· Clin· Epidemiol. (1996); Vol.49(6) 631-636)。即便臨 床效力數據不足，在適當的血液學反應之基礎上也接受納 入額外的多酷類（以製23價肺炎球菌疫苗）（K.R· Brown In ‘Combined Vaccines and Simultaneous Administration’，Ed· Williams 1234463 ,明懸懸, et al· New York Academy of Sciences 1995 pp 241-249) 0 使用2 3價肺炎球囷疫苗（Pnu-Immune 23 - Lederle USA)與流 行性感冒疫苗（Fluarix)之同時性免疫作用亦有人研究（TJ Fletcher, TW Tunnicliffe, K Hammond, K Roberts, JG Ayres; (1997) Br. Med· J. 314 : 1663)，而在同時性免疫作用及相隔一個月的免 疫作用之間，並無記錄顯示顯著的免疫學差異。 將肺炎球菌多醣類與蛋白載體耦合可增其對嬰兒之免 疫原性質。執行中的避免嬰兒中耳炎之臨床效力試驗將可 驗證此一概念。 對已施打過7至11價結合肺炎球菌疫苗之嬰兒，若再 施以2 3價單純多醣肺炎球菌疫苗，可增加其血清型保護 範圍與 IgG 濃度（Block，SL，JA· Hedrick，R.A· Smith，R.D· Tyler, M. Giordani，M.D. Blum，J· Sadoff，Ε· Keegan; Abstract G-88，37th ICAAC， Toronto (1997); Anderson，E.L·，Kennedy，D.J·，Geldmacher，K.M·， Donnelly, J.5 Mendelman, P; The Journal of Paediatrics, May 1996. Vo. 128, n05, Part 1，649-653)。 人類呼吸道細胞融合病毒（RSV)為病毒類副黏液病毒 科之成員，造成下呼吸道疾病，好發於幼童及嬰兒。近期 研究顯示RSV亦為成人之重要病原，老人尤其易受感染。 RSV被覆包膜，具有非分_段、負股核糖核酸（RNA)的基 因組，其1 5,222個核#酸編碼10種信息RNA，每一信息 RNA編碼單一多肽。十種蛋白中之三種為跨膜表面蛋 白·· G(黏附）、F(融合）及SH蛋白。二種蛋白為病毒基質 蛋白（M和M2)，三種蛋白為核蛋白殼之成分（N、P及L)， 1234463 (3) 發曝說明績頁 人 'y23:Al&:r‘Λ：^α/ί:":-二 二種蛋白為非結構蛋白（NS1和NS2)。存在二種不同抗原 性之RSV種系，稱為種系Α與Β。用以分組的種系特徵 決定於G蛋白上殘基的主要差異，而其F蛋白則是保守 的。 呼吸道細胞融合病毒（RSV)會季節性暴發，尖峰在溫和 氣候的冬季及較暖氣候的雨季（DeSilva LM & Hanlon MG. Respiratory Syncytial Virus · a report of a 5-year study at a children's hospital. J Med Virol 1986; 19 : 299-305)。不論發生地區為何， RSV常具規律而可預測的模式，且其甚少與其他呼吸道 病毒病原之暴發同時出現（Glezen WP & Denny FW. Epidemiology of acute lower respiratory disease in children. N. Engl. J. Med. 1973; 288 : 498-505)。 RSV為兒童嚴重下呼吸道疾病之主要原因。估計RSV 感染直接導致40至50%患細支氣管炎的兒童住院及25% 患肺炎的兒童住院。原發性RSV感染通常發生於不滿一 歲的兒童；9 5 %的兒童有在二歲前曾被感染的血清學證 據，而該群體在成人之前則1 0 〇 %皆為如此。 在嬰兒及幼兒，由上至下呼吸道的感染進程約占 4 0 % 病例，其臨床表現為細支氣管炎或肺炎。二至六個月的兒 童有受RSV感染而產生嚴多症狀（原發性呼吸衰竭）之最 高危險；而患有潛在心臟或肺-部疾病的任何年齡兒童、早 產嬰兒、免疫缺損的嬰兒，也同樣具有嚴重併發症的危險。 症候性再感染可發生於任何年齡，且RSV也同樣地更 被視為重要的成人病原，特別是對老人而言。
1234463 RSV感染幾乎確定不會在成人被診斷出，部分原因是 它被當作是兒童的感染。因此，並沒有進行成人病毒證據 的檢驗來解釋呼吸道疾病。此外，對該病毒具有某種程度 部分免疫力的人，是不易由其鼻部分泌物驗出RSV的， 而絕大多數的成人都是如此。青年至中年的成人若免RSV 感染，通常會發展成持續的感冒類似症狀。老年人或許會 發展成長久的呼吸道症狀而無法與流行性感冒實際區 別，其上呼吸道症狀可伴隨下呼吸道病症，包括肺炎。住 在機構的老人群體應予特別注意，因為他們是由許多易感 的個體聚集而成的。此種群體若經感染散佈，其中具多種 健康問題者將因容易受到感染，其疾病將更加嚴重而不易 控制。 更進一步，近期研究報告將RSV感染衝擊評價為成人 及社區在宅健康老人的住院原因，更指出RSV感染在這 些群體的重度下呼吸道疾病中扮演了重要角色（Dowell SF， Anderson LJ. & Gray Jr HE, et al. J. Infect Dis 1996; 174 ^ 456-462; Falsey AR, Cunningham CK, & Barker WH, et al. J. Infect Dis 1995;172 : 389-394)。Dowell鑑定出RSV為導致成人住院之重 度上呼吸道疾病的四種最常見病原之一（Dowell SF，Anderson LJ，& Gray Jr HE，et al· J. Infect Di^L996; 174 : 456-462)。Falsey 證明 了老人的嚴重RSV感染不限於護理之家或暴發的狀況。 當然，RSV感染對居住在社區的老人而言，也是嚴重疾 病的可預期原因。類似於A型流行性感冒的住院狀況， 那些RSV相關感染是與高度發病率有關連的，其證據為 -9- 1234463 發明雙;？頁. (5) 長久的住院日、高度密集照護住院率、及高度換氣支持率 (Falsey AR? Cunningham CK, & Barker WH5 et al. J. Infect Dis 1995;172 : 389-394)。 這些研究指出有效疫苗的醫療及經濟需要，該疫苗對於 嬰兒、成人及社區在宅健康老人與住在機構的老人兩者， 應能避免RSV感染的重度併發症。
對重組次單位疫苗或死體疫苗而言，使用佐劑是相當重 要的。明礬是目前唯一經核准使用在人體之佐劑。然而， 明礬在體液性反應上的補佐效果是有限的，且已知其所謗 導者主為 Th2 型免疫反應（ByarsNE，NakanoG，&WelchM，etal· Vaccine 1991;9 : 309-318)。 然而，已發現3 De-O-醯化單磷醯脂A(3D-MPL)與明礬 併用可增進體液性反應並刺激較佳的 Th 1型免疫。含 3D-MPL佐劑之鋁鹽記為Alum/3D-MPL。 本發明係為一疫苗組合物，其包含：
(a) —種或多種肺炎鏈球菌多醣類，不論其是否與蛋白 或胜肽結合；及 (b) —種與佐劑結合的RSV抗原、而佐劑為一 Thl型反 應之較佳刺激物。 疫苗朝組合疫苗發展，是由i其具有減低接受者的不適 感、易於排程、確保控制的完-整性等優點，但它也同時存 在降低疫苗效力的風險。因此，製造符合群體需要且不彼 此干擾的組合疫苗是有助益的。若疫苗的組合能產生综 效，改善一種或兩種疫苗效力，或改善一種或兩種疫苗的 -10- 1234463 ⑹ 相關保護能力，這就更有助益了。本發明之疫苗組合物可 實現此目標，將其施予特別容易罹患肺炎鏈球菌和/或 RSV感染的兒童或老人，能產生很大的好處。
本發明之疫苗組合物可視情況添加一種或多種某數量 的其他抗原’如流行性感冒病毒抗原。目前可講得的流行 性感冒疫苗包括完整不活化病毒疫苗、裂粒疫苗、及次單 位疫苗。所有的流行性感冒疫苗通常為三價疫苗。它們包 含了由兩種A型流行性感冒病毒種系和一種B型流行性 感冒病毒種系所衍製之抗原。其標準0.5毫升劑量大多含 有每一種系之紅血球凝集素成分1 5微克。 決定何種種系併入流行性感冒疫苗的步驟是複雜的過 程，需要世界衛生組織、國家衛生主管機關及疫苗製造商 的通力合作。 肺炎球菌多醣類可藉其與蛋白載體行化學耦合而成較 強免疫原，避免嬰兒中耳炎之臨床效力試驗正在執行中。
通常使用兩種結合法來生產免疫原多醣結構物：（1)碳 水化合物與蛋白之直接結合；及（2)碳水化合物與蛋白藉 雙官能性連結劑或間隔劑之間接結合。通常，直接及間接 結合法兩者皆要在衍生作用前，化學激活其碳水化合物份 額。實例見於美國專利 5,651，971 及 Dick與 Beurret之
Glycoconjugates of Bacterial Carbohydrate Antigens」結合疫苗， J.ML Cruse & R.E. Lewis (eds)，Vol. 10, 48-1 14 (1989)。 如本發明之組合物之肺炎鏈球菌多醣，其較佳者為結合 形態但不必要為此形態。非結合的肺炎鏈球菌多醣並未被 -11 - 1234463 ⑺ 排除。 肺炎鏈球菌多醣類，若其為結合形態，則與其結合者可 為蛋白或胜肽。多醣抗原與某數量之Τ幫助者蛋白結合， 對 Τ-幫助者提供表位。代表性蛋白包括白喉類毒素、破 傷風類毒素、及流感嗜血桿菌Β之蛋白D或其脂化衍生 物脂蛋白D。其他適當的蛋白載體包括白喉Crm 197及流 行性感冒之主要非結構性蛋白 NS 1 (特別是胺基酸 1至
8 1)。 蛋白 D是如本發明之疫苗之較佳組份，並與該疫苗之 肺炎鏈球菌多_類相結合。蛋白 D的片斷亦為可溶性。 蛋白D已述於歐洲專利0 5 94 6 1 0。供使用的可溶性片斷 包括了含有 T-幫助者表位之片斷。特定言之，較佳的蛋 白D片斷包含了 N-端1/3之該蛋白。
令人驚訝地，吾人發現將蛋白 D-結合肺炎鏈球菌多醣 與RSV抗原組合在如本發明之組合物中，並不會影響對 該結合物蛋白D組份之免疫反應。蛋白D為一保護性抗 原，用以抵抗非可分型的流感嗜血桿菌B(NTHi)感染。 因此，本發明更可供為疫苗，其包含一種RSV抗原及 至少一種肺炎鏈球菌多醣，而該多醣與蛋白 D或其斷片 結合，選擇性地添加佐劑如_工111佐劑。 本發明之疫苗中肺炎鏈球菌組份典型地包含多醣抗原 (結合者較佳），其中多醣類為衍生自至少四種血清型之肺 炎球菌。這四種較佳的血清型包括6B、14、19F及23F。 更佳者為該組合物包括至少 7種血清型，例如由血清沒 -12- 1234463
4、6B、9V、14、18C、19F及23F所衍生者。仍為更佳 者尚有包括至少1 1種血清型之該組合物，例如該組合物 之一個具體實施例包括由血清型1、3、4、5、6B、7F、 9V、14、18C、19F及23F所衍生之莢膜多醣類（結合者較 佳）。本發明之較佳的具體實施例中包括至少1 3種或至少 1 5種或至少1 7種多醣抗原（結合者較佳），雖然本發明也 考慮過更多的多醣抗原，例如2 3價者（如血清型1、2、3、 4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、 17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 及 33F)〇 老人用接種疫苗（立即預防肺炎）最好將血清型 8和 12F(最佳者15和22亦同）涵括至上述1 1價抗原性組合物 以製成15價疫苗，而嬰兒或幼童用者（重點在於中耳炎） 最好涵括血清型6A和19A以製成13價疫苗。 涵括在如本發明之疫苗中適當的RSV抗原，包括不活 化RSV病毒，如化學性不活化RSV病毒可使用福馬林使 其不活化。不活化病毒可由如減毒RSV製得，該RSV可 由如多代培養或基因操縱方式來減毒，而不活化病毒也可 由野生型RSV製得。重組RSV也可用於疫苗，該RSV是 經改造而包含不同RSV種系之包膜抗原，例如RSV種系 A之骨幹加上RSV B包膜蛋_白，可視需要進行減毒處理。 適當的RSV抗原包括，特別是由RSV病毒所衍生之抗 原’較佳者為人類RSV包膜糖蛋白，如RSV F或G蛋白 或其免疫原性斷片，其例揭載於美國專利5，1 4 9，6 5 0，或 含有至少一種RSV F和G蛋白兩者之免疫原性斷片之歲 -13- 1234463 'v ^ S Λ " Λ ^ , " - 發明說;明績頁 二,y二乂〜 (9) 合性多胜，較有助益的RSV FG嵌合性蛋白之例揭載於美 國專利5, 1 94,5 95，其較佳者由CHO細胞所表達。 較佳的RSV抗原為RSV包膜糖蛋白或其衍生物。較佳 的抗原由RSV種系A所衍生。替代的抗原可由種系B所 衍生，或可由每一種系A和B之組合物取得抗原。較佳 的抗原是由F糖蛋白、G糖蛋白或FG融合蛋白或其免疫 原性衍生物所選出的。
典型的免疫原性衍生物包括，其蛋白缺乏FZ\tm、G △ tm及FAtm GAtm跨膜區域。較佳的信號序列是由 G蛋白刪出的。若F或G蛋白上至少約5 0 %或至少約8 0 % 的胞外區域（連續序列）能呈現出，則為較佳者。其特例包 括F蛋白之1至526或1至489胺基酸、G蛋白之69至 298或替代的97至279胺基酸、及融合蛋 白。尚有一替代性融合包含了 F蛋白的1至489胺基酸 並接續G蛋白的97至279胺基酸。
如本發明之RSV/肺炎鏈球菌疫苗組合物含有佐劑，該 佐劑為 Th 1型反應之較佳謗導劑，可協助免疫系統之細 胞媒介分支。 對抗原之免疫反應是經由抗原與免疫系統的細胞之交 互作用而生成的。免疫反應的-Ιέ果可概括地區分為兩種極 端的類別，是為體液性或細胞媒介免疫反應（傳統上以抗 體及細胞性作用物之保護機理為其各別特徵）。這些反應 類別所用術語為Thl-型反應（細胞媒介反應）及Th2-免疫 反應（體液性反應）。 -14- 1234463 (10)
極端的 Th 1 -型免疫反應之特徵有特異性抗原的生成、 單套型限制性細胞毒性T淋巴球及自然殺手細胞反應。 小鼠Thl-型反應之特徵常為IgG2a亞型抗體的生成，而 於人體其相對應者為IgGl型抗體。Th2-型免疫反應之特 徵為多種類型之免疫球蛋白同類型原之生成，包括小鼠的 IgGl、IgA 及 IgMo
普遍認為這兩型免疫反應背後的驅動力為細胞素，這是 數種經驗定的蛋白信使，用來協助免疫系統細胞，並促進 最終的免疫反應，不論其為Thl或Th2反應。因此高水 平的 Th 1 -型細胞素傾向利於對特定抗原謗導產生細胞媒 介免疫反應，而高水平的 Th2-型細胞素傾向利於對該抗 原誘導產生體液性免疫反應。
必須謹記的是，Thl和 Th2-型免疫反應的區別並不是 絕對的。實際上個體所支持的免疫反應可描述為優勢Th 1 或優勢 Th2。然而，將細胞素視為不同家族是便利的想 法，其法述於Mosmann與Coffman所著之鼠科CD4 + ve T細 胞株（Mosmann，T.R. and Coffman，R.L. (1989) TH1 and TH2 cells : different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology，7, pl45-173) 〇 傳統上， Thl-型反應與T-淋巴球所產^生之INF- 7及IL-2細胞素相 關聯。其他常與T h 1 -型免疫反應之誘導相關聯的細胞素 並非產自T細胞，如IL-12。相對而言，Th2-型反應則與 IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 及腫瘤壞死因子-万（TNF-/S )之 分泌相關聯。 -15- (ii) 1234463
WMMKM 已知某些疫苗佐劑特別適於刺激Thl及Th2-型細胞素 反應。傳統上’在接種疫苗或感染後免疫反應之Thl ·· Th2 平衡的取好指標，包括直接測量T淋巴球在體外受抗原 重覆刺激後所產生之Th丨或Th2細胞素，和/或測量抗原 特異性抗體反應之IgGl ·· IgG2a比率。
從而’當分離的T細胞群體在體外受抗原重覆刺激時， Th 1型佐劑能刺激該τ細胞產生高水平之Th 1 -型細胞 素’且該佐劑能謗導與Th 1 -型同類型原相關聯的抗原特 異性免疫球蛋白反應。能促進優勢Th 1反應之適當補佐 系統，包括單磷醯脂A或其衍生物，特別是3 -去-0 -醯化 單磷醯脂A，及單磷醯脂a之組合，較佳者為3-去-0-醯 化單磷醯脂 A(3D-MPL)與鋁鹽。更適用的補佐系統描述 於下。 此種佐劑已述於國際專利申請號W0 94/〇〇丨53及W0 9 5/17209之實例中。
3D-MPL已述於英國專利2220211 (Ribi)。化學上’該物 為具有4，5或6醯化鏈的3 -去-Ο -醯化單磷臨脂A之混 合物，其製造商為RibilmmunochemMontana。較佳的3-去 醯化單磷醯脂A之型式已揭載於歐洲專利EP 〇 689 454B 。 一一 3 D-MPL之較佳粒子大小要小到足以通過〇·22微米之 無菌過濾薄膜（如歐洲專利EP 0 6 8 9 4 5 4所述） 3D-MPL之正常每劑用量在10微克至1〇0微克範圍 内，較佳者為25至50微克，其中抗原之典塑每劑用量在 -16 - 1234463 (12) 聲，說貧 2至50微克範圍内。 另較佳的佐劑包含QS2 1，是由Quillaja Saponaria Molina 樹皮衍生之急素之非毒性部分經Hpic純化而得。可視需 要將其與3-去-〇-酿化單磷醯脂a摻合，亦可視需要再與 載體摻合。 生產 QS21之方法已揭載（以 QS21)於美國專利號 5,057,540 。 含有QS21之非反應原性佐劑配方已揭載於W0 96/33739。將此種含有qS2i與膽固醇的配方與抗原一起 配製’可顯不其為有效刺激Th丨之佐劑。從而構成本發 明之一部之疫苗組合物可包括q s 2 1與膽固醇之組合。 尚有Th 1反應之較佳刺激劑可為佐劑，包括免疫調節 性寡核酸類’例如揭載於W〇 96/025 55之未甲基化CpG。 不同Th 1刺激佐劑之結合，如上述及者，亦被考慮以 其τ ^ 1型反應之較佳刺激效果用作佐劑。舉例而言， QS21(較佳者亦可含膽固醇）可與3D-MPL —起配製。 QS21:3D-MPL之比率典型為1: 10至1〇: 1之等級間； 較佳者為1 : 5至5 : 1，且實際常為1 : 1。理想综效之 3D-MPL : QS21的較佳範圍為2.5 : 1至i : i。 依本發明之疫苗組合物含^審載體者較佳。載體可為油含 於水之乳液，或鋁鹽。 - 較佳的油含於水之乳液包含了可代謝油，如鯊晞、α生 育酚及tween 8 0。尚有油含於水之乳液，其含span 8 5和/ 或卵磷脂和/或tricaprylin。 -17- (13) 1234463
^々作法疋’將氫氧化铭（明礬）或磷酸鋁加入本發明 之組合物中，以強化免疫原性。 诗佳的作法是’將如本發明之疫苗組合物之抗原與 3D-MPL及明礬給組合起來。 人類所用之QS21與3D-MPL ,其疫苗中之典型每劑用 曰在1微克土 200微克範圍内，如10至100微克，較佳 者為1 0至50微克。典型的油含水之乳液包含自2至1 〇% 的農缔、自2至10%的α生育酚及自〇·3至3%的tween 80。 農婦· α生θ紛之較佳比率為等於或小於1，如此可得較 I足的乳液S P an 8 5亦可以1 %的水平存在。在某些例 子中’本發明之疫苗若再加安定劑將會更有助益。 非毒性油含於水之乳液，較佳者為其水性載體，含有非 母陡油如農^或鯊烯、乳化劑如tween 80。其水性載體舉 例可為磷酸鹽緩衝液。 一特別有效的佐劑配方其油含於水之乳液中有QS2 1、
3D-MPL及生育紛，該配方已述於WO 95/17210。 n % < &苗將包含具有免疫保護性數量之抗原，並可 由常規技術所製備。 疫备製備法已概路述於Pharmaceutical Biotechnology，卷61 疫田口又冲一次單元與佐劑手，Powell和 Newman編輯， Plenum Press 出版，1995 ; New Trends and Developments in Vaccines， Voller等人編輯，university Park Press出版，巴爾的摩，馬里 蘭’美國，1 9 7 8。脂體包覆法，例如Fullerton所發明者， 已載於美國專利4,235,877。蛋白結合與巨分子之結合法， -18- 1234463 (14) 例如Likhite所發明者，已載於美國專利4,372, 945，而Armor 等人所發明者，載於美國專利4,474, 757。
每劑疫苗之蛋白量，其在典型疫苗中之選定，是該量可 謗導.出免疫保護性反應，而無顯著的、不良的副作用。此 量將隨所用之特定免疫原而改變。一般而言，咸認為每劑 可含1至1000毫克蛋白，較佳者為2至100毫克，最佳 者為4至4 0毫克。某特別疫苗所用之理想量，可由標準 研究來確定，該研究對受試者之抗體滴定數及其他反應進 行觀測。在初次疫苗接種之後，受試者在約4週内可接受 追加接種。特別對嬰兒而言，三劑是較佳的。 除了對肺炎鏈球菌或RSV感染易感者之疫苗接種外， 本發明之醫藥組合物尚可用於免疫治療性地醫療遭受該 感染之患者。
本發明進一步提供了所述疫苗配方之製作方法，其中該 法包含了將肺炎鏈球菌抗體及RSV抗體與Th-Ι謗導佐 劑、載體之混合動作，而佐劑例如3D-MPL，較佳的載體 則如明礬。 視需要可用任何方便的順序加入其他抗原，以製所述多 價疫苗組合物。 本發明更提供了疫苗組合j之生產方法，其包含了將和 蛋白D結合之肺炎鏈球菌與RSV抗原及醫藥上可接受之 賦形劑的混合動作。 在以下實例中，將RSV疫苗候選者FG與23-價肺炎球 菌疫苗商品（Wyeth-Lederle所製 Pneumune)進行組合，將在 -19- 蔘明爾賴 1234463 (15) 小鼠試驗中執行其效果的評價。本試驗檢定了組合的免疫 作用，而該疫苗經物理性混合並注射同一部位。本研究之 結果可證明共同综效，兩種疫苗之某些免疫學標記顯示出 改善的反應。
這些實例更可證明小鼠試驗中，與RSV疫苗候選者及 1 1價結合肺炎球菌疫苗組合之疫苗，本研究可證明對多 數免疫學標記而言，在抗原之間沒有干擾或只有輕微干 擾，但事實上對部分免疫學標記而言，卻有改善的反應而 有综效性效果。明顯地，蛋白 D組份不會減低其結合的 肺炎球菌多醣類之免疫反應。 圖式簡單說明 圖1表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，抗 -FG Ig抗體對具不同佐劑之FG反應之分析。
圖2表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，抗 -RSVA中和抗體對具不同佐劑之FG反應之分析。 圖3A表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 對於個體抗-FG之Ig、IgGl及IgG2a之同類型原對 具不同佐劑之F G反應之分析。 圖3 B表示於以各種調配物亍肌肉免疫作用之老鼠中， 對於個體抗-FG Ig、IgGl及IgG2a之同類型原對具 不同佐劑之FG反應分析中，抗-FG之IgGl/IgG2a 比率。 圖4表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，其 -20- 1234463 _ (16) 發明謂31績頁 (A )脾臟細胞；及（B )淋巴結細胞對具不同佐劑 之FG所謗導的FG-特異性淋巴增生之分析。 圖5表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，具 不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導出的抗-RSVA中和 抗體反應之分析 圖6表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， (A)個體抗-FG同類型原；及（B ) IgGl對IgG2a 同類型原比率對具不同佐劑之F G或F G + P S反應之 分析。 圖7表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，具 不同佐劑之F G或F G + P S所謗導的抗體反應之分析。 圖8表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，體 外重複刺激1 〇微克/毫升劑量之具不同佐劑之F G或 FG+PS，其脾臟細胞之（A) IFN-r及（B) IL-5細 胞素分泌反應；及（C ) IFN- r對IL-5之比率分析。 圖9表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中，具 不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導的抗- FG Ig抗體反 應之分析。 圖1 0表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 所謗導的抗-RSVA中抗體對具不同佐劑之FG或 FG+PS反應之分析。- 圖1 1表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， (A)個體抗-FG同類型原；及（B) IgGl對IgG2a 同類型原比率對具不同佐劑之F G或F G + P S反應 -21 - 1234463 (17) 圖12 圖13 圖14 圖15 圖16 之分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 具不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導的抗體反應之 分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 體外重複刺激1 〇微克/毫升劑量之具不同佐劑之 FG或FG+PS，其脾臟細胞之（A) IFN-r及（B) IL-5細胞素分泌反應；及（C ) IFN- r對IL-5之比 率之分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 具不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導的抗-FG Ig抗 體反應之分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 具不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導的抗-RSVA中 和抗體反應之分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， (A)個體抗-FG同類型原；及（B) IgGl對IgG2a
圖17 同類型原比率對具不同佐劑之F G或F G + P S反應 之分析。 表示於以各種調配物導d亍肌肉免疫作用之老鼠中， 具不同佐劑之FG或FG+ PS所謗導的抗體反應之 圖18 分析。 表示於以各種調配物進行肌肉免疫作用之老鼠中， 體外重複刺激1 〇微克/毫升劑量之具不同佐劑之 -22- 1234463 (18)
FG或FG+PS，其脾臟細胞之（A) IFN-r及（B) IL-5細胞素分泌反應；及（C ) IFN- r對IL-5之比 率之分析。 圖19表示血清IgG對PS-共軛體之蛋白質-D載體成分之 反應之分析。 圖20表示血清IgG及同類型原對PS-共軛體之蛋白質-D 載體成分之反應之分析。 實例 實例1-組合的RSV + 23-價肺炎球菌疫苗之評價 1 .調配方法： 使加水稀釋的FG抗原（2微克：1/10 HD)吸附於50微 克Al(OH)3上15分鐘。使用時，將5微克3D-MPL加入 該配製液而成 1 〇 〇毫微米粒子之懸浮液，並使該液培釀 30分鐘。再以10倍濃縮的pH 7.4之PBS來缓衝該配製 液。使用時，在緩衝溶液加入1 5分鐘後，再加入2 3價肺 炎球菌疫苗（11.5微克：1/50 HD)。相同的配製順序也用 在無 FG之群組，故在加入 23價肺炎球菌疫苗之前， 3D-MPL會先吸附於Al(OH)3上。在濃縮緩衝劑或23價 肺炎球菌疫苗加入15分鐘後，再將苯氧基乙醇（5毫克/ 毫升）加入該配製液作為保存劚。 在室溫下攪動該液以進行培釀。在首次注射之前，配製 液同時用來製備2注射劑，而最終配方之成熟需7曰。 配方成分組成： 組分 批次號碼 濃度 (微克/毫升） 緩衝液 -23 - 1234463
FG 54/023 265 10 PO4,150NaCl pH6.8 A1(0H)3 96A0089 1 03 80 h2o 23-價 Pneumune 1150 食鹽水 3D-MPL 109 964 h2o 2 ·免疫作用準據： 1 1組小鼠每組10隻在第〇日與第2 8曰用不同的配方 以不同途徑（5 0微升）接種小鼠（見表1)。第7及8組用活 體RSV以鼻内途徑（60微升）接種。在第28日（第1劑後 28曰）及第42日（第II劑後14曰）抽取血清。在第42曰， 由第4、5、6、7、8、9組各取5隻小鼠，及5隻naive B alb/c 小鼠（第1組、未接種的），再將這些小鼠的脾臟及淋巴結 細胞取出。 3 .體液性反應。 3 · 1 ·抗F G抗體： 所有體液性反應結果由每組的1 〇隻小鼠進行（對於抗
FG滴定數的個體反應及其攙和血清之同類型原概況），而 細胞性反應結果則由每組5隻的小鼠呈現。 在第一次接種後第2 8日及第二次接種後第1 4日取得的 個體血清，將用以檢測其F G特異性I g抗體是否存在、 及其同類型原（IgG2a、IgGl)分布。 分析準據如下··以每井5ΊΧ微克純化的54/023(1微 克/毫升）在4°C添覆至隔夜，在37°C飽和1小時，在37 C以血清培釀1小時30分’在37 (:以抗小鼠ig生物素 1 /1 500(或1§〇1、4〇2&生物素 1/1000)培釀1小時3()分， 在 3 7°C 以 strepta-peroxydase 1/2500 培釀 3〇 分鐘，在室溫以 -24· 1234463
(20) OPDA Sigma培釀15分鐘，再以2NH2S04停止。 以490毫微米波長監測〇d，並以Softmaxpro (4參數方 程式）參照標準曲線決定出滴定數後用EU/毫升來表示。
在第二次接種後第1 4日取得的個體血清，將以如下準 據檢測其是否存有中和抗體：在雙份的96井盤中，將5〇 微升血清一倍連績#釋液（第一稀釋液為1 / 2 5 )，以$ 〇微 升某混合液於3 7 °C培釀1小時，而該混合液含有3 〇 〇 p fu 之RSV-A/Long (Lot 14)和天竺氣補體（1/25稀釋液）。將每 毫升含1 05個細胞之HEp-2細胞懸浮液，於每一井中加入 100微升，在5% C02存在下，於37 °C將該盤培釀4日。 先吸出上層液，加入100微升WST-1製備液（稀釋液為 1/12.5)之後，在5% C〇2存在下，於37°C將該盤再择釀 24小時。以595毫微米波長監測〇D，並使用線性迴歸 (y = a · 1 〇 g X + b)來決定其滴定數，其算法為：滿定數=使未 感染細胞測得之最大OD減少5 0 %的血清稀釋倍數。 類攙和物） Sandoz 生
檢測的對照組包括了隨機選取之人類血清（人 及 Sandoglobuline (lot 069，通稱為人類 ig(}，由 產）之攙和物。 3 · 2 ·抗肺炎球菌多gf I g G : 對肺炎球菌多醣型6B、1一4一、19F和23F之藏類Ig(}。 用由CDC準據所改之ELISA來測量。此準據包括 匕 了對j&i 清添加可溶性細胞壁多糖（C P S)以抑制c p s於轉、、 几月豆又測量。 CPS為鱗醯膽鹼，其含有常見於肺炎球菌的台口 。；、 ° 敗。該物 出現在莢膜之下，故對抗該物之抗體僅有微弱的保護力 -25- 1234463 (21)
由於CPS連結於荚膜多醣，故用於添覆ELISA盤之純化 莢膜多醣通常會有0·5至1%的CPS污染。因此，CPS抗 體的測量，會與莢膜多醣的ELISA結果之解釋相混淆。 將濃度各為20、5、10及20微克/毫升之6B、14、19F 及 23F型多醣之碳酸緩衝液添覆於 ELISA盤以利其進 行。將等價的5 0 0微克/毫升C P S預先混入未稀釋的血清 中，再將培釀30分鐘之混合血清加入ELISA盤。使用
Jackson ImmunoLab山羊抗鼠類IgG(H + L)過氧化酶之ι:2〇〇〇 稀釋液來檢測鼠類I g G。其滴定曲線係參照每一血清型已 知濃度之多醣特異性鼠類單株抗體，以符號邏輯對數比較 法，使用SoftMax Pro軟體算得。其、14、19F及23f 型所用單株細胞各為HASP4、PS 14/4 m , ’外、PS 19/5 及 23/22。 由於可得血清量有限，所檢測者為撸 、、 A幾和血清，因此無法得 統計分析值。 4 ·細胞性反應 由第4至9組及由作為陰性控制 、、’赴的 n a ϊ v e小鼠（筮 組），在第二次接種後第14日分離 ^ 胞，以進彳FG-特異性細胞性反應牌臟細胞及淋巴結細 丨+IL-5)分泌兩者之 FG-特異性淋巴增生與細胞素（ΙρΝ刀析4樣要進仃 分析。 、倍稀釋）的媒劑2 0 〇 上培釀9 6小時，再 ’ F G特異性增生反 井之每井有2.5xl〇6 使用含有10至〇.〇3微克/毫-升f Q 3 微升，在每井4x1 05個細胞的96井♦ 評價其增生作用。因3H-胸苷的加人 應可依吾人之標準準據進行測量。24 -26- (22) (22)1234463
個細胞，具1毫升的媒劑，其包含10微克至〇 〇ι微克之 FG(10倍稀釋液），在96小時培釀後評價其細胞素謗導作 用。收集其上層液’以吾人之標準準據，測定ELisa所 謗導IFN- 7和IL-5之量。 1 .群組。 1 〇個群組接受了兩劑不同配方的疫苗接種，配方本有 23價疫苗或FG或組合劑，兩劑都用了氫氧化铭與 3D-MPL或氫氧化铭來配製。第i組構成cmi研究的控制 組。第2和9組用來評價由腹腔接種的及由肌肉注射接種 的2 3價肺炎球菌疫苗之免疫原性，而文獻載有評價2 3 價肺炎球菌疫苗之腹腔接種法《第3和1 〇組可與第2和 9組平行分析，差別為其23價肺炎球菌疫苗具明蓉 /3D-MPL。因未與FG明礬/3D-MPL組合，第2和3組也 構成了明礬/3D-MPL對23價肺炎球菌疫苗影響之控制 組。由23價肺炎球菌疫苗與FG明礬/3D-MPL之組合劑 之肌肉注射接種所謗導的免疫反應，可用第4組來評價。 因未與2 3價肺炎球菌疫苗組合，第5和6組構成了評價 明礬/3D-MPL對FG影響之控制組。RSV活體接種為自然 R S V IN感染（第7組）所誘導之免疫反應的控制組。最後， 第9組是明礬/3D-MPL單獨—举響之控制組。 -27- 1234463
表1 組別 抗原 佐劑_· 途徑 • 1 /πΤ. ‘ 無 j \w 2 23 價 Pneumune(11.5pg) 無： 肌肉注射 3 23 價 Pneumune (11.5 pg) 明礬/3D-MPL 肌肉注射 4 23 價 Pneumune (11.5pg)/FG (2pg) 明礬/3D-MPL 肌肉注射 5 Ρ〇(2μ8) 明礬/3D-MPL 肌肉注射 6 FG (2pg) k 明礬 肌肉注射 7 RSV Live (Lot 14: 101 2 3 4PFU) 4rrC IN 8 4rrc. 撕 明礬/3D-MPL 肌肉注射 9 價 Pneumune (11.5μ§) 無 腹腔注射 10 23 價 Pneumune (11.5 pg) 明礬/3D-MPL 腹腔注射
•28· 1 .體液性反應 2 2.1.抗-FG抗體 第一次接種後第2 8日及第二次接種後第1 4日之特異性 抗FG抗體之分析顯示，以FG明礬/ 3D-MPL/23-價（第4 組）或單獨以較？0八111111/30-^1?1^/23-價具稍高效價之？0 明礬/ 3 D - MP L (第5組）來接種，能謗導出相似的抗體反應 (圖1 )。以FG明礬（第6_ :组）接種者，在兩個時點都謗 3 導出較預期為低的抗體滴定數。統計分析顯示，第一次接 種後第28日及第二次接種後第14日，在第4至6組所謗 導的抗-F G I g滴定數之間，確有顯著差異。 4 結果 1234463 〇 , ,Λ/於…?，从分•叫， (24) 縈明說明庸頁 抗-R S V A中和抗體的分析（圖2 )，顯示出如同在抗-F G I g反應中所觀測到的類似數據。 基於以上結果，可計算出抗-FG/抗RSV中和抗體比率 (第二次接種後第28日），而顯示出FG明礬/ 3D-MPL/23-價、FG明礬/ 3D-MPL及FG明礬之比率，與由RSVIN組 所謗導出之比率，其比較關係（表2)。 FG SB AS4 / 23 價 FG SB AS4 FG明礬 活鞲RSV 疫苗候選者 -4 ON Ul ^ w S3 3836 2713 1721 703 1 抗-FG ELISA Ig 第一劑接種後2S曰 抗體滴定數（GMT) 392 187 1 ί 117 35 1 RSV-A . Neutra k〇 — 一一 O LA Ul Ο r 53 择1 • / ·*- » i 12170*7 1 78079 26163 J7119 沆-FG ELISA \g 第二劑接種後14曰 1 5809 4664 2771 726 1 RSV-Λ ,Neutra S ^ t； ΰ ELISA/Neuira 比率’ 丨：ΐ
-29- 1234463 (25)
對個體抗-FG之Ig、IgGl及IgG2a之同類型原滴定數 之深度統計分析顯示，將 2 3 -價疫苗加入 F G 明礬 /3D-MPL，可保其Ig及IgGl反應，並能顯著增加其IgG2a 反應（圖3A)。此外，該分析也顯示，其IgGl/IgG2a比率 和FG明礬/3D-MPL/23價及FG明礬/3D-MPL之IgGl滴 定數是相似的，但與F G明礬的數據有顯著差異。這三種 配方所謗導之IgG2a有顯著差異。
2.2 .抗-肺炎球菌多醣I g G 小鼠與其他齧齒動物可產生對抗多St免疫原的I g Μ，但 牠們通常不產生對抗多醣的IgG。這是因為牠們的免疫系 統缺乏對 T-依賴性抗原如多醣之信號，而該信號可謗導 同類型原的轉換。因此，小鼠中抗-多酷IgG的測量，對 於改善的 T-依賴性免疫反應之謗導作用是一種靈敏的檢 測。
所謗導出對抗 23種多醣中之四種 IgG的濃度列於表 3。正如我們在其他實驗注意到的，並沒有產生對抗 6 B 及2 3F型多醣的IgG。然而，仍可測得對抗14及19F型 之 IgG 〇 不含 2 3 -價疫苗的組別亦可測得多醣類 1 4及 1 9 F之 I g G，而確認了該測量的特昙♦。 比較接種途徑顯示出，用明·礬/3D-MPL來補佐23-價疫 苗時，對1 9F型而言肌肉注射途徑顯得比腹腔注射要好， 但是對14型而言則剛好相反。使用單純的2 3 -價，也看 不出有顯著差異。 -30- 1234463 (26) 知、ϊ·" ^^ \ 發明說明績頁 與單獨的2 3 -價相比較，不論使用肌肉注射或IP接種 途徑，23價+明礬/3D-MPL都能對14及19F型謗導出更 多的I g G。然而，與F G組合時，該I g G反應會下降。但 是，23-價+FG/明礬/ 3D-MPL對1 9F之IgG反應，仍較單 純2 3 -價所謗導者為高（比較第3及4組），且其對1 4型之 反應也有改善。 CO ΰ C0 — Ό 00 •u CA 〇\ « Λ Λ to Λ ο Λ ΙΟ Λ —· ο •hJ ΰ， S to Λ C>i •00 ο ΟΝ Λ Π 匕7 ΰ驾 W 2j- UJ Λ Ki u Ο % > Λ 匚 tsi > 芸％! ο 厶 Λ π Λ ο ο /\ ΙΟ t ^ P Λ Λ π Λ ο Λ Π 〇 厶 Λ ο ο Λ Κ) 0 g、冴 3 r Fff CO Λ S： S Λ Π ΰ s ^ R+ a Λ s: 一 Λ Π > a s 欠s 顏 S ? ®ps ί、^n>RSVs涤铝»涊甜麵適 IgG(s^y*^) -31 - 1234463 (27) ^ r //, ^ 软^ 〜气 4/ <ϊ>?%· < s. 發明說隳績軍 八夕崩f ·Ά\ 3 .細胞性反應 脾臟細胞及淋巴結細胞用FG明礬/3D-MPL +/- 23價或 FG明礬所謗導的FG«特異性淋巴增生，並未顯示兩者有 任何差異。
分析IL-5及IFN-r的生產可發現，含FG明礬/ 3D-MPL
的2 3價疫苗並不會降低I ρ N - 7的生產，但卻能少量增加 IL-5的生產（圖4)。使用兩種劑量的FG(10和1微克FG/ 毫升）進行體外重覆刺激，可測得IFN- τ /IL-5比率有 2 至8倍的差異，故可確認上述分析結果。然而，F G明礬 /3D-MPL/23價疫苗仍較FG明礬能謗導出更高的IFN- r /IL-5比率。 結論
對被謗導的抗-FG Ig特異性及抗RSVA中和抗體之滴 定數進行分析可發現，FG明礬/3 D-MPL與23價肺炎球菌 疫苗之組合劑，並不會妨礙僅以FG明礬/3D-MPL所測得 的反應之謗導作用。以抗-FG/抗-RSVA中和抗體比率來 測量反應的品質，與由IN途徑受RSV自然感染所測得比 率相較，仍能保持不變或近似。 由謗導的F G特異性細胞媒介反應的分析可知，將2 3 價疫苗加至FG明礬/3D-MPI:並不會影響脾臟細胞及淋巴 結細胞兩者之淋巴增生的謗導作用。再者，用FG明礬 /3D-MPL所測得的典型Thl型反應之謗導作用’以FG特 異性脾臟及淋巴結細胞在體外所生產的細胞素進行測 量，結果不但不會對該Thl型反應之誘導作用造成妨礙， -32- 1234463
(28) 若以FG特異性同類型原抗體分步進行分析，還能發現有 增強的效果。確實，IFN- r作為Thl反應的標記，其生 產在23價疫苗加至FG明礬/3D-MPL的條件下仍保持不 ’交’而作為T h 2反應標記的11 · 5，其生產只輕微增加。 有趣的是，將23價疫苗加至FG明礬/3D-MPL能顯著增 加作為Thl反應標記之IgG2a抗體的生產，但並不影響 IgGl(Th2反應標記）和igGl/IgG2a反應。
因此，將FG明礬/3D-MPL與23價疫苗組合，並不會 影響用FG明礬/3D-MPL所測得的反應，故FG明礬 /3D-MPL之配方與FG明礬相較更具優勢，也就是說，仍 保有在IgG2a抗體存在下所測得的高度初級及次級中和 抗體反應和Thl反應之謗導作用，和高水平的IFN- 7謗 導作用。 23價疫苗與FG明礬/3D-MPL組合後能使4種受測多醣
中之2種增產igG，但最戲劇性的是，對19F型而言，23 價單獨與明礬/3D-MPL使用可得最高的IgG濃度。 總結來說，23-價肺炎球菌疫苗與RSV FG明礬/3D-MPL 的組合是有利的，如此對兩種疫苗而言都有综效，這兩種 疫苗在特定免疫學測試能顯示其改善效果，而在任何測試 都沒有抑制作用。 _ — 實例2-組合的RSV+1 1-價結合肺炎疫苗之評價方法 組合疫苗是以 3D-MPL+明蓉、具脂體之膽固醇含 3D-MPL + QS21、或具寡核酸之CpG(含或不含明礬）。
添加FG至PS結合物配方對於蛋白D(PD)載體對lgG -33- 1234463 mmm (29) 免疫反應之影響亦被測試。 PD為一保謾性抗原，可對杬非可分型的流感嗜血桿菌 B(NTHi)感染。因此，將PD-結合的肺炎球菌“與⑽組 合起來，可造成有效的保護來對抗三種病原：肺炎鏈球 菌、RS V及非可分型的沉感嗜血桿菌b。對抗NTHi的保 護作用可能涉及Th 1型免疫。因此，也測試了作為Th 1 反應良好指標之抗-PD IgG2a抗體。
本實例所用之1 1 -價候選疫苗包括了莢膜多醣血清型 1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 及 23F,而其 基本製法揭載於歐洲專利 725 1 3。可用 CDAP化學（W0 95/08348)來活化和衍生每一多醣，並將其結合於蛋白載 體。除了血清型3(減少體積以增加黏度）之外，所有的多 醣皆以其天自然型進行結合° 蛋白載體是由非可分蜇的流感嗜血桿菌製得的重組蛋 白D(PD)，由大腸桿菌表達
1 .配製過程： 配方應於首次注射前12曰製備。 1.1. QS21、3D-MPL 基礎配方 於需要時，將抗原FG(2微克）或/和非吸附的ps結合物 (0·5微克/價），稀釋於10倍J矣縮P H 7 ·4的P B S及水的混 合液中。將QS21 (5微克）加至含MPL之脂體中混合，使 其QS2 1/膽固醇之重量比率為1/5(參照如DQ/3D-MPLin)。 身 三十分鐘後再將1微克/毫升之thiomersal加入作為保存劑。 1.2. CpG或3D-MPL基礎配方 -34 -
1234463 (30) 於需要時，先將Al(OH)3稀釋於水，再加入抗原FG(2 微克）或/和非吸附的P s結合物（0 · 5微克/價）。吸附3 0分 鐘後，加入MPL或CpG。三十分鐘後以1 〇倍濃縮pH 6.8 的P04-NaCl來緩衝該配製液。加入1微克/毫升之thiomersal 或5毫克/毫升之phenoxy作為保存劑。 所有的培釀動作都在室溫下伴隨攪動而完成。在首次注 射之前，配製液同時用來製備2注射劑’而最終配方之成 熟需7曰。 1 . 3 .配方成分組成 組分. AG OR IMST 濃度 (pG/ML) AL+++ 濃度 (μσ/ML) 緩衝液 FG 484 P04/NaCl 10/150mM pH 6.8 Clinical undecaval non ads PSi .144 t NaCl 150mM pH6.1 PS3 149 ，丨 NaCl 150mM pH6.1 PS4 125 NaCl 150inM pH6.1 PS5 135 NaCl 150mM pH6.1 PS6b- 206 NaCl 150mM pH6.1 PS7 168 NaCl 150mM pH6.1 PS9 175 NaCl 150mM pH6.1 PS14 180 一 - NaCl 150niM pH6.1 PS18 127 NaCl 150mM pH6.1 PS19 140 NaCi 150mM pH6.1 PS23 158 NaCl 150mM -pH6.1 QS21 2000 h2o MPL 1019 h2o -35- 1234463 (31) y
CpG 5000 h2o SUV DOPC 40000 Choi 10000 MPL2000 PBS pH7.4 Α1Ρ〇4 1000 NaCl 150mM pH6.1 Α1(ΟΗ)3 10380 H20
2 .免疫作用準據： 14組小鼠每組10隻在第〇曰與第2 8曰用不同的配方 以肌肉注射途徑（5 0微升）接種小鼠（見結果節）。血清於第 42日取得。在第42日，由接種過fG抗原的每組中各取 5隻小鼠’及5隻naive Balb/c小鼠，再將這些小鼠的脾臟 細胞取出。 3 .體液性反應。
3 · 1 .抗F G抗體： 所有體液性反應結果由每組的1 〇隻小鼠進行（對於抗 FG Ig、IgGl及IgG2a之個體反應以及中和作用滴定數），而 細胞性反應結果則由每組5隻的小鼠共同呈現。 . '*· 在第二次接種後第1 4 /1 5 — 日-取得個體血清，並檢測其是 否存有FG特異性Ig抗體及其同類型原（IgG2a、1§(}1)分 布。分析準據如下：以每井5〇微克純化的DFGP 107(1 微克/耄升）在4 °C添覆至隔夜，在3 7艺飽和i小時，在3 7 C以血清培釀i小時3 〇分，在3 7它以抗小鼠工g生物素 -36- 1234463
(32) 1 / 1500(或IgGl、IgG2a生物素1 / 1000)培釀1小時3 〇八 刀’在 3 7°C 以 strepta-peroxydase 1 / 1500 培釀 30 分鐘，在室溫以 〇pDA Sigma培釀20分鐘，再以2NH2S04停止。 以490毫微米波長監測OD，並以Softmaxpro (4參數、 程式）參照標準曲線決定出滴定數後用EU/毫升來表示 在第二次接種後第1 4曰取得的個體血清，將以如下淮 據檢測其是否存有中和抗體：在雙份的9 6井盤中，艘c 册5 〇
微升血清二倍連續稀釋液（第一稀釋液為1 / 2 5 )，以5 〇微 升某w合液於3 7 C培釀1小時，而該混合液含有p ^ 之RSV-A/Long (Lot 14)和天竺鼠補體（1/25稀釋液）。將每 毫升含105個細胞之HEp-2細胞懸浮液，於每_井中力 入100微升，在5% C02存在下，於37t將該盤培釀* 曰〇 先吸出上層液，加入100微升WS1M製備液（稀釋液為 1/15)之後，在5%0〇2存在下，於37。〇將該盤再培釀24 小時。以490毫微米波長監測〇D ,並使用線性迴歸 (y=a.i〇gx+b)來決定其滴定數，其算法為：滴定數=使未儀» 感染細胞測得之最大0D減少50%的血清稀釋倍數。 3·2·抗肺炎球菌多jgG : 6BJr7F、14、19F 和 23F 之鼠類 對肺炎球菌多醣型
IgG可用由CDC準據所改之EUSA來測量。此準據包括了 對血清添加可溶性細胞壁多醣（cps)以抑制cps抗體之測 量。CPS為蹲酷膽驗’其含有常見於肺炎球菌的台口酸。 該物出現在莢膜之下’故對抗該物之抗體僅有微弱的保護 ，37- 1234463
(33) 力。由於CPS連結於莢膜多醣，故用於添覆ELIS A盤之純 化莢膜多醣通常會有0.5至1 %的CPS污染。因此，CPs 抗體的測量，會與莢膜多醣的ELIS結果之解釋相混清。 將濃度各為20' 5、5、20及20微克/毫升之6B、7F、 14、19F及23F型多醣之PBS緩衝液添覆於ELISA盤以利 其進行。將等價的500微克/毫升CPS預先混入未稀釋的 血清中，再將培釀3 0分鐘之混合血清加入ELISA盤。使 用Jackson ImmunoLab山羊抗鼠類IgG(H + L)過氧化酶之1. 5000稀釋液來檢測鼠類I g G。其滴定曲線係參照每—血 清型已知濃度之多醣特異性鼠類單株抗體，以符號邏輯對 數比較法，使用SoftMaxPro軟體算得。其6B、7F、14、 19F及23F型所用單株細胞各為HASP4、PS 7/19、PS 14/4、 PS 19/5 及 PS 23/22。 對於血清型3也進行了相似的ELISA，而差異處為其先 用甲基化人類血清蛋白（1微克/毫升於PBS, 2小時，37 °C)添覆該免疫盤，以促進PS3之添覆（2·5微克/毫升於 PBS，隔夜，4t；)。用作標準參照者為pS3/6單株抗體。 3 · 3 · ELIS A之抗P D血清I g G劑量 將MaxiS0rp Nimc免疫盤在37t培釀2小時，其中B至h 列具有每井1〇〇微升的2微-£/毫升pD抗原之pBs稀釋 液，而A列則具有每井100微升的i微克/毫升純化山羊 抗小氣Ig (Jackson)之PBS稀釋液。然後，加入純小鼠 IgG(Jackson)之2倍連續稀釋液（以含〇 〇5% Tween2〇之 稀釋，每井100微升）作為標準曲線（起始濃度丄微克 -38- 1234463 (34)
/毫升，置於A列），並將血清試樣（起始於1/20稀釋液， 置於B至Η列）於4°C培釀至隔夜。而後，將peroxydase-結合的山羊抗-小藏I gG( Jackson)，以含0 · 0 5 % Tween20之 PBS稀釋為1 /5000後，在20 °C伴隨攪動（每井100微升） 培釀3 0分鐘。洗滌數次後，將盤置於暗處與每井1 〇 〇微 升顯示緩衝液（含0.4毫克/毫升OPDA(Sigma)及0.05% H202 之100毫莫耳濃度pH 4.5檸檬酸緩衝液）在室溫培釀15 分鐘。每井加入50微升1N的HC1使顯示作用停止。使 用 Emax immunoreader (Molecular Devices)以 490 及 620 毫微 米波長項取其光學金度。使用SoftMaxPro軟體以4參數 數學法可算得抗體滴定數。 3.4.ELISA之抗PD血清IgG 1、2a及2b劑量 將Maxisorp Nunc免疫盤在4°C培釀至隔夜，其中^至H 列具有每井50微升的2微克/毫升pd抗原之PBS稀釋 液，而A列則具有每井5 0微升的5微克/毫升純化山羊抗 小鼠Ig(Boerhinger)之PBS稀釋液。先將該盤以PBS Tween20 0 · 0 5 % B S A 1 %緩衝液進行飽和，再加入純小鼠丨g 〇卜igG2a 或IgG2b單株抗體（Sigma)之2倍連續稀釋液（以飽和緩衝液· 稀釋’母井50微升）作為標準曲線（起始濃度2〇〇毫微克/ 毫升，置於A列），並將血清-芎樣（飽和緩衝液之稀釋液其 - 起始濃度為1/20稀釋液’置於B至Η列）伴隨擺動於37 - t培釀至隔夜。以NaCl 0.9%Tween20 0.05%緩衝液洗滌數 次後，將生物素化抗-小鼠IgC?l或抗-小鼠IgG2a或抗-小 鼠IgG2b goat IgG(Amersham)以飽和緩衝液稀釋為1/1〇〇〇, -39- 1234463 (35)
伴隨攪動於2 0 °C培釀（5 0微升/井）3 0分鐘。洗滌數次後， 將peroxydase-結合的streptavidin (Amersham)以飽和緩衝液稀 釋為1/1000，用該液將盤伴隨攪動於20°C培釀（50微升/ 井）3 0分鐘。經洗條後’每井加入5 0微升顯示緩衝液（含 〇·4毫克/毫升OPDA(Sigma)及0.05% H2〇2之100毫莫耳濃 度pH 4.5檸檬酸緩衝液）在暗處於室溫培釀2〇分鐘以進 行顯示作用。每并加入5 0微升1 N的H C1使顯示作用停 止。使用 Emax immunoreader (Molecular Devices) « 49 0 及 62 0 晕微米波長讀取其光學密度。使用SoftMaxPro軟體以4參 數數學法可算得抗體滴定數。 4 ·細胞性反應 由所有經FG接種的組別及由作為陰性控制組的na.ive 小藏，在第二次接種後第1 4日分離其脾臟細胞，以進行 F G -特異性細胞性反應之分析。試樣要進行F G -特異性淋 巴增生與細胞素（IFN-g + IL-5)分泌兩者之分析。
使用含有1〇至〇·〇3微克/毫升FG(3 -倍稀釋）的媒劑200 微升，在每井4 X 1 05個細胞的9 6井盤上培釀9 6小時，再 4 h其增生作用。因3 Η -胸嘗的加入，F g特異性增生反 應可依吾人之標準準據進行測量。 24井之每井有2.5xl〇Ml3 >卜胞，具1亳升的媒劑，其包 含10微克至0.01微克之FG(10倍稀釋液），在96小時培 釀後評價其細胞素誘導作用。收集其上層液，以吾人之標 準準據，測定ELISA所謗導IFN- 7和IL-5之量。 結果 -40· 1234463 (36)
1 .群組。 1 4組相隔2 8日接受不同配方的二次肌肉注射接種’配 方包含1卜價結合的疫苗或FG或與明礬3D_MPL、CpG、 Cp g明礬或明礬配製之該兩者的組合劑。 我們將討論列於段落1至4的結果。在每一段落’對於 具優勢Th2-型佐劑之特異性RSV免疫反應之謗導作用， FG明礬之結果將納為控制組。Naive小鼠組也納為FG· 特異性C ΜI分析之内部控制組。 段落1 : 組別 抗原 佐劑卜 途徑 A PS-PD (0.5 μδ) 明攀3D-MPL 肌肉年射 B FG(2pg) 明礬3D-MPL 肌肉注射 C PS，PD(0.5>g) + FG<2pg) 明礬3D-MPL 肌肉注射 D Ρ〇(2μ8) \ 明礬 肌肉注射 E 無 4τττ. ιιΓΕ j \ \\ _注射 段落2 : 組別 抗原 佐劑 途徑 A PS-PD (0.5 μδ) 3D-MPL + QS21 肌肉注射 B FG(2pg)—- 3D-MPL + QS21 肌肉注射 C PS-PD (0.5μ8) + ΡΘ (2 μ§) 3D-MPL + QS21 肌肉注射 D Ρ〇(2μ§) 明礬 肌肉注射 E 並 、、 irrr 腹腔注射 -41 - 1234463 (37)
段落3 : 組別 抗原 佐劑 ' 途徑 A PS-PD (0.5 μ%) CpG(50 μ§) 肌肉注射 B FG (2pg) CpG (50 μ§) 肌肉注射 C PS-PD (0.5 μΒ)^ΈΟ(2 μ§) CpG (50 μ%) 肌肉注射 D PS-PD (0.5 μ§) CpG (50㈣明礬 肌肉注射 E FG (2pg) CpG (50 pg)明礬 肌肉注射 F PS-PD (0.5 pg) + FG (2 pg) CpG (50 pg)明礬 肌肉注射 G FG(2pg) ， 明礬 肌肉注射 Η 迦 te 段落4 : 與段落3同組 2 .段落1 : 2.1 .抗F G抗體 由FG /明礬/ 3D-MPL或由與1 1 -價ps結合物相組合的 FG/明礬/ 3D-MPL所謗導出抗-RSVA中和抗體之水平是類 似的（圖5)。事實上，可由雨疫苗之組合物觀測出R s V A 中和抗體之謗導作用具輕微的综效效果。 分析個體抗-FG IgGl及IgG2a同類型原滴定數可得 出，FG/明礬/ 3D-MPL/1 1-價PS結合物相較於FG/明蓉 /3D-MPL，其謗導作用具相i以一或略低的滴定數（圖6)。 分析IgG2a對IgGl之同類型原比率可顯示，兩疫苗的 存在並不改變同類型原比率，該比率相較由公認Th2謗 導佐劑之FG明礬所謗導者為低。
2.2.抗肺炎球菌多醣IgG -42- 1234463 (38) *> y ^ ' y 〆、、 明:說明續頁 二“y:愈一一… 對於多醣3、6B、14、19F及23F之血清jgG滴定數之 測量已述於實例1。經由1 1 -價P S結合物/明蓉/ 3 d - Μ P L 配方或由F G抗體所補充的同樣疫苗’其接種而謗導之抗 體反應是相似的（圖7)。這個結果顯示出’將肺炎球菌p s 結合物與含RSV FG抗原之明礬3D-MPL配方相組合，並 不降低或改變其抗-肺炎球菌免疫反應。 2 · 3 · F G特異性細胞性反應
分析IL-5及IFN-7之生產可知，FG/明礬/ 3D-MPL和 1 1 -價P S結合物之混合物，對這些細胞素的生產水平具有 少許影響（圖8)。然而所測得的細胞素，亦為免疫反應之 Th概況之指標，並不會受該混合物的影響，且與Th2誘 導佐劑之FG明礬配方所測得之比率有很大的不同。 3.段落 2 : DQ/3D-MPLin 3.1.抗FG抗體
由FG DQ/3D-MPLin或由與1 1-價pS結合物組合的fG DQ/3D-MPLin所謗導出的抗-FG Ig抗體水平是類似的（圖 如抗-FG Ig分析所見，當 合物相混合時，並未觀測到 有影響（圖10)。 分析個體抗-FG IgGl及 出，FG DQ-MP/1 卜價 PS DQ-MP，其誘導作用具相似 類型原比率可顯示，將該疫ί FG DQ-MPLin 與 1 1-價 PS 結 對於抗-RSVA中和抗體水平
IgG2a同類型原滴定數可得 結合物相較於單獨的 FG 的滴定數（圖Π )。分析其同 作組合並不改變同類型原比 '43 . 1234463 (39) 羡 SIR?: 率，該比率相較由公認Th2誘導佐劑之F(}明礬所謗導者 低得多。 3 · 2 ·抗肺炎球菌多釀I g 〇 對於多醣3、6B、 測量已述於實例1。 14、19F及23F之血清igG滴定數之 經由1 1 -價PS結合物/DQ/3D-MPLin 配方或由F G抗體所補充的同樣疫苗，其接種而謗導之抗 體反應是相似的（圖1 2)。這個結果顯示出，將肺炎球菌
PS結合物與含RSV FG抗原之DQ/3D-MPLin配方相組 合’並不降低或改變其抗-肺炎球菌免疫反應。 3 · 3 . F G特異性細胞性反應
對 IL-5 及 IFN- r之生產之初步分析可得知，FG DQ/3D-MPLin和1 1 -價P S結合物之混合物，對IFN - τ的 生產水平具有少許影響（圖1 3)。細胞素為免疫反應之Th 概況之指標，進一步分析所測得的細胞素比率，顯示F G DQ/3D-MPLin與1 1-價PS結合物之混合物，對Th概況具 有少許影響。然而，優勢IF N - r比IL - 5之值’在二抗原 與DQ/3D-MPLin相組合時是保持不變的’且較公認Th2 誘導佐劑之F G明礬配方所測得之比率高出許多。 4.段落3 : CpG與CpG明礬 4.1 .抗F G抗體 _ - 由F G C p G或由與1 1 -價P S結合物相組合的F G c P G所 誘導出的抗- FG Ig抗體水平是類似的（圖14)。FG CPG與 1 1 -價P S結合物之組合這種不產生千擾的情形’也可由 CpG明礬基礎配方觀測得到。 -44- 1234463 (40) 螯明藏#碴頁 如抗-FGIg分析所見，當FGCpG或FGCpG明礬與11-價PS結合物相混合時，並未觀測到對於抗-RSVA中和抗 體水平造成干擾（圖15)。 分析個體抗-FG IgGl及 IgG2a同類型原滴定數可得 出，將11-價PS結合物加至FGCpG或FGCpG明礬配方， 並未發生干擾（圖16)。 進一步分析其同類型原比率可顯示，將兩疫苗作組合並 不改變同類型原比率，該比率相較由Th2謗導佐劑之FG 明礬所謗導者低得多。
4.2.抗肺炎球菌多醣IgG 對於多醣3、6B、7F、14、19F及23F之血清IgG滴定 數之測量已述於實例1。在該實例中測試了 CpG和明礬 / C p G這兩種佐劑配方。對兩種佐劑配方而言，施給 F G 補充的1 1 -價疫苗P S結合物之動物，與僅以1 1 -價疫苗 PS結合物接種之動物相較，其抗-PS IgG滴定數至少是相 似的（圖1 7)。這個結果顯示出，將肺炎球菌P S結合物與 含RSV FG抗原之CpG或明礬CpG配方相組合，並不降 低或改變其抗-肺炎球菌免疫反應。對血清型7F及1 4之 抗體效價於使用 CpG佐劑調配物時係顯著促進FG之存 在。 一- 4.3 . F G特異性細胞性反應 分析IL-5及IFN- τ之生產可知，FG CpG或CpG明礬 和1 1 -價P S結合物之混合物，不會對這些細胞素生產水 平或其IFN-r/IL-5比率造成影響（圖18)。因此，為Thl -45- 1234463 (41) 發明諱明績頁 反應標記之優勢IFN- T，對具CpG和CpG明礬的兩種組 合配方而言是不變的。在使用 CpG佐劑配方之FG存在 下，IFN- τ謗導作用甚至還會增進。 5.段落4 ··
添力口 FG至PS結合物配方對於蛋白D(PD)載體對IgG 免疫反應之影響亦有測試。PD為一保護性抗原，可對抗 非可分型的流感嗜血桿菌B(NTHi)感染。某Thl細胞-媒 介的免疫可能涉及對抗NTHi的保護作用。因此，也測試 了作為Thl反應良好指標之抗-PD IgG2a抗體。 5 . 1 .抗F G抗體 見段落3 5.2.抗肺炎球菌多醣IgG 見段落3 5 . 3 . F G特異性細胞性反應 見段落3
5.4. ELISA之抗PD血清IgG、IgG卜2a及2b劑量 如圖19所示，當使用佐劑時（CpG或 Alum CpG)，對 PD載體反應之總血清IgG不會被FG存在於肺炎球菌PS 結合體調配物影響。以CpG或Alum CpG PS接合體調配 物引發免疫之高比率血清抗IgG2a抗體（約總IgG之 3 0 %)不會因添加 F G於彼等調配物中而修飾（圖 2 0)。此 IgG2a反應係強Thl免疫之指標。综上，此等結果說明結 合PD-結合肺炎球菌PS及RSV FG抗原於CpG或Alum CpG調配物内不會改變抗-PD免疫反應。 -46-
a< t <^V f>^ »{> « / <· v / f 明說明讀買< PkdL·^ Ύ：ί：Ά ^ J 1234463 (42) 討論與結論
段落1 :明裝/3D-MPL 結果證明了肺炎球菌 PS結合物與具明礬 3D-MPL之 RSV FG抗原配方的組合，並不改變體液性抗-肺炎球菌免 疫反應。體液性及細胞性 F G -特異性免疫反應兩者的水 平，似乎僅受混合物輕微影響，但不會影響單純F G配方 之Th概況。
段落 2 : D0/3D-MPLin 結果證明了肺炎球菌PS結合物與具3D-MPLin之RSV F G抗原配方的組合，並不改變體液性抗-肺炎球菌免疫反 應。細胞性反應之進一步研究指出，具D Q / 3 D - Μ P L i η之 兩種抗體配方的組合，對 IFN- r之謗導作用有些許影 響。然而，與FG(單獨）配方相較，該組合並不影響Th概 況。 段落3 : CdG/CdG明礬
結果證明了肺炎球菌PS結合物與具CpG或CpG明礬 之RSV FG抗原配方的組合，並不降低或改變體液性抗-肺炎球菌免疫反應或體液性及細胞性F G -特異性反應。 段落4 : CpG/CpG明礬 結果證明了 PD-結合的肺來尊菌PS與具CpG或CpG明 礬之RSV FG抗原配方的組合，並不降低或改變抗-PD免 疫反應。 總結來說，23-價肺炎球菌疫苗與RSV FG 3D-MPL 6勺組 合是有利的，如此對兩種疫苗而言都有综效，這兩種疫苗 -47-
1234463 (43)
在特定免疫學測試能顯示其改善效果，而在任何測試都沒 有抑制作用。由上述結果可察知有利的組合，其為1 1 -價 PD-結合的肺炎球菌PS與具某特定Thl佐劑之RSV FG 抗原的組合。的確，大部分對不同受測 Th 1佐劑之免疫 讀取值而言，疫苗抗原的組合對原疫苗預存特性不會妨 礙，或僅有輕微妨礙（且對所關心的整體反應是不顯著 的）。如實例1中所觀測，當F G與2 3 -價疫苗組合時，在 某些免疫學測試中，部分狀況下一種或另一種疫苗呈現了 改善效果。
-48-

Claims (1)

1234463
107452號專利申請案 |請專利範圍替換本(94年2月） 拾、申請專利範圍 1 . 一種疫苗組合物，其包含： (a) —或多種肺炎鏈球菌多醣類，結合或未結合至蛋 白質或胜肽；及 (b) RSV 抗原， 其與佐劑結合，且該佐劑為Th 1型免疫反應之優勢刺 激物，其中該T h 1型反應之優勢刺激物為至少一種選 自下列所組成之群之佐劑：3D-MPL、其粒子大小宜近 似或小於100毫微米之3D-MPL、QS21、QS21與膽固 醇之混合物、及CpG寡核甞酸。 2. 如申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中肺炎鏈球 菌多醣係結合至包括下列蛋白所組成之群：流感嗜血 桿菌B之蛋白D或其斷片，蛋白D之脂化物（脂蛋白 D);破傷風毒素，及白喉毒素。 3. 如專利申請範圍第1或2項之疫苗組合物，其另包括 載體。 4. 如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該Th 1 型反應之優勢刺激物包含3 D - Μ P L。 5. 如申請專利範圍第 4項之疫苗組合物，其另包含 QS21。 6. 如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該肺 炎鏈球菌多醣為23 -價肺炎球菌多醣疫苗。 7.如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該肺 炎鏈球菌多醣為1 1 -價結合的肺炎球菌多醣疫苗。 1234463 :申請專利範圍續頁 8. 如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該RSV 抗原為人類RSV包膜糖蛋白。 9. 如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該RSV 抗原為嵌合性FG或其斷片。 1 0.如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中額外 存在流行性感冒病毒抗原。 1 1 .如申請專利範圍第1或2項之疫苗組合物，其中該載 體係選自下列所組成之群：氫氧化鋁、磷酸鋁及生育 酉分及水包油之乳液。 1 2 . —種製備如申請專利範圍第1至1 1項中任一項之疫 苗組合物之方法，該方法包含掺合肺炎鏈球菌抗原及 RSV抗原與Thl謗導佐劑，其中該Thl佐劑係選自下 列所組成之群之佐劑：3D-MPL、其粒子大小宜近似或 小於100毫微米之3D-MPL、QS21、QS21與膽固醇之 混合物、及CpG寡核菩酸。 1 3 . —種製備疫苗組合物之方法，其包含摻合結合至蛋白 D或其斷片之肺炎鏈球菌多醣，與RSV抗原及醫藥上 可接受的賦形劑。 1 4 · 一種如申請專利範圍1至1 1項中任一項之疫苗組合 物之用途，其係用於製備用於預防或改善病患受RSV 及/或肺炎鏈球菌之感染之藥物。 1234463
M鲭#无，本療f£〕 S0
♦滴定數 B平均. _
TW089107452A 1999-04-20 2000-04-20 Vaccine composition for treating streptococcus pneumoniae and respiratory syncytial virus infection, and preparation method thereof TWI234463B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9909077.1A GB9909077D0 (en) 1999-04-20 1999-04-20 Novel compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TWI234463B true TWI234463B (en) 2005-06-21

Family

ID=10851924

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW089107452A TWI234463B (en) 1999-04-20 2000-04-20 Vaccine composition for treating streptococcus pneumoniae and respiratory syncytial virus infection, and preparation method thereof

Country Status (26)

Country Link
US (1) US20040228879A1 (zh)
EP (2) EP1927366A1 (zh)
JP (1) JP2002542204A (zh)
KR (1) KR100632835B1 (zh)
CN (1) CN1192797C (zh)
AR (1) AR023535A1 (zh)
AT (1) ATE395079T1 (zh)
AU (1) AU754101B2 (zh)
BR (1) BR0010682A (zh)
CA (1) CA2365579A1 (zh)
CO (1) CO5300414A1 (zh)
CZ (1) CZ20013773A3 (zh)
DE (1) DE60038877D1 (zh)
ES (1) ES2304960T3 (zh)
GB (1) GB9909077D0 (zh)
HK (1) HK1045100A1 (zh)
HU (1) HUP0201905A3 (zh)
IL (1) IL145981A0 (zh)
MY (1) MY125000A (zh)
NO (1) NO20015074L (zh)
NZ (1) NZ514961A (zh)
PL (1) PL351894A1 (zh)
TR (1) TR200103012T2 (zh)
TW (1) TWI234463B (zh)
WO (1) WO2000062801A2 (zh)
ZA (1) ZA200108620B (zh)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9706957D0 (en) 1997-04-05 1997-05-21 Smithkline Beecham Plc Formulation
GB9820525D0 (en) 1998-09-21 1998-11-11 Allergy Therapeutics Ltd Formulation
CZ303653B6 (cs) * 1999-03-19 2013-01-30 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Imunogenní prostredek
GB0000891D0 (en) * 2000-01-14 2000-03-08 Allergy Therapeutics Ltd Formulation
AUPQ761200A0 (en) * 2000-05-19 2000-06-15 Hunter Immunology Limited Compositions and methods for treatment of mucosal infections
FR2828406B1 (fr) * 2001-08-08 2005-06-24 Aventis Pasteur Composition vaccinale bivalente havi
DK1868645T3 (da) 2005-04-08 2012-04-10 Wyeth Llc Multivalent pneumokok-sakkarid-protein-konjugat-sammensætning
US9839685B2 (en) 2006-04-13 2017-12-12 The Regents Of The University Of Michigan Methods of inducing human immunodeficiency virus-specific immune responses in a host comprising nasally administering compositions comprising a naonemulsion and recombinant GP120 immunogen
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US8808707B1 (en) 2006-05-08 2014-08-19 Wyeth Llc Pneumococcal dosing regimen
ES2678694T3 (es) * 2008-04-16 2018-08-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacuna
CN102596243B (zh) * 2009-06-16 2015-10-21 密执安大学评议会 纳米乳剂疫苗
AU2010293902A1 (en) 2009-09-10 2012-03-22 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
CN101703769B (zh) * 2009-11-13 2013-05-08 广东永顺生物制药股份有限公司 一种新型猪链球菌病四价灭活疫苗
KR101609032B1 (ko) * 2010-06-04 2016-04-04 와이어쓰 엘엘씨 스트렙토코커스 뉴모니아 백신 제제
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
CA2966365A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Genentech, Inc. Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
MY187472A (en) 2015-09-10 2021-09-23 Inventprise Llc Multivalent vlp conjugates
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
US11389519B2 (en) 2018-06-11 2022-07-19 Inventprise, Llc Virus-like particle conjugates
US20230330220A1 (en) * 2020-05-01 2023-10-19 Sinocelltech Ltd. Method for improving immunogenicity of protein/peptide antigen
KR20250008122A (ko) 2022-05-11 2025-01-14 화이자 인코포레이티드 보존제를 갖는 백신 제형의 제조 방법
WO2024241172A2 (en) * 2023-05-19 2024-11-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Methods for eliciting an immune response to respiratory syncycial virus and streptococcus pneumoniae infection
CN117717608A (zh) * 2023-12-15 2024-03-19 北京吉诺卫生物科技有限公司 一种包含肺炎球菌与流感病毒的联合疫苗、制备方法及其应用

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
US4372945A (en) 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
BE889979A (fr) 1981-08-14 1982-02-15 Smith Kline Rit Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation
US5149650A (en) 1986-01-14 1992-09-22 University Of North Carolina At Chapel Hill Vaccines for human respiratory virus
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
JP2716503B2 (ja) 1987-12-23 1998-02-18 ジ・アップジョン・カンパニー ヒト呼吸系シンシチウムウイルスの糖蛋白類の免疫原性セグメントを含有するキメラ糖蛋白類
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0761231B1 (en) 1992-06-25 2000-01-12 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine composition containing adjuvants
DK0812593T4 (da) 1993-03-23 2008-05-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccinepræparater indeholdende 3-O-deacyleret monophosphoryllipid-A
RU2160119C2 (ru) * 1993-05-25 2000-12-10 Американ Цианамид Компани Вакцинная композиция, содержащая белок респираторно-синцитиального вируса (варианты)
AU678613B2 (en) 1993-09-22 1997-06-05 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6764682B1 (en) * 1994-06-16 2004-07-20 Aventis Pasteur Limited Adjuvant compositions containing more than one adjuvant
PT772619E (pt) 1994-07-15 2006-10-31 Univ Iowa Res Found Oligonucleotidos imunomoduladores
KR19990007858A (ko) * 1995-04-17 1999-01-25 존 더블유.로우 박테리아의 리포프로테인으로 폴리사카라이드에 대한 면역반응의 유도및 강화
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
GB9620795D0 (en) * 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
CA2239868A1 (en) * 1995-12-06 1997-06-12 James J. Mond Compositions and method for stimulating antibody release by b lymphocytes
SE9601158D0 (sv) * 1996-03-26 1996-03-26 Stefan Svenson Method of producing immunogenic products and vaccines
US6020182A (en) * 1996-07-12 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Subunit respiratory syncytial virus vaccine preparation
WO1998018819A1 (en) * 1996-10-29 1998-05-07 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Purification of respiratory syncytial virus antigens
US6406705B1 (en) * 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
GB9712347D0 (en) * 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
EP1927366A1 (en) 2008-06-04
CN1355710A (zh) 2002-06-26
NZ514961A (en) 2003-08-29
NO20015074L (no) 2001-11-15
PL351894A1 (en) 2003-06-30
CA2365579A1 (en) 2000-10-26
ATE395079T1 (de) 2008-05-15
CZ20013773A3 (cs) 2002-05-15
KR100632835B1 (ko) 2006-10-16
BR0010682A (pt) 2002-02-05
HK1045100A1 (zh) 2002-11-15
KR20010110784A (ko) 2001-12-13
WO2000062801A2 (en) 2000-10-26
AU754101B2 (en) 2002-11-07
ZA200108620B (en) 2002-09-13
TR200103012T2 (tr) 2002-06-21
GB9909077D0 (en) 1999-06-16
MY125000A (en) 2006-07-31
AR023535A1 (es) 2002-09-04
HUP0201905A3 (en) 2003-12-29
US20040228879A1 (en) 2004-11-18
DE60038877D1 (de) 2008-06-26
CN1192797C (zh) 2005-03-16
JP2002542204A (ja) 2002-12-10
EP1171159A2 (en) 2002-01-16
ES2304960T3 (es) 2008-11-01
IL145981A0 (en) 2002-07-25
CO5300414A1 (es) 2003-07-31
HUP0201905A2 (en) 2002-09-28
AU5523300A (en) 2000-11-02
NO20015074D0 (no) 2001-10-18
EP1171159B1 (en) 2008-05-14
WO2000062801A3 (en) 2001-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI234463B (en) Vaccine composition for treating streptococcus pneumoniae and respiratory syncytial virus infection, and preparation method thereof
KR101538535B1 (ko) 15가 폐렴구균성 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물
TWI286938B (en) Immunogenic compositions comprising polysaccharide conjugate antigens and protein D from haemophilus influenzae, methods of preparing the same and vaccines comprising the same
KR102096937B1 (ko) 비경구 노로바이러스 백신 제제
HU228384B1 (en) Vaccine compositions
Schulze et al. Bivalent mucosal peptide vaccines administered using the LCP carrier system stimulate protective immune responses against Streptococcus pyogenes infection
JP2018172417A (ja) 乳児においてｒｓｖ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起するための方法
KR20080027973A (ko) 보조제 배합물로서의 큐에스-21 및 아이엘-12
ES2304068T3 (es) Vacuna frente a enfermedades de transmision sexual.
WO2011005183A1 (en) New composition
AU762857B2 (en) Vaccine
JP2015525794A (ja) 乳児においてｒｓｖ及び百日咳菌に対する免疫応答を惹起するための方法
CA3219201A1 (en) Sars-cov-2 subunit vaccine
JP2008515842A (ja) 混合ワクチン
US20240316183A1 (en) Sars-cov-2 subunit vaccine
TW201008577A (en) Vaccine composition
MXPA01010653A (es) Vacuna de combinacion contra streptococcus pneumoniae y virus sincital respiratorio
EA041147B1 (ru) Композиция многовалентных пневмококковых конъюгатов капсульного полисахарида с белком-носителем и ее применение
Black et al. Safety and Immunogenicity of a Quadrivalent MenACWY-CRM Glycoconjugate Vaccine from Infancy to Adolescence.
Lucero et al. Pneumococcal conjugate vaccines for preventing vaccine-type invasive pneumococcal disease and pneumonia with...

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees