RU2376347C2 - Способ затирания - Google Patents
Способ затирания Download PDFInfo
- Publication number
- RU2376347C2 RU2376347C2 RU2006126098/13A RU2006126098A RU2376347C2 RU 2376347 C2 RU2376347 C2 RU 2376347C2 RU 2006126098/13 A RU2006126098/13 A RU 2006126098/13A RU 2006126098 A RU2006126098 A RU 2006126098A RU 2376347 C2 RU2376347 C2 RU 2376347C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endoglucanase
- xylanase
- seq
- beta
- enzyme
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 67
- 238000005360 mashing Methods 0.000 title description 28
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims abstract description 123
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims abstract description 113
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 44
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 90
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 89
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 claims description 48
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 47
- 241000228215 Aspergillus aculeatus Species 0.000 claims description 37
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 20
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 claims description 13
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 12
- 241001373560 Humicola sp. Species 0.000 claims description 10
- 241000006382 Bacillus halodurans Species 0.000 claims description 8
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims description 7
- 241001557886 Trichoderma sp. Species 0.000 claims description 7
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 6
- 241000228182 Thermoascus aurantiacus Species 0.000 claims description 6
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 claims description 6
- 241000228178 Thermoascus Species 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 claims description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims 1
- 108010041969 feruloyl esterase Proteins 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 78
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 68
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 62
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 56
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 51
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 51
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 46
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 36
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 36
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 34
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 34
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 34
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 34
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 25
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 20
- 108010076363 licheninase Proteins 0.000 description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 15
- 229920000617 arabinoxylan Polymers 0.000 description 15
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N [5-[3,5-dihydroxy-2-(1,3,4-trihydroxy-5-oxopentan-2-yl)oxyoxan-4-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound OC1C(OC(CO)C(O)C(O)C=O)OCC(O)C1OC1C(O)C(O)C(COC(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)O1 UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 12
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- 101710178122 Endoglucanase 4 Proteins 0.000 description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 101000756530 Aspergillus niger Endo-1,4-beta-xylanase B Proteins 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 6
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 6
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 6
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 6
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- -1 xylose oligosaccharides Chemical class 0.000 description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 5
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 5
- 238000004890 malting Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 5
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 4
- 150000003741 xylose derivatives Chemical class 0.000 description 4
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 3
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 description 3
- 101710178123 Endoglucanase 5 Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 3
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 3
- FYGDTMLNYKFZSV-ZWSAEMDYSA-N cellotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-ZWSAEMDYSA-N 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000015041 whisky Nutrition 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001134629 Acidothermus Species 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 101000666763 Aspergillus aculeatus Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 2
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 2
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 2
- 235000015107 ale Nutrition 0.000 description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 2
- 150000004783 arabinoxylans Chemical class 0.000 description 2
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000004464 cereal grain Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P endo-1,4-beta-Xylanase Chemical group C=1C=CC=CC=1C[N+](CC)(CC)CCCNC(C(C=1)=O)=CC(=O)C=1NCCC[N+](CC)(CC)CC1=CC=CC=C1 YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 108010075550 termamyl Proteins 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 125000000969 xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 2
- AUTALUGDOGWPQH-UBLOVXTBSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;(2r,3s,4r)-2,3,4,5-tetrahydroxypentanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O AUTALUGDOGWPQH-UBLOVXTBSA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N (2s,3s,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[(2r,3s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](OC3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000251953 Agaricus brunnescens Species 0.000 description 1
- 241001558184 Agaricus sp. Species 0.000 description 1
- 229920000189 Arabinogalactan Polymers 0.000 description 1
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 101710104295 Beta-1,4-xylanase Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 241001362614 Crassa Species 0.000 description 1
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132690 Endo-1,4-beta-xylanase A Proteins 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000588699 Erwinia sp. Species 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 101000649352 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (strain 4287 / CBS 123668 / FGSC 9935 / NRRL 34936) Endo-1,4-beta-xylanase A Proteins 0.000 description 1
- 241001149959 Fusarium sp. Species 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 229920002581 Glucomannan Polymers 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 1
- 101001035458 Humicola insolens Endoglucanase-5 Proteins 0.000 description 1
- 101001035456 Hypocrea jecorina Endoglucanase-4 Proteins 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241001451060 Poitrasia Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000582914 Saccharomyces uvarum Species 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 1
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000204666 Thermotoga maritima Species 0.000 description 1
- 241001135650 Thermotoga sp. Species 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 108010084650 alpha-N-arabinofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000019312 arabinogalactan Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019998 barley wine Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000020087 canadian whiskey Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010091384 endoglucanase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010092450 endoglucanase Z Proteins 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940046240 glucomannan Drugs 0.000 description 1
- 102000045442 glycosyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 235000020088 irish whiskey Nutrition 0.000 description 1
- 235000015095 lager Nutrition 0.000 description 1
- 235000020022 lambic Nutrition 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 235000021440 light beer Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 125000003071 maltose group Chemical group 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L remazol brilliant blue r Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C(N)=C2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C2=C1NC1=CC=CC(S(=O)(=O)CCOS([O-])(=O)=O)=C1 KUIXZSYWBHSYCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 235000020091 rye whiskey Nutrition 0.000 description 1
- 108010038196 saccharide-binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000020092 scotch whiskey Nutrition 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015106 stout Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
- 150000003742 xyloses Chemical class 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C21—METALLURGY OF IRON
- C21C—PROCESSING OF PIG-IRON, e.g. REFINING, MANUFACTURE OF WROUGHT-IRON OR STEEL; TREATMENT IN MOLTEN STATE OF FERROUS ALLOYS
- C21C7/00—Treating molten ferrous alloys, e.g. steel, not covered by groups C21C1/00 - C21C5/00
- C21C7/04—Removing impurities by adding a treating agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01055—Alpha-N-arabinofuranosidase (3.2.1.55)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
- A23L29/35—Degradation products of starch, e.g. hydrolysates, dextrins; Enzymatically modified starches
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C7/00—Preparation of wort
- C12C7/04—Preparation or treatment of the mash
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C7/00—Preparation of wort
- C12C7/14—Lautering, i.e. clarifying wort
- C12C7/16—Lautering, i.e. clarifying wort by straining
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Metallurgy (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Soy Sauces And Products Related Thereto (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пищевой промышленности и биотехнологии и представляет собой ферментную композицию, содержащую ксиланазу семейства GH10, присутствующую в количестве по меньшей мере 33 вес.% от общего веса ферментного белка, и эндоглюканазу GH12, присутствующую в количестве по меньшей мере 14 вес.% от общего веса ферментного белка. Данная композиция используется для получения затора. Изобретение позволяет получать затор с улучшенной фильтруемостью. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 23 табл.
Description
Настоящее изобретение относится, кроме прочего, к стадии затирания и фильтрации в процессе получения алкогольного напитка, такого как пиво или виски, и к композиции, используемой на стадии затирания и фильтрации такого процесса.
Использование ферментов при пивоварении является общепринятым. Применение ферментов на стадии затирания и фильтрации для того, чтобы улучшить фильтруемость затора и увеличить выход экстракта, описан в WO 97/42302. Однако имеется необходимость в улучшении стадии затирки и фильтрации и в улучшенных ферментных композициях для использования на стадии затирания и фильтрации.
Изобретение предлагает способ получения затора, имеющего улучшенную фильтруемость и/или улучшенный выход экстракта после фильтрации, который включает приготовление затора в присутствии ферментной активности и фильтрацию затора для получения сусла и в котором ферментная активность включает ксиланазу семейства 10 глюкозидгидролазы, присутствующую в количестве по меньшей мере 15 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
Следующий объект изобретения предлагает способ снижения вязкости водного раствора, включающего гидролизат крахмала, предусматривающий испытание по меньшей мере одного ксиланолитического фермента на его гидролитическую активность по отношению к нерастворимому арабиноксилану пшеницы, выбор ксиланолитического фермента, который расщепляет возле разветвленных остатков, оставляя в результате конечно-замещенные олигосахариды ксилозы, и добавление выбранного ксиланолитического фермента к водному раствору, включающему гидролизат крахмала.
В еще одном своем объекте изобретение предлагает способ снижения вязкости водного раствора, включающего гидролизат крахмала, где указанный способ включает испытание по меньшей мере одного эндоглюканолитического фермента на его гидролитическую активность по отношению к бета-глюкану ячменя, выбор эндоглюканолитического фермента, который в условиях: 10 мкг/мл очищенного фермента и 5 мг/мл бета-глюкана ячменя в 50 мМ ацетате натрия, 0,01% Triton X-100 при рН 5,5 и 50°С в течение 1 часа разлагает более чем 70% бета-глюкана ячменя до DP 6 или DP<6, и добавление выбранного эндоглюканолитического фермента к водному раствору, включающему гидролизат крахмала.
В еще одном объекте изобретение предлагает композицию, включающую ксиланазу GH10, присутствующую в количестве по меньшей мере 15 вес.% от общего протеина ферментов, и/или эндоглюканазу GH12, GH7 и/или GH5, присутствующую в количестве по меньшей мере 40 вес.% от общего протеина ферментов.
Другие объекты касаются применений упомянутой композиции в процессе, включающем снижение вязкости водного раствора, содержащего гидролизат крахмала, включая такие процессы, в которых водный раствор, содержащий гидролизат крахмала, предназначен для использования в пищевых композициях.
Определения
В настоящем описании использованы разнообразные термины, которые, как правило, понятны специалистам. Однако некоторые термины использованы в специфическом значении и означают следующее.
Термин "солодовая крупка", как он использован здесь, понимается как крахмал или сахар, содержащий материал, который является основой для приготовления пива, например ячменный солод и добавку.
Термин "солод" понимается как любое осоложенное злаковое зерно, в особенности, ячмень.
Термин "добавка" понимается как часть солодовой крупки, которая не является ячменным солодом. Добавкой может быть любой богатый углеводами материал.
Термин "затор" понимается как водная суспензия крахмала, включающая, например, размолотый ячменный солод, и/или другую добавку, или их комбинацию, замоченные в воде для приготовления сусла.
Термин "сусло" понимается как неферментированный сиропный оттек после экстрагирования солодовой крупки во время затирания.
Термин "барда" понимается как дренированные твердые вещества, остающиеся поле того, как солодовая крупка была экстрагирована и сусло отделено от затора.
Термин "пиво" понимается здесь как ферментированное сусло, например как алкогольный напиток, сваренный из ячменного солода, необязательно, добавки и шишек хмеля.
Термин "извлечение экстракта" в сусле определяется как сумма растворимых веществ, экстрагированных из солодовой крупки (солод и добавки), выраженная в процентах на сухое вещество.
Термин "термостабильный фермент" понимается как фермент, который при температурном режиме и периоде термостатирования, применяемых в способах по настоящему изобретению, в добавленных количествах способен к достаточному разложению рассматриваемого субстрата.
Термин "ксиланаза типа А" понимается как ксиланаза, которая расщепляет арабиноксилановые полимеры, близкие к разветвленным остаткам, оставляя конечно-замещенные олигосахариды ксилозы. Ксиланазы типа А могут быть идентифицированы, используя метод, описанный в разделе "Методы" настоящего описания.
Термин "гомология", когда он использован относительно последовательностей полипептидов или ДНК, указанных в настоящем описании, понимается как степень гомологии между двумя последовательностями, указывающая отклонение первой последовательности от второй. Гомология может быть удобно определена посредством компьютерной программы, известной в данной области, такой как GAP, имеющейся в программном пакете GCG (Program Manual for the Wisconsin Package, Version 8, August 1994, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711) (Needleman, S.B. and Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48, 443-453). Для сравнения полипептидных последовательностей использованы следующие установки: GAP creation penalty в 3,0 и GAP extension penalty в 0,1.
Термин "DP" представляет степень полимеризации, использованную здесь как среднее число глюкозных блоков в полимерах в гидролизате полисахаридов.
Нумерация семейств гликозидгидролазы (GH) и модулей связывания углеводов (СВМ), примененная в данном описании, следует концепции Coutinho, P.M. and Henrissat, B. (1999), CAZy -Carbohydrate-Active Enzymes server at URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/~cazy/CAZY/index.html или, альтернативно, Coutinho, P.M. and Henrissat, B., 1999: The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach, in "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation", K. Ohmmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi S., Karita and T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokyo, p. 15-23 и в Bourne, Y. and Henrissat, B. 2001: Glycoside hydrolases and glycosyltransferases: families and functional modules, Current Opinion in Structure Biology 11: 593-600. Эта система классификации групп гликозидгидролаз основывается на подобиях в первичной структуре. Кроме того, члены семейства показывают один и тот же каталитический механизм и имеют подобия в общей трехмерной структуре, хотя семейство может содержать члены с существенными вариациями в специфичности субстрата.
Наименования эндоглюканаз Humicola insolens следует системе Karlsson, J. 2000, Fungi Cellulases, Study of hydrolytic properties of endoglucanases from Trichoderma reesei and Humicola insolens, Lundt University.
Процессы пивоварения хорошо известны в практике и, как правило, включают стадии солодоращения, затирания и ферментации. В традиционных процессах пивоварения солодоращение служит целям превращения нерастворимого крахмала в растворимый крахмал, уменьшения комплексных протеинов, образования цвето- и вкусообразующих соединений, образования питательных веществ для роста дрожжей и развития ферментов. Тремя главными стадиями процесса солодоращения являются замачивание, проращивание и отсушивание.
Замачивание включает смешение зерен ячменя с водой для повышения уровня влаги и активизации метаболических процессов в непроросшем ячмене. На следующей стадии влажный ячмень проращивают выдерживанием его при подходящей температуре и уровне влажности до тех пор, пока не будет достигнуто требуемое изменение, т.е. такое как разложение крахмала и активация ферментов. Конечной стадией является сушка сырого солода в сушилке. Температурный режим в сушилке определяет цвет ячменного солода и количество ферментов, которые выживают для использования в процессе затирания. Низкая температура сушки более подходит для солодов, когда она важна для сохранения ферментной активности. Солоды, высушенные при высоких температурах, очень богаты окрашивателями, такими как карамелизированные сахара, а также придающими вкус соединениями.
Затирание представляет собой процесс превращения крахмала из размолотого ячменного солода и твердых добавок в ферментируемые и неферментируемые сахара для получения сусла желаемого состава. Традиционное затирание включает смешение размолотого ячменного солода и добавок с водой при заданных температуре и объеме для продолжения биохимических изменений, начатых во время процесса солодоращения. Процесс затирания ведут в течение периода времени при различных температурах для того, чтобы активизировать эндогенные ферменты солода, ответственные за разложение протеинов и углеводов. Несомненно, наиболее важным изменением, осуществляемым при затирании, является превращение молекул крахмала в ферментируемые сахара. Главными ферментами, ответственными за превращение крахмала, в традиционном процессе затирания являются альфа- и бета-амилазы. Альфа-амилаза очень быстро уменьшает нерастворимый и растворимый крахмал путем расщепления молекул крахмала намного более коротких цепочек, которые могут быть атакованы бета-амилазой. Получаемым дисахаридом является мальтоза.
После затирания необходимо отделить жидкий экстракт (сусло) от твердых (барда, т.е. нерастворимое зерно и материал лузги, образующие часть солодовой крупки). Отделение сусла является важным, поскольку твердые содержат большие количества некрахмальных полисахаридов, протеина, слабомодифицированного крахмала, жировых веществ, силикатов и полифенолов (таннинов). Важными некрахмальными полисахаридами, присутствующими в злаковых зернах, являются бета-глюкан и арабиноксилан. Эндосперма клеточных стенок ячменя включает 75% бета-глюкана, 20% арабиноксилана и 5% остаточного протеина с малым количеством целлюлозы, глюкоманнана и фенольных кислот. Длинные цепи арабиноксиланов ячменя и, в меньшей степени, бета-глюкана, которые не были модифицированы в результате ферментативного гидролиза, могут вызвать образование гелей при солюбилизации в воде, и эти гели будут сильно повышать вязкость сусла и понижать фильтруемость. Подобным образом для качества сусла очень важно, чтобы бета-глюкан был уменьшен до более мелких олигомеров, поскольку немодифицированные бета-глюканы позднее будут вызывать проблемы со стойкостью к помутнению готового пива. Поэтому ферментные композиции, включающие эндоглюканазы и ксиланазы, такие как Ultraflo® или Viscozyme®, часто используют на стадии растирания для улучшения разделения сусла. Целями разделения сусла, среди прочего, являются:
- получение хорошего извлечения экстракта,
- получение хорошей фильтруемости,
- обеспечение прозрачного сусла.
Извлечение экстракта и фильтруемость являются важными для экономики процесса пивоварения, в то время как прозрачность является необходимостью для получения пива, в котором не образуется муть. Извлечение экстракта, фильтруемость и прозрачность сусла в значительной мере определяются стандартами солодовой крупки, например ячменного солода и типов добавки, а также примененной технологией затирания.
После отделения сусла от барды сусло может быть ферментировано пивными дрожжами для получения пива.
Дополнительную информацию об обычных способах пивоварения можно найти в "Technology Brewing and Malting" by Wolfgang Kunze of Research and Teaching Institute of Brewing, Berlin (VLB), 2nd revised Edition 1999, ISBN 3-921690-39-0.
Изобретение предлагает способ приготовления затора, имеющего улучшенную фильтруемость и/или улучшенный выход экстракта после фильтрации, который включает приготовление затора в присутствии ферментных активностей и фильтрацию затора для получения сусла, в котором ферментные активности включают ксиланазу семейства GH10 в количестве по меньшей мере 15%, 20%, предпочтительно 25%, таком как по меньшей мере 30%, или по меньшей мере 40%, или по меньшей мере 50%, или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или даже 100 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
В предпочтительном осуществлении ксиланаза является ксиланазой типа А, и в особо предпочтительном осуществлении ксиланаза является ксиланазой типа А, имеющей отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее по меньшей мере 0,25, такое как по меньшей мере 0,30, по меньшей мере 0,40, по меньшей мере 0,50 или даже по меньшей мере 0,60.
В другом предпочтительном осуществлении ксиланаза является ксиланазой, которая при описанном здесь анализе связывания имеет отношение связывания растворимого/нерастворимого волокна ячменя по меньшей мере 0,50, предпочтительно, по меньшей мере 0,60, более предпочтительно, по меньшей мере 0,70, такое как 0,80, 0,90, 1,00, 1,10 или даже по меньшей мере 1,20.
В другом предпочтительном осуществлении ксиланаза происходит из мицелиальных грибов, таких как из штамма Aspergillus sp., предпочтительно из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:9), из штамма Myceliophotora sp., предпочтительно из Myceliophotora thermophillia (SEQ ID NO:13), из штамма Humicola sp., предпочтительно, из Humicola insolens (SEQ ID NO:12). В еще одном предпочтительном осуществлении ксиланаза происходит из штамма Trichoderma sp., предпочтительно из T. reesei, такой как ксиланаза, показанная в SEQ ID NO: 17. В более предпочтительном варианте выполнения ксиланаза имеет по меньшей мере 50%, такую как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из последовательностей.
В другом предпочтительном осуществлении ксиланаза происходит из бактерий, таких как из штамма Bacillus, предпочтительно из Bacillus halodurans.
В другом предпочтительном осуществлении эндоглюканазой является эндоглюканаза, происходящая из Humicola sp., такая как эндоглюканаза из Humicola insolens (SEQ ID NO:3), или эндоглюканаза из H. insolens (SEQ ID NO:4), из Thermoascus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Thermoascus aurantiacus (SEQ ID NO:6), или из Aspergillus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO:16).
В предпочтительном осуществлении ксиланаза имеет по меньшей мере 50%, такую как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из вышеупомянутых последовательностей.
В другом предпочтительном осуществлении присутствует по меньшей мере один дополнительный фермент, каковым ферментом является арабинофуранозидаза.
Изобретение также предлагает способ уменьшения вязкости водного раствора, включающего гидролизат крахмала, где указанный способ включает испытание по меньшей мере одного ксиланолитического фермента на его гидролитическую активность по отношению к нерастворимому арабиноксилану пшеницы; выбор ксиланолитического фермента, который расщепляет близкие к разветвленным остатки, оставляя в результате конечно-замещенные олигосахариды ксилозы; и добавление выбранного ксиланолитического фермента к водному раствору, включающему гидролизат крахмала.
Изобретение далее предлагает способ уменьшения вязкости водного раствора, включающего гидролизат крахмала, где указанный способ включает испытание по меньшей мере одного эндоглюканолитического фермента на его гидролитическую активность по отношению к бета-глюкану ячменя; выбор эндоглюканолитического фермента, который в условиях: 10 мкг/мл очищенного фермента и 5 мг/мл бета-глюкана ячменя в 50 мМ ацетате натрия, 0,01% Triton X-100 при рН 5,5 и 50°С в течение 1 часа разлагает более чем 70% бета-глюкана ячменя до DP 6 или DP<6; и добавление выбранного эндоглюканолитического фермента к водному раствору, включающему гидролизат крахмала.
В предпочтительном осуществлении двух процессов водный раствор, включающий гидролизат крахмала, представляет собой затор для приготовления пива.
Изобретение предлагает также композицию, включающую ксиланазу семейства GH10, присутствующую в количестве по меньшей мере 15 вес.% от общего веса ферментного белка, и/или эндоглюканазу GH12, GH7 и/или GH5, присутствующую в количестве по меньшей мере 40 вес.% от общего веса ферментного белка.
В предпочтительном осуществлении ксиланаза композиции является ксиланазой типа А и, предпочтительно, ксиланазой типа А, имеющей отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее по меньшей мере 0,25, такое как по меньшей мере 0,30, по меньшей мере 0,40, по меньшей мере 0,50 или даже по меньшей мере 0,60.
В предпочтительном осуществлении ксиланаза композиции происходит из мицелиальных грибов, таких как из штамма Aspergillus sp., предпочтительно из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO:8 или SEQ ID NO:9), из штамма Myceliophotora sp., предпочтительно из Myceliophotora thermophillia (SEQ ID NO: 13), из штамма Humicola sp., предпочтительно, из Humicola insolens (SEQ ID NO: 12). В предпочтительном осуществлении ксиланаза композиции имеет по меньшей мере 50%, такую как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из вышеупомянутых последовательностей.
В предпочтительном осуществлении ксиланаза композиции происходит из бактерий, таких как из штамма Bacillus, предпочтительно из Bacillus halodurans.
В предпочтительном осуществлении эндоглюканазой композиции является эндоглюканаза, происходящая из Humicola sp., такая как эндоглюканаза из Humicola insolens (SEQ ID NO:3), эндоглюканаза из H. insolens (SEQ ID NO:4), или из Thermoascus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Thermoascus aurantiacus (SEQ ID NO:6), или из Aspergillus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO:16), или из Trichoderma sp., предпочтительно из T. reesei, и/или T. viride, такая как эндоглюканаза семейства 5, показанная в SEQ ID NO:18, бета-глюканаза семейства 7, показанная в SEQ ID NO:19, или бета-глюканаза семейства 12, показанная в SEQ ID NO:20.
В предпочтительном осуществлении эндоглюканаза композиции имеет по меньшей мере 50%, такую как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из вышеупомянутых последовательностей.
В предпочтительном осуществлении ксиланаза семейства GH10 композиции присутствует в количестве по меньшей мере 20%, предпочтительно 25%, таком как по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45% или даже по меньшей мере 50 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
В предпочтительном осуществлении эндоглюканаза GH семейства 12, 7 и/или 5 композиции присутствует в количестве по меньшей мере 25%, предпочтительно 30%, таком как по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45% или даже по меньшей мере 50%, таком как по меньшей мере 55% или даже по меньшей мере 60 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
Композиция согласно предшествующему аспекту может быть использована в процессе, включающем уменьшение вязкости водного раствора, включающего гидролизат крахмала.
Композиция может быть еще использована в процессе, включающем фильтрацию водного раствора, включающего гидролизат крахмала. В предпочтительном осуществлении водный раствор, включающий гидролизат крахмала, представляет собой затор для приготовления пива, и в другом предпочтительном осуществлении водный раствор, включающий гидролизат крахмала, представляет собой пищевую композицию.
Способ по изобретению может быть применен при затирании любой солодовой крупки. Согласно изобретению солодовая крупка может включать любой содержащий крахмал и/или сахар растительный материал, полученный из любого растения и любой части растения, включая клубни, корни, стебли, листья и семена. Предпочтительно солодовая крупка включает зерно, такое как зерно ячменя, пшеницы, ржи, овса, кома, риса, мило, проса и сорго, и, более предпочтительно, по меньшей мере 10% или, более предпочтительно, по меньшей мере 15%, еще более предпочтительно по меньшей мере 25% или, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 35%, так что по меньшей мере 50%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 90% или даже по меньшей мере 100 вес.% солодовой крупки сусла получают из зерна.
Наиболее предпочтительно солодовая крупка включает осоложенное зерно, такое как ячменный солод. Предпочтительно по меньшей мере 10% или, более предпочтительно, по меньшей мере 15%, еще более предпочтительно по меньшей мере 25% или, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 35%, так что по меньшей мере 50%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 90% или даже по меньшей мере 100 вес.% солодовой крупки сусла получают из осоложенного зерна.
Для затирания солодовых крупок с низким содержанием солода ферменты затирания могут быть поданными экзогенно. Ферменты, использованные главным образом как ферменты разложения крахмала, включают пуллуланазы, альфа-амилазы и амилоглюкозидазы. Использование разлагающих крахмал ферментов при затирании хорошо известно специалистам.
Добавка, включающая легкоферментируемые углеводы, такие как сахара или сиропы, может быть добавлена к солодовому затору до, во время или после процесса затирания по изобретению, но предпочтительно добавляется после процесса затирания. Часть добавки может быть обработана протеазой и/или эндоглюканазой и/или подвергнута тепловой обработке перед добавлением к затору по изобретению.
Во время процесса затирания крахмал, экстрагированный из солодовой крупки, постепенно гидролизуется до ферментированных сахаров и более мелких декстринов. Предпочтительно затор является крахмалом, негативным к иодной пробе перед отделением сусла.
Применение соответствующих ксиланазной и эндоглюканазной активностей в способе по настоящему изобретению приводит к эффективному снижению концентрации бета-глюкана и арабиноксилана, облегчающему разделение сусла, обеспечивая таким образом уменьшенное время цикла, высокое извлечение экстракта и прозрачное сусло.
Сусло, изготовленное способом по первому аспекту изобретения, может быть ферментировано для приготовления пива. Ферментация сусла может включать засевание сусла суспензией, содержащей свежие дрожжи, т.е. дрожжи, не использовавшиеся ранее для изобретения, или дрожжи могут быть рецикловыми дрожжами. Применяемые дрожжи могут быть любыми дрожжами, пригодными для пивоварения, в особенности дрожжами, выбранными из Saccharomyces spp., таких как S. cerevisiae и S. uvarum, включая природные или искусственно полученные варианты этих организмов. Способы ферментации сусла для приготовления пива хорошо известны специалистам.
Способ по изобретению может включать добавление гидрогеля диоксида кремния к ферментированному суслу для повышения коллоидной стабильности пива. Способы могут дополнительно включать добавление кизельгура к ферментированному суслу и фильтрацию для того, чтобы сделать пиво светлым. Пивом, изготовленным ферментацией сусла по изобретению, может быть любой тип пива, например эль, крепкий эль, стаут, портер, лагер, пильзнер, горькое, экспортное пиво, солодовый напиток, хаппушу, ламбик, ячменное вино, высокоалкогольное пиво, низкоалкогольное пиво, низкокалорийное пиво или легкое пиво.
Пиво, изготовленное способом по изобретению, может быть дистиллировано для извлечения этанола, например, для получения виски. Предполагается любой сорт виски, включая бурбон, канадское виски, ирландское виски, ржаное виски и шотландское виски.
Ксиланаза
Для данных целей ксиланаза является ферментом, классифицируемым как ЕС 3.2.1.8. Официальным названием является эндо-1,4-бета-ксиланаза. Системным названием является 1,4-бета-D-ксиланксиланогидролаза. Могут быть использованы другие названия, такие как эндо-(1,4)-бета-ксиланаза, (1-4)-бета-ксилан-4-ксиланогидролаза, эндо-1,4-ксиланаза, ксиланаза, бета-1,4-ксиланаза, эндо-1,4-ксиланаза, эндо-бета-1,4-ксиланаза, эндо-1,4-бета-D-ксиланаза, 1,4-бета-ксиланксиланогидролаза, бета-ксиланаза, бета-1,4-ксиланксиланогидролаза, эндо-1,4-бета-ксиланаза, бета-D-ксиланаза. Катализируемой реакцией является эндогидролиз 1,4-бета-D-ксилозидиновых связей в ксиланах.
Хотя ксиланаза, которая должна использоваться в настоящем изобретении, может быть любого происхождения, включая происхождение от млекопитающих, растительное или животное происхождение, в настоящее время предпочтительно, чтобы ксиланаза была микробиального происхождения. В частности, ксиланаза может быть ксиланазой, полученной из мицелиальных грибов или дрожжей.
Ксиланазы были обнаружены в ряде видов грибов, в частности видов Aspergillus, таких как A. niger, A. awamori, A. aculeatus и A. oryzae, Trichoderma, таких как T. reesei или T. harzianum, Penicillum, таких как P. camenbertii, Fusarium, таких как F. oxysporum, Humicola, таких как H. insolens, и Thermomyces lanuginosa, таких как T. lanuginosa. Ксиланазы были также обнаружены в видах бактерий, например в роде Bacillus, таких как B. pumilus.
Предпочтительно согласно способу по изобретению ксиланаза происходит от мицелиального гриба, такого как Aspergillus sp., Bacillos sp., Humicola sp., Mycellophotora sp., Poitrasia sp., Rhyzomucor sp. или Trichoderma.
Было показано, что специфичность субстрата является ключевым параметром для показателей работы ксиланаз в способе по изобретению. Представляется, что ксиланаза с оптимальным показателем работы в способе по изобретению должна быть ферментом, который присоединяется довольно прочно к растворимому арабиноксилану и довольно слабо - к нерастворимому арабиноксилану. Предпочтительно ксиланаза для использования в настоящем изобретении является ксиланазой, которая в анализе на связывание в методиках, описанных в этой заявке, имеет отношение связывания растворимое/нерастворимое волокно ячменя по меньшей мере 0,50, предпочтительно по меньшей мере 0,60, более предпочтительно по меньшей мере 0,70, такое как 0,80, 0,90, 1,00, 1,10 и даже по меньшей мере 1,20.
Ряд идентифицированных ксиланаз, имеющих эти характеристики, является членами семейства 10 глюкозидгидролаз. Предпочтительно ксиланаза для использования в настоящем изобретении является ксиланазой семейства 10 глюкозидгидролаз (GH10), и наиболее предпочтительно ксиланаза является ксиланазой GH10, которая является также ксиланазой типа А, т.е. ксиланазой, которая расщепляет нерастворимые полимеры арабиноксилана пшеницы близко к разветвленным остаткам, оставляя конечно-замещенные олигосахариды ксилозы (см. примеры для определения типов А и В). Поскольку ферменты GH10 способны подойти ближе к разветвленным ксилозным блокам, они образуют более мелкие олигосахариды, чем ксиланазы GH11.
Предпочтительно ксиланаза для использования в данном изобретении имеет функциональный СВМ, такой как СВМ семейства 1.
Предпочтительно согласно способу по изобретению ксиланазу выбирают из списка, состоящего из ксиланазы, показанной как ксиланаза из Aspergillus aculeatus, показанная как SEQ ID NO: 8 (AA XYL I), ксиланаза из Aspergillus aculeatus, показанная как SEQ ID NO: 9 (AA XYL II), ксиланаза из Bacillus halodurans, показанная как SWISS PROT P07528 (BH XYL A), ксиланаза из Humicola insolens, показанная как SEQ ID NO: 12 (HI XYL III), ксиланаза из Myceliophotora thermophila, показанная как SEQ ID NO: 13 (MT XYL I) и ксиланаза из Trichoderma reesei, такая как ксиланаза, показанная как SEQ ID NO: 17. Предпочтительной также является любая последовательность, имеющая по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или даже по меньшей мере 90% гомологии с любой из вышеупомянутых последовательностей ксиланаз.
Эндоглюканаза
Для данных целей эндоглюканаза является ферментом, классифицируемым как ЕС 3.2.1.4. Хотя эндоглюканаза, которая должна использоваться в настоящем изобретении, может быть любого происхождения, включая происхождение от млекопитающих, растительное или животное происхождение, в настоящее время предпочтительно, чтобы эндоглюканаза была микробиального происхождения. В частности, эндоглюканаза может быть эндоглюканазой, полученной из мицелиальных грибов или дрожжей.
Предпочтительно эндоглюканаза является глюканазой семейства 12 гликозидгидролаз (GH12), семейства 7 гликозидгидролаз (GH7), или семейства 5 гликозидгидролаз (GH5). Более предпочтительно эндоглюканаза является полипептидом, имеющим в суперструктуре бета-"рулет с джемом" или b8/a8-полость.
Хотя эндоглюканаза, которая должна использоваться в настоящем изобретении, может быть любого происхождения, включая происхождение от млекопитающих, растительное или животное происхождение, в настоящее время предпочтительно, чтобы эндоглюканаза была микробиального происхождения. В частности, эндоглюканаза может быть эндоглюканазой, полученной из мицелиальных грибов или дрожжей.
Более предпочтительно согласно способу по изобретению эндоглюканаза происходит от мицелиального гриба, такого как Aspergillus sp. или Humicola sp.
Предпочтительно, согласно способу по изобретению эндоглюканазу выбирают из списка, состоящего из эндоглюканазы из Aspergillus aculeatus, показанной в SEQ ID NO: 1 (AA EG I), эндоглюканазы из Aspergillus aculeatus, показанной в SEQ ID NO: 2 (AA EG II), эндоглюканазы из Aspergillus aculeatus, показанной в SEQ ID NO: 16 (AA EG III), эндоглюканазы из Humicola insolens, показанной в SEQ ID NO: 3 (HI EG I), эндоглюканазы из Humicola insolens, показанной в SEQ ID NO: 4 (HI EG III), эндоглюканазы из Humicola insolens, показанной в SEQ ID NO: 5 (HI EG IV), эндоглюканазы из Trichoderma sp., показанной в SEQ ID NO:19, или эндоглюканазы из Trichoderma sp., показанной в SEQ ID NO: 20. Предпочтительной также является любая последовательность, имеющая по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или даже по меньшей мере 90% гомологии с любой из вышеупомянутых последовательностей.
Другие глюканазы GH12 включают эндоглюканазы из Aspergillus sp., такие как из Aspergillus kawachi (SWISSPROT Q12679) или Aspergillus niger (SWISSPROT O74705), Aspergillus oryzae (SWISSPROT O13454), из Erwinia sp., таких как из Erwinia carotonova (SWISSPROT P16630), и из Thermotoga sp., таких как Thermotoga maritima (SWISSPROT Q60032 или Q9S5XB). Предпочтительной также является любая последовательность, имеющая по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или даже по меньшей мере 90% гомологии с любой из вышеупомянутых последовательностей глюканаз GH12.
Другие глюканазы GH7 включают эндоглюканазы, полученные из Agaricus sp., такие как из Agaricus bisporus (SWISSPROT Q92400), из Aspergillus sp., такие как из Aspergillus niger (SWISSPROT Q9UVS8), из Fusarium sp., такие как из Fusarium oxysporum (SWISSPROT P 46238), из Neuspora sp., такие как из Neuspora crassa (SWISSPROT P38676), или из Trichoderma sp., такие как из Trichoderma longibratchiatum (SWISSPROT Q12714). Предпочтительной также является любая последовательность, имеющая по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или даже по меньшей мере 90% гомологии с любой из вышеупомянутых последовательностей глюканаз GH7.
Другие глюканазы GH5 включают эндоглюканазы, полученные из Acidothermus sp., такие как из Acidothermus celluloliticus (SWISSPROT P554583), из Aspergillus sp., такие как из Aspergillus niger (SWISSPROT O74706), или из Bacillus sp., такие как из Bacillus polymixa (SWISSPROT P23548). Предпочтительной также является любая последовательность, имеющая по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или даже по меньшей мере 90% гомологии с любой из вышеупомянутых последовательностей глюканаз GH5.
Арабинофуранозидаза
Арабинофуранозидаза ЕС 3.2.1.55, общее наименование альфа-N-арабинофуранозидаза, гидролизует концевые невосстановленные остатки альфа-L-арабинофуранизида в альфа-L-арабинозидах. Фермент действует на альфа-L-арабинофуранизиды, альфа-L-арабинаны, содержащие (1,3)- и/или (1,5)-связи арабиноксиланы и арабиногалактаны.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКИ
Ксиланазная активность
Ксиланолитическая активность может быть выражена в единицах FXU, определенных при рН 6,0 с ремазол-ксиланом (4-О-метил-D-глюкуроно-D-ксилан, окрашенный Remazol Brilliant Blue R, Fluka) в качестве субстрата.
Образец ксиланазы инкубируют с ремазол-ксилановым субстратом. Фон неразложенного окрашенного субстрата осаждают этанолом. Оставшаяся голубая окраска супернатанта (что определено спектрофотометрически на 585 нм) пропорциональна ксиланазной активности, и ксиланазные единицы затем определяют относительно ферментного стандарта при стандартных условиях реакции: т.е. при 50,0°С, рН 6,0 и времени реакции 30 мин.
Папка AF 293.6/1, описывающая этот аналитический метод более подробно, доступна по запросу в Novozymes A/S, Denmark, каковая папка настоящим включена ссылкой.
Глюканазная активность
Целлюлитическая активность может быть измерена в единицах грибной эндоглюканазы (FBG), определенных на 0,5% бета-глюкановом субстрате при 30°С, рН 5,0 и времени реакции 30 мин. Грибная эндоглюканаза реагирует с высвобождаемой бета-глюканом глюкозой или восстанавливаемым углеводом, который определяется как восстановленный сахар согласно методу Somogyl-Nelson.
Единица активности грибной эндоглюканазы (FBG) является количеством фермента, которое соответственно указанным выше стандартным условиям высвобождает глюкозу или восстанавливаемый углевод с восстановительной способностью, эквивалентной 1 ммоль глюкозы в минуту.
Ферменты
Ultraflo® L., многокомпонентная ферментная композиция, полученная из Humicola insolens, включающая смесь эндоглюканаз, ксиланаз, пентозаназ и арабаназ. Ultraflo® L. стандартизован до 45 FBG/г и имеет плотность приблизительно 1,2 г/мл. Ultraflo® L может быть получен от Novozymes A/S.
Viscozyme® L., многокомпонентная ферментная композиция, полученная из Aspergillus aculeatus, включающая смесь эндоглюканаз, арабаназ и ксиланаз. Viscozyme® L. стандартизован до 100 FBG/г и имеет плотность приблизительно 1,2 г/мл. Viscozyme может быть получен от Novozymes A/S.
Alcase®, Subtilisin, протеазная композиция, полученная из Bacillus licheniformis. Alcase® может быть получен от Novozymes A/S.
Termamyl SC®, Bacillus альфа-амилаза может быть получена от Novozymes A/S.
Были применены следующие однокомпонентные эндоглюканазы и ксиланазы.
| Эндоглюканазы | |||
| AA EG I | Aspergillus aculeatus | SEQ ID NO:1 | |
| AA EG II | Aspergillus aculeatus | Cel12b | SEQ ID NO:2 |
| АА EG III | Aspergillus aculeatus | Cel12a | SEQ ID NO:16 |
| HI EG I | Humicola insolens | Cel12a, GH12 | SEQ ID NO:3 |
| HI EG III | Humicola insolens | Cel12a, GH12 | SEQ ID NO:4 |
| HI EG IV | Humicola insolens | Cel5a,GH12 | SEQ ID NO:5 |
| HI EG V | Humicola insolens | Cel45a, GH45 | SEQ ID NO:8 |
| TA EG BG025 | Thermoascus aurantiacus | SEQ ID NO:6 | |
| Ксиланазы | |||
| АА XYL I | Aspergillus aculeatus | GH10,Type A | SEQ ID NO:8 |
| AA XYL II | Aspergillus aculeatus | GH10, Type A | SEQ ID NO:9 |
| АА XYL III | Aspergillus aculeatus | GH11, Type B | SEQIDNO:10 |
| BH XYL A | Bacillus halodurans | GH10, Type A | SWISS PROT P07528 |
| HI XYL I | Humicola insolens | GH11, Type B | SEQ ID NO:11 |
| HI XYL III | Humicola insolens | GH10, Type A | SEQ ID NO:12 |
| MT XYL I | Myceliophotora thermophila | GH10, Type A | SEQ ID NO:13 |
| MT XYL III | Myceliophotora thermophila | GH11, Type B | SEQ ID NO:14 |
| TL XYL | Thermomyces lanuginosus | GH11, Type B | SEQ ID NO:15 |
МЕТОДЫ
Приготовление затора
Если не указано иное, затирание проводили следующим образом. Исключая отмеченное (например, в отношении дозировки фермента), затор готовили согласно ЕВС: 4.5.1, используя солод, размолотый согласно ЕВС: 1.1. Опыты по затиранию проводили в 500 мл закрываемых крышками сосудах, выдерживаемых в водяной бане с перемешиванием, и каждый содержал затор с 50 г солодовой крупки, дополненный до общего веса в 300±0,2 г водой, предварительно нагретой до начальной температуры инкубации +1°С. Полученное сусло имело приблизительно 12% Плато.
Температурный профиль затирания
Если не указано иное, затирание проводили, используя температуру начальной инкубации 52°С в течение 30 мин, за чем следовал шаг повышения температуры до 63°С с оставлением этой температуры на 20 мин. Профиль продолжали с шагом повышения до 72°С на 30 мин и затирание завершали при 78°С в течение 5 мин. Все поэтапные температурные градиенты осуществляли повышением на 1°С/мин. Затор охлаждали до 20°С в течение 15 мин, что давало в результате суммарный период инкубации 2 ч 11 мин.
Дополнительные методики
Методики анализа сырья, продуктов, сусла, пива и т.д. можно найти в Analytica-EBC, Analysis Committee of EBC, the European Brewing Convention (1998), Verlag Hans Carl Geranke-Fachverlag. Для настоящего изобретения методами, применяемыми для определения следующих параметров, были методы, указанные ниже.
Плато: рефрактометр.
Бета-глюкан: ЕВС: 8.13.2 (High molecular weight beta-glucan content of wort fluorimetric method).
Мутность: ЕВС: 4.7.1.
Фильтруемость: определение объема (мл) фильтрата: согласно ЕВС: 4.5.1 (Extract of Malt: Congress Mash) subsection 8.2. Filterability: объем фильтрата замеряли после 1 ч фильтрации через гофрированную фильтровальную бумагу диаметром 320 мм, Schleicher and Schüll, No 597 1/2, Machery, Nagel and Co в воронки диаметром 200 мм, присоединенные к 500 мл колбам.
Извлечение экстракта: ЕВС: 4.5.1 (Extract of Malt: Congress Mash. Extract in dry). Термин "извлечение экстракта в сусло" определен как сумма растворимых веществ (глюкоза, сахароза, мальтоза, мальтотриоза, декстрин, протеин, смолы, неорганические вещества, другие вещества), экстрагированных из солодовой крупки (солода и добавок), выраженная в процентах в расчете на сухое вещество. Остающаяся нерастворимая часть определяется как барда.
где:
Е1 - содержание экстракта в образце, в % (вес.),
Е2 - содержание экстракта в сухой солодовой крупке, в % (вес.),
Р - содержание экстракта в сусле, в % Плато,
М - содержание влаги в солодовой крупке, в % (вес.),
800 - количество дистиллированной воды, добавленной в затор на 100 г солодовой крупки.
Вязкость: автоматический вискозиметр, основанный на принципе катящегося шарика. Измеряемую пробу вводят в стеклянный капилляр, в котором катится стальной шарик. Вязкостные свойства испытуемой жидкости могут быть определены путем измерения времени качения стального шарика. Измеряют время качения to шарика через определенное измеряемое расстояние в капилляре. Динамическую вязкость пробы η рассчитывают из калибровочной константы измерительной системы К1(α), времени качения to и разности плотности Δр между шариком и пробой. Используют следующее уравнение:
где:
η - динамическая вязкость пробы (мПа·с),
К(α) - калибровочная константа для измерительной системы (мПа·с·см3/г),
to - время качения для 100 мм (с),
ρк - плотность шарика (7,85 г/см3),
ρs - измеренная плотность пробы (г/см3).
Вязкость представлена в расчете на экстракт (°Плато) как есть или переведена на 8,6°Плато, основываясь на методике Congress mashing.
Пример 1
Характеристика ксиланаз с использованием анализа связывания
Приготовление фракций волокна
Фракцию растворимого волокна готовили следующим образом:
1. 50 кг ячменя размалывали и суспендировали в 450 кг воды при 50°С при перемешивании.
2. Экстракцию проводили в течение 30 минут при перемешивании.
3. Используя предварительно нагретую отстойную центрифугу и центрифугу отбрасывания твердых частиц, готовили не содержащую частиц и осветленную фракцию.
4. Осветленную фракцию подвергали ультрафильтрации при 50оС на трубчатой мембране с величиной отсечения 20000 дальтон. Процесс ультрафильтрации продолжали до тех пор, пока не возрастет вязкость и не уменьшится значительно поток в систему.
5. Концентрированную фракцию отбирали и лиофилизировали.
Фракцию нерастворимого волокна готовили следующим образом:
1. 50 кг ячменя размалывали и суспендировали в 450 кг воды при 50°С при перемешивании. Добавляли 0,25 кг Termamyl SC и раствор нагревали до 85°С при перемешивании. Реакцию проводили в течение 30 мин. Отбирали образец для анализа крахмала иодной пробой.
2. Образец центрифугировали в течение 5 мин при 3000g (в 10 мл центрифужном стакане). Определяли °Плато, используя рефрактометр на супернатанте. За этим следовало определение конверсии крахмала цветной реакцией с иодом: если цвет синий, значит остается крахмал.
3. Реакцию продолжали до тех пор, пока °Плато не стабилизировались. Продукт реакции был готов для центрифугирования.
4. Центрифугирование проводили, используя отстойную центрифугу. Сепарацию проводили при 75°С и получали прозрачный и не содержащий частиц супернатант. Эту фракцию выгружали. Только твердую фракцию использовали в последующем процессе.
5. Отобранную твердую фракцию суспендировали в 500 кг горячей воды. Температуру взвеси доводили до 50°С.
6. Величину рН доводили до 7,5, используя NaOH. Реакцию гидролиза проводили, используя 125 г Alcalase 2.4 L. Во время гидролиза поддерживали рН 7,5 (рН-стат), и время реакции составляло 120 мин. После этого реакционную смесь оставляли перемешиваться без рН-стата при Т=50°С в течение ночи.
7. Затем рН доводили до 6,5, используя HCl.
8. Реакционную смесь центрифугировали, используя отстойную центрифугу.
9. Твердую фракцию собирали и промывали 500 л воды при 50°С в течение 30 мин. Стадии центрифугирования и промывки повторяли.
10. Эту промытую твердую фракцию лиофилизировали.
Анализ фракции волокон
Состав сахаров во фракциях волокон анализировали следующим образом: к 1 г волокна добавляли 50 мл 1М HCl и выдерживали при 100°С в течение 2 час при встряхивании. После этой обработки реакционную смесь немедленно охлаждали на льду и добавляли 11 мл 4М NaOH, чтобы нейтрализовать смесь. Содержание арабинозы, галактозы, глюкозы и ксилозы определяли количественно, используя систему Dionex BioLC, оборудованную колонкой CarBoPac PA-1, как описано у Sørensen et al. (2003) Biotech. Bioeng. vol. 81, No 6, p. 726-731. Результаты показаны в таблице 1.
| Таблица 1 | ||||
| Содержание (г/кг) индивидуальных сахаров во фракциях волокон из ячменя | ||||
| Арабиноза | Галактоза | Глюкоза | Ксилоза | |
| Растворимые волокна | 34,9 | 14,8 | 486,6 | 38,1 |
| Нерастворимые волокна | 102,3 | 10,4 | 42,3 | 307,2 |
Анализ связывания ксиланаз
Анализ связывания ксиланаз проводили следующим образом. Волокно (10 мг) промывали в пробирке Эппендорфа вихревым смешением с 500 мкл ацетатного буфера (50мМ, рН 5,5, 0,1% Triton X-100) перед центрифугированием в течение 2 мин при 13000 g. Промывку и центрифугирование проводили дважды. Затем раствор, содержащий фермент* (500 мкл в ацетатном буфере с рН 5,5), добавляли к субстрату и смесь тщательно перемешивали завихрением и выдерживали в ледяной бане в течение 10 мин. Затем пробирку Эппендорфа, содержащую реакционную смесь, центрифугировали при 14000 g в течение 3 мин, где после этого определяли начальную и остаточную активность, используя в качестве субстрата 0,2% AZCL-арабиноксилан из пшеницы (Megazyme) в 0,2М Na-фосфатном буфере (рН 6,0) + 0,01% Triton-X-100. Колбочку с 900 мкл субстрата предварительно нагревали до 37°С в термомиксере, добавляли 100 мкл пробу фермента, после чего выдерживали в течение 15 мин при 37°С и максимальном встряхивании. Колбочку помещали на лед на 2 мин, перед тем как центрифугировать ее в течение 1 мин при 20000 g. Из супернатанта 2×200 мкл переносили на титрационный микропланшет, измеряли конечный OD 590 нм и сравнивали по отношению с контролем. Контролем был 100 мкл образец фермента, инкубированый с 900 мкл 0,2М Na-фосфатного буфера (рН 6,0) + 0,01% Triton-X-100 вместо субстрата, после чего вся активность была извлечена в супернатант, и эта величина была принята за 1. Результаты показаны в таблице 2.
Две ксиланазы, имеющие самое высокое отношение связывания растворимых/нерастворимых волокон ячменя, ксиланаза II и ксиланаза I из A. aculeatus, были также двумя ксиланазами, имевшими наилучшие показатели в опытах по затиранию.
| Таблица 2 | ||||
| Отношение связывания растворимых/нерастворимых волокон ячменя. Относительная активность, определенная в супернатанте после 10 мин инкубации с фракциями растворимых и нерастворимых волокон ячменя, и полученные соотношения между измеренными в супернатанте активностями растворимого и нерастворимого волокна ячменя |
||||
| Семейство GH | Нерастворимые волокна ячменя | Растворимые волокна ячменя | Отношение связывания растворимых/не- растворимых волокон |
|
| Aspergillus aculeatus Xyl II | 10 | 86 | 104 | 1,21 |
| Aspergillus aculeatus Xyl I | 10 | 105 | 56 | 0,52 |
| Humicola insolens Xyl II | 11 | 82 | 37 | 0,45 |
| Thermomyces lanuginosus Xy I | 11 | 83 | 14 | 0,17 |
| Humicola insolens Xyl I | 11 | 74 | 7 | 0,09 |
| Bacillus halodurans Xyl A | 11 | 79 | 7 | 0,09 |
Пример 2
Определение характеристик специфичности ксиланаз
Ядерно-магнитный резонанс сильного поля (1Н ЯМР) был применен для идентификации различий в специфичности ксиланаз по отношению к нерастворимому арабиноксилану (АХ) пшеницы (нерастворимый Megazyme).
При 1Н ЯМР арабиноксилан или его олигосахарид (АХО) показывает сигналы (химические сдвиги) около 5,0-5,5 ч/млн, возрастающие от аномерных протонов Н-1 от α-L-арабинофуранозидных блоков. Индивидуальные различия между ними, зависящие от их локального окружения, могут быть использованы для оценки специфичности ксиланаз по отношению к этому сильно разветвленному полимеру.
Стандартными условиями являлись: 10 мг/мл АХ в 50 мМ ацетатном буфере, рН 5,5 выдерживали с 0,1 XU/мл в течение 120 мин при 30°С. Затем ксиланазу инактивировали (95°С, 20 мин) и раствор концентрировали на роторном испарителе. Затем пробу дважды упаривали от D2O (1 мл) и, наконец, повторно суспендировали в
D2O (~0,8 мл) перед тем, как ее анализировать. Спектр 1Н ЯМР регистрировали на Varian Mercury 400 мГц при 30°С. Данные собирали за 100 сканирований и сигнал HDO использовали в качестве опорного сигнала (4,67 ч/млн).
Разложение АХ ксиланазой меняет спектр 1Н ЯМР в соответствии со специфичностью фермента. Так, химический сдвиг арабинофуранозида Н-1 изменяется, если арабиноза в получаемом в результате олигосахариде расположена на концевой ксилозе по сравнению с "внутренней" ксилозой. Это может быть результатом того, что ксиланаза способна поместить замещенный ксилозный блок в его +1 субсайт. При использовании приложенных условий было найдено, что все испытанные ксиланазы GH10 были способны делать это, тогда как не было найдено ни одной ксиланазы GH11, имеющей такую характеристику. Тип А относится к ксиланазе, которая расщепляет близкие к разветвленным остатки (замещенные на концах олигосахариды ксилозы), тогда как тип В относится к ксиланазе, которая ведет расщепление между незамещенными ксилозными блоками, давая только внутренне замещенные блоки. Ксиланазы типа А способны также вести расщепление между незамещенными ксилозными блоками. Примеры ксиланаз типа А и типа В, выявленные авторами изобретения, показаны в таблице 3. Для изобретения предпочтительны ксиланазы типа А.
| Таблица 3 | |
| Примеры ксиланаз типа А и типа В | |
| Тип A | Тип B |
| Aspergillus aculeatus Xyl I | Biobake (Quest) |
| Aspergillus aculeatus Xyl II | Humicola insolens Xyl I |
| Bacillus halodurans Xyl A | Myceliophotora thermophila Xyl III |
| Humicola insolens Xyl III | Thermomyces lanuginosus Xyl I |
| Myceliophotora thermophila Xyl I | |
Даже среди ксиланаз типа А предпочтение к расщеплению возле разветвленных остатков или между незамещенными ксилозами варьируется, как показано в таблице 4, где отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее относится к отношению между соответствующими интегралами двух типов протонов. Так, для типа А расщепление приводит в результате к увеличению I1,3-концевое, тогда как для типа В это не происходит. Химическими сдвигами для двух типов протонов являются: для 1,3-прикрепленного арабинофуранозида Н-1 на концевой ксилозе - 5,26 ч/млн и для 1,3-прикрепленного арабинофуранозида Н-1 на внутренней ксилозе - 5,32 ч/млн. Для изобретения предпочтительной является ксиланаза типа А, имеющая отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее по меньшей мере 0,25, такое как по меньшей мере 0,30, по меньшей мере 0,40, по меньшей мере 0,50 или даже по меньшей мере 0,60.
| Таблица 4 | |
| Специфичность ксиланаз, предпочтительность расщепления вблизи разветвленных остатков или незамещенной ксилозы | |
| I1,3-концевое/I1,3-внутреннее | |
| Myceliophotora thermophila Xyl I | 0,64 |
| Aspergillus aculeatus Xyl II | 0,60 |
| Humicola insolens Xyl III | 0,30 |
| Aspergillus aculeatus Xyl I | 0,28 |
Пример 3
Определение характеристик специфичности эндоглюканаз
Специфичность эндоглюканаз изучали путем анализа продуктов разложения после инкубации с бета-глюканом ячменя. Пробирки Эппендорфа с 0,1 и 10 мкг/мл очищенного фермента и 5 мг/мл бета-глюкана ячменя (Megazyme, низкой вязкости) в 50 мМ ацетата натрия, 0,01% Triton X-100 при рН 5,5 выдерживали в термомиксере Эппендорфа при 50°С с перемешиванием.
Испытуемыми ферментами являлись эндоглюканаза EG I из Humicola insolens, эндоглюканаза EG III из Humicola insolens, эндоглюканаза EG IV из Humicola insolens, Aspergillus aculeatus EG II (XG5, Cel12В) и Aspergillus aculeatus EG III (XG53, Cel12A).
Пробы отбирали между 1 и 21,5 ч и инактивировали нагреванием в течение 30 мин при 95°С. Половину каждой пробы разлагали лихеназой (0,085 мкг/мл, Megazyme, из Bacillus subtillis) в 50 мМ MES, 1 мМ CaCl2, pH 6,5 в течение 2 ч при 50°С, после чего лихеназу инактивировали нагреванием до 95°С в течение 30 мин. Обработанные и необработанные лихеназой пробы надлежащим образом разбавляли водой Mill Q и анализировали на системе Dionex DX-500 HPAEC-PAD (колонка CarboPac PA-100; буфер А: 150 мМ NaOH; буфер В: 150 мМ NaOH + 0,6 М ацетата натрия: расход 1 мл/мин. Условия элюирования: 0-3 мин: 95% А + 5% В; 3-19 мин: линейный градиент от 95% А + 5% В до 50% А и 50% В; 19-21 мин: линейный градиент от 50% А + 50% В до 100% В; 21-23 мин: 100% В). В качестве эталона для системы Dionex использовали смесь целлоолигосахаридов (от DP1 до DP6, 100 мМ каждого). Пики на хроматограммах идентифицировали, используя целлоолиго эталоны и известный состав бета-глюкана ячменя после обработки лихеназой (например, Izydorczyk, M.S., Macri, L.J., & MacGregor, A.W., 1997, Carbohydrate Polymers, 35, 249-258). Количественный обсчет пиков на хроматограммах делали, используя факторы отклика, полученные для целлоолиго эталонов, и допуская, что фактор отклика идентичен для олигосахаридов одного и того же DP с бета-1,3 связями. Для олигомеров, более крупных, чем DP6, использовали фактор отклика для DP6.
При анализе продуктов разложения с EG I из Humicola insolens (таблицы 5 и 6) было найдено, что фермент способен разлагать и бета-1,3-, и бета-1,4-связи. Первоначально главными продуктами, возрастающими после обработки лихеназой, являются целлобиоза, целлотриоза и до некоторой степени ламинарибиоза. Это показывает, что связи бета-1,3 между глюкозными блоками в субсайтах -4/-3, -5/-4 и +1/+2 являются допустимыми. Было найдено, что основными продуктами при более высокой дозе фермента (10 мкг/мл) и более длительном времени инкубации (21,5 ч) являются глюкоза и целлобиоза.
С EG III из Humicola insolens (таблицы 7 и 8) основными продуктами после 21,5 ч и при 10 мкг/мл фермента были тетраозы (главным образом, Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu и Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu, но не Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu), пентаозы (возможно, главным образом, Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu и Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu) и более крупные олигомеры. Состав продуктов разложения после обработки лихеназой показывает, что фермент эксклюзивно разлагает связи бета-1,4 в бета-глюкане. Более того, бета-1,4 связями, которые гидролизуются, являются, преимущественно, те, которые не гидролизуются лихеназами (без смежной бета-1,3-связи к невосстанавливаемому концу). То, что количество Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu ("Lic3") не понижается значительно после обработки лихеназой даже после 21,5 ч при 10 мкг/мл, показывает, что фермент обладает лишь ограниченной активностью на участках с только двумя бета-1,4-связями между бета-1,3-связями. Появление значительных количеств глюкозы и ламинарибиозы, но не целлобиозы, после обработки лихеназой показывает, что связи бета-1,3 являются допустимыми между блоками глюкозы в субсайтах -3/-2 и +1/+2, но не между -4/-3 или -5/-4.
Фермент EG IV из Humicola insolens главным образом разлагает бета-глюкан до более крупных олигомеров (таблицы 9 и 10), но после 21,5 ч с 10 мкг/мл фермента образуются значительные количества целлобиозы и олигомеров DP4 (вероятно, преимущественно Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu и Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu). Фермент разлагает примерно одинаковые количества связей бета-1,4 и бета-1,3 в бета-глюкане, и, как представляется, расщепляемые связи бета-1,4 бета-глюкана являются теми, которые не имеют смежных бета-1,3-связей по направлению к невосстанавливаемым концам (в отличие от лихеназ). Обработка лихеназой дает повышенное количество целлобиозы сразу после ограниченного гидролиза EG IV, тогда как целлобиоза и глюкоза появляются только после более далеко идущего гидролиза с EG IV. Это показывает, что связи бета-1,3 между глюкозой в субсайтах -5/-4 более приемлемы, чем между -4/-3 и, в особенности, между -3/-2. Появление ламинарибиозы после обработки лихеназой показывает, что приемлемы также связи бета-1,3 между глюкозой в субсайте +1/+2.
Видно, что с Aspergillus aculeatus EG II (XG5, Cel12B) глюкоза является главным низкомолекулярным продуктом (таблицы 11 и 12). Обработка проб лихеназой при малом разложении бета-глюкана EG II дает увеличение целлобиозы, целлотриозы и ламинарибиозы, но не глюкозы. Это показывает, что связи бета-1,3 являются приемлемыми между глюкозными блоками в субсайтах -5/-4, -4/-3 и +1/+2, но, вероятно, не в -3/-2. Таким образом, глюкоза, высвобожденная EG II, возможно высвобождается экзовоздействием на продукты разложения. Фермент способен гидролизовать связи и бета-1,4, и бета-1,3, хотя связи бета-1,4 кажутся предпочтительными. После 20 часов с наиболее высокой концентрацией фермента наблюдается почти полное разложение бета-глюкана до глюкозы.
Aspergillus aculeatus EG III (XG53, Cel12A) быстро разрушает бета-глюкан, давая олигомеры DP4 (главным образом, Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu и Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu) и DP5 (главным образом, Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu, но также и некоторое количество Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu и Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,4)Glu(бета-1,3)Glu (таблицы 13 и 14)). После 20 часов с наиболее высокой концентрацией фермента образуются также значительные количества целлобиозы, глюкозы и целлотриозы. Обработка проб лихеназой дает увеличение глюкозы, целлотриозы и ламинарибиозы и, особенно, целлобиозы. Это показывает, что связи бета-1,3 могут быть предпочтительны между глюкозными блоками в субсайтах -4/-3, но приемлемы также между -5/-4, -3/-2 и +1/+2. Фермент способен разрушать и связи бета-1,4, и связи бета-1,3.
| Таблица 5 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG1, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,10 | 0,28 | 0,35 | 3,68 | 15,45 | 40,96 |
| Cel2 | 0,40 | 0,93 | 1,51 | 13,80 | 27,32 | 28,76 |
| Cel3 | 0,69 | 1,64 | 2,38 | 9,91 | 6,00 | 0,00 |
| Cel4 | 0,25 | 0,48 | 0,68 | 2,37 | 0,85 | 0,00 |
| Cel5 | 0,00 | 0,40 | 0,35 | 1,66 | 0,11 | 0,00 |
| Cel8 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,00 | 0,00 | 0,13 | 0,07 | 0,06 | 2,12 |
| DP3 | 0,63 | 0,00 | 0,06 | 0,86 | 3,51 | 5,33 |
| DP4 | 0,00 | 0,00 | 0,08 | 1,29 | 4,40 | 4,13 |
| DP5 | 0,87 | 2,38 | 3,65 | 22,91 | 23,44 | 9,14 |
| DP6 | 1,12 | 2,66 | 4,50 | 16,08 | 4,16 | 3,41 |
| DP>6 | 95,93 | 91,23 | 86,30 | 27,38 | 14,70 | 6,16 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 6 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG1 и последующего разложения личеназой, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,14 | 0,17 | 0,45 | 5,15 | 16,24 | 43,66 |
| Cel2 | 3,38 | 4,99 | 10,09 | 36,73 | 43,18 | 35,48 |
| Cel3 | 1,24 | 3,31 | 5,26 | 14,14 | 6,42 | 0,17 |
| Cel4 | 0,21 | 0,79 | 1,39 | 3,79 | 0,90 | 0,00 |
| Cel5 | 0,00 | 0,16 | 0,62 | 1,18 | 0,84 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 2,95 | 2,43 | 3,58 | 9,90 | 7,53 | 4,99 |
| DP3 | 61,59 | 58,54 | 52,42 | 3,56 | 6,49 | 5,46 |
| DP4 | 20,92 | 19,72 | 16,97 | 5,19 | 6,01 | 4,58 |
| DP5 | 4,33 | 4,10 | 5,46 | 13,49 | 9,44 | 2,84 |
| DP6 | 2,23 | 2,88 | 2,75 | 4,84 | 1,00 | 2,47 |
| DP>6 | 3,01 | 2,91 | 0,29 | 2,04 | 1,96 | 0,34 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 7 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG III, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,00 | 0,08 | 0,06 | 0,30 | 0,25 | 0,68 |
| Cel2 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,08 | 0,01 | 0,53 |
| Cel3 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel4 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,03 | 0,00 |
| Cel5 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,03 | 0,24 |
| DP3 | 1,07 | 0,00 | 0,00 | 0,66 | 0,05 | 0,00 |
| DP4 | 0,00 | 0,14 | 0,53 | 5,99 | 7,95 | 39,08 |
| DP5 | 0,78 | 0,00 | 0,75 | 4,50 | 6,68 | 25,08 |
| DP6 | 0,00 | 0,00 | 0,36 | 1,26 | 1,92 | 7,08 |
| DP>6 | 98,15 | 99,78 | 98,29 | 87,22 | 83,09 | 27,31 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 8 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG III и последующего разложения личеназой, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,15 | 0,29 | 1,37 | 6,70 | 14,43 | 13,80 |
| Cel2 | 0,32 | 0,19 | 0,44 | 0,21 | 0,24 | 0,90 |
| Cel3 | 1,03 | 0,00 | 2,01 | 0,93 | 0,45 | 0,15 |
| Cel4 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,03 | 0,00 |
| Cel5 | 0,80 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 4,10 | 1,26 | 2,10 | 7,43 | 13,20 | 13,77 |
| "Lic3" | 59,81 | 65,09 | 61,00 | 47,76 | 40,48 | 56,20 |
| "Lic4" | 22,63 | 23,12 | 21,54 | 18,78 | 7,08 | 9,72 |
| "Lic5" | 4,24 | 4,45 | 4,92 | 10,59 | 15,64 | 2,88 |
| "Lic6" | 3,91 | 2,82 | 3,67 | 3,28 | 2,90 | 2,05 |
| "Lic7" | 3,00 | 2,79 | 2,93 | 4,32 | 5,54 | 0,55 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 9 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG IV, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,13 | 0,63 | 0,66 |
| Cel2 | 0,14 | 0,38 | 1,07 | 7,02 | 5,51 | 12,11 |
| Cel3 | 0,09 | 0,19 | 0,77 | 2,89 | 1,72 | 1,02 |
| Cel4 | 0,81 | 0,20 | 0,34 | 1,10 | 0,55 | 0,13 |
| Cel5 | 0,15 | 0,28 | 0,30 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,29 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,04 | 0,16 |
| DP3 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,68 | 0,00 | 0,11 |
| DP4 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 1,03 | 1,83 | 12,77 |
| DP5 | 0,18 | 0,21 | 0,07 | 0,59 | 0,71 | 3,25 |
| DP6 | 0,00 | 0,13 | 0,26 | 5,78 | 6,04 | 2,44 |
| DP>6 | 98,63 | 98,32 | 97,20 | 80,77 | 82,96 | 67,36 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 10 | ||||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Humicola insolens EG IV и последующего разложения личеназой, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 2,5 | 21,5 | 1 | 2,5 | 21,5 |
| Glu | 0,07 | 0,05 | 0,09 | 1,83 | 2,93 | 7,24 |
| Cel2 | 0,40 | 0,50 | 1,97 | 4,53 | 7,23 | 19,84 |
| Cel3 | 1,45 | 2,05 | 5,59 | 11,84 | 12,00 | 6,94 |
| Cel4 | 0,81 | 1,13 | 1,90 | 1,48 | 0,57 | 0,08 |
| Gel5 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 2,10 | 3,92 | 3,82 | 5,43 | 7,41 | 11,87 |
| DP3 | 63,45 | 61,92 | 60,26 | 54,03 | 47,65 | 30,59 |
| DP4 | 22,95 | 23,32 | 21,96 | 16,11 | 11,03 | 15,88 |
| DP5 | 4,97 | 4,99 | 3,46 | 3,03 | 2,51 | 4,01 |
| DP6 | 3,82 | 0,20 | 0,49 | 0,11 | 3,04 | 1,00 |
| DP>6 | 0,00 | 1,93 | 0,47 | 1,60 | 5,62 | 2,55 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||||
| Таблица 11 | ||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Aspergillus aculeatus EG II (XG5, Cel12B), приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,16 | 0,16 | 16 | 16 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 20 | 1 | 20 |
| Glu | 0,17 | 2,30 | 33,64 | 99,25 |
| Cel2 | 0,00 | 0,00 | 0,54 | 0,00 |
| Cel3 | 0,00 | 0,00 | 0,60 | 0,00 |
| Cel4 | 0,00 | 0,00 | 0,52 | 0,00 |
| Cel5 | 0,00 | 0,00 | 0,11 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,00 | 0,12 | 2,97 | 0,00 |
| DP3 | 0,00 | 0,45 | 0,09 | 0,16 |
| DP4 | 0,00 | 0,06 | 1,85 | 0,02 |
| DP5 | 0,00 | 0,20 | 1,69 | 0,16 |
| DP6 | 0,00 | 0,28 | 4,58 | 0,00 |
| DP>6 | 99,83 | 96,59 | 53,42 | 0,41 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DPi, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DP i с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||
| Таблица 12 | ||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Aspergillus aculeatus EG II (XG5, Cel12B) и последующего разложения личеназой, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,016 | 0,016 | 1,6 | 1,6 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 20 | 1 | 20 |
| Glu | 0,20 | 2,21 | 26,22 | 99,53 |
| Cel2 | 4,88 | 0,61 | 1,31 | 0,00 |
| Cel3 | 3,76 | 3,44 | 4,10 | 0,00 |
| Cel4 | 0,00 | 0,20 | 0,82 | 0,00 |
| Cel5 | 0,00 | 0,88 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,17 | 2,17 | 9,95 | 0,00 |
| DP3 | 61,15 | 59,72 | 36,11 | 0,27 |
| DP4 | 23,43 | 21,49 | 14,35 | 0,04 |
| DP5 | 3,82 | 3,83 | 3,38 | 0,16 |
| DP6 | 0,08 | 2,52 | 2,20 | 0,00 |
| DP>6 | 2,51 | 2,94 | 1,55 | 0,00 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||
| Таблица 13 | ||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Aspergillus aculeatus EG III (XG53, Cel12A), приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 20 | 1 | 20 |
| Glu | 0,05 | 0,23 | 1,42 | 13,28 |
| Cel2 | 0,09 | 0,78 | 4,20 | 20,68 |
| Cel3 | 0,15 | 1,21 | 2,69 | 7,57 |
| Cel4 | 0,17 | 0,91 | 1,19 | 0,00 |
| Cel5 | 0,08 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Cel6 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 0,00 | 0,15 | 0,25 | 0,03 |
| DP3 | 0,33 | 0,16 | 0,00 | 0,42 |
| DP4 | 0,28 | 8,71 | 40,77 | 33,42 |
| DP5 | 1,24 | 15,49 | 30,18 | 20,94 |
| DP6 | 0,79 | 6,69 | 0,26 | 1,65 |
| DP>6 | 96,83 | 65,67 | 19,04 | 2,01 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||
| Таблица 14 | ||||
| Продукты разложения бета-глюкана ячменя эндоглюканазой Aspergillus aculeatus EG III (XG53, Cel12A) и последующего разложения личеназой, приведенные в % вес.% от продуктов разложения | ||||
| Доза фермента (мкг/мл) | 0,1 | 0,1 | 10 | 10 |
| Время инкубации (часы) | 1 | 20 | 1 | 20 |
| Glu | 1,08 | 6,84 | 7,12 | 16,22 |
| Cel2 | 3,37 | 16,31 | 21,82 | 30,46 |
| Cel3 | 3,90 | 5,25 | 4,40 | 7,66 |
| Cel4 | 0,70 | 2,35 | 0,65 | 0,03 |
| Cel5 | 0,58 | 0,00 | 0,00 | 0,10 |
| Cel6 | 0,00 | 1,22 | 0,00 | 0,00 |
| Lam2 | 4,12 | 16,93 | 16,24 | 5,07 |
| DP3 | 57,22 | 33,12 | 6,11 | 0,99 |
| DP4 | 18,69 | 12,16 | 38,91 | 35,81 |
| DP5 | 4,39 | 1,46 | 2,41 | 2,62 |
| DP6 | 3,44 | 2,16 | 0,26 | 0,78 |
| DP>6 | 2,51 | 2,19 | 2,08 | 0,26 |
| Glu: глюкоза, Cel: целлоолиго с DP i, Lam2: ламинарибоза, DPi: олигосахариды с DPi с одной бета-1,3-связью и остальными бета-1,4-связями между глюкозными блоками, DP>6: олигосахариды, содержащие более 6 глюкозных блоков. | ||||
Пример 4
Характеристики затирания и фильтрации
Обычную стандартную обработку Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг сухого вещества (СВ) солодовой крупки (индекс 1.000) сравнивали с экспериментальной обработкой Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ солодовой крупки, дополненной различными эндоглюканазами. Доза 0,2 г Ultraflo® /кг СВ солодовой крупки эквивалентна 2,7 мг протеина фермента/кг СВ солодовой крупки.
| Таблица 15 | |||||
| Эффект эндоглюканазы Humicola insolens EG I (Cel 7b, GH7) и эндоглюканазы Humicola insolens EG V (Cel 45a, GH45) | |||||
| Бета-глюкан | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EGI 1,25 мг ЕР/кг СВ | 1,184 | 0,997 | 1,032 | 0,904 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG V 1,25 мг ЕР/кг СВ | 2,986 | 0,996 | 1,033 | 0,865 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG I 8 мг ЕР/кг СВ | 0,377 | 0,992 | 1,021 | 0,962 | ** Бета-глюкан |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG V 8 мг ЕР/кг СВ | 3,262 | 1,000 | 1,055 | 0,865 | - |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | |||||
Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ, дополненный H. insolens EG I, Cel 7b (GH 7) 8 мг ЕР/кг СВ, снижала содержание бета-глюкана по сравнению со стандартной обработкой (индекс 1.000).
| Таблица 16 | ||||||
| Эффект эндоглюканазы Humicola insolens EG III (Cel 12a, GH12) и эндоглюканазы Humicola insolens EG IV (Cel 5a, GH12) | ||||||
| Бета-глюкан | OD | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EGIV 1,25 мг ЕР/кг СВ | 3,019 | 0,975 | 1,002 | 1,002 | 0,979 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG III 1,25 мг ЕР/кг СВ | 0,628 | 0,949 | 1,000 | 0,999 | 0,957 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG IV 8 мг ЕР/кг СВ | 2,045 | 1,013 | 0,999 | 1,006 | 1,085 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + HI EG III 8 мг ЕР/кг СВ | 0,341 | 0,937 | 1,003 | 0,938 | 1,085 | *** Бета-глюкан, вязкость, фильтруемость |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | ||||||
Эндоглюканаза III H. insolens (Cel 12a, GH12) и Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ снижала содержание бета-глюкана, O.D. и вязкость, в то же время улучшая также фильтруемость по сравнению со стандартной обработкой.
| Таблица 17 | ||||||
| Эффект эндоглюканазы Thermoascus auranticus (GH 5) | ||||||
| Бета-глюкан | OD | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AT EG 5 1,25 мг ЕР/кг СВ | 1,627 | 1,065 | 1,002 | 1,015 | 1,037 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AT EG 8 мг ЕР/кг СВ | 0,432 | 1,033 | 1,001 | 1,017 | 1,000 | ** Бета-глюкан |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | ||||||
Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ, дополненная эндоглюканазой T. aurantiacus BG025 (GH 5), значительно снижала содержание бета-глюкана по сравнению со стандартной обработкой.
Обычную стандартную обработку Ultraflo® 0,2 г/кг СВ солодовой крупки (индекс 1.000) сравнивали с экспериментальной обработкой Ultraflo® 0,1 г/кг СВ солодовой крупки, дополненной различными ксиланазами.
Ни одна из двух ксиланаз GH11, тип В из грибов Bh и Cc, не имела положительного влияния на бета-глюкан, OD, извлечение экстракта, вязкость или фильтруемость.
| Таблица 18 | ||||||
| Эффект эндоглюканазы Bh (GH 11 тип В) | ||||||
| Бета-глюкан | OD | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + BH XYL II 0,7 мг ЕР/кг СВ | 3,223 | 1,100 | 1,000 | 1,032 | 1,082 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + CC XYL II 0,7 мг ЕР/кг СВ | 3,279 | 1,025 | 0,998 | 1,028 | 1,012 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + BH XYL.B 5 мг ЕР/кг СВ | 3,231 | 1,025 | 1,000 | 1,048 | 1,035 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + CC XYL.II 5 мг ЕР/кг СВ | 3,213 | 1,038 | 1,003 | 1,030 | 1,082 | - |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | ||||||
| Таблица 19 | ||||||
| Эффект ксиланазы I Aspergillus aculeatus (GH 10 тип A) и ксиланазы III Mycellophotora thermophila (GH 11 тип B) | ||||||
| Бета-глюкан | OD | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AA XYL.I 5 мг ЕР/кг СВ | 3,401 | 1,125 | 1,006 | 0,981 | 1,143 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + MT XYL II 5 мг ЕР/кг СВ | 3,740 | 0,990 | 1,005 | 1,019 | 0,939 | *** Вязкость, фильтруемость |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AA XYL.I 0,7 мг ЕР/кг СВ | 3,894 | 1,010 | 1,006 | 1,006 | 0,980 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + MT XYL.II 0,7 мг ЕР/кг СВ | 3,218 | 0,927 | 1,007 | 1,020 | 0,776 | - |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | ||||||
| Таблица 20 | |||||
| Эффект ксиланазы Thermomyces lanuginosus (GH 11 тип B) и ксиланазы II Aspergilus aculeatus (GH 10 тип A) | |||||
| Бета-глюкан | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AA XYL.II 0,7 мг ЕР/кг СВ | 2,296 | 1,002 | 0,985 | 0,981 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + TL.XYL 0,7 мг ЕР/кг СВ | 2,375 | 0,994 | 1,015 | 0,868 | - |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + AA XYL.II 5 мг ЕР/кг СВ | 2,152 | 1,000 | 0,970 | 1,075 | *** Вязкость, фильтруемость |
| Ultraflo® 1,4 мг ЕР/кг СВ + TL.XYL 5 мг ЕР/кг СВ | 2,357 | 1,004 | 1,032 | 0,906 | - |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | |||||
Ксиланаза I Aspergilus aculeatus и ксиланаза II Aspergilus aculeatus снижали вязкость, а также улучшали фильтруемость по сравнению со стандартной обработкой.
Обычную стандартную обработку с Ultraflo® 0,2 г/кг СВ солодовой крупки (индекс 1.000) сравнивали с экспериментальной обработкой с Viscozyme 0,1 или 0 г/кг СВ солодовой крупки, дополненной ксиланазой II Aspergilus aculeatus и различными эндоглюканазами.
| Таблица 21 | |||||
| Эффект бета-глюканазы Aspergilus aculeatus EGI (XG5) и эндоглюканазы Aspergilus aculeatus EGIII (XG53) в сочетании с ксиланазой II Aspergilus aculeatus и/или эндоглюканазой Viscozyme® | |||||
| Бета-глюкан | Экстракт | Вязкость | Фильтруемость | Лучшие показатели | |
| Ultraflo® 2,7 мг ЕР/кг СВ | 1,000 | 1,000 | 1,000 | 1,000 | - |
| AA EG II 4 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ Viscozyme® 1,7 мг ЕР/кг СВ |
5,795 | 0,997 | 0,981 | 1,140 | - |
| AA EG III 1 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ Viscozyme® 1,7 мг ЕР/кг СВ |
2,631 | 1,000 | 0,964 | 1,118 | ** Вязкость, фильтруемость |
| AA EG III 2 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ Viscozyme® 1,7 мг ЕР/кг СВ |
1,317 | 1,003 | 0,955 | 1,011 | - |
| AA EG III 4 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ |
0,918 | 1,004 | 0,956 | 1,236 | *** Бета-глюкан, вязкость, фильтруемость |
| AA EG II 8 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ |
6,601 | 1,003 | 0,977 | 1,096 | |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | |||||
Сочетание ксиланазы II Aspergilus aculeatus и эндоглюканазы EG III Aspergilus aculeatus дало значительный эффект на бета-глюкан, вязкость и фильтруемость.
| Таблица 22 | ||||
| Сравнение возрастающих количеств Viscozyme® и композиции по настоящему изобретению. Абсолютные величины | ||||
| Бета-глюкан | OD | %b экстракта | Вязкость | |
| Viscozyme® 3,6 мг ЕР/кг СВ | 189 | 0,030 | 85,0 | 1,38 |
| Viscozyme® 9 мг ЕР/кг СВ | 155 | 0,030 | 85,0 | 1,35 |
| Viscozyme® 13,5 мг ЕР/кг СВ | 127 | 0,031 | 85,2 | 1,34 |
| Viscozyme® 18 мг ЕР/кг СВ | 101 | 0,028 | 85,5 | 1,32 |
| Viscozyme® 27 мг ЕР/кг СВ | 75 | 0,030 | 85,7 | 1,30 |
| Viscozyme® 3,6 мг ЕР/кг СВ AA EG III 2 мг ЕР/кг СВ AA XYL.II 4 мг ЕР/кг СВ |
0 | 0,030 | 85,8 | 1,22 |
| Бета-глюкан (n=4), OD (n=4), экстракт, % (n=4, в расчете на сухое вещество), вязкость (n=4, conv., 8,6°C Plato, сп), фильтруемость (n=2) после 10 мин | ||||
Композиция, включающая Viscozyme® 3,6 мг ЕР/кг СВ, Aspergillus aculeatus EG III 2 мг ЕР/кг СВ и ксиланазу II Aspergillus aculeatus 4 мг ЕР/кг СВ, имела значительно более положительное влияние на бета-глюкан, OD, извлечение экстракта и вязкость, чем имела доза в 7,5 раз больше обычной стандартной дозы Viscozyme® (стандартная доза=3,6 мг ЕР/кг СВ) (таблица 22).
Пример 5
Количественное определение протеиновых связок в гелях SDS-PAGE
Ферментную композицию разбавляли в 250 раз деионизированной водой и выгружали на гель SDS-PAGE с 4-20% Трис-глицина (Nu Page, Invitrogen) и проводили электрофорез, как описано производителем.
После электрофореза гель покрывали пятнами GelCode Blue (Pierce) o/n, после чего обесцвечивали в воде, чтобы фон стал светлым.
Затем полученный гель сканировали, используя денситометр, и анализировали с помощью программы ImageMaster™ v. 1.0 от Amersham Bioscience, следуя методике производителя. Результаты выражены как % плотности связок от общей плотности на данной полосе.
Суммарное количество протеина в образцах фермента измеряли, применяя набор Micro BCA от Pierce, используя методику, прилагаемую к набору.
Claims (20)
1. Ферментная композиция для получения затора, содержащая ксиланазу семейства GH10, присутствующую в количестве по меньшей мере 33 вес.% от общего веса ферментного белка, и
эндоглюканазу GH12, присутствующую в количестве по меньшей мере 14 вес.% от общего веса ферментного белка.
эндоглюканазу GH12, присутствующую в количестве по меньшей мере 14 вес.% от общего веса ферментного белка.
2. Композиция по п.1, в которой ксиланаза является ксиланазой типа А, имеющей отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее по меньшей мере 0,25, такое как по меньшей мере 0,30, по меньшей мере 0,40, по меньшей мере 0,50 или даже по меньшей мере 0,60.
3. Композиция по п.1 или 2, в которой ксиланаза происходит из мицелиальных грибов, так как из штамма Aspergillus sp., предпочтительно из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9), из штамма Myceliophotora sp., предпочтительно из Myceliophotora thermophillia (SEQ ID NO: 13), из штамма Humicola sp., предпочтительно, из Humicola insolens (SEQ ID NO: 12).
4. Композиция по п.1 или 2, в которой ксиланаза происходит из бактерий, таких как из штамма Bacillus, предпочтительно из Bacillus halodurans.
5. Композиция по п.1, в которой эндоглюканазой является эндоглюканаза, происходящая из Humicola sp., такая как эндоглюканаза из Humicola insolens (SEQ ID NO: 3), или эндоглюканаза из Н. insolens (SEQ ID NO: 4), из Thermoascus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Thermoascus aurantiacus (SEQ ID NO: 6), или из Aspergillus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 16).
6. Композиция по п.1, в которой ксиланаза семейства GH10 присутствует в количестве по меньшей мере 20%, предпочтительно 25%, таком как по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, или даже по меньшей мере 70 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
7. Композиция по п.1, в которой эндоглюканаза семейства GH12 присутствует в количестве по меньшей мере 45%, предпочтительно 50%, таком как по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, или даже по меньшей мере 80 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
8. Способ получения затора, имеющего улучшенную фильтруемость, предусматривающий приготовление затора в присутствии ферментной активности, обеспеченной ферментной композицией по любому из пп.1-7 и фильтрацию затора для получения сусла.
9. Способ по п.8, в котором присутствует эндоглюканаза, где указанная эндоглюканаза принадлежит семейству GH12.
10. Способ по п.9, в котором эндоглюканазная активность, принадлежащая к семейству GH12, присутствует в количестве по меньшей мере 40 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка указанной композиции.
11. Способ по любому из пп.8-10, в котором ксиланаза семейства GH10 присутствует в количестве по меньшей мере 20%, предпочтительно, по меньшей мере 25%, таком как по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, или даже по меньшей мере 70 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
12. Способ по п.11, в котором эндоглюканаза семейства GH12 присутствует в количестве по меньшей мере 45%, предпочтительно 50%, таком как по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, или даже по меньшей мере 80 вес.% от общего веса ксиланазного и эндоглюканазного ферментного белка.
13. Способ по п.11, в котором ксиланаза является ксиланазой типа А.
14. Способ по п.13, в котором ксиланаза является ксиланазой типа А, имеющей отношение I1,3-концевое/I1,3-внутреннее по меньшей мере 0,25, такое как по меньшей мере 0,30, по меньшей мере 0,40, по меньшей мере 0,50 или даже по меньшей мере 0,60.
15. Способ по п.11, в котором ксиланаза имеет СВМ предпочтительно СВМ семейства 1.
16. Способ по п.11, в котором ксиланаза является ксиланазой, которая при описанном здесь анализе связывания имеет отношение связывания растворимого/нерастворимого волокна ячменя по меньшей мере 0,50, предпочтительно, по меньшей мере 0,60, более предпочтительно, по меньшей мере 0,70, такое как 0,80, 0,90, 1,00, 1,10 или даже по меньшей мере 1,20.
17. Способ по любому из пп.13-16, в котором ксиланазой является:
a) ксиланаза, происходящая из мицелиальных грибов, таких как штамм Aspergillus sp., предпочтительно из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9), из штамма Myceliophotora sp., предпочтительно из Myceliophotora thermophillia (SEQ ID NO: 13), из штамма Humicola sp., предпочтительно, из Humicola insolens (SEQ ID NO: 12), или из штамма Trichoderma sp., предпочтительно из Т. reesei (SEQ ID NO: 17);
b) ксиланаза, имеющая по меньшей мере 50%, так как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из последовательностей, указанных в а).
a) ксиланаза, происходящая из мицелиальных грибов, таких как штамм Aspergillus sp., предпочтительно из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9), из штамма Myceliophotora sp., предпочтительно из Myceliophotora thermophillia (SEQ ID NO: 13), из штамма Humicola sp., предпочтительно, из Humicola insolens (SEQ ID NO: 12), или из штамма Trichoderma sp., предпочтительно из Т. reesei (SEQ ID NO: 17);
b) ксиланаза, имеющая по меньшей мере 50%, так как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из последовательностей, указанных в а).
18. Способ по любому из пп.13-16, в котором ксиланаза происходит из бактерий, таких как из штамма Bacillus, предпочтительно из Bacillus halodurans.
19. Способ по п.9, в котором эндоглюканазой является:
a) эндоглюканаза, происходящая из Humicola sp., такая как эндоглюканаза из Humicola insolens (SEQ ID NO: 3), или эндоглюканаза из Н. insolens (SEQ ID NO: 4), из Thermoascus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Thermoascus aurantiacus (SEQ ID NO: 6), или из Aspergillus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 16), или из Trichoderma sp., такая как эндоглюканаза из Т. reesei, показанная в SEQ ID NO: 18, эндоглюканаза из Т. viride sp., показанная в SEQ ID NO: 19, или эндоглюканаза из Т. reese, показанная в SEQ ID NO:20;
b) эндоглюканаза, имеющая по меньшей мере 50%, так как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из последовательностей, указанных в а).
a) эндоглюканаза, происходящая из Humicola sp., такая как эндоглюканаза из Humicola insolens (SEQ ID NO: 3), или эндоглюканаза из Н. insolens (SEQ ID NO: 4), из Thermoascus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Thermoascus aurantiacus (SEQ ID NO: 6), или из Aspergillus sp., такая как эндоглюканаза, происходящая из Aspergillus aculeatus (SEQ ID NO: 16), или из Trichoderma sp., такая как эндоглюканаза из Т. reesei, показанная в SEQ ID NO: 18, эндоглюканаза из Т. viride sp., показанная в SEQ ID NO: 19, или эндоглюканаза из Т. reese, показанная в SEQ ID NO:20;
b) эндоглюканаза, имеющая по меньшей мере 50%, так как по меньшей мере 60%, 70%, 80% или даже 90% гомологию с любой из последовательностей, указанных в а).
20. Способ по п.8, в котором присутствует по меньшей мере один дополнительный фермент, каковой фермент выбирают из списка, включающего арабинофуранозидазу, эстеразу феруловой кислоты и ксиланацетилэстеразу.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200301895 | 2003-12-19 | ||
| DKPA200301895 | 2003-12-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006126098A RU2006126098A (ru) | 2008-01-27 |
| RU2376347C2 true RU2376347C2 (ru) | 2009-12-20 |
Family
ID=34684454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006126098/13A RU2376347C2 (ru) | 2003-12-19 | 2004-12-17 | Способ затирания |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20070148741A1 (ru) |
| EP (2) | EP1706477B1 (ru) |
| CN (4) | CN102220191B (ru) |
| BR (1) | BRPI0417686B1 (ru) |
| DK (1) | DK1706477T3 (ru) |
| MX (1) | MXPA06006748A (ru) |
| PL (1) | PL1706477T3 (ru) |
| RU (1) | RU2376347C2 (ru) |
| WO (1) | WO2005059084A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2695461C2 (ru) * | 2013-09-05 | 2019-07-23 | Новозимс А/С | Способ снижения вязкости в способе пивоварения |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102220191B (zh) | 2003-12-19 | 2014-05-21 | 诺维信公司 | 糖化工艺 |
| CA2586779A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Novozymes A/S | Mashing process and enzyme composition useful therein |
| ES2368608T3 (es) | 2006-03-20 | 2011-11-18 | Novozymes, Inc. | Polipéptidos con actividad endoglucanasa y polinucleótidos codifcando los polipéptidos. |
| UA98618C2 (ru) * | 2006-05-19 | 2012-06-11 | Хейнекен Сеплай Чейн Б.В. | Способ изготовления напитка на основе дрожжевого брожения |
| US8765199B2 (en) | 2006-06-15 | 2014-07-01 | Novozymes A/S | Mashing process |
| BRPI0819869B1 (pt) * | 2007-12-12 | 2019-07-16 | Novozymes A/S | Processo enzimático para a produção de um mosto de cervejeiro a partir de cereal não maltado, e, uso de um processo para produção de cerveja |
| PL2222830T3 (pl) * | 2007-12-12 | 2015-12-31 | Novozymes As | Sposób zacierania |
| DE102008060446A1 (de) * | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Krones Ag | Verfahren zum Ermitteln der Filtrierbarkeit von Bier |
| WO2010118257A2 (en) * | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Danisco Us Inc. | Endoglucanase for reducing the viscosity of a plant material slurry |
| WO2010129287A2 (en) | 2009-04-27 | 2010-11-11 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Hemicellulose-degrading enzymes |
| PL2427550T3 (pl) * | 2009-05-07 | 2019-09-30 | Dupont Nutrition Bioscences Aps | Kompleks enzymatyczny z enzymów trichoderma reesei i p. funiculosum |
| CA2780198A1 (en) * | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| CN102869780A (zh) * | 2009-12-21 | 2013-01-09 | 诺维信公司 | 用于自含木素纤维素材料产生发酵产物的方法 |
| US20120276585A1 (en) * | 2009-12-21 | 2012-11-01 | Cofco Corporation | Method for producing fermentation products from lignocellulose-containing material |
| EP2655609A4 (en) | 2010-12-21 | 2015-06-03 | Codexis Inc | ENDOGLUCANASE VARIANTS |
| KR20140018890A (ko) * | 2011-02-09 | 2014-02-13 | 노보자임스 에이/에스 | 탈필링을 위한 셀룰라제 효소 혼합물 및 그것의 이용 |
| US20120251661A1 (en) * | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Peter Toombs | Producing Beer Using a Wort Concentrate |
| HUE037237T2 (hu) * | 2011-09-14 | 2018-08-28 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Kompozíciók, amelyek tartalmaznak enzimeket endo-1,4-béta-xilanáz aktivitással és enzimeket endo-1,3(4)-béta glukanáz aktivitással |
| JP6003077B2 (ja) * | 2012-02-15 | 2016-10-05 | 株式会社豊田中央研究所 | 糖加水分解酵素の細胞外発現の増強剤及びその利用 |
| BR112014027861A2 (pt) | 2012-05-11 | 2017-12-12 | Novozymes As | método de preparação de um mosto |
| JP6068831B2 (ja) * | 2012-05-14 | 2017-01-25 | サッポロビール株式会社 | 植物原料液及び飲料並びにこれらに関する方法 |
| WO2014005499A1 (en) * | 2012-07-02 | 2014-01-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| BR112015002484A2 (pt) * | 2012-08-03 | 2017-11-07 | Dupont Nutrition Biosci Aps | xilanases para solubilização de material contendo arabinoxilano |
| MX2015001543A (es) * | 2012-08-03 | 2015-09-21 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Uso de una xilanasa en maíz y sub-productos de maíz. |
| CN104736702A (zh) | 2012-08-03 | 2015-06-24 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 酶 |
| EP2970371B1 (en) * | 2013-03-14 | 2019-07-31 | Agrivida, Inc. | Use of dimerization domains for temperature regulation of enzyme activity |
| CN106414751A (zh) * | 2014-07-10 | 2017-02-15 | 诺维信公司 | 使用gh5木聚糖酶从淀粉生产乙醇的工艺 |
| WO2016005522A1 (en) | 2014-07-10 | 2016-01-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| EP3017706A1 (en) | 2014-11-05 | 2016-05-11 | Dupont Nutrition Biosciences ApS | Enzymes for malting |
| EP3234143B1 (en) | 2014-12-19 | 2023-06-28 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having xylanase activity and polypeptides having arabinofuranosidase activity |
| ES2935639T3 (es) | 2015-11-26 | 2023-03-08 | Novozymes As | Proceso de molienda |
| EA037907B1 (ru) | 2016-05-02 | 2021-06-04 | Карлсберг Брюириз А/С | Напитки, содержащие -глюкан ячменя |
| EP3545003A4 (en) | 2016-11-25 | 2020-12-09 | Novozymes A/S | GH10 XYLANASE, GH62 ARABINOFURANOSIDASE, CRUSHING PROCESS AND OTHER APPLICATION |
| WO2018127486A1 (en) | 2017-01-03 | 2018-07-12 | Novozymes A/S | Enzymatic dehusking of pulses |
| BR112020012498A2 (pt) | 2017-12-20 | 2020-11-24 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| EP3530743A1 (en) | 2018-02-21 | 2019-08-28 | Cambridge Glycoscience Ltd | Method of production |
| CN118633720A (zh) | 2018-08-15 | 2024-09-13 | 剑桥糖质科学有限公司 | 新型组合物、其用途及其形成方法 |
| BR112021004833A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| WO2021032647A1 (en) | 2019-08-16 | 2021-02-25 | Cambridge Glycoscience Ltd | Methods of treating biomass to produce oligosaccharides and related compositions |
| CN110760399A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-02-07 | 江南大学 | 一种阿拉伯呋喃糖苷酶在啤酒生产中的应用 |
| WO2021116437A2 (en) | 2019-12-12 | 2021-06-17 | Cambridge Glycoscience Ltd | Low sugar multiphase foodstuffs |
| WO2024163289A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-08 | International N&H Denmark Aps | Improved production of rye-based alcoholic beverages |
| WO2025017069A1 (en) | 2023-07-19 | 2025-01-23 | Novozymes A/S | Enzyme assisted juice extraction from sugar cane |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1446203A (en) | 1973-02-28 | 1976-08-18 | Novo Industri As | Preparation of an enzyme product |
| SU614130A1 (ru) | 1976-07-08 | 1978-07-05 | Харьковский Филиал Всесоюзного Научно-Исследовательского Института Пиво-Безалкогольной Промышленности | Комплексный ферментный препарат дл получени пивного сусла из несоложеного сырь |
| US4238345A (en) | 1978-05-22 | 1980-12-09 | Economics Laboratory, Inc. | Stabilized liquid enzyme-containing detergent compositions |
| FI93859C (fi) * | 1985-12-03 | 1995-06-12 | Gist Brocades Nv | Menetelmä glukoosisiirappien ja puhdistettujen tärkkelysten tuottamiseksi vehnän ja muiden viljakasvien pentosaaneja sisältävistä tärkkelyksistä |
| WO1994021785A1 (en) * | 1993-03-10 | 1994-09-29 | Novo Nordisk A/S | Enzymes with xylanase activity from aspergillus aculeatus |
| US5861271A (en) * | 1993-12-17 | 1999-01-19 | Fowler; Timothy | Cellulase enzymes and systems for their expressions |
| EP0746206B1 (en) * | 1994-03-02 | 2004-09-08 | Novozymes A/S | Processing plant material with xylanase |
| IES950367A2 (en) | 1995-05-22 | 1996-02-21 | Christopher Alphonsus Mccormac | Process for the production of ethanol |
| AU7620796A (en) | 1995-11-15 | 1997-06-05 | Novo Nordisk A/S | A process for combined desizing and "stone-washing" of dyed denim |
| WO1997027291A1 (en) * | 1996-01-22 | 1997-07-31 | Novo Nordisk A/S | An enzyme with xylanase activity |
| WO1997027292A1 (en) * | 1996-01-22 | 1997-07-31 | Novo Nordisk A/S | An enzyme with xylanase activity |
| EA001078B1 (ru) | 1996-05-03 | 2000-10-30 | Гист-Брокейдс Б.В. | СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СУСЛА, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПИВА, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПИТЬЕВОГО СПИРТА, ПРИМЕНЕНИЕ α-L-АРАБИНОФУРАНОЗИДАЗ А И В И СМЕСЬ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ |
| EA199600023A1 (ru) | 1996-05-07 | 1997-09-30 | Владимир Михайлович Шемякин | Алкогольный напиток и способ его получения |
| PL191456B1 (pl) * | 1996-08-05 | 2006-05-31 | Dsm Gist Holding Bv | Sposób wytwarzania piwa z wykorzystaniem Maltseed |
| CA2315017C (en) | 1997-12-16 | 2011-10-11 | Genencor International, Inc. | Novel egiii-like enzymes, dna encoding such enzymes and methods for producing such enzymes |
| FR2786784B1 (fr) * | 1998-12-04 | 2003-01-24 | Lesaffre & Cie | FRAGMENT D'ADN CODANT POUR LA XYLANASE THERMOSTABLE XynA DE THERMOASCUS |
| EP1130102B1 (en) * | 2000-02-21 | 2004-10-20 | Puratos N.V. | Enzyme with xylanase activity |
| US6623949B1 (en) | 2000-08-04 | 2003-09-23 | Genencor International, Inc. | Variant EGIII-like cellulase compositions |
| AU2002242633A1 (en) | 2001-03-19 | 2002-10-03 | Novozymes A/S | Fermentation process including the use of enzymes |
| EP1471799A2 (en) | 2002-01-25 | 2004-11-03 | DSM IP Assets B.V. | Thermostable enzyme compositions |
| US8105801B2 (en) | 2003-06-25 | 2012-01-31 | Novozymes A/S | Starch process |
| CN102220191B (zh) | 2003-12-19 | 2014-05-21 | 诺维信公司 | 糖化工艺 |
-
2004
- 2004-12-17 CN CN201110123552.8A patent/CN102220191B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-12-17 CN CN2011101235551A patent/CN102220192B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-12-17 CN CN2011101235566A patent/CN102220193A/zh active Pending
- 2004-12-17 BR BRPI0417686-3 patent/BRPI0417686B1/pt active IP Right Grant
- 2004-12-17 CN CNA200480041919XA patent/CN1918277A/zh active Pending
- 2004-12-17 US US10/583,676 patent/US20070148741A1/en not_active Abandoned
- 2004-12-17 MX MXPA06006748A patent/MXPA06006748A/es active IP Right Grant
- 2004-12-17 PL PL04803032T patent/PL1706477T3/pl unknown
- 2004-12-17 EP EP04803032.4A patent/EP1706477B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-12-17 RU RU2006126098/13A patent/RU2376347C2/ru active
- 2004-12-17 DK DK04803032.4T patent/DK1706477T3/en active
- 2004-12-17 EP EP10180852A patent/EP2258829A3/en not_active Withdrawn
- 2004-12-17 WO PCT/DK2004/000880 patent/WO2005059084A1/en active Application Filing
-
2009
- 2009-06-29 US US12/493,587 patent/US8679791B2/en active Active
-
2014
- 2014-02-27 US US14/191,868 patent/US9279165B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2695461C2 (ru) * | 2013-09-05 | 2019-07-23 | Новозимс А/С | Способ снижения вязкости в способе пивоварения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102220193A (zh) | 2011-10-19 |
| EP1706477B1 (en) | 2016-10-05 |
| EP2258829A2 (en) | 2010-12-08 |
| US20090269818A1 (en) | 2009-10-29 |
| CN102220192A (zh) | 2011-10-19 |
| MXPA06006748A (es) | 2006-09-04 |
| CN102220192B (zh) | 2013-04-17 |
| RU2006126098A (ru) | 2008-01-27 |
| US20140170712A1 (en) | 2014-06-19 |
| US9279165B2 (en) | 2016-03-08 |
| BRPI0417686B1 (pt) | 2019-12-10 |
| PL1706477T3 (pl) | 2017-06-30 |
| EP1706477A1 (en) | 2006-10-04 |
| BRPI0417686A (pt) | 2007-03-20 |
| CN1918277A (zh) | 2007-02-21 |
| DK1706477T3 (en) | 2017-01-23 |
| EP2258829A3 (en) | 2013-03-27 |
| US8679791B2 (en) | 2014-03-25 |
| CN102220191A (zh) | 2011-10-19 |
| WO2005059084A1 (en) | 2005-06-30 |
| US20070148741A1 (en) | 2007-06-28 |
| CN102220191B (zh) | 2014-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2376347C2 (ru) | Способ затирания | |
| EP2756078B1 (en) | Compositions comprising enzymes with endo-1, 4-beta-xylanase activity and enzymes with endo-1,3(4)-beta glucanase activity | |
| EP3225634A1 (en) | Xylanase enzyme activity | |
| EP2427550B1 (en) | Enzyme complex from trichoderma reesei and p. funiculosum enzymes | |
| EP3587568A1 (en) | Enzymes for malting | |
| CA2586779A1 (en) | Mashing process and enzyme composition useful therein | |
| JP2017038604A (ja) | 酵素 |