TW202120128A - 使用ｉｌ－２接合物之免疫腫瘤學組合療法 - Google Patents
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Abstract
文中揭示包括介白素(IL)接合物(例如，IL-2接合物)與其他可用於治療一或多種適應症，例如治療增生性疾病之藥劑或方法組合之組成物、套組和方法。文中亦描述包括一或多個該等介白素接合物(例如，IL-2接合物)之醫藥組成物和套組。
Description
相關申請案之交互參照
本申請案係主張2019年8月15日申請的美國臨時申請案號62/887,400、2019年9月20日申請的美國臨時申請案號62/903,187及2020年1月17日申請的美國臨時申請案號62/962,668之優先權，其各自內容係以全文引用的方式併入本文中。 序列表
本申請案係含有以ASCII格式電子提交的序列表且係以全文引用的方式併入本文中。該2020年8月12日所製作的ASCII副本名稱為2020-08-12_01183-0073-00PCT_seq_listing.txt且大小為128,000個位元(byte)。
不同的T細胞群族係調節免疫系統以維持免疫平衡及耐受性。例如，當細胞毒性T細胞靶定和摧毀受感染的細胞及/或癌細胞時，調節性T(Treg)細胞係藉由防止病態性自我反應，來防止免疫系統不當的反應。在某些情況下，調節不同群族之T細胞係提供治療疾病或適應症之選擇。在某些情況下，在另外的試劑的存在下或組合治療之方法，此項為有利的。
因此，在一方面，文中係提供治療一對象中癌症之方法，該方法係包括投予一對象IL-2接合物與一或多個免疫檢查點抑制劑之組合。
在特定的具體實例中，文中所描述的為用於治療癌症的方法。包括下列具體實例。
具體實例A1為於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO： 3之胺基酸序列，其中至少一個IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(I)之結構置換：
式(I)； 其中： Z為CH2
及Y為
； Y為CH2
及Z為； Z為CH2
及Y為
；或 Y為CH2
及Z為
； W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5 kDa、10 kDa、15 kDa、20 kDa、25 kDa、30 kDa、35 kDa、40 kDa、45 kDa、50 kDa及60 kDa； X具有下列結構：
； X-1係指與前面胺基酸殘基連接的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 其中SEQ ID NO：3中式(I)結構之位置係由下列選出：K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例A2為根據具體實例A1之方法，其中在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。
具體實例A3為根據具體實例A1之方法，其中在IL-2接合物中Y為CH2
而Z為。
具體實例A4為根據具體實例A1之方法，其中在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。
具體實例A5為根據具體實例A1之方法，其中在IL-2接合物中Y為CH2
而Z為。
具體實例A6為根據具體實例A1-A5中任一例之方法，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有25 kDa、30 kDa或35 kDa之平均分子量。
具體實例A7為根據具體實例A6之方法，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有30 kDa之平均分子量。
具體實例A8為根據具體實例A1-A7中任一例之方法，其中在IL-2接合物中，SEQ ID NO：3中式(I)結構的位置為P64。
具體實例A9為具體實例A1之方法，其中該式(I)結構具有式(X)或式(XI)之結構，或為式(X)和式(XI)之混合物：
式(X)；
(XI)； 其中： n為範圍從約2至約5000的整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO： 3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
具體實例A10為具體實例A9之方法，其中在IL-2接合物中，SEQ ID NO：3中式(X)或式(XI)結構之位置為P64。
具體實例A11為具體實例A9或A10之方法，其中在IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2
CH2
)n
-OCH3
具有約25 kDa、30 kDa或35 kDa之分子量。
具體實例A12為具體實例A11之方法，其中在IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2
CH2
)n
-OCH3
具有約30 kDa之分子量。
具體實例A13為具體實例A1之方法，其中該式(I)結構具有式(XII)或式(XIII)之結構，或為式(XII)和式(XIII)之混合物：
式(XII)；
(XIII)； 其中： n為範圍從約2至約5000的整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO： 3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
具體實例A14為具體實例A13之方法，其中在IL-2接合物中，SEQ ID NO： 3中式(XII)或式(XIII)結構之位置係在P64。
具體實例A15為具體實例A13或A14之方法，其中在IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2
CH2
)n
-OCH3
具有約25 kDa、30 kDa或35 kDa之分子量。
具體實例A16為具體實例A15之方法，其中在IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2
CH2
)n
-OCH3
具有約30 kDa之分子量。
具體實例A17為於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO： 50之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)之結構或為式(IV)或式(V)結構之混合物：
式(IV)；
式(V)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5 kDa、10 kDa、15 kDa、20 kDa、25 kDa、30 kDa、35 kDa、40 kDa、45 kDa、50 kDa及60 kDa； X具有下列結構：； X-1係指與前面的胺基酸殘基連接的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。
具體實例A18為根據具體實例A17之方法，其中W為一具有選自25 kDa、30 kDa或35 kDa之平均分子量的PEG基團。
具體實例A19為根據具體實例A18之方法，其中W為一具有30 kDa之平均分子量的PEG基團。
具體實例A20為於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO： 50之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(XII)或式(XIII)之結構，或為式(XII)和式(XIII)結構之混合物：式(XII)；(XIII)； 其中： n為一整數使得-(OCH2
CH2
)n
-OCH3
具有約30 kDa之分子量；及 波形線係指連接SEQ ID NO：50內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
具體實例A21為根據具體實例A1-A20中任一例之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑為一或多個PD-1抑制劑。
具體實例A22為根據具體實例A21之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)及西普利單抗(cemiplimab)。
具體實例A23為根據具體實例A22之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例A24為根據具體實例A22之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例A25為根據具體實例A1-A24中任一例之方法，其中該癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)、經典何杰金氏淋巴瘤(cHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、泌尿道上皮細胞癌、微小衛星體的不穩定性癌、微小衛星體的穩定性癌症、胃癌、大腸癌、大腸直腸癌(CRC)、子宮頸癌、肝細胞癌(HCC)、默克(Merkel)細胞癌(MCC)、黑色素瘤、小細胞肺癌(SCLC)、食道癌、食道鱗狀細胞癌(ESCC)、膠質母細胞瘤、間皮瘤、乳癌、三陰性乳癌、前列腺癌、去勢抗性前列腺癌、轉移性去勢抗性前列腺癌、或具有DNA損傷反應(DDR)缺陷之轉移性去勢抗性前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、中度至低度突變負荷之腫瘤、皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)、鱗狀細胞皮膚癌(SCSC)、低至無表現PD-L1之腫瘤、在其原發解剖起源位置以外全身性傳播至肝臟及CNS之腫瘤及瀰漫性大B-細胞淋巴瘤。
具體實例A26為根據具體實例A1-A25中任一例之方法，其中該IL-2接合物係每週一次，每二週一次，每三週一次，每4週一次，每5週一次，每6週一次，每7週一次，或每8週一次投予該對象。
具體實例A27為根據具體實例A1-A26中任一例之方法，其中該IL-2接合物係藉由靜脈內給藥投予一對象。
具體實例A28為根據具體實例A1-A27中任一例之方法，其中該IL-2接合物為醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
應了解，前述的一般性說明和下列的詳細說明僅作為例示和解釋而非限制所請求的任何標的事項。在某種程度上，以引用的方式併入文中的任何物體與本揭示文的表現內容不相符合時，則以表現內容為主。定義
除非另有說明，否則所有文中所用的技術和科學術語具有如請求標的事項所屬技術之一般技術者所正常理解之相同意義。在本申請書中，除非有特別陳述，否則所使用的單數型係包括多數型。應必須注意，除非內容中明確地指出，否則如本說明書和所附的申請專利範圍中所用，單數形式「一」、「此」亦包括複數參照物。在本申請書中，除非有陳述，否則「或」係指「及/或」。再者，所用的術語「包括」以及其他形式，例如「包含」、「含有」和「涵蓋」並無限制。
在本說明書中有關「某些具體實例」、「一具體實例」或「其他具體實例」係指與該具體實例有關的所述特定特色、結構或特徵係包括在至少某些具體實例中，但不一定是本發明的所有具體實例。
如文中所用，範圍和數量可以「大約」表示一特定數值或範圍。大約亦包括確切的量。因此，「大約5 µL」係指「大約5 µL」以及「5 µL」。一般而言，術語「大約」係包括可預期在實驗誤差內的量，例如，舉例而言，在15%、10%或5%內。
文中所用的章節標題僅用於組織目的且不應視為限制所述的標的事項。
除非另有明確指出，否則術語「或」係以包括的意義來使用，等同「及/或」。
如文中所用，術語「個體」、「對象」和「病患」係指任何的哺乳動物。在某些具體實例中，該哺乳動物為人類。在某些具體實例中，該哺乳動物為非人類。並無任何的術語要求或受限於醫護人員(例如，醫師、護理師、職業護理師、醫師助理、看護或臨終照護人員)之督導(例如，固定或間歇性)所定的狀況。
如文中所用，有關結合親和力，術語「明顯」或「顯著地」係指細胞激素(例如，IL-2多肽)的結合親和力之變化係足以影響細胞激素(例如，IL-2多肽)與目標受體結合。在某些情況下，此術語係指至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更多的變化。在某些情況下，此術語係指至少2-倍、3-倍、4-倍、5-倍、6-倍、7-倍、8-倍、9-倍、10-倍、50-倍、100-倍、500-倍、1000-倍或或更多的變化。
在某些情況下，有關一或多種細胞群族經由一細胞激素訊號傳遞複合活化，術語「明顯」或「顯著地」係指足以活化細胞群族之變化。在某些情況下，活化細胞群組之變化係以受體訊號傳遞效力來測量。在某些情況下，可能提供EC50值。在其他情況下，可能提供ED50值。在另外的情況下，可能提供細胞激素的濃度或劑量。
如文中所用，術語「效力」係指產生一目標效應所需之細胞激素(例如，IL-2多肽)的量。在某些情況下，術語「效力」係指活化一目標細胞激素受體(例如，IL-2受體)所需之細胞激素(例如，IL-2多肽)的量。在其他的情況下，術語「效力」係指活化一目標細胞群族所需之細胞激素(例如，IL-2多肽)的量。在某些情況下，效力係以ED50(有效劑量50)，或產生50%最大效應所需的劑量來測量。在其他的情況下，效力係以EC50(有效濃度50)，或在50%此群族中產生目標效應所需的劑量來測量。
如文中所用，術語「非天然胺基酸」係指20種天然生成胺基酸以外的胺基酸。例示的非天然胺基酸係描述於Young et al., “Beyond the canonical 20 amino acids： expanding the genetic lexicon,”J 。 of Biological Chemistry 285
(15)： 11039-11044 (2010)中，該揭示文係以引用的方式併入本文中。
術語「抗體」在文中係以廣義來使用並包括各種抗體結構，其包括，但不限於單株抗體、多株抗體、多專一性抗體 (例如，雙專一性抗體)及抗體片段，只要其展現所欲的抗原結合活性即可。「抗體片段」係指非完整抗體之分子，其係包括完整抗體的一部分，而該部分係與完整抗體結合之抗原相結合。抗體片段之實例包括，但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2
；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；和從抗體片段所形成的多專一性抗體。在某些具體實例中，該抗原為EGFR。
術語「單株抗體」如文中所用係指從一群實質上同源的抗體所得到的抗體，亦即包括該群族之個別抗體為相同的及/或結合相同表位，但可能的變體抗體除外，例如，含有天然發生的突變或在製造單株抗體期間產生的，此等變體一般係以較小量存在。與多株抗體製備相反，其典型地係包括抗不同決定位(表位)之不同抗體，單株抗體製備的各單株抗體係針對一抗原上的單一決定位。因此，修飾物「單株抗體」係指抗體的特徵係從實質上同源的抗體群族所得來，且不應解釋為需要藉由任何特別的方法製造此抗體。例如，依照本發明所使用的單株抗體可藉由各種技術來製作，其包括，但不限於雜交瘤法、重組DNA法、噬菌體表現法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖動物的方法，此等用於製造單株抗體之方法和其他的例示方法係描述於本文中。
如文中所用，「核苷酸」係指包括一核苷基團和一磷酸基團之化合物。例示的天然核苷酸包括，不限於腺苷三磷酸 (ATP)、尿苷三磷酸(UTP)、胞苷三磷酸(CTP)、鳥苷三磷酸(GTP)、腺二磷酸苷(ADP)、尿苷二磷酸(UDP)、胞苷二磷酸(CDP)、鳥苷二磷酸(GDP)、腺苷單磷酸(AMP)、尿苷單磷酸(UMP)、胞苷單磷酸(CMP)及鳥苷單磷酸(GMP)、去氧腺苷三磷酸(dATP)、去氧胸苷三磷酸(dTTP)、去氧胞苷三磷酸(dCTP)、去氧鳥苷三磷酸(dGTP)、去氧腺苷二磷酸(dADP)、胸苷二磷酸(dTDP)、去氧胞苷二磷酸(dCDP)、去氧鳥苷二磷酸(dGDP)、去氧腺苷單磷酸(dAMP)、去氧胸苷單磷酸(dTMP)、去氧胞苷單磷酸(dCMP)及去氧鳥苷單磷酸(dGMP)。包括一去氧核糖作為糖基之例示的天然去氧核糖核苷酸包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP、dADP、dTDP、dCDP、dGDP、dAMP、dTMP、dCMP及dGMP。包括一核糖作為糖基之例示的天然核糖核苷酸包括ATP、UTP、CTP、GTP、ADP、UDP、CDP、GDP、AMP、UMP、CMP及GMP。
如文中所用，「鹼基」或「核鹼基」係指至少該核苷或核苷酸的核鹼基部分(核苷或核苷酸係包括核糖或去氧核醣變體)，其在某些情況下可能在核苷或核苷酸的糖部分含有另外的修飾。在某些情況下，「鹼基」亦用來代表整個核苷或核苷酸(例如，可能藉由DNA聚合酶將「鹼基」併入DNA中，或藉由RNA聚合酶併入RNA中)。然而，除非文中需要，否則術語「鹼基」並不一定解釋為代表整個核苷或核苷酸。為求清楚起見，在文中所提供的鹼基或核鹼基之化學結構中，僅顯示核苷或核苷酸的鹼基，而省略糖基團及，視需要任何的磷酸殘基。如文中所提供的鹼基或核鹼基之化學結構中所用，波形線係代表連接核苷或核苷酸，其中核苷或核苷酸的糖部分可進一步經修飾。在某些具體實例中，波形線係代表鹼基或核鹼基與糖部份的連接，例如與核苷或核苷酸的五糖連接。在某些具體實例中，此五糖為核糖或去氧核糖。
在某些具體實例中，核鹼基一般為核苷的雜環鹼基部分。核鹼基可為天然生成的，可為修飾的，可不帶有天然鹼基的相似性，及/或可為合成的，例如，藉由有機合成。在特定的具體實例中，核鹼基係包括核苷或核苷酸中的任何原子或原子基團，其中該原子或原子基團能在有或無使用氫鍵下與另外核酸的鹼基相互作用。在特定的具體實例中，非天然的核鹼基並非衍生自天然的核鹼基。應注意，非天然核鹼基並不一定具有鹼性，然而，其可能為了簡單起見而稱為核鹼基。在某些具體實例中，當提及一核鹼基時，「(d)」係指該核鹼基可連接一去氧核糖或核糖，而無括弧的「d」係指該核鹼基係連接去氧核糖。
如文中所用，「核苷」為一包括核鹼基基團和糖基團之化合物。核苷包括，但不限於，天然生成的核苷(如在DNA和RNA所見)、去鹼基核苷、修飾的核苷和具有模擬鹼基及/或糖基之核苷。核苷包括含有任何各種取代的核苷。核苷可為經由核酸鹼基和糖之還原基之間的糖苷鍵聯所形成的糖苷化合物。
化學結構之「類似物」，此術語如文中所用係指保留與母結構之實質上相似性的化學結構，雖然其可能在合成上並不易衍生自母結構。在某些具體實例中，核苷酸類似物為非天然核苷酸。在某些具體實例中，核苷酸類似物為非天然核苷。合成上可衍生自母化學結構的相關化學結構係稱為「衍生物」。
雖然本發明之各種特質可描述於單一具體實例的內文中，但該等特質亦可個別或以任何適合的組合來提供。反之，雖然為了清楚起見本發明可以個別的具體實例之內文描述於文中，但本發明亦可於單一具體實例中施行。IL-2 接合物
細胞激素係包括一細胞訊號傳遞蛋白之家族，例如趨化激素、干擾素、介白素(interleukin)、淋巴介質(lymphokine)、腫瘤壞死因子及在先天性和後天性免疫細胞平衡中扮演一角的其他生長因子。細胞激素係由免疫細胞，例如巨噬細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞和肥大細胞、內皮細胞、纖維母細胞及不同的幹細胞所製造。在某些情形下，細胞激素係調節體液和以細胞為基礎的免疫反應間的平衡。
介白素為調節T和B淋巴細胞、單核細胞群系之細胞、嗜中性白血球、嗜鹼性白血球、嗜酸性白血球、大核細胞及造血細胞之發育和分化的訊號傳遞蛋白。介白素係由幫手CD4 T和B淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、內皮細胞及其他組織駐留細胞所產生。
介白素2(IL-2)為一種第I型多效能細胞激素(pleiotropic type-1 cytokine)，其結構係包括一15.5 kDa四α-螺旋束。IL-2的前驅物形式為長度153個胺基酸殘基，其中前20個胺基酸形成一訊號胜肽及殘基21-153形成此成熟形式。IL-2主要係由CD4+ T細胞在抗原刺激後產生，及較輕程度上由CD8+細胞、天然殺手(NK)細胞及天然殺手T(NKT)細胞、活化的樹突細胞(DC)及肥大細胞產生。經由與特定組合的IL-2受體(IL-2R)亞單元IL-2Rα(亦稱為CD25)、IL-2Rβ(亦稱為CD122)及IL-2Rγ(亦稱為CD132)交互作用發生IL-2訊號傳遞。IL-2與IL-2Rα的交互作用形成具有約10-8
M之Kd
的「低親和力」IL-2受體複合物。IL-2與IL-2Rβ和IL-2Rγ的交互作用形成具有約10-9
M之Kd
的「中度親和力」IL-2受體複合物。IL-2與全部三種亞單元IL-2Rα、IL-2Rβ及IL-2Rγ之交互作用形成具有大於約10-11
M之Kd
的「高親和力」IL-2受體複合物。
在某些情形下，經由「高親和力」IL-2Rαβγ複合物的IL-2訊號傳遞係調整調節性T細胞的活化和增生。調節性T細胞或CD4+
CD25+
Foxp3+
調節性T(Treg)細胞係藉由抑制效應子細胞，例如CD4+
T細胞、CD8+
T細胞、B細胞、NK細胞及NKT細胞，媒介免疫平衡的維護。在某些情形下，Treg細胞係從胸腺產生(tTreg細胞)或從週邊中的純淨T細胞(naïve T cell)所誘發(pTreg細胞)。在某些情況下，Treg細胞被視為週邊耐受性的仲介體(mediator)。實際上，在一研究中，轉移CD25-依賴的週邊CD4+
T細胞在裸小鼠中產生了各種自體免疫疾病，而共轉移CD4+
CD25+
T細胞則抑制自體免疫力的發展(Sakaguchi,et al
., “Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25),”J. Immunol
. 155(3)： 1151-1164 (1995)，該揭示文係以引用的方式併入本文中)。Treg細胞群族的增加下調了效應子T細胞增生並抑制自體免疫力和T細胞抗-腫瘤反應。
經由「中度親和力」IL-2Rβγ複合物之IL-2訊號傳遞係調節CD8+
效應子T(Teff)細胞、NK細胞及NKT細胞的活化和增生。CD8+
Teff細胞(亦稱為細胞毒性T細胞、Tc細胞、細胞毒性T淋巴細胞、CTL、T-殺手細胞、溶細胞T細胞、Tcon或殺手T細胞)為辨識和殺死受損細胞、癌細胞及病原感染細胞之T淋巴細胞。NK和NKT細胞，其與CD8+
Teff細胞、標靶癌細胞和病原感染細胞相類似，為淋巴細胞形式。
在某些情形下，係利用IL-2訊號傳遞來調節T細胞反應及後續用於治療癌症。例如，IL-2係以高劑量形式給藥用以誘發Teff細胞群組的表現供治療癌症。然而，高劑量IL-2進一步導致Treg細胞的共伴刺激，而衰減抗腫瘤免疫反應。高劑量IL-2亦誘發由結合脈管系統中IL-2Rα鏈-表現細胞，包括第2型先天免疫細胞(ILC-2)、嗜酸性白血球和內皮細胞媒介的毒性不良事件。此舉造成了嗜酸性白血球增多症、毛細血管滲漏和血管滲漏症候群(VLS)。
授受性細胞療法(Adoptive cell therapy)使醫師能有效利用病患自身的免疫細胞對抗疾病，例如增生性疾病(例如，癌症)以及感染性疾病。在某些具體實例中，文中係揭示用於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予一有此需要的對象一治療上有效量的(a)IL-2接合物及(b)一或多種另外的藥劑，其中該一或多種另外的藥劑可包括一或多個免疫檢查點抑制劑。
在某些具體實例中，文中所描述的為介白素2(IL-2)接合物。在某些具體實例中，文中所描述的為表 1
中所示的例示多肽。在某些具體實例中，文中所描述的IL-2接合物係舉例說明於表 1
中。表 1.
X
= 包括一非天然胺基酸的位置[AzK] =
N6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸，具有化學文摘社登記號1167421-25-1。[AzK_PEG]
=經由DBCO-媒介的點擊化學與PEG穩定接合之N6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸，形成一包括式(II)或式(III)結構的化合物。例如，若指定，PEG5kD係指端點連接甲氧基基團，具有5千道爾頓之平均分子量的直鏈聚乙二醇鏈。從點擊反應所產生的位置異構物比率為大約1：1或大於1：1。術語「DBCO」係指包括二苯并環辛炔基團之化學基團，例如包括實例2流程1中所示的mPEG-DBCO化合物。甲氧基PEG基團之例示結構係如實例2流程1中所示的mPEG-DBCO。[AzK_L1_PEG]
= 經由DBCO-媒介的點擊化學與PEG穩定接合之N6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸，形成一包括式(IV)或式(V)結構的化合物。例如，若指定，PEG5kD係指端點連接甲氧基基團，具有5千道爾頓之平均分子量的直鏈聚乙二醇鏈。從點擊反應所產生的位置異構物比率為大約1：1或大於1：1。術語「DBCO」係指包括二苯并環辛炔基團之化學基團，例如包括實例2流程1中所示的mPEG-DBCO化合物。
| 名稱 | 序列 | SEQ ID NO ： |
| IL-2 [智人(homo sapiens)] (成熟形式) | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT | 1 |
| IL-2 [智人(homo sapiens)] (前驅物) NCBI登錄號： AAB46883.1 | MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT | 2 |
| 阿地介白素(aldesleukin) | PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 3 |
| IL-2_C125S | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 4 |
| IL-2_P65X | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELK X LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 5 |
| IL-2_E62X | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEE X LKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 6 |
| IL-2_F42X | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLT X KFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 7 |
| IL-2_K43X | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTF X FYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 8 |
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| IL-2_K35[AzK] | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNP[ AzK] LTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT | 14 |
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文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中至少一個IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(I)之結構置換：式(I)； 其中： Z為CH2
而Y為； Y為CH2
而Z為； Z為CH2
而Y為；或 Y為CH2
而Z為； W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指與前面的胺基酸殘基連接的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。
本處及全文，術語「IL-2接合物」係包含所指結構之醫藥上可接受鹽類、溶劑合物和水合物。
本處及全文，式(I)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，式(I)之結構或其任何具體實例或任何變體，係以其醫藥上可接受鹽提供。在某些具體實例中，式(I)之結構或其任何具體實例或任何變體係以其溶劑合物來提供。在某些具體實例中，式(I)之結構或其任何具體實例或任何變體係以其水合物來提供。在某些具體實例中，式(I)之結構或其任何具體實例或任何變體係以游離鹼來提供。
在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中IL-2接合物Y為CH2
而Z為。在文中所述的方法之某些具體實例中，Z為CH2
而Y為。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中Y為CH2
而Z為。本處及全文，Z和Y的具體實例亦包含其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中PEG基團具有選自5kDa、10kDa、20 kDa和30kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中PEG基團具有5kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中PEG基團具有10kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中PEG基團具有15kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此等方法係使用IL-2接合物，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有20kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有25kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有30kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有35kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有40kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有45kDa之平均分子量。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中該PEG基團具有50kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有60kDa之平均分子量。
在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中式(I)結構在IL-2接合物之胺基酸序列中的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(I)結構的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在文中所述的方法之某些具體實例中，在IL-2接合物中式(I)結構在IL-2接合物之胺基酸序列中的位置係選自F41、E61及P64，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(I)結構的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)一IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物。
式(II)；
式(III)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
本處及全文，式(II)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(III)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此[AzK_PEG]為式(II)和式(III)之混合物。
在某些具體實例中，此[AzK_PEG]具有式(II)之結構：式(II)。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一PEG基團具有30kDa之平均分子量。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(II)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此[AzK_PEG]具有式(III)之結構式(III)。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列。在某些具體實例中，W在式(III)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(III)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在文中所揭示的方法之某些具體實例中，係使用一具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列的IL-2接合物，其中[AzK_PEG]係含有一PEG基團，而該PEG基團具有選自下列之平均分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有5kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有10kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有15kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG] 含有一PEG，而該PEG具有20kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有25kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有30kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有35kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有40kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有45kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG] 含有一PEG基團，而該PEG基團具有50kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有60kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：15、16、17、18及19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有選自下列平均分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa及其中PEG基團為一甲氧基PEG基團、直鏈甲氧基PEG基團或支鏈甲氧基PEG基團。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：20-24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。在某些具體實例中，此L-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中此[AzK_PEG5kD]具有式(II)之結構式(II)。 在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_PEG5kD]具有式(III)之結構
式(III)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]具有式(II)或式(III)之結構，或為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
在某些具體實例中，文中所揭示的方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_PEG30kD]具有式(II)之結構：式(II)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_PEG30kD]具有式(III)之結構
式(III)。 在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]為一式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG]的總量，係低於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W為一直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W為直鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W為支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W為甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團為直鏈或支鏈。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團為直鏈。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團為支鏈。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)一IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：20至24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]為一式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG5kD]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG5kD]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG5kD]的總量，係低於1：1。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]為一式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG30kD]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG30kD]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括[AzK_PEG30kD]的總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一文中所述的IL-2接合物，IL-2接合物係包括式(II)之結構或式(III)，或式(II)和式(III)之混合物，其中W為一直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)或式(III)之結構中為一直鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)或式(III)之結構中為一支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)或式(III)之結構中為一甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(II)或式(III)之結構中為一直鏈或支鏈的甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團在式(II)或式(III)之結構中為直鏈。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團在式(II)或式(III)之結構中為支鏈。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]具有式(IV)或式(V)之結構，或式(IV)和式(V)之混合物：
式(IV)；
式(V)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
本處及全文，式(IV)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(V)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG]為一式(IV)和式(V)之混合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG]具有式(IV)之結構：
式(IV).
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：40之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：41之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：43之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：44之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG]具有式(V)之結構式(V)。
在某些具體實例中，此L-2接合物具有SEQ ID NO：40之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：41之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：43之胺基酸序列。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有選自5kDa和30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有選自下列之平均分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有5kDa之平均分子量。 在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]係含有一PEG基團，而該PEG基團具有10kDa之平均分子量。。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有15kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有20kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有25kDa之平均分子量。在某些具之胺基酸序列體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有30kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有35kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有40kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有45kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG] 含有一PEG基團，而該PEG基團具有50kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此 IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有60kDa之平均分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有選自任一SEQ ID NO：40、41、42、43和44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]含有一PEG基團，而該PEG基團具有選自下列之平均分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa且其中PEG基團為一甲氧基PEG基團，直鏈甲氧基PEG基團，或支鏈甲氧基PEG基團。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS: 45-49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或式(IV)和式(V)之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)之結構式(IV)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG5kD]具有式(V)之結構式(V)。 在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS: 50-54之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或為式(IV)和式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)之結構：式(IV)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該[AzK_L1_PEG30kD]具有式(V)之結構式(V)。 在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。在某些具體實例中，此IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)一IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[Azk_L1_PEG]為一式(IV)和式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中，式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中，式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，係低於1：1。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：45至49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]為一式(IV)和式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_ PEG5kD]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG5kD]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG5kD]的總量，係低於1：1。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)一IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：50-54之胺基酸序列，其中[AzK_L1 PEG30kD]為一式(IV)和式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有5kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有10kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有15kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有20kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有25kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有30kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有35kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有40kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有45kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有50kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有55kDa之平均分子量的PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為一具有60kDa之平均分子量的PEG基團。
在某些具體實例中，此方法係使用一文中所述的IL-2接合物，該IL-2結合物係包括式(IV)或式(V)之結構，或式(IV)和式(V)之混合物，其中W為一直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為直鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為支鏈PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中W在式(IV)或式(V)之結構中為直鏈或支鏈的甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團在式(IV)或式(V)之結構中為直鏈。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中該甲氧基PEG基團在式(IV)或式(V)之結構中為支鏈。
有關用於文中所述的方法中之IL-2接合物，甲氧基PEG基團之例示結構係如實例2流程1中mPEG-DBCO結構所示。甲氧基PEG基團之例示結構係如下列mPEG-DBCO結構中所示：
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NOS：3之胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換：
式(VI)
式(VII) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有之結構， X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
本處及全文，式(VI)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(VII)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約to about 350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自下列之整數：2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546。
在某些具體實例中，在IL-2接合物之胺基酸序列中式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置K34。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置F41。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置F43。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置K42。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置E61。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置P64。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置R37。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置T40。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置E67。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置Y44。在某些具體實例中，t在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置V68。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係在位置L71。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VI)結構之量與式(VII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VI)結構之量與式(VII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VI)結構之量與式(VII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中該SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E6且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)的結構中為一整數，使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中n為一整數，使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換，其中n為一整數，使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NOS:3之胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構，或式(VI)和式(VII)之混合物置換：
式(VIII)
式(IX) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有下列結構：, X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指與後面胺基酸殘基連接的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
本處及全文，式(VIII)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(IX)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575的範圍中。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置K34。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置F41。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置F43。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置K42。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置E61。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置P64。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置R37。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置T40。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置E67。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置Y44。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置V68。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物的位置係在位置L71。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VIII)結構之量與式(IX)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VIII)結構之量與式(IX)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(VIII)結構之量與式(IX)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(VIII)和式(IX)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓的範圍內。，
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3 之胺基酸序列，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換：式(X)；式(XI)； 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
本處及全文，式(X)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(XI)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為外消旋，為富含(R)，為富含(S)，為實質上(R)，為實質上(S)，為(R)或為(S)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為外消旋。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為富含(R)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為富含(S)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為實質上(R)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為實質上(S)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為(R)。在某些具體實例中，式(X)和式(XI)內的對掌中心之立體化學為(S)。
在某些具體實例中，n在式(X)和式(XI)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。在某些具體實例中，n在式(X)和式(XI)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(X)、式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置K34。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置F41。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置F43。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置K42。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中t在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置E61。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置P64。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置R37。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置T40。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置E67。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置Y44。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置V68。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物的位置係在位置L71。
在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(X)結構之量與式(XI)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(X)結構之量與式(XI)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中式(X)結構之量與式(XI)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在某些具體實例中，n在式(VI)和式(VII)化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(X)和式(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(X)和式(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，此方法係使用一IL-2接合物，其中n在式(X)和式(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(X)和式(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，在式(X)和式(XI)之結構中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換：式(XII)；式(XIII)； 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
本處及全文，式(XII)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(XIII)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為外消旋，為富含(R)，為富含(S)，為實質上(R)，為實質上(S)，為(R)或為(S)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為外消旋。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為富含(R)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為富含(S)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為實質上(R)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為實質上(S)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為(R)。在某些具體實例中，式(XII)和式(XIII)內的對掌中心之立體化學為(S)。
在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。在某些具體實例中，n在式(XII)和(XIII)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置K34。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置F41。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置F43。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置K42。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置E61。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置係在位置P64。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置R37。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置T40。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置E67。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置Y44。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置V68。在某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物的位置係在位置L71。
在某些具體實例中，式(XII)結構之量與式(XIII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在某些具體實例中，式(XII)結構之量與式(XIII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在某些具體實例中，式(XII)結構之量與式(XIII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，文中所述的為包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在某些具體實例中，n在式(XII)和式(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，n在式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物中為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓的範圍內。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換：式(VIII)；(IX)； 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點。
在某些具體實例中，該IL-2接合物為醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，在IL-2接合物中位於E61的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。在某些具體實例中，n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)或西普利單抗(cemiplimab)。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。
在某些具體實例中，在IL-2接合物中位於P64的胺基酸殘基係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。在某些具體實例中，n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗、納武單抗或西普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物置換：式(VI)；(VII)； 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點。 在某些具體實例中，此IL-2接合物為醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，在IL-2接合物中位於E61的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。在某些具體實例中，n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗、納武單抗或西普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。
在某些具體實例中，在IL-2接合物中位於P64的胺基酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。在某些具體實例中，n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗、納武單抗或西普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之胺基酸序列的IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經與PEG基團共價鍵結的半胱胺酸置換。在某些具體實例中，PEG基團具有選自下列之分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa及60kDa。在某些具體實例中，PEG基團具有5kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有10kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有15kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有20kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有25kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有30kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有35kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有40kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有45kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有50kDa之分子量。在某些具體實例中，PEG基團具有60kDa之分子量。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列且該IL-2接合物中至少一個經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自K34、T36、R37、T40、F41、K42、F43、Y44、E60、E61、E67、K63、P64、V68、L71及Y106。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列且該IL-2接合物中至少一個經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自K34、T40、F41、K42、Y44、E60、E61、E67、K63、P64、V68及L71。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列且該IL-2接合物中至少一個經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的L-2接合物係，其中至少一個非-離胺酸殘基係經包括連接子和水溶性聚合物的離胺酸置換。在某些具體實例中，該水溶性聚合物為PEG基團。
在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括經由不可釋放性鍵聯共價鍵結的PEG基團。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括不可釋放、共價鍵結的PEG基團。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：3，其中在IL-2接合物中非-離胺酸的胺基酸係經離胺酸殘基置換且其中該離胺酸殘基係包括一或多個水溶性聚合物及共價連接子。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於SEQ ID NO：3的K34-Y106區。在某些具體實例中，此離胺酸殘基係位於K34。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於F41。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於F43。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於K42。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於E61。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於P64。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於R37。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於T40。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於E67。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於Y44。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於V68。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於L71。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：3，其中在IL-2接合物中非-離胺酸的胺基酸係經離胺酸殘基置換且其中該離胺酸殘基係包括一或多個水溶性聚合物及共價連接子。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於SEQ ID NO：3之K34-Y106區。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於K34。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於F41。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於F43。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於K42。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於E61。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於P64。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於R37。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於T40。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於E67。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於Y44。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於V68。在某些具體實例中，該離胺酸殘基係位於L71。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一介白素-2(IL-2)變體，其中在IL-2變體的胺基酸序列中非-離胺酸胺基酸係經胺基酸取代，而該胺基酸係包括：(a)離胺酸；(b)共價連接子；和(3)一或多個水溶性聚合物。在某些具體實例中，一或多個水溶性聚合物係包括PEG基團。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換：
式(XIV)；
式(XV)； 其中： m為從0至20之整數； p為從0至20之整數； n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
本處及全文，式(XIV)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(XV)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為外消旋，為富含(R)，為富含(S)，為實質上(R)，為實質上(S)，為(R)或為(S)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為外消旋。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為富含(R)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為富含(S)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為實質上(R)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為實質上(S)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為(R)。在某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)內的對掌中心之立體化學為(S)。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為從0至20，或從1至18，或從1至16，或從1至14，或從1至12，或從1至10，或從1至9，或從1至8，或從1至7，或從1至6，或從1至5，或從1至4，或從1至3，或從1至2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為3。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為4。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m 式(XIV)和式(XV)之化合物中m為5。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為6。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為7。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為8。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為9。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為10。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為11。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為12。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為13。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為14。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為15。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為16。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為17。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為18。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為19。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為20。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為從1至20，或從1至18，或從1至16，或從1至14，或從1至12，或從1至10，或從1至9，或從1至8，或從1至7，或從1至6，或從1至5，或從1至4，或從1至3，或從1至2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在 式(XIV)和式(XV)之化合物中p為3。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為4。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為5。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為6。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為7。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為8。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為9。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為10。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為11。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為12。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為13。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為14。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為15。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為16。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為17。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為18。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為19。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，p在式(XIV)和式(XV)之化合物中為20。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中n在式(XIV)和式(XV)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為從1至6之整數，p為從1至6之整數，及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XIV)和式(XV)之化合物中為從2至6之整數，p為從2至6之整數，及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中、m為從2至4之整數，p為從2至4之整數，及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為1，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為3，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為4，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為5、p為2及nn為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為6，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為7，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為8，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為9，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為10，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為11，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為11，p為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置K34。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置F41。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置F43。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置K42。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置E61。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置P64。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置R37。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置T40。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置E67。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置Y44。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置V68。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XIV)、式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物的位置係在位置L71。
在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XIV)結構之量與式(XV)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XIV)結構之量與式(XV)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XIV)結構之量與式(XV)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61及其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XIV)和式(XV)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓,或約50,000道爾頓。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)之結構或(XV)或(XIV)和(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64，m為從1至6之整數，p為從1至6之整數，及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64及其中m為從1至6之整數，p為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中m為從1至6之整數，p為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XIV)或式(XV)之結構或式(XIV)和式(XV)之混合物置換，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中m為從1至6之整數，p為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XIV)和式(XV)之化合物中，m為2，p為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910。在某之整數些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
文中所描述的為於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換：
式(XVI)；
式(XVII)； 其中： m為從0至20之整數； n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
本處及全文，式(XVI)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。本處及全文，式(XVII)之結構係包含其醫藥上可接受鹽類、溶劑合物或水合物。在某些具體實例中，此IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為外消旋，為富含(R)，為富含(S)，為實質上(R)，為實質上(S)，為(R)或為(S)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為外消旋。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為富含(R)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為富含(S)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為實質上(R)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為實質上(S)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為(R)。在某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)內的對掌中心之立體化學為(S)。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中在式(XVI)和式(XVII)之化合物中m為從1至20，或從1至18，或從1至16，或從1至14，或從1至12，或從1至10，或從1至9，或從1至8，或從1至7，或從1至6，或從1至5，或從1至4，或從1至3，或從1至2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為2。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為3。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為4。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為5。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為6。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為7。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為8。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為9。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為10。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為11。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為12。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為13。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中 m為14。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為15。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為16。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為17。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為18。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為19。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為20。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為從1至6之整數及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為從2至6之整數及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，m在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為從2至4之整數及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為1及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為3及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為4及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為5及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為6及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為7及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為8及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為9及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為10及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為11及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為12及n為選自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136及1137之整數。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中式(I)之結構的位置係參照SEQ ID NO：3中的位置。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置K34。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置F41。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置F43。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置K42。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置E61。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置P64。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置R37。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置T40。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置E67。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置Y44。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置V68。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在SEQ ID NO：3之IL-2接合物的胺基酸序列中，式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物的位置係在位置L71。
在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XVI)結構之量與式(XVII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，為約1：1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XVI)結構之量與式(XVII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，式(XVI)結構之量與式(XVII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
在某些具體實例中，此方法係使用一包括SEQ ID NO：3胺基酸序列的IL-2接合物，其中該至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換，其係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68和L71且其中n為從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，n在式(XVI)和式(XVII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓至約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64，m為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中m為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基為E61且其中m為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中文中所描述的為包括SEQ ID NO：3胺基酸序列之IL-2接合物，其中該IL-2接合物中至少一個經式(XVI)或式(XVII)之結構或式(XVI)和式(XVII)之混合物置換的胺基酸殘基為P64且其中m為從1至6之整數及n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。在文中所述的IL-2接合物之某些具體實例中，在式(XVI)和式(XVII)之化合物中，m為2及n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。在某些具體實例中，n為從約500至約1000。在某些具體實例中，n為從約550至約800。在某些具體實例中，n為約681。
在某些具體實例中，文中所描述的為在一有此需要的對象中治療增生性疾病或症狀之方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)表 1
中所述的細胞激素接合物(例如，IL-2接合物)及(b)一或多種另外的藥劑。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：1-98。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：1-84。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：15-29。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：40-54。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：55-69。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：70-84。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NOs.：85-98。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：1。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：2。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：4。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：5。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：6。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：7。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：8。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：9。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：10。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：11。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：12。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：13。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：14。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：15。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：16。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：17。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：18。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：19。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：20。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：21。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：22。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：23。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：24。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：25。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：26。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：27。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：28。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：24。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：25。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：26。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：27。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：28。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：29。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：30。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：31。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：32。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：33。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：34。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：35。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：36。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：37。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：38。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：39。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：40。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：41。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：42。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：43。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：44。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：45。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：46。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：47。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：48。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：49。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：50。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：51。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：52。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：53。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：54。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：55。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：56。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：57。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：58。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：59。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：60。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：61。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：62。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：63。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：64。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：65。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：66。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：67。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：68。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：69。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：70。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：71。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：72。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：73。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：74。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：75。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：76。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：77。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：78。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：79。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：80。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：81。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：82。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：83。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：84。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：85。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：86。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：87。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：88。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：89。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：90。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：91。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：92。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：93。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：94。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：95。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：96。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：97。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括SEQ ID NO：98。
在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(I)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(II)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(III)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(IV)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(V)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(VI)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(VII)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(VIII)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(IX)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(X)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XI)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XII)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XIII)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XIV)。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XV)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XVI)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XV)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XVI)之結構。在某些具體實例中，此IL-2接合物係包括式(XVII)之結構。
在某些具體實例中，此IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：86、88、90、92、94、96及98之胺基酸序列。在任何這些具體實例中，式(I)之結構或其任何變體，例如式(II)-式(XVII)或其任何變體，係併入包括非天然胺基酸的位置。
在某些具體實例中，文中所述的為在一胺基酸位置經修飾的IL-2接合物。在某些情況下，此修飾係修飾為天然胺基酸。在某些情況下，此修飾係修飾為非天然胺基酸。在某些情況下，文中所述的為包括至少一個非天然胺基酸之經分離和修飾的IL-2多肽。在某些情況下，此IL-2多肽係包括與任一SEQ ID NOS：3至84約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性。在某些情況下，此IL-2多肽係包括與任一SEQ ID NOS：3至84約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性。
在某些情況下，此IL-2接合物進一步係包括另外的突變。在某些情況下，此另外的突變係位在選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107的胺基酸位置。在此等情況下，此胺基酸係與另外的接合基團接合，用以增加血清半衰期、穩定性或其組合。另一種選擇，此胺基酸係在與另外的接合基團結合之前先突變為天然的胺基酸，例如離胺酸、半胱胺酸、組胺酸、精胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸；或突變為非天然胺基酸。
在某些情況下，此PEG基團不限於特定的結構。在某些情況下，此PEG為直鏈(例如，封端(end-capped)，例如，烷氧基PEG或雙功能性PEG)，支鏈或多臂(例如，叉型PEG或連接一多醇核心的PEG)，樹突(或星狀)結構，各自有或無一或多個可降解鍵聯。再者，水溶性聚合物的內部結構可以任何數目的不同重複模式來組建並可由下列組成之群中選出：均聚物、交替共聚物、無規共聚物、嵌段共聚物、交替三聚物、無規三聚物和嵌段三聚物。
PEG典型地將包括許多(OCH2
CH2
)單體[或(CH2
CH2
O)單體，依照PEG的定義而定]。如文中所用，重複單元的數目係以「(OCH2
CH2
)n
」之下標的「n」來定義。因此，(n)的值典型地係落在一或多個下列範圍內：從2至約3400，從約100至約2300，從約100至約2270，從約136至約2050，從約225至約1930，從約450至約1930，從約1200至約1930，從約568至約2727，從約660至約2730，從約795至約2730，從約795至約2730，從約909至約2730及從約1,200至約1,900。就任何特定的聚合物，其中分子量為已知的，其可能藉由將聚合物的總平均分子量除以重複單體的分子量來測定重複單元的數目(亦即「n」)。
在某些情況下，此PEG為一封端聚合物，亦即，具有至少一個端點係封蓋上一相當惰性的基團，例如低碳C1-6
烷氧基基團或羥基基團。當此聚合物為PEG時，例如可使用甲氧基-PEG(通常稱為mPEG)，其為一直鏈形式的PEG，其中聚合物的一端為甲氧基(—OCH3
)基團，而另一端為羥基或其他可視需要經化學修飾的功能性基團。
在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為直鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為支鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為直鏈或支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為一具有從約100道爾頓至約150,000道爾頓之平均分子量的直鏈或支鏈PEG基團。例示的範圍包括，例如在大於5,000道爾頓至約100,000道爾頓範圍內，在從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓之範圍內，在從約10,000道爾頓至約85,000道爾頓之範圍內，在大於10,000道爾頓至約85,000道爾頓之範圍內，在從約20,000道爾頓至約85,000道爾頓之範圍內，在從約53,000道爾頓至約85,000道爾頓之範圍內，在從約25,000道爾頓至約120,000道爾頓之範圍內，在從約29,000道爾頓至約120,000道爾頓之範圍內，在從約35,000道爾頓至約120,000道爾頓及在從約40,000道爾頓至約120,000道爾頓之範圍內的平均分子量。例示的PEG基團之平均分子量包括約100道爾頓，約200道爾頓，約300道爾頓，約400道爾頓，約500道爾頓，約600道爾頓，約700道爾頓，約750道爾頓，約800道爾頓，約900道爾頓，約1,000道爾頓，約1,500道爾頓，約2,000道爾頓，約2,200道爾頓，約2,500道爾頓，約3,000道爾頓，約4,000道爾頓，約4,400道爾頓，約4,500道爾頓，約5,000道爾頓，約5,500道爾頓，約6,000道爾頓，約7,000道爾頓，約7,500道爾頓，約8,000道爾頓，約9,000道爾頓，約10,000道爾頓，約11,000道爾頓，約12,000道爾頓，約13,000道爾頓，約14,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約22,500道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約55,000道爾頓，約60,000道爾頓，約65,000道爾頓，約70,000道爾頓，約75,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約95,000道爾頓及約100,000道爾頓。在某些具體實例中，PEG基團為一具有如上所揭示之平均分子量的直鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為一具有如上所揭示之平均分子量的支鏈PEG基團。在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為一具有定義分子量±10%或15%或20%或25%之直鏈或支鏈PEG基團。例如，包括在本揭示文之範圍內的為包括一具有30,000 Da ± 3000 Da或30,000 Da ± 4,500 Da或30,000 Da ± 6,000 Da分子量之PEG基團的IL-2接合物。
在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為具有從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有下列平均分子量之直鏈或支鏈PEG基團：約5,000道爾頓，約5,500道爾頓，約6,000道爾頓，約7,000道爾頓，約7,500道爾頓，約8,000道爾頓，約9,000道爾頓，約10,000道爾頓，約11,000道爾頓，約12,000道爾頓，約13,000道爾頓，約14,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約22,500道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約55,000道爾頓，約60,000道爾頓，約65,000道爾頓，約70,000道爾頓，約75,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約95,000道爾頓及約100,000道爾頓。在某些具體實例中，PEG基團為一具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓,或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓,或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈或支鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈PEG基團。
在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為具有從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有下列平均分子量之直鏈甲氧基PEG基團：約5,000道爾頓，約5,500道爾頓，約6,000道爾頓，約7,000道爾頓，約7,500道爾頓，約8,000道爾頓，約9,000道爾頓，約10,000道爾頓，約11,000道爾頓，約12,000道爾頓，約13,000道爾頓，約14,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約22,500道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約55,000道爾頓，約60,000道爾頓，約65,000道爾頓，約70,000道爾頓，約75,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約95,000道爾頓及約100,000道爾頓。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓,或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約10,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約20,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約30,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約50,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約60,000道爾頓之平均分子量的直鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為一具有定義分子量± 10%或15%或20%或25%之直鏈甲氧基PEG基團。例如，包括在本揭示文之範圍內的為包括具有30,000 Da ± 3000 Da或30,000 Da ± 4,500 Da或30,000 Da ± 6,000 Da分子量之直鏈甲氧基PEG基團的IL-2接合物。
在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為具有從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有下列平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團：約5,000道爾頓，約5,500道爾頓，約6,000道爾頓，約7,000道爾頓，約7,500道爾頓，約8,000道爾頓，約9,000道爾頓，約10,000道爾頓，約11,000道爾頓，約12,000道爾頓，約13,000道爾頓，約14,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約22,500道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約55,000道爾頓，約60,000道爾頓，約65,000道爾頓，約70,000道爾頓，約75,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約95,000道爾頓及約100,000道爾頓。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓，約10,000道爾頓，約20,000道爾頓，約30,000道爾頓，約50,000道爾頓或約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約5,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約10,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約20,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約30,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約50,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，PEG基團為具有約60,000道爾頓之平均分子量的支鏈甲氧基PEG基團。在某些具體實例中，包括文中所述的IL-2接合物之PEG基團為具有定義分子量±10%或15%或20%或25%的支鏈甲氧基PEG基團。例如，包括在本揭示文之範圍內的為包括具有30,000 Da ± 3000 Da或30,000 Da ± 4,500 Da或30,000 Da ± 6,000 Da分子量之支鏈甲氧基PEG基團的IL-2接合物。
在某些具體實例中，例示的PEG基團包括，但不限於來自Quanta Biodesign, Ltd之直鏈或支鏈的離散PEG(dPEG)；來自Nektar Therapeutics之直鏈、支鏈或叉型PEG；及來自JenKem Technology之Y-型PEG衍生物。接合化學 接合化學
使用各種接合反應來接合併入文中所述之細胞激素多肽中的連接子、接合基團及非天然胺基酸。此等接合反應通常與水性條件為相容的，例如「生物正交」反應。在某些具體實例中，接合反應係由化學試劑，例如催化劑、光或在連接子中發現的反應性化學基團、接合物基團或非天然胺基酸所媒介。在某些具體實例中，接合反應係由酵素所媒介。在某些具體實例中，文中所用的接合反應係描述於Gong, Y., Pan, L. Tett. Lett. 2015, 56, 2123中。在某些具體實例中，文中所用的接合反應係描述於Chen, X.；Wu. Y-W. Org. Biomol. Chem. 2016, 14, 5417中。各個這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在文中所述的某些具體實例中，文中所述的接合反應係包括1,3-偶極環加成反應。在某些具體實例中，此1,3-偶極環加成反應係包括疊氮化物和膦之反應(「點擊」反應)。在某些具體實例中，此接合反應係由銅所催化。在某些具體實例中，文中所述的接合反應產生包括一經由三唑連接的連接子或接合基團之細胞激素多肽。在某些具體實例中，文中所述的接合反應係包括疊氮化物與應變力烯烴(strained olefin)之反應。在某些具體實例中，文中所述的接合反應係包括疊氮化物與應變力炔(strained alkyne)之反應。在某些具體實例中，文中所述的接合反應係包括疊氮化物與環炔，例如DBCO之反應。
在某些文中所述的具體實例中，文中所述的接合反應係包括流程S1中所概述的反應，其中X為在包括一非天然胺基酸之IL-2接合物中的位置，例如在任一SEQ ID NOS：5、6、7、8、9、30、31、32、33及34中的位置。
在某些具體實例中，此接合基團係包括水溶性聚合物。在某些具體實例中，反應性基團係包括炔或疊氮化物。
在某些文中所述的具體實例中，文中所述的接合反應係包括流程S2中所概述的反應，其中X為在包括一非天然胺基酸之IL-2接合物中的位置，例如在任一SEQ ID NOS：5、6、7、8、9、30、31、32、33及34中的位置。
在某些文中所述的具體實例中，文中所述的接合反應係包括流程S3中所概述的反應，其中X為在包括一非天然胺基酸之IL-2接合物中的位置，例如在任一SEQ ID NOS：5、6、7、8、9、30、31、32、33及34中的位置。
在某些文中所述的具體實例中，文中所述的接合反應係包括流程S4中所概述的反應，其中X為在包括一非天然胺基酸之IL-2接合物中的位置，例如任一SEQ ID NOS：5、6、7、8、9、30、31、32、33及34中的位置。流程 S4. 
在某些文中所述的具體實例中，文中所述的接合反應係包括疊氮化物基團間的環加成反應，例如包含在含有一衍生自N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)及應變力環炔，例如衍生自DBCO之胺基酸殘基的蛋白，該DBCO為一包括二苯并環辛炔基團之化學基團。包括DBCO基團的PEG基團可從市面上購得或可藉由本項技術中一般技術者已知的方法來製備。一例示的反應係如流程S5和S6中所示。
接合反應例如文中所述的點擊反應可產生一位置異構物或位置異構物之混合物。在某些情形下，位置異構物的比率為約1：1。在某些情形下，位置異構物的比率為約2：1。在某些情形下，位置異構物的比率為約1.5：1。在某些情形下，位置異構物的比率為約1.2：1。在某些情形下，位置異構物的比率係大於1：1。細胞激素 多肽 製造
在某些情況下，含有天然胺基酸突變或非天然胺基酸突變之文中所述的IL-2接合物，係由重組產生或化學合成。在某些情況下，文中所述的IL-2接合物係由重組產生，例如藉由宿主細胞系統或以無細胞系統產生。在任何文中所述的具體實例或變化中，此胺基酸可為L-胺基酸或D-胺基酸。在某些具體實例中，此胺基酸為L-胺基酸。在其他具體實例中。此胺基酸為D-胺基酸。
在某些情況下，IL-2接合物係經由宿主細胞系統重組所產生。在某些情況下，此宿主細胞為一真核細胞(例如，哺乳動物細胞、昆蟲細胞、酵母菌細胞或植物細胞)或原核細胞(例如，革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌)。在某些情況下，真核宿主細胞為一哺乳動物細胞。在某些情況下，哺乳動物宿主細胞為一穩定的細胞株或已將一感興趣基因物質併入其自我基因體中且在許多世代的細胞分裂後具有表現此基因物質產物之能力的細胞株。在其他的情況下，哺乳動物宿主細胞為一基因轉殖細胞株或未將一感興趣基因物質併入其自我基因體中且在許多世代的細胞分裂後不具有表現此基因物質產物之能力的細胞株。
例示的哺乳動物宿主細胞係包括293T細胞株、293A細胞株、293FT細胞株、293F細胞、293 H細胞、A549細胞、MDCK細胞、CHO DG44細胞、CHO-S細胞、CHO-K1細胞、Expi293F™細胞、Flp-In™ T-REx™ 293細胞株、Flp-In™-293細胞株、Flp-In™-3T3細胞株、Flp-In™-BHK細胞株、Flp-In™-CHO細胞株、Flp-In™-CV-1細胞株、Flp-In™-Jurkat細胞株、FreeStyle™ 293-F細胞、FreeStyle™ CHO-S細胞、GripTite™ 293 MSR細胞株、GS-CHO細胞株、HepaRG™細胞、T-REx™ Jurkat細胞株、Per.C6細胞、T-REx™-293細胞株、T-REx™-CHO細胞株和T-REx™-HeLa細胞株。
在某些具體實例中，真核宿主細胞為一昆蟲宿主細胞。例示的昆蟲宿主細胞包括果蠅(Drosophila
)S2細胞、Sf9細胞、Sf21細胞、High Five™細胞及expresSF+®細胞。
在某些具體實例中，真核宿主細胞為一酵母菌宿主細胞。例示的酵母菌宿主細胞包括畢赤酵母(Pichia pastoris
)(K. phaffii
)酵母菌菌株，例如GS115、KM71H、SMD1168、SMD1168H及X-33及釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae
)酵母菌菌株，例如INVSc1。
在某些具體實例中，真核宿主細胞為一植物宿主細胞。在某些情況下，此植物細胞係包括來自藻類的細胞。例示的植物細胞株包括來自萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)137c，或延長型聚球藻(Synechococcus elongates)PPC 7942之細胞株。
在某些具體實例中，宿主細胞為一原核宿主細胞。例示的原核宿主細胞包括BL21、Mach1™、DH10B™、TOP10、DH5α、DH10Bac™、OmniMax™、MegaX™、DH12S™、INV110、TOP10F’、INVαF、TOP10/P3、ccdB Survival、PIR1、PIR2、Stbl2™、Stbl3™或Stbl4™。
在某些情況下，用於製造文中所述的IL-2多肽之適合的多核酸分子或載體包括任何衍生自真核或原核細胞來源的適合載體。例示的多核酸分子或載體包括來自細菌(例如，大腸桿菌(E. coli
))、昆蟲、酵母菌(例如，畢斥酵母)、藻類或哺乳動物來源之載體。細菌載體包括，例如，舉例而言pACYC177、pASK75、pBAD載體系列、pBADM載體系列、pET載體系列、pETM載體系列、pGEX載體系列、pHAT、pHAT2、pMal-c2、pMal-p2、pQE載體系列、pRSET A、pRSET B、pRSET C、pTrcHis2系列、pZA31-Luc、pZE21-MCS-1、pFLAG ATS、pFLAG CTS、pFLAG MAC、pFLAG Shift-12c、pTAC-MAT-1、pFLAG CTC或pTAC-MAT-2。
昆蟲載體包括，例如pFastBac1、pFastBac DUAL、pFastBac ET、pFastBac HTa、pFastBac HTb、pFastBac HTc、pFastBac M30a、pFastBact M30b、pFastBac、M30c、pVL1392、pVL1393、pVL1393 M10、pVL1393 M11、pVL1393 M12、FLAG載體，例如pPolh-FLAG1或pPolh-MAT 2，或MAT載體，例如pPolh-MAT1或pPolh-MAT2。
酵母菌載體包括，例如Gateway®
pDEST™
14載體、Gateway®
pDEST™
15載體、Gateway®
pDEST™
17載體、Gateway®
pDEST™
24載體、Gateway®
pYES-DEST52載體、pBAD-DEST49 Gateway®
目的載體、pAO815畢斥酵母載體、pFLD1畢斥酵母載體、pGAPZA、B、& C畢斥酵母載體、pPIC3.5K畢斥酵母載體、pPIC6 A、B、& C畢斥酵母載體、pPIC9K畢斥酵母載體、pTEF1/Zeo、pYES2酵母菌載體、pYES2/CT酵母菌載體、pYES2/NT A、B、& C酵母菌載體或pYES3/CT酵母菌載體。
藻類載體包括，例如pChlamy-4載體或MCS載體。
哺乳動物載體包括，例如暫時性表現載體或穩定表現載體。例示的哺乳動物暫時性表現載體包括p3xFLAG-CMV 8、pFLAG-Myc-CMV 19、pFLAG-Myc-CMV 23、pFLAG-CMV 2、pFLAG-CMV 6a,b,c、pFLAG-CMV 5.1、pFLAG-CMV 5a,b,c、p3xFLAG-CMV 7.1、pFLAG-CMV 20、p3xFLAG-Myc-CMV 24、pCMV-FLAG-MAT1、pCMV-FLAG-MAT2、pBICEP-CMV 3或pBICEP-CMV 4。例示的哺乳動物穩定表現載體包括pFLAG-CMV 3、p3xFLAG-CMV 9、p3xFLAG-CMV 13、pFLAG-Myc-CMV 21、p3xFLAG-Myc-CMV 25、pFLAG-CMV 4、p3xFLAG-CMV 10、p3xFLAG-CMV 14、pFLAG-Myc-CMV 22、p3xFLAG-Myc-CMV 26、pBICEP-CMV 1或pBICEP-CMV 2。
在某些情況下，係使用無細胞系統來製造文中所述的細胞激素(例如，IL-2)多肽。在某些情況下，無細胞系統係包括來自一細胞的細胞質及/或核組份之混合物且適合用於活體外核酸合成。在某些情況下，無細胞系統係利用原核細胞組份。在其他的情況下，無細胞系統係利用真核細胞組份。核酸合成係以，例如果蠅細胞、非洲爪蟾卵(Xenopus egg)、古菌(Archaea)或HeLa細胞為基礎的無細胞系統所獲得。例示的無細胞系統包括大腸桿菌S30萃取系統、大腸桿菌T7 S30系統或PURExpress®、XpressCF及XpressCF+。
無細胞轉譯系統多樣地係包括例如質體、mRNA、DNA、tRNAs、合成酶、釋放因子、核糖體、伴護蛋白(chaperone proteins)、轉譯啟動和延長因子、天然及/或非天然胺基酸之組份，及/或其他用於蛋白表現的組份。此等組份視需要係經修飾，用以提升產率，增加合成率，增加蛋白產物保真度，或併入非天然胺基酸。在某些具體實例中，文中所述的細胞激素係使用US 8,778,631；US 2017/0283469；US 2018/0051065；US 2014/0315245；或US 8,778,631中所述的無細胞轉譯系統來合成。在某些具體實例中，無細胞轉譯系統係包括修飾的釋放因子，或甚至從系統中移除一或多個釋放因子。在某些具體實例中，無細胞轉譯系統係包括還原蛋白酶濃縮。在某些具體實例中，無細胞轉譯系統係包括帶有再分配密碼子，用於編碼非天然胺基酸之修飾的tRNA。在某些具體實例中，用於併入非天然胺基酸之文中所述的合成酶係用於無細胞轉譯系統中。在某些具體實例中，tRNA在加入無細胞轉譯系統之前係使用酵素或化學方法預承載非天然胺基。在某些具體實例中，用於無細胞轉譯系統的組份係由修飾的生物體所獲得，例如修飾的細菌、酵母菌或其他生物體。
在某些具體實例中，細胞激素(例如，IL-2)多肽係經由一表現宿主系統或經由無細胞系統，以環狀排列的形式產生。製造包括非天然胺基酸之細胞激素多肽
正交的(orthogonal)或擴展的基因密碼可用於本揭示文中，其中一或多個存在細胞激素(例如，IL-2)多肽之核酸序列中的特定密碼子係經分配用於編碼非天然胺基酸，使得其可藉由使用正交tRNA合成酶/tRNA對在基因上併入細胞激素(例如，IL-2)中。正交tRNA合成酶/tRNA對能使tRNA接上非然胺基酸並能回應此密碼子將非天然胺基酸併入此多肽鏈。
在某些情況下，此密碼子為琥珀(amber)、赭石(ochre)、蛋白石(opal)或四聯體密碼子。在某些情況下，此密碼子係對應將用於攜帶非天然胺基酸之正交tRNA。在某些情況下，此密碼子為琥珀密碼子。在其他的情況下，此密碼子為正交密碼子。
在某些情況下，此密碼子為四聯體密碼子，其可藉由正交的核醣體ribo-Q1解碼。在某些情況下，此四聯體密碼子係如Neumann,et al
., “Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome,”Nature
,464
(7287)：441-444 (2010)中所述，其揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，用於本揭示文的密碼子為再編碼(recoded)密碼子，例如，同義密碼子或稀有密碼子，其可經替代的密碼子置換。在某些情況下，此再編碼密碼子係如Napolitano,et al.,
“Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare arginine codons inEscherichia coli
,”PNAS
,113
(38)：E5588-5597 (2016)中所述。在某些情況下，此再編碼密碼子係如Ostrovet al
., “Design, synthesis及testing toward a 57-codon genome,”Science 353
(6301)：819-822 (2016)中所述。各自這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，係利用非天然核酸將一或多個非天然胺基酸併入細胞激素(例如，IL-2)中。例示的非天然核酸包括，但不限於尿嘧啶-5-基、黃嘌呤-9-基(I)、2-胺基腺嘌呤-9-基、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤之6-甲基和其他烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤之2-丙基和其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基和其他8-經取代腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵基尤其是5-溴、5-三氟甲基和其他5-經取代尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮鳥嘌呤和8-氮腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤和7-去氮腺嘌呤和3-去氮鳥嘌呤和3-去氮腺嘌呤。特定的非天然核酸，例如5-經取代 嘧啶、6-氮嘧啶和N-2經取代嘌呤、N-6經取代嘌呤、O-6經取代嘌呤、2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶，該等增加雙工形成之穩定性，通用核酸、疏水性核酸、混雜核酸、尺寸擴大的核酸、氟化核酸、5-經取代嘧啶、6-氮嘧啶和N-2、N-6及0-6經取代嘌呤包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基、其他烷基之衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤之2-丙基和其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶、5-鹵基胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3
)尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、嘧啶核酸的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基和其他8-經取代腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵基尤其是5-溴、5-三氟甲基、其他5-經取代尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基-腺嘌呤、8-氮鳥嘌呤、8-氮腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤、3-去氮腺嘌呤、三環嘧啶、啡㗁𠯤胞苷([5,4-b][l,4]苯并㗁𠯤-2(3H)-酮)、啡噻𠯤胞苷(1H-嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并噻𠯤-2(3H)-酮)、G-clamp、啡㗁𠯤胞苷(例如，9-(2-胺基乙氧基)-H-嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并㗁𠯤-2(3H)-酮)、咔唑胞苷(2H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-酮)、吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并[3’,2’：4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-酮)、該等其中嘌呤或嘧啶鹼基係經其他雜環置換者、7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶、2-吡啶酮、氮胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、溴尿嘧啶、5-氯胞嘧啶、氯化胞嘧啶、環胞嘧啶、胞嘧啶阿糖胞苷、5-氟胞嘧啶、氟嘧啶、氟尿嘧啶、5,6-二氫胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、羥基脲、碘尿嘧啶、5-硝基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶及5-碘尿嘧啶、2-胺基-腺嘌呤、6-硫-鳥嘌呤、2-硫-胸腺嘧啶、4-硫-胸腺嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶、4-硫-尿嘧啶、N4-乙基胞嘧啶、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮-8-氮鳥嘌呤、5-羥基胞嘧啶、2’-去氧脲苷、2-胺基-2’-去氧腺苷及該等描述於美國專利編號3,687,808；4,845,205；4,910,300；4,948,882；5,093,232；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,681,941；5,750,692；5,763,588；5,830,653和6,005,096；WO 99/62923；Kandimalla et al., (2001) Bioorg. Med. Chem. 9：807-813；The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858- 859；Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613；and Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke and Lebleu Eds., CRC Press, 1993, 273-288。另外的鹼基修飾可參見，例如美國專利第3,687,808號；Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613；and Sanghvi, Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289-302, Crooke and Lebleu ed., CRC Press, 1993。各自這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
包括各種雜環鹼基和各種糖基團(和糖類似物)之非天然核酸在本項技術中為可取得的，且在某些情況下該等核酸係包括一或數個主要五種天然生成核酸之鹼基組份以外的雜環鹼基。例如，在某些情況下，此雜環鹼基包括，尿嘧啶-5-基、胞嘧啶-5-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-8-基、鳥嘌呤-7-基、鳥嘌呤-8-基、4- 胺基吡咯并[2.3-d]嘧啶-5-基、2-胺基-4-側氧吡咯并[2、3-d]嘧啶-5-基、2-胺基-4-側氧吡咯并[2.3-d]嘧啶-3-基基團，其中嘌呤係經由9-位置，嘧啶係經由1-位置，吡咯并嘧啶係經由7-位置及吡唑并嘧啶係經由1-位置，與核酸的糖基團相連接。
在某些具體實例中，核苷酸類似物亦在磷酸基團經修飾。經修飾的磷酸基團包括，但不限於該等在二個核苷酸間的鍵聯帶有修飾並含有，例如硫代磷酸、對掌硫代磷酸、二硫代磷酸、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、甲基和其他烷基膦酸酯，包括3’-伸烷基膦酸酯和對掌膦酸酯、次磷酸酯、磷醯胺酯包括3’-胺基磷醯胺酯和胺基烷基磷醯胺酯、硫酮磷醯胺酯、硫酮烷基膦酸酯、硫酮烷基磷酸三酯及硼磷酸酯。請了解，這些在二個核苷酸之間的磷酸或修飾的磷酸鍵聯係經由3’-5’鍵聯或2’-5’鍵聯且此鍵聯係含有反極性，例如3’-5’至5’-3’或2’-5’至5’-2’。亦包括各種鹽類、混合鹽類和游離酸形式。許多美國專利教導了如何製造和使用含有修飾磷酸之核苷酸並包括，但不限於3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些具體實例中，非天然核酸包括2’,3’-二去氧-2’,3’-二去氫-核苷(PCT/US2002/006460)、5’-經取代DNA和RNA衍生物(PCT/US2011/033961；Saha et al., J, Org Chem., 1995, 60, 788-789；Wang et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1999, 9, 885-890；和Mikhailov et al., Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(1-3), 339-343；Leonid et al., 1995, 14(3-5), 901-905；及Eppacher et al., Helvetica Chimica Acta, 2004, 87, 3004-3020；PCT/JP2000/004720；PCT/JP2003/002342；PCT/JP2004/013216；PCT/JP2005/020435；PCT/JP2006/315479；PCT/JP2006/324484；PCT/JP2009/056718；PCT/JP2010/067560)，或以修飾鹼基所製造的5’-經取代單體之單磷酸鹽(Wang et al., Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids, 2004, 23 (1 & 2), 317-337)。各自這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些具體實例中，非天然核酸係在糖環的5’-位置和2’-位置包括修飾(PCT/US94/02993)，例如經5’-CH2
-取代2’-O-保護的核苷酸(Wu et al., Helvetica Chimica Acta, 2000, 83, 1127-1143和Wu et al., Bioconjugate Chem. 1999, 10, 921-924)。在某些情況下，非天然核酸係包括經製備用於併入寡核苷中之連接醯胺的核苷酸二聚體，其中二聚體中3’連接的核苷(5’至3’)係包括2’-OCH3
和5’-(S)-CH3
(Mesmaeker et al., Synlett, 1997, 1287-1290)。非天然核酸可包括2’-經取代5’-CH2
(或O)修飾的核苷酸(PCT/US92/01020)。非天然核酸可包括5’-亞甲基膦酸酯DNA和RNA單體及二聚體(Bohringer et al., Tet。Lett., 1993, 34, 2723-2726；Collingwood et al., Synlett, 1995, 7, 703-705；and Hutter et al., Helvetica Chimica Acta, 2002, 85, 2777-2806)。非天然核酸可包括具有2’-經取代之5’-膦酸酯單體(US2006/0074035)和其他修飾的5’-膦酸酯單體(WO1997/35869)。非天然核酸可包括5’-修飾的亞甲基膦酸酯單體(EP614907和EP629633)。非天然核酸可包括在5’及/或6’-位置包括一羥基基團之5’或6’-膦酸酯核糖核苷的類似物(Chen et al., Phosphorus, Sulfur and Silicon, 2002, 777, 1783-1786；Jung et al., Bioorg。Med。Chem., 2000, 8, 2501-2509；Gallier et al., Eu. J. Org. Chem., 2007, 925-933；及Hampton et al., J。Med. Chem., 1976, 19(8), 1029-1033)。非天然核酸可包括5’-膦酸酯去氧核糖核苷單體和具有5’-磷酸基團的二聚體(Nawrot et al., Oligonucleotides, 2006, 16(1), 68-82)。非天然核酸可包括具有6’-膦酸酯基團之核苷其中5’或/及6’-位置為未經取代或經硫基-第三丁基基團(SC(CH3
)3
)(及其類似物)；亞甲基胺基基團(CH2
NH2
)(及其類似物)或氰基基團(CN)(及其類似物)取代(Fairhurst et al., Synlett, 2001, 4, 467-472；Kappler et al., J. Med。Chem., 1986, 29, 1030-1038；Kappler et al., J. Med. Chem., 1982, 25, 1179-1184；Vrudhula et al., J. Med。Chem., 1987, 30, 888-894；Hampton et al., J. Med. Chem., 1976, 19, 1371-1377；Geze et al., J. Am. Chem. Soc, 1983, 105(26), 7638-7640；及Hampton et al., J. Am. Chem. Soc, 1973, 95(13), 4404-4414)。各自這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些具體實例中，非天然核酸亦包括糖基團之修飾。在某些情況下，核酸係含有一或多個其中糖基團已經修飾之核苷。此等糖經修飾的核苷可賦予提升的核酸酶穩定性，增加結合親和力或某些其他有利的生物性質。在特定的具體實例中，核酸係包括化學修飾的呋喃核糖環基團。化學修飾的呋喃核糖環之實例包括，不限於，加入取代基基團(包括5’及/或2’取代基基團；二環個原子之橋接形成雙環核酸(BNA)；核糖基環氧原子經S、N(R)或C(R1
)(R2
)(R = H、C1
-C12
烷基或保護基團)置換；及其組合。化學修飾的糖之實例可參見WO2008/101157、US2005/0130923及WO2007/134181，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，修飾的核酸係包括修飾的糖或糖類似物。因此，除了核糖和去氧核糖外，此糖基團可為五碳糖、去氧五碳糖、六碳糖、去氧六碳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖或糖「類似物」環戊基基團。糖可為吡喃基或呋喃基形式。糖基團可為核糖、去氧核糖、阿拉伯糖、或2’-O-烷基核糖的呋喃糖苷，且此糖可與[α]或[β]變旋異構組態之個別的雜環鹼基相連接。糖修飾係包括，但不限2’-烷氧基-RNA類似物、2’-胺基-RNA類似物、2’-氟-DNA及2’-烷氧基-或胺基-RNA/DNA嵌合體。例如，糖修飾可包括2’-O-甲基-尿苷或2’-O-甲基-胞苷。糖修飾係包括經2’-O-烷基-取代的去氧核糖核苷和類2’-O-乙二醇核糖核苷。這些糖或糖類似物及其中此等糖或類似物係連接一雜環鹼基(核酸鹼基)的個別的「核苷」之製備，已為所知。亦可製造糖修飾及與其他修飾組合。
糖基團的修飾係包括核糖和去氧核糖的天然修飾以及非天然修飾。糖修飾包括，但不限於下列在2’位置的修飾：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基和炔基可為經取代或未經取代C1
至C10
烷基或C2
至C10
烯基和炔基。2’糖修飾亦包括但不限於-O[(CH2
)n
O]m
CH3
、-O(CH2
)n
OCH3
、-O(CH2
)n
NH2
、-O(CH2
)n
CH3
、-O(CH2
)n
ONH2
及-O(CH2
)n
ON[(CH2
)n CH3
)]2
，其中n和m為從1至約10。
在2’位置的其他修飾係包括但不限於：C1
至C10
低碳烷基、經取代低碳烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、SH、SCH3
、OCN、Cl、Br、CN、CF3
、OCF3
、SOCH3
、SO2
CH3
、ONO2
、NO2
、N3
、NH2
、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷胺基、經取代矽基、RNA裂解基團、報導子基團、嵌入劑、改善寡核苷酸的藥物動力學性質之基團或改善寡核苷酸的藥效動力學性質之基團及其他具有類似性質的取代基。亦可在糖上的其他位置包括類似的修飾，尤其是3’端核苷酸上糖的3’位置或在2’-5’連接的寡核苷酸和5’端核苷酸的5’位置。修飾的糖亦包括該等在橋接環氧含有修飾者，例如CH2
和S。核苷酸糖類似物亦可具有糖模擬物，例如環丁基基團取代五呋喃糖基糖。有許多的美國專利教示此等修飾糖結構的製備且其係詳細描述一範圍的鹼基修飾，例如美國專利編號4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121, 5,596,091；5,614,617；5,681,941；和5,700,920，其各自係以全文引用的方式併入本文中。
具有修飾糖基團之核酸的實例包括，不限於包括5’-乙烯基、5’-甲基(R或S)、4’-S、2’-F、2’-OCH3
及2’-O(CH2
)2
OCH3
取代基基團之核酸。在2’位置的取代基亦可選自烯丙基、胺基、疊氮基、硫基、O-烯丙基、O-(C1
-C10
烷基)、OCF3
、O(CH2
)2
SCH3
、O(CH2
)2
-O-N(Rm
)(Rn
)及O-CH2
-C(=O)-N(Rm
)(Rn
)，其中各Rm
和Rn
獨立地為H或經取代或未經取代C1
-C10
烷基。
在特定的具體實例中，文中所述的核酸係包括一或多個雙環核酸。在特定的此等具體實例中，雙環核酸係括介於4’和2’核糖基環原子之間的橋聯。在特定的具體實例中，文中所提供的核酸係包括一或多個雙環核酸，其中該橋聯係包括4’至2’雙環核酸。此等4’至2’雙環核酸之實例包括，但不限，下式之一：4’-(CH2
)-O-2’ (LNA)；4’-(CH2
)-S-2’；4’-(CH2
)2
-O-2’ (ENA)；4’-CH(CH3
)-O-2’和4’-CH(CH2
OCH3
)-O-2’及其類似物(參見，美國專利第7,399,845號)；4’-C(CH3
)(CH3
)-O-2’及其類似物，(參見WO2009/006478、WO2008/150729, US2004/0171570、美國專利第7,427,672號，Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 209, 74, 118-134及WO2008/154401)。亦參見，例如：Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456；Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630；Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638；Kumar et al., Bioorg. Med。Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222；Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039；Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379；Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561；Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7；Oram et al., Curr. Opinion Mol。Ther., 2001, 3, 239-243；美國專利編號4,849,513；5,015,733；5,118,800；5,118,802；7,053,207；6,268,490；6,770,748；6,794,499；7,034,133；6,525,191；6,670,461；和7,399,845；國際申請案號WO2004/106356、WO1994/14226、WO2005/021570、WO2007/090071及WO2007/134181；美國專利公開案號US2004/0171570、US2007/0287831及US2008/0039618；美國臨時申請案號60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787及61/099,844；和國際公開案號PCT/US2008/064591、PCT US2008/066154、PCT US2008/068922及PCT/DK98/00393，各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在特定的具體實例中，核酸係包括連接的核酸。核酸可使用任何核酸間的鍵聯相連一起。二種主要種類的核酸間連接基團係以有或無磷原子之存在來定義。代表性含磷的核酸間鍵聯包括，但不限於磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、磷醯胺酯及硫代磷酸(P=S)。代表性不含磷的核酸間連接基團包括，但不限於亞甲基甲基亞胺基(-CH2
-N(CH3
)-O-CH2
-)、硫二酯(-O-C(O)-S-)、硫羰胺甲酸酯(-O-C(O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-Si(H)2-O-)；和N,N*-二甲基肼(-CH2-N(CH3)-N(CH3
))。在特定的具體實例中，具有對掌原子之核酸間鍵聯可製備為外消旋混合物、分離的鏡像異構物，例如，烷基膦酸酯和硫代磷酸。非天然核酸可含有單一修飾。非天然核酸可在一或多個基團內或不同基團之間含有多個修飾。
核酸之骨架磷酸修飾係包括，但不限甲基膦酸酯、硫代磷酸、磷醯胺酯(橋接或非橋接)、磷酸三酯、二硫代磷酸、二硫代磷酸酯及硼烷磷酸酯，且可以任何組合來使用。亦可使用其他非磷酸鍵聯。
在某些具體實例中，骨架修飾(例如，甲基膦酸酯、硫代磷酸、亞磷醯胺和二硫代磷酸核苷酸間鍵聯)可在修飾的核酸上賦予免疫調節活性及/或在活體內提升其穩定性。
在某些情況下，磷衍生物(或修飾的磷酸基團)係連接糖或糖類似物基團並可為單磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷醯胺酯或諸如此類。含有修飾磷酸鍵聯或非磷酸鍵聯之例示的聚核苷酸可參見Peyrottes et al., 1996, Nucleic Acids Res . 24：1841-1848；Chaturvedi et al., 1996, Nucleic Acids Res . 24：2318-2323；和Schultz et al., (1996) Nucleic Acids Res . 24：2966-2973；Matteucci, 1997, “Oligonucleotide analogs：an Overview” in Oligonucleotides as Therapeutic Agents, (Chadwick and Cardew, ed.) John Wiley and Sons, New York, NY；Zon, 1993, “Oligonucleoside Phosphorothioates” in Protocols for Oligonucleotides and analogs, Synthesis and Properties, Humana Press, pp。165-190；Miller et al., 1971, JACS 93：6657-6665；Jager et al., 1988, Biochem。27：7247-7246；Nelson et al., 1997, JOC 62：7278-7287；美國專利第5,453,496號；和Micklefield, 2001, Curr . Med . Chem . 8：1157-1179，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，骨架修飾係包括以替代基團，例如陰離子、中性或陽離子基團取代磷酸二酯鍵聯。此等修飾之實例包括：陰離子核苷間鍵聯；N3’至P5’磷醯胺酯修飾；硼烷磷酸酯DNA；原寡核苷酸；中性核苷間鍵聯，例如甲基膦酸酯；醯胺連接的DNA；亞甲基(甲基亞胺基)鍵聯；甲縮醛和硫代甲縮醛；含有磺醯基基團的骨架；嗎福啉基寡核苷酸；胜肽核酸(PNA)；和帶正電去氧核糖核酸胍(DNG)寡聚物(Micklefield, 2001, Current Medicinal Chemistry 8：1157-1179，其揭示文係以引用的方式併入本文中)。修飾的核酸可包括含有一或多個修飾之嵌合或混合的骨架，例如磷酸酯鍵聯之組合，如磷酸二酯和硫代磷酸酯鍵聯之組合。
磷酸之取代包括，例如短鏈烷基或環烷基核苷間鍵聯，混合的雜原子和烷基或環烷基核苷間鍵聯，或一或多個短鏈雜原子或雜環核苷間鍵聯。這些包括該等具有嗎福啉基鍵聯者(部分係從核苷的糖部分所形成)；矽氧烷骨架；硫化物、亞碸和碸骨架；甲縮醛和硫代甲縮醛骨架；亞甲基甲縮醛和硫代甲縮醛骨架；含烯烴骨架；胺基磺酸骨架；亞甲基亞胺基和亞甲基肼基骨架；磺酸和磺醯胺骨架；醯胺骨架；及其他具有混合N、O、S 和CH2
組份部分的骨架。許多美國專利揭示了如何製造和使用這些類型的磷酸置換並包括，但不限於美國專利編號5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,610,289；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；和5,677,439，各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。亦請了解，在核苷酸的取代中，核苷酸的糖和磷酸基團二者可經，例如醯胺類鍵聯(胺基乙基甘胺酸)(PNA)置換。美國專利編號5,539,082；5,714,331；和5,719,262教導如何製造和使用PNA分子，其各自係以引用的方式併入本文中。亦參見Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500。亦可能將其他類型的分子(接合物)與核苷酸或核苷酸類似物連接，用以促進例如細胞吸收。接合物可化學上與核苷酸或核苷酸類似物連接。此等接合物包括但不限於脂質基團，例如膽固醇基團(Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556)，膽酸(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060)，硫醚，例如，己基-S-三苯基甲硫醇(Manoharan et al., Ann。KY . Acad . Sci., 1992, 660, 306-309；Manoharan et al., Bioorg . Med . Chem。Let., 1993, 3, 2765-2770)，巰基膽固醇(Oberhauser et al., Nucl . Acids Res., 1992, 20, 533-538)，脂肪鏈，例如，十二烷二醇或十一基殘基(Saison-Behmoaras et al., EM5OJ, 1991, 10, 1111-1118；Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330；Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54)，磷脂質，例如，二-十六烷基-外消旋-甘油或l-二-O-十六烷基-外消旋-甘油基-S-H-膦酸三乙銨(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654；Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783)，聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973)，或金剛烷乙酸(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654)，棕櫚基基團(Mishra et al., Biochem。Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237)，或十八烷胺或己基胺基-羰基-氧基膽固醇基團(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937)。許多的美國專利教導此等接合物之製備並包括，但不限美國專利編號4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717, 5,580,731；5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241, 5,391,723；5,416,203, 5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928和5,688,941。各自這些參考文獻之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，非天然核酸進一步係形成非天然鹼基對。於活體內條件下能形成非天然DNA或RNA鹼基對(UBP)之例示的非天然核苷酸包括，但不限於TAT1、dTAT1、5FM、d5FM、TPT3、dTPT3、5SICS、d5SICS、NaM、dNaM、CNMO、dCNMO及其組合。在某些具體實例中，非天然核苷酸係包括：
。 例示的非天然鹼基對包括：(d)TPT3-(d)NaM；(d)5SICS-(d)NaM；(d)CNMO-(d)TAT1；(d)NaM-(d)TAT1；(d)CNMO-(d)TPT3；和(d)5FM-(d)TAT1。
能形成非天然UBP的非天然核苷酸，其可用於製備文中所揭示的IL-2接合物之其他實例可參見Dien et al., J Am Chem Soc., 2018, 140：16115–16123；Feldman et al., J Am Chem Soc, 2017, 139：11427–11433；Ledbetter et al., J Am Chem Soc., 2018, 140：758-765；Dhami et al., Nucleic Acids Res. 2014, 42：10235-10244；Malyshev et al., Nature, 2014, 509：385-388；Betz et al., J Am Chem Soc., 2013, 135：18637-18643；Lavergne et al., J Am Chem Soc. 2013, 135：5408-5419；and Malyshev et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109：12005-12010，各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。在某些具體實例中，非天然核苷酸係包括：
。
在某些具體實例中，可用於製備文中所揭示的IL-2接合物之非天然核苷酸可衍生自下式之化合物
其中R2
係由下列組成之群中選出：氫、烷基、烯基、炔基、甲氧基、甲硫醇、甲硒醇、鹵素、氰基及疊氮基；及 波形線係指連接核糖基或2’-去氧核糖基之鍵，其中核糖基或2’-去氧核糖基的5’-羥基基團為游離形式，其視需要係與單磷酸、二磷酸或三磷酸基團鍵結，或包括在RNA或DNA或在RNA類似物或DNA類似物中。
在某些具體實例中，可用於製備文中所述的IL-2接合物之非天然核苷酸可衍生自下式之化合物
其中： 各X獨立地為碳或氮； R2
，當X為氮時則不存在，而當X為碳時則存在，且獨立地為氫、烷基、烯基、炔基、甲氧基、甲硫醇、甲硒醇(methaneseleno)、鹵素、氰基或疊氮； Y為硫、氧、硒或二級胺； E為氧、硫或硒；及 波形線係指連接核糖基、去氧核糖基或二去氧核糖基基團或其類似物之鍵，其中核糖基、去氧核糖基或二去氧核糖基基團或其類似物為游離形式，與單磷酸、二磷酸、三磷酸、α-硫代磷酸、β-硫代磷酸或γ-硫代磷酸基團連接，或包括在RNA或DNA或在RNA類似物或DNA類似物中。
在某些具體實例中，各X為碳。在某些具體實例中，至少一個X為碳。在某些具體實例中，一個X為碳。在某些具體實例中，至少二個X為碳。在某些具體實例中，二個X為碳。在某些具體實例中，至少一個X為氮。在某些具體實例中，一個X為氮。在某些具體實例中，至少二個X為氮。在某些具體實例中，二個X為氮。
在某些具體實例中，Y為硫。在某些具體實例中，Y為氧。在某些具體實例中，Y為硒。在某些具體實例中，Y為二級胺。
在某些具體實例中，E為硫。在某些具體實例中，E為氧。在某些具體實例中，E為硒。
在某些具體實例中，當X為碳時則R2
存在。在某些具體實例中，當X為氮時則R2
不存在。在某些具體實例中，各R2
，當存在時，為氫。在某些具體實例中，R2
為烷基，例如甲基、乙基或丙基。在某些具體實例中，R2
為烯基，例如-CH2
=CH2
。在某些具體實例中，R2
為炔基，例如乙炔基。在某些具體實例中，R2
為甲氧基。在某些具體實例中，R2
為甲硫醇。在某些具體實例中，R2
為甲硒醇。在某些具體實例中，R2
為鹵素，例如氯、溴或氟。在某些具體實例中，R2
為氰基。在某些具體實例中，R2
為疊氮。
在某些具體實例中，E為硫，Y為硫及各X獨立地為碳或氮。在某些具體實例中，E為硫，Y為硫及各X為碳。
在某些具體實例中，可用於製備文中所揭示的IL-2接合物之非天然核苷酸可衍生自
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
及
。在某些具體實例中，可用於製備文中所揭示的IL-2接合物之非天然核苷酸包括
，
,
，
，
，
，
，
，
，
，
及
或其鹽類。
在某些具體實例中，非天然鹼基對係產生描述於Dumaset al.,
“Designing logical codon reassignment – Expanding the chemistry in biology,”Chemical Science
,6
：50-69 (2015)中之非天然胺基酸，其揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些具體實例中，非天然胺基酸係藉由包括非天然核酸之合成密碼子併入細胞激素(例如，IL多肽)中。在某些情況下，非天然胺基酸係藉由正交、修飾的合成酶/tRNA對併入細胞激素中。此等正交對係包括一能使非天然tRNA接上非然胺基酸的非天然合成酶，同時最小化a)其他內生性胺基酸接上此非天然tRNA及b)此非天然胺基酸接上其他內生性tRNA。此等正交對係包括能接上非天然合成酶的tRNA，同時避免a)其他內生性胺基酸接上內生性合成酶。在某些具體實例中，此等正交對係從各種生物體鑑別出，例如細菌、酵母菌、古菌或人類來源。在某些具體實例中，正交合成酶/tRNA對包括來自單一生物體之組份。在某些具體實例中，正交合成酶/tRNA對係包括來自二種不同生物體之組份。在某些具體實例中，包括修飾前組份之正交合成酶/tRNA對係提升二種不同胺基酸的轉譯。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的丙胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的精胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的天門冬醯胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的天門冬胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的半胱胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的麩醯胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的麩胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的丙胺酸甘胺酸。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的組胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的白胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的異白胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的離胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的甲硫胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的苯丙胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的脯胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的絲胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的蘇胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的色胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的酪胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的纈胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交合成酶為一修飾的磷酸絲胺酸合成酶。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的丙胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的精胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的天門冬醯胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的天門冬胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的半胱胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的麩醯胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的麩胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的丙胺酸甘胺酸。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的組胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的白胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的異白胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的離胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的甲硫胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的苯丙胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的脯胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的絲胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的蘇胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的色胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的酪胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的纈胺酸tRNA。在某些具體實例中，正交的tRNA為一修飾的磷酸胺酸tRNA。
在某些具體實例中，非天然胺基酸係藉由胺基醯基(aaRS或RS)-tRNA合成酶-tRNA對併入細胞激素(例如，IL多肽)中。aaRS-tRNA對之實例包括，但不限詹氏甲烷球菌(Methanococcus jannaschii
)(Mj-Tyr
)aaRS/tRNA對，大腸桿菌TyrRS(Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌(B. stearothermophilus
)tRNACUA
對，大腸桿菌LeuRS(Ec-Leu
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌tRNACUA
對及吡咯離胺醯基-tRNA對。在某些情況下，非天然胺基酸係藉由Mj-Tyr
RS/tRNA對併入細胞激素中(例如，IL多肽)。可藉由Mj-Tyr
RS/tRNA對併入之例示的UAA包括，但不限於對位-經取代苯丙胺酸衍生物，例如對-胺基苯丙胺酸和對-胺基苯丙胺酸；間位-經取代酪胺酸衍生物，例如3-胺基酪胺酸、3-硝基酪胺酸、3,4-二羥基苯丙胺酸及3-碘酪胺酸；苯基硒半胱胺酸；對-硼苯丙胺酸；和鄰-硝基苯甲基酪胺酸。
在某些情況下，非天然胺基酸係藉由Ec-Tyr
/tRNACUA
或Ec-Leu
/tRNACUA
對併入細胞激素(例如，IL多肽)中。可藉由Ec-Tyr
/tRNACUA
或Ec-Leu
/tRNACUA
對併入之例示的UAA包括，但不限於含有二苯甲酮、酮、碘或疊氮化物取代基之苯丙胺酸衍生物；O
-炔丙基酪胺酸；α-胺基辛酸、O-甲基酪胺酸、O-硝基苯甲基半胱胺酸；及3-(萘-2-基胺基)-2-胺基-丙酸。
在某些情況下，非天然胺基酸係藉由吡咯離胺醯基-tRNA對併入細胞激素(例如，IL多肽)中。在某些情況下，此PylRS係得自古細菌，例如，產甲烷的古細菌。在某些情況下，此PylRS係得自巴氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina barkeri
)、馬氏甲烷八疊球菌(Methanosarcina mazei
)或乙酸甲烷八叠球菌(Methanosarcina acetivorans
)。可藉由吡咯離胺醯基-tRNA對併入之例示的UAA包括，但不限醯胺和經胺甲酸取代的離胺酸，例如2-胺基-6-((R)-四氫呋喃-2-甲醯胺基)己酸、N
-ε-D
-丙基-L
-離胺酸及N
-ε-環戊基氧基羰基-L
-離胺酸；N
-ε-丙烯醯基-L
-離胺酸；N
-ε-[(1-(6-硝基苯并[d][1,3]間二氧雜環戊烯基-5-基)乙氧基)羰基]-L
-離胺酸；和N
-ε-(1-甲基環丙-2-烯甲醯胺基)離胺酸。在某些具體實例中，文中所述的IL-2接合物可藉由使用選擇性接上非天然胺基酸，例如N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)之馬氏甲烷八疊球菌tRNA，藉由巴氏甲烷八疊球菌吡咯離胺醯基-tRNA合成酶(Mb
PylRS)來製備。其他的方法已為本項技術之一般技術者所知，例如該等揭示於Zhang et al., Nature 2017, 551(7682)：644-647中的方法，其揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，非天然胺基酸係藉由揭示於US 9,988,619和US 9,938,516中的合成酶併文中所述的細胞激素(例如，IL多肽)中，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
導入文中所揭示的結構或載體之宿主細胞係培養或維養於適合的培養基中，使得tRNA、tRNA合成酶和感興趣蛋白得以產生。此培養基亦包括非天然胺基酸，使得感興趣蛋白得以併入非天然胺基酸。在某些具體實例中，在宿主細胞中亦存在來自細菌、植物或藻類的核苷三磷酸運送蛋白(NTT)。在某些具體實例中，文中所揭示的IL-2接合物係藉由使用表現NTT之宿主細胞所製備。在某些具體實例中，用於宿主細胞中的核苷三磷酸運送蛋白可選自TpNTT1、TpNTT2、TpNTT3、TpNTT4、TpNTT5、TpNTT6、TpNTT7、TpNTT8(假微型海鏈藻(T. pseudonana))、PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5、PtNTT6(三角褐指藻(P. tricornutum))、GsNTT (紅藻(Galdieria sulphuraria))、AtNTT1、AtNTT2 (阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana))、CtNTT1、CtNTT2 (砂眼披衣菌(Chlamydia trachomatis))、PamNTT1、PamNTT2(前衣原體(Protochlamydia amoebophila))、CcNTT(Caedibacter caryophilus)、RpNTT1 (普氏立克次體(Rickettsia prowazekii))。在某些具體實例中，該NTT係選自PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5及PtNTT6。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT1。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT2。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT3。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT4。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT5。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT6。可使用的其他NTT係揭示於Zhang et al.,Nature
2017, 551(7682)：644-647；Malyshev et al,Nature
2014 (509(7500), 385-388；和Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114：1317–1322中，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
正交tRNA合成酶/tRNA對將tRNA接上非天然胺基酸並回應密碼子將非天然胺基酸併入多肽鏈。例示的aaRS-tRNA對包括，但不限詹氏甲烷球菌(Mj-Tyr
)aaRS/tRNA對、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌tRNACUA
對、大腸桿菌LeuRS (Ec-Leu
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌tRNACUA
對及吡咯離胺醯基-tRNA對。根據本揭示文可使用的其他aaRS-tRNA對包括該等衍生自馬氏甲烷八疊球菌之aaRS-tRNA對，該等描述於Feldman et al., J Am Chem Soc., 2018 140：1447–1454；和Zhang et al. Proc Natl Acad Sci USA, 2017, 114：1317–1322中之aaRS-tRNA對，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些具體實例中係提供於一表現NTT和tRNA合成酶之細胞系統中製備文中所揭示的IL-2接合物的方法。在某些文中所述的具體實例中，該NTT係選自PtNTT1、PtNTT2、PtNTT3、PtNTT4、PtNTT5和PtNTT6且該tRNA合成酶係選自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌及馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT1而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT2而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT3而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT3而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr)
/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT4而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT5而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。在某些具體實例中，該NTT為PtNTT6而該tRNA合成酶係衍生自詹氏甲烷球菌、大腸桿菌TyrRS (Ec-Tyr
)/嗜熱脂肪土芽孢桿菌或馬氏甲烷八疊球菌。
在某些具體實例中，文中所揭示的IL-2接合物可於一細胞，例如大腸桿菌中製備，其係包括(a)核苷酸三磷酸運送蛋白Pt
NTT2(包括截斷的變體，其中全長蛋白的前65個胺基酸殘基已刪除)，(b)包括一編碼IL-2變體之雙股寡核苷酸的質體，該變體具有所欲的胺基酸序列且其含有包括第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸之非天然鹼基對，用以提供在非天然胺基酸所欲位置的密碼子，例如併入N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)，(c)編碼衍生自馬氏甲烷八疊球菌之 tRNA的質體，且其係包括非天然核苷酸用以提供辨識的反密碼子(針對IL-2變體之密碼子)取代其天然序列及(d)編碼巴氏甲烷八疊球菌衍生的吡咯離胺醯基-tRNA合成酶(Mb
PylRS)之質體，其可為編碼此tRNA相同的質體或不同的質體。在某些具體實例中，此細胞進一步添加了包括一或多個非天然鹼基之去氧核糖三磷酸。在某些具體實例中，此細胞進一步添加了包括一或多個非天然鹼基之核糖三磷酸。在某些具體實例中，此細胞進一步添加了一或多個非天然胺基酸，例如N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸 (AzK)。在某些具體實例中，此編碼所欲IL-2變體之胺基酸序列的雙股寡核苷酸係在，例如編碼具有SEQ ID NO：3之蛋白序列的位置34、37、40、41、42、43、44、61、64、68或71，或在編碼具有SEQ ID NO：4之蛋白序列的位置35、38、41、42、43、45、62、65、69或72含有一AXC密碼子，其中X為一非天然核苷酸。在某些具體實例中，此細胞進一步係包括一質體，該質體可為蛋白表現質體或編碼來自馬氏甲烷八疊球菌之正交tRNA基因的另外質體，該質體可包括AXC-配對的反密碼子替代其天然序列，其中Y為一互補的非天然核苷酸且可與密碼子中的非天然核苷酸為相同或不相同的。在某些具體實例中，密碼子中的非天然核苷酸為不同的且與反密碼子中的非天然核苷酸為互補的。在某些具體實例中，密碼子中的非天然核苷酸與反密碼子中的非天然核苷酸為相同的。在某些具體實例中，在雙股寡核苷酸中包括非天然鹼基對之第一和第二非天然核苷酸可衍生自,,
,
,
和。在某些具體實例中，在雙股寡核苷酸中包括非天然鹼基對之第一和第二非天然核苷酸可衍生自和。在某些具體實例中，在雙股寡核苷酸中包括非天然鹼基對之第一和第二非天然核苷酸可衍生自和
。在某些具體實例中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸係包括,和或其鹽類。在某些具體實例中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸係包括和或其鹽類。在某些具體實例中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸係包括和
或其鹽類。在某些具體實例中，衍生該包括第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸之雙股寡核苷酸的mRNA可包括一包含衍生自，，
，
及的非天然核苷酸之密碼子。在某些具體實例中，馬氏甲烷八疊球菌tRNA可包括一包含非天然核苷酸的反密碼子，其係辨識包括mRNA之非天然核苷酸的密碼子。馬氏甲烷八疊球菌tRNA中的反密碼子可包括衍生自，，
，
，
及之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸且此tRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸而此tRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自之非天然核苷酸而此tRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此mRNA係包括衍生自
之非天然核苷酸而此tRNA係包括衍生自之非天然核苷酸。宿主細胞係於含有適當營養素之培養基中培養並添加(a)包括一或多個非天然鹼基之去氧核糖核苷的三磷酸鹽，其為編碼包藏此密碼子之細胞激素基因的質體複製所必須，(b)用於轉錄：(i)對應細胞激素之編碼序列並含有包括一或多個非天然鹼基之密碼子的mRNA及(ii)含有包括一或多個非天然鹼基之反密碼子的tRNA，所必須之包括一或多個非天然鹼基之核糖核苷的三磷酸鹽，及(c)併入到感興趣細胞激素之多肽序列的非天然胺基酸。然後將宿主細胞維養於允許感興趣蛋白表現的條件下。
所產生之表現包含AzK的蛋白，可藉由本項技術中一般技術者已知的方法純化及然後可讓其與炔烴，例如包括一具有如文中所揭示的所欲平均分子量之PEG鏈的DBCO，於本項技術中一般技術者已知的條件下反應，得到文中所述的IL-2接合物。其他的方法已為本項技術中一般技術者所知，例如該等揭示於Zhang et al., Nature 2017, 551(7682)：644-647；WO 2015157555；WO 2015021432；WO 2016115168；WO 2017106767；WO 2017223528；WO 2019014262；WO 2019014267；WO 2019028419；和WO2019/028425中之方法，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
所產生之表現包括一或多種非天然胺基酸例如，AzK的蛋白可藉由本項技術中一般技術者已知的方法純化及然後可讓其與炔烴，例如包括一具有如文中所揭示的所欲平均分子量之PEG鏈的DBCO，於本項技術中一般技術者已知的條件下反應，得到文中所述的IL-2接合物。其他的方法已為本項技術中一般技術者所知，例如該等揭示於Zhang et al., Nature 2017, 551(7682)：644-647；WO 2015157555；WO 2015021432；WO 2016115168；WO 2017106767；WO 2017223528；WO 2019014262；WO 2019014267；WO 2019028419；和WO2019/028425之方法，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
另一種選擇，包括非天然胺基酸之細胞激素(例如，IL-2)多肽係藉由將包括tRNA和胺基醯基tRNA合成酶和包括感興趣之核酸結構的文中所述的核酸結構以一或多個框架內正交(停止)密碼子導入宿主細胞中所製備。此宿主細胞係在含有適當營養素之培養基中培養，添加(a)包括一或多個非天然鹼基之去氧核糖核苷的三磷酸鹽，其為編碼包藏此新穎密碼子和反密碼子之細胞激素基因的質體複製所必須，(b)用於轉錄對應(i)含有此密碼子之細胞激素序列及(ii)含有此反密碼子之正交tRNA的mRNA所需之氧核糖核苷的三磷酸鹽，及(c)非天然胺基酸。然後將宿主細胞維養於允許感興趣蛋白表現的條件下。就回應此非天然密碼子，而將非天然胺基酸併入多肽鏈中。例如，將一或多個非天然胺基酸係併入細胞激素(例如，IL-2)多肽中。另一種選擇，二或多個非天然胺基酸可在此蛋白的二或多個位置併入細胞激素(例如，IL-2)多肽。
一旦併入非天然胺基酸之細胞激素(例如，IL-2)多肽在宿主細胞中產生，則可藉由各種本項技術中已知的技術，包括酵素性、化學性及/或滲透性溶解和物理性破壞，將其從其中萃取出。細胞激素(例如，IL-2)多肽可藉由本項技術中已知的標準技術來純化，例如製備性離子交換層析、疏水性層析、親和層析或本項技術之一般技術者已知的其他適合技術。
適合的宿主細胞可包括細菌細胞(例如，大腸桿菌，BL21(DE3))，但最適合的宿主細胞為真核細胞，例如昆蟲細胞(例如，果蠅，如黑腹果蠅(Drosophila melanogaster
))，酵母菌細胞，線蟲(例如秀麗隱桿線蟲(C.elegans
))，小鼠(例如，小家鼠(Mus musculus
))或哺乳動物細胞(例如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)或COS細胞、人類293T細胞、HeLa細胞、NIH 3T3細胞及小鼠紅血球性白血病(MEL)細胞)或人類細胞或其他真核細胞。其他適合的宿主細胞已為熟習本項技術者所熟知。適合地，此宿主細胞為哺乳動物細胞-例如人類細胞或昆蟲細胞。在某些具體實例中，適合的宿主細胞包括大腸桿菌。
一般可用於本發明具體實例中的其他適合宿主細胞為該等在實例章節所提的宿主細胞。載體DNA可經由習知的轉化或轉染技術導入宿主細胞。如文中所用，術語「轉化」和「轉染」希望係指各種用於將外來核酸分子(例如，DNA)導入宿主細胞之熟知的技術，其包括磷酸鈣或氯化鈣共沉澱，DEAE-右璇糖酐-媒介的轉染、脂質轉染(lipofection)或電穿孔。用於轉化或轉染宿主細胞之適合的方法已為本項技術所熟知。
當製造細胞株時，其一般較佳的係製備穩定的細胞株。例如就穩定轉染哺乳動物細胞，已知依照所用的表現載體和轉染技術，僅有小部分的細胞可將外來DNA整合至其基因體中。為了鑑別和選擇這些整合體，一般可將一編碼可選擇標記(例如，對抗生素的抗藥性)的基因與感興趣基因導入宿主細胞中。較佳的可選擇標記包括該等賦予抗藥性之標記，例如G418、潮黴素(hygromycin)或甲胺喋呤(methotrexate)。可將編碼可選擇標記的核酸分子在相同的載體上導入宿主細胞或可在分開的載體上導入。以導入的核酸分子穩定轉染的細胞可藉由藥物選擇來鑑別(例如，具有併入此可選擇標記基因之細胞將存活，而其他的細胞則死亡)。
在一具體實例中，文中所述的結構係整合至宿主細胞的基因體中。一穩定整合的優點為達到個別細胞或選植株之間的一致性。另外的優點為可進行最佳生產者之選擇。因此，所欲的係製造出穩定的細胞株。在另外的具體實例中，係將文中所述的結構轉染至一宿主細胞中。將此等結構轉染至宿主細胞的一優點為蛋白產率可最大化。在一方面，已描述了包括文中所述之核酸結構或載體的細胞。另外的藥劑
在某些具體實例中，文中所述的為於一有此需要的對象中治療增生性疾病或症狀之方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之文中所述的細胞激素接合物(例如，IL-2接合物)。在某些具體實例中，文中所述的為於一有此需要的對象中治療增生性疾病或症狀之方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之文中所述的細胞激素接合物(例如，IL-2接合物)與一或多種另外藥劑之組合。在某些具體實例中，文中所述的為於一有此需要的對象中治療增生性疾病或症狀之方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之文中所述的細胞激素接合物(例如，IL-2接合物)與一或多個免疫檢查點抑制劑之組合。
在某些具體實例中，一或多種另外的藥劑係包括一或多個選自PD-1抑制劑之免疫檢查點抑制劑。在某些具體實例中，一或多種另外的藥劑係包括一或多個PD-1抑制劑。在某些具體實例中，一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗、納武單抗、西普利單抗、派姆單抗(lambrolizumab)、AMP-224、信迪利單抗(sintilimab)、特瑞普利單抗(toripalimab)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、dostarlimab(GSK)、PDR001 (Novartis)、MGA012 (Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(cetrelimab)(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404 (Amgen)、BI-754091 (Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014 (Jounce)、PF-06801591 (Pfizer)及傑諾單抗(genolimzumab)(Apollomics/Genor BioPharma)。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為派姆單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為MP-224。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為信迪利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為特瑞普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為卡瑞利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為替雷利珠單抗。
在某些具體實例中，此一或多種另外的藥劑係包括選自PD-L1抑制劑之免疫檢查點抑制劑。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及度伐魯單抗(durvalumab)、ASC22 (Alphamab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(cosibelimab)(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501(TG Therapeutics)。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為阿替珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為一阿維魯單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為度伐魯單抗。在某些具體實例中，此一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。在某些具體實例中，此一或多個CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗(tremelimumab)、伊匹單抗(ipilimumab)及AGEN-1884 (Agenus)。在某些具體實例中，此一或多個CTLA-4抑制劑為替西木單抗。在某些具體實例中，此一或多種CTLA-4抑制劑為伊匹單抗。
在某些具體實例中，此一或多種另外的藥劑係包括選自CTLA-4抑制劑之免疫檢查點抑制劑。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗和伊匹單抗。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑為替西木單抗。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑為伊匹單抗。治療方法
文中所述的為於一有此需要的對象中治療癌症之方法，該方法係包括投予該對象一有效量之：(a)如文中所述的IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑。在某些具體實例中，文中所述的為於一有此需要的對象中治療癌症之方法，該方法係包括投予該對象一有效量之：(a)如文中所述的IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑。癌症類型
文中所述的為於一對象中治療癌症之方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一有效量之文中所述的IL-2接合物。在某些文中所述的治療癌症方法之具體實例中，該對象中的癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)；頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)、經典何杰金氏淋巴瘤(cHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、泌尿道上皮細胞癌、微小衛星體的不穩定性癌、微小衛星體的穩定性癌症、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌(HCC)、默克細胞癌(MCC)、黑色素瘤、小細胞肺癌(SCLC)、食道癌、食道鱗狀細胞癌(ESCC)、膠質母細胞瘤、間皮瘤、乳癌、三陰性乳癌、前列腺癌、去勢抗性前列腺癌、轉移性去勢抗性前列腺癌、或具有DNA損傷反應(DDR)缺陷之轉移性去勢抗性前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、中度至低度突變負荷之腫瘤、皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)、鱗狀細胞皮膚癌(SCSC)、低至無表現PD-L1之腫瘤、在其原發解剖起源位置以外全身性傳播至肝臟及CNS之腫瘤及瀰漫性大B-細胞淋巴瘤。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中的癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、泌尿道上皮細胞癌、黑色素瘤、肝細胞癌(HCC)、默克細胞癌(MCC)及頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)。在一具體實例中，此癌症為腎細胞癌(RCC)。在一具體實例中，此癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一具體實例中，此癌症為泌尿道上皮細胞癌。在一具體實例中，此癌症為黑色素瘤。在一具體實例中，此癌症為默克細胞癌(MCC)。在一具體實例中，此癌症為頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)。
在某些具體實例中係提供文中所述的方法，其中此一或多種另外的藥劑係包括一或多個免疫檢查點抑制劑。
在某些具體實例中，此一或多個免疫檢查點抑制劑係由下列組成之群中選出：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、OX40促效劑和4-1BB促效劑。
在某些具體實例中，此一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-1抑制劑。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗、納武單抗、西普利單抗、派姆單抗(lambrolizumab)、AMP-224、信迪利單抗(sintilimab)、特瑞普利單抗(toripalimab)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、dostarlimab(GSK)、PDR001(Novartis)、MGA012(Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404(Amgen)。BI-754091(Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014(Jounce)、PF-06801591(Pfizer)及傑諾單抗(Apollomics/Genor BioPharma)。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為派姆單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為一MP-224。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為信迪利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為特瑞普利單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為卡瑞利珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-1抑制劑為替雷利珠單抗。
在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及度伐魯單抗(durvalumab)、ASC22 (Alphamab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501 (TG Therapeutics)。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為阿替珠單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為阿維魯單抗。在某些具體實例中，此一或多個PD-L1抑制劑為度伐魯單抗。在某些具體實例中，此一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。在某些具體實例中，此一或多個CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗、伊匹單抗及AGEN-1884 (Agenus)。在某些具體實例中，此一或多個CTLA-4抑制劑為替西木單抗。在某些具體實例中，此一或多個CTLA-4抑制劑為伊匹單抗。
在某些具體實例中，此一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗和伊匹單抗。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑為替西木單抗。在某些具體實例中，此CTLA-4抑制劑為伊匹單抗。
在某些具體實例中，此癌症為實體腫瘤之形式。在某些具體實例中，此癌症為液體腫瘤之形式。
在某些具體實例中，此IL-2接合物係在投予該對象一或多種另外的藥劑之前，投予該對象。在某些具體實例中，此一或多種另外的藥劑係在投予該對象IL-2接合物之前，投予該對象。在某些具體實例中，此IL-2接合物和此一或多種另外的藥劑係同時投予該對象。
在某些具體實例中，此方法進一步包括除了一或多個免疫檢查點抑制劑之外，亦投予該對象一治療上有效量之一或多個血管內皮細胞生長因子(VEGF)路徑或哺乳動物雷帕黴素標靶(mammalian target of rapamycin)(mTOR)抑制劑。在某些具體實例中，係投予此對象一或多個VEGF路徑抑制劑。在某些具體實例中，此一或多個VEGF路徑抑制劑係由下列組成之群中選出：血管內皮細胞生長因子受體(VEGFR)酪胺酸激酶抑制劑(TKI)和抗-VEGF單株抗體。在某些具體實例中，此一或多個VEGF路徑抑制劑係選自一或多個VEGFR TKI。在某些具體實例中，此一或多個VEGFR TKI係由下列組成之群中選出：卡博替尼(cabozantinib)、阿昔替尼(axitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、索拉非尼(sunitinib)或舒尼替尼(sorafenib)。在某些具體實例中，此一或多個VEGFR TKI為卡博替尼。在某些具體實例中，此一或多個VEGFR TKI為阿昔替尼。在某些具體實例中，此一或多個VEGFR TKI為帕唑帕尼。在某些具體實例中，此一或多個VEGFR TKI為舒尼替尼。在某些具體實例中，其中此一或多個VEGFR TKI為索拉非尼。在某些具體實例中，此一或多個VEGF路徑抑制劑係選自一或多個抗-VEGF單株抗體。在某些具體實例中，此一或多個抗-VEGF單株抗體為貝伐珠單抗(bevacizumab)。
在某些具體實例中，此一或多mTOR係制劑係由下列組成之群中選出：雷帕黴素(rapamycin)、依維莫司(everolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、ridaforolimus及deforolimus。在某些具體實例中，此一或多mTOR抑制劑為雷帕黴素。在某些具體實例中，此一或多mTOR抑制劑為依維莫司。在某些具體實例中，此一或多mTOR抑制劑為替西羅莫司。在某些具體實例中，此一或多mTOR抑制劑為ridaforolimus。在某些具體實例中，此一或多mTOR抑制劑為deforolimus。在某些具體實例中，該對象中的癌症為腎細胞癌(RCC)。
在某些具體實例中，此方法進一步包括除了一或多個免疫檢查點抑制劑之外，亦投予該對象一治療上有效量之一或多個聚-ADP核糖聚合酶(PARP)抑制劑。在某些具體實例中，此PARP抑制劑係由下列組成之群中選出：奧拉帕利(olaparib)、尼拉帕尼(niraparib)、魯卡帕尼(rucaparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)、維利帕尼(veliparib)、CEP-9722及E7016。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為奧拉帕利。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為尼拉帕尼。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為魯卡帕尼。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為他拉唑帕尼。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為維利帕尼。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為CEP-9722。在某些具體實例中，此PARP抑制劑為E7016。
在某些具體實例中，此方法進一步包括除了一或多個免疫檢查點抑制劑之外，亦投予該對象一治療上有效量之非類固醇抗雄性素化合物(NSAA)。在某些具體實例中，此NSAA為氟他胺(flutamide)、尼魯他胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、托米洛胺(topilutamide)、阿帕魯胺(apalutamide)或恩雜魯胺(enzalutamide)。在某些具體實例中，此NSAA為氟他胺。在某些具體實例中，此NSAA為尼魯他胺。在某些具體實例中，此NSAA為比卡魯胺。在某些具體實例中，此NSAA為托米洛胺。在某些具體實例中，此NSAA為阿帕魯胺。在某些具體實例中，此NSAA為恩雜魯胺。
在某些具體實例中，此方法進一步包括除了一或多個免疫檢查點抑制劑之外，亦投予該對象一治療上有效量之一或多個聚-ADP核糖聚合酶(PARP)抑制劑和一非類固醇抗雄性素化合物(NSAA)，其中該PARP抑制劑和NSAA可獨立地選自該等上述之藥劑。
在某些具體實例中，此一或多種另外的藥劑，除了一或多個免疫檢查點抑制劑之外，進一步係包括一或多個化療劑。在某些具體實例中，此一或多個化療劑係包括一或多種以鉑為基底的化療劑。在某些具體實例中，此一或多個化療劑係包括卡鉑和培美曲塞(pemetrexed)。在某些具體實例中，此一或多個化療劑係包括卡鉑和nab-紫杉醇(nab-paclitaxel)。在某些具體實例中，此一或多個化療劑係包括卡鉑和多西紫杉醇(docetaxel)。在某些具體實例中，該對象中的癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。
在某些具體實例中，此一或多種另外的藥劑為一或多個化療劑。在某些具體實例中，此一或多個化療劑係包括一或多個以鉑為基底的化療劑。在某些具體實例中，該對象在投予IL-2接合物和一或多種另外的藥劑之前，經檢測人類乳突病毒(HPV)為陽性。在某些具體實例中，該對象中的癌症為頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)。在某些具體實例中，此方法進一步包括該對象經檢測人類乳突病毒(HPV)為陽性(HPV+)，接著投予此IL-2接合物和一或多種另外的藥劑。投予
在某些具體實例中，在投予此IL-2接合物和一或多種另外的藥劑之後，該對象係經歷一藉由實體腫瘤反應評估標準(iRECIST)所測量之反應。
在某些具體實例中，此反應為一完全反應、部分反應或穩定的疾病。在某些具體實例中，此IL-2接合物係藉由靜脈內、皮下、肌肉內、腦內、鼻內、動脈內、皮內、眼內、骨內輸注、腹膜內或鞘內給藥，投予該對象。在某些具體實例中，此IL-2接合物係藉由靜脈內、皮下或肌肉內給藥，投予一對象。在某些具體實例中，此IL-2接合物係藉由靜脈內給藥，投予一對象。在某些具體實例中，此IL-2接合物係藉由皮下給藥，投予一對象。在某些具體實例中，此IL-2接合物係藉由肌肉內給藥，投予一對象。
在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每週一次，每二週一次，每三週一次，每4週一次，每5週一次，每6週一次，每7週一次，每8週一次，每9週一次，每10週一次，每11週一次，每12週一次，每13週一次，每14週一次，每15週一次，每16週一次，每17週一次，每18週一次，每19週一次，每20週一次，每21週一次，每22週一次，每23週一次，每24週一次，每25週一次，每26週一次，每27週一次或每28週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每二週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每三週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每4週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每5週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每6週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每7週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每8週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每9週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每10週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每11週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每12週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每13週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每14週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每15週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每16週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每17週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每18週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每19週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每20週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每21週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每22週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每23週一次投予一有此需要的對象。在某些具體實例中，一有效量之IL-2接合物係每24週一次投予一有此需要的對象。
在某些具體實例中，對應此量之特定藥物的量係依照例如特定的化合物、疾病嚴重度、需要治療之患者或宿主的特質(例如，體重)之因素而變，但儘管如此例行上係以本項技術中已知的方法，根據該案例特定的相關情況來決定，其包括，例如，所投予的特定藥劑、給藥途徑及所治療的對象或宿主。在某些情況下，所欲的劑量方便地係以單一劑量存在，或為同時(或於一段短時間內)或以適當間隔給藥的分開劑量，例如每天二、三、四或更多個的亞劑量。
在某些具體實例中，此等方法係包括將IL-2接合物以下列範圍內的劑量投予一有此需要的對象：從每公斤之該對象體重1 µg的IL-2接合物至約每公斤之該對象體重200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約2 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約4 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約6 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約8 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約10 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約12 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約14 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約16 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約18 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約20 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約22 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約24 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約26 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約28 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約32 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約34 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約36 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約40 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約45 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約50 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約55 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約60 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約65 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約70 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約75 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約80 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約85 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約90 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約95 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約100 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約110 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約120 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約130 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約140 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約150 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約160 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約170 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約180 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物，或從每公斤之該對象體重約190 µg的IL-2接合物至每公斤之該對象體重約200 µg的IL-2接合物。前述範圍僅為建議性，因為就個別治療療法而言變量大且這些建議值之可觀的偏差並非不常見。此等劑量係依照許多變數而變，不限於所用的化合物活性、所治療的疾病或症狀、給藥模式、個別對象之需求、所治療之疾病或症狀的嚴重度及執業醫師的判斷。在某些具體實例中，此等療法之毒性和治療效用係藉由標準醫藥程序以細胞培養或實驗動物來測定，其包括，但不限於測定LD50(50%群族之致死劑量)和ED50 (50%群族之治療上有效劑量)。毒性和治療效用之間的劑量比率為治療指數且係以LD50和ED50之間的比率來表示。展現高治療指數的化合物為較佳的。使用從細胞培養所得到的數據調配一範圍內的劑量供用於人類。此等化合物的劑量較佳地係在包括具有最小毒性之ED50的循環濃度範圍內。依照所用的劑型和所用的給藥途徑，劑量係在此範圍內變化。
在某些具體實例中，此等方法係包括將IL-2接合物以下列劑量投予一有此需要的對象：每公斤之該對象體重約1 µg的IL-2接合物或每公斤之該對象體重約2 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約4 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約6 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約8 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約10 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約12 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約14 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約16 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約18 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約20 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約22 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約24 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約26 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約28 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約30 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約32 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約34 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約36 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約38 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約40 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約42 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約44 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約46 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約48 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約50 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約55 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約60 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約65 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約70 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約75 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約80 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約85 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約90 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約95 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約100 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約110 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約120 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約130 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約140 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約150 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約160 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約170 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約180 µg的IL-2接合物，每公斤之該對象體重約190 µg的IL-2接合物或約200 µg的IL-2接合物。前述範圍僅為建議性，因為就個別治療療法而言變量大且這些建議值之可觀的偏差並非不常見。此等劑量係依照許多變數而變，不限於所用的化合物活性、所治療的疾病或症狀、給藥模式、個別對象之需求、所治療之疾病或症狀的嚴重度及執業醫師的判斷。在某些具體實例中，此等療法之毒性和治療效用係藉由標準醫藥程序以細胞培養或實驗動物來測定，其包括，但不限於測定LD50(50%群族之致死劑量)和ED50(50%群族之治療上有效劑量)。毒性和治療效用之間的劑量比率為治療指數且係以LD50和ED50之間的比率來表示。展現高治療指數的化合物為較佳的。使用從細胞培養所得到的數據調配一範圍內的劑量供用於人類。此等化合物的劑量較佳地係在包括具有最小毒性之ED50的循環濃度範圍內。依照所用的劑型和所用的給藥途徑，劑量係在此範圍內變化。
在某些具體實例中，另外的藥劑可以一劑量並使用經測定該另外的藥劑為安全及有效之劑量療法來給藥。例如，帕博利珠單抗可根據文中所述的方法以每3週約200 mg之劑量投予一有此需要的對象。在另外的實例中，納武單抗可根據文中所述的方法以每2週約240 mg或每4週約480 mg之劑量投予一有此需要的對象。在另外的實例中，西普利單抗可根據文中所述的方法以每3週約350 mg劑量的靜脈內輸液於30分鐘期間投予一有此需要的對象。在另外的實例中，阿替珠單抗可根據文中所述的方法以每2週840 mg，每3週1200 mg或每4週1680 mg之劑量投予一對象。在另外的實例中，阿維魯單抗可根據文中所述的方法以之每2週800 mg之劑量投予一對象。在另外的實例中，度伐魯單抗可根據文中所述的方法以每2週每公斤之該對象體重10 mg之劑量投予一對象。在另外的實例中，依匹單抗可根據文中所述的方法以每3週每公斤之該對象體重約3 mg之劑量於90分鐘期間總計4個劑量，或每公斤之該對象體重約10 mg於90分鐘期間總計4個劑量，接著每公斤之該對象體重10 mg進行至高3年，投予一對象供治療黑色素瘤。對於晚期腎細胞癌，依匹單抗可根據文中所述的方法以每公斤之該對象體重1 mg之劑量於30分鐘期間給藥。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的重症照護設施或熟習心肺或重症加護醫療之專家。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的重症照護設施或熟習心肺或重症加護醫療之專家。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的重症照護設施。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的熟習心肺或重症加護醫療之專家。投予效果
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血管滲漏症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級、3級或4級血管滲漏症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級血管滲漏症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成3級級血管滲漏症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成4級血管滲漏症候群。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血管緊張性喪失。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血漿蛋白外滲和體液進入血管外空隙。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成低血壓和降低器官灌注。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成嗜中性白血球功能障礙。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成趨化性降低。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物與該對象中播散性感染風險增加無關。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，此播散性感染為敗血症或細菌性心內膜炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，此播散性感染為敗血症。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，此播散性感染為細菌性心內膜炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象在投予IL-2接合物之前係進行先前存在的細菌性感染之治療。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象在投予IL-2接合物之前係以選自苯唑青黴素(oxacillin)、萘夫西林(nafcillin)、環丙沙星(ciprofloxacin)及萬古黴素(vancomycin)之抗細菌劑治療。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會使該對象中先前存在的或初期表現的自體免疫疾病或發炎病症惡化。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會使該對象中先前存在的或初期表現的自體免疫疾病惡化。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在使該對象中先前存在的或初期表現的發炎病症惡化。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症係選自克隆氏症、硬皮病、甲狀腺炎、發炎性關節炎、糖尿病、眼-延髓重肌無力症、急進性IgA腎小球腎炎、膽囊炎、腦血管炎、史蒂芬強森症候群(Stevens-Johnson syndrome)和大皰性類天皰瘡。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為克隆氏症。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為硬皮病。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為甲狀腺炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為發炎性關節炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為糖尿病。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為眼-延髓重肌無力症。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為急進性IgA腎小球腎炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為膽囊炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為腦血管炎。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為史蒂芬強森症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為大皰性類天皰瘡。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成精神狀態改變、說話困難、皮質盲(cortical blindness)、四肢或步態共濟失調、幻覺、激動、感覺遲鈍或昏迷。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成痙攣。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物對於具有已知痙攣病症之對象不會有禁忌。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成毛細血管滲透症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級、3級或4級的毛細血管滲透症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級的毛細血管滲透症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成3級或的毛細血管滲透症候群。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成4級的毛細血管滲透症候群。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成平均動脈血壓下降。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成低血壓。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在使對象的收縮壓低於90 mm Hg或與基線收縮壓相比下降 20 mm Hg。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成貧血。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成腎功能或肝功能障礙。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成嗜酸性白血球增多。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 500個。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 500個至每μL 1500個。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 1500個至每μL 5000個。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 5000個。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行精神性藥物之療法的對象不會有禁忌。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行腎毒性、骨髓毒性、心毒性或肝毒性藥物之療法的對象不會有禁忌。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行胺基糖苷、細胞毒性化療、多柔比星(doxorubicin)、甲胺喋呤或天門冬醯胺酸酶之療法的對象不會有禁忌。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在接受含有抗腫瘤劑之組合療法的對象不會有禁忌。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，此抗腫瘤劑係選自達卡巴仁(dacarbazine)、順鉑(cis-platinum)、泰莫西芬(tamoxifen)和干擾素-α。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成一或多件4級不良事件。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該一或多件4級不良事件係選自體溫過低；休克；心跳過慢；室性期外收縮；心肌缺氧；昏厥；出血；心房節律不整；靜脈炎；第二型房室傳導阻滯；心內膜炎；心包膜積水；外周性壞疽；栓塞；冠狀動脈疾病；口腔炎；噁心和嘔吐；肝功能檢測異常；胃腸道出血；吐血；血痢；腸胃病症；腸穿孔；胰臟炎；貧血；白血球減少；白血球增多症；低鈣血症；鹼性磷酸酶增加；血液尿素氮(BUN)增加；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)增加；呼吸性酸中毒；嗜睡；激動；神經病變；偏執反應.；抽搐；大發作抽搐；譫妄；氣喘、肺水腫；過度換氣；缺氧；咳血；換氣不足；氣胸；瞳孔散大；瞳孔病症；腎功能異常；腎衰竭；和急性腎小管壞死。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在大於1%之該對象中造成一或多件4級不良事件。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，該一或多種4級不良事件係選自體溫過低；休克；心跳過慢；室性期外收縮；心肌缺氧；昏厥；出血；心房節律不整；靜脈炎；第二型房室傳導阻滯；心內膜炎；心包膜積水；外周性壞疽；栓塞；冠狀動脈疾病；口腔炎；噁心和嘔吐；肝功能檢測異常；胃腸道出血；吐血；血痢；腸胃病症；腸穿孔；胰臟炎；貧血；白血球減少；白血球增多症；低鈣血症；鹼性磷酸酶增加；血液尿素氮(BUN)增加；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)增加；呼吸性酸中毒；嗜睡；激動；神經病變；偏執反應.；抽搐；大發作抽搐；譫妄；氣喘、肺水腫；過度換氣；缺氧；咳血；換氣不足；氣胸；瞳孔散大；瞳孔病症；腎功能異常；腎衰竭；和急性腎小管壞死。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在大於1%之該對象中造成一或多件不良事件，其中該一或多件不良事件係選自十二指腸潰瘍；腸壞死；心肌炎；室上性心搏過速；視神經炎後續發的永久性或暫時性失明；暫時性腦缺血；腦膜炎；腦水腫；心包膜炎；過敏性間質性腎炎；和氣管食道瘻管。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在大於1%之該對象中造成一或多件不良事件，其中該一或多件不良事件係選自惡性高熱；心臟停搏；心肌梗塞；肺動脈栓塞；中風；腸穿孔；肝或腎衰竭；嚴重憂鬱導致自殺；肺水腫；呼吸停止；呼吸衰竭。
在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象IL-2接合物，在無增加該對象中週邊CD4+調節T細胞下，增加了該對象中週邊CD8+ T和NK細胞之數目。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象IL-2接合物，在無增加該對象中週邊嗜酸性白血球數目下，增加了該對象中週邊CD8+ T和NK細胞之數目。在文中所述的治療癌症方法之某些具體實例中，投予該對象IL-2接合物，在無增加該對象中腫瘤內CD4+調節T細胞數目下，增加了該對象中腫瘤內CD8+ T和NK細胞之數目。醫藥組成物和調配物
文中所述的為包括一有效量之文中所述的IL-2接合物和一或多種醫藥上可接受賦形劑之醫藥組成物。
在某些具體實例中，包括文中所述的細胞激素接合物(例如，IL-2接合物)之醫藥組成物和調配物係藉由多種給藥途徑投予一對象，其係包括，但不限於非經腸、口服、頰內、直腸、舌下或經皮給藥途徑。在某些情況下，非經腸給藥係包括靜脈內、皮下、肌肉內、腦內、鼻內、動脈內、關節內、皮內、眼內、骨內輸注、腹膜內或鞘內給藥。在某些情況下，此醫藥組成物係經調配供局部給藥。在其他的情形下，此醫藥組成物係經調配供全身給藥。在某些具體實例中，文中所述的醫藥組成物和調配物係藉由靜脈內、皮下和肌肉內給藥來投予。在某些具體實例中，文中所述的醫藥組成物和調配物係藉由靜脈內給藥投予一對象。在某些具體實例中，文中所述的醫藥組成物和調配物係藉由給藥投予一對象。在某些具體實例中，文中所述的醫藥組成物和調配物係藉由肌肉內給藥投予一對象。
在某些具體實例中，此醫藥調配物係包括，但不限水性液體分散液、自乳化分散液、固體溶液、脂質體分散液、氣霧、固體劑型、散劑、立即釋放調配物、控制釋放調配物、快速熔化調配物、錠劑、膠囊、藥片、延遲釋放調配物、延長釋放調配物、脈衝式釋放調配物、多顆粒調配物(例如，奈粒子調配物)及混合的立即和控制釋放調配物。
在某些具體實例中，醫藥調配物係包括以與文中所揭示的組成物之相容性及所欲的劑型之釋放樣態性質為基礎所選擇之載劑或載劑物質。例示的載劑物質包括，例如，黏合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、界面活性劑、增溶劑、安定劑、潤滑劑、濕潤劑、稀釋劑及諸如此類。醫藥上相容的載劑物質包括，但不限阿拉伯膠、明膠、膠體二氧化矽、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、麥芽糊精、甘油、矽酸鎂、聚乙烯吡咯酮(PVP)、膽固醇、膽固醇酯、酪蛋白鈉、大豆卵磷脂、牛磺膽酸、磷脂醯膽鹼、氯化鈉、磷酸三鈣、磷酸氫二鉀、纖維素和纖維素接合物、糖類、硬脂醯乳醯乳酸鈉、鹿角菜膠、單甘油酯、二甘油酯、預明膠化澱粉及諸如此類。參見，例如，Remington ： The Science and Practice of Pharmacy
, Nineteenth Ed (Easton, Pa.：Mack Publishing Company, 1995), Hoover, John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences
, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975, Liberman, H.A。and Lachman, L., Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms
, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980及Pharmaceutical Dosage Form
sand Drug Delivery Systems
, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)，其各自之揭示文係以引用的方式併入本文中。
在某些情況下，此醫藥組成物係調配成免疫脂質體，其係包括多數個直接或間接與脂質體的脂質雙層鍵結之IL-2接合物。例示的脂質包括，但不限於脂肪酸；磷脂；固醇類，例如膽固醇；鞘脂，例如神經鞘磷脂(sphingomyelin)；鞘糖脂(glycosphingolipid)，例如神經節甘脂(ganglioside)、紅細胞糖苷脂(globocide)及腦脂醣苷(cerebroside)；界面活性劑胺類，例如硬脂基、油基及亞麻基(linoleyl)胺。在某些情形下，此脂質係包括陽離子脂質。在某些情形下，此脂質係包括磷脂。例示的磷脂包括，但不限，磷脂酸(phosphatidic acid)(「PA」)、磷脂醯膽鹼(phosphatidylcholine)(「PC」)、磷脂醯甘油(phosphatidylglycerol)(「PG」)、磷脂醯乙醇胺(phophatidylethanolamine)(「PE」)、磷脂醯肌醇(phosphatidylinositol)(「PI」)及磷脂醯絲胺酸(phosphatidylserine)(「PS」)、神經鞘磷脂(包括腦神經鞘磷脂)、卵磷脂(lecithin)、溶血卵磷脂(lysolecithin)、溶血磷脂醯乙醇胺(lysophosphatidylethanolamine)、腦脂醣苷、二花生醯基磷脂醯膽鹼(diarachidoylphosphatidylcholine)(「DAPC」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯膽鹼(「DDPC」)、二反油醯基磷脂醯膽鹼(「DEPC」)、二月桂醯基磷脂醯膽鹼(「DLPC」)、二亞麻醯基磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(「DMPC」)、二油醯基磷脂醯膽鹼(「DOPC」)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(「DPPC」)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(「DSPC」)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-磷脂醯膽鹼(「POPC」)、二花生醯基磷脂醯甘油(「DAPG」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯甘油(「DDPG」)、二反油醯基磷脂醯甘油(「DEPG」)、二月桂醯基磷脂醯甘油(「DLPG」)、二亞麻醯基磷脂醯甘油、二肉豆蔻醯基磷脂醯甘油(「DMPG」)、二油醯基磷脂醯甘油(「DOPG」)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(「DPPG」)、二硬脂醯基磷脂醯甘油(「DSPG」)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-磷脂醯甘油(「POPG」)、二花生醯基磷脂醯乙醇胺(「DAPE」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯乙醇胺(「DDPE」)、二反油醯基磷脂醯乙醇胺(「DEPE」)、二月桂醯基磷脂醯乙醇胺(「DLPE」)、二亞麻醯基磷脂醯乙醇胺、二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(「DMPE」)、二油醯基磷脂醯乙醇胺(「DOPE」)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(「DPPE」)、二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(「DSPE」)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-磷脂醯乙醇胺(「POPE」)、二花生醯基磷脂醯肌醇(「DAPI」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯肌醇(「DDPI」)、二反油醯基磷脂醯肌醇(「DEPI」)、二月桂醯基磷脂醯肌醇(「DLPI」)、二亞麻醯基磷脂醯肌醇、二肉豆蔻醯基磷脂醯肌醇(「DMPI」)、二油醯基磷脂醯肌醇(「DOPI」)、二棕櫚醯基磷脂醯肌醇(「DPPI」)、二硬脂醯基磷脂醯肌醇(「DSPI」)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-磷脂醯肌醇(「POPI」)、二花生醯基磷脂醯絲胺酸(「DAPS」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯絲胺酸(「DDPS」)、二反油醯基磷脂醯絲胺酸(「DEPS」)、二月桂醯基磷脂醯絲胺酸(「DLPS」)、二亞麻醯基磷脂醯絲胺酸、二肉豆蔻醯基磷脂醯絲胺酸(「DMPS」)、二油醯基磷脂醯絲胺酸(「DOPS」)、二棕櫚醯基磷脂醯絲胺酸(「DPPS」)、二硬脂醯基磷脂醯絲胺酸(「DSPS」)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-磷脂醯絲胺酸(「POPS」)、二花生醯基神經鞘磷脂、二癸醯基神經鞘磷脂、二反油醯基神經鞘磷脂、二月桂醯基神經鞘磷脂、二亞麻醯基神經鞘磷脂、二肉豆蔻醯基神經鞘磷脂、神經鞘磷脂、二油醯基神經鞘磷脂、二棕櫚醯基神經鞘磷脂、二硬脂醯基神經鞘磷脂及1-棕櫚醯基-2-油醯基-神經鞘磷脂。
在某些情況下，醫藥調配物進一步係包括pH調節劑或緩衝劑，其係包括酸類，例如乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和氫氯酸，鹼類，例如氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸鈉和叁-羥甲基胺基甲烷，以及緩衝劑，例如檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉和氯化銨。此等酸類、鹼類和緩衝劑係以將組成物之pH維持在一可接受範圍的需求量納入。
在某些情況下，醫藥調配物係包括一或多種將組成物之滲透壓帶至一可接受範圍所需之量的鹽類。此等鹽類包括該等具有鈉、鉀或銨陽離子和氯、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、碳酸氫根、硫酸根、硫代硫酸根或重亞硫酸根陰離子，適合的鹽類包括氯化鈉、氯化鉀、硫代硫酸鈉、硫酸氫鈉和硫酸銨。
在某些具體實例中，醫藥調配物係包括，但不限糖類，如海藻糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖，或鹽類如磷酸鉀、檸檬酸鈉、硫酸銨及/或其他試劑，例如用於增加溶解度和活體內多肽安定性之肝素。
在某些情形下，醫藥調配物進一步係包括用於溶解化合物的稀釋劑，因為其可提供更穩定的環境。溶於緩衝溶液中的鹽類(亦可提供pH控制和維持)在本項技術中係用作為稀釋劑，其係包括，但不限於，磷酸鹽緩衝溶液。在特定的情形下，稀釋劑係增加組成物的體積，用以幫助壓製或創造足夠的體積供均勻混合進行膠囊充填。此等化合物可包括例如，乳糖、澱粉、甘露醇、山梨醇、右旋糖、微晶纖維素例如Avicel®
、磷酸氫鈣、磷酸氫二鈣水合物、磷酸三鈣、磷酸鈣、無水乳糖、噴霧乾燥乳糖、預明膠化澱粉、可壓縮糖例如Di-Pac®
(Amstar)、甘露醇、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸鹽、蔗糖為基底稀釋劑、糖粉、硫酸氫鈣單水合物、硫酸鈣二水合物、乳酸鈣三水合物、葡聚糖(dextrate)、水解穀類固形物、直鏈澱粉、粉狀纖維素、碳酸鈣、甘油、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、肌醇、膨潤土及其諸如此類。在某些具體實例中，文中所述的IL-2接合物可用於包括組胺酸、山梨醇和聚山梨醇酯80之醫藥調配物或任何可提供一穩定調配物的組合中並且可投予有此需要的對象。在一具體實例中，文中所述的IL-2接合物可以完成的藥物產品存在適合的容器，例如小瓶中，如下：IL-2接合物(約2 mg至約10 mg)；L-組胺酸(約0.5 mg至約2 mg)；L-組胺酸鹽酸鹽(約1 mg至約2 mg)；山梨醇(約20 mg至約80 mg)；和聚山梨醇酯80(約0.1 mg至約0.2 mg)；與一足量的注射用水，提供一適合用於所揭示方法中的液體調配物。
在某些情況下，醫藥調配物係包括崩解劑用以幫助破壞或崩解物質。術語「崩解」係包括當與胃腸液接觸時溶解和分散劑型。崩解劑的實例包括澱粉，例如，天然的澱粉，如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉，預明膠化澱粉，例如National 1551或Amijel®
，或甘醇酸澱粉鈉，例如Promogel®
或Explotab®
，纖維素，例如木材產物、甲基晶體纖維素，例如，Avicel®
、Avicel®
PH101、Avicel®
PH102、Avicel®
PH105、Elcema®
P100、Emcocel®
、Vivacel®
、Ming Tia®
及Solka-Floc®
、甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素(croscarmellose)或交聯纖維素，例如交聯羧甲基纖維素鈉(Ac-Di-Sol®
)、交聯羧甲基纖維素或交聯羧甲基纖維素、交聯澱粉，例如甘醇酸澱粉鈉、交聯聚合物，例如聚維酮(crospovidone)、交聯聚乙烯吡咯酮，海藻酸鹽，例如海藻酸或海藻酸之鹽，如海藻酸鈉，黏土，例如Veegum®
HV(矽酸鎂鋁)、膠，例如瓊脂、關華豆膠、刺槐豆膠、卡拉膠(Karaya)、果膠或鹿角菜膠、甘醇酸澱粉鈉、膨潤土、天然海棉、界面活性劑、樹脂例如陽離子交換樹脂，柑橘渣、月桂基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉與澱粉之組合及諸如此類。
在某些情形下，醫藥調配物係包括填充劑，例如乳糖、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、纖維素、纖維素粉末、右旋糖、葡聚糖、右旋糖酐、澱粉、預明膠化澱粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨醇、氯化鈉、聚乙二醇及諸如此類。
潤滑劑和助流劑亦視需要包括在文中所述的醫藥調配物中供防止、降低或抑制物質之黏附或磨擦。例示的潤滑劑包括，例如，硬脂酸、氫氧化鈣、硬脂醯延胡索酸鈉，碳水化合物例如礦物油或氫化植物油，例如氫化大豆油(Sterotex®
)、高級脂肪酸及其鹼金屬和鹼土金屬鹽類，例如鋁鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽、硬脂酸、硬脂酸鈉、甘油、滑石、蠟、Stearowet®
、硼酸、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、聚乙二醇(例如，PEG-4000)或甲氧基聚乙二醇，例如Carbowax™、油酸鈉、苯甲酸鈉、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、月桂基硫酸鎂或鈉、膠體氧化矽，例如Syloid™、Cab-O-Sil®
、澱粉例如玉米澱粉、矽油、界面活性劑及諸如此類。
塑化劑包括用於軟化微膠化物質或薄膜塗層，使其較不具脆性之物質。適合的塑化劑包括，例如，聚乙二醇，如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350和PEG 800，硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纖維素和三乙酸甘油酯。塑化劑亦可用作為分散劑或濕潤劑。
增溶劑包括例如三乙酸甘油酯、三乙基檸檬酸酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉(sodium docusate)、維生素E TPGS、二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯酮、N-羥乙基吡咯酮、聚乙烯吡咯酮、羥丙基甲基纖維素、羥丙基環狀糊精、乙醇、正丁醇、異丙醇、膽固醇、膽鹽、聚乙二醇200-600、四氫呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)、二乙二醇單乙基醚(transcutol)、丙二醇和二甲基異山梨酯及諸如此類之化合物。
安定劑包括，例如任何抗氧化劑、緩衝劑、酸、防腐劑及諸如此類之化合物。例示的安定劑包括L-精胺酸鹽酸鹽、胺丁三醇(tromethamine)、白蛋白(人類)、檸檬酸、苯甲醇、酚、磷酸氫二鈉無水合物、丙二醇、間甲酚、乙酸鋅、聚山梨醇酯-20或Tween® 20，或胺丁三醇(trometamol)。
懸浮劑包括，例如聚乙烯吡咯酮，例如，聚乙烯吡咯酮K12、聚乙烯吡咯酮K17、聚乙烯吡咯酮K25或聚乙烯吡咯酮K30、乙烯吡咯酮/乙烯乙酸酯共聚物(S630)、聚乙二醇，例如，此聚乙二醇可具有約300至約6000或約3350至約4000或約7000至約5400之分子量，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、聚山梨醇酯-80、羥乙基纖維素、海藻酸鈉、膠，例如鹿角菜膠和阿拉伯膠、瓊脂膠、黃原膠，包括黃原膠、糖類、纖維素，例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚山梨醇酯-80、海藻酸鈉、聚乙氧基化山梨醇酐單月桂酸酯、聚乙氧基化山梨醇酐單月桂酸酯、普維酮(povidone)及諸如此類之化合物。
界面活性劑包括，例如月桂基硫酸鎂或鈉、多庫酯鈉、聚山梨醇酯(Tween) 60或80、三乙酸甘油酯、維生素E TPGS、山梨醇酐單月油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐單月油酸酯、聚山梨醇酯、伯洛沙姆(polaxomers)、膽鹽、甘油單硬脂酸酯、氧化乙烯和氧化丙烯共聚物，例如，Pluronic®
(BASF)之化合物及諸如此類。另外的介面活性劑包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如，聚氧乙烯(60)氫化蓖麻油及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如，辛基酚聚醚(octoxynol)10、辛基酚聚醚40。有時候，係包括界面活性劑用以增進物理定性或用於其他目的。
增黏劑包括，例如，甲基纖維素、黃原膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇、海藻酸鹽、阿拉伯膠、幾丁聚醣及其組合物。
濕潤劑包括，例如，油酸、單硬脂酸甘油酯、單油酸山梨醇酐酯、單月桂酸山梨醇酐酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯單油酸山梨醇酐酯、聚氧乙烯單月桂酸山梨醇酐酯、多庫酸酯鈉、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、多庫酸酯鈉、三乙酸甘油脂、聚山梨醇酯80、維生素E TPGS、銨鹽及諸如此類之化合物。
在某些情況下，一包括IL-2接合物(例如該等式(I-XVII))和一免疫檢查點抑制劑之醫藥組成物係以包括二種藥物之調配物來給藥。在某些情況下，IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然係介於10：1至1：10。在某些情況下，的IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然係介於7：1至1：2。在某些情況下，IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然係介於5：1至1：5。在某些情況下，IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然係介於3：1至1：3。在某些情況下，IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然為約10：1或約9：1，約8：1，約7：1，約6：1，約5：1，約4：1，約3：1，約2：1或約1：1。在某些情況下，IL-2接合物與免疫檢查點抑制劑之重量百分比或反之亦然為10：1至1：1，7：1至2：1，5：1至1：1，或3：1至1：1。
在特定的具體實例中，免疫檢查點抑制劑(例如PD-1抑制劑)和文中所述的IL-2接合物(例如該等式(I-XVII))之組合係以純化合物投予。在另外的具體實例中，免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物之組合物係與醫藥上適合或可接受載劑(在文中亦稱為醫藥上適合(或可接受)賦形劑，生理上適合(或可接受)賦形劑，或生理上適合(或可接受)載劑)組合，而該載劑係以所選的給藥途徑及，例如Remington ： The Science and Practice of Pharmacy
(Gennaro, 21st
Ed。Mack Pub。Co., Easton, PA (2005) 中所述的標準醫藥施行為基準所選擇，該揭示係以引用的方式併入本文中)。在某些具體實例中，免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物係以個別的組成物投予。在某些具體實例中，免疫檢查點抑制劑及/或文中所述的IL-2接合物之個別的組成物係與適合(或可接受)賦形劑組合。在某些具體實例中，免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物係以單一、組合的組成物投予。
文中所提供的為包括IL-2接合物文中所述的及免疫檢查點抑制劑與一或多種醫藥可接受載劑之醫藥組成物。若該載劑與組成物的其他成份為相容的且對接受者(亦即該對象或病患)為無害的，則該載劑(或賦形劑)為可接受或適合的。在特定的具體實例中，免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物為實質上純的，其中其係含有低於約5%,或低於約1%，或低於約0.1%的其他有機小分子，例如在合成方法的一或多個步驟中所產生的未反應中間物或合成副產物。在某些情況下，此醫藥組成物係包括一免疫檢查點抑制劑和一文中所述的IL-2接合物及一或多種醫藥上可接受賦形劑。在某些情況下，包括免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物或其組合之醫藥組成物係包括(以非限定實例而言)賦形劑，例如0.9%氯化鈉注射USP、無水乙醇、dl
-α生育醇、無水檸檬酸、聚山梨醇酯80、聚乙二醇 400、丙二醇、苯甲醇、檸檬酸鈉、亞硫酸鈉、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor)EL、白蛋白或其任何組合。在某些情況下，此醫藥組成物係包括奈粒子。在某些情況下，此醫藥組成物係包括常用於可注射組成物中的其他賦形劑。在某些情況下，此醫藥組成物係包括一顯影劑用以幫助可視化此醫藥組成物之遞送。在某些情況下，此醫藥組成物係包括液體、溶液或凝膠。在某些情況下，包括免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物或其組合之醫藥組成物為可注射的。在某些情況下，此醫藥組成物係包括溶解免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物或其組合之賦形劑。在另外的具體實例中，包括免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物之醫藥組成物係以非經腸給藥的劑型來提供，其係包括一或多種醫藥上可接受賦形劑或載劑。在某些情況下，包括免疫檢查點抑制劑和文中所述的IL-2接合物或其組合之醫藥組成物為可注射的。當醫藥組成物調配成供靜脈內、皮膚或皮下注射時，活性成份為無熱原且具有適合的pH、等張性及穩定性之非經腸可接受水性溶液的形式。熟習本項技術之相關技術者使用，例如等張媒劑，例如氯化鈉注射液、林格氏(Ringer’s)注射液或乳酸化林格氏注射液，能充分製備適合的溶液。在某些具體實例中，係包括防腐劑、增溶劑、賦形劑、緩衝劑、抗氧化劑及/或其他添加劑。製造套組 / 製品
在特定的具體實例中，文中所揭示的為與一或多種文中所述的方法和組成物一起使用之套組和製品。此等套組係包括分隔用以接收一或多種容器，例如小瓶、試管及諸如此類之載體、包裝或容器，各容器係包括其中一種用於文中所述之方法中的分開元件。適合的容器包括，例如瓶子、小瓶及試管。在一具體實例中，此等容器係由各種物質，例如玻璃或塑膠所形成。
套組典型地係包括列出內容物之標籤及/或使用說明書帶有使用說明之包裝插頁。典型的亦包括一組說明書。
在一具體實例中，標籤係在容器上或與容器相結合。在一具體實例中，當形成標籤的字母、數字或其他字元係連附、模塑或蝕刻在容器本身時，此標籤係在容器上，而當標籤係存在一托住此容器之儲藏器或載具中時，則標籤係與容器相結合，例如包裝插頁。在一具體實例中，標籤係用於指出使用特定治療應用之內容。此標籤亦指出，例如在文中所述的方法中，使用內容之指示。
在特定的具體實例中，此醫藥組成物係以含有一或多個包含文中所提供的化合物之單位劑型的包裝或分配器裝置來呈現。此包裝，例如含有金屬或塑膠箔片，例如泡罩(blister)包裝。在一具體實例中，此包裝或分配器裝置係伴隨一用於給藥之說明書。在一具體實例中，此包裝或分配器裝置亦伴隨與容器結合的注意事項，其形式由管理醫藥品的製造、使用或銷售之政府機關訂定，該注意事項係反映機關核准的藥物形式係用於人類用藥或獸藥給藥。此注意事項，例如，係標示由美國食品和藥物管理局核准的標籤或已核准的產品插頁。在一具體實例中，亦製備調配在相容的醫藥載劑中含有一文中所提供的化合物之組成物，放置在適合容器並標示供治療適應症。例示的具體實例
本揭示文進一步係藉由下列具體實例來揭示。各具體實例的特點當適當和切實可行時，與任何其他具體實例為可組合的。
具體實例1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(I)之結構置換：式(I)； 其中： Z為 CH2
而Y為； Y為 CH2
而Z為； Z為 CH2
而Y為；或 Y為 CH2
而Z為； W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：
； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例1.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(I)之結構置換：式(I)； 其中： Z為CH2
而Y為； Y為CH2
而Z為； Z為CH2
而Y為；或 Y為CH2
而Z為； W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa及60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點；. 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例2. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。
具體實例3. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中Y為CH2
而Z為。
具體實例4. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。
具體實例5. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中Z為CH2
而Y為。
具體實例6. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中Y為CH2
而Z為。
具體實例7. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有選自下列之平均分子量：5 kDa、10kDa、20 kDa和30kDa。
具體實例8. 之方法根據具體實例1或1.1，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有10kDa、20kDa或30kDa之平均分子量，或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例9. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有30kDa之平均分子量。
具體實例10. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(I)結構的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例11. 根據具體實例1或1.1之方法，其中在IL-2接合物中，在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(I)結構的位置係選自F41、E61及P64。
具體實例12. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物：式(II)；
式(III)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例12.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例13. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該[AzK_PEG]為式(II)和式(III)之混合物。
具體實例14. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該[AzK_PEG]具有式(II)之結構：式(II)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例15. 根據具體實例14之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列。
具體實例16. 之方法根據具體實例15之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例17. 根據具體實例16之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例18. 之方法根據具體實例17之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例19. 之方法根據具體實例17之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例20. 之方法根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
具體實例21. 之方法根據具體實例20，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例22. 之方法根據具體實例21之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例23. 之方法根據具體實例22之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例24. 之方法根據具體實例22之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例25. 之方法根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列。
具體實例26. 之方法根據具體實例25之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例27. 之方法根據具體實例26之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例28. 之方法根據具體實例27之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。.
具體實例29. 之方法根據具體實例27之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例30. 之方法根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列。
具體實例31. 之方法根據具體實例30之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例32. 之方法根據具體實例31之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例33. 之方法根據具體實例32之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例34. 之方法根據具體實例32之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例35. 之方法根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列。
具體實例36. 之方法根據具體實例35之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例37. 之方法根據具體實例36之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例38. 之方法根據具體實例37之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例39. 之方法根據具體實例37之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例40. 之方法根據具體實例12或12.1之方法，其中該[AzK_PEG]具有式(III)之結構式(III)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例41. 根據具體實例40之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列。
具體實例42. 根據具體實例41之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa.
具體實例43. 根據具體實例42之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例44. 根據具體實例43之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例45. 根據具體實例43之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例46. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
具體實例47. 根據具體實例46之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例48. 根據具體實例47之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例49. 根據具體實例48之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例50. 根據具體實例48之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例51. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列。
具體實例52. 根據具體實例51之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例53. 根據具體實例52之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例54. 根據具體實例53之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例55. 根據具體實例53之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例56. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列。
具體實例57. 根據具體實例56根據，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa。
具體實例58. 根據具體實例57，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例59. 根據具體實例58，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例60. 根據claim 具體實例58，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例61. 根據具體實例12或12.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列。
具體實例62. 根據具體實例61之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例63. 根據具體實例62之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例64. 根據具體實例63之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例65. 根據具體實例63之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例66. 根據具體實例1至65中任一例之方法，其中W為直鏈或支鏈PEG基團。
具體實例67. 根據具體實例1至65中任一例之方法，其中W為直鏈PEG基團。
具體實例68. 根據具體實例1至65中任一例之方法，其中W為支鏈PEG基團。
具體實例69. 根據具體實例1至65中任一例之方法，其中W為甲氧基PEG基團。
具體實例70. 根據具體實例69之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈或支鏈。
具體實例71. 根據具體實例70之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈。
具體實例72. 根據具體實例70之方法，其中該甲氧基PEG基團為支鏈。
具體實例73. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：20-24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例73.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：20-24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]具有式(II)或式(III)之結構，或式(II)和式(III)之混合物。：式(II)；式(III)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例74. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。
具體實例75. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
具體實例76. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
具體實例77. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
具體實例78. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
具體實例79. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該[AzK_PEG5kD]具有式(II)之結構式(II)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例80. 根據具體實例79之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。
具體實例81. 根據具體實例79之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
具體實例82. 根據具體實例79之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
具體實例83. 根據具體實例79之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
具體實例84. 根據具體實例79之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
具體實例85. 根據具體實例73或73.1之方法，其中該[AzK_PEG5kD]具有式(III)之結構式(III)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例86. 根據具體實例85之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列。
具體實例87. 根據具體實例85之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
具體實例88. 根據具體實例85之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
具體實例89. 根據具體實例85之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
具體實例90. 根據具體實例85之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
具體實例91. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]具有式(II)或式(III)之結構，或為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例91.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]具有式(II)或式(III)之結構，或為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例92. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。
具體實例93. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
具體實例94. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
具體實例95. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。
具體實例96. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
具體實例97. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該[AzK_PEG30kD]具有式(II)之結構：式(II)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例98. 根據具體實例97之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。
具體實例99. 根據具體實例97之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
具體實例100. 根據具體實例97之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
具體實例101. 根據具體實例97之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。
具體實例102. 根據具體實例97之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
具體實例103. 根據具體實例91或91.1之方法，其中該[AzK_PEG30kD]具有式(III)之結構式(III)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例104. 根據具體實例103之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：25之胺基酸序列。
具體實例105. 根據具體實例103之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：26之胺基酸序列。
具體實例106. 根據具體實例103之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
具體實例107. 根據具體實例103之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：28之胺基酸序列。
具體實例108. 根據具體實例103之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：29之胺基酸序列。
具體實例109. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為一具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例109.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：15-19之胺基酸序列，其中[AzK_PEG]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例110. 根據具體實例109或109.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG]的總量，為約1：1.
具體實例111. 根據具體實例109或109.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG]的總量，係大於1：1。
具體實例112. 根據具體實例109或109.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG]的總量，係低於1：1。
具體實例113. 根據具體實例109至112中任一例之方法，其中W為直鏈或支鏈PEG基團。
具體實例114. 根據具體實例109至112中任一例之方法，其中W為直鏈PEG基團。
具體實例115. 根據具體實例109至112中任一例之方法，其中W為支鏈PEG基團。
具體實例116. 根據具體實例109至112中任一例之方法，其中W為甲氧基PEG基團。
具體實例117. 根據具體實例116之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈或支鏈。
具體實例118. 根據具體實例117之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈。
具體實例119. 根據具體實例117之方法，其中該甲氧基PEG基團為支鏈。
具體實例120. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：20至24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例120.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：20至24之胺基酸序列，其中[AzK_PEG5kD]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例121. 根據具體實例120或120.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG5kD]的總量，為約1：1
具體實例122. 根據具體實例120或120.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG5kD]的總量，係大於1：1。
具體實例123. 根據具體實例120或120.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG5kD]的總量，係低於1：1。
具體實例124. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例124.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：25-29之胺基酸序列，其中[AzK_PEG30kD]為式(II)和式(III)結構之混合物：式(II)；式(III)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例125. 根據具體實例124或124.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG30kD]的總量，為約1：1.
具體實例126. 根據具體實例124或124.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG30kD]的總量，係大於1：1.
具體實例127. 根據具體實例124或124.1之方法，其中式(II)結構之量與式(III)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_PEG30kD]的總量，係低於1：1。
具體實例128. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]具有式(IV)或式(V)之結構或式(IV)和式(V)之混合物：式(IV)；
式(V)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例128.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG]具有式(IV)或式(V)之結構或式(IV)和式(V)之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例129. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG]為式(IV)和式(V)之混合物。
具體實例130. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG]具有式(IV)之結構：式(IV)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例131. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：40之胺基酸序列。
具體實例132. 根據具體實例131之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例133. 根據具體實例132之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例134. 根據具體實例133之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例135. 根據具體實例133之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例136. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：41之胺基酸序列。
具體實例137. 根據具體實例136之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例138. 根據具體實例137之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例139. 根據具體實例138，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例140. 根據具體實例138之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例141. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
具體實例142. 根據具體實例141之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa。
具體實例143. 根據具體實例142之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例144. 根據具體實例143之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例145. 根據具體實例143之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例146. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：43之胺基酸序列。
具體實例147. 根據具體實例146，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例148. 根據具體實例147之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例149. 根據具體實例148之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例150. 根據具體實例148之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例151. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：44之胺基酸序列。
具體實例152. 根據具體實例151之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例153. 根據具體實例152之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例154. 根據具體實例153之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例155. 根據具體實例153之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例156. 根據具體實例128或128.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG]具有式(V)之結構
式(V)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例157. 根據具體實例156之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：40之胺基酸序列。
具體實例158. 根據具體實例156之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa及30kDa。
具體實例159. 根據具體實例158之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例160. 根據具體實例159之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例161. 根據具體實例159之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例162. 根據具體實例156之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：41之胺基酸序列。
具體實例163. 根據具體實例162之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例164. 根據具體實例163之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例165. 根據具體實例164之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例166. 根據具體實例164之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例167. 根據具體實例156之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
具體實例168. 根據具體實例167之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例169. 根據具體實例168之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例170. 根據具體實例169之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例171. 根據具體實例169之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例172. 根據具體實例156之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：43之胺基酸序列。
具體實例173. 根據具體實例172之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例174. 根據具體實例173之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例175. 根據具體實例174之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例176. 根據具體實例174之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例177. 根據具體實例156之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：44之胺基酸序列。
具體實例178. 根據具體實例177之方法，其中W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa和30kDa。
具體實例179. 根據具體實例178之方法，其中W為具有選自5kDa和30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例180. 根據具體實例179之方法，其中W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例181. 根據具體實例179之方法，其中W為具有30kDa平均分子量之PEG基團。
具體實例182. 根據具體實例128至181中任一例之方法，其中W為直鏈或支鏈PEG基團。
具體實例183. 根據具體實例128至181中任一例之方法，其中W為直鏈PEG基團。
具體實例184. 根據具體實例128至181中任一例之方法，其中W為支鏈PEG基團。
具體實例185. 根據具體實例128至181中任一例之方法，其中W為甲氧基PEG基團。
具體實例186. 根據具體實例185之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈或支鏈。
具體實例187. 根據具體實例186之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈。
具體實例188. 根據具體實例186之方法，其中該甲氧基PEG基團為支鏈。
具體實例189. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：45-49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或式(IV)和式(V)之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例189.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：45-49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或式(IV)和式(V)之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例190. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
具體實例191. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。
具體實例192. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。
具體實例193. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。
具體實例194. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
具體實例195. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG5kD]具有式(IV)之結構式(IV)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例196. 根據具體實例195之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
具體實例197. 根據具體實例195之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。
具體實例198. 根據具體實例195之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。
具體實例199. 根據具體實例195之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。
具體實例200. 根據具體實例195之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
具體實例201. 根據具體實例189或189.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG5kD]具有式(V)之結構式(V)； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例202. 根據具體實例201之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
具體實例203. 根據具體實例201之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：46之胺基酸序列。
具體實例204. 根據具體實例201之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：47之胺基酸序列。
具體實例205. 根據具體實例201之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：48之胺基酸序列。
具體實例206. 根據具體實例201之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：49之胺基酸序列。
具體實例207. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：50-54之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例207.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：50-54之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例208. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。
具體實例209. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。
具體實例210. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。
具體實例211. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
具體實例212. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
具體實例213. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)之結構：式(IV)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例214. 根據具體實例213之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。
具體實例215. 根據具體實例213之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。
具體實例216. 根據具體實例213之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。
具體實例217. 根據具體實例213之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
具體實例218. 根據具體實例213之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
具體實例219. 根據具體實例207或207.1之方法，其中該[AzK_L1_PEG30kD]具有式(V)之結構式(V)；
或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例220. 根據具體實例219之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：50之胺基酸序列。
具體實例221. 根據具體實例219之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：51之胺基酸序列。
具體實例222. 根據具體實例219之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：52之胺基酸序列。
具體實例223. 根據具體實例219之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
具體實例224. 根據具體實例219之方法，其中該IL-2接合物具有SEQ ID NO：54之胺基酸序列。
具體實例225. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[Azk_L1_PEG]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例225.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：40-44之胺基酸序列，其中[Azk_L1_PEG]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa和60kDa；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例226. 根據具體實例225或225.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，在IL-2接合物中為約1：1.
具體實例227. 根據具體實例225或225.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，在IL-2接合物中，係大於1：1.
具體實例228. 根據具體實例225或225.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG]的總量，在IL-2接合物中，係低於1：1.
具體實例229. 根據具體實例225至228中任一例之方法，其中W為直鏈或支鏈PEG基團。
具體實例230. 根據具體實例225至228中任一例之方法，其中W為直鏈PEG基團。
具體實例231. 根據具體實例225至228中任一例之方法，其中W為支鏈PEG基團。
具體實例232. 根據具體實例225至228中任一例之方法，其中W為甲氧基PEG基團。
具體實例233. 根據具體實例232之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈或支鏈。
具體實例234. 根據具體實例233之方法，其中該甲氧基PEG基團為直鏈。
具體實例235. 根據具體實例233，其中該甲氧基PEG基團為支鏈。
具體實例236. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：45至49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團。；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例236.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：45至49之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG5kD]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有5kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例237. 根據具體實例236或236.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_L1_ PEG5kD]的總量，為約1：1。
具體實例238. 根據具體實例236或236.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_L1_PEG5kD]的總量，係大於1：1。
具體實例239. 根據具體實例236或236.1之方法，其中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括IL-2接合物中[AzK_L1_PEG5kD]的總量，係低於1：1。
具體實例240. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括任一SEQ ID NOS：50至54之胺基酸序列，其中[AzK_L1 PEG30kD]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例240.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物包括任一SEQ ID NOS：50-54之胺基酸序列，其中[AzK_L1 PEG30kD]為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；式(V)； 其中： W為具有30kDa平均分子量之PEG基團；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例241. 根據具體實例240或240.1之方法，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，為約1：1。
具體實例242. 根據具體實例240或240.1之方法，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，係大於1：1。
具體實例243. 根據具體實例240或240.1之方法，其中在IL-2接合物中式(IV)結構之量與式(V)結構之量的比率，包括[AzK_L1_PEG30kD]的總量，係低於1：1。
具體實例244. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VI)之結構或(VII)或(VI)和(VII)之混合物置換：式(VI)(VII) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有下列結構：, 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例244.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(VI)之結構或(VII)或(VI)和(VII)之混合物置換：式(VI)(VII) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例245. 根據具體實例244或244.1之方法，其中n在式(VI)和(VII)化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
具體實例246. 根據具體實例244或244.1之方法，其中n在式(VI)和(VII)化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
具體實例247. 根據具體實例244至246中任一例之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例248. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為K34。
具體實例249. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為F41。
具體實例250. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為F43。
具體實例251. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為K42。
具體實例252. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為E61。
具體實例253. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為P64。
具體實例254. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為R37。
具體實例255. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為T40。
具體實例256. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為E67。
具體實例257. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為Y44。
具體實例258. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為V68。
具體實例259. 根據具體實例247之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VI)、式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物的位置為L71。
具體實例260. 根據具體實例244至259中任一例之方法，其中式(VI)結構之量與式(VII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。
具體實例261. 根據具體實例244至259中任一例之方法，其中式(VI)結構之量與式(VII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
具體實例262. 根據具體實例244或244.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64及其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例263. 根據具體實例244或244.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
具體實例264. 根據具體實例244或244.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例265. 根據具體實例264之方法，其中n在式(VI)和(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例266. 根據具體實例244或244.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例267. 根據具體實例266之方法，其中n在式(VI)和(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例268. 根據具體實例266之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例269. 根據具體實例266之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例270. 根據具體實例267之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為681。
具體實例271. 根據具體實例244或244.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例272. 根據具體實例271之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n在式(VI)和(VII)化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例273. 根據具體實例271之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例274. 根據具體實例273之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例275. 根據具體實例271之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為681。
具體實例276. 根據具體實例244或244.1之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
具體實例277. 根據具體實例244或244.1之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
具體實例278. 根據具體實例244或244.1之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
具體實例279. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(VIII)之結構或(IX)或(VIII)和(IX)之混合物置換：式(VIII)(IX) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有下列結構：， 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例279.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中至少一個在IL-2接合物中的胺基酸殘基係經式(VIII)之結構或(IX)或(VIII)和(IX)之混合物置換：式(VIII)(IX) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例280. 根據具體實例279或279.1之方法，其中n在(VIII)和(IX)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
具體實例281. 根據具體實例279或279.1，其中n在(VIII)和(IX)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546.
具體實例282. 根據具體實例279至281中任一例之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例283. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為K34。
具體實例284. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為F41。
具體實例285. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為F43。
具體實例286. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為K42。
具體實例287. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為E61。
具體實例288. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為P64。
具體實例289. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為R37。
具體實例290. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為T40。
具體實例291. 根據具體實例282，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為E67。
具體實例292. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為Y44。
具體實例293. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為V68。
具體實例294. 根據具體實例282之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(VIII)、式(IX)之結構或式(VIII)和(IX)之混合物的位置為L71。
具體實例295. 根據具體實例279至294中任一例之方法，其中式(VIII)結構之量與式(IX)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。
具體實例296. 根據具體實例279至294中任一例之方法，其中式(VIII)結構之量與式(IX)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
具體實例297. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例298. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
具體實例299. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例300. 根據具體實例299之方法，其中n在(VIII)和(IX)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例301. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例302. 根據具體實例300之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n在(VIII)和(IX)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例303. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例304. 根據具體實例303之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例305. 根據具體實例302之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61及其中n為681。
具體實例306. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例307. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64及其中n在(VIII)和(IX)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例308. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例309. 根據具體實例279或279.1之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例310. 根據具體實例307之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64及其中n為681。
具體實例311. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(X)或(XI)之結構，或(X)和(XI)之混合物置換：式(X)(XI) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
具體實例312. 根據具體實例311之方法，其中n在式(X)和(XI)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
具體實例313. 根據具體實例311之方法，其中n在式(X)和(XI)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
具體實例314. 根據具體實例311至313中任一例之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例315. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為K34。
具體實例316. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為F41。
具體實例317. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為F43。
具體實例318. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為K42。
具體實例319. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為E61。
具體實例320. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為P64。
具體實例321. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為R37。
具體實例322. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為T40。
具體實例323. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為E67。
具體實例324. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為Y44。
具體實例325. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為V68。
具體實例326. 根據具體實例314之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(X)、式(XI)之結構或式(X)和(XI)之混合物的位置為L71。
具體實例327. 根據具體實例311至326中任一例之方法，其中式(X)結構之量與式(XI)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。
具體實例328. 根據具體實例311至326中任一例之方法，其中式(X)結構之量與式(XI)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
具體實例329. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例330. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
具體實例331. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例332. 根據具體實例330之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且其中n在式(X)和(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例333. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例334. 根據具體實例311之方法，其中n在式(X)和(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例335. 根據具體實例311之方法，其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例336. 根據具體實例335之方法，其中n為從約550至約800之整數。
具體實例337. 根據具體實例332之方法，其中n為681。
具體實例338. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例339. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64及其中n在式(X)和(XI)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例340. 根據具體實例311之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例341. 根據具體實例340之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例342. 根據具體實例339之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為681。
具體實例343. 根據具體實例311之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
具體實例344. 根據具體實例311之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
具體實例345. 根據具體實例311之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
具體實例346. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(XII)或(XIII)之結構或(XII)和(XIII)之混合物置換：式(XII)(XIII) 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
具體實例347. 根據具體實例346之方法，其中n在式(XII)和(XIII)之化合物中係在從約5至約4600，或從約10至約4000，或從約20至約3000，或從約100至約3000，或從約100至約2900，或從約150至約2900，或從約125至約2900，或從約100至約2500，或從約100至約2000，或從約100至約1900，或從約100至約1850，或從約100至約1750，或從約100至約1650，或從約100至約1500，或從約100至約1400，或從約100至約1300，或從約100至約1250，或從約100至約1150，或從約100至約1100，或從約100至約1000，或從約100至約900，或從約100至約750，或從約100至約700，或從約100至約600，或從約100至約575，或從約100至約500，或從約100至約450，或從約100至約至約350，或從約100至約275，或從約100至約230，或從約150至約475，或從約150至約340，或從約113至約340，或從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約340至約795，或從約341至約682，或從約568至約909，或從約227至約1500，或從約225至約2280，或從約460至約2160，或從約460至約2050，或從約341至約1820，或從約341至約1710，或從約341至約1250，或從約225至約1250，或從約341至約1250，或從約341至約1136，或從約341至約1023，或從約341至約910，或從約341至約796，或從約341至約682，或從約341至約568，或從約114至約1000，或從約114至約950，或從約114至約910，或從約114至約800，或從約114至約690，或從約114至約575之範圍內。
具體實例348. 根據具體實例346之方法，其中n在式(XII)和(XIII)之化合物中為選自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545及4546之整數。
具體實例349. 根據具體實例346至348中任一例之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
具體實例350. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為K34。
具體實例351. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為F41。
具體實例352. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為F43。
具體實例353. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為K42。
具體實例354. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為E61。
具體實例355. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為P64。
具體實例356. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為R37。
具體實例357. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為T40。
具體實例358. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為E67。
具體實例359. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為Y44。
具體實例360. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為V68。
具體實例361. 根據具體實例349之方法，其中在IL-2接合物之胺基酸序列中，式(XII)、式(XIII)之結構或式(XII)和(XIII)之混合物的位置為L71。
具體實例362. 根據具體實例346至361中任一例之方法，其中式(XII)結構之量與式(XIII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係大於1：1。
具體實例363. 根據具體實例346至361中任一例之方法，其中式(XII)結構之量與式(XIII)結構之量的比率，包括IL-2接合物之總量，係低於1：1。
具體實例364. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例365. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61及P64且n為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137及1249之整數。
具體實例366. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自E61和P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例367. 根據具體實例365之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基係選自F41、F43、K42、E61和P64且其中n在式(XII)和(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例368. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為E61且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例369. 根據具體實例346之方法，其中n在式(XII)和(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例370. 根據具體實例346之方法，其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例371. 根據具體實例370之方法，其中n為從約550至約800之整數。
具體實例372. 根據具體實例369之方法，其中n為681。
具體實例373. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約450至約800，或從約454至約796，或從約454至約682，或從約568至約909之整數。
具體實例374. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n在式(XII)和(XIII)之化合物中為選自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909及910之整數。
具體實例375. 根據具體實例346之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約500至約1000之整數。
具體實例376. 根據具體實例375之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為從約550至約800之整數。
具體實例377. 根據具體實例374之方法，其中SEQ ID NO：3中經置換的胺基酸殘基為P64且其中n為681。
具體實例378. 根據具體實例346之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量係在從約1,000道爾頓約200,000道爾頓，或從約2,000道爾頓至約150,000道爾頓，或從約3,000道爾頓至約125,000道爾頓，或從約4,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約100,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約90,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約80,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約70,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約65,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約60,000道爾頓，或從約5,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約6,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約7,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約40,000道爾頓，或從約8,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約35,000道爾頓，或從約9,500道爾頓至約30,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約10,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約15,000道爾頓至約30,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約50,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約45,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約35,000道爾頓，或從約20,000道爾頓至約30,000道爾頓之範圍內。
具體實例379. 之方法根據具體實例346之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓，約50,000道爾頓，約60,000道爾頓，約70,000道爾頓，約80,000道爾頓，約90,000道爾頓，約100,000道爾頓，約125,000道爾頓，約150,000道爾頓，約175,000道爾頓或約200,000道爾頓。
具體實例380. 根據具體實例346之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約5,000道爾頓，約7,500道爾頓，約10,000道爾頓，約15,000道爾頓，約20,000道爾頓，約25,000道爾頓，約30,000道爾頓，約35,000道爾頓，約40,000道爾頓，約45,000道爾頓或約50,000道爾頓。
具體實例381. 根據具體實例1至380中任一例之方法，其中該一或多種另外的藥劑為一或多個由下列組成之群中選出的免疫檢查點抑制劑：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、OX40促效劑和4-1BB促效劑。
具體實例382. 根據具體實例381之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-1抑制劑。
具體實例383. 根據具體實例382之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、西普利單抗(cemiplimab)、派姆單抗(lambrolizumab)、AMP-224、信迪利單抗(sintilimab)、特瑞普利單抗(toripalimab)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、達斯特單抗(dostarlimab)(GSK)、PDR001(Novartis)、MGA012 (Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404 (Amgen)。BI-754091 (Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014 (Jounce)、PF-06801591 (Pfizer)及傑諾單抗(Apollomics/Genor BioPharma)。
具體實例384. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例385. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例386. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為西普利單抗。
具體實例387. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為派姆單抗。
具體實例388. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為MP-224。
具體實例389. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為信迪利單抗。
具體實例390. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為特瑞普利單抗。
具體實例391. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為卡瑞利珠單抗。
具體實例392. 根據具體實例383之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為替雷利珠單抗。
具體實例393. 根據具體實例381之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-L1抑制劑。
具體實例394. 根據具體實例393之方法，其中該一或多個PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、ASC22 (Αmab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501 (TG Therapeutics)。
具體實例395. 根據具體實例394之方法，其中該一或多個PD-L1抑制劑為阿替珠單抗。
具體實例396. 根據具體實例394之方法，其中該一或多個PD-L1抑制劑為阿維魯單抗。
具體實例397. 根據具體實例394之方法，其中該一或多個PD-L1抑制劑為度伐魯單抗。
具體實例398. 根據具體實例381之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。
具體實例399. 之方法根據具體實例398之方法，其中該一或多個CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗(tremelimumab)、伊匹單抗(ipilimumab)及AGEN-1884 (Agenus)。
具體實例400. 根據具體實例399之方法，其中該一或多個CTLA-4抑制劑為替西木單抗。
具體實例401. 根據具體實例399之方法，其中該一或多個CTLA-4抑制劑為伊匹單抗。
具體實例402. 根據具體實例1至401中任一例之方法，其中該對象中的癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)、經典何杰金氏淋巴瘤(cHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、泌尿道上皮細胞癌、微小衛星體的不穩定性癌、微小衛星體的穩定性癌症、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌(HCC)、默克細胞癌(MCC)、黑色素瘤、小細胞肺癌(SCLC)、食道癌、膠質母細胞瘤、間皮瘤、乳癌、三陰性乳癌、前列腺癌、去勢抗性前列腺癌、轉移性去勢抗性前列腺癌、或具有DNA損傷反應(DDR)缺陷之轉移性去勢抗性前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、中度至低度突變負荷之腫瘤、皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)、鱗狀細胞皮膚癌(SCSC)、低至無表現PD-L1之腫瘤、在其原發解剖起源位置以外全身性傳播至肝臟及CNS之腫瘤及瀰漫性大B-細胞淋巴瘤。
具體實例403. 根據具體實例402之方法，其中該對象中的癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、泌尿道上皮細胞癌和黑色素瘤。
具體實例404. 根據具體實例1至403中任一例之方法，其中該IL-2接合物係每週一次，每2週一次，每3週一次，每4週一次，每5週一次，每6週一次，每7週一次，或每8週一次投予該有此需要的對象。
具體實例405. 根據具體實例404之方法，其中該IL-2接合物係每週一次，每2週一次，或每3週一次投予該有此需要的對象。
具體實例406. 根據具體實例405之方法，其中該IL-2接合物係每2週一次投予該有此需要的對象。
具體實例407. 根據具體實例405之方法，其中該IL-2接合物每3週一次投予該有此需要的對象。
具體實例408. 根據具體實例1至407中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血管滲漏症候群。
具體實例409. 根據具體實例408之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級、3級或4級血管滲漏症候群。
具體實例410. 根據具體實例409之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級血管滲漏症候群。
具體實例411. 根據具體實例409之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成3級血管滲漏症候群。
具體實例412. 根據具體實例409之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成4級血管滲漏症候群。
具體實例413. 根據具體實例1至412中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血管緊張性喪失。
具體實例414. 根據具體實例1至413中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成血漿蛋白外滲和體液進入血管外空隙。
具體實例415. 根據具體實例1至414中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成低血壓和降低器官灌注。
具體實例416. 根據具體實例1至415中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成嗜中性白血球功能障礙。
具體實例417. 根據具體實例1至415中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成趨化性降低。
具體實例418. 根據具體實例1至417中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物與該對象中播散性感染風險增加無關。
具體實例419. 根據具體實例418之方法，其中該播散性感染為敗血症或細菌性心內膜炎。
具體實例420. 根據具體實例419之方法，其中該播散性感染為敗血症。
具體實例421. 根據具體實例419之方法，其中該播散性感染為細菌性心內膜炎。
具體實例422. 根據具體實例1至421中任一例之於一對象中治療癌症的方法，其中該對象在投予IL-2接合物之前係進行治療先前存在的細菌性感染。
具體實例423. 根據具體實例422之方法，其中該對象在投予IL-2接合物之前係以選自苯唑青黴素(oxacillin)、萘夫西林(nafcillin)、環丙沙星(ciprofloxacin)及萬古黴素(vancomycin)之抗細菌劑治療。
具體實例424. 根據具體實例1至423中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會使該對象中先前存在的或初期呈現的自體免疫疾病或發炎病症惡化。
具體實例425. 根據具體實例424之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會使該對象中先前存在的或初期呈現的自體免疫疾病惡化。
具體實例426. 根據具體實例424之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在使該對象中先前存在的或初期呈現的發炎病症惡化。
具體實例427. 根據具體實例424之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症係選自克隆氏症、硬皮病、甲狀腺炎、發炎性關節炎、糖尿病、眼-延髓重肌無力症、急進性IgA腎小球腎炎、膽囊炎、腦血管炎、史蒂芬強森症候群(Stevens-Johnson syndrome)和大皰性類天皰瘡。
具體實例428. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為克隆氏症。
具體實例429. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為硬皮病。
具體實例430. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為甲狀腺炎。
具體實例431. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為發炎性關節炎。
具體實例432. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為糖尿病。
具體實例433. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為眼-延髓重肌無力症。
具體實例434. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為急進性IgA腎小球腎炎。
具體實例435. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為膽囊炎。
具體實例436. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為腦血管炎。
具體實例437. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為史蒂芬強森症候群。
具體實例438. 根據具體實例427之方法，其中該對象中之自體免疫疾病或發炎病症為大皰性類天皰瘡。
具體實例439. 根據具體實例1至438中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成精神狀態改變、說話困難、皮質性盲症、四肢或步態共濟失調、幻覺、激動、感覺遲鈍或昏迷。
具體實例440. 根據具體實例1至439中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成痙攣。
具體實例441. 根據具體實例1至440中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物對於具有已知痙攣病症之對象不會有禁忌。
具體實例442. 根據具體實例1至441中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成毛細血管滲透症候群。
具體實例443. 根據具體實例442之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級、3級或4級的毛細血管滲透症候群。
具體實例444. 根據具體實例443之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成2級的毛細血管滲透症候群。.
具體實例445. 根據具體實例443之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成3級的毛細血管滲透症候群。
具體實例446. 根據具體實例443之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不會在該對象中造成4級的毛細血管滲透症候群。
具體實例447. 根據具體實例1至446中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成平均動脈血壓下降。
具體實例448. 根據具體實例1至447中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成低血壓。
具體實例449. 根據具體實例448之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在使對象的收縮壓低於90 mm Hg或與基線收縮壓相比下降20 mm Hg。
具體實例450. 根據具體實例1至449中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成貧血。
具體實例451. 根據具體實例1至450中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成腎或肝功能障礙。
具體實例452. 根據具體實例1至451中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成嗜酸性白血球增多。
具體實例453. 根據具體實例452之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 500個。
具體實例454. 根據具體實例452之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 500個至每μL 1500個。
具體實例455. 根據具體實例452之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 1500個至每μL 5000個。
具體實例456. 根據具體實例452之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會造成該對象之週邊血液中嗜酸性白血球計數超過每μL 5000個。
具體實例457. 根據具體實例1至456中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行精神性藥物之療法的對象不會有禁忌。
具體實例458. 根據具體實例1至457中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行腎毒性、骨髓毒性、心毒性或肝毒性藥物之療法的對象不會有禁忌。
具體實例459. 根據具體實例458之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在進行胺基糖苷、細胞毒性化療、多柔比星(doxorubicin)、甲胺喋呤或天門冬醯胺酸酶之療法的對象不會有禁忌。
具體實例460. 根據具體實例1至459中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物對於正在接受含有抗腫瘤劑之組合療法的對象不會有禁忌。
具體實例461. 根據具體實例460之方法，其中該抗腫瘤劑係選自達卡巴仁(dacarbazine)、順鉑(cis-platinum)、泰莫西芬(tamoxifen)和干擾素-α。
具體實例462. 根據具體實例1至461中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該對象後，不會在該對象中造成一或多件4級不良事件。
具體實例463. 如具體實例462之方法，其中該一或多件4級不良事件係選自體溫過低；休克；心跳過慢；室性期外收縮；心肌缺氧；昏厥；出血；心房節律不整；靜脈炎；第二型房室傳導阻滯；心內膜炎；心包膜積水；外周性壞疽；栓塞；冠狀動脈疾病；口腔炎；噁心和嘔吐；肝功能檢測異常；胃腸道出血；吐血；血痢；腸胃病症；腸穿孔；胰臟炎；貧血；白血球減少；白血球增多症；低鈣血症；鹼性磷酸酶增加；血液尿素氮(BUN)增加；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)增加；呼吸性酸中毒；嗜睡；激動；神經病變；偏執反應；抽搐；大發作抽搐；譫妄；氣喘、肺水腫；過度換氣；缺氧；咳血；換氣不足；氣胸；瞳孔散大；瞳孔病症；腎功能異常；腎衰竭；和急性腎小管壞死。
具體實例464. 根據具體實例1至463中任一例之方法，其中投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該等對象後，不會在大於1%之對象中造成一或多件4級不良事件。
具體實例465. 根據具體實例464之方法，其中該一或多件4級不良事件係選自體溫過低；休克；心跳過慢；室性期外收縮；心肌缺氧；昏厥；出血；心房節律不整；靜脈炎；第二型房室傳導阻滯；心內膜炎；心包膜積水；外周性壞疽；栓塞；冠狀動脈疾病；口腔炎；噁心和嘔吐；肝功能檢測異常；胃腸道出血；吐血；血痢；腸胃病症；腸穿孔；胰臟炎；貧血；白血球減少；白血球增多症；低鈣血症；鹼性磷酸酶增加；血液尿素氮(BUN)增加；高尿酸血症；非蛋白氮(NPN)增加；呼吸性酸中毒；嗜睡；激動；神經病變；偏執反應.；抽搐；大發作抽搐；譫妄；氣喘、肺水腫；過度換氣；缺氧；咳血；換氣不足；氣胸；瞳孔放大；瞳孔放病症；腎功能異常；腎衰竭；和急性腎小管壞死。
具體實例466. 根據具體實例1至465中任一例之方法，其中投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該等對象後，不會在大於1%之該等對象中造成一或多件不良事件，其中該一或多件不良事件係選自十二指腸潰瘍；腸壞死；心肌炎；室上性心搏過速；視神經炎後續發的永久性或暫時性失明；暫時性腦缺血；腦膜炎；腦水腫；心包膜炎；過敏性間質性腎炎；和氣管食道瘻管。
具體實例467. 根據具體實例1至466中任一例之方法，其中投予一群對象有效量的IL-2接合物，在IL-2接合物投予該等對象後，不會在大於1%之該等對象中造成一或多件不良事件，其中該一或多件不良事件係選自惡性高熱；心臟停搏；心肌梗塞；肺動脈栓塞；中風；腸穿孔；肝或腎衰竭；嚴重憂鬱導致自殺；肺水腫；呼吸停止；呼吸衰竭。
具體實例468. 根據具體實例1至467中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在無增加該對象中週邊CD4+調節T細胞下，增加了該對象中週邊CD8+ T和NK細胞之數目。
具體實例469. 根據具體實例1至468中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在無增加該對象中週邊嗜酸性白血球數目下，增加了該對象中週邊CD8+ T和NK細胞之數目。
具體實例470. 根據具體實例1至469中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物，在無增加該對象中腫瘤內CD4+調節T細胞數目下，增加了該對象中腫瘤內CD8+ T和NK細胞之數目。
具體實例471. 根據具體實例1至470中任一例之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的重症照護設施或熟習心肺或重症加護醫療之專家。
具體實例472. 根據具體實例471之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的重症照護設施。
具體實例473. 根據具體實例471之方法，其中投予該對象有效量的IL-2接合物不需要有可取得的熟習心肺或重症加護醫療之專家。
具體實例474. 根據具體實例1至473中任一例之方法，其中該癌症為實體腫瘤之形式。
具體實例475. 根據具體實例1至473中任一例之方法，其中該癌症為液體腫瘤之形式。
具體實例476. 根據具體實例381至475中任一例之方法，其中該IL-2接合物係在投予該對象一或多個免疫檢查點抑制劑之前，投予該對象。
具體實例477. 根據具體實例381至475中任一例之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑在投予該對象IL-2接合物之前，投予該對象。
具體實例478. 根據具體實例381至475中任一例之方法，其中該IL-2接合物和一或多個免疫檢查點抑制劑係同時投予該對象。
具體實例479. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經與PEG基團共價鍵結的半胱胺酸置換。
具體實例480. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有選自下列之分子量：5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa及60kDa。
具體實例481. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有5kDa之分子量。
具體實例482. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有10kDa之分子量。
具體實例483. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有15kDa之分子量。
具體實例484. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有20kDa之分子量。
具體實例485. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有25kDa之分子量。
具體實例486. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有30kDa之分子量。
具體實例487. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有35kDa之分子量。
具體實例488. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有40kDa之分子量。
具體實例489. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有45kDa之分子量。
具體實例490. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有50kDa之分子量。
具體實例491. 根據具體實例479之方法，其中PEG基團具有60kDa之分子量。
具體實例492. 根據具體實例479至491中任一例之方法，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列且至少一個在IL-2接合物中經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自K34、T36、R37、T40、F41、K42、F43、Y44、E60、E61、E67、K63、P64、V68、L71及Y106。
具體實例493. 根據具體實例479至491中任一例之方法，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列且至少一個在IL-2接合物中經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自 K34、T40、F41、K42、Y44、E60、E61、E67、K63、P64、V68及L71。
具體實例494. 根據具體實例479至491中任一例之方法，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列且至少一個在IL-2接合物中經半胱胺酸置換的胺基酸殘基係選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。
具體實例495. 根據具體實例479至494中任一例之方法，其中該一或多種另外的藥劑為一或多個由下列組成之群中選出的免疫檢查點抑制劑：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、OX40促效劑和4-1BB促效劑。
具體實例496. 根據具體實例495之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-1抑制劑。
具體實例497. 根據具體實例496之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗、納武單抗、西普利單抗、派姆單抗、AMP-224、信迪利單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗、替雷利珠單抗、達斯特單抗 (GSK)、PDR001 (Novartis)、MGA012 (Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404 (Amgen)。BI-754091 (Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014 (Jounce)、PF-06801591 (Pfizer)及傑諾單抗(Apollomics/Genor BioPharma)。
具體實例498. 根據具體實例495之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-L1抑制劑。
具體實例499. 根據具體實例498之方法，其中該一或多個PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、ASC22(Αmab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501 (TG Therapeutics)。
具體實例500. 根據具體實例495之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。
具體實例501. 根據具體實例500之方法，其中個該一或多CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗、伊匹單抗及AGEN-1884 (Agenus)。
具體實例502. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中至少一個非離胺酸殘基係經包括連接子和水溶性聚合物的離胺基酸置換。
具體實例503. 如具體實例502之方法，其中該水溶性聚合物為PEG基團。
具體實例504. 根據具體實例502或503之方法，其中該一或多種另外的藥劑為一或多由下列組成之群中選出的免疫檢查點抑制劑係：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、OX40促效劑和4-1BB促效劑。
具體實例505. 根據具體實例504之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-1抑制劑。
具體實例506. 根據具體實例505之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗、納武單抗、西普利單抗、派姆單抗、AMP-224、信迪利單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗、替雷利珠單抗、dostarlimab (GSK)、PDR001 (Novartis)、MGA012 (Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404 (Amgen)。BI-754091 (Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014 (Jounce)、PF-06801591 (Pfizer)及傑諾單抗(Apollomics/Genor BioPharma)。
具體實例507. 根據具體實例506之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-L1抑制劑。
具體實例508. 根據具體實例507之方法，其中該PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、ASC22(Αmab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501 (TG Therapeutics)。
具體實例509. 根據具體實例508之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。
具體實例510. 根據具體實例509之方法，其中該一或多個CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗、伊匹單抗及AGEN-1884 (Agenus)。
具體實例511. 如具體實例1至510中任一例之方法，其中該IL-2接合物係包括一經由不可釋放鍵聯共價鍵結的PEG基團。
具體實例512. 如具體實例11至511中任一例之方法，其中該IL-2接合物係包括一不可釋放、共價鍵結之PEG基團。
具體實例513. 根據具體實例1至512中任一例之方法，其中在投予該IL-2接合物和一或多種另外的藥劑之後，該對象係經歷一藉由實體腫瘤反應評估標準(iRECIST)所測量之反應。
具體實例514. 根據具體實例513之方法，其中該反應為一完全反應、部分反應或穩定的疾病。
具體實例515. 根據具體實例1至514中任一例之方法，其中該IL-2接合物係藉由靜脈內、皮下、肌肉內、腦內、鼻內、動脈內、關節內、皮內、眼內、骨內輸注、腹膜內或鞘內給藥，投予該對象。
具體實例516. 根據具體實例515之方法，其中該IL-2接合物係藉由靜脈內、皮下或肌肉內給藥，投予一對象。
具體實例517. 根據具體實例515之方法，其中該IL-2接合物係藉由靜脈內給藥，投予一對象。
具體實例518. 根據具體實例515之方法，其中該IL-2接合物係藉由皮下給藥，投予一對象。
具體實例519. 根據具體實例515之方法，其中該IL-2接合物係藉由肌肉內給藥，投予一對象。
具體實例520. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為具有SEQ ID NO：3之IL-2接合物，其中在IL-2接合物中非離胺酸胺基酸係經離胺酸殘基置換且其中該離胺酸殘基係包括一或多個水溶性聚合物和共價連接子。
具體實例521. 如具體實例520之方法，其中該離胺酸殘基係位於SEQ ID NO：3之K34-Y106區中。
具體實例522. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於K34。
具體實例523. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於F41。
具體實例524. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於F43。
具體實例525. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於K42。
具體實例526. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於E61。
具體實例527. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於P64。
具體實例528. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於R37。
具體實例529. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於T40。
具體實例530. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於E67。
具體實例531. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於Y44。
具體實例532. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於V68。
具體實例533. 如具體實例521之方法，其中該離胺酸殘基係位於L71。
具體實例534. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多種另外的藥劑，其中該IL-2接合物為一介白素-2(IL-2)變體，其中在IL-2變體的胺基酸序列中非-離胺酸胺基酸係經胺基酸取代，而該胺基酸係包括：(a)離胺酸；(b)共價連接子；和(3)一或多個水溶性聚合物。
具體實例535. 如具體實例520至534中任一例之方法，其中一或多個水溶性聚合物係包括PEG基團。
具體實例536. 如具體實例535之方法，其中PEG基團為支鏈或直鏈PEG基團。
具體實例537. 根據具體實例520至536中任一例之方法，其中該一或多種另外的藥劑為一或多個由下列組成之群中選出的免疫檢查點抑制劑：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、OX40促效劑和4-1BB促效劑。
具體實例538. 根據具體實例537，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-1抑制劑。
具體實例539. 根據具體實例538之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗、納武單抗、西普利單抗、派姆單抗、AMP-224、信迪利單抗、特瑞普利單抗、卡瑞利珠單抗、替雷利珠單抗、達斯特單抗 (GSK)、PDR001 (Novartis)、MGA012 (Macrogenics/Incyte)、GLS-010 (Arcus/Wuxi)、AGEN2024 (Agenus)、西妥昔單抗(Janssen)、ABBV-181 (Abbvie)、AMG-404 (Amgen)。BI-754091 (Boehringer Ingelheim)、CC-90006 (Celgene)、JTX-4014 (Jounce)、PF-06801591 (Pfizer)及傑諾單抗(Apollomics/Genor BioPharma)。
具體實例540. 根據具體實例539之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自PD-L1抑制劑。
具體實例541. 根據具體實例540之方法，其中該PD-L1抑制劑係選自阿替珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、ASC22(Αmab/Ascletis)、CX-072 (Cytomx)、CS1001 (Cstone)、科西貝利單抗(Checkpoint Therapeutics)、INCB86550 (Incyte)及TG-1501 (TG Therapeutics)。
具體實例542. 根據具體實例541之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑係選自CTLA-4抑制劑。
具體實例543. 根據具體實例542之方法，其中該CTLA-4抑制劑係選自替西木單抗、伊匹單抗及AGEN-1884(Agenus)。
具體實例544. 根據具體實例381至543中任一例之方法，其中該方法進一步係包括投予該對象一治療上有效量之一或多種血管內皮細胞生長因子(VEGF)路徑或哺乳動物雷帕黴素標靶(mTOR)抑制劑。
具體實例545. 根據具體實例544之方法，其中係投予該對象一或多個VEGF路徑抑制劑。
具體實例546. 根據具體實例545之方法，其中該一或多個VEGF路徑抑制劑係由下列組成之群中選出：血管內皮細胞生長因子受體(VEGFR)酪胺酸激酶抑制劑(TKI)和抗-VEGF單株抗體。
具體實例547. 根據具體實例546之方法，其中該一或多個VEGF路徑抑制劑係選自一或多個VEGFR TKI。
具體實例548. 根據具體實例547之方法，其中該一或多個VEGFR TKI係由下列組成之群中選出：卡博替尼(cabozantinib)、阿昔替尼(axitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、索拉非尼(sunitinib)或舒尼替尼(sorafenib)。
具體實例549. 根據具體實例548之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為卡博替尼。
具體實例550. 根據具體實例548之方法，其中該一或多個VEGFR TKIs為阿昔替尼。
具體實例551. 根據具體實例548之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為帕唑帕尼。
具體實例552. 根據具體實例548之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為舒尼替尼。
具體實例553. 根據具體實例548之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為索拉非尼。
具體實例554. 根據具體實例546之方法，其中該一或多個VEGF路徑抑制劑係選自一或多個抗-VEGF單株抗體。
具體實例555. 根據具體實例554之方法，其中該一或多個抗-VEGF單株抗體為貝伐珠單抗。
具體實例556. 根據具體實例544之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑係由下列組成之群中選出：雷帕黴素(rapamycin)、依維莫司(everolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)及地福莫司(deforolimus)。
具體實例557. 根據具體實例556之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑為雷帕黴素。
具體實例558. 根據具體實例556之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑為依維莫司。
具體實例559. 根據具體實例556之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑為替西羅莫司。
具體實例560. 根據具體實例556之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑為、地磷莫司(ridaforolimus)。
具體實例561. 根據具體實例556之方法，其中該一或多個mTOR抑制劑為地福莫司(deforolimus)。
具體實例562. 根據具體實例544至561中任一例之方法，其中該對象中的癌症為腎細胞癌(RCC)。
具體實例563. 根據具體實例562之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為阿昔替尼或卡博替尼。
具體實例564. 根據具體實例562之方法，其中該一或多個VEGFR TKI為卡博替尼。
具體實例565. 根據具體實例381至543中任一例之方法，其中該一或多種另外的藥劑進一步係包括一或多種化療劑。
具體實例566. 根據具體實例565之方法，其中該一或多種化療劑係包括一或多種以鉑為基底的化療劑。
具體實例567. 根據具體實例565之方法，其中該一或多種化療劑係包括卡鉑和培美曲塞(pemetrexed)。
具體實例568. 根據具體實例565之方法，其中該一或多種化療劑係包括卡鉑(carboplatin)和nab-紫杉醇(nab-paclitaxel)。
具體實例569. 根據具體實例565之方法，其中該一或多種化療劑係包括卡鉑和多西紫杉醇(docetaxel)。
具體實例570. 根據具體實例565至569中任一例之方法，其中該對象中的癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。
具體實例571. 根據具體實例1至570中任一例之方法，其中該一或多種另外的藥劑為一或多種化療劑。
具體實例572. 根據具體實例571之方法，其中該一或多種化療劑係包括一或多種以鉑為基底的化療劑。
具體實例573. 根據具體實例1至572中任一例之方法，其中該對象在投予IL-2接合物和一或多種另外的藥劑之前，經檢測人類乳突病毒(HPV)為陽性。
具體實例574. 根據具體實例572之方法，其中該對象中的癌症為頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)。
具體實例575. 根據具體實例1至572中任一例之方法，該方法進一步包括該對象經檢測人類乳突病毒(HPV)為陽性(HPV+)，接著投予該IL-2接合物和一或多種另外的藥劑。
具體實例576. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VIII)或(IX)之結構，或(VIII)和(IX)之混合物置換：式(VIII)(IX) 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：, 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例576.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑之方法，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VIII)或(IX)之結構，或(VIII)和(IX)之混合物置換：式(VIII)(IX) 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例577. 如具體實例576或576.1之方法，其中在IL-2接合物中位於E61的胺基酸殘基係經式(VIII)或(IX)之結構，或(VIII)和(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。
具體實例578. 如具體實例577之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。
具體實例579. 如具體實例577或578之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗或納武單抗。
具體實例580. 如具體實例579之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例581. 如具體實例579之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例582. 如具體實例576或576.1之方法，其中在IL-2接合物中位於P64的胺基酸殘基係經式(VIII)或(IX)之結構，或(VIII)和(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。
具體實例583. 如具體實例582之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。
具體實例584. 如具體實例582或583之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗或納武單抗。
具體實例585. 如具體實例584之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例586. 如具體實例584之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例587. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VI)或(VII)之結構，或(VI)和(VII)之混合物置換：式(VI)(VII) 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：， 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例587.1. 一種於一對象中治療癌症的方法，該方法係包括於一有此需要的對象中投予一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個PD-1抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中在IL-2接合物中位於E61或P64的胺基酸殘基係經式(VI)或(VII)之結構，或(VI)和(VII)之混合物置換：式(VI)(VII) 其中： n為一整數使得PEG基團的分子量為從約15,000道爾頓至約60,000道爾頓；及 X具有下列結構：； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 或其醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例588. 如具體實例587或587.1之方法，其中在IL-2接合物中位於E61的胺基酸殘基係經式(VI)或(VII)之結構，或(VI)和(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。
具體實例589. 如具體實例588之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約30,000道爾頓。
具體實例590. 如具體實例588或589之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗或納武單抗。
具體實例591. 如具體實例590之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例592. 如具體實例590之方法，其中此一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例593. 如具體實例587或587.1之方法，其中在IL-2接合物中位於P64的胺基酸殘基係經式(VI)或(VII)之結構，或(VI)和(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為從約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。
具體實例594. 如具體實例593之方法，其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30,000道爾頓。
具體實例595. 如具體實例593或594之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗或納武單抗。
具體實例596. 如具體實例595之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
具體實例597. 如具體實例595之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
具體實例598。 如具體實例1-597中任一例之方法，其中該IL-2接合物為一醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
具體實例599. 一種IL-2接合物，係用於如具體實例1-598中任一例之方法。
具體實例600。 一種IL-2接合物之用途，係用於製造醫藥品供根據具體實例1-598中任一例之方法治療癌症。實例
這些實例僅提供做為說明性目的且並非限制文中所提供的請求項之範圍。
在實例2至8中所揭示的各化合物係利用SEQ ID NO：4和[AzK_PEG]基團，其中在IL-2接合物中經取代的胺基酸位置係參照SEQ ID NO：4中的位置。
例如，在表 3A
和3B
中標示「P65_5kD」的化合物係使用類似實例2中所揭示的方法所製備，其中首先係製備具有SEQ ID NO：4之蛋白，其中在位置65的脯胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)(SEQ ID NO：10)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有5kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和(III)之混合物的SEQ ID NO：20之產物，其中W為一具有5kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。
在另外的實例中，用於實例4、實例5、實例6及實例11(在實例11中亦稱為「IL-2_P65[AzK_PEG30kD]」且就實例11及圖示中係稱為「化合物A」)中，在表 3A
和3B
中標示「P65_30kD」的化合物，首先係先藉由製備具有SEQ ID NO：4之蛋白所製備，其中在位置65的脯胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)(SEQ ID NO：10)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和(III)之混合物的SEQ ID NO：25之產物，其中W為一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置65的脯胺酸(P65)係經式(VI)或(VII)之結構或(VI)和(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置65的脯胺酸(P65)係經式(X)或(XI)之結構或(X)和(XI)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。
在另外的實例中，在表 3A
和3B
中標示「P62_5kD」的化合物首先係先藉由製備具有SEQ ID NO：4之蛋白所製備，其中在SEQ ID NO：4位置62的麩胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸AzK (SEQ ID NO：11)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有5kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和(III)之混合物的SEQ ID NO：21之產物，其中W為一具有5kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。
在另外的實例中，在表 3A
和3B
中標示「E62_30kD」且亦用於實例4中的化合物首先係先藉由製備具有SEQ ID NO：4之蛋白所製備，其中在位置62的麩胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)(SEQ ID NO：11)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和(III)之混合物的SEQ ID NO：26之產物，其中W為一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置62(E62)的麩胺酸係經式(VI)或(VII)之結構或(VI)和(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置62(E62)的麩胺酸係經式(X)或(XI)之結構或(X)和(XI)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。
在另外的實例中，在表 3A
和3B
中標示「K35_30kD」且亦用於實例8中的化合物首先係先藉由製備具有SEQ ID NO：4之蛋白所製備，其中在位置35的離胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK) (SEQ ID NO：14)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和(III)之混合物的SEQ ID NO：20之產物，其中W為一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置35的離胺酸(K35)係經式(VI)或(VII)之結構或(VI)和(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置35的離胺酸(K35)係經式(X)或(XI)之結構或(X)和(XI)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團具有約30 kDa之分子量。
實例9和10係利用包括SEQ ID NO：50之化合物「IL-2_P65_[AzK_L1_PEG30kD]-1」，其中在位置64的脯胺酸係經AzK_L1_PEG30kD置換，其中AzK_L1_PEG30kD係定義為式(IV)或式(V)之結構或式(IV)和(V)之混合物及30 kDa直鏈mPEG。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置64的脯胺酸(P64)係經式(VIII)或(IX)之結構或(VIII)和(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團之分子量為約30 kDa。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中在位置64的脯胺酸(P64)係經式(XII)或(XIII)之結構或(XII)和(XIII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團之分子量為約30 kDa。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1在實例12和其後實例中及在圖示中係稱為「化合物B」。此化合物係使用類等揭示於實例2中的方法所製備，其中係先製備具有SEQ ID NO：3之蛋白，其中在位置64的脯胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸AzK (SEQ ID NO：35)置換。然後讓含有AzK-蛋白於點擊化學條件下與包括具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應。
實例11係利用上述的化合物「IL-2_P65[AzK_PEG30kD]」(文中亦稱為「P65_30kD」)。實例 1
激酶和細胞激素受體二聚化分析
細胞處理
將PathHunter細胞株從冷凍儲液根據標準程序擴增。將細胞以20 µL的總體積植入白色孔壁、384-孔微量盤並在檢測前培養適當的時間。促效劑模式
關於促效劑測定，係將細胞與樣本培養，誘發反應。進行樣本儲液之中間稀釋，產生溶於分析緩衝液之5X樣本。將約5 µL的5X樣本加到細胞中並依分析而定，於37°C培養6至16小時。媒劑濃度為1%。訊號偵測
關於促效劑和拮抗劑分析，係分別經由單次加入12.5或15 µL (50 % v/v)的PathHunter偵測試劑混合液，係產生分析訊號，接著於室溫培養1小時。就某些分析，係使用高敏感性偵測試劑(PathHunter Flash套組)偵測活性，用以提升分析效能。在這些分析中，係於孔槽中加入等體積的偵測試劑(25或30 µL)，接著於室溫培養1小時。在訊號產生後以PerkinElmer EnvisionTM儀器讀取微量盤讀數進行化學發光訊號偵測。數據分析
使用CBIS數據分析套件(ChemInnovation, CA)分析化合物活性。就促效劑分析，係使用下列公式計算活性百分比： 活性%=100% x (試驗樣本的平均RLU–媒劑對照組的平均RLU)/(對照配體的平均MAX RLU– 媒劑對照組的平均RLU)。
關於拮抗劑模型分析，係使用下列公式計算抑制百分比： 抑制% =100% x (1 - (試驗樣本的平均RLU–媒劑對照組的平均RLU)/(EC80對照組的平均RLU–媒劑對照組的平均RLU)。實例 2
用於鑑別未連結
IL-2R
α
之聚乙二醇化
IL-2
化合物的以細胞為主之篩選
將例示的IL-2接合物進行功能性分析：K35、F42、K43、E62和P65。將IL-2接合物於大腸桿菌中使用文中所揭示的方法表現為包涵體，其中係製備編碼此帶有所欲胺基酸序列之蛋白的表現質體，其係含有(a)包括第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸之非天然鹼基對，用以提供在所欲位置之密碼子，在該位置係併入一非天然胺基酸N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)及一在tRNA的相配反密碼子，(b)一編碼衍生自馬氏甲烷八疊球菌之tRNA的質體且其係包括一非天然核苷酸用以提供一相配的反密碼子取代其天然序列，(c)一編碼巴氏甲烷八疊球菌衍生的吡咯離胺醯基-tRNA合成酶(Mb
PylRS)之質體及(d)N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)。編碼所欲IL-2變體之胺基酸序列的雙股寡核苷酸，在例如編碼具有SEQ ID NO：3之蛋白序列的位置34、37、40、41、42、43、44、61、64、68或71，或編碼具有SEQ ID NO：4之蛋白序列的位置35、38、41、42、43、45、62、65、69或72含有一密碼子AXC，其中X為如文中所揭示之非天然核苷酸。在某些具體實例中，此細胞進一步係包括可為蛋白表現質體之質體或編碼來自馬氏甲烷八疊球菌的正交tRNA基因之另外質體，其係包括一與AXC-相配之反密碼子GYT取代其天然序列，其中Y為如文中所揭示之非天然核苷酸且其可與密碼子中的非天然核苷酸為相同的或不同的。X和Y係選自如文中所揭示之非天然核苷酸dTPT3、dNaM和dCNMO。使用標準程序純化此表現蛋白，之後使用DBCO-媒介的無銅點擊化學將穩定的共價mPEG基團與AzK相連接進行含有AzK-之IL-2產物位點專一性聚乙二醇化(流程 1
)。
流程 1
例示的AzK_PEG介白素變體之合成(其中n係指重複的PEG單元之數目)。AzK基團與DBCO炔基基團的反應可得到一位置異構物產物或位置異構物產物之混合物。
於Discoverx (Fremont, CA)使用PathHunter IL-2細胞激素受體分析進行IL-2接合物之功能活性篩選。此分析係使用表現IL-2受體β(IL-2Rβ)和γ(IL-2Rγ)亞單位之重組的人類U2OS細胞株，其各自係與一半的分裂報導子酵素β-半乳糖苷酶融合。第二細胞株已進一步工程化用以表現IL-2Rα亞單位。這二株細胞株之平行檢測能評估IL-2受體αβγ以及基礎βγ複合物之變體活化。IL-2 βγ受體複合物上的IL-2促效劑刺激受體二聚化及報導子β-半乳糖苷酶重建，產生化學發光訊號。此分析係以促效劑模式運作，用以測定各受試物品之EC50
且比較IL2Rα陽性和陰性細胞類型之間的劑量反應曲線態樣能測定IL2Rα對所觀察的活性之貢獻。
表2係顯示在以細胞為主之篩選中對10kD(除非有標註)PEG化IL-2接合物之IL-2受體促效作用的EC50數據。表 2.
*係指30kD PEG化IL-2接合物。
| 位置 | βγ EC50 (nM) | αβγ EC50 (nM) | βγ/αβγ 比率 |
| 天然 | 1.68 | 0.074 | 23 |
| 理想 | 1.68 | 1.68 | 1 |
| K35 | 6.75 | 0.15 | 45 |
| F42 | 6.09 | 0.515 | 12 |
| K43 | 9.84 | 0.131 | 75 |
| E62 | 3 | 1.5 | 2 |
| P65* | 23.8 | 4.44 | 5 |
| R38 | 4.16 | 0.165 | 25 |
| T41 | 6.37 | 0.0489 | 130 |
| E68 | 7.70 | 0.0893 | 86 |
| Y45* | 9.06 | 0.110 | 83 |
| V69* | 9.99 | 0.083 | 121 |
PEG
化
IL-2
與人類
IL-2
受體亞單位
之生化相互作用
使用表面電漿共振(SPR)於Biosensor Tools LLC (Salt Lake City, UT)測定PEG化IL-2化合物與人類L-2受體亞單位相互作用的動力學。就這些研究，係將人類IgG1 Fc-融合IL-2 Rα(Sino Biological #10165-H02H)和β(Sino Biological #10696-H02H)胞外區捕捉至Biacore蛋白A-塗覆CM4感應晶片之表面。這些表面係以雙重複，以二-倍連續稀釋以2µM的天然IL-2(野生型IL-2；Thermo # PHC0021)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD或E62_5kD開始，使用Biacore 2000 SPR儀器探測。注射試驗樣本歷時60秒用以測量結合，接著僅注射緩衝液(清洗)歷時30秒用以測量解離。將反應單位(RU，Y-軸)對時間(s，X-軸)作圖。
就評估IL-2受體α亞單位對IL-2結合β之效應，係以相對於β約二-倍超量捕捉α。於這些表面，以三-倍連續稀釋於2.5µM開始，施以天然IL-2(野生型IL-2)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD或E62_5kD。將包括大變動之結合數據與1：1相互作用模型擬合且摘要動力學參數係彙整於表 3A
和表 3B
中。如表 3A
和表 3B
中所示，小的PEG消除IL2Rα結合，但對IL2Rβ結合具有較低非專一性效應。表 3A
. IL-2變體與個別IL-2受體亞單位表面–IL-2受體α表面相互作用的動力學參數
表 3B.
IL-2變體與個別IL-2受體亞單位表面–IL-2受體β表面相互作用的動力學參數
| ka (M-1 s-1 ) | kd (s-1 ) | KD (µM) | |
| IL-2天然 | 4.5 ± 0.3 x107 | 0.410 ± 0.01 | 0.009 ± 0.002 |
| P65_30kD | 114 ± 36 x107 | 0.018 ± 0.008 | 158 ± 21 |
| P65_5kD | 797 ± 226 x107 | 0.033 ± 0.004 | 42 ± 7 |
| E62_30kD | 333 ± 88 x107 | 0.050 ± 0.01 | 162 ±7 |
| E62_5kD | 1010 ± 41 x107 | 0.035 ± 0.002 | 34.4 ± 0.3 |
| ka (M-1 s-1 ) | kd (s-1 ) | KD (µM) | |
| IL-2天然 | 1.3 ± 0.2 x106 | 0.185 ± 0.009 | 0.145 ± 0.005 |
| P65_30kD | 1.8 ± 0.2 x105 | 0.370 ± 0.01 | 2.09 ± 0.09 |
| P65_5kD | 9.0 ± 0.4 x105 | 0.270 ± 0.01 | 0.305 ± 0.002 |
| E62_30kD | 1.8 ± 0.4 x105 | 0.208 ± 0.006 | 1.14 ± 0.01 |
| E62_5kD | 6.6 ± 0.8 x105 | 0.281 ± 0.004 | 0.428 ± 0.00 |
在初級人類白血球減除系統
(LRS)-
衍生的
PBMC
樣本中
IL-2
化合物之活體外免疫反應剖析
為了測定IL-2 P65_30kD、K64_30kD、K43_30kD、K35_30kD和F42_30kD之差異性受體專一性如何達到初級免疫細胞亞群族之活化，係使用多色流式細胞分析於人類LRS-衍生的週邊血液單核細胞(PBMC)樣本中進行淋巴細胞活化的濃度反應剖析。這些研究係於PrimityBio LLC (Fremont, CA)進行。將新鮮LRS-衍生的樣本以天然IL-2、L-2 P65_30kD、K64_30kD、K43_30kD、K35_30kD及F42_30kD以5-倍連續稀釋由30 µg/mL的最高濃度開始進行處理。培養45 min後，將樣本固定並以抗體染色，偵測轉錄因子STAT5(pSTAT5)(一種上游結合標記)之磷酸化形式和IL-2受體訊號傳遞複合物的活化及一組表面標記用以追蹤特異性T細胞和天然殺手(NK)細胞亞群族中pSTAT5形成。用於LRS-衍生的PBMC樣本之流式細胞研究的染色板組係包括效應子T細胞(Teff：CD3+、CD4+、CD8+、CD127+)、NK細胞(CD3-、CD16+)及調節T細胞(Treg：CD3+、CD4+、CD8-、IL-2Rα+、CD127-1)標記。
就不同T和NK細胞亞組在濃度反應模式之活化，將分析流式細胞術數據，以天然IL-2處理後，讀取pSTAT5累積量。由於IL-2 Rα之Treg-專一性表現，相較於CD8 Teff和NK細胞，天然IL-2展現在Treg中對pSTAT5刺激之增強效力。相較於天然化合物，PEG化的變體在CD8 T細胞和NK細胞群族上展現中度降低的效力，但在有關天然IL-2之IL-2 Rα表現Treg細胞的效力上顯現差異的下降。
表 4
係提供在人類LRS樣本或經所示的IL-2變體處理之CTLL-2增生中pSTAT5訊號傳遞(EC50)的劑量反應EC50。 表4. 在人類LRS樣本或經所示的IL-2變體處理之CTLL-2增生中pSTAT5訊號傳遞(EC50)的劑量反應EC50
N.D。= 未測定
| 處理 | NK 細胞 | Treg 細胞 | CD8+T 細胞 | CD8/Treg 比率 | CTLL-2 |
| 天然IL-2 | 5150.5 | 62.5 | 25703.5 | 411.3 | 846 |
| E62_30kD | 12834 | 37213 | 66644 | 1.8 | 398,012 |
| E62_5kD | 5327.5 | 18146 | 41552.5 | 2.3 | 275,590 |
| E62K | 10305 | 11086 | 64037 | 5.8 | 58,213 |
| P65_30kD | 15741 | 40740.5 | 113638 | 2.8 | 677,198 |
| P65_5kD | 1920 | 6324.5 | 13769.5 | 2.2 | 194,924 |
| K35_30kD | 14021 | 358 | 63023 | 176.0 | N.D. |
| F42_30kD | 16397 | 36856 | 107944 | 2.9 | 123,936 |
| K43_30kD | 9004 | 4797 | 50504 | 10.5 | N.D. |
從MFI作圖產生的劑量反應曲線計算EC50值(pg/mL)。實例 3
PEG
和殘基取代促成
No-
α
藥理學
就測定PEG和殘基取代是否會影響IL-2 E62之no-α藥理學，係使用多色流式細胞術在人類LRS-衍生的週邊血液單核細胞(PBMC)樣本中進行淋巴細胞活化的濃度反應剖析。這些研究係以PrimityBio LLC (Fremont, CA)進行。將新鮮LRS-衍生的樣本以天然IL-2、、E62K或E62_30kD以5-倍連續稀釋由30 µg/mL的最高濃度開始進行處理。培養45 min後，將樣本固定並以抗體染色，偵測轉錄因子STAT5 (pSTAT5)(一種上游結合標記)之磷酸化形式和IL-2受體訊號傳遞複合物的活化及一組表面標記用以追蹤特異性T細胞和天然殺手(NK)細胞亞群族中pSTAT5形成。用於LRS-衍生的PBMC樣本之流式細胞研究的染色板組係包括標記CD4、CD4+記憶中心、CD4+記憶效用、 CD4+記憶T細胞、CD4+原生T細胞、CD4+ T細胞、CD8, CD8+記憶中心、CD8+記憶效用、CD8+記憶T細胞、CD8+ 原生T細胞、CD8+T細胞、NK細胞及T調節細胞。實例 4
在純淨
(naïve)
(E3826-U1704)
和帶有
B16-F1
腫瘤
(E3826-U1803)C57BL/6
小鼠中之
PK/PD
研究
此研究設計係彙整於表 5
和表 6
中，其中劑量係參考不包括PEG基團質量之蛋白組份的質量來計算。在所指的點經由心臟穿刺收集終端血液樣本。研究E3826-U1704，包括13個時間點(0.13、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、48、72、96和120 h)在每個時間點殺死3隻小鼠，及研究E3826-U1803係包括9個時間點(2、8、12、24、48、72、120、168和240 h)每個時間點殺死4-7隻小鼠。在E3826-U1803研究中收集血漿和血液細胞(在二個研究中)和腫瘤進行PK和PD分析。
使用定性人類IL-2 ELISA分析(Abcam, Cambridge, UK)進行血漿樣本的生物分析。使用ELISA分析測定阿地介白素(Aldesleukin)、E62_30kD和P65_30kD和在衍生自血漿的樣本中的內標準之濃度。以NW Solutions (Seattle, WA)進行PK數據分析。將PK數據輸入Phoenix WinNonlin v6.4 (Certara/Pharsight, Princeton, NJ)進行分析。以非房室法使用IV團注給藥模型，分析各組平均血漿濃度對時間的數據。表 5.
編號E3826-U1704–純淨C57/BL6小鼠中對照和試驗治療組之PK/PD研究
*劑量係指P65_30kD IL-2多肽量，其中劑量係參考不包括PEG基團質量之蛋白組份的質量來計算。表 6.
PK/PD研究編號E3826-U1803–對照組和試驗治療組-帶有B16F-10黑色素瘤小鼠(其中劑量係參考不包括PEG基團質量之蛋白組份的質量來計算)。
| 治療 | 劑量 *(mg/Kg) | 途徑，時程 | 時間點 | N |
| 對照組 | 0 | IV，單一劑量 | 13 | 3 |
| 阿地介白素 | 0.3 | IV，單一劑量 | 13 | 3 |
| P65_30kD | 0.3 | IV，單一劑量 | 13 | 3 |
| E62_30kD | 0.3 | IV，單一劑量 | 13 | 3 |
| 治療 | 劑量 *(mg/Kg) | 途徑，時程 | 時間點 | N |
| 無(預投予) | 0 mg/kg | 無 | 1 | 6 |
| 媒劑對照組 | 0 mg/kg | IV，單一劑量 | 9 | 3 |
| P65_30kD | 1 mg/kg | IV，單一劑量 | 9 | 4 |
| P65_30kD | 3 mg/kg | IV，單一劑量 | 9 | 4 |
在研究E3826-U1704中，如表 7
中所彙整的，相對於阿地介白素，P65_30kD和E62_30kD二者展現優越的PK樣貌。在單一IV團注之阿地介白素劑量後，在投予後0.03 h(投予後第一個測量點)觀察到Tmax且平均血漿濃度係在投予後4 h測量出。在單一IV團注投予P65_30kD和E62_30kD後，在投予後0.03 h觀察到Tmax且平均血漿濃度係在投予後120 h(最後測量時間點)測量出。在一個別的研究中，在IV投予E62_5kD後，在投予後0.133 h觀察到Tmax
且平均血漿濃度係在投予後12 h測量出。
以Cmax
和AUC0-t
為基準的暴露係如下：P65_30kD ＞E62_30kD ＞＞ E62_5kD＞阿地介白素。帶有較小PEG之E62_5kD具有較接近rIL-2之PK樣貌(表7
)。以Cmax和AUC0-t為基準，P65_30kD暴露比阿地介白素分別高5.5和200倍。此外，相較於阿地介白素，P65_30kD展現23-倍延長的t1/2(13.3 h對0.57 h)和約198-倍降低的CL (6.58對1300 mL/h/Kg)。就P65_30kD和E62_30kD二者，相對於阿地介白素，分布量(分別為82.4和92.3 mL/Kg)為約4.2至4.7-倍下降且類似於小鼠中的血容量(85 mL/Kg；[Boersen 2013])。此項顯示P65_30kD和E62_30kD大部份分布在全身的循環內。 表7. C57BL/6雌性小鼠中P65_30kD PK 參數
備註：R2
為各濃度對時間圖式之末期的適合度(goodness-of-fit)參數 所有的參數顯示3個顯著圖式。實例 5
| 參數 | 單位 | P65_30kD | E62_30kD | E62_5kD | 阿地介白素 |
| Tmax | h | 0.030 | 0.030 | 0.133 | 0.030 |
| Cmax | ng/mL | 4,870 | 4,230 | 936 | 884 |
| AUC0-t | h*ng/mL | 45,600 | 37,100 | 798 | 229 |
| R2 | 0.992 | 0.986 | 0.851 | 0.900 | |
| AUCINF | h*ng/mL | 45,600 | 37,100 | 807 | 230 |
| t1/2 | h | 13.300 | 14.500 | 2.56 | 0.573 |
| CL | mL/h/Kg | 6.580 | 8.07 | 372 | 1300 |
| Vss | mL/Kg | 82.4 | 92.3 | 404 | 390 |
週邊血液腔室中的藥效動力學觀察
使用STAT5磷酸化作用和誘發細胞增生作用(早期分子標記Ki-67和細胞計數)作為藥效動力學讀數，用以評估P65_30kD相對於其藥物動力學之藥理學樣貌。就P65_30kD和阿地介白素二者在CD8+效應子T細胞中，STAT5 PD標記顯示與PK的良好相關性(表7)。在NK和CD8+T細胞中觀察到持久性升高的pSTAT5高達72 h及在Treg中高達24 h。在以阿地介白素投予的小鼠中pSTAT5誘發在僅2 h後回到基線。STAT5磷酸化作用轉譯成CD8+效應子T細胞和NK細胞之增生反應(72 – 120 hrs)，但T reg則無，CD8+效應子T細胞之表型分析顯露了在此群族內實質的CD44+記憶細胞擴增。
在帶有
B16-F10
腫瘤
(E3826-U1803)C57BL/6
小鼠中腫瘤腔室之藥效動力學觀察
表 8
係顯示在3 mg/kg之單一劑量的P65_30kD後，在帶有B16-F10腫瘤小鼠中的血漿和腫瘤藥物濃度，其中劑量係參考不包括PEG基團質量的蛋白組份之質量所計算。腫瘤半衰期為血漿半衰期的二倍(24.4對12.6)，其表示P65_30kD穿透腫瘤且停留在腫瘤中。曲線交叉的尾端顯示血漿消除比腫瘤快(數據未顯示)。腫瘤：就1和3 mg/kg劑量，血漿AUC比率分別為9.7%和8.4%。表 8.
P65_30kD血漿和腫瘤PK參數帶有B16-F10腫瘤C57BL/6雌性小鼠
| 參數 | P65_30kD (3 mg/kg) | |
| 血漿 | 腫瘤 | |
| Tmax (h) | *2.00 | 8 |
| Cmax (ng/mL) | 40000 | 1550 |
| t1/2 (h) | 12.60 | 24.4 |
| AUC0-t (h*ng/mL) | 656,000 | 55200 |
| R2 | 0.974 | 0.988 |
| AUCINF (h*ng/mL) | 656,000 | 55200 |
Balb/c
小鼠
E3826-U1802
中的
MTD
研究
以純淨雌性Balb/c小鼠於Crown Biosciences, Inc.(San Diego, CA)進行P65_30kD之劑量範圍研究。研究設計係如表 9
中所示，其中劑量係參考不包括PEG基團質量的蛋白組份之質量所計算。經由頜下靜脈於8個時間點抽取血液樣本(0.25、1、4、12、24、34、48 & 72 h)。收集血漿和血液細胞進行PK和PD分析。
使用市售ELISA套組，將所有的血漿樣本進行人類IL-2以及小鼠IL-2、TNF-α、IFNγ、IL-5和IL-6細胞激素之分析。表 9.
PK/PD和MTD研究編號E3826-U1802–純淨Balb/C小鼠中對照組和試驗治療組
*除了72 hr時間點以外，所有的時間點係經由頜下靜脈收集血液。72 hr時間點為終末採血。 #僅使用0.3 mg/kg劑量的P65_30kD進行PK/PD評估。
| 治療 | 劑量 (mg/kg) | 途徑，時程 | 時間點 | N |
| 純淨 | 0 mg/kg | 0 | 3 | |
| 媒劑對照組 | 0 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 0.01 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 0.03 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 0.1 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 1.0 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 3.0 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| 阿地介白素 | 5.0 mg/kg | IV, BID x 3 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 0.01 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 0.03 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 0.1 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 1.0 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 3.0 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| P65_30kD | 5.0 mg/kg | IV，單一劑量 | 3 | 3 |
| #P65_30kD | 0.3 mg/kg | IV，單一劑量 | 8 | 3 |
使用
Balb/c
小鼠在
MTD
研究中之毒理學觀察
與高劑量阿地介白素有關的主要毒性為血管滲漏症候群和相關的細胞激素釋放症候群(CRS)。就評估此效應在小鼠中的潛在性，係以劑量範圍從0.01-5.0 mg/kg劑量之單一IV投予P65_30kD來進行(表 9
)，其中劑量係參考不包括PEG基團質量的蛋白組份之質量所計算。所進行的分析為血液學、組織學、器官重量和細胞激素分析。相對於媒劑對照組小鼠，投予P65_30kD或阿地介白素的小鼠在血液學、組織學或重量無觀察到異常。有關細胞激素的分析，從1 mg/kg開始至5 mg/kg觀察到阿地介白素提升血漿IL-5量。就P65_30kD，僅在5 mg/kg劑量見到中度增加的IL-5(但相較於阿地介白素為較低的)。在阿地介白素和P65_30kD中觀察到全身IFNγ量之暫時性升高。實例 6
食蟹獼猴
(
Cynomolgus monkeys
)
中的
PK/PD–
研究編號
：
20157276
以非純淨食蟹獼猴在0.3 mg/kg的單一靜脈內劑量給藥後評估P65_30kD的藥物動力學和藥效動力學，其中劑量係參考不包括PEG基團質量的蛋白組份之質量所計算。該研究係在Charles River Laboratories, Inc.(Reno, NV)進行且PK數據分析係於NW Solutions (Seattle, WA)進行。在投予前及15個時間點收集血液樣本(投予後0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72、120、144、168、192和 240 he)。收集血漿和血液細胞二者進行PK和PD分析。使用所選的時間點進行PK、PD、細胞群族和血液學分析。
使用市售ELISA套組對所有的血漿樣本進行人類IL-2(PK讀出)分析。
表 10
係顯示食蟹獼猴中的P65_30kD PK參數。表 10.
| 0.3 mg/kg | |||||
| 動物 2699 | 動物 2705 | 平均 | |||
| ROA | 參數 | 單位 | 估算值 | ||
| IV | Tmax | hr | 0.500 | 0.500 | 0.500 |
| Cmax | ng/mL | 11000 | 11400 | 11200 | |
| AUC0-t | hr*ng/mL | 121000 | 120000 | 121000 | |
| t1/2 | hr | 13.4 | 13.9 | 13.6 | |
| CL | mL/hr/kg | 2.47 | 2.49 | 2.48 | |
| Vss | mL/kg | 29.0 | 32.1 | 30.5 |
單一IV大劑量投予後，投予後0.5 h觀察到Tmax(投予後第一次測量時間點)及在投予後168 h測量出平均血漿濃度(最後一次測量)。P65_30kD的t1/2
和AUC分別為13.6 h和121000 hr*ng/mL。
血液學參數
-
食蟹獼猴
-
研究編號：
20157276
就血液學參數，評估時間係相當於第-1天投予前，以及投予後1、3、6、8、10、12、14、17、19、21天。
實例
7
例示的
IL-2
化合物在初級人類白血球減除系統
(LRS)-
衍生的
PBMC
樣本中之活體外免疫反應剖析
為了測定例示的IL-2化合物之差異性受體專一性如何達到初級免疫細胞亞群之活化，係使用多色流式細胞術於人類LRS-衍生的週邊血液單核細胞(PBMC)樣本中進行淋巴細胞活化之濃度-反應剖析。藉由SEQ NO. 1之修飾合成表 12
之接合物。這些研究係於PrimityBio LLC (Fremont, CA)進行。將衍生自人類LRS樣本的初級淋巴細胞以例示的IL-2化合物之連續稀釋液處理並使用表 11
中所示的小組以各淋巴細胞類型中的pSTAT5訊號傳遞為基準定量。表 11 .
關鍵指標細胞群族
| 標記 | 細胞群族 |
| CD3 | T細胞 |
| CD4 | 細胞 |
| CD8 | T效應子細胞 |
| CD45RA | 純淨T細胞 |
| CD56 | NK細胞 |
| CD14/19 | 單核細胞/B細胞 |
| CD25 | Treg或有經驗T細胞 |
| CD127 | 非Treg |
| CD62L | 記憶T與效應子記憶T細胞 |
| pSTAT5 (Y694) | 活化標記 |
以濃度-反應模式，以例示的IL-2變體K9_30kD治療後讀取pSTAT5累積，將流式細胞術數據進行不同T和NK細胞亞組之活化分析。
表 12
係顯示以所指的IL-2變體治療後，在人類LRS樣本或CTLL-2增生作用中pSTAT5訊號傳遞(EC50)之劑量反應EC50。表 12.
以所指的IL-2變體治療後，在人類LRS樣本或CTLL-2增生作用中pSTAT5訊號傳遞(EC50)之劑量反應EC50
*在各個別實驗中相較於天然IL-2(野生型IL-2)之Treg效力變化。
| 化合物 | NK 細胞 | CD8+ T 細胞 | Treg 細胞 | CD8+/Treg 比率 | Treg EC50 對比天然 IL-2 之增加倍數 | CTLL-2 增生作用 |
| 原生IL-2 | 4586 | 31024 | 75 | 414 | 1 | 455.8 |
| K9_30kD | 169578 | 1100679 | 2217 | 496 | 30 | 504 |
| H16_30kD | 2545257 | 12070108 | 34976 | 345 | 466 | 80755 |
| L19_30kD | 6756768 | 22436430 | 93205 | 241 | 1243 | 3510 |
| D20_30kD | 2643930 | 9505217 | 1129455 | 8 | 15059 | 689939 |
| M23_30kD | 143620 | 539824 | 1030 | 524 | 14 | 1102 |
| N26_30kD | 258531 | 1188859 | 2459 | 483 | 33 | 2594 |
| N88_30kD | 3298113 | 11111537 | 323201 | 34 | 4309 | 66606 |
| E100_30kD | 35088 | 195823 | 483 | 405 | 6 | 1676 |
| N119_30kD | 34010 | 143380 | 535 | 268 | 11 | 1215 |
| T123_30kD | 33396 | 152928 | 269 | 569 | 6 | 255 |
| Q126_30kD | 3676807 | 19722480 | 29454 | 670 | 393 | 3584 |
| S127_30kD | 20210 | 92190 | 150 | 615 | 3 | 123 |
| T131_30kD | 24207 | 132922 | 258 | 515 | 3 | 641 |
| N88R/D109_30kD | 2780819 | 12503386 | 175805 | 71 | 3663 | 59577 |
| V91K | 20537 | 102255 | 142 | 720 | 3 | 99.5 |
| N88R | 2312847 | 15025734 | 11082 | 1356 | 148 | 363 |
從MFI作圖產生之劑量反應曲線計算EC50值(pg/ml)。實例 8
C57BL/6
小鼠中的
PK
研究
實驗詳情係彙整於表 13
中，其中劑量係參考不包括PEG基團質量的蛋白組份之質量所計算。表 13.
| 組別 | 動物的數目 | 檢測/對照物(劑量) | 途徑，投予療法 | 療效評估點 |
| 1 | 9 | 原生IL-2(野生型) (3.0 mg/kg) 濃度：0.6 mg/mL | IV，第0天T=0以5 mL/kg單一劑量 | 於投予後0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、12及24小時收集血液 |
| 2 | 9 | K35_30kD (3.0 mg/kg) 濃度：0.6 mg/mL | IV，第0天T=0以5 mL/kg單一劑量 | |
| 3 | 9 | K35_30kD (0.3 mg/kg) 濃度：0.6 mg/mL | IV，第0天T=0以5 mL/kg單一劑量 | |
| 額外 | 6 | N/A | N/A | 空白基質收集 (未計時) |
| 總計 | 33 |
以二種劑量評估例示的PEG化IL-2化合物K35_30kD之藥物動力學性質。將凍乾試驗物以PBS重建並就各劑量組以0.3和3 mg/kg經由靜脈內尾靜脈注射投予9隻C57BL/6雄性小鼠(參見下文收集詳情)。於投予後0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、12及24小時收集血液樣本。使用來自Abcam (ab100566)不會與天然小鼠IL-2交叉反應之hIL-2 ELISA套組進行試驗物之偵測和定量。就調整天然和PEG化的化合物套組之ELISA-專一性差異敏感性，係使用試驗物稀釋緩衝液產生天然IL-2和K35_30kD試驗物標準曲線並就個別標準曲線分析數據。作圖之數據係代表如上述三個個別樣本之平均值和SEM(生物性重複)且K35_30kD試驗品之PK參數係摘錄及彙整於表 14
中。表 14
。
實例 9
| 分析物 | 單位 | 劑量 | ||
| 0.3 mg/kg | 3 mg/kg | |||
| 估算值 | ||||
| Tmax | hr | 0.250 | 0.250 | |
| Cmax | ng/mL | 6080 | 57700 | |
| AUCo-t | hr*/ng/mL | 38500 | 425000 | |
| R2 | 0.994 | 0.947 | ||
| IL-2 K35-mPEG30kD | AUC½extrap | % | 35.3 | 37.4 |
| AUC0-∞ | h*ng/mL | 59600 | 679000 | |
| t1/2 | hr | 18.2 | 19.5 | |
| Cmax /D | kg*ng/mL/mg | 20300 | 19200 | |
| AUCo-t /D | hr*ng/mL | 128000 | 142000 |
與人類
IL-2R
α
和
IL-2R
β
結合之特性
進行一研究找出例示的IL-2接合物IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1與人類IL-2Rα和IL-2Rβ之結合特性。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1係如先前之描述並包括SEQ ID NO：50，其中位置64的脯胺酸係經AzK_L1_PEG30kD置，其中AzK_L1_PEG30kD係定義為式(IV)或式(V之結構)或式(IV)和式(V)之混合物及一30 kDa直鏈mPEG鏈。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦定義為包括SEQ ID NO：3之化合物，其中位置64的脯胺酸係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦定義為包括SEQ ID NO：3之化合物，其中位置64的脯胺酸係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。
使用類似該等實例2中所揭示的方法製備化合物，其中首先製備一具有SEQ ID NO：3的蛋白，其中位置64的脯胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸AzK(SEQ ID NO：35)置換。然後讓含有AzK-的蛋白於點擊化學條件下與包括一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應。簡言之，將用於生物接合的IL-2使用文中所揭示的方法於大腸桿菌中表現為包涵體，該方法係使用：(a)一表現質體，其係編碼(i)具有所欲胺基酸序列的蛋白，其基因含有一第一非天然鹼基對，用以在所欲位置提供一密碼子，在該位置併入非天然胺基酸N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸 (AzK)，及(ii)一衍生自馬氏甲烷八疊球菌Pyl的tRNA，其基因係包括一第二非天然核苷酸用以提供一相配反密碼子取代其原生序列；(b)一編碼衍生自巴氏甲烷八疊球菌吡咯離胺醯基-tRNA合成酶(Mb
PylRS)的質體，(c)AzK；及(d)核苷酸三磷酸轉運體PtNTT2之剪切變體，其中全長蛋白的前65個胺基酸殘基係經刪除。編碼該IL-2變體之胺基酸序列的雙股寡核苷酸係含有一密碼子AXC為此序列的密碼子64，該序列係編碼具有SEQ ID NO：3之蛋白，其中P64係經文中所述的非天然胺基酸置換。編碼來自馬氏甲烷八疊球菌之正交tRNA基因的質體係包括一與AXC-相配的反密碼子GYT取代其原生序列，其中Y為如文中所揭示的非天然核苷酸。X和Y係選自如文中所揭示的非天然核苷酸dTPT3和dNaM。使用標準程序從包涵體萃取表現蛋白並再褶疊，之後使用DBCO-媒介的無銅點擊化學將穩定共價mPEG基團(具有30kDa之平均分子量的甲氧基直鏈PEG基團)與該AzK相連接，將含有AzK-的IL-2產物進行位點專一性peg化(如上述流程S6所概述)。
試驗物樣本與 IL-2R α 結合。
將試驗物樣本溶液進行IL-2Rα受體表面結合之試驗。使用Scrubber-2 (Biologic Software Pty Ltd)藉由減去來自無受體之參照表面的訊號以及緩衝注射液之平均值來處理反應數據。將rhIL-2系列濃度之反應與1：1包括質量轉移之相互作用模型全面擬合)。結合常數之彙整係提供於表 15
中。表 15.
| KD (nM) | ||
| IL-2 Rα | IL-2 Rβ | |
| rhIL-2 | 11 ± 1 | 0.7 ± 1 |
| IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1 | n.d. | 3.1 ± 0.3 |
於塗覆蛋白的 CM4 感測晶片上捕捉 Fc- 標記 IL-2R β
。將CM4感測晶片與Biacore 4000光學生物感測器相接合並以HBS-P電泳緩衝液(HBS-P為添加0.005%聚山梨醇酯(Tween)-20之1X HBS-N)啟動儀器三次。使用標準NHS/EDC偶合條件將蛋白A偶合。IL-2Rβ-Fc在水中解離至0.1 mg/ml的濃度及然後以電泳緩衝液稀釋1/1000。注射IL-2Rβ-Fc歷經不同的時間長度，製造2種不同密度的受體表面(~750 RU和1500 RU，數據未顯示)。
樣本與 IL-2R β 結合的特性
。將試驗物樣本溶液進行IL-2Rβ受體表面結合之試驗。使用Scrubber-2 (Biologic Software Pty Ltd)藉由減去來自無受體之參照表面的訊號以及緩衝注射液之平均來處理反應數據。將以雙重複試驗的rhIL-2 (4 uM最高濃度2-倍稀釋)和IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1樣本(8 uM最高濃度 2-倍稀釋)之反應與1：1包括質量轉移之相互作用模型全面擬合。結合常數之彙整係提供於表 15
中。
結果
。將His-標記IL-2Rα以不同密度捕捉至Biacore SPR感測系統內載有鎳的NTA感測晶片。以不同密度將Fc-標記IL-2Rβ捕捉至塗覆蛋白A的CM4感測晶片上。將反應數據與1：1相互作用模型擬合用以測定各相互作用的常數。重組的人類IL-2 (rhIL-2)係以約~11 nM的親和力與IL-2Rα結合，而IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1樣本與IL-2Rα可能偵測出為無結合。rhIL-2以~700 nM的親和力與IL-2Rβ結合，而IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-1在這些條件下係以~3 uM的親和力與IL-2Rβ結合。實例 10
進行一研究以測定IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1與重組人類介白素-2(hIL-2)對磷酸化形式的轉錄因子STAT5(pSTAT5)訊號傳遞效力人類初級免疫細胞類型之效力和差異性細胞類型專一性。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1係如先前描述並包括SEQ ID NO：50，其中位置64的脯胺酸殘基係經AzK_L1_PEG30kD置換，其中AzK_L1_PEG30kD係定義為式(IV)或式(V)之結構或式(IV)和式(V)之混合物及30 kDa直鏈mPEG鏈。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦定義為包括SEQ ID NO：3之化合物，其中位置64(P64)的脯胺酸係經式(VIII)或式(IX)之結構或式(VIII)和式(IX)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。化合物IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1亦定義為包括SEQ ID NO：3之化合物，其中位置64脯胺酸殘基係經式(XII)或式(XIII)之結構或式(XII)和式(XIII)之混合物置換且其中為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。使用類似該等實例2中所揭示的方法製備化合物，其中先製備一具有SEQ ID NO：3的蛋白，其中位置64的脯胺酸係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸 AzK (SEQ ID NO：35)置換。然後讓含有AzK-的蛋白於點擊化學條件下與包括一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應。
人類 PBM 樣本處理方法
。將IL-2(對照組，1 mg/mL)及IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(「批件1」：1.27 mg/mL；「批件2」：2.29 mg/mL)儲液以冷凍儲液儲存於-20°C。
將IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1批件1和批件2化合物以PBS稀釋及使用PBS + 0.1% BSA將IL-2稀釋，製造10X儲液。依照實驗，10X IL-2儲液濃度為5ug/mlGLP-1而GLP-2儲液係介於6-300 µg/ml。將10X儲液以5-倍稀釋度連續稀釋，製造10-點劑量效價。依照實驗，最高IL-2劑量為5 µg/ml而批件1和批件2儲液係介於6-300 µg/ml。將10 µl的各儲液加到90 µl的細胞樣本，達到IL-2最終最高濃度為500 ng/ml及各自批件1和批件2為0.6-30 µg/ml。
樣本刺激。
為刺激，係將上述之10 µl的劑量效價加到90 µl預平衡至37°C的血液樣本。將樣本於37°C培養45分鐘。在培養時間結束時，將紅血球溶解並同時如下固定細胞：
將100 µl細胞轉置於 00 µl的BD Lyse/固定緩衝液(Beckton Dickinson, Cat# 558049)及立刻旋轉。就在加入前藉由以細胞培養水以1：5稀釋儲液，製備BD Lyse/Fix。將樣本於室溫培養10分鐘，然後以450 x g離心5分鐘成細胞團。將細胞團以PBS+0.5% BSA清洗並儲存於-37°C直到分析。
染色法
步驟1.於室溫融化細胞。步驟2.加入Fc Block(TruStain FcX™)。步驟3.於室溫培養5分鐘。步驟4.加入下表 16
的抗體：表 16. 用於人類版組的抗體
.
| 螢光團 | |
| CD4 | BUV737 |
| CD56 | BV711 |
| CD16 | BV711 |
| CD8 | BUV805 |
| CD27 | BV786 |
| CD45RA | BUV395 |
| CD127 | FITC |
| CD25 | 生物素 |
步驟5.於室溫培養20分鐘。步驟6.以PBS+0.5% BSA清洗細胞二次。步驟7.於1體積量的細胞中加入10體積量的甲醇通透細胞。步驟8.於4°C培養細胞10分鐘。步驟9.以PBS清洗。步驟10.以PBS w/ 0.5% BSA清洗細胞。步驟11.加入Fc Block(TruStain FcX™)。步驟12.加入下表 17
的通透後染色版組。表 17 . 染色試劑
.
| 螢光團 | |
| CD3 | PE-Cy7 |
| STAT5 | Ax647 |
| 鏈黴親和素(Streptavidin) | BV421 |
| FOXp3 | PE |
流式細胞術和數據分析
。將樣本置於Becton Dickinson Fortessa和LSR II儀器上以五種雷射運作(372 nM、405 nM、488 nM、561 nM及640 nM)。此等儀器係配置20個包括散射參數之偵測器。將此等儀器使用Becton Dickinson Cytometer Setup & Tracking Beads規律地校正。將含有染色樣本的96孔盤以8,000個細胞/秒使用孔高通量取樣器運作。
將數據以.fcs檔案輸出到網路磁碟機及補償給用以說明外溢的螢光團且加註解在fcs檔案。然後閘控此等fcs檔案。首先使用FSC-A藉由FSC-H以單態閘控細胞，用以排除任何聚集物或雙態。在此閘控內，係以中度至高度前散射(FSC-A)和側面散射(SSC-A)閘控此等細胞，用以排除紅血球、碎片及粒細胞。然後閘控T細胞為CD3+、CD56/16陰性群族第3組。NK細胞經鑑別為CD3陰性、CD56/16高群族，第3組。然後將T細胞分成CD4+T細胞和CD8+T細胞。然後從CD4+T細胞閘控Treg細胞，為CD25高
x C127低
群組。
衍生 EC50 值之統計和作圖
。從偵測磷酸化之通道中的訊號計算各細胞群族、捐贈者和化合物治療的中位數螢光強度(MFI)。使用Spotfire分析統計學。在Spotfire內，數據就化合物劑量係以log尺度而就MFI讀數係以線性尺度作圖。使用4-參數邏輯回歸方程式擬合這些數據。計算EC50為此曲線之反曲點。
結果
。將人類IL-2和IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1樣本稀釋並以三重複對各如上述三個個別捐贈者進行試驗。所計算的半數最大有效濃度(EC50)值係列表19中。結果驗證了IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1在人類淋巴細胞中為一有效的IL-2受體訊號傳遞促效劑。與之前試管內結合研究相符，相較於並非結構上表現高量的IL-2Rα之Teff和NK細胞，其顯示IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1專一性結合IL-2R亞單位並不與IL2Rα結合，其驗證了在Treg細胞中專一降低的訊號傳遞效力其係依賴IL-2Rα結合才有效。表 18.
hIL-2和IL-2_P65[AzK_ L1_PEG30kD]-批件1對抗來自人類捐贈者之初級CD8+T細胞、NK細胞及Treg細胞亞群之效力特性
數據為從三個獨捐贈者之三重複試驗樣本所計算的平均值±平均值之標準差(SEM)。 *IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1.實例 11
| 人類 EC50 (ng/mL) | ||||||
| 物質 | CD8+ T | 記憶 CD8+ T | NK | Treg | CD8/Treg 比率 | |
| 人類 IL-2 | 12.4 ± 1.29 | 11.3 ± 1.63 | 2.88 ± 1.63 | 0.027 ± 0.005 | 460 | |
| 批件 1* | 224 ± 25.3 | 240 ± 27.3 | 54.7 ± 6.55 | 114 ± 20.3 | 2.0 | |
| 批件 2* | 265 ± 12.4 | 284 ± 18.3 | 55.7 ± 8.62 | 132 ± 24.0 | 2.0 |
使用化合物 A 加上檢查點抑制劑治療帶有 CT-26 腫瘤的 Balb/c 小鼠
。根據文中所揭示的方法藉由先製備具有SEQ ID NO：4的蛋白來製備化合物IL-2_P65[AzK_PEG30kD](在文中亦稱為「P65_30kD」及在圖式中係稱為「化合物A」)，其中位置65的脯胺酸殘基係經N
6-((2-疊氮乙氧基)-羰基)-L-離胺酸(AzK)(SEQ ID NO：10)置換。然後讓含有AzK-的蛋白於點擊化學條件下與包括一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團的DBCO反應，得到具有包括式(II)、式(III)或式(II)和式(III)混合物之SEQ ID NO：25的產物，其中W為一具有30kDa平均分子量之甲氧基直鏈PEG基團。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中位置65(P65)的脯胺酸殘基係經式(VI)或式(VII)之結構或式(VI)和式(VII)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。此化合物亦可定義為包括SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中位置65(P65)的脯胺酸殘基係經式(X)或式(XI)之結構或式(X)和式(XI)之混合物置換且其中n為一整數使得PEG基團的分子量為約30 kDa。
化合物A作為單一療法及與抗-PD-1抗體組合之研究係於Balb/c雌性小鼠中進行。Balb/c雌性小鼠6-8週大，具有16 g至21 g平均體重，係購自Jackson Laboratories (Sacramento, CA)用於研究1和2。Balb/c雌性小鼠，7-8週大，具有18 g至22 g平均體重，係由HD Biosciences購自Taconic Biosciences用於研究3。低溫保存的CT-26大腸癌細胞小瓶係購自American Tissue Type Collection (ATCC, Manassas, VA)。將細胞融化並根據製造商的方法培養。在腫瘤細胞接種當天，將細胞以無血清培養基清洗，計數及以每0.1 mL 250,000個(研究1和2)或300,000個(研究3)活細胞的濃度再懸浮冷的無血清培養基。將CT-26細胞(0.1 mL)以皮下注射至個別小鼠的側腹並讓腫瘤生長。
就其中使用化合物A和抗-PD-1抗體之組合的研究1和2，所用的抗體為抗小鼠PD-1(BioXcell；RMP1-14)及對照抗為IgG1同型抗體(BioXcell；catalog #BP0089, lot #2A3)。就其中使用抗-PD-1抗體的研究3，所用的抗體為抗小鼠PD- (BioXcell；產品編號#BP0146，RMP1-14，批號#695318A1)及對照抗體為IgG1同型抗體(BioXcell；產品編號#BP0089，批號#2A3)。
將凍乾化合物A以0.1 M乙酸重建成10 mg/mL儲液。然後將其以1x磷酸緩衝食鹽水(PBS)進一步稀釋成操作濃度。在投予動物的1小時內將化合物重建及稀釋並置於冰上直到投予。使用前將凍乾的化合物儲存於-80°C。媒劑係儲存於4°C。
使用帶有CT-26腫瘤Balb/c小鼠進行三個個別效用研究。研究1的設計，其係評估化合物A作為單一藥劑之劑量依賴的效用，係概述於表 19
中。研究2和3之設計，其係評估化合物與抗-PD-1抗體組合之效用，係分別概述於表 20
和表 21
中。化合物A的給藥途徑為靜脈內(IV)。小鼠中之IV投予係經由尾靜脈進行。抗體係以腹膜內(IP)給藥。所有的藥劑係以每次投予之前立即取得的各動物之個別體重為基準來給藥。投予療法之詳情係描述於下。表 19. 研究
#1：帶有CT-26腫瘤小鼠中之對照組和試驗治療組
IV = 靜脈內；QWx3 = 每週一次總計3個劑量；Q2Wx2 = 每2週一次總計2個劑量表 20.
研究#2：帶有CT-26腫瘤小鼠中之對照組和試驗治療組
BIWx3 = 每週2次進行3週總計6個劑量；IP = 腹膜內；IV = 靜脈內；QWx3 = 每週一次總計3個劑量表 21.
研究#3：帶有CT-26腫瘤小鼠中之對照組和試驗治療組
BIWx3 = 每週2次進行3週總計6個劑量；IP = 腹膜內；IV = 靜脈內；QWx3 =每週一次總計3個劑量；Q2Wx2 = 每2週一次總計2個劑量
| 藥劑 | 劑量 (mg/kg) | 途徑，時程 | 小鼠數目 |
| 媒劑對照組 | 0 | IV，QWx3 | 10 |
| 化合物A | 0.3 | IV，QWx3 | 10 |
| 化合物A | 0.3 | IV，Q2Wx2 | 10 |
| 化合物A | 1 | IV, QWx3 | 10 |
| 化合物A | 1 | IV, Q2Wx2 | 10 |
| 化合物A | 3 | IV，QWx3 | 10 |
| 化合物A | 3 | IV，Q2Wx2 | 10 |
| 藥劑 | 劑量 (mg/kg) | 途徑，時程 | 小鼠數目 |
| 媒劑對照組+ IgG同型對照 | 0 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
| 化合物A | 3 | IV，QWx3 | 14 |
| 化合物A | 6 | IV，QWx3 | 14 |
| 抗-PD-1抗體 | 10 | IP，BIWx3 | 14 |
| 化合物A + 抗-PD-1抗體 | 6 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
| 藥劑 | 劑量 (mg/kg) | 途徑，時程 | 小鼠數目 |
| 媒劑對照+IgG同型對照 | 0 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
| 化合物A | 1 | IV，QWx3 | 14 |
| 化合物A | 3 | IV，QWx3 | 14 |
| 化合物A | 6 | IV，QWx3 | 14 |
| 化合物A | 9 | IV，QWx3 | 14 |
| 抗-PD-1抗體 | 10 | IP, BIWx3 | 14 |
| 化合物A + 抗-PD-1抗體 | 1 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
| 化合物A + 抗-PD-1抗體 | 3 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
| 化合物A + 抗-PD-1抗體 | 6 + 10 | IV，QWx3 + IP, BIWx3 | 14 |
在研究1中，帶有CT-26腫瘤小鼠，係在腫瘤接種後第4天當平均腫瘤體積為~80 mm3
時開始係以媒劑IV治療每週一次總計3個劑量(QWx3)或化合物A以0.3、1或3 mg/kg IV，每週一次總計3個劑量(QWx3)，或每2週次總計2個劑量(Q2Wx2)。
在研究2中，帶有CT-26腫瘤小鼠係在腫瘤接種後第5天當平均腫瘤體積為~80 mm3
時治療。投予為以媒劑IV QWx3 + IgG同型對照IP或化合物A以3或6 mg/kg IV以QWx3投予時程，或抗-PD-1抗體以10 mg/kg IP，或化合物A以6 mg/kg IV QWx3 + 抗-PD-1抗體以10 mg/kg之組合IP。在所有的案例中，抗體的IP投予為每週2次進行3週總計6個劑量(BIWx3)。
在研究3中，帶有CT-26腫瘤小鼠係在腫瘤接種後第7天當平均腫瘤體積為~70 mm3
時治療。投予為IV QWx3 + IgG同型對照 IP BIWx3；或化合物A以1、3、6或9 mg/kg IV以QWx3投予時程，或抗-PD-1抗體以10 mg/kg IP BIWx3；或化合物A以1、3或6 mg/kg IV QWx3 + 抗-PD-1抗體以10 mg/kg IP BIWx3之組合。
全部三個研究之概要係如表22所示。每天一次觀察動物的臨床症狀。依照IACUC指南，當腫瘤體積長到超過2000 mm3
或觀察到具有持續惡化症狀或顯現明顯嚴重痛苦及/或疼痛時將動物人道安樂死。
監測各小鼠的存活歷時超過100天，將研究2和3中存活的無腫瘤動物納入再挑戰持續研究歷時2個週期，相隔2個月。特言之，將無腫瘤動物經由在另一側下腹接種相同類型的腫瘤細胞(CT-26)再挑戰。對照動物為年齡相符的無用過藥小鼠(naïve mice)同時在另一側下腹接種相同數目的CT-26癌細胞。
每3至4天使用數位卡尺測量監測腫瘤生長，直到研究結束。計算腫瘤體積為寬度2
x長度/2，其中寬度為最小直徑而長度為最大直徑。原始腫瘤數據係呈現在研究報告中。
將各組的平均腫瘤體積數據對時間作圖附帶平均之標準誤差(SEM)長條圖。另外，將動物安樂死之前最後一天的個別腫瘤體積數據作圖附帶平均值和SEM長條圖，用以檢測數據的分布。
使用GraphPad Prism v.7.0進行動物安樂死前最後一天的腫瘤體積數據之統計分析。使用單因子ANOVA分析數據之顯著性。使用杜凱氏檢定(Tukey’s test)程序(2-側)配對比較。提報各個別比較之p-值。
各治療組對比對照組的腫瘤生長抑制百分比(%TGI)係計算為： [(對照組-對照組基線)-(治療組-治療組基線)]/(對照組-對照組基線) x 100%。
記錄各小鼠的存活並產生Kaplan-Meir圖用以顯示治療組的存活並以對數等級檢定[log-rank (Mantel-Cox) test]評估顯著性。在研究#1、#2及#3中以及在研究#2和#3中二個存活無腫瘤小鼠之再挑戰週期期間，於治療開始後監測存活歷時超過100天。使用GraphPad Prism version 7.0進行分析。表 22.
以化合物A作為單一治療及與抗-小鼠PD-1抗體組合於小鼠中的腫瘤生長
a
BIW投予進行3週(總計6個劑量)；b
1和3 mg/kg化合物A組合組之數據未顯示。 %TGI係於第15天(研究1)和第17天(研究2和3)所計算。 結果為平均值±SEM
| 化合物A劑量 [抗體劑量a ] (mg/kg) | %TGI (相對於媒劑對照組) | ||||
| 研究#1 | 研究#2 | 研究#3 | |||
| QWx3 | Q2Wx2 | QWx3 | QWx3 | ||
| 化合物 A 單一治療 | 0.3 | 19 | 20 | - | - |
| 1 | 31 | 27 | - | 30 | |
| 3 | 51* | 45* | 56 | 59*** | |
| 6 | - | - | 36* | 86*** | |
| 9 | - | - | - | 85*** | |
| 抗體[10] | - | - | 44# | 44# | |
| 組合治療 b | 6 + [10] | - | - | 75** | 84** |
QWx3 = 每週1次總計2個劑量；Q2Wx2 = 每2週一次總計2個劑量；TGI = 腫瘤生長抑制。* p＜0.052對媒劑對照組；** p＜0.05對單一治療(化合物A或抗體)；*** p＜0.001對媒劑或抗體同型對照組；#
p＜0.01對抗體同型對照組。
在研究1中，評估帶有皮下建立的CT-26大腸腫瘤之雌性Balb/c小鼠中化合物A作為單一藥劑的劑量依賴效用。根據IACUC所述的人類療效評估終點，當對照組中的數個腫瘤體積達到超過2000 mm3
時，此研究正規地在治療開始後第15天結束。圖 1
係顯示以化合物A QWx3投予治療組，隨時間變化的平均腫瘤體積。圖 2
係顯示以化合物A QWx3投予治療之各動物，在治療後第15天的腫瘤體積。圖 3
係顯示以化合物AQ2Wx2投予治療組，隨時間變化的平均腫瘤體積。圖 4
係顯示以化合物AQ2Wx2投予治療之各動物，在治療後第15天的腫瘤體積。
就QWx3投予時程，化合物A展現劑量依賴的單一藥劑抗腫瘤活性，相較於媒劑對照組，就0.3、1及3 mg/kg劑量組分別產生31%、19%及52%之%TGI。同樣地，就Q2Wx2投予時程，化合物A展現劑量依賴的單一藥劑抗腫瘤活性，相較於媒劑對照組，就0.3、1及3 mg/kg劑量組分別產生20%、27%及45%之%TGI。然而，在二組投予時程中，相較於媒劑對照組，僅3 mg/kg劑量為統計上顯著地(p ＜0.05)。二組投予時程展現相當的抗腫瘤活性。因此，就此小鼠模型中的後續研究，係選定QWx3投予時程。
在圖 3 、 5
及8
中，黑色箭頭係指化合物A投予的天數。圖 1
和3
中的數據為以化合物AQWx3投予和Q2Wx2投予之平均腫瘤生長曲線；黑色箭頭係指化合物A投予的天數。圖 2
和4
中的數據係代表以化合物AQWx3投予和Q2Wx2投予治療後第15天的個別腫瘤體積和平均腫瘤體積±平均標準誤差(SEM)(10隻小鼠/組)。數據係代表個別腫瘤體積；亦顯示平均值± SEM以及相較於媒劑對照組之%TGI。
圖 3
中的數據係代表以化合物AQ2Wx2投予之平均腫瘤體積±平均值標準誤差(SEM)(10隻小鼠/組)。圖 4
中的數據係代表以化合物AQ2Wx2投予治療後第15天的個別腫瘤體積和平均腫瘤體積。*p＜0.05對媒劑對照組在第15天。
於帶有CT-26大腸腫瘤小鼠中進行二個個別研究(研究2和3)用以評估化合物A作為單一藥劑及與鼠類抗-PD-1檢查點抑制劑抗體組合。化合物A的投予範圍係介於重疊的研究之間，其中研究3具有較廣的劑量範圍。在二個研究中，化合物A係以QWx3給藥及相同劑量等級的抗體係以BIWx3給藥。
在研究2中，化合物A的抗腫瘤活性係以單一藥劑以3和6 mg/kg(QWx3)於帶有皮下建立的CT-26大腸腫瘤之雌性Balb/c小鼠中評估。另外，組合的抗腫瘤活性係以6 mg/kg (QWx3)IV投予的化合物A和10 mg/kg IP (BIWx3)抗-PD-1抗體來評估。%TGI係於治療開始後第15天計算，因為對照組中的數個腫瘤體積達到超過2000 mm3
。然而，展現完全腫瘤抑制之治療組中的動物係依循每週一次或二次的頻率測量。
化合物A展現劑量單一藥劑抗腫瘤活性，相較於媒劑對照組，就3和6 mg/kg劑量組分別產生56.3%和35.6%之%TGI。在組合研究中，帶有CT-26腫瘤小鼠係於腫瘤接種後5天當平均腫瘤體積為~80 mm3
時開始以化合物AIV以6 mg/kg QWx3或IP以抗-PD-1抗體BIWx3，或以相同投予時程之組合治療。圖 5
中係顯示以媒劑、6 mg/kg 化合物A作為單一藥劑、抗-PD-1抗體作為單一藥劑及6 mg/kg 化合物A和抗-PD-1抗體之組合治療的平均腫瘤生長曲線。圖 5
中之數據係代表平均腫瘤體積± SEM(14隻小鼠/組)。上方箭頭係指化合物A投予的天數而下方箭頭係指抗-PD-1抗體投予的天數。相較於單獨的化合物A或抗-PD-1抗體，組合的抗腫瘤活性顯著提升(p＜0.05)。圖 6
係顯示%TGI數據並顯示相較於以媒劑對照組、單獨的化合物A或單獨抗-PD-1抗體治療之組別，以化合物A和抗-PD-1抗體之組合治療的組別在治療後第15天顯現顯著的抗腫瘤效用(單獨化合物A組為35.6%；單獨抗-PD-1抗體組為44.1%；及化合物A和抗-PD-1抗體組合給藥組為74.6%)。數據係代表個別腫瘤體積；亦顯示平均值± SEM和相較於媒劑對照組之%TGI。*p＜0.05, **p＜0.01及***p＜0.01；對媒劑對照組。┴
p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。各組的中位數存活時間係如圖 7
中所示且就對媒劑對照組、化合物A、抗-PD-1抗體及化合物A+抗-PD-1抗體組分別為17、27、27.5及38天。組合組的中位數存活時間明顯比化合物A(p＜0.05)和抗-PD-1抗體(p＜0.05)單一藥劑治療組更長。在治療後98天，在各化合物A和抗-PD-1抗體投予組中14隻動物中僅1隻存活無腫瘤(7%)，而組合組中14隻中有4隻存活無腫瘤(29%)。圖 7
中的數據係代表各治療組的Kaplan-Meier存活曲線。*p＜0.05對媒劑對照組。┴
p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。
在研究3中，化合物A之單一藥劑抗腫瘤活性係以較廣的劑量範圍(1、3、6及9 mg/kg)，與研究2相同的IV QWx3給藥時程相比較，於帶有SC CT-26大腸腫瘤雌性Balb/c小鼠中加以評估。圖 8
中的數據係代表當化合物A以1 mg/kg、3 mg/kg、6 mg/kg及9 mg/kg單一藥劑投予時的平均腫瘤生長曲線。數據係代表平均腫瘤體積±SEM(14隻小鼠/組；9 mg/kg 化合物A除外為12隻小鼠/組)。黑色箭頭係指化合物A投予的天數。單獨以1 mg/kg、3 mg/kg、6 mg/kg及9 mg/kg的化合物A投予亦展現劑量依賴的抗腫瘤活性，相較於媒劑對照組，就1、3、6及9 mg/kg 劑量組分別產生29.8%、58.8%、86.2%及84.8%之%TGI(圖 9
)。%TGI係於治療開始後第15天計算，因為對照組中的數個腫瘤體積達到超過2000 mm3
。然而，展現完全腫瘤抑制之治療組中的動物係依循每週一次或二次的頻率測量。圖 9
中的數據係代表在治療後第15天之個別腫瘤體積。數據係代表個別腫瘤體積平均值±SEM且亦顯示相較於媒劑對照組之%TGI。***p＜0.01對媒劑對照組。最低劑量(1 mg/kg)並未顯示統計上顯著的抗腫瘤活性，而其他3個劑量組，相較於媒劑治療組為統計上顯著的(p＜0.001)。此數據亦顯示二個高劑量組(6 mg/kg和9 mg/kg)之%TGI為相類似的，其顯示在6 mg/kg劑量時達到最大抗腫瘤活性。在9 mg/kg劑量組中，發現14隻動物中有2隻由於治療在體重減少＞15%後死亡。
在研究之組合期中，化合物A係以1、3或6 mg/kg (QWx3)與抗-PD-1抗體以10 mg/kg IP (BIWx3)一起投予。帶有CT-26腫瘤小鼠係以IV以1、3、6或9 mg/kg之化合物AQWx3或IP抗-PD-1抗體BIWx3，或以相同投予時程之組合，在腫瘤細胞接種後7天當平均腫瘤體積為~70 mm3
時治療。請注意，就9 mg/kg的化合物A單一藥劑組，發現二隻動物在體重減少＞15%之後死亡且不納入分析。就1 mg/kg 化合物A + 抗-PD-1抗體之組合，以存活數據為基準未觀察到累加的抗腫瘤活性。就化合物A的投予後天數，在抗-PD-1抗體組中14隻動物中有1隻存活(7%)，而3 mg/kg單一藥劑組則無動物存活。然而，在3 mg/kg 化合物A + 抗-PD-1抗體組，14隻動物中有2隻存活(14%)達到化合物A天數。如圖 10
中所示，相較於各單獨的單一藥劑，6 mg/kg 化合物A + 抗-PD-1抗體之組合造成存活延長。就媒劑對照組、化合物A (6 mg/kg)、抗-PD-1抗體 (10 mg/kg)及化合物A + 抗-PD-1抗體組(6 mg/kg的化合物A和10 mg/kg抗-PD-1抗體 )，中位數存活時間分別為21、35、24.5及49天。組合組的中位數存活時間明顯比化合物A和抗-PD-1抗體 (p＜0.05)單一藥劑治療組更長。特言之，就化合物A的投予後天數，6 mg/kg的化合物A組中無動物存活，而抗-PD-1抗體組中14隻動物中僅有1隻(7%)存活無腫瘤。然而，在組合組中，14隻動物中有5隻(36%)存活無腫瘤(p＜0.05)。圖 10
中的數據係代表治療組的Kaplan-Meier存活曲線。*p＜0.05對媒劑對照組。┴p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。實例 12
全血細胞激素釋放分析
將來自6位健康捐贈者之人類全血以連續稀釋的IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(化合物B)或IL-2，單獨或與PEM(「Pembro」或帕博利珠單抗)或NIVO(納武單抗)組合培養24 h。使用Meso Scale Discovery (MSD) U-plex套組就6種分析物(IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、TNFα)測量處理後從全血釋放進入上清液中的細胞激素。方法
來自6位健康捐贈者之肝素試管中的血液係得自Scripps Research Institute (TSRI；San Diego, CA)捐血中心。樣本係於採集當天檢測；捐贈者1-3係在同一日而捐贈者4-6則在另一日。
將人類全血以各種濃度的IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1和90 µg/mL的帕博利珠單抗或127 μg/mL的納武單抗培養(預計的臨床劑量之Cmax值)。
首先將全血以RPMI 1640培養基稀釋2-倍。將體積180 µL的預稀釋全血植入96-孔組織培養盤。然後，於分析盤中加入20 µL的10x最終試驗濃度之化合物。試驗條件包括連續稀釋的IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1(4.5 µg/mL、1.5 µg/mL、0.8 µg/mL、0.45 µg/mL及0.2 µg/mL)或IL-2 (0.8 µg/mL、0.45 µg/mL、0.2 µg/mL、0.1 µg/mL及0.03 µg/mL)及連續稀釋的IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1或IL-2加上90 µg/mL PEM或127 µg/mL NIVO。此外，包括正對照和負對照用以顯示此分析之偵測和規格：使用100 µg/mL預塗覆Ultra LEAF小鼠抗-人類CD3作為分析的正對照。50 µg/mL預塗覆Ultra LEAF 小鼠IgG1, κ為上述抗-人類CD3之同型對照。僅含IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1調配緩衝液為分析的負對照。亦以無治療做為分析的負對照。
將化合物加到孔槽後，將血液於37°C培養。將樣本離心後，收集治療後24 h的上清液並在分析前儲存於-80°C。以MSD U-plex套組將從此分析所釋放的人類細胞激素(IFN-γ、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-5、IL-4)定量。此分析之偵測下限係列於下表中。各盤的偵測極限係從Discovery workbench之MSD軟體提報。各盤具有些微不同的偵測極限。材料 表 23.
所用的材料和來源
結果
| 材料 | 供應商 | 型號 # | 調配物 | 儲液 |
| IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1 Pilot 2 #0590-164 | Cytovance | N/A | 調配物緩衝液 | 2.18 mg/mL |
| 調配物緩衝液：10 mM組胺酸pH 6.0，5%山梨醇，0.01%聚山梨醇酯80 | Cytovance | N/A | N/A | N/A |
| IL-2 | R&D Systems | 202-IL-500 | 0.1M 乙酸 | 1 mg/mL |
| Biolegend Ultra-LEAF™純化的抗-人類CD3 (UCHT1) | Biolegend | 300438 | PBS | 1 mg/mL |
| Biolegend Ultra-LEAF™ 純化的小鼠IgG1，κ同型對照(MOPC-21) | Biolegend | 400166 | PBS | 1 mg/mL |
| 帕博利珠單抗(PEM) | Selleckchem | A200502 | PBS | 9.97 mg/mL |
| Ultra-LEAF™純化的人類IgG4同型對照重組抗體 | Biolegend | 403702 | PBS | 1 mg/mL |
| U-plex生物標記組1(人類IFN-γ、TNFα、IL-10、IL-6, IL-4、IL-5) | Meso Scale Discovery) (MSD) | K15067L-2 | N/A | N/A |
| Gibco™ RPMI 1640培養基，HEPES | Gibco™ | 22400089 | ||
| Falcon™聚苯乙烯微量盤，96孔，TC處理 | Corning | 353072 |
24 hr處理，IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1和IL-2誘發劑量依賴的誘發IFN-γ，但未誘發此分析中所試驗的其他5種細胞激素顯著釋放(IL4、IL5、IL8、TNFa、IL6)。與Pem或Nivo組合，IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1和IL-2 (R&D)二者皆未造成此研究中所試驗的細胞激素樣貌(IFN-γ
、IL-4、IL-5、IL-8、TNF-α、IL-6)顯著變化。個別捐贈者之數據係列於表 24
-32
中。單一捐贈者之代表圖係如圖 11A
-11B
中所示。圖 24.
IFN-γ和IL-6量之控制條件
BDL = 低於偵測極限表 25 。
Control conditions for IL-5和IL-8量之控制條件
BDL = 低於偵測極限表 26 .
TNF-α和IL-4量之控制條件
BDL = 低於偵測極限表 27.
以IL-2處理之IFN-γ和IL-6量
各捐贈者之數據(例如，D1-D6)係以其特定的調配物緩衝液值正常化。nd = 未測定。表 28 .
以IL-2處理的IL-8和IFN-α量
各捐贈者之數據(例如，D1-D6)係以其特定的調配物緩衝液值正常化。表 29 .
以IL-2處理的IL-5和IL-4量
BDL = 低於偵測極限表 30 .
以化合物B (IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1)處理的IFN-γ和IL-6量
「化合物B」為IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1。各捐贈者之數據(例如，D1-D6)係以其特定的調配物緩衝液值正常化。BDL = 低於偵測極限表 31. 以化合物 B (IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1) 處理之 IL-8 和 TNF-α 量
「化合物B」為IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1。各捐贈者之數據(例如，D1-D6)係以其特定的調配物緩衝液值正常化表 32.
以化合物B (IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1)處理之IL-5和IL-4量
「化合物B」為IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1。BDL = 低於偵測極限實例 13
| 處理 | 濃度 ug/ml | IFN-γ | IL-6 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B調配物緩衝液 | n/a | 43.91 | 8.77 | 7.75 | 9.31 | 268.77 | 13.03 | 2.77 | 0.68 | 1.31 | 0.49 | 5.60 | 0.73 |
| 無處理(培養基) | n/a | 21.58 | 5.12 | 8.35 | 7.03 | 288.70 | 11.78 | 0.93 | 0.31 | 0.99 | 2.23 | 4.53 | 1.28 |
| IgG4同型對照 | 50 | 33.42 | 29.17 | 7.86 | 12.79 | 262.93 | 10.33 | 4.73 | 0.47 | 1.50 | 0.56 | 8.54 | 21.30 |
| 小鼠IgG1,κ | 100 | 21.75 | BDL | 7.19 | 6.44 | 94.74 | 132.02 | 1.64 | 0.88 | 0.89 | 0.71 | 4.27 | 1.85 |
| PEM | 90 | 52.78 | 9.62 | 8.80 | 11.71 | 301.71 | 10.08 | 1.09 | 0.39 | 0.92 | 0.65 | 8.95 | 1.06 |
| NIVO | 127 | 29.77 | 9.34 | 6.61 | 7.56 | 256.75 | 9.51 | 1.28 | 0.48 | 1.09 | 0.59 | 3.29 | 0.62 |
| 塗覆抗-CD3 | 100 | 13095.85 | 110278.12 | 2890.41 | 12415.49 | 46221.98 | 137695.00 | 279.20 | 106.57 | 20.18 | 66.79 | 452.34 | 1414.77 |
| 處理 | 濃度 ug/ml | IL-8 | TNF-α | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B調配物緩衝液 | n/a | 48.07 | 8.77 | 39.07 | 39.28 | 143.62 | 30.69 | 4.17 | 0.68 | 1.2 | 1 | 5.82 | 1.04 |
| 無處理(培養基 | n/a | 20.56 | 8.77 | 7.84 | 27.93 | 78.91 | 23.45 | 3.03 | 0.68 | 1.24 | 1.11 | 5.61 | 1.25 |
| IgG4同型對照 | 50 | 37.11 | 12.77 | 9.58 | 24.88 | 91.61 | BDL | 2.66 | 1.33 | 1.82 | 0.75 | 6.58 | 0.91 |
| 小鼠IgG1,κ | 100 | 20.37 | 7.42 | 7.92 | 22.37 | 57.12 | 24.8 | 1.42 | 0.27 | 0.14 | 0.69 | 3.44 | BDL |
| PEM | 90 | 22.01 | 8.48 | 11.36 | 23.29 | 95.5 | 28.32 | 2.33 | 0.68 | 1.67 | 0.97 | 5.88 | 1.43 |
| NIVO | 127 | 20.59 | 7.68 | 7.95 | 22.61 | 67.38 | 19.68 | 2.35 | 0.44 | 1.33 | 1.21 | 4.89 | BDL |
| 塗覆抗-CD3 | 100 | 5211.87 | 1780.7 | 1346.96 | 4031.78 | 5306.3 | 10117.33 | 475.92 | 2519.34 | 136.1 | 894.5 | 1187.77 | 3780.63 |
| 處理 | 濃度 ug/ml | IL-5 | IL-4 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B調配物緩衝液 | n/a | 0.71 | 0.06 | 0.59 | BDL | BDL | BDL | 0.05 | 0.06 | 0.08 | 0.09 | BDL | BDL |
| 無處理(培養基 | n/a | 0.81 | 0.14 | 0.87 | BDL | BDL | BDL | 0.11 | 0.06 | 0.11 | 0.05 | BDL | BDL |
| IgG4同型對照 | 50 | 0.26 | 0.23 | 0.64 | BDL | 0.77 | BDL | 0.05 | 0.12 | BDL | 0.12 | BDL | BDL |
| 小鼠IgG1,κ | 100 | 0.66 | 0.09 | 0.56 | BDL | BDL | BDL | 0.04 | 0.14 | 0.16 | BDL | BDL | 0.09 |
| PEM | 90 | 1.03 | 0.72 | 0.79 | BDL | BDL | BDL | 0.10 | 0.03 | 0.03 | 0.09 | BDL | BDL |
| NIVO | 127 | 2.65 | 1.50 | 0.91 | BDL | BDL | BDL | 0.11 | 0.11 | 0.05 | 0.10 | BDL | BDL |
| 塗覆抗-CD3 | 100 | 34.49 | 308.57 | 7.64 | 31.81 | 137.92 | 656.77 | 11.33 | 47.81 | 1.33 | 11.65 | 18.59 | 82.57 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IFN-γ | IL-6 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| IL-2 | 0.8 | 115.31 | 290.42 | 314.96 | 81.72 | 61.31 | 850.98 | 22.76 | 17.26 | 10.13 | 19.67 | 17.12 | 51.15 |
| IL-2 | 0.45 | 105.72 | 352.81 | 331.98 | 85.34 | 58.16 | 433.00 | 18.47 | 11.07 | 7.20 | 12.82 | 18.02 | 65.04 |
| IL-2 | 0.2 | 104.20 | 228.19 | 278.17 | 104.40 | 51.97 | 437.67 | 15.93 | 5.48 | 4.12 | 6.96 | 12.56 | 49.09 |
| IL-2 | 0.1 | 95.61 | 135.05 | 224.27 | 68.31 | 47.44 | 387.76 | 13.48 | 2.66 | 2.73 | 4.02 | 10.94 | 28.98 |
| IL-2 | 0.03 | 64.49 | 62.13 | 81.74 | 45.09 | 39.50 | 170.85 | 7.89 | 1.07 | 1.35 | 2.31 | 9.18 | 16.60 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.8 | 138.79 | 274.43 | 318.86 | 117.65 | 51.99 | 437.11 | 27.72 | 17.63 | 10.91 | 22.39 | 32.49 | 50.58 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.45 | 107.58 | 247.26 | 354.82 | 111.66 | 55.99 | 430.47 | 23.19 | 11.71 | 7.45 | 31.52 | 15.11 | 55.85 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.2 | 112.00 | 231.40 | 283.69 | 76.41 | 64.28 | 244.58 | 20.84 | 6.54 | 4.93 | 7.65 | 14.72 | 29.07 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.1 | 99.87 | 151.13 | 241.42 | 106.24 | 50.17 | 274.30 | 16.91 | 3.10 | 3.44 | 13.06 | 13.48 | 28.87 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.03 | 76.19 | 44.44 | 87.79 | 40.85 | 38.04 | 131.98 | 11.01 | 1.46 | 1.47 | 2.10 | 9.98 | 15.04 |
| IL-2+ 納武單抗 | 0.8 | 112.83 | 245.07 | 396.28 | 67.50 | 53.02 | 344.33 | 24.21 | 17.31 | 12.10 | 19.46 | 16.29 | 50.22 |
| IL-2+納武單抗 | 0.45 | 98.79 | 262.60 | 335.91 | 66.15 | 47.95 | 457.22 | 17.85 | 13.65 | 7.85 | 11.72 | 13.01 | 40.96 |
| IL-2+納武單抗 | 0.2 | 101.09 | 204.58 | 260.76 | 59.56 | 46.18 | 238.28 | 17.54 | 6.37 | 4.23 | 6.38 | 13.08 | 30.47 |
| IL-2+納武單抗 | 0.1 | 100.69 | 423.63 | 230.39 | 92.71 | 37.74 | 206.75 | 12.71 | 3.10 | 3.98 | 9.98 | 9.74 | 20.84 |
| IL-2+納武單抗 | 0.03 | 72.59 | 40.13 | 76.36 | nd | 38.22 | 149.74 | 8.23 | 1.22 | 1.44 | 29.61 | 8.51 | 14.21 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IL-8 | TNF-α | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| IL-2 | 0.8 | 5.88 | 6.00 | 4.53 | 2.28 | 5.80 | 25.94 | 5.97 | 14.38 | 13.84 | 4.88 | 16.45 | 24.31 |
| IL-2 | 0.45 | 4.67 | 5.98 | 4.98 | 2.02 | 5.32 | 36.29 | 5.04 | 14.83 | 13.27 | 4.48 | 16.22 | 37.41 |
| IL-2 | 0.2 | 4.34 | 5.42 | 4.01 | 1.88 | 4.89 | 27.24 | 5.10 | 12.68 | 11.74 | 4.18 | 15.14 | 26.06 |
| IL-2 | 0.1 | 3.80 | 5.00 | 3.76 | 1.60 | 4.44 | 17.45 | 4.60 | 11.07 | 10.68 | 3.16 | 12.89 | 16.94 |
| IL-2 | 0.03 | 2.70 | 2.50 | 1.42 | 1.38 | 3.95 | 11.11 | 3.52 | 3.88 | 4.45 | 2.55 | 10.86 | 12.96 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.8 | 7.00 | 6.95 | 4.83 | 2.97 | 7.84 | 24.43 | 6.02 | 17.35 | 13.48 | 6.42 | 16.66 | 23.88 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.45 | 5.77 | 6.41 | 4.43 | 3.71 | 5.86 | 27.94 | 5.46 | 17.44 | 12.60 | 6.33 | 15.51 | 25.44 |
| IL-2+帕博利珠單抗 | 0.2 | 5.37 | 6.73 | 3.59 | 2.24 | 6.01 | 15.52 | 5.20 | 15.55 | 11.03 | 3.54 | 15.96 | 17.18 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.1 | 5.39 | 4.85 | 3.08 | 2.73 | 5.47 | 18.57 | 4.85 | 11.49 | 10.45 | 5.06 | 13.80 | 16.99 |
| IL-2帕博利珠單抗 | 0.03 | 3.60 | 2.28 | 1.52 | 1.65 | 4.72 | 8.60 | 4.24 | 4.94 | 4.19 | 2.82 | 11.29 | 8.91 |
| IL-2+納武單抗 | 0.8 | 6.66 | 6.26 | 4.31 | 2.02 | 6.22 | 26.11 | 5.71 | 17.11 | 13.39 | 4.52 | 14.18 | 26.91 |
| IL-2+納武單抗 | 0.45 | 5.06 | 6.42 | 4.04 | 1.80 | 5.28 | 22.75 | 5.35 | 15.39 | 12.10 | 4.61 | 13.60 | 22.81 |
| IL-2+納武單抗 | 0.2 | 4.09 | 4.96 | 3.16 | 1.49 | 4.82 | 19.00 | 4.97 | 11.83 | 9.17 | 3.23 | 12.57 | 17.17 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.1 | 3.80 | 4.31 | 2.97 | 3.04 | 5.09 | 12.19 | 4.33 | 10.74 | 7.90 | 5.14 | 11.43 | 11.44 |
| IL-2+納武單抗 | 0.03 | 2.28 | 1.88 | 1.03 | 2.86 | 3.65 | 8.55 | 3.35 | 4.04 | 3.60 | 5.41 | 10.15 | 9.42 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IL-5 | IL-4 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| IL-2 | 0.8 | 9.45 | 6.04 | 4.34 | 0.71 | 10.86 | 22.27 | 0.25 | 0.21 | 0.21 | 0.13 | 0.85 | 1.02 |
| IL-2 | 0.45 | 10.57 | 11.00 | 5.85 | BDL | 15.40 | 22.08 | 0.14 | 0.34 | 0.32 | 0.08 | 0.68 | 0.89 |
| IL-2 | 0.2 | 14.53 | 8.79 | 3.46 | 0.93 | 12.29 | 28.22 | 0.30 | 0.42 | 0.28 | 0.10 | 0.77 | 1.05 |
| IL-2 | 0.1 | 5.24 | 6.79 | 3.85 | 0.26 | 9.57 | 23.02 | 0.21 | 0.32 | 0.14 | 0.09 | 0.75 | 0.83 |
| IL-2 | 0.03 | 7.56 | 3.73 | 1.35 | 0.66 | 22.70 | 13.05 | 0.27 | 0.18 | 0.15 | 0.14 | 0.74 | 0.52 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.8 | 5.62 | 8.14 | 4.45 | 1.55 | 14.17 | 24.07 | 0.24 | 0.35 | 0.33 | 0.28 | 0.78 | 1.15 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.45 | 4.54 | 7.16 | 3.00 | 0.93 | 9.82 | 21.83 | 0.16 | 0.39 | 0.27 | 0.26 | 0.70 | 1.20 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.2 | 8.95 | 11.58 | 6.50 | 0.56 | 12.53 | 15.88 | 0.31 | 0.31 | 0.47 | 0.12 | 0.82 | 0.76 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.1 | 7.42 | 7.03 | 1.90 | BDL | 8.53 | 23.41 | 0.21 | 0.27 | 0.36 | 0.12 | 0.64 | 0.76 |
| IL-2 +帕博利珠單抗 | 0.03 | 5.87 | 2.86 | 2.05 | 0.42 | 14.25 | 8.53 | 0.17 | BDL | 0.13 | 0.08 | 0.82 | 0.51 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.8 | 7.16 | 7.98 | 4.18 | 1.38 | 20.46 | 20.83 | 0.22 | 0.25 | 0.44 | 0.14 | 1.00 | 1.21 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.45 | 7.14 | 7.05 | 4.22 | BDL | 11.55 | 18.52 | 0.21 | 0.31 | 0.28 | 0.17 | 0.54 | 0.88 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.2 | 7.32 | 7.45 | 4.18 | 1.97 | 12.97 | 20.73 | 0.21 | 0.34 | 0.30 | 0.25 | 0.74 | 0.75 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.1 | 8.67 | 5.37 | 3.43 | 3.04 | 10.46 | 16.09 | 0.26 | 0.21 | 0.18 | 0.14 | 0.61 | 0.62 |
| IL-2 +納武單抗 | 0.03 | 3.77 | 2.02 | 1.37 | BDL | 11.82 | 12.10 | 0.17 | BDL | 0.11 | 0.19 | 0.74 | 0.63 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IFN-γ | IL-6 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B | 4.5 | 213.24 | 135.44 | 233.77 | 75.99 | 36.04 | 611.22 | 39.77 | 0.56 | 2.49 | 4.94 | 10.61 | 38.95 |
| 化合物B | 1.5 | 93.02 | 96.56 | 195.89 | 49.83 | 31 | 122.98 | 11.82 | 0.84 | 1.82 | 1.87 | 8.33 | 16.01 |
| 化合物B | 0.8 | 66.82 | 53.46 | 119.28 | 44.78 | 26.93 | 92.69 | 9.38 | 0.43 | 1.45 | 1.71 | 7.56 | 11.61 |
| 化合物B | 0.45 | 49.07 | 35.17 | 85.18 | 33.58 | 21.99 | 74.08 | 7.87 | 0.74 | 1.06 | 1.29 | 6.06 | 3.41 |
| 化合物B | 0.2 | 32.02 | 12.82 | 32.15 | 27.63 | 14.39 | 21.95 | 4.50 | BDL | 0.91 | 1.11 | 3.84 | 1.09 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 4.5 | 102.42 | 164.69 | 263.89 | 68.16 | 38.09 | 275.34 | 15.12 | 1.79 | 3.26 | 3.03 | 10.86 | 36.39 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 1.5 | 80.56 | 82.28 | 161.63 | 49.21 | 35.01 | 98.36 | 11.90 | 1.29 | 1.96 | 3.01 | 11.07 | 9.88 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.8 | 74.09 | 43.39 | 130.28 | 38.2 | 29.55 | 62.73 | 12.28 | 0.82 | 1.71 | 1.31 | 9.23 | 6.49 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.45 | 46.77 | 27.81 | 86.44 | 31.51 | 19.78 | 37.93 | 7.53 | 0.46 | 1.17 | 1.52 | 6.70 | 1.78 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.2 | 29.43 | 8.62 | 25.97 | 20.27 | 14.52 | 17.75 | 5.59 | BDL | 0.74 | 0.93 | 5.04 | 0.86 |
| 化合物B +納武單抗 | 4.5 | 91.59 | 126.64 | 269.98 | 59.66 | 38.57 | 901.52 | 11.56 | 1.33 | 4.23 | 2.83 | 9.24 | 34.57 |
| 化合物B +納武單抗 | 1.5 | 82.94 | 71.26 | 185.79 | 50.31 | 30.37 | 210.47 | 10.75 | 1.04 | 1.97 | 1.40 | 7.14 | 11.44 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.8 | 59.41 | 67.83 | 124.17 | 30.37 | 24.23 | 41.88 | 7.60 | 7.56 | 1.56 | 0.87 | 6.38 | 2.36 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.45 | 51.93 | 21.19 | 84.35 | 26.44 | 18.76 | 30.17 | 7.73 | 0.48 | 1.17 | 1.33 | 4.39 | 2.01 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.2 | 32.55 | 7 | 25.07 | 16.26 | 12.1 | 18.32 | 4.57 | BDL | 0.71 | 1.06 | 2.59 | 0.84 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IL-8 | TNF-α | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B | 4.5 | 7.67 | 4.09 | 2.99 | 2.18 | 4.24 | 20.12 | 6.23 | 11.39 | 10.42 | 4.96 | 12.33 | 26.03 |
| 化合物B | 1.5 | 2.83 | 3.87 | 3.09 | 1.66 | 3.64 | 11.46 | 4.43 | 8.33 | 8.80 | 3.30 | 10.85 | 13.94 |
| 化合物B | 0.8 | 3.08 | 2.86 | 2.20 | 1.36 | 3.30 | 6.84 | 4.16 | 6.48 | 6.68 | 2.92 | 9.94 | 8.02 |
| 化合物B | 0.45 | 2.21 | 2.61 | 1.43 | 1.42 | 2.69 | 3.50 | 3.56 | 5.28 | 4.56 | 3.12 | 8.20 | 5.30 |
| 化合物B | 0.2 | 1.48 | 1.60 | 0.71 | 1.27 | 2.22 | 1.30 | 2.64 | 3.10 | 2.84 | 2.24 | 6.23 | 2.00 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 4.5 | 4.19 | 4.64 | 2.61 | 2.13 | 4.65 | 21.72 | 5.10 | 11.12 | 8.91 | 4.49 | 12.42 | 20.50 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 1.5 | 4.10 | 3.46 | 2.79 | 2.66 | 4.45 | 15.57 | 4.87 | 8.68 | 8.24 | 3.80 | 12.07 | 15.39 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.8 | 3.36 | 2.80 | 2.10 | 1.53 | 4.13 | 5.51 | 4.41 | 6.88 | 6.21 | 3.15 | 10.56 | 6.04 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.45 | 2.35 | 2.19 | 1.58 | 1.69 | 3.21 | 2.09 | 3.51 | 4.09 | 4.89 | 2.52 | 8.33 | 3.46 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.2 | 1.66 | 1.41 | 0.62 | 1.20 | 2.46 | 1.23 | 2.97 | 2.59 | 2.41 | 2.69 | 6.18 | 2.09 |
| 化合物B +納武單抗 | 4.5 | 3.97 | 4.16 | 3.22 | 1.63 | 4.05 | 16.97 | 5.36 | 9.71 | 9.57 | 3.83 | 12.26 | 21.81 |
| 化合物B +納武單抗 | 1.5 | 2.86 | 2.62 | 2.16 | 1.42 | 3.70 | 6.78 | 4.84 | 6.45 | 7.11 | 3.15 | 10.53 | 9.76 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.8 | 2.97 | 2.55 | 1.97 | 1.19 | 3.56 | 1.99 | 3.95 | 5.33 | 5.87 | 2.87 | 8.88 | 3.17 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.45 | 2.15 | 1.72 | 1.19 | 1.10 | 2.53 | 2.05 | 3.66 | 3.88 | 3.94 | 2.86 | 7.22 | 3.38 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.2 | 1.45 | 1.30 | 0.59 | 0.91 | 1.86 | 0.90 | 2.67 | 2.35 | 2.21 | 1.88 | 4.85 | 2.31 |
| 處理 | 濃度 μg/ml | IL-5 | IL-4 | ||||||||||
| D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | D6 | ||
| 化合物B | 4.5 | 6.39 | 6.87 | 1.39 | 0.91 | 8.54 | 31.80 | 0.18 | 0.12 | 0.18 | 0.21 | 0.44 | 1.07 |
| 化合物B | 1.5 | 3.73 | 5.22 | 1.57 | 1.02 | 8.15 | 12.23 | 0.20 | 0.13 | 0.16 | 0.14 | 0.60 | 0.43 |
| 化合物B | 0.8 | 8.67 | 2.03 | 1.51 | BDL | 3.16 | 4.73 | 0.20 | BDL | BDL | 0.06 | 0.20 | 0.25 |
| 化合物B | 0.45 | 3.63 | 1.17 | 1.03 | BDL | 1.26 | 5.18 | 0.08 | 0.14 | 0.10 | 0.11 | 0.29 | 0.25 |
| 化合物B | 0.2 | 0.66 | BDL | BDL | BDL | 0.31 | 0.27 | 0.10 | 0.08 | 0.12 | 0.07 | 0.04 | BDL |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 4.5 | 7.22 | 8.02 | 2.77 | 0.74 | 9.13 | 27.48 | 0.26 | 0.30 | 0.20 | 0.14 | 0.59 | 1.10 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 1.5 | 3.91 | 4.10 | 1.36 | BDL | 7.45 | 5.54 | 0.21 | 0.13 | 0.16 | 0.09 | 0.59 | 0.41 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.8 | 4.74 | 6.45 | 0.92 | BDL | 5.71 | 2.69 | 0.18 | 0.10 | 0.11 | 0.11 | 0.48 | 0.15 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.45 | 2.54 | 0.59 | 0.82 | BDL | 2.69 | BDL | 0.17 | 0.08 | BDL | 0.07 | 0.30 | 0.08 |
| 化合物B +帕博利珠單抗 | 0.2 | 0.84 | BDL | 0.71 | BDL | 0.33 | 0.35 | 0.14 | BDL | BDL | 0.09 | 0.03 | BDL |
| 化合物B +納武單抗 | 4.5 | 4.76 | 5.65 | 3.54 | 0.20 | 9.21 | 20.27 | 0.23 | 0.27 | 0.24 | 0.15 | 0.74 | 1.00 |
| 化合物B +納武單抗 | 1.5 | 3.66 | 2.11 | 1.41 | 0.36 | 9.57 | 5.42 | 0.20 | 0.09 | 0.17 | 0.16 | 0.69 | 0.30 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.8 | 3.20 | BDL | 0.90 | BDL | 3.96 | 1.10 | 0.21 | BDL | 0.14 | 0.09 | 0.34 | 0.07 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.45 | 5.11 | BDL | 1.03 | 0.11 | 2.08 | 1.06 | 0.16 | BDL | 0.13 | 0.08 | 0.20 | 0.07 |
| 化合物B +納武單抗 | 0.2 | 2.83 | 0.60 | 0.73 | BDL | 1.97 | BDL | 0.10 | 0.14 | BDL | 0.05 | 0.07 | BDL |
同種異體人類混合之淋巴細胞反應
(MLR)
分析
使用同種異體人類混合之淋巴細胞反應(MLR)分析評估化合物B(IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1)作為單一藥劑以及與檢查點抑制劑(納武單抗或帕博利珠單抗)組合增進TCR活化之能力，作為對呈現專一性抗原或新生抗原之腫瘤細胞的溶細胞反應模型。表 33 .
材料
表 34. 材料 ( 繼續 )
| 材料 | 供應商 | 型號 # | 調配物 | 儲液濃度 |
| 化合物B (IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1) | Synthorx | 批號#0590- 187 | 調配物緩衝液(參見下文) | 2 mg/mL |
| 調配物緩衝液：10 mM 組胺酸pH 6.0，5%山梨醇，0.01%聚山梨醇酯80 | Cytovance | N/A | N/A | N/A |
| 納武單抗(nivo) | Selleckchem | A2002 | PBS | 5 mg/mL |
| 納武單抗 | Bristol-Meyers Squibb | NDC 0003- 3772-11 | N/A | 10mg/mL |
| 帕博利珠單抗 | Merck & Co. | NDC 0006- 3026-01 | N/A | 25mg/mL |
| Ultra-LEAF™純化的人類IgG4同型對照重組抗體 | Biolegend | 403702 | PBS | 1 mg/mL |
| EasySep人類CD4+ T細胞分離套組 | Stemcell | 17952 | N/A | N/A |
| EasySep人類單核細胞分離套組 | Stemcell | 19359 | N/A | N/A |
| 人類IFN-γ ELISA套組 | Abcam | Ab46025 | N/A | N/A |
| 成份 | 供應商 | 型號 # | 儲液濃度 | 操作濃度 |
| MonoDC轉分化培養基 | ||||
| BioWhittaker X-VIVO15無造血血清培養基 | Lonza | 04418Q | N/A | N/A |
| FBS | Corning | 35011CV | 100% | 5% |
| 青黴素-鏈黴素 | Fisher Scientific | 15140122 | 100% | 1% |
| MEM非必須胺基酸溶液 | Gibco | 11140-050 | 100x | 1x |
| 丙酮酸鈉 | Gibco | 11360-070 | 100 mM | 1 mM |
| HEPES | Gibco | 15630080 | 1 M | 10 mM |
| 重組的人類IL-4蛋白(/CF) | R&D | 204-IL-050 | 1.5e+6 IU/mL | 1500 IU/mL |
| 重組的人類GM-CSF蛋白(/CF) | R&D | 215-GM- 050 | 1.5e+6 IU/mL | 1500 IU/mL |
| MLR 共同培養基 | ||||
| RPMI 1640培養基，HEPES | Gibco | 22400089 | N/A | N/A |
| FBS | Corning | 35011CV | 100% | 5% |
| 青黴素-鏈黴素 | Fisher Scientific | 15140122 | 100% | 1% |
| MEM非必須胺基酸溶液 | Gibco | 11140-050 | 100x | 1x |
| 丙酮酸鈉 | Gibco | 11360-070 | 100 mM | 1 mM |
| HEPES | Gibco | 15630080 | 1 M | 10 mM |
| 2-巰基乙醇 | Gibco | 21985023 | 50 mM | 50 µM |
使用來自二位正常健康捐贈者的週邊血液單核細胞(PBMC)進行分析操作。藉由使用陰性單核細胞選擇套組(Stemcell)於活體外培養分離自PBMC的單核細胞7天產生MonoDC，其係包括加入1,500 IU/mL的IL-4和1,500 IU/mL的GM-CSF。於第3天和第5天替換培養基。於第7天收集MonoDC。在該日，從不同的捐贈者以陰性選擇套組(Stemcell)分離CD4+T細胞。將CD4+T細胞(1 x 105
)和同種異體monoDC (1 x 104
)於96-孔微量滴定盤中，在單獨的化合物B濃度範圍(0.005-100 µg/mL)，或共同與5、50或500 ng/mL的納武單抗、帕博利珠單抗或同型IgG對照物之存在下共培養。就各處理條件，每次操作係設定3重複。共培養5天後，使用酵素連接免疫吸附分析(ELISA)套組(Abcam；型號#Ab46025)分析分泌在培養上清液中的IFN-γ。來自化合物B和帕博利珠單抗組合之IFN-γ量係如圖 12
中所示。來自化合物B和納武單抗組合之IFN-γ量係如圖 13
和14
中所示。使用臨床等級的納武單抗產生圖 13
中所示之數據及使用研究等級的納武單抗(Selleckchem)產生圖 14
中所示的數據。結果顯示化合物B、納武單抗和帕博利珠單抗，用作為單一藥劑，以濃度依賴的方式誘發IFN-γ釋放。令人驚訝地，(a)化合物B和納武單抗及(b)化合物B和帕博利珠單抗之組合在MLR分析中展現協同效應。圖 12 、 13
及14
中所顯示的數據係代表來自一捐贈者成對之3重複的平均值±平均值標準誤差。實例 14
在週邊血液中和
CT-26
腫瘤內，化合物
B
誘發
CD8+ T
、
NK
及
Treg
細胞中
Ki67
的表現，但僅擴增
CD8+ T
和
NK
細胞而未擴增
Treg
就評估化合物B之藥物動力學(PK)和藥效動力學(PD)性質，係將Balb/c雌性小鼠(6-8週大具有16至22 g之平均體重，Jackson Laboratories或Taconic Biosciences)於側腹區域以皮下接種CT-26腫瘤細胞(ATCC)。藉由一週三次測量腫瘤來監測腫瘤生長。當腫瘤體積達到約150 mm3
時，將小鼠隨機分配為對照組和治療組。在IV投予單一劑量3 mg/kg的化合物B於帶有CT-26腫瘤小鼠後，於投予後第0天(2 h、8 h及12 h)、第1天(每個時間點N=3隻小鼠)、第2、3、5、7、10及12天(每個時間點N=4隻小鼠)採集終末血液和腫瘤樣本。使用ELISA分析就化合物B分析血漿和腫瘤樣本。藥物動力學分析
將腫瘤分成二半，一半稱重並以液態氮冷凍供腫瘤PK分析。將冷凍的腫瘤樣本以溶解緩衝液(1錠的蛋白酶抑制劑(SIGMA, 型號#4693159001)溶於10 mL 1x PBS)均質化。每0.1 g組織係與0.4 mL的溶解緩衝液混合。於各組織收集試管加入5 mm不鏽鋼微珠(Qiagen, 型號#69989)，之後以Tissue Lyser II (Qiagen)以20 Hz均質20秒。均質後，將腫瘤溶解物旋轉並收集上清液進行化合物B PK分析。
化合物B的腫瘤暴露為大約血漿暴露的4%(血漿和腫瘤分別為AUC0-t
429,000和15,900 h•ng/mL)如圖 15
中所示。腫瘤 t1/2
幾乎為血漿t1/2
的二倍(在腫瘤和血漿中分別為19.9 h和9.8 h)，其顯示化合物B分布在腫瘤中且相對於血液腔室滯留一段較長的時間。藥效動力學分析
流式細胞術。
就全血免疫細胞表型，係在終末收集後將血液樣本溶解並立即固定。簡言之，根據製造商的方法，將樣本以20個體積預加熱的1x溶解/固定緩衝液(BD phosflowTM
，型號#558049)處理。將細胞懸浮液以Fc block (TruStain fc-X anti CD16/32, BioLegend)阻斷，之後抗體染色。阻斷後，先將細胞以下列細胞表面標記染色：Ax488抗-小鼠CD3 (17A2)、Bv786抗-小鼠CD4 (RM4-5)、Bv711抗-小鼠CD8a (53-6.7)、Bv421抗-小鼠CD49b (DX5)、生物素抗-小鼠CD25 (REA568)、Bv605抗-小鼠CD335 (29A1.4)。然後將細胞以4°C預冷卻的甲醇(Fisher Chemical, A412-4)通透化並以PE抗-小鼠FoxP3(FJK-16s)、PerCP eFluor710抗-Ki67及Ax647抗-Pstat5 (Py694)，以及以PEcy7抗-CD44 (IM7)和用於生物素之BUV395鏈黴親和素，進行內部染色。利用BD LSRFortess，藉由以FlowJo軟體分析讀取樣本讀數。
CD8細胞經鑑別為CD3+CD8a+。Treg細胞經鑑別為CD3+CD4+CD25+FoxP3+。天然殺手細胞係以CD3-CD335+CD49b+做為閘控。記憶CD8細胞係以CD3+CD8+CD44高
來評估。
腫瘤 FACS
。藉由將腫瘤切碎成小塊並以MACS小鼠腫瘤解離套組(Miltenyi, 130-096-730)根據製造商的方法消化，製備小鼠腫瘤樣本之單一細胞懸浮液。以eFluor 780可固定活細胞染劑(eBioscience, 65-0865-14)鑑別活細胞。將細胞懸浮液以抗-小鼠CD16/32抗體(TruStain FcX, BioLegend, 型號101319)阻斷，接著細胞表面標記染色。然後將細胞以FoxP3/轉錄因子固定/通透化試劑(eBioscience, 型號00-5521-00)固定並通透化，及然後進行細胞內標記染色。用於表現抗原之抗體為PEcy7抗-小鼠CD45(30-F11)、BUV395抗-小鼠CD3e(17A2)、BV510抗-小鼠CD4(GK1.5)、PE-eF610 CD8a (53-6.7)、BV605抗-小鼠CD335(29A1.4)、AF700抗-小鼠CD25(PC61)、APC抗-小鼠CD49b(DX5)。用於內部抗原之抗體為PE抗-FoxP3(FJK-16s)和AF488抗-Ki67(11F6)。CD8細胞群族經鑑別為CD3+CD8+，而NK細胞群族經鑑別為CD3-CD335+CD49b+。Treg細胞係以CD3+CD4+CD25+FoxP3+為閘控。事件係以BD LSRFortessa取得及藉由FlowJo軟體分析。
結果
。將血液和腫瘤樣本以細胞亞群族(CD8+ T、NK及Treg細胞)進行PD讀出分析，包括胞內磷酸化STAT5 (pSTAT5，一種受體佔據和早期訊號傳遞之標記)、Ki67(一種細胞增生標記)及CD8+ T、NK和Treg細胞計數。僅於血液中測量各種細胞類型上的pSTAT5。
以3 mg/kg的化合物B投予之帶有CT-26腫瘤小鼠顯示持續誘發週邊血液中CD8+ T、CD8+記憶T、NK和Treg細胞群族中的pSTAT5。週邊血液CD8+ T細胞(圖 16A
)和CD8+記憶T細胞(圖 16B
)中pSTAT5+細胞的百分比在投予後2 h達到高峰且持續保持升高至約48 h並在72 hr前回到基線。就NK細胞(圖 16C
)，pSTAT5+細胞在投予後逐漸增加於48 h達到高峰，並於120 h前回到基線。Treg細胞中pSTAT5+的誘發(圖 16D
)係依循類似CD8+ T細胞的模式。
pSTAT5誘發後，化合物B誘發三種細胞群族(CD8+ T、NK及Treg細胞)中顯著的Ki67活化從第1天至第7天達到相同程度(p＜0.05)，之後在第10天前回到媒劑對照組的量(圖 17A-17F
)。如圖 17A
和圖 17B
中所示，藉由化合物B活化Ki67從3至12天轉譯成顯著的CD8+ T細胞增生反應(p ＜0.05對比對照組)。CD8+ T細胞之表型分析顯露了在相同的時間期間實質擴增此群組內的CD44+記憶細胞。對比CD8+ T細胞，在投予後3天化合物B誘發最大NK細胞擴增並在第5天保持升高(p＜0.05對比對照組)，之後在第7天前回到媒劑治療對照組的量(圖 17C
和圖 17D
)。對比CD8+ T和NK細胞二者，在投予後第3天化合物B僅造成非常短暫及大量降低的Treg細胞擴增量(相較於CD8+T和NK細胞的15-25%，僅2.5%)(圖 17E
和17F
)。CD8+ T細胞之擴增和缺乏明顯CD4+ Treg細胞亞群族之擴增使得CD8+ T/Treg比例逐漸增加，就3 mg/kg劑量組在第7天達到高峰(圖 17G
)。
腫瘤樣本之分析顯露了，以化合物B治療後7天，CD8+ T細胞和NK細胞在腫瘤內顯著擴增(p＜0.05對比對照組)並保持升高直到第10天(圖 18A-18B
)。然而，就化合物B而言，相對於媒劑，腫瘤內的Treg細胞群族並未隨時間顯示明顯擴增(圖 18C
)。CD8+ T細胞的擴增和缺乏CD4+ Treg細胞亞群組擴增使得CD8+ T/Treg比例逐漸增加，就3 mg/kg劑量組在第7天達到高峰(圖 18D
)。
總結
。在帶有CT-26腫瘤小鼠中，3 mg/kg化合物B誘發所有免疫細胞類型，包括CD8+T、CD8+記憶、NK及Treg細胞之週邊pSTAT5活化，其顯示IL-2Rβ/γ受體複合物之涉入。此外，化合物B在此劑量所有這些細胞類型中誘發增生標記Ki-67，但增生作用僅在CD8+T和NK細胞中觀察到。此舉造成在此劑量於週邊血液中大約20的CD8/Treg比率。雖然化合物B的腫瘤暴露為大約血漿暴露的4%，但其停留在腫瘤內為二倍長的時間，使得CD8T/Treg比率足以顯現腫瘤生長抑制作用。在6和9 mg/kg之較高劑量時，觀察到較大的腫瘤生長抑制造成腫瘤消退。實例 15
在小鼠
CT-26
腫瘤中化合物
B
增加腫瘤內
T
細胞分量及
TCR
多樣性
使用帶有CT-26腫瘤小鼠檢測化合物B作為單一藥劑及與抗-PD-1抗體組合對T細胞組庫之效應。將Balb/c雌性小鼠(6-8週大具有16至22 g之平均體重，Jackson Laboratories或Taconic Biosciences)於側腹區以皮下接種CT-26腫瘤細胞(ATCC)並藉由一周三次測量腫瘤，監測腫瘤生長。當腫瘤達到約180 mm3
，將小鼠(每組N=4)隨機分配到下列組別：對照組(化合物B媒劑+同型對照物)，化合物B(於第0天6 mg/kg單一IV劑量)，小鼠抗-PD-1抗體(於第0天和第3天10 mg/kg二個劑量，IP)或化合物B+抗-PD-1抗體之組合。投予前及於投予後第5、8、12及16天收集血液和腫瘤樣本並儲存於-80ºC直到分析。將樣本進行腫瘤內T細胞分量和TCR多樣性分析(aptive Biotechnologies, Seattle, WA)。於浸潤T細胞上經由immunoSEQTM
進行TCR定序。
如相較於媒劑或單獨抗-PD-1抗體組(p =0.005)，藉由事後杜氏檢定(post-hoc Dunn’s test)所測，在第8天前，以單獨6 mg/kg的化合物B，或與抗-PD-1抗體組合治療的CT-26腫瘤顯示明顯較低的TCR細胞組庫單株性(clonality)。單株性係藉由細胞組庫內單株或寡株顯性之程度藉由測量殖株頻數分配之形狀來定量。殖株的多樣性係藉由減低採樣將模板數降至最少來測定。與單株性一致，在第5天和第8天，TCR多樣性顯示相反趨勢且在以化合物B或化合物+抗-PD-1抗體組合治療的組別中為較高(p＜0.05)(圖 19
)。就化合物B或抗-PD-1抗體組合治療，以T細胞組庫衡量標準於第12或16天未觀察到顯著差異。
如圖 20
中所示，TCR定序亦展現化合物B單獨或與抗-PD-1抗體組合(p＜0.05)提升了腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)分量。第8天的週邊血液樣本分析顯露化合物B，相較於媒劑對照組，亦明顯降低(p = 0.001)T細胞單株性，與腫瘤中的觀察一致(圖 21
)。實例 16
化合物
B
重新編程高
Teff
活性、
IFN-
γ
誘發及檢查點配體表現之
CT-26
腫瘤微環境
亦經由mRNAseq (Ominiseq, Buffalo, NY)剖析來自上述實例15之研究的CT-26腫瘤樣本並以GeneCentric (Research Triangle Park, NC)分析，用以鑑別細胞和淋巴細胞浸潤和活化的分子標籤。數據係以對照組(媒劑)、化合物B (6 mg/kg)、小鼠抗-PD-1 (10 mg/kg)或化合物B和小鼠抗-PD-1之組合(每組N=10隻小鼠)治療後第8天CT26腫瘤樣本的表現熱圖來呈現。所有的標籤和個別基因係以K‐W p‐值＜0.05表示(PD-L1除外，p=0.23)。化合物B和抗-PD1治療-誘發的免疫活化係以使用編造不同免疫標籤的基因和個別基因的log 2中位數居中表現值產生之數值為基礎的熱圖來表示。亦製作顯示個別免疫活化標籤或個別基因表現量的箱線圖。在這些箱線圖中，進行第8和12天整個對照組和治療組的逐對比較及當Wilcoxon Rank Sum 檢定的p-值為＜ 0.05時，顯示p-值)。使用R program version 3.5.3產生熱圖和箱線圖。箱線圖係顯示下、中和上四分位數表現數據。Plot whiskers係顯示表現數據的全整分布。圖 22
中所提供的名稱係相當於人類垂直同源基因。
圖 22
熱圖的最首行係顯示單一投予化合物B後8天，CT26腫瘤經活化的CD8+效應子和記憶T細胞及CD56dim
(溶細胞表型)NK細胞浸潤。這些細胞群族進一步係藉由與抗-PD-1抗體組合來提升。平均數居中log 2表現量(圖 23
)係顯示，相對於投予前的量，化合物B顯著(p＜0.05)提升這些腫瘤中活化的和記憶CD8+T細胞，而相較於投予前的量或對照組，化合物B和抗-PD-1抗體之組合顯著增加CD56dim
NK細胞(p＜0.01)。如圖 22
中所示，化合物B誘發多重的IL-2標記之反應和T細胞活化，包括三條IL-2受體鏈CD28、4-1BB及CD40。此外，化合物B治療造成升高的檢查點抑制受體PD-1和CTLA4及PD-1配體PD-L1和PD-L2之表現。化合物B亦誘發IFN- γ釋放及活化IFN-γ訊號傳遞路徑上的基因報導(圖 24A
)。
為了在帶有CT-26腫瘤小鼠中建構對化合物B的標籤反應，係在投予後第8天於媒劑對照組與化合物B治療動物間對ID差異表現基因進行監督分析(FDR＜0/01)。使用顯著性分析，對比第8天化合物B治療小鼠和第8天媒劑對照組樣本之間的基因表現圖式。使用錯誤發現率(FDR = 0.01)調整多個比較。以FDR-調整的p-值將基因排名，就對應的倍數變化係列於表 35
中。倍數變化大於1係指基因表現在化合物B治療臂中為較高的；倍數變化低於1係指基因表現在對照臂中為較高的。表 35.
鑑別用於開發化合物B預測性反應標籤(PRS)之新基因標記的表現變化監督分析
| 基因 | 原始 p- 值 | P- 值 | 倍數 | 基因 | 原始 p- 值 | P- 值 | 倍數 |
| F10 | 1.12E-6 | 0.000 | 3.2 | NR4A3 | 9.24E-6 | 0.011 | 2.5 |
| IL2RA | 1.12E-6 | 0.008 | 3.8 | BCL2L14 | 9.24E-6 | 0.011 | 6.1 |
| CDH1 | 2.24E-6 | 0.008 | 3.0 | DCSTAMP | 9.24E-6 | 0.011 | 4.1 |
| GZMK | 2.24E-6 | 0.009 | 4.0 | CTLA4 | 1.20E-5 | 0.012 | 3.7 |
| SEPT3 | 5.88E-6 | 0.009 | 5.3 | ARHGEF37 | 1.20E-5 | 0.012 | 3.0 |
| F7 | 5.88E-6 | 0.011 | 5.4 | STRIP2 | 1.57E-5 | 0.015 | 4.6 |
| PDCD1LG2 | 5.88E-6 | 0.011 | 4.6 | FAM169A | 2.24E-5 | 0.015 | 1.7 |
| ASGR2 | 5.88E-6 | 0.011 | 4.6 | CCL22 | 2.41E-5 | 0.015 | 3.8 |
| RAMP3 | 5.88E-6 | 0.011 | 3.1 | MEX3B | 2.55E-5 | 0.015 | 1.6 |
| IL12B | 5.88E-6 | 0.011 | 6.5 | HR | 2.58E-5 | 0.015 | 4.3 |
| FLT3 | 8.12E-6 | 0.011 | 3.9 | TACR1 | 2.69E-5 | 0.015 | 2.7 |
| CCL17 | 8.96E-6 | 0.011 | 7.3 |
使用43個最具差異表現基因中的42個進行原型化合物B PRS。將基因GT(ROSA)26從原型PRS排除，因為此基因係用作為小鼠中敲入基因座。製造原型化合物B細胞並與對照組、化合物B及抗-PD1治療臂比較。進行第8天和第12天整個對照組和治療組之PRS的逐對比較並如箱線圖所示(圖 24A
)。顯示藉由逐對Wilcoxon Rank Sum檢定所產生的P-值(p-值＜ 0.05)。使用R program version 3.5.3產生箱線圖，其係顯示上四分位數、中位數和下四分位數表現數據。Plot whiskers係顯示中位數加或減1.5倍內部四分位數間距(IQR)，或當最小/最大落在1.5倍IQR內時，為最小/最大表現數據。
相對於對照組，在第8天42個基因被化合物B上調。使用顯示於表 35
中的23個人類垂直同源物建立一原型反應標籤。如表 35
概述的內容中所示，偵測到數個具有已知IL-2相關生物學之基因。就化合物B單一藥劑和與抗-PD-1抗體之組合，相對於媒劑治療的小鼠，觀察到顯著的標籤細胞(圖 24B
)。實例 17
在以
CT-26
細胞再注射挑戰的存活動物中，化合物
B
促進持久性記憶
T
細胞反應之建立，防止
CT-26
腫瘤生長
在實例15中，7隻小鼠在第100天仍為無腫瘤並各包括1隻來自3 mg/kg化合物B，6 mg/kg化合物B以及抗-PD-1抗體組的動物及4隻來自6 mg/kg化合物B + 抗-PD-1抗體組之動物。將這7隻小鼠和7隻未用過藥的對照小鼠於第121天同時接種相同數目的CT-26腫瘤細胞(研究#2)。如圖 25
中所示，先前經化合物B、抗-PD-1抗體或其組合治療的7隻小鼠並無發生腫瘤，而所有的對照組動物長出腫瘤，其顯示回應最初的治療建立了持久性記憶T細胞群族。而2個月後，在第181天將7隻存活的經治療無腫瘤動物再次與7隻對照小鼠一起接種上CT-26腫瘤細胞。再一次，7隻經治療的無腫瘤動物並未發生腫瘤而對照組動物則長出腫瘤(圖 25
)。這7隻無腫瘤動物存活至第202天研究終了時。
以存活的動物於另外的研究(研究#3)中重複再挑戰實驗。在第102天腫瘤完全消退之總計9隻存活無腫瘤小鼠(來自9 mg/kg化合物B和抗-PD-1抗體組各1隻，2隻來自3 mg/kg化合物B+抗-PD-1抗體組合組及5隻來自6 mg/kg化合物B+抗-PD-1抗體組合組)以皮下接種CT-26腫瘤細胞再挑戰。另外10隻無用過藥對照小鼠亦同時接種。如圖 26
中所示，9隻動物並無發生腫瘤，其顯示回應最初的治療建立了持久性記憶T細胞群族。相反的，全部10隻對照動物皆發生腫瘤。二個月後，於第163天，於第一次挑戰中存活的相同9隻動物中進行第二次再挑戰；另外9隻無用過藥動物作為對照組。如同第一次再挑戰的情況，9隻存活動物並無發生腫瘤，其確認了最初療後記憶T細胞反應之持久性，而在對照組動物中長出腫瘤(圖 26
)。這9隻無腫瘤動物存活至第184天研究終了時。
就測定化合物B促進持久性T細胞記憶反應的能力，係在第二次再挑戰後60天，從研究#2之7隻存活的小鼠收集血液樣本。表現記憶之血液樣本的FACS分析揭露了化合物B促進建立抗CT-26腫瘤之持久性免疫學記憶，如觀察到週邊記憶T細胞(CD3+)，包括記憶CD8+ T細胞的整體增加(圖 27A-27B
)。
總結
。在6 mg/kg化合物B治療的腫瘤之TIL分析中顯露了T細胞組庫和活化的CD8+T細胞(包括效應子記憶)和NK細胞及IFNγ標籤增加，其誘發檢查點配體。免疫檢查點治療已被廣泛使用且在越來越多的癌症中顯現效用，包括轉移黑色素瘤和腎細胞癌(Hodi F.S. et al., N. Engl. J. Med. (2010) 363(8)：711–723；Topalian S.L. et al., N. Engl. J. Med. (2012) 366(26)：2443–2454；Wolchok J.D. et al., N. Engl. J. Med. (2013) 369(2)：122–133；Sharma P. et al. Cell (2015) 161(2)：205–214；Alsaab H.O. et al., Frontiers in Pharmacology (2017) 8：561, 1-15；Pardoll D.M. Nat. Rev. Cancer (2016) 12(4)：252–264)。然而，完全反應率仍相當低。免疫檢查點抑制劑顯露了功能失調的細胞毒性T淋巴細胞之裂縫並將其填補，而細胞激素治療，例如IL-2可使其活化並增生。此外，以IL-2為基礎的治療可擴增和活化Fc+淋巴細胞，例如NK細胞。因此，檢查點抑制劑與IL-2之組合彼此互補，媒介對提升抗-腫瘤反應之免疫反應的效應。在目前的研究中，相較於各單一藥劑，化合物B和抗-PD-1之組合治療由於提升活化的細胞毒性CD8+T和NK細胞之多樣性和單株性，而產生存活利益。再者，經化合物B或組合治療的無腫瘤小鼠具有持久性記憶T細胞群組。此項產生於二次相隔二個月以相同的腫瘤細胞再挑戰後，在存活小鼠中注射腫瘤細胞，其中第一次再挑戰為最後化合物B、抗-PD-1抗體或組合治療後100天。
在文中已顯示和描述本發明較佳的具體實例之同時，此等具體實例僅以舉例說明的方式提供對熟習本項技術者應為顯而易見的。在不悖離本發明之下，熟習本項技術者現在應能想到許多的變化、改變及取代。應了解，在施行本發行時可應用文中所述的本發明具體實例之各種替代選擇。希望下列請求項係定義本發明之範圍且據此涵蓋這些請求項中的方法和結構及其同等物。文中所引述的所有專利和科學文獻之揭示文明確地係以全文引用的方式併入本文中。
無
參照下列陳述圖例的具體實例之詳細說明將更能了解本發明之特色和優點，其中係利用本發明之原理及其伴隨的圖式：
圖 1
係顯示來自實例11研究1以QWx3時程IV投予化合物A之抗腫瘤活性的圖式。黑色箭頭代表化合物A的投予日。
圖 2
係顯示來自實例11研究1以QWx3時程IV投予化合物A之腫瘤體積的圖式。
圖 3
係顯示來自實例11研究1以QWx3時程投予化合物A，各治療的動物於治療後第15天之腫瘤體積。黑色箭頭代表化合物A的投予日。
圖 4
係顯示來自實例11研究1以Q2Wx2時程投予化合物A，各動物於治療後第15天之腫瘤體積。
圖 5
係顯示來自實例11研究2以媒劑、6 mg/kg化合物A作為單一藥劑、抗-PD-1抗體作為單一藥劑及6 mg/kg化合物A和抗-PD-1抗體之組合治療小鼠的平均腫瘤生長曲線。黑色箭頭代表化合物A的投予日。
圖 6
係顯示來自實例11研究2以化合物A和抗-PD-1抗體組合治療的組別，相較於以媒劑、單獨化合物A或單獨的抗-PD-1抗體治療的組別，於治療後第15天的%TGI數據之圖式。*p＜0.05，**p＜0.01及***p＜0.01；對媒劑對照組。┴
p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。數據係代表平均腫瘤體積±SEM(14隻小鼠/組)。
圖 7
係顯示來自實例11研究2之治療組的Kaplan-Meier存活曲線圖。*p＜0.05對媒劑對照組。┴
p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。
圖 8
係代表實例11研究3中化合物A以1 mg/kg、3 mg/kg、6 mg/kg及9 mg/kg單一試劑投予時的平均腫瘤生長曲線。數據係代表平均腫瘤體積±SEM(14隻小鼠/組；9 mg/kg化合物A除外，為12隻小鼠/組)。黑色箭頭代表化合物A的投予日。
圖 9
係代表來自實例11研究3於治療後第15天的個別腫瘤體積。數據係代表個別的腫瘤體積；平均值±SEM及亦顯示與媒劑對照組相比的%TGI。***p＜0.01對媒劑對照組。
圖 10
係顯示以媒劑(對照組)、單獨抗-PD-1抗體、單獨化合物A及化合物A和抗-PD-1抗體組合治療之治療組的Kaplan-Meier存活曲線圖。來自實例11研究3，*p＜0.05對媒劑對照組。┴
p＜0.05對抗-PD-1抗體。#p＜0.05對化合物A。
圖 11A
和圖 11B
係顯示就實例12之單一捐贈者，單獨的IL-2和IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1以及與納武單抗(Nivo)或帕博利珠單抗(Pem)組合之代表性細胞激素量的圖式。圖 11A
係顯示IFN-γ、IL-8、IL-6、TNF-α、IL-4及IL-5 量之圖式。圖 11B
係顯示IL-6、TNF-α及IL-5量之圖式。
圖 12
係顯示根據實例13在化合物B(IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1)和帕博利珠單抗組合之混合淋巴細胞反應(MLR)分析中干擾素-γ的釋放。
圖 13
和圖 14
係顯示根據實例13在化合物B(IL-2_P65[AzK_L1_PEG30kD]-1)和納武單抗組合之混合淋巴細胞反應(MLR)分析中干擾素-γ的釋放。
圖 15
係顯示來自實例14化合物B的藥物動力學性質。
圖 16A-16D
係顯示根據實例14在投予化合物B之後，分別在週邊血液CD8+T細胞、CD8+記憶T細胞、NK細胞及Treg細胞中pSTAT5+細胞的量。
圖 17A-17G
係顯示根據實例14被化合物B所活化的CD8+T、NK及Treg細胞群族中之Ki67。
圖 18A-18D
係顯示根據實例14以化合物B治療後的腫瘤樣本分析(CD8+T細胞、NK細胞及Treg 細胞量和CD8+/Treg比率)。
圖 19
係顯示根據實例15以化合物B和小鼠抗-PD-1抗體治療後的TCR多樣性。
圖 20
係顯示根據實例15在所指的治療(例如化合物B及/或小鼠抗-PD-1抗體)之後TIL單株性(clonality)對T細胞分量。
圖 21
係顯示根據實例15以化合物B治療之後與媒劑對照組相比的T細胞單株性。
圖 22
係顯示來自實例16在以對照(媒劑)、化合物B(6 mg/kg)和小鼠抗-PD-1(10 mg/kg)，或化合物B和小鼠抗-PD-1之組合(每組N=10隻小鼠)治療後，來自第8天CT26腫瘤樣本的表現熱圖。
圖 23A-23C
係顯示根據實例16以化合物B治療後的腫瘤微環境狀況之關鍵表現報導子：活化的CD8+效應子和效應子記憶T細胞及溶細胞NK細胞的浸潤分析。CTL = 對照組(媒劑)；Cmpd B 化合物B；aPD1 = 小鼠抗-PD-1抗體 ；Cmpd B aPD1 =化合物B和小鼠抗-PD-1抗體之組合。
圖 24A-24B
係顯示根據實例16回應治療之干擾素γ基因表現標記量的分析工具分析。CTL = 對照組(媒劑)；Cmpd B 化合物B；aPD1 = 小鼠抗-PD-1抗體 ；Cmpd B aPD1 =化合物B和小鼠抗-PD-1抗體之組合。
圖 25
和圖 26
係顯示根據實例17於再挑戰(re-challenged)的無腫瘤動物中之存活和腫瘤生長評估。
圖 27A
和圖 27B
係顯示根據實例17於再挑戰的小鼠中化合物B促進整體週邊記憶T細胞(CD3+)，包括記憶CD8+T細胞增加。
無
Claims (28)
- 一種於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該IL-2接合物中至少一個胺基酸殘基係經式(I)之結構置換：式(I)； 其中： Z為CH2 而Y為
； Y為CH2 而Z為
； Z為CH2 而Y為；或 Y為CH2 而Z為
； W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5 kDa、10 kDa、15 kDa、20 kDa、25 kDa、30 kDa、35 kDa、40 kDa、45 kDa、50 kDa及60 kDa； X具有下列結構：
； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點； 其中SEQ ID NO：3中式(I)結構之位置係選自K34、F41、F43、K42、E61、P64、R37、T40、E67、Y44、V68及L71。
- 根據請求項1之方法，其中在該IL-2接合物中Z為CH2 而Y為。
- 之方法根據請求項1之方法，其中在該IL-2接合物中Y為CH2 而Z為。
- 之方法根據請求項1之方法，其中在該IL-2接合物中Z為CH2 而Y為。
- 之方法根據請求項1之方法，其中在該IL-2接合物中Y為CH2 而Z為.
- 根據請求項1-5中任一項之方法，其中在該IL-2接合物中該PEG基團具有25 kDa、30 kDa或35 kDa之平均分子量。
- 根據請求項6之方法，其中在IL-2接合物中該PEG基團具有30 kDa之平均分子量。
- 根據請求項1-7中任一項之方法，其中在該IL-2接合物中SEQ ID NO：3中之式(I)結構的位置為P64。
- 如請求項1之方法，其中該式(I)之結構具有式(X)或式(XI)之結構，或為式(X)和式(XI)之混合物：式(X)；
(XI)； 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
- 如請求項9之方法，其中在該IL-2接合物中SEQ ID NO：3中之式(X)或式(XI)結構的位置為P64。
- 如請求項9或10，其中在該IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2 CH2 )n -OCH3 具有約25 kDa、30 kDa或35 kDa之分子量。
- 如請求項11之方法，其中在該IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2 CH2 )n -OCH3 具有約30 kDa之分子量。
- 如請求項1之方法，其中式(I)之結構具有式(XII)或式(XIII)之結構，或為式(XII)和式(XIII)之混合物：式(XII)；
(XIII)； 其中： n為範圍從約2至約5000之整數；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
- 如請求項13之方法，其中在該IL-2接合物中SEQ ID NO：3中之式(XII)或式(XIII)結構的位置為P64。
- 如請求項13或14之方法，其中在該IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2 CH2 )n -OCH3 具有約25 kDa、30 kDa或35 kDa之分子量。
- 如請求項15之方法，其中在該IL-2接合物中n為一整數使得-(OCH2 CH2 )n -OCH3 具有約30 kDa之分子量。
- 一種於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：50之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(IV)或式(V)之結構，或為式(IV)或式(V)結構之混合物：式(IV)；
式(V)； 其中： W為具有選自下列平均分子量之PEG基團：5 kDa、10 kDa、15 kDa、20 kDa、25 kDa、30 kDa、35 kDa、40 kDa、45 kDa、50 kDa及60 kDa； X具有下列結構：
； X-1係指連接前面胺基酸殘基的點；及 X+1係指連接後面胺基酸殘基的點。 - 根據請求項17之方法，其中W為具有選自25 kDa、30 kDa或35 kDa平均分子量之PEG基團。
- 根據請求項18之方法，其中W為具有30 kDa平均分子量之PEG基團。
- 一種於一有此需要的對象中治療癌症的方法，該方法係包括投予該對象一治療上有效量之(a)IL-2接合物，及(b)一或多個免疫檢查點抑制劑，其中該IL-2接合物係包括SEQ ID NO：50之胺基酸序列，其中[AzK_L1_PEG30kD]具有式(XII)或式(XIII)之結構，或為式(XII)和式(XIII)結構之混合物：式(XII)；(XIII)； 其中： n為一整數使得-(OCH2 CH2 )n -OCH3 具有約30 kDa之分子量；及 波形線係指連接SEQ ID NO：3內未經置換的胺基酸殘基之共價鍵。
- 根據請求項1-20中任一項之方法，其中該一或多個免疫檢查點抑制劑為一或多個PD-1抑制劑。
- 根據請求項21之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑係選自帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)及西普利單抗(cemiplimab)。
- 根據請求項22之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
- 根據請求項22之方法，其中該一或多個PD-1抑制劑為納武單抗。
- 根據請求項1-24中任一項之方法，其中該癌症係選自腎細胞癌(RCC)、非小細胞肺癌(NSCLC)；頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)、經典何杰金氏淋巴瘤(cHL)、原發性縱膈腔大B細胞淋巴瘤(PMBCL)、泌尿道上皮細胞癌、微小衛星體的不穩定性癌、微小衛星體的穩定性癌症、胃癌、大腸癌、大腸直腸癌(CRC)、子宮頸癌、肝細胞癌(HCC)、默克細胞癌(MCC)、黑色素瘤、小細胞肺癌(SCLC)、食道癌、食道鱗狀細胞癌(ESCC)、膠質母細胞瘤、間皮瘤、乳癌、三陰性乳癌、前列腺癌、去勢抗性前列腺癌、轉移性去勢抗性前列腺癌、或具有DNA損傷反應(DDR)缺陷之轉移性去勢抗性前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、中度至低度突變負荷之腫瘤、皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)、鱗狀細胞皮膚癌(SCSC)、低至無表現PD-L1之腫瘤、在其原發解剖起源位置以外全身性傳播至肝臟及CNS之腫瘤及瀰漫性大B-細胞淋巴瘤。
- 根據請求項1-25中任一項之方法，其中該IL-2接合物係每週一次，每二週一次，每三週一次，每4週一次，每5週一次，每6週一次，每7週一次，或每8週一次投予該對象。
- 根據請求項1-26中任一項之方法，其中該IL-2接合物係藉由靜脈內給藥投予對象。
- 根據請求項1-27中任一項之方法，其中該IL-2接合物為醫藥上可接受鹽、溶劑合物或水合物。
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