[go: up one dir, main page]

RU2627182C1 - Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С - Google Patents

Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С Download PDF

Info

Publication number
RU2627182C1
RU2627182C1 RU2016121667A RU2016121667A RU2627182C1 RU 2627182 C1 RU2627182 C1 RU 2627182C1 RU 2016121667 A RU2016121667 A RU 2016121667A RU 2016121667 A RU2016121667 A RU 2016121667A RU 2627182 C1 RU2627182 C1 RU 2627182C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
gramicidin
aneurinibacillus
migulanus
production
Prior art date
Application number
RU2016121667A
Other languages
English (en)
Inventor
Кирилл Константинович Сыров
Владимир Викторович Нестерук
Original Assignee
Открытое акционерное общество "Валента Фармацевтика" (ОАО "Валента Фарм")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Открытое акционерное общество "Валента Фармацевтика" (ОАО "Валента Фарм") filed Critical Открытое акционерное общество "Валента Фармацевтика" (ОАО "Валента Фарм")
Priority to RU2016121667A priority Critical patent/RU2627182C1/ru
Priority to KR1020197034175A priority patent/KR102197825B1/ko
Priority to CN201911258242.XA priority patent/CN111172225B/zh
Priority to EP17807096.7A priority patent/EP3467098A4/en
Priority to EP19218434.9A priority patent/EP3660141A1/en
Priority to PCT/RU2017/000326 priority patent/WO2017209651A1/ru
Priority to CN201780033122.2A priority patent/CN109312298B/zh
Priority to KR1020187037709A priority patent/KR102106479B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of RU2627182C1 publication Critical patent/RU2627182C1/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/28—Gramicidins A, B, D; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/66—Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B, C; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/08—Bacillus brevis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения грамицидина С с помощью штамма продуцента Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212. Полученный штамм позволяет продуцировать грамицидин C с высоким выходом. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения действующего вещества грамицидина С с помощью штамма продуцента Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212. Полученный мутантный штамм позволяет продуцировать грамицидин с высоким выходом.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Известны способы получения грамицидина С при глубинном выращивании продуцента Bacillus brevis на синтетических средах [Коршунов В.В. Физиология обмена веществ Bacillus brevis subsp. G.-B. в связи с биосинтезом грамицидина С. - Канд. дисс., 1962, М., МГУ, Коршунов В.В., Егоров Н.С. Синтетическая среда для развития Bacillus brevis и образование граммидина. Микробиология, 1962; 31:3, 515-519, Шапошников В.Н., Работнова И.Л., Силаев А.Б. и др. Способ получения кристаллического грамицидина С. - Авторское свидетельство на изобретение №187243, 1963, Куплетская М.Б. Влияние аэрации на развитие и образование граммидина культурой Bacillus brevis var. G.-B. Микробиология, 1965; 34:5, 905-909, Жарикова Г.Г. Естественная изменчивость споровых бактерий и биосинтез полипептидных антибиотиков. - Докт. дисс., 1972, М., МГУ, Березовская А.И., Выпияч А.Н., Егоров Н.С. и др. Штамм Bacillus brevis 101 - продуцент грамицидина С. - Авторское свидетельство на изобретение №686463, 1978. Способ глубинного культивирования Bacillus brevis штамм 101 для получения грамицидина С, - РФ 2447143, 24.11.2008].
Известен периодический процесс получения грамицидина С при выращивании наиболее продуктивных штаммов Bacillus brevis. [Удалова Т.П. Особенности роста и развития Bacillus brevis var. G.-B в связи с биосинтезом грамицидина S. - Канд. дисс., 1979, М., МГУ], который использовали для синтеза продукта при выращивании Bacillus brevis штамма 101 [Юдина Т.П. Физиолого-биохимические особенности продуцентов граммидина Bacillus brevis subsp. G.-B. и их вариантов. - Канд. дисс., 2002, М., МГУ], характеризуется тем, что производится одноразовая загрузка питательной среды в ферментер, инокуляция посевным материалом, культивирование при аэрации и перемешивании в течение 27 часов до достижения величины pH 6,0 и ниже.
В основу изобретения поставлена задача, создать более эффективный способ продукции грамицидина с высоким, с промышленной точки зрения, выходом и предложить микроорганизмы, которые могут быть использованы в этом способе. Поставленная задача решается путем получения нового штамма Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном варианте изобретение относится к
штамму бактерий Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212.
В предпочтительном варианте изобретение относится к
штамму бактерий Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212, продуценту грамицидина.
В другом варианте изобретение относится к
применению штамма бактерий Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212 для получения грамицидина.
Родовое и видовое название культуры - Aneurinibacillus migulanus.
Номер, полученный при регистрации - ВКПМВ-10212.
Способ получения штамма - получен как мутант.
Идентифицирована культура ВКПМ ФГУП «ГосНИИГенетика» (г. Москва), отчет об идентификации штамма №101 методом анализа 16S РНК от 16 марта 2009 г.
Справка о депонировании прилагается. Дата депонирования 03.03.2009.
Культурально-морфологические особенности штамма - палочки длиной 4-8 мкм, шириной 0,6-0,7 мкм, образует споры с овальными краями размером 0,8-1,0 мкм. Аэроб. Не разжижает желатину. Не гидролизует крахмал. Потребляет азот в аминной и аммонийной форме. На агаризованной питательной среде Гаузе-Бражниковой при культивировании в течение 40-48 часов при температуре 40±1°С образует колонии округлой формы, приподнятые над поверхностью агара, с отчетливо выраженным кратерообразным или точечным центром. Цвет колоний - бежевый, колонии непрозрачные, пастообразной констистенции. Легко снимаются с поверхности агара петлей. Форма и размер колоний сильно варьируют в зависимости от состава среды, густоты посева и других факторов. В процессе культивирования может расщепляться на варианты с отличающейся морфологией и сниженной продукцией антибиотика.
Область применения штамма: промышленное производство антибиотиков.
Продукт, синтезируемый штаммом: грамицидина С гидрохлорид (кристаллический).
Активность (продуктивность) штамма, другие производственные показатели - при культивировании в качалочных колбах на «лабораторной регламентной» жидкой питательной среде в течение 72 часов продуцирует 2±0,3 г/л грамицидина С, что соответствует 0,2±0,02 гграмицидина С/гбиомассы. При выращивании в ферментерах при оптимальных условиях удельная продукция грамицидина С может составлять до 0,4 гграмицидина С/гбиомассы. Средняя продуктивность линий, поддерживаемых в активном состоянии на агаризованных средах на 27.01.2009 г. составляет 2,073 г/л грамицидина С; содержание близкородственных примесей - 15,3%.
Способ определения активности штамма с указанием метода - экстракция грамицидина С из культуральной жидкости этиловым спиртом с последующим определение концентрации грамицидина С методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - хранение спор на пшене, хранение вегетативных клеток и спор в лиофильно высушенном состоянии (на молоке 10-20%).
Способ, условия и состав сред для размножения штамма - выращивание на агаризованной среде Гаузе-Бражниковой (дрожжевая вода 50% по объему или 28 мг % по аминному азоту; пептон 1%; NaCl 0,5%; агар-агар 3%; pH 7,0) в течение 48-72 часов при 40°С. Выращивание на жидкой полусинтетической среде «лабораторная регламентная» (на 1 л среды: глицерин дистиллированный - 20 мл, молочная кислота пищевая 40% - 8 мл; K2HPO4 - 9,9 г, NaCl - 5 г; MgSO4⋅7H2O - 0,2 г; аммоний щавелевокислый - 8,12 г; дрожжевой автолизат - до 5 мг %) в качалочных колбах вместимостью 0,75 л (0,1 л среды) на круговой качалке (частота вращения 220 об/мин, амплитуда 1 м) при 40°С в течение 48-72 часов.
Оптимальные условия и состав среды для ферментации - среда «ферментационная регламентная» (глицерин - 30 мл, молочная кислота 40% - 24,6 мл, K2HPO4 - 2 г, NaCl - 5 г; MgSO4⋅7H2O - 0,2 г; аммоний щавелевокислый - 12 г; дрожжевой автолизат - до 10 мг %; гидролизат казеина - до 20 мг %; лапрол - 2 мл; pH после стерилизации 7,02-7,2). Аэрация 1,25 м3 О2/м3 среды час, давление - 0,5 ати, интенсивность перемешивания должна обеспечивать массобмен по кислороду на уровне от 0,2-0,3 ммоль О2/л⋅мин в начале ферментации до 0,4-1,0 ммоль О2/л⋅мин в конце ферментации в зависимости от достигнутой биомассы (0,035-0,045 ммоль О2/гбиомассы⋅мин). Хемостатирование на уровне pH 6,4-7,2. Культивирование в течение 16-48 часов в зависимости от способа ведения ферментации.
ДНК штамма содержит рестракционный сайт HindIII.
Штамм не является зоопатогенным, фитопатогенным.
Рис. 1. Рестрикционный анализ фрагмента ДНК, кодирующего ген 16S РНК исследуемого штамма 101.
1. Фрагмент ДНК, кодирующий ген 16S РНК исследуемого штамма 101, обработанный рестриктазой HindIII
2. Маркер 1 kb DNA Ladder (10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250 п.н., снизу вверх)
3. Фрагмент ДНК, кодирующий ген 16S РНК исследуемого штамма 101, не обработанный рестриктазой HindIII.
Пример 1. Идентификация штамма 101 до вида с помощью анализа 16S РНК
Этапы работ
I. Рассев культуры до отдельной колонии и получение биомассы для анализа 16S РНК
I. Выделение ДНК
II. Выбор праймеров и режимы ПЦР
Консервативные праймеры для наработки 16S rDNA -
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
с режимами реакции:
1. 95°С - 3 мин
2. 35 циклов 95°С - 30 сек
57°С - 30 сек
72°С - 1 мин 30 сек
3. 72°С - 5 мин
III. Секвенирование 16S rDNA, сравнение секвенсов и построение деревьев родства
Секвенирование проводится на автоматическом секвенаторе АЕ3000.
Для анализа секвенсов используются специализированные филогенетические компьютерные программы.
Стабильность воспроизведения результатов. Проводится не менее трех повторов ПЦР-реакций.
Условия электрофореза ПЦР исследуемых образцов.
1,0% агарозный гель, электрофорез при напряженности электрического поля 5 В/см.
IV. Рестрикционный анализ фрагмента ДНК, кодирующего ген 16S РНК
а) Секвенирование вариабельных участков 16S rDNA.
При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для штамма
для штамма 101:
Figure 00000004
Figure 00000005
б) Анализ результатов секвенирования и построение дерева родства.
Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам Bacteria; Firmicutes; Bacillales; Paenibacillaceae; Aneurinibacillus group; Aneurinibacillus, причем гомология с видами Aneurinibacillus migulanus и Aneurinibacillus aneurinilyticus составляет 98%.
Последовательности были выровнены с соответствующими последовательностями ближайших видов бактерий, доступными из базы данных GenBank.
Результаты обработки секвенсов при помощи компьютерной программы, находящейся на сайте RDB II (Ribosomal Database Project II), предназначенной для определения родства микроорганизмов и построения филогенетических деревьев, представляются в графическом виде.
Figure 00000006
Figure 00000007
Дальнейший анализ по RDP II 16S рРНК базе данных показал гомологию с теми же видами бактерий и наиболее близкими видами являются Aneurinibacillus migulanus и Aneurinibacillus aneurinilyticus.
По данным анализа было построено филогенетическое дерево с гомологичными штаммами (рис. 2).
Sequence description
Ab.miqula2 Aneurinibacillus migulanus DSM 2895 (T)
Ab.anurlv2 Aneurinibacillus aneurinilyticus DSM 5562 (T)
Ab.migulan Aneurinibacillus migulanus ATCC 9999 (T)
Ab.anurlyt Aneurinibacillus aneurinilyticus NCIMB 10056
Ab.anurly3 Aneurinibacillus aneurinilyticus ATCC 12856 (T)
Ab.thaerph Aneurinibacillus thermoaerophilus str. L420-91 DSM 10154 (T)
Ab.thaerp2 Aneurinibacillus thermoaerophilus DSM 10155
Oxl.oxali2 Oxalophagus oxalicus str. Alt Ox1 DSM 5503 (T)
B.badius2 Bacillus badius ATCC 14574 (T)
101.txt Исследуемый штамм 101
Критерием отнесения микроорганизма к тому или иному виду считается гомология не менее 97%. По этому критерию исследуемый штамм можно отнести к видам Aneurinibacillus migulanus и Aneurinibacillus aneurinilyticus.
Для более точной идентификации воспользовались методы рестрикционного анализа фрагмента ДНК, кодирующего ген 16S РНК.
По литературным данным известно, что данный фрагмент ДНК Aneurinibacillus migulanus содержит рестрикционный сайт HindIII, тогда как у Aneurinibacillus aneurinilyticus данный рестрикционный сайт отсутствует.
Проведен рестрикционный анализ фрагмента ДНК, кодирующего ген 16S РНК исследуемого штамма 101. Результаты работы показаны на рисунке 1.
Наличие фрагментов 620 п.н. и 870 п.н. при обработке фрагмента ДНК рестриктазой HindIII говорит о том, что сайт HindIII присутствует в составе фрагмента ДНК исследуемого штамма 101.
Этот критерий позволяет отнести исследуемый штамм 101 к виду Aneurinibacillus migulanus.
Пример 2. Способ получения грамицидина С
Грамицидин С получают методом ферментации. Процесс состоит из четырех этапов: обработка продуктивного штамма Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212 в лаборатории, подготовка прививочного материала, культивирование прививочного материала в лабораторном ферментере, биосинтез грамицидина С в основном ферментере.
Основные параметры ферментации подобраны с учетом морфологии и стабильности продуктивного штамма Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212. Время выращивания продуктивного штамма на среде агара в термостате варьирует в диапазоне от 48 до 120 часов и позволяет семенной объем в большем объеме, чем при культивировании на чашках Петри. Бактериальную суспензию хранят в 15% защитном растворе глицерина при температуре от -20°С до -80°С.
Предварительную подготовку посевного материала проводят в лабораторном ферментере в среде агаре и отсутствии других микроорганизмов.
Затем инокулят перемещают в следующий ферментер в количестве 1-2,5% от объема среды ферментации, состоящей из цитрата натрия, хлорида аммония, калия дигидрофосфата, D- и L-молочной кислоты в соотношении 1:1, порошка экстракта дрожжей, порошка казеина, пеногасителя Struktol J 647. Оптимальные параметры процесса ферментации: оптическая плотность от 10 до 20, pH от 5,5 до 7,5, отсутствие других микроорганизмов. Процесс ферментации продолжается от 48 до 120 часов.
Следующий этап производства заключается в брожении посевного материала в основном ферментере. Объем посевного материала составляет 8-17% от среды ферментации, состоящей из цитрата натрия, хлорида аммония, калия дигидрофосфата, D- и L-молочной кислоты в соотношении 1:1, порошка экстракта дрожжей, порошка казеина, пеногасителя Struktol J 647. Оптимальное значение pH в диапазоне от 6,5 до 7,0 контролируется добавлением раствора аммиака. Оптимальную концентрацию питательных веществ поддерживают добавлением растворов глицерина, сульфата аммония и кукурузного крахмала. Процесс ферментации продолжается от 48 до 120 часов.
Полученную биомассу фильтруют на керамическом фильтрующем модуле способом ультрафильтрации, промывая биомассу деионизированной водой для удаления примесей из биомассы. Концентрированную биомассу сушат в распылительной сушилке при температуре 180°С. Высушенную биомассу промывают ацетоном при температуре 40°С для удаления окрашенных примесей. Ацетон удаляют при помощи продувки азотом, затем повторно промывают ацетоном и сушат в вакууме при температуре 45°С.
Далее грамицидин С экстрагируют этанолом корректируя pH до 3,0-4,0 разбавленной хлористоводородной кислотой (HCl : этанол = 1:2). Экстракцию проводят несколько раз, удаляя экстракты с помощью сжатого азота. После отделения этанола биомассу сушат в вакууме при температуре около 47°С.
Высушенную биомассу растворяют в воде и обесцвечивают активированным углем, затем фильтруют на фильтр-прессе, промывая этанолом для уменьшения потерь продукта из-за сорбции на угле.
Полученный экстракт перемещают в кристаллизатор, разбавляют деионизированной водой, добавляют концентрированный раствор хлорида натрия и нагревают до температуры 55-65°С. После осветления раствор охлаждают до температуры не выше 5°С. Полученный кристаллы отделяют на центрифуге и сушат в вакууме при температуре не более 65°С, затем измельчают на штырьковой мельнице, просеивают через сита с диаметром ячеек 400 и 200 мкм и упаковывают в полиэтиленовые мешки, помещенные в алюминиевые контейнеры.

Claims (2)

1. Штамм бактерий Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212, продуцент грамицидина C.
2. Применение штамма бактерий Aneurinibacillus migulanus ВКПМВ-10212 для получения грамицидина C.
RU2016121667A 2016-06-01 2016-06-01 Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С RU2627182C1 (ru)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016121667A RU2627182C1 (ru) 2016-06-01 2016-06-01 Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С
KR1020197034175A KR102197825B1 (ko) 2016-06-01 2017-05-19 그라미시딘 s의 생산 및 정제방법
CN201911258242.XA CN111172225B (zh) 2016-06-01 2017-05-19 用于生产和纯化生产短杆菌肽s的方法
EP17807096.7A EP3467098A4 (en) 2016-06-01 2017-05-19 SOUCHEANEURINIBACILLUS MIGULANUS
EP19218434.9A EP3660141A1 (en) 2016-06-01 2017-05-19 Method for producing and purification of gramicidin s
PCT/RU2017/000326 WO2017209651A1 (ru) 2016-06-01 2017-05-19 Штамм aneurinibacillus migulanus и его применение
CN201780033122.2A CN109312298B (zh) 2016-06-01 2017-05-19 米氏硫胺素芽孢杆菌菌株及其用途
KR1020187037709A KR102106479B1 (ko) 2016-06-01 2017-05-19 아네우리니바실러스 미굴라너스(aneurinibacillus migulanus) 균주 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016121667A RU2627182C1 (ru) 2016-06-01 2016-06-01 Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2627182C1 true RU2627182C1 (ru) 2017-08-03

Family

ID=59632658

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016121667A RU2627182C1 (ru) 2016-06-01 2016-06-01 Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С

Country Status (5)

Country Link
EP (2) EP3467098A4 (ru)
KR (2) KR102106479B1 (ru)
CN (2) CN111172225B (ru)
RU (1) RU2627182C1 (ru)
WO (1) WO2017209651A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2794363C1 (ru) * 2021-11-15 2023-04-17 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтические композиции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU187243A1 (ru) *
SU686463A1 (ru) * 1978-05-03 1987-04-30 МГУ им.М.В.Ломоносова Штамм @ @ 101-продуцент грамицидина @
RU2447143C2 (ru) * 2008-11-24 2012-04-10 Виктор Викторович Дербышев СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus brevis ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАМИЦИДИНА С

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6117670A (en) * 1994-06-08 2000-09-12 Novartis Finance Corporation Pyrrolnitrin biosynthesis genes and uses thereof
CN103897999B (zh) * 2012-12-25 2016-05-04 中国农业大学 一种短芽孢杆菌及其应用及发酵产生短杆菌素的方法
CN104277995B (zh) * 2014-07-14 2017-01-11 东华大学 一种米氏硫胺素芽孢杆菌dy3菌株及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU187243A1 (ru) *
SU686463A1 (ru) * 1978-05-03 1987-04-30 МГУ им.М.В.Ломоносова Штамм @ @ 101-продуцент грамицидина @
RU2447143C2 (ru) * 2008-11-24 2012-04-10 Виктор Викторович Дербышев СПОСОБ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Bacillus brevis ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАМИЦИДИНА С

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЮДИНА Т.П., Физиолого- биохимические особенности продуцентов грамицидина S Bacillus brevis subsp. G.-B. и их вариантов, диссер. На соискание ученой степени кандидата биологических наук, Москва, 2002, с. 24-130. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2794363C1 (ru) * 2021-11-15 2023-04-17 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтические композиции для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний

Also Published As

Publication number Publication date
CN111172225A (zh) 2020-05-19
KR20190132560A (ko) 2019-11-27
EP3467098A1 (en) 2019-04-10
EP3467098A4 (en) 2019-11-27
KR20190007070A (ko) 2019-01-21
KR102106479B1 (ko) 2020-06-03
KR102197825B1 (ko) 2021-01-05
EP3467098A9 (en) 2019-05-15
WO2017209651A1 (ru) 2017-12-07
CN109312298B (zh) 2022-05-27
CN109312298A (zh) 2019-02-05
EP3660141A1 (en) 2020-06-03
CN111172225B (zh) 2023-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103627662B (zh) 一种花生慢生根瘤菌及其用途
CN101993847B (zh) 一种细菌纤维素菌株
CN108823102B (zh) 寒地秸秆腐熟真菌被孢霉菌株及其在水稻秸秆腐熟中的应用
RU2381270C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА
CN110713956B (zh) 一株赖氨酸芽孢杆菌s12及其应用
CN109266578A (zh) 大肠埃希氏菌ACThr1032及其在发酵生产L-苏氨酸中的应用
CN106190898B (zh) 一种溶解池塘甲藻的蜡样芽孢杆菌jzbc1的工业化液体发酵方法
CN108531404A (zh) 一株层出镰孢菌的培养方法及其应用
RU2627182C1 (ru) Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С
WO2023016387A1 (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用
CN109112171A (zh) 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法
CN109161488A (zh) 一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法
JPH0449396B2 (ru)
RU2716984C1 (ru) Штамм Sarocladium kiliense - продуцент лонголитина - комплекса фибринолитических и тромболитических ферментов и способ получения лонголитина
CN107641602A (zh) 一株产朊假丝酵母及其在发酵产蛋白中的应用
CN1141383C (zh) 一种蜡状芽孢杆菌及其制备方法
CN113604362B (zh) 一种提高印度梨形孢产孢的方法
CN115820440B (zh) 一株四乙酰植物鞘氨醇高产诱变菌株及其应用
EA030630B1 (ru) Штамм aneurinibacillus migulanus и его применение
CN116218690B (zh) 一种产布雷非德菌素a的拟粗壮弯孢霉及其发酵方法
CN109401990B (zh) 一株具有抑菌活性的酿酒酵母菌hkb-36及其应用
CN108165514A (zh) 一株芽孢杆菌及其发酵产物和应用
RU2001949C1 (ru) Штамм гриба TRICHODERMA REESEI - продуцент целлюлолитических ферментов
CN105733965B (zh) 一种含有马唐的丝状真菌液体发酵培养基及其制备方法
SU881117A1 (ru) Штамм астINомусеS GRISeUS вниигенетика-307ф, продуцент антибиотика гризина

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner