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TW202430566A - 一種包含特異性結合ｈｇｆｒ和ｅｇｆｒ的雙特異性抗體的醫藥組成物 - Google Patents

一種包含特異性結合ｈｇｆｒ和ｅｇｆｒ的雙特異性抗體的醫藥組成物 Download PDF

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TW202430566A
TW202430566A TW112145642A TW112145642A TW202430566A TW 202430566 A TW202430566 A TW 202430566A TW 112145642 A TW112145642 A TW 112145642A TW 112145642 A TW112145642 A TW 112145642A TW 202430566 A TW202430566 A TW 202430566A
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TW
Taiwan
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seq
pharmaceutical composition
hgfr
egfr
histidine
Prior art date
Application number
TW112145642A
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Inventor
李小菲
田晨敏
Original Assignee
大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司
大陸商上海恆瑞醫藥有限公司
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Application filed by 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司, 大陸商上海恆瑞醫藥有限公司 filed Critical 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司
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Abstract

本揭露涉及一種包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的醫藥組成物。具體而言，本揭露涉及一種包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的醫藥組成物及其作為藥物的用途。

Description

一種包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的醫藥組成物
本揭露屬於藥物製劑領域，具體涉及一種包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的醫藥組成物，以及其作為藥物的用途。
這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。
表皮生長因子受體(EGFR)和肝細胞生長因子受體(HGFR)是兩種受體酪胺酸激酶，共同在多種腫瘤細胞上高表達，如非小細胞肺癌(NSCLC)、結直腸癌(CRC)和頭頸癌(HNC)等。
EGFR信號通路藉由調節細胞增殖，血管生成以及癌症細胞的轉移和生存，在腫瘤生物學中發揮著重要作用，該通路的失調會導致腫瘤的發生。由於HGFR的過表達，活化突變，自分泌或旁分泌信號轉導或者基因擴增引起的異常信號激活，HGFR也與許多腫瘤的發生相關。藉由對癌症療效的調查發現，EGFR和HGFR信號通路存在著重要聯繫。
NSCLC占肺癌總數的83%，而EGFR激活型突變是其中常見的類型(白人10-15%，亞洲人50%)。一直以來，EGFR酪胺酸激酶抑制劑(TKI)都是NSCLC的一線療法。儘管初始響應率很高(70-80%)，但通常在一年內就會出現耐藥。耐藥的機制主要有兩種，其一是另一種EGFR突變的出現，比如EGFR T790M；其二就是HGFR信號通路的補償激活。這些因素均影響腫瘤的治療效果。
本揭露提供一種包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的醫藥組成物，該組成物具有治療活性。此外，該組成物還具有穩定性好等優勢。
在一些實施方案中，本揭露提供一種醫藥組成物，包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體和緩衝劑，其中，
該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含至少一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和至少一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2；
該緩衝劑為組胺酸緩衝劑、醋酸鹽緩衝劑、枸櫞酸鹽緩衝劑、琥珀酸鹽緩衝劑或磷酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，本揭露提供一種醫藥組成物，包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體和緩衝劑，其中，
該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含至少一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和至少一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2；
該抗原結合模塊1包含重鏈可變區M-VH和輕鏈可變區M-VL，該M-VH包含M-HCDR1、M-HCDR2和M-HCDR3，該M-VL包含M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3，和
該抗原結合模塊2包含重鏈可變區E-VH和輕鏈可變區E-VL，該E-VH包含E-HCDR1、E-HCDR2和E-HCDR3，該E-VL包含E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3，
該E-HCDR1、E-HCDR2、E-HCDR3、E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，該E-HCDR1如SEQ ID NO：6所示，該E-HCDR2如SEQ ID NO：7所示，該E-HCDR3如SEQ ID NO：8所示，該E-LCDR1如SEQ ID NO：9所示，該E-LCDR2如SEQ ID NO：10所示，和該E-LCDR3如SEQ ID NO：11所示；和
該M-HCDR1、M-HCDR2、M-HCDR3、M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，其中，
(i)該M-HCDR1如SEQ ID NO：30所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：31所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：32所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：33所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示，或
(ii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：18所示，該M-HCDR2包含SEQ ID NO：19所示，該M-HCDR3包含SEQ ID NO：20所示，該M-LCDR1包含SEQ ID NO：21所示，該M-LCDR2包含SEQ ID NO：22所示，和該M-LCDR3包含SEQ ID NO：23所示，或
(iii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：24所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：25所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：26所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：28所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示；
該緩衝劑為組胺酸緩衝劑、醋酸鹽緩衝劑、枸櫞酸鹽緩衝劑、琥珀酸鹽緩衝劑或磷酸鹽緩衝劑。
在一些實施方案中，該緩衝劑為組胺酸緩衝劑。
在一些實施方案中，該緩衝劑為組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑。
在一些具體的實施方案中，該緩衝劑為組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.5至6.5。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.0至6.5。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.5至6.5。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.5至6.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為6.0至6.5。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為5.8至6.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約6.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.5至6.0。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.5至5.5。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約4.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為約5.2。
當本揭露中提及點值時，應當理解該點值包含了誤差範圍。這種誤差範圍是由於實驗室環境、人員操作、儀器、方法學、測量誤差等因素所致。以pH為例，當測值為約6.0時，應當理解其包含了誤差範圍。作為一個示例，採用工業用pH計測量製劑時，“約6.0”表示6.0±0.2(即pH為5.8至6.2)。
在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為4.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.2。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為5.8。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為6.0。在一些實施方案中，該醫藥組成物的pH為6.2。
通常，藉由置換緩衝劑獲得的醫藥組成物的pH與緩衝劑pH幾乎一致。同時，所屬技術領域中具有通常知識者公知，在藥物製劑的過程中，有時可能會存在pH飄移，但藥物製劑的PH的飄移一般很小(例如±0.3範圍內)。在一些實施方案中，藥物製劑的pH的飄移在±0.3範圍內。在一些實施方案中，藥 物製劑的pH的飄移在±0.2範圍內。在一些實施方案中，藥物製劑的pH的飄移在±0.1範圍內。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至250mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至200mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至200mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為80mg/mL至180mg/mL。
在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至150mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至120mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至100mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至150mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為80mg/mL至120mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為90mg/mL至110mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為約100mg/mL。
在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為80mg/mL至200mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為90mg/mL至200mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為100mg/mL至200mg/mL。 在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為120mg/mL至200mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為120mg/mL至180mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為135mg/mL至165mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為約150mg/mL。
在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至100mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至75mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為48mg/mL至72mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為54mg/mL至66mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為約60mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為約70mg/mL。
在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至250mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為100mg/mL至250mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為160mg/mL至240mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為180mg/mL至220mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為約200mg/mL。
在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、48mg/mL、50mg/mL、54mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、66mg/mL、70mg/mL、72mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL、100mg/mL、105mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、135mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、165mg/mL、180mg/mL、200mg/mL、220mg/mL、240mg/mL或250mg/mL，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為60mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為70mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為100mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為150mg/mL。在一些實施方案中，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為200mg/mL。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含表面活性劑。在一些實施方案中，該表面活性劑是非離子表面活性劑。在一些實施方案中，該表面活性劑選自泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188，簡稱P188)、聚山梨酯(例如聚山梨酯20、聚山梨酯80)、聚羥亞烴、Triton、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸鈉、辛基糖甙鈉、月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆蔻基-磺基甜菜鹼、亞油基-磺基甜菜鹼、硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基-肌胺酸、肉豆蔻基-肌胺酸、亞油基-肌胺酸、硬脂基-肌胺酸、亞油基-甜菜鹼、肉豆蔻基-甜菜鹼、鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基-甜菜鹼、柯卡醯胺基丙基-甜菜鹼、亞油醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺基丙基-甜菜鹼、異硬脂醯胺基丙 基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基-二甲基胺、棕櫚醯胺基丙基-二甲基胺、異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯與丙烯二醇的共聚物等。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯或泊洛沙姆。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯80、聚山梨酯20或泊洛沙姆188。在一些實施方案中，該表面活性劑為聚山梨酯80。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該表面活性劑濃度為0.01mg/mL至1.0mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.1mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.2mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.3mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.4mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.48mg/mL至0.72mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.54mg/mL至0.66mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.6mg/mL。
在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.3mg/mL至0.6mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.4mg/mL至0.6mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.6mg/mL至0.8mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.2mg/mL至0.4mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.2mg/mL至0.3mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.24mg/mL至0.36mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.24mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為約0.3mg/mL。
在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.24mg/mL、0.3mg/mL、0.36mg/mL、0.4mg/mL、 0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL或1.0mg/mL，或者為這些點值之間的任意範圍。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.6mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.24mg/mL。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.3mg/mL。
在一些實施方案中，該表面活性劑為0.6mg/mL的聚山梨酯80。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.24mg/mL的聚山梨酯80。在一些實施方案中，該表面活性劑濃度為0.3mg/mL的聚山梨酯80。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含糖。在一些實施方案中，該糖選自常規組成物(CH2O)n及其衍生物，包括單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原性糖、非還原性糖等等。該糖可選自蔗糖、海藻糖、葡萄糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖苷、甘油、赤藻糖醇、丙三醇、阿拉伯糖醇、木醣醇、山梨糖醇、甘露醇、密二糖、松三糖、蜜三糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、山梨醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異-麥芽酮糖等。
在一些實施方案中，該糖為蔗糖、海藻糖、甘露醇或山梨糖醇。在一些實施方案中，該糖為蔗糖或海藻糖。在一些實施方案中，該糖為蔗糖。
在一些實施方案中，該糖的濃度為10mg/mL至100mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為20mg/mL至90mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為20mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為30mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為50mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為60mg/mL至90mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為60mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為67.5mg/mL至 82.5mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為70mg/mL至80mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為約75mg/mL。
在一些實施方案中，該糖的濃度為56mg/mL至84mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為63mg/mL至77mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為約70mg/mL。
在一些實施方案中，該糖的濃度為20mg/mL至50mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為20mg/mL至40mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為20mg/mL至35mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為22.4mg/mL至33.6mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為25.2mg/mL至30.8mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為約28mg/mL。
在一些實施方案中，該糖的濃度為30mg/mL至50mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為30mg/mL至40mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為約37.5mg/mL。
在一些實施方案中，該糖的濃度非限制性實施包括10mg/mL、20mg/mL、22.4mg/mL、25.2mg/mL、28mg/mL、30mg/mL、30.8mg/mL、33.6mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、56mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、63mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、77mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、84mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL、100mg/mL，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，該糖的濃度為28mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為37.5mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為70mg/mL。在一些實施方案中，該糖的濃度為75mg/mL。
在一些實施方案中，該糖為70mg/mL至80mg/mL的蔗糖；較佳地，該糖為75mg/mL的蔗糖。
在一些實施方案中，該糖為63mg/mL至77mg/mL的蔗糖；較佳地，該糖為70mg/mL的蔗糖。
在一些實施方案中，該糖為25.2mg/mL至30.8mg/mL的蔗糖；較佳地，該糖為28mg/mL的蔗糖。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，該緩衝劑的濃度為5mM至100mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為5mM至50mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至50mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為5mM至30mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至30mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為15mM至25mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為18mM至22mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM至20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM或20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為約20mM。
在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為20mM至30mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為22.5mM至27.5mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為約25mM。
在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為5mM至15mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為8mM至12mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為9mM至11mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為約10mM。
在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為5mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、15mM、18mM、20mM、22mM、22.5mM、25mM、27.5mM、 30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為10mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為20mM。在一些實施方案中，該緩衝劑的濃度為25mM。
在一些實施方案中，該緩衝劑為10mM或20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為10mM或20mM組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑。在一些實施方案中，該緩衝劑為25mM組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物還包含輔料。在一些實施方案中，該輔料為甲硫胺酸、鹽酸精胺酸、甘胺酸、脯胺酸、組胺酸、苯丙胺酸、谷胺酸、天冬胺酸、氯化鈉、氯化鈣或乙二胺四乙酸二鈉。在一些實施方案中，該輔料為氯化鈉或氯化鈣。在一些實施方案中，該輔料為甲硫胺酸或鹽酸精胺酸。在一些實施方案中，該輔料為鹽酸精胺酸。在一些實施方案中，該輔料為甲硫胺酸。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為1mM至300mM；較佳地，輔料的濃度為25mM至200mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為1mM至200mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為1mM至20mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為4mM至20mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為8mM至12mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為9mM至11mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為約10mM。
在一些實施方案中，該輔料的濃度為1mM至10mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為3mM至5mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為3.6mM至4.4mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為約4mM。
在一些實施方案中，該輔料的濃度為1mM至240mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為80mM至240mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為160mM至240mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為180mM至220mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為約200mM。
在一些實施方案中，該輔料的濃度為80mM至120mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為90mM至110mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為約100mM。
在一些實施方案中，輔料的濃度為1mM、3mM、3.6mM、4.4mM、5mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、20mM、25mM、30mM、50mM、75mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、150mM、160mM、180mM、200mM、240mM、250mM、280mM或300mM，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，該輔料的濃度為4mM。在一些實施方案中，該輔料的濃度為10mM。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為100mM。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為200mM。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為4mM或10mM的甲硫胺酸。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為100mM或200mM的鹽酸精胺酸。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物還包含酶。在一些實施方案中，該酶為透明質酸酶(PH20)。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為10U/mL至3000U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為150U/mL至2400U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為150U/mL至2200U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為600U/mL至2200U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為800U/mL至2000U/mL。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為700U/mL至2400U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為800U/mL至2400U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為1600U/mL至2400U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為1800U/mL至2200U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為約2000U/mL。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為150U/mL至2000U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為500U/mL至1100U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為600U/mL至1000U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為640U/mL至960U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為700U/mL至900U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其 中該酶的濃度為720U/mL至880U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為約800U/mL。
在一些實施方案中，該酶的濃度為10U/mL、50U/mL、100U/mL、150U/mL、300U/mL、500U/mL、600U/mL、640U/mL、700U/mL、720U/mL、800U/mL、880U/mL、900U/mL、960U/mL、1000U/mL、1100U/mL、1200U/mL、1500U/mL、1600U/mL、1800U/mL、2000U/mL、2200U/mL、2400U/mL、2500U/mL、2800U/mL或3000U/mL，以及這些點值之間的任一範圍。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為800U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為1000U/mL。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為2000U/mL。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶為1000U/mL或2000U/mL的PH20。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該酶為800U/mL的PH20。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體中，
該抗原結合模塊1包含重鏈可變區M-VH和輕鏈可變區M-VL，該M-VH包含M-HCDR1、M-HCDR2和M-HCDR3，該M-VL包含M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3，其中，
該E-HCDR1、E-HCDR2、E-HCDR3、E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，該E-HCDR1如SEQ ID NO：6所示，該E-HCDR2如SEQ ID NO：7所示，該E-HCDR3如SEQ ID NO：8所示，該E-LCDR1如 SEQ ID NO：9所示，該E-LCDR2如SEQ ID NO：10所示，和該E-LCDR3如SEQ ID NO：11所示；和
該M-HCDR1、M-HCDR2、M-HCDR3、M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，其中，
(i)該M-HCDR1如SEQ ID NO：30所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：31所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：32所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：33所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示，或
(ii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：18所示，該M-HCDR2包含SEQ ID NO：19所示，該M-HCDR3包含SEQ ID NO：20所示，該M-LCDR1包含SEQ ID NO：21所示，該M-LCDR2包含SEQ ID NO：22所示，和該M-LCDR3包含SEQ ID NO：23所示，或
(iii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：24所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：25所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：26所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：28所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示；
較佳地，
(i)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含兩個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
其中一個抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：30所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：31所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：32所示的M- HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：27所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：33所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：29所示的M-LCDR3；
另一個抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：18所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：19所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：20所示的M-HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：21所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：22所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：23所示的M-LCDR3；和
該抗原結合模塊2，其E-VH具有：如SEQ ID NO：6所示的E-HCDR1、如SEQ ID NO：7所示的E-HCDR2和如SEQ ID NO：8所示的E-HCDR3，並且其E-VL具有：如SEQ ID NO：9所示的E-LCDR1、如SEQ ID NO：10所示的E-LCDR2和如SEQ ID NO：11所示的E-LCDR3；或
(ii)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
該抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：18所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：19所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：20所示的M-HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：21所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：22所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：23所示的M-LCDR3；和
該抗原結合模塊2，其E-VH具有：如SEQ ID NO：6所示的E-HCDR1、如SEQ ID NO：7所示的E-HCDR2和如SEQ ID NO：8所示的E-HCDR3，並且其E-VL具有：如SEQ ID NO：9所示的E-LCDR1、如SEQ ID NO：10所示的E-LCDR2和如SEQ ID NO：11所示的E-LCDR3。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，其中，
(i)該M-VH包含與SEQ ID NO：16具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：17具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；或
該M-VH包含與SEQ ID NO：12具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：13具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；或
該M-VH包含與SEQ ID NO：14具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：15具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；和/或
(ii)該E-VH包含與SEQ ID NO：3具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該E-VL包含與SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：4具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；
較佳地，
(i)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含兩個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
其中一個抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：16所示，並且M-VL如SEQ ID NO：17所示；
另一個抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：12所示，並且M-VL如SEQ ID NO：13所示；和
該抗原結合模塊2的E-VH如SEQ ID NO：3所示，並且E-VL如SEQ ID NO：5所示；或
(ii)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
該抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：12所示，和該M-VL如SEQ ID NO：13所示，並且該抗原結合模塊2的E-VH如SEQ ID NO：3所示，和E-VL如SEQ ID NO：5所示。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中，
該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，其具有一條如SEQ ID NO：34所示的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：35所示的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：36所示的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：37所示的第四鏈；或
具有一條如SEQ ID NO：38所示的第一鏈、一條如SEQ ID NO：39所示的第二鏈、一條如SEQ ID NO：40所示的第三鏈和一條如SEQ ID NO：41所示的第四鏈。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體具有Format1或Format2結構，Format1的結構示意圖見圖1，Format2的結構示意圖見圖2。
在一些實施方式中，如上任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，其為低岩藻糖基化雙特異性抗體；較佳地，該低岩藻糖基化雙特異性抗體為至少80%、85%、90%、95%或100%未被岩藻糖糖基化修飾的抗體；更佳地，該雙特異性抗體檢測不到岩藻糖糖基化修飾。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，和
(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為5.0至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)30mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)200mM的鹽酸精胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)100mM的鹽酸精胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，和
(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約75mg/mL的蔗糖，和
(d)約20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，
(d)1mM至300mM的輔料，
(e)10U/mL至3000U/mL的酶，和
(f)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至200mM的甲硫胺酸，
(e)700U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)1600U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至200mM的甲硫胺酸，
(e)150U/mL至2200U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)100mg/mL至200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)4mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)800U/mL至2200U/mL的透明質酸酶，和
(f)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)120mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)1600U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)20mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約70mg/mL的蔗糖，
(d)約10mM的甲硫胺酸，
(e)約2000U/mL的透明質酸酶，和
(f)約25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的透明質酸酶，和
(f)25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至10mM的甲硫胺酸，
(e)600U/mL至1000U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至15mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至35mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至10mM的甲硫胺酸，
(e)720U/mL至880U/mL的透明質酸酶，和
(f)8mM至12mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.24mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約28mg/mL的蔗糖，
(d)約4mM的甲硫胺酸，
(e)約800U/mL的透明質酸酶，和
(f)約10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.24mg/mL的聚山梨酯80，
(c)28mg/mL的蔗糖，
(d)4mM的甲硫胺酸，
(e)800U/mL的透明質酸酶，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)80mM至240mM的鹽酸精胺酸，和
(e)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)160mg/mL至240mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)160mM至240mM的鹽酸精胺酸，和
(e)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)180mg/mL至220mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)180mM至220mM的鹽酸精胺酸，和
(e)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約75mg/mL的蔗糖，
(d)約200mM的鹽酸精胺酸，和
(e)約20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)200mM的鹽酸精胺酸，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)80mM至120mM的鹽酸精胺酸，和
(e)5mM至15mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)30mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)90mM至110mM的鹽酸精胺酸，和
(e)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)約100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約37.5mg/mL的蔗糖，
(d)約100mM的鹽酸精胺酸，和
(e)約10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)100mM的鹽酸精胺酸，和
(e)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0或6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)5mM的甲硫胺酸，
(e)1000U/mL的PH20，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0或6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)1000U/mL的PH20，和
(e)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)5mM的甲硫胺酸，
(e)1000U/mL的PH20，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上所述的醫藥組成物，該醫藥組成物是液體製劑。在一些實施方案中，該液體製劑的溶劑是水。
本揭露還提供一種的凍乾製劑，其特徵在於該凍乾製劑複溶後可形成如上任一項所述的醫藥組成物。
本揭露還提供一種凍乾製劑，其為如上任一項所述的醫藥組成物的凍乾形式製劑。
本揭露還提供一種製備凍乾製劑的方法，其中包括將如上任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。在一些實施方案中，如上任一項所述冷凍乾燥依次包括預凍、一次乾燥和二次乾燥的步驟。
本揭露還提供一種凍乾製劑，該製劑藉由將如上任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
本揭露還提供一種複溶溶液，其特徵在於該複溶溶液是藉由將如上任一項所述的凍乾製劑經複溶製備獲得。
本揭露還提供一種複溶溶液，其為如上任一項所述的凍乾製劑的複溶形式製劑。
在一些實施方案中，如上任一項的所述的複溶溶液，其組分和含量與前述的醫藥組成物的組分和含量相同。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，和
(d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為5.0至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)30mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL mg/mL的蔗糖，
(d)200mM的鹽酸精胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL mg/mL的蔗糖，
(d)100mM的鹽酸精胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，和
(d)5mM至100mM的緩衝劑，該複溶溶液的pH為4.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)90mg/mL至110mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
(d)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約75mg/mL的蔗糖，和
(d)約20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為約6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
(c)10mg/mL至100mg/mL的糖，
(d)1mM至300mM的輔料，
(e)10U/mL至3000U/mL的酶，和
(f)5mM至100mM的緩衝劑，該複溶溶液的pH為4.5至6.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至200mM的甲硫胺酸，
(e)700U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)1600U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至200mM的甲硫胺酸，
(e)150U/mL至2200U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)100mg/mL至200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)4mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)800U/mL至2200U/mL的透明質酸酶，和
(f)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)120mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至20mM的甲硫胺酸，
(e)1600U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
(f)20mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約70mg/mL的蔗糖，
(d)約10mM的甲硫胺酸，
(e)約2000U/mL的透明質酸酶，和
(f)約25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的透明質酸酶，和
(f)25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至10mM的甲硫胺酸，
(e)600U/mL至1000U/mL的透明質酸酶，和
(f)5mM至15mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至35mg/mL的蔗糖，
(d)1mM至10mM的甲硫胺酸，
(e)720U/mL至880U/mL的透明質酸酶，和
(f)8mM至12mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.24mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約28mg/mL的蔗糖，
(d)約4mM的甲硫胺酸，
(e)約800U/mL的透明質酸酶，和
(f)約10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.24mg/mL的聚山梨酯80，
(c)28mg/mL的蔗糖，
(d)4mM的甲硫胺酸，
(e)800U/mL的透明質酸酶，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)80mM至240mM的鹽酸精胺酸，和
(e)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)160mg/mL至240mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)160mM至240mM的鹽酸精胺酸，和
(e)10mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)180mg/mL至220mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
(c)70mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
(d)180mM至220mM的鹽酸精胺酸，和
(e)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約75mg/mL的蔗糖，
(d)約200mM的鹽酸精胺酸，和
(e)約20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)200mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)200mM的鹽酸精胺酸，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)50mg/mL至150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)20mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)80mM至120mM的鹽酸精胺酸，和
(e)5mM至15mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.5至5.5。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)80mg/mL至120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.2mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80，
(c)30mg/mL至50mg/mL的蔗糖，
(d)90mM至110mM的鹽酸精胺酸，和
(e)15mM至25mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為4.8至5.2。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)約100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)約0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)約37.5mg/mL的蔗糖，
(d)約100mM的鹽酸精胺酸，和
(e)約10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為約5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)100mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)100mM的鹽酸精胺酸，和
(e)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0或6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)2000U/mL的PH20，和
(e)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，
(d)10mM的甲硫胺酸，
(e)2000U/mL的PH20，和
(f)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)150mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)120mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.6mg/mL的聚山梨酯80，
(c)75mg/mL的蔗糖，和
(d)20mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)5mM的甲硫胺酸，
(e)1000U/mL的PH20，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0或6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)1000U/mL的PH20，和
(e)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，
(d)5mM的甲硫胺酸，
(e)1000U/mL的PH20，和
(f)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)75mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為5.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的複溶溶液，其包含如下組分：
(a)60mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
(b)0.3mg/mL的聚山梨酯80，
(c)37.5mg/mL的蔗糖，和
(d)10mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑；該複溶溶液的pH為6.0。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其為靜脈注射製劑、皮下注射製劑、腹腔注射製劑或肌肉注射製劑。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其為靜脈注射製劑。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其為皮下注射製劑。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其適用於靜脈注射、皮下注射、腹腔注射或肌肉注射。在一些實施方案中，如上 任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其適用於靜脈注射。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液，其適用於皮下注射。
在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液或凍乾製劑，其用於製備靜脈注射、皮下注射、腹腔注射或肌肉注射的藥物。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液或凍乾製劑，其用於製備靜脈注射的藥物。在一些實施方案中，如上任一項所述的醫藥組成物或複溶溶液或凍乾製劑，其用於製備皮下注射的藥物。
本揭露還提供一種藥盒，其包括至少一個容器，各容器獨立地包含如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑或如上任一項所述的複溶溶液。
在一些實施方案中，本揭露還提供診斷、治療、緩解受試者病症的方法，包含向該受試者施用有效量的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒。
在一些實施方案中，本揭露還提供一種治療或預防疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒。
在一些實施方案中，本揭露還提供如上任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒，其用於治療或預防疾病。
在一個方面，本揭露還提供如前任一項所述的醫藥組成物、如上任一項所述的凍乾製劑、如上任一項所述的複溶溶液或如上任一項所述的藥盒在製備用於預防或治療疾病或病症的藥物中的用途。
在一些具體實施方案中，前面任一項所述的疾病是腫瘤。在一些實施方式中，該腫瘤選自肺癌(包括非小細胞肺癌和小細胞肺癌)、乳腺癌、胰腺癌、結直腸癌(包括結腸癌和直腸癌)、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸癌和膠質母細胞瘤。在一些實施方式中，該腫瘤選自肺癌、乳腺癌、胰腺癌、結腸癌、頭頸癌、胃癌和膠質母細胞瘤。
在一些具體的實施方式中，該肺癌為非小細胞肺癌。
在一些具體的實施方式中，該肺癌為轉移性非小細胞肺癌。
在一些具體的實施方式中，該肺癌為小細胞肺癌。
在一些具體的實施方式中，該肺癌為人肺腺癌。
在一些具體的實施方式中，該肺癌為胃癌。
在一些具體的實施方式中，該腫瘤為EGFR和/或HGFR相關的腫瘤。
圖1為Format1的結構示意圖。
圖2為Format2的結構示意圖。
圖3為抗體與EGFR CHO-S細胞結合活性實驗結果圖，其中，圖縱坐標為平均螢光強度(簡稱MFI，下同)。
圖4為抗體與HGFR CHO-S細胞結合活性實驗結果圖。
圖5為抗體與H1975-HGF細胞結合活性實驗結果圖。
圖6為抗體與MKN-45細胞結合活性實驗結果圖。
圖7為抗體對細胞EGFR磷酸化的抑制實驗結果。
圖8為抗體對細胞HGFR磷酸化的抑制實驗結果。
圖9為抗體對細胞AKT磷酸化的抑制實驗結果。
圖10為抗體對細胞表面HGFR的減少實驗結果。
圖11為抗體對SNU-5細胞的增殖抑制。
圖12為抗體對Hs746T細胞的ADCC殺傷實驗結果。
圖13為抗體對H292細胞的ADCC殺傷實驗結果。
圖14為抗體抑制HCC827小鼠腫瘤細胞的生長。
術語
為了更容易理解本揭露，以下具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文中另有明確定義，否則本文使用的所有其它技術和科學術語都具有本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義。
本揭露所用的單數形式“一個”、“一種”和“該”包括複數指代，除非上下文清楚表明並非如此。
除非上下文另外清楚要求，否則在專利說明書和申請專利範圍中，應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為“包括但不僅限於”的意義，而不是排他性或窮舉性意義。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。
所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，當參考數值範圍、截止值或特定值使用時，“約”可以表示在1個或多於1個標准偏差之內。或者，“約”可以表示相差最高達20%的範圍(即±20%)。由於本文所用的許多數值是藉由實驗確定的，因此所屬技術領域中具有通常知識者應當理解，此類確定可以在不同實驗之間有差異並且通常在不同實驗之間有差異。由於這種內在差異，認為本文所用的值不應受到過度限制。因此，術語“約”用於涵蓋與指定值相差±20%或更小的變化、±10%或更小的變化、±5%或更小的變化、±1%或更小的變化、±0.5%或更小的變化、或者±0.1%或更小的變化。
儘管本揭露提供了含量範圍或含量值，但所屬技術領域中具有通常知識者理解，該含量範圍或含量值涵蓋了所測定具體值的可接受誤差範圍。
本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。
“HGFR”應作廣泛的理解，旨在涵蓋HGFR在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於HGFR基因在擴增、複製、轉錄、剪接、加工、轉譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體HGFR、成熟HGFR、膜表達的HGFR、HGFR剪接變體、修飾的HGFR、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的HGFR。
“EGFR”應作廣泛的理解，旨在涵蓋EGFR在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於EGFR基因在擴增、複製、轉錄、剪接、加工、轉譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體EGFR、成熟EGFR、膜表達的EGFR、EGFR剪接變體、修飾的EGFR、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的EGFR。
術語“胺基酸”是指天然存在的和合成的胺基酸，以及以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些胺基酸，以及後來修飾的那些胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物是指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構(即與氫、羧基、胺基和R基團結合的α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正亮胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有修飾的R基團(例如，正亮胺酸)或修飾的肽骨架，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物是指具有與胺基酸的一般化學結構不同的結構，但是以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的化學化合物。
術語“抗體”以最廣義使用，並且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體，多株抗體；單特異性抗體，多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段，或抗原結合部分)，只要它們展現出期望的抗原結合活性。“天然抗體”指天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚體蛋白，由二硫鍵結合的兩條輕鏈和兩條重鏈構成。從N至C端，每條重鏈具有一個可變區(VH)，又稱作可變重域、重鏈可變區，接著是三個恆定域(CH1、CH2和CH3)。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個可變區(VL)，又稱作可變輕域，或輕鏈可變域，接著是一個恆定輕域(輕鏈恆定區、CL)。
術語“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段，如單鏈抗體)。現有技術已揭露了各種結構的雙特異性抗體。根據IgG分子的完整性可分為IgG樣雙特異性抗體和抗體片段型雙特異性抗體。根據抗原結合區域的數量可分為二 價、三價、四價或更多價的雙特異性抗體。根據結構是否對稱可分為對稱結構雙特異性抗體和不對稱結構雙特異性抗體。其中，片段型雙特異性抗體，例如缺乏Fc片段的Fab片段，其藉由將2個或多個Fab片段結合在一個分子中形成雙特異性抗體，其具有較低的免疫原性，且分子量小，具有較高的腫瘤組織滲透性，該類型的典型的抗體結構如F(ab’)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab等。IgG樣雙特異性抗體(例如具有Fc片段)，這類抗體相對分子量較大，Fc片段有助於抗體的純化，並提高其溶解性、穩定性，Fc部分還可能會與受體FcRn結合，增加抗體血清半衰期。典型的雙特異性抗體結構模型如KiH、CrossMAb、Triomabquadroma、Fc△Adp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2：1 TCBs、1Fab-IgG TDB、FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等雙特異性抗體(參見Aran F.Labrijn等，Nature Reviews Drug Discovery volume 18，pages585-608(2019)；Chen S1等，J Immunol Res.2019 Feb 11；2019：4516041)。
術語“可變區”或“可變域”指抗原結合分子中結合抗原的域。本文中，特異性結合HGFR的抗原結合模塊1中的重鏈可變區標示為M-VH，輕鏈可變區標示為M-VL；特異性結合EGFR的抗原結合模塊2中的重鏈可變區標示為E-VH，輕鏈可變區標示為E-VL。VH和VL各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。其中，術語“互補決定區”或“CDR”指可變結構域內主要促成與抗原結合的區域；“框架”或“FR”是指除CDR殘基之外的可變結構域殘基。VH包含3個CDR區：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3個CDR區： LCDR1、LCDR2和LCDR3。本文中，M-VH中的3個CDR區分別標示為M-HCDR1、M-HCDR2和M-HCDR3；M-VL中的3個CDR區分別標示為M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3；E-VH中的3個CDR區分別標示為E-HCDR1、E-HCDR2和E-HCDR3；E-VL中的3個CDR區分別標示為E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3。每個VH和VL由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。單個VH或VL可能足以賦予抗原結合特異性。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界，例如：“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”編號規則、“ABM”編號規則、“contact”編號規則(參見Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)；Front Immunol.2018 Oct 16；9：2278)等；各種編號系統之間的對應關係是所屬技術領域中具有通常知識者熟知的。本揭露的編號規則如下表1中所示。
表1. CDR編號系統之間的關係
Figure 112145642-A0202-12-0060-1
除非另有說明，本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。儘管在具體的實施方案中，採用了Kabat編號規則來限定胺基酸殘基，但是其他編號系統所的對應技術方案將視為等同技術方案。
術語“抗體片段”指不同於完整抗體的分子，其包含完整抗體的部分，該部分保留了完整抗體的抗原結合能力。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、單域抗體、單鏈Fab(scFab)、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
Fab指由免疫球蛋白的VH和CH1(Fab重鏈)與VL和CL(Fab輕鏈)組成的蛋白質。
Fv指由免疫球蛋白的VH與VL組成的抗原結合域。
本揭露中，在一些實施方案中，該第一Fab具有Fab的結構。而在經替換的Fab中，CH1與CL分別被Titin鏈或Obscurin鏈替代。
術語“Fc區”或“片段可結晶區”用於定義抗體重鏈的C末端區域，包括天然Fc區和改造的Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含了相同或不同的兩個亞基。在一些實施方式中，人IgG重鏈的Fc區定義為從Cys226位置處的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基末端。用於本文所述抗體的合適天然序列Fc區包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。除非另有說明，Fc區的編號規則為EU索引。
術語“Titin鏈”是指Titin蛋白中一段長度為78-118個胺基酸的片段，其包含Titin Ig-樣152結構域的肽段或其功能變體。該Titin鏈能夠與Obscurin鏈形成二聚化複合物。
術語“Obscurin鏈”是指Obscurin蛋白上一段長度為87-117個胺基酸的片段，其包含Obscurin Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體；或是指Obscurin-樣1蛋白上一段長度為78-118個胺基酸的片段，其包含Obscurin-樣Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體。該Obscurin鏈能夠與Titin鏈結合形成二聚化複合物。本揭露的Titin鏈與Obscurin鏈可用於替換Fab中的CH1和CL，形成經替換的Fab(Fab-S)。該替換不影響抗原結合分子與抗原的結合。
術語“抗原結合模塊”指特異性結合目標抗原的多肽分子。抗原結合模塊包括如本文所述的抗體及其片段。具體的抗原結合模塊包括抗體的抗原結合域，其包含抗體重鏈可變區和抗體輕鏈可變區。術語“特異性結合HGFR的抗原結合模塊”是指能夠以足夠的親和力結合HGFR或其表位的模塊。在某些實施例中，特異性結合HGFR的抗原結合模塊具有以下的平衡解離常數(KD)：<約1μM、<約100nM或<約10nM或更小，其是藉由Biacore方法測量的。在某些實施例中，特異性結合HGFR的抗原結合模塊結合來自不同物種的HGFR中的保守表位。術語“特異性結合EGFR的抗原結合模塊”是指能夠以足夠的親和力結合EGFR或其表位的模塊，使得含有該模塊的分子可用作靶向EGFR的診斷劑和/或治療劑。在某些實施例中，特異性結合EGFR的抗原結合模塊具有以下的平衡解離常數(KD)：<約1μM、<約100nM、<約10nM或更小，其是藉由Biacore方法測量的。在某些實施例中，特異性結合EGFR的抗原結合模塊結合來自不同物種的EGFR中的保守表位。抗原結合模塊包括如本文定義的抗體片段，例如Fab，經替換的Fab或Fv。
在上下文中，“抗原結合模塊1”、“抗原結合模塊2”、“連接子1”、“連接子2”中的序數詞，其目的僅在於區分不同的技術特徵、化學實體；而不限定任何順序、水平、數量。
術語“連接子”指連接兩個多肽片段的連接單元。在本文中，同一或不同結構式中出現的連接子可以是相同或不同的。連接子可以是肽連接子，其包含一個或更多個胺基酸，典型的約1-30個、2-24個或3-15個胺基酸。應用於本文的連接子可以是相同或不同的。當“-”出現在結構式中，其表示兩側的單元直接藉由共價鍵連接。當術語“鍵”出現在結構單元，其表示該單元兩側的單元直接連接。
除非另有說明，本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述雙特異性抗體，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。本揭露中，“醫藥組成物”和“製劑”並不互相排斥。
“有效量”包含足以改善或預防醫學病症的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定受試者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化：如待治療的病症、受試者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。
“藥學可接受的載體”或“藥學可接受的賦形劑”包括當與活性成分組合時，允許該成分保留生物學活性並且不與受試者的免疫系統反應的任何材 料。例子包括但不限於任何標準藥物載體，例如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳劑如油/水乳劑、和各種類型的潤濕劑。在一些實施例中，用於氣霧劑或腸胃外施用的稀釋劑是磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或生理(0.9%)鹽水。包含此類載體的組成物藉由眾所周知的常規方法配製。
“緩衝劑”指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。
“組胺酸緩衝劑”是包含組胺酸的緩衝劑。組胺酸緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸組胺酸，組胺酸-醋酸組胺酸，組胺酸-磷酸組胺酸，組胺酸-硫酸組胺酸等緩衝劑，較佳組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑。組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑可由組胺酸與鹽酸配製而成，或者由組胺酸與鹽酸組胺酸配製而成。
“枸櫞酸鹽緩衝劑”是包括枸櫞酸根離子的緩衝劑。枸櫞酸鹽緩衝劑的實例包括枸櫞酸-枸櫞酸鈉、枸櫞酸-枸櫞酸鉀、枸櫞酸-枸櫞酸鈣、枸櫞酸-枸櫞酸鎂等。較佳的枸櫞酸鹽緩衝劑是枸櫞酸-枸櫞酸鈉。
“琥珀酸鹽緩衝劑”是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉鹽、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽等。較佳的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉鹽。示例性的，該琥珀酸-琥珀酸鈉可由琥珀酸與氫氧化鈉配製而成，或由琥珀酸與琥珀酸鈉鹽配製而成。
“磷酸鹽緩衝劑”是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括檸檬酸-磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-枸櫞酸等。較佳的磷酸鹽緩衝劑是檸檬酸-磷酸氫二鈉。
“醋酸鹽緩衝劑”是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、組胺酸-醋酸組胺酸、醋酸-醋酸鉀、醋酸-醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂等。較佳的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉。
“泊洛沙姆(poloxamer)”是環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物，其是水溶性的並在藥物製劑中用作表面活性劑。泊洛沙姆的實例包括泊洛沙姆188(P188)。
“凍乾製劑”表示液體或溶液形式的醫藥組成物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或醫藥組成物。通常，冷凍乾燥包括預凍、一次乾燥、二次乾燥。預凍目的是冷凍產品，獲得結晶固體；在一些實施方案中，預凍溫度設定為-45℃，預凍速度設定為1℃/min。一次乾燥也稱為主乾燥，是樣品冷凍乾燥的主要階段，目的是移除產品裡冰的同時，保持產品形狀，最小程度的減少對產品的破壞；若一次乾燥的溫度和真空度選擇不當，會導致製品的塌陷；較高的溫度和真空度均會加快凍乾效率，但同時也會增加製品塌陷的風險。在一些實施方案中，一次乾燥的溫度可為本領域常規的溫度，例如-30℃-0℃。二次乾燥也稱為解析乾燥，是藉由抽極限真空(0.01mbar)和升高溫度(20℃-40℃)除去製品中結合水的主要步驟。由於大多數生物製品對溫度比較敏感，所以二次乾燥溫度常選擇在溫度範圍的低點，例如25℃。冷凍乾燥的時間與冷凍機、凍乾製劑劑量、凍乾藥劑的容器有關。這種時間的調整是為所屬技術領域中具有通常知識者所熟知的。
本揭露中所述醫藥組成物的溶液形式，若無特殊說明，其中的溶劑均為水。本揭露所述的醫藥組成物能夠達到一種穩定的效果：其中的抗體在貯藏後基本上保留其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學活性的醫藥組成物， 較佳地，醫藥組成物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於醫藥組成物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術，可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。
“‘置換”是指溶解抗體蛋白的溶劑體系的置換，例如，使用穩定製劑的緩衝體系經物理操作方式將含抗體蛋白的高鹽或高滲溶劑體系置換，從而使抗體蛋白存在於穩定製劑中。所稱物理操作方式包括但不限於超濾、透析或離心。
穩定的製劑是在下述情况下没有觀察到顯著變化的製劑：在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、較佳6個月、更佳1年，且甚至更佳地多達2年。另外，穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑：其在包括25℃的溫度保存包括24小時、7天、1個月、3個月或6個月在內的時段後表現出期望的特徵。還包括40℃的溫度保存包括4週、1個月、3個月或6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的例子：藉由SEC-HPLC測得，通常不超過約20%或10%、較佳不超過約5%的抗體發生聚集或降解。藉由視覺分析，製劑是淡黄色近無色澄明液體或者無色澄明液體，或澄清至稍微乳白色。該製劑的浓度、pH和重量克分子渗透壓濃度具有不超過±10%變化，較佳不超過±5%的變化。該製劑通常形成不超過約10%、較佳不超過約5%的聚集。
如果在目檢顏色和/或澄清度後，或者藉由UV光散射、尺寸排阻色譜法(SEC)和動態光散射(DLS)測得，抗體沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的物理穩定性”。蛋白構象的變化可以藉由螢光光譜法(其確定蛋白三級結構)和藉由FTIR光譜法(其確定蛋白二級結構)來評價。
如果抗體沒有顯示出顯著的化學改變，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的化學穩定性”。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白，可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短(藉由諸如尺寸排阻色譜法和CE-SDS等方法來評價)、氧化(藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價)、脫醯胺作用(藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價)和異構化(藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價)。
如果抗體在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的生物活性”。
“施用”、“給予”和“處理”，當其應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“施用”、“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“施用”、“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組成物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當其應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。
“治療”意指給予患者內用或外用治療劑，例如包含本揭露的任一種的複溶溶液，該患者具有一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床有測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種 因素變化，例如患者的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本揭露的實施方案(例如治療方法或製品)在緩解每個目標疾病症狀方面可能無效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者中應當減輕目標疾病症狀。
本揭露的複溶溶液可藉由任何合適的手段施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要局部治療，則病灶內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何適當的途徑，例如，藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射。本文考慮多種給藥時間方案，包括但不限於，單次或在多個時間點多次施用，推注施用和脈衝輸注。在一些實施方案中，本揭露的複溶溶液藉由皮下注射施用。
本揭露的複溶溶液將以符合良好醫療實踐的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病症、所治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的起因、試劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。視需要地，複溶溶液還可以與用於預防或治療該病症的一種或更多種其它試劑一起配製。此類其它試劑的有效量取決於複溶溶液中存在的抗原結合分子的量、病症或治療的類型以及其它因素。可以與本文所述相同的劑量和施用路徑使用，或以本文所述劑量的約1至99%使用，或以任何劑量使用，並藉由經驗/臨床確定為合適的任何途徑使用。在以上說明書中提出了本揭露一種或多種實施方式的細節。雖然可使用與本文所述類似或相同的 任何方法和材料來實施或測試本揭露，但是以下描述較佳的方法和材料。藉由說明書和申請專利範圍，本揭露的其他特點、目的和優點將是顯而易見的。在說明書和申請專利範圍中，除非上下文中有清楚的另外指明，單數形式包括複數指代物的情況。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語都具有本揭露所屬技術領域具有通常知識者所理解的一般含義。說明書中引用的所有專利和出版物都藉由引用納入。提出以下實施例是為了更全面地說明本揭露的較佳實施方式。這些實施例不應以任何方式理解為限制本揭露的範圍，本揭露的範圍由申請專利範圍限定。
實施例-特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體製備與檢測
PCT/CN2022/105714(申請日：2022.07.14；優先權專利申請號：CN202110794137.9)藉由援引完整收入本揭露。
實施例1：抗原蛋白及抗體的製備
1.1 抗原蛋白結構
以人EGFR蛋白(UniProt Epidermal growth factor receptor，Uniprot號：P00533)作為EGFR的模板，在EGFR蛋白基礎上融合His標簽，設計本發明檢測用的帶His標簽的人EGFR蛋白胞外域(簡稱：EGFR-His)；其胺基酸序列如下：
EGFR-His的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0069-2
Figure 112145642-A0202-12-0070-3
SEQ ID NO：42
註釋：劃線部分為EGFR蛋白胞外域；斜體部分為His標簽。
【O232】以人HGFR蛋白(UniProt Hepatocyte growth factor receptor，Uniprot號：P08581)作為HGFR的模板，在HGFR蛋白基礎上融合His標簽或Fc，設計本發明檢測用的帶His標簽的HGFR蛋白胞外域(簡稱HGFR-His)、帶Fc標簽的HGFR蛋白胞外域(簡稱HGFR-Fc)，其胺基酸序列如下：
HGFR-His的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0070-4
Figure 112145642-A0202-12-0071-5
SEQ ID NO：43
註釋：劃線部分為HGFR蛋白胞外域；斜體部分為His標簽。
以人HGF蛋白(UniProt Hepatocyte growth factor，Uniprot號：P14210)作為HGF的模板，設計本揭露檢測用帶His標簽的HGF蛋白(簡稱HGF-His)，其胺基酸序列如下：
HGF-His的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0071-6
Figure 112145642-A0202-12-0072-7
SEQ ID NO：44
註釋：劃線部分為HGF蛋白；斜體部分為His標簽。
1.2 蛋白的純化
1.2.1 重組蛋白的純化步驟：
將細胞表達上清樣品高速離心去除雜質，並將緩衝液置換為PBS，加入咪唑至終濃度為5mM。用含有5mM咪唑的PBS溶液平衡鎳管柱，沖洗2-5倍管柱體積。將置換後的細胞上清樣品上Ni Sepharose excel管柱(GE，17-3712-02)。用含有5mM咪唑的PBS溶液沖洗管柱，至A280讀數降至基線。後用PBS+10mM咪唑沖洗層析管柱，除去非特異結合的雜蛋白，並收集流出液。再用含有300mM咪唑的PBS溶液沖提目的蛋白，並收集沖提峰。收集的沖提液濃縮後用凝膠層析Superdex200(GE，28-9893-35)進一步純化，流動相為PBS。去除聚體峰，收集沖提峰。所得到的蛋白經電泳，肽圖，LC-MS鑑定為正確後分裝備用。
1.2.2 抗體的純化步驟：
將細胞表達的上清樣品經高速離心去除雜質，上清進行MabSelect Sure(GE，17-5438-01)親和層析。MabSelect Sure層析管柱先用0.2M NaOH再生，利用純水沖洗後用PBS平衡管柱，將上清結合後，利用PBS進行洗滌至A280讀數降 至基線。用0.1M醋酸緩衝液在pH3.5條件下沖提目的蛋白，用1M Tris-HCl中和。沖提樣品適當濃縮後利用PBS平衡好的凝膠層析Superdex200(GE，28-9893-35)進一步純化，合併收集目的蛋白所在接收管濃縮至適當濃度。此方法用來純化本發明中涉及的抗體。
實施例2. 特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的製備及鑑定
利用特異性結合HGFR的分子與特異性結合EGFR的分子，構建特異性結合HGFR和EGFR的抗體。
2.1 特異性結合EGFR的分子
特異性結合EGFR的分子可以來源於任意適宜的抗體，例如Zalutumumab(簡稱Zal)或其變體(例如Zal.1，Zal.1是藉由將Zal輕鏈第一位胺基酸殘基由A突變為D獲得)，其中，
Zal重鏈的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0073-8
SEQ ID NO：1
Zal輕鏈的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0074-9
SEQ ID NO：2
Zal的重鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0074-10
SEQ ID NO：3
Zal的轻鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0074-11
SEQ ID NO：4
Zal.1的重鏈可變區的胺基酸序列為SEQ ID NO：3
Zal.1的輕鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0074-12
SEQ ID NO：5。
Zal和Zal.1的CDR序列見表2：
表2. 特異性結合EGFR分子的CDR
Figure 112145642-A0202-12-0075-76
備註：上述CDR根據Kabat編號系統確認。
2.2 特異性結合HGFR的分子
特異性結合HGFR的分子可以來源於任意適宜的抗體，包括描述於國際公開號WO2013003680A1(藉由援引完整收入本文)中的Onartuzumab(簡稱Omab)等抗體；描述於國際公開號WO2016165580A1(藉由援引完整收入本文)中的Ab10等抗體；以及上述抗體的突變抗體。其中，Omab、Ab10的可變區的胺基酸序列如下：
Omab的重鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0075-14
SEQ ID NO：12
Omab的輕鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0075-15
SEQ ID NO：13
Ab10的重鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0076-16
SEQ ID NO：14
Ab10的輕鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0076-17
SEQ ID NO：15
藉由對Ab10的CDR進行突變，獲得Ab10突變抗體：Ab10.1；Ab10.1的恆定區與Ab10相同，Ab10.1可變區胺基酸序列如下：
Ab10.1的重鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0076-18
SEQ ID NO：16
Ab10.1的輕鏈可變區的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0076-19
SEQ ID NO：17
備註：上述特異性結合HGFR分子的序列中，其中下劃線部分為根據Kabat編號系統確認的CDR區部分，斜體加粗部分為突變胺基酸殘基。
特異性結合HGFR分子的CDR見表3：
表3. 特異性結合HGFR分子的CDR
Figure 112145642-A0202-12-0077-77
備註：上述CDR根據Kabat編號系統確認。
2.3 特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體
利用特異性結合HGFR的分子與特異性結合EGFR的分子，構建特異性結合HGFR和EGFR的具有Format1或Format2結構的雙特異性抗體，Format1的結構示意圖見圖1，Format2的結構示意圖見圖2。其中，
Format1包含如下結構的4條鏈，其中，
鏈1為：
VH(抗EGFR抗體)-連接子1-VH(抗HGFR抗體1)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(knob)，
鏈2為：VL(抗EGFR抗體)-連接子1-VL(抗HGFR抗體1)-CL，
鏈3為：VH(抗HGFR抗體2)-連接子2-Titin鏈-IgG1Fc(hole)，
鏈4為：VL(抗HGFR抗體2)-連接子2-Obscurin鏈。
Format2包含如下結構的4條鏈，其中，
鏈1為：VH(抗HGFR抗體)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(knob)，
鏈2為：VL(抗HGFR抗體)-CL，
鏈3為：VH(抗EGFR抗體)-連接子2-Titin鏈-IgG1Fc(hole)，
鏈4為：VL(抗EGFR抗體)-連接子2-Obscurin鏈；
示例性地，利用Ab10.1(抗HGFR抗體1)、Omab(抗HGFR抗體2)、Zal.1(抗EGFR抗體)、人IgG1重鏈恆定區/kappa輕鏈恆定區以及T.16(Titin 鏈)/O.28(Obscurin鏈)，構建具有Format1結構的EM1和具有Format2結構的EM2。
EM1的4條鏈的胺基酸序列如下：
EM1的鏈1的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0078-21
Figure 112145642-A0202-12-0079-22
SEQ ID NO：34
EM1的鏈2的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0079-23
SEQ ID NO：35
EM1的鏈3的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0079-24
SEQ ID NO：36
EM1的鏈4的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0080-25
SEQ ID NO：37
EM2的4條鏈的胺基酸序列如下所示：
EM2的鏈1的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0080-26
SEQ ID NO：38
EM2的鏈2的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0080-27
Figure 112145642-A0202-12-0081-28
SEQ ID NO：39
EM2的鏈3的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0081-29
SEQ ID NO：40
EM2的鏈4的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0081-30
SEQ ID NO：41
備註：上述序列中，單下劃線部分為可變區，虛下劃線部分為CL，點下劃線部分為Fc區，斜體部分為CH1，雙下劃線部分為連接子，波浪線部分為Obscurin鏈/Titin-T鏈。
連接子1的胺基酸序列：GGGGSGGGG(SEQ ID NO：45)
連接子2的胺基酸序列：GGGGS(SEQ ID NO：46)
IgG1Fc(knob)的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0082-31
(SEQ ID NO：47)
IgG1Fc(hole)的胺基酸序列：
Figure 112145642-A0202-12-0082-32
(SEQ ID NO：48)
CL：
Figure 112145642-A0202-12-0082-33
Figure 112145642-A0202-12-0082-34
(SEQ ID NO：49)
T.16(Titin鏈)
Figure 112145642-A0202-12-0083-35
(SEQ ID NO：50)
O.28(Obscurin鏈)
Figure 112145642-A0202-12-0083-36
(SEQ ID NO：51)。
測試例
測試例1：Biacore檢測體外結合親和力和動力學實驗
藉由Biacore T200(GE)測定待測分子與人EGFR(SEQ ID NO：42)或人HGFR蛋白(SEQ ID NO：43)的親和力，方法如下：
用Protein A生物傳感芯片親和捕獲抗體分子，然後於芯片表面流經抗原180秒，之後解離600秒，用Biacore T200儀器實時檢測反應信號獲得結合和解離曲線。在每個實驗循環解離完成後，用10mM Gly-HCl(pH 1.5)將生物傳感芯片洗淨再生。數據擬合模型採用1：1 Model，獲得待測分子親和力數值。本實施例中，陽性對照MCLA為一種特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體(具體序列參見WO2019031965A1中的PB8532)。
實驗結果見表4，實驗結果表明，本揭露構建的突變抗體和雙特異性抗體均具有很強的親和力，Ab10.1的親和力至少是母抗體Ab10親和力的4倍。
表4：本發明抗體與人EGFR或人HGFR的體外親和力
Figure 112145642-A0202-12-0084-37
測試例2：抗體的體外細胞結合實驗
特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的細胞結合活性藉由流式細胞儀來檢測。將1×106個/mL EGFR CHO-S穩轉細胞株、HGFR CHO-S穩轉細胞株、H1975-HGF或MKN-45腫瘤細胞株用1%BSA PBS緩衝液封閉後，加入不同濃度稀釋的抗體樣品(C25為陰性對照，其為無關靶點的IgG1抗體蛋白，以下同)孵育1小時。洗兩次後，再加入R-PE-羊抗人(H+L)抗體(Invitrogen，CAT#H10104)孵育0.5小時。洗兩次後，使用流式細胞儀讀取螢光信號值。
實驗結果見圖3至圖6，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體對腫瘤細胞的結合能力比陽性抗體MCLA更強。
測試例3：抗體拮抗EGFR結合EGF的阻斷實驗
抗體對EGF/EGFR的阻斷能力藉由ELISA來檢測。包被1μg/mL兔抗His抗體(金斯瑞，A01857)，4℃過夜後封閉。洗板後加入2μg/mL EGFR-His(SEQ ID NO：42)，孵育1h。洗板後加入2μg/mL EGF-mFc(Acro，EGF-H525b)和不同濃度稀釋的抗體，孵育1小時。洗板後加入辣根過氧化物酶-羊抗鼠IgG 抗體(Jackson，115-035-062)，孵育1小時。洗板後加入四甲基聯苯胺溶液顯色，最後加入終止液，在酶標儀上測量OD450值。實施例中，陽性對照JNJ為一種特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體(JNJ也稱Amivantamab，具體序列結構參見WHO Drug Information,33(2)：237-239)。
實驗結果見表5，實驗結果表明，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能有效阻斷EGF與EGFR的結合。
表5. 雙特異性抗原結合分子阻斷EGF與EGFR的結合實驗結果
Figure 112145642-A0202-12-0085-38
測試例4：抗體拮抗HGFR結合HGF的阻斷實驗
抗體對HGF/HGFR的阻斷能力藉由ELISA來檢測。包被5μg/mLHGFR-His(序列參見SEQ ID NO：43)，4℃過夜後封閉。洗板後加入2μg/mL bio-HGF-His(序列參見SEQ ID NO：44)和不同濃度稀釋的抗體，孵育1小時。洗板後加入辣根過氧化物酶-鏈黴親和素(Jackson，016-030-084)，孵育1小時。洗板後加入四甲基聯苯胺溶液顯色，最後加入終止液，在酶標儀上測量OD450值。
實驗結果見表6，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體阻斷HGFR結合HGF的最大阻斷力比陽性抗體JNJ更強。
表6. 雙特異性抗原結合分子阻斷HGF與HGFR的結合實驗結果
Figure 112145642-A0202-12-0086-39
測試例5：抗體對細胞EGFR磷酸化的抑制實驗
取H292細胞(也稱NCI-H292，人肺癌細胞(淋巴結轉移)，中國科學院細胞庫，下同)以12000個/孔鋪於96孔板(Corning，3599)，培養基為RPMI1640+10%FBS，其後將96孔板在37℃、5% CO2培養箱培養24小時。第二天，棄去培養基，更換成無血清的培養基(RPMI640+25mM HEPES+0.1mM NEAA+1mM丙酮酸鈉)饑餓16-20小時。第三天，配製抗體，首濃度為6μM，5倍梯度稀釋，更換饑餓培養基，37℃、5% CO2培養箱培養1小時，期間加入50μL 100ng/mL rEGF(R&D，236-EG-200)，37℃、5% CO2培養箱繼續培養15分鐘，最後根據PHOSPHO-EGFR(TYR1068)KITS(Cisbio，64EG1PEG)說明書，檢測磷酸化EGFR。
實驗結果見圖7，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能有效抑制細胞EGFR磷酸化。
測試例6：抗體對細胞HGFR磷酸化的抑制實驗
取H292細胞以12000個/孔鋪於96孔板(Corning，3599)，培養基為RPMI1640+10%FBS，其後將96孔板在37℃、5% CO2培養箱培養24小時。第二天，棄去培養基，更換成無血清的培養基(RPMI640+25mM HEPES+0.1mM NEAA+1mM丙酮酸鈉)饑餓16-20小時。第三天，配製抗體，首濃度為1μM，10倍梯度稀釋，更換饑餓培養基，37℃、5% CO2培養箱培養1小時，期間加入50μL 200ng/mL rHGF(R&D,294-HG-005)37℃、5% CO2培養箱繼續培養30分鐘，最後根據p-c-Met(Tyr1234/1235)Assay Kit(PerkinElmer，ALSU-PCMET-A50)說明書，檢測磷酸化HGFR。
實驗結果見圖8，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能有效抑制細胞HGFR磷酸化，抑制能力比Ab10.1強。
測試例7：抗體對細胞AKT磷酸化的抑制實驗
取H292細胞以12000個/孔鋪於96孔板(Corning，3599)，培養基為RPMI1640+10% FBS，其後將96孔板在37℃、5% CO2培養箱培養24小時。第二天，棄去培養基，更換成無血清的培養基(RPMI640+25mM HEPES+0.1mM NEAA+1mM丙酮酸鈉)饑餓16-20小時。第三天，配製抗體，首濃度為4μM，5倍梯度稀釋，更換饑餓培養基，37℃、5% CO2培養箱培養1小時，期間加入50μL 200ng/mL rHGF(R&D,294-HG-005)和50ng/mL rEGF(R&D，236-EG-200)，混合均勻，37℃、5% CO2培養箱繼續培養1小時，最後根據PHOSPHO-AKT(SER473)KITS(Cisbio，64AKSPEG)說明書，檢測磷酸化AKT。細胞內AKT磷酸化水平藉由665nm的螢光信號值與620nm的螢光信號值比值(ratio)來反映，比值=665nm處螢光信號值/620nm處螢光信號值*104，比值越高，細胞內AKT磷酸化水平越高。
實驗結果見圖9，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能有效抑制細胞AKT磷酸化，且抑制能力比陽性對照抗體強。
測試例8：抗體降低細胞表面的HGFR表達
取HCC827細胞(人非小細胞肺癌細胞，源自ATCC)以3×105個/孔鋪於6孔板，培養基RPMI1640+10% FBS，其後將6孔板在37℃，5% CO2培養箱培養24小時。配製抗體至濃度200nM，處理且反應18小時。處理過後，PBS洗細胞一次，加入500μL無酶細胞解離緩衝液(Gibco,#13151)收集細胞，藉由離心分離細胞與無酶細胞解離緩衝液。使用羊抗人HGFR抗體(R&D systems,AF276)進行免疫螢光染色，4℃反應1小時。隨後，用含2%FBS的PBS洗兩次。其後加入ALEXA488-驢抗羊二抗(Thermo Fisher,A-11055)4℃反應1小時，洗兩次後用BD Cytofix(BD,#554655)固定細胞。再用PBS洗一次後，使用流式細胞儀讀取螢光信號值。
實驗結果見圖10，實驗結果顯示，相較陽性對照抗體，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能更有效地減少細胞表面的HGFR，抑制受體信號通路。
測試例9：抗體對SNU-5細胞的增殖抑制實驗
取SNU-5細胞(人胃癌細胞，源自ATCC)以4000個/孔鋪於96孔板(Corning，3903)，培養基為IMDM+5%FBS，其後將96孔板在37℃、5%CO2培養箱培養24小時。配製抗體至濃度5μM，5倍梯度稀釋，加入上述96孔板，其後在37℃、5%CO2培養箱培養5天，最後，根據說明書配製CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(Promega，G7573)，每孔加入50μL CTG，室溫下孵育10min，用封底膜封好後，用多標記微孔板檢測系統(PerkinElmer,victor3)檢測螢光強度(Luminescence，簡稱Lum)。
計算公式：Lum=測定值-培養基讀數；
%抑制=(Lum0-Lum)/Lum0*100%；
其中Lum0為抗體濃度為0的孔的螢光強度，Lum為各稀釋濃度抗體孔的螢光強度。
實驗結果見圖11，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體對SNU-5細胞的增殖抑制能力比陽性抗體更強。
測試例10：抗體對腫瘤細胞的ADCC殺傷實驗
配製抗體至200nM濃度，5倍梯度稀釋。分別收集腫瘤細胞：Hs746T細胞(人胃癌細胞，南京科佰生物科技有限公司)和H292細胞，PBS洗一次後，用緩衝液(PBS+10%FBS+20mM HEPES)調整細胞密度為1×106個/mL，然後在2mL細胞中加入3μL BATDA試劑(PerkinElmer，AD0116)，在37℃，5% CO2培養箱孵育15min。離心後，用沖洗緩衝液(PBS+20mM HEPES)洗三次，計數調整細胞密度為1×105個/mL。收集NK92--FCGR3A(176V)細胞(穩定轉化有FCGR3A(176V)的NK92細胞(購自南京科佰生物科技有限公司))，PBS洗一次後，用培養基重新懸浮細胞計數，調整細胞密度為5×105個/mL。最後在96孔板(corning，3788)中加入100μL NK92--FCGR3A(176V)細胞，50μL稀釋抗體，50μL標記後的腫瘤細胞。同時，設置自發對照釋放孔，其不含NK92--FCGR3A(176V)細胞，而含有100μL培養基；設置陽性對照孔，其含有10μL裂解緩衝液+50μL標記後的腫瘤細胞+140μL培養基；設置背景對照孔，其含標記後的細胞上清50μL+150μL培養基。然後將96孔板300rpm離心2分鐘後，在37℃，5% CO2培養箱孵育2小時。取上清100μL到新96孔板(corning，3788)，300g離心5min後，取20μL到檢測板(PerkinElmer，AD0116)，然後加入200μL銪溶液(PerkinElmer，AD0116)，室溫下震盪孵育15分鐘，最後檢測TRF。其中，EM1(afuc)為去岩藻糖基化的EM1；EM2(afuc)為去岩藻糖基化的EM2。
計算公式：特異釋放%=(實驗釋放-自發釋放)/(最大釋放-自發釋放)*100。
實驗結果見圖12和圖13，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體去岩藻糖基化後，可顯著提高其對細胞的ADCC殺傷能力。
測試例11：抗體在小鼠H1975-HGF模型的體內藥效實驗
將H1975-HGF細胞(穩轉人HGF的H1975細胞(人肺腺癌細胞，ATCC))(5×106個)接種於CD1裸雌性小鼠(維通利華)右肋部皮下。
當腫瘤體積大小為189mm3時，根據腫瘤體積大小將動物隨機分組，每組10隻，包括C25-3mpk組(陰性對照，其為無關靶點的IgG1抗體蛋白，給藥劑量為3mg/kg)、JNJ-3mpk組(陽性對照，給藥劑量為3mg/kg)和EM1-3.5mpk組(EM1試驗組，給藥劑量為3.5mg/kg)。以動物分組(0天)起，每週給藥兩次，腹腔注射給藥，連續2到3週。每週測量腫瘤體積2次，稱小鼠體重，記錄數據。藉由T-檢驗對數據進行統計學分析。其中，C25-3mpk、JNJ-3mpk、EM1-3.5mpk為等莫耳量。
腫瘤體積(T)計算公式：T=1/2長×(短)2；
相對腫瘤增殖率T/C%=(T-T0)/(C-C0)×100%；
抑瘤率TGI%=1-T/C%；
其中，T和T0為給藥組腫瘤體積，其中T0為實驗開始時的腫瘤體積；C和C0是陰性對照組腫瘤體積，其中C0是陰性對照組實驗開始時的腫瘤體積。
實驗結果見表7，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能顯著抑制腫瘤細胞的生長，第21天時，等莫耳的本揭 露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體組的平均腫瘤體積小於陽性對照的一半，抑瘤藥效強於陽性對照抗體JNJ。
表7. 抗體在小鼠H1975-HGF模型的體內藥效實驗
Figure 112145642-A0202-12-0091-41
測試例12：抗體在小鼠HCC827模型的體內藥效實驗
將HCC827細胞(人非小細胞肺癌細胞，源自ATCC)(8.555×106個)接種於NUNU雌性小鼠(維通利華)右肋部皮下。
當瘤體積大小為200mm3時，根據瘤體積大小將動物隨機分組，每組10隻，包括C25-3mpk組(陰性對照，其中C25為無關靶點的IgG1抗體蛋白，給藥劑量為3mg/kg)、MCLA-3mpk組(陽性對照，給藥劑量為3mg/kg)、EM1-3.5mpk組(EM1高劑量試驗組，給藥劑量為3.5mg/kg)、EM1-1.17mpk組(EM1低劑量試驗組，給藥劑量為1.17mg/kg)和EM2-3mpk組(EM2試驗組，給藥劑量為3mg/kg)。以動物分組(0天)起，每週給藥兩次，腹腔注射給藥，連續2到3週。每週測量腫瘤體積2次，稱小鼠體重，記錄數據。其中，C25-3mpk、MCLA-3mpk、EM1-3.5mpk和EM2-3mpk為等莫耳量。
實驗結果見圖14，實驗結果顯示，本揭露的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體能顯著抑制腫瘤細胞的生長，抑瘤效果強於陽性對照抗體。
製備實施例-特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體製劑
SEC分子排阻色譜法：
根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。
SEC%(SEC單體含量百分比)=A單體/A總×100%(A單體為樣品中主峰單體的峰面積，A總為所有峰面積之和)。△SEC%=穩定性實驗後製劑的SEC%-穩定性實驗前製劑的SEC%。
SEC測定用儀器：安捷倫HPLC 1260；
管柱：Waters，BioResolveTM SEC mAb 200Å，2.5μm，7.8×300mm。
NR-CE毛細管凝膠電泳：
將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳，並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。
NR-CE%=A主峰/A總×100%(A主峰為樣品中主峰的峰面積，A總為所有峰面積之和)。
△NR-CE%=穩定性實驗後製劑的NR-CE%-穩定性實驗前製劑的NR-CE%。
CE測定用儀器：Beckman毛細管電泳儀，型號PA800 plus。
IEC離子交換色譜：
以離子交換樹脂或化學鍵合離子交換劑為固定相，利用被分離組分離子交換能力的差別或選擇性係數的差別而實現分離的色譜方法。
IEC%=A中性峰面積/A總面積×100%(A總面積為酸性峰、中性峰和鹼性峰面積之和)。△IEC%=穩定性實驗後製劑的IEC%-穩定性實驗前製劑的IEC%。
IEC測定用儀器：安捷倫HPLC 1260。
滲透壓測定：
冰點法測定滲透壓，以冰點下降值與溶液的莫耳濃度成正比例關係為基礎，採用高靈敏度感溫元件，測定溶液結冰點，藉由電量轉化為滲透壓。
滲透壓測定用儀器：羅澤Loser，型號OM815。
蛋白
以下實施例所採用的蛋白為HGFR-EGFR雙特異性抗體EM1(以下簡稱“蛋白”)。
蛋白的濃度測定用儀器：紫外可見分光光度計，型號：Nano Drop oneC，光程為1mm。
製劑實施例1. 不同離子強度篩選
用表8所示的緩衝體系製備100mg/mL蛋白、80mg/mL蔗糖、0.4mg/mL聚山梨酯80(PS80)的製劑。對樣品進行強制降解研究(40℃放置4週)，以SEC和NR-CE為評價指標，考察不同緩衝體系對蛋白穩定性的影響。
結果見表8。SEC數據顯示，兩者沒有明顯差異。NR-CE數據顯示，20mM離子強度的製劑組優於50mM離子強度的製劑組。
表8不同離子強度篩選結果
Figure 112145642-A0202-12-0093-44
註釋：His-HCl代表組胺酸-鹽酸組胺酸；40℃ W4：40℃放置4週，下同。
製劑實施例2. pH和緩衝體系篩選
用表9所示的緩衝體系製備100mg/mL蛋白、80mg/mL蔗糖、0.4mg/mL聚山梨酯80(PS80)的製劑。對樣品進行強制降解研究(40℃放置4週)，以外觀、SEC和NR-CE為評價指標，考察不同緩衝體系對蛋白穩定性的影響。
結果見表9。外觀數據顯示，含His-HCl和His-AA的製劑的外觀優於其他組。SEC及NR-CE數據顯示，40℃放置4週後，含His-HCl(pH 6.0或pH 6.5)的製劑的單體純度優於其他組。
表9 pH和緩衝體系篩選結果
Figure 112145642-A0202-12-0094-43
註釋：AA代表醋酸-醋酸鈉鹽；His-AA代表組胺酸-醋酸組胺酸；CA代表枸櫞酸-枸櫞酸鈉鹽；SA代表琥珀酸-琥珀酸鈉鹽；PB代表磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉鹽；下同。
製劑實施例3. 糖種類篩選
用20mM His-HCl緩衝液(pH 6.0)製備100mg/mL蛋白、表10所示的不同種類的糖和0.6mg/mL PS80的製劑。對樣品進行強制降解研究(40℃放置4週)，以外觀、SEC、NR-CE為評價指標，考察不同糖種類對蛋白穩定性的影響。
結果見表10，外觀和純度項數據顯示，40℃放置4週後，含蔗糖的製劑組優於含海藻糖的製劑組。
表10糖種類篩選結果
Figure 112145642-A0202-12-0095-45
製劑實施例4. 表面活性劑篩選
用20mM His-HCl緩衝液(pH 6.0)製備100mg/mL蛋白、75mg/mL蔗糖、表11所示表面活性劑的製劑。對樣品進行強制降解研究(25℃，300rpm振搖7天；40℃放置4週)，以SEC和NR-CE為評價指標，考察不同表面活性劑對蛋白穩定性的影響。
結果見表11。外觀數據顯示，振搖7天後，含0.4mg/mL PS80的製劑組外觀差於其他製劑組；40℃放置4週後，含0.6mg/mL泊洛沙姆188(P188)的製劑組外觀差於其他製劑組。NR-CE數據顯示，40℃放置4週後，含0.6mg/mL泊洛沙姆188(P188)的製劑組差於其他製劑組，含0.4mg/mL PS80的製劑組略優，含0.6mg/mL PS80的製劑組和含0.8mg/mL PS80的製劑組沒有明顯差異。
表11表面活性劑篩選結果
Figure 112145642-A0202-12-0096-46
註釋：振搖D7：振搖7天；40℃ W4：40℃放置4週。
製劑實施例5. 凍乾
製備表12蛋白樣品並進行凍乾，凍乾參數見表13：
表12蛋白凍乾劑處方設計表
Figure 112145642-A0202-12-0096-47
表13蛋白凍乾工藝開發凍乾參數
Figure 112145642-A0202-12-0096-48
*：一次乾燥與二次乾燥時間根據具體情況進行調整。
兩種凍乾成品外觀顯示粉餅均完整，無明顯塌陷，粉餅外觀無顯著差異。
製劑實施例6. 凍乾穩定性1
用10mM His-HCl pH6.0製備37.5mg/mL蔗糖、0.3mg/mL PS80、50mg/mL蛋白樣品的製劑，用20mL西林瓶和20mm凍乾膠塞進行凍乾工藝篩選。凍乾參數見表14。終工藝樣品凍乾前後及高溫穩定性見表15。
表14蛋白凍乾工藝開發凍乾參數
Figure 112145642-A0202-12-0097-49
*：一次乾燥與二次乾燥時間根據具體情況進行調整。
表15凍乾後產品穩定性數據
Figure 112145642-A0202-12-0097-50
結果顯示，凍乾前外觀澄明，凍乾後粉餅完整無明顯塌陷，複溶澄明；高溫(40℃)結果顯示，40℃ 4W條件下SEC、NR-CE和IEC無顯著變化，穩定性較好。
製劑實施例7. 黏度與pH關係
分別將用20mM His-HCl pH5.0、20mM His-HCl pH6.0製備的蛋白濃縮至不同濃度，測定其在25℃的黏度。結果見表16，在His-HCl體系中，pH 5.0的黏度低於pH 6.0。
表16黏度與pH的關係
Figure 112145642-A0202-12-0098-51
註釋：N/A表示由於樣品黏度太大，無法製備。
製劑實施例8. 凍乾穩定性2(皮下製劑)
製備表17蛋白樣品並進行凍乾，凍乾參數見表14：
表17蛋白凍乾劑處方設計表
Figure 112145642-A0202-12-0098-52
表18蛋白複溶處方
Figure 112145642-A0202-12-0099-53
表19凍乾後產品穩定性數據
Figure 112145642-A0202-12-0099-54
結果顯示，凍乾前外觀澄明，凍乾後粉餅完整無明顯塌陷，複溶澄明；複溶後25℃24h結果顯示，SEC、NR-CE和IEC無顯著變化，穩定性較好。
製劑實施例9. 凍乾穩定性3(皮下製劑)
製備表20蛋白樣品並進行凍乾，凍乾參數見表14：
表20蛋白凍乾劑處方設計表
Figure 112145642-A0202-12-0100-55
表21蛋白複溶處方
Figure 112145642-A0202-12-0100-56
表22凍乾後產品穩定性數據
Figure 112145642-A0202-12-0100-57
結果顯示，凍乾前外觀澄明，凍乾後粉餅完整無明顯塌陷，複溶澄明；高溫結果顯示，40℃ 4W條件下SEC和酶活無顯著變化，穩定性較好。
製劑實施例10. 凍乾穩定性4(皮下製劑)
製備表23蛋白樣品並進行凍乾，凍乾參數見表14：
表23蛋白凍乾劑處方設計表
Figure 112145642-A0202-12-0101-58
表24蛋白複溶處方
Figure 112145642-A0202-12-0101-59
表25凍乾後產品穩定性數據
Figure 112145642-A0202-12-0102-60
註釋：40℃ 4W表示該條件下40℃放置4週，2-8℃ M6表示該條件下4℃放置6個月，25℃ M6表示該條件下25℃放置6個月。
結果顯示，凍乾前外觀澄明，凍乾後粉餅完整無明顯塌陷，複溶澄明；40℃ 4W、25℃ M6及2-8℃ M6結果顯示，純度項和酶活無顯著變化，穩定性較好。
製劑實施例11. 終處方凍乾5(皮下製劑)
製備表26蛋白樣品並進行凍乾，凍乾參數見表14：
表26蛋白凍乾劑處方設計表
Figure 112145642-A0202-12-0103-61
凍乾結果顯示，凍乾成品外觀顯示粉餅完整，無明顯塌陷。複溶後處方為蛋白濃度150mg/mL，25mM pH5.0 His-HCl，蔗糖70mg/mL，10mM甲硫胺酸，PS80 0.6mg/mL，2000U/mL透明質酸酶，複溶後外觀澄清透明。
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Claims (23)

  1. 一種醫藥組成物，包含特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體和緩衝劑，其中，
    該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含至少一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和至少一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2；
    該抗原結合模塊1包含重鏈可變區M-VH和輕鏈可變區M-VL，該M-VH包含M-HCDR1、M-HCDR2和M-HCDR3，該M-VL包含M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3，和
    該抗原結合模塊2包含重鏈可變區E-VH和輕鏈可變區E-VL，該E-VH包含E-HCDR1、E-HCDR2和E-HCDR3，該E-VL包含E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3，
    該E-HCDR1、E-HCDR2、E-HCDR3、E-LCDR1、E-LCDR2和E-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，該E-HCDR1如SEQ ID NO：6所示，該E-HCDR2如SEQ ID NO：7所示，該E-HCDR3如SEQ ID NO：8所示，該E-LCDR1如SEQ ID NO：9所示，該E-LCDR2如SEQ ID NO：10所示，和該E-LCDR3如SEQ ID NO：11所示；和
    該M-HCDR1、M-HCDR2、M-HCDR3、M-LCDR1、M-LCDR2和M-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的，其中，
    (i)該M-HCDR1如SEQ ID NO：30所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：31所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：32所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：33所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示，或
    (ii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：18所示，該M-HCDR2包含SEQ ID NO：19所示，該M-HCDR3包含SEQ ID NO：20所示，該M-LCDR1包含SEQ ID NO：21所示，該M-LCDR2包含SEQ ID NO：22所示，和該M-LCDR3包含SEQ ID NO：23所示，或
    (iii)該M-HCDR1如SEQ ID NO：24所示，該M-HCDR2如SEQ ID NO：25所示，該M-HCDR3如SEQ ID NO：26所示，該M-LCDR1如SEQ ID NO：27所示，該M-LCDR2如SEQ ID NO：28所示，和該M-LCDR3如SEQ ID NO：29所示；
    該緩衝劑為組胺酸緩衝劑、醋酸鹽緩衝劑、枸櫞酸鹽緩衝劑、琥珀酸鹽緩衝劑或磷酸鹽緩衝劑；
    較佳地，該緩衝劑為組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑。
  2. 如請求項1所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物的pH為4.5至6.5；
    較佳地，該醫藥組成物的pH為4.8至6.2；
    更佳地，該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
  3. 如請求項1或2所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至250mg/mL；
    較佳地，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為1mg/mL至200mg/mL；
    更佳地，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為50mg/mL至200mg/mL；
    最佳地，該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體的濃度為80mg/mL至180mg/mL。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含表面活性劑；
    較佳地，該表面活性劑為聚山梨酯或泊洛沙姆；
    更佳地，該表面活性劑為聚山梨酯80。
  5. 如請求項4所述的醫藥組成物，其中該表面活性劑的濃度為0.01mg/mL至1.0mg/mL；
    較佳地，該表面活性劑的濃度為0.1mg/mL至0.8mg/mL；
    更佳地，該表面活性劑的濃度為0.4mg/mL至0.8mg/mL。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物包含糖；
    較佳地，該糖為蔗糖、海藻糖、甘露醇或山梨糖醇；
    更佳地，該糖為蔗糖。
  7. 如請求項6所述的醫藥組成物，其中該糖的濃度為10mg/mL至100mg/mL；
    較佳地，該糖的濃度為20mg/mL至80mg/mL；
    更佳地，該糖的濃度為60mg/mL至80mg/mL。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的醫藥組成物，其中該緩衝劑的濃度為5mM至100mM；
    較佳地，該緩衝劑的濃度為5mM至50mM；
    更佳地，該緩衝劑的濃度為5mM至30mM。
  9. 如請求項1至8中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物還包含輔料；較佳地，該輔料為甲硫胺酸、鹽酸精胺酸、甘胺酸、脯胺酸、組胺酸、苯丙胺酸、谷胺酸、天冬胺酸、氯化鈉、氯化鈣或乙二胺四乙酸二鈉；更佳地，該輔料為甲硫胺酸或鹽酸精胺酸；最佳地，該輔料為甲硫胺酸。
  10. 如請求項9所述的醫藥組成物，其中該輔料的濃度為1mM至300mM；較佳地，輔料的濃度為1mM至200mM；更佳地，輔料的濃度為1mM至20mM。
  11. 如請求項1至10中任一項所述的醫藥組成物，其中該醫藥組成物還包含酶；較佳地，該酶為透明質酸酶。
  12. 如請求項11所述的醫藥組成物，其中該酶的濃度為10U/mL至3000U/mL；較佳地，該酶的濃度為150U/mL至2400U/mL；更佳地，該酶的濃度為700U/mL至2400U/mL；更佳地，該酶的濃度為1600U/mL至2400U/mL。
  13. 如請求項1至12中任一項所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體中，
    (i)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含兩個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
    其中一個抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：30所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：31所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：32所示的M-HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：27所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：33所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：29所示的M-LCDR3；
    另一個抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：18所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：19所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：20所示的M-HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：21所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：22所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：23所示的M-LCDR3；和
    該抗原結合模塊2，其E-VH具有：如SEQ ID NO：6所示的E-HCDR1、如SEQ ID NO：7所示的E-HCDR2和如SEQ ID NO：8所示的E-HCDR3，並且其E-VL具有：如SEQ ID NO：9所示的E-LCDR1、如SEQ ID NO：10所示的E-LCDR2和如SEQ ID NO：11所示的E-LCDR3；或
    (ii)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
    該抗原結合模塊1，其M-VH具有：如SEQ ID NO：18所示的M-HCDR1、如SEQ ID NO：19所示的M-HCDR2和如SEQ ID NO：20所示的M-HCDR3，並且其M-VL具有：如SEQ ID NO：21所示的M-LCDR1、如SEQ ID NO：22所示的M-LCDR2和如SEQ ID NO：23所示的M-LCDR3；和
    該抗原結合模塊2，其E-VH具有：如SEQ ID NO：6所示的E-HCDR1、如SEQ ID NO：7所示的E-HCDR2和如SEQ ID NO：8所示的E-HCDR3，並且其E-VL具有：如SEQ ID NO：9所示的E-LCDR1、如SEQ ID NO：10所示的E-LCDR2和如SEQ ID NO：11所示的E-LCDR3。
  14. 如請求項13所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體中：
    (i)該M-VH包含與SEQ ID NO：16具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：17具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；或
    該M-VH包含與SEQ ID NO：12具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：13具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；或
    該M-VH包含與SEQ ID NO：14具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該M-VL包含與SEQ ID NO：15具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；或
    (ii)該E-VH包含與SEQ ID NO：3具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列，並且該E-VL包含與SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：4具有至少90%的序列同一性的胺基酸序列；
    較佳地，
    (i)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含兩個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
    其中一個抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：16所示，並且M-VL如SEQ ID NO：17所示；
    另一個抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：12所示，並且M-VL如SEQ ID NO：13所示；和
    該抗原結合模塊2的E-VH如SEQ ID NO：3所示，並且E-VL如SEQ ID NO：5所示；或
    (ii)該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體包含一個特異性結合HGFR的抗原結合模塊1和一個特異性結合EGFR的抗原結合模塊2，
    該抗原結合模塊1的M-VH如SEQ ID NO：12所示，和該M-VL如SEQ ID NO：13所示，並且該抗原結合模塊2的E-VH如SEQ ID NO：3所示，和E-VL如SEQ ID NO：5所示。
  15. 如請求項13或14所述的醫藥組成物，其中該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，其具有一條如SEQ ID NO：34所示的第一鏈、一條如SEQ ID NO：35所示的第二鏈、一條如SEQ ID NO：36所示的第三鏈和一條如SEQ ID NO：37所示的第四鏈；或
    具有一條如SEQ ID NO：38所示的第一鏈、一條如SEQ ID NO：39所示的第二鏈、一條如SEQ ID NO：40所示的第三鏈和一條如SEQ ID NO：41所示的第四鏈。
  16. 如請求項1至8、13至15中任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
    (a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
    (c)10mg/mL至100mg/mL的糖，和
    (d)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.5至6.5；
    較佳地，該醫藥組成物包含如下組分：
    (a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
    (c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
    (d)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2；
    更佳地，該醫藥組成物包含如下組分：
    (a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
    (c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，和
    (d)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
  17. 如請求項1至15中任一項所述的醫藥組成物，其包含如下組分：
    (a)1mg/mL至250mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.01mg/mL至1.0mg/mL的表面活性劑，
    (c)10mg/mL至100mg/mL的糖，
    (d)1mM至300mM的輔料，
    (e)10U/mL至3000U/mL的酶，和
    (f)5mM至100mM的緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.5至6.5；
    較佳地，該醫藥組成物包含如下組分：
    (a)1mg/mL至200mg/mL的該特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.1mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
    (c)20mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
    (d)1mM至200mM的甲硫胺酸，
    (e)700U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
    (f)5mM至50mM的組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為4.8至6.2；
    更佳地，該醫藥組成物包含如下組分：
    (a)80mg/mL至180mg/mL的特異性結合HGFR和EGFR的雙特異性抗體，
    (b)0.4mg/mL至0.8mg/mL的聚山梨酯80，
    (c)60mg/mL至80mg/mL的蔗糖，
    (d)1mM至20mM的甲硫胺酸，
    (e)1600U/mL至2400U/mL的透明質酸酶，和
    (f)5mM至30mM的組胺酸-鹽酸組胺酸緩衝劑或組胺酸-醋酸組胺酸緩衝劑；該醫藥組成物的pH為5.0至6.0。
  18. 一種凍乾製劑，該凍乾製劑複溶後可形成如請求項1至17任一項所述的醫藥組成物。
  19. 一種製備凍乾製劑的方法，其中包括將如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物進行冷凍乾燥的步驟。
  20. 一種凍乾製劑，該製劑藉由如請求項19所述的方法獲得的。
  21. 一種複溶溶液，該複溶溶液藉由將如請求項18或20所述的凍乾製劑經複溶製備獲得。
  22. 如請求項1至17任一項所述的醫藥組成物或如請求項21所述的複溶溶液，其為靜脈注射製劑、皮下注射製劑、腹腔注射製劑或肌肉注射製劑；較佳為靜脈注射製劑或皮下注射製劑。
  23. 一種治療或預防疾病的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物、或如請求項18或20所述的凍乾製劑、或如如請求項21所述的複溶溶液；
    較佳地，該疾病是腫瘤；更佳地，該腫瘤選自肺癌、乳腺癌、胰腺癌、結直腸癌、肉瘤、腎細胞癌、肝細胞癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸癌和膠質母細胞瘤。
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