SK282024B6

SK282024B6 - Farmaceutický prípravok na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek a použitie cyklopeptidov na výrobu liečiva

Info

Publication number: SK282024B6
Application number: SK706-93A
Authority: SK
Inventors: Alfred Jonczyk; G�Nter H�Lzemann; Brunhilde Felding-Habermann; Guido Melzer; Beate Diefenbach; David A. Cheresh; Horst Kessler; Marion Gurrath; Gerhard MLLER
Original assignee: Merck Patent Gesellschaft Mit Beschr�Nkter Haftung
Priority date: 1992-07-06
Filing date: 1993-07-06
Publication date: 2001-10-08
Also published as: NO307985B1; CN1084408A; JPH06293659A; CA2099541A1; NO932439L; JP4192114B2; KR940001900A; US5866540A; UA43823C2; PL299559A1; CA2099541C; DK0578083T3; AU1268797A; HUT66348A; NO932439D0; DE69324305D1; MX9304035A; DE69324305T2; JP2004224803A; CZ131593A3

Abstract

Je opísaný farmaceutický prípravok na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek sprostredkovanej integrínom alfaV-beta3, obsahujúci aspoň jeden cyklopeptid vzorca (Ia) až (I) alebo jeho fyziologicky vhodnú soľ v množstve účinnom na túto inhibíciu a farmaceuticky vhodný nosič zvolený zo súboru zahŕňajúceho vodu, rastlinné oleje, alkoholy, najmä benzylalkoholy, alkylénglykoly, polyetylénglykoly, glyceroltriacetát, želatínu, sacharidy, ako je laktóza alebo škrob, stearan horečnatý, mastenec a vazelín. Použitie týchto cyklopeptidov na výrobu liečiva na liečenie alebo profylaxiu trombózy, infarktu myokardu, apoplexie, artériosklerózy, zápalov, anginy pectoris a/alebo nádorových chorôb; na inhibíciu adhézie buniek pri tvorbe osteoklastov; na liečenie a profylaxiu osteoporózy a na liečenie a profylaxiu v prípade hojenia rán.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka farmaceutického prípravku na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek a použitia určitých cyklopeptidov na výrobu liečiva.

Doterajší stav techniky

Je známe, že zlúčeniny, ktoré sú schopné špecificky inhibovať interakcie receptor β₃ integrínu-ligand („antagonistu receptora adhétie“, skrátene „ARA“), jc možné používať ako terapeutické činidlá pri liečbe osteoporózy, trombózy, infarktu myokardu, artériosklerózy, zápalov, apoplexie, angíny pectoris a nádorov. Tieto zlúčeniny ďalej inhibujú adhéziu buniek v prípade tvorby osteoklastov a sú vhodné sa ako činidlá podporujúce angiogenézu a hojenie rán.

Úlohou tohto vynálezu bolo nájsť nové látky typu ARA, ktoré by boli schopné blokovať väzbu fibrinogénu β₃integrínu, na účely vyvinutia lepších liečiv, vhodných na uvedené účely.

Teraz sa s prekvapením zistilo, že opísané cyklopeptidy vzorca (la) až (Ir) a ich fyziologicky vhodné adičné soli s kyselinami majú také antagonistické vlastnosti proti receptorom adhézie. Definované cyklopeptidy sú známe. Sú opísané napríklad vo FEBS Lett. 291 50 až 54 (1991). Táto citácia sa uvádza ako náhrada za prenesenie celého textu citovaného dokumentu do týchto podkladov. V tejto publikácii sa síce opisuje výroba uvedených cyklopeptidov, ako aj ich konformačná analýza, ale nič sa tu neuvádza o tom, že by tieto zlúčeniny mali mať antagonistické vlastnosti proti receptorom adhézie.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu je farmaceutický prípravok na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek sprostredkovanej integrínom alfaV-beta3, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje aspoň jeden cyklopeptid vzorca (la) až (11) (I) a) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala);

b) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Ala);

c) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-V al-D-Ala);

d) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Leu-D-Ala);

e) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Gly);

f) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Gly);

g) cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Ala);

h) cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Gly);

i) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Gly);

j) cyklo(-Arg-Gl y- Asp-Phe-D-Pro-Gly);

k) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Ala);

l) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Ala);

alebo jeho fyziologicky vhodnú soľ v množstve účinnom na túto inhibíciu a farmaceutický vhodný nosič zvolený zo súboru zahŕňajúceho vodu, rastlinné oleje, alkoholy, najmä benzylalkoholy, alkylénglykoly, polyetylénglykoly, glyceroltriacetát, želatínu, sacharidy, ako je laktóza alebo škrob, stearan horečnatý, mastenec a vazelín.

Skratky zvyškov aminokyselín, ktoré sa používajú v uvedených a vzorcoch, označujú nasledovné zvyšky:

Ala	alanín
Arg	arginín
Asp	kyselina asparágová
Gly	glycín
His	histidín
Leu	leucín

Phe fenylalanín

Pro prolín

Val valín.

Okrem toho sa v tomto texte používajú ešte tieto skratky.

BOC terc.butoxykarbonyl

OBZ benzyloxykarbonyl

DCC1 dicyklohexylkarbodiimid

DMF dimetylformamid

FAB bombardovanie rýchlymi atómami

HOBt 1-hydroxybenzotriazol

M⁺ pík molekulového iónu

OMe metoxy.

Účinnosť uvedených zlúčenín sa dá potvrdiť s použitím metódy, ktorú opísali J. W. Smith, Z. M. Ruggeri, T. J. Kunicki a D. A. Cheresh v J. Biol. Chem. 265, 12267 až 12271 (1990).

Ďalej je uvedený podrobnejší opis tejto metódy: Neupravená plaíňa s 96 jamkami s plochým dnom sa potiahne roztokom receptora (α_Πβ₃; a_vp₃) s koncentráciou 1 pg/ml v poťahovacom pufri, v množstve 100 pl na jamku a platňa sa inkubuje v trepačke cez noc pri 4 °C. Potom sa platňa raz opláchne väzobným pufrom a blokuje blokačným pufrom (100 pl na jamku) 2 hodiny pri 30 °C. Po ďalšom premytí väzbovým pufrom sa pridá biotinylovaný ligand a kompetítor.

Ligandový fibrinogén sa používa v konečnej koncentrácii 1 pg/ml. Kompetítor sa pridáva vo vzrastajúcej koncentrácii. Ligand aj kompetítor sa pridáva v objeme 50 pl na jamku pri dvojnásobku konečnej koncentrácie. Na riedenie sa používa väzobný pufer.

Platňa sa zakryje a inkubuje 3 hodiny pri 30 °C. Neviazaná látka sa z platne odstráni trojnásobným opláchnutím väzobným pufrom (100 pl na jamku).

Pridá sa konjugát antibiotínová protilátka - alkalická fosfatáza (zriedenie 1 :2000) vo väzobnom pufri (100 pl na jamku) a platňa sa 1 hodinu inkubuje pri 30 °C.

Potom sa platňa trikrát opláchne väzobným pufrom, pridá sa roztok substrátu a vykoná sa vyvíjanie v tme pri teplote miestnosti počas 1 až 5 minút.

Reakcia sa zastaví prídavkom 0,4M roztoku hydroxidu sodného v množstve 100 pl na jamku a odčítajú sa hodnoty na čítacom zariadení ELISA pri 405 nm.

Všetky hodnoty sa merajú v troch replikáciách. Zistia sa nasledujúce hodnoty IC 50:

Zlúčenina IC50(uM) α_{π 3}a cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala); 0,320,90 cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Ala); 0,761,10 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-D-Ala); 1,500,25 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Leu-D-Ala); 0,760,31 cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Gly); 0,130,62 cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Gly); 0,060,54 cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Ala): 22,004,50 cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Gly); 20,501,52 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Gly); 1,530,16 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Gly); 1,501,06 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Ala); 0,620,48 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Ala); 0,740,37

Predmetom vynálezu je aj použitie cyklopeptidov vzorca (la) až (II) na výrobu liečiva na liečenie alebo profylaxiu trombózy, infarktu myokardu, apoplexie, artériosklerózy, zápalov, angíny pectoris a/alebo nádorových chorôb. Pri takej výrobe sa používajú najmä nechemické postupy. Pritom sa tieto zlúčeniny spracovávajú na vhodnú aplikačnú formu spolu s aspoň jedným tuhým, kvapalným a/alebo polotuhým nosičom, alebo pomocnou látkou, a prípadne sa tiež miešajú s jednou alebo viacerými inými účinnými zlúčeninami.

Prípravky podľa vynálezu možno používať ako liečivá v humánnom alebo veterinárnom lekárstve. Ako vhodné nosiče možno uviesť organické alebo anorganické látky, ktoré sú vhodné na enterálne (napríklad orálne), parenterálne alebo topické podávanie, a ktoré nereagujú s účinnými zlúčeninami, ako je napríklad voda, rastlinné oleje, benzylalkoholy, alkylénglykoly, polyetylénglykoly, triacetát glycerolu, želatína, uhľohydráty, ako je laktóza alebo škrob, stearan horečnatý, mastenec a vazelína. Pri orálnom podávaní sa používajú najmä tablety, pilulky, potiahnuté tablety, kapsuly, prášky, granuláty, sirupy, šťavy alebo kvapky; pri rektálnom podávaní najmä čapíky, pri parenterálnom podávaní najmä roztoky, prednostne olejové alebo vodné roztoky, ale tiež suspenzie, emulzie alebo implantáty; a pri topickom podávaní najmä masti, krémy alebo zásypy. Činné zlúčeniny je tiež možné lyofilizovať, pričom vzniknuté lyofilizáty sa potom môžu použiť napríklad pri výrobe injekčných prípravkov. Uvedené prípravky môžu byť sterilizované a/alebo môžu obsahovať pomocné látky, ako sú mazadlá, konzervačné prísady, stabilizátory a/alebo zmáčadlá, emulgátory, soli na ovplyvnenie osmotického tlaku, tlmiče pH, farbiace činidlá, príchute a/alebo aromatické látky. Ak je to žiaduce, môžu tieto prípravky obsahovať tiež jednu alebo viac iných účinných látok, napríklad jeden alebo viac vitamínov.

Definované látky sa môžu používať ako farmakologicky účinné látky v humánnom a veterinárnom lekárstve, najmä na liečbu a profylaxiu trombózy, infarktu myokardu, angíny pectoris, apoplexie a nádorových, teda rakovinových chorôb. Tieto zlúčeniny sú predovšetkým inhibítormi adhézie buniek, ktoré sú užitočné pri inhibícii napríklad agregácie krvných a nádorových buniek. Definované zlúčeniny sa teda môžu používať na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek, napríklad somatických buniek alebo rakovinových buniek cicavcov.

Látky podľa tohto vynálezu sa spravidla podávajú podobne ako iné známe obchodne dostupné peptidy, najmä potom podobne ako zlúčeniny opísané v US patente č. 4 472 305, prednostne v dávke od asi 0,05 do 500, najmä od 0,5 do 100 mg na dávkovaciu jednotku. Celková denná dávka robí prednostne asi 0,01 až 2 mg/kg telesnej hmotnosti. Konkrétna dávka, ktorá sa používa u každého jednotlivého pacienta, však bude závisieť od mnohých rôznych faktorov, ako je napríklad účinnosť konkrétne použitej zlúčeniny, vek, telesná hmotnosť, celkový zdravotný stav, pohlavie, strava, čas a cesta podávania, rýchlosť vylučovania, podávaná farmaceutická kombinácia a závažnosť konkrétnej poruchy, na ktorú je liečba orientovaná. Prednosť sa dáva parenterálnemu podávaniu.

Predpokladá sa, že odborník v tomto odbore môže na základe predchádzajúceho opisu bez vynaloženia vynálezcovského úsilia v plnom rozsahu využiť vynález. Nasledujúce prednostné špecifické predvedenia tohto vynálezu majú teda iba ilustratívny charakter a v žiadnom ohľade neobmedzujú rozsah vynálezu, pre ktorý sú určujúce iba pripojené nároky.

V predchádzajúcich a nasledujúcich príkladoch sú všetky teploty uvádzané v °C a nie sú korigované. Ak nie je uvedené inak, rozumejú sa pod všetkými údajmi v dieloch a percentách údaje hmotnostné.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Preparačný príklad

2,0 g peptidu BOC-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala-OMe sa rozpustí v 60 ml metanolu, k roztoku sa pridá 1,5 ml 2N roztoku hydroxidu sodného a zmes sa 3 hodiny mieša pri °C. Potom sa zmes odparí, zvyšok sa vyberie z vody, okyslí na pH 3 zriedenou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje etylacetátom. Extrakt sa vysuší síranom sodným a znova odparí. Získaný peptid vzorca BOC-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala-OH sa 2 hodiny mieša pri 20 °C s 20 ml 2N chlorovodíka v dioxáne. Zmes sa odparí a získaný peptid vzorca H-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala-OH sa rozpustí v zmesi 1800 ml dichlórmetánu a 200 ml dimetylformamidu. Roztok sa ochladí na 0 °C, postupne sa k nemu pridá za miešania 0,5 g DOOI, 0,3 g HOBt a 0,23 ml N-metylmorfolínu a vzniknutá zmes sa ďalej mieša 24 hodín pri 0 °C a 48 hodín pri 20 °C. Roztok sa skoncentruje a zbaví solí v zmesovom ionexovom lôžku. Ionex sa odfiltruje, roztok sa odparí a zvyšok sa chromatograficky prečistí. Získa sa cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala). M⁺: 646 (FAB).

Podobným spôsobom sa získajú nasledujúce cyklopeptidy:

cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Ala); M⁺: 660;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-D-Ala); M⁴:646;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Leu-D-Ala); M⁺: 660;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Gly); M⁺: 632;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Gly); M⁺: 645;

cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Ala): M⁺: 646;

cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Gly): M⁺; 632 cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Gly); M⁺: 630;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Gly); M⁺: 630;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Ala); M⁺: 644;

cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Ala); M⁺: 644.

Nasledujúce príklady sa vzťahujú na farmaceutické prípravky na báze zlúčenín vzorca (I) alebo ich adičné soli s kyselinami.

Príklad A

Tablety

Zmes 1 kg cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala), 10 kg laktózy, 6 kg mtaokryštalickej celulózy, 6 kg zemiakového škrobu, 1 kg polyvinylpyrolidónu, 0,8 kg mastenca a 0,1 kg stearanu horečnatého sa obvyklým lisovacím postupom spracuje na tablety, z ktorých každá obsahuje 10 mg účinnej zlúčeniny.

Príklad B

Potiahnuté tablety

Podobným spôsobom ako v príklade A sa lisovaním vyrobia tablety, ktoré sa dodatočne obvyklým postupom potiahnu povlakom zo sacharózy, zemiakového škrobu, mastenca, tragantu a farbiacej látky.

Príklade

Kapsuly

Kapsuly z tvrdej želatíny sa naplnia obvyklým spôsobom peptidom cyklo (-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala) tak, aby každá kapsula obsahovala 5 mg účinnej zlúčeniny.

Príklad D

Injekcie

Roztok 1 kg cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala-) v 30 litroch 1,2-propándiolu sa podrobí filtračnej sterilizácii, a potom sa ním naplnia injekcie, ktoré sa za sterilných podmienok zatavia. Každá injekcia obsahuje 2 mg účinnej zlúčeniny.

Príklad E

Masť

500 mg cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala) sa zmieša s 99,5 g ropnej vazelíny za aseptických podmienok.

Príklad F

Injekčné fľaštičky

Hodnota pH roztoku 100 g cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala) a 5 g hydrogenfosforečnanu disodného v 3 1 redestilovanej vody sa nastaví na 6,5 pomocou 2N kyseliny chlorovodíkovej, potom sa roztok sterilizuje filtráciou a náplni do injekčných fľaštičiek. Obsah fľaštičiek sa za sterilných podmienok lyofilizuje, potom sa fľaštičky sterilným spôsobom uzavrú. Každá z nich obsahuje 5 mg účinnej látky.

Podobným spôsobom je možné získať farmaceutické prípravky, ktoré obsahujú niektorú z ďalších účinných látok vzorca (la - r) a/alebo jej fyziologicky vhodnú adičnú soľ s kyselinou.

Ak sa reakčné zložky a/alebo pracovné podmienky, ktoré sú uvedené v týchto príkladoch, nahradia reakčnými zložkami a/alebo pracovnými podmienkami, ktoré sú genericky alebo špecificky opísané inde v týchto podlohách, dosiahne sa pri reprodukcii uvedených príkladov podobný úspech.

Na základe uvedeného opisu môže odborník v tomto odbore ľahko spoznať základné charakteristiky tohto vynálezu a bez toho, aby sa odchýlil od duchu a rozsahu vynálezu, môže v ňom uskutočniť rôzne zmeny a modifikácie, aby ho prispôsobil rôznym použitiam a podmienkam.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický prípravok na inhibíciu adhézie živočíšnych buniek sprostredkovanej integrínom alfaV-beta3, vyznačujúci sa tým, že obsahuje aspoň jeden cyklopeptid vzorca (la až 1) (I) (a) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Ala);

(b) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Ala);

(c) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-D-Ala);

(d) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Leu-D-Ala);

(e) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Gly);

(f) cyklo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu-Gly);

(g) cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Ala);

(h) cyklo(-D-Arg-Gly-Asp-Phe-Val-Gly);

(i) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Gly);

(j) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Gly);

(k) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Ala);

(l) cyklo(-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Pro-Ala);

alebo jeho fyziologicky vhodnú soľ v množstve účinnom na túto inhibíciu a farmaceutický vhodný nosič zvolený zo súboru zahŕňajúceho vodu, rastlinné oleje, alkoholy, najmä benzylalkoholy, alkylénglykoly, polyefylénglykoly, glyceroltriacetát, želatínu, sacharidy, ako je laktóza alebo škrob, stearan horečnatý, mastenec a vazelín.
2. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým,že živočíšnymi bunkami sú somatické bunky cicavcov.
3. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, v y značujúci sa tým,že živočíšnymi bunkami sú rakovinové bunky.
4. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že obsahuje 0, 05 až 500 mg tohto cyklopeptidu v dávkovacej jednotke.
5. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyzná i u j ú c i sa tým, že obsahuje 0,5 až 100 mg tohto cyklopeptidu v dávkovacej jednotke.
6. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že je vo forme fľaštičky s náplňou pre injekcie s pH 6,5 obsahujúcou cyklopeptid vzorca (la až 1) v množstve 5 mg, hydrogenfosforečnan disodný a redestilovanú vodu.
7. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyzná í u j ú c i sa tým, že je vo forme sterilnej zatavenej ampulky obsahujúcej cyklopeptid vzorca (la až 1) v množstve 2 mg, 1,2-propándiol a redestilovanú vodu.
8. Farmaceutický prípravok podľa nároku 1, vyzná č u j ú c i sa tým, že je vhodný na liečenie alebo profylaxiu trombózy, infarktu myokardu, apoplexie, artériosklerózy, zápalov, angíny pectoris a/alebo nádorových chorôb.
9. Použitie cyklopeptidov vzorca (la až 1) podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie alebo profylaxiu trombózy, infarktu myokardu, apoplexie, artériosklerózy, zápalov, angíny pectoris a/alebo nádorových chorôb.
10. Použitie cyklopeptidov vzorca (la až 1) podľa nároku 1 na výrobu liečiva na inhibíciu adhézie buniek pri tvorbe osteoklastov.
11. Použitie cyklopeptidov vzorca (la až 1) podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie a profylaxiu osteoporózy.
12. Použitie cyklopeptidov vzorca (la až 1) podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie a profylaxiu v prípade hojenia rán.