CN115594762A

CN115594762A - 一种铁蛋白重链抗体及其用途

Info

Publication number: CN115594762A
Application number: CN202110777534.5A
Authority: CN
Inventors: 柯天一; 郁倩文; 劳芳; 孙雯倩; 姚德惠; 张鹏飞; 刘岩; 阎西冲
Original assignee: Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd
Current assignee: Kunshan Xinyunda Biotech Co ltd
Priority date: 2021-07-09
Filing date: 2021-07-09
Publication date: 2023-01-13

Abstract

本公开涉及一种铁蛋白重链抗体及其用途，所述抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与其分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与其具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。所述抗体通过竞争性筛选，与铁蛋白重链具有较高的亲和力。

Description

一种铁蛋白重链抗体及其用途

技术领域

本公开涉及一种铁蛋白重链(Ferritin heavy chain)的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的抗体的应用。

背景技术

铁是细胞生存必需的微量元素之一，铁缺乏导致人体的缺铁性贫血、儿童发育迟缓；但细胞内的铁过多则可诱发自由基增多，进而造成脂质、蛋白质、碳水化合物及核酸等生物大分子的损伤，最终导致细胞死亡。铁蛋白对于保持细胞内的铁平衡至关重要。铁蛋白(Ferritin)是一种大约450kDa的大蛋白，由24个亚基自组装成球形笼状结构，其内部和外部尺寸分别为大约8和大约12nm，笼状结构容纳包含多达4500个铁原子的铁核。真核生物铁蛋白包含重链(H；21kDa)和轻链(L；19kDa)。H链负责Fe(II)氧化成Fe(III)并包括催化性铁氧化酶位点，而L链在铁成核中发挥作用。H和L链共同组装成24聚体的杂聚体铁蛋白。

铁蛋白的水平是机体健康水平的指征之一。铁蛋白水平降低是缺铁性贫血的表现，水平升高则反映了包括恶性肿瘤、炎症、肝脏疾病和反复输血等诸多因素的影响。通常，血清铁蛋白水平维持在相对稳定的范围内，而WHO规定男性和女性的铁蛋白正常浓度分别为30-300ng/mL和15-200ng/mL。血清铁蛋白的异常升高可能反映了多种疾病，例如肝炎、肝硬化、肝癌、肺癌和白血病等。此外，血清铁蛋白的降低可导致贫血和营养不良。因此检测血清中的铁蛋白对临床有指导价值。

同时，由于铁蛋白具有可包裹药物的笼状结构、显著的稳定性、较小且尺寸均一等特点，本领域已经尝试将铁蛋白用作药物载体以递送药物。铁蛋白的药物递送方式可以是将药物，如小分子药物阿霉素装载在笼状空腔内。另外，由于H-铁蛋白具有与受体TfR1结合的活性，其能够靶向多个高表达TfR1的肿瘤组织，并能穿越血脑屏障。因此本领域尝试用H-铁蛋白作为肿瘤药物载体以及作为潜在能够穿越血脑屏障的纳米药物载体，将H-铁蛋白与不同的治疗剂、示踪剂等偶联亦能达到治疗和诊断的效果。

上述研究同时也引发了对于铁蛋白本身的测定的需求，虽然已经建立了一些测定铁蛋白的方法，例如电化学免疫传感器、放射免疫分析和电感耦合等离子体质谱(ICPMS)等。尽管这些方法是相对灵敏和有着优良的选择性，但这些仪器昂贵，操作复杂，需要特定的专业知识和训练有素的操作员。因此，快捷、方便的免疫检测方法仍是最具有潜力的铁蛋白测定方法，但目前现存的免疫测定试剂盒由于抗体灵敏性、特异性的问题，成为免疫测定准确性和可靠性的瓶颈，也是目前医院使用的铁蛋白免疫检测普遍灵敏度不高的原因之一。目前已经有若干关于铁蛋白抗体的相关报道，如CN110468108B和CN105821004A公开了轻链铁蛋白的单克隆抗体和应用，但对于具有巨大载药潜力的H铁蛋白的检测仍旧缺乏有效抗体，因此本领域仍有开发灵敏度高、特异性好的铁蛋白单克隆抗体的需求。

发明内容

为了解决上述问题，本公开第一方面提供了一种杂交瘤细胞株3A71B6，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，杂交瘤细胞株3A71B6保藏编号为CGMCC NO:21906，能够分泌特异性识别人铁蛋白重链的单克隆抗体3A。

第二方面，本公开提供一种由杂交瘤细胞株3A71B6分泌的特异性识别人铁蛋白重链的单克隆抗体3A，其具有轻链和重链。

并且，其中，所述的重链的重链可变区包括以下三个重链CDR：

SEQ ID NO.:3VH-CDR1：SYWMH

SEQ ID NO.:4VH-CDR2：EINPSNARTNYNEKFKS和

SEQ ID NO.:5VH-CDR3：SSYGKNAMDY。所述的轻链的轻链可变区包括以下三个轻链CDR：

SEQ ID NO.:8VL-CDR1：RTSQDISNYLN

SEQ ID NO.:9VL-CDR2：YTSRLHS和

SEQ ID NO.:10VL-CDR3：QEGNTLPRT

在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留重链铁蛋白结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述的抗体的轻链包括所述的三个轻链CDR以及用于连接轻链CDR的轻链框架区；和所述的抗体的重链包括所述的三个重链CDR以及用于连接重链CDR的重链框架区。

在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在另一优选例中，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO.:1所示。

在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。

在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。

在另一优选例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在另一优选例中，所述轻链可变区的如SEQ ID NO.:6所示。

在另一优选例中，所述抗体的轻链还包括轻链恒定区。

在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。

在另一优选例中，所述抗体为人源化抗体。

在另一优选例中，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体和/或人源化抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体。

在另一优选例中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、和F(ab')2。

在本公开的第三方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有以下元件：

(i)重链和/或轻链或所述抗体的抗原结合片段，或者所述重链和所述轻链形成的抗重链铁蛋白的抗体，

在另一优选例中，所述重链的重链可变区包括SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQID NO.:5所示的3个重链 CDR，而所述轻链的轻链可变区包括SEQ ID NO.:8、SEQ IDNO.:9和SEQ ID NO.:10所示的3个轻链CDR；以及

(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。

在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签。

在另一优选例中，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白。

在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。

在本公开的第四方面，提供了一种抗体制剂，所述的抗体制剂包括：

(a)如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段；以及

(b)药学上可接受的运载体，所述的运载体包括：缓冲剂、无菌水，任选的表面活性剂。

在本公开的第五方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋白和/或如本公开第四方面所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。

在本公开的第六方面，提供了一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：

(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段和/或如本公开第三方面所述的重组蛋白；和

(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素和/或酶。

在本公开的第七方面，提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：

(1)如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段；或

(2)如本公开第三方面所述的重组蛋白。

在本公开的第八方面，提供了一种载体，所述的载体含有如本公开的第七方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。

在本公开的第九方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞含有如本公开的第八方面所述的载体或基因组中整合有如本公开的第七方面所述的多核苷酸。

在本公开的第十方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋白、如本公开第四方面所述的抗体制剂、如本公开第六方面所述的抗体药物偶联物、如本公开第七方面所述的多核苷酸、如本公开第八方面所述的载体和/或如本公开第九方面所述的宿主细胞，所述活性成分用于：

(a)制备检测试剂或试剂盒；

(b)制备预防和/或治疗铁蛋白相关疾病的药物或制剂；和/或

(c)制备预防和/或治疗癌症药物或制剂。

在另一优选例中，所述癌症或肿瘤选自下组：肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、肝癌、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病。

在本公开的第十一方面，提供了一种体外非诊断目的的检测样品中重链铁蛋白的方法，所述方法包括步骤：

(1)在体外，将所述样品与如本公开第二方面所述的抗体或其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋白、如本公开第四方面所述的抗体制剂和/或如本公开第六方面所述的抗体药物偶联物接触；

(2)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在重链铁蛋白。

在本公开的第十二方面，提供了一种体外的检测(包括诊断性目的或非诊断性目的)样品中重链铁蛋白的方法，所述方法包括步骤：

在本公开的第十三方面，提供了一种治疗铁蛋白相关疾病的方法，所述方法包括：

给需要的对象施用如本公开第二方面的抗体或其抗原结合片段、如本公开第三方面所述的重组蛋白、如本公开第四方面所述的抗体制剂和/或第六方面所述的抗体的药物偶联物。

在本公开的第十四方面，提供了一种分泌特异性识别人铁蛋白重链的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC NO:21906。

应理解，在本公开范围内中，本公开的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1示出了本公开单克隆抗体的SDS-PAGE检测结果。

图2示出了抗体浓度检测曲线。

图3示出了本公开单克隆抗体的WESTERN-BLOT检测结果。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，经过大量筛选，获得一株能分泌具有优异亲和力的抗重链铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及由其分泌获得重链铁蛋白单克隆抗体。实验表明，本公开的抗体能够与重链铁蛋白高亲和力结合。

I.术语

在本公开中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文使用的和除非另作说明，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的加或减10％之内。在需要整数的情况下，该术语是指在给定值或范围的加或减10％之内、向上或向下舍入到最接近的整数。

如本文所用，术语“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或情况可以发生但不是必须发生。

如本文所用，术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的不同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、dδ、ε、γ、和μ。IgG代表免疫球蛋白中最重要的一类，由于化学结构和生物功能差异，它又可以分为4 个子类：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ或λ链。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(V区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区(C区)。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的FR区(FR)。4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区 (LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区和4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为FR1、CDR1、 FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。轻链的3个CDR区，即轻链高变区(LCDR)，指LCDR1、LCDR2和LCDR3；重链的3个CDR区，即重链高变区(HCDR)，指HCDR1、HCDR2和HCDR3。发明所述的抗体或抗原结合片段的LCVR 和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR2-3)，或者符合kabat和 chothia的编号规则(HCDR1)。天然重链和轻链可变区中的四个FR区大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个 CDR相连，在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR 一起形成了抗体的抗原结合部位。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR 区域。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。

如本文所用，术语“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，或单一Fv片段。Fv抗体含有抗体重链可变区、轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般的， Fv抗体还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。

本公开不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本公开还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。

在本公开中，抗体包括用本领域技术人员熟知技术所制备的鼠的、嵌合的、人源化的包含本公开CDR区的抗体。重组抗体，例如嵌合的和人源化的单克隆抗体，包括人的和非人的部分，可以采用本领域熟知的DNA重组技术制备。

如本文所用，术语“单克隆抗体”指得自单个细胞来源的克隆分泌的抗体。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原表位。所述的细胞可能是真核的、原核的或噬菌体的克隆细胞株。

如本文所用，术语“嵌合抗体”是由鼠源性抗体的V区基因与人抗体的C区基因拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染宿主细胞表达的抗体分子。既保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力，又使其人源Fc段能有效介导生物学效应功能。

如本文所用，术语“人源化抗体”，是本公开鼠抗的一种可变区改造形式，具有源自(或基本上源自)非人类抗体 (优选小鼠单克隆抗体)的CDR区，和基本源自人源抗体序列的FR区和恒定区；即将鼠抗的CDR区序列嫁接到不同类型的人种系抗体构架序列上。因为CDR序列负责大部分的抗体-抗原相互作用，所以可以通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体性质的重组抗体。

如本文中所用，术语“单特异性抗体”(monospecific antibody)是指能够与一种特定表位结合的抗体(包括但不限于二价抗体)。

如本文中所用，术语“双特异性抗体”(Bispecific antibody，BsAb)是指能够与两种不同抗原或相同抗原上的两种不同表位结合的抗体，通常，双特异性抗体包含两种抗原结合位点，其中每种特异于不同的表位。在某些实施方案中，所述双特异性抗体能够同时结合两种表位，特别是在两种不同的细胞上表达的两种表位。

如本文所用，术语“三特异性抗体”指能够与三种不同抗原或相同抗原上的三种不同表位或两种不同抗原上存在的三种不同表位结合的抗体。

如本文所用，术语“多特异性抗体”是指能够与两种或更多种不同抗原或相同抗原上的两种或更多种不同表位结合的抗体。因此，多特异性抗体包括双特异性和三特异性抗体。

在本公开中，抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性、或者更多的多重特异性。

在本公开中，本公开的抗体还包括其保守性变异体，指与本公开抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表1进行氨基酸替换而产生。

表1

最初的残基	代表性的取代	优选的取代
			Ala(A)	Val；Leu；Ile	Val
Arg(R)	Lys；Gln；Asn	Lys
			Asn(N)	Gln；His；Lys；Arg	Gln
Asp(D)	Glu	Glu
			Cys(C)	Ser	Ser
Gln(Q)	Asn	Asn
			Glu(E)	Asp	Asp
Gly(G)	Pro；Ala	Ala
			His(H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile(I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe	Leu
			Leu(L)	Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys(K)	Arg；Gln；Asn	Arg
			Met(M)	Leu；Phe；Ile	Leu
Phe(F)	Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Leu
			Pro(P)	Ala	Ala
Ser(S)	Thr	Thr
			Thr(T)	Ser	Ser
Trp(W)	Tyr；Phe	Tyr
			Tyr(Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val(V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala	Leu

如本文所用，术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但优选是双链DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。

如本文所用，术语“载体”是指能够运输己与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。

如本文所用，术语“表达”指通过多核苷酸的转录和翻译产生多肽的过程。多肽的表达水平可以利用本领域已知的任何方法来评价，包括例如测定从宿主细胞产生的多肽的量的方法。这类方法可以包括但不限于通过ELISA定量细胞裂解物中的多肽，凝胶电泳之后考马斯蓝染色，Lowry蛋白测定以及Bradford蛋白测定。

如本文所用，术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如植物或动物细胞(如哺乳动物细胞)。

如本文所用，术语“药物制剂”指此类形式的制剂：所述制剂允许其中所含活性成分的生物学活性有效，并且不含具有待给予该制剂的对象不可接受的毒性的额外成分。

“药学上可接受的运载体”指药物制剂中的一种成分，其不是活性成分，其对于对象无毒性。药学上可接受的运载体包括但是不限于，缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。

如本文所用，术语“治疗”指给予患者内用或外用治疗剂，包含本公开的任何一种重链铁蛋白抗体及其组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，以有效缓解一种或多种疾病症状的治疗剂的量(治疗有效量)给予患者。“治疗”患有疾病或疾病状况的个体表示所述个体的症状部分或全部缓解，或者在治疗后保持不变。因此，治疗包括预防、治疗和/或治愈。预防指防止潜在疾病和/或防止症状恶化或疾病发展。治疗还包括所提供的任何抗体或其抗原结合片段以及本文所提供的组合物的任何药学用途。

如本文所用，“疗效”表示由个体的治疗所导致的效果，其改变、通常改良或改善疾病或疾病状况的症状，或者治愈疾病或疾病状况。

如本文所用，“治疗有效量”或“治疗有效剂量”指施用于对象之后至少足以产生疗效的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量。因此，其为防止、治愈、改善、阻滞或部分阻滞疾病或病症的症状所必需的量。

如本文所用，“预防有效量”或“预防有效剂量”指在施用于对象时会具有预期的预防效果的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量，例如，防止或延迟疾病或症状的发生或复发，减少疾病或症状发生或复发的可能性。完全预防有效剂量不必通过施用一个剂量发生，并且可以仅在施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以在一次或多次施用中施用。

如本文所用，术语“给予”和“处理”是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物应用于动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体。“给予”和“处理”可以指治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触、以及试剂与流体的接触、流体与细胞的接触。“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理。“处理”当应用于人、动物或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断；包括铁蛋白抗体与人或动物、受试者、细胞、组织、生理区室或生理流体的接触。

如本文所用，术语“患者”或“个体”是指哺乳动物，例如人。

II.抗重链铁蛋白抗体

如本文所用，术语“重链铁蛋白”一般是指天然的或重组的人重链铁蛋白(HFn)，以及人重链铁蛋白的非人同源物。

本公开提供一种针对人重链铁蛋白的高特异性和高亲和力的抗体，其包括重链和轻链，所述重链含有重链可变区(VH)氨基酸序列，所述轻链含有轻链可变区(VL)氨基酸序列。

在本公开中，通过选择优质的人重链铁蛋白抗原免疫小鼠，而后通过将小鼠脾细胞和B细胞融合形成杂交瘤细胞，获得特异性结合人重链铁蛋白的单克隆抗体。

优选地，重链可变区(VH)的CDR选自下组：

SEQ ID NO.:3所示的VH-CDR1，

SEQ ID NO.:4所示的VH-CDR2，和

SEQ ID NO.:5所示的VH-CDR3；和/或

轻链可变区(VL)的CDR选自下组：

SEQ ID NO.:8所示的VL-CDR1，

SEQ ID NO.:9所示的VL-CDR2，和

SEQ ID NO.:10所示的VL-CDR3。

其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个(如1-5、1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸的具有铁蛋白结合亲和力的衍生序列。

在另一优选例中，所述经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸序列所形成的序列优选为同源性为至少 80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

本公开的抗体可以是双链或单链抗体，并且可以是选自动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，更优选为人源化抗体、人-动物嵌合抗体。

本公开所述抗体衍生物可以是单链抗体、和/或抗体片段，如：Fab、Fab'、(Fab')2或该领域内其他已知的抗体衍生物等，以及IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM抗体或其他亚型的抗体中的任意一种或几种。

其中，所述动物优选为哺乳动物，如鼠。

本公开抗体可以是靶向人铁蛋白的鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、CDR嫁接和/或修饰的抗体。

在本公开的一种优选实施例中，上述SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ IDNO.:5中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有重链铁蛋白结合亲和力的序列，位于重链可变区(VH) 的CDR区。

在本公开的一种优选实施例中，上述SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有铁蛋白结合亲和力的序列，位于轻链可变区(VL)的 CDR区。

在本公开的一种更优选实施例中，VH CDR1、CDR2、CDR3分别独立地选自SEQ IDNO.:3、SEQ ID NO.:4和 SEQ ID NO.:5中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有铁蛋白结合亲和力的序列；VL CDR1、CDR2、CDR3分别独立地选自SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10中任意一种或几种序列、或它们经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的具有重链铁蛋白结合亲和力的序列。

本公开上述内容中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量，优选为不超过初始氨基酸序列总氨基酸数量的40％，更优选为不超过35％，更优选为1-33％，更优选为5-30％，更优选为10-25％，更优选为15-20％。

在本公开中，所述添加、缺失、修饰和/或取代的氨基酸数量通常是1、2、3、4或5个，较佳地为1-3个，更佳地为1-2个，最佳地为1个。

在本公开的一种优选实施例中，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO.:3、SEQID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

在本公开的一种优选实施例中，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ IDNO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和 LCDR3。

在本公开的一种优选实施例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在本公开的一种优选实施例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。

在本公开的一种优选实施例中，所述重链可变区包含如SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:1 所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

在本公开的一种优选实施例中，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:6 所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体还包括重链恒定区和/或轻链恒定区。

在本公开的一种优选实施例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。

在本公开的一种优选实施例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体为人源化抗体。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体和/或人源化抗体。

在本公开的一种优选实施例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。

在本公开的一种优选实施例中，所述的抗体为单克隆抗体。

在本公开的一种优选实施例中，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、和F(ab')2。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体的重链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的重链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的重链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体的轻链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的轻链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的轻链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

在本公开的一种优选实施例中，所述抗体包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的重链的氨基酸序列和轻链的氨基酸序列。

在本公开的一种优选实施例中，提供了一种抗人重链铁蛋白的抗体3A：

3A重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.:1)：

EVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYIFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPSNARTNYNEKFKSKATLT VDKSSSTTYMQLSSLTSEDSAVYYCARSSYGKNAMDYWGQGTSVTVSS

3A轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO.:6)：

DIQMTQTPSSLSASLGDRVTISCRTSQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTAYSLTI SNLEQEDIATYLCQEGNTLPRTFGGGTKLEIKR

本公开还提供了编码上述氨基酸的核苷酸序列：

3A VH核苷酸序列(SEQ ID NO.:2)：

gaggtccagctgcagcagcctggggctgaactggtgaagcctgggacttcagtgaagctgtcctgcaaggcttctggctacatcttcaccagctactggatgcactgggtga agcagaggcctggacaaggccttgagtggattggagagattaatcctagcaacgctcgtactaactacaatgagaagttcaagagcaaggccacactgactgtagacaaatcctcc agcacaacctacatgcaactcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagatcctcttatggtaaaaatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcac cgtctcctca

3A VL核苷酸序列(SEQ ID NO.:7)：

gatatccagatgactcagaccccatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcaggacaagtcaggacattagtaattatttaaactggtatcagcaga aaccagatggaactgttaaactcctgatctactacacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagcttattctctgaccattagcaacctgg agcaagaagatattgccacttacctttgccaagagggtaatacgcttccgaggacgttcgggggaggcaccaagctggaaataaaacgg

III.抗体的制备

任何适于产生单克隆抗体的方法都可用于产生本公开的重链铁蛋白抗体。例如，可以用连接或天然存在的重链铁蛋白蛋白或其片段免疫动物。可以使用合适的免疫接种方法，包括佐剂、免疫刺激剂、重复加强免疫接种，可以使用一种或多种途径。

单克隆抗体也可以由杂交瘤产生，该杂交瘤包括与无限增殖化细胞融合的B细胞，该B细胞从转基因非人类动物例如转基因小鼠获得，具有包含人免疫球蛋白重链和轻链基因区段的所有组成成分的基因组。例如，通过选择优质的人重链铁蛋白抗原免疫小鼠，而后通过将小鼠脾细胞和B细胞融合形成杂交瘤细胞，获得特异性结合人重链铁蛋白的单克隆抗体。本发明人经过广泛而深入地研究，经过大量筛选，获得一株能分泌具有优异亲和力的抗重链铁蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC NO:21906。

任何合适形式的铁蛋白都可以作为免疫原(抗原)，用于产生对铁蛋白特异的非人抗体，筛选所述抗体的生物学活性。免疫原可以单独使用，或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强剂组合使用。免疫原可以由天然来源纯化，或者在遗传修饰的细胞中产生。编码免疫原的DNA在来源上可以是基因组或非基因组的(例如cDNA)。可以使用合适的遗传载体表达编码免疫原的DNA，所述载体包括但不限于腺病毒载体、杆状病毒载体、质粒和非病毒载体。

人源化抗体可以选自任何种类的免疫球蛋白，包括IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。同样，任一类轻链都可以在本文的化合物和方法中使用。具体地说，κ、λ链或其变体在本公开的化合物和方法中是可以用的。

制备本公开铁蛋白抗体的示例性方法描述于实施例1。

本公开抗体或其片段的DNA分子的序列可以用常规技术，比如利用PCR扩增或基因组文库筛选等方法获得。此外，还可将轻链和重链的编码序列融合在一起，形成单链抗体。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。

本公开还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

本公开中所述的用重组DNA转化宿主细胞的步骤可用本领域熟知的技术进行。获得的转化子可用常规方法培养，转化子表达本公开的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，用常规培养基在合适的条件下培养。

通常，在适合本公开抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞。然后用常规的免疫球蛋白纯化步骤，如蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析或亲和层析等本领域技术人员熟知的常规分离纯化手段纯化得到本公开的抗体。

所得单克隆抗体可用常规手段来鉴定。比如，单克隆抗体的结合特异性可用免疫沉淀或体外结合试验(如放射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定。

IV.抗体-药物偶联物(ADC)

本公开还提供了基于本公开抗体的抗体偶联药物(antibody-drug conjugate，ADC)。

典型地，所述抗体偶联药物包括所述抗体、以及效应分子，所述抗体与所述效应分子偶联，并优选为化学偶联。其中，所述效应分子优选为具有治疗活性的药物。此外，所述效应分子可以是毒蛋白、化疗药物、小分子药物或放射性核素中的一种或多种。

本公开抗体与所述效应分子之间可以是通过偶联剂进行偶联。所述偶联剂的例子可以是非选择性偶联剂、利用羧基的偶联剂、肽链、利用二硫键的偶联剂中的任意一种或几种。所述非选择性偶联剂是指使效应分子和抗体形成共价键连接的化合物，如戊二醛等。所述利用羧基的偶联剂可以是顺乌头酸酐类偶联剂(如顺乌头酸酐)、酰基腙类偶联剂(偶联位点为酰基腙)中的任意一种或几种。

抗体上某些残基(如Cys或Lys等)用于与多种功能基团相连，其中包括成像试剂(例如发色基团和荧光基团)，诊断试剂(例如MRI对比剂和放射性同位素)，稳定剂(例如乙二醇聚合物)和治疗剂。抗体可以被偶联到功能剂以形成抗体-功能剂的偶联物。功能剂(例如药物，检测试剂，稳定剂)被偶联(共价连接)至抗体上。功能剂可以直接地、或者是通过接头间接地连接于抗体。

抗体可以偶联药物从而形成抗体药物偶联物(ADCs)。典型地，ADC包含位于药物和抗体之间的接头。接头可以是可降解的或者是不可降解的接头。可降解的接头典型地在细胞内环境下容易降解，例如在目标位点处接头发生降解，从而使药物从抗体上释放出来。合适的可降解的接头包括，例如酶降解的接头，其中包括可以被细胞内蛋白酶(例如溶酶体蛋白酶或者内体蛋白酶)降解的含有肽基的接头，或者糖接头例如，可以被葡糖苷酸酶降解的含葡糖苷酸的接头。肽基接头可以包括，例如二肽，例如缬氨酸-瓜氨酸，苯丙氨酸-赖氨酸或者缬氨酸-丙氨酸。其它合适的可降解的接头包括，例如，pH敏感接头(例如pH小于5.5时水解的接头，例如腙接头)和在还原条件下会降解的接头(例如二硫键接头)。不可降解的接头典型地在抗体被蛋白酶水解的条件下释放药物。

连接到抗体之前，接头具有能够和某些氨基酸残基反应的活性反应基团，连接通过活性反应基团实现。巯基特异性的活性反应基团是优选的，并包括：例如马来酰亚胺类化合物，卤代酰胺(例如碘、溴或氯代的)；卤代酯(例如碘、溴或氯代的)；卤代甲基酮(例如碘、溴或氯代)，苄基卤代物(例如碘、溴或氯代的)；乙烯基砜，吡啶基二硫化物；汞衍生物例如3,6-二-(汞甲基)二氧六环，而对离子是醋酸根、氯离子或者硝酸根；和聚亚甲基二甲基硫醚硫代磺酸盐。接头可以包括，例如，通过硫代丁二酰亚胺连接到抗体上的马来酰亚胺。

药物可以是任何细胞毒性，抑制细胞生长或者免疫抑制的药物。在实施方式中，接头连接抗体和药物，而药物具有可以和接头成键的功能性基团。例如，药物可以具有可以和连接物成键的氨基，羧基，巯基，羟基，或者酮基。在药物直接连接到接头的情况下，药物在连接到抗体之前，具有反应的活性基团。

有用的药物类别包括，例如，抗微管蛋白药物、DNA小沟结合试剂、DNA复制抑制剂、烷化试剂、抗生素、叶酸拮抗物、抗代谢药物、化疗增敏剂、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱等。在本公开中，药物-接头可以用于在一个简单步骤中形成ADC。在其它实施方式中，双功能连接物化合物可以用于在两步或多步方法中形成ADC。例如，半胱氨酸残基在第一步骤中与接头的反应活性部分反应，并且在随后的步骤中，接头上的功能性基团与药物反应，从而形成ADC。

通常，选择接头上功能性基团，以利于特异性地与药物部分上的合适的反应活性基团进行反应。作为非限制性的例子，基于叠氮化合物的部分可以用于特异性地与药物部分上的反应性炔基基团反应。药物通过叠氮和炔基之间的1,3-偶极环加成，从而共价结合于接头。其它的有用的功能性基团包括，例如酮类和醛类(适合与酰肼类和烷氧基胺反应)，膦(适合与叠氮反应)；异氰酸酯和异硫氰酸酯(适合与胺类和醇类反应)；和活化的酯类，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯(适合与胺类和醇类反应)。这些和其它的连接策略，例如在《生物偶联技术》，第二版(Elsevier)中所描述的，是本领域技术人员所熟知的。本领域技术人员能够理解，对于药物部分和接头的选择性反应，当选择了一个互补对的反应活性功能基团时，该互补对的每一个成员既可以用于接头，也可以用于药物。

V.抗体制剂

本公开还还提供了包含所述抗体的药物制剂。所述药物制剂一般包括一种或多种任选的药学上可接受的运载体或赋形剂。

运载体的选择部分由特定细胞和/或给药方法来确定。因此，存在多种合适的配方。例如，所述药物制剂可包含防腐剂。合适的防腐剂可包括，例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些实施方案中，采用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物的存在量通常是约0.0001％至约2％(以制剂总重量计)。运载体描述于，例如，《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第16版，Osol,A.编(1980)。在所用剂量和浓度下，药学上可接受的运载体通常是对受者无毒的，包括但不限于：缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷酯，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它糖，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子，如钠；金属络合物(如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。

在一些实施方案中，药物制剂包含有效治疗或预防疾病或病症的量，如治疗有效或预防有效量的细胞。在一些实施方式中，通过定期评估治疗的对象来监测治疗或预防性功效。所需剂量可以通过单药丸给予所述细胞，通过多药丸给予所述细胞或通过连续输注给予细胞来递送。

抗体在不同的制剂缓冲液中具有不同的稳定性，表现为电荷异质性的变化、抗体分子的降解、聚合等，这些质量性质的变化与抗体本身的理化性质相关，因此，在抗体药物开发过程，需根据不同抗体的理化性质筛选适合其自身的制剂缓冲液。目前常用的抗体制剂缓冲体系有磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、组氨酸缓冲液等，同时根据抗体性质会添加不同浓度的盐离子或山梨醇、海藻糖、蔗糖等赋形剂，以及适量的吐温20或吐温80等表面活性剂，以维持抗体的稳定性。

本公开的抗体药物组合制剂可有效抑制本发明人源化抗体的聚集沉淀、水解、氧化及脱酰胺等副反应，同时能有效提高产品在加压(高温、强光照射及冻融等)、加速及长期冷藏条件下的稳定性。

VI.治疗方法和组合物

本公开的任何抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物可以用于治疗方法中。

在一个方面，本公开提供用作药物的本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物。在其他方面，提供用于治疗疾病的本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物。

在一些实施方案中，提供如用于治疗方法中的本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物。在一些实施方案中，本公开提供本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物，其用于治疗个体的方法中，所述方法包括向该个体施用有效量的本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物。在一个这样的实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的至少一种额外的治疗剂，例如，如下文所述。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”可以是人。

在又一个方面，本公开提供本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗疾病。在又一个实施方案中，该药物用于治疗疾病的方法中，所述方法包括向患有疾病的个体施用有效量的药物。在一个这样的实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的至少一种额外的治疗剂，例如，如下文所述。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”可以是人。

在又一个方面，本公开提供一种用于治疗疾病的方法。在一个实施方案中，该方法包括向患有这种疾病的个体施用有效量的本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物。在一个这样的实施方案中，该方法还包括向该个体施用有效量的如下文所述的至少一种额外的治疗剂。根据以上实施方案中任一个实施方案的“个体”可以是人。

在又一个方面，本公开提供了包含本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的药物制剂，例如，用于上述任一种治疗方法中。在一个实施方案中，药物制剂包含本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物，以及可药用载体。在另一个实施方案中，药物制剂包含本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物和至少一种额外的治疗剂，例如，如下文所述。

本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物可以在治疗中单独使用或与其他活性剂组合使用。例如，本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物可以与至少一种额外的治疗剂共施用。

上文所示的这类联合治疗涵盖联合施用(其中在相同或独立的制剂中包含两种或更多种治疗剂)，和独立施用，在这种情况下，本公开抗体的施用可以在施用额外的治疗剂和/或辅助剂之前、同时和/或之后进行。本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物也可以与放射疗法组合使用。

本公开所述的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物(和任何额外的治疗剂)可以通过任何合适的手段施用，所述的合适手段包括肠胃外、肺内和鼻内以及(如果希望局部治疗)病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何合适的途径进行，例如通过注射，如静脉内或皮下注射，这部分地取决于施用是否为短暂或长期。本文中构思了多种给药方案，包括但不限于单次或在多个时间点多次施用、推注施用和脉冲输注。

抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物将以符合良好的医学实践的方式配制、给药和施用。关于这一点，考虑的因素包括正在治疗的具体病症、正在治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症原因、递送药剂的部位、施用方法、施用计划和执业医师已知的其他因素。抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物不需要与目前用来预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制，但是任选地与它们一起配制。这类其他药剂的有效量取决于在该制剂中存在的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的量、疾病类型或疗法、以及上文讨论的其他因素。这些通常以与本文所述相同的剂量并且采用如本文所述的施用途径使用，或以约1％至99％的本文所述剂量使用，或以经验地/临床上确定适宜的任何剂量和任何途径使用。

为了预防或治疗疾病，抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的适宜剂量(当单独使用或与一种或多种其他的额外的治疗剂组合使用时)将取决于待治疗疾病的类型、抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的类型、疾病的严重性和过程、抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物是否出于预防或治疗目的施用、先前的治疗、患者的临床史和对抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的反应、以及主治医师的判断。将抗体或其抗原结合片段或抗体 -药物偶联物适当地按一次或经过一系列治疗施用给患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如 0.5mg/kg-10mg/kg)抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物可以是向患者施用的初始候选剂量，无论是否例如通过一个或多个单独施用或通过连续输注来施用。一个典型的每日剂量可能是从约1μg/kg至100mg/kg或更多，取决于上文提到的因素。对于在几天或更长时间范围内重复施用，取决于病情，治疗通常将持续直至期望的疾病症状抑制作用出现。抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物的一个示例性剂量的范围将是约0.05mg/kg至约10mg/kg。因此，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg中的一种或多种剂量(或其任意组合)。这类剂量可以间歇地施用，例如，每周或每3周(例如，从而患者接受约2个至约20个剂量的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物，或例如约6个剂量的抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物)。可以施用较高的初始负荷剂量，随后是一个或多个较低剂量。然而，可以使用其他剂量方案。通过常规技术和测定法容易地监测这种疗法的进程。

应当理解，可以使用本公开的免疫抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物代替或附加至如本文所报告的抗体或抗体或其抗原结合片段或抗体-药物偶联物来实施上述制剂或治疗方法中的任何一种。

VII.检测用途和试剂盒

本公开的抗体可用于检测应用，例如用于检测样本，从而提供诊断信息。

本公开中，所采用的样本(样品)包括细胞、组织样本和活检标本。本公开使用的术语“活检”应包括本领域技术人员已知的所有种类的活检。因此本公开中使用的活检可以包括例如通过内窥镜方法或器官的穿刺或针刺活检制备的组织样本。

本公开中使用的样本包括固定的或保存的细胞或组织样本。

本公开还提供了一种指含有本公开的抗体(或其片段)的试剂盒，在本公开的一个优选例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、缓冲剂等。在优选例中，本公开的抗体可以固定于检测板。

本公开的主要优点包括：

(1)本公开的抗体具有优异的生物活性和特异性；

(2)本公开抗体通过竞争性筛选，具有更高的亲和力；

下面结合具体实施例，进一步陈述本公开。应理解，这些实施例仅用于说明本公开而不用于限制本公开的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

表2实验主要试剂

试剂名称	厂家
		Protein marker	Thermo
考马斯亮蓝G250	国药集团化学试剂有限公司
		RPMI1640	Thermo
HAT	SIGMA
		HT	SIGMA
酶标二抗	Jackson
		PEG	MERCK
胎牛血清	四季青
		Superdex 200pg	GE Healthcare
Nano drop	Thermo

实施例1：

1、抗原的制备

根据人铁蛋白H亚基的野生型氨基酸序列(SEQ ID NO:11；参见PDB:3AJO_A)获得其编码核苷酸序列(SEQ ID NO：12)，在上述核苷酸序列前加Nde1酶切位点，在该序列之后加终止密码子和Hind III酶切位点序列，通过全基因合成，测序正确后，连接至pET-30a(+)表达质粒载体中。上述表达载体构建成功后，选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌，将含有目的基因的重组质粒转化至宿主菌感受态细胞中，通过含卡那霉素的抗性平板筛选阳性克隆，确定重组菌株。重组菌株接种于LB培养基中摇瓶培养，37℃低速摇瓶培养至OD₆₀₀1.0左右，加入0.5mM IPTG，诱导表达3～4h后离心收菌泥。每30ml菌液离心收集的菌泥加入25mL 20mM Tris-HCl缓冲液重悬均匀，于高压均质机1000bar破碎0.5～2min。高压均质破碎的菌体裂解液，经离心(1500rpm，10min)去除大肠杆菌菌体碎片；上清液72℃加热15分钟；沉淀杂蛋白，离心去除沉淀；上清液在排阻色谱Superdex 200pg柱上分离纯化；SDS-PAGE 电泳鉴定纯度；Nano drop测定蛋白浓度。所有样品纯度均达到96％以上。

2、单克隆抗体的制备和纯化

(1)免疫动物

使用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方法进行4次免疫注射。

第一次免疫抗原的用量均为50μg/只，将抗原用PBS稀释到100μl，与等体积的完全弗氏佐剂混合后完全乳化，用2ML注射器每只小鼠腹股沟皮下注射。第二次免疫间隔两周，第三次与第二次免疫又间隔两周，操作和用量与第一次免疫相同，除了将弗氏完全佐剂换成弗氏不完全佐剂。第三次免疫7天后取血用ELISA方法检测抗体效价。第三次免疫后两周，进行第四次加强免疫，向待取脾小鼠进行加强免疫，小鼠腹腔注射，含50μg抗原(PBS稀释的100μl)，以及等体积不完全弗氏佐剂。选择效价超过100万的脾细胞进行细胞融合。融合前用重链铁蛋白抗原进行腹腔冲击，50μg/只。

(2)细胞融合

处死小鼠，取出脾脏，放入200目筛中研磨，用RPMI1640培养基冲洗，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞SP2/0用RPMI1640培养基洗4遍，每次15000rpm离心5min。将准备好的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞按1:6 比例混合，加入1ml预温至37℃的PEG1450混匀，加完后用预温至37℃的RPMI 1640培养基终止融合反应，转移到HAT选择培养基中，进行杂交瘤细胞的选择性培养和筛选。

用ELISA方法检测杂交瘤细胞培养上清：用2μg/ml的人重链铁蛋白(HFn)蛋白包被微孔板，每孔100μl，4℃ 过夜后用用PBST(磷酸盐缓冲液，pH7.4)洗板三次，5％脱脂奶粉封闭，每孔300μl，37℃孵育2小时。弃去封闭液， PBST洗板2次。将杂交瘤细胞培养上清加入酶标板100μl/孔，同时加入PBST(磷酸盐缓冲液)作为阴性对照，37℃ 孵育2小时。用PBS缓冲液洗微孔板，然后加入缀合了辣根过氧化物酶(HRP)的羊抗鼠IgG抗体37℃孵育2小时。洗板后，在微孔板中加入TMB底物每孔100μl 37℃孵育15min后，2M硫酸每孔50μl终止反应，并用酶标仪在 OD450的条件下分析数值。一共从阳性克隆中挑选了30株杂交瘤细胞株收集培养上清，经测试后，选取5株，进行亚克隆，并经亚型鉴定结果显示均为单一亚型，即效价最好的抗重链铁蛋白的杂交瘤细胞株，命名为3A，亚型鉴定为IgG2b。

将筛选出的阳性杂交瘤细胞株进行单克隆筛选(有限稀释法)，获得能产生高效价(间接ELISA稀释比>1:5,000) 单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆。将杂交瘤细胞株扩大培养，并冻存保种。所述的阳性杂交瘤细胞为抗人重链铁蛋白杂交瘤细胞系3A7 1B6，该细胞系已保存于保藏机构——中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，所述保藏机构简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2021年3月12日，建议的分类命名为Balb/c小鼠杂交瘤细胞株，保藏号为CGMCC NO:21906。

(3)单克隆抗体的制备与纯化

制备：将步骤(2)获得的杂交瘤细胞株3A7 1B6接种至BALB/c小鼠腹腔，制备腹水，然后从腹水中纯化抗体。

纯化：使用ProteinG亲和纯化法。将用PB溶液平衡好的ProteinG填料装入纯化柱中，腹水用0.02M PB溶液稀释后，用0.22μm滤膜过滤，流速0.6ml/min上样纯化柱。上样结束后，用0.02M PB溶液洗柱子至考马斯亮蓝 G250不变蓝为止。然后用0.1M pH3.0的甘氨酸-盐酸溶液洗脱，收集洗脱液至考马斯亮蓝G250不变蓝为止。用饱和碳酸钠调节洗脱产物pH至中性。10kDa超滤管超滤浓缩至1-5ml左右，透析浓缩并更换为PBS pH7.4溶液。SDS-PAGE结果显示(参见图1)，纯化后抗体纯度在95％以上。

3、单克隆抗体的夹心ELISA检测鉴定

为评估杂交瘤克隆的结合活性，将来自该克隆的纯化后的单克隆抗体进行ELISA实验检测。

步骤：

1)抗原包被：用包被液稀释抗原到1μg/ml，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中，4℃放置过夜。

2)洗涤：次日弃去包被液体，洗涤液200μL/孔洗1次。

3)封闭：加200μL/孔封闭液，37℃放置2h。

4)洗涤：次日弃去封闭液，洗涤液200μL/孔洗3次。

5)加待测样品(即制备的单克隆抗体)：以每孔100μL加入待测样(样品需要用PBS稀释到设定浓度)，37℃ 放置1h。

6)洗涤：弃掉待测样品，洗涤液200μL/孔洗3次。

7)加酶标二抗抗体：加入HRP标记羊抗鼠IgG(1:10000，酶稀稀释)，100μl/孔，37℃放置40min。

8)洗涤：弃去酶标二抗抗体，洗涤液200μL/孔洗5次。

9)显色：加新鲜配制的底物溶液90μL/孔，37℃暗处放置15～20min

10)终止反应、比色：加50μL/孔终止液后，用酶标仪测定450nm处各孔的吸光值

将不同的抗体浓度检测的OD值绘制成浓度检测曲线，如图2所示，单克隆抗体检测铁蛋白抗原的灵敏度可以达到0.5ng/ml。

从图2结果来看，本公开制备的3A单抗的EC50值为3.678ng/ml，与铁蛋白抗原有良好的亲和结合能力。

4、单克隆抗体的WESTERN-BLOT检测鉴定

1)聚丙烯酰胺凝胶的制备

①配制浓度为12％的分离胶溶液(10ml)：依次加入去离子水3.3ml、30％丙烯酰胺4ml、PH8.8的Tris 2.5ml、 10％过硫酸铵100μL、10％SDS 100μL、TEMED 6μL(加入TEMED后，分离胶马上开始聚合，故应立即快速混匀)。

②迅速在两玻璃板的间隙中加入分离胶溶液，留出灌注浓缩胶所需空间。

③分离胶聚合完全后，配制浓度为5％的浓缩胶溶液(4ml)：依次加入去离子水2.7ml、30％丙烯酰胺670μL、 PH6.8的Tris 500μL、10％过硫酸铵40μL、10％SDS 40μL、TEMED 6μL，在已聚合的分离胶上直接灌注浓缩胶，立即在浓缩胶溶液中插入干净的梳子。

2)样品的制备

则用8M尿素将重组重链铁蛋白稀释至10ng/μl，取2.5μl至0.5ml的EP管中，然后加7.5μl 8M尿素(总体积为10μl左右)，再加10μl 2×上样缓冲液混匀，沸水浴5-10min，2500rpm离心2min，将管壁溶液离心下来。

3)电泳

①用移液枪慢慢将样品混合物加至样品槽中，预染Marker，上样量10μL。

②80V电泳30min，换电压至120V，电泳直至溴酚蓝上样缓冲液在凝胶中迁移至凝胶底部。

4)转膜

①将胶上的蛋白转到PVDF膜上并封闭。

5)结合抗体

①将膜取出，浸泡于单抗稀释液中，25℃，2h或4℃过夜。单抗稀释至5-10μg/ml。稀释液为500ml的1*TBS +2.5g的酪蛋白+250μl吐温。

②将膜取出，TBST洗5次，每次5min(水平摇床上震荡)。

③将膜取出，浸泡于用TBS稀释液稀释的二抗(羊抗鼠-HRP)中，25℃，1h。其中，羊抗鼠-HRP与TBS按 1:10000比例稀释。

6)曝光

结果如图3所示，由结果来看，本公开制备的单克隆抗体能特异性识别重链铁蛋白，位于20KD处。

实施例2：3A抗体可变区序列的鉴定

将3A抗体蛋白送测序(武汉金开瑞生物工程有限公司)获得Anti-HFn候选序列。

3A VH氨基酸序列(SEQ ID NO.:1)

EVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYIFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPSNARTNYNEKFKSKATLTV DKSSSTTYMQLSSLTSEDSAVYYCARSSYGKNAMDYWGQGTSVTVSS

对应的核苷酸序列为(SEQ ID NO:2)：

3A VL氨基酸序列(SEQ ID NO.:6)

DIQMTQTPSSLSASLGDRVTISCRTSQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTAYSLTIS NLEQEDIATYLCQEGNTLPRTFGGGTKLEIKR

对应的核苷酸序列(SEQ ID NO.:7)：

其中，下划线区为CDRs(IMGT定义，单列如下)：

表3鼠源抗HFn抗体轻链可变区和CDR序列

表4鼠源抗HFn抗体重链可变区和CDR序列

序列表

<110> 昆山新蕴达生物科技有限公司

<120> 一种铁蛋白重链抗体及其用途

<130> MTI21191

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 119

<212> PRT

<213> 3A重链可变区(Mouse)

<400> 1

Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Ala Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Thr Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Lys Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 357

<212> DNA

<213> 3A重链可变区核苷酸序列(Mouse)

<400> 5

gaggtccagc tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctgggacttc agtgaagctg 60

tcctgcaagg cttctggcta catcttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120

cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaacgctcg tactaactac 180

aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacaacctac 240

atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatcctct 300

tatggtaaaa atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 3A重链可变区CDR1(Mouse)

<400> 2

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 3A重链可变区CDR2(Mouse)

<400> 3

Glu Ile Asn Pro Ser Asn Ala Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 3A重链可变区CDR3(Mouse)

<400> 4

Ser Ser Tyr Gly Lys Asn Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 108

<212> PRT

<213> 3A轻链可变区(Mouse)

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Ala Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Leu Cys Gln Glu Gly Asn Thr Leu Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 7

<211> 324

<212> DNA

<213> 3A轻链可变区核苷酸序列(Mouse)

<400> 7

gatatccaga tgactcagac cccatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60

atcagttgca ggacaagtca ggacattagt aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120

gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180

aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagct tattctctga ccattagcaa cctggagcaa 240

gaagatattg ccacttacct ttgccaagag ggtaatacgc ttccgaggac gttcggggga 300

ggcaccaagc tggaaataaa acgg 324

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 3A轻链可变区CDR1(Mouse)

<400> 8

Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 3A轻链可变区CDR2(Mouse)

<400> 9

Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 3A轻链可变区CDR3(Mouse)

<400> 10

Gln Glu Gly Asn Thr Leu Pro Arg Thr

1 5

Claims

1.特异性结合铁蛋白重链的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：

所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO.:3、SEQ ID NO.:4和SEQ ID NO.:5所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；

所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:3、SEQ IDNO.:4和SEQ ID NO.:5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9和SEQ ID NO.:10所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

优选地，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区；

优选地，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区；

优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；

优选地，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO.:6所示的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列。

3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体还包括重链恒定区和/或轻链恒定区；

优选地，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的；

优选地，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的，较佳地为人源的；

优选地，所述抗体为人源化抗体；

优选地，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体和/或人源化抗体；

优选地，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体；

优选地，所述的抗体为单克隆抗体；

优选地，所述的抗体包括单特异性、双特异性、或三特异性抗体；

优选地，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、和F(ab')2；

优选地，所述抗体的重链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的重链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的重链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；

优选地，所述抗体的轻链包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的轻链的氨基酸序列，或与所述杂交瘤产生的抗体的轻链的氨基酸序列具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，较佳地至少85％，更佳地至少为90％，最佳地至少95％的氨基酸序列；

优选地，所述抗体包含保藏号为CGMCC NO:21906的杂交瘤产生抗体的重链的氨基酸序列和轻链的氨基酸序列。

4.一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有以下元件：

(i)权利要求1-3任一项所述的抗体的重链和/或轻链或所述抗体的抗原结合片段，或者所述重链和所述轻链形成的抗重链铁蛋白的抗体，以及

(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列；

优选地，所述的标签序列包括6His标签；

优选地，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白；

优选地，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。

5.一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：

(1)权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段；或

(2)权利要求4所述的重组蛋白。

6.一种载体，所述的载体含有权利要求5所述的多核苷酸；

优选地，所述的载体选自细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞含有基因组中整合有权利要求5所述的多核苷酸，或含有权利要求6所述的载体。

8.一种抗体制剂，所述的抗体制剂包括：

(a)权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段；以及

9.一种试剂盒，所述的试剂盒包含权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求5所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。

10.一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：

(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段和/或权利要求4所述的重组蛋白；和

11.一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的重组蛋白、权利要求5所述的多核苷酸、权利要求6所述的载体、权利要求7所述的宿主细胞、权利要求8所述的抗体制剂和/或权利要求10所述的抗体药物偶联物，所述活性成分用于：

(a)制备检测试剂或试剂盒；

(b)制备预防和/或治疗铁蛋白相关疾病的药物或制剂；和/或

(c)制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂；

优选地，所述癌症或肿瘤选自下组：肺癌、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃肠癌、肝癌、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病。

12.一种体外的检测(包括诊断性或非诊断性)样品中重链铁蛋白的方法，所述方法包括步骤：

(1)在体外，将所述样品与权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的重组蛋白和/或权利要求8所述的抗体制剂和/或权利要求10所述的抗体药物偶联物接触；

13.一种治疗铁蛋白相关疾病的方法，所述方法包括：

给需要的对象施用权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的重组蛋白、权利要求8所述的抗体制剂和/或权利要求10所述的抗体药物偶联物。

14.一种分泌特异性识别人铁蛋白重链的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC NO:21906。