PT1746097E - Heterociclos fundidos de 1,4-di-hidropiridina, processo para a sua preparação, utilização e composições que os contêm - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "HETEROCICLOS FUNDIDOS DE 1,4-DI-HIDROPIRIDINA, PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO, UTILIZAÇÃO E COMPOSIÇÕES QUE OS CONTÊM" A presente invenção refere-se, em particular, a novos compostos químicos, particularmente a novos heterociclos fundidos de di-hidropiridina substituídos, às composições que os contêm e à sua utilização como produtos medicinais. Mais particularmente, a invenção refere-se a naftiridinas ou quinolinas fundidas com pirrole ou pirazole parcialmente saturadas específicas, apresentando actividade anticanceríqena através da modulação da actividade de proteínas, em particular de cinases.

Até à data, a maioria dos compostos comerciais utilizados em quimioterapia são agentes citotóxicos, que colocam problemas consideráveis de efeitos secundários e de tolerância em doentes. Esses efeitos podem ser limitados na medida em que os produtos medicinais utilizados actuem selectivamente em células cancerígenas, com a exclusão de células saudáveis. Uma das soluções para limitar os efeitos adversos da quimioterapia pode, consequentemente, consistir na utilização de produtos medicinais que actuam sobre vias metabólicas ou sobre elementos que constituem essas vias, expressos principalmente em células cancerígenas e que seriam muito pouco expressos ou não seriam de todo em células saudáveis. 1

As cinases de proteína são uma família de enzimas que catalisa a fosforilação de grupos hidroxilo de resíduos de proteína específicos, tais como resíduos de tirosina, serina ou treonina. Essas fosforilações podem modificar significativamente a função de proteínas; deste modo, as cinases de proteína desempenham um papel importante na regulação de uma grande variedade de processos celulares, incluindo em particular metabolismo, proliferação celular, diferenciação celular, migração celular ou sobrevivência celular. De entre as várias funções celulares em que está envolvida a actividade de uma cinase de proteína, alguns processos representam objectivos atractivos para tratar doenças relacionadas com cancro e também outras doenças.

Deste modo, um dos objectivos da presente invenção é proporcionar composições que têm actividade anticancerígena, actuando em particular no que respeita às cinases. De entre as cinases para as quais é pretendida a modulação da actividade, preferidas Aurora A e B. A utilização de inibidores da cinase Aurora como agentes anticancerígenos foi recentemente revista em "aurora kinase inhibitors as anticancer agents, N. Keen e S. Taylor, 2004, Nature Reviews, 4, 927-936.

Foram identificadas muitas proteínas envolvidas na segregação dos cromossomas e na montagem do fuso em levedura e em drosophila. A desorganização dessas proteínas origina a não-segregação dos cromossomas e fusos monopolares ou desorganizados. De entre essas proteínas, necessárias algumas cinases, incluindo Aurora e Ipll, que originam respectivamente de drosophila e S. cerevisiae, para a segregação do cromossoma e a separação do centrossoma. Foi recentemente clonado e caracterizado um análogo humano da Ipll de levedura por vários 2 laboratórios. Esta cinase, designada Aurora2, Aurora A, STK15 ou BTAK, pertence à família das cinases de serina/treonina.

Bischoff et al. demonstraram que Aurora2 é oncogénica e está amplificada em cancros colorrectais humanos (EMBO J, 1998, 17, 3052-3065). Foram também demonstrados exemplos disto em cancros envolvendo tumores epiteliais, tais como cancro da mama.

Entre as outras cinases sobre as quais os produtos da invenção podem actuar, pode ser feita referência às FAK, KDR, Src, Tie2 e cinases dependentes de ciclina, como CDK1, CDK2, CDK4, CDK5, sendo a última de particular interesse no tratamento de doenças relacionadas com o sistema nervoso central.

Merece ser referido que uma das vantagens da presente invenção é proporcionar compostos bastante selectivos. De facto, esses compostos evitam principalmente inibir cinases envolvidas na transcrição celular, o que pode resultar em efeitos secundários graves e/ou em toxicidade mais elevada para células quiescentes. Como resultado, os compostos de acordo com a invenção evitam, principalmente, inibir as cinases CDK7 e/ou CDK9 ou, pelo menos, a proporção de inibição está a favor da cinase Aurora. O seguinte corresponde à pesquisa da técnica anterior considerada pelo Requerente mais próxima para compostos de fórmulas (I) e (II) de acordo com a invenção:

Drizin, Irene; Holladay, Mark W.; Yi, Lin; Zhang, Henry Q.;

Gopalakrishnan, Sujatha; Gopalakrishnan, Murali; Whiteaker,

Kristi L.; Buckner, Steven A.; Sullivan, James P.; Carroll,

William A. Structure-Activity studies for a novel series of tricyclic dihydropyrimidines as KATP channel openers (KCOs). 3

Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2002), 12(11), 1481-1484.

Drizin, Irene; Altenbach, Robert J.; Carroll, William A. Preparation of tricyclic dihydropyrazolone and tricyclic dihydroisoxazolone as potassium channel openers. Publ. Ped. Pat U. S. 2002007059 AI WO 2001066544 A2.

New substituted benzimidazole derivatives are C-JUN N-terminal kinase inhibitors useful in the prevention and/or treatment of e. g. inflammatory diseases, autoimmune diseases, destructive bone disorders and neurodegenerative diseases. Documento WO 200499190 Al.

Gross, Rene; Lajoix, Anne-Dominique; Ribes, Gerard. Novel methods for screening Inhibitors of the Interaction of rat neuronal nitric oxide synthase and its cognate Inhibitor.

Documento WO 2002083936 A2.

Kada, Rudolf; Knoppova, Viera; Kovac, Jaroslav; Cepec, Pavel. Reaction of 2-cyano-3-(4,5-dibromo-2-furyl)-2-propenenitrile and methyl 2-cyano-3-(4,5-dibromo-2-furyl)-2-propenenitrile and methyl 2-cyano-3-(4,5-dibromo-2-furyl)-2-propenoate with nucleophiles. Collection of Czechoslovak Chemical Communications (1984), 49 (4), 984-91.

Kada, Rudolf; Kovac, Jaroslav. Furan derivatives. Part CXV. Condensation reactions of 5-arylthio- and 5-heteroarylthio-2-furaldehydes with nitrometano. Collection of Czechoslovak Chemical Communications (1978), 43 (8), 2037-40. 4 0 documento WO 2005/016245 divulga compostos tendo actividade inibidora de Pi 3-K e métodos de utilização de compostos inibidores de Pi 3-K para inibir o crescimento de células cancerígenas. O documento WO 2005/016245 divulga compostos tendo actividade inibidora de PI 3-K (ver abaixo) e método de utilização desses compostos para inibir o crescimento de células cancerígenas:

RI e R2 podem ser H ou um grupo alquilo, alcenilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, R3 pode ser H, grupo alquilo, alcenilo, aralquilo, alquilo, alcenilo, ... e R4 pode ser H ou um grupo arilo, alquilo, alcenilo, cicloalquilo, aralquilo, arilo opcionalmente substituído. Este não descreve os compostos de fórmula (I) em que X = CR7. Além disso, este não descreve nem sugere os compostos de fórmula (I) em que X = NH e R2 é um arilo substituído com -SR9, NHR9, CONHR9, CONHCH2R9, NHCOR9, NHCONHR9, S02NHR9 ou heteroarilo substituído.

Foi agora verificado, surpreendentemente e de acordo com um primeiro aspecto da invenção, que os produtos correspondentes à fórmula geral (I) abaixo são de particular interesse para inibir uma cinase Aurora: 5

em que, X é NH ou CR7, • quando X = NH, R2 é: arilo substituído com um substituinte seleccionado entre S-Rg, NH-R9, (C=0)-NH-R9, (C=0)-NH-CH2-R9, NH-(C=0)-R9, NH-(C=0)-NH-R9, (S02)-NH-R9 ou heteroarilo substituído com um substituinte seleccionado entre 0-R9, S-R9, NH-R9, (C=0)-NH-R9, (C=0)-NH-CH2-R9, NH-(C=0)-R9, NH-(C=0)-NH-R9, (S02)-NH- R9 ; quando X = CR7, R2 é arilo ou heteroarilo substituído com um substituinte seleccionado entre 0-R9, S-R9, NH- R9, (C=0)-NH-R9, (C=0)-NH-CH2-R9, NH-(C=0)-R9, NH-(C=0)- NH-R9, ( S02) -NH-Rg;

Rg é seleccionado entre arilo e heteroarilo opcionalmente substituído com um substituinte seleccionado entre H, F, Cl, Br, OH, SH, CF3, OCF3, OCH3, SCF3, SCH3, OCHF2, OCH2F, alquilo (C1-C6) , O-alilo, fenilo e fenilo substituído com halogéneo; 6 Υ, Υ' e Υ": (i) cada, independentemente, representa um substituinte seleccionado entre CH2, CHR5, CR5R6, C=0, 0, S, NH e NR7; ou (ii) em conjunto representam um substituinte seleccionado entre uma parte de cadeia -CH2-0-(C=0) -. -(CH2),- e -(CH2)2; • R7 representa um substituinte seleccionado entre: R9, COORg, CORg e CONHRg; • R5 e R6, cada, independentemente, representam Rg; • Rg representa H ou, opcionalmente substituído: -alquilo, -alquil-alquileno, -alquileno, -heterocicloalquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -alquil-heterocicloalquilo, -alquilcicloalquilo, -alquil-arilo ou -alquil-heteroarilo. Y" é, de um modo preferido, CH2.

Um Y preferido é CH2. Y' pode ser particularmente seleccionado entre CH2, CHCH3, C(CH3)2, CH-arilo, CH-heteroarilo, CH-(arilo substituído), CH-(heteroarilo substituído), 0, S, NH e NR7. R2 pode ser particularmente seleccionado entre arilo e heteroarilo substituído; em que a substituição inclui um substituinte seleccionado entre halogéneo, OH, 0R8, CH2-ORB, SH, SR8, NH2 e NHR8. 7

Mais particularmente, R2 pode ser arilo ou heteroarilo substituído com um substituinte seleccionado entre metilo, F, Cl, Br, OH, 0-R9, S-R9, NH-R9, (C=0)-NH-R9, (C=0)-NH-CH2-R9, NH- (C=0) -R9, NH- (C=0) -NH-R9, (S02)-NH-R9; em que R9 é seleccionado entre arilo e heteroarilo, em que arilo e heteroarilo são substituídos com um substituinte seleccionado entre H, F, Cl, Br, OH, SH, CF3, OCF3, OCH3, SCF3, SCH3, OCHF2, OCH2F, alquilo(C1-C6), O-alilo, fenilo e fenilo substituído com halogéneo.

Um R2 preferido é heteroarilo substituído com SR9 e o R9 preferido é heteroarilo opcionalmente substituído. De um modo mais preferido, R9 é benzimidazolilo ou imidazolilo opcionalmente substituído.

Um R2 preferido é heteroarilo substituído, em que heteroarilo é furilo ou tienilo. 0 X é vantajosamente CR7.

Um R7 preferido é C00R8 ou C0NHR8.

Um composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção pode estar na forma racémica, enriquecida num enantiómero, enriquecida num diastereoisómero, seus tautómeros, seus profármacos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

De acordo com um segundo aspecto, a invenção é sobre uma composição farmacêutica compreendendo um produto de acordo com o seu primeiro aspecto, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável. 8

De acordo com o seu terceiro aspecto, a invenção é sobre a utilização de um produto de acordo com o seu primeiro aspecto, como um agente que inibe a proliferação de células tumorais.

De acordo com um quarto aspecto, a invenção é sobre a utilização de um produto de acordo com o seu primeiro aspecto, para produzir um produto medicinal para utilização no tratamento de um estado patológico, especialmente, um estado cancerígeno.

Processo geral para a síntese de tetra-hidropiridinas tricíclicas.

Nos esquemas seguintes, RI é H.

É submetida uma mistura de 1,1 equivalentes de pirazole (X = N) , 1 equivalente de aldeído R2 CHO e 1 equivalente de derivado diceto a refluxo em etanol durante M a várias horas. A solução é arrefecida até à temperatura ambiente. 0 composto pretendido é isolado por filtração ou o solvente removido sob vácuo. Se necessário, o bruto é purificado em sílica gel ou utilizando HPLC preparativa.

Quando Y' é N-Boc o produto é desprotegido, utilizando uma solução de ácido trifluoroacético em diclorometano (50/50). 9

Processo geral para a preparação de tetra-hidropiridinas tricíclicas substituídas em N

10 0 composto tricíclico I, em solução em DCM, é tratado com 2 equivalentes de cloreto benziloxicarbonilo, 2 equivalentes de di-isopropiletilamina (DIEA) e quantidade catalítica de 4-dimetilaminopiridina (DMAP), à temperatura ambiente, durante 24 horas. A mistura de reacção é vertida numa solução de hidrogenossulfato de potássio a 10% e extraída com DCM. A fase orgânica é lavada com água, seca sobre MgS04 e concentrada sob vácuo. Os brutos são purificados em sílica gel para dar o derivado III protegido com Cbz. A protecção Boc é removida por tratamento do composto III com uma solução de TFA/DCM (50/50), à temperatura ambiente, durante 1 hora. Após evaporação do solvente o bruto é purificado em sílica gel para dar IV.

Os derivados acilo de fórmula geral V são preparados em 2 passos. Os compostos de fórmula IV são inicialmente acilados por vários cloretos de acilo em DCM utilizando DIEA e uma quantidade catalítica de DMAP. A mistura de reacção é agitada, de um dia para outro, à temperatura ambiente e vertida em água. A mistura é extraída com DCM. A fase orgânica é lavada com água, seca sobre MgS04 e concentrada sob vácuo. Os compostos V são purificados utilizando HPLC preparativa.

Os derivados alquilo de fórmula geral VI são preparados a partir de compostos IV utilizando o epóxido correspondente em etanol. A solução é submetida a refluxo durante 2 horas ou é irradiada com micro-ondas a 110 °C, durante 10 minutos. A mistura é vertida em água e extraída com DCM. A solução DCM é lavada com água, seca sobre MgS04 e evaporada. O produto resultante hidrogenado com Pd/C sob atmosfera de hidrogénio. 11

Após filtração em celite® e evaporaçao, o bruto é purificado, utilizando LC/MS preparativa.

Os derivados acilo de fórmula geral VII são preparados por acilação directa de I com cloreto de acilo como descrito para III ou com anidridos de ácido em DCM utilizando DIEA durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura é vertida em solução de hidrogenossulfato de potássio a 10% e extraída com DCM. A solução orgânica é lavada com água, seca sobre MgSCh e evaporada. O bruto é tratado directamente com uma solução de TFA/DCM (50/50) durante 1 hora à temperatura ambiente. Os brutos são purificados utilizando LC/MS preparativa para dar VII.

Os derivados alquilo de fórmula geral VIII são obtidos por tratamento do composto 1 com o epóxido correspondente em DMF com micro-ondas a 150 °C. O intermediário é purificado, utilizando HPLC preparativa. O derivado resultante desprotegido de Boc com uma solução de TFA/DCM (50/50). O bruto é purificado por LC/MS preparativa.

Processo geral para a preparação de aldeídos não-comerciais

Preparação de aldeídos de estruturas gerais IX:

12

É tratada uma mistura de 1 equivalente de ácido formilbenzóico e 1 equivalente da anilina ou benzilamina em acetato de etilo (AcOEt) com diciclo-hexilcarbodi-imida (DCC) em 60 °C, durante várias horas. A mistura é vertida em HC1 1 N. A fase orgânica é recolhida e sucessivamente lavada com água, uma solução de bicarbonato de sódio e solução salina saturada saturada. A solução é seca sobre MgSCb e evaporada. Os brutos são purificados em sílica gel quando necessário.

Preparação de aldeídos de estrutura geral X:

É tratada uma mistura de 1 equivalente de aminobenzaldeído e 1 equivalente de cloreto benzoílo em DMF com 2 equivalentes de Dl EA sob condições de micro-ondas a 110 °C, durante 10 minutos. 13

Os compostos 10 geralmente precipitam e sao recolhidos por filtração.

Preparação de aldeídos de estrutura geral XI:

É tratada uma mistura de 1 equivalente de aminobenzaldeído e 1 equivalente de fenilisocianato em DMF sob condições de micro-ondas a 110 °C, durante 10 minutos. Os compostos XI geralmente precipitam e são recolhidos por filtração. 14

Preparação de aldeídos de estruturas gerais XII:

O

R

XII E tratada uma mistura de 1 equivalente de clorossulfonilbenzaldeido e 1 equivalente da anilina em DCE com um excesso de piridina durante várias horas. A mistura é vertida numa solução de HC1 a 10% e extraída com DCM. A fase orgânica é lavada com a solução salina saturada, seca sobre MgS04 e evaporada. Os brutos são purificados em sílica gel para dar aldeídos 12.

Preparação de aldeídos de estrutura geral XV e XVI:

O

(R)m Η XV

XVI com: X - O, S; T = N, O, S n a 0,1, 2,3ou4; m * 0,1,ou 2

H + HX XIII "(R)n NaH/THF/80*C Depois t.a.

(R)n H

XV 15

xiv χνι É adicionado 1 equivalente de suspensão de NaH à temperatura ambiente a uma solução de 1 equivalente do composto de fórmula geral XIII ou XIV em THF seco. A mistura é aquecida a 80 °C, durante 30 minutos. A mistura de reacção é arrefecida até à temperatura ambiente e adicionada uma solução de 1 equivalente de 5-nitro-furalaldeído em THF. A mistura de reacção é agitada até à finalização da reacção e depois vertida em água e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada com solução salina saturada, seca sobre MgS04 e evaporada. Quando necessário os brutos são purificados em sílica gel para dar o composto de fórmula XV ou XVI. 16

Preparação de aldeídos de estrutura geral XVII e XVIII:

(R)m com: x = o, S;T = N,0, S n = 0,1,2, 3 ou 4; m = 0,1 ou 2

H

XVII o 9 % ''s'

H NOj +

(R)m KjCCVDMF 120“C XJV

XVIII É aquecida uma mistura de 1 equivalente de 5-bromo-2-tiofenocarboxaldeído, 1 equivalente de fórmula geral XIII ou XIV e 2 equivalentes de carbonato de potássio a 120 °C até à finalização da reacção. Depois a mistura de reacção é vertida em água e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada com solução salina saturada, seca sobre MgS04 e evaporada. Os brutos são purificados em sílica gel quando necessário para dar os compostos XVII ou XVIII. 17

Parte Experimental

Exemplo 1:4-(4-Hidroxi-3-metil-fenil)-1,4,6,7,8,9-hexa-hidro-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro—acético (não é parte da invenção)

São adicionadas 136,2 mg de 4-hidroxi-3-metilbenzaldeido (1 mmole) a uma mistura de 213 mg de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (1 mmole) e 83 mg aminopirazole (1 mmole) em 5 mL de etanol. A mistura é submetida a refluxo durante 2 horas e arrefecida até à temperatura ambiente. 0 precipitado é recolhido por filtração e lavado com etanol, para dar 316 mg de sólido amarelo pálido (rendimento = 80%). Tempo de retenção (RT) =3,8 min (coluna YMC S5 básica; gradiente de ACN/H20 de 2-85% ao longo de 7 min) (EIMS ([M+H]+): 397). São dissolvidas 100 mg do composto isolado em 5 mL de DCM e tratados com 5 mL de TFA durante 1 hora à temperatura ambiente. Após a evaporação do solvente o bruto é purificado directamente utilizando HPLC preparativa de fase reversa. São isoladas 50 mg do composto pretendido após liofilização das fracções (rendimento = 50%) (coluna YMC S5 básica; gradiente de ACN/H20 de 2-85% ao longo de 7 min) EIMS ([M+H]+): 297. RT = 2,31 RMN de H1 (D6-DMS0) (300 MHz) : 1,99 (s, 3H) ; 3,64 (AB, 2H) ; 4,09 18 (ΑΒ, 2Η) ; 4,97 (s, 1 Η) ; 6,52 (d, 1 Η) ; 6,76 (d, 1 Η) ; 6,80 (s, 1 Η); 7,31 (s, 1 Η); 10,4 (s, 1 Η).

Exemplo 2:4-[3-(4-Cloro-fenoxi)-fenil]-2,4,6,7,8, 9-hexa-hidro-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético (não é parte da invenção).

São adicionados 0,116 mL de 3-(4-clorofenoxi)-benzaldeído (0,5 mmole) a uma mistura de 107 mg de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (0,5 mmole) e 42 mg de aminopirazole (0,5 mmole) em 2,5 mL de etanol. A mistura é submetida a refluxo durante 1/2 hora e arrefecida até à temperatura ambiente. A solução é concentrada sob vácuo. O resíduo oleoso resultante dissolvido em 2,5 mL de DCM e tratado com 2,5 mL de TFA à temperatura ambiente, durante 1 hora. Após a evaporação do solvente o bruto é purificado directamente utilizando HPLC preparativa de fase invertida resultando 70 mg de um sólido branco após liofilização das fracções (rendimento = 31%) . (coluna YMC S5 básica; gradiente de ACN/H20 de 2-85% ao longo de 7 min) EIMS ([M+H]+): 393. RT = 3,91 19 RMN de H1 (D6-DMSO) (300MHz): 3,70 (AB, 2H) ; 4,18 (AB, 2H) ; 5,17 (s, 1 H) ; 6,65 (d, 1 H) ; 6,94 (m, 4H) ; 7,22 (m, 1H) ; 7,45 (m, 3H); 9,80 (sl, 2H); 10,4 (s, 1H)

Exemplo 3: 4-[5-(lH-Benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]- 2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona

São adicionadas 490 mg de 5-(l-H-benzimidazol-2-sulfanil) furano (2 mmoles) a uma mistura de 225 mg de 1,3-dicetopiperidina (2 mmoles) e 183 mg aminopirazole (2,2 mmoles) em etanol. A mistura é submetida a refluxo durante 1/2 hora e arrefecida até à temperatura ambiente. O precipitado é recolhido por filtração e lavado com etanol, para dar 460 mg de sólido amarelo pálido (rendimento = 58%) (coluna YMC S5 básica; gradiente de ACN/H20 de 2-85% ao longo de 7 min) (EIMS ([M+H]+): 404). RT = 3,13 min. RMN de H1 (De-DMSO) (300 MHz) : 1,96 (m, 2H) ; 2,26 (m, 2H) ; 2,54 (m, 2H) ; 4,11 (s, 1 H) ; 5,22 (s, 1 H) ; 5,97 (s, 1 H) ; 6,85 (s, 1H); 7,16 (m, 2H) ; 7,37 (m, 1 H) ; 7,46 (s, 1 H) ; 7,55 (m, 1 H) ; 10,0 (s, 1 H); 12,2 (s, 1 H); 12,47 (s, 1H) . 20

Exemplo 4: 4-[5-(lH-Benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]- 7,7-dimetil-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona

São adicionadas 244 mg de 5-(lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (1 mmole) a uma solução de 156 mg de dimedona (1 mmole) e 91 mg de 3-aminopirazole (1,1 mmole) em 5 mL de etanol. A mistura é aquecida em refluxo durante 1 h. A solução é arrefecida até à temperatura ambiente e evaporada sob vácuo. 0 bruto é purificado directamente em sílica gel, utilizando uma mistura de diclorometano/metanol 98/2, depois 96/4 como eluente.

Após a evaporação das fracções, isoladas 250 mg de um sólido amarelo pálido (58%). (EIMS ([M+H]+): 432). Tempo de

Ret.: 2,56 min RMN de H1 (D6-DMS0) 2,00 (AB, 2H); 2,29 (AB, (300MHz) : 0,81 (s, 3H) ; 0,87 (s, 3H) ; 2H); 5,02 (s, 1 H); 5,85 (s, 1 H); 6,72 O exemplo seguinte foi preparado, utilizando o mesmo processo do exemplo 1: 21

Tabela 1

Os exemplos seguintes foram preparados utilizando o mesmo processo que no exemplo 3 ou 4.

Tabela 2

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 28 ws~CO i° 0 F-fF hnVyi h°^° H 417,00 418,00 3,01 22 (continuação)

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 29 rrbo r I 0 Fvp H0^° H IJ 479,00 480,00 3,66 30 p i °0 γ HNf^lTj Η0^° H 431,00 432,00 3,33 31 -rbo , i 0 γ HNfTll ho^° Η 1 445,00 446,00 3,57 32 Hs-iO 1°0 F'fF hnVVi η°λ° H ! i 509,00 510,00 3,67 23 (continuação)

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 33 rHO I ° F>fF HN^TlS ? H°^° H UL 548,00 549,00 4,27 34 rrto , i°0 γ ηνΎΤΊ n ηο^° »ΛΝλΛτ°ί H υ* 469,00 470,00 3,38 35 t-rto , I ° γ mVjl H0^° H l JL / 523,00 524,00 3,61 36 h Mj ] jjj Ys t 1.1 HO^O HOC X X ^ o H J , 539,00 540,00 3,38 (continuação)

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 37 H Μ Π Q fJ> HO ° H 473,00 474,00 4,25 38 HS~<O Y 0 F-XF ϊ ho^0 H u 497,00 498,00 3,73 39 í-rto , 1° ° Ύ HnVVS > ««A '™νλΛΛ H U 509,00 510,00 3,77 40 H~0 i° ° Ύf hnV]] h<A° H 364,00 365,00 2, 75 25 (continuação)

Exemplos Quimica PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 41 A-’**, rríO *γ0© h«/yV) 417,13 418,13 2,95 42 ms~(O Yo HNlfo Η°Λ° H 391,07 392,07 2,58 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min *Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 30 a 90% durante 7 min

Exemplo 45: 4-[5-(lH-Benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-7-(2-hidroxi-3-piperidin-l-il-propil)-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

26 São adicionadas 508 mg de 5-(lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-f urano-2-carbaldeido 2,08 mmoles) a uma mistura de 443 mg de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (2,08 mmoles) e 173 mg de 3-aminopirazole (2,08 mmoles) em 10 mL de etanol. A mistura é submetida a refluxo durante 1 hora e arrefecida até à temperatura ambiente. A solução é evaporada e o bruto é purificado em sílica gel, utilizando DCM/MeOH (95/5) como eluente. São isoladas 590 mg do sólido amarelo pálido 44 (rendimento = 56%). (EIMS ([M+H]+) : 505; Tempo de Ret. : 3,79 min). São dissolvidas 300 mg do sólido 44 (0,59 mmole) em 4 mL de DCM e são adicionados 0,184 mL de benzilcloroformato (1,3 mmole) seguidos de 0,385 mL de DIEA (2,36 mole) e 20 mg de DMAP (0,16 mmole) . A mistura de reacção é agitada, de um dia para outro, à temperatura ambiente, depois, é vertida em 80 mL de solução de KH2SO4 a 10% (p/v) e extraída duas vezes com 40 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgSC>4 e evaporadas. O resíduo é tratado directamente com 10 mL de uma solução de TFA/DCM (50/50) durante 1 hora à temperatura ambiente. A solução é concentrada sob vácuo. Metade do resíduo resultante dissolvida em 2 mL de etanol e utilizada directamente no passo final. A solução é tratada sob condições de micro-ondas com um excesso de excesso preparado recentemente de 4-(2,3-epoxipropil)piperidina (preparado por agitação de 274 mg de epibromidrina (2 mmoles) e 0,198 mL de piperidina (2 mmoles) em 10 mL de metanol, de um dia para outro, à temperatura ambiente). A mistura é submetida a micro-ondas durante 15 minutos a 150 °C. A solução é evaporada e o resíduo resultante purificado, utilizando HPLC preparativa. São isoladas 29 mg do composto 45 esperado (rendimento = 4%). ([M+H]+) : 546) . Tempo de Ret.: 2,67 min. 27

Exemplo 50: 4-[3-(4-Cloro-fenoxi)-fenil]-7-(2-hidroxi-3-morfolin-4-il-propil)-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético (não é parte da invenção)

0 composto 50 é preparado, utilizando o mesmo processo que no exemplo 45 utilizando 3-(4-clorofenoxi)-benzaldeído como aldeído. São adicionadas 962 mg de 3-(4-clorofenoxi)benzaldeído (5 mmoles) a uma mistura de 1,07 g de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (5 mmoles) e 415 mg de 3-aminopirazole (5 mmoles) em 10 mL de etanol. A mistura é submetida a refluxo durante 1 hora e arrefecida até à temperatura ambiente. A solução é evaporada e o bruto é purificado em sílica gel, utilizando DCM/MeOH (95/5) como eluente. São isoladas 1,33 g de sólido amarelo pálido 46 (rendimento = 54%). (EIMS ([M+H]+): 493; 28

Tempo de Ret.: 3,28 min) (gradiente de acetonitrilo de 30 a 90% durante 7 min). São dissolvidas 1,21 g do sólido (2,46 mmoles) em 20 mL de DCM e são adicionados 0,184 mL de benzilcloroformato (4,92 mmoles) seguidos por 1,6 mL de DIEA (9,84 moles) e 20 mg de DMAP (0,16 mmole) . A mistura de reacção é agitada, de um dia para outro, à temperatura ambiente depois vertida em 80 mL de solução de KH2S04 a 10% (p/v) e extraída duas vezes com 40 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgS04 e evaporadas. 0 bruto é purificado em sílica gel, utilizando uma solução de DCM/MeOH 98/2 como eluente. São isoladas 1,6 g de composto 47 pretendido (rendimento quantitativo) (EIMS ([M+H]+): 627; Tempo de Ret.: 4,52 min) (gradiente de acetonitrilo de 30 a 90% durante 7 min). O produto 47 é tratado com 2 0 mL de uma solução de TFA/DCM (50/50) durante 1 hora, à temperatura ambiente. A solução é concentrada sob vácuo. O produto resultante purificado em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 90/10 como eluente. São isoladas 0,91 g do composto 48 esperado (rendimento = 64%) (EIMS ([M+H]+): 527; Tempo de Ret.: 2,66 min) (gradiente de acetonitrilo de 30 a 90% durante 7 min). É submetida a refluxo uma solução de 53 mg de 48 (0,1 mmole) e 21 mg de epoxipropil)morfolino (0,15 mmole) em 1 mL de etanol durante 2 horas. Após arrefecimento a mistura é vertida em 80 mL de água e extraída duas vezes com 50 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com 50 mL de HC1 0,5 N, com a solução salina saturada, secas sobre MgS04 e evaporadas. O resíduo 49 é hidrogenado directamente sob atmosfera de hidrogénio utilizando 0,01 mmole de paládio sobre carbono. A reacção é mantida sob agitação, de um dia para outro, e a 29 mistura de reacção é filtrada sobre celite. 0 filtrado é evaporado e o bruto é purificado directamente utilizando LC/MS preparativa. São isoladas 45 mg do composto 50 pretendido (rendimento = 85%). ([M+H]+): 536). Tempo de Ret.: 3,77 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Exemplo 52: 4-[5-(lH-Benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-9-(2-hidroxi-3-morfolin-4-il-propil)-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético (não é parte da invenção)

São adicionadas 21 mg de 4-(2,3-epoxipropil)morfolino (0,15 mmole) a uma solução de 50 mg do composto 44 (0,1 mmole) em 1 mL de EtOH e 1 mL de DMF. A solução é aquecida a 150 °C num micro-ondas durante 20 minutos. A solução é evaporada e o intermediário 51 é purificado por LC/MS preparativa. O composto 51 é tratado com 2 mL de uma solução de TFA/DCM (50/50) durante 1 hora à temperatura ambiente. O produto final é purificado, utilizando LC/MS preparativa. São isoladas 19 mg do composto 52 30 (rendimento = 29%). ([M+H]+): 548). Tempo de Ret.: 2,58 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Exemplo 53: 4-[3-(4-Cloro-fenoxi)-fenil]-7-(3,5-dimetil-isoxazole-4-carbonil)-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-l, 2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético (não é parte da invenção)

São adicionados sucessivamente 12 mg de

3,5-dimetilisoxazole-4-carbonilo (0,75 mmole), 16 uL de DIEA (0,1 mmole) e 5 mg de DMAP (0,04 mmole) a uma solução de 26,3 mg (0,05 mmole) de composto 48 em 0,5 mL de DCM. A reacção é agitada, de um dia para outro, e a mistura de reacção é vertida em 20 mL de água e extraída duas vezes com 10 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgS04 e evaporadas. O resíduo resultante dissolvido numa mistura de 1 mL de metanol e 0,1 mL de ácido acético. O composto é hidrogenado, utilizando Pd/C sob atmosfera de hidrogénio. Após 20 horas de hidrogenação a mistura é filtrada sobre celite e o filtrado é concentrado sob vácuo. O bruto é purificado, utilizando LC/MS preparativa resultando em 2,3 mg de produto 53. (Rendimento = 7,4%). ( [ M+H ] +) : 516). Tempo de Ret.: 4, 45 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min) . 31

Exemplo 57: 7-Acetil-4-[3-(4-cloro-fenoxi)-fenil]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoroacético (não é parte da invenção)

São adicionados sucessivamente 6 pL de anidrido acético (0,06 mmole) e 16 pL de DIEA (0,1 mmole) a uma solução de 25 mg (0, 048 mmole) de composto 48 em 1 mL de DCM. A solução é mantida, de um dia para outro, sob agitação e vertida em 20 mL de água. A mistura é extraída com duas vezes 15 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com uma solução de hidrogenossulfato de potássio a 10%, água, secas sobre MgS04 e evaporadas. 0 bruto é hidrogenado directamente sob atmosfera de hidrogénio utilizando Pd/C como catalisador. A reacção é mantida, de um dia para outro, e a mistura de reacção é filtrada sobre celite® (terra de diatomácias). O filtrado é concentrado sob vácuo e o resíduo resultante purificado, utilizando LC/MS preparativa. São isoladas 1,1 mg do produto 57 pretendido (rendimento = 4%). ([M+H]+): 435). Tempo de Ret.: 3,71 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 32

Exemplo 58: 9-Acetil-4-[3-(4-cloro-fenoxi)-fenil]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoroacético

São adicionados sucessivamente 11 ILI de anidrido acético (0,11 mmole) e 33 pL de DIEA (0,2 mmole) a uma solução de 25 mg (0, 048 mmole) de composto 46 em 0,5 mL de DCM. A solução é agitada à temperatura ambiente, durante 2 horas e vertida em 20 mL de água. A mistura é extraída com duas vezes 15 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com uma solução de hidrogenossulfato de potássio a 10%, água, secas sobre MgSCd e evaporadas. O bruto é tratado directamente com 1 mL de solução de TFA/DCM (50/50), à temperatura ambiente, durante 1 hora. A mistura é concentrada sob vácuo e o resíduo resultante purificado, utilizando LC/MS preparativa. São isoladas 23 mg do produto 58 pretendido (rendimento = 52%) . ( [M+H]+) : 435) . Tempo de Ret. : 4,33 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 33

Exemplo 59: 4-[5-(lH-Benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-9-metil-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro—acético

Não é parte da invenção São adicionadas 31 mg de carbonato de potássio (0,225 mmole) a uma solução de 30 mg (0,075 mmole) de composto 3 e 14 pL de iodeto de metilo (0,225 mmole) em 1 mL de DMF. A solução é agitada durante 20 horas à temperatura ambiente e vertida em 20 mL de água. A mistura é extraída com duas vezes 15 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgSC>4 e evaporadas. O bruto é purificado, utilizando LC/MS preparativa. São isoladas 2,2 mg do produto 59 pretendido (rendimento = 6%). ([M+H]+): 418). Tempo de Ret. : 2,54 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 34

Exemplo 60: 3-(5-Oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-N-(4-trifluorometoxi-benzil)-benzamida; composto com ácido trifluoro-acético

HN

H

Preparação do aldeído: são adicionados sucessivamente 540 mg de 1-hidroxibenzotriazole (HOBt) (4 mmoles) e 0,63 mg de di-isopropilcarbodi-imida (DIC) (4 mmoles) a uma solução de 300 mg dos 3-carboxibenzaldeído (2 mmoles) e 382 mg de 4-(trif luorometoxi) benzilamina (2 mmoles) em 5 mL de DCM. A mistura de reacção é agitada, de um dia para outro, à temperatura ambiente e depois é vertida em 20 mL da solução de KH2SO4 a 10%. A mistura é extraída com duas vezes 15 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são lavadas com 20 mL de água, 20 mL da solução salina saturada, secas sobre MgSC>4 e evaporadas dando 670 mg de 3-formil-n-(4-trifluorometoxi-benzil)-benzamida (rendimento = 85%) . ([M+H]+) : 324) . Tempo de

Ret. : 5,24 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min) . O composto 60 é preparado como descrito no exemplo 2 partindo de 21,3 mg de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (0,1 mmole), 8,3 mg aminopirazole (0,1 mmole) e 32,3 mg de aldeído (0,1 mmole) numa mistura de 0,5 mL de etanol e 0,5 mL de DMF resultando em 22,5 mg de produto 60 após purificação por LC/MS preparativa, (rendimento = 38%). ([M+H]+): 484). Tempo de Ret.: 2,51 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 35

Exemplo 61: 3-(5-Oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-l,2,7, 9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-N-(3-trifluoromotoxi-benzil)-benzamida; composto com ácido trifluoro-acético

0 composto 61 foi preparado, utilizando o mesmo processo que o descrito para 60 partindo de 3-(trifluorometoxi)benzilamina. Foram isoladas 25,5 mg do composto pretendido após LC/MS preparativa (rendimento = 43%). ([M+H]+): 484). Tempo de Ret.: 2,47 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 36

Exemplo 62: 3-(5-Oxo-4,5,8,7,8,9-hexa-hidro-2H-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-N-(4-trifluorometoxi-fenil)-banzamida; composto com ácido trifluoro-acético

Preparação do aldeído: são adicionadas 830 mg de diciclo-hexicarbodi-imida) (DCC) (4 mmoles) a uma solução de 300 mg de 4-carboxibenzaldeído (2 mmoles) e 382 mg de 4-(trifluorometoxi)anilina (2 mmoles) em 5 mL de acetato de etilo. A mistura de reacção é aquecida a 60 °C, de um dia para outro e, depois, é vertida em 60 mL de solução de HC1 1 N. A mistura é extraída com duas vezes 30 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são lavadas com 50 mL de água; 50 mL de solução saturada de bicarbonato de sódio e solução salina saturada, secas sobre MgS04 e evaporadas. O bruto é purificado em sílica gel dando 233 mg de 4-formil-n-(3-trifluorometoxi-fenil)-benzamida (rendimento = 38%). ([M+H]+) : 310). Tempo de Ret. : 5,60 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min) .

Foram obtidas 22,3 mg do produto 62 a partir de 30,9 mg de aldeído (0,1 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 2, após LC/MS preparativa (rendimento = 43%) . ([M+H]+) : 470). Tempo de Ret.: 2,61 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 37 foram obtidos

Os exemplos seguintes utilizando o mesmo processo:

Tabela 4

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 63 o f^Y°CFa rj0 η γ HN J 1 L H 469,43 470 2,57 64 |l Λ h 3 í ff F ^JLJL fJ> HN'íX'NX^NH hcXo H 469,43 470 2,58 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 38

Exemplo 65: 4-Cloro-N-[3-(5-oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-fenil]-benzamida; composto com ácido trifluoroacético

Preparação do aldeído: São adicionadas 700 pL de DIEA (4 mmoles) a uma solução de 242 mg de 3-aminobenzaldeído (2 mmoles) e 250 pL de cloreto 4-clorobenzoílo (2 inmoles) em 5 mL de DMF. A reacção é aquecida num micro-ondas a 110 °C, durante 10 minutos. 0 precipitado formado é filtrado e lavado com metanol. São isoladas 670 mg de 4-cloro-n-(3-formil-fenil)-benzamida como um sólido branco (rendimento = 85%). ([M+H]+): 260

Foram obtidas 25 mg do produto 65 a partir de 26 mg de aldeído (0,1 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 2, após LC/MS preparativa (rendimento = 53%). ([M+H]+): 420).

Tempo de Ret. : 2,14 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 39

Exemplo 66: 4-Cloro-N-[5-(5-oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-tiazol-2-il]-benzamida; composto com ácido trifluoro-acético

0 composto 66 foi preparado, utilizando o mesmo processo que o descrito para 65. Foram preparadas 266 mg de 4-cloro-N-(5-formiltiazol-2-il)-benzamida a partir de 256 mg de 2-amino-tiazole-5-carbaldeído (2 mmoles) e 250 pL de cloreto de 4-clorobenzoílo (2 mmoles) (rendimento = 26%). ([M+H]+): 282)

Tempo de Ret. : 6,10 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). Foram isolados 15,2 mg do composto 66 pretendido partindo de 27 mg de aldeído (0,1 mmole) , após purificação por, LC/MS preparativa (rendimento = 28%). ([M+H]+): 427). Tempo de

Ret.: 2,53 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 40

Exemplo 67: 4-Cloro-N-[5-(5-oxo-4,5,6,7, 8,9-hexa-hidro-2H-1,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-tiazol-2-il]-benzamida; composto com ácido trifluoro-acético

Preparação do aldeído: é aquecida uma mistura de 360 mg de 3-aminobenzaldeído (0,3 mmoles) e 460 mg de 4-cloro-fenilisocianato (0,3 mmoles) em 3 mL de DMF num micro-ondas a 110 °C, durante 10 minutos. O precipitado formado é filtrado dando a 1-(4-Cloro-fenil)-3-(3-formil-fenil)-ureia pretendida. ( [M+H] +) : 351. Tempo de Ret.: 5,30 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 23 mg do produto 67 a partir de 27 mg de aldeído (0,1 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 2, após LC/MS preparativa (rendimento = 42%) . ([M+H]+) : 435) . Tempo de Ret.: 2,26 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 41

Exemplo 68: 4-(5-Oxo-4,5,6,7, 8,9-hexa-hidro-2H-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-N-(4-trifluorometoxi-fenil)-benzenossulfonamida; composto com ácido trifluoro-acético

Preparação do aldeído: são adicionados 2 mL de piridina (25 mmoles) a uma mistura de 610 mg de 4-clorossulfonilbenzaldeído (3 mmoles) e 460 mg de 4-trifluorometoxianilina (3 mmoles) em 2 mL de dicloroetano. A mistura de reacção é agitada à temperatura ambiente, durante 5 horas e, depois, é vertida em 100 mL de solução de HC1 a 10%. A mistura é extraída com duas vezes 3 0 mL de DCM. As fases orgânicas combinadas são lavadas com 3 0 mL de água; 30 mL de solução saturada de bicarbonato de sódio e solução salina saturada, a solução é seca sobre MgS04 e evaporada. O bruto é purificado em sílica gel, utilizando DCM/AcOEt 90/10 como eluente. São isoladas 0,48g de 4-formil-n-(4-trifluorometoxi-fenil ) -benzenossulfonamida como um sólido branco (rendimento = 47%). ([M+H]+): 346. Tempo de Ret. : 5,53 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 19 mg do produto 68 a partir de 34,5 mg de aldeído (0,1 mmole) e utilizando o mesmo processo que no 42 exemplo 2, após LC/MS preparativa (rendimento = 31%). ([M+H]+): 506). Tempo de Ret. : 2,56 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Exemplo 69: N-(4-Cloro-fenil)-4-(5-oxo-4,5,8,7,8, 9-hexa-hidro-2H-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-4-il)-benzenossulfonamida; composto com ácido trifluoro-acético

Foi preparado 69 utilizando o mesmo processo que o descrito para 68. Foram preparadas 450 mg de N-(4-Cloro-fenil)-4-formilbenzenossulfonamida a partir de 256 mg de 4-clorossulfonilbenzaldeido (3 mmoles) e 250 uL de cloreto de 4-clorobenzoílo (3 mmoles) (rendimento = 51%). ([M+H]+): 296). Tempo de Ret.: 5,20 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). Foram isolados 18,8 mg de composto 71 pretendido partindo de 29,6 mg de aldeído (0,1 mmole) , após purificação por LC/MS preparativa (rendimento = 33%) . ([M+H]+) : 456) . Tempo de Ret.: 2,28 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 43

Exemplo 70: 4-[5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético; composto com ácido trifluoro-acético

Preparação do aldeído: são adicionadas 200 mg de suspensão de hidreto de sódio (suspensão a 60% em óleo mineral) (5 mmoles) a uma solução de 0,82 g de 2-mercapto-5-metilbenzimidazole (5 mmoles) em 10 mL de THF seco. A mistura de reacção é submetida a refluxo durante V2 hora. A mistura é arrefecida até à temperatura ambiente e são adicionadas, gota a gota, 0,71 g de 5-nitrof uraldeído (5 mmoles) em 5 mL de THF. A mistura de reacção é agitada durante hora e, depois, é vertida em 200 mL de água. A mistura é extraída com duas vezes 75 mL de EtOAc. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgSCq e evaporadas. 0 bruto é purificado em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 97/3 como eluente. São isoladas 1,07 g de 5-(6-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2- carbaldeído como um sólido vítreo negro (rendimento = 83%) . ([M+H]+): 259. Tempo de Ret. : 3,64 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 48,5 mg do produto 70 a partir de 51,7 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no 44 exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 46%). ([M+H]+): 418). Tempo de Ret. : 2,48 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 5

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 71 do Φ Ύ ο T HO^O ΗΝ· X 1 NH H 532,50 533 2,48 72 HO^O HN T I 1 H ' 559,57 560 3,39 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 45

Exemplo 73: 4-[5-(5-Cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8, 9-hexa-hidro-l,2,7,9-tetraazabenz[f]inden-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético; composto com ácido trifluoro-acético

Foram obtidas 304 mg de 5-(5-Cloro-benzotiazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído como um sólido amarelo utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 72 a partir de 402 mg de 5-cloro-2-mercaptobenzotiazole (2 mmoles) e 282 mg de 5-nitro-2-f uraldeido (2 mmoles) e 80 mg de NaH (rendimento = 52%)). ([M+H]+): 296). Tempo de Ret.: 3,47 min (gradiente de acetonitrilo de 30 a 90% durante 7 min).

Foram obtidas 2,6 mg de produto 73 a partir de 50 mg de aldeido (0,17 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 3%). ([M+H]+): 455). Tempo de Ret.: 3,97 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 46

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 6

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 74 HO^O HN> J I Jh H 569,97 570 3,81 75 0> 0 N'J^'a Fsp HO^O HN 7 J 1 H ' 597,04 598 4, 86 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 47

Exemplo 76: 4-[5-(5-Difluorometoxi-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b] quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

Foram obtidas 417 mg de 5-(5-difluorometoxi-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 1,08 g de 5-difluorometoxi-2-mercaptobenzimidazole (5 mmoles) e 0,71 g de 5-nitro-2-furaldeído (5 mmoles) e 200 mg de NaH (rendimento = 27%). ([M+H]+) : 311). Tempo de Ret. : 4,0 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 10 mg do produto 76 a partir de 63 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 9%) . ( [M+H]+) : 470) . Tempo de Ret.: 3,15 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 48

Exemplo 77: 4-[5-(6-Metoxi-lH-benzimidazol-2-iloxi)-furan- 2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

Foram obtidas 15 mg de 5-(6-Metoxi-lH-benzimidazol-2-iloxi)-furano-2-carbaldeido, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 0,82 g de 5-metoxi-2-benzimidazolinona (5 mmoles) e 0,71 g de 5-nitro-2-furaldeído (5 mmoles) e 200 mg de NaH (rendimento = 1,2%). ([M+H]+): 259).

Tempo de Ret. : 2,53 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 2,5 mg do produto 77 a partir de 15 mg de aldeido (0,06 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 8%). ([M+H]+): 418). Tempo de Ret.: 1,03 min (gradiente 10 para 95% acetonitrilo durante 7 min). 49

Exemplo 78: 4-[5-(4-metil-lH-imidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

Foram obtidas 1,84 g de 5-(4-metil-lH-imidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 1 g de 4-metil-l H-2-mercaptoimidazole (8,75 mmoles) e 1,23 g de 5-nitro-2-furaldeído (8,75 mmoles) e 350 mg de NaH (rendimento = 100%). ([M+H]+): 209). Tempo de Ret. : 0,53 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 56 mg do produto 78, a partir de 41,7 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 58%). ([M+H]+): 368). Tempo de Ret.: 2,15 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min). 50

Exemplo 79: 4-15-(5-Metoxi-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

HN

Foram obtidas 1,8 g de 5-(6-metoxi-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 1,8 g de 5-metoxi-2-mercaptobenzimidazole (10 mmoles) e 1,41 g de 5-nitro-2-furaldeído (10 mmoles) e 400 mg de NaH (rendimento = 66%) . ([M+H]+): 274). Tempo de Ret.: 4,13 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 45,1 mg do produto 79, a partir de 54,9 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 41%). ([M+H]+): 434). Tempo de Ret.: 2,93 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo: 51

Tabela 7

Exemplos Química o mesmo processo PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 80 s-íT^i Γ\ F Vo 0 ° X HO^O HN« I I 1h H 434,00 435 2,34 81 ο ΝΛα? FtF HO^O HN Ύ I 1 H ' 461,00 462 3,26 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 52

Exemplo 82: 4-[5-(l-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)- furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético \

HN

H

Foram obtidas 1,52 g de 5-(l-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 0,82 g de 2-mercapto-5-metilbenzimidazole (5 mmoles) e 0,71 g de 5-nitro-2-furaldeído (5 mmoles) e 200 mg de NaH (rendimento = 85%). ([M+H]+): 259). Tempo de Ret. : 1,64 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 53,3 mg do produto 82, a partir de 51,7 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 50%) . ([M+H]+) : 418). Tempo de Ret.: 2,74 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo: 53

Tabela 8

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 83 f=\ F T° ° T ΗΟ'Χ) MN Jí L H 418,12 419 2,19 84 rí ^ T o I ho"o hn"! Jj 1 Ή ' 445,16 446 3,63 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 54

Exemplo 85: 4-[5-(5,6-Dicloro-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil) -furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

HN

a

Foram obtidas 1,24 g de 5-(5,6-Dicloro-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 2,2 g de 5,6-dicloro-2-mercaptobenzimidazole (10 mmoles) e 1,41 g de 5-nitro-2-furaldeido (10 mmoles) e 400 mg de NaH (rendimento = 40%). ([M+H]+): 313). Tempo de Ret.: 4,64 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 26 mg do produto 85, a partir de 62,6 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 19%) . ([M+H]+) : 472). Tempo de Ret.: 4,13 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo: 55

Tabela 9

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 86 HO^O ΗΝ· λ X NH H 472,03 473 3,46 87 rS-òy* F^F HO^O hn! I 1 H ' 499,06 500 4, 49 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 56

Exemplo 88: 4-[5-(5-Cloro-benzoxazol-2-ilsulfanil)-furan-2- il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

Foram obtidas 0,58 g de 5-(5-Cloro-benzoxazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 utilizando 1,03 g de 5-cloro-2-mercaptobenzoxazole (5,5 mmoles) e 0,78 g de 5-nitro-2-furaldeido (5,5 mmoles) e 223 mg de NaH (rendimento = 37%). ([M+H]+): 280). Tempo de Ret.: 4,67 min (gradiente de acetonitrilo de 0 a 50% durante 7 min).

Foram obtidas 10,2 mg do produto 88, a partir de 55,9 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após LC/MS preparativa (rendimento = 9%) . ( [M+H]+) : 439) . Tempo de Ret.: 4,25 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo: 57

Tabela 10

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 89 Ço o N'^-a F^F HO^O HN. J I L Ν"ΊΊ^ν·^ΝΜ H 455,03 456 3,81 90 /=í*~CCl fff 4yO ® Ηθ"^0 HN 1 T| 1 H 1 466,09 467 4,62 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 58

Exemplo 91: 7,7-Dimetil-4-[5-(4-metil-lH-imidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b] quinolin-5-ona; composto com ácido trifluoro-acético

HN

0 composto 91 foi preparado como o 78 partindo de 28 mg de dimedona (0,2 mmole). São isoladas 49,4 do composto pretendido após LC/MS preparativa (rendimento = 49%). ([M+H]+): 396). Tempo de Ret. : 2,53 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Exemplo 92: 4-{5-[5-(4-Cloro-fenil)-1-metil)-lH-imidazol-2- ilsulfanil]-furan-2-il}-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b] quinolin-5-ona

Foram obtidas 1,5 g de 5-[5-(4-cloro-fenil)-1-metil-lH-imidazol-2-ilsulfanil]-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 partindo de 1 g de l-metil-5(4-clorofenil)imidazol-2-tiol (4,45 mmoles), 0,63 g de 59 5-nitrofuraldeído (4,45 mmoles) e 178 mg de hidreto de sódio (4,45 mmoles). (Rendimento = 100%). ([M+H]+): 319). Tempo de

Ret. 3,91 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 56 mg do produto 92, a partir de 64,2 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após cromatografia em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 97/3 como eluente (rendimento = 58%). ([M+H]+): 478). Tempo de Ret.: 3,48 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 11

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 93 J=\ Nr _ F _ T ° Y HN T | 1 H ' 505,13 506 3,74 60 (continuação)

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 94 HO^S) HN· J 1 L H 478,10 479 2,87 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min

Exemplo 95: 4-[5-(5-Trifluorometil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b] quinolin-5-ona

Foram obtidas 1,4 g de 5-(5-Trifluorometil-1 H-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 partindo de 1 g de 2-mercapto-5-trifluorometilbenzimidazole (4,6 mmoles), 0,65 g de 5-nitrofuraldeído (4,6 mmoles) e 180 mg de hidreto de sódio (4,6 mmoles). (Rendimento = 99%). ([M+H]+): 313). Tempo de Ret. 4,78 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 61

Foram obtidas 43 mg do produto 95, a partir de 63 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após cromatografia em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 97/3 como eluente (rendimento = 46%). ([M+H]+) : 472). Tempo de Ret. : 3,84 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 12

62 (continuação)

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 97 rTÍQ. CF3 Yi fj> hnvAnXJ*h H0X0 H 472,09 473 3,25 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min

Exemplo 98: 4-[5-(4,5-Dimetil-lH-imidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5-ona

Foram obtidas 2 g de 5-(4,5-Dimetil-lH-imidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeido, utilizando o mesmo processo que o descrito no exemplo 70 partindo de 1 g de 4,5-dimetil-2-mercaptoimidazole (7,96 mmoles), 1,12 g de 5-nitrofuraldeído (7,96 mmoles) e 320 mg de hidreto de sódio (7,96 mmoles). (Rendimento = 100%). ([M+H]+) : 223). Tempo de Ret. 2,34 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 63

Foram obtidas 36,4 mg do produto 98, a partir de 44,5 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após cromatografia em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 97/3 como eluente (rendimento = 37%). ([M+H]+) : 382). Tempo de Ret. : 2,31 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 13

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 99 H hs~íX Y°o hCuÒl ríF N HO^O 409,51 410 2,69 100 H Η "X Vo 0 ηΌΓ jí 1 X HO^O H 382,45 383 1, 77 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 64

Exemplo 101:4-[5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-tiofen-2-il]-2,4,6,7,8,9-hexa-hidro-pirazolo[3,4-b]quinolin-5- ona

Preparação do aldeído: é aquecida uma mistura de 0,82 g 2-mercapto-5-metilbenzimidazol (5 mmoles), 0,6 mL de 5-bromo-2-tiofenocarboxaldeído (5 mmoles) e 1,4 g de carbonato de potássio em 10 mL de DMF a 110 °C, durante 2 horas. A mistura é arrefecida à temperatura ambiente, depois, é vertida em 200 mL de água e extraída com duas vezes 50 mL de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas são lavadas com solução salina saturada, secas sobre MgS04 e evaporadas. O bruto é purificado em sílica gel, utilizando DCM/MeOH como eluente, dando 0,65 g de 5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-tiofeno-2-carbaldeido. (Rendimento = 47%). ([M+H]+): 275). Tempo de Ret. 3,42 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Foram obtidas 78,8 mg do produto 101 a partir de 54,9 mg de aldeído (0,2 mmole) e utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, após cromatografia em sílica gel, utilizando DCM/MeOH 97/3 como eluente (rendimento = 91%). ([M+H]+): 434). Tempo de

Ret.: 3,07 min (gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min) . 65

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo:

Tabela 14

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 102 rTÒX Y° _ F_ ηνΓ3Γ X 1 F'XF H ' HO^O 461,61 462 3,44 103 cHex fvXf hn^nAJnh hoX0 H 434,10 435 2,5 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 2 a 80% durante 7 min 66

Exemplo 104: Éster etílico do ácido 9-[5-(lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-8-OXO-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-pirrolo[3,4-b][1,7]naftiridino-3-carboxílico; composto com ácido trifluoro-acético

O

O

0 composto 104 foi obtido, utilizando o mesmo processo que no exemplo 2, utilizando 42 mg de N-Boc-3, 4-dicetopiperidina (0,2 mmole), 38 mg de cloridrato de 3-amino-etoxicarbonilpirrol (0,2 mmole), 51 mg de 5-(lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (0,2 mmole) e 33 pL de DIEA (0,2 mmole) . Após LC/MS preparativa foram isoladas 8,5 mg do produto 104 pretendido (rendimento = 7%). ([M+H]+): 476). Tempo de Ret.: 2,98 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min). 67

Exemplo 105: Éster etílico do ácido 9-[5-(lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-8-oxo-4,5,8,7,8,9-hexa-hidro-2H-pirrolo[3,4-b]quinolino-3-carboxílico; composto com ácido trifluoro-acético

h

O

O

0 composto 105 foi obtido, utilizando o mesmo processo que no exemplo 3, utilizando 22,4 mg de 1,3-ciclo-hexanodiona (0,2 mmole), 38 mg de cloridrato 3-amino-etoxicarbonilpirrol (0,2 mmole), 51 mg de 5— (1 H-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (0,2 mmole) e 33 pL de DIEA (0,2 mmole). Após LC/MS preparativa, foram isoladas 7,7 mg do produto 105 pretendido (rendimento = 7%). ([M+H]+): 475). Tempo de Ret.: 3,94 min (gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min).

Os exemplos seguintes foram obtidos utilizando o mesmo processo: 68

Tabela 15

Exemplos Química PM do composto parental EIMS ([M+H]+ RT (min) 106 Io HO^O o=n H 502,59 503 4,3 107 ^yO hnOlX / FiF HO^Q o-\ 488,57 489 4,69 Condições de LC/MS: gradiente de acetonitrilo de 5 a 85% durante 7 min

Exemplo 108: Éster etílico do ácido 9-[5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-8-oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-pirrolo[3,4-b]quinolina-3-carboxílico

69

Passo 1: 5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2- carbaldeído são vertidas 1,16 g de 2-mercapto-5- metilbenzimidazole em 14 mL de tetra-hidrofurano (THF) num frasco de três tubuladoras de 100 mL e depois são adicionadas 309 mg de hidreto de sódio. A mistura é agitada à temperatura de refluxo, durante 30 minutos, seguido pela adição de 1 g de 5-nitrofuraldeído em 7 mL de THF. É permitido ao meio de reacção arrefecer até à temperatura ambiente (ca. 20 °C) e, depois, é vertido numa mistura de 200 mL de água e 100 mL de acetato de etilo (EtOAc). A camada orgânica é isolada e a camada aquosa é extraida duas vezes com EtOAc (2 x 100 mL). As camadas orgânicas são reunidas, secas sob sulfato de magnésio e evaporadas sob pressão reduzida. São recolhidas 1,8 g de 5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (RT 2,98 min; [M+H]+: 259; UV 80%).

Passo 2: Éster etilico do ácido 9-[5-(5-metil-lH- benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-8-oxo-4, 5,6, 7,8, 9-hexa-hidro-2H-pirrolo[3,4-b]quinolino-3-carboxílico (composto do titulo) São vertidos 774 pmol de cloridrato de 3-amino-2- etoxicarbonilpirrole, 774 pmol de 5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (obtido a partir do passo 1), 774 pmol de 1,3 ciclo-hexanodiona e 400 yL de N,N-di-isopropiletilamina em 3 mL de etanol num frasco adequado para irradiação com micro-ondas (Personal synthesizer). O frasco é fechado depois a irradiação é realizada a 100 °C, durante 700 segundos. Após arrefecimento até 20 °C, a mistura de reacção é evaporada sob pressão reduzida. O bruto restante purificado em sílica gel (Automate Intelliflash, Analogix SÍO2 75 g; Eluente 70

EtOAc/ciclo-hexano; de 10/90 a 80/20. (v/v), velocidade: 25mUmin). As fracções contendo o composto esperado são reunidas e evaporadas sob pressão reduzida. O óleo restante solubilizado em 0,5 mL de diclorometano (DCM) depois é cristalizado por adição de pequenas quantidades de di-isopropilóxido. São recolhidas 60 mg de sólido. Espectro de RMN ΤΗ a 400 MHz registado num espectrómetro BRUKER AVANCE DRX-400. Solvente:

DMSO-d6, (sinal de DMSO mantido a 2,50 ppm); δ (ppm): 1,28 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ; 1,89 (m, 2H) ; 2,25 (m, 2H) ; 2,38 (s, 3H) ; 2,57 (m, 1H) ; 2,79 (m, 1 H) ; 4,26 (q, J = 7,0 Hz, 2H) ; 5,14 (s, 1 H) ; 5,96 (d, J = 3,0 Hz, 1 H) ; 6,80 (d largo, J = 3,0 Hz, 2H) ; 6,98 (m largo, 1 H); 7,15 - 7,45 (m largo, 2H); 8,42 (s, 1 H); 11,40 (m largo, 1 H); 12,3 (m largo, 1 H). MS: ES, m/z = 489 = MH+.

Exemplo 109: Éster etílico do ácido 6,6-dimetil-9-[5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furan-2-il]-8-oxo-4,5,6,7,8,9-hexa-hidro-2H-pirrolo[3,4-b]quinolina-3-carboxílico

71 São vertidos 387 pmol de cloridrato de 3-amino-2- etoxicarbonilpirrole, 387 μιηοΐ de 5-(5-metil-lH-benzimidazol-2-ilsulfanil)-furano-2-carbaldeído (obtido a partir do exemplo 108, passo 1), 387 pmol de dimedona e 202 pL de N,N-di-isopropiletilamina em 1,5 mL de etanol num frasco adequado para irradiação com micro-ondas (Personal synthesizer). O frasco é fechado, depois a irradiação é realizada a 100 °C, durante 700 segundos. Após arrefecimento até 20 'C, a mistura de reacção é evaporada sob pressão reduzida. O bruto restante purificado em sílica gel (Automate Intelliflash, Analogix SÍO2 40 g; Eluente EtOAc/ciclo-hexano; de 30/70 a 75/25. (v/v), velocidade: 25mUmin, durante 70 minutos). As fracções contendo o composto esperado são reunidas e evaporadas sob pressão reduzida. 0 óleo restante solubilizado em 0,5 mL de diclorometano (DCM), depois é cristalizado por adição de pequenas quantidades de di-isopropilóxido. São recolhidas 62 mg do composto esperado, como um sólido.

Espectro de RMN ΤΗ a 300 MHz registado num espectrómetro BRUKER AVANCE DPX-300. Solvente: DMSO-d6, (sinal de DMSO mantido a 2,50 ppm); δ (ppm):

Os sinais seguintes são atribuídos a uma espécie (abundância 75% ao longo do espectro): 0,92 (s, 3H) ; 1,00 (s, 3H); 1,29 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,05 (d, J = 16,5 Hz, 1 H); 2,18 (d, J = 16,5 Hz, 1 H); 2,38 (s, 3H); 2,45 - 2,65 (m parcialmente ocultado, 2H) ; 4,25 (q, J = 7,0 Hz, 2H) ; 5,14 (s, 1H) ; 5,98 (d, J = 3,0 Hz, 1H) ; 6,77 (d, J = 3,0 Hz, 1 H) ; 6,82 (d largo, J = 3,0 Hz, 1H); 6,98 (dd, J = 2,0 e 8,5 Hz, 1 H) ; 7,24 (s largo, 1 H) ; 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 8,30 (s, 1 H) ; 11,40 (m largo, 1H) 72 MS: ES, m/z 517 MH+ .

Um produto de acordo com a invenção pode ser utilizado para a preparação de um produto medicinal que útil para tratar um estado patológico, em particular um cancro. A presente invenção refere-se também a composições terapêuticas contendo um composto de acordo com a invenção, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável dependendo do modo de administração seleccionado. A composição farmacêutica pode estar na forma sólida ou liquida ou na forma de lipossomas.

Entre as composições sólidas que podem ser referidas estão pós, cápsulas de gelatina e comprimidos. Entre as formas orais, podem estar também incluídas formas sólidas protegidas contra o meio acidico do estômago. Os suportes utilizados para as formas sólidas consistem em particular em suportes minerais tais como fosfatos ou carbonatos ou suportes orgânicos como lactose, celuloses, amido ou polímeros. As formas líquidas consistem em soluções, suspensões ou dispersões. Estas contêm, tais como suporte dispersivo, quer água quer um solvente orgânico (etanol, NMP ou semelhante) ou misturas de tensioactivos e solventes ou de agentes complexantes e solventes.

As formas líquidas irão ser, de um modo preferido, injectáveis e, como resultado, irão ter uma formulação que aceitável para essa utilização.

As vias aceitáveis de administração por injecção incluem as vias intravenosa, intraperitoneal, intramuscular e subcutâneas, sendo a via intravenosa preferida. 73 A dose administrada dos compostos da invenção irá ser adaptada pelo médico dependendo da via de administração ao doente e do estado do referido doente.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados isoladamente ou como uma mistura com outros agentes anticancerígenos. Entre as combinações possíveis que podem ser referidas estão: • agentes alquilantes e, especialmente, ciclofosfamida, melfalano, ifosfamida, clorambucilo, busulfano, tiotepa, prednimustina, carmustina, lomustina, semustina, esteptozotocina, decarbazina, temozolomida, procarbazina e hexametilmelamina; • derivados de platina, especialmente, tais como cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina; • agentes antibióticos, especialmente, tais como bleomicina, mitomicina ou dactinomicina; • agentes antimicrotúbulos, especialmente, tais como vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina ou taxóides (paclitaxel e docetaxel); • antraciclinas, especialmente, tais como doxorrubicina, daunorubicina, idarubicina, epirubicina, mitoxantrona ou losoxantrona; • topoisomerases do grupo I e II, tais como etopósido, tenipósido, amsacrina, irinotecano, topotecano e tomudex; 74 • fluoropirimidinas, tais como 5-fluorouracilo, UFT ou floxuridina; • análogos de citidina, tais como 5-azacitidina, citarabina, gemcitabina, β-mercaptomurina ou 6-tioguanina; • análogos de adenosina, tais como pentostatina, citarabina ou fosfato de fludarabina; • metotrexato e ácido folínico; • várias enzimas e compostos, tais como L-asparaginase, hidroxiureia, ácido trans-retinóico, suramina, dexrazoxano, amifostina, herceptina e hormonas estrogénio e androgénio; • agentes antivasculares, tais como derivados de combretastatina ou de colchicina e seus profármacos. É também possível combinar os compostos da presente invenção com um tratamento de radiação. Esses tratamentos podem ser administrados simultaneamente, separadamente ou em sequência. 0 tratamento será adaptado pelo médico ao doente a ser tratado.

Um produto da invenção pode ser útil para inibir a actividade in vitro da cinase Aurora A e/ou B. 75

Protocolos experimentais no que respeita aos testes bioquímicos

Aurorai e 2 (Respectivamente. Aurora B e A) 0 efeito inibidor de compostos no que respeita às cinases Aurorai e 2 é determinado com um ensaio de cintilação de radioactividade utilizando quelato de níquel. A actividade cinase de Aurora é medida pela fosforilação de substrato NuMA-histidina na presença de ATP radiomarcado ( [33P] ATP) utilizando placas Flash de 96 poços, em que o quelato de níquel está ligado à superfície da microplaca. A quantidade de 33P incorporado no substrato NuMA é proporcional à actividade de aurora.

Proteínas: A produção de proteína foi realizada no qrupo de produção de proteínas de Sanofi-Aventis. - Aurora-A: foi expressa em E. coli a proteína recombinante completa incluindo uma cauda de histidina no terminal N e foi purificada a 82%.

Aurora-B: o complexo recombinante Aurora-B/INCENP-C3 foi purificado a 50% utilizando a marcação de poli-histidina no terminal N. - NuMA, (uma proteína nuclear que se liga ao sistema mitótico): fragmento de 424 aminoácidos expressos em E. coli 76 (marcado na extremidade do terminal N com histidina para utilização como substrato de ambas as enzimas Aurora).

Protocolo:

As placas Flash utilizadas são placas de 96 poços de quelato de niquel (Perkin Elmer, modelo SMP107).

Os produtos a serem avaliados são incubados num volume de reacção de 100 pL por poço na presença de 10 nM de Aurora-B ou Aurora-A, substrato NuMA a 500nM no tampão seguinte: NaCl 50 mM, MgC12 5 mM, (Aurora-B) ou MgC12 de 10 mM (Aurora-A) e DTT 1 mM a 37 °C. São distribuídos 80 pL do tampão de incubação enzima/substrato em cada poço, seguidos por 10 pL de solução do composto a ser medido com várias concentrações. A reacção é iniciada pela adição de ATP 1 pM (concentração final) contendo 0,2 pCi de [33P] ATP (10 pL) . Após 30 minutos de incubação a reacção é terminada pela remoção da mistura de reacção e cada poço é lavado duas vezes com 300 pL de tampão Tris/HCl. A radioactividade medida em cada poço utilizando um instrumento de contagem de cintilação Packard Top count. A actividade enzimática é expressa como contagens por minuto obtidas em 30 minutos após subtracção do ruído de fundo (meio de reacção sem enzima). a medição é expressa como a percentagem da inibição da actividade de Aurora versus o controlo. 77

Tabela 16: actividade inibidora dos compostos de exemplo em relaçao à cinase Aurora A.

Exemplos IC50 uM 3 0,2 4 0,022 20 0,1 28 0,067

Exemplos IC50 uM 60 6,5 61 11, 4 62 37 63 3,3 64 4, 1 65 0,63 66 11 67 2 68 36 69 20 70 0,03 71 0,16 72 0,019 73 0,029 74 0,17 75 0,062 76 0,034 77 1,2 78 0,2 79 0,062 80 0,43 81 0,029 82 0, 11 83 >10 84 0,82 78 (continuação)

Exemplos IC50 uM Exemplos IC50 uM 29 0,1 85 0,02 30 0,05 86 0,065 31 0,067 87 0, 015 32 0,13 88 0,36 33 0,18 89 0,17 34 0,053 90 0, 75 35 0,04 91 0, 14 36 0,1 92 37 0,19 93 38 0,097 94 39 0,13 95 40 11, 1 96 41 0,026 97 42 0,47 98 43 10 99 45 1,5 100 101 102 103 104 0,12 105 0,01 106 0,008 107 3,45

Lisboa, 9 de Abril de 2010 79

Claims (16)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto correspondente à fórmula geral (I) abaixo

   em que: X é NH ou CR7 e • quando X = NH, R2 é: - arilo substituído com um substituinte seleccionado entre S-R9, NH-R9, (C=0)-NH-R9, (C=0) -NH-CH2-R9, NH-(C=0)-R9, NH-(C=0)-NH-Rg, (S02)-NH-R9 ou heteroarilo substituído com um substituinte seleccionado entre 0-R9, S-R9, NH-R9, (C=0)-NH-R9, (C=0)-NH-CH2-R9, NH-(C=0)-R9, NH- (C=0) -NH-R9, (S02) -NH-Rg • quando X = CR7, R2 é arilo ou Heteroarilo substituído com um substituinte seleccionado entre 0-R9, S-R9, NH-Rg, 1 (c=o)-NH=Rg, (C=0)-nh=ch2-r9 R9, (S02) -NH-R9; NH-(C=0)-R9, NH-(C=0)=NH- • R9 é seleccionado entre arilo e heteroarilo opcionalmente substituído com um substituinte seleccionado entre H, F, Cl, Br, OH, SH, CF3, OCF3, OCH3, SCF3, SCH3, OCHF2, OCH2F, alquilo(C1-C6), O-alilo, fenilo e fenilo substituído com halogéneo; • Y, Y' e Y": (i) cada, independentemente, representa um substituinte seleccionado entre CH2, CHR5, CR5R6. C=0, 0, S, NH, e NR7; ou (ii) em conjunto, representam um substituinte seleccionado entre a parte cadeia -CH2-0-(C=0)-, -(CH2)4- e - (CH2) 2; • R7 representa um substituinte seleccionado entre: R8, COORg, C0R8 e tONHRg; • R5 e R6, cada, independentemente, representam R8; • R8 representa H ou opcionalmente substituído: -alquilo, -alquil-alquileno, -alquileno, -heterocicloalquilo, -cicloalquilo, -arilo, -heteroarilo, -alquil-heterocicloalquilo, -alquil-cicloalquilo, -alquil-arilo ou -alquil-heteroarilo. 2
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y" é CH2.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que Y é CH2.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 a 3, em que Y' é seleccionado entre CH2, CHCH3, C(CH3)2, CH-arilo, CH-heteroarilo, CH-(arilo), CH-(heteroarilo substituído), 0, S, NH, e NR7.
5. 5. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 4, em que R2 é um heteroarilo substituído com SR9:
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que Rg é um heteroarilo opcionalmente substituído,
7. 7. Composto de acordo com as reivindicações 1 a 6, em que R9 é um benzimidazolilo opcionalmente substituído ou um Imidazolilo opcionalmente substituído.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é heteroarilo substituído, em que heteroarilo é furilo ou tienilo.
9. 9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que X é CR7.
10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que R7 é COORs ou C0NHR8.
11. 11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, na forma racémica, enriquecida num enantiómero, 3 enriquecida num diastereoisómero, seus tautómeros, seus profármacos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
12. 12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, como um fármaco.
13. 13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, como um fármaco anticancerigeno.
14. 14. Utilização de um produto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, para produzir um produto medicinal para utilização no tratamento de um estado patológico.
15. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 14, em que o estado patológico é seleccionado entre cancro, psoríase, leucemia e lúpus.
16. 16. Utilização de acordo com a reivindicação 14, em que o estado patológico é o cancro. Lisboa, 9 de Abril de 2010 4