SE531588C2 - Ways to detect previous ethanol intake - Google Patents
Ways to detect previous ethanol intakeInfo
- Publication number
- SE531588C2 SE531588C2 SE0702354A SE0702354A SE531588C2 SE 531588 C2 SE531588 C2 SE 531588C2 SE 0702354 A SE0702354 A SE 0702354A SE 0702354 A SE0702354 A SE 0702354A SE 531588 C2 SE531588 C2 SE 531588C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- peth
- sample
- human
- level
- determined
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/98—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving alcohol, e.g. ethanol in breath
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
25 35 531 E88 ax; (Alling et al., som ersätter kolindelen i fosfatidylkolin med etanol. Reak- tionen visas i fig. l. 1983). Reaktionen katalyseras av fosfolipas D Studier har stött användning av Peth i blod som en markör för alkoholmissbruk (för översikt, se Var- ga et al., 2001). (1998) (1998) har beskrivit ett sätt där Peth bestäms direkt i blod. 25 35 531 E88 ax; (Alling et al., Which replaces the choline moiety in phosphatidylcholine with ethanol. The reaction is shown in Fig. 1, 1983). The reaction is catalyzed by phospholipase D Studies have supported the use of Peth in blood as a marker for alcohol abuse (for a review, see Varga et al., 2001). (1998) (1998) have described a method in which Peth is determined directly in blood.
I sättet isoleras en lipidfraktion för blod och Peth separe- Gunnarsson et al. och Varga et al. ras fràn andra föreningar med vätskekromatografi och detekte- ras med masspektrometri eller evaporativ ljusspridningsdetek- tering. Ett dagligt intag av endast 50 g etanol under 2-3 veckor (1000 g kumulativt) behövs för att Peth skall vara po- sitivt (> gräns för detektering) i blod vid mätning med väts- kekromatografi och evaporativ ljusspridningsdetektering. I två färska studier, vilka vardera använder ett väsentlig bat- teri av olika markörer, demonstreras en extraordinär hög spe- cificitet för Peth när nyktra försökspersoner fràn kända al- koholpatienter undersöks (Wurst et al., 2003 och Wurst et al., 2004).In the process, a lipid fraction is isolated for blood and Peth separe-Gunnarsson et al. and Varga et al. from other compounds by liquid chromatography and detected by mass spectrometry or evaporative light scattering detection. A daily intake of only 50 g of ethanol for 2-3 weeks (1000 g cumulatively) is needed for Peth to be positive (> limit of detection) in blood when measured by liquid chromatography and evaporative light scattering detection. Two recent studies, each using a significant battery of different markers, demonstrate an extraordinarily high specificity for Peth when examining sober subjects from known alcohol patients (Wurst et al., 2003 and Wurst et al., 2004). .
Gaskromatografi med masspektrometri som kräver derivatisering av Peth har också använts för Peth-analys.Gas chromatography with mass spectrometry requiring derivatization of Peth has also been used for Peth analysis.
Inget av de ovan nämnda sätten för att analysera Peth har hög känslighet vid detektering av alkoholkonsumtion. Vidare gör den stora mängden arbete och komplexitet sätten olämpliga för kliniskt rutinarbete. Detta innefattar uttagande av flera milliliter venöst blod i provtagningsrör, ett förfarande som måste utföras av en tränad fackman.None of the above methods for analyzing Peth have high sensitivity in detecting alcohol consumption. Furthermore, the large amount of work and complexity make the methods unsuitable for routine clinical work. This involves taking several milliliters of venous blood in sampling tubes, a procedure that must be performed by a trained professional.
Immunanalysmetoder: En antikropp har framställts mot fosfati- dylalkohol (US 2004/0203070) vilket möjliggör en väsentligt enklare analys för att detektera hög konsumtion av alkohol.Immunoassay methods: An antibody has been produced against phosphatidyl alcohol (US 2004/0203070) which enables a much simpler analysis to detect high consumption of alcohol.
Denna antikropp är emellertid inte specifik mot Peth eftersom den också binder till andra fosfolipider. Känslighet och spe- cificitet kan sålunda ifrågasättas liksom även den praktiska användningen av denna immunanalys. (_71 l0 15 20 25 30 35 531 538 iQ» Fortfarande har inte ett sätt som uppfyller alla viktiga krav utvecklats.However, this antibody is not specific for Peth because it also binds to other phospholipids. Sensitivity and specificity can thus be questioned as well as the practical use of this immunoassay. (_71 l0 15 20 25 30 35 531 538 iQ »Still, a method that meets all important requirements has not been developed.
Kapillärelektroforesmetodik (CE-metodik) för separationen och bestämningen av Peth. Ett sätt baserat har nu utvecklats på CE för Peth är inte en okomplicerad lösning av ett problem och är oväntat. Peth är en onormal fosfolipid med ovanliga kemiska egenskaper och kräver speciella organiska lösningsme- del för upplösning. Molekyler som skall analyseras med CE kräver i allmänhet att de är laddade vilket gäller för Peth först vid högre pH. Ultraviolett (UV) en relativt dålig detekteringsmetod för fosfolipider eftersom detektering anses som dessa molekyler har begränsade ljusabsorberande delar i sin struktur. Det satt som nu har utvecklats omfattar icke-vatten- haltiga media, stapling och konventionell UV-detektering.Capillary electrophoresis methodology (CE methodology) for the separation and determination of Peth. A method based has now been developed on CE for Peth is not an uncomplicated solution to a problem and is unexpected. Peth is an abnormal phospholipid with unusual chemical properties and requires special organic solvents for dissolution. Molecules to be analyzed with CE generally require that they be charged, which only applies to Peth at higher pH. Ultraviolet (UV) a relatively poor detection method for phospholipids because detection is considered as these molecules have limited light-absorbing parts in their structure. The set that has now been developed includes non-aqueous media, stacking and conventional UV detection.
Peth bestäms i extrakt av humana blodprov. Separation av Peth från andra föreningar i provet utförs inom mindre än 5 min.Peth is determined in extracts from human blood samples. Separation of Peth from other compounds in the sample is performed in less than 5 minutes.
Sättet underlättar mindre provvolymer, mikroliter istället för milliliter av blod och utförs omkring 10 gånger snabbare jämfört med tidigare kromatografiska metoder. Det beskrivna CE-sättet erbjuder provtagning av prov i kapillär istället för provtagning in i vanliga vakuumblodprovsrör.The method facilitates smaller sample volumes, microliters instead of milliliters of blood and is performed about 10 times faster compared to previous chromatographic methods. The described CE method offers sampling of capillary samples instead of sampling into standard vacuum blood test tubes.
Fördelar med sättet enligt uppfinningen jämfört med tidigare teknik innefattar högsta möjliga specificitet tillsammans med hög känslighet, mycket små provvolymer och förbättrad snabb- het.Advantages of the method according to the invention compared to prior art include the highest possible specificity together with high sensitivity, very small sample volumes and improved speed.
Sammanfattning av uppfinningen Föreliggande uppfinning tillhandahåller ett sätt för att be- stämma alkoholkonsumtion från ett kroppsprov från människa och/eller icke-humant djur. Sättet enligt uppfinningen karak- teriseras av att Peth bestäms från provet med hjälp av ljus- detektering, varvid närvaron och nivån av Peth i provet kor- relerar med människan och/eller det icke-humana djurets eta- nolkonsumtion. En ny analytisk kemisk separationsmetod för 10 25 30 35 E34 EEE Peth presenteras. För första gången har en kapillär elektro- foresseparationsmetod för Peth utvecklats.Summary of the Invention The present invention provides a method for determining alcohol consumption from a human and / or non-human animal body sample. The method according to the invention is characterized in that Peth is determined from the sample by means of light detection, wherein the presence and level of Peth in the sample correlates with the ethanol consumption of the human and / or the non-human animal. A new analytical chemical separation method for E34 EEE Peth is presented. For the first time, a capillary electrophoresis separation method for Peth has been developed.
Huvudaspekten för uppfinningen avser ett sätt i vilket Peth separeras och koncentreras on-line, benämnt "stapling”, genom användning av kapillärelektrofores med specificerade kemiska lösningar, benämnda ”separationsmedia”.The main aspect of the invention relates to a method in which Peth is separated and concentrated on-line, called "stacking", using capillary electrophoresis with specified chemical solutions, called "separation media".
Kort beskrivning av ritningarna Fig. l: Bildning av fosfatidyletanol.Brief description of the drawings Fig. 1: Formation of phosphatidylethanol.
Fig. 2: Elektroferogram av Peth-analys.Fig. 2: Electroferogram of Peth analysis.
Fig. 3: Illustration av staplingseffekt.Fig. 3: Illustration of stacking effect.
Detaljerad beskrivning av uppfinningen Ett sätt för att beskriva etanolintag i en människa OCh/eller ett icke-humant djur från ett biologiskt prov, där fosfatidyl- etanol bestäms från provet med hjälp av kapillärelektrofores, varvid närvaron eller nivån av fosfatidyletanol i provet kor- relerar med människans och/eller det icke-humana djurets eta- nolintag. Den idé som ligger bakom föreliggande uppfinning är att en kapillärelektroforesmetod för Peth nu har utvecklats framgångsrikt. Man har oväntat funnit att en kapillärelektro- foresmetod leder till ett känsligare och mycket snabbare sätt att bestämma Peth i biologiska prov. Bestämningen av tidigare alkoholintag i biologiska prov genom detektering och kvanti- fiering av Peth med föreliggande sätt kräver förbehandling av prov genom extraktion, mest vanligtvis utförd med organiska lösningsmedel. Detta är nödvändigt eftersom Petb i biologiska prov förekommer antingen bunden till cellmembran, lipoprotei- ner, andra partiklar eller i form av lipidvesiklar och sålun- da màste frisättas för att förekomma som upplösta fria mole- kyler. Efter extraktion utförs vanligtvis ett koncentrations- steg på provet genom indunstning.Detailed Description of the Invention A method of describing ethanol intake in a human OCh / or a non-human animal from a biological sample, wherein phosphatidylethanol is determined from the sample by capillary electrophoresis, wherein the presence or level of phosphatidylethanol in the sample correlates with human and / or non-human animal ethanol intake. The idea behind the present invention is that a capillary electrophoresis method for Peth has now been successfully developed. It has unexpectedly been found that a capillary electrophoresis method leads to a more sensitive and much faster way of determining Peth in biological samples. The determination of previous alcohol intake in biological samples by detection and quantification of Peth by the present method requires pretreatment of samples by extraction, most usually performed with organic solvents. This is necessary because Petb in biological samples occurs either bound to cell membranes, lipoproteins, other particles or in the form of lipid vesicles and thus must be released to appear as dissolved free molecules. After extraction, a concentration step is usually performed on the sample by evaporation.
Fram till nyligen har tensider använts i elektrofores för att separera hydrofoba föreningar såsom fosfolipider, varvid tek- l0 20 25 30 35 531 538 niken kallas micellar elektrokinetisk kromatografi (MEKC).Until recently, surfactants have been used in electrophoresis to separate hydrophobic compounds such as phospholipids, the technique being called micellar electrokinetic chromatography (MEKC).
Några få publikationer har beskrivit användningen av icke- vattenhaltig kapillärelektrofores (NACE) fosfolipider. för separation av Ett sätt där icke-vattenhaltig kapillärelektrofores tillsam- mans med stapling erhàllen genom att sänka jonstyrkan i pro- vet används för att bestämma Peth. Kapillären är ett cylind- riskt rör för vilket längden kan vara mellan l och 50 cm och innerdiametern kan vara mellan l och 100 pm. Bestämningen av Peth utförs med UV-detektering. Uppfinningen beskriver för första gången e:t sätt där NACE tillsammans med stapling an- vänds för separation av en lipidförening. Huvudfördelen med uppfinningen är att laddade lipidföreningar såsom fosfolipi- der och Peth kan separeras elektroforetiskt och detekteras vid tillräcklig: låga nivåer (0,05-5 uM) med konventionell UV-detektering. UV-detektering anses som en enkel standardde- tekteringsmetod med låg känslighet för lipider. Eftersom mer eller mindre alla kommersiella CE-enheter är utrustade med en UV-detektor erbjuder uppfinningen omedelbar användning med de flesta enheter. I sättet består separationsmediet av en elek- trolyt som är ammoniumformiat, ammoniumacetat, ammoniumpropi- onat eller en blandning av två eller tre av dessa alternativ.A few publications have described the use of non-aqueous capillary electrophoresis (NACE) phospholipids. for separation of A method in which non-aqueous capillary electrophoresis together with stacking obtained by lowering the ionic strength of the sample is used to determine Peth. The capillary is a cylindrical tube for which the length can be between 1 and 50 cm and the inner diameter can be between 1 and 100 μm. The determination of Peth is performed with UV detection. The invention describes for the first time a method in which NACE together with stacking is used for separation of a lipid compound. The main advantage of the invention is that charged lipid compounds such as phospholipids and Peth can be separated electrophoretically and detected at sufficient: low levels (0.05-5 μM) with conventional UV detection. UV detection is considered a simple standard detection method with low sensitivity to lipids. Since more or less all commercial CE units are equipped with a UV detector, the invention offers immediate use with most units. In the process, the separation medium consists of an electrolyte which is ammonium formate, ammonium acetate, ammonium propionate or a mixture of two or three of these alternatives.
Separationsmediet innehåller inget vatten. Provinförande kan utföras hydrodynamiskt eller elektrokinetiskt. Separations- spänningen kan variera mellan 40 V/cm och 5000 V/cm. i samband med uppfinningen betyder om ledningsförmågan i det införda provet, Stapling innehållande Peth, är lägre än den för elekt- rolytlösningen. I uppfinningen åstadkommes detta genom en lägre koncentration av elektrolyt (lägre jonstyrka) i det in- förda Peth-provet jämfört med elektrolytlösningen. Effekten av stapling i uppfinningen förbättrar detekteringsgränsen med l80-250 gånger jämfört med ett liknande system utan stapling.The separation medium does not contain water. Test insertion can be performed hydrodynamically or electrokinetically. The separation voltage can vary between 40 V / cm and 5000 V / cm. in connection with the invention means whether the conductivity of the introduced sample, Stacking containing Peth, is lower than that of the electrolyte solution. In the invention this is achieved by a lower concentration of electrolyte (lower ionic strength) in the introduced Peth sample compared to the electrolyte solution. The effect of stacking in the invention improves the detection limit by 180-250 times compared to a similar system without stacking.
Sättet att bestämma fosfatidyletanol är avsett speciellt för att detektera och övervaka ohämmat intag och hög konsumtion av alkohol på ett tillförlitligt sätt. 10 15 20 25 30 35 531 588 Sättet i följande exempel är optimerat för att mäta Peth i humana blodprov.The method of determining phosphatidylethanol is specifically designed to detect and monitor unrestricted intake and high consumption of alcohol in a reliable manner. 5 15 20 25 30 35 531 588 The method in the following example is optimized for measuring Peth in human blood samples.
Exempel: Blodprovstagning Antingen kapillärt eller venöst humant blod uppsamlas i ett blodprovtagningsrör innehållande antikoagulant.Example: Blood sampling Either capillary or venous human blood is collected in a blood sampling tube containing anticoagulant.
Beredning av blodprov För humana blodprov tillsätts en volym blod under omrörning till 33 volymer hexan:2-propanol (3:2 volym/VOlym) OCÖ fÖï5 om vidare under 5 s. Centrifugering av blandningen utförs vid 1500 x g under 10 min och supernatanten uppsamlas för fort- satt analys.Preparation of blood samples For human blood samples, one volume of blood is added with stirring to 33 volumes of hexane: 2-propanol (3: 2 volume / volume). continued analysis.
Peth-standardlösning och humana blodextrakt indunstas under kväve till torrhet och löses upp i separationsmedium före analys.Peth standard solution and human blood extracts are evaporated under nitrogen to dryness and dissolved in separation medium before analysis.
Instrumentutrustning NACE-separationer utförs på ett kapillarelektröforessystem utrustat med UV-detektor. En kapillär av smält kiseldioxid med 75 um innerdiameter, 375 um ytterdiameter med en total längd av 24 cm (17,2 cm till detektor) används.Instrument equipment NACE separations are performed on a capillary electrophoresis system equipped with a UV detector. A capillary of molten silica with 75 μm inner diameter, 375 μm outer diameter with a total length of 24 cm (17.2 cm to detector) is used.
Separationsbetingelser 40 till 60 % acetonitril och 26-40 % 2-propanol med 60-90 mM ammoniumacetat som elektrolyt och med 5-15 % hexan och 2-10 % metanol som ytterligare modifierare används som separations- medium. Anmärkning: Inget vatten är inkluderat, sålunda NACE.Separation conditions 40 to 60% acetonitrile and 26-40% 2-propanol with 60-90 mM ammonium acetate as electrolyte and with 5-15% hexane and 2-10% methanol as additional modifiers are used as separation medium. Note: No water is included, thus NACE.
Proven är upplösta i separationsmediet med undantag för att Denna 30-50 mM ammoniumacetat används istället. Anmärkning: 10 15 20 25 30 531 538 ...,;_¿ reduktion av elektrolyt, som sänker jonstyrkan, orsakar prov- stapling. Proven införs hydrodynamiskt vid 34 mbar under 2-4 s men kan också införas elektrokinetiskt. är 3-8 nl. UV-detektering utförs vid 200 nm. Separationsspän- ningen är 10-20 kV.The samples are dissolved in the separation medium except that this 30-50 mM ammonium acetate is used instead. Note: 10 15 20 25 30 531 538 ...,; _ ¿reduction of electrolyte, which lowers the ionic strength, causes sample stacking. The samples are introduced hydrodynamically at 34 mbar for 2-4 s but can also be introduced electrokinetically. is 3-8 nl. UV detection is performed at 200 nm. The separation voltage is 10-20 kV.
Injektionsvolymen Separationer körs mot negativ pool. Ka- pillärtemperaturen är inställd på 25°C i körningar. Före dag- lig användning sköljs kapillären successivt med > 100 volymer av 0,5 M natriumhydroxid, destillerat vatten, metanol respek- tive separationsmedium. Mellan körningarna sköljs kapillären med 8 volymer separationsmedium. Alla lösningar avgasas i ett ultraljudvattenbad.Injection volume Separations are run towards the negative pool. The capillary temperature is set at 25 ° C in runs. Before daily use, the capillary is successively rinsed with> 100 volumes of 0.5 M sodium hydroxide, distilled water, methanol or separation medium. Between runs, the capillary is rinsed with 8 volumes of separation medium. All solutions are degassed in an ultrasonic water bath.
Ett sätt där närvaron eller nivån av Peth i det biologiska provet bestäms via ett mikrochip Det beskrivna sättet kan miniatyriseras till mikrochipformat.A method in which the presence or level of Peth in the biological sample is determined via a microchip The described method can be miniaturized to microchip format.
Detta betyder nedskalning av förfaranden, speciellt separa- tionen av Peth i en anordning i vilket längden för separa- tionskanalen är < 5 cm och den inre vidden för denna kanal är < 50 um.This means scaling down procedures, especially the separation of Peth in a device in which the length of the separation channel is <5 cm and the internal width of this channel is <50 μm.
Ett sätt där närvaron eller nivån av Peth kan bestämmas i det biologiska provet som har en volym mindre än 100 pl och/eller vikt mindre än 100 pg En stor fördel med sättet är möjligheten att analysera mycket små mängder och volymer av biologiska prov. Skada och lidande kan minskas i människor och icke-humana djur vid borttagandet av mindre prov. Andra fördelar är minskat arbete och att provtagning kan utföras av oprofessionella.A method where the presence or level of Peth can be determined in the biological sample having a volume less than 100 μl and / or weight less than 100 pg A major advantage of the method is the ability to analyze very small amounts and volumes of biological samples. Injury and suffering can be reduced in humans and non-human animals by removing smaller samples. Other advantages are reduced work and that sampling can be performed by unprofessional people.
Ett sätt där Peth bestäms i vilket biologiskt prov som helst med potential att innehålla Peth, t.ex. blod, vävnader, celler Detta är för att uppvisa riskabelt och skadligt drickande.A method in which Peth is determined in any biological sample with the potential to contain Peth, e.g. blood, tissues, cells This is to exhibit risky and harmful drinking.
Konsumtion överstigande 24 doser alkohol i man och 16 doser alkohol i kvinnor per vecka eller alternativt mer än 7 doser i män och mer än 5 doser i kvinnor vid ett enda tillfälle kan anses som hög alkoholkonsumtion. En dos motsvarar omkring 12 lO 20 25 30 35 53% E33 g ren etanol. Sättet kan också användas för att finna och studera alkoholrelaterade sjukdomar.Consumption in excess of 24 doses of alcohol in men and 16 doses of alcohol in women per week or alternatively more than 7 doses in men and more than 5 doses in women at a single time can be considered high alcohol consumption. One dose corresponds to about 12% 53% E33 g of pure ethanol. The method can also be used to find and study alcohol-related diseases.
Screening och/eller övervakning av intaget av etanol i en människa via sättet I närvaro av alkohol i kroppen inkorporeras en etanolmolekyl i fosfolipider i en reaktion katalyserad av fosfolipas D där vanligtvis vatten inkorporeras. Mängden fosfatidyletanol i kroppen korrelerar med alkoholkonsumtion.Screening and / or monitoring of the intake of ethanol in a human via the method In the presence of alcohol in the body, an ethanol molecule is incorporated into phospholipids in a reaction catalyzed by phospholipase D where usually water is incorporated. The amount of phosphatidylethanol in the body correlates with alcohol consumption.
Det sätt där sättet utförs 1 till 7 dagar, veckor eller måna- der efter etanolintag Detekterbar fosfatidyletanol förblir i kroppen under minst en till flera dagar efter konsumtion, till och med två veckor i några fall, beroende på nivån vid starten for nykterhet. Des- sa tidsramar beror emellertid på sättets känslighet och kan sålunda förändras närhelst en känsligare metod utvecklas.The way the method is performed 1 to 7 days, weeks or months after ethanol intake Detectable phosphatidylethanol remains in the body for at least one to several days after consumption, even two weeks in some cases, depending on the level at the start of sobriety. However, these time frames depend on the sensitivity of the method and can thus change whenever a more sensitive method is developed.
Det sätt där närvaron eller nivån av Peth mäts i mer än en typ av prov Ett prov som skall undersökas kan vara vilket biologiskt prov som helst med potential att innehålla Peth; blOd, nader eller celler. eïï me* t.ex. väv- Provet kan också vara en biopsi, dikolegalt prov, ett post mortem-prov eller ett prov taget från vävnader av ett embryo eller foster. Indirekt kan det också användas för att detektera aktiviteten och placeringen av fosfolipas D, exempelvis från cell- eller vävnadskulturer eller histologiska prov.The way in which the presence or level of Peth is measured in more than one type of sample A sample to be examined can be any biological sample with the potential to contain Peth; blood, nodes or cells. eïï me * e.g. tissue- The sample can also be a biopsy, dicolegal sample, a post mortem sample or a sample taken from tissues of an embryo or fetus. Indirectly, it can also be used to detect the activity and location of phospholipase D, for example from cell or tissue cultures or histological samples.
Det sätt där sättet kombineras med åtminstone ett andra sätt för att bestämma etanolintag i en människa och/eller icke- humant djur 10 15 20 25 30 35 53'§ 588 (fi Situationer kan förekomma där Peth ensam inte är tillräcklig för att bestämma etanolintag eller vid tillfällen där Peth behöver bekräftas genom något annat sätt.The method in which the method is combined with at least one second method for determining ethanol intake in a human and / or non-human animal 538 § 588 (fi Situations may occur where Peth alone is not sufficient to determine ethanol intake or at times when Peth needs to be confirmed by some other means.
Sättet omfattar vidare korrelering av etanolintaget och/eller nivån av Peth som bestäms i kroppsprovet till en nivå av Peth detekterad i ett livsmedel, livsmedelsliknande substans, dryck eller medicinering förtärd av människan och/eller det icke-humana djuret före eller vid tidpunkten för erhållandet av kroppsprovet Markören Peth kan snart komma att ha viktig delaktighet i om- råden för allmän hälsa och allmän säkerhet som en mer objek- tiv metod för att bekräfta alkoholreiaterade sjukdomar, för- hindra missbruksutveckling och förhindra trafikolyckor och våldsbeteende. Användningen av denna markör, antingen ensam eller tillsammans med andra markörer för biologiskt till- stånd, förväntas leda till väsentlig förbättring i behand- lingsresultat, terapieffektivitet och hälsa, sociala och so- cioekonomiska fördelar som kommer att vara svåra att över- skatta.The method further comprises correlating the ethanol intake and / or the level of Peth determined in the body sample to a level of Peth detected in a food, food-like substance, beverage or medication consumed by man and / or the non-human animal before or at the time of obtaining the body test The marker Peth may soon have important participation in areas of public health and public safety as a more objective method for confirming alcohol-related illnesses, preventing the development of substance abuse and preventing traffic accidents and violent behavior. The use of this marker, either alone or in combination with other markers of biological condition, is expected to lead to significant improvement in treatment outcomes, therapy effectiveness and health, social and socio-economic benefits which will be difficult to overestimate.
Definition: ”Peth” i samband med uppfinningen betyder den fosfatidyletanolmolekyl i vilken de båda fettsyradelarna kan variera men huvudsakligen består av 1620 (palmitinsyra), l8:O (stearinsyra), l8:l l8:2 och 20:4 (oljesyra), (linolsyra) (arakidonsyra).Definition: "Peth" in connection with the invention means the phosphatidylethanol molecule in which the two fatty acid moieties may vary but mainly consists of 1620 (palmitic acid), 18: 0 (stearic acid), 18: 188: 2 and 20: 4 (oleic acid), ( linoleic acid) (arachidonic acid).
Definition: ”Stapling” i samband med uppfinningen betyder om ledningsförmågan för det införda provet är lägre än den för elektrolytlösningen att den högre elektriska fältstyrkan och de högre migreringshastigheterna för provkomponenterna resul- terar i att provzonerna skärps när de kommer in i elektrolyt- lösningen. 531 588 lill* Referensförteckning Hannuksela, M.L., Liisanantti, M.K., Nissinen, A.E.T., Savolainen, MJ. (2007) Biochemícal markers of alcoholism. Clin. Chem. Lab. Med. 45, xxx-xxx.Definition: “Stacking” in connection with the invention means that if the conductivity of the introduced sample is lower than that of the electrolyte solution, the higher electric field strength and the higher migration rates of the sample components result in the sample zones being sharpened when entering the electrolyte solution. 531 588 lill * Reference List Hannuksela, M.L., Liisanantti, M.K., Nissinen, A.E.T., Savolainen, MJ. (2007) Biochemical markers of alcoholism. Clin. Chem. Lab. With. 45, xxx-xxx.
Laposata, M. (1999) Assessment of ethanol intake-current tests and new assays on the horizon. Am J Clin Pathol 112: 443450 ' Alling, C., Gustavsson, L., Änggård, E. (l 983) An abnormal phospholipid in rat organs añer ethanol.Laposata, M. (1999) Assessment of ethanol intake-current tests and new assays on the horizon. Am J Clin Pathol 112: 443450 'Alling, C., Gustavsson, L., Änggård, E. (l 983) An abnormal phospholipid in rat organs añer ethanol.
F EBS Lett. 152, 24-28.F EBS Lett. 152, 24-28.
GunnarssonjT., Karlsson, A.,“Hansson, P., Johnson, G., Alling, C., & Odham, G. (1998) Determinatíon of phosphatidylethanol in blood from alcoholic-males using high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering or electrospray mass spectrometric detection, J .Chromatogi-.B Biomed. Sci. Appl. 705: pp. 243 to 249.GunnarssonjT., Karlsson, A., “Hansson, P., Johnson, G., Alling, C., & Odham, G. (1998) Determinatíon of phosphatidylethanol in blood from alcoholic-males using high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering or electrospray mass spectrometric detection, J .Chromatogi-.B Biomed. Sci. Appl. 705: pp. 243 to 249.
Varga, A., Hansson, P., Lundqvist, C., & Alling, C. (1998) Phosphatidyletltanol in blood as a marker of ethanol consumption in healthy volunteers: comparison With other markers, Alcohol Clm. Exp. Res. 22: pp. 1832 to 1837.Varga, A., Hansson, P., Lundqvist, C., & Alling, C. (1998) Phosphatidylethanol in blood as a marker of ethanol consumption in healthy volunteers: comparison With other markers, Alcohol Clm. Exp. Res. 22: pp. 1832 to 1837.
Varga A Moller K, Hanson P Aradottir S, Alling C (2001) Phosphatidylethanol; clinical significance and biochernical basis. In New and upcoming markers of alcohol consumption. Wurst F. M. (ed) Darrnstadt, Steinkopff-Springer Verlag, pp 75-92 Wurst F M, Vogel R, J achau K, Varga A, Alling C, Alt A, Skipper G E (2003) Ethylglucuronide discloses recent covert alcohol use not detected by standard testing in forensic psychiatnc inpatients.Varga A Moller K, Hanson P Aradottir S, Alling C (2001) Phosphatidylethanol; clinical significance and biochernical basis. In New and upcoming markers of alcohol consumption. Wurst FM (ed) Darrnstadt, Steinkopff-Springer Verlag, pp 75-92 Wurst FM, Vogel R, J achau K, Varga A, Alling C, Alt A, Skipper GE (2003) Ethylglucuronide discloses recent covert alcohol use not detected by standard testing in forensic psychiatnc inpatients.
Alcoholism Clinical and Experimental Research 27: 471476 Wurst F M, Alexson S, Wolfersdorf M, Bechtel G, Forster S, Alling C, Aradottir S, Jachau K, Huber P, Allen J P, Auwärter V, Pragst F (2004) Concentration of fatty acid ethyl esters in hair of alcohohcs: Comparison to other biological state rnarkers and self reported ethanol intake. Alcohol Alcohol 39z33~ 3 8Alcoholism Clinical and Experimental Research 27: 471476 Wurst FM, Alexson S, Wolfersdorf M, Bechtel G, Forster S, Alling C, Aradottir S, Jachau K, Huber P, Allen JP, Auwärter V, Pragst F (2004) Concentration of fatty acid ethyl esters in hair of alcohohcs: Comparison to other biological state rnarkers and self reported ethanol intake. Alcohol Alcohol 39z33 ~ 3 8
Claims (10)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE0702354A SE531588C2 (en) | 2007-10-23 | 2007-10-23 | Ways to detect previous ethanol intake |
| PCT/SE2008/051187 WO2009054784A1 (en) | 2007-10-23 | 2008-10-22 | Method for assessing previous ethanol intake |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE0702354A SE531588C2 (en) | 2007-10-23 | 2007-10-23 | Ways to detect previous ethanol intake |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE0702354L SE0702354L (en) | 2009-04-23 |
| SE531588C2 true SE531588C2 (en) | 2009-06-02 |
Family
ID=40579769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE0702354A SE531588C2 (en) | 2007-10-23 | 2007-10-23 | Ways to detect previous ethanol intake |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| SE (1) | SE531588C2 (en) |
| WO (1) | WO2009054784A1 (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2591368A4 (en) * | 2010-07-09 | 2014-03-19 | Innovator Skaane Ab | Methods for determination of ethanol consumption |
| SE2050826A1 (en) | 2020-07-02 | 2022-01-03 | Capitainer Ab | Functionalized blood sampling device and method for peth measurement |
| WO2022003178A1 (en) | 2020-07-02 | 2022-01-06 | Capitainer Ab | Blood sampling device and method for peth measurement |
| CN113970603A (en) * | 2020-07-24 | 2022-01-25 | 复旦大学 | Biomarkers used to differentiate drinking deaths from postmortem drinking |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060084134A1 (en) * | 2004-06-10 | 2006-04-20 | Wurst Friedrich M | Direct ethanol metabolite ethyl sulfate as an useful diagnostic and therapeutic marker of alcohol consumption |
-
2007
- 2007-10-23 SE SE0702354A patent/SE531588C2/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-10-22 WO PCT/SE2008/051187 patent/WO2009054784A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE0702354L (en) | 2009-04-23 |
| WO2009054784A1 (en) | 2009-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Elmongy et al. | Saliva as an alternative specimen to plasma for drug bioanalysis: A review | |
| US9816980B2 (en) | Apparatus and corresponding method for sampling and analyzing drugs and respective metabolites in breath air, particularly suitable for performing road drug tests | |
| Samyn et al. | On-site testing of saliva and sweat with Drugwipe and determination of concentrations of drugs of abuse in saliva, plasma and urine of suspected users | |
| Lanaro et al. | Detection of paraquat in oral fluid, plasma, and urine by capillary electrophoresis for diagnosis of acute poisoning | |
| Varga et al. | Nonaqueous capillary electrophoresis for analysis of the ethanol consumption biomarker phosphatidylethanol | |
| Świądro et al. | Development of a new method for drug detection based on a combination of the dried blood spot method and capillary electrophoresis | |
| Ren et al. | Rapid enrichment and sensitive detection of extracellular vesicles through measuring the phospholipids and transmembrane protein in a microfluidic chip | |
| Wernly et al. | Confirmation testing of 11-nor-Δ9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid in urine with micellar electrokinetic capillary chromatography | |
| SE531588C2 (en) | Ways to detect previous ethanol intake | |
| Zhang et al. | On-line preconcentration of fluorescent derivatives of catecholamines in cerebrospinal fluid using flow-gated capillary electrophoresis | |
| WO2000031531A1 (en) | Monitoring patient compliance and bioavailability of drugs by deproteinizing body fluids | |
| Frölich et al. | Acetylcholine in human CSF: methodological considerations and levels in dementia of Alzheimer type | |
| Lu et al. | A new method for screening and determination of diuretics by on‐line CE‐ESI‐MS | |
| CN115728353B (en) | Application of MscCG in the preparation of test kits for detecting valproic acid drugs | |
| RU2517054C1 (en) | Method for prediction of clinical course of lipidemia | |
| CN114624343B (en) | Method for relatively quantifying 45 inflammations and immune metabolites in serum | |
| Ole¸ dzka et al. | Simultaneous separation of eight benzodiazepines in human urine using field-amplified sample stacking micellar electrokinetic chromatography | |
| WO2016065041A1 (en) | Quantitative molar concentration detection of specific apolipoprotein-containing particles present in bodily fluids by using capillary electrophoresis | |
| Aranda-Merino et al. | Rapid determination of phenylalanine and tyrosine in volumetrically collected dried blood spots using fully automated processing and analysis by capillary electrophoresis | |
| Brunner et al. | Capillary electrophoresis for therapeutic drug monitoring | |
| Dogrukol‐Ak et al. | A capillary zone electrophoretic method for the determination of nimesulide in pharmaceutical preparation and serum | |
| EP2470890A1 (en) | Method and apparatus for detecting a lipophilic analyte of interest in a sample | |
| Fang et al. | Comparisons of different extraction methods and solvents for saliva samples | |
| CN114544790A (en) | Application of reagent for detecting lysophosphatidylethanolamine (22:5) in blood plasma in preparation of depression detection kit | |
| EP4242658A1 (en) | A system and method for biomolecule detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |