RU2747399C2

RU2747399C2 - Соли производного индазола и их кристаллы

Info

Publication number: RU2747399C2
Application number: RU2019112080A
Authority: RU
Inventors: Кейко ОНУМА
Original assignee: Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд.
Priority date: 2016-11-28
Filing date: 2017-11-27
Publication date: 2021-05-04
Also published as: SG11201903795WA; JP2018108981A; WO2018097273A1; AU2017363699A1; EP3544967A4; CA3041986A1; JP6346368B1; CN109790141A; RU2019112080A; EP3544967B1; CN109790141B; BR112019008489A2; ES2954879T3; RU2019112080A3; MX2019004967A; KR102425785B1; KR20190084941A; US20190144419A1; IL266003A; EP3544967A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к солям (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, и кислоты, выбранной из группы, состоящей из бромистоводородной кислоты, малеиновой кислоты и миндальной кислоты, а также к кристаллам указанных солей. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, обладающей ERα ингибирующей активностью, на основе указанных солей или их кристаллов. Технический результат – получены новые соединения, их кристаллы и фармацевтическая композиция на их основе, которые могут найти применение в медицине для лечения рака молочной железы. 22 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 пр., 22 ил.

Description

[Область техники]

[0001]

Настоящее изобретение относится к солям производного индазола и их кристаллам.

[Уровень техники]

[0002]

На сегодняшний день рак молочной железы является наиболее часто диагностируемым видом злокачественной опухоли среди женщин: каждый год диагностируется почти 200000/1,7 миллиона новых случаев в США/по всему миру, соответственно. Поскольку около 70% опухолей молочной железы являются положительными по эстрогеновому рецептору альфа (ERα) - ключевому онкогену в данной разновидности опухолей - было разработано несколько классов терапии для антагонизма функции ERα, включающих применение: 1) селективных супрессоров эстрогенового рецептора (SERD), из которых примером является фулвестрант, 2) селективных модуляторов эстрогенового рецептора (SERM), из которых примером является тамоксифен, и 3) ингибиторов ароматазы, которые уменьшают системные уровни эстрогена. Такие виды терапии были в значительной степени эффективны в клинической практике, обеспечивая уменьшение возникновения и прогрессирования опухолей молочной железы с ERα+. Однако существуют препятствия, связанные с воздействием на мишени, ассоциированные с этими различными классами соединений. Например, было показано, что тамоксифен активирует сигнальную активность в эндометрии, что приводит к увеличению риска возникновения форм рака эндометрия в клинической практике (Fisher et al., (1994) J. Natl. Cancer Inst. Apr 6; 86 (7): 527-37; van Leeuwen et al., (1994) Lancet Feb 19; 343 (8895): 448-52). И наоборот, поскольку фулвестрант является чистым антагонистом, его применение может привести к потере плотности костной ткани у женщин в период постменопаузы, так как активность ERα является крайне важной для укрепления костей. В дополнение к побочным эффектам, связанным с воздействием на мишени, также начинает проявляться клиническая устойчивость к этим классам антагонистов ERα, что подчеркивает необходимость в разработке соединений следующего поколения.

[0003]

Несколько механизмов устойчивости были идентифицированы с использованием моделей устойчивости in vitro и in vivo в отношении различных видов эндокринной терапии. Таковые включают увеличенное "взаимовлияние" ERα /HER2 (Shou et al., (2004) J. Natl. Cancer Inst. Jun 16; 96 (12): 926-35), аберрантную экспрессию коактиваторов/корепрессоров ERα (Osborne et al., (2003) J. Natl. Cancer Inst. Mar 5; 95(5): 353-61) или потерю ERα в целом для обеспечения независимого от ER роста (Osborne CK, Schiff R (2011) Annu. Rev. Med. 62: 233-47).

[0004]

Недавно в надежде выявления клинически важных механизмов устойчивости большие усилия также были направлены на углубленное определение характеристик генетики устойчивых к эндокринной терапии метастазов, выделенных у пациентов. Несколько независимых лабораторий недавно опубликовали большое количество генетических повреждений, наблюдаемых в устойчивых опухолях по сравнению с первичными (Li et al., (2013) Cell Rep. Sep 26; 4(6): 1116-30; Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51; Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45(12):1439-45). Среди таковых существуют в высокой степени повторяющиеся мутации в лигандсвязывающем домене ESR1 (ген, который кодирует белок ERα), при этом обнаружено, что ними значительно обогащены около 20% устойчивых опухолей относительно опухолей, не подвергавшихся эндокринной терапии (Jeselsohn et al., (2014) Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67; Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45 (12): 1439-45; Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51; Merenbakh-Lamin et al., (2013) Cancer Res. Dec 1; 73 (23): 6856-64; Yu et al., (2014) Science Jul 11; 345 (6193): 216-20; Segal and Dowsett (2014), Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1724-6), что свидетельствует о способности этих мутаций функционально обуславливать клиническую устойчивость. В отличие от обогащения ESR1 мутациями, наблюдаемого в резистентных к терапии опухолях, мутации в других генах, связанных с раком, не продемонстрировали такого усиленного обогащения, что в значительной степени свидетельствует о важности мутаций ERα в повышении устойчивости (Jeselsohn et al., (2014) Clin. Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67).

[0005]

Пациентов с раком молочной железы с ER+ в среднем подвергают лечению с помощью семи независимых видов терапии, включающих виды химиотерапии и различные виды антиэстрогенной терапии, такие как с помощью тамоксифена, фулвестранта и ингибиторов ароматазы. При недавно проведенном геномном профилировании было выявлено, что сигнальный путь ERα остается крайне важным стимулятором роста опухоли в условиях устойчивости, поскольку были обнаружены активирующие мутации в ERα. Таким образом, крайне важной является разработка более эффективных видов терапии, направленных на ER, которые способны обеспечить преодоление устойчивости в клинических условиях. Следовательно, существует необходимость в новых соединениях, которые способны эффективно обеспечить подавление роста опухолей как дикого типа (WT), так и мутантных по ERα положительных опухолей.

[Краткое описание изобретения]

[Техническая задача]

[0006]

Соединение, представленное формулой I, а именно, (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамид (называемое далее в данном документе как соединение (I)), обеспечивает подавление роста опухолей как дикого типа (WT), так и мутантных по ERα положительных опухолей.

[Хим. 1]

Как правило, физические свойства соединения, его солей и их кристаллов, применяемых в качестве фармацевтического препарата, оказывают большое влияние на биодоступность лекарственного средства, чистоту активного фармацевтического ингредиента, назначение препарата и т.п. Следовательно, целью настоящего изобретения является предоставление солей соединения (I) или их кристаллов с потенциалом в применении в качестве лекарственного вещества в фармацевтических препаратах.

[Решение задачи]

[0007]

Автор настоящего изобретения обнаружил соли соединения (I) или их кристаллы с потенциалом в применении в качестве лекарственного вещества в фармацевтических препаратах, завершая тем самым настоящее изобретение.

[0008]

В частности, настоящее изобретение предусматривает следующие пункты <1> - <38>.

<1> Соль (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленная формулой I, и кислоты, выбранной из группы, состоящей из бромистоводородной кислоты, малеиновой кислоты, миндальной кислоты и бензолсульфоновой кислоты.

[Хим. 2]

<2> Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 6,1°, 11,8°, 16,8°, 18,1° и 19,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 3]

<3> Кристалл согласно пункту <2> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,1°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<4> Кристалл согласно пункту <2> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 6,1°, 11,8° и 18,1°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<5> Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 164,3 ppm, 162,2 ppm и 111,9 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 4]

<6> Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 1.

[Хим. 5]

<7> Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 7.

[Хим. 6]

<8> Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 6,2°, 11,7°, 18,7°, 20,4° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 7]

<9> Кристалл согласно пункту <8> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,7°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<10> Кристалл согласно пункту <8> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 6,2°, 18,7° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<11> Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 164,5 ppm, 162,2 ppm и 111,7 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 8]

<12> Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 2.

[Хим. 9]

<13> Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 8.

[Хим. 10]

<14> Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 16,7°, 17,9°, 21,2°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 11]

<15> Кристалл согласно пункту <14> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 24,9°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<16> Кристалл согласно пункту <14> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 17,9°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<17> Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 169,6 ppm, 107,3 ppm и 50,3 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 12]

<18> Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 3.

[Хим. 13]

<19> Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 9.

[Хим. 14]

<20> Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 14,8°, 20,2°, 22,3° и 26,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 15]

<21> Кристалл согласно пункту <20> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 22,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<22> Кристалл согласно пункту <20> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 14,8°, 20,2° и 22,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<23> Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 171,4 ppm, 108,6 ppm, и 48,8 ppm в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 16]

<24> Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 4.

[Хим. 17]

<25> Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 10.

[Хим. 18]

<26> Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 5,1°, 8,8°, 10,3°, 16,9° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 19]

<27> Кристалл согласно пункту <26> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<28> Кристалл согласно пункту <26> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 5,1°, 10,3° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<29> Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 165,9 ppm, 160,7 ppm и 110,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 20]

<30> Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 5.

[Хим. 21]

<31> Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 11.

[Хим. 22]

<32> Кристалл бензолсульфонатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием одного или нескольких дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 5,2°, 9,5°, 10,5°, 21,4° и 24,4°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

[Хим. 23]

<33> Кристалл согласно пункту <32> выше, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 9,5°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<34> Кристалл согласно пункту <32> выше, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 5,2°, 9,5° и 10,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

<35> Кристалл бензолсульфонатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 163,0 ppm, 147,2 ppm и 145,0 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[Хим. 24]

<36> Кристалл бензолсульфонатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 6.

[Хим. 25]

<37> Кристалл бензолсульфонатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием практически такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 12.

[Хим. 26]

<38> Фармацевтическая композиция, содержащая соль или ее кристалл согласно любому из пунктов <1> - <37> выше.

[Предпочтительные эффекты настоящего изобретения]

[0009]

Соли соединения (I) и их кристаллы, предусмотренные настоящим изобретением, характеризуются такими свойствами, как гигроскопичность, как показано в нижеописанных примерах, и потенциал в применении в качестве лекарственного вещества в фармацевтических препаратах.

[Краткое описание графических материалов]

[0010]

[Фиг. 1]

На фигуре 1 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла хлористоводородной соли соединения (I), полученного в примере 1. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 2]

На фигуре 2 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла бромистоводородной соли соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 3]

На фигуре 3 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы A малеатной соли соединения (I), полученной в примере 3. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 4]

На фигуре 4 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы B малеатной соли соединения (I), полученной в примере 4. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 5]

На фигуре 5 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла соли L-миндальной кислоты соединения (I), полученного в примере 5. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 6]

На фигуре 6 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла бензолсульфонатной соли соединения (I), полученного в примере 6. По оси абсцисс показан угол дифракции (2θ), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 7]

На фигуре 7 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристалла хлористоводородной соли соединения (I), полученного в примере 1. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 8]

На фигуре 8 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристалла бромистоводородной соли соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 9]

На фигуре 9 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристаллической формы A малеатной соли соединения (I), полученной в примере 3. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 10]

На фигуре 10 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристаллической формы B малеатной соли соединения (I), полученной в примере 4. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 11]

На фигуре 11 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристалла соли L-миндальной кислоты соединения (I), полученного в примере 5. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 12]

На фигуре 12 показан спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристалла бензолсульфонатной соли соединения (I), полученного в примере 6. По оси абсцисс показан химический сдвиг (ppm), и по оси ординат показана интенсивность пика.

[Фиг. 13]

На фигуре 13 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла хлористоводородной соли соединения (I), полученного в примере 1. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 14]

На фигуре 14 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла бромистоводородной соли соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 15]

На фигуре 15 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристаллической формы A малеатной соли соединения (I), полученной в примере 3. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 16]

На фигуре 16 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристаллической формы B малеатной соли соединения (I), полученной в примере 4. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 17]

На фигуре 17 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла соли L-миндальной кислоты соединения (I), полученного в примере 5. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 18]

На фигуре 18 представлен график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла бензолсульфонатной соли соединения (I), полученного в примере 6. По оси абсцисс показана относительная влажность, и по оси ординат показано изменение веса.

[Фиг. 19]

На фигуре 19 показаны эффекты пролиферации in vitro линий MCF7 дикого типа и несущих мутантные ER в отношении видов клинической терапии с помощью 4-гидрокситамоксифена (4-OHT), ралоксифена и фулвестранта, где у несущих мутацию линий по сравнению с контрольными линиями наблюдается фенотипическая устойчивость к существующим клиническим соединениям, тем самым клетки MCF7, сконструированные для сверхэкспрессии различных ERα^MUT, продемонстрировали частичную устойчивость к различным видам эндокринной терапии.

[Фиг. 20]

На фигуре 20 представлен график, демонстрирующий противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) для перорального применения у самок безтимусных мышей Balb/c, несущих ксенотрансплантат MCF7.

[Фиг. 21]

На фигуре 21 представлен график, демонстрирующий противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) для перорального применения у самок безтимусных мышей (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu), несущих ксенотрансплантат PDX-Y537S.

[Фиг. 22]

На фигуре 22 представлен график, демонстрирующий противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) у ER+ модели WHIM20 PDX, несущей гомозиготную мутацию Y537S.

[Описание вариантов осуществления]

[0011]

Будет подробно описана соль соединения (I) по настоящему изобретению, ее кристалл и способы их получения.

[0012]

Как используется в данном документе, "соль" относится к химической структурной единице, состоящей из соединения (I) в качестве основного компонента и конкретного числа эквивалентов кислоты по отношению к соединению (I). В данном документе термин "соль (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, и кислоты, выбранной из группы, состоящей из бромистоводородной кислоты, малеиновой кислоты, миндальной кислоты и бензолсульфоновой кислоты" используется в том же значении, что и "соль (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, образованного с помощью кислоты, выбранной из группы, состоящей из бромистоводородной кислоты, малеиновой кислоты, миндальной кислоты и бензолсульфоновой кислоты".

[0013]

Примеры "соли", используемой в данном документе, включают соли органических карбоновых кислот с органическими сульфоновыми кислотами и с неорганическими кислотами, и при этом, в частности, предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли.

[0014]

Примеры органических карбоновых кислот включают уксусную кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, миндальную кислоту, винную кислоту, фумаровую кислоту, лимонную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту и яблочную кислоту. Предпочтительные примеры органических карбоновых кислот включают малеиновую кислоту, миндальную кислоту (предпочтительно L-миндальную кислоту), винную кислоту и малоновую кислоту.

[0015]

Примеры органических сульфоновых кислот включают метансульфоновую кислоту, трифторметансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и камфорсульфоновую кислоту. Предпочтительные примеры органических сульфоновых кислот включают метансульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и п-толуолсульфоновую кислоту.

[0016]

Примеры неорганических кислот включают фтористоводородную кислоту, хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, йодистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фосфорную кислоту, угольную кислоту и двухосновную карбоновую кислоту. Предпочтительные примеры неорганических кислот включают хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту и фосфорную кислоту.

[0017]

Соль соединения (I) может также представлять собой сольват. Как используется в данном документе, сольват соли соединения (I) означает твердое вещество, образовавшееся из соли соединения (I) вместе с молекулами растворителя. Примеры растворителя в сольвате включают: кетонный растворитель, такой как ацетон, метилэтилкетон или циклогексанон; сложноэфирный растворитель, такой как этилацетат или метилацетат; эфирный растворитель, такой как 1,2-диметоксиэтан или метил-трет-бутиловый эфир; спиртовой растворитель, такой как метанол, этанол, 1-пропанол или изопропанол; полярный растворитель, такой как N-метил-2-пирролидон, N,N-диметилформамид или диметилсульфоксид; а также воду.

[0018]

Как используется в данном документе, "кристалл" относится к кристаллу соли соединения (I). Соответственно, кристалл хлористоводородной соли соединения (I), например, означает кристалл соли, образованной между соединением (I) и хлористоводородной кислотой.

[0019]

Примеры кристаллов, предпочтительных в данном документе, включают:

(a) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,1°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(b) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,1°, 11,8° и 18,1°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(c) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,1°, 11,8°, 16,8°, 18,1° и 19,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(d) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,1°, 11,8°, 14,9°, 16,8°, 18,1°, 19,1°, 19,5°, 21,7°, 25,9° и 27,4°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(e) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,7°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(f) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,2°, 18,7° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(g) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,2°, 11,7°, 18,7°, 20,4° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(h) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 6,2°, 11,7°, 12,5°, 16,5°, 17,6°, 18,7°, 20,4°, 21,4°, 22,5° и 27,1°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(i) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 24,9°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(j) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 17,9°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(k) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 16,7°, 17,9°, 21,2°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(l) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 4,9°, 9,8°, 16,1°, 16,7°, 17,9°, 19,4°, 21,2°, 22,9°, 24,9° и 30,4°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(m) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 22,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(n) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 14,8°, 20,2° и 22,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(o) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 14,8°, 20,2°, 22,3° и 26,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(p) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 14,8°, 15,8°, 17,1°, 17,5°, 20,2°, 20,9°, 22,3°, 24,6°, 26,5° и 28,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(q) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(r) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,1°, 10,3° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(s) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,1°, 8,8°, 10,3°, 16,9° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(t) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,1°, 8,8°, 10,3°, 13,8°, 16,9°, 18,3°, 19,2°, 21,2°, 22,8° и 24,6°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(u) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 9,5°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(v) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,2°, 9,5° и 10,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(w) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,2°, 9,5°, 10,5°, 21,4° и 24,4°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(x) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся одним или несколькими дифракционными пиками при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющими 5,2°, 9,5°, 10,5°, 12,1°, 15,4°, 17,4°, 20,3°, 21,4°, 23,1° и 24,4°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии;

(aa) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,3 ppm, 162,2 ppm и 111,9 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(bb) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,3 ppm, 162,2 ppm, 148,6 ppm, 138,9 ppm и 111,9 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(cc) кристалл хлористоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,3 ppm, 162,2 ppm, 148,6 ppm, 138,9 ppm, 136,8 ppm, 134,0 ppm, 111,9 ppm, 61,5 ppm, 38,4 ppm и 34,4 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(dd) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,5 ppm, 162,2 ppm и 111,7 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(ee) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,5 ppm, 162,2 ppm, 148,6 ppm, 139,3 ppm и 111,7 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(ff) кристалл бромистоводородной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 164,5 ppm, 162,2 ppm, 148,6 ppm, 139,3 ppm, 135,8 ppm, 134,0 ppm, 111,7 ppm, 60,9 ppm, 39,0 ppm и 34,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(gg) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 169,6 ppm, 107,3 ppm и 50,3 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(hh) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 169,6 ppm, 168,0 ppm, 107,3 ppm, 50,3 ppm и 46,9 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(ii) кристаллическую форму A малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 169,6 ppm, 168,0 ppm, 134,2 ppm, 117,1 ppm, 112,0 ppm, 107,3 ppm, 63,6 ppm, 50,3 ppm, 46,9 ppm и 36,1 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(jj) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 171,4 ppm, 108,6 ppm и 48,8 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(kk) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 171,4 ppm, 167,1 ppm, 108,6 ppm, 48,8 ppm и 44,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(ll) кристаллическую форму B малеатной соли соединения (I), характеризующуюся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 171,4 ppm, 167,1 ppm, 133,3 ppm, 117,8 ppm, 112,8 ppm, 108,6 ppm, 63,1 ppm, 48,8 ppm, 44,5 ppm и 38,3 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(mm) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 165,9 ppm, 160,7 ppm и 110,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(nn) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 176,8 ppm, 165,9 ppm, 160,7 ppm, 147,7 ppm и 110,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(oo) кристалл соли L-миндальной кислоты соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 176,8 ppm, 165,9 ppm, 160,7 ppm, 147,7 ppm, 141,2 ppm, 110,5 ppm, 76,3 ppm, 48,6 ppm, 37,2 ppm и 34,1 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(pp) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 163,0 ppm, 147,2 ppm и 145,0 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре;

(qq) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 163,0 ppm, 160,9 ppm, 147,2 ppm, 145,0 ppm и 109,3 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре; и

(rr) кристалл бензолсульфонатной соли соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющими 163,0 ppm, 160,9 ppm, 147,2 ppm, 145,0 ppm, 140,2 ppm, 133,4 ppm, 109,3 ppm, 47,1 ppm, 37,3 ppm и 34,8 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре.

[0020]

Вышеописанные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии, являются характерными для каждого из кристалла хлористоводородной соли соединения (I), кристалла бромистоводородной соли соединения (I), кристаллической формы A малеатной соли соединения (I), кристаллической формы B малеатной соли соединения (I), кристалла соли L-миндальной кислоты соединения (I) и кристалла бензолсульфонатной соли соединения (I).

[0021]

Как правило, анализ методом рентгеновской порошковой дифрактометрии может привести к возникновению погрешности в углах дифракции (2θ) в диапазоне ±0,2° и, таким образом, вышеописанные значения углов дифракции необходимо рассматривать как включающие значения в диапазоне приблизительно ±0,2°. Следовательно, в настоящее изобретение включены не только кристаллы с пиками при точно таких же углах дифракции полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии, но также и кристаллы с пиками в пределах диапазона погрешности углов дифракции, составляющего приблизительно ±0,2°. Следовательно, используемое в данном документе выражение "характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ ± 0,2°) 18,1°", например, означает "характеризующийся дифракционным пиком при угле дифракции (2θ), составляющем от 17,9° до 18,3°". То же применимо и к другим углам дифракции.

[0022]

Как правило, интенсивности пиков и средние значения ширины углов дифракции (2θ) при измерении с помощью порошковой рентгеновской дифракции отличаются при каждом измерении из-за различий в условиях измерения и разброса размера и формы каждой частицы порошка кристалла, и при этом не всегда стабильны, даже если формы кристаллов одинаковы. Следовательно, в случае сравнения порошковой рентгеновской дифрактограммы, если углы дифракции (2θ) являются одинаковыми, но интенсивности пиков, относительные интенсивности пиков и средние значения ширины отличаются, то эти отличия не подразумевают, что измеренные формы кристаллов отличаются друг от друга. Таким образом, кристалл соли, характеризующийся порошковой рентгеновской дифрактограммой, которая имеет вышеуказанные отличия относительно характерных дифракционных пиков определенного кристалла соли в соответствии с настоящим изобретением, означает, что кристалл имеет такую же форму кристалла, как и соль в соответствии с настоящим изобретением.

[0023]

Используемое в данном документе выражение "характеризующийся практически такой же порошковой рентгеновской дифрактограммой, как и порошковая рентгеновская дифрактограмма, показанная на фигуре 1" означает, что это включает не только случай наличия точно такой же порошковой рентгеновской дифрактограммы, как показано на фигуре 1, но также случай, при котором интенсивности пиков, относительные интенсивности пиков и средние значения ширины отличаются, или случай наличия характерных пиков в пределах диапазона погрешностей углов дифракции, составляющего приблизительно±0,2°. Таким образом, каждый кристалл, характеризующийся такой порошковой рентгеновской дифрактограммой, означает, что кристалл идентичен кристаллу в соответствии с настоящим изобретением.

[0024]

Вышеописанные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре являются характерными для каждого из кристалла хлористоводородной соли соединения (I), кристалла бромистоводородной соли соединения (I), кристаллической формы A малеатной соли соединения (I), кристаллической формы B малеатной соли соединения (I), кристалла соли L-миндальной кислоты соединения (I) и кристалла бензолсульфонатной соли соединения (I).

[0025]

Используемое в данном документе выражение "характеризующийся пиками при химических сдвигах 164,3 ppm, 162,2 ppm и 111,9 ppm" означает "характеризующийся пиками, каждый из которых практически эквивалентен пикам при химических сдвигах, составляющим 164,3 ppm, 162,2 ppm и 111,9 ppm, в случае проведения твердофазной ¹³C-ЯМР спектрометрии при обычных условиях измерения или при практически таких же условиях, как в описании настоящего изобретения".

[0026]

При определении того, применимо ли или нет выражение "характеризующийся пиками, практически эквивалентными", необходимо учитывать то, что вышеописанные значения химических сдвигов включают значения в диапазоне приблизительно ±0,5 ppm, поскольку, как правило, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре могут возникать погрешности в химических сдвигах (ppm) в диапазоне ±0,5 ppm. Следовательно, в настоящее изобретение включены не только кристаллы с точно такими же химическими сдвигами в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре, но также кристаллы с химическими сдвигами в пределах диапазона погрешностей в химических сдвигах, составляющего приблизительно ±0,5 ppm. Следовательно, используемое в данном документе выражение "характеризующийся пиком при химическом сдвиге, составляющим 164,3 ppm", например, означает "характеризующийся пиком при химическом сдвиге, составляющим от 163,8 ppm до 164,8 ppm". То же применимо и к другим химическим сдвигам в спектрах твердофазного ¹³C-ЯМР.

[0027]

Используемое в данном документе выражение "характеризующийся практически таким же твердофазным ¹³C-ЯМР-спектром, как и твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр, показанный на фигуре 7" означает, что оно включает не только случай наличия точно такого же твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, как показано на фигуре 7, но также случай, при котором интенсивности пиков отличаются, или случай наличия характерных пиков в пределах диапазона погрешностей, составляющего приблизительно±0,5 ppm. Таким образом, каждый кристалл, характеризующийся таким твердофазным ¹³C-ЯМР-спектром, означает, что кристалл идентичен кристаллу в соответствии с настоящим изобретением.

[0028]

Подробно будут описаны способы получения соли соединения (I) и ее кристалла.

[0029]

(Получение соединения (I))

Соединение (I) можно синтезировать, как конкретно описано ниже в примере получения 1.

[0030]

(Способ получения соли соединения (I))

Соль соединения (I) можно получать традиционным способом получения соли. В частности, ее можно получать, например, путем суспендирования или растворения соединения (I) в растворителе, при нагревании в случае необходимости, затем путем добавления кислоты к полученной суспензии или раствору и путем перемешивания или отстаивания полученной суспензии или раствора в течение периода времени от нескольких минут до нескольких дней при комнатной температуре или при охлаждении на ледяной бане. Соль соединения (I) можно получать в виде кристаллов или аморфных веществ в соответствии со способами получения. Примеры растворителей, подлежащих применению в этих способах, включают спиртовые растворители, такие как этанол, 1-пропанол и изопропанол; ацетонитрил; кетоновые растворители, такие как ацетон и 2-бутанон; сложноэфирные растворители, такие как этилацетат; растворители на основе насыщенных углеводородов, такие как гексан и гептан; эфирные растворители, такие как трет-бутилметиловый эфир, или воду. Каждый из этих растворителей можно применять как самостоятельно, так и в смеси из двух или более из них.

[0031]

(Способ получения кристалла соли соединения (I))

Кристалл соли соединения (I) можно получать с помощью вышеупомянутых способов получения соли соединения (I) или путем растворения соли соединения (I) при нагревании в растворителе и кристаллизации ее посредством охлаждения и перемешивания.

[0032]

Соль соединения (I), подлежащая применению при кристаллизации, может быть в любой форме: она может представлять собой сольват, гидрат, ангидрид, аморфное вещество, кристаллическое вещество (включая вещества, состоящие из множества кристаллических полиморфов) или их комбинацию.

[0033]

Примеры растворителей, подлежащих применению при кристаллизации, включают спиртовые растворители, такие как метанол, этанол, изопропанол и 1-пропанол; ацетонитрил; амидные растворители, такие как N,N-диметилформамид; сложноэфирные растворители, такие как этилацетат; растворители на основе насыщенных углеводородов, такие как гексан и гептан; кетоновые растворители, такие как ацетон и 2-бутанон; эфирные растворители, такие как трет-бутилметиловый эфир, или воду. Кроме того, каждый из этих растворителей могут применяться как самостоятельно, так и в смеси из двух или более из них.

[0034]

Количество растворителя, подлежащее применению, можно выбирать подходящим образом, при условии, что нижним пределом является количество, в котором можно растворять свободную форму соединения (I) или его соль при нагревании или можно перемешивать суспензию; а верхним пределом является количество, при котором выход кристалла значительно не уменьшается.

[0035]

В ходе кристаллизации можно добавлять затравочный кристалл (например, кристалл требуемой соли соединения (I)), или его можно не добавлять. Температура, при которой добавляют затравочный кристалл, конкретно не ограничена, однако предпочтительно составляет от 0 до 80°C.

[0036]

Как температура, применяемая в ходе растворения при нагревании соли соединения (I), так и температура, при которой растворяется соединение (I), могут быть выбраны подходящим образом в зависимости от растворителя, однако предпочтительно она находится в диапазоне между температурой, при которой начинает кипеть раствор для перекристаллизации, и 50°C, а более предпочтительно - от 65 до 55°C.

[0037]

Быстрое охлаждение в ходе кристаллизации могло бы привести к веществам с кристаллами различных форм (полиморфизм). Таким образом, охлаждение желательно осуществлять при контролировании соответствующим образом скорости охлаждения с учетом ее влияния на качество, размер зерен и другие характеристики кристалла. Например, предпочтительным является осуществление охлаждения при скорости охлаждения, составляющей от 40 до 5°C/ч. Более предпочтительным является осуществление охлаждения при скорости охлаждения, составляющей, например, от 25 до 5°C/ч.

[0038]

Кроме того, конечную температуру кристаллизации можно выбирать подходящим образом в зависимости от выхода, качества и т.п. характеристик кристалла, однако предпочтительно она составляет от 30 до -25°C.

[0039]

Целевой кристалл можно получать выделением кристалла посредством традиционных процедур фильтрации, при необходимости с промывкой отфильтрованного кристалла растворителем и последующим его высушиванием. В качестве растворителя, подлежащего применению для промывки кристалла, может применяться тот же растворитель, что и при кристаллизации. Кроме того, каждый из этих растворителей могут применяться как самостоятельно, так и в смеси из двух или более из них. Предпочтительно, таковым является, например, ацетон, 2-бутанон, этилацетат, трет-бутилметиловый эфир, гексан или смешанный растворитель гексан/2-бутанон.

[0040]

Кристалл, выделенный в ходе процедуры фильтрации, можно высушивать соответствующим образом путем выдержки на воздухе, или в потоке азота, или путем нагревания.

[0041]

Что касается продолжительности сушки, то время, требуемое для того, чтобы количество остаточного растворителя стало меньше, чем заранее установленное количество, можно выбирать соответствующим образом в зависимости от получаемого количества, сушильного устройства, температуры высушивания и т. п. Кроме того, высушивание можно осуществлять в потоке воздуха или при пониженном давлении. Степень понижения давления можно определить соответствующим образом в зависимости от получаемого количества, сушильного устройства, температуры сушки и т.п. После высушивания полученный кристалл можно оставлять на воздухе, если это необходимо.

[0042]

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать путем смешивания фармацевтически приемлемых добавок с солью соединения (I) или ее кристаллом. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать в соответствии с известным способом, таким как способ, описанный в General Rules for Preparations of the Japanese Pharmacopoeia 17^th edition.

[0043]

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить пациентам соответствующим образом в зависимости от лекарственной формы.

[0044]

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению характеризуется пригодностью в качестве терапевтического средства для лечения форм рака, поскольку соль соединения (I) или ее кристалл обеспечивают подавление роста как опухолей дикого типа (WT), так и мутантных по ERα положительных опухолей. Примеры форм рака включают рак молочной железы, рак эндометрия матки, карциному яичника, саркому, карциному щитовидной железы, рак простаты, аденокарциному легкого и гепатоцеллюлярную карциному. Предпочтительный пример форм рака включает рак молочной железы. Более предпочтительный пример форм рака включает ER-положительный рак молочной железы.

[0045]

Дозировка соли соединения (I) или ее кристалла варьируется в зависимости от тяжести симптома, возраста, пола, веса тела, стандартной дозы, типа соли и конкретного типа заболевания и т.п. В случае применения для взрослых, обычно перорально вводят примерно от 30 мкг до 10 г, предпочтительно от 100 мкг до 5 г и более предпочтительно от 100 мкг до 1 г в сутки, или путем инъекции, в каждом случае в виде разовой дозы или разделенных доз, вводят примерно от 30 мкг до 1 г, предпочтительно от 100 мкг до 500 мг и более предпочтительно от 100 мкг до 300 мг в сутки.

[Пример]

[0046]

Далее в данном документе настоящее изобретение будет подробно описано с помощью примеров получения и примеров. Однако не предполагается, что настоящее изобретение ограничивается этими примерами.

[0047]

В данном документе будут использоваться следующие сокращения:

ACN: ацетонитрил

BOC: трет-бутилоксикарбонил

CAN: нитрат церия аммония

Конц.: концентрированный

Cs₂CO₃: карбонат цезия

DABCO: 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан

DCM: дихлорметан

DHP: дигидропиран

DIPEA: N,N-диизопропилэтиламин, основание Хунига

DMA: диметилацетамид

DMF: диметилформамид

DMSO: диметилсульфоксид

DPEphos: (оксиди-2,1-фенилен)бис(дифенилфосфин)

EDCI.HCl: N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимида гидрохлорид

EtOH: этанол

EtOAc: этилацетат

Et₃N: триэтиламин

Пр.: пример

ч: часы

HATU: 1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3- оксида гексафторфосфат

HCl: хлористоводородная кислота

HMPA: гексаметилфосфорамид

HPLC: высокоэффективная жидкостная хроматография

H₂SO₄: серная кислота

IPA: изопропиловый спирт

K₂CO₃: карбонат калия

KOH: гидроксид калия

LCMS: жидкостная хроматография - масс-спектрометрия

MeOH: метанол

Na₂CO₃: карбонат натрия

NBS: н-бромсукцинимид

nBuLi: н-бутиллитий

NH₄Cl: хлорид аммония

NH₄OH: гидроксид аммония

ЯМР: ядерный магнитный резонанс

on или o.n.: в течение ночи

Pd/C: палладий(0) на угле

Pd₂(dba)₃: трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)

PPTS: пиридиния п-толуолсульфонат

PTSA: п-толуолсульфоновая кислота

RT или к. т.: комнатная температура

TBAF: фторид тетрабутиламмония

TEA: триэтиламин

TFA: трифторуксусная кислота

THF: тетрагидрофуран

TLC: тонкослойная хроматография

Pt/C: платина(0) на угле

¹H ЯМР: протонный ядерный магнитный резонанс.

Константу взаимодействия записывали в герцах (Гц).

Сокращения структур расщепления являются следующими:

s: синглет, d: дублет, t: триплет, q: квартет, m: мультиплет, bs: широкий синглет, br s: широкий синглет, dd: двойной дублет, dt: двойной триплет, br d: широкий дублет, br t: широкий триплет.

[0048]

Порошковая рентгеновская дифрактометрия

Порошковая рентгеновская дифрактометрия кристалла, полученного с помощью способа, описанного в следующих примерах, анализировали при следующих условиях измерения.

[0049]

Условия измерения

Устройство: RINT TTR-III (Rigaku)

Кювета для образцов: алюминий

Рентгеновское излучение: Cu K-альфа

Обнаружение: сцинтилляционный счетчик

Напряжение в трубке: 50 кВ

Сила тока в трубке: 300 мА

Щель: щель расходимости, 0,5 мм (щель 2 мм, ограничивающая высоту), рассеивающая щель открыта, приемная щель открыта

Скорость сканирования: 5°/мин

Размер шага: 2θ=0,02°

Диапазон сканирования: 2θ=от 3° до 35°

[0050]

Спектрометрия твердофазного ¹³C-ЯМР

Спектр твердофазного ¹³C-ЯМР кристалла, полученного с помощью способа, описанного в следующих примерах, измеряли при следующих условиях измерения.

[0051]

Условия измерения

Устройство: AVANCE 400 MГц (Bruker)

Температура при измерениях: комнатная температура (22°C)

Эталонный материал: глицин (внешний стандарт: 176,03 ppm)

Измеряемое ядро: ¹³C (100,6131 МГц)

Количество импульсов: 2048 (для кристалла хлористоводородной соли, кристалла бромистоводородной соли, кристаллической формы B малеатной соли, кристалла соли L-миндальной кислоты и кристалла бензолсульфонатной соли), 12288 (для кристаллической формы A малеатной соли)

Частота повторения импульсов: 4 секунды

Время контакта: 1 миллисекунда

Скорость вращения: 5000 Гц

Импульсный режим: измерение TOSS.

[0052]

Гигроскопичность

Кристалл, полученный с помощью способа, описанного в следующих примерах, взвешивали в чаше для образцов, а затем чашу для образцов помещали внутрь изотермической камеры при 25°C. Регулировали относительную влажность (RH) от 0% до 95% с применением системы гравиметрической сорбции паров и измеряли изменение веса образца на каждой стадии при условиях, описанных ниже.

[0053]

Условия измерения

Температура образца: 25°C

RH первой стадии: 0%

RH стадии завершения: 95%

Количество шагов: 39 (0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 0)

Критерий равновесия: 0,002 вес.% за 1 минуту

Максимальное время равновесия: 360 минут

[0054]

Пример получения 1

Получение (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (соединение (I))

[0055]

Сравнительный пример получения 1a

К перемешиваемому раствору 5-бром-1H-индазола (23,5 ммоль) в сухом дихлорметане (50 мл) при 23°C добавляли дигидропиран (9,9 г, 118 ммоль) с последующим добавлением пиридиния п-толуолсульфоната (0,6 г, 2,4 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре, 23°C, в течение 16 ч. После завершения реакции по TLC реакционную смесь гасили водой (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 4-5% этилацетата в гексане с получением 5-бром-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола (20 ммоль, 86%) в виде светло-желтого масла.

[0056]

Сравнительный пример получения 1b

[Хим. 27]

В вышеприведенной схеме

R₁ выбран из группы, состоящей из метила, этила, циклобутила, циклопропила, пропила, изопропила, -CH₂CF₃, -CH₂CH₂F и -CH₂CH₂Cl; R₂ выбран из группы, состоящей из H и F; н равняется 0-1; R₃ представляет собой F, в случае если n=1; m равняется 0-2; R₄ являются одинаковыми или отличными друг от друга и независимо выбраны из группы, состоящей из F, CF₃, Cl, изопропила, -OCH₃, -OCHF₂, -OCF₃, этила и метила; p равняется 0-1; R₅ представляет собой F, в случае если p=1; R₆ и R₇ являются одинаковыми или отличными друг от друга и независимо выбраны из группы, состоящей из метила, этила, пропила, -CH₂CH₂OH, и

[Хим. 28]

где r равняется 1 или 2; или где R₆ и R₇ образуют 4-6-членное гетероциклическое кольцо с атомом N, к которому они присоединены, при этом указанное гетероциклическое кольцо необязательно включает атом кислорода, и при этом указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено F или -CH₂F; и R₈ выбран из группы, состоящей из H и -CH₃.

К перемешиваемому раствору 1 (1,24 ммоль) в DMF (5 мл) при 0°C добавляли (E)-4-бром-N,N-диметилбут-2-енамид (2, 1,24 ммоль) и DIPEA (0,321 г, 2,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 12-48 ч при 23°C, разбавляли холодной водой (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали водой, затем солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенной смеси 3.

[0057]

Сравнительный пример получения 1c

К перемешиваемому раствору 4-йодфенола (227 ммоль) в DMF (750 мл) добавляли карбонат калия (188 г, 1,363 моль) и перемешивали в течение 30 мин. при 23°C, к вышеуказанной смеси добавляли трет-бутил(2-бромэтил)карбамат (71,27 г, 318 ммоль). Содержимое перемешивали при 70°C в течение 12 ч. После завершения реакции реакционную смесь выливали в ледяную воду, отделяемое твердое вещество фильтровали и высушивали при пониженном давлении с получением требуемого соединения, трет-бутил(2-(4-йодфенокси)-этил)карбамата, в виде грязно-белого твердого вещества (220 ммоль, 97%).

[0058]

Пример получения 1a

Синтез 5-бром-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола

[Хим. 29]

Реакцию проводили в соответствии со сравнительным примером получения 1a. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 4-5% этилацетата в гексане с получением указанного в заголовке соединения согласно примеру получения 1a (12,6 г, 86%) в виде светло-желтого масла.

[0059]

Пример получения 1b

Синтез 5-бром-3-фтор-1H-индазола

[Хим. 30]

К перемешиваемому раствору 5-бром-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола (10 г, 35,7 ммоль, полученного в примере получения 1a) в 100 мл ацетонитрила добавляли уксусную кислоту (4 мл) и селектфлуор (25,2 г, 71,4 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч. После завершения реакции по TLC реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали с помощью этилацетата (200 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой, солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 1% этилацетата в н-гексане с получением 5-бром-3-фтор-1H-индазола (6 г, 78%) в виде коричневого масла.

[0060]

Пример получения 1c

Синтез 5-бром-3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола

[Хим. 31]

Реакцию проводили в соответствии со сравнительным примером получения 1a с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 1% этилацетата в н-гексане с получением указанного в заголовке соединения согласно примеру получения 1c (5 г, 60%) в виде коричневого масла.

[0061]

Пример получения 1d

Синтез 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-((триметилсилил)этинил)-1H-индазола

[Хим. 32]

К перемешиваемому раствору 5-бром-3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола (4,5 г, 15 ммоль, полученного в примере получения 1c) в 35 мл THF:Et₃N (5:1) в герметизированной пробирке добавляли йодид меди (0,288 г, 1,5 ммоль) при комнатной температуре. Эту смесь дегазировали с помощью применения трех циклов вакуум/N₂ и добавляли этинилтриметилсилан (2,22 г, 22 ммоль), затем Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0,5 г, 0,7 ммоль). Пробирку для работы под давлением герметизировали и нагревали при 80°C в течение 48 ч. После завершения реакции по TLC реакционную смесь разбавляли водой (250 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (2×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой, солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью Combi-flash с использованием 5% EtOAc в н-гексане с получением 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-((триметилсилил)этинил)-1H-индазола (3,2 г, 72%).

[0062]

Пример получения 1e

Синтез 5-этинил-3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола

[Хим. 33]

К перемешиваемому раствору 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-((триметилсилил)этинил)-1H-индазола (3,2 г, 10 ммоль) в метаноле, 32 мл, добавляли карбонат калия (0,151 г, ммоль), реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали водой, затем солевым раствором. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения согласно примеру получения 1e (2,8 г, неочищенное).

[0063]

Пример получения 1f

Синтез 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-(4,4,4-трифторбут-1-ин-1-ил)-1H-индазола

[Хим. 34]

К перемешиваемому раствору 5-этинил-3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазола (2,6 г, 10,6 ммоль) в 20 мл толуола добавляли 1,1,1-трифтор-2-йодэтан (4,47 г, 21,3 ммоль) при комнатной температуре. Эту смесь дегазировали с помощью трех циклов вакуум/N₂ и добавляли Pd₂(dba)₃ (0,487 г, 0,5 ммоль), а затем DPEphos (1,14 г, 2,1 ммоль) и DABCO (2,39 г, 21,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 24 ч. После завершения реакции по TLC реакционную смесь разбавляли водой (250 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (2×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой, солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии с использованием 5% EtOAc в н-гексане с получением 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-(4,4,4-трифторбут-1-ин-1-ил)-1H-индазола (1,6 г, 46%).

[0064]

Пример получения 1g

Синтез (E)-4-бромбут-2-еновой кислоты

[Хим. 35]

К перемешиваемому раствору (E)-бут-2-еновой кислоты (10,0 г, 116,0 ммоль) в бензоле (150 мл) добавляли N-бромсукцинимид (31,4 г, 120,0 ммоль), затем пероксид бензоила (0,200 г, 1,4 ммоль) при 23°C. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч, что приводило к осаждению кристаллов сукцинамида. Кристаллы отфильтровывали и фильтрат концентрировали. Неочищенное вещество перекристаллизовывали с помощью минимального количества гексана и промывали гексаном с получением (E)-4-бромбут-2-еновой кислоты (6,97 г, 37%) в виде белого твердого вещества.

[0065]

Пример получения 1h

Синтез (E)-4-бром-N, N-диметилбут-2-енамида

[Хим. 36]

(E)-4-бромбут-2-еновую кислоту (2 г, 12,2 ммоль) отбирали в дихлорметан (20 мл) и при 0°C добавляли HATU (5,5 г, 14 ммоль), триэтиламин (2,56 мл,18,4 ммоль) и перемешивали в течение 10 мин. при к. т. К этой смеси медленно добавляли N,N-диметиламин (9,2 мл, 18 ммоль) и содержимое перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и остаток разделяли между водой и этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, 100-200, с использованием 20% этилацетата в н-гексане с получением (E)-4-бром-N,N-диметилбут-2-енамида (0,4 г, 17%) в виде жидкости бледно-зеленого цвета.

[0066]

Пример получения 1i

Синтез трет-бутил(2-(4-йодфенокси)этил)карбамата

[Хим. 37]

Реакцию проводили в соответствии со сравнительным примером получения 1c с получением указанного в заголовке соединения согласно примеру получения 1i в виде грязно-белого твердого вещества (80 г, 97%).

[0067]

Пример получения 1j

Синтез 2-(4-йодфенокси)этан-1-амина

[Хим. 38]

К перемешиваемому раствору трет-бутил(2-(4-йодфенокси)этил)карбамата (25 г, 68,6 ммоль, пример получения 1i) в этаноле (50 мл) при 0°C добавляли 2 М HCl в эфире (250 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч при комнатной температуре. После завершения реакции повышали основность реакционной смеси с помощью насыщенного NaHCO₃, экстрагировали с помощью 10% MeOH в DCM. Органический слой концентрировали при пониженном давлении, и неочищенный материал использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (16 г, 88%).

[0068]

Пример получения 1k

Синтез (E)-4-((2-(4-йодфенокси)этил)амино)-N,N-диметилбут-2-енамида

[Хим. 39]

Реакцию проводили в соответствии со сравнительным примером получения 1b с использованием (E)-4-бром-N,N-диметилбут-2-енамида (пример получения 1h) для соединения 2 с получением неочищенного продукта, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (18,8 г, неочищенный).

[0069]

Пример получения 1l

Синтез трет-бутил(E)-(4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-(4-йодфенокси)этил)карбамата

[Хим. 40]

К перемешиваемому раствору (E)-4-((2-(4-йодфенокси)этил)амино)-N,N-диметилбут-2-енамида (18,8 г, 50,26 ммоль) в сухом дихлорметане (150 мл) добавляли DIPEA (6,4 г 50,2 ммоль) при 0°C, перемешивали в течение 15 мин. при 0°C. К вышеуказанной реакционной смеси добавляли boc-ангидрид (13,1 г, 60,3 ммоль), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. После завершения реакции по TLC реакционную смесь охлаждали до 0°C, гасили ледяной водой (500 мл) и экстрагировали дихлорметаном (500 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой, затем солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 3% MeOH в дихлорметане в качестве элюента с получением трет-бутил(E)-(4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-(4-йодфенокси)этил)карбамата (9 г, 37,8%).

[0070]

Пример получения 1m

Синтез трет-бутил(2-((5-йодпиридин-2-ил)окси)этил)карбамата

[Хим. 41]

К перемешиваемому раствору 2-фтор-5-йодпиридина (5 г, 22,4 ммоль) в DMF (25 мл) добавляли гидрид натрия (0,7 г, 33,5 ммоль) и перемешивали в течение 10 мин. при 0°C, к вышеуказанной смеси добавляли трет-бутил(2-гидроксиэтил)карбамат (1,8 г, 11,2 ммоль). Содержимое перемешивали при 0°C в течение 30 мин. После завершения реакции реакционную смесь выливали в ледяную воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, 230-400 меш, с использованием 15% EtOAc в н-гексане в качестве элюента с получением требуемого соединения, трет-бутил(2-((5-йодпиридин-2-ил)окси)этил)карбамата, в виде грязно-белого твердого вещества (3,5 г, 43%).

[0071]

Пример получения 1n

Синтез трет-бутил(E)-(4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-((5-йодпиридин-2-ил)окси)этил)карбамата

[Хим. 42]

Реакцию проводили согласно подходу, описанному в примерах получения 1j - 1l путем замещения трет-бутил(2-((5-йодпиридин-2-ил)окси)этил)карбамата на трет-бутил(2-(4-йодфенокси)этил)карбамат с получением указанного в заголовке соединения (3,6 г, 47%).

[0072]

Пример получения 1o

Синтез трет-бутил((E)-4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)карбамата

[Хим. 43]

К перемешиваемому раствору 3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-5-(4,4,4-трифторбут-1-ин-1-ил)-1H-индазола (0,66 г, 2,02 ммоль, полученному в соответствии с примерами получения 1d - 1f) в 2-метил-THF (10 мл), добавляли бис(пинаколато)дибор (0,566 г, 2,22 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)платину(0) (0,025 г, 0,02 ммоль) в атмосфере азота, реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 5 ч. Обеспечивали охлаждение раствора до комнатной температуры и добавляли трет-бутил(E)-(4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-((5-йодпиридин-2-ил)окси)этил)карбамат (0,72 г, 1,51 ммоль, полученный в соответствии с примером получения 1n), бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид (0,071 г, 0,1 ммоль), карбонат цезия (1,3 г, 4,04 ммоль) и 2-метил-THF (10 мл). Эту смесь дегазировали азотом и добавляли воду (0,12 мл). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения реакции к вышеуказанной реакционной смеси добавляли 4 М KOH (2,78 мл, 11,13 ммоль) и йодбензол (0,33 г, 1,61 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 7 ч. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью Combi-Flash с применением 100% этилацетата в качестве элюента с получением трет-бутил((E)-4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)карбамата (0,35 г, 23%).

[0073]

Пример получения 1p

Синтез (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)- 4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (соединение (I))

[Хим. 44]

К перемешиваемому раствору трет-бутил((E)-4-(диметиламино)-4-оксобут-2-ен-1-ил)(2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)карбамата (0,35 г, 0,46 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли TFA (1 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После завершения реакции повышали основность реакционной смеси с помощью насыщенного NaHCO₃, экстрагировали ее этилацетатом. Органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения, которое очищали посредством препаративной HPLC с получением требуемого соединения, (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (0,03 г, 11%).

Соединение (I): ¹H ЯМР (400 МГц, Varian Mercury Plus, DMSO-d₆): δ 12,71 (s, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,54 (m, 1H), 7,26-7,18 (m, 7H), 6,62-6,46 (m, 3H), 4,13 (t, J=5,8 Гц, 2H), 3,51-3,43 (m, 2H), 3,34-3,28 (m, 2H), 2,98 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,75 (t, J=5,8 Гц, 2H).

LCMS: 568,2 [M+H]⁺.

[0074]

Пример получения 1q

Синтез (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида гидрохлорида (хлористоводородная соль соединения (I))

[Хим. 45]

К перемешиваемому раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (4,1 г, 7,23 ммоль) в этаноле (24 мл) добавляли 2 М HCl в диэтиловом эфире (7,5 мл) при 0°C. Наблюдали белое твердое вещество в реакционной смеси после перемешивания в течение 30 мин. при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом при 35°C и полученное твердое вещество совместно дистиллировали с дихлорметаном под вакуумом при 45°C. Полученное твердое вещество промывали н-пентаном и высушивали под вакуумом при 50°C в течение 4 ч с получением указанного в заголовке соединения, (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида гидрохлорида (4,3 г, 98%).

¹H ЯМР (400 МГц, Varian Mercury Plus, DMSO-d₆): δ 12,74 (s, 1H), 9,26 (bs, 2H), 7,69-7,34 (m, 3H), 7,28-7,17 (m, 7H), 6,81 (d, J=15,2 Гц, 1H), 6,62-6,53 (m, 2H), 4,37 (t, J=4,4 Гц, 2H), 3,77-3,76 (m, 2H), 3,51-3,43 (m, 2H), 3,23 (bs, 2H), 3,03 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

LCMS: 568,3 [M+H]⁺.

[0075]

Пример 1

Получение кристалла (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида гидрохлорида

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (500,31 мг) в 2-бутаноне (5 мл) добавляли раствор хлористоводородной кислоты (75,6 мкл, 1 экв.) в 2-бутаноне (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 2-бутаноном и высушивали в течение ночи с получением указанного в заголовке кристалла (514 мг, 97%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 1, показаны соответственно на фигурах 1, 7 и 13.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,71 (s, 1H), 9,02 (br s, 2H), 7,67 (d, J=1,9 Гц, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,54 (dd, J=8,7, 1,5 Гц, 1H), 7,29 (dd, J=8,6, 2,4 Гц, 1H), 7,22-7,27 (m, 5H), 7,16-7,21 (m, 1H), 6,78 (d, J=15,2 Гц, 1H), 6,61 (d, J=9,0 Гц, 1H), 6,54 (dt, J=15,1, 6,5 Гц, 1H), 4,34 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,76 (br d, J=6,4 Гц, 2H), 3,45 (q, J=10,8 Гц, 2H), 3,23 (br t, J=4,3 Гц, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 1, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 164,3, 162,2, 148,6, 138,9, 136,8, 134,0, 111,9, 61,5, 38,4, 34,4.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 6,1°, 11,8°, 14,9°, 16,8°, 18,1°, 19,1°, 19,5°, 21,7°, 25,9°, 27,4°.

[0076]

Пример 2

Получение кристалла (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида гидробромида

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (500,44 мг) в 2-бутаноне (5 мл) добавляли раствор бромистоводородной кислоты (100,3 мкл, 1 экв.) в 2-бутаноне (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 2-бутаноном и высушивали в течение ночи с получением указанного в заголовке кристалла (545 мг, 95%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 2, показаны соответственно на фигурах 2, 8 и 14.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,69 (s, 1H), 8,83 (br s, 2H), 7,68 (d, J=2,5 Гц, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,55 (dd, J=8,7, 1,6 Гц, 1H), 7,29 (dd, J=8,7, 2,5 Гц, 1H), 7,22-7,27 (m, 5H), 7,17-7,20 (m, 1H), 6,77 (d, J=15,1 Гц, 1H), 6,61 (d, J=8,5 Гц, 1H), 6,53 (dt, J=15,2, 6,6 Гц, 1H), 4,33 (br t, J=5,0 Гц, 2H), 3,77 (br d, J=6,4 Гц, 2H), 3,45 (q, J=10,8 Гц, 2H), 3,25 (br t, J=4,6 Гц, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 2, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 164,5, 162,2, 148,6, 139,3, 135,8, 134,0, 111,7, 60,9, 39,0, 34,5.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 6,2°, 11,7°, 12,5°, 16,5°, 17,6°, 18,7°, 20,4°, 21,4°, 22,5°, 27,1°.

[0077]

Пример 3

Получение кристаллической формы A (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида малеата

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (100,25 мг) в 2-бутаноне (1 мл) добавляли раствор малеиновой кислоты (10 мг/мл) в 2-бутаноне (2,05 мл). Затем к раствору добавляли гексан (2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 2-бутаноном с получением указанного в заголовке кристалла (107 мг, 89%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 3, показаны соответственно на фигурах 3, 9 и 15.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,69 (s, 1H), 8,72 (br s, 1H), 7,68 (d, J=2,2 Гц, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,55 (dd, J=8,6, 1,2 Гц, 1H), 7,29 (dd, J=8,6, 2,4 Гц, 1H), 7,22-7,27 (m, 5H), 7,16-7,21 (m, 1H), 6,76 (d, J=15,2 Гц, 1H), 6,60 (d, J=8,6 Гц, 1H), 6,53 (dt, J=15,1, 6,6 Гц, 1H), 6,01 (s, 2H), 4,30-4,36 (m, 2H), 3,76 (br d, J=6,4 Гц, 2H), 3,46 (q, J=10,7 Гц, 2H), 3,22-3,27 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 3, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 169,6, 168,0, 134,2, 117,1, 112,0, 107,3, 63,6, 50,3, 46,9, 36,1.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 4,9°, 9,8°, 16,1°, 16,7°, 17,9°, 19,4°, 21,2°, 22,9°, 24,9°, 30,4°.

[0078]

Пример 4

Получение кристаллической формы B (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида малеата

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (499,69 мг) в 2-бутаноне (6 мл) добавляли раствор малеиновой кислоты (102,06 мг, 1 экв.) в 2-бутаноне (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. К смеси добавляли гексан (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 2-бутаноном и высушивали в течение ночи с получением указанного в заголовке кристалла (507 мг, 84%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 4, показаны соответственно на фигурах 4, 10 и 16.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,69 (s, 1H), 8,73 (br s, 2H), 7,68 (d, J=1,8 Гц, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,54 (dd, J=8,7, 1,3 Гц, 1H), 7,29 (dd, J=8,7, 2,4 Гц, 1H), 7,22-7,27 (m, 5H), 7,16-7,20 (m, 1H), 6,76 (d, J=15,2 Гц, 1H), 6,60 (d, J=8,6 Гц, 1H), 6,53 (dt, J=15,2, 6,5 Гц, 1H), 6,01 (s, 2H), 4,30-4,35 (m, 2H), 3,76 (br d, J=6,3 Гц, 2H), 3,46 (q, J=10,8 Гц, 3H), 3,22-3,26 (m, 3H), 3,01 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 4, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 171,4, 167,1, 133,3, 117,8, 112,8, 108,6, 63,1, 48,8, 44,5, 38,3.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 14,8°, 15,8°, 17,1°, 17,5°, 20,2°, 20,9°, 22,3°, 24,6°, 26,5°, 28,5°.

[0079]

Пример 5

Получение кристалла (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамид-L-миндальной кислоты

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (375,57 мг) в 2-бутаноне (5 мл) добавляли раствор L-миндальной кислоты (100,28 мг, 1 экв.) в 2-бутаноне (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. К смеси добавляли 2-бутанон (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали 2-бутаноном и высушивали в течение ночи с получением указанного в заголовке кристалла (412 мг, 86%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 5, показаны соответственно на фигурах 5, 11 и 17.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,69 (br s, 1H), 7,64 (d, J=1,8 Гц, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,53 (dd, J=8,7, 1,3 Гц, 1H), 7,38 (d, J=7,2 Гц, 2H), 7,29 (t, J=7,5 Гц, 2H), 7,21-7,27 (m, 7H), 7,15-7,20 (m, 1H), 6,56 (t, J=4,8 Гц, 1H), 6,54-6,55 (m, 1H), 6,52-6,54 (m, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,17 (t, J=5,6 Гц, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,97 (s, 3H), 2,86 (br t, J=5,6 Гц, 2H), 2,83 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 5, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 176,8, 165,9, 160,7, 147,7, 141,2, 110,5, 76,3, 48,6, 37,2, 34,1.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 5,1°, 8,8°, 10,3°, 13,8°, 16,9°, 18,3°, 19,2°, 21,2°, 22,8°, 24,6°.

[0080]

Пример 6

Получение кристалла (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида бензолсульфоната

К раствору (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида (501,14 мг) в этилацетате (3 мл) добавляли раствор моногидрата бензолсульфоновой кислоты (100 мг/мл) в этилацетате (1,6 мл). Затем к раствору добавляли этилацетат (5 мл) и смесь перемешивали при 45°C в течение 3 дней. Полученное твердое вещество отфильтровывали и высушивали в течение 3 дней с получением указанного в заголовке кристалла (572 мг, 87%). Порошковая рентгеновская дифрактограмма, твердофазный ¹³C-ЯМР-спектр и график, демонстрирующий гигроскопичность кристалла, полученного в примере 6, показаны соответственно на фигурах 6, 12 и 18.

¹H ЯМР (600 MГц, Bruker AVANCE, DMSO-d₆): δ 12,69 (s, 1H), 8,72 (br s, 1H), 7,68 (d, J=2,1 Гц, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,59 (dd, J=7,8, 1,8 Гц, 2H), 7,55 (dd, J=8,7, 1,4 Гц, 1H), 7,23-7,31 (m, 9H), 7,17-7,20 (m, 1H), 6,77 (d, J=15,2 Гц, 1H), 6,61 (d, J=8,6 Гц, 1H), 6,54 (dt, J=15,2, 6,6 Гц, 1H), 4,33 (t, J=5,1 Гц, 2H), 3,77 (d, J=6,3 Гц, 2H), 3,46 (q, J=10,8 Гц, 2H), 3,24 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,86 (s, 3H).

Типичные пики в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре и типичные дифракционные пики, полученные методом рентгеновской порошковой дифрактометрии для кристалла, полученного в примере 6, показаны ниже.

¹³C-ЯМР (100 MГц, твердая фаза): δ 163,0, 160,9, 147,2, 145,0, 140,2, 133,4, 109,3, 47,1, 37,3, 34,8.

Углы, полученные методом рентгеновской порошковой дифракции (2θ ± 0,2°): 5,2°, 9,5°, 10,5°, 12,1°, 15,4°, 17,4°, 20,3°, 21,4°, 23,1°, 24,4°.

[0081]

Растворимость

Избыточное количество кристалла, полученного в примере 6, добавляли в 0,1 моль/л раствор HCl в испытательной пробирке и растворяли при 37°C со встряхиванием в течение часа. Измеряли концентрацию фильтрата для определения растворимости посредством применения высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Растворимость кристалла, полученного в примере 6, составляла 2 мг/мл.

[0082]

Следующие тестовые примеры проводили для исследования фармакологических эффектов соединения (I).

[0083]

(Тестовый пример 1). Соединения, которые ингибируют активность ERα^WT/MUT in vitro

[0084]

Культура клеток

Клетки MCF7 BUS (Coser, et al., (2003) PNAS 100 (24): 13994-13999) поддерживали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла, дополненной 10% FBS, 4 мМ L-глутамином и 1x незаменимыми аминокислотами. Клетки Lenti-X 293T (Clontech, № по каталогу 632180) обычным способом культивировали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла, дополненной 10% FBS.

[0085]

Сайт-направленный мутагенез и инженерия клеточной линии

Набор для сайт-направленного мутагенеза QuikChange II XL (Agilent Technologies, № по каталогу 200523) для создания мутаций Y537S, Y537C, Y537N и D538G в экзоне 8 ERα. ESR1 кДНК дикого типа (GeneCopoeia Inc., № по каталогу GC-A0322, № доступа NM 000125) применяли в качестве матрицы со следующими праймерами мутагенеза (где подчеркнутые нуклеотиды представляют собой участки с мутациями); Y537S: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC TCT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 1), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC AGA GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 2); Y537N: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC AAT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 3), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC ATT GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 4); Y537C: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC TGT GAC CTG CTG CTG GAG ATG (SEQ ID NO: 1), R-CAT CTC CAG CAG CAG GTC ACA GAG GGG CAC CAC GTT CTT (SEQ ID NO: 2); Y537N: F-AAG AAC GTG GTG CCC CTC GC CTG CTG CTG GAG ATG CTG (SEQ ID NO: 7), R-CAG CAT CTC CAG CAG CAG GCC ATA GAG GGG CAC CAC GTT (SEQ ID NO: 8). WT и мутантные ESR1 кДНК клонировали в лентивирусный вектор с обозначением pLenti6.3/V5-Dest (Invitrogen, № по каталогу V533-06). Для создания лентивирусов трансфицировали DNA (WT и мутантный ESR1) совместно с упаковывающими плазмидами в клетки Lenti-X 293T с использованием TransIT (Mirus, № по каталогу MIR 2700). Через 48 ч после трансфекции вирус-содержащую среду фильтровали и добавляли к клеткам MCF7 в присутствии 8 мкг/мл полибрена в течение ночи. Через два дня после инфицирования клетки помещали в селективную среду с 10 мкг/мл бластицидина в течение 2 недель для устойчивой экспрессии.

[0086]

Анализы пролиферации in vitro

Клетки MCF7-WT и -Y537S высевали при 1500 клеток/лунка в 96-луночные планшеты с черными стенками (аналитические планшеты, Costar, № по каталогу 3904). Параллельно клетки также высевали в отдельный 96-луночный планшет (8 лунок/клеточная линия, контрольный планшет) для которого измеряли CTG (люминесцентный анализ для определения жизнеспособности CellTiter-Glo (зарегистрированный торговая марка), Promega, № по каталогу G7572) на следующий день (считывание в день 0). Считывание в день 0 использовали для расчета GI₅₀ в конце эксперимента. На следующий день после высеивания соединения добавляли в аналитические планшеты. Вкратце, последовательное разбавление 1:4 осуществляли в DMSO при конечной концентрации 200x для всех 10 концентраций (9 разбавлений, содержащих соединение, и одно содержащее только DMSO). Серийно разбавленные соединения пипетировали в среду для получения смеси соединение-среда при конечной концентрации 10×. 10 мкл смеси соединение-среда добавляли к клеткам MCF7-WT и -Y537S при значении 3 лунки/концентрация (трижды для каждой концентрации). В день 3 среду/соединение удаляли и заменяли на свежую среду/соединение, как описано выше. В день 6 измеряли CTG и сравнивали со считыванием в день 0 с контрольного планшета для оценки GI₅₀.

[0087]

Результаты

На фигуре 19 показано, что эктопическая экспрессия ERα^{Y537S/N/C, D538G} в клетках MCF7 придает фенотипическую устойчивость к доступным на рынке в настоящее время видам терапии с помощью тамоксифена (SERM), ралоксифена (SERM) и фулвестранта (SERD). Подобные наблюдения также были недавно опубликованы несколькими независимыми лабораториями (Jeselsohn et al., (2014) Clin Cancer Res. Apr 1; 20 (7): 1757-67; Toy et al., (2013) Nat. Genet. 2013 Dec; 45(12):1439-45; Robinson et al., (2013) Nat. Genet. Dec; 45 (12): 1446-51; Merenbakh-Lamin et al., (2013) Cancer Res. Dec 1; 73(23): 6856-64; Yu et al., (2014) Science Jul 11; 345(6193): 216-20). Подтвердив, что ERα^MUT обусловливает устойчивость к современным видам эндокринной терапии, осуществляли идентификацию новых соединений, которые будут уменьшать пролиферацию несущих ERα^MUT клеток MCF7 более эффективно, чем соответствующее клиническое соединение, представляющее собой 4-гидрокситамоксифен. С использованием анализа для определения WT и мутантной жизнеспособности в качестве инструмента скрининга, идентифицировали соединения, которые обладали большим потенциалом по отношению к несущей Y537S линии MCF7 относительно 4-гидрокситамоксифена. Результаты анализа для определения жизнеспособности для соединения (I) являются следующими: GI₅₀ (WT): 0,34 нМ; GI₅₀ (Y537S): 4,26 нМ.

[0088]

(Тестовый пример 2). Способы с использованием ксенотрансплантата in vivo

В тестовом примере 2 ссылки на соединение (I) относятся к хлористоводородной соли соединения (I), полученной в примере получения 1q.

[0089]

Исследование ксенотрансплантата MCF7

Клеточную линию MCF7 с ESR1 дикого типа при раке молочной железы с ER+ у человека (ATCC) культивировали в среду DMEM, дополненную 10% FBS при 37°C в атмосфере 5% CO2, и выдерживали в фазе экспоненциального роста. Клетки собирали в трипсин и повторно суспендировали в смеси 1:1 матригеля и HBSS при конечной концентрации, составляющей 5×10⁷ клеток/мл. 0,2 мл аликвоты клеток инъецировали подкожно в 3^-ю жировую подушку молочной железы самок бестимусных мышей Balb/c возрастом 6-8 недель с введением 1×10⁷ клеток/мышь. Когда средний объем опухоли достигал приблизительно 155 мм³, 92 животных рандомизировали до лечения.

Исследовали противоопухолевую активность в ксенотрансплантатной модели MCF7 с использованием соединения (I). Вводили дозу соединения (I) перорально каждый день в дозах, находящихся в диапазоне от 1 до 30 мг/кг. Каждое лечение начинали в день 0 и продолжали режим введения в течение 17 дней. Объем введения рассчитывали по значениям веса тела отдельной мыши до введения дозы. Значения веса тела измеряли ежедневно, при этом значения объема опухоли измеряли дважды в неделю. Значения объема опухоли (TV) рассчитывали на основании формулы:

TV=длина × ширина^2×0,5

длина: наибольший диаметр опухоли (мм)

ширина: диаметр, перпендикулярный длине (мм)

% ингибирования роста опухоли (TGI) рассчитывали в соответствии со следующей формулой:

[Матем. 1]

где день X представляет собой конечное измерение.

[0090]

Исследование Y537S-положительного ксенотрансплантата PDx

Полученную от пациента ксенотрансплантатную модель опухоли (PDX), представляющую собой мутировавший ESR1-Y537S человека с раком молочной железы с ER+, обозначенный как PDX-Y537S, подкожно размножали у мышей с ослабленным иммунитетом. Опухоли оперативно удаляли в течение 60 дней после имплантации и обрабатывали с получением смешанных фрагментов опухоли. Из тканей солидной опухоли удаляли некротические компоненты, разрезали на фрагменты по 70 мг, смешивали с матригелем и подкожно имплантировали в правый бок самок бестимусных мышей (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) возрастом 6-12 недель. Точное количество фрагментов и объем матригеля определяли в каждом конкретном случае. Когда средний объем опухоли достигал приблизительно 200 мм³, животных рандомизировали до лечения. Все первичные опухоли у человека, использованные в данном исследовании, были подвержены приблизительно 7 пассажам in vivo.

Исследовали противоопухолевую активность в модели PDX-Y537S с использованием соединения (I). Эстроген в исследованиях не добавляли. Вводили дозу соединения (I) перорально каждый день в дозах, находящихся в диапазоне от 3 до 200 мг/кг. Каждую обработку начинали в день 0 и режим введения продолжали не более 35 дней. Объем введения рассчитывали по значениям веса тела отдельной мыши до введения дозы. Значения веса тела измеряли ежедневно, при этом значения объема опухоли измеряли дважды в неделю. Значения объема опухоли рассчитывали на основании ранее описанной формулы.

[0091]

Исследование ксенотрансплантата WHIM20

Полученную от пациента ксенотрансплантатную модель опухоли (PDX), WHIM20, представляющую собой мутировавший ESR1-Y537S человека с раком молочной железы с ER+, размножали у мышей. Опухоли оперативно удаляли и обрабатывали с получением смешанных фрагментов опухоли, и при этом фрагменты повторно подкожно имплантировали новым мышам-реципиентам. Для данного исследования из тканей солидной опухоли удаляли некротические компоненты, разрезали на фрагменты, смешивали с матригелем и подкожно имплантировали в правый бок самок бестимусных мышей SCID-bg возрастом 6-8 недель. Точное количество фрагментов и объем матригеля определяли в каждом конкретном случае. Когда средний объем опухоли достигал приблизительно 370 мм³, животных рандомизировали до лечения. Все первичные опухоли у человека, использованные в данном исследовании, были подвержены приблизительно 4 пассажам in vivo.

Исследовали противоопухолевую активность в полученной от пациента ксенотрансплантатной модели WHIM20 с использованием соединения (I). При исследованиях WHIM20 эстроген не добавляли. Дозу соединения (I) вводили перорально каждый день в указанных дозах. Каждую обработку начинали в день 0 и режим введения продолжали в течение указанных дней. Объем введения рассчитывали по значениям веса тела отдельной мыши до введения дозы. Значения веса тела измеряли ежедневно, при этом значения объема опухоли измеряли дважды в неделю. Значения объема опухоли рассчитывали на основании ранее описанной формулы.

[0092]

Статистический анализ

Данные выражены в виде среднего значения ±SEM для объема опухоли и среднего значения ±SEM для веса тела. Отличия в объеме опухоли в течение периода исследования между группами подвергнутой обработке несущей среды и подвергнутого обработке соединения анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным критерием множественных сравнений Даннетта. Статистические анализы проводили с применением GraphPad Prism (зарегистрированная торговая марка) версии 5.04 (GraphPad Software, Ла-Холья, Калифорния).

[0093]

Результаты (1)

На фигуре 20 показаны противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) у подкожной ксенотрансплантатной модели MCF7, несущей ER дикого типа, выращенной у мышей с ослабленным иммунитетом. Соединение (I) обеспечивало ингибирование роста ксенотрансплантата дозозависимым образом при обработках с помощью 3 мг/кг QD, 10 мг/кг QD и 30 мг/кг QD с ингибированием роста в день 17 (TGI составляло 75%, 80% и 85% и p<0,0001 для всех доз, соответственно). Обработка с помощью соединения (I), 1 мг/кг QDx18, не демонстрировала статистически значимого отличия от контрольной подвергнутой обработке группы (TGI составляло 36%, p>0,05). Все дозы и схемы хорошо переносились с незначительными потерями веса тела или клиническими проявлениями.

Соединение (I) вводили перорально один раз в день на протяжении всего исследования. Данные представляют собой среднее значение ±SEM (объем опухоли) или среднее значение ±SEM (вес тела) (N=6 для групп обработки, N=8 для контрольной несущей среды). * p<0,0001 по сравнению с контрольной несущей средой в день 17 (двухфакторный ANOVA с последующим критерием множественных сравнений Даннетта).

[0094]

Результаты (2)

На фигуре 21 показаны противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) в повторном исследовании на модели ER+ PDX-Y537S, несущей гетерозиготную мутацию Y537S. Соединение (I) обеспечивало ингибирование роста ксенотрансплантата дозозависимым образом при обработках с помощью 3 мг/кг QD, 10 мг/кг QD, 30 мг/кг QD и 100 мг/кг QD со значительным ингибированием роста в день 28 (TGI составляло 61%, 85%, 81% и 84% и p<0,001, p<0,0001, p<0,0001 и p<0,0001, соответственно). Все дозы были хорошо переносимы, с незначительными потерями веса тела или клиническими проявлениями.

Соединение (I) вводили перорально один раз в день на протяжении всего исследования. Данные представляют среднее значение ±SEM (объем опухоли) или среднее значение ±SEM (вес тела) (N=6 для соединения (I) и N=8 для несущей среды). * p<0,001, ** p<0,0001 по сравнению с контрольной несущей средой в день 28 (двухфакторный ANOVA с последующим критерием множественных сравнений Даннетта).

[0095]

Результаты (3)

На фигуре 22 показаны противоопухолевые эффекты и эффекты в отношении веса тела соединения (I) у модели WHIM20 PDX с ER+, несущей гомозиготную мутацию Y537S. Соединение (I) обеспечивало ингибирование роста ксенотрансплантата дозозависимым образом при обработках с помощью 10 мг/кг QD, 30 мг/кг QD и 100 мг/кг QD со значительным ингибированием роста в день 22 (TGI составляло 26%, 36% и 48% и p<0,05, p<0,01 и p<0,0001, соответственно). Эта доза соединения (I) была переносимой в соответствии с рекомендациями Комитета по уходу и использованию лабораторных животных.

Соединение (I) вводили перорально один раз в день на протяжении всего исследования. Данные представляют среднее значение ±SEM (объем опухоли) или среднее значение ±SEM (вес тела) (N=8 для всех групп). Соответственно, *p<0,05, **p<0,01 и ***p<0,0001 по сравнению с контрольной несущей средой в день 22 (двухфакторный ANOVA с последующим критерием множественных сравнений Даннетта).

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Eisai R&D Management Co., Ltd.

<120> СОЛИ ПРОИЗВОДНОГО ИНДАЗОЛА И ИХ КРИСТАЛЛЫ

<130> FP17-0370-00

<150> JP2016-229635

<151> 2016-11-28

<160> 8

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 1

aagaacgtgg tgcccctctc tgacctgctg ctggagatg 39

<210> 2

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 2

catctccagc agcaggtcag agaggggcac cacgttctt 39

<210> 3

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 3

aagaacgtgg tgcccctcaa tgacctgctg ctggagatg 39

<210> 4

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 4

catctccagc agcaggtcat tgaggggcac cacgttctt 39

<210> 5

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 5

aagaacgtgg tgcccctctg tgacctgctg ctggagatg 39

<210> 6

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 6

catctccagc agcaggtcac agaggggcac cacgttctt 39

<210> 7

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 7

aacgtggtgc ccctctatgg cctgctgctg gagatgctg 39

<210> 8

<211> 39

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> праймер для мутагенеза

<400> 8

cagcatctcc agcagcaggc catagagggg caccacgtt 39

<---

Claims

1. Соль (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, и кислоты, выбранной из группы, состоящей из бромистоводородной кислоты, малеиновой кислоты и миндальной кислоты

[Хим. 1]

.

2. Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием трех или более дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 6,1°, 11,8°, 16,8°, 18,1° и 19,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии

[Хим. 2]

.

3. Кристалл по п. 2, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,1°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

4. Кристалл по п. 2, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 6,1°, 11,8° и 18,1°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

5. Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 164,3 ppm, 162,2 ppm и 111,9 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре

[Хим. 3]

.

6. Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанной на фигуре 1

[Хим. 4]

.

7. Кристалл хлористоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, показанного на фигуре 7

[Хим. 5]

.

8. Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием трех или более дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 6,2°, 11,7°, 18,7°, 20,4° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии

[Хим. 6]

.

9. Кристалл по п. 8, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,7°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

10. Кристалл по п. 8, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 6,2°, 18,7° и 22,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

11. Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, который характеризуется наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 164,5 ppm, 162,2 ppm и 111,7 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре

[Хим. 7]

.

12. Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанной на фигуре 2

[Хим. 8]

.

13. Кристалл бромистоводородной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, показанного на фигуре 8

[Хим. 9]

.

14. Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием трех или более дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 16,7°, 17,9°, 21,2°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии

[Хим. 10]

.

15. Кристалл по п. 14, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 24,9°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

16. Кристалл по п. 14, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 17,9°, 22,9° и 24,9°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

17. Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 169,6 ppm, 107,3 ppm и 50,3 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре

[Хим. 11]

.

18. Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанной на фигуре 3

[Хим. 12]

.

19. Кристаллическая форма A малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, показанного на фигуре 9

[Хим. 13]

.

20. Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием трех или более дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 14,8°, 20,2°, 22,3° и 26,5°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии

[Хим. 14]

.

21. Кристалл по п. 20, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 22,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

22. Кристалл по п. 20, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 14,8°, 20,2° и 22,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

23. Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 171,4 ppm, 108,6 ppm и 48,8 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре

[Хим. 15]

.

24. Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанной на фигуре 4

[Хим. 16]

.

25. Кристаллическая форма B малеатной соли (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующаяся наличием твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, показанного на фигуре 10

[Хим. 17]

.

26. Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием трех или более дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), выбранных из группы, состоящей из 5,1°, 8,8°, 10,3°, 16,9° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии

[Хим. 18]

.

27. Кристалл по п. 26, характеризующийся наличием дифракционного пика при угле дифракции (2θ ± 0,2°), составляющем 18,3°, полученного методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

28. Кристалл по п. 26, характеризующийся наличием дифракционных пиков при углах дифракции (2θ ± 0,2°), составляющих 5,1°, 10,3° и 18,3°, полученных методом рентгеновской порошковой дифрактометрии.

29. Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием пиков при химических сдвигах (±0,5 ppm), составляющих 165,9 ppm, 160,7 ppm и 110,5 ppm, в твердофазном ¹³C-ЯМР-спектре

[Хим. 19]

.

30. Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием порошковой рентгеновской дифрактограммы, показанной на фигуре 5

[Хим. 20]

.

31. Кристалл соли L-миндальной кислоты (E)-N,N-диметил-4-((2-((5-((Z)-4,4,4-трифтор-1-(3-фтор-1H-индазол-5-ил)-2-фенилбут-1-ен-1-ил)пиридин-2-ил)окси)этил)амино)бут-2-енамида, представленного формулой I, характеризующийся наличием твердофазного ¹³C-ЯМР-спектра, , показанного на фигуре 11

[Хим. 21]

.

32. Фармацевтическая композиция, обладающая ERα ингибирующей активностью, содержащая эффективное количество соли или ее кристалла по любому из пп. 1-31.