SE513475C2 - Hudsticktestkit - Google Patents

Description

15 20 25 30 35 5132475 ben ävensom cementum och kan, förutsatt att de rätta be- tingelserna föreligger, bilda en ny fästapparat inom ro- tens områden där den förlorats genom parodontal sjukdom (Lindskog S, Lengheden A, Blomlöf L. Successive removal of periodontal tissues. Marginal healing without plaque J.Clin. Periodontol 1991; §0:l4-9).

Parodontal sjukdom är näst efter tandförstöring den control. mest frekventa orala sjukdomen. Det är en progressiv sjukdom och påverkar i sin allvarliga form 5 till 10% av populationen i industrialiserade länder och leder till partiell eller fullständig tandförlust. Många vuxna har emellertid en eller flera tänder som påverkas av sjukdo- men. Sjukdomen är i sin vanligaste form känd som marginal parodontit. Den förorsakas av ansamling av bakteriella avsättningar på tandytorna längs de gingivala marginaler- na. Dessa bakterier som till övervägande delen är anaero- ba härrör fràn värdarnas nativa orala mikroflora och ut- löser en inflammatorisk reaktion i gingivan, vilket re- sulterar i destruktion av tandbindande vävnader (parodon- talt membran och alveolärt ben). Destruktionen av de tandbindande vävnaderna resulterar i en fördjupning av utrymmet (parodontal ficka) mellan tandens rot och gingi- van, Sjukdomen utvecklas allteftersom bakterier migrerar apikalt in i den parodontala fickan, vilken blir djupare och djupare som ett resultat av inflammationen i mjukväv- naden. Om adekvat behandling ej insättes blir tanden mo- bil och faller slutligen ut när tillräckligt tandbindande vävnader förstörts.

Tre teorier eller modeller för utvecklingen av mar- ginal parodontit har föreslagits (Socransky SS, Haffajee AD, Goodson J, Lindhe J. New concepts of destructive pe- riodontal disease. J.Clin. Periodontol 1984; 11:21-32). 1. En långsam kontinuerlig förlust av fästet genom li- vet. 2. Slumpmässiga perioder av förlust av fäste genom li- vet. 10 15 »Aling (refraktära patienter). 20' 35 513 4375 3. Lokaliserad förlust av fäste under vissa perioder i livet.

Det finns skäl att anta att alla dessa tre teorier är giltiga, vardera inom en viss subpopulation av patien- ter som lider av marginal parodontit. Den första teo- rin/modellen är tillämpbar på huvuddelen av patienterna, 50 till 80% av populationen, vilka visar en moderat form av marginal parodontit. Den tredje teorin/modellen är tillämpbar på juvenil parodontit, vilken påverkar unga patienter och då oftast endast de första permanenta mola- rerna. Den andra teorin/modellen upptar 5 till 10% av po- pulationen som lider av allvarlig marginal parodontit.

Inom gruppen av patienter som lider av allvarlig marginal parodontit och vilka förlorar parodontalt fäste (teori/modell 2 ovan) svarar ett stort antal av patienter ej på behand- under godtyckliga perioder genom livet Dessa patienter har troli- gast en ”multifaktoriell genetisk dispositon” att utveck- la allvarlig marginal parodontit. Denna genetiska dispo- sition har antagits leda till en inflammatorisk överreak- _ tiQD,¶ot marginal bakteriell plack, vilket i sin tur med- för destruktion aY.det marginala periodontiet.

.Qi-e _ êummanfattning av Épfinningen -~Ä¥'åHuvudändamål;t E Qföreliggande uppfinning är att åstadkomma ny teknik avseende ett screeningtest för att ,inpm_en_given popšlation identifiera individer vilka har disposition för utveckling av marginal parodontit.

Ett annat ändamål med föreliggande uppfinning är att åstadkomma ett hudsticktestkit för sådan bestämning av benägna individerfïàrfh 0 Ett annat ett förfarande ändamål med uppfinningen är att åstadkomma för bestämning av sådan disposition hos individer inom en given population.

För dessa och andra ändamål som kommer att framgå av följande framställning av uppfinningen åstadkommes en 10 15 20 25 30 35 513 475 hudsticktestkit för bestämning av disposition hos en in- divid att utveckla marginal parodontit, varvid nämnda kit innefattar: a) ett första reagens innehållande en känd kvantitet av en ytstruktur som är gemensam för anaeroba Gram- negativa patogener och som har förmåga att utlösa det in- flammatoriska svar som är förenat med parodontit och gin- givit; b) ett andra reagens innehållande en agonist till nämnda individ; c) en negativ kontroll; och d) instruktioner för användningen av nämnda kit.

Det är föredraget att nämnda första reagens innehål- ler en struktur utvald från en icke-polysackarid enhet av ytlipo- eller -proteokonjugat av sådana anaeroba Gram- negativa patogener.

Det är speciellt föredraget att nämnda konjugat är en lipopolysackarid, och i nämnda konjugat är det speci- ellt föredraget att nämnda enhet är Lipid A eller en ek- vivalent därav med samma biologiska funktion.

Med avseende på det andra reagenset kan nämnda ago- nist vara vilken som helst substans med förmåga att pro- ducera ett inflammatoriskt svar vid påverkan av en indi- vid underkastad test. Ehuru vilken som helst agonist med sådan funktion kan användas är den företrädesvis utvald bland histamin, serotonin, prostaglandiner, leukotriener och bradykinin.

Det är speciellt föredraget att som agonist använda histamin, som är en konventionell påverkansubstans använd vid testning av immunologisk reaktion.

Genom uppfinningen åstadkommes även ett förfarande för bestämning av dispositionen hos en individ att ut- veckla marginal parodontit. Vid ett sådant förfarande ut- föres hudsticktestet genom påverkan av en individ under- kastad testning med ett första reagens såsom definierats ovan och utvärdering av svaret på denna påverkan. Vid detta förfarande indikerar utebliven reaktion eller alst- 10 15 20 25 30 35 5 513 475 ring av endast en mindre reaktion disposition att utveck- la en marginal parodontit.

Såsom kommer att visas nedan genom experimentella data uppvisar patienter pà ett överraskande sätt ett om- vänt svar, dvs de svarar ej så lätt som friska individer med en antiinflammatorisk reaktion mot ett givet gemen- samt Gram-negativt bakteriellt antigen, såsom Lipid A.

Detta försämrade svar kan därför leda till en ostörd el- ler okontrollerad tillväxt av den marginala mikrofloran, speciellt de anaeroba subgingivala patogener som när de uppnår en kritisk volym initierar en period av förlust av marginalt fäste. Den teknik som tillhandahålles genom fö- religgande uppfinning bestående i administrationen av ett lämpligt antigen, såsom Lipid A, har sålunda potentialen av att kunna tjäna som ett screeningtest för tidig iden- tifikation av individer, vilka har en disposition att ut- veckla allvarlig marginal parodontit.

Med avseende på det första reagenset kan vilket som helst antigen eller ytstruktur gemensam för Gram-negativa bakteriella parodontitiska patogener användas vid testme- toden enligt föreliggande uppfinning. Sådana antigener är ofta del av ytkonjugat av nämnda patogener, såsom lipo- eller proteopolysackarider. Eftersom polysackariddelen av sådana konjugat har en struktur som varierar med typen av den aktuella bakteriestammen är det föredraget att använ- da den icke-polysackaridiska enheten av sådana konjugat, vilken enhet är oförändrad oberoende av den bakteriella stammen.

Med avseende på det andra reagenset som användes vid föreliggande uppfinning för att bekräfta en positiv reak- tion är det givet att vilken som helst agonist kan använ- das för ett sådant ändamål. Dessutom kan den negativa kontrollen för att bekräfta negativ reaktion helt enkelt utgöras av pyrogenfritt vatten.

Detaljerad beskrivning av uppfinningen Föreliggande uppfinning kommer ytterligare att il- 10 15 20 25 30 35 513 475 lustreras genom specifika experimentella data, men det bör observeras, att uppfinningen ej är inskränkt till de experiment som redovisas nedan eftersom ändringar och mo- difikationer är uppenbara för fackmannen vid läsning av beskrivningen.

EXEMPEL Hudsticktest under användning av Lipid A Lipid A är en unik del av endotoxiner, lipopolysack- arider (LPS) producerade av alla parodontitpatogener.

Till skillnad fràn polysackariddelen av LPS förblir den oförändrad oavsett bakteriestam. LPS igångsätter ett an- tal biologiska aktiviteter, speciellt det inflammatoriska svaret vid parodontit och gingivit.

Hudsticktest med Lipid A utfördes på tre grupper av individer: ° Patienter med allvarlig marginal parodontit vilka ej svarar på behandling (refraktära patienter).

° Patienter med allvarlig marginal parodontit vilka sva- rar mot behandling.

' Friska kontrollindivider utan marginal parodontit.

(Testet utfördes enligt en rutinprocedur som beskri- ves i Aas K, Backman A, Berlin L, Weeke B. Standardiza- tion of allergen extracts with appropriate methods. The combined use of skin prick testing and standardization of Acta Allergol 1978; 33:238-240, Malling H-J. The skin prick testing and the use of hista- mine references. Allergy 1984; 39:596-601). allergen extracts. och i Patient- och sjukdomskarakteristika för de tre grup- perna återfinnes i Tabell l nedan. GI (gingivalt index) användes som ett mått på aktiv sjukdom. Refraktära pati- enter hade samtliga ett GI>20. Testsubstansen var Lipid A upplöst i vatten (0,1 mg/ml och 1 mg/ml). Histamin (10 mg/ml i vatten) och vatten tjänade som positiva respekti- ve negativa kontroller. till 24 timmar.

Resultatet registrerades efter 18 1? 10 15 20* 25 513 475 TABELL 1 Patient- och sjukdomskarakteristika för de två testgupperna och kontrollgruppen. Inga signifikanta skillnader återfanns mellan grupperna med marginal paro- dontit med avseende pà kön, ålder, fickdjup och antal tänder.

Test/kontrollgrupp n % hon- Medel Antal Marginal Paro- Medel- kön - tänder benförlust dontal gingi- % han- ålder medel- valin- kön fíckdjup dex Patienter med allvarlig mar- 14 42,9 45,7 21,1 32,8% 3,2 29,2 ginal parodontit vilka ej 57,1 svarar pà behandling (GI>20) Patienter med allvarlig mar- 38 44,7 45,4 21,3 30,3% 2,9 11,1 ginal parodontit vilka sva- 55,3 rar pà behandling (GIsZO) Friska kontrollindivider 16 81,2 42,1 - 1,8 mm - - utan marginal parodontit ' 18,8 Alla individer regareade positivt på histamin och negativt på vehikeln (vatten). Students t-test utfördes till testnivàer av signifikans för skillnader mellan test- och kontrollgrupper.

Resultaten från hudsticktestet àterfinnes i Tabell 2 nedan.

TABELL 2 Hudsticktest med Lipid A utfört på tre grupper av individer: patienter med allvarlig marginal parodontit vilka ej svarar på behandling (refraktära patienter), pa- tienter med allvarlig marginal parodontit vilka svara på behandling och friska kontrollindivider utan marginal pa- rodontit. 10 15 20 8 513 475 Test/kontrollgrupp n % + med l mg P _% + med 0,1 mg P Lipid A Lipid A Patienter med allvarlig 14 7,1 0,0007lL 7,1 nsll marginal parodontit vil- nsl ka ej svarar pà behand- ling (GI>20 Patienter med allvarlig 38 57,9 21,1 marginal parodontit vil- nsl nsl ka svarar pà behandling (GIs20) Friska kontrollindivider 16 50,0 18,8 utan marginal parodontít P = probabilitet ns = ingen signifikans; pilarna avser signifikans testad mot gruppen friska kontrollindivider.

Patienter med allvarlig marginal parodontit som ej svarar på behandling (refraktära patienter) uppvisade nästan inget positivt svar på Lipid A som signifikant skilde sig från resultaten med patienter med allvarlig marginal parodontit vilka svarar pà behandling och friska kontrollindivider utan marginalparodontit. Refraktära pa- tienter krävde även högre koncentrationer av Lipid A för att reagera. Ehuru uppfinningen ej är inskränkt till nå- gon speciell teori kan detta tolkas som en försämrad in- flammatorisk reaktivitet för parodontitpatogener i re- fraktära patienter, och testet kan användas för att scre- ena individer för identifiering av sådana som är mottag- liga för allvarlig refraktär parodontit innan parodonti- ten utvecklats alltför långt. Preventiva åtgärder kan så- lunda specifikt riktas mot dessa patienter.

Claims (7)

(šffliklüißä 10 15 20 25 30 35 9 513 475 PATENTKRAV

1. Hudsticktestkit för bestämning av disposition hos en individ att utveckla marginalparodontit, k ä n n e - t e c k n a t därav, att nämnda kit innefattar a) ett första reagens innehållande en känd kvantitet av en ytstruktur som är gemensam för anaeroba Gram- negativa patogener och som har förmåga att utlösa det in- flammatoriska svar som är förenat med parodontit och gin- givit; b) ett andra reagens innehållande en agonist till nämnda individ; c) en negativ kontroll; och d) instruktioner för användningen av nämnda kit.

2. Hudsticktestkit enligt patentkravet 1, k ä n - n e t e c k n a t därav, att nämnda första reagens inne- håller en struktur utvald från en icke-polysackaridenhet av ytlipo- eller -proteokonjugat av nämnda patogener.

3. Hudsticktestkit enligt patentkravet 2, k ä n - n e t e c k n a t därav, att nämnda konjugat är en lipopolysackarid.

4. Hudsticktestkit enligt patentkravet 2 eller 3, k ä n n e t e c k n a t därav, att nämnda enhet är Lipid A eller funktionell ekvivalent därav.

5. Hudsticktestkit enligt något av de föregående patentkraven, k ä n n e t e c k n a t därav, att nämnda agonist är utvald bland histamin, serotonin, prosta- glandiner, leukotriener och bradykinin.

6. Hudsticktestkit enligt patentkravet 5, k ä n - n e t e C k n a d därav, att nämnda agonist är histamin.

7. Hudsticktestkit enligt något av de föregående patentkraven, k ä n n eit e c k n a t därav, att nämnda första reagens utgöres av en vattenlösning av Lipid A, att nämnda andra reagens utgöres av en vattenlösning av histamin, och att nämnda negativa kontroll är vatten.