RU2772214C2 - Функционализированные сахариды в качестве противовоспалительных средств - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и предназначена для воздействия на механизмы воспаления у млекопитающих. В частности, описано применение соединения формулы (Ib), а также фармацевтической композиции на основе этого соединения в качестве противовоспалительного средства, которое воздействует на механизмы воспаления у животных. Кроме того, группа изобретений относится к способу (in vivo) подавления или торможения ответных воспалительных реакций путем применения соединения (Ib) и к способу подавления или торможения экспрессии по меньшей мере одного цитокина путем введения соединения (Ib). Настоящее изобретение относится к соединениям функционализированных сахаридов, применяемых в качестве противовоспалительных средств, которые оказывают воздействие на механизмы воспаления у млекопитающих. Технический результат: обеспечение эффективного воздействия на механизмы воспаления у млекопитающих. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 8 табл., 6 пр.

Формула (Ib)

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к соединениям функционализированных сахаридов, применяемых в качестве противовоспалительных средств, которые оказывают воздействие на механизмы воспаления у млекопитающих.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Воспаление представляет собой сложную ответную биологическую реакцию иммунной системы, направленную на защиту организма от вредных для здоровья веществ, от повреждения и разрушения тканей. Ответная воспалительная реакция может быть инициирована физическими, химическими и инфекционными средствами, такими как бактерии, вирусы и другие патогенные микроорганизмы. Цель появления воспаления заключается в устранении первопричины повреждения, в очистке поврежденных клеток и тканей и в инициировании восстановления тканей.

Воспаление может быть острым или хроническим. Острое воспаление относится к начальной ответной реакции иммунной системы организма на вредные раздражающие воздействия. Хроническое воспаление представляет собой форму длительного воспаления, которое приводит к рекрутменту макрофагов и Т-лимфоцитов. Макрофаги представляют собой крупные фагоцитарные лейкоциты, и вместе с Т-лимфоцитами, которые, как известно, продуцируют цитокины и ферменты, они вызывают более длительное повреждение клеток. Несмотря на то, что для организма необходимо иметь должным образом функционирующую иммунную систему, тем не менее, важно контролировать эти воспалительные механизмы, так как хроническое воспаление может приводить к различным патологиям и даже к раку.

Вместе с тем, термин "воспаление" не является синонимом термина "инфекция". Инфекция относится всего лишь к взаимодействию инвазии микроорганизма с ответной воспалительной реакцией организма на эту инвазию. С другой стороны, воспаление описывает воспалительный механизм, возникающий независимо от возбудителя. Несмотря на это, в медицине воспаление или органоспецифическое воспаление часто называют инфекцией, поскольку микробная инвазия обычно наблюдается во взаимосвязи с воспалением. Тем не менее, важно проводить различие между ними, поскольку многие патологические состояния включают воспалительные процессы, которые не обусловлены микробной или вирусной инвазией, и наоборот, не все микробные или вирусные инфекции приводят к воспалению.

Смешение понятий инфекции и воспаления особенно характерно в случаях гастрита или наличия воспаления в желудке. Многие врачи считают хронический гастрит эквивалентным инфекции Helicobacter pylori (H. pylori). Однако известно, что существует множество других причин этого заболевания. Кроме того, желудочная патология также сохраняться даже после успешной эрадикации H. Pylori. В публикации Genta et al., American Journal of Gastroenterology, совсем недавно было сообщено, что примерно у 20% пациентов, у которых был взят гастробиоптат, был поставлен диагноз не связанного с инфекцией Helicobacter pylori гастрита. Учитывая его распространенность, в публикации Borkman et al., New England Journal Of Medicine было предложено рассматривать не связанный с инфекцией Helicobacter pylori гастрит как отдельную нозологическую форму. Известные причины воспаления желудка при отсутствии бактериальной инфекции, в частности, инфекции H. pylori, включают:

(i) вирусную инфекцию (цитомегаловирус, простой герпес);

(ii) химическое или реактивное воспаление, вызванное рефлюксом желчи и панкреатического сока в желудок или экзогенными веществами, такими как NSAID (нестероидные противовоспалительные препараты), ASA (ацетилсалициловая кислота), алкоголь или химиотерапевтические препараты;

(iii) аутоиммунное воспаление, характеризующееся наличием антител против париетальных клеток;

(iv) лучевое и эозинофильное воспаление;

(v) воспаление в процессе коллагеноза;

(vi) воспаление при болезни Крона;

(vii) воспаление при саркоидозе;

(viii) вызванное стрессом воспаление;

(ix) желудочные виды бактерий у людей, не относящиеся к H. Pylori Helicobacter (NHPH), из которых H. Suis являются наиболее распространенными. Они связаны с хроническим гастритом, язвой желудка и другими патологическими изменениями желудка, как у животных, так и у людей (G. Zhang et al., Vet Res (2016) 47: 101, с. 1 1. 1 -3);

(x) идиопатические: все случаи гастрита, при которых не удается выявить причины заболевания.

Помимо проблемы не связанного с бактериями Helicobacter гастрита, при лечении людей и сельскохозяйственных животных остается проблемой рецидив язвы желудка, даже после успешной эрадикации бактерий Helicobacter. Например, в случае свиней, несмотря на то, что у подвергнутых лечению животных может происходить рубцевания язвы, тем не менее, рецидив язвенной болезни у них является распространенной проблемой. Рецидив язвенной болезни вызывает у животного дискомфорт и потерю аппетита, что приводит к потере веса и к негативным экономическим последствиям. Но и при лечении людей, рецидив язвы желудка представляет собой серьезную угрозу для здоровья. В настоящее время, страдающие хроническим гастритом и/или язвенной болезнью желудка пациенты вынуждены длительно применять ингибиторы протонной помпы (PPI) для блокирования образования кислоты в желудке. Известно, что указанное длительное применение ингибиторов протонной помпы сопровождается многими побочными эффектами и повышает риск развития хронического заболевания почек, почечной недостаточности и повышенного риска сердечно-сосудистых осложнений.

В качестве варианта, вместо блокирования продукции кислоты в желудке, язву желудка и гастрит лечат путем целенаправленного воздействия на бактерии Helicobacter pylori.

Кроме того, для облегчения состояния воспаления желудка противопоказано применение нестероидных противовоспалительных препаратов (NSAID), поскольку известно, что эти препараты являются фактором риска возникновении патологии желудка.

На основании вышеизложенного, можно сделать вывод о том, что существует потребность в противовоспалительных средствах, в результате применения которых могут быть преодолены недостатки современных методов противовоспалительного лечения, такие как большое количество побочных эффектов, а именно повышенный риск возникновения хронического заболевания почек, почечной недостаточности, повышенный риск возникновения сердечно-сосудистых осложнений и другие подобные негативные побочные эффекты, ограниченная область применения, несоблюдение пациентом инструкций по приему препарата, и в результате применения которых могут быть преодолены проблемы рецидивов язвы, в частности, рецидивов язвы желудка.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К удивлению заявителя настоящего изобретения, оказалось, что можно создать противовоспалительные лекарственные средства, которые бы удовлетворяли упомянутым выше требованиям.

Целью настоящего изобретения является создание альтернативного противовоспалительного средства вместо нестероидных противовоспалительных средств (NSAID) для устранения воспаления в желудке млекопитающих, страдающих от гастрита, язвы желудка, или млекопитающих с риском развития этих заболеваний.

Целью настоящего изобретения является создание альтернативы длительному применению ингибиторов протонной помпы (PPI) у субъектов, страдающих от язвенной болезни желудка и хронического гастрита.

Целью настоящего изобретения является создание противовоспалительного средства, которое может воздействовать на механизмы воспаления, лежащие в основе язвенной болезни желудка и гастрита у млекопитающих.

Настоящее изобретение относится к соединениям, применяемым в качестве противовоспалительного средства, которые воздействуют на механизмы воспаления у млекопитающих [обозначаемые далее как противовоспалительное соединение (C)], где указанное противовоспалительное соединение (C) представляет собой, по меньшей мере, одно из соединений, представленных общими формулами (I), (II), (III) или (IV), или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват, изомер или их смесь:

формула (I)

формула (II)

где

- каждый из R¹ независимо выбирают из -OH или -N(R^1a)(R^1b), где каждый из R^1a и R^1b, независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы,

- каждый из R², R⁴, R⁵, R¹¹ и R¹², независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -OR^z, -N(R^z)₂, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы, где R^z независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, защитной группы для аминогруппы, арильного, гетероарильного, алифатического, гетероалифатического и карбогидратного фрагмента,

- каждый из R³ независимо выбирают из группы, состоящей из H, -OH, -NH₂, -SH, OR^w, -NH(R^w), -N(R^w)₂, -SR^w, -O(C=O)R^w, -NH(C=O)R^w, -O(C=NH)R^w, -NH(C=NH)R^w, -S(C=NH))R^w, -NH(C=S)R^w, -S(C=O)R^w, -O(C=S)R^w, -S(=S)R^w, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы, где R^w выбирают из группы, состоящей из карбогидратного фрагмента, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы,

- каждый из R⁶, R¹⁴ и R¹⁵, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, арильной, гетероарильной, алифатической, гетероалифатической группы и карбогидратного фрагмента,

- каждый из R⁷ независимо выбирают из группы, состоящей из H, C(=O)N(R^z')₂, -C(=O)OR^z', защитной группы для гидроксильной группы, арильной, гетероарильной, алифатической, гетероалифатической группы и карбогидратного фрагмента, где R^z' независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы,

- каждый из R¹⁰ независимо выбирают из группы, состоящей из -C(=O)N(R^l)(R^p), -C(=O)OR^k и -CH₂OR^k, где R^l и R^p независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической, гетероалифатической группы и карбогидратного фрагмента, где R^k независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, арильной, гетероарильной, алифатической, гетероалифатической группы и карбогидратного фрагмента,

- каждый из R¹³ независимо выбирают из группы, состоящей из -OH и -N(R^o'')(R^m''), где R^o'' и R^m'', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)R^h, защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы, где R^h выбирают из группы, состоящей из карбогидратного фрагмента, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы,

- каждый из (R^o) и (R^m), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w', защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы, где R^w' выбирают из группы, состоящей из карбогидратного фрагмента, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы;

- каждый из (R^s) и (R^t), независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w'', защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы, где R^w'' выбирают из группы, состоящей из карбогидратного фрагмента, арильной, гетероарильной, алифатической и гетероалифатической группы;

- каждый из R^6a и R^6a', независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из H или -OH, предпочтительно, чтобы R^6a представлял собой H, и R^6a' представлял собой -OH;

- каждый из R^c независимо выбирают из группы, состоящей из H, галогена, гетероарила, -OR^q, -N(R^q)₂, -SR^q, NO₂, -NC, -CN, -N₃, -N(R^q)=NR^q, -CHO, -C(=O)R^q, -C(=S)R^q, C(=NR^q)R^q, -C(=O)OR^q, -C(=NR^q)OR^q, -C(=NR^q)N(R^q)₂, -C(=O)N(R^q)₂, -C(=S)OR^q, -C(=O)SR^q, -C(=S)SR^q, -P(=O)(OR^q)₂, -S(=O)(OR^q), -S(=O)₂(OR^q), -P(=O)N(R^q)₂, -P(=O)₂N(R^q)₂, -C(=O)NR'S(=O)₂R^q, -S(=O)N(R^q)₂ and -S(=O)₂N(R^q)₂, где каждый из R^q независимо выбирают из группы, состоящей из H, алифатической, гетероалифатической группы, арильной, гетероарильной группы и защитной группы для гидроксильной группы,

- каждый из Rⁱ независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, алифатической, гетероалифатической группы, арила и гетероарила,

- каждый Lipid независимо выбирают из H или C_1–30 алифатического фрагмента, в котором от 0 до 10 метиленовых звеньев необязательно заменены на -O-, -NR^x-, -S-, -C(=O)-, -C(=NR^x)-, -S(=O)-, -S(=O)₂-, -N=N-, -C=N-, -C(R^y)=C(R^y')-, -N–O–, арилен или гетероариленовый фрагмент, где каждый из R^x независимо выбирают из группы, состоящей из H, алифатической, гетероалифатической группы, арильной, гетероарильной группы или защитной группы для аминогруппы, и где каждый из R^y и R^y', независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, алифатической, гетероалифатической, арильной и гетероарильной группы.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, применяемой в качестве противовоспалительного средства, которые воздействуют на механизмы воспаления у млекопитающих, которая включает носитель и, в качестве активного ингредиента, эффективное количество противовоспалительного соединения (C), определяемого в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу приготовления указанной фармацевтической композиции.

Кроме того, настоящее изобретение относится к противовоспалительному соединению (C), определяемому в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, для применения в качестве лекарственного препарата.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей носитель и, в качестве активного ингредиента, эффективное количество противовоспалительного соединения (C), определяемого в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, для применения в качестве лекарственного препарата.

Кроме того, настоящее изобретение относится к противовоспалительному соединению (C), определяемому в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, для применения при лечении воспалительных заболеваний или связанных с воспалением заболеваний.

Кроме того, настоящее изобретение относится к противовоспалительному соединению (C), определяемому в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, для применения при лечении заболевания, опосредованного, по меньшей мере, одним цитокином.

Кроме того, настоящее изобретение относится к in vivo способу подавления или торможения ответных воспалительных реакций путем применения противовоспалительного соединения (C), определяемого в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу подавления или торможения экспрессии, по меньшей мере, одного цитокина у млекопитающего.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения связанных с воспалением заболеваний, ассоциированных с уровнями экспрессии цитокина у млекопитающих.

ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ СОЕДИНЕНИЕ (C) И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ СОЛЬ

Далее следует иметь в виду, что все определения и преимущества, описанные выше для противовоспалительного соединения (C), в равной степени применимы к этому варианту осуществления и ко всем дополнительным вариантам осуществления, описанным ниже.

Используемые выше и ниже в изобретении определения имеют следующие значения, если не указано иное.

Термин "алифатическая" включает как насыщенную, так и ненасыщенную, неароматическую линейную цепь (то есть, неразветвленную), разветвленную, ациклическую и циклическую углеводородную цепь, имеющую от 1 до 30 углеродных атомов, которые необязательно замещены с помощью одной или более групп, включающих, но этим не ограничивая, алкил, алкинил, алкенил, арил, галогенид, нитро, амино, эфир, кетон, альдегид, гидрокси, карбоновая кислота, или алкокси. Согласно конкретным вариантам осуществления, используемая в изобретении C_F–G алифатическая группа определяет C_F–G алифатическую группу, имеющую от F до G углеродных атомов, например C_1–12 алифатическая группа определяет алифатическую группу, содержащую от 1 до 12 углеродных атомов, C_1–10 алифатическая группа определяет алифатическую группу, содержащую от 1 до 12 углеродных атомов.

Для обычного специалиста в этой области является очевидным, что "алифатический", как предполагается в изобретении, включает, но этим не ограничивая, алкильный, алкенильный и алкинильный фрагменты. Используемые в изобретении термины "алкил", "алкенил" и "алкинил" имеют обширный диапазон общепринятых значений, и они могут включать фрагмент, который представляет линейный, разветвленный, циклический (циклооалкильный, циклоалкенильный, циклоалкинильный) фрагменты или их комбинацию.

Термин "алкил", применяемый отдельно или в комбинации, обозначает образованный из алкана радикал, который может представлять собой линейный алкил, разветвленный алкил или циклический алкил, содержащий от 1 до 30 углеродных атомов, если не указано иначе. Линейная или разветвленная алкильная группа присоединяется в любой доступной точке для получения стабильного соединения. Алкил также включает линейную или разветвленную алкильную группу, которая содержит циклоалкильную часть или прерывается циклоалкильной частью. Согласно конкретным вариантам осуществления, C_A–B алкил обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от A до B углеродных атомов, например C_1–15 алкил обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от 1 до 15 углеродных атомов, C_1–12 алкил обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от 1 до 12 углеродных атомов, C_1–6 алкил обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал, имеющий от 1 до 6 углеродных атомов, такой как, например, метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, 2-метил-1-пропил. Согласно конкретным вариантам осуществления, циклический C_C–D алкил обозначает циклический алкильный радикал, имеющий от C до D углеродных атомов, например C_3–6 циклический алкил.

Термин "алкенил", применяемый отдельно или в комбинации, обозначает линейный или разветвленный углеводород, содержащий 1-30 углеродных атомов, если не указано иначе, и, по меньшей мере, одну двойную связь углерод-углерод. Примеры алкенильных групп включают этенил, пропенил, изопропенил, бутенил, циклогексенил, циклогексенилалкил и другие подобные алкенильные группы. Алкенил также включает линейную или разветвленную алкенильную группу, которая содержит циклоалкильную часть или прерывается циклоалкильной частью. Двойные связи углерод-углерод могут содержаться или в циклоалкильной части, или в линейной цепи или в разветвленной части. Согласно конкретным вариантам осуществления, C_H–I алкенил обозначает линейный или разветвленный алкенильный радикал, имеющий от H до I углеродных атомов, например, C_1–6 алкенил обозначает линейный или разветвленный алкенильный радикал, имеющий от 1 до 6 углеродных атомов.

Термин "алкинил", применяемый отдельно или в комбинации, обозначает линейный, разветвленный или циклический углеводород, содержащий от 1 до 30 углеродных атомов, содержащих, по меньшей мере, одну тройную связь углерод-углерод. Примеры алкинильных групп включают этинил, пропинил, бутинил и другие подобные алкинилы.

Используемый в изобретении термин "гетероалифатический" относится к определенному в изобретении алифатическому фрагменту, который включает как насыщенные и ненасыщенные, неароматические, линейные (то есть, неразветвленные), разветвленные, ациклические, циклические (то есть, гетероциклические) или полициклические углеводороды, имеющие от 1 до 30 углеродных атомов, если не указано иначе, которые необязательно замещены с помощью одной или более групп, включающих, но этим не ограничивая, алкильную, алкинильную, алкенильную, арильную, галогенидную группы, нитрогруппу, аминогруппу, эфирную, кетоновую, альдегидную, гидроксильную группы, группу карбоновой кислоты или алкоксильную группу, и которые содержат один или более гетероатомов, таких как атомы кислорода, серы, азота, фосфора или кремния, например, вместо углеродных атомов. В конкретных вариантах осуществления, гетероалифатические фрагменты замещены путем независимой замены одного или более из атомов водорода в них на один или более заместителей. Для обычного специалиста в этой области является очевидным, что "гетероалифатический", как предполагается в изобретении, включает гетероалкильный, гетероциклоалкильный, гетероциклоалкенильный и гетероциклоалкинильный фрагменты. Поэтому, используемый в изобретении термин "гетероалкил" включает линейные, разветвленные и циклические алкильные группы, которые содержат один или более гетероатомов, таких как атомы кислорода, серы, азота, фосфора или кремния, например, вместо углеродных атомов. Аналогичное определение применяется к другим номенклатурным терминам, таким как "гетероалкенил", "гетероалкинил" и другим подобным терминам. Кроме того, используемые в изобретении термины "гетероалкил", "гетероалкенил", "гетероалкинил" и другие подобные термины охватывают как замещенные, так и незамещенные группы.

Используемый в изобретении термин "арил", применяемый отдельно или в комбинации, обозначает любую ароматическую группу на основе углеродных атомов, включающую, но этим не ограничивая, фенил, толил, ксилил, куменил, нафтил, антраценил и другие подобные группы, необязательно конденсированную с циклоалкилом или гетероциклилом, содержащими, предпочтительно, 5-7, более предпочтительно, 5-6, атомов в кольце, и/или необязательно замещенную с помощью от 1 до 5 групп или заместителей. Арил может быть необязательно замещен с помощью одной или более групп, включающих, но этим не ограничивая, алкильную, алкинильную, алкенильную, арильную, галогенидную группы, нитрогруппу, аминогруппу, эфирную, кетоновую, альдегидную, гидроксильную группы, группу карбоновой кислоты или алкоксильную группу, при условии, что заместитель присоединяют в одной точке к арилу, или при условии, что заместитель присоединяют в двух точках к арилу, с образованием бициклической системы, например, бензодиоксола, бензодиоксана, бензимидазола.

Термин "гетероарил", применяемый отдельно или в комбинации, обозначает моноциклическую ароматическую кольцевую структуру, содержащую 5 или 6 атомов в кольце, или бициклическую ароматическую группу, имеющую от 8 до 10 атомов, содержащую один или более, предпочтительно, 1-4, более предпочтительно 1-3, гетероатомов, независимо выбранных из группы O, S и N, и необязательно замещенную с помощью от 1 до 5 групп или заместителей, включающих, но этим не ограничивая, алкильную, алкинильную, алкенильную, арильную, галогенидную группы, нитрогруппу, аминогруппу, эфирную, кетоновую, альдегидную, гидроксильную группы, группу карбоновой кислоты или алкоксильную группу. Предполагается, что гетероарил также включает окисленные формы S или N, такие как сульфинил, сульфонил и N-оксид атома третичного азота в кольце. Атом углерода или азота присоединяют к гетероарильной кольцевой структуре таким образом, чтобы сохранялась стабильность ароматического кольца. Более конкретно, термин "гетероарил" включает, но этим не ограничивая, пиридил, фуранил, тиофенил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, имидазолил, изоксазолил, пирролил, пиразолил, пиримидил, бензофуранил, изобензофуранил, бензотиазолил, бензоизотиазолил, бензотриазолил, индолил, изоиндолил, бензоксазолил, хинолил, изохинолил, бензимидазолил, бензизоксазолил, бензотиофенил, дибензофуран и бензодиазепин-2-он-5-ил и другие подобные гетероарильные группы.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, Lipid представляет собой ненасыщенную C_4–20 углеводородную цепь, в которой от 1 до 10 метиленовых звеньев заменены на -C(R^y)=C(R^y')-, где каждый из R^y и R^y', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, алифатической, гетероалифатической, арильной или гетероарильной группы; и где указанная углеводородная цепь необязательно замещена с помощью C_1–6 алкила, C_3–6 циклического алкила, C_1–6 алкенила или гидроксильной группы, предпочтительно, чтобы Lipid представлял собой C_4–20 углеводородную цепь, в которой от 1 до 5 метиленовых звеньев заменены на -C(R^y)=C(R^y')-, где каждый из R^y и R^y', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, C_1–6 алкила и C_1–6 алкенила, и где указанная углеводородная цепь необязательно замещена с помощью C_1–6 алкила, C_3–6 циклического алкила, C_1–6 алкенила или гидроксильной группы, более предпочтительно, чтобы Lipid выбирали из фрагментов, имеющих следующие формулы:

Еще более предпочтительно, чтобы Lipid выбирали из фрагментов, имеющих следующие формулы:

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, Lipid представляет собой насыщенную углеводородную цепь, имеющую общую Z:

Формула Z

где

- каждый из R^9' и R^9'', независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -OH и C_1–6 алкила,

- каждый из R^x' и R^x'', независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из H, C_1–15 алкила и арила, где указанный арил необязательно дополнительно замещен с помощью C_1–15 алкила, и где n=4-30, и m=0 или 1

Предпочтительно, чтобы насыщенную углеводородную цепь выбирали из фрагментов, имеющих следующие формулы:

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, R¹ независимо выбирают из -OH или -N(R^1a)(R^1b), где каждый из R^1a и R^1b, независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, C_1–20 алифатической и C_1–20 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы R¹ представлял собой OH, NH₂, или NH(R^1b), где R1b представляет собой C_1–10 циклоалкильную группу или C_1–10 циклоалкенил, который необязательно замещен с помощью галогена, гидроксила или алкокси, более предпочтительно, чтобы R¹ представлял собой -NH(R^1b), где R^1b имеет следующую формулу:

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, R³ независимо выбирают из группы, состоящей из H, -OH и -OR^w, где R^w выбирают из группы, состоящей из карбогидратного фрагмента, где указанный карбогидратный фрагмент независимо выбирают из группы, состоящей из D- и L- моносахаридов, таких как, в частности, D-эритроза, L-эритроза, D-треоза, L-треоза, L-эритрулоза, D-эритрулоза, D-арабиноза, L-арабиноза, D-дезоксирибоза, L-дезоксирибоза, D-ликсоза, L-ликсоза, D-рибоза, L-рибоза, D-рибулоза, L-рибулоза, D-ксилоза, L-ксилоза, D-ксилулоза, L-ксилулоза, D-аллоза, L-аллоза, D-альтроза, L-альтроза, D-галактоза, L-галактоза, D-глюкоза, L-глюкоза, D-гулоза, L-гулоза, D-идоза, L-идоза, D-манноза, L-манноза, D-талоза, L-талоза, D-фруктоза, L-фруктоза, D-псикоза, L-псикоза, D-сорбоза, L-сорбоза, D-тагатоза, L-тагатоза, D-фукоза, L-фукоза, D-рамноза и L-рамноза, дисахаридов, таких как, в частности, сахароза, лактоза, трегалоза и мальтоза, трисахаридов, таких как, в частности, акарбоза, рафиноза и мелицитоза, более предпочтительно, чтобы R³ представлял собой -OR^w, где R^w представляет собой D-моносахарид, такой как, в частности, D-эритроза, D-треоза, D-эритрулоза, D-арабиноза, D-дезоксирибоза, D-ликсоза, D-рибоза, D-рибулоза, D-ксилоза, D-ксилулоза, D-аллоза, D-альтроза, D-галактоза, D-глюкоза, D-гулоза, D-идоза, D-манноза, D-талоза, D-фруктоза, D-псикоза, D-сорбоза D-тагатоза, D-фукоза и D-рамноза, еще более предпочтительно, чтобы R³ представлял собой -OR^w, где R^w независимо выбирают из группы, состоящей из D-глюкозы, D-галактозы, D-аллозы, D-альтрозы, D-маннозы, D-идозы, D-галозы или D-талозы, наиболее предпочтительно, чтобы R³ представлял собой -OR^w, где R^w представляет собой D-глюкозу.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из R², R⁴, R⁵, R¹¹ и R¹², независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, OR^z, C_1–12 алифатического, C_1–12 гетероалифатического и карбогидратного фрагмента, где R^z выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, C_1–12 алифатической группы, C_1–12 гетероалифатической группы, арила и гетероарила, и где указанный карбогидратный фрагмент выбирают из группы, состоящей из D-моносахаридов, таких как, в частности, D-эритроза, D-треоза, D-эритрулоза, D-арабиноза, D-дезоксирибоза, D-ликсоза, D-рибоза, D-рибулоза, D-ксилоза, D-ксилулоза, D-аллоза, D-альтроза, D-галактоза, D-глюкоза, D-гулоза, D-идоза, D-манноза, D-талоза, D-фруктоза, D-псикоза, D-сорбоза D-тагатоза, D-фукоза и D-рамноза, предпочтительно, чтобы каждый R², R⁴, R⁵, R¹¹ и R¹², независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, OR^z, защитной группы для гидроксильной группы, C_1–6 алкила и карбогидратного фрагмента, где R^z выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы и C_1–6 алкила, и где указанный карбогидратный фрагмент выбирают из группы, состоящей из D-глюкозы, D-галактозы, D-аллозы, D-альтрозы, D-маннозы, D-идозы, D-галозы и D-талозы, более предпочтительно, чтобы R², R⁴, R¹¹ и R¹², независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирали из H или OR^z, где R^z выбирают из H или C_1–6 алкила, более предпочтительно, чтобы R⁵ представлял собой C_1–6 алкил, еще более предпочтительно, чтобы R² представлял собой H, R⁴, R¹¹, и R¹² представлял собой -OH, и R⁵ представлял собой -CH₃.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из R⁶, R¹⁴ и R¹⁵, независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы R⁶, R¹⁴ и R¹⁵, независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H или защитной группы для гидроксильной группы, более предпочтительно, чтобы R⁶, R¹⁴ и R¹⁵, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, представляли собой H.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, R⁷ представляет собой группу -C(=O)N(R^z')₂, где каждый из R^z' независимо выбирают из группы, состоящей из H, арила, гетероарила и C_1–12 алкила, предпочтительно, чтобы каждый из R^z' независимо выбирали из H или C_1–12 алкила, более предпочтительно, чтобы каждый из R^z' независимо выбирали из группы, состоящей из H, метила, этила и пропила, наиболее предпочтительно, чтобы каждый из R^z' независимо представлял собой H.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из R¹⁰ независимо выбирают из -C(=O)N(R^l)(R^p) или -C(=O)OR^k, где R^l и R^p, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для аминогруппы, арильной, гетероарильной, C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, и где R^k независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, арильной, гетероарильной, C_1–30 алифатической и C_1–30 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы каждый из R¹⁰ независимо выбирали из -C(=O)N(R^l)(R^p) или -C(=O)OR^k, где R^l и R^p, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для аминогруппы, арила, гетероарила и C_1–6 алкила, где каждый из R^k независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы и C_1–6 алкила, более предпочтительно, чтобы каждый из R¹⁰ независимо выбирали из -C(=O)N(R^l)(R^p) или -C(=O)OR^k, где R^l и R^p, независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для аминогруппы, метила, этила и пропила, где каждый из R^k независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, метила, этила и пропила, наиболее предпочтительно, чтобы R¹⁰ представлял собой -C(=O)NH₂ или -C(=O)OH.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из R¹³ независимо выбирают из группы, состоящей из -OH и -N(R^o'')(R^m''), где R^o'' и R^m'', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, –C(=O)R^h, защитной группы для аминогруппы, C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, где R^h независимо выбирают из C_1–12 алифатической или C_1–12 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы R^o'' и R^m', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^h и C_1–12 алкила, где R^h представляет собой C_1–12 алкил, более предпочтительно, чтобы R^o'' и R^m'', независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^h и C_1–6 алкила, где R^h представляет собой C_1–6 алкил, наиболее предпочтительно, чтобы R^o'' представлял собой H, и R^m' представлял собой -C(=O)CH₃.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из (R^o) и (R^m), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w', защитной группы для аминогруппы, C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, где R^w' независимо выбирают из группы, состоящей из C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы (R^o) и (R^m), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w', защитной группы для аминогруппы и C_1–12 алкила, где R^w' представляет собой C_1–12 алкил, более предпочтительно, чтобы (R^o) и (R^m), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w' и C_1–6 алкила, где R^w' представляет собой C_1–6 алкил, наиболее предпочтительно, чтобы (R^o) представлял собой H, и (R^m) представлял собой -C(=O)CH₃.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из (R^s) и (R^t), независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w'', защитной группы для аминогруппы, C_1–12 алифатической и C_1–12 гетероалифатической группы, где R^w'' независимо выбирают из C_1–12 алифатической или C_1–12 гетероалифатической группы, предпочтительно, чтобы (R^s) и (R^t), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w'', защитной группы для аминогруппы и C_1–12 алкила, где R^w'' представляет собой C_1–12 алкил, более предпочтительно, чтобы (R^s) и (R^t), независимо друг от друга в каждом случае их присутствия, выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)R^w'' и C_1–6 алкила, где R^w'' представляет собой C_1–6 алкил, наиболее предпочтительно, чтобы (R^s) представлял собой H, и (R^t) представляют собой -C(=O)CH₃.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из R^c независимо выбирают из группы, состоящей из H, -C(=O)OR^q, -C(=O)SR^q, -C(=S)OR^q, -C(=O)SR^q, -C(=S)SR^q, где каждый из R^q независимо выбирают из группы, состоящей из H, C_1–12 алкила, арила, гетероарила и защитной группы для гидроксильной группы, предпочтительно, чтобы каждый из R^c независимо выбирали из группы, состоящей из H, -C(=O)OR^q, -C(=O)SR^q и -C(=O)SR^q, где каждый из R^q независимо выбирают из группы, состоящей из H, C_1–6 алкила и защитной группы для гидроксильной группы, более предпочтительно, чтобы каждый из R^c независимо выбирали из H или -C(=O)OR^q, где каждый из R^q независимо выбирают из группы, состоящей из H, метила, этила и пропила, наиболее предпочтительно, чтобы R^c представлял собой -C(=O)OH.

Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения, каждый из Rⁱ независимо выбирают из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, C_1–12 алифатической, C_1–12 гетероалифатической группы, арила и гетероарила, предпочтительно, чтобы Rⁱ независимо выбирали из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, C_1–12 алкила, арила и гетероарила, более предпочтительно, чтобы Rⁱ независимо выбирали из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы и C_1–6 алкила, еще более предпочтительно, чтобы Rⁱ независимо выбирали из группы, состоящей из H, защитной группы для гидроксильной группы, метила, этила и пропила, наиболее предпочтительно, чтобы Rⁱ представлял собой H.

Подробно описанные выше противовоспалительные соединения (C) по настоящему изобретению имеют несколько центров хиральности и существуют в стереохимически изомерных формах. Используемый в изобретении термин "стереохимически изомерные формы" обозначает все возможные соединения, состоящие из одних и тех же атомов, связанных одной и той же последовательностью химических связей, но имеющих различные пространственные структуры, которые не являются равнозначными, которыми могут обладать указанные в изобретении противовоспалительные соединения (C).

Если не упомянуто или не указано иное, то химическое обозначение подробно описанных выше противовоспалительных соединений (C) охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которыми могут обладать указанные противовоспалительные соединения (C). Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанных противовоспалительных соединений (C). Предполагается, что все стереохимически изомерные формы соединений по настоящему изобретению, как в чистой форме, так и в смеси друг с другом, входят в объем настоящего изобретения.

Предпочтительные противовоспалительные соединения (C) представляют собой соединения с формулой (Ia) [далее обозначаемые в изобретении как противовоспалительные соединения (C) класса I] или их фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват, изомер или их смесь,

Формула (Ia)

где

- каждый из R¹ независимо выбирают из OH, NH₂ или NH(R^1b), где R1b представляет собой C1-10 циклоалкильную группу или C1-10 циклоалкенил, который необязательно замещен с помощью галогена, гидроксила или алкокси, более предпочтительно, чтобы R1 представлял собой -NH(R^1b), где R^1b имеет следующую формулу:

- каждый из R³ независимо выбирают из группы, состоящей из H, -OH и -OR^w, где R^w представляет собой D-глюкозу;

- каждый из R² и R⁴, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из H или -OH;

- каждый из R⁵ независимо выбирают из группы, состоящей из H, -OH и -CH₃;

- Lipid выбирают из следующих фрагментов, имеющих формулу L₁ или формулу L₂:

,

Формула L₁

Формула L₂

Более предпочтительно, чтобы противовоспалительное соединение (C) представляло собой смесь подробно описанных выше противовоспалительных соединений (C) класса I.

Неограничивающие примеры выпускаемых промышленностью противовоспалительных соединений (C), подходящих для применения в изобретении, включают флавомицин^®.

Выпускаемый промышленностью флавомицин^® также хорошо известен под его синонимическим названием бамбермицин.

Бамбермицин или Флавомицин^® представляют собой известный комплекс соединений, в основном состоящий из моеномицина A и C, в частности, основным соединением является моеномицин A, имеющим формулу (Ib), описанную подробно ниже, а минорные соединения обозначают как A₁₂, C₁, C₃ и C₄. Моеномицин A и минорные соединения, обозначаемые как A₁₂, C₁, C₃ и C4, представляют собой подробно описанные выше соединения формулы (Ia).

В моеномицине A, имеющим формулу (Ib), подробно описанную ниже, и в минорных соединения A₁₂, C₁, C₃ и C_4, Lipid имеет формулу L₂, R² представляет собой H, R¹ представляет собой -NH(R^1b), где R^1b имеет следующую формулу:

В моеномицине A, R³ представляет собой OR^w, где R^w представляет собой D-глюкозу, R⁴ представляет собой OH, и R⁵ представляет собой CH₃. В моеномицине A₁₂, R³ представляет собой OR^w, где R^w представляет собой D-глюкозу, R⁴ представляет собой H, и R⁵ представляет собой OH.

В моеномицине C₁, R³ представляет собой H, R⁴ представляет собой H, и R⁵ представляет собой OH. В моеномицине C₃, R³ представляет собой H, R⁴ представляет собой OH, и R⁵ представляет собой CH₃. В моеномицине C₄, R³ представляет собой OH, R⁴ представляет собой OH, и R⁵ представляет собой CH₃.

Бамбермицин или флавомицин® может быть получен из стрептомицетов Streptomyces bambergiensis и Streptomyces ghanaensis, Streptomyces ederensis, Streptomyces geysiriensis и родственных штаммов, или биосинтезирован с образованием в результате описанного выше комплекса соединений. Так как комплекс не подвергают тщательной очистке, флавомицин® также содержит исходные используемые в биосинтезе компоненты и различные промежуточные соединения биосинтеза.

Бамбермицин также известен под названием флавофосфолипол. Бамбермицин, флавофосфолипол и флавомицин® в изобретении применяют взаимозаменяемо.

Предпочтительным противовоспалительным соединением (C) класса I является, в частности, моеномицин A, имеющий формулу (Ib), или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват, изомер или их смесь:

Формула (Ib)

Согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения, противовоспалительные соединения (C) представляют собой соединения формулы (IIa) [далее обозначаемые в изобретении как противовоспалительные соединения (C) класса II] или их фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват, изомер или их смесь:

Формула (IIa)

где

- R³ представляет собой H или -OH;

- каждый из R² и R⁴, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из H или -OH;

- каждый из R^6a и R^6a', независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из H или -OH, предпочтительно, чтобы R^6a представлял собой H, и R^6a' представлял собой -OH;

- R⁵ представляет собой H, -OH или CH₃;

- R¹³ представляет собой -OH или -NHC(=O)CH₃;

- Lipid выбирают из следующих фрагментов, имеющих формулу L₃, формулу L₄ или формулу L₅:

Согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения, противовоспалительные соединения (C) представляют собой соединения формулы (IIIa) [далее обозначаемые в изобретении как противовоспалительные соединения (C) класса III] или их фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемый сольват, изомер их смесь:

Формула (IIIa)

где

- каждый из R⁴ и R⁵, независимо друг от друга и в каждом случае их присутствия, выбирают из группы, состоящей из H, -CH₃ и -OH;

- R₇ независимо выбирают из H или -C(=O)NH₂, предпочтительно, чтобы R₇ представлял собой C(=O)NH₂;

- R¹⁰ независимо выбирают из -C(=O)NH₂ или -C(=O)OH, предпочтительно, чтобы R¹⁰ представлял собой C(=O)NH₂;

- R¹³ независимо выбирают из группы, состоящей из -OH или -NHC(=O)CH₃, предпочтительно, чтобы R¹³ представлял собой --NHC(=O)CH₃

- Lipid выбирают из следующих фрагментов, имеющих формулу L₆, формулу L₇ или формулу L₈:

С точки зрения терапевтического применения, соли подробно описанного выше противовоспалительного соединения (C) по настоящему изобретению представляют собой соли, в которых противоион является фармацевтически приемлемым, и соли которого могут быть названы фармацевтически приемлемыми солями присоединения кислоты и присоединения основания. Однако, соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, могут также находить применение, например, при получении или очистки фармацевтически приемлемого соединения. Все соли, независимо от того, являются ли они фармацевтически приемлемыми, или нет, входят в объем настоящего изобретения.

Подразумевается, что фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты и основания включают активные нетоксичные формы солей присоединения кислоты и основания, которые способны образовывать подробно описанные выше противовоспалительные соединения (C) по настоящему изобретению. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты могут быть легко получены путем обработки основной формы с помощью такой соответствующей кислоты в анионной форме. Соответствующие анионы включают, например, трифторацетат, ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, кальция эдетат, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изетионат, лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, памоат (эмбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, бумацетат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат, триэтиодид и другие подобные анионы. Выбранный противоион сожет быть введен, используя ионообменные смолы. И наоборот, указанные солевые формы могут быть превращены в результате обработки соответствующим основанием в форму свободного основания.

Указанные в изобретении противовоспалительные соединения (C), содержащие кислотный протон, могут быть также превращены в их формы нетоксичных солей присоединения металла или амина путем обработки соответствующими органическими и неорганическими основаниями в катионной форме. Соответствующие основные соли включают соли, образованные органическими катионами, такими как бензатин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, меглюумин, прокаин и другие подобные органические катионы; и соли, образованные катионами металлов, таких как алюминий, кальций, литий, магний, калий, натрий, цинк и другие подобные металлы. И наоборот, указанные солевые формы могут быть превращены путем обработки соответствующей кислотой в свободную форму.

Используемый выше термин "соль присоединения" также включает сольваты, которые способны образовывать указанное в изобретении противовоспалительное соединение (C), а также его соли. Такие сольваты представляют собой, например, гидраты, алкоголяты и другие подобные сольваты.

Общеизвестно, что связанные с воспалением заболевания вовлекают в патологический процесс сложно организованную "систему" сети цитокинов, вследствие чего функционирование иммунной системы тонко сбалансирована за счет действия провоспалительных и противовоспалительных медиаторов или цитокинов.

Подробно описанное выше указанное противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению воздействует на воспалительные механизмы у млекопитающих. Предпочтительно, чтобы подробно описанное выше противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению воздействовало на воспалительные механизмы у не принадлежащих к человеческому роду млекопитающих. Не принадлежащее к человеческому роду млекопитающее может представлять собой свинью; жвачное животное, такое как, в частности, крупный рогатый скот, лошади; верблюда, овцу, козу, кошку, собаку; или грызуна, такого как, в частности, мышь, кролик или крыса, предпочтительно, свинью.

Заявитель с удивлением обнаружил, что подробно описанное выше противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению может воздействовать на экспрессию, по меньшей мере, одного цитокина путем подавления или торможения экспрессии, по меньшей мере, одного цитокина, где указанный цитокин выбирают из группы, состоящей из провоспалительных цитокинов, противовоспалительных цитокинов и хемокинов.

В контексте настоящего изобретения, предполагается, что выражения "по меньшей мере, один цитокин" означают один или более, чем один, цитокин. Другими словами, противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению может подавлять или тормозить экспрессию одного, двух, трех или более цитокинов, и при этом в результате позволяет достигать более высокой терапевтической эффективности при меньшем количестве побочных эффектов.

Кроме того, заявителем было обнаружено, что в результате подавления или торможения экспрессии, по меньшей мере, одного цитокина путем применения противовоспалительного соединения (C) по настоящему изобретению, наблюдается существенное снижение инфильтрации макрофагов, B-клеток и T-клеток. Это говорит о том, что противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению обладает свойствами подавления или торможения воспаления.

Примеры заболеваний, опосредуемых цитокинами (C), и которые поддаются лечению путем применения противовоспалительного соединения (C) по настоящему изобретению, в частности, включают воспалительные заболевания и связанные с воспалением заболевания.

Неограничивающие примеры воспалительных заболеваний, в частности, включают артрит, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, псориаз, множественный склероз, системную эритематозную волчанку (SLE), панкреатит, склеродермию, диабет типа I, воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта, аллергический конъюнктивит, гломерулонефрит, синдром Шегрена, увеит, дерматит, анкилозирующий спондилоартрит и фибромиалгию.

Следует иметь в виду, что термин "воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта" относится к таким заболеваниям, как острый гастрит, хронический гастрит, развитие и рецидив язвы желудка, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженного кишечника и язвенный колит.

Неограничивающие примеры связанных с воспалением заболеваний, в частности, включают нейродегенеративное нарушение, застойная сердечная недостаточность, инсульт, стеноз аортального клапана, почечную недостаточность, аллергию, фиброз, атеросклероз, метаболическое заболевание, сердечно-сосудистое заболевание, осложнение, связанное с применением химиотерапии/лучевой терапии, заболевание печени, нарушение работы желудочно-кишечного тракта, офтальмологическое заболевание, диабетическую ретинопатию, легочное заболевание и проказу.

Провоспалительные цитокины, в частности, включают IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-9, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, TNF-α, LT, LIF, онкостатин и IFN-α, IFN-β и IFN-γ.

Противовоспалительные цитокины, в частности, включают IL-4, IL-10, IL-11, W-13 и TGF-β.

Хемокины, в частности, включают IL-8, Gro-α, MIP-1, MCP-1, ENA-78 и RANTES (хемокин, экспрессируемый и секретируемый T-клетками при активации).

Если не упомянуто или не указано иное, то подробно описанные выше обозначенные цитокины включают в себя все возможные гомологические формы, которые могут быть подавлены указанными противовоспалительными соединениями (C). Гомологию определяют как взаимную схожесть между биологическими структурами, белками или последовательностями ДНК, которая проистекают от общего предшественника. Например, термин "IL-8" относится к IL-8 и всем гомологам IL-8, в частности, таким как IL-8_Kc, IL-8_MIP, IL-8_LIX и другие подобные цитокины.

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество противовоспалительного соединения (C), определенного выше и определенного в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), и фармацевтически приемлемый носитель.

Далее по тексту, выражение "противовоспалительное соединение (C)" подразумевает, применительно к целям настоящего изобретения, как множественное число, так и единственное число, то есть это означает, что композиция по изобретению может включать одно или более чем одно противовоспалительное соединение (C)"

В еще одном аспекте, это изобретение относится к способу приготовления подробно описанной выше фармацевтической композиции, который включает тщательное смешение фармацевтически приемлемого носителя с терапевтически эффективным количеством противовоспалительного соединения (C), определенного выше и определенного в любом одном из представленных в изобретении вариантах осуществления, в частности, противовоспалительным соединением (C) любого из определенных выше классов (I) - (III).

Поэтому, указанные противовоспалительные соединения (C) по настоящему изобретению, в частности, противовоспалительные соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), могут быть приготовлены с целью их введения в виде различных лекарственных форм. В качестве подходящих композиций могут быть упомянуты все композиции, обычно применяемые для системного введения лекарственных средств. Для приготовления фармацевтических композиций по этому изобретению, эффективное количество конкретного соединения, необязательно в форме соли присоединения или комплекса с металлом, в качестве активного ингредиента объединяют путем тщательного смешения с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать большое разнообразие форм, в зависимости от формы препарата, требуемой для введения. Желательно, чтобы эти фармацевтические композиции представляли собой лекарственную форму с разовой дозой, в частности, для перорального, ректального, чрескожного или парентерального введения. Например, при приготовлении композиций в лекарственной форме для перорального введения, могут быть использованы общепринятые фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирта и другие подобные среды, в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и другие подобные вещества в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.

В силу легкости введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее удобные пероральные лекарственные формы с разовой дозой, в случае которых конечно используют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций, носитель обычно включает стерильную воду, по меньшей мере, в значительной степени, хотя могут быть включены в состав и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Могут быть приготовлены инъецируемые растворы, в которых, например, носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или раствор смеси физиологического раствор и глюкозы. Могут быть приготовлены также инъецируемые суспензии, в случае которых могут использоваться соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и другие подобные вещества. Кроме того, к ним относятся препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения, непосредственно перед применением, в препараты в жидкой форме. В композициях, применяемых для чрескожного введения, носитель необязательно включает вещество для усиления проникновения лекарственного средства, и/или подходящее увлажняющее средство, необязательно объединенные с подходящими добавками любой природы в минорных количествах, которые не оказывают существенного вредного воздействия на кожу.

Противовоспалительное соединение (C), определенное выше и определенное в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления, в частности, противовоспалительные соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), могут быть также введены путем пероральной ингаляции или инсуффляции с помощью методов и препаратов, используемых в фармацевтике для введения таким путем. Так, обычно, указанное в изобретении противовоспалительное соединение (C), в частности, противовоспалительные соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), могут быть введены в легкие в форме раствора, суспензии или сухого порошка, причем раствор является предпочтительной формой. Для введения соединений по настоящему изобретению подходит любая система, разработанная для доставки растворов, суспензий или сухих порошков путем пероральной ингаляции или инсуффляции.

Особенно удобно приготавливать упомянутые выше фармацевтические композиции в виде лекарственной формы с разовой дозой с точки зрения простоты введения и равномерности дозирования. Используемая в изобретении лекарственная форма с разовой дозой относится к физически дискретным элементам, подходящим в качестве разовых доз, при этом каждый элемент содержит заданное количество активного ингредиента, рассчитанное для продуцирования требуемого терапевтического эффекта, вместе с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких лекарственных форм с разовой дозой являются таблетки (включающие таблетки с насечкой или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, суппозитории, пакетики с порошком, капсулы-имплантаты, инъецируемые растворы или суспензии и другие подобные формы, и их разделенные кратные количества.

Следует иметь в виду, что термин "терапевтически эффективное количество" обычно относится к количеству активного соединения или компонента или лекарственного средства, которое позволяет достигнуть биологического или лекарственного ответа в ткани, системе, у животного или у человека, искомого, в свете настоящего изобретения, исследователем, ветеринаром, лечащим врачом или другим клиническим врачом, который включает облегчение симптомов заболевания, подвергаемого лечению.

В настоящем изобретении предполагается, что терапевтически эффективное количество определенного выше противовоспалительного соединения (C), в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), относится к количеству, достаточному для профилактического действия, стабилизации или облегчения заболевания, опосредованного, по меньшей мере, одним цитокином, выбранным из группы, состоящей из подробно описанных выше провоспалительных цитокинов, противовоспалительных цитокинов и хемокинов, в частности, по меньшей мере, одного цитокина, выбранных из группы, состоящей из IL-8, Gro-α, MIP-1, MCP-1, ENA-78 и RANTES, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL- 9, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, TNF-α, LT, LIF, онкостатина, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-11, W-13 и TGF-β, более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один цитокин выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, TNF-β, IL-17, IL-23 и IFN-γ, еще более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один из указанных цитокинов выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-1β и IFN-γ.

ПРИМЕНЕНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (C) И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Настоящее изобретение относится к определенному выше противовоспалительному соединению (C), в частности, к противовоспалительному соединению (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), которое применяют в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество противовоспалительного соединения (C), определенного выше и определенного в любом одном из представленных в изобретении вариантах осуществления, в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), и фармацевтически приемлемый носитель, которую применяют в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение относится к определенному выше противовоспалительному соединению (C), в частности, к противовоспалительному соединению (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), которое применяют при лечении воспалительных заболеваний, выбранных из группы артрита, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, псориаза, множественного склероза, системной эритематозной волчанки (SLE), панкреатита, склеродермии, диабета типа I, воспалительного заболевания желудочно-кишечного тракта, аллергического конъюнктивита, гломерулонефрита, синдрома Шегрена, увеита, дерматита, анкилозирующего спондилоартрита и фибромиалгии, предпочтительно, для применения при лечении воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, таких как острый гастрит, хронический гастрит, развитие и рецидив язвы желудка, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженного кишечника и язвенный колит, более предпочтительно, для применения при лечении острого гастрита, хронического гастрита, развития и рецидива язвы желудка.

Настоящее изобретение относится к определенному выше противовоспалительному соединению (C), в частности, к противовоспалительному соединению (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), которое применяют при лечении связанных с воспалением заболеваний, выбранных из группы нейродегенеративного нарушения, застойной сердечной недостаточности, инсульта, стеноза аортального клапана, почечной недостаточности, аллергии, фиброза, атеросклероза, метаболического заболевания, сердечно-сосудистого заболевания, осложнения, связанного с применением химиотерапии/лучевой терапии, заболевания печени, нарушения работы желудочно-кишечного тракта, офтальмологического заболевания, диабетической ретинопатии, легочного заболевания и проказы.

Следовательно, определенное выше противовоспалительное соединение (C), в частности, противовоспалительное соединение (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), и определенная выше фармацевтическая композиция могут использоваться при производстве лекарственного препарата, применяемого для лечения, профилактики или противодействия расстройству или заболеванию, ассоциированного с экспрессией цитокинов, включая определенные выше воспалительные заболевания и определенные выше связанные с воспалением заболевания.

Настоящее изобретение относится к определенному выше противовоспалительному соединению (C), в частности, к противовоспалительному соединению (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), которое применяют при лечении заболевания, опосредованного, по меньшей мере, одним цитокином.

По меньшей мере, один цитокин предпочтительно выбирать из группы, состоящей из подробно описанных выше провоспалительных цитокинов, противовоспалительных цитокинов и хемокинов, предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один цитокин выбирали из группы, состоящей из IL-8, Gro-α, MIP-1, MCP-1, ENA-78 и RANTES, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL- 9, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, TNF-α, LT, LIF, онкостатина, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-11, W-13 и TGF-β, более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один цитокин выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, TNF-β, IL-17, IL-23 и IFN-γ, еще более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один из указанных цитокинов выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-1β и IFN-γ.

Для специалистов в области медицины хорошо известно, что величина точной дозы и частота введения зависят от используемого указанного в изобретении конкретного противовоспалительного соединения (C), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы тела, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого лекарственного препарата, который пациент может принимать. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество может быть уменьшено или увеличено в зависимости от ответа подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки лечащего врача, прописавшего применение соединений по настоящему изобретению.

Как было указано выше, подробно описанное выше противовоспалительное соединение (C) по настоящему изобретению может воздействовать на воспалительные механизмы у животных.

В случае введения животным, определенное выше противовоспалительное соединение (C), в частности, противовоспалительное соединение (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), и определенная выше фармацевтическая композиция, включающая, по меньшей мере, одно из указанных противовоспалительных соединений (C) в качестве активного ингредиента, могут быть добавлены в корм или питьевую воду для животного, могут быть введены путем обрызгивания в качестве пробиотика самке, кормящей молоком детенышей, могут быть введены в форме болюса с замедленным высвобождением или в форме камня для лизания.

Эффективное количество определенного выше противовоспалительного соединения (C), в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из определенных выше (I) - (III), которое специфически подавляет или тормозит экспрессию, по меньшей мере, одного подробно описанного выше цитокина, для лечения животных составляет, предпочтительно, по меньшей мере, 1 ppm, предпочтительно, по меньшей мере, 2 ppm, более предпочтительно, по меньшей мере, 3 ppm, в расчете на суммарную массу корма для животного. С другой стороны, эффективное количество определенного выше противовоспалительного соединения (C), в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из определенных выше (I) - (III), композиции (C) составляет, предпочтительно, менее чем 130 ppm, предпочтительно, менее чем 70 ppm, более предпочтительно, менее чем 35 ppm, в расчете на суммарную массу корма для животного, где животное в этом случае представляет собой грызуна, в частности, мышь. Следует иметь в виду, что, применительно к целям настоящего изобретения, величина верхнего предела не является критически важной, и эффективное количество зависит от конкретного вида животного, подвергаемого лечению. Изобретение, кроме того, относится к корму для животного, включающему определенное выше противовоспалительное соединение (C), в частности, противовоспалительное соединение (C) любого из определенных выше классов (I) - (III), фармацевтическую композицию, включающую указанное противовоспалительное соединение (C) в качестве активного ингредиента.

СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ воспалительныХ заболеваниЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (C)

Настоящее изобретение относится к in vivo способу подавления или торможения ответных воспалительных реакций путем применения, по меньшей мере, одного определенного выше противовоспалительного соединения (C), в частности, противовоспалительного соединения (C) любого из классов (I) - (III), определенных выше и определенных в любом одном из представленных в изобретении вариантов осуществления.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу подавления или торможения экспрессии, по меньшей мере, одного цитокина, у млекопитающего, где указанный способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, количества противовоспалительного соединения (C), определенного выше и определенного в любом одном из представленных в изобретении вариантах осуществления, достаточного для торможения или подавления экспрессии, по меньшей мере, одного цитокина, где цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-8, Gro-α, MIP-1, MCP-1, ENA-78 и RANTES, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-9, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23,TNF-α, LT, LIF, онкостатина, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-4, IL-10, IL-11, W-13 and TGF-β, более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один цитокин выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, TNF-β, IL-17, IL-23 и IFN-γ, еще более предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, один из указанных цитокинов выбирали из группы, состоящей из IL-8, IL-1β и IFN-γ.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения связанных с воспалением заболеваний, ассоциированных с уровнями экспрессии цитокинов у млекопитающих, где указанный способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, количества противовоспалительного соединения (C), определенного выше и определенного в любом одном из представленных в изобретении вариантах осуществления, эффективного для лечения указанного связанного с воспалением заболевания.

Приведенные далее примеры являются только иллюстрациями неограничивающих вариантов осуществления настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

МАТЕРИАЛЫ

а) Постановка эксперимента

Эксперименты проводили на экспериментальной модели на мышах с целью оценки влияния кормовых добавок с флавомицином® в качестве противовоспалительного соединения (C).

Для in vivo экспериментов был выбран штамм мышей BALB/c в связи с тем, что у этого штамма мышей более выражена патология желудка по сравнению с другими штаммами мышей. Мышей подразделяли на 4 группы по 8 животных в каждой. 4 группы имеют следующие характеристики:

1) инфицированная + стандартный рацион: сравнительный пример 1

Мышам группы "сравнительного примера 1" дважды инокулировали внутрижелудочно 108 жизнеспособных бактерий штамма Helicobacter Suis (H.suis) HS1 в течение 48 часов (в день 8 и день 9). В день 17, мышам представляли неограниченный доступ к контрольному рациону (стандартному рациону без флавомицина®). Через 73 дня, мышей умерщвляли путем смещения шейных позвонков при глубокой анестезии с помощью изофлурана. Брали полоску желудочной ткани для выполнения описанных ниже экспериментальных процедур.

2) инфицированная + рацион с добавлением флавомицина® (количество флавомицина® <100 ppm в расчете на суммарное количество предоставляемого рациона): пример 1

Мышам группы "примера 1" дважды инокулировали внутрижелудочно 108 жизнеспособных бактерий штамма Helicobacter Suis (H.suis) HS1 в течение 48 часов (в день 8 и день 9). В день 17, мышам представляли неограниченный доступ к рациону с добавкой флавомицина® (количество флавомицина® <100 ppm в расчете на суммарное количество предоставляемого рациона). Через 73 дня, мышей умерщвляли путем смещения шейных позвонков при глубокой анестезии с помощью изофлурана. Брали полоску желудочной ткани для выполнения описанных ниже экспериментальных процедур.

3) неинфицированная + стандартный рацион: сравнительный пример 2

Мышей группы "сравнительного примера 2" не подвергали внутрижелудочной инокуляции, и им представляли неограниченный доступ к контрольному корму, стандартному рациону без флавомицина®. Через 73 дня, мышей умерщвляли путем смещения шейных позвонков при глубокой анестезии с помощью изофлурана. Брали полоску желудочной ткани для выполнения описанных ниже экспериментальных процедур.

4) неинфицированная + рацион с добавлением флавомицина® (количество флавомицина® <100 ppm в расчете на суммарное количество предоставляемого корма): пример 2

Мышей группы "примера 2" не подвергали внутрижелудочной инокуляции, и им представляли неограниченный доступ к рациону с добавлением флавомицина® (количество флавомицина® <100 ppm в расчете на суммарное количество предоставляемого рациона). Через 73 дня, мышей умерщвляли путем смещения шейных позвонков при глубокой анестезии с помощью изофлурана. Брали полоску желудочной ткани для выполнения описанных ниже экспериментальных процедур.

b) Верификация постановки эксперимента - количественное определение H. suis

Наличие инфекции H.suis определяли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR). Эксперименты проводили так, как это подробно описано ниже. В таблице 1 показано, что группы "сравнительного примера 1" и "примера 1" инфицированы бактериями H.suis. Группы "сравнительного примера 2" и "примера 2" не инфицированы, как показано в таблице 1, поскольку у этих животных бактерии H.suis не были обнаружены.

Таблица 1. Определение наличия инфекции H.suis методом qRT-PCR, выраженного в логарифмических соотношениях H. Suis на мг ткани (абсолютное количественное определение нуклеиновой кислоты (количество бактериальной ДНК) на данное количество образца (мг ткани).

ПРИМЕР	Log H.suis/мг ткани
Сравнительный пример 1	7,880
Пример 1	36,900
Сравнительный пример 2	0
Пример 2	0

МЕТОДЫ

Анализ методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR)

1) Количественное определение H.suis

Количественное определение образования колоний H. suis в желудке проводили в соответствии с публикациями Blaecher C. et al. (2013) и

J.L. et al. (2004). Присутствие ДНК H.suis в экстрактах определяли с использованием специфичного для H. suis метода qRT-PCR с абсолютной количественной оценкой, основанной на гене ureA (Blaecher C. et al. (2013)). Сначала генерировали стандарт путем амплификации части кластера генов ureAB (1236 п.о.) из штамма H.suis HS5 с использованием праймеров U430F и U1735R (

J.L. et al. (2004)). Вкратце, реакции амплификации PCR включали 1 × реакционный буфер [67 мМ Tris/HCl, 16 мМ (NH₄)₂SO₄, 0,45% Triton Х-100, 0,2% желатин], одну единицу ДНК-полимеразы Taq (Biotech International), 200 мкМ каждого дезоксинуклеотидтрифосфата, 2 мМ MgCl₂, 10 пмоль каждого олигонуклеотидного праймера и 1 мкл разведенной ДНК (обычно разведение исходного образца в соотношении 1:10, содержащее приблизительно 20-100 нг/мкл) в конечном объеме 50 мкл. Условиями циклирования были начальная денатурация при 94°С в течение 3 минут, затем 35 циклов при 94°С в течение 10 секунд, 52°С в течение 30 секунд и 72°С в течение 1,5 минут с последующей конечной стадией элонгации при 72°С в течение 5 минут. Все реакции проводили с использованием термоциклера Perkin Elmer PE2400. Продукты PCR разделяли на мини-гелях с агарозой в буфере TAE (40 мМ Tris/ацетат, 1 мМ ЭДТА) и фотографировали при УФ-трансиллюминации после окрашивания бромидом этидия. Продукты PCR очищали перед секвенированием с помощью системы очистки Wizard PCR Preps DNA Purification System (Promega) или фильтров Centricon-100 (Amicon). Затем амплифицированную ДНК непосредственно секвенировали с использованием набора для секвенирования циклов ABI PRISM Ready Reaction DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit (PE Applied Biosystems) и системы GeneAmp® PCR System 2400 (Perkin Elmer) в соответствии с протоколами фирм-производителей. Продукты секвенирования разделяли на секвенаторах model 377 DNA Sequencer и анализировали с использованием программ, содержащихся в прилагаемом пакете (PE Applied Biosystems). Во всех случаях, обе цепи ДНК секвенировали с помощью непрерывных перекрытий. После получения стандарта, были сделаны 10-кратные разведения, начиная с 108 ампликонов PCR, для каждого 9 мкл реакционной смеси. Один микролитр экстрагированной ДНК-матрицы добавляли к 9 мкл реакционной смеси, состоящей из 0,25 мкл обоих праймеров, расположенных внутри фрагмента 1236 п.о. (для получения продукта PCR 150 п.о.), 3,5 мкл воды хроматографической чистоты и 5 мкл SensiMix™ SYBR No-ROX (Bioline Reagents Ltd, London, UK). Смысловой праймер представлял собой BF_HsuisF1: 5'-AAA ACA MAG GCG ATC GCC CTG TA-3'. Антисмысловой праймер представлял собой BF_Hsuis R1: 5'-TTT CTT CGC CAG GTT CAA AGC G-3'. Температура отжига составила 62°С. Оба стандарта и образцы были подвергнуты двум параллельным анализам на системе CFX96™ RT-PCR System с термоциклером C1000 Thermal Cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Результаты выражены в единицах абсолютного количества нуклеиновой кислоты (количества бактериальной ДНК) на данное количество образца (мг ткани).

2). Уровни экспрессии цитокинов

Оценку уровней экспрессии цитокинов проводили методом qRT-PCR в соответствии с публикациями Flahou B. et al. (2012) и Liu C. et al. (2016). РНК экстрагировали с использованием набора RNeasy Mini Kit® (Qiagen, Hilden, Germany) в соответствии с инструкциями фирмы-производителя. Полученные концентрации РНК измеряли с использованием спектрофотометра NanoDrop® (Isogen Life Science, Utrecht, The Netherlands)), после чего концентрацию всех образцов, взятых у всех мышей, принадлежащих к 4 группам, определенным выше в разделе постановка эксперимента, доводили до 1 мкг/мкл, затем синтезировали кДНК с использованием набора iScript™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad, California, USA). Затем проводили анализ экспрессии для генов, кодирующих факторы хозяина, вовлеченные в воспаление. Конститутивные гены PPIa, H2afz и HPRT были включены в качестве эталонных генов. Все используемые последовательности праймеров приведены в таблице 2. Уровни экспрессии мРНК эталонного и целевого генов определяли количественно с использованием метода полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (RT-PCR), описанного ранее (Flahou B. et al. (2012)). Использовали контролируемые без применения матрицы реакционные смеси, и все указанные образцы подвергали двум параллельным анализам. Значения порогового цикла (Ct) сначала нормализовали по среднему геометрическому значению Ct из эталонных генов. Кратность изменений рассчитывали методом ΔΔCT (72) по средним значениям Ct у мышей с отрицательным результатом на присутствие H. suis. И наконец, для каждого целевого гена, выражали результаты в виде кратности изменений уровней экспрессии мРНК у мышей, положительных по H.suis, относительно уровней экспрессии мРНК у мышей, отрицательных по H.suis. Результаты приведены в таблицах 3 и 4 ниже.

Таблица 2. Последовательности праймеров, использованных в методе qRT-PCR

Последовательность (5'-3')	Праймер
CTGACCTAGAGAAGACACAT	IFN-γ - прямой
GGTCAGTGAAGTAAAGGTAC	IFN-γ - обратный
CACCTCACAAGCAGAGCACAAG	IL-1β - прямой
GCATTAGAAACAGTCCAGCCCATAC	IL-1β - обратный
TGCCTGAAGACCCTGCCAAGG	IL-8MIP - прямой
GTTAGCCTTGCCTTTGTTCAG	IL8MIP - обратный
	Конститутивные гены
GGTATCACCCCTCGTCACTT	H2afz - прямой
TCAGCGATTTGTGGATGTGT	H2afz - обратный
CAGGCCAGACTTTGTTGGAT	HPRT - прямой
TTGCGCTCATCTTAGGCTTT	HPRT - обратный
AGCATACAGGTCCTGGCATC	PPIa - прямой
TTCACCTTCCCAAAGACCAC	PPIa- обратный

Иммуногистохимические исследования - определение иммуногистохимии Т-клеток, В-клеток, париетальных клеток, некротических клеток и инфильтрации макрофагов

Иммуногистохимические исследования проводили в соответствии с публикацией Flahou B. et al. (2010). Изготавливали следующие друг за другом гистологические срезы толщиной 5 мкм из залитых в парафин тканей. После регидратации и депарафинизации, проводили индуцированное нагреванием демаскирование антигена в цитратном буфере (рН 6,0) с использованием микроволновой печи. Микроскопические препараты инкубировали с 3% H₂O₂ в метаноле (5 минут) и 30% козьей сывороткой (30 минут) для блокирования активности эндогенной пероксидазы и неспецифических реакций, соответственно. Дифференцирование между Т- и В-лимфоцитами проводили путем окрашивания антигенов CD3 и CD20. Антигены CD3 обнаруживали с использованием поликлонального кроличьего антитела против CD3 (1/100; DakoCytomation). Антигены CD20 обнаруживали с использованием поликлонального кроличьего антитела против CD20 (1/100; Thermo Scientific, Fremont, USA), соответственно. За инкубацией с первичными антителами против CD3 и CD20, следовала инкубация с биотинилированным козьим анти-кроличьим антителом IgG (1/500; DakoCytomation). После промывания, срезы инкубировали с комплексом стрептавидин-биотин-HRP (DakoCytomation) и окрашивали с помощью тетрагидрохлорида диаминобензидина (DAB) и H₂O₂. Для выделения зрелых макрофагов использовали первичное антитело против маркера клеточной поверхности F4/80 (1/50; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, USA). Обнаружение проводили с использованием системы окрашивания ABC для крыс (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Апоптозные клетки идентифицировали путем иммуногистохимического окрашивания с использованием кроличьего поликлонального антитела против активной каспазы-3 и анти-кроличьего набора для окрашивания клеток и тканей HRP-AEC (R & D Systems, Minneapolis, USA). Париетальные клетки идентифицировали путем иммуногистохимического окрашивания для водородно-калиевой аденозинтрифосфатазы с использованием мышиного моноклонального антитела (1/200; Abcam Ltd, Кембридж, Великобритания) и биотинилированного козьего антимышиного IgG-антитела (1/200; DakoCytomation). Апоптозные клетки идентифицировали путем иммуногистохимического окрашивания с использованием кроличьего поликлонального антитела против активной каспазы-3 и анти-кроличьего набора для окрашивания клеток и тканей HRP-AEC (R & D Systems, Minneapolis, USA). Париетальные клетки идентифицировали путем иммуногистохимического окрашивания для водородно-калиевой аденозинтрифосфатазы с использованием мышиного моноклонального антитела (1/200; Abcam Ltd, Cambridge, UK) и биотинилированного козьего анти-мышиного IgG-антитела (1/200; DakoCytomation). И наконец, подсчитывали положительные клетки в пяти случайно выбранных полях зрения микроскопа под большим увеличением (увеличение: х400). Затем для каждой мыши определяли среднее число положительных клеток. Все результаты представлены в таблицах 5, 6, 7 и 8.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Эксперимент 1

Измерение уровней экспрессии цитокинов у H.suis инфицированных животных путем использования подробно описанного выше метода qRT-PCR.

Таблица 3. Результаты эксперимента по проведению исследования qRT-PCR для определения воздействия добавки флавомицина^и на уровни цитокинов у H.Suis инфицированных животных, выраженные в виде кратности изменения уровней экспрессии мРНК.

	Экспрессия (кратность изменения)
Цитокин	Сравнительный пример 1	Пример 1
IL - 1β	0,82	-1,38
IL-8MIP	2,65	1,60
IFN-γ	2,15	-3,88

В таблице 3 показано снижение уровней экспрессии IL-1β, IL-8MIP и IFN-γ у инфицированных животных, получавших рацион с добавкой флавомицина^® (пример 1) по сравнению с контрольной группой, получавшей стандартный рацион (сравнительный пример 1).

Эксперимент 2

Измерение уровней экспрессии цитокина в отсутствии инфекции H.suis путем использования подробно описанного выше метода qRT-PCR.

Таблица 4. Результаты эксперимента по проведению исследования qRT-PCR для определения воздействия добавки флавомицина® на уровни цитокинов у неинфицированных животных, выраженные в виде кратности изменения уровней экспрессии мРНК.

	Экспрессия (кратность изменения)
Цитокин	Сравнительные пример 2	Пример 2
IL - 1β	1,08	-1,42
IL-8MIP	2,47	2,34
IFN-γ	1,25	1,99

В таблице 4 показано снижение экспрессии IL-1β даже в отсутствии инфекции. Уровни экспрессии IL-8MIP остаются стабильными, при этом наблюдается небольшое повышение экспрессии IFN-γ.

Эксперимент 3

Оценка ответной воспалительной реакции у H.suis инфицированных животных путем проведения подробно описанных выше иммуногистохимических исследований.

Таблица 5. Результаты иммуногистохимических исследований по определению воздействия добавки флавомицина^® на число инфильтрирующих T-клеток, B-клеток и макрофагов у H.Suis инфицированных животных, выраженные в виде среднего числа подсчитанных положительных клеток.

Показатель воспаления	Сравнительный пример 1	Пример 1
T-клетки	60,28	21,38
B-клетки	3,08	0,48
Макрофаги	4,75	1,35

В таблице 5 показано сильное уменьшение числа инфильтрирующих T-клеток, B-клеток и макрофагов у мышей, инфицированных H. suis и подвергнутых лечению с помощью флавомицина^® (пример 1) по сравнению со сравнительным примером 1.

Эксперимент 4

Оценка ответной воспалительной реакции при отсутствии инфекции H.suis путем проведения подробно описанных выше иммуногистохимических исследований.

Таблица 6. Результаты иммуногистохимических исследований по определению воздействия добавки флавомицина^® на число инфильтрирующих T-клеток, B-клеток и макрофагов у неинфицированных животных, выраженные в виде среднего числа подсчитанных положительных клеток.

Показатель воспаления	Сравнительный пример 2	Пример 2
T-клетки	54,00	14,10
B-клетки	0,85	1,65
Макрофаги	1,15	0,18

В таблице 6 показан противовоспалительное действие флавомицина^® в группе неинфицированных мышей, получавших рацион с добавкой (пример 2), по сравнению со сравнительным примером 2. В частности, наблюдалось снижение числа T-клеток и макрофагов.

На основании полученных результатов экспериментов 3 и 4, показано, что флавомицин® обладает противовоспалительным действием вне зависимости от наличия инфицирования H.suis.

Эксперимент 5

Физиологическая оценка H.suis инфицированных животных путем проведения подробно описанных выше иммуногистохимических исследований.

Таблица 7. Результаты иммуногистохимических исследований по определению воздействия добавки флавомицина^® на число некротических и париетальных клеток у H.Suis инфицированных животных, выраженные в виде среднего числа подсчитанных положительных клеток.

Физиологический показатель	Сравнительный пример 1	Пример 1
Некротические клетки	0,95	0,50
Париетальные клетки	151,25	213,25

В таблице 7 показано снижение числа некротических клеток для группы инфицированных животных, получавших рацион с добавкой флавомицина^® (пример 1) по сравнению со сравнительным примером 1. Это указывает на то, что животные, получавшие рацион с добавкой флавомицина^®, испытывают в меньшей степени клеточный некроз, чем тот, который можно было бы объяснить за счет подавления ответных воспалительных реакций. Что касается числа париетальных клеток, то обнаруживается более высокое число клеток, измеренное в группе животных, получавшие рацион с добавкой флавомицина^®. Это можно объяснить тем фактом, что уменьшение воспаления в результате введения флавомицина^®, вызывает меньшее повреждение париетальных клеток желудка.

Эксперимент 6

Физиологическая оценка H.suis не инфицированных животных путем проведения подробно описанных выше иммуногистохимических исследований.

Таблица 8. Результаты иммуногистохимических исследований по определению воздействия добавки флавомицина^® на число некротических и париетальных клеток у неинфицированных животных, выраженные в виде среднего числа подсчитанных положительных клеток.

Физиологический показатель	Сравнительный пример 1	Пример 1
Некротические клетки	2,18	0,60
Париетальные клетки	214,63	211,38

В таблице 8 показано снижение числа некротических клеток, являющееся результатом уменьшения воспаления. Число париетальных клеток составляет приблизительно одну и ту же величину, как в примере 2, так и в сравнительном примере 2. Это указывает на то, что лечение с помощью флавомицина не оказывает негативного воздействия на число париетальных клеток.

Принимая во внимание все полученные результаты, можно сделать вывод о том, что введение флавомицина^® оказывает противовоспалительной действие, так как инфильтрация B-клеток, T-клеток и макрофагов, а также уровни IL-1β, IL-8MIP и IFN-γ понижались в группах животных, получавших рацион с добавкой флавомицина^®. Более того, показано, что противовоспалительное действие не зависит от наличия H. suis инфицирования.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> HuVePharma

<120> Функционализированные сахариды в качестве противовоспалительных

средств

<130> PAT2523104EP01

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> BF_HsuisF1 / SEQ ID NO: 1

aaaacamagg cgatcgccct gta 23

<210> 2

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> BF_HsuisR1 / SEQ ID NO: 2

tttcttcgcc aggttcaaag cg 22

<210> 3

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IFN-gamma - прямой / SEQ ID NO: 3

ctgacctaga gaagacacat 20

<210> 4

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IFN-gamma - обратный / SEQ ID NO: 4

ggtcagtgaa gtaaaggtac 20

<210> 5

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IL-1beta - прямой / SEQ ID NO: 5

cacctcacaa gcagagcaca ag 22

<210> 6

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IL-1beta - обратный / SEQ ID NO: 6

gcattagaaa cagtccagcc catac 25

<210> 7

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IL-8MIP - прямой / SEQ ID NO: 7

tgcctgaaga ccctgccaag g 21

<210> 8

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> IL-8MIP - обратный / SEQ ID NO: 8

gttagccttg cctttgttca g 21

<210> 9

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> H2AFZ - прямой / SEQ ID NO: 9

ggtatcaccc ctcgtcactt 20

<210> 10

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> H2AFZ - обратный / SEQ ID NO: 10

tcagcgattt gtggatgtgt 20

<210> 11

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> HPRT - прямой / SEQ ID NO: 11

caggccagac tttgttggat 20

<210> 12

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> HPRT - обратный / SEQ ID NO: 12

ttgcgctcat cttaggcttt 20

<210> 13

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> PPIA - прямой / SEQ ID NO: 13

agcatacagg tcctggcatc 20

<210> 14

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтезированный олигонуклеотид

<400> PPIA - обратный / SEQ ID NO: 14

ttcaccttcc caaagaccac 20

<---

Claims (13)

1. Применение соединения, обозначаемого далее как противовоспалительное соединение (C), в качестве противовоспалительного средства, которое воздействует на механизмы воспаления у млекопитающих, где указанное противовоспалительное соединение (C) представляет собой соединение, представленное формулой (Ib) или его фармацевтически приемлемой солью, фармацевтически приемлемым гидратом или их смесью:

Формула (Ib).

2. Применение противовоспалительного соединения (C) по п. 1, где указанное противовоспалительное соединение (C) воздействует на механизмы воспаления у не принадлежащих к человеческому роду млекопитающих, в частности не принадлежащее к человеческому роду млекопитающее представляет собой свинью; жвачное животное, такое как, в частности, крупный рогатый скот, лошади; верблюда; овцу; козу; кошку; собаку; или грызуна, такого как, в частности, мышь, кролик или крыса; предпочтительно свинью.

3. Применение противовоспалительного соединения (C) по любому одному из пп. 1 или 2, где указанное противовоспалительное соединение (C) воздействует на экспрессию по меньшей мере одного цитокина путем подавления или торможения экспрессии по меньшей мере одного цитокина, где указанный цитокин выбирают из группы, состоящей из провоспалительных цитокинов, в частности IL–1α, IL–1β, IL–2, IL–3, IL–6, IL–7, IL–9, IL–12, IL–17, IL–18, IL–23, TNF–α, LT, LIF, онкостатина и IFN–α, IFN–β, IFN–γ или их смесей; из противовоспалительных цитокинов, в частности IL–4, IL–10, IL–11, W–13, TGF–β или их смесей; и из хемокинов, в частности IL–8, Gro–α, MIP–1, MCP–1, ENA–78, RANTES или их смесей.

4. Применение противовоспалительного соединения (C) по любому одному из пп. 1–3 при лечении воспалительных заболеваний или связанных с воспалением заболеваний, где указанные воспалительные заболевания или связанные с воспалением заболевания опосредуются по меньшей мере одним цитокином, определенным в п. 3.

5. Применение противовоспалительного соединения (C) по п. 4, где воспалительное заболевание выбирают из группы, состоящей из артрита, ревматоидного артрита, воспалительного заболевания кишечника, псориаза, множественного склероза, системной эритематозной волчанки (SLE), панкреатита, склеродермии, диабета типа I, воспалительного заболевания желудочно–кишечного тракта, аллергического конъюнктивита, гломерулонефрита, синдрома Шегрена, увеита, дерматита, анкилозирующего спондилоартрита и фибромиалгии.

6. Применение противовоспалительного соединения (C) по п. 5, где воспалительное заболевание выбирают из группы, состоящей из воспалительных заболеваний желудочно–кишечного тракта, таких как острый гастрит, хронический гастрит, развитие и рецидив язвы желудка, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженного кишечника и язвенный колит.

7. Применение противовоспалительного соединения (C) по п. 4, где связанное с воспалением заболевание выбирают из группы, состоящей из нейродегенеративного нарушения, застойной сердечной недостаточности, инсульта, стеноза аортального клапана, почечной недостаточности, аллергии, фиброза, атеросклероза, метаболического заболевания, сердечно–сосудистого заболевания, осложнения, связанного с применением химиотерапии/лучевой терапии, заболевания печени, нарушения работы желудочно–кишечного тракта, офтальмологического заболевания, диабетической ретинопатии, легочного заболевания и проказы.

8. Применение фармацевтической композиции в качестве противовоспалительного средства, где фармацевтическая композиция включает терапевтически эффективное количество противовоспалительного соединения (C), определенного по п. 1, и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Применение фармацевтической композиции по п. 8, где указанная фармацевтическая композиция находится в виде лекарственной формы с разовой дозой, подходящей для перорального, ректального, чрескожного или парентерального введения, в частности в форме таблеток, капсул, пилюль, суппозиториев, пакетиков с порошком, капсул–имплантатов, инъецируемых растворов или суспензий и в других подобных формах, и их разделенных кратных количествах.

10. In vivo способ подавления или торможения ответных воспалительных реакций путем применения противовоспалительного соединения (C), определенного по п. 1.

11. Способ подавления или торможения экспрессии по меньшей мере одного цитокина у млекопитающего, где указанный способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, количества противовоспалительного соединения (C), определенного по п. 1, достаточного для торможения или подавления по меньшей мере одного цитокина, где указанный цитокин выбирают из группы, состоящей из IL–8, Gro–α, MIP–1, MCP–1, ENA–78 и RANTES, IL–1α, IL–1β, IL–2, IL–3, IL–6, IL–7, IL–9, IL–12, IL–17, IL–18, IL–23, TNF–α, LT, LIF, онкостатина, IFN–α, IFN–β, IFN–γ, IL–4, IL–10, IL–11, W–13 и TGF–β, или чтобы по меньшей мере один цитокин выбирали из группы, состоящей из IL–8, IL–4, IL–6, IL–10, TNF–α, TNF–β, IL–17, IL–23 и IFN–γ, или чтобы по меньшей мере один из указанных цитокинов выбирали из группы, состоящей из IL–8, IL–1β и IFN–γ.