PL180230B1 - Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o dzialaniu farmakologicznym, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents
Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o dzialaniu farmakologicznym, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL180230B1 PL180230B1 PL94334634A PL33463494A PL180230B1 PL 180230 B1 PL180230 B1 PL 180230B1 PL 94334634 A PL94334634 A PL 94334634A PL 33463494 A PL33463494 A PL 33463494A PL 180230 B1 PL180230 B1 PL 180230B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lipopeptides
- formula
- fatty acid
- carbon atoms
- chain
- Prior art date
Links
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 151
- 241000187712 Actinoplanes sp. Species 0.000 title claims abstract description 32
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 12
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims abstract description 52
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 45
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims abstract description 45
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims abstract description 36
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 26
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 20
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 8
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 47
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 32
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 23
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 16
- 108010079465 amphomycin Proteins 0.000 description 15
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 15
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 14
- XBNDESPXQUOOBQ-LSMLZNGOSA-N (2r,3s)-4-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[2-[[(2r,3s)-1-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(1s)-1-[(3s,9ar)-1,4-dioxo-3,6,7,8,9,9a-hexahydro-2h-pyrido[1,2-a]pyrazin-3-yl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-amino-1-oxobutan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]am Chemical compound CCC(C)CCCCC\C=C\CC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@H]([C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)[C@H]1C(=O)N2CCCC[C@@H]2C(=O)N1 XBNDESPXQUOOBQ-LSMLZNGOSA-N 0.000 description 13
- SXGMVGOVILIERA-UHFFFAOYSA-N 2,3-diaminobutanoic acid Chemical group CC(N)C(N)C(O)=O SXGMVGOVILIERA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 12
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 12
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 11
- LXRUAYBIUSUULX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-methylbutanedioic acid Chemical compound OC(=O)C(C)C(N)C(O)=O LXRUAYBIUSUULX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 9
- HXEACLLIILLPRG-UHFFFAOYSA-N pipecolic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 241000187844 Actinoplanes Species 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 229950006446 amfomycin Drugs 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- -1 small molecule compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 5
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000950166 Actinoplanes nipponensis Species 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 4
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 4
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710199746 Aspartocin Proteins 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 3
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 description 3
- 229930184776 aspartocin Natural products 0.000 description 3
- 229950003403 aspartocin Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N chembl2367892 Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(O)C=C(C=4)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CC=4C=C(Cl)C(O5)=CC=4)C(=O)N3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1Cl)=CC=C1OC1=C(O[C@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)NC(C)=O)C5=CC2=C1 DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 208000015688 methicillin-resistant staphylococcus aureus infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 229960001608 teicoplanin Drugs 0.000 description 3
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 101000775660 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.5 Proteins 0.000 description 2
- 101000775628 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.9 Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101000643905 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 3 Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 101000775697 Pseudopleuronectes americanus Ice-structuring protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- YWZWLQHZTXCDIN-BQGUCLBMSA-N aspartocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(N1)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YWZWLQHZTXCDIN-BQGUCLBMSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N oxybenzone Chemical compound OC1=CC(OC)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N p-methoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C=C1 ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- CUXYLFPMQMFGPL-WPOADVJFSA-N (9Z,11E,13E)-octadeca-9,11,13-trienoic acid Chemical compound CCCC\C=C\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O CUXYLFPMQMFGPL-WPOADVJFSA-N 0.000 description 1
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-LKPKBOIGSA-N 1D-chiro-inositol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-LKPKBOIGSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-M 2-methylbutyrate Chemical compound CCC(C)C([O-])=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000489 Agave utahensis Species 0.000 description 1
- 244000303769 Amaranthus cruentus Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101710128742 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- FUTAPPOITCCWTH-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FUTAPPOITCCWTH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 108010048581 Lysine decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical class Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000775692 Pseudopleuronectes americanus Ice-structuring protein 4 Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N acetyl methyl carbinol Natural products CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 1
- 150000004716 alpha keto acids Chemical class 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000003377 anti-microbal effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229940077731 carbohydrate nutrients Drugs 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 235000013495 cobalt Nutrition 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N crotonic acid Chemical compound C\C=C\C(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000006748 manganese carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 244000038651 primary producers Species 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N trans-crotonic acid Natural products CC=CC(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003680 valines Chemical class 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/60—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation occurring through the 4-amino group of 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/827—Actinoplanes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o dzialaniu farmakologicznym o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasyco- ny, nasycony, nierozgaleziony rodnik kwasu tluszczowego lub hydroksytluszczowego o dlugosci lancuchów o 6 do 22 wlacznie ato- mów wegla. P L 180230 B 1 PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są lipopeptydy z Actinoplanes sp. o działaniu farmakologicznym, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna. Wynalazek dotyczy lipopeptydów o homologicznych sekwencjach aminokwasowych, jednak o różnych resztach kwasów tłuszczowych (część lipidowa), które syntetyzuje się z Actinoplanes sp. podczas fermentacji i które są oddawane do pożywki, sposobu wyodrębniania lipopeptydów z pożywki i oczyszczania ich, zastosowania lipopeptydów jako farmakologicznych substancji czynnych, zwłaszcza przeciwko bakteriom Gram-dodatnim.
Wtórne metabolity z mikroorganizmów stosuje się skutecznie do leczenia chorób zakaźnych. W przypadku wtórnych metabolitów chodzi o małocząsteczkowe związki, których tworzenie następuje na „biosyntetycznych drogach jednokierunkowych”, które odgałęziają się od pierwotnego metabolizmu, i których funkcja dla każdorazowych producentów jest niewyjaśniona. Do dzisiaj jest znanych około 8000 wtórnych metabolitów wyodrębnionych z hodowli różnych mikroorganizmów, przede wszystkim grzybów i bakterii gatunku Streptomyces.
Główną dziedziną zastosowania tych wtórnych metabolitów jest leczenie chorób zakaźnych. Jednak przez powszechne ich używanie dochodzi często do wytworzenia oporności tak, że istnieje ciągłe zapotrzebowanie na nowe antybiotyki i substancje czynne o nowych mechanizmach działania (Neu H.C., Science 257, 1992, strony 1064-1073).
Oprócz tego zakres wskazań mikrobiologicznych substancji czynnych rozszerzył się również na choroby, których nie zalicza się do chorób zakaźnych, np. leczenie nowotworów, immunomodulacja albo do regulowania przemiany tłuszczowej, oraz na ochronę roślin jak środki chwastobójcze i owadobójcze. Stosowane substancje czynne są oczywiście często jeszcze obciążone wadami charakteryzującymi się niezadowalającymi poziomami działania, zbyt wysoką toksycznością i/albo niepożądanymi działaniami ubocznymi.
W literaturze opisane są lipopeptydy, których część aminokwasowa odnośnie sekwencji jest identyczna z lipopeptydami według wynalazku albo odnośnie składu aminokwasów jest jednakowa lub bardzo podobna do lipopeptydów według wynalazku. Te lipopeptydy różnią się jednak zasadniczo od lipopeptydów według wynalazku w części lipidowej.
Przykłady tych lipopeptydów stanowią:
- amfomycyna (Amphomycin Antibiot.) /J. Antibiotics, 38, strona 517 (1965)/,
- glumamycyna (Glumamycin) /J. Antibiotics, 38, strona 517 (1965)/,
- zaomycyna (Zaomycin) /J. Antibiot., strona 194 (1960)/,
- aspartocyna (Aspartocin) /Antibiot. Ann., 194 (1960)/,
- tsuhimycyna (Tsuhimycin) /J. Antibiotics, 21, strona 439 (1968)/,
- laspartomycyna (Laspartomycin) /J. Antibiotics 21, strona 55 (1968)/.
Te lipopeptydy, które są określone jako lipopeptydy typu amfomycyna, syntetyzowane są przez mikroorganizmy gatunku Streptomyces. Swą antybiotyczną skuteczność rozwijają one przeciwko bakteriom Gram-dodatnim, jak np. Strepto-, Staphylo- i Enterococcen. Szczególnie szczepy gatunków Staphylo- i Enterococcus okazały się w ostatnim czasie „zarazkami problemowymi”. Przez zarazki problemowe specjalista rozumie takie mikroorganizmy, których efektywne zwalczanie tymczasem na podstawie oporności nie jest możliwe powszechnie stosowanymi antybiotykami, np. β-laktamoantybiotykami albo glikopeptydoantybiotykami, jak na przykład wankomycyna (Vancomycin) albo teikoplanina (Teikoplanin).
Grupą szczepów mikroorganizmów, które wykształciły oporności, sąnp. oporne na metycylinę (Methicillin'ę) szczepy Staphylococcus aureus, nazywane krótko szczepy MRSA. Tymczasem
180 230 wiadomo, że te szczepy MRSA często wykształcały oporności nie tylko wobec metycyliny, lecz poza tym wobec dalszych antybiotyków, np. wankomycyny.
Pominąwszy już wymienione związki ze Streptomyceten, znany jest związek z Actimoplanes nipponensis ATCC 31 145, który na podstawie swego spektrum działania oraz opisanych właściwości fizyko-chemicznych wykazuje strukturalne podobieństwa z lipopepty darni według wynalazku i określonyjestjako związek41.012 (patentUS 4.000.397). Fermentacja Actinoplanes nipponensis ATCC 31145 w różnych warunkach hodowli prowadzi ciągle do względnie niskich wydajności związku 41.012.
Zadaniem wynalazku jest wynalezienie mikrobiologicznych surowców naturalnych o poprawionych właściwościach.
Zadanie to rozwiązano według wynalazku przez fermentację Actioplanes sp. w pożywce płynnej ze źródłem węgla i azotu oraz zwykłymi solami nieorganicznymi, aż do nagromadzenia się z pożywce lipopeptydów, korzystnie lipopeptydów A 1437, następne wyodrębnienie lipopeptydów z pożywki i ewentualnie rozdzielenie mieszaniny na jej poszczególne składniki. Lipopepty dy wykazują farmakologiczną aktywność, a zatem terapeutyczną skuteczność i można je stosować jako antybiotyki o działaniu przeciwko bakteriom Gram-dodatnim, zwłaszcza przeciwko szczepom opornym wobec glikopeptydów.
Przedmiotem wynalazku sązatem: Lipopeptydy o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony łańcuch kwasu tłuszczowego lub hydroksytłuszczowego o długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla.
W lipopeptydach o wzorze 1, R1 oznacza łańcuch zawierający 6-22,korzystnie 10 do 20 włącznie atomów węgla, a zwłaszcza łańcuch zawierający 12-15 atomów węgla.
Korzystne są lipopeptydy o wzorze 1, w który R1 oznacza łańcuch
a) kwasu nC12-tłuszczowego,
b) kwasu nCj 3-tłuszczowego lub
c) kwasu nC14-tłuszczowego, a zwłaszcza lipopeptydy o wzorze 1, w którym R1 oznacza grupę o wzorze 2 lub 3, lub 4.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania lipopeptydów o wzorze 1, w którym R1 ma wyżej podane znaczenia, charakteryzujący się tym, że fermentuje się Actinoplanes sp. w pożywce aż do nagromadzenia się w tej pożywce jednego albo więcej lipopeptydów i oczyszcza się z pożywki jeden lub więcej lipopeptydów o wzorze 1 przez wytrącenie lipopeptydów z pożywki stosując kwasy, przy pH 0,5 do 4 włącznie, potem ewentualnie otrzymane z wytrącenia lipopeptydy oczyszcza się przez chromatografię na wymieniaczach anionowych albo chromatografię na hydrofobowej matrycy, przy czym obydwie chromatografie przeprowadza się alternatywnie albo jedną po drugiej w dowolnej kolejności.
W sposobie fermentuje się Actinoplanes sp. DSM7358. Przedmiotem wynalazku jest również substancja farmakologicznie skuteczna, przeciwko bakteriom Gram-dodatnim, szczególnie korzystnie przeciwko bakteriom opornym wobec glikopeptydu, charakteryzująca się tym, że zawiera jeden lub więcej lipopeptydów o wzorze 1, w którym R1 ma wyżej podane znaczenie, korzystnie lipopeptyd o wzorze 1, wktórymR1 oznaczałańcucho 12,13,14albo 15 atomach węgla, lub łańcuch
a) kwasu nCi2-tłuszczowego,
b) kwasu nCj3-tłuszczowego lub
c) kwasu nC14-tłuszczowego lub grupę o wzorze 2, 3 i 4.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynnąi ewentualnie farmaceutyczne nośniki charakteryzująca się tym, że zawiera jako substancję czynną lipopeptydy o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony rodnik kwasu tłuszczowego lub kwasu hydroksythrszczowego o długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla.
Poniżej wynalazek opisany jest szczegółowo, zwłaszcza jego korzystne postacie wykonania. Poza tym wynalazek jest określony przez treść zastrzeżeń patentowych.
180 230
Określenie pojęć
- Dab oznacza kwas 2,3-diaminomasłowy,
- Pip oznacza kwas pipekolinowy (synonim - homoprolina),
- MeAsp oznacza β-metyloasparaginian,
- Gly oznacza glicynę,
- Asn oznacza asparaginę,
- Asp oznacza kwas asparginowy,
- Val oznacza walinę,
- Pro oznacza prołinę,
- n oznacza normalny/nierozgałęziony, a
- CID oznacza „rozpad wywołany zderzeniami”.
Skrót „i” oznacza „izo”, natomiast „ai” oznacza „ante-izo”. Te oznaczenia znane są specjaliście w związku z kwasami tłuszczowymi (Biochemistry, Zubay, wydawnictwo Addison Wesley w Londynie, Amsterdamie, 1983).
Wszystkie dane procentowe odnoszą się do ciężaru, jeżeli nie podano inaczej. Stosunki w mieszaninach w przypadku cieczy odnoszą się do objętości, o ile nie podano inaczej.
Sposób według wynalazku można stosować do fermentacji w skali laboratoryjnej (zakres mililitra do litra) i dla skali przemysłowej (skala w metrach sześciennych).
Actinoplanes sp. wyodrębnia się z próby ziemi. W celu oczyszczenia z ziemi przeprowadza się ją w zawiesinę przy wytworzeniu szeregu rozcieńczeń fizjologicznym roztworem NaCl (0,9%). Różne rozcieńczenia (10° -106) nanosi się następnie na pożywki Actinomyceten. Po wylęgnięciu kultur w temperaturze 30°C w okresie 2 do 14 dni powstają kolonie Actinomyceten, które można odosobnić i wyodrębnić przez szereg następujących po sobie etapów oczyszczania.
Oznaczanie gatunków przeprowadza się za pomocą morfologicznych i taksonomicznych kryteriów według metod znanych przez specjalistę. Dla gatunku Actinoplanes charakterystyczne są przede wszystkim ruchliwe zarodniki.
Na podstawie następujących po sobie etapów wyodrębniania i oczyszczania można wyodrębnić z Actinoplanes sp. kolonię, która bardzo skutecznie oddaje do pożywki jeden albo więcej związków lipopeptydowych, korzystnie lipopeptydy A 1437 A, B, C, D, E, F, G,H, K, L i/alboM, i jest określana jako główny producent.
Jako główny producent określa się izolat, który produkuje albo oddaje do pożywki jeden, albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku w 10-do 100-krotnie zwiększonej ilości w porównaniu do izolatów takiego samego rodzaju Actinoplanes.
Silnie produkującą kolonię Actinoplanes sp. rozmnaża się. Izolat zdeponowano w Niemieckim Zbiorze Mikroorganizmów i Kultur Komórkowych GmbH, Mascheroder Veg IB, 3300 Braunschweig, Niemcy, według zasad Budapesztańskiej Umowy dnia 18 czerwca 1990 pod następującym numerem: Actinoplanes sp. DSM 7358.
Actinoplanes sp. DSM 7358 ma grzybnię o barwie pomarańczowej i charakteryzuje się kulistymi sporangiami.
W płynnej pożywce (określonej również jako pożywka), która zawiera źródło węgla i źródło azotu oraz zwykłe sole nieorganiczne, Actinoplanes sp., szczególnie DSM 7358, produkuje jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku.
Zamiast szczepu DSM 7358 można używać również jego mutanty i warianty, które syntetyzująjeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku. Takie mutanty można wytwarzać w zasadzie znanym sposobem za pomocą środków fizycznych, na przykład przez naświetlanie, jak promieniami ultrafioletowymi albo rentgenowskimi, albo chemicznymi mutagenami, takimi jak na przykład etylometanosulfonian (EMS), 2-hydroksy-4-metoksybenzofenon (MOB) albo N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyna (MNNG).
Skrining według mutantów i wariantów syntetyzujących jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku następuje według poniższego schematu:
- oddzielenie grzybni po fermentacji,
- wytrącenie lipopeptydów przy pH 1 do 2 (w temperaturze 4°C),
180 230
- rozprowadzenie osadu w H2O/MeOH (1:1),
- analiza zapomocąHPLC, DC albo za pomocąbadania biologicznej aktywności (Hemmhoftest).
Opisane wyżej warunki fermentacji dotyczą Actinoplanes sp., zdeponowanego izolatu DSM 7358 oraz mutantów i wariantów ich.
W pożywce płynnej, która zawiera źródło węgla i źródło azotu oraz zwykłe nieorganiczne sole, Actinoplanes sp., korzystnie DSM 7358, produkuje jeden albo więcej związków lipopeptydowych, korzystnie lipopeptydy A 1437 A-H oraz K, L, M.
Jako korzystne źródła węgla dla aerobowej fermentacji nadają się dające się asymilować węglowodany i alkohole cukrowe jak glukoza, laktoza albo D-mannit oraz produkty naturalne zawierające węglowodany, jak np. ekstrakt słodowy. Jako substancje odżywcze zawierające azot wchodzą w rachubę aminokwasy, peptydy i proteiny jak również produkty ich rozkładu jak peptony albo tryptony, dalej ekstrakty mięsne, zmielone nasiona, na przykład kukurydzy, pszenicy, fasoli, soi albo roślin bawełny, pozostałości podestylacyjne z wytwarzania alkoholi, mączki mięsne albo ekstrakty drożdżowe, albo także sole amonowe i azotany. Odnośnie nieorganicznych soli pożywka płynna może zawierać na przykład chlorki, węglany, siarczany albo fosforany metali alkalicznych, albo metali ziem alkalicznych, żelaza, cynku, kobaltu i manganu.
Wytwarzanie lipopeptydów według wynalazku przeprowadza się szczególnie dobrze w pożywce płynnej, która zawiera około 0,1 do 5%, korzystnie 0,3 do 2% ekstraktu mięsnego i 0,2 do 5%, korzystnie 0,5 do 2% sacharozy i 0,05 do 5 g/1, korzystnie 0,1 do 0,5 g/1 ekstraktu drożdżowego i 0,05 do 2 g/1, korzystnie 0,1 do 1 g/1 siarczanu magnezu i 0,05 do 10 g/1, korzystnie 0,1 do 1 g/1 diwodorofosforanu potasu albo sodu i 0 do 100 μΜ, korzystnie 5 do 20 μΜ chlorku żelazowego. Dane procentowe odnoszą się każdorazowo do ciężaru całej pożywki płynnej.
W tej pożywce płynnej Actinoplanes sp., korzystnie Actinoplanes DSM 7358 tworzy mieszaninę złożoną z lipopeptydów według wynalazku. Mieszanina składa się szczególnie z 11 różnych, wykrywalnych lipopeptydów. Spośród tych lipopeptydów scharakteryzowano lipopeptydy o wzorze 1 według wynalazku jako A 1437 K; L i M i scharakteryzowano, je w poniższej tabeli. Obok lipopeptydów według wynalazku tworzy Actinoplanes sp., korzystnie Actinoplanes DSM 7358 lipopeptydy A, Β, E i G o wzorze 1 scharakteryzowane poniżej w tabeli.
Tabela
| Nazwa lipopeptydu | R1 | Masa cząsteczkowa |
| A 1437 A | wzór 5 | 1290 |
| A 1437 B | wzór 6 | 1304 |
| A 1437 E | wzór 7 | 1290 |
| A 1437 G | wzór 8 | 1318 |
| A 1437K | wzór 3 | 1318 |
| A 1437 L | wzór 4 | 1318 |
| A 1437 M | wzór 2 | 1318 |
Lipopeptyd A 1437 A, zawiera kwas izo-CI3-tłuszczowy. Sekwencja aminokwasowa w 1437 A odpowiada sekwencji aminokwasowej amfomycyny [Bodanszky et al. J. Am. Chem Soc. 95, 2352(1973)].
Lipopeptyd A 1437 B zawiera kwas tłuszczowy typu izo-C14, a zatem kwas tłuszczowy znany z tsuhimycyny [Shoji et al. The Journal of Antibiotics 21,439 (1968)] i posiada sekwencję aminokwasową amfomycyny [Bodanszky et al. J. Am. Chem. Soc. 95, 2352 (1973)].
Lipopeptyd A 1437 E jest identyczny z amfomycyną znaną ze Streptomyceten.
Dalej tworzy Actinoplanes sp., zwłaszcza Actinoplanes DSM 7358 poniżej scharakteryzowane lipopeptydy o wzorze 1A
180 230
Tabela
| Nazwa lipopeptydu | R1 | Masa cząsteczkowa |
| A 1437 C | wzór 5 | 1289 |
| A 1437 D | wzór 6 | 1303 |
| A 1437F | wzór 7 | 1289 |
| A 1437 H | wzór 8 | 1317 |
Lipopeptyd A 1437 C, zawiera jeszcze nieznany dotychczas w lipopeptydach typu amfomycyny kwas izo-C13-tłuszczowy. Skład aminokwasów i sekwencja aminokwasowa w A 1437 C nie są znane z innych lipopeptydów.
Lipopeptyd A 1437 D zawiera kwas tłuszczowy typu izo-C14, a zatem kwas tłuszczowy znany z tsuhimycyny [Shoji et al. The Journal of Antibiotics 21, 439 (1968)].
A 1437 D różni się jednak w swym składzie aminokwasów i sekwencji od znanych dotychczas ze znanego stanu techniki.
Skład aminokwasów amfomycyny, glumamycyny, zaomycyny i tsuhimycyny jest według literatury identyczny. (Strong et al. Antimicrobal Agents and Chemotherapy 1970,42, Bodanszky et al. J. Am. Chem. Soc. 95, 2352 (1973) Inoue, Buli. Chem. Soc. Jap. 35, 1556 (1962)).
Lipopeptyd A 1437 F składa się z kwasu ante-izo-C13-tłuszczowego, a zatem zawiera taki sam typ kwasu tłuszczowego jak znany z amfomycyny. Jego sekwencja aminokwasowa i skład aminokwasowy nie są znane ze stanu techniki.
Lipopeptyd A 1437 H zawiera, równie jak aspartocyna, kwas ante-izo-C15-tłuszczowy. Sekwencja aminokwasowa w A 1437 H nie jest znana ze stanu techniki.
Lipopeptydy A 1437 K, L i M posiadają jako nierozgałęzione kwasy tłuszczowe kwasy tłuszczowe o długości łańcucha C12 - C14. Sekwencja aminokwasowa tych trzech wymienionych lipopeptydów odpowiada sekwencji aminokwasowej amfomycyny.
Lipopeptydy A 1437 A do H i K, L, M wszystkie mają połączenie funkcji karboksylowej C-końcowej proliny z β-aminofunkcją zlokalizowanego aminokońcowo Dab. To połączenie przedstawione jest przez we wzorze 1 względnie 1 A.
Zależnie od składu pożywki płynnej może zmieniać się ilościowy udział jednego albo więcej lipopeptydów według wynalazku. Poza tym przez skład pożywek można sterować syntezą poszczególnych lipopeptydów tak, że lipopeptyd nie jest w ogóle wytwarzany bądź jest wytwarzany w ilości poniżej granicy wykrywalności mikroorganizmu:
Pożywka Actinoplanes sp., zwłaszcza DSM 7358, zawiera lipopeptydy z jednokrotnie nienasyconym, nasyconym, nierozgałęzionym kwasem tłuszczowym albo kwasem hydroksytłuszczowym o długości łańcucha 6 do 22 włącznie atomach węgla, korzystnie o 10 do 20 włącznie atomach węgla, szczególnie korzystnie o 12, 13, 14 albo 15 atomach węgla.
Specjalista zna tego rodzaju kwasy tłuszczowe, tak np. z Rompp Chemie Lexikon, Prof. Falbe undProf, Regitz, 9. wydanie, wydawnictwo Georg Thieme Stuttgart, Nowy Jork albo z The Encyclopedia of Chemistry C.A. and G.G. Hawley, 3. wydanie, Van Nostrand Reinhold Company, Nowy Jork.
Następujące wyliczenie kwasów tłuszczowych jest przykładowe, nie wnosi żadnego zastrzeżenia do kompletności i nie stanowi żądanego ograniczenia.
Nasycone, nierozgałęzione kwasy tłuszczowe w lipopeptydach według wynalazku stanowią przykładowo kwas kapronowy, enantowy, kaprylowy, pelargonowy, kaprynowy, undekanowy, laurynowy, tridekanowy, mirystynowy, pentadekanowy, palmitynowy, margarynowy, stearynowy, nonadekanowy, arachidynowy, behenowy.
Jednokrotnie nienasycone, nierozgałęzione kwasy tłuszczowe w lipopeptydach według wynalazku stanowią przykładowo kwas akrylowy albo krotonowy.
180 230
Poza tym w pożywce mogąpojawiać się lipopeptydy z wielokrotnie rozgałęzionymi kwasami tłuszczowymi, jak np. z kwasem 2',4',6',8'-tetrametylodekanowym lub z wielokrotnie nienasyconymi, nierozgałęzionymi kwasami nie będące związkami według wynalazku. Są to dwukrotnie nienasycony, nierozgałęziony kwas tłuszczowy w lipopeptydach stanowiący przykładowo kwas sorbowy. Trzykrotnie nienasycony, nierozgałęziony kwas tłuszczowy stanowiący przykładowo kwas linolenowy albo kwas elaeostearynowy. Czterokrotnie nienasycony, nierozgałęziony kwas tłuszczowy stanowiący przykładowo kwas arachidonowy. Pięciokrotnie nienasycony, nierozgałęziony kwas tłuszczowy stanowiący przykładowo kwas klupanodenowy. Sześciokrotnie nienasycony, nierozgałęziony kwas tłuszczowy stanowiący przykładowo kwas dokozaheksanowy lub nasycone, rozgałęzione kwasy tłuszczowe w lipopeptydach stanowiące przykładowo kwas izomasłowy albo kwas izowalerianowy, albo odpowiednie kwasy w konfiguracji „ante-izo”.
Kwasy hydroksythiszczowe w lipopeptydach według wynalazku stanowią na przykład hydroksylowane w pozycji 2' i 3' i/albo na końcu łańcucha węglowego kwasy tłuszczowe w konfiguracji „izo” albo „ante-izo”.
Przy dodaniu 0,01 do 5%, korzystnie 0,02 do 0,1% L-waliny do opisanej wyżej pożywki płynnej szczep Actinoplanes sp. tworzy korzystnie lipopeptydy A 1437 B i D. Przy dodaniu 0,01 do 5%, szczególnie 0,1 do 0,5% L-leucyny do wyżej opisanej pożywki płynnej szczep Actimoplanes sp. tworzy korzystnie lipopeptydy A 1437 A i C. Przy dodaniu 0,01 do 5%, szczególnie 0,05 do 0,5% L-izoleucyny do wyżej opisanej pożywki płynnej szczep Actiomoplames sp. tworzy przede wszystkim lipopeptydy A 1437 E, F, G i H. Przy dodaniu 0,01 do 5%, szczególnie 0,03 do 0,5% kwasu L-a-aminomasłowego do opisanej wyżej pożywki płynnej szczep Actinoplanes sp. tworzy korzystnie lipopeptydy K. Przy dodaniu 0,01 do 5%, zwłaszcza 0,05 do 0,5% L-norwaliny do opisanej wyżej pożywki płynnej szczep Actinoplanes sp. tworzy korzystnie lipopeptydy L i/albo M. To samo dotyczy korzystnego szczepu DSM 7358.
Obok tych aminokwasów można stosować także odpowiednie a-ketonokwasy wymienionych aminokwasów (a-ketonoizowalerianian, α-ketonoizokapronian, a-ketono-3-metylowalerianian, a-ketonowalerianian) albo odpowiadające im kwasy (izomaślan, izowalerianian, α-metylomaślan, n-maślan, propionian, walerianian) w odpowiednich stężeniach albo dalsze substancje, które mogąingerować w biosyntezę kwasów tłuszczowych.
Hodowlę mikroorganizmu prowadzi się aerobowo, a więc na przykład wgłębnie przy wstrząsaniu albo mieszaniu w kolbach do wstrząsania albo fermentorach, ewentualnie przy wprowadzaniu powietrza albo tlenu. Można jąprzeprowadzać w zakresie temperatur około 18 do 35°C, korzystnie około 25 do 35°C, a szczególnie w temperaturze 28 do 32°C. Zakres wartości pH powinien znajdować się pomiędzy 6 i 8, korzystnie pomiędzy 6,5 i 7,5. Hodowlę mikroorganizmu w tych warunkach prowadzi się na ogół w ciągu 24 do 300 godzin, korzystnie 36 do 140 godzin.
Korzystnie hodowlę prowadzi się w kilku etapach, to znaczy najpierw wytwarza się w pożywce płynnej jedną albo więcej kultur wstępnych, które potem przeszczepia się do właściwej pożywki produkcyjnej, głównej hodowli, na przykład w stosunku objętościowym 1:10. Kulturę wstępną otrzymuje się na przykład w ten sposób, że grzybnię przeszczepia się do pożywki płynnej i pozostawia do rośnięcia przez około 3 6 do 120 godzin, korzystnie 48 do 72 godzin. Grzybnię można otrzymać przykładowo tak, że szczep pozostawia się do rośnięcia przez około 3 do 40 dni, korzystnie 4 do 10 dni, na stałej albo płynnej pożywce, na przykład drożdże-słód-agar albo odżywczy bulion-agar (standardowe pożywki dla mikroorganizmów z głównymi składnikami peptonem, solą kuchenną i agarem, np. firmy Difco).
Przebieg fermentacji można nadzorować za pomocą wartości pH kultur albo objętości grzybni oraz metodami chromatograficznymi, jak np. DC albo HPLC, albo przez badanie biologicznej aktywności. Związek według wynalazku zawarty jest zarówno w grzybni jak też w przesączu kultury, jednak największa część (>90%) znajduje się w przesączu kultury.
Niżej opisany sposób wyodrębniania służy do oczyszczania lipopęptydów według wynalazku.
Wyodrębnianie albo oczyszczanie lipopeptydu według wynalazku z pożywki prowadzi się znanymi metodami uwzględniając chemiczne, fizyczne i biologiczne właściwości naturalnych
180 230 surowców. W celu testowania stężenia antybiotyków w pożywce albo w poszczególnych etapach wyodrębniania można stosować chromatografię DC, na przykład na żelu krzemionkowym stosując jako eluent izopropanolowy 25% roztwór NH3 albo HPLC. Wywoływanie w przypadku rozdzielania za pomocą DC można prowadzić na przykład barwiącymi odczynnikami jak aldehydem anyżowym, przy czym ilość utworzonej substancji porównuje się celowo z roztworem wzorcowym.
W celu wyodrębnienia lipopeptydów według wynalazku najpierw zwykłymi sposobami oddziela się grzybnię od brzeczki hodowlanej i następnie przesącz hodowlany ustawia się, korzystnie w temperaturze 4°C, na wartość pH 0,5 do 4 włącznie, korzystnie na pH 1,5 do 2,5 włącznie. Do ustawienia wartości pH, a zatem do wytrącenia lipopeptydów A1437 można stosować wszystkie znajdujące się w handlu kwasy. Roztwór inkubuje się do 16 godzin, korzystnie do 4 godzin i następnie odwirowuje powstały osad.
Osad zawierający całość lipopeptydów ponownie przeprowadza się w stan zawiesiny w 1/20 pierwotnej objętości wody dwukrotnie destylowanej i zapomocąNaOH doprowadza do pH 6 do 7. Przy tym osad przechodzi całkowicie do roztworu, który oziębia się do temperatury -20°C i poddaje liofilizacji. Liofilizat, określany dalej jako surowy produkt, zawiera 5 do 30% lipopeptydów i stosuje się go do dalszego wyodrębniania.
Dalsze oczyszczanie jednego albo więcej lipopeptydów według wynalazku przeprowadza się drogą chromatografii na odpowiednich materiałach, korzystnie na przykład na żelu krzemionkowym, tlenku glinu, wymieniaczach jonowych albo żywicach adsorpcyjnych, a całkiem szczególnie korzystnie ma mocno albo słabo zasadowych wymieniaczach anionowych. Za pomocą tej chromatografii oddziela się lipopeptydy, które zawierają Asp albo Asn jako aminokońcowo zlokalizowany aminokwas. Chromatografię lipopeptydów prowadzi się zbuforowanymi roztworami wodnymi albo mieszaninami wodnych i alkoholowych roztworów.
Przez zbuforowane roztwory wodne rozumie się np. wodę, bufor fosforanowy, octan amonu, bufor cytrynianowy, bufor boranowy w stężeniu 0 do 1M, korzystnie 1 do 100 mM, szczególnie korzystnie stosuje się zbuforowane fosforanem roztwory w stężeniu 1 do 100 mM.
Przez mieszaniny wodnych albo alkoholowych roztworów rozumie się wszystkie mieszające się z wodą organiczne rozpuszczalniki, korzystnie metanol, acetonitryl, w stężeniu 10 do 80% rozpuszczalnika, korzystnie 40 do 60% rozpuszczalnika albo również wszystkie zbuforowane roztwory wodne, które sąmieszalne z organicznymi rozpuszczalnikami. Odpowiednimi tu buforami są takie same bufory jak podano wyżej.
Oddzielanie lipopeptydów na podstawie ich różnych kwasów tłuszczowych prowadzi się za pomocą chromatografii z odwróconymi fazami, na przykład MCI® (żywica adsorpcyjna firmy Mitsubishi, laponia). Szczególnie korzystna jest chromatografia z odwróconymi fazami na hydrofobowych materiałach, korzystnie chromatografia na fazach RP-8 albo RP-18. Poza tym oddzielenie może następować za pomocą chromatografii na żelu krzemionkowym.
Chromatografię lipopeptydów przeprowadza się zbuforowanymi albo zakwaszonymi wodnymi roztworami, albo mieszaninami wodnych roztworów z alkoholami, albo innymi rozpuszczalnikami organicznymi mieszającymi się z wodą. Jako organiczny rozpuszczalnik stosuje się korzystnie acetonitryl.
Przez zbuforowane albo zakwaszone roztwory wodne rozumie się np. wodę, bufor fosforanowy, octan amonu, bufor cytrynianowy, bufor boranowy w stężeniu 0 do 0,5 M oraz kwas mrówkowy, kwas octowy, kwas trifluorooctowy albo wszystkie znajdujące się w handlu, znane specjaliście kwasy, korzystnie w stężeniu 0 do 1%, szczególnie korzystnie 0,1%.
Chromatografię prowadzi się z gradientem, który rozpoczyna się ze 100% wody i kończy ze 100% rozpuszczalnika, korzystny jest liniowy gradient 40 do 60% acetonitrylu.
Kolejność obydwu uprzednio wymienionych chromatografii (chromatografia w celu oddzielenia lipopeptydów według aminokwasów Asp albo Asn i według typu kwasu tłuszczowego) jest odwracalna. Korzystne jest oddzielenie lipopeptydów według różnych aminokwasów w pierwszym etapie i następnie dopiero oddzielenie ich według typu kwasu tłuszczowego.
180 230
Jeżeli wymieniony wyżej surowy produkt zawiera lipopeptydy o jednorodnym kwasie tłuszczowym, opisaną wyżej chromatografię (oddzielenie lipopeptydów na podstawie różnych kwasów tłuszczowych) stosuje się do odsalania i dalszego oczyszczania lipopeptydów.
Alternatywnie można prowadzić również chromatografię żelowąna hydrofobowych fazach.
Chromatografię żelową przeprowadza się na żelach poliakryloamidowych albo żelach z mieszanych polimerów, jak na przykład Biogel-P 2® (firmy Biorad) albo Fractogel TSK HW 40® (firmy Merck, Niemcy albo Toso Haas, USA).
Lipopeptydy według wynalazku są trwałe w stanie stałym i w roztworach w zakresie pH pomiędzy 4 i 8, szczególnie 5 i 7, a zatem można j e wprowadzać w zwykłe preparaty galenowe.
Jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku, na podstawie ich cennych właściwości farmakologicznych, można stosować jako środki lecznicze.
Substancje według wynalazku wykazują farmakologiczną skuteczność szczególnie jako antybiotyk przeciwko bakteriom Gram-dodatnim, szczególnie korzystnie przeciwko szczepom opornym wobec glikopeptydu.
W przypadku szczepów opornych wobec penicyliny bądź netycyliny (szczepy MRSA), które wykształciły dalsze oporności wobec antybiotyków, często tylko glikopeptydy jak wankomycyna albo teikoplanina wykazują terapeutycznie wystarczające działanie. W sposób powiększający się występująjednak szczepy oporne wobec tych antybiotyków. (FEMS Microbiol. Lett. 98) 1992) 109 do 116). Jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku wykazuje doskonałe działanie również wobec tych „zarazków problemowych”.
Wynalazek dotyczy również farmaceutycznych preparatów jednego albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku.
Jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku, można stosować zasadniczo jako takie w substancji. Korzystne jest zastosowanie w mieszaninie z odpowiednimi substancjami pomocniczymi albo nośnikami. Jako nośniki w przypadku środków leczniczych dla zwierząt można stosować zwykłe mieszanki paszowe, a w przypadku środków leczniczych dla ludzi można stosować wszystkie farmakologicznie tolerowane nośniki i/albo substancje pomocnicze.
Zgodnie z wynalazkiem środki lecznicze stosuje się na ogół doustnie albo pozajelitowo, ale zasadniczo możliwe jest także stosowanie doodbytnicze. Odpowiednie stałe albo ciekłe galenowe postacie preparatów stanowią na przykład granulaty, proszki, tabletki, drażetki (mikro-)kapsułki, czopki, syropy, emulsje, zawiesiny, aerozole, krople albo odpowiednie do wstrzykiwania roztwory w postaci ampułek oraz preparaty o przedłużonym uwalnianiu substancji czynnej. Przy wytwarzaniu wymienionych postaci preparatów znajdują zastosowanie zazwyczaj nośniki i dodatki i/albo środki pomocnicze jak środki rozkruszające, wiążące, otoczkowe, spęczniające, poślizgowe albo smarujące, substancje smakowe, środki słodzące albo środki solubilizujące. Jako często stosowane nośniki albo substancje pomocnicze można wymienić na przykład węglan magnezu, ditlenek tytanu, laktozę, mannit oraz inne cukry, talk, białko mleka, żelatynę, skrobię, witaminy, celulozę i jej pochodne, oleje zwierzęce albo roślinne, glikole polietylenowe i rozpuszczalniki jak na przykład sterylną wodę, alkohole, glicerynę alboalkohole wielowodorotlenowe.
Jednostki dawkowe dla stosowania doustnego mogą być ewentualnie mikrokapsułkowane, aby opóźniać albo rozciągać na dłuższy czas oddawanie substancji czynnej. To mikrokapsułkowanie odbywa się przykładowo przez powleczenie albo ułożenie substancji czynnej w postaci cząstek w odpowiednie polimery, woski albo podobne.
Farmaceutyczne preparaty korzystnie wytwarza się i stosuje w jednostkach dawkowych, przy czym każda jednostka jako czynny składnik zawiera określoną dawkę jednego albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku. W przypadku jednostek dawkowych jak tabletek, kapsułek i czopków dawka ta może wynosić do około 200 mg, korzystnie jednak około 0,1 do 100 mg, a w przypadku roztworów do wstrzykiwania w postaci ampułek do około 200 mg, korzystnie jednak około 0,5 do 100 mg, na dzień.
Przeznaczona do zastosowania dawka dzienna zależy od ciężaru ciała, wieku, rodzaju i stanu ssaka. Ewentualnie można jednak stosować wyższe albo niższe dawki dzienne. Dzienną dawkę można stosować zarówno przez jednorazowe podanie w postaci pojedynczej jednostki
180 230 dawkowej albo w kilku mniejszych jednostkach dawkowych, jak również przez wielokrotne podawanie podzielonych dawek w określonych odstępach.
Środki lecznicze według wynalazku wytwarza się w ten sposób, że jeden albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku razem ze zwykłymi nośnikami oraz ewentualnie substancjami dodatkowymi i/albo pomocniczymi przeprowadza się w odpowiednie albo odpowiednią postać podawania.
Poniższe przykłady objaśniają dalej wynalazek, przy czym dane procentowe odnoszą się do ciężaru. Stosunki w mieszaninach w przypadku cieczy odnoszą się do objętości, o ile nic innego nie zaznaczono.
Przykłady la) Wytwarzanie kultury glicerynowej Actinoplanes sp. DSM 7358
100 ml-pożywki płynnej (4 g/1 ekstraktu drożdżowego, 15 g/1 rozpuszczalnej skrobi, 1 g/1 K2HPO4,0,5 g/1 MgSO4 x 7 H2O, uzupełnione wodą do 1000 ml, wartość pH przed sterylizacją7,0) zaszczepia się w sterylnej kolbie Erlenmeyera o pojemności 300 ml szczepem Actinoplanes sp. DSM 7358 i inkubuje przez 7 dni w temperaturze 30°C i przy 150 obrotach/min na obrotowej wstrząsarce. Następnie 1,5 ml tej kultury rozcieńcza się przy użyciu 2,5 ml 80% gliceryny i składuje w temperaturze -20°C.
Ib) Wytwarzanie w kolbie Erlenmeyera kultury albo kultury wstępnej Actinoplanes sp. DSM 7358
100 ml płynnej pożywki o następującym składzie: 30 g/1 sacharozy, 2 g/1 KN03, 1 g/1 K2HPO4,0,5 g/1 MgSO4 x 7 H20,0,5 g/1 HC1,0,01 g/1 FeSO4 x 7 H20,2 g/1 ekstraktu drożdżowego, 5 g/1 peptonu zaszczepia się w sterylnej kolbie Erlenmeyera o pojemności 300 ml kulturą wyrośniętą na skośnych rurkach (taka sama pożywka płynna, jednak z 2% agaru) albo za pomocą 1 ml kultury glicerynowej (patrz przykład la) i inkubuje na wstrząsarce przy 180 obrotach/min i w temperaturze 30°C. Maksymalną produkcję jednego albo więcej związków lipopeptydów według wynalazku osiąga się po około 120 godzinach. Do zaszczepienia fermentorów o pojemności 10 i 200 1 wystarcza uzyskana po 48 do 96 godzinach wgłębna kultura (ilość szczepiąca około 10%) z takiej samej pożywki płynnej.
II. Porównawcza charakterystyka Actinoplanes sp. DSM 7358
W celu scharakteryzowania szczepu Actinoplanes sp. DSM 7358 przeprowadza się porównanie z blisko spokrewnionymi szczepami metodą ISP według Shirling'a i Gott!ieb'a (Int. J. of Sys. Bacterioł. 16. 3 (1966) 313 do 349). Wyniki przedstawione sąw tabeli I i pokazująone, że szczep Actinoplanes sp. DSM 7358 różni się od innych szczepów morfologicznie i pod względem swej fizjologii.
Tabela 1
| Actinoplanes sp. DSM 7358 | A.utahensis NRRL 12052 | A.brasiliensis ATCC 25844 | A.nipponensis ATCC 311455 | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Grzybnia powietrzna Sporangia | + | + | + (ISP 3) + | + |
| Pożywka | ||||
| ISP 2 | pomarańczowa | pomarańczowa | żółtopomarańczowa | pomarańczowa |
| ISP 3 | pomarańczowa | pomarańczowa | żółtopomarańczowa | pomarańczowa |
| ISP 4 | pomarańczowa | pomarańczowa | żółtopomarańczowa | pomarańczowa |
| ISP 5 | pomarańczowa | pomarańczowa | żółtopomarańczowa | pomarańczowa |
| ISP 6 | pomarańczowa czerwony egzopigment | pomarańczowa bmnatnoczerwony egzopigment | żółtopomarańczowa czerwony ezgopigment | pomarańczowa czerwony egzopigment |
180 230 cd. tabeli 1
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Melanina | - | - | (+) | (+) |
| Glukoza | + | + | + | + |
| Arabinoza | + | + | + | + |
| Sacharoza | + | + | + | + |
| Ksyloza | + | + | (+) | - |
| Inozytol | + | + | (+) | (+) |
| Mannit | + | + | + | - |
| Fruktoza | 4- | + | + | - |
| Ramnoza | + | + | + | + |
| Rafinoza | + | + | (+) | - |
| Celuloza | + | + | (+) | - |
| Melibioza | - | - | - | - |
| Amigdalina | - | + | + | + |
| Żelatyna (hydroliza) | + | + | + | + |
| Cytrynian (hydroliza) | - | - | + | - |
| Mocznik (hydroliza) | + | - | - | - |
| Argininohydrolaza | + | - | - | - |
| β-galaktozydaza | - | - | - | - |
| Tryptofanaza | - | - | - | - |
| Lizynodekarboksylaza | + | - | - | - |
| Acetoina (tworzenie się) | + | + | + | + |
| Indol (tworzenie się) | - | - | - | - |
| H2S (tworzenie się) | - | - | - | - |
| Tolerancja NaCl | 0 - 2,5% | 0 - 2,5% | 0 - 2,5% | 0 - 2,5% |
Ilia) Wytwarzanie lipopeptydu A 1437 K
Wytwarzanie prowadzi się w następujący sposób:
Fermentor o pojemności 10 1 pracuje w następujących warunkach:
Pożywka: 11 g/1 sacharozy g/1 ekstraktu mięsnego
0,3 g/1 ekstraktu drożdżowego
0,6 g/1 MgSO4
0,1 g/1 KH2PO4 μΜ FeCl3 x 6 H2O
500 mg/1 kwasu L-a-aminomasłowego (albo 1 g/1 racematu) pH 7,3 (przed sterylizacją)
Czas inkubacji: 120 godzin
Temperatura inkubacji: 30°C
Szybkość mieszania: 50 obrotów/min.
N apowietrzanie: 1501 min'1
Przez kilkakrotne dodanie etanolowego roztworu poliolu można powstrzymać tworzenie się piany. Maksimum produkcji osiąga się po około 96 do 120 godzinach.
180 230
Po zakończeniu fermentacji Actinoplanes sp. DSM 7358 sączy się brzeczkę kultury przy dodaniu około 2% środka pomocniczego do sączenia (np. Celite®), przesącz kultury oziębia się do temperatury 4°C i doprowadza do pH 1,5. Po 4 godzinach odwirowuje się przy 10000 g i osad powtórnie przeprowadza w stan zawiesiny w wodzie destylowanej. Przez zobojętnienie zawiesiny wymieniona substancja przechodzi do roztworu. Roztwór zamraża się i liofilizuje. Wydajność surowego peptydu wynosi 1,1 g/1 (= 10 g).
ΙΠ b) Wyodrębnianie lipopeptydu A 1437 K g surowego produktu rozpuszcza się w 100 ml destylowanej wody i przerabia odpowiednio do niżej podanego schematu.
Schemat przerobu (A 1437 K)
- 10 g surowego peptydu w 100 ml destylowanej wody
- adsorpcja na Q-Sepharose fast flow (kolumna 3,5 x 17 cm)
- elucja z następującym gradientem bufor A: NaH2PO4 1 mM w 50% metanolu, pH 5,9 bufor B: NaH2PO4 100 mM w 50% metanolu, pH 5,3 minut: bufor A —> w 45 minut na 25% buforu B, dalsze 45 minut przy 25% buforu B
- liofilizacja frakcji A 1437 K
- odsalanie na Biogefu P2 (wymiar sita 100 - 200) (kolumna 7 x 20 cm) 700 mg A 1437 K (60%)
- chromatografia RP na Nucleosifu C18 7 pm (kolumna 20 x 250 mm) naniesienie: 50 mg wstępnie oczyszczonego produktu elucja z następującym gradientem bufor A: woda dwukrotnie destylowana, 0,1% TFA bufor B: acetonitryl minut: bufor A/5% bufor B —> w 60 minut na 70% buforu B przy przepływie ml/min
- liofilizacja frakcji A 1437 K
5,6 mg A 1437 (> 95%)
IVa) Wytwarzanie lipopeptydów A 1437 L i M
Wytwarzanie prowadzi się w sposób opisany pod Ilia, tylko kwas L-a-aminomasłowy w mieszaninie produkcyjnej zastępuje się przez 500 mg/1 L-norwałiny (albo 1 g/1 racematu) i fermentację przeprowadza się w fermentorze o pojemności 101. Wydajność surowego peptydu wynosi 1,2 g/1 (=12 g).
IVb) Wyodrębnianie lipopeptydów A 1437 L i M g surowego produktu rozpuszcza się w 100 ml destylowanej wody i przerabia odpowiednio do poniższego schematu
Schemat przerobu
- 10 g surowego peptydu w 100 ml destylowanej wody
- adsorpcja na Q-Sepharose fast flow (kolumna 3,5 x 17 cm)
- elucja z następującym gradientem bufor A: NaH2PO4 1 mM w 50% metanolu, pH 5,9 bufor B: NaH2PO4 100 mM w 50% metanolu, pH 5,3 minut: bufor A - w 45 minut na 25% buforu B, dalsze 45 minut przy 25% buforu B
- liofilizacja frakcji A 1437 L i M
- odsalanie na Biogefu P2 (wymiar sita 100 - 200) (kolumna 7 x 20 cm) 900 mg A 1437 L i M (około 60%)
- chromatografia RP na Nucleosifu C18 7 pm (kolumna 20 x 250 mm) naniesienie:50 mg wstępnie oczyszczonego produktu elucja z następującym gradientem
180 230 bufor A: woda dwukrotnie destylowana, 0,1% TFA bufor B: acetonitryl minut: bufor A/5% bufor B-> w 60 minut na 70% buforu B przy przepływie ml/min
- liofilizacja frakcji A 1437 L i M
5,8 mg A 1437 L (> 95%) 6,7 mg A 1437 M (> 95%)
V) Układ HPLC do wykrywania lipopeptydów A 1437
Opisany niżej układ pozwala na oddzielenie i oznaczenie ilościowe lipopeptydów w surowej mieszaninie albo w przesączu kultury; czasy retencji wynoszą pomiędzy 11,5 minut i około 15,9 minut.
Eluent: A fosforan potasu-bufor pH 7,0, 10 mM
B acetonitryl
| Gradient: | t (min) | przepływ (ml/min) | A(%) | B (%) |
| 0 | 1,5 | 80 | 20 | |
| 15 | 1,5 | 50 | 50 | |
| 15,5 | 2 | 00 | 100 | |
| 16,5 | 2 | 00 | 100 | |
| 17 | 1,5 | 80 | 20 | |
| 22 | 1,5 | 80 | 20 |
Kolumna: Shandon ODS Hypersil RP 18 (120 x 4,6 mm z kolumną wstępną 20 x 4,6 mm) albo
Nucleosil 120 RP 18 (120 x 4,6 mm z kolumną wstępną 20 x 4,6 mm)
Przepływ: 1,5 ml/min
Wywoływanie: 210 mm
Iniekcja: 10 pi
VI) Porównanie pomiędzy Actinoplanes nipponensis ATCC 31145 i Actinoplanes spec. DSM 7358
Z obydwu szczepów hoduje się najpierw, jak opisano w przykładzie Ib, kulturę wstępną którą stosuje się do zaszczepienia następujących pożywek produkcyjnych.
| Pożywka 1: | 11 g/1 sacharozy 6 g/1 ekstraktu mięsnego 0,3 g/1 ekstraktu drożdżowego 0,6 g/1 MgSO4 0,1 g/1 KH2PO4 10 μΜ FeCl3 x 6H2O 0,6 g/1 L-waliny pH 7,3 (przed sterylizacją) |
| Pożywka 2: | jak pożywka 1 jednak bez L-waliny |
| Pożywka 3: | glukoza 30 g/1, mączka sojowa 20 g/1, Fe2(SO4)3 0,3 g/1, MnCl2 x 4H2O 0,3 g/1 i CoCl2 x 6H2O pH 7,3 |
każdorazowo 100 ml pożywki w kolbach Erlenmeyera o pojemności 300 ml.
Inkubację prowadzi się w temperaturze 30°C na obrotowej wstrząsarce. Po upływie 48,96 i 144 godzin oznacza się stężenie lipopeptydów A 1437 w przesączu kultury za pomocą HPLC (patrz przykład HI). W pożywce 2 i pożywce 3 w przypadku szczepu Actinoplanes nipponensis 31145
180 230 żaden lipopeptyd nie jest wykrywalny. W pożywce 1 po 144 godzinach wykrywane są niektóre peptydy w bardzo małych ilościach. Jeżeli weźmie się za podstawę identyczną właściwą absorbancję tych związków w porównaniu do peptydów A 1437, to utworzona ilość znajduje się o co najmniej czynnik 100 (< 1 mg/1) poniżej stężenia A 1437 B, jaki syntetyzowany jest przez szczep Actinoplanes spec. DSM 7358 w pożywce 1 po takim samym czasie.
VII) Działanie lipopeptydów A 1437
Czułość istotnych zarazków wobec lipopeptydów A 1437 oznacza się za pomocątestu rozcieńczania agaru. Jako agar stosuje się agar Miiller-Hinton'a, do którego w przypadku S. pyogenes i Enterococcen dodaje się 10% krwi konia. Płytki zawierające antybiotyk zaszczepia się wielokanałowym przyrządem do szczepienia (5 χ 104 cfu/miejsce szczepienia, stacjonarnej kultury każdorazowego szczepu). Wartości NHK (minimalne stężenie hamujące) odczytuje się przy temperaturze 37°C. Jako wartość MHK określa się stężenie antybiotyku, przy którym po 24 godzinach inkubacji nie jest wykrywalny żaden dostrzegalny wzrost zarazków.
Wyniki przedstawione są w tabeli 2. Stosowanąjako kontrola Amfomycynę otrzymano od firmy Boehringer Mannheim (Niemcy). Amfomycyna jest tam do nabycia jako odczynnik wysokowartościowy.
Tabela 2
Substancja A 1437: Aktywność in vitro (widmo AB); stężenie w pg/ml
| A 1437 A | 0,391 | 0,781 | 0,391 | 1,56 | 0,391 | 3,13 |
| A 1437 B | 0,098 | 0,195 | 0,098 | 0,195 | 0,049 | 0,391 |
| A 1437C | 0,195 | 0,781 | 0,391 | 3,13 | 0,781 | 3,13 |
| A 1437 D | 0,049 | 0,195 | 0,049 | 0,781 | 0,391 | 0,781 |
| A 1437E | 0,098 | 0,195 | 0,094 | 0,098 | 0,025 | 0,195 |
| A 1437 F | 0,098 | 0,391 | 0,195 | 1,56 | 0,781 | 1,56 |
| A 1437 G | 0,098 | 0,195 | 0,049 | 0,088 | 0,025 | 0,195 |
| A 1437H | 0,049 | 0,098 | 0,049 | 0,195 | 0,049 | 0,195 |
| Amfomycyna | 0,195 | 0,781 | 0,391 | 1,56 | 0,391 | 1,56 |
Substancja A 1437: Aktywność in vitro (szczepy oporne wobec wankomycyny); stężenie w pg/ml
| Enterococcus faecium VR1 | Enterococcus faecium VR2 | Streptococcus pyogenes | |
| A 1437 A | nie oznaczone | ||
| A 1437 B | 1 | 1 | 0,5 |
| A 1437 C | 4 | 4 | 4 |
| A 1437 D | 2 | 2 | 1 |
| A 1437 E | 4 | 4 | 1 |
| A 1437 F | 4 | 4 | 1 |
| A 1437 G | 0,25 | 0,25 | 0,125 |
| A 1437 H | 1 | 1 | 0,5 |
| Amfomycyna | 4 | 4 | 2 |
Związki K, L, M wykazują aktywność in vitro porównywalną ze związkami A-H.
180 230
Przykład VIa. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 D
Lipopeptyd A 1437 D wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| Wartość skręcalności: | +35°C (c = 0,1; metanol) |
| HPLC: | czas retencji: 15,1 minut |
| Aminokwasy: | 2 kwasy asparaginowe 1 asparagina 1 β-metyloasparginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina |
| FAB-MS: | m/e = 1303, 6952 /(M+H)+/ |
| masa cząsteczkowa: | 1302 6884 (C59H94N14O19) |
| CID-MS: | m/z = 356, 491, 517, 520, 741, 761, 938, 982 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm'1, 2930, 1660, 1530, 1450, 1400. |
Przykład VIb. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 B
Lipopeptyd A 1437 B wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| Wartość skręcalności: | +27° (c = 0,1; metanol) |
| HPLC: | czas retencji: 12,8 minut |
| Aminokwasy: | 3 kwasy asparginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina |
| FAB-MS: | m/e = /(M+H)+/ |
| masa cząsteczkowa: | 1303 (C59H93N13O20) |
| CID-MS: | m/z = 356, 407, 518, 521, 741, 762, 938, 982 |
| IR (Kbr): | δ= 3420 (br) cm'1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIc. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 C
Lipopeptyd A 1437 C wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| Wartość skręcalności: | +30° (c = 0,1; metanol) |
| HPLC: | czas retencji: 14,1 minut |
| Aminokwasy: | 2 kwasy asparaginowe 1 asparagina 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina |
| Masa cząsteczkowa: | 1288 (C5gH92N14O19) |
| CID-MS O: IR (Kbr): | m/z = 356, 392, 503, 741, 747, 938, 981 v = 3420 (br) cm’1, 2930, 1660, 1530, 1450, 1400. |
Przykład VId. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 A
Lipopeptyd A 1437 wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
Wartość skręcalności: +30° (c = 0,1; metanol)
HPLC: czas retencji: 11,8 minut
Aminokwasy: 3 kwasy asparaginowe β-metyloasparaginian
180 230
| 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina | |
| masa cząsteczkowa: | 1289 (C58H91NI3O20) |
| CID-MS: | m/z = 356, 478, 504, 507, 741, 748, 938, 981 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm’1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIe. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 F
Lipopeptyd A 1437 F wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| Wartość skręcalności: | +31° (c = 0,1; metanol) |
| HPLC: czas retencji: | 13,8 minut |
| Aminokwasy: | 2 kwasy asparaginowe 1 asparagina 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina |
| masa cząsteczkowa: | 1288 (C58H92N14O19) |
| CID-MS IR (Kbr): | = m/z = 356, 392, 503, 506, 741, 747, 938, 981 v = 3420 (br) cm'1, 2930, 1660, 1530, 1450, 1400. |
Przykład VIf. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 E
Lipopeptyd A 1437 E wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą.
| HPLC: czas retencji: | 11,5 minut |
| Aminokwasy: | 3 kwasy asparaginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 2 walina |
| masa cząsteczkowa: | 1289 (C58H91N13O20) |
| CID-MS: | m/z = 356, 393, 504, 507, 741, 748, 938, 981 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm'1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIg. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 H
Lipopeptyd A 1437 H wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| Wartość skręcalności: | +32° (c = 0,1; metanol) |
| HPLC: czas retencji: Aminokwasy: | 15,9 minut 2 kwasy asparaginowe 1 asparagina 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 1 walina |
| masa cząsteczkowa: | 1316 (C60H96N14O19) |
| CID-MS: | m/z = 356, 420, 531, 534, 741, 775, 938, 981 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm’1, 2930, 1660, 1530, 1450, 1400. |
180 230
Przykład VIh. Charakterystykalipopeptydu A 1437 G
Lipopeptyd A 1437 G wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
Wartość skręcalności: +34° (c = 0,1; metanol)
| HPLC: czas retencji: Aminokwasy: | 13,6 minut 3 kwasy asparaginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 kwas pipekolinowy 2 waliny |
| masa cząsteczkowa: | 1317 (C^N^) |
| CID-MS: IR (Kbr): | m/z = 356, 421, 532, 535, 741, 776, 938, 981 v = 3420 (br) cm’1, 2925,1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIi. Charakterystyka lipopeptydu A 1437K
Lipopeptyd A 1437 K wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| HPLC: czas retencji: | 12,5 minut |
| Aminokwasy: | 3 kwasy asparaginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 pipekolina 1 walina |
| FAB-MS: masa cząsteczkowa: | m/e = /(M+H)+/ 1299 (C58H9łN13O20) |
| CID-MS: | m/z = 393, 504, 507, 741, 748, 938, 981 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm'1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIj. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 L
Lipopeptyd A 1437 L wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| HPLC: czas retencji: | 13,0 minut |
| Aminokwasy: | 3 kwasy asparaginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 pipekolina 1 walina |
| FAB-MS: | m/e = /(M+H)+/ |
| masa cząsteczkowa: | 1289 (C59H93N13O20) |
| CID-MS: | m/z = 407, 518, 741, 761, 938, 981 |
| IR (Kbr): | v = 3420 (br) cm'1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400. |
Przykład VIk. Charakterystyka lipopeptydu A 1437 M
Lipopeptyd A 1437 M wyodrębnia się jako bezpostaciową substancję stałą
| HPLC: | czas retencji: 9,8 minut |
| Aminokwasy: | 3 kwasy asparaginowe 1 β-metyloasparaginian 2 glicyny 2 kwasy 2,3-diaminomasłowe 1 prolina 1 pipekolina 1 walina |
180 230
FAB-MS: m/e = /(M+H)+/ masa cząsteczkowa: 1275 (C57H89N13O20)
CID-MS: m/z = 379, 490,493, 724, 741, 938, 981
IR (Kbr): v = 3420 (br) cm’1, 2925, 1650, 1535, 1450, 1400.
Przykład VII. C13-chemiczne przesunięcia
W poniższej tabeli pokazane sąC13-chemiczne przesunięcia sygnałów CH lipopeptydu A 1437B
Aby umożliwić porównanie z danymi *H, podano NH-chemiczne związki sygnałów NH albo dla Pip i Pro CoH-przesunięcia odpowiednich układów spinowych.
Tabela
| Zaszeregowanie | Dab | Cly | MeAsp | Gly | Asp | Asp | Asp | Dab | Val | Pro | Pip |
| NH/Ca | 8,30 | 8,43 | 8,19 | 8,12 | 8,09 | 7,96 | 8,15 | 7,87 | 7,30 | 4,13 | 4,62 |
| a | 56,00 | 44,60 | 41,20 | 44,70 | 52,00 | 53,10 | 53,00 | 55,60 | 59,20 | 62,40 | 56,80 |
| β | 50,10 | 14,40 | 36,10 | 35,60 | 36,30 | 47,80 | 31,30 | 30,80 | 27,20 | ||
| z | 16,00 | 20,10 | 18,9 19,7 | 26,00 | 20,60 | ||||||
| δ | 49,40 | 24,90 | |||||||||
| β | 45,00 |
180 230
180 230
WZÓR 2
WZÓR 4
180 230
WZÓR 5
WZÓR 6
WZÓR 7
WZÓR 8
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o działaniu farmakologicznym o wzorze l, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony rodnik kwasu tłuszczowego lub hydroksytłuszczowego o długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla.
- 2. Lipopeptydy według zastrz. 1, znamienne tym, że R1 oznacza korzystnie łańcuch o 12, 13, 14 albo 15 atomach węgla.
- 3. Lipopeptydy według zastrz. 1, znamienne tym, że R1 oznacza łańcuch o 6 do 22 włącznie atomach węgla taki jak łańcucha) kwasu nCi2-tłuszczowego,b) kwasu nC13-tłuszczowego lubc) kwasu nC14-tłuszczowego.
- 4. Lipopeptydy według zastrz. 3, znamienne tym, że R1 oznacza łańcuch o 6 do 22 włącznie atomach węgla taki jak grupa o wzorze 2..
- 5. Lipopeptydy według zastrz. 3, znamienne tym, że R1 oznacza łańcuch o 6 do 22 włącznie atomach węgla taki jak grupa o wzorze 3.
- 6. Lipopeptydy według zastrz. 3, znamienne tym, że R1 oznacza łańcuch o 6 do 22 włącznie atomach węgla taki jak grupa o wzorze 4.
- 7. Sposób wytwarzania lipopeptydów o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony rodnik kwasu tłuszczowego albo kwasu hydroksytłuszczowego o długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla, znamienny tym, że fermentuje się Actinoplanes sp., w pożywce aż do nagromadzenia się w tej pożywce jednego albo więcej lipopeptydów i oczyszcza się z pożywki lipopeptydy o wzorze 1 przez wytrącenie lipopeptydów z pożywki stosując kwasy, przy pH 0, 5 do 4 włącznie, potem ewentualnie otrzymane z wytrącenia lipopeptydy oczyszcza się przez chromatografię na wymieniaczach anionowych albo chromatografię na hydrofobowej matrycy, przy czym obydwie chromatografie przeprowadza się alternatywnie albo jedną po drugiej w dowolnej kolejności.
- 8. Sposób wytwarzania lipopeptydów o wzorze 1, według zastrzeżenia 7, w którym R1 oznacza korzystnie łańcuch o 12,13,14 albo 15 atomach węgla lub R1 oznacza łańcuch o 6 do 22 włącznie atomach węgla taki jak łańcucha) kwasu nC12-thiszczowego,b) kwasu nC13-thiszczowego łubc) kwasu nC14-tłuszczowego, lub taki jak grupa o wzorze 2, 3 lub 4, znamienny tym, że fermentuje się Actinoplanes sp. w pożywce aż do nagromadzenia się w tej pożywce jednego lub więcej lipopeptydów i oczyszcza się z pożywki lipopeptydy o wzorze 1, przez wytrącenie lipopeptydów z pożywki stosując kwasy, przy pH 0,5 do 4 włącznie, potem ewentualnie otrzymane z wytrącenia lipopeptydy oczyszcza się przez chromatografię na wymieniaczach anionowych albo chromatografię na hydrofobowej matrycy, przy czym obydwie chromatografie przeprowadza się alternatywnie albo jedną po drugiej w dowolnej kolejności.
- 9. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i ewentualnie farmaceutyczne nośniki, znamienna tym, że zawiera jako substancję czynną lipopeptydy o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony rodnik kwasu tłuszczowego lub kwasu hydroksytłuszczowego o długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla.
- 10. Substancja farmakologicznie czynna, przeciwko bakteriom Gram-dodatnim, znamienna tym, że zawiera jeden lub więcej lipopeptydów o wzorze 1, w którym R1 oznacza jednokrotnie nienasycony, nasycony, nierozgałęziony rodnik kwasu tłuszczowego lub hydroksytłuszczowego o180 230 długości łańcuchów o 6 do 22 włącznie atomów węgla, korzystnie lipopeptyd o wzorze 1, w którym R1 oznacza łańcuch o 12-15 atomach węgla lub łańcucha) kwasu nC12-thiszczowego,b) kwasu nC13-tłuszczowego lubc) kwasu nC]4-tłuszczowego, lub grupę o wzorze 2, 3 lub 4.* * *
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4319007 | 1993-06-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL180230B1 true PL180230B1 (pl) | 2001-01-31 |
Family
ID=6489896
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94303716A PL179581B1 (pl) | 1993-06-08 | 1994-06-06 | kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PL |
| PL94334634A PL180230B1 (pl) | 1993-06-08 | 1994-06-06 | Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o dzialaniu farmakologicznym, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PL |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94303716A PL179581B1 (pl) | 1993-06-08 | 1994-06-06 | kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PL |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6194383B1 (pl) |
| EP (2) | EP0864584B1 (pl) |
| JP (1) | JP2660161B2 (pl) |
| KR (2) | KR0174264B1 (pl) |
| AT (2) | ATE174604T1 (pl) |
| AU (1) | AU672691B2 (pl) |
| CA (1) | CA2125376C (pl) |
| CY (1) | CY2190B1 (pl) |
| CZ (1) | CZ285322B6 (pl) |
| DE (2) | DE59409616D1 (pl) |
| DK (2) | DK0629636T3 (pl) |
| ES (2) | ES2127312T3 (pl) |
| FI (1) | FI942660L (pl) |
| GR (2) | GR3029591T3 (pl) |
| HK (1) | HK1012009A1 (pl) |
| HU (1) | HU217177B (pl) |
| IL (2) | IL109917A (pl) |
| MA (1) | MA23216A1 (pl) |
| NO (1) | NO942110L (pl) |
| NZ (1) | NZ260682A (pl) |
| OA (1) | OA10066A (pl) |
| PL (2) | PL179581B1 (pl) |
| PT (1) | PT864584E (pl) |
| RU (1) | RU2117672C1 (pl) |
| SK (1) | SK281830B6 (pl) |
| TW (1) | TW455591B (pl) |
| UY (1) | UY23762A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA943983B (pl) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4411025A1 (de) * | 1994-03-30 | 1995-10-05 | Hoechst Ag | Lipopeptid-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
| DE19807972A1 (de) | 1998-02-25 | 1999-08-26 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Lipopeptidantibiotika-Calciumsalze, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung |
| KR100291406B1 (ko) * | 1999-05-13 | 2001-05-15 | 이길정 | 직거 염색기용 기어박스 |
| KR100423751B1 (ko) * | 1999-05-18 | 2004-03-22 | 심선희 | 지그염색기의 직물이송속도 유지장치 |
| KR100331966B1 (ko) * | 1999-10-23 | 2002-04-10 | 윤기룡 | 염색된 직물의 직물권취장치 |
| US6696412B1 (en) * | 2000-01-20 | 2004-02-24 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same |
| US6750199B2 (en) | 2000-07-17 | 2004-06-15 | Micrologix Biotech Inc. | Antimicrobial sulfonamide derivatives of lipopeptide antibiotics |
| US6737403B2 (en) | 2000-07-17 | 2004-05-18 | Micrologix Biotech Inc. | Derivatives of laspartomycin and preparation and use thereof |
| US6511962B1 (en) | 2000-07-17 | 2003-01-28 | Micrologix Biotech Inc. | Derivatives of laspartomycin and preparation and use thereof |
| US20060014674A1 (en) | 2000-12-18 | 2006-01-19 | Dennis Keith | Methods for preparing purified lipopeptides |
| AU2003202878B2 (en) | 2002-01-03 | 2008-07-31 | Migenix Inc. | Dab9 derivatives of lipopeptide antibiotics and methods of making and using the same |
| US6887900B2 (en) * | 2002-03-04 | 2005-05-03 | Divergence, Inc. | Nematicidal compositions and methods |
| US20040157803A1 (en) * | 2002-03-04 | 2004-08-12 | Williams Deryck J. | Nematicidal fatty acid and fatty acid ester related compounds |
| CN1839150A (zh) * | 2003-07-17 | 2006-09-27 | 麦根克斯有限公司 | 脂肽抗菌衍生物组合物及其应用方法 |
| US7368629B2 (en) * | 2004-02-04 | 2008-05-06 | Divergence, Inc. | Nucleic acids encoding anthelmintic agents and plants made therefrom |
| DE102004060750A1 (de) | 2004-12-15 | 2006-07-13 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Deacylierung von Lipopeptiden |
| GB0821540D0 (en) * | 2008-11-25 | 2008-12-31 | Merlion Pharmaceuticals Pte Ltd | Lipopeptide compounds and their use |
| AR079127A1 (es) | 2009-11-23 | 2011-12-28 | Cubist Pharm Inc | Composiciones de daptomicina y metodos relacionados |
| KR101151878B1 (ko) | 2010-06-08 | 2012-05-31 | 미원상사주식회사 | 지방산 트리펩타이드염 및 이를 함유하는 항균 조성물 |
| WO2013012101A1 (ko) * | 2011-07-15 | 2013-01-24 | 미원상사주식회사 | 지방산 트리펩타이드염 및 이를 함유하는 항균 조성물 |
| FR2980802B1 (fr) * | 2011-10-03 | 2014-12-26 | Univ Lille 1 Sciences Et Technologies Ustl | Procede de production de biosurfactants et dispositif de mise en œuvre |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4000397A (en) | 1975-03-21 | 1976-12-28 | Spectra-Physics, Inc. | Signal processor method and apparatus |
| US4001397A (en) * | 1975-08-11 | 1977-01-04 | Pfizer Inc. | Antibiotic compound 41,012 |
| DE4411025A1 (de) * | 1994-03-30 | 1995-10-05 | Hoechst Ag | Lipopeptid-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
-
1993
- 1993-12-17 TW TW082110700A patent/TW455591B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-04-25 UY UY23762A patent/UY23762A1/es not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 HU HU9401465A patent/HU217177B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-06-01 EP EP98110484A patent/EP0864584B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-01 DK DK94108443T patent/DK0629636T3/da active
- 1994-06-01 AT AT94108443T patent/ATE174604T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-06-01 ES ES94108443T patent/ES2127312T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-01 AT AT98110484T patent/ATE198209T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-06-01 DE DE59409616T patent/DE59409616D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-01 DE DE59407475T patent/DE59407475D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-01 EP EP94108443A patent/EP0629636B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-01 PT PT98110484T patent/PT864584E/pt unknown
- 1994-06-01 DK DK98110484T patent/DK0864584T3/da active
- 1994-06-01 ES ES98110484T patent/ES2153224T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-03 NZ NZ260682A patent/NZ260682A/en unknown
- 1994-06-06 PL PL94303716A patent/PL179581B1/pl unknown
- 1994-06-06 PL PL94334634A patent/PL180230B1/pl unknown
- 1994-06-06 FI FI942660A patent/FI942660L/fi unknown
- 1994-06-06 AU AU64620/94A patent/AU672691B2/en not_active Ceased
- 1994-06-06 SK SK685-94A patent/SK281830B6/sk unknown
- 1994-06-06 CZ CZ941381A patent/CZ285322B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-06-06 MA MA23529A patent/MA23216A1/fr unknown
- 1994-06-07 ZA ZA943983A patent/ZA943983B/xx unknown
- 1994-06-07 JP JP6125062A patent/JP2660161B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-07 CA CA002125376A patent/CA2125376C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-07 IL IL10991794A patent/IL109917A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-06-07 RU RU94022485/04A patent/RU2117672C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-06-07 NO NO942110A patent/NO942110L/no not_active Application Discontinuation
- 1994-06-08 KR KR1019940012795A patent/KR0174264B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-08 OA OA60522A patent/OA10066A/fr unknown
-
1997
- 1997-03-05 US US08/811,843 patent/US6194383B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-07-11 KR KR1019980028496A patent/KR100319563B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-07-21 IL IL12545098A patent/IL125450A0/xx unknown
- 1998-12-10 HK HK98113032A patent/HK1012009A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-03-05 GR GR990400678T patent/GR3029591T3/el unknown
-
2000
- 2000-06-16 CY CY0000024A patent/CY2190B1/xx unknown
-
2001
- 2001-01-10 GR GR20010400022T patent/GR3035204T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL180230B1 (pl) | Lipopeptydy z Actinoplanes sp. o dzialaniu farmakologicznym, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna oraz substancja farmakologicznie czynna PL PL PL PL PL PL PL PL | |
| EP0055070B1 (en) | Antibiotic a-4696 factors b1,b2,b3,c1a,c3 and e1 | |
| US4918054A (en) | Antibiotics called `chloropolysporins B and C`, a process for their preparation, and their therapeutic and veterinary use | |
| CA1340338C (en) | Glycopeptide antibiotic pa-45052 and the production thereof | |
| CA1198695A (en) | Antibiotic compound | |
| IE57727B1 (en) | Antibiotics produced by kibdelosporangium aridum shearer gen.nov.,sp.nov.atcc 39323 | |
| JPH0213392A (ja) | ペプチド抗生物質 | |
| US4672036A (en) | Pure cultures of Kibdelsporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 and mutants thereof | |
| AU648816B2 (en) | Antibiotic GE1655 complex and its factors A, B and C | |
| AU738970B2 (en) | Novel antibiotic, feglymycin, processes for its preparation and its use | |
| EP0818464A1 (en) | Methylsulfomycin l, a process for its production and its use | |
| JPH02149593A (ja) | 抗生物質ｇｅ２２７０ | |
| JPH01240196A (ja) | 新規グリコペプチド系抗生物質ｐａ−４５０５２ | |
| IE913058A1 (en) | Antibiotic ge1655 complex and its factors a, b, and c | |
| US4797280A (en) | Antibiotics produced by Kibdelosporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 | |
| CS228936B2 (cs) | Předběžné, respektive doplňkové krmivo pra vytvoření krmivá pro hospodářská zvířata, zvláště přežvýkavco |