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TW202543581A - 遞送組成物 - Google Patents

遞送組成物

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TW202543581A
TW202543581A TW114105239A TW114105239A TW202543581A TW 202543581 A TW202543581 A TW 202543581A TW 114105239 A TW114105239 A TW 114105239A TW 114105239 A TW114105239 A TW 114105239A TW 202543581 A TW202543581 A TW 202543581A
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TW
Taiwan
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bis
lnp
ester
diyl
peg
Prior art date
Application number
TW114105239A
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English (en)
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羅伯特 多爾金
京元 田
阿金 阿金克
蘇恩 中島
斯魯詹 甘達姆
Original Assignee
美商艾伊拉醫療公司
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Publication date
Application filed by 美商艾伊拉醫療公司 filed Critical 美商艾伊拉醫療公司
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Abstract

本揭露提供了例如適用於在脂質奈米顆粒中使用的新型脂質，用於核酸的治療性遞送。還提供了製備和使用該等脂質之方法。

Description

遞送組成物
本發明提供了用於在體外和體內遞送治療性核酸（例如，siRNA、mRNA、gRNA）的新型可電離脂質和脂質奈米顆粒。
由於核酸的相對不穩定性和低細胞滲透性，將該等種類有效靶向遞送至細胞係困難的。因此，需要開發促進將治療性藥劑和/或預防性藥劑（如核酸）遞送至細胞的方法和組成物。較佳的是，該等脂質-核酸顆粒應是耐受良好的並提供足夠的治療指數，使得以有效劑量的核酸進行的患者治療不會與患者不可接受的毒性和/或風險相關。本發明提供了該等和相關的優點。
本發明認識到對組成物、製劑、奈米顆粒和/或奈米材料及其使用方法的需求。除其他事項外，本揭露認識到組成物、製劑、奈米顆粒和/或奈米材料的結構特徵影響體內、體外和離體的功能應答。例如，本揭露描述了，除其他事項外，本文所述之一或多種組分的選擇和組合影響脂質奈米顆粒的功能活性。在一些實施方式中，例如，功能活性可以指期望的向性、穩定性和/或藥物遞送功效。在一些實施方式中，除其他事項外，本揭露描述了一或多種組分的不同比率影響本文所述之組成物、製劑、奈米顆粒和/或奈米材料的一或多種功能活性。
本文提供的脂質奈米顆粒組成物可以進一步包含核酸，如RNA，例如信使RNA（mRNA）。脂質奈米顆粒組成物可用於將mRNA遞送至受試者之細胞。基於信使RNA的基因療法需要將mRNA有效地遞送至血漿中之循環細胞（例如，免疫細胞）或遞送至給定組織中之細胞。與有效mRNA遞送以達到穩健的蛋白質表現水平相關的主要挑戰包括：(a) 在投與於受試者時保護mRNA有效載荷免受普遍存在的血清核酸酶影響的能力；(b) 將mRNA遞送特異性靶向至靶細胞群，從而使其中的蛋白質表現最大化的能力；以及 (c) 將mRNA有效載荷最大程度地遞送至細胞的胞質區室以在細胞質內翻譯成蛋白質的能力。
本發明提供了用於產生脂質奈米顆粒組成物的可電離陽離子脂質，該脂質奈米顆粒組成物促進將放置在其中的有效載荷（例如，核酸）遞送至細胞，例如哺乳動物細胞，例如免疫細胞。該等脂質被設計成能夠將核酸（例如，mRNA）細胞內地遞送至靶細胞類型的胞質區室並快速降解成無毒組分。在不希望受理論束縛的情況下，在一些實施方式中，該等複雜的功能係藉由可電離脂質頭基、疏水「醯基尾」基團和連接可電離陽離子脂質中之頭基和醯基尾基團的連接子的化學與幾何形狀之間的相互作用來實現的。
在一個方面，本發明提供了一種由式 (A-I) 或式 (A-II) 表示的化合物：或(A-I)                                   (A-II)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中L係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L1係視需要經取代的C1-6伸烷基，或C2-6亞雜烷基；每個L2獨立地是C1-6伸烷基；L3係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L4係不存在、視需要經取代的C1-10伸烷基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L5係視需要經取代的C1-10烷基、視需要經取代的C1-10烯基、視需要經取代的C1-10炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-；每個X2係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-；R中之每一個獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基和苯基；R1係氫、視需要經取代的苯基、視需要經取代的3員至7員環脂肪族、包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的3員至7員雜環基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的5員至6員單環雜芳基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的8員至10員雙環雜芳基、-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-CN、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2、-NR2C(O)N(R2)2、-NR2C(S)N(R2)2、-NR2C(NR2)N(R2)2、-NR2C(CHR2)N(R2)2、-N(OR2)C(O)R2、-N(OR2)S(O)2R2、-N(OR2)C(O)OR2、-N(OR2)C(O)N(R2)2、-N(OR2)C(S)N(R2)2、-N(OR2)C(NR2)N(R2)2、-N(OR2)C(CHR2)N(R2)2、-C(NR2)N(R2)2、-C(NR2)R2、-C(O)N(R2)OR2、-C(R2)N(R2)2C(O)OR2、-CR2(R3)2、-OP(O)(OR2)2或-P(O)(OR2)2；或R1係選自以下的環：3員至7員環脂肪族和3員至7員雜環基（包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子），其中該環脂肪族或雜環基環視需要經1-4個R2或R3基團取代；每個R2獨立地是氫、側氧基、-CN、-NO2、-OR4、-S(O)2R4、-S(O)2N(R4)2、-(CH2)n-R4或視需要經取代的選自以下的基團：C1-6脂肪族、苯基、3員至7員環脂肪族、5員至6員單環雜芳基（包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子），以及3員至7員雜環基（包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子）；或者兩次出現的R2與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R3獨立地是-(CH2)n-R4；或者兩次出現的R3與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的5員至6員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R4獨立地是氫、-OR5、-N(R5)2、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-CN、-C(O)N(R5)2、-NR5C(O)R5、-OC(O)N(R5)2、-N(R5)C(O)OR5、-NR5S(O)2R5、-NR5C(O)N(R5)2、-NR5C(S)N(R5)2或-NR5C(NR5)N(R5)2；並且每個R5獨立地是氫或視需要經取代的C1-6脂肪族；或者兩次出現的R5與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R6獨立地是C4-12脂肪族；並且每個n獨立地是0至4。
在一些實施方式中，R1係-N(R2)2。
在一些實施方式中，L1-R1選自由以下組成之群組：。
在一些實施方式中，選自由以下組成之群組：、
在一些實施方式中，係。
在一些實施方式中，係，其中R1000係視需要經取代的C1-10烷基、視需要經取代的C2-10烯基、視需要經取代的C2-10炔基、視需要經取代的C3-10環烷基或視需要經取代的C5-10雜烷基。
在一些實施方式中，係。
在一些實施方式中，係。
在一些實施方式中，x係-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-。
在一些實施方式中，x係-OC(O)-。
在一些實施方式中，當至少一個不是時，則係，其中R1000係視需要經取代的C1-10烷基、視需要經取代的C2-10烯基、視需要經取代的C2-10炔基、視需要經取代的C3-10環烷基或視需要經取代的C5-10雜烷基。
在一些實施方式中，當不是時，則係，其中R1000係視需要經取代的C1-10烷基、視需要經取代的C2-10烯基、視需要經取代的C2-10炔基、視需要經取代的C3-10環烷基或視需要經取代的C5-10雜烷基。
在一些實施方式中，具有式 (A-III) 的化合物(A-III)；其中L1-L5、X2、R1、R”和R1000如前述定義。
在一些實施方式中，X2係OC(O)或C(O)O；並且-L3-R”獨立地選自：
在一些實施方式中，具有式 (A-IV) 的化合物(A-IV)：其中每個X100獨立地是OC(O)、C(O)O、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；L100係C1-C6伸烷基；並且L1-L5、X2、R1、R”和R1000如前述定義。
在一些實施方式中，L100係CH2並且X100係OC(O)。
在一些實施方式中，L4係不存在，並且L100係CH2並且X100係OC(O)。
在一些實施方式中，L2係CH2，X2係OC(O)，並且L3係CH2。
在一些實施方式中，L2係CH2，X2係OC(O)，L3係CH2，L4係不存在，並且L100係CH2並且X100係OC(O)。
在一些實施方式中，L1係C2-C6伸烷基。
在一些實施方式中，-L1-R1選自：
在一些實施方式中，具有式 (B-I) 的化合物：(B-I)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中每個R’獨立地係不存在、視需要經取代的C1-6烷基或視需要經取代的C1-6雜烷基；L中之每一個獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X中之每一個獨立地是O、S、N(R”)、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；每個Z獨立地是、或；條件是Z中之至少一個或兩個係或；m中之每一個獨立地是1-9；t係1、2或3；X10係不存在、O、S、N(R”)、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；R”係H、、或；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R11中之每一個獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R10中之每一個獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基。
在一些實施方式中，Z係。
在一些實施方式中，Z係。
在一些實施方式中，R’係H或CH3。
在一些實施方式中，式 (B-II) 表示的化合物：(B-II)其中Z和R”各自獨立地是、或；條件是Z和R”中之至少兩個或三個係或。
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：、、、和。
在一些實施方式中，具有式 (C-I) 的化合物：或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中X20中之每一個獨立地係不存在、O、S、N(R”)、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；L20中之每一個獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；Z20中之每一個獨立地是、或；條件是Z20中之至少一個係或；m中之每一個獨立地是1-9；t係1、2或3；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R11中之每一個獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R10中之每一個獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；q係0、1、2、3、4、5、6、7、8或9。係4員至8員環或雜環；L1係不存在、C1-6伸烷基、或C2-6亞雜烷基；R1係氫、視需要經取代的苯基、視需要經取代的3員至7員環脂肪族、包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的3員至7員雜環基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的5員至6員單環雜芳基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的8員至10員雙環雜芳基，-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-CN、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2、-NR2C(O)N(R2)2、-NR2C(S)N(R2)2、-NR2C(NR2)N(R2)2、-NR2C(CHR2)N(R2)2、-N(OR2)C(O)R2、-N(OR2)S(O)2R2、-N(OR2)C(O)OR2、-N(OR2)C(O)N(R2)2、-N(OR2)C(S)N(R2)2、-N(OR2)C(NR2)N(R2)2、-N(OR2)C(CHR2)N(R2)2、-C(NR2)N(R2)2、-C(NR2)R2、-C(O)N(R2)OR2、-C(R2)N(R2)2C(O)OR2、-CR2(R3)2、-OP(O)(OR2)2或-P(O)(OR2)2；或R1係選自以下的環：3員至7員環脂肪族和3員至7員雜環基（包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子），其中該環脂肪族或雜環基環視需要經1-4個R2或R3基團取代；每個R2獨立地是氫、側氧基、-CN、-NO2、-OR4、-S(O)2R4、-S(O)2N(R4)2、-(CH2)n-R4或視需要經取代的選自以下的基團：C1-6脂肪族、苯基、3員至7員環脂肪族、5員至6員單環雜芳基（包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子），以及3員至7員雜環基（包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子）；或者兩次出現的R2與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R3獨立地是-(CH2)n-R4；或者兩次出現的R3與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的5員至6員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R4獨立地是氫、-OR5、-N(R5)2、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-CN、-C(O)N(R5)2、-NR5C(O)R5、-OC(O)N(R5)2、-N(R5)C(O)OR5、-NR5S(O)2R5、-NR5C(O)N(R5)2、-NR5C(S)N(R5)2或-NR5C(NR5)N(R5)2；並且每個R5獨立地是氫或視需要經取代的C1-6脂肪族；或者兩次出現的R5與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R6獨立地是C4-12脂肪族；並且每個n獨立地是0至4。
在一些實施方式中，選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，係或。
在一些實施方式中，L1係不存在，並且R1係-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2或-NR2C(O)N(R2)2；並且R2如上所定義。
在一些實施方式中，R1係-OR2或-C(O)OR2。
在一些實施方式中，L1-R1選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，-L1-R1選自：
在一些實施方式中，式 (C-II) 表示的化合物：(C-II)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如上所定義。
在一些實施方式中，式 (C-III) 表示的化合物：(C-III)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如上所定義。
在一些實施方式中，-L20-Z20選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，式 (C-IV) 表示的化合物：(C-IV)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如上所定義。
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：、、、和。
在一些實施方式中，-L1-R1選自：
在一些實施方式中，具有式 (D-I) 的化合物：或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中L101和L102各自獨立地是C1-6伸烷基；L103和L104各自獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X101和X102各自獨立地係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-；L105 、L106、L107和L108各自獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R100、R101、R102和R103各自獨立地是氫、OC1-3脂肪族、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基和苯基；L109係C1-6伸烷基；X103係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-OC(O)O-或-NR105-；R105係氫、C1-10烷烴、C2-10烯烴或C3-12環烷烴；L110係C1-6伸烷基；X104係不存在或-NR106-；L111係C1-6伸烷基；R106係氫、C1-10烷烴、C2-10烯烴或C3-12環烷烴；R104係氫、OR107、C1-10烷烴、C2-10烯烴、C3-12環烷烴或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基和苯基；並且R107係H或C1-12脂肪族。
在一些實施方式中，具有式 (D-II) 的化合物：，其中R100、R101、R102和R103各自獨立地是氫、OC1-3脂肪族、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；L105 、L106、L107和L108各自獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X103係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-OC(O)O-或-NR105-；R105係氫、C1-10烷烴、C2-10烯烴或C3-12環烷烴；L110係C1-6伸烷基；X104係不存在或-NR106-；L111係C1-6伸烷基；R106係氫、C1-10烷烴、C2-10烯烴或C3-12環烷烴；並且R104係氫、OR107、C1-10烷烴、C2-10烯烴、C3-12環烷烴或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R107係H或C1-12脂肪族。
在一些實施方式中，和各自獨立地選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，和各自獨立地選自由以下組成之群組：、、、和。
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：、、、和。
在一些實施方式中，-L1-R1選自：
在一些實施方式中，具有式 (E-I) 的化合物：(E-I)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中X30中之每一個獨立地係不存在、O、S、N(R”)、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；L30中之每一個獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X31中之每一個獨立地是NR”；其中R”係H、、或；條件是Z30中之至少一個係或；Z30中之每一個獨立地是、或；條件是Z30中之至少一個係或；m中之每一個獨立地是1至9；t係1、2或3；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R11中之每一個獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R10中之每一個係視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基。
在一些實施方式中，式 (E-II) 表示的化合物：(E-II)其中X30、L30、X31和Z30如上所定義。
在一些實施方式中，X30係C(O)O、OC(O)、C(O)NH、NHC(O)或O。
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：
在一些實施方式中，選自以下群組，該群組由以下組成：、、、和。
在一些實施方式中，X30係C(O)NH。
在一些實施方式中，X30係C(O)O。
在一些實施方式中，X31係N-R”。
在一些實施方式中，Z30選自由以下組成之群組：
在一些實施方式中，-L1-R1選自：
在一些實施方式中，化合物之質子化形式的pKa係約4.5至約8.0。
在一些實施方式中，陽離子脂質可選自下表所列的可離子化的陽離子脂質，或其異構物或鹽。[表A]
化合物 結構 名稱
A-1 雙(6,6-雙(庚基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-2 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-3 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-4 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-5 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-6 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-7 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-𠰌啉代丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-8 雙(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-9 雙(5-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-10 辛二酸1-(3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基)8-庚基酯
A-11 (Z)-十五碳-7-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯
A-12 (Z)-十三碳-5-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯
A-13 油酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯
A-14 (9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯
A-15 雙(6,6-雙(((Z)-癸-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-16 4-((10,32-雙(辛-3-炔-1-基氧基)-13,18,24,29-四側氧基-9,14,19,23,28,33-六氧雜四十二碳5,36-二炔-21-基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸癸-4-基酯
A-17 6-(壬-3-炔-1-基氧基)-6-(辛-3-炔-1-基氧基)己酸3-((6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯
A-18 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(2-羥基乙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-19 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-20 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-21 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-22 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-23 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-(5,5-雙(癸基氧基)-N-(2-羥基乙基)戊醯胺)乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-24-1 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(二甲基胺基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-24 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-25 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(4-(二甲基胺基)丁基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯
A-26 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(N-(3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)-4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-27 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(二甲基胺基)丙基)(戊基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-28 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(環己基(3-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-29 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)(甲基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-30 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-31 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-32 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-33 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-34 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(哌啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-35 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(2-(吡咯啶-1-基)乙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-36 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(4-(吡咯啶-1-基)丁基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-40 雙(2-己基癸酸)((2-(4,4-二丁氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-41 雙(2-己基癸酸)((2-(6,6-二丁氧基-N-(3-(二甲基胺基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-42 二戊二酸O,O'-(2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)二(十五烷-7-基)酯
A-43 二壬酸((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-44 雙(3-己基十一酸)((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-45 四壬酸(((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯
A-46 四壬酸(((2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4,4-雙(己基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯
A-47 四壬酸(((2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯
A-48 四壬酸(((2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯
A-49 雙(2-己基癸酸)((2-(6-丁氧基-6-(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-50 雙(2-己基癸酸)((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-51 雙(2-己基癸酸)((2-(6,6-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯
A-52 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-53 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-54 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(5-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-5-側氧基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-55 雙(4,4-雙(辛-3-炔-1-基氧基)丁酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-56 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(5-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-5-側氧基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-57 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(((3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙氧基)羰基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-58 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(3-(3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙基)-1-(3-(二甲基胺基)丙基)脲基)丙烷-1,3-二基酯
A-59 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-((((3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙基)硫代)羰基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯
A-60 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-4-苯基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-61 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-5-苯基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-62 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-6-苯基己醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-63 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-7-苯基庚醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-64 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-65 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(4-甲基哌𠯤-1-基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-66 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)-3-側氧基丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-67 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(4-甲基哌𠯤-1-基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-68 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
A-69 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)-3-側氧基丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
[表B]
化合物 結構 名稱
B-1 四(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氮烷三基))四(丁烷-4,1-二基)酯
B-2 四(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基))雙(氮烷三基))四(丁烷-4,1-二基)酯
B-3 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯
B-4 6,6'-(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯
B-5 6-((4-(4-(2-((4-(雙(2-羥基十二烷基)胺基)丁醯基)氧基)乙基)-2,5-二甲基哌𠯤-1-基)丁基)(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)胺基)己酸十一烷基酯
B-6 6,6'-(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(丁烷-4,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯
B-7 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二庚酸雙十一烷基酯
B-8 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二辛酸雙十一烷基酯
B-9 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)(2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基)酯
B-10 6,6-雙(辛基氧基)己酸5-((2-(4-(2-((6,6-雙(辛基氧基)己醯基)氧基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)胺基)戊基酯
B-11 N,N'-(哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺)
B-12 N-(6,6-雙(辛基氧基)己基)-N-(2-(4-(2-((6,6-雙(辛基氧基)己基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)-6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺
B-13 N,N'-(哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(N-(6,6-雙(辛基氧基)己基)-6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺)
B-14 8-((6,6-雙(辛基氧基)己基)(2-(4-(2-((8-(辛基氧基)-8-側氧基辛基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)胺基)辛酸辛基酯
B-15 8,8'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((6,6-雙(辛基氧基)己基)氮烷二基))二辛酸二辛基酯
B-16 N-(2-(4-(2-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)-5-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)-N-(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)戊-1-胺
[表C]
化合物 結構 名稱
C-1 1-(4-(二甲基胺基)丁醯基)-4-(十五烷基氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-2 己二酸1-(5-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)戊醯基)-5-((2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙氧基)羰基)吡咯啶-3-基十七烷-9-基酯
C-3 1-(5-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)戊醯基)-4-(十九烷醯基氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯
C-4 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((6-((2-己基癸醯基)氧基)己基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯
C-5 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯
C-6 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸3-(二甲基胺基)丙基酯
C-7 2-己基癸酸5-((2-(雙(2-羥基乙基)胺基)乙基)胺基甲醯基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)吡咯啶-3-基酯
C-8 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)-4-((2-丁基庚醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸3-(二甲基胺基)丙基酯
C-9 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-𠰌啉代乙基酯
C-10 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((6-((2-己基癸醯基)氧基)己基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯
C-11 4-(4-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)丁氧基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯
C-12 4-(4-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)丁氧基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯
C-13 6-((6-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)己基)(2-(3-(3-(二甲基胺基)丙氧基)吡咯啶-1-基)乙基)胺基)己酸十一烷基酯
C-14 4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-15 1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-16 4-(3-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-17 4-(3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-18 4-(3-((2-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(戊基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-19 4-(3-((2-(環己基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-20 4-(3-((2-(環丁基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-21 1-(8,8-雙(辛基氧基)-5-側氧基辛基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯
C-22 1-(5-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)戊基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-23 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯
C-24 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸十六烷基酯
C-25 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯
C-26-1 5,5-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)戊酸6-((1-(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己醯基)-5-((2-(二乙基胺基)乙基)胺基甲醯基)吡咯啶-3-基)氧基)己基酯
C-26 5,5-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)戊酸6-((1-(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己醯基)-5-((2-(二甲基胺基)乙基)胺基甲醯基)吡咯啶-3-基)氧基)己基酯
C-27 1-(8-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)辛基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯
C-28 1-(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯
[表D]
化合物 結構 名稱
D-1 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(環己基(2-羥基乙基)胺基)丁基)丙烷-1,3-二基酯
D-2 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)3-((2-(環己基(羥基甲基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙烷-1,2-二基酯
D-3 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(((5-(環己基(2-羥基乙基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯
D-4 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)2-(((5-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯
D-5 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)2-(((5-(環己基(2-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)乙基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯
[表E]
化合物 結構 名稱
E-1 六(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷三基))六(丙烷-3,1-二基)酯
E-2 六(4,4-二丙氧基丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷三基))六(己烷-6,1-二基)酯
E-3 N1,N3,N5-三(3-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)苯-1,3,5-三甲醯胺
E-4 苯-1,3,5-三甲酸三(3-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)酯
E-5 苯-1,3,5-三甲酸三(3-(雙(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)胺基)丙基)酯
E-6 三(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基)酯
E-7 N1,N3,N5-三(3-((4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)苯-1,3,5-三甲醯胺
E-8 三(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基)酯
本文還提供了一種包含脂質共混物的脂質奈米顆粒（LNP），該脂質共混物包含本文提供的可電離陽離子脂質和/或脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物（例如，脂質-T細胞靶向基團偶聯物）。
在一些實施方式中，該脂質共混物包含結構脂質（例如，固醇）、中性磷脂和游離PEG-脂質中之一或多種。
在一些實施方式中，LNP包含本發明之可電離脂質、二硬脂醯磷脂醯膽鹼（DSPC）、膽固醇和1,2-二肉豆蔻醯-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000（DMG-PEG2000），視需要莫耳比率分別係約48.5:10:40:1.5。
在一些實施方式中，LNP包含本發明之可電離脂質、二硬脂醯磷脂醯膽鹼（DSPC）、膽固醇和1,2-二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000]（DSPE-PEG2000），視需要莫耳比率分別係約48.5:10:40:1.5。
在一些實施方式中，LNP包含本發明之可電離脂質、二硬脂醯磷脂醯膽鹼（DSPC）、膽固醇和1,2-二肉豆蔻醯-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000（DMG-PEG2000），視需要莫耳比率分別係約48.5:10:39:2.5。
LNP組分的量和比率可以根據期望的形式、結構、功能、貨物、靶標或其任何組合而變化任何量。各組分的量可以在各種實施方式中表示為指定組分所占所有脂質或脂質偶聯組分的總莫耳品質的百分比（mol%）。各組分的量可以在各種實施方式中表示為基於莫耳品質的各組分的相對比率（莫耳比率）。各組分的量可以在各種實施方式中表示為在製造之前用於配製LNP的各組分的重量（mg或當量）。各組分的量可以藉由本領域已知的任何其他方法在各種實施方式中表示。以組分量（「單位」）的一種表示形式給出的任何配製物明確地意在涵蓋以組分量的不同單位表示的任何配製物，其中該等表示形式在轉換成相同單位時係有效等同的。在一些實施方式中，「有效等同」意指兩個或更多個值彼此相差約10%以內。
在一些方面，提供了在受試者之被靶向細胞（例如免疫細胞）中表現目的多肽之方法。在一些實施方式中，該方法包括使該免疫細胞與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）接觸。
在一些方面，提供了調節受試者之靶細胞（例如靶免疫細胞）的細胞功能之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）。
在一些方面，提供了治療、改善或預防有需要的受試者之障礙或疾病的症狀之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）。
下面進一步詳細地描述本發明之各個方面和實施方式。
相關申請本申請要求2024年2月12日提交的美國序號63/552,586；2024年6月28日提交的美國序號63/666,081以及2024年11月27日提交的美國序號63/725,955之優先權，將其中每個的全部內容藉由援引併入本文。
序列表本申請含有已經以XML格式電子提交並藉由引用以其全文特此併入的序列表。所述XML副本創建於2025年2月11日，名為A2002-7000TW_SL.xml，大小為129,622位元組。
本發明提供了可電離陽離子脂質和包含此類可電離陽離子脂質的脂質奈米顆粒組成物、含有此類脂質的醫療套組（kit）、以及製備和使用此類脂質和偶聯物之方法。組成物可以進一步包含脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物。
除非另外指示，否則本發明之實踐採用有機化學、藥理學、細胞生物學和生物化學的常規技術。該等技術在以下文獻中闡明，如「Comprehensive Organic Synthesis [綜合有機合成]」（B.M.Trost和I.Fleming, 編輯, 1991-1992）；「Current protocols in molecular biology [當前分子生物學方案]」（F.M.Ausubel等人, 編輯, 1987, 以及定期更新）；以及「Current protocols in immunology [當今免疫學方案]」（J.E.Coligan等人, 編輯, 1991），將其每一個藉由引用以其全文併入本文。在下面的部分中闡述了本發明之各個方面；然而，在一個特定部分中所述之本發明之方面不限於任何特定部分。
I. 定義為了便於理解本發明，下面定義了許多術語和短語。
除非另外定義，否則本文所用的所有技術和科技術語均具有與本發明所屬領域的普通技術者通常所理解的相同含義。本文所用的縮寫具有其在化學和生物領域內的常規含義。本文闡述的化學結構和化學式應當根據化學領域已知的化學價的標準規則來解釋。另外，例如，當化學基團係雙自由基時，應理解化學基團可以在一個或兩個方向上與結構的其餘部分中之其相鄰原子鍵合，例如-OC(O)-可與-C(O)O-互換，或者-OC(S)-可與-C(S)O-互換。
術語「陽離子脂質」或「可電離陽離子脂質」在本文中可互換使用或一起使用，並且係指在低pH（例如，pH 4）下被質子化（例如，＞ 50%質子化）的脂質，這使得它們帶正電荷，但它們在生理pH（例如，pH 7.4）下可保持中性。
除非上下文不恰當，否則如本文所用，術語「一個/種（a和an）」意指「一個/種或多個/種」，並且包括複數。在一些實施方式中，「一個/種或多個/種」係1或2。在一些實施方式中，「一個/種或多個/種」係1、2或3。在一些實施方式中，「一個/種或多個/種」係1、2、3或4。在一些實施方式中，「一個/種或多個/種」係1、2、3、4或5。在一些實施方式中，「一個/種或多個/種」係1、2、3、4、5或更大。
如本文所用，術語「烷基」係指飽和直鏈或支鏈烴，如1-12、1-10或1-6個碳原子的直鏈或支鏈基團，在本文中分別稱為C1-C12烷基、C1-C10烷基或C1-C6烷基。在一些實施方式中，烷基視需要經取代。示例性烷基包括但不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、異丁基、三級丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。
術語「伸烷基（alkylenyl）」或「伸烷基（alkylene）」係指烷基基團的雙自由基。在一些實施方式中，伸烷基視需要經取代。示例性伸烷基基團係-CH2CH2-。
術語「亞烯基（alkenylenyl）」或「亞烯基（alkenylene）」係指烯基基團的雙自由基。在一些實施方式中，亞烯基視需要經取代。示例性亞烯基基團係-CH=CH-。
術語「亞炔基（akynylenyl）」或「亞炔基（alkynylene）」係指烯基基團的雙自由基。在一些實施方式中，亞炔基視需要經取代。示例性亞炔基基團係。
術語「鹵代烷基」係指經至少一個鹵素取代的烷基。例如，-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CF2CF3等。
如本文所用，術語「脂肪族」或「脂肪族基團」意指完全飽和的或含有一或多個不飽和單元的直鏈的（即非支鏈的）或支鏈的、取代的或未取代的烴鏈，或完全飽和的或含有一或多個不飽和單元（但其不是芳香族的）的單環烴或雙環烴（本文也稱為「碳環」、「碳環的」、「脂環族的」、「環烷基」），所述不飽和單元具有至分子的其餘部分的單個附接點。除非另外規定，脂肪族基團含有1-6個脂肪族碳原子。在一些實施方式中，脂肪族基團含有1-5個碳原子。在一些實施方式中，脂肪族基團含有1-4個碳原子。在一些實施方式中，脂肪族基團含有1-3個碳原子，並且在一些實施方式中，脂肪族基團含有1-2個碳原子。在一些實施方式中，「碳環（carbocyclic）」（或「環脂肪族」或「碳環（carbocycle）」或「環烷基」）係指視需要經取代的單環C3-C8烴，或視需要經取代的C6-C12雙環烴，該烴係完全飽和的或含有一或多個不飽和單元，但不是芳香族的，且具有至分子的其餘部分的單個附接點。適合的脂肪族基團包括但不限於直鏈的或支鏈的、取代的或未取代的烷基、烯基、或炔基基團及其雜合物，例如(環烷基)烷基、(環烯基)烷基或(環烷基)烯基。
術語「橋接雙環」係指具有至少一個橋的任何雙環環系統，即碳環或雜環、飽和或部分不飽和的。如IUPAC定義，「橋」係連接兩個橋頭的多個原子或一個原子的非支鏈或價鍵，其中「橋頭」係環系統的鍵合到三個或更多個骨架原子（排除氫）的任何骨架原子。在一些實施方式中，橋接雙環基團具有7-12個環成員和0-4個獨立地選自氮、氧、或硫的雜原子。此類橋接雙環基團係本領域熟知的並且包括以下列出的那些基團，其中每個基團在任何可取代的碳或氮原子處附接至分子的其餘部分。除非另外規定，橋接雙環基團視需要經如針對脂肪族基團列出的一或多個取代基取代。另外地或可替代地，橋接雙環基團的任何可取代氮係視需要取代的。示例性橋接雙環包括但不限於：
術語「雜環（heterocycle）」、「雜環基（heterocyclyl）」、「雜環自由基（heterocyclic radical）」和「雜環（heterocyclic ring）」在本文中可互換使用，並且係指穩定的3員至8員單環、7員至12員雙環或10員至16員多環雜環部分，其係飽和的或部分不飽和的並且除了碳原子之外還具有一或多個（例如一至四個）雜原子，如上所定義。當指代雜環化合物的環原子時，術語「氮」包括取代的氮。作為實例，在具有0-3個選自氧、硫或氮的雜原子的飽和或部分不飽和環中，氮可為N（如在3,4-二氫-2H-吡咯基中）、NH（如在吡咯啶基中）或NR+（如在N-取代的吡咯啶基中）。雜環可以在導致穩定結構的任何雜原子或碳原子處附接至其側基上，並且環原子中之任一者可以視需要經取代。此類飽和或部分不飽和雜環自由基之實例包括但不限於氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯啶基、哌啶基、十氫喹啉基、㗁唑啶基、哌𠯤基、四氫哌喃基、二㗁𠮿基、二氧戊環基、二氮呯基、氧吖呯基、硫吖呯基、𠰌啉基、硫代𠰌啉基和。雜環基基團可為單環、雙環、三環或多環，較佳的是單環、雙環或三環，更較佳的是單環或雙環。術語「雜環基烷基」係指經雜環基取代的烷基基團，其中烷基和雜環基部分視需要經取代。雙環雜環還包括其中雜環稠合至一或多個芳基、雜芳基或環脂肪族環的基團。示例性雙環雜環基團包括二氫吲哚基、異二氫吲哚基、苯并二氧雜環戊烯基、1,3-二氫異苯并呋喃基、2,3-二氫苯并呋喃基和四氫喹啉基。雙環雜環也可為螺環系統（例如，除了碳原子之外還具有一或多個如上所定義的雜原子（例如，一個、兩個、三個或四個雜原子）的7至11員螺環稠合雜環）。雙環雜環也可為橋接環系統（例如，具有一個、兩個或三個橋原子的7至11員橋接雜環。
「烯基」係指具有所示數目的碳原子（例如，2至8個或2至6個碳原子）和至少一個碳-碳雙鍵的不飽和支鏈或直鏈烷基。該基團可以呈關於一或多個雙鍵的順式或反式組態（Z或E組態）。烯基包括但不限於乙烯基、丙烯基（例如，丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基（烯丙基）、丙-2-烯-2-基）和丁烯基（例如，丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基）。
「炔基」係指具有所示數目的碳原子（例如，2至8個或2至6個碳原子）和至少一個碳-碳三鍵的不飽和支鏈或直鏈烷基。炔基包括但不限於乙炔基、丙炔基（例如，丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基）和丁炔基（例如，丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基）。
術語「側氧基」係本領域公認的並且係指「=O」取代基。例如，經側氧基基團取代的環戊烷係環戊酮。
術語「𠰌啉基」係指具有以下結構的取代基：其係視需要經取代的。
術語「哌啶基」係指具有以下結構的取代基：其係視需要經取代的。
通常，術語「經取代的」，無論術語「視需要」是否在其之前，表示指定部分的一或多個氫被合適的取代基置換。除非另外指示，否則「視需要經取代的」基團可以在基團的每個可取代位置處具有合適的取代基，並且當任何給定結構中之超過一個位置可以經超過一個選自指定組的取代基取代時，在每個位置處的取代基可以相同或不同。在本發明下預想的取代基組合較佳的是為導致形成穩定或化學上可行的化合物的取代基組合。在一些實施方式中，「視需要經取代的」等同於「未取代的或經取代的」。在一些實施方式中，「視需要經取代的」表示指定的原子或基團視需要經一或多個獨立地選自本文提供的視需要取代基的取代基取代。在一些實施方式中，視需要的取代基可以選自由以下組成之群組：C1-6烷基、氰基、鹵素、-O-C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C3-7環烷基、3員至7員雜環基、5員至6員雜芳基和苯基。在一些實施方式中，視需要的取代基係烷基、氰基、鹵素、鹵代、疊氮化物、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、巰基、亞胺基、醯胺基、羧酸、-C(O)烷基、-CO2烷基、羰基、羧基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、磺醯胺、酮、醛、酯、雜環基、芳基或雜芳基。在一些實施方式中，視需要的取代基係-ORs1、-NRs2Rs3、-C(O)Rs4、-C(O)ORs5、C(O)NRs6Rs7、-OC(O)Rs8、-OC(O)ORs9、-OC(O)NRs10Rs11、-NRs12C(O)Rs13、或-NRs14C(O)ORs15，其中Rs1、Rs2、Rs3、Rs4、Rs5、Rs6、Rs7、Rs8、Rs9、Rs10、Rs11、Rs12、Rs13、Rs14和Rs15各自獨立地係H、C1-6烷基、C3-10環烷基、C6-14芳基、5員至10員雜芳基或3員至10員雜環基，其各自係視需要經取代的。
術語「鹵代烷基」係指經至少一個鹵素取代的烷基。例如，-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CF2CF3等。
術語「環烷基」係指衍生自環烷烴的3-12、3-10、3-8、4-8或4-6個碳的單價飽和環狀、二環、橋環（例如，金剛烷基）或螺環烴基，在本文中被稱為例如「C4-8環烷基」。在一些實施方式中，環烷基係視需要經取代的。示例性環烷基包括但不限於環己烷、環戊烷、環丁烷和環丙烷。除非另外說明，否則環烷基在一或多個環位置處視需要經例如烷醯基、烷氧基、烷基、鹵代烷基、烯基、炔基、醯胺基、脒基、胺基、芳基、芳基烷基、疊氮基、胺基甲酸酯、碳酸酯、羧基、氰基、環烷基、酯、醚、甲醯基、鹵素、鹵代烷基、雜芳基、雜環基、羥基、亞胺基、酮、硝基、磷酸酯、膦酸基、次膦酸基、硫酸酯、硫化物、磺醯胺基、磺醯基或硫代羰基取代。在某些實施方式中，環烷基沒有經取代，即它係未取代的。
術語「雜環基」和「雜環基團」係本領域公認的，並且係指飽和、部分不飽和或芳香族的3至10員環結構，可替代地3員至7員環，其環結構包括一至四個雜原子，如氮、氧和硫。在一些實施方式中，雜環基係視需要經取代的。雜環基中之環原子數可以使用Cx-Cx命名法指定，其中x係指定環原子數的整數。例如，C3-C7雜環基係指飽和或部分不飽和的3員至7員環結構，其含有一至四個雜原子，如氮、氧和硫。名稱「C3-C7」指示雜環含有總共從3至7個環原子，包括佔據環原子位置的任何雜原子。C3雜環基的一個實例係氮雜環丙烷基。雜環可為例如單環、二環或其他多環環系統（例如，稠合、螺環、橋接二環的）。雜環可以與一或多個芳基、部分不飽和或飽和的環稠合。雜環基包括例如生物素基、口克唍基、二氫呋喃基、二氫吲哚基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二噻唑基、高哌啶基、咪唑烷基、異喹啉基、異噻唑烷基、異㗁唑啶基、𠰌啉基、氧雜環戊烷基、㗁唑啶基、吩二苯并哌喃基（phenoxanthenyl）、哌𠯤基、哌啶基、哌喃基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啶-2-酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫哌喃基、四氫喹啉基、噻唑烷基、硫雜環戊烷基、硫代𠰌啉基、噻喃基、二苯并哌喃基、內酯、內醯胺（如氮雜環丁酮和吡咯啶酮）、磺內醯胺、磺內酯等。除非另外說明，否則雜環在一或多個位置處視需要經諸如烷醯基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、醯胺基、脒基、胺基、芳基、芳基烷基、疊氮基、胺基甲酸酯、碳酸酯、羧基、氰基、環烷基、酯、醚、甲醯基、鹵素、鹵代烷基、雜芳基、雜環基、羥基、亞胺基、酮、硝基、側氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、硫酸根、硫化物、磺醯胺基、磺醯基和硫代羰基等取代基取代。在某些實施方式中，雜環基沒有經取代，即它係未取代的。
術語「芳基」係本領域公認的並且係指碳環芳香族基團。在一些實施方式中，芳基係視需要經取代的。代表性芳基包括苯基、萘基、蒽基等。術語「芳基」包括具有兩個或更多個碳環的多環環系統，其中兩個或更多個碳係兩個相鄰環（該環係「稠環」）共有的，其中至少一個環係芳香族的，並且例如，其他一或多個環可為環烷基、環烯基、環炔基和/或芳基。除非另外說明，否則芳香環可以在一或多個環位置處經例如鹵素、疊氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、巰基、亞胺基、醯胺基、羧酸、-C(O)烷基、CO2烷基、羰基、羧基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、磺醯胺、酮、醛、酯、雜環基、芳基或雜芳基部分、-CF3、-CN等取代。在某些實施方式中，芳香環在一或多個環位置處經鹵素、烷基、羥基或烷氧基取代。在某些其他實施方式中，芳香環沒有經取代，即它係未取代的。在某些實施方式中，芳基係6員至10員環結構。在一些實施方式中，芳基係C6-C14芳基。
術語「雜芳基」係本領域公認的並且係指包括至少一個環雜原子的芳香族基團。在一些實施方式中，雜芳基係視需要經取代的。在某些情況下，雜芳基含有1、2、3或4個環雜原子。雜芳基之代表性實例包括吡咯基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、㗁唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡𠯤基、嗒𠯤基和嘧啶基等。除非另外說明，否則雜芳基環可以在一或多個環位置處經例如鹵素、疊氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環烷基、羥基、烷氧基、胺基、硝基、巰基、亞胺基、醯胺基、羧酸、C(O)烷基、-CO2烷基、羰基、羧基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺基、磺醯胺、酮、醛、酯、雜環基、芳基或雜芳基部分、-CF3、-CN等取代。術語「雜芳基」還包括具有兩個或更多個環的多環環系統，其中兩個或更多個碳係兩個相鄰環（該環係「稠環」）共有的，其中至少一個環係雜芳香族的，例如，其他環狀環可為環烷基、環烯基、環炔基和/或芳基。在某些實施方式中，雜芳基環在一或多個環位置處經鹵素、烷基、羥基或烷氧基取代。在某些其他實施方式中，雜芳基環沒有經取代，即它係未取代的。在某些實施方式中，雜芳基係5員至10員環結構，可替代地5員至6員環結構，其環結構包括1、2、3或4個雜原子，如氮、氧和硫。
術語「胺」和「胺基」係本領域公認的並且係指未取代和取代的胺兩者，例如由通式-N(R10)(R11)表示的部分，其中R10和R11各自獨立地代表氫、烷基、環烷基、雜環基、烯基、芳基、芳烷基或(CH2)m-R12；或者R10和R11與它們所附接的N原子一起構成在環結構中具有從4至8個原子的雜環；R12代表芳基、環烷基、環烯基、雜環或多環；並且m係零或在1至8範圍內的整數。在某些實施方式中，R10和R11各自獨立地代表氫、烷基、烯基或-(CH2)m-R12。
術語「烷氧基（alkoxyl）」或「烷氧基（alkoxy）」係本領域公認的並且係指如上所定義的具有與其附接的氧自由基的烷基。在一些實施方式中，烷氧基係視需要經取代的。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、三級丁氧基等。「醚」係由氧共價連接的兩個烴。因此，烷基的使該烷基成為醚的取代基係或類似於烷氧基，如可以由-O-烷基、-O-烯基、O-炔基、-O-(CH2)m-R12中之一個表示，其中m和R12如上所述。術語「鹵代烷氧基」係指經至少一個鹵素取代的烷氧基。例如，-O-CH2F、-O-CHF2、-O-CF3等。在某些實施方式中，鹵代烷氧基係經至少一個氟基團取代的烷氧基。在某些實施方式中，鹵代烷氧基係經從1-6、1-5、1-4、2-4或3個氟基團取代的烷氧基。
符號「」指示附接點。
本揭露之化合物可以含有一或多個手性中心和/或雙鍵，因此作為立體異構物（如幾何異構物、鏡像異構物或非鏡像異構物）存在。當在本文中使用時，術語「立體異構物」由所有幾何異構物、鏡像異構物或非鏡像異構物組成。該等化合物可以由符號「R」或「S」指定，這取決於立體碳原子周圍的取代基的組態。本發明涵蓋該等化合物的各種立體異構物及其混合物。立體異構物包括鏡像異構物和非鏡像異構物。鏡像異構物或非鏡像異構物的混合物在命名法中可以由「(±)」指定，但是熟悉該項技術者應認識到結構可以隱含地表示手性中心。應理解，除非另外指示，否則化學結構（例如，通用化學結構）的圖形描繪涵蓋指定化合物的所有立體異構形式。
本發明化合物的單獨立體異構物可以由含有不對稱或立體中心的市售起始材料合成製備，或者藉由製備外消旋混合物、然後進行熟悉該項技術者熟知的拆分方法來製備。該等拆分方法由以下例示：(1) 將鏡像異構物混合物附接到手性助劑上，藉由重結晶或層析法分離所得的非鏡像異構物混合物，並從助劑中釋放光學純的產物；(2) 採用光學活性拆分劑形成鹽；或 (3) 在手性層析柱上直接分離光學鏡像異構物混合物。立體異構混合物也可以藉由熟知的方法拆分成其組成立體異構物，該方法如手性相氣相層析法、手性相高效液相層析法、使化合物結晶為手性鹽複合物或使化合物在手性溶劑中結晶。進一步地，可以使用文獻中所述之超臨界流體層析（SFC）技術分離鏡像異構物。仍進一步地，立體異構物可以藉由熟知的不對稱合成方法由立體異構物純的中間體、試劑和催化劑獲得。
幾何異構物也可以存在於本發明之化合物中。本發明涵蓋由碳-碳雙鍵周圍的取代基排列或碳環周圍的取代基排列產生的各種幾何異構物及其混合物。碳-碳雙鍵周圍的取代基被指定處於「Z」或「E」組態，其中根據IUPAC標準使用術語「Z」和「E」。除非另外規定，否則描述雙鍵的結構涵蓋「E」和「Z」異構物兩者。
碳-碳雙鍵周圍的取代基可替代地可以被稱為「順式」或「反式」，其中「順式」表示取代基在雙鍵的同一側，並且「反式」表示取代基在雙鍵的相對側。碳環周圍的取代基排列被指定為「順式」或「反式」。術語「順式」表示取代基在環平面的同一側，並且術語「反式」表示取代基在環平面的相對側。其中取代基被放置在環平面的同一側和相對側的化合物混合物被指定為「順式/反式」。
本發明還包括同位素標記的本發明化合物，其與本文所述之化合物相同，不同之處在於一或多個原子被原子品質或質量數不同於在自然界中通常發現的原子品質或質量數的原子替換。可以摻入本發明之化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，如分別為2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
某些同位素標記的揭露的化合物（例如，用3H和14C標記的化合物）可用於化合物和/或底物組織分佈測定。氘化（即3H）和碳-14（即14C）同位素對於由於它們易於製備和可檢測性係尤其較佳的。進一步地，用較重的同位素（如氘，即2H）取代可以提供某些治療優勢，這是由於其具有更高的代謝穩定性（例如，體內半衰期增加或劑量需求減少），因此在一些情況下可能係較佳的。同位素標記的本發明化合物通常可以藉由類似於例如本文實例中揭露的程序的程序，藉由用同位素標記的試劑取代非同位素標記的試劑來製備。
如本文所用，術語「受試者」和「患者」係指待藉由本發明之方法治療的生物體。這樣的生物體較佳的是哺乳動物（例如，鼠、猿猴、馬、牛、豬、犬、貓等），並且更較佳的是人。
如本文所用，術語「藥物組成物」係指活性劑與惰性或活性載劑的組合，使得該組成物特別適合於體內或離體的診斷或治療用途。
如本文所用，術語「藥學上可接受的賦形劑」係指任何標準醫藥載劑，如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳劑（例如像油/水或水/油乳劑）和各種類型的潤濕劑。組成物還可以包括穩定劑和防腐劑。關於載劑、穩定劑和輔助劑的實例，參見Remington's The Science and Practice of Pharmacy [雷明頓 藥物科學與實踐], 第21版, A.R.Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, 巴爾的摩, 馬里蘭州（Baltimore, MD）, 2006。
如本領域之技術者已知的，本發明之化合物的「鹽」可以源自無機的或有機的酸和鹼。酸之實例包括但不限於鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、過氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其他酸（如草酸）雖然本身不是藥學上可接受的，但可以用於製備鹽，該鹽可用作在獲得本發明之化合物及其藥學上可接受的酸加成鹽時的中間體。
鹼之實例包括但不限於鹼金屬（例如，鈉）氫氧化物、鹼土金屬（例如，鎂）氫氧化物、胺和式NW4 +的化合物（其中W係C1-4烷基）等。
鹽之實例包括但不限於：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、氟庚酸鹽（flucoheptanoate）、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙鹼酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽等。鹽的其他實例包括與合適的陽離子如Na+、NH4 +和NW4 +（其中W係C1-4烷基）等複合的本發明之化合物的陰離子。
如本文所用的縮寫包括二異丙基乙胺（DIPEA）；4-二甲基胺基吡啶（DMAP）；四丁基碘化銨（TBAI）；1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺（EDC）；六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶基鏻（PyBOP）；9-茀基甲氧基羰基（Fmoc）；四丁基二甲基矽基氯（TBDMSCl）；氟化氫（HF）；苯基（Ph）；雙(三甲基矽基)胺（HMDS）；二甲基甲醯胺（DMF）；二氯甲烷（DCM）；四氫呋喃（THF）；高效液相層析法（HPLC）；質譜法（MS）；蒸發光散射檢測器（ELSD）；電噴灑（ES）；核磁共振波譜法（NMR）。
如本文所用，術語「有效量」係指化合物（例如，核酸，例如，mRNA）足以實現有益或所期望結果的量。有效量可以在一次或多次投與、應用或劑量中投與，並不旨在限於特定的配製物或投與途徑。術語有效量可以被認為包括化合物的治療和/或預防有效量。
如本文所用，短語「治療有效量」意指化合物（例如，核酸，例如，mRNA）、材料或包含化合物（例如，核酸，例如，mRNA）的組成物的這樣的量，其係以適用於任何醫學治療的合理收益/風險比率有效地在哺乳動物（例如，人）或受試者（例如，人類受試者）中之至少一個細胞亞群中產生一些所期望治療效果。
如本文所用的短語「預防有效量」意指化合物（例如，核酸，例如，mRNA）、材料或包含化合物（例如，核酸，例如，mRNA）的組成物的這樣的量，其是以適用於任何醫學治療的合理收益/風險比率藉由降低、最小化或消除患上病況的風險或者降低或最小化病況的嚴重程度而有效地在哺乳動物（例如，人）或受試者（例如，人類受試者）中之至少一個細胞亞群中產生一些所期望預防效果。
如本文所用，術語「治療（treat/treating/treatment）」包括導致病症、疾病、障礙等的改進或改善其症狀的任何作用，例如減少、減輕、調節、改善或消除。
短語「藥學上可接受的」在本文中用於係指在合理的醫學判斷範圍內適用於與人和動物的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理的收益/風險比率相稱的那些化合物、材料、組成物和/或劑型。
在本申請中，在元素或組分被說成包括在和/或選自所列舉的元素或組分的清單的情況下，應當理解該元素或組分可為所列舉的元素或組分中之任何一種，或者該元素或組分可以選自所列舉的元素或組分中之兩種或更多種。
進一步地，應當理解，在不背離本發明之精神和範圍的情況下，本文所述之組成物或方法的元素和/或特徵可以以多種方式組合，無論在本文中是明確的還是暗示的。例如，除非從上下文中另外理解，否則在提及特定化合物的情況下，該化合物可以用於本發明組成物的各種實施方式和/或本發明之方法中。換言之，在本申請內，實施方式已經以使得能夠書寫和繪製清晰且簡明的申請的方式進行了描述和描繪，但是意圖並且將被理解的是，實施方式可以在不背離本發明教導和一項或多項發明的情況下以各種方式組合或分離。例如，應理解的是，本文描述和描繪的所有特徵均可以適用於本文描述和描繪的一項或多項發明的所有方面。
應當理解，除非從上下文和使用中另外理解，否則表述「……中之至少一個/至少一種（at least one of）」包括在該表述後所列舉的物件中之單獨每一個/每一種以及所列舉物件中之兩個或更多個/兩種或更多種的各種組合。除非從上下文中另外理解，否則與三個/種或更多個/種所列舉物件結合的表述「和/或」應當被理解為具有相同的含義。
除非另外明確說明或從上下文中另外理解，否則術語「包括（include/includes/including）」、「具有（have/has/having）」、「含有（contain/contains/containing）」（包括其語法對等詞）的使用通常應當被理解為開放式和非限制性的，例如不排除另外的未列舉的元素或步驟。
除非另外明確說明，否則在數值之前使用術語「約」的情況下，本發明還包括特定的數值本身。如本文所用，除非另外指示或推斷，否則術語「約」係指與標稱值相差 ± 10%的變化。
如本文所用，除非另外指示，否則術語「抗體」意指包含至少一個與特定抗原特異性結合或相互作用的互補決定區（CDR）的任何抗原結合分子或分子複合物。應理解，該術語涵蓋完整抗體（例如，完整單株抗體）或其片段如抗體的Fc片段（例如，單株抗體的Fc片段）或抗體的抗原結合片段（例如，單株抗體的抗原結合片段），包括已經修飾或工程化的完整抗體、抗原結合片段或Fc片段。抗原結合片段之實例包括Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、單鏈抗體（例如，scFv）、微型抗體和雙抗體。已經修飾或工程化的抗體之實例包括嵌合抗體、人源化抗體和多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）。該術語還涵蓋免疫球蛋白單可變結構域，如奈米抗體（例如，VHH）。
如這裡所用，「與X結合的抗體」（即，X係特定抗原）或「抗X抗體」係特異性識別抗原X的抗體。
如本文所用，「包埋的鏈間二硫鍵」或「鏈間包埋的二硫鍵」係指多肽上的這樣的二硫鍵，其不易被水溶性還原劑接近或有效地「包埋」在多肽的疏水區中，使得它既不能用於還原劑，也不能用於與其他親水PEG偶聯。包埋的鏈間二硫鍵進一步描述於WO 2017096361 A1中，將其藉由引用以其全文併入。
如本文所用，LNP的靶向遞送的特異性由接受所遞送的核酸的所期望免疫細胞類型（例如，中靶遞送）的百分比與不意在成為該遞送的目標但接受所遞送的核酸的不希望的免疫細胞類型（例如，脫靶遞送）的百分比之間的比率來定義。例如，當更多的所期望的免疫細胞接受所遞送的核酸，同時更少的不希望的免疫細胞接受所遞送的核酸時，特異性更高。LNP的靶向遞送的特異性也可以定義為被遞送至所期望的免疫細胞的核酸量（例如，中靶遞送）與被遞送至不希望的免疫細胞核酸量（例如，脫靶遞送）的比率。可以使用任何合適的方法確定遞送的特異性。作為非限制性實例，可以測量核酸在所期望的免疫細胞類型中之表現水平，並且將其與核酸在不意在成為該遞送的目標的不同免疫細胞類型中之表現水平進行比較。
如本文所用，在一些實施方式中，參考LNP係不具有免疫細胞靶向基團但在其他方面與所測試的LNP相同的LNP。在一些其他實施方式中，參考LNP係具有不同的可電離陽離子脂質但在其他方面與所測試的LNP相同的LNP。在一些實施方式中，參考LNP包含作為可電離陽離子脂質的ALC-0315（其不同於所測試LNP中之可電離陽離子脂質），但是在其他方面與所測試的LNP相同。
如本文所用，人源化抗體係這樣的抗體，其係完全或部分非人起源的，並且其蛋白質序列已經被修飾以替換某些胺基酸，例如出現在來自人的抗體序列中之VH和VL結構域的架構區中之一或多個相應位置處的胺基酸，以增加其與在人中天然產生的抗體的相似性，以便避免或最小化人的免疫反應。例如，使用基因工程技術，可以將目的非人抗體的可變結構域與人抗體的恒定結構域組合。人源化抗體的恒定結構域在很多時候係人CH和CL結構域。
如本文所用，術語「結構脂質」係指固醇，並且還係指含有固醇部分的脂質。
應當理解，只要本發明保持可操作，步驟的順序或執行某些動作的順序係無關緊要的。此外，可以同時進行兩個或更多個步驟或動作。
在本說明書中之各個地方，取代基以組或以範圍揭露。特別地，意圖係該描述包括這樣的組和範圍的成員的每個單獨的子組合。例如，術語「C1-6烷基」特別旨在單獨揭露C1、C2、C3、C4、C5、C6、C1-C6、C1-C5、C1-C4、C1-C3、C1-C2、C2-C6、C2-C5、C2-C4、C2-C3、C3-C6、C3-C5、C3-C4、C4-C6、C4-C5和C5-C6烷基。藉由舉其他實例的方式，在0至40範圍內的整數特別旨在單獨揭露0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39和40，並且在1至20範圍內的整數特別旨在單獨揭露1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。
除非要求保護，否則在本文中使用任何和所有實例或示例性語言（例如，「如」或「包括」）均僅旨在更好地說明本發明，並不對本發明之範圍施加任何限制。在本說明書中之任何語言均不應當被解釋為指示任何未要求保護的元素為實踐本發明所必需。
在整個說明書中，在組成物和套組被描述為具有、包括或包含特定組分的情況下，或者在過程和方法被描述為具有、包括或包含特定步驟的情況下，設想了另外存在基本上由所列舉的組分組成或由所列舉的組分組成的本發明之組成物和套組，以及存在基本上由所列舉的加工步驟組成或由所列舉的加工步驟組成的根據本發明之過程和方法。
一般情況下，除非另外規定，否則指定百分比的組成物係按重量計的。進一步地，如果變量沒有伴隨定義，則以所述變量的先前定義為準。
免疫球蛋白單可變結構域在一些實施方式中，如本文所述之LNP的免疫細胞靶向基團包含免疫球蛋白單可變結構域，如奈米抗體。
與「單可變結構域」可互換使用的術語「免疫球蛋白單可變結構域」（「ISV」）定義了其中抗原結合位點存在於單個免疫球蛋白結構域上並由其形成的免疫球蛋白分子。這使免疫球蛋白單可變結構域與「常規」免疫球蛋白（例如，單株抗體）或其片段（如Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、di-scFv）區分開來，其中兩個免疫球蛋白結構域、特別是兩個可變結構域相互作用以形成抗原結合位點。通常，在常規的免疫球蛋白中，重鏈可變結構域（VH）和輕鏈可變結構域（VL）相互作用形成抗原結合位點。在這種情況下，VH和VL二者的互補決定區（CDR）將促成抗原結合位點，即總共6個CDR將參與抗原結合位點的形成。鑒於以上定義，常規4鏈抗體（如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE分子；本領域已知）或者衍生自這樣的常規4鏈抗體的Fab、F(ab')2片段、Fv片段（如二硫鍵連接的Fv或scFv片段）或雙抗體（全部本領域已知）的抗原結合結構域通常將不被視為免疫球蛋白單可變結構域，因為在該等情況下，與抗原相應表位的結合通常不會藉由一個（單個）免疫球蛋白結構域發生，而是藉由一對共同結合至相應抗原的表位上的（締合）免疫球蛋白結構域（如輕鏈和重鏈可變結構域）發生，即藉由免疫球蛋白結構域的VH-VL對發生。
相反，免疫球蛋白單可變結構域能夠在不與另外的免疫球蛋白可變結構域配對的情況下與抗原表位特異性地結合。免疫球蛋白單可變結構域的結合位點由單個VH、單個VHH或單個VL結構域形成。因此，免疫球蛋白單可變結構域的抗原結合位點由不超過三個CDR形成。
因此，單可變結構域可為輕鏈可變結構域序列（例如，VL-序列）或其合適的片段；或重鏈可變結構域序列（例如，VH-序列或VHH序列）或其合適的片段；只要它能夠形成單個抗原結合單元（即，基本上由單可變結構域組成的功能性抗原結合單元，使得單個抗原結合結構域不需要與另一個可變結構域相互作用以形成功能性抗原結合單元）。
免疫球蛋白單可變結構域（ISV）可以例如係重鏈ISV，如VH、VHH，包括駱駝化VH或人源化VHH。在一個實施方式中，它係VHH，包括駱駝化VH或人源化VHH。重鏈ISV可以衍生自常規的四鏈抗體或重鏈抗體。
例如，該免疫球蛋白單可變結構域可為（單）結構域抗體（或適合用作單結構域抗體的胺基酸序列）、「dAb」或dAb（或適合用作dAb的胺基酸序列）或Nanobody® ISV（如本文所定義，並且包括但不限於VHH）；其他單可變結構域，或其任一種的任何合適的片段。
特別地，免疫球蛋白單可變結構域可為Nanobody® ISV（如VHH，包括人源化VHH或駱駝化VH）或其合適的片段。[注意：Nanobody®係阿博利恩公眾有限公司（Ablynx N.V.）的注冊商標]。
「VHH結構域」（也稱為VHH、VHH抗體片段和VHH抗體）最初已經被描述為「重鏈抗體」的（即，「沒有輕鏈的抗體」的；Hamers-Casterman等人 1993 Nature [自然] 363: 446-448）抗原結合免疫球蛋白可變結構域。選擇術語「VHH結構域」係為了將該等可變結構域與存在於常規4鏈抗體中之重鏈可變結構域（本文稱為「VH結構域」）和存在於常規4鏈抗體中之輕鏈可變結構域（本文稱為「VL結構域」）區分開來。關於VHH的進一步描述，參考Muyldermans 2001的評論文章（Reviews in Molecular Biotechnology [分子生物技術評論] 74: 277-302）。
對於術語「dAb」和「結構域抗體」，例如參考Ward等人1989（Nature [自然] 341: 544），Holt等人2003（Trends Biotechnol.[生物技術趨勢] 21: 484）；以及例如WO 2004/068820、WO 2006/030220、WO 2006/003388和Domantis有限公司的其他公開的專利申請。還應當注意的是，儘管在本發明之上下文中不太較佳，因為它們不是哺乳動物起源的，但單可變結構域可以衍生自某些鯊魚物種（例如，所謂的「IgNAR結構域」，參見例如WO 2005/18629）。
通常，免疫球蛋白的生成涉及對實驗動物的免疫、免疫球蛋白產生細胞的融合以產生融合瘤、以及篩選所期望的特異性。可替代地，可以藉由篩選天然的、免疫的或合成的文庫，例如藉由噬菌體展示來產生免疫球蛋白。
免疫球蛋白序列（如VHH）的產生已在各種出版物中廣泛描述，包括WO 1994/04678、Hamers-Casterman等人 1993（Nature [自然] 363: 446-448）以及Muyldermans等人 2001（Reviews in Molecular Biotechnology [分子生物技術綜述] 74: 277-302, 2001）。在該等方法中，利用靶抗原來免疫駱駝科動物以誘導針對所述靶抗原的免疫反應。進一步篩選從所述免疫獲得的VHH庫的結合靶標抗原的VHH。
在該等情況下，抗體的生成需要純化的抗原用於免疫和/或篩選。可以從天然來源或在重組產生過程中純化抗原。免疫球蛋白序列的免疫和/或篩選可以使用這樣的抗原的肽片段進行。
在本文中可以使用不同起源的免疫球蛋白序列，包含小鼠、大鼠、兔、驢、人和駱駝科動物免疫球蛋白序列。此外，完全人的、人源化的或嵌合的序列可以用於本文所述之方法中。例如，駱駝科動物免疫球蛋白序列和人源化駱駝科動物免疫球蛋白序列，或駱駝化結構域抗體，例如，如Ward等人 1989（Nature [自然] 341: 544）、WO 1994/04678、以及Davis和Riechmann（1994, Febs Lett. [歐洲生化學會聯合會快報], 339:285-290；和1996, Prot. Eng. [蛋白質工程], 9:531-537）所描述的駱駝化dAb可以在本文中使用。此外，將ISV融合，形成多價和/或多特異性構建體（關於含有一或多個VHH結構域的多價和多特異性多肽及其製備，還參考Conrath等人2001（J. Biol. Chem.[生物化學雜誌], 第276卷, 10.7346-7350）以及例如WO 1996/34103和WO 1999/23221）。
「人源化VHH」包含對應於天然存在的VHH結構域之胺基酸序列的胺基酸序列，但其已經「人源化」，即藉由用出現在來自人的常規4鏈抗體的VH結構域的一或多個相應位置（例如上文所示）的一或多個胺基酸殘基替換所述天然存在的VHH序列（特別是在框架序列中）的胺基酸序列中之一或多個胺基酸殘基。這可以以本身已知的方式進行，這對於熟悉該項技術者來說應是清楚的，例如基於先前技術（例如WO 2008/020079）。此外，應注意，可以以任何本身已知的合適方式獲得這樣的人源化VHH，並因此並不嚴格限於已經使用包含天然存在的VHH結構域作為起始材料的多肽獲得的多肽。
「駱駝化VH」包含對應於天然存在的VH結構域的胺基酸序列但已經被「駱駝化」（即藉由用在（駱駝科動物）重鏈抗體的VHH結構域中之一或多個相應位置處出現的一或多個胺基酸殘基替換來自常規4鏈抗體的天然存在的VH結構域的胺基酸序列中之一或多個胺基酸殘基）的胺基酸序列。這可以按本身已知的方式進行，這對於熟悉該項技術者來說應是清楚的，例如基於先前技術的描述（例如，Davies和Riechman 1994, FEBS [歐洲生化學會聯合會快報] 339: 285; 1995, Biotechnol. [生物技術] 13: 475; 1996, Prot. Eng[蛋白質工程].9: 531; 和Riechman 1999, J. Immunol. Methods[免疫學方法雜誌] 231: 25）。如本文所定義，這樣的「駱駝化」取代插入在形成和/或存在於VH-VL介面的胺基酸位置處和/或所謂的駱駝科動物標誌殘基處（參見例如WO 1994/04678以及Davies和Riechmann（1994和1996, 同上））。在一個實施方式中，用作產生或設計駱駝化VH的起始材料或起點的VH序列係來自哺乳動物的VH序列，如人的VH序列，如VH3序列。然而應注意，可以以任何本身已知的合適方式獲得這樣的駱駝化VH，並因此並不嚴格限於已經使用包含天然存在的VH結構域作為起始材料的多肽獲得的多肽。
免疫球蛋白單可變結構域序列的結構可以被認為由四個框架區（「FR」）構成，其在本領域和本文中分別被稱為「框架區1」（「FR1」）；「架構區2」（「FR2」）；「架構區3」（「FR3」）；和「架構區4」（「FR4」）；該等架構區被三個互補決定區（「CDR」）中斷，該三個互補決定區在本領域和本文中分別被稱為「互補決定區1」（「CDR1」）；「互補決定區2」（「CDR2」）；和「互補決定區3」（「CDR3」）。
在這種免疫球蛋白序列中，框架序列可為任何合適的框架序列，並且合適的框架序列的實例對於技術者來說將是清楚的，例如基於標準手冊和進一步的揭露以及本文提及的先前技術。
框架序列係免疫球蛋白框架序列或已經（例如，藉由人源化或駱駝化）衍生自免疫球蛋白框架序列的框架序列（的合適組合）。例如，該框架序列可為源自輕鏈可變結構域（例如VL序列）和/或重鏈可變結構域（例如VH序列或VHH序列）的框架序列。在一個特定方面，框架序列係已經衍生自VHH序列的框架序列（其中所述框架序列可以視需要已經被部分或完全人源化）或者係已經駱駝化的常規VH序列（如本文所定義）。
特別地，在本文所述之ISV序列中存在的框架序列可以含有一或多個標誌殘基（如本文所定義），使得ISV序列係Nanobody® ISV，例如像VHH，包括人源化VHH或駱駝化VH。這樣的框架序列（的合適組合）之非限制性實例將從本文的進一步揭露中變得清楚。
VH結構域和VHH結構域中之胺基酸殘基總數通常在110至120之範圍內，通常在112與115之間。然而，應注意，更小和更長的序列也可以適合於本文描述之目的。
然而，應當注意的是，關於ISV序列（或用於表現它的核苷酸序列）的起源，以及關於產生或獲得（或者已經產生或獲得）ISV序列或核苷酸序列的方式，本文所述之ISV不受限。因此，該ISV序列可為天然存在的序列（來自任何合適的物種）或合成或半合成序列。在一個特定但非限制性的方面，ISV序列係天然存在的序列（來自任何合適的物種）或者合成的或半合成的序列，包括但不限於「人源化」（如本文所定義）免疫球蛋白序列（如部分或完全人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，特別是部分或完全人源化的VHH序列）、「駱駝化」（如本文所定義）免疫球蛋白序列（特別是駱駝化VH序列）、以及已經藉由諸如以下技術獲得的ISV：親和力成熟（例如，從合成的、隨機的或天然存在的免疫球蛋白序列開始）、CDR移植、鑲面、組合衍生自不同免疫球蛋白序列的片段、使用重疊引物的PCR組裝、和熟悉該項技術者熟知的工程化免疫球蛋白序列的類似技術；或任何前述的任何合適的組合。
類似地，核苷酸序列可為天然存在的核苷酸序列或合成或半合成序列，並且可以例如係藉由PCR從合適的天然存在的模板（例如，從細胞分離的DNA或RNA）分離的序列、已經從文庫（並且特別是表現文庫）分離的核苷酸序列、已經藉由將突變引入天然存在的核苷酸序列中而製備（使用本身已知的任何合適技術，如錯配PCR）的核苷酸序列、已經使用重疊引物藉由PCR製備的核苷酸序列或已經使用本身已知的DNA合成技術製備的核苷酸序列。
通常，Nanobody® ISV（特別是VHH序列，包括（部分）人源化VHH序列和駱駝化VH序列）的特徵可為在一或多個框架序列（同樣如本文進一步所述）中存在一或多個「標誌殘基」（如本文所述）。因此，通常，Nanobody® ISV可以被定義為具有以下（一般）結構的免疫球蛋白序列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4其中FR1至FR4分別指框架區1至4，且其中CDR1至CDR3分別指互補決定區1至3，並且其中一或多個標誌殘基如本文進一步定義。
特別地，Nanobody® ISV可為具有以下（一般）結構的免疫球蛋白序列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4其中FR1至FR4分別指框架區1至4，且其中CDR1至CDR3分別指互補決定區1至3，並且其中框架序列如本文進一步定義。
更特別地，Nanobody® ISV可為具有以下（一般）結構的免疫球蛋白序列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4其中FR1至FR4分別係指架構區1至4，並且其中CDR1至CDR3分別係指互補決定區1至3，並且其中：根據Kabat編號在位置11、37、44、45、47、83、84、103、104和108處的胺基酸殘基中之一或多個係標誌殘基。
在一個實施方式中，免疫球蛋白單可變結構域在架構區中具有有效地防止或減少所謂的「預先存在的抗體」與該多肽的結合的某些胺基酸取代。已經在WO 2015/173325中描述了這樣的ISV，其中 (i) 在位置112處的胺基酸殘基係K或Q之一；和/或 (ii) 在位置89處的胺基酸殘基係T；和/或 (iii) 在位置89處的胺基酸殘基係L並且在位置110處的胺基酸殘基係K或Q之一；並且 (iv) 在 (i) 至 (iii) 中之每一種情況下，在位置11處的胺基酸較佳的是V。
多肽免疫球蛋白單可變結構域可以形成蛋白質或多肽的一部分，該蛋白質或多肽可以包含一或多個（至少一個）免疫球蛋白單可變結構域或基本上由其組成，並且可以視需要進一步包含一或多個另外的胺基酸序列（全部視需要經由一或多個合適的連接子連接）。術語「免疫球蛋白單可變結構域」也可以涵蓋這樣的多肽。一或多個免疫球蛋白單可變結構域可以用作這樣的蛋白質或多肽中之結合單元，該蛋白質或多肽可以視需要含有可用作結合單元的一或多個另外的胺基酸，以便分別提供本發明之單價、多價或多特異性多肽（關於含有一或多個VHH結構域的多價和多特異性多肽及其製備，還參考Conrath等人 2001（J. Biol. Chem.[生物化學雜誌] 276: 7346），以及例如WO 1996/34103、WO 1999/23221和WO 2010/115998）。
該多肽可以包含一個免疫球蛋白單可變結構域或基本上由其組成，如上所概述。這樣的多肽在本文中也被稱為單價多肽。
術語「多價」指示在多肽中存在多個ISV。在一個實施方式中，多肽係「二價的」，即包含兩個ISV或由其組成。在一個實施方式中，多肽係「三價的」，即包含三個ISV或由其組成。在另一個實施方式中，多肽係「四價的」，即包含四個ISVD或由其組成。因此，該多肽可為「二價的」、「三價的」、「四價的」、「五價的」、「六價的」、「七價的」、「八價的」、「九價的」等，即該多肽分別包含兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個等ISV或由其組成。在一個實施方式中，多價ISV多肽係三價的。在另一個實施方式中，多價ISV多肽係四價的。在仍另一個實施方式中，多價ISV多肽係五價的。
在一個實施方式中，多價ISV多肽也可為多特異性的。術語「多特異性」係指結合多個不同的靶分子（也稱為抗原）。因此，該多價ISV多肽可為「雙特異性的」、「三特異性的」、「四特異性的」等，即可以分別與兩種、三種、四種等不同的靶分子結合。
例如，該多肽可為雙特異性-三價的，如包含三個ISV或由其組成的多肽，其中兩個ISV與第一靶標結合，並且一個ISV與不同於第一靶標的第二靶標結合。在另一個實例中，該多肽可為三特異性-四價的，如包含四個ISV或由其組成的多肽，其中一個ISV與第一靶標結合，兩個ISV與不同於第一靶標的第二靶標結合，並且一個ISV與不同於第一和第二靶標的第三靶標結合。在仍另一個實例中，該多肽可為三特異性-五價的，如包含五個ISV或由其組成的多肽，其中兩個ISV與第一靶標結合，兩個ISV與不同於第一靶標的第二靶標結合，並且一個ISV與不同於第一和第二靶標的第三靶標結合。
在一個實施方式中，多價ISV多肽也可為多互補位的。術語「多互補位」係指與相同靶分子（也稱為抗原）上的多個不同表位結合。因此，多價ISV多肽可為「雙互補位的」、「三互補位的」等，即可以分別與相同靶分子上的兩個、三個等不同的表位結合。
在另一個方面，本文所述之包含一或多個免疫球蛋白單可變結構域（或其合適的片段）或基本上由一或多個免疫球蛋白單可變結構域（或其合適的片段）組成的多肽可以進一步包含一或多個另外的基團、殘基、部分或結合單元。這樣的另外的基團、殘基、部分、結合單元或胺基酸序列可以向或可以不向免疫球蛋白單可變結構域（和/或存在它的多肽）提供另外的功能，並且可以改變或可以不改變免疫球蛋白單可變結構域之特性。
例如，這樣的另外的基團、殘基、部分或結合單元可為一或多個另外的胺基酸，使得該化合物、構建體或多肽係（融合）蛋白或（融合）多肽。在較佳的但非限制性的方面，所述一或多個其他基團、殘基、部分或結合單元係免疫球蛋白。甚至更較佳的是，該一或多個其他基團、殘基、部分或結合單元選自結構域抗體、適合用作結構域抗體的胺基酸、單結構域抗體、適合用作單結構域抗體的胺基酸、「dAb」、適合用作dAb的胺基酸或奈米抗體。
可替代地，這樣的基團、殘基、部分或結合單元可以例如係化學基團、殘基、部分，其本身可以具有或可以不具有生物學和/或藥理學活性。例如，但不限於，這樣的基團可以與所述一或多個免疫球蛋白單可變結構域連接，以便提供所述免疫球蛋白單可變結構域的「衍生物」。
在另一個實施方式中，所述另外的殘基可以有效地防止或減少所謂的「預先存在的抗體」與該多肽的結合。為此目的，該多肽和構建體可以含有C末端延伸(X)n（其中n係1至10，較佳的是1至5，如1、2、3、4或5（以及較佳的是1或2，如1）；並且每個X係獨立地選自，較佳的是獨立地選自丙胺酸（A）、甘胺酸（G）、擷胺酸（V）、白胺酸（L）或異白胺酸（I）的（較佳的是天然存在的）胺基酸殘基，關於其，參考WO 2012/175741）。因此，該多肽可以進一步包含C末端延伸(X)n，其中n係1至5，如1、2、3、4或5，並且其中X係天然存在的胺基酸，較佳的不是半胱胺酸。
在上述多肽中，該一或多個免疫球蛋白單可變結構域和該等一或多個基團、殘基、部分或結合單元可以彼此直接連接和/或經由一或多個合適的連接子或間隔子連接。例如，當該一或多個基團、殘基、部分或結合單元係胺基酸時，該連接子也可為胺基酸，使得所得的多肽係融合蛋白或融合多肽。
如本文所用，術語「連接子」表示將兩個或更多個ISV融合在一起形成單一分子的肽。使用連接子連接兩個或更多個（多）肽係本領域熟知的。表B中示出了另外之示例性肽連接子。一類常用的肽連接子稱為「Gly-Ser」或「GS」連接子。該等係基本上由甘胺酸（G）和絲胺酸（S）殘基組成的連接子，並且通常包含肽模體的一或多個重複，該肽模體如GGGGS（SEQ ID NO: 154）模體（例如，具有式(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n（SEQ ID NO: 152），其中n可為1、2、3、4、5、6、7或更大）。此類GS連接子的一些常用實例係9GS連接子（GGGGSGGGS，SEQ ID NO: 157）、15GS連接子（n = 3）（SEQ ID NO: 158）和35GS連接子（n = 7）（SEQ ID NO: 159）。例如，參考Chen等人 2013（Adv. Drug Deliv. Rev. [先進藥物遞送評論] 65(10): 1357-1369）和Klein等人 2014 （Protein Eng. Des. Sel.[蛋白質工程、設計與選擇]27 (10): 325-330）。
通常，應當注意的是，如本文以其最廣泛的意義使用的術語奈米抗體不限於特定的生物來源或特定的製備方法。例如，如下面將更詳細地討論的，奈米抗體可以藉由以下方式來獲得：(1) 藉由分離天然存在的重鏈抗體的VHH結構域；(2) 藉由表現編碼天然存在的VHH結構域的核苷酸序列；(3) 藉由「人源化」（如下所述）天然存在的VHH結構域或藉由表現編碼這樣的人源化VHH結構域的核酸；(4) 藉由「駱駝化」（如下所述）來自任何動物物種、特別是哺乳動物物種（如來自人）的天然存在的VH結構域，或藉由表現編碼這樣的駱駝化VH結構域的核酸；(5) 藉由如Ward等人（同上）所描述的「駱駝化」「結構域抗體」或「Dab」，或藉由表現編碼這樣的駱駝化VH結構域的核酸；(6) 使用製備蛋白質、多肽或其他胺基酸序列的合成的或半合成的技術；(7) 藉由使用核酸合成技術製備編碼奈米抗體的核酸，然後表現由此獲得的核酸；和/或 (8) 藉由前述的任何組合。基於本文的揭露，用於進行前述的合適方法和技術對於熟悉該項技術者來說應是清楚的，並且例如包括下文更詳細地描述的方法和技術。
II. 可電離陽離子脂質本文提供了可電離陽離子脂質，其可以用於產生脂質奈米顆粒組成物以促進將放置在其中的有效載荷（例如，核酸，如DNA或RNA，如mRNA）遞送至細胞，例如哺乳動物細胞，例如免疫細胞。可電離陽離子脂質已經被設計成能夠將核酸（例如，mRNA）細胞內地遞送至靶細胞類型的胞質區室並快速降解成無毒組分。可電離陽離子脂質之複雜功能係藉由可電離脂質頭基、疏水「醯基尾」基團和連接所述頭基和所述醯基尾基團的連接子之化學與幾何形狀之間的相互作用來促進的。通常，可電離胺頭基的pKa被設計成在6-8之範圍內，如在6.2-7.4之間或在6.7-7.2之間，使得它在酸性配製條件（例如，pH 4 - pH 5.5）下保持係強陽離子的，在生理pH（7.4）下保持係中性或弱陰離子的，並且在早期和晚期核內體區室（例如，pH 5.5 - pH 7）中保持係陽離子的。該醯基尾基團在該脂質奈米顆粒與核內體膜的融合和通過結構擾動進行的膜失穩中起關鍵作用。該醯基尾的三維結構（由其長度、不飽和度和位點決定）以及該頭基和尾基的相對大小被認為在促進膜融合中起作用，因此在脂質奈米顆粒核內體逃逸（核酸有效載荷的胞質遞送的關鍵要求）中起作用。連接該頭基和醯基尾基團的連接子被設計成藉由生理上普遍存在的酶（例如，酯酶或蛋白酶）或藉由酸催化的水解來降解。
在一些實施方式中，該可電離陽離子脂質以40-60莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
III. 脂質免疫細胞靶向基團偶聯物在一個方面，本文提供了用於將核酸靶向遞送至細胞（例如，免疫細胞）的脂質奈米顆粒（LNP），其包含脂質共混物。LNP可以包含如本文所述之新穎陽離子脂質。在一些實施方式中，該脂質共混物包含脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物，其包含具有式 (II) 的化合物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]。在一些實施方式中，該脂質共混物包含可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該可電離陽離子脂質包含如本文所述之可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該LNP包含放置在其中的核酸。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含結合T細胞抗原的抗體。在一些實施方式中，該T細胞抗原係CD3、CD4、CD7或CD8或其組合（例如，CD3和CD8兩者、CD4和CD8兩者或CD7和CD8兩者）。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含結合自然殺手（NK）細胞抗原的抗體。在一些實施方式中，該NK細胞抗原係CD7、CD8或CD56或其組合（例如，CD7和CD8兩者）。在一些實施方式中，該抗體係人或人源化抗體。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含與CD3或CD7結合的單一抗體。
在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團經由含有聚乙二醇（PEG）的連接子與脂質共混物中之脂質共價偶合。在一些實施方式中，經由含有PEG的連接子與該免疫細胞靶向基團共價偶合的脂質係二硬脂醯甘油（DSG）、二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（DSPE）、二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（DMPE）、二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（DSPG）、二肉豆蔻醯-甘油（DMG）、二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（DPPE）、二棕櫚醯-甘油（DPG）、二烷基乙醯胺或神經醯胺。在一些實施方式中，該PEG係PEG 2000。在一些實施方式中，該PEG係PEG 3400。
在一些實施方式中，該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物以0.002-0.2莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含抗體，並且該抗體係Fab或免疫球蛋白單可變結構域，如奈米抗體。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv或scFv片段。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含被工程化以敲除一或多個天然鏈間二硫鍵的Fab。例如，在一些實施方式中，該Fab包含含有C233S取代的重鏈片段，根據Kabat編號；和/或含有C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該Fab包含非天然鏈間二硫鍵。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含被工程化以引入一或多個包埋的鏈間二硫鍵的Fab。例如，在一些實施方式中，該Fab抗體包含含有F174C取代的重鏈片段，根據Kabat編號；和/或含有S176C取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該Fab包含含有F174C和C233S取代的重鏈片段和含有S176C和C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含被工程化以敲除一或多個天然鏈間二硫鍵並引入一或多個包埋的鏈間二硫鍵的Fab。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含在重鏈或輕鏈片段的C末端含有半胱胺酸的Fab。在一些實施方式中，該Fab進一步包含在該Fab的重鏈片段與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。在一些實施方式中，該Fab包含與抗體CH1結構域連接的重鏈可變結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的輕鏈可變結構域，其中該CH1結構域和該輕鏈恒定結構域藉由一或多個鏈間二硫鍵連接，並且其中該免疫細胞靶向基團進一步包含藉由胺基酸連接子與該輕鏈恒定結構域的C末端連接的單鏈可變片段（scFv）。在一些實施方式中，該Fab抗體係DS Fab（具有野生型（天然）鏈間二硫鍵的Fab）、NoDS Fab（敲除了天然二硫鍵的Fab，如在重鏈上具有C233S取代和/或在輕鏈上具有C214S取代的Fab，根據Kabat編號）、bDS Fab（沒有天然二硫鍵並引入了非天然鏈間包埋的二硫鍵的Fab，如在重鏈上具有F174C和C233S和/或在輕鏈上具有S176C和C214S取代的Fab，根據Kabat編號）或bDS Fab-ScFv（通過連接子（如(G4S)x（SEQ ID NO: 154））與ScFv連接到的bDS Fab）。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含具有非天然鏈間二硫鍵（例如，工程化的包埋的鏈間二硫鍵）的Fab。
在一些實施方式中，ISV或奈米抗體進一步包含間隔子，其包含在該VHH結構域與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含兩個或更多個VHH結構域。在一些實施方式中，兩個或更多個VHH結構域藉由胺基酸連接子連接。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的第一VHH結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的第二VHH結構域，並且其中視需要該抗體CH1結構域和該抗體輕鏈恒定結構域藉由一或多個二硫鍵連接。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的VHH結構域，和/或該抗體CH1結構域藉由一或多個二硫鍵與抗體輕鏈恒定結構域連接。在一些實施方式中，該CH1結構域包含F174C和C233S取代，和/或該輕鏈恒定結構域包含S176C和C214S取代，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該抗體係ScFv、VHH（Nb）、2xVHH、VHH-CH1/空Vk或VHH1-CH1/VHH-2-Nb bDS。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含Fab，其包含：(a) 含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 2或3之胺基酸序列的輕鏈片段；(b) 含有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的輕鏈片段；(c) 含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈片段；(d) 含有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的輕鏈片段；(e) 含有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的輕鏈片段；(f) 含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的輕鏈片段；(g) 含有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的輕鏈片段；(h) 含有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的輕鏈片段；(i) 含有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的輕鏈片段；(j) 含有SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的輕鏈片段；或(k) 含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的輕鏈片段。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含雙特異性靶向部分。在一些實施方式中，該雙特異性靶向部分與該兩種不同類型的免疫細胞結合。在一些實施方式中，該兩種不同類型的免疫細胞係CD4+ T細胞和CD8+ T細胞。在一些實施方式中，該雙特異性靶向部分係雙特異性抗體。在一些實施方式中，該雙特異性抗體係Fab-ScFv。在一些實施方式中，LNP與第一類型的免疫細胞的表面上的第一抗原結合，並且還與第二類型的免疫細胞的表面上的第二抗原結合。在一些實施方式中，該LNP包含兩種偶聯物。在一些實施方式中，第一偶聯物包含與該第一類型的免疫細胞的第一抗原結合的第一抗體，並且第二偶聯物包含與該第二類型的免疫細胞的第二抗原結合的第二抗體。在一些實施方式中，該兩種不同類型的免疫細胞係T細胞和NK細胞。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團與 (i) CD3和CD56兩者；(ii) CD8和CD56兩者；或 (iii) CD7和CD56兩者結合。
如本文所討論的，可以將該LNP靶向至特定細胞類型，例如免疫細胞，例如T細胞、B細胞或自然殺手（NK）細胞。這可以藉由使用本文所述之一或多種脂質來實現。此外，靶向可以藉由在LNP顆粒的溶劑可及表面上包括靶向基團來增強。例如，靶向基團可以包括特異性結合對（例如，抗體-抗原對、配體-受體對等）的成員。在某些實施方式中，靶向基團係抗體。靶向可以例如藉由使用本文所述之脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物來實施。
視需要，該靶向部分係沒有Fc組分的抗體片段。以前用LNP靶向循環免疫細胞的嘗試已經採用了全抗體（WO 2016/189532 Al）。具有偶聯的全抗體的脂質體或脂質基顆粒由於Fc的接合而從循環中更快地清除，從而降低了它們到達目的靶細胞的潛能（Harding等人 (1997) Biochim Biophys. Acta [生物化學與生物物理學報] 1327, 181-192；Sapra等人 (2004) Clin Cancer Res [臨床癌症研究] 10, 1100-1111；Aragnol等人, (1986) Proc Natl Acad Sci USA [美國國家科學院院刊] 83, 2699-2703）。像靶向EGFR（Mamot等人, (2005) Cancer Res [癌症研究] 65, 11631-11638）、ErbB2（Park等人 (2002) Clin Cancer Res [臨床癌症研究] 8, 1172-1181）或EphA2（Kamoun等人, 2019 Nat. Biomed. Eng [自然生物醫學工程] 3, 264-280）的那些脂質體一樣，用抗體片段靶向的脂質體保持其長循環特性。此外，基於脂質的載劑可以使用膠束插入過程來製備，該過程允許在抗體偶聯單獨製造後幾乎定量地將其摻入（Nellis等人 (2005) Biotechnol Prog [生物技術進展] 21, 221-232），相比之下，偶聯完整IgG時的插入效率極低（Ishida等人 (1999) FEBS Lett.[FEBS快報] 460, 129-133）或需要直接在完整的LNP上完成偶聯（WO 2016/189532 Al）。scFv、Fab或VHH片段也可以直接與活化的PEG-脂質偶聯，以製備可插入的偶聯物。
在一些實施方式中，PEG-(脂質)等同於(脂質)-PEG。
在某些實施方式中，靶向基團可為表面結合抗體或其表面結合抗原結合片段，其可以允許調節細胞靶向特異性。這特別有用，因為可以針對所期望的靶向位點之目的表位產生高度特異性的抗體。在一個實施方式中，可以將多種不同的抗體摻入並呈遞在LNP的表面，其中每種抗體與相同抗原上的不同表位或不同抗原上的不同表位結合。這樣的方法可以增加與特定靶細胞的靶向相互作用的親合力和特異性。
可以基於給定靶細胞的所期望定位、功能或結構特徵來選擇靶向基團或靶向基團組合。例如，為了靶向T細胞、T細胞群或T細胞亞群，可以選擇靶向T細胞（如經由T細胞表面抗原）的一或多種抗體或其抗原結合片段或抗原結合衍生物。示例性T細胞表面抗原包括但不限於例如CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD28、CD39、CD69、CD103、CD137、CD45、T細胞受體（TCR）β、TCR-α、TCR-α/β、TCR-γ/δ、PD1、CTLA4、TIM3、LAG3、CD18、IL-2受體、CD11a、GL7、TLR2、TLR4、TLR5和IL-15受體。為了靶向NK細胞或NK細胞群，可以選擇靶向NK細胞（如經由NK細胞表面抗原）的一或多種抗體、其抗原結合片段或抗原結合衍生物。示例性NK細胞表面抗原包括但不限於CD48、CD56、CD85a、CD85c、CD85d、CD85e、CD85f、CD85i、CD85j、CD158b2、CD161、CD244、CD16a、CD16b、IL-2受體、CD27、CD28、CD48、CD69、CD70、CD86、CD112、CD122、CD155、CD161、CD244、CD266、CD314/NKG2D、CD336/NKP44、CD337/NKP30。為了靶向B細胞或B細胞群，可以選擇靶向B細胞（如經由B細胞抗原）的一或多種抗體、其抗原結合片段或抗原結合衍生物。示例性B細胞抗原包括但不限於CD19（對於除漿細胞外的所有B細胞），CD19、CD25和CD30（對於激活的B細胞），CD27、CD38、CD78、CD138和CD319（對於漿細胞），CD20、CD27、CD40、CD80和PDL-2（對於記憶細胞），Notch2、CD1、CD21和CD27（對於邊緣區B細胞），CD21、CD22和CD23（對於濾泡性B細胞），以及CD1、CD5、CD21、CD24和TLR4（對於調節性B細胞）。
在某些實施方式中，靶向可以例如藉由使用本文所述之脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物來實施。示例性脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物可以包括具有式 (II) 的化合物，[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團，例如T細胞靶向分子，例如抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD7抗體或抗CD8抗體]（式II）。
在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團係多肽，並且該脂質與該多肽的N末端、C末端或中間部分的任何位置偶聯。
在某些實施方式中，該靶向基團或靶向分子係與選自由以下組成之群組的T細胞抗原結合的T細胞靶向劑（例如，抗體）：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD28、CD137、CD45、T細胞受體（TCR）β、TCR-α、TCR-α/β、TCR-γ/δ、PD1、CTLA4、TIM3、LAG3、CD18、IL-2受體、CD11a、TLR2、TLR4、TLR5、IL-7受體或IL-15受體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD2，並且該靶向基團可為例如抗CD2抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD3，並且該靶向基團可為例如抗CD3抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD4，並且該靶向基團可為例如抗CD4抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD5，並且該靶向基團可為例如抗CD5抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD7，並且該靶向基團可為例如抗CD7抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為CD8，並且該靶向基團可為例如抗CD8抗體。在某些實施方式中，該T細胞抗原可為TCR β，並且該靶向基團可為例如抗TCR β抗體。在一些實施方式中，該抗體係人或人源化抗體。
在一些實施方式中，該LNP包含兩種偶聯物。在一些實施方式中，第一偶聯物包含結合CD3的抗體。在一些實施方式中，第二偶聯物包含結合CD11a或CD18的抗體。在一些實施方式中，該LNP包含一種偶聯物。在一些實施方式中，該偶聯物包含結合CD3和CD11a兩者的雙特異性抗體。在一些實施方式中，該偶聯物包含結合CD3和CD18兩者的雙特異性抗體。在一些實施方式中，該LNP結合該免疫細胞的CD7和CD8。在一些實施方式中，第一偶聯物包含結合CD7的抗體，並且第二偶聯物包含結合CD8的抗體。在一些實施方式中，該LNP包含一種偶聯物。在一些實施方式中，該偶聯物包含結合CD7和CD8的雙特異性抗體。
示例性CD2結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：9.6（academic.oup.com/intimm/article/10/12/1863/744536）、9-1（academic.oup.com/intimm/article/10/12/1863/744536）、TS2/18.1.1（ATCC HB-195）、Lo-CD2b（ATCC PTA-802）、Lo-CD2a/BTI-322（美國專利6849258B1）、西普珠單抗（Sipilzumab）/MEDI-507（美國專利6849258B1/en）、35.1（ATCC HB-222）、OKT11（ATCC CRL-8027）、RPA-2.1（PCT揭露案WO 2020023559 A1）、AF1856（R&D系統公司（R&D Systems））、MAB18562（R&D系統公司）、MAB18561（R&D系統公司）、MAB1856（R&D系統公司）、PAB30359（亞諾法生技股份有限公司）、10299-1（亞諾法生技股份有限公司（Abnova Corporation））及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的重鏈可變結構域（VH）和輕鏈可變結構域（VL）：AF1856（R&D系統公司）、MAB18562（R&D系統公司）、MAB18561（R&D系統公司）、MAB1856（R&D系統公司）、PAB30359（亞諾法生技股份有限公司）和10299-1（亞諾法生技股份有限公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：AF1856（R&D系統公司）、MAB18562（R&D系統公司）、MAB18561（R&D系統公司）、MAB1856（R&D系統公司）、PAB30359（亞諾法生技股份有限公司（Abnova Corporation））和10299-1（亞諾法生技股份有限公司），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD2結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：9.6、9-1、TS2/18.1.1、Lo-CD2b、Lo-CD2a、BTI-322、西普珠單抗、35.1、OKT11、RPA-2.1、SQB-3.21、LT2、TS1/8、UT329、4F22、OX-34、UQ2/42、MU3、U7.4、NFN-76或MOM-181-4-F(E)。
示例性CD3結合劑（CD3γ/δ/ε、CD3γ、CD3δ、CD3γ/ε、CD3δ/ε或CD3ε）可為選自由以下組成之群組的抗體：MEM-57（CD3γ/δ/ε，恩佐生命科學公司（EnzoLife Sciences））、MAB100（CD3ε，R&D系統公司）、CD3-H5（CD3ε，亞諾法生技股份有限公司）、CD3-12（CD3ε，細胞傳訊科技公司（Cell Signaling Technology））、LE-CD3（CD3ε，聖克魯斯生物技術公司（Santa Cruz Biotechnology, Inc.））、NBP1-31250（CD3γ，維百奧生物科技有限公司（Novus Biologicals））、16669-1-AP（CD3δ，英傑公司（Invitrogen））及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：MEM-57（CD3γ/δ/ε，恩佐生命科學公司）、MAB100（CD3ε，R&D系統公司）、CD3-H5（CD3ε，亞諾法生技股份有限公司）、CD3-12（CD3ε，細胞傳訊科技公司）、LE-CD3（CD3ε，聖克魯斯生物技術公司）、NBP1-31250（CD3γ，維百奧生物科技有限公司）和16669-1-AP（CD3δ，英傑公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：MEM-57（CD3γ/δ/ε，恩佐生命科學公司（EnzoLife Sciences））、MAB100（CD3ε，R&D系統公司）、CD3-H5（CD3ε，亞諾法生技股份有限公司）、CD3-12（CD3ε，細胞傳訊科技公司（Cell Signaling Technology）、LE-CD3（CD3ε，聖克魯斯生物技術公司（Santa Cruz Biotechnology, Inc.））、NBP1-31250（CD3γ，維百奧生物科技有限公司（Novus Biologicals））、和16669-1-AP（CD3δ，英傑公司（Invitrogen）），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.196: 901-917）, MacCallum（參見, MacCallum R M等人., (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD3結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：hsp34、OKT-3、UCHT1、38.1、HIT3a、RFT8、SK7、BC3、SP34-2、HU291、TRX4、卡妥索單抗（Catumaxomab）、替利珠單抗（teplizumab）、3-106、3-114、3-148、3-190、3-271、3-550、4-10、4-48、H2C、F12Q、I2C、SP7、3F3A1、CD3-12、301、RIV9、JB38-29、JE17-74、GT0013、4E2、7A4、4D10A6、SPV-T3b、M2AB、ICO-90、30A1或Hu38E4.v1（美國專利申請20200299409A1）、REGN5458（美國專利申請20200024356A1）、博納吐單抗（go.drugbank.com/drugs/DB09052/polypeptide_sequences.fasta）。在一些實施方式中，偶聯物包含Fab，其中該Fab包含 (a) 含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 2或3之胺基酸序列的輕鏈片段。在一些實施方式中，該LNP結合CD3，並且還結合CD11a或CD18。
示例性CD4結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：伊巴珠單抗（www.genome.jp/dbget-bin/www_bget?D09575）、AF1856（R&D系統公司）、MAB554（R&D系統公司）、BF0174（親和生物科學公司（Affinity Biosciences））、PAB31115（亞諾法生技股份有限公司）、CAL4（艾博抗公司（Abcam））及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：AF1856（R&D系統公司）、MAB554（R&D系統公司）、BF0174（親和生物科學公司）、PAB31115（亞諾法生技股份有限公司）和CAL4（艾博抗公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：AF1856（R&D系統公司）、MAB554（R&D系統公司）、BF0174（親和生物科學公司（Affinity Biosciences））、PAB31115（亞諾法生技股份有限公司）、和CAL4（艾博抗公司），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD4結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：伊巴珠單抗、OKT4、RPA-T4、S3.5、SK3、N1UG0、RIV6、OTI18E3、MEM-241、B486A1、RFT-4g、7E14、MDX.2、MEM-115、MEM-16、ICO-86、Edu-2或伊巴珠單抗（ilbalizumab）。
示例性CD5結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：He3、MAB1636（R&D系統公司）、AF1636（R&D系統公司）、MAB115（R&D系統公司）、C5/473 + CD5/54/F6（艾博抗公司）、CD5/54/F6（艾博抗公司）、65152（蛋白質技術公司（Proteintech））及其抗原結合片段。在一些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：MAB1636（R&D系統公司）、AF1636（R&D系統公司）、MAB115（R&D系統公司）、C5/473 + CD5/54/F6（艾博抗公司）、CD5/54/F6（艾博抗公司）和65152（蛋白質技術公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：MAB1636（R&D系統公司）、AF1636（R&D系統公司）、MAB115（R&D系統公司）、C5/473 + CD5/54/F6（艾博抗公司）、CD5/54/F6（艾博抗公司）和65152（蛋白質技術公司（Proteintech）），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD5結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：佐莫單抗（zolimomab）、5D7、L17F12、和UCHT2、1D8、3I21、4H10、8J23、5O4、4H2、5G2、8G8、6M4、2E3、4E24、4F10、7J9、7P9、8E24、6L18、7H7、1E7、8J21、7I11、8M9、1P21、2H11、3M22、5M6、5H8、7I19、1A2、8E15、8C10、3P16、4F3、5M24、5O24、7B16、1E8、2H16、BLa1、1804、DK23、Cris1、MEM-32、H65、4C7、OX-19、Leu-1、53-7.3、4H8E6、T101、EP2952、D-9、H-3、HK231、N-20、Y2/178、H-300、CD5/54/F6、Q-20、CC17、MOM-18539-S(P)或MOM-18885-S(P)。
示例性CD7結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：MAB7579（R&D系統公司）、AF7579（R&D系統公司）、EPR22065（艾博抗公司）、1G10D8（蛋白質技術公司）、NBP2-32097（維百奧生物科技有限公司）、NBP2-38440（維百奧生物科技有限公司）及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：MAB7579（R&D系統公司）、AF7579（R&D系統公司）、EPR22065（艾博抗公司）、1G10D8（蛋白質技術公司）、NBP2-32097（維百奧生物科技有限公司）和NBP2-38440（維百奧生物科技有限公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：MAB7579（R&D系統公司）、AF7579（R&D系統公司）、EPR22065（艾博抗公司）、1G10D8（蛋白質技術公司）、NBP2-32097（維百奧生物科技有限公司）和NBP2-38440（維百奧生物科技有限公司），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD7結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：TH-69、3Afl1、T3-3A1、124-1D1、3A1f、CD7-6B7或VHH6。
示例性CD8（CD8α、CD8α/α、CD8α/β或CD8β）結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：2.43（英傑公司）、Du CD8-1（CD8α，英傑公司）、9358-CD（CD8α/β，R&D系統公司）、MAB116（CD8α，R&D系統公司）、ab4055（CD8α，艾博抗公司）、C8/144B（CD8α，維百奧生物科技有限公司）、YTS105.18（CD8α，維百奧生物科技有限公司）、TRX2（patents.justia.com/patent/20170198045）及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：2.43（英傑公司）、51.1（ATCC HB-230）、Du CD8-1（CD8α，英傑公司）、9358-CD（CD8α/β，R&D系統公司）、MAB116（CD8α，R&D系統公司）、ab4055（CD8α，艾博抗公司）、C8/144B（CD8α，維百奧生物科技有限公司）和YTS105.18（CD8α，維百奧生物科技有限公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：2.43（英傑公司）、Du CD8-1（CD8α，英傑公司）、9358-CD（CD8α/β，R&D系統公司）、MAB116（CD8α，R&D系統公司）、ab4055（CD8α，艾博抗公司）、C8/144B（CD8α，維百奧生物科技有限公司）和YTS105.18（CD8α，維百奧生物科技有限公司），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD8結合劑還可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：OKT-8、51.1、S6F1、TRX2、和UCHT4、SP16、3B5、C8-144B、HIT8a、RAVB3、LT8、17D8、MEM-31、MEM-87、RIV11、DK-25、YTC141.1HL或YTC182.20。在一些實施方式中，偶聯物包含Fab，其中該Fab包含含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈片段。
示例性CD8結合劑係包含三個互補決定結構域CDR1、CDR2和CDR3的抗體（例如，ISV）。在一些實施方式中，CDR1包含GSTFSDYG（SEQ ID NO: 100）或與其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或更高序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，CDR2包含IDWNGEHT（SEQ ID NO: 101）或與其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或更高序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中，CDR3包含AADALPYTVRKYNY（SEQ ID NO: 102）或與其具有至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或更高序列同一性的胺基酸序列。在一些實施方式中：(1) 任何胺基酸取代均係保守胺基酸取代；和/或 (2) 所述胺基酸序列僅含有胺基酸取代，並且不含與其相關的胺基酸缺失或插入。在一些實施方式中，該ISVD包含SEQ ID NO: 77，由其組成，或基本上由組成。在一些實施方式中，該藥劑與SEQ ID NO: 77具有至少80%、至少85%、例如90%或95%或更高序列同一性，或與SEQ ID NO: 77具有3、2或1個胺基酸差異；或其任何合適的組合。在一些實施方式中，CD8衍生自哺乳動物，如人。
在一個實施方式中，CD8奈米抗體係BDSn：抗CD8 BDSn Nb序列（CDR1、CDR2、CDR3加下劃線，基於IMGT名稱）：EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSTFSDYGVGWFRQAPGKGREFVADIDWNGEHTSYADSVKGRFATSRDNAKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYCAADALPYTVRKYNYWGQGTQVTVSSGGCGGHHHHHH（SEQ ID NO: 77）
在一些實施方式中，本文所述之CD8奈米抗體以10−5至10−12莫耳/升（M）或更小、10−7至10−12莫耳/升（M）或更小、10−8至10−12莫耳/升（M）的解離常數（KD），和/或以至少107M−1、至少108M−1、至少109M−1（如至少1012M−1）的締合常數（KA）；並且特別是以小於500 nM、小於200 nM、小於10 nM（如小於500 μM）的KD與CD8結合。可以確定本文揭露的奈米抗體針對vWF的KD和KA值。更一般地，本文所述之奈米抗體可以具有如本段所述之關於vWF的解離常數。
本揭露之一類CD8奈米抗體包含具有對應於天然存在的VHH結構域的胺基酸序列但已經被「人源化」（即藉由用在來自人的常規4鏈抗體（例如上面所指示）的VH結構域中之一或多個相應位置處出現的一或多個胺基酸殘基替換所述天然存在的VHH序列的胺基酸序列中之一或多個胺基酸殘基）之胺基酸序列的奈米抗體。應當注意的是，本揭露之這樣的人源化CD8奈米抗體可以以本身已知的任何合適的方式來獲得（即如在上面第 (1)-(8) 點下所指示），因此並不嚴格限於已經使用包含天然存在的VHH結構域作為起始材料的多肽獲得的多肽。
本揭露之另一類CD8奈米抗體包含具有對應於天然存在的VH結構域之胺基酸序列的已經被「駱駝化」（即藉由用在重鏈抗體的VHH結構域中之一或多個相應位置處出現的一或多個胺基酸殘基替換來自常規4鏈抗體的天然存在的VH結構域的胺基酸序列中之一或多個胺基酸殘基）之胺基酸序列的奈米抗體。這可以以本身已知的方式進行，這對於熟悉該項技術者來說應是清楚的，例如基於下面的進一步描述。還參考WO 94/04678。這樣的駱駝化可以優先發生在存在於VH-VL介面處的胺基酸位置和所謂的駱駝科動物標誌殘基處（還參見例如WO 94/04678），還如下面所提及。在一些實施方式中，用作產生或設計駱駝化奈米抗體的起始材料或起點的VH結構域或序列係來自哺乳動物的VH序列，例如人的VH序列。應當注意的是，本揭露之這樣的駱駝化奈米抗體可以以本身已知的任何合適的方式來獲得，因此並不嚴格限於已經使用包含天然存在的VH結構域作為起始材料的多肽獲得的多肽。
例如，「人源化」和「駱駝化」兩者均可以藉由以下方式進行：分別提供編碼這樣的天然存在的VHH結構域或VH結構域的核苷酸序列，然後以本身已知的方式改變該核苷酸序列中之一或多個密碼子，使得新的核苷酸序列分別編碼本揭露之人源化或駱駝化奈米抗體，然後以本身已知的方式表現由此獲得的核苷酸序列，以便提供所期望的奈米抗體。可替代地，分別基於天然存在的VHH結構域或VH結構域的胺基酸序列，可以分別設計本揭露之所期望的人源化或駱駝化奈米抗體的胺基酸序列，然後使用本身已知的肽合成技術從頭合成。此外，分別基於天然存在的VHH結構域或VH結構域的胺基酸序列或核苷酸序列，可以設計編碼所希望的人源化或駱駝化奈米抗體的核苷酸序列，然後使用本身已知的核酸合成技術從頭合成，之後可以以本身已知的方式表現由此獲得的核苷酸序列，以便提供所期望的奈米抗體。
用於獲得奈米抗體和/或編碼其的核苷酸序列和/或核酸的其他合適的方式和技術（從天然存在的VH結構域或較佳的VHH結構域（的胺基酸序列）和/或從編碼其的核苷酸序列和/或核酸序列開始）對於熟悉該項技術者來說應是清楚的，並且可以例如包括以合適的方式將來自天然存在的VH結構域（如一或多個FR和/或CDR）的一或多個胺基酸序列和/或核苷酸序列與來自天然存在的VHH結構域（如一或多個FR或CDR）的一或多個胺基酸序列和/或核苷酸序列組合，以便提供奈米抗體（編碼其的核苷酸序列或核酸）。還提供了化合物和構建體、特別是蛋白質和多肽，其包含本揭露之至少一個這樣的胺基酸序列和/或奈米抗體（或其合適的片段）或基本上由其組成，並且視需要進一步包含一或多個其他基團，殘基、部分或結合單元。在一些實施方式中，這樣的其他基團、殘基、部分、結合單元或胺基酸序列可以向或可以不向所述胺基酸序列和/或奈米抗體（和/或存在它的化合物或構建體）提供其他功能，並且可以改變或可以不改變所述胺基酸序列和/或奈米抗體之特性。
本揭露還涵蓋本揭露之任何多肽，其在一或多個胺基酸位置上已被糖基化，這通常取決於用於表現該多肽的宿主。多肽可以包含本揭露之CD8 奈米抗體的胺基酸序列，該胺基酸序列在其胺基末端、在其羧基末端、或在其胺基末端和在其羧基末端兩者處與至少一個另外的胺基酸序列融合。這樣的其他胺基酸序列可以包含至少一個其他奈米抗體，以便提供包含至少兩個（如三個、四個或五個）奈米抗體的多肽，其中所述奈米抗體可以視需要經由一或多個連接子序列（如本文所定義）連接。包含本揭露之CD8奈米抗體和一或多個另外的奈米抗體的多肽係多價多肽。在多價多肽中，該兩個或更多個奈米抗體可以相同或不同。例如，多價多肽中之兩個或更多個奈米抗體：• 可以針對相同的抗原，即針對所述抗原的相同部分或表位或者針對所述抗原的兩個或更多個不同的部分或表位；和/或• 可以針對不同的抗原；•或其組合。
因此，二價多肽，例如：• 可以包含兩個相同的奈米抗體；• 可以包含針對抗原的第一部分或表位的第一奈米抗體和針對所述抗原的相同部分或表位或者針對所述抗原的另一個部分或表位的第二奈米抗體；或者可以包含針對第一抗原的第一奈米抗體和針對不同於所述第一抗原的第二抗原的第二奈米抗體；而本發明之三價多肽例如：• 可以包含針對相同抗原的相同或不同部分或表位的三個相同或不同的奈米抗體；• 可以包含針對第一抗原上的相同或不同部分或表位的兩個相同或不同的奈米抗體和針對不同於所述第一抗原的第二抗原的第三奈米抗體；或• 可以包含針對第一抗原的第一奈米抗體、針對不同於所述第一抗原的第二抗原的第二奈米抗體和針對不同於所述第一和第二抗原的第三抗原的第三奈米抗體。
示例性CD137結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：4B4-1、P566或烏瑞魯單抗（Urelumab）。示例性CD28結合劑可以選自採用選殖TAB08的CDR的抗體或抗體片段。示例性CD45結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：BC8、9.4、4B2、Tu116或GAP8.3。示例性CD18結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：1B4、TS1/18、MEM-48、YFC118-3、TA-4、MEM-148或R3-3, 24。示例性CD11a結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：MHM24或依法珠單抗（Efalizumab）。示例性IL-2受體結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：YTH 906.9HL、IL2R.1、BC96、B-B10、216、MEM-181、ITYV、MEM-140、ICO-105、達克珠單抗（Daclizumab），或者選自IL2或IL2片段。示例性IL-15R結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：JM7A4或OTI3D5，或者選自IL15或IL15片段。示例性TLR2結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：JM22-41、TL2.1、11G7或TLR2.45。示例性TLR4結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：HTA125或76B357-1。示例性TLR5結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：85B152-5或9D759-2。示例性GL7結合劑可以選自採用選殖GL7的CDR的抗體或抗體片段。
示例性PD1結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：MIH4、J116、J150、OTIB11、OTI17B10、OTI3A1或OTI16D4。另外，示例性抗PD-1抗體描述於例如美國專利案號8,952,136、8,779,105、8,008,449、8,741,295、9,205,148、9,181,342、9,102,728、9,102,727、8,952,136、8,927,697、8,900,587、8,735,553和7,488,802中。示例性抗PD-1抗體包括例如納武單抗（nivolumab）（Opdivo®，百時美施貴寶公司（Bristol-Myers Squibb Co.））、派姆單抗（pembrolizumab）（Keytruda®，默沙東公司（Merck Sharp & Dohme Corp.））、PDR001（諾華製藥公司（Novartis Pharmaceuticals））和匹地利珠單抗（pidilizumab）（CT-011，Cure Tech公司）。示例性抗PD-L1抗體描述於例如美國專利案號9,273,135、7,943,743、9,175,082、8,741,295、8,552,154和8,217,149中。示例性抗PD-L1抗體包括例如阿特珠單抗（atezolizumab）（Tecentriq®，基因泰克公司（Genentech））、德瓦魯單抗（durvalumab）（阿斯利康公司（AstraZeneca））、MEDI4736、阿維魯單抗（avelumab）和BMS 936559（百時美施貴寶公司（Bristol Myers Squibb Co.））。
示例性CTLA-4結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：ER4.7G.11 [7G11]、OTI9G4、OTI9F3、OTI3A5、A3.4H2.H12、14D3、OTI3A12、OTI1A11、OTI1E8、OTI3B11、OTI3D2、OTI10C8、OTI2E9、OTI6F1、OTI7D3、OTI85B、OTI12C6。示例性抗CTLA-4抗體描述於以下中：美國專利案號6,984,720、6,682,736、7,311,910；7,307,064、7,109,003、7,132,281、6,207,156、7,807,797、7,824,679、8,143,379、8,263,073、8,318,916、8,017,114、8,784,815和8,883,984；國際（PCT）公開案號WO 98/42752、WO 00/37504和WO 01/14424；以及歐洲專利案號EP 1212422 B1。示例性CTLA-4抗體包括伊匹單抗（ipilimumab）或曲美木單抗（tremelimumab）。
示例性TCR β結合劑可為選自由以下組成之群組的抗體：H57-597（英傑公司）、8A3（維百奧生物科技有限公司）、R73（TCRα/β，艾博抗公司）、E6Z3S（TRBC1/TCRβ，細胞傳訊科技公司）及其抗原結合片段。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH結構域和VL結構域：H57-597（英傑公司）、8A3（維百奧生物科技有限公司）、R73（TCRα/β，艾博抗公司）和E6Z3S（TRBC1/TCRβ，細胞傳訊科技公司）。在某些實施方式中，結合劑包含選自由以下組成之群組的抗體的VH和VL序列的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3：H57-597（英傑公司）、8A3（維百奧生物科技有限公司）、R73（TCRα/β，艾博抗公司）和E6Z3S（TRBC1/TCRβ，細胞傳訊科技公司），該等CDR由Kabat（參見，Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], NIH出版號91-3242, 貝塞斯達）、Chothia（參見例如，Chothia C & Lesk A M, (1987), J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌]196: 901-917）、MacCallum（參見，MacCallum R M等人, (1996) J. MOL. BIOL.[分子生物學雜誌] 262: 732-745）或本領域已知的任何其他CDR確定方法確定。
示例性CD137結合劑可以選自採用以下選殖的CDR的抗體或抗體片段：4B4-1、P566或烏瑞魯單抗（Urelumab）。
在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含選自由以下組成之群組的抗體：Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv和scFv片段。在一些實施方式中，該抗體係人或人源化抗體。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含Fab或免疫球蛋白單可變結構域，如奈米抗體。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含不含有天然鏈間二硫鍵的Fab。例如，在一些實施方式中，該Fab包含含有C233S取代的重鏈片段和/或含有C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含含有一或多個非天然鏈間二硫鍵的Fab。在一些實施方式中，該鏈間二硫鍵位於分別在該輕鏈片段和該重鏈片段上的兩個非天然半胱胺酸殘基之間。例如，在一些實施方式中，該Fab包含含有F174C取代的重鏈片段和/或含有S176C取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該Fab包含含有F174C和C233S取代的重鏈片段和/或含有S176C和C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含缺乏天然鏈間二硫鍵的Fab。在一些實施方式中，該Fab被工程化以用非半胱胺酸胺基酸替換天然恒定輕鏈和天然恒定重鏈上的形成天然鏈間二硫鍵的一個或兩個半胱胺酸，從而去除該Fab中之天然鏈間二硫鍵。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含C末端半胱胺酸殘基。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含在重鏈或輕鏈片段的C末端含有半胱胺酸的Fab。在一些實施方式中，Fab進一步包含在該Fab的重鏈與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。例如，在一些實施方式中，Fab包含在該Fab的C末端與該C末端半胱胺酸之間的衍生自抗體鉸鏈區（例如，部分鉸鏈序列）的兩個或更多個胺基酸。在一些實施方式中，該Fab包含與抗體CH1結構域連接的重鏈可變結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的輕鏈可變結構域，其中該CH1結構域和該輕鏈恒定結構域藉由一或多個鏈間二硫鍵連接，並且其中該免疫細胞靶向基團進一步包含藉由胺基酸連接子與該輕鏈恒定結構域的C末端連接的單鏈可變片段（scFv）。在一些實施方式中，Fab抗體係DS Fab、NoDS Fab、bDS Fab、bDS Fab-ScFv。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含免疫球蛋白單可變結構域，如奈米抗體（例如，VHH）。在一些實施方式中，該奈米抗體在C末端包含半胱胺酸。在一些實施方式中，該奈米抗體進一步包含間隔子，其包含在該VHH結構域與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。在一些實施方式中，該間隔子包含一或多個甘胺酸殘基，例如兩個甘胺酸殘基。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含兩個或更多個VHH結構域。在一些實施方式中，兩個或更多個VHH結構域藉由胺基酸連接子連接。在一些實施方式中，胺基酸連接子包含一或多個甘胺酸和/或絲胺酸殘基（例如，序列GGGGS（SEQ ID NO: 154）的一或多個重複）。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的第一VHH結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的第二VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域和該抗體輕鏈恒定結構域藉由一或多個二硫鍵（例如，鏈間二硫鍵）連接。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域藉由一或多個二硫鍵與抗體輕鏈恒定結構域連接。在一些實施方式中，CH1結構域包含F174C和C233S取代，並且該輕鏈恒定結構域包含S176C和C214S取代，根據Kabat編號。在一些實施方式中，抗體係ScFv、VHH、2xVHH、VHH-CH1/空Vk或VHH1-CH1/VHH-2-Nb bDS。
示例性靶向部分可以具有如下所闡述的胺基酸序列：抗CD3 hSP34-Fab序列：hSP34重鏈（HC）序列（SEQ ID NO: 1）：EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKY NNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISY WAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSSDKTHTChSP34-mlam輕鏈（LC）序列（小鼠λ）（SEQ ID NO: 2）：QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLA PGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQS NNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADSSSP34-hlam LC（人λ）（SEQ ID NO: 3）：QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLA PGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLSQPK AAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFYPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSK QSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAESS抗CD3 Hu291-Fab序列：Hu291 HC（SEQ ID NO: 4）：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFISYTMHWVRQAPGQGLEWMGYINPRS GYTHYNQKLKDKATLTADKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSAYYDYDGFAYW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDK THTCHu 291 LC（SEQ ID NO: 5）：MDMRVPAQLLGLLLLWLPGAKCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNW YQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSS NPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGES抗CD8 TRX2-Fab序列：TRX2 HC（SEQ ID NO: 6）：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDFGMNWVRQAPGKGLEWVALIYYDG SNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHYDGYYHFFDS WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSD KTHTCTRX2 LC（SEQ ID NO: 7）：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKGSQDINNYLAWYQQKPGKAPKLLIYNTDILHTG VPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCYQYNNGYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD8 OKT8-Fab序列：OKT8 HC（SEQ ID NO: 8）：QVQLVQSGAEDKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPAN DNTLYASKFQGRVTITADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCGRGYGYYVFDHWGQ GTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCOKT8 LC（SEQ ID NO: 9）：DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSRSISQYLAWYQEKPGKAPKLLIYSGSTLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNENPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD4伊巴珠單抗-Fab序列：伊巴珠單抗HC（SEQ ID NO: 10）：QVQLQQSGPEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIHWVRQKPGQGLDWIGYINPYND GTDYDEKFKGKATLTSDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREKDNYATGAWFAY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSD KTHTC伊巴珠單抗LC（SEQ ID NO: 11）：DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMNCKSSQSLLYSTNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYW ASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQYYSYRTFGGGTKLEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD5 He3-Fab序列：He3 HC（SEQ ID NO: 12）：EIQLVQSGGGLVKPGGSVRISCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWMGWINTHT GEPTYADSFKGRFTFSLDDSKNTAYLQINSLRAEDTAVYFCTRRGYDWYFDVWGQG TTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCHe3 LC（SEQ ID NO: 13）：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINSYLSWFQQKPGKAPKTLIYRANRLESGVP SRFSGSGSGTDYTLTISSLQYEDFGIYYCQQYDESPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD7 TH-69-Fab序列：TH-69 HC（SEQ ID NO: 14）：EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISSGGFT YYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTAMYYCARDEVRGYLDVWGAGTTV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCTH-69 LC（SEQ ID NO: 15）：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVP SRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC抗CD2 TS2/18.1-Fab序列：TS2/18.1 HC（SEQ ID NO: 16）：EVQLVESGGGLVMPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVAYISGGGF TYYPDTVKGRFTLSRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARQGANWELVYWGQGT LVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCTS2/18.1 LC（SEQ ID NO: 17）：DIVMTQSPATLSVTPGDRVFLSCRASQSISDFLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPS RFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYFCQNGHNFPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD29.6-Fab序列：9.6 HC（SEQ ID NO: 18）：QVQLQQPGAELVRPGSSVKLSCKASGYTFTRYWIHWVKQRPIQGLEWIGNIDPSDSE THYNQKFKDKATLTVDKSSGTAYMQLSSLTSEDSAVYYCATEDLYYAMEYWGQGT SVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTC9.6 LC（SEQ ID NO: 19）：NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMTCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYW ASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAVYYCHQYLSSHTFGGGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD29-1-Fab序列：9-1 HC（SEQ ID NO: 20）：QVQLQQPGTELVRPGSSVKLSCKASGYTFTSYWVNWVKQRPDQGLEWIGRIDPYDS ETHYNQKFTDKAISTIDTSSNTAYMQLSTLTSDASAVYYCSRSPRDSSTNLADWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTC9-1 LC（SEQ ID NO: 21）：DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPS RFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELRRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGESmutOKT8-Fab序列：mutOKT8 HC（SEQ ID NO: 22）：QVQLVQSGAEDKKPGASVKVSCKASGFNIKDTYIHWVRQAPGQGLEWMGRIDPAND NTLYASKFQGRVTITADTSSNTAYMELSSLRSEDTAVYYCGRGAGAYVFDHWGQGT TVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCmutOKT8 LC（SEQ ID NO: 23）：DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSRSISAALAWYQEKPGKAPKLLIYSGSTLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNENPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES.抗CD56 A1 Fab序列A1 bDS HC（SEQ ID NO: 26）：QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSNWIRQSPSGLEWL GRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARENIAAWTWAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSSDKTHTCGGHHHHHHA1 bDS LC（SEQ ID NO: 27）：EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGLAPRLLIYDTSLRATDI PDRFSGSGSGTAFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD56 A2 Fab序列A2 bDS HC（SEQ ID NO: 28）：EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPN SGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDLSSGYSGYFDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSD KTHTCGGHHHHHHA2 bDS LC（SEQ ID NO: 29）：DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLNWYLQKPGQSPQLLIYLGSN 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NO: 33）：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQIIIHSDGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVSNR FSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPHTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD2 RPA-2.10v1 Fab序列RPA-2.10v1 bDS HC（SEQ ID NO: 34）：EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVASISGGGFL YYLDSVKGRFTISRDNARNILYLHMTSLRSEDTAMYYCARSSYGEIMDYWGQGTSV TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTCP AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCHH HHHHRPA-2.10v1 bDS LC（SEQ ID NO: 35）：DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQRIGTSIHWYQQRTTGSPRLLIKYASESISGIPSR FSGSGSGTDFTLSINSVESEDVADYYCQQSHGWPFTFGGGTKLEIERTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLC STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD1374B4-1 Fab序列4B4-1 bDS HC（SEQ ID NO: 36）：QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFSSYWMHWVKQRPGQVLEWIGEINPGN GHTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSFTTARGFAYWGQ GTLVTVSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 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TDYADSAKGRFTISRDESKNTVYLQMNSLRPEDTAAYYCRALSRIWPYDYWGQGTL VTVSSGGCGGHHHHHH抗CD2828CD065G01 Nb序列（SEQ ID NO: 82）EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSIFRLHTMEWYRRTPETQREWVATITSGGTT NYPDSVKGRFTISRDDTKKTVYLQMNSLKPEDTAVYYCHAVATEDAGFPPSNYWG QGTLVTVSSGGCGGHHHHHH抗CD3 T0170061C09 Nb序列（SEQ ID NO: 83）EVQLVESGGGPVQAGGSLRLSCAASGRTYRGYSMGWFRQAPGREREFVAAIVWSD GNTYYEDSVKGRFTISRDNAKNTMYLQMTSLKPEDSATYYCAAKIRPYIFKIAGQYD YWGQGTLVTVSSGGCGGHHHHHH抗CD312D2 bDS Fab序列12D2 bDS HC（SEQ ID NO: 84）：EVKLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFNFYAYWMGWVRQAPGKGLEWIGEIKKDG TTINYTPSLKDRFTISRDNAQNTLYLQMTKLGSEDTALYYCAREERDGYFDYWGQG VMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHT CGGHHHHHH12D2 bDS LC（SEQ ID NO: 85）：QFVLTQPNSVSTNLGSTVKLSCKRSTGNIGSNYVNWYQQHEGRSPTTMIYRDDKRPD GVPDRFSGSIDRSSNSALLTINNVQTEDEADYFCQSYSSGIVFGGGTKLTVLSQPKAA PSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFYPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSN NKYAACSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAESS抗CD288G8A Fab序列8G8A bDS HC（SEQ ID NO: 86）：EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYND YTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSLTSEDSALYCARWGDGNYWGRGTLTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTCPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTCGGHHH HHH8G8A bDS LC（SEQ ID NO: 87）：DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQKPGSSPKLCIYSTSNLASGV PPRFSGSGSTSYSLTISMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLC STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD282E12 Fab序列2E12 bDS HC（SEQ ID NO: 88）：QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGS TDYNSALKSRLSITKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCARDGYSNFHYYVMDYW GQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS GVHTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDK THTCGGHHHHHH2E12 bDS LC（SEQ ID NO: 89）：DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYYVTSLMQWYQQKPGQPPKLLISAASNV ESGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFGGGTKLEIKRRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD28 CD28.9.3 Fab序列CD28.9.3 bDS HC（SEQ ID NO: 90）：QVKLQQSGPGLVTPSQSLSITCTVSGFSLSDYGVHWVRQSPGQGLEWLGVIWAGGG TNYNSALMSRKSISKDNSKSQVFLKMNSLQADDTAVYYCARDKGYSYYYSMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSD KTHTCGGHHHHHHCD28.9.3 bDS LC（SEQ ID NO: 91）：DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVEYYVTSLMQWY QQKPGQPPKL LIFAASNVES GVPARFSGSG SGTNFSLNIHPVDEDDVAMY FCQQSRKVPY TFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGES抗CD28 HzTN228 Fab序列HzTN228 bDS HC（SEQ ID NO: 92）：QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGFSLTSYGVHWIRQPGKGLEWLGVIWPGTNFN SALMSRLTISEDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYCARDRAYGNYLYAMDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT CPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTC GGHHHHHHHzTN228 bDS LC（SEQ ID NO: 93）：DIQMTQSPSLSASVGDRVTITCRASESVEYVTSLMQWYQKPGKAPKLLIYAASNVDS GVPSRFSGSGTDFTLTISLQPEDIATYCQSRKVPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLCS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD28 TGN2122.C Fab序列TGN2122.C bDS HC（SEQ ID NO: 94）：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYKIHWVRQAPGQGLEWIGYIYPYSG SSDYNQKFKSRATLTVDNSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGGDAMDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT CPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTC GGHHHHHHTGN2122.C bDS LC（SEQ ID NO: 95）：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQRKPGKAPKLLIYGATNLADG VPSRFSGSGSGRDYTLTISSLQPEDFATYFCQNILGTWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD28 TGN2122.H Fab序列TGN2122.H bDS HC（SEQ ID NO: 96）：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNIYYMSWVRQAPGKGLELVAAINPDGG NTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYGGPGFDSWGQGT LVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSSDKTHTC GGHHHHHHTGN2122.H bDS LC（SEQ ID NO: 97）：ENVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLWIYDTSKLASGIP ARFSGSGSRNDYTLTISSLEPEDFAVYYCFPGSGFPFMYTFGGGTKVEIKRTVAAPSV FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLCSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGES抗CD8 TRX2 ScFv序列（SEQ ID NO: 98）：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSDFGMNWVRQAPGKGLEWVALIYYDG SNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHYDGYYHFFDS WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKG SQDINNYLAWYQQKPGKAPKLLIYNTDILHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIA TYYCYQYNNGYTFGQGTKVEIKGGGSGGCGGHHHHHHV1 VHH-CH1 bDS HC（SEQ ID NO: 99）：DVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGYPYSSYCMGWFRQAPGKEREGVAAIDSDG RTRYADSVKGRFTISQDNAKNTLYLQMNRMKPEDTAMYYCAARFGPMGCVDLSTL SFGHWGQGTQVTVSITASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTCPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSSDKTHTCGGHHHHHH
在一些實施方式中，靶向部分包含如本文所揭露的多肽序列。在一些實施方式中，靶向部分包含如本文所揭露的多肽序列的所有六個CDR。在一些實施方式中，靶向部分包含如本文所揭露的免疫球蛋白單可變結構域（ISVD）的CDR1、CDR2和CDR3。在另外的實施方式中，靶向部分結合如本文所揭露的多肽序列所結合的、該靶向分子上的相同表位。在另外的實施方式中，靶向部分與如本文所揭露的多肽序列競爭以結合該靶向分子上的相同表位。
在某些實施方式中，該靶向基團或免疫細胞靶向基團（例如，T細胞靶向劑、B細胞靶向劑或NK細胞靶向劑）可以經由含有聚乙二醇（PEG）的連接子與脂質共價偶合。
在其他實施方式中，用於產生偶聯物的脂質可以選自二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（DSPE）：二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（DPPE）：二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（DMPE）：二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（DSPG）：二肉豆蔻醯-甘油（DMG）：二硬脂醯甘油（DSG）：和N-棕櫚醯-鞘胺醇（C16-神經醯胺）該免疫細胞靶向基團可以直接或經由連接子（例如，含有聚乙二醇（PEG）的連接子）與脂質共價偶合。在某些實施方式中，PEG係PEG 1000、PEG 2000、PEG 3400、PEG 3000、PEG 3450、PEG 4000或PEG 5000。在某些實施方式中，PEG係PEG 2000。
在一些實施方式中，脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物以0.001-0.5莫耳百分比、0.001-0.3莫耳百分比、0.002-0.2莫耳百分比、0.01-0.1莫耳百分比、0.1-0.3莫耳百分比或0.1-0.2莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物可以以0.001-0.5莫耳百分比、0.001-0.1莫耳百分比、0.01-0.5莫耳百分比、0.05-0.5莫耳百分比、0.1-0.5莫耳百分比、0.1-0.3莫耳百分比、0.1-0.2莫耳百分比、0.2-0.3莫耳百分比的範圍，約0.01莫耳百分比、約0.05莫耳百分比、約0.1莫耳百分比、約0.15莫耳百分比、約0.2莫耳百分比、約0.25莫耳百分比、約0.3莫耳百分比、約0.35莫耳百分比、約0.4莫耳百分比、約0.45莫耳百分比或約0.5莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
在某些實施方式中，脂質-免疫細胞靶向劑偶聯物包含DSPE、PEG組分和靶向抗體。在某些實施方式中，抗體係T細胞靶向劑，例如抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD5抗體、抗CD7抗體、抗CD8抗體或抗TCR β抗體。
示例性脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物包含DSPE和PEG 2000，例如如ellis等人 (2005) BIOTECHNOL. PROG. [生物技術進展] 21, 205-220中所述。示例性偶聯物包含具有式 (III) 的結構，其中scFv代表與目的靶標結合的工程化抗體結合位點。在某些實施方式中，工程化抗體結合位點與上文所述之任何靶標結合。在某些實施方式中，工程化抗體結合位點可為例如工程化抗CD3抗體或工程化抗CD8抗體。在某些實施方式中，工程化抗體結合位點可為例如工程化抗CD2抗體或工程化抗CD7抗體。
在某些實施方式中，脂質-免疫細胞靶向劑偶聯物包含DBPE或DAPE、PEG組分和靶向抗體。在某些實施方式中，抗體係T細胞靶向劑，例如抗CD2抗體、抗CD3抗體、抗CD4抗體、抗CD5抗體、抗CD7抗體、抗CD8抗體或抗TCR β抗體。
在一些實施方式中，脂質-免疫細胞靶向劑偶聯物包含DBPE或DAPE、PEG組分，表示為以下：DBPE-PEG2000-Mal；DAPE-PEG2000-Mal。
具有式 (III) 的化合物（SEQ ID NO: 160）的實例如下所示：(III)。
設想了式 (III) 中之scFv可以被完整抗體或其抗原片段（例如，Fab）替換。
具有式 (IV) 的化合物（SEQ ID NO: 161）的另一個實例如下所示：其產生描述於Nellis等人(2005) 同上，或美國專利案號7,022,336中。設想了式 (IV) 中之Fab可以被完整抗體或其抗原片段（例如，(Fab')2片段）或工程化抗體結合位點（例如，scFv）替換。
其他脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物描述於例如美國專利案號7,022,336中，其中該靶向基團可以被目的靶向基團（例如，結合如上文所述之T細胞或NK細胞表面抗原的靶向基團）替換。
在某些實施方式中，具有式 (II) 之示例性偶聯物的脂質組分可為本文所述之任何脂質。在一些實例中，具有式 (II) 的偶聯物的脂質組分基於本文所述之可電離陽離子脂質，例如式 (A-I)、(A-II)、(B-I)、(B-II)、(C-I)、(C-II)、(C-III)、(C-IV)、(D-I)、(D-II)、(E-1) 或 (E-II) 的可電離陽離子脂質或其鹽。例如，示例性可電離陽離子脂質可以選自表A、B、C、D或E中之任一個或其鹽。
在某些實施方式中，基於本揭露之脂質的偶聯物可以包括：，其中scFv代表結合上文所述之靶標（例如，CD2、CD3、CD7或CD8）的工程化抗體結合位點。
在某些實施方式中，脂質共混物可以進一步包含游離PEG-脂質，例如，以便減少經由該靶向基團的非特異性結合量。該游離PEG-脂質可以與該偶聯物中包括的PEG-脂質相同或不同。在某些實施方式中，該游離PEG-脂質選自由以下組成之群組：PEG-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DSPE）或PEG-二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DMPE）、N-(甲基聚氧乙烯氧基羰基)-1,2-二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DPPE-PEG）、1,2-二肉豆蔻醯-rac-甘油-3-甲基聚氧乙烯（PEG-DMG）、1,2-二棕櫚醯-rac-甘油-3-甲基聚氧乙烯（PEG-DPG）、1,2-二油醯-rac-甘油,甲氧基聚乙二醇（DOG-PEG）、1,2-二硬脂醯-rac-甘油-3-甲基聚氧乙烯（PEG-DSG）、N-棕櫚醯-鞘胺醇-1-{琥珀醯[甲氧基(聚乙二醇)]（PEG-神經醯胺）、DSPE-PEG-半胱胺酸或其衍生物。在一些實施方式中，平均PEG長度在2000-5000之間，具有2000、3400或5000。最終組成物可以含有兩種或更多種該等聚乙二醇化脂質的混合物。在某些實施方式中，該LNP組成物包含具有肉豆蔻醯基和硬脂酸醯基鏈的PEG-脂質的混合物。在某些實施方式中，該LNP組成物包含具有棕櫚醯基和硬脂醯基鏈的PEG-脂質的混合物。
在某些實施方式中，PEG-脂質的衍生物在PEG末端具有甲氧基、羥基或羧酸端基。
可以將該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物摻入如下所述之LNP中，例如摻入含有例如可電離陽離子脂質、固醇、中性磷脂和PEG-脂質的LNP中。設想了在某些實施方式中，含有該脂質-免疫細胞靶向基團的LNP可以含有本文所述之可電離陽離子脂質，或者描述於例如美國專利案號10,221,127、10,653,780或美國公開申請案號US 2018/0085474、US 2016/0317676、國際公開案號WO 2009/086558、或Miao等人 (2019) NATURE BIOTECH [自然生物技術] 37:1174-1185或Jayaraman等人 (2012) ANGEW CHEM INT. [德國應用化學] 51: 8529-8533。
可以使用在下面的以下部分中所述之方法和其他組分配製該LNP。
IV. 脂質奈米顆粒組成物本發明提供了包含脂質共混物的脂質奈米顆粒（LNP）組成物，該脂質共混物含有本文所述之可電離陽離子脂質和/或本文所述之脂質-免疫細胞靶向劑偶聯物。在某些實施方式中，該脂質共混物可以包含本文所述之可電離陽離子脂質以及固醇、中性磷脂、PEG-脂質和脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物中之一或多種。
在某些實施方式中，本文所述之可電離陽離子脂質可以以30-70莫耳百分比、30-60莫耳百分比、30-50莫耳百分比、40-70莫耳百分比、40-60莫耳百分比、40-50莫耳百分比、50-70莫耳百分比、50-60莫耳百分比的範圍，或者約30莫耳百分比、約35莫耳百分比、約40莫耳百分比、約45莫耳百分比、約50莫耳百分比、約55莫耳百分比、約60莫耳百分比、約65莫耳百分比或約70莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
固醇在某些實施方式中，脂質奈米顆粒的脂質共混物可以包含固醇組分，例如選自由以下組成之群組的一或多種固醇：膽固醇、岩藻固醇、β-麥固醇、麥角固醇、菜油固醇、豆固醇、豆甾烷醇、和菜籽固醇。在某些實施方式中，固醇係膽固醇。
該固醇（例如，膽固醇）可以以20-70莫耳百分比、20-60莫耳百分比、20-50莫耳百分比、30-70莫耳百分比、30-60莫耳百分比、30-50莫耳百分比、40-70莫耳百分比、40-60莫耳百分比、40-50莫耳百分比、50-70莫耳百分比、50-60莫耳百分比的範圍，或者約20莫耳百分比、約25莫耳百分比、約30莫耳百分比、約35莫耳百分比、約40莫耳百分比、約45莫耳百分比、約50莫耳百分比、約55莫耳百分比、約60莫耳百分比或約65莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
在一些實施方式中，該固醇以30-50莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。在一些實施方式中，該固醇以20-70莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
中性磷脂在某些實施方式中，該脂質奈米顆粒的脂質共混物可以包含一或多種中性磷脂。該中性磷脂可以選自由以下組成之群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DSPE）、1,2-二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DSPC）、氫化大豆磷脂醯膽鹼（HSPC）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DOPE）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DOPC）、和鞘磷脂（SM）。
其他中性磷脂可以選自由以下組成之群組：二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（DSPE）、二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（DMPE）、二硬脂醯-甘油-磷酸膽鹼（DSPC）、氫化大豆磷脂醯膽鹼（HSPC）、二油醯-甘油-磷酸乙醇胺（DOPE）、二亞油醯-甘油-磷酸膽鹼（DLPC）、二肉豆蔻醯-甘油-磷酸膽鹼（DMPC）、二油醯-甘油-磷酸膽鹼（DOPC）、二棕櫚醯-甘油-磷酸膽鹼（DPPC）、二十一烷醯-甘油-磷酸膽鹼（DUPC）、棕櫚醯-油醯-甘油-磷酸膽鹼（POPC）、二十八烯基-甘油-磷酸膽鹼、油醯-膽固醇基半琥珀醯-甘油-磷酸膽鹼、十六基-甘油-磷酸膽鹼、二亞麻醯-甘油-磷酸膽鹼、二花生四烯醯-甘油-3-磷酸膽鹼、雙二十二碳六烯醯-甘油-磷酸膽鹼和鞘磷脂。
該中性磷脂可以以1-10莫耳百分比、1-15莫耳百分比、1-12莫耳百分比、1-10莫耳百分比、3-15莫耳百分比、3-12莫耳百分比、3-10莫耳百分比、4-15莫耳百分比、4-12莫耳百分比、4-10莫耳百分比、4-8莫耳百分比、5-15莫耳百分比、5-12莫耳百分比、5-10莫耳百分比、6-15莫耳百分比、6-12莫耳百分比、6-10莫耳百分比的範圍，或者約1莫耳百分比、約2莫耳百分比、約3莫耳百分比、約4莫耳百分比、約5莫耳百分比、約6莫耳百分比、約7莫耳百分比、約8莫耳百分比、約9莫耳百分比、約10莫耳百分比、約11莫耳百分比、約12莫耳百分比、約13莫耳百分比、約14莫耳百分比或約15莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
在一些實施方式中，該中性磷脂以1-15莫耳百分比（如約5-15莫耳百分比或約5至10莫耳百分比）的範圍存在於該脂質共混物中。
PEG- 脂質該脂質奈米顆粒的脂質共混物可以包括一或多種PEG或PEG修飾的脂質。這樣的種類可以可替代地稱為聚乙二醇化脂質。PEG脂質係用聚乙二醇修飾的脂質。如上面所指出的，當脂質-免疫細胞靶向基團被包括在該脂質共混物中時，游離PEG-脂質可以被包括在該脂質共混物中，以減少或消除經由靶向基團的非特異性結合。在一些實施方式中，該游離PEG-脂質係兩種或更多種獨特的游離PEG-脂質的混合物。
PEG脂質（例如，游離PEG-脂質）可以選自由以下組成之非限制性群組：PEG-修飾的磷脂醯乙醇胺、PEG-修飾的磷脂酸、PEG-修飾的神經醯胺、PEG-修飾的二烷基胺、PEG-修飾的二醯基甘油和PEG-修飾的二烷基甘油。例如，PEG脂質可為PEG-二油醯甘油（PEG-DOG）、PEG-二肉豆蔻醯-甘油（PEG-DMG）、PEG-二棕櫚醯-甘油（PEG-DPG）、PEG-二亞油醯-甘油-磷脂醯乙醇胺（PEG-DLPE）、PEG-二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DMPE）、PEG-二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DPPE）、PEG-二硬脂醯甘油（PEG-DSG）、PEG-二醯基甘油（PEG-DAG，例如PEG-DMG、PEG-DPG和PEG-DSG）、PEG-神經醯胺、PEG-二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（PEG-DSPG）、PEG-二油醯-甘油-磷酸乙醇胺（PEG-DOPE）、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-雙十四烷基乙醯胺和PEG-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DSPE）脂質。在一些實施方式中，該游離PEG-脂質包含二醯基磷脂醯乙醇胺、二烷基磷脂醯乙醇胺、二醯基甘油、神經醯胺、二烷基甘油或二烷基乙醯胺。在一些實施方式中，該烷基鏈係肉豆蔻酸、棕櫚酸、油酸、亞麻油酸或硬脂酸。在一些實施方式中，該游離PEG脂質係DMG-PEG。在一些實施方式中，游離PEG-脂質係DPG-PEG。
在某些實施方式中，該共混物可以含有游離PEG-脂質，其可以選自由以下組成之群組：PEG-二硬脂醯甘油（PEG-DSG）、PEG-二醯基甘油（PEG-DAG，例如PEG-DMG、PEG-DPG和PEG-DSG）、PEG-二肉豆蔻醯-甘油（PEG-DMG）、PEG-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DSPE）和PEG-二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DMPE）。在一些實施方式中，該游離PEG-脂質包含二醯基磷脂醯膽鹼，其包含二棕櫚醯（C16）鏈或二硬脂醯（C18）鏈。
PEG-脂質可以以1-10莫耳百分比、1-8莫耳百分比、1-7莫耳百分比、1-6莫耳百分比、1-5莫耳百分比、1-4莫耳百分比、1-3莫耳百分比、2-8莫耳百分比、2-7莫耳百分比、2-6莫耳百分比、2-5莫耳百分比、2-4莫耳百分比、2-3莫耳百分比的範圍，或者約1莫耳百分比、約2莫耳百分比、約3莫耳百分比、約4莫耳百分比或約5莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。在一些實施方式中，該游離PEG-脂質以1-4莫耳百分比的範圍（如約1-2莫耳百分比、或約2-4莫耳百分比、或約1.5莫耳百分比）存在於該脂質共混物中。在一些實施方式中，該游離PEG-脂質以約0.1-4莫耳百分比（如約0.5至2.5莫耳百分比、或約1至2莫耳百分比）存在於該脂質共混物中。在一些實施方式中，PEG-脂質係游離PEG-脂質。
在一些實施方式中，PEG-脂質可以以0.01-10莫耳百分比、0.01-5莫耳百分比、0.01-4莫耳百分比、0.01-3莫耳百分比、0.01-2莫耳百分比、0.01-1莫耳百分比、0.1-10莫耳百分比、0.1-5莫耳百分比、0.1-4莫耳百分比、0.1-3莫耳百分比、0.1-2莫耳百分比、0.1-1莫耳百分比、0.5-10莫耳百分比、0.5-5莫耳百分比、0.5-4莫耳百分比、0.5-3莫耳百分比、0.5-2莫耳百分比、0.5-1莫耳百分比、1-2莫耳百分比、3-4莫耳百分比、4-5莫耳百分比、5-6莫耳百分比或1.25-1.75莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。在一些實施方式中，PET-脂質可為該脂質共混物的約0.5莫耳百分比、約1莫耳百分比、約1.5莫耳百分比、約2莫耳百分比、約2.5莫耳百分比、約3莫耳百分比、約3.5莫耳百分比、約4莫耳百分比、約4.5莫耳百分比、約5莫耳百分比或約5.5莫耳百分比。在一些實施方式中，PEG-脂質係游離PEG-脂質。
在一些實施方式中，PEG-脂質之脂錨鉤長度係C14（如在PEG-DMG中）。在一些實施方式中，PEG-脂質之脂錨鉤長度係C16（如在DPG中）。在一些實施方式中，PEG-脂質之脂錨鉤長度係C18（如在PEG-DSG中）。在一些實施方式中，PEG-脂質之骨架或頭基係二醯基甘油或磷酸乙醇胺。在一些實施方式中，PEG-脂質係游離PEG-脂質。
本揭露之LNP可以包含未與免疫細胞靶向基團偶聯的一或多種游離PEG-脂質以及與免疫細胞靶向基團偶聯的PEG-脂質。在一些實施方式中，游離PEG-脂質包含與脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物中之脂質相同或不同的脂質。
在一些實施方式中，該游離PEG脂質包含具有至少2000道爾頓的分子量的PEG。在一些實施方式中，該PEG具有約3000至5000道爾頓的分子量。在一些實施方式中，該Fab係抗CD3抗體，並且該LNP中之游離PEG脂質包含具有約2000道爾頓的分子量的PEG。在一些實施方式中，該Fab係抗CD4抗體，並且該LNP中之游離PEG脂質包含具有約3000至3500道爾頓的分子量的PEG。
脂質奈米顆粒的產生在一些實施方式中，藉由使用經由軌道渦旋器快速混合或者藉由微流體混合來產生該LNP。藉由以下方式完成軌道渦旋器混合：將脂質的乙醇溶液快速添加到目的核酸的水性溶液中，然後立即在2,500 rpm下渦旋。在一些實施方式中，使用微流體混合步驟產生該LNP。在一些實施方式中，通過使用例如以優化的混合室幾何形狀為特色的NanoAssemblr裝置和微流體晶片（Precision Nanosystems，不列顛哥倫比亞省溫哥華（Vancouver, BC））在微流體通道中在受控的流速下將水流和有機流混合來實現微流體混合。在一些實施方式中，LNP使用微流體混合步驟產生，該微流體混合步驟快速混合乙醇脂質溶液和核酸水溶液，使該核酸封裝在該固體脂質奈米顆粒中。然後使用選擇的膜過濾裝置將奈米顆粒懸浮液進行緩衝液交換到全水緩衝液中，以進行乙醇去除和奈米顆粒成熟。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其含有例如從約40莫耳百分比至約60莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約35莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種固醇、從約5莫耳百分比至約15莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0.5莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其含有例如從約20莫耳百分比至約60莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約25莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種固醇、從約15莫耳百分比至約60莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其含有例如從約30莫耳百分比至約40莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約20莫耳百分比至約40莫耳百分比的一或多種固醇、從約30莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其含有例如從約30莫耳百分比至約40莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約20莫耳百分比至約40莫耳百分比的一或多種固醇、從約30莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其包含例如從約30莫耳百分比至約40莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約20莫耳百分比至約40莫耳百分比的一或多種固醇、從約30莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質、從約0.01至0.5的PEG靶向脂質以及從0至0.5的PEG點擊柄（即，疊氮化物、DBCO-疊氮化物和Tz-TCO）。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其包含例如從約30莫耳百分比至約40莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約20莫耳百分比至約40莫耳百分比的一或多種固醇、從約30莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種中性脂質以及從約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種PEG-脂質、約0.03至0.05 PEG靶向脂質、或約0.1至0.2 PEG點擊柄（即疊氮化物、DBCO-疊氮化物和Tz-TCO）。
在某些實施方式中，所得的LNP組成物包含脂質共混物，其包含例如從約30莫耳百分比至約40莫耳百分比的本文所述之一或多種可電離陽離子脂質、從約20莫耳百分比至約40莫耳百分比的一或多種固醇、從約30莫耳百分比至約50莫耳百分比的一或多種中性脂質、約0莫耳百分比至約5莫耳百分比的一或多種DSPE PEG FAB，約0.03至0.05或約0.1至0.2 DSPE PEG疊氮化物。
在某些實施方式中，所得LNP組成物包含可電離脂質: 結構脂質: 固醇脂質: DSG-PEG2000:DSPE-PEG2000-馬來醯亞胺，比率為58:7:33.5:1.4:0.1或58:10:30.5:1.4:0.1。
在某些實施方式中，所得LNP組成物包含可電離脂質: 結構脂質: 固醇脂質: DPG-PEG2000:DSPE-PEG2000-馬來醯亞胺，比率為58:7:33.5:1.4:0.1或58:10:30.5:1.4:0.1。
在某些實施方式中，所得LNP組成物包含可電離脂質: 結構脂質: 固醇脂質: PEG-脂質: DSPE PEG FAB:DSPE PEG疊氮化物，莫耳比率分別係約33.0:39.9:25.4:1.54:0.05:0.11。
在某些實施方式中，所得LNP組成物包含可電離脂質: 結構脂質: 固醇脂質: PEG-脂質: DSPE PEG FAB:DSPE PEG疊氮化物，莫耳比率分別係約33.5:40.5:25.8:0.0:0.05:0.11。
在某些實施方式中，含有靶向部分的脂質以小於2 mol%存在。
在某些實施方式中，含有靶向部分的脂質以小於1.5 mol%存在。
在某些實施方式中，含有靶向部分的脂質以小於1.0 mol%存在。
在某些實施方式中，含有靶向部分的脂質以小於0.5 mol%存在。
脂質奈米顆粒的物理特性LNP組成物的特徵可以取決於脂質奈米顆粒（LNP）組成物中含有的組分、其絕對或相對量。特徵還可以根據該LNP組成物的製備方法和條件而變化。
可以藉由多種方法來表徵LNP組成物。例如，顯微鏡檢查（例如，透射電子顯微鏡檢查或掃描電子顯微鏡檢查）可以用於檢查LNP組成物的形態和大小分佈。動態光散射或電位測定法（例如，電位滴定）可以用於測量ζ電位。動態光散射還可以用於確定粒度。
諸如Zetasizer Nano ZS（英國瑪律文儀器有限公司（Malvern Instruments Ltd），英國烏斯特郡瑪律文（Malvern, Worcestershire, UK））等儀器也可以用於測量LNP組成物的多種特徵，如粒度、多分散性指數和ζ電位。藉由依賴於RNA結合染料（用於確定染料可及RNA的比例的ribogreen、cybergreen）的方法和LNP去配製（de-formulation）的組合，然後對總RNA含量進行HPLC分析來確定RNA封裝效率。
在一些實施方式中，LNP具有在1-250 nm、1-200 nm、1-150 nm、1-100 nm、50-250 nm、50-200 nm、50-150 nm、50-100 nm、75-250 nm、75-200 nm、75-150 nm、75-100 nm、100-250 nm、100-200 nm、100-150 nm範圍內的平均直徑。在某些實施方式中，LNP組成物可以具有約1 nm、約10 nm、約20 nm、約30 nm、約40 nm、約50 nm、約60 nm、約70 nm、約80 nm、約90 nm、約100 nm、約110 nm、約120 nm、約130 nm、約140 nm、約150 nm、約160 nm、約170 nm、約180 nm、約190 nm或約200 nm的平均直徑。在一些實施方式中，LNP具有約100 nm的平均直徑。在一些實施方式中，LNP具有在50-200 nm範圍內的平均直徑。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP顯示凍融後的平均直徑變化小於1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或40%。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP顯示凍融後的平均直徑變化小於30%。在一些實施方式中，使用在MES pH 6.5緩衝液中之10%蔗糖進行凍融和直徑測量。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP顯示靶向抗體插入後的平均直徑變化小於1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或40%。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP顯示靶向抗體插入後的平均直徑變化小於15%。在一些實施方式中，使用37°C孵育持續4小時，在pH 6.5 MES中測量靶向抗體插入後的直徑變化。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP具有小於50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200 nm的平均LNP直徑。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP具有小於100 nm的平均LNP直徑。
可替代地或另外，LNP組成物可以具有在從0.05-1、0.05-0.75、0.05-0.5、0.05-0.4、0.05-0.3、0.05-0.2、0.08-1、0.08-0.75、0.08-0.5、0.08-0.4、0.08-0.3、0.08-0.2、0.1-1、0.1-0.75、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3、0.1-0.2之範圍內的多分散性指數。在某些實施方式中，多分散性指數在0.1-0.25、0.1-0.2、0.1-0.19、0.1-0.18、0.1-0.17、0.1-0.16或0.1-0.15之範圍內。在一些實施方式中，該LNP具有在從0.05至1範圍內的多分散性指數。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP具有小於0.4、0.3、0.25、0.2、0.15、0.1或0.05的多分散性。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP具有小於0.25的多分散性。
可替代地或另外，LNP組成物可以具有約-30 mV至約+30 mV的ζ電位。在某些實施方式中，LNP組成物具有約-10 mV至約+20 mV的ζ電位。ζ電位可以隨著pH的變化而變化。因此，在某些實施方式中，LNP組成物在pH 5.5或pH 5下可以具有約0 mV至約+30 mV或約+10 mV至+30 mV或約+20 mV至約+30 mV的ζ電位，和/或在pH 7.4下可以具有約-30 mV至約+5 mV或約-20 mV至約+15 mV的ζ電位。在一些實施方式中，該LNP在pH 5下具有從約+5 mV至約+50 mV（如在pH 5下約+10 mV至約+30 mV）的ζ電位。在一些實施方式中，該LNP在pH 7.4下具有從約-10 mV至約+10 mV的ζ電位。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 7.4下具有大於-10、-9、-8、-7、-6、-5.5、-5、-4.5、-4、-3.5、-3、-2.5、-2、-1.5、-1或-0.5 mV的ζ電位。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 7.4下具有大於-10 mV的ζ電位。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 7.4下具有大於-1 mV的ζ電位。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 5.5下具有大於-1、0、1、2、3、4、4.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、22.5或25 mV的ζ電位。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 5.5下具有大於5 mV的ζ電位。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP組成物或LNP在pH 5.5下具有大於15 mV的ζ電位。
V. 有效載荷LNP組成物可以包含用於遞送至細胞（例如，免疫細胞）或組織（例如，受試者之細胞（例如，免疫細胞）或組織）的藥劑，例如核酸分子。在某些實施方式中，核酸中之核苷酸數係從約400至約6000。
本發明之LNP組成物可以包括核酸，例如DNA或RNA，如mRNA、tRNA、微RNA、siRNA、gRNA（指導RNA）、circRNA（環狀RNA）、核酶、誘騙RNA或dicer底物siRNA。在一些實施方式中，mRNA編碼受體、生長因子、激素、細胞介素、抗體、抗原、酶或疫苗。在一些實施方式中，mRNA編碼能夠調節免疫細胞中之免疫反應的多肽。在一些實施方式中，mRNA編碼能夠對免疫細胞進行重新程序設計的多肽。在一些實施方式中，mRNA編碼合成T細胞受體（synTCR）或嵌合抗原受體（CAR）。在一些實施方式中，該CAR係TTR-023 抗CD20（Leu-16）。在一些實施方式中，該CAR包含SEQ ID NO: 24的胺基酸序列。在一些實施方式中，編碼該CAR的mRNA包含25的多核苷酸序列。TTR-023抗CD20（Leu-16）CAR序列（包括前導序列）（SEQ ID NO: 24）：METDTLLLWVLLLWVPGSTGDYKAKEVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFT SYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSS LTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSSGGGSGGGSGGGGSSDIVLT QSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFS GSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGGGGSAAAIEVMY PPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIF WVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR（SEQ ID NO: 24）
相應的核酸序列（SEQ ID NO: 25）：atggagaccgacaccctgttgctttgggtactgttactttgggtgcccggatctaccggtgattacaaggccaaggaggtgcagctgca gcagagcggagccgagctggtgaagccaggcgcttccgtgaagatgtcttgtaaggcctccggctacacattcaccagctacaatat gcactgggtaaagcagactccggggcagggcctggagtggataggtgccatctaccctggcaacggcgacaccagctacaaccag aagtttaaggggaaggctactctaacagcggacaagtcgtcctctaccgcctacatgcaactcagctccctgacgagcgaggactcc gcggactactactgtgcccgctccaactactacggctctagctattggttcttcgacgtgtggggcgctggaacgaccgtgaccgtgtct tccggtggaggttccgggggcggaagcggcggtggcggcagttcggacatcgtgctgacccagagccctgccatcctgtccgcttc cccgggggagaaagttacgatgacctgccgagcgagctccagtgtcaactacatggattggtaccagaagaagcccggcagcagtc ccaagccgtggatttacgctactagcaacctggcgtccggtgtcccggctcgcttctcaggttctggctcgggtactagttattcattaac catttctcgcgtggaggctgaggacgctgccacctactactgccaacagtggtctttcaaccctcccactttcggaggcggcaccaagc tcgagatcaagggcgggggtggctccgcagcagccattgaggtgatgtatcctcctccctatttggacaacgagaagtcaaatggcac catcatccacgttaagggcaagcacctgtgcccatctcccctgttcccaggcccctctaagcccttctgggtcctggtggtggtcggcg gcgtcctggcatgttactctctgctggtgaccgtcgcgttcatcatcttttgggtccggtccaagcgcagccgcctgctccactccgacta catgaatatgactcctcgtaggcccggtccaacccgcaagcactaccagccgtacgcgccgcccagagactttgctgcttaccgatcc agagtgaaattttctaggtcggccgaacctcccgcatatcagcagggccagaaccagctgtacaacgaactcaacttgggacggcgc gaggaatacgatgtgctggataaacgccgtggccgcgatcccgagatgggcgggaagccacgtcgcaaaaaccctcaggagggc ctttacaacgagttgcagaaggacaaaatggcggaggcctactccgagatcggaatgaagggggagcgccggcgcggcaaaggg catgacggcctctaccagggcctgtccacagccacgaaagacacctatgacgccctgcatatgcaggccctgcccccgcgctgataa tga（SEQ ID NO: 25）
設想了核酸可以含有天然存在的組分，如天然存在的鹼基、糖或連接基團（例如，磷酸二酯連接基團）；或者可以含有非天然存在的組分或修飾（例如，硫酯連接基團）。例如，該核酸可以被合成為含有熟悉該項技術者已知的鹼基、糖、連接子修飾。此外，該核酸可為線性或環狀的，或者具有任何所期望的組態。該LNP組成物可以包括多種核酸分子（例如，多種RNA分子），它們可以相同或不同。
在某些實施方式中，有效載荷係mRNA。在某些實施方式中，特定LNP組成物可以含有許多mRNA分子，它們可以相同或不同。在某些實施方式中，包括一或多種不同mRNA的一或多種LNP組成物可以與細胞組合和/或同時接觸。設想了mRNA可以包括莖環、鏈終止核苷、polyA序列、多腺苷酸化訊息和/或5'帽結構中之一或多種。該mRNA可以編碼用於在例如免疫障礙、炎性障礙或癌症中使用的受體，如嵌合抗原受體（CAR）。另外，該mRNA可以編碼用於在治療性或預防性疫苗中使用的抗原，例如用於治療或預防病原體（例如，微生物或病毒病原體）感染，或用於減少或改善由這樣的感染直接或間接引起的副作用。
在某些實施方式中，CAR選自：
在某些實施方式中，CAR選自：
先導序列 scFv 鉸鏈 TM 共刺激 ICD 刺激 ICD
hCD8a FMC63 hCD8a hCD8a h41BB hCd3z
hCSF2RA FMC63 hIgG4 hCd28 h41BB hCd3z
hCD8a 人CD19 scfv hCD8a hCD8a hCD28 hCd3z
hCD8a FMC63 hCD8a hCD8a hCD28 hCd3z
hCSF2RA FMC63 hIgG4 hCd28 hCD28 hCd3z
hCD8a 人CD19 scfv hCD8a hCD8a h41BB hCd3z
hCD8a 人CD19 scfv hCD8a hCd28 h41BB hCd3z
hCD8a 人CD19 scfv hIgG4 hCd28 h41BB hCd3z
hCSF2RA 人CD19 scfv hIgG4 hCd28 hCD28 hCd3z
在某些實施方式中，LNP組成物可以包括一或多種其他組分，包括但不限於一或多種藥學上可接受的賦形劑、疏水性小分子、治療劑、碳水化合物、聚合物、滲透性增強分子和表面改變劑。
在一些實施方式中，在所得的LNP組成物中該脂質組分與該有效載荷（例如，mRNA）的wt/wt比率係從約1:1至約50:1。在某些實施方式中，在所得的組成物中該脂質組分與該有效載荷（例如，mRNA）的wt/wt比率係從約5:1至約50:1。在某些實施方式中，wt/wt比率係從約5:1至約40:1。在某些實施方式中，wt/wt比率係從約10:1至約40:1。在某些實施方式中，wt/wt比率係從約15:1至約25:1。
在某些實施方式中，在該等脂質奈米顆粒中該有效載荷（例如，mRNA）的封裝效率係至少50%。在某些實施方式中，封裝效率係至少80%、至少90%或大於90%。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現大於50%、55%、60%、65、70%、75%、80%、82.5%、85%、87.5%、90%、92.5%、95%、97.5或99%的封裝效率。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現大於87.5%的封裝效率。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現小於50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、17.5%、15%、12.5%、10%、7.5%、5%、2.5%或1%的染料可及RNA。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現小於12.5%的染料可及RNA。
在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現大於50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的總mRNA回收率。在一些實施方式中，使用本文所述之方法製備並表徵的包含本文所述之可電離陽離子脂質的LNP展現大於80%的總mRNA回收率。
RNA 有效載荷在某些實施方式中，RNA有效載荷係mRNA、tRNA、微RNA或siRNA有效載荷。
在某些實施方式中，優化脂質奈米顆粒組成物用於將RNA（例如，mRNA）遞送至靶細胞以在該細胞內翻譯。mRNA可為天然或非天然存在的mRNA。mRNA可以包括一或多種修飾的核鹼基、核苷或核苷酸。
核鹼基可以選自由以下組成之非限制性群組：腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基胞嘧啶、5-羥基甲基胞嘧啶、胸腺嘧啶、假尿嘧啶、二氫尿嘧啶、N1-甲基假尿嘧啶、次黃嘌呤和黃嘌呤。在一些實施方式中，核鹼基係N1-甲基假尿嘧啶。
mRNA的核苷係包括糖分子（例如，5碳或6碳糖，如戊糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖或其去氧衍生物）與核鹼基的組合的化合物。核苷可為經典核苷（例如，腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、5-甲基尿苷、去氧腺苷、去氧鳥苷、去氧胞苷、去氧尿苷和胸苷）或其類似物，並且可以包括一或多個取代或修飾。
mRNA的核苷酸係含有核苷和磷酸基團或替代基團（例如，硼酸磷酸酯、硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、膦酸酯、烷基、醯胺化物和甘油）的化合物。核苷酸可為經典核苷酸（例如，腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、5-甲基尿苷、去氧腺苷、去氧鳥苷、去氧胞苷、去氧尿苷和胸苷單磷酸）或其類似物，並且可以包括一或多個取代或修飾，包括但不限於烷基、芳基、鹵基、側氧基、羥基、烷氧基和/或硫代取代；一或多個稠環或開環；核鹼基、糖和/或磷酸或替代組分的氧化和/或還原。核苷酸可以包括一或多個磷酸或替代基團。例如，核苷酸可以包括核苷和三磷酸基團。「核苷三磷酸」（例如，鳥苷三磷酸、腺苷三磷酸、胞苷三磷酸和尿苷三磷酸）可為指經典核苷三磷酸或其類似物或衍生物，並且可以包括如本文所述之一或多個取代或修飾。
mRNA可以包括5'非翻譯區、3'非翻譯區和/或編碼或翻譯序列。mRNA可以包括任何數目的鹼基對，包括數十、數百或數千個鹼基對。任何數目（例如，全部、一些或沒有）的核鹼基、核苷或核苷酸可為經典種類的取代的、修飾的或以其他方式非天然存在的類似物。在某些實施方式中，可以修飾特定核鹼基類型的全部。例如，mRNA中之所有胞嘧啶均可為5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，一或多個或所有尿苷鹼基可為N1-甲基假尿苷。
在某些實施方式中，mRNA可以包括5'帽結構、鏈終止核苷酸、莖環、polyA序列和/或多腺苷酸化訊息。
帽結構或帽種類係包括藉由連接子連接的兩個核苷部分的化合物，並且可以選自天然存在的帽、非天然存在的帽或帽類似物。帽種類可以包括一或多種修飾的核苷和/或連接子部分。例如，天然mRNA帽可以包括在其5'位處藉由三磷酸鍵連接的鳥嘌呤核苷酸和在7位處甲基化的鳥嘌呤（G）核苷酸，例如m7G(5')ppp(5')G，通常寫成m7GpppG。帽種類也可為抗反向帽類似物。可能的帽種類之非限制性列表包括m7GpppG、m7Gpppm7G、m73'dGpppG、m7Gpppm7G、m73'dGpppG和m2702'GppppG。
可替代地或另外，mRNA可以包括鏈終止核苷。例如，鏈終止核苷可以包括在其糖基的2'和/或3'位處去氧的那些核苷。這樣的種類可以包括3'-去氧腺苷（蟲草素）、3'-去氧尿苷、3'-去氧胞嘧啶、3'-去氧鳥苷、3'-去氧胸腺嘧啶和2',3'-二去氧核苷，如2',3'-二去氧腺苷、2',3'-二去氧尿苷、2',3'-二去氧胞嘧啶、2',3'-二去氧鳥苷和2',3'-二去氧胸腺嘧啶。
可替代地或另外，mRNA可以包括莖環，如組蛋白莖環。莖環可以包括1、2、3、4、5、6、7、8個或更多個核苷酸鹼基對。例如，莖環可以包括4、5、6、7或8個核苷酸鹼基對。莖環可以位於mRNA的任何區域。例如，莖環可以位於非翻譯區（5'非翻譯區或3'非翻譯區）、編碼區或polyA序列或尾中、之前或之後。
可替代地或另外，mRNA可以包括polyA序列和/或多腺苷酸化訊息。polyA序列可以完全或主要由腺嘌呤核苷酸或其類似物或衍生物組成。polyA序列可為位於mRNA的3'非翻譯區域附近的尾。
mRNA可以編碼任何目的多肽，包括任何天然或非天然存在的或以其他方式修飾的多肽。由mRNA編碼的多肽可以具有任何大小，並且可以具有任何二級結構或活性。在一些實施方式中，當在細胞中表現時，由mRNA編碼的多肽可以具有治療效果。在一些實施方式中，mRNA可以編碼抗體、酶、生長因子、激素、細胞介素、病毒蛋白（例如，病毒衣殼蛋白）、抗原、疫苗或受體。在一些實施方式中，mRNA可以編碼工程化受體（如CAR）或者用於在治療性疫苗（例如，癌症疫苗）或預防性疫苗（例如，用於使微生物或病毒病原體感染的風險或嚴重程度最小化的疫苗）中使用的抗原。在一些實施方式中，mRNA編碼能夠調節免疫細胞中之免疫反應的多肽。在一些實施方式中，mRNA編碼能夠對免疫細胞進行重新程序設計的多肽。在一些實施方式中，mRNA編碼合成T細胞受體（synTCR）或嵌合抗原受體（CAR）。
可以設計脂質組成物用於一或多種特定的應用或靶標。例如，LNP組成物可以被設計成將mRNA遞送至哺乳動物身體的特定細胞、組織、器官或系統或其組（如腎系統）。可以改變LNP組成物的物理化學特性，以便增加對受試者內的特定靶位點的選擇性。例如，可以基於不同器官的開窗大小（fenestration size）來調整粒度。LNP組成物中包括的mRNA還可以取決於一或多種所期望的遞送靶標。例如，可以選擇mRNA用於特定適應症、病症、疾病或障礙，和/或用於遞送至特定細胞、組織、器官或系統或其組（例如，局部或特異性遞送）。
脂質組成物中mRNA的量可以取決於該mRNA的大小、序列和/或其他特徵。LNP中mRNA的量還可以取決於該LNP組成物的大小、組成、所期望的靶標和/或其他特徵。mRNA和其他元素（例如，脂質）的相對量也可以變化。可以例如使用吸收光譜法（例如，紫外-可見光譜法）測量LNP組成物中mRNA的量。
在一些實施方式中，可以選擇一或多種mRNA、脂質和聚合物及其量，以提供特定的N:P比率（可帶正電荷的脂質或聚合物胺（N = 氮）基團與帶負電荷的核酸磷酸（P）基團的比率）。組成物的N:P比率係指一或多種脂質中之氮原子與mRNA中之磷酸基團數的莫耳比率。通常，較佳的是較低的N:P比率。N:P比率可以取決於特定的脂質及其pKa。在某些實施方式中，可以選擇該mRNA和LNP組成物和/或其相對量，以提供從約1:1至約30:1或從約1:1至約20:1的N:P比率。在某些實施方式中，N:P比率可為例如1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1或8:1。在某些實施方式中，N:P比率可為從約2:1至約5:1。在某些實施方式中，N:P比率可為約4:1。在其他實施方式中，N:P比率係從約4:1至約8:1。例如，N:P比率可為約4:1、約4.5:1、約4.6:1、約4.7:1、約4.8:1、約4.9:1、約5.0:1、約5.1:1、約5.2:1、約5.3:1、約5.4:1、約5.5:1、約5.6:1、約5.7:1、約6.0:1、約6.5:1或約7.0:1。
奈米顆粒組成物中mRNA的量可以取決於mRNA的大小、序列和/或其他特徵。奈米顆粒組成物中mRNA的量還可以取決於奈米顆粒組成物的大小、組成、所期望的靶標和/或其他特徵。mRNA和其他元素（例如，脂質）的相對量也可以變化。在一些實施方式中，在奈米顆粒組成物中脂質組分與mRNA的wt/wt比率可為從約5:1至約50:1，如5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1和50:1。例如，脂質組分與mRNA的wt/wt比率可為從約10:1至約40:1。可以例如使用吸收光譜法（例如，紫外-可見光譜法）測量奈米顆粒組成物中mRNA的量。
mRNA的封裝效率描述了相對於所提供的初始量，在製備後被封裝或以其他方式與脂質組成物相關的mRNA的量。封裝效率理想地高（例如，接近100%）。可以例如藉由比較在用一或多種有機溶劑或去污劑分解該LNP組成物之前和之後含有該脂質組成物的溶液中mRNA的量來測量封裝效率。螢光可以用於測量溶液中游離mRNA的量。對於本發明之LNP組成物，mRNA的封裝效率可為至少50%，例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。在某些實施方式中，封裝效率可為至少80%。
VI. 配製和遞送方式本發明之LNP組成物可以全部或部分配製成藥物組成物。該藥物組成物可以進一步包括一或多種藥學上可接受的賦形劑或輔助成分，如本文所述之那些。用於配製和製造藥物組成物和藥劑的一般指南可在例如Remington's [雷明頓] (2006) 同上中獲得。常規賦形劑和輔助成分可以用於本發明之任何藥物組成物中，除非任何常規賦形劑或輔助成分可能與本發明之LNP組成物的一或多種組分不相容。如果賦形劑或輔助成分與LNP組成物的組分的組合可能導致任何不希望的生物學作用或在其他方面有害的作用，則它可能與該組分不相容。
在一些實施方式中，一或多種賦形劑或輔助成分可以構成包括本發明之LNP組成物的藥物組成物的總品質或體積的大於50%。例如，該一或多種賦形劑或輔助成分可以構成藥物組成物的30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在某些實施方式中，賦形劑例如被美國食品和藥物管理局批准用於在人中使用和用於獸醫用途。在某些實施方式中，賦形劑係醫藥級的。在某些實施方式中，賦形劑符合美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）、英國藥典和/或國際藥典的標準。
藥物組成物中該一或多種脂質或LNP、一或多種藥學上可接受的賦形劑和/或任何另外的成分的相對量將取決於待治療受試者之身份、體型和/或狀況以及進一步取決於待投與組成物的途徑而變化。
可以將脂質組成物和/或包括一或多種LNP組成物的藥物組成物投與任何受試者，包括可以受益於由將核酸例如RNA（例如，mRNA、tRNA或siRNA）遞送至一或多種特定細胞、組織、器官或系統或其組（如腎系統）提供的治療效果的人類患者。儘管本文提供的關於LNP組成物和包括LNP組成物的藥物組成物的描述主要針對適用於投與於人的組成物，但熟悉該項技術者應理解，這樣的組成物通常適用於投與於任何其他哺乳動物。理解對適用於投與於人的組成物進行修飾，以便使組成物適用於投與各種動物。
根據本揭露之藥物組成物可以作為單一單位劑量和/或作為多個單一單位劑量製備、包裝和/或散裝出售。如本文所用，「單位劑量」係離散量的藥物組成物，其包含預定量的活性成分（例如，有效載荷）。
本發明之藥物組成物可以製備成適用於多種投與途徑和方法的多種形式。例如，本發明之藥物組成物可以製備成液體劑型（例如，乳劑、微乳劑、奈米乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑）、可注射形式、固體劑型（例如，膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑）、用於局部和/或經皮投與的劑型（例如，軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、散劑、溶液劑、噴霧劑、吸入劑和貼劑）、混懸劑、散劑和其他形式。
用於口服和腸胃外投與的液體劑型包括但不限於藥學上可接受的乳劑、微乳劑、奈米乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和/或酏劑。除了活性成分外，液體劑型還可以包含本領域中常用的惰性稀釋劑，例如像水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油（特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯、以及其混合物。除了惰性稀釋劑以外，口服組成物還可以包括輔助劑，如潤濕劑、乳化劑和助懸劑、甜味劑、調味劑和/或芳香劑。
可以根據已知技術使用適宜分散劑、潤濕劑和/或懸浮劑配製可注射製劑，例如，無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射製劑可為在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑和/或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液和/或乳液，例如作為1,3-丁二醇中之溶液。可以採用的可接受的媒介物和溶劑尤其是水、林格氏溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。常規採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可以採用任何溫和的不揮發性油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。諸如油酸等脂肪酸可以用於注射劑的製備中。
可注射配製物可以例如藉由以下方式來滅菌：經細菌截留過濾器過濾，和/或併入呈無菌固體組成物形式的滅菌劑，該組成物可以在使用前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中。
其他組分另外，設想了該藥物組成物可以包括除了上文所述之那些外的一或多種組分。
該藥物組成物還可以包括一或多種滲透性增強劑分子、碳水化合物、聚合物、治療劑、表面改變劑或其他組分。滲透性增強劑分子可為描述於例如美國專利申請公開案號2005/0222064中之分子。碳水化合物可以包括單糖（例如，葡萄糖）和多糖（例如，糖原及其衍生物和類似物）。
該藥物組成物還可以含有表面改變劑，包括例如陰離子蛋白（例如，牛血清白蛋白）、界面活性劑（例如，陽離子界面活性劑，如二甲基二十八烷基-溴化銨）、糖或糖衍生物（例如，環糊精）、聚合物（例如，肝素、聚乙二醇和泊洛沙姆）、黏液溶解劑（例如，乙醯半胱胺酸、艾蒿（mugwort）、鳳梨蛋白酶、木瓜酶、大青屬（clerodendrum）、溴己新、羧甲司坦、依普拉酮、美司鈉、胺溴索、索布瑞醇、多米奧醇、來托司坦、司替羅寧、硫普羅寧、凝溶膠蛋白、胸腺素β4、阿法鏈道酶、奈替克新和厄多司坦）和DNA酶（例如，rhDNA酶）。表面改變劑可以放置在本文所述之組成物內和/或其表面上。
除了該等組分外，含有本發明之LNP組成物的藥物組成物還可以包括可用於藥物組成物的任何物質。例如，該藥物組成物可以包括一或多種藥學上可接受的賦形劑或輔助成分，如但不限於一或多種溶劑、分散介質、稀釋劑、分散助劑、懸浮助劑、制粒助劑、崩解劑、填充劑、助滑劑、液體媒介物、黏合劑、界面活性劑、等滲劑、增稠劑或乳化劑、緩衝劑、潤滑劑、油、防腐劑和其他種類。還可以包括諸如蠟、黃油、著色劑、包衣劑、調味劑和芳香劑等賦形劑。藥學上可接受的賦形劑係本領域熟知的（參見例如，Remington's [雷明頓] (2006) 同上）。
分散劑可以選自由以下組成之非限制性列表：馬鈴薯澱粉、玉米澱粉、木薯澱粉、澱粉羥乙酸鈉、黏土、海藻酸、瓜爾膠、柑橘渣、瓊脂、膨潤土、纖維素和木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、矽酸鹽、碳酸鈉、交聯聚(乙烯基-吡咯啶酮)（交聚維酮）、羧甲基澱粉鈉（澱粉羥乙酸鈉）、羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉（交聯羧甲纖維素）、甲基纖維素、預膠化澱粉（澱粉1500）、微晶澱粉、水不溶性澱粉、羧甲基纖維素鈣、矽酸鎂鋁（VEEGUM®）、十二烷基硫酸鈉、四級銨化合物和/或其組合。
界面活性劑和/或乳化劑可以包括但不限於天然乳化劑（例如，阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸、海藻酸鈉、黃蓍膠、chondrux、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟和卵磷脂）、膠質黏土（例如，膨潤土 [矽酸鋁] 和VEEGUM® [矽酸鎂鋁]）、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇（例如，硬脂醇、鯨蠟醇、油醇、三醋精單硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、單硬脂酸甘油酯和丙二醇單硬脂酸酯、聚乙烯醇）、卡波姆（例如，羧基聚亞甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯聚合物）、角叉菜膠、纖維素衍生物（例如，羧甲基纖維素鈉、粉狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素）、脫水山梨醇脂肪酸酯（例如，聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯 [TWEEN® 20]、聚氧乙烯脫水山梨醇 [TWEEN® 60]、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯 [TWEEN® 80]、脫水山梨醇單棕櫚酸酯 [SPAN® 40]、脫水山梨醇單硬脂酸酯 [SPAN® 60]、脫水山梨醇三硬脂酸酯 [SPAN® 65]、單油酸甘油酯、脫水山梨醇單油酸酯 [SPAN® 80]）、聚氧乙烯酯（例如，聚氧乙烯單硬脂酸酯 [MYRJ® 45]、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚甲醛硬脂酸酯和SOLUTOL®）、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯（例如，CREMOPHOR®）、聚氧乙烯醚（例如，聚氧乙烯十二烷基醚 [BRIJ® 30]）、聚(乙烯基-吡咯啶酮)、二乙二醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、十二烷基硫酸鈉、PLURONIC®F 68、POLOXAMER® 188、西曲溴銨、西吡氯銨、氯化苄烷銨、多庫酯鈉和/或其組合。
防腐劑的實例可以包括但不限於抗氧化劑、螯合劑、抗微生物防腐劑、抗真菌防腐劑、醇防腐劑、酸性防腐劑和/或其他防腐劑。抗氧化劑之實例包括但不限於α生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥茴醚、丁羥甲苯、單硫代甘油、焦亞硫酸鉀、丙酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸和/或亞硫酸鈉。螯合劑之實例包括乙二胺四乙酸（EDTA）、檸檬酸一水合物、依地酸二鈉、依地酸二鉀、依地酸、富馬酸、蘋果酸、磷酸、依地酸鈉、酒石酸和/或依地酸三鈉。抗微生物防腐劑之實例包括但不限於氯化苄烷銨、氯化苯索寧、苯甲醇、溴硝丙二醇、溴棕三甲銨、西吡氯銨、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、丙三醇、海克替啶、咪脲、酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇和/或硫柳汞。抗真菌防腐劑之實例包括但不限於對羥苯基甲酸丁酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉和/或山梨酸。醇防腐劑之實例包括但不限於乙醇、聚乙二醇、苯甲醇、酚、酚類化合物、雙酚、氯丁醇、羥基苯甲酸酯和/或苯乙醇。酸性防腐劑之實例包括但不限於維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、乙酸、脫氫抗壞血酸、抗壞血酸、山梨酸和/或植酸。其他防腐劑包括但不限於生育酚、乙酸生育酚、甲磺酸去鐵胺、溴棕三甲銨、丁羥茴醚（BHA）、丁羥甲苯（BHT）、乙二胺、十二烷基硫酸鈉（SLS）、十二烷基醚硫酸鈉（SLES）、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸、亞硫酸鉀、焦亞硫酸鉀。
緩衝劑之實例包括但不限於檸檬酸鹽緩衝溶液、乙酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡糖酸鈣、d-葡糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、乳糖醛酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、二鹼式磷酸鈣、磷酸、三鹼式磷酸鈣、磷酸氫氧化鈣、乙酸鉀、氯化鉀、葡糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、乙酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、胺丁三醇、胺基磺酸鹽緩衝液（例如，HEPES）、氫氧化鎂、氫氧化鋁、海藻酸、無熱原水、等滲鹽水、林格氏溶液、乙醇和/或其組合。
在某些實施方式中，該等脂質奈米顆粒組成物及其配製物適於靜脈內、肌內、皮內、皮下、動脈內、腫瘤內或藉由吸入投與。在某些實施方式中，將約0.001 mg/kg至約10 mg/kg的劑量投與於受試者。根據本揭露之組成物可以配製成劑量單位形式以便於投與和劑量的一致性。然而，應理解，本揭露之組成物的總日用量將由主治醫師在合理的醫學判斷範圍內決定。
對於任何特定患者，特定的治療有效、預防有效或在其他方面適當的劑量水平（例如，用於成像）將取決於多種因素，包括所治療障礙（如果有的話）的嚴重程度和身份；所採用的一或多種mRNA；所採用的特定組成物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所採用的特定藥物組成物的投與時間、投與途徑和排泄速率；治療的持續時間；與所採用的特定藥物組成物組合或同時使用的藥物；以及醫學領域熟知的類似因素。
VII. 方法本揭露提供了將有效載荷遞送至靶細胞或組織（例如，受試者之靶細胞或組織）之方法以及用於在這樣的方法中使用的LNP或含有該LNP的藥物組成物。本文中關於例如治療疾病或障礙、或者例如將核酸遞送至細胞、或者例如在細胞中產生目的多肽之方法的任何揭露也應被解釋為關於用於在這樣的方法中使用的LNP或包含該LNP的藥物組成物的揭露。
在另一個方面，本文提供了一種將核酸遞送至免疫細胞（例如，T細胞）之方法，該方法包括在允許該核酸進入該免疫細胞的條件下使該免疫細胞暴露於本文所述之含有該核酸的LNP。
在另一個方面，本文提供了一種將核酸遞送至有需要的受試者之細胞（例如免疫細胞（例如，T細胞））之方法，該方法包括向該受試者投與包含本文所述之含有核酸的LNP的組成物，從而將該核酸遞送至該免疫細胞。
在另一個方面，本文提供了一種將核酸（例如，mRNA）的遞送靶向至受試者之細胞（例如免疫細胞（例如，T細胞））之方法，該方法包括向該受試者投與本文所述之含有該核酸的LNP，以促進將該核酸靶向遞送至該免疫細胞。
在某些實施方式中，本發明提供了在哺乳動物細胞中產生目的多肽（例如，目的蛋白）的方法以及用於在這樣的方法中使用的LNP或含有該LNP的藥物組成物。在這樣的細胞中產生多肽之方法涉及使細胞與包含目的RNA（例如，編碼目的多肽（例如，目的蛋白）的mRNA）的LNP組成物接觸。在使所述細胞與該LNP組成物接觸後，該mRNA可以被吸收並在所述細胞中翻譯以產生目的多肽。
通常，使哺乳動物細胞與包括編碼目的多肽的mRNA的LNP組成物接觸的步驟可以在體內、離體或在體外進行。與細胞接觸的LNP組成物的量和/或其中的mRNA的量可以取決於所接觸細胞或組織的類型、投與方式、該LNP組成物和其中的mRNA的物理化學特徵（例如，大小、電荷和化學成分）以及其他因素。通常，有效量的LNP組成物將允許在該細胞中有效地產生多肽。效率度量可以包括多肽翻譯（由多肽表現指示）、mRNA降解水平和免疫反應指標。
使包括mRNA的LNP組成物與細胞接觸的步驟可以涉及或引起轉染，其中該LNP組成物可以與細胞膜融合以允許將該mRNA遞送至該細胞中。在引入細胞的細胞質中後，然後經由該細胞的細胞質內的蛋白質合成機器將該mRNA翻譯成蛋白質或肽。
在某些實施方式中，本文所述之LNP組成物可以用於將治療劑或預防劑遞送至受試者。例如，LNP組成物中包括的mRNA可以編碼多肽並在接觸和/或進入（例如，轉染）細胞時產生治療性或預防性多肽。在某些實施方式中，本發明之LNP組成物中包括的mRNA可以編碼可改進或增加受試者之免疫力的多肽。
在某些實施方式中，使細胞與包括mRNA的LNP組成物接觸可以降低細胞對外源核酸的先天免疫反應。可以使細胞與包括第一量的第一外源mRNA的第一LNP組成物接觸，該第一外源mRNA包括可翻譯區，並且可以確定該細胞對該第一外源mRNA的先天免疫反應水平。隨後，可以使該細胞與包括第二量的第一外源mRNA的第二組成物接觸，與第一量相比，第二量係較少量的第一外源mRNA。可替代地，該第二組成物可以包括第一量的不同於該第一外源mRNA的第二外源mRNA。使該細胞與該第一組成物和該第二組成物接觸的步驟可以重複一次或多次。
另外，可以視需要確定該細胞中多肽產生的效率，並且可以使該細胞與該第一組成物和/或該第二組成物重複地再次接觸，直到達到靶蛋白質產生效率。
本揭露提供了將核酸（例如，mRNA）遞送至哺乳動物細胞或組織（例如，受試者之哺乳動物細胞或組織）之方法。將mRNA遞送至這樣的細胞或組織涉及將包括該mRNA的LNP組成物投與於受試者，例如藉由注射（例如，經由肌內注射）或血管內遞送至該受試者。在投與後，該LNP可以靶向和/或接觸細胞，例如免疫細胞，如T細胞。在使該細胞與該LNP組成物接觸後，可翻譯mRNA可以在該細胞中翻譯以產生目的多肽。
在某些實施方式中，本發明之LNP組成物可以靶向特定類型或類別的細胞。可以使用本文所述之脂質促進這種靶向以形成LNP，其還可以包括用於靶向目的細胞的靶向基團。在某些實施方式中，特異性遞送可以導致與其他目標（例如，不表現或僅以低水平表現目的受體的細胞）相比，到達靶向目標（例如，表現或以高水平表現與該LNP的免疫細胞靶向基團結合之目的受體的細胞）的mRNA的量增加大於2倍、5倍、10倍、15倍或20倍。
本發明之LNP組成物可用於治療特徵在於蛋白質或多肽活性缺失或異常的疾病、障礙或病症。在將編碼缺失或異常多肽的mRNA遞送至細胞後，該mRNA的翻譯可以產生該多肽，從而減少或消除由該多肽的缺失或由該多肽引起的活性異常引起的問題。因為翻譯可以快速發生，所以本發明之方法和組成物可用於治療急性疾病、障礙或病症，如膿毒症、中風和心肌梗死。本發明之LNP組成物中包括的mRNA也能夠改變給定種類的轉錄速率，從而影響基因表現。
可以投與本發明之組成物之特徵在於蛋白質或多肽活性功能失調或異常的疾病、障礙和/或病症包括但不限於癌症和增殖性疾病、遺傳性疾病（例如，囊性纖維化）、自體免疫性疾病、糖尿病、神經退化性疾病、心血管和腎血管疾病以及代謝性疾病。多種疾病、障礙和/或病症的特徵可以在於蛋白質活性缺失（或大幅減少，使得無法發揮正確的蛋白質功能）。這樣的蛋白質可能不存在，或者它們可能基本上是非功能性的。功能異常蛋白的特定實例係囊性纖維化跨膜傳導調節蛋白（CFTR）基因的誤義突變變體，其產生CFTR蛋白的功能異常蛋白變體，這導致囊性纖維化。本揭露提供了用於藉由投與包括mRNA和脂質組分的LNP組成物來治療受試者之這樣的疾病、障礙和/或病症之方法，該脂質組分包括KL10、磷脂（視需要不飽和的）、PEG脂質和結構脂質，其中該mRNA編碼拮抗或以其他方式克服該受試者之細胞中存在的異常蛋白質活性的多肽。
本文所述之治療性和/或預防性組成物可以使用有效地預防、治療、診斷或成像疾病、障礙和/或病症和/或任何其他目的的任何合理的量和任何投與途徑投與於受試者。投與於給定受試者之特定量可以根據受試者之物種、年齡和一般狀況、投與目的、特定組成物、投與方式等而變化。根據本揭露之組成物可以配製成劑量單位形式以便於投與和劑量的一致性。然而，應理解，本揭露之組成物的總日用量將由主治醫師在合理的醫學判斷範圍內決定。
可以藉由多種途徑投與包括一或多種mRNA的LNP組成物，例如口服、靜脈內、肌內、動脈內、髓內、鞘內、皮下、室內、經皮或皮內、皮內、經直腸、陰道內、腹膜內、局部、經黏膜、經鼻、或腫瘤內投與。在某些實施方式中，可以靜脈內、肌內、皮內、動脈內、腫瘤內或皮下投與LNP組成物。然而，本揭露涵蓋藉由任何適當的途徑遞送本發明之LNP組成物（考慮到藥物遞送科學的可能進步）。通常，最適當的投與途徑將取決於多種因素，包括包含一或多種mRNA的LNP組成物的性質（例如，它在諸如血流和胃腸道等各種身體環境中之穩定性）、患者的情況（例如，患者是否能夠耐受特定的投與途徑）等。
包括一或多種mRNA的LNP組成物可以與一或多種其他治療劑、預防劑、診斷劑或成像劑組合使用。「與……組合」並不旨在暗示藥劑必須同時投與和/或被配製以供一起遞送，但該等遞送方法在本揭露之範圍內。例如，包括一或多種不同mRNA的一或多種LNP組成物可以組合投與。組成物可以與一或多種其他所期望的治療劑或醫療程序同時、在其之前或在其之後投與。通常，每種藥劑將以針對該藥劑確定的劑量和/或時間表來投與。在一些實施方式中，本揭露涵蓋與這樣的藥劑組合遞送本發明之組成物或者其成像、診斷或預防組成物，該藥劑改進其生體可用率、降低和/或修飾其代謝、抑制其排泄和/或修飾其在體內的分佈。
應進一步理解的是，組合利用的治療、預防、診斷或成像活性劑可以在單一組成物中一起投與或者在不同組成物中單獨投與。通常，期望組合利用的藥劑將以不超過單獨利用它們時的水平的水平來利用。在一些實施方式中，組合利用的水平可以低於單獨利用的水平。
在組合方案中將採用的特定療法（治療劑或程序）組合將考慮所期望的治療劑和/或程序的相容性以及待實現的所期望治療效果。還應理解的是，所採用的療法可以實現對相同障礙的期望效果（例如，可用於治療癌症的組成物可以與化學治療劑同時投與），或者它們可以實現不同的效果（例如，控制任何有害作用）。
在一些實施方式中，不超過1%、不超過2%、不超過3%、不超過4%、不超過5%、不超過6%、不超過7%、不超過8%、不超過9%、不超過10%、不超過15%、不超過20%、不超過25%、不超過30%、不超過35%、不超過40%、不超過45%或不超過50%的不意在成為該遞送的目標的細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，不意在成為該遞送的目標的細胞係受試者之非免疫細胞。在一些實施方式中，不超過5%的非免疫細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，不意在成為該遞送的目標的細胞係不被該方法靶向的細胞。在一些實施方式中，不意在成為該遞送的目標的細胞係不被該方法靶向的受試者細胞。
在一些實施方式中，由本文所述之LNP遞送至該免疫細胞的核酸或由該LNP遞送的核酸所編碼且在該免疫細胞中表現的多肽之半衰期比由參考LNP遞送至該免疫細胞的核酸或由該參考LNP遞送的核酸所編碼且在該免疫細胞中表現的多肽之半衰期長至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍。在一些實施方式中，由該LNP遞送的核酸或由該LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期比由參考LNP遞送的核酸或由該參考LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期長至少10%。
在一些實施方式中，LNP的組成物與該參考LNP的組成物在以下方面不同：可電離陽離子脂質的類型、可電離陽離子脂質的相對量、PEG脂質中脂錨鉤的長度、PEG脂質的骨架或頭基、PEG脂質的相對量或免疫細胞靶向基團的類型或其任何組合。在一些實施方式中，LNP的組成物與該參考LNP的組成物僅在可電離陽離子脂質的類型方面不同。在一些實施方式中，LNP的組成物與該參考LNP的組成物僅在PEG脂質的量方面不同。在一些實施方式中，參考LNP包含陽離子脂質DLin-KC3-DMA，但是在其他方面與所測試的LNP相同。在一些實施方式中，參考LNP包含陽離子脂質DLin-KC2-DMA，但是在其他方面與所測試的LNP相同。在一些實施方式中，參考LNP包含陽離子脂質ALC-0315，但是在其他方面與所測試的LNP相同。在一些實施方式中，參考LNP包含陽離子脂質SM-102，但是在其他方面與所測試的LNP相同。在一些實施方式中，PEG脂質係游離PEG脂質。
在一些實施方式中，至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%的免疫細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，至少10%的免疫細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，免疫細胞係受試者之免疫細胞。在一些實施方式中，免疫細胞係被該方法靶向的免疫細胞。在一些實施方式中，免疫細胞係被該方法靶向的受試者免疫細胞。
在一些實施方式中，由該LNP遞送的核酸的表現水平比由參考LNP遞送的核酸的表現水平高至少1%、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。在一些實施方式中，由該LNP遞送的核酸的表現水平比由參考LNP遞送的核酸的表現水平高至少10%。在一些實施方式中，用本文所述之方法測量和比較表現水平。在一些實施方式中，藉由表現所編碼多肽的細胞的比率來測量表現水平。在一些實施方式中，用FACS測量表現水平。在一些實施方式中，藉由在細胞中表現的所編碼多肽的平均量來測量表現水平。在一些實施方式中，表現水平被測量為平均螢光強度。在一些實施方式中，藉由所編碼多肽或由細胞分泌的其他材料的量來測量表現水平。
在另一個方面，本文提供了將核酸的遞送靶向至受試者之免疫細胞之方法。在一些實施方式中，該方法包括使該免疫細胞與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。在一些實施方式中，LNP包含可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該LNP包含含有以下式 (II) 的化合物的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]。
在一些實施方式中，LNP包含固醇或其他結構脂質。在一些實施方式中，LNP包含中性磷脂。在一些實施方式中，LNP包含游離聚乙二醇（PEG）脂質。在一些實施方式中，LNP包含該核酸。
在一些實施方式中，本揭露之一個方面涉及如本文所揭露的LNP或含有其的藥物組成物，用於在將核酸的遞送靶向至受試者之免疫細胞的方法中使用。這樣的方法可以用於治療如本文所揭露的疾病或障礙。在一些實施方式中，如本文所揭露的方法可以包括使受試者之免疫細胞在體外或離體地與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。在一些實施方式中，在本揭露該LNP係如中本文所述之LNP。
在一些實施方式中，LNP提供以下益處中之至少一種：(i) 與參考LNP相比，靶向遞送至該免疫細胞的特異性增加；(ii) 與參考LNP相比，該核酸或由該核酸編碼的多肽在該免疫細胞中之半衰期增加；(iii) 與參考LNP相比，轉染率增加；並且(iv) 低水平的染料可及mRNA（＜ 15%）和高RNA封裝效率，其中相對於在LNP批量製備中使用的總RNA，在最終配製物中回收至少80%的mRNA。
在一些方面，提供了在受試者之靶向免疫細胞中表現目的多肽之方法。在一些實施方式中，該方法包括使該免疫細胞與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。在一些實施方式中，LNP包含可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該LNP包含含有以下式 (II) 的結構的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]。
在一些實施方式中，LNP包含固醇或其他結構脂質。在一些實施方式中，LNP包含中性磷脂。在一些實施方式中，LNP包含游離聚乙二醇（PEG）脂質。在一些實施方式中，LNP包含編碼該多肽的核酸。在一些實施方式中，本揭露之一個方面涉及如本文所揭露的LNP或含有其的藥物組成物，用於在受試者之靶向免疫細胞中表現目的多肽的方法中使用。這樣的方法可以用於治療如本文所揭露的疾病或障礙。在一些實施方式中，如本文所揭露的方法可以包括使受試者之免疫細胞在體外或離體地與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。
在一些實施方式中，LNP提供以下益處中之至少一種：(i) 與參考LNP相比，在該免疫細胞中之表現水平增加；(ii) 與參考LNP相比，在該免疫細胞中表現的特異性增加；(iii) 與參考LNP相比，該核酸或由該核酸編碼的多肽在該免疫細胞中之半衰期增加；(iv) 與參考LNP相比，轉染率增加；以及(v) 低水平的染料可及mRNA（＜ 15%）和高RNA封裝效率，其中相對於在LNP批量製備中使用的總RNA，在最終配製物中回收至少80%的mRNA。
在一些方面，提供了調節受試者之靶免疫細胞的細胞功能之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與脂質奈米顆粒（LNP）。在一些實施方式中，LNP包含可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該LNP包含含有以下式 (II) 的結構的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]。
在一些實施方式中，LNP包含固醇或其他結構脂質。在一些實施方式中，LNP包含中性磷脂。在一些實施方式中，LNP包含游離聚乙二醇（PEG）脂質。在一些實施方式中，LNP包含編碼用於調節該免疫細胞的細胞功能的多肽的核酸。在一些實施方式中，本揭露之一個方面涉及如本文所揭露的LNP或含有其的藥物組成物，用於在調節受試者之靶向免疫細胞的細胞功能的方法中使用。這樣的方法可以用於治療如本文所揭露的疾病或障礙。在一些實施方式中，如本文所揭露的方法可以包括使受試者之免疫細胞在體外或離體地與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。
在一些實施方式中，LNP提供以下益處中之至少一種：(i) 與參考LNP相比，在該免疫細胞中之表現水平增加；(ii) 與參考LNP相比，在該免疫細胞中表現的特異性增加；(iii) 與參考LNP相比，該核酸或由該核酸編碼的多肽在該免疫細胞中之半衰期增加；(iv) 與參考LNP相比，轉染率增加；(v) 該LNP能夠以與參考LNP相比更低的劑量投與，以在該免疫細胞中實現相同的生物學作用；以及(vi) 低水平的染料可及mRNA（＜ 15%）和高RNA封裝效率，其中相對於在LNP批量製備中使用的總RNA，在最終配製物中回收至少80%的mRNA。
在一些實施方式中，細胞功能的調節包括對該免疫細胞進行重新程序設計以啟動免疫反應。在一些實施方式中，細胞功能的調節包括調節該免疫細胞的抗原特異性。
在一些方面，提供了治療、改善或預防有需要的受試者之障礙或疾病的症狀之方法。在本文所述之關於藉由投與例如本發明之LNP來治療、改善和/或預防障礙或疾病的症狀之方法的任何實施方式中，該揭露旨在還被解釋為提供例如LNP，用於在治療、改善和/或預防障礙或疾病的症狀的所述方法中使用。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與脂質奈米顆粒（LNP）以將核酸遞送至該受試者之免疫細胞。在一些實施方式中，LNP包含可電離陽離子脂質。在一些實施方式中，該LNP包含含有以下式 (II) 的結構的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]。
在一些實施方式中，LNP包含固醇或其他結構脂質。在一些實施方式中，LNP包含中性磷脂。在一些實施方式中，LNP包含游離聚乙二醇（PEG）脂質。在一些實施方式中，LNP包含該核酸。
在一些實施方式中，核酸調節該免疫細胞的免疫反應，從而治療或改善該症狀。在一些實施方式中，本揭露之一個方面涉及如本文所揭露的LNP或含有其的藥物組成物，用於在治療、改善或預防有需要的受試者之障礙或疾病的症狀的方法中使用。疾病或障礙可以如本文所揭露。在一些實施方式中，如本文所揭露的方法可以包括使受試者之免疫細胞在體外或離體地與脂質奈米顆粒（LNP）接觸。
在一些實施方式中，LNP提供以下益處中之至少一種：(i) 與參考LNP相比，將該核酸遞送至該免疫細胞的特異性增加；(ii) 與參考LNP相比，該核酸或由該核酸編碼的多肽在該免疫細胞中之半衰期增加；(iii) 與參考LNP相比，轉染率增加；(iv) 該LNP可以以與參考LNP相比更低的劑量投與，以達到相同的治療功效；(v) 與參考LNP相比，免疫細胞的功能獲得水平增加；以及(vi) 低水平的染料可及mRNA（＜ 15%）和高RNA封裝效率，其中相對於在LNP批量製備中使用的總RNA，在最終配製物中回收至少80%的mRNA。
在一些實施方式中，該障礙係免疫障礙、炎性障礙或癌症。在一些實施方式中，核酸編碼用於在治療或預防病原體感染的治療性或預防性疫苗中使用的抗原。
在一些實施方式中，不超過1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的非免疫細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，不超過1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%的不意在成為該遞送的目標的不希望的免疫細胞被該LNP轉染。在一些實施方式中，由該LNP遞送至該免疫細胞的核酸或由該LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期比由參考LNP遞送至該免疫細胞的核酸或由該參考LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期長至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更長。
在一些實施方式中，至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或更多的意在成為該遞送的目標的免疫細胞被該LNP轉染。
在一些實施方式中，由該LNP遞送的核酸的表現水平比由參考LNP遞送的核酸在相同免疫細胞中之表現水平高至少5%、至少10%、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍或更多。
在一個方面，提供了用於將核酸遞送至受試者之NK細胞的脂質奈米顆粒（LNP）。LNP包含：(a) 可電離陽離子脂質，(b) 包含以下式 (II) 的結構的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]；(c) 固醇或其他結構脂質；(d) 中性磷脂；(e) 游離聚乙二醇（PEG）脂質；以及(f) 該核酸。在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含結合CD56的抗體。
在一個方面，提供了用於將核酸遞送至受試者之免疫細胞的脂質奈米顆粒（LNP）。LNP包含：(a) 可電離陽離子脂質；(b) 包含以下結構的偶聯物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]；(c) 固醇或其他結構脂質；(d) 中性磷脂；(e) 游離聚乙二醇（PEG）脂質；以及(f) 該核酸。
在一些實施方式中，該免疫細胞靶向基團包含結合CD7或CD8的抗體，並且該游離PEG脂質係DMG-PEG或DPG-PEG。
在一些方面，提供了將核酸的遞送靶向至受試者之免疫細胞之方法。在一些實施方式中，該方法包括使該免疫細胞與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）接觸。在一些實施方式中，該方法用於靶向NK細胞。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團與CD56結合。在一些實施方式中，該方法用於同時靶向T細胞和NK細胞兩者。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團與CD7、CD8或CD7和CD8兩者結合。在一些實施方式中，該方法用於同時靶向CD4+和CD8+ T細胞兩者。在一些實施方式中，免疫細胞靶向基團包含與CD3或CD7結合的多肽。
在一些方面，提供了在受試者之靶向免疫細胞中表現目的多肽之方法。在一些實施方式中，該方法包括使該免疫細胞與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）接觸。
在一些方面，提供了調節受試者之靶免疫細胞的細胞功能之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）。
在一些方面，提供了治療、改善或預防有需要的受試者之障礙或疾病的症狀之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與本文提供的脂質奈米顆粒（LNP）。
在一些方面，提供了治療受試者之與CD8相關的疾病或障礙之方法。在一些實施方式中，該方法包括向該受試者投與本文所述之藥物組成物。在一些實施方式中，該疾病或障礙係癌症。
本揭露中揭露的和所要求保護的LNP適用於上述方法。
VIII. 用於在醫療應用中使用的套組本發明之另一個方面提供了用於治療障礙的套組。該套組包含：可電離陽離子脂質、脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物、包含可電離陽離子脂質和/或脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物的脂質奈米顆粒組成物（具有或沒有封裝的有效載荷（例如，mRNA））、以及用於治療醫學障礙（如癌症或者微生物或病毒感染）的說明書。實例
本揭露舉例說明了本文所述之組成物、製劑、配製物、奈米顆粒和/或奈米材料。本揭露還舉例說明了製備、表徵和驗證本文所述之組成物、製劑、配製物、奈米顆粒和/或奈米材料之方法。
實例 1 ：材料與方法本實例提供了製備、表徵和驗證本文所述之組成物、製劑、奈米顆粒和/或奈米材料之示例性材料以及方法。
LNP 製劑尤其是，本實例提供了示例性LNP製劑。
將脂質奈米顆粒組分以指定的脂質組分莫耳比率溶解在100%乙醇中。將核酸（NA）貨物溶解在10 mM檸檬酸鹽、100 mM NaCl（pH 4.0）中，導致NA貨物的濃度大約為0.22 mg/mL。在一些實施方式中，NA貨物包括功能性NA和報告DNA條碼，兩者以功能性NA比條碼的品質比率1:10至10:1混合。如本文所述，NA可為siRNA、反義、表現型DNA或mRNA。
採用11.7的總脂質比NA品質比率來製備LNP。根據製造商的方案，使用Precision Nanosystems NanoAssemblr Spark或Benchtop系列儀器藉由脂質和NA溶液的微流體混合形成LNP。在使用不同流速的混合期間，水性溶劑比有機溶劑的比率保持在大約2:1或3:1。混合後，收集LNP，用PBS稀釋（大約1:1 v/v）。通過20 kDa過濾器使用在4°C下在PBS中透析4至24小時進行進一步的緩衝液交換。初始透析後，經由動態光散射（DLS）對各個LNP製劑進行表徵，以測量大小（例如，直徑）和多分散性。此外，LNP亞群的pKa經由2-(對甲苯胺基)-6-萘磺酸（TNS）測定進行測量。將在特定直徑和多分散性範圍內的LNP合併，並在4°C下通過100 kDa透析盒用磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）進一步透析1至4小時。第二次透析後，使用0.22 μM過濾器對LNP進行無菌過濾並儲存在4°C下以供進一步使用。
LNP 表徵DLS - LNP流體動力學直徑和多分散性指數（PDI）使用高通量動態光散射（DLS）（DynaPro酶標儀II，懷亞特公司（Wyatt））進行測量。LNP用IX PBS稀釋至適當的濃度並進行分析。根據製造商的說明，NA濃度藉由Qubit微RNA套組（用於siRNA）或HS RNA套組（用於mRNA）來測定。封裝效率藉由測量未裂解和裂解的LNP中之核酸濃度來測定。
pKa製備10 mM HEPES（西格瑪奧德里奇公司（Sigma Aldrich））、10 mM MES（西格瑪奧德里奇公司）、10 mM乙酸鈉（西格瑪公司（Sigma））和140 nM氯化鈉（西格瑪奧德里奇公司）的儲備溶液，並使用氯化氫和氫氧化鈉將pH調節至約pH 4-10的範圍。每個pH值重複四次，將140 pL的pH經調節的緩衝液添加至96孔板中，隨後添加5 pL 2-(對甲苯胺基)-6-萘磺酸（60 pg/mL）。每孔添加5 pL LNP。在輕柔振盪下孵育5分鐘後，使用325 nm的激發波長和435 nm的發射波長（BioTek Synergy H4 Hybrid）測量螢光。
LNP 投與將大約8-12週齡的雄性和雌性小鼠用於由本實例描述的研究。每隻小鼠被暫時束縛，並且將合併的LNP經由尾靜脈注射進行靜脈內投與（IV），每次實驗多達五隻動物。年齡匹配的小鼠還用於經由尾靜脈注射投與媒劑（IX PBS），每次實驗多達三隻動物。給藥後72小時，收集包括肝、脾、骨髓、腎、肺、肌肉和血液的組織用於分析。
流對肝、腎、肺和肌肉組織進行機械消化，然後使用蛋白酶混合物進行酶消化，然後通過70 uM過濾器生成單細胞懸浮液。脾組織被機械消化以產生單細胞懸浮液。所有組織均用（銨-氯-鉀）ACK緩衝液處理以裂解紅血球，然後用經螢光標記的抗體染色以進行流動式細胞分析術和螢光激活細胞分選（FACS）。使用市售抗體。使用BD FACSMelody（碧迪醫療公司（Becton Dickinson）），經由流動式細胞分析術採集樣本以在分選之前生成門控。一般而言，門控結構為大小-＞單個細胞-＞活細胞-＞目的細胞。T細胞被定義為CD45+CD3+，單核細胞被定義為CD45+CDllb+，以及B細胞被定義為CD45+CD19+。內皮細胞被定義為CD31+，單核細胞和庫普弗細胞被定義為CD45+CDllb+，以及肝細胞被定義為CD31-/CD45-。對於siRNA研究，靶基因的下調被門控。對於mRNA研究，靶基因的上調被門控。使用來自媒劑給藥小鼠的組織來設置分選門控。每個細胞亞群中具有正確表型的多達100萬個細胞被分選到PBS中。分選後，經由離心使細胞沈澱，並根據製造商的方案使用Quick Extract DNA提取溶液（路西根公司（Lucigen））提取DNA。DNA提取後，將DNA儲存在-20°C下。
濃度和封裝效率根據製造商的說明，NA濃度藉由Qubit微RNA套組（用於siRNA）或HS RNA套組（用於mRNA）來測定。封裝效率藉由測量未裂解和裂解的LNP來確定。
hEPO 表現對於人EPO（hEPO）蛋白表現，小鼠在投與後6小時被暫時束縛並采血（經由尾靜脈）。將血液收集在肝素管中，加工成血漿，並儲存在-80°C下直至準備使用。根據製造商的說明，適當稀釋的血漿用於使用R&D系統公司ELISA套組（DuoSet；DY286-05）測量hEPO蛋白。
耐受性 ALT/AST 定量對於大鼠天冬胺酸轉胺酶（AST）和丙胺酸轉胺酶（ALT）定量，大鼠在投與後2、4、6、24、48和72小時被暫時束縛並采血。將血液收集在肝素管中，加工成血漿，並儲存在-80°C下直至準備使用。根據製造商的說明，使用AST/GOT試劑（賽默飛世爾科技公司（ThermoFisher），TR70121）定量AST，並使用ALT/GPT試劑（賽默飛世爾科技公司，TR71121）定量ALT。
RatMCP-I ELISA對於大鼠單核細胞趨化蛋白-1（MCP-I）蛋白表現，大鼠在投與後2、4、6、24、48和72小時被暫時束縛並采血。將血液收集在肝素管中，加工成血漿，並儲存在-80°C下直至準備使用。根據製造商的說明，適當稀釋的血漿用於使用R&D系統公司ELISA套組（DuoSet；DY3144-05）測量MCP-I蛋白。
實例 2 ：效力可以如該實例中所述來測定具有至各種細胞類型的有效遞送之示例性LNP製劑。
本實例提供了用於有效遞送至本文所述之各種細胞類型之示例性LNP組成物、製劑、奈米顆粒和/或奈米材料。
基於衍生自Screen之結果，鑒定了幾種脂質示例性LNP製劑用於脾遞送，並且特別是用於B細胞遞送。該等鑒定出的脂質被配製到LNP製劑中，並使用Cre報告系統進行篩選。每組使用三隻Ai 14小鼠。有效載荷包含0.3 mg/kg Cre mRNA。注射後168小時收集數據。將結果與作為對照的ALC-315 LNP製劑進行比較。
實例 3 ： 脂質奈米顆粒組成物的製備製備LNP組成物以產生可電離的脂質：結構脂質: 固醇脂質: PEG-脂質，莫耳比率分別是33:39.9:25.4:1.5。將脂質以以下比率混合並溶解在乙醇（有機相）中。使用不含RNA酶的水和500 mM檸檬酸鹽pH 4緩衝液製備mRNA相（水相），以達到10 mM檸檬酸鹽和0.12 mg/ml mRNA的最終濃度。
對於每種LNP組成物，脂質和mRNA在NanoAssemblr Ignite上以3:1體積比率以12 ml/min的流速混合。將樣本載入至Slide-a-Lyzer G3透析盒（10k MWCO）中，並在室溫下透析至200倍樣本體積的1x TBS（從20x原液（賽默飛世爾科技公司）稀釋）中2小時。然後將透析緩衝液更換為新鮮的1x TBS緩衝液，並在4°C下透析過夜至少12小時。然後收集透析樣本並使用Amicon超速離心過濾器（100k MWCO）以2000g進行濃縮。然後使用0.2 um mPES過濾器對濃縮的樣本進行無菌過濾。然後使用Ribogreen RNA測定套組（賽默飛世爾科技公司）對樣本進行分析，包括大小和多分散性（瑪律文帕納科公司（Malvern Panalytical））以及用於封裝的mRNA
實例 4 ：靶向 LNP 配製方案製備LNP組成物以產生可電離的脂質：結構脂質: 固醇脂質: PEG-脂質: DSPE PEG FAB:DSPE PEG疊氮化物，莫耳比率分別是33:39.9:25.4:1.5:0.05:0.1。將mRNA懸浮在10 mM檸檬酸鹽pH 4緩衝液（水相）中。將可電離脂質、結構脂質和膽固醇溶解在乙醇流（有機相）中。將含有少量DSPE PEG疊氮化物和DMG PEG 2000的DSPE PEG Fab溶解在稀釋流（稀釋相）中之1x TBS中。然後將LNP以水相比有機相比稀釋相的3:1:4比率混合。
實例 5 ：用於 LNP 分析的 Ribogreen將配製物中使用的mRNA使用TE緩衝液稀釋至2 μg/mL，然後連續稀釋至1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.25 μg/mL、0.125 μg/mL。產生了兩條標準曲線，一條在TE緩衝液中，另一條在4% Triton緩衝液（TX）中。使用TE將已濃縮並無菌過濾的LNP稀釋兩次，以擬合TE和TX標準曲線。將樣本載入到96孔板上，並向孔中添加TE或4% Triton緩衝液。將Ribogreen染料用TE緩衝液稀釋1:200倍，然後添加至所有孔中。然後將板在酶標儀上、在37°C下震盪孵育3分鐘，然後在酶標儀上讀數。
實例 6 ：流方案8-10週齡的C57BL/6動物（庫存編號：000664）獲自JAX，並被允許適應至少3天的時間。以10 uL/克體重的劑量體積靜脈內投與含有一定劑量範圍的eGFP mRNA的脂質奈米顆粒（LNP）配製物。給藥後16小時，動物被安樂死，收集末梢血液和脾並加工用於流動式細胞分析術。
使用FlowJo分析流數據，並對每個樣本針對單個活細胞和T細胞亞群（CD4和CD8）進行門控。計算每個實驗組的GFP表現，並將GFP+細胞報告為總T細胞、T細胞亞型和非T細胞的百分比。還計算了所有活細胞的GFP表現以及跨不同細胞群的MFI。
實例 7 ：靶向脂質將靶向劑（例如，Ab、scFv或Fab）與靶向LNP締合，使LNP表面官能化。根據本領域已知的方法激活與LNP上存在的點擊化學互補的靶向劑上的點擊柄。例如，包含1,2-二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-PEG-四𠯤（DSPE-PEG-Tz）的LNP與用互補的反式環辛烯（TCO）點擊柄特異性或非特異性修飾的靶向劑締合。將1 μM靶向分子（例如，抗CD5Fab、scFV或Ab或抗CD8Fab、scFv或Ab）添加至LNP中，並且根據本領域已知的方法在室溫下進行點擊化學締合16小時。藉由使LNP藉由使用Sephacryl 400樹脂的粒徑排阻層析（SEC）柱去除未締合的抗體。
SPAAC偶聯：Fab'-DBCO：經由馬來醯亞胺基團和輕鏈（LC）中C末端半胱胺酸之間的共價偶合，將Fab’與DBCO-PEG3-馬來醯亞胺偶聯。用1 M碳酸氫鈉緩衝液（pH 9.0）中和蛋白質（乙酸鈉緩衝液（pH 5.5）中之5-7 mg/mL），隨後添加1.2莫耳當量的DBCO-PEG3-Mal，在室溫下反應2小時。藉由PD-10脫鹽柱去除過量的DBCO-PEG3-Mal。
DSPE-PEG2000-Fab：使用3莫耳當量的DBCO-PEG3-N3（艾萬提極性脂質公司（Avanti Polar Lipids））和Fab-DBCO在pH 7.4磷酸鹽緩衝液中在室溫下進行偶聯反應12-16小時。藉由SDS-PAGE和LC-MS監測所得偶聯物的產生。使用pH 7.4磷酸鹽緩衝液，使用100 kDa Millipore再生纖維素膜過濾分離所得的偶聯物，並在使用前在4°C儲存。
實例 8 ：可電離脂質的合成本實例提供了製備、表徵和驗證本文所述之可電離脂質之示例性材料和方法。如下文實例中所述，在某些示例性實施方式中，根據以下一般程序製備化合物。應當理解，雖然一般方法描繪了本揭露之某些化合物的合成，但是以下一般方法和熟悉該項技術者之一已知的其他方法可以應用於所有化合物以及該等化合物中之每一種的亞類和種類，如本文所述。
以下示例脂質係根據以下合成方案製備的。
方案 1 （中間體） 方案 2 – A 類化合物的代表性合成脂質A-4脂質A-31 方案 2a 方案 3 – B 類化合物的代表性合成脂質B-9脂質B-11、B-12和B-13脂質B-10 方案 4 – C 類化合物的代表性合成脂質C-15脂質C-26 方案 5 – E 類化合物的代表性合成脂質E-1脂質E-3 製備化合物 2 的一般程序 向化合物1（100 g，780 mmol）在MeOH（300 mL）和H2O（600 mL）中之溶液中添加NaOAc（128 g，1.56 mol）和NH2OH.HCl（108 g，1.56 mol）。將混合物在70°C下攪拌6小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.49，起始材料：Rf= 0.59）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除MeOH。將殘餘物用H2O（500 mL）稀釋並用EtOAc（300 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 10/1至1/1）純化。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物2（108 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-12-P1A1（400 MHz，DMSO-d6 ）δ= 10.61 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.97 (br d, J = 14.3 Hz, 1H), 1.99 (s, 1H), 1.59 - 1.77 (m, 3H), 1.48 (br s, 2H), 1.25 (br s, 1H)
製備化合物 3 的一般程序 向化合物2（108 g，754 mmol）在CCl4（1.00 L）中之溶液中添加SOCl2（108 g，905 mmol）和MeOH（1.00 L）。將混合物在0-5°C攪拌2小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.55，起始材料：Rf= 0.59）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用EtOAc 3.00 L稀釋並用鹽水2.00 L洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈棕色油狀物的化合物3（107 g，粗品）。
製備化合物 4 的一般程序 向化合物3（40.0 g，254 mmol）在化合物3A（133 g，1.01 mol）中之溶液中添加PPTS（9.60 g，38.2 mmol）。將混合物在120°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.63，起始材料：Rf= 0.28）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 200/1至80/1）純化。獲得呈無色油狀物的化合物4（30.0 g，84.9 mmol，33.4%產率）。 1 H NMR ：ET89868-26-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.46 (s, 1H), 3.56 (s, 2H), 3.42 (s, 2H), 2.35 (s, 2H), 1.56 (br d, J = 7.0 Hz, 10H), 1.24 - 1.37 (m, 20H), 0.89 (s, 6H)
製備化合物 5 的一般程序 向化合物4（30.0 g，84.9 mmol）在EtOH（150 mL）和H2O（150 mL）中之溶液中添加KOH（38.1 g，679 mmol）。將混合物在110°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.53，起始材料：Rf= 0.76）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除EtOH。將殘餘物用H2O 300 mL稀釋，並使用1M HCl酸化至PH = 5。然後，將混合物用EtOAc 900 mL（300 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物5（31.6 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-32-P1B1（400 MHz，DMSO-d6 ）δ= 4.39 (br s, 1H), 3.27 - 3.52 (m, 4H), 2.10 (br s, 2H), 1.46 (br s, 8H), 1.25 (br s, 22H), 0.85 (br s, 6H)
製備化合物 6 的一般程序 向化合物5（31.6 g，84.8 mmol）在DCM（300 mL）中之溶液中添加化合物5A（3.47 g，38.6 mmol）、EDCI（22.2 g，116 mmol）和DMAP（1.18 g，9.64 mmol）。將混合物在25°C下攪拌10小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.63，起始材料：Rf= 0.51）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM。將殘餘物用H2O 200 mL洗滌，然後用石油醚900 mL（300 mL x 3）萃取。將合併的有機層用200 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物6（33.0 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-35-P1A2（400 MHz，CDCl3）δ= 4.75 (s, 4H), 4.46 (s, 2H), 3.55 (s, 4H), 3.41 (s, 4H), 2.44 (s, 4H), 1.56 (br s, 18H), 1.28 (br s, 42H), 0.89 (s, 12H)
製備化合物 7 的一般程序 向化合物6（8.00 g，10.0 mmol）在DCM（80.0 mL）中之溶液中添加化合物6A（2.05 g，20.0 mmol）、NaBH(OAc)3（6.36 g，30.0 mmol）和HOAc（90.2 mg，1.50 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 1.701 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 200 mL洗滌，並用EtOAc 900 mL（300 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO3200 mL和鹽水200 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至50/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7（4.60 g，5.20 mmol，51.9%產率）。
製備化合物 9 的一般程序 向化合物8（10.0 g，63.2 mmol）在THF（10.0 mL）中之溶液中添加DMAP（7.72 g，63.2 mmol）、吡啶（9.99 g，126 mmol）和四氫呋喃-2,5-二酮（12.6 g，126 mmol）。將混合物在50°C下攪拌8小時。將混合物在70°C下攪拌6小時。LCMS（產物RT = 1.717 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除THF，然後將殘餘物用H2O 150 mL洗滌，並用MTBE 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層用50 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 10/1至1/1）純化。獲得呈黃色油狀的化合物9（10.0 g，38.7 mmol，61.3%產率）。 1 H NMR ：ET89868-6-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 12.17 (br s, 1H), 4.79 (s, 1H), 2.46 (s, 4H), 1.41 - 1.50 (m, 4H), 1.23 (br s, 10H), 0.85 (s, 6H)
製備 A-31 的一般程序 向化合物7（4.50 g，5.08 mmol）在DCM（45.0 mL）中之溶液中添加化合物9（1.97 g，7.62 mmol）、EDCI（1.95 g，10.2 mmol）和DMAP（31.1 mg，254 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。LCMS（產物RT = 2.545 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物用DCM 30 mL稀釋，用鹽水80 mL洗滌並用DCM 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-31（601 mg，534 μmol，10.5%產率）。 1 H NMR ：ET89868-44-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.88 (br s, 1H), 4.44 (s, 3H), 4.10 - 4.37 (m, 3H), 3.86 (br s, 1H), 3.46 - 3.61 (m, 4H), 3.24 - 3.45 (m, 5H), 2.44 - 2.76 (m, 10H), 2.26 - 2.43 (m, 6H), 1.89 (br d, J = 6.9 Hz, 2H), 1.42 - 1.76 (m, 22H), 1.27 (br s, 54H), 0.88 (s, 18H)LCMS：ET89868-44-P1B1產物：RT = 3.439 min，[M+H]+= 1126.0，純度 = 97.0%
製備化合物 7b 的一般程序 向化合物6（8 g，10.0 mmol）在DCM（80.0 mL）中之溶液中添加化合物6B（2.57 g，20.0 mmol）、NaBH(OAc)3（6.36 g，30.0 mmol）和HOAc（90.2 mg，1.50 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 1.773 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 200 mL洗滌，並用EtOAc 900 mL（300 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO3200 mL和鹽水200 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至50/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7b（4.00 g，4.39 mmol，43.84%產率）。
製備 A-6 的一般程序 向化合物7b（3.90 g，4.28 mmol）在DCM（39.0 mL）中之溶液中添加化合物9（1.66 g，6.42 mmol）、EDCI（1.64 g，8.56 mmol）和DMAP（26.1 mg，214 μmol）。將混合物在25°C攪拌1小時。LCMS（產物RT = 2.559 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物用DCM 30 mL稀釋，用鹽水80 mL洗滌並用DCM 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-6（604 mg，524 μmol，12.3%產率）。 1 H NMR ：ET89868-45-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.87 (br d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.44 (s, 3H), 4.10 - 4.37 (m, 3H), 3.86 (br d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.55 (br d, J = 9.3 Hz, 4H), 3.39 (br d, J = 9.3 Hz, 6H), 2.48 – 3.01 (m, 10H), 2.31 (br d, J = 7.3 Hz, 4H), 1.77 – 2.07 (m, 6H), 1.55 (br d, J = 7.1 Hz, 22H), 1.27 (br s, 54H), 0.88 (s, 18H)LCMS：ET89868-45-P1B2產物：RT = 3.529 min，[M+H]+= 1151.9，純度 = 99.6%
製備化合物 4c 的一般程序 向化合物3（10.0 g，63.61 mmol）在化合物3C（32.6 g，254 mmol）中之溶液中添加PPTS（2.40 g，9.54 mmol）。將混合物在120°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.63，起始材料：Rf= 0.28）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 200/1至70/1）純化。獲得呈無色油狀物的化合物4c（6.00 g，17.2 mmol，26.98%產率）。 1 H NMR ：ET89868-21-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 5.23 - 5.51 (m, 4H), 4.46 (s, 1H), 3.57 (s, 2H), 3.42 (s, 2H), 2.35 (s, 2H), 2.05 (br d, J = 3.6 Hz, 8H), 1.57 (br d, J = 2.3 Hz, 10H), 1.42 (s, 4H), 0.96 (s, 6H)
製備化合物 5c 的一般程序 向化合物4c（6.00 g，17.2 mmol）在EtOH（30.0 mL）和H2O（30.0 mL）中之溶液中添加KOH（7.70 g，137 mmol）。將混合物在110°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.45，起始材料：Rf= 0.70）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除EtOH。將殘餘物用H2O 100 mL稀釋，並使用1M HCl酸化至PH = 5。然後，將混合物用EtOAc 450 mL（150 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物5c（6.10 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-34-P1B1（400 MHz，DMSO-d6 ）δ= 5.22 – 5.49 (m, 4H), 4.40 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.48 (td, J = 6.4, 9.4 Hz, 2H), 3.34 (td, J = 6.4, 9.4 Hz, 2H), 2.16 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.99 (quin, J = 6.9 Hz, 8H), 1.43 - 1.52 (m, 8H), 1.24 - 1.39 (m, 6H), 0.91 (t, J = 7.6 Hz, 6H)
製備化合物 6c 的一般程序 向化合物5c（6.10 g，16.6 mmol）在DCM（60.0 mL）中之溶液中添加化合物5A（678 mg，7.52 mmol）、EDCI（4.33 g，22.6 mmol）和DMAP（230 mg，1.88 mmol）。將混合物在25°C下攪拌10小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.61，起始材料：Rf= 0.51）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM。將殘餘物用H2O 100 mL洗滌，然後用石油醚450 mL（150 mL x 3）萃取。將合併的有機層用100 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物6c（6.40 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-36-P1A2（400 MHz，CDCl3）δ= 5.28 - 5.45 (m, 8H), 4.46 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.57 (td, J = 6.5, 9.2 Hz, 4H), 3.41 (td, J = 6.6, 9.2 Hz, 4H), 2.44 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 1.99 – 2.09 (m, 16H), 1.55 - 1.72 (m, 16H), 1.37 - 1.47 (m, 12H), 0.96 (t, J = 7.5 Hz, 12H)
製備化合物 7c 的一般程序 向化合物6c（6.40 g，8.09 mmol）在DCM（64.0 mL）中之溶液中添加化合物6A（1.65 g，16.2 mmol）、NaBH(OAc)3（5.14 g，24.3 mmol）和HOAc（72.9 mg，1.21 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 1.701 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 100 mL洗滌，並用EtOAc 450 mL（150 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO3100 mL和鹽水100 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至50/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7c（3.80 g，4.33 mmol，53.5%產率）。
製備 A-4 的一般程序 向化合物7c（3.70 g，4.22 mmol）在DCM（37.0 mL）中之溶液中添加化合物9（1.63 g，6.33 mmol）、EDCI（1.62 g，8.43 mmol）和DMAP（25.8 mg，211 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 5/1，產物：Rf= 0.59，起始材料：Rf= 0.56）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 30 mL稀釋，用鹽水80 mL洗滌並用DCM 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-4（615 mg，550 μmol，13.1%產率）。 1 H NMR ：ET89868-45-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 5.20 - 5.42 (m, 8H), 4.77 - 4.85 (m, 1H), 4.32 - 4.41 (m, 3H), 4.03 - 4.29 (m, 3H), 3.67 - 3.92 (m, 1H), 3.44 - 3.53 (m, 4H), 3.16 - 3.39 (m, 6H), 2.28 - 2.59 (m, 10H), 2.21 - 2.31 (m, 6H), 1.92 – 2.02 (m, 14H), 1.80 (br d, J = 6.9 Hz, 2H), 1.46 - 1.61 (m, 18H), 1.29 - 1.38 (m, 12H), 1.14 - 1.26 (m, 14H), 0.80 - 0.91 (m, 18H)LCMS：ET89868-46-P1B2產物：RT = 3.131 min，[M+H]+= 1117.9，純度 = 96.1%
製備化合物的一般程序 向化合物3（10.0 g，63.6 mmol）在化合物3D（24.1 g，191 mmol）中之溶液中添加PPTS（2.40 g，9.54 mmol）。將混合物在100°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.63，起始材料：Rf= 0.28）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物蒸餾以去除過量的化合物3D，並將剩餘的粗產物用於下一步驟。獲得呈無色油狀物的化合物4d（16.9 g，粗品）。
製備化合物 5d 的一般程序 向化合物4d（15.9 g，46.0 mmol）在EtOH（80.0 mL）和H2O（80.0 mL）中之溶液中添加KOH（12.9 g，230 mmol）。將混合物在100°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.34，起始材料：Rf= 0.52）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除EtOH。將殘餘物用H2O 150 mL稀釋，並使用1M HCl酸化至PH = 5。然後，將混合物用EtOAc 600 mL（200 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物5d（6.00 g，16.5 mmol，35.8%產率）。 1 H NMR ：ET89868-52-P1A1（400 MHz，DMSO-d6 ）δ= 11.96 (br s, 1H), 4.52 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.56 (td, J = 6.8, 9.3 Hz, 2H), 3.45 (td, J = 6.8, 9.3 Hz, 2H), 2.31 - 2.37 (m, 4H), 2.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.12 (ddd, J = 2.3, 4.4, 6.8 Hz, 4H), 1.45 - 1.55 (m, 4H), 1.26 - 1.43 (m, 10H), 0.82 - 0.90 (m, 6H)
製備化合物 6d 的一般程序 向化合物5d（3.00 g，8.23 mmol）在DCM（30.0 mL）中之溶液中添加化合物5A（337 mg，3.74 mmol）、EDCI（2.15 g，11.2 mmol）和DMAP（45.7 mg，374 μmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.51，起始材料：Rf= 0.36）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM。將殘餘物用H2O 20 mL洗滌，然後用石油醚30 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層用30 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物6d（3.00 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89868-58-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.74 (s, 4H), 4.56 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.66 (td, J = 7.1, 9.1 Hz, 4H), 3.54 (td, J = 7.2, 9.1 Hz, 4H), 2.38 - 2.46 (m, 12H), 2.14 (tt, J = 2.3, 6.9 Hz, 8H), 1.61 - 1.74 (m, 8H), 1.35 - 1.50 (m, 20H), 0.86 - 0.95 (m, 12H)
製備化合物 7d 的一般程序 向化合物6d（3.00 g，3.83 mmol）在DCM（30.0 mL）中之溶液中添加化合物6A（783 mg，7.66 mmol）、NaBH(OAc)3（2.44 g，11.5 mmol）和HOAc（34.5 mg，575 μmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。TLC（DCM/MeOH = 5/1，產物：Rf= 0.52，起始材料：Rf= 0.82）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 30 mL洗滌，並用EtOAc 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO350 mL和鹽水50 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至5/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7c（2.60 g，2.99 mmol，78.1%產率）。
製備 A-17 的一般程序 向化合物7d（2.60 g，2.99 mmol）在DCM（25.0 mL）中之溶液中添加化合物9（927 mg，3.59 mmol）、EDCI（1.15 g，5.98 mmol）和DMAP（18.3 mg，150 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 5/1，產物：Rf= 0.60，起始材料：Rf= 0.45）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 30 mL稀釋，用鹽水80 mL洗滌並用DCM 150 mL（50 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-17（608 mg，548 μmol，18.3%產率）。 1 H NMR ：ET89868-61-P1A4（400 MHz，CDCl3）δ= 4.85 (br d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.55 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.38 - 4.50 (m, 1H), 4.25 - 4.36 (m, 2H), 4.15 - 4.24 (m, 1H), 3.61 - 3.70 (m, 4H), 3.51 - 3.60 (m, 4H), 3.33 - 3.49 (m, 2H), 2.91 (br s, 1H), 2.54 - 2.73 (m, 10H), 2.42 (tt, J = 2.2, 7.0 Hz, 8H), 2.33 (td, J = 7.7, 15.7 Hz, 4H), 2.14 (tt, J = 2.3, 6.8 Hz, 8H), 1.96 – 2.10 (m, 2H), 1.58 - 1.68 (m, 8H), 1.32 - 1.56 (m, 26H), 1.26 (br s, 10H), 0.85 - 0.94 (m, 18H)LCMS：ET89868-61-P1A1產物：RT = 2.710 min，[M+H]+= 1109.9，純度 = 99.9%
製備化合物 7e 的一般程序 向化合物6d（600 mg，766 μmol）在DCM（6.00 mL）中之溶液中添加化合物6B（196 mg，1.53 mmol）、NaBH(OAc)3（487 mg，2.30 mmol）和HOAc（6.90 mg，115 μmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。TLC（DCM/MeOH = 5/1，產物：Rf= 0.34，起始材料：Rf= 0.80）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 10 mL洗滌，並用EtOAc 60 mL（20 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO330 mL和鹽水30 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7e（380 mg，424 μmol，55.4%產率）。
製備 A-32 的一般程序 向化合物7e（380 mg，424 μmol）在DCM（4.00 mL）中之溶液中添加化合物9（132 mg，509 μmol）、EDCI（163 mg，849 μmol）和DMAP（1.59 mg，21.2 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 10/1，產物：Rf= 0.53，起始材料：Rf= 0.38）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 10 mL稀釋，用鹽水20 mL洗滌並用DCM 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-32（137 mg，118 μmol，27.9%產率）。 1 H NMR ：ET89868-124-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.87 (br s, 1H), 4.56 (br s, 2H), 4.39 - 4.50 (m, 1H), 4.33 (br s, 2H), 4.22 (br s, 1H), 3.65 (s, 4H), 3.56 (s, 4H), 3.41 (br s, 2H), 3.02 (br s, 1H), 2.60 (br s, 6H), 2.42 (br s, 8H), 2.31 (br s, 4H), 2.15 (br s, 14H), 1.62 (br s, 8H), 1.40 (br s, 26H), 1.27 (br s, 12H), 0.91 (s, 18H)LCMS：ET89868-124-P1B1產物：RT = 2.698 min，[M+H]+= 1135.8，純度 = 98.2%
製備化合物 7f 的一般程序 向化合物6c（630 g，796 μmol）在DCM（6.00 mL）中之溶液中添加化合物6B（204 mg，1.59 mmol）、NaBH(OAc)3（506 mg，2.39 mmol）和HOAc（7.17 mg，119 μmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。TLC（DCM/MeOH = 5/1，產物：Rf= 0.55，起始材料：Rf= 0.94）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 10 mL洗滌，並用EtOAc 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO350 mL和鹽水50 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至5/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7c（300 mg，332 μmol，41.7%產率）。
製備 A-33 的一般程序 向化合物7f（300 mg，332 μmol）在DCM（3.00 mL）中之溶液中添加化合物9（103 mg，399 μmol）、EDCI（127 mg，664 μmol）和DMAP（2.03 mg，16.6 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 10/1，產物：Rf= 0.47，起始材料：Rf= 0.38）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 10 mL稀釋，用鹽水10 mL洗滌並用DCM 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-33（138 mg，119 μmol，35.8%產率）。 1 H NMR ：ET89868-116-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 5.35 (s, 8H), 4.88 (br s, 1H), 4.45 (br s, 7H), 3.55 (br s, 4H), 3.42 (br s, 6H), 2.60 (br d, J = 9.5 Hz, 6H), 2.31 (br s, 4H), 2.04 (br d, J = 2.3 Hz, 20H), 1.59 (br d, J = 6.9 Hz, 22H), 1.41 (br s, 12H), 1.26 (br s, 14H), 0.96 (s, 18H)LCMS：ET89868-116-P1B1產物：RT = 3.136 min，[M+H]+= 1143.9，純度 = 98.6%
製備化合物 7g 的一般程序 向化合物6（0.70 g，875 μmol）和化合物6G（249 mg，1.75 mmol）在DCM（7.00 mL）中之溶液中添加NaBH(OAc)3（556 mg，2.63 mmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。LCMS（ET89944-90-P1A1，RT = 4.186 min）表明化合物6被消耗並且檢測到期望的化合物。首先，將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。其次，將殘餘物用H2O（50.0 mL）稀釋並用EtOAc（50.0 mL x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50.0 mL）洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 10/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7g（0.25 g，270 μmol，30.8%產率）。 1 H NMR ：ET89944-90-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.43 - 4.50 (m, 2 H), 4.10 (br d, J=5.13 Hz, 2 H), 3.51 - 3.61 (m, 5 H), 3.34 - 3.47 (m, 5 H), 3.12 - 3.17 (m, 1 H), 3.00 - 3.08, (m, 1 H), 2.83 - 2.91 (m, 1 H), 2.70 (br s, 2 H), 2.28 - 2.40 (m, 4 H), 2.02 - 2.09 (m, 2 H), 1.83 (br s, 2 H), 1.51 - 1.68 (m, 16 H), 1.21 - 1.47 (m, 47 H), 0.85 - 0.93 (m, 12 H)
製備 A-34 的一般程序 向化合物7g（200 mg，216 μmol）在DCM（2.00 mL）中之溶液中添加化合物9（83.7 mg，323 μmol）、EDCI（216 mg，649 μmol）和DMAP（1.32 mg，10.8 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 10/1，產物：Rf= 0.56，起始材料：Rf= 0.42）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 10 mL稀釋，用鹽水10 mL洗滌並用DCM 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由製備型HPLC（TFA條件）純化。獲得呈黃色油狀物的A-34（80.0 mg，61.6 μmol，8.14%產率）。 1 H NMR ：ET89868-134-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.81 - 4.92 (m, 1H), 4.45 (s, 3H), 4.30 - 4.38 (m, 1H), 4.11 - 4.27 (m, 3H), 3.52 - 3.67 (m, 6H), 3.41 (s, 4H), 2.96 - 3.08 (m, 2H), 2.46 - 2.68 (m, 7H), 2.27 - 2.41 (m, 5H), 1.78 - 2.07 (m, 7H), 1.58 (br s, 60H), 1.28 (br s, 56H), 0.89 (s, 18H)LCMS：ET89868-134-P1B4產物：RT = 3.473 min，[M+H]+= 1165.9，純度 = 98.5%
製備化合物 7h 的一般程序 向化合物6（0.70 g，875 μmol）和化合物6H（200 mg，1.75 mmol）在DCM（7.00 mL）中之溶液中添加NaBH(OAc)3（556 mg，2.63 mmol）。將混合物在25°C攪拌1小時。LCMS（ET89944-89-P1A1，RT = 4.523 min）表明化合物6被消耗並且檢測到期望的化合物。首先，將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。其次，將殘餘物用H2O（50.0 mL）稀釋並用EtOAc（50.0 mL x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50.0 mL）洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。獲得呈黃色油狀物的化合物7h（700 mg，粗品）。
製備 A-35 的一般程序 向化合物7h（200 mg，223 μmol）在DCM（2.00 mL）中之溶液中添加化合物9（86.4 mg，334 μmol）、EDCI（128 mg，668 μmol）和DMAP（1.36 mg，11.1 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 10/1，產物：Rf= 0.52，起始材料：Rf= 0.32）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 10 mL稀釋，用鹽水10 mL洗滌並用DCM 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-35（90.0 mg，71.2 μmol，31.9%產率）。 1 H NMR ：ET89868-127-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.89 (br s, 1H), 4.46 (br d, J = 5.3 Hz, 5H), 4.13 (s, 2H), 3.56 (br d, J = 9.1 Hz, 4H), 3.41 (s, 6H), 2.61 (s, 8H), 2.31 (br s, 4H), 1.80 (br s, 4H), 1.56 (br s, 28H), 1.25 - 1.36 (m, 48H), 0.89 (s, 18H)LCMS：ET89868-127-P1B4產物：RT = 3.455 min，[M+H]+= 1137.9，純度 = 90.6%
製備化合物 7i 的一般程序 向化合物6（0.70 g，875 μmol）和化合物6I（249 mg，1.75 mmol）在DCM（7.00 mL）中之溶液中添加NaBH(OAc)3（556 mg，2.63 mmol）。將混合物在25°C攪拌1小時。LCMS（ET89944-91-P1A1，RT = 4.113 min）表明化合物6被消耗並且檢測到期望的化合物。首先，將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。其次，將殘餘物用H2O（50.0 mL）稀釋並用EtOAc（50.0 mL x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50.0 mL）洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以給出殘餘物。獲得呈黃色油狀物的化合物7i（700 mg，粗品）。
製備 A-36 的一般程序 向化合物7i（200 mg，216.11 μmo）在DCM（2.00 mL）中之溶液中添加化合物9（83.8 mg，324 μmol）、EDCI（124 mg，648 μmol）和DMAP（1.32 mg，10.8 μmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。TLC（DCM/MeOH = 10/1，產物：Rf= 0.55，起始材料：Rf= 0.46）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用DCM 10 mL稀釋，用鹽水10 mL洗滌並用DCM 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的A-36（136 mg，113 μmol，52.4%產率）。 1 H NMR ：ET89868-135-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.79 - 4.99 (m, 2H), 4.45 (s, 3H), 4.27 - 4.37 (m, 1H), 4.06 - 4.26 (m, 2H), 3.54 (s, 4H), 3.41 (s, 4H), 3.18 - 3.33 (m, 2H), 2.62 (s, 8H), 2.31 (br s, 4H), 1.82 (br s, 2H), 1.45 - 1.72 (m, 24H), 1.28 (br s, 58H), 0.89 (s, 18H)。LCMS：ET89868-135-P1B2產物：RT = 3.429 min，[M+H]+= 1166.0，純度 = 97.1%
製備 A-40 和 A-41 的一般程序 A-40                                                     A-41 製備 A-42 的一般程序 製備 A-43 的一般程序 製備 A-44 的一般程序 製備 A-45 的一般程序 A45B-9 的合成 製備化合物 7 的一般程序 向化合物6（0.80 g，7.01 mmol）在MeCN（8.00 mL）中之溶液中添加TEA（2.26 g，17.5 mmol）和化合物6A（2.25 g，14.7 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 0.101 min）表明起始材料被完全消耗。將混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化，以得到呈無色油狀物的化合物7（1.60 g，6.19 mmol，88.4%產率）。 1 H NMR ：ET89912-8-P1B（400 MHz，CDCl3）δ3.70 (s,6H), 3.43 - 3.47 (m, 2H), 3.21 - 3.25 (m, 2H), 2.76 - 2.79 (m, 2H), 2.66 - 2.69 (m, 2 H), 2.31 - 2.37 (m, 2H), 1.02 - 1.07 (m,6H)。
製備化合物 8 的一般程序 在0°C下，向化合物7（1.40 g，5.42 mmol）在THF（14.0 mL）中之溶液中添加LAH（0.51 g，13.5 mmol，5.42 mL，2.50 M）。將混合物在0°C下攪拌1小時。LCMS（產物RT = 0.093 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物藉由水（0.50 mL）淬滅。然後將混合物過濾，並將濾液在減壓下濃縮以得到呈灰白色固體的化合物8（1.00 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89912-8-P1B（400 MHz，CDCl3）δ3.62 - 3.67 (m, 4H), 2.86 - 2.94 (m, 4H), 2.42 - 2.45 (m, 2H), 2.32 - 2.35 (m, 2H), 2.08 - 2.11 (m, 2 H), 1.06 - 1.08 (m,6H)。
製備化合物 B-9 的一般程序 向化合物8（0.90 g，4.45 mmol）在DCM（9.00 mL）中之溶液中添加化合物5（3.65 g，9.79 mmol）和EDCI（2.05 g，10.7 mmol）和DMAP（0.11 g，0.89 mmol）。將混合物在25°C下攪拌6小時。LCMS（產物RT = 4.65 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化，以得到呈淺黃色油狀物的B-9（0.54 g，0.59 mmol，13.3%產率）。 1 H NMR ：ET89912-18-P1B2（400 MHz，CDCl3）δ 4.45 (t,J= 5.7 Hz, 2H), 4.11 - 4.21 (m, 4H), 3.55 (td,J= 6.7, 9.2 Hz, 4H), 3.40 (td,J= 6.7, 9.2 Hz, 4H), 2.97 (td,J= 6.6, 13.6 Hz, 2H), 2.79 (br dd,J= 2.3, 11.1 Hz, 2H), 2.41 - 2.60 (m, 4H), 2.31 (t,J= 7.6 Hz, 4H), 2.14 (br t,J= 10.6 Hz, 2H), 1.50 - 1.68 (m, 16H), 1.21 - 1.41 (m, 44H), 0.99 - 1.12 (m, 6H), 0.84 - 0.94 (m, 12H)。
B-10 的合成 製備化合物 9 的一般程序 向化合物8A（10.0 g，58.0 mmol）在DCM（100 mL）中之溶液中添加化合物8（13.6 g，69.6 mmol）、DMAP（1.42 g，11.6 mmol）和EDCI（16.7 g，87.1 mmol）。將混合物在25°C下攪拌3小時。LCMS（產物RT = 2.42 min）表明起始材料被完全消耗。向反應混合物中添加H2O（100 mL）並用DCM（100 mL x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（100 mL）洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到呈無色油狀物的化合物9（20.0 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89912-8-P1B（400 MHz，CDCl3）δ4.04 - 4.08 (m, 2H), 3.39 - 3.43 (m, 2H), 2.30 - 2.34 (m, 2H), 1.68 - 1.88 (m, 2 H), 1.60 - 1.66 (m, 4H), 1.40 - 1.48 (m,2H), 1.26 - 1.31 (m, 16H), 0.86 - 0.90 (m, 3H)。
製備化合物 10 的一般程序 在25°C下，向化合物9（8.00 g，22.9 mmol）在MeCN（80.0 mL）中之溶液中添加化合物9A（3.97 g，22.9 mmol）和DIEA（4.44 g，34.3 mmol）。將混合物在25°C下攪拌2小時。LCMS（產物RT = 1.37 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮，以得到呈灰白色固體的化合物10（8.00 g，18.1 mmol，79.0%產率）。 1 H NMR ：ET89912-8-P1B（400 MHz，CDCl3）δ4.05 - 4.08 (m, 2H), 3.67 - 3.70 (m, 2H), 3.42 - 3.44 (m, 1H), 2.90 - 2.99 (m, 2H), 2.54 - 2.62 (m, 11H), 2.33 - 2.35(m, 2H), 1.61 - 1.67 (m, 7H), 1.29 - 1.32 (m, 19 H), 0.88 - 0.91 (m, 3H)。
製備化合物 6 的一般程序 在25°C下，向化合物5（2.68 g，7.18 mmol）和化合物8A（1.20 g，7.18 mmol）在DCM（26.8 mL）中之溶液中添加DMAP（87.7 mg，0.72 mmol）和EDCI（2.07 g，10.8 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 5.28 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化，以得到呈無色油狀物的化合物6（1.50 g，2.88 mmol，40.0%產率）。
製備化合物 7 的一般程序 在25°C下，向化合物6（1.50 g，2.88 mmol）和化合物10（1.27 g，2.88 mmol）在THF（6.00 mL）和ACN（6.00 mL）中之溶液中添加K2CO3（1.19 g，8.63 mmol）和KI（0.57 g，3.45 mmol）。將混合物在80°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 3.68 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化，以得到呈黃色油狀物的化合物7（1.00 g，1.13 mmol，39.4%產率）。
製備化合物 B-10 的一般程序 向化合物7（1.00 g，4.45 mmol）和化合物5（0.42 g，4.45 mmol）在DCM（1.00 mL）中之溶液中添加EDCI（0.33 g，1.70 mmol）和DMAP（27.7 mg，0.23 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 4.54 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM。將殘餘物藉由製備型HPLC（柱：X-Select CSH苯基-己基100*30 5u；流動相：[H2O (0.2%FA) – CAN/THF = 1/1]；梯度：30% - 70% B，經20.0 min）純化，以得到呈棕色油狀物的B-10（0.39 g，0.32 mmol，27.8%產率）。 1 H NMR ：ET89912-34-P1B1（400 MHz，CDCl3）δ 4.46 - 4.47 (m, 2H), 4.44 - 4.45 (m, 2H), 4.04 - 4.07 (m, 4H), 3.54 - 3.56 (m, 4H), 3.01 - 3.09 (m, 6H), 2.81 - 2.89 (m, 8H), 2.32 - 2.35 (m, 7H), 1.61 - 1.66 (m, 27H), 1.27 - 1.56 (m, 66H), 0.87 - 0.90 (m, 15H)。
s,s C-15 的合成 製備化合物 2_A 的一般程序 在黑暗中向化合物1_A（29.7 g，106 mmol）在DMF（100 mL）中之溶液中添加Ag2O（19.8 g，160 mmol）和3-溴丙-1-烯（23.2 g，191 mmol）。將混合物在50°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 0.502 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物過濾並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 10/1至4/1）純化。獲得呈無色油狀物的化合物2_A（18.3 g，57.3 mmol，53.89%產率）。 1 H NMR ：ET89868-64-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 7.28 - 7.42 (m, 5H), 5.77 - 5.91 (m, 1H), 5.06 - 5.28 (m, 4H), 4.41 - 4.54 (m, 1H), 4.06 - 4.14 (m, 1H), 3.93 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.76 (m, 4H), 2.20 - 2.41 (m, 2H)
製備化合物 3_A 的一般程序 在0°C下，向在DMF（100 mL）中之化合物2_A（18.3 g，57.3 mmol）在THF（200mL）中之溶液中添加BH3.THF（1 M，19.8 mL）。將混合物在0-25°C下攪拌3小時。LCMS（產物RT = 1.394 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物藉由在0°C下添加NH4Cl 150 mL來淬滅，並用EtOAc 600 mL（200 mL x 3）萃取。將合併的有機層用200 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 1/1至0/1）純化。獲得呈白色油狀物的化合物2_A（7.00 g，20.8 mmol，36.2%產率）。 1 H NMR ：ET89868-65-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 7.28 - 7.41 (m, 5H), 5.05 - 5.24 (m, 2H), 4.42 - 4.26 (m, 1H), 4.01 - 4.08 (m, 1H), 3.60 - 3.79 (m, 8H), 3.50 - 3.58 (m, 2H), 2.12 - 2.34 (m, 2H), 1.76 (quin, J = 5.7 Hz, 2H)
製備化合物 4_A 的一般程序 向化合物3_A（6.00 g，17.8 mmol）在DCM（25 mL）中之溶液中添加Et3N（2.70 g，26.7 mmol）、DMAP（109 mg，889 μmol）和TosCl（4.07 g，21.3 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 0.540 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物藉由在0°C下添加NH4Cl 150 mL來淬滅，並用EtOAc 600 mL（200 mL x 3）萃取。將反應混合物在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈白色固體的化合物4_A（9.76 g，粗品）。
製備化合物 5_A 的一般程序 向化合物4_A（8.74 g，17.8 mmol）在THF（60.0 mL）中之溶液中添加吡咯啶（7.71 g，108 mmol）。將混合物在70°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 0.348 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物用NaHCO350 mL稀釋並用EtOAc 240 mL（80 mL x 3）萃取。將合併的有機層用50 mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物5_A（5.40 g，13.8 mmol，77.8%產率）。 1 H NMR ：ET89868-74-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 7.28 - 7.74 (m, 5H), 5.04 - 5.24 (m, 2H), 4.38 - 4.56 (m, 1H), 3.98 – 4.07 (m, 1H), 3.52 - 3.75 (m, 4H), 3.36 - 3.47 (m, 2H), 2.42 - 2.58 (m, 6H), 2.17 - 2.38 (m, 2H), 1.69 - 1.82 (m, 6H)
製備化合物 6_A 的一般程序 向化合物5_A（5.40 g，13.8 mmol）在THF（13.5 mL）和H2O（13.5 mL）中之溶液中添加LiOH（662 mg，27.7 mmol）。將混合物在25°C下攪拌8小時。LCMS（產物RT = 0.321 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物用H2O 70 mL稀釋並冷凍乾燥，以得到殘餘物。藉由製備型HPLC（HCl條件）純化殘餘物。獲得呈黃色油狀物的化合物6_A（1.20 g，3.19 mmol，23.0%產率）。
製備化合物 7_A 的一般程序 向化合物6_A（400 mg，1.06 mmol）在DMF（6 mL）中之溶液中添加化合物12_A（629 mg，1.28 mmol）、Cs2CO3（762 mg，2.34 mmol）和KI（17.6 mg，106 μmol）。將混合物在60°C下攪拌8小時。LCMS（產物RT = 0.694 min）表明起始材料沒有被完全消耗。將反應混合物用H2O 5 mL稀釋並用EtOAc 30 mL（10 mL x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水20 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至5/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物7_A（650 mg，824 μmol，77.5%產率）。
製備化合物 8_A 的一般程序 在Ar2下，向化合物7_A（600 mg，760 μmol，1當量）在THF（10.0 mL）中之溶液中添加Pd/C（1.00 g，940 μmol，10%純度）。將懸浮液在真空下脫氣並用H2吹掃幾次。將混合物在25°C在H2（35 psi）下攪拌1小時。LCMS（產物RT = 2.876 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物過濾並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物8_A（500 mg，粗品）。
製備化合物 14_A 的一般程序 向化合物7_A（10.0 g，87.6 mmol）在十一烷-1-醇（30.2 g，175 mmol）中之溶液中添加H2SO4（859 mg，8.76 mmol）。將混合物在70°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.27，起始材料：Rf= 0.50）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物過濾並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 20/1至5/1）純化。獲得呈無色油狀物的化合物14_A（10.0 g，34.9 mmol，39.9%產率）。
製備化合物 15_A 的一般程序 向化合物15_A（5.00 g，17.5 mmol）在DCM（50.0 mL）中之溶液中添加DMP（8.88 g，21.0 mmol）。將混合物在25°C下攪拌3小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.22，起始材料：Rf= 0.62）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物藉由在0°C下添加Na2S2O380 mL來淬滅，然後用DCM 300 mL（100 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO3100 mL和鹽水100 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 20/1至6/1）純化。獲得呈無色油狀物的化合物15_A（4.00 g，14.1 mmol，80.57%產率）。
製備 C-15 的一般程序 向化合物8_A（500 mg，763 μmol）在DCM（5.00 mL）中之溶液中添加化合物15_A（261 mg，916 μmol）和NaBH(OAc)3（485 mg，2.29 mmol）。將混合物在25°C下攪拌8小時。LCMS（產物RT = 1.557 min）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM，然後用H2O 10 mL洗滌，並用EtOAc 90 mL（30 mL x 3）萃取。將合併的有機層用NaHCO350 mL和鹽水50 mL洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，DCM/MeOH = 100/1至10/1）純化。獲得呈棕色油狀物的C-15（416 mg，450 μmol，59.01%產率）。 1 H NMR ：ET89868-74-P1A1（400 MHz，CDCl3）δ= 4.50 (s, 1H), 4.06 (br d, J = 3.0 Hz, 6H), 3.56 (s, 2H), 3.43 (br d, J = 6.5 Hz, 4H), 3.22 (dd, J = 1.9, 10.2 Hz, 1H), 3.09 (s, 1H), 2.59 - 2.80 (m, 6H), 2.22 - 2.48 (m, 8H), 1.88 (br s, 10H), 1.63 (br s, 14H), 1.27 (br s, 40H), 0.89 (s, 9H)
C-26 的合成 E-1 的合成 製備化合物 6a 的一般程序 向化合物5a（10.0 g，40.7 mmol）和NaH（2.35 g，91.4 mmol）在DMF（100 mL）中之溶液中添加化合物4a（12.0 g，40.7 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 4.233）表明起始材料完全消耗。將反應混合物用H2O（300 mL）稀釋並用EtOAc（100mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物6a（6.00 g，32.0%產率）。 1 H NMR ：ET89867-48-P1A1（400 MHz，CDCL3-d6）δ4.26 - 4.46 (m, 1H), 3.95 – 4.10 (m, 1H), 3.67 - 3.78 (m, 3H), 3.57 - 3.62 (m, 3H), 3.31 - 3.48 (m, 3H), 2.20 - 2.34 (m, 1H), 2.00 - 2.09 (m, 1H), 1.48 - 1.53 (m, 3H), 1.46 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 1.39 - 1.44 (m, 6H), 1.30 - 1.36 (m, 4H), 0.89 (s, 9H), 0.04 (s, 6H)
製備化合物 7a 的一般程序 向化合物6a（6.00 g，13.1 mmol）在THF/H2O（42.0 mL）中之溶液中添加LiOH（1.10 g，26.2 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。LCMS（產物RT = 3.949）表明起始材料完全消耗。將反應混合物用飽和NaHCO3溶液調節至pH = 6。然後將反應混合物用H2O（100 mL）稀釋並用EtOAc（50.0mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物7a（5.01 g，粗品）。
製備化合物 8a 的一般程序 向化合物7a（5.00 g，11.2 mmol）在DMF（35.0 mL）中之溶液中添加N', N'-二甲基乙烷-1,2-二胺（1.48 g，16.8 mmol）、HATU（8.53 g，22.4 mmol）和DIEA（4.35 g，33.6 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 2.700）表明起始材料完全消耗。將反應混合物用H2O（100 mL）稀釋並用EtOAc（50.0mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物7a（5.01 g，粗品）。
製備化合物 9a 的一般程序 向化合物8a（5.01 g，4.13 mmol）在TFA/DCM（4N，7.00V）（35.0 mL）中之溶液。將混合物在25°C下攪拌1小時。LCMS（產物RT = 1.878）表明起始材料被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮以去除DCM/TFA。然後添加在DCM（50.0 ml）中之TBSCl（1.38 g，4.96 mmol）、TEA（1.93 g，10.3 mmol）。將混合物在25°C下攪拌1小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 0/1，產物：Rf= 0.25，起始材料：Rf= 0.14）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用H2O（20.0 mL）稀釋並用EtOAc（10.0mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈棕色油狀物的化合物3（3.12 g，粗品）。
製備化合物 10a 的一般程序 向化合物9a（2.60 g，6.25 mmol）在DMF（26.0 ml）中之溶液中添加化合物5（2.00 g，5.63 mmol）、HATU（4.76 g，12.5 mmol）和DIEA（2.43 g，18.7 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 3.907）表明起始材料完全消耗。在25°C下向反應混合物中添加H2O（100 ml）並用EtOAc萃取（30mL x 3）。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈棕色油狀物的化合物10a（6.12 g，粗品）。 1 H NMR ：ET89867-73-P1A1（400 MHz，CDCL3-d6）δ5.27 - 5.43 (m, 4H), 4.39 - 4.59 (m, 2H), 3.94 – 4.07 (m, 1H), 3.73 - 3.83 (m, 1H), 3.54 - 3.62 (m, 4H), 3.35 - 3.46 (m, 6H), 3.20 - 3.30 (m, 3H), 2.18 - 2.32 (m, 6H), 1.98 - 2.11 (m, 10H), 1.71 - 1.91 (m, 6H), 1.52 - 1.64 (m, 10H), 1.37 - 1.45 (m, 6H), 1.30 - 1.34 (m, 4H), 0.93 - 0.98 (m, 6H), 0.88 - 0.90 (m, 8H), 0.00 - 0.11 (m, 6H)
製備化合物 11a 的一般程序 向化合物10a（2.50 g，3.26 mmol）和KF（1.90 g，32.6 mmol）在DMF（25.0 mL）中之溶液。將混合物在105°C下攪拌16小時。LCMS（產物RT = 3.039）表明起始材料完全消耗。將反應混合物用H2O（100 mL）稀釋並用EtOAc（50.0mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將粗產物不經進一步純化用於下一步驟。獲得呈黃色油狀物的化合物2A（2.20 g，粗品）。
製備化合物 C-26 的一般程序 向化合物11a（1.00 g，1.53 mmol）在DCM（7.00 ml）中之溶液中添加化合物4（0.54 g，1.37 mmol）、EDCI（0.40 g，2.29 mmol）、DMAP（0.05 g，0.46 mmol）。將混合物在25°C下攪拌5小時。LCMS（產物RT = 4.329）表明起始材料完全消耗。在25°C下向反應混合物中添加H2O（100 ml）並用EtOAc萃取（30mL x 3）。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物10a（0.52 g，0.53 mmol，34.5%產率）。LCMS：ET89867-78-P1A8產物：RT = 2.387 min，[M+H]+= 988，純度 = 98.1% 1 H NMR ：ET89867-15-P1A3（400 MHz，DMSO-d6）δ5.26 - 5.41 (m, 8H), 4.50 - 4.59 (m, 1H), 4.42 - 4.49 (m, 2H), 4.19 - 4.36 (m, 1H), 4.01 - 4.10 (m, 2H), 3.50 - 3.63 (m, 5H), 3.35 - 3.45 (m, 7H), 2.56 - 2.73 (m, 2H), 2.43 - 2.53 (m, 2H), 2.25 - 2.38 (m, 8H), 2.18 - 2.24 (m, 2H), 2.97 - 1.09 (m, 18H), 1.53 - 1.75 (m, 20H), 1.31 - 1.46 (m, 14H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 12H)
製備化合物 2 的一般程序 向化合物1（90.0 g，498 mmol）、KI（82.7 g，498 mmol）和NaCN（29.67 g，605 mmol）在DMSO（900 mL）中之溶液。將混合物在100°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 5/1，產物：Rf= 0.60，起始材料：Rf= 0.56）表明起始材料已完全消耗。將反應混合物用飽和NaHCO3溶液調節至pH = 8。然後用H2O（1.00 L）稀釋並用EtOAc（500 mL x 3）萃取。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物6a（40.0 g，233 mmol，32.0%產率）。 1 H NMR：ET89867-7-P1A2（400 MHz，CDCL3-d6）δ4.50 (br s, 1H), 3.59 - 3.71 (m, 2H), 3.43 - 3.55 (m, 2H), 2.35 - 2.46 (m, 2H), 1.75 (br s, 4H), 1.20 (t, J = 7.0 Hz, 6H)
製備化合物 3 的一般程序 向化合物2（22.5 g，131 mmol）、(Z)-辛-5-烯-1-醇（50.5 g，394 mmol）和PPTS（1.65 g，6.57 mmol）的溶液。將混合物在105°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 5/1，產物：Rf= 0.78，起始材料：Rf= 0.60）表明起始材料已完全消耗。在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物3（32.0 g，95.2 mmol，32.0%產率）。
製備化合物 4 的一般程序 向化合物3（31.0 g，92.4 mmol）、KOH（18.2 g，323 mmol）在EtOH/H2O（217 ml）中之溶液。將混合物在105°C下攪拌72小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.32，起始材料：Rf= 0.90）表明起始材料已完全消耗。在減壓下濃縮以得到殘餘物。獲得呈黃色油狀物的化合物4（30.0 g，84.6 mmol，91.5%產率）。 1 H NMR ：ET89867-23-P1A1 (400 MHz, CDCL3-d6)δ5.25 - 5.42 (m, 4H), 4.38 - 4.49 (m, 1H), 3.48 - 3.58 (m, 2H), 3.37 - 3.44 (m, 2H), 2.10 - 2.19 (m, 2H), 1.97 – 2.09 (m, 8H), 1.49 - 1.62 (m, 8H), 1.34 - 1.45 (m, 4H), 0.95 (t, J = 7.6 Hz, 6H)
製備化合物 10 的一般程序 向化合物9（11.4 g，72.5 mmol）、化合物9a（33.7 g，290 mmol）和PPTS（1.82 g，3.62 mmol）的溶液。將混合物在105°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 5/1，產物：Rf= 0.78，起始材料：Rf= 0.60）表明起始材料已完全消耗。在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物3（14.0 g，47.0 mmol，64.9%產率）。 1 H NMR：ET89867-27-P1A1（400 MHz，CDCL3-d6）δ3.55 - 3.65 (m, 2H), 3.38 - 3.48 (m, 2H), 2.42 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.88 – 2.01 (m, 2H), 1.54 - 1.63 (m, 4H), 1.24 - 1.40 (m, 16H), 0.82 - 0.95 (m, 6H)
製備化合物 11 的一般程序 向化合物10（12.0 g，40.3 mmol）、KOH（7.92 g，141 mmol）在EtOH（120 ml）中之溶液。將混合物在105°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 3/1，產物：Rf= 0.32，起始材料：Rf= 0.8）表明起始材料已完全消耗。在減壓下濃縮以得到殘餘物。獲得呈黃色油狀物的化合物4（11.3 g，粗品）。
製備化合物 12_A 的一般程序 向化合物11（11.0 g，34.7 mmol）在DCM（77.0 ml）中之溶液中添加化合物11a（6.10 g，31.2 mmol）、EDCI（9.99 g，52.1 mmol）、DMAP（0.84 g，6.95 mmol）。將混合物在25°C下攪拌12小時。TLC（石油醚/乙酸乙酯 = 0/1，產物：Rf= 0.60，起始材料：Rf= 0.32）表明起始材料已完全消耗。在25°C下向反應混合物中添加H2O（100 ml）並用EtOAc萃取（30mL x 3）。將合併的有機層經Na2SO4乾燥，過濾，並且在減壓下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO2，石油醚/乙酸乙酯 = 100/1至0/1）純化。獲得呈黃色油狀物的化合物10a（5.80 g，11.75 mmol，33.8%產率）。
E-1-19 的合成 在室溫下，向100 mL圓底燒瓶中之添加辛醇（5 g，38.393 mmol，1當量）、4,4-二甲氧基丁腈（2.23 g，17.277 mmol，0.45當量）和PPTS（0.48 g，1.920 mmol，0.05當量）。將所得混合物在110°C攪拌3 h。使混合物冷卻至室溫。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物用庚烷（150 mL）稀釋。將所得混合物用2 x 100 mL水、1 x 100 mL飽和NaHCO3和100 mL鹽水洗滌。將所得混合物經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮以得到呈黃色油狀物的4,4-雙(辛基氧基)丁腈（8.0 g，粗品）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
PH-AERA-SDPC-2024-01-E-1-20 的合成 在室溫下，向250 mL壓力罐反應器中添加4,4-雙(辛基氧基)丁腈（8 g，24.592 mmol，1當量）、EtOH（80 mL）和KOH的水性溶液（3 M，20 mL，61.482 mmol，2.5當量）。將所得混合物在110°C攪拌24 h。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物在減壓下濃縮。將所得混合物用水（50 mL）稀釋。將混合物用1 M HCl（水性）酸化至pH 5。將所得混合物用EtOAc（2 x 200 mL）萃取。將合併的有機層用水（3 x 100 mL）和鹽水（2 x 100 mL）洗滌，經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮以得到4,4-雙(辛基氧基)丁酸（5.2 g，粗品）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
E-1-57 的合成 在25°C下，向250 mL 3頸圓底燒瓶中添加4,4-雙(辛基氧基)丁酸（5.2 g，15.093 mmol，1當量）、3-溴丙醇（2.52 g，18.112 mmol，1.2當量）、DCM（104 mL）和DMAP（0.18 g，1.509 mmol，0.1當量）。在室溫下，向上述混合物中分批添加N-(N-環己基碳醯亞胺基)環己胺（3.74 g，18.112 mmol，1.2當量）。將所得混合物在室溫下攪拌3 h。將所得混合物用正庚烷（100 mL）稀釋。將所得混合物過濾。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用正庚烷/EA（98:2）洗脫，以得到呈無色油狀物的4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-溴丙基酯（3.1 g，產率：44.1%）。
E-1-62 的合成 在室溫下，向100 mL 3頸圓底燒瓶中添加4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-溴丙基酯（3.0 g，6.445 mmol，1當量）、N-(3-胺基丙基)胺基甲酸苄基酯（0.67 g，3.223 mmol，0.5當量）、K2CO3（4.45 g，32.225 mmol，5當量）、MeCN（60 mL）和KI（2.14 g，12.890 mmol，2當量）。將所得混合物在80°C下、在氮氣氣氛下攪拌18 h。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物用水（50 mL）稀釋。將所得混合物用正庚烷（3 x 80 mL）萃取。將合併的有機層用水（2 x 100 mL）、MeOH/水（1:3，3 x 100 mL）和鹽水（100 mL）洗滌，經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用庚烷/EA（3:7）洗脫，以得到呈黃色油狀物的4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-[(3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}丙基)(3-{[4,4-雙(辛基氧基)丁醯基]氧基}丙基)胺基]丙基酯（2.1 g，產率：33.3%）。
E-1-63 的合成 在室溫下，向100 mL圓底燒瓶中放入4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-[(3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}丙基)(3-{[4,4-雙(辛基氧基)丁醯基]氧基}丙基)胺基]丙基酯（1.5 g，1.535 mmol，1當量）和甲醇（30 mL）。在室溫下，向其中添加Pd/C（300 mg，20% wt）。將混合物在室溫下、在H2（25 atm）氣氛下攪拌2小時。將所得混合物過濾，將濾餅用EA（2 x 15 mL）洗滌。將濾液在減壓下濃縮，以得到4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-[(3-胺基丙基)(3-{[4,4-雙(辛基氧基)丁醯基]氧基}丙基)胺基]丙基酯（900 mg，粗品）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
E-1 的合成 在室溫下、在N2氣氛下，向8 mL小瓶中放入均苯三甲酸（50 mg，0.238 mmol，1.00當量）和亞硫醯氯（100 uL）。將混合物在80°C攪拌2小時。將所得混合物在減壓下濃縮。
在室溫下，向另一個100 mL圓底燒瓶中放入4,4-雙(辛基氧基)丁酸3-[(3-胺基丙基)(3-{[4,4-雙(辛基氧基)丁醯基]氧基}丙基)胺基]丙基酯（882.89 mg，1.047 mmol，4.40當量）、THF（17.7 mL）和DIEA（0.21 mL，1.190 mmol，5當量）。在0°C下，向其中添加上述醯氯（在2 mL THF中）。將混合物在室溫下攪拌2小時。將所得混合物在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相快速層析法純化，條件如下：柱，C18矽膠；流動相，H2O（0.1% FA）中之MeCN/IPA（1/1），10 min內50%至90%梯度；90%至90% 5 min，檢測器，UV 205 nm。將級分直接凍乾，以得到呈淺黃色油狀物的AERA-E-1-0（112.5 mg，產率：17.6%）。LCMS-PH-AERA-SDPC-2024-01-E-1-0（ES，m/z）：2685.2 [M+H]+ 1HNMR-PH- AERA-SDPC-2024-01-E-1-0 (300 MHz, CDCl3,ppm)：δ 8.669 (brs, 3H), 8.381 (brs, 1H), 8.159 (brs, 2H), 4.503 (t,J= 5.7 Hz, 6H), 4.147 (t,J= 6.0 Hz, 12H), 3.613-3.583 (m, 18H), 3.456-3.636 (m, 12H), 3.078-2.784 (m, 20H), 2.401 (t,J= 7.5 Hz, 12H), 2.376-1.894 (m, 30H), 1.548 (t,J= 6.6 Hz, 24H), 1.402-1.148 (m, 120H), 0.918-0.852 (m, 36H)。
B-13-15 的合成 在室溫下，向100 mL 3頸底燒瓶中放入6,6-雙(辛基氧基)己酸乙基酯（3 g，7.488 mmol，1當量）和THF（60 mL）。在0°C下、在N2氣氛下，向其中添加氫化鋁鋰（THF中之2.0 M）（6.74 mL，13.478 mmol，1.8當量）。將混合物在25°C下攪拌2小時。在5°C下，將反應藉由添加水（0.51 mL）和NaOH（15%，0.51 mL）和水（1.55 mL）來淬滅。將所得MgSO4乾燥。將固體濾出並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用庚烷/EA（10/1）洗脫，以得到呈淺黃色油狀物的6,6-雙(辛基氧基)己-1-醇（1.95 g，產率：72.7%）。
B-13-16 的合成 在室溫下，向250 mL圓底燒瓶中放入6,6-雙(辛基氧基)己-1-醇（1.95 g，5.438 mmol，1當量）、Et3N（1.10 g，10.876 mmol，2當量）和DCM（40 mL）。在0°C下、在N2氣氛下，向其中滴加甲磺醯氯（0.81 g，7.069 mmol，1.3當量）。將混合物在0°C攪拌2小時。將所得混合物用DCM（150 mL）稀釋。將混合物用水（2 x 80 mL）和鹽水（100 mL）洗滌。經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，以得到甲磺酸6,6-雙(辛基氧基)己基酯（1.3 g，產率：54.7%）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
B-13 的合成 在室溫下，向250 mL圓底燒瓶中放入甲磺酸6,6-雙(辛基氧基)己基酯（1140.67 mg，2.610 mmol，4.5當量）、2-[4-(2-胺基乙基)哌𠯤-1-基]乙胺（100 mg，0.580 mmol，1.00當量）和MeCN（20 mL）。在室溫下、在N2氣氛下，向其中添加KI（144.54 mg，0.870 mmol，1.5當量）和K2CO3（802.3 mg，4.640 mmol，10當量）。將混合物在80°C攪拌6小時。將所得混合物在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法重新純化，用MeOH/DCM（10/1）洗脫，以得到最終產物（138.2 mg，純度：94.0%）。藉由逆相快速層析法純化，條件如下：柱，C18矽膠；流動相，ACN/IPA=1/1中之FA，22 min內40%至90%梯度；檢測器，ELSD。將餾出物用Na2CO3（1%，水性溶液）鹼化至pH = 10，並在減壓下濃縮。將產物溶解在正庚烷（400 mL）中並用MeOH/H2O（4:1）（2 x 100 mL）洗滌，經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，以得到呈淺黃色油狀物的AERA-B-13-0（115.3 mg，產率：12.9%）。LCMS-PH-AERA-SDPC-2024-01-B-13-0（ES，m/z）：1534.5 [M+H]+HNMR-PH- AERA-SDPC-2024-01-B-13-0（300 MHz，CDCl3）：δ 4.467 (t,J= 5.7 Hz, 4H), 3.609-3.556 (m, 8H), 3.534-3.377 (m, 8H), 2.559-2.321 (m, 24H), 1.765-1.715 (m, 24H), 1.649-1.534 (m, 104H), 0.92- 0.822 (m, 24H)。
C-40A-3 的合成 在室溫下，向500 mL圓底燒瓶中添加5-側氧基戊酸乙酯（6 g，41.618 mmol，1當量）、DCM（120 mL）和Na2SO4（17.73 g，124.824 mmol，3.00當量）。將所得混合物在氮氣氣氛下、在25°C下攪拌5 min。在25°C下，向上述混合物中添加庚醇（14.51 g，124.854 mmol，3當量）和KHSO4（1.70 g，12.485 mmol，0.3當量）。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。將所得混合物過濾，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用正庚烷/EA（20:1）洗脫，以得到呈無色油狀物的5,5-雙(庚基氧基)戊酸乙基酯（8 g，產率：53.6%）。
C-40A-4 的合成 在室溫下，向250 mL圓底燒瓶中添加5,5-雙(庚基氧基)戊酸乙基酯（8 g，22.311 mmol，1當量）、THF（80 mL）、H2O（16 mL）和LiOH（1.6 g，44.693 mmol，3當量）。將所得混合物在氮氣氣氛下、在室溫下攪拌18 h。在真空下濃縮THF。將混合物用HCl（0.5M，水性）酸化至Ph (4-5)。將水層用EtOAc（2 x 200 mL）萃取。將有機相經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮以得到5,5-雙(庚基氧基)戊酸（6.0 g，粗品）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
C-40A-6 的合成 在室溫下，向250 mL圓底燒瓶中添加5,5-雙(庚基氧基)戊酸（6 g，18.154 mmol，1當量）、DCM（120 mL）、6-溴-1-己醇（3.29 g，18.154 mmol，1當量）、DMAP（0.44 g，3.631 mmol，0.20當量）和EDCI（3.38 g，21.785 mmol，1.2當量）。將所得混合物在氮氣氣氛下、在室溫下攪拌18 h。將所得混合物用3 x 50 mL水和1 x 50 mL鹽水洗滌。將有機相經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用正庚烷/EA（20:1）洗脫，以得到呈淺黃色油狀物的5,5-雙(庚基氧基)戊酸 6-溴己基酯（4 g，產率：44.7%）。
C-40A-8 的合成 在0°C下、在氮氣氣氛下，向1-[(苄基氧基)羰基]-4-羥基吡咯啶-2-甲酸（2.15 g，8.104 mmol，1當量）和DMF（40 mL）的攪拌溶液中分批添加NaH（0.49 g，20.260 mmol，2.5當量）。將所得混合物在氮氣氣氛下、在0°C下攪拌30 min。在0°C下，向上述混合物中滴加5,5-雙(庚基氧基)戊酸 6-溴己基酯（4 g，8.104 mmol，1當量）。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。將反應倒入水/冰（100 mL）中。將水層用EtOAc（3 x 100 mL）萃取。將有機相用3 x 100 mL水和1 x 100 mL鹽水洗滌。將有機相經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，以得到1-[(苄基氧基)羰基]-4-[(6-{[5,5-雙(庚基氧基)戊醯基]氧基}己基)氧基]吡咯啶-2-甲酸（4.0 g，粗品）。粗產物不經進一步純化直接用於下一步。
C-40A-10 的合成 在室溫下，向250 mL圓底燒瓶中添加1-[(苄基氧基)羰基]-4-[(6-{[5,5-雙(庚基氧基)戊醯基]氧基}己基)氧基]吡咯啶-2-甲酸（4 g）、DCM（80 mL）、DIEA（1.53 g，11.800 mmol，2當量）、HATU（2.69 g，7.080 mmol，1.2當量）和(2-胺基乙基)二乙胺（0.69 g，5.900 mmol，1當量）。將所得混合物在氮氣氛下於室溫攪拌過夜。將所得混合物用3 x 50 mL水和1x50 mL鹽水洗滌。將有機相經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用DCM/MeOH（10:1）洗脫，以得到呈淺黃色油狀物的4-[(6-{[5,5-雙(庚基氧基)戊醯基]氧基}己基)氧基]-2-{[2-(二乙基胺基)乙基]胺基甲醯基}吡咯啶-1-甲酸苄基酯（2 g）。
C-40A-11 的合成 在氮氣氣氛下，在500 mL圓底燒瓶中，向4-[(6-{[5,5-雙(庚基氧基)戊醯基]氧基}己基)氧基]-2-{[2-(二乙基胺基)乙基]胺基甲醯基}吡咯啶-1-甲酸苄基酯（2 g，2.577 mmol，1當量）在100 mL EtOH中之溶液中添加Pd/C（0.4 g，20% wt）。將混合物在氫氣氣氛下使用氫氣球在室溫下氫化18 h。將混合物通過矽藻土墊過濾並將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法純化，用DCM/MeOH（10:1）洗脫，以得到呈淺黃色油狀物的5,5-雙(庚基氧基)戊酸6-[(5-{[2-(二乙基胺基)乙基]胺基甲醯基}吡咯啶-3-基)氧基]己基酯（0.8 g，產率：48.6%）。
C-40A-0 的合成 在室溫下，向100 mL圓底燒瓶中添加6,6-雙(辛基氧基)己酸（464.30 mg，1.246 mmol，1.00當量）、DCM（16 mL）、DIEA（322.12 mg，2.492 mmol，2.00當量）、HATU（568.59 mg，1.495 mmol，1.2當量）和5,5-雙(庚基氧基)戊酸6-[(5-{[2-(二乙基胺基)乙基]胺基甲醯基}吡咯啶-3-基)氧基]己基酯（800.00 mg，1.246 mmol，1當量）。將所得混合物在氮氣氛圍下在室溫下攪拌18小時。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物溶解在正庚烷（300 mL）中。將所得混合物用2 x 50 mL MeOH/H2O = 4/1洗滌。將有機相用無水Na2SO4乾燥並在真空下濃縮。將粗產物藉由逆相快速層析法純化，條件如下：柱，XB-苯基；流動相，H2O（0.1% FA）中之MeCN，16 min內50%至90%梯度；檢測器，UV 200 nm。將級分用飽和Na2CO3（1.0%，水性）鹼化至pH = 8並濃縮以去除MeCN。將殘餘物溶解在正庚烷（100 mL）中。將混合物用MeOH/H2O（4/1，2 x 20 mL）和水（1 x 50 mL）洗滌。將有機相經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，以得到呈淺黃色油狀物的5,5-雙(庚基氧基)戊酸6-({1-[6,6-雙(辛基氧基)己醯基]-5-{[2-(二乙基胺基)乙基]胺基甲醯基}吡咯啶-3-基}氧基)己基酯（147.9 mg，產率：11.9%）。LC-MS-PH-AERA-SDPC-2024-01-C-40A-0：(ES, m/z)：996.8 [M+H]+；1H-NMR-PH-AERA-SDPC-2024-01-C-40A-0：（300 MHz，CDCl3，ppm）：δ 4.491-4.474 (m, 1H), 4.460-4.442 (m, 2H), 4.233-4.200 (m, 1H), 4.065 (t,J= 6.9 Hz, 2H), 3.750 (s, 1H), 3.606-3.523 (m, 4H), 3.465-3.389 (m, 7H), 3.366-3.250 (m, 2H), 2.544-2.504 (m, 5H), 2.360-2.314 (m, 4H), 2.011 (s, 1H), 1.728-1.523 (m, 20H), 1.456-1.289 (m, 44H), 1.082 (s, 6H), 0.891 (t,J= 6.3 Hz, 12H)。[表X].本文所述之示例性組成物及其特性
組成物 可電離脂質 IL 莫耳 % DSPC 莫耳 % Chol 莫耳 % DMG-PEG 莫耳 % DSPE-PEG-Fab 莫耳 % DSPE-PEG- 疊氮化物莫耳 % Fab 來源 粒度 PDI EE mRNA 劑量（ mg/kg ） % GFP+ T 細胞
1 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 97.42 0.0901 92 GFP 1 ***
2 A-31 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 102.1 0.1182 91 GFP 1 **
3 B-13 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 81.96 0.1073 88 GFP 1 *
5 C-40 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 130.1 0.1152 99 GFP 1 *
6 E-1 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 78.43 0.0410 95 GFP 1 *
7 A-4 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 81.75 0.0719 97 GFP 1 **
8 A-6 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 96.83 0.0191 98 GFP 1 **
9 A-31 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 103.2 0.0218 98 GFP 1 **
10 B-9 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 79.95 0.0395 59 GFP 1 *
11 B-13 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 130.4 0.0249 55 GFP 1 *
12 C-15 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 82.44 0.1977 99 GFP 1 *
14 C-40 44.3 11.1 42.7 1.66 0.07 0.14 Fab1 123.6 0.2266 99 GFP 1 *
18 A-4 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 93.4 0.089 87 GFP 1 **
19 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 92.91 0.089 95 GFP 1 ****
20 A-31 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 87.62 0.082 97 GFP 1 **
21 B-9 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 104.9 0.1272 83 GFP 1 *
22 DLinKDMA 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab1 117.7 0.008 81 GFP 1 *
23 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab1 103.3 0.112 95 GFP 0.075 ***
24 A-6 24.7 45.9 29.2 0.00 0.06 0.12 Fab1 107.5 0.094 91 GFP 0.075 **
25 A-6 40.5 36.3 23.1 0.00 0.05 0.10 Fab1 106.9 0.113 97 GFP 0.075 ****
26 A-6 39.1 30.7 30.1 0.00 0.06 0.13 Fab1 91.08 0.108 98 GFP 0.075 ***
27 A-6 29.4 47.9 22.6 0.00 0.05 0.09 Fab1 128.6 0.157 91 GFP 0.075 ***
28 A-6 36.8 44.5 18.4 0.00 0.06 0.12 Fab1 127.4 0.115 93 GFP 0.075 ***
29 A-6 30.7 37.2 32.0 0.00 0.05 0.10 Fab1 93.93 0.08 97 GFP 0.075 ***
30 A-6 29.4 35.5 34.8 0.00 0.07 0.15 Fab1 87.61 0.143 96 GFP 0.075 **
31 A-6 21.3 53.4 25.2 0.00 0.05 0.10 Fab1 126.7 0.163 87 GFP 0.075 **
32 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab1 91.48 0.136 97 GFP 0.075 ***
33 A-6 27.5 51.1 21.2 0.00 0.07 0.14 Fab1 95.19 0.0631 96 GFP 0.075 **
34 A-6 22.4 41.6 35.8 0.00 0.06 0.11 Fab1 82.25 0.119 98 GFP 0.075 **
35 A-6 46.4 27.0 26.5 0.00 0.06 0.11 Fab1 97.4 0.099 98 GFP 0.075 **
36 A-6 35.9 43.4 20.5 0.00 0.04 0.09 Fab1 105.5 0.116 97 GFP 0.075 ***
37 A-6 44.1 39.4 16.3 0.00 0.05 0.10 Fab1 105.3 0.117 97 GFP 0.075 **
38 A-6 37.5 33.5 28.9 0.00 0.04 0.09 Fab1 91.85 0.0845 98 GFP 0.075 **
39 A-6 43.7 34.3 21.8 0.00 0.07 0.14 Fab1 93.1 0.079 98 GFP 0.075 **
40 A-6 35.3 27.8 36.7 0.00 0.06 0.11 Fab1 86.53 0.079 98 GFP 0.075 **
41 A-6 31.9 52.0 16.0 0.00 0.05 0.10 Fab1 114.4 0.117 95 GFP 0.075 **
42 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab1 102.5 0.175 98 GFP 0.075 ****
43 A-6 27.2 44.4 28.3 0.00 0.04 0.09 Fab1 116.8 0.178 97 GFP 0.075 ***
44 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.08 0.17 Fab1 95.1 0.124 97 GFP 0.075 ***
45 A-6 23.3 58.5 18.0 0.00 0.06 0.12 Fab1 162.9 0.176 85 GFP 0.075 *
46 A-6 26.2 31.7 41.9 0.00 0.06 0.13 Fab1 73.03 0.083 98 GFP 0.075 **
47 A-6 19.5 49.1 31.3 0.00 0.05 0.10 Fab1 133.5 0.215 95 GFP 0.075 ***
48 A-6 51.1 29.7 19.0 0.00 0.06 0.12 Fab1 106.5 0.056 99 GFP 0.075 ***
49 A-6 38.7 46.8 14.4 0.00 0.05 0.09 Fab1 143.1 0.197 94 GFP 0.075 ***
50 A-6 42.5 24.7 32.7 0.00 0.05 0.10 Fab1 105.8 0.051 99 GFP 0.075 ***
51 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.04 0.08 Fab1 106.7 0.155 98 GFP 0.075 ***
52 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab2 120 0.088 88 GFP 0.1 ***
53 A-17 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 98.71 0.074 73 GFP 1 ****
54 A-17 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 98.71 0.074 73 GFP 0.3 ****
55 A-17 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 98.71 0.074 73 GFP 0.1 ****
56 A-17 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 98.71 0.074 73 GFP 0.03 ***
57 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 75.36 0.12 89 GFP 1 ***
58 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 75.36 0.12 89 GFP 0.3 ***
59 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 75.36 0.12 89 GFP 0.1 **
60 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 75.36 0.12 89 GFP 0.03 *
61 A-6 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 86.87 0.1424 88 GFP 0.1 ****
62 A-32 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 122.1 0.0508 84 GFP 1 ****
63 A-32 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 122.1 0.0508 84 GFP 0.3 ****
64 A-32 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 122.1 0.0508 84 GFP 0.1 ****
65 A-32 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 122.1 0.0508 84 GFP 0.03 **
66 A-33 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 104.9 0.0865 89 GFP 1 ****
67 A-33 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 104.9 0.0865 89 GFP 0.3 ****
68 A-33 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 104.9 0.0865 89 GFP 0.1 ***
69 A-33 33.0 39.9 25.4 1.54 0.05 0.11 Fab2 104.9 0.0865 89 GFP 0.03 **
70 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab2 92.4 0.078 88 GFP 0.05 ***
71 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab2 107 0.1 89 GFP 0.075 **
72 A-6 33.5 40.5 25.8 0.00 0.05 0.11 Fab3 87.5 0.04 83 GFP 0.075 ***
73 ALC-315 33.1 40 25.5 1.5 0 0 Fab1 124.9 0.185 77 GFP 1 *
74 ALC-315 32.9 39.7 25.3 1.5 0.2 0.4 Fab1 134.3 0.109 83 GFP 1 ***
75 ALC-315 33 39.9 25.4 1.5 0.1 0.1 Fab1 128.2 0.082 85 GFP 1 ***
[表XI].本文所述之另外之示例性組成物及其特性
組成物 可電離脂質 IL 莫耳 % DSPC 莫耳 % Chol 莫耳 % DMG-PEG2000 莫耳 % DSPE-PEG2000-Fab 莫耳 % Fab 來源 粒度 PDI EE mRNA 劑量（ mg/kg ） % GFP+ T 細胞
76 A-6 34.0 32.25 32.25 1.45 0.05 Fab3 58.8 0.15 90 eGFP 0.1 **
77 A-40 34.0 32.25 32.25 1.45 0.05 Fab3 61.6 0.18 89 eGFP 0.1 *
78 A-41 34.0 32.25 32.25 1.45 0.05 Fab3 53.5 0.09 91 eGFP 0.1 *
79 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 64.8 0.18 91 eGFP 0.1 ***
80 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 56.1 0.055 98 eGFP 0.1 **
81 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 56.1 0.055 98 eGFP 0.03
82 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG1000） Fab3 54 0.082 98 eGFP 0.1 **
83 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG1000） Fab3 54 0.082 98 eGFP 0.03
84 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG3400） Fab3 55.9 0.045 98 eGFP 0.1 **
85 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG3400） Fab3 55.9 0.045 98 eGFP 0.03 *
86 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG5000） Fab3 55.2 0.050 98 eGFP 0.1 **
87 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05（PEG5000） Fab3 55.2 0.050 98 eGFP 0.03 *
88 A-4 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 64.9 0.13 89 eGFP 0.1 ****
89 A-4 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 64.9 0.13 89 eGFP 0.03 **
90 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 82.0 0.09 88 eGFP 0.1 ***
91 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 82.0 0.09 88 eGFP 0.03 **
92 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 62.6 0.056 96 eGFP 0.1 ****
93 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 62.6 0.056 96 eGFP 0.03 *
94 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 63.71 0.10 89 eGFP 0.1 ***
95 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 64.87 0.08 82 eGFP 0.1 ***
96 A-6 47.22 26.22 26.22 0.31 0.03 Fab3 84.45 0.07 95 eGFP 0.1 ****
97 A-6 46.4 25.8 25.8 1.97 0.03 Fab3 72.89 0.10 94 eGFP 0.1 ***
98 A-6 46.3 28.9 24.4 0.4 0.03 Fab3 74.55 0.05 96 eGFP 0.1 ****
99 A-6 46.3 28.9 24.4 0.4 0.03 Fab3 74.55 0.05 96 eGFP 0.03 **
100 A-6 43.7 26.2 29.3 0.7 0.03 Fab3 70.15 0.06 96 eGFP 0.1 ****
101 A-6 43.7 26.2 29.3 0.7 0.03 Fab3 70.15 0.06 96 eGFP 0.03 **
102 A-6 41.7 22.8 34.6 0.9 0.04 Fab3 71.46 0.06 94 eGFP 0.1 ***
103 A-6 41.7 22.8 34.6 0.9 0.04 Fab3 71.46 0.06 94 eGFP 0.03 *
104 A-6 48.1 33.6 17.1 1.2 0.04 Fab3 72.64 0.06 96 eGFP 0.1 ****
105 A-6 48.1 33.6 17.1 1.2 0.04 Fab3 72.64 0.06 96 eGFP 0.03 ***
106 A-6 48.6 34.6 16.4 0.4 0.04 Fab3 86.0 0.03 97 eGFP 0.1 ****
107 A-6 48.6 34.6 16.4 0.4 0.04 Fab3 86.0 0.03 97 eGFP 0.03 **
108 A-6 33.0 40.0 25.4 1.55 0.05 Fab3 58.89 0.07 91 eGFP 0.1 ***
109 A-6 48.57 34.59 16.43 0.36 0.04 Fab3 84.09 0.06 94 eGFP 0.1 ****
110 A-6 35.6 16.35 47.42 0.59 0.06 Fab3 65.3 0.01 93 eGFP 0.1
111 A-6 47.11 16.84 35.14 0.87 0.04 Fab3 75.9 0.02 93 eGFP 0.1 **
112 A-6 35.77 34.34 28.73 1.12 0.04 Fab3 76.28 0.11 91 eGFP 0.1 **
113 A-6 37.39 30.49 29.91 2.13 0.09 Fab3 56.79 0.06 85 eGFP 0.1 *
114 A-6 39.64 30.12 29.33 0.87 0.05 Fab3 67.35 0.06 93 eGFP 0.1 ***
115 A-6 36.03 34.49 27.75 1.68 0.06 Fab3 63.86 0.08 88 eGFP 0.1 *
116 A-6 36.58 35.02 28.17 0.18 0.06 Fab3 72.24 0.07 93 eGFP 0.1 **
117 A-6 42.05 34.56 22.02 1.33 0.05 Fab3 74.87 0.09 93 eGFP 0.1 ***
118 A-6 42.56 34.97 22.28 0.14 0.05 Fab3 84.04 0.02 94 eGFP 0.1 ***
119 A-6 33.04 39.93 25.44 1.54 0.05 Fab3 72.68 0.08 89 eGFP 0.1 **
120 A-4 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 107.6 0.16 95 eGFP 1.0 ****
121 A-4 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 107.6 0.16 95 eGFP 0.1 **
122 A-4 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 107.6 0.16 95 eGFP 0.03 *
123 A-4 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 92.8 0.08 96 eGFP 1.0 **
124 A-4 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 92.8 0.08 96 eGFP 0.1 *
125 A-4 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 92.8 0.08 96 eGFP 0.03
126 A-6 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 91.2 0.16 96 eGFP 1.0 ****
127 A-6 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 91.2 0.16 96 eGFP 0.1 ***
128 A-6 33.5 40.5 25.8 0.20 0.05 Fab3 91.2 0.16 96 eGFP 0.03
129 A-6 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 87.4 0.09 95 eGFP 1.0 **
130 A-6 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 87.4 0.09 95 eGFP 0.1 *
131 A-6 44.4 11.2 42.7 1.7 0.07 Fab3 87.4 0.09 95 eGFP 0.03
132 A-4 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 105.48 0.16 86 eGFP 1.0 ****
133 A-4 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 105.48 0.16 86 eGFP 0.1 ***
134 A-4 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 105.48 0.16 86 eGFP 0.03 *
135 A-4 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 110.4 0.13 88 eGFP 1.0 ****
136 A-4 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 110.4 0.13 88 eGFP 0.1 **
137 A-4 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 110.4 0.13 88 eGFP 0.03
138 A-6 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 77.0 0.12 88 eGFP 1.0 ****
139 A-6 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 77.0 0.12 88 eGFP 0.1 ***
140 A-6 33.0 39.9 25.4 1.5 0.05 Fab3 77.0 0.12 88 eGFP 0.03 *
141 A-6 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 82.0 0.17 83 eGFP 1.0 ****
142 A-6 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 82.0 0.17 83 eGFP 0.1 **
143 A-6 33.1 39.9 25.5 1.5 0.02 Fab3 82.0 0.17 83 eGFP 0.03 *
* ＞ 10%，** 20-40%，*** 40-50%，**** ＞ 50%Fab1消化的mAbFab2細胞產生的FabFab3細胞產生的Fab'
儘管出於清楚理解之目的已經藉由說明和實例的方式稍為詳細地描述了前述發明，但是該等描述和實例不應當被解釋為限制本發明之範圍。本文引用的所有專利和科學文獻之揭露內容均以其全文藉由援引明確併入。其他實施方式在申請專利範圍內。
無
無
無
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Claims (195)

  1. 一種具有式 (A-II) 的化合物：(A-II)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中L係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L1係視需要經取代的C1-6伸烷基或C2-6亞雜烷基；每個L2獨立地是C1-6伸烷基；L3係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L4係不存在、視需要經取代的C1-10伸烷基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；L5係視需要經取代的C1-10烷基、視需要經取代的C1-10烯基、視需要經取代的C1-10炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-；每個X2係不存在、-OC(O)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、-C(O)NH-或-OC(O)O-；每個R獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；R1係氫、視需要經取代的苯基、視需要經取代的3員至7員環脂肪族、包含1-3個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的3員至7員雜環基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的5員至6員單環雜芳基、包含1-4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的視需要經取代的8員至10員雙環雜芳基，-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-CN、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2、-NR2C(O)N(R2)2、-NR2C(S)N(R2)2、-NR2C(NR2)N(R2)2、-NR2C(CHR2)N(R2)2、-N(OR2)C(O)R2、-N(OR2)S(O)2R2、-N(OR2)C(O)OR2、-N(OR2)C(O)N(R2)2、-N(OR2)C(S)N(R2)2、-N(OR2)C(NR2)N(R2)2、-N(OR2)C(CHR2)N(R2)2、-C(NR2)N(R2)2、-C(NR2)R2、-C(O)N(R2)OR2、-C(R2)N(R2)2C(O)OR2、-CR2(R3)2、-OP(O)(OR2)2或-P(O)(OR2)2；或R1係選自以下的環：3員至7員環脂肪族和包含1-3個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3員至7員雜環基，其中該環脂肪族或雜環基環視需要經1-4個R2或R3基團取代；每個R2獨立地是氫、側氧基、-CN、-NO2、-OR4、-S(O)2R4、-S(O)2N(R4)2、-(CH2)n-R4或視需要經取代的選自以下的基團：C1-6脂肪族、苯基、3員至7員環脂肪族、包含1-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5員至6員單環雜芳基，以及包含1-3個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3員至7員雜環基；或者兩次出現的R2與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧或硫的雜原子；每個R3獨立地是-(CH2)n-R4；或者兩次出現的R3與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的5員至6員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧或硫的雜原子；每個R4獨立地是氫、-OR5、-N(R5)2、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-CN、-C(O)N(R5)2、-NR5C(O)R5、-OC(O)N(R5)2、-N(R5)C(O)OR5、-NR5S(O)2R5、-NR5C(O)N(R5)2、-NR5C(S)N(R5)2或-NR5C(NR5)N(R5)2；並且每個R5獨立地是氫或視需要經取代的C1-6脂肪族；或者兩次出現的R5與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R6獨立地是C4-12脂肪族；並且每個n獨立地是0至4。
  2. 如請求項1所述之化合物，其中R1係-N(R2)2。
  3. 如請求項1所述之化合物，其中L1-R1選自由以下組成之群組：。
  4. 如請求項1所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  5. 如請求項1所述之化合物，其中係。
  6. 如請求項1所述之化合物，其中係。
  7. 如請求項1所述之化合物，其中係。
  8. 一種具有式 (B-I) 的化合物：(B-I)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中每個R’獨立地係不存在、視需要經取代的C1-6烷基或視需要經取代的C1-6雜烷基；每個L獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；每個X獨立地是O、S、N(R”)、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；每個Z獨立地是、或；條件是Z中之至少一個或兩個係或；m中之每一個獨立地是1-9；t係1、2或3；X10係不存在、O、S、N（R”）、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；R”係H、、或；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；每個R11獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基和苯基；並且每個R10獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基和苯基。
  9. 如請求項8所述之化合物，其中Z係。
  10. 如請求項8所述之化合物，其中Z係。
  11. 如請求項8所述之化合物，其中R'係H或CH3。
  12. 如請求項8所述之化合物，其由式 (B-II) 表示：(B-II)，其中Z和R”各自獨立地是、或；條件是Z和R”中之至少兩個或三個係或。
  13. 如請求項8-12所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  14. 如請求項8-12所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：、、、和。
  15. 一種具有式 (C-I) 的化合物：或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中X20中之每一個獨立地係不存在、O、S、N（R”）、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；L20中之每一個獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；Z20中之每一個獨立地是、或；條件是Z20中之至少一個係或；m中之每一個係1-9；t係1、2或3；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R11中之每一個獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R10中之每一個獨立地是氫、OR6或視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；q係0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；係4員至8員環或雜環；L1係不存在、C1-6伸烷基、或C2-6亞雜烷基；R1係氫、視需要經取代的苯基、視需要經取代的3員至7員環脂肪族、包含1-3個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的視需要經取代的3員至7員雜環基、包含1-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的視需要經取代的5員至6員單環雜芳基、包含1-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的視需要經取代的8員至10員雙環雜芳基，-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-CN、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2、-NR2C(O)N(R2)2、-NR2C(S)N(R2)2、-NR2C(NR2)N(R2)2、-NR2C(CHR2)N(R2)2、-N(OR2)C(O)R2、-N(OR2)S(O)2R2、-N(OR2)C(O)OR2、-N(OR2)C(O)N(R2)2、-N(OR2)C(S)N(R2)2、-N(OR2)C(NR2)N(R2)2、-N(OR2)C(CHR2)N(R2)2、-C(NR2)N(R2)2、-C(NR2)R2、-C(O)N(R2)OR2、-C(R2)N(R2)2C(O)OR2、-CR2(R3)2、-OP(O)(OR2)2或-P(O)(OR2)2；或R1係選自以下的環：3員至7員環脂肪族和包含1-3個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3員至7員雜環基，其中該環脂肪族或雜環基環視需要經1-4個R2或R3基團取代；每個R2獨立地是氫、側氧基、-CN、-NO2、-OR4、-S(O)2R4、-S(O)2N(R4)2、-(CH2)n-R4或視需要經取代的選自以下的基團：C1-6脂肪族、苯基、3員至7員環脂肪族、包含1-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的5員至6員單環雜芳基，以及包含1-3個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3員至7員雜環基；或者兩次出現的R2與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧和硫的雜原子；每個R3獨立地是-(CH2)n-R4；或者兩次出現的R3與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的5員至6員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧或硫的雜原子；每個R4獨立地是氫、-OR5、-N(R5)2、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-CN、-C(O)N(R5)2、-NR5C(O)R5、-OC(O)N(R5)2、-N(R5)C(O)OR5、-NR5S(O)2R5、-NR5C(O)N(R5)2、-NR5C(S)N(R5)2或-NR5C(NR5)N(R5)2；並且每個R5獨立地是氫或視需要經取代的C1-6脂肪族；或者兩次出現的R5與它們所附接的一或多個原子一起形成視需要經取代的4員至7員雜環基，該雜環基包含0-1個另外的選自氮、氧或硫的雜原子；每個R6獨立地是C4-12脂肪族；並且每個n獨立地是0至4。
  16. 如請求項15所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  17. 如請求項15所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  18. 如請求項15所述之化合物，其中係或。
  19. 如請求項15-18所述之化合物，其中L1係不存在，並且R1係-OR2、-C(O)OR2、-C(O)SR2、-OC(O)R2、-OC(O)OR2、-N(R2)2、-C(O)N(R2)2、-S(O)2N(R2)2、-NR2C(O)R2、-OC(O)N(R2)2、-N(R2)C(O)OR2、-NR2S(O)2R2、或-NR2C(O)N(R2)2；並且R2如請求項15中所定義。
  20. 如請求項15所述之化合物，其中R1係-OR2或-C(O)OR2。
  21. 如請求項15所述之化合物，其中L1-R1選自由以下組成之群組： 和
  22. 如請求項15所述之化合物，其由式 (C-II) 表示：(C-II)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如請求項15中所定義。
  23. 如請求項15所述之化合物，其由式 (C-III) 表示：(C-III)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如請求項15中所定義。
  24. 如請求項15所述之化合物，其中-L20-Z20選自由以下組成之群組：
  25. 如請求項15所述之化合物，其由式 (C-IV) 表示：(C-IV)其中L1係不存在，R1係OR2，q係2-9，X20係OC(O)或C(O)O，R2、L20和Z20如請求項15中所定義。
  26. 如請求項15-25所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  27. 如請求項15-25所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：、、、和。
  28. 一種具有式 (E-I) 的化合物：(E-I)或該化合物的N-氧化物、異構物、或其藥學上可接受的鹽，其中X30中之每一個獨立地係不存在、O、S、N（R”）、S-S、OC(O)、C(O)O、C(O)NH、NHC(O)、OC(O)O、OC(O)NH或NHC(O)O；L30中之每一個獨立地係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；X31中之每一個獨立地是NR”；其中R”係H、、或；條件是Z30中之至少一個係或；Z30中之每一個獨立地是、或；條件是Z30中之至少一個係或；m中之每一個獨立地是1至9；t係1、2或3；L10係視需要經取代的C1-10伸烷基、視需要經取代的C1-10亞烯基、視需要經取代的C1-10亞炔基或視需要經取代的C2-10亞雜烷基；R11中之每一個獨立地是C2-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、經包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環取代的C2-C10脂肪族、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基；並且R10中之每一個獨立地係視需要經取代的選自以下的基團：C6-20脂肪族、3員至12員環脂肪族、包含0-4個獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的7員至12員橋接雙環、1-金剛烷基、2-金剛烷基、固醇基或苯基。
  29. 如請求項28所述之化合物，其由式 (E-II) 表示(E-II)其中X30、L30、X31和Z30如請求項20中所定義。
  30. 如請求項28所述之化合物，其中X30係C(O)O、OC(O)、C(O)NH、NHC(O)或O。
  31. 如請求項28-30所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：
  32. 如請求項28-30所述之化合物，其中選自由以下組成之群組：、、、和。
  33. 如請求項28所述之化合物，其中X30係C(O)NH。
  34. 如請求項33所述之化合物，其中X30係C(O)O。
  35. 如請求項28所述之化合物，其中X31係N-R”。
  36. 如請求項28所述之化合物，其中Z30選自由以下組成之群組：
  37. 如請求項1-36中任一項所述之化合物，其中該化合物之質子化形式的pKa係約4.5至約8.0。
  38. 如請求項1所述之化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 A-1 雙(6,6-雙(庚基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-2 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-3 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-4 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-5 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-6 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-7 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-𠰌啉代丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-8 雙(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-9 雙(5-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-10 辛二酸1-(3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基)8-庚基酯 A-11 (Z)-十五碳-7-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-12 (Z)-十三碳-5-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-13 油酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-14 (9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-15 雙(6,6-雙(((Z)-癸-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-16 6-(壬-3-炔-1-基氧基)-6-(辛-3-炔-1-基氧基)己酸3-((6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-17 4-((10,32-雙(辛-3-炔-1-基氧基)-13,18,24,29-四側氧基-9,14,19,23,28,33-六氧雜四十二碳5,36-二炔-21-基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸癸-4-基酯 A-18 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(2-羥基乙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-19 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-20 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-21 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-22 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-23 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-(5,5-雙(癸基氧基)-N-(2-羥基乙基)戊醯胺)乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-32 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(二甲基胺基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-24 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-25 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(4-(二甲基胺基)丁基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-26 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(N-(3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)-4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-27 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(二甲基胺基)丙基)(戊基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-28 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(環己基(3-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-29 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)(甲基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-30 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-31 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
    。
  39. 如請求項8所述之化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 B-1 四(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(氮烷三基))四(丁烷-4,1-二基)酯 B-2 四(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基))雙(氮烷三基))四(丁烷-4,1-二基)酯 B-3 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯 B-4 6,6'-(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯 B-5 6-((4-(4-(2-((4-(雙(2-羥基十二烷基)胺基)丁醯基)氧基)乙基)-2,5-二甲基哌𠯤-1-基)丁基)(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)胺基)己酸十一烷基酯 B-6 6,6'-(((2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(丁烷-4,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二己酸雙十一烷基酯 B-7 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二庚酸雙十一烷基酯 B-8 6,6'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)氮烷二基))二辛酸雙十一烷基酯 B-9 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)(2,5-二甲基哌𠯤-1,4-二基)雙(乙烷-2,1-二基)酯 B-10 6,6-雙(辛基氧基)己酸5-((2-(4-(2-((6,6-雙(辛基氧基)己醯基)氧基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)胺基)戊基酯 B-11 N,N'-(哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺) B-12 N-(6,6-雙(辛基氧基)己基)-N-(2-(4-(2-((6,6-雙(辛基氧基)己基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)-6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺 B-13 N,N'-(哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙(N-(6,6-雙(辛基氧基)己基)-6,6-雙(辛基氧基)己-1-胺) B-14 8-((6,6-雙(辛基氧基)己基)(2-(4-(2-((8-(辛基氧基)-8-側氧基辛基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)胺基)辛酸辛基酯 B-15 8,8'-((哌𠯤-1,4-二基雙(乙烷-2,1-二基))雙((6,6-雙(辛基氧基)己基)氮烷二基))二辛酸二辛基酯 B-16 N-(2-(4-(2-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)乙基)哌𠯤-1-基)乙基)-5-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)-N-(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)戊-1-胺
    。
  40. 如請求項15所述之化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 C-1 1-(4-(二甲基胺基)丁醯基)-4-(十五烷基氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-2 己二酸1-(5-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)戊醯基)-5-((2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙氧基)羰基)吡咯啶-3-基十七烷-9-基酯 C-3 1-(5-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)戊醯基)-4-(十九烷醯基氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯 C-4 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((6-((2-己基癸醯基)氧基)己基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯 C-5 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯 C-6 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸3-(二甲基胺基)丙基酯 C-7 2-己基癸酸5-((2-(雙(2-羥基乙基)胺基)乙基)胺基甲醯基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)吡咯啶-3-基酯 C-8 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)-4-((2-丁基庚醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸3-(二甲基胺基)丙基酯 C-9 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-𠰌啉代乙基酯 C-10 1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙醯基)-4-((6-((2-己基癸醯基)氧基)己基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯 C-11 4-(4-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)丁氧基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)吡咯啶-2-甲酸2-(4-甲基哌𠯤-1-基)乙基酯 C-12 4-(4-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)丁氧基)-1-(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯 C-13 6-((6-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)己基)(2-(3-(3-(二甲基胺基)丙氧基)吡咯啶-1-基)乙基)胺基)己酸十一烷基酯 C-14 4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-15 1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-16 4-(3-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-17 4-(3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-18 4-(3-((2-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(戊基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-19 4-(3-((2-(環己基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-20 4-(3-((2-(環丁基(2-羥基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙氧基)-1-(6-側氧基-6-(十一烷基氧基)己基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-21 1-(8,8-雙(辛基氧基)-5-側氧基辛基)-4-((2-己基癸醯基)氧基)吡咯啶-2-甲酸2-(吡咯啶-1-基)乙基酯 C-22 1-(5-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)戊基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-23 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸7-((4,4-雙(庚基氧基)丁醯基)氧基)庚基酯 C-24 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸十六烷基酯 C-25 1-(4-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯 C-26 5,5-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)戊酸6-((1-(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己醯基)-5-((2-(二乙基胺基)乙基)胺基甲醯基)吡咯啶-3-基)氧基)己基酯 C-27 1-(8-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)辛基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯 C-28 1-(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)-4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-2-甲酸(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯-1-基酯
    。
  41. 如請求項28所述之化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 E-1 六(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷三基))六(丙烷-3,1-二基)酯 E-2 六(4,4-二丙氧基丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷三基))六(己烷-6,1-二基)酯 E-3 N1,N3,N5-三(3-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)苯-1,3,5-三甲醯胺 E-4 苯-1,3,5-三甲酸三(3-(雙(4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)酯 E-5 苯-1,3,5-三甲酸三(3-(雙(3-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)丙基)胺基)丙基)酯 E-6 三(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基)酯 E-7 N1,N3,N5-三(3-((4-(2-己基-2-壬基-1,3-二氧戊環-4-基)丁基)胺基)丙基)苯-1,3,5-三甲醯胺 E-8 三(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((((苯-1,3,5-三羰基)三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基))三(氮烷二基))三(丙烷-3,1-二基)酯
    。
  42. 一種化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 D-1 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(環己基(2-羥基乙基)胺基)丁基)丙烷-1,3-二基酯 D-2 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)3-((2-(環己基(羥基甲基)胺基)乙基)(甲基)胺基)丙烷-1,2-二基酯 D-3 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(((5-(環己基(2-羥基乙基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯 D-4 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)2-(((5-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯 D-5 雙(6,6-雙(癸基氧基)己酸)2-(((5-(環己基(2-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)乙基)胺基)戊醯基)氧基)甲基)丙烷-1,3-二基酯
    。
  43. 一種用於將核酸靶向遞送至免疫細胞的脂質奈米顆粒（LNP），該脂質奈米顆粒包含脂質共混物，該脂質共混物包含：(a) 脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物，其包含具有式 (II) 的化合物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]；以及(b) 可電離陽離子脂質，其包含如請求項1至42所述之化合物中之任一種，其中該LNP進一步包含放置在其中的核酸。
  44. 如請求項43所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含結合T細胞抗原的抗體。
  45. 如請求項44所述之LNP，其中該T細胞抗原係CD3、CD4、CD7、CD8或其組合（例如，CD3和CD8兩者、CD4和CD8兩者或CD7和CD8兩者）。
  46. 如請求項43至45中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含結合自然殺手（NK）細胞抗原的抗體。
  47. 如請求項46所述之LNP，其中該NK細胞抗原係CD7、CD8、CD56或其組合（例如，CD7和CD8兩者）。
  48. 如請求項43至47中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團經由含有聚乙二醇（PEG）的連接子與該脂質共混物中之脂質共價偶合。
  49. 如請求項48所述之LNP，其中經由含有PEG的連接子與該免疫細胞靶向基團共價偶合的該脂質係二硬脂醯甘油（DSG）、二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（DSPE）、二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（DMPE）、二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（DSPG）、二肉豆蔻醯-甘油（DMG）、二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（DPPE）、二棕櫚醯-甘油（DPG）或神經醯胺。
  50. 如請求項48或49所述之LNP，其中該PEG係PEG 2000或PEG 3400。
  51. 如請求項43至50中任一項所述之LNP，其中該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物以0.001至0.5莫耳百分比（例如，0.002-0.2莫耳百分比）的範圍存在於該脂質共混物中。
  52. 如請求項43至51中任一項所述之LNP，其中該脂質共混物進一步包含結構脂質（例如，固醇）、中性磷脂和游離PEG-脂質中之一或多種。
  53. 如請求項43至52中任一項所述之LNP，其中該可電離陽離子脂質以30-70（例如，40-60）莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  54. 如請求項52所述之LNP，其中該固醇以20-70（例如，30-50）莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  55. 如請求項52或54所述之LNP，其中該固醇係膽固醇。
  56. 如請求項52至55中任一項所述之LNP，其中該中性磷脂選自由以下組成之群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DSPE）、1,2-二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DSPC）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DOPE）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DOPC）和鞘磷脂。
  57. 如請求項52至56中任一項所述之LNP，其中該中性磷脂以5-15莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  58. 如請求項52至57中任一項所述之LNP，其中該游離PEG-脂質選自由以下組成之群組：PEG-修飾的磷脂醯乙醇胺、PEG-修飾的磷脂酸、PEG-修飾的神經醯胺、PEG-修飾的二烷基胺、PEG-修飾的二醯基甘油和PEG-修飾的二烷基甘油，或者其中該PEG脂質係PEG-二油醯甘油（PEG-DOG）、PEG-二肉豆蔻醯-甘油（PEG-DMG）、PEG-二棕櫚醯-甘油（PEG-DPG）、PEG-二亞油醯-甘油-磷脂醯乙醇胺（PEG-DLPE）、PEG-二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DMPE）、PEG-二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DPPE）、PEG-二硬脂醯甘油（PEG-DSG）、PEG-二醯基甘油（PEG-DAG，例如PEG-DMG、PEG-DPG和PEG-DSG）、PEG-神經醯胺、PEG-二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（PEG-DSPG）、PEG-二油醯-甘油-磷酸乙醇胺（PEG-DOPE）、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-雙十四烷基乙醯胺或PEG-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DSPE）脂質。
  59. 如請求項52至57中任一項所述之LNP，其中該游離PEG-脂質包含二醯基磷脂醯乙醇胺，其包含二棕櫚醯（C16）鏈或二硬脂醯（C18）鏈，並且視需要該游離PEG-脂質包含PEG-DPG和PEG-DMG。
  60. 如請求項52至59中任一項所述之LNP，其中該游離PEG-脂質以1-4莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  61. 如請求項52至60中任一項所述之LNP，其中該游離PEG-脂質包含與該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物中之脂質相同或不同的脂質。
  62. 如請求項43至61中任一項所述之LNP，其中該LNP具有在50 nm-200 nm範圍內的平均直徑。
  63. 如請求項62所述之LNP，其中該LNP具有約100 nm的平均直徑。
  64. 如請求項43至63中任一項所述之LNP，其中該LNP具有在從0.05至1範圍內的多分散性指數。
  65. 如請求項43至64中任一項所述之LNP，其中該LNP在pH 5下具有從約+10 mV至約+30 mV的ζ電位。
  66. 如請求項43至65中任一項所述之LNP，其中該核酸係DNA或RNA。
  67. 如請求項66所述之LNP，其中該RNA係mRNA。
  68. 如請求項67所述之LNP，其中該mRNA編碼受體、生長因子、激素、細胞介素、抗體、抗原、酶或疫苗。
  69. 如請求項67所述之LNP，其中該mRNA編碼能夠調節該免疫細胞中之免疫反應的多肽。
  70. 如請求項67所述之LNP，其中該mRNA編碼能夠對該免疫細胞進行重新程序設計的多肽。
  71. 如請求項69所述之LNP，其中該mRNA編碼合成T細胞受體（synTCR）或嵌合抗原受體（CAR）。
  72. 如請求項43至71中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含抗體，並且該抗體係Fab或免疫球蛋白單可變結構域（例如，奈米抗體）。
  73. 如請求項43至71中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv或scFv片段。
  74. 如請求項72或請求項73所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含被工程化以敲除C末端的天然鏈間二硫鍵的Fab。
  75. 如請求項74所述之LNP，其中該Fab包含含有C233S取代的重鏈片段和含有C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。
  76. 如請求項73至75中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含具有非天然鏈間二硫鍵（例如，工程化的包埋的鏈間二硫鍵）的Fab。
  77. 如請求項76所述之LNP，其中該Fab在該重鏈片段中包含F174C取代，並且在該輕鏈片段中包含S176C取代，根據Kabat編號。
  78. 如請求項73至77所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含在該重鏈或輕鏈片段的C末端含有半胱胺酸的Fab。
  79. 如請求項78所述之LNP，其中該Fab進一步包含在該Fab的重鏈片段與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。
  80. 如請求項72所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含免疫球蛋白單可變結構域。
  81. 如請求項72或80所述之LNP，其中該免疫球蛋白單可變結構域在該C末端包含半胱胺酸。
  82. 如請求項81所述之LNP，其中該免疫球蛋白單可變結構域包含VHH結構域，並且進一步包含間隔子，該間隔子包含在該VHH結構域與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。
  83. 如請求項73和80至82中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含兩個或更多個VHH結構域。
  84. 如請求項83所述之LNP，其中該兩個或更多個VHH結構域藉由胺基酸連接子連接。
  85. 如請求項83所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的第一VHH結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的第二VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域和該抗體輕鏈恒定結構域藉由一或多個二硫鍵連接。
  86. 如請求項72和80至82中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域藉由一或多個二硫鍵與抗體輕鏈恒定結構域連接。
  87. 如請求項85或86所述之LNP，其中該CH1結構域包含F174C和C233S取代，並且該輕鏈恒定結構域包含S176C和C214S取代，根據Kabat編號。
  88. 如請求項43至69中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含Fab，該Fab包含：(a) 含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 2或3之胺基酸序列的輕鏈片段；或(b) 含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈片段。
  89. 如請求項43至88中任一項所述之LNP，其中該可電離陽離子脂質選自脂質A-1至A-10。
  90. 如請求項43至88中任一項所述之LNP，其中該可電離陽離子脂質選自脂質A-11至A-20。
  91. 如請求項43至88中任一項所述之LNP，其中該可電離陽離子脂質選自脂質A-21至A-31。
  92. 如請求項43至91中任一項所述之LNP，其中該LNP包含：(a) 該可電離陽離子脂質；(b) 該偶聯物，其包含下式的化合物：[脂質] - [視需要的連接子] - [免疫細胞靶向基團]；(c) 固醇或其他結構脂質；(d) 中性磷脂；(e) 游離聚乙二醇（PEG）脂質；以及(f) 該核酸。
  93. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該免疫細胞係NK細胞，並且該免疫細胞靶向基團包含結合CD56的抗體。
  94. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該免疫細胞靶向基團包含結合CD7或CD8的抗體，並且該游離PEG脂質係DMG-PEG或PEG-DPG。
  95. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含抗體，並且該抗體係Fab或免疫球蛋白單可變結構域。
  96. 如請求項95所述之LNP，其中該Fab被工程化以敲除C末端的天然鏈間二硫鍵。
  97. 如請求項96所述之LNP，其中該Fab包含含有C233S取代的重鏈片段和含有C214S取代的輕鏈片段。
  98. 如請求項96所述之LNP，其中該Fab包含非天然鏈間二硫鍵。
  99. 如請求項96所述之LNP，其中該Fab在該重鏈片段中包含F174C取代，並且在該輕鏈片段中包含S176C取代。
  100. 如請求項95所述之LNP，其中該抗體係免疫球蛋白單可變（ISV）結構域，並且該ISV結構域係Nanobody® ISV。
  101. 如請求項100所述之LNP，其中該游離PEG脂質包含具有至少2000道爾頓的分子量的PEG。
  102. 如請求項101所述之LNP，其中該PEG具有約3000至5000道爾頓的分子量。
  103. 如請求項95所述之LNP，其中該抗體係Fab。
  104. 如請求項103所述之LNP，其中該Fab結合CD3，並且該LNP中之游離PEG脂質包含具有約2000道爾頓的分子量的PEG。
  105. 如請求項103所述之LNP，其中該Fab係抗CD4抗體，並且該LNP中之游離PEG脂質包含具有約3000至3500道爾頓的分子量的PEG。
  106. 如請求項95所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含兩個或更多個VHH結構域。
  107. 如請求項106所述之LNP，其中該兩個或更多個VHH結構域藉由胺基酸連接子連接。
  108. 如請求項107所述之LNP，其中該免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的第一VHH結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的第二VHH結構域。
  109. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該LNP結合CD3，並且還結合CD11a或CD18。
  110. 如請求項109所述之LNP，其中該LNP包含兩種偶聯物，其中第一偶聯物包含結合CD3的抗體，並且第二偶聯物包含結合CD11a或CD18的抗體。
  111. 如請求項109所述之LNP，其中該LNP包含一種偶聯物，並且該偶聯物包含結合CD3和CD11a兩者的雙特異性抗體。
  112. 如請求項109所述之LNP，其中該LNP包含一種偶聯物，並且該偶聯物包含結合CD3和CD18兩者的雙特異性抗體。
  113. 如請求項111或112所述之LNP，其中該雙特異性抗體係免疫球蛋白單可變結構域或Fab-ScFv。
  114. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該LNP結合該免疫細胞的CD7和CD8。
  115. 如請求項114所述之LNP，其中該LNP包含兩種偶聯物，其中第一偶聯物包含結合CD7的抗體，並且第二偶聯物結合CD8。
  116. 如請求項114所述之LNP，其中該LNP包含一種偶聯物，其中該偶聯物包含結合CD7和CD8的雙特異性抗體。
  117. 如請求項116所述之LNP，其中該雙特異性抗體係免疫球蛋白單可變結構域或Fab-ScFv。
  118. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP與作為第一類型的免疫細胞的免疫細胞的表面上的第一抗原結合，並且還與第二類型的免疫細胞的表面上的第二抗原結合。
  119. 如請求項118所述之LNP，其中該兩種不同類型的免疫細胞係CD4+ T細胞和CD8+ T細胞。
  120. 如請求項118所述之LNP，其中該LNP包含兩種偶聯物，並且第一偶聯物包含與該第一類型的免疫細胞的第一抗原結合的第一抗體，並且第二偶聯物包含與該第二類型的免疫細胞的第二抗原結合的第二抗體。
  121. 如請求項118所述之LNP，其中該LNP包含一種偶聯物，並且該偶聯物包含雙特異性抗體，並且該雙特異性抗體與該第一類型的免疫細胞上的第一抗原和該第二類型的免疫細胞上的第二抗原兩者結合。
  122. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該雙特異性抗體係免疫球蛋白單可變結構域或Fab-ScFv。
  123. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該免疫細胞靶向基團包含與CD3或CD7結合的單一抗體。
  124. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該免疫細胞靶向基團結合CD7、CD8或者CD7和CD8兩者。
  125. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至T細胞和NK細胞兩者，其中該免疫細胞靶向基團與以下結合：(a) CD3和CD56兩者；(b) CD8和CD56兩者；或(c) CD7和CD56兩者。
  126. 如請求項93至125中任一項所述之LNP，其中該LNP具有在50 nm-200 nm範圍內的平均直徑。
  127. 如請求項126所述之LNP，其中該LNP具有約100 nm的平均直徑。
  128. 如請求項93至127中任一項所述之LNP，其中該LNP具有在從0.05至1範圍內的多分散性指數。
  129. 如請求項93至128中任一項所述之LNP，其中該LNP在pH 5下具有從約+10 mV至約+30 mV的ζ電位。
  130. 如請求項93至129中任一項所述之LNP，其中該核酸係DNA或RNA。
  131. 如請求項130所述之LNP，其中該RNA係mRNA。
  132. 如請求項131所述之LNP，其中該mRNA編碼受體、生長因子、激素、細胞介素、抗體、抗原、酶或疫苗。
  133. 如請求項131所述之LNP，其中該mRNA編碼能夠調節該免疫細胞中之免疫反應的多肽。
  134. 如請求項133所述之LNP，其中該mRNA編碼能夠對該免疫細胞進行重新程序設計的多肽。
  135. 如請求項134所述之LNP，其中該mRNA編碼合成T細胞受體（synTCR）或嵌合抗原受體（CAR）。
  136. 如請求項43至92中任一項所述之LNP，其中該LNP用於將核酸遞送至免疫細胞，並且其中該免疫細胞靶向基團包含缺乏天然鏈間二硫鍵的Fab。
  137. 如請求項136所述之LNP，其中該Fab被工程化以用非半胱胺酸胺基酸替換天然恒定輕鏈和天然恒定重鏈上的形成天然鏈間二硫鍵的一個或兩個半胱胺酸，從而去除該Fab中之天然鏈間二硫鍵。
  138. 一種將核酸的遞送靶向至受試者之免疫細胞之方法，該方法包括使該免疫細胞與如請求項43至137中任一項所述之LNP接觸，其中該LNP包含該核酸。
  139. 一種在受試者之靶向免疫細胞中表現目的多肽之方法，該方法包括使該免疫細胞與如請求項43至137中任一項所述之LNP接觸，其中該LNP包含編碼該多肽的核酸。
  140. 一種調節受試者之靶免疫細胞的細胞功能之方法，該方法包括向該受試者投與如請求項43至137中任一項所述之LNP，其中該LNP包含調節該免疫細胞的細胞功能的核酸。
  141. 一種治療、改善或預防有需要的受試者之障礙或疾病的症狀之方法，該方法包括向該受試者投與LNP以將核酸遞送至該受試者之免疫細胞，其中該LNP如請求項43至137中任一項所述，其中該LNP包含該核酸。
  142. 如請求項141所述之方法，其中該障礙係免疫障礙、炎性障礙或癌症。
  143. 如請求項141所述之方法，其中該核酸編碼用於在治療或預防病原體感染的治療性或預防性疫苗中使用的抗原。
  144. 如請求項138至143中任一項所述之方法，其中該可電離陽離子脂質係。
  145. 如請求項138至143中任一項所述之方法，其中該可電離陽離子脂質係。
  146. 如請求項138至143中任一項所述之方法，其中該可電離陽離子脂質係。
  147. 如請求項138至146中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含結合T細胞抗原的抗體。
  148. 如請求項147所述之方法，其中該T細胞抗原係CD3、CD8或CD3和CD8兩者。
  149. 如請求項138至146中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含結合自然殺手（NK）細胞抗原的抗體。
  150. 如請求項149所述之方法，其中該NK細胞抗原係CD7、CD8或CD56。
  151. 如請求項138至150中任一項所述之方法，其中該抗體係人抗體或人源化抗體。
  152. 如請求項138至151中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團經由含有聚乙二醇（PEG）的連接子與該脂質共混物中之脂質共價偶合。
  153. 如請求項152所述之方法，其中經由含有PEG的連接子與該免疫細胞靶向基團共價偶合的脂質係二硬脂醯甘油（DSG）、二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（DSPE）、二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（DMPE）、二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（DSPG）、二肉豆蔻醯-甘油（DMG）、二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（DPPE）、二棕櫚醯-甘油（DPG）或神經醯胺。
  154. 如請求項152或153所述之方法，其中該PEG係PEG 2000。
  155. 如請求項138至154中任一項所述之方法，其中該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物以0.002-0.2莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  156. 如請求項138至155中任一項所述之方法，其中該可電離陽離子脂質以40-60莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  157. 如請求項138至156所述之方法，其中該固醇係膽固醇。
  158. 如請求項49至157中任一項所述之方法，其中該固醇以30-50莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  159. 如請求項138至158所述之方法，其中該中性磷脂選自由以下組成之群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DSPE）、1,2-二硬脂醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DSPC）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（DOPE）、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼（DOPC）、鞘磷脂（SM）。
  160. 如請求項138至159所述之方法，其中該中性磷脂以5-15莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  161. 如請求項138至160中任一項所述之方法，其中該游離PEG-脂質選自由以下組成之群組：PEG-修飾的磷脂醯乙醇胺、PEG-修飾的磷脂酸、PEG-修飾的神經醯胺、PEG-修飾的二烷基胺、PEG-修飾的二醯基甘油和PEG-修飾的二烷基甘油，該PEG脂質可為PEG-二油醯甘油（PEG-DOG）、PEG-二肉豆蔻醯-甘油（PEG-DMG）、PEG-二棕櫚醯-甘油（PEG-DPG）、PEG-二亞油醯-甘油-磷脂醯乙醇胺（PEG-DLPE）、PEG-二肉豆蔻醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DMPE）、PEG-二棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DPPE）、PEG-二硬脂醯甘油（PEG-DSG）、PEG-二醯基甘油（PEG-DAG，例如PEG-DMG、PEG-DPG和PEG-DSG）、PEG-神經醯胺、PEG-二硬脂醯-甘油-磷酸甘油（PEG-DSPG）、PEG-二油醯-甘油-磷酸乙醇胺（PEG-DOPE）、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-雙十四烷基乙醯胺或PEG-二硬脂醯-磷脂醯乙醇胺（PEG-DSPE）脂質。
  162. 如請求項138至160所述之方法，其中該游離PEG-脂質包含二醯基磷脂醯乙醇胺，其包含二肉豆蔻醯（C14）鏈、二棕櫚醯（C16）鏈或二硬脂醯（C18）鏈。
  163. 如請求項138至162中任一項所述之方法，其中該游離PEG-脂質以0.5-2.5莫耳百分比的範圍存在於該脂質共混物中。
  164. 如請求項138至163中任一項所述之方法，其中該游離PEG-脂質包含與該脂質-免疫細胞靶向基團偶聯物中之脂質相同或不同的脂質。
  165. 如請求項138至164所述之方法，其中該LNP具有在50 nm-200 nm範圍內的平均直徑。
  166. 如請求項165所述之方法，其中該LNP具有約100 nm的平均直徑。
  167. 如請求項138至166所述之方法，其中該LNP具有在從0.05至1範圍內的多分散性指數。
  168. 如請求項138至167所述之方法，其中該LNP在pH 5下具有從約+10 mV至約+30 mV的ζ電位。
  169. 如請求項138至168所述之方法，其中該核酸係DNA或RNA。
  170. 如請求項169所述之方法，其中該RNA係mRNA、tRNA、siRNA、gNRA或微RNA。
  171. 如請求項170所述之方法，其中該mRNA編碼受體、生長因子、激素、細胞介素、抗體、抗原、酶或疫苗。
  172. 如請求項170所述之方法，其中該mRNA編碼能夠調節該免疫細胞中之免疫反應的多肽。
  173. 如請求項170所述之方法，其中該mRNA編碼能夠對該免疫細胞進行重新程序設計的多肽。
  174. 如請求項170所述之方法，其中該mRNA編碼合成T細胞受體（synTCR）或嵌合抗原受體（CAR）。
  175. 如請求項138至174中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含抗體，並且該抗體係Fab或免疫球蛋白單可變結構域。
  176. 如請求項138至174中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含選自由以下組成之群組的抗體片段：Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv和scFv片段。
  177. 如請求項175或176所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含含有一或多個鏈間二硫鍵的Fab。
  178. 如請求項177所述之方法，其中該Fab包含含有F174C和C233S取代的重鏈片段和含有S176C和C214S取代的輕鏈片段，根據Kabat編號。
  179. 如請求項175至178中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含在該重鏈或輕鏈片段的C末端含有半胱胺酸的Fab。
  180. 如請求項175所述之方法，其中該Fab進一步包含在該Fab的重鏈片段與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。
  181. 如請求項176至180中任一項所述之方法，其中該Fab包含與抗體CH1結構域連接的重鏈可變結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的輕鏈可變結構域，其中該CH1結構域和該輕鏈恒定結構域藉由一或多個鏈間二硫鍵連接，並且其中該免疫細胞靶向基團進一步包含藉由胺基酸連接子與該輕鏈恒定結構域的C末端連接的單鏈可變片段（scFv）。
  182. 如請求項175所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含免疫球蛋白單可變結構域。
  183. 如請求項175或182所述之方法，其中該免疫球蛋白單可變結構域在該C末端包含半胱胺酸。
  184. 如請求項183所述之方法，其中該免疫球蛋白單可變結構域包含VHH結構域，並且進一步包含間隔子，該間隔子包含在該VHH結構域與該C末端半胱胺酸之間的一或多個胺基酸。
  185. 如請求項175和182至184中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含兩個或更多個VHH結構域。
  186. 如請求項185所述之方法，其中該兩個或更多個VHH結構域藉由胺基酸連接子連接。
  187. 如請求項185所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的第一VHH結構域和與抗體輕鏈恒定結構域連接的第二VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域和該抗體輕鏈恒定結構域藉由一或多個二硫鍵連接。
  188. 如請求項175和182至184中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含與抗體CH1結構域連接的VHH結構域，並且其中該抗體CH1結構域藉由一或多個二硫鍵與抗體輕鏈恒定結構域連接。
  189. 如請求項185或186所述之方法，其中該CH1結構域包含F174C和C233S取代，並且該輕鏈恒定結構域包含S176C和C214S取代，根據Kabat編號。
  190. 如請求項138至174中任一項所述之方法，其中該免疫細胞靶向基團包含Fab，該Fab包含：(a) 含有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 2或3之胺基酸序列的輕鏈片段；(b) 含有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的重鏈片段和含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的輕鏈片段。
  191. 如請求項138至190中任一項所述之方法，其中不超過5%非免疫細胞被該LNP轉染。
  192. 如請求項138至191中任一項所述之方法，其中由該LNP遞送的核酸或由該LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期比由參考LNP遞送的核酸或由該參考LNP遞送的核酸所編碼的多肽之半衰期長至少10%。
  193. 如請求項138至192中任一項所述之方法，其中至少10%免疫細胞被該LNP轉染。
  194. 如請求項138至193中任一項所述之方法，其中由該LNP遞送的核酸的表現水平比由參考LNP遞送的核酸的表現水平高至少10%。
  195. 一種化合物，其具有以下結構之一： 化合物 結構 名稱 A-1 雙(6,6-雙(庚基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-2 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-3 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-4 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-5 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-6 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-7 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-𠰌啉代丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-8 雙(4,4-雙(辛基氧基)丁酸)((2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-9 雙(5-((4,4-雙(辛基氧基)丁醯基)氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-10 辛二酸1-(3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基)8-庚基酯 A-11 (Z)-十五碳-7-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-12 (Z)-十三碳-5-烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-13 油酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-14 (9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸3-((6,6-雙(庚基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-15 雙(6,6-雙(((Z)-癸-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-16 4-((10,32-雙(辛-3-炔-1-基氧基)-13,18,24,29-四側氧基-9,14,19,23,28,33-六氧雜四十二碳5,36-二炔-21-基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸癸-4-基酯 A-17 6-(壬-3-炔-1-基氧基)-6-(辛-3-炔-1-基氧基)己酸3-((6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己醯基)氧基)-2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙基酯 A-18 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(2-羥基乙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-19 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(雙(2-羥基乙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-20 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-21 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-22 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-23 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(2-(5,5-雙(癸基氧基)-N-(2-羥基乙基)戊醯胺)乙基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-24-1 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(3-(3-(二甲基胺基)丙氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-24 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)哌啶-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-25 雙(5,5-雙(癸基氧基)戊酸)2-(4-(4-(二甲基胺基)丁基)哌𠯤-1-基)丙烷-1,3-二基酯 A-26 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(N-(3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)-4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-27 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(二甲基胺基)丙基)(戊基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-28 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(環己基(3-((2-羥基乙基)(甲基)胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-29 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-((3-(環丙基(2-羥基乙基)胺基)丙基)(甲基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-30 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-31 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-32 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-33 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-34 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(哌啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-35 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(2-(吡咯啶-1-基)乙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-36 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(4-(吡咯啶-1-基)丁基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-40 雙(2-己基癸酸)((2-(4,4-二丁氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-41 雙(2-己基癸酸)((2-(6,6-二丁氧基-N-(3-(二甲基胺基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-42 二戊二酸O,O'-(2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)二(十五烷-7-基)酯 A-43 二壬酸((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-44 雙(3-己基十一酸)((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-45 四壬酸(((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯 A-46 四壬酸(((2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4,4-雙(己基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯 A-47 四壬酸(((2-(4-(癸-4-基氧基)-4-側氧基-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯 A-48 四壬酸(((2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(2-側氧基乙烷-2,1-二基))雙(丙烷-2,1,3-三基)酯 A-49 雙(2-己基癸酸)((2-(6-丁氧基-6-(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-50 雙(2-己基癸酸)((2-(4,4-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-51 雙(2-己基癸酸)((2-(6,6-雙(己基氧基)-N-(3-(吡咯啶-1-基)丙基)己醯胺)丙烷-1,3-二基)雙(氧基))雙(4-側氧基丁烷-4,1-二基)酯 A-52 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-53 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-54 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(5-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-5-側氧基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-55 雙(4,4-雙(辛-3-炔-1-基氧基)丁酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-56 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(5-(癸-4-基氧基)-N-(3-(二甲基胺基)丙基)-5-側氧基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-57 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(((3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙氧基)羰基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-58 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(3-(3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙基)-1-(3-(二甲基胺基)丙基)脲基)丙烷-1,3-二基酯 A-59 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-((((3-(癸-4-基氧基)-3-側氧基丙基)硫代)羰基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)丙烷-1,3-二基酯 A-60 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-4-苯基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-61 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-5-苯基戊醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-62 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-6-苯基己醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-63 雙(6,6-雙(辛-3-炔-1-基氧基)己酸)2-(N-(3-(二甲基胺基)丙基)-4-側氧基-7-苯基庚醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-64 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-65 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(4-甲基哌𠯤-1-基)丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-66 雙(6,6-雙(辛基氧基)己酸)2-(N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)-3-側氧基丙基)-4-側氧基-4-(十一烷-4-基氧基)丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-67 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(4-甲基哌𠯤-1-基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-68 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯 A-69 雙(6,6-雙(((Z)-辛-5-烯-1-基)氧基)己酸)2-(4-(癸-4-基氧基)-N-(3-(1-甲基哌啶-4-基)-3-側氧基丙基)-4-側氧基丁醯胺)丙烷-1,3-二基酯
    。
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