RU2657517C2 - Анализ адромедуллина и способы определения зрелого адромедуллина - Google Patents
Анализ адромедуллина и способы определения зрелого адромедуллина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2657517C2 RU2657517C2 RU2014123987A RU2014123987A RU2657517C2 RU 2657517 C2 RU2657517 C2 RU 2657517C2 RU 2014123987 A RU2014123987 A RU 2014123987A RU 2014123987 A RU2014123987 A RU 2014123987A RU 2657517 C2 RU2657517 C2 RU 2657517C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- adm
- gly
- mature
- amide
- binders
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract description 34
- 102000004379 Adrenomedullin Human genes 0.000 title abstract description 19
- 101800004616 Adrenomedullin Proteins 0.000 title abstract description 19
- ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N adrenomedullin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 ULCUCJFASIJEOE-NPECTJMMSA-N 0.000 title abstract 17
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims abstract description 56
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 51
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 31
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 20
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 55
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 27
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 19
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 5
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 5
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 12
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 36
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 5
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 101000690940 Homo sapiens Pro-adrenomedullin Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- -1 Texas red Chemical class 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 102000046663 human ADM Human genes 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDLISIVVYLGCKO-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-4',5'-dichloro-2',7'-dimethoxyfluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=C(C(O)=O)C=C2C21C1=CC(OC)=C(O)C(Cl)=C1OC1=C2C=C(OC)C(O)=C1Cl IDLISIVVYLGCKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-x-rhodamine Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010015108 Epstein-Barr virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000000395 SH3 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050008861 SH3 domains Proteins 0.000 description 1
- 101100319898 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YAP6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102100024554 Tetranectin Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000005053 phenanthridines Chemical class 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- MYIOYATURDILJN-UHFFFAOYSA-N rhodamine 110 Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N)=CC2=[O+]C2=CC(N)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O MYIOYATURDILJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010206 sensitivity analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013645 tetranectin Proteins 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
- A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- A61K38/1725—Complement proteins, e.g. anaphylatoxin, C3a or C5a
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7095—Inflammation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение касается способа in vitro контроля терапии у пациентов, у которых подозревают наличие сепсиса. Сущность способа: концентрацию зрелого адромедуллина (ADM) 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly в образце биологической жидкости указанного пациента с сепсисом определяют, используя иммунологический анализ с применением комбинации двух связующих, которые выбраны из группы, состоящей из антитела к ADM и/или фрагмента антитела к ADM, и которые связывают две различные области в пределах области зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид (SEQ ID No. 1) или аминокислотный 21-52-Gly (SEQ ID No. 2) соответственно. Каждая из указанных областей содержит по меньшей мере 4 или 5 аминокислот, при этом контролируют терапию путем сравнения определенной концентрации зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly с пороговым значением, где значения концентрации зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly выше порогового значения определяют пациента, который не поддается или плохо поддается терапии, а значения ниже порогового значения определяют пациента, который поддается терапии. Изобретение касается комбинации двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце, которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид (SEQ ID No. 1) или аминокислотный 21-52-Gly зрелого адромедуллина (SEQ ID No. 2) соответственно, где каждая из указанных областей содержит по меньшей мере 4 или 5 аминокислот, и где иммунологический анализ не является сэндвич анализом, выполняемым вручную с трубкой, покрытой сложным эфиром акридиния. Также изобретение касается набора для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце, содержащего комбинацию двух указанных связующих. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 6 пр., 6 табл., 11 ил.
Description
Предметом настоящего изобретения является способ in vitro для терапии периода наблюдения у пациентов с сепсисом, в котором концентрацию зрелого ADM 1-52 и/или зрелого ADM 1-52-Gly в образце биологической жидкости указанного пациента с сепсисом определяют, используя анализ, включающий два связующих, которые связывают две различные области в пределах области зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид SEQ ID No. 1 или аминокислотный 21-52-Gly SEQ ID No. 2, где каждая из указанных областей содержит, по меньшей мере, 4 или 5 аминокислот.
Предметом представленного изобретения, кроме того, являются анализы и способы калибрования.
Пептидный адромедуллин (ADM) описан впервые у Kitamura et al., (смотри также 1; цифровые данные основаны на прилагаемом списке литературы) как новый гипотензивный пептид, содержащий 52 аминокислоты, который был выделен из феохромоцитомы человека. В том же году, также были описаны кДНК, кодирующая пептид предшественника, содержащий 185 аминокислот, и полная аминокислотная последовательность данного пептида предшественника. Пептид предшественника, который содержит, среди прочего, сигнальную последовательность из 21 аминокислоты на N-конце, называют как "пре-проадреномедуллин" (пре-проADM). Пре-проADM содержит 185 аминокислот и имеет последовательность, которая соответствует SEQ ID No: 3. Зрелый ADM отображается в SEQ ID No. 4 и зрелый ADM-Gly отображается в SEQ No. 5.
Пептидный адромедуллин (ADM) представляет собой пептид, который содержит 52 аминокислоты (SEQ ID No: 2), и который содержит аминокислоты от 95 по 146 из пре-проADM, из которого он формируется путем протеолитического расщепления. В настоящее время, по сути, только несколько фрагментов из пептидных фрагментов, образованных при расщеплении пре-проADM, были более точно охарактеризованы, в частности физиологически активные пептиды адромедуллина (ADM) и "РАМР", пептид, содержащий 20 аминокислот (22-41), которые следуют за 21 аминокислотой сигнального пептида в пре-проADM. Для обоих как ADM, так и РАМР, к тому же физиологически активные суб-фрагменты были обнаружены и исследованы более детально. Открытие и характеристика ADM в 1993 инициировало интенсивные исследования активности и поток публикаций, результаты которых были недавно подытожены в различных обзорных статьях, в контексте представленного описания, в котором ссылка делается, в частности, на статьи, которые были найдены в выпуске "Peptides", посвященном ADM (Peptides 22 (2001)), в частности (2) и (3). Дополнительным обзором является (4). В научных исследованиях на сегодняшний день, было обнаружено, среди прочего, что ADM может быть рассмотрен как полифункциональный регуляторный пептид. Он высвобождается в кровообращение в неактивной форме, продолженной глицином (5). Кроме того, существует связывающий белок (6), который является специфическим для ADM, и возможно, аналогичным образом, модулирует действие ADM.
Данные физиологические воздействия ADM, а также РАМР, которые имеют первостепенное значение в исследованиях на сегодняшний день, представляли собой воздействия, влияющие на кровяное давление. Таким образом, ADM является эффективным вазодилататором, причем существует возможность связать гипотензивный эффект, в частности, с пептидными сегментами в C-терминальной части ADM.
Кроме того, было обнаружено, что вышеуказанный далее физиологически активный пептид РАМР, образованный из пре-проADM, аналогичным образом демонстрирует гипотензивное действие, даже если он по-видимому, имеет механизм действия, отличающийся от такого ADM (смотри также в дополнение к вышеупомянутым обзорным статьям (3) и (4) также (7), (8) или (9) и (10)).
Кроме того, было обнаружено, что концентрации ADM, которые могут быть измерены в кровотоке и других биологических жидкостях, присутствуют, при ряде патологических состояний, значительно выше концентраций, которые были обнаружены у здоровых контрольных личностей. Таким образом, уровень ADM значительно возрастает у пациентов с застойной сердечной недостаточностью, инфарктом миокарда, заболеваниями почек, гипертоническими расстройствами, сахарным диабетом, в острой фазе шока и при сепсисе, и при септическом шоке, хотя и в разной степени. Концентрации РАМР, кроме того, являются возросшими при некоторых указанных патологических состояниях, но уровни плазмы снижаются по отношению к ADM ((3); страница 1702).
Кроме того, известно, что необычно высокие концентрации ADM должны наблюдаться при сепсисе или при септическом шоке (смотри также (3) и (11), (12), (13), (14) и (15)). Полученные результаты относятся к типичным гемодинамическим изменениям, которые известны как типичный симптом развития болезни у пациентов с сепсисом и другими тяжелыми синдромами, такими как, например, SIRS.
Хотя, предполагается, что ADM и РАМР образуются из одного и того же пептида предшественника, пре-проADM (SEQ ID No: 3), в котором аминокислотные последовательности, соответствующие данным пептидам присутствуют в виде частичных пептидов в эквимолярных количествах, концентрации ADM или РАМР, измеряемые в биологических жидкостях, по всей видимости, отличаются. В этом нет ничего необычного.
Таким образом, измеряемые концентрации различных продуктов разрушения одного и того же пептида предшественника могут различаться, например, потому что они представляют собой результат различных конкурирующих путей разрушения, которые, например, в случае различных патологических состояний, приводят к различной фрагментации предшествующего пептида и, следовательно, различным продуктам разрушения. Определенные частичные пептиды, содержащиеся в пептиде предшественника, могут быть образованы как свободные пептиды или не могут быть образованы, и/или различные пептиды образуются различными путями и в различных количествах. Даже если только один путь разрушения берут для обработки пептида предшественника, и, следовательно, все продукты разрушения происходят от одного и того же пептида предшественника, и должны быть сформированы в чистом виде, главным образом, в эквимолярных количествах, сравнительно устойчивые концентрации различных частичных пептидов и фрагментов, измеряемые в биологических жидкостях могут быть очень разными, а именно, например, когда их индивидуальные пептиды образуются с разной скоростью и/или имеют различные индивидуальные стабильности (время жизни) в соответствующей биологической жидкости, или если же они удаляются из кровотока на основании различных механизмов выведения и/или при разных скоростях выведения.
Адромедуллин играет решающие роли во время развития сепсиса ((16), (17)) и при многочисленных острых и хронических заболеваниях ((18), (4)).
ADM повышается при сепсисе и является прогностическим для последствий при сепсисе ((19), (14), (11)). Лечение сепсиса доводят до конца для раннего контролируемого наблюдения успешности лечения или неблагоприятного исхода, что является существенной остаточной неудовлетворенной клинической необходимостью.
В настоящее время не существует никаких ADM анализов, пригодных для рутинных диагностик. Чувствительность общедоступных в настоящее время тестов, чтобы определить зрелый ADM, является слишком низкой. Таким образом, для анализа является необходимым большой объем плазмы. Кроме того, в настоящее время, общедоступные анализы демонстрируют стабильность, связанную предварительно аналитическими ограничениями, например, образцы должны быть стабилизированы апротинином ((20), (21)). Вдобавок, некоторые анализы ADM требуют широкомасштабную подготовку образцов перед измерением (11).
Целью представленного изобретения является обеспечение анализа, который пригоден как рутинный способ для прямого измерения зрелого ADM, подходящий для стандартной автоматизированной лаборатории и технологии диагностики на месте.
Удивительно, но оказалось, что такой анализ может быть использован для контроля лечения у пациентов с сепсисом.
Объектом представленного изобретения является способ in vitro для контролирования терапии у пациентов с сепсисом, в котором определяют концентрацию зрелого ADM 1-52 и/или зрелого ADM 1-52-Gly в образце биологической жидкости указанного пациента с сепсисом, используя анализ, включающий два связующих вещества, которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly, который является аминокислотным 21-52-амидом SEQ ID No. 1 или аминокислотным 21-52-Gly SEQ ID No. 2, в котором каждая из указанных областей содержит, по меньшей мере, 4 или 5 аминокислот.
В одном варианте осуществления изобретения объектом является способ in vitro для контролирования терапии у пациентов с сепсисом, в котором одно из указанных связующих связывается с областью, которая включена в следующую последовательность зрелого ADM и/или зрелого ADM 1-52-Gly: ADM 21-32: CTVQKLAHQIYQ (SEQ ID No. 6)
и в котором указанный второй из данных связующих связывается с областью, которая включена в следующую последовательность зрелого ADM и/или зрелого ADM 1-52-Gly: ADM 42-52: APRSKISPQGY (SEQ ID No. 7)
В одном варианте осуществления изобретения чувствительность анализа указанного анализа способна определять количество ADM у здоровых субъектов и составляет <10 пг/мл, предпочтительно <40 пг/мл, более предпочтительно <70 пг/мл.
В одном варианте осуществления изобретения указанное связующее демонстрирует аффинность связывания со зрелым ADM и/или зрелым ADM 1-52-Gly, по меньшей мере, 107 Μ-1, предпочтительно 108 Μ-1, предпочтительная аффинность составляет больше чем 109 М-1, наиболее предпочтительная - больше чем 1010 М-1. Квалифицированный специалист в данной области с уровня техники знает, что может быть рассмотрено компенсирование более низкой аффинности путем применения более высокой дозы соединений и данное мероприятие не будет приводить к выходу за пределы объема изобретения.
Для определения аффинности антител к адромедуллину, определяли кинетики связывания адромедуллина с иммобилизованным антителом посредством поверхностного плазмонного резонанса без введения метки, используя систему Biacore 2000 (GE Healthcare Europe GmbH, Freiburg, Germany). Обратимую иммобилизацию антител осуществляли, используя анти-мышиное Fe антитело, ковалентно связанное с высокой плотностью с поверхностью СМ5 сенсора в соответствии с инструкциями производителя (набор для захвата мышиного антитела; GE Healthcare), (22).
В одном варианте осуществления изобретения указанное связующее выбирают из группы, включающей анти-адромедуллиновое антитело, или фрагмент анти-ADM антитела, связывающийся с ADM, или не-Ig матрицу, связывающуюся с адромедуллином.
Доведение до конца терапии означает, что, по меньшей мере, одну концентрацию ADM зрелого 1-52 (SEQ ID No. 4) и/или зрелого ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5) определяют в образце, предпочтительно больше чем один раз, предпочтительно два раза или один раз в день после начала терапии.
В одном варианте осуществления изобретения он может быть так называемым POC-тестом (диагностика на месте), который представляет собой технологию тестирования, которая позволяет выполнение теста в пределах менее чем 1 час около пациента без требования полностью автоматизированной системы анализа. Одним из примеров данной технологии является иммунохроматографическая технология проведения теста.
В одном варианте осуществления изобретения такой анализ представляет собой сэндвич иммуноанализ, с использованием какого-либо вида технологии детектирования, включая, но, не ограничиваясь этим, ферментную метку, хемилюминесцентную метку, электрохемилюминесцентную метку, предпочтительно полностью автоматизированный анализ. В одном варианте осуществления изобретения такой анализ представляет собой меченый ферментом сэндвич анализ. Примеры автоматизированного или полностью автоматизированного анализа включают анализы, которые могут быть использованы для одной из следующих систем: Roche Elecsys®, Abbott Architect®, Siemens Centauer®, Brahms Kryptor®, Biomerieux Vidas®, Alere Triage®.
Разнообразные иммунологические анализы известны и могут быть использованы для анализов и способов представленного изобретения, они включают: радиоиммунологические анализы ("RIA"), гомогенные иммуноферментные анализы ("EMIT"), фермент-связанные иммуносорбентные исследования ("ELISA"), апоферментный реактивационный иммуноанализ ("ARIS"), иммуноанализы с индикаторными полосками и иммунно-хроматографические анализы.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, один из указанных двух связующих метят для того, чтобы их детектировать.
Предпочтительные способы детектирования включают иммуноанализы в различных форматах, таких как, например, радиоиммунологический анализ (RIA), хемилюминесцентные- и флуоресцентные-иммуноанализы, фермент-связанные иммуноанализы (ELISA), сферические матрицы на основе Luminex, белковые микроматричные анализы, и быстрые форматы исследований, такие как, например, иммунно-хроматографические тест-полоски.
В предпочтительном варианте осуществления указанную метку выбирают из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку, метку с радиоактивным йодом.
Анализы могут быть гомогенными или гетерогенными анализами, конкурентными и неконкурентными анализами. В одном варианте осуществления, анализ представлен в форме сэндвич анализа, который является неконкурентным иммуноанализом, в котором молекула, которую детектируют и/или количественно определяют, связывается с первым антителом и со вторым антителом. Первое антитело может быть связанным с твердой фазой, например, сферой, поверхностью лунки или другого контейнера, чипом или полоской, и второе антитело представляет собой антитело, которое метят, например красителем, радиоактивным изотопом, или реакционно-способным, или каталитически активным фрагментом. Количество меченого антитела, связанного с анализируемым образцом, затем измеряют, используя соответствующий способ. Общий состав и процедуры, связанные с "сэндвич анализами" хорошо установлены и известны квалифицированному специалисту в данной области (23).
В другом варианте осуществления анализ включает две молекулы захвата, предпочтительно, антитела, которые оба присутствуют как дисперсии в жидкой реакционной смеси, в которой первый маркирующий компонент присоединяется к первой молекуле захвата, где указанный первый маркирующий компонент является частью маркирующей системы, основанной на флуоресцентном- или хемилюминесцентном гашении или усилении, и второй маркирующий компонент указанной маркирующей системы присоединяется ко второй молекуле захвата, таким образом, что при связывании обеих молекул захвата с анализируемым образцом измеряемый сигнал генерируется таким образом, что позволяет детектирование сформированных сэндвич-комплексов в растворе, содержащем образец.
В другом варианте осуществления, указанная маркирующая система содержит криптаты редкоземельных металлов или хелаты редкоземельных металлов в комбинации с флуоресцентным красителем или хемилюминесцентным красителем, в частности с красителем цианинового типа.
В контексте представленного изобретения, анализы, основанные на флуоресценции, включают использование красителей, которые, например, могут быть выбраны из группы, состоящей из FAM (5- или 6-карбоксифлуоресцеина), VIC, NED, флуоресцеина, флуоресцеинизотиоцианата (FITC), IRD-700/800, цианиновых красителей, таких как CY3, CY5, CY3.5, CY5.5, Cy7, ксантен, 6-карбокси-2',4',7',4,7-гексахлорфлуоресцеин (HEX), ΤΕΤ, 6-карбокси-4',5'-дихлор-2',7'-диметоксифлуоресцеин (JOE), Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметил-6-карбоксиродамин (TAMRA), 6-карбокси-Х-родамин (ROX), 5-карбоксиродамин-6G (R6G5), 6-карбоксиродамин-6С (RG6), родамин, родамин зеленый, родамин красный, родамин 110, BODIPY красителей, таких как BODIPY TMR, орегоновый зеленый, кумаринов, таких как умбеллиферон, бензимидов, таких как хехст 33258; фенантридинов, таких как техасский красный, якима желтый, Alexa Fluor, PET, бромистый этидий, акридиновых красителей, карбазольных красителей, феноксазиновых красителей, порфириновых красителей, полиметиновых красителей, и т.д.
В контексте представленного изобретения, анализы, основанные на хемилюминесценции, включают использование красителей, которые основаны на физических принципах, описанных для хемилюминесцентных материалов в (24). Предпочтительными хемилюминесцентными красителями являются сложные эфиры акридиния.
Как упоминается в данном документе, "анализ" или "диагностический анализ" может быть какого-либо типа, применяемого в области диагностики. Такой анализ может быть основан на связывании с анализируемым образцом, чтобы быть детектированным одним или больше зондами захвата с определенной аффинностью. Что касается взаимодействия между молекулами захвата и молекулами-мишенями, или молекулами, представляющими интерес, константа аффинности предпочтительно составляет больше, чем
В контексте представленного изобретения, "молекулы связующего вещества" представляют собой молекулы, которые могут быть использованы для связывания молекул-мишеней или молекул, представляющих интерес, то есть с анализируемыми образцами (то есть в контексте представленного изобретения РСТ и его фрагментов), из образца. Молекулы связующего вещества, таким образом, должны иметь соответствующую форму, как пространственную, так и с точки зрения особенностей поверхности, таких как поверхностный заряд, гидрофобность, гидрофильность, присутствие или отсутствие доноров и/или акцепторов Льюиса, чтобы специфически связываться с молекулами-мишенями или молекулами, представляющими интерес. Таким образом, связывание, например, может быть опосредованным через взаимодействия ионной, ван-дер-Ваальсовской, пи-пи, сигма-пи, гидрофобной или водородной связи или комбинации из двух или больше упомянутых выше взаимодействий между молекулами захвата и молекулами-мишенями или молекулами, представляющими интерес. В контексте представленного изобретения, молекулы связующего вещества, например, могут быть выбраны из группы, состоящей из молекулы нуклеиновой кислоты, молекулы углевода, молекулы РНК, белка, антитела, пептида или гликобелка. Предпочтительно, молекулы связующего вещества представляют собой антитела, включая их фрагменты с достаточной аффинностью к мишени или молекуле, представляющей интерес, и включая рекомбинантные антитела или фрагменты рекомбинантных антител, а также химически и/или биохимически модифицированные производные указанных антител или фрагментов, полученных из вариантной цепи с длиной, по меньшей мере, из их 12 аминокислот.
Хемилюминесцентная метка может быть меткой сложного эфира акридиния, стероидными метками, включающими изолюминольные метки и тому подобное.
Ферментные метки могут быть лактатдегидрогеназой (LDH), креатинкиназой (CPK), щелочной фосфатазой, аспартатаминотрансферазой (AST), аланинаминотрансферазой (ALT), кислой фосфатазой, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой и т.д.
В одном варианте осуществления изобретения, по меньшей мере, один из указанных двух связывающих веществ является связанным с твердой фазой, как магнитные частицы, и полистирольными поверхностями.
В одном варианте осуществления изобретения концентрация зрелого ADM 1-52 и/или зрелого ADM 1-52-Gly, измеренная в образце плазмы или крови, находится в диапазоне 10-500 пг/мл.
Уровни ADM представленного изобретения определялись согласно описанному ADM анализу. Указанные выше значения могли быть отличающимися в других ADM анализах, в зависимости от их способа калибровки. Указанные выше значения соответственно должны применяться для таких по-разному откалиброванных ADM анализов, принимая во внимание различия в калибровке. ADM анализы могли быть откалиброваны согласно корреляции и корректированию посредством своих нормальных диапазонов (здоровое население). Альтернативно, коммерчески доступные контрольные образцы могли быть использованы для корректирования различных калибровок (ICI Diagnostics, Berlin, Germany). Согласно описанному ADM анализу определяли среднее значение нормальной совокупности, которое составляло 24,7 пг/мл.
В одном варианте осуществления изобретения применяется пороговая чувствительность в соответствии, с чем значение выше пороговой чувствительности показывает, что пациент не реагирует или плохо реагирует на терапию, тогда как значение ниже указанной пороговой чувствительности показывает пациента, который реагирует на терапию.
В одном варианте осуществления изобретения применяется пороговая чувствительность от 60 до 80 пг/мл, предпочтительно 70 пг/мл.
В одном варианте осуществления изобретения указанный образец выбирают из группы, включающей человеческую цитратную плазму, гепаринизированную плазму, ЭДТА плазму, цельную кровь.
В одном варианте осуществления изобретения взятый указанный образец непосредственно измеряют без какой-либо дополнительной подготовки образца.
В одном варианте осуществления изобретения указанный способ осуществляют на полностью автоматизированном приборе. Roche Elecsys®, Abbott Architect®, Siemens Centauer®, Brahms Kryptor®, Biomerieux Vidas®, Alere Triage®.
В одном варианте осуществления изобретения зрелый ADM 1-52 и/или зрелый ADM 1-52-Gly определяют, по меньшей мере, в двух образцах, где указанные образцы берут в различные моменты времени от указанных пациентов с сепсисом. Указанные образцы могут браться один раз в день в дни терапии. Такой диагностический режим может быть применен для другого биомаркера, который описывают, например (25) и также (26).
В одном варианте осуществления изобретения объем измеряемого образца составляет меньше или равно 50 мкл.
Способ in vitro для контролирования терапии у пациентов с сепсисом в соответствии с представленным изобретением может быть комбинированным с дополнительными клиническими и/или лабораторными параметрами и/или клиническими показателями, такими как, например, Apache 2 показатель, SOFA показатель, или другие, или одним или больше параметрами, содержащимися в пределах показателя. Изменяемые величины/параметры могут комбинировать постоянно или с перерывами, используя стандартные статистические способы.
Объектом изобретения, кроме того, является анализ для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце, который включает два связующих, которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly, который представляет собой аминокислотный 21-52-амид SEQ ID No. 1 или аминокислотный 21-52-Gly зрелого адромедуллина SEQ ID No. 2, где каждая из указанных областей содержит, по меньшей мере, 4 или 5 аминокислот, и где указанный анализ не является выполняемым вручную сэндвич анализом с трубкой покрытой сложным эфиром акридиния.
Объектом изобретения, кроме того, является анализ для определения зрелого адромедуллина, и/или адромедуллина-Gly, и/или адромедуллина-Gly в образце, который включает два связующих, которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly, который представляет собой аминокислотный 21-52-амид SEQ ID No. 1 или аминокислотный 21-52-Gly зрелого адромедуллина SEQ ID No. 2, где каждая из указанных областей содержит, по меньшей мере, 4 или 5 аминокислот, и где указанный анализ не является выполняемым вручную сэндвич анализом с трубкой покрытой сложным эфиром акридиния, и где одно из указанных связующих представляет собой антитело, которое связывается с SEQ ID No. 4, и где второе из указанных связующих представляет собой антитело, которое связывается с SEQ ID No. 7 (APRSKISPQGY-CO-NH2).
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением одно из указанных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM:
CTVQKLAHQIYQ (SEQ ID No. 6)
и где указанное второе из данных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM:
APRSKISPQGY (SEQ ID No. 7)
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением чувствительность анализа указанного анализа, которая способна быть количественно определенной ADM у здоровых субъектов, и составляет <10 пг/мл, предпочтительно <40 пг/мл и более предпочтительно <70 пг/мл.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением указанное связующее демонстрирует аффинность связывания с адромедуллином, по меньшей мере, 107 Μ-1, предпочтительно 108 Μ-1, предпочтительная константа аффинности составляет больше чем 109 М-1, наиболее предпочтительно - больше чем 1010 М-1. Квалифицированный специалист в данной области с уровня техники знает, что может быть рассмотрено компенсирование более низкой аффинности путем применения более высокой дозы соединений и данное мероприятие не будет приводить к выходу за пределы объема изобретения. Аффинность связывания может быть определена, как описано выше.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением указанное связующее выбирают из группы, включающей анти-адромедуллиновое антитело или фрагмент анти-ADM антитела, которое связывается с ADM, или не-Ig матрицу, которая связывается с адромедуллином.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением такой анализ представляет собой сэндвич анализ, предпочтительно, полностью автоматизированный анализ. Это может быть ELISA, полностью автоматизированный или выполняемый в ручную. Это может быть так называемый PCT-тест (диагностика на месте). Примеры автоматизированного или полностью автоматизированного анализа включают анализы, которые могут быть использованы для одной из следующих систем: Roche Elecsys®, Abbott Architect®, Siemens Centauer®, Brahms Kryptor®, Biomerieux Vidas®, Alere Triage®. Примеры форматов исследований приведены выше.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретеним, по меньшей мере, один из указанных двух связующих является меченным, для того чтобы быть определенным. Примеры меток представлены выше.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением, по меньшей мере, один из указанных двух связующих является связанным с твердой фазой. Примеры твердых фаз представлены выше.
В одном варианте осуществления анализов для определения зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly в образце в соответствии с представленным изобретением указанную метку выбирают из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку, метку с радиоактивным йодом.
Следующим объектом представленного изобретения является набор, включающий анализ в соответствии с представленным изобретением, в котором компоненты указанного анализа могут содержаться в одном или больше контейнере.
Следующим объектом представленного изобретения является способ калибрования анализа в соответствии с представленным изобретением, в котором связующее, предпочтительно антитело, используют таким образом, что он связывается с областью, по меньшей мере, из 5 аминокислот в пределах аминокислот 1-16 (SEQ ID No. 8) зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly. Указанное связующее может быть антителом, или фрагментом антитела, или не-Ig матрицей, которая связывается с областью, по меньшей мере, из 5 аминокислот в пределах аминокислот 1-16 (SEQ ID No. 8) зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly.
В одном варианте осуществления способа калибрования анализа в соответствии с изобретением указанное N-терминальное антитело, или фрагмент, или матрица распознает и связывается с N-терминальным концом (aal) зрелого адромедуллина и/или адромедуллина-Gly. Данный способ в другом предпочтительном варианте осуществления указанное анти-ADM-антитело или анти-адромедуллиновый фрагмент антитела или не-Ig матрица связывается только с областью в последовательности зрелого ADM, если N-терминальный конец ADM является свободным. В указанном варианте осуществления анти-ADM-антитело, или анти-адромедуллиновый фрагмент антитела, или не-Ig матрица не могли бы связываться с областью в последовательности зрелого ADM, если указанная последовательность является включенной в про-ADM.
Антитела, приемлемые для калибрования анализа в соответствии с изобретением, являются такими связующими, которые смягчают адсорбционные свойства ADM. Кроме того, такое связующее должно быть совместимым со связующими, используемыми в анализе детектирования, например, указанное связующее не должно препятствовать при связывании меченого связующего и твердофазного связующего в случае ELISA.
Представленные способы и анализы являются приемлемыми для рутинных применений. В большинстве случаев рутинные применения требуют того, что необходимый объем образца не должен превышать 50 мкл. Рутинное применение, кроме того, требует того, что предшествующая аналитическая обработка остается минимальной или является нулевой (использование рутинных образцов подобных ЭДТА плазме, цитратной плазме). Предварительные аналитические требования должны соответствовать клинической практике: минимальная стабильность анализируемого образца (>90% восстановление) должна быть при комнатной температуре, по меньшей мере, 2 часа.
Антитело в соответствии с представленным изобретением представляет собой белок, включающий один или больше полипептидов, в значительной степени кодированных иммуноглобулиновыми генами, которые специфически связывают антиген. Распознающие иммуноглобулиновые гены включают каппа, лямбда, альфа (IgA), гамма (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), дельта (IgD), эпсилон (IgE) и мю (IgM) константные области генов, а также огромное количество вариабельных областей иммуноглобулиновых генов. Иммуноглобулиновые легкие цепи полной длины имеют, в основном, приблизительно 25 Кд или 214 аминокислот в длину. Иммуноглобулиновые тяжелые цепи полной длины имеют, в основном, приблизительно 50 Кд или 446 аминокислот в длину. Легкие цепи кодируются геном с вариабельной областью на NH2-терминальном конце (приблизительно 110 аминокислот в длину) и каппа или лямбда ген с константной областью на COOH-терминальном конце. Тяжелые цепи кодируются, подобным образом, геном с вариабельной областью (приблизительно 116 аминокислот в длину) и одним из других генов с константной областью.
Основной структурной единицей антитела, как правило, является тетрамер, который состоит из двух идентичных пар иммуноглобулиновых цепей, где каждая пара имеет одну легкую и одну тяжелую цепь. В каждой паре, вариабельные области легкой и тяжелой цепи связываются с антигеном, и константные области являются посредниками эффекторных функций. Иммуноглобулины, кроме того, существуют в различных других формах, включая, например, Fv, Fab и (Fab')2, а также бифункциональные гибридные антитела и единичные цепи ((27), (28), (29), (30), (31)). Вариабельная область иммуноглобулиновой легкой или тяжелой цепи включает структурную область, прерванную тремя гипервариабельными областями, также называемые области определения комплементарности (CDR) смотри (32). Как указано выше, CDR являются, прежде всего, ответственными за связывание с эпитопом антигена. Иммунный комплекс представляет собой антитело, такое как моноклональное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело или человеческое антитело, или функциональный фрагмент антитела, специфически связанный с антигеном.
Химерные антитела представляют собой антитела, чьи гены с легкой и тяжелой цепью были сконструированными, как правило, путем генной инженерии, из иммуноглобулиновых генов с вариабельной и константной областями, которые принадлежат к различным видам. Например, вариабельные сегменты генов из мышиного моноклонального антитела могут быть связаны с человеческими константными сегментами, такими как каппа и гамма 1 или гамма 3. В одном примере, терапевтическое химерное антитело является, таким образом, гибридным белком, состоящим из вариабельного или антиген-связывающего домена из мышиного антитела и константного или эффекторного домена из человеческого антитела, хотя другие виды, относящиеся к млекопитающим, могут быть использованы, или вариабельная область может быть получена, путем использования молекулярных способов. Способы создания химерного антитела хорошо известны в данной области с уровня техники, например, смотри (33). "Гуманизированное" иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин, который включает человеческую структурную область и один или больше CDR из нечеловеческого (такого как мышиного, крысиного или синтетического) иммуноглобулина. Нечеловеческий иммуноглобулин, обеспечивающий CDR, называется "донором" и человеческий иммуноглобулин, обеспечивающий структуру, называется "акцептором". В одном варианте осуществления, все CDR являются из донорного иммуноглобулина в гуманизированном иммуноглобулине. Не существует необходимости в присутствии константных областей, но если они присутствуют, они должны быть в значительной степени идентичными к константным областям человеческого иммуноглобулина, то есть, по меньшей мере, приблизительно 85-90%, такая как приблизительно 95% или больше идентичность. Следовательно, все части гуманизированного иммуноглобулина, за исключением возможно CDR, являются в значительной степени идентичными соответствующим частям природных последовательностей человеческого иммуноглобулина. "Гуманизированное антитело" представляет собой антитело, содержащее гуманизированную легкую цепь и гуманизированную тяжелую цепь иммуноглобулина. Гуманизированное антитело связывается с тем же антигеном, что и донорное антитело, которое обеспечивает CDR. Акцепторная структура гуманизированного иммуноглобулина или антитела может иметь ограниченное количество заместителей аминокислотами, взятыми из донорной структуры. Гуманизированные или другие моноклональные антитела может иметь дополнительные консервативные аминокислотные замещения, которые в значительной степени не оказывают влияния на связывание антигена или другие функции иммуноглобулина. Иллюстративные консервативные замещения являются такими как gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gln; ser, thr; lys, arg; и phe, tyr. Гуманизированные иммуноглобулины могут быть сконструированы посредством генной инженерии (например, смотри (34)). Человеческое антитело представляет собой антитело, в котором гены с легкой и тяжелой цепью являются человеческого происхождения. Человеческие антитела могут быть сгенерированы, используя способы, используя способы, известные в данной области с уровня техники. Человеческие антитела могут быть получены путем иммортализации человеческой В клетки, секретирующей антитело, представляющей интерес. Иммортализации может быть осуществлена, например, путем EBV инфицирования или путем слияния человеческой В клетки с клеткой миеломы или гибридомы с получением триомной клетки. Человеческие антитела, кроме того, могут быть получены согласно способам фагового дисплея (смотри, например, (35), (36), (37), которые включены в данный документ в виде ссылки), или выбраны из комбинаторной библиотеки человеческого моноклонального антитела (смотри Morphosys website). Человеческие антитела, кроме того, могут быть получены путем использования трансгенных животных, несущих человеческий иммуноглобулиновый ген (например, смотри (38) и (39) которые включены в данный документ в виде ссылки).
Таким образом, ADM антитело может иметь форматы, известные в данной области с уровня техники. Примерами являются человеческие антитела, моноклональные антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, CDR-привитые антитела. В предпочтительном варианте осуществления антитела в соответствии с представленным изобретением представляют собой рекомбинантно полученные антитела как, например, IgG, типовый, полной длины иммуноглобулин или фрагмент антител, содержащий, по меньшей мере, F-вариабельный домен тяжелой и/или легкой цепи как, например, химически связанные антитела (связывание фрагмента антигена), включая, но не ограничиваясь этим, Fab-фрагменты, включая Fab минитела, Fab антитело с одиночной цепью, моновалентное Fab антитело с эпитопными метками, например, Fab-V5Sx2; бивалентный Fab (мини-антитело) димеризованный с СНЗ доменом; бивалентный Fab или мультивалентный Fab, например, образованный посредством мультимеризации с помощью гетерологического домена, например, посредством димеризации dHLX доменов, например, Fab-dHLX-FSx2; Р(ab')2-фрагменты, scFv-фрагменты, мультимеризованные мультивалентные или/и мультиспецифические scFv-фрагменты, бивалентные и/или биспецифические диатела, BITE® (биспецифический Т-клеточный блокиратор), трифункциональные антитела, поливалентные антитела, например, из отличающегося класса, чем G; антитела с одиночным доменом, например, нанотела, полученные из верблюжьих или рыбьих иммуноглобулинов и многих других.
В дополнение к анти-ADM антителам другие полимерные матрицы являются хорошо известными в данной области с уровня техники как такие, что образуют комплекс мишенной молекулы и используются для генерирования высоко мишенных специфических биополимеров. Примерами являются аптамеры, шпигельмеры, антикалины и конотоксины.
В предпочтительном варианте осуществления формат ADM антитела format выбирают из группы, включающей Fv фрагмент, scFv фрагмент, Fab фрагмент, scFab фрагмент, (Fab)2 фрагмент и scFv-Fc слитый белок. В другом преимущественном варианте осуществления формат антитела выбирают из группы, включающей scFab фрагмент, Fab фрагмент, scFv фрагмент и их биологически доступные оптимизированные конъюгаты, такие как ПЭГилированные фрагменты. Одним из наиболее предпочтительных форматов является scFab формат.
He-Ig матрицы могут быть белковыми матрицами и могут быть использованы как имитаторы антитела, так как они способны связываться с лигандами или антигенами. He-Ig матрицы могут быть выбраны из группы, состоящей из не-Ig матриц на основе тетранектина (например, описанных в (40)), фибронектиновых матриц (например, описанных в (41)); матриц на основе липокалина {например, описанных в (42)); убиквинтиновых матриц (например, описанных в (43)), матриц переноса (например, описанных в (44)), белковых А матриц (например, описанных в (45)), матриц на основе повтора анкирина (например, описанных в (46), микробелковых (предпочтительно микробелки, образующие цистеиновый узел) матриц (например, описанных в (47)), матриц на основе Fyn SH3 домена (например, описанных в (48)), матриц на основе EGFR-A-домена (например, описанных в (49)) и матриц на основе домена Куница (например, описанных в (59)).
В другом преимущественном варианте осуществления анти-ADM антитело или фрагмент антитела, связывающийся с ADM, представляет собой моноспецифическое антитело. Моноспецифические антитела представляют собой антитела, которые все имеют аффинность к одному и тому же антигену. Моноклональные антитела являются моноспецифическими, но моноспецифические антитела, кроме того, могут быть получены, используя другие способы, чем продуцирование их из обыкновенной зародышевой клетки.
В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения антитела в соответствии с представленным изобретением могут быть получены следующим образом:
Balb/c мыши иммунизировали 100 мкг ADM-пептид-BSA-конъюгата в 0 и на 14 день (эмульгированный в 100 мкл полного адъюванта Фрейнда) и 50 мкг на 21 и 28 день (в 100 мкл неполного адъюванта Фрейнда). За три дня до этого проводили эксперимент слияния, в котором животное получало 50 мкг конъюгата, растворенного в 100 мкл физиологического раствора, которое давалось в виде одной внутрибрюшинной и одной внутривенной инъекции.
Спленоциты от иммунизированной мыши и клетки из миеломной клеточной линии SP2/0 были слитыми с 1 мл 50% полиэтиленгликоля в течение 30 с при 37°C. После промывания, клетки высевали в 96-луночные планшеты для клеточной культуры. Гибридные клоны выбирали на основании роста в HAT среде [RPMI 1640 культуральная среда, дополненная 20% эмбриональной телячьей сывороткой и HAT-добавкой]. Через две недели HAT среду заменяют на HT среду в течение трех переносов, с последующим возвращением к нормальной клеточной культуральной среде.
Клеточные культуральные супернатанты первично подвергали скринингу на антиген-специфические IgG антитела через три недели после слития. Давшие положительный результат микрокультуры переносили в 24-лунковые планшеты для культивирования. После повторного исследования выбранные культуры клонировали и переклонировали, используя способ предельного разведения, и определяли изотопы (смотри также (51) и (52)).
Антитела могут быть получены посредством фагового дисплея в соответствии со следующим способом:
Библиотеки генов человеческого интактного антитела HAL7/8 использовали для выделения рекомбинантной одиночной цепи F-вариабельных доменов (scFv) против пептида адромедуллина. Библиотеки генов антитела подвергали скринингу, используя стратегию пэннинга, которая включает использование пептидов, содержащих биотиновую метку, связанную через два различных спейсера с пептидной последовательностью адромедуллина. Смесь циклов пэннинга, используя неспецифически связанный антиген и стрептавидин-связанный антиген, использовали, чтобы минимизировать фон неспецифических связующих. Элюированные фаги из третьего цикла пэннинга использовали для генерирования моноклонального scFv, экспрессирующего E. coli штаммы. Супернатант из культивирования данных клональных штамов непосредственно использовали для антиген ELISA исследования. (53) и (54).
Гуманизацию мышиных антител могут проводить в соответствии со следующим способом:
Для гуманизации антитела последовательность антитела мышиного происхождения анализируют для структурного взаимодействия скелетных областей (FR) с областями определения комплементарности (CDR) и антигеном. Основываясь на структурном моделировании выбирают соответствующий FR человеческого происхождения, и последовательности мышиной CDR трансплантируют в человеческую FR. Вариации в аминокислотной последовательности CDR или FR могут быть введены в структурные взаимодействия восстановления, которые были отменены переключателем видов для FR последовательностей. Данное восстановление структурных взаимодействий может быть достигнуто, используя библиотеки фагового дисплея или с помощью направленного подхода, руководствуясь молекулярным моделированием (55.)
Создание антител
Нами были созданы мышиные моноклональные антитела, связывающиеся с N-терминальным концом, среднераспространенным и C-терминальной частью hADM, и определены их константы аффинности (таблица 1).
Пептиды для иммунизации
Пептиды были поставлены компанией JPT Peptide Technologies GmbH (Berlin, Germany). Пептиды связывали с BSA, используя способ Сульфо-SMCC перекрестного сшивания. Способ перекрестного сшивания выполняли в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Fisher/Pierce).
Пример 1
Генерация антител и определение их констант аффинности
Мышиные антитела генерировали в соответствии сое следующим способом: Balb/c мышь иммунизировали 100 мкг пептид-BSA-конъюгат на 0 и 14 день (эмульгированный в 100 мкл полного адъюванта Фрейнда) и 50 мкг на 21 и 28 день (в 100 мкл неполного адъюванта Фрейнда). За три дня до этого проводили эксперимент слияния, в котором животное получало 50 мкг конъюгата, растворенного в 100 мкл физиологического раствора, которое давалось в виде одной внутрибрюшинной и одной внутривенной инъекции.
Спленоциты от иммунизированной мыши и клетки из миеломной клеточной линии SP2/0 были слитыми с 1 мл 50% полиэтиленгликоля в течение 30 с при 37°C. После промывания, клетки высевали в 96-луночные планшеты для клеточной культуры. Гибридные клоны выбирали на основании роста в HAT среде [RPMI 1640 культуральная среда, дополненная 20% эмбриональной телячьей сывороткой и HAT-добавкой]. Через две недели HAT среду меняют на HT среду в течение трех переносов, с последующим возвращением к нормальной клеточной культуральной среде.
Клеточные культуральные супернатанты первично подвергали скринингу на антиген-специфические IgG антитела через три недели после слития. Давшие положительный результат микрокультуры переносили в 24-лунковые планшеты для культивирования. После повторного исследования выбранные культуры клонировали и переклонировали, используя способ предельного разведения, и определяли изотипы ((51) и (52)).
Получение моноклонального антитела
Антитела получали, используя стандартные способы получения антитела (56), и чистили с помощью белка А. Чистота антитела составляла >95%, основываясь на SDS гель-электрофорезном анализе.
Константы аффинности
Для определения аффинности антител к адромедуллину, определяли кинетики связывания адромедуллина с иммобилизированным антителом с помощью поверхностного плазмонного резонанса без меток, используя систему Biacore 2000 (GE Healthcare Europe GmbH, Freiburg, Germany). Обратимую иммобилизацию антител проводили, используя анти-мышиное Fe антитело, ковалентно связанное с высокой плотностью с поверхностью СМ5 датчика в соответствии с инструкциями производителя (комплект захвата мышиного антитела; GE Healthcare) (22).
Способ введения метки (меченое вещество): 100 мкг (100 мкл) антитела (1 мг/мл в PBS, pH 7,4,) смешивали с 10 мкл NHS-сложный эфир акридиния (1 мг/мл в ацетонитриле, In Vent GmbH, Germany) (57) и инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре. Меченный СТ-Н чистили, используя гель-фильтрационную ВЭЖХ на Bio-Sil® SEC 400-5 (Bio-Rad Laboratories, Inc., USA). Очищенное меченое антитело разбавляли в (300 ммоль/л фосфата калия, 100 ммоль/л NaCl, 10 ммоль/л Na-ЭДТА, 5 г/л бычьего сывороточного альбумина, рН 7,0). Конечная концентрация составляла приблизительно 800.000 относительных световых единиц (RLU) меченого соединения (приблизительно 20 нг меченого антитела) на 200 мкл. Хемилюминесценцию сложного эфира акридиния измеряли путем использования AutoLumat LB 953 (Berthold Technologies GmbH & Co. KG).
Твердая фаза: Полистирольные трубки (Greiner Bio-One International AG, Austria) покрывали (18 часов при комнатной температуре) антителом ((1.5 мкг антитело/0,3 мл 100 ммоль/л NaCl, 50 ммоль/л TRIS/HCl, рН 7.8). После блокирования 5% бычьим сывороточным альбумином, трубки промывали PBS, pH 7,4 и сушили в вакууме.
Калибровочные стандарты:
Синтетический человеческий ADM (Bachem, Switzerland) линейно разбавляли, используя 50 мМ Трис/HCl, 250 мМ NaCl, 0,2% Triton Х-100, 0,5% BSA, 20 табл./л полных протеазных таблеток смеси ингибиторов протеаз (Roche AG); pH 7,8. Калибровочные стандарты хранили при -20°C до использования.
Пример 2
Определение комбинации антитела, которая дает высокие соотношения сигнал/шум
hADM Иммуноанализ:
50 мкл образца (или калибровочного стандарта) раскапывали из пипетки на покрытые трубки, после добавления меченого второго антитела (200 мкл), трубки инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре. Несвязанное меченое вещество удаляли путем промывания 5 раз (каждый по 1 мл) промывным раствором (20 мМ PBS, pH 7,4, 0,1% Triton Х-100).
Хемилюминесценцию связанной трубки измеряли путем использования LB 953.
Все антитела использовали в сэндвич иммуноанализе как покрытую трубку и меченое антитело, и комбинировали в следующих вариациях (таблица 2):
Инкубирование выполняли, как описано в hADM-иммуноанализе. Результаты представлены в соотношении специфический сигнал (при 10 нг/мл АОМ)/фоновый (образец без ADM) сигнал.
Неожиданно, мы обнаружили, что комбинация MR-ADM и CT-ADM является комбинацией с наиболее высоким соотношением сигнал/шум.
Впоследствии, мы использовали данную комбинацию с антителом для дальнейших исследований. Мы использовали MR-ADM, как твердофазное антитело, и CT-ADM, как меченое антитело. Типичная кривая доза/сигнал показана на фиг. 1. Аналитическая чувствительность (среднее из 10 серий, образец без ADM+2SD) анализа составляла 2 пг ADM/мл.
Пример 3
Стабильность человеческого адромедуллина:
Человеческий ADM разбавляли в человеческой цитратной плазме (n=5, конечная концентрация 10 нг ADM/мл) и инкубировали при 24°С. В выбранные точки времени, аликвоты замораживали при -20°C. Непосредственно после оттаивания образцы hADM определяли количественно путем использования hADM иммуноанализ, описанный выше.
Неожиданно, используя комбинации с антителом MR-ADM и CT-ADM в сэндвич иммунном анализе, преаналитическая стабильность анализируемого образца является высокой (только 0,9%/ч среднее значение потери иммунной реактивности). В отличие от этого, используя другие способы анализа, сообщалось о периоде полувыведения из плазмы только 22 мин (Hinson 2000). Поскольку время от взятия образца до анализа в обычном больничном порядке составляет меньше чем 2 ч, используемый способ определения является приемлемым для стандартной постановки диагноза. Примечательно, что какие-либо нестандартные добавки к образцам (подобные апротинину, (20)) не нужны, чтобы достигнуть приемлемых стабильностей ADM-иммунологической реактивности.
Пример 4
Воспроизводимость препаратов калибровочного стандарта
Авторы обнаружили высокое варьирование результатов, получая калибровочные стандарты для ADM анализов (среднее CV 8,5%, смотри таблицу 4). Это может быть в результате высокой адсорбции hADM на поверхностях пластмассы и стекла (смотри также (58)). Данный эффект только слегка был уменьшен путем добавления детергентов (вплоть до 1% Triton X 100 или 1% Tween 20), белка (вплоть до 5% BSA) и раствора высокой ионной силы (вплоть до 1М NaCl) или их комбинаций. Неожиданно, если избыток анти ADM антитела (10 мкг/мл) добавляют в буфер разбавления калибровочного стандарта, то восстановление и воспроизводимость препаратов калибровочного стандарта для ADM анализа существенно улучшились до <1% среди препарата CV (таблица 4).
К счастью, присутствие N-терминальных антител не оказывало действие на генерируемый ADM-сигнал за счет комбинации MR- и C-терминальных антител (фиг. 11).
Средипрепаратное варьирование калибровочных стандартов
ADM анализ калибровочные стандарты получали, как описано выше с и без 10 мкг/мл NT-ADM-антитела. Коэффициенты варьирования представлены от 5 независимых анализов препарата. Калибровочные стандарты измеряли, используя ADM анализ, описанный выше, с/ш-с = соотношение сигнал-шум.
Для всех следующих исследований мы использовали ADM анализ, основанный на калибровочных стандартах, полученных в присутствии 10 мкг/мл NT-ADM антитела и 10 мкг/мл NT-ADM антитела, как добавление в буфер меченого вещества.
Пример 5
Чувствительность
Цель чувствительности анализа состояла в том, чтобы полностью покрыть ADM концентрации здоровых субъектов.
ADM концентрация у здоровых субъектов:
Здоровые субъекты (n=100, средний возраст 56 лет) обследовали, используя ADM анализ. Среднее значение составляло 24,7 пг/мл, наиболее низкое значение 11 пг/мл и 99-процентильный эквивалент 43 пг/мл. Поскольку чувствительность анализа составляла 2 пг/мл, 100% всех здоровых субъектов попадали в диапазон обнаружения, используя описанный ADM анализ (смотри фиг. 2).
Пример 6
Клиническое исследование
101 ED пациент, соответствующие определению сепсиса (59) были впоследствии госпитализированы (в среднем 5 дней госпитализации) и получали отвечающую протоколам лечебную терапию. ЭДТА-плазма генерировалась с 1-го дня (ED представление) и один образец каждый день на протяжении пребывания в больнице. Время, чтобы заморозить образцы для последующего ADM-измерения, составляло меньше чем 4 часа.
Характеристики пациентов просуммированы в таблице 5
26,7% из всех пациентов умерли во время пребывания в больнице, и считаются пациентами, у которых не был достигнут лечебный эффект, 73,3% из всех пациентов пережили сепсис и считаются пациентами, у которых достигнут лечебный эффект.
66% из всех присутствующих пациентов с сепсисом имели ненормальное значение ADM >43 пг/мл (99-процентильный эквивалент), показывая, что ADM не является маркером для инфекции.
Результаты клинического исследования
Начальный ADM является высокопрогностическим.
Мы привели в соответствие начальное значение ADM со смертностью в больнице и сравнили ADM с показателем сепсиса по шкале APACHE 2 (смотри (60)). ADM является высоко прогностическим для конечного результата сепсиса (смотри фиг. 3) и сравнимым с показателем по шкале APACHE 2. Если ADM и APACHE 2 объединят (Фиг. 4), то появится важная дополнительная информация.
ADM в осуществлении контроля лечения
Пациентов лечили, основываясь на отвечающей протоколам лечебной терапии (таблица 5). Среднее время госпитализации составляло 5 дней. ADM измеряли каждый день в больнице (день 1 = госпитализация) и устанавливать взаимосвязь со смертностью в больнице (таблица 6). ADM изменялся во время пребывания в больнице и изменение в течение времени улучшало прогностическое значение на 52% от начального, Хи2 от 19,2 до 29,2 на 5-й день.
Использование простой обрезанной модели при 70 пг/мл ADM показало 68% риск смерти пациентов, начиная с ADM концентраций >70 пг/мл, и оставалась все пребывание в больнице >70 пг/мл (пациенты, у которых не был достигнут лечебный эффект). Пациенты, которые имели все время значение ADM <70 пг/мл, или, у которых наблюдалось изменение от >70 пг/мл до <70 пг/мл, имели смертность только 11% (пациенты, которые хорошо поддавались лечению/терапии) и пациенты, демонстрирующие значения ADM >70 пг/мл и понижение их ADM концентрации во время стационарного лечения до значений <70 пг/мл, имели 0% смертность. Пациентов, у которых наблюдалось изменение от <70 пг/мл до >70 пг/мл во время лечения в стационаре больнице, не было. Среднее время необходимое для получения информации о пациенте, у которого был достигнут лечебный эффект/пациенте, у которого не был достигнут лечебный эффект для всех пациентов составляло приблизительно 1 день. Пациентам, у которых >70 пг/мл, реагирующим на лечение во время пребывания в стационаре больницы, понадобилось приблизительно 2 дня, чтобы показать успех лечения по ADM.
ЛИТЕРАТУРА
(1) Kitamura, K., et al., "Adrenomedullin: A Novel Hypotensive Peptide Isolated From Human Pheochromocytoma", Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 192 (2), pp. 553-560(1993).
(2) Editorial, Takahashi, K., "Adrenomedullin: from a pheochromocytoma to the eyes", Peptides, Vol. 22, p. 1691 (2001).
(3) Eto, T., "A review of the biological properties and clinical implications of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP), hypotensive and vasodilating peptides", Peptides, Vol. 22, pp. 1693-1711 (2001).
(4) Hinson, et al., "Adrenomedullin, a Multifunctional Regulatory Peptide", Endocrine Reviews, Vol.21(2), pp. 138-167 (2000).
(5) Kitamura, K., et al., "The intermediate form of glycine-extended adrenomedullin is the major circulating molecular form in human plasma", Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 244(2), pp. 551-555 (1998). Abstract Only.
(6) Pio, R., et al., "Complement Factor H is a Serum-binding Protein for Adrenomedulli, and the Resulting Complex Modulates the Bioactivities of Both Partners", The Journal of Biological Chemistry, Vol.276(15), pp.12292-12300 (2001).
(7) Kuwasako, K., et al., "Purification and characterization of PAMP-12 (PAMP-20) in porcine adrenal medulla as a major endogenous biologically active peptide", FEBS Lett, Vol. 414(1), pp. 105-110 (1997). Abstract Only.
(8) Kuwasaki, K., et al., "Increased plasma proadrenomedullin N-terminal 20 peptide in patients with essential hypertension", Ann. Clin. Biochem., Vol. 36 (Pt. 5), pp. 622-628 (1999). Abstract Only.
(9) Tsuruda, T., et al., "Secretion of proadrenomedullin N-terminal20 peptide from cultured neonatal rat cardiac cells", Life Sci., Vol. 69(2), pp. 239-245 (2001). Abstract Only.
(10) EP 0622458 A2
(11) Hirata, et al., "Increased Circulating Adrenomedullin, a Novel Vasodilatory Peptide, in Sepsis", Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, Vol.81(4), pp. 1449-1453 (1996).
(12) Ehlenz, K., et al., "High levels of circulating adrenomedullin in severe illness: Correlation with C-reactive protein and evidence against the adrenal medulla as site of origin", Exp Clin Endocrinol Diabetes, Vol. 105, pp. 156-162 (1997).
(13) Tomoda, Y., et al., "Regulation of adrenomedullin secretion from cultured cells", Peptides, Vol. 22, pp.1783-1794 (2001).
(14) Ueda, S., et al., "Increased Plasma Levels of Adrenomedullin in Patients with Systemic Inflammatory Response Syndrome", Am. J. Respir. Crit. Care Med., Vol. 160, pp. 132-136 (1999).
(15) Wang, P., "Andrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis", Peptides, Vol. 22, pp. 1835-1840 (2001).
(16) Wang 1998
(17) Wang 1998 Arch Surg, Itoh, 2007
(18) Parlapiano, С, et al.; "Adrenomedulin assay and its clinical significance", European Review for Medical and Pharmacological Sciences, 1999; 3:53-61
(19) Hirata 2007
(20) Ohta 1999
(21) Kitamura 1994
(22) Lorenz et al." Functional Antibodies Targeting IsaA of Staphylococcus aureus Augment Host Immune Response and Open New Perspectives for Antibacterial Therapy"; Antimicrob Agents Chemother. 2011 January; 55(1): 165-173.
(23) The Immunoassay Handbook, Ed. David Wild, Elsevier LTD, Oxford; 3rd ed. (May 2005), ISBN-13: 978-0080445267; Hultschig С et al., Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb; 10(1): 4-10. PMID: 16376134
(24) Kirk-Othmer, Encyclopedia of chemical technology, 4th ed., executive editor, J.I. Kroschwitz; editor, M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, 1993, vol. 15, p. 518-562, incorporated herein by reference, including citations on pages 551-562.
(25) Schuetz P, et al. PCT follow up measurement for monitoring antibiotic treatment success; 8 Cochrane Database Syst Rev. 2012 Sep 12;9: CD007498. Procalcitonin to initiate or discontinue antibiotics in acute respiratory tract infections.
(26) Christ-Crain M, et al. "Procalcitonin guidance of antibiotic therapy in community-acquired pneumonia: a randomized trial" Am J Respir Crit Care Med. 2006 Jul 1;174(1): 84-93. Epub 2006 Apr 7.
(27) Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17:105, 1987;
(28) Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85: 5879-5883, 1988;
(29) Bird et al., Science 242:423-426, 1988;
(30) Hood et al., Immunology, Benjamin, Ν.Y., 2nd ed., 1984;
(31) Hunkapiller and Hood, Nature 323:15-16,1986);
(32) E. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1983
(33) U.S. Patent No. 5,807,715.
(34) U.S. Patent No. 5,585,089
(35) Dower et al., PCT Publication No. WO 91/17271;
(36) McCafferty et al., PCT Publication No. WO 92/001047;
(37) Winter, PCT Publication No. WO 92/20791
(38) Lonberg et al., PCT Publication No. WO 93/12227; and
(39) Kucherlapati, PCT Publication No. WO 91/10741,
(40) US 2010/0028995
(41) EP 1266 025;
(42) WO 2011/154420
(43) WO 2011/073214
(44) US 2004/0023334
(45) EP 2231860
(46) WO 2010/060748
(47) EP 2314308
(48) WO 2011/023685
(49) WO 2005/040229
(50) ЕР 1941867
(51) Lane, R.D. (1985). A short-duration polyethylene glycol fixsiontechnique for increasing production of monoclonal antibody-secreting hybridomas. J. Immunol. Meth. 81: 223-228;
(52) Ziegler, B. et al. (1996) Glutamate decarboxylase (GAD) is not detectable on the surface of rat islet cells examined by cytofluorometry and complement-dependent antibody-mediated cytotoxicity of monoclonal GAD antibodies, Horm. Metab. Res. 28: 11-15);
(53) Hust, M., et al. 2011. A human scFv antibody generation pipeline for proteome research. Journal of Biotechnology 152, 159-170;
(54) Schütte, M., et al. 2009. Identification of a putative Crf splice variant and generation of recombinant antibodies for the specific detection of Aspergillus fumigatus. PLoS One 4, e6625);
(55) Almagro JC, Fransson J., 2008. Humanization of antibodies. Front Biosci. 2008 Jan 1;13: 1619-33;
(56) Marx et al., Monoclonal Antibody Prodcution, ATLA 25,121,1997;
(57) EP 0353971;
(58) Lewis, L., et al., "Adrenomedullin (1-52) measured in human plasma by radioimmunoassay: plasma concentration, adsorption, and storage", Clinical Chemistry, Vol. 44(3), pp.571-577 (1998);
(59) Crit Care Med. 2008 Jan; 36(1): 296-327;
(60) Knaus et al., 1985, 2001.ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фигура 1 показывает типичную кривую hADM доза/ответ, используя MR-ADM, как твердофазное антитело, и CT-ADM как меченое антитело.
Фигура 2: Здоровых субъектов (n=100, средний возраст 56 лет) оценивали, используя ADM анализ. Среднее значение составляло 24,7 пг/мл, наиболее низкое значение 11 пг/мл и 99-процентильный эквивалент 43 пг/мл. Поскольку чувствительность анализа составляла 2 пг/мл, 100% всех здоровых субъектов попадали в диапазон обнаружения, используя описанный ADM анализ.
Фигура 3: Прогнозирование смертности в стационаре больницы - Результаты по логистической регрессии.
Фигура 4: Прогнозирование смертности в стационаре больницы - ADM является независимым от Apache и обеспечивает дополнительную прогностическую информацию.
Фигуры с 5 по 10: ADM-кинетики конкретного пациента.
Фигура 5 и Фигура 6: Выжившие субъекты, ADM составляет <70 пг/мл при ED поступлении (1-й день) и во время пребывания в стационаре больницы. ADM показывает пациента, хорошо поддающегося лечению.
Фигура 7 и Фигура 8: Выжившие субъекты, ADM составляет выше 70 пг/мл при ED поступлении (1-й день) и снижается во время получения лечения в стационаре больницы до значений ниже 70 пг/мл (пациенты, у которых достигнут лечебный эффект).
Фигура 9 и Фигура 10: Умершие пациенты, ADM составляет выше 70 пг/мл при ED поступлении (1-й день) и не снижается до значений ниже 70 пг/мл во время получения лечения в стационаре больницы (пациенты, у которых не был достигнут лечебный эффект).
Фигура 11: ADM анализ в присутствии и при отсутствии N-терминального антитела.
ADM анализ выполняли, как описано выше. А) эталонная кривая В) в присутствии NT-ADM-антитела (10 мкг/мл, 3,33 мкг/испытание). Добавление NT-ADM-антитела не влияет на ADM анализ.
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ
SEQ ID No. 1: ADM 21-52
CTVQKLAHQIYQFTDKDICDNVAPRSKISPQGY-CONH2
SEQ ID No. 2: ADM 21-52-Gly CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYG
SEQ ID No. 3: PreProADM
MKLVSVALMYLGSLAFLGADTARLDVASEFRKKWNKWALSRGKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCWQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAHGAPAPPSGSAPHFL
SEQ ID No. 4: ADM 1-52
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGY-CONH2
SEQ ID No. 5: ADM 1-S2-Gly
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCWQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYG
SEQ ID No. 6: ADM 21-32 CTVQKLAHQIYQ
SEQ ID No. 7: ADM 42-52 APRSKISPQGY
SEQ ID No. 8: ADM 1-16-Gly (аминокислота)
YRQSMNNFQGLRSFGC
Claims (25)
1. Способ in vitro контроля терапии у пациентов, у которых подозревают наличие сепсиса, в котором концентрацию зрелого адромедуллина (ADM) 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly в образце биологической жидкости указанного пациента с сепсисом определяют, используя иммунологический анализ с применением комбинации двух связующих, которые выбраны из группы, состоящей из антитела к ADM и/или фрагмента антитела к ADM, и которые связывают две различные области в пределах области зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид (SEQ ID No. 1) или аминокислотный 21-52-Gly (SEQ ID No. 2) соответственно, где каждая из указанных областей содержит по меньшей мере 4 или 5 аминокислот, при этом контролируют терапию путем сравнения определенной концентрации зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly с пороговым значением, где значения концентрации зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly выше порогового значения определяют пациента, который не поддается или плохо поддается терапии, а значения ниже порогового значения определяют пациента, который поддается терапии.
2. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1, в котором одно из указанных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 4), и в котором указанное второе из данных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5).
3. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1 или 2, где чувствительность иммунологического анализа является достаточной, чтобы количественно определить ADM у здоровых субъектов, которая составляет <10 пг/мл, предпочтительно <40 пг/мл и более предпочтительно <70 пг/мл.
4. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1 или 2, в котором указанное связующее демонстрирует аффинность связывания со зрелым ADM 1-52 амидом и/или зрелым ADM 1-52-Gly по меньшей мере 107 М-1.
5. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1 или 2, в котором такой иммунологический анализ представляет собой сэндвич анализ, предпочтительно полностью автоматизированный анализ.
6. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1 или 2, в котором по меньшей мере одно из указанных двух связующих метят, для того чтобы детектировать.
7. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 1 или 2, в котором по меньшей мере одно из указанных двух связующих является связанным с твердой фазой.
8. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 6, в котором указанную метку выбирают из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку, метку с радиоактивным йодом.
9. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, в котором концентрация зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly, измеренная в образце, находится в диапазоне 10-500 пг/мл.
10. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, в котором применяют пороговую чувствительность от 60 до 80 пг/мл, предпочтительно 70 пг/мл.
11. Способ in vitro для контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, в котором указанный образец выбирают из группы, включающей человеческую цитратную плазму, гепаринизированную плазму, ЭДТА плазму, цельную кровь.
12. Способ in vitro для контроля терапии у пациентов с сепсисом по п. 11, в котором указанный взятый образец измеряют непосредственно без какой-либо дополнительной подготовки образца.
13. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, 12, в котором указанный способ выполняют на полностью автоматизированном устройстве.
14. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, 12, в котором зрелый ADM 1-52 амид и/или зрелый ADM 1-52-Gly определяют по меньшей мере в двух образцах, где указанные образцы отбирают в различных точках времени у указанных пациентов с сепсисом.
15. Способ in vitro контроля терапии у пациентов с сепсисом по любому из пп. 1, 2, 8, 12, в котором объем измеряемого образца составляет меньше или равен 50 мкл.
16. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце, которые выбраны из группы, включающей антитело к ADM и/или фрагмент антитела к ADM, и которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид (SEQ ID No. 1) или аминокислотный 21-52-Gly зрелого адромедуллина (SEQ ID No. 2) соответственно, где каждая из указанных областей содержит по меньшей мере 4 или 5 аминокислот, и где иммунологический анализ не является сэндвич анализом, выполняемым вручную с трубкой, покрытой сложным эфиром акридиния.
17. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце, которые выбраны из группы, включающей антитело к ADM и/или фрагмент антитела к ADM, и которые связываются с двумя различными областями в пределах области зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly, которая представляет собой аминокислотный 21-52-амид (SEQ ID No. 1) или аминокислотный 21-52-Gly зрелого адромедуллина (SEQ ID No. 2) соответственно, где каждая из указанных областей содержит по меньшей мере 4 или 5 аминокислот, и где для указанного определения используют сэндвич анализ, выполняемый вручную с трубкой, покрытой сложным эфиром акридиния, и где одно из указанных связующих представляет собой антитело, связывающееся с SEQ ID No. 6 CTVQKLAHQIYQ, и где второе из указанных связующих представляет собой антитело, связывающееся с SEQ ID No. 7 APRSKISPQGY, в которой карбоксильная кислота заменена амидной группой (APRSKISPQGY-CO-NH2).
18. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17, в котором одно из указанных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 4), и где указанное второе из данных связующих связывается с областью, содержащейся в следующей последовательности зрелого ADM 1-52 амида и/или зрелого ADM 1-52-Gly (SEQ ID No. 5).
19. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17 или 18, где чувствительность указанного иммунологического анализа является достаточной, чтобы количественно определить ADM у здоровых субъектов, и составляет <10 пг/мл, предпочтительно <40 пг/мл и более предпочтительно <70 пг/мл.
20. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17 или 18, в котором указанное связующее демонстрирует аффинность связывания с ADM по меньшей мере, 107 М-1.
21. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17 или 18, в котором для указанного определения используют иммунологический анализ, который представляет собой сэндвич анализ, предпочтительно полностью автоматизированный анализ.
22. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17 или 18, в котором по меньшей мере один из указанных двух связующих метят для того, чтобы детектировать.
23. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 17 или 18, в котором по меньшей мере одно из указанных двух связующих является связанным с твердой фазой.
24. Комбинация двух связующих для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце по п. 23, в котором указанную метку выбирают из группы, включающей хемилюминесцентную метку, ферментную метку, флуоресцентную метку, метку с радиоактивным йодом.
25. Набор для определения зрелого ADM 1-52 амида и/или ADM 1-52-Gly в образце, содержащий комбинацию двух связующих по любому из пп. 16-24.
Applications Claiming Priority (23)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP11189450 | 2011-11-16 | ||
| EP11189447 | 2011-11-16 | ||
| EP11189449 | 2011-11-16 | ||
| EP11189447.3 | 2011-11-16 | ||
| EP11189449.9 | 2011-11-16 | ||
| EP11189452 | 2011-11-16 | ||
| EP11189448 | 2011-11-16 | ||
| EP11189452.3 | 2011-11-16 | ||
| EP11189448.1 | 2011-11-16 | ||
| EP11189450.7 | 2011-11-16 | ||
| EP12160016.7 | 2012-03-16 | ||
| EP12160018 | 2012-03-16 | ||
| EP12160015.9 | 2012-03-16 | ||
| EP12160018.3 | 2012-03-16 | ||
| EP12160014.2 | 2012-03-16 | ||
| EP12160017.5 | 2012-03-16 | ||
| EP12160017 | 2012-03-16 | ||
| EP12160016 | 2012-03-16 | ||
| EP12160014 | 2012-03-16 | ||
| EP12160015 | 2012-03-16 | ||
| EP12186449 | 2012-09-27 | ||
| EP12186449.0 | 2012-09-27 | ||
| PCT/EP2012/072928 WO2013072509A1 (en) | 2011-11-16 | 2012-11-16 | Adrenomedullin assays and methods for determining mature adrenomedullin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014123987A RU2014123987A (ru) | 2015-12-27 |
| RU2657517C2 true RU2657517C2 (ru) | 2018-06-14 |
Family
ID=47148677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014123987A RU2657517C2 (ru) | 2011-11-16 | 2012-11-16 | Анализ адромедуллина и способы определения зрелого адромедуллина |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US9535060B2 (ru) |
| EP (1) | EP2780717B1 (ru) |
| JP (1) | JP6336911B2 (ru) |
| CN (1) | CN104067130B (ru) |
| DK (1) | DK2780717T3 (ru) |
| ES (1) | ES2617211T3 (ru) |
| HK (1) | HK1202624A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20170427T1 (ru) |
| HU (1) | HUE032648T2 (ru) |
| MY (5) | MY178654A (ru) |
| PL (1) | PL2780717T3 (ru) |
| PT (1) | PT2780717T (ru) |
| RS (1) | RS55804B1 (ru) |
| RU (1) | RU2657517C2 (ru) |
| SI (1) | SI2780717T1 (ru) |
| WO (1) | WO2013072509A1 (ru) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LT3553084T (lt) | 2011-11-16 | 2023-03-10 | Adrenomed Ag | Anti-adrenomedulino (adm) antikūnas arba anti-adm antikūno fragmentas, arba anti-adm ne-ig karkasas, skirtas organų funkcijos sutrikimo arba organų nepakankamumo profilaktikai arba sumažinimui paciento, sergančio lėtine arba ūmine liga arba esančio ūminės būklės, organizme |
| AU2012338733B2 (en) | 2011-11-16 | 2017-08-24 | Adrenomed Ag | Anti-adrenomedullin (ADM) antibody or anti-ADM antibody fragment or anti-ADM non-Ig scaffold for use in therapy of an acute disease or acute condition of a patient for stabilizing the circulation |
| PT2780371T (pt) | 2011-11-16 | 2019-01-30 | Adrenomed Ag | Anticorpo anti-adrenomedulina (adm) ou fragmento de anticorpo anti-adm ou uma estrutura não ig anti-adm para a regulação do equilíbrio de fluidos num doente com uma doença aguda ou crónica |
| KR101548284B1 (ko) * | 2014-05-23 | 2015-08-28 | 주식회사 나노엔텍 | 신규한 시료 내 검출대상물의 검출방법 및 그를 이용한 검출키트 |
| JP6944449B2 (ja) * | 2015-11-27 | 2021-10-06 | ベー．エル．アー．ハー．エム．エス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 対象の細胞外液量状態のマーカーとしてのＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ |
| RU2764766C2 (ru) * | 2016-08-09 | 2022-01-21 | Б.Р.А.Х.М.С. Гмбх | Гистоны и/или proadm в качестве маркеров, свидетельствующих об органной дисфункции |
| EP3309550A1 (en) * | 2016-10-12 | 2018-04-18 | sphingotec GmbH | Method for the detection of apolipoprotein e4 |
| EP3555130A1 (en) * | 2016-12-16 | 2019-10-23 | AdrenoMed AG | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in intervention and therapy of congestion in a patient in need thereof |
| JP6862963B2 (ja) * | 2017-03-17 | 2021-04-21 | 東ソー株式会社 | ペプチドの吸着抑制剤 |
| WO2018216580A1 (ja) * | 2017-05-22 | 2018-11-29 | 東ソー株式会社 | アドレノメデュリン濃度変動による予後予測の情報提供方法及びその試薬 |
| EP3682245A1 (en) * | 2017-09-13 | 2020-07-22 | B.R.A.H.M.S GmbH | Pro-adm as a therapy monitoring marker for critcally ill patients |
| JP7291688B2 (ja) * | 2017-09-13 | 2023-06-15 | ベー．エル．アー．ハー．エム．エス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 重篤患者における腎置換療法のための指標としてのアドレノメズリン前駆体 |
| CN111511390B (zh) * | 2017-09-25 | 2024-09-20 | 艾德里诺医药公司 | 用于治疗或预防疾病症状的抗肾上腺髓质素(adm)结合剂 |
| US20220268761A1 (en) | 2017-10-18 | 2022-08-25 | Adrenomed Ag | Therapy monitoring under treatment with an anti-adrenomedullin (adm) binder |
| BR112020014940A2 (pt) * | 2018-02-08 | 2020-12-08 | Sphingotec Gmbh | Adrenomedulina (adm) para diagnóstico e/ou predição de demência e ligante antiadrenomedulina para uso em terapia e prevenção de demência |
| US20210155680A1 (en) * | 2018-02-27 | 2021-05-27 | Shimadzu Corporation | ANTIBODY THAT SPECIFICALLY RECOGNIZES N TERMINUS OF APP669-x, AND IMMUNOASSAY METHOD |
| WO2019167128A1 (ja) * | 2018-02-27 | 2019-09-06 | 株式会社 島津製作所 | サンドイッチ型免疫測定法 |
| EP3608673A1 (en) * | 2018-08-08 | 2020-02-12 | B.R.A.H.M.S GmbH | Pro-adm for prognosing the risk of a medical condition requiring hospitalization in patients with symptoms of infectious disease |
| CN113597429A (zh) * | 2019-03-01 | 2021-11-02 | 株式会社岛津制作所 | App669-711测定方法及测定用试剂盒 |
| CN110470771B (zh) * | 2019-09-05 | 2021-06-01 | 清华大学 | 一种评价转基因植物食用安全性的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0622458A2 (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Adrenomedullin |
| RU2209071C2 (ru) * | 2001-08-08 | 2003-07-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии | Способ лечения сепсиса у детей |
| WO2004090546A1 (de) * | 2003-04-10 | 2004-10-21 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Bestimmung eines midregionalen proadrenomedullin-teilpeptids in biologischen flüssigkeiten zu diagnostischen zwecken sowie immunoassays für die durchführung einer solchen bestimmung |
| US20100021469A1 (en) * | 1995-08-18 | 2010-01-28 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | Functional role of adrenomedullin (am) and the gene related product (pamp) in human pathology and physiology |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
| AU634716B2 (en) | 1988-08-01 | 1993-03-04 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for detection of an analyte using acridinium esters and liposomes |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| WO1991010741A1 (en) | 1990-01-12 | 1991-07-25 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
| US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| EP0585287B1 (en) | 1990-07-10 | 1999-10-13 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
| WO1993012227A1 (en) | 1991-12-17 | 1993-06-24 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| CA2242308A1 (en) | 1997-12-08 | 1999-06-08 | Smithkline Beecham Laboratoires Pharmaceutiques | Novel compounds |
| DE19847690A1 (de) | 1998-10-15 | 2000-04-20 | Brahms Diagnostica Gmbh | Verfahren und Substanzen für die Diagnose und Therapie von Sepsis und sepsisähnlichen systemischen Infektionen |
| US6818418B1 (en) | 1998-12-10 | 2004-11-16 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
| ATE313802T1 (de) | 1999-09-10 | 2006-01-15 | Us Gov Health & Human Serv | Bestimmung von adrenomedullin-bindenden proteinen |
| AU2002305394A1 (en) | 2001-05-04 | 2002-11-18 | Biosite, Inc. | Diagnostic markers of acute coronary syndromes and methods of use thereof |
| JP2005508623A (ja) | 2001-08-30 | 2005-04-07 | バイオレクシス ファーマシューティカル コーポレイション | 改変されたトランスフェリン融合タンパク質 |
| US6864237B2 (en) | 2002-05-17 | 2005-03-08 | Ping Wang | Treatment of shock using adrenomedullin and adrenomedullin binding protein-1 |
| DK2298278T3 (en) | 2002-06-07 | 2016-02-01 | Dyax Corp | Prevention and reduction of blood loss and inflammatory response |
| JP2007523844A (ja) | 2003-04-25 | 2007-08-23 | ジェノバ・リミテッド | 心臓血管障害において減少する分泌ポリペプチド種 |
| US6884781B2 (en) | 2003-05-16 | 2005-04-26 | Ping Wang | Treatment of shock using adrenomedullin binding protein-1 |
| JP2007518062A (ja) * | 2003-09-29 | 2007-07-05 | バイオサイト インコーポレイテッド | 敗血症を診断する方法および診断するための組成物 |
| WO2005040229A2 (en) | 2003-10-24 | 2005-05-06 | Avidia, Inc. | Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers |
| US20100028995A1 (en) | 2004-02-23 | 2010-02-04 | Anaphore, Inc. | Tetranectin Trimerizing Polypeptides |
| US20070280886A1 (en) | 2004-09-09 | 2007-12-06 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and Therapeutics for Diseases Associated with Adrenomedullin Receptor (Amdr) |
| US8278262B2 (en) | 2004-09-21 | 2012-10-02 | Biontech Ag | Use of microproteins as tryptase inhibitors |
| US9829494B2 (en) | 2005-12-01 | 2017-11-28 | Adrenomed Ag | Methods of treatment using ADM antibodies |
| US7993832B2 (en) * | 2006-08-14 | 2011-08-09 | Xdx, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring the status of transplant rejection and immune disorders |
| EP2231860B1 (en) | 2007-12-19 | 2011-10-05 | Affibody AB | Polypeptide derived from protein a and able to bind pdgf |
| CN107011425B (zh) | 2008-11-03 | 2021-01-01 | 分子组合公司 | 抑制vegf-a受体相互作用的结合蛋白 |
| CA2772162C (en) | 2009-08-27 | 2018-05-22 | Covagen Ag | Anti-il-17a fynomers and medical uses thereof |
| EP2379581B1 (en) | 2009-12-14 | 2013-10-09 | Scil Proteins GmbH | A method for identifying hetero-multimeric modified ubiquitin proteins with binding capability to ligands |
| DE102010040035A1 (de) | 2010-03-04 | 2011-09-08 | Robert Bosch Gmbh | Verbesserungen der Rückwärts-Analyse zur Bestimmung von Fehlermaskierungsfaktoren |
| WO2011127176A2 (en) | 2010-04-06 | 2011-10-13 | The Children's Research Institute | Methods for treating or screening for compounds for the treatment of sepsis |
| ES2552954T3 (es) | 2010-04-30 | 2015-12-03 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Anticuerpos anti-C5a y métodos para el uso de los anticuerpos |
| RU2569745C2 (ru) | 2010-06-08 | 2015-11-27 | Пиерис АГ | Мутеины липокалина слезы, связывающие альфа il-4 r |
| FR2964103B1 (fr) * | 2010-08-30 | 2018-11-23 | Universite D'aix-Marseille | Anticorps se liant a l'adrenomedulline et aux recepteurs de l'adrenomedulline et leurs utilisations comme medicament |
| US11067586B2 (en) * | 2011-11-16 | 2021-07-20 | Sphingotec Gmbh | Adrenomedullin assays and methods for determining mature adrenomedullin |
-
2012
- 2012-11-16 MY MYPI2014001418A patent/MY178654A/en unknown
- 2012-11-16 MY MYPI2014001421A patent/MY175997A/en unknown
- 2012-11-16 HU HUE12791143A patent/HUE032648T2/en unknown
- 2012-11-16 MY MYPI2014001422A patent/MY192113A/en unknown
- 2012-11-16 WO PCT/EP2012/072928 patent/WO2013072509A1/en active Application Filing
- 2012-11-16 MY MYPI2014001420A patent/MY174877A/en unknown
- 2012-11-16 PL PL12791143T patent/PL2780717T3/pl unknown
- 2012-11-16 DK DK12791143.6T patent/DK2780717T3/en active
- 2012-11-16 CN CN201280066354.5A patent/CN104067130B/zh active Active
- 2012-11-16 EP EP12791143.6A patent/EP2780717B1/en active Active
- 2012-11-16 US US14/358,147 patent/US9535060B2/en active Active
- 2012-11-16 US US13/679,294 patent/US9304127B2/en active Active
- 2012-11-16 MY MYPI2014001423A patent/MY174894A/en unknown
- 2012-11-16 ES ES12791143.6T patent/ES2617211T3/es active Active
- 2012-11-16 RU RU2014123987A patent/RU2657517C2/ru active
- 2012-11-16 RS RS20170258A patent/RS55804B1/sr unknown
- 2012-11-16 PT PT127911436T patent/PT2780717T/pt unknown
- 2012-11-16 SI SI201230877A patent/SI2780717T1/sl unknown
- 2012-11-16 US US13/679,281 patent/US9140696B2/en active Active
- 2012-11-16 JP JP2014541693A patent/JP6336911B2/ja active Active
-
2015
- 2015-03-24 HK HK15102988.3A patent/HK1202624A1/xx unknown
-
2017
- 2017-03-16 HR HRP20170427TT patent/HRP20170427T1/hr unknown
-
2023
- 2023-06-23 US US18/340,235 patent/US12228581B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0622458A2 (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Adrenomedullin |
| US20100021469A1 (en) * | 1995-08-18 | 2010-01-28 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of | Functional role of adrenomedullin (am) and the gene related product (pamp) in human pathology and physiology |
| RU2209071C2 (ru) * | 2001-08-08 | 2003-07-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии | Способ лечения сепсиса у детей |
| WO2004090546A1 (de) * | 2003-04-10 | 2004-10-21 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Bestimmung eines midregionalen proadrenomedullin-teilpeptids in biologischen flüssigkeiten zu diagnostischen zwecken sowie immunoassays für die durchführung einer solchen bestimmung |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LYNLEY K LEWIS ET AL: "Adrenomedullin(1-52) measured in human plasma by radioimmunoassay: plasma concentration, adsorption, and storage", CLINICAL CHEMISTRY, vol. 44, no. 3, 1 March 1998 (1998-03-01), pages 571 - 577. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130195874A1 (en) | 2013-08-01 |
| EP2780717B1 (en) | 2016-12-21 |
| ES2617211T3 (es) | 2017-06-15 |
| US9304127B2 (en) | 2016-04-05 |
| DK2780717T3 (en) | 2017-02-13 |
| PT2780717T (pt) | 2017-02-16 |
| EP2780717A1 (en) | 2014-09-24 |
| CN104067130A (zh) | 2014-09-24 |
| PL2780717T3 (pl) | 2017-06-30 |
| US20140322824A1 (en) | 2014-10-30 |
| MY174877A (en) | 2020-05-20 |
| US9140696B2 (en) | 2015-09-22 |
| MY178654A (en) | 2020-10-20 |
| RS55804B1 (sr) | 2017-08-31 |
| RU2014123987A (ru) | 2015-12-27 |
| JP6336911B2 (ja) | 2018-06-06 |
| SI2780717T1 (sl) | 2017-05-31 |
| JP2014533827A (ja) | 2014-12-15 |
| MY192113A (en) | 2022-07-28 |
| US20240085438A1 (en) | 2024-03-14 |
| US20130195875A1 (en) | 2013-08-01 |
| MY174894A (en) | 2020-05-20 |
| HUE032648T2 (en) | 2017-10-30 |
| CN104067130B (zh) | 2017-02-22 |
| US12228581B2 (en) | 2025-02-18 |
| MY175997A (en) | 2020-07-20 |
| WO2013072509A1 (en) | 2013-05-23 |
| US9535060B2 (en) | 2017-01-03 |
| HRP20170427T1 (hr) | 2017-06-16 |
| HK1202624A1 (en) | 2015-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2657517C2 (ru) | Анализ адромедуллина и способы определения зрелого адромедуллина | |
| JP6820399B2 (ja) | 血圧降下治療をガイドするアドレノメジュリン | |
| EP2594588B1 (en) | Anti-Adrenomedullin (ADM) antibody or anti-ADM antibody fragment or an anti-ADM non-Ig protein scaffold for use in therapy | |
| EP2780370B1 (en) | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy of an acute disease or acute condition of a patient for stabilizing the circulation | |
| US12247988B2 (en) | Adrenomedullin assays and methods for determining mature andrendomedullin | |
| AU2012338730A1 (en) | Anti-adrenomedullin (ADM) antibody or anti-ADM antibody fragment or anti-ADM non-Ig scaffold for reducing the risk of mortality in a patient having a chronic or acute disease or acute condition | |
| US20220268761A1 (en) | Therapy monitoring under treatment with an anti-adrenomedullin (adm) binder | |
| CA3030214A1 (en) | Adrenomedullin for assessing congestion in a subject with acute heart failure | |
| EP2541252A1 (en) | Method of obtaining a binder to prepro-vasopressin or fragments thereof | |
| JP2022128212A (ja) | モノクローナル抗体、サイトケラチン１８フラグメントの測定試薬、試薬キットおよび測定方法 | |
| EP3019875B1 (en) | Augurin immunoassay | |
| RU2776811C2 (ru) | Мониторинг терапии при лечении связывающим веществом против адреномедуллина (adm) | |
| US20210388108A1 (en) | Antibodies specific for glycosylated apoj and uses thereof | |
| CN119604526A (zh) | 用于治疗或预防休克的抗肾上腺髓质素（ADM）抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig支架 |