TW200812970A

TW200812970A - Inhibitors of AKT (protein kinase B)

Info

Publication number: TW200812970A
Application number: TW096122142A
Authority: TW
Inventors: Sajan Joseph; Renhua Li; Michael Ray Myers; Aktham Aburub; Jenny Pingqi Dai; Christopher Randall Schmid
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2006-06-20
Filing date: 2007-06-20
Publication date: 2008-03-16
Also published as: PE20080338A1; EA200970041A1; MX2008015904A; PL2035385T3; KR20090015978A; KR101067551B1; US20090221633A1; AU2007261120A1; EA015712B1; NO20090289L; EP2035385B1; ECSP088992A; DOP2008000053A; ATE455102T1; PT2035385E; AR061240A1; JP2009541335A; DK2035385T3; ES2336630T3; HRP20100147T1

Description

200812970 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明提供為Akt之抑制劑之化合物、包括該等化合物之組合物及使用該等化合物之方法。 ^ 【先前技術】蛋白質激酶涉及在正常及病理狀況下使生長因子、激素及其他細胞調節分子與細胞生長、存活及新陳代謝相聯繫之信號轉導路徑。一種如此之蛋白質激酶，即蛋白質激酶 B(亦稱為Akt)為絲胺酸/蘇胺酸激酶，其在促進各種細胞類型之增殖及存活中起重要作用，進而保護細胞免於細田= 亡（程式化細胞死亡）。大量蛋白質激酶及磷酸酶調節Akt之活性。舉例而十， Akt之活化為磷脂醯肌醇3-激酶（PI3-K)所介導，該灯弘艮激酶促使第二信使磷脂與Akt之普列克底物蛋白（pleckstrin)同源 (PH)結合域結合。該結合使Akt錨定至質膜且引起酶之攝酸化及活化。PI3-K之催化亞單位Ρ11〇α之擴增或^、〖調節亞單位ρ85α之突變導致若干類人類癌症中之Akt之活化。近期研究亦已證明了 PI3-K/AKT路徑在眾多病毒之生命週期中之作用。 ' WO 01/91754係關於蛋白質激酶抑制劑。w〇 2〇〇5/ 0 11697涉及蛋白質激酶A抑制劑及蛋白質激酶B抑制劑。 WO 2005/054202係關於AKT抑制劑。由於Akt在調節細胞存活中之關鍵作用，因此其為各種病症、尤其癌症及病毒性感染之有效治療提供新穎治療乾 120821.doc 200812970 點。然而，該等治療需要開發Akt之有效、選擇性、生物可用型抑制劑。對替代性Akt抑制劑存在需要。因此，本發明提供顯示增強之效能、選擇性及/或生物可用性之新穎Akt抑制劑、包括該等化合物之組合物及使用該等化合物之方法。另外，當含有新穎Akt抑制劑之醫藥組合物經稀釋或於溶液中時，其必定必須沒有沈澱現象以便傳遞至患者。本發明提供包括處於缺乏如此之沈澱現象的特定1)11值範圍内 t 之新穎Akt抑制劑的醫藥組合物。【發明内容】本發明提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯紛或其醫藥學上可接受之鹽，或該化合物或其鹽之水合物0 本發明亦提供4-[5-(2-胺基-乙烧績酿基）-異喧嚇^7-基]_ 苯酚二鹽酸鹽。 I 本發明另外提供4-[5·(2-胺基-乙烧石黃龜基）-異喧琳_7_ 基]-苯紛單鹽酸鹽半水合物。本發明亦提供用作藥劑之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異 4 喹啉-7-基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉- ^ 7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉- 7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。另外，本發明提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯 120821.doc 200812970 酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉基卜苯盼單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥劑：多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺、乳房、卵巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、甲狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤。本發明亦提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7_基卜本紛或包含4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異喧琳-7-基]•苯紛二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉·7·基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥劑：多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤。本發明另外提供4-[5-(2-胺基-乙燒石黃醯基）_異喹琳-7-基]-苯酚或包含4_[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉基卜苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉基卜苯紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療非小細胞肺癌或神經膠母細胞瘤用之藥劑。本發明另外提供4-[5-(2-胺基-乙垸磺醯基）_異喹琳基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯紛一鹽酸鹽或4-[5-(2 -胺基-乙烧磺醯基）_異唾琳_7_基]-苯盼單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物 120821 .doc 200812970 或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥d · C型肝炎、風疹、人類免疫缺乏症病毒（mv)、b型肝火或人類巨細胞病毒（HCMV)。另外’本發明提供用於治療多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺、礼房、卵巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、曱狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤的4_[5_(2_胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_ 7一基]β笨酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_ " a酉夂鹽或4·[5_(2-胺基·乙烧石黃酿基）_異喧·琳基]_ 苯紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明亦提供用於治療多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤的4_[5_(2_ 胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基卜苯酚或包含4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明另外提供用於治療非小細胞肺癌或神經膠母細胞瘤的4-[5-(2-胺基_乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基卜苯酚或包含 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基>異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明另外提供用於治療c型肝炎、風疹、人類免疫缺 120821.doc 200812970 乏症病毋（HIV)、B型肝炎或人類巨細胞病毒（HCMV)的4_ [5♦胺基-乙院石黃醯基）-異，奎琳乂基卜苯盼或包含心[5私

胺基-乙烧績醯基）.異㈣_7_基卜苯紛二鹽酸鹽或4七I 胺基乙烧石尹、酸基）-異喧琳基]•苯紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明另外提供一種治療有需要之患者之多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺、乳房、印巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、曱狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤的方法，其包括投與有效S之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]·苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基卜苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明亦提供一種治療有需要之患者之多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_胺基_乙烷磺醯基異喹啉-7-基]-苯酚或包含4_[5_(2-胺基_乙烷磺醯基）_異喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4_[5-(2_胺基-乙烷磺醯基）_異 1琳-7-基]-本紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明另外提供一種治療有需要之患者之非小細胞肺癌或神經膠母細胞瘤的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_ 胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或包含4_[5_(2_胺基· 120821.doc -10· 200812970 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明另外提供一種治療有需要之患者之c型肝炎、風疹、人類免疫缺乏症病毒（HIV)、B型肝炎或人類巨細胞病，毒（HCMV)的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_胺基-乙烷 ^ 磺醯基）_異喹啉_7-基]-苯酚或包含4-[5-(2•胺基·乙烷磺醯 ( 基）_異喹啉基]-苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）/、土琳-7-基]-本齡單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接义之鹽或該化合物或其鹽之水合物。本發明亦提供一種醫藥組合物，其包括4_[5_(2_胺基_乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯酚或包含‘[5_(2_胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7•基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基·乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接X之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥學上可接 (/ 受之載劑、稀釋劑或賦形劑。本發明另外提供一種冷凍乾燥醫藥組合物，其包括4_[5_ (2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]_苯酚或包含4^5_(2_胺 * 基_乙烷磺醯基）_異喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2-胺 ’ 基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物的其酉為车上了接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中當用水性稀释劑稀釋時，該組合物之PH值小於4.2且大於2.0、小於3·2且大於2.0，或小於2·8且大於2.〇。 120821 .doc 200812970 本發明亦提供—種醫藥組合物，其包括於溶液中之4_[5· (2-fe基-乙烷磺醯基）_異喹琳·7_基]苯酚或包含4·[5_(二胺基-乙烷磺醯基）-異喹琳_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4·[5·(2_胺基-乙烧續醯基）_異喹琳_7_基]_苯盼單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中該組合物之ρΗ 值小於4.2且大於2.0、小於32且大於2〇，或小於28且大於 2.0。本發明另外提供呈結晶形式的4_[5_(2_胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物，其具有在 2Θ=4·9、14·8及1〇·2處具有強峰之X射線粉末繞射圖。本發明亦提供4-[5-(2-胺基_乙烷磺醯基 >異喹啉_7_基]_ 苯酚或其醫藥學上可接受之鹽或其水合物。【實施方式】本务明之化合物為Akt之抑制劑且據信適用於治療與Akt 活性有關之病症。因此，本發明之化合物為抗贅生劑及/ 或抗病毒劑。本發明之化合物適用於治療顯示缺乏PTEN之贅瘤、具有失調（deregulated)PI3-激酶活性之贅瘤或顯示高Akt活性之贅瘤。據# Akt抑制劑適用於治療多發性骨髓瘤（pjsu等人，(2001) 98(9) 2853-2855);非小細胞肺癌 (Balsara，以（2004) 25(11) 2053_2059);神經朦母細胞瘤（Koul等人，Μα/· Cancer 77zer. (2006) 5. 637-644);神經母細胞瘤（Li等人，及以·（2005) 65(6)， 12082Ldoc -12- 200812970 2070-2075);黑素瘤（Dai等人，/·〇/ Cm (2005) 23(7)，1473-1482)及前列腺贅瘤（Majumder等人 ’ C^coge^ze (2005) 24，7465-7474);乳房贅瘤（Tokunaga 等人，/· 〇/ Clin. Oncology (Meeting Abstracts) (2005) 23(16S), 9500);卵巢贅瘤（Cheung 等人，PNAS (1992) 89，9267-9271 ; Yuan等人（2000) ; Hu等人（2000));原發性胃或腸類型贅瘤（Ang等人，Ze"· (2005) 225(1)，53-59);子宮内膜贅瘤（Jin 等人 ’ 5r"/*y/2 J. 〇/ Cawcer (2004) 91 1808-1812);甲狀腺贅瘤（Ringel 等人，C⑽cer iia· (2001) 61(16)，6105_6111 ; De Vita等人，(2000) 60, 3916-3920);胰腺贅瘤（Schliemen等人，«/·〇/ C⑽cer (2003) 89，2110-2115);肺贅瘤（Massion 等人，dm. «/· CWi· Care Mei (2004) 170，1088-1094);或膀胱贅瘤（Rieger-Christ 等人，Oncogwe (2004) 23(27)，4745-4753)。亦據信Akt抑制劑適用於治療諸如以下者之病毒： C型肝炎及C型肝炎之NS5A(Mannova等人，J· Fz>o/· (2005) 79(14)，8742-8749; He 等人（2002));風疹（Cooray等人， P7 〜/og>y (2005) 2(1)，1-12);人類免疫缺乏症病毒（HIV) 之Tat蛋白質（Borgatti等人（1997)) ; B型肝炎之蛋白質 X(Lee等人（2001))，或人類巨細胞病毒（HCMV)(Johnson# 乂（2001)) 〇 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚與（例如）常用於醫藥化學領域之生理學上可接受之鹽形成醫藥學上可接受之酸加成鹽。該等鹽亦為本發明之部分。醫藥學上可 120821.doc -13- 200812970 接受之鹽及製備其之通用方法在此項技術中為熟知的。參見（例如），P. Stahl 等人，Handbook of Pharmaceutical

Salts: Properties，Selection and Use，（VCHA/Wiley-VCH， 2002) ； S. M. Berge等人，丨’Pharmaceutical Salts，” Journal of Pharmaceutical Sciences，第 66 卷，第 1 期，1977 年 1 月。 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚之較佳鹽包含單鹽酸鹽及二鹽酸鹽。本文中所描述之中間物可形成鹽。除鹽以外，本發明之化合物及本文中所描述之中間物可形成水合物或醫藥學上可接受之鹽之水合物。較佳化合物為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚。另一較佳化合物為4-[5-(2·胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]_苯酚二鹽酸鹽。更佳化合物為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物。如本文中所使用，術語’’患者”係指罹患一或多種與高 Akt活性相關之病症之哺乳動物。應瞭解，最佳患者為人類。亦應瞭解，本發明特別係關於抑制哺乳動物 Akt/PKB。術語π治療’’及其類似術語意謂包含諸如減少及/或抑制贅瘤之生長、Akt 1、Akt 2及/或Akt 3之擴增及/或過度表現、細胞增殖及存活及/或病毒複製的效應。如本文中所使用，術語π有效量”係指抑制Akt達至提供藥理學效應之程度之量。 120821.doc -14- 200812970 本發明亦提供一種醫藥組合物，其包括4_[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或其醫藥學上可接受之骑或其水合物’以及醫藥學上可接受之载劑、稀释劑或&形劑。本發明之醫藥組合物包含稀釋前之形式，諸如冷凍乾燥形式；及稀釋後之形式，諸如有待於投與患者之形式該等醫藥組合物之pH值為小於約4.2至大於約2 〇。更件地，PH值為小於約3.2至大於約2.〇。最佳pH值為小於二 2·8至大於約2·〇。”醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑”為此項技術中一般公認用於將生物活性劑傳遞至患者 (例如哺乳動物，較佳為人類）之介f。該等載劑、稀釋劑或賦形劑通常係根據完全屬於熟習此項技術者能夠確定i 解釋之能力範圍内之大量因素來調配。該等因素包含（但不限於）：所調配之活性劑之類型及性質；欲投與含有藥劑之組合物之受檢者；組合物之所欲投藥途徑；及所靶向之治療適應症。醫藥學上可接受之載劑及賦形劑包含水性及非水性液體介質以及各種固體及半固體劑型。該等載劍、稀釋劑或賦形劑可包含大量除活性劑以外之不同成分及添加劑，該等額外成分因熟習此項技術者所熟知之各種原因（例如對活性劑之穩定化作用）而包含於調配物中。關於合適醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑以及其選擇所涉及之因素的描述見於各種易得到之來源。參見（例如），Remington: The Science and Practice of Pharmacy(A·

Gennaro等人編，第 19版，Mack Publishing Co.，1995)。本發明之化合物可以含有習知無毒醫藥學上可接受之載 I20821.doc -15- 200812970 劑、稀釋劑或賦形劑式全身性投與，諸如與。之酉藥組合物之劑量單位調配物的形靜脈内（例如藉由快速注射或輸液）投對4 [5 (2·版基-乙燒石黃酿基）_異哇淋1基]-苯齡之醫藥組合物而言’活性成分將通常以按組合物之總重量計為約 0.5至95重量％之量存在。可應用適當包衣以增加可口性或延緩吸收。用於治療患者之本文中所又T所描述之病症的本發明之化合物療有效里可以熟習此項技術者已知之各種方式來確定。然而應瞭解，對於任何特定患者而言，具體之劑量水平將視各種因素而$，該等因素包含：所採用之特定化合 :之活性、年齡、冑重、-般健康狀況、性別、飲食、投藥時間、技藥途技及排泄速率、藥物組合及特^疾病之嚴重性。劑量頻率亦可視所使用之化合物及所治療之特定疾病而變化。舉例而言，典型日劑量可含有約i mg至i §之活性成分。本發明之化合物可藉由採用除文獻中已知或例示於實驗私序中之其他標準操作以外的本文中所提供之資訊來箩備。、除非另外指定，否則本文中使用之術語及縮寫具有其正系s義。舉例而言，，’LC„係指液相層析；，，扣^，，係指雙 (一苯膦基）丁烷；Pd (〇Ac)2係指乙酸鈀；"DMF”係指n，n_ 二曱基甲醯胺；，，dmso”係指二曱亞砜；，，扮2〇，，係指乙醚；”Et〇AC”係指乙酸乙醋；"TFA"係指以乙酸； 120821.doc -16· 200812970 係指甲醇。製備製備1 2-[7-(4-甲氧基-苯基）-異喹琳-5-石黃醯基]-乙胺二鹽酸鹽用於二噁烷（350 mL)中之4 N HC1處理{2-[7·(4_甲氧基_ 苯基）-異喹啉_5_磺醯基卜乙基}-胺基甲酸第三丁酯（u.〇〇 g，24.85 mmol)於無水MeOH(150 mL)中之漿料。在室溫下將所得反應混合物攪拌隔夜，隨後真空濃縮至1 /2體積且用過量EtOAc處理，使黃色固體沈澱。藉由在N2氣氛下真空過濾回收所得固體；用EtOAc洗滌且在真空下（在N2氣氛下）乾燥以得到呈黃色固體之標題化合物（10.23 g，產率 99%) : MS (ES): m/z 343.0 (M++H)。製備2 7-溴·異喹啉-5-磺酸將發煙 H2S04(2,000 mL，21.33 mol ; 26-29.5% 游離 s〇3) 添加至一配備機械攪;摔器、回流冷凝器、&管線及溫度計之圓底燒瓶中。用冰/丙酮浴將發煙HJO4冷卻至大約 l〇°C，隨後逐份添加7-溴異喹啉HC1(500.00 g，2>Q4 m〇l)，保持反應混合物之溫度在大約15-20°C以下。_旦完成7-溴異喹啉HC1之添加後，在大約l〇〇°c下將所得反靡混合物加熱隔夜。將反應混合物冷卻至室溫，隨後緩慢傾倒至正攪拌著之冰H2〇溶液中。藉由真空過濾回收所得沈澱物’用HzO洗務，隨後用Et2〇洗丨條，且真空過渡乾燥，接著在乾燥烘箱中，在大約35°C下減壓乾燥以得到呈灰白色 120821.doc -17- 200812970 固體之標題化合物（501.42 §，產率85%):丁〇卩-%8[^8 + ; m/z] 287.933 1/287.9330 ° 製備3 7-(4-(甲氧基-苯基）-異喹啉-5-磺酸用2 M Na2C03水溶液（652 mL)處理7_漠-異喧琳-5-石黃酸 (150.00 g，0.520 mol)及 4-甲氧基苯基賴酸（90.87 g，0.598 mol)於 DMF(1，400 mL)及 MeOH(375 mL)中之溶液。用 N2 將所得漿料脫氧3次，隨後添加Pd(OAc)2(2.33 g，0.0104 mol)及 dppb(5.54 g，0.0130 mol)。在大約 70°C 下將所得反應混合物加熱3 hr，隨後使其冷卻至室溫隔夜。用 H20(4,000 mL)稀釋反應混合物且用5 N HC1水溶液將pH值調節至大約pH 2。使所得漿料在室溫下攪拌30 min，隨後藉由真空過濾回收棕色固體，用H20洗滌且真空過濾乾燥。將棕色固體溶於DMF(1，000 mL)及2 M Na2C03水溶液 (650 mL)中，且經由Celite®墊過濾所得溶液，用DMF(400 mL)/H20(400 mL)洗滌。用5 N HCM水溶液處理濾液以將pH 值調節至大約pH 2。使所得漿料在室溫下攪拌30 min，隨後藉由真空過濾回收固體，用H20洗滌且真空過濾乾燥隔夜。再次將固體溶於DMF(1，000 mL)及2 M Na2C03水溶液 (1，000 mL)中且用Celite®處理所得溶液以產生漿料。在室溫下將所得漿料攪拌30 min，隨後經由Celite⑧墊過濾，用 HW洗滌。用5 N HC1水溶液處理濾液以將pH值調節至大約pH 2。在室溫下將所得漿料攪拌30 min，隨後藉由真空過濾回收固體，用H20洗滌且真空過濾乾燥隔夜。將固體 120821.doc -18 - 200812970 壓碎，隨後用EtOAc洗滌，真空過濾乾燥隔夜，接著在乾爍烘箱中，在大約35 C下減壓乾燥以得到呈黃色固體之標題化合物（136.79 g，產率 83%) : tof.ms' [ES + ; 316.0624/316.0643。分析計算值 Ci6Hi3N〇4S: c 6〇94; H 4·15; N 4.44; S 10·16。實驗值 C 6〇 76; H 4 13; N 4 5〇; § 9.90 〇製備4 7-(4-曱氧基-苯基）_異喧琳石黃醢氯向7-(4-曱氧基-苯基）-異啥琳石黃酸（1213 g， mmol)於 1，2-二氣乙烷（200 mL)及 DMF(2.99 mL，38.5 mmol)中之漿料中逐滴添加乙二醯氣（26 8 mL，3〇8 mmol)。在氮氣氛下機械攪拌該漿料，同時在6〇_65它下加熱4 hr。將該漿料冷卻至-l〇°C。等待30 min，隨後過溏。用20%乙醚/二氣曱烷洗滌黃色固體且在氮氣氛下乾燥，得到呈黃色粉末之標題化合物（14.8 g)。製備5 7-(4-甲氧基-苯基）-異喹琳-5-硫醇鈉鹽 A·向7-(4-甲氧基-苯基）-異喧琳-5-續醯氯（4.0 g，12 mmol)於二噁烷（40 mL)中之漿料中添加三羧基乙基膦鹽酸鹽（13.73 g，48 mmol)及水（10 mL)。將該混合物加熱至 100°C且攪拌3 hr。在冰浴中冷卻該混合物，且經由吸管緩慢添加NaOH(5 N，60 mL)。過遽淺黃色沈殿物且空氣乾燥以得到標題化合物（3·2 g，95%)。質譜（LCMS)m/z= 266.2 (M-Na+) ° 120821.doc -19- 200812970 或者，標題化合物可如下製得： B.⑴用N2將7-(4-甲氧基-苯基）-異喹啉_5_磺酸（100.00 g，0.317 mol)於無水甲苯（2,500 mL)中之溶液去氧3次，隨後用 Ph3P(332.58 g，1.268 mol)、12(80.46 g，〇·317 mol)及 Βιι3Ν(152·00 mL，0.638 mol)處理。使所得反應混合物在 %下回流1小時，隨後冷卻至室溫隔夜同時將空氣鼓入反應混合物中。用1 N NaOH水溶液（500 mL)處理該反應混合物，隨後在室溫下將所得反應混合物攪拌隔夜同時將空氣鼓入反應混合物中。藉由真空過濾回收所得棕褐色沈澱物。用THF/EhO之1/1溶液洗滌，隨後真空過濾乾燥以得到呈淺棕褐色固體之雙-(7-(4-曱氧基-苯基）_異喹啉_5)_二硫化物（72.50 g ’ 產率 86%) : 4 NMR (400 MHz，DM SO) δ 9.39 (s，2Η)，8.51 (d，2Η)，8·41 (s，2Η)，8·11 (d，2Η)，8·00 (d，2H)，7.53 (d，4H)，6.94 (d，4H)，3.78 (s，6H)。 Β· (ii)用 NaBH4(2.84 g，75.07 mmol)處理雙 _(7_(4_ 甲氧基-苯基）-異喹啉-5)·二硫化物於無水THF(850 mL)中之聚料。在大約35°C下，在A下將所得反應混合物加熱大約1 小時’隨後在大約45 C下’在N2下加熱1小時。製備6 7-(4-甲氧基-苯基）-異喹啉-5_亞磺酸納向於水（10 mL)中之7-(4-甲氧基-苯基）_異喹啉磺醯氯 (1.48 g，4 mmol)中添加 Na2S〇3(1〇1 g，8 mm〇i)及

NaHC03(l .01 g，12 mmol)。將混合物加熱至1〇〇。〇且攪拌 1 hr。將反應混合物冷卻至室溫，且減壓移除水。將甲醇 120821.doc •20- 200812970 (40 mL)添加至殘餘物中，攪拌1〇 min。過濾白色固體，用甲醇洗滌且合併濾液。濃縮得到標題化合物（11 g)。製備7 (3,5_二氯-亞苄基）-(2,2_二乙氧基_乙基）_胺將2,2-二乙氧基-乙胺（1852 5 g; 100當量；13 63莫耳）、3,5-二氯-苯甲醛（2453 g ; ΐ·〇〇當量；13.60莫耳）及甲苯（12 L)裝至一配備迪恩·斯達克收集器（Dean Stark 、冷凝器、氮氣入口、頂置式攪拌及熱電偶之22 L燒瓶中。使淺黃色反應物溫至回流。在88。〇下溶劑開始蒸餾。收集總共大約65 0 mL餾出物（大約24〇 mL之水）。在蒸餾期間，使溫度增加至114°C。在回流2 hr後，NMR顯示產物。在 2.5 hr後停止加熱。經由有凹槽濾紙，將溶液以重力過濾至大玻璃瓶中以移除少數微粒（包含一小部分玻璃管，其最有可月b來自3,5-二氯-苯甲駿）。使用Buchi燒瓶與設定在 45 C下之水浴，濃縮所過濾之溶液。一旦溶劑停止餾出後’就在完全真空下使溫度增加至7(rc且保持大約15 hr 以移除任何殘餘甲苯。（3,5·二氣-亞苄基>(2,2_二乙氧基_ 乙基）-胺之重量為4059.3 g(理論值之ι〇2·9%)。質譜 (LCMS)m/z=291.2 (Μ+Η+)。製備8 5,7-二氯-異喹啉鹽酸鹽將三就甲磺酸（2.97 L ; 33.52莫耳·，5.03 kg)裝至一配備迪恩-斯達克收集器、頂置式攪拌、冷凝器、氮氣入口、3 L加料漏斗（經由冷凝器自燒瓶緩衝）及熱電偶之12 [燒瓶 120821.doc -21 - 200812970 中。將二氟甲磺酸加熱至12〇°C。用二氯甲烷（1350 mL)稀釋（3,5-二氯-亞苄基）_(2,2_二乙氧基·乙基）_胺（135〇5呂； 1·〇〇當量；4·65莫耳）且將其裝至加料漏斗中。添加係以 119 C之溫度開始。經90分鐘完成添加，保持溫度在12〇。〇下。在添加期間收集大致1500 mL之餾出物。面積％ HPLC 在添加後45夯鐘完成且顯示94.14%產物及4.86% (3，5-二氯-亞苄基Η2,2·二乙氧基-乙基）_胺。15 hr後停止加熱。將反應物冷卻至大約80°C。此時，將燒瓶置放於冰水浴中且進一步冷卻。添加甲醇（2.7 ，同時在9。〇下反應。經 60分鐘完成添加。最高溫度為27。〇。一些固體在甲醇添加期間形成。分若干份將該漿料轉移至一 2 L加料漏斗中且將其添加至在冰水中經冷卻至低於2。〇之於22 L燒瓶中之氫氧化銨溶液（5.1 L ; 36.67莫耳；4.59 kg)及水（5.1 L)中。該加料漏斗具有Teflon®管延伸部分以防止材料沿燒瓶之側面向下跑，此不良狀況會導致較多油性之固體附著於燒瓶壁。以小塊方式添加材料以防止加料漏斗由於固體而堵塞。經3 5分鐘完成添加，包含燒瓶及加料漏斗之曱醇（9〇〇 mL)沖洗。最咼溫度為26°C。棕色固體形成。將漿料冷卻至14C。將固體過濾、於聚丙稀塾上。用2x4 L及ix2 L之水洗滌固體。隨後用2 L庚烷洗滌固體以輔助乾燥。在5〇。〇下將固體真空乾燥至999.0 g(理論值之1〇8·4%)之重量。將 5,7-二氣-異喹啉（997 g ; ι·〇〇當量；5 〇3莫耳）及乙醇 (14.97 L)裝至一配備加料漏斗、氮氣入口、頂置式攪拌及熱電偶之22 L燒瓶中。在環境溫度（22。〇)下攪拌棕色漿 120821.doc -22 - 200812970 莫耳；1·3〇 kg)裝至加料漏。棕色漿料變暗。藉由添加料。將乙醯氯（11 8 0 mL ; 16.5 8 斗中。將其逐滴添加至燒瓶中 100-200 mL乙醯氣，固體顯現大部分_ 未形成。當繼續添加時，固體再現。經45分鐘完成添加。最高溫度為43°C，其在添加進行至接近一半時達到i在浴中以冷水保持。在添加大約3/4之乙醯氯之後，移取反應樣本以作NMR分析。因為樣本顯現為鹽’所以可能不需要過量的乙醯氯。將漿料攪拌且使其冷卻。4〇分鐘後，温度為30°C。將漿料冷卻至低於2它且在冰水浴中保持丨5 hr。過濾漿料。用2χ 1.3 L之冷卻乙醇洗滌固體。濕濾餅重量為 811.4 g。在50°C下真空乾燥固體。乾重為648 4 g。其表示產率為 61.0。/〇。質譜（LCMS)m/z=199.05 (M+H+)。製備9 -氣-異啥琳-5-基硫基）-乙基]-胺基曱酸第三丁酉旨將碳酸鉀（1952 g ; 14· 12莫耳）裝至一配備頂置式攪拌、加料漏斗、氮氣入口及熱電偶之22 L燒瓶中。添加二甲基甲醯胺（4 L)。分若干份添加5,7-二氯-異喹啉鹽酸鹽（646β1 g ; 1.00當量；2.76莫耳）及連同DMF(330 mL)。將Boc-半胱胺（514 g; 1·〇5當量；2.90莫耳）溶於二曱基甲醯胺（152〇 mL)中且裝至加料漏斗中。將混合物溫至60。〇。經由頂部空間氮淨化15分鐘同時將混合物升溫。在60°C下，經2小時又1 5分鐘添加b〇c_半胱胺溶液。添加之後1小時又2〇分鐘之HPLC顯示28.1 %起始物質、67.26%產物、4.22%異構體及0·25%雙取代物（0.25% bis)。使反應物溫至75°C。在 120821.doc -23- 200812970 75°C下，收集表a中之HPLC資料。 75°C下之時間~~ 5,7-二氯- 異喹啉 HC1 % [2-(7-氯-異嗤淋-5-基硫基)乙基]-胺基曱酸第三丁酯％異構體％雙取代物％ 30分鐘 2.75 90.27 5.54 1.44 1小時 0.93 91.39 5.52 2.16 1.5小時 0.20 91.25 5.32 3.23 表Α·製備[2-(7-氯-異喹啉_5_基硫基）-乙基]-胺基曱酸第三丁酯之反應HPLC資料 1 · 5小時後，用冷卻水浴置換加熱套。使反應物冷卻至 20-25°C。過濾固體且用DMF(2x810 mL)洗滌。用MTBE (5.15 L)及 5% LiCl(5.15 L)稀釋 DMF溶液。在 50 L底部出口燒瓶中攪拌後，分離諸層。用ΜΤΒΕ(2·9 L)萃取水層。將 ΜΤΒΕ層合併且用5% LiCl(2x2.9 L)洗滌。經由有凹槽濾紙將MTBE層以重力過濾且使用Buchi燒瓶與設定在35°C下之水浴使其濃縮以得到892.7 g(理論值之95.6%，未校正）之 [2-(7-氣-異喹啉基硫基）-乙基]-胺基甲酸第三丁酯。質譜（LCMS)m/z=339.85 (M+H+)。製備10 [2-(7-氯-異喹啉-5-磺醯基）-乙基]•胺基曱酸第三丁酯藉由在設定在50°C下之水浴中旋轉Buchi燒瓶使[2-(7-氣-異喹啉-5-基硫基）-乙基]-胺基甲酸第三丁酯（700 g ; 1.00當量；2.07莫耳）溶於異丙醇（ι〇·53 L)中。將對甲氧酚（12.29 g ; 98.01毫莫耳；12.29 g)、鎢酸鈉二水合物（31·4 g ; 95.20毫莫耳）、[2-(7-氣-異喹啉-5-基硫基）-乙基]_胺基甲酸第三丁酯溶液、異丙醇（2·77 L)、水（3.38 L)及乙酸（123 120821.doc •24- 200812970 mL，2.15莫耳；128.90 g)裝至一配備冷凝器、氮氣入口、頂置式攪拌、加料漏斗及熱電偶之22 l燒瓶中。添加水使標色溶液變成微乳狀外觀。纟用熱水浴使反應物溫至 5〇°C。經！小時添加過氧化氫（6〇7 mL; 5_94莫耳；673 77 g)。在添加期間，藉由過氧化氫添加速率且當需要時藉由將冷水或溫水添加至浴中將溫度維持在5〇_55它下。反應物仍為乳狀棕色。在添加結束時反應溫度為54。〇且使用溫水浴維持在53-57 C下。添加之後10分鐘iHpLC顯示在 2.89 min 處之 24·69% 峰、65·57%產物、5〇3%異構體、 4.33%雙取代物及在3·〇5 min處之〇18%峰。添加之後2小日守之HPLC顯示0.06%亞石風、在3.046 min處之1.27%峰、 88.10%產物、4·61%異構體及5·79%雙取代物。將浴排乾且用冰水置換以冷卻反應。當反應溫度達到27C時，藉由添加9%亞硫酸氫鈉溶液（25〇 mL)中止過氧化物。未觀察到溫度增加。過氧化物試片及澱粉碘化物試紙顯示無剩餘過氧化物。經15-20分鐘添加水（5.64 L)。在添加期間，溫度自 18°C增加至24t。在環境溫度下將混合物攪拌隔夜。在冰水浴中將漿料冷卻至低於rc且保持。對上清液隨時間之定量HPLC顯示，在低於5它下，h5小時後完成結晶。過濾固體且用水（2x2 L)洗滌。濕濾餅重量為831 g。在5(rc下將固體真空乾燥。乾燥[2-(7-氯-異喹啉-5-磺醯基）_乙基]_ 胺基甲酸第三丁酯之重量為531 g(理論值之69.31%，未校正）。質譜（LCMS)m/z=371.85 (M+H+)。製備11 120821.doc -25- 200812970 (2-{7-[4-(四氫-哌喃-2-基氧基）-苯基]-異喹啉-5-磺醯基}-乙基）-胺基曱酸第三丁酯在氮淨化條件下，將PEPPSITM(Pyridine_Enhanced Precatalyst

Preparation Stabilization and Initiation ; 51·0 g ; 74.9 毫莫耳）、[2-(7-氣-異喹啉-5-磺醯基）_乙基]-胺基甲酸第三丁酯 (1-3 83 1^;3.729 莫耳）、苯基_酸（895 §;4_03莫耳）、〖2(：03(1.〇3 9 1^;7.518莫耳）及乙醇（15 1〇裝入60 1^反應器中。最初將12 L乙醇添加至反應器中且剩餘3 L用於沖洗 f ；其他裝料。將反應物溫至回流（78。〇。HPLC顯示，％小時後完成反應。使用Huber⑧循環器使反應物冷卻至59°C。經 18分鐘將水（8.7 L)添加至反應物中。在水添加期間，溫度自59 C降低至42°C。使用Huber®循環器，經1小時使反應物自42°C冷卻至0°C。在0°C下將漿料保持1小時。使用聚丙烯墊過濾固體且用1:1乙醇：水（3.7 L ;經冷卻）洗滌。在過濾器上乾燥固體隔夜。隨後在60°C下真空乾燥固體22小 f 時。固體之乾重為2.171 kg。粗製（2-{7-[4-(四氫-u辰π南·2· 基氧基）-苯基]-異喹琳-5-績醯基}-乙基）-胺基甲酸第三丁酯中之Pd含量為2196 mcg/g且藉由KF得知，固體含有6.9% 之水。將一氟甲烧（4 L)裝入50 L底部出口燒瓶中。將粗製 - (2-{7-[4-(四氫-哌喃-2-基氧基）-苯基]-異喹啉_5_磺醯基卜乙基）-胺基甲酸第三丁酯裝至該50 L燒瓶中且用二氯甲烧 (1 L)沖洗。裝入Na2S〇4(1.9 kg)且用二氣甲烷（(M L)沖洗。將Darco G-60®(3.8 kg)裝至20 L Btichi燒瓶中且於二鼠甲烧（12 L)中製成衆料。將該聚料轉移至5〇 l燒航且用 120821.doc -26- 200812970 一虱甲烷（4.9 L)沖洗。在環境溫度下將混合物攪拌2小時。使50 cm不錄鋼過濾器裝備有聚丙烯墊且用Hyfl〇 Super Cel®(l，7 kg)裝填。用二氯甲烷（2 L)沖洗Hyfl〇 8叩以 Cel墊。將50 L燒甑之内含物過濾於Hyfi〇 Super匸❻广墊上。用二氯曱烷（22 L)沖洗燒瓶及濾餅。經由〇·45微米過濾筒，將濾液裝至60 L反應器中。使反應器之内含物升溫且藉由在低度真空（大約64〇 mm Hg)下蒸餾來使其濃縮。在35-37°C下，經2小時收集大致33 L之餾出物。添加乙醇 (10 L)。將真空緩慢調節降至28〇 mm Hg同時繼續蒸館。一旦達到真空，就增加溫度以維持蒸餾。一旦反應器中之體積達到大約10 L後，就以維持反應器中之體積同時蒸館出溶劑之速率添加乙醇（6.5 L)。一旦所有乙醇添加完後，就停止蒸餾。最終體積為大約1〇 L。蒸餾結束時之溫度為 5 6°C。使在溶劑交換期間形成之漿料冷卻至2〇它且保持隔夜。過濾漿料。用1:1乙醇：水（1.8 L)洗滌固體。濕遽餅重里為1 ·878 kg。在50C下真空乾综固體以得到ι·23〇6 kg (產率64·36%)(2-{7-[4-(四氳-哌喃-2-基氧基苯基 >異唾琳_5_ 磺醯基卜乙基）-胺基曱酸第三丁酯。質譜 (LCMS)m/z=513.62 (Μ+Η) 〇實例實例1 4 - [ 5 - (2 -胺基-乙烧績酿基）-異啥琳-7-基]-苯驗二鹽酸鹽 120821.doc -27- 200812970

Α·{2-[7-(4_曱氧基苯基）異喧啉基硫基]_乙基}-胺基曱酸第三丁酯向於丙酮（10 mL)中之7-(4-曱氧基-苯基）-異喹琳-5-硫醇鈉鹽（0.29 g，1 mmol)中添加（2-溴-乙基）-胺基甲酸第三丁酯（0.22 g，1 mmol)及碳酸鉀（〇·ΐ4 g，1 mm〇i)。在室溫下將該混合物攪拌4 hr，隨後裝載於矽膠管柱上，且用己烷中之65%乙酸乙酯溶離以得到標題化合物（〇·35 g，86%)。質譜（LCMS)m/z=3 5 5.2 (M+H+)。 Β·{2-[7-(4·甲氧基-苯基異喹啉_5_磺醯基乙基卜胺基曱酸第三丁酯向{2-[7-(4-曱氧基-苯基）-異喹啉_5_基硫基]_乙基卜胺基甲酸第三丁酯（0·35 g，0.85 mmol)於乙酸（8 mL)中之溶液中添加水（2 mL)。在冰浴中將混合物冷卻至〇。〇。經5 min 之時期，逐滴添加ΚΜηΟ4(0·27 g，1.7 mmol)於水（2 mL)中之溶液。在添加後，在0°C下將反應混合物攪拌3 〇 min。逐滴添加H2〇2(30%於水中）直至棕色消失。將混合物在乙酸乙6旨（5 0 mL)與飽和碳酸氫納（40 mL)之間分溶。分離有機層，經硫酸鈉乾燥；過濾且濃縮。在矽膠管柱上用己烧中之66%乙酸乙酯層析殘餘物而得到呈白色固體之標題化合物（0.245 g)。質譜（LCMS)m/z=433.2 (M+H+)。 120821.doc -28- 200812970 C-4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽在-20°C下，向於二氣乙烷（10 mL)中之{2-[7-(4-曱氧基_ 苯基）-異嗜琳-5-石黃酿基]-乙基}-胺基甲酸第三丁 g旨（0.22 g，0.51 mmol)中添加 BBr3(1.0 Μ於二氯甲烷中，3.0 mL)。在添加後，在-20°C下將反應混合物攪拌2 hr，緩慢溫至室溫且在室溫下授拌2 hr。添加甲醇（5 mL)以中止過量BBr3。減壓蒸發溶劑，且經由逆相HPLC(具有0.01% TFA之0-100%乙腈：水）純化殘餘物以得到呈TFA鹽之4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異喹琳-7-基]-苯酚（0.18 g)。隨後，藉由將2 mL飽和碳酸氫納水溶液添加至TFA鹽中且攪拌隔夜以便使TFA鹽轉化成游離鹼來使〇·ΐ2 g TFA鹽轉化成二鹽酸鹽。過濾游離鹼。首先用水，隨後用乙醚洗滌游離鹼。乾燥固體。隨後，使固體懸浮於甲醇中。添加〇.2 mL 濃HC1水溶液且攪拌1 hr。減壓濃縮溶劑以得到二鹽酸鹽 (0.10 g)。質譜（LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。實例2 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉·7_基卜苯酚在〇°C下，經40 min，在有力地頂置式攪拌之情況下，向於二氯甲烷（1 L)中之{2-[7-(4-甲氧基-苯基）_異喹啉磺醯基]_乙基}-胺基曱酸第三丁酯（25〇〇 g，56 49 mm〇1) 中添加BBr3(l.〇 Μ於二氣甲烷中，200 mL，2〇〇 mm〇1)。移除冷卻浴且在室溫下攪拌隔夜。冷卻至且經丨匕逐滴添加甲醇（500 mL)。過濾所得漿料，用二氯甲烷（1〇〇 mL) 沖洗燒瓶且用沖洗液洗滌固體。用額外二氯甲烷（15〇 mL) 12082l.d〇( -29- 200812970 洗務固體且真空過濾乾燥。在攪拌下，在曱醇（400 mL)中將固體製成漿料，隨後真空濃縮成薄糊狀物。添加額外甲醇（400 mL)且在攪拌下將固體進一步製成漿料。將漿料真空濃縮至乾燥，且將固體真空乾燥隔夜。將固體粉碎成粉末且在甲醇（1 L)中製成漿料。添加Amberlyst® Α·21樹脂 (75 g)且稅拌直至粉末溶解。過濾樹脂，將經過濾樹脂在甲醇（220 mL)中製成漿料且再次過濾樹脂，合併濾液。用甲醇（100 mL)洗滌經過濾樹脂且將該洗滌液添加至濾液中。將濾液與乙醇（200 mL)合併且將混合物真空濃縮至約 200 mL之體積以得到漿料。添加乙醇（4〇〇 mL)，將漿料溫至50°C歷時約15 min，隨後真空濃縮至約2〇〇 mLi體積。將漿料冷卻至室溫，過渡且用乙醇（2x15 mL)沖洗遽餅， ik後真空乾燥以得到呈棕褐色固體之標題化合物（ι〇·22 g，55%)。質譜（LCMS)m/z=329 〇 (M+H+)。實例3 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異喹啉_7_基]_苯酚用冰/Ηβ浴將2-[7-(4·甲氧基_苯基）_異喹琳巧·確醯基]一乙胺二鹽酸鹽（9·55(Μ m.99 _D於無水CH2Cl2(400 mL)中之水料冷卻至大約5 c，隨後藉由逐滴添加於 CH2Cl2中之U贿液（92.〇〇扯，％〇〇 _〇1)來處理該冷漿料。完成BBg添加後，移除冷浴且使所得反應混合物在室溫下於N2下攪拌隔夜。”醇中止所得反應混合物，隨後真空濃縮以得到殘餘物。將所得殘餘物溶於甲醇(2〇〇机）中且真空濃縮以得到殘餘物。重複上述步驟3次，隨後 120821.doc -30- 200812970 將殘餘物在Et2〇(300 mL)中製成漿料且用飽和NaHC〇3水溶液處理直至達到大約pH 7。藉由真空過濾回收所得固體’隨後溶於CHCh/MeOH之3/1溶液中。用Naci使遽液飽和，隨後用CHCl3/MeOH之3/1溶液（每次2x4〇() mL)萃取。經MgSCU乾燥合併之有機物，過濾，隨後真空濃縮以得到固體/殘餘物。將固體/殘餘物在少量甲醇（2〇 mL)及過量己烧中製成聚料’隨後藉由真空過據回收所得固體，用己烧洗滌且真空過濾乾燥以得到（7.60 g)之淺黃色固體。將淺汽色固體（7.6〇 g)在無水CH2Cl2(4〇〇 mL)中製成漿料且用冰/H2〇浴冷卻至大約5°C，隨後藉由逐滴添加1〇 Μ ΒΒγ3κ CH2C12中之溶液（70.00 mL，70.00 mmol)進行處理。完成 BBn之添加後，移除冷浴且使所得反應混合物在室溫下於 A下攪拌4小時。再取一份含於CH2Cl2中之1〇 M BBq (70·00 mL，70.00 mmol)逐滴添加至該反應混合物中，隨後使所得反應混合物在室溫下於A下攪拌隔夜。在大約 4〇°C下將反應物加熱大約1小時，隨後藉由逐滴添加另一份含於 CH2C12 中之 1.0 M BBr3(23.00 mL，23·〇〇 mm〇i)來進行處理。在大約40T：下將所得反應混合物加熱大約2小時，隨後用MeOH中止反應且真空濃縮以得到殘餘物。將所得殘餘物溶於曱醇（200 mL)中且真空濃縮以得到黃色殘餘物。重複上述步驟3次。用飽和NaHC〇3處理黃色殘餘物以將pH值調節至大約7，隨後藉由真空過濾回收所得固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法（isc〇 330 g矽膠，純 CH2C12 至含於 CH2Cl2ti5% 2 n 120821.doc -31 - 200812970

MeOH至含於CH2C12中之10% 2 N NH4/MeOH)半純化以得到固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法 (ISCO 330 g矽膠，純 CH2C12至含於 CH2C12 中之 5% 2 N NH4/MeOH至含於 CH2C12 中之 10% 2 N NH4/MeOH)再純化以得到固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法（ISCO 330 g石夕膠，純CH2C12至含於CH2C12中之5% 2 N w NH4/MeOH至含於 CH2C12 中之 10% 2 N NH4/MeOH 至含於 CH2C12中之150/〇 2 N NH4/MeOH)再純化以得到固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法（ISC〇 33〇 g石夕膠，於CHC13中之5% MeOH至含於CHC13中之1〇〇/0 MeOH至含於CHC13中之20% MeOH至含於CHC13中之30% MeOH)再純化以得到呈黃色固體之（6.85 g，產率90·8%)之標題化合物：MS (ES +，m/z): 329.0 (M+1)。實例4 4-[5-(2-胺基-乙烧石頁醯基）_異啥琳基]-苯紛單鹽酸；鹽，未知水合物狀態將4-[5-(2-胺基·乙烷磺醯基異喹啉-基]_苯酚（ι7ι ·8 mg)連同15 mL之95% Et0H一起置放於小瓶中。將小瓶置放於設定至8(TC之加熱板上，同時攪拌該溶液以溶解化合物。因為存在極少溶解甚至無溶解發生，所以添加丨莫耳當量之HC1(0.52 mL之於水中之丨N HC1)以溶解固體且產生壳黃色溶液。在HC1添加後不到〗分鐘，固體形成開始且隨時間增加。在m：下大約2小時後，自熱源移除樣本°且使其在RTT_隔夜。經由濾紙，使用真空過渡收集固體。 120821.doc -32· 200812970 在空氣乾燥隔夜後，回收107.8 mg之標題化合物（產率 63%)。X射線粉末繞射：角度，2Θ(強度％) : 11·8 (100〇); 16.6 (52·9); 8·2 (43.4)。實例5 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物 Α·製備種子材料。向4-[5-(2·胺基-乙烧石黃酿基）-異噎琳基]-苯酚（0.2509 g，0.764 mmol)於乙醇（5 mL)中之聚料中添加HC1水溶液（1 Μ，0.765 mL，0.765 mmol)。將所得混合物加熱至回流隔夜。冷卻至室溫且真空過濾漿料。用乙醇沖洗固體，且真空過濾乾燥以得到0.1842 g之黃色固體。 B·4-[5-(2-胺基-乙烧續醯基）-異嗜琳_7_基]-苯紛單鹽酸鹽半水合物向4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7_基>苯酚（175 g，5.33 mmol)於乙醇（35 mL)中之漿料中添加HC1水溶液（1 Μ，5·3 3 mL，5.3 3 mmol)。將該混合物加熱至回流且添加水（2.5 mL)以獲得溶液。將溶液冷卻至6〇它且用自上述a獲付之約2 mg頁色固體接種以獲得漿料。冷卻至室溫且授拌隔夜。真空過濾漿料且用乙醇沖洗濾餅，隨後真空過濾乾燥以得到呈黃色固體之1.331 g(67%)之標題化合物。質譜 (LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。卡爾費舍值（Kad Fischer): 3·〇〇%。X射線粉末繞射：角度，2Θ(強度％): 4 9 (47 3); 14.8 (55.8); 10.2 (45.5)。 120821.doc •33- 200812970 實例6 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7_基卜苯酚二鹽酸鹽將心[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯盼〇6 57 g，50.45 mm〇l)在甲醇（500 mL)中製成漿料。獨立地，藉由將乙醯氯（12.60 mL，177.05 mmol)添加至曱醇（165 mL) 中來製備HC1於甲醇中之溶液。在室溫下，經min將hci 於甲醇中之溶液逐滴添加至4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異啥琳-7-基]-苯酚於甲醇中之漿料中。攪拌3〇 min，隨後經 1小時逐滴添加乙酸乙酯（600 mL)。攪拌30 min，隨後過溏固體且用乙酸乙酯洗滌（2\10〇1111〇。在50。(：下真空乾燥固體，隨後在室溫下伴以緩慢投與氮氣進一步真空乾燥以得到標題化合物（18.3 g，90%)。質譜（LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。實例7 4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異噎琳-7-基]-苯紛二鹽酸鹽將乙醉（24 L)及（2-{7-[4-(四氫-旅喃-2 -基氧基）-苯基]_異喹啉-5-磺醯基}-乙基）-胺基甲酸第三丁酯（2.652 kg; 5.173 莫耳）裝入60 L反應器中。用乙醇（2.6 L)沖洗（2-{7-[4-(四氫-哌喃-2_基氧基）-苯基]-異喹啉-5-磺醯基}-乙基）-胺基甲酸第三丁酯。用水（1·42 L)稀釋鹽酸溶液（31.9% ; 1780 g; 15·6莫耳）。將該HC1溶液裝至反應器中且用水（0.2 L)沖洗。將反應物溫至70°C。黃色溶液在約30°C形成且黃色漿料在接近70°C時再形成。在70°C下將反應物保持％ hr且隨後溫至回流（78°C)。HPLC顯示在回流下1.5小時後完成反 120821.doc -34- 200812970 應。經13分鐘將水（14.5 L)添加至反應物中。將溫度降至 69°C。將反應物加熱返回至回流（8〇。〇且溶液形成。使反應物冷卻至68°C且固體開始形成。在68°C下將反應物保持 % hr且隨後經ΐ·5小時冷卻至2°C。在1-2°C下，將漿料保持 1 hr。過濾固體且用乙醇（4·6 L)洗滌。濕濾餅重量為3 236 kg。在50°C下真空乾燥固體以得到2.106 kg(理論值之 101.4%)4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異唾淋_7_基]-苯紛二鹽酸鹽。質譜（LCMS)m/z=402.31 (M+H)。實例8 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽半水合物使用於該實例之乙醇及氫氧化鈉溶液經由〇·22微米過濾筒過濾。所用水為具有内毒素對照之純化水。將乙醇（8 L)及4-[5-(2·胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7•基]_ 苯酚二鹽酸鹽（841.6 g ; 2.097莫耳）裝至一配備頂置式攪拌、冷凝器、氮氣入口、加熱套、熱電偶及加料漏斗之22 L燒瓶中。用乙醇（3.28 L)沖洗4-[5·(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹琳-7-基]-苯齡二鹽酸鹽。使反應物溫至55c。經7分鐘，將氫氧化鈉溶液（1100 mL ; 1.91 Ν ; 2· 10莫耳）添加至反應物中，在此期間，溫度增加至62°C。將反應物加熱至回流（78°C)且保持1 hr。立刻將水（ι·96 L)添加至反應物中。溫度降低至68°C。將反應物加熱返回至回流（79°C)且溶液形成。將Darco G_60®(43 8 g)添加至反應物中。在回流下將反應物保持1.25小時。經由GFF紙將熱Darco G-60® 120821.doc -35- 200812970 漿料過濾至另一 22 L燒瓶中。得到淺黃色溶液。用熱乙醇 (2.5 L)沖洗原始燒瓶及Darco G-60®濾、餅。在沖洗期間，固體開始在濾液中形成。使含有濾液及洗滌液之22 L燒瓶配備頂置式攪拌器、氮氣入口及熱電偶。將漿料攪拌且使其冷卻至環境溫度。過濾固體且用乙醇（2 L)洗滌。濕濾餅重量為672 g。在50°C下真空乾燥固體以得到540 g(產率 68.9%)之4-[5_(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物。質譜（LCMS)m/z=329.3 (M+H+)。所例示化合物為Akt活性之抑制劑。該等化合物之抑制活性可藉由以下方法證明。

Aktl磷酸化檢定該檢定藉由競爭性螢光偏振免疫檢定（FPIA)量測PKC α 假底物肽之Α粦酸化。該檢定藉由量測當填酸特異性抗體為磷酸肽產物所置換時自經螢光標記之示蹤肽發射之偏振光的強度變化來間接量測反應中所形成之磷酸肽產物之濃度。用標準曲線校正來得到定量結果。酶及底物自Sf9昆蟲細胞純化之活性人類重組Aktl(全長）係得自 Upstate Biotechnology，Inc 〇肽底物（M.W.1561)係購得。標準檢定溶液溶液（A) : 20% DMSO(二甲亞颯）或於20% DMSO或5 00 mM EDTA中之化合物；溶液（B):檢定緩衝液混合物：75 μΜ肽底物、38 mM MgCl2、pH 7·4 之 70 mM HEPES、 0·01% Triton X-100® 及 50 μΜ ATP(腺苷三磷酸）；溶液 120821.doc -36- 200812970 (C) : Akt激酶混合物：PH 7·4 之 70 mM HEPES、1 mM DTT(二硫蘇糖醇）、〇·〇1% Triton-X-100® 及 Aktl 酶。 FPIA之程序首先將5 pL之溶液（A)與10 pL溶液（B)混合。藉由將10 pL溶液（C)添加至該混合物中來引發酶反應。（25 pL反應混合物中之最終濃度或量：4% DMSO(最小受抑制之孔）或於4% DMSO或100 mM EDTA(最大受抑制之孔）中之各種化合物濃度；30 μΜ肽底物；15 mM MgCl2 ; pH 7·4 之 70 mM HEPES ； 20 μΜ ATP ； 0.4 mM DTT ； 0.01% Triton X-100®)。在黑色半區平底96孔微量滴定盤中執行反應。在室溫下60 min後，藉由添加含有260 mM EDTA、3.4 nM螢光素示蹤劑及7.5 nM抗磷酸絲胺酸抗體之25 μι中止/ 偵測混合物來終止反應。在室溫下，在暗處將盤培育3 hr 以上，且隨後使用Tecan Ultra盤讀取器讀取螢光偏振（在 λβχ=485 nm、λβχ=530 nm處）。每孔之填酸化產物之濃度係使用所製偫之肽競爭物稀釋液系列作為標準曲線，根據毫偏振（mP)單位計算。本發明之所例示化合物以1 μΜ或更小之ICw抑制Aktl磷酸化。實例1之化合物在該檢定中以45 +/-17 nM(n=3)之 IC5G 抑制 Aktl 磷酸化。

用於偵測磷酸GSK3b(pGSK3b)之基於細胞之ELISA (cELISA):

Akt在細胞中之標靶將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之U87MG細胞接種至96孔板中且在37°C下用5% C02培育隔夜。10個濃度之 120821.doc -37- 200812970 實例1化合物係藉由1:2連續稀釋至培養基中，自4 mM儲備液（於100% DMSO中）製備。將等體積之連續稀釋液之各者直接添加至細胞中。2 hr後停止處理。在處理結束時，移除培養基，且用冰冷磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)將細胞洗滌一次。根據供應商之程序將細胞固定於PREFER中，接著在 PBS/0.1% SDS 及 PBS/0.1% Triton X-100® 中清洗，隨後在 SEA Block阻斷緩衝液中隔夜培育。繼阻斷步驟之後用抗 pGSK3b/Ser9之兔抗體隔夜培育細胞，接著用山羊抗兔IgG 培育。按照供應商之程序’藉由SuperSignal ELISA Femto 偵測pGSK3b。實例1之化合物在該檢定中以2.04 +/-0.68(η=8)μΜ之 IC50抑制 pGSK3b。活體内標乾抑制研究藉由單一 IV注射之活體内標靶抑制：將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之U87MG細胞皮下地植入裸小鼠之後側腹中。當腫瘤達到200-250 mm3之大小時，在劑量-反應研究中或在時間-過程研究中，藉由單一 IV注射向動物投與化合物。在各次治療結束時，用 C02使動物窒息。藉由外科切除術採集腫瘤，快速冷凍於液氮中且在-80°C下儲存直至分析。自藉由心臟穿刺而自心臟採集之血液製備血清且在-80°C下儲存直至分析。樣本分析：用乙醯亞硝酸鹽/曱醇自血清萃取Akt抑制劑且藉由 LC/MS/MS將其與内標物一起加以分析。使用Powergen 125均質器在2體積之含有25 mM THs(pH 7.5)、Roche完整 120821.doc -38- 200812970 蛋白酶抑制劑及1 mM飢酸鹽之溶解緩衝液中將腫瘤均質化，隨後相繼地通過18號針及23號針。在將溶胞產物在 20,〇〇〇Xg下離心3〇分鐘後，自上清液部分收集可溶性細胞質萃取物。用BC A套組測定細胞質萃取物中之蛋白質濃度。用ELISA套組分析可溶性萃取物中之鱗酸-GSK3b (pGSK3b) 〇對該檢定中之神經膠母細胞瘤而言，實例1之化合物在使用25 mg/kg之單一 IV注射i小時時，抑制pGSK3b 76%。活體内腫瘤生長抑制研究將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之u87Mg細胞或得自人類非小細胞肺癌之H1155細胞皮下地植入裸小鼠之後側腹中。在腫瘤細胞植入後3天，執行顯微手術以將套管插入導管用於經由頸靜脈連續輸液。隨後，在第二天，以4〇 ML/hr將以各種濃度調配於D5 W(於水中之右旋糖5%) 中之實例1輸注人小鼠中歷時4天。每週量測腫瘤兩次直至研究終止’通常在初始植入後第24天。腫瘤生長抑制係藉由將治療組之平均腫瘤體積除以媒劑治療組之平均腫瘤體積來計算。對神、、、工膠母細胞瘤而言，當在檢定結束時量測時，使用 27 mg/kg/天之連續輸液，實例1化合物抑制腫瘤生長 50%。對非小細胞肺癌而言，當在檢定結束時量測時，使用24 mg/kg/天之連續輸液，實例1化合物抑制腫瘤生長63%。醫藥組合物研究 120821.doc -39- 200812970 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物之醫藥組合物包括非還原糖及pH調節劑。可溶性研究展不’甘露醉看來似乎不影響4-[5-(2 -胺基-乙烧續酿基）-異啥琳-7-基]-苯紛單鹽酸鹽半水合物之可溶性。然而，半水合物之可溶性為pH值依賴性的且在pH值$3.91時為>19 mg/mL。又，沈殿發生之速率為pH值依賴性的。表1 :初始溶液pH值對沈澱速率（ppt)之影響。所有溶液係最初以大致15 mg 4-[5-(2 -胺基-乙烧績酿基）-異喧琳-7· 基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物/mL來製備且在室溫下儲存。介質 pH值(初始）沈澱(ppt) 0.05 NHC1/3%甘露醇 1.68 無ppt直至96小時 0.01 NHC1/3% 甘露醇 3.19 無ppt直至96小時 0.005 NHC1/3%甘露醇 3.58 48 hr後ppt 0.0025 NHC1/3%甘露醇 3.91 36 hr 後 ppt 0.001 NHC1/3% 甘露醇 4.20 24 hr後ppt 再溶解沈澱物之LC/MS分析顯示，其為氨損失後自兩種 4_[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚分子（4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚之質譜：（LCMS) m/z=329.1 (M+H+))形成之”二聚體類”分子（質譜（LCMS) m/z=640.2 (M+H+))。另外，沈澱看來似乎並不歸因於向可溶性較低之固態形式之改變。 120821.doc 40·

Claims

200812970 十、申請專利範圍： 1· 一種化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7- 基l·苯酚或其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。 2·如請求項1之化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異喧琳-7-基]-苯紛二鹽酸鹽。 3·如請求項1之化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異唾啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物。 4·如請求項1至3中任一項之化合物，其係用作藥劑。 5 · 一種如請求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥劑··多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺乳房、印巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、甲狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤。 6· 種如请求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥劑：多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤。 7· 一種如請求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製造供治療非小細胞肺癌或神經膠母細胞瘤用之藥劑。種如明求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥劑：C型肝炎、風疹、人類免疫缺乏症病毒（mv)、b型肝炎或人類巨細胞病毒 (HCMV) 〇 9’ -種醫藥組合物’其包括如請求項⑴中任一項之化合 120821.doc 200812970 物及醫藥學上可控 ίο. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 又载背丨、稀釋劑或賦形劑。 “凍乾知醫藥組合物，其包括如請求項1至3中任〜亦、:物及西藥學上可接受之載劑、稀釋劑或職步 W〜、中當用水性稀釋劑稀釋時，該組合物 ^ 4·2且大於2.〇。』於士明求項1G之冷;東乾燥醫藥組合物，其中該阳值小於 3.2且大於2,〇。、如請求項u之冷;東乾燥醫藥組合物，其中該ρΗ值小於 2.8且大於2.0。種商藥組合物，其包括含於溶液中之如請求項丨至3中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中該組合物之pH值小於42且大於2.〇。如請求項13之醫藥組合物，其中該組合物之該pH值小於 3.2且大於2.〇。如睛求項14之醫藥組合物，其中該組合物之該pH值小於 2.8且大於2.0。一種呈結晶形式之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_ 基]-笨盼單鹽酸鹽半水合物，其具有在20=49、14.8及 10.2處具有強峰之X射線粉末繞射圖。 120821.doc 200812970 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無）

120821.doc