SU1068479A1 - Штамм @ @ 81- @ -продуцент нейтральной протеазы - Google Patents

Description

да

00 4ib

Ю Изобретение относитс  к микробиологической промьоопенности и каоабтс  получени  штаммов - продуцентов нейтральной т.ротеазы, и препараты, полученные на основе фермента нейтральной протеазы, примен ютс  в пищевой прокклилен- i ности в медицине,, кожевенной промышленности , в животноводстве и ЯР. Известен штамм Вас.subtlEis 2D3 с активностью нейтральной протеазы/равной . 52,5 ед/мл, определенной по расщеплению а казеина, что соответствует 12-13 ед/мл по метод Лелейн-Фольгдрда. Штамм Вас. subtif 203 представл ет соОой только науч ный интерес, так уровень активности нейтральной протеазы, син теэнруемой этим штаммом, в 10-15 р ниже по сравнению со штаммами, используе1 «1ми на производстве Г13. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положитель ному эффекту  вл етс  штамм Baci6P subtitls 103, образующий нейтральную протеазу с активностью 6070 ед/мл по методу Лелейн-Фольгард Штамм характеризуетс  высокой в зкостью культуральной жидкости и чувствительностью к фагам 21. Недостатком известных штаммов  вл етс  сравнительно низкий уровень aKTHB.HqcTH нейтральной протеазы в производстве, высока  в зкость культуральной жидкости, что затрудн ет фильтрацию, сушку и, следовательно, ограничивает применением этих штаммов только дл  получени  неочищенного препарата протосубтилина ГЗХ. . Недостатком штамма Bac.subtiCls 103, помимо указанных качеств, вл етс  нестабильность активности нейтральной протеазы ,св занна  с внезапным её снижением. Целью изобретени   вл етс  получение продуцента нейтральной протеазы с высокой и стабильной активностью фермента в услови х производства , а также низкой в зкостью культуральной жидкости. Новый штамм Bac.subtiPls в1-ОГ получен генетико-селекционными приемами из штамма Вас.subtle is ВНИИгенетика-44-продуцента oL -амилазы . Штамм споробен в услови х производства в 63 м ферментерах продуцировать нейтральную протеазу с активностью до 100-118 ед/мл (метод Лелейн-Фольгарда), превосход  по активности используемые на производстве штам1«л Вас. subtifis 103. В таблице привод тс  данные сопоставительного анализа по уровню активности Нейтральной протеазы, времени ферментации и объему слива, полученные при экспериментальной проверке шТаммов - нового Вас. subtieis 81-orи Вас. subtieis 103 в услови х Омутнинского химического .

Преимущества штакша Вас. subti- Jia 81-ОГ по. сравнению со штаьмом Bac.subtiPis 103: более высокий уровень актнв1 ости нейтральной протеазы (на 46% в среднем), более короткий срок ферментации, что позвол ет в услови х производства экономить электроэнергию/ больший объем слива культуральной жидкости, иными

словами, более высокий выход целевого продукта, устойчивость к инфекции .

60 Штамм Bac.subti is 81-ОГ характеризуетс  низкой в зкостью культуральной жидкости, что отличает его от известных штаммов - продуцентов нейтральной протеазы - и таким

65 образом расшир ет возможности его использовани  дл  получени  очищен ных препаратов. На основе очищенных препаратов нейтральной протеазы можно получить препараты медицинского назначени . Штамм испытан в услови х Омутнинского химическог завода и характеризуетс  устойчиво тью к фагам распространенньш на этом заводе, и посторонней микрофлоре . За период проведенных испытаний не наблюдают ни одного случа пгщени  активности ерм&ита, что позвол ет сделать вывод, что Вас. subtlpis 81-ОГ НС только превосходит по уровню активности нейтральной протеиназы известные продуценты этого фермента, но  вл етс  более технологичным по своим свойствам . Штамм Bac.subtiPis 81-ОГ-продуцент нейтральной протеазы хранитс  в Центральном музее промьлиленных микроорганизмов ВНИИгенетик и имеет регистрационный номер ЦМПМ В-2574. Биологическа  характеристика штамма Bac.subtifis 81-ОГ.и пример использовани  штамма в производстве ных услови х в ферментерах емкостью 63 м.. Культурно-морфологические призн ки штс1мма Bac.subtitls 81-ОГ. Морфологи . Клетки штамма представл ют собой грамположительные, спорообразующие пгшочки размером 2,54 ,5-0,7 мк. Размер спор 1,0-1,2 «0,6-0,7 мк. Культуральные и физиологические| признаки штамма Bac.subtlEls 81-ОГ М со-пептонный агар (МПА). Чере 48 ч роста при культура образует плотные, кожистые колонии серо го цвета. Средн   часть колонии более темного цвета, кра  более св лые (беловатые). Поверхность колонии мелкосклгщчата . . М со-пептонный бульон (ffflB). Пр выращивании в МПВ в течение 24 ч при без встр хивани  рост без помутнени  среды, на поверхности образуетс  суха  пленка. При встр  хивании на качалке среда мутиеет. сто нии образуетс  пленка. Агаризованиа  среда Хоттингера. Через 48 ч роста при культура образует желтовато-серме, кругла плоские колонии с белыми лопастными кра ми. Диаметр колоний 3,54 ,5 мм. Поверхность колоний шерохо вата , матова . На синтетической среде с минеральным .азотом (среда Спипайзена) культура растет в виде мелких, круглых, серовато-белых колоний диаметром 1-2 мм. Поверхность колоний матова . На ломтиках- картофел  культура образует морщинистую, мелкоскладчатую пленку желтоватого цвета. При хранении в холодильнике при 2-4°С пленка не ослизн етс  в течение мес ца . Желатрну разжижает. Крахмал гидролизует. Молоко пептонизирует. Отношение к источникам углерода. Глюкозу, лактозу, фруктозу, сахарозу -усваивает. Хранение штамма осуществл ют в лиофильио высушенном состо нии в стекл нных гшпулах. Пример использовани  штамма Bac.subtlfls 81-ОГ дл  получени  нейтргшьной протеазы в производственных услови х. Посевной материал получают выращиванием штамма Вас.subt1(is 81-ОГ в колбах в виде пленки в жидкой питательной среде следующего состава, %: крахмал 10; гц моний лимоннокислый 2-х згш цений 3; KHyPO4 0,03; itlHfO 0,15; CaSO 0,14; FeSO4 0,002J MnSO4 0,000125,- CuSO4 0,00075; h-аминобензойна  кислота 0,001; вода 86,2. рН 6,0-6,3. Температура . Полученный посевной материал в количестве 0,01% от объема среды в ферментере засевают аппарат объеьюм 63 м с 30 мЗ ферментационной среды следующего состава , %; крахмал осахаренный 13; СаСО, 0,05.; КСС 0,15; СаСРгО/О ; MgSO4 0,05; (NH J-HPO- 1,2; кукурузный 3KCTpaKt 0,8; пено-. -гаситель пропииол 0,05. рН 6,6. Ферментацию осуществл ют при аэрацией в течение 44 ч. Активность нейтральной, протеазы в культурной жидкости 306 ед/мтГ (метод Лелейн-Фольгарда). Культуральную жидкость высушивают на распылительной сушил1(,е« Выход препарата ГЗХ от культуральной жидкости составл ет 63,5%. г Ожидаемый годовой экономический эффект от использоваии  штамма в услови х Омутнинского химического завода составл ет 128 тыс.руб.

Claims (1)

1. (54> штамм Bacillus jultllu· 81.-ОГПРОДУЦЕНТ НЕЙТРАЛЬНОЙ’ПРОТЕАЗЫ. (5-7) Штамм Baciffus subtifis 81-ОГ -(коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов института Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и'селекции промышленных организаций, коллекционный номер ЦМПМ В-2574) продуцент нейтральной протеазы.