RU2110991C1 - Микрошарики микронного или субмикронного размера с полимерной оболочкой и способ их изготовления - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и относится к микрошарикам микронного или субмикронного размера с полимерной оболочкой, заполненным воздухом или газом, и способу их изготовления. Заполненные воздухом или газом микрошарики окружены нанесенной на поверхности раздела фаз полимерной оболочкой, которая выполнена из синтетического полимера, для инъекцирования в живые организмы или вводимые орально, реактально или уретрально для терапевтических или диагностических целей (эхография). Свойства полимерной мембраны микрошариков (эластичность, проницаемость, биоразлагаемость) могут регулироваться путем выбора полимера, условий осаждения на поверхности раздела фаз и полимерных добавок. Конденсация полимера в суспензии составляет от 0,00004 до около 400 мг/мл, толщина оболочки составляет 50 - 500 нм и количество воздуха или газа составляет от 0,00003 до около 500 мнл/мл суспензии. Способ изготовления микрошариков осуществляют путем осаждения на поверхности раздела фаз полимерного вещества, при этом готовят эмульсию масло в воде, добавляют полимер, нерастворимый в водяной фазе, осаждают полимер, удаляют закапсулированную гидрофобную фазу, при этом гидрофобную фазу выпаривают одновременно с водной фазой при замещении воздухом или газом. 3 с. и 19 з.п.ф-лы.

Description

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и относится к микрошарикам, заполненным воздухом или газом, включенным в органическую полимерную оболочку, которые могут быть диспергированы или суспендированы в водной среде и использоваться в этой форме для оральных, ректальных и уретральных случаев применения или для инъецирования в живые существа, в частности для целей ультразвуковой эхографии и других медицинских случаев применения.

Изобретение также включает способ изготовления указанных микрошариков в сухом состоянии, причем последние способны немедленно диспергироваться в водном жидком носителе для получения суспензий с улучшенными свойствами по отношению к существующим подобным продуктам. Следовательно, суспензии из микрошариков в жидком носителе, готовые для введения, также является частью изобретения.

Хорошо известно, что микротела или микрошарики воздуха или газа, например микросферы, такие как микропузырьки или микрошарики, суспендированные в жидкости, представляют собой исключительно эффективные ультразвуковые отражатели для эхотерапии. В этом описании выражение "микропузырек" специально обозначает микросферы воздуха или газа в суспензии в жидкости-носителе, которую обычно получают в результате введения в нее воздуха или газа в разделенной форме, при этом жидкость предпочтительно также содержит поверхностно-активные вещества для регулирования поверхностных свойств и стабильности пузырьков. В микропузырьках поверхность раздела газа с жидкостью главным образом содержит свободно связанные молекулы жидкости-носителя. Выражение "микрокапсула" или "микросфера" предпочтительно обозначает воздушные или газовые объемы с материальной границей раздела или оболочкой из молекул, иных чем жидкость-носитель, т.е. стенка полимерной мембраны. Как микропузырьки, так и микросферы полезны в качестве средств ультразвукового контрастирования. В частности, при инъекцирования в кровоток живых тел суспензий из микропузырьков или микросфер газа (в диапазоне от 0,5 до 10 мкм) в жидком носителе в значительной степени усилится получение изображения с помощью ультразвуковой эхографии, способствуя таким образом визуализации внутренних органов. Получение изображения сосудов и внутренних органов может значительно помочь при медицинской диагностике, в частности при обнаружении сердечно-сосудистых и других заболеваний.

Образование суспензий из микропузырьков в инъецируемом жидком носителе, пригодном для эхографии, может быть осуществлено высвобождением газа, растворенного под давлением в этой жидкости, или путем химической реакции, выделяющей газообразные продукты, или путем смешивания с жидкостью растворимых или нерастворимых твердых веществ, содержащих воздух или газ, увеличенные или поглощенные ими.

В частности, в патенте США N 4446442 (Шеринг) раскрыт ряд различных технологий для производства суспензий из микропузырьков газа в стерилизованном инъецируемом жидком носителе, использующем: а) раствор поверхностно активного вещества в жидком носителе (водный) и б) раствор средства увеличения вязкости в качестве стабилизатора. Для создания пузырьков раскрытая здесь технология включает пропускание при высокой скорости смеси а), б) и воздуха через малое отверстие; или инъецирование а) и б) незадолго до использования вместе с физиологически приемлемым газом; или добавление кислоты к а) и карбоната к б), при этом оба компонента смешивают вместе как раз перед употреблением, и кислота реагирует с карбонатом для создания пузырьков CO₂; или добавлением газа под избыточным давлением к смеси из а) и б) при хранении, причем указанный газ высвобождается в микропузырьки в момент, когда эта смесь используется для инъецирования.

Одна проблема с микропузырьками заключается в том, что они обычно имеют кратковременный срок жизни даже в присутствии стабилизаторов. Поэтому в Европейском патенте N 131540 (Шеринг) раскрыто приготовление суспензий из микропузырьков, в которых стабилизированный инъецируемый жидкий носитель, например физиологический водный раствор соли, или раствор сахара, такого как мальтоза, декстроза, лактоза или галактоза, смешивается с твердыми микрочастицами (в диапазоне от 0,1 до 1 мкм) тех же самых сахаров, содержащих удерживаемый ими воздух. С целью получения суспензии из пузырьков в жидком носителе как жидкие, так и твердые компоненты перемешивают вместе в стерильных условиях в течение нескольких секунд и как только суспензия получена, она должна быть использована немедленно, т.е. она должна быть инъецирована в течение 5-10 мин для эхо - графических измерений; в самом деле из-за того, что пузырьки недолговечны, их концентрация становится слишком низкой, чтобы иметь практическое значение спустя этот период времени.

Другая сложность с микропузырьками для эхографии после инъецирования - это размер. Как обычно признано, полезный размер пузырьков для обеспечения легкого переноса через малые кровеносные сосуды находится в пределах примерно от 0,5 до 10 мкм; при более крупных пузырьках существует опасность образования тромбов и последующей эмболии. В частности, в суспензиях с пузырьками, описанных в патенте США N 4446442 (Шеринг), в котором водные растворы поверхностно-активных веществ, таких как лецитин, сложных и простых эфиров жирных кислот и жирные спирты с полиоксиэтиленом и полиоксиэтилированными полиолами, таким как сорбитол, гликоли и глицерин, холестерол, или полиокси-этилен-полиоксипропиленовые полимеры, энергично встряхивают с растворами повышающих вязкость и стабилизирующих соединений, таких как моно- и полисахариды (глюкоза, лактоза, сахароза, декстран, сорбитол); полиолы, например глицерин, полигликоли; полипептиды, такие как белки, желатин, оксополижелатин и белок плазмы, только примерно 50% микропузырьков имеет размер ниже 40-50 мкм, что делает такие суспензии непригодными для многих случаев применения в эхографии.

Микрокапсулы или микрошарики были разработаны с целью устранения некоторых из вышеуказанных недостатков. Как сказано ранее, в то время как микропузырьки имеют только нематериальную или исчезающую оболочку, т.е. они только окружены стенкой жидкости, поверхностное натяжение которой изменяется от наличия поверхностно-активного вещества, микрошарики или микрокапсулы имеют осязаемую оболочку, выполненную из реального материала, иного, чем сам носитель, например полимерной мембраны с определенной механической прочностью. Иными словами, они представляют собой микросферы из твердого материала, в которых воздух или газ более или менее плотно заключен в капсулы.

В частности, в патенте США N 4276885 (Тикнер и др.) описывается применение микрокапсул с поверхностной мембраной, содержащих газ, для усиления ультразвуковых изображений, при этом мембрана включает множество нетоксичных и неантигенных органических молекул. В описанном варианте осуществления эти микропузырьки имеют желатиновую мембрану, которая предотвращает слипание, и их предпочтительный размер составляет 5-10 мкм. Мембрана этих микропузырьков достаточно стабильна для проведения эхографических измерений; однако спустя некоторый период времени газ, заключенный внутри, будет растворяться в потоке крови и пузырьки постепенно исчезнут, что, по-видимому, вызвано медленным растворением желатина. До применения микрокапсулы хранят в желатиновых растворах, в которых они стабильны при хранении, но желатин требует разогрева и расплавления, чтобы стать жидким в момент, когда суспензия используется для выполнения инъецирования.

Микросферы с улучшенной стабильностью при хранении, хотя без желатина, описаны в патенте США N 4718433 (Фейнштейн). Эти микрошарики получают обработкой ультразвуком (от 5 до 30 кГц) вязких белковых растворов, таких как 5%-ный сывороточный альбумин, и имеют диаметры в диапазоне от 2 до 20 мкм, главным образом от 2 до 4 мкм. Микросферы стабилизируют путем денатурации мембраны, образующей белок после обработки ультразвуком, в частности, путем использования тепла или химических средств, например, с помощью реакции с формальдегидом или глутарового альдегида. Концентрация стабильных микросфер, полученная по этой технологии, составляет примерно 8 • 10⁶ мл в диапазоне 2-4 мкм, примерно 10⁶ мл в диапазоне 4-5 мкм и менее 5•10⁵ в диапазоне 5-6 мкм. Время стабильности этих микросфер составляет 48 ч или больше, и они позволяют легкое получение изображения левой половины сердца после внутривенной инъекции. В частности, обработанные ультразвуком микропузырьки из альбумина при их инъецировании в периферийную вену способны пройти через легкие. Это приводит к эхорадиографическому помутнению полости левого желудочка так же как и тканей миокарда.

Недавно еще более усовершенствованные микропузырьки для ультразвуковой эхотерапии с инъекцией были описаны в Европейском патенте N 324938 (Виддер). В этом документе описаны высокие концентрации (свыше 10⁸) или заполненные воздухом, связанные с белком микросферы менее чем 10 мкм, которые сохраняются в течение нескольких месяцев или более. Водные суспензии этих микропузырьков получают ультразвуковой кавитацией растворов денатурируемых белков, например, сывороточного альбумина человека, причем эта операция также приводит к степени пенообразования мембрано-образующего белка и к его последующему отверждению с помощью тепла. Другие белки, такие как гемоглобин и коллаген, также подходят.

Совсем недавно М.А. Уитли и др. (Биоматериалы 11, (1990), 713-717) описали приготовление микросфер с полимерным покрытием путем ионотропной желатинизации альгината. В этой публикации упомянуто несколько технологий для приготовления микрокапсул; в одном случае раствор альгината пропускали под давлением сквозь иглу в потоке воздуха, что создавало струю выделяющегося воздуха, заполняющего капсулы, которые отверждали в ванне, 1,2%-ного водного CaCl₂. Во втором случае использовалась соэкструзия газа и жидкости, газовые пузырьки вводили в образующиеся капсулы с помощью трехбарабанной головки, т. е. воздух вводили под давлением в центральную капиллярную трубку, в то время как раствор альгината пропускали под давлением сквозь более широкую трубку, расположенную коаксиально с капиллярной трубкой, и продували стерильный воздух вокруг нее через рубашку, охватывающую эту вторую трубку. Таким же образом в третьем случае газ захватывался в раствор альгината до распыления путем использования гомогенизатора или путем обработки ультразвуком. Полученные таким образом микропузырьки имели диаметры в пределах от 30 до 100 мкм, однако они все еще были слишком велики для легкого прохождения через легочные капилляры.

Высокая стабильность при хранении суспензий микропузырьков, описанных в Европейском патенте N 324938, позволяет им продаваться на рынке в таком виде, т. е. с фазой жидкого носителя, что является ценным коммерческим качеством, так как приготовление перед употреблением уже не является необходимым. Однако белковый материал, используемый в этом документе, может вызвать аллергенные реакции у чувствительных пациентов и, кроме того, необычайная прочность и стабильность мембранного материала имеет несколько недостатков, в частности, из-за их жесткости мембраны не могут выдержать внезапные колебания давления, которым могут быть подвергнуты микросферы, в частности, во время перемещения по потоку крови, причем эти изменения давления вызваны пульсациями сердца. Таким образом, при практических ультразвуковых опытах часть микросфер будет прорвана, что делает затруднительной воспроизводимость получения изображения; таким же образом эти микропузырьки непригодны для орального применения, так как они не будут выдерживать пищеварительные ферменты, присутствующие в желудочно-кишечном тракте. Кроме того, известно, что микросферы с гибкими стенками являются более эхогенными, чем соответствующие микросферы с жесткими стенками.

Наряду с этим в случае инъекций чрезмерная стабильность материала, образующего стенки микросферы, будет заземлять его биодеградацию испытываемым организмом и может привести к проблемам метаболизма. Следовательно, является более предпочтительным разработать выдерживающие давление микропузырьки, окруженные мягкой и эластичной мембраной, которая может временно деформироваться под воздействием изменений давления и наделена повышенной эхогенностью; таким же образом можно было бы показать, что микропузырьки с регулируемой способностью к биодеградации, в частности, выполненные из полупроницаемых биодеградируемых полимеров с регулируемой микропористостью для способствования медленному проникновению биологических жидкостей, могли бы быть высокоцелесообразными.

Эти желательные свойства теперь были достигнуты с помощью микрошариков согласно настоящему изобретению, как определено в пп. 1 и 2 формулы и в последующих ее пунктах. Кроме того, хотя такие микросферы могут обычно быть изготовлены с относительно коротким сроком хранения, т.е. способными к биодеградации для преодолевания вышеуказанных проблем метаболизма в результате использования выбранных типов полимеров, этот признак (который в настоящее время регулируется параметрами изготовления) не является недостатком в коммерческом плане, так как либо микропузырьки могут храниться и транспортироваться в сухом виде, что представляет собой условие, при котором они стабильны неопределенно долгое время, или же мембрана может быть выполнена практически непроницаемой для жидкости-носителя, когда разложение начинает происходить только после инъецирования. В первом случае микрошарики, поставляемые в форме сухого порошка, просто смешивают с частью носителя в водной фазе до применения, причем эта часть выбирается в зависимости от необходимости. Отметим, что это является дополнительным преимуществом по сравнению с веществами по уровню техники, так как концентрация может быть выбрана по желанию, и начальные значения, далеко превосходящие вышеуказанные 10⁸ мл, т.е. в диапазоне от 10⁵ до 10¹⁰, легко доступны. Необходимо отметить, что предложенный способ позволяет регулировать пористость в широких пределах; следовательно, микросферы с практически непроницаемой мембраной могут быть легко приготовлены, являясь стабильными в форме суспензий в водных жидкостях, могут продаваться на рынке также в таком виде.

Микросферы с мембранами из осажденных на поверхности раздела полимеров, как определено в п.1 формулы, хорошо известны в данной области, но при заполнении их жидкостью. Они обычно могут получаться в результате эмульгирования в капельки (размер которых регулируется в зависимости от параметров эмульгирования) первой водной фазы в органическом растворе полимера, с последующим диспергированием этой эмульсии во второй водной фазе и последующим выпариванием органического растворителя. Во время выпаривания летучего растворителя полимер осаждается на поверхности раздела на границе капелек и образует микропористую мембрану, которая эффективно ограничивает заключенную в капсулу первую водную фазу от окружающей второй водной фазы. Эта технология, хотя и возможная, не является предпочтительной в настоящем изобретении. В качестве альтернативы, можно эмульгировать с помощью эмульгатора гидрофобную фазу в водной фазе (обычно содержащей повышающие вязкость вещества в качестве стабилизаторов эмульсии), в результате чего получают водно-масляную эмульсию из капелек этой гидрофобной фазы и после этого к ней добавляют мембранообразующий полимер, растворенный в летучем органическом растворителе, несмешиваемом с водной фазой.

Если этот полимер нерастворим в гидрофобной фазе, он осядет в виде поверхности раздела на границе между капельками и водной фазой. В противном случае испарение летучего растворителя приведет к образованию указанной нанесенной в виде поверхности раздела мембраны вокруг капелек эмульгированной гидрофобной фазы. Последующее выпаривание заключенной в капсулу летучей гидрофобной фазы приводит к получению заполненных водой микросфер, окруженных нанесенными в виде поверхности раздела полимерными мембранами. Эта технология, которую целесообразно использовать в настоящем изобретении, описана К.Уно и др. в Microencapsolation 1 (1984), 3-8 и K.Makino et al., Chem. , Pharm. Bull. 33 (1984), 1195-1205. Как сказано выше, размер капелек может регулироваться изменением параметров амульгирования, т.е. природы эмульгатора (чем более гидрофильно-липофильный баланс, тем меньше капельки) и условий перемешивания (чем быстрее и более энергично перемешивание, тем меньше капельки).

В другом варианте полимер, образующий стенку на поверхности раздела, растворяется в самой исходной гидрофобной фазе; последняя эмульгируется в капельки в водной фазе, и мембрана вокруг капелек образуется после последующего выпаривания этой заключенной в капсулу гидрофобной фазы. Пример этого приведен авторами J.R. Farnand et al. Poweler Technology 22 (1978), 11-16, которые эмульгируют раствор полимера (например, полиэтилена) в нафталине в кипящей воде, затем после охлаждения они извлекают нафталин в виде суспензии заключенных в полимер микрошариков в холодной воде и, наконец, они удаляют нафталин, подвергая микрошарики сублимированию, в результате чего получают микропузырьки размером 25 мкм. Существуют другие примеры, в которых полимер растворяется в смешанной гидрофобной фазе, содержащей летучий гидрофобный органический растворитель и водорастворимый органический растворитель, затем этот раствор полимера эмульгируют в водной фазе, содержащей эмульгатор, посредством чего водорастворимый полимер диспергирует в водную фазу, способствуя таким образом получению эмульсии из микрокапелек гидрофобной фазы и побуждая полимер осаждаться на поверхности раздела; это описано в Европейском патенте N 274961 (Х.Фесси).

Вышеупомянутая технология может быть приспособлена для приготовления заполненных воздухом или газом микропузырьков, пригодных для ультразвукового получения изображений, при условии, что будут найдены соответствующие условия для регулирования размера сферы в требуемых пределах, проницаемости или непроницаемости и замены заключенной в капсулу жидкой фазы воздухом или выбранным газом. Регулирование общего размера сфер важно для приспособления микропузырьков к целям применения, т.е. инъецированию или оральному приему. Условия размеров для инъецирования (средний размер от 0,5 до 10 мкм) были обсуждены ранее. Для орального применения диапазона может быть намного шире, при этом считается, что пригодность к эхографии возрастает с размером; следовательно, можно использовать микропузырьки в нескольких диапазонах в пределах от 1 до 1000 мкм в зависимости от необходимости и при условии, что мембрана достаточно эластична, чтобы не прорваться во время прохождения в желудке и кишечнике. Регулирование проницаемости стенки ячейки важно для обеспечения того, что инфильтрация инъецируемой фазой водного носителя отсутствует или достаточно медленна для того, чтобы ухудшить эхографические измерения, но в ряде случаев еще существенна для обеспечения относительно быстрой способности к биологическому разложению после испытания, т.е. легкую метаболизацию суспензии организмом. Таким же образом микропористая структура оболочки микропузырьков (поры от нескольких нанометров до нескольких сотен нанометров для оболочки микропузырьков) с толщиной в пределах от 50 до 500 нм) является фактором упругости, т.е. микросферы могут легко воспринимать колебания давления без разрушения. Предпочтительный диапазон размеров пор составляет примерно 50-2000 нм.

Условия для достижения этих результатов удовлетворяются в результате использования метода, описанного в пунктах 17, 18 и в последующих пунктах формулы изобретения.

Один фактор, который позволяет регулировать проницаемость мембраны микропузырьков - это скорость выпаривания гидрофобной фазы относительно скорости выпаривания воды в ходе этапа (4) способа по п.17 формулы, например, в условиях сушки из замороженного состояния, что является случаем варианта осуществления, изложенного в п.20 формулы изобретения. В частности, если выпаривание осуществляется между примерно -40 и 0^oC и используется гексан в качестве гидрофобной фазы при полистироле, представляющем собой нанесенный на поверхности раздела полимер, получают шарики с относительно большими порами; это происходит потому, что давление пара углеводорода в выбранном температурном диапазоне значительно больше, чем давление пара воды, это значит, что разность давлений между внутренним и наружным в сферах будет стремиться к повышению размера пор в мембране сфер, в результате чего заключенный внутрь материал будет выпарен. Напротив, использование циклооктана в виде гидрофобной фазы (при - 17^oC давление пара такое же, что и давление воды) приведет к получению шариков с очень маленькими порами, так как разность давлений между внутренним и внешним сфер при выпаривании сведена к минимуму.

В зависимости от степени пористости микропузырьки по данному изобретению могут оставаться стабильными в водном носителе от нескольких часов до нескольких месяцев и давать воспроизводимые эхографические сигналы в течение длительного периода времени. В настоящее время в зависимости от выбранного полимера мембрана микропузырьков может быть выполнена практически непроницаемой при суспендировании в жидких носителях с соответствующими осмотическими свойствами, т. е. содержать растворенные вещества в соответствующих концентрациях. Необходимо отметить, что существование микропор в оболочке микропузырьков по данному изобретению, как оказывается, также находится во взаимосвязи с эхографической реакцией, т.е. если все другие факторы постоянны, микропористые пузырьки обеспечивают более эффективный эхографический сигнал, чем соответствующие непористые пузырьки. Причина неизвестна, но можно предположить, что когда газ находится в резонансе в замкнутой структуре, амортизирующие свойства последней могут быть различны, если она пористая или непористая.

Другие неводные растворимые органические растворители, которые имеют давление пара того же порядка при температурах между примерно -40^oC и 0^oC, пригодны в качестве гидрофобных растворителей в данном изобретении. Они включают углеводороды, такие как, в частности, н-октан, циклооктан, диметил-циклогексан, этил-циклогексан, 2-, 3- и 4- метил-гептан, 3-этил-гексан, толуол, ксилол, 2-метил-2-гептан, 2,2,3,3- тетраметилбутан и т.п. Сложные эфиры, такие как пропил- и изопропилбутират и изобутират, бутил-формиат и т. п. также пригодны в данном ряду. Другое преимущество сушки из замороженного состояния заключается в работе при пониженном давлении газа вместо воздуха, в результате чего будут получены микропузырьки, заполненные газом. Физиологически приемлемые газы, такие как CO₂, N₂O, метан, фреон, гелий и другие редкие газы, являются возможными. Газы с активностью радиоактивного индикатора могут быть рассмотрены.

В качестве летучего растворителя, нерастворимого в воде, который должен использоваться для растворения полимера, который должен осаждаться на поверхности раздела, можно привести галоидные соединения, такие как CCl₄, CH₃Br, CH₂Cl₂, хлороформ, фреон, низкокипящие сложные эфиры, такие как метил, этил и пропилацетат, такие как и низкие простые эфиры, и кетоны с низкой водорастворимостью. Когда используются неполностью нерастворимые в воде растворители, например простой диэтиловый эфир, в качестве водной фазы целесообразно использовать водный раствор, насыщенный указанным ранее растворителем.

Водная фаза, в которой эмульгируется гидрофобная фаза, так как масляно-водная эмульсия предпочтительно содержит 1-20 вес.% водорастворимых гидрофильных соединений, таких как сахара и полимеры в виде стабилизаторов, например поливиниловый спирт (ПВС), поливинил-пирролидон (ПВП), полиэтиленгликоль (ПЭГ), желатин, полиглутаминовая кислота, альбумин и полисахариды, такие как крахмал, декстран, агар, ксантан и тому подобное. Подобные водные фазы могут быть использованы в качестве жидкости-носителя, в которой микропузырьки переводят в суспензию до применения.

Часть этого водорастворимого полимера может остаться в оболочке микропузырьков, или же он может быть удален промывкой шариков до воздействия на них конечным выпариванием заключенной в капсулу фазы из гидрофобной сердцевины.

Эмульгаторы, которые должны использоваться (0,1-5% мас.) для получения водно-масляной эмульсии гидрофобной фазы в водной фазе включают большинство физиологически приемлемых эмульгаторов, в частности яичный лецитин, или лецитин из соевых бобов, или синтетический лецитин, такой как насыщенные синтетические лецитины, например димиростоил-фосфатидил-холин, дипальмитоил-фосфатидил-холин, или дистеароил-фосфатидил-холин, или ненасыщенные синтетические лецитины, такие как диолеил-фосфатидил-холин или дилинолеил-фосфатидил-холин. Эмульгаторы также включают в себя поверхностно активные вещества, такие как свободные жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот с полиоксиалкиленовыми соединениями, такими как полиоксипропиленгликоль и полиоксиэтиленгликоль; простые эфиры жирных кислот с полиоксиалкилированным сорбитаном; мыла; глицерин-полиалкилен-стеарат; глицерин-полиоксиэтилен-рицинолеат; гомо- и сополимеры полиалкиленгликолей; полиэтоксилированное соевое масло и касторовое масло, также как и гидрогенизированные производные; простые и сложные эфиры сахарозы или других углеводов с жирными кислотами, жирными спиртами, причем последние могут быть полиоксиалкилированы; моно-, ди- и триглицериды насыщенных и ненасыщенных жирных кислот; глицериды или соевое масло и сахароза.

Полимер, который составляет оболочку или ограничивающую мембрану инъецируемых микропузырьков, может быть выбран из большинства гидрофильных, биоразлагаемых физиологически совместимых полимеров. Среди таких полимеров можно привести полисахариды с низкой водорастворимостью, полилактиды и полигликолиды и их сополимеры, сополимеры лактидов и лактонов, таких как ε -капролактон, δ -валеролактон, полипептиды и белки, такие как желатин, коллаген, глобулины и альбумины. Большая разносторонность в выборе синтетических полимеров - это другое преимущество настоящего изобретения, так как, в случае с пациентами-аллергетиками может возникнуть необходимость избежать использование микропузырьков, выполненных из натуральных белков (альбумин, желатин), как в патентах США N 4276885 или Европейском патенте N 324938. Другие подходящие полимеры включают поли-(орто) эфиры (см., в частности патент США N 4093709; патенты США N 4131648; 4138344; N 4180646); полимолочная и полигликолевая кислоты и их сополимеры, в частности ДЕКCOН (см. I. Heller, Biomaterials (1980), 51; поли(DL- лактид-ко- δ -капролактон), поли(DL -лактид- со- δ -валеролактон), поли (DL - лактид-со- γ - бутиролактон), полиалкилцианоакрилаты; полиамиды, полигидроксибутират; полидиоксаноне; поли- β - аминокетоны (Polymer 23 (1982), 1693); полифосфазены (Science 193 (1976), 1214); и полиангидриды. Ссылки на биоразлагаемые полимеры могут быть найдены в R. Langer et. al, Macromol. Chem. Phys. C23 (1983), 61-126). Полиаминокислоты также, как полиглутамовая и полиаспаргиновая кислоты, также могут быть использованы вместе с их производными, т.е. частичные сложные эфиры с низшими спиртами или гликолями. Полезным примером таких полимеров является поли-(трет. бутил-глутамат). Сополимеры с другими аминокислотами, такими как метионин, лейцин, валин, пролин, глицин, аламин и т.д. также возможны. Недавно несколько новых производных полиглутамовой кислоты и полиаспаргиновой кислоты с регулируемой биоразлагаемостью были описаны (см. WO87/03891; патент США N 4888398 и Европейский патент N 130935, включенные в данную заявку в виде ссылки). Эти полимеры (и сополимеры с другими аминокислотами) имеют формулу следующего типа:
-(NH-CHA-CO)_x(NH-CHX-CO)_y
где
X обозначает боковую ветвь аминокислотного остатка, а A обозначает группу формулы - (CH₂)_пCOOR¹R²-OCOR (II), где R¹ и R² обозначают H или низшие алкилы, а R обозначает алкил или арил; или R и R¹ соединены вместе с помощью замещенного или незамещенного связывающего элемента для получения колец с 5 или 6 элементами.

Также может обозначать группу формулы:
-(CH₂)_nCOO-CHR¹COOR (I)
и
-(CH₂)_nCO(NH-CHX-CO)_mNH-CH(COOH)- (CH₂)_pCOOH (III)
и соответствующие ангидриды. Во всех этих формулах n, m и p являются низшими целевыми числами (не превышающими 5), а x и y также являются целыми числами, выбранными как имеющие молекулярные веса не ниже 5000.

Вышеупомянутые полимеры пригодны для получения микропузырьков согласно данному изобретению и в зависимости от природы заместителей R, R¹, R² и X свойства мембраны могут регулироваться, в частности прочность, эластичность и биоразлагаемость. В частности, X может представлять собой метил (аланин), изопропил (валин), изобутил (лейцин и изолейцин), бензил (фенилаланин).

Добавки могут быть введены в полимерную стенку микрошариков для изменения физических свойств, таких как диспергируемость, эластичность и водопроницаемость. Для включения в полимер добавки могут быть растворены в несущей полимер фазе, например гидрофобной фазе, которая должна быть эмульгирована в водной среде, в результате чего они будут соосаждаться с полимером во время образования мембраны межповерхностного раздела.

Среди полезных добавок можно указать соединения, которые могут "гидрофобизировать" мембрану микрошариков с целью снизить водопроницаемость, такие как жиры, парафины и высокомолекулярные углеводороды. Добавки, которые улучшают диспергируемость микрошариков в инъецируемом носителе-жидкости, представляют собой амфипатические соединения, такие как фосфолипиды; они также увеличивают водопроницаемость и скорость биоразлагаемости.

Не разлагаемые биологически полимеры для изготовления микрошариков, предназначенных для использования в пищеварительном тракте, могут быть выбраны из большинства водонерастворимых, физиологически приемлемых, биологически стойких полимеров, включая полиолефины (полистирол), акриловые смолы (полиакрилаты, полиактилонитрил), сложные полиэфиры (поликарбонат), полиуретаны, полимочевину и их сополимеры. Предпочтительным сополимером является АБС (акрил-бутадиен-стирол).

Добавки, которые увеличивают эластичность мембран, представляют собой пластификаторы, такие как изопропилмиристат и тому подобное. Таким же образом очень полезные добавки представлены полимерами, родственными полимерами самой мембраны, но с относительно малым молекулярным весом. В частности, при использовании сополимеров полимолочного/полигликолевого типа в качестве образующего мембрану материала, свойства мембраны могут быть изменены выгодным образом (увеличенная мягкость и способность к биоразложению) путем введения в качестве добавок низкомолекулярных (от 1000 до 15000 Дальтон) полигликолидов или полилактидов. Также полезной смягчающей добавкой является полиэтиленгликоль с умеренным до низкого молекулярным весом (например, ПЭГ 2000).

Количество добавок, которые должны быть введены в полимер, образующий нанесенную на поверхность раздела мембрану микрошариков по настоящему изобретению, чрезвычайно переменно и зависит от потребности. В некоторых случаях не используют никаких добавок; в других случаях количества добавок, которые могут достичь примерно 20 мас.% от полимера, являются возможным.

Инъецируемые микрошарики согласно настоящему изобретению могут храниться в сухом виде в присутствии или при отсутствии добавок для улучшения сохранности и для предупреждения слипания. В качестве добавок можно выбирать от 0,1 до 25 мас.% водорастворимых физиологически приемлемых соединений, таких как маннитол, галактоза, лактоза или сахароза, или гидрофильные полимеры, такие как декстран, ксантан, агар, крахмал, поливинилпирролидон, полиглутамовая кислота, поливиниловый спирт (ПВА), альбумин и желатин. Полезный срок годности микропузырьков в инъецируемой фазе с жидким носителем, т.е. период, в течение которого отмечаются полезные эхографические сигналы, может регулироваться и продолжаться от нескольких минут до нескольких месяцев в зависимости от необходимости; это может быть достигнуто путем регулирования пористости мембраны от практической непроницаемости по отношению к жидким носителям до пористости с размерами пор от нескольких нанометров до нескольких сот нанометров. Эта степень пористости может регулироваться наряду с выбором соответствующего образующего мембрану полимера и полимерных добавок путем изменения скорости выпаривания и температуры в стадии (4) способа по п. 17 формулы изобретения и выбора соответствующего соединения (или смеси соединений), образующего гидрофобную фазу, т.е. чем больше разность его парциального давления выпаривания и разности парциального давления испарения водной фазы, тем крупнее будут поры в мембране микрошариков. Это регулирование путем подбора гидрофобной фазы может быть далее улучшено путем подбора стабилизаторов и путем изменения их концентрации с целью регулирования скорости испарения воды во время изготовления микрошариков. Все эти вариации могут быть легко осуществлены специалистами в данной области.

Необходимо заметить, что хотя микрошарики по данному изобретению могут продаваться в сухом виде, в частности, когда они разработаны с ограниченным сроком действия после инъецирования, может быть желательным также продавать готовые препараты, т.е. суспензии из микрошариков в водном жидком носителе, готовые для инъецирования или орального введения. Это требует, чтобы мембрана микрошариков была практически непроницаема (по крайней мере в течение нескольких месяцев или более) к жидкости-носителю. Такие условия могут быть легко достигнуты с помощью метода по настоящему изобретению при должном выборе полимера и параметров нанесения на поверхности раздела. Были найдены необходимые параметры (в частности, при использовании полиглутамового полимера (где A - это группа формулы I), а циклооктан представляет собой гидрофобную фазу), так что пористость мембраны после испарения гидрофобной фазы получается настолько незначительна, что микрошарики практически непроницаемы к водной жидкости-носителю, в которой они суспендированы.

Предпочтительный вводимый препарат для диагностических целей содержит суспензию в буферизированном (или без буфера) соляном растворе (0,9% водного NaCl) буфер 10 мм трис-HCl), содержащем от 10⁸ до 10¹⁰ пузырьков на 1 мл. Он может быть приготовлен главным образом согласно рекомендациям нижеследующих примеров, предпочтительно примеров 3 и 4, с использованием поли -(DL-лактидных) полимеров от фирмы Берингер, Ингельхайм, Германия).

Пример 1. Один грамм полистирола растворяли в 19 г жидкого нафталина при 100^oC. Этот раствор нафталина эмульгировали при 90-95^oC в 200 мл водного раствора поливинилового спирта (ПВС) (4 мас.%), содержащего 0,1% эмульгатора T ween-40. Эмульгирующая головка представляла собой модель Polytron РТ-3000 при примерно 10000 об/мин. Затем эмульсию разбавляли при перемешивании с применением 500 мл той же самой водной фазы при 15^oC, в результате чего капельки нафталина отверждались в шарики размером менее 50 мкм, что подтверждали пропусканием через сетку с размером отверстий 50 мкм. Суспензию центрифугировали при 1000 г и шарики промывали водой и повторно центрифугировали. Этот этап был повторен дважды.

Шарики повторно переводили в суспензию в 100 мл воды с 0,8 г растворенной лактозы, и суспензию замораживали в кусок при - 30^oC. Кусок затем подвергали испарению примерно при 0,5-2 торр в пределах от -20 до -10^oC. Таким образом получили заполненные воздухом микрошарики среднего размера 5-10 мкм и с регулируемой пористостью, они давали эхографический сигнал при 2,25 и 7,5 МГц после их диспергирования в воде (3%-ная дисперсия по массе). Стабильность микрошариков в сухом состоянии была эффективна в течение неопределенного промежутка времени; сразу после суспендирования в водной жидкости-носителе полезный срок действия для эхографии составлял примерно 30 мин или более. В связи с тем, что полистирил не является биоразлагаемым, этот материал не был благоприятным для инъекционной эхографии, а был полезен при исследовании пищеварительного тракта. В этом примере четко подтверждается выполнение способа по данному изобретению.

Пример 2. Смесь сополимеров 50:50 (0,3 г)DL -лактида и гликолида (Du Pont Medisorb) и 16 мг яичного лецитина растворяли в 7,5 мл CHCl₃ для получения раствора (1).

Раствор (2), содержащий 20 мг парафина (т.пл. 54-56^oC) в 10 мл циклооктана (т. пл. 10-13^oC), получали и эмульгировали в 150 мл водного раствора (0,13 мас.%) Pluronic F - 108 (блоксополимер этиленоксида и пропиленоксида), также содержащем 1,2 г CHCl₃. Эмульгирование осуществляли при комнатной температуре с использованием головки Polytron при 7000 об/мин. Затем раствор (1) добавляли при перемешивании и спустя 30-60 с эмульгаторную головку заменяли винтовой мешалкой (500 об/мин, и перемешивание продолжали в течение примерно 3 ч при комнатной температуре (22^oC). Суспензию пропускали через сетку в 50 мкм и замораживали в кусок, который затем подвергали лиофилизации в пределах от -20 до 0^oC под глубоким вакуумом (ловушка от -60 до -80^oC). Таким образом получали 0,264 г (88%) заполненных воздухом микрошариков, стабильных в сухом состоянии.

Суспензия указанных микрошариков в воде (без стабилизаторов) давала сильный эхографический сигнал в течение не менее одного часа. После инъецирования в организм они биологически разлагались через несколько дней.

Пример 3. Готовили раствор используя 200 мл тетрагидрофурана (ТГФ), 0,8 г сополимера DL-лактид/гликолид 50:50 (Герингер АГ), 80 мг яичного лецитина, 64 мг парафина и 4 мл октана. Этот раствор эмульгировали добавлением медленным образом в 400 мл 0,1%-ного водного раствора Pluronic F -108 при винтовом перемешивании (500 об/мин). После перемешивания в течение 15 мин молочнообразную дисперсию выпаривали при 10-12 торр при 25^oC в ротационном выпаривателе до сокращения объема до примерно 400 мл. Дисперсию просеивали на 50 мкм сетке, затем ее замораживали при -40^oC и лиофилизировали примерно при 1 торр. Остаток (1,32 г очень мелкого порошка) растворяли в 40 мл дистиллированной воды, что давало после 3 мин перемешивания вручную очень однородную дисперсию из микрошариков в среднем размером 4,5 мкм, что замеряли с использованием анализатора частиц (Masterizer от фирмы Malvern). Концентрация микрошариков (счетчик Coulter) составляла примерно 2 • 10⁹/мл. Эта суспензия давала сильные эхографические сигналы, которые сохранялись в течение примерно 1 ч.

Если в настоящем примере не применять добавки к полимеру мембраны, т.е. используется только 800 мг сополимера лактид/гликолид в растворе ТГФ/октан, отмечают резкое снижение проницаемости стенки ячейки, при этом эхографический сигнал от дисперсии в водном носителе незначительно снижается спустя 3 дня.

Использование промежуточных количеств добавок давало шарики с контролируемыми промежуточной пористостью и сроком действия.

Пример 4. В этом примере использовали полимер формулы, определенной в п. 8 формулы изобретения, в которой боковая группа имела формулу (II), где R¹ и R² обозначают водород, а R обозначает трет-бутил. Приготовление этого полимера (названного как poly-POME G) описано в патенте США N 4888398.

Порядок был, как в примере 3, с использованием 0,1 г poly-POMEG, 70 мл ТГФ, 1 мл циклооктана и 100 мл 0,1%-ного водного раствора Pluronic F-108. Не добавляли лецитина или высокомолекулярного углеводорода. Молочнообразную эмульсию выпаривали при 27^oC/10 торр до получения остатка примерно в 100 мл, затем его пропускали через сито с размером ячеек 50 мкм и замораживали. Выпаривание замороженного блока осуществляли до сухости (0,5-1 торр). Выход составлял 0,18 г из-за присутствия поверхностно активного вещества. Все это диспергировали в 10 мл дистиллированной воды и считали на счетчике Coulter. Оказалось, что измеренные концентрации составляли 1,43 • 10⁹ микрокапсул/мл, средний размер 5,21 мкм, что определяли с помощью анализатора частиц (Mastersizer от фирмы Malvern). Дисперсию разбавляли 100-кратно, т.е. для получения примерно 1,5 • 10⁷ микросфер/мл, и замеряли в отношении пригодности к эхографии. Амплитуда эхо-сигнала была в 5 раз больше при 7,5 МГц, чем при 2,25 МГц. Эти сигналы были воспроизводимы в течение длительного периода времени.

Измерения на пригодность к эхографии были проведены с помощью импульсной эхо-системы, состоящей из держателя образца из плексиглаза (диаметр 30 мм) с акустическим окном из Mylar толщиной 20 мкм, из держателя датчика, погруженного в водяную баню с постоянной температурой, из импульсного генератора-приемника (Accutron M3010JS) с внешним предусилителем с фиксированным усилием в 40 дБ и внутренним усилителем с регулируемым усилением от - 40 до +40 дБ и из взаимозаменяемых 13 мм нефокусированных преобразователей. Фильтр нижних частот 10 МГц вводили в приемную часть для улучшения соотношения сигнал-шум. Плата АЦП в ПЭВМ ИБМ была Jonotek STR 832. Измерения проводили при 2, 25, 3,5, 5 и 7,5 МГц.

Если в данном примере используемый полимер заменять на сополимеры молочной кислоты и лактона, при этом лактоны представляют собой γ -бутиролактон, δ -валеролактон или ε -капролактон (см. Fukuzaki et. al., J. Biomedical Mater. Res. 25(1991), 315-328), были получены подобные положительные результаты. Также в подобном контексте полиалкилцианоакрилаты, в частности сополимер 90: 10 поли (DL-лактид-со-гликолид) дали удовлетворительные результаты. Предпочтительный полимер представляет собой поли (DL-лактид) от фирмы Берингер-Ингель-хейм, продаваемый под наименованием " Resower R-206" или Resower R-207.

Пример 5. Двухкамерную эхокардиографию осуществляли с использованием аппарата Acuson -128 с препаратом из примера 4 (1,43•10⁹/мл) на подопытной собаке после инъекции в периферийную вену 0,1-2 мл дисперсии. После нормального ожидания усиления контраста при получении изображения правого сердца отмечали интенсивный и длительный сигнал с усилением на левом сердце с ясным выделением эндокарды, что подтверждает, что микрошарики, изготовленные из poly-POMEG (или по крайней мере их значительная часть), были способны пройти через легочную капиллярную циркуляцию и остаться в кровотоке в течение времени, достаточного для проведения эффективного эхографического анализа.

В другой серии экспериментов отмечали устойчивое усиление доплеровского сигнала от системных артерий и портальной вены у кролика, и у крысы после инъекции в периферийную вену от 0,5 до 2 мл препарата микрошариков, приготовленного согласно описанному в примере 4, но используя поли (DL-молочную кислоту) в качестве полимерной фазы. Использованный состав содержал 1,9•10⁸ пузырьков/мл.

Другой состав, приготовленный также согласно рекомендациям примера 4, получали с использованием поли (третилбутилглутамина). Этот состав (0,5 мл при разбавлении в 3,4•10⁸ микрошариков/мл инъецировали в портальную вену крыс, и это давало устойчивое усиление контраста паренхимы печени.

Пример 6. Суспензия из микрошариков (1,1•10⁹ пузырьков/мл) готовилась как описано в примере 1 (смола - полистирол); 1 мл этой суспензии разбавляли в 100 мл 300 мМ растворе маннитола и 7 мл полученного разбавленного раствора вводили внутрижелудочно лабораторной крысе. Животное проверяли с помощью аппарата Acuson 128 для получения изображения методом двумерной эхографии пищеварительного тракта, что ясно показало одиночные петли тонкой кишки и ободочной кишки.

Claims (22)

1. Микрошарики микронного или субмикронного размера с полимерной оболочкой, заполненные воздухом или газом, пригодные в виде суспензии в среде жидкого носителя для введения человеку или животному для диагностики, в том числе для получения изображения методом эхографии, отличающиеся тем, что оболочка микрошариков выполнена из синтетического полимера, который является деформируемым, эластичным и осаждаемым на границе раздела фаз, концентрация полимера в суспензии составляет от 0,00004 до 400 мг/мл, толщина оболочки составляет от 50 до 500 нм и количество воздуха или газа, заполняющего микрошарики, составляет от 0,00003 до 500 мкл/мл суспензии.

2. Микрошарики по п. 1, отличающиеся тем, что полимер оболочки представляет собой биоразлагаемый полимер, выбранный среди полисахаридов, полиаминокислот, полилактидов и полигликолидов и их сополимеров, сополимеров лактидов и лактонов, полипептидов, поли-(орто)эфиров, полидиоксанона, поли-β-алминокетонов, полифосфазенов, полиангидридов и поли(алкил-циано-акрилатов).

3. Микрошарики по п.1, отличающиеся тем, что полимер оболочки выбирают из производных полиглутаминовой или полиаспарагиновой кислоты и их сополимеров с другими аминокислотами.

4. Микрошарики по п.3, отличающиеся тем, что производные полиглутаминовой кислоты и полиаспарагиновой кислоты выбирают из сложных эфиров и амидов, содержащих их карбоксилированную боковую функцию, причем указанные боковые функции имеют формулы
-(CH₂)_nCOO-CHR¹ COOR, или
-(CH₂)_nCOOR¹ R²-O-COR, или
-(CH₂)_nCO(NH-CHX-CO)_mNHCH (COOH)-(CH₂)_p COOH,
в которых R обозначает алкильный или арильный заместитель, R¹ и R² обозначают Н или низшие алкилы, или R и R¹ связаны вместе с помощью замещенного или незамещенного связывающего элемента для образования кольца с 5 или 6 элементами, n равно 1 или 2, p равно 1, 2 или 3, m равно целому числу от 1 до 5, а X обозначает боковую цепь аминокислотного остатка.

5. Микрошарики по п.1, отличающиеся тем, что полимер оболочки содержит добавки для регулирования степени эластичности и размера и плотности пор для регулирования проницаемости.

6. Микрошарики по п.5, отличающиеся тем, что указанные добавки включают пластификаторы, амфипатические вещества и гидрофобные соединения.

7. Микрошарики по п.6, отличающиеся тем, что в качестве пластификаторов содержит изопропил-миристат, глицерил-моностеарат и подобные вещества для регулирования гибкости, в качестве амфипатических веществ используют поверхностно-активные вещества и фосфолипиды, такие как лецитины, для регулирования проницаемости путем увеличения пористости, а в качестве гидрофобных соединений содержит высокомолекулярный углеводород, такой как парафин, для уменьшения пористости.

8. Микрошарики по п.6, отличающиеся тем, что добавки включают низкомолекулярные полимеры в диапазоне от 1000 до 15000 Дальтон, для регулирования мягкости и упругости оболочки микрошариков.

9. Микрошарики по п.8, отличающиеся тем, что низкомолекулярные полимерные добавки выбирают из полилактидов, полигликолидов, полиалкиленгликолей, таких как полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль, и многоатомных спиртов, таких как полиглицерин.

10. Микрошарики по п.1, отличающиеся тем, что полимер не является биоразлагаемым в пищеварительном тракте и непроницаемым для биологических жидкостей.

11. Микрошарики по п.10, отличающиеся тем, что полимер выбирают из полиолефинов, полиакрилатов, полиакрилонитрила, негидролизуемых сложных полиэфиров, полиуретанов и полимочевины.

12. Способ изготовления микрошариков микронного или субмикронного размера с полимерной оболочкой путем осаждения на поверхности раздела фаз полимерного вещества, отличающийся тем, что первое - готовят эмульсию масло в воде путем эмульгирования гидрофобной органической фазы в водной фазе, второе - добавляют в эту эмульсию раствор в легколетучем растворителе, минимум, одного полимера, нерастворимого в водной фазе, третье - осаждают полимер на поверхности раздела фаз, представляющий собой поверхность частиц дискретной фазы суспензии, испарением легколетучего растворителя с образованием суспензии в воде, четвертое - воздействуют на суспензию пониженным давлением, удаляя закапсулированную гидрофобную фазу.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что выпаривание гидрофобной фазы на четвертом этапе осуществляют при температуре, при которой парциальное давление пара указанной гидрофобной фазы имеет тот же порядок, что и парциальное давление водяного пара.

14. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанное выпаривание по этапу четыре осуществляют в условиях сушки из замороженного состояния.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что сушку из замороженного состояния проводят при температуре от -40 до 0^oС.

16. Способ по п.12, отличающийся тем, что гидрофобную фазу выбирают из органических соединений, имеющих давление пара примерно 1 торр при температуре от примерно -40 до 0^oC.

17. Способ по п.12, отличающийся тем, что водная фаза содержит в растворенном виде 1 - 20 мас.% стабилизаторов, включающих гидрофильные соединения, выбранные из сахаров, ПВС, ПВП, желатина, крахмала, декстрина, полидекстрозы, альбумина.

18. Способ по п. 12, отличающийся тем, что добавки для регулирования степени проницаемости оболочки микрошариков добавляют к гидрофобной фазе.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что указанные добавки включают гидрофобные твердые вещества, такие как жиры, парафины и высокомолекулярные углеводороды в количестве 0,1 - 5 мас.%, присутствие которых в полимере оболочки микрошариков снижает проницаемость к водным жидкостям.

20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанные добавки включают амфипатические соединения, такие как фосфолипиды, или низкомолекулярные полимеры, присутствие которых в полимере оболочки повышает проницаемость микрошариков по отношению к водным жидкостям.

21. Способ изготовления микрошариков, заполненных воздухом или газом в виде суспензий в жидком носителе, при котором на первом этапе эмульгируют гидрофобную органическую фазу в водную фазу с получением капелек указанной гидрофобной органической фазы в виде масляно-водной эмульсии в указанной водной фазе, причем указанная органическая фаза содержит в растворенном в ней виде один или более водорастворимых полимеров, затем на втором этапе воздействуют на указанную эмульсию пониженным давлением, удаляют гидрофобную фазу выпариванием, в результате чего полимер, растворенный в капельках, осаждают на поверхности раздела фаз и образуют полимерную ограничивающую оболочку, при этом капельки превращаются в микрошарики, отличающийся тем, что указанную гидрофобную фазу выбирают так, что на втором этапе ее выпаривают одновременно с водной фазой и после выпаривания замещают воздухом или газом.

22. Способ по п.21, отличающийся тем, что гидрофобная фаза, подвергнутая эмульгированию в указанной водной фазе, также содержит водорастворимый растворитель, который после его разбавления добавляют в указанную водную фазу в процессе эмульгирования, способствует уменьшению размера капелек и вызывает осаждение на поверхности раздела фаз полимера до осуществления этапа два.