TW202317633A

TW202317633A - 特異性識別ｔｎｆｒ２的抗體及其用途

Info

Publication number: TW202317633A
Application number: TW111125549A
Authority: TW
Inventors: 作安衣; 文武翟; 賀沖; 楊立飛
Original assignee: 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2022-07-07
Publication date: 2023-05-01
Also published as: CN118103397A; US20250011448A1; EP4367139A1; WO2023283611A1

Abstract

本申請提供抗TNFR2抗體、編碼該抗TNFR2抗體的核酸分子、包含該核酸分子的載體、包含該載體的宿主細胞、製備該抗TNFR2抗體的方法、包含該抗TNFR2抗體的藥物組合物及使用該抗TNFR2抗體或組合物的方法。

Description

特異性識別TNFR2的抗體及其用途

本申請涉及特異性識別腫瘤壞死因子受體2（TNFR2）的抗體，及其製備方法和用途，包括治療癌症及/或感染性疾病的方法。

腫瘤壞死因子受體2（TNFR2），又稱腫瘤壞死因子受體超家族成員1B（TNFRSF1B）和CD120b，是一種與同源配體TNFα和淋巴毒素-α（LT-α）結合的膜受體。TNFR1在細胞質部分有一個死亡域（DD）並且可以啟動caspas依賴途徑和NFκB途徑。與TNFR1相比，TNFR2缺乏DD，但可以招募銜接蛋白TNF受體相關因子2（TRAF2）和TRAF3，並啟動NFκB非經典途徑和MAP激酶途徑（Brenner et al., 2015）。TNFR2在免疫細胞和一些非免疫細胞上表現，包括內皮細胞、心肌細胞、星形膠質細胞等（Ward-Kavanagh et al., 2016）。儘管早期研究顯示TNFR2共刺激初始T細胞功能，後來證明TNFR2也通過誘導CD8+T細胞快速收縮從而限制CD8+T細胞介導的病毒清除和抗腫瘤免疫（Bertrand et al., 2015; DeBerge et al., 2015; Kim et al., 2009; Wortzman et al., 2013b）。一些研究顯示，調節T細胞（Treg細胞）中TNFR2的表現高於初始T細胞，並且TNFR2信號通路對Treg細胞的發育、增殖和存活非常重要（Chen et al., 2013; Horwitz et al., 2013; Mahmud et al., 2014）。因此，TNFR2信號通路在調節免疫反應中起著關鍵作用。此外，在腫瘤微環境中，TNFR2在Treg細胞和髓源抑制性細胞（MDSC）中高表現，這顯示TNFR2在腫瘤免疫中具有潛在功能（Chen et al., 2013; Hu et al., 2014）。事實上，已有多篇文獻報導了抗小鼠TNFR2抗體的抗腫瘤效果，儘管其機制尚不明確（Case et al., 2020; Nie et al., 2016; Tam et al., 2019; Williams et al., 2018）。此外，TNFR2的一個已知突變與T細胞淋巴瘤有關，包括蕈樣真菌病和Sezary綜合征，這顯示它可能是一種原癌基因（Ungewickell et al., 2015）。也有報告稱TNFR2在某些類型的癌症中上調，並與不良預後相關（Yang et al., 2017; Zhang et al., 2018）。

因此，本領域仍需要能夠有效抑制或以其他方式拮抗TNFR2的治療性抗體，以及治療由TNFR2介導的疾病或病症的相關方法，例如癌症或傳染性疾病。

本文提及的所有出版物、專利、專利申請和已公開的專利申請中披露的內容，以引用方式全部併入本文中。

一方面，本申請提供一種分離的能夠特異性地與人TNFR2上的抗原決定區結合的抗TNFR2抗體，該抗原決定區包含選自由SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136組成的組中的1個、2個、3個、4個、5個、6個或7個胺基酸殘基。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 39所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 63所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 39具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 63中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 40所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 64所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 40或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 40具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 64中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 41所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 65所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 41具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 65中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 42所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 66所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 42具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 66或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 66中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 43所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 67所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 43具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 67中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 44所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 68所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 44具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 68中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 45所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 69所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 45具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 69中任一具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含： HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含胺基酸序SEQ ID NO: 27列或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如SEQ ID NOs: 46-62中任一胺基酸序列所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如SEQ ID NOs: 70-77中任一胺基酸序列所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含：V _H，其包含SEQ ID NOs: 46-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 46-62中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 70-77中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體，其包含：(i) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 48具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性；(ii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 70具有至少約80%序列同一性；(iii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 71具有至少約80%序列同一性；(iv) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性；(v) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 55具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(vi) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 56具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性；(vii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 57具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(viii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 58具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(ix) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 59具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(x) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 60具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(xi) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 61具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；(xii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 62具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其與人TNFR2特異性結合的Kd值為約0.1pM至約10nM。

在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其與上述任一種分離的抗TNFR2抗體競爭性地與TNFR2特異性結合。在一些實施例中，提供一種分離的抗TNFR2抗體，其與上述任一種分離的抗TNFR2抗體特異性地結合相同的抗原決定區。

在一些實施例中，如上該任一種分離的抗TNFR2抗體，該分離的抗TNFR2抗體包含Fc片段。在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體是全長的IgG抗體。在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體是全長的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體是嵌合的、人的或人源化的抗體。在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體是抗原結合片段，該抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab’) ₂、Fab’-SH、單鏈Fv（scFv）、Fv片段、dAb、Fd、奈米抗體（nanobody）、雙鏈抗體（diabody）和線性抗體。

在一些實施例中，提供一種分離的核酸分子，該核酸分子編碼如上該任一種抗TNFR2抗體。在一些實施例中，提供一種載體，該載體包含如上該任一種核酸分子。在一些實施例中，提供一種宿主細胞，該宿主細胞表現如上該任一種抗TNFR2抗體、如上該任一種核酸分子或如上該任一種載體。在一些實施例中，提供一種製備抗TNFR2抗體的方法，其包含：a) 在能有效表現抗TNFR2抗體的條件下培養上述任一種宿主細胞；和b) 從宿主細胞中獲得表現的抗TNFR2抗體。

在一些實施例中，提供一種在所需個體中治療疾病或病症的方法，包括向該個體投與有效量的如上任一種抗TNFR2抗體。在一些實施例中，提供如本文任一種抗TNFR2抗體在製備用於在所需個體中治療疾病或病症的藥物組合物中的用途。在一些實施例中，提供如上任一種抗TNFR2抗體或包含如上任一種抗TNFR2抗體的藥物組合物在製備用於治療疾病或病症的藥物中的用途。在一些實施例中，該疾病或病症與TNFR2有關，包括癌症或傳染性疾病。在一些實施例中，該疾病或病症選自由非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管交界處腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌和傳染性疾病病，包括但不限於人乳頭瘤病毒（HPV）、人免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦-巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。

同時還提供包含如上任一種抗TNFR2抗體的藥物組合物、套組以及生產製品。

相關申請的交叉引用

本申請要求2021年7月8日提交的美國臨時申請63/219,796的優先權，其全部內容通過引用併入本文。 參考電子序列表

電子序列表（710262000740SEQLIST.xml；大小：89,434位元組；生成日期：2022.07.05）的內容通過整體引用併入本文。

本申請一方面提供一種分離的能夠特異性地與人及/或食蟹猴TNFR2結合的抗TNFR2抗體。通過雜交瘤技術、人源化方法以及合理設計的生物化學及生物學實驗，本發明已經鑑定出能夠結合人及/或食蟹猴TNFR2並抑制人及/或食蟹猴TNFα與其受體TNFR2作用的高效抗體分子。本文給出的結果顯示，本申請提供的抗體與人及/或食蟹猴TNFR2結合具有高親和力和生物活性。

本申請所提供的抗TNFR2抗體包括，例如，全長抗TNFR2抗體、抗TNFR2單鏈抗體（scFvs）、抗TNFR2 Fc融合蛋白、多特異性（如雙特異性）抗TNFR2抗體、抗TNFR2免疫結合物以及諸如此類的。

一方面，本申請提供一種分離的能夠特異性地與人TNFR2上的抗原決定區結合的抗TNFR2抗體，該抗原決定區包含如SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的胺基酸殘基Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DDYID（SEQ ID NO: 1）；HC-CDR2，其包含EIYPGSGNTYYNEKFKG（SEQ ID NO: 7）；和HC-CDR3，其包含SQVYGKIAMDH（SEQ ID NO: 14）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含RASESVDNSGNSFMH（SEQ ID NO: 20）；LC-CDR2，其包含RASNLES（SEQ ID NO: 27）；和LC-CDR3，其包含QQSKEDPYT（SEQ ID NO: 33）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DFNMD（SEQ ID NO: 2）；HC-CDR2，其包含YINPNNGDAAYNQKFKS（SEQ ID NO: 8）；和HC-CDR3，其包含WGWAFAY（SEQ ID NO: 15）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含KASQDVKTAVA（SEQ ID NO: 21）；LC-CDR2，其包含ATSYRYT（SEQ ID NO: 28）；和LC-CDR3，其包含QQHYSIPYT（SEQ ID NO: 34）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DDFIH（SEQ ID NO: 3）；HC-CDR2，其包含RINPSNANTEYAPKFQD（SEQ ID NO: 9）；和HC-CDR3，其包含NDGYYDGLFY（SEQ ID NO: 16）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含KASQDVGTAVA（SEQ ID NO: 22）；LC-CDR2，其包含WASTRHT（SEQ ID NO: 29）；和LC-CDR3，其包含QQYSSYPFT（SEQ ID NO: 35）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含NFAMS（SEQ ID NO: 4）；HC-CDR2，其包含TIRSGDNYSYYSDNVKG（SEQ ID NO: 10）；和HC-CDR3，其包含NWDKVFDY（SEQ ID NO: 17）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含RASESVDSYGYSFMH（SEQ ID NO: 23）；LC-CDR2，其包含RASNLKS（SEQ ID NO: 30）；和LC-CDR3，其包含QQSNEDHT（SEQ ID NO: 36）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含IYGMN（SEQ ID NO: 5）；HC-CDR2，其包含WIHTYTGEPTYADDFKG（SEQ ID NO: 11）；和HC-CDR3，其包含RERYGSF（SEQ ID NO: 18）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含TASQSVDYGGVSYMN（SEQ ID NO: 24）；LC-CDR2，其包含GASNQES（SEQ ID NO: 31）；和LC-CDR3，其包含QQSNEDPPT（SEQ ID NO: 37）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含SGYYWN（SEQ ID NO: 6）；HC-CDR2，其包含YITYDGNNNYDPSLKN（SEQ ID NO: 12）；和HC-CDR3，其包含GDYGDSAMDY（SEQ ID NO: 19）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含SASSSVSYMH（SEQ ID NO: 25）；LC-CDR2，其包含EISKLAS（SEQ ID NO: 32）；和LC-CDR3，其包含QQWNYPLIT（SEQ ID NO: 38）。

在一些實施例中，該分離的抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含SGYYWN（SEQ ID NO: 6）；HC-CDR2，其包含YITYDGNNNYNPSLKS（SEQ ID NO: 13）；和HC-CDR3，其包含GDYGDSAMDY（SEQ ID NO: 19）；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含SASSGVNYMH（SEQ ID NO: 26）；LC-CDR2，其包含EISKLAS（SEQ ID NO: 32）；和LC-CDR3，其包含QQWNYPLIT（SEQ ID NO: 38）。

同時還提供編碼抗TNFR2抗體的核酸，包含抗TNFR2抗體的組合物，以及製備和使用本申請之抗TNFR2抗體的方法。定義

如本文所述，「治療（treatment）」或「治療（treating）」是一種獲得有益的或期望的結果的方法，包括臨床結果。鑒於本申請的目的，該有益的或期望的臨床結果，包括但不限於以下一種或多種：緩解由疾病引起的一種或多種症狀，減輕疾病程度，穩定疾病（例如，預防或延遲疾病惡化），預防或延遲疾病的擴散（例如，轉移），預防或延遲疾病復發，延遲或減緩疾病進展，改善疾病狀態，緩解疾病（部分或全部），減少治療疾病所需的一種或多種其他藥物的劑量，延遲疾病進展，改善或提高生活品質，增加體重，及/或延長生存期。同時，「治療」還包括疾病病理結果的減少（例如，對癌症而言，腫瘤體積）。本申請的方法考慮了這些治療的任何一個或多個方面。

術語「抗體」包括全長抗體及其抗原結合片段。全長抗體包括兩條重鏈和兩條輕鏈。輕鏈和重鏈的可變區負責抗原的結合。兩條鏈中的可變區通常包括3個高變的環，被稱為互補決定區（CDRs）（輕鏈（LC）CDRs包括LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，重鏈（HC）CDRs包括HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3）。本文所披露的抗體或抗原結合片段的CDR邊界可通過Kabat, Chothia或Al-Lazikani慣例來定義或識別（Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991）。重鏈或輕鏈的3個CDR區插入到被稱為框架區（FRs）的側翼區段之間，該框架區比CDR區具有更高的保守性，並形成支撐高變環的支架。重鏈和輕鏈的恆定區並不參與抗原結合，但展示出多種效應功能。抗體是基於它們重鏈恆定區的胺基酸序列進行分類或分型的。抗體的五種主要類別或同種型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特徵在於分別具有α、δ、ε、γ和μ型重鏈。幾種主要的抗體類別被分為亞類，如IgG1（γ1重鏈）、IgG2（γ2重鏈）、IgG3（γ3重鏈）、IgG4（γ4重鏈）、IgA1（α1重鏈n）或IgA2（α2重鏈）。

如本文所述，術語「抗原結合片段」包括抗體片段，包括，例如，雙鏈抗體（diabody）、Fab、Fab’、F(ab’) ₂、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) ₂、雙特異性dsFv (dsFv-dsFv’)、二硫鍵穩定的雙鏈抗體（ds雙鏈抗體）、單鏈Fv(scFv)、scFv二聚體（二價雙鏈抗體），由包含一個或多個CDRs的抗體片段組成的多特異性抗體、單域抗體、奈米抗體（nanobody）、域抗體、二價域抗體或者能夠與抗原結合但不包含完整抗體結構的任何其他抗體片段。抗原結合片段還包括包含如上抗體片段的融合蛋白。抗原結合片段也包括包含如上抗體片段的融合蛋白。抗原結合片段能夠與親本抗體或親本抗體片段（如親本scFv）結合相同的抗原。在一些實施例中，抗原結合片段可能包括來自特定人抗體的一個或多個CDRs，該CDRs被移植到來自一個或多個不同人抗體的框架區。

如本文所述，術語「抗原決定區」是指抗體或抗體部分結合的抗原上特定的原子或胺基酸組。如果兩種抗體或抗體部分表現出與某抗原競爭性結合，則它們可能結合抗原上相同抗原決定區。

如本文所述，當第一抗體在等莫耳濃度下抑制第二抗體與TNFR2靶標結合至少50%（例如，至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%）時，第一抗體與第二抗體「競爭」結合TNFR2靶標，反之亦然。PCT出版物WO 03/48731描述了基於交叉競爭的高通量抗體「抗原決定區歸類」方法。

如本文所述，術語「特異性地結合」、「特異性地識別」或「對…來說是特異性的」是指可測量的和可再現的相互作用，例如抗體與靶標的結合可以確定在異質分子群，包括生物分子中存在該靶標。例如，抗體能夠特異性地識別某靶標（可以是抗原決定區）是指，與其他靶標結合相比，該抗體與該靶標的結合具有更高的親和力，親合力，更容易及/或更持久。在一些實施例中，特異性地識別抗原的抗體與抗原的一個或多個抗原決定簇反應，其結合親和力是其與其他靶標結合親和力的至少10倍。

如本文所述，一種「分離的」抗TNFR2抗體是指一種抗TNFR2抗體，其（1）與天然存在的蛋白無關，（2）不含相同來源的其他蛋白，（3）由不同種屬的細胞所表現，或（4）自然界中不存在。

如本文所述，術語「分離的核酸」，是指基因組、cDNA或合成來源的核酸或其組合。根據其來源，該「分離的核酸」（1）與自然界中發現的「分離的核酸」中的全部或部分多核苷酸無關，（2）可與自然狀態下不與之相連的多核苷酸可操作性地連接，或（3）在自然界中不作為較長序列的一部分而存在。

如本文所述，術語「CDR」或「互補決定區」是指重鏈和輕鏈多肽的可變域內發現的非連續抗原結合位點。在文獻Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, 「Sequences of proteins of immunological interest」 (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948 (1997); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996); Abhinandan and Martin, Mol. Immunol.,45: 3832-3839 (2008); Lefranc M.P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77 (2003); 和 Honegger and Plückthun, J. Mol. Biol., 309:657-670 (2001)中已經描述這些特殊的區域，其中當彼此之間互相比較時，這些定義包括胺基酸殘基的重合或子集。然而，採用任何一種定義方式來指示抗體或移植抗體或其變體的CDR，均包括在本文所定義和使用的術語範圍之內。表1中列了由上述引用的各篇參考文獻所定義的CDR所包括的胺基酸殘基的位置，以示比較。CDR預測的演算法和結合介面在本領域是已知的，包括，例如Abhinandan and Martin, Mol. Immunol.,45: 3832-3839 (2008); Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307 (2010); 和Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438 (2015)中均有描述。本段中所引用的參考文獻的內容以其整體引用併入本文中，以用於本申請和可能包含在本文中的一個或多個請求項中。表 1 ： CDR 定義

	Kabat ¹	Chothia ²	MacCallum ³	IMGT ⁴	AHo ⁵
V _HCDR1	31-35	26-32	30-35	27-38	25-40
V _HCDR2	50-65	53-55	47-58	56-65	58-77
V _HCDR3	95-102	96-101	93-101	105-117	109-137
V _LCDR1	24-34	26-32	30-36	27-38	25-40
V _LCDR2	50-56	50-52	46-55	56-65	58-77
V _LCDR3	89-97	91-96	89-96	105-117	109-137

¹胺基酸殘基編號參照上述Kabat et al .中的命名方法 ²胺基酸殘基編號參照上述Chothia et al.中的命名方法 ³胺基酸殘基編號參照上述MacCallum et al.中的命名方法 ⁴胺基酸殘基編號參照上述Lefranc et al.中的命名方法 ⁵胺基酸殘基編號參照上述Honegger and Plückthun中的命名方法

術語「嵌合抗體」是指重鏈及/或輕鏈的一部分與來自特定種屬或屬於特定抗體種類或亞類的抗體中的相應序列一致或具有同源性，而這個（些）鏈的剩餘部分與來自另一種屬或屬於其他抗體種類或亞類的抗體中的相應序列一致或具有同源性的抗體，以及此類抗體的片段，只要其具有本申請中的生物學活性（見U.S. Patent No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。

「Fv」是包含完整抗原識別及結合位點的最小抗體片段。該片段是由一個重鏈可變域和一個輕鏈可變域緊密非共價連接形成的二聚體。通過這兩個域的折疊衍生出6個高變環（輕鏈和重鏈中各3個環），該高變環為抗體提供了用於結合抗原的胺基酸殘基，並且賦予抗體與抗原結合的特異性。然而，即使單個可變域（或Fv片段的一半，其僅包含對抗原具有特異性的3個CDRs）也具有識別和結合抗原的能力，儘管其親和力低於完整的結合位點。

「單鏈Fv」，也可簡寫成「sFv」或「scFv」，是包含被連接成單一多肽鏈的V _H和V _L抗體域的抗體片段。在一些實施例中，scFv多肽進一步包括V _H和V _L域之間的連接多肽，該連接多肽使得scFv形成抗原結合的理想結構。關於scFv的概述，見Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)。

術語「雙鏈抗體（diabodies）」是指，在V _H和V _L域之間採用短接頭（例如5~10個殘基）構建scFv片段（見上段內容）製備而成的一種小抗體片段，這樣就使得可變域在鏈間而不是鏈內進行配對，產生一個雙價片段，即具有兩個抗原結合位點的片段。雙特異性的雙鏈抗體是兩個「交叉」scFv片段的異二聚體，其中兩個抗體的V _H和V _L域位於不同的多肽鏈上。在EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)中全面描述了雙鏈抗體。

非人源（如齧齒類）抗體的「人源化」形式是嵌合抗體，其包括最少的來自非人源抗體的序列。大多數情況下，人源化抗體是人源免疫球蛋白（受體抗體），其中受體抗體的高變區（HVR）殘基被來自非人源種屬例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物的且具有理想的抗體特異性，親和力和性能的高變區殘基所取代（供體抗體）。在某些情況下，人源免疫球蛋白框架區（FR）中的殘基被相應的非人源殘基所取代。另外，人源化抗體可以包括在受體抗體或供體抗體中均不存在的殘基。這些修飾能夠進一步改善抗體的性能。通常，人源化抗體基本上包含至少一個，通常兩個可變域，其中所有或基本上所有的高變環均與非人免疫球蛋白的高變環相對應，以及所有或基本上所有的框架區均是人免疫球蛋白序列。人源抗體任選地也還包括免疫球蛋白恆定區（Fc）的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恆定區。具體細節可以參考Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 和Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). 。

本文所鑑定的多肽和抗體序列的「胺基酸序列同一性百分比（%）」或「同源性」被定義為：在認為保守性取代屬於序列同一性的一部分的情況下進行序列對比，候選序列與待比較多肽序列中相同胺基酸殘基所占的百分比。可以通過本領域技術範圍內的多種比對方式來確定胺基酸序列同一性百分比，例如，使用如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign (DNASTAR)、或MUSCLE軟體等可公開獲得的電腦軟體。本領域技術人員可以確定用於測量比對的合適的參數，包括在所比較序列的全長上實現最大化比對所需的任何演算法。然而，為了本文的目的，胺基酸序列同一性百分比數值是使用序列比對電腦程式MUSCLE (Edgar, R.C., Nucleic Acids Research32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics5(1):113, 2004)生成的。

術語「Fc受體」或「FcR」用於描述結合抗體Fc區的受體。在一些實施例中，本申請之FcR是結合IgG抗體（一種γ受體）的FcR，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亞類的受體，包括這些受體的等位基因變體和可變剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA（「啟動受體」）和FcγRIIB（「抑制受體」），它們具有相似的胺基酸序列，主要在細胞質結構域有所不同。啟動受體FcγRIIA的胞質結構域中含有免疫受體酪胺酸活化基序（ITAM）。抑制受體FcγRIIB的胞質結構域中含有免疫受體酪胺酸抑制基序（ITIM）（見M. in Daëron , Annu. Rev. Immunol.15:203-234 (1997)）。該術語還包括同種異型，例如FcγRIIIA同種異型: FcγRIIIA-Phe158、FcγRIIIA-Val158、FcγRIIA-R131及/或FcγRIIA-H131。在Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol9:457-92 (1991)和Capel et al., Immunomethods4:25-34 (1994); and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) 中對FcRs進行了描述。本申請中術語FcR涵蓋其他類型的FcRs，包括將來鑑定的FcRs。術語FcR同時還包括新生兒受體FcRn，其負責向新生兒轉移母體IgGs（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）。

術語「FcRn」指新生兒Fc受體（FcRn）。FcRn與主要組織相容性複合體（MHC）在結構上相似，由α鏈非共價結合到β2微球蛋白上組成。新生兒Fc受體FcRn的多種功能在Ghetie and Ward (2000) Annu. Rev. Immunol.18, 739-766.中進行了描述。FcRn在免疫球蛋白IgGs從母體向新生兒的被動轉運和調控血清IgG水準中起到重要作用。FcRn作為一種救助受體，可以在細胞內和細胞間以完整的形式結合和運輸胞吞化的IgG，並使它們免於經受默認的降解途徑。

人IgG Fc區的「CH1結構域」通常從118位胺基酸延伸到215位胺基酸（EU編號系統）。

「鉸鏈區」通常被定義為從人IgG1的216位Glu延伸到230位Pro (Burton, Molec . Immunol.22:161-206 (1985))。通過將形成重鏈間二硫鍵的第一個和最後一個半胱胺酸殘基置於與IgG1相同位置後，可以使得其他IgG同種型的鉸鏈區與IgG1序列比對。

人IgG Fc區的「CH2結構域」通常從231位胺基酸延伸到340位胺基酸。CH2結構域的獨特之處在於，它不會與另一個區域緊密配對，而是在完整的天然IgG分子的兩個CH2結構域之間插入了兩條N端連接的支鏈糖鏈。據推測，糖類可能作為域與域間配對的替代，有助於保持CH2結構域穩定。Burton, Molec Immunol.22:161-206 (1985)。

「CH3」結構域包括在Fc區內從C末端殘基延伸到CH2結構域（從341位胺基酸到抗體序列的C末端，通常為IgG的第446或447位胺基酸殘基）。

「功能性Fc片段」具有天然Fc區序列所具有的「效應功能」。示例性的「效應功能」包括C1q結合；補體依賴的細胞毒作用（CDC）；Fc受體結合；抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）；吞噬作用；細胞表面受體的下調（如B細胞受體；BCR）等。這類效應功能通常需要Fc區與結合結構域（如抗體可變區）結合，並且可以使用本領域公知的多種實驗方法進行評估。

具有「改變的」FcR結合親和力或ADCC活性的IgG Fc變體的抗體，與親本多肽或包含天然Fc序列的多肽相比，其FcR結合活性（如FcγR或FcRn）及/或ADCC活性增強或減弱。表現出與FcR「結合增強」的Fc變體與親本多肽或包含天然IgG Fc序列的多肽相比，其與至少一種FcR具有更高的結合親和力（例如更低的表觀Kd或IC ₅₀值）。在一些實施例中，與親本多肽相比，結合能力增強3倍，例如5、10、25、50、60、100、150、200，甚至高達500倍或結合力提高25%到1000%。表現出與FcR「結合降低」的Fc變體，與親本多肽相比，其與至少一種FcR具有更低的親和力（例如更高的表觀Kd或IC ₅₀值）。與親本多肽相比，其結合能力下降40%或更多。

「抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用」或「ADCC」是一種細胞毒性形式，指分泌型的Ig與存在於某些細胞毒性細胞（例如自然殺傷細胞（NK）、中性粒細胞和巨噬細胞）上的Fc受體（FcRs）結合，使這些細胞毒性效應細胞能夠特異性結合攜帶抗原的靶細胞，隨後使用細胞毒素殺死靶細胞。抗體「武裝」細胞毒性細胞並且是這種殺傷所必需的。介導ADCC的主要細胞類型中，NK細胞只表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol9:457-92 (1991) 第464頁的Table 3中總結了在造血細胞上FcR的表現。評估目標分子的ADCC活性，可以進行體外ADCC實驗，在美國專利No. 5,500,362或5,821,337中進行了描述。適用於此類實驗的效應細胞包括外周血單核細胞（PBMC）和自然殺傷性細胞（NK）。可選地，或者此外，目標分子的ADCC活性也可以在體內進行評估，例如在如Clynes et al. PNAS (USA)95:652-656 (1998) 中所公開的動物模型中進行了描述。

包含Fc區變體的多肽與包含野生型IgG Fc多肽或親本多肽相比，在人體效應細胞存在下表現出「增強的ADCC活性」或能夠更有效的介導ADCC效應，該包含Fc區變體的多肽在實驗時與包含野生型IgG Fc多肽（或親本多肽）數量上基本相同時，無論在體外或體內均能更有效的介導ADCC。通常採用本領域已知的任何體外ADCC實驗方法來鑑定此類變體，例如用於鑑定ADCC活性的實驗或方法，例如在動物模型中等。在一些實施例中，此類變體與野生型Fc（或親代多肽）相比，介導ADCC的效率提高5到100倍，例如25到50倍。

「補體依賴的細胞毒作用」或「CDC」是指在補體存在的情況下裂解靶細胞。經典的補體途徑的啟動是由補體系統第一組分（C1q）與結合同源抗原的抗體（具有適宜結構的亞類）相結合而啟動的。為了評估補體啟動，可以進行CDC實驗，如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods202:163 (1996)中所描述的。在美國專利No.6,194,551B1和WO 99/51642中描述了具有改變的Fc區胺基酸序列並增加或降低的C1q結合能力的多肽變體。這些專利出版物的內容通過引用明確地併入本文中。另見Idusogie et al. J. Immunol.164: 4178-4184 (2000)。

除非另有說明，一種「編碼胺基酸序列的核苷酸序列」包括相互之間互為簡並形式且編碼相同胺基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白質或RNA的核苷酸序列也可包括內含子，例如編碼蛋白質的核苷酸序列在某些形式中包含內含子。

術語「可操作性地連接」是指調控序列與異源核苷酸序列之間的功能性連接，從而使後者表現。例如，當第一個核苷酸序列與第二個核苷酸序列處於功能性關係時，第一個核苷酸序列與第二個核苷酸序列為可操作性地連接。例如，如果啟動子影響編碼序列的轉錄或表現，該啟動子與編碼序列為可操作性地連接。通常，可操作性連接的DNA序列是連續的，並且在必要時，可以在同一個閱讀框中連接兩個蛋白質編碼區。

「同源」是指兩個多肽之間或兩個核酸分子之間的序列相似性或序列同一性。如果兩個比較序列的同一位置為相同的堿基或胺基酸單體亞基時，例如兩個DNA分子的同一位置均為腺嘌呤，則這兩個DNA分子在該位置是同源的。兩個序列間的同源百分比是指兩個序列中共有的匹配或同源位置的數量與位置總數之比再乘以100所得函數。例如，兩個序列中如果10個位置中有6個位置是相匹配或同源的，則這兩個序列的同源性為60%。舉例來說，DNA序列ATTGCC和TATGGC具有50％的同源性。通常來說，在比對兩個序列時，以得到最大同源性為目的來進行對比。

本文所公開的抗TNFR2抗體或組合物的「有效量」是指足以實現特定目的的量。「有效量」可以憑經驗和通過已知的與該目的相關的方法確定。

術語「治療有效量」是指本文公開的抗TNFR2抗體或組合物可有效「治療」個體的疾病或病症的量。在癌症的情況下，本文公開的抗TNFR2抗體或組合物治療有效量可減少癌細胞數量；減少腫瘤大小和重量；抑制（即，在一定程度上延緩，最好停止）癌細胞浸潤周圍器官；抑制（即，在一定程度上延緩，最好停止）腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上緩解與癌症相關的一種或多種症狀。在本文所公開的抗TNFR2抗體或組合物可防止生長及/或殺死現有癌細胞的範圍內，其可為細胞抑制性及/或細胞毒性。在一些實施例中，治療有效量為生長抑制的量。在一些實施例中，治療有效量是延長病人生存期的量。在某些實施例中，治療有效量是改善患者無進展生存期的量。

如本文所用的，「藥學上可接受的」或「藥理學上相容的」是指無生物學活性或者其他不期望性質的材料，例如該材料能夠加入到給予患者的藥物組合物中，而不會引起顯著的不良生物反應，或者，不與組合物中包含的任何其他組分以有害的方式相互作用。藥學上可接受的載體或賦形劑優選滿足毒理學和製造檢測的所需標準及/或包含在美國食品和藥品管理局編制的非活性成分指南中。

本文中描述的本申請的實施例應理解為包含「由……組成」及/或「基本上由……組成」的實施例。

本文中提及「約」為一個數值或參數，包含（和描述）針對該值或參數本身的變體。例如，涉及「約X」的描述，包括「X」的描述。

如本文所用的，提及「不是（not）」一個數值或參數，通常表示並描述「除了（other than）」某一數值或參數之外。例如，該方法不能用於治療X型癌症，意味著該方法通常用於治療除X型癌症之外的其他類型。

除非上下文另有明確說明，本文和該請求項中所採用的單數形式「一」，「一個」和「該」包括複數對象。抗 TNFR2 抗體

一方面，本申請提供特異性結合人及/或食蟹猴TNFR2的抗TNFR2抗體。該抗TNFR2抗體包括，但不限於，人源化抗體，嵌合抗體，小鼠抗體，人抗體，以及本文之包含重鏈及/或輕鏈CDRs的抗體分子。一方面，本申請提供與TNFR2結合的分離的抗體。預期的抗TNFR2抗體包括，例如，全長抗TNFR2抗體（如全長IgG1或IgG4），抗TNFR2單鏈抗體，抗TNFR2 Fc融合蛋白，多特異性（如雙特異性）抗TNFR2抗體，抗TNFR2免疫結合物，以及諸如此類的。在一些實施例中，抗TNFR2抗體是全長抗體（如全長IgG1或IgG4）或其抗原結合片段，其特異性結合TNFR2。在一些實施例中，抗TNFR2抗體是Fab、Fab’、F(ab’) ₂、Fab’-SH、單鏈Fv (scFv)、Fv片段、dAb、Fd、奈米抗體（nanobody）、雙鏈抗體（diabody）或線性抗體。在一些實施例中，特異性結合TNFR2的抗體是指抗體與TNFR2結合的親和力至少是與非靶標結合親和力的10倍以上（包括例如10、10 ²、10 ³、10 ⁴、10 ⁵、10 ⁶、或10 ⁷倍）。在一些實施例中，非靶標是指不是TNFR2的抗原。結合親和力可通過本領域已知的方法來測定，如ELISA，螢光啟動細胞分選（FACS）分析或放射免疫沉澱分析（RIA）。Kd值可以通過本領域已知的方法來測定，如表面等離子共振（SPR）技術或生物層干涉技術（BLI）。

儘管本文廣泛地討論了包含人序列的抗TNFR2抗體（例如，包含人CDR序列的人重鏈和輕鏈可變域），但同時也考慮了非人抗TNFR2抗體。在一些實施例中，非人抗TNFR2抗體包括本文之抗TNFR2抗體的人CDR序列和非人框架區序列，在一些實施例中，非人框架區序列包括任何的用於使用如本文之一種或多種人CDR序列產生重鏈及/或輕鏈可變域的序列，包括例如哺乳動物，例如小鼠、大鼠、兔子、豬、牛（例如，牛、公牛、水牛）、鹿、綿羊、山羊、雞、貓、狗、雪貂、靈長類（例如，小猿，獼猴）等。在一些實施例中，非人抗TNFR2抗體包括將一種或多種本文之人CDR序列移植到非人框架區中（例如，鼠或雞的框架區序列）所產生的抗TNFR2抗體。

示例性的人TNFR2胞外區（ECD）的胺基酸序列包含SEQ ID NO: 83所示的胺基酸序列或由SEQ ID NO: 83所示的胺基酸序列組成。示例性的小鼠TNFR2胞外區（ECD）的胺基酸序列包含SEQ ID NO: 4所示的胺基酸序列或由SEQ ID NO: 84所示的胺基酸序列組成。示例性的食蟹猴TNFR2胞外區（ECD）的胺基酸序列包含SEQ ID NO: 85所示的胺基酸序列或由SEQ ID NO: 85所示的胺基酸序列組成。

在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體特異性識別人TNFR2中的抗原決定區。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體與除人之外的其他物種的TNFR2發生交叉反應。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體對人TNFR2是完全特異性的，並且不與其他非人物種的TNFR2發生交叉反應。

在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體與人TNFR2內的線性抗原決定區特異性結合。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體與人TNFR2內的非線性抗原決定區特異性結合。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體與人TNFR2上的抗原決定區特異性結合，其中該抗原決定區包含1個、2個、3個、4個、5個、6個或7個胺基酸殘基，該胺基酸殘基選自由SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136組成的組中。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體與人TNFR2上的抗原決定區特異性結合，其中該抗原決定區包含如SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136。

在一些實施例中，與已知抗TNFR2抗體相比，本文之抗TNFR2抗體結合不同的TNFR2區域或抗原決定區，並且令人驚訝的是，與已知抗TNFR2抗體相比，本文之抗TNFR2抗體在以下一個或多個特性中表現出更好的效果。

在一些實施例中，該特性包括，但不限於：（i）抑制TNF-α與TNFR2結合；（ii）抑制TNFR2信號通路；（iii）與人TNFR2和食蟹猴TNFR2具有交叉反應；（iv）與dsDNA、胰島素或杆狀病毒顆粒的非特異性結合力更低；（v）抑制Treg細胞增殖；（vi）抑制腫瘤生長或消除腫瘤細胞；（vii）降低Treg介導的免疫抑制；（viii）將Treg轉化為效應T細胞；（ix）體內藥代動力學（PK）曲線；（x）熱穩定性（例如：高Tm或Tagg）;（xi）可開發性；（xii）毒性或免疫原性降低；或（xiii）製造便利性提高。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體與TNFR2蛋白（或其片段）的至少一種等位基因變體發生交叉反應。在一些實施例中，等位基因變體與天然存在的TNFR2蛋白（或其片段）相比，具有至多30個（如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個）的胺基酸取代（例如保守取代）。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體不與TNFR2蛋白（或其片段）的任何等位基因變體發生交叉反應。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體與TNFR2蛋白的至少一種種間變體發生交叉反應。在一些實施例中，例如，TNFR2蛋白（或其片段）是人TNFR2，並且TNFR2蛋白（或其片段）的種間變體是食蟹猴中的變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體不與TNFR2蛋白的任何種間變體發生交叉反應。

在一些實施例中，如本文之任一抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體包括抗體重鏈恆定區和抗體輕鏈恆定區。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括IgG1型重鏈恆定區。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括IgG2型重鏈恆定區。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括IgG3型重鏈恆定區。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括IgG4型重鏈恆定區。在一些實施例中，該重鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 78。在一些實施例中，該重鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 79。在一些實施例中，該重鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 82。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，該輕鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 80。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，該輕鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 81。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括抗體重鏈可變域和抗體輕鏈可變域。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、7和14，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 20、27和33，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、7和14；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 20、27和33。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 39所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 63所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 39所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 63所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 39所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 63所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 39具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 63具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 2、8和15，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 21、28和34，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 2、8和15；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 21、28和34。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 40所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 64所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 40所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 64所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 40所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 64所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 40所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 40具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 64具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 40所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 3、9和16，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 22、29和35，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 3、9和16；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 22、29和35。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 41所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 65所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 41所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 65所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 41所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 65所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 41具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 65具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、10和17，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 23、30和36，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、10和17；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 23、30和36。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 42所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 66所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 42所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 66所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 42所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 66所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 42所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 42具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 66具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 42所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 5、11和18，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 24、31和37，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 5、11和18；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 24、31和37。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 43所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 67所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 43所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 67所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 43所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 67所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 43具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 67具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、12和19，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 25、32和38，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、12和19；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 25、32和38。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 44所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 68所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 44所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 68所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 44所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 68所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 44所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 44具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 68具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 44所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、13和19，或者包含至多5個胺基酸取代的V _H變體；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 26、32和38，或者包含至多5個胺基酸取代的V _L變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、13和19；以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 26、32和38。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 45所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 69所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 45所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 69所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 45所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 69所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 45所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID No: 45具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 69具有至少約90%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NO: 45所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 20所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 20所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含： LC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 20所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代； LC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。

在一些實施例中，上述胺基酸取代僅限於如本申請表4所示的「示例性取代」。在一些實施例中，胺基酸取代僅限於如本申請表4所示的「優選取代」。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 1所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 7所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 14所示的胺基酸序列；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NO: 20所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如SEQ ID NOs: 46-62中任一胺基酸序列所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如SEQ ID NOs: 70-77中任一胺基酸序列所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 48所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 49所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 55所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 56所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 57所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 58所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 59所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 60所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 61所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 62所示的V _H包含的1個、2個或3個HC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 72所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 70所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 71所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 72所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _L，該V _L包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的1個、2個或3個LC-CDRs。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 48所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 72所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 49所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 70所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 49所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 71所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 49所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 72所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 55所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 56所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO:72所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 57所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 58所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO:75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 59所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 60所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 61所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 62所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 75所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 46-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 46-62中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 70-77中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 46-62中任一所示的胺基酸序列，以及V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 48具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 70具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 71具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 55具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 56具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 57具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 58具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 59具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 60具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 61具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 62具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。

在一些實施例中，功能性抗原決定區可通過組合丙胺酸掃描法來解析。在此過程中，組合丙胺酸掃描技術可用於鑑定TNFR2蛋白中與抗TNFR2抗體相互作用所必需的胺基酸。在一些實施例中，該抗原決定區是構象的，同時可以採用與TNFR2蛋白結合的抗TNFR2抗體的晶體結構來鑑定抗原決定區。

在一些實施例中，本申請提供與本文之任一種抗TNFR2抗體競爭性地結合TNFR2的抗體。在一些實施例中，提供能夠與本文之任一種抗TNFR2抗體競爭性結合TNFR2上的抗原決定區的抗體。在一些實施例中，提供抗TNFR2抗體，其與包含V _H和V _L的抗TNFR2抗體分子結合相同的抗原決定區，其中該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列，以及該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，提供抗TNFR2抗體，其與包含V _H和V _L的抗TNFR2抗體競爭性地結合TNFR2，其中該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列，以及該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列。

在一些實施例中，可以利用競爭實驗來鑑定與本文之抗TNFR2抗體競爭性結合TNFR2的單株抗體。競爭實驗可以通過識別相同的或空間上重疊的抗原決定區或者通過一個抗體競爭性抑制另一抗體與抗原結合來確定兩個抗體是否結合相同的抗原決定區。在某些實施例中，這種競爭性抗體與本文之抗體結合相同的抗原決定區。一些示例性的競爭實驗包括，但不限於如Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.)中所提到的常規實驗。用於解析抗體結合的抗原決定區的詳細示例性方法如Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols，" in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N.J.)中該。在一些實施例中，如果每種抗體阻斷另一種抗體結合的50％或更多，則稱其結合相同的抗原決定區。在一些實施例中，與本文之抗TNFR2抗體競爭的抗體是嵌合抗體、人源化抗體或全人抗體。

示例性抗TNFR2抗體序列如表2A-2B和3A-3B所示，其中根據Kabat定義方式進行CDR編號。本領域技術人員將認識到有多種已知演算法來預測CDR的位置以及界定抗體輕、重鏈可變區。包含如本文之抗TNFR2抗體的CDRs、V _H及/或V _L序列的，但基於預測演算法而非下表中所示例的抗體也在本申請的範圍內。表 2A. 示例性抗 TNFR2 抗體 CDR 序列

抗體名稱	HC-CDR1	HC-CDR2	HC-CDR3
51B5	DDYID (SEQ ID NO: 1)	EIYPGSGNTYYNEKFKG (SEQ ID NO: 7)	SQVYGKIAMDH (SEQ ID NO: 14)
85G8.4	DFNMD (SEQ ID NO: 2)	YINPNNGDAAYNQKFKS (SEQ ID NO: 8)	WGWAFAY (SEQ ID NO: 15)
102E4	DDFIH (SEQ ID NO: 3)	RINPSNANTEYAPKFQD (SEQ ID NO: 9)	NDGYYDGLFY (SEQ ID NO: 16)
29G3	NFAMS (SEQ ID NO: 4)	TIRSGDNYSYYSDNVKG (SEQ ID NO: 10)	NWDKVFDY (SEQ ID NO: 17)
6F12	IYGMN (SEQ ID NO: 5)	WIHTYTGEPTYADDFKG (SEQ ID NO: 11)	RERYGSF (SEQ ID NO: 18)
11C1	SGYYWN (SEQ ID NO: 6)	YITYDGNNNYDPSLKN (SEQ ID NO: 12)	GDYGDSAMDY (SEQ ID NO: 19)
15H10	SGYYWN (SEQ ID NO: 6)	YITYDGNNNYNPSLKS (SEQ ID NO: 13)	GDYGDSAMDY (SEQ ID NO: 19)

抗體名稱	LC-CDR1	LC-CDR2	LC-CDR3
51B5	RASESVDNSGNSFMH (SEQ ID NO: 20)	RASNLES (SEQ ID NO: 27)	QQSKEDPYT (SEQ ID NO: 33)
85G8.4	KASQDVKTAVA (SEQ ID NO: 21)	ATSYRYT (SEQ ID NO: 28)	QQHYSIPYT (SEQ ID NO: 34)
102E4	KASQDVGTAVA (SEQ ID NO: 22)	WASTRHT (SEQ ID NO: 29)	QQYSSYPFT (SEQ ID NO: 35)
29G3	RASESVDSYGYSFMH (SEQ ID NO: 23)	RASNLKS (SEQ ID NO: 30)	QQSNEDHT (SEQ ID NO: 36)
6F12	TASQSVDYGGVSYMN (SEQ ID NO: 24)	GASNQES (SEQ ID NO: 31)	QQSNEDPPT (SEQ ID NO: 37)
11C1	SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 25)	EISKLAS (SEQ ID NO: 32)	QQWNYPLIT (SEQ ID NO: 38)
15H10	SASSGVNYMH (SEQ ID NO: 26)	EISKLAS (SEQ ID NO: 32)	QQWNYPLIT (SEQ ID NO: 38)

表 2B. 示例性抗 TNFR2 抗體 CDR 序列

抗體名稱	HC-CDR1	HC-CDR2	HC-CDR3
SB1901-1, 2, 9, 10, 18, 19, 25, 26, 27, 33, 38, 41, 42, 48, 52, 59, 61, 63, 65, 68, 69, 72, 74, 76, 78, 80, 82	DDYID (SEQ ID NO: 1)	EIYPGSGNTYYNEKFKG (SEQ ID NO: 7)	SQVYGKIAMDH (SEQ ID NO: 14)

抗體名稱	LC-CDR1	LC-CDR2	LC-CDR3
SB1901-1, 2, 9, 10, 18, 19, 25, 26, 27, 33, 38, 41, 42, 48, 52, 59, 61, 63, 65, 68, 69, 72, 74, 76, 78, 80, 82	RASESVDNSGNSFMH (SEQ ID NO: 20)	RASNLES (SEQ ID NO: 27)	QQSKEDPYT (SEQ ID NO: 33)

表 3A. 示例性序列

序列編號	描述	序列
39	51B5 V _H	QVQLQQSGAELARPGTSVKLSCKASGYTFTDDYIDWVKQRTGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARSQVYGKIAMDHWGQGTSVTVSS
40	85G8.4 V _H	EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTDFNMDWVKQSHGKSLEWIGYINPNNGDAAYNQKFKSKATLTVDKSSNTAYMELHSLTSDDSAVYYCARWGWAFAYWGQGTLVTVSA
41	102E4 V _H	EVLLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDFIHWVQQRPEQGLEWIGRINPSNANTEYAPKFQDKATITTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCTRNDGYYDGLFYWGQGTTLTVSS
42	29G3 V _H	EVMLVESGGASVKPGGSLKLSCAASGFTFSNFAMSWVRQTPEKRLEWVATIRSGDNYSYYSDNVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSKDTSIYYCARNWDKVFDYWGQGTTLTVSS
43	6F12 V _H	QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKTSGYTFTIYGMNWVKQAPGKGLKWMGWIHTYTGEPTYADDFKGRFVFSLETSDSTAYLQINNLKSEDMATYFCVRRERYGSFWGQGTLVTVSA
44	11C1 V _H	DVQLRESGPGLVTPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQIPGNKLEWMGYITYDGNNNYDPSLKNRISITRDTSKNQFFLTLNSVTSEDTATYYCARGDYGDSAMDYWGQGTSVTVSS
45	15H10 V _H	DVQLQESGPGLVTPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYITYDGNNNYNPSLKSRFSITRDTSKNQFFLKLNSVTSEDTATYYCARGDYGDSAMDYWGQGTSVTVSS

63	51B5 V _L	DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNSGNSFMHWYQQIPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGARTDFTLTIDPVGAVDVATYYCQQSKEDPYTFGGGTKLEIE
64	85G8.4 V _L	DIVMTQSHKIMSTSVGDRVSITCKASQDVKTAVAWYQQKPGQSPKLLIYATSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISTVQAEDLAVYYCQQHYSIPYTFGGGTKLEIK
65	102E4 V _L	DIVMTQSHKFMSSSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYPFTFGSGTKLEIK
66	29G3 V _L	DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGYSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLKSGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDHTFGGGTKLEIK
67	6F12 V _L	DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCTASQSVDYGGVSYMNWYQQKPGQPPKLLIYGASNQESGIPVRFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPPTFGAGTKLELK
68	11C1 V _L	EIVLTQSPAITAASLGQKVTITCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKPWIYEISKLASGVPARFSGSGSGTSYSLIISSMEAEDAAIYYCQQWNYPLITFGAGTKLELK
69	15H10 V _L	EIVLTQSPAITAASLGQKVTITCSASSGVNYMHWYQQKSGTSPKPWIYEISKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAAIYYCQQWNYPLITFGAGTKVELK

表 3B. 示例性序列

序列編號	描述	序列
46	SB1901-1 V _HSB1901-2 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
47	SB1901-9 V _HSB1901-10 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
48	SB1901-18 V _HSB1901-19 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRATMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
49	SB1901-25 V _HSB1901-26 V _HSB1901-27 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTLTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
50	SB1901-33 V _HSB1901-38 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTANTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
51	SB1901-41 V _HSB1901-42 V _HSB1901-48 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
52	SB1901-52 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
53	SB1901-59 V _HSB1901-61 V _HSB1901-63 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRATLTANKSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
54	SB1901-65 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
55	SB1901-68 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
56	SB1901-69 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRDKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
57	SB1901-72 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRDKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
58	SB1901-74 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNTAISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
59	SB1901-76 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRNTGISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
60	SB1901-78 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQATGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTADKSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
61	SB1901-80 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQAPGQGLEWIGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS
62	SB1901-82 V _H	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYIDWVRQAPGQGLEWMGEIYPGSGNTYYNEKFKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSQVYGKIAMDHWGQGTLVTVSS

70	SB1901-1 V _LSB1901-9 V _LSB1901-25 V _LSB1901-33 V _LSB1901-41 V _L	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
71	SB1901-2 V _LSB1901-10 V _LSB1901-18 V _LSB1901-26 V _LSB1901-42 V _L	DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
72	SB1901-19 V _LSB1901-27 V _LSB1901-59 V _LSB1901-65 V _LSB1901-69 V _L	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGAGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
73	SB1901-38 V _L	DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
74	SB1901-48 V _L	DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGARTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
75	SB1901-52 V _LSB1901-68 V _LSB1901-72 V _LSB1901-74 V _LSB1901-76 V _LSB1901-78 V _LSB1901-80 V _LSB1901-82 V _L	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
76	SB1901-61 V _L	DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGAGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
77	SB1901-63 V _L	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNSGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGARTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPYTFGQGTKVEIK
78	IgG1 重鏈恆定區	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
79	IgG4 重鏈恆定區	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
80	輕鏈恆定區（κ）	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
81	輕鏈恆定區（γ）	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
82	IgG1 重鏈恆定區突變體	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

表 3C. 示例性序列

抗體	V _H	V _L
SB1901-1	SEQ ID NO: 46	SEQ ID NO: 70
SB1901-2	SEQ ID NO: 46	SEQ ID NO: 71
SB1901-9	SEQ ID NO: 47	SEQ ID NO: 70
SB1901-10	SEQ ID NO: 47	SEQ ID NO: 71
SB1901-18	SEQ ID NO: 48	SEQ ID NO: 71
SB1901-19	SEQ ID NO: 48	SEQ ID NO: 72
SB1901-25	SEQ ID NO: 49	SEQ ID NO: 70
SB1901-26	SEQ ID NO: 49	SEQ ID NO: 71
SB1901-27	SEQ ID NO: 49	SEQ ID NO: 72
SB1901-33	SEQ ID NO: 50	SEQ ID NO: 70
SB1901-38	SEQ ID NO: 50	SEQ ID NO: 73
SB1901-41	SEQ ID NO: 51	SEQ ID NO: 70
SB1901-42	SEQ ID NO: 51	SEQ ID NO: 71
SB1901-48	SEQ ID NO: 51	SEQ ID NO: 74
SB1901-52	SEQ ID NO: 52	SEQ ID NO: 75
SB1901-59	SEQ ID NO: 53	SEQ ID NO: 72
SB1901-61	SEQ ID NO: 53	SEQ ID NO: 76
SB1901-63	SEQ ID NO: 53	SEQ ID NO: 77
SB1901-65	SEQ ID NO: 54	SEQ ID NO: 72
SB1901-68	SEQ ID NO: 55	SEQ ID NO: 75
SB1901-69	SEQ ID NO: 56	SEQ ID NO: 72
SB1901-72	SEQ ID NO: 57	SEQ ID NO: 75
SB1901-74	SEQ ID NO: 58	SEQ ID NO: 75
SB1901-76	SEQ ID NO: 59	SEQ ID NO: 75
SB1901-78	SEQ ID NO: 60	SEQ ID NO: 75
SB1901-80	SEQ ID NO: 61	SEQ ID NO: 75
SB1901-82	SEQ ID NO: 62	SEQ ID NO: 75

TNFR2

腫瘤壞死因子（TNF）受體2（TNFR2）是一種信號分子，位於強效調節性T細胞亞群（Treg）表面，可通過核因子κB（NF-kB）啟動這些細胞增殖。TNFR2也在許多人類腫瘤的表面大量表現（Vanamee ÉS. et al., TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. Trends Mol Med. 2017 Nov;23(11):1037-1046）。TNFR2是一種調節細胞存活和增殖的細胞表面受體（Chen, X. et al. (2007) Interaction of TNF with TNF receptor type 2 promotes expansion and function of mouse CD4+CD25+ T regulatory cells. J. Immunol. 179, 154–161），並且靶向該受體近來已成為潛在的下一代癌症治療方法（Chen, X. and Oppenheim, J.J. (2017) Targeting TNFR2, an immune checkpoint stimulator and oncoprotein, is a promising treatment for cancer. Sci. Signal. 10, eaal2328）。某些人腫瘤細胞可以異常表現TNFR2，並且腫瘤浸潤以高抑制的TNFR2+Treg為主（Shimizu, J. et al. (1999) Induction of tumor immunity by removing CD25+CD4+ T cells: a common basis between tumor immunity and autoimmunity. J. Immunol. 163, 5211–5218, Ungewickell, A. et al. (2015) Genomic analysis of mycosis fungoides and Sezary syndrome identifies recurrent alterations in TNFR2. Nat. Genet. 47, 1056–1060).

在一些實施例中，本文公開的抗TNFR2抗體阻斷TNFα與TNFR2的結合和TNFR2信號通路。這裏所說的抗TNFR2抗體阻斷TNFα與TNFR2結合是指抗體分子與受體TNFR2結合，從而阻止了配體TNFα與同一受體結合。本文公開的抗TNFR2抗體阻斷TNFR2信號通路是指其阻斷了TNFR2介導的細胞啟動。在一些實施例中，本文公開的抗TNFR2抗體對TNFR2陽性細胞具有清除作用，是指在向患者（例如，人類）投與時，這種抗體分子特異性結合TNFR2陽性細胞表面表現的TNFR2，並且這種結合導致此類靶細胞的清除。如上該，TNFR2在各種癌症患者腫瘤中的Treg上高表現，在此類患者中，本發明的抗體分子將優先結合Treg，從而導致Treg的清除。Treg對其他免疫細胞（如CD8陽性（CD8+）細胞）的增殖、啟動和細胞毒性能力具有抑制作用。因此，Treg的清除將至少間接導致CD8+細胞的增殖、啟動和遷移增加，從而增加腫瘤內CD8+細胞的數量。 全長抗 TNFR2 抗體

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體包含IgG恆定區域，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的恆定區域。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是全長的人抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體包含小鼠免疫球蛋白Fc序列。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體包含已經改變的或以其他方式改變的Fc序列，使其具有增強的抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）和補體依賴的細胞毒作用（CDC）的效應功能。

因此，例如，在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體與TNFR2特異性結合。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體與TNFR2特異性結合。在一些實施例中，該IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體與TNFR2特異性結合。在一些實施例中，該IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體與TNFR2特異性結合。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，該IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，該IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-6中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 7-13中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 14-19中任一所示的胺基酸序列；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 20-26中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 27-32中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 33-38中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及b)輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：a)重鏈可變域，該重鏈可變域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19；以及b) 輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 39-62中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 63-77中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 39-62中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 63-77中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 39-62中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 63-77中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 39-62中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77,中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 63-77,中任一胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含重鏈可變域V _H，該V _H包含SEQ ID NOs: 39-62中任一所示的胺基酸序列，以及輕鏈可變域V _L，該V _L包含SEQ ID NOs: 63-77中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 40，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 66。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 40，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 66。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，以及輕鏈可變域，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。 結合親和力

結合親和力可以採用Kd、Koff、Kon或Ka來表示。如本文所用，術語「Koff」是指抗體從抗原/抗體複合物中解離的速率常數，通過動力學選擇裝置測定。本文所用的術語「Kon」是指抗體與抗原結合形成抗原/抗體複合物的結合速率常數。本文所用的術語解離常數「Kd」是指特定抗體抗原相互作用時的解離常數，描述了在抗體分子溶液中，抗原佔據所有抗體結合位點的一半並且達到平衡時所需的抗原濃度，等於Koff/Kon。Kd的測定假設所有的結合分子均在溶液中。抗體與細胞壁連接的情況，例如在酵母表現系統中，相應的解離速率常數採用EC50來表示，其是Kd的一個良好的近似值。親和結合常數Ka是解離常數Kd的倒數。

平衡解離常數（Kd）可以作為反應抗體部分與抗原親和力的指標。例如，可以通過Scatchard方法使用標記有各種標記物的抗體，和Biacore儀器（由Amersham Biosciences製造）進行簡單分析，根據用戶手冊或附帶套組，通過表面等離子體共振來分析生物分子間的相互作用。使用這些方法得到的Kd值，用單位M（mol）來表示。與靶標特異性結合的抗體可能具有，例如≤ 10 ^-7M、≤ 10 ^-8M、≤ 10 ^-9M、≤ 10 ^-10M、≤ 10 ^-11M、≤ 10 ^-12M或≤ 10 ^-13M的Kd值。

抗體的結合特異性可以通過本領域已知的方法進行實驗測定。這些方法包括，但不限於Western blots、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-、EIA-、BIAcore測試和肽掃描等。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體特異性結合TNFR2靶標，其Kd值為10 ^-7M至10 ^-13M（例如10 ^-7M至10 ^-13M、10 ^-8M至10 ^-13M、10 ^-9M至10 ^-13M或10 ^-10M至10 ^-12M）。因此，在一些實施例中，抗TNFR2抗體與TNFR2之間結合的Kd值為10 ⁻⁷M至10 ⁻¹³M、1×10 ⁻⁷M至5×10 ⁻¹³M、10 ⁻⁷M至10 ⁻¹²M、10 ⁻⁷M至10 ⁻¹¹M、10 ⁻⁷M至10 ⁻¹⁰M、10 ⁻⁷M至10 ⁻⁹M、10 ⁻⁸M至10 ⁻¹³M、1×10 ⁻⁸M至5×10 ⁻¹³M、10 ⁻⁸M至10 ⁻¹²M、10 ⁻⁸M至10 ⁻¹¹M、10 ⁻⁸M至10 ⁻¹⁰M、10 ⁻⁸M至10 ⁻⁹M、5×10 ⁻⁹M至1×10 ⁻¹³M、5×10 ⁻⁹M至1×10 ⁻¹²M、5×10 ⁻⁹M至1×10 ⁻¹¹M、5×10 ⁻⁹M-1×10 ⁻¹⁰M、10 ⁻⁹M至10 ⁻¹³M、10 ⁻⁹M至10 ⁻¹²M、10 ⁻⁹M至10 ⁻¹¹M、10 ⁻⁹M至10 ⁻¹⁰M、5×10 ⁻¹⁰M至1×10 ⁻¹³M、5×10 ⁻¹⁰M至1×10 ⁻¹²M、5×10 ⁻¹⁰M至1×10 ⁻¹¹M、10 ⁻¹⁰M至10 ⁻¹³M、1×10 ⁻¹⁰M至5×10 ⁻¹³M、1×10 ⁻¹⁰M至1×10 ⁻¹²M、1×10 ⁻¹⁰M至5×10 ⁻¹²M、1×10 ⁻¹⁰M至1×10 ⁻¹¹M、10 ⁻¹¹M至10 ⁻¹³M、1×10 ⁻¹¹M至5×10 ⁻¹³M、10 ⁻¹¹M至10 ⁻¹²M、10 ⁻¹²M至10 ⁻¹³M。在一些實施例中，抗TNFR2抗體與TNFR2之間結合的Kd值為10 ^-7M至10 ^-13M。

在一些實施例中，抗TNFR2抗體與非靶標之間結合的Kd值高於抗TNFR2抗體與靶標的Kd值，並且本文中引用的一些實施例中，抗TNFR2抗體與靶標（例如，TNFR2）的結合親和力高於TNFR2抗體與非靶標的結合親和力。一些實施例中，非靶標是指非TNFR2抗原。在一些實施例中，抗TNFR2抗體（針對TNFR2）與非TNFR2靶標結合的Kd值是抗TNFR2抗體和靶標TNFR2之間結合的Kd的至少10倍，例如10-100倍、100-1000倍、10 ³-10 ⁴倍、10 ⁴-10 ⁵倍、10 ⁵-10 ⁶倍、10 ⁶-10 ⁷倍、10 ⁷-10 ⁸倍、10 ⁸-10 ⁹倍、10 ⁹-10 ¹⁰倍、10 ¹⁰-10 ¹¹倍、10 ¹¹-10 ¹²倍。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體與非靶標結合的Kd值為10 ^-1M至10 ^-6M（例如10 ^-1M至10 ^-6M，10 ^-1M至10 ^-5M，10 ^-2M至10 ^-4M）。在一些實施例中，該非靶標是指非TNFR2抗原。因此，在一些實施例中，抗TNFR2抗體與非TNFR2靶標之間結合的Kd值為10 ^-1M至10 ^-6M、1×10 ^-1M至5×10 ^-6M、10 ^-1M至10 ^-5M、1×10 ^-1M至5×10 ^-5M、10 ^-1M至10 ^-4M、1×10 ^-1M至5×10 ^-4M、10 ^-1M至10 ^-3M、1×10 ^-1M至5×10 ^-3M、10 ^-1M至10 ^-2M、10 ^-2M至10 ^-6M、1×10 ^-2M至5×10 ^-6M、10 ^-2M至10 ^-5M、1×10 ^-2M至5×10 ^-5M、10 ^-2M至10 ^-4M、1×10 ^-2M至5×10 ^-4M、10 ^-2M至10 ^-3M、10 ^-3M至10 ^-6M、1×10 ^-3M至5×10 ^-6M、10 ^-3M至10 ^-5M、1×10 ^-3M至5×10 ^-5M、10 ^-3M至10 ^-4M、10 ^-4M至10 ^-6M、1×10 ^-4M至5×10 ^-6M、10 ^-4M至10 ^-5M、10 ^-5M至10 ^-6M。

在一些實施例中，當提及抗TNFR2抗體以高結合親和力特異性地識別TNFR2靶標，並以低結合親和力結合非靶標時，該抗TNFR2抗體與TNFR2靶標結合的Kd值為10 ^-7M至10 ^-13M（例如10 ^-7M至10 ^-13M、10 ^-8M至10 ^-13M、10 ^-9M至10 ^-13M、10 ^-10M至10 ^-12M），並且與非靶標結合的Kd值為10 ^-1M至10 ^-6M（例如10 ^-1M至10 ^-6M、10 ^-1M至10 ^-5M、10 ^-2M至10 ^-4M）。核酸

編碼抗TNFR2抗體的核酸分子也被考慮在內。在一些實施例中，提供一種（或一組）編碼全長抗TNFR2抗體的核酸，包括本文之任一種全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體的核酸（或一組核酸）還可以包括編碼多肽標籤的核酸序列（例如蛋白純化標籤，His-標籤、HA標籤）。

同時本文還考慮了包含抗TNFR2抗體的分離的宿主細胞，編碼抗TNFR2抗體多肽組分的分離的核酸，或者包含編碼本文之抗TNFR2抗體多肽組分的核酸的載體。

本申請還包括這些核酸序列的變體。例如，變體包括至少在中等嚴格雜交條件下與編碼本申請的抗TNFR2抗體的核酸序列雜交的核苷酸序列。

本申請同時還提供可將本申請中核酸序列插入到其中的載體。

簡言之，將編碼抗TNFR2抗體的天然或合成的核酸插入到合適的表現載體中，使得核酸可操作性的連接到5’和3’端調控元件，例如包括啟動子（例如淋巴細胞特異性啟動子）和3’非翻譯區（UTR），可表現抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）。該載體可適用於在真核宿主細胞中複製和整合。典型的殖株與表現載體包含調控目標核酸序列的表現的轉錄和翻譯終止子、起始序列和啟動子。

本申請之核酸也可以通過使用標準的基因遞送方案，用於核酸免疫和基因治療。核酸遞送方法是本領域已知的。例如參見U.S.Pat.Nos.5,399,346、5,580,859、5,589,466，通過引用其全部內容併入本文。在一些實施例中，本申請還提供基因治療載體。

可以將核酸選殖到許多類型的載體中。例如，可以將核酸選殖到載體中，該載體包括，但不限於，質體、噬菌粒、噬菌體衍生物、動物病毒和柯斯質體。特別感興趣的載體包括表現載體、複製載體、探針生成載體和測序載體。

此外，表現載體可以以病毒載體的形式提供給細胞。病毒載體技術是本領域熟知的，並且描述於例如Green and Sambrook （2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York），以及其他病毒學或分子生物學手冊中。可用作載體的病毒包括，但不限於，反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒和慢病毒。通常，合適的載體包括一個在至少一種生物體中起作用的複製起點、啟動子序列、方便的限制性內切酶位點以及一個或多個選擇標記物（參見例如，WO 01/96584; WO 01/29058; 和U.S. Pat. No. 6,326,193）。

已經開發了許多基於病毒的系統，用於將基因轉移到哺乳動物細胞中。例如，反轉錄病毒為基因遞送系統提供了便利的平臺。可以應用本領域已知的技術，將選擇的基因插入載體中並包裝在反轉錄病毒顆粒中。然後分離重組病毒，在體內或體外遞送至受試者的細胞中。許多反轉錄病毒系統在本領域中是已知的。在一些實施例中，使用腺病毒載體。許多腺病毒載體在本領域中是已知的。在一些實施例中，使用慢病毒載體。衍生自反轉錄病毒的載體，例如慢病毒，是實現長期基因轉移的合適工具，因為它們使得轉基因長期穩定的整合以及在子代細胞中繁殖。慢病毒載體相對於衍生自腫瘤的反轉錄病毒例如小鼠白血病病毒具有額外的優勢，因為它們可以轉導非分裂細胞，例如肝細胞。同時，其還具有低免疫原性的額外優勢。

其他的啟動子元件，例如，增強子，調控轉錄起始頻率。通常它們位於起始位點上游30-110bp處，雖然最近發現很多啟動子也包含起始位點下游的功能元件。啟動子元件之間的間隔通常是靈活的，所以當元件彼此之間位置互換或移動時仍保持啟動子的功能。在胸苷激酶（tk）啟動子中，啟動子元件之間的間隔增加到50bp，活性才會開始下降。

合適啟動子的一個示例是即時早期巨細胞病毒（CMV）啟動子序列。該啟動子序列是一個很強的組成型啟動子序列，可以驅動任何與其可操作性連接的多核苷酸序列高水準表現。合適啟動子的另一個示例是延伸因子1α（EF-1α）啟動子。然而，也可以使用其他組成型啟動子，包括但不限於，猿猴病毒40（SV40）早期啟動子、小鼠乳腺腫瘤病毒（MMTV）、人免病缺陷病毒長末端重複序列（HIV-LTR）啟動子、MoMuLV啟動子、禽類白血病病毒啟動子、Epstein-Barr病毒即刻早期啟動子、勞斯氏肉瘤病毒啟動子以及人類基因啟動子，例如包括但不限於，肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、血紅蛋白啟動子和肌酸激酶啟動子。此外，不應將本申請局限在僅使用組成型啟動子。誘導型啟動子也是本申請考慮的部分。誘導型啟動子的使用提供了一種分子開關，當需要這種表現時，能啟動其與之可操作性連接的多核苷酸序列表現，當不需要時，則關閉表現。誘導型啟動子，包含但不局限於，金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子和四環素啟動子。

在一些實施例中，抗TNFR2抗體的表現是可誘導的。在一些實施例中，編碼抗TNFR2抗體的核酸序列可操作的連接到誘導型啟動子上，包括本文之任一誘導型啟動子。誘導型啟動子

誘導型啟動子的使用提供了一種分子開關，當需要表現時，可啟動與之可操作性連接的多核苷酸序列表現，而在不需要表現時，則關閉表現。真核細胞中適用的示例性誘導型啟動子，包括但不限於，激素調節元件（例如，參見Mader, S. and White, J. H. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:5603-5607）、合成配體調節元件（參見Spencer, D. M. et al(1993) Science262: 1019-1024）以及電離輻射調控元件（參見Manome, Y. et al.(1993) Biochemistry32: 10607-10613; Datta, R. et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA89: 1014- 10153）。其他適用於體內或體外哺乳動物系統的示例性誘導型啟動子參見Gingrich et al.(1998) Annual Rev. Neurosci21:377-405。在一些實施例中，用於表現抗TNFR2抗體的誘導型啟動子系統為Tet系統。在一些實施例中，用於表現抗TNFR2抗體的誘導型啟動子系統為大腸桿菌lac抑制系統。

本申請所採用的一個示例性誘導型啟動子系統為Tet系統。該系統是基於Gossen等（1993）描述的Tet系統。在一個示例性實施例中，目標多核苷酸由包含一個或多個Tet操縱子（TetO）位點的啟動子控制。在非啟動狀態，Tet阻遏物（TetR）與TetO位點結合並抑制啟動子的轉錄。在啟動狀態，例如，在存在誘導劑如四環素（Tc）、無水四環素、多西環素（Dox）或其活性類似物的情況下，誘導劑會使TetR從TetO上釋放，從而導致轉錄發生。多西環素是四環素抗生素家族中的一員，其化學名為1-二甲胺基-2,4a,5,7-五羥基-11-甲基-4,6-二氧基-1,4a,11,11a,12,12a-六氫四烯-3-甲醯胺。

在一個實施例中，TetR經密碼子優化適用於在哺乳動物細胞中表現，例如小鼠或人類細胞。由於遺傳密碼的簡並性，大多數胺基酸由不止一個密碼子編碼，從而使得給定核酸的序列具有大量的變體，而其編碼的胺基酸序列沒有任何改變。然而，許多生物體在密碼子使用方面存在差異，也稱為「密碼子偏好」（即，給定胺基酸使用特定密碼子的偏好）。密碼子偏好通常與特定密碼子的優勢tRNA種類的存在有關，反過來又提高了mRNA翻譯的效率。因此可以通過密碼子優化來定制源自特定物種的編碼序列（例如，原核生物），以提高其在不同物種（例如，真核生物）中的表現。

Tet系統的其他具體變體，包括以下的「Tet-Off」和「Tet-On」系統。在Tet-off系統中，轉錄在Tc或Dox存在下是失活的。在該系統中，由TetR與單純皰疹病毒VP16強轉錄啟動結構域融合組成的四環素調控的轉錄啟動蛋白（tTA），在四環素反應啟動子元件（TRE）轉錄控制下調控靶核酸的表現。TRE元件由TetO序列串聯與啟動子（通常是來源於人巨細胞病毒即刻早期啟動子的最小啟動子序列）融合組成。在不存在Tc或Dox的情況下，tTA結合TRE並啟動靶基因的轉錄。在存在Tc或Dox的情況下，tTA不能結合TRE，靶基因不能表現。

相反，在Tet-On系統中，轉錄在Tc或Dox存在下是啟動的。Tet-On系統是基於反向四環素調控的轉錄啟動因子rtTA。與tTA一樣，rtTA是由TetR阻遏物與VP16反式啟動域組成的融合蛋白。然而，TetR的DNA結合區中4個胺基酸的變化改變了rtTA的結合特性，使其在存在Dox的情況下只能識別靶轉基因TRE上的tetO序列。所以在Tet-On系統中，只有在存在Dox的情況下，rtTA才能啟動TRE調控的靶基因的轉錄。

另一種誘導型啟動子系統是大腸桿菌的lac阻遏物系統（參見Brown et al., Cell49:603-612 (1987)）。Lac阻遏物系統通過調控與包含lac操縱子（lacO）的啟動子可操作性連接的目標多核苷酸的轉錄發揮功能。Lac阻遏物（lacR）與LacO結合，進而阻止目標多核苷酸的轉錄。通過合適的誘導劑來誘導目標多核苷酸的表現，例如，異丙基-β-D硫代半乳糖吡喃苷（IPTG）。

為了評估多肽或其部分的表現，待導入細胞的表現載體還可包含選擇標記基因或報告基因或二者都有，以便於從病毒載體轉染或感染的細胞群體中識別和選擇表現細胞。在其他方面，選擇標記可以攜帶在單獨的DNA片段上並在共轉染實驗中使用。選擇標記基因或報告基因都可側接於合適的調控序列，使其在宿主細胞中能夠表現。有用的選擇標記包括，例如，抗生素耐藥基因，如neo以及類似基因。

報告基因可用於鑑定潛在的轉染細胞和評價調控序列的功能。通常，報告基因是不存在於受體生物體或組織中或不由受體生物體或組織表現的基因，其編碼一種多肽，其表現表現為一些易於檢測的特性，例如酶活性。當DNA導入受體細胞後，在合適的時間檢測報告基因的表現。合適的報告基因可包括編碼螢光素酶、β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯轉移酶、分泌鹼性磷酸酶或綠色螢光蛋白的基因（例如 ., Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters479: 79-82）。合適的表現系統是公知的，可以通過已知的技術製備或通過商業途徑獲得。通常，把具有能夠顯示報告基因最高表現水準的最小5'側翼區的構建體認定為啟動子。此類啟動子區可以與報告基因連接，並用於評估某些物質在調節啟動子驅動的轉錄中能力。

在一些實施例中，提供編碼本文之任一種全長抗TNFR2抗體的核酸。在一些實施例中，該核酸包括編碼全長抗TNFR2抗體重鏈和輕鏈的一個或多個核酸序列。在一些實施例中，該一個或多個核酸序列中的每一個包含在單獨的載體中。在一些實施例中，至少有一些核酸序列包含在同一載體中。在一些實施例中，所有核酸序列包含在同一載體中。載體可以選自，例如，哺乳動物表現載體和病毒載體（如源自反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒和慢病毒的載體）。

將基因導入細胞並表現的方法在本領域是已知的。在表現載體的上下文中，通過本領域的任何方法載體可以很容易地導入宿主細胞中，如哺乳動物細胞、細菌、酵母或昆蟲細胞。例如表現載體可以通過物理、化學或生物方法導入宿主細胞。

將多核苷酸導入宿主細胞的物理方法包括磷酸鈣沉澱、脂質體轉染、基因槍法、顯微注射、電穿孔法以及諸如此類。製備包含載體及/或外源核酸的細胞的方法在本領域是熟知的。參見例如Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)。在一些實施例中，通過磷酸鈣轉染法將多核苷酸導入宿主細胞。

將目標多核苷酸導入宿主細胞的生物學方法包括使用DNA和RNA載體。病毒載體，特別是反轉錄病毒載體，已成為將基因插入哺乳動物細胞，例如人類細胞中的最廣泛使用的方法。其他病毒載體可以源自慢病毒、痘病毒、單純皰疹病毒1型、腺病毒和腺相關病毒等。參見如U.S. Pat. Nos. 5,350,674 和5,585,362。

將多核苷酸導入宿主細胞的化學方法包括膠體分散系統，例如高分子複合物、奈米膠囊、微球、磁珠和以脂質為基礎的系統，其包括水包油乳劑、膠團、混合膠團和脂質體。一種在體內和體外被用作遞送載體的示例性膠體系統是脂質體（例如，人工膜囊）。

在使用非病毒遞送系統的情況下，示例性的遞送載體是脂質體。考慮使用脂質製劑將核酸導入宿主細胞（體外、離體或體內）。在另一方面，該核酸可以與脂質結合。與脂質結合的核酸可被包裹進脂質體的水性內部，散佈在脂質體的脂質雙層內，通過與脂質體和寡核苷酸結合的連接分子連接在脂質體，包埋在脂質體中，與脂質體形成複合物，分散在含有脂質的溶液中，與脂質混合，與脂質結合，懸浮在脂質中，包含在膠束中或與膠束混合，或以其他方式與脂質結合。脂質、脂質/DNA或脂質/表現載體相關的組合物在溶液中不限於任何特定結構。例如，它們可能以雙分子層結構、以膠束或以「塌陷」結構存在。它們也可以簡單的分散在溶液中，可能形成大小或形狀不均勻的聚集體。脂質是脂肪物質，可以是天然存在的或是合成的脂質。例如，脂質包括天然存在於細胞質中的脂肪滴，以及含有長鏈脂肪烴及其衍生物的一類化合物，例如脂肪酸、醇、胺、胺基醇和醛。

無論採用何種方法將外源核酸導入宿主細胞中或以其他方式將細胞暴露於本申請的抑制劑中，為了確認重組DNA序列存在於宿主細胞中，可以進行多種實驗。這類實驗包括例如本領域技術人員熟知的「分子生物學」實驗。例如Southern和Northern blotting，RT-PCR和PCR；「生物化學」實驗，例如檢測某一特定多肽是否存在或不存在，例如通過免疫學方法（ELISAs和Western blots）或者通過本文之實驗來進行鑑定均落入本申請範圍內。抗 TNFR2 抗體的製備

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是單株抗體或源於單株抗體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體包括來自單株抗體的V _H和V _L，或者其變體。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體進一步包括來自單株抗體的C _H1和C _L區域，或者其變體。單株抗體可以應用例如本領域已知的方法製備，包括雜交瘤細胞法、噬菌體展示方法或應用重組DNA法。此外，示例性的噬菌體展示法在本文及以下的實施例中進行了描述。

在雜交瘤細胞法中，通常用免疫劑免疫倉鼠、小鼠或其他適合的宿主動物，以誘導產生或能夠產生與免疫劑特異性結合的抗體的淋巴細胞。或者，可以在體外免疫淋巴細胞。免疫劑可包括目標蛋白的多肽或融合蛋白。為獲得抗原決定區特異性抗體，免疫劑可以是主要包含抗原決定區或由抗原決定區組成的多肽，或主要包含抗原決定區或由抗原決定區組成和過表現細胞系的抗原片段或結構域（Greenfield EA. Standard Immunization of Mice, Rats, and Hamsters. Cold Spring Harb Protoc. 2020 Mar 2;2020(3):100297; Holzlöhner P, Hanack K. Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology. J Vis Exp. 2017 Jan 2;(119):54832）。可通過本領域已知的方法鑑定抗原決定區特異性抗體，該方法包括但不限於抗原結構域交換、丙胺酸掃描和抗原-Fab複合物晶體結構研究（Toride King M, Brooks CL. Epitope Mapping of Antibody-Antigen Interactions with X-Ray Crystallography. Methods Mol Biol. 2018;1785:13-27; Morrison KL, Weiss GA. Combinatorial alanine-scanning. Curr Opin Chem Biol. 2001 Jun;5(3):302-7）。通常，如果需要人源細胞，採用外周血淋巴細胞（PBLs），而如果需要非人哺乳動物來源細胞，則會使用脾細胞或淋巴結細胞。使用適當的融合劑將淋巴細胞與永生細胞系進行融合，例如聚乙二醇，以形成雜交瘤細胞。永生細胞系通常是轉化的哺乳動物細胞，尤其是齧齒類、牛科和人源的骨髓瘤細胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤細胞系。雜交瘤細胞可以在合適的培養基中進行培養，該培養基優選含有一種或多種抑制未融合永生細胞生長或存活的物質。例如，如果親本細胞缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT或HPRT），則雜交瘤細胞培養基通常包括次黃嘌呤、胺蝶呤和胸苷（HAT培養基），該培養基能阻止HGPRT缺陷細胞生長。

在一些實施例中，永生化細胞系有效融合，通過所選擇的抗體生產細胞保證抗體高水準穩定表現，並且對某些培養基敏感，例如HAT培養基。在一些實施例中，永生細胞系是小鼠骨髓瘤細胞系，可以從例如，加利福尼亞聖地牙哥的索爾克細胞保藏中心和佛吉尼亞馬納薩斯的美國典型培養物保藏中心獲得。同時還描述了人骨髓瘤和鼠-人雜交骨髓瘤細胞系用於製備人源單株抗體。

然後可以測定培養雜交瘤細胞的培養基中是否存在針對多肽的單株抗體。由雜交瘤細胞產生的單株抗體的結合特異性可以通過免疫沉澱法或體外結合實驗確定，如放射性免疫測定法（RIA）或酶聯免疫吸附法（ELISA）。此類技術或分析方法在本領域是已知的。單株抗體的結合親和力可以通過例如Munson and Pollard, Anal. Biochem.,107:220 （1980）中之斯卡查德（Scatchard）分析確定。

在鑑定出所需的雜交瘤細胞後，可以通過有限稀釋法對目標殖株進行亞選殖，並通過標準方法進行培養。基於此目的適合的培養基包括，例如改良Eagle培養基（DMEM）和RPMI-1640培養基。或者，雜交瘤細胞可以在哺乳動物體內以腹水的形式生長。

亞選殖分泌的單株抗體可以通過常規免疫球蛋白純化方法從培養基或腹水中分離或純化，例如蛋白A-瓊脂糖凝膠、羥基磷灰石色譜層析、凝膠電泳、透析或親和層析。

在一些實施例中，根據本文之任一抗TNFR2抗體，該抗TNFR2抗體包含選自抗體文庫（例如展示scFv或Fab片段的噬菌體文庫）之殖株的序列。該殖株可以通過篩選具有所需活性的抗體片段組合文庫的方法進行鑑定。例如，本領域已知多種方法用於產生噬菌體展示文庫以及篩選這些文庫來獲得所需結合特性的抗體。這些方法在例如 Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001)中進行了綜述，並且在例如McCafferty et al., Nature348:552-554; Clackson et al., Nature352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol.338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA101(34): 12467-12472 (2004); and Lee et al., J. Immunol. Methods284(1-2): 119-132(2004)中進行了進一步描述。

在某些噬菌體展示方法中，通過聚合酶鏈式反應（PCR）分別選殖V _H和V _L基因的所有組成成分，並在噬菌體文庫中隨機重組，然後篩選能夠結合抗原的噬菌體，如Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)中該。噬菌體通常以scFv片段或以Fab片段形式展示抗體片段。免疫來源的文庫噬菌體提供針對免疫原的高親和力抗體而不需要構建雜交瘤細胞。或者，可以選殖天然庫（例如來自人），來提供針對多種非自身抗原和自身抗原的單一抗體來源，而不需任何免疫，如Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)中該。最後，天然文庫也可以通過選殖來自幹細胞的非重排V-gene片段，並使用包含隨機序列的PCR引物編碼CDR3高變區並且在體外完成重排的方法進行製備，如Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)中該。描述人抗體噬菌體文庫的專利出版物包括，例如U.S. Pat. No. 5,750,373、和US Patent Publication Nos. 2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764,、2007/0292936和2009/0002360。

通過噬菌體展示篩選文庫中能夠特異性結合靶標TNFR2的抗TNFR2抗體部分的方法來製備抗TNFR2抗體。該文庫可以是人scFv噬菌體展示文庫，具有至少1×10 ⁹（例如，至少1 × 10 ⁹、2.5 × 10 ⁹、5 × 10 ⁹、7.5 × 10 ⁹、1 × 10 ¹⁰、2.5 × 10 ¹⁰、5 × 10 ¹⁰、7.5 × 10 ¹⁰或1 × 10 ¹¹）種多樣性的獨特的人抗體片段。在一些實施例中，該文庫是人天然文庫，通過從健康受試者的PMBCs和脾臟中提取的DNA構建，包含所有人重鏈和輕鏈亞家族。在一些實施例中，該文庫是人天然文庫，通過從各種疾病患者體內分離的PMBCs中提取的DNA構建，例如自身免疫病的患者、癌症患者和感染性疾病的患者。在一些實施例中，該文庫是半合成的人文庫，其中重鏈CDR3完全是隨機的，所有胺基酸（除了半胱胺酸）以相同的概率存在於任何給定的位置。（參見,例如, Hoet, R.M. et al., Nat. Biotechnol.23(3):344-348, 2005)。在一些實施例中，半合成的人文庫的重鏈CDR3長度在5到24個（例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個）胺基酸之間。在一些實施例中，該文庫是全合成的噬菌體展示文庫。在一些實施例中，該文庫是非人噬菌體展示文庫。

對靶標TNFR2具有高親和力的噬菌體殖株可以通過噬菌體與靶標TNFR2的迭代結合進行篩選，該靶標TNFR2與固相支持物結合（例如用於溶液淘選的珠子或用於細胞淘選的哺乳動物細胞），接下來去除未結合的噬菌體，並洗脫特異性結合噬菌體。隨後，洗脫結合的噬菌體殖株並用於感染合適的宿主細胞，例如 E. coliXL1-Blue，進行表現和純化。可以通過多輪淘選（例如，2、3、4、5、6或更多輪），例如溶液淘選、細胞淘選或兩者結合以富集特異性結合TNFR2的噬菌體殖株。富集的噬菌體殖株與靶標TNFR2的特異性結合可以通過本領域已知的任何方法進行檢測，包括例如ELISA和FACS。篩選抗體文庫的另一種方法是在酵母細胞表面展示蛋白質。Wittrup等人（US Patent Nos. 6,699,658 and 6,696,25 1）開發了一種酵母細胞展示文庫的方法。在該酵母展示系統中，一種涉及酵母凝集素蛋白（Aga1）的成分被固定在酵母細胞壁上。另一個涉及凝集素蛋白Aga2第二個亞單位的成分可以通過二硫鍵與Aga1蛋白結合展示在酵母細胞表面。Aga1蛋白在Aga1基因整合後從酵母染色體表現。將單鏈可變片段（scFv）文庫與酵母展示質體中的Aga2序列進行遺傳上的融合，轉化後的Aga2序列通過營養標記以游離型保留在酵母中。Aga1和Aga2蛋白均在半乳糖誘導型啟動子的控制下表現。

人抗體V基因庫（V _H和V _K片段）通過使用簡並引物的PCR方法獲得（Sblattero, D. & Bradbury, A. Immunotechnology3, 271–278 1998）。PCR範本來自商用RNA或cDNA，包括PBMC、脾臟、淋巴結、骨髓和扁桃體。將單獨的V _H和V _KPCR文庫組合，然後通過重疊延伸PCR以scFv形式組裝在一起（Sheets, M.D. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA95, 6157–6162 1998）。為了構建酵母scFv展示文庫，通過同源重組將得到的scFv PCR產物選殖到酵母中的酵母展示質體中。（Chao, G, et al, Nat Protoc. 2006;1(2):755-68. Miller KD, et al. Current Protocols in Cytometry4.7.1-4.7.30, 2008）。

如U.S. patent No. 7,732,195B2該，可使用哺乳動物細胞展示系統找到抗TNFR2抗體，其中抗體部分展示在細胞表面上，並且通過抗原引導篩選方法分離針特異性靶向TNFR2的抗體部分。可以建立代表多數人類IgG抗體基因的中國倉鼠卵巢（CHO）細胞文庫，並用於發現表現高親和力抗體基因的殖株。已經開發出另一種展示系統，能夠通過交替剪接同時實現高水準的細胞表面展示和相同蛋白質的分泌，其中展示的蛋白質表型仍然與基因型相關，允許在生物物理和基於細胞的功能分析中同時表徵可溶性分泌抗體。這種方法克服了以前哺乳動物細胞展示的許多限制，使抗體能夠以全長糖基化IgG的形式直接選擇和成熟（Peter M. Bowers, et al, Methods2014,65:44-56）。暫態表現系統適用於抗體基因恢復前的單輪抗原選擇，因此最適用於從較小的文庫中選擇抗體。穩定的游離型載體提供了一個有吸引力的選擇。游離型載體可以高效轉染並穩定地保持在低拷貝數，允許多輪平移和更複雜抗體文庫的解析。

IgG文庫是基於種系序列的V基因片段，這些片段與一組從人供體中分離出來的重排（D）J區相連。從2000份人血液樣本中收集的RNA被反轉錄成cDNA，並且使用V _H和V _K特異性引物擴增V _H和V _K片段，並通過凝膠提取純化。通過將V _H和V _K片段分別亞選殖到含有IgG1或K恆定區的展示載體中，然後電穿孔或轉化293T細胞，以構建IgG文庫。為了構建scFv展示文庫，通過連接V _H和V _K生成scFv，然後將其亞選殖到展示載體中，然後通過電穿孔或轉化到293T細胞中。如我們所知的，IgG文庫是基於種系序列的V-基因片段連接到從供體組分離的重排（D）J區域，供體可以是小鼠、大鼠、兔或猴。

單株抗體也可以通過重組DNA方法進行製備，例如U.S. Patent No. 4，816,567中該。編碼本申請中該單株抗體的DNA可以通過常規方法（例如通過能特異性結合編碼鼠源抗體輕鏈和重鏈基因的寡聚核苷酸探針）輕易的分離和測序。如上雜交瘤細胞或本申請的TNFR2特異性噬菌體殖株可以作為這種DNA的來源。分離後，可將DNA置於表現載體中，然後該載體轉染入宿主細胞，例如猿猴COS細胞、中華倉鼠卵巢癌（CHO）細胞或不產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞中，獲得在重組宿主細胞中合成的單株抗體。該DNA也可以被修飾，例如用人類重鏈和輕鏈恆定結構及/或用框架區域的編碼序列代替同源的非人序列（U.S. Patent No. 4,816,567; Morrison et al., supra)，或者將非免疫球蛋白多肽的全部或部分編碼序列共價連接到免疫球蛋白編碼序列上。這種非免疫球蛋白多肽可以取代本申請中抗體的恆定區，或可以取代本申請中抗體可變域中的一個抗原結合位點，形成嵌合的二價抗體。

該抗體可以是單價抗體。製備單價抗體的方法是本領域已知的。例如，一種涉及免疫球蛋白輕鏈和修飾重鏈的重組表現方法。通常在Fc區的任意位置截短重鏈，以阻止重鏈相互交聯。或者，相關的半胱胺酸殘基被其他胺基酸殘基取代或被缺失以防止交聯。

體外方法也適用於製備單價抗體。消化抗體產生抗體片段，特別是Fab片段，可以使用任何本領域已知的方法完成。

具有所需結合特異性（抗體-抗原結合位點）的抗體可變域可以與免疫球蛋白恆定區融合。優選與免疫球蛋白重鏈恆定區進行融合，其包括至少部分鉸鏈，CH2和CH3區。在一些實施例中，包含輕鏈結合必要位點的第一重鏈恆定區（CH1）至少出現在一種融合體中。編碼免疫球蛋白重鏈融合體的DNA，如果需要，還可以包括編碼免疫球蛋白輕鏈的DNA，被插入進獨立的表現載體中，並共轉染至合適的宿主生物中。全人 和人源化抗體

該抗TNFR2抗體（如全長的抗TNFR2抗體）可以是人源化抗體或全人抗體。非人（如小鼠）抗體部分的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’) ₂、scFv或抗體的其他抗原結合子序列），其通常包括最少的源於非人免疫球蛋白的序列。人源化抗體包括人免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（受體抗體），其中受體CDR的殘基被具有所需特異性、親和力和性能的非人源（供體抗體）CDR殘基取代，例如小鼠、大鼠或兔子的CDR。在一些實施例中，人免疫球蛋白Fv框架區殘基被相應的非人源殘基取代。人源化抗體還可以包含既不屬於受體抗體也不在引入的CDR或框架區序列中的胺基酸殘基。通常，人源化抗體包含至少一個，通常兩個可變域，其中全部或基本上全部CDR區對應於非人免疫球蛋白的CDR區，全部或基本上全部框架區是人免疫球蛋白共有序列。

通常，人源化抗體含有一個或多個從非人源引入的胺基酸殘基。那些非人源胺基酸殘基通常被稱為「移入」殘基，通常來自「移入」可變域。根據一些實施例，人源化基本上可以按照Winter和其同事的如下方法進行（Jones et al., Nature,321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature,332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science,239: 1534-1536 (1988)），通過用齧齒動物CDRs或CDR序列取代人源抗體的相應序列。因此，這種「人源化」抗體部分（U.S. Patent No. 4,816,567），其基本上少於完整的人源抗體，其可變域已被來自非人源的相應序列所取代。在實際中，人源化抗體部分是典型的人源抗體部分，其中一些CDR殘基和可能的一些框架區殘基被來自齧齒類抗體中類似位點的殘基所取代。

全人抗體是人源化的一種替代方式。例如，目前可以製備在免疫後能夠產生完整的全人抗體文庫而不產生內源性免疫球蛋白的轉基因動物（例如，小鼠）。例如，已有報導，嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區（JH）基因的純合子缺失，完全抑制了內源性抗體的產生。將人種系免疫球蛋白基因陣列轉移到這種種系突變小鼠體內，可在抗原刺激下產生全人抗體，參見，例如akobovits et al., PNAS USA,90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature,362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993); U.S. Patent Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669; 5,545,807;和WO 97/17852。或者，可以通過將人類免疫球蛋白基因座引入轉基因動物中（例如內源性免疫球蛋白基因已經被部分或全部沉默的小鼠）來製備全人抗體。抗原刺激後，可以發現全人抗體的產生在各個方面都與其在人類中的產生非常相似，包括基因重排、組裝和抗體文庫。這種方法在例如U.S. Patent Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; and 5,661,016, and Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature,368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995) 中進行了描述。

全人抗體也以通過體外活化B細胞（見U.S. Patents 5,567,610 和 5,229,275）或通過使用本領域已知的各種技術來產生，包括噬菌體展示文庫。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol.,227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.,222:581 (1991). Cole et al.和Boerner et al.等人的技術也可以用於製備全人單株抗體。見Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R. Liss, p. 77 (1985) and Boerner et al., J. Immunol.,147(1): 86-95 (1991)。抗 TNFR2 抗體變體

在一些實施例中，也考慮了本文提供的抗TNFR2抗體的變體（例如，全長的抗TNFR2抗體）的胺基酸序列。例如，可能需要改善抗體的結合親和力及/或其他生物學活性。抗體變體的胺基酸序列可以通過在編碼抗體的核苷酸序列中引入適當的修飾或通過肽合成來製備。此類修飾包括例如，抗體胺基酸序列中殘基的缺失及/或插入及/或取代。可以通過胺基酸殘基缺失、插入和取代的任一組合來完成最終的構建，使其具有所需的特徵。例如，抗原結合性。

在一些實施例中，提供具有一個或多個胺基酸取代的抗TNFR2抗體變體。取代突變的目標位點包括高變區（HVRs）和框架區（FRs）。可以在目標抗體中引入胺基酸取代，篩選所需活性的產物，例如，改善的生物活性，保持/改善抗原結合能力，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。

保守取代如下表4所示。表 4 保守取代

原始殘基	示例性取代	優選取代
Ala (A)	Val; Leu; Ile	Val
Arg (R)	Lys; Gln; Asn	Lys
Asn (N)	Gln; His; Asp, Lys; Arg	Gln
Asp (D)	Glu; Asn	Glu
Cys (C)	Ser; Ala	Ser
Gln (Q)	Asn; Glu	Asn
Glu (E)	Asp; Gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	Asn; Gln; Lys; Arg	Arg
Ile (I)	Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucine	Leu
Leu (L)	Norleucine; Ile; Val; Met; Ala; Phe	Ile
Lys (K)	Arg; Gln; Asn	Arg
Met (M)	Leu; Phe; Ile	Leu
Phe (F)	Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	Thr	Thr
Thr (T)	Val; Ser	Ser
Trp (W)	Tyr; Phe	Tyr
Tyr (Y)	Trp; Phe; Thr; Ser	Phe
Val (V)	Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucine	Leu

根據側鏈性質將胺基酸分為不同類別： a、疏水胺基酸：去甲亮胺酸Norleucine、蛋胺酸Met、丙胺酸Ala、纈胺酸Val、亮胺酸Leu、異亮胺酸Ile； b、中性親水性胺基酸：半胱胺酸Cys、絲胺酸Ser、蘇胺酸Thr、天冬醯胺Asn、穀胺醯胺Gln； c、酸性胺基酸：天冬胺酸Asp、谷胺酸Glu； d、鹼性胺基酸：組胺酸His、賴胺酸Lys、精胺酸Arg； e、影響鏈方向的胺基酸：甘胺酸Gly、脯胺酸Pro； f、芳香族胺基酸：色胺酸Trp、酪胺酸Tyr、苯丙胺酸Phe。

非保守胺基酸的取代包含將以上一種類別取代為另一種類別。

一種示例性的取代變體是親和力成熟的抗體，可採用例如以噬菌體展示為基礎的親和力成熟技術而方便地產生。簡言之，將一個或多個CDR殘基進行突變，變體抗體部分展示在噬菌體上，並篩選具有特定生物活性（例如，基於抑制TNFR2依賴的Stat5啟動實驗的生物學活性或結合親和力）的變體。可以在HVRs區進行改變（例如，取代），例如，來獲得改善基於抑制TNFR2依賴的Stat5啟動實驗的生物學活性或抗體親和力。可以在HVR的「熱點區」產生改變，即在體細胞成熟過程中發生高頻突變的密碼子編碼的殘基（參見，例如Chowdhury, Methods Mol. Biol.207:179-196 (2008)），及/或在特異的決定性殘基（SDRs），檢測所得變體V _H和V _L的結合親和力。從二級文庫中構建和重新選擇親和力成熟的方法已經在一些文獻中進行描述，例如，Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))。

在一些親和力成熟的實施例中，通過多種方法中的任一種（例如易錯PCR，鏈改組或寡核苷酸定向突變），將多樣性引入選擇的用於親和力成熟的可變基因中。然後創建二級文庫。對該文庫進行篩選，鑑定出具有所需親和力的抗體變體。另一種引入多樣性的方法包括HVR介導的方式，其中幾個HVR殘基（例如，一次4-6個殘基）被隨機化。涉及抗原結合的HVR殘基被特異性地識別，例如，採用丙胺酸掃描誘變或建模。通常CDR-H3和CDR-L3區域尤其是重點靶標。

在一些實施例中，取代、插入或缺失可能發生在一個或多個HVRs內，只要這種改變基本上不降低抗體結合抗原的能力。例如，可以在HVRs中產生基本上不降低結合親和力的保守性改變（例如，本文中提供的保守性取代）。這些改變可能發生在HVR「熱點區」或SDRs區域之外。在一些實施例中上文提供的變體V _H和V _L序列，每一個HVR或者是未發生改變，或者包含不超過1個、2個或3個胺基酸取代。

一種有用的可以鑑定出抗體中能被靶向性突變的胺基酸殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變」，如Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085中該。在該方法中，一個或一組目標殘基（例如，帶電殘基如精胺酸、天冬胺酸、組胺酸、賴胺酸和谷胺酸）被中性或帶負電荷胺基酸（例如，丙胺酸或谷胺酸）取代，以此來確定抗體與抗原相互作用是否受到影響。可以在胺基酸的位置進一步引入取代，來證明該位置對初始取代具有功能敏感性。或者/另外，通過抗原-抗體複合物的晶體結構來鑑定抗體和抗原之間的接觸位點。這些接觸位點殘基和鄰近殘基可作為取代候選物而被靶向或消除。篩選變體，確定它們是否具有所需要的性質。

胺基酸序列的插入，包括在胺基端及/或羧基末端的融合，長度範圍從1個殘基到包含100個或更多個殘基的多肽，還包括在序列內插入1個或多個胺基酸殘基。末端插入的例子包括N末端具有甲硫胺醯殘基的抗體。抗體分子的其他插入變體，包括在抗體分子N-末端或C-末端融合一個酶（例如，ADEPT）或增加抗體血清半衰期的多肽。 Fc區變體

在一些實施例中，將一個或多個胺基酸修飾引入本文之抗體（例如，全長抗TNFR2抗體或抗TNFR2抗體融合蛋白）的Fc區，從而產生Fc區變體。在一些實施例中，Fc區變體具有增強的ADCC效能，通常與結合Fc的受體（FcRs）有關。在一些實施例中，Fc區變體具有降低的ADCC效能。有很多關於Fc序列的改變或突變影響其效能的例子，例如，WO 00/42072和Shields et al. J Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 描述了與FcRs的結合增強或減弱的抗體變體。這些出版物的內容通過引用併入本文。

抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）是治療性抗體針對腫瘤細胞的作用機制。ADCC是細胞介導的免疫防禦，當靶細胞膜表面的抗原被特異性抗體（例如，抗TNFR2抗體）結合，免疫系統的效應細胞主動裂解靶細胞（例如，癌細胞）。通常ADCC效應涉及由抗體啟動的NK細胞。NK細胞表現Fc受體CD16。該受體識別並結合與靶細胞表面相結合的抗體分子的Fc部分。NK細胞表面最常見的Fc受體為CD16或FcγRIII。Fc受體與抗體Fc區的結合導致NK細胞的活化，釋放細胞裂解顆粒，隨後靶細胞凋亡。ADCC對腫瘤細胞的殺傷作用可以通過轉染高親和力FcR的NK-92細胞的特異性實驗來測定。其結果與不表現FcR的野生型NK-92進行比較。

在一些實施例中，本申請還提供抗TNFR2抗體變體（例如全長抗TNFR2抗體變體），其包含具有部分但不是全部的效應功能Fc區，使得其在體內具有延長的半衰期，然而特定的效應功能（例如CDC或ADCC）是非必需的或有害的，這種抗TNFR2抗體成為本申請理想的候選。通過在體外及/或體內進行細胞毒性檢測來確認CDC及/或ADCC活性的減少/消除。例如，通過Fc受體（FcR）結合試驗來確認抗體缺乏FcγR結合能力（因此可能缺乏ADCC活性）但依然保留FcRn的結合能力。介導ADCC的主要細胞中，NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)第464頁的表3中總結了FcR在造血細胞上的表現。在體外評估目標分子的ADCC活性的非限制性實例在U.S. Pat. No. 5,500,362中進行了描述（參見例如Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA83:7059-7063 (1986)) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA82:1499-1502 (1985); U.S. Pat. No. 5,821,337 (見於Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987))。或者，可以採用非放射性檢測方法（參見，例如ACTI™流式細胞術非放射性細胞毒性檢測（CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.）和CYTOTOX 96™非放射性細胞毒性檢測（Promega, Madison, Wis.））。此類檢測實驗採用的效應細胞包括外周血單核細胞（PBMC）和自然殺傷細胞（NK）。

或者，另外地，目標分子的ADCC活性在體內進行檢測，例如，在動物模型中，如Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA95:652-656 (1998)中該。同時還可以進行C1q結合試驗來確認抗體不能與C1q結合，從而缺乏CDC活性。參見，例如WO2006/029879和WO 2005/100402中C1q和C3c結合 ELISA。為了評估補體啟動情況，可進行CDC檢測（參見，例如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods202:163 (1996); Cragg, M. S. et al., Blood101:1045-1052 (2003); 和Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood103:2738-2743 (2004))。使用本領域已知的方法來測定FcRn結合和體內清除/半衰期（參見，例如，Petkova, S. B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)）。

具有降低的效應功能的抗體，包括在Fc區殘基238、265、269、270、297、327和329位進行一個或多個殘基的取代（U.S. Pat. No. 6,737,056）。這些Fc變體包括在265、269、270、297和327位進行兩個或多個殘基的取代的Fc變體，包括被稱為「DANA」的Fc變體，其在265和297位殘基取代為丙胺酸（U.S. Pat. No. 7,332,581）。

這類與FcRs結合能力提高或降低的抗體變體已有描述（參見例如U.S. Pat. No. 6,737,056; WO 2004/056312,和Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) ）。

在一些實施例中，提供一種抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）變體，其包含具有一個或多個能夠增強ADCC效應的胺基酸取代的Fc區變體。在一些實施例中，Fc區變體包含一個或多個能夠增強ADCC效應的胺基取代，這些取代的位置在Fc區的298、333及/或334位（EU殘基編號）。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體（例如，全長的抗TNFR2抗體）變體包括在Fc區的S298A，E333A和K334A位胺基酸取代。

在一些實施例中，Fc區的改變導致C1q結合及/或補體依賴性細胞毒作用（CDC）的改變（即增強或減弱），參見U.S. Pat. No. 6,194,551, WO 99/51642, 和Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)中該。

在一些實施例中，提供一種抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）變體，其包含具有一個或多個胺基酸取代的Fc區變體，能夠延長半衰期及/或增強與Fc受體（FcRn）的結合。具有延長半衰期和改善FcRn結合的抗體在US2005/0014934A1（Hinton等）中有所描述。這些抗體Fc區包含一個或多個胺基酸取代，增強了Fc區與FcRn的結合。這些Fc變體在Fc區包含238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424 或434位的殘基中的一個或多個取代，例如Fc區434位殘基的取代（U.S. Pat. No. 7,371,826）。

同時參見Duncan & Winter, Nature322:738-40 (1988); U.S. Pat. No. 5,648,260; U.S. Pat. No. 5,624,821和WO 94/29351中提供其他Fc區變體的例子。

本申請考慮了包括本文之任一種Fc變體或其組合的抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）。糖基化變體

在一些實施例中，對本文所提供的抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）進行改變，以增加或降低抗TNFR2抗體糖基化的程度。通過改變抗TNFR2抗體或其多肽部分的胺基酸序列以此來增加或去除一個或多個糖基化位點，可以方便地實現添加或刪除抗TNFR2抗體上的糖基化位點。

其中抗TNFR2抗體包含Fc區，可以改變與其連接的糖。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含分支的雙觸角寡糖，該寡糖通常通過N-連接與Fc區CH2結構域Asn297連接，參見例如Wright et al. ， TIBTECH15:26-32 (1997)。該寡糖可包含多種糖類，例如甘露糖、N-乙醯胺基葡萄糖苷（GlcNAc）、半乳糖和唾液酸，以及與雙觸角寡糖結構「莖」部的GlcNAc相連接的海藻糖。在一些實施例中，可對本申請的抗TNFR2抗體進行寡糖修飾，從而產生具有某些改進特性的抗TNFR2抗體變體。

與Fc區的CH2結構域連接的N-聚糖是異質的。CHO細胞中產生的抗體或Fc融合蛋白通過岩藻糖基轉移酶活性被岩藻糖基化，參見Shoji-Hosaka et al., J. Biochem.2006, 140:777- 83。通常，可以在人血清中檢測出一小部分天然存在的非岩藻糖基化IgGs。Fc區的N-糖基化對於其與FcγR結合很重要；而非岩藻糖基化的N-聚糖增強了Fc與FcγRIIIa的結合能力。與FcγRIIIa結合能力增強使得ADCC效應增強，這在需要細胞毒性的某些抗體治療應用中是有利的。

在一些實施例中，當不需要Fc介導的細胞毒作用時，增強的效應功能可能是有害的。在一些實施例中，Fc片段或CH2結構域是非糖基化的。在一些實施例中，通過對CH2結構域中的N-糖基化位點進行突變以阻止其糖基化。

在一些實施例中，提供抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）變體，其包含Fc區，其中連接於Fc區的糖類結構具有減少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，這可能會增強ADCC功能。具體地，本文提供抗TNFR2抗體，其相對於野生型CHO細胞產生的相同抗TNFR2抗體具有減少的岩藻糖。也就是說，它們的特徵在於，與天然CHO細胞（例如，產生天然糖基化形式的CHO細胞，含有天然FUT8基因的CHO細胞）產生的抗體相比，具有更少量的岩藻糖。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體的N-連接聚糖具有少於50%、40%、30%、20%、10%或5%的岩藻糖。例如，該抗TNFR2抗體的岩藻糖含量可能是1％-80％、1％-65％、5％-65％或20％-40％。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體的N-連接聚糖不包含岩藻糖，即，其中抗TNFR2抗體完全不含岩藻糖，或沒有岩藻糖或是去岩藻糖基化。岩藻糖的含量是通過計算連接到Asn297上的糖鏈內岩藻糖平均含量相對於通過MALDI-TOF質譜測量的所有連接在Asn297上的糖結構（如複合、雜交或甘露糖結構）的總量來確定的，如WO 2008/077546該。Asn297是指位於Fc區297位的天冬醯胺殘基（EU Fc區殘基編號體系）。然而，由於抗體的微小序列變化，Asn297也可位於297位的上游或下游±3個胺基酸，即在294和300位之間。這些岩藻糖基化變體可能具有增強的ADCC功能。參見例如US Patent Publication Nos. US 2003/0157108 (Presta, L.)，US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。與「去岩藻糖基化」或「岩藻糖缺乏」的抗體變體相關的出版物的實例，包括US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621； US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119； WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)。能夠產生去岩藻糖基化抗體的細胞系包括缺乏蛋白岩藻糖基化功能的Lec13 CHO細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；US Pat Appl No US 2003/0157108 A1, Presta, L；和WO 2004/056312 A1, Adams et al., 尤其是實施例11），和基因敲除細胞系，例如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因，FUT8基因敲除的CHO細胞（參見Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；和 WO2003/085107）。

抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）變體進一步涉及二等分寡糖，例如，其中連接於抗TNFR2抗體Fc區的雙觸角寡糖被GlcNAc等分。這種抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）變體可能具有減少的岩藻糖基化及/或增強的ADCC功能。這類抗體變體的實例在WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.)；U.S. Pat. No. 6,602,684 (Umana et al.)；US 2005/0123546 (Umana et al.),和Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851-861 (2006)中有所描述。還提供抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）變體，其在與Fc區連接的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基。這類抗TNFR2抗體變體可能具有增強的CDC功能。這類變體在例如WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.)；和WO 1999/22764 (Raju, S.)中有所描述。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）變體能包含能與FcγRIII相結合的Fc區。在一些實施例中，包含Fc區的該抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）變體在人效應細胞（例如T細胞）存在下具有ADCC活性，或者與具有人野生型IgG1 Fc區的其他相同抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）相比，在人效應細胞存在下，具有增強的ADCC活性。半胱胺酸工程變體

在一些實施例中，需要製備半胱胺酸工程化的抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體），在該抗體中一個或多個胺基酸殘基被半胱胺酸殘基取代。在一些實施例中，取代殘基出現在抗TNFR2抗體的可及位點。通過用半胱胺酸取代那些殘基，具有活性的巰基基團位於抗TNFR2抗體的可及位點，可以用於將該抗TNFR2抗體與其他部分偶聯，例如藥物部分或接頭-藥物部分，來製備如本文中進一步描述的抗TNFR2免疫結合物。半胱胺酸工程化的抗TNFR2抗體（例如，全長抗TNFR2抗體）可以按照例如U.S. Pat. No. 7,521,541該進行製備。衍生物

在一些實施例中，本文所提供的抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）可進一步修飾以包含本領域已知並且容易獲得的其他非蛋白部分。適用於衍生化抗TNFR2抗體的部分，包括但不限於，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例，包括但不限於，聚乙二醇（PEG）、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊烷、聚-1,3,6-三氧雜環已烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸（均聚物或無規共聚物）、右旋糖酐或聚（n-乙烯基吡咯烷酮）聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇（例如甘油）、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中的穩定性，在製造中具有優勢。聚合物可以具有任意分子量，可以是支鏈或非支鏈的。連接在抗TNFR2抗體上的聚合物數量可以變化，並且如果連接多於一個多聚物，它們可以是相同的或不同的分子。通常，用於衍生化的聚合物的數量及/或類型可基於以下考慮因素來確定，包括但不限於，需要改進抗TNFR2抗體的特性或功能，抗TNFR2抗體衍生物是否用於特定條件下的治療等。 藥物組合物

本文還提供包含任一種抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）、編碼抗體的核酸、包含編碼抗體的核酸的載體或者包含本文之核酸或載體的宿主細胞的組合物（例如藥物組合物，在這裏也稱為製劑）。在一些實施例中，提供一種藥物組合物，包含本文之任一種抗TNFR2抗體和藥學上可接受的載體。

可通過混合具有所需純度的抗TNFR2抗體與任選的藥學上可接受的載體、賦形劑或穩定劑（ Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）獲得合適的抗TNFR2抗體製劑，製備成凍幹製劑或液體製劑形式。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所用劑量和濃度下對接受者無毒，包括緩衝劑如：磷酸鹽、檸檬酸和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋胺酸；防腐劑（例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲基氯化銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；苯酚；丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇和間甲酚）；低分子量（少於10個殘基）多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，例如甘胺酸、穀胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或賴胺酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；糖類，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽反離子如鈉；金屬複合物（如鋅-蛋白複合物）；及/或非離子表面活性劑如TWEEN™，PLURONICS™或聚乙二醇（PEG）；示例性製劑如WO98/56418中該，並通過引用明確併入本文。適合皮下給藥的凍幹製劑在WO97/04801中有所描述。這類凍幹製劑可通過合適的稀釋劑重構成高蛋白濃度的製劑，並且重構的製劑可以通過皮下給藥的方式給予本文中待治療個體。陽離子脂質體或脂質體可以用於將本申請中的抗TNFR2抗體遞送至細胞。

本文之製劑除包含抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）之外，還可以包含一種或多種治療特定病症所必要的其他活性物質，優選具有活性互補且彼此無不良反應的物質。例如，除了抗TNFR2抗體之外，可能需要進一步包含，例如，抗腫瘤藥劑、生長抑制藥劑、細胞毒性藥劑或化療藥劑。這些分子以對預期目的有效的量組合存在。其他這些物質的有效量取決於製劑中抗TNFR2抗體的含量，疾病或病症或治療的類型，以及如上其他因素。這些藥物通常以與本文描述的相同劑量和給藥途徑使用，或者以目前應用劑量的1%至99%使用。

該抗TNFR2抗體（例如，全長抗TNFR2抗體）也可以包埋在例如通過凝聚技術和介面聚合製備的微膠囊中，例如分別在膠體藥物遞送系統（例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米顆粒和奈米膠囊）中或粗乳液中的羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚（甲基丙烯酸甲酯）微膠囊。可以製備緩釋製劑。

可以製備抗TNFR2抗體（例如，全長抗TNFR2抗體）的緩釋製劑。緩釋製劑的適合的實例包括含有抗體（或其片段）的固體疏水聚合物半透性基質，這些基質是成型製品的形式，例如，薄膜或微膠囊。緩釋基質的實例包括聚酯、水凝膠（例如，聚（2-羥乙基甲基丙烯酸酯）或聚（乙烯醇））、聚乳酸（U.S. Pat. No. 3,773,919），L-谷胺酸和L-谷胺酸乙酯共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOT ^TM（由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球）以及聚-D(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸之類的聚合物可以使分子的釋放超過100天，某些水凝膠可以在更短的時間內釋放蛋白質。當包封的抗體在體內長時間停留時，它們會因暴露於37°C的潮濕環境中發生變性或聚集，可能導致生物活性的喪失或免疫原性的改變。可以根據相應的機制，設計合理的策略來穩定抗TNFR2抗體。例如，如果發現聚集機制是通過硫代二硫化物交換形成分子間S-S鍵，則可以通過修飾巰基殘基、在酸性溶液中凍幹、控制含水量、使用適當的添加劑、以及開發特定的聚合物基質組合物來實現穩定化。

在一些實施例中，該抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）在含有檸檬酸鹽、氯化鈉、乙酸鹽、琥珀酸鹽、甘胺酸、聚山梨酯80（吐溫80）或上述任何組合的緩衝液中配製。

用於體內給藥的製劑必須是無菌的。這可以通過例如應用無菌過濾膜過濾而容易地實現。 使用抗 TNFR2 抗體的治療方法

抗TNFR2抗體（例如，全長的抗TNFR2抗體）及/或本申請之組合物可以投與於個體（例如，哺乳動物，如人類）來治療與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）。在一些實施例中，抗TNFR2抗體通過阻斷TNFR2的免疫抑制作用增強免疫反應，例如，在腫瘤微環境中。這些疾病包括，但不限於，非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌。因此，在一些實施例中，本申請提供了一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的組合物（如藥物組合物），該組合物包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體），如本文之任一種抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）。在一些實施例中，該個體是人類。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含特異性結合人TNFR2抗原決定區的抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗原決定區包含如SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的胺基酸殘基Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 39具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 63具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。

在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 40或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 40具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 64具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 41具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 65具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 42具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 66或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 66具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 43具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 67（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）具有至少約80%序列同一性。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 44具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 68（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）具有至少約80%序列同一性。

例如，在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含：V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6；HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13；和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26；LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，該抗TNFR2抗體是全長抗體。在一些實施例中，該全長抗TNFR2抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 45具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 69具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。

在一些實施例中，提供一種治療個體中與TNFR2信號傳導相關的疾病及/或病症（例如，癌症或感染性疾病）的方法，包括向該個體投與有效量的包含抗TNFR2抗體（如全長抗TNFR2抗體）的藥物組合物，其中該抗TNFR2抗體包含V _H，其包含SEQ ID NOs: 46-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 46-62中任一所示的胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V _L，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列具有至少約80%（例如，至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組。在一些實施例中，該個體是人類。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO:57，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，本文之抗TSLP抗體包含V _H，該V _H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，以及V _L，該V _L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75。在一些實施例中，本文之抗TNFR2抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗TNFR2抗體。在一些實施例中，該IgG1是人IgG1。在一些實施例中，該IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 78組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 82組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 79組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 80組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 81組成。

在一些實施例中，該個體是哺乳動物（例如人、非人靈長類、大鼠、小鼠、牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓等）。在一些實施例中，該個體是人類。在一些實施例中，該個體是臨床患者、臨床試驗志願者、實驗動物等。在一些實施例中，該個體年齡小於60歲（包括例如小於50、40、30、25、20、15或10歲）。在一些實施例中，該個體年齡大於60歲（包括例如大於70、80、90或100歲）。在一些實施例中，該個體是被診斷為或在遺傳角度上易患本文所描述的一種或多種疾病或病症（例如癌症或感染性疾病）。在一些實施例中，該個體具有一種或多種與本文之一種或多種疾病或病症相關的風險因子。

在一些實施例中，本申請提供一種向個體中對表面表現TNFR2的細胞遞送抗TNFR2抗體（例如本文之任一種抗TNFR2抗體，例如分離的抗TNFR2抗體）的方法，該方法包括向該個體投與包含抗TNFR2抗體的組合物。

癌症或感染性疾病或任何其他與TNFR2信號傳導相關的疾病的許多診斷方法和這些疾病的臨床描述在本領域是已知的。這類方法包括，但不限於，例如免疫組化、PCR以及螢光原位雜交（FISH）。在一些實施例中，本申請該抗TNFR2抗體（例如，全長抗TNFR2抗體）及/或組合物與第二、第三或第四藥劑（包括例如，抗腫瘤藥劑、生長抑制劑、細胞毒性藥劑、免疫療法或化療劑）聯合使用來治療與TNFR2信號傳導相關的疾病或病症，包括與TNFR2表現或過表現相關的癌症。

癌症治療可通過例如，腫瘤消退、腫瘤重量或大小縮小、進展時間、生存期、無進展生存期、總緩解率、緩解期、生活品質、蛋白質表現及/或活性進行評估。可以採用確定治療效果的方法，包括例如，通過放射成像測量反應。

在一些實施例中，以腫瘤生長抑制率（%TGI）衡量治療效果，使用等式100-（T/C×100）計算，其中T是治療腫瘤的平均相對腫瘤體積，C是未治療腫瘤的平均相對腫瘤體積。在一些實施例中，%TGI為約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%或大於95%。在一些實施例中，使用粒細胞的形狀變化及/或粒細胞存活率的增加來衡量治療效果。在一些實施例中，通過單核細胞分泌細胞因子的增加來衡量治療效果。 投與抗 TNFR2 抗體的劑量和方法

投與於個體（例如人）的抗TNFR2抗體（例如分離的抗TNFR2抗體）組合物的劑量可能因特定組合物、給藥方式和治療疾病類型的不同而不同。在一些實施例中，組合物（例如，包含分離的抗TNFR2抗體的組合物）的量可在癌症或感染性疾病治療中有效地產生客觀回應（例如，部分回應或完全回應）。在一些實施例中，抗TNFR2抗體組合物的量足以在個體中產生完全回應。在一些實施例中，抗TNFR2抗體組合物的量足以在個體中產生部分回應。在一些實施例中，抗TNFR2抗體組合物的給藥劑量（例如當單獨投與時）足以在使用抗TNFR2抗體組合物治療的個體群體中產生高於20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、64%、65%、70%、75%、80%、85%或90%的總回應率。個體對本文之治療方法的回應可以確定，例如，根據RECIST評分。

在一些實施例中，組合物（例如包含分離的抗TNFR2抗體的組合物）的量足以控制症狀和降低個體病情惡化的風險。在一些實施例中，組合物的量足以控制症狀和降低個體病情惡化的風險。在一些實施例中，在使用抗TNFR2抗體組合物治療的個體群體中，組合物的量（例如當單獨投與時）足以產生高於50%、60%、70%或77%的臨床益處。

在一些實施例中，組合物（例如包含分離的抗TNFR2抗體的組合物）的量，在單獨使用或與第二，第三、及/或第四藥劑聯合使用時，與同一受試者治療前相比或與未接受治療的其他受試者的相應活性相比，其足以控制症狀和降低個體病情惡化的風險。可以採用標準方法來測量該療效的大小，例如純化酶的體外檢測、基於細胞的檢測、動物模型或人體試驗。

在一些實施例中，當將組合物投與於個體時，組合物中抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的量低於引起毒性效應（即，一種高於臨床可接受毒性水準的效應）的水準，或者處於潛在副作用可以控制或耐受的水準。

在一些實施例中，遵循相同的給藥方案，組合物的量接近組合物的最大耐受劑量（MTD）。在一些實施例中，組合物的量高於MTD的80%、90%、95%或98%。

在一些實施例中，組合物中抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的含量在0.001 µg到1000 µg的範圍之內。

在如上該任一個實施例中，組合物中的TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的有效量，按照體重計算，為0.1 µg/kg到100 mg/kg的範圍之內。

抗TNFR2抗體組合物可通過多種途徑投與於個體（如人類），包括，例如靜脈注射、動脈內給藥、腹腔注射、肺內給藥、口服給藥、吸入給藥、血管內給藥、肌肉注射、氣管內給藥、皮下注射、眼內給藥、鞘內給藥、粘膜給藥或經皮給藥。在一些實施例中，使用組合物的緩釋製劑。在一些實施例中，組合物通過吸入給藥。在一些實施例中，組合物通過靜脈給藥。在一些實施例中，組合物通過口內給藥。在一些實施例中，組合物通過動脈給藥。在一些實施例中，組合物通過腹膜內給藥。在一些實施例中，組合物通過肝內給藥。在一些實施例中，組合物通過肝動脈輸注給藥。在一些實施例中，組合物投與於遠離第一病灶的部位。 製品及套組

在本申請的一些實施例中，提供一種製品，該製品包含一種物質，該物質能夠用於治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病），或者用於遞送抗TNFR2抗體（例如一種全長抗TNFR2抗體）到表面表現TNFR2的細胞。該製品可以包括一種容器以及在容器上或隨該容器附帶的標籤或包裝說明書。合適的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多種材料製成，例如玻璃或塑膠。通常，該容器內裝有能夠有效治療本文之疾病或病症的組合物，並且具有一個無菌端口（例如該容器可以是一個靜脈輸液袋或是一個具有皮下注射針頭可刺穿蓋子的小瓶）。組合物中的至少一種活性物質即為本申請之抗TNFR2抗體。標籤或包裝說明書標示了該組合物可以用於治療的特定病症。標籤或包裝說明書進一步包含給患者投與抗TNFR2抗體組合物的說明書。包括聯合治療的製品和套組均在本文的考慮範圍之內。

包裝說明書是指通常包含在治療產品的商業包裝內的說明書，其包含關於與這些治療產品使用有關的適應症、用法、劑量、投與、禁忌症及/或警告資訊。在一些實施例中，包裝說明書標明該組合物可以用於治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）。在一些實施例中，包裝說明書標明該組合物可以用於治療選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌組成的組中的疾病或病症。

此外，該製品還可以包括第二容器，其包含藥學上可接受的緩衝液，例如抑菌性注射用水（BWFI）、磷酸鹽緩衝液、格林氏溶液或葡萄糖溶液。還可以包括從商業和用戶角度而言所需的其他材料，包括其他緩衝液、稀釋液、篩檢程式、針頭和注射器。

同時還提供可用於各種目的的套組，例如用於治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病），或者用於遞送抗TNFR2抗體（例如全長抗TNFR2抗體）到表面表現TNFR2的細胞中，任選與製品組合。本申請的套組包括一個或多個容器，其包含抗TNFR2抗體組合物（或單劑量形式及/或製品），並且在一些實施例中，進一步包含另一種藥劑（例如本文之藥劑）及/或與本文之任一方法相一致的使用說明書。該套組可進一步包括選擇適合治療個體的描述。本申請中套組中所附帶的使用說明書通常是標籤或包裝說明書上的書面說明（例如包含在套組內的紙頁），機器可讀的說明（例如，磁性或光學儲存光碟上的說明）也是可以接受的。

例如，在一些實施例中，套組包括一種包含抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的組合物。在一些實施例中，套組包括：a) 包含本文之任一種抗TNFR2抗體的組合物，和b) 至少一種有效量的其他藥劑，其能夠增強抗TNFR2抗體的效果（如治療效果、檢測效果）。在一些實施例中，套組包括：a) 包含本文之任一種抗TNFR2抗體的組合物，和b) 向個體投與抗TNFR2抗體組合物用於治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）的使用說明書。在一些實施例中，套組包括：a) 包含本文之任一種抗TNFR2抗體的組合物，和b) 至少一種有效量的其他藥劑，其能夠增強抗TNFR2抗體的效果（如治療效果、檢測效果）和c) 向個體投與抗TNFR2抗體組合物和其他物質用於治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）的使用說明書。該抗TNFR2抗體和其他藥劑可以存在於獨立的容器或同一個容器中。例如，該套組可以包括一種特定組合物或兩種或更多種組合物，其中一種組合物包括抗TNFR2抗體，另一種組合物包括另一種藥劑。

在一些實施例中，套組包含一種（或一組）編碼抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的核酸。在一些實施例中，套組包含：a) 一種（或一組）編碼抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的核酸，和b) 一種表現核酸（或一組核酸）的宿主細胞。在一些實施例中，套組包含：a) 一種（或一組）編碼抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的核酸，和b) 使用說明書，適用於：i) 在宿主細胞中表現抗TNFR2抗體，ii) 製備包含抗TNFR2抗體的組合物，和iii) 向個體投與包含抗TNFR2抗體的組合物來治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）。在一些實施例中，套組包括：a) 一種（或一組）編碼抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的核酸，b) 一種表現核酸（或一組核酸）的宿主細胞，和c) 使用說明書，適用於：i) 在宿主細胞中表現抗TNFR2抗體，ii) 製備包含抗TNFR2抗體的組合物，和iii) 向個體投與包含抗TNFR2抗體的組合物來治療與TNFR2信號傳導有關的疾病或病症（例如，癌症或感染性疾病）。

本申請之套組以合適的形式進行包裝。合適的包裝包括，但不限於，小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝（例如密封的聚酯薄膜或塑膠袋）等。套組可以任選地提供其他的組分，例如緩衝液和說明資訊。因此，本申請還提供製品，其包括小瓶（如密封的小瓶）、瓶子、廣口瓶、軟包裝等。

關於抗TNFR2抗體組合物的使用說明書，通常包括一些資訊，諸如，劑量、給藥週期和給藥途徑。容器可以是單位劑量的，大包裝的（如，多劑量包裝）或亞單位劑量的。例如，提供一種包含足夠劑量的如本文之抗TNFR2抗體（例如全長的抗TNFR2抗體）的套組以對個體進行長期有效的治療，例如一週、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2週、3週、4週、6週，8週，3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間。套組還可包含多單位劑量的抗TNFR2抗體、藥物組合物和使用說明書，並且以足夠在藥房中儲存和使用的量進行包裝，例如，醫院藥房和複方藥房。

本領域的技術人員將認識到在本申請的範圍和宗旨內可能的若干實施例。現在將通過參考以下非限制性實施例來更詳細地描述本申請。以下實施例進一步闡明本申請，但不應解釋為以任何方式進行限制其範圍。 具體實施方式

以下典型示例對本發明的各種特徵和實施例進行了說明，這些示例旨在說明而非限制。本領域技術人員能輕而易舉地理解，具體示例僅為本發明的說明性示例，在後面的請求項中進行更充分地描述。本申請描述的每個實施例和特徵應理解為可與申請中包含的每個實施例互換和組合。 實施例 1 ：製備 TNFR2 多肽

本示例旨在說明各種TNFR2多肽構建體的製備，該TNFR2多肽構建體在誘導產生和篩選本公開的抗TNFR2抗體中用作抗原。

合成人TNFR2（huTNFR2）、小鼠TNFR2（musTNFR2）或食蟹猴TNFR2（cynoTNFR2）胞外域（ECD）編碼序列並使用限制性內切酶將其亞選殖到表現載體pTTal上，識別位點為EcoRI和HindIII。胺基酸序列如表5所示。為了進行純化和檢測，所有構建體均具有以下的序列：位於C端的人IgG1 Fc，位於C端的小鼠IgG2a Fc或位於C端的10×His-tag序列。表 5 TNFR2 多肽序列

SEQ ID NO	蛋白	序列
83	huTNFR2(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGD
84	musTNFR2(ECD)	VPAQVVLTPYKPEPGYECQISQEYYDRKAQMCCAKCPPGQYVKHFCNKTSDTVCADCEASMYTQVWNQFRTCLSCSSSCTTDQVEIRACTKQQNRVCACEAGRYCALKTHSGSCRQCMRLSKCGPGFGVASSRAPNGNVLCKACAPGTFSDTTSSTDVCRPHRICSILAIPGNASTDAVCAPESPTLSAIPRTLYVSQPEPTRSQPLDQEPGPSQTPSILTSLGSTPIIEQSTKGG
85	cynoTNFR2(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGGTCRLREYYDQTAQMCCSKCPPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAQLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICHVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPAPSTAPGTSFLLPVGPSPPAEGSTGD

按照製造商的操作說明書在Expi293細胞（Thermo Fisher Scientific）中表現融合蛋白。簡而言之，分別用表現載體對293F細胞進行轉染，並將上述細胞在37°C、8% CO ₂和120rpm條件下培養5天。

為純化Fc融合蛋白，收集後，將澄清的上清培養基與用PBS緩衝液平衡的MabSelect蛋白A樹脂（GE Healthcare）混合，室溫溫和旋轉培育1.5h。培育後，將懸浮液裝入柱中，用20倍柱體積的包含0.15M NaCl的PBS緩衝液洗滌樹脂，然後用3倍柱體積的50mM磷酸鈉（pH 3.0）洗脫。用1M Tris-HCl（pH 9.0）將洗脫液的pH快速調至pH 5.2，並將緩衝液替換為PBS緩衝液。

為純化His-tag蛋白，收集後，將澄清的上清培養基裝入預先用含有0.25M NaCl和5mM咪唑（pH 8.0）的20mM磷酸鈉緩衝液（pH 7.4）平衡的Histrap柱（GE Healthcare）中。用10倍柱體積的含有0.25M NaCl和15mM咪唑（pH 8.0）的20mM磷酸鈉緩衝液（pH 7.4）洗滌柱子，然後用3倍柱體積的含有0.25M NaCl和100mM咪唑（pH 8.0）的20mM磷酸鈉緩衝劑（pH 7.4）洗脫。將洗脫緩衝液替換為PBS緩衝液。 實施例 2 ：使用雜交瘤法制備抗 TNFR2 抗體及其篩選與鑑定

本示例旨在說明使用小鼠雜交瘤技術製備抗TNFR2抗體的方法，以及篩選和選擇抗體以進一步表徵的方法。

免疫接種和融合：用Expi293或CHO細胞中產生的與His-或小鼠IgG2a Fc融合的人TNFR2重組ECD免疫Balb/c和NZB小鼠，RIBI（Sigma Aldrich，cat# S6322-1VL）、Titermax（Sigma Aldrich，cat# T2684-1ML）或/和Freund's（Freund佐劑，不完全）（Sigma Aldrich，cat# F5506-10x-10mL）作為佐劑。如下文該，通過ELISA測定終點滴度。最後一次免疫後三天，根據標準操作說明書採集脾臟和淋巴結並進行處理。用EasySep小鼠B細胞分離套組（StemCell，cat# 19854A）分離小鼠B細胞，並用PEG將上述細胞與骨髓瘤細胞SP2/0-Ag14細胞（ATCC，CRL 1581）融合。按照標準操作說明書，將融合細胞接種在半固態殖株細胞HY選殖培養基D（StemCell，cat#03804）的六孔板中。使用ClonePix 2儀器（Molecular Devices）將單株雜交瘤殖株挑選到96孔/板中，並在HT培養基中培養。

ELISA 實驗：培養10-14天後，收集上清液，並用帶有His或人Fc標籤的人或食蟹猴TNFR2胞外域蛋白包被的96孔ELISA板，通過ELISA進行初篩。上述蛋白在包被緩衝液中（1×磷酸鹽緩衝液，PBS）的濃度為1μg/mL或0.5μg/mL，將其以50μL/孔包被96孔圓底ELISA板（corning，cat#25381-051），4°C下過夜。去除包被液後，以250μL/孔加入封閉液以封閉平板，並在室溫下培育2小時，該封閉液為含有1%牛血清白蛋白（BSA）的磷酸鹽緩衝液（PBS）（pH 7.4）。然後用300μL含有0.05%TWEEN®-20（洗滌緩衝液）的PBS洗板3次。將50μL單個的雜交瘤殖株的培養上清液（或指定濃度的純化抗體）加入單個孔中，然後在室溫下培育2小時或在37°C下培育1小時。用洗滌緩衝液洗板3次後，按50μL/孔加入1:2000稀釋的山羊抗小鼠抗體-AP（Southern Biotech，cat# 1030-04）。室溫下培育平板1小時，用洗滌緩衝液洗4次，並加入50μL/孔的Sigma快速對硝基苯磷酸片（pNPP）（Sigma-Aldrich，cat#N2770-50SET）顯色30分鐘。在405 nm處，用Synergy HT（Bio-TEK）分析平板。

從初篩中鑑定獲得的親本雜交瘤在48或24孔板中擴大培養，並根據初篩操作方法進行驗證性ELISA，以進一步確認和篩選抗人或抗食蟹猴TNFR2結合物。

雜交瘤受體阻斷試驗：進一步測試在初篩中鑑定的雜交瘤上清液阻斷人TNFR2與人TNFα之間生化結合的能力。人TNFα重組蛋白（R&D system，Cat#210-TA-100）在包被緩衝液中濃度為0.5μg/mL，將其按50μL/孔包被96孔圓底ELISA板，4°C下過夜。去除包被緩衝液後，將封閉緩衝液加入板中，室溫培育1小時，以阻斷非特異性結合。在封閉期間，將雜交瘤抗體樣品與0.5µg/mL TNFR2-huFc以1:1的體積比混合，並在室溫下再培育1.5小時。然後將抗原抗體混合溶液以50μL/孔轉移到TNFα包被的孔中，並在室溫下培育1.5小時。用洗滌緩衝液洗板5次。然後，按50μL/孔加入在分析緩衝液中以1:2000稀釋的山羊抗人IgG Fc-AP（Southern Biotech，cat#2014-04），室溫下培育1小時，用洗滌緩衝液洗4次，並用50μL/孔的pNPP底物顯色30分鐘。在405nm處，用Synergy HT（Bio-TEK）分析平板。具有預期的與人和食蟹猴TNFR2結合以及阻斷人TNFR2與人TNFα結合的能力的親本雜交瘤被優先用於亞選殖並進行進一步表徵。用有限稀釋法進行亞選殖，通過目測以確保殖株性。用相同的結合和阻斷試驗篩選雜交瘤亞選殖，冷凍保存所挑選出的陽性殖株。

雜交瘤抗體的純化：通過初篩抗原結合ELISA確定雜交瘤殖株。陽性殖株在無血清培養基中擴大至30mL，抗體純化方法如下該。在300g條件下離心10分鐘以去除細胞，並用0.22微米篩檢程式過濾，以澄清上清培養基。澄清的上清液培養基與用PBS緩衝液平衡後的蛋白A樹脂（Thermo Fisher Scientific，cat# A26458）混合，並在室溫下緩慢旋轉培育1.5小時。培育後，將懸浮液裝入柱中，用10倍柱體積的含有0.5M NaCl的PBS緩衝液洗滌樹脂，然後用0.1M甘胺酸-HCl（pH 2.8）洗脫。用1M Tris-HCl（pH 8.5）快速中和洗脫液，並將緩衝液替換為PBS。根據上述的操作方法進一步驗證純化的雜交瘤抗體的結合和阻斷功能。 雜交瘤抗體殖株的測序及擴增

提取 RNA：在T75燒瓶中，單株抗人TNFR2雜交瘤在標準雜交瘤培養基（DMEM/F12，10%FBS，1%穀胺醯胺，1%pen/strep）中生長7-10天，直至細胞密度為1-3×10 ⁵，細胞活力＞80%。從培養物中取100-300萬個細胞於15mL離心管中，300g離心5分鐘以沉澱細胞。用5mL預冷的PBS清洗沉澱的細胞。去除PBS，將細胞重新懸浮於600uL緩衝液RLT Plus（Qiagen，cat#74134）中。按照製備操作說明書（Qiagen，cat# 74134）從裂解物中分離總RNA。

PCR 擴增以製備 cDNA：利用特異的反向PCR引物與重鏈和κ鏈的轉換寡核苷酸共同合成cDNA。為合成cDNA，使用1μg RNA作為範本，然後用Clontech（TAKARA，cat# 639537）的SMART Scribe反轉錄酶套組進行反轉錄。此外，試劑還包括10uM引物（Integrated DNA technologies）、10mM去氧核苷酸三磷酸混合物（New England Biolab，cat# N0447S）、水和80U/μLRNAse抑制劑（Invitrogen，cat# 10000840）。恆定區域特異性反向引物與通用正向引物一起用於5'-RACE-PCR反應。PCR產物經凝膠純化並選殖到TOPO-TA載體（ThermoFisher，cat# 451641）上，然後轉化感受態細胞（Thermo Fisher，cat35# 451641）。在轉化和藍/白斑篩選後，挑選白色菌落並在含有羧苄青黴素的LB肉湯培養基中培養過夜。使用M13正向和T7正向引物對Miniprep純化的質體進行測序。抗人TNFR2雜交瘤的可變域序列總結在表2A和3A，並在所附序列表中提供。 實施例 3 ：抗 TNFR2 嵌合抗體體外試驗

本示例旨在說明用於表徵抗TNFR2嵌合抗體功能活性的細胞學試驗。 製備抗 TNFR2 抗體重組 IgG1 變體

利用本領域已知的方法製備具有小鼠抗TNFR2抗體重鏈和輕鏈可變區和人恆定區的重組抗TNFR2嵌合抗體構建體。示例性的人重鏈恆定區和輕鏈恆定區的序列如表3B所示。根據提供的操作說明書，使用Expi293表現系統表現重組抗TNFR2嵌合抗體。以1:1的比例將重鏈和輕鏈質體共轉染到細胞中，轉染的細胞培養6天後收集。

按照以下操作說明書純化重組IgG分子。300g離心10分鐘去除細胞並用0.22µm篩檢程式過濾，以澄清上清培養基。將澄清的上清培養基與用PBS緩衝液平衡後的MabSelect蛋白A樹脂混合，並在室溫下緩慢旋轉培育1.5小時。培育後，將懸浮液裝入柱中，用20倍柱體積的包含0.15M NaCl的PBS緩衝液洗滌樹脂，然後用3倍柱體積的50mM磷酸鈉（pH 3.0）洗脫。用1M Tris-HCl（pH 9.0）將洗脫液的pH快速調整至pH 5.2，並將緩衝液替換為PBS緩衝液。

純化的重組嵌合抗體與 TNFR2 結合：對純化的重組嵌合抗體進行huTNFR2、cynoTNFR2抗原結合ELISA。簡而言之，用PBS中濃度為1µg/mL的huTNFR2或食蟹猴TNFR2-His包被384孔、透明、平底、高結合板（VWR，cat# 29444-096），4°C過夜。去除包被溶液，加入封閉緩衝液封閉平板，並在室溫下培育1小時。然後用洗滌緩衝液洗板3次。將在PBS中連續稀釋的純化抗體加入單個孔中，室溫培育1小時。用洗滌緩衝液洗板3次。然後按50μL/孔加入在ELISA稀釋液中以1:3000稀釋的山羊抗hu-Kappa-AP（Southern Biotech，cat# 2061-04）或1:3000稀釋的山羊抗人IgG Fc-AP，室溫下培育1小時，用洗滌緩衝液洗5次，按50μL/孔加入pNPP底物顯色30分鐘。在405nm處，用Bio-TEK分析平板。嵌合TNFR2抗體與huTNFR2和cynoTNFR2的結合試驗呈陽性。TNFR2結合EC50值如表6、圖1A（和huTNFR2的結合）和圖1B（和cynoTNFR2的結合）所示。表 6

EC50(nM)	51B5	102E4	29G3	85G8.4	15H10	11C1
huTNFR2	0.03648	0.0400	0.02928	0.03903	0.05105	0.05075
cynoTNFR2	0.04938	0.3379	0.04137	0.0488	0.04995	0.05698

純化的重組嵌合抗體阻斷 TNFR2：按照上述相同方案對純化的重組嵌合體抗體進行人TNFR2阻斷ELISA，不同之處僅在於向反應中按50µL/孔加入用分析緩衝液連續稀釋（從10µg/mL開始，1:3稀釋）的純化抗體。阻斷IC ₅₀值表示抑制50%的huTNFR2或cynoTNFR2與包被的人TNFα或食蟹猴TNFα結合時的抗體濃度。如表7、圖2A（和huTNFR2的結合）和圖2B（和cynoTNFR2的結合）所示，所有TNFR2抗體都能夠與huTNFR2或cynoTNFR2結合，阻止TNFR2與其配體人TNFα或食蟹猴TNFα的結合，但102E4除外，102E4不能阻斷食蟹猴TNFα與cynoTNFR2結合。表 7

IC50(nM)	51B5	102E4	29G3	85G8.4	15H10	11C1
huTNFR2	0.5168	1.130	0.5052	0.5834	0.5839	0.7228
cynoTNFR2	0.9682	/	0.9271	1.021	1.008	1.094

嵌合抗 TNFR2 抗體的非特異性結合評價：

使用胰島素、雙鏈DNA（dsDNA）和杆狀病毒顆粒（BVP）ELISA評價嵌合抗TNFR2抗體的非特異性結合（參見Hotzel et al., MAbs2012;4(6):753-60.）。簡而言之，用胰島素、dsDNA或杆狀病毒顆粒的1%懸浮液包被96孔Maxisorp板（BlueSky Biotech），4°C過夜。然後在室溫下用含有1%BSA和0.05%Tween-20的PBS封閉平板1小時。在平板中加入用含有0.5%BSA的PBS連續稀釋的嵌合TNFR2抗體，培育1小時，然後用PBS洗板。具有高非特異結合的Boco（Bococizumab，Pfizer）和低非特異結合的Evo（Evolocumab，Amgen）作為對照。在ELISA緩衝液中，用山羊抗人IgG-Fc-AP檢測結合抗體。在室溫下攪拌培育平板1小時，用洗滌緩衝液洗6次，並按50μL/孔加入pNPP底物顯色3-10分鐘。在405nm處，用Biotek Gen5平板閱讀器（BioTek）分析平板，並與對照抗體進行比較。抗TNFR2嵌合抗體均未檢測到與dsDNA、胰島素和BVP的結合（圖3A-3C）。抗體不與人CD40、4-1BB、TNFR1、CD27、GITR、FAS、LTβR和小鼠TNFR2結合（數據未顯示）。 結合親和力測定：

在Octet RED96儀器上，使用生物層干涉法在30°C和1200rpm攪拌下測量抗TNFR2抗體的結合親和力（單價Kd）。使用動力學緩衝液（PBS、0.1%Tween-20和1%牛血清白蛋白）中的抗人IgG-Fc捕獲（AHC）生物感測器（ForteBio）進行以下動力學分析：(a) 抗體（2µg/mL）300秒，(b) 基線120秒，(c) 與His-tag-huTNFR2（2.5、0.5和0µg/mL）和His-tag-cynoTNFR2（2.5、0.5和0µg/mL）結合420秒，以及(d) 解離1200秒。Savitzky-Golay過濾後，使用Octet數據分析軟體8.0（ForteBio）利用1:1結合模型進行數據擬合和分析。計算Koff/Kon的比值，作為平衡解離常數（Kd），總結在表8（如下）中。表 8 抗 TNFR2 IgGs 與 huTNFR2 和 cynoTNFR2 的結合親和力

殖株	hu TNFR2-His	cynoTNFR2-His
Kd (M)	Kon (1/Ms)	Koff (1/s)	Kd (M)	Kon (1/Ms)	Koff (1/s)
51B5	6.68E-10	4.16E+05	2.78E-04	6.72E-10	9.67E+05	6.50E-04
85G8.4	1.95E-09	1.29E+05	2.51E-04	1.30E-09	4.12E+05	5.34E-04
29G3	4.53E-09	2.51E+05	1.14E-03	1.59E-09	1.26E+06	2.00E-03
102E4	1.59E-09	4.39E+05	6.96E-04	No Binding
15H10	4.53E-10	5.71E+04	2.58E-05	1.42E-09	2.59E+05	3.68E-04
6F12	3.77E-09	2.39E+05	8.86E-04
11C1	2.46E-09	1.05E+05	2.58E-04

與表現 huTNFR2 的細胞結合

為檢測抗TNFR2抗體與表現huTNFR2的細胞的結合，我們使用穩定表現huTNFR2的Expi293細胞進行FACS分析。

將huTNFR2（Uniprot，P20333）的編碼序列選殖到慢病毒載體中，並根據病毒包裝套組（Lenti-X™ Packaging Single Shots，Cat# 631275, Takada）的說明書包裝病毒。重組病毒轉導Expi293細胞，並用嘌呤黴素篩選。將穩定表現huTNFR2的細胞系與抗TNFR2抗體在含有0.5%BSA、1mM EDTA和0.1%疊氮化鈉（FACS緩衝液）的PBS中，4℃培育30分鐘。洗滌細胞，將細胞與10nM藻紅蛋白（PE）結合的抗人Fc抗體（Biolegend，cat# 409304）在4℃下培育20分鐘。洗滌細胞，用Attune（ThermoFisher Scientific）流式細胞儀分離細胞。使用FlowJo軟體分析數據。用平均螢光強度（MFI）表示抗體結合。表 9

抗體	51B5	102E4	29G3	85G8.4	15H10	11C1
EC50(nM)	0.6258	0.8191	0.6537	1.465	2.522	2.045

結果如表9和圖4A所示，抗TNFR2抗體51B5、102E4、85G8.4、29G3、11C1和15H10與Expi293-TNFR2細胞能有效地結合，且其結合具有劑量依賴性。與 huTNFR2-Expi293 細胞結合並阻斷 TNFα 的結合

將穩定表現huTNFR2的Expi293細胞與抗TNFR2抗體在4℃下培育30分鐘。洗滌細胞，將細胞與連接有10 nM Alexa Fluor 647的（ThermoFisher Scientific，cat# A20186）人TNFα（SinoBiogical，cat# 10602-HNAE）在4℃下一起培育20分鐘。洗滌細胞並用流式細胞儀收集細胞。使用FlowJo軟體分析數據。用MFI表示TNFα結合。表 10

抗體	51B5	29G3	85G8.4	15H10	11C1
IC50(nM)	0.4932	0.2749	1.574	3.368	2.511

如表10和圖4B所示，抗TNFR2嵌合抗體51B5、85G8.4、29G3、11C1和15H10能有效地抑制可溶性TNFα與表現TNFR2的Expi293細胞結合，且其抑制具有劑量依賴性。 人調節性 T （ Treg ）細胞高水準表現 TNFR2

本實驗探討了TNFR2在人免疫細胞中的表現水準。以下抗體用於染色：抗人CD3（BD Biosciences，cat# 557705）、抗人CD4（Biolegend，cat# 317424）、抗人CD8（BD Biosciences，cat# 557760）、抗人Foxp3抗體（Fisher Scientific，cat# 50-151-75）、抗人TNFR2（R&D System，cat# FAB226P）、人TruStain FcX（Biolegend，cat# 422302）。人原代外周血單個核細胞（PBMCs）（StemCell Technologies，cat# 70025）在加入/不加入200U/ml IL-2（Peprotech，cat# 200-02）的條件下培養3天。然後將其與Fc阻斷抗體在4°C下培育10分鐘，用抗CD3、抗CD4和抗CD8抗體在4℃下染色20分鐘。洗滌細胞並用固定/透化緩衝液（ThermoFisher Scientific，cat# 00-5523-00）在4°C下固定/透化30分鐘。用1×透化緩衝液洗細胞，並在1×透化緩衝液中用抗Foxp3抗體在4℃下染色30分鐘。洗滌細胞，用2%PFA固定，用流式細胞儀進行分離和分析。用FlowJo軟體分析Treg細胞和效應細胞（CD4+Foxp3細胞）中TNFR2的表現（MFI）。

如圖5所示，與效應細胞相比，Treg細胞顯示出更高的TNFR2表現。IL-2未顯著增加TNFR2的表現。 人原代 Treg 細胞測定

檢測了抗TNFR2抗體對人原代Treg細胞的功能活性。於圓形底板中，將PBMC與200U/ml IL-2和20ng/ml TNFα在存在或不存在抗TNFR2抗體的完整培養基中37℃下培育72小時。在4℃下，用抗CD3抗體和抗CD4抗體在FACS緩衝液中染色細胞30分鐘。洗滌細胞，並在4℃下用固定/透化緩衝液固定/透化30分鐘。然後用1×透化緩衝液洗滌，並在4℃下用抗人Foxp3抗體在1×透化緩衝液中染色30分鐘。洗滌細胞，用2%PFA固定，用流式細胞儀進行分離和分析。用FlowJo軟體分析Foxp3+細胞在CD4+細胞中的百分比。表 11

抗體	51B5	102E4	29G3	85G8.4	15H10	11C1	6F12
EC50(nM)	0.1432	0.3327	0.2656	0.4808	0.7434	0.5782	0.3569

如表11和圖6所示，抗TNFR2抗體51B5、102E4、85G8.4、29G3、11C1、6F12和15H10能有效地抑制PBMC中Treg細胞的增殖，且該抑制具有劑量依賴性。 實施例 4 ：純化的嵌合抗 TNFR2 抗體的結構域結合位點解析

一組小鼠-人嵌合TNFR2構建體，其中小鼠受體的半胱胺酸富集區（CRDs）分別被人受體的相應區域替換，或反之（圖7）：按上述方法重組製備huTNFR2-musCRD1(ECD)、huTNFR2-musCRD2(ECD)、huTNFR2-musCRD3(ECD)、huTNFR2-musCRD4(ECD)、musTNFR2-huCRD1(ECD)、musTNFR2-huCRD2(ECD)、musTNFR2-huCRD3(ECD)和musTNFR2-huCRD4(ECD)。構建體的胺基酸序列如表12所示。通過ELISA進行抗原決定區解析實驗，在平板上捕獲抗體，分別檢測其與重組hu/mus TNFR2嵌合蛋白的結合。結果如表13所示，鑑定了與人TNFR2受體CRD3結合的TNFR2抗體51B5。表 12 TNFR2 多肽序列

SEQ ID NO	蛋白	序列
86	huTNFR2-musCRD1(ECD)	VPAQVVLTPYKPEPGYECQISQEYYDRKAQMCCAKCPPGQYVKHFCNKTSDTVCASCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGD
87	huTNFR2-musCRD2(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDDCEASMYTQVWNQFRTCLSCSSSCTTDQVEIRACTKQQNRVCTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGD
88	huTNFR2-musCRD3(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICACEAGRYCALKTHSGSCRQCMRLSKCGPGFGVASSRAPNGNVLCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGD
89	huTNFR2-musCRD4(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDSCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKACAPGTFSDTTSSTDVCRPHRICSILAIPGNASTDAVCTSTSPTRSMAPGAVHLPQPVSTRSQHTQPTPEPSTAPSTSFLLPMGPSPPAEGSTGD
90	musTNFR2-huCRD1(ECD)	LPAQVAFTPYAPEPGSTCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCDDCEASMYTQVWNQFRTCLSCSSSCTTDQVEIRACTKQQNRVCACEAGRYCALKTHSGSCRQCMRLSKCGPGFGVASSRAPNGNVLCKACAPGTFSDTTSSTDVCRPHRICSILAIPGNASTDAVCAPESPTLSAIPRTLYVSQPEPTRSQPLDQEPGPSQTPSILTSLGSTPIIEQSTKGG
91	musTNFR2-huCRD2(ECD)	VPAQVVLTPYKPEPGYECQISQEYYDRKAQMCCAKCPPGQYVKHFCNKTSDTVCASCEDSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQNRICACEAGRYCALKTHSGSCRQCMRLSKCGPGFGVASSRAPNGNVLCKACAPGTFSDTTSSTDVCRPHRICSILAIPGNASTDAVCAPESPTLSAIPRTLYVSQPEPTRSQPLDQEPGPSQTPSILTSLGSTPIIEQSTKGG
92	musTNFR2-huCRD3(ECD)	VPAQVVLTPYKPEPGYECQISQEYYDRKAQMCCAKCPPGQYVKHFCNKTSDTVCADCEASMYTQVWNQFRTCLSCSSSCTTDQVEIRACTKQQNRVCTCRPGWYCALSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTETSDVVCKACAPGTFSDTTSSTDVCRPHRICSILAIPGNASTDAVCAPESPTLSAIPRTLYVSQPEPTRSQPLDQEPGPSQTPSILTSLGSTPIIEQSTKGG
93	musTNFR2-huCRD4(ECD)	VPAQVVLTPYKPEPGYECQISQEYYDRKAQMCCAKCPPGQYVKHFCNKTSDTVCADCEASMYTQVWNQFRTCLSCSSSCTTDQVEIRACTKQQNRVCACEAGRYCALKTHSGSCRQCMRLSKCGPGFGVASSRAPNGNVLCKPCAPGTFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNASMDAVCAPESPTLSAIPRTLYVSQPEPTRSQPLDQEPGPSQTPSILTSLGSTPIIEQSTKGG

表 13 抗原決定區解析

	huTNFR2_musCRD	musTNFR2_huCRD
抗體	mCRD1	mCRD2	mCRD3	mCRD4	huCRD1	huCRD2	huCRD3	huCRD4
51B5	+	+	-	+	-	-	+	-

實施例 5 ：製備 51B5 的人源化變體

本示例旨在說明製備來自雜交瘤殖株51B5的鼠抗人TNFR2抗體的人源化變體。 鼠抗人 TNFR2 抗體的人源化

將來自雜交瘤51B5的小鼠抗體的輕鏈可變區（V _L）和重鏈可變區（V _H）序列分別與人種系抗體序列進行比對。人種系κ輕鏈（Gene ID – V gene: IGKV4_1*01）和重鏈（Gene ID – V gene: IGHV1_8*01和IGHV1-46*01）作為人框架。

將小鼠TNFR2抗體輕鏈和重鏈的互補決定區（CDR）分別移植到經鑑定最接近的人框架中，以製備人源化抗體殖株。在此過程中，通過將來自小鼠抗體V區的CDR移植到人種系抗體V區框架上，使抗體51B5人源化，從供體移植到受體序列的CDR由Kabat定義（Kabat et al., 1987）。為了恢復抗體的活性，在人源化序列中還保留了來自小鼠V區的許多框架殘基，發現這些V區是部分V _H-V _L相互作用介面，或是「Vernier」區的框架殘基，這可以調整CDR結構並微調以適合抗原結合（Foote et al., 1992）。

人源化抗體的可變區序列總結在表2B和3B中。 實施例 6 ：人源化抗 TNFR2 抗體的體外試驗 製備重組的 IgG 形式的人源化抗 TNFR2 抗體

按上述方法製備全長IgG形式的人源化抗TNFR2抗體（重構為IgG1）。 與表現 huTNFR2 的細胞的結合

如上文實施例3該，檢測人源化抗TNFR2抗體與表現huTNFR2的細胞的結合。結果如表14所示。表 14

抗體	與細胞表面TNFR2結合(MFI)	抗體	與細胞表面TNFR2結合(MFI)
SB1901-1	2060	SB1901-41	2222
SB1901-2	1999	SB1901-42	2353
SB1901-9	1969	SB1901-48	1758
SB1901-10	2053	SB1901-52	1653
SB1901-18	1819	SB1901-58	2001
SB1901-25	2068	SB1901-59	1963
SB1901-26	1916	SB1901-61	1887
SB1901-33	1721	SB1901-63	1586
SB1901-38	1631

結合親和力

在Octet RED96儀器（ForteBio）上，使用生物層干涉法在30°C和1200 rpm條件下測定抗TNFR2抗體的結合親和力（單價Kd）。使用動力學緩衝液（PBS、0.1%Tween-20和1%牛血清白蛋白）中的抗人IgG Fc捕獲（AHC）生物感測器（ForteBio）進行以下動力學分析：(a) 抗體（2µg/mL）300秒，(b) 基線120秒，(c) 與His-tag-huTNFR2（2.5、0.5和0µg/mL）結合420秒，以及(d) 解離1200秒。Savitzky-Golay過濾後，使用Octet數據分析軟體8.0（ForteBio）利用1:1結合模型進行數據擬合和分析。計算Koff/Kon的比值，作為平衡解離常數（Kd）。人源化抗體的結合親和力示例如表15所示。表 15 人源化抗體與 TNFR2 抗原的結合親和力

抗體	Kd (nM)	Kon (1/Ms)	Koff (1/s)
SB1901-68	1.95	4.08E+05	7.96E-04
SB1901-69	1.25	4.10E+05	5.13E-04
SB1901-72	1.11	4.12E+05	4.56E-04
SB1901-80	2.52	3.73E+05	9.37E-04

人源化抗體的體外結合和阻斷試驗

如上該，對人源化抗體進行基於FACS的結合和阻斷試驗。如圖8A和8B所示，與嵌合TNFR2抗體相比，TNFR2抗體的人源化不影響其結合和阻斷功能。 人原代 Treg 細胞體外增殖試驗

用上述人源化抗體進行人原代Treg細胞增殖試驗。示例性試驗（圖9）顯示，與嵌合對照相比，人源化TNFR2抗體可以抑制Treg細胞增殖，這顯示人源化不會改變其體外抑制Treg細胞增殖的抗體功能。 實施例 7 ：評價人源化抗 TNFR2 抗體活性的體內抗腫瘤效果研究本示例旨在說明人源化抗TNFR2抗體功能活性的體內腫瘤模型研究。

本實施例中使用MC38皮下腫瘤模型，研究概況如表16所示（如下）。表 16 體內皮下腫瘤研究操作方案概況

模型	品系 ( 供應商 )	隨機腫瘤體積	治療組	劑量
MC38	C57BL/6-Tnfrsf1b ^tm1 ^(TNF-RSF1B)/Bcgen (Biocytogen)	33-156 mm ³	對照組	人MOPC21 同種型抗體	10mg/kg
Group 1	SB1901-72	10mg/kg

動物和飼養：本研究使用40只雌性C57BL/6-Tnfrsf1b ^{tm1(TNF-RSF1B)}/Bcgen小鼠（6-9週齡）。用「SPF大鼠和小鼠生長」的繁殖性飼料餵食動物，小鼠可自由飲水。為便於識別，對動物進行耳部標記，並在背部左側區域剃毛，以備移植細胞。將動物安置在聚碳酸酯籠中（籠大小為320×200×135mm）。環境溫度控制在20℃~26℃，濕度控制在40-70%。動物護理和使用符合JOINN LABORATORIES（Suzhou）Inc.的標準操作規程，《實驗動物護理與使用指南》（第8版，國家研究委員會生命科學委員會實驗動物資源研究所；國家科學院出版社；華盛頓特區，2010年），以及美國農業部通過的《動物福利法》（公共法案99-198）進行的規定。

細胞製備和移植：從基礎醫學研究所購買的小鼠結腸癌細胞系MC38在含有2mM L-穀胺醯胺、10%胎牛血清（FBS）和1%100×青黴素/鏈黴素（PS）的RPMI培養基中培養和擴增。在培養箱中保持37℃、5%CO ₂的生長環境。擴增完成後，使用0.25%胰蛋白酶EDTA溶液對細胞（第3代）進行胰蛋白酶化。然後洗滌細胞並計數。移植前細胞活率為92%-94%。將細胞懸浮在杜氏磷酸鹽緩衝鹽水（DPBS）中，濃度為1×10 ⁷/ml。用酒精準備墊對試驗動物的移植部位進行消毒，並使用25號針頭和1毫升注射器皮下移植0.2mL。

測量和抗體治療：讓腫瘤生長，然後將小鼠隨機分為不同的研究組。分配小鼠以確保所有組的平均體重在研究群體的總平均腫瘤負荷的10%以內。人MOPC21 IgG1同種型抗體（見於Hamlyn PH, Gait MJ, Milstein C. (1981) Complete sequence of an immunoglobulin mRNA using specific priming and the dideoxynucleotide method of RNA sequencing. Nucleic Acids Res. 9(18):4485-4494）和SB1901-72由本公司自行製備。對於每種抗體，小鼠每週接受兩次腹腔注射治療，持續3週，並監測腫瘤體積（n=10只小鼠/組）。用遊標卡尺測量腫瘤的長軸和短軸，記錄以計算腫瘤體積，並根據腫瘤體積繪製腫瘤生長曲線，以比較兩組之間的差異。根據以下公式計算腫瘤體積：V=1/2×長軸×短軸 ²。根據相對腫瘤體積（RTV）和相對腫瘤增長率T/C（%）計算腫瘤體積抑制率。 RTV = Vt/V0 Vt：每次測量腫瘤後得到的腫瘤體積。 V0：初始腫瘤體積（第一次注射前）。 T/C (%) = 供試品組平均RTV/對照組平均RTV × 100%。腫瘤體積抑制率IRTV (%) = 100% -T/C (%)。 副作用評估：觀察所有動物的臨床症狀或毒性，至少每天一次。每週給動物稱重一次。如果體重減輕超過20%或出現其他需要安樂死的臨床症狀，則對動物實施安樂死。當單個動物的腫瘤體積達到或超過2500mm ³時，對動物實施安樂死。結果：各組的腫瘤體積變化和平均腫瘤體積抑制率（IRTV，%）如圖10A和10B所示。結果顯示，在第22天，第1組的腫瘤體積顯著低於同種型抗體治療組（P＜0.001），顯示利用SB1901-72阻斷TNFR2可有效抑制腫瘤生長。在同一時間點，兩組之間的體重沒有顯著差異。動物在一般臨床觀察中未顯示異常。 實施例 8 ：丙胺酸掃描試驗解析抗原決定區

在本試驗中，通過丙胺酸掃描解析了人源化抗TNFR2抗體SB1901-19、SB1901.72或SB1901/76與人TNFR2結合的抗原決定區。在嵌合蛋白musTNFR2-huCRD3（ECD）（SEQ ID NO: 92）的huTNFR2 CRD3區域內進行丙胺酸掃描突變。將His-tag添加到嵌合蛋白突變體的C末端以便進行純化和檢測。用人源化TNFR2抗體SB1901-19、SB1901-72或SB1901-76包被平板，4°C下過夜。洗滌後，加入嵌合蛋白的丙胺酸突變，並在室溫下振盪培育2小時。再次洗滌平板。然後，將與AP偶聯的抗His抗體添加到平板上，並在室溫下培育1小時。洗滌平板，用pNPP底物顯色30分鐘。在450nm波長下讀取平板。

丙胺酸掃描結果顯示，人源化抗TNFR2抗體SB1901-19、SB1901-72或SB1901-76的抗原決定區相同（數據未顯示）。圖11A-11B顯示了示例性抗體SB1901-76的丙胺酸掃描結果，以及人TNFR2的CRD3區域（SEQ ID NO 83）中的胺基酸R99、K108、E110、G111、R113、L114和D136是抗體結合到人TNFR2所必需的。結果顯示，SB1901-19、SB1901-72或SB1901-76抗體的構象抗原決定區包含SEQ ID NO 83的胺基酸殘基R99、K108、E110、G111、R113、L114和D136，或由上述殘基組成。 實施例 9 ：抗 TNFR2 抗體可開發性試驗

除了與所期望的靶分子結合外，所有抗體藥物還必須滿足一系列關於其製造可行性、儲存穩定性和無脫靶粘性的標準。通常將這一系列特徵稱為「可開發性」。具有高可開發性的抗體往往具有較少的不良生物物理特徵，如碎片、聚集或共純化雜質。聚集是評估生物製品最關鍵的因素之一，許多生物物理特性都會導致聚集。聚集傾向會產生一些嚴重的與製造、保質期、患者給藥和免疫原性相關的問題（Bee JS, Davis M, Freund E, Carpenter JF, Randolph TW. Aggregation of a monoclonal antibody induced by adsorption to stainless steel. Biotechnol Bioeng. 2010;105(1): 121-9）。被廣泛接受且互補的用於評估聚集的工具是動態光散射（DLS）和尺寸排阻色譜法（SEC-HPLC）。

SEC-HPLC：使用SEC-HPLC在40°C下測試示例性抗TNFR2抗體SB1902-72的聚集，時長4週。簡而言之，使用TSKgel G3000SWxl（7.8mm × 30cm）柱，流動相A溶液（0.1M磷酸鹽緩衝液（pH 6.7）+0.05%NaN3）中加入5μg抗體樣品（1mg/mL）。使用安捷倫HPLC系統，在流動相A溶液中以1mL/min的流速在約8到15分鐘內洗脫抗體，並在280nm下進行UV吸光度監測。

表17為通過SEC-HPLC方法測得的穩定性結果。就聚集而言，加速熱壓力條件（40°C下4週）不會誘導聚集。表 1 7

樣品說明	平均 % 主峰	平均 % HWM（高分子量）	平均 % LMW（低分子量）
SB1901-72（1mg/mL）pH7.2, 40℃（w0）	100	未檢測到	未檢測到
SB1901-72（1mg/mL）pH7.2, 40℃（w2）	100	未檢測到	未檢測到
SB1901-72（1mg/mL）pH7.2, 40℃（w4）	100	未檢測到	未檢測到

結合親和力：示例性抗TNFR2抗體SB1902-72在40°C下放置4週後，在Octet RED96儀器（ForteBio）上，使用生物層干涉法，在30°C和1200rpm條件下，測定上述抗體的結合親和能力。在動力學緩衝液（PBS、0.1%Tween-20和1%牛血清白蛋白）中使用抗人IgG-Fc捕獲（AHC）生物感測器（ForteBio）進行以下動力學分析：(a) 抗體樣品（2μg/mL）300秒，(b) 基線120秒，(c) 與His-tag-huTNFR2（2.5、0.5和0μg/mL）結合420秒，以及(d) 解離1200秒。在Savitzky–Golay過濾後，使用Octet數據分析軟體8.0（ForteBio）利用1:1結合模型進行數據擬合和分析。

結合動力學數據如表18所示，顯示在加速熱壓力條件下（40°C條件下4週），與人TNFR2的結合不受影響。表 1 8

樣品說明	Kd (M)	Kon (1/Ms)	Koff (1/s)
SB1901-72 (1mg/mL), pH7.2, 40° C (w0)	1.68E-09	2.95E+05	4.95E-04
SB1901-72 (1mg/mL), pH7.2, 40° C (w2)	1.35E-09	3.48E+05	4.71E-04
SB1901-72 (1mg/mL), pH7.2, 40° C (w4)	1.06E-09	4.97E+05	5.27E-04

這些數據顯示，示例性SB1901-72抗體在加速熱壓力條件下（40°C條件下4週）表現出優異的可開發性。 參考文獻1. Brenner, D., Blaser, H., and Mak, T.W. (2015). Regulation of tumour necrosis factor signalling: live or let die. Nat. Rev. Immunol. 15, 362–374. 2. Bertrand, F., Rochotte, J., Colacios, C., Montfort, A., Tilkin-Mariame´, A.F., Touriol, C., Rochaix, P., Lajoie-Mazenc, I., Andrieu-Abadie, N., Levade, T., et al. (2015). Blocking Tumor Necrosis Factor a Enhances CD8 T-cell-Dependent Immunity in Experimental Melanoma. Cancer Res. 75, 2619–2628. 3. Case K, Tran L, Yang M, Zheng H, Kuhtreiber WM, Faustman DL. (2020) TNFR2 blockade alone or in combination with PD-1 blockade shows therapeutic efficacy in murine cancer models. J Leukoc Biol. 107(6):981-991 4. Chen, X., Wu, X., Zhou, Q., Howard, O.M., Netea, M.G., and Oppenheim, J.J. (2013). TNFR2 is critical for the stabilization of the CD4+Foxp3+ regulatory T. cell phenotype in the inflammatory environment. J. Immunol. 190, 1076–1084 5. DeBerge, M.P., Ely, K.H., Wright, P.F., Thorp, E.B., and Enelow, R.I. (2015). Shedding of TNF receptor 2 by effector CD8+ T cells by ADAM17 is important for regulating TNF-a availability during influenza infection. J. Leukoc. Biol. 98, 423–434. 6. Fuqian Yang, Zhonghua Zhao and Nana Zhao. (2017) Clinical implications of tumor necrosis factor receptor 2 in breast cancer. Oncology Letters 14: 2393-2398. 7. Horwitz, D.A., Pan, S., Ou, J.N., Wang, J., Chen, M., Gray, J.D., and Zheng, S.G. (2013). Therapeutic polyclonal human CD8+ CD25+ Fox3+ TNFR2+ PD-L1+ regulatory cells induced ex-vivo. Clin. Immunol. 149, 450–463. 8. Kim, E.Y., Teh, S.J., Yang, J., Chow, M.T., and Teh, H.S. (2009). TNFR2-deficient memory CD8 T cells provide superior protection against tumor cell growth. J. Immunol. 183, 6051–6057. 9. Lindsay K. Ward-Kavanagh, Wai Wai Lin, John R. Sedy´, and Carl F. Ware. (2016) The TNF Receptor Superfamily in Co-stimulating and Co-inhibitory Responses. Immunity 44, 1005, 1019. 10. Mahmud, S.A., Manlove, L.S., Schmitz, H.M., Xing, Y., Wang, Y., Owen, D.L., Schenkel, J.M., Boomer, J.S., Green, J.M., Yagita, H., et al. (2014). Costimulation via the tumor-necrosis factor receptor superfamily couples TCR signal strength to the thymic differentiation of regulatory T cells. Nat. Immunol. 15, 473–481. 11. Nie Y, He J, Shirota H, Trivett AL, Yang D, Klinman DM, Oppenheim JJ, Chen X. (2018) Blockade of TNFR2 signaling enhances the immunotherapeutic effect of CpG ODN in a mouse model of colon cancer. Sci Signal. 11:eaan0790. 12. Tam EM, Fulton RB, Sampson JF, et al. (2019) Antibody-mediated targeting of TNFR2 activates CD8(+) T cells in mice and promotes antitumor immunity. Sci Transl Med. 11:eaax0720. 13. Ungewickell, A., Bhaduri, A., Rios, E., Reuter, J., Lee, C.S., Mah, A., Zehnder, A., Ohgami, R., Kulkarni, S., Armstrong, R., et al. (2015). Genomic analysis of mycosis fungoides and Se´ zary syndrome identifies recurrent alterations in TNFR2. Nat. Genet. 47, 1056–1060. 14. Williams GS, Mistry B, Guillard S, et al. (2016) Phenotypic screening reveals TNFR2 as a promising target for cancer immunotherapy. Oncotarget. 2016, 7:68278-68291. 15. Wortzman, M.E., Lin, G.H., and Watts, T.H. (2013b). Intrinsic TNF/TNFR2 interactions fine-tune the CD8 T cell response to respiratory influenza virus infection in mice. PLoS ONE 8, e68911. 16. Xin Hu, Baihua Li, Xiaoyan Li, et al. (2014) Transmembrane TNF-a Promotes Suppressive Activities of Myeloid-Derived Suppressor Cells via TNFR2. J Immunol 192:1320-1331 17. Yan Wen Zhang, Qian Qian Chen, Jie Cao, et al. (2019) Expression of tumor necrosis factor receptor 2 in human non-small cell lung cancer and its role as a potential prognostic biomarker. Thoracic Cancer 10: 437–444. 18. J Foote, G Winter. Antibody framework residues affecting the conformation of the hypervariable loops. J Mol Biol. 1992 224(2):487-99. 19. Greenfield EA. Standard Immunization of Mice, Rats, and Hamsters. Cold Spring Harb Protoc. 2020 Mar 2;2020(3):100297. 20. Holzlöhner P, Hanack K. Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology. J Vis Exp. 2017 Jan 2;(119):54832. 21. Toride King M, Brooks CL. Epitope Mapping of Antibody-Antigen Interactions with X-Ray Crystallography. Methods Mol Biol. 2018;1785:13-27. 22. Morrison KL, Weiss GA. Combinatorial alanine-scanning. Curr Opin Chem Biol. 2001 Jun;5(3):302-7.

圖1A-1B所示結果為通過ELISA分析的示例性嵌合抗TNFR2抗體與人TNFR2或食蟹猴TNFR2的結合親和力。圖1A為51B5、102E4、29G3、85G8.4、15H10或11C1與人TNFR2的結合曲線。圖1B為51B5、102E4、29G3、85G8.4、15H10或11C1與食蟹猴TNFR2的結合曲線。圖2A-2B所示結果為通過ELISA分析的示例性嵌合抗TNFR2抗體阻斷TNFα與TNFR2結合的配體阻斷試驗。圖2A所示結果為嵌合抗TNFR2抗體51B5、102E4、29G3、85G8.4、15H10和11C1表現出很強的阻斷人TNFα與人TNFR2結合的能力。圖2B所示結果為抗TNFR2抗體51B5、102E4、29G3、85G8.4、15H10和11C1表現出很強的阻斷食蟹猴TNFα與食蟹猴TNFR2結合的能力。圖3A所示結果為嵌合抗TNFR2抗體與dsDNA的非特異性結合。圖3B所示結果為嵌合抗TNFR2抗體與胰島素的非特異性結合。圖3C所示結果為嵌合抗TNFR2抗體與杆狀病毒顆粒的非特異性結合。圖4A所示結果為通過FACS分析的人抗TNFR2抗體與表現人TNFR2的Expi293細胞的結合能力。圖4B所示結果為抗TNFR2抗體抑制可溶性TNFα與表現TNFR2的Expi293細胞結合的能力。圖5所示結果顯示與非Treg效應T細胞相比，人Treg細胞表現更高水準的TNFR2，並且IL-2處理略微增加Treg細胞上TNFR2的表現。圖6所示為人Treg細胞增殖試驗中抗TNFR2抗體的結果，顯示所有抗TNFR2抗體均抑制PBMC中Treg細胞增殖。圖7顯示了一組小鼠-人嵌合TNFR2結構，其用於抗原決定區解析和結合研究。圖8A所示為通過FACS分析的示例性人源化抗TNFR2抗體的結合試驗結果。圖8B所示為通過FACS分析的示例性人源化抗TNFR2抗體的配體阻斷試驗結果。圖9所示為示例性人源化抗TNFR2抗體在體外人原代Treg細胞增殖試驗中的結果。圖10A所示結果為不同治療組小鼠個體的腫瘤體積。圖10B所示結果為不同治療組中平均腫瘤體積的抑制率（%）。圖11A-11B所示為使用丙胺酸掃描分析的示例性人源化抗體SB1901-76的抗原決定區解析結果。

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Claims

一種分離的特異性結合人TNFR2抗原決定區的抗TNFR2抗體，其中該抗原決定區包含如SEQ ID NO: 83所示人TNFR2序列的胺基酸殘基Arg99、Lys108、Glu110、Gly111、Arg113、Leu114和Asp136或由上述胺基酸殘基組成。
一種分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含：重鏈可變域（V _H），該V _H包含：重鏈互補決定區(HC-CDR) 1，其包含DDYID（SEQ ID NO: 1）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代； HC-CDR2，其包含EIYPGSGNTYYNEKFKG（SEQ ID NO: 7）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；和 HC-CDR3，其包含SQVYGKIAMDH（SEQ ID NO: 14）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；以及輕鏈可變域（V _L），該V _L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含RASESVDNSGNSFMH（SEQ ID NO: 20）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代； LC-CDR2，其包含RASNLES（SEQ ID NO: 27）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代；和 LC-CDR3，其包含QQSKEDPYT（SEQ ID NO: 33）或其變體，該變體包含至多約3個胺基酸的取代。
一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如SEQ ID NOs: 39、46-62中任一胺基酸序列所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如SEQ ID NOs: 63、70-77中任一胺基酸序列所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
如請求項1至3中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其包含： V _H，其包含SEQ ID NOs: 39、46-62中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 39、46-62中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性；以及 V _L，其包含SEQ ID NOs: 63、70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 63、70-77中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性。
如請求項1至4中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其包含： (i) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 39具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 63具有至少約80%序列同一性； (ii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 48具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性； (iii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 70具有至少約80%序列同一性； (iv) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 71具有至少約80%序列同一性； (v) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 49或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 49具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性； (vi) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 55具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性； (vii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 56具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 72或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 72具有至少約80%序列同一性； (viii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 57具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性； (ix) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 58具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性； (x) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 59具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性； (xi) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 60具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性； (xii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 61或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 61具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性；或 (xiii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 62具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 75或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 75具有至少約80%序列同一性。
一種分離的抗TNFR2抗體，其包含V _H，該V _H包含如SEQ ID NOs: 40-45中任一胺基酸序列所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，該V _L包含如SEQ ID NOs: 64-69中任一胺基酸序列所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
如請求項6之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含： (i) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 40所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 64所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3； (ii) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 41所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 65所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3； (iii) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 42所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 66所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3； (iv) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 43所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 67所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3； (v) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 44所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 68所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；或 (vi) V _H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 45所示的V _H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V _L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 69所示的V _L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
如請求項7之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含： (i) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 21， LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (ii) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 3，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 22，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (iii) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 17，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 23，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (iv) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (v) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；或 (vi) V _H，該V _H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 19，或者該V _H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V _L，該V _L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38，或者該V _L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
如請求項8之分離的抗TNFR2抗體，其包含： V _H，其包含SEQ ID NOs: 40-45中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 40-45中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性；以及 V _L，其包含SEQ ID NOs: 64-69中任一所示的胺基酸序列或其變體，該變體與SEQ ID NOs: 64-69中任一胺基酸序列具有至少約80%序列同一性。
如請求項9之分離的抗TNFR2抗體，其包含： (i) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 40或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 40具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 64具有至少約80%序列同一性； (ii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 41具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 65具有至少約80%序列同一性； (iii) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 42具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 66或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 66具有至少約80%序列同一性； (iv) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 43具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 67具有至少約80%序列同一性； (v) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 44或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 44具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 68具有至少約80%序列同一性；或 (vi) V _H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 45或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 45具有至少約80%序列同一性；以及V _L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69或其變體，該變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 69具有至少約80%序列同一性。
一種分離的抗TNFR2抗體，其與如請求項1至10中任一項之分離的抗TNFR2抗體競爭與TNFR2的特異性結合，或與如請求項1至10中任一項之分離的抗TNFR2抗體特異性地結合相同的抗原決定區。
如請求項1至11中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體與人TNFR2結合的Kd值為約0.1pM至約10nM。
如請求項1至12中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體包含Fc片段。
如請求項13之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體是全長的IgG抗體。
如請求項14之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體是全長的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
如請求項1至15中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體是嵌合的、人的或人源化的抗體。
如請求項1至12中任一項之分離的抗TNFR2抗體，其中該抗TNFR2抗體是抗原結合片段，該抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab)’ ₂、Fab’-SH、單鏈Fv (scFv)、Fv片段、dAb、Fd或雙鏈抗體（diabody）。
一種分離的核酸分子，其編碼請求項1至17中任一項之抗TNFR2抗體。
一種載體，其包含如請求項18之分離的核酸分子。
一種分離的宿主細胞，其包含如請求項1至17中任一項之分離的抗TNFR2抗體、如請求項18之核酸分子或如請求項19之載體。
一種製備分離的抗TNFR2抗體的方法，其包含： a) 在能有效表現抗TNFR2抗體的條件下培養如請求項20之宿主細胞；和 b) 從宿主細胞中獲得表現的抗TNFR2抗體。
一種藥物組合物，其包含如請求項1至17中任一項之抗TNFR2抗體、如請求項18之核酸分子、如請求項19之載體、如請求項20之分離的宿主細胞或如請求項21之方法製備的抗TNFR2抗體，以及藥學上可接受的載體。
一種如請求項1至17中任一項之分離的抗TNFR2抗體、如請求項18之核酸分子、如請求項19之載體、如請求項20之分離的宿主細胞、如請求項21之方法製備的抗TNFR2抗體或如請求項22之藥物組合物的用途，其係用於製備用於治療疾病或病症的藥物。
如請求項23之用途，其中該疾病或病症與TNFR2信號傳導或TNFR2表現異常有關，包含癌症或感染性疾病。
如請求項24之用途，其中該疾病或病症選自非小細胞肺癌、腎上腺癌、膀胱癌、腦癌、胰腺癌、乳腺癌、結直腸癌、黑色素瘤、胃食管結合部腺癌、食管癌、食管腺癌、膽囊癌、胃癌、宮頸癌、胃腺癌、頭頸癌、心臟癌、肝細胞癌、腎癌、肝癌、間皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、脾癌、小細胞肺癌、睾丸癌、甲狀腺癌、子宮癌，以及感染性疾病，包括但不限於，人乳頭瘤病毒（HPV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、單純皰疹病毒（HSV）、水痘帶狀皰疹病毒（VSV）、巨細胞病毒（CMV）、愛潑斯坦巴爾病毒（EBV）、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、衣原體、結核分枝桿菌、鏈球菌、肺炎球菌、假單胞菌、彎曲桿菌、沙門氏菌、煙麯黴、黃麯黴、新型隱球菌和莢膜組織胞漿菌。