PT94906B

PT94906B - Processo para a preparacao de novos derivados n-(23-vincristinoilicos) e n-(5'-noranidro-23-vinblastinoilicos) do acido 1-amino-metil-fosfonico

Info

Publication number: PT94906B
Application number: PT94906A
Authority: PT
Inventors: Gilbert Lavielle; Patrick Hautefaye; Alain Pierre
Original assignee: Adir
Priority date: 1989-08-04
Filing date: 1990-08-03
Publication date: 1997-03-31
Also published as: ZA905924B; EP0412015B1; PT94906A; NZ234771A; ATE109485T1; AU625885B2; OA09299A; DE69011235D1; IE66007B1; FR2651348B1; IE902808A1; EP0412015A1; JPH03118388A; CA2022538A1; FR2651348A1; AU6014990A; CA2022538C; JPH075619B2; US5100881A; ES2060979T3

Description

A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos derivados N-(23-vincrlstinoílicos)e N-(5'-noranidro-23-vin.bla s tinoílicos) do ácido 1-amino-metll-fosfó nico.

Os alcalóides bisindóllcos do tipo da vincristina e da navelblna (patente de invenção europeia N» 010458) são utilizados desde há muito tempo em terapêutica, principalmente em qui mioterapia anticancerosa. Contudo, estes compostos possuem uma toxicidade elevada que limita as suas utilizações. ‘Além disso, a actividade da navelbina só aparece para posologias elevadas.

Com o objecto de obter compostos com uma menor toxicidade e uma actividade antitumoral mais importante foram preparados alguns derivados N-( 0-4-desacetil-23-vincristinoíl)-aminados (patentesde invenção belgas N«s. 895262 e 813168).

Muito recentemente, o pedido de patente de invenção europeia Na 313392 descreveu derivados N-( 23-vInblastinoílicos) do ácido 1-amino-metil-fosfónico. Estes compostos são dotados de uma enorme actividade e têm uma menor toxicidade (neurotoxicldade) em relação aos compostos de referência.

As necessidades clínicas favorecem, contudo, o desenvol vimento constante de novas moléculas anticancerosas com o objec tivo de se obter uma actividade melhorada e uma toxicidade se2

cundária menor.

A Requerente descobriu agora que certos derivados fosfónicos da vincristina e da navelbina, de estrutura eriginal, possuem propriedades farmacológicas muito interessantes. Com efeito, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção são dotados de uma actividade antltumoral muito superior à de todos os derivados da vincristina e da navelbina já conhecidos. Além disso, as toxicidades observadas são significatlvamente inferiores às dos compostos de referência.

A presente invenção tem mais particuiarmente por objeto um processo para a preparação de derivados do ácido 1-amino¹metil-fosfónico de fórmula geral,

9' _r>CH₂)n

12 (I)

CO NH-CH p

. or₂or₃ na qual

- R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo de cadeia linear ou ramificada comportanto 1 a 6 átomos de carbono, alcenilo de cadeia linear ou ramificada comportando 2 a 6 átomos de carbono, arilalquilo com 1 a 10 átomos de carbono, podendo comportar como substituinte sobre o ciclo aromático um átomo de balogé neo, um radical hidróxi cu alquilo ou alcoxi comportando, cada um, 1 a 5 átomos de carbono, 2-indolil-metiloy

4-imldazolil-metilo ou alcoxi-carbonilmetilo comportando 3 ^a U átomos de carbono,

- Rg e R^ iguais ou diferentes representam, cada um, um radical alquilo de cadeia linear ou ramificada comporportando 1 a 6 átomos de carbono, n representa um número inteiro igual a 1 ou 2,

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical formilo ou metilo com a condição, contudo, de R^ nunca representar um radical metilo quando n representa o número 2, e

- R^ e R^ formam considerados em conjunto uma ligação dupla ou Rçj representa um átomo de hidrogénio e R^ representa um radical hidróxi, sob a forma de mistura de diàstereoisômeros ou de isómeros puros, dos seus -óxidos e dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado quer pelo facto de se fazer reagir uma amina, sob a forma racémica

ou opticamente pura, de fórmula geral

R₁ - CH

NH

(II) na qual S^, Rg ^e têm os significados com um composto de fórmula geral,

10·

11·

R4 definidos antes, (III)

CO N₃23 na qual n, R^ e R^ têm os significados definidos antes e R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, para se obter respectivamente sob a forma de mistura de diastereoisómeros ou de isómeros puros os compostos de fórmula geral I na qual os símbolos n, R^, R^, R^, R^ e R^ têm os significados definidos antes e o símbolo R^ representa um átomo de hidroϊ génio ου um radical metilo, depois,para se obter os compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R^ representa um radical formilo, submete-se os compostos de fórmula geral

9·

II ^x OR3 o

na qual n, R₁, Rg, R^, R^ e R^ têm os significados definidos antes, à acção de ácido fórmico na presença de anidrido acético, quer pelo facto de se fazer reagir um composto sob forma racénica ou opticamente puro de fórmula geral,

9‘

Ο 23 \ OR2 η\ (I OR₃Ο na qual Rp Rg, e têm os significados definidos antes, com o ião permanganato em meio ácido no seio de um dissolvente inerte, a uma temperatura compreendida entre -4-0 e -75°C, para se obter os compostos de fórmula geral I, na qual o símbo lo n representa o número 2 e o símbolo R^ representa um radical formilo, e em seguida pelo facto de se salificar os compostos de fórmula geral I com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, ou pelo facto de se transformar nos -óxidos correspondentes com um dissolvente orgânico básico saturado de oxigénio.

Os 1-aminometi1-fosfonatos, compostos de fórmula geral

II, podem ser preparados de acordo com três processos:

quer mediante redução com zinco de compostos de fór mula geral

Rn CH

I

N

OR, _pz ²

II ^X0R 0 ³ (V)

OH na qual R^, R₂ e R^ têm os significados definidos antes, em solução em ácido fórmico, quer mediante alquilação de iminas de fórmula geral

(VI) na qual R₂ e R^ têm os significados definidos antes, com um halogeneto de alquilo de fórmula geral

- X (VII) na qual R^ tem os significados definidos antes de acordo com o método descrito emBuli. Soc. Chim. Fr. (1978),11, p.?5;

- quer mediante reacção da difenilfosforil-azia (D. RP. A.) com ácidos de fórmula geral

Β

R.

Ζ

CH

COOH (VIII) _X°R₂

na qual R^, R₂ ® R^ têm os significados definidos antes, para se obter os carbamatos de fórmula geral /NHCOOCH ₂ \

Ri - °Π _0R ¹ X Z^or2

P (IX)

OR.

na qual R.^, R₂ e R^ têm os significados definidos antes, que se submetem, em seguida, a uma hldrogenólise catqlftica para se obter as aminas de fórmula geral II /7Tetrahedron Letters, 24, (49), p. 5461, ( 1983)

Os compostos de. fórmula geral V preparam-se mediante reacção da hidroxilamina com as cetonas de fórmula geral,

(X) /^CR2

na qual R₁, R₂ e R^ têm os significados definidos antes, de acordo com o processo descrito em Synthesis, (1981),p.57. A preparação dos compostos de fórmula geral IX ó conhecida ( Houben Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Georg Thien Verlag, Stuttgart, 5® ed., vol . 12/1, p. 453).

A preparação de compostos de fórmula geral VI está dejá crita em Tetrahedron Letters, (1973), 46. P· 4645.

A formilação dos compostos de fórmula geral Ia efectua-se de acordo com um processo já conhecido. ZfJ. Org. Chem., 23, p. 727, (1958).7.

Os compostos de fórmula geral III preparam-se em duas etapas. A primeira consiste em adicionar um excesso de hidrazina anidra a uma solução de vlncristina ou de navelbina base em metanol anidro. Faz-se reagir em seguida o composto obtido de fórmula geral,

9'

(XI) r₄ co nh-nh₂

5Λ * na qual n, e têm os significados definidos antes e

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, com nitrito de sódio em meio ácido, para se obter os compostos de fórmula geral III.

ácido utilizado quando desta última reacção pode ser o ácido clorídrico. Mantém-se a temperatura do meio reaccio10

nal entre G - $°C.

Extraem-se em seguida as acilazidas formadas com um dis_ solvente aprótico não solúvel em água, de preferência o clorereto de metileno. Os compostos de fórmula geral III não se isolam, de preferência. Com efeito, concentra-se a solução or gânica que os contém e juntam-se, em seguida, à temperatura ambiente, os derivados de fórmula geral III com os derivados do ácido 1-aminometil-fosfónico de fórmula geral II.

As afinas de fórmula geral II podem obter-se opticamente puras mediante cristalização fraccionada dos seus sais com um ácido opticamente puro, ZTJ. Org. Chem.”, (1963), 28 , ρ. 2^83_7 ou de acordo com o processo descrito em ”Llebigs Ann. Chem., (1987), p. >+5.

A preparação dos compostos de fórmula geral IV está já descrita na literatura (pedido de patente de invenção europeia vs 318*392 e a oxidação destes compostos com o ião permanganato efectua-se de acordo com um processo já conhecido (pedido de patente de invenção europeia N® C117 861).

Cs compostos de fórmula geral I quando preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, podem obter-se sob a forma de diasterecisómeros puros mediante condensação das alcilazidas correspondentes com uma amina de fórmula geral II opticamente pura ou a partir da mistura de dlastereoisómeros, que se separa, em seguida, mediante cromatografia líquida de alta pressão (H.L.F.C.).

Os compostos de fórmula geral I são derivados da 16-des carbometoxi-k-G-desacetil — vinciistina-l6-carboxamida e da 16-descarbometoxi-k-G-desacetil-ã’-noranidro-vinblastina-16-car11

boxamida. Contudo, prefere-se designá-los como sendo derivados N-( 23-vincristinoílicos) do ácido 1-aminometil-fosfónico e dos derivados N-( 5 ’-noranidrc-23-vinbLaátinoílicos) do ácido 1-aminometil-fosfónico.

Os sufixos (+) ou (-) utilizados para designar certos compostos não indicam o sentido em que estes compostos rodam o plano de polarização da luz mas indicam que eles se prepara ram com uma amina de fórmula geral II opticamente pura; (+) ou (-).

Entre os ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêtico para a preparação de sais de adição dos compostos de fórmula geral I, pode-se citar os ácidos fosfórico, clorídrico, cítrico, oxálico, malelco, sulfúrico, tartárlco, mandélico, fu márico, metanossulfónico, etc.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, assim como os seus sais de adição, são dota dos de propriedades farmacológicas multo interessantes e distinguem- se dos outros derivados da vincristina ou da navelbina já conhecidos.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção foram ensaiados quanto à sua capacidade para prolongar a sobrevivência de murganhos portadores de células tumorais (P 388 e sobre um cancro do pulmão humano) por via intraperitoneal de acordo com os protocolos recomendados pelo Instituto Nacional do Cancro USA (Geran R. I. e colab, Câncer Chemotherapy Reports, (1972), III, 3, N® 2, p. 1-87) e reconhecidos como representativos do efeito anti-tumoral em clínica humana £ Driscoll J. C. S. Câncer Treatment Reports, (198¹*), Na 1, ρ. 63-85 e ’Ίη vivo câncer Models US Depatment of Health and Human Services NIH Publicação 8^-2635 Fev. 1989·_7.

Os compostos de acordo com a presente invenção revelaram-se não somente capazes de retardar o crescimento de tumores en xertados no murganho mas também de curar animais. Com efeito, observaram-se numerosas remissões completas. Além disso, ensaios comparativos com compostos de referência descritos na literatura - vinblastina, vincristina e navelbina - e com o composto mais activo descrito no pedido de patente de invenção europeia Νδ 318 392, demonstraram que os compostos de acordo com a presente invenção têm uma actividade muito superior em relação aos compostos já conhecidos.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção são úteis para o homem e os animais no caso da doença de Hodgkin, linfonas não hodgkinianos, cancros de testícu lo, epiteliotia do seio e do ovário, sarcoma de Kaposi, coriocarei noma hlstocltose, rabdomiosarcomas, neuroblastomas, tumores de Wilms, sarcomas de Ewing, cancro do pulmão, etc. Pode-se igualmente encarar outras aplicações terapêuticas para os compostos de acordo com a presente invenção. Com efeito, sabe-se que os alcalóides bis-indólicos e os seus derivados são activos no tratamento de certas artrites ou da psoríase. (Patentes de invenção norte-americanas Nfis. 4.208.^+11 e 3-7^+9.78^+)A presente invenção estende-se igualmente às composições farmacêuticas que comportam como ingrediente activo pelo menos um composto de fórmula geral I quando preparado pelo processo de acordo com a presente invenção, um dos seus isómeros õpticos ou um dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico ou um dos seus N^’-óxidos com um ou vários excipientes, inertes, não tóxicos e apropriados.

As composições farmacêuticas assim obtidas, apresentam-se, com vantagem, sob diversas formas, tais como por exemplo comprimidos, drageias, gélulas, cremes para aplicações locais, supositórios, soluções injectáveis, etc. Podem conter doses compreendidas entre 0,1 e 100 mg de um ou vários compostos de acordo com a presente invenção.

Para a sua aplicação terapêutica, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, os seus isómeros ópticos ou os seus sais de adição são administrados, de preferência, por via parenteral. De uma maneira geral, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção podem ser utilizados inspirando-se em técnicas e limitações que são conhecidas para os tratamentos terapêuticos com outros alcaloides da classe Vinca.

A posologia pode variar largamente em função da idade, do peso do paciente, da natureza e da gravidade da afecção, da via de administração assim como do esquema terapêutico utilizado. As doses diárias totais estão geralmente compreendidas entre 0,01 e cerca de 20 mg/kg.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção podem ser utilizados sós ou em combinação com um ou vários agentes carcinostáticos incluindo por exemplo os agentes alquilantes, os antimetabólicos tais como o metotrexato, o 5-fluoro-uracilo, a 6-mercapto-purina, a 6-tio-guanina, os arabinosidos da citosina e os antibióticos tais como a actinolb·

micina D, a daunorubicina, a adriamicina 9 a cis-diamino-dicl<2 ro-platina, etc.

Cs exemplos seguintes, dados a título não limitativo, ilustram a presente invenção.

Os espectros de ressonância magnética nuclear (R.M.N.) do e do protão foram registados a 10C MHg

Exemplo 1

N-(4-0-desacetil-5'-noranidro-23-vinblastinoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo

C-NH-CH ^ch3

0^23 \ OCH2CH3

II^och₂ch₃ o

A uma solução de 130 ml de ácido clorídrico N, arrefecida a 0°C e contendo 2,3^ mmoles de N-( ^l+-0-desacetil-5’-noranidro-23-vinblastinoíl)-carbo-hldrazlda, adicionam-se 5,20 mmo les de nitrito de sódio. Depois de 10 minutos de contacto a G°C. ajusta-se o pH do meio reaccional a 8,8 com uma solução gelada e saturada de hldrogenocarbonato de sódio e extrai-se rapidamente com 4 vezes 100 ml de diclorometano. Lavam-se as fases orgânicas reunidas com uma solução saturada de cloreto de sódio e secam-se sobre sulfato de magnésio anidro. Concentra-se a fase orgânica até um volume de 50 ml, adicionam-se 3,10 mmoles de l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo 2fSynthesis, 51, (2981).7 θ abandona-se o melo reaccional durante 24 horas à temperatura ambiente.

Após evaporação do dissolvente, purifica-se o resíduo mediante cromatografia sobre coluna de sílica (230-4-00 malhas) utilizando como eluente uma mistura de tolueno e de etanol (80V/ /20V).

Isola-se o composto pretendido que se cristaliza em uma mistura de éter etílico e de éter de petróleo (5CV/5OV)

Rendimento 32 %·

Exemplo 2 (+) N-(4-0-desacetll-5'-ncranidro-23-vinblastlnoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo

Prepara-se este composto de acordo com o processo descrito antes a partir de lj4 g de N-(4-O-desacetil-5’-noranidro-23-vinblastinoíl)-carbo-hidrazida e de 0,5 e de (+) 1-amino-2-netil -propi 1-fosfonato de dietilo.

Após 24 horas de agitação ã temperatura ambiente separa-se o dissolvente para se obter 1,45 g de composto que se dis solve em 4 ml de etanol. Purifica-se em seguida, esta solução utilizando uma coluna contendo 500 g de Uchroprep RP 18 (l5-25^Um). Slui-se com uma mistura de metanol e de solução aquosa de hidrogenofosfato dissódico O,C1M ( 7θ V/30V). Fixa-se o débito da fase móvel em 20 ml/min. Reunem-se as frac ções 540 a 590 e após condensação sob vazio, extrai-se o resíduo com cloreto de metileno e seca-se, depois, a fase orgânica sobre sulfato de magnésio anidro. Após evaporação do dissolvente, obtém-se o (+) N-(4-0-desacetil-5'-noranidro-23-vinblatinoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo.

Rendimento: 3θ %· sulfato correspondente forma-se após adição de uma quantidade adequada de etanol sulfúrico.

Cs espectros de ressonância magnética nuclear dados a seguir foram realizados com o sulfato de (+) N-(4-0-desacetil-5’-noranidro-23-vlnblatinoíl)-l-amino-2-met11-propil-fosfonato de dietilo.

ΛΖ

Espectro de ressonância magnética nuclear do (dissolvente D^O) :

178 Λ	PPm	co₂	82,0	PP®	°2	34,1	ppm C¹⁹
175,25/175,3	PPm	CONH	69,7	PPm	c²¹	31,4	ppm OKCH^)_n
i6i,i	PPm	C¹¹	66,6/66,8	PPm	(OÇH^CH-j	)₂ 29,3	19 t ppm C ⁷
156,0	PPm	c¹⁸	58,6	PP®	C²3'	20 ,7/22	,5 ppm CHCÇH^g
133,8	PP®	c»'	57,0	PPm	c¹⁶'	18,3	ppm (oa^çp^
133,7	PPm	c¹^	56,2	PPm	c²^	13,7	ppm C¹⁸
130,3	PPm	c²'	53,4/54,9	PPm	c²⁶	9,7	ppm C¹⁸
126,4	ppm	c¹⁰'	5»*,8	PPm	c⁷
123,7	PPm	c¹⁹’	52,1	PP®	c³+c⁵
123,6	PPm	c*	49,2	PPm	c²¹’
120,4	PPm	c⁹'	46,1	PPm	c⁸’
114,7	ppm	c¹²'	45,5	PPm	c⁶
106,9	PPm	c⁷’	Μ5Λ	Ppm	c²⁰
97,5	PPm	c¹²	42,1	PP®	c²⁹
83,7	PPm	c¹⁶	36,5	PPm	C¹?’
Espectro de	ressonância magnética nuclear do	protão (dissolvente D_o0);

7,84	PP®	ÍH C⁹'-H	3,73	ppm	1Ή
7,54	PPm	1Ή C¹²^-H	3,55	PPm	1Ή
7,35	PPm	2H Ο^'-Η+Ο¹¹'^	3,42/3,94	PPm	2H
6,50	PPm	1H C^l2-H Λ“ν	3,14/3,85	PPm	2H
6,45	PPm	ÍH C⁷-H *1 ) ,	2,91/3,59	PPm	2H
5,98	PPm	ÍH C -H «» Q»	2,87	FPm	3H
5,88	PPm	1H C -R	2,60/3,14	PPm	2H
5,83	PPm	ÍH C^1?'-H	2,34	PPm	ÍH
4,70/4,90	PPm	ÍH C²¹’-H	2,11	PPm	29
4,39	PPm	1H C -H ·	2,02/2,44	PPm	2H
4,24	ppm	4h (cçh₂-ch )₂	2,02	PPm	1H
4,08	PPm	ÍH C¹⁷-H	1,38	Ppm	6H
3,93	ppm	3H c²^-h	1,32/1,74	ppm	2H
3,80/4,15	PPm	2H C⁷ -H	1,10	ppm	3H
3,79	ppm	3H C²3‘-H	1,09/1,11	PPm	6H
			0,81	PPm	3H

C²-H c²¹-h c³-h c⁵-h _C3’-H c²^-h c¹⁷’

-H

C^1?-H

C⁶-H

C^ll+,-R (OCH ÇH )

C¹⁹-H

C¹⁸'-K

CH(ÇK-J_O

C^-H³ ia

Exemplo 3 (-) N-(4-0-desacetil-5’-noranidro-23-vinblastinoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo

Prepara-se este composto de acordo com o processo descrito no exemplo 2 mas utilizando o (-) l-amino-2-metll-propil-fosfonato de dietilo.

guando da purificação mediante cromatografia reunem-se as fracções 400 a 500 e tratam-se de acordo com o processo des crito antes.

Rendimento: 29 %·

Espectro de ressonância magnética nuclear do ¹^C (dissolvente CDCl^

174,2	ppm	^co2-	110,6	PPm	c¹²’	44,8	PPm	c⁶
172,9	ppm	CONH	93,5	PPm	c¹²	44,3	PPm	_C3'
158,1	ppm	c¹¹	82,9	PPm	c²	42,9	PPm	c²¹'
152,8	ppm	C¹⁸	80,2	PPm	c¹⁶	42,5	PPm	c²⁰
134,3	ppm	c¹⁸’	64,6	PPm	c²¹	39,1	PPm	c²⁹
134,0	ppm	_c20·	62,0	PP®	(OÇH.CHJ-	35,0	ppm	c¹⁷'
132,1	ppm	C²’	55,7	Ppm	c²⁵	31,1	PPm	c¹⁹
129,5	ppm	c¹^	54,9	PPm	c¹⁶	29,8	PPm	2J(ch )₂
128,5	PPm	c⁸’	53,6	ppm	c⁷	27,7	ppm	C¹⁹’
124,5	PPm	c^llf	53,4	PPm	c⁶'	20,8/18,2	PPm	CH(ÇH-).
122,7	PPm	c¹⁰’	52,2	PP®	c²3’	16,3	PPm	(0CH_ÇH )
120,0	FPm	c¹¹’	50,3	PPm	_C3	12,0	PPm	c¹⁸'
118,3	PPm	c⁹'	49,8	PPm	c²⁶	8,4	PPm	c¹⁸
118,2	PPm	C?’	49,0	PPm

Exemplo 4 (+) N-(N_a-desformil-4-0-desacetll-23-vlncristinoíl-l-ami no-2-metil-propil-fosfonato de distilo.

9’

H

T χ p / oc₂h₅

II '^x'OC₂h₅o

O 23 NH

CH z\ ch₃ ch₃

Agitam-se durante 24 horas, à temperatura ambiente, 4,6 g de N -desformil-4-C-desacetil-23-vincristinoíl-azida em solução em 50 ml de diclorometano, na presença de 1,2 g de (+) 1-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo, para se obter o composto pretendido. Purifica-se em seguida, o ( + ) N-(N -desformi1-4-0-desacetil-23-vincristlnoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo, mediante cromatografia de acordo com o processo descrito no exemplo 2.

Rendimento: 27 %·

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão ( dissolven te CDCl^):

8,5	ppm	1H	NH	2,80/3,30	ppm 2H C^-H
8,1	ppm	2H	NH, NHCO	2,74	ppm 2H C²¹'-H
7,50	ppm	1H	C^y -H	2,64	ppm 2H C²¹-H
7,20/7,12	PP®	3H	Ο^'-Η+Ο^-Η+Ο¹²’	-H 2,40/3,21	, · 3' ppm zK G. -H
6,65	Ppm	ÍH	c⁹-h	2,45/3,10	ppm 2H C^-H
6,27	PPm	ÍH	c¹²-h	2,35/4,03	17' ppm 2H C ' -H
5,85	PPm	1H	C^ll+-H	2,3^	ppm ÍH ÇH(CH₃)₂
5,70	PPm	1H	C^l5-H	1,90/2,10	ppm 2H C⁶-H
1+,42	PPm	ÍH	c²⁶-h	i,5i	ppm 2H C^l5'-H
4,10	PPm	5H	0^-Η+(00Η₂0Η₃)₂	1,40	ppm 2H C¹⁹-H
3,91	PPm	ΙΉ	c²-h	1,38	ppm 6H (OCHg^,
3,75	PPm	3H	0CH₃	1,25/1,60	ppm 2H C¹⁹’-H
3,65	PPm	3H	c²3'-k	1,14	ppm 6H CH(ÇH₃)₂
3,31	ppm	2H	c⁹’-h	0,90	ppm 6H C^-H+C¹⁸-:

Exemplo 5 (-)__N-(N_a-desformil-4-0-desacetll-23-vlncrlstlnoÍl)-l-amlrio-2-met11-propll-fosfonato de dletllo

Prepara-se este composto de acordo com o processo descrito no exemplo 4 mas utilizando o (-) l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo.

Purifica-se o composto obtido mediante cromatografia de acordo com o método descrito no exemplo 3·

Rendimento: 29

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão (dissolvente CDC1

8,7	ppm 1H NH
8,03	ppm 1Ή NHCC
7,48	ppm 1H C⁹ -H
7,17/7	,15/7,09 ppm 3H
6,63	PPm	1H	c⁹-h
6,27	ppm	1Ή	c¹²-h
5,91	PPm	1H	c¹⁴-h
5,79	PP®	1H	C^-H
4,50	PPm	1H	c²⁶-h
4,13	PPm	1H	C*-H
4,08	PPm	4H	(oçh₂ch₃)₂
3,91	PPm	1H	c²-h
3,75	PPm	3H	OCH^
3,63	ppm.	3H	c²³'-h
3,28	PPm	2H	5' C⁷ -H
2,83/3	,28 ppm	2H	C^-H

2,75 ppm 2H (?^Ρ-Η 2,70 ppm 2H C²¹-H

2,41/3,15 ppm 2H C³-H

-H 2,35/4,00 ppm 2H C¹⁷’-h 2,35 ppm 1H ÇHÍCH^ 1,88/2,10 ppm 2H C⁶-H 1,54 ppm 2H Ο^’-Η

1,44 ppt: 2H C¹⁹-H

1,42 ppm 6H (0CH₂-H₃)₂

1,25/1,65 ppm 2H C¹⁹’-H

1,15/1,11 ppm 6H CHÍCH^k

0,98	..ppm 3H C¹⁸'-H
0,91	ppm 3H C^-H

Exem22

Exemplo 6 ( + ) N-( 4--0-desacetil-23-vincristinoíl)-1-amino-2-met11-propil-fosfonato de dietilo·

9‘

-p ^OC₂H₅

II ^OC₂Hs o em uma misacético. Man

CH Z\ ch₃ ch₃

Dissolvem-se 3,7 g dc composto do exemplo tura de 22 ml de ácido fórmico e 4 ml de anidrido tém-se o melo reaccional durante uma hora b temperatura ambiente e trata-se, em seguida, com 12C ml de água gelada. Leva-se então o pH da solução a 9 mediante adição de uma solução gelada de amoníaco. Extrai-se o meio reaccional duas vezes com diclorometano. Lava-se a fase orgânica com água salgada, depois uma vez com água e seca-se sobre sulfato de magnésio anidro. Concen tra-se o meio sob vazio. Obtêm-se deste modo 3,5 g do composto

pretendido que se purifica mediante H.P.L.C. preparativa (500 g de Lichroprep RP 18; eluente NagHFO^ 10“²M 40V; Metanol 60V.). Recuperam-se as fracções 75 a 140, ccncentra-se o dissolvente sob vazio e extrai-se a fase aquosa residual com dicl£ rometano. Lava-se a fase orgânica com água, seca-se e concentra-se scb vazio. Obtêm-se deste modo 500 mg de composto puro.

Rendimento; 13 %·

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão ( dissolvente CDCl^):

9,5	ppm IH CHO	34/4,0	PPm	2H	C^-H
8,5	ppm IH NH	3,31	PPm	2H	C⁷ -H
8,1	ppm 3H NH,NHC0, C⁹-H	2,45/3,10	ppm	2H	C³-H
7,65	ppm IH C¹²-H	2,40/3,21	PPm	2H	c³'-h
7,50	ppm JH-C⁹’-H	2,35/4,03	PPm	2H	Ο^'-Η
7,40	PPm	2,14	PPm	IH	ÇH(ch₃)₂
7,12	10' 11’ 19* ppm 3H c^iu -H+C^Xi -H+C^ -H	1,90/2,50	PP®	2H	c⁶-h
7,02	PPm	1,51	PPm	2H	cⁱ⁵'-h
5,85	ppm IH C¹¹⁺-H	1,40	ppm	2H	c¹⁹-h
5,70 4,42	ppm 1K C^-H ppm IH C²⁶-H	1,38 1,25/1,60	PPm PPm	6H 2H	( 0CH₂-Ç!^ c¹⁹'-h
4,36	21' ppm 2H	1,14	PPm	6H	CH(ÇK₃)₂
4,10	ppm 5H C -H+(OOI₂CH )₂	0,90	PPm	6H	c¹⁸'-h
4,02	ppm 2H C²¹	0,72	Ppm	3H	C^-H

3,91 ppm 1H-C²-H 3,75 ppm 3H c²⁵—h 3,65 ppm 3H C²³'-H

Exemplo 7 (-) N-(4-C-desacetil-23-vincristlnoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo

Prepara-se este composto de acordo com o processo descrito no exemplo 6 mas utilizando o composto do exemplo 5.

Purifica-se o composto obtido mediante cromatografia, de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas recuperando as fracções 200 a 290.

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão (dissolvente CDC1

8,12	ppm	1H	c¹²-h		3,25/3,9	PPm	2H	C^-H
7/8	ppm	IH	c⁹-h		2,83/3,8	PPm	2H	c3’-H
7/3	ppm	IH	c⁹’-h		2,27/3,9	PPm	2H	Ο^'-Η
7,44	ppm	IH	c¹²'-h		2,12	PPm	IH	2i(CH )₂ S 'J
7,12	ppm	IH	C¹⁰'-H		1,78/2/1	ppm	2H	C-H
7/2	ppm	IH	C^lr-H		1,47	PPm	2H	C^1?'-H
5,91	Ppm	2H	C^ll+-H +	c¹⁵-h	1,44	Ppm	2H	c¹⁹’-h
4,45	PPm	IH	c²-h		1,40/1,70	ppm:	2H	C¹⁹’-9
4,20	PPm	3H	c²⁶-h +	c²¹'-h	1,31	PPm	6H	CH(ÇH )
4,10	PPm	5H	c²¹-h+( oçh₂-ch )₂	1,10	PPm	1Ή	14’ C -K
3,85	ppm	IH	c¹⁷-h		0,95/1,02	PP®	6H	(OO^ÇH^
3,80	FPm	3H	c²^-h		0,86	PPm	3H	C^-H
3/3	PPm	3H	c²³'-h		0,70	PPm	3H	c¹⁸’-h
3//3,9	PPm	2H	51 C⁹ -H
3,55/4,1	PPm	2H	C^-H
3,3/4,44	PPm	2H	c6’._h

Espectro de ressonância magnética nuclear do (dissolveitte

CDCl^):

173,3	ppm	c²⁸'	56,1	PPm	C⁹’
169,5	ppm	C²⁸	55,1	PPm	C¹⁶’
161,5	ppm	c²**	52,3	PPm	c²⁸'
156,7	ppm	c¹¹	50,4	PPm	c?
l4'í,2	PP®	c¹⁸	49,4	PPm	c⁸
136,0	PPm	c¹⁸’	48,9/50,4	PPm	c²⁶
132,5	PP®	c¹*	48,8	PPm	c⁹
130,4	PPm	c²'	44,1	PPm	c⁸'
128,3	PPm	c⁸’	41,8	PPm	c²⁰
126,4	PPm	c¹⁰	38,8	PPm	c⁶
123,7	PPm	c® + Ç?	35,9	PPm	c¹?'
121,7	Ppm	c¹⁴ ₊ c¹⁰	35,1	PPm	c¹?'
118,6	PPm	c¹¹’	33,9	PPm	c¹⁹'
117,7	PPm	c⁹ ’	31,4	PP®	c¹⁹
113,0	PPm	_c7‘	29,4	PPm	SH(CH,),
112,2	ppm	c¹²’	26,2	ppm
100,7	PPm	c¹²	20,4	PP®	c⁶’
82,3	PPm	c¹⁶	17,4/20,1	PPm	(OCH^CH, 2 3
72,3	PPm	c¹?	16,2	PPm	chCçh₃)₂
69,4	PPm	c²	7,23	PPm	c¹⁸'
66,5	ppm	c²⁰’	6,15	PPm	C¹⁸
64,3	PP®	21’ cr
61,6/62	PPm	(oçh₂-ch₃)₂
60,3	PPm	c²¹’
56,2	PPm	c²⁵

Exemplo 8 (+) N-CN-desformIl-4-0-desacetil-23-vincristinoíl)-1-amino-etil-fosfonato de dietilo

9'

O

Prepara-se este composto de acordo com o processo descrito no exemplo 4- mas utilizando o ( + )-l-aminoetil-fosfonato de dietilo.

Çr

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão (dissolvente CDC1

7,62	ppm	1H	9' C⁷ -H	2,90/3,35	PPm	2H	c³-h
7,35				2,80	PPm	2H	c²¹’-h
7,15	ppm	3H	c¹⁰'-h+c¹¹'-h+c¹²'-h	2,60	PPm	2H	c²¹’-h
7,08				2,20/3,10	PPm	2H	c³'-h
6,6o	PPm	1H	c⁹-h	2.40/3,20	PPm	2H	c⁵-h
6,10	PPm	1Ή	c¹²-h	2,50/4,00	PP®	2H	c¹⁷’-h
5,80	PP®	1H	c¹⁴-h	1,60/2,00	PPm	2H	c⁶-h
5,60	PPm	1H	C^-H	1,60	PPm	2H	c¹⁵'-h
*+,5o	PPm	1H	c²⁶-h	1,50	PPm	3H	CH₃-CH₂
4,18	PPm	ΙΉ	4 C -H	i,45	PPm	2H	c¹⁹-h
4,11	PPm	4H	(cch₂ch₃)₂ q	1,30	PPm	6H(	CCH^),,
3,85	PPm	1H	C -H	1,30/1,70	PPm	2H	c¹⁹'-h
3,80	ppm	3H	C²^-H	0,95	PPm	3H	C¹⁸’-H
3,60	PPm	3H	c²⁸'-h	0,80	PPm	3H	c¹⁸-h
3,35	PPm	2H	C*’-H

Exem2fi

Exemplo 9 (+) N-(4-0-desacetil-23-vincristinoí1)-1-amino-etil

-fosfonato de dietilo

9·

O

Processo A

Prepara-se este composto a partir do composto do exemplo 8, utilizando o processo descrito no exemplo 6.

Espectro de ressonância magnética nuclear do protão (dissol vente CDCl^):

8,CC	PPm	IH	c¹²-h	3,40/4,10	PPm	2H	c⁶’-h
7,70	PPm	IH	c⁹-h	3,30/3,80	ppm	2H	C^'-H
7,55	PPm	IH	c⁹’-h	3,30/3,75	PPm	2H	c³-h
7,50	PPm	IH	c¹²'-h	2,80/3,70	PPm	2H	c³'-h
7,10	PPm	2H	C¹⁰'-H + C^1:L'-H	2,30/3,90	PPm	2H	c¹⁷'-h
5,95	PPm	IH	C^ll+-H	1,70/2,40	PPm	2H	c⁶-h
5,90	PPm	IH	(Z-H	1,50	PPm	2H	15' C~ -H
4,30	PPm	IH	c²-h	1,40	PPm	3H	ÇH..-CH
4,25	PPm	IH	c²⁶-h	1,40/1,70	PP®	2H	c¹⁹-h
4,20	PFm	3H	21 21' υ -H + -H	1,30/1,60	PPm	2H	c¹⁹'-h
4,05	PPm	4H	(c-çh₂-ch₃)₂	1,05	PPm	6H	(0CH₂-ÇH₃)
3,70	PPm	3H	C²^-H	1,00	PPm	IH	C^ll+'-H
3,65	PPm	3H	c²3¹	0,95	PPm	3H	c^-h
3,40/	3,90 ppm	2H	C^-H	0,90	PPm	3H	c¹⁸’-h

Processo B

Arrefece-se até 70°C uma solução de 300 mg de sulfato de ( + ) N-(4-0-desacetil-23-vinblastinoíl)-l-amino-etil-fosfonato de dietilo (pedido de patente de invenção europeia Nc 3I8*392) em 28 ml de cloreto de metileno e 4 ml de ácido acé tico, depois de se expulsar os gases mediante borbulhamento de árgon b temperatura ambiente.

Adiciona-se, gota a gota, uma solução de 103 mg de permanganato de potássio e 290 mg de éter coroa 18-6 em 12 ml de

JO ς, * cloreto de metileno.

Uma vez terminada a reacção, despeja-se o meio reaccio nal sobre uma solução gelada de 19 ml de dissuXfito de sódio a % e de 10 ml de amoníaco concentrado.

Filtra-se a emulsão resultante sobre celite e extrai-se o filtrado com 3 vezes 25 ml de cloreto de metileno.

Lavam-se as fases orgânicas reunidas com 10 ml de água, secam-se sobre sulfato de magnésio e evapora-se o dissolvente para se obter o composto pretendido.

Para se obter o sulfato correspondente, adiciona-se uma quantidade adequada de etanol sulfúrico.

Rendimento global 20

ESTUDO FARMACOLOGICO.

Exemplo 10

Actividade antitumoral sobre a leucemia P 388 no murganho

Murganhos (n = 6), da estirpe ^B^^D2^F1 ^^Fl^{: C}S7³ 16 ^X DSAg), receberam,por via intraperitoneal, no dia zero, 0,4 ml de soro fisiológico contendo em suspensão 10^ células leucémícas Os compostos a examinar foram administrados aos grupos ensaios, por via intraperitoneal, um dia depois da inoculação da leucemia. Registou-se a mortalidade dos animais dos grupos ensaios e ccntrôlos durante 60 dias depois da Inoculação. No quadro 1 indica-sé o número dos sobreviventes consignados ao fim de 30 dias e 60 dias de observação. Após 60 dias de observação, os animais que sobreviveram foram considerados em remissão a longo

termo. 0 quadro 2 indica os valores da percentagm da duração da vida média (T.M.S.) dos grupos ensaios T sobre a vida média do grupo controlo C não tratado. Valores de T/C (T.M.S.) superiores a 125 % são significativos de uma actividade antitumoral.

Como os resultados dcs Quadres 1 e 2 o demonstram, os compostos de acordo com a presente invenção possuem uma melhor actividade antitumoral em relação aos compostos de referência vinblastina e vincristina, assim como em relação ao ( + ) *^T-(4-0-desacetil-23-vinblastlnoíl)-1-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo (N.D.V.A.M.F.P.) que é o composto mais activo dos compostos descritos no pedido de patente de invenção europeia N® 318*392. Com efeito, o composto do exemplo 6 para uma dose duas vezes inferior à do N.D.V.A.í-'.Ρ.Ρ. é curativa para a totalidade dos murganhos.

Quadro 1

Compostos	Dose mg/kg	Sobreviventes
30 dias	60 dias
Vinblastina	3 mg/kg	1/6	1/6
Vincristina	3 mg/kg	0/6	0/6
v.D.V.A.M.F.F.	C ,2 mg/kg	5/6	5/6
Exemplo 6	0,1 mg/kg	6/6	6/6

Qua.32 /

Quadro 2

Compostos	4 Dose mg/kg	T/C %
Vinblastina	3 mg/kg	2M-5
Vincristina	3 mg/kg	192
N.D.V.A.M.P.P.	0,2 mg/kg	405
Exemplo 6	0,1 mg/kg	>550 ..........

Exemplo 11

Aetividade antitumoral sobre um cancro do pulmão humano enxertado no murganho NUDE (LK1)

Os murgarhos NUDE são tratados quando o tamanho do tumor é de 5 mm x 5 mm. Os compostos são administrados nos dias 0, 3, 6 e 9 por via intraperitoneal. Como os resultados do Quadro 3 o demonstram, os compostos de acordo com a presente inven ção possuem uma aetividade antitumoral muito importante, enquan to a vinblastina é multo pouco activa.

Quadro 3

Compostos	Dose mg/kg	fe SGD	T/C^**
— —————————-		---—	——————————
Vinblastina	1	1,5 (+)	56 ( + )
Exemplo 2	0,70	3,1 (+++)	21 (+++)

* * : SGD : Standard gorfth delay ** : Volume tumor Animais/volume tumor animais testemunhas

Exemplo 12

Citoxicidade In vitro

As células L1210, em fase exponencial de crescimento, são diluídas em meio de cultura completo (RPMI , contendo 10 % de soro fetal de vitela, 2 nM de glutamina, 50 Unidades/ml de penicilina, 50Alg/ffií de estreptomicina, 10 nw Hepes) de modo a obter-se uma densidade de 10 células/ml.

Os compostos são testados com 9 concentrações (séries de diluições de 2 em 2) e incubados com as células durante 4-8 ho ras. Quantifica-se em seguida o número de células viáveis mediante um ensaio colorimétrico,o Microculture Tetrazolium ASSAY.

Os resultados são expressos em CI^^, concentração de composto que inibe de 50 a proliferação das células testemunhas.

Como os resultados do quadro 4 o demonstram, os compos tos pfeparados pelo processo de acordo com a presente invenção possuem uma melhor actividade antitumoral que os compostos de referência vinblastina e vincristina.

Qua-

Quadro 4

1 Compostos	^CI5o
, Vincristina	4,20 + 0,7 nK
Vinblastina	2,30 + 0,5 nM
Exemplo 2 1	0,30 ± 0,09 nM
j_ Exemplo 6	0,35 + 0,09 nM

Preparação Farmacêutica

Exemplo 13

Pó liofilizado para preparação injectável contendo 0,2 mg de ( + ) N-( 4-0-desacetil-23-vlncrLstinoíl)-1-amino-2-metil-propil-fosfcnato de dietilo (+) N-(4-0-desacetil-23-vincristinoíl)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo 0,2 mg

Lactose anidra 10,0 mg para um frasco de pó.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral (I)

OR₂

OR₃ /

na qual

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo de cadeia linear ou ramificada comportando 1 a

6 átomos de carbono, um radical alcenilo de cadeia linear ou ramificada comportando 2 a 6 átomos de carbono, um radical arilalquilo com 7 a 10 átomos de carbono, po •dendo comportar como substituinte no ciclo aromático um átomo de halogéneo, um radical hidroxi ou um radical alquilo ou alcoxi comportando, cada um, 1 a 5 átomos de carbono, um radical 2-indolil-metilo, um radical 4-imidazolil-metilo ou um radical alcoxi-carbonílmetilo comportando 3 a 11 átomos de carbono;

-R2 e R^ iguais ou diferentes representam, cada um, um radical alquilo de. cadeia linear ou ramificada comportando 1 a 6 átomos de carbono;

- n representa um numero inteiro igual a 1 ou 2;

R₄ representa um átomo de hidrogénio ou um radical formilo ou metilo, com a condição, contudo, de R^ nunca representar um radical metilo quando n representa o número 2, e e R_r considerados em conjunto reoresentam uma □ D ‘ ligação dupla, ou R^ representa um átomo de hidrogénio e Rg representa um radical hidroxi, sob a forma de mistura de diastereoisómeros ou de isómeros puros, dos seus ,-óxidos e dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico , caracterizado, quer pelo facto de se fazer reagir uma amina, sob a forma racémica ou opticamente pura, de fórmula geral nh₂ na qual R., , R₂ e R^ têm os significados definidos antes com um composto de fórmula geral (III) co n₃ na qual n, e Ρ.θ têm os significados definidos antes e R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, para se obter respectivamente sob a reoisõmeros ou de isómeros puros os forma de mistura de diastecompostos de fórmula geral

I na qual os símbolos n, R^, R2, R^Rç^ ^{e R}g têm ^os significados definidos antes e o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, depois, para se obter os compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R^ representa um radical formilo, de se submeter os compostos de fórmula geral

0R₃ na qual n, , R₂, finidos antes, ã acção de_ácido fórmico na quer ^R31 ^R5 ^{e R}g têm os significados depresença de anidrido acético, pelo facto de se fazer reagir um composto sob forma racémi39 ca ou opticamente activo puro de fórmula geral

9'

O na qual R^, R₂ e R^ têm os significados definidos antes , com o ião permanganato em meio ácido no seio de um dissolvente inerte a uma temperatura compreendida entre -40°C e -75°C, para se obter os compostos de fórmula geral I, na qual o .símbolo n representa o número 2 e o símbolo representa um radical formilo, e em seguida de se salificar os compostos de fórmula geral I com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista far macêutico, ou de se transformar nos N, ,-óxidos corresocndentes com um o dissolvente orgânico básico saturado de oxigénio.
2. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou outro processo quimicamente equivalente, para a preparação do N-(4-0-desacetil-5'-noranidro-23-vinblastinoil)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo, sob a forma de uma mistura de diastereoisómeros ou de isómeros puros, assim como dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou outro pro cesso quimicamente equivalente, para á preparação do (+) N-(N · -desformil-4-0-desacetil-23-vincristinoil)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo, e dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação I ou outro processo quimicamente equivalente, para a preparação do (+) N-(4-0-desacetil-23-vincristinoil)-l-amino-2-meti1-propil-fosfonato de dietilo, e dos seus sais de adição com um ácido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou um outro processo quimicamente equivalente, para a preparação do {-) N- (4-0-desacetil-23-vincristinoil)-l-amino-2-metil-propil-fosfonato de dietilo, e como dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou um outro processo quimicamente equivalente, para a preparação do (+) N- (4-0-desacetil-23-vincristinoil)-1-amino-etil-fosfonato de dietilo, e dos seus sais de adição com um ãcido inorgânico ou orgânico aceitãvel sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemen te substituídos.